CN100366621C - 博落回总生物碱盐及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及新型博落回总生物碱盐的应用及制备工艺,本发明博落回总生物碱有机酸盐及硼酸盐的含量为:50.0%~90%,以血根碱和白屈菜红碱的有机酸盐及硼酸盐重量计。本发明的博落回总生物碱有机酸盐及硼酸具有抗菌、抗炎活性,而且活性明显优于其硫酸盐及盐酸盐。本发明涉及含有此博落回总生物碱有机酸盐及硼酸盐的药品及日化产品在人及动物的抗菌、抗炎方向的应用。
Description
技术领域
本发明涉及新的博落回总生物碱有机酸盐及硼酸盐及应用、制备方法。
背景技术
博落回(Macleaya cordata(Willd.)R.Br.),又名号筒草、号筒杆、泡桐杆、勃勒回、山大筒、黄薄荷、黄婆娘、三钱三、野麻子、吹火筒,是罂粟科博落回属多年生高大草本,使用博落回治疗疥癣、疔毒及杀虫灭蛆等在我国有悠久的历史。最早记载博落回的本草文献为《本草拾遗》。现统一命名为博落回,广泛用于医药、生物农药、兽医兽药、精细化工产品原料。
博落回为多年生高大草本,高1~2.5m,全体带有白粉,折断后有黄汁流出。根粗大,橘红色。茎圆柱形,直立,中空,绿色,有时带红紫色。单叶互生,阔卵形,裂片有不规则波状齿,上面绿色光滑,下面白色,具密细毛。花白色,蒴果下垂,倒卵状长椭圆形,扁平,红色。种子4~6粒。花期6~7月,果期8~11月。生于山坡,丘陵或低山草地,林边,路旁等处。分布长江流域中、下游各省。
博落回是生长于长江中下游地区的民间习用草药,药用始载于《本草拾遗》,陈藏器谓:“博落回,生江南山谷,茎叶如蓖麻,茎中空,吹之作声,如博落回,折之有黄汁,药人立死,不可入口也”。又谓:“主恶疮瘿根,瘤赘瘜肉,白癜风,蛊毒”。《本草纲目》列于蓖麻附录项下,均指此种植物。该药味苦,性寒。有消肿、解毒、杀虫的功能。传统用于用于疔毒脓肿,恶疮溃疡,烫伤、顽癣等。
博落回各部位均可使用,报道中多以茎杆和根的使用为多,果实的研究及使用报道则较为少见,本专利以博落回果实的研究和应用为主,是对博落回使用的有益探索与创新。
博落回中主要含有血根碱(Sanguinarine)、白屈菜红碱(Chelerythrine)、博落回碱(Bocconine)、博落回宁碱(Bocconoline)、甲氧基白屈菜红碱(Chelilutine)、二氢血根碱(dihydrosanguinarine)、二氢白屈菜红碱(Dihydrochelerythrine)等苯并菲啶型生物碱及原阿片碱(Protopine),α-别隐品碱(α-Allocryptopine)、β-别隐品碱(β-Allocryptopine)等原托品型生物碱。果实中生物碱含量较全草要高,可达3%以上,又以血根碱和白屈菜红碱为主,而毒性成分原阿片碱在果实中含量则较少。博落回茎中则以二氢血根碱、二氢白屈菜红碱、6-甲氧基二氢白屈菜红碱等为主,6-甲氧基二氢血根碱则为茎中发现的微量成分。
现代药理研究表明博落回具有明显的抗菌、杀虫、改善肝功能、提高免疫力及抗肿瘤等作用。
目前,已有US 4517172、US4590061、US4683133等美国专利涉及将血根提取物、博落回提取物等用于牙菌斑显示剂及牙周病等口腔疾病的治疗。另外,美国专利US 4145412及US 4689216则描述了含血根提取物、博落回提取物或其有效成分应用于牙膏的情况。日本专利JP62185026描述了博落回提取物及其类似物用于治疗皮肤瘙痒的方法;JP62093237则描述了博落回用于治疗发癣菌病(Trichophytosis)的方法;JP63141916、JP63072617则是将博落回应用于头发的滋养方面。
国内目前也有一些使用博落回或其提取物的专利,在医药方面的应用主要涉及以下一些方向。CN1470513和CN1457780公开了将博落回应用于抗癌方向的方法;CN1425460及CN1199640涉及将博落回应用于皮肤护理方面;CN1065394涉及将博回应用于漱口水;CN1060215则将博落回应用于治疗肝炎。
目前,博落回提取物,主要成分为血根碱氯化物和白屈菜红碱氯化物,已在美国环保署获得登记,登记的主要活性成分为氯化血根碱和氯化白屈菜红碱,登记类型为杀菌剂(Fungicide)。国内博落回植物农药也已获得登记,登记的有效成分为血根碱,登记类型为杀虫剂/杀菌剂。
博落回生物碱虽然有明显的生物活性,但其溶解性很低,而且在碱性条件下易发生变化,因此,博落回生物碱很难直接发挥其诸多生物活性,所以现在市场上出现的产品多以其盐酸盐或硫酸盐应用于产品中。但是以博落回总生物碱的盐酸盐或硫酸盐来替代博落回总生物碱是否合理,能否提高或保证博落回总生物碱的生物活性,未在已有的有关博落回的应用和研究文献中有所报道,缺乏有效的研究和论证,是个需要深入探讨的问题。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种具有更好的生物活性,消炎,杀菌效果,可定量的博落回总生物碱有机酸盐及硼酸盐。
本发明的另一目的是提供上述博落回总生物碱有机酸盐及硼酸盐的制备方法。
本发明还一目的旨在提供上述博落回总生物碱有机酸盐及硼酸盐的应用。
一些有机酸具有很广泛的生理活性,比如水杨酸或阿斯匹林,不但具有抗菌消炎、解热镇痛的作用,还具有免疫调节,抑制肿瘤的活性,但由于酸性强,也导致此类物质具有一定的胃肠道反应和对肝、肾等器官的不良作用,从而限制了应用。对此类物质,一般采用结构修饰的方法来降低它们的副作用,主要方向就是减少化合物的酸性,比如与胺类化合物脱水生成酰胺或者将羧基改造为其它基团。
硼酸与水杨酸、苯甲酸、马来酸、酒石酸同是可用于消毒、抑菌的活性物质,具有明显的抑菌、抗炎作用,而且硼酸也不是典型的矿酸,所以本发明也涉及到博落回总生物碱硼酸盐的制备与应用研究。但现有技术中均是将博落回总生物碱、及硼酸与水杨酸、苯甲酸、马来酸、酒石酸等其药理及相关的作用都是分别进行研究。
本发明的发明人则是突破上述研究惯例,用一种新的角度去考虑,以博落回总生物碱为工具,通过与经发明人多次研究试验后才决定采用的硼酸与水杨酸、苯甲酸、马来酸、酒石酸这些酸类物质组合成盐的方式来达到降低其酸性并保持或提高其活性而增加其使用价值的目的。因此本发明通过让此类有机酸及硼酸与博落回总生物碱成盐,一方面对于博落回总生物碱而言可在解决其溶解性的同时有效保证甚至提高其生物活性,另一方面对于所选有机酸及硼酸而言,又可降低其酸性,提高其使用价值。
由于本发明所涉及的有机酸及硼酸与博落回总生物碱所形成的盐属于弱酸弱碱盐,所以成盐的条件和性质与以往文献中的盐酸盐或硫酸盐有明显区别。本发明对此进行了深入研究,提出了制备博落回有机酸盐及硼酸盐的新工艺。
最终,所形成的博落回总生物碱有机酸盐及硼酸盐可以更小的剂量和更好的活性,也就是更安全合理的形式得到应用。因此,本发明是对博落回生物碱盐应用形式和机理的重要尝试和突破。
本发明的目的是通过下述方式实现的:
本发明所提供的博落回总生物碱盐为博落回总生物碱水杨酸盐或博落回总生物碱苯甲酸盐或博落回总生物碱马来酸盐或博落回总生物碱酒石酸盐或博落回总生物碱硼酸盐;
上述博落回总生物碱盐中的血根碱和白屈菜红碱盐重量含量为:50.0%~90%。
本发明第一次明确地提供博落回总生物碱有机酸(水杨酸、苯甲酸、马来酸、酒石酸)盐及硼酸盐,产品设计思路科学合理,质量可控,是一种新型的植物精细化工产品,且本发明博落回总生物碱有机酸盐及硼酸盐可以很好地制备出来。
本发明的另一目的是通过下述方式实现的:
本发明所提供的博落回总生物碱有机酸盐及硼酸盐的制备方法为:
方法一:将博落回总生物碱溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等极性或中等极性溶剂中,搅拌下加入有机酸,薄层监控血根碱和白屈菜红碱反应完全。此方法涉及的有机酸包括水杨酸、苯甲酸、酒石酸及马来酸。
方法二:将有机酸溶解于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等极性或中等极性溶剂中,搅拌下加入博落回总生物碱,薄层监控血根碱和白屈菜红碱反应完全。此方法涉及的有机酸包括水杨酸、苯甲酸、酒石酸及马来酸。
方法三:将博落回总生物碱溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等极性或中等极性溶剂中,将有机酸溶于相应的甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等极性或中等极性溶剂中,在搅拌下将二者混合,薄层监控血根碱和白屈菜红碱反应完全。此方法涉及的有机酸包括水杨酸、苯甲酸、酒石酸及马来酸。
方法四:将有机酸置于水中,加热到60~80℃,缓慢加入生物碱,薄层监控血根碱和白屈菜红碱至反应完全。此方法涉及的有机酸包括水杨酸、苯甲酸、酒石酸及马来酸。
方法五:博落回总生物碱硼酸盐的制备,将博落回总碱溶于甲醇或乙醇中,向溶液中加入定量的饱和硼酸溶液,收集沉淀即得博落回总生物碱硼酸盐。
所用薄层方法:硅胶G(青岛海洋化工厂)制备层析板,不加粘合剂;以苯∶环己烷(9∶1)为展开剂,碘化铋钾显色,白屈菜红碱的Rf为0.4;血根碱的Rf为0.6。
所制备的博落回总生物碱有机酸盐及硼酸盐中的血根碱和白屈菜红碱的有机酸盐或硼酸盐重量含量范围为50~90%,高效液相方法检测。上述制备的博落回总生物碱有机酸盐和博落回总生物碱硼酸盐及其应用未见任何文献报道。
本发明还一目的为:将含有上述博落回总生物碱有机酸盐的产品可作为具有抗菌、消炎作用的药品或日用化学品;用于动物有关的抗菌、抗炎作用的兽药或饲料添加剂;用于动物有关的消毒用品或日用化学品。
本发明的博落回总生物碱有机酸盐可应用于多种剂型的产品,包括粉剂、酊剂、洗液及喷剂等。
本发明所使用的原料可来自博落回的果荚、茎杆及根;血水草的根。
本发明通过使产品的特征明确化,从而使生产建立在较好的量化控制基础上,摆脱了对原料产地的依赖而使原料的来源得以扩大,从而在产品质量可控的前提下最终降低生产成本,使本发明的产品的工业化建立在较好较充足的原料基础上,是传统中药生产模式的重要突破。本发明以博落回生物碱的有机酸盐及硼酸盐为产品应用形式,充分结合了博落回总生物碱的生物活性及所用有机酸和硼酸的活性特点,并且改善了产品的使用性能,因此也提高了博落回的用药水平,而且所得产品的抗菌、抗炎作用明显。
为了更好理解本发明实质,下面以更具体的试验例说明。
试验:本发明制备的博落回总生物碱有机酸盐及硼酸盐的抗菌、抗炎作用。为方便比较,所有用于体外抗菌、抗炎试验的供试品的含量均为60±3%,以博落回总生物碱盐的重量计。
一、体外抗真菌试验
1、博落回总生物碱水杨酸盐
供试品:博落回总生物碱水杨酸盐(批号:040518,长沙世唯科技有限公司提供),试验前制备成2mg/ml(以提取物量计);酮康唑(批号040112,沈阳药科大学合成研究室提供),制备成1mg/ml溶液。
菌株:7种菌株均购自中国医学科学院南京皮肤病研究所。
体外抗菌试验:取白色念珠菌20~25℃培养24h的第二代新鲜培养物,用氯化钠注射液稀释;絮状表皮癣菌、石膏样毛癣菌和红色毛癣菌均用20~25℃培养7天的斜面培养物,用氯化钠注射液将培养物洗下,振摇、过滤、镜检计孢子数、稀释,使菌液终浓度为1×106CFU/ml。
金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及大肠杆菌接种于肉汤培养基中传5代,取纯种再接种于琼脂培养基,置37℃培养24h,取菌苔制成相应试验菌悬液,用标准比浊管调整细菌浓度为1×106CFU/ml备用。
以1mg/ml酮康唑做为阳性对照,采用试管二倍稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),见表二。
表二、博落回总生物碱水杨酸盐体外抗菌作用
菌种 | MIC(μg/ml) | MBC(μg/ml) |
白色念珠菌絮状表皮癣菌石膏样毛癣菌红色毛癣菌金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌大肠杆菌 | 12017036021014030110 | 27238777044031080236 |
2、博落回总生物碱苯甲酸盐
供试品:博落回总生物碱苯甲酸盐(批号:040612,长沙世唯科技有限公司提供),试验前制备成2mg/ml(以提取物量计)。
抗菌测试实验方法如例1,结果如表三所示。
表三、博落回总生物碱苯甲酸盐体外抗菌作用
菌种 | MIC | MBC |
白色念珠菌絮状表皮癣菌石膏样毛癣菌红色毛癣菌金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌大肠杆菌 | 16032021024015040170 | 380660460500350100381 |
3、博落回总生物碱酒石酸盐
供试品:博落回总生物碱酒石酸盐(批号:040619,长沙世唯科技有限公司提供),试验前制备成2mg/ml(以提取物量计)。
抗菌测试实验方法如例1,结果如表四所示。
表四、博落回总生物碱酒石酸盐体外抗菌作用
菌种 | MIC | MBC |
白色念珠菌絮状表皮癣菌石膏样毛癣菌红色毛癣菌金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌大肠杆菌 | 230320290170130122170 | 492660710374294253376 |
4、博落回总生物碱马来酸盐
供试品:博落回总生物碱马来酸盐(批号:040702,长沙世唯科技有限公司提供),试验前制备成2mg/ml(以提取物量计)。
抗菌测试实验方法如例1,结果如表五所示。
表五、博落回总生物碱马来酸盐体外抗菌作用
菌种 | MIC | MBC |
白色念珠菌絮状表皮癣菌石膏样毛癣菌红色毛癣菌金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌大肠杆菌 | 201220310130143118150 | 411468636302319341334 |
5、博落回总生物碱硼酸盐
供试品:博落回总生物碱硼酸盐(批号:040704,长沙世唯科技有限公司提供),试验前制备成2mg/ml(以提取物量计)。
抗菌测试实验方法如例1,结果如表六所示。
表六、博落回总生物碱硼酸盐体外抗菌作用
菌种 | MIC | MBC |
白色念珠菌絮状表皮癣菌石膏样毛癣菌红色毛癣菌金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌大肠杆菌 | 1122203611211763493 | 23456277524437882231 |
6、博落回总生物碱硫酸盐
供试品:博落回总生物碱硫酸盐(批号:040704,湖南太阳植物有限公司(湖南祁东县归阳镇前进街205号)提供),试验前制备成2mg/ml(以提取物量计)。
抗菌测试实验方法如例1,结果如表七所示。
表七、博落回总生物碱硫酸盐体外抗菌作用
菌种 | MIC | MBC |
白色念珠菌絮状表皮癣菌石膏样毛癣菌红色毛癣菌金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌大肠杆菌 | 440270322147243146326 | 918576715325528321690 |
7、博落回总生物碱盐酸盐
供试品:博落回总生物碱盐酸盐(批号:040514,长沙世唯科技有限公司提供),试验前制备成2mg/ml(以提取物量计)。
抗菌测试实验方法如例1,结果如表七所示。
表八、博落回总生物碱盐酸盐体外抗菌作用
菌种 | MIC | MBC |
白色念珠菌絮状表皮癣菌石膏样毛癣菌红色毛癣菌金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌大肠杆菌 | 365220272237313106281 | 778476605489658221615 |
结论:体外抗菌试验表明,本发明制备的博落回总生物碱有机酸(水杨酸、苯甲酸、马来酸、酒石酸)盐及硼酸盐有明显的抗菌活性。与博落回总生物碱的盐酸盐及硫酸盐相比,本发明制备的有机酸盐及硼酸盐有明显更好的抗菌活性。
二、抗炎试验
1、博落回总生物碱水杨酸盐的抗炎活性
动物:小鼠,昆明种;大鼠,Wistar品系,均由湖南中医学院实验动物中心提供。
供试品:博落回总生物碱水杨酸盐(批号:040518,长沙世唯科技有限公司提供)。
氢化可地松:河南利华制药有限公司生产,批号:031204。
以上使用的药物均室温保存,实验时以生理盐水配制成适当浓度药液使用。
对二甲苯致小鼠耳廓肿胀反应的影响。昆明种小鼠,雄性,26~30g,按体重分层,随机分为空白对照、氢化可地松、博落回总生物碱水杨酸盐大中小剂量5组,每组12只。各组小鼠按20ml/kg容积灌胃给药,间隔12h给药3次。末次给药后60min以二甲苯接触右耳5s,15min脱颈椎处死小鼠,用直径6mm的打孔器将双耳同部位等面积切下,称取左右耳片重量,计算耳廓肿胀率(%)和肿胀抑制率(%)。实验结果见表九。
表九水杨酸盐对二甲苯致小鼠耳廓急性炎症的抑制作用(x±s)
组别 | 剂量(mg/kg) | 肿胀率(%) | 肿胀抑制率(%) |
空白对照博落回总生物碱水杨酸盐博落回总生物碱水杨酸盐博落回总生物碱水杨酸盐氢化可地松 | -5010020020 | 110.3±31.275.8±25.4<sup>*</sup>54.3±21.6<sup>**</sup>30.4±26.1<sup>**</sup>38.5±21.3<sup>**</sup> | -31.350.172.465.1 |
注:1.博落回总生物碱水杨酸盐按纯品计算,下同;2.组间比较t检验,与空白对照组比较*P<0.05,**P<0.01,下同。
对蛋清致大鼠足跖肿胀反应的影响。Wistar大鼠,180~220g,雌雄各半,按体重分层,随机分为空白对照、氢化可地松、博落回总生物碱水杨酸盐大中小剂量5组,每组12只。各组大鼠按10ml/kg容积灌胃给药,分别给予生理盐水、氢化可地松20mg/kg、博落回总生物碱水杨酸盐40、80、160mg/kg,间隔12h给药3次。末次给药后30min,以新鲜蛋清0.1ml注射于大鼠左后足跖皮下致炎。容积法测定大鼠致炎足外踝突出处平面以下部位致炎前和致炎后0.5、1.0、2.0、4.0和6.0h的容积,计算大鼠足跖肿胀值。实验结果见表十。
表十水杨酸盐对蛋清致大鼠足跖肿胀值的影响(x±s)
组别 | 剂量(mg/kg) | 0.5h | 1h | 2h | 4h | 6h |
空白对照 | 0.77±0.18 | 0.90±0.21 | 0.83±0.20 | 0.61±0.22 | 0.42±0.15 | |
博落回总生物碱水杨酸盐 | 50 | 0.69±0.18 | 0.66±0.17<sup>*</sup> | 0.60±0.13<sup>*</sup> | 0.45±0.14 | 0.29±0.13 |
博落回总生物碱水杨酸盐 | 100 | 0.54±0.16<sup>*</sup> | 0.58±0.12<sup>**</sup> | 0.53±0.10<sup>**</sup> | 0.39±0.11<sup>*</sup> | 0.18±0.11<sup>**</sup> |
博落回总生物碱水杨酸盐 | 200 | 0.45±0.16<sup>**</sup> | 0.43±0.11<sup>**</sup> | 0.39±0.09<sup>**</sup> | 0.29±0.08<sup>**</sup> | 0.13±0.12<sup>**</sup> |
氢化可地松 | 20 | 0.52±017<sup>**</sup> | 0.53±0.13<sup>**</sup> | 0.44±0.08<sup>**</sup> | 0.33±0.09<sup>**</sup> | 0.16±0.12<sup>**</sup> |
实验结果表明,博落回总生物碱水杨酸盐对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、蛋清致大鼠足跖肿胀有较明显的抑制作用。
2、博落回总生物碱苯甲酸盐的抗炎活性
供试品:博落回总生物碱苯甲酸盐(批号:040612,长沙世唯科技有限公司提供)
表十一苯甲酸盐对二甲苯致小鼠耳廓急性炎症的抑制作用(x±s)
组别 | 剂量(mg/kg) | 肿胀率(%) | 肿胀抑制率(%) |
空白对照博落回总生物碱苯甲酸盐博落回总生物碱苯甲酸盐博落回总生物碱苯甲酸盐氢化可地松 | -5010020020 | 110.3±31.281.8±25.4<sup>*</sup>61.3±21.6<sup>**</sup>39.4±26.1<sup>**</sup>38.5±21.3<sup>**</sup> | -25.844.464.365.1 |
注:1.博落回总生物碱苯甲酸盐按纯品计算,下同;2.组间比较t检验,与空白对照组比较*P<0.05,**P<0.01,下同。
表十二苯甲酸盐对蛋清致大鼠足跖肿胀值的影响(x±s)
组别 | 剂量(mg/kg) | 0.5h | 1h | 2h | 4h | 6h |
空白对照 | 0.77±0.18 | 0.90±0.21 | 0.83±0.20 | 0.61±0.22 | 0.42±0.15 | |
博落回总生物碱苯甲酸盐 | 50 | 0.75±0.18 | 0.72±0.17<sup>*</sup> | 0.66±013<sup>*</sup> | 0.51±0.14 | 0.35±0.13 |
博落回总生物碱苯甲酸盐 | 100 | 0.60±0.16<sup>*</sup> | 065±0.12<sup>**</sup> | 0.58±0.10<sup>**</sup> | 0.44±0.11<sup>*</sup> | 0.25±0.11<sup>**</sup> |
博落回总生物碱苯甲酸盐 | 200 | 0.52±0.16<sup>**</sup> | 0.49±0.11<sup>**</sup> | 0.44±0.09<sup>**</sup> | 0.34±0.08<sup>**</sup> | 0.18±0.12<sup>**</sup> |
氢化可地松 | 20 | 0.52±0.17<sup>**</sup> | 0.53±0.13<sup>**</sup> | 0.44±0.08<sup>**</sup> | 0.33±0.09<sup>**</sup> | 0.16±0.12<sup>**</sup> |
实验结果表明,博落回总生物碱苯甲酸盐对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、蛋清致大鼠足跖肿胀有较明显的抑制作用。
3、博落回总生物碱酒石酸盐的抗炎活性
供试品:博落回总生物碱酒石酸盐(批号:040619,长沙世唯科技有限公司提供)
表十三酒石酸盐对二甲苯致小鼠耳廓急生炎症的抑制作用(x±s)
组别 | 剂量(mg/kg) | 肿胀率(%) | 肿胀抑制率(%) |
空白对照博落回总生物碱酒石酸盐博落回总生物碱酒石酸盐博落回总生物碱酒石酸盐氢化可地松 | -5010020020 | 110.3±31.279.8±25.4<sup>*</sup>583±21.6<sup>**</sup>37.4±26.1<sup>**</sup>38.5±21.3<sup>**</sup> | -27.747.166.165.1 |
注:1.博落回总生物碱酒石酸盐按纯品计算,下同;2.组间比较t检验,与空白对照组比较*P<0.05,**P<0.01,下同。
表十四酒石酸盐对蛋清致大鼠足跖肿胀值的影响(x±s)
组别 | 剂量(mg/kg) | 0.5h | 1h | 2h | 4h | 6h |
空白对照 | 0.77±0.18 | 0.90±0.21 | 0.83±0.20 | 0.61±0.22 | 0.42±0.15 | |
博落回总生物碱酒石酸盐 | 50 | 0.79±0.18 | 0.73±0.17<sup>*</sup> | 0.69±0.13<sup>*</sup> | 0.52±0.14 | 0.37±0.13 |
博落回总生物碱酒石酸盐 | 100 | 0.64±0.16<sup>*</sup> | 0.68±0.12<sup>**</sup> | 0.60±0.10<sup>**</sup> | 0.45±0.11<sup>*</sup> | 0.26±0.11<sup>**</sup> |
博落回总生物碱酒石酸盐 | 200 | 0.54±0.16<sup>**</sup> | 0.50±0.11<sup>**</sup> | 0.45±0.09<sup>**</sup> | 0.33±0.08<sup>**</sup> | 0.21±0.12<sup>**</sup> |
氢化可地松 | 20 | 0.52±0.17<sup>**</sup> | 0.53±0.13<sup>**</sup> | 0.44±0.08<sup>**</sup> | 0.33±0.09<sup>**</sup> | 0.16±0.12<sup>**</sup> |
实验结果表明,博落回总生物碱酒石酸盐对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、蛋清致大鼠足跖肿胀有较明显的抑制作用。
4、博落回总生物碱马来酸盐的抗炎活性
供试品:博落回总生物碱马来酸盐(批号:040702,长沙世唯科技有限公司提供)
表十五马来酸盐对二甲苯致小鼠耳廓急性炎症的抑制作用(x±s)
组别 | 剂量(mg/kg) | 肿胀率(%) | 肿胀抑制率(%) |
空白对照博落回总生物碱马来酸盐博落回总生物碱马来酸盐博落回总生物碱马来酸盐氢化可地松 | -5010020020 | 110.3±31.284.8±25.4<sup>*</sup>62.3±21.6<sup>**</sup>44.4±26.1<sup>**</sup>38.5±21.3<sup>**</sup> | -23.143.559.765.1 |
表十六马来酸盐对蛋清致大鼠足跖肿胀值的影响(x±s)
组别 | 剂量(mg/kg) | 0.5h | 1h | 2h | 4h | 6h |
空白对照 | 0.77±0.18 | 0.90±0.21 | 0.83±0.20 | 0.61±0.22 | 0.42±0.15 | |
博落回总生物碱马来酸盐 | 50 | 0.74±0.18 | 0.71±0.17<sup>*</sup> | 0.65±0.13<sup>*</sup> | 0.50±0.14 | 0.34±0.13 |
博落回总生物碱马来酸盐 | 100 | 0.59±0.16<sup>*</sup> | 0.63±0.12<sup>**</sup> | 0.58±0.10<sup>**</sup> | 0.44±0.11<sup>*</sup> | 0.23±0.11<sup>**</sup> |
博落回总生物碱马来酸盐 | 200 | 0.50±0.16<sup>**</sup> | 0.49±0.11<sup>**</sup> | 0.44±0.09<sup>**</sup> | 0.34±0.08<sup>**</sup> | 0.18±0.12<sup>**</sup> |
氢化可地松 | 20 | 0.52±0.17<sup>**</sup> | 0.53±0.13<sup>**</sup> | 0.44±0.08<sup>**</sup> | 0.33±0.09<sup>**</sup> | 0.16±0.12<sup>**</sup> |
注:1.博落回总生物碱马来酸盐按纯品计算,下同;2.组间比较t检验,与空白对照组比较*P<0.05,**P<0.01,下同。
实验结果表明,博落回总生物碱马来酸盐对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、蛋清致大鼠足跖肿胀有较明显的抑制作用。
5、博落回总生物碱硼酸盐的抗炎活性
供试品:博落回总生物碱硼酸盐(批号:040704,长沙世唯科技有限公司提供)
表十七硼酸盐对二甲苯致小鼠耳廓急性炎症的抑制作用(x±s)
组别 | 剂量(mg/kg) | 肿胀率(%) | 肿胀抑制率(%) |
空白对照博落回总生物碱硼酸盐博落回总生物碱硼酸盐博落回总生物碱硼酸盐氢化可地松 | -5010020020 | 110.3±31.284.7±25.4<sup>*</sup>60.1±21.6<sup>**</sup>42.2±26.1<sup>**</sup>38.5±21.3<sup>**</sup> | -23.245.561.765.1 |
注:1.博落回总生物碱硼酸盐按纯品计算,下同;2.组间比较t检验,与空白对照组比较*P<0.05,**P<0.01,下同。
表十八硼酸盐对蛋清致大鼠足跖肿胀值的影响(x±s)
组别 | 剂量(mg/kg) | 0.5h | 1h | 2h | 4h | 6h |
空白对照 | 0.77±0.18 | 0.90±0.21 | 0.83±0.20 | 0.61±0.22 | 0.42±0.15 | |
博落回总生物碱硼酸盐 | 50 | 0.72±0.18 | 0.70±0.17<sup>*</sup> | 0.64±0.13<sup>*</sup> | 0.48±0.14 | 0.32±0.13 |
博落回总生物碱硼酸盐 | 100 | 0.60±0.16<sup>*</sup> | 0.61±0.12<sup>**</sup> | 0.56±0.10<sup>**</sup> | 0.41±0.11<sup>*</sup> | 0.21±0.11<sup>**</sup> |
博落回总生物碱 | 200 | 0.48±0.16<sup>**</sup> | 0.46±0.11<sup>**</sup> | 0.42±0.09<sup>**</sup> | 0.31±0.08<sup>**</sup> | 0.17±0.12<sup>**</sup> |
硼酸盐 | ||||||
氢化可地松 | 20 | 0.52±0.17<sup>**</sup> | 0.53±0.13<sup>**</sup> | 0.44±0.08<sup>**</sup> | 0.33±0.09<sup>**</sup> | 0.16±0.12<sup>**</sup> |
实验结果表明,博落回总生物碱硼酸盐对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、蛋清致大鼠足跖肿胀有较明显的抑制作用。
6、博落回总生物碱硫酸盐的抗炎活性
供试品:博落回总生物碱硫酸盐(批号:040704,湖南太阳植物有限公司(湖南祁东县归阳镇前进街205号)提供)
表十九硫酸盐对二甲苯致小鼠耳廓急性炎症的抑制作用(x±s)
组别 | 剂量(mg/kg) | 肿胀率(%) | 肿胀抑制率(%) |
空白对照博落回总生物碱硫酸盐博落回总生物碱硫酸盐博落回总生物碱硫酸盐氢化可地松 | -5010020020 | 110.3±31.288.7±25.4<sup>*</sup>66.4±20.6<sup>**</sup>47.2±26.1<sup>**</sup>38.5±21.3<sup>**</sup> | -19.639.857.265.1 |
注:1.博落回总生物碱硫酸盐按纯品计算,下同;2.组间比较t检验,与空白对照组比较*P<0.05,**P<0.01,下同。
表二十硫酸盐对蛋清致大鼠足跖肿胀值的影响(x±s)
组别 | 剂量(mg/kg) | 0.5h | 1h | 2h | 4h | 6h |
空白对照 | 0.77±0.18 | 0.90±0.21 | 0.83±0.20 | 0.61±0.22 | 0.42±0.15 | |
博落回总生物碱硫酸盐 | 50 | 0.78±0.11<sup>*</sup> | 0.72±0.17 | 0.64±0.13 | 0.57±0.14<sup>*</sup> | 0.42±0.13 |
博落回总生物碱硫酸盐 | 100 | 0.71±0.16 | 0.66±0.12<sup>**</sup> | 0.59±0.10<sup>*</sup> | 0.48±0.13<sup>*</sup> | 0.36±0.15<sup>**</sup> |
博落回总生物碱硫酸盐 | 200 | 0.67±0.16<sup>*</sup> | 0.59±0.18<sup>**</sup> | 0.50±0.11<sup>*</sup> | 0.42±0.09<sup>**</sup> | 0.30±0.07<sup>**</sup> |
氢化可地松 | 20 | 0.52±0.17<sup>**</sup> | 0.53±0.13<sup>**</sup> | 0.44±0.08<sup>**</sup> | 0.33±0.09<sup>**</sup> | 0.16±0.12<sup>**</sup> |
7、博落回总生物碱盐酸盐的抗炎活性
供试品:博落回总生物碱盐酸盐(批号:040514,长沙世唯科技有限公司提供)
表二十一盐酸盐对二甲苯致小鼠耳廓急性炎症的抑制作用(x±s)
组别 | 剂量(mg/kg) | 肿胀率(%) | 肿胀抑制率(%) |
空白对照博落回总生物碱盐酸盐博落回总生物碱盐酸盐 | -50100 | 110.3±31.290.1±23.4<sup>*</sup>71.8±21.6<sup>**</sup> | -18.334.9 |
博落回总生物碱盐酸盐氢化可地松 | 20020 | 52.1±25.7<sup>**</sup>38.5±21.3<sup>**</sup> | 52.765.1 |
表二十二盐酸盐对蛋清致大鼠足跖肿胀值的影响(x±s)
组别 | 剂量(mg/kg) | 0.5h | 1h | 2h | 4h | 6h |
空白对照 | 0.77±0.18 | 0.90±0.21 | 0.83±0.20 | 0.61±0.22 | 0.42±0.15 | |
博落回总生物碱盐酸盐 | 50 | 0.71±0.12 | 0.77±0.14 | 0.65±0.11<sup>*</sup> | 0.52±0.14<sup>*</sup> | 0.41±0.13 |
博落回总生物碱盐酸盐 | 100 | 0.68±0.16 | 0.61±0.12<sup>*</sup> | 0.54±0.10<sup>*</sup> | 0.45±0.13<sup>**</sup> | 0.34±0.15<sup>**</sup> |
博落回总生物碱盐酸盐 | 200 | 0.61±0.11 | 0.54±0.13<sup>**</sup> | 0.45±0.11<sup>**</sup> | 0.35±0.09<sup>**</sup> | 0.27±0.07<sup>**</sup> |
氢化可地松 | 20 | 0.52±0.17<sup>**</sup> | 0.53±0.13<sup>**</sup> | 0.44±0.08<sup>**</sup> | 0.33±0.09<sup>**</sup> | 0.16±0.12<sup>**</sup> |
注:1.博落回总生物碱盐酸盐按纯品计算,下同;2.组间比较t检验,与空白对照组比较*P<0.05,**P<0.01,下同。
结论:抗炎试验表明,本发明制备的博落回总生物碱有机酸盐(水杨酸、苯甲酸、马来酸、酒石酸)及硼酸盐具有明显的抗炎活性。与博落回总生物碱盐酸盐及硫酸盐相比,本发明制备的有机酸盐及硼酸盐有明显更好的抗炎活性。
具体实施方式
本实验所用博落回总生物碱购自湖南太阳植物有限公司
实施例1
将批号为040713的博落回总生物碱10g(其中约含4g血根碱,MW349.39;2g的白屈菜红碱,MW365.40)溶于乙醇中,搅拌下加入水杨酸(MW138.21)1.7g,薄层监控,根据反应情况补加少量水杨酸,直至血根碱和白屈菜红碱成盐反应完全。薄层方法:硅胶G(青岛海洋化工厂)制备层析板,不加粘合剂;以苯∶环己烷(9∶1)为展开剂,碘化铋钾显色,白屈菜红碱的Rf为0.4;血根碱的Rf为0.6。待成盐反应完全,回收乙醇,干燥得博落回总生物碱水杨酸盐,收率为77.4%。采用高效液相进行含量测定,总盐含量为53.4%(以血根碱水杨酸盐和白屈菜红碱水杨酸盐计)。
色谱条件如下:
色谱柱:HypersilODS25μ4.6×200mm。
流动相:A为乙腈;B为0.05%磷酸-0.2%三乙胺-水。
Time | flow | %A | %B |
0.0012.0015.0018.00 | 0.60.60.60.6 | 25405525 | 75604575 |
柱温:30℃;流速:0.6ml/min;检测波长:270nm;进样量:5μl。标准品及样品浓度约为0.1mg/ml。
实施例2
将批号为040713的博落回总生物碱10g溶于乙酸乙酯中,与1.5g苯甲酸(MW 122.13)按例1方法制备博落回总生物碱苯甲酸盐,收率71.2%。按实施例1方法检测,博落回总生物碱苯甲酸盐含量为51.1%。
实施例3
将批号为040713的博落回总生物碱10g溶于甲醇中,与1.8g酒石酸(MW150.12)按例1方法制备博落回总生物碱酒石酸盐,收率78.4%。按例1方法检测,博落回总生物碱酒石酸盐含量为52.6%。
实施例4
将批号为040713的博落回总生物碱10g溶于氯仿中,与1.4g马来酸(MW116.07)按例1方法制备博落回总生物碱马来酸盐,收率71.7%。按例1方法检测,博落回总生物碱马来酸盐含量为50.2%。
实施例5
将2g水杨酸溶解于丙酮中,搅拌下加入批号为040605的博落回总生物碱10g,薄层监控,适当补加少量水杨酸使血根碱和白屈菜红碱反应完全。回收溶剂,干燥得博落回总生物碱水杨酸盐,收率78.4%。按例1方法检测,博落回总生物碱水杨酸盐含量为63.2%。
实施例6
将1.8g苯甲酸溶解于乙酸乙酯中,搅拌下加入批号为040605的博落回总生物碱10g,按实施例5方法制得博落回总生物碱苯甲酸盐,收率77.3%。按例1方法检测,博落回总生物碱苯甲酸盐含量为61.2%。
实施例7
将2.2g酒石酸溶解于乙醇中,搅拌下加入批号为040605的博落回总生物碱10g,按实施例5方法制得博落回总生物碱酒石酸盐,收率78.4%。按例1方法检测,博落回总生物碱酒石酸盐含量为60.7%。
实施例8
将1.7g马来酸溶解于甲醇中,搅拌下加入批号为040605的博落回总生物碱10g,按实施例5方法制得博落回总生物碱马来酸盐,收率72.6%。按例1方法检测,博落回总生物碱马来酸盐含量为62.5%。
实施例9
将批号为040812的10g博落回总生物碱溶于丙酮中,将2.5g水杨酸溶于丙酮中,在搅拌下将二者混合,薄层监控,适当补加水杨酸或水杨酸丙酮溶液,直至血根碱和白屈菜红碱反应完全。回收溶剂,干燥得博落回总生物碱水杨酸盐,收率76.5%。经检测,博落回总生物碱水杨酸盐含量为76.4%。
实施例10
将批号为040812的10g博落回总生物碱溶于乙酸乙酯中,将2.2g苯甲酸溶于乙酸乙酯中,按实施例9方法制备博落回总生物碱苯甲酸盐,收率75.5%。经检测,博落回总生物碱苯甲酸盐含量为73.7%。
实施例11
将批号为040812的10g博落回总生物碱溶于乙醇中,将2.7g酒石酸溶于乙醇中,按实施例9方法制备博落回总生物碱酒石酸盐,收率74.7%。经检测,博落回总生物碱酒石酸盐含量为77.1%。
实施例12
将批号为040812的10g博落回总生物碱溶于甲醇中,将2.1g马来酸溶于甲醇中,按实施例9方法制备博落回总生物碱马来酸盐,收率73.6%。经检测,博落回总生物碱马来酸盐含量为74.3%。
实施例13
将3g水杨酸置于水中,加热到60℃,缓慢加入批号为040907的10g博落回总生物碱,薄层监控,适量补加水杨酸或水杨酸水溶液,直至血根碱和白屈菜红碱反应完全。回收溶剂,干燥得博落回总生物碱水杨酸盐,收率83.7%。经检测,博落回总生物碱水杨酸盐含量为89.1%。
实施例14
将2.7g苯甲酸置于水中,加热到60℃,缓慢加入批号为040907的10g博落回总生物碱,依实施例13所述方法制备博落回总生物碱苯甲酸盐,收率88.3%。经检测,博落回总生物碱苯甲酸盐含量为89.1%。
实施例15
将3.3g酒石酸置于水中,加热到80℃,缓慢加入批号为040907的10g博落回总生物碱,依实施例13所述方法制备博落回总生物碱酒石酸盐,收率82.5%。经检测,博落回总生物碱水杨酸盐含量为87.6%。
实施例16
将2.5g马来酸置于水中,加热到80℃,缓慢加入批号为040907的10g博落回总生物碱,依实施例13所述方法制备博落回总生物碱马来酸盐,收率86.3%。经检测,博落回总生物碱马来酸盐含量为88.24%。
实施例17
博落回总生物碱硼酸盐的制备。将批号为040605的20g博落回总生物碱溶于乙醇中,向溶液中加入1.8g硼酸的饱和水溶液,薄层确定反应终点,回收溶剂,干燥得博落回总生物碱硼酸盐,收率72.5%。经检测,博落回总生物碱硼酸盐含量为61.3%。
以下例子提供博落回总生物碱有机酸盐在终端产品中的应用形式。
实施例18
博落回总生物碱盐粉剂制备举例。
取本发明博落回总生物碱水杨酸盐20g、百部5000g、水杨酸3000g、以重量计。将5000g百部用水提取,浓缩干燥得百部提取物,将此百部提取物与水杨酸3000g及博落回总生物碱水杨酸盐20g混合,过80目筛,混合均匀,分装制得100包,每包含博落回总生物碱水杨酸盐200mg。本品外用,具抗菌、抗炎活性。每包用2500-3000ml热水溶解,将脚完全浸泡入其中30-40分钟即可,每日一次,每次一包,三天为一疗程。
实施例19
博落回总生物碱盐酊剂制备举例。
博落回总生物碱酒石酸盐10g,苦参提取物50g,百部提取物50g,60%酒精稀释至1000ml,二层纱布过滤,棕色玻璃瓶中密封备用。本品外用,可用于治疗手、足癣。用药棉少许蘸酊剂搽于患处,1d 3次-4次。10d为一个疗程,一般连续治疗3个-6个疗程。
实施例20
博落回总生物碱盐洗液制备举例。
将苦参50g、蛇床子50g、地肤子50g、(花椒)川椒20g、百部50g加水煎煮二次,每次2小时,滤过,合并滤液,浓缩至25℃时相对密度不低于1.07,加入薄荷脑1g和博落回总生物碱马来酸盐5g,搅拌使溶解,加水制成1000ml,即得。本品具抗菌、抗炎作用,可用于皮肤的清洁及护理。
实施例21
博落回总生物碱盐喷剂制备举例。
喷剂(商品名“博净”):取博落回总生物碱水杨酸盐1g,加纯净水500ml,搅拌使溶解,加水稀释制成1000ml溶液即得。本品具抗菌、抗炎作用,可用于表面的清洁及护理。本品经湖南省疾病预防控制中心检测,博净喷剂原液作用2min对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的平均抑制率分别为72.82%,80.87%和69.34%。
Claims (10)
1.博落回总生物碱盐,其特征在于:所述博落回总生物碱盐为博落回总生物碱水杨酸盐或博落回总生物碱苯甲酸盐或博落回总生物碱马来酸盐或博落回总生物碱酒石酸盐或博落回总生物碱硼酸盐;
上述博落回总生物碱盐中的相应血根碱和白屈菜红碱盐重量含量为:50.0%~90%。
2.制备权利要求1中所述的博落回总生物碱盐的方法,其特征在于:将博落回总生物碱溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯或氯仿溶剂中,搅拌下加入有机酸,薄层监控血根碱和白屈菜红碱反应完全,此方法涉及的有机酸为水杨酸、苯甲酸、酒石酸或马来酸。
3.制备权利要求1中所述的博落回总生物碱盐的方法,其特征在于:将有机酸溶解于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯或氯仿溶剂中,搅拌下加入博落回总生物碱,薄层监控血根碱和白屈菜红碱反应完全,此方法涉及的有机酸为水杨酸、苯甲酸、酒石酸或马来酸。
4.制备权利要求1中所述的博落回总生物碱盐的方法,其特征在于:将博落回总生物碱溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、或氯仿溶剂中,将有机酸溶于相应的甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯或氯仿溶剂中,在搅拌下将二者混合,薄层监控血根碱和白屈菜红碱反应完全,此方法涉及的有机酸为水杨酸、苯甲酸、酒石酸或马来酸。
5.制备权利要求1中所述的博落回总生物碱盐的方法,其特征在于:将有机酸置于水中,加热到60~80℃,缓慢加入博落回总生物碱,薄层监控血根碱和白屈菜红碱至反应完全,此方法涉及的有机酸为水杨酸、苯甲酸、酒石酸或马来酸。
6.制备权利要求1中所述的博落回总生物碱盐的方法,其特征在于:博落回总生物碱硼酸盐的制备,将博落回总生物碱溶于甲醇或乙醇中,向溶液中加入定量的饱和硼酸溶液,收集沉淀即得博落回总生物碱硼酸盐。
7.权利要求1所述博落回总生物碱盐的应用,其特征在于:用于抗菌、抗炎作用的药品的制备。
8.权利要求1所述博落回总生物碱盐的应用,其特征在于:用于日用化学品的制备。
9.权利要求1所述博落回总生物碱盐的应用,其特征在于:用于动物有关的抗菌、抗炎作用的兽药或饲料添加剂或消毒用品或日用化学品的制备。
10.权利要求1所述博落回总生物碱盐的应用,其特征在于:用于粉剂、酊剂、洗液或喷剂的制备。
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