CN100372576C

CN100372576C - 可促进神经再生的复合胶原神经导管及其中空湿法纺丝成形方法

Info

Publication number: CN100372576C
Application number: CNB2004100992056A
Authority: CN
Inventors: 张菁; 成立萍; 王庆瑞; 谢涵坤
Original assignee: Shanghai Shen Wei Medical Gas Co Ltd; Donghua University
Current assignee: Shanghai Shen Wei Medical Gas Co Ltd; Donghua University
Priority date: 2004-12-29
Filing date: 2004-12-29
Publication date: 2008-03-05
Anticipated expiration: 2024-12-29
Also published as: CN1795932A

Abstract

一种可促进神经再生的复合胶原神经导管及其中空湿法纺丝成形方法。由胶原蛋白，壳聚糖及致孔剂组成的复合胶原蛋白纺丝原液，通过一步法中空湿法纺丝成形方法制得复合胶原神经导管。该方法中纺丝成形与致孔技术相结合，一次性成型中空半透性神经导管，减少了导管加工的复杂性。易于纺制出不同的孔径、孔隙率、直径及截面形状的神经导管，从而创造出适合各类细胞粘附生长的环境，促进神经的再生。

Description

可促进神经再生的复合胶原神经导管及其中空湿法纺丝成形方法

技术领域

本发明涉及一种可促进神经再生的复合胶原神经导管及其中空湿法纺丝成形方法，该神经导管可以植入生物体内修复外周神经再生。

背景技术

神经系统是人体内的最主要的器官之一，它控制着人体的感官运动功能。各种外伤如压迫、牵伸、撕裂、切断以及其他因素如局部缺血、肿瘤等将会造成神经系统的部分或全部损伤，从而导致功能丧失和其它神经性疾病。缺损神经的修复与功能的重建是人类尚待攻克的难题之一。

目前，缺损神经的修复主要采取外膜吻合、束膜吻合；自体、异体神经移植；神经导管桥接术；损伤神经部位的药物辅助治疗、电磁辅助治疗等。外膜与束膜吻合术是直接将断离神经的的近体端、远体端进行手术缝合，由于神经没有伸展功能，缝合产生的张力会影响神经的再生，对长间歇的神经缺损也无能为力。自体神经移植有二次手术和自体神经取出部位功能丧失问题。神经导管桥接术是目前神经再生修复的研究热点，由于神经具有一定的再生修复能力，通过导管诱导，为缺损神经的近体端、远体端搭桥，引导神经的再生方向，可以使缺损长度较短的神经再生修复。

胶原是组成胶原纤维的蛋白质，约占哺乳动物总蛋白质的1/3，其在皮肤和结缔组织中含量丰富。通常胶原由3条多肽链构成三股螺旋结构，氨基酸的主要组成为脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸，分子量约20万～30万。以胶原蛋白为基材的胶原神经导管不仅可以起到支架的桥接作用，而且具有神经营养的作用，可以较好的促进神经的再生。目前，桥接术采用的胶原神经导管的研制大都采用冻干成形法制得，其能耗大、生产效率低，且孔隙率不宜控制。因此研究寻找一种新型的胶原神经导管及其成形方法，是个很有意义的课题。

发明内容

本发明提供一种可促进神经再生的复合胶原神经导管及其中空湿法纺丝成形方法。本发明复合胶原神经导管是由复合胶原蛋白纺丝原液通过中空湿法纺丝成形方法制得。

复合胶原蛋白纺丝原液包括胶原蛋白，壳聚糖及致孔剂组份并以下列重量份组成：浓度为1.5-2.8％的胶原蛋白酸液10份，浓度为3-5％的壳聚糖酸液1-5份及致孔剂0.1-0.5份。

在复合胶原蛋白纺丝原液中，胶原蛋白是复合胶原神经导管的基材，它具有神经营养的作用，可以较好的促进神经的再生，胶原蛋白可取自于哺乳动物的皮肤或结缔组织，例如牛筋、牛跟腱、牛皮、猪皮等，胶原蛋白酸液可选自胶原蛋白柠檬酸溶液或胶原蛋白醋酸溶液，壳聚糖酸液可选自壳聚糖柠檬酸溶液或壳聚糖醋酸溶液；壳聚糖不仅能有效的改变胶原蛋白的流变性能，改善可纺性，而且可以很好的延长神经导管的降解周期；利用湿法纺丝致孔原理，调节致孔剂的含量及分子量，能较好的控制复合神经导管管壁上的孔径大小和孔隙率的分布。致孔剂可选自聚乙烯吡咯烷酮(分子量为3×10⁴-9×10⁴)，聚乙二醇(分子量为4×10²-2×10⁴)或水溶性聚乙烯醇。

复合胶原蛋白纺丝原液的制备(下面为重量份)：将浓度为1.5-2.8％的胶原蛋白柠檬酸溶液或胶原蛋白醋酸溶液10份，浓度为3-5％的壳聚糖醋酸溶液或壳聚糖柠檬酸溶液1-5份及致孔剂0.1-0.5份搅拌混合后，离心脱泡，即能制得复合胶原蛋白纺丝原液。

复合胶原蛋白纺丝原液通过中空湿法纺丝成形方法即能制得复合胶原神经导管。本发明中空湿法纺丝成形制得复合胶原神经导管的方法包括下列步骤：

1、制备复合胶原蛋白纺丝原液

①脱脂：将哺乳动物的皮肤或结缔组织，例如市售新鲜牛筋，切片，再冷冻清洗，用0.8～5％的二甲基亚砜的碱溶液处理24～72小时脱脂，再用高速组织捣碎机捣碎，放于离心脱泡机中离心15～30min，去掉上清液。

②除去非胶原蛋白：用NaCl溶液(2.0～4.5M)浸泡5min，搅拌均匀，再用Tris-HCl(0.05M,pH＝7.5)浸泡30min，搅拌过夜，离心20min，反复多次NaCl/Tris-HCl处理，至上清液粘度极低。用冷蒸馏水短时反复冲洗，直至去除NaCl，离心5min，晾干。

③酶解提取胶原：加入重量比为4-8∶1的0.1～0.4％胃蛋白酶，乙二胺四乙酸四钠EDTA，及它们5～20倍体积的蒸馏水，置于37℃左右培养箱中培养24hr，利用胃蛋白酶使胶原蛋白被酶解出来，随后用冷蒸馏水反复冲洗，加入2～5倍体积的0.1～1％H₂O₂杀酶，随之仍用冷蒸馏水反复冲洗。用丙酮沉淀除去杂质，再用冷蒸馏水反复冲洗，离心控干，加入0.5％的柠檬酸(pH＝2～4)酸溶。反复沉淀酸溶后，用冷蒸馏水洗至中性。

④溶胀：接着加入0.5～1.5％的柠檬酸(pH＝2～4)缓冲液溶胀24～48hr，用市售食品搅拌机充分搅拌。过滤三次，置于室温下熟化1～8天，即得胶原蛋白，分子量为200000-300000。

⑤复合胶原蛋白纺丝原液的配制(重量份)：将浓度为1.5％～2.8％的胶原蛋白柠檬酸溶液或醋酸溶液10份，浓度为3-5％的壳聚糖醋酸溶液或柠檬酸溶液1～5份及致孔剂0.1-0.5份混合。致孔剂可选自于聚乙烯吡咯烷酮(分子量为3×10⁴-9×10⁴)，聚乙二醇(分子量为4×10²-2×10⁴)或水溶性聚乙烯醇。混合时先配制好胶原蛋白柠檬酸溶液或醋酸溶液，然后用滴管把壳聚糖醋酸溶液或柠檬酸溶液，滴入胶原蛋白溶液中，边滴边搅拌使其充分混合反应，再加入致孔剂混匀，加完后再把混合液离心脱泡，即制得流变性好，浓度满足纺丝要求的复合胶原蛋白纺丝原液。

该复合胶原蛋白纺丝原液的分子量为200000-300000，相对粘度为8-15Pa·S，浓度为2-3.5％。

2、中空湿法纺丝成形方法制得复合胶原神经导管

将制得的复合胶原蛋白纺丝原液，采用常用中空湿法纺丝装置纺丝。首先将纺丝液置入可控温的纺丝釜，通过活塞和压力传感器对釜施加压力0.8～1.5Mpa，控制填充液的流量为20～100ml/min。填充液采取丙酮、甘油或水溶性聚乙烯醇，中空填充液的作用是形成中空纤维导管的内腔。纺丝原液再经过鹅型过滤器(其中过滤网为60～100目)到喷丝头，计量泵控制其流量为2～20ml/min。喷丝头采用长径比为80～160，喷丝头的长度至少为10cm，喷丝头内部的针芯长度与喷丝头长度之比根据纺制的中空纤维导管的要求在1/3～3/4之间不等。随着喷丝头形状的改变，可制成不同截面形状的神经导管，喷丝头可选自园形喷丝头，花瓣形喷丝头、三角形喷丝头或海岛形喷丝头。丝出喷丝头成形，进入丙酮为主体组成的凝固浴中，组成凝固浴的丙酮、氨水与去离子水的重量比为95～98∶4～1∶1。根据神经导管的内径不同，凝固时间在10s～5min之间不等，采用负拉伸，出凝固浴后晾干。这时导管力学性能较差，故必须进行交联处理，进入交联浴，交联浴的组成为0.05MHCl：0.25％的戊二醛的水溶液的重量比1∶1，交联10min，用磷酸缓冲溶液进行反复漂洗，直至去除其上的戊二醛。所得中空纤维导管，即是本发明复合胶原神经导管，置于酒精中保存备用。

本发明中空湿法纺丝成形方法制得的复合胶原神经导管具有下列性能：拉伸强度为45-60KPa，管壁上的孔经约为0.8-3μm，孔隙率为11-16％。

本发明中空湿法纺丝成形方法中首先使用了胶原蛋白，壳聚糖及致孔剂的合适配方制得粘度高、浓度适中、流变性能优越的复合胶原蛋白纺丝原液，再通过中空湿法纺丝成形方法制得神经导管。由于纺丝原液中含有致孔剂，利用湿法纺丝致孔原理，纺丝成形与致孔的结合，调节纺丝原液中致孔剂的含量及分子量，能较好的控制复合胶原导管壁上的孔径大小和孔隙率的分布。并利用湿纺成形喷丝头尺寸与形状的变化的改变，能一次性成型中空半透性神经导管，减少了导管加工的复杂性。易于纺制出不同的孔径、孔隙率、直径及截面形状的神经导管，从而创造出适合各类细胞粘附生长的环境，促进神经的再生。

本发明复合胶原神经导管具有致密光滑的屏障外表面，且其上的孔径、孔隙率的大小能够满足不同神经生长微环境的需要，即能够避免神经营养因子的流失，又可以使得体内能促进神经再生的成分流进、小分子体液的循环，且能防止大的有害物质流入。

本发明中空湿法纺丝成形方法是一步法连续研制中空纤维导管的有效途径，利用湿法纺丝直接纺出中空复合胶原神经导管，方便快速，不但可以用于神经导管，促进外周缺损神经的修复，而且可以低成本大量获得具特定功能的组织工程骨架材料及可降解的缓释药物载体等。

附图说明

图1是采用园形喷丝头成形的中空圆形纤维导管(复合胶原神经导管)截面示意图。

图2是采用花瓣形喷丝头成形的复合胶原神经导管截面示意图。

图3是采用三角形喷丝头成形的复合胶原神经导管截面示意图。

图4是采用海岛形喷丝头成形的复合胶原神经导管截面示意图。

图5复合胶原神经导管管壁上孔径的示意图。

图6复合胶原神经导管所承受的应力—应变曲线。

具体实施方式

实施例1复合牛胶原蛋白纺丝原液的制备

切取牛跟腱，清洗、去腱膜、速冻、切片，再冷却清洗，用0.8％的二甲基亚砜的碱溶液处理58小时脱脂，再用转速为12000r/min的高速组织捣碎机捣碎，离心(4000r/min)15min，去掉上清液。加入NaCl(2.0M)浸泡5min，搅拌均匀，加入Tris-HCl(0.05M,pH＝7.5)浸泡30min，搅拌过夜，离心(4000r/min)20min，反复多次NaCl/Tris-HCl处理，至上清液粘度极低。用冷蒸馏水短时反复冲洗，直至去除NaCl，离心(4000r/min)5min，晾干。加入重量比为8∶1的0.1％的胃蛋白酶(型号1∶3000)与乙二胺四乙酸四钠EDTA及20倍体积的蒸馏水，置于37℃左右培养箱中培养24hr，使胶原蛋白被酶解出来，用冷蒸馏水反复冲洗，加入5倍体积的0.5％H₂O₂杀酶，随之仍用冷蒸馏水反复冲洗。用丙酮沉淀除去杂质，再用冷蒸馏水反复冲洗，离心控干，加入0.5％的柠檬酸(PH＝2.4)酸溶。反复沉淀，酸溶后，用冷蒸馏水洗至中性。加入0.5％的1.00mol/L的柠檬酸(pH＝2～4)缓冲液溶胀24h，用食品搅拌机充分搅拌。过滤三次，于室温25℃下熟化5天，即得牛胶原蛋白柠檬酸溶液，胶原蛋白分子量为300000，放于冰箱中备用。

将浓度为4％，脱乙酰度96.7％的壳聚糖醋酸溶液2重量份利用滴管缓慢滴入预先配制的(浓度为2.8％，分子量约为300000)10重量份胶原蛋白柠檬酸溶液中，边滴边搅拌，使其充分与胶原蛋白混合反应。最后再加入分子量为60000的聚乙烯吡咯烷酮0.3重量份混匀，加完后再将混合液离心脱泡，即得复合牛胶原蛋白纺丝原液。

室温下测得复合牛胶原蛋白纺丝原液的相对粘度为15Pa·S，浓度为3.5％，分子量约为300000。

实施例2复合牛胶原蛋白纺丝原液的制备

切取牛跟腱，清洗、去腱膜、速冻、切片，再冷却清洗，用2％的二甲基亚砜的碱溶液处理24小时脱脂，再用转速为12000r/min的高速组织捣碎机捣碎，离心(4000r/min)20min，去掉上清液。加入NaCl(3.0M)浸泡5min，搅拌均匀，加入Tris-HCl(0.05M,pH＝7.5)浸泡30min，搅拌过夜，离心(4000r/min)20min，反复多次NaCl/Tris-HCl处理，至上清液粘度极低。用冷蒸馏水短时反复冲洗，直至去除NaCl，离心(4000r/min)5min，晾干。加入重量比为4∶1的0.4％胃蛋白酶(型号1∶3000)与乙二胺四乙酸四钠EDTA及10倍体积的蒸馏水，置于37℃左右培养箱中培养24小时，使胶原蛋白被酶解出来，用冷蒸馏水反复冲洗，加入5倍体积的0.1％H₂O₂杀酶，随之仍用冷蒸馏水反复冲洗。用丙酮沉淀除去杂质，再用冷蒸馏水反复冲洗，离心控干，加入0.5％的柠檬酸(PH＝2.4)酸溶，反复沉淀，酸溶后，用冷蒸馏水洗至中性。加入0.5％的1.00mol/L的柠檬酸(pH＝2～4)缓冲液溶胀48h，用食品搅拌机充分搅拌。过滤三次，于室温25℃下熟化8天，即得胶原蛋白柠檬酸溶液，胶原蛋白分子量为250000，放于冰箱中备用。

将浓度为3％，脱乙酰度96.7％的壳聚糖醋酸溶液5重量份利用滴管缓慢滴入所制得的(浓度为2.0％，分子量约为250000)10重量份胶原蛋白柠檬酸溶液中，边滴边搅拌，使其充分与胶原蛋白混合反应。最后再加入分子量为400的聚乙二醇0.5重量份混匀，加完后再将混合液离心脱泡，即得复合牛胶原蛋白纺丝原液。

室温下测得复合牛胶原蛋白纺丝原液的相对粘度为12Pa·S，浓度为2.8％，分子量约为250000。

实施例3复合牛胶原蛋白纺丝原液的制备

切取牛跟腱，清洗、去腱膜、速冻、切片，再冷却清洗，用5％的二甲基亚砜的碱溶液处理72小时脱脂，再用转速为12000r/min高速组织捣碎机捣碎，离心(4000r/min)30min，去掉上清液。加入NaCl(4.0M)浸泡5min，搅拌均匀，加入Tris-HCl(0.05M,pH＝7.5)浸泡30min，搅拌过夜，离心(4000r/min)20min，反复多次NaCl/Tris-HCl处理，至上清液粘度极低。用冷蒸馏水短时反复冲洗，直至去除NaCl，离心(4000r/min)5min，晾干。加入重量比为6∶1的0.3％胃蛋白酶(型号1∶3000)与乙二胺四乙酸四钠EDTA及10倍体积的蒸馏水，置于37℃左右培养箱中培养24小时，使胶原蛋白被酶解出来，用冷蒸馏水反复冲洗，加入3倍体积的0.5％H₂O₂杀酶，随之仍用冷蒸馏水反复冲洗。用丙酮沉淀除去杂质，再用冷蒸馏水反复冲洗，离心控干，加入0.5％的柠檬酸(PH＝2.4)酸溶。

反复沉淀，酸溶后，用冷蒸馏水洗至中性。加入0.5％的1.00mol/L的柠檬酸(pH＝2～4)缓冲液溶胀48h，用食品搅拌机充分搅拌。过滤三次，于室温25℃下熟化2天，即得牛胶原蛋白柠檬酸溶液，胶原蛋白分子量约为200000，放于冰箱中备用。

将浓度为5％，脱乙酰度96.7％的壳聚糖醋酸溶液3重量份利用滴管缓慢滴入所制得的(浓度为1.5％，分子量约为200000)10重量份胶原蛋白中，边滴边搅拌，使其充分与胶原蛋白混合反应。最后再加入水溶性聚乙烯醇0.1重量份混匀，加完后再将混合液离心脱泡，即得复合牛胶原蛋白纺丝原液。

室温下测得复合牛胶原蛋白纺丝原液的相对粘度为8Pa·S，浓度为2％，分子量约为200000。

实施例4复合猪胶原蛋白纺丝原液的制备

取新鲜猪皮，速冻、切片，再冷却清洗，脱脂，用新洁尔灭清洗5min，再反复用蒸馏水清洗。用5倍体积的冰蒸馏水浸泡碎猪皮4h后，将其放入高速组织捣碎机捣碎成糊状(12000r/min)。离心(4000r/min,15min)后去除上清液。用含4.0mol/L的NaCl/Tris-HCl缓冲液(0.05mol/L，pH＝7.5)1000ml对猪皮进行前处理，以除去脂肪和大量的非胶原性杂蛋白。浸泡过夜，用冰蒸馏水反复洗涤，去除NaCl。离心(4000r/min)5min，晾干。加入重量比为6∶1的0.3％胃蛋白酶(型号1∶3000)与乙二胺四乙酸四钠EDTA及10倍体积的蒸馏水，置于37℃左右培养箱中培养24小时，使胶原蛋白被酶解出来，用冷蒸馏水反复冲洗，加入3倍体积的0.5％H₂O₂杀酶，随之仍用冷蒸馏水反复冲洗。用丙酮沉淀除去杂质，再用冷蒸馏水反复冲洗，离心控干，加入0.5％的柠檬酸(PH＝2.4)酸溶。

反复酸溶、沉淀三次以上，后用0.5mol/L的醋酸溶液透析三天，每隔数小时更换一次透析液。最后蒸馏水透析直至在透析液中滴加AgNO₃溶液无沉淀产生，至此可以得到高纯度的猪胶原。置于4℃的冰箱中保存。将浓度为4％的壳聚糖柠檬酸溶液2重量份利用滴管缓慢滴入预先配制的浓度为2.8％的10重量份猪胶原蛋白醋酸溶液中，边滴边搅拌，使其充分与胶原蛋白混合反应。最后再加入聚乙烯吡咯烷酮0.3重量份混匀，加完后再将混合液离心脱泡，即得复合猪胶原蛋白纺丝原液。

室温下测得复合猪胶原蛋白纺丝原液的相对粘度为8.2Pa·S，浓度为2.1％，分子量约为200000。

实施例5中空湿法纺丝成形方法制得中空园形复合胶原神经导管

将实施例1制得的复合牛胶原蛋白纺丝原液，置入室温下的纺丝釜，通过活塞和压力传感器对釜施加压力0.8Mpa，控制填充液的流量为40ml/min，填充液采取丙酮，经过鹅型过滤器(其中过滤网为100目)到喷丝头、计量泵控制其流量为3ml/min。采用圆形的喷丝头，其长径比为100，喷丝头的长度为12cm；喷丝头内部的针芯长/喷丝头长为2/3。丝出喷丝头成形，进入丙酮为主体的凝固浴中，丙酮∶氨水∶去离子水的重量比为98∶1∶1。凝固时间为3min，采用负拉伸，出凝固浴后直接晾干，进入交联浴(交联浴组成为0.05MHCl∶0.25％戊二醛的水溶液的重量比1∶1)交联10min，用磷酸缓冲溶液进行反复漂洗，直至去除其上的戊二醛。消毒备用。所得的中空园形复合胶原神经导管截面如图1所示，测得拉伸强度为49kPa，壁上孔径为1.2um，孔隙率约为15.2％。测得的神经导管壁上的孔径如图5所示，导管所承受的应力-应变曲线如图6所示。

实施例6 中空湿法纺丝成形方法制得中空花瓣形复合胶原神经导管

将实施例2制得的复合牛胶原蛋白纺丝原液，置入室温下的纺丝釜，通过活塞和压力传感器对釜施加压力1.2Mpa，控制填充液的流量为70ml/min，填充液采取甘油，经过鹅型过滤器(其中过滤网为100目)到喷丝头，计量泵控制其流量为10ml/min。采用花瓣形喷丝头，其长径比为120，喷丝头的长度为15cm；喷丝头内部的针芯长/喷丝头长为2/3。丝出喷丝头成形，进入丙酮为主体的凝固浴中，丙酮：氨水：去离子水的重量比为96∶3∶1。凝固时间为1min，采用负拉伸，出凝固浴后直接晾干，进入交联浴(交联浴组成为0.05MHCl∶0.25％戊二醛的水溶液的重量比1∶1)交联10min，用磷酸缓冲溶液进行反复漂洗，直至去除其上的戊二醛，消毒备用。所得的中空花瓣形复合胶原神经导管截面如图2所示，测得拉伸强度为58kPa，壁上孔径约为2.2um，孔隙率约为13.5％。

实施例7中空湿法纺丝成形方法制得中空三角形复合胶原神经导管

将实施例3制得的复合牛胶原蛋白纺丝原液，置入室温下的纺丝釜，通过活塞和压力传感器对釜施加压力1.2Mpa，控制填充液的流量为80ml/min，填充液采取水溶性聚乙烯醇，经过鹅型过滤器(其中过滤网为80目)到喷丝头，计量泵控制其流量为20ml/min。采用三角形喷丝头，其长径比为140，喷丝头的长度为16cm；喷丝头内部的针芯长/喷丝头长为2/3。丝出喷丝头成形，进入丙酮为主体的凝固浴中，丙酮：氨水：去离子水的重量比为96∶3∶1。凝固时间为5min，采用负拉伸，出凝固浴后直接晾干，进入交联浴(交联浴组成为0.05MHCl∶0.25％戊二醛的水溶液的重量比1∶1)交联10min，用磷酸缓冲溶液进行反复漂洗，直至去除其上的戊二醛，消毒备用。所得的中空三角形复合胶原神经导管截面如图3所示，测得拉伸强度为60kPa，壁上孔径约为2.8um，孔隙率约为15.8％。

实施例8中空湿法纺丝成形方法制得中空海岛形复合胶原神经导管

将实施例4制得的复合猪胶原蛋白纺丝原液，置入室温下的纺丝釜，通过活塞和压力传感器对釜施加压力1.5Mpa，控制填充液的流量为100ml/min，填充液采取丙酮，经过鹅型过滤器(其中过滤网为100目)到喷丝头，计量泵控制其流量为12ml/min。采用海岛形喷丝头，其长径比为100，喷丝头的长度为12cm；喷丝头内部的针芯长/喷丝头长为2/3。丝出喷丝头成形，进入丙酮为主体的凝固浴中，丙酮∶氨水∶去离子水的重量比为95：4∶1，凝固时间为30秒，采用负拉伸，出凝固浴后直接晾干，进入交联浴(交联浴组成为0.05MHCl∶0.25％戊二醛的水溶液的重量比1∶1)交联10min，用磷酸缓冲溶液进行反复漂洗，直至去除其上的戊二醛。所得的中空海岛形复合胶原神经导管截面如图4所示。测得的拉伸强度为45kPa，壁上孔径约为1.2um，孔隙率约为11.3％。

Claims

1.一种制得可促进神经再生的复合胶原神经导管的中空湿法纺丝成形方法，其特征在于包括下列步骤：

A)制备复合胶原蛋白纺丝原液

1)将哺乳动物的皮肤或结缔组织用0.8-5％二甲基亚砜的碱溶液处理24-72小时进行脱脂；

2)用2.0-4.5M的NaCl溶液浸泡，再用0.05M，PH＝7.5的Tris-HCl浸泡，除去非胶原蛋白；

3)加入重量比为4-8∶1的0.1-0.4％的胃蛋白酶与乙二胺四乙酸四钠及它们5-20倍体积的蒸馏水，置于37℃培养箱中培养24小时，胶原蛋白被酶解出来；

4)加入0.5-1.5％柠檬酸溶液溶胀24-48小时，置于室温下熟化1-8天，即得胶原蛋白；

5)将浓度为1.5-2.8％的胶原蛋白酸液10重量份，浓度为3-5％壳聚糖酸液1-5重量份及致孔剂0.1-0.5重量份混合后，离心脱泡，即得复合胶原蛋白纺丝原液，所述致孔剂选自聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇或水溶性聚乙烯醇，

B)中空湿法纺丝成形制得复合胶原神经导管

将复合胶原蛋白纺丝原液置入中空湿法纺丝装置中的纺丝釜，对釜施加压力0.8～1.5Mpa，控制填充液的流量为20～100ml/min，纺丝原液通过鹅型过滤器到喷丝头，计量泵控制其流量为2～20ml/min，喷丝头的长径比为80～160，喷丝头的长度至少为10cm，喷丝头内部的针芯长度与喷丝头长度之比为1/3～3/4，丝出喷丝头成形，进入凝固浴中，组成凝固浴的丙酮，氨水与去离子水的重量比为95～98∶4～1∶1，凝固时间为10s～5min，再进入交联浴，交联浴的组成为0.05MHCl∶0.25％戊二醛的水溶液的重量比1∶1，交联10min，即得复合胶原神经导管。

2.如权利要求1所述的中空湿法纺丝成形方法，其特征在于所述胶原蛋白酸液是选自胶原蛋白柠檬酸溶液或胶原蛋白醋酸溶液。

3.如权利要求1所述的中空湿法纺丝成形方法，其特征在于所述壳聚糖酸液是选自壳聚糖柠檬酸溶液或壳聚糖醋酸溶液。

4.如权利要求1所述的中空湿法纺丝成形方法，其特征在于所述哺乳动物的皮肤或结缔组织选自牛皮、猪皮、牛筋或牛跟腱。

5.如权利要求1所述的中空湿法纺丝成形方法，其特征在于所述聚乙烯吡咯烷酮的分子量为3×10⁴-9×10⁴，聚乙二醇的分子量为4×10²-2×10⁴。

6.如权利要求1所述的中空湿法纺丝成形方法，其特征在于所述填充液是选自丙酮，甘油或水溶性聚乙烯醇。

7.如权利要求1所述的中空湿法纺丝成形方法，其特征在于所述喷丝头选自园形喷丝头、花瓣形喷丝头、三角形喷丝头或海岛形喷丝头。

8.一种可促进神经再生的复合胶原神经导管，其特征在于它是通过权利要求1-7其中任一项所述的方法获得的。