BRPI0807974A2 - Formas cristalinas de um composto de 8-azabiciclo[3.2.1] octano - Google Patents

Description

FORMAS CRISTALINAS DE UM COMPOSTO DE 8-AZABICICLO[3.2.1]

OCTANO

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

Campo da invenção 5 A invenção é dirigida às formas de sal cristalino de

um composto de 8-azabiciclo[3.2.1]octano que são úteis como antagonistas do receptor opióide μ. A invenção também é dirigida às composições farmacêuticas que compreendem esses compostos cristalinos, métodos de utilização desses 10 compostos para o tratamento ou atenuação de condições médicas mediadas pela atividade do receptor opióide μ, e processos úteis para a preparação desses compostos.

Técnicas estabelecidas

Os Pedidos Provisórios de Patente U.S. com designação comum Nos 60/777.962, depositado em Io de março de 2006, e 60/841.028, depositado em 30 de agosto de 2006, e o Pedido de Patente U.S. N0 de Série 11/711.961 revelam compostos de 8-azabiciclo[3.2.1]octano que são antagonistas do receptor opióide μ que, espera-se, sejam úteis para o tratamento ou atenuação de condições médicas mediadas pela atividade do receptor opióide μ. Em particular, o composto sulfato de 3- endo-(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil) amino]etil}-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il) benzamida é especificamente revelado nesses pedidos como demonstrando atividade antagonista do receptor opióide μ.

A estrutura química de 3-endo-(8-{2-[ciclohexilmetil((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino]etil}-8-aza-biciclo [3.2.1]oct-3-il)benzamida (daqui por diante composto 1) é mostrada abaixo:

30 I

Para utilizar eficazmente esse composto como um agente

terapêutico, seria desejável ter uma forma de sal em estado sólido que possa ser prontamente fabricado e que possua estabilidade química e física aceitáveis. Por exemplo, seria altamente desejável ter uma forma de sal que seja 10 termicamente estável, por exemplo, em temperaturas que excedam cerca de 175°C ou cerca de 180°C, e não seja higroscópico nem deliqüescente, facilitando, dessa forma, o processamento e armazenamento do material. Sólidos cristalinos são geralmente preferidos em relação às formas 15 amorfas, para aumento da pureza e estabilidade do produto manufaturado.

Nenhuma forma de sal cristalino de composto 1 foi relatada previamente. Conseqüentemente, existe a necessidade de uma forma de sal cristalino de composto 1

2 0 estável que não seja higroscópica nem deliqüescente, e

exiba estabilidade térmica favorável.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção fornece um sal de sulfato cristalino de 3-endo-(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)-2,3- diidroxi-propionil)amino]etil}-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-

il) benzamida ou um solvato deste. Em um aspecto, a forma de sal cristalino da invenção é um sal de sulfato cristalino de composto I. Em outro aspecto, a forma de sal cristalino da invenção é um hidrato cristalino do sal de

3 0 sulfato de composto 1. Surpreendentemente, verificou-se que o sal de sulfato cristalino da invenção não exibe eventos térmicos significativos abaixo de uma temperatura de fusão na faixa de cerca de 190 a cerca de 2050C e exibe uma alteração de 5 peso de menos do que cerca de 0,3% quando exposto a uma gama de umidade relativa entre cerca de 2% e cerca de 90% em temperatura ambiente. Além disso, nem o sal de sulfato cristalino da invenção nem o hidrato deste são deliqüescentes quando expostos a até cerca de 90% de 10 umidade relativa em temperatura ambiente.

Entre outros usos, espera-se que as formas de sal cristalino da invenção sejam úteis para a preparação de composições farmacêuticas para o tratamento ou atenuação de condições médicas mediadas pela atividade do receptor 15 opióide μ. Conseqüentemente, em outro dos aspectos da composição, a invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende um veículo farmaceuticamente aceitável e um sal de sulfato cristalino de 3-endo-(8-{2-[ciclohexilmetil((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino]etil}-8-aza-biciclo 20 [3.2.1]oct-3-il)benzamida ou um solvato deste.

A invenção também fornece um método de tratamento ou melhora de uma doença ou condição atenuada por tratamento com um antagonista do receptor opióide μ, por exemplo, um distúrbio de motilidade reduzida do trato gastrintestinal, 25 o método compreendendo a administração ao mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal de sulfato cristalino de 3-endo-(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)-2,3- diidroxi-propionil)amino]etil}-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3- il) benzamida ou um solvato deste.

3 0 A invenção ainda fornece um método de tratamento de disfunção intestinal ou obstrução total do intestino pósoperatória induzida por opióide, o método compreendendo a administração ao mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal de sulfato cristalino de 3 -endo-(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi

propionil)amino]etil}-8-aza-biciclo [3.2.1] oct-3-

il)benzamida ou um solvato deste.

Em outro aspecto do método, a invenção fornece um processo para a preparação de um sal de sulfato cristalino 10 da invenção, o processo compreendendo o contato de 3-endo(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino] etil}-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)benzamida com ácido sulfúrico para formar uma mistura de reação, e o isolamento do sal de sulfato cristalino da mistura de reação.

A invenção fornece um processo adicional para a

preparação de um sal de sulfato cristalino da invenção, o processo compreendendo a dispersão de um hidrato cristalino do sal de sulfato de 3-endo-(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)

2,3-diidroxi-propionil)amino]etil}-8-aza-biciclo[3.2.1]oct3-il)benzamida em um diluente que compreende metanol para formar uma mistura de reação, e o isolamento do sal de sulfato cristalino da mistura de reação.

Ainda em outro aspecto do método, a invenção fornece um processo para a preparação de um sal de sulfato 25 cristalino de composto 1, o processo compreendendo: (a) o contato de um precursor protegido com composto 1 em que os grupos hidróxi estão protegidos com ácido sulfúrico para formar uma primeira mistura de reação; (b) isolamento de um sal sólido de grau intermediário de sulfato do composto 1 3 0 da primeira mistura de reação; (c) dispersão do sal sólido de grau intermediário de sulfato em um diluente que compreende metanol para formar uma segunda mistura de reação; e (d) isolamento do sal de sulfato cristalino da segunda mistura de reação.

Em um aspecto relacionado da composição, a invenção

fornece o aduto de bissulfito de benzil éster de ácido Nciclohexilmetil-(2-oxoetil)-carbâmico, que é útil para a preparação do precursor protegido acima para o composto 1.

A invenção também fornece um sal de sulfato cristalino 10 da invenção, como aqui descrito, para uso em terapia ou como um medicamento, bem como o uso de um sal de sulfato cristalino da invenção na fabricação de um medicamento, especialmente para a fabricação de um medicamento para o tratamento de um distúrbio associado à atividade do 15 receptor opióide μ em um mamífero.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS Vários aspectos da presente invenção são ilustrados por referência aos desenhos em anexo.

A Figura 1 mostra um padrão de difração de pó com raios X (XRPD) de um sal de sulfato cristalino de 3-endo(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino] til}-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)benzamida da invenção.

A Figura 2 mostra um traçado de calorimetria de varredura diferencial (DSC) (eixo vertical lateral direito) 25 e um traçado de análise térmica gravimétrica (TGA) (eixo vertical lateral esquerdo) para um sal de sulfato cristalino de 3-endo-(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)-2,3- diidroxi-propionil)amino]etil}-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3- il) benzamida da invenção.

3 0 A Figura 3 mostra um traçado de absorção dinâmica de umidade (DMS) para um sal de sulfato cristalino de 3-endo(8-{2- [ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino] etil}-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)benzamida da invenção.

A Figura 4 mostra um padrão de difração de pó com raios X (XRPD) de um hidrato cristalino de um sal de sulfato de 3-endo-(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxipropionil)amino]etil}-8-aza-biciclo[3.2.1] oct-3-il) benzamida da invenção.

A Figura 5 mostra um traçado de calorimetria de 10 varredura diferencial (DSC) (eixo vertical lateral direito) e um traçado de análise térmica gravimétrica (TGA) (eixo vertical lateral esquerdo) para um hidrato cristalino de um sal de sulfato de 3-endo-(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)-2,3- diidroxi-propionil)amino]etil}-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3- 15 ilJbenzamida da invenção.

A Figura 6 mostra um traçado de absorção dinâmica de umidade (DMS) para um hidrato cristalino de um sal de sulfato de 3-endo-(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxipropionil)amino]etil}-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)

2 0 benzamida da invenção.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

A invenção fornece um sal de sulfato cristalino de 3- endo-(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil) amino]etil}-8-aza-biciclo[3.2.1] oct-3-il)benzamida ou um solvato deste.

Definições

Na descrição dos compostos, composições e métodos da invenção, os seguintes termos possuem os seguintes significados, a menos que indicado de forma diferente.

0 termo "quantidade terapeuticamente eficaz" significa uma quantidade suficiente para efetuar o tratamento quando administrada a um paciente que necessita de tratamento.

0 termo "tratamento", como aqui usado, significa o tratamento de uma doença, um distúrbio ou uma condição médica em um paciente, por exemplo, um mamífero (particularmente um ser humano) que inclui:

(a) prevenção da ocorrência da doença, do distúrbio ou da condição médica, ou seja, tratamento profilático de um paciente;

(b) atenuação da doença, do distúrbio ou da condição

médica, ou seja, eliminação ou produção da regressão da doença, do distúrbio ou da condição médica em um paciente, incluindo o antagonismo aos efeitos de outros agentes terapêuticos;

(c) supressão da doença, do distúrbio ou da condição

médica, ou seja, tornar mais lento ou interromper o desenvolvimento da doença, do distúrbio ou da condição médica em um paciente; ou

(d) alívio dos sintomas da doença, do distúrbio ou da condição médica em um paciente.

0 termo "solvato" significa um complexo ou agregado formado por uma ou mais moléculas de um soluto, ou seja, um composto da invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, e uma ou mais moléculas de um solvente. Tais 25 solvatos são tipicamente sólidos cristalinos que possuem uma proporção molar substancialmente fixa de soluto e solvente. Solventes representativos incluem, como forma de exemplo, água, metanol, etanol, isopropanol, ácido acético, e semelhantes. Quando o solvente é água, o solvato formado 3 0 é especificamente denominado um hidrato. O termo "sal de sulfato cristalino" ou, alternativamente, "sal de sulfato cristalino (forma anidra)" ou "sal anidro de sulfato", como aqui usado, significa um sólido cristalino que não inclui uma fração 5 molar substancialmente fixa de moléculas de solvente na rede cristal, ou seja, um que não seja um solvato ou hidrato. Solvatos, ou especificamente hidratos, da invenção são identificados explicitamente.

Deve-se observar que, como usado na especificação e nas reivindicações em anexo, as formas no singular "um", "uma", "o" e "a" podem incluir referências no plural, a menos que o conteúdo indique claramente de forma diferente.

Agente ativo

0 agente ativo nas presentes formas de sal, ou seja, composto 1, é designado 3-endo-(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)

2,3-diidroxi-propionil)amino] etil}-8-aza-biciclo[3.2.1]oct3-il)benzamida. Alternativamente, usando as convenções da IUPAC, como implementadas no software AutoNom (MDL Information Systems, GmbH, Frankfurt, Alemanha), o composto 20 é denominado 3-((IR,3R,5S)-8-{2-[ciclohexilmetil-((S)-2,3- diidroxi-propionil)amino]etil}- 8-azabiciclo[3.2.1] oct-3- il)benzamida. Portanto, o nome aqui utilizado corresponde à notação da IUPAC, com a orientação endo do grupo fenil substituído com relação ao grupo 8-azabiciclo[3.2.1]octano 25 indicada explicitamente. Ainda em outras nomenclaturas comuns, a porção "((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino" da molécula é designada de forma variável como ((S)-2,3- diidroxi-l-oxopropil)amino ou ((S)-2,3-

diidroxipropanamido).

3 0 Formas de sal da invenção Em um aspecto, a invenção fornece sulfato de 3-endo(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino] etil}-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)benzamida cristalino.

Em um aspecto, o sal de sulfato cristalino da presente invenção é caracterizado por um padrão de difração de pó com raios X (XRPD) que possui dois ou mais picos de difração, incluindo três ou mais e quatro ou mais picos de difração, em valores de 2Θ selecionados de 6,58 ± 0,20, 7,52 ± 0,20, 9,35 ± 0,20, 14,69 ± 0,20, 16,01 + 0,20, 17,45 ± 0,20, 17,99 ± 0,20, 18,62 ± 0,20, 19,76 ± 0,20, 21,11 ± 0,20, 22,07 ± 0,20, 23,18 ± 0,20, 23,74 ± 0,20, 24,56 ± 0,20, 25,63 ± 0,20, 26,45 ± 0,20, 27,86 ± 0,20, 28,31 ± 0,20, 29,54 + 0,20, 30,59 ± 0,20, 31,58 ± 0,20, 33,89 ± 0,20 e 36,02 ± 0,20. Em particular, nesse aspecto, a forma cristalina é caracterizada por um padrão de difração de pó com raios X que possui dois ou mais picos de difração, incluindo três ou mais e quatro ou mais picos de difração, em valores de 2Θ selecionados de 14,69 ± 0,20, 16,01 ±

0.20, 21,11 ± 0,20, 22,07 ± 0,20 e 23,18 ± 0,20.

2 0 Como é bem conhecido no campo da difração de energia

de raios X, as posições de pico dos espectros de XRPD são relativamente menos sensíveis aos detalhes experimentais, tais como detalhes de preparação de amostra e geometria do instrumento, do que são as alturas relativas de pico. Dessa 25 forma, em um aspecto, um sal de sulfato cristalino de composto 1 é caracterizado por um padrão de difração de pó com raios X no qual as posições de pico estão substancialmente de acordo com aquelas mostradas na Figura

1.

3 0 A estrutura cristalina do sulfato foi ainda caracterizada por análise de difração de raios X cristal única, fornecendo os seguintes parâmetros de rede: célula unitária é ortorrômbica com dimensões a = 6,823 9 Á, b = 16,2275 Â, c = 24,2021 Á, α = β = γ = 90°; volume celular 5 (V) de 2680,0 Á3; densidade calculada é 1,38 g/cm3; grupo espacial é Ρ2ι2ι2χ (#19). A estrutura molecular resultante confirma que a composição química é aquela do sal de sulfato de composto 1 em uma proporção molar de 1:1 de contra-íon de sulfato para composto 1 e que a célula 10 unitária assimétrica não contém água ou outras moléculas solventes. Os picos de difração de energia de raios X previstos a partir das posições atômicas derivadas estão plenamente de acordo com o padrão de XRPD observado.

Em outro aspecto, o sal de sulfato cristalino da 15 presente invenção é caracterizado por seu comportamento quando exposto à temperatura elevada. Como demonstrado na Figura 2, o traçado de calorimetria de varredura diferencial (DSC) de uma amostra altamente cristalina exibe um pico no fluxo de calor endotérmico, identificado como 20 uma transição de fusão, na faixa de cerca de 1900C a cerca de 205°C. O traçado de análise térmica gravimétrica (TGA) mostra ausência de perda de peso significativa em temperaturas abaixo do ponto de fusão. A decomposição térmica ocorre aproximadamente mediante fusão.

Ainda em outro aspecto, um sal de sulfato cristalino é

caracterizado por seu espectro de absorção infravermelha que mostra bandas de absorção significativas em torno de 430, 590, 639, 705, 867, 1.036, 1.053, 1.105, 1.171, 1.231, 1.277, 1.375, 1.391, 1.452, 1.476, 1.553, 1.596, 1.639, 1.664, 2.852, 2.907, 2.928, 2.967, 3,168 e 3.357 cm'1. Foi demonstrado que um sal de sulfato cristalino de composto 1 possui um perfil de adsorção/dessorção reversível, com um nível excepcionalmente baixo de capacidade higroscópica (ou seja, menos do que cerca de 5 0,3% de ganho de peso na faixa de umidade de 2% de umidade relativa até 90% de umidade relativa em temperatura ambiente), como mostrado na Figura 3.

Adicionalmente, verificou-se que o sal de sulfato cristalino de composto 1 é estável mediante exposição a 10 temperatura e umidade elevadas. Após armazenamento por 4 semanas a 40°C e 75% de umidade relativa, a análise por HPLC não mostrou degradação química e não havia alterações detectáveis nos resultados de DSC, TGA ou XRPD.

Em outro aspecto, a invenção fornece um hidrato cristalino de um sal de sulfato de composto 1.

Em um aspecto, um hidrato cristalino de um sal de sulfato da presente invenção é caracterizado por um padrão de difração de pó com raios X (XRPD) que possui dois ou mais picos de difração, incluindo três ou mais e quatro ou mais picos de difração, em valores de 2Θ selecionados de 9,41 ± 0,20, 9,98 ± 0,20, 15,17 ± 0,20, 16,70 ± 0,20, 18,59 ± 0,20, 19,46 ± 0,20, 19,91 ± 0,20, 20,63 ± 0,20, 21,35 ± 0,20, 21,89 ± 0,20, 23,00 ± 0,20, 24,20 ± 0,20, 25,40 ± 0,20, 26,03 ± 0,20, 27,44 ± 0,20, 28,46 ± 0,20, 29,45 ± 0,20, 31,22 ± 0,20, 31,82 ± 0,20, 33,17 ± 0,20, 33,56 ± 0,20 e 36,89 ± 0,20. Em particular, nesse aspecto, a forma cristalina é caracterizada por um padrão de difração de pó com raios X que possui dois ou mais picos de difração, incluindo três ou mais e quatro ou mais picos de difração, em valores de 2Θ selecionados de 16,70 ± 0,20, 18,59 ± 0,20, 19,46 ± 0,20, 19,91 ± 0,20, 23,00 ± 0,20 e 24,20 ± 0,20.

Em outro aspecto, um hidrato cristalino de um sal de sulfato de composto 1 é caracterizado por um padrão de difração de pó com raios X no qual as posições de pico estão substancialmente de acordo com aquelas mostradas na Figura 4.

O hidrato cristalino de um sal de sulfato da presente invenção também é caracterizado por seu traçado de calorimetria de varredura diferencial (DSC), que exibe dois eventos endotérmicos: um primeiro pico no fluxo de calor endotérmico na faixa de cerca de 125 a cerca de 133°C, e um segundo pico na faixa de cerca de 178 a cerca de 183°C, quando analisado em uma taxa de aquecimento de IO0C por minuto, como ilustrado na Figura 5. O traçado de análise térmica gravimétrica (TGA) mostra um primeiro evento térmico entre cerca de 60 e cerca de 140°C e um segundo evento térmico entre cerca de 14 0 e cerca de 1900C. A análise por TGA acoplada ao IR do material vaporizado no primeiro evento térmico é consistente com uma composição de hidrato que possui cerca de um mole de água por mole de sulfato do composto 1.

Surpreendentemente, um hidrato cristalino de um sal de sulfato de composto 1 demonstrou baixa capacidade 25 higroscópica. Como ilustrado na Figura 6, o hidrato cristalino exibe um perfil de adsorção/dessorção reversível em temperatura ambiente ao longo de toda a faixa de cerca de 2% a cerca de 90% de umidade relativa, com menos do que cerca de 0,3% de ganho de peso ao longo de toda a faixa de

3 0 umidade relativa. Essas propriedades das formas de sal desta invenção são ainda ilustradas nos Exemplos abaixo.

Procedimentos sintéticos

0 agente ativo, 3-endo-(8-{2-[ciclohexilmetil-((S) 5 2,3-diidroxi-propionil)amino]etil}-8-aza-biciclo[3.2.1]oct3-il)benzamida, pode ser preparado a partir de materiais de partida prontamente disponíveis pela utilização dos procedimentos descritos nos Exemplos abaixo, ou com a utilização dos procedimentos descritos nos Pedidos U.S. com 10 designação comum listados na seção "Fundamentos da invenção" deste pedido.

Em um método de preparação, um sal de sulfato cristalino da invenção é preparado pelo contato de 3-endo(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)-2, 3-diidroxipropionil)amino]etil} -8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-

il)benzamida com cerca de 0,5 a cerca de 1,5 equivalente molar, incluindo cerca de 1 equivalente molar, de ãcido sulfúrico. Geralmente, essa reação é realizada em um diluente inerte em uma temperatura que varia de cerca de 20 0°C a cerca de 65°C, incluindo cerca de 60 a cerca de 65°C. Diluentes inertes adequados incluem, por exemplo, metanol, tolueno, diclorometano, e combinações como, por exemplo, tolueno e acetonitrila, diclorometano e acetonitrila, e tolueno, acetonitrila e água, além de uma combinação de 25 metanol e água que compreende cerca de 10% de água. Com o uso desses diluentes, uma mistura de reação com uma concentração entre cerca de 5 e cerca de 4 00 mg/ml, incluindo entre cerca de 50 e cerca de 100 mg/ml, é preparada e mantida por cerca de 2 e cerca de 24 horas, com

3 0 agitação opcional. A mistura pode ser resfriada até entre cerca de 5 e cerca de 2O0C durante o período de manutenção.

Com o término da reação, um sal cristalino da invenção é isolado da mistura de reação por qualquer meio convencional, por exemplo, filtração, concentração, centrifugação, e semelhantes.

Alternativamente, o sulfato cristalino da invenção é preparado por recristalização da forma de hidrato. O hidrato cristalino está disperso em um diluente inerte, como descrito acima, em uma concentração entre cerca de 5 e 10 cerca de 400 mg/ml. Metanol, ou uma combinação de metanol: água, em uma proporção de cerca de 3:1 a cerca de 9:1, é diluente particularmente útil para essa reação. A mistura de reação é mantida em temperaturas na faixa de cerca de 0 a cerca de 65°C, tipicamente com agitação, por 15 entre cerca de 1 e cerca de 24 horas, incluindo entre cerca de 1 e cerca de 6 horas. Tipicamente, a mistura de reação é resfriada de cerca de 65°C até entre cerca de 5 e cerca de 20 0C durante o período de manutenção. Para aumentar o rendimento, o volume da solução pode ser reduzido em torno 20 de 50%, antes de manter a mistura de reação por um período de tempo entre cerca de 1 e cerca de 24 horas, incluindo entre cerca de 1 e cerca de 6 horas, em uma temperatura entre cerca de 5 e cerca de 20°C. Os cristais resultantes são recuperados convencionalmente.

2 5 Tanto o sal de sulfato cristalino quanto o hidrato

cristalino do sal de sulfato de composto 1 são vantajosamente preparados a partir do precursor protegido do composto I. Como descrito nos exemplos abaixo, para preparar o agente ativo, o aldeído protegido 2, benzil éster de ácido ^-ciclohexilmetil-(2-oxoetil)-carbâmico, regenerado a partir de seu aduto de bissulfito 3, é acoplado ao cloridrato de 3-endo-(8-azabiciclo[3.2.1]oct-3- il)-benzamida 4 para fornecer o intermediário protegido 5,

(ciclohexilmetilamino)etil]- 8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3- il}benzamida 6.

A reação do intermediário 6 com (45)-2,2-dimetil-1,3- dioxolano-4-carboxilato de lxtio 7 fornece o intermediário protegido {2-[3-(3-carbamoil-fenil)-8-azabiciclo[3.2.1]oct8-il] etil}ciclohexilmetil-amida de ácido (S)-2,2-dimetil[1,3]dioxolano-4-carboxílico 8.

cerca de 0,8 a cerca de 1,3 equivalente, tipicamente cerca

que é desprotegido para fornecer 3-endo-{8-[2-

10

3

2

15

H

H

5

6

o

25

6

8

0 intermediário protegido 8 é colocado em contato com de 1 a cerca de 1,2 equivalente, de ácido sulfúrico aquoso em um diluente inerte, por exemplo, acetato de etila ou acetato de isopropila, em uma temperatura entre cerca de 20 e cerca de 30°C. Um segundo diluente, que é miscível com a 5 mistura de reação, e no qual o produto é menos solúvel, é tipicamente incluído na mistura de reação. Acetonitrila é útil como o segundo diluente. A mistura de reação é tipicamente agitada por um período entre cerca de 2 e cerca de 72 horas, resultando na desproteção do composto 8 e 10 formação do sal sólido de grau intermediário de sulfato de composto 1, que é tipicamente predominantemente o hidrato cristalino do sulfato do composto I. 0 produto de grau intermediário pode ser isolado convencionalmente, por exemplo, por filtração.

A forma de hidrato pode ser obtida por recristalização

do produto de sulfato de grau intermediário, por exemplo, por suspensão do produto de grau intermediário em acetonitrila com aquecimento, adição de água para promover a dissolução, resfriamento até a temperatura ambiente, e 2 0 isolamento da forma recristalizada de hidrato, como descrito no Exemplo 2 abaixo.

0 sal de sulfato cristalino de composto 1 pode ser obtido a partir do produto sólido de grau intermediário da etapa de desproteção descrita acima. O produto de grau 25 intermediário está disperso em um diluente inerte que compreende metanol em uma concentração entre cerca de 5 e cerca de 400 mg/ml, incluindo entre cerca de 50 e cerca de 200 mg/ml. Surpreendentemente, foi determinado que uma combinação de metanol e água, que possui até 25% de água, 30 incluindo entre cerca de 0 e cerca de 15% de água, e entre cerca de 5 e cerca de 15% de água, é um diluente útil para a preparação de um sal anidro cristalino. Em particular, uma combinação de metanol e água que compreende cerca de 10% de água é útil para recristalização do produto de grau 5 intermediário no sal anidro de sulfato da presente invenção.

Em um processo de recristalização típico, a mistura de reação é aquecida até que seja obtida a dissolução completa; por exemplo, a mistura de reação é aquecida até 10 cerca de 65°C, e depois resfriada até entre cerca de 5 e cerca de 220C ao longo de um período entre cerca de 2 e cerca de 24 horas. Opcionalmente, cristais de semeadura do sal anidro de sulfato podem ser adicionados quando a mistura de reação estiver abaixo da temperatura de 15 dissolução. Os cristais resultantes são recuperados convencionalmente, por exemplo, por filtração.

De acordo ainda com outro processo, a forma de hidrato pode ser preparada a partir da forma de sulfato cristalino (anidra). Tipicamente, o sulfato cristalino primeiro é

2 0 convertido em uma forma amorfa, mais solúvel, por exemplo, por liofilização ou evaporação rápida de uma solução preparada a partir do sulfato cristalino. O material amorfo sólido de sulfato é então disperso em um sistema solvente aquoso, por exemplo, 25% de água e 75% de acetonitrila, e 25 opcionalmente agitado por um período de tempo, acima de cerca de 12 ou acima de cerca de 24 horas, em temperaturas na faixa de cerca de 0 a cerca de 65 0C. Tipicamente, a temperatura inicialmente é elevada até cerca de 650C e depois reduzida até entre cerca de 5 e cerca de 20°C. A 30 forma de hidrato cristalino resultante é recuperada convencionalmente.

Conseqüentemente, em um aspecto do método, dentre outros processos, a invenção fornece um processo para a preparação de um sal de sulfato cristalino de composto 1, o 5 processo compreendendo: (a) o contato de um precursor protegido com composto 1 em que os grupos hidróxi estão protegidos, com ácido sulfúrico para formar uma primeira mistura de reação; (b) isolamento de um sal sólido de grau intermediário de sulfato de composto 1 da primeira mistura 10 de reação; (c) dispersão do sal sólido de grau intermediário de sulfato em um diluente que compreende metanol para formar uma segunda mistura de reação; e (d) isolamento do sal de sulfato cristalino da segunda mistura de reação.

Além disso, em um aspecto da composição, a invenção

fornece o aduto de bissulfito de benzil éster de ácido Nciclohexilmetil-(2-oxoetil)-carbâmico 3 útil para a preparação do composto I. Como descrito na Preparação 1, o aduto de bissulfito 3 pode ser preparado por aminação 20 redutiva de ciclohexanocarboxaldeído por 2,2- dietoxietilamina usando sódio triacetoxiborohidreto, seguida por adição de um grupo de proteção amino, desproteção da funcionalidade aldeído e conversão no aduto de bissulfito por reação com bissulfito de sódio. 25 Alternativamente, a aminação redutiva inicial pode ser realizada por hidrogenação catalítica. Catalisadores de hidrogenação adequados incluem, sem limitação, catalisadores de paládio, platina e níquel de Raney.

Composições farmacêuticas

3 0 As formas de sal de sulfato cristalino da invenção são tipicamente administradas a um paciente na forma de uma composição ou formulação farmacêutica. Essas composições farmacêuticas podem ser administradas ao paciente por qualquer via de administração aceitável, incluindo, sem

limitação, modos de administração orais, retais, vaginais, nasais, inalados, tópicos (incluindo transdérmicos) e parenterais.

Conseqüentemente, em um dos aspectos das composições, a invenção é dirigida a uma composição farmacêutica que 10 compreende um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável e uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal de sulfato cristalino de composto 1 ou um solvato deste. Opcionalmente, essas composições farmacêuticas podem conter outros agentes terapêuticos e/ou de formulação, se 15 desejado. Quando se discutem as composições, subentende-se que o termo "sal da invenção" inclui o sal de sulfato cristalino de composto 1, bem como solvatos, em particular, o hidrato, deste.

As composições farmacêuticas da invenção tipicamente 20 contêm uma quantidade terapeuticamente eficaz do agente ativo, presente na forma de um sal da invenção. Tipicamente, essas composições farmacêuticas conterão cerca de 0,1 a cerca de 95% por peso do agente ativo; preferivelmente, de cerca de 5 a cerca de 70% por peso; e 25 mais preferivelmente de cerca de 10 a cerca de 60% por peso do agente ativo.

Qualquer veículo ou excipiente convencional pode ser usado nas composições farmacêuticas da invenção. A escolha de um veículo ou excipiente em particular, ou combinações de veículos ou excipientes, dependerá do modo de administração usado para tratar um paciente ou tipo de condição médica ou estado de doença em particular. A esse respeito, a preparação de uma composição farmacêutica adequada para um modo de administração em particular está 5 incluída no escopo daqueles habilitados nas técnicas farmacêuticas. Adicionalmente, os veículos ou excipientes usados nas composições farmacêuticas desta invenção estão disponíveis comercialmente. Como ilustração adicional, técnicas convencionais de formulação são descritas em 10 "Remington: The Science and Practice of Pharmacy", 20a Edição, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000); e H.C. Ansel e cols., "Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems", 7a Edição, Lippincott Williams

& White, Baltimore, Maryland (1999) .

Exemplos representativos de materiais que podem servir

como veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem, sem limitação, os seguintes: açúcares, tais como Iactose, glicose e sacarose; amidos, tais como amido de milho e amido de batata; celulose como, por exemplo, celulose 2 0 microcristalina, e seus derivados, tais como carboximetil celulose sódica, etil celulose e acetato de celulose; tragacanto em pó; malte; gelatina; talco; excipientes, tais como manteiga de cacau e ceras de supositórios; óleos, tais como óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de açafroa, óleo de gergelim, azeite de oliva, óleo de milho e óleo de soja; glicóis como, por exemplo, propileno glicol; polióis, tais como glicerina, sorbitol, manitol e polietileno glicol; ésteres, tais como oleato de etila e laurato de etila; ágar; agentes de tamponamento, tais como hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio; ácido algínico; água sem pirógeno; solução salina isotônica; solução de Ringer; álcool etílico; soluções de tampão de fosfato; e outras substâncias atóxicas compatíveis empregadas em composições farmacêuticas.

As composições farmacêuticas são preparadas

tipicamente por mistura ou mescla cuidadosa e íntima do agente ativo com um veículo farmaceuticamente aceitável e um ou mais ingredientes opcionais. A mistura uniformemente mesclada resultante pode então ser moldada ou carregada em 10 comprimidos, cápsulas, pílulas e semelhantes, com a utilização de procedimentos e equipamentos convencionais.

As composições farmacêuticas da invenção são preferivelmente embaladas em uma forma de dosagem unitária. 0 termo "forma de dosagem unitária" refere-se a uma unidade 15 fisicamente distinta adequada à dosagem de um paciente, ou seja, cada unidade contém uma quantidade predeterminada de agente ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado, tanto isoladamente quanto em combinação com uma ou mais unidades adicionais. Por exemplo, essas formas de

2 0 dosagem unitária podem ser cápsulas, comprimidos, pílulas, e semelhantes, ou embalagens unitárias adequadas à administração parenteral.

Em uma modalidade, as composições farmacêuticas da invenção são adequadas à administração oral. Composições 25 farmacêuticas adequadas à administração oral podem estar na forma de cápsulas, comprimidos, pílulas, pastilhas, cachets, drágeas, pós, grânulos; ou como uma solução ou uma suspensão em um líquido aquoso ou não aquoso; ou como uma emulsão líquida óleo-em-água ou água-em-óleo; ou como um 30 elixir ou xarope; e semelhantes; cada uma contendo uma quantidade predeterminada de um composto da presente invenção como um ingrediente ativo.

Quando destinada à administração oral em uma forma de dosagem sólida (ou seja, como cápsulas, comprimidos,

5 pílulas e semelhantes), as composições farmacêuticas da invenção compreenderão tipicamente o agente ativo e um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis como, por exemplo, citrato de sódio ou fosfato dicálcico. Opcional ou alternativamente, essas formas de dosagem sólida também 10 podem compreender: enchimentos ou extensores, tais como amidos, celulose microcristalina, lactose, sacarose, glicose, manitol e/ou ácido silícico; aglutinantes, tais como carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinil pirrolidona, sacarose e/ou acácia; umectantes como, por 15 exemplo, glicerol; agentes de desintegração, tais como ágar-ágar, carbonato de cálcio, amido de batata ou de tapioca, ácido algínico, certos silicatos e/ou carbonato de sódio; agentes de retardo de solução como, por exemplo, parafina; aceleradores da absorção, tais como compostos de

2 0 amônio quaternário; agentes umidificantes, tais como álcool

cetílico e/ou monoestearato de glicerol; absorventes, tais como caulim e/ou argila bentonita; lubrificantes, tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietileno glicóis sólidos, lauril sulfato de sódio e/ou 25 misturas destes; agentes corantes; e agentes de tamponamento.

Agentes de liberação, agentes umidificantes, agentes de revestimento, agentes adoçantes, flavorizantes e perfumantes, conservantes e antioxidantes também podem

3 0 estar presentes nas composições farmacêuticas da invenção. Exemplos de antioxidantes farmaceuticamente aceitáveis incluem: antioxidantes hidrossolúveis, tais como ácido ascórbico, cloridrato de cisteína, bissulfato de sódio, metabissulfato de sódio, sulfito de sódio, e semelhantes;

antioxidantes lipossolúveis, tais como palmitato de ascorbila, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, lecitina, propil gaiato, alfa-tocoferol, e semelhantes; e agentes quelantes de metal, tais como ácido cítrico, ácido etilenodiamina tetra-acético, sorbitol, ácido tartárico, 10 ácido fosfórico, e semelhantes. Agentes de revestimento para comprimidos, cápsulas, pílulas e semelhantes incluem aqueles usados para revestimentos entéricos, tais como ftalato de acetato de celulose, ftalato de acetato de polivinila, ftalato de hidroxipropil metilcelulose, 15 copolímeros de ácido metacrílico-éster de ácido metacrílico, trimelitato de acetato de celulose, carboximetil etil celulose, succinato de acetato de hidroxipropil metil celulose, e semelhantes.

As composições farmacêuticas da invenção também podem

2 0 ser formuladas para fornecer liberação lenta ou controlada do agente ativo, usando, como forma de exemplo, hidroxipropil metil celulose em proporções variáveis; ou outras matrizes poliméricas, lipossomos e/ou microesferas. Além disso, as composições farmacêuticas da invenção podem 25 opcionalmente conter agentes de opacificação e podem ser formuladas de modo a liberar o ingrediente ativo apenas, ou preferencialmente, em certa porção do trato gastrintestinal, opcionalmente, de forma retardada. Exemplos de composições combinadas que podem ser usadas 30 incluem substâncias poliméricas e ceras. O agente ativo também pode estar em forma microencapsulada, se adequado, com um ou mais dos excipientes descritos acima.

Formas de dosagem líquida adequadas à administração oral incluem, como ilustração, emulsões, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires farmaceuticamente aceitáveis. Formas de dosagem líquida tipicamente compreendem o agente ativo e um diluente inerte como, por exemplo, água ou outros solventes, agentes solubilizantes e emulsificantes, tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonato de etila, acetato de etila, álcool benzílico, benzoato de benzila, propileno glicol, 1,3- butileno glicol, óleos (esp., óleo de semente de algodão, óleo de amendoim, óleo de milho, óleo de germe de trigo, azeite de oliva, óleo de rícino e óleo de gergelim) , glicerol, álcool tetrahidrofurílico, polietileno glicóis e ésteres de ácido graxo de sorbitano, e misturas destes. Suspensões, além do ingrediente ativo, podem conter agentes de suspensão como, por exemplo, alcoóis isoestearílicos etoxilados, polioxietileno sorbitol e ésteres de sorbitano, celulose microcristalina, meta-hidróxido de alumínio, bentonita, ágar-ágar e tragacanto, e misturas destes.

Os sais desta invenção também podem ser administrados por via parenteral (por exemplo, por injeção intravenosa, subcutânea, intramuscular ou intraperitoneal). Para 25 administração parenteral, o agente ativo é tipicamente misturado com um veículo adequado para administração parenteral, incluindo, como forma de exemplo, soluções aquosas estéreis, solução salina, alcoóis de baixo peso molecular como, por exemplo, propileno glicol, polietileno 30 glicol, óleos vegetais, gelatina, ésteres de ácido graxo, por exemplo, oleato de etila, e semelhantes. As formulações parenterais também podem conter um ou mais antioxidantes, solubilizantes, estabilizantes, conservantes, agentes umidificantes, emulsificantes ou agentes dispersantes.

Essas formulações podem ser tornadas estéreis pelo uso de um meio injetável estéril, um agente esterilizante, filtração, irradiação ou calor.

Alternativamente, as composições farmacêuticas da invenção são formuladas para administração por inalação. 10 Composições farmacêuticas adequadas à administração por inalação estarão tipicamente na forma de um aerossol ou um pó. Essas composições são geralmente administradas com a utilização de dispositivos de liberação bem conhecidos, tais como um inalador de dose metrificada, um inalador de 15 pó seco, um nebulizador ou um dispositivo de liberação similar.

Quando administradas por inalação com o uso de um recipiente pressurizado, as composições farmacêuticas da invenção compreenderão tipicamente o ingrediente ativo e um propelente adequado como, por exemplo,

diclorodifluormetano, triclorofluormetano,

diclorotetrafluoretano, dióxido de carbono ou outro gás adequado. Adicionalmente, a composição farmacêutica pode estar na forma de uma cápsula ou cartucho (feito, por 25 exemplo, de gelatina) que compreende um composto da invenção e um pó adequado para uso em um inalador de pó. Bases de pós adequadas incluem, como forma de exemplo, lactose ou amido.

Os sais da invenção também podem ser administrados por

3 0 via transdérmica com o uso de sistemas e excipientes de liberação transdérmicos conhecidos. Por exemplo, o agente ativo pode ser misturado com intensificadores da permeação, por exemplo, propileno glicol, monolaurato de polietileno glicol, azacicloalcan-2-onas, e semelhantes, e incorporado 5 em um emplastro ou sistema de liberação similar. Excipientes adicionais, incluindo agentes de gelificação, emulsificantes e tampões, também podem ser usados nessas composições transdérmicas, se desejado.

Se desejado, os sais desta invenção podem ser 10 administrados em combinação com um ou mais outros agentes terapêuticos. Nessa modalidade, um sal desta invenção é misturado fisicamente com o outro agente terapêutico para formar uma composição que contém ambos os agentes, ou cada agente está presente em composições separadas e distintas 15 que são administradas ao paciente simultânea ou seqüencialmente.

Por exemplo, um sal da invenção pode ser combinado com um segundo agente terapêutico com o uso de procedimentos e equipamentos convencionais para formar uma composição que

2 0 compreende um composto 1 e um segundo agente terapêutico.

Adicionalmente, os agentes terapêuticos podem ser combinados com um veículo farmaceuticamente aceitável para formar uma composição farmacêutica que compreende um sal da invenção, um segundo agente terapêutico e um veículo 25 farmaceuticamente aceitável. Nessa modalidade, os componentes da composição são tipicamente misturados ou mesclados para criar uma mistura física. A mistura física é então administrada em uma quantidade terapeuticamente eficaz com o uso de qualquer uma das vias aqui descritas.

3 0 Alternativamente, os agentes terapêuticos podem permanecer separados e distintos antes da administração ao paciente. Nessa modalidade, os agentes não são misturados fisicamente juntos antes da administração, mas são administrados simultaneamente ou em momentos separados como composições 5 separadas. Essas composições podem ser embaladas separadamente ou podem ser embaladas juntas como um kit. Os dois agentes terapêuticos no kit podem ser administrados pela mesma via de administração ou por vias de administração diferentes.

Qualquer agente terapêutico compatível com o presente

agente ativo pode ser usado como o segundo agente terapêutico. Em particular, agentes pró-cinéticos que atuam por meio de mecanismos diferentes do antagonismo ao receptor opióide μ podem ser usados em combinação com os 15 presentes compostos. Por exemplo, agonistas do receptor 5-HT4, por exemplo, tegaserod, renzaprida, mosaprida, prucaloprida, {(IS,3R,5R)-8-[2-(4-acetilpiperazin-l-il)

etil]-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il}amida de ácido 1- isopropil-lH-indazol-3-carboxílico, { (IS, 3J?, 5R) - 8- [ (R) - 2- 20 hidróxi-3-(metanossulfonil-metil-amino)propil]-8-azabiciclo [3.2.1]oct-3 -il}amida de ácido l-isopropil-2-oxo-l,2- diidroquinolina-3-carboxílico, ou éster metílico de ácido 4-(4 -{ [(2-isopropil-lH-benzoimidazol-4-

carbonil)amino]metil}-piperidin-I-ilmetil)piperidina-1- carboxílico podem ser usados como o segundo agente terapêutico.

Agentes pró-cinéticos adicionais úteis incluem, sem limitação, agonistas do receptor S-HT3 (por exemplo, pumosetrag) , antagonistas do receptor 5-HTia (por exemplo, AGI 001), ligantes de alfa-2-delta (por exemplo, PD217 014), abridores do canal de cloreto (por exemplo, lubiprostona), antagonistas de dopamina (por exemplo, itoprida, metaclopramida, domperidona), agonistas de GABA-B (por exemplo, baclofeno, AGI 006), agonistas opióides kappa 5 (por exemplo, asimadolina), antagonistas muscarínicos Mi e M2 (por exemplo, acotiamida), agonistas de motilina (por exemplo, mitencinal), ativadores da guanilato ciclase (por exemplo, MD-1100), e agonistas de grelina (por exemplo, Tzp 101, RC 1139).

Além disso, os sais da invenção podem ser combinados

com agentes terapêuticos opióides. Esses agentes opióides incluem, sem limitação, morfina, petidina, codeína, diidrocodeína, oxicontina, oxicodona, hidrocodona, sufentanil, fentanil, remifentanil, buprenorfina, metadona e heroina.

Vários exemplos adicionais desses agentes terapêuticos são conhecidos na técnica e qualquer um desses agentes terapêuticos conhecidos pode ser empregado em combinação com os compostos desta invenção. Agentes secundários, 20 quando incluídos, estão presentes em uma quantidade terapeuticamente eficaz, ou seja, em qualquer quantidade que produza um efeito terapeuticamente benéfico quando coadministrado com um composto da invenção. Doses adequadas para os outros agentes terapêuticos administrados em 25 combinação com um composto da invenção estão tipicamente na faixa de cerca de 0,05 μ9/άίβ a cerca de 100 mg/dia.

Conseqüentemente, as composições farmacêuticas da invenção opcionalmente incluem um segundo agente terapêutico, como descrito acima.

3 0 Os seguintes exemplos ilustram composições farmacêuticas representativas da presente invenção:

Exemplo de formulação A: Cápsulas de gelatina rígidas para administração oral

Um sal da invenção (50 g), lactose atomizada (200 g) e estearato de magnésio (10 g) são misturados cuidadosamente. A composição resultante é carregada em uma cápsula de gelatina rígida (2 60 mg de composição por cápsula).

Exemplo de formulação B: Cápsulas de gelatina rígidas para administração oral Um sal da invenção (20 mg) , amido (89 mg) , celulose

microcristalina (89 mg) e estearato de magnésio (2 mg) são misturados cuidadosamente e depois são passados através de uma peneira U.S. de trama N0 45. A composição resultante é carregada em uma cápsula de gelatina rígida (2 00 mg de composição por cápsula).

Exemplo de formulação C: Cápsulas de gelatina para administração oral

Um sal da invenção (10 mg) , mono-oleato de polioxietileno sorbitano (50 mg) e pó de amido (250 mg) são 2 0 misturados cuidadosamente e depois carregados em uma cápsula de gelatina (310 mg de composição por cápsula). Exemplo de formulação D: Comprimidos para administração oral

Um sal da invenção (5 mg) , amido (50 mg) e celulose 25 microcristalina (35 mg) são passados através de uma peneira U.S. de trama N0 4 5 e misturados cuidadosamente. Uma solução de polivinilpirrolidona (10% do peso em água, 4 mg) é misturada com os pós resultantes, e essa mistura é depois passada através de uma peneira U.S. trama N0 14. Os 30 grânulos assim produzidos são secos a 50-60°C e passados através de uma peneira U.S. trama N0 18. Amido de carboximetil sódico (4,5 mg), estearato de magnésio (0,5 mg) e talco (1 mg), que foram passados previamente através de uma peneira U.S. trama N0 60, são então adicionados aos 5 grânulos. Após mistura, a mistura é compactada em uma máquina de comprimidos para gerar um comprimido pesando 100 mg.

Exemplo de formulação E: Comprimidos para administração oral

Um sal da invenção (25 mg) , celulose microcristalina

(400 mg) , dióxido de silício fumegado (10 mg) e ácido esteárico (5 mg) são misturados cuidadosamente e depois compactados para formar comprimidos (44 0 mg de composição por comprimido).

Exemplo de formulação F: Comprimidos com marca única para administração oral

Um sal da invenção (15 mg) , amido de milho (50 mg) , croscarmelose sódica (25 mg) , lactose (120 mg) e estearato de magnésio (5 mg) são misturados cuidadosamente e depois compactados para formar comprimido com marca única (215 mg de composições por comprimido).

Exemplo de formulação G: Suspensão para administração oral Os ingredientes seguintes são cuidadosamente misturados para formar uma suspensão para administração oral contendo 100 mg de ingrediente ativo por 10 ml de suspensão:

Ingredientes Quantidade

30

Sal da invenção Ácido fumárico Cloreto de sódio

0,1 g 0,5 g 2,0 g Metil parabeno Propil parabeno Açúcar granulado Sorbitol (solução 70%) Veegum k (Vanderbilt Co.) Flavorizante

25,5 g

0,15 g

12,85 g

0, 05 g

1,0 g

0,035 ml

Colorantes Água destilada

q.s. até 100 ml

0,5 mg

Exemplo de formulação H: Composição de pó seco

Um sal micronizado da invenção (1 mg) é misturado com lactose (25 mg) e depois carregado em um cartucho de inalação de gelatina. 0 conteúdo do cartucho é administrado usando um inalador de pó.

Exemplo de formulação J: Formulação injetável

Um sal da invenção (0,1 g) é misturado com 0,1 M de solução tampão de citrato de sódio (15 ml). 0 pH da solução resultante é ajustado até o pH 6 com o uso de I N de ácido clorídrico aquoso ou I N de hidróxido de sódio aquoso. Soro fisiológico estéril em tampão de citrato é então adicionado para fornecer um volume total de 2 0 ml.

Será subentendido que qualquer forma de sal da invenção (ou seja, sal cristalino ou solvato) que seja adequada ao modo de administração em particular pode ser usada nas composições farmacêuticas discutidas acima. Utilidade

0 presente agente ativo, sulfato de 3-endo-(8-{2- [ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino]etil}-8- aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)benzamida, é um antagonista no receptor opióide μ e, portanto, espera-se que os sais da invenção sejam úteis para o tratamento de condições médicas mediadas por receptores opióides μ ou associadas à atividade do receptor opióide μ, ou seja, condições médicas que são atenuadas por tratamento com um antagonista do receptor opióide μ. Em particular, espera-se que os sais da 5 invenção sejam úteis para o tratamento de efeitos adversos associados ao uso de opióide analgésicos, ou seja, sintomas tais como constipação, esvaziamento gástrico diminuído, dor abdominal, distensão abdominal, náuseas, e refluxo gastresofágico, denominados coletivamente disfunção 10 intestinal induzida por opióides. Espera-se também que as presentes formas de sal sejam úteis para o tratamento de obstrução total do intestino pós-operatória, um distúrbio de motilidade reduzida do trato gastrintestinal que ocorre após cirurgia abdominal ou outra cirurgia. Além disso, foi 15 sugerido que compostos antagonistas do receptor opióide μ como, por exemplo, o composto 1, podem ser usados para reverter náuseas e vômitos induzidos por opióides.

Como foi demonstrado que o composto 1 aumenta a motilidade do trato gastrintestinal (GI) em modelos 2 0 animais, espera-se que os sais da invenção sejam úteis para o tratamento de distúrbios do trato GI causados por motilidade reduzida em mamíferos, incluindo seres humanos. Esses distúrbios da motilidade GI incluem, como ilustração, constipação crônica, constipação predominante na síndrome 25 do cólon irritável (C-IBS), gastroparesia diabética e idiopática, e dispepsia funcional.

Em um aspecto, portanto, a invenção fornece um método de aumento da motilidade do trato gastrintestinal em um mamífero, o método compreendendo a administração ao mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica que compreende um veículo farmaceuticamente aceitável e um sal da invenção.

Quando usados para tratar distúrbios de motilidade reduzida do trato GI ou outras condições mediadas por 5 receptores opióides μ, os sais da invenção tipicamente serão administrados oralmente em uma dose diária única ou em múltiplas doses ao dia, embora possam ser usadas outras formas de administração. Por exemplo, particularmente quando usados para tratar obstrução total do intestino pós10 operatória, os compostos da invenção podem ser administrados parenteralmente. A quantidade de agente ativo administrada por dose ou a quantidade total administrada por dia tipicamente será determinada por um médico, à luz das circunstâncias relevantes, incluindo a condição a ser 15 tratada, a via de administração escolhida, o composto específico administrado e sua atividade relativa, a idade, o peso e a resposta do paciente individual, a gravidade dos sintomas do paciente, e semelhantes.

As doses adequadas para o tratamento de distúrbios de

2 0 motilidade reduzida do trato GI ou outros distúrbios

mediados por receptores opióides μ irão variar de cerca de 0,0007 a cerca de 20 mg/kg/dia de agente ativo, incluindo de cerca de 0,0007 a cerca de 1,4 mg/kg/dia. Para um ser humano médio com 70 kg, essa seria uma quantidade de cerca de 0,05 a cerca de 100 mg por dia de agente ativo.

Em um aspecto da invenção, os compostos da invenção são usados para tratar disfunção intestinal induzida por opióides. Quando usados para tratar disfunção intestinal induzida por opióides, os compostos da invenção tipicamente

3 0 serão administrados oralmente em uma dose diária única ou em múltiplas doses ao dia. De preferência, a dose para o tratamento de disfunção intestinal induzida por opióides irá variar de cerca de 0,05 a cerca de 100 mg por dia.

Em outro aspecto da invenção, os compostos da invenção 5 são usados para tratar obstrução total do intestino pósoperatória. Quando usados para tratar obstrução total do intestino pós-operatória, os compostos da invenção tipicamente serão administrados por via oral ou intravenosa em uma dose diária única ou em múltiplas doses ao dia. De 10 preferência, a dose para o tratamento de obstrução total do intestino pós-operatória irá variar de cerca de 0,05 a cerca de 100 mg por dia.

A invenção também fornece um método de tratamento de um mamífero que possui uma doença ou condição associado à 15 atividade do receptor opióide μ, o método compreendendo a administração ao mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção ou de uma composição farmacêutica que compreende um composto da invenção.

2 0 O presente agente ativo é opcionalmente administrado

em combinação com outro agente ou agentes terapêuticos, em particular, em combinação com agentes pró-cinéticos que atuam por meio de mecanismos opióides não μ. Conseqüentemente, em outro aspecto, os métodos e 25 composições da invenção ainda compreendem uma quantidade terapeuticamente eficaz de outro agente pró-cinético.

Como descrito acima, os sais da invenção são antagonistas do receptor opióide μ. A invenção ainda fornece, portanto, um método de antagonismo de um receptor

3 0 opióide μ em um mamífero, o método compreendendo a administração de um sal da invenção ao mamífero.

Entre outras propriedades, verificou-se que o presente agente ativo em forma de base livre e de sal de sulfato exibe ligação potente aos receptores opióides μ e pouco ou 5 nenhum agonismo em ensaios funcionais do receptor μ. Portanto, os sais da invenção são antagonistas potentes do receptor opióide μ. Além disso, o agente ativo demonstrou predominantemente atividade periférica, quando comparada com atividade do sistema nervoso central em modelos 10 animais. Portanto, espera-se que os sais da invenção revertam reduções induzidas por opióides da motilidade GI, sem interferência com os efeitos centrais benéficos de analgesia. Essas propriedades, bem como a utilidade dos compostos da invenção, podem ser demonstradas com a 15 utilização de vários ensaios in vitro e in vivo bem conhecidos por aqueles habilitados na técnica. Ensaios representativos são descritos com mais detalhe nos exemplos seguintes.

EXEMPLOS

Os exemplos sintéticos e biológicos a seguir são

oferecidos para ilustrar a invenção, e não devem ser considerados de modo algum como limitantes do escopo da invenção. Nos exemplos abaixo, as seguintes abreviações possuem os seguintes significados, a menos que indicado de 25 forma diferente. As abreviações não definidas abaixo possuem seus significados geralmente aceitos.

DIPEA = N1N- diisopropiletilamina DMF = N1N- dimetilformamida

EtOAc = acetato de etila

3 0 EtOH = etanol MeTHF = 2-metiltetrahidrofurano

MTBE = terc-butil metil éter

NaHMDS = bis(trimetilsilil)amida de sódio

PyBop = hexafluorfosfato de benzotriazol-1- iloxitripirrolidino-fosfônio

psi = libras por polegada quadrada

Rt = tempo de retenção

THF = tetrahidrofurano

Reagentes e solventes foram adquiridos de fornecedores comerciais (Aldrich, Fluka, Sigma etc.), e usados sem purificação adicional. As reações foram executadas sob atmosfera de nitrogênio, a menos que observado de forma diferente. O progresso das misturas de reação foi monitorado por cromatografia de camada delgada (TLC), cromatografia analítica líquida de alta performance (HPLC anal.), e espectrometria de massa. As proporções endo/exo de produtos foram determinadas por análise por HPLC usando os protocolos descritos abaixo. As misturas de reação foram constituídas como descrito especificamente em cada reação; comumente, elas foram purificadas por extração e outros métodos de purificação como, por exemplo, cristalização dependente de temperatura e de solvente, e precipitação. A caracterização de produtos de reação foi feita rotineiramente por espectrometria de massa e 1H-RNM. Para medida de RNM, as amostras foram dissolvidas em solvente deuterado (CD3OD, CDCl3 ou DMS0-d6) , e os espectros de 1HRNM foram adquiridos com um instrumento Varian Gemini 2 0 00 (300 MHz) sob condições de observação padronizadas. A identificação espectrométrica de massa dos compostos foi 3 0 realizada por um método de ionização por eletrospray (ESMS) com um instrumento de Applied Biosystems (Foster City, CA) modelo API 15 0 EX ou com um instrumento de Agilent (Paio Alto, CA) modelo 1100 LC/MSD.

Condições gerais de HPLC Coluna: Zorbax SB-Aq, 5 μπκ 4,6 x 250 mm

Temperatura da coluna: 4O0C Taxa de fluxo: 1,0 ml/min

Fases móveis: A = Água/ACN (98:2) + TFA 0,1%

B = Água/ACN (10:90) + TFA 0,1%,

Volume de injeção: 10 μΐ

Comprimento de onda do detector: 214 nm Método de HPLC 1

Os compostos brutos foram dissolvidos em Água/ACN (50:50) a cerca de 1 mg/ml e analisados usando o seguinte gradiente ao longo de 20 minutos (tempo (min)/% de B) : 0/10, 2,5/20, 9/75, 15/90, 17/90, 18/10, 20/10.

Método de HPLC 2

Os compostos foram dissolvidos em Água/ACN (90:10) a cerca de 1 mg/ml e analisados usando o seguinte gradiente ao longo de 30 minutos (tempo (min)/% de B) : 0/10, 13/10, 23/65, 28/90, 29/90, 30/10.

Método de HPLC 3

Os compostos foram dissolvidos em Água/ACN (90:10) a cerca de 1 mg/ml e analisados usando o seguinte gradiente ao longo de 55 minutos (tempo (min)/% de B) : 0/10, 10/20, 46/75, 47/90, 50/10, 55/10.

Preparação 1: Síntese de aduto de bissulfito de benzil éster de ácido W-ciclohexilmetil-(2-oxoetil)-carbâmico

a. Preparação de W-ciclohexilmetil-(2,2-dietoxietil)

3 0 amina A uma mistura de 2,2-dietoxietilamina (209 ml, 1,43 mol) e MeTHF (1.050 litros), foi adicionado ciclohexanocarbaldeído (107 ml, 0,89 mol). A mistura de reação foi agitada por 3 0 minutos em temperatura ambiente e 5 resfriada até 0°C. Triacetoxiborohidreto de sódio (378 g, 1,7 9 mol) foi adicionado ao longo de 4 0 minutos e a mistura de reação foi agitada por 2 horas e resfriada até 0°C. Um M de NaOH (1 litro) foi adicionado. A camada orgânica foi lavada com salmoura em água (1:1, 2x1 litro) e o volume 10 foi reduzido até aproximadamente 20%. MeTHF (1 litro) foi adicionado, e o volume reduzido até aproximadamente 20%. A solução do intermediário do título bruto foi usada diretamente na etapa seguinte.

b. Preparação de benzil éster de ácido N

ciclohexilmetil-(2,2-dietoxietil)carbâmico

Ao produto da etapa prévia (~ 213 g, ~ 0,9 mol), foram adicionados MeTHF (2 litros) e DIPEA (233 ml, 1,34 mol). A mistura de reação foi resfriada até O0C e cloroformato de benzila (140 ml, 0,98 mol) foi adicionado gota a gota. A 20 mistura de reação foi agitada por 3 0 minutos a 0°C, por 2 horas, a O0C até a temperatura ambiente, e depois por 1 hora em temperatura ambiente. Água (1,6 litro) foi adicionada, e a mistura de reação foi agitada por 10 minutos. As fases foram separadas e a camada orgânica foi 25 lavada com bicarbonato de sódio (1,6 litro) e água (1,6 litro). As camadas foram separadas e a camada orgânica foi reduzida até cerca de 20%. MeTHF (1 litro) foi adicionado e o volume reduzido até aproximadamente 20%. A solução do intermediário do título bruto foi usada diretamente na

3 0 etapa seguinte. c. Síntese de aduto de bissulfito de benzil éster de ácido N-ciclohexilmetil-(2-oxoetil)-carbâmico

Ao produto da etapa prévia (~ 302 g, ~ 0,62 mol) e acetonitrila (2 litros) , foi adicionado I M de HCl (2 5 litros) , e a mistura de reação foi agitada a 300C por 7 horas. Acetato de etila (2 litros) foi adicionado, e a mistura de reação foi agitada por 10 minutos. As fases foram separadas, a camada orgânica foi lavada com I M de HCl (1,5 litro), as fases foram novamente separadas, e a 10 camada orgânica foi lavada com 0,5 M de HCl (1 litro) . Bissulfito de sódio (71,4 g, 0,69 mol) foi adicionado, e a mistura de reação foi agitada de um dia para o outro, e depois filtrada. O reator e o bolo do filtro foram lavados com acetato de etila (1 litro). A solução resultante foi 15 seca ao ar por 2 horas e sob vácuo de um dia para o outro para fornecer o composto do título como um sólido branco (199 g, >99% de pureza da área por HPLC) . 0 filtrado foi tratado pelo mesmo procedimento para fornecer um segundo lote do composto do título (30 g).

Preparação 2: Síntese de 3-endo-(8-azabiciclo [3.2.1]

oct-3-il)-benzamida

a. Preparação de 8-benzil-3-exo-(3-metoxifenil)-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-ol

A um frasco de 3 litros, foi adicionado pó de cloreto 25 ceroso (194 g, 0,79 mol). 0 frasco foi depurado com nitrogênio e THF (8 00 ml) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada a 25 0C por 1 hora. À mistura, foi adicionado aproximadamente I M de brometo de 3-metoxifenil magnésio em THF (800 ml, 0,87 mol) gota a gota. O caldo 30 resultante foi agitado a 3°C por 1,5 hora. Uma solução de 8-benzil-8-aza-biciclo[3.2.1]octan-3-ona (120,4 g, 0,56 mol) em THF (200 ml) foi então adicionada gota a gota, mantendo a temperatura interna em -50C. A solução resultante foi agitada por 15 minutos. A mistura de reação 5 foi adicionada a um frasco contendo 6 N de HCl (800 ml) , mantendo a temperatura a 10°C . Após o solvente ter sido removido por evaporação rotatória, a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. Os sólidos foram isolados por filtração, lavados com 6 N de 10 HCl (70 ml) e acetonitrila (3 x 70 ml) e secos, para fornecer o sal de HCl do intermediário do título como um sólido esbranquiçado (161 g).

b. Preparação de 8-benzil-3-(3-metoxifenil)-8- azabiciclo[3.2.1]oct-2-eno A um frasco de 3 litros, foram adicionados cloridrato

de 8-benzil-3-exo-(3-metoxifenil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan3-ol (383,9 g, 1,06 mol), 6 M de HCl (800 ml) e MeTHF (200 ml) . O caldo resultante foi aquecido a 700C por 2,5 horas sob nitrogênio. A mistura de reação foi transferida para um reator de 12 litros e resfriada até 10°C. 0 frasco de reação foi lavado com MeTHF (1 litro) que foi adicionado ao reator de 12 litros. NaOH (50% do peso em água, 200 ml) foi adicionado, e mais NaOH (50% do peso, 150 ml) foi adicionado em porções até que fosse alcançado o pH de aproximadamente 13. As fases foram separadas, a camada de água foi extraída com MeTHF (1 litro) , e as camadas de MeTHF combinadas foram lavadas com salmoura (1 litro). O solvente foi reduzido por evaporação rotatória a 30 a 40°C, gerando o intermediário do título (360 g) como um óleo espesso. EtOH (1,5 litro) foi adicionado, e o volume foi reduzido até aproximadamente 500 ml e depois ajustado até 18 litro.

c. Preparação de 3-endo-(3-metoxifenil)-8-azabiciclo [3.2.1]octano

Ao 8-benzil-3-(3-metoxifenil)-8-azabiciclo[3.2.1]oct

2-eno (em EtOH 95%, 400 ml, 0,20 mol), preparado na etapa prévia, foram adicionados 6 M de de HCl (45 ml) e depois MeTHF (50 ml) . A mistura de reação foi depurada com nitrogênio, aquecida até 40°C, e paládio sobre carbono (10%

do peso, 8 g) foi adicionado. 0 reator foi pressurizado com hidrogênio (3 x 137,89 kPa) e depois hidrogenado a 137,89 kPa a 40°C por 18 horas. A mistura de reação foi filtrada através de Celite, concentrada, lavada com MeTHF (2 x 100 ml), filtrada através de um filtro de vidro

áspero, lavada com MeTHF (10 ml) e seca no filtro para fornecer o sal de HCl do intermediário do título como um sólido branco (31 g, isômero único (isômero exo indetectável por HPLC)). Um adicional de 5,2 g de produto foi recuperado do licor-mãe.

d. Preparação de 3-endo-(8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il)

f enol

A um frasco de 500 ml, foram adicionados cloridrato de

3-endo-(3-metoxifenil)-8-azabiciclo[3.2.1]octano (115 g, 0,45 mol) e ácido hidrobrômico (48% do peso em água, 100

ml, 0,88 mol). A mistura foi aquecida até 120°C e mantida naquela temperatura por 24 horas com agitação. Mais solução de ácido hidrobrômico (25 ml) foi adicionada, e a mistura de reação foi aquecida com agitação por 6 horas e depois resfriada até 70°C. Acetonitrila (200 ml) foi adicionada, e

o caldo resultante foi resfriado até 10°C e depois filtrado, e o bolo do filtro foi lavado com acetonitrila (50 ml) para gerar o sal de HBr do intermediário do título (99 g, > 99% puro) como um sólido granular branco.

e. Preparação de 2,2,2-triflúor-1-[3-endo-(3- hidroxifenil)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-8-il]etanona

A uma solução de hidrobrometo de 3-endo-(8- azabiciclo[3.2.1]oct-3-il)-fenol (54,4 g, 0,19 mol), tolueno (210 ml) e trietilamina (40 ml, 0,29 mol), foi adicionado anidrido trifluoracético (54 ml, 0,3 8 mol) ao

longo de 20 minutos. A mistura de reação foi agitada a 40°C por 2 horas. Acetato de etila (3 70 ml) e salmoura em água (1:1, 265 ml) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada por 15 minutos, as fases foram separadas. À camada orgânica, foi adicionado bicarbonato de sódio saturado

(300 ml) , e a mistura foi agitada vigorosamente de um dia para o outro. As fases foram separadas e a camada orgânica foi lavada com salmoura em água (1:1, 265 ml) seca sobre sulfato de sódio e a maior parte do solvente foi removida por evaporação rotatória. Tolueno (100 ml) foi adicionado,

2 0 e o solvente removido por evaporação rotatória para

fornecer o intermediário do título bruto.

f. Preparação de éster 3-endo-[8-(2,2,2-triflúoracetil)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il]fenílico de ácido trifluormetanossulfônico

A um frasco de 500 ml, foram adicionadas a solução de

acetato de etila (220 ml) do intermediário da etapa prévia (32,8 g, 0,11 mol) e trietilamina (23 ml, 0,17 mol). A solução foi resfriada até 50C e cloreto de trifluormetano sulfonil (14 ml, 0,13 mol) foi adicionado gota a gota.

3 0 Deixou-se que a mistura aquecesse até 25 °C, e ela foi agitada naquela temperatura por 1 hora. Bicarbonato de sódio saturado (2 00 ml) foi adicionado, as camadas foram separadas, salmoura (150 ml) foi adicionada à camada orgânica, as camadas foram novamente separadas, e o 5 solvente foi removido da camada orgânica para fornecer o intermediário do título bruto.

g. Preparação de 3-endo-[8-(2,2,2-trifluoracetil)-8- azabiciclo[3.2.1]oct-3-il]-benzonitrila

A um frasco de 100 ml, foram adicionados éster 3-endo[8 -(2,2,2-triflúor-acetil)- 8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il]

fenílico de ácido trifluormetanossulfônico (25,3 g, 58,7 mmol), tris(dibenzilidenoacetona) dipaládio (0) (0,81g, 0,9 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino) ferroceno (1,01 g, 1,8 mmol) e cianeto de zinco (4,2 g, 35,8 mmol). 0 frasco foi 15 depurado três vezes com nitrogênio por 5 minutos e depois colocado sob um abrigo a vácuo por 5 minutos. Ao frasco, foram adicionados DMF (150 ml) e água destilada (2,5 ml). A solução foi depurada com nitrogênio com agitação por 10 minutos, aquecida até 1200C e agitada a 1200C sob 20 nitrogênio por 4 horas. Quando a reação estava completada, 20 g de produto de um lote prévio, preparado pelo mesmo procedimento, foram adicionados e agitados por 20 minutos.

A maior do solvente foi removida por destilação, e a solução foi resfriada até 22°C. À solução, foi adicionado 25 acetato de etila (445 ml) , e a solução resultante foi filtrada através de Celite. Bicarbonato de sódio (450 ml) foi adicionado, e a solução foi agitada por 15 minutos. As camadas foram separadas, e a camada orgânica foi lavada com salmoura diluída (2 x 95 ml) , e filtrada através de sulfato 30 de sódio. 0 volume foi reduzido até cerca de 50 ml por remoção de acetato de etila. Álcool isopropílico (150 ml) foi adicionado, e a solução foi agitada a 220C por 1 hora. Os sólidos foram isolados por filtração e lavados com álcool isopropílico (2 x 25 ml) para fornecer o 5 intermediário do título (33,5 g, 100% puro por HPLC) como um sólido esbranquiçado/marrom claro. Um segundo lote de produto (6,3 g, > 98% puro por HPLC) foi isolado do filtrado.

h. Síntese de 3-endo-(8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-il)benzamida

Uma solução de 3-endo-[8-(2,2,2-trifluoracetil)-8- azabiciclo[3.2.1]oct-3-il]-benzonitrila (10 g, 32 mmol) em ácido sulfúrico (96%, 12 ml) foi aquecida até 50°C com agitação e mantida naquela temperatura com agitação por 2 15 horas. A mistura de reação foi resfriada até 22°C e adicionada lentamente a um frasco de 500 ml contendo 5 N de NaOH (90 ml) e metanol (100 ml), que foi resfriado até 10°C. Os precipitados de sal foram filtrados e o filtrado foi agitado a 22°C por 1 hora. A mistura de reação foi

2 0 concentrada sob pressão reduzida. Ao resíduo foi adicionado MeTHF (150 ml) , e a mistura de reação foi agitada a 22°C por 5 minutos. As camadas foram separadas e MeTHF (100 ml) foi adicionado ã camada aquosa. As camadas foram separadas e salmoura (150 ml) foi adicionada às camadas orgânicas 25 combinadas. As camadas foram separadas, e a camada orgânica foi seca sobre carbonato de potássio e filtrada, e o solvente foi removido. Uma mistura de EtOH (25 ml) e HCl concentrado (2,6 ml) foi adicionada ao resíduo com agitação, e depois MTBE (25 ml) foi adicionado e a solução 30 foi agitada a 22°C. Os sólidos precipitados foram filtrados e secos ao ar para fornecer o sal de HCl do composto do título (8 g, 97% de pureza por HPLC) como um sólido branco.

Preparação 3: Síntese de 3-endo-(8-azabiciclo [3.2.1] oct-3-il)benzamida a. Preparação de 8-benzil-8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-en

3-il éster de ácido triflúor-metanossulfônico

A um frasco de 500 ml, foram adicionados cloridrato de 8-benzil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-ona (50,4 g, 200 mmol), EtOAc (160 ml) e 4 N de NaOH (50 ml) . A mistura de reação

foi aquecida até 3O0C e agitada naquela temperatura por 1 hora. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi descartada. 0 total da camada orgânica foi reduzido até aproximadamente 4 0 ml por evaporação rotatória e THF (270 ml) foi adicionado.

A solução resultante foi adicionada a um frasco de 1

litro e resfriada até -20°C. Uma solução de NaHMDS (I M em THF, 23 0 ml, 23 0 mmol) foi adicionada ao frasco ao longo de 15 minutos. A mistura de reação foi agitada a -20 ± 5°C por

1 hora. N-fenil-bis(trifluormetanossulfonimida) (82,2 g,

2 0 23 0 mmol) foi adicionada à mistura de reação em porções ao

longo de 5 minutos, e a mistura foi agitada a -20°C até 10°C por 1 hora. À mistura de reação, foi adicionado I N de NaOH (200 ml), e deixou-se que a mistura fosse aquecida até 220C com agitação. 0 solvente foi parcialmente removido por

evaporação rotatória a 30°C até um total de 450 ml. À mistura de reação restante, foram adicionados EtOAc (3 00 ml) e heptano (150 ml). A mistura foi agitada a 22°C por 5 minutos. As camadas foram separadas, e a camada aquosa foi descartada. A camada orgânica foi lavada com I N de NaOH (3

3 0 x 4 50 ml) . As camadas aquosas foram descartadas. A camada orgânica foi concentrada por evaporação rotatória para fornecer o intermediário do título (77 g, >96% de pureza pelo Método de HPLC 1).

1H RNM (dg-DMSO, 400 MHz) : δ (ppm) 7, 25-7,35 (m, 5H) , 5 6,05 (d, J = 5,2, 1H) , 3,64 (q, J = 13,2, 2H) , 3,40-3,44 (m, 2H) , 2,77 (d, J = 16,4, 1H) , 1,79-2,09 (m, 5H) , 1,52- 1,59 (m, 1H).

b. Preparação de 3-(8-benzil-8-azabiciclo [3.2.1]oct-2- en-3-il)benzamida

Ao produto bruto da etapa prévia, foi adicionado THF

(420 ml) , e a solução foi depurada com nitrogênio por 5 minutos. A um frasco de 2 litros, foram adicionados ácido 3-carbamoilfenil borônico (98%, 33,0 g, 200 mmol), acetato de paládio (II) (98%, 0,46 g, 2 mmol), 1,1'15 bis(difenilfosfino)ferroceno (97%, 1,1 g, 2 mmol) e fluoreto de potássio (34,9 g, 600 mmol), seguidos pela solução em THF de 8-benzil-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-2-en-3-

il éster ácido triflúor-metanossulfônico. A mistura resultante foi depurada com nitrogênio por 5 minutos, aquecida até o refluxo (67°C) sob nitrogênio e agitada por

2 horas. A mistura de reação foi resfriada até 30°C, e depois EtOAc (500 ml) e I N de NaOH (500 ml) foram adicionados, e a mistura foi agitada a 22°C por 10 minutos. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi 25 descartada. A camada orgânica foi lavada com uma mistura de salmoura (250 ml) e água (250 ml) e agitada por 5 minutos. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi descartada, a camada orgânica foi brevemente seca sobre Na2SO4, filtrada, e o solvente foi parcialmente removido. O 3 0 produto se precipitou como sólidos amarelo claros durante a remoção do solvente. 0 caldo resultante (cerca de 2 00 ml) foi filtrado, e os sólidos foram lavados com EtOAc gelado (0°C, 100 ml) e secos sob alto vácuo a 25°C para fornecer o intermediário do titulo (42,5 g) como um sólido amarelo claro.

O licor-mãe e as lavagens acima foram combinados e concentrados, e o caldo resultante (cerca de 100 ml) foi agitado a 5°C por 30 minutos e filtrado. Os sólidos filtrados foram lavados com EtOAc gelado (0°C, 30 ml) e 10 secos sob alto vácuo para fornecer um segundo lote do intermediário do título (7 g, rendimento combinado de 78%, > 98,5% puro pelo Método de HPLC 1).

(m/z): [M+H]+ calculado para C2IH22N2O, 319,18; encontrado 319,4. 1H RNM (CDCl3, 400 MHz): δ (ppm) 7,9 (s, 15 1H) , 7,63 (d, J = 6,4, 1H) , 7,57 (d, J = 6,4, 1H) , 7,21- 7,42 (m, 6H), 6,38 (d, J = 4,4, 1H), 6,13 (s, br, 1H), 5,83 (s, br, 1H), 3,68-3,76 (m, 2H), 3,46-3,51 (m, 2H), 2,92 (d, J = 17,2, 1H) , 2,18-2,26 (m, 1H) , 2,04-2,12 (m, 2H) , 1,86- 1,92 (m, 1H), 1,58-1,65 (m, 1H).

c. Síntese de 3-endo-(8-azabiciclo[3.2.1]oct-3-

il)benzamida

A um vaso de hidrogenação de 1 litro, foram adicionados 3-(8-benzil-8-azabiciclo[3.2.1]oct-2-en-3-

il)benzamida (40 g, 125 mmol), EtOH (800 ml), 6 M de HCl 25 (42 ml) e água (80 ml), e a mistura foi agitada a 22°C até que a dissolução completa fosse observada. A mistura de reação foi depurada com nitrogênio por 5 minutos enquanto era aquecida até 30°C ao longo de 5 minutos. À mistura, foi adicionado Pd/C 10% do peso (50% em água, 4 g) . A mistura 30 foi depurada na pressão atmosférica com hidrogênio por 5-10 minutos durante aquecimento. A mistura foi agitada a 500C sob um flixxio de hidrogênio a < 34,47 kPa (< 0,34 atmosfera) por 5 horas, resultando em uma conversão >99% dos reagentes, de acordo com análise por HPLC. A solução foi 5 resfriada até 30°C e filtrada através de Celite para fornecer uma solução do sal de HCl bruto do composto do título com uma proporção endo-.exo de aproximadamente 93:7 pelo Método de HPLC 2; Rt endo = 10,97, Rt exo = 12,67. (m/z): [M+H] + calculado para Ci4Hi8N2O, 231,15; encontrado 10 231,2.

A água foi removida do produto bruto por destilação azeotrópica a 3 O0C em EtOH (aproximadamente 8 0 ml) para fornecer um caldo que foi aquecido até 60°C até a dissolução completa. A solução foi resfriada até 35°C e foram adicionados cristais de semeadura do produto (0,05 g) (os cristais de semeadura foram preparados de acordo com o processo descrito na Preparação 2) . 0 caldo resultante foi agitado a 22°C por 30 minutos, MTBE (120 ml) foi adicionado lentamente, e o caldo foi agitado a 220C por 4 horas, e depois a 0°C por 1 hora. Os sólidos resultantes foram filtrados, lavados com EtOH gelado e secos sob alto vácuo para fornecer o sal de HCl do composto do título (24,5 g) como um pó branco (75% de rendimento, >98,5% de pureza < 0,4% de isômero exo pelo Método de HPLC 3, Rt endo = 8,67, Rt exo = 9,43).

(m/z): [M+H]+ calculado para Ci4Hi8N2O 231,15; encontrado 231,2. 1H RNM (de-DMS0, 400 MHz) : δ (ppm) 9,13 (s, br, 1H) , 9,03 (s, br, 1H), 8,05 (s, 1H) , 7,93 (s, 1H) , 7,73 (d, J = 7,6, 1H), 7,58 (d, J = 7,6, 1H), 7,40 (t, J = 7,6, 2H) , 3,97 (s, 2H) , 3,17-3,23 (m, 1H) , 2,39-2,46 (m, 2Η) , 2,19-2,24 (m, 2Η) , 1,86-1,89 (m, 2Η) , 1,59-1,63 (m, 2Η) .

Exemplo ΙΑ: Síntese de sulfato cristalino de 3-endo(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil)

amino]etil}-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)benzamida

a. Preparação de benzil éster de ácido Nciclohexilmetil-(2-oxoetil)-carbâmico

A um frasco de 10 0 ml, foram adicionados aduto de bissulfito de benzil éster de ácido N-ciclohexilmetil-(2- 10 oxoetil)-carbâmico (3,94 g, I mmol) e MeTHF (35 ml), seguidos por água (25 ml) . O caldo resultante foi agitado em temperatura ambiente por 5 minutos e I M de NaOH (8 ml) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 4 5 minutos. As camadas foram 15 separadas, e o total da camada orgânica foi reduzido até aproximadamente 8 ml para fornecer o intermediário do título bruto.

b. Preparação de benzil éster de ácido 2-[3-endo-(3- carbamoilfenil)- 8-azabiciclo[3.2.1]oct-8-il]-etil}

ciclohexilmetil-carbâmico

Ao produto da etapa prévia, foi adicionado DMF (15 ml), seguido por cloridrato de 3-endo-(8-

azabiciclo[3.2.1]oct-3-il)-benzamida (2,67 g, 1 mmol) e depois DMF (10 ml) . A mistura foi agitada em temperatura 25 ambiente por 30 minutos, resfriada até 10°C, e depois foi adicionado triacetoxiborohidreto de sódio (4,25 g, 2 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 90 minutos e depois resfriada até 10°C. Acetato de isopropila (100 ml) foi adicionado, seguido por I M de NaOH 30 (50 ml) . A mistura foi agitada por 15 minutos, e as fases foram separadas. A camada orgânica foi lavada com salmoura em água (1:1, 2 x 50 ml), e o total da camada orgânica foi reduzido até aproximadamente 10 ml para fornecer o intermediário do título bruto.

c. Preparação de 3-endo-{8-[2-(ciclohexilmetilamino)

etil]-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il}benzamida

Ao produto da etapa prévia, foram adicionados EtOH (30 ml) e HCl concentrado (1,5 ml). A solução foi depurada com nitrogênio, paládio sobre carbono 10% (470 mg) foi adicionado, e a mistura foi depurada com nitrogênio por 5 minutos, e depois hidrogenada a 2 06,84 kPa de um dia para o outro. Após depuração com nitrogênio por 2 minutos, a solução foi filtrada através de Celite, e o solvente foi removido até aproximadamente 10 ml. Acetato de isopropila (40 ml) e I M de NaOH (20 ml) foram adicionados. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada com salmoura (2 0 ml), as fases foram separadas e o solvente orgânico removido até 5-10 ml. Acetato de isopropila (20 ml) foi adicionado e o volume reduzido até aproximadamente 8 ml, ao qual acetato de isopropila (20 ml) foi adicionado. O caldo resultante foi agitado em temperatura ambiente por 2 horas.

O produto foi isolado por filtração, o frasco de reação e o bolo do filtro foram lavados com acetato de isopropila (10 ml) para gerar o intermediário do título (2,4 g, 98% puro) como um sólido esbranquiçado.

d. Preparação de sulfato de 3-endo-(8 -{2 [ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino]etil}-8- aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)benzamida (forma de hidrato)

A um frasco de 500 ml, foram adicionados 3-endo-{8-[2-

3 0 (ciclohexilmetilamino)etil]-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il} benzamida (31 g, 83,9 mmol) e DMF (150 ml). A mistura foi agitada por 10 minutos, e depois foram adicionados hexafluorfosfato de benzotriazol-l-iloxitris(pirrolidino)fosfônio (56,8 g, 109 mmol) e (4S)-2,2-dimetil-1,3 5 dioxolano-4-carboxilato de litio (15,6 g, 92,3 mmol), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas. Acetato de etila (600 ml) e 0,5 M de NaOH (3 00 ml) foram adicionados, e as fases foram separadas. A camada orgânica continha {2- [3- (3-carbamoil-fenil)-8-azabiciclo[3.2.1] oct10 8-il]etil}ciclohexilmetil-amida de ácido (S)-2,2-dimetil[1,3]dioxolano-4-carboxílico bruta (aproximadamente 84 mmol), que não foi isolada.

A camada orgânica foi lavada com salmoura em água (1:1, 2 x 300 ml) e as fases foram separadas. À camada 15 orgânica, foram adicionados 2 M de H2SO4 (42 ml) , e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. Acetonitrila (3 00 ml) foi adicionada, e o caldo resultante foi agitado por 2 horas. 0 produto foi isolado por filtração, o bolo do filtro foi lavado com 20 acetonitrila (200 ml) , seco ao ar por 2 horas e depois sob vácuo em temperatura ambiente por 20 horas para fornecer o composto do título (40 g, 97% puro por HPLC) como um pó branco.

e. Síntese de sulfato cristalino de 3-endo-(8 -{2 [ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino]etil}-8- aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)benzamida

A um frasco de 100 ml, foi adicionada a forma de hidrato sulfato de 3-endo-(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)-2,3- diidroxi-propionil)amino]etil}-8-aza-biciclo [3.2.1]oct-3-

3 0 il) benzamida (2 g) e MeOH (4 0 ml) . 0 caldo resultante foi aquecido até 650C sob nitrogênio por 2 0 minutos, resultando em dissolução completa. A solução foi resfriada até a temperatura ambiente com agitação. Cerca de 20 ml de solvente foram removidos sob ligeiramente pressão reduzida, 5 e o caldo resultante agitado em temperatura ambiente de um dia para o outro. 0 produto foi isolado por filtração, e o frasco e o bolo do filtro foram lavados com acetonitrila (2x5 ml) . O bolo do filtro foi seco ao ar por 2 horas e depois sob vácuo em temperatura ambiente de um dia para o 10 outro para fornecer o composto do título (1,71 g, > 99% puro por HPLC, aproximadamente 85% de rendimento) como um pó branco.

Uma amostra preparada de acordo com o procedimento acima foi caracterizada por 1H RNM (4 00 MHz, DMSO d6) : δ 15 (ppm) 9,08 & 8,94 (dois conjuntos de brs, 1H) , 7,99-8,04 (m, 2H) , 7,74-7,76 (m, 1H) , 7,68-7,70 (m, 1H) , 7,41-7,45 (m, 2H) , 4,81, 5,00 e 5,30 (três conjuntos de brs, 2H) , 4,34 (m deformado, 1H) , 4,00 & 4,05 (m deformado, 2H) , 3,01-3,25 e 3,47-3,55 e 3,75-3,82 (três conjuntos de m, 20 10H) , 2,50-2,55 (m, 2H) , 1,99 (m deformado, 2H) , 1,56- 1,70(m, 8H), 1,15-1,19 (m, 3H), 0,89-0,99 (m, 2H).

Exemplo IB: Síntese de sulfato cristalino de 3-endo(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino] etil}-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)benzamida a. Preparação de sulfato de 3-endo-(8-{2-

[ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino]etil}-8- aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)benzamida

Uma mistura de 3-endo-{8-[2-(ciclohexilmetilamino) etil]-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il}benzamida (100 g, 270,6 mmol) e DMF (480 ml) foi agitada por 10 minutos e depois resfriada a 0°C. Hexafluorfosfato de benzotriazol-1- iloxitris(pirrolidino)fosfônio (183 g, 352 mmol) e lítio (4S)-2,2-dimetil-l,3-dioxolano-4-carboxilato (49,3 g, 324 mmol) foram adicionados em uma porção a 0°C. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 6 horas. Acetato de isopropila (2,0 I) e I M de NaOH (1,0 1) foram adicionados, a mistura de reação foi agitada por 15 minutos, e as fases foram separadas. A camada orgânica foi lavada com salmoura em água (1:1, 2 x 1,0 litro) e as fases foram separadas. A camada orgânica foi reduzida até um quarto do volume (aproximadamente 500 ml) , acetonitrila (500 ml) foi adicionada, e a mistura de reação foi agitada até homogênea, para fornecer uma solução de intermediário 2-[3-endo-(3-carbamoil-fenil)-8-azabiciclo[3.2.1]oct-8-il]etil-ciclohexilmetil-amida de ácido (S)-2,2-dimetil-l,3- dioxolano-4-carboxíIico em acetato de isopropila e acetonitrila.

Uma alíquota da solução de intermediário acima (3,03 g, 6,09 mmol) em acetato de isopropila/acetonitrila (22,5 ml) foi combinada com 2,0 M de ácido sulfúrico em água (3,68 ml) e mantida a 25°C por 20 horas, e depois mantida a 10°C com agitação por 5 horas. A solução da reação foi filtrada, e o bolo do filtro foi lavado com acetonitrila (25 ml) e seco, para gerar o sal de grau intermediário de sulfato do composto do título (2,91 g, 99,4% de pureza por HPLC) como um sólido branco, predominantemente na forma de hidrato cristalino.

b. Síntese de sulfato cristalino de 3-endo-(8-{2 [ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino]etil}-8- aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)benzamida Uma mistura do grau intermediário do sulfato de 3- endo-(8-2-[ciclohexilmetil-((S)-2, 3-diidroxi-propionil)amino]-etil-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)-benzamida (154,0 g, 277,1 mmol) preparado como na etapa prévia e metanol/10% 5 de água (616 ml) foi aquecida a 65°C ao longo de 45 minutos com agitação. A mistura de reação foi resfriada até 55°C, foram adicionados cristais de semeadura do produto do título (120 mg), a mistura de reação foi agitada a 55°C por

1 hora, e a temperatura foi reduzida até 20°C na taxa de 10 10°C/h, e depois mantida por 8 horas. A mistura de reação foi resfriada até 5°C, mantida por 30 minutos, e filtrada. 0 bolo do filtro foi lavado com metanol (2 x 25 ml) e seco de um dia para o outro sob alto vácuo para gerar o composto do título (126,3 g, 99,9% de pureza).

Exemplo 2: Recristalização de sulfato de 3-endo-(8-{2

[ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino]etil}-8- aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)benzamida (forma de hidrato)

O sulfato do Composto 1 (forma de hidrato) (920 mg) foi suspenso em acetonitrila (5 ml) e aquecido até 65°C. 20 Água (2,4 ml) foi então adicionada gota a gota até que a dissolução completa fosse obtida. A solução resultante foi resfriada até temperatura ambiente ao longo de 20 minutos. A nucleação foi observada por volta de 35°C. Os sólidos foram isolados por filtração a vácuo, lavados com 25 acetonitrila (5 ml) e secos para fornecer o composto do título.

Exemplo 3: Cristalização de sulfato de 3-endo-(8-{2- [ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino]etil}-8- aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)benzamida

3 0 O sulfato do Composto 1 (forma de hidrato) (50 mg) foi disperso em uma mistura solvente de água (10%) e metanol (90%) (0,83 ml) e aquecido até 60°C com agitação. Deixou-se que a solução resultante resfriasse até a temperatura ambiente ao longo de 2 horas. Os sólidos resultantes foram 5 isolados por filtração a vácuo para fornecer o composto do título (8 mg).

Exemplo 4: Cristalização de sulfato de 3-endo-(8-{2- [ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino]etil}-8- aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)benzamida O sulfato do Composto 1 (forma de hidrato) (42 mg) foi

disperso em uma mistura solvente de água (25%) e metanol (75%) (0,42 ml) e aquecido até 60°C com agitação. Deixou-se que a solução resultante resfriasse até a temperatura ambiente. 0 volume foi reduzido por 50% por evaporação 15 rotatória, e a solução foi deixada em temperatura ambiente de um dia para o outro. Os sólidos resultantes foram isolados por filtração a vácuo para fornecer o composto do título (8 mg).

Exemplo 5: Cristalização de sulfato de 3-endo-(8-{2- [ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil) amino] etil}-8- aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)benzamida

O Composto 1 (11 mg) foi dissolvido em uma mistura solvente de tolueno (22%) e acetonitrila (78%) (0,2 ml) . Acetonitrila (0,15 ml) foi adicionada, seguida por 0,04 M 25 de ácido sulfúrico em acetonitrila (0,59 ml). Formou-se um precipitado sólido mediante a adição de ácido. A mistura de reação foi deixada em temperatura ambiente por 12 horas. Os sólidos resultantes foram isolados por filtração para fornecer o composto do título.

Exemplo 6: Cristalização de sulfato de 3-endo-(8-{2- [ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino]etil}-8- aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)benzamida

0 Composto 1 (3 8 mg) foi dissolvido em diclorometano (0,5 ml). À solução, foi adicionado 0,04 M de ácido 5 sulfúrico em acetonitrila (1,91 ml). Formou-se um precipitado sólido mediante a adição de ácido. A mistura de reação foi deixada em temperatura ambiente por 12 horas. Os sólidos resultantes foram isolados por filtração para fornecer o composto do título.

Exemplo 7: Cristalização de sulfato de 3-endo-(8-{2-

[ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino]etil}- 8 aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)benzamida

O Composto 1 (22 mg) foi dissolvido em uma mistura solvente de tolueno (23%) e acetonitrila (77%) (0,41 ml). À 15 solução, foi adicionado 0,04 M de ácido sulfúrico em acetonitrila (1,20 ml). Formou-se um precipitado sólido mediante a adição de ácido. Água (0,16 ml) foi adicionada à mistura de reação, dissolvendo o precipitado. A nucleação foi observada após 2 horas. Os sólidos resultantes foram 20 isolados por filtração a vácuo para fornecer o composto do título.

Exemplo 8: Cristalização de sulfato de 3-endo-(8-{2- [ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino]etil}-8- aza-biciclo [3.2.1]oct-3-il)benzamida (forma de hidrato)

O sulfato cristalino do Composto 1 (7,1 g) foi

dissolvido em uma mistura solvente de água (42 ml) e acetonitrila (25 ml). A solução foi liofilizada para produzir um sal amorfo de sulfato. 0 sal amorfo (6,6 g) foi disperso em uma mistura solvente de acetonitrila (75%) e água (25%) (34,6 ml) e aquecido até 65°C por 10 minutos com agitação, e deixou-se que resfriasse até que fosse alcançada a temperatura ambiente. Após 12 horas, os sólidos resultantes foram isolados por filtração a vácuo para fornecer o composto do título (5,4 g).

Exemplos 9-17: Propriedades das formas de sal da

invenção

Amostras do sal de sulfato cristalino de 3-endo-(8-{2- [ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino]etil}-8- aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)benzamida (composto 1)

preparadas como no Exemplo IA e do hidrato cristalino do sal de sulfato de composto 1, preparado como no Exemplo 2, foram analisadas por difração de pó com raios X (XRPD) , calorimetria de varredura diferencial (DSC), análise termogravimétrica (TGA), espectroscopia infravermelha (IR) 15 e cromatografia iônica.

Exemplo 10: Difração de pó com raios X

Os padrões de difração de pó com raios X das Figuras 1 e 4 foram obtidos com um difratômetro Rigaku usando radiação Cu Ka (30,0 kV, 15,0 mA) . A análise foi realizada

2 0 com o goniômetro executado em modo de varredura contínua de

3o por minuto, com um tamanho de etapa de 0,03° sobre uma gama de 2 a 40°. As amostras foram preparadas em suportes de amostras de quartzo como uma camada delgada de material em pó. O instrumento foi calibrado com um padrão de silício.

Exemplo 11: Análise térmica

A calorimetria de varredura diferencial (DSC) foi realizada usando um módulo de TA Instruments Modelo Q-100. Os dados foram coletados e analisados usando o software de

3 0 TA Instruments Thermal Advantage para Q Series™. Uma amostra de cerca de 1-10 mg foi pesada precisamente em uma bandeja de alumínio com tampa. A amostra foi avaliada usando uma rampa de aquecimento linear de 10°C/min de 50C até, tipicamente, 265°C. A célula DSC foi depurada com 5 nitrogênio seco durante o uso. Traçados de DSC representativos para as amostras do sal de sulfato cristalino e do hidrato cristalino de um sal de sulfato de composto 1 são mostrados nas Figuras 2 e 5, respectivamente.

A análise termogravimétrica (TGA) foi realizada usando

um módulo de TA Instruments Modelo Q-500. Os dados foram coletados e analisados usando o software de TA Instruments Thermal Advantage para Q Series™. Uma amostra pesando cerca de 1-5 mg foi colocada em uma badeja de alumínio em um

berço de platina e avaliada da temperatura ambiente até 300°C com uma taxa de aquecimento linear de 10°C/min. As câmaras de equilíbrio e da fornalha foram depuradas com nitrogênio durante o uso. Traçados de TGA representativos para as amostras de um sal de sulfato cristalino e de um

2 0 hidrato cristalino de um sal de sulfato de composto 1

também são mostrados nas Figuras 2 e 5, respectivamente.

Exemplo 12: Estimativa de Absorção dinâmica de umidade A avaliação da absorção dinâmica de umidade (DMS) foi realizada a 25 0C usando um sistema de VTI SGA-100 com

micro-equilíbrio atmosférico (VTI Corp., Hialeah, FL 33016). Foi usado um tamanho de amostra de aproximadamente 5-10 mg, e a umidade foi ajustada no valor ambiente no início da análise. Uma análise de DMS típica consistia em três varreduras: umidade relativa (RH) ambiente até 2%, 2%

3 0 de RH até 90% de RH, 90% de RH até 5% de RH em uma taxa de varredura de 5% de RH/etapa. A massa foi medida a cada dois minutos, e a RH era alterada para o valor seguinte (± 5% de RH) quando a massa da amostra era estável dentro de 0,02% para 5 pontos consecutivos. Traçados de DMS representativos

5 para as amostras de um sal de sulfato cristalino e de um hidrato cristalino de um sal de sulfato de composto 1 são mostrados nas Figuras 3 e 6, respectivamente.

Exemplo 13: Análise infravermelha

0 espectro de absorção infravermelha (IR) foi determinado ao longo da faixa de freqüência de 4.000 a

4 00 cm'1 usando um espectrômetro Avatar 3 60 FT-IR equipado com um módulo de espectroscopia por refletância difusa no infravermelho com transformada de Fourier (DRIFTS). Um espectro de absorção IR representativo para uma amostra de 15 um sal de sulfato cristalino da invenção teve bandas de absorção significativas a 430 ± 1, 590 ± 1, 639 ± 1, 705 ±

1, 867 ± 1, 1.036 ± 1, 1.053 ± 1, 1.105 ± 1, 1.171 ± 1, 1.231 ± 1, 1.277 ± 1, 1.375 ± 1, 1.391 ± 1, 1.452 ± 1, 1.476 ± 1, 1.553 ± 1, 1.596 ± 1, 1.639 ± 1, 1.664 ± 1, 2.852 ± 1, 2.907 ± 1, 2.928 ± 1, 2.967 ± 1, 3.168 ± 1 e 3.357 ± 1 cm'1.

Exemplo 14: Análise de estrutura cristal por difração de raios X

Um pedaço do cristal do sal de sulfato do Composto 1 25 com as dimensões de 0,43 x 0,05 x 0,031 mm foi montado em uma fibra de vidro. Os dados da estrutura cristal por difração de raios X foram obtidos usando um detector de área de raios X Bruker SMART 6K CCD com um diâmetro de janela de 13,5 cm, controlado pelo software SMART versão 30 5.630 (Bruker, 2003) usando radiação Cu Ka. A distância da amostra até o detector era de 5,03 9 cm. Os dados foram coletados em uma temperatura de -153 ± 1°C, e foram analisados usando o software SHELXS versão 6.14 (Bruker, 2003) . Os seguintes parâmetros de rede foram derivados: a 5 célula unitária é ortorrômbica com dimensões a = 6,8239 À, b = 16,2275 Â, c = 24,2021 Â, α = β = γ = 90°; volume celular (V) de 2680,0 Â3; densidade calculada é de 1,38 g/cm3; grupo espacial é Ρ2χ2ι2ι (#19) ; os picos de difração de pó com raios X previstos a partir das posições atômicas 10 derivadas de acordo com o software Mercury 1.4 foram avaliados por inspeção visual como estando perfeitamente de acordo com os resultados experimentais da Figura 1.

Exemplo 15: Avaliação da estabilidade em estado sólido Amostras do sal de sulfato da invenção foram armazenadas em múltiplos frascos de vidro abertos a 20°C e

6 0% de umidade relativa (RH) e a 40°C e 75% de RH. Em intervalos específicos, o conteúdo de um frasco representativo foi removido e analisado por DSC, TGA, PXRD, e por HPLC quanto à pureza química. Após 4 semanas de 20 armazenamento, não havia alteração detectável nos termogramas de DSC ou TGA, nem no padrão de XRPD de amostras armazenadas em qualquer uma das condições. A pureza química das amostras armazenadas por HPLC ficou inalterada em 99,7%.

Exemplo 16: Determinação do teor de contra-íon

Uma amostra do sal de sulfato da invenção foi analisada por cromatografia iônica de sulfato usando um sistema de cromatografia iônica Dionex ICS-2000 equipado com um supressor de ânion auto-regenerador, detector de 3 0 condutividade, coluna de troca aniônica analítica IonPac ASll-HC e coluna de guarda IonPac AGll-HC. O teor de sulfato da amostra foi determinado como sendo de 17,1%, o que pode ser comparado com um teor de sulfato teórico de 17,6% para um equivalente molar de íon sulfato por mole de composto parente.

Exemplo 17: Determinação do teor de água do hidrato Uma amostra do hidrato da invenção foi analisada por TGA acoplada à análise IR do material vaporizado durante perda de peso inicial. O traçado de TGA mostra uma perda de 10 peso de 3,2% abaixo de 100°C, que pode ser comparada com uma perda de peso teórica de 3,1% para um monoidrato do sulfato do Composto I. 0 espectro IR do material vaporizado era consistente com o espectro IR de referência da água.

Ensaio 1: Ensaio de ligação de radioligante em receptores opióides humanos μ, humanos Delta e de porquinho-da-índia Kappa

a. Preparação de membrana

Células CHO-Kl (Ovário de Hamster Chinês) transfectadas estavelmente com cDNA do receptor opióide 20 humano μ ou de receptor kappa de porquinho-da-índia foram cultivadas em meio que consiste em meios Hams-F12 suplementados com FBS 10%, 100 unidades/ml de penicilina 100 pg/ml de estreptomicina e 800 pg/ml de Geneticina em uma incubadora de CO2 5%, umidificada a 370C. Os níveis de 25 expressão do receptor (Bmax aproximadamente 2,0 e aproximadamente 0,414 pmol/mg de proteína, respectivamente) foram determinados usando [3H]-Diprenorfina (atividade específica de aproximadamente 50-55 Ci/mmol) em um ensaio de ligação de radioligante de membrana.

As células foram cultivadas até 80-95% de confluência (< 25 passagens de subcultura). Para a passagem da linhagem celular, a monocamada de células foi incubada por 5 minutos em temperatura ambiente e coletada por agitação mecânica em 10 ml de PBS suplementado com 5 mM de EDTA. Após a 5 ressuspensão, as células foram transferidas para 4 0 ml de meio de crescimento fresco para centrifugação por 5 minutos a 1.000 rpm, e ressuspensas em meio de crescimento fresco na proporção de divisão apropriada.

Para a preparação da membrana, as células foram 10 coletadas por agitação mecânica suave com 5 mM de EDTA em PBS, seguida por centrifugação (2.5 00 g por 5 minutos). Os péletes foram ressuspensos em tampão de ensaio (50 mM de ácido 4-(2-hidroxietil)piperazina-1-etanossulfônico N-(2- hidroxietil)piperazina-N'-(ácido 2-etanossulfônico)

(HEPES)), pH 7,4, e homogeneizados com um homogeneizador politron no gelo. Os homogeneizados resultantes foram centrifugados (1.200 g por 5 minutos), os péletes descartados e o sobrenadante centrifugado (40.000 g por 20 minutos). Os péletes foram lavados uma vez por ressuspensão 20 em tampão de ensaio, seguido por uma centrifugação adicional (40.000 g por 20 minutos). Os péletes finais foram ressuspensos em tampão de ensaio (1 equivalente de T225 frasco/l ml de tampão de ensaio) . A concentração de proteína foi determinada usando um kit de ensaio de

2 5 proteína Bio-Rad Bradford, e as membranas foram armazenadas

em alíquotas congeladas a -80°C, enquanto necessário.

Membranas de receptor opióide humano delta (hDOP) foram adquiridas de Perkin Elmer. As Kd e Bmax relatadas para essas membranas determinadas por análises de saturação

3 0 em ensaios de ligação de radioligante de [3H]-Natrindol foram de 0,14 nM CpKd = 9,85) e 2,2 pmol/mg de proteína, respectivamente. A concentração de proteína foi determinada usando um kit de ensaio de proteína Bio-Rad Bradford. As membranas foram armazenadas em alíquotas congeladas a 8O0C, enquanto necessário.

b. Ensaio de ligação de radioligantes

Os ensaios de ligação de radioligante foram realizados em uma placa de ensaio de polipropileno de 96 poços Axygen de 1,1 ml, em um volume total de ensaio de 2 00 μΐ contendo 10 a quantidade apropriada de proteína da membrana (aproximadamente 3, aproximadamente 2 e aproximadamente 2 0 pg para mi, delta e kappa, respectivamente) em tampão de ensaio, suplementado com albumina sérica bovina 0,025% (BSA) . Foram feitos estudos de saturação de ligação para 15 determinação dos valores Kd do radioligante usando [3H] Diprenorfina em 8-12 concentrações diferentes, variando de 0,001 nM - 5 nM. Foram efetuados ensaios de deslocamento para determinação dos valores pKi dos compostos com [3H] Diprenorfina a 0,5, 1,2 e 0,7 nM para mi, delta e kappa,

2 0 respectivamente, e onze concentrações de composto, variando

de 10 pM - 100 μΜ.

Os dados de ligação foram analisados por análise por regressão não linear com a suíte de programas GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) usando o 25 modelo de 3 parâmetros para competição por um sítio. 0 mínimo da curva foi fixado ao valor para ligação não específica, determinado na presença de 10 μΜ de naloxona. Os valores Ki para os compostos de teste foram calculados, em Prism, a partir dos valores de IC50 com o melhor ajuste,

3 0 e do valor Kd do radioligante, usando a equação de ChengPrusoff (Ki= IC5o/(1+( [L]/Kd) ) em que [L] = a concentração de [3H]-Diprenorfina. Os resultados são expressos como o logaritmo decádico negativo dos valores Ki, pKi.

Os compostos de teste que possuem um valor pKi maior nesses ensaios possuem uma afinidade de ligação maior pelo receptor opióide μ, delta ou kappa. O sal de sulfato do Composto 1 exibiu um valor pKi de 9,9 no receptor opióide μ humano.

Ensaio 2: Ativação mediada por agonista do receptor opióide μ em membranas preparadas por células CHO-Kl que expressam o receptor opióide μ humano

Neste ensaio, os valores da potência e da atividade intrínseca de compostos de teste foram determinados pela medida da quantidade de GTP-Eu ligado presente após ativação do receptor em membranas preparadas por células CHO-Kl que expressam o receptor opióide μ humano.

a. Preparação de membrana do receptor Opióide mi:

Membranas do receptor opióide μ humano (hMOP) foram preparadas como descrito acima ou foram adquiridas de Perkin Elmer. As PKd e Bmax relatadas para as membranas adquiridas determinadas por análises de saturação em um ensaio de ligação de radioligante de [3H]-Diprenorfina foram de 10,06 e 2,4 pmol/mg de proteína, respectivamente. A concentração de proteína foi determinada usando um kit de ensaio de proteína Bio-Rad Bradford. As membranas foram armazenadas em alíquotas congeladas a -80°C, enquanto necessário. GTP-Eu e GDP liofilizados foram diluídos até 10 μΜ e 2 mM, respectivamente, em H2O destilada duplamente, e depois misturados, e ficaram em repouso em temperatura ambiente por 30 minutos, antes da transferência para amostras de alíquotas individuais para armazenamento a 20 ° C.

b. Ensaio de troca de nucleotídeo GTP-Eu μ de humano

Foram feitos ensaios de troca de nucleotídeo GTP-Eu usando o kit de ligação de GTP DELPHIA (Perkin/Elmer) em placas de filtro de 96 poços AcroWell de acordo com as especificações do fabricante. As membranas foram preparadas como descrito acima e, antes do início do ensaio, as alíquotas foram diluídas até uma concentração de 200 pg/ml em tampão de ensaio (50 mM de HEPES, pH 7,4 a 25°C) , depois homogeneizadas por 10 segundos usando um homogeneizador Polytron. Os compostos de teste foram recebidos como 10 mM de soluções de estoque em DMS0, diluídos até 400 μΜ em tampão de ensaio contendo BSA 0,1%, e foram então feitas diluições seriais (1:5) para gerar dez concentrações de composto, variando de 4 0 pM - 80 μΜ; GDP e GTP-Eu foram diluídos até 4 μΜ e 40 nM, respectivamente, em tampão de ensaio. 0 ensaio foi realizado em um volume total de 100 μΐ, contendo 5 μς de proteína da membrana, composto de teste variando de 10 pM - 20 μΜ, 1 μΜ de GDP e 10 nM de GTP-Eu diluídos em 10 mM de MgCl2, 50 mM de NaCl e 0,0125% de BSA, (concentrações finais do ensaio) . Uma curva de concentração-resposta DAMGO (Tyr-D-Ala-Gly-(metil)Phe-Glyol) (variando de 12,8 pM - 1 mM) foi incluída em cada placa.

As placas de ensaio foram preparadas imediatamente antes do ensaio, após a adição de 25 μΐ de tampão de ensaio, 25 μΐ de composto de teste e 25 μΐ de GDP e GTP-Eu. 0 ensaio foi iniciado pela adição de 25 μΐ de proteína da

3 0 membrana e deixou-se incubar por 3 0 minutos. As placas de ensaio foram depois filtradas com uma tubulação a vácuo Waters conectada ao aparelho de vácuo regulada para 33,86-

40,63 kPa e lavada com solução de lavagem de GTP em temperatura ambiente (2 x 3 00 ml) . Os fundos das placas 5 foram blotted para remover o excesso de líquido. As placas foram então imediatamente lidas para determinar a quantidade de GTP-Eu ligado por medida da fluorescência tempo-resolvida (TRF) em uma leitora de placas Packard Fusion. Veículo: DMSO não excedeu 1% da concentração final 10 do ensaio.

A quantidade de GTP-Eu ligado é proporcional ao grau de ativação dos receptores opióides μ pelo composto de teste. A atividade intrínseca (IA), expressa como uma percentagem, foi determinada como a proporção da quantidade 15 de GTP-Eu ligado observada para ativação pelo composto de teste em relação à quantidade observada para ativação por DAMGO, que supostamente é um agonista total (IA=IOO). 0 sal de sulfato de composto 1 demonstrou uma atividade intrínseca de -5 neste ensaio. Dessa forma, o presente sal

2 0 de sulfato demonstrou ser um antagonista.

Ensaio 3: Modelo em rato da eficácia in vivo Neste ensaio, a eficácia dos compostos de teste foi avaliada em um modelo de trânsito gastrintestinal, que avalia a atividade periférica. Este estudo foi aprovado 25 pelo "Institutional Animal Care and Use Committee at Theravance, Inc." e adequado ao "Guide for the Care and Use of Laboratory Animais" publicado pela "National Academy of Sciences" (em 1996) .

a. Ensaio de esvaziamento gástrico de ratos

3 0 Os compostos de teste foram avaliados no ensaio de esvaziamento gástrico em ratos para determinar sua habilidade para reverter esvaziamento gástrico retardado induzido por loperamida. Os ratos ficaram em jejum de um dia para o outro, antes da administração dos compostos de 5 teste ou de veículo pela via de administração intravenosa, subcutânea, intramuscular ou oral, em doses que variam de

0,001 a cerca de 30 miligramas/quilograma (mg/kg). A administração do composto de teste foi seguida por administração subcutânea de loperamida em uma dose de 1 mg/kg ou de veículo. Cinco minutos após a administração de loperamida ou veículo, foi administrada uma refeição de carvão, não nutritiva, não absorvível, por meio de engorda oral, e animais tiveram livre acesso à água pelos sessenta minutos de duração do experimento. Os animais foram então submetidos à eutanásia por meio de asfixia com dióxido de carbono, seguida por toracotomia, e o estômago foi cuidadosamente removido. 0 estômago foi ligado no esfíncter esofagiano inferior e no esfíncter pilórico para evitar esvaziamento adicional durante a remoção de tecido. 0 peso gástrico foi então determinado após remoção das ligaduras,

b. Análise de dados e resultados

Os dados foram analisados usando a suíte de programas GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA). Foram construídas curvas do percentual de reversão por 25 análise de regressão não linear usando um modelo sigmóide de dose-resposta (inclinação variável), e os valores de ID50 com o melhor ajuste foram calculados. Os mínimos e máximos da curva foram fixados para valores de controle de loperamida (indicando 0% de reversão) e controles de 30 veículo (indicando 100% de reversão), respectivamente. Os resultados são expressos como ID50, a dose necessária para 50% de reversão dos efeitos de loperamida, em miligramas por quilograma. 0 sal de sulfato do composto 1, administrado oralmente, exibiu um valor de ID50 de 0,26 mg/kg no modelo de esvaziamento gástrico.

Embora a presente invenção tenha sido descrita com referência a modalidades específicas desta, deve ser entendido por aqueles habilitados na técnica que várias alterações podem ser feitas e que equivalentes podem ser substituídos, sem se afastar do verdadeiro espírito e escopo da invenção. Além disso, podem ser feitas muitas modificações para adaptar uma situação, material, composição de matéria, processo, etapa de processo ou etapas em particular ao objetivo, espírito e escopo da presente invenção. Todas essas modificações visam ser incluídas no escopo das reivindicações em anexo. Adicionalmente, todas as publicações, patentes e documentos de patente aqui citados anteriormente são aqui incorporados por referência em sua totalidade, como se fossem aqui incorporados individualmente por referência.

Claims (28)

1. Forma de sal cristalino caracterizada pelo fato de ser o sal de sulfato de 3-endo-(8-{2-[ciclohexilmetil-((S) 2, 3-diidroxi-propionil)amino]etil}-8-aza-biciclo[3.2.1]oct3-il)benzamida ou um solvato desta.

2. Forma de sal cristalino, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a forma de sal cristalino é um sal cristalino de sulfato.

3. Forma de sal cristalino, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que a forma de sal cristalino é caracterizada por um padrão de difração de pó com raios X que possui dois ou mais picos de difração em valores de 2Θ selecionados de 6,58 ± 0,20, 7,52 ± 0,20, 9,35 ± 0,20, 14,69 ± 0,20, 16,01 ± 0,20, 17,45 ± 0,20, 15 17,99 ± 0,20, 18,62 ± 0,20, 19,76 ± 0,20, 21,11 ± 0,20, 22,07 ± 0,20, 23,18 ± 0,20, 23,74 ± 0,20, 24,56 ± 0,20, 25,63 ± 0,20, 26,45 ± 0,20, 27,86 ± 0,20, 28,31 ± 0,20, 29,54 ± 0,20, 30,59 ± 0,20, 31,58 ± 0,20, 33,89 ± 0,20 e 36,02 ± 0,20.

4. Forma de sal cristalino, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que o padrão de difração de pó com raios X compreende dois ou mais picos de difração em valores de 2Θ selecionados de 14,69 ± 0,20,16,01 ± 0,20, 21,11 ± 0,20, 22,07 ±0,20 e 23,18 ± 0,20.

5. Forma de sal cristalino, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que a forma de sal cristalino é caracterizada por um padrão de difração de pó com raios X no qual as posições de pico estão substancialmente de acordo com as posições de pico do padrão mostrado na Figura 1.

6. Forma de sal cristalino, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que a forma de sal cristalino é caracterizada por um traçado de calorimetria de varredura diferencial registrado em uma taxa de aquecimento de IO0C por minuto que mostra um máximo no fluxo de calor endotérmico em uma temperatura entre cerca de 190°C e cerca de 205°C.

7. Forma de sal cristalino, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que a forma de sal cristalino é caracterizada por um traçado de calorimetria de varredura diferencial substancialmente de acordo com aquele mostrado na Figura 2.

8. Forma de sal cristalino, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a forma de sal cristalino é um hidrato de um sal de sulfato.

9. Forma de sal cristalino, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que a forma de sal cristalino é caracterizada por um padrão de difração de pó com raios X que possui dois ou mais picos de difração em valores de 2Θ selecionados de 9,41 ± 0,20, 9,98 ± 0,20, .15,17 ± 0,20, 16,70 ± 0,20, 18,59 ± 0,20, 19,46 ± 0,20, . 19,91 ± 0,20, 20,63 ± 0,20, 21,35 ± 0,20, 21,89 ± 0,20, . 23,00 ± 0,20, 24,20 ± 0,20, 25,40 ± 0,20, 26,03 ± 0,20, . 27,44 ± 0,20, 28,46 ± 0,20, 29,45 ± 0,20, 31,22 ± 0,20, .31,82 ± 0,20, 33,17 ± 0,20, 33,56 ± 0,20 e 36,89 ± 0,20.

10. Forma de sal cristalino, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que o padrão de difração de pó com raios X compreende dois ou mais picos de difração em valores de 2Θ selecionados de 16,70 ± 0,20, . 18,59 ± 0,20, 19,46 ± 0,20, 19,91 ± 0,20, 23,00 ± 0,20 e

11. Forma de sal cristalino, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que a forma de sal cristalino é caracterizada por um padrão de difração de pó com raios X no qual as posições de pico estão substancialmente de acordo com as posições de pico do padrão mostrado na Figura 4.

12. Forma de sal cristalino, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que a forma de sal cristalino é caracterizada por um traçado de calorimetria de varredura diferencial substancialmente de acordo com aquele mostrado na Figura 5.

13. Composição farmacêutica caracterizada por compreender um veículo farmaceuticamente aceitável e a forma de sal cristalino de qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12.

14. Processo para a preparação de um sal cristalino de sulfato de 3-endo-(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxipropionil)amino]etil}-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3- il)benzamida caracterizado pelo fato de compreender: (a) o contato de um precursor protegido com 3-endo-(8- {2 -[ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino]etil} - 8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)benzamida, em que os grupos hidróxi são protegidos com ácido sulfúrico para formar uma primeira mistura de reação; (b) o isolamento de um sal sólido de grau intermediário de sulfato de 3-endo-(8-{2-[ciclohexilmetil((S)-2,3-diidroxi-propionil)amino]etil}- 8-aza-biciclo [3.2.1]oct-3-il)benzamida da primeira mistura de reação; (c) a dispersão do sal sólido de grau intermediário de sulfato em um diluente que compreende metanol para formar uma segunda mistura de reação; e (d) o isolamento do sal cristalino de sulfato da segunda mistura de reação.

15. Processo, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o precursor protegido é {2- [3-(3-carbamoil-fenil)-8-azabiciclo [3.2.1]oct-8- il]etil}ciclohexilmetil-amida de ácido (S)-2,2-dimetil[1,3]dioxolano-4-carboxilico.

16. Processo, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o diluente que compreende metanol ainda compreende até cerca de 25% de água.

17. Processo, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o diluente que compreende metanol compreende entre cerca de 5% e cerca de 15% de água.

18. Processo para a preparação de um sal cristalino de sulfato de 3-endo-(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxipropionil )amino]etil}-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3- il)benzamida caracterizado pelo fato de que compreende: (a) o contato de 3-endo-(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)2,3-diidroxi-propionil)amino]etil}-8-aza-biciclo[3.2.1]oct3-il)benzamida com ácido sulfúrico para formar uma mistura de reação; e (b) o isolamento do sal cristalino de sulfato da mistura de reação.

19. Processo para a preparação de um sal cristalino de sulfato de 3-endo-(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxipropionil) amino]etil}- 8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3- il)benzamida caracterizado pelo fato de que compreende: (a) a dispersão de um hidrato cristalino do sal de sulfato de 3-endo-(8-{2-[ciclohexilmetil-((S)-2,3-diidroxipropionil)amino]etil}-8-aza-biciclo[3.2.1] oct-3-il) benzamida em um diluente que compreende metanol para formar uma mistura de reação; e (b) o isolamento do sal cristalino de sulfato da mistura de reação.

20. Processo, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que o diluente que compreende metanol ainda compreende até 25% de água.

21. Aduto caracterizado pelo fato de ser de bissulfito de éster benzílico de ácido N-ciclohexilmetil-(2-oxoetil)carbâmico.

22. Forma de sal cristalino, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12, caracterizada por ser usada em terapia.

23. Use da forma de sal cristalino de qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12, caracterizada por ser na fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou condição médica em um mamífero atenuada por tratamento com um antagonista do receptor opióide mu.

24. Uso, de acordo com reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é disfunção intestinal ou obstrução total do intestino pós-operatória induzida por opióide.

25. Método de tratamento de um mamífero possuindo uma condição médica atenuada por tratamento com um antagonista do receptor opióide mu caracterizado pelo fato de compreender a administração ao mamífero de uma composição farmacêutica que compreende um veículo farmaceuticamente aceitável e da forma de sal cristalino de qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12.

26.Método, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que a condição médica é disfunção intestinal ou obstrução total do intestino pósoperatória induzida por opióide.

27.Método de aumento da motilidade do trato gastrintestinal em um mamífero caracterizado por compreender a administração ao mamífero de uma composição farmacêutica que compreende um veículo farmaceuticamente aceitável e a Forma de sal cristalino, de qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12.

28.Método de antagonizar um receptor opióide mu em um mamífero caracterizado por compreender a administração ao mamífero de uma composição farmacêutica que compreende um veículo farmaceuticamente aceitável e a Forma de sal cristalino, de qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4,5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12.