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PATENTANSPRÜCHE
1. Verfahren zur Herstellung neuer Polypeptidderivate der Formel 1
A-B-Gly-D-E-F (I) worin
A für einen Rest der Formel
EMI1.1
R1 für Wasserstoff oder eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 C-Atomen,
R2 für Wasserstoff oder zusammen mit R1 für eine Äthy- lenbrücke,
Z für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 5 C-Atomen, Alkenyl mit 3 bis 5 C-Atomen, Alkinyl mit 3 bis 5 C-Atomen, Cyclopropylmethyl oder Cyclobutylmethyl, wobei die HO-Gruppe sich in meta- oder para-Stellung zum
EMI1.2
Rest befindet,
B für -Gly-, -D-Ala-, -Sar- oder -Pro-,
D für -Phe-, -D-Phe-,
-Tyr- oder -D-Tyr-,
E für -D- oder -L-Methionin oder -D- oder -L-Methioninsulfoxid,
F für einen Rest der Formel
EMI1.3
worin
R3 Wasserstoff oder Methyl und
R4 a) -(CH2)m-CH20H m = O bis 6
EMI1.4
worin R5 für Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 5
C-Atomen steht, d) (CH2)nCONH2 n = 1 oder 2 e) (CH2)n-COOR6 worin n für 1 oder 2 und R6 für Wasserstoff oder
Alkyl mit 1 bis 5 C-Atomen steht,
EMI1.5
p = 0 oder 1
EMI1.6
n = 1 oder 2 h) -CH2-CH2-S-CH3
EMI1.7
EMI1.8
bedeuten, stehen, wobei die Reste A und F die Konfiguration der Loder D-Reihe haben können, sowie Säureadditionssalze dieser Polypeptidderivate, dadurch gekennzeichnet, dass man die entsprechenden Aminosäuren bzw.
der Aminoalkohol in der in der obigen Formel festgelegten Reihenfolge einzeln oder nach vorheriger Bildung kleinerer Peptideinheiten miteinander verknüpft, wobei die Aminosäuren und Peptide aktivierte terminale Carboxylgruppen oder aktivierte a-Aminogruppen enthalten können und nicht an der Reaktion teilnehmende freie funktionelle Gruppen intermediär durch geeignete Schutzgruppen geschützt werden können und gegebenenfalls anschliessend die erhaltenen Polypeptide bzw. Polypeptiddert- vate in ihre Säureadditionssalze überführt.
2. Verwendung der nach dem Verfahren gemäss Patentanspruch 1 erhaltenen Polypeptide der Formel I zur Herstellung von Komplexen dieser Verbindungen, dadurch gekennzeichnet, dass man die Polypeptide der Formel I mit komplexbildenden anorganischen Metallverbindungen umsetzt.
Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung neuer Polypeptidderivate der Formel I
A-B-Gly-D-E-F (I) worin
A für einen Rest der Formel
EMI1.9
R1 für Wasserstoff oder eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 C-Atomen,
R2 für Wasserstoff oder zusammen mit R1 für eine Äthylenbrücke
Z für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 5 C-Atomen, Alkenyl mit 3 bis 5 C-Atomen, Alkinyl mit 3 bis 5 C-Atomen, Cyclopropylmethyl oder Cyclobutylmethyl.
wobei die HO-Gruppe sich in meta- oder para-Stellung zum
EMI2.1
Rest befindet,
B für -Gly-, -D-Ala-, -Sar- oder -Pro-,
D für -Phe-, -D-Phe-, -Tyr- oder -D-Tyr-,
E für -D- oder -L-Methionin oder -D- oder -L-Methioninsulfoxid,
F für einen Rest der Formel
EMI2.2
worin
R3 Wasserstoff oder Methyl und
R4 a) (CH2)rnCH2OH m = 0 bis 6
EMI2.3
worin Rs für Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 5
C-Atomen steht, d) (CH2)nCONH n = 1 oder 2 e) -(CH2)n-COOR6 worin n für 1 oder 2 und R6 für Wasserstoff oder
Alkyl mit 1 bis 5 C-Atomen steht,
EMI2.4
p = () oder 1
EMI2.5
n = 1 oder 2 h) -CH2-CH2-S-CH3
EMI2.6
j) -(CH2)4-NH2
EMI2.7
bedeuten, stehen, wobei die Reste A und F die Konfiguration der Loder D-Reihe haben können,
sowie Säureadditionssalze und
Komplexe dieser Polypeptidderivate.
Als Säureadditionssalze kommen solche mit organischen Säuren, polymeren Säuren und Salze mit anorganischen Säuren in Frage. Unter den Komplexen sind z. B. anorganische Verbindungen, die sich von Metallen wie Calcium, Magnesium, Aluminium, Cobalt und insbesondere von Zink ableiten lassen, zu nennen.
In den obigen Verbindungen hat der Rest A bevorzugt die Konfiguration der L-Reihe, und es steht
R1 als Alkylgruppe bevorzugt für Methyl oder zusammen mit R2 für die Äthylenbrücke,
Z als Alkylgruppe bevorzugt für Methyl, als Alkenylgruppe für Allyl und als Alkinylgruppe für 2-Propinyl,
B bevorzugt für den -D-Ala-Rest.
Aus Nature 258, 567-8 (1975) ist es bekannt, dass die natürlichen Enkephaline die nachfolgende Struktur besitzen:
H-Tyr-Gly-Gly-Phe-X-OH (X = Leu oder Met-)
Die neuen Polypeptidderivate der obigen Formel können nach für die Synthese von Verbindungen dieser Art allgemeinen bekannten Methoden hergestellt werden, wobei die Aminosäuren bzw. der Aminoalkohol in der festgelegten Reihenfolge einzeln oder nach vorheriger Bildung kleinerer Peptideinheiten miteinander verknüpft werden. Die Verknüpfung der Aminosäuren und/oder Peptideinheiten erfolgt z. B.
in der Weise, dass man eine Aminosäure mit geschützter a-Aminogruppe und aktivierter terminaler Carboxylgruppe mit einer Aminosäure oder einem Peptid mit freier a -Amino- gruppe und freier oder geschützter terminaler Carboxylgruppe umsetzt oder dass man eine Aminosäure oder ein Peptid mit aktivierter o -Aminogruppe und geschützter terminaler Carboxylgruppe mit einer Aminosäure oder einem Peptid mit freier terminaler Carboxylgruppe und geschützter a-Aminogruppe umsetzt.
Die Aminosäuren und Peptide können während der Synthese auch mit löslichen (Bayer-Methode) oder unlöslichen (Merrifield-Methode) hochmolekularen Polymer-Schutzgruppen versehen werden. Das Einbauen des Aminoalkohols in die Polypeptide geschieht auf analoge Weise wie für die Aminosäuren.
Die Carboxylgruppe kann beispielsweise durch tSberfüh- rung in ein Säureazid, -anhydrid, -imidazolid, -isoxazolid oder einen aktivierten Ester oder durch Reaktion mittels eines Carbodiimids oder N,N'-Carbonyldiimidazols aktiviert werden.
Vorzugsweise wird als Kondensationsmethode die Carbodiimidmethode, die Azidmethode, die Methode der aktivierten Ester und die Anhydridmethode verwendet.
An der Reaktion nicht beteiligte freie, funktionelle Gruppen können beim Aufbau des erfindungsgemässen Peptids durch die von der Synthese langkettiger Peptide her bekannten Schutzgruppen geschützt werden.
Die Umwandlung einer nicht mehr benötigten geschützten Aminogruppe in eine freie Gruppe sowie die Umwandlung einer funktionell abgewandelten Carboxylgruppe in eine freie Carboxylgruppe im Laufe des Verfahrens zur Herstellung der neuen Polypeptide erfolgt nach an sich bekannten Methoden durch Behandlung mit hydrolysierenden bzw. reduzierenden Mitteln.
Die Ausgangsprodukte zur Herstellung der neuen Polypeptidderivate können, sofern sie bisher nicht bekannt waren, nach den für die Peptidchemie bekannten Methoden erhalten werden, wobei die Aminosäuren bzw. der Aminoalkohol einzeln oder nach vorheriger Bildung kleinerer Peptideinheiten miteinander verknüpft werden.
Die durch den Rest Z substituierten Hydroxyphenylalaninderivate können z. B. hergestellt werden, indem man das Hydroxyphenylalanin mit einer entsprechenden Carbonylverbindung umsetzt und das entstandene Addukt durch katalytisch erregten Wasserstoff oder durch komplexe Hydride zum N-Alkylderivat reduziert. Letzteres wird auf bekanntem Wege mit einer N-Schutzgruppe, z. B. der tert. Butyloxycarbonylgruppe, versehen und zur Peptidsynthese eingesetzt. Auch kann man ein Hydroxyphenylalanin, dessen Stickstoffatom, phenolische Hydroxylgruppe und Carboxylgruppe geschützt sind, z. B. Boc-Tyr(Boc)-OCH3, in einem inerten Lösungsmittel mit einer starken Base, z. B. NaH, und dem entsprechenden Halogenderivat ZHal zum alkylierten N,O,O'-geschützten Hydroxyphenylalanin, z. B. Boc-N-Z-Tyr(BOC)-OCH3, umsetzen.
Dieses Derivat wird zur Peptidsynthese, z. B. nach der Azidmethode, eingesetzt. Vorgängig können auch die O-Schutzgruppen entfernt werden.
Das Methioninolsulfoxid kann z. B. durch Oxidation des Schwefelatoms des Methioninols zu einer Sulfoxidgruppe hergestellt werden. Diese Oxidation kann nach an sich für die Umsetzung von Thioäthern in Sulfoxide bekannten Verfahren durchgeführt werden. Vorteilhaft findet die Reaktion in saurer wässriger Lösung oder in einem mit Wasser mischbaren Lösungsmittel statt. Als Säure kann man sowohl eine starke (z. B.
HCl) als auch eine schwache Säure (z. B. Essigsäure) benützen.
Als mit Wasser mischbares Lösungsmittel kann man z. B.
Methanol verwenden. Als Oxidationsmittel verwendet man vorzugsweise Wasserstoffperoxid. Das Oxidationsmittel wird in der theoretischen Menge eingesetzt.
Die Polypeptidderivate der Formel I und die physiologisch verträglichen Säureadditionssalze bzw. Komplexe dieser Verbindungen weisen im Tierversuch interessante pharmakodynamische Eigenschaften auf. Sie können daher als Heilmittel verwendet werden. Insbesondere besitzen sie analgetische Eigenschaften.
Die Verbindungen zeigen z. B. eine hohe Affinität zum Opiatrezeptor im Rattenhirn. Die Testierung erfolgt wie beschrieben bei C. B. Pert and S. H. Snyder, Molecular Pharmacology 10, 868 (1974). Die ED50, d.h. die Konzentration bei der 50% des spezifisch gebundenen t3Hj-Naloxans verdrängt werden, liegt bei diesen Verbindungen bei 10-5 bis 10-'1 Mol/Liter.
Die analgetischen Eigenschaften zeigen sich auch im Tail Flick-Test an der Maus mit Dosen von 1 bis 50 mg/kg Körpergewicht i.v. Die neuen Verbindungen können deshalb als Heilmittel, insbesondere zur Linderung von Schmerzzuständen verschiedenster Genese, verwendet werden. Die zu verwendenden Dosen variieren naturgemäss je nach Art der Substanz, der Administration und des zu behandelnden Zustandes. Im allgemeinen werden jedoch bei Testtieren befriedigende Resultate mit einer Dosis von ca. 0,4 bis 60 mg/kg Körpergewicht erhalten. Diese Dosis kann nötigenfalls in 2 bis 4 Anteilen oder auch als Retardform verabreicht werden. Für grössere Säugetiere liegt die Tagesdosis bei etwa 30 bis 350 mg. So enthalten z. B. für orale Applikationen die Teildosen etwa 7,5 bis 175 mg der Verbindungen der Formel I neben festen oder flüssigen Trägersubstanzen.
Die erfindungsgemäss erhaltenen Verbindungen der Formel I können als Heilmittel Verwendung finden. Diese Heilmittel, beispielsweise eine Lösung oder eine Tablette, können nach bekannten Methoden, unter Verwendung der üblichen Hilfs- und Trägerstoffe, hergestellt werden.
Im folgenden Beispiel, welches die Ausführung des Verfahrens erläutert, den Umfang der Erfindung aber in keiner Weise einschränken soll, erfolgen alle Temperaturangaben in Celsiusgraden.
Es werden folgende Ahkürzungen verwendet:
Boc = tert. Butyloxycarbonyl
DMF = Dimethylformamid
CBO = Benzyloxycarbonyl
Met (o) = Methioninsulfoxid-rest
Beispiel H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Met-Serinol (Tritluoracetat)
2 g Boc-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Met-Serinol werden bei Raumtemperatur in 10 ml CF3COOH/CH2Cl2 1:1 gelöst.
Nach 30 Minuten engt man am Vakuum ein und verreibt den Rückstand mit Äther. Das feste Produkt wird aus Methanol Äther umkristallisiert. Man erhält die Titelverbindung vom Zers.p. 2000: [am20 = +2,10 (c = 1,0 in DMF).
Das als Ausgangsmaterial verwendete Boc-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Met-Serinol wird wie folgt hergestellt: a) Boc-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-OCH3
53 g CBO-D-Ala-Gly-Phe-OCH3 werden in 400 ml Dioxan und 50 ml Wasser nach Zugabe von 5 g eines Pd-Katalysators bei Raumtemperatur unter Normaldruck bis zur konstanten Wasserstoffaufnahme hydriert. Man filtriert vom Katalysator ab, dampft ein und nimmt den Rückstand in 200 ml DMF auf. Zur Lösung bei 0 gibt man 15 g Hydroxisuccinimid, 30 g Boc-Tyrosin und 26 g Dicyclohexylcarbodiimid.
Nach einem Tag bei 0 und einem Tag bei Raumtemperatur filtriert man vom ausgeschiedenen Dicyclohexylharnstoff ab, engt ein und nimmt in Essigester auf. Man wäscht mit verdünnter HCI und Wasser und engt ein. Aus der konzentrierten Lösung kristallisiert die Titelverbindung auf Zusatz von Äther aus. Zers.p. 100 ; [alD20 = -9,5 (c = 1 in DMF).
b) Boc-Tyr-D-Al a-Gly-Phe-N HNH2
43 g Boc-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-OCH3 werden in 300 ml Methanol gelöst und mit 35 ml Hydrazinhydrat versetzt.
Nach einem Tag bei Raumtemperatur dampft man ein und trituriert den Rückstand mit Wasser, welches mit HCI auf pH = 3 abgesäuert wird. Man filtriert vom ausgefallenen Produkt, trocknet und erhält die Titelverbindung vom Zers.p. 195 ; [c/.lD20 = -20,9 (c = 1 in DMF).
c) Boc-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Met-Serinol
Zu 2,5 g Boc-Tyr-D-AlaGly-Phe-NHNH2 in 40 ml DMF gibt man bei -20" 2,7 ml HCl-5,6n in Dioxan, 0,52 ml tert.-Butylnitrit und nach 10 Minuten 3,4 ml Triäthylamin und 2 g H-Met-Serinol-Trifluoracetat. Nach 4 Stunden bei 0 und 15 Stunden bei Raumtemperatur engt man am Vakuum ein, nimmt den Rückstand in Essigester auf und wäscht wiederholt mit verdünnter HCI und Wasser und dampft die organische Phase ein. Der Rückstand kristallisiert aus Methanol-Äther und man erhält die Titelverbindung vom Zers.p. 140"; [am20 = -15 (c = 1 in DMF).
Analog zu dem Beispiel 1 wurden, ausgehend von den entsprechenden Ausgangsverbindungen, auch folgende Polypeptide hergestellt:
Beispiel 2 H-Tyr-DAla-Gly-Phe-Met(O)-Serinol CF3COOH [oJ020 = +0,30 (c = 1 in DMF)
Beispiel 3
H-Tyr-DAla-Gly-Phe-Met-Asparaginol CF3COOH [sIlD22 = 2,10 (c = (),33 in DMF)
Beispiel 4
H-Tyr-DAla-Gly-Phe-Met-Glutaminol CF,COOH []022 = ¯3,() (c = (),4 in DMF)
Beispiel 5 H-Tyr-DAla-G Iy-Phe-Met-Threoninol CF3COO H [α]D22 = +4,7 (c = 1 in DMF)
Beispiel 6 H-Tyr-DAla-Gly-Phe-Met(O)-Threoninol .
CF3COOH [α]D22 = +25,60 (c = 1,07 in CH3COOH 95%)
Beispiel 7 H-Tyr-DAla-Gly-Phe-Met(O)-Asparaginol CF3COOH [α]D22 = +12,8 (c = 1,1 in CH3COOH 95%)
Beispiel 8 H-Tyr-DAla-Gly-Phe-Met(O)-Glutaminol CF3COOH [α]D 22= = +18,50 (c = 0,93 in CH3COOH 95%)
** WARNING ** beginning of DESC field could overlap end of CLMS **.
PATENT CLAIMS
1. Process for the preparation of new polypeptide derivatives of the formula 1
A-B-Gly-D-E-F (I) wherein
A for a residue of the formula
EMI1.1
R1 represents hydrogen or an alkyl group with 1 to 4 carbon atoms,
R2 for hydrogen or together with R1 for an ethylene bridge,
Z represents hydrogen, alkyl having 1 to 5 carbon atoms, alkenyl having 3 to 5 carbon atoms, alkynyl having 3 to 5 carbon atoms, cyclopropylmethyl or cyclobutylmethyl, the HO group being in the meta or para position
EMI1.2
Rest is located
B for -Gly-, -D-Ala-, -Sar- or -Pro-,
D for -Phe-, -D-Phe-,
-Tyr- or -D-Tyr-,
E for -D- or -L-methionine or -D- or -L-methionine sulfoxide,
F for a remainder of the formula
EMI1.3
wherein
R3 is hydrogen or methyl and
R4 a) - (CH2) m-CH20H m = O to 6
EMI1.4
wherein R5 is hydrogen or alkyl with 1 to 5
C atoms, d) (CH2) nCONH2 n = 1 or 2 e) (CH2) n-COOR6 where n is 1 or 2 and R6 is hydrogen or
Alkyl having 1 to 5 carbon atoms,
EMI1.5
p = 0 or 1
EMI1.6
n = 1 or 2 h) -CH2-CH2-S-CH3
EMI1.7
EMI 1.8
mean, where the radicals A and F can have the configuration of the L or D series, and acid addition salts of these polypeptide derivatives, characterized in that the corresponding amino acids or
the amino alcohol is linked individually or in the order defined in the formula above or after the prior formation of smaller peptide units, the amino acids and peptides being able to contain activated terminal carboxyl groups or activated a-amino groups and free functional groups which do not participate in the reaction are intermediately protected by suitable protective groups can and optionally subsequently convert the polypeptides or polypeptide derivatives obtained into their acid addition salts.
2. Use of the polypeptides of the formula I obtained by the process according to claim 1 for the production of complexes of these compounds, characterized in that the polypeptides of the formula I are reacted with complex-forming inorganic metal compounds.
The invention relates to a process for the preparation of new polypeptide derivatives of the formula I.
A-B-Gly-D-E-F (I) wherein
A for a residue of the formula
EMI1.9
R1 represents hydrogen or an alkyl group with 1 to 4 carbon atoms,
R2 for hydrogen or together with R1 for an ethylene bridge
Z represents hydrogen, alkyl having 1 to 5 carbon atoms, alkenyl having 3 to 5 carbon atoms, alkynyl having 3 to 5 carbon atoms, cyclopropylmethyl or cyclobutylmethyl.
the HO group being in the meta or para position to the
EMI2.1
Rest is located
B for -Gly-, -D-Ala-, -Sar- or -Pro-,
D for -Phe-, -D-Phe-, -Tyr- or -D-Tyr-,
E for -D- or -L-methionine or -D- or -L-methionine sulfoxide,
F for a remainder of the formula
EMI2.2
wherein
R3 is hydrogen or methyl and
R4 a) (CH2) rnCH2OH m = 0 to 6
EMI2.3
wherein Rs is hydrogen or alkyl with 1 to 5
C atoms, d) (CH2) nCONH n = 1 or 2 e) - (CH2) n-COOR6 where n is 1 or 2 and R6 is hydrogen or
Alkyl having 1 to 5 carbon atoms,
EMI2.4
p = () or 1
EMI2.5
n = 1 or 2 h) -CH2-CH2-S-CH3
EMI2.6
j) - (CH2) 4-NH2
EMI2.7
mean, where radicals A and F can have the configuration of the Loder D series,
as well as acid addition salts and
Complexes of these polypeptide derivatives.
Suitable acid addition salts are those with organic acids, polymeric acids and salts with inorganic acids. Among the complexes are e.g. B. inorganic compounds that can be derived from metals such as calcium, magnesium, aluminum, cobalt and in particular zinc.
In the above compounds, residue A preferably has the configuration of the L series and it is
R1 as an alkyl group preferably for methyl or together with R2 for the ethylene bridge,
Z as an alkyl group preferably for methyl, as an alkenyl group for allyl and as an alkynyl group for 2-propynyl,
B preferred for the -D-Ala residue.
From Nature 258, 567-8 (1975) it is known that the natural enkephalins have the following structure:
H-Tyr-Gly-Gly-Phe-X-OH (X = Leu or Met-)
The new polypeptide derivatives of the above formula can be prepared by methods which are generally known for the synthesis of compounds of this type, the amino acids or the amino alcohol being linked to one another in the specified sequence or after the prior formation of smaller peptide units. The amino acids and / or peptide units are linked z. B.
in such a way that an amino acid with a protected a-amino group and an activated terminal carboxyl group is reacted with an amino acid or a peptide with a free a-amino group and a free or protected terminal carboxyl group, or in that an amino acid or a peptide with an activated o-amino group and protected terminal carboxyl group with an amino acid or a peptide with free terminal carboxyl group and protected a-amino group.
The amino acids and peptides can also be provided with soluble (Bayer method) or insoluble (Merrifield method) high molecular weight polymer protective groups during the synthesis. The incorporation of the amino alcohol into the polypeptides takes place in a manner analogous to that for the amino acids.
The carboxyl group can be activated, for example, by conversion into an acid azide, anhydride, imidazolide, isoxazolide or an activated ester or by reaction using a carbodiimide or N, N'-carbonyldiimidazole.
The carbodiimide method, the azide method, the activated ester method and the anhydride method are preferably used as the condensation method.
Free, functional groups which are not involved in the reaction can be protected in the construction of the peptide according to the invention by the protective groups known from the synthesis of long-chain peptides.
The conversion of a protected amino group which is no longer required into a free group and the conversion of a functionally modified carboxyl group into a free carboxyl group in the course of the process for the preparation of the new polypeptides is carried out according to methods known per se by treatment with hydrolyzing or reducing agents.
The starting products for the preparation of the new polypeptide derivatives, if they were not previously known, can be obtained by the methods known for peptide chemistry, the amino acids or the amino alcohol being linked individually or after prior formation of smaller peptide units.
The hydroxyphenylalanine derivatives substituted by the Z radical can, for. B. can be prepared by reacting the hydroxyphenylalanine with a corresponding carbonyl compound and reducing the adduct formed by catalytically excited hydrogen or by complex hydrides to the N-alkyl derivative. The latter is known to an N-protecting group, for. B. the tert. Butyloxycarbonyl group, provided and used for peptide synthesis. You can also a hydroxyphenylalanine, the nitrogen atom, phenolic hydroxyl group and carboxyl group are protected, for. B. Boc-Tyr (Boc) -OCH3, in an inert solvent with a strong base, e.g. B. NaH, and the corresponding halogen derivative ZHal for alkylated N, O, O'-protected hydroxyphenylalanine, e.g. B. Boc-N-Z-Tyr (BOC) -OCH3.
This derivative is used for peptide synthesis, e.g. B. used by the azide method. The O-protecting groups can also be removed beforehand.
The methioninolsulfoxide can e.g. B. by oxidation of the sulfur atom of methioninol to a sulfoxide group. This oxidation can be carried out according to processes known per se for the conversion of thioethers into sulfoxides. The reaction advantageously takes place in acidic aqueous solution or in a water-miscible solvent. The acid can be both a strong (e.g.
HCl) as well as a weak acid (e.g. acetic acid).
As a water-miscible solvent, one can e.g. B.
Use methanol. Hydrogen peroxide is preferably used as the oxidizing agent. The theoretical amount of the oxidizing agent is used.
The polypeptide derivatives of the formula I and the physiologically tolerable acid addition salts or complexes of these compounds have interesting pharmacodynamic properties in animal experiments. They can therefore be used as a remedy. In particular, they have analgesic properties.
The connections show e.g. B. a high affinity for the opiate receptor in the rat brain. The test is carried out as described by C. B. Pert and S. H. Snyder, Molecular Pharmacology 10, 868 (1974). The ED50, i.e. the concentration at which 50% of the specifically bound t3Hj naloxane is displaced is 10-5 to 10-'1 mol / liter for these compounds.
The analgesic properties are also shown in the tail flick test on the mouse with doses of 1 to 50 mg / kg body weight IV. The new compounds can therefore be used as a remedy, in particular for the relief of painful conditions of various origins. The doses to be used naturally vary depending on the type of substance, the administration and the condition to be treated. In general, however, satisfactory results are obtained with test animals with a dose of approximately 0.4 to 60 mg / kg body weight. If necessary, this dose can be administered in 2 to 4 portions or as a slow-release form. For larger mammals, the daily dose is around 30 to 350 mg. So contain z. B. for oral applications, the partial doses of about 7.5 to 175 mg of the compounds of the formula I in addition to solid or liquid carriers.
The compounds of the formula I obtained according to the invention can be used as medicaments. These remedies, for example a solution or a tablet, can be prepared by known methods using the customary auxiliaries and carriers.
In the following example, which explains the implementation of the method, but is not intended to restrict the scope of the invention in any way, all the temperatures are given in degrees Celsius.
The following abbreviations are used:
Boc = tert. Butyloxycarbonyl
DMF = dimethylformamide
CBO = benzyloxycarbonyl
Met (o) = methionine sulfoxide residue
Example H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Met-Serinol (Tritluoroacetate)
2 g Boc-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Met-Serinol are dissolved in 10 ml CF3COOH / CH2Cl2 1: 1 at room temperature.
After 30 minutes, the mixture is concentrated in vacuo and the residue is triturated with ether. The solid product is recrystallized from methanol ether. The title compound is obtained from Zers.p. 2000: [am20 = +2.10 (c = 1.0 in DMF).
The Boc-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Met-Serinol used as the starting material is produced as follows: a) Boc-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-OCH3
53 g of CBO-D-Ala-Gly-Phe-OCH3 are hydrogenated in 400 ml of dioxane and 50 ml of water after addition of 5 g of a Pd catalyst at room temperature under normal pressure until constant hydrogen absorption. The catalyst is filtered off, evaporated and the residue is taken up in 200 ml of DMF. 15 g of hydroxisuccinimide, 30 g of Boc-tyrosine and 26 g of dicyclohexylcarbodiimide are added to the solution at 0.
After one day at 0 and one day at room temperature, the precipitated dicyclohexylurea is filtered off, concentrated and taken up in ethyl acetate. It is washed with dilute HCl and water and concentrated. The title compound crystallizes from the concentrated solution upon addition of ether. Zers.p. 100; [alD20 = -9.5 (c = 1 in DMF).
b) Boc-Tyr-D-Al a-Gly-Phe-N HNH2
43 g of Boc-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-OCH3 are dissolved in 300 ml of methanol and mixed with 35 ml of hydrazine hydrate.
After a day at room temperature, the mixture is evaporated and the residue is triturated with water, which is acidified to pH = 3 with HCl. The product which has precipitated is filtered off, dried and the title compound is obtained from the decomp. 195; [c / .ID20 = -20.9 (c = 1 in DMF).
c) Boc-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Met-Serinol
To 2.5 g of Boc-Tyr-D-AlaGly-Phe-NHNH2 in 40 ml of DMF are added at -20 "2.7 ml of HCl-5.6n in dioxane, 0.52 ml of tert-butyl nitrite and after 10 minutes 3.4 ml of triethylamine and 2 g of H-Met-Serinol trifluoroacetate After 4 hours at 0 and 15 hours at room temperature, the mixture is concentrated in vacuo, the residue is taken up in ethyl acetate and washed repeatedly with dilute HCl and water and the organic is evaporated Phase 1. The residue crystallizes from methanol ether and the title compound is obtained from decomp. 140 "; [am20 = -15 (c = 1 in DMF).
Analogously to Example 1, the following polypeptides were also prepared, starting from the corresponding starting compounds:
Example 2 H-Tyr-DAla-Gly-Phe-Met (O) -Serinol CF3COOH [oJ020 = +0.30 (c = 1 in DMF)
Example 3
H-Tyr-DAla-Gly-Phe-Met-Asparaginol CF3COOH [sIlD22 = 2.10 (c = (), 33 in DMF)
Example 4
H-Tyr-DAla-Gly-Phe-Met-Glutaminol CF, COOH [] 022 = ¯3, () (c = (), 4 in DMF)
Example 5 H-Tyr-DAla-G Iy-Phe-Met-Threoninol CF3COO H [α] D22 = +4.7 (c = 1 in DMF)
Example 6 H-Tyr-DAla-Gly-Phe-Met (O) -Threoninol.
CF3COOH [α] D22 = +25.60 (c = 1.07 in CH3COOH 95%)
Example 7 H-Tyr-DAla-Gly-Phe-Met (O) -asparaginol CF3COOH [α] D22 = +12.8 (c = 1.1 in CH3COOH 95%)
Example 8 H-Tyr-DAla-Gly-Phe-Met (O) -Glutaminol CF3COOH [α] D 22 = = +18.50 (c = 0.93 in CH3COOH 95%)