CN100352460C - 治疗呼吸、循环系统等疾病的泡腾片及制备方法和质控方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种治疗呼吸、循环系统等疾病的泡腾片及制备方法和质控方法，它是用黄芪1998g、防风666g、炒白术666g和微晶纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙基纤维素、微粉硅胶、碳酸氢钠、枸橼酸、富马酸、阿司帕坦制备而成的；与现有技术相比，本发明泡腾片使用安全，可提高机体免疫力，在治疗呼吸系统、循环系统等疾病方面疗效确切；具有溶解快，生物利用度高，稳定性好的优点，而且携带和服用方便，还能更好的提高患者依从性，方便患者用药。

Description

治疗呼吸、循环系统等疾病的泡腾片及制备方法和质控方法

技术领域：本发明涉及一种治疗呼吸、循环系统等疾病的泡腾片(玉屏风泡腾片)及制备方法和质控方法，属于中药的技术领域。

背景技术：玉屏风类制剂是临床上治疗气虚卫外不固，反复感冒的常用方剂，具有治疗、预防和良好的免疫调节作用，在治疗呼吸系统、循环系统等疾病方面疗效较好。但随着中药研究水平的提高，不断地开发出新的剂型。泡腾片是中药剂型现代化可选择的剂型之一，在使用方法、人体吸收以及治疗效果等方面都优于普通剂型。一方面，利用泡腾剂中的酸、碱成分遇水后发生中和反应，产生大量的二氧化碳气泡起到崩解作用，使片剂中的成份及时分解，使主药与人体器官充分接触，提高药物疗效和作用时间；另一方面，产生的碳酸可以起到屏蔽药物苦味的效果，药片完全溶解后即成了一杯可口、略带苏打味的药液，使消费者在用药时不会产生厌药情绪，提高用药依从性。因此，将现有玉屏风制剂改剂为泡腾片，能显著提高其生物利用度，更好的提高患者依从性，方便患者用药。另外，为全面考察和控制本发明制剂的质量，保证其临床疗效，需要制定合理而稳定的质量控制方法。

发明内容：

本发明的目的在于：提供一种治疗呼吸、循环系统等疾病的泡腾片(玉屏风泡腾片)及制备方法和质控方法，本发明在现有技术的基础上，所提供的泡腾片具有溶解快、生物利用度高、稳定性好等优点，能更好的提高患者依从性，方便患者用药。

本发明是这样构成的：它是用黄芪1998g、防风666g、炒白术666g和微晶纤维素430g、交联聚乙烯吡咯烷酮190g、低取代羟丙基纤维素150g、微粉硅胶154g、碳酸氢钠465g、枸橼酸380g、富马酸210g、阿司帕坦15g制备而成的。

本发明所述治疗呼吸、循环系统等疾病的泡腾片的制备方法为：将防风酌予破碎，提取挥发油，备用，药渣及黄芪、炒白术二味加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成50～60℃相对密度为1.10±0.02的稠膏，加2倍量乙醇使沉淀，静置24小时，过滤，滤液减压回收乙醇并浓缩成适量，真空干燥，干浸膏粉碎过80目筛，与处方量的微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、微粉硅胶、交联聚乙烯吡咯烷酮、阿司帕坦、碳酸氢钠、枸橼酸、富马酸混合均匀，加入挥发油密闭，压片，包装即得。

本发明所述治疗呼吸、循环系统等疾病的泡腾片的质量控制方法：主要包括性状、检查，以及鉴别、含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别包括以黄芪甲苷对照品、白术对照药材为对照的薄层鉴别和以5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品为对照的高效液相色谱法；含量测定是以黄芪甲苷对照品为对照的高效液相色谱法。

黄芪药材的鉴别方法是以黄芪甲苷对照品为对照，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2并在10℃以下放置的下层溶液为展开剂的薄层鉴别方法；白术药材的鉴别方法是以白术对照药材为对照，以环己烷∶乙酸乙酯＝7∶3为展开剂的薄层鉴别方法；防风药材的鉴别方法是以5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品为对照，以乙腈∶水＝21∶79为流动相的高效液相色谱法。

具体的鉴别方法包括以下项目的部分或全部：

(1)取本发明制剂3片，研细，加水30ml，待发泡完全后，过滤，滤液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次，每次20ml，弃去氨液，正丁醇蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2并在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，365nm紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

(2)取本发明制剂6片，研细，加水50ml，待发泡完全后，过滤，滤液用乙醚振摇提取2次，每次25ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取白术对照药材2g，加水50ml，煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶乙酸乙酯＝7∶3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％对二甲氯基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，365nm紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

(3)取本制剂含量测定项下的供试品溶液作为供试品溶液，取5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释成每1ml中含200μg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈∶水＝21∶79为流动相，检测波长254nm，供试品溶液中5-O-甲基维斯阿米醇苷与相邻峰的分离度应符合要求；分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入色谱仪，供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。

黄芪甲苷的含量测定方法为：

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水按30～80％∶70～20％做梯度洗脱；用蒸发光散射检测器检测，理论板数以黄芪甲苷峰计算应小小于5000；

对照品溶液的制备  取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中含0.2mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取本发明制剂10片，研细、混匀，精密称取粉末约10g，置500ml烧杯中，置60℃水浴中，缓缓加入预热至60℃的水100ml，待气泡散尽，也可超声加速气泡溢出，用中速滤纸抽滤，用预热至60℃的水冲洗滤饼3次，每次10ml，合并洗液至250ml分液漏斗中；用水饱和正丁醇提取三次，每次70ml，合并正丁醇液，用稀氨水洗涤三次，每次40ml，分取正丁醇层，减压蒸干；残渣加甲醇10ml溶解，作为供试品溶液；

测定法精密吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl和20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标两点法以对数方程计算，即得；

本发明制剂每片含黄芪以黄芪甲苷C₄₁H₆₈0₁₄计，应不低于0.39mg。

本发明所述质量控制方法包括：

性状：本制剂为黄白色片，片面有散在黄色斑点；

鉴别：(1)取本发明制剂3片，研细，加水30ml，待发泡完全后，过滤，滤液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次，每次20ml，弃去氨液，正丁醇蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2并在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，365nm紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

(2)取本发明制剂6片，研细，加水50ml，待发泡完全后，过滤，滤液用乙醚振摇提取2次，每次25ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取白术对照药材2g，加水50ml，煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶乙酸乙酯＝7∶3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％对二甲氯基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，365nm紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

(3)取本制剂含量测定项下的供试品溶液作为供试品溶液，取5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释成每1ml中含200μg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈∶水＝21∶79为流动相，检测波长254nm，供试品溶液中5-O-甲基维斯阿米醇苷与相邻峰的分离度应符合要求；分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入色谱仪，供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰；

检查：

崩解时限  取本发明制剂1片，置盛有200ml25℃水的250ml烧杯中，有许多气泡放出，当气泡停止逸出时，片剂完全分散在水中，无聚集的颗粒剩余；取本发明制剂6片，同法测定；各片均应在5分钟内崩解完毕；

其他应符合《中国药典》2005版附录ID片剂项下有关的各项规定；

含量测定：

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水按30～80％∶70～20％做梯度洗脱；用蒸发光散射检测器检测，理论板数以黄芪甲苷峰计算应不小于5000；

对照品溶液的制备  取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中含0.2mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备  取本发明制剂10片，研细、混匀，精密称取粉末约10g，置500ml烧杯中，置60℃水浴中，缓缓加入预热至60℃的水100ml，待气泡散尽，也可超声加速气泡溢出，用中速滤纸抽滤，用预热至60℃的水冲洗滤饼3次，每次10ml，合并洗液至250ml分液漏斗中；用水饱和正丁醇提取三次，每次70ml，合并正丁醇液，用稀氨水洗涤三次，每次40ml，分取正丁醇层，减压蒸干；残渣加甲醇10ml溶解，作为供试品溶液；

测定法精密吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl和20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标两点法以对数方程计算，即得；

本发明制剂每片含黄芪以黄芪甲苷C₄₁H₆₈O₁₄计，应不低于0.39mg。

本方中黄芪味甘微温，归脾、肺经，号称补药之长。具有益气、固表、升阳、托毒生肌、利水消肿之功，用于气虚血亏、表虚自汗、四肢无力或久病衰弱、脾胃不壮者，能抗御外邪、可使脾土得补、肺气得养、外邪难以入侵，为方中君药；辅以白术补气健脾，燥湿利水，助主药黄芪固表止汗；佐药防风疏风解表、胜湿止痛、祛风止痉见长；合黄芪、白术以益气散邪，且黄芪得防风固表而不致留邪，防风得黄芪，祛邪而不伤正，实系补中有疏、散中寓补、扶正祛邪、相得益彰。

与现有技术相比，本发明泡腾片具有溶解快，生物利用度高，稳定性好的优点，而且携带和服用方便，尤其适用于儿童、老年人和不易吞服固体制剂的人群使用；本制剂使用安全，可提高机体免疫力，在治疗呼吸系统、循环系统等疾病方面疗效确切；本制剂还能更好的提高患者依从性，方便患者用药。

本申请人进行了一系列实验来选择本发明药物制剂的制备工艺和质量控制方法，以保证其科学、合理、可行，并具有良好的疗效。

一、制备工艺研究

1.挥发油提取时间的确定

试验方法：取一个处方量防风，提取挥发油、提取时间分别为3小时、4小时、5小时，比较其出油率，确定最佳挥发油提取时间，试验结果如下：

提取时间(小时)	挥发油量(ml)	出油率(％，ml/g)
			3	3.2	0.48
4	4.6	0.69
			5	4.8	0.72

试验结果表明，挥发油提取时间为4小时，其生药材中的挥发油已基本提取完全，因此确定挥发油提取时间为4小时。

2.提取加水量的确定

试验方法：取一个处方量的药材，分别加12倍、10倍、8倍、6倍量的水提取，以出膏率作评价指标。确定最佳提取加水量，试验结果如下：

提取加水量(倍)	出膏率
		12	53.45％
10	53.15％
		8	48.05％
6	45.34％

试验果表明，采用加10倍量水提取时较为适宜，其出膏率明显高于加8倍量及6倍量时的出膏率，与加12倍量水提取时出膏率无明显差别，因此确定提取加水量为10倍量。

3.醇沉时加醇量及醇沉时间的确定

玉屏风口服液其制备工艺中未明确醇沉时加醇量及醇沉时间，因此本发明制剂在制备工艺研究时对加醇量进行了筛选，试验结果如下：

浸膏量	加醇量(倍)/时间(小时)	结果
			一个处方药材所提取的浸膏	1/24	难以分层，醇沉后浸膏极少，回收乙醇后的浸膏中含量很低，制得成品含量为0.31mg/片
一个处方药材所提取的浸膏	224	沉淀效果好，能除去粘液质，回收乙醇后的浸膏含量较高，制得成品含量为0.45mg/片
			一个处方药材所提取的浸膏	3/24	除去大部分粘液质外，还去除了部分有效成份，回收乙醇后的浸膏含量偏低制得成品含量为0.37mg/片
一个处方药材所提取的浸膏	4/24	回收乙醇后的浸膏含量较3倍量时更低，制得成品含量为0.32mg/片

试验结果表明，采用加2倍量的乙醇醇沉24小时，较为适宜，即能去除大部分粘液质等杂质，又能最大程度的保留其有效成份。

4.关于水沉工序的相关说明

为了适应口服液澄明度质量要求，原玉屏风口服液制备工艺中，除醉沉外，还有一道水沉工序。本发明制剂为泡腾片，属口服固体制剂，且经试验表明，水沉时反能去除极少一部分细微的水不溶性杂质，为更大程度的保留其浸膏中的有效成份，因此本发明制剂制备工艺中略去了水沉这一道工序。

5.制剂处方工艺筛选

组成	处方1	处方2	处方3	处方4
					玉屏风干浸膏粉(g)	一个处方所提	一个处方所提	一个处方所提	一个处方所提
糊精(g)	200g	-	-	-
					甘露醇(g)	200g	-	-	-
微晶纤维素(g)	-	200	300	430
					交联聚乙烯吡咯烷酮(g)	-	-	-	190
低取代羟丙基纤维素(g)	150	150	200	150
					微粉硅胶(g)	150	150	150	154
阿司帕坦(g)	15	-	-	15
					碳酸氢纳(g)	465	465	465	465
枸橼酸(g)	380	380	380	380
					富马酸(g)	210	210	210	210

结果：处方一在压片过程中有粘冲现象；

处方二所得片子片面光滑，但崩解不合格，有时会产生粘冲现象。口味较差：

处方三所得片子片面光滑，但崩解不合格，口味较差；

处方四所得片子片面光滑，崩解合格，口味适宜：

最终确定玉屏风泡腾片处力及制备工艺如下：

干浸膏粉(一个处方药材所提)
		微晶纤维素	430g
交联聚乙烯吡咯烷酮	190g
		低取代羟丙基纤维素	150g
微粉硅胶	154g
		碳酸氢钠	465g
枸橼酸	380g
		富马酸	210g
阿司帕坦	15g

共制成1000片，每片重2.50g。

制各工艺：取处方量的干浸膏粉，与低取代羟丙基纤维素、微粉硅胶、交联聚乙烯吡咯烷酮微晶纤维素、碳酸氢纳、富马酸、枸橼酸及阿司帕坦混合均匀，加入挥发油，密闭，压片、包装，即得。

6.三批中试产品的试验结果

批号	050401	050402	050403
				生药材投入量(kg)	33.30	33.30	33.30
浸膏量(kg)	13.4	13.3	13.1
				出膏率(％)	40.24	39.94	39.34
碳酸氢钠(kg)	4.65	4.65	4.65
				微晶纤维素(kg)	4.30	4.30	4.30
低取代羟丙基纤维素(kg)	1.50	1.50	1.50
				交联聚乙烯吡咯烷酮(kg)	1.90	1.90	1.90
阿司帕坦(kg)	0.15	0.15	0.15
				微粉硅胶(kg)	1.54	1.54	1.54
枸橼酸(kg)	3.80	3.80	3.80

富马酸(kg)	2.10	2.10	2.10
				理论产量(片)	10000	10000	10000
实际产量(片)	9012	8964	8904
				成品率(％)	90.12	89.64	89.04

结论：本发明制剂三批中试产品试制结果表明，本发明制剂工艺合理、稳定，成品收得率较高，所得成品经质量检验，结果表明均符合规定。

二、药效学研究

1.调节机体免疫功能

(1)本药对小鼠脾脏抗体形成细胞数及溶血空斑实验PEC明显的双向调节作用，每日灌胃0.3g/kg，基数低者用药后提高，基数高者用药后降低。

(2)对肺卫气虚的患者，给与本药有明显改善其免疫功能，使血清IgG、IgA明显增高，淋巴细胞转化率也明显增加，而对IgM影响则不明显。

(3)用本药治疗各类肾小球肾炎易感冒而诱致病情反复发作的患者，可使其免疫功能低下者得到纠正和恢复，使PFC从17％提高至48￡(正常值为40％)。

(4)本药对小鼠巨噬细胞吞噬功能有明显的促进作用，按12.5/kg口服给药与0.75g/kg葡萄糖组对照，结果给药组巨噬细胞吞噬率及吞噬指数分别为25.89、35.53，葡萄糖组为12.27和15.40，两组之间差异非常显著。

(5)用本药制成片剂，治疗感冒、流感及慢性支气管炎患者，可使患者机体免疫力明显提高，经测定用药后IgG、IgA、T-淋巴细胞转化率、E-玫瑰花结形成率、PHA皮试等各项免疫指标均较治疗前明显增长。

(6)用玉屏风口服液给小鼠灌胃连续3d，明显促进小鼠巨噬细胞的吞噬功能。

(7)提前喂饲玉屏风汤剂组在风寒刺激后RES廓清功能明显高于喂饲白开水，说明玉屏风散能有效地预防风寒刺激导致巨噬细胞吞噬和杀菌功能的抑制。

2.抗菌、抗病毒

本药口服液(浓度为1g生药/ml)经鸡胚尿囊腔给药(0.1ml)及尿囊腔感染病毒或卵黄囊给药、尿囊腔感染病毒。可见到对流行性感冒病毒/A/宗科/1/68(H3N2)毒株15ELD50、30ELD50感染量均有明显的抑制作用。实验组病毒血凝试验阳性率均低于病毒对照组。药液实验组鸡胚阴性尿囊液再接种于鸡胚尿囊腔盲传三代后，除个别血凝转阳外，绝大部分均为阴性。因此，本药在鸡胚内不仅是抑制流感病毒，而且能灭活病毒。

3.对肾炎的病例修复作用：

以肾脏的病例修复程度来判定药物的疗效，效果也较明显。

4.抗变态反应：

能使鼻粘膜血流量由治疗前72.51±11.27ml/100mg/min升至113.21±28.08ml/100mg/min。对患者鼻粘膜超微结构的观察表明，用本药治疗后可明显改善细胞和细胞器的形态和功能，粘膜上皮细胞功能得到恢复，使酸性细胞浸润剂脱颗粒反应减少，组织水肿减轻，并可消除基底膜免疫复合物沉积，使气管恢复正常。

5.增强肾上腺皮质功能：

对氢化可的松所致的阳虚小鼠模型，本药可使其体重明显增加，肾上腺占体重的百分比也明显增加，与对照组相比差异显著。对血浆皮质醇的影响不甚明显。表明本药能显著增强阳虚动物的肾上腺皮质功能。

6.抗应激性：

本药有较好地增强体力，对抗疲劳之作用，能明显延长小鼠电刺激运动时间。

三、稳定性研究

玉屏风泡腾片经6个月的加速稳定性试验及6个月的长期稳定性试验，结果表明，玉屏风泡腾片在加速稳定性试验条件下放置6个月及在长期稳定性试验条件下放置6个月，质量稳定，各项检测指标均符合标准规定要求，因此玉屏风泡腾片有效期暂定为二年。

四、质量控制方法研究

(一)样品及对照品来源

样品：本公司自制，批号为：050401、050402、050403

对照品来源：黄芪甲苷对照品来源于中国药品生物制品检定所，批号：0781-200210白术对照药材来源于中国药品生物制品检定所，批号：1120925-200407

(二)性状

本发明制剂为泡腾片剂，由浸膏粉加适量辅料经制粒后压片而成，浸膏粉本身为黄色或浅黄色，所用辅料为白色或类白色，本制剂性状应为黄白色片：片面有散在黄色斑点。

(三)鉴别

参考中国药典2005年版玉屏风口服液鉴别项下内容，用薄层的方法对本发明制剂主药黄芪、白术进行鉴别，用液相的方法对防风进行鉴别。

1、黄芪的薄层鉴别

(1)取本发明制剂3片，研细，加水30ml，待发泡完全后，过滤，滤液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次，每次20ml，弃去氨液，正丁醇蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光灯(365nm)下显相同颜色的荧光斑点。

(2)点样量的选择

经实验选择供试品溶液与对照品溶液各点样2μl、5μl、10μl，结果发现供试品溶液与对照品溶液点样5μl、10μl时斑点较好，较为清晰。故本标准对照品溶液与供试品溶液选用5μl作为点样量。

(3)专属性实验

取缺黄芪的阴性样品约0.5g，同供试品法操作制成阴性供试品溶液，展开后在对照品处无相应斑点，说明阴性样品对本实验无干扰。

2、白术的薄层鉴别

(1)提取溶剂的选择

a、取本发明制剂6片，研细，加水50ml，待发泡完全后，过滤，滤液用乙醚振摇提取2次，每次25ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取白术对照药材2g，加水50ml，煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(7∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％对二甲氯基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下斑点显色不明显，紫外光灯(365nm)下显相同颜色的荧光斑点。

b、取本发明制剂6片，研细，加水50ml，待发泡完全后，过滤，滤液用石油醚(30～60℃)振摇提取2次，每次25ml，合并提取液，蒸于，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取白术对照药材2g，加水50ml，煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(7∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％对二甲氯基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品与对照药材在日光和紫外光灯(365nm)下都没有斑点，此提取方法不可行。

比较两种溶剂的提取方法，乙醚效果较好。故选择乙醚作为本标准的提取方法。

(2)点样量的选择

经实验选择供试品溶液与对照品溶液各点样2μl、5μl、10μl，结果发现供试品溶液与对照品溶液点样5μl、10μl时斑点较好，较为清晰。故本标准对照品溶液与供试品溶液选用5μl作为点样量。

(3)专属性实验

取缺白术的阴性样品约2g，同a法操作制成阴性供试品溶液，展开后在对照品处无相应斑点，说明阴性样品对本实验无干扰。

3、防风的鉴别

本发明制剂处方中，防风药材含有5-O-甲基维斯阿米醇苷，中国药典防风药材项下有对该成分的含量测定，故采用高效液相色谱法进行5-O-甲基维斯阿米醇苷的鉴别。

仪器：Agilent 1100高效液相色谱仪

Alltech2000激光蒸发光散射检测器

色谱柱：Zorbax XDB-C18(250×4.6mm，5μ)

Kromasil 100-C18(250×4.6mm，5μ)

试剂：甲醇、乙腈Merck，色谱纯

水为Mi11Q 18.2MΩ纯水

色谱条件：以乙腈-水(21∶79)为流动相，检测波长254nm，5-O-甲基维斯阿米醇苷与相邻峰的分离度应符合要求。

对照品溶液的制备：精密称取5-O-甲基维斯阿米醇苷适量，加甲醇溶解并稀释成每1ml中约含0.2mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本制剂含量测定项下供试品溶液。

阴性制剂：照处方量制备不含防风的阴性制剂，照含量测定项下供试品溶液的制备方法操作，即得。

精密吸取上述溶液各10μl，分别注入色谱仪，记录色谱图。实验显示，5-O-甲基维斯阿米醇苷与相邻峰的分离度大于1.5，阴性制剂中不含干扰成分，同时采用二极管阵列检测器记录5-O-甲基维斯阿米醇苷峰位置的紫外吸收光谱，三批样品均在对照品溶液位置有色谱峰，其紫外吸收光谱均与5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液主峰的紫外吸收光谱一致。

取本制剂含量测定项下的供试品溶液作为供试品溶液，取5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释成每1ml中约含200μg的溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-水(21∶79)为流动相，检测波长254nm，供试品溶液中5-O-甲基维斯阿米醇苷与相邻峰的分离度应符合要求。分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入色谱仪，供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。

(四)检查

1、崩解时限

(1)选择依据

本制剂为泡腾片剂，根据中国药典2000年版二部附录XA项下关于泡腾片剂的相关描述进行崩解时限检测。

(2)检测方法

取本发明制剂1片，置盛有200ml25℃水的250ml烧杯中。有许多气泡放出，当气泡停止逸出时，片剂完全分散在水中，无聚集的颗粒剩余。取本发明制剂6片，同法测定。各片均应在5分钟内崩解完毕。

(3)检测结果

表1玉屏风泡腾片崩解时限检查结果

批号	050401	050402	050403
				崩解时限	4分	4分	4分

2、砷盐按中国药典2000年版一部附录IX F砷盐检查法第一法进行检查，结果符合规定

表2砷盐测定结果

批号	050401	050402	050403
				砷盐	＜2ppm	＜2ppm	＜2ppm

3、重金属按中国药典2000年版一部附录IX E重金属检查法第二法进行检查，结果符合规定。

表3重金属测定结果

批号	050401	050402	050403
				重金属	＜10ppm	＜10ppm	＜10ppm

4、片重差异

本发明制剂片重大于0.3g，按2000年版中国药典一部规定片重差异应在±5％以内，取本发明制剂三批样品20片检查，结果见下表。

表4片重差异检查结果

本发明制剂三批样品测定结果表明，片重差异均在规定范围之内。

5、微生物限度

照微生物限度检查法(中国药典2000年版一部附录XIII)检查，三批样品的检查结果见下表。

表5微生物限度检查结果

批号	050401	050402	050403
				细菌数(个/g)	符合规定	符合规定	符合规定
霉菌数(个/g)	符合规定	符合规定	符合规定

大肠杆菌(个/g)	未检出	未检出	未检出
				活螨(个/g)	未检出	未检出	未检出

(五)含量测定

据文献报道，测定黄芪甲苷主要采用薄层扫描法、高效液相蒸发光散射检测或紫外检测。由于黄芪甲苷的结构中缺乏长共轭结构，没有紫外发色基闭，因此紫外检测的灵敏度低，很难用于复方制剂的质控而薄层扫描法限于仪器设备条件，存在精密度差、误差高的缺点，且提取富集操作繁琐；蒸发光散射检测器是近年来迅速发展的一项检测技术，属于通用型检测器，特别是采用梯度洗脱时几乎不会发生基线的漂移，适于测定黄芪甲苷等紫外吸收低的成分。

仪器：Agilent 1100高效液相色谱仪

Alltech2000激光蒸发光散射检测器

色谱柱：Zorbax XDB-C18(250×4.6mm，5μ)

Kromasil 100-C18(250×4.6mm，5μ)

试剂：甲醇、乙腈Merck，色谱纯

水为MillQ 18.2MΩ纯水

1、色谱条件的选择

根据文献报道，采用合适的提取方法，采用乙腈-水系统即可有效分离黄芪甲苷，由于本发明制剂为复方制剂，因此实验中在洗脱黄芪甲苷后做梯度洗脱，以便将色谱柱中残余成分洗出，避免干扰下一个样品的分析。

由于ELSD检测器的灵敏度低，采用串连二极管阵列检测的方法对比考察成分的分离。

供试品溶液的制备：取本发明制剂10片研细，混匀，取粉末10g，置500ml烧杯中，在60℃水浴下，缓缓加入预热至60℃的水100ml，待气泡散尽，用中速滤纸抽滤，用水冲洗滤饼(10ml×3)，合并洗液至250ml分液漏斗中，用水饱和正丁醇提取(70ml×3)，合并正丁醇液，用稀氨水洗涤(40ml×3)，分取正丁醇层，减压蒸干，残渣加甲醇10ml溶解，即得。

对照品溶液的制备；取黄芪甲苷对照品，加甲醇溶解制成约0.5mg/ml的溶液。

空白溶液的制备；按照处方量制备不含黄芪药材的空白制剂，照供试品溶液制备项下操作，作为空白溶液。

色谱条件：流动相A为水，B为乙腈，照下表梯度洗脱：

时间(min)	B％
		0	30
15	30
		20	80
30	80

检测器条件：检测模式为撞击器关闭，空气流速2.8ml/min，挥发温度100℃。

从色谱图可以看出，采用梯度洗脱能良好分离黄芪甲苷，无论ELSD检测器或DAD检测器都显示空白实验在黄芪甲苷峰的位置没有干扰。

2、提取方式的选择

为考察不同方法对提取率的影响，设计提取方式的考察实验。

参考相关文献，提取黄芪甲苷多用正丁醇(预先用水饱和)提取，之后用稀氨水洗除含酚羟基的黄酮等杂质。最后用甲醇溶解。因本发明制剂为泡腾片，遇水会产生大量气体，溶液呈发泡状，因此提取前须用水先分散样品，待气泡溢出后再用正丁醇提取的方法操作。实验中发现，采用超声或加热的方法都可以加速气泡的溢出。

(1)常温提取：取本发明制剂10片研细，混匀，取粉末10g，置500ml烧杯中，置超声槽中，缓缓加入水100ml，边加边超声(250W)，待气泡散尽后，用中速滤纸抽滤，用水冲洗滤饼(10ml×3)，合并洗液至250ml分液漏斗中，用水饱和正丁醇提取(70ml×3)，合并正丁醇液，用稀氨水洗涤(40ml×3)，分取正丁醇层，减压蒸干，残渣加甲醇10ml溶解，即得。

(2)热水提取：取本发明制剂10片研细，混匀，取粉末10g，置500ml烧杯中，置60℃水浴中，缓缓加入预热至60℃的水100ml，待气泡散尽，用中速滤纸抽滤，用水冲洗滤饼(10ml×3)，合并洗液至250ml分液漏斗中，用水饱和正丁醇提取(70ml×3)，合并正丁醇液，用稀氨水洗涤(40ml×3)，分取正丁醇层，减压蒸干，残渣加甲醇10ml溶解，即得。

(3)回流提取：取本发明制剂10片研细，混匀，取粉末10g，置500ml烧杯中，在60℃水浴下，缓缓加入预热至60℃的水100ml，待气泡散尽，同流提取3小时，趁热抽滤，用60℃水冲洗滤饼(10ml×3)，合并洗液至250ml分液漏斗中，加预先用水三角瓶中，加甲醇50ml，回流提取2小时，提取液减压蒸干，用50℃水10ml溶解，用水饱和正丁醇提取三次(25ml×3)，合并正丁醇液，用稀氨水洗涤三次(25ml×3)，分取正丁醇液减压蒸干，残渣精密加入甲醇10ml溶解，作为供试品溶液。

(4)超声提取：取本发明制剂10片研细，混匀，取粉末10g，置500ml烧杯中，在60℃水浴下，缓缓加入预热至60℃的水100ml，待气泡散尽，超声(250W)提取3小时，抽滤，用水冲洗滤饼(10ml×3)，合并洗液至250ml分液漏斗中，加预先用水三角瓶中，加甲醇50ml，回流提取2小时，提取液减压蒸干，用50℃水10ml溶解，用水饱和正丁醇提取三次(25ml×3)，合并正丁醇液，用稀氨水洗涤三次(25ml×3)，分取正丁醇液减压蒸干，残渣精密加入甲醇10ml溶解，作为供试品溶液。

取上述溶液，分别进样10μl，记录色谱图，计算称样量/对数峰面积的数值如下：

方法	1	2	3	4
					称样量(g)	10.17	10.09	9.98	10.18
峰面积	300.3	350.42	327.33	325.98
					对数峰面积	2.4776	2.5446	2.5150	2.5132
对数峰面积/称样量	0.2436	0.2522	0.2520	0.2469

实验结果显示，采用超声、加热和回流提取的称样量/峰面积比值基本一致，常温提取则略低约3％，考虑到操作方便，同时加热更有助于气泡的消散，因此选用热水提取、再用正丁醇萃取的方式处理样品。

3、标准曲线和范围

精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇溶解制成贮备液，并用甲醇定量稀释成一系列的标准溶液如下：

称样量：39.46mg→10ml(甲醇)

分别量取0.5、1、1.5、2、2.5、3ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，稀释作为标准溶液，精密量取上述标准溶液各10μl，注入色谱仪，记录色谱图，以浓度(μg/ml)的自然对数～峰面积的自然对数绘制标准曲线(见附图1)，结果如下：

溶液号	1	2	3	4	5	6	7	8
									浓度(ug/ml)	39.464	78.928	197.32	394.64	591.96	789.28	986.6	1183.92
对数浓度	1.5962	1.8972	2.2952	2.5962	2.7723	2.8972	2.9941	3.0733
									平均峰面积	41.61	106.35	396.39	1287.43	2454.58	3778.56	4491.17	5352.76
对数峰面积	1.6192	2.0267	2.5981	3.1097	3.3900	3.5773	3.6524	3.7286
									不同浓度范围的回归结果			1～6	1～7	1～8	2～6	2～7	2～8
斜率			1.5205	1.501	1.47846	1.56713	1.53026	1.49337
									截矩			-0.8415	-0.8023	-0.7559	-0.96433	-0.88196	-0.79753
相关系数			0.9993	0.9991	0.9987	0.99949	0.9987	0.99769

由上述实验结果可见，溶液2～6的线性关系较好，当浓度达到1mg/ml以上时，相关系数下降，从图1也可以看出1mg/ml的点已经偏离曲线，故本法测定黄芪甲苷的含量，浓度在100～900μg/ml间为宜，回归方程LogA＝1.567LogC-0.964，r＝0.9995(n＝5)。

4、回收率

取050401批样品(折合含黄芪甲苷为0.188mg/g)研细的粉末，精密称取5g共9份，分别置9个500ml烧杯中，再分别加入黄芪甲苷对照品溶液(浓度400μg/ml的甲醇溶液)2、2.5、3ml(各三份)，置60℃水浴中，缓缓加入预热至60℃的水100ml，待气泡散尽，用中速滤纸抽滤，用水冲洗滤饼(10ml×3)，合并洗液至250ml分液漏斗中，用水饱和正丁醇提取(70ml×3)，合并正丁醇液，用稀氨水洗涤(40ml×3)，分取正丁醇层，减压蒸干，残渣加甲醇10ml溶解，作为供试品溶液，用图1标准曲线测定加入量，计算回收率如下：

样品含量(mg/g)	0.188
										样品加入量(g)	4.921	4.865	4.958	4.997	4.78	5.162	5.36	5.121	4.878
含黄芪甲苷(mg)	0.9251	0.9146	0.9321	0.9394	0.8986	0.9705	1.0077	0.9627	0.9171
										对照品浓度mg/ml	0.4048
峰面积	350.88	341.12	350.61	419.91	401.20	424.86	509.81	496.49	491.61
										对数峰面积	2.5452	2.5329	2.5448	2.6232	2.6034	2.6282	2.7074	2.6959	2.6916
测定量(mg)	0.8109	0.7904	0.8029	1.0066	0.9924	0.9905	1.1953	1.2033	1.2349
										回收率	100.2％	87.6％	88.2％	99.5％	98.1％	97.9％	98.4％	99.1％	101.7％
组内平均RSD	99.0％±1.29％			98.5％±0.88％			99.7％±1.73％
										组间平均RSD	99.1％±1.28％

回收率实验显示，本发明制剂测定黄芪甲苷的含量，三个浓度的回收率均在97.0％～102.0％之间，可以满足定量测定的要求。

5、重现性实验

取050401批样品，照上述方法平行制备6份供试品溶液进样，测定黄芪甲苷得含量，结果如下：

样品	1	2	3	4	5	6
							含量(μg/g)	173.2	172.1	170.9	175.7	170.9	174.9
平均±RSD	172.9±1.22％

6份平行样品的测定结果一致，RSD＜3％，符合分析方法验证的要求。

6、溶液放置的稳定性实验和精密度实验

取050401批样品含量测定项下溶液，设置连续进样序列(自动进样器处于室内环境下，无遮盖)，定时进样测定，黄芪甲苷峰面积结果如下(第一行中括号内的数字为等效放置的时间)：

次数	1	2	3	4(1h)	5	6	7(2h)	8(3h)	9(6h)	10(12h)
											峰面积	363.89	353.9	357.55	368.67	350.25	352.8	358.17	360.66	357.8	367.45
比值	100.0％	97.3％	98.3％	101.3％	96.3％	97.0％	98.4％	99.1％	98.3％	101.0％
											RSD	1.99％						1.70％

配置好的溶液连续进样6次，峰面积无明显差异，RSD＜3.0％，在室内环境下具塞放置12小时，峰面积无明显差异，RSD＜3.0％。

7、含量测定

根据上述研究，采用乙腈-水系统，可以在碳十八柱上分离玉屏风泡腾片中的黄芪甲苷，二极管阵列检测器和缺黄芪阴性制剂的实验显示经提取后其他成分对黄芪甲苷的测定无干扰；根据不同提取方法的实验，采用热水提取+正丁醇萃取的方法，可以保证黄芪甲苷从制剂中有效提取；图1标准曲线测定结果显示，在100～900μg/ml的浓度范围内，ELSD检测器经对数变换后显示较好的线性关系；三个浓度的回收率实验结果，各点回收率均在97％～102％之间；多次取样的重现性良好，多次进样的精密度和溶液的稳定性都可以满足测定的需要，故上述方法可用于玉屏风泡腾片中黄芪甲苷的含量测定。

对于使用ELSD检测器的样品，由于其线性关系较紫外法差，因此定量方式多采用标准曲线法或外标两点法测定，我们对这两种方法的测定结果进行了对比。

取三批样品各10片，分别研细、混匀，精密称取粉末约10g，置500ml烧杯中，置60℃水浴中，缓缓加入预热至60℃的水100ml，待气泡散尽(必要时可超声加速气泡溢出)，用中速滤纸抽滤，用水冲洗滤饼(10ml×3)，合并洗液至250ml分液漏斗中，用预先以水饱和的正丁醇提取(70ml×3)，合并正丁醇液，用稀氨水洗涤(40ml×3)，分取正丁醇层，减压蒸干，残渣加甲醇10ml溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品约10mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。精密量取供试品溶液10μl，对照品溶液5μ1和20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标两点法以对数方程计算含量，同时分别以图1标准曲线和对照品溶液(外标两点法)计算含量，结果如下：

批号	050401	050402	050403
				外标法含量(mg/g)	171.5	184.3	188.0
标准曲线含量(mg/g)	172.9	185.8	189.6

采用两种计算方法的结果一致，为简化操作和计算，最终含量测定采用外标两点法测定

附图说明：

图1是以黄芪甲苷对照品浓度(μg/ml)的自然对数～峰面积的自然对数绘制的标准曲线图。

具体实施方式：

本发明的实施例1：黄芪1998g、防风666g、炒白术666g、微晶纤维素430g、交联聚乙烯吡咯烷酮190g、低取代羟丙基纤维素150g、微粉硅胶154g、碳酸氢钠465g、枸橼酸380g、富马酸210g、阿司帕坦15g

将防风酌予破碎，提取挥发油，备用，药渣及黄芪、炒白术二味加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成50～60℃相对密度为1.10±0.02的稠膏，加2倍量乙醇使沉淀，静置24小时，过滤，滤液减压回收乙醇并浓缩成适量，真空干燥，干浸膏粉碎过80目筛，与处方量的微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、微粉硅胶、交联聚乙烯吡咯烷酮、阿司帕坦、碳酸氢钠、枸橼酸、富马酸混合均匀，加入挥发油密闭，压成1000片，包装即得。本制剂溶于适量水后口服，一次3片，一日3次。

本发明的实施例2：质量控制方法包括以下部分或全部内容：

性状：本制剂为黄白色片，片面有散在黄色斑点。

鉴别：(1)取本发明制剂3片，研细，加水30ml，待发泡完全后，过滤，滤液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次，每次20ml，弃去氨液，正丁醇蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2并在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，365nm紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点。

(2)取本发明制剂6片，研细，加水50ml，待发泡完全后，过滤，滤液用乙醚振摇提取2次，每次25ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取白术对照药材2g，加水50ml，煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶乙酸乙酯＝7∶3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％对二甲氯基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，365nm紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点。

(3)取本发明制剂含量测定项下的供试品溶液作为供试品溶液，取5-O-叶基维斯阿米醇苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释成每1ml中含200μg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈∶水＝21∶79为流动相，检测波长254nm，供试品溶液中5-O-甲基维斯阿米醇苷与相邻峰的分离度应符合要求；分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入色谱仪，供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。

检查：

崩解时限取本发明制剂1片，置盛有200ml25℃水的250ml烧杯中，有许多气泡放出，当气泡停止逸出时，片剂完全分散在水中，无聚集的颗粒剩余；取本发明制剂6片，同法测定；各片均应在5分钟内崩解完半。

其他应符合《中国药典》2005版附录ID片剂项下有关的各项规定。

含量测定：

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水按30～80％∶70～20％照下表做梯度洗脱；用蒸发光散射检测器检测，理论板数以黄芪甲苷峰计算应不小于5000：

时间(min)	乙腈％
		0	30
15	30
		20	80
30	80

对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中含0.2mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取本发明制剂10片，研细、混匀，精密称取粉末约10g，置500ml烧杯中，置60℃水浴中，缓缓加入预热至60℃的水100ml，待气泡散尽，也可超声加速气泡溢出，用中速滤纸抽滤，用预热至60℃的水冲洗滤饼3次，每次10ml，合并洗液至250ml分液漏斗中；用水饱和正丁醇提取三次，每次70ml，合并正丁醇液，用稀氨水洗涤三次，每次40ml，分取正丁醇层，减压蒸干；残渣加甲醇10ml溶解，作为供试品溶液；

测定法精密吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl和20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标两点法以对数方程计算，即得；

本发明制剂每片含黄芪以黄芪甲苷C₄₁H₆₈O₁₄计，应不低于0.39mg。

本发明的实施例3：质量控制方法可包括以下内容：

性状：本制剂为黄白色片，片面有散在黄色斑点。

鉴别：(1)取本发明制剂3片，研细，加水30ml，待发泡完全后，过滤，滤液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次，每次20mml，弃去氨液，正丁醇蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2并在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，365nm紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点。

(2)取本发明制剂6片，研细，加水50ml，待发泡完全后，过滤，滤液用乙醚振摇提取2次，每次25ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取白术对照药材2g，加水50ml，煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶乙酸乙酯＝7∶3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％对二甲氯基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，365nm紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点。

检查：应符合《中国药典》2005版附录ID片剂项下有关的各项规定。

含量测定：

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水按30～80％∶70～20％照下表做梯度洗脱；用蒸发光散射检测器检测，理论板数以黄芪甲苷峰计算应不小于5000；

时间(min)	乙腈％
		0	30
15	30
		20	80
30	80

对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中含0.2mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取本发明制剂10片，研细、混匀，精密称取粉末约10g，置500ml烧杯中，置60℃水浴中，缓缓加入预热至60℃的水100ml，待气泡散尽，也可超产加速气泡溢出，用中速滤纸抽滤，用预热至60℃的水冲洗滤饼3次，每次10ml，合并洗液至250ml分液漏斗中；用水饱和正丁醇提取三次，每次70ml，合并正丁醇液，用稀氨水洗涤三次，每次40ml，分取正丁醇层，减压蒸干；残渣加甲醇10ml溶解，作为供试品溶液：

测定法精密吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl和20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标两点法以对数方程计算，即得；

本发明制剂每片含黄芪以黄芪甲苷C₄₁H₆₈O₁₄计，应不低于0.39mg。

本发明的实施例4：质量控制方法可包括以下内容：

性状：本制剂为黄白色片，片面有散在黄色斑点；

鉴别：(1)取本发明制剂6片，研细，加水50ml，待发泡完全后，过滤，滤液用乙醚振摇提取2次，每次25ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取白术对照药材2g，加水50ml，煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材溶液：照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶乙酸乙酯＝7∶3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％对二甲氯基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，365nm紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点。

(2)取本制剂含量测定项下的供试品溶液作为供试品溶液，取5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释成每1ml中含200μg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈∶水＝21∶79为流动相，检测波长254nm，供试品溶液中5-O-甲基维斯阿米醇苷与相邻峰的分离度应符合要求；分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入色谱仪，供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。

检查：

崩解时限  取本发明制剂1片，置盛有200ml25℃水的250ml烧杯中，有许多气泡放出，当气泡停止逸出时，片剂完全分散在水中，无聚集的颗粒剩余；取本发明制剂6片，同法测定；各片均应在5分钟内崩解完毕。

其他应符合《中国药典》2005版附录ID片剂项下有关的各项规定。

本发明的实施例5：质量控制方法可包括以下内容：

性状：本制剂为黄白色片，片面有散在黄色斑点。

鉴别：取本发明制剂3片，研细，加水30ml，待发泡完全后，过滤，滤液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次，每次20ml，弃去氨液，正丁醇蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2并在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，365nm紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点。

检查：

崩解时限取本发明制剂1片，置盛有200ml 25℃水的250ml烧杯中，有许多气泡放出，当气泡停止逸出时，片剂完全分散在水中，无聚集的颗粒剩余；取本发明制剂6片，同法测定；各片均应在5分钟内崩解完毕。

其他应符合《中国药典》2005版附录ID片剂项下有关的各项规定。

含量测定：

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水按30～80％∶70～20％照下表做梯度洗脱；用蒸发光散射检测器检测，理论板数以黄芪甲苷峰计算应不小于5000：

时间(min)	乙腈％
		0	30
15	30
		20	80
30	80

对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中含0.2mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取本发明制剂10片，研细、混匀，精密称取粉末约10g，置500ml烧杯中，置60℃水浴中，缓缓加入预热至60℃的水100ml，待气泡散尽，也可超声加速气泡溢出，用中速滤纸抽滤，用预热至60℃的水冲洗滤饼3次，每次10ml，合并洗液至250ml分液漏斗中：用水饱和正丁醇提取三次，每次70ml，合并正丁醇液，用稀氨水洗涤三次，每次40ml，分取正丁醇层，减压蒸干；残渣加甲醇10ml溶解，作为供试品溶液；

测定法精密吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl和20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标两点法以对数方程计算，即得；

本发明制剂每片含黄芪以黄芪甲苷C₄₁H₆₈O₁₄计，应不低于0.39mg。

本发明的实施例6：质量控制方法可包括以下内容：

性状：本制剂为黄白色片，片面有散在黄色斑点。

鉴别：取本制剂含量测定项下的供试品溶液作为供试品溶液，取5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释成每1ml中含200μg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈∶水＝21∶79为流动相，检测波长254nm，供试品溶液中5-O-甲基维斯阿米醇苷与相邻峰的分离度应符合要求；分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入色谱仪，供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。

检查：

崩解时限取本发明制剂1片，置盛有200ml25℃水的250ml烧杯中，有许多气泡放出，当气泡停止逸出时，片剂完全分散在水中，无聚集的颗粒剩余；取本发明制剂6片，同法测定；各片均应在5分钟内崩解完毕。

其他  应符合《中国药典》2005版附录ID片剂项下有关的各项规定。

含量测定：

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水按30～80％∶70～20％照下表做梯度洗脱：用蒸发光散射检测器检测，理论板数以黄芪甲苷峰计算应不小于5000：

时间(min)	乙腈％
		0	30
15	30
		20	80
30	80

对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中含0.2mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取本发明制剂10片，研细、混匀，精密称取粉末约10g，置500ml烧杯中，置60℃水浴中，缓缓加入预热至60℃的水100ml，待气泡散尽，也可超声加速气泡溢出，用中速滤纸抽滤，用预热至60℃的水冲洗滤饼3次，每次10ml，合并洗液至250ml分液漏斗中；用水饱和正丁醇提取三次，每次70ml，合并正丁醇液，用稀氨水洗涤三次，每次40ml，分取正丁醇层，减压蒸干；残渣加甲醇10ml溶解，作为供试品溶液；

测定法精密吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl和20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标两点法以对数方程计算，即得；

本发明制剂每片含黄芪以黄芪甲苷C₄₁H₆₈O₁₄计，应不低于0.39mg。

Claims (7)

1.一种治疗呼吸、循环系统疾病的泡腾片，其特征在于：它是用黄芪1998g、防风666g、炒白术666g和微晶纤维素430g、交联聚乙烯吡咯烷酮190g、低取代羟丙基纤维素150g、微粉硅胶154g、碳酸氢钠465g、枸橼酸380g、富马酸210g、阿司帕坦15g制备而成的。

2.如权利要求1所述治疗呼吸、循环系统疾病的泡腾片的制备方法，其特征在于：将防风酌予破碎，提取挥发油，备用，药渣及黄芪、炒白术二味加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成50～60℃相对密度为1.10±0.02的稠膏，加2倍量乙醇使沉淀，静置24小时，过滤，滤液减压回收乙醇并浓缩成适量，真空干燥，干浸膏粉碎过80目筛，与微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、微粉硅胶、交联聚乙烯吡咯烷酮、阿司帕坦、碳酸氢钠、枸橼酸、富马酸混合均匀，加入挥发油密闭，压片，包装即得。

3.如权利要求1或2所述治疗呼吸、循环系统疾病的泡腾片的质量控制方法，其特征在于：所述质量控制方法主要包括性状、检查，以及鉴别、含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别包括以黄芪甲苷对照品、白术对照药材为对照的薄层鉴别和以5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品为对照的高效液相色谱法；含量测定是以黄芪甲苷对照品为对照的高效液相色谱法。

4.按照权利要求3所述治疗呼吸、循环系统疾病的泡腾片的质量控制方法，其特征在于：黄芪药材的鉴别方法是以黄芪甲苷对照品为对照，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2并在10℃以下放置的下层溶液为展开剂的薄层鉴别方法；白术药材的鉴别方法是以白术对照药材为对照，以环己烷∶乙酸乙酯＝7∶3为展开剂的薄层鉴别方法；防风药材的鉴别方法是以5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品为对照，以乙腈∶水＝21∶79为流动相的高效液相色谱法。

5.按照权利要求3或4所述治疗呼吸、循环系统疾病的泡腾片的质量控制方法，其特征在于：鉴别方法包括以下项目的部分或全部：

(1)取制剂3片，研细，加水30ml，待发泡完全后，过滤，滤液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次，每次20ml，弃去氨液，正丁醇蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2并在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，365nm紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

(2)取制剂6片，研细，加水50ml，待发泡完全后，过滤，滤液用乙醚振摇提取2次，每次25ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取白术对照药材2g，加水50ml，煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶乙酸乙酯＝7∶3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％对二甲氯基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，365nm紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

(3)取本制剂含量测定项下的供试品溶液作为供试品溶液，取5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释成每1ml中含200μg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI D高效液相色谱法试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈∶水＝21∶79为流动相，检测波长254nm，供试品溶液中5-O-甲基维斯阿米醇苷与相邻峰的分离度应符合要求；分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入色谱仪，供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。

6.按照权利要求3所述治疗呼吸、循环系统疾病的泡腾片的质量控制方法，其特征在于：黄芪甲苷的含量测定方法为：

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水按30～80％∶70～20％做梯度洗脱；用蒸发光散射检测器检测，理论板数以黄芪甲苷峰计算应不小于5000；

对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中含0.2mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取制剂10片，研细、混匀，精密称取粉末约10g，置500ml烧杯中，置60℃水浴中，缓缓加入预热至60℃的水100ml，待气泡散尽，也可超声加速气泡溢出，用中速滤纸抽滤，用预热至60℃的水冲洗滤饼3次，每次10ml，合并洗液至250ml分液漏斗中；用水饱和正丁醇提取三次，每次70ml，合并正丁醇液，用稀氨水洗涤三次，每次40ml，分取正丁醇层，减压蒸干；残渣加甲醇10ml溶解，作为供试品溶液；

测定法精密吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl和20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标两点法以对数方程计算，即得；

本制剂每片含黄芪以黄芪甲苷C₄₁H₆₈O₁₄计，应不低于0.39mg。

7.按照权利要求3所述治疗呼吸、循环系统疾病的泡腾片的质量控制方法，其特征在于：所述质量控制方法中的性状为：

本制剂为黄白色片，片面有散在黄色斑点；

鉴别为：(1)取制剂3片，研细，加水30ml，待发泡完全后，过滤，滤液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次，每次20ml，弃去氨液，正丁醇蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2并在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，365nm紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

(2)取制剂6片，研细，加水50ml，待发泡完全后，过滤，滤液用乙醚振摇提取2次，每次25ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取白术对照药材2g，加水50ml，煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材溶液；照附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶乙酸乙酯＝7∶3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％对二甲氯基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，365nm紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

(3)取本制剂含量测定项下的供试品溶液作为供试品溶液，取5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释成每1ml中含200μg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI D高效液相色谱法试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈∶水＝21∶79为流动相，检测波长254nm，供试品溶液中5-O-甲基维斯阿米醇苷与相邻峰的分离度应符合要求；分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入色谱仪，供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰；

检查为：

崩解时限取制剂1片，置盛有200ml25℃水的250ml烧杯中，有许多气泡放出，当气泡停止逸出时，片剂完全分散在水中，无聚集的颗粒剩余；取制剂6片，同法测定；各片均应在5分钟内崩解完毕；

其他应符合《中国药典》2005版附录ID片剂项下有关的各项规定；

含量测定为：

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水按30～80％∶70～20％做梯度洗脱；用蒸发光散射检测器检测，理论板数以黄芪甲苷峰计算应不小于5000；

对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中含0.2mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备  取制剂10片，研细、混匀，精密称取粉末约10g，置500ml烧杯中，置60℃水浴中，缓缓加入预热至60℃的水100ml，待气泡散尽，也可超声加速气泡溢出，用中速滤纸抽滤，用预热至60℃的水冲洗滤饼3次，每次10ml，合并洗液至250ml分液漏斗中；用水饱和正丁醇提取三次，每次70ml，合并正丁醇液，用稀氨水洗涤三次，每次40ml，分取正丁醇层，减压蒸干；残渣加甲醇10ml溶解，作为供试品溶液；

测定法精密吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl和20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标两点法以对数方程计算，即得；

本制剂每片含黄芪以黄芪甲苷C₄₁H₆₈O₁₄计，应不低于0.39mg。

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