Procédé de dédoublement de la DL-hydroxy-proline Dans son brevet No 327724, la titulaire a décrit un procédé de dédoublement de la DL-proline, de formule (I), par l'intermédiaire des sels N-3,5-dinitrobenzoyliques des prolines <I>D</I> et<I>L,</I> de formule (II), et des<I>D(-)</I> et L(-I-)- thréo-1-p -nitrophényl-2 - amino-propane -1,3- diols, de formule (III).
EMI0001.0011
Le D(-)-thréo-1-p-nitrophényl-2-amino- propane-1,3-diol présente la propriété de don ner avec la N-3,5-dinitrobenzoyl-L-proline un sel peu soluble dans l'eau ou les solvants orga niques tandis que le sel correspondant de la N-3,5-dinitrobenzoyl-D-proline reste dissous. Inversement, et dans les mêmes conditions, la base LU-) donne avec la forme D de l'amino- acide N-3,5-dinitrobenzoylé un sel peu soluble, tandis que le sel correspondant de la forme L reste en solution.
Dans chacun de ces cas, le traitement alcalin de l'insoluble, suivi d'acidi- fication, conduit, après récupération du réactif de dédoublement, à la forme optiquement active recherchée de la N-3,5-dinitrobenzoyl- proline ; le traitement similaire du filtrat conduit à l'énantiomorphe correspondant. L'hy drolyse de la N-3,5-dinitrobenzoylproline dé doublée fournit, sans racémisation, la D- ou L- proline correspondante.
En poursuivant l'étude du dédoublement par les D(-) et L(-I-)-thréo-1-p-nitrophényl- 2-amino-propane-1,3-diols, on a maintenant trouvé que la DL-hydroxy-proline (IV), peut être aussi dédoublée par l'intermédiaire de son dérivé N-3,5-dinitrobenzoylé (V), en utilisant ces agents de dédoublement.
La présente invention a donc pour objet un procédé de dédoublement de la DL-hydroxy- proline par l'intermédiaire de son dérivé N-3,5-dinitrobenzoylé, caractérisé en ce qu'on fait réagir le D(-) ou le L(-I-)-thréo-1-p-nitro- phényl-2-amino-propane-1,3-diol sur la N-3,5- dinitrobenzoyl-DL-hydroxy-proline au sein d'un solvant, l'un des deux énantiomorphes donnant un sel peu soluble avec le réactif de dédouble ment, on sépare les sels des deux énantiomor- phes par leur différence de solubilité,
on libère les N-3,5-dinitrobenzoyl-D- et L-hydroxy-pro- lines de leurs sels par traitement alcalin suivi d'acidification et on saponifie les N-3,5-dinitro- benzoyl-D- et L-hydroxy-prolines pour obtenir, respectivement, les hydroxy-prolines <I>D</I> et<I>L.</I> Les réactifs eux-mêmes sont obtenus sous leurs formes optiquement actives selon la méthode décrite par Velluz, Amiard et July <I>(Bull.
Soc.</I> Chim., 1953, p. 342).
Dans ce procédé et à l'inverse de la pro hne, le sel peu soluble de la N-3,5-dinitro- benzoyl-D-hydroxy-proline est fourni par la base D ; celui de l'énantiomorphe L par la base L.
EMI0002.0017
On peut obtenir ainsi la N-3,5-dinitro- benzoyl-L-hydroxy-proline à partir de N-3,5- dinitrobenzoyl-DL-hydroxy-proline avec un rendement de 90 0/0, ce qui représente un avan tage considérable sur les méthodes connues de dédoublement de cet aminoacide.
C'est ainsi que Leuchs et Bormann<I>(Ber.</I> dtsch. chem. Ges. 1919, 52, 2086) dédoublent le N-phényl-isocyanate de la DL-hydroxy-proline par l'intermédiaire de son sel de quinine avec un rendement qui ne dépasserait pas 30 %. De plus, la N-3,
5-dinitrobenzoylation de l'hy- droxy-proline est pratiquement quantitative et l'hydrolyse du produit dédoublé conduit à l'hydroxy-proline correspondante pure sans ra- cémisation.
On peut effectuer la dinitrobenzoylation par toutes les méthodes connues ou encore faire réagir le chlorure de 3,5-dinitrobenzoyle sur un ester ou un autre dérivé de la proline, d'où l'on peut, ensuite, régénérer facilement l'amino- acide N-acylé. On peut également, lors de la préparation des sels de D(-) ou L(-I-)-thréo- 1-p-nitrophényl-2-aminopropane-1,3-diol, faire varier la nature du solvant, les températures de dissolution et de cristallisation et le temps de refroidissement, sans s'éloigner pour cela du cadre de la présente invention.
Les hydroxy-prolines <I>D</I> et<I>L</I> obtenues par le présent procédé servent à synthétiser des peptides ou d'autres molécules plus complexes à activité physiologique.
L'exemple qui suit illustre l'invention. Exemple <I>Préparation de la</I> N-3,5-dinitrobenzoyl-DL-hydroxy-proline On dissout 10 g de DL-hydroxy-proline dans 200 ems de soude N, refroidit à 01> C et ajoute en une minute, sous vive agitation, 22 g de chlorure de 3,5-dinitrobenzoyle fraîchement pulvérisé. On enlève le bain réfrigérant et agite pendant quinze minutes à la température am biante. Après filtration, on chauffe à 50,) C et introduit 21 ce d'acide chlorhydrique concen tré.
On obtient ainsi, après refroidissement, 24 g (96%) de N-3,5-dinitrobenzoyl-DL- hydroxy-proline, F = 205-207 C. Ce produit est nouveau. <I>Dédoublement et préparation des</I> <I>D- et</I> L-hydroxy-prolines <I>a) Formation du sel de la</I> N-3,5-dinitro- benzoyl-L-hydroxy-proline <I>avec le</I> L(-I-)- thréo <I>-1- p -</I> nitrophényl <I>-2 -</I> amino <I>-</I> propnrie - 1,3-diol On dissout,
à 80 C, 20 g de N-3,5-dinitro- benzoyl-DL-hydroxy-proline dans 160 cm'j de dioxane contenant 5 % d'eau, et ajoute 13,5 g de L(+)-thréo-1-p-nitrophényl-2-amino-pro- pane-1,
3-diol. On refroidit à<B>250C</B> en agitant et essore le sel formé qu'on lave avec deux fois 10 cm-' de dioxane contenant 5 % d'eau. Ce sel hydraté fond à 140-141 C, [a] _ - 780 2 (c = 10/0, eau). Le sel de la N-3,5-dinitrobenzoyl-L-hydroxy-proline avec le L(+) -thréo -1-p -nitrophényl-2-amino-propane- 1,3-diol n'a pas encore été décrit. Rendement en produit sec : 14,7 g (89 0/0).
<I>b) Obtention de la</I> N-3,5-dinitrobenzoyl-L- hydroxy-proline On traite 14,7 g du sel ci-dessus par 32 ce de soude N. On observe la dissolution du pro duit puis la cristallisation du L(-I-)-thréo-1-p- nitrophényl-2-amino-propane-1,3-diol qu'on essore et lave avec un peu d'eau. On récupère ainsi 4,8 g (35,5 0/0) du réactif de dédouble ment. On acidifie le filtrat obtenu ci-dessus, saturé de chlorure de sodium, par 3,5 ce d'acide chlorhydrique concentré et extrait en quatre fois par 15, 10, 5 et 5 ce d'acétate d'éthyle. On lave la solution organique avec un peu d'eau, sèche sur sulfate de magnésium et évapore.
On obtient 8,3 g de N-3,5-dinitro- benzoyl-L-hydroxy-proline (83,% par rapport à la N-3,5-dinitrobenzoyl-DL-hydroxy-proline de départ). [U120 = -147o 2 (c = 1 éthanol à 50 0/0). Ce produit est nouveau. <I>c) Séparation de la</I> L-hydroxy-proline On chauffe quarante minutes au reflux une solution de 2,5 g de N-3,5-dinitrobenzoyl-L- hydroxy-proline dans 25 ce d'acide chlor hydrique 5 N.
On filtre, évapore à sec sous vide et cristallise dans l'acétone le chlorhydrate de L-hydroxy-prolïne obtenu. On reprend dans un volume d'eau, ajoute 0,7 ce d'aniline puis 12 cm-' d'alcool absolu bouillant. On obtient ainsi, après refroidissement, 0,87 g (87 0/0) de L-hydroxy-proline cristallisée, F = 273-274 C, [c7 D = -77o 1o (c = 1 0/0, eau). <I>d)
Séparation de la</I> D-hydroxy-proline On évapore à sec la solution d'où a cristal lisé le sel de N-3,5-dinitrobenzoyl-L-hydroxy- proline avec le L(-', )-thréo-l-p-nitrophényl- 2-amino-propane-1,3-diol et reprend par un peu d'eau. En traitant cette solution aqueuse concentrée par 40 ce de soude N, on récu père, comme indiqué en b), 7,2 g (53 0/0) de réactif de dédoublement. Le filtrat saturé de chlorure de sodium et additionné de 5 ce d'acide chlorhydrique concentré est extrait à l'acétate d'éthyle comme en b).
On concentre la solution organique à 20 ce et récupère par refroidissement 1,5 g (7,5 0/0) de N-3,5-dinitro- benzoyl-DL-proline qui peut être adjoint à une nouvelle venue de racémique à dédoubler. On filtre, évapore à sec et obtient 9,5 g (95 0/0) de N-3,5-dimtrobenzoyl-D-hydroxy-proline amorphe souillée par une faible quantité de racémique ; [a]'20 = -I- 1150 2 (c = 1 %, éthanol à 50 0/0).
On obtient la D-hydroxy- proline correspondante par hydrolyse chlor hydrique ménagée comme il est indiqué en c) pour la L-hydroxy-prohne.
<I>Préparation de la</I> N-3,5-dinitrobenzoyl-D-hydroxy-proline <I>à l'aide du</I> D(-)-thréo-1-p-nitrophényl- 2-amino-propane-1,3-diol La N-3,5-dinitrobenzoyl-D-hydroxy-proline impure obtenue selon d) est traitée par le D (-) -thréo-1-p,nitrophényl-2-amino-propane- 1,3-diol comme il est indiqué en a) pour le L(+) -thréo-1-p -nitrophényl-2-amino-propane- 1,3-diol. On obtient ainsi le sel hydraté de la N-3,5-dinitrobenzoyl-D-hydroxy-proline avec le D (-)
-thréo-1-p-nitrophényl-2-amino-propane- 1,3-diol, F = 140-141 C, [(xjD = -h 780 2 (c = 1;%, eau). Ce produit est nouveau. Il conduit comme en 1 b), à la N-3,5-dinitro- benzoyl-D-hydroxy-proline amorphe, [a]2 = -I- 147o 2 (c = 10/0, éthanol à 50,0/0, puis, suivant l'exemple 1 c) à la D-hydroxy-proline optiquement pure, [ajD = -i- 770 10 (c = 1'%,
eau). La N-3,5-dinitrobenzoyl-D-hydroxy- proline n'a pas encore été décrite.