<EMI ID=1.1>
immunosuppressif sQr et actif" La présente invention est relative à un médicament de grande valeur à administrer par la voie orale et contenant
<EMI ID=2.1>
tuant efficace. Le médicament conforme à l'invention est
utile, comme agent immunosuppressif, pour la suppression des maladies dites auto-immunes, telles que les syndromes néphrétiques, les rhumatismes articulaires et les lupus erythematosus de l'organisme, etc.
En outre, il est possible de diminuer ou d'abaisser
la dose du corticostéroïde par l'emploi du KH-125 chez un patient qui a longtemps été traité avec cette hormone.
L'invention se rapporte à des compositions pharmaceutiques; plus particulièrement, elle concerne des compositions pharmaceutiques utiles pour la suppression des maladies dites auto-immunes.
Des médicaments immunosuppressifs, tels que la 6-mercaptopurine, l'azathioprine et la cyclophosphamide, ont été utilisés cliniquement pour le traitement des rhumatismes articulaires, des syndromes néphrétiques, de l'hépatite et de l'anémie hémolytique, toutes affections qui ont été considérées comme appartenant aux maladies dites auto-immunes. Toutefois, la haute toxicité de ces médicaments a rendu difficile leur utilisation clinique, en particulier leur prescription à plusieurs reprises pour un patient pendant un temps prolongé. Par conséquent, la mise au point d'un nouvel agent immunosuppressif,
dont la marge de sécurité est plus grande, sans réduire ses effets thérapeutiques, a longuement été attendue.
Les recherches qui ont conduit à la découverte de la présente invention, ont mis en cause les dérivés des hydrazides des amino-acides dotés d'une puissante activité immunosuppressive et d'une faible toxicité.
Au cours d'un essai pour tenter de découvrir un agent immunosuppressif à toxicité abaissée, environ cinquante hydrazidas d'acide, principalement des dérivés des hydrazides des amino-acides, ont été synthétisés et triés en ce qui concerne leur aptitude à supprimer la formation d'anticorps pour les érythrocytes du mouton chez les souris. Au cours de ces recherches, on a constaté que l'hydrazide de N-benzènesulfonyl-B-alanine (KH-125) possédait la plus puissante activité immunosuppressive et une toxicité aiguë assez basse parmi les composés soumis à l'essai. D'autres études pharmacologiques et toxicologiques détaillées ont été effectuées sur
le KH-125.
Au cours des études pharmacologiques détaillées, il s'est confirmé que le KH-125 a la propriété de supprimer, chez les rats,l'arthrite adjuvante, ainsi que la néphrite
<EMI ID=3.1>
ont été évaluées par des essais de toxicité chronique et subaiguë chez les rats, par des études tératologiques chez les rats et les lapins et également par des essais favorisant le cancer chez lessouris et les rats. D'après ces études,
on a observé que le KH-125 a une toxicité cnnsidérablement plus basse que celle des agents immunosuppressifs bien connus. En outre, le KH-125 n'exerce aucun effet tératogène ou cancérigène, ces deux effets étant inévitablement partagés par les médicaments immunosuppressifs existants, tels que la cyclophosphamide, la 6-mercaptopurine, etc.
Avant que le composé conforme à l'invention puisse être utilisé médicalement, il doit bien entendu être transformé en une composition pharmaceutique par association avec un véhicule pharmaceutique approprié.
Par le terme "pharmaceutique" utilisé dans le présent mémoire, on entend exclure toute possibilité par laquelle la nature du véhicule, considéré, bien entendu, en rapport avec la voie selon laquelle on se propose d'administrer la composition, pourrait être nuisible plutôt que favorable.
Le choix d'un mode de présentation approprié, conjointement avec un véhicule adéquat, est considéré comme rentrant dans la compétence des spécialistes habitués à la préparation de formulations pharmaceutiques.
Par conséquent, il est proposé, grâce à la présente invention, une composition pharmaceutique qui comprend un
<EMI ID=4.1>
avec un véhicule pharmaceutique approprié.
Les compositions de l'invention peuvent être administrées oralement et,eu égard à ces modes,le "véhicule pharmaceutique" est préférablement: l'excipient ingestible d'un comprimé, d'un comprimé revêtu,d'une pilule ou d'un comprimé sublingual;le conteneur ingestible d'une capsule ou d'un cachet; le support solide,pulvérulent et ingestible d'une poudre; ou le milieu liquide ingestible d'un sirop, d'une solution, d'une suspension ou d'un élixir.
Aux dessins annexés:
la figure 1 montre les effets prophylactiques du KH-125 et du 6-MP sur l'arthrite adjuvante. Les médicaments ont été administrés oralement une fois par jour pendant 17 jours en partant du jour de l'injection de l'adjuvant.
�
- A, B : Modifications du gonflement du pied ayant subi l'injection d'adjuvant;
- C, D : Modifications du gonflement du pied n'ayant pas subi l'injection d'adjuvant;
- E : Etat de l'arthrite 21 jours après l'injection d'adjuvant; <EMI ID=5.1> La figure 2 montre l'effet du KH-125 sur l'indice des fusions, l'épaisseur de la membrane de base et sur l'urée protéique chez les rats néphrétiques. L'urée protéique a été mesurée 18 jours après l'injection de la néphrétoxine; ensuite, les rats ont été tués deux jours après pour l'examen au microscope électronique. Les lignes verticales montrent l'erreur normalisée.
<EMI ID=6.1>
respectivement.
<EMI ID=7.1>
La figure 3 est une comparaison du KH-125 avec d'autres agents immunosuppressifs en ce qui concerne l'indice des fusions,l'épaisseur de la membrane de base et l'urée protéique. L'urée protéique a été mesurée 18 jours après l'injection de la néphrétoxine; ensuite, les rats néphrétiques ont été tués trois jours après pour l'examen au microscope électronique. Voir légendes de la figure 2 pour d'autres détails.
<EMI ID=8.1>
but de mettre en évidence la présente invention, sans cependant la limiter à ceux-ci.
Exemple 1 : Préparation de l'hydrazide de N-benzène-sulfonyl-8-
alanine
A une solution de 7,5 g d'ester éthylique de N-benzènesulfonyl-B-alanine dans 20 ml d'éthanol,on ajoute lentement 2,1 g
<EMI ID=9.1>
reflux pendant 6 heures.Après refroidissement,les cristaux sépa- rés par précipitation sont recueillis et recristallisés dans de
<EMI ID=10.1>
alanine sous la forme de plaquettes incolores d'un point de fusion de 135 à 137[deg.]C.
<EMI ID=11.1>
Exemple 2 :
Des comprimés sont préparés par mélange et granulation des constituants suivants, conformément aux techniques pharmaceutiques connues.
<EMI ID=12.1>
Exemple 3 :
Des comprimés sont préparés par mélange, granulation, moulage par pression et revêtement des constituants suivants, conformément aux techniques pharmaceutiques connues :
<EMI ID=13.1>
Exemple 4 :
Des capsules sont préparées, conformément aux techniques pharmaceutiques connues, par exemple, en utilisant les constituants suivants :
<EMI ID=14.1>
Exemple 5 :
Une composition pulvérulente est préparée à partir des constituants suivants, conformément aux techniques pharmaceutiques connues :
<EMI ID=15.1>
Exemple 6 :
Une suspension à administrer par la voie orale est préparée à partir des constituants suivants, conformément aux techniques pharmaceutiques connues.
<EMI ID=16.1>
Exemple 7 :
Des granules sont préparés à partir des constituants suivants, conformément aux techniques pharmaceutiques connues.
<EMI ID=17.1>
Expérience A : Toxicité aiguë de l'hydrazide de N-benzène-
<EMI ID=18.1>
La toxicité aiguë du KH-125 a été étudiée chez les rats de Wistar et les souris ddY des deux sexes. Les valeurs
<EMI ID=19.1>
suivantes :
1520 (p.o.), 1230 (i.p.) et 1150 (s.c.) pour les souris mâles;
1570 (p.o.), 1410 (i.p.) et 1440 (s.c.) pour les souris femelles;
>4000 (p.o.), 2150 (i.p.) et >4000 (s.c.) pour les rats;
>4000 (p.o.), 2580 (i.p.) et >4000 (s.c.) pour les rates. Aucune différence de sexe concernant la toxicité aiguë n'a été apparenteExpérience B : Etude de la toxicité chronique de l'hydrazide
<EMI ID=20.1>
L'étude de la toxicité chronique du KH-125 a été effectuée sur des rats de Wistar des deux sexes. Les rats ont été traités oralement avec du KH-125 pendant 6 mois à des niveaux de dose de 0 (témoin), 10, 20 et 40 mg/kg/jour.
Tous les rats étaient vivants après un traitement de
6 mois avec le KH-125. Le gain de poids est légèrement inhibé dans les groupes à 40 mg/kg/jour. Les découvertes hématologiques ont révélé une dimunition, dépendant de la dose, de l'hémoglobine et du nombre des érythrocytes. Aucun changement sensible n'a été observé en ce qui concerne les activités enzymatiques du sérum par le traitement avec le KH-125, sauf qu'on a constaté de légères augmentations, mais dépendant de la dose, du S-GOT et du S-GPT. Aucun effet important sur les symptômes généraux, l'absorption d'aliments, l'analyse d'urine et le fractionnement de la protéine de sérum n'a été observé. Aucun effet toxique, qui pourrait être attribué au médicament, n'a été détecté au cours des examens histopathologiques.
Expérience C : Effet suppressif de l'hydrazide de N-benzène-
sulfonyl-s-alanine (KH-125) sur la production d'anticorps pour les érythrocytes du mouton L'effet du KH-125 sur la production d'anticorps chez les souris ddY a été examiné par la technique des plaquettes
de Cunningham et Szenberg (Immunology, 14, 599, 1968) et comparé avec d:'autres agents.
Les souris ont été immunisées par une injection intra-/
veineuse d'érythrocytes de mouton lavés (4 x 108 cellules/ souris). L'administration du KH-125 s'est faite oralement pendant 4 jours consécutifs, à partir du jour de l'injection d'antigène. Les cellules formant plaque 19S (PFC) ont été comptées 4 jours après l'immunisation. Comme indiqué au tableau 1, le KH-125 supprime, en fonction de la dose, l'apparition des PFC 19S.
Au cours de l'expérience comparative, des agents d'essai ont été administrés par la voie du péritoine pendant
8 jours consécutifs, en commençant un jour avant l'immunisation. Des PFC 7S ont été comptés 9 jours après l'immunisation. Comme indiqué au tableau 2, l'effet suppressif du KH-125 sur l'apparition des PFC 7S est supérieur à celui de la prednisolone ou de la 6-mercaptopurine, mais est moins efficace que celui
de la cyclophosphamide.
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<EMI ID=22.1>
<EMI ID=23.1>
<EMI ID=24.1>
<EMI ID=25.1>
<EMI ID=26.1>
Expérience D : Effet suppressif de l'hydrazide de N-benzène-
sulfonyl-6-alanine (KH-125) sur l'arthrite adjuvante chez les rats
L'effet du KH-125 sur l'arthrite adjuvante chez les rats a été comparé avec celui de la 6-mercaptopurine. Les rats de Sprague-Dawley ont reçu une seule injection intradermique de 0,1 ml d'une suspension d'huile paraffinique liquide de Mycobacterium tuberculosis (concentration: 5 mg/ml) dans
la zone subplantaire d'une patte arrière droite. Des agents d'essai ont été administrés oralement une fois par jour pendant
17 jours, à partir du jour de l'injection d'adjuvant. Les volumes des pieds arrière droit et gauche ont été déterminés volumétriquement en immergeant les pieds dans l'eau. L'état de l'arthrite a été obtenu par observation visuelle et a
été gradué de 0 à 4+.
Au cours de l'expérience prophylactique sur l'arthrite adjuvante le KH-125 et la 6-mercaptopurine suppriment, en fonction de la dose, le gonflement des pieds ayant subi ou
non une injection d'adjuvant, ainsi que l'accroissement de l'activité de l'arthrite (figure 1). Trois des 7 rats traités avec 30 mg/kg/jour de 6-mercaptopurine sont morts au cours
de l'expérience, mais ceux qui ont reçu une dose de l'ordre
de 80 mg/kg/jour de KH-125 ont survécu pendant la période d'essai entière. La comparaison entre les deux médicaments
eu égard à la marge de sécurité - c'est-à-dire la dose maximale tolérée par administrations répétées par rapport à la dose efficace pour la suppression de l'arthrite adjuvante - a montré que le KH-125 peut être considéré comme étant environ 3 fois aussi sur que la 6-mercaptopurine.
La recrudescence de l'augmentation du pied, se produisant après le retrait du KH-125, n'est pas importante.
Expérience E : Effet suppressif de l'hydrazine de N-benzène-
<EMI ID=27.1>
néphrétoxique des rats
L'effet du KH-125 sur la néphrite néphrétoxique des rats de Wistar a été évalué en partant des trois points ci-après :
1) mesures des protéines de l'urine;
2) découvertes au microscope électronique; et
3) découvertes au microscope lumineux.
Les rats néphrétiques ont étépréparés conformément à la méthode de Shibata (The Saishin-Igaku, 20, 1089, 1965).
Au cours d'une expérience prophylactique, le KH-125
a été administré oralement deux fois par jour pendant 18 jours au cours d'une période de 21 jours, en commençant 2 jours avant l'injection de néphrétoxine et en terminant 18 jours après l'injection. La protéine d'urine a été mesurée 18 jours
après l'injection de néphrétoxine; ensuite, les rats néphrétiques ont été tués 2 jours après pour des examnns histopathologiques. Comme représenté à la figure 2, l'urée protéique a diminué, en fonction de la dose, grâce au traitement avec le KH-125. Dans les découvertes au microscope électronique, on
a observé que l'indice des fusions des traitements des pieds épithéliaux a été amélioré et que l'épaississement de la membrane de base glomérulaire a été supprimé par le traitement avec le KH-125. Les découvertes au microscope lumineux ont montré également une bonne amélioration de la néphrite ches les animaux traités avec le KH-125.
Au cours d'une expérience comparative, des agents d'essai ont été administrés une fois par jour: KH-125, 15 jours pendant 0 à 10 et 15 à 18 jours (p.o.); 6-mercaptopurine
<EMI ID=28.1>
11 jours pendant 0 à 10 jours (i.p.); et prednisolone, 11 <EMI ID=29.1>
animaux ont été tués 3 jours après pour des examens histopathologiques. Comme indiqué à la figure 3, la néphrite néphrétoxique est efficacement supprimée en grande partie dans le groupe traité avec le KH-125 comme le montre la diminution de l'urée protéinique, l'amélioration de l'indice des fusions des procédés des pieds épithéliaux et la suppression de l'épaississement
de la membrane de base glomérulaire.
REVENDICATIONS
1.- Composition pharmaceutique se présentant sous la
forme d'une unité de dosage orale, caractérisée en ce qu'elle comprend un support pharmaceutique et environ 1 à 400 mg par unité d'hydrazide de N-benzène-sulfonyl-B-alanine.
<EMI ID = 1.1>
sQr immunosuppressive and active "The present invention relates to a drug of great value to be administered orally and containing
<EMI ID = 2.1>
killing effective. The medicament according to the invention is
useful, as an immunosuppressive agent, for the suppression of so-called autoimmune diseases, such as nephretic syndromes, rheumatoid arthritis and lupus erythematosus from the body, etc.
In addition, it is possible to decrease or decrease
the dose of the corticosteroid by the use of KH-125 in a patient who has been treated with this hormone for a long time.
The invention relates to pharmaceutical compositions; more particularly, it relates to pharmaceutical compositions useful for the suppression of so-called autoimmune diseases.
Immunosuppressive drugs, such as 6-mercaptopurine, azathioprine and cyclophosphamide, have been used clinically for the treatment of rheumatoid arthritis, nephretic syndromes, hepatitis, and hemolytic anemia, all of which have been considered as belonging to the so-called autoimmune diseases. However, the high toxicity of these drugs has made their clinical use difficult, especially their prescription repeatedly for a patient for an extended period of time. Therefore, the development of a new immunosuppressive agent,
whose safety margin is greater, without reducing its therapeutic effects, has long been awaited.
The research which led to the discovery of the present invention has implicated the derivatives of the hydrazides of the amino acids endowed with a powerful immunosuppressive activity and a low toxicity.
In an attempt to find an immunosuppressive agent of lowered toxicity, about fifty acid hydrazidas, mainly derivatives of the hydrazides of the amino acids, were synthesized and screened for their ability to suppress the formation of acid. antibody for sheep erythrocytes in mice. During this research, N-benzenesulfonyl-B-alanine hydrazide (KH-125) was found to have the most potent immunosuppressive activity and relatively low acute toxicity among the compounds tested. Further detailed pharmacological and toxicological studies have been performed on
the KH-125.
During detailed pharmacological studies, it was confirmed that KH-125 has the property of suppressing adjuvant arthritis in rats, as well as nephritis.
<EMI ID = 3.1>
were evaluated by chronic and subacute toxicity tests in rats, by teratological studies in rats and rabbits, and also by cancer-promoting assays in mice and rats. According to these studies,
KH-125 has been observed to have significantly lower toxicity than that of well-known immunosuppressive agents. Additionally, KH-125 does not exert any teratogenic or carcinogenic effects, both of which are inevitably shared by existing immunosuppressive drugs, such as cyclophosphamide, 6-mercaptopurine, etc.
Before the compound according to the invention can be used medicinally, it must of course be converted into a pharmaceutical composition by association with a suitable pharmaceutical vehicle.
By the term "pharmaceutical" used in the present specification, it is meant to exclude any possibility by which the nature of the vehicle, considered, of course, in connection with the route according to which it is proposed to administer the composition, could be harmful rather than favorable.
Selection of a suitable mode of presentation, together with a suitable vehicle, is considered to be within the skill of those skilled in the art of preparing pharmaceutical formulations.
Therefore, there is provided by the present invention a pharmaceutical composition which comprises a
<EMI ID = 4.1>
with an appropriate pharmaceutical vehicle.
The compositions of the invention can be administered orally and, in view of these modes, the "pharmaceutical vehicle" is preferably: the ingestible excipient of a tablet, a coated tablet, a pill or a tablet. sublingual; the ingestible container of a capsule or cachet; the solid, pulverulent and ingestible carrier of a powder; or the ingestible liquid medium of a syrup, solution, suspension or elixir.
In the accompanying drawings:
Figure 1 shows the prophylactic effects of KH-125 and 6-MP on adjuvant arthritis. The drugs were administered orally once a day for 17 days starting from the day of the adjuvant injection.
�
- A, B: Changes in the swelling of the foot having undergone the adjuvant injection;
- C, D: Changes in the swelling of the foot not having undergone the adjuvant injection;
- E: State of arthritis 21 days after the adjuvant injection; <EMI ID = 5.1> Figure 2 shows the effect of KH-125 on the fusion index, basement membrane thickness and on protein urea in nephritic rats. The protein urea was measured 18 days after the injection of nephretoxin; then the rats were killed two days later for electron microscopic examination. Vertical lines show the normalized error.
<EMI ID = 6.1>
respectively.
<EMI ID = 7.1>
Figure 3 is a comparison of KH-125 with other immunosuppressive agents with respect to fusion index, basement membrane thickness, and protein urea. The protein urea was measured 18 days after the injection of nephretoxin; then, the nephritic rats were killed three days later for examination under the electron microscope. See captions in figure 2 for further details.
<EMI ID = 8.1>
aim to demonstrate the present invention, without however limiting it to them.
Example 1: Preparation of N-benzene-sulfonyl-8- hydrazide
alanine
To a solution of 7.5 g of N-benzenesulfonyl-B-alanine ethyl ester in 20 ml of ethanol is slowly added 2.1 g
<EMI ID = 9.1>
reflux for 6 hours. After cooling, the precipitated crystals are collected and recrystallized from
<EMI ID = 10.1>
alanine in the form of colorless platelets with a melting point of 135 to 137 [deg.] C.
<EMI ID = 11.1>
Example 2:
Tablets are prepared by mixing and granulating the following components according to known pharmaceutical techniques.
<EMI ID = 12.1>
Example 3:
Tablets are prepared by mixing, granulating, pressure molding and coating the following components according to known pharmaceutical techniques:
<EMI ID = 13.1>
Example 4:
Capsules are prepared, according to known pharmaceutical techniques, for example, using the following components:
<EMI ID = 14.1>
Example 5:
A pulverulent composition is prepared from the following constituents, in accordance with known pharmaceutical techniques:
<EMI ID = 15.1>
Example 6:
A suspension for oral administration is prepared from the following components according to known pharmaceutical techniques.
<EMI ID = 16.1>
Example 7:
Granules are prepared from the following components according to known pharmaceutical techniques.
<EMI ID = 17.1>
Experiment A: Acute toxicity of N-benzene hydrazide
<EMI ID = 18.1>
The acute toxicity of KH-125 was studied in Wistar rats and ddY mice of both sexes. Values
<EMI ID = 19.1>
following:
1520 (p.o.), 1230 (i.p.) and 1150 (s.c.) for male mice;
1570 (p.o.), 1410 (i.p.) and 1440 (s.c.) for female mice;
> 4000 (p.o.), 2150 (i.p.) and> 4000 (s.c.) for rats;
> 4000 (p.o.), 2580 (i.p.) and> 4000 (s.c.) for rats. No sex difference in acute toxicity was apparent Experiment B: Chronic toxicity study of hydrazide
<EMI ID = 20.1>
The study of the chronic toxicity of KH-125 was carried out on Wistar rats of both sexes. Rats were orally treated with KH-125 for 6 months at dose levels of 0 (control), 10, 20 and 40 mg / kg / day.
All rats were alive after treatment with
6 months with the KH-125. Weight gain was slightly inhibited in the 40 mg / kg / day groups. Hematologic findings revealed a dose-dependent decrease in hemoglobin and erythrocyte count. No substantial changes were observed in serum enzymatic activities by treatment with KH-125, except that slight increases were seen, but dose dependent, of S-GOT and S- GPT. No significant effects on general symptoms, food intake, urinalysis and serum protein fractionation were observed. No toxic effects, which could be attributed to the drug, were detected during histopathological examinations.
Experiment C: Suppressive effect of N-benzene hydrazide
sulfonyl-s-alanine (KH-125) on antibody production for sheep erythrocytes The effect of KH-125 on antibody production in ddY mice was examined by the platelet technique
by Cunningham and Szenberg (Immunology, 14, 599, 1968) and compared with other agents.
Mice were immunized by intra- /
venous washed sheep erythrocytes (4 x 108 cells / mouse). The administration of KH-125 was carried out orally for 4 consecutive days, starting from the day of the antigen injection. 19S plaque forming cells (PFCs) were counted 4 days after immunization. As shown in Table 1, KH-125 suppresses, depending on the dose, the appearance of PFC 19S.
In the comparative experiment, test agents were administered via the peritoneum for
8 consecutive days, starting one day before immunization. 7S PFCs were counted 9 days after immunization. As shown in Table 2, the suppressive effect of KH-125 on the appearance of PFC 7S is greater than that of prednisolone or 6-mercaptopurine, but is less effective than that
cyclophosphamide.
<EMI ID = 21.1>
<EMI ID = 22.1>
<EMI ID = 23.1>
<EMI ID = 24.1>
<EMI ID = 25.1>
<EMI ID = 26.1>
Experiment D: Suppressive effect of N-benzene hydrazide
sulfonyl-6-alanine (KH-125) for adjuvant arthritis in rats
The effect of KH-125 on adjuvant arthritis in rats was compared with that of 6-mercaptopurine. Sprague-Dawley rats received a single intradermal injection of 0.1 ml of a liquid paraffinic oil suspension of Mycobacterium tuberculosis (concentration: 5 mg / ml) in
the subplantar area of a right hind leg. Test agents were administered orally once daily for
17 days, from the day of the adjuvant injection. The volumes of the right and left rear feet were determined volumetrically by immersing the feet in water. The condition of the arthritis was obtained by visual observation and
been graduated from 0 to 4+.
During the prophylactic experiment on adjuvant arthritis, KH-125 and 6-mercaptopurine suppressed, depending on the dose, the swelling of the feet which had suffered or
not adjuvant injection, as well as increased arthritis activity (Figure 1). Three of the 7 rats treated with 30 mg / kg / day 6-mercaptopurine died during
experience, but those who received a dose of the order
of 80 mg / kg / day of KH-125 survived for the entire test period. The comparison between the two drugs
with regard to the margin of safety - i.e. the maximum dose tolerated by repeated administration versus the effective dose for adjuvant arthritis control - showed that KH-125 can be considered to be approximately 3 times as safe as 6-mercaptopurine.
The recrudescence of the increase in the foot, occurring after the withdrawal of KH-125, is not significant.
Experiment E: Suppressive effect of N-benzene- hydrazine
<EMI ID = 27.1>
nephretoxic rats
The effect of KH-125 on nephretoxic nephritis in Wistar rats was assessed based on the following three points:
1) urine protein measurements;
2) findings under an electron microscope; and
3) findings under a light microscope.
Nephritic rats were prepared according to the method of Shibata (The Saishin-Igaku, 20, 1089, 1965).
During a prophylactic experiment, KH-125
was administered orally twice daily for 18 days over a 21-day period, starting 2 days before the nephretoxin injection and ending 18 days after the injection. Urine protein was measured 18 days
after injection of nephretoxin; then, the nephritic rats were killed 2 days later for histopathological examinations. As shown in Figure 2, the protein urea decreased, depending on the dose, due to treatment with KH-125. In electron microscopic discoveries, we
observed that the fusion index of epithelial foot treatments was improved and the thickening of the glomerular basement membrane was suppressed by the treatment with KH-125. The findings under a light microscope also showed good improvement in nephritis in animals treated with KH-125.
In a comparative experiment, test agents were administered once daily: KH-125, 15 days for 0-10 and 15-18 days (p.o.); 6-mercaptopurine
<EMI ID = 28.1>
11 days for 0 to 10 days (i.p.); and prednisolone, 11 <EMI ID = 29.1>
animals were killed 3 days later for histopathological examinations. As shown in Figure 3, nephretoxic nephritis is effectively suppressed largely in the group treated with KH-125 as shown by decrease in protein urea, improvement in index of epithelial foot process fusions and removal of thickening
of the glomerular basement membrane.
CLAIMS
1.- Pharmaceutical composition presented under the
form of an oral dosage unit, characterized in that it comprises a pharmaceutical carrier and about 1 to 400 mg per unit of N-benzene-sulfonyl-B-alanine hydrazide.