CA2258800A1

CA2258800A1 - Antioxidant and/or antielastase composition based on lupine oil

Info

Publication number: CA2258800A1
Application number: CA002258800A
Authority: CA
Inventors: Philippe Msika; Alain Rancurel; Marie-Georgette Montaudoin
Original assignee: Individual
Current assignee: Laboratoires Expanscience SA
Priority date: 1997-04-24
Filing date: 1998-04-24
Publication date: 1998-10-29
Also published as: AU7535298A; WO1998047479A1; EP0914090A1; EP0914090B1; DE69841706D1; ES2347505T3; EP2225957A1; FR2762512A1; JP2000514835A; US6146616A; FR2762512B1

Abstract

The invention concerns an antioxidant and/or antielastase composition containing lupine oil or one or several fractions thereof, its use in cosmetics, pharmaceutics and as food additive. More particularly it concerns a composition containing a mixture of lupine oil and wheat germ concentrate, preferably in a proportion of 70 wt. % of lupine oil and 38 wt. % of wheat germ concentrate.

Description

CA 022=.8800 1998-12-22 wo 98/47479 PCT~FR98/00827 COMPOSITION ANTI-OXYDANTE ET/OU ANTI-ELASTASE A BASE D'HUILE DE LUPIN

La présente invention a pour objet de nouvelles compositions à base d'huile de lupin, ou de fractions de celle-ci, notamment des concentrats et des insaponifiables.
o L'huile de lupin peut être extraite notamment à partir de farines et/ou de graines de lupin.
Le lupin est un proche parent du pois, de la fève, du soja et du haricot. La graine est traditionnellement employee en alimentation humaine pour sa forte teneur en proteines. Il est également incorporé dans l'alimentation des ruminants sous forme de la plante entière ou de ses graines et aussi fréquemment utilisé comme engrais vert. Plus particulièrement, quatre espèces de lupin presentent un réel intérêt agronomique: le lupin blanc (lupinus albus), le lupin bleu (lupinus angustifolius), le lupin jaune (lupinus luteus) et le lupin changeant (lupinus mutabilis).
Les vegétaux constituent une source lipidique abondante et l' extraction 20 d'huile végétale a déjà été largement réalisée. L'huile peut ê~re alors utilisée directement, ou sous forme de certaines de ses fractions. Parrni les fractions susceptibles d'etre obtenues à partir d'une huile végetale, on peut citer les insaponifiables ou encore les concentrats.
Selon la Pharmacopee Europeenne, 2~m~ edition, page V.3.4.7; le terme CA 022 = .8800 1998-12-22 wo 98/47479 PCT ~ FR98 / 00827 ANTI-OXIDIZING AND / OR ANTI-ELASTASE COMPOSITION BASED ON LUPINE OIL

The subject of the present invention is new oil-based compositions.
lupine, or fractions thereof, including concentrates and unsaponifiables.
o Lupine oil can be extracted in particular from flour and / or lupine seeds.
Lupine is a close relative of peas, beans, soybeans and beans. The seed is traditionally used in human food for its high content in proteins. It is also incorporated in the feed of ruminants in the form whole plant or its seeds and also frequently used as a fertilizer green. More specifically, four species of lupine are of real interest agronomic: white lupine (lupinus albus), blue lupine (lupinus angustifolius), yellow lupine (lupinus luteus) and the changing lupine (lupinus mutabilis).
Plants are an abundant source of fat and extraction 20 vegetable oil has already been widely carried out. The oil can then be used directly, or as some of its fractions. Among the fractions likely to be obtained from a vegetable oil, mention may be made of unsaponifiables or concentrates.
According to the European Pharmacopoeia, 2 ~ m ~ edition, page V.3.4.7; the term

2~ ~ insaponifiable ~ s'applique aux substances, non volatiles, obtenues par extraction, avec un solvant organique d'une solution de la substance à examiner après saponification d'une huile végétale ou animale Par ailleurs, la méthode dite de distillation moléculaire permet de concentrer des huiles, issues notamment de plantes (huiles végetales) et d'obtenir des 30 concentrats dans lesquels la concentration en insaponifiables peut atteindre par exemple de l'ordre de I0 % à 20 % en poids, voir même plus, cette concentration étant de l'ordre de 1% à 2% en poids dans les huiles de départ.

CA 022~8800 1998-12-22 ..
W O 98/47479 PCT~R98/00827 Des huiles végétales ont ainsi fait l'objet d'utilisations diverses, essentiellement en cosmétologie. Par exemple, le brevet FR 92 07830 décrit la preparation de compositions à base de fractions insaponifiables d'huiles de germe de blé et de sésame pour un usage cosmétique, ces concentrats etant obtenus par distillation moléculaire selon une methode préférentielle décrite au brevet.
En ce qui concerne l'huile de lupin, aucune utilisation cosmétique ou pharmaceutique n'a été envisagée à ce jour. La publication de brevet européen EP-A-441672 décrit un procédé d'extration de constituants d'une matiere vegétale permettant notamment d'obtenir une huile de lupin sans trace d'alcaloïde. Ce 0 document décrit en particulier le traitement des graines de lupin amer et vise essentiellement à valoriser un tourteau protéique débarassé de l'amertume caractéristique des graines de lupin amer.
Les inventeurs ont maintenant constaté que, de façon surprenante, une composition contenant de l'huile de lupin ou une ou plusieurs fractions de celle-ci présentait un certain nombre de propriétés ouvrant la voie à des applications variées dans le domaine cosmétique, pharm~ceutique ou alimentaire.
Les études à la base de l'invention ont permis de mettre en évidence que l'huile de lupin ou ses fractions exerce notamment une activité anti-oxydante et anti-élastase.
La présente invention a donc pour objet une composition anti-oxydante et/ou anti-élastase contenant de l'huile de lupin ou une ou plusieurs fractions de celle-ci.
L'huile de lupin peut être extraite à partir de farines et/ou de graines de lupin.
L'huile de lupin peut être obtenue par toute méthode connue, en particulier par pression directe des graines de lupin.
On utilisera de préférence comme matière première pour l'obtention de l'huile de lupin ou de ses fractions, des espèces de lupin dites douces, c'est-à-dire dépourvues d'amertume. On peut citer notamment le lupin blanc, le lupin bleu, lelupin jaune et le lupin changeant en particulier le lupin blanc (lupinus albus). L'huile de lupin extraite de cette variéte de lupin est alors dépourvue d'alcaloïdes indésirables.
L'invention vise plus particulièrement une composition comprenant de l'huile de lupin sous forme d'une fraction constituée par un concentrat d'huile de lupinobtenu par distlllation moléculaire de ladite huile.

CA 022~8800 1998-12-22 W O 98/47479 3 PCT~R98/00827 Selon un mode de réalisation préféré, les compositions à base d'huile de lupin selon l'invention comprennent une ou plusieurs fractions d'huile de lupin sous forme d'insaponifiable tel que contenu dans un concentrat d'huile de lupin obtenu par 5 distillation moléculaire de ladite huile.
Avantageusement, la quantité en poids de la fraction insaponifiable dans le concentrat d'huile de lupin est d'environ 30 % à environ 70 %, de préférence d'environ 45 % à environ 65 % et de façon encore plus préférée, de l'ordre de 60 %.
Les inventeurs ont constaté que l'huile de lupin possède une teneur 0 particulièrement élevée en dérivés polyphénoliques, ,B-carotène et tocophérols et il est connu que les dérivés polyphénoliques contribuent à la stabilité à l'oxydation d'une composition les contenant. Avantageusement, I'invention a pour objet une composition anti-oxydante et/ou anti-élastase qui contient une fraction d'huile de lupin comprenant des dérivés phénoliques. D'une manière plus générale, I'invention 5 concerne également toute composition anti-oxydante et/ou anti-élastase qui contient des dérivés phénoliques extraits de l'huile de lupin. De préférence, la teneur en dérivés phénoliques est au moins égale à 20 ppm.
L'invention a également pour objet une composition dans laguelle l'huile de lupin ou ses fractions sont en mélange avec de l'huile de germe de blé ou une ou20 plusieurs de ses fractions. Dans ce cas, la fraction d'huile de germe de blé utilisée peut être également un concentrat obtenu par distillation moléculaire de ladite huile ou encore une fraction insaponifiable contenue dans un tel concentrat. De façon surprenante, les inventeurs ont maintenant établi que l'huile de germe de blé ou ses fractions pouvait avantageusement être utilisée en combinaison avec l'huile de lupin 25 ou ses fractions.
De préférence, lorsque les deux types d'huile sont présents dans une composition selon l'invention, I'huile de lupin est en mélange avec un concentrat d'huile de germe de blé.
Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, les quantités en poids de 30 concentrat d'huile de germe de blé et d'huile de lupin varient respectivement entre environ 10 % et environ 90 % et entre environ 90 % et environ 10 % de manière à ce que le total des quantités de ces deux huiles fasse 100 %.

CA 022~8800 1998-12-22 W O 98/47479 4 PCT~R98/00827 De façon surprenante, on a par ailleurs constaté que dans un certain rapport de composition, I'activité anti-oxydante, en particulier antiradicalaire était nettement meilleure.
C'est pourquoi, une composition préférée selon l'invention, est celle dans laquelle les quantités en poids du concentrat d'huile de germe de blé et d'huile de lupin sont respectivement de 30 % et 70 %.
L'invention concerne également l'utilisation cosmétique d'une composition selon I ' invention, notamment comme agent anti-oxydant, antiradicalaire, anti-élastase, protecteur WA et/ou B, protecteur de l'ADN contre des dommages, o notamment oxydatifs. Grâce aux activités mises en évidence pour les compositions selon l'invention, il est possible d'utiliser les compositions selon l'invention, à titre cosmétique ou pharmaceutique, notamment pour la photoprotection, contre le vieillissement actinique ou non, et pour la protection de la peau contre des agressions oxydantes y compris la pollution.
L'invention vise également les compositions selon l'invention, à titre de produit pharmaceutique, notamment dermatologique et plus particulièrement à titre d'agent destiné à la prévention ou au traitement des effets des WA et/ou UVB sur la peau, aux niveaux épidermique, dermique, cellulaire ou extracellulaire, de produit pharmaceutique pour la prévention et le traitement des effets de l'oxydation, deI'élastase et des radicaux libres sur la peau, ou encore à titre d'agent ayant une activité de protection de l'ADN contre des dommages, notamment des dommages oxydatifs.
L'invention a également pour objet une méthode de traitement cosmétique comprenant l'application d'une composition anti-oxydante ou anti-élastase ou d'une composition cosmétique selon l'invention sur la surface cutanée d'un individu.
Sous un autre aspect, I'invention concerne une composition cosmetique ou pharmaceutique comprenant une composition selon l'invention, de préférence en association avec un véhicule physiologiquement acceptable.
Les compositions cosmétiques ou pharmaceutiques ainsi définies, sont susceptibles d'être utilisées notamment en tant que produit solaire protecteur des UVB et/ou A et/ou rayonnement infra-rouge, crème restructurante, raffermissante,produit, notamment crème pour la prévention et la régression des vergetures, crème nutritive, antiride (lutte contre le vieillissement de la peau épiderme et derme) et CA 022~8800 1998-12-22 W O 98/47479 5 PCT~R98/00827 protectrice de jour, contour des levres et des yeux, sticks labiaux régénerants et protecteurs. Pour ces utilisations, les compositions cosmétiques selon l'invention sont avantageusement formulees pour un usage topique, notamment sous forme de crèmes, d'émulsions, de pommades, de sticks ou de gels.
Les compositions cosmétiques ou pharmaceutiques selon l'invention, peuvent présenter une teneur totale en poids en huile de lupin ou ses fractions et huile de germe de blé ou ses fractions de l'ordre de 0,5 à 10 % environ, de préférence deenviron 1% à environ 5%.
L'activité anti-oxydante des compositions selon l'invention, mise en évidence o par la stabilité à l'oxydation notamment de l'huile de lupin et du concentrat correspondant est particulièrement avantageuse car elle ouvre des possibilités d'utilisations supplémentaires en tant que complément alimentaire mettant à profit cette activité anti oxydante.
Enfin, I'invention a également pour objet un procédé de préparation des compositions décrites ci-dessus. Différentes variantes sont envisageables selon les compositions. Ainsi, par exemple on peut citer:
- le mélange de deux concentrats d'huile de lupin et d'huile de germe de blé
tels qu'obtenus par la méthode de distillation moléculaire par exemple telle que décrite dans la revue ~ Parfumerie Cosmétique et Arôme ~ (1985, n~ 61, page 91-96);
- le mélange préalable des huiles de lupin et de gerrne de blé suivi de la distillation moléculaire du mélange selon le procédé décrit ci-dessus, - le mélange d'huile de lupin et d'un concentrat d'huile de germe de blé
obtenu par distillation moléculaire.
Le concentrat d'huile de germe de blé est avantageusement préparé selon le procédé de distillation moléculaire décrit au brevet FR 92 07830. Selon ce procedé, I'huile est étalée en couche mince sur la surface chauffee d'un rotor conique tournant a grande vitesse. On maintient un vide poussé dans l'enceinte de distillation. Dans ces conditions, il y a évaporation et non pas ébullition, depuis la surface chaude, des constituants de l'insaponifiable dont la séparation devient possible par rapport aux glycérides, I'avantage étant que l'huile et l'insaponifiable, réputés fragiles, ne sont pas dégradés au cours de l'opération.

.

W O 98t47479 6 PCT/FR98/00827 L'invention sera davantage détaillée dans les exemples de realisation qui suivent qui illustrent la préparation d'huile de lupin et de concentrat d'huile de germe de blé, séparément ou en mélanges, de formulations de compositions à base de tels mélanges et d'indications de leurs activités.

I. Exemples de préparation d'huile de lupin et d'ins~ponifiable d'huile de lupin E~MPLE 1: L'huile de lupin 0 On utilise des graines issues de semences certifiées (de lupinus albus), commercialisées par la société CANA.
Après un pré-nettoyage, les graines sont soigneusement nettoyées (élimination des graines et particules étran,ères résiduelles, des graines cassées), et peuvent être décortiquées.
Elles sont aplaties dans un broyeur à cylindres; après conditionnement hydrothermique à une température de 70~C environ, leur humidité varie entre 5% et 10%.
L'extraction de l'huile est alors réalisée dans un extracteur par percolation à
l'hexane. L'extracteur étant rempli d'écailles broyées, I'extraction est réalisée par 4 à
6 lavages à l'hexane pour chaque charge.
Après chaque lavage, le miscella est pompé vers un distillateur; après l'égouttage suivant le dernier lavage, le tourteau est envoyé vers un désolvanteur.
Le miscella est distillé en continu dans un distillateur chauffé par circulationde vapeur; il est continuellement recyclé dans le distillateur.
A la fin des opérations, l'huile contenant encore de l'hexane est envoyée vers la distillation finale pour éliminer l'hexane sous vide (de 10mm à 35mm de mercure) entre 70~C et 1 00~C par ~ stripping ~ (strippage) pendant 10 mn.
La composition d'une huile brute extraite de ~raines selon le procédé ci-dessus est indiquée ci-après:
- Caractères organoleptiques: huile de couleur jaune orangé, d'odeur caractéristique.
- Composition en acides gras:
. Acide myristique C14 < 0,50 %

CA 022~8800 1998-12-22 . Acide palmitique C16 4 à 10 %
. Acide palmitoléique C16' < 2%
. Acide stéarique C18 < 4%
. Acide oléique C18' 45 à 65 %
s . Acide linoléique C18" 9 à 17 %
. Acide linolénique C18"' 5 à 11 %
. Acide arachidique C20 < 3%
. Acide gadoléique C20' 2 à 8%
. Acide béhénique C22 < 6%
o . Acide érucique C22' < 5%
. Acide lignocérique C24 < 2%
- Teneur en insaponifiable > 1 ,5g/1 OOg - Teneur en carotènes (en mg/lOOg) > 25mg/lOOg - Teneur en tocophérols > O,lg/lOOg - Teneur en dérivés phénoliques (en equivalent d'acide gallique) > 20 ppm - Teneur en alcool triterpénique (alpha-lupéol) O, I à 1%
- Teneur en stérols totaux: > 0,8g/lOOg . % relatif en campéstérol 18 à 24 %
. % relatif en stigmastérol 5 à 10 %
. % relatif en J3 sitostérol 48 à 65 %
. % relatif en delta 5 - avenastérol < 5%

EXEMPLE 2: Préparation d'un concentrat d'huile de lupin par distillation 25 moléculaire La distillation moléculaire est réalisée par étalement de l'huile en couche mince sur la surface chauffée d'un rotor conique tournant à grande vitesse. On maintient un vide poussé dans l'enceinte de distillation. On introduit dans un appareil ,o de distillation moléculaire approprié et de préférence du style centrifuge, de l'huile de lupin telle qu'obtenue à l'exemple 1. Le débit d'alimentation est de 10 à 30 kg par heure et de préférence entre 15 et 20 kg par heure.
Les paramètres de la distillations sont les suivants:

CA 022~8800 1998-12-22 W 098/47479 8 PCT~R98/00827 - température: 210~C à 250~C;
- vide de là lO ,um (soit 0,13 à 1,3 Pa).
Le pourcentage distillé étant proche de 10, on recueille soigneusement ce tillat La richesse en matière non saponifiable de cette fraction distillée est compriseentre 45 % et 65 %.
Les caractéristiques du concentrat ainsi obtenu sont les suivantes:

- Caractères organoleptiques: pâte jaune-orangé
o - Teneur en squalène ~ 0,2g/lOOg - Teneur en carotènes ~ 22,0mg/100g - Teneur en tocophérols ~ 9,Og/lOOg . % relatif en alpha tocophérol ~ l,O %
. % relatif en gamma tocophérol ~ ~0,0 %
. % relatif en delta tocophérol ~ 15,0 %
- Teneur en stérols totaux ~ 40,0g/lOOg . % relatif en campéstérol ~ 20,0 %
. % relatif en stigmastérol ~ 9,0 %
. % relatif en 13 sitostérol ~ 60,0 %
. % relatif en delta 5 - avenastérol ~ 2,0 %
. % relatif en delta 7 - stigmastérol ~ 2,0 %
- Teneur en dérivés phenoliques, exprimée en acide gallique ~ 40,0ppm - Teneur en insaponifiable total ~ 60,0 %
2i EXEMPLE 3: Préparation de l'insaponifiable d'huile de lupin ~e concentrat d'huile de lupin obtenu à l'exemple 2 est saponiflé dans un réacteur en acier inoxydable, dans les conditions suivantes:
On ajoute, pour 100 kg de concentrat, 20 kg d'hydroxyde de potassium en écailles, 250 kg d'alcool et 30 kg d'eau. On porte le mélange à reflux pendant Sheures.

CA 022~8800 1998-12-22 W O 98/47479 9 PCT~R98/00827 La solution hydroalcoolique des savons ainsi obtenue, est diluée de son volume avec de l'eau déminéralisee et extraite par du dichloroéthane (DCE) dans un appareil à coritre-courant par exemple une colonne pulsee, qui extrait sélectivement la partie insaponifiable.
s Cette solution d'insaponifiable est alors lavée par de l'eau dans un autre appareil à contre-courant de façon à éliminer les savons entraînés lors de l'extraction.
Le DCE est éliminé à raison de 95 % environ, sous pression atmosphérique dans un appareil d'évaporation à flot tombant, puis l'évaporation est terminée dans un appareil sous vide muni d'une double enveloppe et d'un injecteur permettant o l'introduction de vapeur vive dans la masse, selon le mode opératoire suivant:
. Le produit est chauffé à 100~C, sous vide de 10mm de Hg (soit 1,3 kPa) jusqu'à cessation de la distillation du dichloroéthane residuel; à ce moment, lavapeur d'eau est injectée dans la masse, à raison de 4% en poids d'eau par rapport au poids d'insaponifiable. La durée de l'opération est d'environ 4 heures.
. Le produit est séché par injection d'azote, en utilisant la tubulure ayant servi à l'introduction de la vapeur.
. Le produit est alors refroidi et le vide est cassé sous courant d'azote.
L'insaponifiable est conservé en fût polyéthylène haute densité et sac polyéthylène basse densité sous azote jusqu'à son utilisation.
L'insaponifiable d'huile de lupin ainsi obtenu est une pâte jaune orangé
contenant:
- des tocophérols environ 3%
. dont environ 96 % de gamma-tocophérol . et environ 4% d'alpha-tocophérol - des stérols environ 40 % avec une teneur relative en:
. campéstérol environ 25 %
. stigmastérol environ 8%
.13 sitostérol environ 52 %

EXEMPLE 4: Mélange d'un concentrat d'huile de germe de blé et d'huile de lupin.

On prépare un concentrat d1huile de germe de blé selon le procédé décrit au brevet FR 92 07830 dont le contenu est ici incorporé par référence, et on le mélange CA 022~8800 1998-12-22 avec de l'huile de lupin telle qu'obtenue à l'exemple 1, dans des proportions respectives en poids de 30 % et 70 % par rapport au poids total du mélange. Les caractéristiques du mélange obtenu sont les suivantes:

s - Caractères organoleptiques: huile limpide de couleur jaune orange, d'odeur caractéristique.
- Composition en acides gras:
. Acide myristique C14 < 2 %
. Acide palmitique Cl6 7 à 14 %
o . Acide palmitoléique C16' < 2%
. Acide stéarique C 18 < 5%
. Acide oleique C18' 38 à 52 ~/0 . Acide linoléique C18" 25 à 30 %
. Acide linolénique C18"' 4 à 11 %
IS . Acide arachidique C20 < 3%
. Acide gadoléique C20' 2 à 8%
. Acide béhénique C22 1 à 6%
. Acide érucique C22' < s%
. Acide lignocérique C24 < 2%
- Teneur en insaponifiable > 4g/lOOg - Teneur en carotènes (en mg/lOOg) > 15mg/lOOg - Teneur en tocophérols > 500mg/lOOg - Teneur en dérivés phénoliques > 14 mg/L~g - Teneur en stérols totaux: > 2,5 %
2s . % relatif en campéstérol 18 à 25 %
. % relatif en stigmastérol 3 à 10 %
. % relatif en B sitostérol 48 à 64 %
. % relatif en delta S - avenastérol < 6%

30 II. Exemples de formulation (les produits désignés sous des appellations commerciales sont, sauf mention particulière, cités dans l'annuaire INCI; 6~m~
édition.

CA 022~8800 1998-12-22 1. Crème à l'huile de lupin Montanov 68 5,00 %
s Beurre de Karite 3,00 %
Huile de parafflne 10,00 %
Cetearyl octanoate 5,00 %
Dimethicone 1,00 %
~luile de lupin 5,00 %
0 Phénoxyéthanol 0,40 %
Phénonip 0,80 %
Eau 59,10 %
Glycérine 10,00 %
Controx VP 0, 10 %
1~ Parfun borealis n~l 0,60 %

2. Crème hydratante légère à l'huile de lupin Huile de vaseline épaisse 2,00 %
Octyl dodecanol 2,00 %
Cetearyl glucoside 5,00 %
Huile de jojoba 1,00 %
Squalane 1,00 %
Alcool cétostéarylique 25 OE 1,00 %
2~ Controx VP 0,10 %
~:uile de lupin 5,00 %
Eau purifiée 72,475 %
Citrate trisodique 0,10 %
Acide citrique monohydrate 0,025 %
Silicone Q21401* 4,00 %
Conservateur GD 700** 0,20 %
Sepigel 305 0,80 %
Aloe vera gel 5,00 %

CA 022~8800 1998-12-22 W O 98/47479 12 PCT~R98/00827 Par~um composition 53905-1 Synarome 0,30 %
* Le silicone Q21401 est commercialisé par la société Dow Corning sous la désignation Cyclométhicone et diméthiconol;
** Le conservateur GD 700 est commercialisé par la société PHYTOCOS sous:
5 propylène glycol, eau, phénoxyéthanol, méthylparaben, butylparaben, isobutylparaben, éthylparaben; méthylchlorothiazolinone et méthylisothiazolinone 2 ~ ~ unsaponifiable ~ applies to non-volatile substances obtained by extraction, with an organic solvent of a solution of the substance to be examined after saponification of a vegetable or animal oil In addition, the so-called molecular distillation method makes it possible to concentrate oils, in particular from plants (vegetable oils) and to obtain 30 concentrates in which the concentration of unsaponifiables can reach by example of the order of I0% to 20% by weight, or even more, this concentration being of the order of 1% to 2% by weight in the starting oils.

CA 022 ~ 8800 1998-12-22 ..
WO 98/47479 PCT ~ R98 / 00827 Vegetable oils have thus been the subject of various uses, essentially in cosmetology. For example, patent FR 92 07830 describes the preparation of compositions based on unsaponifiable fractions of germ oils of wheat and sesame for cosmetic use, these concentrates being obtained by molecular distillation according to a preferred method described in the patent.
With regard to lupine oil, no cosmetic use or pharmaceutical has not been considered to date. European patent publication EP-A-441672 describes a process for extracting constituents from a vegetable matter allowing in particular to obtain a lupine oil without trace of alkaloid. This 0 document describes in particular the treatment of bitter lupine seeds and aims essentially to enhance a protein meal free of bitterness characteristic of bitter lupine seeds.
The inventors have now found that, surprisingly, a composition containing lupine oil or one or more fractions thereof exhibited a number of properties paving the way for various applications in the cosmetic, pharm ~ ceutique or food.
The studies underlying the invention have made it possible to demonstrate that lupine oil or its fractions exerts in particular an antioxidant and anti-elastase.
The present invention therefore relates to an antioxidant and / or anti-elastase containing lupine oil or one or more fractions thereof.
Lupine oil can be extracted from flour and / or lupine seeds.
Lupine oil can be obtained by any known method, in particular by direct pressure of the lupine seeds.
It will preferably be used as a raw material for obtaining the oil lupine or its fractions, so-called sweet lupine species, i.e.
without bitterness. Mention may in particular be made of the white lupine, the blue lupine, the yellow lelupine and the lupine changing in particular the white lupine (lupinus albus). Oil of lupine extracted from this variety of lupine is then devoid of alkaloids undesirable.
The invention relates more particularly to a composition comprising oil of lupine in the form of a fraction consisting of a concentrate of lupine oil obtained by molecular distillation of said oil.

CA 022 ~ 8800 1998-12-22 WO 98/47479 3 PCT ~ R98 / 00827 According to a preferred embodiment, the compositions based on lupine oil according to the invention comprise one or more fractions of lupine oil in the form unsaponifiable as contained in a concentrate of lupine oil obtained by 5 molecular distillation of said oil.
Advantageously, the quantity by weight of the unsaponifiable fraction in the lupine oil concentrate is about 30% to about 70%, preferably from about 45% to about 65% and even more preferably, on the order of 60%.
The inventors have found that lupine oil has a content 0 particularly high in polyphenolic derivatives,, B-carotene and tocopherols and it polyphenolic derivatives are known to contribute to oxidation stability of a composition containing them. Advantageously, the invention relates to a antioxidant and / or anti-elastase composition which contains a fraction of lupine comprising phenolic derivatives. More generally, the invention 5 also relates to any antioxidant and / or anti-elastase composition which contains phenolic derivatives extracted from lupine oil. Preferably, the content of phenolic derivatives is at least 20 ppm.
The invention also relates to a composition in laguelle the oil of lupine or its fractions are mixed with wheat germ oil or one or more of its fractions. In this case, the fraction of wheat germ oil used can also be a concentrate obtained by molecular distillation of said oil or an unsaponifiable fraction contained in such a concentrate. In a way surprisingly, the inventors have now established that wheat germ oil or its fractions could advantageously be used in combination with lupine oil 25 or its fractions.
Preferably, when both types of oil are present in a composition according to the invention, the lupine oil is mixed with a concentrate wheat germ oil.
According to a preferred embodiment of the invention, the quantities by weight of 30 concentrate of wheat germ oil and lupine oil vary between about 10% and about 90% and between about 90% and about 10% so that that the total of the quantities of these two oils is 100%.

CA 022 ~ 8800 1998-12-22 WO 98/47479 4 PCT ~ R98 / 00827 Surprisingly, we have also found that in a certain report in composition, the antioxidant activity, in particular anti-free radical was clearly better.
This is why a preferred composition according to the invention is that in which the amounts by weight of the concentrate of wheat germ oil and lupine are 30% and 70% respectively.
The invention also relates to the cosmetic use of a composition according to the invention, in particular as an antioxidant, anti-radical, anti-elastase, protector WA and / or B, protector of DNA against damage, o in particular oxidative. Thanks to the activities highlighted for the compositions according to the invention, it is possible to use the compositions according to the invention, as cosmetic or pharmaceutical, in particular for photoprotection, against actinic aging or not, and for the protection of the skin against aggressions oxidants including pollution.
The invention also relates to the compositions according to the invention, by way of pharmaceutical product, in particular dermatological product and more particularly as agent intended for the prevention or treatment of the effects of WA and / or UVB on the skin, epidermal, dermal, cellular or extracellular, of product pharmaceutical for the prevention and treatment of the effects of oxidation, elastase and free radicals on the skin, or also as an agent having a DNA protection activity against damage, including damage oxidative.
The invention also relates to a cosmetic treatment method comprising the application of an antioxidant or anti-elastase composition or a cosmetic composition according to the invention on the skin surface of an individual.
In another aspect, the invention relates to a cosmetic composition or pharmaceutical comprising a composition according to the invention, preferably in association with a physiologically acceptable vehicle.
The cosmetic or pharmaceutical compositions thus defined are likely to be used in particular as a sun protection product against UVB and / or A and / or infrared radiation, restructuring, firming cream, product, in particular cream for the prevention and regression of stretch marks, cream nutritious, anti-wrinkle (fight against aging of the epidermis and dermis skin) and CA 022 ~ 8800 1998-12-22 WO 98/47479 5 PCT ~ R98 / 00827 day protection, lip and eye contour, regenerating lip sticks and protectors. For these uses, the cosmetic compositions according to the invention are advantageously formulated for topical use, in particular in the form of creams, emulsions, ointments, sticks or gels.
The cosmetic or pharmaceutical compositions according to the invention can have a total content by weight of lupine oil or its fractions and wheat germ or its fractions on the order of about 0.5 to 10%, preferably about 1% to about 5%.
The antioxidant activity of the compositions according to the invention, demonstrated o by oxidation stability, in particular of lupine oil and of the concentrate is particularly advantageous because it opens up possibilities additional uses as a dietary supplement taking advantage this antioxidant activity.
Finally, the invention also relates to a process for the preparation of compositions described above. Different variants are possible depending on the compositions. Thus, for example, we can cite:
- the mixture of two concentrates of lupine oil and wheat germ oil as obtained by the molecular distillation method for example such as described in the review ~ Parfumerie Cosmétique et Arôme ~ (1985, n ~ 61, page 91-96);
- the prior mixing of lupine and wheat germ oils followed by molecular distillation of the mixture according to the process described above, - the mixture of lupine oil and a concentrate of wheat germ oil obtained by molecular distillation.
The wheat germ oil concentrate is advantageously prepared according to the molecular distillation process described in patent FR 92 07830. According to this process, The oil is spread in a thin layer on the heated surface of a rotating conical rotor high speed. A high vacuum is maintained in the distillation chamber. In these conditions, there is evaporation and not boiling, from the hot surface, of constituents of the unsaponifiable whose separation becomes possible with respect to glycerides, the advantage being that the oil and the unsaponifiable material, reputed to be fragile, are not not degraded during the operation.

.

WO 98t47479 6 PCT / FR98 / 00827 The invention will be further detailed in the exemplary embodiments which which illustrate the preparation of lupine oil and germ oil concentrate wheat, separately or in mixtures, formulations of compositions based on such mixtures and indications of their activities.

I. Examples of preparation of lupine oil and ponifiable of lupine oil E ~ MPLE 1: Lupine oil 0 We use seeds from certified seeds (from lupinus albus), marketed by CANA.
After pre-cleaning, the seeds are thoroughly cleaned (elimination of foreign seeds and particles, residual eras, broken seeds), and can be peeled.
They are flattened in a roller mill; after conditioning hydrothermal at a temperature of about 70 ~ C, their humidity varies between 5% and 10%.
The oil is then extracted in an extractor by percolation at hexane. The extractor being filled with crushed scales, the extraction is carried out by 4 to 6 washes with hexane for each load.
After each wash, the miscella is pumped to a distiller; after the draining following the last wash, the cake is sent to a desolvant.
The miscella is continuously distilled in a still heated by steam circulation; it is continuously recycled in the still.
At the end of the operations, the oil still containing hexane is sent to final distillation to remove hexane under vacuum (from 10mm to 35mm of mercury) between 70 ~ C and 1 00 ~ C by ~ stripping ~ (stripping) for 10 min.
The composition of a crude oil extracted from ~ raines according to the process below above is indicated below:
- Organoleptic characters: orange-yellow oil, with characteristic odor.
- Composition of fatty acids:
. Myristic acid C14 <0.50%

CA 022 ~ 8800 1998-12-22 . Palmitic acid C16 4 to 10%
. Palmitoleic acid C16 '<2%
. C18 stearic acid <4%
. C18 'oleic acid 45 to 65%
s. C18 "linoleic acid 9 to 17%
. C18 "'linolenic acid 5 to 11%
. Arachidic acid C20 <3%
. Gadoleic acid C20 '2 to 8%
. Behenic acid C22 <6%
o. Erucic acid C22 '<5%
. C24 lignoceric acid <2%
- Unsaponifiable content> 1.5g / 1 OOg - Carotene content (in mg / lOOg)> 25mg / lOOg - Tocopherol content> O, lg / lOOg - Phenolic derivatives content (in equivalent gallic acid)> 20 ppm - Triterpene alcohol content (alpha-lupeol) O, I at 1%
- Total sterol content:> 0.8g / lOOg . relative% in campesterol 18 to 24%
. relative% in stigmasterol 5 to 10%
. relative% in J3 sitosterol 48 to 65%
. relative delta 5 - avenasterol <5%

EXAMPLE 2 Preparation of a concentrate of lupine oil by distillation 25 molecular Molecular distillation is carried out by spreading the oil in a layer thin on the heated surface of a conical rotor rotating at high speed. We maintains a high vacuum in the distillation chamber. We introduce into a device , o suitable molecular distillation and preferably of the centrifugal style, oil lupine as obtained in Example 1. The feed rate is 10 to 30 kg per hour and preferably between 15 and 20 kg per hour.
The distillation parameters are as follows:

CA 022 ~ 8800 1998-12-22 W 098/47479 8 PCT ~ R98 / 00827 - temperature: 210 ~ C to 250 ~ C;
- void from there lO, um (ie 0.13 to 1.3 Pa).
The percentage distilled being close to 10, we carefully collect this tillat The richness in non-saponifiable matter of this distilled fraction is between 45% and 65%.
The characteristics of the concentrate thus obtained are as follows:

- Organoleptic characters: yellow-orange paste o - Squalene content ~ 0.2g / lOOg - Carotene content ~ 22.0mg / 100g - Tocopherol content ~ 9, Og / lOOg . relative% in alpha tocopherol ~ l, O%
. relative% in gamma tocopherol ~ ~ 0.0%
. Relative% in tocopherol delta ~ 15.0%
- Total sterol content ~ 40.0g / lOOg . relative% in campesterol ~ 20.0%
. relative stigmasterol% ~ 9.0%
. relative% in 13 sitosterol ~ 60.0%
. Relative% in Delta 5 - avenasterol ~ 2.0%
. Relative% in Delta 7 - Stigmasterol ~ 2.0%
- Content of phenolic derivatives, expressed in gallic acid ~ 40,0ppm - Total unsaponifiable content ~ 60.0%
2i EXAMPLE 3 Preparation of the lupine oil unsaponifiable material ~ e concentrate of lupine oil obtained in Example 2 is saponiflé in a stainless steel reactor, under the following conditions:
20 kg of potassium hydroxide are added per 100 kg of concentrate.
scales, 250 kg of alcohol and 30 kg of water. The mixture is brought to reflux for Sheures.

CA 022 ~ 8800 1998-12-22 WO 98/47479 9 PCT ~ R98 / 00827 The hydroalcoholic solution of soaps thus obtained is diluted by its volume with demineralized water and extracted with dichloroethane (DCE) in a current-flow device, for example a pulse column, which selectively extracts the unsaponifiable part.
s This unsaponifiable solution is then washed with water in another counter-current device to eliminate soaps entrained during extraction.
The DCE is eliminated at a rate of approximately 95%, at atmospheric pressure in a falling flow evaporator, then the evaporation is complete in a vacuum device provided with a double envelope and an injector allowing o the introduction of live steam into the mass, according to the following procedure:
. The product is heated to 100 ~ C, under a vacuum of 10mm Hg (i.e. 1.3 kPa) until the distillation of the residual dichloroethane ceases; at this time, the water vapor is injected into the mass, at a rate of 4% by weight of water relative to the unsaponifiable weight. The duration of the operation is approximately 4 hours.
. The product is dried by nitrogen injection, using the tubing used when steam is introduced.
. The product is then cooled and the vacuum is broken under a stream of nitrogen.
The unsaponifiable is kept in high density polyethylene barrel and bag low density polyethylene under nitrogen until used.
The unsaponifiable lupine oil thus obtained is an orange-yellow paste containing:
- about 3% tocopherols . of which approximately 96% gamma-tocopherol . and about 4% alpha-tocopherol - sterols around 40% with a relative content of:
. campersol about 25%
. stigmasterol about 8%
.13 sitosterol about 52%

EXAMPLE 4 Mixture of a concentrate of wheat germ oil and lupine oil.

A concentrate of wheat germ oil is prepared according to the process described in patent FR 92 07830, the content of which is incorporated herein by reference, and it is mixed CA 022 ~ 8800 1998-12-22 with lupine oil as obtained in Example 1, in proportions by weight of 30% and 70% respectively relative to the total weight of the mixture. The characteristics of the mixture obtained are as follows:

s - Organoleptic characteristics: limpid oil of yellow orange color, odor feature.
- Composition of fatty acids:
. Myristic acid C14 <2%
. Palmitic acid Cl6 7 to 14%
o. Palmitoleic acid C16 '<2%
. Stearic acid C 18 <5%
. Oleic acid C18 '38 to 52 ~ / 0 . Linoleic acid C18 "25 to 30%
. C18 "'linolenic acid 4 to 11%
IS. Arachidic acid C20 <3%
. Gadoleic acid C20 '2 to 8%
. Behenic acid C22 1 to 6%
. Erucic acid C22 '<s%
. C24 lignoceric acid <2%
- Unsaponifiable content> 4g / lOOg - Carotene content (in mg / lOOg)> 15mg / lOOg - Tocopherol content> 500mg / lOOg - Content of phenolic derivatives> 14 mg / L ~ g - Total sterol content:> 2.5%
2s. relative% in campesterol 18 to 25%
. relative% in stigmasterol 3 to 10%
. relative% in B sitosterol 48 to 64%
. relative delta S - avenasterol <6%

30 II. Examples of formulation (products designated under appellations unless otherwise stated, are listed in the INCI directory; 6 ~ m ~
editing.

CA 022 ~ 8800 1998-12-22 1. Cream with lupine oil Montanov 68 5.00%
s Shea Butter 3.00%
Paraffin oil 10.00%
Cetearyl octanoate 5.00%
Dimethicone 1.00%
~ lupine oil 5.00%
0 Phenoxyethanol 0.40%
Phenonip 0.80%
Water 59.10%
Glycerin 10.00%
Controx VP 0.10%
1 ~ Parfun borealis n ~ l 0.60%

2. Light moisturizer with lupine oil 2.00% thick petrolatum oil Octyl dodecanol 2.00%
Cetearyl glucoside 5.00%
Jojoba oil 1.00%
Squalane 1.00%
Cetostearyl alcohol 25 EO 1.00%
2 ~ Controx VP 0.10%
~: lupine oil 5.00%
Purified water 72.475%
0.10% trisodium citrate Citric acid monohydrate 0.025%
Silicone Q21401 * 4.00%
Preservative GD 700 ** 0.20%
Sepigel 305 0.80%
Aloe vera gel 5.00%

CA 022 ~ 8800 1998-12-22 WO 98/47479 12 PCT ~ R98 / 00827 By ~ um composition 53905-1 Synaroma 0.30%
* Q21401 silicone is sold by Dow Corning under the designation Cyclomethicone and dimethiconol;
** The preservative GD 700 is marketed by the company PHYTOCOS under:
5 propylene glycol, water, phenoxyethanol, methylparaben, butylparaben, isobutylparaben, ethylparaben; methylchlorothiazolinone and methylisothiazolinone

3. Crème au concentrat d'huile de lupin o Esters d'acides gras polyoxyéthylénés 4,00 %
Acide stéarique 3,00 %
Alcool cétylique 2,00 %
Huile de vaseline fluide 2,00 %
Propylène glycol 2,00 %
Glycérine 1,50 %
Concentrat d'huile de lupin 1,00 %
Polyimidazole urée 0,20 %
Parahydroxybenzoate de méthyle 0,20 %
Parahydroxybenzoate de propyle 0,10 %
Acide tartrique 0,02 %
Parfum 0,30 %
Eau.. q.s.p 100,00 % 3. Cream with lupine oil concentrate o Esters of polyoxyethylenated fatty acids 4.00%
Stearic acid 3.00%
Cetyl alcohol 2.00%
2.00% fluid vaseline oil Propylene glycol 2.00%
Glycerin 1.50%
Lupine oil concentrate 1.00%
Polyimidazole urea 0.20%
0.20% methyl parahydroxybenzoate Propyl parahydroxybenzoate 0.10%
Tartaric acid 0.02%
Perfume 0.30%
Water .. qs 100.00%

4. Creme à l'insaponifiable de lupin Monostearate de sorbitan polyoxyéthyléné 3,20 %
Octyldodecanol 3,00 %
Huile d'amande douce 2,80 %
Monostéarate de sorbitan 2,00 %
Huile de vaseline fluide 2,00 %
Laurate d'hexyle 2,00 %
Cire d'abeille 2,00 %
Alcool cétylique 1,50 %

CA 022'78800 l998-l2-22 W O 98/4;'479 13 PCT/FR98/00827 Stéarate de diéthylène glycol 1,50 %
Mélange de monoglycérides d'alcools gras de triglycérides et d'esters cireux 1,00 %
Insaponifiable de lupin 1,00 %
Parahydroxybenzoate de méhyle 0,30 %
Parahydroxybenzoate de propyle 0,10 %
Parfum 0,25 %
Eau.. q.s.p 100,00 %

0 5. Crème anti-âge avec un mélanoe comprenant 30 % de concentrat d'huile de germe de blé et 70 % d'huile de lupin Arlacel 165 5,00 %
Cetearyl octanoate 14,00 %
Palmitate de cetyle 1,00 %
Concentrat d'huile de germe de blé
et huile de lupin 3,00 %
Phenonip 0,80 %
Phenoxyéthanol 0,40 %
Controx VP 0,10 %
Eau 72,50 %
Sepigel 2,50 %
Parfum Firmenich petit matin 0,70 %

25 6. Lait après-soleil avec un mélan~e comprenant 30 % d'un concentrat d'huile de germe de blé et 70 % d'huile de lupin Emulgade SE* 6,00 %
Miglyol 812 3,00 %
Cetearyl Octanoate 3,00%
Beurre de Karite 2,00 %
Alcool cetylique 1,00 %
Concentrat d'huile de germe de blé et CA 022~8800 l998-l2-22 huile de lupin 1,50 %
Silicone Q2 1401 2,00 %
Eau 76,90 %
Glycérine 3,00 %
Controx VP 0,10 %
Phenonip 0,80 %
Phenoxyethanol 0,40 %
Parfum eau marine TM 4509 Technicoflor 0,30 %
* Emulgade SE est commercialisé par la société Henkel sous: Glyceryl stearate, 0 ceteareth-20, ceteareth-12, cetearyl alcohool et cétyl palmitate.

7. Crème solaire avec un mélan~e comprenant 30 % d'un concentrat d'huile de ~erme de blé et 70 % d'huile de lupin Eau qsp 100 %
Caprylic/Capric Triglyceride 16,10 %
Dioxyde de titane 10,00 %
Octyl Palmitate 4,64 %
Benzoate d'alkyle C12-15 4,00 %
Cyclomethicone 3,00 %
Cetearyl Octanoate 3,50 %
Cetyl Dimethicone Copolyol 2,50 %
Oxyde de zinc 2,00 %
Aluminium/Magnesium Hydroxide Stearate 2,00 %
2s Cetyl Dimethicone 1,00 %
Acide isostéarique 1,00 %
Chlorure de sodium 1,00 %
Phenoxyethanol 0,876 %
Tocopheryl acetate 0,50 %
Octyldodecanol 0,28725 %
Methylparaben 0,128 %
~,utylparaben 0,048 %

.. , . .. , . ~ .. . .

W O 98/47479 15 PCT~R98/00827 Concentrat d'huile de germe de blé et huile de lupin 2,00 %

8. Crème solaire avec un mélanoe comprenant 30 ~/O d'un concentrat d'huile de germe de blé et 70 % d'huile de lupin Eau qsp 100 %
Octyl Methoxycinnamate 7,50 %
Octyl Cocoate 10,00 %
0 Octyl Salicylate 5,00%
Oleth-2 3 oo %
Benzophenone-3 3,00 %
Huile de vaseline 1,80 %
Stearyl Heptanoate 1,425 %
Stearamine Oxide 1,30 %
Acrylates/Octylacrylamide Copolymer 1,30 %
Sulfate de Magnesium 0,50 %
Vitamine E 0,50 %
Sodium Magnesium Silicate 0,40 %
Phenoxyethanol 0,053 %
Methylparaben 0,012 %
Parfum 0,20 %
Concentrat d'huile de germe de blé et d'huile de lupin 1,00 %
2~
m. Etude de l'activité antiradicalaire de mélange d'huile de lupin et du concentrat d'huile de germe de blé: comparaisoll avec la vitamine E et la vitamine C associée au glutathion.

30 1. Produits testés Cinq échantillons référencés ci-après ont été testés:
L0: huile de germe de blé

. . .

CA 022~8800 1998-12-22 W O 98147479 16 PCT~R98/00827 . L50: mélange de 50 % de concentrat d'huile de germe de blé et 50 %
d'huile de lupin . L70 mélange de 30 % de concentrat d'huile de germe de blé et 70 %
d'huile de lupin . L90: mélange de 10 % de concentrat d'huile de germe de blé et 90 %
d'huile de lupin . L100: huile de lupin pure L'activité de ces cinq lots a été comparée à celle de l'acétate de vitamine E
(Sigma), d'une association ascorbate de sodium (vitamine C) et glutathion (Sigma), o ainsi qu'à celle de la 13-carotène à 30 % en solution dans un glycéride synthétique (Reférence 1) et à celle d'un mélange de 50 % en poids de concentrat d'huile de germe de blé et 50 % en poids de concentrat d'huile de sésame (tel que décrit aubrevet FR 92 07830) (Référence 2).

2. Matériels et méthodes 2.1. Cultures cellulaires Les cellules sont des kératinocytes épidermiques humains. On s'est procure des kératinocytes à partir d'un déchet opératoire résultant d'une intervention de plastie mammaire réalisée chez une femme âgée de 40 ans (donneur BIOPREDIC
n~ VACHL0009). Les cellules sont utilisées au sixième passage, elles sont ensemencées à 1 x 105 cellules par puits dans des plaques de culture de 6 puits. Elles sont utilisées à confluence.

2.2. Evaluation de l'activité antiradicalaire Elle est quantifée par une méthode fluorométrique qui met en évidence le taux d'hydroperoxydes qui sont des métabolites des radicaux libres. On utilise une sonde appropriée qui se transforme en un dérivé fluorescent en leur présence, selon la méthode décrite par Keston A.S. and Brandt R. (The fluorometric analysis of ultramicroquantitiesofhydrogenperoxide,Anal.Biochem. 11, 1965, 1-5).
2.3. Irradiation aux U.S.A. et observations des effets de l'irradiation Les radicaux libres sont générés au niveau de la culture cellulaire par irradiation par les rayonnements ultraviolets A. Les kératinocytes sont irradiés par CA 022~8800 1998-12-22 . W O 98/47479 17 PCT/FR98/00827 des rayons WA du coté inférieur de la monocouche (pour éviter les éventuels effets filtres des produits à l'essai) à l'aide d'une table à ultraviolets (VILBERT
LOU~MAT) pendant 90 minutes (10 J/cm-) Les produits à l'essai ainsi que les deux produits de référence, référence I et référence 2, sont solubilisés dans du diméthylformamide (DMF).
Les produits à l'essai, L0, L50, L70, L90 et L100 sont testés à des concentrations de 0,00000 1; 0,0000 1; 0,000 1; 0,00 1 et 0,0 1 % (p/v) (soit 1; 1 0;
100; 1000 et 10000 ppm) dans le tampon HBSS (solution saline de Hacks) contenant0,04%(v/v)deDMF.
0 La concentration en DMF est maintenue constante à 0,04 % (v/v) dans chaque dilution.
Les références 1 et 2 sont testées à 0,01 % (p/v) dans le tampon HBSS
contenant 0,04 % (v/v) de DMF.
Le mélange vitamine C à 0,5 mg/ml + glutathion à 0,5 mg/ml et l'acétate de vitamine E à 0,1 % (p/v) sont directement solubilisés dans le tampon HBSS.
La sonde destinée a mettre en évidence les hydroperoxydes (sonde CM-H2DCF-DA commercialisée par MOLECULAR PROBES) a été utilisée à 5~1M dans le milieu d'essai.
Les kératinocytes sont incubés à températures ambiante avec les produits à
I'essai et les produits de référence pendant l'irradiation, soit 90 minutes.

2.4. Témoins Des keratinocytes témoins irradiés (+UVA) ou non irradiés (-UVA) par des rayons WA sont incubés dans le tampon HBSS (avec témoin (DM~) ou sans (DMF) à 0,04 % (v/v)) et contenant seulement la sonde pendant la durée de l'irradiation.
Après irradiation, les kératinocytes sont Iysées par action des ultrasons. Les Iysats cellulaires sont transférés dans des plaques de 96 puits et analysés par fluorimétrie a l'aide d'un analyseur de plaques (excitation: 355 nm, émission:
460 nm).
Les résultats sont exprimés en unité de fluorescence / puits de culture CA 022~8800 1998-12-22 W 098/47479 18 PCT~R98/00827 3. Résultats Les groupes de données (groupe de témoin et groupes traités) ont été
comparés par une analyse de la variance à un facteur (ANOVA 1), suivie par un test de Dunnett.
Le pourcentage de protection des produits à l'essai ou des produits de référence Rl et R2 a été calculé à l'aide de la formule suivante:

Valeur moyenne obtenue Valeur moyenne obtenue avec le témoin irradié - avec les produits a I'essai lo ou les produits de référence % de protection = _ _ _ Xloo Valeur moyenne obtenue - Valeur moyenne obtenue avec le témoin irradie avec le témoin non irradié

Par convention, lorsque les valeurs mesurées en présence des produits à
l'essai ou ~n présence des produits de référence étaient inférieures à celles du~témoin non irradie~, le pourcentage de protection a été rapporté à 100 % De même, lorsque ces valeurs étaient supérieures à celles du ~témoin irradié~, le pourcentage de protection a été rapporté à 0%.
Les tableaux ci-après (Tableaux I à 7) présentent les résultats obtenus exprimés en % de protection.

Tableau 1 témoin témoinvitamine acétate réf 1 réf 2 C + de 0,01% 0,01%
- UVA + UVAglutathion vitamine E(p/v) (p/v) %

de 100 0 100 65 62 9 protection 2s wo 98/47479 19 PCT/FRg8/00827 Tableau 2 Témoin Témoin L 0 (% p/v) DMF DMF
- WA + WA 0,000001 0,00001 0,0001 0,001 0,01 % de protection 100 0 64 56 96 28 23 Tableau 3 Témoin Témoin L 50 (% p/v) D~ DM~
- WA + WA 0,000001 0,00001 0,0001 0,001 0,01 % de protection100 0 3 8 60 66 17 5 8 Tableau 4 Témoin Témoin L 70 (% p/v) DMF DMF
- WA + WA 0,000001 0,00001 0,0001 0,001 0,01 % de protection100 0 51 95 86 0 0 o Tableau ~

Témoin Témoin L 90 (% p/v) DMF DMF
- WA + WA 0,000001 0,00001 0,0001 0,001 0,0]
% de protection100 0 8 64 56 60 27 , _ CA 022~8800 1998-12-22 W 0 98/47479 20 ~CTAFR98/00827 Tableau 6 Témoin Témoin L 100 (% p/v) DMF DMF
- WA + WA 0,000001 0,000010,0001 0,001 0,01 %de protection 100 0 24 26 33 79 87 Les résultats reportés aux Tableaux I à 6 permettent de tirer les conclusions 4. Lupine unsaponifiable cream Polyoxyethylenated sorbitan monostearate 3.20%
Octyldodecanol 3.00%
Sweet almond oil 2.80%
Sorbitan monostearate 2.00%
2.00% fluid vaseline oil Hexyl Laurate 2.00%
Beeswax 2.00%
Cetyl alcohol 1.50%

CA 022'78800 l998-l2-22 WO 98/4; '479 13 PCT / FR98 / 00827 Diethylene glycol stearate 1.50%
Mixture of fatty alcohol monoglycerides triglycerides and waxy esters 1.00%
Unsaponifiable with lupine 1.00%
Methyl parahydroxybenzoate 0.30%
Propyl parahydroxybenzoate 0.10%
0.25% fragrance Water .. qs 100.00%

0 5. Anti-aging cream with a melanoid comprising 30% germ oil concentrate wheat and 70% lupine oil Arlacel 165 5.00%
Cetearyl octanoate 14.00%
Cetyl palmitate 1.00%
Wheat germ oil concentrate and lupine oil 3.00%
Phenonip 0.80%
Phenoxyethanol 0.40%
Controx VP 0.10%
Water 72.50%
Sepigel 2.50%
Firmenich perfume early morning 0.70%

25 6. After-sun milk with a melan ~ e comprising 30% of a concentrated oil wheat germ and 70% lupine oil Emulgade SE * 6.00%
Miglyol 812 3.00%
Cetearyl Octanoate 3.00%
Shea Butter 2.00%
Cetyl alcohol 1.00%
Wheat germ oil concentrate and CA 022 ~ 8800 l998-l2-22 lupine oil 1.50%
Silicone Q2 1401 2.00%
Water 76.90%
Glycerin 3.00%
Controx VP 0.10%
Phenonip 0.80%
Phenoxyethanol 0.40%
Marine water perfume TM 4509 Technicoflor 0.30%
* Emulgade SE is marketed by the company Henkel under: Glyceryl stearate, 0 ceteareth-20, ceteareth-12, cetearyl alcohool and cetyl palmitate.

7. Sunscreen with a melan ~ e comprising 30% of a concentrated oil ~ wheat husk and 70% lupine oil Water qs 100%
Caprylic / Capric Triglyceride 16.10%
Titanium dioxide 10.00%
Octyl Palmitate 4.64%
C12-15 alkyl benzoate 4.00%
Cyclomethicone 3.00%
Cetearyl Octanoate 3.50%
Cetyl Dimethicone Copolyol 2.50%
Zinc oxide 2.00%
Aluminum / Magnesium Hydroxide Stearate 2.00%
2s Cetyl Dimethicone 1.00%
Isostearic acid 1.00%
Sodium chloride 1.00%
Phenoxyethanol 0.876%
Tocopheryl acetate 0.50%
Octyldodecanol 0.2825%
Methylparaben 0.128%
~, utylparaben 0.048%

..,. ..,. ~ ... .

WO 98/47479 15 PCT ~ R98 / 00827 Wheat germ oil concentrate and lupine oil 2.00%

8. Sunscreen with a melanoid comprising 30 ~ / O of an oil concentrate wheat germ and 70% lupine oil Water qs 100%
Octyl Methoxycinnamate 7.50%
Octyl Cocoate 10.00%
0 Octyl Salicylate 5.00%
Oleth-2 3 oo%
Benzophenone-3 3.00%
Vaseline oil 1.80%
Stearyl Heptanoate 1.425%
Stearamine Oxide 1.30%
Acrylates / Octylacrylamide Copolymer 1.30%
Magnesium sulfate 0.50%
Vitamin E 0.50%
Sodium Magnesium Silicate 0.40%
Phenoxyethanol 0.053%
Methylparaben 0.012%
Perfume 0.20%
Wheat germ oil concentrate and lupine oil 1.00%
2 ~
m. Study of the anti-free radical activity of a mixture of lupine oil and wheat germ oil concentrate: comparaisoll with vitamin E and vitamin C associated with glutathione.

30 1. Products tested Five samples referenced below were tested:
L0: wheat germ oil . . .

CA 022 ~ 8800 1998-12-22 WO 98147479 16 PCT ~ R98 / 00827 . L50: mixture of 50% wheat germ oil concentrate and 50%
lupine oil . L70 mixture of 30% wheat germ oil concentrate and 70%
lupine oil . L90: mixture of 10% wheat germ oil concentrate and 90%
lupine oil . L100: pure lupine oil The activity of these five batches was compared with that of vitamin E acetate (Sigma), a combination of sodium ascorbate (vitamin C) and glutathione (Sigma), o as well as that of 13-carotene 30% in solution in a synthetic glyceride (Reference 1) and that of a mixture of 50% by weight of oil concentrate wheat germ and 50% by weight of sesame oil concentrate (as described in the patent FR 92 07830) (Reference 2).

2. Materials and methods 2.1. Cell cultures The cells are human epidermal keratinocytes. We got keratinocytes from an operational waste resulting from an intervention of breast surgery performed on a 40-year-old woman (BIOPREDIC donor n ~ VACHL0009). The cells are used on the sixth pass, they are seeded at 1 x 105 cells per well in 6-well culture plates. They are used at confluence.

2.2. Evaluation of anti-free radical activity It is quantified by a fluorometric method which highlights the levels of hydroperoxides which are metabolites of free radicals. We use a appropriate probe which turns into a fluorescent derivative in their presence, according to the method described by Keston AS and Brandt R. (The fluorometric analysis of ultramicroquantitiesofhydrogenperoxide, Anal.Biochem. 11, 1965, 1-5).
2.3. Irradiation in the USA and observations of the effects of irradiation Free radicals are generated in cell culture by irradiation with ultraviolet radiation A. Keratinocytes are irradiated with CA 022 ~ 8800 1998-12-22 . WO 98/47479 17 PCT / FR98 / 00827 WA rays on the lower side of the monolayer (to avoid possible effects filters of the test products) using an ultraviolet table (VILBERT
LOU ~ MAT) for 90 minutes (10 J / cm-) The test products as well as the two reference products, reference I and reference 2, are dissolved in dimethylformamide (DMF).
The test products, L0, L50, L70, L90 and L100 are tested at concentrations of 0.00000 1; 0.0000 1; 0.000 1; 0.00 1 and 0.0 1% (w / v) (i.e. 1; 1 0;
100; 1000 and 10000 ppm) in HBSS buffer (Hacks saline solution) containing 0.04% (v / v) of DMF.
0 The DMF concentration is kept constant at 0.04% (v / v) in each dilution.
References 1 and 2 are tested at 0.01% (w / v) in HBSS buffer containing 0.04% (v / v) of DMF.
The mixture of vitamin C at 0.5 mg / ml + glutathione at 0.5 mg / ml and acetate 0.1% vitamin E (w / v) are directly dissolved in HBSS buffer.
The probe intended to highlight the hydroperoxides (CM- probe H2DCF-DA marketed by MOLECULAR PROBES) was used at 5 ~ 1M in the test medium.
The keratinocytes are incubated at room temperature with the products to The test and the reference products during irradiation, ie 90 minutes.

2.4. Witnesses Control keratinocytes irradiated (+ UVA) or not irradiated (-UVA) with WA rays are incubated in HBSS buffer (with control (DM ~) or without (DMF) 0.04% (v / v)) and containing only the probe for the duration of the irradiation.
After irradiation, the keratinocytes are lyzed by the action of ultrasound. The Cell iysates are transferred to 96-well plates and analyzed by fluorimetry using a plate analyzer (excitation: 355 nm, emission:
460 nm).
The results are expressed in fluorescence unit / culture well CA 022 ~ 8800 1998-12-22 W 098/47479 18 PCT ~ R98 / 00827 3. Results The data groups (control group and treated groups) were compared by a factor analysis of variance (ANOVA 1), followed by a test from Dunnett.
The percentage of protection of the products under test or the products of reference Rl and R2 was calculated using the following formula:

Average value obtained Average value obtained with the irradiated witness - with the test products lo or the reference products % protection = _ _ _ Xloo Average value obtained - Average value obtained with witness irradiated with witness not irradiated By convention, when the values measured in the presence of the products to the test or ~ n presence of reference products were lower than that of the ~ non-irradiated control ~, the percentage of protection was reported at 100%
even, when these values were higher than those of the ~ irradiated witness ~, the protection percentage has been reported as 0%.
The tables below (Tables I to 7) present the results obtained expressed as% protection.

Table 1 control witness vitamin acetate ref 1 ref 2 C + 0.01% 0.01%
- UVA + UVAglutathione vitamin E (w / v) (w / v) %

from 100 0 100 65 62 9 protection 2s wo 98/47479 19 PCT / FRg8 / 00827 Table 2 Control Witness L 0 (% w / v) DMF DMF
- WA + WA 0.000001 0.00001 0.0001 0.001 0.01 % of protection 100 0 64 56 96 28 23 Table 3 Control Witness L 50 (% w / v) D ~ DM ~
- WA + WA 0.000001 0.00001 0.0001 0.001 0.01 % of protection 100 0 3 8 60 66 17 5 8 Table 4 Control Witness L 70 (% w / v) DMF DMF
- WA + WA 0.000001 0.00001 0.0001 0.001 0.01 % of protection 100 0 51 95 86 0 0 o Table ~

Control Witness L 90 (% w / v) DMF DMF
- WA + WA 0.000001 0.00001 0.0001 0.001 0.0]
% of protection 100 0 8 64 56 60 27 , _ CA 022 ~ 8800 1998-12-22 W 0 98/47479 20 ~ CTAFR98 / 00827 Table 6 Control Witness L 100 (% w / v) DMF DMF
- WA + WA 0.000001 0.000010.0001 0.001 0.01 %of protection 100 0 24 26 33 79 87 The results reported in Tables I to 6 allow conclusions to be drawn

5 suivantes:
- Le DMF à 0,04 % (v/v) utilisé comme solvant intermédiaire des produits à
tester et des produits de référence (réf. I et réf. 2) n'a pas d'effet significatif vis à vis de l'intensité de la fluorescence émise par la sonde, avant et après irradiation des cellules.
lo - Les deux produits de référence vitamine C + glutathion d'une part et acétate de vitamine E d'autre part, présentent un effet protecteur attendu de 100 % et 65 %
respectivement vis à vis de l'effet délétère des rayons UVA.
- Les produits de référence, réf. I et réf. 2 testés à 0,01 % (p/v) présentent un effet protecteur de 62 % et 93 % respectivement vis à vis de l'effet délétere des rayons UVA.
En ce qui concerne les produits à tester, on observe les résultats suivants:
- un effet protecteur est obtenu avec les produits L 0, L 50, L 70, L 90 et L 100 vis à vis des effets délétères des rayons UV riches en UVA.
- le produit L 0 (100 % de concentrat d'huile de germe de blé) est plus protecteur aux faibles concentrations testées qu'aux fortes concentrations.
- un effet inverse est observé pour le produit L 100 (100 % d'huile de lupin).
- les mélanges L 50 et L 90 ne sont pas meilleurs que les produits L 0 et L 100.
- par contre, de façon inattendue, le produit L 70, notamment a une 2~ concentration de 0,0001 % (p/v) est signi~lcativement plus protecteur que les quatre autres produits.

.

CA 022~8800 l998-l2-22 IV. Etude de l'activité anti élastase du produit L 70 dans un modèle d'e~plant de peau humaine.

L'étude de l'activité anti élastase représente un bon indice du vieillissement 5 de la peau puisqu'il est maintenant bien connu que la dégradation des fibres élastiques présentes dans le derme met en jeu des élastases endogènes. Le test utilisé
permet d'étudier l'activité anti élastase in vitro dans des coupes d'explant de peau humaine. Une application d'élastase purifiée sur une partie limitée de la coupe s'accompagne d'une dégradation des fibres élastiques endogènes. Les fibres 0 élastiques sont colorées par la (+) catéchine. Le pourcentage de fibres élastiques intactes par champ optique est évalué par analyse d'images. Un produit présentant une activité anti élastase permet de conserver l'intégrité des fibres élastiques en présence d'élastase purifiée.

1. Produits testés Le produit L 70 testé précédemment pour son activité anti radicalaire a été
comparé à des produits anti élastase de référence: l'élastinal (Sigma) et le chlorure de mercure (Sigma).

20 2. Matériels et Méthodes 2.1. Réactifs On utilise une élastase pancréatique (type IV, référence E0258, Sigma). Le milieu d'incubation des coupes de peau humaine ((( véhicule )>) est le tampon Hépés 0,1 M, ajusté à pH 7.5 avec la soude et contenant 0,} M de chlorure de sodium.
2s 2.2. Système d'essai Les coupes de peau sont réalisées à partir d'un déchet opératoire recueilli après une plastie abdominale. Le donneur était une femme âgée de 37 ans. On réalise des explants de 1 cm de diamètre et on les dépose sur un support de liège et on ies 30 congèle à -80~C. On réalise des coupes transverses de 6 llm d'épaisseur avec un cryomicrotome. Les coupes sont fixées sur des lames de verre et maintenues hydratées avec le véhicule pendant l'essai.

CA 022~8800 1998-12-22 2.3. Préparation des produits à tester et des produits de référence, incubation avec le système d'essai Les produits à tester, le sont à 0,5; 1 et 5% (v/v) dans le véhicule.
L'él~st~tin~l est testé à 0,01 et 0,1% (p/v) dans le véhicule Le chlorure de mercure est testé à 0,025 et 0,125% (p/v) dans le véhicule.
Les dilutions des produits à tester et des produits de référence sont déposées sur les coupes de peau, à raison de 100 ~11 par coupe (0,32 cm2 de surface), et pré-incubées pendant dix minutes à 37~C. Des bandes de papier filtre (0,16 cm7 de surface) imbibées de véhicule seul (témoin véhicule) ou contenant de l'élastase 0 pancréatique à 5 unités internationales (Ul)/ml (témoin enzyme) sont déposées sur les coupes. Les lames sont placées en chambre humide à 37~C pendant trois heures.

2.4. Evaluation de l'activité anti élastase Après l'incubation, les coupes sont rincées avec le milieu d'incubation et colorées par la (+) catéchine. L'activité de l'enzyme en absence et en présence des produits à tester ou des produits de référence est évaluée par analyse d'image:
I'image des coupes colorées est digitalisée sur un écran vidéo; un logiciel d'analyse d'image permet de mesurer les niveaux de gris des images binarisées; on mesure la surface occupée par les fibres élastiques intactes. Les résultats sont exprimés en pourcentage de fibres élastiques intactes par champ optique.
Le pourcentage d'inhibition de l'activité elastase des produits à l'essai et desproduits de référence est calculé à l'aide de la formule suivante:

Valeur obtenue avec le Valeur obtenue avec les témoin enz~me - produits à l'essai ou les produits de référence %d'inhibition X 100 Valeur obtenue avec le - Valeur obtenue avec le témoin véhicule temoin enzyme CA 022~8800 1998-12-22 W O 98/47479 23 PCT~R98/00827 Les résultats sont montrés au tableau ci-après (Tableau 7).

Tableau 7 Produit Concentration % d'inhibition % (vlv) Témoin véhicule - 100 Témoin enzyme - o 0,0~5 (p/v) 18,4 Chlorure de mercure0,125 (p/v) 39,3 0,01 (p/v) 71 ,5 Elastatinal 0,1 (p/v) 59,9 0,5 31 s Le calcul du pourcentage d'inhibition de l'activité élastase donne de fac,on attendue 100 % en absence d'élastase (témoin véhicule) et 0% en présence d'elastase (témoin enzyme).
L'elastatinal, testé à 0,01 et 0,1 % (p/v) inhibe respectivement de 71 % et 60 lo % I'activité de l'élastase. Les fibres d'élastine sont en grande partie intactes dans la zone d'application de l'élastase.
Le chlorure de mercure, testé à 0,025 et 0,1~5 % (v/v), inhibe respectivement de 18 % et 39 % la dégradation des fibres d'élastine par l'élastase.
L 70, testé à 0,5; 1 et 5% (v/v), inhibe respectivement de 31 %, 70 % et 70 %
15 la dégradation des fibres d'élastine par l'élastase.

V. Etude de l'activité anti-élastase d'une huile de Lupin brute telle qu'obtenueà l'exemple 1 et d'une huile de Lupin obtenue par pression directe des graines de Lupin (huile de lupin pression).
L'huile de lupin pression est obtenue par pression à froid, avec une presse de type titan, des graines de lupin de l'espèce Lupinus albus décortiguées. Le tourteau est recyclé en continu afin d'extraire l'huile résiduelle. Après l'étape de pression, .

CA 022~8800 1998-12-22 W 098/47479 24 PCT~R98/00827 I'huile est stockée à température arnbiante dans une cuve appropriée pendant 24 heures.
Elle est ensuite filtrée afin d'éliminer la matière solide en suspension telle que fibres ou phopholipides.
Les caractéristiques de l'huile de lupin pression obtenue sorit les suivantes:

- Caractères organoleptiques: huile de couleur jaune orangé, d'odeur caractéristique.
- Composition en acides gras:

o acide myristique C14 < 0,50 %
acide palmitique C16 4 à 10 %
acide palmitoléique C16' < 2 %
acide stéarique Cl 8 < 4 %
acide oléique C18' 45 à 65 %
1~ acide linoléique C18" 9 à 17 %
acide linolénique C18"' 5 à 11 %
acide arachidique C20 S 3 %
acide gadoléique C20' 2 à 8 %
acide béhénique C22 < 6 %
acide érucique C22' < 5 %
acide lignocérique C24 < 2 %

- Teneur en insaponifiable < 1,5 g/100 g - Teneur en carotènes (en mg/100 g) environ 25 mg/100 g 2i - Teneur en tocophérols environ 120 mg/ 100 g - Teneur en dérives phénoliques (en équivalent d'acide gallique) environ 30 ppm - Teneur en alcool triterpénique (alpha-lupéol) 0,1 g à I %
- Teneur en stérols totaux < 0,8 g/100 g % relatif en campéstérol 18 à 24 %
% relatif en stigmastérol 5 à 10 %
% relatif en ~ sitostérol 48 à 65 %
% relatif en delta 5 - avenastérol < 5 %

L'activité anti-élastase est déterrninée dans les conditions indiquées au IV ci-dessus.
Les résultats obtenus sont rassemblés dans le tableau ci-après.

5 Tableau 8 Produits Concentration Inhibition % (v/v) Témoin véhicule - +++
Témoin enzyme - 0 Chlorure de mercure 0,125 (p/v) ++
Elastatinal 0,1 (p/v) ++
0,5 +
HuiledeLupin brute 1 ++
++
O,S +
Huile de lupin pression 1 +~
S l l l L'él~t~tin~l et le chlorure de mercure ont eté utilises comme produit de réference.
Comme attendu, en absence d'elastase (témoin vehicule), on n'observe aucune lO dégradation des fibroblastes.
Comme attendu, l'élastatinal, testé à 0,1 % (p/v), et le chlorure de mercure, testé à 0,125 % (p/v), inhibent fortement l'activité enzymatique de l'élastase.
L'activité anti-élastase de l'huile de lupin brute et celle de l'huile de lupin pression augmentent avec la concentration. A une concentration de 5 % (v/v), l'huile de lupin pression inhibe totalement l'activité enzymatique de l'élastase.

VI. Etude de l'activité anti oxydante d'une composition à base d'huile de lupin ou de ses fractions dans le test au Rancimat.

L'activité anti oxydante est évaluée par le test au Rancimat. Ce test représenteune adaptation du test de Swift pour être automatisé sur un appareil Rancimat (une version du test au Rancimat est commercialisée par la Société METROHM, Suisse).

CA 022~8800 1998-12-22 W O 98t47479 26 PCT/FR98/00827 Le tableau ci-après (Tableau 9) indique les resultats de stabilité au Rancimat 98~C, 20Vh) pour des compositions selon l'invention et, à titre de comparaison, pour d'autres huiles d'origine végétale.

s Tableau 9 ECHANTILLONS ANALYSES RESULTATS
Huile de lupin 60,4 h ~Huile de tournesol environ 10 h Huile de maïs 18,2 h Huile de sésame 20,7 h Concentrat d'huile de lupin > 75 h VIl~. Etude de l'activité antio~ydante de fractions d'huile de Lupin par une 0 méthode de vieillissement accéléré.

Les résultats sont reportés dans le tableau 10 ci-après.

Tableau 10 Produits Concentration Indice de peroxyde Indice de peroxyde dans l'huile de départ après 13 jours (% poids)(m équivalent/kg)(m équivalent/kg) Huile végétale - 3,4 IS,~
denaturée Concentrat 2,5 6,4 10,1 Insaponifiable 2,3 2,~ 6,7 Le témoin utilisé est une huile végétale dénaturée dont on a extrait par distillation moléculaire la quasi totalité de l'insaponifiable. Elle contient essentiellement des triglycérides qui sont des substrats facilement oxydables.

CA 022~8800 1998-12-22 Le concentrat d'huile de lupin est tel qu'obtenu à l'exemple 2 et l'insaponifiable est tel qu'obtenu à l'exemple 3.
Après rnise en solution dans l'huile dénaturée, I'activité anti-oxydante des fractions est testée par une méthode de vieillissement accéléré. Un film mince d'huile, de 2 à 3 mm d'épaisseur, est exposé à l'air pendant 13 jours, à 50~C.
La dégradation oxydative est evaluée par mesure de l'indice de peroxyde.
L'effet anti-oxydant des dif~érentes fractions est d'autant plus marqué que l'indice de peroxyde après 13 jours d'exposition est faible.
On constate que la résistance à l'oxydation du témoin est augmenté en 0 présence de concentrat d'huile de lupin et encore davantage en présence d'insaponifiable. Ces résultats démontrent donc l'activité antioxydante de ces fractions d'huile de lupin.

~. Etude de l'effet protecteur de l'ADN.
1~
On a également observé que les compositions selon l'invention avaient un effet protecteur sur l'ADN testé en utilisant un système générateur d'espèces oxygénées réactives induisant la formation de lésions sur l'ADN. Ce test a permis de mettre en évidence, en particulier pour la composition à base de 30 % de concentrat d'huile de germe de blé et de 70 % d'huile de lupin (L70), une inhibition significative des dommages créés par une espèce oxygénée reactive (ROS), I'oxygène singulet ~2 généré par eclaircissement du bleu de méthylène, révélatrice de l'effet protecteur.

2~ 1. Produits testés Les produits de l'invention L70, L100, sont comparés à l'huile de lupin raffinée et à un témoin (~ carotène à 3mg/lOOg).

2. Principe du test utilisé
Le test utilisé est un système biologique de détection de dommages (essai 3-D) sur de l'ADN capté sur microplaque (Analytical Biochemistry, 199~, 232, 37-42).
Les dommages sont reconnus par les enzymse de réparation et réparés par des extraits cellulaires purifiés. La réparation des lésions implique une phase d'excision CA 022~8800 1998-12-22 W O 98/47479 28 PCT~R98/00827 puis de resynthèse du fragment d'ADN endommage et excisé. Au cours de l'étape desynthèse réparatrice, un (ou des) nucléotide(s) modifié(s) (dUTP digoxigénylé ouDIG-11-dUTP~ est (sont) incorporé(s) dans l'ADN. Ces nucléotides sont ensuite reconnus par anticorps anti-DIG couplé à la phosphatase alcaline. Un substrat de la 5 phosphatase alcaline (Lumi-Phos 530) est ensuite ajouté et le signal luminescent émis est mesuré par un luminomètre (Lumax 2, commercialisé par la société
S.F.R.I.). L'intensité du signal recueilli est fonction de différents paramètres(extraits, concentration en sels, quantite d'ADN, temps de réaction...) dont celui relatif au nombre de lésions réparées, donc de lésions présentes sur l'ADN. Une 0 relation dose-réponse est observée dans la limite de l à 15 lésions pour 6 kilobases pour la plupart des lésions.
Ce système est susceptible de réparer tout type de lésion puisque toutes les enzymes de réparation des lésions de l'ADN sont présentes et actives dans les extraits. Les dommages oxydatifs sont donc reconnus dans ce système.
Les dommages sont créés par par des espèces oxygénées réactives (ROS) au moyen d'un système qui induit la formation de lésions sur l'ADN adsorbé dans un puits, conduisant à la lecture d'un signal de synthèse réparatrice. En présence d'un composé ou d'un mélange de composés permettant de protéger l'ADN, du fait par exemple de propriétés antioxydantes ou antiradicalaires, on observe une diminution, voire une abolition du signal de réparation, reflet de la quantité de lésions.
On génère, par éclaircissement du bleu de méthylène, le ROS 1O2, puissant électrophile qui possède une durée de vie très courte. Il réagit donc très rapidement avec des bases de l'ADN et produit des dommages divers de type modification de bases ou perte de bases, très génotoxiques.
3. Matériels et Méthodes 3.1. Matériel Les réactifs utilisés sont décrits dans l'article Analytical Biochemistry, 1995,232, 37-42.
Le signal chimioluminescent est détecté à l'aide d'un luminomètre lumax 2 commercialisé par la société S.F.R.I.

CA 022~8800 1998-12-22 3.2. Méthodes 3.2.1. Adsorption de l'ADN cible dans les puits de microplaque On met en contact de l'ADN plasmidique (pBS) ultrapurifié (forme superenroulée majoritaire) avec les puits sensibilisés par de la poly-lysine pendant 30 minutes à 30~C sous agitation légère à une concentration de I ~,lg/ml dans un volume de 50~11. Dans ces conditions, I'adsorption de l'ADN est quantitative (environ 40 ng par puits).
On ajoute un contrôle positif de réparation consistant en un plasmide préendommagé aux W-C (appelé pBSUv).
0 Après l'incubation, les puits sont lavés 2 fois avec une solution de PBS
additionnée de Tween 20 à 0,1 %.

3.2.2. Génération de ROS par éclairement de bleu de méthylène Une solution stock de bleu de méthylène à 10 ~lg/ml est diluée à une concentration de 4 ng/ml dans de l'eau ultrapure (qualité MilliQ de Millipore).
Cette solution est mélangée à volume égal avec différentes dilutions des échantillons, et 50 ~,11 du mélange (à 2 ng/ml de bleu de méthylène) sont ajoutés dans les puits contenant l'ADN plasmidique adsorbé. Les puits sont posés sur la glace et éclairés 20 minutes par 2 lampes de 100W, distantes de 30 cm.
3.2.3. Dilutions des échantillons à tester dans le test de protection de l'ADN
Les quatre échantillons ont été testés à 3 dilutions. Les resultats sont présentés au Tableau 9.
Les dilutions ont eté réalisées 2X, dans du propylène glycol, afin d'obtenir les2~ dilutions voulues après addition d'un volume de solution de bleu de méthylène de 4 ng/ml.
Afin de vérifier que l'abaissement du signal de réparation n'est pas aspécifique, les mêmes dilutions (lX) sont incubées dans les mêmes conditions sur du pBSU~. Une dilution ne présentera un effet protecteur que si l'on note un abiassement du signal de réparation, à cette dilution, en présence de bleu de méthylène, et une absence de modification du signal sur le pBSUv. Une inhibition du signal de réparation contrôle du pBSUv peut par exemple être expliquée par une CA 022~8800 1998-12-22 W O g8/47479 30 PCT/FR98/00827 interaction directe de l'échantillon avec l'ADN qui bloque l'accès des lésions aux enzymes de réparation.

Ces différentes dilutions ont été incubées sur de l'ADN non endommagé
s (pBS) et éclairées en l'absence de bleu de méthylène. Ce test permet de vérifier que le produit testé n'est pas génotoxique.

Tableau 11 Composé Dilution ou % d'inhibition % d'inhibition testé Concentration spécifique aspécifique 0,01 19 3 L70(%) 0,1 96 6 0,01 58 4 L100 (%) 0,1 54 6 0,01 56 27 huile de lupin 0,1 45 43 raffinée(%) 1 62 24 0,01 45 0 Témoin (%) 0,1 53 (+2) 0,01 0 2 Propylène 0,1 6 6 glycol (%) I 13 7 4. Résultats Ils sont exprimés comme le pourcentage d'inhibition de réparation résiduelle.
La valeur 0% correspond au signal de réparation dans la condition de traitement bleu de méthylène seul.
s CA 022~8800 1998-12-22 W 098/47479 31 PCT~R98/00827 De même, une inhibition du signal de réparation peut être parfois observée de façon aspécifique (en absence de ROS), ceci pouvant être dû à une interaction directe du composé avec l'ADN (désorption de l'ADN du puits, association aspécifique avec l'ADN qui va masquer les lésions aux enzymes de réparation...). Un contrôle 5 consistant à incuber les agents testés avec de l'ADN prélésé est donc ajouté. Une diminlltion du signal dans cette condition reflète une inhibition aspécifique ducomposé, indépendante de ses possibles propriétés de protection de l'ADN contre des dommages oxydatifs.
Les valeurs données dans le Tableau 11 sont calculées à partir des valeurs en 0 RLU, comme suit:
Le pourcentage d'inhibition spécifique est calculé comme la baisse relative de l'effet lésionnel dû aux oxygènes singulets générés par le bleu de méthylène (BM) éclairé, soit [RLU BM] - [RLU BM + test de dilution]

tRLU BM]

RLU: Relative Light Unit; unité arbitraire de quantite de lumière BM: condition bleu de méthylène + lumière L'effet protecteur d'un composé est d'autant plus fort que son inhibition des dommages créés par l'oxygène singulet est fort, mais il est nécessaire de tenir compte pour l'interprétation de ces résultats de l'aspécificité d'inhibition du signal.
Le propylène glycol, utilisé comme contrôle interne ne présente de lui-même que de très faibles propriétés protectrices, peu significatives, vis-à-vis de l'oxygène singulet. Son effet est donc négligeable et il constitue donc le contrôle négatif Le composé L70 présente ainsi des propriétés protectrices certaines vis-à-vis de l'oxygène singulet. Son effet aspécifique est faible.
L'efficacité du composé L100 est également satisfaisante.
En ce qui concerne l'huile de lupin raffinée, une forte aspécificité aux trois doses testées ne permet pas de conclure avec certitude sur son efficacité.
Le témoin ne présente pas d'effet-dose, mais ne montre pas, par contre, d'aspécificité.

W 098/47479 32 PCT~R98100827 Enfin, aucun des produits testés n'apparaît génotoxique car aucune élevation du signal de réparation n'a été observée suite à une incubation des produits surl'ADN. Following 5:
- DMF 0.04% (v / v) used as an intermediate solvent for products to testing and reference products (ref. I and ref. 2) has no significant effect on the intensity of the fluorescence emitted by the probe, before and after irradiation of cells.
lo - The two reference products vitamin C + glutathione on the one hand and acetate vitamin E on the other hand, have an expected protective effect of 100% and 65%
respectively with respect to the deleterious effect of UVA rays.
- Reference products, ref. I and ref. 2 tested at 0.01% (w / v) show a protective effect of 62% and 93% respectively against the deleterious effect of UVA rays.
With regard to the products to be tested, the following results are observed:
- a protective effect is obtained with the products L 0, L 50, L 70, L 90 and L 100 with regard to the deleterious effects of UV rays rich in UVA.
- the product L 0 (100% concentrate of wheat germ oil) is more protective at the low concentrations tested than at the high concentrations.
- an opposite effect is observed for the product L 100 (100% lupine oil).
- the mixtures L 50 and L 90 are not better than the products L 0 and L 100.
- on the other hand, unexpectedly, the product L 70, in particular has a 2 ~ concentration of 0.0001% (w / v) is significantly more protective than four other products.

.

CA 022 ~ 8800 l998-l2-22 IV. Study of the anti-elastase activity of the product L 70 in a model of e ~ plant of human skin.

The study of anti-elastase activity represents a good index of aging 5 of the skin since it is now well known that the degradation of fibers elastic present in the dermis involves endogenous elastases. The test used allows to study anti elastase activity in vitro in skin explant sections human. An application of purified elastase on a limited part of the section is accompanied by degradation of endogenous elastic fibers. Fibers 0 elastics are colored by (+) catechin. The percentage of elastic fibers intact by optical field is evaluated by image analysis. A product presenting an anti-elastase activity makes it possible to preserve the integrity of the elastic fibers in presence of purified elastase.

1. Products tested The product L 70 previously tested for its anti-radical activity has been compared to benchmark anti-elastase products: elastinal (Sigma) and chloride of mercury (Sigma).

20 2. Materials and Methods 2.1. Reagents A pancreatic elastase is used (type IV, reference E0258, Sigma). The incubation medium for human skin sections (((vehicle)>) is the Hépés buffer 0.1 M, adjusted to pH 7.5 with soda and containing 0,} M of sodium chloride.
2s 2.2. Test system The skin cuts are made from collected operational waste after a tummy tuck. The donor was a 37-year-old woman. We realize explants of 1 cm in diameter and we place them on a cork support and we ies 30 freezes at -80 ~ C. We make cross sections of 6 llm thick with a cryomicrotome. The cups are fixed on glass slides and held hydrated with the vehicle during the test.

CA 022 ~ 8800 1998-12-22 2.3. Preparation of test products and reference products, incubation with test system The products to be tested are at 0.5; 1 and 5% (v / v) in the vehicle.
The ~ st ~ tin ~ l is tested at 0.01 and 0.1% (w / v) in the vehicle Mercury chloride is tested at 0.025 and 0.125% (w / v) in the vehicle.
The dilutions of the products to be tested and of the reference products are deposited on skin sections, at a rate of 100 ~ 11 per section (0.32 cm2 of surface), and pre-incubated for ten minutes at 37 ~ C. Strips of filter paper (0.16 cm7 of surface) soaked in vehicle alone (vehicle control) or containing elastase 0 pancreatic to 5 international units (IU) / ml (enzyme control) are deposited on the cuts. The slides are placed in a humid chamber at 37 ~ C for three hours.

2.4. Evaluation of anti elastase activity After incubation, the sections are rinsed with the incubation medium and stained with (+) catechin. The activity of the enzyme in the absence and in the presence of products to be tested or reference products is evaluated by image analysis:
The image of the colored sections is digitized on a video screen; analysis software image is used to measure the gray levels of binarized images; we measure the surface occupied by intact elastic fibers. The results are expressed in percentage of intact elastic fibers by optical field.
The percentage inhibition of the elastase activity of the test products and of the reference products is calculated using the following formula:

Value obtained with Value obtained with enz ~ me control - test products or reference products % inhibition X 100 Value obtained with - Value obtained with witness vehicle witness enzyme CA 022 ~ 8800 1998-12-22 WO 98/47479 23 PCT ~ R98 / 00827 The results are shown in the table below (Table 7).

Table 7 Product Concentration% inhibition % (vlv) Vehicle indicator - 100 Enzyme control - o 0.0 ~ 5 (w / v) 18.4 Mercury chloride 0.125 (w / v) 39.3 0.01 (w / v) 71.5 Elastatin 0.1 (w / v) 59.9 0.5 31 s The calculation of the percentage of inhibition of elastase activity gives fac expected 100% in the absence of elastase (vehicle control) and 0% in the presence of elastase (enzyme control).
Elastatin, tested at 0.01 and 0.1% (w / v) inhibits by 71% and 60 respectively lo% I'elastase activity. The elastin fibers are largely intact in the elastase application area.
Mercury chloride, tested at 0.025 and 0.1 ~ 5% (v / v), inhibits respectively 18% and 39% degradation of elastin fibers by elastase.
L 70, tested at 0.5; 1 and 5% (v / v), inhibits by 31%, 70% and 70% respectively 15 degradation of elastin fibers by elastase.

V. Study of the anti-elastase activity of a crude Lupine oil as obtained in Example 1 and of a Lupine oil obtained by direct pressure of the seeds Lupine (lupine oil pressure).
Pressed lupine oil is obtained by cold pressing, with a press titan type, lupine seeds of the hulled Lupinus albus species. The cake is continuously recycled to extract residual oil. After the pressure step, .

CA 022 ~ 8800 1998-12-22 W 098/47479 24 PCT ~ R98 / 00827 The oil is stored at ambient temperature in an appropriate tank for 24 hours.
It is then filtered in order to remove the solid matter in suspension such as fibers or phopholipids.
The characteristics of the pressure lupine oil obtained are as follows:

- Organoleptic characters: orange-yellow oil, with characteristic odor.
- Composition of fatty acids:

o myristic acid C14 <0.50%
palmitic acid C16 4 to 10%
palmitoleic acid C16 '<2%
stearic acid Cl 8 <4%
oleic acid C18 '45 to 65%
1 ~ C18 "linoleic acid 9 to 17%
linolenic acid C18 "'5 to 11%
arachidic acid C20 S 3%
gadoleic acid C20 '2 to 8%
behenic acid C22 <6%
erucic acid C22 '<5%
lignoceric acid C24 <2%

- Unsaponifiable content <1.5 g / 100 g - Carotene content (in mg / 100 g) about 25 mg / 100 g 2i - Tocopherol content around 120 mg / 100 g - Phenolic derivative content (in gallic acid equivalent) approximately 30 ppm - Triterpene alcohol content (alpha-lupeol) 0.1 g at I%
- Total sterol content <0.8 g / 100 g relative% in campesterol 18 to 24%
relative% in stigmasterol 5 to 10%
relative% in ~ sitosterol 48 to 65%
relative delta 5 - avenasterol <5%

The anti-elastase activity is determined under the conditions indicated in IV above.
The results obtained are collated in the table below.

5 Table 8 Concentration Inhibition Products % (v / v) Vehicle indicator - +++
Enzyme control - 0 Mercury chloride 0.125 (w / v) ++
Elastatinal 0.1 (w / v) ++
0.5 +
Crude oil 1 ++
++
O, S +
Lupine oil pressure 1 + ~
S lll El ~ t ~ tin ~ l and mercury chloride were used as a product of reference.
As expected, in the absence of elastase (vehicle control), no lO degradation of fibroblasts.
As expected, the elastatin, tested at 0.1% (w / v), and the mercury chloride, tested at 0.125% (w / v), strongly inhibit the enzymatic activity of elastase.
The anti-elastase activity of crude lupine oil and that of pressurized lupine oil increase with concentration. At a concentration of 5% (v / v), lupine oil pressure completely inhibits the enzymatic activity of elastase.

VI. Study of the antioxidant activity of a composition based on lupine oil or its fractions in the Rancimat test.

The antioxidant activity is evaluated by the Rancimat test. This test represents an adaptation of the Swift test to be automated on a Rancimat device (a version of the Rancimat test is marketed by METROHM, Switzerland).

CA 022 ~ 8800 1998-12-22 WO 98t47479 26 PCT / FR98 / 00827 The table below (Table 9) shows the stability results at Rancimat 98 ~ C, 20Vh) for compositions according to the invention and, for comparison, for other vegetable oils.

s Table 9 RESULTS ANALYZED SAMPLES
Lupine oil 60.4 h ~ Sunflower oil about 10 h Corn oil 18.2 h Sesame oil 20.7 h Lupine oil concentrate> 75 h VI ~. Study of the antio ~ ydante activity of Lupine oil fractions by a 0 accelerated aging method.

The results are reported in Table 10 below.

Table 10 Products Concentration Peroxide index Peroxide index in the starting oil after 13 days (% weight) (m equivalent / kg) (m equivalent / kg) Vegetable oil - 3.4 IS, ~
denatured Concentrate 2.5 6.4 10.1 Unsaponifiable 2.3 2, ~ 6.7 The control used is a denatured vegetable oil which was extracted by molecular distillation almost all of the unsaponifiable matter. It contains essentially triglycerides which are easily oxidizable substrates.

CA 022 ~ 8800 1998-12-22 The lupine oil concentrate is as obtained in Example 2 and the unsaponifiable is as obtained in Example 3.
After dissolving in denatured oil, the antioxidant activity of fractions is tested by an accelerated aging method. A thin film of oil, 2 to 3 mm thick, is exposed to air for 13 days, at 50 ~ C.
Oxidative degradation is evaluated by measuring the peroxide index.
The antioxidant effect of the various fractions is all the more marked as the peroxide index after 13 days of exposure is low.
It can be seen that the resistance to oxidation of the control is increased in 0 presence of lupine oil concentrate and even more in the presence unsaponifiable. These results therefore demonstrate the antioxidant activity of these fractions of lupine oil.

~. Study of the protective effect of DNA.
1 ~
It has also been observed that the compositions according to the invention have a protective effect on DNA tested using a species generating system reactive oxygen inducing the formation of DNA damage. This test allowed highlight, in particular for the composition based on 30% concentrate wheat germ oil and 70% lupine oil (L70), an inhibition significant of the damage created by a reactive oxygen species (ROS), Singlet oxygen ~ 2 generated by lightening of methylene blue, revealing protective effect.

2 ~ 1. Products tested The products of the invention L70, L100, are compared to lupine oil refined and to a control (~ carotene at 3 mg / lOOg).

2. Principle of the test used The test used is a biological damage detection system (test 3-D) on DNA captured on a microplate (Analytical Biochemistry, 199 ~, 232, 37-42).
The damage is recognized by the repair enzymes and repaired by purified cell extracts. Repairing lesions involves an excision phase CA 022 ~ 8800 1998-12-22 WO 98/47479 28 PCT ~ R98 / 00827 then resynthesis of the damaged and excised DNA fragment. During the restorative synthesis stage, a modified nucleotide (s) (digoxigenylated dUTP or DIG-11-dUTP ~ is (are) incorporated into DNA. These nucleotides are then recognized by anti-DIG antibody coupled to alkaline phosphatase. A substrate of the 5 alkaline phosphatase (Lumi-Phos 530) is then added and the luminescent signal emitted is measured by a luminometer (Lumax 2, marketed by the company SFRI). The intensity of the signal collected is a function of different parameters (extracts, salt concentration, amount of DNA, reaction time, etc.) including that relating to the number of lesions repaired, therefore of lesions present on DNA. A
0 dose-response relationship is observed within the limit of l to 15 lesions for 6 kilobases for most lesions.
This system is capable of repairing any type of lesion since all the DNA damage repair enzymes are present and active in extracts. Oxidative damage is therefore recognized in this system.
The damage is created by reactive oxygen species (ROS) at the by means of a system which induces the formation of lesions on the DNA adsorbed in a well, leading to the reading of a restorative synthesis signal. In the presence of a compound or a mixture of compounds making it possible to protect DNA, by example of antioxidant or anti-radical properties, there is a decrease, or even an abolition of the repair signal, reflecting the amount of damage.
By lightening the methylene blue, the powerful ROS 1O2 is generated.
electrophilic which has a very short lifespan. So he reacts very quickly with DNA bases and produces various damage like modification of bases or loss of bases, very genotoxic.
3. Materials and Methods 3.1. Equipment The reagents used are described in the article Analytical Biochemistry, 1995,232, 37-42.
The chemiluminescent signal is detected using a lumax 2 luminometer marketed by the company SFRI

CA 022 ~ 8800 1998-12-22 3.2. Methods 3.2.1. Adsorption of target DNA in microplate wells We put in contact with ultrapurified plasmid DNA (pBS) (form majority supercoiled) with the wells sensitized with poly-lysine for 30 minutes at 30 ~ C with light stirring at a concentration of I ~, lg / ml in a volume from 50 ~ 11. Under these conditions, the DNA adsorption is quantitative (about 40 ng per well).
A positive repair control consisting of a plasmid is added pre-damaged to WC (called pBSUv).
0 After incubation, the wells are washed twice with a PBS solution with 0.1% Tween 20 added.

3.2.2. Generation of ROS by illumination of methylene blue A stock solution of methylene blue at 10 ~ lg / ml is diluted to a concentration of 4 ng / ml in ultrapure water (MilliQ quality from Millipore).
This solution is mixed in equal volume with different dilutions of the samples, and 50 ~, 11 of the mixture (at 2 ng / ml of methylene blue) are added to wells containing adsorbed plasmid DNA. The wells are placed on ice and lit 20 minutes by 2 lamps of 100W, 30 cm apart.
3.2.3. Dilutions of the samples to be tested in the DNA protection test The four samples were tested at 3 dilutions. The results are presented in Table 9.
The dilutions were carried out 2X, in propylene glycol, in order to obtain the 2 ~ desired dilutions after addition of a volume of methylene blue solution of 4 ng / ml.
In order to verify that the lowering of the repair signal is not aspecific, the same dilutions (1X) are incubated under the same conditions on pBSU ~. A dilution will only have a protective effect if there is a lowering of the repair signal, at this dilution, in the presence of blue methylene, and an absence of modification of the signal on pBSUv. An inhibition of repair signal control of pBSUv can for example be explained by a CA 022 ~ 8800 1998-12-22 WO g8 / 47479 30 PCT / FR98 / 00827 direct interaction of the sample with DNA which blocks access of lesions to repair enzymes.

These different dilutions were incubated on undamaged DNA
s (pBS) and illuminated in the absence of methylene blue. This test verifies that the product tested is not genotoxic.

Table 11 Compound Dilution or% inhibition% inhibition tested Specific aspecific concentration 0.01 19 3 L70 (%) 0.1 96 6 0.01 58 4 L100 (%) 0.1 54 6 0.01 56 27 lupine oil 0.1 45 43 refined (%) 1 62 24 0.01 45 0 Control (%) 0.1 53 (+2) 0.01 0 2 Propylene 0.1 6 6 glycol (%) I 13 7 4. Results They are expressed as the percentage of inhibition of residual repair.
The value 0% corresponds to the repair signal in the blue processing condition methylene alone.
s CA 022 ~ 8800 1998-12-22 W 098/47479 31 PCT ~ R98 / 00827 Similarly, inhibition of the repair signal can sometimes be observed from aspecific way (in the absence of ROS), this can be due to a direct interaction of the compound with DNA (desorption of DNA from the well, non-specific association with DNA that will mask damage to repair enzymes ...). Control 5 consisting of incubating the tested agents with pre-sampled DNA is therefore added. A
signal decrease in this condition reflects an aspecific inhibition of the compound, independent of its possible protective properties of DNA against oxidative damage.
The values given in Table 11 are calculated from the values in 0 RLU, as follows:
The percentage of specific inhibition is calculated as the relative decrease in the lesional effect due to the singlet oxygen generated by methylene blue (BM) lit either [RLU BM] - [RLU BM + dilution test]

tRLU BM]

RLU: Relative Light Unit; arbitrary unit of light quantity BM: methylene blue + light condition The protective effect of a compound is all the stronger when its inhibition of damage created by singlet oxygen is strong but it is necessary to hold counts for the specificity of signal inhibition for the interpretation of these results.
Propylene glycol, used as internal control does not present itself that very weak, insignificant protective properties with respect to oxygen singlet. Its effect is therefore negligible and it therefore constitutes the negative control Compound L70 thus exhibits certain protective properties with respect to singlet oxygen. Its aspecific effect is weak.
The effectiveness of compound L100 is also satisfactory.
With regard to refined lupine oil, a strong lack of specificity to the three doses tested does not allow to conclude with certainty on its effectiveness.
The witness does not have a dose effect, but does not show, however, of specificity.

W 098/47479 32 PCT ~ R98100827 Finally, none of the products tested appears to be genotoxic because no breeding of the repair signal was not observed following an incubation of the products on the DNA.

Claims

1. Using lupine oil or one or more of its fractions for producing an antioxidant composition and/or anti-elastase.

2. Use according to claim 1 characterized in that said lupine oil is obtained from flour and/or lupine seeds.

3. Use according to claim 1 or 2, characterized in that that said lupine oil is obtained from a variety of sweet lupine.

4. Use according to claim 3, characterized in that said lupine oil is obtained from lupinus albus.

5. Use according to one of claims 1 to 4, characterized in that said fraction is an oil concentrate of lupine, obtained by molecular distillation of said oil.

6. Use according to one of claims 1 or 5, characterized in that said fraction is a fraction unsaponifiable contained in a concentrate obtained by molecular distillation of said oil.

7. Use according to claim 6, characterized in that the amount by weight of the unsaponifiable fraction in the lupine oil concentrate is about 30% to about 70%, preferably from about 45% to about 65%.

8. Use according to one of claims 1 to 7, characterized in that said composition contains a fraction of lupine oil comprising phenolic derivatives.

9. Use of polyphenolic derivatives extracted from the oil of lupine for producing an antioxidant composition and/or anti-elastase.

10. Use according to one of claims 8 or 9, characterized in that the content of phenolic derivatives is at least equal to 20ppm.

11. Use according to one of claims 1 to 10, characterized in that said composition contains oil of wheat germ or one or more fractions thereof.

12. Use according to claim 11, characterized in that that said wheat germ oil fraction is a concentrate obtained by molecular distillation of said oil.

13. Use according to claim 12, characterized in that that said wheat germ oil fraction is a fraction unsaponifiable contained in a concentrate obtained by molecular distillation of said oil.

14. Use according to claim 11 or 12, characterized in that said composition contains an oil concentrate of wheat germ mixed with lupine oil.

15. Use according to claim 14, characterized in that that the quantities by weight of wheat germ oil concentrate and lupine oil vary respectively between about 10% to about 90%, and between about 90% to about 10%, so as to that the total of the quantities of these two oils make 100%.

16. Use according to claim 15, characterized in that that the quantities by weight of wheat germ oil concentrate and lupine oil are 30% and 70% respectively.

17. Use according to one of claims 1 to 16, characterized in that the composition is a composition cosmetics, in particular as an antioxidant, anti-radical, anti-elastase, UVA and/or UVB protector, protective DNA against damage, especially oxidative.

18. Use according to one of claims 1 to 16, characterized in that the composition is a composition pharmaceutical, in particular dermatological.

19. Use according to one of claims 1 to 16 characterized in that the composition is a product pharmaceutical for the prevention or treatment of the effects UVA and/or UVB on the skin at the epidermal, dermal levels, cellular or extracellular.

20. Use according to one of claims 1 to 16 characterized in that the composition is a pharmaceutical product for the prevention and treatment of the effects of oxidation, elastase and free radicals on the skin.

21. Use according to one of claims 1 to 16 characterized in that the composition is an agent having a activity of protecting DNA against damage, in particular oxidative.

22. Use according to one of claims 1 to 16, characterized in that the composition is a composition cosmetic or pharmaceutical and that it comprises a combination with a physiologically acceptable vehicle.

23. Use according to claim 22, characterized in that that the composition is used as a sunscreen product protector against UVB and/or A and/or infrared radiation, cream restructuring, firming, product, in particular cream for the prevention and regression of stretch marks, nourishing cream, anti-wrinkle (fight against aging of the skin epidermis and dermis) and daily protector, lip and eye contour, regenerating and protective lip sticks.

24. Use according to claim 22 or 23, characterized in that the composition is formulated for topical use, in particular in the form of cream, emulsion, ointment, stick or frost.

25. Use according to one of claims 22 to 24, characterized in that the total content by weight of oil of lupine or its fractions and wheat germ oil or its fractions of said composition is of the order of approximately 0.5% to approximately 10%, preferably from about 1% to about 5%

26. Method of cosmetic treatment, characterized in that it comprises the use of a composition according to one of claims 1 to 16 or 22 to 25 on the skin surface of a individual.

27. Use of a composition according to one of the claims 1 to 16 as a dietary supplement.

28. Process for the preparation of a composition which can be used according to one of claims 12 to 16, characterized in that one prepares a concentrate of wheat germ oil by distillation molecular weight and mixed with lupine oil.