Procédé de préparation de l'acide 3',5'-dichloro-4-amino-ptéroylglutamique. La présente invention concerne la prépa ration de l'acide3',5'-dichloro-4-a.mino-ptéroyl- glutainique qui est un nouveau composé.
Wieland et Purrmann [Ann. 544, 179 <B>(1939)]</B> ont décrit la réaction de la. 2-amino- 4,6,7-ti>ihydroxy-ptéridine (leucoptérilie) dans l'acide acétique et l'acide chlorhydrique avec le chlore. On n'a pas établi de façon défini tive la constitution du produit qu'ils obte naient.
On croit. cependant. que ce pouvait être la ?-imino-5-hydrox@rliramil- 7-oxamide. De même, Wieland et Tartter [Ann. 543, 287 (79.10)] ont décrit la réaction clé la 2,4,6,7- tétrahydroxy - ptéridine (désimino - leucopté- rine) avec le chlore dans le méthanol.
Le pro duit principal qu'ils obtenaient était l'ester méthylique de l'acide 5-méthoxyiiramil-7- oxalique et une petite quantité de semi-éther de glycol. De plus, Scopf et Kottler [Ann. 539, <B>128</B> (1939)] ont montré que la 2-amino-4,6- dihydroxy-ptéridine (xanthoptérine) est rapi dement attaquée par le chlorate de sodium en solution chlorhydrique à 100 C avec for- niation, en passant par des intermédiaires, d'acide oxalique, d'acide glyoxylique,
de gua- nidine et d'urée. On sait également que, quand on traite par l'eau de chlore l'acide \û-amino- 4-hy droxy-ptéridine-6-carboxyliqlie, lui e hydro lyse se produit et qu'on peut déceler de la g-lianidine [Angier et autres, Science, 103. <B>667</B> (1946) ]. Whittle et autres [J. A. C.
S. 69, 1786 (1947)] ont également montré que le chlorate de sodium réagissait avec l'acide ptéroylglutamique à. 80 C pour scinder la molécule et produire l'acide 2 - amino - 4 1 ;
vdroxy -ptér idine-6-carboxylique et l'acide -1- amino-3,5-dichloro-benzoy lglutamique. Il res sort donc de ces publications qu'on a constaté jusqu'ici que l'action des halogènes tels que le chlore sur les ptéridines substituées conduit à de nombreux produits variés et provoque la. dégradation du noyau de ptéridine lui- même.
Le composé obtenu selon le procédé de la. présente invention répond à. la formule
EMI0001.0057
Selon l'invention, on prépare ('e nouveau composé en faisant réagir l'acide 4-amino- ptéroy1glutamique avec lin agent de chlora tion et en séparant du iriélange réactionnel l'acide chloré ainsi obtenu.
Le iloli < < ail coml)osé constitue lui Solide ainorpbe d'un jaune pâle, soluble dans l'acide elilorhydrique concentré et dans la diméthyl- formalnide bouillante, peu soluble dans le méthanol bouillant et insoluble dans l'éther. On effectue de préférence la, réaction dans un solvant tel qu'une solution aqueuse d'un acide minéral à laquelle on peut ajouter directement du chlore gazeux, ou dans un autre solvant convenable tel que l'acide acé tique.
On peut également former le chlore in situ, en utilisant, par exemple, l'eau oxy génée en présence d'acide chlorhydrique.
De préférence, on met en oeuvre le pro cédé selon l'invention à une température com prise dans l'intervalle de -10 à -h 35 C. Les meilleurs rendements sont obtenus dans la partie inférieure de l'intervalle indiqué.
Pour la mise en oeuvre du procédé, il est préférable d'utiliser approximativement 2 molécules-gramme de chlore par molécule- gramme du composé de départ. Si on doit utiliser plus de 2 molécules-gramine de chlore par molécule dudit composé, une réaction sup plémentaire peut intervenir entre le dérivé dihalogéné obtenu et l'excès de chlore, ce qui peut.
entraîner une complète dégradation de la molécule de ptéridine. L'utilisation de moins de 2 molécules de chlore conduit égale ment à un mélange de produits finaux. Le composé préparé selon la présente invention présente une activité remarquable comme antagoniste de l'acide ptéroylghita- mique et a, par suite, une grande importance en médecine du point de vue expérimental et pour le traitement de diverses affections.
<I>Exemple:</I> On dilue avec 300 cms d'eau une solution de 22 g d'acide 4-amino-ptéroylglutamique dans 300 cm3 d'acide chlorhydrique concen tré. Après refroidissement à 0 C, on y fait barboter 7,7 g de chlore gazeux. Puis on refroidit encore un peu plus le mélange, on filtre et on lave le résidu avec 200 cm3 d'acide chlorhydrique dilué froid; on traite 1a solu tion au charbon actif et on la filtre. On dilue le filtrat avec de l'eau, on refroidit le mélange et on filtre à nouveau.
Afin de purifier le produit obtenu, on lave le gâteau à l'acide chlorhydrique dilué, puis on le dissout dans 500 ems d'eau contenant de l'ammoniaque. Après chauffage à. 70 C, on verse la masse épaisse dans 2450 eml d'acétone et on agite. Après refroidissement jusqu'au lendemain, on filtre le sel d'ammonium, on lave à. l'acétone et on sèche pour obtenir 17,A g de 3',5'-di- chloro-4-amino-ptéroylglutama.te d'ammonium. L'acide libre est obtenu par dissolution du sel d'ammonium dans l'eau et par acidification ultérieure.
Lorsqu'il. est. précipité dans des mélanges aqueux, il forme un gel. Le sel de magnésium du nouveau composé constitue un solide granuleux (sphérulites) très difficile- ment soluble dans l'eau bouillante.
Le spectre d'absorption dans l'ultraviolet du nouveau composé est caractéristique: Dans l'hydroxyde de sodium. 0,1N. il pos sède des maximums d'absorption à 259 ni et 370 my et des minimums d'absorption à 241 my. et 325 my. Dans L'acide chlorhydrique 0.1N, il. possède des maximums d'absorption à 280 m,cc et 335 mp et des minimums d'absorption à 259 m/s et 321 mu.
Process for preparing 3 ', 5'-dichloro-4-amino-pteroylglutamic acid. The present invention relates to the preparation of 3 ', 5'-dichloro-4-a.mino-pteroyl-glutainic acid which is a new compound.
Wieland and Purrmann [Ann. 544, 179 <B> (1939)] </B> have described the reaction of the. 2-amino-4,6,7-ti> ihydroxy-pteridine (leukopterilia) in acetic acid and hydrochloric acid with chlorine. The constitution of the product they obtain has not been definitively established.
We believe. however. that it could be? -imino-5-hydrox @ rliramil-7-oxamide. Likewise, Wieland and Tartter [Ann. 543, 287 (79.10)] have described the key reaction 2,4,6,7-tetrahydroxy-pteridine (desimino-leukopterin) with chlorine in methanol.
The main product they obtained was 5-methoxyiramil-7-oxalic acid methyl ester and a small amount of glycol half ether. In addition, Scopf and Kottler [Ann. 539, <B> 128 </B> (1939)] have shown that 2-amino-4,6-dihydroxy-pteridine (xanthopterin) is rapidly attacked by sodium chlorate in hydrochloric solution at 100 C with strong- niation, via intermediates, of oxalic acid, glyoxylic acid,
guanidine and urea. It is also known that, when \ u-amino-4-hy droxy-pteridine-6-carboxylic acid is treated with chlorine water, hydrolysis occurs and that g-lianidin can be detected. [Angier et al., Science, 103. <B> 667 </B> (1946)]. Whittle and others [J. A. C.
S. 69, 1786 (1947)] have also shown that sodium chlorate reacts with pteroylglutamic acid at. 80 C to split the molecule and produce 2 - amino - 4 acid 1;
vdroxy -pter idine-6-carboxylic acid and -1-amino-3,5-dichloro-benzoylglutamic acid. It therefore emerges from these publications that it has hitherto been observed that the action of halogens such as chlorine on substituted pteridines leads to many varied products and causes the. degradation of the pteridine nucleus itself.
The compound obtained according to the process of. present invention responds to. the formula
EMI0001.0057
According to the invention, the new compound is prepared by reacting 4-amino-pteroylglutamic acid with a chlorinating agent and separating the chlorinated acid thus obtained from the reaction mixture.
The iloli <<<<<coml) dared garlic constitutes itself a pale yellow inorganic solid, soluble in concentrated hydrofluoric acid and in boiling dimethyl formalnide, sparingly soluble in boiling methanol and insoluble in ether. The reaction is preferably carried out in a solvent such as an aqueous solution of a mineral acid to which gaseous chlorine can be added directly, or in another suitable solvent such as acetic acid.
The chlorine can also be formed in situ, using, for example, the oxygenated water generated in the presence of hydrochloric acid.
Preferably, the process according to the invention is carried out at a temperature in the range of -10 to -h 35 C. The best yields are obtained in the lower part of the indicated range.
In carrying out the process, it is preferable to use approximately 2 gram molecules of chlorine per gram molecule of the starting compound. If more than 2 gramin molecules of chlorine are to be used per molecule of said compound, an additional reaction may take place between the dihalogen derivative obtained and the excess of chlorine, which may.
cause complete degradation of the pteridine molecule. The use of less than 2 molecules of chlorine also leads to a mixture of end products. The compound prepared according to the present invention exhibits remarkable activity as an antagonist of pteroylghitamic acid and is therefore of great importance in medicine from the experimental point of view and for the treatment of various ailments.
<I> Example: </I> A solution of 22 g of 4-amino-pteroylglutamic acid in 300 cm3 of concentrated hydrochloric acid is diluted with 300 cms of water. After cooling to 0 C, 7.7 g of gaseous chlorine are bubbled through it. The mixture is then cooled a little more, filtered and the residue washed with 200 cm3 of cold dilute hydrochloric acid; the solution is treated with activated carbon and filtered. The filtrate is diluted with water, the mixture is cooled and filtered again.
In order to purify the product obtained, the cake is washed with dilute hydrochloric acid and then dissolved in 500 ems of water containing ammonia. After heating to. 70 C, the thick mass is poured into 2450 eml of acetone and stirred. After cooling overnight, the ammonium salt is filtered off, washed with. acetone and dried to obtain 17.0 g of ammonium 3 ', 5'-dichloro-4-amino-pteroylglutamate. The free acid is obtained by dissolving the ammonium salt in water and by subsequent acidification.
When he. East. precipitated in aqueous mixtures, it forms a gel. The magnesium salt of the new compound constitutes a granular solid (spherulites) which is very difficult to dissolve in boiling water.
The ultraviolet absorption spectrum of the new compound is characteristic: In sodium hydroxide. 0.1N. it has absorption maximums at 259 ni and 370 my and absorption minimums at 241 my. and 325 my. In 0.1N hydrochloric acid, it. has absorption maximums at 280 m, cc and 335 mp and absorption minimums at 259 m / s and 321 mu.