La présente invention a pour objet une composi-tion pharmaceutique contenant une association de deux subs-tances actives, l'indapamide et le 8~(3-tert-butylamino- The subject of the present invention is a composition pharmaceutical tion containing a combination of two subs-active ingredients, indapamide and 8 ~ (3-tert-butylamino-
2-hydroxypropoxy)-thiachromanne.
L'indapamide, ou N~ sulfamoyl 4~chloro benza-mido) 2-methylindoline, ou encore 4-chloro N-(2-méthyl 1-indolinyl) 3-sulfamoyl-benzamide, a été décrit dans l'exemple 1 du brevet français N69.06023 (publié sous le N~2.003.311), comme diurétique utilisable en particulier 10 dans le traitement de l'hyperter,sion artérielle.
Le 8-(3-tert-butylamino-2-hydroxypropoxy)-thia---chromanne (ou ses sels d'addition) est décrit dans l~exem-ple 2 du brevet ~ranQais N 71.11445 (publié sous le N 2.092.004) qui indique des propriétés cardio-15 vasculaires, en particulier bêta-bloquantes.
Or, nous avons maintenant trouvé que les deux composés précédents associés ont des propriétés sy-nergétiques inattendues, permettant de prévoir leur uti-lisation thérapeutique simultanée.
L'invention concerne donc une composition phar-maceutique contenant une association d'indapamide et de 8-(3-tert-butylamino 2-hydroxypropoxy)-thiachromanne ou un de ses sels d'addition pharmaceutiquement acceptables, chacun de ces deux composés pouvant se trouver sous forme 25 racémique ou d'isomère optique, ainsi qu'un excipient ou véhicule thérapeutiquement compatible.
7~
Pour la commodité, le 8-(3-tert-butylamino 2-hydroxypropoxy)-thiachromanne sera désigné "THPT" ci-apres.
Etude phar~acvlogique Les composés étudiés selon l'invention ont été testés sur l'ir,hibition fonctionnelle de l'adény-late cyclase menbranaire seuls et en association.
Le globule rouge de pigeon esk connu pour sa grande activité adénylate cyclase depuis les travaux de 10 SUT~ERLAND et coll. (Adenyl cyclase 1. Distribution, pre-paration and properties, J. Bio-l. Chem. (1962~ 237 : 1220-1227). Les expériences ont été réalisées sur des fantomes d'érythrocytes ~cellules ouvertes) préparés a partir de sang de pigeons Strasser selon la technique de 15 S~LESSE R. et GARNT~R J., "Effects of drugs on pigeon ery-throcyte membrane and asymetric control of adenylate - cyclase by the lipid bilayer" (BiochemO Piophys. Acta - (1979) ~54 : 102-103).
Les suspensions obtenues ont été incubees 20 vingt minutes en tampon hypotoniqu~ avec un volume de pro-duit testé à la concentration ~inale désirée . Les dosages de l'activité adénylate cyclase ont été ef-fectuées selon la méthode de BIRNBAUMER L. et coll~ (J.
Biol. Chem.(1969) 244 : 2468-3476) et de RAMACH~NDRAN J~ ;
25 LEE V. (Biochem. BiophysO Res. Commun. (1970) 41 358-366).
Les concentrations finales de reactifs etaient AT? 2 m M dont 1~ Ci de [~- 32~p ATP, théophylline 4 m M, phosphocréatine 10 m M, creatine kinase 0,5 g/l, MgCl2 7,5 m M, trométhamine, HCl ("TRIS", HCl) 10 m M, pH - 7,4 2-hydroxypropoxy) -thiachroman.
Indapamide, or N ~ sulfamoyl 4 ~ chloro benza-mido) 2-methylindoline, or 4-chloro N- (2-methyl 1-indolinyl) 3-sulfamoyl-benzamide, has been described in Example 1 of French patent N69.06023 (published under N ~ 2.003.311), as a diuretic which can be used in particular 10 in the treatment of high blood pressure.
8- (3-tert-butylamino-2-hydroxypropoxy) -thia ---chromanne (or its addition salts) is described in the example ~
ple 2 of the patent ~ ranQais N 71.11445 (published under N 2.092.004) which indicates cardio-15 vascular, in particular beta-blockers.
Now, we have now found that the two associated previous compounds have sy-unexpected energetics, to predict their usefulness simultaneous therapy.
The invention therefore relates to a pharmaceutical composition.
maceutical containing an association of indapamide and 8-(3-tert-butylamino 2-hydroxypropoxy) -thiachroman or a of its pharmaceutically acceptable addition salts, each of these two compounds can be in the form 25 racemic or optical isomer, as well as an excipient or therapeutically compatible vehicle.
7 ~
For convenience, 8- (3-tert-butylamino 2-hydroxypropoxy) -thiachromanne will be designated "THPT" ci-after.
Phar ~ acvlogical study The compounds studied according to the invention have been tested on ir, functional hibition of adeny-late menbranar cyclase alone and in combination.
The esk pigeon red blood cell known for its great adenylate cyclase activity since the work of 10 SUT ~ ERLAND et al. (Adenyl cyclase 1. Distribution, pre-paration and properties, J. Bio-l. Chem. (1962 ~ 237: 1220-1227). The experiments were carried out on erythrocyte ghosts ~ open cells) prepared from Strasser pigeon blood using the technique of 15 S ~ LESSE R. and GARNT ~ R J., "Effects of drugs on pigeon ery-throcyte membrane and asymetric control of adenylate - cyclase by the lipid bilayer "(BiochemO Piophys. Acta - (1979) ~ 54: 102-103).
The suspensions obtained were incubated 20 twenty minutes in hypotonic buffer ~ with a volume of pro-duit tested at the desired ~ inale concentration. The adenylate cyclase activity assays were ef-carried out according to the method of BIRNBAUMER L. et al ~ (J.
Biol. Chem. (1969) 244: 2468-3476) and RAMACH ~ NDRAN J ~;
25 LEE V. (Biochem. BiophysO Res. Commun. (1970) 41 358-366).
Final reagent concentrations were AT? 2 m M of which 1 ~ Ci of [~ - 32 ~ p ATP, theophylline 4 m M, phosphocreatine 10 m M, creatine kinase 0.5 g / l, MgCl2 7.5 m M, tromethamine, HCl ("TRIS", HCl) 10 m M, pH - 7.4
- 3 ~
. Le volume kotal était de 75 microlitres et le nombre de cellules par tube environ 108.
La production d'AMP cyclique (AMPc) était stimulée soit par l'isoprotérénol 0,05 m M en présence 5 de 0,1 m M de GTP9 soit par le fluorure de sodium 10 m M. On ajoutait le composé à la concentration finale requise.
La réaction était arrêtée après 15 minutes à 37 C par l'ajout de 300 microlitres d'acide chlorhy-drique 0,5 N et un passage de 3 minutes au bain marie 10 bouillant. On retirait ensuite les tubes du bain marie en neutralisant le contenu par 300 microlitres d'imidazole 1,65 No Après centrifugation .~10 mn, 4000 g) 500 micro-litres du surnageant .étaient verses sur une colonne 15 d'alumine neutre activée et elués par 296 ml d'imidazole 10 m M, pH - 7,5. Ces colonnes ont un rendement en AMPc de g5 ~. .
La radio-activité des échantillons était me-surée dans un compteur à scintillations ~'Packard 20 Tricarb'~, en utilisant l'e~fet Cerenkov après addition à
l'éluat de 1O ml d'une solution aqueuse à 1/o~ d'acide 7-amino 1,3 - naphtalène disul~onique (rendement de comp tage 65 ~.
Nous avons établi, selon une échelle loga-25 rithmique, trois concentrations au-dessus et trois concentrations au-dessous de la concentration pour laquelle on observe in vitro 9 sur l'artère mésentérique de rat, une inhibition de moitié de la vasoconstriction '7~
induite par la noradrénaline.
Les résultats sont donnés comme la moyenne de trois essais en picomoles d~AMP cyclique produites par mi-nute et par milligramme de phospholipides membranaires.
On constate que l'indapamide et le THPT soumis à
ce test inhibent l'activation de l'adénylate cyclase sti-mulée par l'isoprotérénol ou par le ~luorure de sodium :
la quantité d'AMP~ produit décroit. La nature de l'effet observé sur la production de l'AMPc dépend de la 10 concentration du composé utilisé. On a déterminé
graphiquement la concentration active de chaque composé
produisant une inhibition de 25 % (CA25~ et 50 % (CA50) puis celle de leurs mélanges à ces concentrations :
Indapamide (PoM~ ~ 365~89)- CA2s = 9 x 10 5 mole/l _ CA50 = 3 x 10 4 mole/l THPT, HCl ~P.M. = 331,90) ~ CA25 = 1,2 x 10 5 mole/l CA50 ~ 7 x 10 5 mole~l On a rasse!Dblé dans le tableau suivant les pourcentages d'inhibition obtenue avec chacun des 4 20 mélanges des deux composés à ces concentrations :
T A B L E A U
Indapamide 25 % Indapamide 50 %
THPT 25 % 45 % 62 %
THPT 50 % 62 % 75 %
On constate que l'inhibition obtenue avec le mélange des deux composés est nettement supérieure à celle obtenue avec chacun séparément. Par exemple, avec un mélange aux concentrations de 9 x 10 5 mole/l d'indapamide 5 et de 1,2 x 10-5 mole/l de THPT, on obtient 45 d'inhibition, qui n'est atteint que par 2,5 x 10-~ mole~l d'indapamide ou par 5 x 10-5 mole/l de THPT, c'est à dire environ 3 à 4 fois la quantité nécessaire de chacun des composés pris séparement. Les deux effets correspondant 10 à 25 % d'inhibition se multiplient donc au niveau d~
l'effet global et aboutissent à une inhibition de 45 % de l'activité de l'enzyme.
, .,~
Di~cussion .
~ Le T~PT étant connu comme béta-bloquant~ son acti-15 vité inhibitrice sur l'adényl cyclase associée à un récepteur bêta extra cellulaire était prévisible. Par contre, il était in~ttendu qu'un diurétique antihyper-tenseur tel que l'indapamide possède une activité simi-laire et surtout que l'acti~ité de ces deux composés soit 20 conjuguée : en effet9 la courbe dose/activité de ces __ composés et en particulier leurs CA25 et CA50 montrent qu'ils agissent en synergie multiplicatrice.
L'AMPc est un second messager intracellulaire déclanchant la mise en route des ~onctions cellulaires~ En 25 inhibant l'adényl cyclase, on freine dcnc tous les états d'hyperactivité cellulaire tels qu'ils existent dans l'hyperthyroIdie, l'hypertension, l'hypersensibilité, etc... En conséquence, l'association des deux composés agissant en synergie selon l'invention est 30 particulierement indiquée pour le traitement des hyper-activités béta-dépendantes telles qu'on en rencontre dans l~hypertension, en particulier dans les cas .~.97~
d'hypertension artérielle sévere avec insu~fisance rénale, ou bien dans des maladies telle que l'hyperthyroidie.
Les compositions pharma~eutiques selon l'invention 5 sonS de -préférence administrée~ par voie orale, et peuvent être sous forme de comprimés, comprimés enrobés, gelules, suspensions, etc... Elles peuvent con-tenir en particulier de 0,8 à 3 mg d'indapamide, et de 3 à 12 mg de THPT ou-un de ses sels d'addition pharmaceu-10 tiquement acceptables, ainsi que les excipients ~uvéhicules usuels pour la forme orale, et peuvent être administrés en une ou deux prises journalieres.
EXEMPLE : COMPRIME DE 90 mg.
Indapamide......... O..... O...... O.................. 1,2~ mg~
15 Chlorhydrate de 8-(3-tert-butylamino 2-hydroxypropoxy)-thiachromanne............ ....... .......... .......... ~,00 mg Acide stéarique.... OO........... ;......... O......... O~9O mg Carboxymethyl amidon sodique................... O.~3,00 mg Cellulose microcristalline.........~............ 33,38 mg 20 Lactose............................,............ 35,75 mg Hydrogénophosphate de calcium............. c..... 10,00 mg Silice colloidale....................... ......... 0,27 mg Stéarate de magnésium.............. ~...... ~..... 0 9 45 mg Ce comprimé peut être enrobé. - 3 ~
. The total volume was 75 microliters and the number of cells per tube approximately 108.
Cyclic AMP production (cAMP) was stimulated either by 0.05 mM isoproterenol in the presence 5 of 0.1 m M of GTP9 or by sodium fluoride 10 m M. On added the compound to the required final concentration.
The reaction was stopped after 15 minutes at 37 C by the addition of 300 microliters of chlorhy-drique 0.5 N and a passage of 3 minutes in a water bath 10 boiling. The tubes were then removed from the water bath by neutralizing the content with 300 microliters of imidazole 1.65 No After centrifugation. ~ 10 min, 4000 g) 500 micro-liters of the supernatant were poured onto a column 15 neutral activated alumina and eluted with 296 ml of imidazole 10 m M, pH - 7.5. These columns have a cAMP yield of g5 ~. .
The radioactivity of the samples was me-safe in a scintillation counter ~ 'Packard 20 Tricarb '~, using the Cerenkov e ~ fet after addition to the eluate of 10 ml of an aqueous solution containing 1 / o ~ acid 7-amino 1,3 - naphthalene disul ~ onique (yield of comp floor 65 ~.
We have established, on a log-25 rithmic, three concentrations above and three concentrations below the concentration for which we observe in vitro 9 on the mesenteric artery rat, half the inhibition of vasoconstriction '7 ~
noradrenaline-induced.
The results are given as the average of three picomole trials of cyclic AMP produced by mid-nute and per milligram of membrane phospholipids.
It is found that indapamide and THPT subjected to this test inhibits activation of adenylate cyclase sti-mulated by isoproterenol or by sodium luoride:
the amount of AMP ~ product decreases. The nature of the effect observed on cAMP production depends on the 10 concentration of the compound used. We determined graphically the active concentration of each compound producing an inhibition of 25% (CA25 ~ and 50% (CA50) then that of their mixtures at these concentrations:
Indapamide (PoM ~ ~ 365 ~ 89) - CA2s = 9 x 10 5 mole / l _ CA50 = 3 x 10 4 mole / l THPT, HCl ~ PM = 331.90) ~ CA25 = 1.2 x 10 5 mole / l CA50 ~ 7 x 10 5 mole ~ l We have enough! Dblé in the table following the inhibition percentages obtained with each of the 4 20 mixtures of the two compounds at these concentrations:
BOARD
Indapamide 25% Indapamide 50%
THPT 25% 45% 62%
THPT 50% 62% 75%
It can be seen that the inhibition obtained with the mixture of the two compounds is significantly higher than that obtained with each separately. For example, with a mixture at concentrations of 9 x 10 5 mole / l of indapamide 5 and 1.2 x 10-5 mole / l of THPT, we obtain 45 inhibition, which is only reached by 2.5 x 10- ~ mole ~ l indapamide or 5 x 10-5 mole / l THPT, i.e.
about 3 to 4 times the amount needed for each compounds taken separately. The two corresponding effects 10 to 25% inhibition therefore multiply at the level of ~
the overall effect and result in a 45% inhibition of the activity of the enzyme.
,., ~
Impact.
~ T ~ PT being known as beta-blocker ~ its activity 15 inhibitory activity on adenyl cyclase associated with a Extra cellular beta receptor was predictable. By against, it was unexpected that an antihyper diuretic tensor such as indapamide has a similar activity laire and especially that the activity of these two compounds is 20 combined: indeed9 the dose / activity curve of these __ compounds and in particular their CA25 and CA50 show that they act in multiplying synergy.
CAMP is a second intracellular messenger triggering the start of ~ cellular unctions ~ En 25 inhibiting adenyl cyclase, braking all states of cellular hyperactivity as they exist in hyperthyroidism, hypertension, hypersensitivity, etc ... Consequently, the association of the two compounds acting in synergy according to the invention is 30 particularly indicated for the treatment of beta-dependent hyperactivities such as that encountered in hypertension, especially in cases . ~ .97 ~
blind, severe hypertension kidney, or in diseases such as hyperthyroidism.
Pharmaceutical ~ eutic compositions according to the invention 5 sonS of -preferably administered ~ orally, and can be in the form of tablets, tablets mixes, capsules, suspensions, etc ... They can take in particular 0.8 to 3 mg of indapamide, and 3 12 mg THPT or one of its pharmaceutical addition salts 10 ticks acceptable, as well as excipients ~ uvehiles usual for the oral form, and can be administered in one or two daily doses.
EXAMPLE: 90 mg TABLET.
Indapamide ......... O ..... O ...... O .................. 1.2 ~ mg ~
15 8- (3-tert-butylamino 2-hydroxypropoxy) hydrochloride -thiachromanne ............ ....... .......... .......... ~, 00 mg Stearic acid .... OO ...........; ......... O ......... O ~ 9O mg Carboxymethyl sodium starch ................... O. ~ 3.00 mg Microcrystalline cellulose ......... ~ ............ 33.38 mg 20 Lactose ............................, ............ 35.75 mg Calcium hydrogen phosphate ............. c ..... 10.00 mg Colloidal silica ....................... ......... 0.27 mg Magnesium stearate .............. ~ ...... ~ ..... 0 9 45 mg This tablet can be coated.