CN100413511C - 全蚕粉中降血糖活性物质的分离方法 - Google Patents
全蚕粉中降血糖活性物质的分离方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种全蚕粉中降血糖活性物质的分离方法。其分离步骤为首先将全蚕粉与浸提缓冲液按1∶1的比例混匀，置4～8℃环境下浸提、过滤、分离，进行全蚕粉降血糖有效成分的提取；然后将全蚕粉浸提液上离子交换柱层析，进行阳离子交换柱层析，并调整pH值；再洗脱、样品收集、浓缩与干燥。本发明保持了家蚕体内的原有活性物质，降血糖活性成分单一；产出量高，获得率为2.7%。
Description
技术领域
本发明涉及一种活性物质的分离方法，特指一种全蚕粉中降血糖活性物质的分离方法。
背景技术
用家蚕制成的全蚕粉具有降血糖作用。如专利“含有蚕粉末为有效成分的降血糖剂及其制造方法(CN95115559.8)”，“含乳铁蛋白全蚕粉的生产方法(CN03115855.2)”，“一种全蚕粉保健食品制备方法(CN03116235.5)”，“桑蚕粉的制备方法及其应用(CN200410017227.3)”。但家蚕是真核生物，具有完整生命特征的有机体，用其制备的全蚕粉成分复杂，特别是蚕体内含有一些大分子物质如糖、脂等，对某些人群可能是过敏原；家蚕在饲养过程中有可能受到来自多方面的污染等有可能对人(特别是病人)造成损害。分离全蚕粉中降血糖活性物质，对全蚕粉的有效成分和药效学的检测指标提供规范科学的标准，有利于实现产品质量的有效控制等。
发明内容
本发明的目的是提供一种全蚕粉中降血糖活性物质的分离方法，其保持了家蚕体内的原有活性物质，产出量高。
实现上述目的的技术方案，其特征是：
1、全蚕粉降血糖有效成分的提取：将全蚕粉与浸提缓冲液按1∶1的比例混匀，置4～8℃环境下浸提、过滤、分离等。
2、上离子交换柱层析：将全蚕粉浸提液上离子交换柱层析，进行阳离子交换柱或阴离子交换柱层析，并调整pH值大于3.0。
3、洗脱：分别用水和NH4OH洗脱。
4、样品收集：收集样品每管10ml，用测麦芽糖糖苷酶抑制剂活性的方法，检测并收集有葡萄糖苷酶抑制剂活性部分。
5、浓缩、干燥：将有葡萄糖苷酶抑制剂活性部分，进行超低温冷冻干燥，保存备用。
本发明的优点：
(1)保持家蚕体内的原有生物活性物质：整个全蚕粉的制备过程，都是在低温环境下完成的，有利于家蚕体内原有活性物质的保存。
(2)降血糖活性成分单一：通过离子交换柱层析，分离出的活性成分单一，降血糖效果上佳。
(3)分离物产出率高：使用本分离方法，最终得率可达2.7％。降血糖效果显著。
具体实施方式
本发明的分离步骤如下：
1、全蚕粉降血糖有效成分的提取：按1∶1的比例将全蚕粉与浸提缓冲液混匀，置4～8℃环境下浸提24小时；然后，过滤、分离浸提液。
2、上离子交换柱层析：将全蚕粉浸提液上离子交换柱层析，进行阳离子交换柱柱层析，并调整pH值大于3.0。
3、洗脱：分别用水和NH4OH洗脱3-4次。
4、样品收集：收集样品每管10ml，用测麦芽糖糖苷酶抑制剂活性的方法，检测并收集有葡萄糖苷酶抑制剂活性部分。
5、浓缩、干燥：将有葡萄糖苷酶抑制剂活性部分，进行超低温冷冻干燥，保存备用。
将上述分离的降血糖有效成分溶于水，进行实验小鼠的罐胃实验，服用该分离物有效成分0.045mg/天·克体重剂量，30天后空腹和餐后2小时的血糖值分别比模型对照组降低25％和16％；服用相同剂量的“拜糖平”，30天后空腹和餐后2小时的血糖值分别比模型对照组降低31％和18％。而添食15mg/天·克体重剂量的全蚕粉，30天后实验鼠空腹和餐后2小时的血糖值分别降低了18.81％和11.07％。总之，全蚕粉的使用剂量为该分离有效成分的330倍，而降血糖效果仅为分离有效成分的70％-75％。
当全蚕粉与浸提缓冲液在4～8℃环境下浸提时间低于12小时，最终分离物的得率不足1％，降血糖效果为浸提24小时的78.6％，效果明显降低。但当浸提时间超过24小时，最终分离物的得率及其降血糖效果，与浸提24小时相比较没有显著差异。
综上所述，本发明的制备工艺流程：全蚕粉——降血糖有效成分的提取——上离子交换柱层析——洗脱——样品收集——浓缩干燥。
Claims (1)
1. 全蚕粉中降血糖活性物质的分离方法，其特征是：
(1)全蚕粉降血糖有效成分的提取：将全蚕粉与浸提缓冲液按1∶1的比例混匀，置4～8℃环境下浸提、过滤、分离；
(2)上离子交换柱层析：将全蚕粉浸提液上离子交换柱层析，进行阳离子交换柱层析，并调整pH值大于3.0；
(3)洗脱：分别用水和NH4OH洗脱；
(4)样品收集：收集样品每管10ml，用测麦芽糖糖苷酶抑制剂活性的方法，检测并收集有葡萄糖苷酶抑制剂活性部分；
(5)浓缩、干燥：将有葡萄糖苷酶抑制剂活性部分，进行超低温冷冻干燥，保存备用。
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Non-Patent Citations (4)
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| QHL3对α－葡萄糖苷酶活力影响及降糖机理研究. 李宏等.西北农业学报，第12卷第1期. 2003 |
| QHL3对α－葡萄糖苷酶活力影响及降糖机理研究. 李宏等.西北农业学报，第12卷第1期. 2003 * |
| 不同来源蚕粉的营养组成及抑制糖苷酶活性的比较研究. 李学等.中国参业，第27卷第1期. 2006 |
| 不同来源蚕粉的营养组成及抑制糖苷酶活性的比较研究. 李学等.中国参业，第27卷第1期. 2006 * |
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