CN100339707C - 通过高效液相色谱法检测奥硝唑光学对映体的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了通过高效液相色谱法检测奥硝唑光学对映体的方法，具体如下：(1)色谱条件：色谱柱采用纤维素酯类为固定相的手性柱；流动相为正己烷-甲基叔丁基醚-异丙醇-冰醋酸；检测波长为280nm～340nm。(2)采用有机溶剂将样品配为含奥硝唑消旋体0.05～0.5mg/ml的溶液。(3)测定，记录色谱图。本发明测定方法达到的左、右旋奥硝唑分离度可达1.5～2.3，符合中国药典要求。本发明提供方法同时可用于奥硝唑光学对映体的定量。
Description
技术领域
本发明涉及通过高效液相色谱法检测奥硝唑光学对映体的方法，更具体的说是检测奥硝唑生产过程中或者是奥硝唑产品中左、右旋奥硝唑的方法。
背景技术
奥硝唑(Ornidazole，CAS 16773-42-5)为硝基咪唑类衍生物，其化学名为1-(3-氯-2-羟丙基)-2-甲基-5-硝基咪唑，分子式：C7H10ClN3O3，分子量：219.6，是一种强力抗厌氧菌及抗原虫感染的药物。奥硝唑的抗微生物作用是通过其分子中的硝基在无氧环境中还原成氨基，或通过自由基的形成与细胞成分相互作用，从而导致微生物的死亡。很多消旋体通过高效液相色谱法分离的方法是已知的，但流动相、溶剂、柱温、色谱柱等因素对于拆分结果有很大影响或不适用于目标消旋体。
发明内容
本发明的目的是提供通过高效液相色谱法检测在奥硝唑消旋体手性合成中所得奥硝唑光学对映体的方法，以控制合成样品的纯度。
本发明采用纤维素酯类为固定相的手性柱进行拆分，奥硝唑手性碳原子上有一个羟基和一个氯甲基，而纤维素酯类结构中的空穴和通道与对映体选择性的形成了对映体包合物，从而达到分离。
流动相对实验结果中左、右旋奥硝唑分离度及峰形均有很大影响，经发明人实验摸索，确定以正己烷-甲基叔丁基醚-异丙醇-冰醋酸(75～100∶2～15∶0.1～8∶0.1～1.5，优选为85～95∶6～10∶0.5～3∶0.2～0.8，更优选为90∶8∶2∶0.5)为流动相效果很好。其中加入甲基叔丁基醚可以提高左、右旋奥硝唑分离度，冰醋酸可以改善峰形。
溶剂的选择与左、右旋奥硝唑分离度有关。经实验确定采用正丙醇、异丙醇、乙醇、正丁醇、甲醇或甲基叔丁基醚作为溶解用溶剂，优选以甲基叔丁基醚为溶剂。
本发明提供的通过高效液相色谱法检测左、右旋奥硝唑的方法的具体条件如下：
1.色谱条件：色谱柱采用纤维素酯类为固定相的手性柱；流动相为正己烷-甲基叔丁基醚-异丙醇-冰醋酸(75～100∶2～15∶0.1～8∶0.1～1.5，优选为85～95∶6～10∶0.5～3∶0.2～0.8，更优选为90∶8∶2∶0.5)；检测波长为280nm～340nm(优选为300nm～320nm，更优选为约310nm)；柱温为20～45℃(优选为35～45℃，更优选为40℃)；流动相流速为0.5～2.0ml/min(优选为0.8-1.2ml/min，更优选为约1.0ml/min)。
2.样品溶液的配置：采用有机溶剂(优选选自正丙醇、异丙醇、乙醇、正丁醇、甲醇或甲基叔丁基醚，更优选为甲基叔丁基醚)，将样品配制为含奥硝唑消旋体0.05～0.5mg/ml(优选0.1～0.3mg/ml，更优选为0.2mg/ml)的溶液。
3.测定：将溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，并进行分析。
采用此色谱条件测定奥硝唑消旋体中左、右旋奥硝唑分离度可达1.5～2.3，符合中国药典要求。此色谱条件同时可用于奥硝唑光学对映体的定量。
附图说明
图1：按照实施例1的条件分离左、右旋奥硝唑的高效液相色谱图。
图2：按照实施例2的条件分离左、右旋奥硝唑的高效液相色谱图。
具体实施方式
实施例1.
仪器：SHIMADZU LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器，HT-230A柱温箱；
色谱柱：Daicel Chralcel OB-H色谱柱(0.46×25cm，5μm)；
流动相：正己烷-甲基叔丁基醚-异丙醇-冰醋酸(90∶8∶2∶0.5)
柱温：40℃；
流速：1.0ml/min；
检测波长：310nm。
定位溶液1的配置：精密称取左旋奥硝唑适量，用甲基叔丁基醚溶解并稀释成0.1mg/ml；
定位溶液2的配置：精密称取右旋奥硝唑适量，用甲基叔丁基醚溶解并稀释成0.1mg/ml；
样品溶液的配置：精密称取奥硝唑消旋体适量，用甲基叔丁基醚溶解并稀释成0.2mg/ml；
测定：各取定位溶液1、定位溶液2、样品溶液20μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图，谱图见图1。奥硝唑消旋体中左、右旋奥硝唑分离度为2.3。其中奥硝唑消旋体中左旋奥硝唑含量为44％，右旋奥硝唑含量为56％。
实施例2.
仪器：SHIMADZU LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器，HT-230A柱温箱；
色谱柱：Hibar RT Cellulose Triacetate色谱柱(0.46×25cm，10μm)；
流动相：正己烷-甲基叔丁基醚-异丙醇-冰醋酸(90∶8∶5∶0.6)
柱温：40℃；
流速：1.5ml/min；
检测波长：300nm。
定位溶液1的配置：精密称取左旋奥硝唑适量，用乙醇溶解并稀释成0.1mg/ml；
定位溶液2的配置：精密称取右旋奥硝唑适量，用乙醇溶解并稀释成0.1mg/ml；
样品溶液的配置：精密称取奥硝唑消旋体适量，用乙醇溶解并稀释成0.2mg/ml；
测定：各取定位溶液1、定位溶液2、样品溶液20μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图，图谱见图2。奥硝唑消旋体中左、右旋奥硝唑分离度为2.0。其中奥硝唑消旋体中左旋奥硝唑含量为45％，右旋奥硝唑含量为55％。
Claims (12)
1.通过高效液相色谱法检测奥硝唑光学对映体的方法，具体如下：
1)色谱条件：色谱柱采用纤维素酯类为固定相的手性柱；流动相为正己烷-甲基叔丁基醚-异丙醇-冰醋酸，比例为75～100∶2～15∶0.1～8∶0.1～1.5；检测波长为280nm～340nm；柱温为20～45℃；流动相流速为0.5～2.0ml/min；
2)样品溶液的配制：采用有机溶剂将样品配制成为含奥硝唑消旋体0.05～0.5mg/ml的溶液，所述有机溶剂选自正丙醇、异丙醇、乙醇、正丁醇、甲醇和甲基叔丁基醚；
3)测定：将溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图并进行分析。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述流动相正己烷-甲基叔丁基醚-异丙醇-冰醋酸比例为85～95∶6～10∶0.5～3∶0.2～0.8。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述流动相正己烷-甲基叔丁基醚-异丙醇-冰醋酸比例为90∶8∶2∶0.5。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于检测波长为300nm～320nm。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于检测波长为310nm。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于柱温为35～45℃。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于柱温为40℃。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于流动相流速为0.8～1.2ml/min。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于流动相流速为1.0ml/min。
10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于样品溶液的配制中采用的有机溶剂为甲基叔丁基醚。
11.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于将样品溶液配制为含奥硝唑消旋体0.1～0.3mg/ml的溶液。
12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于将样品溶液配制为含奥硝唑消旋体0.2mg/ml的溶液。
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