CA2670001A1 - Composition pour la prevention et/ou le traitement des maladies associees a la surexpression du tnf et/ou de l'il-12 - Google Patents
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Abstract
La présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé de formule (I) ou l'un de ses sels pharmaceutiquement ac ceptables dans laquelle R1, R2 et R3 sont indépendamment un hydrogène ou un groupement R7-CO- où R7 est un groupement alkyle, alcène ou alcyne linéaire, ramifié ou cyclique comprenant de 2 à 24 atomes de carbone; R4 est un atome d' hydrogène ou un groupement mannosyl substitué en position 6 par un résid u R6 choisi dans le groupe comprenant un atome d'hydrogène et un groupement R7-CO-; et R5 est choisi dans le groupe comprenant un atome hydrogène, un mo no-, un di-, un tri-, un tétra- et un penta-mannosyl; ainsi que l'utilisatio n d'une telle composition pour la fabrication d'un médicament destiné à la p révention ou au traitement d'une maladie associée à la surexpression du TNF et/ou de l'IL-12 chez un sujet.
Description
COMPOSITION POUR LA PREVENTION ET/OU LE TRAITEMENT DES
MALADIES ASSOCIEES A LA SUREXPRESSION DU TNF ET/OU DE L'IL-12.
La présente invention concerne le domaine de la prévention ou du traitement des maladies associées à la surexpression du TNF et/ou de l'IL-12 chez un sujet.
L'incidence des maladies inflammatoires, comme l'arthrite rhumatoïde ou la maladie de Crohn, est en constante augmentation dans les pays développés, notamment en Europe. Pour ces pathologies, le TNF et l'IL-12 constituent des effecteurs clés.
L'interleukine-12 est une cytokine présentant une structure unique et des effets pléiotropiques (KOBAYASHI et al.,. J. Exp. Med., vol.170, p:827-845., 1989 ; SEDER et al., Proc. Natl. Acad.. Sci. USA, vol.90, p:10188-10192, 1993 ;
LING et al., J. Immunol., vol.154, p:116-127, 1995 ; PODLASKI
et al., Arch. Biochem..Biophys., vol.294, p:230-237, 1995).
Celle-ci consiste en deux sous-unités (p40 et p35) formant des hétérodimères activateurs ou des homodimères p40 inhibiteurs. L'IL-12 est produite majoritairement par les macrophages et les monocytes essentiellement suite à une activation d'origine diverse, endogène ou exogène, notamment par des microorganismes, parasites intracellulaires, des bactéries ou des produits bactériens. Des études fonctionnelles ont montré que l'IL-12 stimule l'activité
cytolytique des cellules NK (Natural Killer) et des macrophages. Enfin, l'IL-12 joue un rôle central dans la différenciation des cellules T de type Thl et permet l'induction de la production d'IFN-y.
Le TNFa est une cytokine sécrétée par les monocytes et les macrophages en réponse à des endotoxines ou d'autres stimuli. Le TNFa correspond à un homotrimère soluble dont les sous-unités protéiques présentent 17 kDa (SMITH et al.,
MALADIES ASSOCIEES A LA SUREXPRESSION DU TNF ET/OU DE L'IL-12.
La présente invention concerne le domaine de la prévention ou du traitement des maladies associées à la surexpression du TNF et/ou de l'IL-12 chez un sujet.
L'incidence des maladies inflammatoires, comme l'arthrite rhumatoïde ou la maladie de Crohn, est en constante augmentation dans les pays développés, notamment en Europe. Pour ces pathologies, le TNF et l'IL-12 constituent des effecteurs clés.
L'interleukine-12 est une cytokine présentant une structure unique et des effets pléiotropiques (KOBAYASHI et al.,. J. Exp. Med., vol.170, p:827-845., 1989 ; SEDER et al., Proc. Natl. Acad.. Sci. USA, vol.90, p:10188-10192, 1993 ;
LING et al., J. Immunol., vol.154, p:116-127, 1995 ; PODLASKI
et al., Arch. Biochem..Biophys., vol.294, p:230-237, 1995).
Celle-ci consiste en deux sous-unités (p40 et p35) formant des hétérodimères activateurs ou des homodimères p40 inhibiteurs. L'IL-12 est produite majoritairement par les macrophages et les monocytes essentiellement suite à une activation d'origine diverse, endogène ou exogène, notamment par des microorganismes, parasites intracellulaires, des bactéries ou des produits bactériens. Des études fonctionnelles ont montré que l'IL-12 stimule l'activité
cytolytique des cellules NK (Natural Killer) et des macrophages. Enfin, l'IL-12 joue un rôle central dans la différenciation des cellules T de type Thl et permet l'induction de la production d'IFN-y.
Le TNFa est une cytokine sécrétée par les monocytes et les macrophages en réponse à des endotoxines ou d'autres stimuli. Le TNFa correspond à un homotrimère soluble dont les sous-unités protéiques présentent 17 kDa (SMITH et al.,
2 J. Biol. Chem., vol.262, p:6951-6954, 1987). Pour des revues sur le TNF, voir BEUTLER et al., (Nature, vol.320, p:584, 1986), OLD (Science, vol.230, p:630, 1986), et LE et al.
(Lab. Invest., vol.56, p:234). Pour autant, des cellules autres que les monocytes et les macrophages sont susceptibles de produire du TNFa. A titre d'exemple, des lignées cellulaires humaines non-monocytiques produisent du TNF
(RUBIN et al., J. Exp. Med., vol.164, p:1350, 1986; SPRIGGS
et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol.84, p:6563, 1987).
Le TNF entraîne une réaction pro-inflammatoire qui résulte en un endommagement des tissus, comme l'induction d'une activité pro-coagulante dans les cellules vasculaires endothéliales (POBER et al., J. Immunol., vol.136, p:1680, 1986), l'augmentation de l'adhérence des neutrophiles et des lymphocytes (POBER et al., J. Immunol., vol.138, p:3319, 1987), et la stimulation du relargage de platelet activatirig fâctor par lés macrophages, les neutrophiles et les cellules vasculaires endothéliales (CAMUSSI et al., J.
Exp. Med., vol.166, p:1390, 1987).
Pour traiter différentes maladies inflammatoires, à
savoir l'arthrite rhumatoïde, la maladie de Crohn et le psoriasis, différentes thérapies anti-TNF ont été
développées (SCHREIBER et al., 2001) et le nombre de patients traités dans le monde avec ces thérapies atteint déjà le million, majoritairement en Europe et aux USA. La majorité de ces thérapies utilise des anticorps dirigés contre le TNF
comme ceux décrits dans le brevet US 5,698,195. A titre d'exemple d'anticorps dirigés contre le TNF et utilisés en thérapie, on peut citer l'HUMIRA (ABOTT), le CDP-870 (UCB
Pharma), l'AFELIMOMAB (KNOLL Gmbh), l'Infliximab (Centocor) et le Remicade (Shering-Plough).
(Lab. Invest., vol.56, p:234). Pour autant, des cellules autres que les monocytes et les macrophages sont susceptibles de produire du TNFa. A titre d'exemple, des lignées cellulaires humaines non-monocytiques produisent du TNF
(RUBIN et al., J. Exp. Med., vol.164, p:1350, 1986; SPRIGGS
et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol.84, p:6563, 1987).
Le TNF entraîne une réaction pro-inflammatoire qui résulte en un endommagement des tissus, comme l'induction d'une activité pro-coagulante dans les cellules vasculaires endothéliales (POBER et al., J. Immunol., vol.136, p:1680, 1986), l'augmentation de l'adhérence des neutrophiles et des lymphocytes (POBER et al., J. Immunol., vol.138, p:3319, 1987), et la stimulation du relargage de platelet activatirig fâctor par lés macrophages, les neutrophiles et les cellules vasculaires endothéliales (CAMUSSI et al., J.
Exp. Med., vol.166, p:1390, 1987).
Pour traiter différentes maladies inflammatoires, à
savoir l'arthrite rhumatoïde, la maladie de Crohn et le psoriasis, différentes thérapies anti-TNF ont été
développées (SCHREIBER et al., 2001) et le nombre de patients traités dans le monde avec ces thérapies atteint déjà le million, majoritairement en Europe et aux USA. La majorité de ces thérapies utilise des anticorps dirigés contre le TNF
comme ceux décrits dans le brevet US 5,698,195. A titre d'exemple d'anticorps dirigés contre le TNF et utilisés en thérapie, on peut citer l'HUMIRA (ABOTT), le CDP-870 (UCB
Pharma), l'AFELIMOMAB (KNOLL Gmbh), l'Infliximab (Centocor) et le Remicade (Shering-Plough).
3 Toutefois ces différents traitements ont révélé des effets indésirables comme l'augmentation de la tendance à
développer la tuberculose et des infections opportunistes (MOHAN et al., Curr. Opin. Rheumatol., vol.15, p :179-184, 2003). Des milliers de cas ont été rapportés chez des patients traités par des thérapies anti-TNF (ASKLING et al., Arthritis Rheum, vol.52, p :1986-1992, 2005), la plupart étant des tuberculoses atypiques, difficiles à diagnostiquer et correspondant à des cas de tuberculose disséminée et extrapulmonaire, et probablement liés à la réactivation d'une infection chronique latente (MOHAN et al., Clin. Infect.
Dis., vol.39, p :295-299, 2004). Ainsi, jusqu'à 1-2% des patients traités par anti-TNF sont susceptibles de développer une tuberculose et en raison de la diminution du coût des thérapies anti-TNF, le nombre de patients atteints risque d'augmenter. Si la majorité de ces infections correspondent à
la réactivation d'une infection latente, près de 30% des cas correspondent à des primo infections. Finalement, ces traitements anti-TNF pour des patients ayant un antécédent d'infection à la tuberculose nécessitent un traitement antibiotique pendant près de 9 mois (KEANE, Rheumatology, Oxford, 2005).
Les traitements dirigés contre l'IL-12 sont eux à un stade plus précoce de développement avec notamment des anticorps dirigés contre l'IL-12 tels que décrits dans la demande PCT W09816248, des hyaluronanes spécifiques inhibant l'expression de l'IL-12 et décrits dans la demande de brevet US2004/097465.
Il existe donc encore aujourd'hui un besoin de développer de nouvelles thérapies pour les maladies inflammatoires et d'autres pathologies associées à une surexpression du TNF
et/ou de l'IL-12.
développer la tuberculose et des infections opportunistes (MOHAN et al., Curr. Opin. Rheumatol., vol.15, p :179-184, 2003). Des milliers de cas ont été rapportés chez des patients traités par des thérapies anti-TNF (ASKLING et al., Arthritis Rheum, vol.52, p :1986-1992, 2005), la plupart étant des tuberculoses atypiques, difficiles à diagnostiquer et correspondant à des cas de tuberculose disséminée et extrapulmonaire, et probablement liés à la réactivation d'une infection chronique latente (MOHAN et al., Clin. Infect.
Dis., vol.39, p :295-299, 2004). Ainsi, jusqu'à 1-2% des patients traités par anti-TNF sont susceptibles de développer une tuberculose et en raison de la diminution du coût des thérapies anti-TNF, le nombre de patients atteints risque d'augmenter. Si la majorité de ces infections correspondent à
la réactivation d'une infection latente, près de 30% des cas correspondent à des primo infections. Finalement, ces traitements anti-TNF pour des patients ayant un antécédent d'infection à la tuberculose nécessitent un traitement antibiotique pendant près de 9 mois (KEANE, Rheumatology, Oxford, 2005).
Les traitements dirigés contre l'IL-12 sont eux à un stade plus précoce de développement avec notamment des anticorps dirigés contre l'IL-12 tels que décrits dans la demande PCT W09816248, des hyaluronanes spécifiques inhibant l'expression de l'IL-12 et décrits dans la demande de brevet US2004/097465.
Il existe donc encore aujourd'hui un besoin de développer de nouvelles thérapies pour les maladies inflammatoires et d'autres pathologies associées à une surexpression du TNF
et/ou de l'IL-12.
4 Les phosphatidyl-myo-inositol mannosides (PIM) sont des molécules de faible poids moléculaire (-2500) connues comme faisant partie de la paroi mycobactérienne, qui contient également inclue également les lipoarabinomannanes (LAM) et les lipomannanes (LM ; voir figure 1). Les PIM comprennent en général de 1 à 4 chaînes acylés, un résidu glycéro-phospho-myo-inositol et 1 à 6 résidus mannosylés, et peuvent également être synthétisés. Il est connu de l'art antérieur que certains LAM (PILAM) d'espèces à croissance rapide et non virulentes, comme M. smegmatis, sont des molécules pro-inflammatoires stimulant la production de TNF et d'IL-12 (CHATTERJEE, Infect Immun, 1992 ; GILLERON, J. Biol. Chem., 1997) . Il a ainsi été démontré que les PILAM activent les macrophages par une voie TLR2-dépendante en activant la voie de signalisation NF-kappaB (MEANS et al., J. Immunol., vol.163, p :3920-3927, 1999). De même, il a également été mis en évidence une action pro-inflammatoire des LM, notamment les LM de Mycobacterium bovis BCG (QUESNIAUX, J. Immunol., 2004 ; VIGNAL, J. Immunol., 2003). Cette activité pro-inflammatoire résulte d'une induction de l'activation des macrophages et des cytokines pro-inflammatoires par le biais du récepteur TLR2 et de la protéine adaptateur MyD88 (QUESNIAUX et al., J.Immunol., 2004). Après une séparation des formes mono-, di-, tri- et tétra-acylées de LM de M.
bovis BCG par une purification extensive, il a pu être démontré que les LM tri- et tétra-acylées présentent une forte activité pro-inflammatoire TLR-dépendante (GILLERON et al., Chem. Biol., vol.13, p :39-47, 2006). Ainsi, le profil d'acylation des LM mycobactériens représente un moyen additionnel de régulation de la réponse inflammatoire de l'hôte.
Les dimannoside (PIMZ) et hexamannoside (PIM6) phosphatidyl-myo-inositol sont les deux classes les plus abondantes de PIM chez Mycobacterium bovis BCG et Mycobacterium tuberculosis H37Rv. PIMl, PIM3, PIM4 et PIM5 sont observés uniquement en quantité limitée, suggérant qu'ils correspondent à des intermédiaires biosynthétiques.
bovis BCG par une purification extensive, il a pu être démontré que les LM tri- et tétra-acylées présentent une forte activité pro-inflammatoire TLR-dépendante (GILLERON et al., Chem. Biol., vol.13, p :39-47, 2006). Ainsi, le profil d'acylation des LM mycobactériens représente un moyen additionnel de régulation de la réponse inflammatoire de l'hôte.
Les dimannoside (PIMZ) et hexamannoside (PIM6) phosphatidyl-myo-inositol sont les deux classes les plus abondantes de PIM chez Mycobacterium bovis BCG et Mycobacterium tuberculosis H37Rv. PIMl, PIM3, PIM4 et PIM5 sont observés uniquement en quantité limitée, suggérant qu'ils correspondent à des intermédiaires biosynthétiques.
5 Les PIM sont synthétisés à partir de phosphatidylinositol (PI) par l'addition séquentielle de résidus mannose à des positions spécifiques. Les trois gènes codant pour les mannosyl transférases impliquées dans l'addition des trois premières unités a-Manp sont maintenant connus. L'étape d'initiation est catalysée par l'enzyme pimA (KORDULAKOVA et al., J. Biol. Chem., 2002) et consiste en le transfert d'un résidu ct-Manp en position 2 du myo-inositol du PI pour former PIM1, alors l'addition d'un second résidu a-Manp sur le myo-inositol en position 6 est catalysée par l'enzyme pimB
(SCHAEFFER et al., J. Biol. Chem., vol.274, p :31625-31631, 1999) . L'élongation s'opère ensuite par le biais de pimC
(KREMER et al., Biochem. J., vol.363, p :437-447, 2002) pour obtenir PIM3, par l'addition d'un troisième résidu a-Manp sur l'unité a-Manp liée en 6 sur l'inositol. La structure des différents PIM a pu être déterminée (GILLERON et al., 1999 ;
GILLERON et al., 2001 ; GILLERON et al., 2003). L'étude des PIM a en outre permis de caractériser les différentes formes acylées des PIM (GILLERON et al., précité, 2001). Finalement, la synthèse complète de PIMZ et PIM6 a pu être effectuée récemment (STADELMAIER et al., Carbohydr. Res., vol.338, p :2557-69, 2003 ; LIU et al., J. Arn. Chem. Soc., vol.128, p :3638-48, 2006).
De façon surprenante et inattendue, les inventeurs ont mis en évidence que certaines formes acylées de PIM2 et de PIM6 inhibent l'induction de la réponse cytokines pro-inflammatoires.
(SCHAEFFER et al., J. Biol. Chem., vol.274, p :31625-31631, 1999) . L'élongation s'opère ensuite par le biais de pimC
(KREMER et al., Biochem. J., vol.363, p :437-447, 2002) pour obtenir PIM3, par l'addition d'un troisième résidu a-Manp sur l'unité a-Manp liée en 6 sur l'inositol. La structure des différents PIM a pu être déterminée (GILLERON et al., 1999 ;
GILLERON et al., 2001 ; GILLERON et al., 2003). L'étude des PIM a en outre permis de caractériser les différentes formes acylées des PIM (GILLERON et al., précité, 2001). Finalement, la synthèse complète de PIMZ et PIM6 a pu être effectuée récemment (STADELMAIER et al., Carbohydr. Res., vol.338, p :2557-69, 2003 ; LIU et al., J. Arn. Chem. Soc., vol.128, p :3638-48, 2006).
De façon surprenante et inattendue, les inventeurs ont mis en évidence que certaines formes acylées de PIM2 et de PIM6 inhibent l'induction de la réponse cytokines pro-inflammatoires.
6 Ainsi, un premier objet de l'invention consiste en une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé de formule (I) O
OR
HO O~ ~O
O --/___\OR
R3 OR4 R,O z (I) ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables dans laquelle :
= R1r R2 et R3 sont indépendamment un hydrogène ou un groupement R7-CO- où R7 est un groupement alkyle, alcène ou alcyne linéaire, ramifié ou cyclique comprenant de 2 à 24 atomes de carbone ;
= R4 est un atome d'hydrogène ou un groupement mannosyl substitué en position 6 par un résidu R6 choisi dans le groupe comprenant un atome d'hydrogène et un groupement R7-CO- ;
= R5 est choisi dans le groupe comprenant un atome hydrogène, un mono-, un di-, un tri-, un tétra- et un penta-mannosyl.
Avantageusement, le ou les groupements mannosyls sont des groupements alpha-mannosyls. De préférence, le groupement R5 est choisi dans le groupe comprenant un atome hydrogène, un mono- et un penta-mannosyl.
Avantageusement encore, le groupement R7 est un groupement alkyle linéaire. De préférence, le groupement R7 comprend de 11 à 21 atomes de carbone et de manière particulièrement préférée de 13 à 19 atomes de carbone.
OR
HO O~ ~O
O --/___\OR
R3 OR4 R,O z (I) ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables dans laquelle :
= R1r R2 et R3 sont indépendamment un hydrogène ou un groupement R7-CO- où R7 est un groupement alkyle, alcène ou alcyne linéaire, ramifié ou cyclique comprenant de 2 à 24 atomes de carbone ;
= R4 est un atome d'hydrogène ou un groupement mannosyl substitué en position 6 par un résidu R6 choisi dans le groupe comprenant un atome d'hydrogène et un groupement R7-CO- ;
= R5 est choisi dans le groupe comprenant un atome hydrogène, un mono-, un di-, un tri-, un tétra- et un penta-mannosyl.
Avantageusement, le ou les groupements mannosyls sont des groupements alpha-mannosyls. De préférence, le groupement R5 est choisi dans le groupe comprenant un atome hydrogène, un mono- et un penta-mannosyl.
Avantageusement encore, le groupement R7 est un groupement alkyle linéaire. De préférence, le groupement R7 comprend de 11 à 21 atomes de carbone et de manière particulièrement préférée de 13 à 19 atomes de carbone.
7 Les composés de formule (I) peuvent être obtenus simplement par l'homme du métier par purification de PIM à
partir de mycobactéries et comme décrit dans les exemples ou par synthèse chimique selon le protocole décrit dans STADELMAIER et al. (précité, 2003) ou dans LIU et al.
(précité, 2006).
Les sels pharmaceutiquement acceptables des composés de formule (I) ne sont pas limités et incluent, à titre d'exemple, des sels de base inorganique comme les sels de métal alcalin (sels de sodium, de lithium, de potassium, etc.), les sels d'ammonium et les sels de bases organiques comme les sels de diéthylamine, de cyclohexamine et d'acide aminés.
Selon un mode de réalisation préférée, la composition selon l'invention comprend au moins un composé de formule (I) ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables dans laquelle formule (I) .
= L'un des résidus Rl, R2 et R3 est un groupement R7-CO-où R7 est un groupement alkyle, alcène ou alcyne linéaire, ramifié ou cyclique comprenant de 2 à 24 atomes de carbone, et les deux autres étant des atomes d'hydrogène ;
= R4 est un atome d'hydrogène ; et = R5 est un atome hydrogène.
Selon un second mode de réalisation préférée, la composition selon l'invention comprend au moins un composé de formule (I) ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables dans laquelle formule (I) .
partir de mycobactéries et comme décrit dans les exemples ou par synthèse chimique selon le protocole décrit dans STADELMAIER et al. (précité, 2003) ou dans LIU et al.
(précité, 2006).
Les sels pharmaceutiquement acceptables des composés de formule (I) ne sont pas limités et incluent, à titre d'exemple, des sels de base inorganique comme les sels de métal alcalin (sels de sodium, de lithium, de potassium, etc.), les sels d'ammonium et les sels de bases organiques comme les sels de diéthylamine, de cyclohexamine et d'acide aminés.
Selon un mode de réalisation préférée, la composition selon l'invention comprend au moins un composé de formule (I) ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables dans laquelle formule (I) .
= L'un des résidus Rl, R2 et R3 est un groupement R7-CO-où R7 est un groupement alkyle, alcène ou alcyne linéaire, ramifié ou cyclique comprenant de 2 à 24 atomes de carbone, et les deux autres étant des atomes d'hydrogène ;
= R4 est un atome d'hydrogène ; et = R5 est un atome hydrogène.
Selon un second mode de réalisation préférée, la composition selon l'invention comprend au moins un composé de formule (I) ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables dans laquelle formule (I) .
8 = Rl, R2 et R3 étant indépendamment un atome d' hydrogène ou un groupement R7-CO- où R7 est un groupement alkyle, alcène ou alcyne linéaire, ramifié ou cyclique comprenant de 2 à 24 atomes de carbone ;
= R4 est mannosyl groupement mannosyl substitué en position 6 par un résidu R6 choisi dans le groupe comprenant un atome d'hydrogène et un groupement R7-CO- ; et = R5 est un mannosyl ; où
= l'un des résidus R1r R2, R3 et R6 est un groupement R7-CO- et les trois autres résidus étant des atomes d'hydrogène.
Selon un troisième mode de réalisation préférée, la composition selon l'invention comprend au moins un composé de - formule ( I ) - - - ou l ' un -- de-- -- ses---- sels ; pharmaceutiquement acceptables dans laquelle formule (I) :
= Rl, R2 et R3 sont indépendamment un hydrogène ou un groupement R7-CO- où R7 est un groupement alkyle, alcène ou alcyne linéaire, ramifié ou cyclique comprenant de 2 à 24 atomes de carbone ;
= R4 est mannosyl groupement mannosyl substitué en position 6 par un résidu R6 choisi dans le groupe comprenant un atome d'hydrogène et un groupement R7-CO-; et = R5 est un penta-mannosyl; où
= au moins deux des résidus Rl, R2, R3 et R6 correspondent à un groupement R7-CO-.
= R4 est mannosyl groupement mannosyl substitué en position 6 par un résidu R6 choisi dans le groupe comprenant un atome d'hydrogène et un groupement R7-CO- ; et = R5 est un mannosyl ; où
= l'un des résidus R1r R2, R3 et R6 est un groupement R7-CO- et les trois autres résidus étant des atomes d'hydrogène.
Selon un troisième mode de réalisation préférée, la composition selon l'invention comprend au moins un composé de - formule ( I ) - - - ou l ' un -- de-- -- ses---- sels ; pharmaceutiquement acceptables dans laquelle formule (I) :
= Rl, R2 et R3 sont indépendamment un hydrogène ou un groupement R7-CO- où R7 est un groupement alkyle, alcène ou alcyne linéaire, ramifié ou cyclique comprenant de 2 à 24 atomes de carbone ;
= R4 est mannosyl groupement mannosyl substitué en position 6 par un résidu R6 choisi dans le groupe comprenant un atome d'hydrogène et un groupement R7-CO-; et = R5 est un penta-mannosyl; où
= au moins deux des résidus Rl, R2, R3 et R6 correspondent à un groupement R7-CO-.
9 PCT/FR2007/001898 Avantageusement, deux,.trois ou quatre des résidus R1r R2, R3 et R6 correspondent à un groupement R7-CO-.
Dans la composition selon l'invention, le composé de formule (I) peut être formulé selon des méthodes bien connues comme solubilisé dans un solvant, du DMSO, de l'eau, dans un tampon ou incorporé dans des émulsions et des microémulsions.
La composition selon l'invention peut comprendre en outre des composants bien connus dans le domaine pharmaceutique comme des agents stabilisants, des agents émulsifiants, des agents de tonicité, des agents conservateurs, des colorants, des excipients, des liants, des lubrifiants notamment.
Un deuxième objet de l'invention consiste en l'utilisation d'une composition telle que décrite précédemment pour la fabrication d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement d'une maladie associée à la surexpression du TNF et/ou de l'IL-12 chez un sujet.
Par sujet, on entend un mammifère, de préférence un humain.
Par maladie associée à la surexpression du TNF et/ou de l'IL-12, on entend :
A) les maladies immunes ou auto-immunes comme la polyarthrite rhumatoïde, le rejet de greffe, le diabète sucré, le lupus érythémateux disséminé ou la maladie de Basedow ;
B) les infections et notamment les chocs résultant d'une infection chronique ou aigue d'origine bactérienne, virale et/ou parasitaire ;
C) les maladies inflammatoires comme les maladies inflammatoires chroniques (la sarcoïdose, l'affection abdominale inflammatoire, l'arthrite rhumatoïde, la rectocolite hémorragique, la maladie de Crohn) et les maladies inflammatoires vasculaires (le syndrômè de défibrination, l'arhtérosclérose, la maladie de Kawazaki) ;.
D) les maladies neurodégénératives comme les maladies démyélinisantes (la sclérose en plaques et la myélite 5 transverse aigue), les maladies extrapyramidales et cérébelleuses (les lésions du système corticospinal ou les désordres des noyaux gris centraux) ;
E) Les pathologies malignes impliquant des tumeurs sécrétant du TNF ou impliquant le TNF comme la leucémie
Dans la composition selon l'invention, le composé de formule (I) peut être formulé selon des méthodes bien connues comme solubilisé dans un solvant, du DMSO, de l'eau, dans un tampon ou incorporé dans des émulsions et des microémulsions.
La composition selon l'invention peut comprendre en outre des composants bien connus dans le domaine pharmaceutique comme des agents stabilisants, des agents émulsifiants, des agents de tonicité, des agents conservateurs, des colorants, des excipients, des liants, des lubrifiants notamment.
Un deuxième objet de l'invention consiste en l'utilisation d'une composition telle que décrite précédemment pour la fabrication d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement d'une maladie associée à la surexpression du TNF et/ou de l'IL-12 chez un sujet.
Par sujet, on entend un mammifère, de préférence un humain.
Par maladie associée à la surexpression du TNF et/ou de l'IL-12, on entend :
A) les maladies immunes ou auto-immunes comme la polyarthrite rhumatoïde, le rejet de greffe, le diabète sucré, le lupus érythémateux disséminé ou la maladie de Basedow ;
B) les infections et notamment les chocs résultant d'une infection chronique ou aigue d'origine bactérienne, virale et/ou parasitaire ;
C) les maladies inflammatoires comme les maladies inflammatoires chroniques (la sarcoïdose, l'affection abdominale inflammatoire, l'arthrite rhumatoïde, la rectocolite hémorragique, la maladie de Crohn) et les maladies inflammatoires vasculaires (le syndrômè de défibrination, l'arhtérosclérose, la maladie de Kawazaki) ;.
D) les maladies neurodégénératives comme les maladies démyélinisantes (la sclérose en plaques et la myélite 5 transverse aigue), les maladies extrapyramidales et cérébelleuses (les lésions du système corticospinal ou les désordres des noyaux gris centraux) ;
E) Les pathologies malignes impliquant des tumeurs sécrétant du TNF ou impliquant le TNF comme la leucémie
10 (aigue, myélocytique, lymphocytique ou myélodispastique chronique), le lymphome (Hodgkin ou malin (Burkitt)) ; et F) l'hépatite induite par l'alcool.
De préférence, ledit médicament est destiné à la prévention ou au traitement d'une maladie inflammatoire chez un sujet.
Ledit médicament peut être administré par injection (intraveineuse, intramusculaire, sous-cutané, intracutané, etc.), administration nasale, orale, percutanée ou par inhalation. En fonction du mode d'administration, ledit médicament peut être préparé sous forme de solutions, d'émulsions, de cachets, de poudres, d'onguents, de lotions, de gels, de suppositoires ou de sprays.
Dans ledit médicament, la concentration en composé (I) ou de son sel pharmaceutiquement acceptable n'est pas limitée et est comprise de préférence entre 0,1 et 100% (p/p) et de manière particulièrement préférée entre 0,5 et 20%.
Les exemples qui suivent permettent d'illustrer l'invention et sont donnés à titre non-limitatif.
EXEMPLES
De préférence, ledit médicament est destiné à la prévention ou au traitement d'une maladie inflammatoire chez un sujet.
Ledit médicament peut être administré par injection (intraveineuse, intramusculaire, sous-cutané, intracutané, etc.), administration nasale, orale, percutanée ou par inhalation. En fonction du mode d'administration, ledit médicament peut être préparé sous forme de solutions, d'émulsions, de cachets, de poudres, d'onguents, de lotions, de gels, de suppositoires ou de sprays.
Dans ledit médicament, la concentration en composé (I) ou de son sel pharmaceutiquement acceptable n'est pas limitée et est comprise de préférence entre 0,1 et 100% (p/p) et de manière particulièrement préférée entre 0,5 et 20%.
Les exemples qui suivent permettent d'illustrer l'invention et sont donnés à titre non-limitatif.
EXEMPLES
11 1) Purification des différentes formes acylées de phosphatidyl-myo-inositol di- (PIM2) et hexa- (PIM6) mannosides :
Un extrait lipidique enrichi en PIM a été obtenu par purification des glycolipides de Mycobacterium. Bovis BCG
selon le protocole décrit dans VERCELLONE et al. (J. Biol.
Chem., vol.264, p :7447-7454, 1989) et dans GILLERON et al.
(J. Biol. Chem., vol.276, p :34896-34904, 2001).
Un extrait lipidique contenant des phospholipides insolubles dans l'acétone a ensuite été appliqué sur une colonne de QMA-SPHEROSIL M (BIOSEPRA S.A.) préalablement équilibrée par des solutions de chloroforme, chloroforme/méthanol (1 :1, v/v), méthanol pour éluer les composés neutres. Les phospholipides ont ensuite été élués en différentes fractions à l'aide de solvants organiques comprenant de l'acétate d'ammonium * Fraction A : 750 mg de phospholipides (enrichis en phosphatidyl-myo-inositol di-mannosides (PIMZ)) élués avec un mélange chloroforme/méthanol (1 :2, v/v) comprenant 0,1 M
d'acétate d' ammonium ;
* Fraction B (subdivisée en deux fractions) : 440 mg de phospholipides (essentiellement des cardiolipides) et 160 mg de phospholipides (mélange de phosphatidyl-myo-inositol di-(PIM2) et hexa- (PIM6) mannosides) élués avec un mélange chloroforme/méthanol (1 :2, v/v) comprenant 0,2 M d'acétate d'ammonium ; et * Fraction C 55 mg de phospholipides (enrichie en phosphatidyl-myo-inositol hexamannosides (PIM6)) élués avec une solution de méthanol comprenant 0,2 M d'acétate d'ammonium.
Un extrait lipidique enrichi en PIM a été obtenu par purification des glycolipides de Mycobacterium. Bovis BCG
selon le protocole décrit dans VERCELLONE et al. (J. Biol.
Chem., vol.264, p :7447-7454, 1989) et dans GILLERON et al.
(J. Biol. Chem., vol.276, p :34896-34904, 2001).
Un extrait lipidique contenant des phospholipides insolubles dans l'acétone a ensuite été appliqué sur une colonne de QMA-SPHEROSIL M (BIOSEPRA S.A.) préalablement équilibrée par des solutions de chloroforme, chloroforme/méthanol (1 :1, v/v), méthanol pour éluer les composés neutres. Les phospholipides ont ensuite été élués en différentes fractions à l'aide de solvants organiques comprenant de l'acétate d'ammonium * Fraction A : 750 mg de phospholipides (enrichis en phosphatidyl-myo-inositol di-mannosides (PIMZ)) élués avec un mélange chloroforme/méthanol (1 :2, v/v) comprenant 0,1 M
d'acétate d' ammonium ;
* Fraction B (subdivisée en deux fractions) : 440 mg de phospholipides (essentiellement des cardiolipides) et 160 mg de phospholipides (mélange de phosphatidyl-myo-inositol di-(PIM2) et hexa- (PIM6) mannosides) élués avec un mélange chloroforme/méthanol (1 :2, v/v) comprenant 0,2 M d'acétate d'ammonium ; et * Fraction C 55 mg de phospholipides (enrichie en phosphatidyl-myo-inositol hexamannosides (PIM6)) élués avec une solution de méthanol comprenant 0,2 M d'acétate d'ammonium.
12 Des étapes de lyophilisation/resuspension successives ont été effectuées pour éliminer les sels d'acétate d'ammonium de ces différentes fractions.
Les différentes formes acylées ont ensuite été purifiées à partir des fractions obtenues.
Pour les phosphatidyl-myo-inositol hexamannosides (PIM6), 20 mg de phospholipides de la fraction C ont été
resuspendues dans une solution d'acétate d'ammonium 0,1M
contenant 15% (v/v) de propanol-1 par colonne d'octyl-sépharose CL-4B (PHARMACIA) pré-équilibrée avec le même tampon. La colonne est d'abord éluée avec 50 ml de tampon d'équilibrage puis avec un gradient linéaire de propanol-1 de à 65% (v/v) (250 ml chacun) dans une solution d'acétate d'ammonium 0, 1M à un débit de 5 ml/h. Les fractions ont été
15 collectées toutes les 30 minutes. 20 l de chaque fraction ont été séchées et soumis à une hydrolyse acide (100 l d'acide trifluoroacétique 2M, 2h à 110 C). Les hydrolysats ont été séchés, resuspendus dans de l'eau puis analysés par chromatographie échangeuse d'anion à pH élevé (HPAEC) pour leur contenu en mannose comme décrit dans GILLERON et al.
(Précité, 2003). Les fractions obtenues ont été regroupées en fonction de leur profil de purification et des lyophilisations répétées ont permis d'éliminer les sels d'acétate d'ammonium. Une étape de précipitation à l'acétone a été réalisée pour chaque fraction pour éliminer les contaminants issus du propanol-1. Finalement, 1,2mg, lmg, 7,5mg et 3mg des fractions I à IV respectivement ont pu être obtenus.
Pour les phosphatidyl-myo-inositol dimannosides (PIM2), 20 mg de phospholipides de la fraction A ont été resuspendues dans une solution d'acétate d'ammonium 0,1M contenant 25%
(v/v) de propanol-1 par colonne d'octyl-sépharose CL-4B
Les différentes formes acylées ont ensuite été purifiées à partir des fractions obtenues.
Pour les phosphatidyl-myo-inositol hexamannosides (PIM6), 20 mg de phospholipides de la fraction C ont été
resuspendues dans une solution d'acétate d'ammonium 0,1M
contenant 15% (v/v) de propanol-1 par colonne d'octyl-sépharose CL-4B (PHARMACIA) pré-équilibrée avec le même tampon. La colonne est d'abord éluée avec 50 ml de tampon d'équilibrage puis avec un gradient linéaire de propanol-1 de à 65% (v/v) (250 ml chacun) dans une solution d'acétate d'ammonium 0, 1M à un débit de 5 ml/h. Les fractions ont été
15 collectées toutes les 30 minutes. 20 l de chaque fraction ont été séchées et soumis à une hydrolyse acide (100 l d'acide trifluoroacétique 2M, 2h à 110 C). Les hydrolysats ont été séchés, resuspendus dans de l'eau puis analysés par chromatographie échangeuse d'anion à pH élevé (HPAEC) pour leur contenu en mannose comme décrit dans GILLERON et al.
(Précité, 2003). Les fractions obtenues ont été regroupées en fonction de leur profil de purification et des lyophilisations répétées ont permis d'éliminer les sels d'acétate d'ammonium. Une étape de précipitation à l'acétone a été réalisée pour chaque fraction pour éliminer les contaminants issus du propanol-1. Finalement, 1,2mg, lmg, 7,5mg et 3mg des fractions I à IV respectivement ont pu être obtenus.
Pour les phosphatidyl-myo-inositol dimannosides (PIM2), 20 mg de phospholipides de la fraction A ont été resuspendues dans une solution d'acétate d'ammonium 0,1M contenant 25%
(v/v) de propanol-1 par colonne d'octyl-sépharose CL-4B
13 (PHARMACIA) pré-équilibrée avec le même tampon. La colonne est d'abord éluée avec 50 ml de tampon d'équilibrage puis avec un gradient linéaire de propanol-1 de 25 à 50% (v/v) (125 ml chacun) dans une solution d'acétate d'ammonium 0,1M à
un débit de 5 ml/h. Les fractions ont été collectées toutes les 15 minutes. 20 l de chaque fraction ont été séchées et soumis à une hydrolyse acide (100 l d'acide trifluoroacétique 2M, 2h à 110 C). Les hydrolysats ont été
séchés, resuspendus dans de l'eau puis analysés par chromatographie échangeuse d'anion à pH élevé (HPAEC) pour leur contenu en mannose comme décrit dans GILLERON et al.
(précité, 2003). Les fractions obtenues ont été regroupées en fonction de leur profil de purification et des lyophilisations répétées ont permis d'éliminer les sels d' acétate d'ammonium.
2) Préparation des cultures primaires de macrophages Des cellules murines de moelle osseuse ont été obtenues à partir de fémurs de lignées de souris sauvages souris C57BL/6 (B6), de souris déficientes en TLR2 (MICHELSEN et al., J. Biol. Chem., vol.276, p : 25680-25686, 2001) ou en SIGN-Rl (LANOUE et al., J. Exp. Med., vol.200, p : 1383-1393, 2004) et des lignées contrôles correspondantes respectivement. Les cellules obtenues ont été cultivées (106/ml) pendant 7 jours dans un milieu DMEM (DUBECCO) complémenté avec 20% de sérum de cheval et 30% de milieu cellulaire conditionné L929 (source de M-CSF, MULLER et al., Mol. Med., vol.2, p :247-255, 1996). Trois jours après renouvellement du milieu, la préparation cellulaire comprend une population homogène de macrophages.
3) Stimulation des macrophages de souris sauvages par le LPS en présence et en l'absence de PIM
un débit de 5 ml/h. Les fractions ont été collectées toutes les 15 minutes. 20 l de chaque fraction ont été séchées et soumis à une hydrolyse acide (100 l d'acide trifluoroacétique 2M, 2h à 110 C). Les hydrolysats ont été
séchés, resuspendus dans de l'eau puis analysés par chromatographie échangeuse d'anion à pH élevé (HPAEC) pour leur contenu en mannose comme décrit dans GILLERON et al.
(précité, 2003). Les fractions obtenues ont été regroupées en fonction de leur profil de purification et des lyophilisations répétées ont permis d'éliminer les sels d' acétate d'ammonium.
2) Préparation des cultures primaires de macrophages Des cellules murines de moelle osseuse ont été obtenues à partir de fémurs de lignées de souris sauvages souris C57BL/6 (B6), de souris déficientes en TLR2 (MICHELSEN et al., J. Biol. Chem., vol.276, p : 25680-25686, 2001) ou en SIGN-Rl (LANOUE et al., J. Exp. Med., vol.200, p : 1383-1393, 2004) et des lignées contrôles correspondantes respectivement. Les cellules obtenues ont été cultivées (106/ml) pendant 7 jours dans un milieu DMEM (DUBECCO) complémenté avec 20% de sérum de cheval et 30% de milieu cellulaire conditionné L929 (source de M-CSF, MULLER et al., Mol. Med., vol.2, p :247-255, 1996). Trois jours après renouvellement du milieu, la préparation cellulaire comprend une population homogène de macrophages.
3) Stimulation des macrophages de souris sauvages par le LPS en présence et en l'absence de PIM
14 Les macrophages dérivés de la moelle osseuse de souris sauvages B6 ont été cultivés sur des plaques de culture 96 puits à raison de 105 cellules par puits puis stimulés par du LPS (100 ng/ml, Escherichia. coli, sérotype 0111 :B4, SIGMA) avec ou sans PIM (6,7 g/ml). Les fractions de PIM utilisées correspondaient aux différentes formes acylées de PIM6 (Ac1PIM6 à Ac4PIM6) et à deux fractions de PIM2r une fraction comprenant les formes monoacylées de PI et de PIM2 (PIC16 et PIM2C16) et une fraction comprenant les formes tri et tétracylées de PIM2 (Ac3PIM2 et Ac4PIM2) Toutes les préparations de PIM lyophilisées utilisées étaient solubilisées dans du DMSO et additionnées aux cultures à une concentration finale non cytotoxique de 1%.
Après une stimulation de 24 heures, les surnageants de culture ont été collectés et analysés pour leur contenu en cytokines TNF-ct et IL-12p40 par ELISA (DUOSET) et pour leur contenu en nitrite par la réaction de GRIESS.
Les résultats montrent que les formes di-, tri- et tétra-acylées de PIM6 ainsi que les formes mono-acylées de PI
et de PIM2 inhibent fortement la synthèse de TNF-a induite chez les macrophages en présence de LPS. En outre la forme mono-acylée de PIM6 ainsi que les formes tri- et tétra-acylées de PIM2 inhibent également cette synthèse de TNFa bien que dans une moindre mesure, notamment dans le cas des formes tri- et tétra-acylées de PIM2 (figure 2). Des résultats similaires ont été obtenus pour le NO et l'expression de l'IL-12p40. Un test de cytotoxicité MTT
réalisé sur les mêmes macrophages en présence des différentes fractions de PIM a permis de montrer que seule la fraction mono-acylée de PIM6 présente une faible cytotoxicité pour les cellules (figure 3).
Dans la mesure où des préparations de PIM2 et de PIM6 ont été identifiées initialement comme étant des stimulateurs de la sécrétion de TNF et d'IL-12p40 par des cultures primaires de macrophages, des préparations non fractionnées 5 de PIM (fraction A à C) ont été testées sur la réponse induite par le LPS à la concentration de 20 g/ml.
Les résultats obtenus n'ont montré aucune inhibition de la réponse inflammatoire (TNF-a et IL-12p40) des cultures primaires de macrophages induite par le LPS en présence des 10 préparations de PIM non fractionnées.
Cela tend à démontrer que la pureté ainsi que la provenance et la nature des formes acylées de PIMZ et/ou PIM6 influent sur l'efficacité de l'inhibition de la réponse inflammatoire.
Après une stimulation de 24 heures, les surnageants de culture ont été collectés et analysés pour leur contenu en cytokines TNF-ct et IL-12p40 par ELISA (DUOSET) et pour leur contenu en nitrite par la réaction de GRIESS.
Les résultats montrent que les formes di-, tri- et tétra-acylées de PIM6 ainsi que les formes mono-acylées de PI
et de PIM2 inhibent fortement la synthèse de TNF-a induite chez les macrophages en présence de LPS. En outre la forme mono-acylée de PIM6 ainsi que les formes tri- et tétra-acylées de PIM2 inhibent également cette synthèse de TNFa bien que dans une moindre mesure, notamment dans le cas des formes tri- et tétra-acylées de PIM2 (figure 2). Des résultats similaires ont été obtenus pour le NO et l'expression de l'IL-12p40. Un test de cytotoxicité MTT
réalisé sur les mêmes macrophages en présence des différentes fractions de PIM a permis de montrer que seule la fraction mono-acylée de PIM6 présente une faible cytotoxicité pour les cellules (figure 3).
Dans la mesure où des préparations de PIM2 et de PIM6 ont été identifiées initialement comme étant des stimulateurs de la sécrétion de TNF et d'IL-12p40 par des cultures primaires de macrophages, des préparations non fractionnées 5 de PIM (fraction A à C) ont été testées sur la réponse induite par le LPS à la concentration de 20 g/ml.
Les résultats obtenus n'ont montré aucune inhibition de la réponse inflammatoire (TNF-a et IL-12p40) des cultures primaires de macrophages induite par le LPS en présence des 10 préparations de PIM non fractionnées.
Cela tend à démontrer que la pureté ainsi que la provenance et la nature des formes acylées de PIMZ et/ou PIM6 influent sur l'efficacité de l'inhibition de la réponse inflammatoire.
15 4) Stimulation des macrophages de souris déficientes en TLR2 par le LPS en présence et en'l'absence de PIM
Il avait été préalablement établi que les préparations de PIM non fractionnées constituaient des agonistes de TLR2 (JONES et al., J. Leukoc. Biol., vol.69, p :1036-1044, 2001) et que la faible activation des macrophages en présence de PIM2 ou de PIM6 était dépendante de TLR2 (GILLERON et al., cité précédemment, 2003).
Pour examiner l'hypothèse selon laquelle TLR2 serait impliqué dans l'activité anti-inflammatoire des fractions acylées de PIM, des macrophages dérivés de la moelle osseuse de souris déficientes en TLR2 ont été cultivés et testés en présence de LPS avec ou sans fraction comprenant différentes formes acylées de PIM2 ou de PIM6 comme décrit précédemment (cf. 3)
Il avait été préalablement établi que les préparations de PIM non fractionnées constituaient des agonistes de TLR2 (JONES et al., J. Leukoc. Biol., vol.69, p :1036-1044, 2001) et que la faible activation des macrophages en présence de PIM2 ou de PIM6 était dépendante de TLR2 (GILLERON et al., cité précédemment, 2003).
Pour examiner l'hypothèse selon laquelle TLR2 serait impliqué dans l'activité anti-inflammatoire des fractions acylées de PIM, des macrophages dérivés de la moelle osseuse de souris déficientes en TLR2 ont été cultivés et testés en présence de LPS avec ou sans fraction comprenant différentes formes acylées de PIM2 ou de PIM6 comme décrit précédemment (cf. 3)
16 Les résultats montrent comme précédemment que les formes di-, tri- et tétra-acylées de PIM6 ainsi que les formes mono-acylées de PI et de PIM2 inhibent fortement la synthèse de TNF-a induite chez les macrophages en présence de LPS. En outre la forme mono-acylée de PIM6 ainsi que les formes tri-et tétra-acylées de PIM2 inhibent également cette synthèse de TNFa bien que dans une moindre mesure, notamment dans le cas des formes tri- et tétra-acylées de PIM2 (figure 4) . En conséquence, l'effet anti-inflammatoire de ces fractions est indépendant de TLR2.
5) Stimulation des macrophages de souris déficientes en SIGN-Rl par le LPS en présence et en l'absence de PIM
Le récepteur DC-SIGN humain est connu comme étant un récepteur essentiel pour la fixation de M. tuberculosis (via les ManLAM et les LM).
Pàur examiner l'hypothèse selon laquelle les récepteurs murins de la famille de DC-SIGN seraient impliqués dans l'activité anti-inflammatoire des fractions acylées de PIM, des macrophages dérivés de la moelle osseuse de souris déficientes en SIGN-Rl ont été cultivés et testés en présence de LPS avec ou sans fraction comprenant différentes formes acylées de PIM2 ou de PIM6 comme décrit précédemment [cf.
paragraphe 3)].
Les résultats montrent comme précédemment que les formes di-, tri- et tétra-acylées de PIM6 ainsi que les formes mono-acylées de PI et de PIM2 inhibent fortement la synthèse de TNF-a induite chez les macrophages déficients en SIGN-Rl en présence de LPS. En outre, la forme mono-acylée de PIM6 ainsi que les formes tri- et tétra-acylées de PIMZ inhibent également cette synthèse de TNFa bien que dans une moindre mesure, notamment dans le cas des formes tri- et tétra-
5) Stimulation des macrophages de souris déficientes en SIGN-Rl par le LPS en présence et en l'absence de PIM
Le récepteur DC-SIGN humain est connu comme étant un récepteur essentiel pour la fixation de M. tuberculosis (via les ManLAM et les LM).
Pàur examiner l'hypothèse selon laquelle les récepteurs murins de la famille de DC-SIGN seraient impliqués dans l'activité anti-inflammatoire des fractions acylées de PIM, des macrophages dérivés de la moelle osseuse de souris déficientes en SIGN-Rl ont été cultivés et testés en présence de LPS avec ou sans fraction comprenant différentes formes acylées de PIM2 ou de PIM6 comme décrit précédemment [cf.
paragraphe 3)].
Les résultats montrent comme précédemment que les formes di-, tri- et tétra-acylées de PIM6 ainsi que les formes mono-acylées de PI et de PIM2 inhibent fortement la synthèse de TNF-a induite chez les macrophages déficients en SIGN-Rl en présence de LPS. En outre, la forme mono-acylée de PIM6 ainsi que les formes tri- et tétra-acylées de PIMZ inhibent également cette synthèse de TNFa bien que dans une moindre mesure, notamment dans le cas des formes tri- et tétra-
17 acylées de PIM2 (Figure 5) . En conséquence, l'effet anti-inflammatoire de ces fractions est indépendant de SIGN-Rl.
Claims (11)
1) Une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé de formule (I) ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables dans laquelle :
.cndot. R1, R2 et R3 sont indépendamment un hydrogène ou un groupement R7-CO- où R7 est un groupement alkyle, alcène ou alcyne linéaire, ramifié ou cyclique comprenant de 2 à 24 atomes de carbone ;
.cndot. R4 est un atome d'hydrogène ou un groupement mannosyl substitué en position 6 par un résidu R6 choisi dans le groupe comprenant un atome d'hydrogène et un groupement R7-CO- ; et .cndot. R5 est choisi dans le groupe comprenant un atome hydrogène, un mono-, un di-, un tri-, un tétra- et un penta-mannosyl.
.cndot. R1, R2 et R3 sont indépendamment un hydrogène ou un groupement R7-CO- où R7 est un groupement alkyle, alcène ou alcyne linéaire, ramifié ou cyclique comprenant de 2 à 24 atomes de carbone ;
.cndot. R4 est un atome d'hydrogène ou un groupement mannosyl substitué en position 6 par un résidu R6 choisi dans le groupe comprenant un atome d'hydrogène et un groupement R7-CO- ; et .cndot. R5 est choisi dans le groupe comprenant un atome hydrogène, un mono-, un di-, un tri-, un tétra- et un penta-mannosyl.
2) La composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que ledit groupement R7 est un groupement alkyle linéaire.
3) La composition selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que ledit groupement R7 comprend de 11 à 21 atomes de carbone, de préférence de 13 à 19 atomes de carbone.
4) La composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, laquelle composition comprend au moins un composé de formule (I) ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables dans laquelle formule (I) :
.cndot. L'un des résidus Rl, R2 et R3 est un groupement R7-CO-où R7 est un groupement alkyle, alcène ou alcyne linéaire, ramifié ou cyclique comprenant de 2 à 24 atomes de carbone, et les deux autres étant des atomes d'hydrogène ;
.cndot. R4 est un atome d'hydrogène ; et .cndot. R5 est un atome hydrogène.
.cndot. L'un des résidus Rl, R2 et R3 est un groupement R7-CO-où R7 est un groupement alkyle, alcène ou alcyne linéaire, ramifié ou cyclique comprenant de 2 à 24 atomes de carbone, et les deux autres étant des atomes d'hydrogène ;
.cndot. R4 est un atome d'hydrogène ; et .cndot. R5 est un atome hydrogène.
5) La composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, laquelle composition comprend au moins un composé de formule (I) ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables dans laquelle formule (I) :
.cndot. Rl, R2 et R3 étant indépendamment un atome d'hydrogène ou un groupement R7-CO- où R7 est un groupement alkyle, alcène ou alcyne linéaire, ramifié ou cyclique comprenant de 2 à 24 atomes de carbone ;
.cndot. R4 est mannosyl groupement mannosyl substitué en position 6 par un résidu R6 choisi dans le groupe comprenant un atome d'hydrogène et un groupement R7-CO- ; et .cndot. R5 est un mannosyl ; où
.cndot. l'un des résidus R1, R2, R3 et R6 est un groupement R7-CO- et les trois autres résidus étant des atomes d' hydrogène.
.cndot. Rl, R2 et R3 étant indépendamment un atome d'hydrogène ou un groupement R7-CO- où R7 est un groupement alkyle, alcène ou alcyne linéaire, ramifié ou cyclique comprenant de 2 à 24 atomes de carbone ;
.cndot. R4 est mannosyl groupement mannosyl substitué en position 6 par un résidu R6 choisi dans le groupe comprenant un atome d'hydrogène et un groupement R7-CO- ; et .cndot. R5 est un mannosyl ; où
.cndot. l'un des résidus R1, R2, R3 et R6 est un groupement R7-CO- et les trois autres résidus étant des atomes d' hydrogène.
6) La composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, laquelle composition comprend au moins un composé de formule (I) ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables dans laquelle formule (I) :
.cndot. R1, R2 et R3 sont indépendamment un hydrogène ou un groupement R7-CO- où R7 est un groupement alkyle, alcène ou alcyne linéaire, ramifié ou cyclique comprenant de 2 à 24 atomes de carbone ;
.cndot. R4 est mannosyl groupement mannosyl substitué en position 6 par un résidu R6 choisi dans le groupe comprenant un atome d'hydrogène et un groupement R7-CO-; et .cndot. R5 est un penta-mannosyl; où
.cndot. au moins deux-- des -résidus R1, R2, R3 et R6 correspondent à un groupement R7-CO-.
.cndot. R1, R2 et R3 sont indépendamment un hydrogène ou un groupement R7-CO- où R7 est un groupement alkyle, alcène ou alcyne linéaire, ramifié ou cyclique comprenant de 2 à 24 atomes de carbone ;
.cndot. R4 est mannosyl groupement mannosyl substitué en position 6 par un résidu R6 choisi dans le groupe comprenant un atome d'hydrogène et un groupement R7-CO-; et .cndot. R5 est un penta-mannosyl; où
.cndot. au moins deux-- des -résidus R1, R2, R3 et R6 correspondent à un groupement R7-CO-.
7) La composition selon la revendication 6, caractérisée en ce que deux, trois ou quatre des résidus R1, R2, R3 et R6 correspondent à un groupement R7-CO-.
8) La composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre au moins un composé choisi dans le groupe comprenant les agents stabilisants, les agents émulsifiants, les agents de tonicité, les agents conservateurs, les colorants, les excipients, les liants, les lubrifiants.
9) Utilisation d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 8 pour la fabrication d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement d'une maladie associée à la surexpression du TNF et/ou de l'IL-12 chez un sujet.
10) L'utilisation selon la revendication 9, caractérisée en ce que ladite maladie associée à la surexpression du TNF
et/ou de l'IL-12 est choisie dans le groupe comprenant les maladies immunes ou auto-immunes, les infections, les maladies inflammatoires, les maladies neurodégénératives, les pathologies malignes impliquant des tumeurs sécrétant du TNF
ou impliquant le TNF et l'hépatite induite par l'alcool.
et/ou de l'IL-12 est choisie dans le groupe comprenant les maladies immunes ou auto-immunes, les infections, les maladies inflammatoires, les maladies neurodégénératives, les pathologies malignes impliquant des tumeurs sécrétant du TNF
ou impliquant le TNF et l'hépatite induite par l'alcool.
11) L'utilisation selon la revendication 10, caractérisée en ce que ladite maladie associée à la surexpression du TNF
et/ou de l'IL-12 est choisie parmi les maladies inflammatoires.
et/ou de l'IL-12 est choisie parmi les maladies inflammatoires.
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