**WARNUNG** Anfang DESC Feld konnte Ende CLMS uberlappen **.
PATENTANSPRÜCHE
1. Verfahren zur Herstellung neuer Polypeptidderivate der Formel I
A-B-Gly-D-E (I) worin
A für einen Rest der Formel
EMI1.1
R1 für Wasserstoff oder eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 C-Atomen,
R2 für Wasserstoff oder zusammen mit R1 für eine Äthylenbrücke,
R3 für Wasserstoff oder eine R4CO-Gruppe,
R4 für einen gesättigten oder ungesättigten, geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 17 C-Atomen, einen Phenylrest oder einen Phenylalkylrest mit 7 bis 12 C-Atomen, wobei die Phenylreste durch 1 oder 2 Substituenten aus der Reihe Halogen, Alkyl mit 1 bis 4 C-Atomen oder Alkoxy mit I bis 4 C-Atomen substituiert sein können, wobei die R3O-Oruppe sich in meta- oder para-Stellung zum
EMI1.2
-Rest befeindet,
Z für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 5 C-Atomen, Alkenyl mit 3 bis 5 C-Atomen,
Alkinyl mit 3 bis 5 C-Atomen, Cyclopropylmethyl, Cyclobutylmethyl oder R4CO-,
B für -Gly-, -D-Ala-, Sar- oder -Pro-,
D für -Phe-, -D-Phe-, -Tyr- oder -D-Tyr- oder, falls R3 eine R4CO-Gruppe bedeutet, für-Tyr(R4CO) oder -D-Tyr(R4CO)-,
E für -D- oder -L-Methioninolslfoxid oder -D- oder -L-Methioninolsulfoxid, worin die OH-Gruppe durch einen R4COO-Rest ersetzt ist, stehen, sowie Säureadditionssalze dieser Polypeptidderivate, dadurch gekennzeichnet, dass man in Polypeptidderivaten der Formel
A-B-Gly-D-E' (11) worin A, B und D die obige Bedeutung haben und E' für einen -D- oder -L-Methioninolrest oder einen -D- oder -L-Methioninolrest, worin die OH-Gruppe durch einen R4COO-Rest ersetzt ist, steht, das Schwefelatom des Methioninol- bzw.
veresterten Methioninolrestes zu einer Sulfoxidgruppe oxidiert und gegebenenfalls die so erhaltenen Polypeptidderivate obiger Formel in ihre Säureadditionssalze überführt.
2. Verwendung der nach dem Verfahren gemäss Patentanspruch 1 erhaltenen Polypeptidderivate der Formel I zur Herstellung von Komplexen dieser Verbindungen, dadurch gekennzeichnet. dass man die Polypeptidderivate der Formel I mit komplexbildenden anorganischen Metallverbindungen umsetzt.
Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung neuer Polypeptidderivate der Formel I
A-B-Gly-D-E (I) worin
A für einen Rest der Formel
EMI1.3
R1 für Wasserstoff oder eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 C-Atomen,
R2 für Wasserstoff oder zusammen mit R1 für eine Äthylenbrücke,
R3 für Wasserstoff oder eine R4CO-Gruppe,
R4 für einen gesättigten oder ungesättigten, geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 17 C-Atomen, einen Phenylrest oder einen Phenylalkylrest mit 7 bis 12 C-Atomen, wobei die Phenylreste durch 1 oder 2 Substituenten aus der Reihe Halogen, Alkyl mit 1 bis 4 C-Atomen oder Alkoxy mit 1 bis 4 C-Atomen substituiert sein können, wobei die R30-Gruppe sich in meta- oder para-Stellung zum
EMI1.4
Rest befindet,
Z für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 5 C-Atomen, Alkenyl mit 3 bis 5 C-Atomen, Alkinyl mit 3 bis 5 C-Atomen,
Cyclopropylmethyl, Cyclobutylmethyl oder R4CO-,
B für -Gly-, -D-Ala-, Sar- oder -Pro-,
D für -Phe-, -D-Phe-, -Tyr- oder -D-Tyr- oder, falls R3 eine R4CO-Gruppe bedeutet, für -Tyr(R4CO)- oder -D-Tyr(R4CO)-,
E für -D- oder -L-Methioninolsulfoxid oder -D- oder -L-Methioninolsulfoxid, worin die OH-Gruppe durch einen R4COO-Rest ersetzt ist, stehen, sowie der Säureadditionssalze dieser Polypeptidderivate und Verfahren zur Herstellung von Komplexen dieser gemäss Patentanspruch 1 erhaltenen Polypeptidderivate.
Als Säureadditionssalze kommen solche mit organischen Säuren, polymeren Säuren und Salze mit anorganischen Säuren in Frage. Unter den Komplexen sind z. B. anorganische Verbindungen, die sich von Metallen wie Calcium, Magnesium, Aluminium, Cobalt und insbesondere von Zink ableiten lassen, zu nennen.
In den obigen Verbindungen kann der Rest A sowohl die Konfiguration der D- als auch der L-Reihe haben, bevorzugt jedoch diese der L-Reihe, und es steht Rt als Alkylgruppe bevorzugt für Methyl oder zusammen mit R2 für die Äthylenbrücke,
Z als Alkylgruppe bevorzugt für Methyl, als Alkenylgruppe für Allyl und als Alkinylgruppe für 2-Propinyl,
B bevorzugt für den -D-Ala-Rest.
Aus Nature 258, 567-8 (1975) ist es bekannt, dass die natürlichen Enkephaline die nachfolgende Struktur besitzen:
H-Tyr-Gly-Gly-Phe-X-OH (X = Leu oder Met-)
Die Polypeptidderivate der obigen Formel I können erfindungsgemäss hergestellt werden, indem man in Polypeptidderivaten der Formel
A-B-Gly-D-E' (11) worin A, B und D die obige Bedeutung haben und E' für einen -D- oder -L-Methioninolrest oder einen -D- oder -L-Methioninolrest, worin die OH-Gruppe durch einen R4COO-Rest ersetzt ist, steht, das Schwefelatom des Methioninol- bzw.
veresterten Methioninolrestes zu einer Sulfoxidgruppe oxidiert.
Diese Oxidation kann nach an sich für die Umsetzung von Thioäthern in Sulfoxide bekannten Verfahren durchgeführt werden.
Vorteilhaft findet die Reaktion in saurer wässriger Lösung
oder in einem mit Wasser mischbaren Lösungsmittel statt. Als Säure kann man sowohl eine starke (z. B. HCI) als auch eine schwache Säure (z. B. Essigsäure) benützen. Als mit Wasser mischbares Lösungsmittel kann man z. B. Methanol verwenden. Als Oxidationsmittel verwendet man vorzugsweise Wasserstoffperoxid. Das Oxidationsmittel wird in der theoretischen Menge eingesetzt.
Die als Ausgangsprodukte verwendeten Polypeptidderivate der Formel II können nach für die Synthese von Verbindungen dieser Art allgemein bekannten Methoden hergestellt werden, wobei die Aminosäuren in der festgelegten Reihenfolge einzeln oder nach vorheriger Bildung kleinerer Peptideinheiten miteinander verknüpft werden. Die Verknüpfung der Aminosäuren und/oder Peptideinheiten erfolgt z.
B. in der Weise, dass man eine Aminosäure mit geschützter a-Aminogruppe und aktivierter terminaler Carboxylgruppe mit einer Aminosäure oder einem Peptid mit freier a-Aminogruppe und freier oder geschützter terminaler Carboxylgruppe umsetzt oder dass man eine Aminosäure oder ein Peptid mit aktivierter a-Aminogruppe und geschützter terminaler Carboxylgruppe mit einer Aminosäure oder einem Peptid mit freier terminaler Carboxylgruppe und geschützter a-Aminogruppe umsetzt.
Die Aminosäuren und Peptide können während der Synthese auch mit löslichen (Bayer-Methode) oder unlöslichen (Merrifield-Methode) hochmolekularen Polymer-Schutzgruppen versehen werden. Das Einbauen des Aminoalkohols in die Polypeptide geschieht auf analoge Weise wie für die Aminosäuren.
Die Carboxylgruppe kann beispielsweise durch Überführung in ein Säureazid, -anhydrid, -imidazolid, -isoxazolid oder einen aktivierten Ester oder durch Reaktion mittels eines Carbodiimids oder N,N'-Carbonyldiimidazols aktiviert werden.
Vorzugsweise wird als Kondensationsmethode die Carbodiimidmethode, die Azidmethode, die Methode der aktivierten Ester und die Anhydridmethode verwendet.
An der Reaktion nicht beteiligte freie, funktionelle Gruppen können beim Aufbau des nach dem erfindungsgemässen Verfahren erhaltenen Peptids durch die von der Synthese langkettiger Peptide her bekannten Schutzgruppen geschützt werden.
Die Umwandlung einer nicht mehr benötigten geschützten Aminogruppe in eine freie Gruppe sowie die Umwandlung einer funktionell abgewandelten Carboxylgruppe in eine freie Carboxylgruppe im Laufe des Verfahrens zur Herstellung der neuen Polypeptide erfolgt nach an sich bekannten Methoden durch Behandlung mit hydrolysierenden bzw. reduzierenden Mitteln.
Die Ausgangsprodukte zur Herstellung der neuen Polypeptidderivate können, sofern sie bisher nicht bekannt waren, nach an sich bekannten Methoden erhalten werden, wobei die Aminosäuren bzw. der Aminoalkohol einzeln oder nach vorheriger Bildung kleinerer Peptideinheiten miteinander verknüpft werden.
Die durch den Rest Z substituierten Hydroxyphenylalaninderivate können z. B. hergestellt werden, indem man das Hydroxyphenylalanin mit einer entsprechenden Carbonylverhindung umsetzt und das entstandene Addukt durch katalytisch erregten Wasserstoff oder durch komplexe Hydride zum N-Alkylderivat reduziert. Letzteres wird auf bekanntem Wege mit einer N-Schutzgruppe, z. B. der tert. Butyloxycarbonylgruppe, versehen und zur Peptidsynthese eingesetzt. Auch kann man ein Hydroxyphenylalanin, dessen Stickstoffatom, phenolische Hydroxylgruppe und Carboxylgruppe geschützt sind, z. B. Boc-Tyr(Boc)-OCH3, in einem inerten Lösungsmittel mit einer starken Base, z. B. NaH, und dem entsprechenden Halogenderivat ZHal zum alkylierten N,O,O'-geschützten Hydroxyphenylalanin, z. B. Boc-N-Z-Tyr(BOC)-OCH3, umsetzen. Dieses Derivat wird zur Peptidsynthese, z.
B. nach der Azidmethode, eingesetzt. Vorgängig können auch die O-Schutzgruppen entfernt werden.
Die mit einem R4CO-Rest veresterten Polypeptidderivate können auch nach an sich bekannten Methoden hergestellt werden. Die O-Acylderivate der Formel I können z. B. durch Umsetzung der nichtacylierten Verbindungen mit einem entsprechenden Acylierungsmittel in einer stark sauren Lösung erhalten werden. Als stark saures Lösungsmittel verwendet man vorzugsweise Trifluoressigsäure. Die N,O-Acylderivate der Formel I erhält man z. B. durch Umsetzung der nichtacylierten Verbindungen mit einem entsprechenden Acylierungsmittel in einem indifferenten Lösungsmittel. Als indifferentes Lösungsmittel verwendet man vorzugsweise Methylenchlorid.
Als Acylierungsmittel können z. B. R4COCI oder (R4CO)2O eingesetzt werden.
Die Polypeptidderivate der Formel I und die physiologisch verträglichen Säureadditionssalze bzw. Komplexe dieser Verbindungen weisen im Tierversuch interessante pharmakodynamische Eigenschaften auf. Sie können daher als Heilmittel verwendet werden. Insbesondere besitzen sie analgetische Eigenschaften.
Die Verbindungen zeigen z. B. eine hohe Affinität zum Opiatrezeptor im Rattenhirn. Die Testierung erfolgt wie beschrieben bei C. B. Pert and S. H. Snyder, Molecular Pharmacology 10, 868 (1974). Die ED,,, d.h. die Konzentration, bei der 50% des spezifisch gebundenen [3H]-Naloxans verdrängt werden, liegt bei diesen Verbindungen bei 10-5 bis 10-11 Mol/Liter.
Die analgetischen Eigenschaften zeigen sich auch im Tail Flick-Test an der Maus mit Dosen von 1 bis 50 mg/kg Körpergewicht i. v. Die neuen Verbindungen können deshalb als Heilmittel, insbesondere zur Linderung von Schmerzzuständen verschiedenster Genese, verwendet werden. Die zu verwendenden Dosen variieren naturgemäss je nach Art der Substanz, der Administration und des zu behandelnden Zustandes. Im allgemeinen werden jedoch bei Testtieren befriedigende Resultate mit einer Dosis von ca. 0,4 bis 60 mg/kg Körpergewicht erhalten. Diese Dosis kann nötigenfalls in 2 bis 4 Anteilen oder auch als Retardform verabreicht werden. Für grössere Säugetiere liegt die Tagesdosis bei etwa 30 bis 350 mg. So enthalten z. B. für orale Applikationen die Teildosen etwa 7,5 bis 175 mg der Verbindungen der Formel I neben festen oder flüssigen Trägersubstanzen.
Die erfindungsgemässen Verbindungen der Formel I können als Heilmittel verwendet werden. Diese Heilmittel, beispielsweise eine Lösung oder eine Tablette, können nach bekannten Methoden, unter Verwendung der üblichen Hilfsund Trägerstoffe, hergestellt werden.
Im folgenden Beispiel, welches die Ausführung des Verfahrens erläutert, den Umfang der Erfindung aber in keiner Weise einschränken soll, erfolgen alle Temperaturangaben in Celsiusgraden.
Es werden folgende Abkürzungen verwendet: TFA = Trifluoressigsäure BOC = tert.-Butyloxycarbonyl Bzl = Benzyl DMF -= Dimethylformamid
Beispiel
H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Methioninolsulfoxid
0,57 g H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Methioninol werden in 10 ml 2n Essigsäure gelöst und mit 1,0 ml 1,0m H202 versetzt. Nach einer Stunde bei Raumtemperatur wird die Lösung bei 25 C zur Trockene abgedampft, der Rückstand in Wasser gelöst und lyophilisiert. [C(1D2O = + 23 c = 0,6 in Essigsäure 95%.
Das als Ausgangsmaterial verwendete H-Tyr-D-Ala-Gly Phe-Methioninol wird wie folgt hergestellt: a) BOC-Phe-Methioninol
2,9 g BOC-Phe-OH und 1,4 ml N-Äthylmorpholin werden in 50 ml abs. Tetrahydrofuran gelöst und bei -10" mit 1,4 ml Chlorameisensäure-isobutylester versetzt. Nach 10 Minuten gibt man eine Lösung von 1,7 g Methioninol-hydrochlorid und 1,26 ml N-Äthylmorpholin in 25 ml Dimethylformamid zu. Nach 2stündigem Rühren bei Raumtemperatur wird die Lösung im Vakuum abgedampft und der Rückstand in Essigester aufgenommen. Man wäscht wiederholt mit verdünnter Citronensäure und Kaliumbicarbonat und isoliert die Titelverbindung. Smp. 106 ; [alD20 = -24" (c = 2,0 in DMF).
b) H-Phe-Methioninol trifluoracetat
3,8 g BOC-Phe-Methioninol werden in 50 ml Trifluoressigsäure/1-Chlorbutan (1:1) 1 Stunde lang bei Raumtemperatur stehengelassen. Anschliessend wird die Lösung zur Trokkene abgedampft. mit einem Gemisch Äther/Petroläther (1:2) pulverisiert und direkt für die Kupplung weiterbenützt.
c) BOC-D-Ala-Gly-OBzl
1,9 g BOC-D-Ala-OH und 1,3 ml N-Äthylmorpholin werden in 50 ml abs. Tetrahydrofuran gelöst und bei -15" 1,3 ml Chlorameisensäure-isobutylester dazugetropft. Nach 5 Minuten gibt man eine Lösung von 3,4 g Glycin-benzylestertosylat und 1,3 ml N-Äthylmorpholin in 50 ml DMF dazu.
Nach lstündigem Rühren bei -10" wird das Reaktionsgemisch eingedampft und der Rückstand in Essigester aufgenommen. Man wäscht wiederholt mit verdünnter Zitronensäure und Kaliumbicarbonat. Die Titelverbindung kristallisiert aus Äther. Smp. 88 ; [am20 = 11,6 (c = 2,0 in DMF).
d) H-D-Ala-Gly-OBzl Hydrochlorid
3,4 g BOC-D-Ala-Gly-OBzl werden in 50 ml HC1-halti- gem Dioxan gelöst und während 1 Stunde stehengelassen. Man engt die Lösung im Vakuum ein und versetzt mit überschüssigem Äther. Das ausgefallene Salz wird abfiltriert, getrocknet und als solches zur Kupplung eingesetzt.
e) BOC-Tyr-D-Ala-Gly-O Bzl
2,8 g BOC-Tyr-OH und 1,3 ml N-Äthylmorpholin werden in 50 ml abs. Tetrahydrofuran gelöst und bei -15" 1,3 ml Chlorameisensäure-isobutylester dazugetropft. Nach 5 Minuten gibt man die Lösung von 2,7 g HCl H-D-Ala-Gly-OBzl und 1,3 ml N-Äthylmorpholin in 20 ml DMF dazu. Nach stündigem Rühren bei -10" wird wie unter c) aufgearbeitet.
Die Titelverbindung kristallisiert aus Methanol-Petroläther.
Zers.p. 650: [a]n20 = 35,0 (c = 1,5 in Methanol).
f) BOC-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Methioninol
5,0 g BOC-Tyr-D-Ala-Gly-OBzl werden in 50 ml Methanol unter Zusatz von Pd/C katalytisch hydriert. 4,1 g BOC-Tyr- D-Ala-Gly-OH und 1,1 ml N-Methylmorpholin werden in 50 ml abs. Tetrahydrofuran gelöst und bei -15" 1,0 ml Chlorameisensäureäthylester zugetropft. Nach 5 Minuten gibt man eine Lösung von 4,0 g H-Phe-Methioninol trifluoracetat und 1,2 ml N-Methylmorpholin in 50 ml DMF dazu. Nach 1stündigem Rühren bei 0 wird das Reaktionsgemisch eingedampft und der Rückstand in Essigester aufgenommen. Man wäscht wiederholt mit 10%iger Phosphorsäure und in Natriumbicarbonat. Nach Eindampfen des Essigesters wird der Rückstand in Methanol/Äther kristallisiert.
Smp, 158 ; [alD20 = - 18 (c = 0,7 in DMF).
g) H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Methioninol
2,0 g BOC-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Methioninol werden in 20 ml TFA-CH2CI2 gelöst und während 30 Minuten bei 0 stehengelassen. Nach Einengen der Lösung im Vakuum wird die Verbindung mit Äther ausgefällt und abfiltriert. Man erhält die Titelverbindung als amorphes TFA-Salz. [u]D20 = +25 (c = 2,1 in Essigsäure- 95%).
Aus diesem TFA-Salz wird mit Hilfe eines basischen Ionenaustauschers die freie Base hergestellt.
Aminosäureanalyse: Tyr 1,0; Ala 1,0; Gly 1,0; Phe 1,0.
** WARNING ** beginning of DESC field could overlap end of CLMS **.
PATENT CLAIMS
1. Process for the preparation of new polypeptide derivatives of the formula I.
A-B-Gly-D-E (I) wherein
A for a residue of the formula
EMI1.1
R1 represents hydrogen or an alkyl group with 1 to 4 carbon atoms,
R2 for hydrogen or together with R1 for an ethylene bridge,
R3 for hydrogen or an R4CO group,
R4 is a saturated or unsaturated, straight-chain or branched alkyl radical having 1 to 17 carbon atoms, a phenyl radical or a phenylalkyl radical having 7 to 12 carbon atoms, the phenyl radicals having 1 or 2 substituents from the series halogen, alkyl having 1 to 4 C atoms or alkoxy can be substituted with I to 4 C atoms, the R3O group being in the meta or para position
EMI1.2
-Rest hostile,
Z for hydrogen, alkyl with 1 to 5 C atoms, alkenyl with 3 to 5 C atoms,
Alkynyl with 3 to 5 carbon atoms, cyclopropylmethyl, cyclobutylmethyl or R4CO-,
B for -Gly-, -D-Ala-, Sar- or -Pro-,
D for -Phe-, -D-Phe-, -Tyr- or -D-Tyr- or, if R3 represents an R4CO group, for -Tyr (R4CO) or -D-Tyr (R4CO) -,
E represents -D- or -L-methioninolslfoxid or -D- or -L-methioninolsulphoxide, in which the OH group is replaced by an R4COO radical, and acid addition salts of these polypeptide derivatives, characterized in that polypeptide derivatives of the formula
AB-Gly-DE '(11) wherein A, B and D have the above meaning and E' for a -D- or -L-methioninol residue or an -D- or -L-methioninol residue, in which the OH group is represented by a R4COO radical is replaced, the sulfur atom of the methioninol or
esterified methioninol residue oxidized to a sulfoxide group and, if necessary, the polypeptide derivatives thus obtained of the above formula are converted into their acid addition salts.
2. Use of the polypeptide derivatives of the formula I obtained by the process according to claim 1 for the preparation of complexes of these compounds, characterized. that the polypeptide derivatives of the formula I are reacted with complex-forming inorganic metal compounds.
The invention relates to a process for the preparation of new polypeptide derivatives of the formula I.
A-B-Gly-D-E (I) wherein
A for a residue of the formula
EMI1.3
R1 represents hydrogen or an alkyl group with 1 to 4 carbon atoms,
R2 for hydrogen or together with R1 for an ethylene bridge,
R3 for hydrogen or an R4CO group,
R4 is a saturated or unsaturated, straight-chain or branched alkyl radical having 1 to 17 carbon atoms, a phenyl radical or a phenylalkyl radical having 7 to 12 carbon atoms, the phenyl radicals having 1 or 2 substituents from the series halogen, alkyl having 1 to 4 C atoms or alkoxy can be substituted with 1 to 4 C atoms, the R30 group being in the meta or para position
EMI1.4
Rest is located
Z represents hydrogen, alkyl having 1 to 5 carbon atoms, alkenyl having 3 to 5 carbon atoms, alkynyl having 3 to 5 carbon atoms,
Cyclopropylmethyl, cyclobutylmethyl or R4CO-,
B for -Gly-, -D-Ala-, Sar- or -Pro-,
D for -Phe-, -D-Phe-, -Tyr- or -D-Tyr- or, if R3 represents an R4CO group, for -Tyr (R4CO) - or -D-Tyr (R4CO) -,
E represents -D- or -L-methioninolsulfoxide or -D- or -L-methioninolsulfoxide, in which the OH group is replaced by an R4COO radical, and the acid addition salts of these polypeptide derivatives and processes for the preparation of complexes thereof according to claim 1 obtained polypeptide derivatives.
Suitable acid addition salts are those with organic acids, polymeric acids and salts with inorganic acids. Among the complexes are e.g. B. inorganic compounds that can be derived from metals such as calcium, magnesium, aluminum, cobalt and in particular zinc.
In the above compounds the radical A can have both the configuration of the D and the L series, but preferably that of the L series, and Rt as the alkyl group is preferably methyl or together with R2 the ethylene bridge,
Z as an alkyl group preferably for methyl, as an alkenyl group for allyl and as an alkynyl group for 2-propynyl,
B preferred for the -D-Ala residue.
From Nature 258, 567-8 (1975) it is known that the natural enkephalins have the following structure:
H-Tyr-Gly-Gly-Phe-X-OH (X = Leu or Met-)
The polypeptide derivatives of the above formula I can be prepared according to the invention by using polypeptide derivatives of the formula
AB-Gly-DE '(11) wherein A, B and D have the above meaning and E' for a -D- or -L-methioninol residue or an -D- or -L-methioninol residue, in which the OH group is represented by a R4COO radical is replaced, the sulfur atom of the methioninol or
esterified methioninol residue oxidized to a sulfoxide group.
This oxidation can be carried out according to processes known per se for the conversion of thioethers into sulfoxides.
The reaction advantageously takes place in acidic aqueous solution
or in a water-miscible solvent instead. Both strong (e.g. HCl) and weak acid (e.g. acetic acid) can be used as the acid. As a water-miscible solvent, one can e.g. B. Use methanol. Hydrogen peroxide is preferably used as the oxidizing agent. The theoretical amount of the oxidizing agent is used.
The polypeptide derivatives of the formula II used as starting products can be prepared by methods which are generally known for the synthesis of compounds of this type, the amino acids being linked to one another in the specified sequence or after prior formation of smaller peptide units. The amino acids and / or peptide units are linked z.
B. in such a way that an amino acid with a protected a-amino group and an activated terminal carboxyl group is reacted with an amino acid or a peptide with a free a-amino group and a free or protected terminal carboxyl group or that an amino acid or a peptide with an activated a-amino group and protected terminal carboxyl group with an amino acid or a peptide with free terminal carboxyl group and protected a-amino group.
The amino acids and peptides can also be provided with soluble (Bayer method) or insoluble (Merrifield method) high molecular weight polymer protective groups during the synthesis. The incorporation of the amino alcohol into the polypeptides takes place in a manner analogous to that for the amino acids.
The carboxyl group can be activated, for example, by conversion to an acid azide, anhydride, imidazolide, isoxazolide or an activated ester or by reaction using a carbodiimide or N, N'-carbonyldiimidazole.
The carbodiimide method, the azide method, the activated ester method and the anhydride method are preferably used as the condensation method.
Free, functional groups not involved in the reaction can be protected by the protective groups known from the synthesis of long-chain peptides when the peptide obtained by the process according to the invention is built up.
The conversion of a protected amino group which is no longer required into a free group and the conversion of a functionally modified carboxyl group into a free carboxyl group in the course of the process for the preparation of the new polypeptides is carried out according to methods known per se by treatment with hydrolyzing or reducing agents.
The starting products for the preparation of the new polypeptide derivatives, if they were not previously known, can be obtained by methods known per se, the amino acids or the amino alcohol being linked individually or after prior formation of smaller peptide units.
The hydroxyphenylalanine derivatives substituted by the Z radical can, for. B. can be prepared by reacting the hydroxyphenylalanine with a corresponding carbonyl compound and reducing the resulting adduct by catalytically excited hydrogen or by complex hydrides to the N-alkyl derivative. The latter is known to an N-protecting group, for. B. the tert. Butyloxycarbonyl group, provided and used for peptide synthesis. You can also a hydroxyphenylalanine, the nitrogen atom, phenolic hydroxyl group and carboxyl group are protected, for. B. Boc-Tyr (Boc) -OCH3, in an inert solvent with a strong base, e.g. B. NaH, and the corresponding halogen derivative ZHal for alkylated N, O, O'-protected hydroxyphenylalanine, e.g. B. Boc-N-Z-Tyr (BOC) -OCH3. This derivative is used for peptide synthesis, e.g.
B. used by the azide method. The O-protecting groups can also be removed beforehand.
The polypeptide derivatives esterified with an R4CO residue can also be prepared by methods known per se. The O-acyl derivatives of the formula I can, for. B. can be obtained by reacting the non-acylated compounds with an appropriate acylating agent in a strongly acidic solution. Trifluoroacetic acid is preferably used as the strongly acidic solvent. The N, O-acyl derivatives of the formula I are obtained, for. B. by reacting the non-acylated compounds with a corresponding acylating agent in an inert solvent. Methylene chloride is preferably used as the inert solvent.
As acylating agents such. B. R4COCI or (R4CO) 2O can be used.
The polypeptide derivatives of the formula I and the physiologically tolerable acid addition salts or complexes of these compounds have interesting pharmacodynamic properties in animal experiments. They can therefore be used as a remedy. In particular, they have analgesic properties.
The connections show e.g. B. a high affinity for the opiate receptor in the rat brain. The test is carried out as described by C. B. Pert and S. H. Snyder, Molecular Pharmacology 10, 868 (1974). The ED ,,, i.e. the concentration at which 50% of the specifically bound [3H] naloxane is displaced is 10-5 to 10-11 mol / liter for these compounds.
The analgesic properties are also shown in the tail flick test on the mouse with doses of 1 to 50 mg / kg body weight i. v. The new compounds can therefore be used as a remedy, in particular for the relief of painful conditions of various origins. The doses to be used naturally vary depending on the type of substance, the administration and the condition to be treated. In general, however, satisfactory results are obtained with test animals with a dose of approximately 0.4 to 60 mg / kg body weight. If necessary, this dose can be administered in 2 to 4 portions or as a slow-release form. For larger mammals, the daily dose is around 30 to 350 mg. So contain z. B. for oral applications, the partial doses of about 7.5 to 175 mg of the compounds of the formula I in addition to solid or liquid carriers.
The compounds of the formula I according to the invention can be used as medicaments. These remedies, for example a solution or a tablet, can be prepared by known methods, using the customary auxiliaries and carriers.
In the following example, which explains the implementation of the method, but is not intended to restrict the scope of the invention in any way, all the temperatures are given in degrees Celsius.
The following abbreviations are used: TFA = trifluoroacetic acid BOC = tert-butyloxycarbonyl Bzl = benzyl DMF - = dimethylformamide
example
H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-methioninolsulfoxide
0.57 g of H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-methioninol are dissolved in 10 ml of 2N acetic acid and mixed with 1.0 ml of 1.0m H202. After one hour at room temperature, the solution is evaporated to dryness at 25 ° C., the residue is dissolved in water and lyophilized. [C (1D2O = + 23 c = 0.6 in acetic acid 95%.
The H-Tyr-D-Ala-Gly Phe-methioninol used as starting material is produced as follows: a) BOC-Phe-methioninol
2.9 g of BOC-Phe-OH and 1.4 ml of N-ethylmorpholine in 50 ml of abs. Tetrahydrofuran dissolved and mixed with 1.4 "isobutyl chloroformate at -10". After 10 minutes, a solution of 1.7 g of methioninol hydrochloride and 1.26 ml of N-ethylmorpholine in 25 ml of dimethylformamide is added. After stirring for 2 hours The room temperature is evaporated in vacuo and the residue is taken up in ethyl acetate. The mixture is washed repeatedly with dilute citric acid and potassium bicarbonate and the title compound is isolated. Mp 106; [alD20 = -24 "(c = 2.0 in DMF).
b) H-Phe-methioninol trifluoroacetate
3.8 g of BOC-Phe-methioninol are left in 50 ml of trifluoroacetic acid / 1-chlorobutane (1: 1) for 1 hour at room temperature. The solution is then evaporated to the dry air. pulverized with a mixture of ether / petroleum ether (1: 2) and used directly for the coupling.
c) BOC-D-Ala-Gly-OBzl
1.9 g BOC-D-Ala-OH and 1.3 ml N-ethylmorpholine are in 50 ml abs. Dissolved tetrahydrofuran and added dropwise at -15 "1.3 ml of isobutyl chloroformate. After 5 minutes, a solution of 3.4 g of glycine benzyl ester tosylate and 1.3 ml of N-ethylmorpholine in 50 ml of DMF is added.
After stirring for 1 hour at -10 ", the reaction mixture is evaporated and the residue is taken up in ethyl acetate. The mixture is washed repeatedly with dilute citric acid and potassium bicarbonate. The title compound crystallizes from ether. Mp 88; [am20 = 11.6 (c = 2.0 in DMF).
d) H-D-Ala-Gly-OBzl hydrochloride
3.4 g of BOC-D-Ala-Gly-OBzl are dissolved in 50 ml of HC1-containing dioxane and left to stand for 1 hour. The solution is concentrated in vacuo and excess ether is added. The precipitated salt is filtered off, dried and used as such for the coupling.
e) BOC-Tyr-D-Ala-Gly-O Bzl
2.8 g BOC-Tyr-OH and 1.3 ml N-ethylmorpholine are in 50 ml abs. Dissolved tetrahydrofuran and added dropwise at -15 "1.3 ml of isobutyl chloroformate. After 5 minutes, the solution of 2.7 g of HCl HD-Ala-Gly-OBzl and 1.3 ml of N-ethylmorpholine in 20 ml of DMF is added. After stirring for hours at -10 ", the mixture is worked up as under c).
The title compound crystallizes from methanol-petroleum ether.
Zers.p. 650: [a] n20 = 35.0 (c = 1.5 in methanol).
f) BOC-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-methioninol
5.0 g of BOC-Tyr-D-Ala-Gly-OBzl are catalytically hydrogenated in 50 ml of methanol with the addition of Pd / C. 4.1 g of BOC-Tyr-D-Ala-Gly-OH and 1.1 ml of N-methylmorpholine are dissolved in 50 ml. Dissolved tetrahydrofuran and added dropwise at -15 "1.0 ml of ethyl chloroformate. After 5 minutes, a solution of 4.0 g of H-Phe-methioninol trifluoroacetate and 1.2 ml of N-methylmorpholine in 50 ml of DMF was added. After stirring for 1 hour The reaction mixture is evaporated and the residue taken up in ethyl acetate, washed repeatedly with 10% phosphoric acid and in sodium bicarbonate, and after the ethyl acetate has been evaporated, the residue is crystallized in methanol / ether.
M.p. 158; [alD20 = - 18 (c = 0.7 in DMF).
g) H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-methioninol
2.0 g of BOC-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-methioninol are dissolved in 20 ml of TFA-CH2CI2 and left at 0 for 30 minutes. After concentrating the solution in vacuo, the compound is precipitated with ether and filtered off. The title compound is obtained as an amorphous TFA salt. [u] D20 = +25 (c = 2.1 in acetic acid- 95%).
The free base is produced from this TFA salt with the aid of a basic ion exchanger.
Amino acid analysis: Tyr 1.0; Ala 1.0; Gly 1.0; Phe 1.0.