CN107505410B - 高效液相色谱拆分那格列奈及其立体异构体的方法 - Google Patents
高效液相色谱拆分那格列奈及其立体异构体的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107505410B CN107505410B CN201710697637.4A CN201710697637A CN107505410B CN 107505410 B CN107505410 B CN 107505410B CN 201710697637 A CN201710697637 A CN 201710697637A CN 107505410 B CN107505410 B CN 107505410B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nateglinide
- isomer
- hexane
- cis
- resolving
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种高效液相色谱拆分那格列奈及其立体异构体的方法，将含有那格列奈及其顺式异构体和L‑异构体的混合样品溶于稀释液至浓度0.1~2mg/mＬ；以硅胶表面共价键合有直链淀粉‑三（3‑氯‑5‑甲基苯基氨基甲酸酯）为固定相，用高效液相色谱系统拆分那格列奈及其立体异构体。本发明方法可以快速、高效、并可同时拆分那格列奈及其顺式异构体和L‑异构体。其分离效率高、拆分时间短，顺式异构体与那格列奈之间的分离度为3.82，L‑异构体与那格列奈之间的分离度为9.84，有效实现了一种方法对那格列奈和其顺式异构体和L‑异构体的同时分离和测定，保证了那格列奈产品的有效性和安全性。
Description
技术领域
本发明涉及一种那格列奈及其异构体的拆分方法，属于医药技术领域。
背景技术
那格列奈 (Nateglinide)，化学名为N-（反式-4-异丙基环已基-1-甲酰基）-D-苯丙氨酸，是一种非磺酰脲类口服降血糖药，它通过刺激胰岛素释放而降低血糖，具有起效快和作用时间短的特点。
那格列奈分子的立体结构上存在顺反异构和光学异构现象，市售的强活性物质为反式D构型化合物。有报道称口服1.6 mg/Kg那格列奈与口服100 mg/Kg L-异构体产生的降糖效果相当（约20%），而顺式异构体则无降糖作用。在生产过程中，那格列奈原料药中往往会存在少量的顺式及L构型异构体，为了控制顺式及L构型异构体，我们对那格列奈及其手性异构体进行拆分方法研究，对顺式及L构型异构体同时进行控制，可以从一定程度上保证那格列奈产品的有效性和安全性。
那格列奈及其异构体结构式如下：
那格列奈
顺式异构体
L-异构体
Yang等人报道了一种基于（R）-苯甘酸和3，5-二硝基苯胺键合硅胶手性固定相拆分那格列奈及其L-异构体的方法，以Sumichiral OA-3300 (250×4.6 mm, 5µm)为色谱柱，以0.025mol/L的醋酸铵甲醇溶液为流动相，该方法缓冲液浓度较高，色谱柱使用寿命较短（Gengliang Yang等，Chromatographia. (2002). 56(7): 515-518.）。
此后，Yang等人又报道了一种基于分子印迹聚合物固定相拆分那格列奈及其L-异构体的方法，那格列奈和L-异构体之间的分离度仅有1.94（Gengliang Yang等，Chromatographia, 2004, 59(11): 705-708.）。
Sangaraju等报道了一种基于硅胶表面涂敷有直链淀粉-三（3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯）固定相拆分那格列奈及其L-异构体的方法，以Chiralpak AD-H (250×4.6 mm, 5µm)为色谱柱，以正己烷：乙醇（90:10）为流动相，那格列奈和L-异构体之间的分离度为8.2。该方法仅对那格列奈和L-异构体进行了拆分。（Sangaraju S 等，Chromatographia, 2009,69(9-10): 1123- 1127.）
Phan, Thanh Dung等采用胶束电动毛细管色谱法拆分了那格列奈及其L-异构体，以甲基-β-环糊精作为背景电解质，那格列奈和L-异构体间的分离度为2.78，那格列奈和L-异构体的保留时间分别为21.34min和22.14min。（Phan, Thanh Dung等，Archives ofpharmacal research, 2010, 33(12): 2017-2024.）。
Li等报道了一种基于大环糖肽-Ristocetin A键合硅胶为固定相拆分那格列奈及其顺式异构体和L-异构体的方法，以Chirobiotic R（ASTEC: Ristocetin A，250×4.6 mm,5µm）为色谱柱，以甲醇-乙腈（1:1，加0.2%的醋酸和0.1%三乙胺）为流动相，那格列奈与顺式异构体间的分离度为2.07，那格列奈与L-异构体间的分离度仅为2.60，那格列奈峰的理论板数为5950。（李语如等, 药物分析杂志, 2006(4):443-445.）。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种基于新的手性固定相快速、高效、并可同时拆分那格列奈及顺式异构体和L-异构体的高效液相色谱方法。
本发明为实现上述发明目的采用的技术方案如下：本发明是一种高效液相色谱拆分那格列奈及其立体异构体的方法，其特征在于：将含有那格列奈及其顺式异构体和L-异构体的混合样品溶于稀释液至浓度0.1~2mg/mＬ；以硅胶表面共价键合有直链淀粉-三（3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯）为固定相，以正己烷、无水乙醇和三氟乙酸混合溶液为流动相，用高效液相色谱系统拆分那格列奈及其立体异构体；所述的稀释液选自正己烷、无水乙醇、三氟乙酸中一种或者几种组成的混合物。
本发明所述的方法，其进一步优选的技术方案是：所述的以硅胶表面共价键合有直链淀粉-三（3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯）为固定相的手性柱为键合型手性色谱柱CHIRALPAK IG。
本发明所述的方法，其进一步优选的技术方案是：所述的稀释液为正己烷和无水乙醇组成的混合物，且正己烷：无水乙醇的体积比优选为70~90:30~10，进一步优选为，正己烷：无水乙醇的体积比为80:20。
本发明所述的方法，其进一步优选的技术方案是：所述的流动相流速为0.5~2.0mL/min，色谱柱温度为25~45℃，检测波长为210~254 nm。所述色谱柱温度进一步优选为30℃~40℃。
本发明所述的方法，其进一步优选的技术方案是：所述流动相中，按体积比计算，正己烷：无水乙醇：三氟乙酸为70~90 : 10~30 : 0.1~0.5。最优选为，正己烷：无水乙醇：三氟乙酸为80 :20 :0.1。
本发明所述的方法，其进一步优选的技术方案是：所述的进样量为0.1μL ~50μL。
本发明方法中，拆分所用仪器为高效液相色谱仪。
本发明方法采用高效液相色谱系统对那格列奈及其顺式异构体和L-异构体进行拆分，填料为硅胶表面共价键合有直链淀粉-三（3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯），以正己烷、无水乙醇及三氟乙酸的混合溶剂为流动相。本发明分离效率高、拆分时间短，顺式异构体与那格列奈之间的分离度可以达到3.82，L-异构体与那格列奈之间的分离度可以达到9.84，有效实现了一种方法对那格列奈和其顺式异构体和L-异构体的同时分离和测定，保证了那格列奈产品的有效性和安全性。
附图说明
图1 是那格列奈及其顺式异构体和L-异构体的分离色谱图；
图2 是那格列奈中顺式异构体和L-异构体的含量检测色图。
具体实施方式
下面通过具体实施例子并结合附图对本发明进一步阐述，但并不限制本发明。
实施例1，一种高效液相色谱同时拆分那格列奈及其顺式异构体和L-异构体的方法：分别称取那格列奈、顺式异构体和L-异构体适量，用正己烷：无水乙醇（80:20）适量使溶解并稀释制成每1mL中约含那格列奈1mg、顺式异构体2µg和L-异构体2µg的混合溶液；以硅胶表面共价键合有直链淀粉-三（3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯）为固定相，以正己烷、无水乙醇和三氟乙酸混合溶液为流动相，用高效液相色谱系统拆分那格列奈及其异构体；所述的表面共价键合有直链淀粉-三（3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯）型手性柱为键合型手性色谱柱CHIRALPAK IG。所述的流动相流速为1mL/min，色谱柱温度为30℃，检测波长为220nm。所述的进样量为10μL。所述流动相中，按体积比计算，正己烷：无水乙醇：三氟乙酸为80 :20: 0.1。
实施例2，一种高效液相色谱同时拆分那格列奈及其顺式异构体和L-异构体的方法：分别称取那格列奈、顺式异构体和L-异构体适量，用正己烷：无水乙醇（75:25）适量使溶解并稀释制成每1mL中约含那格列奈1mg、顺式异构体2µg和L-异构体2µg的混合溶液；以硅胶表面共价键合有直链淀粉-三（3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯）为固定相，以正己烷、无水乙醇和三氟乙酸混合溶液为流动相，用高效液相色谱系统拆分那格列奈及其异构体；所述的表面共价键合有直链淀粉-三（3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯）型手性柱为键合型手性色谱柱CHIRALPAK IG。所述的流动相流速为0.8mL/min，色谱柱温度为30℃，检测波长为220nm。所述的进样量为20μL。所述流动相中，按体积比计算，正己烷：无水乙醇：三氟乙酸为80 :20: 0.1。
实施例3，一种高效液相色谱同时拆分那格列奈及其顺式异构体和L-异构体的方法：分别称取那格列奈、顺式异构体和L-异构体适量，用稀释液适量使溶解并稀释制成每1mL中约含那格列奈1mg、顺式异构体2µg和L-异构体2µg的混合溶液；以硅胶表面共价键合有直链淀粉-三（3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯）为固定相，以正己烷、无水乙醇和三氟乙酸混合溶液为流动相，用高效液相色谱系统拆分那格列奈及其异构体；所述的稀释液为正己烷：无水乙醇（75:25）。所述的流动相流速为0.8mL/min，色谱柱温度为30℃，检测波长为220nm。所述的进样量为20μL。所述流动相中，按体积比计算，正己烷：无水乙醇：三氟乙酸为80 :20: 0.1。
实施例4，一种高效液相色谱同时拆分那格列奈及其顺式异构体和L-异构体的方法：分别称取那格列奈、顺式异构体和L-异构体适量，用稀释液适量使溶解并稀释制成每1mL中约含那格列奈1mg、顺式异构体2µg和L-异构体2µg的混合溶液；以硅胶表面共价键合有直链淀粉-三（3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯）为固定相，以正己烷、无水乙醇和三氟乙酸混合溶液为流动相，用高效液相色谱系统拆分那格列奈及其异构体；所述的稀释液为正己烷：无水乙醇：三氟乙酸（70:30:0.1）。所述的流动相流速为1.2mL/min，色谱柱温度为35℃，检测波长为210nm。所述的进样量为50μL。所述流动相中，按体积比计算，正己烷：无水乙醇：三氟乙酸为75 :25: 0.1。
实施例5，那格列奈及其对映异构体的拆分实验一：
分别称取那格列奈、顺式异构体和L-异构体适量，用正己烷：无水乙醇（80:20）适量使溶解并稀释制成每1mL中约含那格列奈1mg、顺式异构体2µg和L-异构体2µg的混合溶液，作为系统适用性品溶液；用Chiralpak IG（250×4.6mm，5µm）为色谱柱；以正己烷：无水乙醇：三氟乙酸（80:20:0.1）为流动相；检测波长210nm，柱温35℃。精密量取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，洗脱时间为12min。
色谱分离结果见图1所示，从图1 中可以看出，顺式异构体色谱峰保留时间为5.603min，L-异构体色谱峰保留时间为9.203min，那格列奈色谱峰的保留时间为6.343min；顺式异构体与那格列奈色谱峰两者间分离度为3.82；L-异构体与那格列奈色谱峰两者之间的分离度为9.84。
实施例６，那格列奈中顺式异构体及L-异构体的含量测定实验二：
取本品适量，精密称定，加稀释液（正己烷：无水乙醇=80:20）使溶解并定量稀释制成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液。用硅胶表面共价键合纤维素-三（3,5-二氯苯基氨基甲酸酯）为填充剂；以正己烷：无水：三氟乙酸（80:20:0.1）为流动相；检测波长210nm，柱温35℃。精密量取供试品溶液各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，洗脱时间为12min。
那格列奈中异构体含量结果见图2所示，从图2中可以看出，那格列奈与顺式异构体和L-异构体间良好分离，并能被较好的检出，按峰面积归一化法计算那格列奈中顺式异构体的含量为0.03%，L-异构体的含量为0.01%。
综上所述，本发明的一种那格列奈及其对映体高效液相色谱拆分方法可以同时有效的将那格列奈与顺式异构体和L-异构体很好的分离并准确测定。
以上所述仅是本发明的实施方式的举例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种高效液相色谱拆分那格列奈及其立体异构体的方法，其特征在于：将含有那格列奈及其顺式异构体和L-异构体的混合样品溶于稀释液至浓度0.1~2mg/mＬ；以硅胶表面共价键合有直链淀粉-三（3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯）为固定相，用高效液相色谱系统拆分那格列奈及其立体异构体；
所使用的流动相为正己烷、无水乙醇及三氟乙酸的混合溶液，按体积比计算，正己烷：无水乙醇：三氟乙酸为70~90 :10~30 : 0.1~0.5。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的硅胶表面共价键合有直链淀粉-三（3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯）固定相对应的手性柱为键合型手性色谱柱CHIRALPAK IG。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的稀释液选自正己烷、无水乙醇、三氟乙酸中一种或者几种组成的混合物。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的稀释液为正己烷、无水乙醇组成的混合物，且正己烷：无水乙醇的体积比为70~90:30~10。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，正己烷：无水乙醇的体积比为80:20。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述流动相中，按体积比计算，正己烷：无水乙醇：三氟乙酸为80 :20 : 0.1。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的流动相流速为0.5~2.0mL/min，色谱柱温度为25~45℃，检测波长为210~254 nm。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：所述色谱柱温度为30℃~40℃。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于：进样量为0.1μL ~50μL。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710697637.4A CN107505410B (zh) | 2017-08-15 | 2017-08-15 | 高效液相色谱拆分那格列奈及其立体异构体的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710697637.4A CN107505410B (zh) | 2017-08-15 | 2017-08-15 | 高效液相色谱拆分那格列奈及其立体异构体的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107505410A CN107505410A (zh) | 2017-12-22 |
| CN107505410B true CN107505410B (zh) | 2020-05-08 |
Family
ID=60691854
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710697637.4A Active CN107505410B (zh) | 2017-08-15 | 2017-08-15 | 高效液相色谱拆分那格列奈及其立体异构体的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107505410B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108279273A (zh) * | 2017-12-28 | 2018-07-13 | 常州胜杰化工有限公司 | 一种s-烯虫乙酯的高效液相色谱分析方法 |
| CN108947854B (zh) * | 2018-06-30 | 2020-09-08 | 常州市阳光药业有限公司 | 重酒石酸间羟胺及其异构体的拆分方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100384813C (zh) * | 2002-07-03 | 2008-04-30 | 特瓦制药工业有限公司 | 制备那格列奈及其中间体的方法 |
| CN104133006B (zh) * | 2014-06-18 | 2016-01-20 | 中国民用航空局民用航空医学中心 | 一种超高效液相-质谱法检测血液中降血糖以及降血压药物的方法 |
| CN105929084B (zh) * | 2016-07-18 | 2018-11-23 | 江苏德源药业股份有限公司 | 高效液相色谱拆分苯甲酸阿格列汀及其对映异构体的方法 |
-
2017
- 2017-08-15 CN CN201710697637.4A patent/CN107505410B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107505410A (zh) | 2017-12-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110596268B (zh) | 一种氟雷拉纳消旋体中异构体的分离检测方法 | |
| CN104634887A (zh) | 一种分离和测定替格瑞洛及其光学异构体的方法 | |
| CN107505410B (zh) | 高效液相色谱拆分那格列奈及其立体异构体的方法 | |
| CN111579658B (zh) | 一种茚虫威手性中间体的含量分析方法 | |
| CN104820028B (zh) | 一种用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对映异构体的方法 | |
| Pittler et al. | Enantioseparation of dansyl amino acids by HPLC on a monolithic column dynamically coated with a vancomycin derivative | |
| CN108947854B (zh) | 重酒石酸间羟胺及其异构体的拆分方法 | |
| CN110849980A (zh) | 一种l-丙氨酸异丙酯中对映异构体含量的检测方法 | |
| CN113866337B (zh) | 一种分离与测定磷酸奥司他韦同分异构体的质量分析方法 | |
| Suedee et al. | Direct resolution of propranolol and bupranolol by thin‐layer chromatography using cellulose derivatives as stationary phase | |
| CN106645528B (zh) | 一种替格瑞洛手性异构体含量的高效液相色谱检测方法 | |
| CN107941959A (zh) | 一种分离依折麦布及其光学异构体的液相色谱方法 | |
| Zhou et al. | Separation of mandelic acid and its derivatives with new immobilized cellulose chiral stationary phase | |
| Sethi et al. | Enantioselective LC analysis and determination of selective serotonin reuptake inhibitors | |
| CN109557218B (zh) | Ahu377及其异构体的色谱分析方法 | |
| CN110749692B (zh) | L-谷氨酸二乙酯盐酸盐及其光学异构体的分离检测方法 | |
| CN107064336B (zh) | 一种柱前衍生化分析分离科立内酯二醇对映异构体的方法 | |
| Sung et al. | Preparation of 2R, 3S, 2′ R-nadolol enantiomer using S-(-)-menthyl chloroformate as a chiral derivatizing reagent | |
| CN112480028B (zh) | 一种手性拆分异丙嗪的方法 | |
| CN112979511B (zh) | 一种用hplc分析及制备叔丁基亚磺酰胺对映异构体的方法 | |
| CN107703227B (zh) | 一种甲磺酸多拉司琼手性异构体的高效液相色谱检测方法 | |
| CN109085255B (zh) | 一种hplc法分析及制备3-(n-对甲苯磺酰基-l-丙氨酰氧基)-5-苯基吡咯及其对映异构体的方法 | |
| CN112630313A (zh) | 一种(s)-3-羟基四氢呋喃对映异构体的高效液相拆分方法 | |
| Chen et al. | Comparison of the chiral separation of amino‐acid derivatives by a teicoplanin and RN‐β‐CD CSPs using waterless mobile phases: Factors that enhance resolution | |
| CN101881755A (zh) | 通过高效液相色谱法检测盐酸艾司洛尔光学异构体的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |