BRPI0720564A2

BRPI0720564A2 - pirimidinonas biciclìcas e seus usos

Info

Publication number: BRPI0720564A2
Application number: BRPI0720564-3A
Authority: BR
Inventors: Eric Dale Jones; Jonathan Alan Victor Coates; David Ian Rhodes; John Joseph Deadman; Nicholas Andrew Vandegraff; Lisa Jane Winfield; Neeranat Thienthong; Neil Choi; Katherine Macfarlane; William Issa
Original assignee: Avexa Ltd
Priority date: 2006-12-22
Filing date: 2007-12-21
Publication date: 2011-08-16
Also published as: US20100168063A1; US20110009366A1; CN101880280B; US8207334B2; WO2008077188A1; AR064517A1; HK1131615A1; BRPI0722411A2; AU2007336703B2; AU2010201160A1; EP2114903A1; NZ577491A; EP2114903B1; CA2673183C; DK2114903T3; JP2010513322A; JP5208962B2; AR077043A2; DE602007012308D1; EP2269992A1

Abstract

<B>PIRIMIDINONAS BICìCLICAS E SEUS USOS<D>. A presente invenção fornece um composto de Fórmula I ou um derivado, sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitável deste. é ainda fornecido um método de tratamento ou profilaxia de uma infecção viral em um indivíduo compreendendo a administração ao referido indivíduo de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula I ou um derivado, sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitável deste. Uma composição farmacêutica ou medicamento compreendendo um composto de Fórmula I também é fornecido.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção Para"PISIMIDINCWÍÍ^S BICÍCLICAS E SEUS USOS".

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente, invenção se refere a novos compostos depirimidinona biciclicos e análogos seus para o tratamentode infecções virais, particularmente infecções por HIV.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

O retrovirus designado "vírus da imunodeficiênciahumana" ou "HIV" é o agente etiológico de uma doençacomplexa que destrói progressivamente o sistema imune. Essadoença é conhecida como sindrome da imunodeficiênciaadquirida ou AIDS. Em dezembro de 2005 estimava-se que 40milhões de pessoas estariam vivendo com HIV pelo mundo eque mais de 3 milhões de mortes ocorrem por ano.

Uma característica da replicação retroviral inclui atranscrição reversa do genoma viral no DNA proviral e suaintegração no genoma da célula hospedeira. Esses passos sãonecessários para a replicação do HIV e são mediados pelasenzimas codificadas pelo vírus, transcriptase reversa eintegrase, respectivamente.

Infecção por HIV segue uma via em que a partículaviral se liga aos receptores da superfície celular e os co-receptores resultando na ' fusão da partícula viral nacélula. Os conteúdos dos vírus são liberados no citoplasma,onde a transcrição reversa do genoma do HIV ocorre. Atravésde uma série. de. .passos uma cópia de DNA pré-viral de fitadupla é produzida. O DNA proviral é transportado pará onúcleo em um complexo conhecido como o complexo pré-integração (PIC), o qual contém integrase e outrasproteínas virais e possivelmente celulares. Uma vez dentro,o núcleo do DNA. proviral é integrado no genoma da célulahospedeira através da ação da integrase. Uma vez integrado,a transcrição e tradução do genoma viral pode ocorrer,resultando na produção de proteínas virais e em um novogenoma de RNA viral. Essas proteínas e genoma se montam nasuperfície celular e, dependendo do tipo celular,possivelmente outros compartimentos membranosos

intracelulares. Partículas montadas então se desenvolvem dacélula e durante, ou logo após, esse processo amadurecem empartículas de HIV infecciosas pela ação da protease viral.

A integração do genoma proviral no genoma da célulahospedeira requer a ação de uma integrase a qual efetuaesse processo em pelo menos três passos, possivelmentequatro. O primeiro passo envolve -a montagem do genoma viralem um complexo de nucleoproteína estável, em segundo lugar,o processamento dos dois nucleotídeos- do terminal 3' dogenoma para produzir extremidades marcadas com. trêsresíduos de OH 3' e em terceiro a transferência dessasextremidades no· genoma da célula hospedeira. O passo finalenvolve o preenchimento do intervalo do sitio de inserçãono genoma hospedeiro. Ainda há uma maior conjectura sobrese a integrase efetua esse passo final ou se ela é efetuadapor enzimas de reparo celular.

Atualmente a infecção por HIV pode ser tratada com umavariedade de inibidores no mercado, os quais almejam atranscriptase reversa, a protease ou a entrada na célula. Otratamento com infecção por HIV com esses, ou com umacombinação desses medicamentos é conhecido como sendo umtratamento eficaz para AIDS e doenças similares. Falhas comos atuais inibidores incluem a rápida emergência e aumentode incidência de resistência e vários efeitos colaterais e,deste modo, existe uma necessidade por novas classes deproteínas almejando inibidores, tais como a integrase.

RESUMO DA INVENÇÃO

Em um primeiro aspecto, a presente invenção fornece umcomposto de Fórmula I ou de um derivado, sal ou pró-medicamento farmaceuticamente aceitável seu, em que:A é uma porção aromática ou heteroaromáticamonocíclica ou bicíclica fundida ao anel contendonitrogênio;

X é selecionado do grupo consistindo de 0 e S;

Y é selecionado do grupo consistindo de 0 e S;

R1 é. de 0 - 3 substituintes, cada um dos quais sendoindependentemente selecionado do grupo consistindo de CN,alquil C1-10, alquenil C2-10, alquil C1-10PO3H2, -O-alquil C1-10,alquil C1-10NR3R4, -O-alquil C1-10NR3R4, halogênio, NR3R4,alquilaril, alquileteroaril, aril, heteroaril, -0-alquilaril, SO2NR3R4;

R3 e R4 são cada um independentemente selecionados dogrupo consistindo de hidrogênio, C02alquil C1-4, C(O) alquilC1-4, alquil C1-10, C1-10NR5R6, -NH(CO) (CO)NHCalquil C1-4; ou R3e R4 tomados juntos com o nitrogênio ligado formam um anelheterociclico de 5 a 7 membros o qual contém de zero a doisheteroátomos adicionais selecionados de N, 0 ou S, onde Spode estar no estado de oxidação S, S(O) ou S(O)2 e em queo referido anel heterociclico é opcionalmente substituídonos átomos de carbono ou nitrogênio com um ou maissubstituintes selecionados de' halo, aril, C(O) alquil Ci_4,S02-alquil C1-4, SO2H, alquil C1-4, CO2H, C02alquil C1-4, NR5R6;alquil C1-4NR5R6;Rs e R6 são cada um independentemente selecionados dogrupo consistindo-de H, e alquil C1-4 ou R5 e R6, juntamentecom o nitrogênio ligado formam um anel heterociclico de 5 a7 membros o qual contém de zero a dois heteroátomosadicionais selecionados de Ν, 0 ou S, onde S pode estar noestado de oxidação S, S(O) ou S (0)2 e em que o referidoanel heterociclico é opcionalmente substituído nos átomosde carbono ou nitrogênio com um ou mais substituintesselecionados de halogênio e alquil C1-4;

quando R1 é alquilaril ou -O-alquilaril, o grupo arildo referido substituinte alquilaril é opcionalmentesubstituído com um substituinte selecionado de alquil C1-10/-0-alquil C1-10, alquil C1-I0NR3R4, -0-alquil C1-I0NR3R4,halogênio, NR3R4f alquilaril, -O-alquilaril, SO2NR3R4,

B é ausente ou é -C(O)-;

C é ausente ou é selecionado do grupo consistindo de -0-, -NH- e -NH-NH-C(O)-;

R2 é selecionado do grupo consistindo de heteròaril,heterociclil e R7;

R7 é selecionado de H, alquilaril e alquil C1-10,com a condição de que se R2 é R7, então B e C devemestar presentes.

Em um segundo aspecto, a presente invenção fornece ummétodo de tratamento ou profilaxia de uma infecção viral emum indivíduo compreendendo a administração ao referidoindivíduo de- uma quantidade eficaz de um composto defórmula (I) ou de um derivado, sal ou pró-medicamentofarmaceuticamente aceitável deste.

Em um terceiro aspecto, é fornecido o uso de umcomposto de Fórmula I ou de um derivado, sal ou pró-medicamento pró-medicamento farmaceuticamente aceitáveldeste no preparo de um medicamento para o tratamento ouprofilaxia de uma infecção viral em um indivíduo.

Em um quarto aspecto, a presente invenção fornece umacomposição farmacêutica compreendendo um composto de acordocom o primeiro aspecto e um veículo, diluente ou excipientefarmaceuticamente aceitável.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

Figura 1 mostra uma tabela da atividade dos compostos,incluindo os compostos de acordo com a presente invenção,em ensaios de transferência de fita usando a enzima HIVintegrase do tipo selvagem e mutante. A enzima mutanteinclui a mutação Q148K e é resistente aos inibidores daintegrase publicados tais como S-1360, Raltegravir (MerckMK-0518) e GS9137 (Gilead GS-9137).

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃOEm um primeiro aspecto, a presente invenção fornece umcomposto de Fórmula I ou um derivado, sal pró-medicamentofarmaceuticamente aceitável deste, em que:

<formula>formula see original document page 8</formula>

A é uma porção aromática ou heteroaromáticamonocíclica ou biciclica fundida ao anel contendonitrogênio;

X é selecionado do grupo consistindo de O e S;

Y é selecionado do grupo consistindo de O e S;

R1 é de 0 - 3 substituintes, cada um dos quais sendoindependentemente selecionado do grupo consistindo de CN,alquil C1-10, alquenil C2-10, alquil C1-10PO3H2, -0-alquil C1-10,alquil C1-10NR3R4, -O-alquil C1-10NR3R4, halogênio, NR3R4,alquilaril, alquileteroaril, aril, heteroaril, -O-alquilaril, SO2NR3R4;

R3 e R4 são cada um independentemente selecionados dogrupo consistindo de hidrogênio, C02alquil C1-4, C(O) alquilC1-4, alquil C1-10, C1-10NR5R6, -NH(CO) (CO)NHCalquil C1-4; ou R3e R4 tomados juntos com o nitrogênio ligado formam um anelheterociclico de 5 a 7 membros o qual contém de zero a doisheteroátomos adicionais selecionados de Ν, 0 ou S, onde Spode estar no estado de oxidação S, S(O) ou S(O)2 e em queo referido anel heterociclico é opcionalmente substituídonos átomos de carbono ou nitrogênio com um ou maissubstituintes selecionados de halo, aril, C(0)alquil C1-4,S02-alquil C1-4, SO2H, alquil C1-4, CO2H, C02alquil C1-4, NR5R6;alquil C1-4NR5R6;

Rs e R6 são cada um independentemente selecionados dogrupo consistindo de H, e alquil C1-4 ou R5 e R6, juntamentecom o nitrogênio ligado formam um anel heterociclico de 5 a7 membros o qual contém de zero a dois heteroátomosadicionais selecionados de N, 0 ou S, onde S pode estar noestado de oxidação S, S(O) ou S(O)2 e em que o referidoanel heterociclico é opcionalmente' substituído nos átomosde carbono ou nitrogênio com um ou mais substituintesselecionados de halogênio e alquil C1-4;

quando R1 é alquilaril ou -O-alquilaril, o grupo arildo referido substituinte alquilaril é opcionalmentesubstituído com um substituinte selecionado de alquil C1-10,-0 —alquil C1-10, alquil C1-10NR3R4, —0-alquil C1-10NR3R4,halogênio, NR3R4, alquilaril, -0-alquilaril, SO2NR3R4,B é ausente ou é -C(O)-;

C é ausente ou é selecionado do grupo consistindo de -0-, -NH- e -NH-NH-C(O)-;R2 é selecionado do grupo consistindo de heteroaril,heterociciil e R7;

R7 é selecionado de H, alquilaril e alqüil C1-10;com a condição de que se R2 é R7, então BeC devemestar presentes.

Em uma forma preferida, R2 é heteroaril ouheterociciil. Mais preferivelmente, R2 é substituído comaril ou arilalquil.

Em uma forma preferida, alquenil C2-10 é alil.

Em uma forma preferida, o composto de fórmula I éselecionado do grupo consistindo dos compostos de FórmulaII, III, IV, V e VI:<formula>formula see original document page 11</formula>Nos compostos de fórmula III, IV e V, Z é Of S ou NR8,em que ér<H/ ,,aiquil · C1-10-, alquil C1-10NR3R4, alquilaril,

Em uma outra forma preferida, o composto de fórmula Ié um composto de fórmula VII:

<formula>formula see original document page 12</formula>

Em uma forma preferida, NR3R4 é morfolina.Em uma forma preferida, R7 é fluorbenzil, maispreferivelmente 4-fluorbenzil.

Em outra forma preferida, R7 é diclorobenzil, maispreferivelmente 3,4-diclorobenzil

Preferivelmente, heteroaril é selecionado do grupoconsistindo de tetrazol, triazol, pirazol, imidazol,oxazol, oxadiazol, tiazol, tiadiazol.

Preferivelmente, o composto é selecionado de:

4-fluorbenzilamida do ácido 7-bromo-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

4-fluorbenzilamida do ácido 3-hidróxi-7-metil-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxíIico

alquilete.roaril, aril e heteroaril.3,4.-dicIorobenzilamida do ácido 3-hidróxi-7-metil-4oxo-4H-piridol[1,3-a]pirimidino-2-carboxilico

3, 4-diiclg;robenzilamida _ do ácido 7-cloro-3-hidróxi-4- oxo-4H-pirido [ 1, 2-a] pirimidino-2-carboxilico

4-fluorbenzilamida do ácido 7-cloro-3-hidróxi-4-oxo4H-pirido [ 1, 2-a] pirimidirio-2-carboxílico

4-fluorbenzilamida do ácido 7-(1,1-dióxidoisotiazolidino-2-il)-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

4-fluorbenzilamida do ácido 7-(1,1-Dióxido[1,2]tiazinano-2-il)-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

4-fluorbenzilamida do ácido 3-hidróxi-4-oxo-7piperidin-l-il-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxíIico

4-fluorbenzilamida do. ácido 3-hidróxi-7-morfolin-4-il4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxiIico

4-fluorbenzilamida do ácido 3-hidróxi-7-(4metilpiperazin-l-il)-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxílico

Éster terc-butilico do ácido 4-[2-(4fluorbenzilcarbamoil)-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-7-il]-piperazino-1-carboxilico4-fluorbenzilamida do ácido 7-(2-

dimetilaminoetMamiFio) -3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido [1,2-α] pirimidino-2-car'bóxilico

4-fluorbenzilamida do ácido 3-hidróxi-4-oxo-7-(2-pirrolidin-l-iletilamino)-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

N-[2-(4-fluorbenzilcarbamoil)-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-α]pirimidin-7-il]N',N'-dimetiloxalamida

4-fluorbenzilamida do ácido 3-hidróxi-7-(2-morfolin-4-iletilamino)-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

4-fluorbenzilamida do ácido 9-dimetilamino-3-hidróxi-7-morfolin-4-il-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

4-fluorbenzilamida do ácido 9-etil-3-hidróxi-7-morfolin-4-il-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxíIico

3-cloro-2-fluorbenzilamida do ácido 3-hidróxi-7-morfolin-4-il-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-ilmetil)-amida do ácido 7-

(3-cloro-2-fluorbenzil)-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-α]pirimidino-2-carboxilico

4-fluorbenzilamida do ácido 7-(4-fluorbenzil)-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxílico(1H-tetrazol-5-il)-amida do ácido 7-(3-cloro-2-fluorbenzil) -3-hidroxi-4-oxò-4H-pirido [1, 2-a]pirimidino-2-carboxíIico

7-(3-cloro-2-fluorbenzil)-3-hidróxi-2-(2H-tetrazol-5-il)-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

7-(3-cloro-2-fluorbenzil)-3-hidróxi-2-(2H-[1,2,4]triazol-3-carbonil)-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

7-(3-cloro-2-fluorbenzil)-3-hidróxi-2-(lH-tetrazol-5-carbonil)-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

4-fluorbenzilamida do ácido 3-hidróxi-8-morfolin-4-il4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

Ácido 7-(3-cloro-2-fluorbenzil)-3-hidróxi-4-oxo-4Hpirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxílico

Ácido 7-(4-fluorbenzil)-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2a]pirimidino-2-carboxilico

4-fluorbenzilamida do ácido 3-hidróxi-6-morfolin-4-il4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxíIico

4-fluorbenzilamida do ácido 3-hidróxi-9-morfolin-4-il4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxíIico

4-fluorbenzilamida do ácido 7-bromo-3-hidróxi-4-tioxo4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxíIico

4-fluorbenzilamida do ácido 3-mercapto-4-oxo-4Hpirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxílicoN' -[2-(4-fluorfenil)-acetil]-hidrazida do ácido 3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxíIico

2 - [ 5- (4-f luorbenzil) .-[1,3,4 ]oxadiazol-2-il] -3-hidroxipirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

4-fluorbenzilamida do ácido 3-hidróxi-7-(morfolino-4-sulfonil)-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

4-fluorbenzilamida do ácido 3-hidróxi-4-oxo-7-sulfamoil-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

4-fluorbenzilamida do ácido 7-dimetilsulfamoil-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxíIico

3-hidróxi-4-oxo-7-pirrolidin-l-ilmetil-4H-pirido[1,2—a]pirimidino-2-carboxílico

4-fluorbenzilamida do ácido 7-dimetilaminometil-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxíIico

Em um segundo aspecto, a presente invenção fornece ummétodo de tratamento ou profilaxia de uma infecção viral emum indivíduo compreendendo a administração ao referidoindivíduo de uma quantidade eficaz de um composto defórmula (I) ou de um derivado, sal ou pró-medicamentofarmaceuticamente aceitável deste.

Em um terceiro aspecto, é fornecido o uso de umcomposto de Fórmula I ou um derivado, sal ou pró-medicamento farmaceuticamente aceitável deste no preparo deum medicamento para o tratamento ou profilaxia de umainfecção viral :rem um indivíduo.

Preferiveimente, a infecção viral do segundo e doterceiro aspectos é uma infecção por HIV ou SIV.

Mais preferiveimente, a infecção por HIV ou SIVcompreende uma cepa viral resistente a outros inibidores daintegrase. Ainda mais preferiveimente, o tipo viralcompreende a enzima HIV integrase com a mutação Q148K.Certos compostos da presente invenção mostraram atividadesurpreendentemente mais alta contra a enzima HIV integrase(Q148K) que é resistente aos inibidores da integrasepublicados, tais como S-1360, Raltegravir (Merck MK-0518) eGS9137 (Gilead GS-9137). Um composto mostrandoparticularmente alta atividade contra Q148K é o composto doExemplo 6.13 (ver Figura 1).

Um exemplo de referências de literatura aos perfis deresistência de Q148K pode ser encontrado no 14° CROI(Conference on Retroviral and Opportunistic Infections),Los Angeles, 27 de fevereiro de 2007 de John Wai, MerckResearch Labs, 1Next generation inhibitors of HIV-IIntegrase Strand Transfer: Structural diversity andresistance profiles.Conforme aqui utilizado, o termo "halo" ou "halogênio"se refere a flúor -(flúor), cloro (cloro), bromo (bromo) ouiodo (iodo).

Conforme aqui utilizado, o termo "alquil" ou usadosozinho ou em termos compostos tais como NH(alquil) ouN(alquil)2 se refere a uma cadeia linear monovalente ou agrupos de hidrocarboneto ramificados, tais como de 1 a 3,de 1 a 6 ou de 1 a 10 átomos de carbono, conformeapropriado. Por exemplo, grupos alquil adequados incluem,porém não estão limitados a, metil, etil, propil,isopropil, n-butil, sec-butil, terc-butil, pentil, 2-metilbutil, 3-metilbutil, n-hexil, 2-, 3- ou 4-metilpentil,2-etilbutil, n-hexil ou 2-, 3-, 4- ou 5-metilpentil.

Conforme aqui utilizado, o termo "alquenil" se referea uma cadeia linear ou a grupos hidrocarboneto ramificadoscom uma ou mais duplas ligações entre os átomos de carbono.Grupos alquenil adequados incluem, porém não estãolimitados a, etenil, alil, propenil, isopropenil, butenil,pentenil e hexenil.

O termo "cicloalquil", conforme aqui utilizado, se refereaos grupos de hidrocarboneto cíclicos. Grupos cicloalquiladequados incluem, porém não estão limitados a,ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil e cicloexil.O termo "aril", conforme aqui utilizado se refere a umgrupo hidrocarboneto aromático C6-Ci0, por exemplo, fenil ounaftil.

0 termo "alquilaril" inclui, por exemplo, benzil.

0 termo "heterociclo", quando usado sozinho ou empalavras compostas, inclui resíduos de hidrocarbonetosfundidos ou conjugados, monocíclicos ou policíclicos,preferivelmente C3-6/ em que um ou mais átomos de carbono(e, onde apropriado, átomos de hidrogênio ligado a eles)são substituídos por um heteroátomo de modo a fornecer umresíduo não-aromático. As ligações entre os átomos podemser saturadas ou insaturadas. Heteroátomos adequadosincluem 0, N e S. Onde dois ou mais átomos de carbono sãosubstituídos, estes podem ser por dois ou mais dos mesmosheteroátomos ou por diferentes heteroátomos. Exemplosadequados de grupos heterocíclicos podem incluirpirrolidinil, piperidil, piperazinil, morfolino,quinolinil, isoquinolinil, tiomorfolino, dioxanil, 2,2'-dimetil-[1,3]-dioxolanil, tetraidrofuranil,

tetraidropiranil, tetraidropirrolil, etc.

0 termo "heteroaril" inclui um anel heteroaromático de5 ou 6 membros contendo um ou mais. heteroátomosselecionados de 0, N e S. Exemplos adequados de gruposheteroaril incluem furanil, tiofenil, tetrazolil, 1,2,3-triazolil, 1,2,4-triázolil, imidazolil, pirazolil,piridinil, pirimidinil, oxazolil, oxadiazolil, tioazolil,tiodiazolil, etc. O anel heteroaromático pode ser fundido aum anel heteroaromático ou aromático de 5 ou 6 membros paraformar um sistema de anel aromático bicíclico, por exemplo,benzofurano.

A não ser que seja estabelecido de outra forma, cadagrupo alquil, C1cloalquil, alquilaril, aril, heteroC1clil,ou heteroaril pode ser opcionalmente substituído com um oumais de alquil C1-C3, Cicloalquil C3-C6, aril C6,heterociclil, heteroaril, alquil C1-C3-OH, alquilaril, OH,0-alquil C1C3, halogênio, CN, NO2, CO2H, C02-alquil C1C3,CONH2, CONH (alquil C1-C3), COM (alquil C1C3) 2, trif luormetil,NH2, NH (alquil C1-C3) ou N (alquil C1-C3J2. Por exemplo, umgrupo aril opC1onalmente substituído pode ser um grupo 4-metilfenil ou 4-hidroxifenil, e um grupo alquilopC1onalmente substituído pode ser 2-hidroxietil,trifluormetil ou difluormetil. Cada substituinte alquil,C1cloalquil, alquilaril, aril, heteroC1clil ou heteroarilopcional pode também ser opcionalmente substituído.

Exemplos de substituintes opcionais também incluemgrupos protetores de nitrogênio adequados (ver "ProtectiveGroups in Organic Synthesis" Theodora Greene and PeterWuts, terceira edição, Wiley IntersC1ence, 1999) .Os sais do composto de fórmula I são preferivelmentefarmaceuticamente aceitáveis, porém será percebido que saisnão-farmaceuticamente aceitáveis caem dentro do escopo dapresente invenção, uma vez que estes são úteis comointermediários no preparo de sais farmaceuticamenteaceitáveis.

O termo "derivado farmaceuticamente aceitável" podeincluir qualquer sal, hidrato ou pró-medicamentofarmaceuticamente aceitável, ou qualquer outro composto quequando administrado a um indivíduo seja capaz de fornecer(diretamente ou indiretamente) um composto de fórmula I Ouqualquer metabólito antibacterialmente ativo ou resíduoseu.

Sais farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem,porém não estão limitados aos, sais de ácidos inorgânicosfarmaceuticamente aceitáveis tais como ácidos clorídrico,sulfúrico fosfórico, nítrico, carbônico, bórico, sulfâmicoe bromídrico, ou sais de ácidos orgânicos farmaceuticamenteaceitáveis, tais como os ácidos acético, propiônico,butírico, tartárico, maleico, hidroximaleico, fumárico,málico, cítrico, lático, múcico, glucônico, benzóico,succínico, oxálico, fenilacético, metanossulfônico,toluenossulfônico, benzenossulfônico, salicílico,sulfanílico, aspártico, glutâmico, edético, esteárico,palmitico, oleico, láurico, pantotênico, tânico, ascórbicoe valérico.

Sais de base incluem, porém não estão limitados,àqueles formados com cátions farmaceuticamente aceitáveis,tais como de sódio, potássio, litio, cálcio, magnésio,zinco, amônio, alquilamônio tais como sis formados comtrietilamina, alcoxiamônio tais como aqueles formados cometanolamina e sais formados de etilenodiamina, colina ouaminoácidos tais como arginina, lisina ou histidina.

Informações gerais sobre os tipos de sais farmaceuticamenteaceitáveis e suas formações são conhecidas pelas pessoasversadas na técnica e é conforme descrito nos textosgerais, tal como "Handbook of Pharmaceutical salts"P.H.Stahl, C.G.Wermuth, Ia edição, 2002, Wiley-VCH.

Grupos básicos contendo nitrogênio podem ser

quaternizados com agentes tais como haletos de alquilainferiores, tais como cloretos, brometos e iodetos demetila, etila, propila, e butila; dialquilsulfatos comosulfato de dimetila e dietila; e outros.

Grupos hidroxila podem ser esterificados com grupos

incluindo ácidos alquilcarboxilicos inferiores, tais comoácido acético e ácido 2,2-dimetilpropiônico, ou sulfonadoscom grupo incluindo ácidos alquilsulfônicos, tal como ácidometilsulfônico (ver, por exemplo, o composto do Exemplo 15.10)

Essa invenção também engloba composições farmacêuticascontendo pró-medicamentos dos compostos de Fórmula I. Essainvenção também engloba métodos de tratamento ou prevençãode uma infecção viral em um indivíduo pela administração depró-medicamentos dos compostos de fórmula I. Compostos defórmula I com grupos amino, amido, hidróxi ou carboxílicoslivres podem ser convertidos em pró-medicamentos.

Pró-medicamentos incluem compostos em que um resíduode aminoácido, ou uma cadeia polipeptídica de dois ou maisresíduos de aminoácidos (por exemplo, dois, três ou quatro)os quais sejam covalentemente unidos aos grupos amino,hidróxi e carboxílico livres dos compostos de fórmula I. Osresíduos de aminoácidos incluem os 20 aminoácidos deocorrência natural comumente designados pelos três símbolosde letras e também incluem 4-hidroxiprolina, hidroxilisina,demosina, isodemosina, 3-metilistidina, norvlina, beta-alanina, ácido gama-aminobutírico, citrulina, homocisteína,homosserina, ornitina e metioninossulfona. Pró-medicamentostambém incluem compostos em que os carbonatos, carbamatos,amidas e ésteres alquílicos, estão covalentemente ligadosaos substituintes acima de fórmula I pela cadeia lateral dopró-medicamento do carbono da carbolina. Pró-medicamentostambém incluem derivados de fosfato dos compostos defórmula I (tais como ácidos, sais de ácidos ou ésteres)unidos por uma ligação fósforo-oxigênio a uma hidroxilalivre dos compostos de fórmula I.

Também será reconhecido que os compostos de fórmula Ipodem possuir centros assimétricos e são, deste modo,capazes de existir em mais de uma forma estereoisomérica. Άinvenção, deste modo, também se refere aos compostos naforma isomérica substancialmente pura em um ou mais centrosassimétricos, por exemplo, com mais de 90% de ee, tais comode 95% a 97% de ee ou mais do que 99% de ee, assim comomisturas, incluindo suas misturas racêmicas. Tais isômerospodem ser preparados por síntese assimétrica, por exemplo,usando intermediários quirais, ou por resolução quiral.

Em um quarto aspecto, a presente invenção fornececomposição farmacêutica compreendendo um composto de acordocom o primeiro aspecto e um veículo, diluente ou excipientefarmaceuticamente aceitável.

As composições da presente invenção podem conteroutros agentes terapêuticos conforme descrito abaixo, epodem ser formuladas, por exemplo, pelo uso de veículos oudiluentes sólidos ou líquidos convencionais, assim comoaditivos farmacêuticos de um tipo apropriado do modo daadministração desejada (por exemplo, excipientes, ligantes,conservantes, estabilizantes, flavorizantes, etc.) deacordo com as técnicas tais como aquelas bem conhecidas natécnica da formulação farmacêutica.

Os compostos da presente invenção podem seradministrados por vias adequadas, por exemplo,parenteralmente, tais como pelas técnicas de injeção ouinfusão subcutânea, intravenosa, intramuscular ouintracisternal (por exemplo, como soluções ou suspensõesaquosas ou não-aquosas injetáveis estéreis).

Formulações farmacêuticas incluem aquelas paraadministração oral, retal, nasal, tópica (incluindo bucal esublingual), vaginal ou parenteral (incluindointramuscular, subcutânea e intravenosa) ou em uma formaadequada para administração por inalação ou insuflação. Oscompostos da invenção, juntamente com um adjuvante, veiculoo diluente convencional, pode ser então colocado na formade composições farmacêuticas e nas suas unidades dedosagem, e em tal forma podem ser empregados como sólidos,tais como comprimidos ou cápsulas preenchidas, ou líquidoscomo soluções, suspensões, emulsões, elixires ou cápsulaspreenchidas com os mesmos, todos para uso oral, na forma desupositório para administração retal; ou na forma desoluções injetáveis estéreis, para uso parenteral (incluindosubcutâneo).Além dos primatas, tais como humanos, uma variedade deoutros mamíferos pode ser tratada de acordo com o método dapresente invenção. Por exemplo, mamíferos incluindo, porémsem se limitar a, vacas, ovelhas, cabras, cavalos,cachorros, gatos, porquinhos-da-índia, ratos ou outrasespécies de bovinos, ovinos, eqüinos, caninos, felinos,roedores ou murinos podem ser tratadas. Entretanto, ométodo também pode ser praticado em outras espécies, taiscomo em espécies de aves (por exemplo, galinhas).

Os indivíduos tratados com o método acima sãomamíferos, incluindo sem se limitar a vacas, ovelhas,cabras, cavalos, cachorros, gatos, porquinhos-da-índia,ratos ou outras espécies de bovinos, ovinos, eqüinos,caninos, felinos, roedores ou murinos, e preferivelmente umser humano, macho ou fêmea.

O termo "quantidade eficaz" significa a quantidade dacomposição individual que irá eliciar a resposta biológicaou médica de um tecido, sistema, animal ou humano queesteja sendo procurada pelo pesquisador, veterinário,médico ou outro clínico.

Conforme será entendido pelas pessoas versadas natécnica - de tratamento de infecções virais, eparticularmente infecções por HIV, o termo "tratamento" nãosignifica necessariamente que a infecção viral écompletamente curada. 0 termo "tratamento" engloba qualquerredução na carga viral e/ou inibição de replicação noindivíduo sendo tratado.

O termo "composição", conforme aqui utilizado, étencionado a englobar um produto compreendendo osingredientes especificados nas quantidades especificadas,assim como qualquer produto o qual resulte, diretamente ouindiretamente, da combinação dos ingredientes especificadosnas quantidades especificadas. Por "farmaceuticamenteaceitável" se entende que o carreador, diluente ouexcipiente deve ser compatível com os outros ingredientesda formulação e não deletérios ao seu receptor.

Os termos "administração de" e ou "administrando um"composto deve ser entendido como significando fornecer umcomposto da invenção ao indivíduo necessitado dessetratamento.

As composições farmacêuticas para a administração doscompostos dessa invenção podem ser convenientementeapresentadas na forma de unidade de dosagem e podem serpreparadas por qualquer um dos métodos em conhecidos natécnica farmacêutica. Todos os métodos incluem o passo decolocar o ingrediente ativo em associação com o veículo, oqual constitui um ou mais ingrediente acessórios. Em geral,as composições farmacêuticas são preparadas colocando-seuniformemente e intimamente o ingrediente ativo emassociação com um veiculo liquido ou um veiculo sólidofinamente dividido ou ambos, é então, quando necessário,modelar o produto na formulação desejada. Na composiçãofarmacêutica, o composto objeto ativo é incluído em umaquantidade suficiente para produzir o efeito desejado noprocesso ou condição das doenças. Conforme aqui utilizado,o termo "composição" é tencionado a englobar um produtocompreendendo os ingredientes especificados nas quantidadesespecificadas, assim como qualquer produto o qual resulte,diretamente ou indiretamente, da combinação dosingredientes especificados nas quantidades especificadas.

As composições farmacêuticas podem estar na forma deuma suspensão aquosa ou oleaginosa injetável estéril. Essasuspensão pode ser formulada de acordo com a técnicaconhecida, usando aqueles agentes dispersantes ouumidificantes adequados os quais foram mencionados acima. Apreparação injetável estéril pode também ser uma solução oususpensão injetável estéril em um diluente ou solventeparenteralmente aceitável não-tóxico, por exemplo, como umasolução de 1,3-butanodiol. Dentre os veículos e solventesaceitáveis que podem ser empregados estão: água, solução deRinger e solução de cloreto de sódio isotônica. Além disso,óleos estéreis fixos são convencionalmente empregados comoum solvente ou meio suspensor. Para este propósito,qualquer óleo fixo suave pode ser empregado, incluindomono- ou diglicerideos sintéticos. Além disso, ácidosgraxos tais como ácido oléico, encontram uso na preparaçãode injetáveis.

A composição farmacêutica e o método da presenteinvenção podem ainda compreender outros compostosterapeuticamente ativos, os quais são usualmente aplicadosno tratamento das condições patológicas mencionadas acima.A seleção dos agentes apropriados para uso na terapia decombinação pode ser feita por uma pessoa normalmenteversada na técnica, de acordo com os princípiosfarmacêuticos convencionais. A combinação dos agentesterapêuticos pode agir sinergisticamente para efetuar otratamento ou prevenção dos vários distúrbios descritosacima. Ao usar essa abordagem, uma pessoa pode ser capaz dealcançar eficácia terapêutica com dosagens mais baixas decada agente, reduzindo deste modo o potencial para efeitoscolaterais adversos.

Quando outros agentes terapêuticos são empregadosjuntamente com os compostos da presente invenção, elespodem ser usados, por exemplo, em quantidades conformeanotadas no Physician Desk Reference (PDR) ou conforme deoutro modo determinado por . uma pessoa normalmente versadana técnica.

No tratamento ou. prevenção das condições as quaisrequerem a inibição do HIV ou inibição da enzima HIVinte.grase, um nível de dosagem apropriado será geralmentede cerca de. 0,01 até 500 mg por Kg de peso corporal dopaciente por dia, o qual pode ser administrado em dosesmúltiplas ou individuais. Preferivelmente, o nível dedosagem será de cerca de 0,1 até cerca de 250 mg/Kg pordia; mais preferivelmente, cerca de 0,5 até cerca de 100mg/Kg por dia. Um nível de dosagem adequado Pode ser decerca de 0,01 até 250 mg/Kg por dia, de cerca de 0,05 até100 mg/Kg por dia, ou de cerca de 0,1 até 50 mg/Kg por dia.Dentro dessa faixa, a dosagem pode ser de 0,05 a 0,5, de0,5 a 5 ou de 5 a 50 mg/Kg por dia. Para administraçãooral, as composições são preferivelmente fornecidas naforma de comprimidos contendo de 1,0 a 1000 miligramas doingrediente ativo, particularmente 1,0, 5,0, 10,0, 15,0,20,0, 25,0, 50,0, 75,0, 100,0, 150,0, 200,0, 250,0, 300,0,400,0, 500,0, 600,0, 750,0, 800,0, 900,0 e 1000,0miligramas do ingrediente ativo para o ajuste sintomáticoda dosagem ao paciente a ser tratado. Os compostos podemser administrados em um regime de 1 a 4 vezes por dia,preferivelmente de uma a duas vezes por dia.Entretanto, será entendido que o nível de doseespecífica* e a freqüência da dosagem para qualquer pacienteparticular pode variar e irá depender de uma variedade defatores, incluindo a atividade do composto específicoempregada, a estabilidade metabólica e a duração da açãodaquele composto, a idade, o peso corporal, a saúde geral,sexo, dieta, modo e tempo de administração, taxa deexcreção, combinação de fármacos, a severidade da condiçãoparticular e a terapia em curso.

Para que a natureza da invenção seja mais claramenteentendida, suas formas preferidas serão agora descritas porreferência aos seguintes Exemplos não-limitativos.

EXEMPLOS

Métodos

Condições de HPLC

Todas as medições por HPLC foram efetuadas em umSistema 2690 Alliance da Waters.

Método 1

Coluna:

Coluna Waters Exterra C18 (Parte # 186000410) a 30°C,taxa de fluxo de 0,4 mL/min, espectro medido a 254 nM.

Tampões:

Tampão A: água 100%, tampão B: acetonitrila 100%,tampão C: TFA aquoso 2%Gradiente: (gradiente linear, curva 6)

<formula>formula see original document page 32</formula>

Método 2:

Coluna:

Coluna Merck C18 Chromolith (Parte # 1.02129.0001) a30°C, taxa de fluxo e 4 mL/min, espectro medido a 254 nm.Tampões:

<formula>formula see original document page 32</formula>

Método 3:

Col una:Coluna Merck C18 Chromolith (Parte # 1.02129.0001) a30°C, taxa de fluxo a 4 mL/min, espectro medido a 254 nm.

Tampões:

Tampão A: água 100%, tampão B: acetonitrila 100%,tampão C: TFA aquoso 2%

Gradiente: (gradiente linear, curva 6)

<formula>formula see original document page 32</formula>

Método 4

Coluna:Coluna Merck C18 Chromolith (Parte # 1.02129.0001) a30°C, taxa de -.f.luxo a 4 mL/min, espectro medido a 254 nm.

Tampões;

Tampão A: água 100%, tampão B: acetonitrila 100%,tampão C: TFA aquoso 2%

Gradiente: (gradiente linear, curva 6)

2.3 min 0.7 min 0.15 min 0.85 min70%A:25%B.5%C--- 20%A:75%B;5%C-·- 20%A:75%B:5%C-70%A:25%B:5%C-- 70"AA:25%B.5%C

Método 5

Coluna:

Coluna Phenomenex Gemini C18 (Parte # 344382-2) a30°C, taxa de fluxo de 0,4 mL/min, espectro medido a 254nM.

Tampões:

Tampão A: água 100%, tampão B: acetonitrila 100%,tampão C: TFA aquoso 2%

Gradiente: (gradiente linear, curva 6)

5 min 1min 0.25 min 3.75 min49%A:50%B:1%C-- 4%A:95%B:1%C-> 4%A:95%B:1%C-- 49%A:50%B:1%C-- 49%A:50%B:1%C

Método 6

Coluna:

Coluna Phenomenex Gemini C18 (Parte # 344382-2) á30°C, taxa de fluxo de 0,4 mL/min, espectro medido a 254nM.Tampões:Tampões:

Tampão A: água 100%, tampão B: acetonitrila 100%,tampão C: TFA aquoso 2%

Gradiente: (gradiente linear, curva 6)

4 min 1 min 0.25 min 4.75 min69%A:30%B: 1 %C-- 39%A:60%B: 1 %C-►39%A:60%B:1 %C-69%A:30%B: 1 %C-► 69%A:30%B: 1 %C

Método 7

Coluna:

Coluna Waters Symmetry® C18 (Part No. WAT045905) a25°C, taxa de fluxo de 1 mL/min, espectro medido a 254 nM.Tampões:

Tampão A: acetonitrila 100%; Tampão B: TFA aquoso.Gradiente: (gradiente linear, curva 6)

5 min 10min 10min10%A:90%B -- 10%A:90%B -— 100%A:0%B -- 100%A:0%B

Esquema Geral 1: Síntese<formula>formula see original document page 35</formula>

Procedimento Geral 1: Adaptação de OrganicPreparations and Procedures International, 22(4), 1990,532-534

O composto amino pode reagir como no esquema 1 com oderivado de fumarato ou análogos adequados de fumarato,onde, por exemplo, os grupos acetil podem ser substituídospor outros grupos de saída adequados tais como tosil oumetil. A reação pode ser efetuada em um solvente adequado,tal como metanol, DME, DMA, DMSO, clorofórmio, THF oudioxano. A reação pode ser aquecida ou submetida àirradiação por microondas (ver, por exemplo, B. R. Roberts& C. R. Strauss, Ace. Chem. Res. 2005, 38, 653-661, "TowardRapid, 'Green' Predictable Microwave-assisted Synthesis").A reação pode ser efetuada na ausência ou presença dequantidades catalíticas de ácido ou base.Esquema Geral 2: Síntese Alternativa 1

<formula>formula see original document page 36</formula>

Esquema Geral 3: Síntese Alternativa 2<formula>formula see original document page 37</formula>Outras Reações: Esquema 4

<formula>formula see original document page 38</formula>

Compostos onde o substituinte é halogênio podem aindareagir pelos métodos conhecidos pelas pessoas versadas natécnica, conforme mostrado acima, onde o "acoplamento Pd"inclui reações tais como as de Suzuki, Buchwald, Heck ouSonogashira e a substituição aromática nucleofilica (ver,por exemplo, as reações descritas em L. S. Hegedus,"Transition Metals in the Synthesis of Complex OrganicMolecules", University Science books, 1994, primeira ediçãoou M. Smith "Organic synthesis", 2001, McGraw-Hill·Science,2a edição), os quais opcionalmente usam um catalisadormetálico, tal como uma forma adequada de paládio e oreagente 1 é um derivado de Ri (por exemplo, derivados deRi incluindo halogênio ou boronato).

Esquema 5

<formula>formula see original document page 38</formula>O OH pode ser preparado pelos métodos conhecidos pelaspessoas versadas na técnica, conforme mostrado no Esquema(5), por exemplo, onde "P" pode ser benzil (ver I.Stansfield et al, lActive site inhibitors of HCV NS5Bpolymerase' Bio-Org. Med-Chem. Lett, 2004, 14, 5085-5088)ou um grupo protetor adequado, tal como descrito em"Protective Groups in Organic Synthesis" Theodora Greene ePeter Wuts, terceira edição, Wiley Interscience, 1999).

Esquema 6.

<formula>formula see original document page 39</formula>

Exemplo 1: Preparação de diacetoxxfumarato de dimetila

<formula>formula see original document page 39</formula>O procedimento descrito em OPPI, 22(4), 1990, 532-534foi seguido.

Uma solução túrbida levemente agitada de ácidodiidroxifumárico (10,7 g, 72,5 mmol) em metanol anidro (50mL) sob nitrogênio foi esfriada (banho de gelo/água).Cloreto de tionila (10,5 mL, 144 mmol) foi adicionado por20 min sob a superfície da solução metanólica com umaseringa. Depois da adição, o banho de esfriamento foicoletado por filtração e lavado com metanol gelado (10 mL)e água (80 mL) . Diidroxifumarato de dimetila foi obtidocomo um sólido branco (11,8 g) . Esse material (10,8 g) eacetato de isopropenila (36 mL) foram combinado e aquecidoaté o refluxo com agitação sob nitrogênio por 8 h. A reaçãofoi esfriada até a temperatura ambiente e armazenada a 0°Cde um dia para o outro. 0 precipitado resultante foicoletado por filtração e lavado com metanol gelado (5 mL)para produzir diacetoxifumarato de dimetila como um sólidobranco (6,4 g).

Exemplo 2: Preparação de éster metilico do ácido 7-bromo-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[l,2-a]pirimidino-2-carboxilico<formula>formula see original document page 41</formula>

2-amino-5-bromopiridina (664 mg, 3,85 mmol)diacetoxifumarato de dimetila (1,00 g, 3,84 mmol) e ácidoacético glacial (10 gotas) em metanol seco (10 mL) foramcombinados e aquecidos até o refluxo. Depois de 48 h areação foi esfriada até a temperatura ambiente econcentrada in vácuo. Acetato de etila (2 mL) foiadicionado ao resíduo, o qual foi submetido ao ultra-sompor 2 min e o precipitado resultante foi coletado por filtração e lavado com acetato de etila gelado (1 mL) eseco com bomba para produzir o éster metílico do ácido 7-bromo-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxílico como um sólido amarelo (24 mg, 2%) RMN 1H (300MHz, CDCl3) δ 4,19 (3H, s, OCH3), 7,53 (2H, d, J = 1,4 Hz, H8 e H9) , 9,00 (1H, d, J = 1,4 Hz, H6) , 10,53 (1H, br s,OH).

MS (ESI + ) m/z 299 (M[Br79]+I), 301 (M[Br81]+l),HPLC método 1 96,0%/4,30 min.Exemplo 2.1: Preparação do éster metilico do ácido 3-hidróxi-7-mètil-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 42</formula>

RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 2,40 (3H, s, C3), 4,11 (3H,s, OCH3), 7,39 (1H, dd, J = 9,1 Hz, 1,8 Hz, H8), 7,60 (1H,d, J = 9,1 Hz, H9), 8,68 (1H, m, H6).

MS (ESI + ) m/z 235 (M+l), (ESI-) m/z 233 (M-I)

HPLCroétodo 1 100%/3,74 min.

Exemplo 2.2 Preparação de éster metilico do ácido 7-cloro-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[l,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 42</formula>

RMN 1H (300 MHζ, CDCl3) δ 8,74 (1H, dd, J = 2,4 Hz, 09Hz, H7) , 7,52 (1H, d, J = 9,4 Hz, H9) , 7,41 (1H, dd, J =9,4 Hz, 2,4 Hz, H8), 3,98 (3H, s, C3).

MS (ESI+) m/z 255 (M+l), (ESI") m/z 253 (M-I)HPLCmetodo 1 96%/4 , 14 min.

Exemplo 2.3: Preparação do éster metilico do ácido 3-hidróxi-7-morfolin-4-il-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 43</formula>

5-morfolin-4-il-piridin-2-ilamina foi preparada pelaadaptação do procedimento descrito em J. Med. Chem., 2005,48(7), 2388-2406. Resumidamente, 5-bromo-2-nitropiridinafoi reagida com morfolina e carbonato de potássio em DMSO a60-70°C para produzir 4-(6-nitropiridin-3-il)-morfolina com84% de rendimento. A redução com paládio em carbono sob umaatmosfera de hidrogênio forneceu 5-morfolin-4-ilpiridin-2-ilamina com 70% de rendimento. Esta foi convertida em éstermetilico do ácido 3-hidróxi-7-morfolin-4-il-4-oxo-4H-pirido[1,2-α]pirimidino-2-carboxíIico com 25% de rendimentopela adaptação' do procedimento descrito no Exemplo 2, ondeácido ácètico -5-lacial foi usado ao invés de ácido p-toluenossulfônico.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO): δ 3,22 (4H, t, J = 5,0 Hz,-NCH2CH2O-), 3,89 (4H, t, J = 5,0 Hz, -NCH2CH2O-), 4,10 (3H,s, OCH3), 7,45 (1H, dd, J = 9,9, 2,7 Hz, H8), 7,63 (1H, d,J = 9,9 Hz, H9), 8,17 (1H, d, J = 2,7 Hz, H6) , 10,32 (IHrs, 0H)

MS (ESI + ) m/z 305 (M + 1)

HPLC método 7 97, 4%/ll, 7 min.

Exemplo 2.4: Preparação do éster metilico do ácido 3-hidróxi-8-morfolin-4-il-4-oxo-4H-pirido[l,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 44</formula>

Trad. para "reflux" = refluxo

Trad. para "toluene" = tolueno

Trad. para "mopholine" = morfolinaTrad. para "example" = exemplo

Ácido 2-picolínico reagiu com cloreto de tionila e

metanol para fornecer 4-cloro-2-picolinato de metila, oqual foi hidrolisado e o sal de cloridrato foi submetido aum rearranjo de Curtius. A clivagem do grupo protetor Bocproduziu 2-amino-4-cloropiridina. O procedimento descritoem W02006040520 foi adaptado para introduzir a morfolina naposição 4. Esta foi ciclizada no éster intermediário usandouma adaptação do procedimento descrito no Exemplo 2, onde areação foi conduzida a 60°C.

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,43 (t, J = 4,7 Hz, 4H) ,3,73 (t, J = 4,7 Hz, 4H) , 3,85 (s, 3H) , 6,67 (d, J = 2,4Hz, 1H) , 7,27 (dd, J = 8,2 Hz, 2,5 Hz, 1H) , 8,59 (d, J =8,2 Hz, 1H), 9,29 - 9,63 (brs, 1H)

MS (ESI+) m/z 328 (M+23)

Exemplo 2.5: Prepàração de éster metilico do ácido 3-hidróxi-9-morfolin-4-il-4-oxo-4H-pirido[l,2-α]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 45</formula>O procedimento descrito no Exemplo 2.3 foi adaptadopara 3-bromo-2-nitropiridina para produzir 2-amino-3-morfolinopiridina, a qual foi convertida no éster desejadopela adaptação do procedimento descrito no Exemplo 2.

RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3, 45-3, 56 (m, 4H) , 4,00-4,11(m, 7H) , 6,97 (t, J = 7,3 Hz, 1H) , 7,22 (d, J = 7,3 Hz,1H) , 8,63 (dd, J = 7,2, 1,1 Hz, 1H) , 10,31 (s, 1H)

MS (ESI + ) M/Z (m + 23)

Exemplo 2.6: Preparação do éster metílico do ácido 3-hidróxi-4-oxo-7-piperidin-l-il-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 46</formula>

O procedimento descrito no Exemplo 2.3 foi adaptado,exceto pelo uso de piperidina. A 2-amino-5-piperidinopiridina resultante foi convertida no ésterdesejado pela àdaptação do procedimento no Exemplo 17.1(Passo 1), exceto pelo uso de cloreto de pivaloíla paraproduzir o produto desejado.

RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 1,43 (s, 9H) , 1, 58-1, 82 (m,6H) , 3,24 (t, J = 4,8 Hz, 4H) , 3,96 (s, 3H) , 7,64 - 7,78(m,2H), 8,30 (d, J= 1,8 Hz, 1H) .

Exemplo 3: Preparação do éster metílico do ácido 3-ciano-6-hidróxi-7-oxo-1,7-diidropirazolo[1,5-a]pirimidino-5-carboxílico

<formula>formula see original document page 47</formula>

3-amino-4-pirazol carbonitrila (400 mg, 3,7 mmol) ediidroxifumarato (978 mg, 5,5 mmol) foram dissolvidos emácido acético glacial (5 mL) e a mistura foi aquecida até100°C. Depois de 2 d, a reação foi completada por análisede HPLC e foi esfriada até a temperatura ambiente. Acetatode etila (10 mL) foi adicionado até iniciar a precipitaçãodo produto e o precipitado resultante foi coletado porfiltração. O produto foi isolado com 62% de rendimento (534mg).

RMN1H (300 MHz, Dg-DMSO) : δ 3,90 (3H, s, OCH3) e 8,39(1H, s, CHC[CN]).

MS (ESI + ) m/z 235 (M + 1)HPLCmôtodo 2 8 9,3%/l,07 min.

Exemplo 3.1: Preparação de 4-fluorbenzilamida do ácido3-ciano-6-hidróxi-7-oxo-l,7-diidropirazolo[1,5-o]pirimidino-5-carboxilico com 4-fluorbenzilamida.

<formula>formula see original document page 48</formula>

Éster metilico do ácido 3-ciano-6-hidróxi-7-oxo-1,7-diidropirazolo[1,5-a]pirimidino-5-carboxilico (100 mg,0, 427 mmol) foi suspenso em MeOH (10 mL) e a isto foiadicionado 4-f luorbenzilamina (122 μL;, 1,07 mmol) e areação foi aquecida até o refluxo por 2 dias antes de seresfriada até a temperatura ambiente e filtrada. O filtradofoi concentrado e recristalizado a partir de metanol quentepara produzir o produto como um sólido amarelo (25 mg,18%).

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) : δ 4,01 (2H, s, H3N+CH2Ph), 4, 48 (2H, d, J = 6,6 Hz, [C=0]NHCH2), 7,14 -7,49 (8H, m,Ar-CH), 8,08 (1H, s, CHC [CN]), 9,13 (1H, t, J = 6,6 Hz,[C=O]NHC2).

MS (ESI+) m/z 328 [M+H] + .

Exemplo 3.2: Preparação de 3,4-diclorobenzamida do ácido 3-ciano-6-hidróxi-7-oxo-l,7-diidropirazolo[1,5-a]pirimidino-5-carboxilico; composto com 3,4-diclorobenzamina

<formula>formula see original document page 49</formula>

Composto preparado pela adaptação do procedimento no Exemplo 3.1RMN1H (300 MHz, D6-DMSO): δ 8,45 (1Η, s, Ar-CH), 7,79- 7,57 (4Η, m, Ar-CH), 7, 39 - 7, 32 (2Η, m, Ar-CH), 4,78(2Η, s, H3N+CH2), 4,49 (2Η, d, J = 6, 3 Hz, NHCH2).MS (ESI+) m/z 379 [Μ+Η]+.

Exemplo 3.3: Preparação do éster metilico do ácido 6-hidróxi-7-oxo-2-fenil-1,7-diidropirazolo[1,5-a]pirimidino-5-carboxilico

<formula>formula see original document page 50</formula>

Composto preparado pela adaptação do procedimento noExemplo 3.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0): δ 3,94 (3H, s, OCH3), 6,47(1H, s, CHCtPh]), 7,42 - 7,51 (3H, m, Ar-CH), 7,95 (2H, d,J = 6,6 Hz, Ar-CH).

MS (ESI + ) m/z 286 [M+l]+.

HPLCmétodo 2 95, 6%/l, 24 min.

Exemplo 3.4: Preparação de 4-fluorbenzamida do ácido6-hidróxi-7-oxo-2-fenil-1,7-diidropirazolo[1,5-a]pirimidino-5-carboxílico; composto com 4-fluorbenzilamina<formula>formula see original document page 51</formula>

Composto preparado pela adaptação do procedimento noExemplo 3.1.

RMN 1H (300 MHζ, D6-DMSO) : δ 4,01 (2H, s, NH3CH2Ph),.4,47 (2H, d, J = 6,0 Hz, [C=0]NHCH2), 6,03 (1H, s,CHC[Ph]), 7,11 - 7,51 (11H, m, Ar-CH), 7,91 (2H, d, J = 7,2Hz, Ar-CH).

MS (ESI + ) m/z 379 [M+H]+.

Exemplo 3.5: Preparação de 3,4-diclorobenzamida doácido 6-hidróxi-7-oxo-2-fenil-l,7-diidropirazolo[1,5-a]pirimidino-5-carboxilico<formula>formula see original document page 52</formula>

Composto preparado pela adaptação do procedimento noExemplo 3.1

RMN 1H (300 MHζ, D6-DMSO) : δ 4,58 (2H, d, J = 6, 0 Hz,NCH2), 6,49 (1H, Sf CHC [Ph]), 7,29 - 7,67 (6H, m, Ar-CH) ,7,92 (2H, d, J = 7,2 Hz, Ar-CH), 9,20 (1H, t, J - 6,0 Hz,[C=OlNHCH2) .

MS (ESI + ) m/z 429" [M+H] + .

Exemplo 3.6: Preparação do éster metílico do ácido 6-hidróxi.-7-oxo-l, 7-diidropirazolo [1,5-a]pirimidino-5-carboxilico<formula>formula see original document page 53</formula>

Composto preparado pela adaptação do procedimento

no Exemplo 3.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO): δ 7,96 (1H, s, CHCHNH)

6,05 (1H, d, J = 1,8 Hz, CHCHNH), 3,87 (3H, s, OCH3).

MS (ESI + ) m/z 210 (M + 1)

HPLCmétodo 3 97%/l, 18 min.

Exemplo 3.7: Preparação de 4-clorobenzilamida doácido 6-hidróxi-7-oxo-l,7-diidropirazolo[1,5-a] pirimidino-5-carboxílico

<formula>formula see original document page 53</formula>Composto preparado pela adaptação do procedimento noExemplo 3.1.

RMN 1H: (300 MHz, D6-DMSO): δ 10,0 (1H, s, OH), 9,35(1H, t, J = 6,3 Hz, NHCH2), 7,93 (1H, d, J = 8,4 Hz, Ar-CH), 7,68 (1H, d, J = 8,4 Hz, Ar-CH), 7,38-7,26 (4H, m, Ar-CH), 4,30 (2H, d, J = 6,3 Hz, NHCH2).MS (ESI+) m/z Sem ionização.

Exemplo 3.8: Preparação de éster metilico do ácido 1-(4-fluorbenzil)-6-hidróxi-7-oxo-l,7-diidropirazolo[1,5-o]pirimidino-5-carboxílico

<formula>formula see original document page 54</formula>

Composto preparado pela adaptação do procedimento noExemplo 3.

RMN 1H (300 MHζ, D6-DMSO): δ 8,48 (1H, d, J = 3,6 Hz,Ar-CH), 7,23-7,08 (4H, m, Ar-CH), 6,47 (1H, d, J = 3,6 Hz,Ar-CH), 5,76 (2H, s, CH2Ar), 3,81 (3H, s, OCH3).MS (ESI + ) m/z 318 [M+H]+.Exemplo 3.9: Preparação de 4-fluorbenzamida do ácido1-(4-fIuorbenzii)-6-hidróxi-7-oxo-1,7-diidropirazolo[1,5-α]pirimidino-5-carboxilico

<formula>formula see original document page 55</formula>

Composto preparado pela adaptação do procedimento noExemplo 3.1.

RMN 1H: (300 MHz, D6-DMSO): δ 11,96 (1H, s, OH), 9,53(1H, s, NH), 8,48 (1H, d,' J = 3,3 Hz, Ar-CH) , 7,36 (IHr d,J = 5,7 Hz, Ar-CH), 7,33 (1H, d, J = 5,4 Hz, Ar-CH), 7,23(1H, d, J = 5,4 Hz, Ar-CH), 7,20 (1H, d, J = 5,4 Hz, Ar-CH), 7,18 - 7,0 (4H, m, Ar-CH), 6,40 (2H, d, J = 3,6 Hz,CH2NH), 5,73 (2H, s, CH2Ar).

MS (ESI + ) m/z 411 [M+H] + .

Exemplo 3.10: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 1-(4-fluorbenzil)-6-hidróxi-7-oxo-l,7-diidropirazolo[1,5-a]pirimidino-5-carboxílico<formula>formula see original document page 56</formula>

Composto preparado pela adaptação do procedimento noExemplo 3.1.

RMN 1H: (300 MHz, D6-DMSO): δ 11,83 (1H, s, OH), 9,57(1H, t, J = 6,9 Hz, NHCH2), 8,50 (1H, d, J = 3,6 Hz, Ar-CH), 7,56 (1H, m, Ar-CH) , 7,31-7,04 (5H, m, Ar-CH) , 6,41(1H, d, J = 3,6 Hz, Ar-CH), 5,74 (3H, m, CH2Ar e Ar-CH),4,41 (2H, d, J = 6,9 Hz, CH2NH).

MS (ESI + ) m/z 461 [M] + .

Exemplo 3.11: Preparo do éster metiIico do ácido 6-hidróxi-l-metil-7-oxo-l,7-diidropirazolo[1,5-α]pirimidino-5-carboxílico

<formula>formula see original document page 56</formula>O composto preparado pela adaptação do procedimento noExemplo 3 e foi usado no próximo passo sem purificaçãoadicional.

Exemplo 3.12: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doacido 6-hidroxi-1-metil-7-oxo-1, 7-diidropirazolo[1,5-apirimidino-5-carboxilico

<formula>formula see original document page 57</formula>

Composto preparado pela adaptação do procedimento noExemplo 3.1.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO)': δ 9,77 (1H, s, NH), 8,12(IHf d, J = 3,3 Hz, Ar-CH), 7,60-7,52 (2H, m, Ar-CH), 7,34-7,30 (1H, m, Ar-CH), 6,32 "(1H, d, J = 3, 6 Hz, Ar-CH), 4,46(2H, d, J = 5,7 Hz, CH2NH), 4,02 (3H, s, CH3).

MS (ESI+) m/z 367 e 369 [M+H]+.

Exemplo 3.13: Preparação de 4-fluorbenzilamida doácido 6-hidróxi-l-metil-7-oxo-l,7-diidropirazolo[1,5-a]pirimidino-5-carboxilico<formula>formula see original document page 58</formula>

Composto preparado pela adaptação do procedimento noExemplo 3.1.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO): δ 11,8 (1H, s, OH), 9,54(1H, s, NH), 8,12 (1H, d, J = 3,3 Hz, Ar-CH), 7,38 (1H, d,J = 9,3 Hz, Ar-CH), 7,35 (1H, d, J = 8,7 Hz, Ar-CH) , 7,15(1H, d, J = 9,3 Hz, Ar-CH), 7,12 (1H, d, J = 8,7 Hz, Ar-CH), 6,33 (1H, d, J = 3,6 Hz, Ar-CH), 4,45 (2R, d, J = 6,6Hz, CH2NH), 4,05 (3H, s, CH3).

MS (ESI + ) m/z 317 [M+H]+.

Exemplo 3.14: Preparação do éster metilico do ácido 3-bromo-6-hidróxi-7-oxo-1,7-diidropirazolo[1,5-a]pirimidino-5-carboxilico

<formula>formula see original document page 58</formula>O composto preparado pela adaptação do procedimento noExemplo 3 e foi usado no próximo passo sem purificaçãoadicional.

Exemplo 3.15: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 3-bromo-6-hidróxi-7-oxo-l,7-diidropirazolo[1,5-a]pirimidino-5-carboxílico

<formula>formula see original document page 59</formula>

Composto preparado pela adaptação do procedimento noExemplo 3.1.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO): δ 4,78 (2H, s, CH2NH), 7,35(1H, d, J = 8,1 Hz, CHCHC[Cl]) , 7,60 (1H, d, J = 8,1 Hz,CHCHC[C1]), 7,61 (1H, d, J = 1,8 Hz, NHCHC[Br]) , 7,75 (1H,s, [C]CHC[Cl]), 8,00 (1H, s, CH2NH), 8,50 (1H, s, OH).

MS (ESI+) m/z 473 [M+MeCN]+.

Exemplo 3.16: Preparação de 2-fluorbenzamida do ácido3-bromo-6-hidróxi-7-oxo-l,7-diidropirazolo[1,5-oQ -pirimidino-5-carboxílico<formula>formula see original document page 60</formula>

Composto preparado pela adaptação do procedimento noExemplo 3.1.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO): δ 4,89 (2H, s, CH2NH), 7,21-7,45 (5H, m, 4 χ Ar-CH e 1 χ NH), 8,04 (1H, dd, J = 8,1,7,4 Hz, Ar-CH), 8,74 (1H, s, CH2NH).

MS (ESI+) m/z Sem ionizaçào.

Exemplo 3.17: Preparação do éster metílico do ácido 6-hidróxi-7-oxo-3-fenil-l,7-diidropirazolo[1,5-a]pirimidino-5-carboxilico

<formula>formula see original document page 60</formula>

Fenilpirazolamina (100 mg, 0,63 mmol),diacetoxifumarato (180 mg, 0,69 mmol) e ácido p-toluenossulfônico (5 mg) foram aquecidos a 100°C por 20minutos antes se serem esfriados à temperatura ambiente esubmetidos ao ultra-som com etanol: i-propanol p>or 10 min. Oprecipitado resultante foi coletado e lavado <c«om etanol. Oproduto foi isolado com um sólido amarelo (47 :rug, 26%).

RMN 1H (300 MHζ, D6-DMSO): δ 8,53 (1H, s, Ar-CH), 7,82(2H, d, J = 6,9 Hz, Ar-CH), 7,47 (2H, m, Ai-CH.), 7,29 (1H,m, Ar-CH), 3,89 (3H, s, OCH3).

MS (ESI + ) m/z 286 [M+H]+.

Exemplo 3.18: Preparação de 3,4-dicloxob*e:nz±lamida doácido 6-hidróxi-7-oxo-3-fenil-l, 7-diidropir:ajzolo [1,5-a] -pirimidino-5-carboxilico

<formula>formula see original document page 61</formula>

0 composto foi preparado pela adaptação . doprocedimento no Exemplo 3.1.

RMN 1H: (300 MHz, D6-DMSO): δ 9,29 (1H, nm, NH), 8,48(1H, bs, CHNH) , 7,63 (1H, d, J = 1,8 Hz, Ar-CH , 7,61 (2H,m, Ar-CH), 7,59 (1H, s, Ar-CH), 7,47-7,3.5 (4H, m, Ar-CH),7,24 (1H, m, Ar-CH), 4,59 (2H, d, J = 6,3 Hz, NHCH2).

MS (ESI + ) m/z 429 [M] + .Exemplo 3.19: Preparação de 4-fluorbenz±lamida doácido 3-ciano-1-(4-fluorbenzil)-6-hidroxi-7-oxo-1,7diidropirazolo [-1, 5-ɑ] -pirimidino-5-carboxilico

<formula>formula see original document page 62</formula>

Hidreto de sódio (11,0 mg, 0,367 mmol) foi adicionadoem uma porção a uma suspensão agitada do composto 4-fluorbenzilamida do ácido 3-ciano-6-hidróxi-7-oxo-l,7-fluorbenzilamina (Exemplo 3.1) (100 mg, 0,306 mmol) em DMF(2 mL) sob nitrogênio em temperatura ambiente. A misturafoi agitada por 30 min antes de cloreto de p-fluorbenzila(40 ^iL, 0, 366 mmol) ser adicionado e a mistura foi aquecidaa 90°C por 2 dias Depois desse tempo, a reação foi esfriadaaté a temperatura ambiente e dividida entre acetato deetila (10 mL) e ácido clorídrico aquoso (1 M, 10 mL) . Acamada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraídacom acetato de etila (3 χ 10 mL) . Os orgânicos combinadosforam lavados com água (3 χ 10 mL) , salmoura (10 mL) e aseguir concentrados. O resíduo foi purificado porcromatografia em coluna (95:5:1diclorometano:metanol:amônia aquosa) para produzir oproduto desejado (50 mg, 36%).

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO): δ 8,11 (1H, s, CHC [CN]),7,45 (1H, d, J = 6,0 Hz, Ar-H), 7,42 (1H, d, J = 6,0 Hz,Ar-H), 7,36 (1H, d, J = 5,4 Hz, Ar-H), 7,34 (1H, d, J = 5,4Hz, Ar-H), 7,15 (1H, d, J = 9,3 Hz, Ar-H), 7,09 (1H, d, J =8,7 Hz, Ar-H), 7,05 (1H, d, 9,3 Hz, Ar-H), 7,03 (1H, d, J =8,7 Hz, Ar-H), 4,96 (2H, s, CH2N), 4,38 (2H, d, J = 6,3 Hz,NHCH2) .

MS (ESI + ) m/z 434 [M+H] + .

Exemplo 4: Preparação de éster metilico do ácido 6-hidróxi-2-metil-7-oxo-7H-isoxazol [2 ,3-α] pirimidino-5-carboxilico

<formula>formula see original document page 63</formula>

5-metilisoxazol-3-ilamina (392 mg, 3,99 mmol),diacetoxifumarato de dimetila (1,04 g, 3,99 mmol) e ácidop-toluenossulfônico (10 mg) foram combinados em um frascotampado e aquecidos a 100°C. Depois de 5 h a reação foiesfriada até a temperatura ambiente e etanol (2,5 mL) eéter isopropílicò (2/5 mL) foram adicionados ao resíduo, oqual foi submetido ao ultra-som por 15 min. O precipitadoresultante coletado por filtração foi lavado com etanolgelado (5 mL) e seco na bomba para produzir éster metiIicodo ácido 6-hidróxi-2-metil-7-oxo-7H-isoxazol[2, 3-a]pirimidino-5-carboxílico (331 mg, 37%) RMN 1H: (300 MHz,D6DMSO) δ 2,50 (3H, s, CH3), 3,84 (3H, s, OCH3), 6,67 (1H,s, H3), 10,31 (1H, br s, 0H).

MS (ESI+) m/z 225 (M+l)

HPLCmétodo 4 99, 3%/0, 52 min.

Exemplo 5: Preparação de éster metílico do ácido 3-hidróxi-4-oxo-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2a]pirimidino-2-carboxílico

<formula>formula see original document page 64</formula>

2-aminobendazol (200 mg, 1,50 mmol),dimetoxidiacetoxifumarato (430 mg, 1,65 mmol) e ácido p-toluenossulfônico (5 mg) foram aquecidos em um tubo fechadoa IOO°C por 2 h. 0 resíduo foi triturado com etanol/éterpropílico (5 mL) e submetido ao ultra-som por 10 min. Oprecipitado resultante foi coletado e recristalizado apartir de acetonitrila quente para produzir o éstermetilico do ácido 3-hidróxi-4-oxo-4,10-diidrobenzo[4, 5]imidazo[1,2a]pirimidino-2-carboxíIico (153 mg, 39%).

RMN 1H (300 MHζ, D6-DMSO): δ 3,90 (3H, s, OCH3), 7,10(1H, m, Ar-CH), 7,25- 7,51 (3H, m, 2 χ Ar-CH e NH) e 8,43(1H, d, J = 7,8 Hz, Ar-CH).

MS (ESI + ) m/z 260 (M+l) .

Exemplo 6: Preparação de 4-fluorbenzilamida do ácido7-bromo-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 65</formula>

Éster metilico do ácido 7-bromo-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[l,2-a]pirimidino-2-carboxilico (20 mg, 0,07 mmol) ep-fluorbenzilamina (19 uL, 0,17 mmol) em metanol seco (4mL) foram aquecidos até o refluxo com agitação. 0 progressoda reação foi monitorado por HPLC. Depois de 6 h, a reaçãofoi esfriada até a temperatura ambiente e concentrada invácuo. o resíduo foi triturado com éter dietilico (2 mL) eo precipitado foi coletado por filtração e lavado com éterdietilico (10 mL) e seco com bomba para produzir 4-fluorbenzilamida do ácido 7-bromo-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico (24 mg, 92%) como umsólido marrom, amarelado.

RMN 1H (300 MHz, D6DMSO) δ 4,51 (2H, s, NCH2), 7,33(6H), 8,57 (1H, m, H6), 11,21 (1H, br s, NH).

MS (ESI + ) m/z 392 (M[Br79]+l), 394 (M [Br81]+1),HPLCmétodo 99, 6%/6, 5 min.

Pela adaptação do procedimento descrito no Exemplo 6,os seguintes compostos foram obtidos (6.1 - 6.13):

Exemplo 6.1: Preparação de 4-fluorbenzamida do ácido3-hidróxi-7-metil-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 66</formula>

MS (ESI+) m/z 328 (M+l),

HPLCmétodo 94 , 8%/6,20 min.

Exemplo 6.2: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 3-hidróxi-7-metil-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 66</formula><formula>formula see original document page 67</formula>

MS (ESI) m/z 378 (Μ[Cl35] + 1).

HPLCmétodo 7 100%/6, 74 min.

Exemplo 6.3: Preparação de 4-fluorbenzilamida do ácido7-cloro-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 67</formula>

RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 9,95 (1H, bs, NHa), 8,93 1H,app, t, NHb), 8,62 (1H, s, H6a), 7,58 (1H, d, J = 4 Hz,H8), 7, 45 - 7,27 (2H, m, ArH), 7,26-7,21 (2H, m, ArH),7, 07-6, 99 (2H, m, ArH), 6, 99-6, 90 (2H, m, ArH), 4,52(0, 32H, d, =, 4 Hz, CH2a), 4,31 (0,68H, d, J 6,6 Hz, CH2b).

MS (ESI + ) m/z 348 (M+l), (ESI-) m/z 346 (M-1).

HPLCmétodo 1 93%/6, 35 min.

Exemplo 6.4: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 7-cloro-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 67</formula>RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 9,95 (1Η, bs, NHa), 9,13 (1Η,app, t , NHb), 8,65 (1H, s, H6a) , 7,57 (1Η, d, J 8,4 Hz,Η8), 7, 40-7, 33 (2Η, m, ArH), 7,26-7, 24 (1H, m, ArH), 7,153(1H, dd, -J = 8,1 Hz, 1,8 Hz, ArH), 7,05 (1H, d, J = 7,8 Hz,ArH), 4,51 (0,41 H, d, J = 6,3 Hz, CH2a), 4, 30 (0, 59 H, d,J = 6, 3 Hz, CH2b)

MS (ESI+) m/z 400 (M+l) , (ESI") m/z 396 (M-1)

HPLCmétodo1 91%/6,89 min.

Exemplo 6.5: Preparação de 4-fluorbenzilamida do ácido3-hidróxi-4-oxo-4,10-diidrobenzo [4,5] imidazo [1,2-<x]pi rimidino- 2 -carboxi1ico

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO): δ 4,51 (2H, d, J = 6, 3 Hz,NHCH2), 7,14-7,50 (7H, m, Ar-CH) , 8,44 (1H, d, J = 8,1 Hz,Ar-CH) e 9,27 (1H, t, J = 6,3 Hz, NHCH2).

MS (ESI + ) m/z 353 (M + 1)

HPLCmétodo 5 92%/3, 10 min.

<formula>formula see original document page 68</formula>

Exemplo 6.6: Preparação de 4-fluorbenzilamida do ácido6-hidróxi-2-metil-7-oxo-7H-isoxazolo[2,3-a]pirimidino-5-carboxilico<formula>formula see original document page 69</formula>

RMN 1H (300 MHz, D6DMSO) δ 2,49 (3Η, s, CH3), 4,48 (2Η,d, J = 5,9 Hz, NCH2), 6,50 (s, 1H, H3) , 6,95 (2H, m, ArH),7,30 (2H, m, ArH), 9,14 (1H, br s, NH).

MS (ESI + ) m/z 318 (M+l) , (ESI") m/z 316 (M-I)

HPLCmétodo ι 90%/5, 50 min.

Exemplo 6.7: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 6-hidróxi-2-metil-7-oxo-7H-isoxazolo[2,3- a]pirimidino-5-carboxílico

<formula>formula see original document page 69</formula>

RMN 1H (300 MHz, D6DMSO) δ 2,49 (3H, s, CH3), 4,48 (2H,d, J = 5,9 Hz, NCH2), 7,30 (1H, dd, J = 8,2, 2,3 Hz, ArH),7,52 (2H, m, ArH), 10,45 (1H, br s, NH).

MS (ESI + ) m/z 368 (M [Cl35, Cl35]+1) , (ESI-) m/z 366(M[Cl35,Cl35]-1)

HPLCmétodo 4 92%/l, 83 min.Exemplo 6.8: Preparação de 4-fluorbenzilamida do ácido3-hidróxi-7-mòrfolin-:4-il-4-oxo-4H-pirido [1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 70</formula>

(300 MHz, D6-DMS0) : δ 12,13 (IH, s, 0H), 9,67 (IH, t, J=6,9 Hz, NHCH2), 8,00 (IH, s, CHC[morfolino]) , 7,85 (IH, d,J = 9,6 Hz, CHCHC [morfolino] ) , 7,50 (IH, d, J= 9,6 Hz,CHCHC [morfolino] ) , 7,39 (2H, m, Ar-CH) , 7,16 (2H, m, Ar-CH), 4,50 (2H, d, J = 6, 9 Hz, NHCH2), 3,76 (4H, m, CH2OCH2)e 3,16 (4H, m, CH2NCH2).

MS (ESI + ) m/z 397 (M+l)HPLCmétodo 6 98%/6, 40 min

Exemplo 6.9: Preparação de 4-metoxibenzilamida doácido 3-hidróxi-7-morfolin-4-il-4-oxo-4H-pirido[l,2- a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 70</formula>RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) : δ 12,25 (1Η, Sf-OH), 9,55(1Η, t, J = 6,9 Hz, CH2NH), 7,99 (1Η, s, CHC [morfolino] ) ,7,84 (IH, d, J = 9,6 Hz, CHCHC[morfolino]) , 7,50 (IHf d, J= 9,6 Hz, CHCHC [morfolino] ) , 7,29 (2Η, d, J = 8,4 Hzf Ar-CH) , 6,91 (2Η, d, J = 8,4 Hzf Ar-CH) , 4,44 (2H, d, J = 6,9Hz, CH2NH), 3, 79-3,72 (4H, m, CH2OCH2), 3,70 (3H, s, OCH3) e3,18 (4H, m, CH2NCH2).

MS (ESI + ) m/z 411 (M+l)

HPLCmétodo 6 99%/6,21 min.

Exemplo 6.10: Preparação de benzilamida do ácido 3-hidróxi-7-morfolin-4-il-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 71</formula>

RMN 1H (300 MHzf D6-DMS0): δ 12,17 (1H, s, OH), 9,66(1H, t, J= 6,3 Hz, CH2NH), 7,99 (1H, s, CHC[morfolino]),7,85 (1H, d, J = 9,6 Hz, CHCHC[morfolino]), 7,50 (1H, d, J=9,6 Hz, CHCHC[morfolino]), 7,38 - 7,25 (5H, m, Ar-CH),4,52 (2H, d, J = 6,3 Hz, CH2NH), 3,77 (4H, m, CH2OCH2) e3,18 (4H, m, CH2NHCH2).

MS (ESI + ) m/z 381 (M+l) .

HPLCmétodo 6 97%/6, 32 min.Exemplo 6.11: preparacao de 4-clorobenzamida do acido3-hidróxi-7-morfolin-4-il-4-oxo-4H-pirido[l,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 72</formula>

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0) : δ 12,10 (1H, s, OH), 9,69(1H, t, J = 6,9 Hz, CH2NH), 7,99 (1H, s, CHCfraorfolino]),7,85 (1H, d, J = 9,9 Hz, CHCHC[morfolino]), 7,50 (1H, d, J=9,9 Hz, CHCHC[morfolino]), 7,52-7,36 (4H, m, Ar-CH), 4,50(2H, d, J = 6,9 Hz, CH2NH), 3,76 (4H, m, CH2OCH2) e 3,18(4H, m, CH2NHCH2) .

MS (ESI + ) m/z 415 (M+l)

HPLCmétodo 6 95%/7, 22 min

Exemplo 6.12: Preparação de 2-clorobenzilamida doácido 3-hidróxi-7-morfolin-4-il-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 72</formula>

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0): δ 12,00 (1H, s, OH), 9,63(1H, t, J = 6,3 Hz, NHCH2), 8,00 (1Hf s, CHC[morfolino]) ,7,85 (1Η, d, J = 9,6 Hz, CHCHC [morfolino]) , 7,53 (1Η, d, J= 9,6 Hz, CHCHC[morfolino]), 7,48 (1H, m, Ar-CH), 7,37-7,31(3H, m, Ar-CH), 4,61 (2H, d, J = 6,3 Hz, NHCH2), 3,78 (4H,m, CH2OCH2) e 3,19 (4H, m, CH2NHCH2).

MS (ESI+) m/z 415 (M+l)+

HPLCmétodo 90%/3, 85 min

Exemplo 6.13: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 3-hidróxi-7-morfolin-4-il-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 73</formula>

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0): δ 12,00 (1H, s, OH), 9,73(1H, bs, CH2NH), 7,99 (1H, s, CHC[morfolino]), 7,85 (1H, d,J = 9,9 Hz, CHCHC [morfolino]), 7,61 (2H, m,CHCHC[morfolino] e CHC[Cl]C[Cl]), 7,50 (2H, d, J = 8,1 Hz,Ar-CH), 7,35 (2H, d, J = 8,1 Hz, Ar-CH), 4,51 (2H, d, J =6,6 Hz, CH2NH), 3,77 (4H, m, CH2OCH2) e 3,18 (4H, m,CH2NHCH2).

MS (ESI+) m/z 449 (M [Cl35, Cl35]+1) , (ESI") m/z 447(M[C135,C135] -1)

HPLCmétodo 5 94%/4, 84 minExemplo 6/14: Preparação de 4-fluorbenzilamida doácido 3-hidróxi-8-morfolin-4-il-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxílico

<formula>formula see original document page 74</formula>

Usando o produto do Exemplo 2.4, o procedimentodescrito no Exemplo 6 foi adaptado (exceto pelo uso desomente 1,3 eq. de 4-fluorbenzilamina) para produzir ocomposto desejado.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0) : δ 11,60 (1H, s, 0H), 9,50(1H, t, J = 6,3 Hz, NH), 8,55 (1H, d, J = 8,4 Hz, Ar-CH) ,7,41-7,36 (2H, m, Ar-CH), 7,22-7,12 (3H, m, Ar-CH), 6,51(1H, s, Ar-CH), 4,47 (2H, d, J = 6,3 Hz, NHCH2), 3,72 (4H,m, CH2OCH2), 3,34 (4H, m, CH2NHCH2).

(ESI") m/z 397 (M-I)

HPLCmétodo 7 94 , 4%/9, 0 min

Exemplo 6.15: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 3-hidróxi-8-morfolin-4-il-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxílico<formula>formula see original document page 75</formula>

Usando o produto do Exemplo 2.4, o procedimentodescrito no Exemplo 6 foi adaptado (exceto pelo uso desomente 1,3 eq. de 3,4-diclobenzilamina) para produzir ocomposto desejado.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0) : δ 11,50 (1H, s, OH), 9,61(1H, t, J = 6,3 Hz, NH), 8,57 (1H, d, J = 8,4 Hz, Ar-CH),7,63-7,60 (2H, m, Ar-CH), 7,34 (1H, d, J = 8,4 Hz, Ar-CH),7,22 (1H, d, J = 8,4 Hz, Ar-CH), 6,53 (1H, s, Ar-CH), 4,49(2H, d, J = 6,3 Hz, NHCH2), 3,75 (4H, m, CH2OCH2), 3,37 (4H,m, CH2NHCH2) .

(ESI') m/z 447 (M[C135]-1) .

HPLCmétodo 7 93, 2%/10, 2 min.

Exemplo 6.16: Preparação de 4-fluorbenzilamida doácido 3-hidróxi-9-morfolin-4-il-4-oxo-4H-pirido[l,2- a]pirimidino-2-carboxílico<formula>formula see original document page 76</formula>

Usando o produto do exemplo 2.5, o procedimentodescrito no Exemplo 6 foi adaptado (exceto pelo uso desomente 1,3 eq. de 4-fluorbenzilamina) para produzir ocomposto desejado.

RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3,23 (4H, s, -NCH2CH2O-),3,76 (4H, s, -NHCH2CH2O-), 4,61 (2H, d, J = 5,7 Hz, -(O=C)NHCH2-), 6,91 (2H, m, ArH), 7,09 (2H, t, J = 8,4 Hz,ArH), 7,34 (2H, bt, ArH), 7,98 (1H, s, -(O=C)NHCH2-), 8,61(1H, d, J = 7,2 Hz, ArH), 11,80 (1H, s, OH).

(ESI + ) m/z 399 (M+1).

HPLCmétodo 7 97, 0%/11, 6 min.

Exemplo 6.17: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 3-hidróxi-9-morfolin-4-il-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxílico<formula>formula see original document page 77</formula>

Usando o produto do Exemplo 2.5, o procedimentodescrito no Exemplo 6 foi adaptado (exceto pelo uso desomente 1,3 eq. de 3,4-diclorobenzilamina e pela reação tersido efetuada em uma mistura 1:1 demetanol/tetraidrofurano) para produzir o composto desejado.

RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3,35 (4H, s, -NHCH2CH2O-),3,97 (4H, s, -NHCH2CH2O-), 4,64 (2H, d, J = 6,0 Hz, -(O=C)NHCH2-), 6,99 (2H, m, ArH), 7,24 (1H, m, ArH), 7,48(2H, m, ArH), 8,50 (1H, bs, -(O=C)NHCH2-), 8,69 (1H, d., J =7,8 Hz, ArH), 11,84 (1H, s, OH).

(ESI + ) m/z 471 (M+Na)

HPLCmétodo 7 91, 0%/13, 1 min

Exemplo 16.8: Preparação de 3,4-diclorobenzilamidá doácido 3-hidr óxi-4-oxo-7-piperidin-1-il-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxílico<formula>formula see original document page 78</formula>

Usando o produto do Exemplo 2.6, o procedimentoescrito no Exemplo 6 foi adaptado (exceto pelo uso desomente 1,3 eq. de 3,4-diclorobenzilamina) para produzir ocomposto desejado.

RMN Ih (300 MHz, CDCl3) δ 1,58 (2H, bm, ciclico-N(CH2)3CH2NCH2-), 1,73 (4H, bs, Ciclico-N(CH2)3CH2NCH2-),3,20 (4H, bm, Ciclico-N(CH2)2CH2NCH2-), 4,62 (2H, d, J= 6,0Hz, -(O=C)NHCH2-), 7,50 (4H, m, ArH), 8,24 (1H, dd, J = 1,8Hz, ArH), 8,51 (1H, bs, -(O=C)NHCH2-), 11,86 (1H, s, 0H).

(ESI-) m/z 445 (M[Cl35]-1)

HPLCmétodo 7 91, 0%/14, 9 min

Exemplo 7: Preparação de 4-fluorbenzilamida do ácido3-ciano-6-hidróxi-7-oxo-l,7-diidropirazolo[1,5-a]pirimidino-5-carboxílico

<formula>formula see original document page 78</formula>5-(4-fluorberizilcarbamoil)-7-oxo-2-fenil-1,7-diidro-pirazolo [1,5-a]pirimidin-6-olato; 4-fluorbenzilamônio (25mg) foram suspensos em água (1 mL) e ácido clorídricoáquoso (1,0 Mf 1 mL) foi adicionado. A mistura foisubmetida ao ultra-som por 5 min e o precipitado resultantefoi coletado por filtração e lavado com água (2 mL) e secona bomba para produzir 4-fluorbenzilamida do ácido 3-ciano-6-hidróxi-7-oxo-1,7-diidropirazolo[1, 5-a]pirimidino-5-carboxílico (13 mg) como um sólido incolor.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0) : δ 4,53 (2Hf d, J = 5,9 Hz,NHCH2), 7,15 (2H, m, ArH), 7f42 (2H, m, ArH), 8,36 (1H, s,H2) , 7,92 (2H, d, J = 7,2 Hzf Ar-CH) , 9,14 (1H, t, J = 5,9Hz, NHCH2), 11,25 (1H, br s, 0H).

MS (ESI-) m/z 326 (M-I).

HPLCmétodo 5 95, 4%/4 , 14 min.

Pela adaptação do procedimento descrito no Exemplo 7,os seguintes compostos foram obtidos.

Exemplo 7.1: Preparação de 4-fluorbenzilamida do ácido6-hidróxi-7-oxo-2-fenil-l,7-diidropirazolo[1,5-a]pirimidino-5-carboxilico<formula>formula see original document page 80</formula>

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0) : δ 4,58 (2Η, d, J = 5,9 Hz,NHCH2), 6,50 (1Η, s, Η3) , 7,15 (2Η, m, ArH), 7,42 (5Η, m,ArH), 7,93 (2Η, m, ArH), 9,10 (1H, t, J = 5,9 Hz, NHCH2),10,80 (1H, br s, OH), 11,84 (1H, br s, NH).

MS (ESI+) m/z 379 (M+l).

Exemplo 8: Preparação de 3-hidróxi-7-metil-2-(5-m-tolil- [1,3>4] oxadiazol-2-il)-pirido[1,2-α]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 80</formula>

Exemplo 8.1: Preparação de éster raetilico do ácido 3-benzxlóxi-7-metil-4-oxo-4H-pirido[1,2-α]pirimidino-2-carboxilico<formula>formula see original document page 81</formula>

O produto do Exemplo 2.1 (1,5 g, 6,4 mmol) e carbonatode potássio (2,7 g, 19,6 mmol) foram misturados com acetona(30 mL) , sob atmosfera de N2. A mistura foi agitada a 70°Cpor 25 min, depois do que brometo de benzila (2,0 g, 11,7mmol) foi adicionado e a mistura foi submetida a refluxopor 10 h. Depois de ser esfriada até a temperaturaambiente, a mistura foi vertida em água (100 mL) , extraídacom diclorometano. A fase orgânica foi lavada com água,seca e concentrada in vácuo. A purificação porcromatografia em coluna flash (diclorometano) produziu ocomposto desejado (1,5 g, 70%).

RMN 1H (300 MHζ, CDCl3): δ 2,44 (d, J = 0,9 Hz, 3H) ,3,92 (s, 3H), 5,32 (s, 2H) , 7,27 - 7,41 (m, 3H) , 7,47-7,57(m, 3H), 7,65 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 8,76-8,85 (m, 1H).

MS (ESI+) m/z 325 (M+l), 347 (M+23).

Exemplo 8.2: Preparação do ácido 3-benzilóxi-7-metil-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico<formula>formula see original document page 82</formula>

A uma solução agitada do produto do Exemplo 8.1 (400mg, 1,23 mmol) em metanol (20 mL) foi adicionada solução dehidróxido de litio IN aquosa (2,46 mL) em temperaturaambiente. Depois de 3 h, ácido clorídrico IN aquoso (20 mL)foi adicionado. A mistura foi extraída com acetato de etilae as fases orgânicas foram lavadas com salmoura, secas(Na2SO4) e concentradas in vácuo. 0 produto foi usadodiretamente no Exemplo 8.3.

Exemplo 8.3: N'-(3-benzilóxi-7-metil-4-oxo-4H-pirido[l,2-α]pirimidino-2-carbonil)-hidrazida do ácido 3-netilbenzóico

<formula>formula see original document page 82</formula>

A uma solução do produto do Exemplo 8.2 (200 mg, 0,644mmol) em tetraidrofurano (10 mL) foram adicionados 3-metilbenzoilidrazina (94,8 mg, 0,632 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (6,98 mg, 0,0576 mmol) e cloridrato de1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (98 mg, 0,632mmol) sucessivamente em temperatura ambiente. Depois de 12h a solução reacional foi interrompida com água (20 mL) e extraída com acetato de etila. O extrato foi lavado comácido clorídrico aquoso 2 N (20 mL) , hidróxido de sódioaquoso 2 N (20 mL) , seco (NaaSCu) e concentrado in vácuopara produzir o composto desejado (53%).

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) : δ 2,39 (s, 3H) , 2,44 (s, 3H) , 5,21 (s, 2H) , 7, 30-7, 45 (m, 5H) , 7, 56-7, 63 (m, 2H) ,7,69-7,79 (m, 3H), 7,84 (dd, J = 9,4, 2,1 Hz, 1H), 8,78-8,85 (m, 1H), 10,56 (d, J = 11,1 Hz, 2H).

MS (ESI+) m/z 443 (M+l), 465 (M+23).

Exemplo 8.4: Preparação de 3-benzilóxi-7-metil-2-(5-m- tolil-[1,3,4]oxadiazol-2-il>-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 83</formula>

O produto do Exemplo 8.3 (20 mg, 0,457 mmol),tetracloreto de carbono (0,221 mL, 2,28 mmol) etrietilamina (0,165 mL, 1,19 mmol) foram misturados com acetonitrila (10 mL). A essa mistura foi adicionadotrifenilfosfina (291 mg, 1,11 mmol) em temperaturaambiente. Depois de ser agitada em temperatura ambiente deum dia para o outro, a solução reacional foi diluída comacetato de etila (100 mL), lavada com bicarbonato de sódiosaturado aquoso (50 mL) , água (50 mL) e salmoura (50 mL)sucessivamente, e a seguir seca (Na2S0í) . O produto brutofoi submetido à cromatografia flash (hexano-acetato deetila 1:1) para produzir o composto desejado.

RMN 1H (300 MHζ, DMSO-d6) : δ 2,41 (s, 3H) , 2,46(d, J = 1,1 Hz, 3H), 5,32 (s, 2H) , 7, 28 - 7,33 (m, 3H) ,7, 46 - 7,52 (m, 4H), 7,75 - 7, 90 (m, 4H) , 8,82 - 8,86 (m,1H) .

MS (ESI+) m/z 425 (M+l), 447 (M+23).

Exemplo 8.5: Preparação de 3-hidróxi-7-metil-2-(5-m-tolil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)-pirido[1,2-o]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 84</formula>

0,047 mmol) em acetonitrila (5 mL) foi adicionado iodeto detrimetilsilila (54 μL, 0,38 mmol) gota a gota sob N2 emtemperatura ambiente. Depois de 2 h, metanol (5 mL) foiadicionado e a solução foi agitada por 10 mi. Água (10 mL)foi adicioitada e à reação foi extraída com diclorometano. Afase orgânica foi lavada com solução de bissulfito de sódioaquosa, seca (Na2SO4) e concentrada in vácuo para produziro composto desejado (88,6%).

RMN 1H (300MHz, CDCl3): δ 2,43 (s, 3H), 2,49 (s, 3H) ,7, 38 - 7, 50 (m, 3H) , 7,65 (d, J = 8,8 Hz, 1H) , 8,03-8,09(m, 2H), 8,78 (s, 1H), 9,92 (brs, 1H) .

MS (ESI+) m/z 335 (M+l), 357(M+23).

Exemplo 8.6: Preparação de 3-hidróxx-7-metil-2-(5-fenil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)-pirido[1,2-α]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 85</formula>

O procedimento descrito nos Exemplos 8.1-8.5 foiadaptados para preparar 3-hidróxi-7-metil-2-(5-fenil-[1, 3,4]oxadiazol-2-il)-pirido[1,2-α]pirimidin-4-ona.

RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 2,43 (s, 3H) , 7,45 (d, J =8,5 Hz, 1H), 7, 54 - 7, 68 (m, 4H), 8,26 (d, J = 6,6 Hz, 2H) ,8,77 (s, 1H).

MS (ESI+) m/z 321 (M+l) .HPLCmétodo 7 82, 8%/14 , 3 min.Exemplo 8.7: Préperação de 2-[5-(2-clorofenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-3-hidróxi-7-metil-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 86</formula>

0 procedimento descrito nos Exemplos 8.1-8.5 foiadaptados para preparar 2-[5-(2-clorofenil)-[1,3,4] oxadiazol-2-il]-3-hidróxi-7-metilpirido[1,2-a]pirimidin-4-ona.

RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 2,43 (d, J = 1,1 Hz, 3H) ,7,44 (dd, J = 9,2, 2,2 Hz, 1H), 7,49 (dd, J = 7,7, 1,5 Hz,1H) , 7,55 (dt, J = 7,5, 1,8 Hz, 1H), 7, 60 - 7, 66 (m, 2H) ,8,13 (dd, J= 7,7, 1,8 Hz, 1H), 8,76 - 8,79 (m, 1H), 9,71 -9,91 (brs, 1H)

MS (ESI + ) m/z 377 (M+ Na+) .

HPLCmétodo 7 92, 2%/15, 4 min.

Exemplo 8.8: Preparação de 2-[5-(4-metoxifenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-3-hidróxi-7-metilpirido[1,2-a]pirimidin-4-ona<formula>formula see original document page 87</formula>

O procedimento descrito nos Exemplos 8.1-8.5 foiadaptados para preparar 2- [5-(4-metoxifenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-3-hidróxi-7-metilpirido[1,2-a]pirimidin-4-ona.

RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 2,43 (s, 3H) , 3,92 (s, 3H) ,7,07 (d, J = 8,9 Hz, 2H) , 7,44 (dd, J = 9,5 Hz, 1,9 Hz,1H) , 7,64 (d, J = 9,4 Hz, 1H) , 8,21 (d, J = 8,9 Hz, 2H) ,8,78 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 9,88-10,10 (brs, 1H).

MS (ESI + ) m/z 373 (M + Na+) .

HPLCmétodo 7 92, 4%/15, 3 min.

Exemplo 8.9: Preparação de 2-[5-(4-fluorfenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-3-hidróxi-7-morfolin-4-il-pirido[1,2-o]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 87</formula>

Usando o produto descrito no Exemplo 2.3 como materialde partida, o procedimento descrito nos Exemplos 8.1-8.5foi adaptado · para -preparar 2-[5-(4-fluorfenil)-[1, 3, 4]oxadiazol-2-il]-3-hidróxi-7-morfolin-4-il-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona.

RMN 1H (300 MHζ, DMSO-d6) δ 3,23 (t, J = 4,8 Hz, 4H) ,3,80 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 7,52 (t, J = 9,0 Hz, 2H) , 7,67(d, J = 10,0 Hz, 1H) , 7,87 (dd, J = 10,0 Hz, 2,4 Hz, 1H) ,8,03 (d, J = 2,3 Hz, 1H) , 8,16 (dd, J = 8,8 Hz, 5,1 Hz,2H), 10,46 - 10,60 (brs, 1H).

HPLCmêtodo 7 98, 4%/8, 5 min

Exemplo 9: Preparação de 2-[5-(4-fluorbenzil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-3-hidróxi-7-metilpirido[1,2-a]pi.rimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 88</formula>

Example 9.1: Preparação da hidrazida do ácido 3-benzilóxi-7-metil-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico<formula>formula see original document page 89</formula>

A uma solução agitada do produto do Exemplo 8.1 (800mg, 2,56 mmol) em metanol (30 mL) foi adicionada hidrazina(6,0 eq) em temperatura ambiente. A mistura foi a seguiraquecida a 45°C por 4 h, a seguir parcialmente concentradain vácuo (não até a secura) , a seguir esfriada até atemperatura ambiente. 0 sólido resultante foi filtrado,lavado com água e seco sob vácuo para produzir o compostodesejado (650 mg, rendimento de 78%).

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) : δ 2,42 (s, 3H) , 5,15 (s,2H), 7,28 - 7,45 (m, 3H), 7,48 - 7,53 (m, 2H), 7,66 (d, J =8,8Hz, 1H), 7,80 (dd, J = 8,8, 2,1 Hz, 1H), 8,78 (s, 1H),8,93 (brs, 2H) , 9,7 (brs, 1H) .

MS (ESI+) m/z 325 (M+l), 347(M+23).

Exemplo 9.2: Preparação de N' -[2-(4-fluorfenil)-acetil]-hidrazida do ácido 3-benzilóxi-7-metil-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxílico<formula>formula see original document page 90</formula>

O produto do Exemplo 9,1 (160 mg, 0,524 mmol) ecarbonato de sódio (106 mg, 1 mmol) foram misturados comtetraidrofurano anidro (25 mL) e a seguir secos em banho degelo. Δ essa solução agitada foi adicionado cloreto de 4-fluorfenilacetila (90 mg, 0,55 mmol) gora a gota. A misturafoi agitada em temperatura ambiente por 2 h e a seguirconcentrada in vácuo. 0 resíduo foi dividido entre acetatoe etila e água, e a fase orgânica foi lavada com água, seca(Na2S04) e concentrada in vácuo. Cromatografia em colunacurta produziu o composto desejado (210 mg, rendimento de86%) .

RMN 1H (300MHz, CDCl3): δ 2,45 (s, 3H) , 3,67 (s, 2H) ,5,40 (s, 2H) , 6,95 - 7,10 (m, 2H) , 7, 30 - 7, 42 (m, 5H) ,7,50 - 7,60 (m, 3H), 7,64 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 8,70 - 8,80(m, 2H), 10,42 (brs, 1H).

MS (ESI + ) m/z 461 (M+l) , 483 (M+23).

Exemplo 9.3: Preparação de 3-benzilóxi-2-[5- (4-fluorbenzil) - [1, 3, 4] oxadiazol-2-il] -7-metilpirido [1,2-a]pirimidin-4-ona<formula>formula see original document page 91</formula>

O procedimento descrito no Exemplo 8.4 foi adaptado aoproduto obtido no Exemplo 9.2 para produzir o produtodesejado (70% ) .

RMN 1H (300MHz, CDCl3): δ 2,46 (d, J = 0,9 Hz, 3H) ,4,25 (s, 2H) , 5,39 (s, 2H.) , 6,96 - 7, 05 (m, 2H) , 7,27 -7,34 (m, 5H) , 7,38 - 7, 45 (m, 2H) , 7,56 (dd, J = 9,1 Hz,2,OHz, 1H), 7,70 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 8,78 - 8,83 (m, 1H).

MS (ESI+) m/z 443 (M+l), 465 (M+23).

Exemplo 9.4: Preparação de 2-[5-(4-fluorbenzil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-3-hidróxi-7-metilpirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 91</formula>O procedimento descrito no Exemplo- 8.5 foi adaptado aoproduto obtido no Exemplo 9.3 para produzir o produtodesejado (52%).

RMN 1H: (300 MHζ, CDCl3): δ 2,42 (s, 3H) , 4,37 (s,2H), 7,02 - 7,11 (m, 2H), 7,32 - 7,48 (m, 3H), 7,61 (d, J =9,6 Hz, 1H), 8,76 (s, 1H), 9,79 (brs, 1H) .

MS (ESI") m/z 351 (M-I) .

HPLCmetodo 7 97, 3%/8, 5 min

Exemplo 9.5: Preparação de 2-[5-(3,4-diclorobenzil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-3-hidróxi-7-metilpirido[1,2-α]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 92</formula>

O procedimento descrito nos Exemplo 9.1-9,4 foiadaptado para preparar 2-[5-(3,4-diclorobenzil)-[1,3,4] oxadiazol-2-il]-3-hidróxi-7-metiIpirido[1,2-α]pirimidin-4-ona.

RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 2,43 (s, 3H) , 4,35 (s, 2H) ,7,26 (1H, sobreposto), 7,41 - 7,55 (m, 3H) , 7,64 (d, J =9,2 Hz, 1H), 8,76 (s, 1H), 9,55 - 9,85 (brs, 1H).MS (-ESI-) m/z 401 (M-1) .HPLCmétodo 7 97, 6%/18, 0 min.

Exemplo 9.6: Preparação de 2-[5-(3,4-diclorobenzil)[1,3,4]oxadiazol-2-il]-3-hidróxi-7-morfolin-4-il-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

Exemplo 9.1

<formula>formula see original document page 93</formula>

Usando o material de partida preparado no Exemplo 2.3,o procedimento descrito no Exemplo 9.1-9,4 foi adaptadopara preparar 2-[5-(3,4-diclorobenzil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-3-hidróxi-7-metilpirido[1,2-a]pirimidin-4-ona.

RMN1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,18 - 3,24 (m, 4H), 3,75 -3,83 (m, 4H), 4,47 (s, 2H), 7,40 (dd, J = 8,3, 2,0 Hz, 1H),7,61 (d, J = 9,8 Hz, 1H) , 7,65 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7,72(d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,85 (dd, J = 9,9, 2,5 Hz, 1H) , 8,01(d, J = 2,5 Hz, 1H), 10,41 (s, 1H) .

HPLCmétodo 7 94, 1%/17,2 min.

Exemplo 9.7: Preparação de 2-[5-(4-fluorbenzil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-3-hidróxi-7-morfolin-4-il-pirido[1,2-a]pirimidxn-4-ona<formula>formula see original document page 94</formula>

Usando o material de partida preparado no Exemplo 2.3,o procedimento descrito no Exemplo 9.1-9,4 foi adaptadopara preparar 2-[5-(4-fluorbenzil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-3-hidróxi-7-metilpirido[1,2-a]pirimidin-4-ona.

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,20 (t, J = 4,8 Hz, 4H) ,3,79 (t, J = 4,8 Hz, 4H) , 4,42 (s, 2H) , 7,21 (t, J = 9,0Hz, 2H), 7,43 (dd, J = 8,8, 5,5 Hz, 2H), 7,61 (d, J = 9,9Hz, 1H), 7,85 (dd, J = 9,8, 2,5 Hz, 1H), 8,00 (d, J =2,5Hz, 1H), 10,39 (s, 1H) .

MS (ESI") m/z 422 (M - 1) .

HPLCmétodo 7 94, 1%/14, 7 min.

Exemplo 10: Preparação de 2-[5-(4-fluorbenzil)-[1,3,4]tiadiazol-2-il]-3-hidróxi-7-metilpirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 94</formula>Exemplo 10 :1-: Preparação de 3-behzilóxi-2-[5- (4-fluorbenzil)-[1,3,4]tiadiazol-2-il]-7-metilpirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 95</formula>

O produto do Exemplo 9.2 (80 mg, 0,173 mmol) e oReagente de Lawensson (200 mg, 0,5 mmol) foram misturadoscom tolueno (15 mL) e submetidos a refluxo por 10 h. Amistura reacional foi concentrada in vácuo e cromatografiaflash (acetato de etila/diclorometano/éter dietilico 2:6:1)produziu o composto desejado (60 mg, 75,3%).

RMN 1H (300MHz, DMSO-d6) : δ 2,42 (s, 3H) , 4,53 (s,2H) , 5,26 (s, 2H), 7,17 - 7,26 (m, 2H) , 7,29 - 7, 35 (m,3H) , 7, 40 - 7, 49 (m, 4H) , 7,67 (d, J = 9,5 Hz, 1H) , 7,80(dd, J = 9,4Hz, 1,9 Hz, 1H), 8,77 (d, J = 1,1 Hz, 1H).

MS (ESI+) m/z 459 (M+l), 481 (M + 23).

Exemplo 10.2: Preparação de 2-[5- (4-fluorbenzil)-[1,3,4]tiadiazol-2-il]-3-hidróxi-7-metilpirido[1,2-a]pirimidin-4-ona<formula>formula see original document page 96</formula>

O procedimento descrito no Exemplo 8.5 foi adaptado aoproduto obtido no Exemplo 10.1 para produzir o produtodesejado (34%).

RMN 1H (300MHz, CDCl3): δ 2,39 (d, J = 0,8 Hz, 3H) ,4,48 (s, 2H) , 7,02 - 7,12 (m, 2H) , 7, 30 - 7, 45 (m, 4H) ,8,71 - 8,77 (m, 1H), 10,80 (brs, 1H).

MS (ESI+) m/z 369 (M + 1), 391 (M + 23).

HPLCmétodo7 96, 7%/15, 8 min.

Exemplo 10.3: Preparação de 2-[5-(3,4-diclorobenzil)-[1,3,4]tiadiazol-2-il]-3-hidróxi-7-metilpirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 96</formula>

O procedimento descrito no Exemplo 10.1-10.2 foiadaptado para preparar 2-[5-(3, 4-diclorobenzil)-[1, 3,4] tiadiazol-2-il] -3-hidróxi-7-mietílpirido [ 1, 2-α]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 97</formula>

RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3,16 - 3,25 (m, 4Η) , 3,73 -3,83 (m, 4Η) , 4,29 (s, 2Η) , 7,37 (d, J = 8,6 Hz, 1Η) , 7,63(d, J = 8,3 Hz, 2Η) , 7,69 (s, 1Η) , 7,86 (d, J = 8,8 Hz',1Η), 7,98 (s, 1Η), 10,71 (s, IH).

MS (ESI") m/z 417 (M[C135]-1).

HPLCmétodo 7 97, 8%/19, 8 min.

Exemplo 10.4; Preparação de 2-[5-(3,4-diclorobenzil)-[1,3,4]tiadiazol-2-il]-3-hidróxi-7-morfolin-4-il-pirido [1,2-ot]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 97</formula>

Usando o material de partida preparado no Exemplo 2.3,o procedimento descrito no Exemplo 10.1-10.2 foi adaptadopara preparar 2-[5-(3,4-diclorobenzil)-[1,3,4]tiadiazol-2-il]-3-hidróxi-7-morfolin-4-il-pirido[1, 2-α]pirimidin-4-ona

RMN 1H (300 MHζ, DMSO-d6) δ 3,15-3,25 (m, 4H) , 3,70 -3,85 (m, 4H) , 4,60 (s, 2H) , 7,42 (dd, J = 8,2 Hz, 2,1 Hz,1H) , 7,60 (d, J = 9,8 Hz, 1H) , 7,65 (d, J = 8,2 Hz, 1H) ,7,74 (d, J = 2V 1 Hz, 1H), 7,86 (dd, J = 9,8 Hz, 2,5 Hz,1H), 8,01 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 10,50 - 11,10 (brs, 1H)MS (ESI-) m/z 488 (M-I).

HELCmétodo 7 97,6%/19,3 min.

Exemplo 10.5: Preparação de 2-[5-(4-fluorbenzil) -[1,3,4]tiadiazol-2-il]-3-hidróxi-7-morfolin-4-il-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 98</formula>

Usando o material de partida preparado no Exemplo 2.3,o procedimento descrito no Exemplo 9.1-9.4 foi adaptadopara preparar 2-[5-(4-fluorbenzil)-[1,3,4]tiadiazol-2-il]-3-hidróxi-7-morfolin-4-il-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,20 (t, J = 4,8 Hz, 4H) ,3,78 (t, J = 4,8 Hz, 4H) , 4,56 (s, 2H) , 7,21 (t, J = 8,8Hz, 2H) , 7,47 (dd, J = 8,8 Hz, 5,5 Hz, 2H) , 7,59 (d, J =9,8 Hz, 1H), 7,85 (dd, J = 9,9 Hz, 2,7 Hz, 'IH), 8,01 (d, J= 2,6 Hz, 1H), 10,80 (s, 1H)

MS (ESI") m/z 438 (M-1)

HPLCmétodo 7 94, 1%/14,2 minExemplo 11: Preparação de 2-[5-(4-fluorbenzi.l)[1,2 , 4] oxacíiazol-3-il] -3-hidróxi-7-metilpirido [1,2-a]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 99</formula>

Exemplo 11.1: Preparação de 3-benzilóxi-7-metil-4-oxo-4H-pirido [1,2-a]pxrimidino-2-carbaldeído oxima

<formula>formula see original document page 99</formula>

O produto do Exemplo 8.1 (3,1 g, 10 mmol) foidissolvido em tetraidrofurano anidro (50 mL) e esfriado até-78°C. A essa solução agitada foi adicionado gota a gotahidreto de diisobutilaluminio (13 mL, IN emtetaidrofurano). Depois de 4 h, CCF mostrou que o materialde partida foi consumido e que a solução reacional foisuprimida com solução de sulfato e sódio aquosa. 0 materialinsolúvel foi removido por filtração e o filtrado foiconcentrado in vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em umsolvente misturado, de acetato de etila/diclorometano (1:1 5mL) e foi lavado eom salmoura, seco (Na2S04) e filtrado.

A uma solução de cloridrato de hidroxilamina (760 mg,11 mmol) em água (120 mL) foi adicionada a solução dealdeído acima seguido pela adição de bicarbonato de sódio(900 mg, 10,7 mmol). A mistura foi agitada em temperaturaambiente por 2 h e o precipitado resultante foi coletadopor filtração e lavado com água e seco sob vácuo paraproduzir o produto desejado (2,77 g, k rendimento global dodois passos de 90%) .

Exemplo 11.2: Preparação de 3-benzilóxi-7-metil-4-oxo-4H-pxrido[1,2-a]pirimidino-2-carbonitrila

<formula>formula see original document page 100</formula>

Tricloro-1,3,5-triazina (576 mg, 3,15 mmol) foidissolvida em N,N-dimetilformamida anidra (DMF) (1 mL) eagitada em temperatura ambiente por 30 min. A essa soluçãofoi adicionada gota a gota uma solução do produto doExemplo. 11.1 (927 mg, 3 mmol) em DMF (5 mL) . A mistura foiagitada em temperatura ambiente por 2 h, a seguir acetatode etila (50 mL) foi adicionado e a fase orgânica foiseparada e lavada com salmoura, seca (Na2SO4) è concentradain vácuo. A purificação por cromatografia flash curtaproduziu o composto desejado (530 mg, 60,7%).

RMN 1H (300MHz, CDCl3): δ 2,45 (d, J = 1,2 Hz, 3H) ,5,54 (s, 2H) , 7,30 - 7, 40 (m, 3H) , 7, 48 - 7, 54 (m, 2H) ,7,55 - 7,58 (m, 2H), 8,77 (dd, J = 2,7, 1,2 Hz, 1H).

Exemplo 11.3: Preparação de 3-benzilóxi-N-hidróxi-7-metil-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidina-2-carboxamidina

0 produto do Exemplo 11.2 (530 mg, 1,82 mmol) ecloridrato de hidroxilamina (0,549 g, 7,9 mmol) forammisturados com etanol (50 mL) . A essa solução agitada foiadicionado bicarbonato de sódio (663 mg, 7,9 mmol) e amistura foi aquecida a 70°C por 3 h. O solvente foiremovido in vácuo e o resíduo foi dissolvido em um solventemisturado (diclorometano/etanol 200 mL:10 mL) , lavado comágua, seco (Na2SO4) e concentrado in vácuo para produzir ocomposto desejado (472 mg, 80%) .

MS (ESI+) m/z 325 (M+l), 347 (M+23), 379 (M+55).Exemplo 11.4: Preparação dé 3-benzilóxi-2-[5-(4fluorbenzil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-7-metilpirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 102</formula>

O produto do Exemplo 11.3 (472 mg, 1,46 mmol) foidissolvido em um solvente misturado de diclorometano/etanol(120 mL:120 mL) , com agitação. Trietilamina (155 mg, 1,53mmol) foi a seguir adicionado seguido pela adição gota agota de cloreto de 4-fluorfenilacetila (263 mg, 1,53 mmol).A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 2 h,concentrada in vácuo em seguida e o resíduo resultante foidissolvido em acetato de etila e lavado com água, seco(Na2SO4) e concentrado in vácuo. O sólido resultante foiusado sem purificação.

O sólido acima (668 mg) foi suspenso em tolueno (25mg) e a mistura foi submetida a refluxo por 24 h. Osolvente foi concentrado in vácuo para produzir o compostodesejado quantitativamente.RMN 1H (300MHz, CDGl3): δ 2,46 (d, J = 0,7 Hz-, 3H) ,4,32 (s, 2H), 5,38 (s, 2H) , 7, 00 - 7, 08 (m, 2Ή) , 7,20 -7,30 (m, 3H?) , 7, 32 - 7,37 (m, 2H) , 7, 44 - 7,52 (m, 2H) ,7,55 (dd, J - 9,2, 1,9 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 9,1 Hz, 1H),8,81-8,85 (m, 1H).

MS (ESI + ) m/z 443 (M + 1), 465 (M + 23).

Exemplo 11.5: Preparação de 2- [5- (4-fluorbenzi.l) -[1,2,4]oxadiazol-3-il]-3-hidróxi-7-metilpirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 103</formula>

O procedimento descrito no Exemplo 8.5 foi adaptadopara o produto obtido no Exemplo 11.4 para produzir oproduto desejado (68%).

RMN 1H (300MHz, CDCl3): δ 2,41 (d, J = 0,7 Hz, 3H) ,4, 39 (s, 2H), 7,01 - 7,12 (m, 2H) , 7, 32 - 7, 44 (m, 3H) ,7,68 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 8,70 (s, 1H), 8,72 - 8, 90 (brs,1H) .

MS (ESI + ) m/z 353 (M + 1), 375 (M + 23).

HPLCmetodo 7 94 , 5%/14 , 4 minExemplo 12: Preparação de 3-hidróxi-7-metil-2-(5-feniloxazol-2-il)-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 104</formula>

Exemplo 12.1: Preparação de 2-amino-l-pentiletanona

<formula>formula see original document page 104</formula>

α-bromoacetona (7,0 g, 0,035 mmol), urotropina (5,4 g,0,0385 mol) e iodeto de sódio (5,8 g, 0, 0385 mol) forammisturados em etanol (425 mL) e agitados em temperaturaambiente por 24 h. A mistura reacional foi filtrada e amassa filtrada foi lavada com etanol gelado e o sólidoresultante foi dissolvido em etanol (100 mL) e ácidoclorídrico aquoso 6 N (20 mL) foi adicionado. A mistura foisubmetida a refluxo por 5 h, a seguir esfriada atétemperatura ambiente. A mistura foi filtrada e o filtradofoi concentrado ín vácuo. 0 resíduo resultante foirecristalizado a partir de éter diisopropílico/ácidoclorídrico concentrado (100/1) para fornecer o produtodesejado (4,1 g, 69%).RMN-1H (300MHz, CDGl3): δ 4,57 (s, 2H) , 7,56 - 7, 691(m, 2H), 7 , 71 - 7,76 (m, 1H), 8,00 - 8,03 (m, 2H), 8,52 (brs, 3H).

Exemplo 12.2: Preparação de (2-oxo-2-feniletil)-amidado ácido 3-benzilóxi-7-metil-4-oxo-4H-pirido[1,2-a-pirxmidino-2-carboxílico

<formula>formula see original document page 105</formula>

A uma solução do produto do Exemplo 8.2 (324 mg, 1mmol) em tetraidrofurano (15 mL) em temperatura ambiente,foi adicionado o produto do Exemplo 12.1 (162 mg, 1,2mmol), 1-hidroxibenzotriazol (162 mg, 1,2 mmol), cloridratode 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (191 mg, 1mmol) e trietilamina (112 mg, 1,1 mmol) sucessivamente.

Depois de 3 h, a solução reacional foi suprimida comsolução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (5 mL) . Amistura foi extraída com acetato de etila e a fase orgânicafoi lavada com água, salmoura e a seguir seca em (Na2S04) econcentrada in vácuo. Cromatografia flash do resíduoproduziu o produto desejado (215 mg, 45%).RMN 1H (300MHz, JCDCl3) : δ 2,45 (s, 3H) , 4,93 (d, J =4, 5Hz, 2H) , 5,4 4 (s, 2H) , 7, 26 - 7, 32 (m, 3Η), 7,51 - 7,72(m, 7Η), 8,03 (d, J = 7,5Hz, 2Η) , 8,65 (s, 1Η, NH), 8,79(s, 1Η).

MS (ESI + ) m/z 428 (Μ + 1), 450 (Μ + Na+), 482 (Μ +MeOH + Na+) .

Exemplo 12.3: Preparação de 3-benzilóxi-7-metil-2-(5-feniloxazol-2-i1)-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

Ά uma solução agitada do produto do Exemplo 12.2 (170mg, 0,4 mmol) em acetonitrila (5 mL) em temperaturaambiente foi adicionado tetracloreto de carbono (360 mg,2,4 mmol), trietilamina (130 mg, 1,28 mmol) etrifenilfosfina (320 mg, 1,2 mmol) sucessivamente. Depoisde 2 h, solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada (5mL) foi adicionada e os produtos foram extraídos comacetato de etila. A fase orgânica foi lavada com água,salmoura e a seguir seca (Na2SO4) e concentrada in vácuo. Acromatografia flash do resíduo produziu o composto desejado(142 mg, 86%).RMN 1H (300MHz, GDCl3) 62, 4 5 (s, 3Η) , 5,4 6 (s, 2Η),7,29 - 7, 37 (m, 6Η), 7,54 - 7,61 (m, 6Η), 7,75 (d, 1Η),8,80 (s, 1H).

MS (ESI¯) m/z 380 (M-1) ; MS (ESI + ) m/z 410 (M + 1),432 (M + Na+), 464 (M + MeOH + Na+), 841 (2M + Na+).

Exemplo 12.4: Preparação de 3-hidróxi-7-metil-2-(5-feniloxazol-2-il) -pirido [1,2-ɑ]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 107</formula>

O produto do Exemplo 12.3 (62 mg, 0,5 mmol) e iodetode sódio (440 mg, 2,9 mmol) foram misturados comacetonitrila (5 mL). A essa solução agitada foi adicionadocloreto de trimetllsilila (316 mg, 2,9 mmol) gota a gota. Amistura foi agitada por 1 h, a seguir interrompida pelaadição de metanol (5 mL) seguido por água (20 mL) e aseguir extraída com acetato e etila. As camadas orgânicacombinadas foram lavadas com salmoura, secas (Na2S04) econcentradas in vácuo até um volume de 1 mL. Hexano (15 mL)foi adicionado gota a gota e o sólido resultante foicoletado por filtração e seco sob vácuo para produzir oproduto desejado (38 mg, 79%).RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 2,40 (s, 3Η), 7,40 - 7,57(m, 6Η), 7,8-4 ,(s, 2Η), 8,74 (s, 1Η).

MS (ESI + ) m/z 320 (Μ + 1), 342 (Μ + Na+), 374 (Μ +MeOH + Na+), 661 (2Μ + Na + ).

HPLCmétodo 7 95, 0%/15, 6 min

Exemplo 12.5: Preparação de 2-[5-(4-fluorfenil)-oxazol-2-il]-3-hidróxi-7-metilpirido[1,2-α]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 108</formula>

0 procedimento descrito no Exemplo 12.1-12.4 foiadaptado para preparar 2-[5-(4-fluorfenil)-oxazol-2-il]-3-hidróxi-7-metilpirido[1,2-a]pirimidin-4-ona.

RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 2,43 (s, 3H), 7,45 (d, J =8,5 Hz, 1H), 7, 54 - 7, 68 (m, 4H), 8,26 (d, J = 6,6 Hz, 2H),8,77 (s, IH).

MS (ESI + ) m/z 321 (M + 1).

HPLCmêtodo 7 82,8/15,5 min

Exemplo 12.6: Preparação de 2-[5-(4-metoxifenil)oxazol-2-il] -3-hidróxi-7-metilpirido [1,2-α]pxrimidin-4-ona<formula>formula see original document page 109</formula>

O procedimento descrito no Exemplo 12.1-12.4 foiadaptado para preparar 2-[5-(4-metoxifenil)-oxazol-2-il]-3-hidróxi-7-metilpirido[1,2-α]pirimidin-4-ona.

RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 2,40 (s, 3H) , 3,87 (s, 3H) ,6,99 (d, J = 8,3 Hz, 2H) f 7,39 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 7,45(s, 1H), 7,62 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 7,77 (d, J = 8,5 Hz,2H), 8,75 (s, 1H), 10,75 - 11,35 (brs, 1H).

MS (ESI+) m/z 372 (M + Na+) .

HPLCmétodo 7 94, 1%/16, 1 min.

Exemplo 12.7: Preparação de cloridrato de l-amino-3-(4-fluorfenil)-propan-2-ona

<formula>formula see original document page 109</formula>Os procedimentos conforme descritos em Tetrahedron.1994, 50 (21), 6287-6298 e em Chem. Pharm. Bull 1984, 32(7), 2536-2543 foram adaptados para produzir cloridrato de1-amino-3-(4-fluorfenil)-propan-2-ona.

Exemplo 12.8: Preparação de cloridrato de l-amino-3-(3,4-diclorofenil)-propan-2-ona

<formula>formula see original document page 110</formula>

Os procedimentos em Tetrahedron. 1994, 50 (21), 6287-6298 e Chem. Pharm. Buli. 1984, 32 (7), 2536-2543 foramadaptados para produzir cloridrato de 1-amino-3-(3,4-diclorofenil)-propan-2-ona.

Exemplo 12.9: Preparação de 2-[5-(4-fluorbenzil)-oxazol-2-il]-3-hidróxi-7-metilpirido[l,2-a]pirimidin-4-ona<formula>formula see original document page 111</formula>

Usando o material do Exemplo 12.7 e adaptando osprocedimentos do Exemplos 12.2-4 produziu-se 2— [5—(4 —fluorbenzi1)-oxazol-2-il]-3-hidróxi-7-metiIpirido[1,2-a]pirimidin-4-ona.

RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 2,41 (s, 3H) , 4,17 (s, 2H),6,81 - 7,18 (m, 3H) , 7, 26 - 7,60 (m, 4H) , 8,77 (s, 1H),10, 40 - 11, 80 (brs, 1H).

MS (ESI + ) m/z 352 (M + 1) .

HPLCmétodo7 89, 6%/15, 5 min.

Exemplo 13: Preparação de 3-hidróxi-7-metil-2-(5-feniltiazol-2-il)-pirido [1,2a]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 111</formula>

Exemplo 13.1: Preparação de 3-benzilóxi-7-metil-2-(5-feniltiazol-2-il) -pirido [1, 2-o]pirimidin-4-ona<formula>formula see original document page 112</formula>

O produto do Exemplo 12.2 (100 mg, 0,23 mmol) e oReagente de Lawensson (120 mg, 0,3 mmol) foram misturadoscom tolueno (10 mL) e submetidos a refluxo por 12 h. Amistura reacional foi concentrada in vácuo e cromatografiaflash produziu o composto desejado (27 mg, 27% derendimento).

RMN 1H (300MHz, CDCl3): δ 2,44 (s, 3H) , 5,55 (s, 2H) ,7, 30 - 7, 70 (m, 11H) , 7,80 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 8,28 (s,1H), 8,80 (s, 1H) .

Exemplo 13.2: Preparação de 3-hidróxi-7-metil-2-(5-feniltiazol-2-il)-pirido[1,2a]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 112</formula>

O procedimento descrito no Exemplo 8.5 foi adaptado aoproduto obtido no Exemplo 13.1 para produzir o produtodesejado (80%).RMN 1H . (300MHz, CDCl3): δ 2,39 (s, 3H), 7, 32-7, 56 (m

5H), 7, 62-7,70 (m, 2H), 8,12 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 11,65(brs, IH).

MS (ESI + ) m/z 336 (M + 1) .

HPLCmétodo 7 98, 7%/17, 5 min

Exemplo 13.3: Preparação de 2-[5-(4-fluorbenzil)-tiazol-2-il] -3-hidróxi-7-metilpirido [1,2-a]pirimidi.n-4-ona

<formula>formula see original document page 113</formula>

Usando o material do Exemplo 12.7 e adaptando osprocedimentos dos Exemplos 13.1 a 13.2 produziu-se 2- [5— (4 —fluorbenzil)-tiazol-2-il]-3-hidróxi-7-metilpirido[1,2-α]pirimidin-4-ona.

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 2,35 (d, J = 1,2 Hz, 3H) ,4,31 (s, 2H) , 7,18 (t, J = 9,9 Hz, 2H) , 7,39 Cddf J = 8,9Hz, 5,5 Hz, 2H) , 7, 45 - 7,60 (m, 2H), 7,95 (s, '1H), 8,58-8, 64 (m, 1H) , 11,31 (s, 1H) .

MS (ESI + ) m/z 390 (M + Na+)

HPLCmétodo 7 96, 7%/18, 5 minExemplo 13.4: Preparação de 2-[5-(3,4-diclorobenzil)-tiazol-2-il]-3-(hidroxi-7-metilpirido[1,2-a] pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 114</formula>

Usando o material do Exemplo 12.8 e adaptando osprocedimentos dos Exemplos 13.1 a 13.2 produziu-se 2 — [ 5—(3,4-diclorobenzil)-tiazol-2-il]-3-hidróxi-7-metiIpirido[1,2-a]pirimidin-4-ona.

RHN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 2,36 (d, J = 1,2 Hz, 3H) ,4,34 (s, 2H) , 7,37 (dd, J = 8,3 Hz, 2,0 Hz, 1H) , 7,47 -7,60 (m, 2H) , 7,62 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7,67 (d, J = 2,1Hz, 1H), 7,98 (s, 1H), 8,60 - 8,65 (m, 1H), 11,28 (s, 1H).

MS (ESI + ) Wz 418 (M + 1) .HPLCmétodo 7 98, 8%/19, 8 min.

Exemplo 13.5: Preparação de 2-[5-(4-fluorbenzil)-tiazol-2-il]-3-hidróxi-7-morfolin-4-il-pirido[1,2-o]pirimidin-4-ona<formula>formula see original document page 115</formula>

Usando os materiais do Exemplo 2.2 e do Exemplo 12.7 eadaptando os procedimentos dos Exemplos 13.1 a 13.2produziu-se 2-[5-(4-fluorbenzil)-tiazol-2-il]-3-hidróxi-7-morfolin-4-ilpirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,14-3,21 (m, 4H) , 3,74 -3,81 (m, 4H), 4,31 (s, 2H), 7,18 (t, J = 8,9 Hz, 2H) , 7,39(dd, J = 8,8 Hz, 5,5 Hz, 2H) , 7,53 (d, J = 9,9 Hz, 1H) ,7,83 (dd, J = 9,9 Hz, 2,6 Hz, 1H), 7,95 (s, 1H) , 8,04 (d, J= 2,5 Hz, 1H), 11,25 (s, 1H).

MS (ESI + ) m/z 461 (M+ Na+) .

HPLCmétodo 7 86,3%/19,6 min.

Exemplo 13.6: Preparação de 2-[5-(3,4-di.clorobenzil)-tiazol-2-il]-3-hidróxi-7-morfolin-4-il-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona<formula>formula see original document page 116</formula>

Usando os materiais do Exemplo 2.3 e do Exemplo 12.8 eadaptando os procedimentos dos Exemplos 13.1 ao 13.2produziu-se 2-[5-(3,4-diclorobenzil)-tiazol-2-il]-3-hidróxi-7-morfolin-4-ilpirido[1,2-a]pirimidin-4-ona.

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,14 - 3,21 (m, 4H) , 3,74- 3,82 (m, 4H), 4,33 (s, 2H), 7,36 (dd, J = 8,2 Hz, 2,1 Hz,1H) , 7,53 (d, J = 10,0 Hz, 1H) , 7,62 (d, J = 8,2 Hz, 1H) ,7,67 (d, J = 2,1 Hz, 1H) , 7, 74 - 7, 86 (m, 1H) , 7,96 (s,1H), 8,01 - 8,06 (m, 1H), 11,18 - 11,28 (brs, 1H).

MS (ESI") m/z 487 (M-I) .

HPLCraétodo 7 97, 1%/19, 7 min.

Exemplo 13.7: Preparação de 2-[5-(4-fluorbenzil)-tiazol-2-i.l] -3-hidróxi-7-morfolin-4-ilmetilpirido[l ,2-a]pirimidin-4-ona<formula>formula see original document page 117</formula>

Passo 1:

O produto do Exemplo 2.1 (3,66 g, 15,6 mmol), cloretode t-butildimetilsilila (3,52) e imidazol (2,66 g) foramadicionados a diclorometano/DMF (30 mL/10 mL) e a misturafoi agitada em temperatura ambiente por 2 h. A mistura foidiluída com diclorometano (30 mL) e a fase orgânica foilavada com água, seca, filtrada e concentrada in vácuo. 0resíduo foi submetido à cromatografia em coluna(hexano/acetato de etila 4:1) para produzir o compostodesejado (5,02 g, 92%).RMN 1H (300 MHζ, CDCl3): δ 0,32 (s, 6Η), 0,99 (s, 9Η) ,2,39 (s, 3Η) , 3,97 (s, 3Η) , 7,42 (dd, J = 9,1, 1,8 Hz, 1Η) ,7,62 (d, J = 9,2 Hz, 1Η) , 8,68 (bs, 1Η) .

Passo 2:

A uma solução agitada do produto do Passo 1 (5 g, 14mmol) em tetracloreto de carbono (80 mL) foi adicionada N-bromosuccinimida (4,1 g) e peróxido de t-butila (0,348 g)sob atmosfera de nitrogênio. A mistura reacional foisubmetida a refluxo por 5 h e a seguir esfriada até atemperatura ambiente. A solução foi diluída comdiclorometano (200 mL), lavada com água, seca, filtrada econcentrada in vácuo. O resíduo foi submetido àcromatografia em coluna (hexano/acetato de etila 8:1) paraproduzir o composto desejado (3,0 g, 48%) como um sólidoamarelo.

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) : δ 0,26 (s, 6H) , 0,94 (s,9H), 3,86 (s, 3H), 4,88 (s, 2H), 7,66 (d, J = 9,2 Hz, 1H),7,79 (dd, J = 9,3, 2,0 Hz, 1H) , 9,03 (d, J = 1,8 Hz, 1H) .

Passo 3:

O produto do passo 2 (1,1 g, 2,6 mmol) e morfolina(672 mg, 7,73 mmol) foram dissolvidos em um solventemisturado de diclorometano/metanol (1:1, 20 mL) . A soluçãofoi agitada em temperatura ambiente por 4 h, a seguirparcialmente concentrada in vácuo e diluída comdiclorometano (40 mL) a qual foi lavada com salmoura, seca,filtracla e evaporada sob pressão reduzida. Purificação porcromatografia em coluna de sílica gel (hexano/acetato deetila 1:1) produziu o produto desejado (1,03 g, 92%).

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) : δ 0,26 (s, 6H) , 0,93 (s,9H) , 2,43 (t, J = 4,5 Hz, 4H) , 3, 53 - 3, 62 (m, 6H) , 3,86(s, 3H), 7,64 (dd, J = 9,1, 0,6 Hz, 1H), 7,76 (dd, J = 9,2,1,9 Hz, 1H), 8,74 (dd, J = 1,8, 0,6 Hz, 1H).

Passo 4:

O produto do Passo 4 (100 mg, 0,23 mmol)foi adicionadoa um solvente misturado e agitado de ácido acéticoglacial/água/tetraidrofurano (1:1:3, 5 mL) e a mistura foiagitada de um dia para o outro em temperatura ambiente.Água (10 mL) foi adicionada e a seguir hidrogenocarbonatode sódio sólido foi adicionado para ajustar o pH ~ 7. Amistura foi extraída duas vezes com diclorometano e ascamadas orgânicas combinadas foram lavadas, secas econcentradas in vácuo para produzir o composto desejado (65mg, 88%).

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6): δ 2,42 (t, J = 4,5 Hz, 4H) ,3, 53 - 3, 63 (m, 6H) , 3,88 (s, 3H) , 7,58 (d, J = 9,2 Hz,1H), 7,64 (dd, J = 9,4, 1,7 Hz, 1H) , 8,62 - 8, 67 (m, 1H),10,24 (s, 1H).

Passos 5-9:Os procedimentos, descritos no Exemplo 8.1 (exceto pelareação ser conduzida a 70°C usando DMF como solvente),Exemplo 8.2, Exemplo 12.2, Exemplo 13.1 e Exemplo 12.4foram adaptados para fornecer 2-[5-(4-fluorbenzil)-tiazol-2-il]-3-hidróxi-7-morfolin-4-ilmetilpirido[1,2-a]pirimidin-4-ona.

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 2,40 (m, 4H, N-CH2-CH2-O),3,53 (s, 2H, Ar-CH2-N), 3,57 (t, J = 4,7 Hz, 4H, N-CH2-CH2-O) , 4,30 (s, 2H, CH2-tiazol), 7,17 (t, J = 8,9 Hz, 2H,ArH), 7,39 (dd, J = 8,9 Hz, 5,4 Hz, 2H, ArH), 7,52 (d, J =8,9 Hz, 1H, H9) , 7,65 (dd, J = 8,9, 2,4 Hz, 1H, H8), 7,95(s, 1H, CH(tiazol)), 8,66 (m, 1H, H6), 11,33 (s, 1H, OH).

MS (ESI + ) m/z 453 (M + 1) .

Exemplo 14: Preparação de benzilamidas do ácido 3-hidróxi-4-oxo-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]pirimidino-2-carboxíIico substituídas

Rota<formula>formula see original document page 121</formula>

2-aminobenzilimidazol foi alquilado pela adaptação doprocedimento descrito em WO2005/058869. 0 procedimentodescrito no Exemplo 5 foi adotado para preparar os ésteresmetilicos os quais foram convertidos nos derivados de amidapela adaptação do procedimento descrito no Exemplo 6. Osprodutos finais foram purificados ou por recristalização oupor HPLC preparativo (produzindo sais de formato) . Osexemplos a seguir (14.1-14.17) foram preparados pelaadaptação do procedimento acima.

Exemplo 14.1: Preparação da 3,4-diclorobenzilamida doácido 3-hidróxi-4-oxo-4,10-diidrobenzo[4,5] imidazo[1,2-

α]pirimidino-2-carboxílico<formula>formula see original document page 122</formula>

RMN 1H (300MHz, D6 DSMO) : δ 9,38 (1H, m, NHCH2), 8,43(1H, d, J = 8,1 Hz, Ar-CH), 7, 72 - 7,25 (6H, m, Ar-CH) ,4,52 (2H, d, J = 6,3 Hz, NHCH2).

MS (ESI") m/z 403 (M - 1) .

Exemplo 14.2: Preparação de 4-fluorbenzilamida doácido 3-hidróxi-4-oxo-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-

α]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 122</formula>

RMN 1H (300MHz, D6 DMSO) : δ 9,27 (1H, m, NHCH2), 8,44(1H, d, J = 8,1 Hz, Ar-CH), 7,50-7,14 (7H, m, Ar-CH), 4,51(2H, d, J = 6, 3 Hz, NHCH2) .MS (ESI+) m/z 353 (Μ + 1) .

Exemplo 14 .3: Preparação de 3,4-difluorbenzilamida doácido 3-hidróxi-4-oxo-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 123</formula>

RMN 1H (300MHz, D6-DMS0) : δ 9,31 (1H, t, J = 6, 3 Hz,NHCH2), 8,44 (1H, d, J = 8,1 Hz, Ar-CH) , 7,51 - 7,18 (6H,m, Ar-CH), 4,51 (2H, d, J = 6,3 Hz, NHCH2).MS (ESI") m/z 370 (M - 1) .

Exemplo 14.4: Preparação de 4-fluorbenzilamida doácido 3-hidróxi-10-metil-4-oxo-4,10-diidrobenzo [4 , 5] imidazo [1 ,2-o]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 123</formula>RMN 1H (300MHz, D6 DMSO) : δ 11,89 (OH), 9,61 (1H, t, J= 6,6 Hz, ,NHGH2), 8,44 (1H, d, J = 7,8 Hz, Ar-CH), 7,54(2H, m, Ar-CH), 7,41 (2H, dd, J = 9,0, -5,7 Hz, Ar-CH),7,35-7,30 (1H, m, Ar-CH), 7,17 (2H, m, Ar-CH), 4,54 (2H, d,J = 6,6 Hz, NHCH2), 3,78 (3H, s, CH3).

MS (ESI + ) m/z 367 (M + 1).

Exemplo 14.5: Preparação de 4-fluobenzilam±da do ácido3-hidróxi-10-metil-4-oxo-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 124</formula>

RMN 1H (300MHz, D6 DMSO): δ 11,71 (OH), 9,61 (1H, t, J= 6,6 Hz, NHCH2), 8,44 (1H, d, J = 8,1 Hz, Ar-CH), 7,63 -7,52 (4H, m, Ar-CH), 7,38 - 7,34 (2H, m, Ar-CH), 4,54 (2H,d, J = 6,6 Hz, NHCH2), 3,79 (3H, s, CH3).

MS (ESI + ) m/z 417 (M + 1).

Exemplo 14.6: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 10-(4-fluorbenzil)-3-hidróxi-4-oxo-4,10-diidrobenzo [4,5]imidazo[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico<formula>formula see original document page 125</formula>

RMN 1H (300MHz, D6 DMSO) : δ 11,8 (1H, s, OH), 9,75(1H, bs, NH), 8,47 (1H, d, J = 4,8 Hz, Ar-CH), 7,64 (1H, d,J = 5,1 Hz, Ar-CH), 7,63 (1H, s, Ar-CH), 7,55 (1H, d, J =5,1 Hz, Ar-CH), 7,54 (1H, d, J = 4,8 Hz, Ar-CH), 7,48 (1H,dd, J = 4,8, 4,5 Hz, Ar-CH), 7,45 (1H, dd, J = 4,8, 4,2 Hz,Ar-CH), 7,38-7,32 (2H, m, Ar-CH), 7,17 (1H, d, J = 5,4 Hz,Ar-CH), 7,15 (1H, d, J = 5,1 Hz, Ar-CH), 5,61 (2H, s, Ar-CH2), 4,57 (2H, d, J = 3, 6 Hz, CH2NH).

MS (ESI + ) m/z 511 (M + 1) .

Exemplo 14.7: Preparação e 3,4-diclorobenzilamida doácido 3-hidróxi-10-(2-morfolin-4-iletil)-4-oxo-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]pirimidino-2-carboxílico<formula>formula see original document page 126</formula>

RMN 1H (300MHz, D6.DMSO): δ 11,77 (1H, s, OH), 9,60(1H, t, J = 6,4 Hz, NH), 8,46 (1H, d, J = 8,4 Hz, Ar-CH) ,7,67-7,51 (4H, m, Ar-CH), 7,35 (2H, d, J = 8,1 Hz, Ar-CH), 4, 53 (2H, d, J = 6,4 Hz, NHCH2), 4,49 (2H, t, J = 6,0 Hz,NCH2CH2NH), 3,30 (4H, m, CH2OCH2), 2,69 (2H, t, J = 6,0 Hz,NCH2CH2N), 2, 94-2, 43 (4H, m, CH2NCH2).

MS (ESI + ) m/z 516 (M) + .

Exemplo 14.8: Preparação de 3,4-dicloroenzilamida do ácido 3-hidróxi-4-oxo-10-(2-pirrolidin-l-iletil)-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

RMN 1H (300 MHz, D6 DMSO) : δ 8,09 (1H, s, NH), 7,70-7,65 (3H, m, Ar-CH), 7,37 - 7,29 (4H, m, Ar-CH), 5,30 (0,7H, s, tautômero B NCH2), 4,62 (1,3H, d, J = 6,3 Hz, Tautômero A NCH2), 4,31 (2H, t, J = 6,9 Hz, NCH2CH2N), 2,98-2,92 (2H, m, NCH2CH2N), 2,65 (2H, m, CH2NCH2), 2,59 (2H, m,CH2NCH2), 1, 82 - 1, 77 (4H, m, NCH2CH2CH2).

MS (ESI+) m/z 500 (M)+.Exemplo.;, 14,. 9 : Preparação de 3, 4-diclorobenzilamida doácido 3-fiidróxi-4-oxo-10-(2-piperidin-l-xletil)-4,10-diidrobenzo [4 ,5] imidazo [1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 127</formula>

RMN 1H (300MHz, D6 DMSO) : δ 11,58 (1H, bs, OH), 8,69

(1H, d, J = 7,8 Hz, Ar-CH), 8,12 (1H, bs, NH), 7,48 (2H, d,J = 7,0 Hz, Ar-CH), 7,45 (1H, d, J = 8,4 Hz, Ar-CH), 7,35 -7,30 (2H, m, Ar-CH), 7,23 (1H, dd, J = 8,1, 1,8 Hz, Ar-CH),4,62 (2H, d, J = 6,0 Hz, CH2NH), 4,31 (2H, t, J = 6,9 Hz,NCH2CH2N), 2,72 (2H, t, J = 6, 9 Hz, NCH2CH2N), 2,46 (4H, t,J = 5,4 Hz, CH2NCH2), 1,62 - 1,41 (6H, m, NCH2CH2CH2CH2).

MS (ESI + ) m/z 514 e 516 (M)+.

Exemplo 14.10: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 3-hidróxi-10-(2-metoxietil)-4-oxo-4,ΙΟ-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]pirimidino-2-carboxíIico<formula>formula see original document page 128</formula>

RMN 1H (300MHz, D6 DMSO) : δ 11,78 (1H, s, OH), 9,66(1H, bs, NH), 8,45 (1H, d, J = 8,1 Hz, Ar-CH) , 7,65 - 7,60(3H, m, Ar-CH), 7,53 (1H, m, Ar-CH), 7, 37 - 7, 30 (2H, m,Ar-CH), 4,55 (2H, d, J = 6,3 Hz, CH2NH), 4,52 (2H, t, J =5,4 Hz, OCH2CH2N), 3,72 (2H, t, J = 5,4 Hz, OCH2CH2N), 3,27(3H, s, OCH3) .

MS (ESI+) m/z 461 e 463 (M + 1) .

Exemplo 14.11: Preparação de 3,4-diclorobenzi.lamida doácido 3-hid.róxi-4-oxo-10- (3-piperidin-l-il-propil) -4,10-diidrobenzo [4,5] imidazo [1,2-a]pirimidino-2-carboxili.co

<formula>formula see original document page 128</formula>RMN 1H (300MHz., D6 DMSO) : δ 11,70 (1H, bs, OH), 9,39(1H, t, J .= .6, 3 Hz, NHCH2), 8,47 (1H, d, J = 7,8 Hz, Ar-CH), 7,65-7,51 (4H, m, Ar-CH), 7,37-7,24 (2H, m, Ar-CH),4,42 (2H, t, J = 6,0 Hz, CH2N), 4,31 (2H, d, J = 6,3 Hz,NHCH2), 2,25 (2H, t, J = 6,0 Hz, CH2N), 1,99-1, 92 (6H, m,CH2NCH2 e NCH2CH2CH2N), 1,17 - 1,11 (6H, m, NCH2CH2CH2CH2).

MS (ESI+) m/z 528 e 530 (M + 1).

Exemplo 14.12: Preparação de 3,4-dicloobenzilamida doácido 3-hxdróxi-7,8-diiaetil-4-oxo-4,10-diidrobenzo [4 , 5] imidazo [1,2-a]pirimidino-2-carboxílico

<formula>formula see original document page 129</formula>

RMN 1H (300MHz, D6 DMSO) : δ 9,30 (1H, t, J = 6, 6 Hz,NH), 8,22 (1H, s, Ar-CH), 7,60 (2H, m, Ar-CH), 7,35 (1H, d,J = 8,1 Hz, Ar-CH), 7,21 (1H, s, Ar-CH), 4,51 (2H, d, J =6,6 Hz, CH2NH), 2,34 (6H, s, 2 χ CH3).MS (ESI + ) m/z 431 (M)+.Exemplo 14.13: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 3-hidróxi-7 ^ 8-dimetil-10-(2-morfolin-4-iletil)-4-oxo-4 ,10-diidrobenzo[4,5] imidazo[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 130</formula>

RMN 1H (300MHz, D6 DMSO) : δ 11,70 (1H, s, OH), 9,53(1H, bs, NH), 8,25 (1H, s, Ar-CH), 7,62 (1H, d, J = 8,1 Hz,Ar-CH), 7,59 (1H, d, J = 2,4 Hz, Ar-CH), 7,44 (1H, s, Ar-CH), 7,33 (1H, dd, J = 8,1, 2,4 Hz, Ar-CH), 4,53 (2H, d, J= 6,3 Hz, NHCH2), 4,44 (2H, t, J = 5, 7 Hz, NCH2CH2N) ., 3,31(4H, m, CH2OCH2), 2,68 (2H, t, J = 5,7 Hz, NCH2CH2N), 2,43(4H, m, CH2NCH2), 2,38 (3H, s, CH3), 2,35 (3H, s, CH3).

MS (ESI+) m/z 544 e 546 (M + 1).

Exemplo 14.14: Preparação de 3-cloro-4-fluorbenzilamida do ácido 3-hidróxi-10-(2-morfolin-4-iletil)-4-ΟΧΟ-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-ɑ]pirimidina-2-carboxilico<formula>formula see original document page 131</formula>

RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 2,52 (4Η, bdd, J = 4,5 Hz,2x-NCH2CH20-) , 2,79 (2Η, t, J =6,3, 7,2 Hz, -NCH2CH2NAr-),3,59 (4Η, bdd, J = 4,2 Hz, 2x-NCH2CH20-) , 4,31 (t, J = 6,6Hz, -NCH2CH2NAr-), 4,61 (2H, dd, J = 6, 0 Hz, -NHCH2-), 7,15(1Η, t, J = 8,4, 8,7 Hz, ArCH), 7,25 (1H, dd, J = 2,4, 4,5Hz ArCH), 7,32 (2H, m, ArCH), 7,42 (1H, dd, J = 2,4, 6,9 HzArCH), 7,50 (2H, dt, J = 1,5, 7,8 Hz, ArCH) , 8,00 (1H, s,NH), 8,72 (1H, s, NH), 8,68 (1H, d, J = 8,1 Hz, ArCH) ,11,62 (1H, s, OH) .

MS (ESI + ) m/z 500 (M[C135]+1).

Exemplo 14.15: Preparação de 4-cloro-3-trifluormetilbenzilamida do ácido 3-hidróxi-10-(2-morfolin-4-iletil)-4-oxo-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo [1,2-a]pirimidino-2-carboxilico<formula>formula see original document page 132</formula>

RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 2,51 (4Η, bdd, J = 4,5 Hz,2x-NCH2CH20-) , 2, 77 (2Η, t, J = 6, 6 Hz, -NCH2CH2NAr-), 3,59(4Η, bdd, J = 4,5 Hz, 2x-NCH2CH20-) , 4,31 (t, J = 6,6 Hz, -NCH2CH2NAr-), 4,68 (2H, dd, J = 6,0 Hz, -NHCH2-), 7,30 (2H,m, ArCH), 7,47, (2H, dt, J = 0,9, 8,0 Hz, ArCH), 7,50 (2H,bdd, J = 0,9, ArCH) , 7,68 (1H, bs, ArCH), 8,07 (1H, d, J =7,8 Hz, ArCH), 11,55 (1H, s, OH).

MS (ESI + ) m/z 550 (M[C135]+1).

Exemplo 14.16: Preparação de (3,4-diclorobenzil)-metilamida do ácido 3-hidróxi-10-(2-morfolin-4-iletil)-4-oxo-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico: Sal de formato<formula>formula see original document page 133</formula>

RMN 1H (300 MHζ, CDCl3) δ 2,52 (4Η, bdd, J = 4,5 Hz,2x-NCH2CH20-), 2,79 (2Η, t, J = 6,3, 7,2 Hz, -NCH2CH2NAr-),3,59 (4Η, bdd, J = 4,2 Hz, 2x-NCH2CH20-), 4,31 (t, J = 6, 6Hz, -NCH2CH2NAr-), 4,61 (2H, dd, J = 6,0 Hz, -NHCH2-), 7,15(1H, t, J = 8,4, 8,7 Hz, ArCH), 7,25 (1H, dd, J = 2,4, 4,5Hz ArCH), 7,32 (2H, m, ArCH), 7,42 (1H, dd, J = 2,4, 6,9 HzArCH), 7,50 (2H, dt, J = 1,5, 7,8 Hz, ArCH), 8,00 (1H, s,NH), 8,72 (1H, s, NH), 8,68 (1H, d, J = 8,1 Hz, ArCH),11,62 (1H, s, OH).

MS (ESI+) m/z 530 (M[C135] + 1 - sal)

Exemplo 14.17: Preparação de 2-[2-(3,4-diclorofenil)-pirrolidino-l-carbonil]-3-hidróxi-10-(2-morfolin-4-iletil)-10H-benzo[4,5]imidazo[1,2-a]pirimidin-4-ona<formula>formula see original document page 134</formula>

1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 2,52 (4Η, bdd, J = 4,5 Hz,2x-NCH2CH20-), 2,79 (2Η, t, J = 6,3, 7,2 Hz, -NCH2CH2NAr-),3,59 (4Η, bdd, J = 42 Hz, 2x-NCH2CH20-), 4,31 (t, J = 6, 6Hz, -NCH2CH2NAr-), 4,61 (2Η, dd, J = 6,0 Hz, -NHCH2-), 7,15(1Η, t, J = 8,4, 8,7 Hz, ArCH), 7,25 (1H, dd, J = 2,4, 45Hz ArCH), 7,32 (2H, m, ArCH), 7,42 (1H, dd, J = 2,4, 6,9 HzArCH), 7,50 (2H, dt, J = 1,5, 7,8 Hz, ArCH), 8,00 (1H, s,NH), 8,72 (1H, s, NH), 8,68 (1H, d, J = 8,1 Hz, ArCH) ,11,62 (1H, s, OH).

MS (ESI + ) m/z 556 (M [Cl35]+1) .

Exemplo 15: Preparação de benzilamidas do ácido 3-hxdróxi-4-oxo-10-(2-piperazin-1-iletil)-4,10-dxidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]pirimidino-2-carboxílico:Método Geral<formula>formula see original document page 135</formula>

Exemplo 15.1.1: Preparação do éster t-butilico doácido 4-(2-cloroetil)-piperazino-l-carboxilico

<formula>formula see original document page 135</formula>

Éster t-butílico do ácido 4-(2-cloroetil)-piperazino-1-carboxíIico foi preparado de acordo com um procedimentopatente descrito em W02002/44141.RMN 1H (300MHz, CDCl3): δ 3,45 (2H, t, J = 6, 9 Hz,NCH2), 3,40' (4Η, t, J = 4,8 Hz, CH2NCH2) , 2,52 (2H, t, J =6,9 Hz, CH2Cl), 2,42 (4H, t, J = 4,8 Hz, CH2NCH2), 1,49 (9H,s, C[CH3]3.

MS (ESI + ) m/z 249 (M + 1).

Exemplo 15.1.2: Preparação do éster terc-butilico doácido 4 - [2- (2-aminobenzoimidazol-1-il) -etil] -piperazi.no-1-carboxilico

<formula>formula see original document page 136</formula>

Éster terc-butílico do ácido 4-[2-(2-aminobenzoimidazol-1-il)-etil]-piperazino-l-carboxílico foipreparado de acordo com o procedimento descrito emW02 005/058869.

RMN 1H (300 MHz, CDCl3): δ 7,43 (1H, d, J = 7,5 Hz,Ar-CH) , 7,17 - 7,06 (3H, m, Ar-CH) , 5,78 (2H, s, NH2), 3,64(2H, t, J = 5,7 Hz, NCH2CH2N), 3,46 (4H, m, CH2NCH2), 2,56(4H, m, CH2NCH2), 2,43 (2H, t, J = 5,7 Hz, NCH2CH2N), 1,46(9H, s, C[CH3]3.MS (ESI + ) m/z 346 (Μ + 1) .

Exemplo 15.2:, Preparação de éster metílico do ácido 3-acetóxi-10-[2-(4-terc-butoxicarbonilpiperazin-l-il)-etil]-4-OXO-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-o]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 137</formula>

Éster metílico do ácido 3-acetóxi-10-[2-(4-terc-butoxicarbonilpiperazin-l-il)-etil]-4-oxo-4,10-diidrobenzo [ 4 , 5]imidazo[l,2-a]pirimidino-2-carboxilico foipreparado pela adaptação do procedimento mostrado noExemplo 5.

RMN 1H (300 MHz, D6 DMSO): δ 8,66 (1H, d, J = 8,7 Hz,Ar-CH), 7,58 (1H, m, Ar-CH), 7,42 (2H, m, Ar-CH), 4,29 (2H,t, J = 5,9 Hz, NCH2CH2N), 3,96 (3H, s, OCH3), 3,55 (4H, t, J =5,4 Hz, CH2NCH2), 2,88 (2H, t, J = 5,9 Hz, NCH2CH2N), 2,70(4H, t, J = 5,4 Hz, CH2NCH2), 2,20 (3H, s, O=CCH3), 1,47(9H, s, C[CH3]3) ·MS (ESI+) m/z 514 (Μ + 1).

Exemplo 15.3: Preparação do éster metilico do ácido 3-acetóxi-4-oxo-10-(2^piperazin-l-iletil)-4,10-diidrobenzo [4,5] imidazo [1,2-a] pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 138</formula>

Éster metilico do ácido 3-acetóxi-10-[2-(4-terc-butoxicarbonilpiperazin-l-il)-etil]-4-oxo-4,10-diidro-benzo[4,5]imidazo[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico (33 mg,0,064 mmol) foi tratado com ácido trifluoracético (0,20 mL)e agitado por uma hora em temperatura ambiente. Depoisdeste tempo, a mistura foi concentrada e o resíduo brutofoi o produto desejado (27 mg, 100%).

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0) : δ 8,76 (1H, bs, NH), 8,47(1H, d, J = 8,1 Hz, Ar-CH) , 7,85 (1H, d, J = 8,1 Hz, Ar-CH), 7,65 (1H, dd, J = 8,1, 7,8 Hz, Ar-CH), 7,47 (1H, dd, J= 8,1, 7,8 Hz, Ar-CH), 4,57 (2H, t, J = 5,4 Hz, NCH2CH2N),3,88 (3H, s, OCH3), 3, 27-3, 07 (10H, m, 2 x NCH2CH2N e 8 χNHCH2CH2NCH2CH2) , 2,31 (3H, s, [C=OJCH3).MS (ESI + ) m/z 414 (Μ + 1) .

Exemplo 15.4: Preparação do éster terc-butilico doácido 4-{2-[2-(3,4-diclorobenzilcarbamoil)-3-hidróxi-4-oxo-4H-benzo[4,5]imidazo[1,2-a]pirimidin-10-il]-etil}-piperazino-1-carboxilico

<formula>formula see original document page 139</formula>

O produto do Exemplo 15.2 foi convertido em ésterterc-butílico do ácido 4-{2-[2-(3,4-diclorobenzilcarbamoil)-3-hidróxi-4-oxo-4H-benzo [4,5] imidazo [ 1, 2-or]pirimidin-10-il] -etil} -piperazino-1-carboxilico seguindo um procedimento adaptado do Exemplo6.

RMN 1H (300 MHz, D6 DMSO): δ 8,68 (1H, d, J = 7,5 Hz,Ar-CH) , 8,02 (1H, t, J = 6,3 Hz, NHCH2), 7,49 - 7,14 (6H,m, Ar-CH), 4,63 (2H, d, J = 6, 3 Hz, NHCH2), 4,31 (2H, t, J= 6,9 Hz, NCH2CH2N), 3,34 (4H, m, CH2NCH2), 2,79 (2H, t, J =6,9 Hz, NCH2CH2N), 2,45 (4Η, m, CH2NCH2), 1,47 (9Η, s,C[CH3]3)

MS (ESI + ) m/z 615 e 617 (M + 1).

Exemplo 15.5: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 3-hidróxi-4-oxo-10-(2-piperazin-l-iletil)-4,10-dxidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 140</formula>

O produto do Exemplo 15.3 foi convertido em 3,4-diclorobenzilamida do ácido 3-hidróxi-4-oxo-10-(2-piperazin-l-iletil)-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-

a]pirimidino-2-carboxilico seguindo um procedimentoadaptado do Exemplo 6.

RMN 1H (300MHz, D6 DMSO): δ 9, 65 (1H, t, J = 6,6 Hz,NHCH2), 8,46 (1H, d, J = 8,1 Hz, Ar-CH), 7, 68-7, 60 (3H, m,Ar-CH), 7,58 -7,50 (1H, m, Ar-CH), 7,38- 7, 31 (2H, m, Ar-CH),4,54 (2H, d, J = 6, 6 Hz, NHCH2), 4, 47 (2H, t, J = 6,0 Hz,NCH2CH2N) , 3, 16 (4H, m, CH2NCH2), 2, 66 (2H, t, J = 6,0 Hz,NCH2CH2N), 2,41 (4H, m, CH2NCH2).MS (ESI+) m/z 515 e 517 (Μ + 1).

Exemplo 15.6: Preparação da 3,4-dicloobenzilamida doácido 3-hidróxi-10-[2-(4-metanossulfonilpxperazin-1-il)-etil] -4-oxo-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 141</formula>

Éster metílico do ácido 3-acetóxi-4-oxo-10-(2-piperazin-l-iletil)-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[l,2-a]pirimidino-2-carboxilico (Exemplo 15.3) (97 mg, 0,235mmol) foi dissolvido em diclorometano (1 mL) e a isso foiadicionada trietilamina (98 μL, 0,71 mmol), seguido porcloreto de mesila (21 μL, 0,26 mol) . A reação foi agitadaem temperatura ambiente antes dos solventes seremevaporados e o resíduo convertido em 3,4-dicloobenzilamidado ácido 3-hidróxi-10-[2-(4-metanossulfonilpiperazin-1-il)-etil]-4-oxo-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]pirimidino-2-carboxíIico por uma adaptação do procedimento descrito noExemplo 6.RMN 1H (300MHz, D6 DMSO) : δ 9,60 (1H, t, J = 6, 3 Hz,NHCH2), 8,47 (1Η, d, J = 8,1 Hz, Ar-CH'), 7, 68 - 7,52 (4H,m, Ar-CH),.. 7,36 - 7,31 (2H, m, Ar-CH), 4,55 (2H, d, J = 6,3Hz, NHCH2), 4,51 (2H, t, J = 5,7 Hz, NCH2CH2N), 2,87 (4H, m,CH2NCH2), 2,79 (2H, t, J = 5,7 Hz, NCH2CH2N), 2,74 (3H, s,SCH3), 2,57 (4H, m, CH2NCH2).

MS (ESI + ) m/z 593 e 595 (M + 1).

Exemplo 15.7: Preparação de 3,4-dicloobenzilamida doácido 10-[2-(4-acetilpiperazin-l-il)-etil]-3-hidróxi-4-oxo-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 142</formula>

Ester raetilico do ácido 3-acetóxi-4-oxo-10-(2-piperazin-l-iletil)-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a}pirimidino-2-carboxílico (Exemplo 15.3) (100 mg, 0,242mmol) foi dissolvido em diclorometano (1 mL) e a isso foiadicionada trietilamina (96 μL, 0,70 mmol), seguido porcloreto de acetila (21 μιΧ, 0,266 mol). A reação foi agitadaem temperatura ambiente por 3 horas antes dos solventesserem evaporádos e o resíduo foi convertido em 3,4-dicloobenzilamida do ácido 10-[2-(4-acetilpiperazin-l-il)-etil]-3-hidróxi-4-oxo-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]pirimidino-2-carboxíIico por uma adaptação doprocedimento descrito no Exemplo 6.

RMN 1H (300MHz, D6 DMSO) : δ 9,61 (1H, t, J = 6,3 Hz,NHCH2), 8,46 (1H, d, J = 8,4 Hz, Ar-CH) , 7,70 - 7, 62 (3H,m, Ar-CH), 7,57 (1H, m, Ar-CH), 7,37 (2H, m, Ar-CH), 4,56(2H, d, J = 6,3 Hz, NHCH2), 4,51 (2H, t, J = 5,7 Hz,NCH2CH2N), 3,20 (2H, m, CH2NCH2), 3,12 (2H, m, CH2NCH2), 2,73(2H, t, J = 5,7 Hz, NCH2CH2N), 2,45 - 2,38 (4H, m, CH2NCH2),1,89 (3H, s, CH3) .

MS (ESI + ) m/z 557 (M) + .

Exemplo 15.8: Preparação da 3,4-diclorobenzilamida doácido 3-hidróxi-10-[2-(4-metilpiperazin-l-il)-etil]-4-oxo-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico<formula>formula see original document page 144</formula>

Ester metílico do ácido 3-acetóxi-4-oxo-10-(2-piperazin-l-iletil)-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]piriraidino-2-carboxilico (Exemplo 15.3) (97 mg, 0,235mmol) foi dissolvido em metanol (1 mL) e a isso foiadicionado cianoboroidreto de sódio (21 mg, 0,63 mmol) eacetato de sódio (30 mg, 0,38 mmol) seguido por formaldeido(38 μL, 0,47 mmol). A reação foi agitada em temperaturaambiente por 2 horas antes dos solventes evaporarem e oresíduo ser convertido em 3,4-diclorobenzilamida do ácido3-hidróxi-10-[2- (4-metilpiperazin-l-il)-etil]-4-oxo-4,10-diidrobenzo [4,5]imidazo[1,2-a]pirimidino-2-carboxílico poruma adaptação do procedimento descrito no Exemplo 6.

RMN 1H (300MHz, D6 DMSO) : δ 9,58 (1H, t, J = 6,3 Hz,NHCH2), 8,46 (1H, d, J - 7,2 Hz, Ar-CH) , 7, 66 - 7,53 (4H,m, Ar-CH), 7,36 - 7,31 (2H, m, Ar-CH), 4,54 (2H, d, J = 6,3Hz, NHCH2), 4,47 (2H, t, J = 6, 0 Hz, NCH2CH2N), 2,67 (2H, t,J = 6,0 Hz, NCH2CH2N), 2, 54 - 2, 26 (8Η, m, CH2NCH2CH2NCH2),1,99 (3Η, s, CH3).

MS (ESI+) m/z 527 (M)+.

Exemplo 15.9.1: Preparação do éster metílico do ácido3-acetóxi-10- [2- (4-metoximetilpiperazin-l-il) -etil] -4-oxo-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 145</formula>

Éster metilico do ácido 3-acetóxi-4-oxo-10-(2-piperazin-l-iletil)-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1, 2-a]pirimidino-2-carboxilico (Exemplo 15.3) (97 mg, 0,235mmol) foi dissolvido em diclorometano (1 mL) e ao qual foiadicionado diisopropiletilamina (95 μL, 0,52 mmol), seguidopor cloreto de metoxiletila (20 μL, 0, 258 mmol). A reaçãofoi agitada em temperatura ambiente por 24 h antes dossolventes evaporarem e o resíduo ser purificado porcromatografia em coluna (98:1,5:0,5 dediclorometano:metanol:amônia aquosa) para produzir oproduto desejado (30 mg, 28%).

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) : δ 8,68 (1H, d, J = 8,4 HzAr-CH), 7,54 (1H, dd, J = 8,1, 7,8 Hz, Ar-CH) , 7,41 - 7,35(2H, m, Ar-CH), 4,42 (2H, t, J = 6,3 Hz, NCH2CH2N), 3,99(3H, s, OCH3), 3,60 (2H, s, CH2OCH3), 3, 52-3, 45 (2H, m,CH2N), 3,31 (2H, m, CH2N), 2,83 (2H, t, J = 6,3 Hz,NCH2CH2N), 2, 55 - 2, 46 (4H, m, CH2NCH2), 2,09 (3H, s, OCH3),2,06 (3H, s, O=CCH3).

MS (ESI+) m/z 458 (M + 1).

Exemplo 15.9.2: Preparação de 3,4-dlclorobenzilamidado ácido 3-hidróxi-10-[2-(4-metoximetilpxperazin-l-il)-etil]-4-oxo-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 146</formula>

O produto do Exemplo 15.9.1 foi convertido em 3,4-diclorobenzilamida do ácido 3-hidróxi-10-[2-(4-metoximetilpiperazin-l-il)-etil]-4-oxo-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[l,2-α]pirimidino-2-carboxilicousando um'procedimento adaptado do Exemplo 6.

RMN 1H (30.0MHz, D6 DMSO) : δ 8,70 (1H, d, J = 8,1 Hz,Ar-CH), 7,90 (1H, m, NH), 7,52 - 7,19 (6H, m, Ar-CH), 4,63(2H, d, J = 6,0 Hz, CH2NH), 4,32 (2H, t, J = 6,6 Hz,NCH2CH2N), 3,85 (2H, s, CH2OCH3), 3,65 (2H, m, CH2N), 3,50(2H, m, CH2N), 2,81 (2H, t, J = 6,6 Hz, NCH2CH2N), 2,51 (4H,m, CH2NCH2), 2,04 (3H, s, OCH3).

MS (ESI + ) m/z 557 e 559 (M + 1).

Exemplo 15.10: Preparação do éster 2-(3,4-diclorobenzilcarbamoil)-10-[2- (4-metanossulfonilpiperazin-1-il)-etil]-4-oxo-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]pirimidin-3-ílico do ácido metanossulfônico

<formula>formula see original document page 147</formula>

3,4-diclorobenzilamida do ácido 3-hidróxi-4-oxo-10-(2-piperazin-l-iletil)-4,10-diidrobenzo[4,5]imidazo[1,2-a]pirimidino-2-carboxíIico (Exemplo 15.5) (75 mg, 0,146mmol) e trietilamina (60 pL, 0,31 mmol) foram dissolvidosem dicloròmetáno (ImL) e a isso foi adicionado cloreto demesila (18 µx,, 0,31 mmol). A reação foi agitada emtemperatura ambiente por 15 minutos, depois do que ossolventes foram concentrados in vácuo e o resíduo foipurificado por cromatografia em coluna (95:4.5:0,5 dediclorometano:metanol:amõnia aquosa) para fornecer oproduto desejado (65 mg, 7 6%).

RMN 1H (300MHz, D6 DMSO) : d 8,48 (1H, t, J = 6,6 Hz,NHCH2), 7,82 (1H, d, J = 8,1 Hz, Ar-CH) , 7,62 (4H, m, Ar-CH), 7,35 (2H, m, Ar-CH), 4,57 (2H, m, CH2N), 4,49 (2H, t,J = 6,0 Hz, NCH2CH2N), 4,16 (2H, d, J = 6, 6 Hz, NHCH2), 2,88(4H, m, CH2NCH2), 2,78 (2H, m, NCH2CH2N), 2,55 (2H, m,CH2N), 2,06 (6H, s, 2 x S-CH3).MS (ESI + ) m/z 671 e 673 (M + 1) .

Exemplo 16: Preparação dos ésteres metilicos do ácido6-hidróxi-5-oxo-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidino-7-carboxilico

Exemplo 16.1: Preparação do éster metilico do ácido 6-(2,2-dimetilpropionilóxi)-5-oxo-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidino-7-carboxilico<formula>formula see original document page 149</formula>

Passo 1:

0 procedimento descrito no Exemplo 5 foi aplicado a 2-aminotiazol para produzir o éster desejado.

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,86 (s, 3H) , 7,55 (d, J =4,7 Hz, IH)) 7,96 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 10,21 (s, 1H)

Passo 2:

O éster acima (620 mg, 2,7 mmol) e trietilamina (2,21g, 21 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (30 mL) . À10 solução acima foi adicionado cloreto de pivaloíla (362 mg,3,0 mmol) gota a gota em temperatura ambiente. Depois dotérmino da adição, a mistura foi agitada por 1 h, a seguirconcentrada in vácuo. O resíduo foi purificado porcromatografia em coluna usando (hexano/acetato e etila 1:1)15 para produzir o produto desejado (610 mg, 83%).

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 1,30 (s, 9H) , 3,84 (s,3H), 7,73 (d, J = 5,0 Hz, 1H) , 8,08 (d, J = 4,8 Hz, 1H).

MS (ESI+) m/z 333 (M+ Na+) .

Ester metilico do ácido 6-hidróxi-2-metil-5-oxo-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidino-7-carboxílico<formula>formula see original document page 150</formula>

O procedimento descrito no Exemplo 5 foi aplicado ao2-amino-5-metiltiazol para produzir o éster desejado.

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 2,41 (d, J = 1,4 Hz, 3H),3,85 (s, 3H), 7,81 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 10,21 (s, 1H).MS (ESI+) m/z 263 (M+ Na+) .

Exemplo 16.3: Preparação do éster metilico do ácido 6-hidróxi-3-metil-5-oxo-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidino-7-carboxilico

<formula>formula see original document page 150</formula>

Trad. para "reflux = refluxoTrad. para "procedure adapted from..." = procedimentoadaptado de...Trad. para "Example" = ExemploTrad. para "step" = passoAmino-4-metiltiazol foi convertido no N-acetato portratamento 'com anidrido acético a 90°C com 80% derendimento. Este foi oxidado com mCPBA com 45% derendimento, então foi hidrolisado para produzir o N-óxidode 2-amino-4-metiltiazol, o qual foi submetido às condiçõesdescritas em J. Heterocyclic Chem., 1979, 16 para produziro éster bruto. Este foi acilado usando o procedimentodescrito no Exemplo 16.1 (passo 2) para produzir o produtodesejado.

RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 1,41 (s, 9H), 2,82 (s, 3H),3,93 (s, 3H), 6,55 (s, 1H)

Exemplo 16.4: Preparação do éster metílico do ácido 6-hidróxi-2-isopropil-5-oxo-5H-tiazolo[3,2-ά]pirimidino-7-carboxilico

<formula>formula see original document page 151</formula>

0 procedimento descrito no Exemplo 5 foi aplicado em2-amino-5-isopropiltiazol para produzir o éster desejado.

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 1,29 (d, J = 7,0 Hz, 6H) ,3,12 - 3,23 (m, 1H) , 3,85 (s, 3H) , 7,75 (d, J = 1,2 Hz,1H) , 10,23 (s, 1H) .

MS (ESI-) m/z 267 (Μ - 1)Exemplo 17: Preparação das benzilamidas do ácido 6-hidróxi-5-oxò"-5H-tiazolo [3,2-a]pirimidino-7-carboxilicosubstituído

Exemplo 17.1: Preparação da 4-fluorbenzilamida doácido 6-hidróxi-5-oxo-5H-tiazolo [3,2-a]pirimidino-7-carboxilico

<formula>formula see original document page 152</formula>

Partindo do produto do Exemplo 16.1 e adaptando oprocedimento ao do Exemplo 6, 4-fluorbenzilamida do ácido6-hidróxi-5-oxo-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidino-7-carboxílicofoi obtido.

RMN 1H (300 MHζ, D6-DMS0) : δ 12,35 (1H, s, 0H), 9,74(1H, t, J = 6,3 Hz, CH2NH), 7,97 (1H, d, J = 5,1 Hz, Ar-CH), 7,52 (1H, d, J = 5,1 Hz, Ar-CH) , 7,38 (2H, dd, J =7,8, 8,0 Hz, Ar-CH), 7,58 (2H, dd, J = 7,8, 8,0 Hz, Ar-CH),4,45 (2H, d, J = 6,3 Hz, CH2NH).

MS (ESI") m/z 318 (Μ - H) .

Exemplo 17.2: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 6-hidróxi-5-oxo-5H-tiazolo [3,2-ct]pirimidino-7-carboxílicoPartindo do produto do Exemplo 16.1 e adaptando oprocedimérito ''do' Εχβπψ^ΐ.ο 6, 3,4-diclorobenzilamida do ácido6-hidróxi-5-oxo-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidino-7-carboxilico

<formula>formula see original document page 153</formula>

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) : δ 12,22 (1H, s, OH),9,79 (1H, t, J = 5,7 Hz, CH2NH), 7,97 (1H, d, J = 5,4 Hz,Ar-CH), 7,60 (1H, d, J = 8,1 Hz, Ar-CH) , 7,60 (1H, s, Ar-CH), 7,52 (1H, d, J = 5,4 Hz, Ar-CH), 7,34 (1H, d, J = 8,1Hz, Ar-CH), 4,47 (2H, d, J = 5,7 Hz, CH2NH).

MS (ESI" m/z 368 (M[C135]-1).

HPLCmétodo 7 99, 1%/15, 4 min.

Exemplo 17.3: Preparação de 4-fluorbenzilamida doácido 6-hidróxi-2-metil-5-oxo-5H-tiazolo[3,2-a]pxrimidino-7-carboxílico

<formula>formula see original document page 153</formula>

Partindo do produto do Exemplo 16.2 e adaptando oprocedimento do Exemplo 6, 4-fluorbenzilamida do ácido 6-hidróxi-2-metil-5-oxo-5H-tiazolo[3,2-α]pirimidino-7-carboxílico foi obtida.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) δ 2,38 (3H, s, -CHC(S)CH3),4,42 (2H, d, J = 5,7 Hz, -NH-CH2-), 7,13 (2H, m, ArH), 7,37(2H, m, ArH), 7,79 (1H, s, -CHC(S)CH3), 9,72 (1H, t, J =6,3 Hz, -NHCH2-).

MS (ESI" m/z 332 (M[C135]-1).

HPLCmétodo 7 98, 4%/10, 6 min.

Exemplo 17.4: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 6-hidróxi-2-metil-5-oxo-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidino-7-carboxilico

<formula>formula see original document page 154</formula>

Partindo do produto do Exemplo 16.2 e adaptando oprocedimento do Exemplo 6, 3,4-diclorobenzilamida do ácido6-hidróxi-2-metil-5-oxo-5H-tiazolo[3,2-α]pirimidino-7-carboxilico foi obtido.

RMN 1H (300 MHζ, D6-DMSO) : δ 12,21 (1H, s, OH), 9,76(1H, t, J = 6,3 Hz, CH2NH), 7,81 (1H, s, Ar-CH), 7,59 (2H,d, J = 7,8 Hz, Ar-CH), 7,33 (1H, d, J = 7,8 Hz, Ar-CH),4,46 (2H, d, J = 6,3 Hz, CH2NH), 2,40 (3H, s, CH3).MS (ESI") m/z 382 (M [Cl35]-1) .HPLCmétòdo 7 99, 1%/14 , 6 min

Exemplo 17.5: 3,4-diclorobenzilamida do ácido 6-hidróxi-3-metil-5-òxo-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidino-7-carboxilico

<formula>formula see original document page 155</formula>

Partindo do produto do Exemplo 16.3 e adaptando oprocedimento do Exémplo 6, 3,4-diclorobenzilamida do ácido6-hidróxi-3-metil-5-oxo-5H-tíazolo[3,2-a]pirimidino-7-carboxílico foi obtida.

RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 2,80 (3H, s, -(CH)C(N)CH3),4,57 (2H, d, J = 6,6 Hz, -NH-CH2-), 6,37 (1H, s, -(CH3)C=CH-S-), 7,18 (1H, m, ArH), 7,43 (2H, m, ArH), 7,95(1H, m, -NHCH2-) .

MS (ESI") m/z 332 (M[C135] - 1).

HPLCmétodo ? 99, 6%/10, 6 min.

Exemplo 17.6: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 6-hidróxi-2-isopropil-5-oxo-5H-tiazolo[3,2-

α]pirimidino-7-carboxilico<formula>formula see original document page 156</formula>

Partindo do produto do Exemplo 16.4 e adaptando oprocedimento do Exemplo 6, 3,4-diclorobenzilamida do ácido6-hidróxi-2-isopropil-5-oxo-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidino-7-carboxílico.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) δ 1,27 (6H, d, 2 x (CH3)2CH-), 3,15 (1H, m, CH3)2CH-), 4,44 (2H, d, J = 6,6 Hz, -(O=C)NHCH2-), 7,31 (1H, dd, J = 1,8, 8,1 Hz, ArH), 7,58(2H, m, ArH), 7,74 (1H, d, J = 1,2 Hz, ArH), 9,78 (1H, t, J= 6,0 Hz, -(O=C)NHCH2-), 12,22 (1H, s, OH).

MS (ESI+) m/z 434 (M [Cl35]+Na).

HPLCmétodo 7 99, 0%/15, 2 min.

Exemplo 17.7: Preparação de acilbenzilamidas do ácido2-aminometil-6-hidróxi-5-oxo-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidino-7-carboxílico substituído - Métodos Gerais<formula>formula see original document page 157</formula>

Passo 1

<formula>formula see original document page 157</formula>

Uma solução agitada do produto do Exemplo 16.2 (660mg, 2,75 mmol) em diclorometano (50 mL) foi esfriado (banhode gelo/água). N,N-dimetilaminopiridina (500 mg, 4,13 mmol)foi adicionada gota a gota. A mistura foi aquecida até atemperaturas, ambiente e agitada por 6· h. CGF indicou que oéster inicial foi consumido e a mistura foi lavada duasvezes com ácido clorídrico aquoso (4,0 Μ) , salmoura, seca(Na2SO4) , filtrada e concentrada in vácuo para produzir ocomposto desejado como um sólido amarelo (70 mg, 90%).

RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 2,38 (s, 3H) , 2,49 (s, 3H) ,3,96 (s, 3H), 7,70 (s, 1H).

MS (ESI + ) m/z 305 (M+23)Passo 2

<formula>formula see original document page 158</formula>

O intermediário do passo 1 (6 g, 21 mmol), N-bromosuccinimida (3,02 g) e peróxido e t-butila (1,03 g) emtetracloreto de carbono (400 mL) foram combinados eaquecidos até o refluxo. Depois de 1 h, outra porção de N-bromossuccinimida (1,14 g) foi adicionada. A misturareacional foi submetida ao refluxo por mais 4 h, a seguiresfriada até a temperatura ambiente. Os sólidos foramcoletado por filtração e a seguir dissolvidos emdiclorometano e a solução foi lavada com água, seca eevaporada até a secura para produzir o produto bruto.Purificação adicional foi recristalização a partir dediclorometàno/hexano produziu o composto desejado (3,0 g,39%) como um sólido branco.

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 2,31 (s, 3H), 3,87 (s,3H), 5,02 (d, J = 0,9 Hz, 2H), 8,33 (t, J = 0,8 Hz, 1H).

MS (ESI + ) m/z 383 (M [Br79]+23), 385 (M[Br81]+23)

Passo 3: A

O produto do Passo 2 (0,33 mmol) e amina (1 mmol) emdiclorometano (6 mL) foi agitado em temperatura ambientepor 20 h. 0 precipitado resultante foi coletado porfiltração, lavado com metanol gelado e usado diretamente nopróximo passo reacional.

Passo 3: B

A uma solução agitada do produto do passo 3: A (0,83mmol) em diclorometano (20 mL) amina foi adicionada gota agota (2,49 mmol) em temperatura ambiente. A mistura foimantida em temperatura ambiente por 24 h. A mistura foidiluída com diclorometano (20 mL) e extraída com ácidoclorídrico aquoso (1,0 M, 20 mL). A fase aquosa foiajustada para pH = 10 usando hidróxido de sódio aquoso (1,0M) e a seguir extraída com diclorometano (2 χ 30 mL). Ascamadas orgânicas combinadas foram secas (Na2SO4),filtradas e concentradas in vácuo. 0 produto foi aindapurificado por ,recristalização ou por HPLC preparativo.

Passo 4: A

O procedimento descrito no Exemplo 6 foi adaptado. 0produto foi ainda purificado ou por recristalização ou porHPLC preparativo.

Passo 4: B

A uma solução agitada do produto do Passo 3: B (0,14mmol) em metanol (20 mL) foi adicionado 1,3 equivalentes debenzilamina. A mistura resultante foi submetida a refluxopor 24 h e a seguir concentrada in vácuo. 0 resíduo foidissolvido em diclorometano (20 mL) e lavado com hidróxidode sódio aquoso (1,0 M, 10 mL) e à camada orgânica foiadicionado ácido clorídrico aquoso (1,0 M, 15 mL). Oprecipitado resultante foi coletado por filtração, lavadocom água gelada seguido por hexano. O sólido foi seco invácuo para produzir o composto desejado como um sal decloridrato.

Exemplo 17.7.1: Preparação de 4-fluorbenzilamida doácido 6-hidróxi-2-morfolin-4-ilmetil-5-oxo-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidino-7-carboxilico

Usando o Passo 3: A e o Passo 4: A o composto a seguirfoi preparado:<formula>formula see original document page 161</formula>

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) δ 2,43 (4Η, bs, N-CH2-CH2-O),3,56 (4Η, bs, N-CH2-CH2-O), 4,43 (2Η, d, J = 6,3 Hz, -NH-CH2-), 7,14 (2Η, m, ArH), 7,36 (2Η, m, ArH), 7,96 (1H, s,S-C=CH-N-), 9,74 (1H, bs, O=C-NH-CH2).MS (ESI") m/z 419 (M[C135]-1)HPLCmétodo 7 96, 7%/12, 2 min

Exemplo 17.7.2: Preparação de 3,4-diclorobenzilamidado ácido 6-hidróxi-2-morfolin-4-ilmetil-5-oxo-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidino-7-carboxilico

Usando o Passo 3: Ae o Passo 4: A o seguinte compostofoi preparado:

<formula>formula see original document page 161</formula>

(300 MHz, D6-DMS0) δ 2,49 (4H, s, N-CH2-CH2-O), 3,61(4H, s, N-CH2-CH2-O), 4,49 (2H, d, J = 6,3 Hz, -NH-CH2-),7,36 (1H, dd, J = 8,4, 2,1 Hz, ArH), 7,62 (2H, m, ArH),8/03 (IHf--S, S-G=CH-N-), 9,82 (1Η, btr O=C-NH-CH2), 12,25(1H, s, OH).

MS (ESI-) m/z 467 (M[C135]-1).

HPLCmét0do 7 99, 1%/13, 9 min.

Exemplo 17.7.3: Preparação de 3,4-dicloobenzilamida doácido 6-hidróxi-5-oxo-2-piperidin-l-ilmetil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidino-7-carboxilico

Usando o Passo 3: A e o Passo 4: A o composto a seguirfoi preparado:

<formula>formula see original document page 162</formula>

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0) : δ 11,84 (1H, s, OH), 8,03(1H, m, NHCH2), 7,77 (1H, s, Ar-CH) , 7,45 (2H, m, Ar-CH) ,7,18 (IH1 d, J = 8,7 Hz, Ar-CH), 4,58 (2H, d, J = 6,3 Hz,NHCH2), 3,56 (2H, s, NCH2 [C] ) , 2,45 (4H, m, CH2NCH2), 1,59-1,45 (6H, m, NCH2CH2CH2CH2).

MS (ESI-) m/z 465 (M[C135] - 1).

HPLCmétodo 7 97, 7%/10, 3 min.

Exemplo 17.7.4: Preparação de cloreto de dibutil-[7-(3,4-diçlorobenzilcarbamoil)-6-hidróxi-5-oxo-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-2-ilmetil]-amônioUsando o Passo 3: B e o Passo 4: B o composto a seguirfoi preparado:

<formula>formula see original document page 163</formula>

RMN 1H: (300 MHz, D6-DMS0): δ 12,25 (1H, s, OH), 10,79(1H, bs, N+HCl), 9,80 (1H, t, J = 6,0 Hz, NHCH2), 8,30 (1H,s, Ar-CH), 7,57 (1H, d, J = 6,6 Hz, Ar-CH) , 4,56 (2H, bs,NCH2[C]), 4,45 (2H, d, J = 6,0 Hz, CH2NH), 3,01 (4H, m, 2 xNCH2CH2), 1,66 (4H, m, 2 χ NCH2CH2CH2), 1,31 (4H, m, 2 χNCH2CH2CH2CH3), 0,89 (6H, t, J = 7,2 Hz, 2 χ NCH2CH2CH2CH3).

MS (ESI~) m/z 509 (M[Cl35]-1).

HPLCmétodo 7 98 , 5%/ll, 5 min.

Exemplo 17.7.5: Preparação de 3,4-dicloroenzamida doácido 6-hidróxi-5-oxo-2-piperazin-l-ilmetil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidino-7-carboxílico

Usando o Passo 3: A e o Passo 4: A o composto a seguirfoi preparado:<formula>formula see original document page 164</formula>

RMN 1H: (300 MHζ, D6-DMSO) : δ 10,94 (1Η, s, OH), 7,85(IH, S, Ar-CH), 7,59 (1Η, d, J = 8,4 Hz, Ar-CH), 7,55 (1Η,s, Ar-CH), 7,30 (1Η, d, J = 8,4 Hz, Ar-CH), 4,47 (2Η, d, J=6,0 Hz, CH2NH), 4,32 (2Η, s, NCH2[C]), 2,89 (4H, m,CH2NCH2), 2,50 (4H, m, CH2NCH2).

MS (ESI") m/z 466 (M[C135]-1)

HPLCmétodo 7 96, 3%/9, 97 min

Exemplo 17.7.6: Preparação de 3,4-diclorobenzilamidado ácido 6-hidróxi-2-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-5-oxo-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidino-7-carboxílico

Usando o Passo 3: A e o Passo 4: A, o composto aseguir foi preparado:

<formula>formula see original document page 164</formula>

RMN 1H (300 MHζ, DMSO) δ 2,17 (3H, -N-CH3), 2,33 (4H,bs, N-CH2-CH2-O), 2,46 (4H, bs, N-CH2-CH2-O), 4,44 (2H, d, J= 6,3 Hz, -NH-CH2-), 7,30 (1Η, dd, J = 2,1, 8,1 Hz, ArH),7,57 (2Η, m, ArH), 7,94 (1Η, s, S-C=CH-N-), 9,87 (1Η, bt,O=C-NH-CH2) .

MS (ESI + ) m/z 482 (Μ [Cl35] +1) .

HPLCmétodo 7 95, 9%/10, 3 min.

Exemplo 17.7.7: Preparação de 3,4-diclorobenzilaiaidado ácido 6-hidróxi-2-(3-metilpiperazin-l-ilmetil)-5-oxo-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidino-7-carboxílico

Usando o Passo 3: Aeo Passo 4: Ao composto a seguirfoi preparado:

<formula>formula see original document page 165</formula>

RMN 1H: (300 MHz, D6-DMS0) : δ 7,82 (1H, s, Ar-CH) ,7,57 (1H, d, J = 8,1 Hz, Ar-CH), 7,54 (1H, s, Ar-CH), 7,29(1H, d, J = 8,1 Hz, Ar-CH), 4,56 (2H, d, J = 5,7 Hz,CH2NH), 3,69 (2H, s, CH2N), 3, 67 - 2, 83 (5H, m,NCHtCH3JCH2NCH2), 2,14 (1H, t, J = 6, 3 Hz, CH2N), 1,86 (1H,t, J = 6,3 Hz, CH2N), 1,02 (3 H, d, J = 6,3 Hz, CH3CH).

MS (ESI-) m/z 480 (M[C135]-1).

HPLCraétodo 7 81, 4%/10, 1 min.Exemplp 17.7.8: Preparação de cloridrato de 3,4-diclorobenzirlamida do ácido 2-dietilaminometil-6-hidróxi-5-óxò-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidino-7-carboxilico

Usando o Passo 3: B e o Passo 4: B o composto a seguirfoi preparado:

<formula>formula see original document page 166</formula>

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0): δ 12,25 (1H, s, OH), 11,09(1H, bs, NH+Et2), 9,81 (1H, t, J = 6,3 Hz, NHCH2), 8,32 (1H,s, Ar-CH), 7,59 (1H, d, J = 8,1 Hz, Ar-CH) , 7,56 (1H, s,Ar-CH), 7,32 (1H, d, J = 8,1 Hz, Ar-CH), 4,54 (2H, s,CH2NH+), 4,46 (2H, d, J = 6, 3 Hz, NHCH2) , 3,06 (4H, ra, 2 χCH2CH3), 1,26 (6H, m, 2 χ CH2CH3).

MS (ESI') m/z 453 (M[C135] -1).

HPLCmétodo 7 98 , 5%/10, 2 min

Exemplo 17.7.9: Preparação de cloridrato de 3,4-diclorobenzilamida do ácido 6-hidróxi-5-oxo-2-pirrolidin-l-ilmetil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidino-7-carboxilico<formula>formula see original document page 167</formula>

R1MN 1H: (300 MHz, D6-DMSO): δ 12,26 (1H, s, OH), 11,01(1H, bs, NH+), 9,80 (1H, t, J = 6,3 Hz, CH2NH), 8,26 (1H,s, Ar-CH), 7,58 (1H, d, J = 8,2 Hz, Ar-CH), 7,57 (1H, s,Ar-CH), 7,31 (1H, d, J = 8,1 Hz, Ar-CH), 4,57 (2H, bs,CH2NH+), 4,45 (2H, d, J= 6,3 Hz, CH2NH), 3,47 (2H, m,CH2N), 3,10 (2H, m, CH2N), 2,04 - 1, 85 (4H, m, NCH2CH2CH2).

MS (ESI") m/z 451 (M[C135]-1).HPLCmétodo 7 99, 4%/10,1 min.

Exemplo 17.7.10: Preparação de cloridrato de 3,4-diclorobenzilamida do ácido 2-dimetilaminometil-6-hidróxi-5-oxo-5H-tiazolo [3,2-a]pirimidirio-7-carboxílico

Usando o Passo 3: Be o Passo 4: B o composto a seguirfoi preparado:

<formula>formula see original document page 167</formula>

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) : δ 12,26 (1H, s, OH), 11,18(1H, bs, NH+), 9,81 (1H, t, J = 6,3 Hz, CH2NH), 8,25(1H, s, Ar-CH), 7,60 (1H, d, J = 8,1 Hz, Ar-CH), 7,58(IHr s, Ar-CH), 7,33 (1H, d, J = 8,1 Hz, Ar-CH), 4,51(2H,,bs,. CH2NH+), 4,48 (2H, d, J= 6,3 Hz, CH2NH), 2,75(6H, s, 2 χ CH3).

MS (ESI-) m/z 427 (M [Cl35]-1).

HPLCmétodo 7 98,0%/9, 9 min.

Exemplo 17.7.11: Preparação de éster terc-butilico doácido 4-[7-(3,4-diclorobenzilcarbamoil)-6-hidróxi-5-oxo-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidin-2-ilmetil]-piperazino-l-carboxilico

Usando o Passo 3: Ae o Passo 4: Ao composto a seguirfoi preparado:

<formula>formula see original document page 168</formula>

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) : δ 12,24 (1H, s, OH), 9,80(1H, m, CH2NH), 8,00 (1H, s, Ar-CH), 7,61 (1H, d, J = 8,4Hz, Ar-CH), 7,59 (1H, s, Ar-CH), 7,33 (1H, d, J = 8,4 Hz,Ar-CH), 4,46 (2H, d, J = 6,0 Hz, CH2NH), 3,71 (2H, s,CH2N), 3,33 (4H, m, CH2NCH2), 2,41 (4H, m, CH2NCH2), 1,40(9H, s, C[CH3]3).

MS (ESI-) m/z 566 (M[C135]-1).

HPLCmétodo 7 98, 3%/ll, 4 min.Exemplo 17.7.12: Preparação de 3,4-diclorobenzilamidado ácido. 6-hidróxi-2-[4-(2-metoxifenil)-piperazin-1-ilmetil]-5-oxo-5H-tiazolo[3,2-α]pirimidino-7-carboxilico

Usando o Passo 3: Ae o Passo 4: A o composto a seguirfoi preparado:

<formula>formula see original document page 169</formula>

(300 MHz, D6-DMS0) δ 2,61 (4H, bs, 2X-NCH2CH2N-CH2-) ,2,96 (4H, bs, 2x-NCH2CH2N-CH2-) , 3,60 (2H, s, -NCH2CH2N-CH2-), 3,75 (3 H, s, -OCH3), 4,45 (2H, dd, J = 6,6 Hz, -(O=C)NHCH2-), 6,90 (4H, m, ArH), 7,26 (1H, dd, J = 1,5, 9,1Hz, ArH), 7,53 (3H, m, ArH), 12,1 (1H, bs, OH).

MS (ESI-) m/z 572 (M[C135]-1).

HPLCmétodo 7 97, 0%/ll, 2 min.

Exemplo 17.7.13: Preparação de cloridrato de 3,4-diclorobenzilamida do ácido 6-hidróxi-5-oxo-2-

propilaminometil-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidino-7-carboxílico

Usando o Passo 3: Be o Passo 4: B o composto a seguirfoi preparado:<formula>formula see original document page 170</formula>

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) δ 0,91 (3Η, t, J = 1,2 Hz,CH3CH2-), 1,65 (2Η, q, J = 1,2 Hz, CH3CH2-), 2,87 (2Η, t, J= 7,2 Hz, -CH2CH2-), 4,37 (2Η, s, -CH2CH2NH2+CH2-) , 4,47 (2H,dd, J = 6,6 Hz, -(O=C)NHCH2-), 7,33 (1H, dd, J = 2,1, 8,4Hz, ArH), 7,59 (2H, m, ArH), 8,23 (1H, s, ArH), 9,36 (1H,bs, -(O=C)NHCH2-), 9,79 (1H, t, J = 6,0 Hz, ArH), 12,3 (1H,bs, OH).

MS (ESI") m/z 439 (M[C135]-1)HPLCmétodo 7 96, 0%/10, 2 min.

Exemplo 17.7.14: 3,4-diclorobenzilamida do ácido 6-hidróxi-5-oxo-2-(4-fenilpiperazin-l-ilmetil)-5H-tiazolo[3,2-a]pirimidino-7-carboxilico

Usando o Passo 3: Ae o Passo 4: A o composto a seguirfoi preparado:<formula>formula see original document page 171</formula>

RMN 1H: (300 MHz, D6-DMSO) δ 2,62 (4Η, bs, PhNCH2CH2N-), 3,14 (4Η, bs, PhNCH2CH2O-), 3,74 (2Η, s, PhNCH2CH2NCH2-),4,46 (2Η, d, J = 6,0 Hz, -(O=C)NHCH2-), 6,77 (2Η, t, J =1,5 Hz, ArH), 6,93 (2Η, d, J = 8,1 Hz, ArH), 7,20 (2H, t, J= 7,5 Hz, ArH), 7,32 (1H, dd, J = 1,8, 8,2 Hz, ArH), 7,60(2H, m, ArH), 8,0 (1H, s, ArH) 9,88 (1H, t, J = 6,6 Hz, -(O=C)NHCH2-) .

MS (ESI") m/z 542 (M[C135]-1).

HPLCmétodo 7 75, 0%/ll, 4 min.

Exemplo 17.7.15: Preparação de 3,4-diclorobenzilamidado ácido 6-hidróxi-2-(4-metanossulfonilpiperazin-l-ilmetil) -5-oxo-5H-tiazolo [3 ,2-a]pirimidi.no-7-carboxílico

Usando o Passo 3: Ae o Passo 4: A o composto a seguirfoi preparado:<formula>formula see original document page 172</formula>

RMN 1H: (300 MH ζ, D6-DMSO) δ 2,54 (4Η, bs,(SO2CH3)NCH2CH2N-), 2,88 (3Η, bs, (SO2CH3)NCH2CH2N-), 3,14(4Η, bs, (SO2CH3)NCH2CH2N-), 3,65 (2Η, s, -NCH2CH2NCH2-),4,43 (2Η, bs, -(O=C)NHCH2-), 7,25 (1Η, bs, ArH), 7,51 (2Η,bs, ArH), 7,71 (1Η, bs, AxK) .

MS (ESI") m/z 544 (M[C135]-1).

HPLCmétodo 7 92, 0%/10, 9 min.

Exemplo 18: Preparação de benzilamidas do ácido 6-hidróxi-5-oxo-l,5-diidroimidazo[1,2-a]pirimidino-7-carboxilico substituídas

Exemplo 18.1 Métodos Gerais

<formula>formula see original document page 172</formula>Exemplo 18.1.1: Rota Ά

Exemplo 18.1.1.1: Preparação do éster metilico doácido 6-hidróxi-5-oxo-l,5-diidroimidazo[1,2-a]pirimidino-7carboxilico (Passo 1)

<formula>formula see original document page 173</formula>

Monossulfato de 2-aminoimidazol (7,4 g, 56 mmol) foisuspenso em metanol anidro (20 mL) e esfriado até -78°C. Aessa mistura foi lentamente adicionada uma solução demetóxido de sódio (3,0 g, 56 mmol) em metanol anidro (20mL). Depois de completada a adição, a mistura foi aquecidaaté a temperatura ambiente e mantida em temperaturaambiente por 4 h. O sólido foi coletado por filtração elavado com metanol anidro e as lavagens foram combinadas econcentradas até a secura in vácuo para produzir 2-aminoimidazol (4,1 g, 90% de rendimento).

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 4, 95 - 5, 30 (brs, 2H),6,40 (s, 2H).

Diacetoxifumarato de dimetila (3,2 g, 12 mmol), 2-aminoimideazol (1,03 g, 12 mmol) e ácido p-toluenossulfônico (395 mg, 2,0 mmol foram misturados em umfrasco de 25 mL e imersos em um banho de óleo pré-aquecido(120°C). Depois de 6 h, a mistura reacional foi esfriadaaté a temperaturã ámbiente é acetato de etila (10 mL) emetanol (0,6 mL) foram adicionados ao resíduo e a misturafoi submetida ao ultra-som por 2 min. O precipitadoresultante foi coletado por filtração, lavado com acetatode etila gelado (1 mL) e seco com bomba para produzir oóleo bruto. A recristalização a partir de metanol produziuo éster metilico do ácido 6-hidróxi-5-oxo-l, 5-diidroimidazo[1,2-a]pirimidino-7-carboxíIico (1,03 g, 41%).

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,85 (s, 3H) , 7,56 - 7,64(m, 2H), 9,00 - 9,40 (brs, 1H), 12,30-12,70 (brs, 1H).

Exemplo 18.1.1.2: Preparação de éster metilico doácido 6-acetóxi-5-oxo-l,5-diidroimidazo[1,2-a]pirimidino-7-carboxilico (Passo 2):

<formula>formula see original document page 174</formula>

O produto do Exemplo 18.1.1.1 (300 mg, 1,43 mmol) eN, N-dimetilaminopiridina (262 mg, 2,15 mmol) foramdissolvidos em diclorometano (20 mL) e a seguir esfriadosaté 5°C. A essa mistura agitada foi adicionada gota a gotauma solução de cloreto de acetila (112 mg, 1,43 mmol) emdiclorometano (5 mL). Depois de ser mantida nestatemperatura por 30 min. a mistura foi a'quecida até atemperatura ambiente e agitada por mais 12 h.

0 solvente foi removido sob pressão reduzida e oresíduo resultante foi submetido à cromatografia em colunade sílica gel usando diclorometano/metanol (20:1) comoeluente. 0 éster metílico do ácido 6-acetóxi-5-oxo-l,5-diidroimidazo[1,2-a]pirimidino-7-carboxílico (195 mg,54,2%) foi obtido como um sólido amarelo.

RMN 1H: (300 MHζ, DMSO-d6) δ 2,26 (s, 3H) , 3,84 (s,3H) , 7,72 (d, J = 2, 6Hz, 1H) , 7,75 (d, J = 2,6Hz, 1H) ,13,20-13,26 (brs, 1H).

Exemplo 18.1.1.3: Preparação do éster metilico doácido 6-acetóxi-l-(2-morfolin-4-iletil)-5-oxo-l,5-diidroimidazo[l,2-a]pirimidino-7-carboxilico (Passo 3)

<formula>formula see original document page 175</formula>

O produto do Exemplo 18.1.1.2 (30 mg, 0,12 mmol) e 18-coroa-6 (3 mg, 10% p/p) foram misturados com acetonitrila(5 mL) em temperatura ambiente. A essa solução agitada foiadicionado carbonato e potássio anidro (83 mg, 0,60 mmol) ecloridrato de 4-(-2-cloroetil)morfolina (25 mg, 0,132 mmol).

A mistura fòi aquecida sob refluxo por 2 h e a seguiresfriada até a temperatura ambiente. A reação foiconcentrada até quase a secura in vácuo e acetato e etila(15 mL) foi adicionado e a mistura foi lavada com água (2 χ10 mL). A camada orgânica foi separada, seca e concentradain vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia emcoluna usando diclorometano/metanol (20:1) como eluente. Oéster metilico do ácido 6-acetóxi-l-(2-morfolin-4-iletil)-5-oxo-l,5-diidroimidazo[1,2-a]pirimidino-7-carboxíIico (15mg, 34%) foi obtido como um sólido branco.

Exemplo 18.1.1.4: Preparação do éster metilico doácido 6-acetóxi-l-alil-5-oxo-l,5-diidroimidazo[1,2-a]pirimidino-7-carboxílico

<formula>formula see original document page 176</formula>

O procedimento descrito no Exemplo 18.1.1.3 foiadaptado, exceto por hidreto de sódio (1,1 eq) seradicionado à mistura reacional em temperatura ambiente 30min antes da adição de brometo de alila (1,1 eq) eaquecendo a mistura reacional até 70°C.

RMN 1H (500 MH ζ, CDCl3): δ 7,65 (1H, d, J = 2,7 Hz,Ar-Ch), 7,10 (1H, d, J = 2,7 Hz, Ar-CH), 5,98 (1H, ddt, j =17,1, 10,5, 5,7 Hz, CH2CH=CH2), 5,39 (2H, m, CH2CH-CH2),4,78 (2H, dt, J = 5,7, 1,8 Hz, CH2CH=CH2), 3,95 (3H, s,OCH3), 2,37 (3H, s, C[=0]CH3).

Exemplo 18.1.2: Rota B

Exemplo 18.1.2.1: Preparação de 1-(2-piperidin-l-il-etil)-lH-imidazol-2-ilamina (Passo 1)

<formula>formula see original document page 177</formula>

Monossulfato de 2-aminoimidazol (500 mg, 1,89 mmol) ecarbonato de potássio (580 mg, 4,16 mmol) foram suspensosem DMF (2 mL) e monocloridrato de cloroetilpiperidina (766mg, 4,16 mmol) foi adicionado. A reação foi aquecida a100°C por 2,5 horas antes de ser esfriada até a temperaturaambiente e filtrada. 0 filtrado foi concentrado epurificado por cromatografia em coluna (95:4,5:0,5 dediclorometano:metanol:amônia aquosa) e o produto foiisolado como um óleo marrom (83 mg, 11%).RMN 1H (300 MHzf D6-DMSO): δ 6,59 (ÍH, s, Ar-CH), 6,45(1Η, s, Ar-CH) , 5,41 (2H, bs, NH2), 3,80 (2H, t, J = 5,0Hz, NCH2CH2N), 2,59 (2H, t, J = 5,0 Hz, NCH2CH2N), 2,46 (4H,m, CH2NCH2), 1,57 (4H, m, NCH2CH2CH2CH2), 1,45 (2H, m,NCH2CH2CH2CH2) .

Exemplo 18.1.2.2: Preparação do éster metilico doácido 6-acetóxi-5-oxo-l-(2-piperidin-l-iletil)-1,5-diidroimidazo[1,2-a]pirimidino-7-carboxilico (Passo 2)

<formula>formula see original document page 178</formula>

O procedimento descrito no Exemplo 4 foi adaptado paraproduzir éster metilico do ácido 6-acetóxi-5-oxo-l-(2-piperidin-l-iletil)-1,5-diidroimidazo[1,2-a]pirimidino-7-carboxilico.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0) : δ 7,60 (1H, d, J = 2,4 Hz,Ar-CH), 7,42 (1H, d, J = 2,4 Hz, Ar-CH), 4,33 (2H, m,CH2N), 3,95 (3H, s, OCH3), 2,76 (2H, m, CH2N), 2,54 (4H, m,CH2NCH2), 2,37 (3H, s, O=CCH3), 1, 63 - 1,43 (6H, m,NCH2CH2CH2CH2) .

MS (ESI+) m/z 363 (M + 1) .Exemplo 18.2: Preparação de 4-fluorbenzilamida doácido 6-hidroxi-1-metil-5-oxo-l, 5-diidroimidazo [1,2-a]pirimidinò-7-càrboxilico

<formula>formula see original document page 179</formula>

Partindo de iodometano e adaptando o procedimentodescrito no Exemplo 18.1.2 produziu-se éster metilico doácido 6-hidróxi-l-metil-5-oxo-l,5-diidroimidazo[1,2—a]pirimidino-7-carboxilico. Pela adaptação do procedimentodescrito no Exemplo 6 produziu-se 4-fluorbenzilamida doácido 6-hidróxi-l-metil-5-oxo-l,5-diidroimidazo[1,2-a]pirimidino-7-carboxílico.

Exemplo 18.3: Preparação de 3,4-

diclorobenzilamida do ácido 6-hidróxi-l-metil-5-oxo-l,5-diidroimidazo[1,2-a]pirimidino-7-carboxilico

<formula>formula see original document page 179</formula>

O procedimento descrito no Exemplo 18.2 foi adaptadopara produzir 3,4-diclorobenzilamida do ácido 6-hidróxi-1-metil-5-oxo-l,5-diidroimidazo[1,2-α]pirimidino-7-carboxilíco.

(300 MHz, DMSO) δ 3,67 (3H, s, N-CH3), 4,50 (2H, d, J= 6,3 Hz, -NH-CH2-), 7,32 (1H, dd, J = 2,1, 8,1 Hz, -(CH3)N-CH-CH-N-), 7,58 (4H, m, ArH), 9,56 (1H, t, J = 6,3Hz, -NHCH2-).

MS (ESI-) m/z 365 (M[C135]-1)

Exemplo 18.4: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 6-hidróxi-l-(2-morfolin-4-iletil)-5-oxo-l,5-diidroimidazo[1,2-α]pirimidino-7-carboxilico

<formula>formula see original document page 180</formula>

Usando o produto do Exemplo 18.1.1.3 e pela adaptaçãodo procedimento descrito no Exemplo 6, 6-hidróxi-l-(2-morfolin-4-iletil)-5-oxo-l,5-diidroimidazo[1,2-α] pirimidino-7-carboxíIico foi preparado.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0): δ 9,57 (1H, t, J = 6,6 Hz,NHCh2), 7,67 (1H, d, J = 2,7 Hz, Ar-CH) , 7,60 (3H, m, Ar-CH), 7,33 (1H, d, J = 8,4 Hz, Ar-CH), 4,53 (2H, d, J = 6,6Hz, NHCH2), 7,26 (2H, t, J = 5,4 Hz, NCH2CH2N), 3,43 (4H, t,J = 4,8 Hz, CH2OCH2), 2,68 (2Η, t, J = 5,4 Hz, NCH2CH2N),2,45 (4Η, m, CH2NCH2).

MS (ESI-) m/z 464 (Μ [Cl35]-1) .

Exemplo 18.5: Preparação de 3,4-diclorobenzilaiaida doácido 6-hidróxi-5-oxo-l-(2-piperidin-l-xletil)-1,5-diidroimidazo[1,2-a]pirimidino-7-carboxilico

<formula>formula see original document page 181</formula>

O procedimento do Exemplo 6 foi adaptado ao produto doExemplo 18.1.2.2 para produzir 3,4-diclorobenzilamida doácido 6-hidróxi-5-oxo-l-(2-piperidin-l-iletil)-1, 5-diidroimidazo[1,2-a]pirimidino-7-carboxilico

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0) : δ 11,43 (1H, s, OH), 9,55(1H, bs, NH), 7, 64-7, 59 (4H, m, Ar-CH) , 7,32 (1H, d, J =8,1 Hz, Ar-CH), 4,51 (2H, d, J = 6,6 Hz, CH2NH), 4,23 (2H,t, J = 6,3 Hz, NCH2CH2N), 2,62 (2H, t, J = 6,3 Hz,NCH2CH2NH), 2,41-2,38 (4H, m, CH2NCH2), 1,23 (6H, m,NCH2CH2CH2CH2) .

MS (ESI+) m/z 464 (M[C135]+1).Exemplo 18.6: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido > l-alil-6-hidróxi-5-oxo-l,5-diidroimidazo[1,2-a]pirimidino-7-carboxilico

<formula>formula see original document page 182</formula>

O produto descrito no Exemplo 6 foi aplicado aoproduto do Exemplo 18.1.1.4 para produzir o produtodesejado.

RMN 1H (500 MHζ, D6-DMSO) : δ 9,57 (1H, m, NHCH2),7, 66-7, 57 (4H, m, Ar-CH) , 7,33 (1H, d, J = 7,8 Hz, Ar-CH),6, 10-5, 97 (1H, m, CH2C=CH2), 5,27 (1H, m, CH2C=CH2), 5,23(1H, m, CH2C-CH2), 4,77 (2H, d, J = 5,4 Hz, CH2C=CH2), 4,51(2H, d, J = 6, 6 Hz, NHCH2) .

MS (ESI + ) m/z 393 (M [Cl35]+1) .

Exemplo 19: Preparação de benzilamidas do ácido 2-hidróxi-l-oxo-lH-9-oxa-4,9a-diazafluoreno-3-carboxilico

Exemplo 19.1: Preparação de éster metilico do ácido 2-hidróxi-l-oxo-lH-9-oxa-4,9a-diazafluoreno-3-carboxilico<formula>formula see original document page 183</formula>

Para o Passo Ieo Passo 2, o procedimento descrito emJ. Heterocyclic Chem., 1989, 26, 1293 foi adaptado paraproduzir 3-aminobenzisoxazol. O procedimento descrito noExemplo 5 foi adaptado para produzir o éster desejado.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0) δ 3,90 (s, 3H) , 7,52-7,62(m, 1H), 7, 80-7, 90 (m, 2H) , 8,12 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 10,92(s, 1H) .

MS (ESI+) m/z 283 (M + Na) .

Exemplo 19.2: Éster metilico do ácido 2-hidróxi-5-morfolin-4-il-l-oxo-lH-9-oxa-4,9a-diazafluoreno-3-carboxilico

<formula>formula see original document page 183</formula>

Pela adaptação do procedimento descrito no Exemplo19.1 e usando 2-flúor-6-morfolin-4-ilbenzonitrila comomaterial de partida o éster desejado foi preparado.RMN 1H (300 MHz,. D6-DMS0) δ 3,24-3,45 (4Η), 3,85 (t, J= 4,6 Hz, 4H), 3,9,0, (s,3Η) , 6,89 (d, J = 8,3 Hz, 1Η) , 7,25(d, J = 8,1 Hz, 1H) , 7, 68 (t, J = 8,4 Hz, 1H) , 10,78 (s,1H).

Exemplo 19.3: Preparação do éster metálico do ácido 2-benzilóxi-l-oxo-lH-9-oxa-4,9a-diazafluoreno-3-carboxilico

<formula>formula see original document page 184</formula>

Uma solução do produto do Exemplo 19.1 (50 mg, 0,19mmol) e álcool benzilico (46 mg, 0,42 mmol) emtetraidrofurano (10 mL) foi esfriada (banho de gelo/água).A essa solução foi adicionado trifenilfosf ino (111 mg.,0,423 mmol) e azodicarboxilato de diisopropila (85 mg, 0,42mmol). A mistura foi aquecida até a temperatura ambiente e,depois de 2 h, os voláteis foram concentrados in vácuo. 0resíduo foi purificado por cromatografia em coluna(hexano:acetato de etila 1:1) para produzir o compostodesejado (53 mg, 79%) como um sólido branco.RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,82 (s, 3Η) , 5,23 (s,2Η) , 7, 31-7 , 52 " (m, 5Η) , 7, 57-7, 67 .(m, 1Η) ; 7, 93 (d, J = 3,2Hz, 2Η), 8,18 (d, J = 7,7 Hz, 1Η)

Exemplo 19.4: Preparação dò éster metiIico do ácido 2-benzilóxi-5-morfolin-4-il-l-oxo-lH-9-oxa-4,9a-diazafluoreno-3-carboxilico

<formula>formula see original document page 185</formula>

0 procedimento descrito no Exemplo 8.1 foi adaptado,onde a reação foi efetuada a 70°C usando DMF como osolvente, para fornecer o composto desejado.

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3, 33-3, 40 (m, 4H) , 3,77-3,86 (m, 7H) , 5,21 (s, 2H) , 6,93 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7,29-7,50 (m, 6H), 7,75 (t, J = 8,4 Hz, 1H) .

Exemplo 19.5: Preparação do ácido 2-benzilóxi-l-oxo-lH-9-oxa-4,9a-diazafluoreno-3-carboxílico<formula>formula see original document page 186</formula>

Usando o produto do Exemplo 19.3 e adaptando oprocedimento descrito no Exemplo 8.2 o composto desejadofoi obtido.

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 5,21 (s, 2H) , 7,30-7,45(m, 3H), 7,50 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 7, 56 - 7, 69 (m, 1H),7,93 (d, J = 3,6 Hz, 2H), 8,19 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 13,78-13,98 (brs, 1H).

Exemplo 19,6: Preparação do ácido 2-benzilóxi-5-morfolin-4-il-1-oxo-1H-9-oxa-4,9a-diazafluoreno-3-carboxilicoUsando, o produto do Exemplo 19.4 e adaptando oprocedimento descritfo" no Exêmplo 8.2 o composto desejadofoi obtido.

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,34-3,41 (m, 4H) , 3,78-5 3, 86 (m, 4H) , 5,20 (s, 2H), 6,93 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7,30-7,44 (m, 4H) , 7, 46 - 7, 54 (m, 2H) , 7,75 (t, J = 8,2 Hz,1H), 13,58-13,79 (brs, 1H).

MS (ESI-) m/z 420 (M-I).

Exemplo 19.7: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 2-benzilóxx-5-morfolin-4-il-l-oxo-lH-9-oxa-4,9a-diazafluoreno-3-carboxilico

<formula>formula see original document page 187</formula>

N,N'-dicicloexilcarbodiimida (110 mg, 0,522 mmol) foiadicionado a uma solução agitada do produto do Exemplo 19.6(200 mg, 0, 475 mmol) em diclorometano (100 mL) . Depois de30 min, N, N-dimetilaminopiridina (6 mg, 0,05 mmol) , 3,4-diclorobenzilamina (92 mg, 0,52 mmol) e 1-hidroxibenzotriazol (70 mg, 0,52 mmol) foram adicionadossucessivamente. A mistura foi agitada em temperaturaambiente de um dia para o outro e acumulada em água eextração produziram o produto bruto foi posteriormentepurificado por cromatografia flash (hexano/acetato de etila4:1) como eluente para produzir o produto desejado (120 mg,44%) como um sólido amarelo.

RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 3, 37-3, 45 (m, 4H), 3,85-3,95(m, 4H), 4,51 (d, J = 5,8 Hz, 2H), 5,43 (s, 2H), 6,84 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 7,06-7,16 (m, 2H), 7,28-7, 36 (m, 3H), 7,37-7,49 (m, 4H), 7,55-7,71 (m, 2H).

Exemplo 19.8: Preparação de 3,4-dicloobenzilamida doácido 2-hidróxi-5-morfolin-4-il-l-oxo-lH-9-oxa-4,9a-diazafluoreno-3-carboxilico

<formula>formula see original document page 188</formula>

Cloreto ferrico (10 mg, 0,062 mmol) foi adicionado auma solução do produto do Exemplo 19.7 (12 mg, 0,021 mmol)em diclorometano (5 mL). A mistura foi agitada emtemperatura ambiente por 1,5 h,a seguir ácido clorídricoaquoso (1,0 M) foi adicionado em gotas até a solução ficarlímpida. Os produtos foram extraído com acetato de etila ea fase orgânica foi seca e concentrada in vácuo. 0 resíduofoi recristalizãdo a p.artir de um solvente misturado(hexano/acetato de etila 10/1) para produzir o compostodesejado (8 mg, 80%) como um sólido cinza.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) : δ 12,28 (1H, s, OH), 8,62(1H, m, NHCH2), 7,28 (3H, m, Ar-CH) , 7,40 (1H, d, J = 8,7Hz, Ar-CH), 7,30 (1H, d, J = 8,4 Hz, Ar-CH), 6,95 (1H, d, J= 8,1 Hz, Ar-CH), 4,62 (2H, d, J = 6, 6 Hz, NHCH2), 3,77(4H, m, CH2OCH2), 2,49 (4H, m, CH2NCH2).

MS (ESI") m/z 487 (M[C135]-1).

Exemplo 19.9: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 2-hidróxi-l-oxo-lH-9-oxa-4,9a-diazafluoreno-3-carboxilico

<formula>formula see original document page 189</formula>

Usando o produto do Exemplo 19.5 e adaptando osprocedimentos descritoOs no Exemplo 19.7 e no Exemplo 19.8produziu-se o composto desejado.

RMN 1H (300 MHζ, D6-DMS0) δ 4,55 (2H, d, J = 6,0 Hz, -NH-CH2-), 7,37 (1H, dd, J = 8,4, 2,1Hz, ArH), 7,61 (3H, m,ArH), 7,87 (2H, m, ArH), 8,07 (1H, d, J = 7,5 Hz, ArH),9,77 (1H, t, J = 6,0 Hz, O=C-NH-CH2), 12,79 (1H, s, OH).MS (ESI+) m/z 404 (M[C135]+1). HPLCmetodo 7 ·96> 2% /19,0 min

Exemplo 19.10: Preparação de 4-fluorbenzilamida doácido 2-hidróxi-1-oxo-1H-9-oxa-4,9a-diazafluoreno-3-carboxilico

<formula>formula see original document page 190</formula>

Usando o produto do Exemplo 19.5 e adaptando osprocedimento descritos no Exemplo 19.7 e no Exemplo 19.8produziu-se o composto desejado.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0) δ 4,54 (2H, d, J = 6, 9 Hz, -NH-CH2-), 7,17 (2H, t, J = 9,0 ,2,4 Hz, ArH), 7,42 (2H, m,ArH), 7,60 (1H, m, ArH), 7,87 (1H, m, ArH), 8,06 (1H, d, J= 8,1 Hz, ArH), 9,72 (1H, t, J = 6,6 Hz O=C-NH-Ch2), 12,93(1H, s, OH).

MS (ESI") m/z 352 (M-I)

HPLCmétodo 7 93,1%/12, 5 min.

Exemplo 19.11: Preparação de 4-fluorbenzilamida doácido 2-hidróxi-5-morfolin-4-il-l-oxo-lH-9-oxa-4,9a-diazafluoreno-3-carboxílico<formula>formula see original document page 191</formula>

Usando o produto do Exemplo 19.6 e adaptando osprocedimentos descritos no Exemplo 19.7 e no Exemplo 19.8produziu-se o composto desejado.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) δ 3,29 (4H, s, N-CH2-CH2-O),3,71 (4H, s, N-CH2-CH2-O), 4,60 (2H, dd, J = 6, 0 Hz, -NH-CH2-), 6,94 (1H, dd, J = 7,8 Hz, ArH), 7,21 (2H, t, J = 8,2Hz, ArH), 7,29 (1H, dd, J = 8,4Hz, ArH), 7,45 (2H, m, ArH),7,70 (1H, dd, J = 8,4 Hz, ArH), 8,43 (1H, t, O=C-NH-CH2), 12,42 (1H, s, OH).

MS (ESI") m/z 437 (M[C135]-1)

HPLCmétodo 7 91, 0%/15, 7 min

Exemplo 20: Preparação de benzilamidas do ácido 3-hidróxi-4-oxo-4H-9-tia-l,4a-diazafluoreno-2-carboxilico substituído

Pela adaptação dos procedimento descritos no Exemplo 4e no Exemplo 6, os compostos a seguir foram preparados:

Exemplo 20.1: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 3-hidróxi-4-oxo-4H-9-tia-l,4a-diazafluoreno-2- carboxilico<formula>formula see original document page 192</formula>

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) : δ 12,35 (1Η, s, OH), 9,82(1Η, t, J = 6,9 Hz, NHCH2), 8,90 (IHf m, Ar-CH), 8,01 (IHrm, Ar-CH), 7, 63-7, 56 (4Η, m, Ar-CH), 7,35 (1Η, d, J = 7,8Hz, Ar-CH), 4,48 (2Η, d, J = 6,9 Hz, CH2NH).

MS (ESI-) m/z 418 (M[C135]-1)

HPLQnétodo 7 91 % /18 , 8 min.

Exemplo 20.2: Preparação de 3,4-dicloobenzilamida doácido 3-hidróxi-7-metóxi-4-oxo-4H-9-tia-l,4α-diazafluoreno-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 192</formula>RMN 1H (300 ^Hz, D|6-DMSO) : δ 12,30 (IHf s, OH), 9,75(1Η, t, J '·6, 9 Hz, NHCH2), 8,77 (1H, d, J = 9,3 Hz, Ar-CH), 7, 63-7, 59 (3H, m, Ar-C), 7,33 (1H, d, J ='8,4 Hz, Ar-C) , 7,13 (1H, d, J = 9,3 Hz, Ar-CH) , 4,46 (2H, d, J = 6, 9Hz, CH2NH), 3,83 (3H, s, CH3).

HPLCMétodo 7 95, 3%/19, 1 min.

Exemplo 21: Preparação do ácido 3-hidróxi-4-oxo-4,6-diidropirimido[1,2-b]indazol-2-carboxxlico substituído

Exemplo 21.1: Preparação do éster metílico do ácido 3-hidróxi-4-oxo-4,6-diidropirimido[1,2-6]indazol-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 193</formula>

Passo 1:

2-fluorbenzonitrila (605 mg, 5 mmol) e hidrato dehidrazina aquosa 85% (352 mg, 6 mmol) foram misturados com1-butanol (3 mL) . A mistura foi aquecida sob refluxo comagitação por 5 h, a seguir esfriada até a temperaturaambiente. O precipitado resultante foi coletado porfiltração e lavado com diclorometano e a massa filtrada foiseca a vácuo para produzir o 3-aminobenzipirazol (293 mg,44%) .193

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) : δ 5,26-5, 36 (brs, 2Η),6, 84-6, 93 (m, ·ΊΗ) , 7,18-7,24 (m, 2Η) , 7,67 (dt, J = 8,1,0,9 Hz, 1Η), 11,33 (s,'1Η).

Passo 2:

O procedimento descrito no Exemplo 3 foi adaptado aoproduto do Passol para produzir o composto desejado.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) : δ 3,91 (s, 3H) , 7,33 (t, J= 7,7 Hz, 1H), 7,48 (dt, J = 8,0, 0,8 Hz, 1H) , 7,70 (t, J =7,7 Hz, 1H), 8,09 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 10,25 (s, 1H) , 13,10- 13,80 (brs, 1H).

MS (ESI-) m/z 258 (M-I) .

Exemplo 21.2: Preparação do éster metílico do ácido 3-hidróxi-10-morfolin-4-il-4-oxo-4,6-diidropirimido[1,2-6]indazol-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 194</formula>

Pela adaptação do procedimento descrito no Exemplo21.1 e usando 2-flúor-6-morfolin-4-ilbenzonitrila comomaterial de partida o éster desejado foi preparado.MS (ESI") m/z 343 (M-I)Exemplo 21.3: Preparação de 4-f luorbenzilaznida do

ácido 3-hidróxi-10-morfolin-4-il-4-oxo-4,6-diidropirimido[1,2-b]indazol-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 195</formula>

O produto do Exemplo 21.2 (172 mg, 0,5 mmol) , métodode sódio (54 mg, 1,0 mmol) e 4-fluorbenzilamina (1,87 mg,1,5 mmol) em metanol (15 mL) foram combinados e aquecidoscom agitação em refluxo de um dia para o outro. A misturafoi esfriada até a temperatura ambiente e o sólidoresultante foi coletado por filtração e dissolvido emdiclorometano (30 mL) . A solução foi lavada com ácidoclorídrico aquoso (2,0 Μ) , água, seca e concentrada invácuo para produzir o produto desejado (84 mg, 38,4).

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0): δ 13,61 (1H, s, NH), 11,97(1H, s, OH), 8,45 (1H, t, J = 6,0 Hz, NHCH2), 7,56 (1H, t,J = 6,0 Hz, Ar-CH), 7,45 (2H, dd, J = 9,0, 8,0 Hz, Ar-CH) ,7,20 (2H, dd, j = 9,0, 9,0, Hz, Ar-CH), 7,00 (1H, d, J =8,1 Hz, Ar-CH), 6,71 (1H, d, J = 7,8 Hz, Ar-CH), 4,61 (2H,d, J = 6,0 Hz, NHCH2), 3,69 (4H, m, CH2OCH2), 3,15 (4H, m,CH2NCH2) .MS (ESI") m/z 436 (M-I) .

HPLCmetodo 7 98, 9%/13, 6 min.

Exemplo 21.4: Preparação de 4-fluorbenzilamida doácido 3-hidróxi-4-oxo-4,6-diidropirimido[1,2-b]indazol-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 196</formula>

Pela adaptação do procedimento descrito no Exemplo21.3 o composto desejado foi preparado.

RMN 1H (300 MHz, DMSO) δ 4,55 (2H, d, J = 6, 6 Hz, -NH-CH2-), 7,18 (2H, m, ArH), 7,42 (4H, m, ArH), 7,70 (1H, t, J= 7,2, 7,8 Hz, ArH), 8,09 (1H, d, J = 7,8 Hz, ArH), 9,67(1H, t, J = 6,6 Hz, O=C-NH-CH2), 12,40 (1H, s, OH).

MS (ESI") m/z 351 (M-I)

HPLCm6todo 7 96, 4%/13, 9 min

Exemplo 21.5: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida do ácido 3-hidróxi-10-morfolin-4-il-4-oxo-4,6-diidropirimido[1,2-6]indazol-2-carboxilico<formula>formula see original document page 197</formula>

RMN 1H (300 MHz, DMSO) δ 3,19 (4H, s, N-CH2-CH2-O),3, 75 (4H, s, N-CH2-CH2-O), 4,63 (2H, d, J = 6,3 Hz, -NH-CH2-), 6,70 (1H, dd, J = 7,8 Hz, ArH), 7,00 (1H, dd, J = 8,4Hz, ArH), 7,41 (1H, dd, J = 6,9, 2,1 Hz, ArH), 7,56 (1H, t,J = 8,2 Hz, ArH), 7,66 (2H, m, ArH), 8,59 (1H, t, J = 5,7Hz, O=C-NH-CH2), 11,81 (1H, s, OH).

MS (ESI") m/z 486 (M[C135]-1)

HPLCmétodo 7 94, 3%/15, 8 min

Exemplo 21.6: Preparação de éster metílico do ácido 3-hidróxi-6-metil-4-oxo-4,6-diidropirimido[1,2-b]indazol-2-carboxilico<formula>formula see original document page 198</formula>

Passo 1:

3-aminobenzopirazol (266 mg, 2 mmol) e anidridoftálico (296 mg, 2 mmol) foram misturados e aquecidos a170°C por 30 min. A mistura foi esfriada até temperaturaambiente, depois do que metanol (10 mL) foi adicionado eentão a mistura foi submetida ao ultra-som por 2 min. 0sólido foi coletado por filtração e lavado com metanol paraproduzir o produto desejado (352 mg, 67%).

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0) δ 7,13-7,20 (m, 1H), 7,40-7,48 (m, 1H), 7,60-7,66 (m, 1H), 7,70 (dd, J = 8,2, 0,8 Hz,1H), 7,94-8,07 (m, 4H), 13,44 (s, 1H).

Passo 2:

Iodometano (1,41 g, 10 mmol) foi adicionado gota agota em temperatura ambiente a uma solução agitada doproduto do Passo 1 (2,63 mg, 10 mmol) e carbonato depotássio (2,76 g, 20 mmol) em DMF (50 mL). Depois de 3 h amistura reaciònal foi esfriada até a temperatura ,ambiente evertida era : água gelada (300 mL) e extraída comdiclorometano (3 χ 100 mL). As camadas orgânicas combinadasforam lavadas com salmoura, secas e evaporadas sob pressãoreduzida e o resíduo resultante foi recristalizado a partirde acetato de etila para produzir o composto desejado (2,27g, 82%) .

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) δ 4,12 (s, 3H) , 7,19 (ddd, J= 8,0, 7,0, 0,8 Hz, 1H) , 7,49 (ddd, J = 8,6, 6,9, 1,1 Hz,1H), 7,71 (dt, J = 8,0, 1,1 Hz, 1H), 7,73 (dt, J = 8,8, 0,9Hz, 1H), 7, 94-8, 06 (m, 4H) .

Passo 3:

O produto do Passo 2 (277 mg, 1 mmol) foi suspendidoem uma mistura de metanol (15 mL) e hidrato de hidrazinaaquosa (588 mg, 10 mmol). A mistura foi aquecida em refluxopor Ihea seguir esfriada em temperatura ambiente. Água(40 mL) foi adicionada e a mistura foi extraída comdiclorometano (3 c 20 mL) . As camadas orgânicas combinadasforam lavadas com salmoura, secas e concentradas in vácuo.O resíduo foi purificado por cromatografia flash(diclorometano/metanol 10:1) para produzir o compostodesejado (105 mg, 72%) .RMN 1H (300 MHz, DMSO) δ 3,71 (s, 3Η) , 5,39 (s,2Η) □6,85-6, 9-3 (m, 1Η) , 7,21-7., 33 (m, 2Η) , 7,66 (dt, J =8,0, 1,0 Hz, 1Η).

Passo 4:

O procedimento descrito no Exemplo 3 foi adaptado aoproduto do passo 3 para produzir ó composto desejado.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) δ 3,87 (s, 3H) , 3,90 (s,3H), 7,35-7,47 (m, 1H), 7,76 (d, J = 3,5 Hz, 2H), 8,04 (d,J = 8,0 Hz, 1H), 10,35 (s, 1H).

MS (ESI + ) m/z 296 (M+23) .

Exemplo 21.7: Preparação do éster metilico do ácido 3-hidróxi-6-metil-10-morfolin-4-il-4-oxo-4,6-diidro-pirimido[1,2-6]indazol-2-carboxílico

<formula>formula see original document page 200</formula>

Pelo uso de 4-morfolin-4-il-1H-indazol-3-ilamina eadaptando o procedimento descrito no Exemplo 21.6, ocomposto desejado foi preparado.RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) δ 3,30 (4Η, obscurecido pelopico da água), 3,82 (s, 3H), 3,84-3, 93 (m, 7H) , 6,79 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,1 Hz, IH), 7,61 (t, J = 8,2Hz, 1H), 10,24 (s, 1H)

MS (ESI+) m/z 381 (M+23 .

Exemplo 21.8: Preparação de 4-fluorbenzilamida doácido 3-hidróxi-6-metil-10-morfolin-4-il-4-oxo-4,6-diidropirimido [ 1, 2 -b] indazol-2 -carboxilico

<formula>formula see original document page 201</formula>

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) δ 3,15 (4H, s, N-CH2-CH2-O),3,66 (4H, s, N-CH2-CH2-O), 4,62 (2H, d, J = 6,0 Hz, -NH-CH2-), 6,70 (1H, dd, J = 7,8 Hz, ArH), 7,21 (3H, m, ArH), 7,45(2H, m, ArH), 7,62 (1H, t, J = 8,1 Hz, ArH), 8,39 (1H, t, J= 6,3 Hz, O=C-NH-CH2), 12,02 (1H, s, OH).

MS (ESI-) m/z 450 (M-1).

HPLCmétodo 7 99, 74/12,6 min.Exemplo 21.9: Preparação de 3,4-dicloobenzilamida doacido -3-hidroxi-6-metil-10-morfolin-4-il-4-oxo-4,6-diidro-pirimido [1,2-b]indazol-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 202</formula>

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0) δ 3,23 (4H, bs, -NCH2CH2O-),3,73 (4H, bs, -NCH2CH2O-), 3,82 (3H, s, -NCH3), 4,63 (2H, d,J = 6,6 Hz, -(O=C)NHCH2-), 6,84 (2H, d, J = 8,1 Hz, ArH),7,27 (2H, d, J = 8,1 Hz, ArH), 7,39 (2H, dd, J = 2,4, 8,0Hz, ArH), 7,65 (3H, m, ArH), 9,73 (1H, t, J = 6,6 Hz, -(O=C)NHCH2-), 11,87 (1H, s, OH).

MS (ESI-) m/z 524 (M [Cl35]+Na)

HPLCmétodo ί 96, 0%/14, 2 min.

Exemplo 21.10: Preparação de 4-fluorbenzilamida doácido 3-hidróxi-6-metil-4-oxo-4,6-diidropirimido[1,2-b]indazol-2-carboxílico<formula>formula see original document page 203</formula>

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0) δ 3,84 (3H, s, -NCH3), 4,55(2H, d, J = 6,0 Hz, - (O=C)NHCH2-), 7,18 (2H, m, ArH), 7,47(3 H, m, ArH), 7,76 (2H, dd, J = 1,5, 9,1 Hz, ArH), 8,06(1H, dd, J = 0,9, 8,5 Hz, ArH), 9,68 (1H, bt, -(O=C)NHCH2-) , 12,47 (1H, bs, OH) .

MS (ESI") m/z 365 (M-I)

HPLCmétodo 7 85, 0%/12, 8 min

Exemplo 21.11: Preparo de 3,4-diclorobenzilamida doácido 3-hidróxi-6-metil-4-oxo-4,6-diidropirimido[1,2-6]indazol-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 203</formula>

RMN 1H (300 MHζ, D6-DMS0) δ 3,84 (3H, s, -NCH3), 4,56(2H, d, J = 6,6 Hz, -(O=C)NHCH2-), 7,37 (2H, dd, J = 2,1,8,4 Hz, ArH), 7,47 (1Η, m, ArH), 7,62 (2Η, m, ArH), 7,77(2Η, d, J = 3,6 Hz, ArH), 8,06 (1H, d, J = 8,1 Hz, ArH),9,73 (1H, bs, - (O=C)NHCH2-) , 12,34 (1H, bs, OH).

MS (ESI-) m/z 415 (M[C135]-1), 417 (M[C137J-1)

HPLCmétodo 7 88,0%/14,4 min

Exemplo 22: Preparação de benzilamidas do ácido 3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido [1,2-a]pirimidino-2-carboxilicodissubstituido.

Exemplo 22.1: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 3-hidróxi-9-iodo-7-morfolin-4-il-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxílico

<formula>formula see original document page 204</formula>

Trad. para "step" = passoTrad. Para "example" = exemplo

Passo 1:

Periodato de sódio (1,53 g, 7,16 mmol) foi adicionadoa uma solução agitada de 5-flúor-2-aminopiridina (2,0 g,17,9 mmol) em ácido sulfúrico aquoso (2,0 M, 30 mL) e areação foi aquecida até 100°C. Uma solução de iodeto desódio (2, 68 g, 17,9 nunol) em água. (10 mL) foi adicionadagota a gota à mistura reacional. Depois do término daadição, a mistura foi submetida a refluxo por Iheaseguir esfriada até a temperatura ambiente. Solução debicarbonato de sódio aquosa saturada foi adicionada gota agota para ajustar o pH ~7,0. e a mistura foi extraída comdicloroetano (3 x) . As camadas orgânicas combinadas foramlavadas com solução de bissulfito de sódio, salmoura, secase concentradas in vácuo. O resíduo foi submetido àcromatografia em coluna (hexano/acetato de etila 4:1) paraproduzir o composto desejado (2,56 g, 60%).

RMN 1H (300MHz, CDCl3) δ 4, 70-5, 03 (brs, 2H) , 7,69(dd, J = 7,2, 2,1 Hz, 1H) , 7,93 (d, J = 2,1 Hz, 1H) .MS (ESI + ) m/z 239 (M+l)

Passo 2:

O produto do Passo 1 (400 mg, 1,68 mmol) foidissolvido em ácido sulfúrico concentrado (2 mL) e esfriadoaté -10°C. A essa solução agitada foi adicionado gota agota uma mistura de peróxido de hidrogênio aquoso 30% (2,3g, 20,2 mmo1) e ácido sulfúrico concentrado (4,2 mL). Amistura foi mantida a -IO0C por 30 min, depois do que elafoi aquecida até 8°C e agitada nesta temperatura de um diapara o outro. A mistura foi vertida em água gelada (50 mL)e extraída com diclorometano (3 x),. As camadas orgânicascombinadas foram lavadas com solução de bissulfito de sódioaquoso, salmoura, secas e concentradas in vácuo. O resíduofoi submetido à cromatografia em coluna (hexano/acetato deetila 5:1) para produzir o produto desejado (36 mg, 8,0%).

RMN 1H (300MHz, CDCl3) δ 8,13 (dd, J = 6,9, 2,3 Hz,1H), 8,35 (d, J = 2,4 Hz, 1H).

Passo 3:

Pela adaptação do procedimento descrito no Exemplo2.3, o composto desejado foi obtido.

RMN 1H (300 MHζ, CDCl3) δ 3,36 (t, J = 4,9 Hz, 4H) ,3,88 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 7,69 (d, J = 2,6 Hz, 1H) , 8,06(d, J = 2,6 Hz, 1H).

MS (ESI+) m/z 358 (M+23)

Passo 4:

O produto do Passo 3 (607 mg, 1,8 mmol) foi dissolvidoem etanol anidro (50 mL)sob atmosfera de N2. Cloreto deestanho (IV) anidro (2,75 g, 14,5 mmol) e 2-3 gotas de águaforam adicionadas sucessivamente. A mistura foi submetida arefluxo de um dia para o outro, depois do que ela foiconcentrada in vácuo. O resíduo foi misturado com água esolução de hidróxido de sódio aquosa (0,2 M) foi adicionadapara ajustar o pH ~ 11. A mistura resultante foi extraídacom diclorometano (3 x) e as camadas orgânicas combinadasforam submetidas à cromatografia em coluna (hexano/acetatode etila 1:2) para. produzir o produto desejado (489 mg, 89%).

RMN 1H (300 MHz, CDCl3) δ 2, 94-3, 03 (m, 4H), 3,77-3,87(m, 4H), 4,50-4,76 (brs, 2H), 7,56 (d, J = 2,6 Hz, 1H),7,78 (d, J = 2,6 Hz, 1H).

MS (ESI + ) m/z 306 (M+l).

Passo 5:

O procedimento descrito no Exemplo 2 foi adaptado aoproduto do Passo 4 para produzir o composto desejado.

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,14-3,22 (m, 4H), 3,70-3,81 (m, 4H), 3,89 (s, 3H), 8,00 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 8,47(d, J = 2,6 Hz, 1H), 10,31 (s, 1H).

Passo 6:

O procedimento descrito no Exemplo 6 foi adaptado aoproduto do Passo 5 para produzir o composto desejado.

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,14-3,21 (m, 4H), 3,72-3,81 (m, 4H), 4,62 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 7,39 (dd, J = 8,3,1,8 Hz, 1H), 7,61-7,67 (m, 2H), 8,01 (d, J = 2,6 Hz, 1H),8, 50 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 8,95 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 11,82(s, 1H).

MS (ESI-) m/z 573 (M[C135]-1)

HPLCmétodo 7 92, 7 %/12, 4 minExemplo 22.2: Preparação do ester metílico do ácido[2- (4-fluorbenzilcarbamoil) -3-hidróxi-7-iodo-4-oxo-4H-pirido [1, 2f-a] pirimidxn-9-il ] -carbâmico

<formula>formula see original document page 208</formula>

Passo 1:

2,3-diamino-5-iodopiridina (2,35 g, 10 mmol) empiridina (15 mL) foi esfriado em banho e gelo. À soluçãoagitada acima foi adicionado cloroformato de etila (1,08 g,10 mmol) gota a gota. A mistura foi agitada a 0°C por 15mine a seguir em temperatura ambiente por 3 h, depois do queela foi diluída com água (30 mL) e acetato de etila (30mL). A fase orgânica foi lavada com água, seca econcentrada in vácuo. O resíduo foi submetido àcromatografia em coluna (dicloroetano) para produzir ocomposto desejado (2,52 g, 82%).RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 1,24 (t, J = 7, 1 Hz, 3Η) ,4,12 (q, J = 7,1 Hz, 2Η) , 6,05 (s, 2Η) , 7,87 (d, J = 2,1Hz, 1Η), 7,92 (s, 1H) , 8,78 (s, 1H) .

MS (ESI+) m/z 308 (M+l)

Passo 2:

O procedimento descrito no Exemplo 2 foi adaptado paraproduzir o produto desejado.

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 1,28 (t, J = 7,1 Hz, 3H) ,3,90 (s, 3H), 4,23 (q, J = 7,0 Hz, 2H) , 8,19 (d, J = 1,7Hz, 1H), 8,56 (d, J = 1,8Hz, 1H), 8,70 (s, 1H) □ 10,66 (s,1H)

MS (ESI+) m/z 456 (M+23) .

Passo 3:

O procedimento descrito no Exemplo 6 foi adaptado paraproduzir o produto desejado.

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 1,30 (t, J = 7,1 Hz, 3H) ,4,26 (q, J = 7,1 Hz, 2H) , 4,62 (d, J = 6,1 Hz, 2H) , 7,20(t, J = 9,0 Hz, 2H), 7,38 (dd, J = 8,8, 5,4 Hz, 2H), 8,39(d, J = 1,7 Hz, 1H) , 8,56 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 9,99 (s,1H), 10,47 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 12,66 (s, 1H) .

MS (ESI") m/z 525 (M-1)

HPLCmétodo 7 90, 4 %Exemplo 23: Preparação de amidas e ácidos 7-benzil-3-hidróxi-4-òxo-4H-piridó [1,2-a]pirimidino-2-carboxilicostibstituidos

Exemplo 23.1: Preparação do éster metilico do ácido 3-(terc-butildimetilsilanilóxi)-7-iodo-4-oxo-4H-pirido[1,2-a] pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 210</formula>

Passo 1:

Partindo de 2-amino-5-iodopiridina e adaptando oprocedimento descrito no Exemplo 5 o éster desejado foiobtido.

RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,85 (s, 3H) , 7,37 (d, J =9,1 Hz, 1H, H9), 7,79 (dd, J = 9,3, 2,1 Hz, 1H, H8), 8,86(d, J = 2,1 Hz, 1H, H6), 8,50 (d, J = 2,6 Hz, 1H) , 10,46(s, 1H, OH).

MS (ESI + ) m/z 347 (M+l)

Passo 2:

Pela adaptação do procedimento descrito no Exemplo13.7 (Passo 1) o composto silil desejado foi obtido.RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) : δ 0,25 (s, 6Η) , 0,93 (s,9Η), 3,85(s, 3Η) , 7,44 (dd, J = 9,2 ,0,8 Hz, 1Η) , 7,94(dd, J = 9,3, 1,9 Hz, 1Η) , 8,97 (dd, J = 1,9, 0,8 Hz, 1Η).

Exemplo 23.2: Preparação do éster metilico do ácido 3-(terc-butildimetilsilanilóxi) -7- (3-cloro-2-fluorbenzil) -4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 211</formula>

O composto desejado foi preparado pela adaptação doprocedimento descrito em WO2004046115, exceto pelo uso detri-o-tolilfosfano ao invés de trifuran-2-ilfosfano.

RMN 1H (300 MHz, CDCl3): δ 0,33 (s, 6H) , 1,00 (s, 9H),3,97 (s, 3H), 4,03 (s, 2H) , 7,01-7,14 (m, 2H) , 7,29-7,43(m, 2H) , 7,61 (d, J = 9,1 Hz, 1H) , 8,75 (d, J = 1,3 Hz,1H) .

Exemplo 23.3: Preparação do ácido 7-(3-cloro-2-fluorbenζil)-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilicoHidróxido de sódio aquoso (0,5 M, 1,1 mL) foiadicionado a uma. solução agitada do produto do Exemplo 23.2(22 mg, 0, 046 mmol) em metanol (5 mL) · Δ mistura foiagitada a 50°C por 24 h. A seguir ácido clorídrico aquoso(1,0 M) foi adicionado gota a gota para ajustar o pH a 3 ~4. O metanol foi evaporado sob pressão reduzida e o sólidoresultante foi coletado por filtração e seco in vácuo paraproduzir o composto desejado como um sólido marrom (13 mg,81%) .

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO): δ 8,73 (1H, s, Ar-CH), 7,78(1H, d, J = 9,3 Hz, Ar-CH), 7,72 (1H, d, J = 9,3 Hz, Ar-CH), 7,49 (1H, dd, J = 7,5, 6,6 Hz, Ar-CH), 7,35 (1H, dd, J= 7,5, 5,7 Hz, Ar-CH), 7,20 (1H, dd, J = 7,8, 7,2 Hz, Ar-CH), 4,18 (2H, s, CH2Ar).

MS (ESI") m/z 347 (M [Cl35]-1)

HPLCmétodo 7 96, 1%/13, 2 min

Exemplo 23.4: Preparação de 4-fluorbenzilamida doácido

7-(3-cloro-2-fluorbenzil)-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxílico

<formula>formula see original document page 212</formula>Usando o produto do Exemplo 23.3, 4-fluorbenzilamina epela adaptação do procedimento descrito no Exemplo 6 ocomposto desejado foi obtido.

RMN 1H (300 MH ζ, DMSO) δ 4,13 (2H, s, Cl, F-Ph-CH2-) ,4, 48 (2H, d, J = 6,3 Hz, - (O=C)NHCH2-), 7,17 (4H, m, ArH),7,39 (3H, m, ArH), 7,50 (3H, m, ArH), 9,64 (1H, s, ArH),9,68 (1H, t, J = 6,0 Hz, -(O=C)NHCH2-), 12,21 (1H, s, OH)MS (ESI") m/z 454 (M[C135]-1)HPLCmétodo τ 94 , 0% /18,1 min

Exemplo 23.5: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 7-(3-cloro-2-fluorbenzil)-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pxrimidino-2-carboxílico

<formula>formula see original document page 213</formula>

Usando o produto do Exemplo 23.3, 3,4-diclorobenzilamina e pela adaptação do procedimentodescrito no Exemplo 6 o composto desejado foi obtido.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0) δ 4,13 (2H, s, Cl5F-pH-Ch2-) ,4,49 (2H, d, J = 6,0 Hz, (O=C)NHCH2-), 7,17 (4H, t, J = 6,9Hz, ArH), 7,32 (2H, m, ArH), 7,59 (7H, m, ArH), 8,65 (1H,s, ArH), 9,74 (1H, T, J = 6,6 Hz, -(O=C)NHCH2-), 12,081H,s, OH).MS (ESI+) m/z 506 (M[C135]+ 1)HPLCmétodo ι 99,01/18,0 min

Exemplo 24.1: Preparação de 2-[3-(4-fluorbenzil)[1,2,4]oxadiazol-5-il]-3-hidróxi-7-morfolin-4-il-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona

<formula>formula see original document page 214</formula>

Example 19.8

Trad. para "step" = passo

Trad. para "example" = exemplo

Passo 1:

O procedimento descrito em J. Med. Chem. 1999, 42

(20), 4088-4098 foi usado.Passo 2:

Usando o produto do Exemplo 2.3 e adaptando osproced9imentos do Exemplo 8.1 e 8.2, ácido 3-benzilóxi-7-morfolin-4-il-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxílico . foi preparado. Esse composto (159 mg) foicombinado com o produto do passo 1 (300 mg, 0,79 mmol) ,trifenilfosf ino (6.19 mg) e trietilamina (0,3 mL) emacetonitrila (30 mL) sob uma atmosfera de nitrogênio e foiagitado sob temperatura ambiente por 10 min. Tetracloretode carbono (0,4 mL) foi adicionado gota a gota e a misturafoi agitada por llh. 0 solvente foi removido in vácuo e oresíduo foi dissolvido em diclorometano, lavado comsalmoura, seco e evaporado. 0 resíduo foi submetido àcromatografia em coluna (hexano/acetato de etila 1:4) e ocomposto desejado foi obtido como um sólido amarelo (280mg, 67%) .

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0) : δ 3,18-3,29 (m, 4H), 3,40(s, 2H) , 3, 74-3, 86 (m, 4H) , 5,17 (s, 2H) , 6,29-6,72 (m,2H) , 7,11 (t, J = 8,8 Hz, 2H), 7,24-7, 46 (m, 7H), 7,71 (d,J = 9,7 Hz, 1H) , 8,05 (dd, J = 9,8, 2,4 Hz, 1H) , 8,22 (d, J=2,3 Hz, 1H).

Passo 3:

Uma solução do produto do passo 2 □ 260 mg □ 0,49mmol □ em tolueno (30 mL) foi aquecida em refluxo por 12 h.A mistura reacional foi esfriada até a temperatura ambientee concentrada sob pressão reduzida. Purificação porcromatografia em coluna (hexano;acetato de etila 1:4)produziu o compbsto desejado como um solido amarelo (183mg, 73% ).

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0) : δ 3,27 (t, J = 4,7 Hz, 4H) ,3,80 (t, J = 4,7 Hz, 4H), 4,22 (s, 2H), 5,21 (s, 2H) , 7,17(t, J = 8,9 Hz, 2H) , 7,25-7, 44 (m, 7H) , 7,76 (d, J = 9,6Hz, 1H) , 8,07 (dd, J = 9,8, 2,6 Hz, 1H) , 8,20 (d, J = 2,4Hz, 1H)

Passo 4:

O procedimento descrito no Exemplo 19.8 foi adaptadopara fornecer o composto desejado.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0) : δ 10,67 (1H, s, OH), 7,97(1H, s, Ar-CH), 7,84 (1H, d, J = 7,8 Hz, Ar-CH) , 7,62 (1H,d, J = 9,0 Hz, Ar-CH), 7,42 (1H, d, J = 8,4 Hz, Ar-CH),7,39 (1H, d, J = 8,7 Hz, Ar-CH), 7,19 (1H, d, J = 8,4 Hz,Ar-CH), 7,16 (1H, d, J = 9,0 Hz, Ar-CH), 4,23 (2H, s,ArCH2), 3,78 (4H, m, CH2OCH2), 3,20 (4H, m, CH2NCH2).

MS (ESI+) m/z 424 (M+l)

HPLCMÉTODO 7 91, 7%/12, 0 min.

Exemplo 24.2: Preparação de 2-[3-(3,4-diclorobenzil)-[1,2,4] oxadiazol-5-il] -3-hidróxi-7-xnorfolin-4-il-pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona<formula>formula see original document page 217</formula>

Partindo de 3,4-diclorobenzilnitrila e adaptando oprocedimento descrito no Exemplo 24.1, o composto desejadofoi obtido.

RMN 1H: (300 MHz, D6-DMS0): δ 10,71 (1H, s, OH), 7,98(1H, s, Ar-CH), 7,85 (1H, d, J = 9,6 Hz, Ar-CH), 7,66 (3 H,m, Ar-CH), 7,36 (1H, d, J = 8,1 Hz, Ar-CH), 4,24 (2H, s,ArCH2), 3,78 (4H, m, CH2OCH2), 3,22 (4H, m, CH2NCH2).

MS (ESI + ) m/z 474 (M[C135]+1)

Exemplo 25.1: Preparação de 2-[4-(4-fluorbenzil)-4,5-diidroxazol-2-il]-3-hidróxi-7-morfolin-4-ilpirido[1,2-a]pirimidin-4-ona; sal de sódio<formula>formula see original document page 218</formula>

Passo 1:

Uma mistura agitada do produto do Exemplo 2.3 (305 mg,1 mmol) e 2-amino-3-(4-fluorfenil)-propan-l-ol (169 mg, 1mmol) em etanol (15 mL) foi aquecida até o refluxo por 2 d.0 solvente foi evaporado in vácuo para produzir um produtobruto o qual foi usado diretamente no próximo passo.

Passo 2:

Cloreto de metanossulfonila (228 mg, 2,0 mmol) etrietilamina (0,5 mL, 3,59 mmol) foi adicionado a umamistura agitada do produto do passo 2 em diclorometano (50mL) . Depois de 2 h, a mistura reacional foi diluída comacetato de etila (50 mL) e a fase orgânica foi lavada.combicarbonato de sódio aquoso saturado (50 mL), água (50 mL)e salmoura (50 mL) seca, filtrada e concentrada in vácuo. Oresíduo foi purificado por cromatografia flash(hexano/acetátó de etila 1:5) para produzir o compostodesejado (250 mg, 50% em dois passos).

RMN 1H (300 MHz, DMSO-D6) δ 2,82 (dd, J = 13,8, 6,7Hz, 1H), 2,97 (dd, J = 14,0 Hz, 6,8Hz, 1H), 3,25-3,31 (m,4H) , 3,50 (s, 3H), 3, 76-3, 85 (m, 4H) , 4,01-4,13 (m, 1H),4, 40-4, 48 (m, 1H), 4, 50-4,63 (m, 1H) , 7,12 (t, J = 9,0 Hz,2H), 7,37 (dd, J = 8,6, 5,7 Hz, 2H) , 7,82 (d, J = 9,5 Hz,1H), 8,18 (dd, J = 9,7, 2,6 Hz, 1H), 8,23 (d, J = 2,4 Hz, 1H)

MS (ESI + ) m/z 503 (M+l)

Passo 3:

0 produto do Passo 3 (228 mg) e hidróxido de sódiosólido (40 mg, 1 mmol) foram misturados em metanol (25 mL).

A mistura resultante foi agitada em temperatura ambientepor lha água gelada (100 mL) foi adicionada. Oprecipitado resultante foi coletado por filtração e lavadocom água gelada para produzir o composto desejado como umsal de sódio (170 mg, 76%).

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) δ 3,07 (2H, m, -CH2-Ph-F),3,24 (4H, m, -OCH2CH2N-), 3,85 (4H, m, -OCH2CH2N-), 4,54(1H, m, cíCliCo-NCHCH2O-), 7,00 (2H, t, J = 9,0 Hz, ArH),7,30 (2H, m, ArH), 7,64 (1H, d, J = 10,0 Hz, ArH), 7,80(1Η, dd, J = 2,7, 9,9 Hz, ArH), 8,13 (1Η, d, J =2,4A Hz,ArH) .

MS (ESI-) m/z 423 (M-Na-1)

HPLCmétodo 7 87 , 0%/17, 7 min

Exemplo 25.2: Preparação de 2-[4-(4-fluorbenzil)-4,5-diidroxazol-2-il] -3-hidróxi-7-morfolin-4-ilmetilpirido [1,2-a]pirimidin-4-ona; sal de sódio

<formula>formula see original document page 220</formula>

Usando o produto do Exemplo 13.7 (Passo 4) e adaptandoo procedimento no Exemplo 25.1, o composto desejado foiobtido.

MS (ESI+) m/z 461 (M-Na+1)

HPLCmétodo , 85,4%/ll,4 min

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO): δ 8,55 (1H, s, Ar-CH), 7,42(3H, m, Ar-CH), 6,89 (2H, m, Ar-CH), 6,75 (1H, m, Ar-CH),4,27 (2H, m, OCH2CHfN]), 3,72 (4H, m, CH2OCH2), 3,59 (2H, s,Ar-CH2), 3,25 (1H, m, OCH2CfN]), 2,51 (4H, m, CH2NCH2)Exemplo 26.1: Preparação de 4-fluorbenzilamida doácido 7- (1·^ΐ^·^0χρΐ8θ^βζόίί<ί1η-2-±1) -3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido [1,2-a].pirimi'dino-2-carboxilico

Exemplo 26.1.1: Preparação de 4-£luorbenzilamida doácido 3-hidróxi-7-iodo-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 221</formula>

O procedimento descrito no Exemplo 6 foi adaptado aoproduto do Exemplo 23.1 (Passol) para produzir o compostodesejado.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0): δ 4,59 (2H, d, J = 6, 9 Hz,NHCH2), 7,15 (2H, m, ArH), 7,29 (1H, d, J = 9,4 Hz, H9) ,7,38 (2H, dd, J = 8,3, 5,9 Hz, ArH), 7,81 (1H, dd, J = 9,4,1,7 Hz, H8) , 9,71 (1H, t, J = 6,9 Hz, NHCH2), 12,33 (1H, s,OH).

MS (ESI+) m/z 440 (M+l) .

HPLCmétodo 7 97, 5%/15, 5 min

Exemplo 26.1.2: Preparação de 4-fluorbenzilamidado ácido 3-benzilóxi-7-iodo-4-oxo-4H-pirido[l,2-

a]pirimidino-2-carboxílico<formula>formula see original document page 222</formula>

O procedimento descrito no Exemplo 18.1 foi adaptadopara produzir produto desejado.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) 4,41 (2H, d, J= 6,2 Hz,NHCH2), 5,12 (2H, s, ArCH2O), 7,04 (2H, t, J = 9,1 Hz,ArH), 7,32-7, 39 (7H, m, ArH), 7,50 (1H, dd, J = 0,6, 9,3Hz, H9) , 8,06 (1H, dd, J = 2,1, 9,3 Hz, H8) , 9,01-9,13 (2H,m, H6 e NHCH2)

MS (ESI+) m/z 530 (M+l)

Exemplo 26.1.3: Preparação de 4-fluorbenzilamida doácido 3-benzilóxi-7-(1,l-dioxoisotiazolidin-2-il)-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 222</formula>

O produto do Exemplo 26.1.2 (100 mg, 0,189 mmol), 1,1-dióxido de isotiazolidina (46 mg, 0,378 mmol), iodeto decobre (I) (4 mg, 0,019 mmol), N,N-dimetiletildiamina (3 mg,0,039 mmol) e carbonato de potássio (55 mg, 0,378 mmol)foram misturados em DMF (4,0 mL) e aquecido até 80°C.Depois de 2 h, CCF indicou que a ração, estava completa. Amistura réaçiona.l foi esfriada até a temperatura ambiente evertida env; ácido clorídrico anidro (1,0 M, 40 mL) . O sólidoresultante foi coletado por filtração e lavado com água,seco e submetido À cromatografia em coluna(diclorometano/metanol 50:1) para produzir o produtodesejado (93 mg, 95%).

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0) δ 3,64 (2H, t, J = 1,3 Hz,Ciclico-(SO2)-CH2CH2CH2N), 3,89 (2H, t, J= 6, 5 Hz, cíclico-(SO2)-CH2CH2CH2N-), 4,43 (2H, d, J = 5,9 Hz, NHCH2), 5,14(2H, s, CH2O) □ 7,06 (2H, t, J = 9,0 Hz, ArH), 7,32-7,48(7H, m, ArH), 7,84 (1H, d, J = 9,9 Hz, ArH), 8,00' (1H, dd,J = 2,8, 9,7 Hz, ArH), 8,61 (1H, d, J = 2,6 Hz, ArH), 9,07(1H, t, J = 6,2 Hz, NHCH2).

Exemplo 26.1.4: Preparação de 4-fluorbenzilamida doácido 7-(1,l-dioxoisotiazolidin-2-il)-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 223</formula>

para produzir o composto desejado.RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) δ 3,62 (2Η, t, J= 1,2 Hz,Ciclico-(SO2)-CHaeH2GH2N-), 4,50 (2Η, d, J = 6,3 Hz, -(O=C)NHCH2-)., 7,16 (2Η, t, J = 8,7 Hz, ArH), 7,41 (2Η, m,ArH), 7,64 (1H, d, J = 9,6 Hz, ArH), 7,83 (1H, dd, J = 2,7,9,9 Hz, ArH), 8,35 (1H, d, J = 1,8 Hz, ArH), 9,74 (1H, bt,-.(O=C)NHCH2-), 12,28 (1H, s, OH).

MS (API+) m/z 455 (M+Na)

Exemplo 26.2: Preparação de 3,4-diclorobenzilaxnida doácido 7-(1,l-dioxoisotiazolidin-2-il)-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido [1,2-a]pi.rimidino-2-carboxílico

<formula>formula see original document page 224</formula>

0 procedimento descrito no Exemplo 2 6.1 foi adaptadopara produzir o composto desejado.

RMN 1H (300 MH ζ, D6-DMS0) δ 3,62 (2H, t, J= 7,8 Hz,Ciclico-(SO2)-CH2CH2CH2N-), 3,84 (2H, t, J = 6,3 Hz,Ciclico-(SO2)-CH2CH2CH2N-), 4,52 (2H, d, J= 6,3 Hz, -(O=C)NHCH2-), 7,36 (1H, dd, J = 2,1, 8,1 Hz, ArH), 7,62(3H, m, ArH), 7,84 (1H, dd, J = 2,1, 9,9 Hz, ArH), 8,36(1Η, d, J = 2,4 Hz, ArH), 9,78 (1H, bt, -(O=C)NHCH2-),12/14 (1H, s; OH) .

* 'ms (ESI-) m/z 481 (M[C135]-1)

Exemplo 26.3: Preparação de 4-fluorbenzilamida doácido 7-(1,1-dioxo-[1,2]tiazi.nan-2-il)-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 225</formula>

o procedimento descrito no Exemplo 26.1 foi adaptadopara produzir o composto desejado.

RMN 1H: (300 MHz, D6-DMS0): δ 12,32 (1H, s, OH), 9,72(IHf t, J = 6,3 Hz, NH), 8,60 (1H, s, Ar-CH) , 7,71 (1H, d,J = 9,6 Hz, Ar-CH) , 7,56 (1H, d, J = 9,6 Hz, Ar-CH) , 7,43(2H, m, Ar-CH), 7,18 (1H, d, J = 8,7 Hz, Ar-CH), 7,15 (1H,d, J = 8,7 Hz, Ar-CH), 4,51 (2H, d, J = 6, 3 Hz, NHCH2),3,77 (2H, m, CH2N), 3,42 (2H, m, CH2S), 2,18 (2H, m,CH2CH2CH2S), 1,86 (2H, m, CH2CH2CH2S).

MS (ESI + ) m/z 447 (M+l)

HPLCmétodo 7 96, 1%/12, 0 minExemplo 26.4: Preparação de 3,4-dicloroenzilamida doácido 7- (1,1-diòxcs- [1,2]tiazinan-2-il)-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-càrboxilico

<formula>formula see original document page 226</formula>

0 procedimento descrito no Exemplo 26.1 foi adaptadopara produzir o composto desejado.

RMN 1H: (300 MHz, D6-DMSO) δ 1,84 (2H, bm, cíclico-(SO2)-CH2CH2CH2CH2N-), 2,18 (2H, bm, cíclico-(SO2) -CH2CH2CH2CH2N-), 3,40 (2H, bm, Ciclico-(SO2)-CH2CH2CH2CH2N-),3, 74 (2H, bm, cíclico-(SO2)-CH2CH2CH2CH2N-) , 4,50 (2H, d, J= 6,6 Hz, -(O=C)NHCH2-), 7,50 (1H, dd, J = 1,8, 8,2 Hz,ArH), 7,58 (3H, m, ArH), 7,69 (1H, dd, J = 2,4, 9,9 Hz,ArH), 8,58 (1H, d, J = 1,8 Hz, ArH), 9,76 (1H, t, J = 6,9Hz, -(O=C)NHCH2-), 12,16 (1H, S, 0H).

MS (API + ) m/z 497

(M[C135]+1) HPLCmétodo 7 92, 0%/13, 2 min

Exemplo 26.5: Preparação de 4-fluorbenzilamida doácido 3-hidróxi-4-oxo-7-(2,2,2-trifluoracetilamino)-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilicoExemplo 26.5.1: Preparação de 4-fluorbenzilamida doácido 3-hidroxi-4-oxo-7 —(2,2,2- triflouoracetilamino) -4H—pirido[1,2-aÍpirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 227</formula>

0 produto do Exemplo 6 reagiu sob condições descritasno Exemplo 8.1 para produzir o produto desejado.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) 4,43 (2H, d, J= 6,0 Hz,NHCH2), 5,15 (2H, s, CH2O), 7,06 (2H, t, J = 8,8 Hz, ArH),7,28-7,51 (7H, m, ArH), 7,69 (1H, d, J = 9,5 Hz, H9) , 8,02(1H, dd, J = 1,7, 9,6 Hz, H8), 9,02 (1H, d, J = 1,5 Hz,H6) , 9,09 (1H, t, J = 5,9 Hz, NHCH2).

MS (ESI + ) m/z 482 (M [Br79]+1) , 484 (M[Br81]+l)

Exemplo 26.5.2: Preparação de 4-fluorbenzilamida doácido 3-hidróxi-4-oxo-7-(2,2,2-trifluoracetilamino)-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 227</formula>O produto do Exemplo 26.5.1reagiu sob as condiçõesdescritas no. Exemplo 26.1.3 usando trifluoracetamida paraproduzir o composto desejado (22 mg, 31%).

RMN 1H (300 MHz, D6-DMS0) δ 4,49 (2H, d, J = 6,0 Hz, -NH-CH2-), 7,15 (2H, m, ArH), 7,42 (2H, m, ArH), 7,57 (1H,d, J = 9,6 Hz, ArH), 7,83 (1H, d, J = 9,6 Hz, ArH), 9,36(1H, dd, J = 1,8 Hz, ArH), 9,72 (1H, bt, O=C-NH-CH2), 11,96(1H, s, OH)

MS (ESI + ) m/z 423 (M-I)

HPLCmétodo 7 96, 7%/12, 4 min

Exemplo 26.6: Preparação de 3,4-diclorobenzilamida doácido 3-hidróxi-4-oxo-7-(2,2,2-trifluoracetilamino)-4H-pirido[1,2-a]pirimidino-2-carboxilico

<formula>formula see original document page 228</formula>

0 procedimento descrito no Exemplo 26.5 foi adaptadopara produzir o composto desejado.

RMN 1H ((300 MHz, D6-DMS0) δ 4,49 (2H, bd, J = 6,6 Hz,-(C=O)NHCH2-), 7,34 (1H, m, ArH), 7,60 (3H, m, ArH), 7,89(1H, dd, J = 2,4, 9,9 Hz, ArH), 9,37 (1H, d, J = 2,1 Hz,ArH), 9,75 (1H, bt, -(O=C)NHCH2-), 12,14 (1H, s, 0H)MS (ESI+) m/z 423 (M-I)

MS (ESI"Γ m/i '4 73 "(Μ [Cl35]-1)

HPLCmétc,aô :3> 82, 0%/13,7 min

Exemplo ' 7 27,. 1: Preparação do ácido [2- (4-fluorbenzilcarbamoil)-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2-a]pirimidin-7-ilmetil]-fosfônico

<formula>formula see original document page 229</formula>

Passo 1: (Usando o produto do Exeoplo 13.7 (Passo 2))

A uma solução agitada do produto do Exemplo 13.7(Passo 2) (347 mg, 0,81 mmol) em tolueno (10 mL) foiadicionado trietilfosfito (268 mg, 1,62 mmol). A misturafoi aquecida em refluxo por 4 h, depois do eu ela foiconcentrada até a secura in vácuo. 0 resíduo foi submetidoà cromatografia em coluna (diclorometano/metanol 30:1) paraproduzir o composto desejado (373 mg, 95%).RMN 1H (300 MHzf, CDCl3) δ 0,33 (s, 6Η) , 0,99 (s, 9Η),1,30 (t, J = 7, 0. Hz, 6Η), 3,15 (d, J = 21, 4 Hz, 2Η), 3,98(s, 3Η), 4,04-4,16 (m, 4Η), 7, 55-7, 68 (m, 2Η), 8,75 (d, J =3,0 Hz, 1H)

MS (ESI+) m/z 507 (Μ+23)

Passo 2:

Uma mistura do produto do Passo 1 (115 mg, 0,24 mmol)e ácido p-toluenossulfônico (5 mg, 0,024 mmol) em metanol(5 mL) foi agitada em temperatura ambiente de um dia para ooutro. A solução foi concentrada in vácuo para produzir oproduto bruto quantitativamente, o qual foi diretamenteusado no próximo passo.

Passo 3:

O produto bruto do Passo 2 foi dissolvido em15 acetonitrila (4 mL) e a solução agitada foi esfriada (banhode gelo/água). Iodeto de trimetilsilila (191 mg, 0,97 mmol)foi adicionado gota a gota e depois de 2 h a solução foiaquecida até a temperatura ambiente e agitada de um diapara o outro. A mistura reacional foi suprimida com metanole a seguir concentrada in vácuo À solução resultante foiadicionada acetonitrila (4 mL) e a mistura foi submetida aoultra-som por 5 min. O sólido resultante foi coletado porfiltração, lavado com acetonitrila e seco in vácuo paraproduzir o produto desejado (62 mg, 87%).RMN 1H (300 MHz, CD3OD) δ 3,36 (d, sobreposto, 2Η) , 4,08 (s,, 3Η), J , 9,4 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 8,13 (d, J = 9,2Hz, 1Η), 8,95 (s, 1H)

MS (ESI) m/z 313 (M-1) Passo 4:

O procedimento descrito no Exemplo 6 foi adaptado parafornecer o composto alvo.

RMN 1H (300 MHz, D6-DMSO) δ 3,07 (2H, d, J = 20,7 Hz,-PCH2Ph-), 4,49 (2H, d, J = 5,7 Hz, -(O=C)NHCH2-), 7,15(2H, m, ArH), 7,50 (4H, m, H7, H8 e 2x ArH), 8,58 (1H, s,H6) , 9,74 (1H, bs, -(O=C)NHCH2-), 12,15 (1H, bs, OH).MS (ESI) m/z 406 (M-1)

Exemplo 27.2: Preparação do ácido [2-(3, 4-diclorobenzilcarbamoil)-3-hidróxi-4-oxo-4H-pirido[1,2- a]pirimidin-7-ilmetil]-fosfônico

<formula>formula see original document page 231</formula>

O procedimento descrito no Exemplo 27.1 foi adaptadopara produzir o composto desejado.RMN 1H: (300 MHζ, D6-DMSO) δ 2,97 (2Η, d, J = 21,3 Hz,PCH2), 4, 49 . (l.H,, d, J = 5,4 Hz, GH2NH), 7,49 (5H, m, H8, H9e 2 χ ArH) , 8,58 (ÍH, bs, H6) , 9,75 (1H, bs, CH2NH), 11,8(1H, bs, OH) .

MS (ESI-) m/z 456 (M[C135]-1)

Exemplo 28 Ensaios Biológicos

Os compostos da presente invenção puderam ser testadosem relação à atividade biológica usando as técnicas deensaio abaixo:

Exemplo 28.1. Ensaio combinado de processamento3'/transferência de fit

Um ensaio combinado de processamento 3'/transferênciade fita semelhante àquele publicado (Ovenden et al.Phytochemistry. Dezembro de 2004; 65(24):3255-9.) pôde serusado. o ensaio pôde ser adaptado a um formato de placa de96 poços. Resumidamente, 400 ng do composto a ser testadoforam incubados com 30 nM de substrato de DNA, consistindoda seqüência de oligonucleotideos U5 LTR anelada marcadacom DIG; 5'-ACTGCTAGAGATTTTCCACACTGACTAAAAGGGTC-DIG-3') oubiotina (5'-Bio- GACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGC AGT-31)de modo que cada substrato tenha ou uma marcação DIG ou umaBio nas fitas opostas. As reações são executadas por 2 h a37°C, os produtos gerados como resultado do processamento31 e a atividade de transferência de fita são ligadas àsplacas de estreptavidina e detectados usando conjugadovánti-DIG-ftísá&tâifè alcalina e o substrato p-nitrofenilfosfato.

ExemplTo 28.2. Ensaio especifico de transferência defita:

O ensaio específico de transferência de fita é deformato similar àquele do ensaio combinado de transferênciade fita/processamento 3', exceto pelo uso de um substratobiotinilado que representa uma extremidade LTR pré-processada (5'-Bio-GACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCA-3').

Oligonucleotídeos 5'-biotina-GACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCA-3' e 5'-ACTGCTAGAGATTTTCCACACTGACTAAAAGGGTC-DIG-31 são anelados em Tris-Cl 10 mM pH 8,0, NaCl 100 mM,EDTA 2 mM em uma concentração final de 30 μΜ.

Cada reação (40 μι) contém 30 nM de DNA substrato e400 ng de integrase em um tampão reacional compreendendoTris-Cl 20 mM pH 7,5, NaCl 25 mM, MnC12 5 mM, MgC12 5 mM,B-ME 5 mM, BSA 50 μg/mL, Tween-20 0,05% v/v.

Os compostos são adicionados em DMSO em volumereacional final de 1/10.

As reações são incubadas a 37□C por 2 h seguido pelaadição de tampão de ajuste 60 μL contendo Tris-Cl 33 mM pH7,5, NaCl 664 mM, EDTA 16,6 mM, 0,166 mg/mL de DNA deesperma de salmão -'submetido ao ultra-som.

As amostras são a seguir transferidas às placasrevestidas com esteptavidina e os produtos das reaçõesenzimáticas são deixados se ligar por 1 h em temperaturaambiente.

As placas foram a seguir lavadas com 3 x 5 min comNaOH 30 mM, NaCl 200 mM, EDTA 1 mM, a seguir 3 x 5 min comlavagem 2: Tris-HCl 10 mM pH 8,0, EDTA 6 mM, nuclease 0,1mg/mL de BSA sem nuclease.

Fab anti-digoxigenina-fosfatase (Roche, 0,1 U/mL),diluído 1/2000 em tampão de lavagem 2 é a seguir adicionadoa cada poço e as placas foram incubadas lha 37°C.

As placas são a seguir lavadas 3 vezes com TBS-Tewwn-20 (0,1%), a seguir duas vezes com TBS e 100 uL desubstrato (1 mg/mL de p-nitrofenilfosfato em Tris 0,1 M, pH9,8) é adicionado e as placas incubadas até odesenvolvimento suficiente de cor.

Exemplo 28.3 Inibição da replicação por HIV

As células são semeadas em placas de micro titulaçãode 96 poços a 50.000 células por 50 μL por poço em RF-10contendo 2 μg/mL de polibreno (rf-10/2). Os compostos sãopreparado até 4 χ a concentração final em RF-10/2 e 30 μLadicionados às células. Virus (40 μL em RF-10/2 contendo1600 pfu) são adicionados a cada poço ou 40 μL> de RF-10/2para o controles negativos e para avaliar a citotoxicidadedo composto. Depois de 2 4 h, mais 90 μL de meio ou meiocontendo 1 χ composto é adicionado a cada poço. Nos dias 4após a infecção, 100 μL de meio são removidos de cada poçoe substituídos com 100 μL; de meio fresco com ou semcomposto. Quarenta e oito horas depois os sobrenadantesforam coletados e o níveis de p24 extracelular foramdeterminados. Os sobrenadantes são diluídos 1 emlO.OOO e osníveis de p24 avaliados usando o kit de ensaio Vironostikap24. EC50 é calculada como a concentração necessária parainibir a produção de HIV p24 até 50% daquela dos controlessem fármacos.<table>table see original document page 236</column></row><table>

N/A não-aplicável

NT não testado

+++ indica um valor entre 0,001 μΜ e 1 μΜ.

++ indica ura valor entre 1 μΜ e 10 μΜ.

+ indica um valor maior do que 1 μΜ.

Exemplo 28.4 Comparação da atividade contra aintegrase o tipo selvagem e a mutante (Q148K)

Exemplo 28.4.1 Ensaio de transferência de fita:Um procedimento de ensaio de transferência de fita-similar aqüelé - publicado (-.Ovenden et al. Phytochemistry.Dezembro de 2004; 65(24):3255-9.) é usado. Resumidamente,400 ng da enzima;-do tipo selvagem ou mutante resistente afármaco, é misturado com o composto a ser testado eincubado com substrato de DNA 30 nM. 0 DNA do substrato éprojetado para mimetizar o terminal de DNA do HIV quesofreu processamento da extremidade 3' e consiste dosoligonucleotideos da seqüência U5 LTR anelados marcados comdigoxigenina (DIG; 5'- ACTGCTAGAGATTTTCCACACTGACTAAAAGGGTC-DIG-S') ou biotina (5'-Bio-GACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCA-3') de modo que cada substrato tenha ou uma etiqueta DIGou Bio em filamentos opostos. As reações são efetuadas porlha 37°C. Os produtos gerados como resultado da atividadede transferência de filamentos são ligados às placas deestreptavidina e detectados usando o conjugado da fosfatasealcalina ant-DIG e substrato p-nitrofenilfosfato.

Figura 1 representa como um exemplo os resultados doensaio de transferência de fita dos compostos selecionadoscontra a integrase do tipo selvagem e a integrase contendoa mutação Q148K.

Exemplo 28.4.2 Enzimas mutantes:

HIV integrase foi modificada em um vetor shuttle(pGEM) contendo a maior parte da seqüência gag e pol doHIV-1 usando mutagênese direcionada a sitio para gerarseqüências dey integrase que tenham sido publicadas comoco.nferidoras de resistência aos inibidores da integrasepublicãdos. Estes incluem, põem não estão limitados, àsmutações tais côo Q148K. A região codificadora da integrasefoi então submetida a PCR e clonada em um vetor deexpressão bacteriano. A introdução especifica da(s)mutação(ões) desejadas foi confirmada por análise deseqüência. As proteínas foram expressas, purificadas eusadas em ensaios de transferência de fitas.

Por todo este relatório a palavra "compreende(comprise)" ou variações tais como "compreende (comprises)"ou "compreendendo" serão entendidas como implicando nainclusão de um elemento formal, totalidade ou passo, ougrupo de elementos, totalidade ou passos, porém não aexclusão de qualquer outro elemento, totalidade ou passo,ou grupo de elementos, totalidade ou passos.

Todas as publicações mencionadas neste relatóriodescritivo são aqui incorporadas por referência. Qualquerdiscussão dos documentos, atos, materiais, dispositivos,artigos ou semelhantes que tenham sido incluídos nopresente relatório descritivo, é feita somente com opropósito de fornecer um contexto para a presente invenção.Isto não deve ser tomado como uma consideração de quequalquer um ou todos esses assuntos formam parte da base datécnica anterior·' ou eram de conhecimento geral comum nocampo relevante à presente invenção, conforme existente naAustrália ou em qualquer outro lugar antes da data deprioridade de cada reivindicação deste pedido.

Será percebido pelas pessoas versadas na técnica quenumerosas variações e/ou modificações podem ser feitas àinvenção conforme mostrado nas modalidades especificas semsair do espirito ou escopo da invenção, conforme amplamentedescrito. Estas modalidades devem ser, consequentemente,consideradas em todos os sentidos como ilustrativas e nãocomo restritivas.

Referências

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Vompe A.F. & Turitsyna N.F., J.Gen. Chem. of the USSR.,1957, 27, 3318-3325.

Martinez-Barrasa V., Delgado F., Burgos C, Garcia-Navio J.L., Izquierdo M.L. & Alvarez-Builla J.,Tetrahedron, 2000, 56, 2481-2490.

Carceller R., Garcia-Navio J.L., Izquierdo M. L.,Alvarez-Builla J., Fajardo M., Gomez- Sal P. & Gago F.,Tetrahedron, 1994, 50(17), 4995-5012.Burgos C, Delgado F., Garcia-Navio J.L., IzaquierdoM. L. & Alvàrez-BÜilla J., Tetrahedron, 1995, 51 (31), 8649-8654.

de La Rosa R., Martinez-Barrasa V., Burgos C. &Alvarez-Builla J., Tet.Let, 2000, 41, 5837-5840. BehrmanE.J., Kiser R.L., Garas W.F., Behrman E.C. & Pitt B.M.,J.Chem.Res.(M), 1995,1051-1063.

Claims

1. Composto de fórmula I ou um derivado, sal ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável do mesmo caracterizadopelo fato de que:<formula>formula see original document page 241</formula>A é uma porção heteroaromática ou aromática biciclicaou monociclica fundida ao anel contendo nitrogênio;X é selecionado do grupo consistindo de 0 e S;Y é selecionado do grupo consistindo de 0 e S;R1 é 0-3 substituintes, cada um dos quais éindependentemente selecionado do grupo consistindo de CN,C1-10alquila, C2-10alquenila, C1-10alquilPO3H2, -O-C1-10alquila,C1-10alquilNR3R4, -O-C1-XoalquilNR3R4, halo, NR3R410alquilarila, alquilheteroarila, arila, heteroarila,-O-alquilarila, SO2NR3R4;R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionadosdo grupo consistindo de hidrogênio, C02C1-4alquila,C (0) C1-4alquila, C1-10alquila, C1-10NR5R6,-NH (CO) (CO) NHCx-4alquila; ou R3 e R4, tomados junto com onitrogênio preso, formam um anel heterociclico de 5 a 7elementos o qual contém zero a dois heteroátomos adicionaisselecionados de Ν, 0 ou S onde S pode estar no estado deoxidação S, S(O) ou S(O)2 e em que o referido anelheterociclico é opcionalmente substituído nos átomos decarbono ou nitrogênio por um ou mais substituintesselecionados de halo, arila, C (0) C1-4alquila, S02Ci-4alquila,SO2H, C1-4alquila, CO2H, C02C1-4alquila, NR5R6,. C1-4alquilNR5R6;R5 e R6 são, cada um, independentemente selecionadosdo grupo consistindo de H, e C1-4alquila ou R5 e R6, juntocom o nitrogênio preso, formam um anel heterociclico de 5 a-7 elementos o qual contém zero a dois heteroátomosadicionais selecionados de N, 0 ou S onde S pode estar noestado de oxidação S, S(O) ou S(O)2 e em que o referidoanel heterociclico é opcionalmente substituído nos átomosde carbono ou nitrogênio por um ou mais substituintesselecionados de halo e C1-4alquila;quando Ri é alquilarila ou -0-alquilarila, o grupoarila do referido substituinte alquilarila é opcionalmentesubstituído com um substituinte selecionado de C1-10alquila,-0-C1-10alquila, C1-10alquilNR3R4, -O-C1-10alquilNR3R4, halo,NR3R4, alquilarila, -0-alquilarila, SO2NR3R4B está ausente;C está ausente;R2 é selecionado do grupo consistindo de heteroarila eheterociclila.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que R2 é heteroarila.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 2,caracterizado pelo fato de que R2 é substituído por arilaou alquilarila.

4. Composto, de acordo com a reivindicação 3,caracterizado pelo fato de que R2 é substituído poralquilarila.

5. Composto, de acordo com a reivindicação 4,caracterizado pelo fato de que a referida alquilarila édifluorobenzila.

6. Composto, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que ocomposto de fórmula I é selecionado do grupo consistindo decompostos de fórmula II, III, IV, V e VI:<formula>formula see original document page 244</formula>em que Z é Ο, S ou NR8 em que R8 é H, C1-10alquila,C1-10alquilNR3R4, alquilarila, alquilheteroarila, arila eheteroarila.

7. Composto, de acordo com qualquer uma dasreivindicações , 1 a 6, caracterizado pelo fato de que NR3R4é morfolina.

8. Composto, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que aheteroarila é selecionada do grupo consistindo detetrazola, triazola, pirazola, imidazola, oxazola,oxadiazola, tiazola, tiadiazola.

9. Método de tratamento ou profilaxia de uma infecçãoviral em um indivíduo caracterizado pelo fato decompreender administração, ao referido indivíduo, de umaquantidade eficaz de um composto como definido por qualqueruma das reivindicações 1 a 8 ou um derivado, sal ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável do mesmo.

10. Uso de um composto como definido por qualquer umadas reivindicações 1 a 8 ou um derivado, sal ou pró-fármacofarmaceuticamente aceitável do mesmo caracterizado pelofato de ser para o preparo de um medicamento para otratamento ou profilaxia de uma infecção viral em umindivíduo.

11. Método, de acordo com a reivindicação 9 ou uso deacordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato deque a infecção viral é uma infecção pelo HIV ou SIV.

12. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato decompreender um composto como definido por qualquer uma dasreivindicações 1 a 8 e um veículo, diluente ou excipientefarmaceuticamente aceitável.

13. Composto, de acordo com as reivindicações 1 a 8 ouum derivado, sal ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitáveldo mesmo, caracterizado pelo fato de que é para uso notratamento ou profilaxia de uma infecção viral em umindivíduo.

14. Composto, de acordo com a reivindicação 13,caracterizado pelo fato de ser para uso no tratamento ouprofilaxia de uma infecção por HIV ou SIV.