Verfahren zur Herstellung neuer Derivate der 7-Amino-cephalosporansäure
Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung neuer therapeutisch wirksamer Derivate der 7-Aminocephalosporansäure (ACA) der Formel 1
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worin Rt einen über eines seiner Stickstoffatome gebundenen Tetrazolylrest bedeutet und R2 Wasserstoff oder eine freie oder durch eine Carbonsäure oder Thiocarbonsäure veresterte Hydroxylgruppe, jedoch nicht die Acetoxygruppe, eine N-substituierte Carbamoylorygruppe, in der Sauerstoffatome durch Schwefel ersetzt sein können, oder eine quaternäre Aminogruppe ist, und ihrer Salze.
Eine wie erwähnt veresterte Hydroxylgruppe R2, die sich von einer Carbonsäure oder Thiocarbonsäure ableitet, ist beispielsweise eine gegebenenfalls z. B.
durch Halogenatome, besonders Chlor, substituierte Niederalkanoyloxygruppe wie Formyloxy, Propionyloxy, Butyryloxy, Pivaloyloxy, Chloracetoxy, oder eine gegebenenfalls z. B. durch Niederalkyl-, Niederalkoxyoder Niederalkylmercaptoreste, Halogenatome oder die Nitrogruppe substituierte mono- oder dicyclische Aryl carbonyloxy- oder Arylthiocarbonyloxygruppe, insbe sondere die Thiobenzoxylgruppe.
R2 kann auch eine substituierte Carbamoyloxygruppe, z.B. eine Gruppe der Formel -O-CO-NR-R3 sein, worin R3 ein aliphatischer, aromatischer, araliphatischer oder heterocyclischer Rest, besonders ein unsubstituierter oder substituierter, vorzugsweise durch eine oder mehrere Niederalkoxygruppen oder Halogen- atome substituierter, gerader oder verzweigter Niederalkylrest, wie der Methyl-, Sithyl-, vor allem aber der ss-Chloräthylrest, ist.
R2 kann weiter eine Thiocarbamoylmercaptogruppe der Formel
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sein, worin R3 die oben angegebene Bedeutung hat und R4 für Wasserstoff oder R5 steht.
R2 bedeutet ferner eine quaternäre Aminogruppe, in der das quaternäre Stickstoffatom z.B. Teil eines aromatischen Ringes, wie eines Chinolin-, Isochinolinoder Pyrimidinringes, insbesondere aber eines unsubstituierten oder substituierten Pyridinringes, z. B. der Formel
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worin R5 für Wasserstoff oder eine oder mehrere Niederalkyl-, Niederalkoxycarbonyl-, Carbamoyl- oder Carboxylgruppen oder ein oder mehrere Halogenatome steht.
Die Salze der neuen Verbindungen sind Metallsalze, vor allem solche von therapeutisch anwendbaren Alkali- oder Erdalkalimetallen, wie Natrium, Kalium, Ammonium, Calcium, oder Salze mit organischen Basen, z. B. Triäthylamin, N-Äthylpiperidin, Dibenzylamin, N-Benzyl-ss-phenetylamin, N,N'-Dibenzyläthylendiamin, Procain, Ephenamin. Ist R2 basisch, so können sich innere Salze bilden.
Die neuen Verbindungen weisen eine besonders gute antibakterielle Wirkung auf. Sie sind sowohl gegenüber grampositiven wie vor allem auch gegenüber gram-negativen Bakterien wirksam, z. B. gegen Staphy lococcus aureus peniciilin-resistent, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Salmonelin typhosa und Bacterium proteus, wie sich auch im Tierversuch, z. B. an Mäusen, zeigt. An diesen sind bei subcutaner Anwendung, je nach Art der bakteriellen Infektion, 0,1-100 mg/kg chemotherapeutisch wirksam. Die Verbindungen können daher zur Bekämpfung von Infektionen, die durch solche Mikroorganismen hervorgerufen werden, verwendet werden, ferner als Futtermittelzusätze, zur Konservierung von Nahrungsmitteln oder als Desinfektionsmittel.
Besonders wertvoll sind Verbindungen, in denen R2 die ss-Chloräthylcarbamoyl- oder eine unsubstituierte oder, wie oben angegeben, substituierte Pyridiniogruppe ist.
Die neuen Verbindungen können nach an sich bekannten Methoden hergestellt werden. Erfindungsgemäss werden sie erhalten, wenn man eine Verbindung der Formel II
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worin Z für Wasserstoff steht und R2 die angegebene Bedeutung hat, durch die Gruppe Rl-CH2-CO- acyliert.
Wenn erwünscht, können erhaltene Verbindungen der Formel I, worin R2 für eine durch eine Thiocarbonsäure veresterte Hydroxylgruppe steht, in entsprechende Verbindungen, worin R2 für eine quaternäre Aminogruppe, z. B. substituierte Pyridiniogruppe, oder insbesondere für die unsubstituierte Pyridiniogruppe steht, übergeführt werden, indem man sie mit einem entsprechenden tertiären Amin, z. B. Pyridin, umsetzt.
Wenn erwünscht, kann man die erhaltenen Verbindungen in ihre therapeutisch verwendbaren Metall-, wie Alkali- oder Erdalkalimetallsalze, oder Salze mit Ammoniak oder organischen Basen überführen oder aus erhaltenen Salzen die freien Carbonsäuren oder gegebenenfalls inneren Salze bilden.
Die Acylierung der Verbindung II, worin Z für Wasserstoff steht, wird in der für die Acylierung von Aminosäuren bekannten Weise, z. B. mittels eines Säurehalogenids, besonders Säurechlorids, oder Säureazids oder eines Säureanhydrids, insbesondere eines gemischten Anhydrids, z. B. eines mit monoveresterter Kohlensäure, Pivalinsäure oder Trichloressigsäure gebildeten gemischten Anhydrids, oder mit der freien Säure selbst in Gegenwart eines I(ondensationsmittels wie eines Carbodiimids, z. B. des Dicyclohexylcarbodiimids, vorgenommen. Man kann die Acylierung der Verbindung II auch in der Weise vornehmen, dass man die Verbindung II, worin Z für Wasserstoff steht, zunächst silyliert oder stannyliert,. das Silylierungs- bzw.
Stannylierungsprodukt mit der Säure oder einem reaktionsfähigen Säurederivat, welches die Gruppe Rl- CH2-CO- enthält, acyliert und gegebenenfalls vorhandene Silyl- oder Stannylgruppen durch Alkohol oder Wasser abspaltet, vgl. z. B. das britische Patent 1 073 530 und die holländische Anmeldung 67, 17107.
Die als Ausgangsstoffe verwendeten Cephalosporinderivate sind bekannt oder können nach an sich bekannten Verfahren hergestellt werden. Verbindungen der Formel II, worin Z für Wasserstoff steht und R eine andere Estergruppe als die Acetoxygruppe ist, werden vorteilhaft nach dem im Schweizer Patent Nr.
507 983 beschriebenen Verfahren hergestellt.
Die Erfindung betrifft auch diejenigen Ausführungsformen des Verfahrens, bei denen die Reaktionskomponenten gegebenenfalls in Form ihrer Salze vorliegen.
Die neuen Verbindungen können als Heilmittel, z. B. in Form pharmazeutischer Präparate, Verwendung finden. Diese enthalten die Verbindungen in Mischung mit einem für die enterale, topicale oder parenterale Applikation geeigneten pharmazeutischen organischen oder anorganischen, festen oder flüssigen Trägermaterial.
Die Erfindung wird in den folgenden Beispielen beschrieben. Die Temperaturen sind in Celsiusgraden angegeben.
In der Dünnschichtchromatographie auf Silicagelplatten werden die folgenden Systeme verwendet:
System 52 = n-Butanol-Eisessig-Wasser (75 : 7,5 : 21)
System 101 A = n-Butanol-Pyridin-Eisessig-Wasser (42:24:4:30).
Beispiel 1
In einem mit Rührer versehenen 100 ml-Sulfierkol- ben wird eine Lösung von 1,41 g 1-TetrazolylessigZ säure und 1,5 ml Triäthylamin in 20 ml Tetrahydrofu ran unter Stickstoffatmosphäre auf -50 C abgekühlt und mit 1,2 ml Trichloracetylchlorid versetzt. Man lässt unter Rühren während 15 Minuten bei der gleichen Temperatur reagieren. Dann wird rasch unter in- tensivem Rühren und Kühlen eine kalte Lösung (ca.
-50" C) von 1,4 g 3-(ss-Chloräthylcarbamoyl-methyl)- 7-amino-ceph-3-em-4-carbonsäure und 2,5 ml Triäthylamin in 50 ml Methylenchlorid zugegeben und noch während 45 Minuten weitergerührt.
Hierauf wird das Reaktionsgemisch auf 30 ml SOlsige wässrige Kaliumdihydrogenphosphat-Lösung gegossen, geschüttelt und auf pH 6,5 eingestellt. Man trennt die Schichten und extrahiert die wässrige Phase zuerst mit 30 ml Methylenchlorid und dann mit 60 ml Essigester nach. Die organischen Phasen werden zweimal mit je 10 ml 0,1 m. Phosphatpuffer pH 6,7 zurückgewaschen und dann verworfen. Die vereinigten wässrigen Phasen werden mit 150ml Essigester überschichtet, mit 4 n.
Salzsäure unter Schütteln auf pH 2,4 eingestellt und die Phasen getrennt. Nach Sättigung mit Kochsalz wird die wässrige Phase noch zweimal mit je 100 ml Essigester extrahiert, die organischen Phasen sukzessive zweimal mit je 20 mol gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, mit Natriumsulfat getrocknet und anschliessend durch eine Säule von 20g Silicagel (Durchmesser 27 mm, Höhe 70 mm) filtriert. Man wäscht die Säule mit 100 ml Essigester nach und dampft das Filtrat im Vakuum zur Trockne ein. Der amorphe, schaumige Rückstand wird in Methanol aufgenommen und mittels Natrium-a-äthylhexanoat in ein Rohkristallisat des Natriumsalzes übergeführt.
Daraus erhält man durch Ansäuern auf pH 2,4, Extraktion mit Essigester und Eindampfen im Vakuum die kristallisierte Säure und daraus mit Natrium-a-äthylhexanoat das reine kristallisierte Natriumsalz der O-Desacetyl-O-(ss-chloräthylcarbamoyl)-7 [tetrazolyl(1)-acetylamino]-cephalosporansäure.
[a]D20 = +1210 + 10 (c = 1 in Wasser).
Rf52 = 0,23; RflotA = 0)5
Das Ausgangsmaterial kann wie folgt hergestellt werden: 0,916 g Desacetyl-7-amino-cephalosporansäure werden in 60 ml abs. Methylenchlorid aufgeschlämmt und mit 0,56ml Triäthylamin versetzt. Nach Zugabe von 1,02 ml bis-(Tri-n-butylzinn)-oxyd löst sich der Niederschlag fast vollständig auf. Unter gutem Rühren werden innerhalb von 5 Minuten 7,7 ml einer 100/eigen Lösung (w/v) von ss-Chloräthylisocyanat in abs.
Methylenchlorid zugetropft. Nach einer Reaktionszeit von 1 Stunde bei Raumtemperatur wird ein wenig ungelöstes Material durch Filtration mittels einer Nutsche mit Hyflo-Filterhilfsmittel entfernt. Der Niederschlag wird mit Methylenchlorid gewaschen und das klare Filtrat mit 2 ml Wasser versetzt. Durch Zugabe von Ameisensäure (ca. 0,6 ml) wird der pH-Wert von 7,7 auf 3,5 herabgesetzt. Die dabei erhaltene Suspension wird während 1 Stunde im Eisbad gekühlt. Das schwach gelbliche Produkt wird abgenutscht, mit Methanol, Methylenchlorid und Äther gewaschen und im Wasserstrahlvakuum getrocknet.
Nach dem Trocknen im Hochvakuum über Nacht werden 0,723 g feinpulverige, beigegefärbte 3 -(p-Chloräthylcarbamoyl-methyi)- 7-amino-ceph-3-em-4-carbonsäure erhalten, welche wie folgt charakterisiert wird:
Dünnschichtchromatographie an Cellulose: für das System (93): n-Butanol-Methanol-Wasser (40:20:40) mit Laufstrecke 14 cm, Rf = 0,70.
Sichtbar gemacht durch Ninhydrin/Collidin.
[a]D20 = +990 11 10 (c = 1,023 /o in 0,1 N NaHCO3).
Beispiel 2 [n einem mit Rührer versehenen 100 ml-Sulfierkolben wird eine Lösung von 1,41 g 1-Tetrazolylessigsäure und 1,5 ml Triäthylamin in 20 ml Tetrahydrofuran unter Stickstoff auf -50 C abgekühlt und mit 1,2 ml Trichloracetylchlorid versetzt. Man lässt unter Rühren während 15 Minuten bei der gleichen Temperatur reagieren. Dann wird rasch unter intensivem Rühren und Kühlen eine kalte Lösung (ca. -50 C) von 1,25 g 3-(Methylcarbamoyl-methyl)7-amino-ceph-3-em-4-carbonsäure und 2,5 ml Triäthylamin in 50 ml Methylenchlorid zugegeben und noch während 45 Minuten weitergerührt.
Hierauf wird das Reaktionsgemisch auf 30 ml 50/obige wässrige Kaliumdihydrogenphosphat-Lösung gegossen, geschüttelt und auf pH 6,5 eingestellt. Man trennt die Schichten und extrahiert die wässrige Phase zuerst mit 30 ml Methylenchlorid und dann mit 60 ml Essigester nach. Die organischen Phasen werden zweimal mit je 10 ml 0,1 m. Phosphatpuffer pH 6,7 zurückgewaschen und dann verworfen. Die vereinigten wässrigen Phasen werden mit 150 ml Essigester überschichtet, mit 4 n.
Salzsäure unter Schütteln auf pH 2,4 eingestellt und die Phasen getrennt. Nach Sättigung mit Kochsalz wird die wässrige Phase noch zweimal mit je 100 ml Essigester extrahiert, die organischen Phasen sukzessive zweimal mit je 20 ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, mit Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ein Gewichtsteil des amorphen, schaumigen Rückstandes wird in ca. 10 Volumteilen Aceton gelöst, mit ca. 30 Volumteilen Chloroform vermischt und auf eine Säule von 50 g Silicagel (Durchmesser 24 mrn, Höhe 22 cm) gegeben. Man eluiert mit einem Gemisch aus Aceton/Chloroform 1:3. In den ersten Eluatfraktionen erhält man eine kleine Menge eines Nebenproduktes. Darauf folgt die gewünschte Substanz.
Die Eluatlösung wird im Vakuum zu einem Schaum eingedampft, in 10 ml Volumteilen Methanol aufgenommen und mittels einer 3-m. methanolischen Na-a-äthylhexanoatlösung in das kristalline Natriumsalz übergeführt. Durch Filtration und Waschen mit Aceton lässt es sich isolieren. Zur weiteren Reinigung wird es in der im Beispiel 1 beschriebenen Weise nochmals in die Säureform übergeführt. Daraus erhält man das reine kristalline Natriumsalz der O-Desacetyl-O-(methylcarbamoyl)-7-[tetra- zolyl(1)-acetylamino] -cephalosporansäure.
[a]D20 = +1270 + 1" (c = 0,98 in Wasser);
Rf52 = 0,17; Rf101A = 0,4.
Das Ausgangsmaterial kann wie folgt hergestellt werden:
1,83 g Desacetyl-7-amino-cephalosporansäure werden in 120 ml abs. Methylenchlorid aufgeschlämmt und mit 1,12 ml Triäthylamin versetzt. Nach Zugabe von 2,04 ml bis-(Tri-n-butylzinn)-oxyd löst sich der Niederschlag fast vollständig auf. Unter gutem Rühren werden innerhalb von 5 Minuten 8,3 ml einer 100/obigen Lösung (w/v) von Methylisocyanat in abs. Methylenchlorid zugetropft. Nach einer Reaktionszeit von 1 Stunde bei Raumtemperatur wird ein wenig ungelöstes Material durch Filtration mittels einer Nutsche mit Hyflo-Filterhilfsmittel entfernt. Der Niederschlag wird mit Methylenchlorid gewaschen und das klare Filtrat mit 4 ml Wasser versetzt.
Durch Zugabe von Ameisensäure (ca. 1,2ml) wird der pH-Wert von 7,7 auf 3,5 herabgesetzt. Die dabei erhaltene Suspension wird während einer Stunde im Eisbad gekühlt. Das schwach gelbliche Produkt wird abgenutscht, mit Methanol, Methylenchlorid und Äther gewaschen und im Wasserstrahlvakuum getrocknet. Nach dem Trocknen im Hochvakuum über Nacht erhält man die 3 -Methylcarbamoylmethyl) 7-amino-ceph-3-em-4-carbonsäure als feinpulveriges beigegefärbtes Material, welches wie folgt charakterisiert wird: Dünnschichtchromatographie an Cellulose: für das System (93): n-Butanol-Methanol-Wasser (40:20:40) mit Laufstrecke 14 cm, Rf = 0,62.
Sichtbar gemacht durch NinhydriníCollidin.
UV-Spektrum (in 0,1 N NaHCOs): max. = 261 nm (8 100).
In analoger Weise kann man die O-Des acetyl-O-äthylcarbamoyl-7-[tetrazolyl (1)-acetylamino] -cephalosporansäure herstellen.
[a]D20= +1240 :1: 10 (c = 0,98 in Wasser); Rfs2 = 0,21; Rf162A = 0,44.
Process for the preparation of new derivatives of 7-amino-cephalosporanic acid
The invention relates to a process for the preparation of new therapeutically effective derivatives of 7-aminocephalosporanic acid (ACA) of the formula 1
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where Rt is a tetrazolyl radical bonded via one of its nitrogen atoms and R2 is hydrogen or a free hydroxyl group or a hydroxyl group esterified by a carboxylic acid or thiocarboxylic acid, but not the acetoxy group, an N-substituted carbamoylory group in which oxygen atoms can be replaced by sulfur, or a quaternary amino group , and their salts.
A hydroxyl group R2 which is esterified as mentioned and which is derived from a carboxylic acid or thiocarboxylic acid is, for example, an optionally z. B.
by halogen atoms, especially chlorine, substituted lower alkanoyloxy group such as formyloxy, propionyloxy, butyryloxy, pivaloyloxy, chloroacetoxy, or an optionally z. B. mono- or dicyclic aryl carbonyloxy or arylthiocarbonyloxy group substituted by lower alkyl, lower alkoxy or lower alkyl mercapto radicals, halogen atoms or the nitro group, in particular the thiobenzoxyl group.
R2 can also be a substituted carbamoyloxy group, e.g. be a group of the formula -O-CO-NR-R3, wherein R3 is an aliphatic, aromatic, araliphatic or heterocyclic radical, especially an unsubstituted or substituted, preferably straight or branched lower alkyl radical, preferably substituted by one or more lower alkoxy groups or halogen atoms, such as the methyl, sithyl, but especially the ss-chloroethyl radical is.
R2 can furthermore be a thiocarbamoyl mercapto group of the formula
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where R3 has the meaning given above and R4 is hydrogen or R5.
R2 also means a quaternary amino group in which the quaternary nitrogen atom is e.g. Part of an aromatic ring, such as a quinoline, isoquinoline or pyrimidine ring, but in particular an unsubstituted or substituted pyridine ring, e.g. B. the formula
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wherein R5 represents hydrogen or one or more lower alkyl, lower alkoxycarbonyl, carbamoyl or carboxyl groups or one or more halogen atoms.
The salts of the new compounds are metal salts, especially those of therapeutically applicable alkali or alkaline earth metals, such as sodium, potassium, ammonium, calcium, or salts with organic bases, e.g. B. triethylamine, N-ethylpiperidine, dibenzylamine, N-benzyl-ss-phenetylamine, N, N'-dibenzylethylenediamine, procaine, ephenamine. If R2 is basic, internal salts can form.
The new compounds have a particularly good antibacterial effect. They are effective against both gram-positive and especially against gram-negative bacteria, e.g. B. against Staphy lococcus aureus peniciilin-resistant, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Salmonelin typhosa and Bacterium proteus, as also found in animal experiments, e.g. B. on mice shows. With subcutaneous application, 0.1-100 mg / kg are chemotherapeutically effective on these, depending on the type of bacterial infection. The compounds can therefore be used to combat infections caused by such microorganisms, and also as feed additives, for the preservation of food or as disinfectants.
Particularly valuable are compounds in which R2 is the β-chloroethylcarbamoyl or an unsubstituted or, as indicated above, substituted pyridinio group.
The new compounds can be prepared by methods known per se. According to the invention, they are obtained when a compound of the formula II
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where Z is hydrogen and R2 has the meaning given, acylated by the group Rl-CH2-CO-.
If desired, compounds of the formula I in which R2 is a hydroxyl group esterified by a thiocarboxylic acid can be converted into corresponding compounds in which R2 is a quaternary amino group, e.g. B. substituted pyridinio group, or especially the unsubstituted pyridinio group, can be converted by treating them with a corresponding tertiary amine, for. B. pyridine, implemented.
If desired, the compounds obtained can be converted into their therapeutically useful metal salts, such as alkali or alkaline earth metal salts, or salts with ammonia or organic bases, or the free carboxylic acids or optionally internal salts can be formed from the salts obtained.
The acylation of the compound II, in which Z is hydrogen, is carried out in the manner known for the acylation of amino acids, e.g. B. by means of an acid halide, especially acid chloride, or acid azide or an acid anhydride, especially a mixed anhydride, e.g. B. a mixed anhydride formed with monoesterified carbonic acid, pivalic acid or trichloroacetic acid, or with the free acid itself in the presence of an ondensating agent such as a carbodiimide, e.g. dicyclohexylcarbodiimide. The acylation of the compound II can also be carried out in this way make that the compound II, in which Z is hydrogen, is first silylated or stannylated, the silylation or
Stannylation product is acylated with the acid or a reactive acid derivative which contains the group Rl — CH2 — CO— and any silyl or stannyl groups present are split off by alcohol or water, cf. z. E.g. British patent 1,073,530 and Dutch application 67, 17107.
The cephalosporin derivatives used as starting materials are known or can be prepared by processes known per se. Compounds of the formula II in which Z is hydrogen and R is an ester group other than the acetoxy group are advantageously prepared according to the method described in Swiss Patent No.
507 983 described method.
The invention also relates to those embodiments of the process in which the reaction components are optionally present in the form of their salts.
The new compounds can be used as remedies, e.g. B. in the form of pharmaceutical preparations, use. These contain the compounds in a mixture with a pharmaceutical, organic or inorganic, solid or liquid carrier material suitable for enteral, topical or parenteral administration.
The invention is described in the following examples. The temperatures are given in degrees Celsius.
The following systems are used in thin layer chromatography on silica gel plates:
System 52 = n-butanol-glacial acetic acid-water (75: 7.5: 21)
System 101 A = n-butanol-pyridine-glacial acetic acid-water (42: 24: 4: 30).
example 1
In a 100 ml sulfonation flask equipped with a stirrer, a solution of 1.41 g of 1-tetrazolyl acetic acid and 1.5 ml of triethylamine in 20 ml of tetrahydrofuran is cooled to -50 ° C. under a nitrogen atmosphere and 1.2 ml of trichloroacetyl chloride are added. It is allowed to react with stirring for 15 minutes at the same temperature. Then quickly a cold solution (approx.
-50 "C) of 1.4 g of 3- (ss-chloroethylcarbamoyl-methyl) -7-amino-ceph-3-em-4-carboxylic acid and 2.5 ml of triethylamine in 50 ml of methylene chloride were added and stirring was continued for 45 minutes .
The reaction mixture is then poured into 30 ml of aqueous aqueous potassium dihydrogen phosphate solution, shaken and adjusted to pH 6.5. The layers are separated and the aqueous phase is extracted first with 30 ml of methylene chloride and then with 60 ml of ethyl acetate. The organic phases are twice with 10 ml 0.1 m. Phosphate buffer pH 6.7 was washed back and then discarded. The combined aqueous phases are covered with 150 ml of ethyl acetate, with 4 n.
Hydrochloric acid adjusted to pH 2.4 with shaking and the phases separated. After saturation with common salt, the aqueous phase is extracted twice with 100 ml of ethyl acetate each time, the organic phases are successively washed twice with 20 mol of saturated common salt solution each time, dried with sodium sulfate and then passed through a column of 20 g of silica gel (diameter 27 mm, height 70 mm) filtered. The column is washed with 100 ml of ethyl acetate and the filtrate is evaporated to dryness in vacuo. The amorphous, foamy residue is taken up in methanol and converted into crude crystals of the sodium salt using sodium a-ethylhexanoate.
Acidification to pH 2.4, extraction with ethyl acetate and evaporation in vacuo gives the crystallized acid and from it the pure crystallized sodium salt of O-deacetyl-O- (ss-chloroethylcarbamoyl) -7 [tetrazolyl (with sodium a-ethylhexanoate) 1) acetylamino] cephalosporanic acid.
[a] D20 = +1210 + 10 (c = 1 in water).
Rf52 = 0.23; RflotA = 0) 5
The starting material can be prepared as follows: 0.916 g of desacetyl-7-amino-cephalosporanic acid are dissolved in 60 ml of abs. Slurried methylene chloride and mixed with 0.56ml triethylamine. After adding 1.02 ml of bis (tri-n-butyltin) oxide, the precipitate dissolves almost completely. With thorough stirring, 7.7 ml of a 100% own solution (w / v) of ß-chloroethyl isocyanate in abs.
Methylene chloride was added dropwise. After a reaction time of 1 hour at room temperature, a little undissolved material is removed by filtration using a suction filter with Hyflo filter aid. The precipitate is washed with methylene chloride and 2 ml of water are added to the clear filtrate. The pH value is reduced from 7.7 to 3.5 by adding formic acid (approx. 0.6 ml). The suspension obtained is cooled in an ice bath for 1 hour. The pale yellowish product is filtered off with suction, washed with methanol, methylene chloride and ether and dried in a water jet vacuum.
After drying in a high vacuum overnight, 0.723 g of finely powdered, beige-colored 3 - (p-chloroethylcarbamoyl-methyi) - 7-amino-ceph-3-em-4-carboxylic acid are obtained, which is characterized as follows:
Thin-layer chromatography on cellulose: for system (93): n-butanol-methanol-water (40:20:40) with a distance of 14 cm, Rf = 0.70.
Made visible by ninhydrin / collidine.
[a] D20 = +990 11 10 (c = 1.023 / o in 0.1 N NaHCO3).
Example 2 [In a 100 ml sulfonation flask equipped with a stirrer, a solution of 1.41 g of 1-tetrazolylacetic acid and 1.5 ml of triethylamine in 20 ml of tetrahydrofuran is cooled to -50 ° C. under nitrogen and treated with 1.2 ml of trichloroacetyl chloride. It is allowed to react with stirring for 15 minutes at the same temperature. Then a cold solution (about -50 ° C.) of 1.25 g of 3- (methylcarbamoyl-methyl) 7-amino-ceph-3-em-4-carboxylic acid and 2.5 ml of triethylamine is rapidly added with vigorous stirring and cooling 50 ml of methylene chloride were added and the mixture was stirred for a further 45 minutes.
The reaction mixture is then poured into 30 ml of 50% above aqueous potassium dihydrogen phosphate solution, shaken and adjusted to pH 6.5. The layers are separated and the aqueous phase is extracted first with 30 ml of methylene chloride and then with 60 ml of ethyl acetate. The organic phases are twice with 10 ml 0.1 m. Phosphate buffer pH 6.7 was washed back and then discarded. The combined aqueous phases are covered with a layer of 150 ml of ethyl acetate, with 4 n.
Hydrochloric acid adjusted to pH 2.4 with shaking and the phases separated. After saturation with common salt, the aqueous phase is extracted twice with 100 ml of ethyl acetate each time, the organic phases are successively washed twice with 20 ml of saturated common salt solution each time, dried with sodium sulfate and evaporated to dryness in vacuo. One part by weight of the amorphous, foamy residue is dissolved in about 10 parts by volume of acetone, mixed with about 30 parts by volume of chloroform and placed on a column of 50 g silica gel (diameter 24 mm, height 22 cm). It is eluted with a mixture of acetone / chloroform 1: 3. A small amount of a by-product is obtained in the first fractions of the eluate. This is followed by the desired substance.
The eluate solution is evaporated to a foam in vacuo, taken up in 10 ml parts by volume of methanol and using a 3-m. methanolic Na-a-ethylhexanoate solution converted into the crystalline sodium salt. It can be isolated by filtration and washing with acetone. For further purification, it is converted again into the acid form in the manner described in Example 1. This gives the pure crystalline sodium salt of O-deacetyl-O- (methylcarbamoyl) -7- [tetrazolyl (1) acetylamino] cephalosporanic acid.
[a] D20 = +1270 + 1 "(c = 0.98 in water);
Rf52 = 0.17; Rf101A = 0.4.
The starting material can be made as follows:
1.83 g of deacetyl-7-aminocephalosporanic acid are dissolved in 120 ml of abs. Slurried methylene chloride and treated with 1.12 ml of triethylamine. After adding 2.04 ml of bis (tri-n-butyltin) oxide, the precipitate dissolves almost completely. With thorough stirring, 8.3 ml of a 100% above solution (w / v) of methyl isocyanate in abs. Methylene chloride was added dropwise. After a reaction time of 1 hour at room temperature, a little undissolved material is removed by filtration using a suction filter with Hyflo filter aid. The precipitate is washed with methylene chloride and 4 ml of water are added to the clear filtrate.
The pH value is reduced from 7.7 to 3.5 by adding formic acid (approx. 1.2 ml). The resulting suspension is cooled in an ice bath for one hour. The pale yellowish product is filtered off with suction, washed with methanol, methylene chloride and ether and dried in a water jet vacuum. After drying in a high vacuum overnight, the 3-methylcarbamoylmethyl) 7-amino-ceph-3-em-4-carboxylic acid is obtained as a finely powdered, beige-colored material, which is characterized as follows: Thin-layer chromatography on cellulose: for system (93): n -Butanol-methanol-water (40:20:40) with running distance 14 cm, Rf = 0.62.
Made visible by ninhydriníCollidin.
UV spectrum (in 0.1 N NaHCOs): max. = 261 nm (8,100).
In an analogous manner, O-Des acetyl-O-ethylcarbamoyl-7- [tetrazolyl (1) acetylamino] cephalosporanic acid can be prepared.
[a] D20 = +1240: 1:10 (c = 0.98 in water); Rfs2 = 0.21; Rf162A = 0.44.