BRPI0806920A2 - Sulfonil semicarbazidas, carbonil semicarbazidas, semicarbazidas e ureias, composições farmacêuticas das mesmas, e métodos para tratar viroses de febre hemorrágica. incluindo infecções associadas com arenaviroses. - Google Patents

Sulfonil semicarbazidas, carbonil semicarbazidas, semicarbazidas e ureias, composições farmacêuticas das mesmas, e métodos para tratar viroses de febre hemorrágica. incluindo infecções associadas com arenaviroses. Download PDF

Info

Publication number
BRPI0806920A2
BRPI0806920A2 BRPI0806920-4A BRPI0806920A BRPI0806920A2 BR PI0806920 A2 BRPI0806920 A2 BR PI0806920A2 BR PI0806920 A BRPI0806920 A BR PI0806920A BR PI0806920 A2 BRPI0806920 A2 BR PI0806920A2
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
substituted
bis
hydrazinecarboxamide
propyl
trifluoromethyl
Prior art date
Application number
BRPI0806920-4A
Other languages
English (en)
Inventor
Thomas R Bailey
Dennis E Hruby
Dongcheng Dai
Tove Bolken
Original Assignee
Siga Technologies Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Siga Technologies Inc filed Critical Siga Technologies Inc
Publication of BRPI0806920A2 publication Critical patent/BRPI0806920A2/pt

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/17—Amides, e.g. hydroxamic acids having the group >N—C(O)—N< or >N—C(S)—N<, e.g. urea, thiourea, carmustine
    • A61K31/175—Amides, e.g. hydroxamic acids having the group >N—C(O)—N< or >N—C(S)—N<, e.g. urea, thiourea, carmustine having the group, >N—C(O)—N=N— or, e.g. carbonohydrazides, carbazones, semicarbazides, semicarbazones; Thioanalogues thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/17—Amides, e.g. hydroxamic acids having the group >N—C(O)—N< or >N—C(S)—N<, e.g. urea, thiourea, carmustine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/18—Sulfonamides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/275—Nitriles; Isonitriles
    • A61K31/277—Nitriles; Isonitriles having a ring, e.g. verapamil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/415—1,2-Diazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/433—Thidiazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/538—1,4-Oxazines, e.g. morpholine ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/675—Phosphorus compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pyridoxal phosphate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C275/00—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C275/28—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton
    • C07C275/30—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton being further substituted by halogen atoms, or by nitro or nitroso groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C275/00—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C275/28—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton
    • C07C275/32—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton being further substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C07C275/34—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton being further substituted by singly-bound oxygen atoms having nitrogen atoms of urea groups and singly-bound oxygen atoms bound to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C275/00—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C275/28—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton
    • C07C275/38—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton being further substituted by doubly-bound oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C275/00—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C275/28—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton
    • C07C275/42—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C281/00—Derivatives of carbonic acid containing functional groups covered by groups C07C269/00 - C07C279/00 in which at least one nitrogen atom of these functional groups is further bound to another nitrogen atom not being part of a nitro or nitroso group
    • C07C281/06—Compounds containing any of the groups, e.g. semicarbazides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C311/00—Amides of sulfonic acids, i.e. compounds having singly-bound oxygen atoms of sulfo groups replaced by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C311/48—Amides of sulfonic acids, i.e. compounds having singly-bound oxygen atoms of sulfo groups replaced by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of sulfonamide groups further bound to another hetero atom
    • C07C311/49—Amides of sulfonic acids, i.e. compounds having singly-bound oxygen atoms of sulfo groups replaced by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of sulfonamide groups further bound to another hetero atom to nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/70—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/66—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D233/84—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D261/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings
    • C07D261/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings
    • C07D261/06—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings having two or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D261/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings having two or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
    • C07D277/20—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D277/32—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D277/36—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D285/00—Heterocyclic compounds containing rings having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D275/00 - C07D283/00
    • C07D285/01—Five-membered rings
    • C07D285/02—Thiadiazoles; Hydrogenated thiadiazoles
    • C07D285/04—Thiadiazoles; Hydrogenated thiadiazoles not condensed with other rings
    • C07D285/06—1,2,3-Thiadiazoles; Hydrogenated 1,2,3-thiadiazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/16—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms
    • C07D295/20—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms by radicals derived from carbonic acid, or sulfur or nitrogen analogues thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/22—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with hetero atoms directly attached to ring nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D317/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D317/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3
    • C07D317/44—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D317/46—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
    • C07D317/48—Methylenedioxybenzenes or hydrogenated methylenedioxybenzenes, unsubstituted on the hetero ring
    • C07D317/62—Methylenedioxybenzenes or hydrogenated methylenedioxybenzenes, unsubstituted on the hetero ring with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to atoms of the carbocyclic ring
    • C07D317/66—Nitrogen atoms not forming part of a nitro radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D319/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D319/10—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes
    • C07D319/14—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D319/16—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
    • C07D319/18—Ethylenedioxybenzenes, not substituted on the hetero ring
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Nitrogen- Or Sulfur-Containing Heterocyclic Ring Compounds With Rings Of Six Or More Members (AREA)
  • Other In-Based Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Heterocyclic Compounds That Contain Two Or More Ring Oxygen Atoms (AREA)
  • Thiazole And Isothizaole Compounds (AREA)

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "SULFONIL SEMICARBAZIDAS, CARBONIL SEMICARBAZIDAS, SEMICARBAZI- DAS E UREIAS, COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS E USO DAS MES- MAS".
Este pedido é uma continuação em parte de e reivindica priori-
dade para o Pedido de Patente Internacional n° de série PCT/US2005/043931, depositado em 6 de dezembro de 2005, que reivindica prioridade para o Pedido de Patente Provisório U.S. n° de série 60/632.990, depositado em 6 de dezembro de 2004. Ambos os pedidos de prioridade em 10 suas totalidades são incorporados aqui por referência para todos os propósi- tos.
DECLARAÇÃO COM RESPEITO À PESQUISA FEDERALMENTE PATRO- CINADA OU DESENVOLVIMENTO
Esta invenção foi sustentada em parte por fundos do governo U.S. (National Institutes of Health SBIR Grant n^ 1 R43 AI056525-01, R43 AI056525-02, e R44 AI056525-04) e o governo U.S. pode portanto ter certos direitos na invenção.
CAMPO
O uso de sulfonil semicarbazidas, carbonil semicarbazidas, se- 20 micarbazidas, e ureias, bem como derivados e análogos das mesmas, e composições farmacêuticas contendo as mesmas, para o tratamento ou pro- filaxia de infecções virais e doenças associadas às mesmas. Em particular, aquelas infecções virais e doenças associadas causadas por viroses de fe- bre hemorrágica, tais como Arenaviroses podem ser tratadas.
ANTECEDENTES
Viroses de febre hemorrágica foram discutidas na literatura cien- tífica. As seguintes publicações, patentes, e pedidos de patente são citados neste pedido como números sobrescritos:
1. Charrel, R. N. e de Lamballerie X., ANTIVIRAL RESEARCH. 57:89-100(2003).
2. Peters C. J., "Arenavírus diseases," em Porterfield J., ed., EXOTIC VIRAL INFECTION, London: Chapman e Hall Medicai, 227-246
(1995).
3. Buchmeier, M.J., Clegg1 J.C.S., Franze-Fernandez1 M. T., Ko- lakofsky, D., Peters, C. J., e Southern, P. J., "Virus Taxonomy: Sixth Report
of the International Committee on Taxonomy of Viruses," Murphy, F.A., Fau- quet, C. M. e outro, Eds. Sprnger-Verlag, Nova Iorque, 319-323 (1995).
4. Clegg, J. C. S., Bowen, M.D., e outro, "Arenaviridear em Van Regenmortel, Μ. H. V., Fauquet, C. M., Bishop, D. H. L., Carsten, E.B., Es- tes, M.K., Lemon, S.M., Maniloff, J., Mayo, M.A., McGeoch1 D.J., Pringle,
C.R., Wickner, R. B. (Eds) Virus Taxonomy. Seven Report of the Internatio- nal Committee for the Taxonomy of Viruses, Academic Press, Nova Iorque, pp 633-640 (2000).
5. McCormick, J. B., Epidemiology and control of Lassa fever, CURR. TOP. MICROBIOL. IMMUNOL., 134: 69-78 (1987).
6. Leifer, E., Gocke, D.J., e outro, Report of a Iaboratory-
acquired infection treated with plasma from a person recently recovered from the disease, AM. J. TROP. MED. HYG., 19:677-679 (1970).
7. McCormick, J.B., King, I. J., Webb, P. A., e outro, Lassa Fe- ver: Effective therapy with Ribavirín, N. ENGL. J. MED., 314: 20-26 (1986).
8. Kilgore, P. E., Ksiazek, T. G., Rollin, P. E., e outro, Treatment
of Bolivian Hemorrhagic Fever with intravenous ribavirín, CLIN. INFECT. PIS., 24: 718-722 (1997).
9. Enria, D.A., e Maiztegui, J.I., Antiviral treatment of Argentine Hemorrhagic Fever, ANTIVIRAL RES., 23: 23-31 (1994).
10. Huggins, J. W., Prospects For Treatment Of Viral Hemorrha-
gic Fevers With Ribavirín, A Broad-Spectrum Antiviral Drug, REV. INFECT. DIS., ll:Suppl.4:S750-S761 (1989).
11. Candurra, N. A., Maskin, L., e Pamonte. E. B., Inhibition of arenavírus multiplication in vitro byphenotiazines, ANTIVIRAL RES., 31 (3):
149-158(1996).
12. Glushakova, S. E., Lakuba, A. I., Vasiuchkov, A.P., Mar'ian- kova, R. F., Kukareko1 T. M., SteFmakh, T.A., Kurash, T. P., e Lukashevich, I. S., Lysosomotropic agents inhibit the penetration of arenavírus into a culture ofBHK-21 andvero cells, VOPROSY VIRUSOLOG II. 35(2): 146-150 (1990).
13. Petkevich, A. S., Sabynin, V. M., Lemeshko1 N. N., Lukashe- vich, I. S., e Beloruss, N., Study ofthe effect ofrimantadine on the reproducti-
on of several arenavíruses, EPIDEMIOL. MIKROBIOL., 138-143 (1982).
14. Wachsman, M. B., Lopez, E. M. F., Ramirez1 J. A., Gala- govsky, L. R., e Coto1 C. E., Antiviral effect of brassinosteroids against her- pes virus and arenavírus, ANTIVIRAL. CHEM. CHEMOTHER., 1 1(1): 71-77
(2000).
15. Rawls1 W. E., Banerjee, S.N., McMiIIan1 C. A., e Buchmeier1
M. J., Inhibition of Pichinde virus replication by actinomycin D, J. GΕΝ. Vl- ROL., 33(3): 421-434 (1976).
16. Enria, D. A., Feuillade, M. R., Levis1 S., Briggiler, A. M., Am- brosio, A. M., Saavedra, M. C1 Beeker1 J. L., Aviles1 G., Garcia, J., Sabattini,
M.,"Impact of vaccination of a high-risk population for Argentine hemorrhagic fever with a live-attenuated Junin virus vaccine" em Saluzzo, J. F., Dodet, B., (eds) FACTORS IN THE EMERGENCE AND CONTROL FOR RODENT- BORNE VIRAL DISEASES, Paris: Elsevier, 1999, pp. 273-279 (1999).
17. Bagai1 S. e Lamb, R. A., J. CELL BIOL., 135: 73-84 (1996).
18. Beyer, W. R., e outro, J. VIROL., 77: 2866-72 (2003).
19. Bowen, M. D., e outro, VIROLOGY, 219: 285-90 (1996).
20. Castagna, A., e outro, DRUGS, 65: 879-904 (2005).
21. Childs, J. E., e Peters, C. J., "The Arenaviridae" Ed Salvato (ed.), Plenum Press, Nova Iorque, pp. 331-84 (1993).
22. Cianci1 C, e outro, ANTIMICROB AGENTS CHEMOTHER,
48: 2448-54 (2004).
23. Clegg, J. C., CURR TOP MICROBIOL IMMUNOL, 262: 1-24
(2002)=
24. Frpeschke, M., e outro, J. BIOL CHEM., 278: 41914-20
(2003).
25. Garcia, C. C, e outro, ANTIVIR CHEM CHEMOTHER, 1 1 : 231-7 (2000). 26. Hall, W. C, e outro, AM J TROP MED HYG, 55: 81-8 (1996).
27. Harman, A., e outro, J VIROL, 76: 10708-16 (2002).
28. Jeetendra, E., e outro, J VIROL, 77: 12807-18 (2003).
29. Kinomoto, M., e outro, J Virol, 79: 5996-6004 (2005).
30. Kunz, S., e outro, VIROLOGY, 314: 168-78 (2003).
31. Lenz, O., e outro, PROC NATL ACAD Sci USA, 98: 12701-5
(2001).
32. Maron, M. D. e Ames, B. N., MUTAT RES, 1 13: 173-215
(1983).
33. Oldfield, V., e outro, DRUGS, 65: 1 139-60 (2005).
34. Peters, C. J., e outro, CURR TOP MICROBIOL IMMUNOL, 134: 5-68(1987).
35. Petkevich, A. S., e outro, VOPR VIRUSOL, 244-5 (1981).
36. Southern, P. J., VIROLOGY, 2: 1505-51 (2001).
37. Weissenbacher, M. C, e outro, INFECT IMMUN, 35: 425-30
(1982).
38. West, J. T., e outro, J VIROL, 75: 9601-12 (2001).
39. Yao, Q. e Compans, R. W., J VIROL, 69: 7045-53 (1995).
40. Beyer, W. R., e outro, "Oncoretrovirus and Ientivirus vectors pseudotyped with Iymphocytic choriomeningitis virus glycoprotein: generati-
on, concentration, and broad hostrange." J. VIROL. 76:1488-1495 (2002).
41. Connor, R. I., e outro, "Vpr is required for efficient replication of human immunodeficiency virus type-1 in mononuclear phagocytes." VI- ROLOGY 206:935-944 (1995).
42. Naldini, L., e outro, "In vivo gene delivery and stable trans-
duction of nondividing cells by a Ientiviral Vectoij' SCIENCE 272:263-267
(1996).
43. Rojek, J. M,, e outro, "Characterization of the cellular recep- tors for the South American hemorrhagic fever viruses Junin, Guanarito, and
Machupo." VIROLOGY 349:476-491 (2006).
44. Simmons, G., e outro, "Characterization of severe acute res- piratory syndrome-associated coronavirus (SARS-CoV) spike glycoprotein- mediated viral entry." PROC. NATL. ACAD. SCI. USA 101 :4240-4245 (2004).
45. Wool-Lewis, R. J., e P. Bates, "Characterization of Ebola vi- rus entry by using pseudotyped viroses: Identification of receptor-deficient 5 cell lines." J. VIROL. 72:3155-3160 (1998).
Todas as publicações, patentes, e pedidos de patente citados neste pedido são aqui incorporados por referência em sua totalidade na mesma extensão como se cada publicação, patente, ou pedido de patente individual fosse especificamente e individualmente indicado ser incorporado por referência em sua totalidade.
O National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID) e os Centers for Disease Control and Prevention (CDC) têm classificado várias viroses como agentes potenciais de bioterrorismo (www.bt.cdc.gov/agent/agentlist-category.asp). Os agentes mais ameaçado- 15 res, os patógenos de Categoria A, têm o maior potencial para impacto de saúde pública adverso e casualidades em massa se usados de maneiras mal intencionadas. Dentro dos patógenos de Categoria A, existem várias viroses que podem causar febres hemorrágicas virais com taxas de fatalida- de de caso elevadas. As viroses de febre hemorrágica de Categoria A pro- 20 põem sérias ameaças como armas biológicas potenciais porque: 1) elas po- dem ser disseminadas através de aerossóis; 2) uma dose baixa (1-10 unida- des de formação de placa (pfu)) pode causar doença; 3) elas causam morbi- dade e mortalidade severas (taxas de fatalidade de caso de 15-30%); 4) elas podem causar medo e pânico no público em geral; 5) não existe nenhuma 25 vacina eficaz aprovada pelos Estados Unidos ou antivirais específicos dis- poníveis; 6) estes patógenos são facilmente disponíveis e podem ser facil- mente produzidos em grandes quantidades; e 7) pesquisa sobre prevenção
rio \/órípc \/irnoQc -fcahrp hpmorránira fr\i r^nnH
VJ Ü VUI lUÜ Vll VwV/ϋ VlV/ I V^L/I Õ I IWI I IUI I U^IWU IVI Wl
Arenaviroses são viroses envolvidas com um genoma que con- siste em dois segmentos de RNA de filamento único designados pequeno (S, 3,5 Kb) e grande (L, 7,5 Kb), ambos com uma disposição de codificação de ambissentido.36 O segmento de RNA S codifica as proteínas estruturais principais, proteína de nucleocapsídeo (NP) e uma proteína envelope pre- cursora (GPC) codificando duas glicoproteínas envelopes (GP1 externa e GP2 de transmembrana),18’24,30,31 e o segmento de RNA L codifica a prote- ína L de RNA polimerase e uma proteína de 11 KDa1 proteína Z, com função 5 regulatória putativa.19 GP1 e GP2, que formam a ponta de glicoproteína de superfície tetramérica, são responsáveis pela entrada de vírus em células hospedeiras alvejadas.
A família Arenaviridae consiste em um único gênero (Arenavírus) que inclui diversas viroses (atualmente 23 viroses reconhecidas1) causando doenças de febre hemorrágica severas em humanos.2 A família Arenaviridae foi dividida em dois grupos de acordo com filogenia baseada em seqüência.
O grupo "Old World", originado da África, inclui o vírus de coriomeningite Iin- focítica de patógenos humanos (LCM) e vírus Lassa. O grupo "New World", originado da América Latina, é dividido em 3 classes. A classe B inclui, além 15 das viroses por Tacaribe e Amapari, as viroses patogênicas humanas de Categoria A Junín (febre hemorrágica argentina), Machupo (febre hemorrá- gica boliviana), Guanarito (Febre hemorrágica venezuelana), e Sábia (Febre hemorrágica brasileira). Estas viroses de Categoria A são capazes de causar doença de febre hemorrágica fatal freqüente e severa em seres humanos.
Roedores são o hospedeiro natural de arenaviroses, embora o
vírus Tacaribe seja encontrado em morcegos. As arenaviroses caracteristi- camente produzem infecções virêmicas crônicas em seu hospedeiro natu- ral,15 que sucessivamente elimina o vírus em sua urina e fezes, finalmente infeccionando humanos em contato íntimo com estes materiais infectados 25 por aerossol ou contato direto com abrasões de pele ou cortes. A história natural da doença humana é determinada pela patogenicidade do vírus, sua distribuição geográfica, o habitat e os hábitos do hospedeiro reservatório
91
roedor, e a natureza da interação humano-roedor. Diversas Arenaviroses estão associadas com doença hemorrágica severa em ser humano.
Vírus Lassa (do grupo Old World) é responsável por febre he-
morrágica de Lassa, enquanto 4 viroses do grupo New World (todas de Classe B) causam febre hemorrágica severa em ser humano. Aquelas viro- ses são: vírus Junín responsável por febre hemorrágica argentina, vírus Ma- chupo por febre hemorrágica boliviana, e vírus Guanarito por febre hemorrá- gica venezuelana. Vírus Sábia foi isolado de um caso fatal de febre hemor- rágica no Brasil. Estima-se que vírus Lassa cause de 100.000 a 300.000 in- 5 fecções e aproximadamente 5.000 mortes anualmente.5 Até agora, 30.000 casos confirmados estimados de infecções por Junín foram documentados, enquanto cerca de 2.000 de Machupo, 200 de Guanarito e apenas 2 de Sá- bia.1
Recentes conceitos sobre o uso de Arenaviroses como armas 10 biológicas têm grifado a necessidade de desenvolver produtos terapêuticos de molécula pequena que alvejam estas viroses.1 A disponibilidade de fár- macos antivirais direcionados a estas viroses forneceria tratamento e um forte impedimento contra seu uso como agentes de biocombate. Uma vez que fármacos antivirais podem ser facilmente administrados (oral, pílula, ou 15 líquido) e exercem seu efeito antiviral dentro de horas de administração, eles servirão para eficazmente tratar pacientes doentes, proteger aqueles suspei- tos de estarem expostos ao patógeno (profilaxia pós-exposição), e assistir na contenção conveniente de uma deflagração.
Atualmente, não existe nenhum tratamento específico de vírus 20 aprovado para uso contra febres hemorrágicas por Arenavírus. Manejo de doença presente consiste em cuidado de suporte geral: monitoramento e correção de fluido, eletrólito e desequilíbrios osmóticos e tratamento de he- morragia com fator de coagulação ou substituição de plaqueta. Terapia de soro imune convalescente pode ser eficaz no tratamento de casos de doen- 25 ça por vírus Junín e Machupo, porém a disponibilidade de tal soro é extre- mamente limitada.
Ribavirina, um análogo de nucleosídeo, foi usada com algum
ci iroccn om nariontoc Ho fohría nnr I acca Fm OYnpriônrisLQ npnupnaí riha-
WMWWWW Wlll k/UVIV/l I IW Vl ^ IVWI V bV<V/VV4i ■—' ·» V#\|WVI IVI IV1V«V ^vrvjviv· « ■ V Wl
virina intravenosa fornecida aos pacientes dentro dos primeiros 6 dias após desenvolvimento de febre diminuiu a mortalidade de 76% para 9%.7'9 Uma experiência controlada de 18 pacientes com febre hemorrágica argentina resultou em 13% de mortalidade em pacientes tratados comparados com 40% em pacientes não tratados.10 Terapia de ribavirina é associada com efeitos adversos incluindo uma anemia hemolítica reversível, relacionada à dose e também tem demonstrado teratogenicidade e Ietalidade de embrião em diversas espécies animais. É portanto classificada como um fármaco de 5 categoria X de gravidez, contraindicado durante a gravidez. Ribavirina intra- venosa está disponível em fornecedores limitados nos Estados Unidos para uso compassivo sob uma aplicação FND. O regime de dosagem para terapia de ribavirina que foi usado em casos de febre por Lassa e consiste em uma dose de carga intravenosa (IV) de 30 mg/kg inicial, seguida por 16 mg/kg IV 10 a cada 6 horas durante 4 dias; em seguida 8 mg/kg IV a cada 8 horas duran- te 6 dias (tempo de tratamento total de 10 dias). O custo do tratamento para um homem adulto é de aproximadamente $800. Os atributos de ribavirina tornam-a menos do que ideal para o tratamento de febres hemorrágicas por Arenavírus.
Vários inibidores in vitro de replicação de Arenavírus foram rela-
tados na literatura incluindo fenotiazinas, trifluoroperazina e clorpromazina,1 amantadina,12,13 brassinoesteroides14 e actinomicina D.15 As atividades anti- Arenavírus dos mesmos compostos são geralmente fracas e não específi- cas.
A única febre hemorrágica por Arenavírus apenas para a qual
estudos foram empreendidos visando o desenvolvimento de uma vacina foi a febre hemorrágica argentina (AHF) causada por vírus Junín. Uma vacina viva atenuada, chamada Candid 1, foi avaliada em experiências controladas entre trabalhadores agrícolas em áreas endêmicas de AHF, onde ela pare- 25 ceu reduzir o número de casos de AHF relatados sem nenhum efeito colate- ral grave.16 Não é conhecido se a vacina de Candid 1 seria útil contra outras febres hemorrágicas por Arenavírus e esta vacina não está disponível nos Estados Unidos da América.
Vírus Tacaribe é um arenavírus de New World (NWA) de nível 2 de biossegurança (BSL 2) que é encontrado em Classe B e filogeneticamen- te relacionado ao NWA de Categoria A (Junín, Machupo, Guanarito e Sábia). Vírus Tacaribe é 67% a 78% idêntico ao vírus Junín no nível de aminoácido para todas as quatro proteínas virais. A fim de analisar quanto a inibidores de NWA um ensaio de análise de alta produtividade (HTS) para replicação de vírus foi desenvolvido usando vírus Tacaribe como um substituto para NWA de Categoria A. Uma biblioteca de 400.000 moléculas pequenas foi 5 analisada usando este ensaio de HTS. Uma série guia foi escolhida com ba- se nas propriedades do fármaco e esta série foi otimizada através de quími- ca iterativa resultando na identidade de um inibidor de molécula pequena altamente ativo e específico de vírus Tacaribe com atividade seletiva contra NWA patogênico humano (Junín, Machupo, Guanarito e Sábia). Esta molé- 10 cuia demonstra propriedades farmacodinâmicas favoráveis que permitiram a demonstração de atividade antiarenavírus in vivo em um modelo de camun- dongo recém-nascido.
Todas as Arenaviroses de patógenos humanos do grupo New World causando febre hemorrágica são da Classe B. Estas viroses de pató- geno humano requerem manipulação sob refreamento de nível elevado (BSL-4). Entretanto, viroses por Amapari e Tacaribe também de Classe B podem ser desenvolvidas em cultura de tecido sob refreamento de BSL-2 (nível baixo). Trabalhar sob refreamento de nível baixo torna experimenta- ções mais fáceis e mais seguras com estas viroses. Enquanto vírus Amapari produz efeito citopático baixo, vírus Tacaribe pode ser desenvolvido facil- mente em cultura de célula e produz CPE forte em de 4 a 6 dias. Uma vez que este CPE está diretamente relacionado à replicação viral, compostos que inibem replicação de vírus em cultura de célula podem ser identificados facilmente como conferindo proteção de CPE induzido por vírus (embora seja teoricamente possível inibir CPE sem inibir replicação de vírus). Além disso, compostos tendo atividade identificada contravírus Tacaribe também provavelmente serão ativos contra o patógeno humano Arenavírus causando febre hemorrágica (Junín, Machupo, Guanarito e Sábia) dado o grau elevado de homologia (em torno de 70% de identidade para todas as 4 proteínas de vírus Tacaribe comparado ao vírus Junín, com longa extensão de proteína com identidade perfeita) entre estas viroses.
O que é necessário na técnica são novas terapias e preventivos para o tratamento de infecções virais e doenças associadas, tais como cau- sadas por viroses de febre hemorrágica como Arenaviroses.
SUMÁRIO
São fornecidos compostos e composições e/ou métodos para o tratamento e profilaxia de infecções virais, bem como doenças associadas com infecções virais em hospedeiros vivos. Em particular, são fornecidos compostos e composições e/ou métodos para o tratamento e profilaxia de viroses de febre hemorrágica, tais como Arenaviroses.
Em uma modalidade é fornecido aqui um método para o trata- 10 mento ou profilaxia de uma infecção viral ou doença associada com a mes- ma, compreendendo administrar em uma quantidade terapeuticamente efi- caz a um mamífero em necessidade do mesmo, um composto de fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em outra modalidade, uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade farmaceuti- 15 camente eficaz do composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mes- mo, e um veículo farmaceuticamente aceitável é fornecida. Além disso, compostos de fórmula I, bem como sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos são fornecidos.
Compostos de fórmula I incluem
(SO2)p
/
R2
em que
n é um número inteiro de 0 a 6; m é um número inteiro de 0 a 1; p é um número inteiro de 0 a 1 ;
Ri é selecionado do grupo consistindo em H e alquila;
R2 é selecionado do grupo consistindo em fenila substituída ou
não-substituída, arila substituída e não-substituída, heteroarila substituída e não-substituída, alquila substituída ou não-substituída, alquila ramificada substituída ou não-substituída, e ciclo-heteroalquilas insaturadas substituí- das ou não-substituídas;
ou em que R1 e R2 combinam-se juntos para formar uma C4-C10 heteroal- quila saturada cíclica substituída ou não-substituída;
não-substituída, arila substituída e não-substituída, heteroarila substituída e não-substituída, alquila substituída ou não-substituída, alquila ramificada substituída ou não-substituída, e ciclo-heteroalquilas insaturadas substituí- das ou não-substituídas ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
R3 é selecionado do grupo consistindo em H e alquila; ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
Outros compostos de fórmula I incluem:
IA
NH
\
^(SO2)
R2
em que
10
R2 é selecionado do grupo consistindo em fenila substituída ou
Outros compostos de fórmula I incluem:
em que
Ri é selecionado do grupo consistindo em H e alquila; R2 é selecionado do grupo consistindo em fenila substituída ou não-substituída, arila substituída e não-substituída, heteroarila substituída e não-substituída, alquila substituída ou não-substituída, alquila ramificada substituída ou não-substituída, e ciclo-heteroalquilas insaturadas substituí- das ou não-substituídas;
ou em que Ri e R2 combinam-se juntos para formar uma C4-10 heteroalquila saturada cíclica substituída ou não-substituída; ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
Em outras modalidades, no composto de fórmula I, n é O ou 1.
Além disso, em outras modalidades, no composto de fórmula I, mé 1 epé 1 ou alternativamente, m é O e p é 0.
Em outras modalidades, na fórmula I, Ri e R2 combinam-se jun- tos para formar uma C4.10 heteroalquila saturada cíclica substituída ou não- substituída selecionada do grupo consistindo em:
Me
15
e
Em ainda outras modalidades, na fórmula I, R2 é selecionado do
grupo consistindo em: R*
10
15
em que cada de R5, R6, R7, Re e Rg é independentemente selecionado do grupo consistindo em: hidrogênio, acetila, metóxi, trifIuorometila, fluoro, clo- ro, bromo, iodo, acilamino, metila, sulfonamida, trifluorometóxi, carbóxi, ciano e 1,1,2,2-tetrafluoroetóxi.
Em particular, certas modalidades relacionam-se a um composto de fórmula I selecionado do grupo consistindo em:
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(4-(fenil)-fenilsulfonil]hidrazina-1- carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(4-(2-metil-2-propil)- fenilsulfonil]hidrazina-1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[7-(4-metil-3,4-di-hidro-2H- ben- zo[1,4]oxazinil)sulfonil]hidrazina-1 -carboxamida; N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[5-(1-dimetilamino- naftil)sulfonil]hidrazina-1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexaíiuoro-2-rnetiipropii)-2-[(2,4,6- trimetilfenil)sulfonil]hidrazina-1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(3-cloro-6- metoxifenil)sulfonil]hidrazina-1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(3,6- dimetoxifenil)sulfonil]hidrazina-1 -carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(4-(4- [1,2,3]tiadiazolil)fenil)sulfonil]hidrazina-1 -carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(3-bromofenil)sulfonil]hidrazina- 1-carboxamida;
N-2-( 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(4-bromofenil)sulfonil]hidrazina- 1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(4-metilfenii)sulfonil]hidrazina-1- carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(4-metoxifenil)sulfonil]hidrazina- 1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(4- difluorometoxifenil)sulfonil]hidrazina-1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(3-flúor-4-cioro- fenil)sulfonil]hidrazina-1 -carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(4- trifluorometoxifenil)sulfonil]hidrazina-1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(4-flúor-fenil)sulfonil]hidrazina-1- carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(3-metoxifenil)sulfonil]hidrazina-
1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropii)-2-[(2-metilfenil)sulfonil]hidrazina-1- carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(3- trifluorometilfenil)sulfonil]hidrazina-1 -carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(2,4- dimetoxifenil)sulfonil]hidrazina-1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropi!)-2-[2-(5-cloro-l,3-dimeti!-'//-/- pirazo-
lil)sulfonil]hidrazina-1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metiipropil)-2-[(3-metilfenil)sulfonil]hidrazina-1 - carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(4- trifluorometilfenil)sulfonil]hidrazina-1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(2- trifluorometilfenil)sulfonil]hidrazina-1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[4-(pirrolidin-1-sulfonil)fenil sulfo- 5 nil]hidrazina-1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(2-clorofenil)sulfonil]hidrazina-1- carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[2-(5-morfolin-4- il)piridilsulfonil]hidrazina-1 -carboxamida;
10 N-2-(1,1,1 !3.3!3-hexafluoro-2-meti!propi!)-2-[(2-
trifluorometoxifenil)sulfonil]hidrazina-1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(2,4- diclorofenil)suifonil]hidrazina-1-carboxamida;
N-2-( 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[fenilsulfonil]hidrazina-1 - 15 carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(3- difluorometoxifenil)sulfonil]hidrazina-1 -carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(3-cianofenil)sulfonii]hidrazina-1- carboxamida;
1 20 N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(4-cianofenil)sulfonil]hidrazina-1- carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metiipropil)-2-[5-(2,3-di- hidrobenzo[1,4]dioxinil)sulfonil]hidrazina-1 -carboxamida;
N-2-(1,1,1, 3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(4-metilfenil)sulfonil]-1-metil- 25 hidrazina-1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(3-fluorofenil)sulfonil]hidrazina-1- carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(3,4-difluorofenil)sulfonil] hidra- zina-1 -carboxamida;
30 N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(2,4-dimetiltiazol-5- il)sulfonil]hidrazina-1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(4-acetilfenil)sulfonil]hidrazina-1- carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(2,6-difluorofenil)sulfonil] hidra- zina-1 -carboxamida;
N-2-( 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(2-fluorofenil)sulfonil]hidrazina-1 - carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(2,5- difluorofenil)sulfonil]hidrazina-1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(4-metilfenil)sulfonil]-2-metil- hidrazina-1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(2,6- diclorofenil)sulfonil]hidrazina-1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(2,6- ditrifluorometilfenil)sulfonil]hidrazina-1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(4-metilfenil)sulfonil]hidrazina-1- metilcarboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(3,5-dimetiiisoxazol-5- il)sulfonil]hidrazina-1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(4-nitrofenil)sulfonil]hidrazina-1- carboxamida; N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(1-metilimidazol-4- il)sulfonil]hidrazina-1 -carboxamida;
N-2-( 1,1,1,3,3,3-hexafiuoro-2-metilpropil)-2-[metilsulfonil]hidrazina-1 - carboxamida;
4-fenilpiperazina-1 -(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiietil)-carboxamida; 4-Morfolino-1 -(2,2,2- trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-carboxamida;
1-(2-acetilfenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1-metil-1-trifluorometiletil)-ureia;
1 -Piperidino-1 -(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-carboxamida;
1 -(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -triflüorometiletil)-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-ureia;
1-(4-trifluorometilfenil)-3-(2,2,2-triflüoro-1-metil-1-trif!uorometi!eti!)-ureia; 4-metilpiperazina-1 -(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-carboxamida;
1 -naftalen-1 -il-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia;
1 -(4-clorofenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia; 4-fenilpiperidin-1 -il-1 -(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-carboxamida; 1 -(2-fenil(fenil))-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia;
1 -(2,6-Difluorofenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia;
2-[3-(1,1-bis-trifluorometiletil)-ureído]benzamida;
1 -(2-cloro-6-fluorofenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia;
1 -(3-trifluorometilfenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia;
2-[3-(1,1-bis-trifluorometiletil)-ureido]benzenossulfonamida; 1-(2,2,3,3-Tetrafluoro-2,3-di-hidrobenzo[1,4]dioxin-5-il)-3-(2,2,2-trifluoro-1- metil-1 -trifluorometiletil)-ureia;
1 -(3-trifluorometoxifenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia;
1 -(4-trifluorometoxifenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia; 4-metil-1 -piperidina-1 -(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-carboxamida; 1 -naftalen-2-il-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia;
1 -(2-fluorofenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia; 1-(2,6-dimetoxifenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1-metil-1-trifluorometiletil)-ureia;
Ácido 3-trifluorometóxi-4-[3-(1,1 -bis-trifluorometiletil)-ureído]benzóico; l-fenil-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia;
1 -(3-cianofenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia;
1 -(3-metoxifenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia;
1-(2-(1,1,2,2-tetrafluoroetóxi)fenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1-metil-1- trifluorometiletil)-ureia;
3-[3-(1,1-bis-trifluorometiletil)-ureído]benzenossulfonamida;
1 -(3-fluorofenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia;
1 -(4-bromofenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia;
1 -(2-cianofenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia;
1 -(4-cianofenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia;
1 -(2,2-difluorobenzo[1,3]dioxol-4-il)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 - trifluorometiletil)-ureia;
1 -(4-c!orofenÍ!)-3-(2,2,2-trif!uoro-1 -metil-l -trifluorometiletilj-ureia;
1 -(3-metilfenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia;
4-[3-(1,1-bis-trifluorometiletil)-ureído]benzenossulfonamida;
1 -(2,6-dibromofenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia;
1 -(2-metilfenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia; 1 -(4-metilfenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil- l-trifluorometiletil)-ureia;
1-pirrolidinil-1-(2,2,2-trifluoro-1-metil-1-trifluorometiletil)-carboxamida;
1 -(4-fluorofenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia;
1 -(2,4-dibromofenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia;
(2,2,2-trifluoro-1-metil-1-trifluorometiletil)-amida de ácido azepano-1- carboxílico;
1 -(4-bromo-2-trifluorometoxifenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)- ureia;
1 -(2-trifluorometoxifenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia;
1 -(2-trifluorometilfenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia;
1 -(2-metoxifenil)-3-(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)-ureia; e N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-1-metilpropil)-2-[(4- difluorometoxifenil)sulfonil]hidrazina-1-carboxamida.
mento ou profilaxia de uma infecção viral ou doença associada com a mes- ma, compreendendo administrar em uma quantidade terapeuticamente efi- caz a um mamífero em necessidade do mesmo, um composto de fórmula Il ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
preende uma quantidade farmaceuticamente eficaz do composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um veículo farmaceuticamente aceitável é fornecido. Além disso, compostos de fórmula II, bem como sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos são fornecidos.
Em outra modalidade é fornecido aqui um método para o trata-
Em outra modalidade, uma composição farmacêutica que com-
Compostos de fórmula Il incluem:
f^Vf o R3
F F "« R
Fórmula Il
em que
n é um número inteiro de 0 a 6; m é um número inteiro de 0 a 1;
R1 é selecionado do grupo consistindo em H e alquila;
R2 é selecionado do grupo consistindo em fenila substituída ou não-substituída, arila substituída e não-substituída, heteroarila substituída e 5 não-substituída, alquila substituída ou não-substituída, alquila ramificada substituída ou não-substituída, e ciclo-heteroalquilas insaturadas substituí- das ou não-substituídas; ou em que R1 e R2 combinam-se juntos para formar uma C^1O heteroalquila saturada cíclica substituída ou não-substituída;
R3 e R4 são independentemente selecionados do grupo consis- 10 tindo em H e alquila;
ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
Em particular, certas modalidades relacionam-se a um composto de fórmula Il selecionado do grupo consistindo em:
2-[2,5-bis(2,2,2-trifluoroetóxi)benzoil]-N-[1,1- 15 bis(trifluorometil)propil]hidrazinacarboxamida;
N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(4-terc-butilbenzoil)hidrazinacarboxamida;
2-(1,1 '-bifenil-4-ilcarbonil)-N-[1,1- bis(trifluorometil)propil]hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(1-naftoil)hidrazinacarboxamida;
- 20 2-(1,1'-bifenil-2-ilcarbonil)-N-[1,1-
bis(trifluorometil)propil]hidrazinacarboxamida;
N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(4-metilbenzoil)hidrazinacarboxamida;
N-[1,1 -bis(trifluorometil)propil]-2-(2-naftoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(2,5-dimetoxibenzoil)hidrazinacarboxamida; 25 N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(3,4-diclorobenzoiI)hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(4-bromobenzoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(4-isopropilbenzoil)hidrazinacarboxamida; Ν-Γ1,1 -bis(trifluorometi!)propil]-2-(3i5-di.meti!benzoi!)hidraz!nacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(mesitilcarbonil)hidrazinacarboxamida; e 30 N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(5-cloro-2- metoxibenzoil)hidrazinacarboxamida.
Em uma modalidade, o mamífero a ser tratado é um ser huma- no. Em modalidades particulares, a infecção viral a ser tratada é um vírus de febre hemorrágica, tal como um Arenavírus. O Arenavírus pode ser selecio- nado do grupo consistindo em Junín, Machupo, Guanarito, Sábia, Lassa, Tacaribe, Pinchinde, e VSV.
Detalhes de métodos e formulações são mais completamente
descritos abaixo.
BREVE DESCRIÇÃO DAS DIVERSAS VISTAS DOS DESENHOS
A figura 1 fornece a estrutura química, fórmula, e peso molecular
de ST-336.
A figura 2 mostra o efeito do tempo de adição de ST-336 sobre a
produção de vírus Tacaribe e formação de placa. Na figura 2A, células Vero foram infectadas com vírus Tacaribe em um MOI = 0,01. ST-336 foi adicio- nado antes de ou durante infecção por Tacaribe (-1, 3, 6, 9,12, 15, 18 ou 21 horas após infecção). Em 24 horas após infecção, produções de vírus foram 15 determinadas por ensaio de placa. Na figura 2B, células Vero foram infecta- das com 400 pfu de vírus Tacaribe. ST-336 foi adicionado durante 1 hora antes da infecção (-1), por 1 hora durante adsorção (0), e durante 1 hora após a infecção (+1). Monocamadas infectadas foram lavadas com PBS e revestidas com meio contendo agarose. Cinco dias após infecção, as células 20 foram fixadas em glutaraldeído e tingidas de violeta cristal antes da conta- gem da placa.
A figura 3 mostra que ST-336 liga-se com K0ff lento ao vírion de Tacaribe intacto na ausência de células. Na figura 3A, é fornecido um dia- grama do esquema de diluição de vírus antes da semeadura. O vírus mistu- 25 rado com ST-336 e diluído (lado esquerdo) ou vírus diluído e ST- 336 adicio- nado após diluição (lado direito). Na figura 3B, pinturas das placas que resul- taram após semeadura de cada diluição mostrada na figura 3A sobre células Vero são fornecidas.
A figura 4 mostra o mapeamento de variantes de resistência ao fármaco de ST-336 ("DRVs"). Na figura 4A, um mapa linear do precursor de glicoproteína ("GPC") mostrando a localização do peptídeo sinal ("SP"), do- mínio de transmembrana ("TM"), o sítio de clivagem entre GP1 e GP2 (Κ261-Α262), a localização dos quatro mutantes resistentes a ST-336 ("DR #1-4"), e a mudança de aminoácido para cada é fornecido. Na figura 4B, o alinhamento de seqüência de aminoácido de GP2 de NWA tipo silvestre e DRVs de ST 336 é mostrado. É mostrada a seqüência de aminoácido da 5 porção de terminal C de GP2 (aminoácidos 397 a 457) contendo o domínio de transmembrana (marcado por linhas verticais), a localização das muta- ções para DR# I-4 (sublinhado), e a diferença de aminoácido em Amapari (em negrito).
A figura 5 fornece a estrutura química, fórmula, e peso molecular 10 para ST-294.
A figura 6 mostra o efeito de ST-294 em camundongos recém- nascidos desafiados com vírus Tacaribe. Camundongos BALB/c de quatro dias de idade foram infectados IP com 30 x LD50 de Tacarbide vírus e trata- dos diariamente durante 10 dias com veículo (controle), ribavarina em 25 15 mg/kg, ST-294 duas vezes ao dia (BID) em 50 mg/kg ou uma vez ao dia (SID) em 100 mg/kg. É mostrado na figura 6 a porcentagem de sobreviven- tes em cada grupo de tratamento no dia 9 e dia 10 após infecção. DESCRIÇÃO DETALHADA
Compostos que são úteis para o tratamento e profilaxia de infec- k 20 ções virais, bem como doenças associadas com infecções virais em hospe- deiros vivos, são fornecidos. Em particular, são fornecidos compostos e composições e/ou métodos para o tratamento e profilaxia de viroses de febre hemorrágica, tais como Arenaviroses. Entretanto, antes de fornecer outros detalhes, os seguintes termos primeiro serão definidos.
25 DEFINIÇÕES
De acordo com esta descrição detalhada, as seguintes abrevia- ções e definições aplicam-se. Deve ser observado que como usado aqui, as formas singulares "um," "uma," e "o/a" incluem referentes plurais a menos que o contexto claramente dite de outra maneira.
30 As publicações descritas aqui são fornecidas somente para sua
descrição. Nada aqui deve ser construído como uma admissão com respeito à antecipação das publicações. Além disso, as datas de publicação forneci- das podem ser diferentes das datas de publicação reais, que podem neces- sitar ser independentemente confirmadas.
Onde uma faixa de valores é fornecida, entende-se que cada valor intermediário é abrangido. Os limites superior e inferior destas faixas menores podem independentemente ser incluídos na menor, submetidos a qualquer limite especificamente excluído na faixa relatada. Onde a faixa rela- tada inclui um ou ambos os limites, faixas excluindo qualquer um daqueles limites incluídos são também incluídas na invenção. São também contem- plados quaisquer valores que se incluem nas faixas citadas. A menos que definido de outra maneira, todos os termos técnicos e científicos usados aqui têm o mesmo significado como comumente entendido por alguém versado na técnica. Quaisquer métodos e materiais similares ou equivalentes àque- les descritos aqui podem também ser usados na prática ou teste. Todas as publicações mencionadas aqui são incorporadas aqui por referência para divulgar e descrever os métodos e/ou materiais com relação aos quais as publicações são citadas.
Por "paciente" ou "indivíduo" é pretendido incluir qualquer mamí- fero. Um "mamífero," para propósitos de tratamento, refere-se a qualquer animal classificado como um mamífero, incluindo porém não limitado a, hu- 20 manos, animais domésticos e de fazenda, e animais de jardim zoológico, de esportes, ou de estimação, tais como cães, cavalos, gatos, vacas, ratos, camundongos, cobaias e similares.
O termo "eficácia" como usado aqui no contexto de um regime de dosagem crônico refere-se à eficácia de um regime de tratamento particu- lar. Eficácia pode ser medida baseada na mudança do curso da doença em resposta a um agente.
O termo "sucesso" como usado aqui no contexto de um regime de tratamento crônico refere-se à eficácia de um regime de tratamento parti- cular. Este inclui um equilíbrio de eficácia, toxicidade (por exemplo, efeitos 30 colaterais e tolerância do paciente de uma formulação ou unidade de dosa- gem), concordância do paciente, e similares. Para um regime de administra- ção crônico ser considerado "bem-sucedido" deve-se equilibrar diferentes aspectos de cuidado do paciente e eficácia para produzir um resultado do paciente favorável.
Os termos "tratar," "tratamento," e similares são usados aqui pa- ra referir-se à obtenção de um efeito farmacológico e fisiológico desejado. O 5 efeito pode ser profilático em termos de prevenir ou parcialmente prevenir uma doença, sintoma, ou condição da mesma e/ou pode ser terapêutico em termos de uma cura parcial ou completa de uma doença, condição, sintoma, ou efeito adverso atribuído à doença.
Os termos "tratar" e "tratamento," como usados aqui, abrangem qualquer tratamento de uma doença em um mamífero, tal como um ser hu- mano, e incluem: (a) prevenção da doença de ocorrência em um indivíduo que pode ser predisposto à doença porém não foi ainda diagnosticado como tendo-a, isto é, fazendo com que os sintomas clínicos da doença não se de- senvolvam em um indivíduo que pode ser predisposto à doença porém não experimenta ainda ou apresenta sintomas da doença; (b) inibição da doença, isto é, interrupção ou redução do desenvolvimento da doença ou seus sin- tomas clínicos; e (c) alívio da doença, isto é, causando regressão da doença e/ou seus sintomas ou condições. Tratamento de um paciente sofrendo de doença relacionada à inflamação patológica é contemplado. Prevenção, ini- bição, ou alívio de efeitos adversos atribuídos à inflamação patológica duran- te períodos longos de tempo e/ou são tais causados pelas respostas fisioló- gicas à inflamação inapropriada presente em um sistema biológico durante períodos longos de tempo são também contemplados.
Como usado aqui, "acila" refere-se aos grupos H-C(O)-, alquil- 25 C(O)-, alquil-C(O)- substituído, alquenil-C(O)-, alquenil-C(O)- substituído, alquinil-C(O)-, alquinil-C(O)- substituído, cicloalquil-C(O)-, cicloalquil-C(O)- substituído, aril-C(O)-, aril-C(O)- substituído, heteroaril-C(O)-, heteroaril-C(O) substituído, heterocíclico-C(O)-, e heterocíclico-C(O)- substituído em que alquila, alquila substituída, alquenila, alqueníla substituída, alquinila, alquinila 30 substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, arila, arila substituída, hete- roarila, heteroarila substituída, heterocíclico e heterocíclico substituído são como definidos aqui. "Acilamino" refere-se ao grupo -C(O)NRR em que cada R é in- dependentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substi- tuída, arila, arila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heteroarila, 5 heteroarila substituída, heterocíclico, heterocíclico substituído e em que cada R é unido para formarem juntos com o átomo de nitrogênio um anel hetero- cíclico ou heterocíclico substituído em que alquila, alquila substituída, alque- nila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, cicloalquila, cicloal- quila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, 10 heterocíclico e heterocíclico substituído são como definidos aqui.
"Alquenila" refere-se ao grupo alquenila preferivelmente tendo de 2 a 10 átomos de carbono e mais preferivelmente de 2 a 6 átomos de carbono e tendo pelo menos 1 e preferivelmente de 1 a 2 sítios de insatura- ção de alquenila.
"Alquenila inferior" refere-se a um grupo alquenila preferivelmen-
te tendo de 2 a 6 átomos de carbono e tendo pelo menos 1 sítio e preferi- velmente apenas 1 sítio de insaturação de alquenila (isto é, >C=C<). Este termo é exemplificado por grupos tais como alila, etenila, propenila, butenila, e similares.
"Alquenila substituída" refere-se aos grupos alquenila tendo de 1
a 5 substituintes independentemente selecionados do grupo consistindo em alcóxi, alcóxi substituído, acila, acilamino, tiocarbonilamino, acilóxi, amino, amidino, alquilamidino, tioamidino, aminoacila, aminocarbonilamino, aminoti- ocarbonilamino, aminocarbonilóxi, arila, arila substituída, arilóxi, arilóxi subs- 25 tituído, ariloxiarila, ariloxiarila substituída, halogênio, hidroxila, ciano, nitro, carboxila, carboxilalquila, carboxil-alquila substituída, carboxil-cicloalquila, carboxil-cicloalquila substituída, carboxilarila, carboxil-arila substituída, car- boxilheteroarila, carboxil-heteroarila substituída, carboxilheterocíclico, carbo- xil-heterocíclico substituído, cicloalquila, cicloalquila substituída, guanidino, 30 guanidinossulfona, tiol, tioalquila, tioalquila substituída, tioarila, tioarila substi- tuída, tiocicloalquila, tiocicloalquila substituída, tio-heteroarila, tio-heteroarila substituída, tio-heterocíclico, tio-heterocíclico substituído, heteroarila, hete- roarila substituída, heterocíclico, heterocíclico substituído, cicloalcóxi, ciclo- alcóxi substituído, heteroarilóxi, heteroarilóxi substituído, heterociclilóxi, hete- rociclilóxi substituído, oxicarbonilamino, oxitiocarbonilamino, cicloalquilóxi, cicloalquilóxi substituído, heteroarilóxi, heteroarilóxi substituído, -OS(O)2- 5 alquila, -0S(0)2-alquila substituída, -0S(0)2-arila, -0S(0)2-arila substituída, - 0S(0)2-heteraarila, -OS(0)2-heteroarila substituída, -OS(0)2-heterocíclico, - OS(0)2-heterocíclico substituído, -OSO2-NRR em que R é hidrogênio ou al- quila, -NRS(0)2-alquila, -NRS(0)2-alquila substituída, -NRS(0)2-arila, - NRS(0)2-arila substituída, -NRS(0)2-heteroarila, -NRS(0)2-heteroarila substi- 10 tuída, -NRS(0)2-heterocíclioo, -NRS(0)2-heterocíclico substituído, -NRS(O)2- NR-alquila, -NRS(0)2-NR-alquila substituída, -NRS(0)2-NR-arila, -NRS(O)2- NR-arila substituída, -NRS(0)2-NR-heteroarila, -NRS(0)2-NR-heteroarila substituída, -NRS(0)2-NR-heterocíclico, -NRS(0)2-NR-heterocíclico substitu- ído em que R é hidrogênio ou alquila, mono- e di-alquilamino, mono- e di- 15 (alquila substituída)amino, mono- e di-arilamino, mono- e di-arilamino substi- tuído, mono- e di- heteroarilamino, mono- e di-heteroarilamino substituído, mono- e di-heterocíclico amino, mono- e di-heterocíclico amino substituído, aminas dissubstituídas assimétricas tendo diferentes substituintes indepen- dentemente selecionados do grupo consistindo em grupos alquila, alquila k 20 substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, hete- rocíclico, heterocíclico substituído e alquenila substituída tendo grupos ami- no bloqueados por grupos de bloqueio convencionais tais como Boc, Cbz, formila, e similares ou grupos alquenila/alquenila substituída substituídos com -S02-alquila, -S02-alquila substituída, -S02-alquenila, -S02-alquenila 25 substituída, -S02-cicloalquila, -S02-cicloalquila substituída, -SO2- arila, -SO2- arila substituída, -S02-heteroarila, -S02-heteroarila substituída, -SO2- heterocíclico, -S02-heterocíclico substituído e -SO2NRR onde R é hidrogênio ou alquila.
"Alcóxi" refere-se ao grupo "alquil-O-" que inclui, por meio de 30 exemplo, metóxi, etóxi, n-propóxi, /so-propóxi, n-butóxi, terc-butóxi, sec- butóxi, n-pentóxi, />hexóxi, 1,2-dimetilbutóxi, e similares.
"Alcóxi substituído" refere-se ao grupo "alquil-O- substituído". "Alquila" refere-se aos grupos alquila linear ou ramificada tendo de 1 a 10 átomos de carbono, alternativamente 1 a 6 átomos de carbono. Este termo é exemplificado por grupos tais como metila, t-butila, n-heptila, octila e similares.
5 "Alquila inferior" refere-se aos grupos alquila monovalentes ten-
do de 1 a 5 átomos de carbono incluindo grupos alquila de cadeia linear e ramificada. Este termo é exemplificado por grupos tais como metila, etila, /so-propila, n-propila, n-butila, /so-butila, sec-butila, f-butila, n-pentila e simila- res. "Alquila inferior" pode ser opcionalmente substituída com um halogênio, tal como cloro, fluoro, bromo, e similares.
"Alquila substituída" refere-se a um grupo alquila, de 1 a 10 áto- mos de carbono, tendo de 1 a 5 substituintes independentemente seleciona- dos do grupo consistindo em alcóxi, alcóxi substituído, acila, acilamino, tio- carbonilamino, acilóxi, amino, amidino, alquil amidino, tioamidino, aminoaci- 15 Ia, aminocarbonilamino, aminotiocarbonilamino, aminocarbonilóxi, arila, arila substituída, arilóxi, arilóxi substituído, ariloxilarila, ariloxiarila substituída, cia- no, halogênio, hidroxila, nitro, carboxila, carboxilalquila, carboxil-alquila subs- tituída, carboxil-cicloalquila, carboxil-cicloalquila substituída, carboxilarila, carboxil-arila substituída, carboxil-heteroarila, carboxil-heteroarila substituí- 20 da, carboxil-heterocíclico, carboxil-heterocíclico substituído, cicloalquila, ci- cloalquila substituída, guanidino, guanidinossulfona, tiol, tioalquila, tioalquila substituída, tioarila, tioarila substituída, tiocicloalquila, tiocicloalquila substitu- ída, tioeteroarila, tioeteroarila substituída, tioeterocíclico, tioeterocíclico subs- tituído, heteroarila, arila substituída, heteroarila substituída, heterocíclico, 25 heterocíclico substituído, cicloalcóxi, cicloalcóxi substituído, heteroarilóxi, heteroarilóxi substituído, heterociclilóxi, heterociclilóxi substituído, oxicarboni- lamino, oxitiocarbonilamino, cicloalquilóxi, cicloalquilóxi substituído, heteroa- rilóxi, heteroarilóxi substituído, -0S(0)2-alquila, -0S(0)2-alquila substituída, - 0S(0)2-arila, -0S(0)2-arila substituída, -OS(0)2-heteroarila, -OS(O)2- 30 heteroarila substituída, -OS(0)2-heterocíclico, -OS(0)2-heterocíclico substitu- ído, -OSO2-NRR em que R é hidrogênio ou alquila, -NRS(0)2-alquila, - NRS(0)2-alquila substituída, -NRS(0)2-arila, -NRS(0)2-arila substituída, - NRS(0)2-heteroarila, -NRS(0)2-heteroarila substituída, -NRS(O)2- heterocíclico, -NRS(0)2-heterocíclico substituído, -NRS(0)2-NR-alquila, - NRS(0)2-NR-alquila substituída, -NRS(0)2-NR-arila, -NRS(0)2-NR-arila substituída, -NRS(0)2-NR-heteroarila, -NRS(0)2-NR-heteroarila substituída, - NRS(0)2-NR-heterocíclico, -NRS(0)2-NR-heterocíclico substituído em que R é hidrogênio ou alquila, mono- e di-alquilamino, mono- e di-(alquila substituí- da)amino, mono- e di-arilamino, mono- e di-arilamino substituído, mono- e di- heteroarilamino, mono- e di-heteroarilamino substituído, mono- e di- heterocíclico amino, mono- e di-heterocíclico amino substituído, aminas dis- substituídas assimétricas tendo diferentes substituintes independentemente selecionados do grupo consistindo em alquila, alquila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, heterocíclico e heterocíclico substituído e grupos alquila substituída tendo grupos amino bloqueados por grupos de bloqueio convencionais tais como Boc, Cbz, formila, e similares ou grupos alquila/alquila substituída substituídos com -S02-alquila, -SO2- alquila substituída, -S02-alquenila, -S02-alquenila substituída, -SO2- cicloalquila, -S02-cicloalquila substituída, -S02-arila, -S02-arila substituída, - SO2- heteroarila, -S02-heteroarila substituída, -S02-heterocíclico, -SO2- heterocíclico substituído e -SO2NRR em que R é hidrogênio ou alquila. k 20 "Amidino" refere-se ao grupo H2NC(=NH)- e o termo "alquilami-
dino" refere-se aos compostos tendo 1 a 3 grupos alquila (por exemplo, al- quilHNC(=NH)-).
"Amino" refere-se ao grupo -NH2.
"Amino substituído" refere-se ao grupo -NRR, em que cada gru- 25 po R é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, arila, arila substituída, hete- roarila, heteroarila substituída, heterocíclico, heterocíclico substituído, -SO2- alquila, -S02-alquila substituída, -S02-alquenila, -S02-alquenila substituída, - 30 S02-cicloalquila, -S02-cicloalquila substituída, -S02-arila, -S02-arila substitu- ída, -S02-heteroarila, -S02-heteroarila substituída, -S02-heterocíclico, -SO2- heterocíclico substituído, contanto que ambos os grupos R não sejam hidro- gênio; ou os grupos R possa ser unidos juntos com o átomo de nitrogênio para formar um anel heterocíclico ou heterocíclico substituído.
"Aminoacila" refere-se aos grupos -NRC(0)alquila, -NRC(0)alquila substituída, -NRC(0)cicloalquila, -NRC(0)cicloalquila substi- 5 tuída, -NRC(0)alquenila,
-NRC(0)alquenila substituída, -NRC(0)alquinila, -NRC(0)alquinila substituí- da, -NRC(0)arila, -NRC(0)arila substituída, -NRC(0)heteroarila, -NRC(0)heteroarila substituída, -NRC(0)heterocíclico, e -NRC(0)heterocíclico substituído em que R é hidrogênio ou alquila e em que 10 alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, arila, arila substituída, hete- roarila, heteroarila substituída, heterocíclico e heterocíclico substituído são como definidos aqui.
"Arila" ou "Ar" refere-se a um grupo carbocíclico aromático insa- 15 turado de 6 a 14 átomos de carbono tendo um único anel (por exemplo, feni- la) ou múltiplos anéis condensados (por exemplo, naftila ou antrila) cujos anéis condensados podem ou não podem ser aromáticos (por exemplo, 2- benzoxazolinona, 2H-1,4-benzoxazin-3(4H)-ona-7ila, e similares) contanto que o ponto de ligação seja através de um átomo de anel aromático.
"Arila substituída" refere-se aos grupos arila que são substituídos
com de 1 a 3 substituintes selecionados do grupo consistindo em hidróxi, acila, acilamino, tiocarbonilamino, acilóxi, alquila, alquila substituída, alcóxi, alcóxi substituído, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substi- tuída, amidino, alquilamidino, tioamidino, amino, aminoacila, aminocarboniló- 25 xi, aminocarbonilamino, aminotiocarbonilamino, arila, arila substituída, arilóxi, arilóxi substituído, cicloalcóxi, cicloalcóxi substituído, heteroarilóxi, heteroari- lóxi substituído, heterociclilóxi, heterociclilóxi substituído, carboxila, carboxi- lalquila, carboxil-alquila substituída, carboxil-cicloalquila, carboxil-cicloalquila substituída, carboxilarila, carboxil-arila substituída, carboxilheteroarila, car- 30 boxil-heteroarila substituída, carboxil-heterocíclico, carboxil-heterocíclico substituído, carboxilamido, ciano, tiol, tioalquila, tioalquila substituída, tioarila, tioarila substituída, tio-heteroarila, tio-heteroarila substituída, tiocicloalquila, tiocicloalquila substituída, tio-heterocíclico, tio-heterocíclico substituído, ci- cloalquila, cicloalquila substituída, guanidino, guanidinossulfona, halo, nitro, heteroarila, heteroarila substituída, heterocíclico, heterocíclico substituído, cicloalcóxi, cicloalcóxi substituído, heteroarilóxi, heteroarilóxi substituído, he-
5 terociclilóxi, heterociclilóxi substituído, oxicarbonilamino, oxitiocarbonilamino, -S(0)2-alquila, -S(0)2-alquila substituída, -S(0)2-cicloalquila, -S(O)2- cicloalquila substituída, -S(0)2-alquenila, -S(0)2-alquenila substituída, -S(O)2- arila, -S(0)2-arila substituída, -S(0)2-heteroarila, -S(0)2-heteroarila substituí- da, -S(0)2-heterocíclico, -S(0)2-heterocíclico substituído, -0S(0)2-alquila, - 10 0S(0)2-alquila substituída, -0S(0)2-arila, -0S(0)2-arila substituída, -OS(O)2- heteroarila, -OS(0)2-heteroarila substituída, -0S(0)2- heterocíclico, -OS(O)2- heterocíclico substituído, -OSO2-NRR em que R é hidrogênio ou alquila, - NRS(0)2-alquila, -NRS(0)2-alquila substituída, -NRS(0)2-arila, -NRS(O)2- arila substituída, -NRS(0)2-heteroarila, -NRS(0)2-heteroarila substituída, - 15 NRS(0)2-heterocíclico, -NRS(0)2-heterocíclico substituído, -NRS(O)2-NR- alquila, -NRS(0)2-NR-alquila substituída, -NRS(0)2-NR-arila, -NRS(O)2-NR- arila substituída, -NRS(0)2-NR-heteroarila, -NRS(O)2-NR- heteroarila substi- tuída, -NRS(0)2-NR-heterocíclico, -NRS(0)2-NR-heterocíclico substituído em que R é hidrogênio ou alquila, mono- e di-alquilamino, mono- e di-(alquila k 20 substituída)amino, mono- e di-arilamino, mono- e di-arilamino substituído, mono- e di- heteroarilamino, mono- e di-heteroaril amino substituído, mono- e di-heterocíclico amino, mono- e di-heterocíclico amino substituído, aminas dissubstituídas assimétricas tendo diferentes substituintes independente- mente selecionados do grupo consistindo em alquila, alquila substituída, ari- 25 Ia, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, heterocíclico e hete- rocíclico substituído e grupos amino na arila substituída bloqueados por gru- pos de bloqueio convencionais tais como Boc, Cbz, formila, e similares ou substituídos com -SO2NRR em que R é hidrogênio ou alquila.
"Cicloalquenila" refere-se aos grupos alquenila cíclicos de 3 a 8 30 átomos de carbono tendo única ou múltiplas insaturações porém que não são aromáticos.
"Cicloalcóxi" refere-se aos grupos -O-cicloalquila. "Cicloalcóxi substituído" refere-se aos grupos -O-cicloalquila
substituída.
"Cicloalquila," com referência aos compostos de fórmulas I e Il e os derivados de PEG, refere-se aos grupos alquila cíclicos de 3 a 12 átomos 5 de carbono tendo um único ou múltiplos anéis condensados incluindo, por meio de exemplo, adamantila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo- hexila, ciclo-octila e similares.
"Cicloalquila" refere-se aos grupos alquila cíclicos de 3 a 8 áto- mos de carbono tendo um único anel cíclico incluindo, por meio de exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-octila e similares. São excluídos desta definição grupos alquila de multianéis tais como adamanta- nila, etc.
"Cicloalquila inferior" refere-se aos grupos alquila cíclicos de 3 a
6 átomos de carbono tendo um único anel cíclico incluindo, por meio de e- xemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila e ciclo-hexila.
"Cicloalquila substituída" e "cicloalquenila substituída" referem- se a um grupo cicloalquila ou cicloalquenila, tipicamente de 3 a 8 átomos de carbono, tendo de 1 a 5 substituintes independentemente selecionados do grupo consistindo em oxo (=0), tioxo (=S), alcóxi, alcóxi substituído, acila, 20 acilamino, tiocarbonilamino, acilóxi, amino, amidino, alquilamidino, tioamidi- no, aminoacila, aminocarbonilamino, aminotiocarbonilamino, aminocarboni- lóxi, arila, arila substituída, arilóxi, arilóxi substituído, ariloxiarila, ariloxiarila substituída, halogênio, hidroxila, ciano, nitro, carboxila, carboxilalquila, car- boxil-alquila substituída, carboxil-cicloalquila, carboxil-cicloalquila substituída, 25 carboxilarila, carboxil-arila substituída, carboxilheteroaríla, carboxil- heteroarila substituída, carboxil-heterocíclico, carboxil-heterocíclico substitu- ído, cicloalquila, cicloalquila substituída, guanidino, guanidinossulfona, tiol, tioalquila, tioalquila substituída, tioarila, tioarila substituída, tiocicloalquila, tiocicloalquila substituída, tio-heteroarila, tio-heteroarila substituída, tio- 30 heterocíclico, tio-heterocíclico substituído, heteroarila, heteroarila substituída, heterocíclico, heterocíclico substituído, cicloalcóxi, cicloalcóxi substituído, heteroarilóxi, heteroarilóxi substituído, heterociclilóxi, heterociclilóxi substituí- do, oxicarbonilamino, oxitiocarbonilamino, -0S(0)2-alquila, -0S(0)2-alquila substituída, -0S(0)2-arila, -0S(0)2-arila substituída, -OS(0)2-heteroarila, - OS(0)2-heteroarila substituída, -OS(0)2-heterocíclico, -OS(0)2-heterocíclico substituído, -OSO2-NRR em que R é hidrogênio ou alquila, -NRS(0)2-alquila, 5 -NRS(0)2-alquila substituída, -NRS(0)2-arila, -NRS(0)2-arila substituída, - NRS(0)2-NR-heteroarila, -NRS(0)2-heteroarila substituída, -NRS(O)2- heterocíclico, -NRS(0)2-heterocíclico substituído, -NRS(0)2-NR-alquila, - NRS(0)2-NR-alquila substituída, -NRS(0)2-NR-arila, -NRS(0)2-NR-arila substituída, -NRS(0)2-NR-heteroarila, -NRS(0)2-NR-heteroarila substituída, - 10 NRS(0)2-NR-heterocíclico, -NRS(0)2-NR-heterocíclico substituído em que R é hidrogênio ou alquila, mono- e di-alquilamino, mono- e di-(alquila substituí- da)amino, mono- e di-arilamino, mono- e di-arilamino substituído, mono- e di- heteroarilamino, mono- e di-heteroarilamino substituído, mono- e di- heterocíclico amino, mono- e di-heterocíclico amino substituído, aminas dis- 15 substituídas assimétricas tendo diferentes substituintes independentemente selecionados do grupo consistindo em alquila, alquila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, heterocíclico e heterocíclico substituído e grupos alquinila substituída tendo grupos amino bloqueados por grupos de bloqueio convencionais tais como Boc, Cbz, formila, e simila- 20 res ou grupos alquinila/alquinila substituída substituídos com -S02-alquila, - S02-alquila substituída, -S02-alquenila, -S02-alquenila substituída, -SO2- cicloalquila, -S02-cicloalquila substituída, -S02-arila, -S02-arila substituída, - S02-heteroarila, -S02-heteroarila substituída, -S02-heterocíclico, -SO2- heterocíclico substituído e -SO2NRR em que R é hidrogênio ou alquila.
"Halo" ou "halogênio" refere-se a fluoro, cloro, bromo e iodo.
"Heteroarila" refere-se a um grupo carbocíclico aromático de 2 a 10 átomos de carbono e de 1 a 4 heteroátomos selecionados do grupo con- sistindo em oxigênio, nitrogênio e enxofre dentro do anel ou óxidos do mes- mo. Tais grupos heteroarila podem ter um único anel (por exemplo, piridila 30 ou furila) ou múltiplos anéis condensados (por exemplo, indolizinila ou ben- zotienila) em que um ou mais dos anéis condensados podem ou não podem ser aromáticos contanto que o ponto de ligação seja através de um átomo de anel aromático. Adicionalmente, os heteroátomos do grupo heteroarila po- dem ser oxidados, isto é, para formar N-óxidos de piridina ou 1,1-dioxo- 1,2,5-tiadiazóis e similares. Adicionalmente, os átomos de carbono do anel podem ser substituídos com um oxo (=0). O termo "heteroarila tendo dois 5 átomos de nitrogênio no anel de heteroarila" refere-se a um grupo heteroarila tendo dois, e apenas dois, átomos de nitrogênio no anel de heteroarila e op- cionalmente contendo 1 ou 2 outros heteroátomos no anel de heteroarila, tal como oxigênio ou enxofre.
"Heteroarila substituída" refere-se aos grupos heteroarila que são substituídos com de 1 a 3 substituintes selecionados do grupo consistin- do em hidróxi, acila, acilamino, tiocarbonilamino, acilóxi, alquila, alquila subs- tituída, alcóxi, alcóxi substituído, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, amidino, alquilamidino, tioamidino, amino, aminoacila, aminocarbonilóxi, aminocarbonilamino, aminotiocarbonilamino, arila, arila substituída, arilóxi, arilóxi substituído, cicloalcóxi, cicloalcóxi substituído, he- teroarilóxi, heteroarilóxi substituído, heterociclilóxi, heterociclilóxi substituído, carboxila, carboxilalquila, carboxil-alquila substituída, carboxil-cicloalquila, carboxil-cicloalquila substituída, carboxila ri Ia, carboxil-arila substituída, car- boxilheteroarila, carboxil-heteroarila substituída, carboxilheterocíclico, carbo- xil-heterocíclico substituído, carboxilamido, ciano, tiol, tioalquila, tioalquila substituída, tioarila, tioarila substituída, tio-heteroarila, tio-heteroarila substi- tuída, tiocicloalquila, tiocicloalquila substituída, tio-heterocíclico, tio- heterocíclico substituído, cicloalquila, cicloalquila substituída, guanidino, gua- nidinossulfona, halo, nitro, heteroarila, heteroarila substituída, heterocíclico, heterocíclico substituído, cicloalcóxi, cicloalcóxi substituído, heteroarilóxi, heteroarilóxi substituído, heterociclilóxi, heterociclilóxi substituído, oxicarboni- lamino, oxitiocarbonilamino, -S(0)2-alquila, -S(0)2-alquila substituída, -S(O)2- cicloalquila, -S(0)2-cicloalquila substituída, -S(0)2-alquenila, -S(0)2-alquenila substituída, -S(0)2-arila, -S(0)2-arila substituída, -S(0)2-heteroarila, -S(O)2- heteroarila substituída, -S(0)2-heterocíclico, -S(0)2-heterocíclico substituído, -0S(0)2-alquila, -0S(0)2-alquila substituída, -0S(0)2-arila, -0S(0)2-arila substituída, -0S(0)2-hetemarila, OS(0)2-heteroarila substituída, -OS(O)2- heterocíclico, -OS(0)2-heterocíclico substituído, -OSO2-NRR onde R é hidro- gênio ou alquila, -NRS(0)2-alquila, -NRS(0)2-alquila substituída, -NRS(O)2- arila, -NRS(0)2-arila substituída, -NRS(0)2-heteroarila, -NRS(0)2-heteroarila substituída, -NRS(0)2-heterocíclico, -NRS(0)2-heterocíclico substituído, - 5 NRS(0)2-NR-alquila, -NRS(0)2-NR-alquila substituída, -NRS(0)2-NR-arila, - NRS(0)2-NR-arila substituída, -NRS(0)2-NR-heteroarila, -NRS(O)2-NR- heteroarila substituída, -NRS(0)2-NR-heterocíclico, -NRS(O)2-NR- heterocíclico substituído em que R é hidrogênio ou alquila, mono- e di- alquilamino, mono- e di-(alquila substituída)amino, mono- e di-arilamino, mo- 10 no- e di-arilamino substituído, mono- e di-heteroarilamino, mono- e di- heteroarilamino substituído, mono- e di-heterocíclico amino, mono- e di- heterocíclico amino substituído, aminas dissubstituídas assimétricas tendo diferentes substituintes independentemente selecionados do grupo consis- tindo em alquila, alquila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, hete- 15 roarila substituída, heterocíclico e heterocíclico substituído e grupos amino na arila substituída bloqueados por grupos de bloqueio convencionais tais como Boc, Cbz, formila, e similares ou substituídos com -SO2NRR em que R é hidrogênio ou alquila.
"Heteroarilóxi" refere-se ao grupo -O-heteroarila e "heteroarilóxi k 20 substituído" refere-se ao grupo -O-heteroarila substituída.
"Heteroaralcóxi" refere-se ao grupo heteroaril-alquileno-O-,
"Heteroaralcóxi substituído" refere-se ao grupo heteroaril- alquileno-O- substituído.
"Heterociclo" ou "heterocíclico" refere-se a um grupo saturado ou 25 insaturado tendo um único anel ou múltiplos anéis condensados, de 1 a 10 átomos de carbono e de 1 a 4 heteroátomos selecionados do grupo consis- tindo em nitrogênio, enxofre ou oxigênio dentro do anel em que, em sistemas de anel fundidos, um ou mais anéis podem ser arila ou heteroarila.
"Heterocíclico substituído" refere-se aos grupos heterociclo que 30 são substituídos com de 1 a 3 substituintes selecionados do grupo consistin- do em oxo (=0), tioxo (=S), alcóxi, alcóxi substituído, acila, acilamino, tiocar- bonilamino, acilóxi, amino, amidino, alquilamidino, tioamidino, aminoacila, aminocarbonilamino, aminotiocarbonilamino, aminocarbonilóxi, arila, arila substituída, arilóxi, arilóxi substituído, ariloxiarila, ariloxiarila substituída, ha- logênio, hidroxila, ciano, nitro, carboxila, carboxilalquila, carboxil-alquila substituída, carboxil-cicloalquila, carboxil-cicloalquila substituída, carboxilari- 5 Ia, carboxil-arila substituída, carboxil-heteroarila, carboxil-heteroarila substi- tuída, carboxil-heterocíclico, carboxil-heterocíclico substituído, cicloalquila, cicloalquila substituída, guanidino, guanidinossulfona, tiol, tioalquila, tioalqui- la substituída, tioarila, tioarila substituída, tiocicloalquila, tiocicloalquila substi- tuída, tio-heteroarila, tio-heteroarila substituída, tio-heterocíclico, tio- 10 heterocíclico substituído, heteroarila, heteroarila substituída, heterocíclico, heterocíclico substituído, cicloalcóxi, cicloalcóxi substituído, heteroarilóxi, heteroarilóxi substituído, -C(O)OariIa, -C(0)0-arila substituída, heterocicliló- xi, heterociclilóxi substituído, oxicarbonilamino, oxitiocarbonilamino, -OS(O)2- alquila, -0S(0)2-alquila substituída, -0S(0)2-arila, -0S(0)2-arila substituída, - 15 OS(0)2-heteroarila, -OS(0)2-heteroarila substituída, -OS(0)2-heterocíclico, - OS(0)2-heterocíclico substituído, -OSO2-NRR em que R é hidrogênio ou al- quila, -NRS(0)2-alquila, -NRS(0)2-alquila substituída, -NRS(0)2-arila, - NRS(0)2-arila substituída, -NRS(0)2-heteroarila, -NRS(0)2-heteroarila substi- tuída, -NRS(0)2-heterocíclico, -NRS(0)2-heterocíclico substituído, -NRS(O)2- 20 NR-alquila, -NRS(0)2-NR-alquila substituída, -NRS(0)2-NR-arila, -NRS(O)2- NR-arila substituída, -NRS(0)2-NR-heteroarila, -NRS(0)2-NR-heteroarila substituída, -NRS(0)2-NR-heterocíclico, -NRS(0)2-NR-heterocíclico substitu- ído em que R é hidrogênio ou alquila, mono- e di-alquilamino, mono- e di- (alquila substituída)amino, mono- e di-arilamino, mono- e di-arilamino substi- 25 tuído, mono- e di-heteroarilamino, mono- e di-heteroarilamino substituído, mono- e di-heterocíclico amino, mono- e di-heterocíclico amino substituído, aminas dissubstituídas assimétricas tendo diferentes substituintes indepen- dentemente selecionados do grupo consistindo em alquila, alquila substituí- da, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, heterocíclico e 30 heterocíclico substituído e grupos alquinila substituída tendo grupos amino bloqueados por grupos de bloqueio convencionais tais como Boc, Cbz, for- mila, e similares ou grupos alquinila/alquinila substituída substituídos com - S02-alquila, -SCVaIquiIa substituída, -S02-alquenila, -S02-alquenila substitu- ída, -S02-cicloalquila, -S02-cicloalquila substituída, -S02-arila, -S02-arila substituída, -S02-heteroarila, -S02-heteroarila substituída, -SO2- heterocíclico, -S02-heterocíclico substituído e -SO2NRR onde R é hidrogênio 5 ou alquila.
Exemplos de heterociclos e heteroarilas incluem, porém não são limitados a, azetidina, pirrol, imidazol, pirazol, piridina, pirazina, pirimidina, piridazina, indolizina, isoindol, indol, di-hidroindol, indazol, purina, quinolizina, isoquinolina, quinolina, ftalazina, naftilpiridina, quinoxalina, quinazolina, cino- 10 lina, pteridina, carbazol, carbolina, fenantridina, acridina, fenantrolina, isotia- zol, fenazina, isoxazol, fenoxazina, fenotiazina, imidazolidina, imidazolina, piperidina, piperazina, indolina, ftalimida, 1,2,3,4-tetraidroisoquinolina, 4,5,6,7-tetra-hidrobenzo[b]tiofeno, tiazol, tiazolidina, tiofeno, benzo[b]tiofeno, morfolino, morfolinila, tiomorfolino, tiomorfolinila (também referida como tia- 15 morfolinila), piperidinila, pirrolidina, tetra-hidrofuranila, e similares.
"Opcionalmente substituído" significa que o grupo relacionado pode ser não-substituído ou o grupo relacionado pode ser substituído.
"Veículo farmaceuticamente aceitável" significa um veículo que é útil na preparação de uma composição farmacêutica ou formulação que é k 20 geralmente segura, não-tóxica, e nem biologicamente nem de outra maneira indesejável, e inclui um veículo que é aceitável para uso veterinário bem como uso farmacêutico humano. Um excipiente ou veículo farmaceuticamen- te aceitável inclui ambos um ou mais do que um de tais veículos.
"Cátion farmaceuticamente aceitável" refere-se ao cátion de um 25 sal farmaceuticamente aceitável.
"Sal farmaceuticamente aceitável" refere-se aos sais que man- têm a eficácia biológica e propriedades de compostos que não são biologi- camente ou de outra maneira indesejáveis. Sais farmaceuticamente aceitá- veis referem-se aos sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos, cujos 30 sais são derivados de uma variedade de contraíons orgânicos e inorgânicos bem conhecidos na técnica e incluem, por meio de exemplo apenas, sódio, potássio, cálcio, magnésio, amônio, tetra-alquilamônio, e similares; e quando a molécula contém uma funcionalidade básica, sais de ácidos orgânicos ou inorgânicos, tais como cloridrato, bromidrato, tartarato, mesilato, acetato, maleato, oxalato e similares.
Sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis podem ser preparados de bases inorgânicas e orgânicas. Sais derivados de bases inor- gânicas, incluem por meio de exemplo apenas, sais de sódio, potássio, lítio, amônio, cálcio e magnésio. Sais derivados de bases orgânicas incluem, po- rém não são limitados a, sais de aminas primária, secundária e terciária, tais como alquil aminas, dialquil aminas, trialquil aminas, alquil aminas substituí- das, di(alquila substituída)aminas, tri(alquila substituída)aminas, alquenil a- minas, dialquenil aminas, trialquenil aminas, alquenil aminas substituídas, di(alquenila substituída)aminas, tri(alquenila substituída)aminas, cicloalquil aminas, di(cicloalquil)aminas, tri(cicloalquil)aminas, cicloalquil aminas substi- tuídas, cicloalquil amina dissubstituída, cicloalquil aminas trissubstituídas, cicloalquenil aminas, di(cicloalquenil)aminas, tri(cicloalquenil)aminas, cicloal- quenil aminas substituídas, cicloalquenil amina dissubstituída, cicloalquenil aminas trissubstituídas, aril aminas, diaril aminas, triaril aminas, heteroaril aminas, dieteroaril aminas, trieteroaril aminas, aminas heterocíclicas, aminas dieterocíclicas, aminas trieterocíclicas, di- e tri-aminas misturadas onde pelo menos dois dos substituintes na amina são diferentes e são selecionados do grupo consistindo em alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substi- tuída, cicloalquila, cicloalquila substituída, cicloalquenila, cicloalquenila subs- tituída, arila, heteroarila, heterocíclico, e similares. São também incluídas aminas onde os dois ou três substituintes, juntamente com o nitrogênio de amino, formam um grupo heterocíclico ou heteroarila.
Exemplos de aminas adequadas incluem, por meio de exemplo apenas, isopropilamina, trimetil amina, dietil amina, tri(iso-propil)amina, tri(n- propil)amina, etanolamina, 2-dimetilaminoetanol, trometamina, lisina, argini- na, histidina, cafeína, procaína, hidrabamina, colina, betaína, etilenodiamina, 30 glucosamina, N-alquilglucamínas, teobromo, purinas, piperazina, piperidina, morfolina, N-etilpiperidina, e similares. Deve também ser entendido que ou- tros derivados de ácido carboxílico seriam úteis, por exemplo, amidas de ácido carboxílico, incluindo carboxamidas, alquil carboxamidas inferiores, dialquil carboxamidas, e similares.
Sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis podem ser preparados de ácidos inorgânicos e orgânicos. Sais derivados de ácidos 5 inorgânicos incluem ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, e similares. Sais derivados de ácidos orgânicos inclu- em ácido acético, ácido propiônico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxá- lico, ácido málico, ácido malônico, ácido succínico, ácido maleico, ácido fu- márico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinâmico, ácido 10 mandélico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido p-tolueno- sulfônico, ácido salicílico, e similares.
Um composto pode agir como um profármaco. Profármaco signi- fica qualquer composto que libera um fármaco origem ativo in vivo quando tal profármaco é administrado a um indivíduo mamífero. Profármacos são 15 preparados por modificação de grupos funcionais presentes de uma tal ma- neira que as modificações podem ser clivadas in vivo para liberar o compos- to origem. Profármacos incluem compostos em que um grupo hidróxi, amino, ou sulfidrila é ligado a qualquer grupo que pode ser clivado in vivo para re- generar o grupo hidroxila, amino, ou sulfidrila livre, respectivamente. Exem- k 20 pios de profármacos incluem, porém não são limitados a ésteres (por exem- plo, derivados de acetato, formiato, e benzoato), carbamatos (por exemplo, Ν,Ν-dimetilamino-carbonila) de grupos funcionais hidróxi, e similares.
Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" significa a quantidade de um composto ou anticorpo que, quando administrada a um mamífero pa- 25 ra tratar uma doença, é suficiente para executar tal tratamento para a doen- ça. A "quantidade terapeuticamente eficaz" variará dependendo do compos- to, da doença, e sua severidade e da idade, peso, etc., do mamífero a ser tratado.
Formulações Farmacêuticas dos Compostos 30 Em geral, os compostos serão administrados em uma quantida-
de terapeuticamente eficaz por qualquer um dos modos aceitos de adminis- tração para estes compostos. Os compostos podem ser administrados por uma variedade de rotinas, incluindo, porém não limitadas a, oral, parenteral (por exemplo, rotinas de administração subcutâneas, subdurais, intraveno- sas, intramusculares, intratecais, intraperitoneais, intracerebrais, intra- arteriais, ou intralesionais), tópica, intranasal, localizada (por exemplo, apli- 5 cação cirúrgica ou supositório cirúrgico), retal, e pulmonar (por exemplo, ae- rossóis, inalação, ou pó). Consequentemente, estes compostos são eficazes tanto como composições injetáveis quanto orais. Os compostos podem ser administrados continuamente por infusão ou por injeção em bolo.
A quantidade real do composto, isto é, o ingrediente ativo, de- penderá de vários fatores, tais como a severidade da doença, isto é, a con- dição ou doença a ser tratada, idade, e saúde relativa do indivíduo, a potên- cia do composto usado, a rotina e forma de administração, e outros fatores.
Toxicidade e eficácia terapêutica de tais compostos podem ser determinadas por procedimentos farmacêuticos padrões em culturas de cé- lula ou animais experimentais, por exemplo, para determinar a LD50 (a dose letal em 50% da população) e a ED50 (a dose terapeuticamente eficaz em 50% da população). A relação de dose entre efeitos tóxico e terapêutico é o índice terapêutico e pode ser expressa como a relação LD50ZED50. Os dados obtidos dos ensaios de cultura de célula e estudos animais podem ser usa- dos na formulação de uma faixa de dosagem para uso em humanos. A do- sagem de tais compostos situa-se dentro de uma faixa de concentrações circulantes que incluem a ED5O com pouca ou nenhuma toxicidade. A dosa- gem pode variar dentro desta faixa dependendo da forma de dosagem em- pregada e da rotina de administração utilizada. Para qualquer composto u- sado, a dose terapeuticamente eficaz pode ser estimada inicialmente de en- saios de cultura de célula. Uma dose pode ser formulada em modelos ani- mais para alcançar uma faixa de concentração plasmática circulante que inclui a IC50 (isto é, a concentração do composto teste que alcança uma ini- bição semimáxima de sintomas) como determinada em cultura de célula. Tal informação pode ser usada para mais precisamente determinar doses úteis em humanos. Níveis em plasma podem ser medidos, por exemplo, por cro- matografia líquida de alto desempenho. A quantidade da composição farmacêutica administrada ao pa- ciente variará dependendo do que está sendo administrado, do propósito da administração, tal como profilaxia ou terapia, do estado do paciente, da ma- neira de administração, e similares. Em aplicações terapêuticas, as compo- 5 sições são administradas a um paciente já sofrendo de uma doença em uma quantidade suficiente para curar ou pelo menos parcialmente interromper os sintomas da doença e suas complicações. Uma quantidade adequada para executar, isto é, definida como "dose terapeuticamente eficaz." Quantidades eficazes para este uso dependerão da condição da doença a ser tratada 10 bem como pelo julgamento do médico assistente dependendo de fatores tais como a severidade da inflamação, a idade, peso, e condição geral do paci- ente, e similares.
As composições administradas a um paciente são na forma de composições farmacêuticas descritas supra. Estas composições podem ser 15 esterilizadas por técnicas de esterilização convencionais, ou podem ser esté- reis filtradas. As soluções aquosas resultantes podem ser empacotadas para uso no estado em que se encontram, ou liofilizadas, a preparação Iiofilizada sendo combinada com um veículo aquoso estéril antes da administração. Será entendido que o uso de certos dos excipientes, veículos, ou estabilizan- 20 tes precedentes resultará na formação de sais farmacêuticos.
O composto ativo é eficaz por uma ampla faixa de dosagem e é geralmente administrado em uma quantidade farmaceuticamente- ou tera- peuticamente eficaz. A dosagem terapêutica dos compostos variará de acor- do com, por exemplo, o uso particular para o qual o tratamento é feito, a ma- 25 neira de administração do composto, a saúde e condição do paciente, e o julgamento do médico prescrevente. Por exemplo, para administração intra- venosa, a dose tipicamente será na faixa de cerca de 0,5 mg a cerca de 100 mg por quilograma de peso corporal. Doses eficazes podem ser extrapola- das de curvas de resposta à dose derivadas de sistemas testes de modelo 30 animal ou in vitro. Tipicamente, o clínico administrará o composto até uma dosagem ser alcançada que obtém o efeito desejado.
Quando empregados como produtos farmacêuticos, os compos- tos são habitualmente administrados na forma de composições farmacêuti- cas. Composições farmacêuticas contêm como o ingrediente ativo um ou mais dos compostos acima, associados com um ou mais excipientes ou veí- culos farmaceuticamente aceitáveis. O excipiente empregado é tipicamente 5 um adequado para administração a indivíduos humanos ou outros mamífe- ros. Na preparação das composições, o ingrediente ativo é habitualmente misturado com um excipiente, diluído por um excipiente, ou incluso dentro de um veículo que pode ser na forma de uma cápsula, sachê, papel ou outro recipiente. Quando o excipiente serve como um diluente, ele pode ser um 10 material sólido, semissólido, ou líquido, que age como um veículo, portador, ou meio para o ingrediente ativo. Desse modo, as composições podem ser na forma de comprimidos, pílulas, pós, lozangos, sachês, selos, elixires, suspensões, emulsões, soluções, xaropes, aerossóis (como um sólido ou em um meio líquido), unguentos contendo, por exemplo, até 10% em peso 15 do composto ativo, cápsulas de gelatina macia e dura, supositórios, soluções injetáveis estéreis, e pós empacotados estéreis.
Na preparação de uma formulação, pode ser necessário moer o composto ativo para fornecer o tamanho de partícula apropriado antes da combinação com os outros ingredientes. Se o composto ativo for substanci- 20 almente insolúvel, ordinariamente será moído para um tamanho de partícula de menos do que 200 mesh. Se o composto ativo for substancialmente solú- vel em água, o tamanho de partícula será normalmente ajustado por moa- gem para fornecer uma distribuição substancialmente uniforme na formula- ção, por exemplo, cerca de 40 mesh.
Alguns exemplos de excipientes adequados incluem lactose,
dextrose, sacarose, sorbitol, manitol, amidos, goma acácia, fosfato de cálcio, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato de cálcio, celulose microcristalina, polivinilpirrolidona, celulose, água estéril, xarope, e metil celulose. As formu- lações podem adicionalmente incluir: agentes lubrificantes tais como talco, 30 estearato de magnésio, e óleo mineral; agentes umectantes; agentes emulsi- ficantes e de suspensão; agentes de conservação tais como metil- e propil- hidróxi-benzoatos; agentes adoçantes; e agentes aromatizantes. As compo- sições da invenção podem ser formuladas a fim de fornecer liberação rápida, sustentada, ou retardada do ingrediente ativo após administração ao pacien- te por emprego de procedimentos conhecidos na técnica.
A quantidade de composto ativo na composição farmacêutica e 5 forma de dosagem unitária da mesma podem ser variadas ou ajustadas am- plamente dependendo da aplicação particular, da maneira ou introdução, da potência do composto particular, e da concentração desejada. O termo "for- mas de dosagem unitária" refere-se às unidades fisicamente distintas ade- quadas como dosagens unitárias para indivíduos humanos e outros mamífe- 10 ros, cada unidade contendo uma quantidade pré-determinada de material ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado, em associação com um excipiente farmacêutico adequado.
O composto pode ser formulado para administração parenteral em um veículo inerte adequado, tal como uma solução salina fisiológica es- 15 téril. A dose administrada será determinada por rotina de administração.
Administração de agentes terapêuticos por formulação intrave- nosa é bem conhecida na indústria farmacêutica. Uma formulação intrave- nosa deve possuir certas qualidades com exceção de ser apenas uma com- posição na qual o agente terapêutico é solúvel. Por exemplo, a formulação
1 20 deve promover a estabilidade total do(s) ingrediente(s) ativo(s), além disso, a fabricação da formulação deve ser eficaz em custo. Todos estes fatores ul- timamente determinam o sucesso total e utilidade de uma formulação intra- venosa.
Outros aditivos acessórios que podem ser incluídos em formula- 25 ções farmacêuticas e compostos como segue: solventes: etanol, glicerol, propileno glicol; estabilizantes: EDTA (ácido tetra-acético de diamina de eti- leno), ácido cítrico; conservantes antimicrobianos: álcool benzílico, metil pa- rabeno, propil parabeno; agentes de tamponamento: ácido cítrico/citrato de sódio, tartarato de hidrogênio de potássio, tartarato de hidrogênio de sódio, 30 ácido acético/acetato de sódio, ácido maleico/maleato de sódio, ftalato de hidrogênio de sódio, ácido fosfórico/fosfato de di-hidrogênio de potássio, áci- do fosfórico/fosfato de hidrogênio de dissódio; e modificadores de tonicidade: cloreto de sódio, manitol, dextrose.
A presença de um tampão pode ser necessária para manter o pH aquoso na faixa de cerca de 4 a cerca de 8. O sistema tampão é geral- mente uma mistura de um ácido fraco e um sal solúvel do mesmo, por e- 5 xemplo, citrato de sódio/ácido cítrico; ou o sal de monocátion ou dicátion de um ácido dibásico, por exemplo, tartarato de hidrogênio de potássio; tartara- to de hidrogênio de sódio, ácido fosfórico/fosfato de di-hidrogênio de potás- sio, e ácido fosfórico/fosfato de hidrogênio de dissódio.
A quantidade de sistema tampão usada é dependente do (1) pH 10 desejado; e (2) a quantidade de fármaco. Geralmente, a quantidade de tam- pão usada está em uma relação molar de 0,5 : 1 a 50 : 1 de tampão: alen- dronato (onde os mois de tampão são empregados como os mois combina- dos dos ingredientes tampões, por exemplo, citrato de sódio e ácido cítrico) de formulação para manter um pH na faixa de 4 a 8 e geralmente, uma rela- 15 ção molar de 1 : 1 a 10 : 1 de tampão (combinado) para fármaco presente é usada.
Um tampão útil é citrato de sódio/ácido cítrico na faixa de 5 a 50 mg por ml de citrato de sódio para 1 a 15 mg por ml de ácido cítrico, suficien- te para manter um pH aquoso de 4-6 da composição.
O agente tampão pode também estar presente para prevenir a
precipitação do fármaco através da formação de complexo de metal solúvel com íons de metal dissolvidos, por exemplo, Ca, Mg, Fe, Al, Ba, que podem lixiviar-se de recipientes de vidro ou tampões de borracha ou estar presente em água de torneira ordinária. O agente pode agir como um agente de com- 25 plexo competitivo com o fármaco e produzir um complexo de metal solúvel resultando na presença de particulados indesejáveis.
Além disso, a presença de um agente, por exemplo, cloreto de sódio em uma quantidade de cerca de 1-8 mg/ml, para ajustar a tonicidade ao mesmo valor do sangue humano pode ser requerida para evitar a incha- 30 ção ou retração de eritrócitos na administração da formulação intravenosa resultando em efeitos colaterais indesejáveis tais como náusea ou diarréia e possivelmente em distúrbios sanguíneos associados. Em geral, a tonicidade da formulação iguala-se àquela do sangue humano que é na faixa de 282 a 288 mOsm/kg, e em geral é 285 mOsm/kg, que é equivalente à pressão os- mótica correspondente a uma solução a 0,9% de cloreto de sódio.
Uma formulação intravenosa pode ser administrada por injeção 5 intravenosa direta, bolo i.v., ou pode ser administrada por infusão por adição a uma solução de infusão apropriada tal como injeção de cloreto de sódio a 0,9% ou outra solução de infusão compatível.
As composições são preferivelmente formuladas em uma forma de dosagem unitária, cada dosagem contendo de cerca de 5 a cerca de 100 10 mg, mais habitualmente cerca de 10 a cerca de 30 mg, do ingrediente ativo. O termo "formas de dosagem unitária" refere-se às unidades fisicamente distintas adequadas como dosagens unitárias para indivíduos humanos e outros mamíferos, cada unidade contendo uma quantidade pré-determinada de material ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado, em 15 associação com um excipiente farmacêutico adequado.
O composto ativo é eficaz por uma ampla faixa de dosagem e é geralmente administrado em uma quantidade farmaceuticamente eficaz. Se- rá entendido, entretanto, que a quantidade do composto realmente adminis- trado será determinada por um médico, levando em consideração as cir- 20 cunstâncias relevantes, incluindo a condição a ser tratada, a rotina escolhida de administração, o composto real administrado, a idade, peso, e resposta do paciente individual, a severidade dos sintomas do paciente, e similares.
Para preparar composições sólidas tais como comprimidos, o ingrediente ativo principal é misturado com um excipiente farmacêutico para 25 formar uma composição de pré-formulação sólida contendo uma mistura homogênea de um composto da presente invenção. Quando referindo-se a estas composições de pré-formulação como homogêneas, pretende-se que o ingrediente ativo seja disperso uniformemente em toda a composição de modo que a composição possa ser facilmente subdividida em formas de do- 30 sagem unitária igualmente eficazes tais como comprimidos, pílulas e cápsu- las. Esta pré-formulação sólida é em seguida subdividida em formas de do- sagem unitária do tipo descrito acima contendo de, por exemplo, 0,1 a cerca de 500 mg do ingrediente ativo.
Os comprimidos ou pílulas podem ser revestidos ou de outra maneira combinados para fornecer uma forma de dosagem fornecendo a vantagem de ação prolongada. Por exemplo, o comprimido ou pílula pode 5 compreender um componente de dosagem interna e um de dosagem exter- na, o último sendo na forma de um envelope sobre o anterior. Os dois com- ponentes podem ser separados por uma camada entérica que serve para resistir à desintegração no estômago e permitir o componente interno passar intacto no duodeno ou ser retardado em liberação. Uma variedade de mate- 10 riais pode ser usada para tais camadas entéricas ou revestimentos, tais ma- teriais incluindo vários ácidos poliméricos e misturas de ácidos poliméricos com tais materiais como goma-laca, álcool cetílico, e acetato de celulose.
As formas líquidas nas quais as novas composições podem ser incorporadas para administração oralmente ou por injeção incluem soluções 15 aquosas, xaropes adequadamente aromatizados, suspensões aquosas ou oleosas, e emulsões aromatizadas com óleos comestíveis tais como óleo de caroço de algodão, óleo de sésamo, óleo de coco, ou óleo de amendoim, bem como elixires e veículos farmacêuticos similares.
Composições para inalação ou insuflação incluem soluções e 20 suspensões em solventes orgânicos ou aquosos, farmaceuticamente aceitá- veis, ou misturas dos mesmos, e pós. As composições líquidas ou sólidas podem conter excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados como descrito supra. Composições em solventes farmaceuticamente aceitáveis podem ser nebulizadas por uso de gases inertes. Soluções nebulizadas po- 25 dem ser respiradas diretamente do dispositivo de nebulização ou o dispositi- vo de nebulização pode ser ligado a uma tenda de máscara de face, ou má- quina de respiração de pressão positiva intermitente. Composições em solu- ção, suspensão, ou pó podem ser administradas por dispositivos que distri- buem a formulação de uma maneira apropriada.
Os compostos podem ser administrados em uma forma de libe-
ração sustentada. Exemplos adequados de preparações de liberação sus- tentada incluem matrizes semipermeáveis de polímeros hidrofóbicos sólidos contendo a proteína, cujas matrizes são na forma de artigos moldados, por exemplo, películas, ou microcápsulas. Exemplos de matrizes de liberação sustentada incluem poliésteres, hidrogéis (por exemplo, poli(2-hidroxietil- metacrilato) como descrito por Langer e outros, J. Biomed. Mater. Res. 15: 5 167-277 (1981) e Langer, Chem. Tech. 12: 98-105 (1982) ou álcool poliviníli- co)), polilactídeos (Patente U.S. n° 3.773.919), copolímeros de ácido L- glutâmico e gama etil-1-glutamato (Sidman e outros, Biopolymers 22: 547- 556, 1983), etileno-acetato de vinila não degradável (Langer e outro, supra), copolímeros de ácido lático-ácido glicólico degradáveis tais como o LUPRON 10 DEPOT® (isto é, microesferas injetáveis compostas de copolímero de ácido lático-ácido glicólico e acetato de leuprolida), e ácido poli-D-(-)-3- hidroxibutírico (EP 133.988).
Os compostos podem ser administrados em uma forma de libe- ração sustentada, por exemplo uma injeção de depósito, preparação de im- 15 plante, ou bomba osmótica, que pode ser formulada de uma tal maneira co- mo para permitir uma liberação sustentada do ingrediente ativo. Implantes para formulações de liberação sustentada são bem conhecidos na técnica. Implantes podem ser formulados como, incluindo porém não limitados a, mi- croesferas, pranchas, com polímeros biodegradáveis ou não-biodegradáveis. 20 Por exemplo, polímeros de ácido lático e/ou ácido glicólico formam um polí- mero erosível que é bem tolerado pelo hospedeiro.
Os seguintes exemplos de formulação ilustram composições farmacêuticas.
Exemplo de Formulação 1 Cápsulas de gelatina dura contendo os seguintes ingredientes
são preparadas:
Ingrediente_Quantidade (mg/cápsula)_
Ingrediente ativo 30,0
Amido 305,0
Estearato de magnésio 5,0
Os ingredientes acima são misturados e carregados em cápsu- las de gelatina dura em quantidades de 340 mg. Exemplo de Formulação 2
Uma fórmula de comprimido é preparada usando os ingredientes
abaixo:
Ingrediente_Quantidade (mg/cápsula)_
Ingrediente ativo 25,0
Celulose microcristalina 200,0
Dióxido de silício coloidal 10,0
Ácido esteárico 5,0
Os componentes são misturados e prensados para formar com- primidos, cada um pesando 240 mg.
Exemplo de Formulação 3
Uma formulação inaladora de pó seco é preparada contendo os seguintes componentes:
Ingrediente_Peso %_
Ingrediente ativo 5
Lactose 95
A mistura ativa é misturada com a Iactose e a mistura é adicio- nada a um aparelho de inalação de pó seco.
Exemplo de Formulação 4
Comprimidos, cada qual contendo 30 mg de ingrediente ativo, são preparados como segue:
Ingrediente_Quantidade (mg/cápsula)_
Ingrediente ativo 30,0 mg
Amido 45,0 mg
Celulose microcristalina 35,0 mg
Polivinilpirrolidona (como solução a 4,0 mg
10% em água)
Carboximetil amido de sódio 4,5 mg
Estearato de magnésio 0,5 mg
Talco 1,0 mg
Total 120 mg
O ingrediente ativo, amido, e celulose são passados através de uma peneira U.S. de 20 mesh e misturados cuidadosamente. A solução de polivinilpirrolidona é misturada com os pós resultantes, que são em seguida passados através de uma peneira U.S. de malha 16. Os grânulos desse mo- do produzidos são secados em 50° a 60°C e passados através de uma pe- 5 neira U.S. de 16 mesh. O carboximetil amido de sódio, estearato de magné- sio, e talco, previamente passados através de uma peneira U.S. de 30 mesh, são em seguida adicionados aos grânulos, que após mistura, são prensados em uma máquina de comprimido para produzir comprimidos cada um pe- sando 150 mg.
Exemplo de Formulação 5
Cápsulas, cada qual contendo 40 mg de medicamento, são pre- paradas como segue:
Ingrediente_ Quantidade (mg/cápsula)_
Ingrediente ativo 40,0 mg
Amido 109,0 mg
Estearato de magnésio 1,0 mg
Total 150,mg
O ingrediente ativo, celulose, amido, um estearato de magnésio são misturados, passados através de uma peneira U.S. de 20 mesh, e car- regados em cápsulas de gelatina dura em quantidades de 150 mg.
Exemplo de Formulação 6
Supositórios, cada qual contendo 25 mg de ingrediente ativo, são preparados como segue:
Ingrediente_Quantidade__
Ingrediente ativo 25 mg
Glicerídeos de ácidos graxos saturados para 2,000 mg
O ingrediente ativo é passado através de uma peneira U.S. de 60 mesh e suspenso nos glicerídeos de ácido graxo saturado previamente derretidos usando o aquecimento mínimo necessário. A mistura é em segui- da vertida em um molde de supositório de capacidade nominal de 2,0 g e deixada resfriar.
Exemplo de Formulação 7 Suspensões, cada qual contendo 50 mg de medicamento por 5,0 ml de dose, são preparadas como segue:
Ingrediente_Quantidade___
Ingrediente ativo 50,0 mg
Goma Xantana 4,0 mg
Carboximetil celose de sódio (11 %) 500 mg
Celulose microcristalina (89%)
Sacarose 1,75 g
Benzoato de sódio 10,0 mg
Saborecor q.v.
Água purificada para
O medicamento, sacarose, e goma Xantana são misturados, passados através de uma peneira U.S. de 10 mesh, e em seguida mistura- 5 dos com uma solução previamente preparada da celulose microcristalina e carboximetil celulose de sódio em água. O benzoato de sódio, sabor, e cor são diluídos com um pouco da água e adicionados com agitação. Água sufi- ciente é em seguida adicionada para produzir o volume requerido.
Exemplo de Formulação 8 Comprimidos de gelatina dura, cada qual contendo 15 mg de
ingrediente ativo, são preparados como segue:
Ingrediente_Quantidade (mg/cápsula)_
Ingredienteativo 15,0 mg
Amido 407,0 mg
Estearato de magnésio 3,0 mg
Total 425,0 mg
O ingrediente ativo, celulose, amido, e estearato de magnésio são misturados, passados através de uma peneira U.S. de 20 mesh, e car- regados em cápsulas de gelatina dura em quantidades de 560 mg.
Exemplo de Formulação 9
Uma formulação intravenosa pode ser preparada como segue:
Ingrediente__Quantidade_
Ingrediente ativo 250,0 mg Salina isotônica IOOOmI
Composições de composto terapêutico geralmente são coloca- das em um recipiente tendo uma porta de acesso estéril, por exemplo, uma bolsa ou frasconete de solução intravenosa tendo um tampão perfurável por uma agulha de injeção hipodérmica ou instrumento afiado similar.
Exemplo de Formulação 10
Uma formulação tópica pode ser preparada como segue:
Ingrediente_Quantidade_
Ingredienteativo 1-10 g
Cera emulsificante 30 g
Parafina líquida 20 g
Parafina macia branca para 100 g
A parafina macia branca é aquecida até derreter. A parafina lí- quida e cera emulsificante são incorporadas e agitadas até dissolverem-se.
O ingrediente ativo é adicionado e a agitação é continuada até dispersar-se. A mistura é em se- guida resfriada até solidificar-se.
Exemplo de Formulação 11
Uma formulação de aerossol pode ser preparada como segue: uma solução do composto candidato em bicarbonato de sódio/salina a 0,5% (peso/volume) em uma concentração de 30,0 mg/ml é preparada usando o seguinte procedimento:
A. Preparação de Solução de Matéria Prima de solução salina / Bicarbonato
Ingrediente Grama/100,0 ml Concentração final Bicarbonato de sódio 0,5 g 0,5 % Salina q.s. ad 100,0 ml q.s. ad 100% Procedimento:
1. Adicionar 0,5 g de bicarbonato de sódio em um frasco volumé-
trico de 100 ml.
2. Adicionar aproximadamente 90,0 ml de salina e sonicado até se dissolver. 3. Q.S. para 100,0 ml com salina e misturar cuidadosamente.
B. Preparação de 30,0 mg/ml de Composto Candidato: 10.0 ml
Ingrediente Grama/10,0 ml Concentração final Composto candidato 0,300 g 30,0 mg/ml Solução de Matéria q.s. ad 10,0 ml q.s. ad 100% Prima de solução salina / Bicarbonato de sódio a 0,5% Procedimento:
1. Adicionar 0,300 g do composto candidato em um frasco volu- métrico de 10,0 ml.
2. Adicionar aproximadamente 9,7 ml de solução de matéria pri- ma de solução salina / bicarbonato de sódio a 0,5%.
3. Sonicar até o composto candidato ser completamente dissol- vido.
4. Q.S. para 10,0 ml com solução de matéria prima de solução
salina / bicarbonato de sódio a 0,5% e misturar.
Dispositivos de liberação transdérmica ("emplastros") podem também ser empregados. Tais emplastros transdérmicos podem ser usados para fornecer infusão contínua ou descontínua dos compostos em quantida- 15 des controladas. A construção e uso de emplastros transdérmicos para a liberação de agentes farmacêuticos são bem conhecidos na técnica. Vide, por exemplo, Patente U.S. n° 5.023.252, emitida em 11 de Junho, 1991, in- corporada aqui por referência. Tais emplastros podem ser construídos para liberação contínua, pulsátil, ou imediata de agentes farmacêuticos.
Técnicas de colocação direta ou indireta podem ser usadas
quando for desejável ou necessário introduzir a composição farmacêutica no cérebro. Técnicas diretas geralmente envolvem a colocação de um catéter de liberação de fármaco no sistema ventricular do hospedeiro para desviar a barreira hematoencefálica. Um tal sistema de liberação implantável usado 25 para o transporte de fatores biológicos para regiões anatômicas específicas do corpo é descrito na Patente U.S. n° 5.011.472, que é aqui incorporada por referência. Técnicas indiretas geralmente envolvem formulação das composições para prover latenciação de fármaco pela conversão de fárma- cos hidrofílicos em fármacos solúveis em lipídio. A latenciação é geralmente alcançada através de bloqueio dos grupos hidróxi, carbonila, sulfato, e amina 5 primária presentes no fármaco para tornar o fármaco mais solúvel em lipídio e receptivo para transporte através da barreira hematoencefálica. Alternati- vamente, a distribuição de fármacos hidrofílicos pode ser realçada por infu- são intra-arterial de soluções hipertônicas que podem transitoriamente abrir a barreira hematoencefálica.
A fim de realçar a meia-vida de soro, os compostos podem ser
encapsulados, introduzidos no lúmen de lipossomas, preparados como um coloide, ou outras técnicas convencionais podem ser empregadas que for- necem uma meia-vida de soro estendida dos compostos. Uma variedade de métodos está disponível para preparar lipossomas, como descrito em, por 15 exemplo, Szoka e outros, Patente U.S. n—4.235.871, 4.501.728 e 4.837.028 cada um dos quais é incorporado aqui por referência.
Composições farmacêuticas são adequadas para uso em uma variedade de sistemas de liberação de fármaco. Formulações adequadas para uso na presente invenção são encontradas em Remington1S Pharma- ceutical Sciences, Mace Publishing Company, Philadelphia, PA, 17a ed. (1985).
Utilidade
Os compostos e composições farmacêuticas fornecidos mostram atividade biológica em tratamento e prevenção de infecções virais e doenças associadas, e, consequentemente, têm utilidade em tratamento de infecções virais e doenças associadas, tais como viroses de febre hemorrágica, em mamíferos incluindo humanos.
Viroses de febre hemorrágica (HFVs) são viroses de RNA que causam uma variedade de síndromes de doença com características clínicas similares. HFVs que são de interesse como armas biológicas potenciais in- cluem porém não são limitadas a: Arenaviridae (Junín, Machupo, Guanarito, Sábia, Lassa, Tacaribe, Pinchinde, e VSV), Filoviridae (viroses por ebola e Marburg), Flaviviridae (febre amarela, febre hemorrágica de omsk e Viroses da doença da Kyasanur florest), e Bunyaviridae (febre do Rift Valley). As a- renaviroses de ocorrência natural e arenaviroses planejadas potenciais são incluídas na lista de patógeno de Categoria A de acordo com o Center for 5 Disease Control and Prevention como estando entre aqueles agentes que têm o maior potencial para casualidades em massa.
Fatores de risco incluem: viagem para África ou Ásia, manipula- ção de carcaças de animal, contato com pessoas ou animais infectados, e/ou mordidas de artrópode. Arenaviroses são altamente infecciosas após 10 contato direto com secreções corporais e/ou sangue infectados. Humanos geralmente tornam-se infectados através de contato com roedores infecta- dos, a mordida de um artrópode infectado, contato direto com carcaças de animal, inalação de excreções de roedor infeccioso e/ou injeção de alimento contaminado com excreções de roedor. O vírus Tacaribe foi associado com 15 morcegos. Transmissão aerotransportada de febre hemorrágica é outro mo- do, porém um pouco menos comum. Contato pessoa a pessoa pode tam- bém ocorrer em alguns casos.
Todos das febres hemorrágicas exibem sintomas clínicos simila- res. Entretanto, em geral as manifestações clínicas são não-específicas e 20 variáveis. O período de incubação é aproximadamente 7-14 dias. O início é gradual com febre e mal-estar, taquipneia, bradicardia relativa, hipotensão, choque circulatório, injeção conjuntival, faringite, linfadenopatia, encefalite, mialgia, dor dorsal, cefaleia e tonteira, bem como hiperestesia da pele. Al- guns pacientes infectados podem não desenvolver manifestações hemorrá- 25 gicas.
Métodos de diagnóstico em laboratórios especializados incluem detecção de antígeno por ensaio imunossorvente ligado à enzima de captura de antígeno (ELISA), detecção de anticorpo IgM por ensaio imunossorvente ligado à enzima de captura de anticorpo, reação em cadeia de polimerase de 30 transcriptase reversa (RT-PCR), e isolamento viral. Detecção de antígeno (por ensaio imunossorvente ligado à enzima) e reação em cadeia de polime- rase de transcriptase reversa são as técnicas diagnosticas mais úteis no ce- nário clínico agudo. Isolamento viral é de valor limitado porque requer um laboratório de biossegurança de nível 4 (BSL-4).
Exemplos
Esforços foram feitos para garantir exatidão com respeito aos 5 números usados (por exemplo, quantidades, temperatura, etc.) porém al- guns erros experimentais e divergências devem ser considerados. A menos que indicado de outra maneira, partes são partes por peso, peso molecular é peso molecular médio, temperatura é em graus Centígrados, e pressão é ou perto de atmosférica. Abreviações não definidas acima adotam seu signifi- 10 cado geralmente aceito.
Síntese de Compostos
Os compostos são facilmente preparados por meio de diversas rotinas sintéticas divergentes com a rotina particular selecionada relativa à facilidade de preparação do composto, a disponibilidade comercial de mate- 15 riais de partida, e similares.
Os compostos podem ser preparados de materiais de partida facilmente disponíveis usando os seguintes métodos e procedimentos ge- rais. Será apreciado que onde condições de processo (isto é, temperaturas de reação, tempos, taxas molares de reagentes, solventes, pressões, etc.)
‘ 20 são fornecidas, outras condições de processo podem também ser usadas a menos que de outra maneira relatado. Condições de reação ideais podem variar com os reagentes ou solvente particulares usados, porém tais condi- ções podem ser determinadas por alguém versado na técnica por procedi- mentos de otimização de rotina.
25 Adicionalmente, como será evidente para aqueles versados na
técnica, grupos de proteção convencionais podem ser necessários para pre- venir certos grupos funcionais de passarem por reações indesejadas. Gru- pos de proteção adequados para vários grupos funcionais bem como condi- ções adequadas para proteção e desproteção de grupos funcionais particu- 30 lares são bem conhecidas na técnica, por exemplo, numerosos grupos de proteção são descritos em T. W. Greene e G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Segunda Edição, Wiley, Nova Iorque, 1991, e referências citadas aqui.
Além disso, os compostos tipicamente conterão um ou mais cen- tros quirais. Consequentemente, se desejado, tais compostos podem ser preparados ou isolados como estereoisômeros puros, isto é, como enantiô- 5 meros individuais ou diastereômeros, ou como misturas enriquecidas de es- tereoisômero. Todos tais estereoisômeros (e misturas enriquecidas) são in- cluídos a menos que de outra maneira indicado. Estereoisômeros puros (ou misturas enriquecidas) podem ser preparados usando, por exemplo, materi- ais de partida oticamente ativos ou reagentes estereosseletivos bem conhe- 10 cidos na técnica. Alternativamente, misturas racêmicas de tais compostos podem ser separadas usando, por exemplo, cromatografia de coluna quiral, agentes de resolução quirais, e similares.
A menos que de outra maneira indicado, os produtos são uma mistura de enantiômeros R, S. Entretanto, quando um produto quiral é dese- jado, o produto quiral pode ser obtido por meio de técnicas de purificação que separam enantiômeros de uma mistura de R, S para prover um ou o ou- tro estereoisômero. Tais técnicas são conhecidas na técnica.
Em outra modalidade, os compostos podem ser fornecidos como profármacos que convertem-se (por exemplo, hidrolisam-se, metabolizam- se, etc.) in vivo em um composto acima.
Os seguintes Métodos foram usados para preparar os compos- tos mencionados abaixo como indicado.
Exemplos 1-12. 14-45. 47-50
Os compostos de Exemplos 1-50 foram preparados seguindo o procedimento geral abaixo mencionado para o Exemplo 13 usando o com- posto 13 (a) e reagindo com as seguintes benzenossulfonil-hidrazinas: 4- fenilbenzenossulfonil hidrazina, 4-t-butilbenzenossulfonil hidrazina, 4-metil- 3,4-di-hidro-2,7-benzo[1,4]oxazina-7-sulfonil hidrazina, 5-(1-
dimetilaminonaftil)sulfonil hidrazina, 2,4,6-trimetilbenzenossulfonil hidrazina, 3-cloro-6-metoxibenzenossulfonil hidrazina, 2,5-dimetoxibenzenossulfonil hidrazina, 4-(4-[1,2,3]tiadiazolil)benzenossulfonil hidrazina, 3- bromobenzenossulfonil hidrazina, 4-bromobenzenossulfonil hidrazina, 4- metilbenzenossulfonil hidrazina, 4-metoxibenzenossulfonil hidrazina, 3-flúor- 4-clorobenzenossulfonil hidrazina, 4-trifluorometoxibenzenossulfonil hidrazi- na, 4-fluorobenzenossulfonil hidrazina, 3-metoxibenzenossulfonil hidrazina, 2-metilbenzenossulfonil hidrazina, 3-trifluorometilbenzenossulfonil hidrazina, 5 2,4-dimetoxibenzenossulfonil hidrazina, 5-cloro-1,3-dimetil-IH-pirazolilsulfonil hidrazina, 3-metilbenzenossulfonil hidrazina, 4-trifluorometilbenzenossulfonil hidrazina, 2-trifluorometilbenzenossulfonil hidrazina, 4-(pirrolidin-1- sulfonil)benzenossulfonil hidrazina, 2-clorobenzenossulfonil hidrazina, 5-(2- morfolin-4-il)piridilsulfonil hidrazina, 2-trifluorometoxibenzenossulfonil hidra- 10 zina, 2,4-diclorobenzenossulfonil hidrazina, 3-difluorometiibenzenossulfonil hidrazina, 3-cianobenzenossulfonil hidrazina,
4-cianobenzenossulfonil hidrazina, 5-(2,3-di-hidrobenzo[1,4]dioxinil)sulfonil hidrazina, 2-(4-metilbenzenossulfonil)-1-metil hidrazina, 3- fluorobenzenossulfonil hidrazina, 3,4-difluorobenzenossulfonil hidrazina, 2,4- 15 dimetiltiazol-5-ilsulfonil hidrazina, 4-acetilbenzenossulfonil hidrazina, 2,6- difluorobenzenossulfonil hidrazina, 2-fluorobenzenossulfonil hidrazina, 2,5- difluorobenzenossulfonil hidrazina, 1-(4-metilbenzenossulfonil)-1-metil hidra- zina, 2,6-diclorobenzenossulfonil hidrazina, 2,6- ditrifluorometilbenzenossulfonil hidrazina, 3,5-dimetilisoxazol-5-ilsulfonil hi- ^ 20 drazina, 4-nitrobenzenossulfonil hidrazina, (l-metilimidazol-4-il)sulfonil hidra- zina, e metilsulfonil hidrazina.
Exemplo 13
Preparação de N-2-( 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(4-
difluorometoxifenil)sulfonil]hidrazina-1-carboxamida 25 a. Preparação de 1.1.1.3.3.3-hexafluoro-2-isocianato-2-metilpropano, com- posto 13(a)
13(a) Uma solução de trimetilsililazida (26 ml, 180 mmols) foi lenta-
mente adicionada gota a gota a uma solução de fluoreto de 2,2- bis(trifluorometil)propionila (38 g, 179 mmols) e cloreto de benziltrietilamônio (0,065 g, 0,28 mmol) em xilenos (120 ml) a O0C. Na conclusão da adição, a 5 mistura resultante foi aquecida a 110 °C. Após 4 h, a mistura foi destilada a 760 mm de Hg, e a fração em ebulição a 40-50°C continha 13(a). Produção do produto líquido é de 60%.
b. Preparação de N-2-(1.1.1.3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil-2-fY4- difluorometoxifeniOsulfonillhidrazina-1-carboxamida
0,25 mmol) em trietilamina (25 mg, 0,25 mmol) em 1 ml de THF seco foi adi- cionada hidrazina anidrosa (15 mg, 0,26 mmol) em temperatura ambiente. Após agitar em temperatura ambiente durante 2 h, uma solução de
1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-isocianato-2-metilpropano (13a) (54 mg, 0,26 mmol)
em 1 ml de dietiléter. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambien- te durante 12 h. O solvente foi removido em vácuo, e o material bruto sub- metido à HPLC de fase reversa fornecendo o produto como um sólido cero- so branco (83 mg, 75%).
Exemplo 46
Preparação de N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2-[(4-
metHfenH)sulfonil]hidrazina-1 -metilcarboxamida
o,
10 A uma solução de N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-metilpropil)-2- [(4-metilfenil)sulfonil]hidrazina-1-carboxamida (100 mg, 0,254 mmol) prepa- rada como descrito acima, e carbonato de césio (165 mg, 0,51 mmol) em 1,6 ml de NMP foi adicionado iodometano (17,5 ml, 0,28 mmol). A mistura ama- 5 rela foi agitada em temperatura ambiente durante 2 h antes da adição de 5 ml de água. A mistura foi extraída com EtOAc, e a fase orgânica lavada su- cessivamente com água e salmoura. A fase orgânica foi secada sobre Mg- SO4, e concentrada em vácuo. O produto bruto foi cromatografado em sílica- gel com EtOAc a 10% em hexanos.
Exemplo 51
Preparação de 4-fenilpiperazina-1 -(2,2,2-trifIuoro-1 -metil-1 -trifluorometiletil)- carboxamida
A 1-fenilpiperazina (0,04 ml, 0,25 mmol) foi adicionado
1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- ísocianato-2-metilpropano (13a) (124 mg, 0,6 mmol) em 1 ml de dietiléter. A mistura foi agitada em temperatura ambiente em um frasconete firmemente tampado durante 12 h. A mistura reacional foi submetida à HPLC de fase reversa (CH3CN/H20) e o produto isolado Iiofili- zado para fornecer o produto como um sólido branco.
Exemplos 52-98
Os compostos de Exemplos 52-98 foram preparados seguindo o
procedimento geral acima mencionado para o exemplo 51 usando o com- posto 13(a) e reagindo com as seguintes aminas ou anilinas: morfolina, 2- acetilanilina, piperidina, 3,4,5-trimetoxianilina, 4-trifluorometilanilina, A- metilpiperazina, 1-aminonaftaleno, 2-cloroanilina, 4-fenilpiperidina, 2- 25 fenilanilina, 2,6-difluoroanilina, 2-amimobenzamida, 2-cloro-6-fluoroanilina, 3- trifluorometilanilina, 2-aminobenzenossulfonamida, 5-amino(2,2,3,3- Tetrafluoro-2,3-di-hidrobenzo[1,4]dioxano), 3-trifluorometoxianilina, A- trifluorometoxianilina, 4-metilpiperidina, 2-aminonaftaleno, 2-fluoroanilina, 2,6-dimetoxianilina, ácido 4-amino-3-trifluorometoxibenzoico, anilina, 3- 30 cianoanilina, 3-metoxianilina, 2-(1,1,2,2-tetrafluoroetóxi)anilina, 3- aminobenzenossulfonamida, 3-fluoroanilina, 4-bromoanilina, 2-cianoanilina, 4-cianoanilina, 3-amino-2,2-difluorobenzo[1,3]dioxano, 4-cloroanilina, 3- metilanilina, 4-aminobenzenossulfonamida, 2,6-dibromoanilina, 2- metilanilina, 4-metilanilina, pirrolidina, 4-fluoroanilina, 2,4-dibromoanilina, a- zepano, 4-bromo-2-trifluorometoxianilina, 2-trifluorometoxianilina, 2- trifluo- rometilanilina, e 2-metoxianilina._
Número Estrutura Nome do Exem¬ plo 1 -Xr-Hj N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- metilpropil)-2-[(4-(fenil)- fenilsulfonil]hidrazina-1 - carboxamida; 2 M Xr ° N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- mi__U metilpropil)-2-[(4-(2-metil-2- % XXp propil)-fenilsulfonil]hidrazina- 1-carboxamida; 3 y Vt „ N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- ""Xsr-NM HN-J metilpropil)-2-[7-(4-metil-3,4- U di-hidro-2H- ben- zo[1,4]oxazinil)sulfonil]hidrazi na-1 -carboxamida; 4 -XrHj xx „ N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- IJ k metilpropil)-2-[5-(1- F dimetilamino- 5 O N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- V /-nVh O CH3 metilpropil)-2-[(2,4,6- F'^\r---NH . HN-J 1 trimetilfenil)sulfonil]hidrazina- H3C^ 1-carboxamida; 6
OCH3
Ν-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- metilpropil)-2-[(3-cloro-6- metoxifenil)sulfonil]hidrazina- 1-carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3'hexafluoro-2-
metilpropil)-2-[(3,6-
dimetoxife-
nil)sulfonil]hidrazina-1 - carboxamida;__
8
10
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- metilpropil)-2-[(4-(4- [1,2,3]tiadiazolil)fenil)sulfonil] hidrazina-1 -carboxamida;
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- metilpropil)-2-[(3- bromofenil)sulfonil]hidrazina- 1-carboxamida;_
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- metilpropil)-2-[(4- bromofenil)sulfonil]hidrazina- 1-carboxamida;
11
CH3
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- metilpropil)-2-[(4- metilfenil)sulfonil]hidrazina-1- carboxamida;
12
OCHa
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- metilpropil)-2-[(4- metoxifenil)sulfonil]hidrazina- 1-carboxamida;_ 13 V Vr ■ N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- ----Il metiipropil)-2-[(4- 'Χχ difluorometoxife- 14 Vhu N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- v. vx metilpropil)-2-[(3-flúor-4-cloro- fenil)sulfonil]hidrazina-1 - carboxamida; X O N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- H$C /-T O metilpropil)-2-[(4- F --NH HN^__Il trifluorometoxife- F- "XX. nil)sulfonil]hidrazina-1 - carboxamida; 16 V Vt ° N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- F”^>r-'NH HN---Η metilpropil)-2-[(4-flúor- V Vx. fenil)sulfonil]hidrazina-1- carboxamida; 17 •X Vr . N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- H3C V--NH HN--JI metilpropil)-2-[(3- F f. -χτ metoxifenil)sulfonil]hidrazina- 1-carboxamida; 18 V ^-iIh O CH3 N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- F~"jV"'nh kn-J 1 metilpropil)-2-[(2- H3C-^ metilfenil)sulfonil]hidrazina-1- f"Vf U carboxamida; 19 F F O N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- F---- 7-NH metilpropil)-2-[(3- .H3C / \ trifluorometilfe- ----IJ nil)sulfonil]hidrazina-1 - 0^\^Y^CFj carboxamida; r U 20
OCH3
Ν-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-
metilpropil)-2-[(2,4-
dimetoxife-
nil)sulfonil]hidrazina-1 - carboxamida;
21
H3C
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- metilpropil)-2-[2-(5-cloro-l,3- dimetil -1H- pirazo- lil)sulfonil]hidrazina-1 - carboxamida; _
22
X^
H3C'
F
\ F
,CH5
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- metilpropil)-2-[(3- metilfenil)sulfonil]hidrazina-1- carboxamida;_
23
XJhu
Cfi
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- metilpropil)-2-[(4- trifluorometilfe- nil)sulfonil]hidrazina-1 - ca rboxamida;_
24
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- metilpropil)-2-[(2- trifluorometilfe- nil)sulfonil]hidrazina-1 - carboxamida;
25
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- metilpropil)-2-[4-(pirrolidin-1- sulfonil)fenil sulfo-
nil]hidrazina-1 -carboxamida;
26
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- metilpropil)-2-[(2- clorofenil)sulfonil]hidrazina-1- ca rboxamida; _ 27 V V-nVh ο N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- F^JV-"'NH hn J metilpropil)-2-[2-(5-morfolin-4- H3C^T 0 IT^n il)piridilsulfonil]hidrazina-1- carboxamida; 28 V /-T O OCF3 N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- --V,,/ .Ij ί metilpropil)-2-[(2- H3C^T trifluorometoxife- \ F LJ nil)sulfonil]hidrazina-1 - F carboxamida; 29 V V-nVh 0 Cl N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- f-"V-nh HN--I I metilpropil)-2-[(2,4- h3c^T /γ\ diclorofenil)sulfonil]hidrazina- f/v . IAci 1-carboxamida; .'Φ lUl N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- metilpropil)-2- [fenilsulfonil]hidrazina-1 - carboxamida; 31 Ih ί N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- ">5^0/““· metilpropil)-2-[(3- difluorometoxife- nil)sulfonil]hidrazina-1 - carboxamida; 32 V '^---τ o N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- p^V-Nn h'n ! metilpropil)-2-[(3- XX cianofenil)sulfonil]hidrazina-1- carboxamida; 33 XJFxj ' N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafIuoro-2- metilpropil)-2-[(4- cianofenil)sulfonil]hidrazina-1- ca rboxamida; 34 -XJtj O0 N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- X 0U metilpropil)-2-[5-(2,3-di- \ I V- /CH’ N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- H3c^^ 0 metilpropil)-2-[(4- 36 H3C \ ' N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- F^ /T 0 metilpropil)-2-[(3- 'NH HN----JJ fluorofenil)sulfonil]hidrazina- Pt Kj 1-carboxamida; 37 Jy y~T ° N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- F JV^nh hn-^,11 metilpropil)-2-[(3,4- h30XL ° difluorofenil)sulfonil] hidrazi- ■ -Φ na-1-carboxamida; 38 V V-NH 0 N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- HN---^jj metilpropil)-2-[(2,4- % aCX dimetiltiazol-5- H-íC · il)sulfonil]hidrazina-1 - 39 Λ U N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- H3C y~w o metilpropil)-2-[(4- ■ *A -"NH HN -J acetilfenil)sulfonil]hidrazina-1- r- XX- carboxamida; CHi 40 F F 0 N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- F-^\ /T ° ' ? metilpropil)-2-[(2,6- H3C V--NH HN-----H I difluorofenil)sulfonil] hidrazi- F na-1-carboxamida; M Ή
Xr-NH μ H3C^
f-T"f
41
Ν-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- metilpropil)-2-[(2- fluorofenil)sulfonil]hidrazina- 1-carboxamida;
42
HjC'
F
NH
\ P HN
rp
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- metilpropil)-2-[(2,5- difluorofenil)sulfonil]hidrazina- 1-carboxamida;
43
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- metilpropil)-2-[(4- metilfenil)sulfonil]-2-metil- hidrazina-1 -carboxamida;
44
NH HN
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- metilpropil)-2-[(2,6- diclorofenil)sulfonil]hidrazina- 1-carboxamida;
45
FtC
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- metilpropil)-2-[(2,6- ditrifiuorometilfe- nil)sulfonil]hidrazina-1- ca rboxamida;
46
HnJ
\„s X'
CH3
N~2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- metilpropil)-2-[(4- metilfenil)sulfonil]hidrazina-1- metilca rboxamida;_
47
N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- metilpropil)-2-[(3,5- dimetilisoxazol-5- il)sulfonil]hidrazina-1 - carboxamida; 48 .........."0"“ Ν-2-( 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- F f \ metilpropil)-2-[(4- V 7-nVh ο nitrofenil)sulfonil]hidrazina-1- F >^ΝΗ 'HN-J carboxamida; 49 ■XJu N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- % ■'Χ) metilpropil)-2-[(1- CH, metilimidazol-4- il)sulfonil]hidrazina-1 - carboxamida; 50 -XrJlLJ N-2-(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2- F metilpropil)-2- [metilsulfonil]hidrazina-1 - carboxamida; 51 F 4-fenilpiperazina-1 -(2,2,2- F\ I trifluoro-1-metil-1- I trifluorometiletil)- '-7\ Η L ί carboxamida; Λ 52 ί 4-morfolino-1 -(2,2,2- trifluoro- hScVs/ I 1 -metil-1 -trifluorometiletil)- ■χ " O ca rboxamida; 53 F 1-(2-acetilfenil)-3-(2,2,2- hSc-Vv/ I I trifluoro-1-metil-1 - ----A Η Η trifluorometiletil)-ureia; .λ 54 F\l/^ O 1 -piperidino-1 -(2,2,2-trifluoro- H3C\V [I 1 -metil-1 -trifluorometiletil)- ..-"Tl O.. carboxamida; 55 OCH3 1 -(2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 - I XX trifluorometiletil)-3-(3,4,5- F F , trimetoxifenil)-ureia; 56 I Γ 1 -(4-trifluorometilfenil)-3- h3cV^JL Jk^J (2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 - H H trifluorometiletil)-ureia; F V 57 Ip 4-metilpiperazina-1 -(2,2,2- 'V'vA/ O trifluoro-1-metil-1- hScVn/ Il trifluorometiletil)- ^ H L I ca rboxamida; pV- \^N^CH3 58 h^cVIl |] 1 -naftalen-1 -il-3-(2,2,2- ___J H H trifluoro-1 -metil-1 - F \ trifluorometiletil)-ureia; 59 F'N''-X< O |<:;:?í^^ 1 -(4-clorofenil)-3-(2,2,2- H3Cv / li trifliioro-1-metil-1- λ,ΑΑ/ trifluorometiletil)-ureia; F-7\ H H T / \ 60 I /F 4-fenilpiperidin-1 -il-1 -(2,2,2- s^vl/ 0 trifluoro-1 -metil-1 - H3CIv/ Il trifluorometiletil)- '/VvN'^^^NX^Vvv) carboxamida; ___J H I ■ F f 61 1 /F 1-(2-fenil(fenil))-3-(2,2,2- H3cV /11 I trifluoro-1 -metil-1 - η η I trifluorometiletil)-ureia; 62 F T 1 -(2,6-difluorofenil)-3-(2,2,2- F. I F F trifluoro-1-metil-1- 7^ 0 I trifluorometiletil)-ureia; H3C. / ___ήί H F 'c 63 p x! JH7 2-[3-( 1,1 -bis-trifluorometiletil)- f-4^o r ureído]benzamida; H3C / li ΓΎ^ H H fXAf F O 64 F Ύ 1 -(2-cloro-6-fluorofenil)-3- fJ/^ CIv^ F (2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 - h,cL/ I trifluorometiletil)-ureia; ^___V H H F \ 65 ’F ^CF3 1 -(3-trifluorometilfenil)-3- Il I (2,2,2-trifluoro-l -metil-1 - ^J H H trifluorometiletil)-ureia; F--- /\ F V 66 F T S. 2-[3-(1,1 -bis-trifluorometiletil)- F I /F 2no2s ureído]benzenossulfonamida; O H3 C\/ li ■ ---1"Λ H H fA 67 l· \p 1 -(2,2,3,3-T etraf I uo ro-2, 3-d i- χλΛ1’ hidrobenzo[1,4]dioxin-5-il)-3- ■■ X (2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 - trifluorometiletil)-ureia; 68 F OCF3 1-(3-trifluorometoxifenil)-3- X/o f^· (2,2,2-trif I uo ro-1 -metil-1 - "-cV I 1- trifluorometiletil)-ureia; -71 H H F^v\ F V 69 ^J/Fo ^\.OCFa 1 -(4-trifluorometoxifenil)-3- η h (2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 - f V trifluorometiletil)-ureia; 70 p ------ ^CH3 4-metil-1 -piperidina-1 -(2,2,2- F I /F trifluoro-1-metil-1- I ^ trifluorometiletil)- " O ca rboxamida; 71 F x^^ 1 -naftalen-2-il-3-(2,2,2- H3C^c I JL trifluoro-1-metil-1- __J H H trifluorometiletil)-ureia; F- /\ F V 72 F T S. 1-(2-fluorofenil)-3-(2,2,2- I /F F trifluoro-1-metil-1- '^'■'1/ O trifluorometiletil)-ureia; H3C\/ I f F F 73 F T 1 -(2,6-dimetoxifenil)-3-(2,2,2- F- I /pH3CO- H3CO trifluoro-1 -metil-1 - m,cn/ i J trifluorometiletil)-ureia; H H FV 74 O Ácido 3-T rifluormetóxi-4-[3- F\K ° (1,1 -bis-trifluorometiletil)- HsCvv: XlJ ureído]benzóico; Λ H H F /\ F3CO 75 F 1 -fenil-3-(2,2,2-trifluoro-1 - I -F metil-1-trifluorometiletil)-ureia; f^K o hSCvv/ Η ____J H H F \ 76 I CN 1 -(3-cianofenil)-3-(2,2,2- ψο trifluoro-1-metil-1- *S/ 'I JL- trifluorometiletil)-ureia; J H H F V 77 Ϊ F 1 -(3-metoxifenil)-3-(2,2,2- H3Cvv/ I Μ trifluoro-1-metil-1- F -V trifluorometiletil)-ureia; 78 1-(2-(1,1,2,2- tetrafluoroetóxi)fenil)-3-(2,2,2- trifluoro-1-metil-1- trifluorometiletil)-ureia; 79 F 3-[3-(1,1 -bis-trifluorometiletil)- JCl- ureídojbenzenossulfonamida; F F 80 f^S r F 1 -(3-fluorofenil)-3-(2,2,2- HjC\ / trifluoro-1-metil-1- 7\ ^K. /· trifluorometiletil)-ureia; / N N H H F V 81 J/; ~^γ*' 1 -(4-bromofenil)-3-(2,2,2- ___J H H trifluoro-1-metil-1- F V trifluorometiletil)-ureia; 82 F 1 -(2-cianofenil)-3-(2,2,2- H3cVv/ O I trifluoro-1-metil-1- f-7\ h h I trifluorometiletil)-ureia; /1 83 r ............ ^CN 1 -(4-cianofenil)-3-(2,2,2- H3C I I I trifluoro-1-metil-1- H H trifluorometiletil)-ureia; F V 84 ¥ F Ί -(2,2- StXCl difluorobenzo[1,3]dioxol-4-il)- -7\ H H \ 3-(2,2,2-trifluoro-1-metil-1- /\ trifluorometiletil)-ureia; 85 v° ΓΊΓ” 1 -(4-clorofenil)-3-(2,2,2- ____y η η trifluoro-1-metil-1- F V trifluorometiletil)-ureia; 86 SsXXX 1 -(3-metilfenil)-3-(2,2,2- JxI K ch^ trifluoro-1-metil-1- _...... trifluorometiletil)-ureia; 87 ... 4-[3-( 1,1 -bis-trifluorometiletil)- r^-v/S°2NH2 ureído]benzenossulfonamida; yíkXX ____J H H F V ... 88 StOD 1-(2,6-dibromofenil)-3-(2,2,2- H H T trifluoro-1-metil-1 - "7\ J trifluorometiletil)-ureia; 89 F F 1-(2-metilfenil)-3-(2,2,2- 1 r~i trifluoro-1-metil-1- ---tí 1r trifluorometiletil)-ureia; ■ F A Hsc 90 I F 1-(4-metilfenil)-3-(2,2,2- ^___/ H H trifluoro-1-metil- I- F f , - trifluorometiletil)-ureia; 91 I yF 1 -pirrolidinil-1 -(2,2,2-trifluoro- o 1 -metil-1 -trifluorometiletil)- hS0Vv/ li carboxamida; ^7\ " 92 Fv^ I 0 Jt 1 -(4-fluorofenil)-3-(2,2,2- Hac\/ I trifluoro-1-metil-1 - J H H trifluorometiletil)-ureia; F--- 7\ - F F 93 F-X^o r^Y"Br 1 -(2,4-dibromofenil)-3-(2,2,2- StA-XJ trifluoro-1-metil- I- H H trifluorometiletil)-ureia; f"7\ J 94 I Y (2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 - 0 trifluorometiletil)-amida de H3C\ /11 ácido azepano-1-carboxílico; YY>. 95 F\ Y ,Br 1-(4-bromo-2- HsCn/ I· F3CO trifluorometoxifenil)-3-(2,2,2- __V - H H trifluoro-1-meti!-1- F /\ trifluorometiletil)-ureia; ■ F F 96
1 -(2-trifluorometoxifenil)-3- (2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 - trifluorometiletil)-ureia;
97
1 -(2-trifluorometilfenil)-3- (2,2,2-trifluoro-1 -metil-1 - trifluorometiletil)-ureia;
98
1 -(2-metoxifenil)-3-(2,2,2- trifluoro-1-metil-1- trifluorometiletil)-ureia.
10
Exemplos 99-112
Os compostos de Exemplos 99-112 foram preparados usando a seguinte rotina sintética:
F F
^rjSrV
F F
2
Para sintetizar isocianato, 2, uma solução de Me3SiNa (3,12 ml, mmols) em o- xileno seco (15 ml) foi lentamente adicionada a uma solu- ção do fluoreto, 1 (5,34 g, 24 mmols), e cloreto de trietilbenzilamônio (TEBA, 22 mg, 4 mmols) em o-xileno seco (20 ml) em temperatura ambiente. A mis- tura reacional foi aquecida para 110°C e agitada durante 4 horas. O isocia- nato desejado, 2, foi isolado por destilação da mistura reacional bruta (2,49 g, 46% de produção).
O procedimento geral, usando hidrazina como reagente de parti- da é como segue: H2N-
Ν=-=0
Y
0
R
A uma solução de hidrazida (1 eq) em THF seco foi adicionada uma solução do isocianato (1 eq) em THF seco. A mistura reacional foi agi- tada em temperatura ambiente durante a noite. O produto requerido foi iso- lado usando HPLC eluindo com 10-80% de sistema solvente acetonitrilo/H20 (com TFA a 0,1%).
O procedimento geral usando cloreto ácido como reagente de partida é como segue:
cVr-
o
H2N'
H
'nYr
O
Y
O
A uma solução de hidrazina anidrosa (1 eq) em THF seco foi lentamente adicionada uma solução de cloreto ácido (1 eq) em THF seco. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora, após
o que uma solução do isocianato (1 eq) em THF seco foi adicionada. A mis- tura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. O produ- to requerido foi isolado usando HPLC eluindo com 10-80% de sistema sol-
Número Estrutura Dados de Nome do E- RMN/MS xemplo N/A ■gX/J' N-[1,1- A 0 bis(trifluorometil)prop il]-2-(4- fluorobenzo- il)hidrazinacarboxami da; N/A N-[1,1- bis(trifluorometil)prop il]-2-(3,4- dimetoxibenzo- il)hidrazinacarboxami da; 991 1H NMR in DMSO-Ci6: δ 2-[2,5-bis(2,2,2- 9.92 (d, I Η), 8.36 (s, I Η), trifluoroetóxi)benzoil]- 7.26 (m, 4H), 4.80 (m, 4H), N-[1,1- 2.43 (q, 2H), 1.03 (t, 3H) bis(trifluorometil)prop il]hidrazinacarboxami da; 1001 F1F vVch- 1HNMR in CD3OD: 5 7.80 N-[1,1- ^AhvJCP' (dd, 2H), 7.52 (dd, 2H), bis(trifluorometil)prop fA ο- 2.50 (q, 2H), 1.34 (s, 9H), il]-2-(4-terc- Ι 1.11 (t, 3H) butilbenzo- il)hidrazinacarboxami da; 1012 Λ Γΐ 1HNMR in CD3OD: δ 7.94 2-(1 ,r-bifenil-4- T (d, 2H), 7.74 (d, 2H), 7.67 ilcarbonil)-N-[1,1- FF 0 (dd, 2H), 7.47 (t, 2H), 7.38 bis(trifluorometil)prop (t, 1H), 2.50 (q, 2H), 1.12 il]hidrazinacarboxami (t, 3H) da; 1021 1HNMR in CD3OD: 5 8.34 N-[1,1 - (d, 1H), 8.01 (d, 1H), 7.93 bis(trifluorometil)prop (d, 1H), 7.76 (dd, 1H), 7.56 il]-2-(1- (m, 3H), 2.55 (q, 2H), 1.15 nafto- (t, 3H) il)hidrazinacarboxami da; 1033 U lHNMRinCD3OD: δ 7.65 2-( 1,1 '-bifenil-2- (d, 1Η), 7.54 (t, 1Η), 7.39 ilcarbonil)-N-[1,1- (m, 7H), 2.49 (q, 2H), 1.07 bis(trifluorometil)prop (t, 3H) il]hidrazinacarboxami da; 1041 ^Χνσ" 1H NMRin CD3OD: 5 7.76 N-[1,1 - FF 0 (d, 2H), 7.29 (d, 2H), 2.49 bis(trifluorometil)prop (q, 2H), 2.40 (s, 3H), 1.10 il]-2-(4- (t, 3H) metilbenzo- il)hidrazinacarboxami da; 1053 <¥ι ΓϊΊ 1H NMR in CD3OD: 5 8.44 N-[1,1 - FF ° (s, 1H), 7.93 (m, 4H), 7.59 bis(trifluorometil)prop (m, 2H), 2.51 (q, 2H), 1.13 il]-2-(2- (t,3H) nafto- il)hidrazinacarboxami da; 16 O4 Λ 0 O-CH1 Ή NMR in CD3OD: δ 7.49 N-[1,1- (s, 1H), 7.10 (s, 2H), 3.93 bis(trifluorometil)prop (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 2.50 il]-2-(2,5- (q, 2H), 1.11 (t, 3H); MS dimetoxibenzo- ESI+ m/z 417.9 (M+H)+ il)hidrazinacarboxami da; 1071 ^’Ανότ 1HNMR in DMSO-d6: 5 N-[1,1- FF 0 10.54 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), bis(trifluorometil)prop 8.13 (s, 1H), 7.84 (m, 2H), il]-2-(3,4- 7.46 (s, 1H), 2.41 (q, 2H), diclorobenzo- 1.03 (t, 3H) il)hidrazinacarboxami da; 1083 £ 1H NMR in CD3OD: δ 7.78 N-[1,1- tI. (d, 2H), 7.65 (d, 2H}, 2.49 bis(trifluorometiI)prop -íjyC (q, 2H), 1.10 (t,3H) il]-2-(4- £ bromobenzo- il)hidrazinacarboxami da; 1091 FF 0 1H NMR in CD3OD: δ 7.79 N-[1,1- (d, 2H), 7.35 (d, 2H), 2.97 bis(trifluorometil)prop (m, 1H), 2.49 (q, 2H), 1.27 il]-2-(4- (d, 6H), 1.11 (t, 3H) isopropilbenzo- il)hidrazinacarboxami da; 1101 FF ° Ή NMR in CD3OD: δ 7.47 N-[1,1- (s, 2H), 7.22 (s, 1H), 2.49 bis(trifluorometil)prop (q, 2H), 2.35 (s, 6H), 1.11 il]-2-(3,5- (t, 3H) dimetilbenzo- il)hidrazinacarboxami da; 1114 fA · 0 ch^ 1HNMR in CD3OD: 0 6.88 N-[1,1 - (s, 2H), 2.52 (q, 2H), 2.32 bis(trifluorometil)prop (s, 6H), 2.26 (s, 3H), 1.11 il]-2- (t, 3H) (mesitilcarbo- nil)hidrazinacarboxa mida; 1123 'ί'-νί» Ή NMR in CD3OD: δ 7.86 N-[1,1- F F O O-CH1 (d, 1H), 7.50 (dd, IH), 7.16 bis(trifluorometil)prop (d, 1H), 3.97 (s, 3H), 2.48 il]-2-(5-cloro-2- (q,2H), 1.10 (t, 3H) metoxibenzo- il)hidrazinacarboxami da. 1 Purificado por HPLC; 98% de pureza.
2 Purificado por HPLC; 99% de pureza.
3 Purificado por HPLC; 97% de pureza.
4 Purificado por HPLC; 96% de pureza.
ENSAIO 1 Aproximadamente 400.000 compostos da biblioteca de compos- to foram testados neste ensaio. Placas de ensaio foram montadas como se- gue. Células Vero foram semeadas em 80% de confluência sobre placas de 96 cavidades. Compostos testes (80 por placa) da biblioteca foram adiciona- 5 dos às cavidades em uma concentração final de 5 μΜ. Vírus Tacaribe (TRVL 11573) foi em seguida adicionado em uma diluição de vírus que resultaria em 90% de CPE após 5 dias (pré-determinada como uma diluição de 800 vezes da matéria-prima de vírus; multiplicidade de infecção [MOI] de aproxi- madamente 0,001). As placas foram incubadas a 37°C e 5% de CO2 durante 10 5 dias, em seguida fixadas com 5% de glutaraldeído e tingidas com 0,1% de violeta cristal. A extensão de CPE de vírus foi quantificada espectrometrica- mente em OD570 usando uma Leitora de Microplaca Sintonizável VersaMax de Dispositivos Moleculares. A atividade inibitória de cada composto foi cal- culada subtraindo-se a OD570 da cavidade de composto teste da OD570 mé- 15 dia de cavidades de célula infectada por vírus, em seguida dividindo-se pela OD570 média de cavidades de célula infectada por simulação. O resultado representa a porcentagem de proteção contra atividade de CPE de vírus Ta- caribe conferida pelo composto. "Hits" neste ensaio foram definidos como compostos que inibiram CPE induzido por vírus em mais do que 50% na 20 concentração teste. Dos aproximadamente 400.000 compostos analisados na campanha de HTS de vírus Tacaribe, 2.347 hits foram identificados (0,58% de taxa de hit).
Hits de qualidade são definidos como compostos inibidores (Hits) que exibem estruturas químicas aceitáveis, potência antiviral e seleti- 25 vidade, e espectro de atividade antiviral. Especificamente, compostos identi- ficados como hits em ensaios de HTS (descritos acima) foram avaliados con- tra quatro critérios: (i) comodidade química, (ii) potência inibitória, (iii) seleti- vidade inibitória e, (iv) especificidade antiviral. Com base nos parâmetros de HTS, todos os hits têm valores de EC50 < 5 μΜ. As estruturas químicas de 30 compostos que alcançam este critério inicial foram visualmente examinadas quanto à comodidade química. Um composto quimicamente tratável é defini- do como uma entidade que é sinteticamente acessível usando metodologia química razoável, e que possui funcionalidades quimicamente estáveis e qualidades similares ao fármaco (potenciais). Hits que atravessaram este filtro químico medicinal foram avaliados quanto sua potência inibitória. Valo- res de EC50 foram determinados de um diagrama da atividade inibitória do 5 composto tipicamente através de oito concentrações de composto (50, 15, 5, 1,5, 0,5, 0,15, 0,05 e 0,015 uM). Para estimar se o hit é um inibidor seletivo, o efeito sobre funções celulares foi determinado usando um ensaio de proli- feração de célula padrão. Uma concentração de citotoxicidade de 50% (CC50) foi determinada usando um método colorimétrico baseado em tetrazó- 10 lio, que mede, a redução in situ de brometo de tetrazólio de 3-(4,5- dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenila (MTT) para cristais de formazan azuis insolúveis por enzimas mitocondriais em células metabolicamente ativas. Cristais solu- bilizados foram quantificados espectrometricamente. Usando os valores de EC50 e CC50, um índice Seletivo (SI) foi calculado (SI = CC50/ EC50). Hits com 15 valores de SI de pelo menos 10 foram considerados também.
A especificidade da atividade antiviral exibida por compostos hit foi determinada por teste dos compostos contra várias viroses relacionadas e não-relacionadas. Os compostos são testados contra uma variedade de viroses de DNA (HSV, CMV, vírus de vacínia) e RNA (RSV, rotavírus, febre k 20 do Rift Valley, vírus Ebola, pseudotipo de Ebola GP, pseudotipo de Lassa GP, pseudotipo env de HIV) não-relacionadas. Compostos que serão sele- cionados para outro desenvolvimento são aqueles que são seletivos contra o vírus alvo original selecionado e inativos contra viroses não relacionadas. Número do Tacaribe ECs0 Candide 1 Exemplo A= <0.5 μΜ A= <0.5 μΜ B= 0.5 to <1.0 μΜ B= 0.5 to <1.0 μΜ C= 1.0 to <5 μΜ C= 1.0 to <5 μΜ D= >5 μΜ D= >5 μΜ 1 A 2 A 3 A 4 A 5 A 6 A 7 A 8 A 9 A IO A 11 A 12 A 13 A 14 B 15 B 16 B 17 B IS B 19 B 20 B 21 B C 22 B 23 B 24 C 25 C 26 C 27 C 28 C 29 C 30 C 31 C 32 C 33 C 34 C 35 C 36 C 37 C 38 C 39 C D 40 C 41 C 42 C 43 C 44 C ■ 45 C 46 D 47 D 48 D 49 D 50 D Continuação.
51 A 52 A 53 B 54 B 55 B 56 B 57 C 58 C 59 C 60 C 61 C 62 C 63 C 64 C 65 C 66 C 67 C 68 C 69 C 70 C 71 C 72 C 73 . C 74 C 75 C 76 C 77 C 78 C 79 C 80 C 81 C 82 C 83 C 84 C 85 D 86 D 87 D 88 D 89 D 90 D 91 D 92 D 93 D 94 D 95 D 96 D 97 D 98 D Ensaio 2
Uma biblioteca química foi criada e analisada a qual representa uma coleção bem equilibrada e ampla de 400.000 compostos acumulados durantes vários anos de uma variedade de fontes distintas. A biblioteca ob- tém ampla cobertura através de espaço de propriedade envolvendo os se- guintes descritores químicos: logaritmo calculado de coeficiente de divisão de n-octanol/água (CIogP)1 polar (área de superfície acessível por água 5 (PSA), globularidade (estrutura tridimensional) e peso molecular (média: 394,5 daltons).
Células e viroses
Células Vero (epitélio de rim de macaco verde africano, ATCC #CCL-81) foram desenvolvidas em meio essencial mínimo de Eagle (MEM, Gibco) suplementado com 2 mM de L-glutamina, 25 pg/ml de gentamicina, e soro bovino fetal inativado por aquecimento a 10% (FBS). Para meio de in- fecção (IM), a concentração de soro foi reduzida para 2%. Células HEp-2 (carcinoma humano do epitélio da laringe; ATCC #CCL-23) foram cultivadas em MEM contendo FBS inativado por aquecimento a 10% e 1% de penicili- na/estreptomicina. Células MRC-5 (fibroblasto de pulmão normal humano; ATCC #CCL-171) foram cultivadas em MEM contendo FBS inativado por aquecimento a 10%, 1% de penicilina/estreptomicina, 1% de L-glutamina (Invitrogen 25030-081), 1% de aminoácidos não-essenciais (Invitrogen #11140-050), 1% de piruvato de sódio (Invitrogen #11360-070), e 2% de bi- carbonato de sódio. Células MA104 (rim de macaco verde africano epitelial, ATCC CRL-2378,1) foram cultivadas em MEM com 1% de penicili- na/estreptomicina, 1% de L-glutamina, 1% de aminoácidos não-essenciais, 1% de piruvato de sódio, e 2% de bicarbonato de sódio e 62,5 ug/ml de trip- sina e nenhum soro durante infecção por vírus. Todas as linhagens celulares foram incubadas a 37°C e 5% de CO2. Vírus sincicial respiratório (RSV; iso- lado A), vírus de coriomeningite linfocítica (LCMV; isolado de Armstrong E350), citomegalovírus (CMV; isolado AD-169), vírus herpes simples 1 (HSV-I; isolado KOS), vírus de vacínia (Cepa WR), vírus Tacaribe (cepa TR- VL 11573) e rotavírus (cepa WA) foram obtidos de ATCC (#VR-1422, #VR- 1540, #VR-134, #VR-538, #VR-1493, #VR-1354, #VR-114, e #VR-2018 res- pectivamente). Candid 1 e Amapari BeAn 70563 foram obtidos de Dr. Robert Tesh na University of Texas Medicai Branch (Galveston, TX). Trabalho feito com viroses por BSL 4 (Lassa, Machupo, Guanarito, e Junín) bem como co- ronavírus associado à síndrome respiratória aguda severa (SARS-CoV) foi conduzido por colaboradores em USAMRIID (Fort Detrick, MD).
Ensaios Antivirais para Análise de Especificidade: Ensaio de Efeito Citopáti- 5 Co ("CPE"), Ensaio de Redução de Placa de Vírus, e ELISA
Um ensaio CPE viral foi usado para avaliar o efeito antiviral de compostos contravírus Tacaribe (células Vero), vírus de vacina Candid-1 (células Vero), vírus Amapari (células Vero), SARS-CoV (células Vero), HSV-1 (células Vero), RSV (células HEp-2), vírus de vacínia (células Vero), 10 e Rotavírus (MA 104). Um ensaio imunossorvente ligado à enzima ("ELISA") foi usado para avaliar o efeito antiviral de compostos contra CMV (células MRC-5) e LCMV (células Vero). Todos estes ensaios foram realizados nos meios apropriados contendo FBS inativado por aquecimento a 2%. Placas de cultura de célula de noventa e seis cavidades foram semeadas 24 horas 15 antes do uso com 1,5 X 104 (Vero), 2,2 X 104 (HEp-2 e MA104), e 4,5 X 104 (MRC-5) células por cavidade. Para teste de suscetibilidade de composto, compostos (solubilizados com 100% de DMSO) foram adicionados às cavi- dades em duplicata em concentrações finais de 50, 15,8, 5, 1,6, 0,5, 0,16, 0,05, 0,016 e 0 μΜ. A concentração final de DMSO nos ensaios foi 0,5%. k 20 Matérias-primas de vírus foram tituladas em um experimento separado para determinar a concentração que resultou em 90% de destruição da monoca- mada de célula (ensaio CPE) após 3 dias (HSV-1, Rotavírus e vacínia) ou 4 dias (SARS-CoV, RSV, vírus Tacaribe, vírus de vacina Candid 1 e vírus A- mapari) ou a concentração que gerou um sinal de ELISA de 2,5 em uma 25 densidade ótica de 650 nm (OÜ65o) após 3 dias (LCMV) ou 4 dias (CMV). Estas diluições preestabelecidas de vírus foram adicionadas às cavidades contendo diluições seriais de composto. Células não-infectadas e células que receberam vírus sem composto foram incluídas em cada placa de en- saio. Além disso, agentes de referência, quando disponíveis, foram incluídos 30 em cada placa de ensaio (ganciclovir para HSV-1 e CMV, Sigma #G2536; ribavirina para LCMV e RSV, Sigma #R9644; e rifampicina para vírus de va- cínia, Sigma #R3501). As placas foram incubadas a 37 C e 5% de CO2 du- rante 3 dias (HSV-1, Rotavírus, LCMV1 vírus de vacínia) ou 4 dias (Vírus Ta- caribe, vírus Amapari, vírus Candid 1, SARS-CoV, RSV, e CMV). Placas in- fectadas por HSV-1, SARS-CoV, Rotavírus, vírus de vacínia, RSV, vírus Ta- caribe, vírus Amapari, vírus de vacina Candid 1 foram processadas para tin- 5 gimento de violeta cristal enquanto placas infectadas com CMV e LCMV fo- ram processadas para análise por ELISA. Para tingimento de violeta cristal, as placas foram fixadas com 5% de glutaraldeído e tingidas com 0,1% de violeta cristal. Após enxágüe e secagem, a densidade ótica em 570 nm (OD570) foi medida usando uma Leitora de Microplaca. Para análise por ELI- 10 SA, o meio das placas infectadas por LCMV e CMV foi removido e as células foram fixadas com 100% de metanol (Fisher, CAS #67-56-1, grau de HPLC) durante 20 minutos em temperatura ambiente. A solução de metanol foi re- movida e as placas foram lavadas 3 vezes com PBS. Sítios de ligação não- específicos foram bloqueados pela adição de 130 pL de Tampão de Blo- 15 queio Superblock (Pierce #37515) durante 1 hora a 37°C. O agente de blo- queio foi removido e as cavidades foram lavadas 3 vezes com PBS. Trinta pL de uma diluição de 1:20 de anticorpo monoclonal específico de Proteína Nuclear (NP) de LCMV (doação generosa de Juan Carlos de Ia Torre, The Scripps Research lnstitute, La Jolla CA) ou 30 pL de uma diluição de 1:200 20 de anticorpos monoclonais de coquetel específicos de CMV (proteína 52 e produto de gene 44 longo único) (Dako, #M0854) em Tampão de Bloqueio Superblock contendo 0,1% de Tween-20 foram adicionados. Após 1 hora de incubação a 37°C, a solução de anticorpo primário foi removida e as cavida- des foram lavadas 3 vezes com PBS contendo 0,1% de Tween-20. Quarenta 25 pL de anticorpo monoclonal conjugado de peroxidase de rábano-picante an- ticamundongo de cabra (Bio-Rad #172-1011) diluídos 1:4000 (LCMV) ou 1:400 (CMV) em Tampão de Bloqueio Superblock contendo 0,1% de Tween- 20 foram adicionados às cavidades e as placas foram incubadas durante 1 hora a 37°C. A solução de anticorpo secundário foi removida e as cavidades 30 foram lavadas 5 vezes com PBS. O ensaio foi desenvolvido durante 15 mi- nutos pela adição de 130 pL de substrato de 3,3',5,5-tetrametilbenzidina (Sigma #T0440) para quantificar a atividade de peroxidase. A OD65O do produto de reação resultante foi medida usando uma Leitora de Microplaca Cinética de Dispositivos Moleculares com um filtro de 650 nm.
Antiviral atividade contravírus Tacaribe foi avaliada por três mé- todos: ensaio CPE, Redução de Placa, e Ensaio de Inibição de Produção de Vírus. Para o ensaio CPE de HTS, células Vero foram semeadas em 80% de confluência sobre placas de 96 cavidades. Compostos testes (80 por placa) da biblioteca foram adicionados às cavidades em uma concentração final de μΜ. Vírus Tacaribe foi em seguida adicionado em uma diluição de vírus que resultaria em 90% de CPE após 5 dias (multiplicidade de infecção ("MOI") de aproximadamente 0,001). As placas foram incubadas a 37°C e 5% de CO2 durante 5 dias, em seguida fixadas com 5% de glutaraldeído e tingidas com 0,1% de violeta cristal. A extensão de CPE de vírus foi quantifi- cada espectrometricamente em OD57O usando uma Leitora de Microplaca Envision. A atividade inibitória de cada composto foi calculada subtraindo-se da OD570 de cavidade de composto teste da OD570 média de cavidades de célula infectada por vírus, em seguida dividindo-se pela OD570 média de ca- vidades de célula infectada por silindra. O resultado representa a porcenta- gem de proteção contra atividade de CPE de vírus Tacaribe conferida por cada composto. "Hits" neste ensaio foram definidos como composto que ini- k 20 biu CPE induzido por vírus em mais do que 50% na concentração teste (5 μΜ). hits que possuiam comodidade química foram também avaliados quan- to à sua potência inibitória. Os valores de concentração inibitória de 50% (EC50) foram determinados de um diagrama da atividade inibitória do com- posto seguindo o ensaio CPE através de oito concentrações de composto (50, 15, 5, 1,5, 0,5, 0,15, 0,05 e 0,015 μΜ). Todas as determinações foram realizadas em duplicata.
No Ensaio de Redução de Placa, monocamadas de célula Vero desenvolvidas em placas de 6 cavidades foram infectadas com cerca de 50 PFU/cavidade na ausência ou presença de várias concentrações dos com- 30 postos. Após 1 h de adsorção de vírus a 37°C, inóculo residual foi substituí- do por uma mistura de 50:50 de agarose Seaplaque a 1% (em água desioni- zada) e 2x MEM. As placas foram contadas após 5-7 dias de incubação a 37°C. A EC50 foi calculada como a concentração de composto requerida para reduzir números de placa de vírus em 50%. Sob condições de BSL 4 em USAMRIID os ensaios de redução de placa (com viroses por Lassa, Ma- chupo, Guanarito, e Junín) foram realizados como segue: 200 PFU de cada 5 vírus foram usados para infectar as células Vero. Após adsorção de vírus, monocamadas de célula foram enxaguadas e revestidas com meio completo contendo agarose a 1% e, ou composto teste escasso ou com diferentes concentrações variando de 15 μΜ a 0,05 μΜ. Após 5 dias de incubação a 37°C, as monocamadas foram tingidas com vermelho neutro e os números 10 de placas foram contados.
Em Ensaios de Redução de Produção de Vírus, células Vero desenvolvidas em placas de 24 cavidades foram infectadas com vírus Taca- ribe em uma multiplicidade de infecção ("MOI") de 0,1 na presença de dife- rentes concentrações dos compostos, duas cavidades por concentração. 15 Após 48 h de incubação a 37°C o vírus foi colhido e as produções de vírus foram determinadas por formação de placa em células Vero. Os valores de EC50 foram calculados como indicado acima e cálculos similares foram reali- zados para determinar a ECgo e ECgg.
Ensaio de Citotoxicidade Viabilidade celular foi medida por um ensaio de proliferação de
célula para determinar um efeito do composto sobre funções celulares de modo que uma concentração de citotoxicidade de 50% (CC50) possa ser cal- culada; a relação deste valor para a EC5O é referida como o índice seletivo (S.l. = CC50/EC50). Dois tipos de ensaios foram usados para determinar a 25 citotoxicidade. Um foi um método colorimétrico que mede a redução de bro- meto de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil-tetrazólio (MTT), e o outro usa fluorimetria para medir a redução de resazurina (Azul Alamar). Ambos os métodos produziram dados similares. Culturas confluentes em placas de 96 cavidades foram expostas a diferentes concentrações dos compostos, com 30 duas cavidades para cada concentração, usando condições de incubação equivalentes àquelas usadas nos ensaios antivirais.
Química medicinal Diversos compostos potentes foram identificados pelo HTS de Tacaribe e foram agrupados em diversos grupos de tipo estrutura. Um grupo de compostos, com ST-336 (FW = 407,3) representando o protótipo baseado em atividade antiviral e comodidade química, foi escolhido para outro desen- 5 volvimento. Através de análise retrossintética de ST-336, foi determinado que a biblioteca de análogos pode ser preparada convergentemente em uma única etapa sintética combinando-se um isocianato com uma hidrazida de acila. Usando esta química, 165 análogos foram preparados e os mais po- tentes examinados quanto ao metabolismo in vitro.
10 Tempo de Experimento de Adição
Este experimento foi planejado para caracterizar o mecanismo de ação dos compostos antivirais. Células Vero foram desenvolvidas em placas de cultura de 24 cavidades. O meio foi removido quando as células alcançaram 70-80% de confluência e substituído com meio de infecção. As 15 células foram infectadas com vírus Tacaribe em MOI = 0,1. Após 1 hora de adsorção, o inóculo viral foi removido e substituído com meio de infecção fresco. Cavidades em duplicata foram tratadas com 3 μΜ de ST-336 1 h an- tes da infecção, no momento da infecção ou em momentos específicos após infecção (de 1 a 20 h p.i.). Culturas de célula infectadas de controle foram k 20 tratadas com veículo fármaco (DMSO) apenas. ST-336 foi removido 1 hora após absorção e a monocamada foi lavada duas vezes com PBS-M resfriado e substituída com meio de infecção fresco. As células foram colhidas em 24 h p.i. e foram tituladas como descrito acima.
Em um experimento separado, células Vero semeadas em um 25 prato de 6 cavidades foram infectadas com vírus Tacaribe em MOI = 4. A absorção foi realizada durante 1 hora. Três μΜ de ST-336 foram adicionados durante 1 hora em 1 hora antes da infecção, durante infecção, e 1 hora após a infecção. Seguindo a adição de fármaco e infecção por vírus, monocama- das foram lavadas 3 vezes com meios completos. Quatro horas após a últi- 30 ma adição de fármaco, as monocamadas foram revestidas com agarose a 1% sem composto até as placas desenvolverem-se. Em 5 a 7 dias após in- fecção, as monocamadas foram fixadas, tingidas de violeta cristal e números de placa contados.
Ensaio para Ligação de Composto ao Vírus Intacto
Este experimento foi planejado para testar as propriedades inibi- tórias de ligação/fusão de ST-336 com respeito ao vírus Tacaribe. Células 5 Vero foram desenvolvidas em MEM com 2% de soro de bezerro fetal. Para este experimento, as células foram desenvolvidas para 70-80% de confluên- cia em placas de cultura de 24 cavidades. Em um grupo de tubos vírus Ta- caribe (4000 pfu) foi tratado com 1% de DMSO, serialmente diluído dez ve- zes em meio de infecção e tratado com as concentrações específicas de ST- 10 336 (400 pfu + 0,5 μΜ de ST-336, 40 pfu + 0,05 μΜ de ST-336) ou DMSO apenas (400 pfu ou 40 pfu + DMSO). Em outro grupo de tubos vírus Tacari- be (4000 pfu) foi tratado com 5 μΜ de ST-336 em seguida serialmente diluí- do dez vezes em meio de infecção. As suspensões foram semeadas em ca- vidades e após adsorção durante uma hora inóculos foram removidos e re- 15 vestidos com agarose Seaplaque a 0,5% em MEM. A placa foi incubada a 37°C até o efeito citopático ser observado na cavidade de controle de DM- SO. As células foram fixadas com 5% de glutaraldeído e tingidas com 0,1% de violeta cristal para visualização da placa.
Outro ensaio empregado para testar as propriedades de ligação de ST-336 às F-proteínas de pré-fusão sobre vírions foi um experimento de diálise. Vírus Tacaribe purificado (1000 pfu) foi incubado com 5 μΜ de ST- 336 ou 0,5% de DMSO. As suspensões foram dialisadas durante a noite a 4°C em uma câmara de diálise. Vinte e quatro horas após a diálise suspen- sões virais foram tituladas sobre células Vero. Após uma hora de adsorção, inóculos foram removidos e uma agarose Seaplaque a 0,5% em revestimen- to de MEM foi aplicada. A placa foi incubada a 37°C até o efeito citopático ser observado. As células foram fixadas com 5% de glutaraldeído e tingidas com 0,1% de violeta cristal. Para confirmar a ausência de fármaco livre em amostra de vírus-fármaco dialisada, vírus foi reforçado em mistura dialisada no momento da infecção e as placas desenvolvidas como descrito acima. Isolamento de Viroses Variantes Resistentes ao Fármaco
Inicialmente, placas únicas de vírus Tacaribe WT foram isoladas. Para esta purificação de placa células Vero em uma placa de 6 cavidades foram infectadas com 50 pfu/cavidade de vírus Tacaribe WT durante 1 hora a 37°C. Após adsorção de vírus o inóculo foi removido e cada cavidade foi revestida com agarose Seaplaque a 0,5% em MEM e incubada a 37°C até 5 as placas serem visíveis (5-7 dias). Quatro placas foram furadas e também amplificadas em células Vero em uma placa de 24 cavidades até CPE de- senvolver-se (5-7 dias). Extratos de célula infectada por vírus foram colhidos raspando-se as células nos meios e em seguida coletados em tubos de mi- crocentrífuga de 1,5 ml. Cada isolado purificado de placa foi também amplifi- 10 cado em placas de 150 mm, e em seguida cada matéria-prima de vírus que se originou de uma placa de vírus foi titulada.
Para o isolamento de variantes de vírus Tacaribe resistentes ao composto, cada isolado purificado de placa tipo silvestre foi titulado na pre- sença de 3 μΜ de ST-336 como descrito. Células Vero em uma placa de 6 cavidades foram infectadas com IO4-IO6 pfu/cavidade em meios contendo 3 μΜ de ST- 336 durante 1 hora, em seguida as células foram revestidas com agarose Seaplaque a 0,5% em MEM contendo 3 μΜ de ST-336 e incubadas até as placas formarem-se. As placas foram furadas e usadas para infectar as células Vero em uma placa de 24 cavidades sem composto. Quando CPE desenvolveu-se as cavidades infectadas foram colhidas. Cada isolado resis- tente ao fármaco foi em seguida titulado sobre uma placa de 96 cavidades em diluições de 0,5 log, iniciando com 25 μΙ_ de matéria-prima de vírus pura, sem composto e com 1 μΜ e 3 μΜ de ST-336. Cada mutante passou por diversos ciclos de purificação de placa antes das matérias-primas de vírus finais serem feitas.
Sequenciamento
RNA foi extraído de cada dos isolados de Tacaribe WT (1-4) e quatro dos isolados resistentes ao fármaco (DR#l-4) e usado para PCR de transcrição reversa. Iniciadores específicos para a GPC (Tac-dianteira: 5' 30 GCCTAACTGAACCAGGTGAATC (SEQ ID NO: 1) e Tac-reversa: 5' TAA- GACTTCCGCACCACAGG (SEQ ID NO:2)) de Tacaribe foram usados para amplificação e sequenciamento. Solubilidade
Dois testes foram usados para estimar a solubilidade do com- posto: solubilidade em meio de cultura de célula com e sem várias concen- trações de soro e solubilidade em tampão aquoso em pH 7,4. As soluções 5 foram agitadas durante a noite e em seguida filtradas através de uma coluna YM-30 Amicon Centrifree com uma interrupção de 30.000 MW para remover composto potencialmente precipitado e composto ligado à proteína. O com- posto foi quantificado por LC/MS ou espectrometria de UV.
Estabilidade
Estabilidade metabólica in vitro foi determinada por Sistemas de
Absorção (Exton, PA) usando o sobrenadante 9000 x g (S9) de fígado ho- mogeneizado de várias espécies como uma fonte de enzimas de conjugação oxidativa (por exemplo, citocromos P450, UdP-glucuronosil transferase) que são conhecidas serem as séries de reação primárias de biotransformação 15 para a maioria dos fármacos. A estabilidade metabólica foi medida como a persistência de composto origem durante o tempo de incubação nas frações de S9 por espectrometria de massa. Resumidamente, frações de S9 de hu- mano, rato, camundongo, e cobaia foram obtidas de Xenotech (Lenexa, KS). A mistura reacional, menos coquetéis cofatores, foi preparada (1 mg/ml de 20 frações de S9 de fígado, NADPH a 1 mM, UDPGA a 1 mM, PAPS a 1 mM, GSH a 1 mM, fosfato de potássio a 100 mM pH 7,4, cloreto de magnésio a 10 mM, 10 μΜ de artigo teste) e equilibrada a 37°C durante 3 min. Uma alí- quota de mistura reacional foi empregada como um controle negativo. A rea- ção foi iniciada pela adição de coquetéis cofatores à mistura reacional ape- 25 nas, e em seguida a mistura reacional e controle negativo foram incubados em um banho de água em agitação a 37°C. Alíquotas (100 μΙ) foram retira- das em triplicata em 0, 15, 30, e 60 minutos e combinadas com 900 μΙ de 50/50 de acetonitrila/dH20 gelados para terminar a reação. Cada amostra foi analisada por meio de LC/MS/MS. O Iog natural da porcentagem restante foi 30 plotado versus o tempo. Um ajuste linear foi usado para determinar a cons- tante de taxa. O ajuste foi truncado quando a porcentagem restante de artigo teste foi menos do que 10%. As meias-vidas de eliminação associadas com o desaparecimento de artigos teste e controle foram determinadas para com- parar sua estabilidade metabólica relativa.
Genotoxicidade
Um ensaio de mutagenicidade bacteriana exploratório (teste 5 Ames) foi usado para estimar o potencial da genotoxicidade do composto. Este ensaio utilizou cepas de teste de S. typhimurium TA7007 e TA7006 (mutações em par de base único) e TA98 (mutação de deslocamento de es- trutura) com e sem ativação metabólica (S9 de fígado de rato induzido por Aroclor) como descrito previamente.32 10 Avaliações de Farmacocinética ("PK") em Ratos e Camundonqos Recém- nascidos
Análise de farmacocinética oral de compostos selecionados foi realizada em ratos Sprague Dawley em um estudo de dose única com amos- tras de soro empregadas durante um período de 24 h. Para a avaliação de 15 PK de camundongos recém-nascidos, camundongos BALB/c de 4 dias de idade foram dosados intraperitonealmente (IP) e amostras de soro foram empregadas durante um período de 24 horas. Uma alíquota de 50 μΙ de plasma foi combinada com 150 μΙ de acetonitrila a 100% contendo um pa- drão interno (100 ng/ml de tolbutamida) em um tubo de centrífuga de 1,5 ml.
^ 20 As amostras foram vortexadas e centrifugadas a 13.000 rpm durante dez minutos. Uma alíquota de 80 μΙ do sobrenadante resultante foi em seguida transferida para uma HPLC para análise do frasconete. Níveis plasmáticos de cada composto foram determinados por LC/MS/MS, e parâmetros farma- cocinéticos foram determinados usando software WinNoIin.
25 Eficácia em Modelo de Camundongo Recém-nascido
Para determinar a tolerância de ST-294, camundongos BALB/c recém-nascidos (4 dias de idade) foram administrados com dosagens IP de 0 (veículo), 10, 25, ou 100 mg/kg/dia de ST-294 durante 5 dias com avalia- ção da condição clínica diariamente.
30 Para testar a eficácia de ST-294 no modelo de camundongo re-
cém-nascido de Tacaribe, camundongos BALB/c de quatro dias de idade (8 por grupo de dose) foram desafiados com 3 x 103 PFU (30 X LD50) de vírus Tacaribe por camundongo por injeção IP com morte como o ponto final. Os camundongos foram tratados com placebo (veículo), ribavirina (MP Biomedi- cal) administrada IP a 25 mg/kg uma vez ao dia durante 10 dias, ou ST-294 administrado IP a 100 mg/kg uma vez ao dia ou a 50 mg/kg duas vezes ao 5 dia durante 10 dias. Os camundongos foram monitorados diariamente e pe- sados dia sim, dia não durante todo o estudo. Quaisquer camundongos mos- trando sinais de morbidade foram eutanizados por asfixia de CO2- Todos os estudos animais adaptaram-se para o Institute for Laboratory Animal Rese- arch e foram aprovados através de inspeção de IACUC apropriada.
Resultados
Homoloqia entre Tacaribe e Outro NWA de BSL 4
Existem atualmente 23 espécies virais reconhecidas da família Arenaviridae.4 Estas viroses foram classificadas em dois grupos: as arenavi- roses de Old World (Lassa/LCM) e o grupo de New World (complexo de Ta- caribe). O complexo de Tacaribe de New World compreende três linhagens filogenéticas, designadas Classes A, B, e C. Classe B inclui o vírus Tacaribe prototípico, vírus Amapari e os quatro patógenos de Categoria A da América do Sul (Junín, Machupo, Guanarito e Sábia). Vírus Tacaribe é 67% a 78% idêntico ao vírus Junín no nível de aminoácido para todas as quatro proteí- nas virais.23 Trabalho com arenaviroses de Categoria A autênticas requer refreamento de laboratório máximo (BSL- 4), e portanto apresenta resultados seguros e logísticos significantes. Uma vez que vírus Tacaribe está intima- mente relacionado aos patógenos de Categoria A ele foi escolhido como um NWA de BSL 2 substituto para o desenvolvimento de um ensaio de HTS pa- ra análise quanto a inibidores de replicação de vírus.
Ensaio de HTS de Tacaribe
Uma vez que vírus Tacaribe desenvolve-se bem em cultura de célula e causa efeito citopático induzido por vírus claro (CPE) um ensaio CPE de HTS forte é desenvolvido em uma placa de 96 cavidades. O ensaio 30 CPE é um ensaio de célula inteiro que leva em consideração o cálculo do índice seletivo dos compostos e identificação de inibidores de quaisquer eta- pas essenciais no ciclo de vida do vírus. Dos 400.000 compostos analisados no ensaio de HTS de vírus Tacaribe, 2.347 hits foram identificados (0,58% de taxa de hit). Todos estes hits tiveram valores de EC50 < 5 μΜ. Os 2.347 hits foram em seguida qualificados baseados em quatro critérios: i) comodi- dade química, ii) potência inibitória, iii) seletividade inibitória, e iv) especifici- 5 dade antiviral. Um composto quimicamente tratável é definido como uma entidade que é sinteticamente acessível usando metodologia química razoá- vel, e que possui funcionalidades quimicamente estáveis e qualidades simi- lares ao fármaco potenciais. Hits que atravessaram este filtro químico medi- cinal foram avaliados quanto à sua potência inibitória. Valores de EC50, 10 CC50, e índice seletivo (SI) foram determinados para estimar se o hit foi um inibidor seletivo, hits com valores de SI de pelo menos 10 foram considera- dos também. Dos 2.347 hits identificados, 36 compostos exibiram todas as características de hits de qualidade. Estes compostos foram quimicamente tratáveis, tiveram valores de EC50 < 5 μΜ e valores de SI > 10. Entre os 36 15 hits de qualidade, existiram diversos grupos do tipo estrutura. Um tipo estru- tura foi escolhido para outro desenvolvimento e ST-336 é o protótipo repre- sentativo para esta série. ST-336 é um composto de 407,33 daltons e sua estrutura é mostrada na figura 1.
Tabela 1: Especificidade de ST-336
Vírus (ensaio) ST-336 (μΜ) NWA Tacaribe (CPE) EC50 0,055 (CPE) EC90 0,125 (Produção de vírus) EC90 0,068 (Produção de vírus) EC99 0,085 (Redução de placa) EC50 0,100 Candidl (CPE) EC50 0,062 Amapari (CPE) EC50 >20* Machupo (Redução de placa) EC50 0,150 Guanarito (Redução de placa) EC50 0,300 Junín (Redução de placa) EC50 0,150 OWA Lassa (Redução de placa) EC50 >20 LCMV (Elisa) EC50 >20 Os resultados representam a média de pelo menos duas determinações in- dependentes;
* 20 μΜ representam o limite de solubilidade do composto.
Caracterização de ST-336 5 Como observado na Tabela 1, ST-336 tem potência submicro-
molar, boa seletividade, e especificidade antiviral contravírus Tacaribe bem como o NWA de Categoria A. Avaliação de ST-336 em um ensaio de redu- ção de produção de vírus contravírus Tacaribe produziu valores de ECgo e ECgg de 0,068 μΜ e 0,085 μΜ respectivamente. O valor de CC50 para ST- 336 sobre células Vero é > 20 μΜ, que representa o limite de solubilidade deste composto em meios de cultura de célula, fornecendo um índice seleti- vo de > 363. A atividade de ST-336 contravírus Tacaribe foi testada sobre múltiplas linhagens celulares e todos os valores de EC50 foram similares àqueles alcançados sobre células Vero (dados não-mostrados). Quando tes- tado contra diversas arenaviroses, ST-336 não mostrou nenhuma atividade inibitória contra OWA, vírus LCM ou vírus Lassa autêntico (Tabela 1). Este fármaco também careceu de atividade contra o vírus Amapari de NWA. Este foi um resultado surpreendente que forneceu a ligação filogenética íntima entre viroses por Amapari e Tacaribe.23,19 Esta discrepância é mais tarde discutida seguindo o sequenciamento de GP2 de todas NWA. Entretanto, importantemente ST-336 mostrou atividade antiviral potente contra a cepa de vacina de vírus Junín (Candid 1) bem como Machupo, Guanarito, e Junín (Tabela 1).
Tabela 2: Seletividade de ST-336;
Vírus (ensaio) ST-336 EC50 (μΜ) Viroses de DNA HSV-1 (CPE) >20* CMV (Elisa) >20 Vacínia (CPE) >20 Viroses de RNA RSV-A (CPE) >20 Rotavírus (CPE) >20 SARS (CPE) >20 Ebola (CPE) >20 Os resultados representam a média de pelo menos duas determinações in- dependentes;
* 20 μΜ representa o limite de solubilidade do composto.
A especificidade da atividade antiviral exibida por ST-336 foi de- 5 terminada por teste contra várias viroses relacionadas e não-relacionadas. Como mostrado na Tabela 2, ST-336 não mostrou nenhuma atividade contra uma variedade de viroses de DNA (HSV, CMV, vírus de vacínia) e RNA (RSV, Rotavírus, SARS e vírus Ebola) não-relacionadas.
Mecanismo de Ação de ST-336 10 Um tempo de ciclo único (24 h) de experimento de adição foi
feito para determinar quando durante o ciclo de replicação de vírus ST-336 exerce sua atividade antiviral. O efeito de ST- 336 sobre a produção de vírus Tacaribe foi determinado seguindo a adição de composto às culturas de cé- lula Vero em vários momentos antes ou após a infecção. ST-336 foi adicio- "15 nado uma hora antes da infecção (-1 h), durante adsorção de vírus (0 h), e em diversos momentos após infecção. O fármaco foi mantido, seguindo adi- ção seqüencial, sobre culturas de célula infectadas durante o tempo integral do experimento. Culturas infectadas de controle foram tratadas com veículo fármaco (DMSO) apenas. Em 24 horas após infecção, as amostras foram coletadas, e as produções de vírus foram determinadas por ensaio de placa. Como mostrado na figura 2A, ST-336 exerceu seu efeito inibitório apenas no estágio muito precoce no ciclo de vida do vírus. Adição de ST-336 em quais- quer pontos do tempo após infecção não teve nenhum efeito sobre a produ- ção de vírus. Estes dados sugerem que ST-336 é um inibidor de estágio precoce de replicação de vírus.
Estes resultados foram confirmados em um segundo tipo de ex- perimento de adição no tempo. Neste experimento, o composto foi reforçado no meio de cultura durante apenas 1 hora, 1 hora antes da infecção (-1 h), durante infecção (0) e 1 hora após infecção (+1 h), e em seguida removido. As culturas foram lavadas para remover qualquer composto residual e reves- tidas com agarose. Números de placa de vírus foram em seguida determina- 5 dos em 5 dias após infecção. Dados na figura 2B mostraram que enquanto o composto adicionado antes e após adsorção de vírus durante 1 hora não teve nenhum efeito sobre a formação de placa, o composto adicionado du- rante o processo de adsorção/entrada de 1 h dramaticamente reduziu a for- mação de placa de Tacaribe. Estes dados são compatíveis com ST-336 10 sendo um inibidor de adsorção/entrada.
Dois métodos foram empregados para determinar se ST-336 está ligando-se aos vírions intactos. No primeiro experimento, 1000 PFU de vírus Tacaribe purificado foram incubadas com ST-336 ou DMSO e dialisa- das durante a noite a 4°C e tituladas. Enquanto nenhum vírus foi titulado da 15 bolsa dialisada originalmente incubada com fármaco, mais do que 300 PFU de vírus foram tituladas da bolsa dialisada de veículo DMSO (dados não- mostrados). Nenhum fármaco foi biologicamente detectado na bolsa de diáli- se originalmente contendo 5 μΜ de fármaco como medido pela incapacidade da mistura dialisada de vírus mais fármaco inibir vírus Tacaribe recentemen- 20 te adicionado (300 PFU). Estes dados sugeriram que ST-336 liga-se a ví- rions intactos com uma constante de dissociação muito lenta. No segundo experimento (figura 3), vírus Tacaribe foi incubado em um tubo de teste com
5 μΜ de ST-336 ou DMSO. Diluições de 1 : 10 seriais foram realizadas e para algumas amostras ST-336 foi adicionado como uma diluição especifi- 25 cada representando a concentração de fármaco esperada seguindo a dilui- ção de amostra. Quando vírus e composto são diluídos com meios, a con- centração de composto alcançará a concentração sem um efeito inibitório, a menos que o composto seja capaz de ligar-se ao vírus. Vírus teste sem composto no tubo inicial foi também diluído em meios e concentrações de 30 composto correspondentes àquelas encontradas nos tubos onde vírus e composto foram diluídos juntos foram adicionadas a cada diluição de vírus. Titulação sobre células Vero mostrou que ST-336 presente em excesso no tubo inicial persistiu durante duas diluições de 1 : 10 adicionais através de ligação de vírus específica e inibe infecção por vírus. Em contraste, quando fármaco foi adicionado em uma diluição especificada vírus não foi inibido no mesmo grau como vírus diluído com fármaco (dados não-mostrados). Estes 5 dados sugerem que ST-336 liga-se com pelo menos um K0ff lento à proteína intacta presente em vírus Tacaribe.
Isolamento de Variantes de Resistência ao Fármaco
A taxa de mutação esperada de viroses de RNA é muito alta (~1 mutante em 10.000) e um método comum para determinar o alvo de um an- 10 tiviral é isolar resistência de vírus ao antiviral e em seguida mapear o sítio de resistência. Variantes de vírus com suscetibilidade reduzida ao ST-336 fo- ram isoladas de matérias-primas de vírus Tacaribe tipo silvestre semeadas na presença de ST-336. A frequência observada de variantes resistentes ao fármaco ST-336 (ST-336DR) foi como esperada para viroses de RNA. Dezes- 15 seis isolados de ST-336DR de quatro matérias-primas de vírus Tacaribe tipo silvestre independentes foram isolados e a placa purificada três vezes. To- dos os isolados de ST-336DR foram testados quanto à sua capacidade de desenvolver-se na presença de ST- 336. O desenvolvimento de isolados de ST-336DR não foi afetado pela presença de ST-336 em concentrações que •20 completamente inibiram replicação de vírus Tacaribe tipo silvestre (dados não-mostrados). O isolamento e confirmação de variantes de vírus resisten- tes ao fármaco fortemente sugerem que ST-336 age como um inibidor antivi- ral direto.
Para determinar a base genética para resistência e o alvo mole- 25 cular de ST-336, RNA foi isolado dos isolados de ST-336DR e tipo silvestre. Com base no tempo de experimentos de adição, suspeita-se que as glico- proteínas virais possam ser o alvo de ST-336. A região de GPC precursora de glicoproteína integral do segmento S foi sequenciada. Análise de seqüên- cia foi realizada em quatro isolados tipo silvestre (WT#l-4) e quatro isolados 30 de ST-336DR derivados de seleção de fármaco aplicada a cada isolado tipo silvestre parental correspondente (DR#1,1 de WT#1, DR#2,1 de WT#2, DR#3,1 de WT#3 e DR#4,1 de WT#4). A análise de seqüência mostrou que o gene GPC dos quatro isolados tipo silvestre parentais tinha seqüências idênticas. Quando comparadas às seqüências de GPC de quatro variantes de resistência ao fármaco, cada possuía uma única mudança de nucleotídeo que em todos os casos resultou em uma mudança de aminoácido. figura 4A 5 mostra a localização de cada uma das mutações que estão localizadas em ou em volta do domínio de transmembrana de GP2. Os alinhamentos de se- qüência da região da GP2 contendo as mudanças é apresentado na figura 4B. A única mudança em DR#1,1 foi na posição de aminoácido 418 (I418T), em DR#2,1 em aminoácido 416 (T416N), em DR#3,1 em aminoácido 433 10 (S433I) e em DR#4,1 em aminoácido 436 (F436I). 1418 é similarmente con- servado (I ou L, porém nunca um T) em todos os arenavírus de New World de classe B1 enquanto T416 é conservado entre todos NWA de classe B. F436 é similarmente conservado com uma exceção; vírus Amapari codifica uma Ieucina na posição 436. Esta mudança em vírus Amapari pode explicar 15 sua falta de suscetibilidade a ST-336 (Tabela 2). 1418, T416, S433 e F436 situam-se perto dos limites de terminal N e terminal C do domínio de trans- membrana putativo de GP2, uma região conhecida desempenhar um papel vital em fusão de vírus envolvido.17,27,28,38,39 Empregados juntos, estes da- dos sugerem que mudanças de aminoácido em GP2 de arenavírus na posi- 20 ção 416, 418, 433 ou 436 são suficientes para conferir suscetibilidade redu- zida a ST-336 e são compatíveis com o mecanismo de inibição de fusão proposto sugerido por experimentos virológicos.
Otimização Hit-a-Guia
Dados preliminares mostraram que ST-336, ao mesmo tempo 25 que demonstrando especificidade e atividade antiviral de interessse, tinha propriedades farmacocinéticas (PK) pobres em roedores (camundongo e ratos, dados não-mostrados). A fim de melhorar as propriedades PK de ST- 336, uma campanha química de otimização guia foi iniciada. O objetivo do programa de otimização foi desenvolver compostos que possuem atributos 30 compatíveis com o perfil de produto de fármaco final. Atividades de otimiza- ção guia compreendem uma série de iterações envolvendo projeto e síntese química de análogos da estrutura guia, seguida por uma série de avaliações biológica, fisioquímica, e farmacológica dos novos compostos. Análogos químicos fluíram através de um paradigma de avaliação de composto que envolveu primeiro avaliações virológica e de citotoxicidade in vitro, seguidas por uma série de avaliações como listado: estabilidade metabólica in vitro 5 (S9), solubilidade, mutagênese bacteriana exploratória e avaliações farma- cocinéticas. 165 análogos foram preparados e os mais potentes foram exa- minados quanto ao metabolismo in vitro em extratos de fígado S9. Os mais estáveis foram dosados em ratos, e ST-294 emergiu como um representati- vo oralmente biodisponível, potente dos compostos.
Caracterização de ST-294
A estrutura de ST-294 (N-2-( 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-1 -metilpropil)- 2-[(4-difluorometoxifenil)sulfonil]hidrazina-1-carboxamida) é mostrada na fi- gura 5. ST-294 foi testado contra os mutantes de Tacaribe resistentes ao fármaco gerados com ST-336 (DR#l-4) e todos os mutantes evocaram resis- tência cruzada a ST-294 sugerindo que este composto esteja alvejando a mesma área de GP2 como ST-336 (dados não-mostrados). A atividade de ST-294 contra viroses por Tacaribe, Machupo, Guanarito, e Junín foi similar àquela observada com ST-336 (Tabela 3). A CC50 de ST-294 em células Ve- ro é > 50 μΜ produzindo um índice seletivo de > 416. Outra caracterização de ST-294 mostrou que este composto é solúvel até 23 μΜ em meios con- tendo soro de bezerro fetal a 10% e até 480 μΜ em tampão a pH 7,4 (Tabela 3). A estabilidade metabólica de ST-294 foi testada em extratos de fígado S9 de rato, camundongo, ser humano, e cobaias e foi descoberta ser mais está- vel em S9 humano seguido por camundongo, rato e cobaia respectivamente (Tabela 3). Análise das farmacocinéticas orais de ST-294 foi inicialmente realizada no rato visto que esta espécie é bem caracterizada para este tipo de estudo. Os ratos foram dosados com ST-294 por gavagem oral e as a- mostras foram empregadas durante um período de 24 h. Níveis de soro fo- ram muito altos (Cmax = 6670 ng/ml) e ST-294 tem boa biodisponibilidade oral (68,2%) (Tabela 3). Tabela 3: Caracterização de ST-294;
Vírus (ensaio)__ST-294
Tacaribe (CPE) EC50 0,120μΜ (Redução de placa) EC50 Ο,ΙΟΟμΜ Machupo (Redução de placa) EC50 0,300μΜ Guanarito (Redução de placa) EC50 1 ,ΟμΜ Junín (Redução de placa) EC50 0,300μΜ Propriedades Solubilidade (0%, 2%, 10% FBS) 18, 21 e 23 μΜ Solubilidade (plon, pH 7,4) 480 μΜ Estabilidade (S9) de ra- 26/74/100/23min to/camundongo/humano/g.p Genotoxicidade (teste Ames) Negativo PK (rato/oral) /4 vida 2 horas Biodisponibilidade (F) 68,2% PK (camundongo recém-nascido/IP) >2 vida 3 horas Cmax 2910 ng/ml Estudo de Eficácia com ST-294 em Modelo de Camundonqo Recém-nascido ST-294 tem potente atividade antiviral contra NWA e boas pro- priedades similares ao fármaco, desse modo a etapa seguinte foi para testar a capacidade de ST-294 inibir doença induzida por NWA em um modelo a- 5 nimal. Para os agentes de Categoria A, os experimentos requerem refrea- mento BSL 4. Entretanto, em um esforço de obter uma leitura de dados inici- al, um modelo de desafio de vírus Tacaribe em camundongos recém- nascidos foi estabelecido. Na preparação para este estudo, experimentos de PK e tolerância foram realizados com ST-294 em camundongos recém- nascidos antes de conduzir uma experiência de eficácia. Camundongos BALB/c (4 dias de idade) recém-nascidos foram dosados IP com 10 mg/kg de ST- 294 e amostras de sangue foram coletadas para análise. Relativo às 5 concentrações antivirais in vitro requeridas para inibir CPE de vírus Tacaribe (EC50 ~ 66 ng/ml), concentrações plasmáticas médias em camundongos recém-nascidos foram bem acima deste nível durante períodos prolongados de tempo (> 15x até 8 h e 6x em 24 h após dosagem, dados não- mostrados). Neste modelo o fármaco é distribuído por meio da rotina IP de- 10 vido à dificuldade de realizar múltiplas gavagens orais em camundongos re- cém-nascidos. Para testar a tolerância, camundongos recém-nascidos foram administrados com dosagens IP variando de 0-100 mg/kg/dia de ST-294 du- rante 5 dias. Dosagens de 100 mg/kg/dia durante 5 dias foram bem tolera- das pelos camundongos recém-nascidos visto que não houve nenhum sinal 15 clínico de toxicidade e os camundongos ganharam peso na mesma taxa co- mo os camundongos de controle (dados não-mostrados). Esta concentração testada mais alta de ST-294 de 100 mg/kg/dia foi usada em um estudo de eficácia animal de Tacaribe.
A meia-vida e níveis de fármaco mostrados no estudo de PK nos k 20 camundongos recém-nascidos não foram equivalentes àqueles observados nos ratos, porém os níveis de soro pareceram suficientes para realizar um estudo animal à prova de conceito no modelo animal de Tacaribe. Camun- dongos de quatro dias de idade foram desafiados com 30 X LD50 de vírus Tacaribe e tratados com placebo, ribavirina como um controle ou ST-294. Como os resultados na figura 6 demonstraram, ST-294 mostrou eficácia nos camundongos recém-nascidos infectados por Tacaribe tanto com sobrevi- vência quanto um atraso em morte similar ao fármaco controle (ribavirina). Empregados juntos estes dados sugerem que ST-294 é um candidato a fár- maco apropriado e promissor para prosseguir em estudos animais definitivos onde cobaias e primatas serão desafiados com NWA autêntico (viroses por Junfn e Guanarito) e tratados em vários momentos após infecção e profilati- camente com ST-294. Discussão
Através de um programa de química medicinal e HTS bem- sucedido, um candidato a fármaco antiviral de NWA1 ST-294, foi identificado. Este fármaco potencialmente e seletivamente inibe viroses por NWA in vitro 5 incluindo as 3 viroses de Categoria A de NIAID/CDC (viroses por Junín, Ma- chupo, e Guanarito). Este composto foi também avaliado quanto à estabili- dade em extratos de fígado S9 e quanto a suas propriedades farmacocinéti- cas e foi descoberto ser metabolicamente estável e oralmente biodisponível. Em um estudo de eficácia animal preliminar, ST-294 mostrou proteção signi- 10 ficante contra doença induzida por vírus Tacaribe em camundongos recém- nascidos. Através de estudos de mecanismo de ação é evidente que esta série de compostos alveja GP2 e são inibidores de entrada viral.
A partir dos experimentos de diálise e diluição (figura 3) é evi- dente que o fármaco se liga ao vírus e persiste durante diluições. Este fenô- 15 meno pode potencialmente ter um efeito quando titula-se amostras de vírus durante outros experimentos. Entretanto, no momento do experimento de adição, não houve persistência de fármaco o suficiente devido à alta diluição afetar os títulos quando adicionada 1 hora ou mais após infecção (figura 2).
Uma vez que ST-294 tem melhor estabilidade de S9 do que ST- 20 336, pensa-se que o metabolismo ocorre no grupo metila no anel aromático (figura 1). A posição benzílica é suscetível à oxidação. Quando não existe nenhum hidrogênio benzílico presente como em ST-294 (figura 2), a oxida- ção é bloqueada e desse modo elimina a série de reação de metabolismo mais rápido. A adição do grupo difluorometóxi em ST-294 forneceu este 25 composto de estabilidade de S9 aumentada, porém não reduziu a atividade antiviral.
No modelo de camundongo recém-nascido de Tacaribe os ca- mundongos pareceram morrer de uma doença neurológica (indicada por pa- ralisia traseira) e não é conhecido se ST-294 pode atravessar a barreira he- 30 matoencefálica. Além disso a meia-vida e níveis de fármaco deste candidato a fármaco administrado IP em camundongos recém-nascidos não são tão bons quanto dosagem oral em ratos desse modo níveis de soro e composto que chegam ao cérebro podem ter comprometido a capacidade de obter pro- teção completa neste modelo. Os modelos animais mais apropriados para febre hemorrágica causada por arenaviroses são em cobaias e primatas não-humanos onde o vírus replica-se predominantemente no baço, nódulos 5 linfáticos e medula óssea causando diátese hemorrágica. Modelos de cobaia são bem-estabelecidos para doenças por vírus Junín, Machupo, e Guanarito, e representam o melhor modelo animal pequeno para avaliação durante es- tudos pré-clínicos.26, 34 Cobaias infectadas com cepas patogênicas de vírus Junín desenvolvem uma doença fatal aparentada à AHF humana.37 10 Existem muitos relatos do papel do domínio de transmembrana
na função de proteínas de fusão virais. No caso de hemaglutinina de vírus infiuenza, é claro que uma âncora de transmembrana é requerida para ativi- dade de fusão completa.27 Em contraste, exigências de seqüência específica dentro do domínio de transmembrana foram identificadas, por exemplo, em 15 vírus da imunodeficiência humana (HIV) tipo 1, vírus de leucemia de murino, viroses espumosas, coronavírus, vírus da doença de Newcastle e vírus de sarampo.27 Com base nas variantes de resistência ao fármaco gerados du- rante estes estudos, a classe de ST-336 de compostos alveja a proteína en- velope GP2, com mutações que eliciam suscetibilidade reduzida ao fármaco k 20 que surge em ou em volta da região de transmembrana (figura 4).
Fármacos que alvejam as interações entre o envelope de vírus e o receptor celular representam uma nova classe de fármacos antivirais. Para terapia de HIV, inibidores de entrada têm recentemente despertado grande interesse por causa de sua atividade contra viroses resistentes a múltiplos 25 fármacos. Um novo antiviral contra HlV foi recentemente aprovado pela FDA chamado enfuvirtida. Enfuvirtida (Fuzeon®) é um potente inibidor de fusão que bloqueia a formação do feixe de seis hélices e desse modo previne fu- são de membrana.29 Enfuvirtida foi bem-sucedida na melhora da resposta virológica e imunológica em pacientes infectados por HIV que experímenta- 30 ram tratamento.33 Existem diversos outros compostos que se opõem à en- trada de HIV que estão em diferentes estágios de desenvolvimento, entre eles: 1) o inibidor de ligação dextrin-2-sulfato; 2) os inibidores da interação PRO 542 de glicoproteína (gp) 120/CD4, TNX 355 e BMS 488043; e 3) os inibidores de correceptor subdivididos naqueles que alvejam CCR5 ou CX- CR4.20 O sucesso de enfuvirtida e outros na série de reação de desenvolvi- mento é a prova de que inibidores de entrada de vírus podem ser usados para tratar doenças virais em seres humanos.
ST-294 também tem o potencial para uso profilático uma vez que este fármaco parece ligar-se ao vírus (figura 3) e preveniria infecção. Outros inibidores de entrada de vírus têm demonstrado proteção quando administrados profilaticamente.22 Os resultados apresentados aqui mostram que ST-294 é um po-
tente inibidor específico de arenaviroses de New World incluindo as viroses de febre hemorrágica de Categoria A (Junín, Machupo, e Guanarito). Mais importantemente, o alvo de ST-294 (entrada de vírus na célula) serve como um alvo viável para desenvolvimento antiviral. Uma vez que infecção por 15 vírus pode ser completamente inibida em concentrações na faixa nanomolar, o alvo para ST-294 parece ser tanto acessível quanto extremamente sensí- vel aos reagentes que rompem seu papel no processo de infecção.
ENSAIO 3
Ensaio de Efeito Citopático ("CPE"11)
Um ensaio CPE viral foi usado para avaliar o efeito antiviral dos
Exemplos 100-113 contravírus Tacaribe (células Vero), vírus de vacina Can- did-1 (células Vero), vírus Amapari (células Vero), SARS-CoV (células Vero), HSV-I (células Vero), RSV (células HEp-2), vírus de vacínia (células Vero), e Rotavírus (MAI 04). Um ensaio imunossorvente ligado à enzima ("ELISA") foi 25 usado para avaliar o efeito antiviral de compostos contra CMV (células MRC- 5) e LCMV (células Vero). Todos estes ensaios foram realizados nos meios apropriados contendo FBS inativado por aquecimento a 2%. Placas de cultu- ra de célula de noventa e seis cavidades foram semeadas 24 horas antes do uso com 7 x 104 (Vero), 2,2 x 104 (HEp-2 e MA104), e 4,5 x 104 (MRC-5) cé- 30 lulas por cavidade. Para teste de suscetibilidade de composto, compostos (solubilizados com 100% de DMSO) foram adicionados às cavidades em duplicata em concentrações finais de 50, 15,8, 5, 1,6, 0,5, 0,16, 0,05, 0,016 e 0 μΜ. A concentração final de DMSO nos ensaios foi 0,5%. Matérias-primas de vírus foram tituladas em um experimento separado para determinar a concentração que resultou em 90% de destruição da monocamada de célula (ensaio CPE) após 3 dias (HSV-I, Rotavírus e vacínia) ou 7 dias (SARS- 5 CoV1 RSV1 vírus Tacaribe, vírus de vacina Candid 1 e vírus Amapari) ou a concentração que gerou um sinal de ELISA de 2,5 em uma densidade ótica de 650 nm (OD570) após 3 dias (LCMV) ou 4 dias (CMV). Estas diluições preestabelecidas de vírus foram adicionadas às cavidades contendo dilui- ções seriais de composto. Células não-infectadas e células que receberam 10 vírus sem composto foram incluídas em cada placa de ensaio. Além disso, agentes de referência, quando disponíveis, foram incluídos em cada placa de ensaio (ganciclovir para HSV-I e CMV, Sigma #G2536; ribavirina para LCMV e RSV, Sigma #R9644; e rifampicina para vírus de vacínia, Sigma #R3501). As placas foram incubadas a 37°C e 5% de CO2 durante 3 dias 15 (HSV-I, Rotavírus, LCMV, vírus de vacínia) ou 7 dias (Vírus Tacaribe, vírus Amapari, vírus Candid 1, SARS-CoV, RSV, e CMV). Placas infectadas por HSV- 1, SARS-CoV, Rotavírus, vírus de vacínia, RSV, vírus Tacaribe, vírus Amapari, vírus de vacina Candid 1 foram processadas para tingimento de violeta cristal enquanto placas infectadas com CMV e LCMV foram proces- ‘ 20 sadas para análise por ELISA. Para tingimento de violeta cristal, as placas foram fixadas com 5% de glutaraldeído e tingidas com 0,1% de violeta cris- tal. Após enxágüe e secagem, a densidade ótica em 570 nm (OD570) foi me- dida usando uma Leitora de Microplaca. Para análise por ELISA, o meio das placas infectadas por LCMV e CMV foi removido e as células foram fixadas 25 com 100% de metanol (Fisher, CAS #67-56-1, grau de HPLC) durante 20 minutos em temperatura ambiente. A solução de metanol foi removida e as placas foram lavadas 3 vezes com PBS. Sítios de ligação não-específicos foram bloqueados pela adição de 130 pL de tampão de bloqueio Superblock (Pierce #37515) durante 1 hora a 37°C. O agente de bloqueio foi removido e 30 as cavidades foram lavadas 3 vezes com PBS. Trinta μί de uma diluição de 1:20 de anticorpo monoclonal específico de Proteína Nuclear (NP) de LCMV (doação generosa de Juan Carlos de Ia Torre, The Scripps Research Institu- te, La Jolla, CA) ou 30 μί de uma diluição de 1:200 de anticorpos monoclo- nais de coquetel específicos de CMV (proteína 52 e produto de gene 44 lon- go único) (Dako, #M0854) em tampão de bloqueio Superblock contendo 0,1% de Tween-20 foram adicionados. Após 1 hora de incubação a 37°C, a 5 solução de anticorpo primário foi removida e as cavidades foram lavadas 3 vezes com PBS contendo 0,1% de Tween-20. Quarenta μί de anticorpo mo- noclonal conjugado de peroxidase de rábano-picante anticamundongo de cabra (Bio-Rad #172-101 1) diluídos 1:4000 (LCMV) ou 1:400 (CMV) em tampão de bloqueio Superblock contendo 0,1% de Tween-20 foram adicio- 10 nados às cavidades e as placas foram incubadas durante 1 hora a 37°C. A solução de anticorpo secundário foi removida e as cavidades foram lavadas 5 vezes com PBS. O ensaio foi desenvolvido durante 15 minutos pela adição de 130 pL de substrato de 3,3',5,5- tetrametilbenzidina (Sigma #T0440) para quantificar a atividade de peroxidase. A ODôso do produto de reação resul- 15 tante foi medida usando uma Leitora de Microplaca Cinética de Dispositivos Moleculares com um filtro de 650 nm.
Atividade antiviral contravírus Tacaribe foi avaliada por três mé- todos: Ensaio CPE, Redução de Placa, e Ensaio de Inibição de Produção de Vírus. Para o ensaio CPE de HTS, células Vero foram semeadas em 80% de 20 confluência sobre placas de 96 cavidades. Compostos testes (80 por placa) da biblioteca foram adicionados às cavidades em uma concentração final de 5 μΜ. Vírus Tacaribe foi em seguida adicionado em uma diluição de vírus que resultaria em 90% de CPE após 7 dias (multiplicidade de infecção ("MOI") de aproximadamente 0,001). As placas foram incubadas a 37°C e 25 5% de CO2 durante 7 dias, em seguida fixadas com 5% de glutaraldeído e tingidas com 0,1% de violeta cristal. A extensão de CPE de vírus foi quantifi- cada espectrometricamente em OD570 usando uma Leitora de Microplaca Envision. A atividade inibitória de cada composto foi calculada subtraindo-se a OD570 de cavidade de composto teste da OD570 média de cavidades de 30 célula infectada por vírus, em seguida dividindo-se pela OD570 média de ca- vidades de célula infectada por silindra. O resultado representa a porcenta- gem de proteção contra atividade de CPE de vírus Tacaribe conferida por cada composto. Os valores de concentração inibitória de 50% (EC50) foram determinados de um diagrama da atividade inibitória do composto seguindo o ensaio CPE através de oito concentrações de composto (50, 16, 5, 1,6, 0,5, 0,16, 0,05 e 0,016 μΜ). Todas as determinações foram realizadas em 5 duplicata.
No Ensaio de Redução de Placa, monocamadas de célula Vero desenvolvidas em placas de 6 cavidades foram infectadas com cerca de 50 PFU/cavidade na ausência ou presença de várias concentrações dos com- postos. Após 1 h de adsorção de vírus a 37°C e 5% de CO2, inóculo residual 10 foi substituído por uma mistura de 50:50 de agarose Seaplaque a 1% (em água desionizada) e 2x MEM. As placas foram contadas após 5-7 dias de incubação a 37°C. A EC50 foi calculada como a concentração de composto requerida para reduzir números de placa de vírus em 50%. Sob condições de BSL 4 em USAMRIID os ensaios de redução de placa (com viroses por 15 Lassa, Machupo, Guanarito1 e Junín) foram realizados como segue: 200 PFU de cada vírus foram usadas para infectar células Vero. Após adsorção de vírus, monocamadas de célula foram enxaguadas e revestidas com meio completo contendo agarose a 1% e ou composto teste escasso ou com dife- rentes concentrações variando de 15 μΜ a 0,05 μΜ. Após 5 dias de incuba- k - 20 ção a 37°C e 5% de CO2, as monocamadas foram tingidas com vermelho neutro e os números de placas foram contados.
Em Ensaios de Redução de Produção de Vírus, células Vero desenvolvidas em placas de 24 cavidades foram infectadas com vírus Taca- ribe em uma multiplicidade de infecção ("MOI") de 0,01 na presença de dife- 25 rentes concentrações dos compostos, duas cavidades por concentração. Após 48 h de incubação a 37°C o vírus foi colhido e as produções de vírus foram determinadas por formação de placa em células Vero. Os valores de EC50 foram calculados como indicado acima e cálculos similares foram reali- zados para determinar ECgo e EC99.
30 Ensaio de Citotoxicidade
Viabilidade celular foi medida por um ensaio de proliferação de célula para determinar um efeito do composto sobre funções celulares de modo que uma concentração de citotoxicidade de 50% (CC50) possa ser cal- culada; a relação deste valor para a ECs0 é referida como o índice seletivo (S.l. = CC50ZEC50). Três tipos de ensaios foram usados para determinar a citotoxicidade. Um foi um método colorimétrico que mede a redução de bro- 5 meto de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil-tetrazólio (MTT), um usa fluorime- tria para medir a redução de resazurina (Azul Alamar) e o método final usa medições de densidade ótica de violeta cristal. Todos os três métodos pro- duziram dados similares. Culturas confluentes em placas de 96 cavidades foram expostas a diferentes concentrações dos compostos, com duas cavi- 10 dades para cada concentração, usando condições de incubação equivalen- tes àquelas usadas nos ensaios antivirais. Para tingimento de violeta cristal, as placas foram fixadas com 5% de glutaraldeído e tingidas com 0,1% de violeta cristal. Após enxágüe e secagem, a densidade ótica em 570 nm
(OD570) foi medida usando uma Leitora de Microplaca Envision.
Tacaribe EC50 Candid 1 ECso Número do Exemplo Α=<0.5μΜ Α=<0.5μΜ B= 0.5 to <1.0μΜ B= 0.5 to <1 .ΟμΜ C=1.0 to <5μΜ C=1.0 to <5μΜ ϋ=£5μΜ 0=£5μΜ 99 A D 100 A C 101 A C 102 A D 103 B C 104 B D 105 A C 106 A C 107 B C 108 B C . 109 A C 110 A C 111 C N/A 112 A D ENSAIO 4
Ensaio Antivírus Pseudotipado
Pseudotipos virais foram usados para demonstrar que o alvo viral de ST-336, descrito acima, é a glicoproteína envelope de arenavírus. Este é um ensaio substituto que usa apenas a proteína envelope do vírus alvo, não o vírus propriamente dito. Pseudotipos virais são gerados por co- transfecção de um provírus retroviral defeituoso de replicação contendo um gene repórter, e um plasmídeo expressando um envelope viral heterólogo. O provírus é construído de modo que o envelope retroviral homólogo não seja 5 expresso, e desse modo proteínas envelope virais heterólogas são adquiri- das como partículas virais de brotamento não-especificamente proteínas de superfície celular de captura. Pseudotipos preparados desta maneira infecta- rão células por meio do envelope heterólogo e são comumente usados para ensaiar funções do envelope heterólogo.40"45 A infecção é medida pelo sinal 10 produzido da construção repórter integrada. Um pró-vírus de HIV deficiente de env com um repórter de Iuciferase de vaga-lume foi usado para o descrito aqui. A quantidade de vírus infeccioso usada para infectar uma linhagem de cultura de célula é diretamente proporcional, sobre diversas ordens de mag- nitude, à luminescência mediada por Iuciferase produzida nas células infec- 15 tadas. Viroses pseudotipadas contendo envelopes virais não relacionados, habitualmente a proteína VSVg de vírus de estomatite vesicular, são usadas como controles de especificidade.
Outro uso de pseudotipos virais é que eles permitem análise funcional de um envelope fora do contexto do vírus do qual ele foi derivado. 20 Muitas viroses de febre hemorrágica requerem refreamento de laboratório máximo (BSL-4); o qual confere resultados seguros e logísticos significantes. Ensaios substitutos podem ser realizados sob condições de laboratório de BSL-2 menos restritivas, uma vez que eles não usam o patógeno propria- mente dito. Esta estratégia foi usada para examinar eficácia antiviral contra a 25 arenaviroses de febre hemorrágica que normalmente requerem refreamento de laboratório máximo, tais como viroses por Machupo e Guanarito.
Infecção por vírus de pseudotipo é ensaiada em células de cultu- ra de tecido, habitualmente 293T (rim embrionário humano) ou MRC-5 (pul- mão humano). As células são semeadas em placas de 96 cavidades de mo- 30 do que elas sejam um pouco subconfluentes no dia seguinte. A fim de testar as propriedades inibitórias de um determinado composto, diluições de com- posto seriais são preparadas em DMSO. Cada destas diluições é em segui- da também diluída 100 vezes em meios de cultura de célula. Meios de cultu- ra de célula são substituídos com as diluições de composto em meios, e em seguida subsequentemente um volume igual de matéria-prima de vírus de pseudotipo é adicionado. O vírus de pseudotipo é diluído em meios de cultu- 5 ra de célula de modo que a quantidade de vírus adicionada a cada cavidade seja suficiente para produzir um sinal de Iuciferase fornecendo uma relação de sinal-para-ruído de 20 para 50. Atividade de Iuciferase é medida 2-3 dias após infecção usando métodos de detecção de bioluminescência baseados em Iuciferina padrões, tais como Sistema de Ensaio de Luciferase de Pro- 10 mega. Cada diluição de composto é testada em cavidades em triplicata, e atividade de Iuciferase é convertida em uma porcentagem de infecciosidade baseada em controles positivo (nenhum composto) e negativo (nenhum ví- rus) na mesma placa. Concentrações cinqüenta por cento eficazes (EC50S) são calculadas com software IDBS XLfit4,1 para Microsoft Excel, usando um . 15 modelo logístico de quatro parâmetros ajustado para y = A + B/(1 + (x/C)AD), onde A (base) e B (topo) são fixados em 0 e 100% respectivamente, C =
EC50, D = fator de inclinação, x = concentração de composto, e y = resposta.
Número do EC50 vs. vírus pseudotipado (μΜ) Exemplo Α=<0.5μΜ B= 0.5 to <1.0μΜ 0=1.0ΙΟ<5μΜ 0=δ5μΜ Tacaribe Guanarito Machupo Pichinde VSV 99 A C B C D 100 A A A C D 101 A A A B D 102 A C A C D 103 A A A C D 104 A A A C D 105 A A A C D 106 A A A D D 107 A A A C D 108 A A A C D 109 A A A D D 110 A B A C D 111 A B A C D 112 A A A C . D Todas as referências citadas aqui são incorporadas por referên- cia em sua totalidade para todos os propósitos.

Claims (32)

1. Uso de um composto de fórmula Il abaixo: <formula>formula see original document page 110</formula> Fórmula Il em que n é um número inteiro de 0-6; m é um número inteiro de 0-1; Ri é selecionado do grupo consistindo em H e alquila; R2 é selecionado do grupo consistindo em fenila substituída ou não-substituída, arila substituída e não-substituída, heteroarila substituída e não-substituída, alquila substituída ou não-substituída, alquila ramificada substituída ou não-substituída, e ciclo-heteroalquilas insaturadas substituí- das ou não-substituídas; ou onde Ri e R2 combinam-se juntos para formar uma C4-10 heteroalquila saturada cíclica substituída ou não-substituída; R3 e R4 são independentemente selecionados do grupo consis- tindo em H e alquila; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, referido uso sendo caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de uma composição farmacêutica para o tratamento ou profilaxia de uma infecção viral.
2. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que n é 0,1, ou 2.
3. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que n é 1.
4. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato dequemél.
5. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que m é 1 e n é 1.
6. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto de fórmula Il é selecionado do grupo consistindo em: 2-[2,5-bis(2,2,2-trifluoroetóxi)benzoil]-N-[1,1- bis(trifluorometil)propil]hidrazinacarboxamida; N-[1,1 -bis(trifluorometil)propil]-2-(4-terc-butilbenzoil)hidrazinacarboxamida; 2-(1,1’-bifenil-4-ilcarbonil)-N-[1,1- bis(trifluorometil)propil]hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(1-naftoil)hidrazinacarboxamida; 2-(1,1 ’-bifenil-2-ilcarbonil)-N-[1,1 - bis(trifluorometil)propil]hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(4-metilbenzoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1 -bis(trifluorometil)propil]-2-(2-naftoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1 -bis(trifluorometil)propil]-2-(2,5-dimetoxibenzoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1 -bis(trifluorometil)propil]-2-(3,4-diclorobenzoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1 -bis(trifluorometil)propil]-2-(4-bromobenzoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(4-isopropilbenzoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1 -bis(trifluorometil)propil]-2-(3,5-dimetilbenzoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(mesitilcarbonil)hidrazinacarboxamida; e N-[1,1 -bis(trifluorometil)propil]-2-(5-cloro-2- metoxibenzoil)hidrazinacarboxamida.
7. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto de fórmula Il é N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(4- metilbenzoil)hidrazinacarboxamida.
8. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto de fórmula Il é N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(2,5- dimetoxibenzoil)hidrazinacarboxamida.
9. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o tratamento ou profilaxia se dá em um humano.
10. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a infecção viral é um vírus de febre hemorrágica.
11. Uso de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o vírus de febre hemorrágica é um Arenavírus.
12. Uso de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o Arenavírus é selecionado do grupo consistindo em Tacaribe, Guanarito, Machupo, Pichinde, e VSV.
13. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que também compreende o uso concomitante de cidofovir, cidofovir cícli- co, ou sais, ésteres, ou profármacos dos mesmos.
14. Uso de um composto de fórmula I abaixo: <formula>formula see original document page 112</formula> em que n é um número inteiro de 0-6; m é um número inteiro de 0-1; p é um número inteiro de 0-1; Ri é selecionado do grupo consistindo em H e alquila; R2 é selecionado do grupo consistindo em fenila substituída ou não-substituída, arila substituída e não-substituída, heteroarila substituída e não-substituída, alquila substituída ou não-substituída, alquila ramificada substituída ou não-substituída, e ciclo-heteroalquilas insaturadas substituí- das ou não-substituídas; ou onde Ri e R2 combinam-se juntos para formar uma C4-C10 heteroalquila saturada cíclica substituída ou não-substituída; R3 é selecionado do grupo consistindo em H e alquila; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, referido uso sendo caracterizado pelo fato de ser para o tratamento ou profi- Iaxia de uma infecção viral, e também compreendendo o uso concomitante de uma combinação de cidofovir, cidofovir cíclico, ou sais, ésteres ou pro- fármacos dos mesmos.
15. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de com- preender um veículo farmaceuticamente aceitável e uma quantidade farma- ceuticamente eficaz de um composto de fórmula II: <formula>formula see original document page 113</formula> em que n é um número inteiro de 0-6; m é um número inteiro de 0-1; Ri é selecionado do grupo consistindo em H e alquila; R2 é selecionado do grupo consistindo em fenila substituída ou não-substituída, arila substituída e não-substituída, heteroarila substituída e não-substituída, alquila substituída ou não-substituída, alquila ramificada substituída ou não-substituída, e ciclo-heteroalquilas insaturadas substituí- das ou não-substituídas; ou onde Ri e R2 combinam-se juntos para formar uma C4-C10 heteroalquila saturada cíclica substituída ou não-substituída; R3 e R4 são independentemente selecionados do grupo consis- tindo em H e alquila; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
16. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 15, caracterizada pelo fato de que n é 0,1, ou 2.
17. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 15, caracterizada pelo fato de que n é 1.
18. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 15, caracterizada pelo fato de que m é 1.
19. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 15, caracterizada pelo fato de que m é 1 e n é 1.
20. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 15, caracterizada pelo fato de que o composto de fórmula Il é selecionado do grupo consistindo em: 2-[2,5-bis(2l2,2-trifluoroetóxi)benzoil]-N-[1,1- bis(trifluorometil)propil]hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(4-terc-butilbenzoil)hidrazinacarboxamida; 2-(1,1’-bifenil-4-ilcarbonil)-N-[1,1- bis(trifluorornetil)propil]hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(1-naftoil)hidrazinacarboxamida; 2-(1,1’-bifenil-2-ilcarbonil)-N-[1,1- bis(trifluorometil)propil]hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(4-metilbenzoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(2-naftoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1 -bis(trifluorometil)propil]-2-(2,5-dimetoxibenzoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(3,4-diclorobenzoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1 -bis(trifluorometil)propil]-2-(4-bromobenzoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(4-isopropilbenzoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(3,5-dimetilbenzoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(mesitilcarbonil)hidrazinacarboxamida; e N-[1,1 -bis(trifluorometil)propil]-2-(5-cloro-2- metoxibenzoil)hidrazinacarboxamida.
21.Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 15, caracterizada pelo fato de que o composto de fórmula Il é N-[1,1 - bis(trifluorometil)propil]-2-(4-metilbenzoil)hidrazinacarboxamida.
22. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 15, caracterizada pelo fato de que o composto de fórmula Il é N-[1,1- bis(trifluorometil)propil]-2-(2,5-dimetoxibenzoil)hidrazinacarboxamida.
23. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 15, caracterizada pelo fato de que também compreende cidofovir, cidofovir cícli- co, ou sais, ésteres, ou profármacos dos mesmos.
24. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de com- preender um veículo farmaceuticamente aceitável e uma quantidade farma- ceuticamente eficaz de um composto de fórmula I: <formula>formula see original document page 115</formula> em que n é um número inteiro de 0-6; m é um número inteiro de 0-1; p é um número inteiro de 0-1; Ri é selecionado do grupo consistindo em H e alquila; R2 é selecionado do grupo consistindo em fenila substituída ou não- substituída, arila substituída e não-substituída, heteroarila substituída e não- substituída, alquila substituída ou não-substituída, alquila ramificada substi- tuída ou não-substituída, e ciclo-heteroalquilas insaturadas substituídas ounão-substituídas; ou onde Ri e R2 combinam-se juntos para formar uma C4-10 heteroalquila saturada cíclica substituída ou não-substituída; R3 é selecionado do grupo consistindo em H e alquila; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e também compreendendo cidofovir, cidofovir cíclico, ou sais, ésteres ou profármacos dos mesmos.
25. Composto, caracterizado pelo fato de apresentar a fórmula II: <formula>formula see original document page 115</formula> Fórmula Il em que n é um número inteiro de 0-6; m é um número inteiro de 0-1; R1 é selecionado do grupo consistindo em H e alquila; R2 é selecionado do grupo consistindo em fenila substituída ou não-substituída, arila substituída e não-substituída, heteroarila substituída e não-substituída, alquila substituída ou não-substituída, alquila ramificada substituída ou não-substituída, e ciclo-heteroalquilas insaturadas substituí- das ou não-substituídas; ou onde R1 e R2 combinam-se juntos para formar uma C4--Io heteroalquila saturada cíclica substituída ou não-substituída; Rz e R4 são independentemente selecionados do grupo consis- tindo em H e alquila; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
26. Composto de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que n é 0,1, ou 2.
27. Composto de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que n é 1.
28. Composto de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que m é 1.
29. Composto de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que m é 1 e n é 1.
30. Composto de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que o composto de fórmula Il é selecionado do grupo consistin- do em: 2-[2,5-bis(2,2,2-trifluoroetóxi)benzoil]-N-[1,1- bis(trifluorometil)propil]hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(4-terc-butilbenzoil)hidrazinacarboxamida;2-(1,1 ’-bifenil4-ilcarbonil)-N-[1,1- bis(trifluorometil)propil]hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(1-naftoil)hidrazinacarboxamida;2-(1,1 ’-bifenil-2-ilcarbonil)-N-[1,1- bis(trifluorometil)propil]hidrazinacarboxamida; N-[1,1 -bis(trifluorometil)propil]-2-(4-metilbenzoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(2-naftoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(2,5-dimetoxibenzoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(3,4-diclorobenzoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(4-bromobenzoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1 -bis(trifluorometil)propil]-2-(4-isopropilbenzoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2-(3,5-dimetilbenzoil)hidrazinacarboxamida; N-[1,1 -bis(trifluorometil)propil]-2-(mesitilcarbonil)hidrazinacarboxamida; e N-[1,1 -bis(trifluorometil)propil]-2-(5-cloro2-metoxibenzoil)hidrazinacarboxa- mida.
31. Composto de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que o composto de fórmula Il é N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2- (4-metilbenzoil)hidrazinacarboxamida.
32. Composto de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que o composto de fórmula Il é N-[1,1-bis(trifluorometil)propil]-2- (2,5-dimetoxibenzoil)hidrazinacarboxamida.
BRPI0806920-4A 2007-01-17 2008-01-16 Sulfonil semicarbazidas, carbonil semicarbazidas, semicarbazidas e ureias, composições farmacêuticas das mesmas, e métodos para tratar viroses de febre hemorrágica. incluindo infecções associadas com arenaviroses. BRPI0806920A2 (pt)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11/653,972 2007-01-17
US11/653,972 US7994221B2 (en) 2004-12-06 2007-01-17 Sulfonyl semicarbazides, carbonyl semicarbazides, semicarbazides and ureas, pharmaceutical compositions thereof, and methods for treating hemorrhagic fever viruses, including infections associated with arenaviruses
PCT/US2008/000529 WO2008147474A2 (en) 2007-01-17 2008-01-16 Sulfonyl semicarbazides, carbonyl semicarbazides, semicarbazides and ureas, pharmaceutical compositions thereof, and methods for treating hemorrhagic fever viruses, including infections associated with arenaviruses

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BRPI0806920A2 true BRPI0806920A2 (pt) 2014-04-29

Family

ID=40075707

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BRPI0806920-4A BRPI0806920A2 (pt) 2007-01-17 2008-01-16 Sulfonil semicarbazidas, carbonil semicarbazidas, semicarbazidas e ureias, composições farmacêuticas das mesmas, e métodos para tratar viroses de febre hemorrágica. incluindo infecções associadas com arenaviroses.

Country Status (10)

Country Link
US (3) US7994221B2 (pt)
EP (1) EP2124921A4 (pt)
JP (1) JP2010526025A (pt)
KR (1) KR20100028017A (pt)
CN (1) CN101641092A (pt)
AU (1) AU2008257428A1 (pt)
BR (1) BRPI0806920A2 (pt)
CA (1) CA2674967A1 (pt)
MX (1) MX2009007687A (pt)
WO (1) WO2008147474A2 (pt)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8410149B2 (en) * 2004-12-06 2013-04-02 Siga Technologies Inc. Sulfonyl semicarbazides, semicarbazides and ureas, pharmaceutical compositions thereof, and methods for treating hemorrhagic fever viruses, including infections associated with arenaviruses
US7994221B2 (en) 2004-12-06 2011-08-09 Siga Technologies, Inc. Sulfonyl semicarbazides, carbonyl semicarbazides, semicarbazides and ureas, pharmaceutical compositions thereof, and methods for treating hemorrhagic fever viruses, including infections associated with arenaviruses
WO2006062898A2 (en) * 2004-12-06 2006-06-15 Siga Technologies, Inc. Compounds and methods for treating hemorrhagic fever viruses
WO2007120374A2 (en) 2006-02-01 2007-10-25 Siga Technologies, Inc. Anti-arenaviral compounds
US8791110B2 (en) 2006-02-01 2014-07-29 Siga Technologies, Inc. Anti-arenaviral compounds
JP2009528367A (ja) 2006-03-02 2009-08-06 サイガ・テクノロジーズ・インコーポレーテッド アレナウイルス感染の治療のための抗ウイルス薬剤
US8871746B2 (en) 2006-03-02 2014-10-28 Kineta Four, LLC Antiviral drugs for treatment of arenavirus infection
JP5380078B2 (ja) 2006-03-02 2014-01-08 サイガ・テクノロジーズ・インコーポレーテッド アレナウイルス感染の治療のための抗ウイルス薬剤
US7977365B2 (en) 2006-03-02 2011-07-12 Siga Technologies, Inc. Antiviral drugs for treatment of arenavirus infection
CN101743008A (zh) 2007-05-23 2010-06-16 西佳技术公司 用于治疗或预防登革热感染的抗病毒药
US8818588B2 (en) 2007-07-12 2014-08-26 Odyne Systems, Llc Parallel hybrid drive system utilizing power take off connection as transfer for a secondary energy source
US9878616B2 (en) 2007-07-12 2018-01-30 Power Technology Holdings Llc Hybrid vehicle drive system and method using split shaft power take off
US9061680B2 (en) 2007-07-12 2015-06-23 Odyne Systems, Llc Hybrid vehicle drive system and method for fuel reduction during idle
US8408341B2 (en) 2007-07-12 2013-04-02 Odyne Systems, Llc Hybrid vehicle drive system and method and idle reduction system and method
US20120207620A1 (en) 2007-07-12 2012-08-16 Odyne Systems, LLC. Hybrid vehicle drive system and method and idle reduction system and method
US8978798B2 (en) 2007-10-12 2015-03-17 Odyne Systems, Llc Hybrid vehicle drive system and method and idle reduction system and method
US9283954B2 (en) 2007-07-12 2016-03-15 Odyne Systems, Llc System for and method of fuel optimization in a hybrid vehicle
JP5393679B2 (ja) 2007-08-27 2014-01-22 シガ・テクノロジーズ・インコーポレーテッド アレナウイルス感染症を治療するための抗ウイルス薬
US9452992B2 (en) 2011-08-10 2016-09-27 President And Fellows Of Harvard College Small molecule inhibitors of ebola and lassa fever viruses
US11225240B2 (en) 2011-12-02 2022-01-18 Power Technology Holdings, Llc Hybrid vehicle drive system and method for fuel reduction during idle
EP3071438A4 (en) 2013-11-18 2017-08-02 Power Technology Holdings LLC Hybrid vehicle drive system and method using split shaft power take off
DE102015207036A1 (de) * 2015-04-17 2016-10-20 Karl Sebastian Lang Arenaviren zur Anwendung bei der Behandlung und/oder Vorbeugung von Tumoren sowie Verfahren zur Herstellung von Arenaviren mit (verbesserten) tumorregressiven Eigenschaften
US11629139B2 (en) 2017-09-08 2023-04-18 President And Fellows Of Harvard College Small molecule inhibitors of Ebola and Lassa fever viruses and methods of use
CN117582436A (zh) * 2023-08-31 2024-02-23 甫康（上海）健康科技有限责任公司 亚胺酰基酰肼类化合物、含其的组合物和其应用

Family Cites Families (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3709574A1 (de) 1987-03-24 1988-10-06 Bayer Ag Substituierte triazolinone
DE3803523A1 (de) 1987-06-12 1988-12-22 Bayer Ag Substituierte triazolinone
US5625073A (en) 1987-06-12 1997-04-29 Bayer Aktiengesellschaft Herbicidal substituted triazolinones
US5182303A (en) 1988-12-27 1993-01-26 E. I. Du Pont De Nemours And Company Substituted semicarbazone arthropodicides
DE3916208A1 (de) 1989-05-18 1990-11-22 Bayer Ag Substituierte triazolone
US5194084A (en) 1989-05-18 1993-03-16 Bayer Aktiengesellschaft Herbicidal substituted triazolones
US5534486A (en) 1991-04-04 1996-07-09 Bayer Aktiengesellschaft Herbicidal sulphonylaminocarbonyl triazolinones having substituents bonded via oxygen
DE4111394A1 (de) 1991-04-09 1992-10-15 Behringwerke Ag Amidinophenylalaninderivate, verfahren zu deren herstellung, deren verwendung und diese enthaltende mittel
AU696084B2 (en) 1994-06-02 1998-09-03 Zeneca Limited Substituted pyrrolidone, thiazolidones or oxazolidones as herbicides
US5814442A (en) 1994-06-10 1998-09-29 Georgetown University Internally controlled virion nucleic acid amplification reaction for quantitation of virion and virion nucleic acid
US6610683B2 (en) 1996-09-12 2003-08-26 Idun Pharmaceuticals, Inc. Treatment of infectious disease using interleukin-1β-converting enzyme (ICE)/CED-3 family inhibitors
US5945446A (en) 1997-02-10 1999-08-31 Laubc Biochemicals, Corporation Process for preparing synthetic soil-extract materials and medicaments based thereon
US6524567B2 (en) 1997-02-10 2003-02-25 Laub Biochemicals Corp. Synthetic soil-extract materials and medicaments for hemorrhagic fever viruses based thereon
US5904857A (en) 1997-04-17 1999-05-18 Nalco Chemical Company 4-alkyl and aryl semicarbazides as oxygen scavengers
WO1999020272A1 (en) 1997-10-21 1999-04-29 Merck & Co., Inc. Azapeptide acids as cell adhesion inhibitors
JPH11240859A (ja) * 1997-12-26 1999-09-07 Nippon Bayer Agrochem Co Ltd フルオロ置換ベンゾイルウレア類及び有害生物防除剤
JP2002541215A (ja) 1999-04-09 2002-12-03 ユーロ−セルティック エス． ア． ナトリウムチャネル遮断薬組成物およびその使用
US7244721B2 (en) 2000-07-21 2007-07-17 Schering Corporation Peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
US7335779B2 (en) 2002-03-08 2008-02-26 Quonova, Llc Modulation of pathogenicity
US20040077607A1 (en) 2002-10-21 2004-04-22 Uckun Fatih M. Aryl phosphate derivatives of d4T with potent anti-viral activity against hemorrhagic fever viruses
WO2004096197A2 (en) 2003-05-02 2004-11-11 Universita Degli Studi Di Cagliari 5-aza-7-deazapurine nucleosides for treating flaviviridae
US7737168B2 (en) 2003-06-20 2010-06-15 Siga Technologies, Inc. Compounds, compositions, and methods for treatment and prevention of orthopoxvirus infections and associated diseases
US7687641B2 (en) 2003-06-20 2010-03-30 Siga Technologies, Inc. Chemicals, compositions, and methods for treatment and prevention of orthopoxvirus infections and associated diseases
CA2529761C (en) 2003-06-20 2013-08-13 Siga Technologies, Inc. Compounds, compositions and methods for treatment and prevention of orthopoxvirus infections and associated diseases
DE10348023A1 (de) 2003-10-15 2005-05-19 Imtm Gmbh Neue Alanyl-Aminopeptidasen-Inhibitoren zur funktionellen Beeinflussung unterschiedlicher Zellen und zur Behandlung immunologischer, entzündlicher, neuronaler und anderer Erkrankungen
US7994221B2 (en) 2004-12-06 2011-08-09 Siga Technologies, Inc. Sulfonyl semicarbazides, carbonyl semicarbazides, semicarbazides and ureas, pharmaceutical compositions thereof, and methods for treating hemorrhagic fever viruses, including infections associated with arenaviruses
WO2006062898A2 (en) 2004-12-06 2006-06-15 Siga Technologies, Inc. Compounds and methods for treating hemorrhagic fever viruses
WO2007120374A2 (en) 2006-02-01 2007-10-25 Siga Technologies, Inc. Anti-arenaviral compounds
JP2009528367A (ja) 2006-03-02 2009-08-06 サイガ・テクノロジーズ・インコーポレーテッド アレナウイルス感染の治療のための抗ウイルス薬剤
US7977365B2 (en) 2006-03-02 2011-07-12 Siga Technologies, Inc. Antiviral drugs for treatment of arenavirus infection
JP5380078B2 (ja) 2006-03-02 2014-01-08 サイガ・テクノロジーズ・インコーポレーテッド アレナウイルス感染の治療のための抗ウイルス薬剤
JP2010535705A (ja) 2007-04-23 2010-11-25 シガ テクノロジーズ，インコーポレーテッド オルソポックスウイルス感染及び関連疾患の治療及び予防のための化学物質、組成物、及び方法
CN101743008A (zh) 2007-05-23 2010-06-16 西佳技术公司 用于治疗或预防登革热感染的抗病毒药
JP5393679B2 (ja) 2007-08-27 2014-01-22 シガ・テクノロジーズ・インコーポレーテッド アレナウイルス感染症を治療するための抗ウイルス薬
CA2712071A1 (en) 2008-01-15 2009-10-08 Siga Technologies, Inc. Antiviral drugs for treatment of arenavirus infection
US9029376B2 (en) 2008-06-03 2015-05-12 Siga Technologies, Inc. Small molecule inhibitors for the treatment or prevention of dengue virus infection
WO2012060820A1 (en) 2010-11-02 2012-05-10 Siga Technologies, Inc. Sulfonyl semicarbazides, semicarbazides and ureas, pharmaceutical compositions thereof, and methods for treating hemorrhagic fever viruses, including infections associated with arenaviruses

Also Published As

Publication number Publication date
JP2010526025A (ja) 2010-07-29
WO2008147474A2 (en) 2008-12-04
CA2674967A1 (en) 2008-12-04
US8658697B2 (en) 2014-02-25
MX2009007687A (es) 2010-12-06
US20110118505A1 (en) 2011-05-19
EP2124921A4 (en) 2010-04-14
CN101641092A (zh) 2010-02-03
US8664274B2 (en) 2014-03-04
KR20100028017A (ko) 2010-03-11
AU2008257428A1 (en) 2008-12-04
WO2008147474A8 (en) 2009-07-09
US20130261087A1 (en) 2013-10-03
WO2008147474A3 (en) 2009-01-22
US20100256096A1 (en) 2010-10-07
US7994221B2 (en) 2011-08-09
EP2124921A2 (en) 2009-12-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BRPI0806920A2 (pt) Sulfonil semicarbazidas, carbonil semicarbazidas, semicarbazidas e ureias, composições farmacêuticas das mesmas, e métodos para tratar viroses de febre hemorrágica. incluindo infecções associadas com arenaviroses.
US9067873B2 (en) Sulfonyl semicarbazides, semicarbazides and ureas, pharmaceutical compositions thereof, and methods for treating hemorrhagic fever viruses, including infections associated with arenaviruses
US7872037B2 (en) Antiviral drugs for treatment of arenavirus infection
JP5393679B2 (ja) アレナウイルス感染症を治療するための抗ウイルス薬
US9199920B2 (en) Antiviral drugs for treatment of arenavirus infection
CA2965258C (en) Therapy for inhibition of single-stranded rna virus replication
JP2017538676A (ja) ミトコンドリア透過性遷移孔（ｍｔＰＴＰ）の小分子阻害剤
US9212134B2 (en) Inhibitors of viral entry into mammalian cells
WO2012060820A1 (en) Sulfonyl semicarbazides, semicarbazides and ureas, pharmaceutical compositions thereof, and methods for treating hemorrhagic fever viruses, including infections associated with arenaviruses
US9115065B2 (en) Sulfonyl semicarbazides, semicarbazides and ureas, pharmaceutical compositions thereof, and methods for treating hemorrhagic fever viruses, including infections associated with Arenaviruses
AU2015255306A1 (en) Inhibitors of viral entry into mammalian cells

Legal Events

Date Code Title Description
B08F Application dismissed because of non-payment of annual fees [chapter 8.6 patent gazette]

Free format text: REFERENTE A 6A ANUIDADE.

B08K Patent lapsed as no evidence of payment of the annual fee has been furnished to inpi [chapter 8.11 patent gazette]

Free format text: REFERENTE AO DESPACHO 8.6 PUBLICADO NA RPI 2277 DE 26/08/2014.