BRPI0812952A2 - composição imunogênica canina, e, kit de diagnóstico para detectar parvovírus - Google Patents

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Abstract

COMPOSIÇÃO IMUNOGÊNICA CANINA, USO, MÉTODO PARA DETECTAR A PRESENÇA DO CPV EM UMA AMOSTRA BIOLÓGICA, E, KIT DE DIAGNÓSTICO Vacinas de parvovírus canino e diagnósticos e métodos para o seu uso são fornecidos.

Description

“COMPOSIÇÃO IMUNOGÊNICA CANINA, USO, MÉTODO PARA í DETECTAR A PRESENÇA DO CPV EM UMA AMOSTRA BIOLÓGICA, E, KIT DE DIAGNÓSTICO”
LISTAGEM DE SEQUÊNCIA Este pedido inclui como a Listagem de Sequência os conteúdos completos do arquivo de texto anexo “Sequence.txt”, criado em 12 de Junho de 2008, contendo 3.780 bites, aqui incorporado por referência.
DESCRIÇÃO
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO Campo da Invenção A invenção no geral diz respeito às formulações de vacina e testes de diagnóstico de parvovírus canino (CPV) melhoradas. Em particular, a invenção fornece formulações de vacina de CPV melhoradas e testes de diagnóstico que compreendem variantes de CPV dominantes recém emergentes que correntemente circulam em populações caninas. Fundamentos da invenção O parvovírus canino (CPV) é primariamente um patógeno entérico que infecta cães, especialmente cães jovens. A infecção por parvovírus é caracterizada pela diarréia aguda, febre e leucopenia em cães e filhotes com mais do que 4 a 5 semanas de idade e doença miocárdica em filhotes jovens. A taxa de mortalidade da doença em cães não vacinados é muito alta. Embora vacinas contra CPV estejam disponíveis, porque o CPV é um vírus de DNA de filamento único e tem uma capacidade extrema para mutar, o vírus mostra uma capacidade acentuável para variar antigenicamente e dessemodo iludir a proteção imune proporcionada pelas vacinas. Assim, monitoramento constante do tipo antigênico e genótipo do agente causativo é necessário. CPV foi primeiro isolado em 1978 e foi chamado de “CPV-2” para distinguí-lo do vírus Diminuto de parvovírus canino (CMV ou CPV-I).
CPV-2 é no geral acreditado ser uma variante genética do vírus da panleucopenia felina (FPV) ou do vírus entérico da marta (MEV) e é genética e antigenicamente muito intimamente relacionada com parvovírus que infecta martas, raposas, racuns e outros carnívoros. O capsídeo CPV contém um —genomade DNA de filamento único de cerca de 5200 bases com apenas duas matrizes de leitura aberta, embora pelo menos quatro proteínas são codificadas devido à junção de MRNA alternativa. O capsídeo de parvovírus é feito de duas proteínas virais (VP), VP1 e VP2, com VP2 sendo a proteína capsídica de parvovírus imunogênica principal. Uma variante genética do isolado de CPV original foi identificada em 1979-1980 e foi chamada de CPV tipo 2a. em meados de 1980, também uma outra variante, tipo 2b, foi identificada e desde então, os tipos 2a e 2b parecem ter deslocado completamente o CPV-2 original. As vacinas correntes são direcionadas apenas contra as variantes2a e 2b, não obstante a variante 2a não ser mais detectada nos Estados Unidos. Para uma revisão da descoberta e evolução do CPV, ver Parrish e Kawaoka, 2005.
CPV-2b difere de CPV-2a apenas em duas posições de aminoácido: Asn-426 em 2a (codificado por AAT) é Asp em 2b (codificado por GAT) e Ile-555 em 2a é Val em 2b. A troca de Ile-555 para Val é de fato —umareversão para a sequência tipo 2 original. Os tipos antigênicos 2a e 2b do CPV pareceram ser relativamente estáveis por vários anos. Entretanto, em 2000 uma variante “2c” foi descrita em que a posição 426 é Glu codificado por GAA (a posição 555 permanece Val). A variante 2c foi relatada na Itália (Buonavoglia et al., 2001), Vietnam (Nakamura et al., 2001) e outros países, incluindo Espanha (Nakamura et al., 2004; Decaro et al., 2006), mas até agora não houve nenhum relato confirmado da variante 2c nos Estados Unidos e as vacinas contra CPV não foram atualizadas para incluir tais variantes. Isto é de importância especial porque, diferente das variantes anteriormente descritas que infectam primariamente filhotes, o CPV2c tem a capacidade para infectar cães adultos. Além disso, a sequência de uma À variante 2b com variações de códon nas posições 494 e 572 foi submetida ao GenBank (gi: 54646340) em 2003 e relatado por Shackelton et al. em 2005 (Proceedings National Academy Sciences 102: 379-384), mas nenhuma — alteração na vacina de CPV ou composições de diagnóstico foram propostas com base em tais sequências. Vários problemas surgem quando as vacinas não são atualizadas. Primeiramente, mesmo os cães vacinados podem ser suscetíveis à infecção pelas variantes de CPV que não estão incluídas na vacina. Em segundo lugar, quando cães vacinados ficam doentes, seus proprietários frequentemente alegam eu as cepas virais na vacina causaram a doença. Isto tem frequentemente resultudo no pagamento de remuneração aos proprietários, visto que não existe nenhum modo prático para a companhia da vacina fornecer evidência ao contrário.
Diversas preparações de vacina contra o CPV foram propostas: As Patentes dos Estados Unidos 4.193.990 e 4.193.991 concedidas a Appel et al., descrevem vacinas virais heterotípicas e inativadas (“mortas”), respectivamente, em que a vacina exemplar proporcionou proteção contra o CPV original.
A Patente dos Estados Unidos 4.303.645 concedida a Carmichael er al., descreve uma vacina que compreende um CPV atenuado produzido pela passagem em série prolongada do vírus em linhagens de célula não oncogênicas. A vacina exemplar também protege contra o isolado do CPV original.
A Patente dos Estados Unidos 4.971.793 concedida a Wood et al. e Patente dos Estados Unidos 5.882.652 concedida a Valdes et al., ambas descrevem vacinas de subunidade recombinante que compreendem a proteína VP-2 do CPV produzida em baculovírus recombinante. A proteína VP-2 não é de nenhum tipo ou subtipo especificado.
A Patente dos Estados Unidos 5.885.585 concedida a Parrish í et al., descreve uma vacina do CPV que compreende uma forma atenuada de uma variante 2b. Devido à capacidade do vírus CPV para mutar e desenvolver — novas variantes antigênicas, existe uma necessidade contínua para monitorar a constituição genética das variantes do CPV e desenvolver vacinas e testes de diagnóstico que reflitam as variantes do CPV correntes.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção fornece vacinas atualizadas para prevenir ainfecção pelo CPV e diagnosticar métodos para detectar variantes do CPV novas e emergentes. As vacinas e métodos de diagnóstico são fundamentados na descoberta de variantes do CPV anteriormente desconhecidas e anteriormente não avaliadas e levando em conta a emergência de formas mutantes do vírus para o qual as formulações de vacina anterior e diagnósticos são inadequados. As vacinas da presente invenção pretendem fornecer proteção contra formas emergentes de CPV e os diagnósticos fornecem a capacidade para detectar as formas recém envolvidas do vírus, ambas destas capacidades foram anteriormente indisponíveis. Em particular, uma nova variante rara é útil como uma variante “marcadora” em vacinas. O uso da variante marcadora torna possível investigações forense de se os sintomas da doença em um animal vacinado com a variante marcadora são causadas ou não pela vacina, ou por uma outra cepa de CPV. As novas formulações de vacina incluem CPV atenuado integral com DNA de filamento único tendo uma ou mais das seguintes características: 2bA494A572 é uma variante 2b do CPV que contém pelo menos as seguintes mudanças: o códon que codifica a posição 494 da proteína de VP2 é TGC ao invés de TGT e o códon que codifica a posição 572 da proteína VP2 é GTC ao invés de GTA. Estas mudanças não resultam em mudanças de aminoácido (tanto TGC quanto TGT codificam cisteína e tanto : GTC quanto GTA codificam valina). Não obstante, esta variante causa doença em animais que foram anteriormente vacinados com as vacinas convencionais, correntemente disponíveis e devem ser incorporados em novas 5 — formulações de vacina. Embora as mudanças nas posições 494 e 572 fossem anteriormente descritas, elas não foram avaliadas. Além disso, este isolado americano pode conter outras mutações. 2bA431 é uma variante de CPV 2b rara recém descoberta (por exemplo, uma variante de 2bA494A572) em que o códon que codifica a posição 431 da proteína VP2 é CTG ao invés de CTA. Embora esta mudança também não resulte em uma mudança de aminoácido, esta variante não obstante também causa doença em animais vacinados e pode ser incorporada em novas formulações de vacina. Significantemente, devido à sua escassez, 2bA431 representa uma sequência “marcadora” de vacina ideal.
A 2c americana (ou dos Estados Unidos) é a primeira variante 2c isolada nos Estados Unidos e é a variante 2c predominante (81 %). Esta variante também é aludida como a “variante 2c maior”.
2cA440 é uma variante 2c do CPV recém descoberta em que o códon que codifica a posição 440 da proteína VP2 é GCA, ao invés de ACA, o que resulta em uma mudança na sequência de aminoácido da treonina (ACA) para alanina (GCA) nesta posição. Esta variante causa doença em animais vacinados e deve ser incorporada em novas formulações de vacina. Esta variante é correntemente uma variante menor (19 %) e é também aqui aludida como a “variante 2c menor”.
2cA430A440, uma outra variante de 2cA440, que, além de conter GCA no códon para a posição 440, também varia das sequências de 2c conhecidas tendo a leucina na posição 430 codificada por TTA ao invés do TTG usual.
Todas estas variantes de CPV foram detectadas pela reação da — cadeia da polimerase (PCR) e isolada em cultura de célula de cães infectados com CPV e/ou seus filhotes que já podem ter sidovacinados contra CPV usando vacinas comerciais convencionais. Assim, estas variantes recém É emergentes são capazes de escapar da vigilância imune em cães vacinados de acordo com protocolos correntes, se a variação muda (2cA440 e 2cA430A440 em parte) ou não (2hbA494A572 e 2bA431) na sequência de aminoácido da proteína de VP2 nas posições indicadas. Além disso, as técnicas de diagnóstico correntemente disponíveis para o uso no campo não detectam as novas variantes de CPV ou reagem deficientemente, levando à sensibilidade diminuída. A presente invenção resolve estes problemas pelo fornecimento de vacinas e diagnósticos que levam em conta as novas variantes.
A invenção fornece ainda um método para propagar parvovírus canino, particularmente as variantes aqui descritas, que não produzem um efeito citopático (CPE) ou produzem apenas um CPE brando, quando cultivadas apenas em células CRFK. O método compreende a etapa de cultivar o parvovírus canino em uma mistura de células renais de felino Crandall Reese (CRFK) e células Vero em um meio adequado. A etapa de cultivo é realizada sob condições que permitam que o parvovírus canino se propague em títulos mais altos do que aqueles atingíveis quando o CPV é cultivado apenas em células CRFK.
A invenção fornece ainda uma vacina de parvovírus que — compreende uma ou mais variantes de CPV. O nível de neutralização da uma ou mais variantes de CPV é pelo menos 4 vezes mais baixa do que o nível de neutralização de uma ou mais variantes de CPV selecionadas do grupo que consiste de CPV-2, CPV-2a, CPV-2b e CPV-2c, como determinado usando soro de um animal vacinado com uma vacina que compreende uma ou mais das variantes de CPV: CPV-2, CPV-2a, CPV-2b e CPV-2c. Em algumas formas de realização, os níveis de neutralização são determinados por um ensaios de neutralização de soro e expressado como um título de neutralização.
DESCRIÇÃO RESUMIDA DOS DESENHOS Figura 1. Sequência de 2bhA494A572 exemplares (a sequência de ácido nucléico representada pela SEQ ID NO: 1) em que o códon para a posição
494 é TGC e o códon para a posição 572 é GTC. A sequência de ácido nucléico que codifica os aminoácidos de 426 a 572 da proteína de VP2 é mostrada. À SEQ ID NO: 1 reflete a sequência de ácidos nucléicos que codifica somente os aminoácidos 426 a 572, enquanto a SEQ ID NO: 9 reflete a sequência da Figura —lnasuatotalidade.
Figura 2. Uma sequência de 2bA431 exemplar (a sequência de ácido nucléico representada pela SEQ ID NO: 2) em que o códon para a posição 431 é CTG. A sequência de ácido nucléico que codifica os aminoácidos de 426 a 572 da proteína de VP2 é mostrada. A SEQ ID NO: 2 reflete a sequência de ácidos nucléicos que codifica somente os aminoácidos 426 a 572, enquanto a SEQ ID NO: 10 reflete a sequência da Figura 2 na sua totalidade.
Figura 3. A sequência de ácido nucléico que codifica os aminoácidos de 426 a 572 (a sequência de ácido nucléico representada pela SEQ ID NO: 3) da proteína de VP2 2c americana maior é mostrada.
Figura 4. Uma sequência de 2cA440 exemplar (2c americana menor) (a sequência de ácido nucléico representada pela SEQ ID NO: 4) em que o códon para a posição 440 é GCA ao invés de ACA, que codifica alanina ao invés de treonina. A sequência de ácido nucléico que codifica os aminoácidos de 426 a 572 da proteína VP2 é mostrada.
Figura 5. Uma sequência 2cA430A440 exemplar (a sequência de ácido nucléico representada pela SEQ ID NO: 5).
Figura 6. Estrutura dobrada hipotética associada com a variante 2c como listada na SEQ ID NO: 6. Figura 7. Estrutura dobrada hipotética associada com a — variante 2bA431 como listada na SEQ ID NO: 7.
Figura 8. Estrutura dobrada hipotética associada com a variante 2cA430A440 como listada na SEQ ID NO: 8.
DESCRIÇÃO DETALHADA DAS FORMAS DE REALIZAÇÃO
PREFERIDAS DA INVENÇÃO A presente invenção fornece vacinas contra o CPV e
À; REIVINDICAÇÕES
1. Composição imunogênica canina, caracterizada pelo fato de que compreende virions de parvovirus que têm uma proteína tipo VP-2, ditos virions de parvovírus compreendendo um ácido nucléico, dito ácido nucléico compreendendo a sequência de nucleotídeos selecionada do grupo que consiste de: SEQ ID NO: 2; uma porção da SEQ ID NO: 2 que inclui pelo menos nucleotídeos 16-18 que são CTG, em que dita porção da SEQ ID NO:2 — codifica uma região antigênica de proteína tipo VP-2; SEQ ID NO: 4; e uma porção da SEQ ID NO: 4 que inclui pelo menos nucleotídeos 43-45 que são GCA, em que a dita porção da SEQ ID NO:4 codifica uma região antigênica de proteína tipo VP-2.
2. Composição imunogênica canina de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende ainda virions compreendendo uma sequência de ácido nucléicos selecionada do grupo que consiste da: SEQ ID NO: |; uma porção da SEQ ID NO: 1 que codifica uma região antigênica da proteína tipo VP-2; SEQ ID NO: 3; uma porção da SEQ ID NO: 3 que codifica uma região antigênica da proteína tipo VP-2; e sequências que codificam uma proteína tipo VP-2b.
3. Composição imunogênica canina de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que os ditos virions de parvovirus são atenuados.
4. Composição imunogênica canina de acordo com a
: 2 À reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que os ditos virions de parvovirus são atenuados.
5. Uso da SEQ ID NO: 2 ou uma porção da SEQ ID NO: 2 que codifica uma região antigênica e da SEQ ID NO: 4 ou uma porção da SEQ ID —NO:4que codificauma região antigênica, caracterizado pelo fato de ser para a produção de uma vacina contra infecção por parvovírus.
6. Uso de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a dita vacina contra o parvovírus compreende ainda as sequências de ácido nucléico selecionadas do grupo que consiste da: SEQ ID NO: 1, uma porção da SEQ ID NO: 1 que codifica uma região antigênica, SEQ ID NO: 3, uma porção da SEQ ID NO: 3 que codifica uma região —antigênicae sequências que codificam uma proteína tipo VP-2b.
7. Uso de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a dita SEQ ID NO: 2 ou a dita porção da SEQ ID NO: 2 e a dita SEQ ID NO: 4 ou a dita porção da SEQ ID NO: 4 estão presentes em um parvovírus atenuado.
8. Método para detectar a presença do CPV em uma amostra biológica, caracterizado pelo fato de que compreende expor a dita amostra às moléculas que específica ou seletivamente se ligam a a) uma ou mais das sequências de ácido nucléico SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 e SEQ ID NO: 4; ou b) sequências de aminoácido codificadas por uma ou mais das sequências de ácido nucléico SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 e SEQ ID NO: 4 e
. 3 : detectar um evento de ligação entre as ditas moléculas e a dita uma ou mais sequências de ácido nucléico ou a dita uma ou mais sequências de aminoácido.
9. Método de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo —fatodequeasditas moléculas são iniciadores de oligonucleotídeo.
10. Método de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que as ditas moléculas são anticorpos.
11. Kit de diagnóstico, caracterizado pelo fato de que é para detectar parvovirus em cães domésticos e filhotes de cachorros, canídeos — selvagens, lobos, cães selvagens, gatos domésticos e gatos filhotes, gatos selvagens, marta, pandas vermelhos, raposas, leões, tigres, animais em zoológicos ou áreas protegidas, e animais em instalações de pesquisa, compreendendo moléculas específicas para detectar em cães domésticos e filhotes de cachorros, canídeos selvagens, lobos, cães selvagens, gatos domésticos e gatos filhotes, gatos selvagens, marta, pandas vermelhos, raposas, leões, tigres, animais em zoológicos ou áreas protegidas, e animais em instalações de pesquisa, a) uma ou mais das sequências de ácidos nucléicos, selecionadas do grupo que consiste daSEQ ID NO: 2 e SEQ ID NO: 4; ou b) sequências de aminoácido codificadas por uma ou mais das sequências de ácidos nucléicos da SEQ ID NO: 4.
12. Kit de diagnóstico de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que as ditas moléculas são iniciadores de — oligonucleotídeos.
13. Kit de diagnóstico de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que as ditas moléculas são anticorpos.
14. Kit de diagnóstico de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que os ditos anticorpos são anticorpos monoclonais.
S 15. Kit de diagnóstico de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que compreende ainda moléculas específicas para detectar a) uma ou mais das sequências de ácidos nucléicos — selecionadas do grupo que consiste da SEQ ID NO:1 a SEQ ID NO: 3; ou b) sequências de aminoácidos codificadas por um ou mais das sequências de ácidos nucléicos selecionadas do grupo que consiste da SEQ ID NO: 1, SEQID NO: 2 e SEQID NO: 3.
16. Composição imunogênica canina, caracterizada pelo fato de que compreende uma ou mais variantes de CPV, em que um nível de neutralização dos ditos um ou mais variantes de CPV é pelo menos 4 vezes menor do que um nível de neutralização de um ou mais variantes de CPV selecionados do grupo que consiste de CPV-2, CPV-2a, CPV-2b e CPV 2c.
17. Composição imunogênica canina de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que os ditos níveis de neutralização são determinados por um ensaio de neutralização sérica e são expressos como um título de neutralização.
. 426
GATGATAATGTATTGCTACCAACAGATCCAATTGGAGGTAAAACAGGAATTAACTA TACTAATATATTTAATACTTATGGTCCTTTAACTGCATTAAATAATGTACCACCAGTT
TATCCAAATGGTCAAATTTGGGATAAAGAATTTGATACTGACTTAAAACCAAGACTT 494
CATGTAAATGCACCATTTGTTTIGICAAAATAATTIGCCCTGGTCAATTATTTIGTAAAA GTTGCGCCTAATTTAACAAATGAATATGATCCTGATGCATCTGCTAATATGTCAAGA ATTGTAACTTACTCAGATTTTTGGTGGAAAGGTAAATTAGTATTTAAAGCTAAÁCTA
AGAGCCTCTCATACTTGGAATCCAATTCAACAAATGAGTATTAATGTAGATAACCAA 572 “TTTAACTATGTACCAAGTAATATTGGAGGTATGAAAATTGICTATGAAAAATCOTCAA
CTAGCACCTAGAAAATTATATTAACATACTTACTATGTTTTTATGTITATTACATAT Figura 1
. 426 431
GATGATAATGTATTGCTGCCAACAGATCCAATTGGAGGTAAAACAGGAATTAACTA TACTAATATATTTAATACTTATGGTCCTTTAACTGCATTAAATAATGTACCACCAGTT TATCCAAATGGTCAAATTTGGGATAAAGAATITGATACTGACTTAAAACCAAGACTT CXTOTAAMIGOAGONTETOTTIGTON ALATAMTÁROOOTIGTCANTESTTIGTARAA, GTTGCGCCTAATTTAACAAATGAATATGATCCTGATGCÇATCTGCTAATATGTCAAGA ATTGTAACTTACTCAGATTTTTGGTGGAAAGGTAAATTAGTATTTAAAGCTAAACTA AGAGCCTCTCATACTTGGAATCOCAATTCAACAAATGAGTATTAATGTAGATAACCAA TTTAACT, ATGTACOANGTANTATTGOAGOTATOAAAMTIÓROL ATGAAAAATCTCAA
CTAGCACCTAGAAAATTATATTAACATACTTACTATGTIITTTATGTITATTACATAT Figura 2
GAAGATAATGTATTGCTACCAACAGATCCAATTGGAGGTAAAACAGGAATTAACTA TACTAATATATTTAATACTTATGGTCCTTTAACTGCATTAAATAATGTACCACCAGTT TATCCAAATGGTCAAATTTGGGATAAAGAATTTGATACTGACTTAAAACCAAGACTT CATGTAANTGONCOATIVOTITOTOAASATAMTESICOOTGBTCAATIATTIGT, AAAA GTTGCGCCTAATTTAACAAATGAATATGATCCTGATGCATCTGCTAATATGTCAAGA
ATTGTAACTTACTCAGATTTTIGGTGGAAAGGTAAATTAGTATTTAAAGCTAAACTA , AGAGCCTCTCATACTTGGAATCCAATTCAACAAATGAGTATTAATGTAGATAACCAA 7 TITANGIATOTADCOAAGTAATATIGUAGGTATGA&AATTOTA, Figura 3
GAAGATAATGTATTGCTACCAACAGATCCAATTGGAGGTAAAGÇAGGAATTAACTA 7 TACTAATATATTTAATACTTATGGTCCTTTAACTGÇATTAAATAATGTACCACCAGTT
Ú TATCCAAATGGTCAAATTTGGGATAAAGAATTTGATACTGACTTAAAACCAAGACTT 494 CATGTAAATGCACCATTTGTTTGTCAAAATAATTGTCCTGGTCAATTATTTGTAAAA,
GTTGCGCCTAATTTAACAAATGAATATGATCCTGATGCATCTGCTAATATGTCAAGA ATTGTAACTTACTCAGATTTTTGGTGGAAAGGTAAATTAGTATTTAAAGCTAAACTA
AGAGCCTCTCATACTTGGAATCCAATTCAACAAATGAGTATTAATGTAGATAACCAA " s72
TTTAACTATGTACCAAGTAATATTGGAGGTATGAAAATTGTA Figura 4
7 GAAGATAATGTATTACTACCAACAGATCCAATTGGAGGTAAAGCAGGAATTAACTA
TACTAATATATTTAATACTTATGGTCCTTTAACTGCATTAAATAATGTACCACCAGTT TATCCAAATGGTCAAATTTGGGATAAAGAATTTGATACTGACTTAAAACCAAGACT T CATGTAAATGCACCATTTGITIGICAAAATAATIGTCCTGGT CAATTATTTGTAAAA
GTTGCGCCTAATTTAACAAATGAATATGATCCTGATGCATCTGCTAATATGTCAAGA | ATTGTAACTTACTCAGATTTTTGGTGGAAAGGTAA ATTAGTATTTAAAGCTAAACTA
AGAGCCTCTCATACTTGGAATCCAATTCAACAAATGAGTATTAATGTAGATAACCAA
TTTAACTATGTACCAAGTAATATIGGAGGTATGAAAATTGTA Figura 5
+. | á % |
A a e; a aos Fº F*a o : Fº got ' te 17 a des 9 —t ea. ao E j x a 3 E) 9750 a ) a À Ix—a—e t i ENERGIA = 31 Figura 6
A+ >c . X gd “ E À ae qt ço?
À | des Fº 9 et 4 sa ta o. DS) gos ata, j . q A í 50 À j a À gQra—e ENERGIA = 2.2 Figura 7 '
x : O e da . Cc à 2 O a oi des ço Pr, o) | - SG “9 qe . t e: ea Ve ge. ”) —t a.
Aa a 3 a f 50 a a.
À Grao t ENERGIA = 2.9 Figura 8 é 1 : RESUMO “COMPOSIÇÃO IMUNOGÊNICA CANINA, USO, MÉTODO PARA DETECTAR A PRESENÇA DO CPV EM UMA AMOSTRA BIOLÓGICA, E, KIT DE DIAGNÓSTICO” Vacinas de parvovírus canino e diagnósticos e métodos para o seu uso são fornecidos.
Este anexo apresenta o código de controle da listagem de sequências biológicas de que trata a Resolução INPI 228 de 11/11/2009: Código de Controle Campo 1
DONATE Campo 2
ONDE Outras Informações: - Nome do Arquivo: 104736e001.txt - Data de Geração do Código: 24-06-2010 - Hora de Geração do Código: 13:33:49 - Código de Controle: - Campo 1: DFB8428073FCO062A - Campo 2: 48F9993E74717B6C Gerado pelo Sistema de Listagem de Sequências Biológicas (SisBioList) a A
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