<B>Procédé de dédoublement de la</B> DL-profine La présente invention est relative à un pro cédé de dédoublement de la DL-proline, com posé correspondant à la formule (1). La nota tion<I>DL</I> désigne la proline racémique, mélange en proportions égales de L-proline et de son énantiomorphe, la D-proline.
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La proline est l'un des acides aminés gluco- formateurs intervenant, sous sa forme lévogyre (L-proline), dans le métabolisme animal.
Elle participe, en outre, sous ses deux formes D et L, à la structure de divers polypeptides la forme D dans les polypeptides de l'ergot de seigle ; la forme L dans la gramicidine, l'A:C.T.H., l'ocytocine, etc.
Les méthodes de synthèse de la proline conduisant au racémique, il est nécessaire de pouvoir disposer d'un procédé de dédoublement facile et peu onéreux. La seule méthode de dédoublement de la DL-proline actuellement connue fait intervenir, comme intermédiaire, le sel de cinchonine de la N-m-nitrobenzoylproline (cf. E. Fischer et Zemplen, <I>Ber.</I> dtsch. chem. Ges., 1909, 42, 2989). Selon les auteurs de cette méthode, le rendement du dédoublement ne dépasserait pas 40 /o.
De plus, lorsqu'on procède à la saponification des dérivés N-m- nitrobenzoylés de D- et L-proline obtenus, on provoque une racémisation partielle, ce qui oblige à effectuer la purification de la D- ou de la L-proline par l'intermédiaire de sels métalliques.
La présente invention a pour objet un procédé de dédoublement de la DL-proline par l'intermédiaire du sel de la N-3,5-dinitro- benzoyl-DL-proline et du D(-) ou L(+) thréo-1-p - nitrophényl - 2 - amino -propane -1,3 - diol.
Le procédé suivant l'invention est carac térisé en ce qu'on fait réagir le D(-)- ou le L(+)-thréo -1-p -nitroph6nyl-2-amino-propane- 1,3-diol sur la N-3,5-dinitrobenzoyl-DL-proline au sein d'un solvant, l'un des deux énantio- morphes donnant un sel peu soluble avec le réactif de dédoublement, on sépare les sels des deux énantiomorphes par leur différence de solubilité, on libère les N-3,
5-dinitrobenzoyl- D- et =L-prolines de leurs sels par traitement alcalin suivi d'acidification et on saponifie les D- et L-N-3,5-dinitrobenzoyl-prolines pour ob tenir respectivement les prolines D et L. Le rendement de dédoublement est géné ralement compris entre 80 et 90 0/0. Cette méthode offre, en outre, l'avantage de conduire à la N-3,5-dinitrobenzoyl-D-proline et la N-3,5- dinitrobenzoyl-L-proline que l'on peut hydro lyser sans racémisation notable.
Dans le brevet No 319787, la titulaire a décrit l'utilisation du L(+)-thréo-1-p-nitro- phényl-2-amino-propane-1,3-diol comme agent de résolution des DL-acyl-tryptophanes, par exemple des N-acétyl- et N-formyl-DL-trypto- phanes. Or, il a été trouvé que, par suite de trop grandes solubilités, les N-acétyl- et N- formyl-DL-prolines ne conviennent pas.
Par contre, il est possible d'opérer sur la N-3,5- dinitrobenzoyl-DL-proline (II) : alors que les énantiomorphes L des acyltryptophanes for maient avec le L(;
)-thréo-1-p-nitrophényl-2- amino-propane-1,3-diol des sels peu solubles, la N-3,5-dinitrobenzoyl-D-proline forme avec le L(+)-thréo-1-p -nitrophényl-2- amino-propane- 1,3-diol un sel très peu soluble dans l'eau. ou dans certains solvants organiques, tels que l'alcool, tandis que le sel correspondant de la N-3,5-di- nitrobenzoyl-L-proline reste entièrement dissous dans ces conditions.
Les N-3,5-dinitrobenzoyl-D- et L-prolines offrent, en outre, l'avantage consi dérable d'être très facilement hydrolysées en prolines <I>D</I> et<I>L,</I> pratiquement sans racémisa- tion. Il suffit d'isoler le précipité formé par action de L(+)-thréo-1-p-nitrophényl-2-amino- propane-1,3-diol sur le racémate de N-3,
5- dinitrobenzoyl-proline et de le traiter par un agent alcalin pour obtenir le sel alcalin de la N-3,5-dinitrobenzoyl-D-proline, d'où l'on passe par acidification à la N-3,5-dinitrobenzoyl- D-proline puis, par saponification, à la D- proline. Par un traitement similaire du filtrat, on obtient la N-3,5-dinitrobenzoyl-L-proline qui peut alors être souillée par de faibles quantités de racémique.
En général, une série de recristallisations dans un solvant approprié suffit à purifier ce produit. Dans le cas où une purification plus complète serait nécessaire, on peut avantageusement traiter le mélange par le D(-)-thréo-1-p-nitrophényl-2-amino -propane- 1,3-diol qui, à l'inverse de son énantiomorphe L, fournit, dans les conditions précitées, avec la N-3,5-dinitrobenzoyl-L-proline un sel peu soluble. Ce sel cristallise tandis que le sel cor respondant formé avec la N-3,5-dinitrobenzoyl- D-proline reste dissous.
Par traitement alcalin suivi d'acidification, on passe ensuite aisément à la L-proline pure.
La N-3,5-dinitrobenzoyl-DL-proline peut être préparée aisément par N-3,5-dinitroben- zoylation de la DL-proline selon Schotten- Baumann (cf. Saunders, <I>J.</I> Chem. <I>Soc.</I> 1938, page 1397). Il faut noter que l'auteur n'a pas envisagé l'emploi de ce dérivé pour le dédou blement de la proline.
Le L(-I-)-thréo-1-p-nitrophényl-2-amino- propane-1,3-diol, dérivé de la synthèse du chloramphénicol, lors du dédoublement de la base racémique correspondante, est obtenu se lon le procédé décrit par Velluz, Amiard et Joly <I>(Bull. Soc.</I> Chirn., 1953, page 342). II présente la structure (III). Ses caractéristiques physiques sont les suivantes : F = 162-163,) C ;
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(c = 2 0/0, acide chlor hydrique 0,1N).
EMI0002.0078
(D(-)-thréo-1-p-nitrophényl-2-amino-propane- 1,3-diol :
EMI0002.0081
(c = 2 0/0, acide chlorhydrique 0,1N)).
Si l'on opère, dans la mise en oeuvre du procédé suivant l'invention, par exemple au sein de l'eau ou d'un solvant organique tel que l'alcool, le L(+)-thréo-1-p-nitrophényl-2- amino-propane-1,3-diol fournit un sel de<I>N-3,5-</I> dinitrobenzoyl-D-proline très peu soluble, tan dis que le sel de N-3,5-dinitrobenzoyl-L- proline reste dissous.
La N-3,5-dinitrobenzoyl- D-proline obtenue par dédoublement trouve, ainsi qu'il a été indiqué, son usage pour l'ob tention de la D-proline. La N-3,5-dinitro- benzoyl-L-proline résiduelle peut être trans formée en L-proline par saponification. On sait que la proline optiquement active est aisé ment racémisée, par exemple par chauffage à 140-145 C, en présence d'eau de baryte, selon Fischer (Z. Physiol. Chem., 1901,<I>33,</I> 167).
Par le jeu des dédoublements et des racémisations successives de la forme L, on peut transformer ainsi la totalité de la forme L, primitivement présente, en forme D. On peut également opérer de façon similaire pour transformer, par dédoublements et racémisa- tions successives de la forme D, la totalité de la forme<I>D,</I> primitivement présente, en forme<I>L.</I>
En libérant les N-3,5-dinitrobenzoyl-D- et L-prolines de leurs sels, sous l'action d'une base, on récupère plus de 90 % du réactif de dédoublement mis en jeu. Ce réactif peut être utilisé à nouveau.
L'exemple suivant illustre l'invention.
On peut notamment effectuer la dinitro- benzoylation par toutes les méthodes connues ou encore faire réagir le chlorure de 3,5-di- nitrobenzoyle sur un ester ou un autre dérivé de la proline d'où l'on peut, ensuite, régénérer facilement l'aminoacide N-acylé. On peut éga lement, lors de la préparation des sels de D(-) ou L(+)-thréo-1-p-nitrophényl-2-amine- propane-1,3-diol, faire varier la nature du solvant, les températures de dissolution et de cristallisation et le temps de refroidissement.
<I>Exemple</I> <I>Préparation</I> <I>de la</I> N-3,5-dinitrobenzoyl-DL-proline On opère selon Saunders <I>(J.</I> Chem. <I>Soc.,</I> 1938, page 1397). On dissout 2,7 g de DL- proline dans 52 cm-' de soude, refroidit à 00 C et ajoute 6,25 g de chlorure de 3,5-dinitro- benzoyle. On enlève le bain réfrigérant et agite quinze minutes à température ambiante. Après filtration, on introduit 5 cms d'acide chlor hydrique concentré. On obtient ainsi 6,8 g (95%) de N-3,5-dinitrobenzoyl-DL-proline, F. 221-2220 C.
<I>Dédoublement à l'aide de</I> L(+ )-thréo-1-p-nitrophényl-2-amino-propane- 1,3-diol <I>et séparation des</I> prolines <I>D et L</I> <I>a) Formation du sel de la</I> N-3,5-dinitro- benzoyl-D-proline <I>et du</I> L(-I-)-thréo-1-p- nitrophényl-2-amino-propane-1,3-diol. On dissout vers 70o C 5 g de dérivé N-3,5- dinitrobenzoylé ci-dessus dans 25 cm3 d'eau et ajoute 3,75 g de L(+)
-thréo-1 p-nitrophényl- 2-amino-propane-1,3-diol. On refroidit à 400 C, en trente minutes, sous agitation, et essore le sel formé qu'on lave avec un peu d'eau. Après recristallisation dans l'eau et séchage à l'étuve à 600 C, le produit hydraté fond vers 100 C,
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(c=0,5 0/0, éthanol à 50 0/0). Rendement: 3,5 g (85 0/0).
Le sel de L(+)-thréo-1-p-nitrophényl-2- amino-propane-1,3-diol et de N-3,5-dinitro- benzoyl-D-proline est nouveau.
<I>b) Obtention de la</I> N-3,5-dinitrobenzoyë-D- proline.
On traite, à 40 C, 3,5 g du sel ci-dessus par 7 cm' de soude N. On observe la disso lution du produit, puis la cristallisation du L(+ )-thréo -1-p - nitrophényl-2-amino-propane- 1-3-diol qu'on essore et lave avec un peu d'eau. On récupère ainsi 1,4 g (37 0/0) du réactif de dédoublement.
On acidifie le filtrat ci-dessus par 0,7 cm3 d'acide chlorhydrique concentré. La N-3,5 dinitrobenzoyl-D-proline qui cristallise est alors essorée, lavée avec un peu d'eau, et séchée. On obtient ainsi 2,01 g (80% par rapport à la N-3,5-dinitrobenzoyl-DL-proline mise en oeuvre) de produit cristallisé, F=179-1800 C,
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(c=0,5 0/0,
éthanol à 50 %). <I>c) Séparation de la</I> D-proline.
On chauffe pendant trente minutes au reflux une solution de 1 g de N-3,5-dinitro- benzoyl-D-proline dans 10 cms d'acide chlor hydrique 5N. On filtre, évapore à sec sous vide et cristallise dans l'acétone le chlorhydrate de D-proline obtenu. Le produit est alors repris par 10 cm3 d'eau et traité pendant une heure par 2 g de Amberlite 1 R 4 B 5>.
Après filtra tion et évaporation à sec sous vide, on obtient 300 mg (80 %) de D-proline cristallisée,
EMI0003.0096
(c = 0,5 0/0, eau).
<I>d) Séparation de la</I> L-proline.
En traitant par 1 cm3 de lessive de soude la solution aqueuse d'où a cristallisé le sel de N-3,5-dinitrobenzoyl-D-proline et du L(-I-)- thréo -1-p -nitrophényl -2 - amino -propane-1,3 - diol, on récupère, comme indiqué en b), 2,1 g (56 %) de réactif de dédoublement.
Le filtrat additionné de 1 cm3 d'acide chlorhydrique concentré fournit alors 2,7 g de N-3,5-dinitro- benzoyl-L-proline impure que l'on recristallise selon les méthodes habituelles ou que l'on puri fie par l'intermédiaire du sel qu'il fournit avec le D(-)-thréo-1-p-nitrophényl-2-amino-pro- pane-1;3-diol.
Le produit récupéré dans les eaux-mères de recristallisation de la N-3,5-dinitrobenzoyl- L-proline peut être adjoint à une nouvelle venue de racémique à dédoubler.
On obtient la L-proline par hydrolyse chlorhydrique ménagée de la N-3,5-dinitro- benzoyl-L-proline, comme il est indiqué en c) pour la D-proline.
Purification <I>de la</I> N-3,5-dinitrobenzoyl-L-proline <I>à l'aide de</I> D(-)-thréo-1-p-nitrophényl-2-amino-propane- 1,3-diol On traite, à 40 C, 2,8 g de la N-3,5-di- nitrobenzoyl-L-proline impure obtenue selon d) par 2 g de D(-)-thréo-1-p-nitrophényl-2- amino-propane-1,3-diol dans 14 cm' d'eau.
On obtient ainsi 2,9 g du sel hydraté de la N-3,5 dinitrobenzoyl-L-proline et du D(-)-thréo- 1-p -nitrophényl -2- amino -propane -1,3 - diol, F = 1000 C,
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(c = 0,5 %, éthanol â 50 %). Après traitement alcalin, séparation de la base, puis acidification comme indiqué en b), on obtient 2,1 g de N-3,5-di- nitrobenzoyl-L-proline pure, F = 179-180 C,
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(c=0,5 /o, éthanol à 50 %).
Le sel de D(-)-thréo-1-p-nitrophényl-2- amino-propane-1,3-diol et de N-3,5-dinitro- benzoyl-L-proline est nouveau.
<B> Process for resolving the </B> DL-profine The present invention relates to a process for resolving DL-proline, a compound corresponding to formula (1). The term <I> DL </I> designates racemic proline, a mixture in equal proportions of L-proline and its enantiomorph, D-proline.
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Proline is one of the glucoforming amino acids involved, in its levorotatory form (L-proline), in animal metabolism.
It also participates, in its two forms D and L, in the structure of various polypeptides, form D in rye ergot polypeptides; the L form in gramicidin, A: C.T.H., oxytocin, etc.
Since the methods of synthesizing proline lead to the racemic, it is necessary to be able to have an easy and inexpensive resolution process. The only method of resolution of DL-proline currently known involves, as an intermediate, the cinchonine salt of Nm-nitrobenzoylproline (cf. E. Fischer and Zemplen, <I> Ber. </I> dtsch. Chem. Ges ., 1909, 42, 2989). According to the authors of this method, the yield of doubling would not exceed 40 / o.
In addition, when the saponification of the N-nitrobenzoyl derivatives of D- and L-proline obtained is carried out, a partial racemization is caused, which makes it necessary to carry out the purification of D- or L-proline by intermediate of metal salts.
The present invention relates to a process for resolving DL-proline via the salt of N-3,5-dinitro-benzoyl-DL-proline and D (-) or L (+) threo-1 -p - nitrophenyl - 2 - amino -propane -1.3 - diol.
The process according to the invention is characterized in that the D (-) - or L (+) - threo -1-p -nitroph6nyl-2-amino-propane-1,3-diol is reacted on the N-3,5-dinitrobenzoyl-DL-proline in a solvent, one of the two enantiomorphs giving a sparingly soluble salt with the resolution reagent, the salts of the two enantiomorphs are separated by their difference in solubility, we release the N-3,
5-dinitrobenzoyl- D- and = L-prolines of their salts by alkali treatment followed by acidification and the D- and LN-3,5-dinitrobenzoyl-prolines are saponified to obtain respectively the prolines D and L. The yield of doubling is generally between 80 and 90%. This method also offers the advantage of leading to N-3,5-dinitrobenzoyl-D-proline and N-3,5-dinitrobenzoyl-L-proline which can be hydrolyzed without significant racemization.
In Patent No. 319787, the patentee described the use of L (+) - threo-1-p-nitro-phenyl-2-amino-propan-1,3-diol as a resolution agent for DL-acyl-tryptophanes , for example N-acetyl- and N-formyl-DL-tryptophanes. However, it has been found that, as a result of too great solubilities, N-acetyl- and N-formyl-DL-prolines are not suitable.
On the other hand, it is possible to operate on N-3,5-dinitrobenzoyl-DL-proline (II): while the L enantiomorphs of acyltryptophanes form with L (;
) -threo-1-p-nitrophenyl-2-amino-propane-1,3-diol poorly soluble salts, N-3,5-dinitrobenzoyl-D-proline forms with L (+) - threo-1- p -nitrophenyl-2-amino-propane-1,3-diol a salt which is very slightly soluble in water. or in certain organic solvents, such as alcohol, while the corresponding salt of N-3,5-di-nitrobenzoyl-L-proline remains fully dissolved under these conditions.
The N-3,5-dinitrobenzoyl-D- and L-prolines also offer the considerable advantage of being very easily hydrolyzed into <I> D </I> and <I> L, </ I prolines. > practically without racemization. It suffices to isolate the precipitate formed by the action of L (+) - threo-1-p-nitrophenyl-2-amino-propane-1,3-diol on the N-3 racemate,
5- dinitrobenzoyl-proline and to treat it with an alkaline agent to obtain the alkali salt of N-3,5-dinitrobenzoyl-D-proline, from which one passes by acidification with N-3,5-dinitrobenzoyl - D-proline then, by saponification, to D-proline. By similar treatment of the filtrate, N-3,5-dinitrobenzoyl-L-proline is obtained which can then be contaminated with small amounts of racemate.
In general, a series of recrystallizations from an appropriate solvent is sufficient to purify this product. In the case where a more complete purification would be necessary, one can advantageously treat the mixture with D (-) - threo-1-p-nitrophenyl-2-amino -propane-1,3-diol which, unlike its enantiomorph L, provides, under the above conditions, with N-3,5-dinitrobenzoyl-L-proline a sparingly soluble salt. This salt crystallizes while the corresponding salt formed with N-3,5-dinitrobenzoyl-D-proline remains dissolved.
By alkaline treatment followed by acidification, one then passes easily to pure L-proline.
N-3,5-dinitrobenzoyl-DL-proline can be easily prepared by N-3,5-dinitrobenzoylation of DL-proline according to Schotten-Baumann (cf. Saunders, <I> J. </I> Chem . <I> Soc. </I> 1938, page 1397). It should be noted that the author has not envisaged the use of this derivative for the splitting of proline.
L (-I -) - threo-1-p-nitrophenyl-2-amino-propane-1,3-diol, derived from the synthesis of chloramphenicol, during the resolution of the corresponding racemic base, is obtained by the process described by Velluz, Amiard and Joly <I> (Bull. Soc. </I> Chirn., 1953, page 342). It has the structure (III). Its physical characteristics are as follows: F = 162-163,) C;
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(c = 20/0, 0.1N hydrochloric acid).
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(D (-) - threo-1-p-nitrophenyl-2-amino-propane-1,3-diol:
EMI0002.0081
(c = 2 0/0, 0.1N hydrochloric acid)).
If one operates, in the implementation of the process according to the invention, for example in water or an organic solvent such as alcohol, L (+) - threo-1-p- nitrophenyl-2-amino-propan-1,3-diol provides a salt of <I> N-3,5- </I> dinitrobenzoyl-D-proline which is very poorly soluble, whereas the salt of N-3,5 -dinitrobenzoyl-L-proline remains dissolved.
The N-3,5-dinitrobenzoyl-D-proline obtained by resolution finds, as has been indicated, its use for the production of D-proline. Residual N-3,5-dinitro-benzoyl-L-proline can be transformed into L-proline by saponification. It is known that optically active proline is easily racemized, for example by heating at 140-145 C, in the presence of barite water, according to Fischer (Z. Physiol. Chem., 1901, <I> 33, </ I > 167).
By the play of the successive doublings and racemizations of the form L, we can thus transform the totality of the form L, originally present, into the form D. We can also operate in a similar way to transform, by successive doublings and racemizations of form D, the totality of form <I> D, </I> originally present, in form <I> L. </I>
By freeing the N-3,5-dinitrobenzoyl-D- and L-prolines from their salts, under the action of a base, more than 90% of the resolution reagent used is recovered. This reagent can be used at new.
The following example illustrates the invention.
The dinitro-benzoylation can in particular be carried out by all the known methods or else the 3,5-di-nitrobenzoyl chloride can be reacted with an ester or another derivative of proline from which it is then possible to easily regenerate the product. N-acylated amino acid. It is also possible, during the preparation of the salts of D (-) or L (+) - threo-1-p-nitrophenyl-2-amine-propane-1,3-diol, to vary the nature of the solvent, dissolution and crystallization temperatures and cooling time.
<I> Example </I> <I> Preparation </I> <I> of </I> N-3,5-dinitrobenzoyl-DL-proline The procedure is according to Saunders <I> (J. </I> Chem. <I> Soc., </I> 1938, page 1397). 2.7 g of DL-proline are dissolved in 52 cm 3 of sodium hydroxide, cooled to 00 ° C. and 6.25 g of 3,5-dinitro-benzoyl chloride are added. The cooling bath is removed and stirred for fifteen minutes at room temperature. After filtration, 5 cms of concentrated hydrochloric acid are introduced. 6.8 g (95%) of N-3,5-dinitrobenzoyl-DL-proline, F. 221-2220 C.
<I> Doubling using </I> L (+) -threo-1-p-nitrophenyl-2-amino-propane- 1,3-diol <I> and separation of </I> prolines <I > D and L </I> <I> a) Salt formation of </I> N-3,5-dinitro-benzoyl-D-proline <I> and </I> L (-I-) -threo-1-p-nitrophenyl-2-amino-propane-1,3-diol. 5 g of the above N-3,5-dinitrobenzoyl derivative are dissolved at around 70 ° C in 25 cm3 of water and 3.75 g of L (+) are added.
-threo-1 p-nitrophenyl-2-amino-propane-1,3-diol. Cooled to 400 ° C. over thirty minutes, with stirring, and the salt formed is filtered off and washed with a little water. After recrystallization from water and drying in an oven at 600 C, the hydrated product melts at around 100 C,
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(c = 0.5 0/0, 50 0/0 ethanol). Yield: 3.5 g (85%).
The salt of L (+) - threo-1-p-nitrophenyl-2-amino-propane-1,3-diol and N-3,5-dinitro-benzoyl-D-proline is new.
<I> b) Obtaining </I> N-3,5-dinitrobenzoyë-D-proline.
3.5 g of the above salt are treated at 40 ° C. with 7 cm 3 of N sodium hydroxide solution. Dissolution of the product is observed, followed by crystallization of L (+) -thréo -1-p - nitrophenyl-2. -amino-propane- 1-3-diol which is drained and washed with a little water. 1.4 g (37%) of the resolution reagent are thus recovered.
The above filtrate is acidified with 0.7 cm3 of concentrated hydrochloric acid. The N-3,5 dinitrobenzoyl-D-proline which crystallizes is then drained, washed with a little water, and dried. 2.01 g (80% relative to the N-3,5-dinitrobenzoyl-DL-proline used) of crystalline product is thus obtained, Mp = 179-1800 C,
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(c = 0.5 0/0,
50% ethanol). <I> c) Separation of </I> D-proline.
A solution of 1 g of N-3,5-dinitro-benzoyl-D-proline in 10 cms of 5N hydrochloric acid is heated for thirty minutes under reflux. Filtered, evaporated to dryness under vacuum and crystallized from acetone the hydrochloride of D-proline obtained. The product is then taken up in 10 cm3 of water and treated for one hour with 2 g of Amberlite 1 R 4 B 5>.
After filtration and evaporation to dryness under vacuum, 300 mg (80%) of crystallized D-proline are obtained,
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(c = 0.5 0/0, water).
<I> d) Separation of </I> L-proline.
By treating with 1 cm3 of sodium hydroxide solution the aqueous solution from which crystallized the salt of N-3,5-dinitrobenzoyl-D-proline and L (-I -) - threo -1-p -nitrophenyl -2 - amino-propan-1,3-diol, 2.1 g (56%) of resolution reagent are recovered, as indicated in b).
The filtrate to which 1 cm3 of concentrated hydrochloric acid is added then gives 2.7 g of impure N-3,5-dinitro-benzoyl-L-proline which is recrystallized according to the usual methods or which is purified by l. 'intermediate the salt which it provides with D (-) - threo-1-p-nitrophenyl-2-amino-propane-1; 3-diol.
The product recovered in the mother liquors for recrystallization of N-3,5-dinitrobenzoyl-L-proline can be added to a new occurrence of racemate to be resolved.
L-proline is obtained by controlled hydrochloric hydrolysis of N-3,5-dinitro-benzoyl-L-proline, as indicated in c) for D-proline.
Purification <I> of </I> N-3,5-dinitrobenzoyl-L-proline <I> using </I> D (-) - threo-1-p-nitrophenyl-2-amino- propane-1,3-diol 2.8 g of the impure N-3,5-di-nitrobenzoyl-L-proline obtained according to d) are treated at 40 ° C. with 2 g of D (-) - threo-1 -p-nitrophenyl-2-amino-propane-1,3-diol in 14 cm 3 of water.
There is thus obtained 2.9 g of the hydrated salt of N-3,5 dinitrobenzoyl-L-proline and of D (-) - threo-1-p -nitrophenyl -2-amino-propane -1,3 - diol, F = 1000 C,
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(c = 0.5%, 50% ethanol). After alkaline treatment, separation of the base, then acidification as indicated in b), 2.1 g of pure N-3,5-di-nitrobenzoyl-L-proline are obtained, Mp = 179-180 C,
EMI0004.0038
(c = 0.5 / o, 50% ethanol).
The salt of D (-) - threo-1-p-nitrophenyl-2-amino-propane-1,3-diol and N-3,5-dinitro-benzoyl-L-proline is new.