BRPI0719379A2 - Composto, composição farmacêutica, uso de composto, mistura, métodos para coletar dados para o diagnóstico de uma doença ou condição associada com amilóide em uma amostra ou um paciente, para determinar a extensão da carga de placa amiloidogênica em um tecido e/ou um fluido corporal, para coletar dados para determinar a predisposição a uma doença ou condição associada com amilóide em um paciente, para coletar dados para monitorar a doença residual mínima em um paciente seguindo o tratamento com um anticorpo ou uma composição de vacina e para coletar dados para predizer a responsividade de um paciente sendo tratado com um anticorpo ou uma composição de vacina, e, kit de teste - Google Patents

Composto, composição farmacêutica, uso de composto, mistura, métodos para coletar dados para o diagnóstico de uma doença ou condição associada com amilóide em uma amostra ou um paciente, para determinar a extensão da carga de placa amiloidogênica em um tecido e/ou um fluido corporal, para coletar dados para determinar a predisposição a uma doença ou condição associada com amilóide em um paciente, para coletar dados para monitorar a doença residual mínima em um paciente seguindo o tratamento com um anticorpo ou uma composição de vacina e para coletar dados para predizer a responsividade de um paciente sendo tratado com um anticorpo ou uma composição de vacina, e, kit de teste Download PDF

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amyloid
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patient
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Nampally Sreenivasachary
Sophie Lohmann
Lopez Deber Maria Pilar
Bosch Maria Pihlgren
Andreas Muhs
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Description

"COMPOSTO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, USO DE COMPOSTO, MISTURA, MÉTODOS PARA COLETAR DADOS PARA O DIAGNÓSTICO DE UMA DOENÇA OU CONDIÇÃO ASSOCIADA COM AMILÓIDE EM UMA AMOSTRA OU UM PACIENTE, PARA DETERMINAR A EXTENSÃO DA CARGA DE PLACA AMILOIDOGÊNICA EM UM TECIDO E/OU UM FLUIDO CORPORAL, PARA COLETAR DADOS PARA DETERMINAR A PREDISPOSIÇÃO A UMA DOENÇA OU CONDIÇÃO ASSOCIADA COM AMILÓIDE EM UM PACIENTE, PARA COLETAR DADOS PARA MONITORAR A DOENÇA RESIDUAL MÍNIMA EM UM PACIENTE SEGUINDO O TRATAMENTO COM UM ANTICORPO OU UMA COMPOSIÇÃO DE VACINA E PARA COLETAR DADOS PARA PREDIZER A RESPONSIVIDADE DE UM PACIENTE SENDO TRATADO COM UM ANTICORPO OU UMA COMPOSIÇÃO DE VACINA, E, KIT DE TESTE"
A presente invenção diz respeito a novos compostos que podem ser utilizados no tratamento de um grupo de distúrbios e anormalidades associadas com proteína amilóide, tais como Mal de Alzheimer e de doenças ou condições associadas com proteínas semelhantes a amilóide. A presente invenção ainda diz respeito a composições farmacêuticas que compreendem estes compostos e ao uso destes compostos para a preparação de medicamentos para o tratamento de doenças ou condições associadas com amilóide ou proteínas semelhantes a amilóide. Um método para tratar doenças ou condições associadas com amilóide ou proteínas semelhantes a amilóide também é divulgado.
Os compostos da presente invenção também podem ser usados no tratamento de doenças oculares associadas com anormalidades/mudanças patológicas nos tecidos do sistema visual, particularmente associadas com anormalidades/mudanças patológicas relacionadas com amilóide-beta nos tecidos do sistema visual, tais como degradação neuronal. As ditas anormalidades patológicas podem ocorrer, por exemplo, em tecidos diferentes do olho, tais como o córtex visual que leva a déficits visuais córticos; a câmara anterior e o nervo óptico que leva ao glaucoma; as lentes que levam à catarata devido à deposição de beta-amilóide; os vítreos que levam à amiloidoses oculares; a retina que leva à degeneração retinal e à degeneração macular, por exemplo, degeneração macular relacionada com a idade; o nervo óptico que leva ao corpo hialino do nervo óptico, neuropatia óptica e neurite óptica e a córnea que leva à distrofia de treliça.
Muitas doenças do envelhecimento são fundamentadas em ou associadas com amilóide ou proteínas semelhantes a amilóide e são caracterizadas, em parte, pela formação de depósitos extracelulares de amilóide ou material semelhante a amilóide que contribui com a patogênese, bem como a progressão da doença. Estas doenças incluem, mas não limitam- se a, distúrbios neurológicos, tais como Mal de Alzheimer (AD), doenças ou condições caracterizadas pela perda de capacidade de memória cognitiva, tais como, por exemplo, deterioração cognitiva branda (MCI), demência do corpo de Lewy, síndrome de Down, hemorragia cerebral hereditária com amiloidose (tipo Dutch); o complexo de Parkinson-Demência de Guam. Outras doenças que são fundamentadas em ou associadas com proteínas semelhantes a amilóide são paralisia supranuclear progressiva, esclerose múltipla; doença de Creutzfeld Jacob, mal de Parkinson, demência relacionada com o HIV, ALS (esclerose lateral amiotrófica), miosite corporal de inclusão (IBM), Diabete de Início Adulto; amiloidose cardíaca senil; tumores endócrinos e outras doenças, incluindo doenças oculares associadas com amilóide que alvejam tecidos diferentes do olho, tal como o córtex visual, incluindo déficits visuais córticos; a câmara anterior e o nervo óptico, incluindo glaucoma; as lentes, incluindo catarata devido à deposição de beta-amilóide; o vítreo, incluindo amiloidose ocular; a retina, incluindo degenerações retinais primárias e degeneração macular, em particular degeneração macular relacionada com a idade; o nervo óptico, incluindo corpo hialino do nervo óptico, neuropatia óptica e neurite óptica e a córnea, incluindo distrofia de treliça.
Embora a patogênese dessas doenças possa ser diversa, seus depósitos característicos freqüentemente contém muitos constituintes moleculares compartilhados. A um grau significante, isto pode ser atribuível à ativação local de caminhos pró-inflamatórios, desse modo, levando à deposição concorrente de componentes complementares ativados, reagentes de fase aguda, moduladores imunes e outros mediadores inflamatórios.
Mal de Alzheimer (AD) é um distúrbio neurológico primariamente pensado ser causado pelas placas amilóides, um acúmulo de depósito anormal de proteínas no cérebro. O tipo mais freqüente de amilóide encontrado no cérebro de indivíduos afetados é composto primariamente de fibrilas Αβ. evidência científica demonstra que um aumento na produção e acúmulo de proteína beta-amilóide em placas leva à morte celular do nervo, que contribui para o desenvolvimento e progressão do AD. A perda de células nervosas em áreas cerebrais estratégicas, por sua vez, causa a redução nos neurotransmissores e dano da memória. As proteínas, principalmente responsáveis pela formação de placa inclui a proteína precursora amilóide (APP) e duas presenilinas (presenilina I e presenilina II). A clivagem seqüencial da proteína precursora de amilóide (APP), que é constitutivamente expressada e catabolizada na maioria das células, pelas enzimas β e γ secretase leva à liberação de peptídeo A β de 39 a 43 aminoácidos. A degradação de APPs provavelmente aumenta sua propensidade a se agregar em placas. Este é, especialmente o fragmento Αβ (1-42) que tem uma propensidade alta de formação de agregados devido a dois resíduos de aminoácido muito hidrofóbicos em seu terminal C. O fragmento Αβ(1-42) é, portanto, acreditado estar principalmente envolvido e responsável pela iniciação da formação de placas neuríticas em AD e ter, portanto, um potencial patológico alto. Portanto, existe uma necessidade quanto a moléculas específicas que podem alvejar e difundir a formação de placa amilóide.
Os sintomas de AD manifestam-se lentamente e o primeiro sintoma pode ser apenas o esquecimento brando. Neste estágio, os indivíduos podem esquecer de eventos recentes, atividades, os nomes de pessoas familiares ou coisas e podem não ser capazes de resolver problemas de matemática simples. Assim com ao doença progride, os sintomas são mais facilmente observados e tornam-se sérios o bastante para fazer com que pessoas com AD ou seus membros familiares busquem auxílio médico. Os sintomas de estágio médio de AD incluem o esquecimento de como realizar tarefas simples, tais como arrumar-se e problemas desenvolvem-se com a fala, entendimento, leitura, ou escrita. Pacientes com AD em estágio posterior podem tornar-se ansiosos ou agressivos, podem desviar-se de casa e ultimamente necessitam de cuidado total. Presentemente, o único caminho definitivo para diagnosticar o
AD é identificar placas e entrelaçados no tecido cerebral em uma autópsia após a morte do indivíduo. Portanto, os médicos podem apenas realizar o diagnóstico de "possível" ou "provável" AD enquanto a pessoa ainda está viva. Usando-se métodos correntes, os médicos podem diagnosticar AD corretamente até 90 por cento do tempo usando-se diversas ferramentas para diagnosticar o "provável" AD. Os médicos perguntam questões sobre a saúde geral da pessoa, problemas médicos passados e a história de quaisquer dificuldades que a pessoa tem passado em atividades diárias. Os testes comportamentais de memória, resolução de problemas, atenção, contagem e linguagem fornecem informação da degeneração cognitiva e testes médicos, tais como teste de sangue, urina ou fluido espinhal e varreduras cerebrais podem fornecer alguma informação adicional.
O controle de AD consiste de tratamentos com base em medicação e que não tem base em medicação. Os tratamentos concentrados na mudança do curso básico da doença (atraso ou reverso da progressão) tem sido muito amplamente mal sucedido. Os medicamentos que restauram o déficit (defeito) ou mal funcionamento, nos mensageiros químicos das células nervosas (neurotransmissores), em particular os inibidores de colinesterase 5 (ChEIs), tais como tacrina e rivastigmina, foram mostrados melhorar os sintomas. Os ChEIs impedem a degradação enzimática de neurotransmissores, desse modo, aumentando a quantidade de mensageiros químicos para a transmissão de sinais nervosos no cérebro.
Para algumas pessoas em estágio precoce e médio da doença, os medicamentos tacrina (COGNEX®, Morris Plains, NJ), donepezil (ARICEPT®, Tokyo, JP), rivastigmina (EXELON®, East Hanover, NJ) ou galantamina (REMINIL®, New Brunswick, NJ) podem ajudar a evitar que alguns sintomas tomem-se piores por um tempo limitado. Um outro medicamento, memantina (NAMENDA®, New York, NY), foi aprovado para o tratamento de AD moderado a grave. Os medicamentos também estão disponíveis para tratar as manifestações psiquiátricas de AD. Também, alguns medicamentos podem ajudar a controlar os sintomas de comportamento de AD, tais como insônia, agitação, delírios, ansiedade e depressão. O tratamento destes sintomas frequentemente deixa os pacientes mais confortáveis e toma seu cuidado mais fácil para os enfermeiros. Infelizmente, a despeito de avanços, os tratamentos significantes mostram que sua classe de agentes é consistentemente melhor do que um placebo, as doenças continuam a progredir e o efeito médio no funcionamento mental tem sido apenas modesto. Muitos dos medicamentos usados na medicação contra o AD, tais como, por exemplo, ChEIs também têm efeitos colaterais que incluem disfiinção gastrointestinal, toxicidade para o fígado e perda de peso.
Outras doenças que são fundamentadas em ou associadas com o acúmulo ou depósito de proteína semelhante a amilóide são deterioração cognitiva branda, demência do corpo de Lewy (LBD), esclerose lateral amiotrófica (ALS), miosite corporal de inclusão (IBM) e degeneração macular, em particular degeneração macular relacionada com a idade (AMD).
A deterioração cognitiva branda (MCI) é um termo geral mais comumente definido como um distúrbio de memória sutil mas mensurável.
Uma pessoa com MCI experimenta problemas de memória maiores do que os normalmente esperados com o envelhecimento, mas não mostra outros sintomas de demência, tais como julgamento ou raciocínio prejudicado.
A demência do corpo de Lewy (LBD) é um distúrbio neurodegenerativo que pode ocorrer em pessoas mais velhas do que 65 anos 10 de idade, que tipicamente causa os sintomas de deterioração cognitiva (pensamento) e mudanças de comportamento anormais. Os sintomas podem incluir deterioração cognitiva, sinais neurológicos, distúrbios do sono e insuficiência autonômica. A deterioração cognitiva é a característica presente de LBD na maioria dos casos. Os pacientes têm episódios recorrentes de 15 confusão que pioram progressivamente. A flutuação da capacidade cognitiva é frequentemente associada com a mudança de graus de atenção e agilidade. A deterioração cognitiva e as flutuações de pensamento podem variar por minutos, horas ou dias.
A esclerose lateral amiotrófica (ALS) é caracterizada pela 20 degeneração de neurônios motores superiores e inferiores. Em alguns pacientes com ALS, demência ou afasia podem estar presentes (ALS-D). a demência é mais comumente uma demência frontotemporal (FTD) e muitos destes casos têm inclusões de tau-negativo ubiquitinapositivo, as inclusões em neurônios do gito dentado e as camadas dos lobos frontais e temporais.
A miosite de corpo de inclusão (IBM) é uma doença
paralisante usualmente observada em pessoas com mais de 50 anos, que as fibras musculares desenvolvem inflamação e começam a atrofiar, mas em que o cérebro é poupado e os pacientes retêm seu intelecto total. Duas enzimas envolvidas na produção da proteína amilóide-β foram observadas estarem aumentadas dentro das células musculares de pacientes com esta doença muscular progressiva mais comum de pessoas mais idosas, em que o amilóide-β também está aumentado.
A degeneração macular é uma doença ocular comum que causa deterioração da mácula, que é a área central de uma retina (o tecido fino como papel na parte de trás do olho onde as células sensíveis a luz enviam sinais visuais ao cérebro). A visão aguçada, clara, ‘à frente’ é processada pela mácula. O dano da mácula resulta no desenvolvimento de pontos cegos ou visão borrada ou distorcida. A degeneração macular relacionada com a idade (AMD) é uma causa principal de deterioração visual nos Estados Unidos e para pessoas com mais de 65 anos, esta é a causa principal de cegueira legítima entre caucasianos. Aproximadamente, 1,8 milhões de americanos com 40 anos e mais velhos têm AMD avançado e outros 7,3 milhões de pessoas com AMD intermediário estão em risco substancial de perda de visão. O governo estima que em 2020 existirão 2,9 milhões de pessoas com AMD avançado. As vítimas de AMD são frequentemente surpreendidas e frustradas em descobrir que tão pouco é conhecido sobre as causas e o tratamento de sua condição de cegueira.
Existem duas formas de degeneração macular: a degeneração 20 macular seca e a degeneração macular úmida. A forma seca, em que as células da mácula começam a quebrar-se, é diagnosticada em 85 por cento dos casos de degeneração macular. Ambos os olhos são usualmente afetados pela AMD seca, embora um olho também possa perder a visão enquanto o outro olho permanece não afetado. Corpo hialino, que são depósitos amarelos 25 sob a retina, são sinais precoces comuns de AMD seca. O risco de desenvolver AMD seca ou AMD úmida avançadas aumenta assim como o número ou tamanho de corpo hialino aumenta. É possível que a AMD seca avance e cause perda de visão sem transformar-se na forma úmida da doença; entretanto, também é possível para a AMD seca de estágio precoce mudar subitamente na forma úmida.
A forma úmida, embora tenha apenas contagens de 15 por cento dos casos, resulta em 90 por cento da cegueira e é considerada AMD avançada (não existe estágio precoce ou intermediário de AMD úmida). A 5 AMD úmida é sempre precedida pela forma seca da doença. Como a forma seca piora, algumas pessoas começam a ter vasos saguíneos anormais que se desenvolvem por trás da mácula. Estes vasos são muito frágeis e perderão fluido e sangue (consequentemente egeneração amcular ‘úmida’), causando dano rápido à mácula.
A forma seca de AMD inicialmente, causará frequentemente,
visão levemente manchada. O centro de visão, em particular, pode então tomar-se manchada e esta região toma-se maior assim como a doença progride. Nenhum sintoma pode ser relatado se um olho for afetado. Na AMD úmida, linhas retas podem se tomar onduladas e perda de visão central pode ocorrer rapidamente.
O diagnóstico de degeneração macular tipicamente envolve um exame de olho dilatado, teste de acuidade visual e uma inspeção de fundo do olho usando-se um procedimento denominado fundoscopia para auxiliar no diagnóstico de AMD, e - se a AMD úmida for suspeita - angiografia com 20 fluoresceína também pode ser realizada. Se a AMD seca atingir os estágios avançados, não existe tratamento corrente para evitar a perda de visão. Entretanto, uma fórmula de dose alta específica de antioxidantes e de zinco pode atrasar ou evitar que a AMD intermediária progrida ao estágio avançado. Macugen® (injeção de pegaptanib sódico), photocoagulação a laser e terapia 25 fotodinâmica podem controlar o desenvolvimento de vasos sanguíneos e sangramento anormais na mácula, o que é útil para algumas pessoas que tem a AMD úmida; entretanto, a visão que já foi perdida não será restaurada por estas técnicas. Se visão já foi perdida, existem auxiliares para pouca visão que podem ajudar a melhorar a qualidade de vida. Um dos sinais mais precoces de degeneração macular relacionada com a idade (AMD) é o acúmulo de depósitos extracelulares conhecidos como corpo hialino entre a lâmina basal de um eptélio pigmentado retinal (RPE) e membrana de Bruch's (BM). Estudos recentes conduzidos por Anderson et al. Confirmaram que o corpo hialino contém amilóide beta. (Experimental Eye Research 78 (2004) 243-256).
Os príons causam doenças neurodegenerativas, tais como scrapie em ovelhas, encefalopatia espongiforme bovina em gado e doença de Creutzfeldt-Jacob em seres humanos. O único componente conhecido da partícula é a isoforma scrapie da proteína, PrPSc. Embora os príons multipliquem-se, não existe evidência de que este contenha ácido nucléico. O PrPSc é derivado do PrPC de proteína celular não infeccioso, por um processo pós-tradução durante o qual o PrPC sofre uma mudança conformacional profunda.
A proteína scrapie PrPSc tem um papel crítico na degeneração neuronal e durante o desenvolvimento da doença sofre uma transição de três estágios como segue: PrPC (isoforma celular normal de proteína) - PrPSc: forma infecciosa (isoforma scrapie de proteína) - proteína PrP27-30.
Uma tal cascata de eventos ocorre durante o desenvolvimento da doença de Creutzfeldt-Jacob (CJD), Kuru, síndrome de Gerstmann- Straussler-Scheinker (GSS), insônia familiar fatal no homem, scrapie em ovelhas e cabras, encefalopatia em marta e encefalopatia espongiforme bovina em gado.
A proteína não tóxica celular (PrPC) é uma sialoglicoproteína de peso molecular de 33000 a 35000 que é expressada predominantemente em neurônios. Nas doenças mencionadas acima, o PrPC é convertido em uma forma alterada (PrPSc), que é distinguível de seu homólogo normal por sua resistência relativa à digestão da protease. O PrPSc acumula-se no sistema nervoso central de animais afetados em indivíduos e seu núcleo resistente a protease agrega-se de maneira extracelular A amiloidose não é uma entidade de doença simples mas, em vez disso, um grupo diverso de processos de doença progressivos caracterizados pelos depósitos de tecido extracelulares de uma proteína semelhante a amido cerosa denominada amilóide, que acumula-se em um ou mais órgãos ou sistemas corporais. Como os depósitos de amilóide formam- se, estes começam a interferir com a função normal do órgão ou sistema corporal. Existem pelo menos 15 tipos diferentes de amiloidose. As formas principais são a amiloidose primárias em antecedente conhecido, amiloidose secundária seguindo alguma outra condição e amiloidose hereditária.
A amiloidose secundária ocorre em pessoas que têm uma infecção crônica ou doença inflamatória, tal como tuberculose, uma infecção bacteriana denominada febre mediterrânea familiar, infecções ósseas (osteomielite), artrite reumatóide, inflamação do intestino delgado (ileíte granulomatosa), doença de Hodgkin e mal de Hansen.
Glaucoma é um grupo de doenças do nervo óptico que envolve que envolve a perda de células dos gânglios retinais (RGCs) em um padrão característico de neuropatia óptica. O glaucoma é frequentemente, mas nem sempre, acompanhado por uma pressão ocular aumentada, que pode ser um resultado do bloqueio da circulação de aquoso ou sua drenagem.
Embora a pressão intra-ocular aumentada seja um fator de risco significante para o desenvolvimento de glaucoma, nenhum limiar de pressão intra-ocular pode ser definido sendo determinante para a causa do glaucoma.
O dano também pode ser causado pelo fornecimento de sangue deficiente às fibras nervosas ópticas vitais, uma fraqueza na estrutura do nervo e/ou um problema na saúde das fibras nervosas por si só.
Glaucoma não tratado leva ao dano permanente do nervo óptico e perda de campo visual resultante, que pode progredir para a cegueira. Os RGCs são as células nervosas que transmitem sinais visuais do olho ao cérebro. Caspase-3 e Caspase-8, duas enzimas principais o processo apoptóptico, são ativadas no processo que leva à apoptose de RGCs. A Caspase-3 cliva a proteína precursora de amilóide (APP) para a produção de fragmentos neurotóxicos, incluindo amilóide β. Sem o efeito protetor do APP, o acúmulo de amilóide β em uma camada de célula de gânglio retinal resulta na morte de RGCs e perda irreversível da visão.
Os tipos diferentes de glaucomas são classificados como glaucomas de ângulo aberto, se a condição for crônica ou glaucomas de ângulo fechado, se glaucoma agudo ocorrer subitamente. O glaucoma usualmente afeta ambos os olhos, mas a doença pode progredir mais rapidamente em um olho do que no outro.
O glaucoma de ângulo aberto crônico (COAG), também conhecido como glaucoma de ângulo aberto primário (POAG), é o tipo mais comum de glaucoma. O COAG é causado pelo bloqueio microscópico na malha trabecular, que diminui a drenagem do fluxo aquoso no canal de Sclemm e aumenta a pressão intra-ocular (IOP). O POAG usualmente afeta ambos os olhos e está fortemente associado com a idade e um histórico familiar positivo. Sua frequência aumenta em pessoas mais velhas assim como o mecanismo de drenagem pode, gradualmente, tomar-se entupido com o envelhecimento. O aumento na pressão intra-ocular em pacientes afetados pelo glaucoma de ângulo aberto crônico não é acompanhado por quaisquer sintomas até a perda ser sentida na área visual central.
O Glaucoma de Fechamento de Ângulo Agudo (AACG) ou glaucoma de ângulo fechado é um tipo relativamente raro de glaucoma caracterizado por uma aumento súbito na pressão intra-ocular de 35 a 80 mmHg, que leva à dor grave e perda irreversível de visão. A pressão súbita é causada pelo fechamento do ângulo de filtração e do bloqueio de canais de drenagem. Os indivíduos com ângulos estreitos tem um risco aumentado quanto a um fechamento súbito do ângulo. O AACG usualmente ocorre monocularmente, mas o risco existe em ambos os olhos. Idade, catarata e pseudoexfoliação também são fatores de risco visto que estas são associadas com o aumento das lentes e compactação ou estreitamento do ângulo. Um 5 ataque de glaucoma súbito pode estar associado com dor ocular grave e dor de cabeça, olho inflamado, náusea, vômitos e visão manchada.
O glaucoma de mecanismo misto ou combinado é uma mistura ou combinação de glaucoma de ângulo aberto ou fechado. Este afeta pacientes com ACG agudo cujo ângulo abre após airidotomia a laser, mas que continua 10 a requerer medicações para o controle de IOP, bem como pacientes com POAG ou glaucoma pseudoexfoliativo que desenvolve gradualmente o estreitamento do ângulo.
O glaucoma de tensão normal (NTG), também conhecido como glaucoma de tensão baixa (LTG), é caracterizado pelo dano do nervo óptico progressivo e perda de visão periférica similar àquela vista em outros tipos de glaucoma; entretanto, a pressão intra-ocular está na faixa normal ou ainda abaixo da normal.
O glaucoma congênito (infantil) é um tipo, hereditário relativamente raro de glaucoma de ângulo aberto. O desenvolvimento 20 insuficiente da área de drenagem resulta em pressão aumentada no olho que pode levar à perda de visão a partir do dano do nervo óptico e a um olho aumentado. O diagnóstico precoce e tratamento são críticos para preservar a visão em crianças afetadas pela doença.
O glaucoma secundário pode resultar de um dano ocular, inflamação na íris do olho (irite), diabete, catarata ou uso de esteróides em indivíduos suscetíveis a esteróide. O glaucoma secundário também pode estar associado com o deslocamento retinal ou oclusão ou bloqueio da veia retinal.
O glaucoma pigmentar é caracterizado pelo deslocamento de grânulos de pigmento da íris. Os grânulos causam bloqueio do sistema de drenagem do olho, que leva à pressão intra-ocular elevada e dano ao nervo óptico.
O glaucoma exfoliativo (pseudoexfoliação) é caracterizado pelos depósitos de material escamoso na cápsula anterior e no ângulo do olho.
5 O acúmulo de material escamoso bloqueia o sistema de drenagem e aumenta a pressão ocular.
O diagnóstico de glaucoma pode ser feito usando-se vários testes. A tonometria determina a pressão no olho medindo-se o tom ou a firmeza de sua superfície. Diversos tipos de tonômetros estão disponíveis para 10 este teste, o mais comum sendo o tonômetro de aplanação. A paquimetria determina a espessura da córnea que, por sua vez, mede a pressão intra- ocular. A gonioscopia permite o exame do ângulo de filtragem e da área de drenagem do olho. A gonioscopia também pode determinar se os vasos sanguíneos anormais podem ser bloqueados pela drenagem do fluido aquoso 15 fora do olho. A oftalmoscopia permite o exame o nervo óptico e pode detectar quedas ou mudanças na camada de fibra nervosa ou mudanças no disco óptico ou endentação (sangria) desta estrutura, que pode ser causado pela pressão intra-ocular aumentada ou queda axonal. A gonioscopia também é útil na estimativa do dano ao nervo do fluxo sanguíneo deficiente ou pressão intra- 20 ocular aumentada. O teste de campo visual mapeia o campo de visão, subjetivamente, podendo detectar sinais de dano glaucomatoso ao nervo óptico.
Isto é representado pelos padrões específicos de perda de campo visual. A tomografia de coerência ocular, uma medida objetiva de perda de camada fibrosa, é realizada, buscando-se, na espessura da camada fibrosa do nervo óptico (alterado no glaucoma) por intermédio do diferencial na transmissão de luz através do tecido axonal danificado.
O Corpo hialino do nervo óptico são solidificações globulares de proteína e sais de cálcio que são sentidos e representa secreções através de estruturas vasculares congenitamente alteradas que afetam a camada de fibra nervosa axonal. Estes acúmulos ocorrem na camada de fibra do nervo peripapilar e são sentidos danificar a camada de fibra nervosa diretamente pela compressão ou indiretamente através de interrupções do fornecimento 5 vascular à camada de fibra nervosa. Estes, usualmente, tomam-se visíveis após a primeira década de vida em indivíduos afetados. Isto ocorre mais frequentemente em ambos os olhos mas também pode afetar um olho e pode causar perda branda de visão periférica durante muitos anos.
A neuropatia óptica é uma doença caracterizada por dano ao 10 nervo óptico causado pela desmielinação, bloqueio do fornecimento de sangue, deficiências nutricionais ou toxinas. As neuropatias ópticas de desmielinação de (ver neurite óptica abaixo) são tipicamente causados por um processo de desmielinação básico, tal como esclerose múltipla. O bloqueio do fornecimento de sangue, conhecido como neuropatia óptica 15 isquêmica, pode levar à morte ou disfunção de células do nervo óptico. A neuropatia óptica isquêmica não arterítica usualmente ocorre em pessoas de meia idade. Os fatores de risco incluem pressão sanguínea alta, diabete e aterosclerose. A neuropatia óptica isquêmica arterítica usualmente ocorre em pessoas mais idosas seguindo a inflamação das artérias (arterite), 20 particularmente, a artéria temporal (arterite temporal). A perda de visão pode ser rápida ou se desenvolver gradualmente por 2 a 7 dias e o dano pode ser a um ou ambos os olhos. Em pessoas com neuropatia óptica causada pela exposição a uma toxina ou a uma deficiência nutricional, ambos os olhos são usualmente afetados.
Cerca de 40 % das pessoas com neuropatia óptica isquêmica
não arterítica experimenta a melhora espontânea durante o tempo. A neuropatia óptica isquêmica não arterítica é tratada pelo controle da pressão sanguínea e dos níveis de colesterol. A neuropatia óptica isquêmica arterítica é tratada com altas doses de corticosteróides para evitar a perda da visão no segundo olho.
A neurite óptica está associada com a perda de visão branda ou grave em um ou ambos os olhos e pode ser causada por um processo desmielinante sistêmico (ver acima), infecção viral, vacinação, meningite, 5 sífilis, esclerose múltipla e inflamação intra-ocular (uveíte). O movimento ocular pode ser doloroso e a visão pode se deteriorar com repetição de episódios. Os diagnóstico envolve o exame das reações das pupilas e determinando-se se o disco óptico está dilatado. A formação de imagem por ressonância magnética (MRI) pode mostrar evidência de esclerose múltipla 10 ou, raramente, um tumor que comprime o nervo óptico, caso no qual a visão melhora uma vez que o tumor é aliviado. Muitos casos de neurite óptica melhoram em alguns meses sem tratamento. Em alguns casos, o tratamento com costicoesteróides intravenosos pode ser necessário.
Uma catarata é uma opacidade que desenvolve-se na lente 15 cristalina do olho ou em seu envelope. As cataratas tipicamente causam a perda de visão progressiva e podem causar cegueira se deixada sem tratamento. Na Catarata de Morgagnian, o córtex da catarata se liqüefaz progressivamente para formar um fluido branco leitoso e pode causar inflamação grave se a cápsula da lente romper e vazar. Se deixada sem 20 tratamento, a catarata também pode causar glaucoma facomórfico. As cataratas podem ser congênitas por natureza ou causadas por fatores genéticos, idade avançada, exposição a ultravioleta por longo período, exposição à radiação, diabete, dano ocular ou trauma físico.
A cirurgia extra-capsular (ECCE) é o tratamento mais eficaz para tratar a catarata. Na cirurgia, a lente é removida, mas a maioria da cápsula da lente é deixada intacta. A facoemulsificação, uma pequena incisão na lateral da córnea, é tipicamente usada para to quebrar as lentes antes da extração.
A amiloidose ocular é um distúrbio hereditário associado com a Polineuropátia Amiloidóptica Familiar do Tipo I (FAP) e caracterizado por vasos conjuntivais anormais, ceratoconjuntivite sicca, anormalidades pupilares e, em alguns casos, opacidades vítreas e glaucoma secundário. A FAP tipo I está associada com mutações na transtiretina (TTR), uma proteína 5 plasmática tetramérica (prealbumina) sintetizada no fígado, um epitélio de pigmento retinal 2 e plexo tecoróide do cérebro. Mutações diferentes fazem com que a transtiretina para a polimerização em uma estrutura dobrada de fibrila amilóide, que leva à amiloidose hereditária. A mutação mais freqüente é TTR-met303, em que a metionina substitui a valina na posição 30 na 10 transtiretina.
A FAP tipo IV está associada com a distrofia comeal de treliça (LCD). A distrofia comeal de treliça é uma amiloidose comeal usualmente bilateral primária hereditária caracterizada pela presença de linhas de treliça refrativas com um contorno duplo no estroma comeal. A LCD tipo I (Biber- 15 Haab-Dimmer) é um distúrbio comeal simétrico bilateral dominante autossômico caracterizado pela presença de numerosas linhas de treliça finas translúcidas com pontos brancos e turvamento leve nas camadas superficiais e medianas do estroma central. Os sintomas começam durante a primeira ou segunda décadas de vida, causando uma perda progressiva da visão. A 20 maioria dos pacientes requer um transplante comeal com 40 anos de idade. A LCD tipo II está associada com a amiloidose sistêmica (síndrome de Meretoj a's) e é caracterizado pela presença de linhas de treliça finas no limbo, cómea central e estroma. A visão não é afetada até depois na vida. A LCD tipo III afeta pessoas de meia idade e é caracterizado pela presença de linhas 25 de treliça finas que estendem-se do limbo ao limbo. A LCD tipo III A é caracterizada pelo acúmulo de depósitos de amilóide no estroma e na presença de tiras de amilóide presentes entre o estroma e a camada de Bowman, a LCD tipo III A difere da LCD tipo III por causa da presença de erosões comeais, a ocorrência em brancos e o padrão hereditário dominante autossômico.
A síndrome de Down (DS) ou trissomia 21 é o distúrbio genético mais comum com uma incidência de 1:700 nascimentos vivos e é frequentemente associada com várias anomalias congênitas. O distúrbio, que 5 é causado pela presença de um cromossomo 21 extra, é associado com depósitos prematuros da proteína formadora de placa amilóide-beta e desenvolvimento de Mal de Alzheimer na idade mediana. Além disso, muitas pessoas afetadas pela DS sofrem de cataratas começando na infância e muitas sofrem de glaucoma congênito. Visto que o gene para a proteína precursora 10 de amilóide, que é clivada para formar amilóide beta, está localizado no membro longo do cromossomo 21 em seres humanos, a super-expressão deste gene pode levar a níveis aumentados de proteína precursora de amilóide e deposição de amilóide em síndrome de Down.
Não existe cura para o glaucoma. As medicações para o 15 tratamento de glaucoma incluem agentes que diminuem a produção do humor aquoso no olho, tais como beta bloqueadores (Timópticos, Betópticos), inibidores da anidrase carbônica (Trusopt, Azopt) e alfa agonistas (Alphagan, Iopidina) e agentes que redirecionam a drenagem do humor aquoso através de um caminho diferente na parte de trás do olho, tal como prostaglandina 20 (Xalatan). As cirurgias a laser incluem a trabeculoplastia, um procedimento que ajuda o humor aquoso a deixar o olho mais eficazmente. De acordo com a Glaucoma Foundation, quase 80 % dos paciente respondem bem o bastante para o procedimento atrasar ou evitar cirurgia adicional. Entretanto, a pressão aumenta novamente nos olhos de metade de todos os pacientes dentro de dois 25 anos após a cirurgia a laser, de acordo com o National Eye Institute. A cirurgia incisional é realizada se a medicação e os tratamentos com laser adicionais não forem bem sucedidos na redução da pressão dentro do olho. Um tipo de cirurgia, uma trabeculectomia, cria uma abertura na parede do olho de modo que o humor aquoso possa drenar. Entretanto, cerca de um terço de pacientes com trabeculectomia desenvolvem cataratas dentro de cinco anos, de acordo com a Glaucoma Foundation. Se a trabeculectomia falha, procedimentos incisionais adicionais incluem colocar um tubo de drenagem no olho entre a córnea e a íris e o uso de um laser ou tratamento 5 congelante pra destruir o tecido no olho que produz o humor aquoso. A cirurgia pode salvar a visão remanescente no paciente, mas esta não melhora a visão. A visão pode realmente ser pior seguindo a cirurgia.
A degeneração macular relacionada com a idade (AMD) é uma causa principal de cegueira entre caucasianos acima de 65 anos de idade. 10 Embora muito progresso tenha sido feito recentemente na pesquisa da degeneração macular, não existem tratamentos que evite a morte celular neuronal que ocorre durante o curso da doença. Também não existem tratamentos definitivos contra outras doenças oculares associadas com degradação neuronal relacionada com beta-amilóide, tais como déficits 15 visuais córticos, corpo hialino do nervo óptico, neuropatia óptica, neurite óptica, amiloidose ocular e distrofia de treliça.
Os depósitos de amilóide tipicamente contém três componentes. As fibrilas de proteína amilóide, que responde por cerca de 90 % do material amilóide, compreende um de diversos tipos diferentes de 20 proteínas. Estas proteínas são capazes de dobrar-se nas denominadas fibrilas em lâminas "beta-dobradas", uma configuração de proteína única que apresenta locais de ligação para o vermelho Congo resultando em propriedades de tingimento únicas da proteína amilóide. Além disso, os depósitos de amilóide estão intimamente associados com o componente de 25 amilóide P (pentagonal) (AP), uma glicoproteína relacionada com o amilóide P de soro normal (SAP) e com glicosaminoglicanos sulfatados (GAG), carboidratos complexos de tecido conectivo.
Um desenvolvimento com relação ao tratamento do Mal de Alzheimer e doenças priônicas foi o projeto de moléculas que ligam-se à conformação de lâmina β anormal de Αβ e PrP, respectivamente, desse modo evitando a agregação destas moléculas. A conformação de lâmina β de peptídeos é caracterizada em que as ligações de hidrogênio são formadas em um padrão regular entre os filamentos de aminoácido vizinhos. Esta 5 disposição leva a um estrutura tri-dimensional estável. Os receptores de ligação H (grupo C=O) e doadores de ligação H (grupo NH) alternam em peptídeos de lâmina β de ocorrência natural com os átomos a serem ligados estando irregularmente em uma linha. Dentro de cada filamento de aminoácido, as distâncias entre os doadores de ligação H vizinhos e 10 receptores de ligação H estão dentro de faixas específicas. Em particular, a distância entre o doador de ligação H (grupo NH) e o receptor de ligação H (grupo C=O) dentro de um resíduo de aminoácido é de 3,5 a 4,0 Â. A distância entre o receptor de ligação H (grupo C=O) do resíduo de aminoácido e o doador de ligação H (grupo NH) do seguinte resíduo de 15 aminoácido que participa de ligação inter-filamento é de 2,6 a 2,9 Â. Em outras palavras, as distâncias entre os doadores de ligação H e receptores de ligação H vizinhos dentro de um filamento de aminoácido alternam entre as seguintes faixas:
Doador de ligação H (aminoácido 1) - receptor de ligação H (aminoácido 1) = 3,5 a 4,0 Â; receptor de ligação H (aminoácido 1) - doador de ligação H 2 (aminoácido 2) = 2,6 a 2,9 Â.
Os ligandos que são projetados para a ligação às lâminas β idealmente, têm uma ordem de doadores de ligação H e receptores de ligação H que é complementar à ordem de doadores de ligação H e receptores de ligação H nos filamentos de aminoácido da lâmina β.
No WO 03/095429 e Rzepecki et al., Synthesis (2003) 12, 1815-1826 as moléculas sintéticas são descritas sendo ditas para a ligação à conformação β de Αβ ou PrP, desse modo evitando sua agregação. Para este fim, certas moléculas foram sintetizadas contendo duas ou mais porções de amino pirazol ligados por ligadores contendo grupo carbonila, por exemplo, "AmpOx" e "Trimer".
"Trimer”
Algumas das moléculas descritas em WO 03/095429 são ditas ter um efeito inibidor na formação de agregados de Αβ em dois ensaios 5 biofísicos. De acordo com Rzepecki et al., Synthesis (2003) 12, 1815-1826 uma das moléculas descritas neste foi capaz de reduzir a agregação de um PrPc recombinante na solução. As propriedades fisico-químicas, entretanto, não foram investigadas neste estudo.
As propriedades fisico-químicas desempenham um papel 10 chave na penetração da barreira sangue-cérebro por neuroterapêuticos. Fatores relevantes ao sucesso de medicamentos para o CNS foram revistos (H. Pajouhesh and G. R. Lenz, NeuroRx®: J. Am. Soc. Exp. Neurother. (2005) Vol. 2, 541). Estes incluem o coeficiente de divisão entre água e n- octanol (LogP), isto é, basicamente a lipofilicidade do composto. Alguns dos 15 compostos descritos no WO 03/095429 e Rzepecki et al., Synthesis (2003) 12, 1815-1826 têm um LogP calculado desfavorável e, portanto, não são esperados passar a barreira sangue-cérebro. Em particular, "AmpOx" tem um LogP calculado abaixo de zero.
Outros compostos descritos nos documentos acima têm propriedades que os tomam inadequados para a administração a um paciente devido a seus efeitos colaterais nocivos. Por exemplo, o "Trimer" é mutagênico, carcinogênico e metabolicamente instável.
Foi um objetivo da presente invenção fornecer compostos que podem ser utilizados no tratamento de doenças ou condições associadas com amilóide ou proteínas semelhantes a amilóide, incluindo amiloidose. Os compostos devem ser capazes de passar a barreira sangue-cérebro. Além disso, estes devem ser farmaceuticamente estáveis, em particular, estes devem ter propriedades mutagênicas ou carcinogênicas ou serem metabolicamente instáveis.
Um outro objetivo da presente invenção é fornecer opções de tratamento melhoradas para pacientes afetados por doenças oculares associadas com anormalidades/mudanças patológicas nos tecidos do sistema visual, particularmente associadas com anormalidades/mudanças patológicas relacionadas com amilóide-beta nos tecidos do sistema visual, tais como, por exemplo, degradação neuronal. As ditas anormalidades patológicas podem ocorrer, por exemplo, em tecidos diferentes do olho, tal como o córtex visual que leva à déficits visuais córticos; a câmara anterior e o nervo óptico que leva à glaucoma; as lentes que leva à catarata devido à deposição de beta- amilóide; o vítreo que leva à amiloidose ocular; a retina que leva à degeneração retinal primária e degeneração macular, por exemplo, degeneração macular relacionada com a idade; o nervo óptico que leva à corpo hialino do nervo óptico, neuropatia óptica e neurite óptica e a córnea que leva à distrofia de treliça.
Os presente inventores observaram surpreendentemente que estes objetivos podem ser atingidos pelos compostos da fórmula geral (II) como descrito a seguir.
Consequentemente, a presente invenção diz respeito a um composto da fórmula geral (II). Em um outro aspecto, a presente invenção diz respeito a uma composição farmacêutica que compreende um composto da fórmula geral (II).
Ainda, em um outro aspecto da presente invenção diz respeito ao uso de um composto da fórmula geral (II) para a preparação de um medicamento para o tratamento de doenças ou condições associadas com amilóide ou proteínas semelhantes a amilóide, incluindo amiloidose.
Também é divulgado neste um método para tratar doenças ou condições associadas com amilóide ou proteínas semelhantes a amilóide, que compreende administrar a um paciente em necessidade de tal tratamento uma quantidade eficaz de um composto da fórmula geral (II).
Ainda, em um outro aspecto da presente invenção diz respeito ao uso de um composto da fórmula geral (I) para a preparação de um medicamento para tratar ou aliviar os efeitos de doenças oculares associadas com anormalidades/mudanças patológicas nos tecidos do sistema visual.
Também é divulgado neste um método para tratar ou aliviar os efeitos de doenças oculares associadas com anormalidades/mudanças patológicas nos tecidos do sistema visual que compreende administrar a um paciente em necessidade de tal tratamento uma quantidade eficaz de um composto da fórmula geral (I).
As doenças oculares associadas com anormalidades/mudanças patológicas nos tecidos do sistema visual são particularmente associadas com anormalidades/mudanças patológicas relacionadas com amilóide-beta nos tecidos do sistema visual, tais como, por exemplo, degradação neuronal. As ditas anormalidades patológicas podem ocorrer, por exemplo, em tecidos diferentes do olho, tal como o córtex visual que leva à déficits visuais córticos; a câmara anterior e o nervo óptico que leva à glaucoma; as lentes que leva à catarata devido à deposição de beta-amilóide; o vítreo que leva à amiloidose ocular; a retina que leva à degeneração retinal primária e degeneração macular, por exemplo degeneração macular relacionada com a idade; o nervo óptico que leva à corpo hialino do nervo óptico, neuropatia óptica e neurite óptica e a córnea que leva à distrofia de treliça.
Em um outro aspecto, a invenção diz respeito a uma mistura (tal como uma composição farmacêutica) que compreende um composto de acordo com a presente invenção e, opcionalmente, pelo menos um composto biologicamente ativo adicional e/ou um carreador farmaceuticamente aceitável e/ou um diluente e/ou um excipiente. A substância biologicamente ativa adicional pode ser um composto conhecido usado na medicação de doenças e distúrbios que são causados por ou associados com amilóide ou proteínas semelhantes a amilóide incluindo amiloidose, um grupo de doenças e distúrbios associadas com amilóide ou proteína semelhante a amilóide tal como a proteína Αβ envolvida no Mal de Alzheimer.
A substância ou composto biologicamente ativos adicionais podem exercer seu efeito biológico pelo menos mecanismo ou similar como o composto de acordo com a invenção ou por um mecanismo não tratado de ação ou por uma multiplicidade de mecanismos relacionados e/ou não relacionados de ação.
Um método para coletar dados para o diagnóstico de uma doença ou condição associada com amilóide em uma amostra ou em um paciente é divulgado compreendendo:
(a) colocar uma amostra ou uma parte do corpo específica ou área do corpo suspeita de conter uma proteína amilóide em contato com um composto de acordo com a presente invenção;
(b) deixar o corpo ligar-se com a proteína amilóide;
(c) detectar o composto ligado à proteína e
(d) correlacionar opcionalmente a presença ou ausência de ligação de composto com a proteína amilóide com a presença ou ausência de proteína amilóide na amostra ou parte ou área do corpo específica.
Uma outra forma de realização da presente invenção é um método para determinar a extensão da carga de placa amiloidogênica em um tecido e/ou um fluido corporal que compreende:
(a) fornecer uma amostra representativa do tecido e/ou fluido corporal sob investigação;
(b) testar a amostra quanto à presença de proteína amilóide
com um composto de acordo com a presente invenção;
(c) determinar a quantidade de composto ligado à proteína
amilóide e
(d) calcular a carga de placa no tecido e/ou fluido corporal.
Um outro aspecto diz respeito a um método para coletar dados
para determinar a predisposição a uma doença ou condição associada com amilóide em um paciente que compreende detectar a ligação específica de um composto de acordo com a presente invenção a uma proteína amilóide em uma amostra ou in situ que compreende as etapas de:
(a) colocar a amostra ou uma parte do corpo específica ou área
do corpo suspeita de conter a proteína amilóide em contato com um composto de acordo com a presente invenção, cujo composto liga-se especificamente à proteína amilóide;
(b) deixar o corpo ligar-se com a proteína amilóide para formar um complexo de composto/proteína;
(c) detectar a formação do complexo de composto/proteína;
(d) correlacionar opcionalmente a presença ou ausência do complexo de composto/proteína com a presença ou ausência de proteína amilóide na amostra ou parte ou área do corpo específica e
(e) comparar opcionalmente a quantidade do complexo de
composto/proteína a um valor de controle normal.
Ainda, em um outro aspecto da presente invenção é um método para coletar dados para monitorar a doença residual mínima em um paciente seguindo o tratamento com um anticorpo ou uma composição de vacina, em que os métodos compreendem:
(a) colocar uma amostra ou uma parte do corpo específica ou área do corpo suspeita de conter uma proteína amilóide em contato com um composto de acordo com a presente invenção, cujo composto liga-se
especificamente à proteína amilóide;
(b) deixar o corpo ligar-se com a proteína amilóide para formar um complexo de composto/proteína;
(c) detectar a formação do complexo de composto/proteína;
(d) correlacionar opcionalmente a presença ou ausência do complexo de composto/proteína com a presença ou ausência de proteína
amilóide na amostra ou parte do corpo ou área do corpo específica e
(e) comparar opcionalmente a quantidade do complexo de composto/proteína a um valor de controle normal.
Um método para coletar dados para predizer a responsividade de um paciente sendo tratado com um anticorpo ou uma composição de vacina também é descrita compreendendo:
(a) colocar uma amostra ou uma parte do corpo específica ou área do corpo suspeita de conter uma proteína amilóide em contato com um composto de acordo com a presente invenção, cujo composto liga-se
especificamente à proteína amilóide;
(b) deixar o corpo ligar-se com a proteína amilóide para formar um complexo de composto/proteína;
(c) detectar a formação do complexo de composto/proteína;
(d) correlacionar opcionalmente a presença ou ausência do complexo de composto/proteína com a presença ou ausência de proteína
amilóide na amostra ou parte do corpo ou área do corpo específica e
(e) comparar opcionalmente a quantidade do complexo de composto/proteína a um valor de controle normal.
Um outro aspecto da presente invenção é um conjunto de teste para a detecção e diagnóstico de uma doença ou condição associada com amilóide que compreende um composto de acordo com a presente invenção.
Em uma primeira forma de realização, a presente invenção diz respeito a um composto da fórmula geral (II)
N-K
H
-R2
P
independentemente representa uma ligação simples ou
uma ligação dupla. É evidente que a seleção dos dois deve levar a um composto tendo estabilidade suficiente para aplicações farmacêuticas. Portanto, em uma primeira alternativa preferida um é uma ligação dupla e o outro é uma ligação simples ou em uma segunda alternativa preferida ambos são uma ligação simples. Será entendido que a primeira
alternativa preferida, em que um é uma ligação dupla e o outro é uma ligação simples, inclui formas de realização, em que os dois são parte de um sistema aromático.
Pé 1, 2 ou 3.
Cada ligador K é independentemente alquileno Ci_3 que é
opcionalmente substituído por um ou mais grupos alquila Ci_4. Preferivelmente, cada ligador K é -CH2-, -CH2CH2- ou -CH2CH2CH2-.
Cada B é independentemente a anel carbocíclico saturado ou insaturado de 5 ou 6 membros, em que o anel heterocíclico B é opcionalmente 20 substituído por um ou mais, preferivelmente um ou dois, substituintes selecionados de alquila Ci_4, alcóxi C1.4, mono- e di-alquila C 1.4 amino, cicloalquila C3.7 amino e heterociclila saturada de 5 ou 6 membros ou dois substituintes podem ser unidos para formar um anel de 5 a 7 membros saturado, insaturado ou aromático que é fundido com o anel heterocíclico B e 25 em que o anel heterocíclico B pode conter, além das unidades VeW um ou mais, preferivelmente um ou dois, heteroátomos, selecionados de N, NR, S e O, em que R é selecionado de H e alquila Ci_4.
O grupo heterociclila saturado de 5 ou 6 membros contém
átomos de carbono e 1 ou mais, preferivelmente 1 ou 2, heteroátomos selecionados de N, ΝΉ, O e S. Os átomos de nitrogênio e enxofre podem ser 5 opcionalmente oxidado. O grupo heterociclila saturado de 5 ou 6 membros pode ser ligado a seu grupo pendente em qualquer heteroátomo ou átomo de carbono. Exemplos do grupo heterociclila saturado de 5 ou 6 membros incluem mas não limitam-se a, pirrolidinila, piperidinila e morfolinila.
independentemente selecionados de indolina opcionalmente substituído, pirazolileno opcionalmente substituído, piridinileno opcionalmente substituído, 2-piridinonileno opcionalmente substituído, 2-piperidonileno opcionalmente substituído, tiazolileno opcionalmente substituído e isotiazolileno opcionalmente substituído. Mais preferivelmente, cada anel B 15 heterocíclico é independentemente selecionados dos seguintes grupos:
Preferivelmente, cada anel B heterocíclico é
H
H
O
O
Estes grupos não necessitam ser incorporados na direção 10
15
indicada mas também podem ser incorporados na direção oposta. Por exemplo
também pode ser incorporado como
0
Preferivelmente, entretanto, estes são incorporados na dada
direção.
R1 é selecionado de -H, -halogênio, alquila C].4, NH2, -NH- alquila C].4, -alquileno Ci_4-NH2, -alquileno Ci_4-NH-alquila C].4, -arila, -aril-
3 3 3
R , -alquileno C].4-arila, -alquileno C].4-aril-R , heteroarila, -heteroaril-R , - NH-alquileno Ci.4-arila, -NH-alquileno C].4-aril-R3, -OH e O-alquila Ci_4. R1 é preferivelmente -H, -CH3, -NH-alquila C].4 ou -CH2-NH-CH3.
R é alquila C].4, halogênio, OH ou O-alquila C].4.
R é -H, -arila, -alquila Cj.4 ou um grupo da fórmula
20
em que Β, V, W e K são como definidos acima, qéOouleré 0 ou 1. Preferivelmente, R é H ou arila.
Cada unidade W é independentemente um receptor de ligação H. Preferivelmente, cada unidade W é independentemente N ou C=O.
Cada unidade V é independentemente opcional e, se presente, é independentemente um doador de ligação H. Cada unidade V é preferivelmente NH.
Arila é preferivelmente um arila de 5 a 7 membros, tal como fenila.
Heteroarila é preferivelmente um heteroarila de 5 a 7 membros (preferivelmente um heteroarila de 5 membros), que inclui pelo menos um heteroátomo selecionado de O, S ou N. Os exemplos são
X
Halogênio é preferivelmente F ou Cl.
Em uma forma de realização, os compostos da fórmula (II) têm a fórmula (II')
independentemente representa uma ligação simples ou uma ligação dupla. E evidente que a seleção dos dois deve levar a um 10 composto tendo estabilidade suficiente para aplicações farmacêuticas. Portanto, em uma primeira alternativa preferida um é uma ligação dupla e o outro é uma ligação simples ou em uma segunda alternativa preferida ambos =^: são uma ligação simples. Será entendido que a primeira alternativa preferida, em que um é uma ligação dupla e a outra é 15 uma ligação simples, inclui formas de realização, em que os dois são parte de um sistema aromático.
p é 2 ou 3.
Cada ligador K é independentemente alquileno Ci_3 que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos alquila C 1.4. Preferivelmente, cada ligador K é -CH2- ou -CH2CH2-.
Cada B é independentemente um anel heterocíclico de 5 ou 6 membros, em que o anel heterocíclico B é opcionalmente substituído por um ou mais, preferivelmente um ou dois, substituintes selecionados de alquila C]. 4, alcóxi Cm, mono e di alquila Cm amino, cicloalquila C3.7 amino e heterociclila saturada de 5 ou 6 membros ou dois substituintes podem ser unidos para formar um anel de 5 a 7 membros saturado, insaturado ou aromático que é fundido com o anel heterocíclico B e em que o anel 5 heterocíclico B pode conter, além das unidades VeW um ou mais, preferivelmente um ou dois, heteroátomos, selecionados de N, NR, S e O, em que R é selecionado de H e alquila Cm-
O grupo heterociclila saturado de 5 ou 6 membros contém átomos de carbono e 1 ou mais, preferivelmente 1 ou 2, heteroátomos 10 selecionados de N, NH, O e S. Os átomos de nitrogênio e enxofre podem ser opcionalmente oxidado. O grupo heterociclila saturado de 5 ou 6 membros pode ser ligado a seu grupo pendente em qualquer heteroátomo ou átomo de carbono. Os exemplos do grupo heterociclila saturado de 5 ou 6 membros incluem mas não limitam-se a , pirrolidinila, piperidinila e morfolinila.
Preferivelmente, cada anel B heterocíclico é
independentemente selecionado de pirazolileno opcionalmente substituído, piridinileno opcionalmente substituído, 2-piridinonileno opcionalmente substituído, 2-piperidonileno opcionalmente substituído, tiazolileno opcionalmente substituído e isotiazolileno opcionalmente substituído. Mais 20 preferivelmente, cada anel B heterocíclico é independentemente selecionado dos seguintes grupos:
R1 é selecionado de H, alquila C 1.4, NH2, NH-alquila C 1.4, alquileno Cm-NH2, alquileno CM-NHalquila Cm, OH e O-alquila Cm. R1 é preferivelmente H, CH3, NH-CH3 ou CH2-NH-CH3.
R é H, ou um grupo da fórmula
em que Β, V, W e K são como definidos acima e q é O ou 1. Preferivelmente, R é H.
Cada unidade W é independentemente um receptor de ligação
H. Preferivelmente, cada unidade W é independentemente N ou C=O.
Cada unidade V é independentemente opcional e, se presente, é independentemente um doador de ligação H. Cada unidade V é preferivelmente NH.
Os compostos preferidos são resumidos na seguinte tabela.
2a HN-/ \ Jjh N It H U 2h 2s Jl i 21 Svs^^ 2u xW^ hn^n Hír\^NH N 2w _.-# jj A /---~"H S-As ^ ^""S H 2y H2N M ♦» í[ H N N Tj H 2z ^xy^P ^ M Nos compostos da presente invenção os doadores de ligação e receptores de ligação H estão preferivelmente dispostos em um padrão que é essencialmente complementar ao padrão de doadores de ligação H e receptores de ligação H presentes nos filamentos de aminoácido de estruturas 5 de lâmina β como apresentado na parte introdutória.em particular, as distâncias entre os doadores de ligação H e receptores de ligação H vizinhos nos compostos da presente invenção estão preferivelmente na faixa de 2,6 a 2,9 Â ou 3,5 a 4,0 Â.
As distâncias entre os doadores de ligação H e receptores de ligação H vizinhos nos compostos da presente invenção podem, por exemplo, ser medidos diretamente dos modelos de Dreiding dos compostos. Alternativamente, os programas de computador de modelagem molecular, tais como MacroModel 7.2, podem ser usados para a determinação de distância.
Os compostos da presente invenção não apenas caracterizam um padrão de doador/receptor de ligação H que promove sua ligação aos filamentos de aminoácido de estruturas de lâmina β, estes também têm propriedades fisico-químicas favoráveis que facilitam seu uso como neuroterapêuticos. Em particular, sua lipofllicidade está em uma faixa que deve intensificar sua penetração da barreira sangue-cérebro. Preferivelmente, o coeficiente de divisão calculado (milogP) entre água e octanol dos compostos da presente invenção está na faixa de 0 e 4, mais preferivelmente de 1 a 3.
Os valores de milogP podem ser calculados de acordo com o
software disponível na rede mundial (http://www.molinspiration.com), fornecido por P. Ertl of Novartis Pharma AG. Uma cópia do software também está disponível a partir do requerente.
Além da lipofilicidade, a área de superfície polar (PSA) de uma molécula é um fator importante para a determinação da adequabilidade de um composto como um neuroterapêutico (H. Pajouhesh et al., NeuroRx : J. Am. Soc. Exp. Neurother. (2005) Vol. 2, 541). O PSA é definido como a
2 · · · λ ·
área de superfície (A ) ocupada por átomos de nitrogênio e oxigênio e os hidrogênios polares ligados a estes. Isto é fortemente refletivo da capacidade e 15 polaridade da ligação de hidrogênio. Enquanto o PSA leva em conta a estrutura tri-dimensional de uma molécula, o PSA topológico (TPSA) está fundamentado na estrutura bi-dimensional correspondente. PSA e TPSA fornecem resultados similares, com o TPSA permitindo uma resposta significantemente maior devido à sua representação bi-dimensional menos 20 computacionalmente intensiva. Os compostos da presente invenção, no geral, têm um TPSA que facilita a penetração da barreira sangue-cérebro. Preferivelmente, o TPSA dos compostos da presente invenção é igual a ou abaixo de 90 Â2.
Os valores de TPSA podem ser calculados de acordo com o software disponível na rede mundial (http://www.molinspiration.com), fornecido pela P. Ertl of Novartis Pharma AG. Uma cópia do software também está disponível a partir do requerente.
Os compostos da fórmula geral (II) podem ser feitos por etapas por intermédio da formação de ligações de peptídeo e redução subsequente com o complexo de borano dimetilsulfeto para a produção das aminas secundárias.
Enquanto for possível para os compostos da presente invenção serem administrados sozinhos, é preferível formulá-los em uma composição farmacêutica de acordo com a prática farmacêutica padrão. Desta maneira, a invenção também fornece uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da formula (II) em mistura com um excipiente farmaceuticamente aceitável.
Os excipientes farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na técnica farmacêutica e são descritos, por exemplo, em Remington1S Pharmaceutical Sciences, 15° Ed., Mack Publishing Co., New Jersey (1991). O excipiente farmacêutico pode ser selecionado com respeito à via de administração pretendida e prática farmacêutica padrão. O excipiente deve ser aceitável no sentido de não ser nocivo ao seu receptor.
Os excipientes farmaceuticamente úteis que podem ser usados na formulação da composição farmacêutica da presente invenção podem compreender, por exemplo, carreadores, veículo, diluentes, solventes, tais como os álcoois monoídricos, tais como etanol, isopropanol e álcoois poliídricos, tais como glicóis e óleos comestíveis, tais como óleo de soja, óleo de coco, óleo de oliva, óleo de cártamo, óleo de semente de algodão, ésteres oleosos, tais como oleato de etila, miristato de isopropila, aglutinantes, adjuvantes, solubilizadores, agentes espessantes, estabilizadores, desintegrantes, deslizantes, agentes lubrificantes, agentes de tamponação, emulsificantes, agentes umectantes, agentes de suspensão, agentes adoçantes, corantes, sabores, agentes de revestimento, conservantes, antioxidantes, agentes processadores, modificadores de liberação de medicamento e intensificadores, tais como fosfato de cálcio, estato de magnésio, talco, monossacarídeos, dissacarídeos, amido, gelatina, celulose, metilcelulose, carboximetil celulose sódica, dextrose, hidroxipropil-p-ciclodextrina, polivinilpirrolidona, ceras de ponto de fusão baixos e resinas trocadoras de íon.
As vias de administração (liberação) dos compostos da invenção incluem mas não limitam-se a, um ou mais de: oral (por exemplo, 5 como um tablete, cápsula ou como uma solução ingerível), tópica, mucosal (por exemplo, como uma pulverização nasal ou aerossol para inalação), nasal, parenteral (por exemplo, por uma forma injetável), gastrointestinal, intraespinal, intraperitoneal, intramuscular, intravenosa, intrauterina, intra- ocular, intradérmica, intracranial, intratraqueal, intravaginal, 10 intracerebroventricular, intracerebral, subcutânea, oftálmica (incluindo intravitreal ou intracameral), transdérmica, retal, bucal, epidural e sublingual.
Por exemplo, os compostos podem ser administrados oralmente na forma de tabletes, cápsulas, óvulos, elixires, soluções ou suspensões, que podem conter agentes flavorizantes ou corantes, para as aplicações de liberação imediata, atrasada, modificada, sustentada, pulsada ou controlada.
Os tabletes podem conter excipientes, tais como celulose microcristalina, lactose, citrato de sódio, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio dibásico e glicina, desintegrantes, tais como amido (preferivelmente amido de 20 milho, batata ou tapioca), glicolato de amido sódico, croscarmelose sódica e certos silicatos complexos e aglutinantes de granulação, tais como polivinilpirrolidona, hidroxipropilmetilcelulose (HPMC),
hidroxipropilcelulose (HPC), sacarose, gelatina e acácia. Adicionalmente, os agentes lubrificantes, tais como estearato de magnésio, ácido esteárico, 25 beenato de glicerila e talco podem ser incluídos. As composições sólidas de um tipo similar também podem ser utilizadas como enchedores em cápsulas de gelatina. Os excipientes preferidos neste respeito incluem lactose, amido, uma celulose, açúcar de leite ou polietileno glicóis de peso molecular alto. Para suspensões aquosa e/ou elixires, o agente pode ser combinado com vários agentes adoçantes ou flavorizantes, matérias corantes ou pigmentos, com agentes emulsificantes e/ou de suspensão e com diluentes, tais como água, etanol, propileno glicol e glicerina e combinações destes.
Se os compostos da presente invenção foram administrados parenteralmente, então os exemplos de tal administração incluirá um ou mais de: intravenosamente, intraarterialmente, intraperitonealmente, intratecalmente, intraventricularmente, intrauretralmente, intrastemalmente, intracranialmente, intramuscularmente ou subcutaneamente administrando-se os compostos e/ou usando-se as técnicas de infusão. Para a administração parenteral, os compostos são melhores usados na forma de uma solução aquosa estéril que pode conter outras substâncias, por exemplo, bastante sais ou glicose para fabricar a solução isotônica com sangue, as soluções aquosas devem ser adequadamente tamponadas (preferivelmente a um pH de 3 a 9), se necessário. A preparação de formulações parenterais adequadas sob condições estéreis é facilmente realizada pelas técnicas farmacêuticas padrão bem conhecidas por aqueles habilitados na técnica.
Como indicado, os compostos da presente invenção podem ser administrados intranasalmente ou por inalação e são convenientemente liberados na forma de um inalador e pó seco ou uma apresentação de 20 pulverização de aerossol a partir de um recipiente pressurizado, bomba, pulverização ou nebulizador com o uso de um propelente adequado, por exemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetra- fluoroetano, um hidrofluoroalcano, tal como 1,1,1,2-tetrafluoroetano (HFA134AT) ou 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropano (HFA 227EA), dióxido de 25 carbono ou outro gás adequado. No caso de um aerossol pressurizado, a unidade de dosagem pode ser determinada fomecendo-se uma válvula para a liberação de uma quantidade medida. O recipiente pressurizado, bomba, pulverização ou nebulizador podem conter uma solução ou suspensão do composto ativo, por exemplo, usando-se uma mistura de etanol e do propelente como o solvente, que pode conter adicionalmente um lubrificante, por exemplo, trioleato de sorbitano. As cápsulas e o cartuchos (feitos, por exemplo, de gelatina) para o uso em um inalador ou insuflador podem ser formulados para conter uma mistura em pó do composto e uma base de pó 5 adequada, tal como lactose ou amido.
Alternativamente, os compostos da presente invenção podem ser administrados na forma de um supositório ou pessário ou estes podem ser aplicados topicamente na forma de um gel, hidrogel, loção, solução, creme, unguento ou pó para polvilhamento. Os compostos da presente invenção 10 também podem ser dérmica ou transdermicamente administrados, por exemplo, pelo uso de um emplastro na pele.
Estes também podem ser administrados pelas vias retal ou pulmonar. Estes também podem ser administrados pela via ocular. Para o uso oftálmico, os compostos podem ser formulados como suspensões 15 micronizadas em solução salina estéril com pH ajustado isotônica ou preferivelmente, como soluções em solução salina estéril com pH ajustado isotônica opcionalmente em combinação com um conservante, tal como um cloreto de benzalcônio. Alternativamente, estes podem ser formulados em um unguento, tal como petrolato.
Para a aplicação tópica à pele, os compostos da presente
invenção podem ser formulados como um unguento adequado contendo o composto ativo em suspensão ou dissolvido em, por exemplo, uma mistura com um ou mais dos seguintes: óleo mineral, petrolato líquido, petrolato branco, propileno glicol, cera emulsificante e água. Alternativamente, estes 25 podem ser formulados como uma loção ou creme adequados, em suspensão ou dissolvidos, por exemplo, uma mistura de um ou mais dos seguintes: óleo mineral, monostearato de sorbitano, um polietileno glicol, parafina líquida, polissorbato 60, cera de ésteres cetílicos, álcool cetearílico, 2-octildodecanol, álcool benzílico e água. Tipicamente, um médico determinará a dosagem real que será mais adequada para um paciente individual. O nível de dosagem específico e a frequência de dosagem para qualquer indivíduo particular podem ser variados e dependerão de uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto específico utilizado, a estabilidade metabólica e a duração da ação daquele composto, a idade, peso corporal, saúde geral, sexo, dieta, modo e tempo de administração, taxa de excreção, combinação de medicamento e gravidade da condição particular e da terapia corrente individual.
Uma dosagem proposta dos compostos de acordo com a presente invenção para a administração a um humano (de aproximadamente 70 kg de peso corporal) é de 0,1 mg a 1 g, preferivelmente 1 mg a 500 mg do ingrediente ativo por unidade de dosagem. A unidade de dosagem pode ser administrada, por exemplo, 1 a 4 vezes por dia. A dosagem dependerá da via de administração. Será apreciado que esta pode ser necessária para fazer as variações de rotina à dosagem dependendo da idade e peso do paciente bem como a gravidade da condição a ser tratada. A dosagem precisa e a via de administração será ultimamente na discrição do médico atendente ou veterinário.
Os compostos da invenção também podem ser usados em combinação com outros agentes terapêuticos. Quando um composto da invenção é usado em combinação com um segundo agente terapêutico ativo contra a mesma doença na dosagem de cada um composto pode diferir de que quando o composto é usado sozinho.
As combinações referidas acima podem ser convenientemente apresentadas para o uso na forma de uma formulação farmacêutica. Os componentes individuais de tais combinações podem ser administrados seqüencialmente ou simultaneamente em formulações farmacêuticas combinadas ou separadas por qualquer via conveniente. Quando a administração é seqüencial, o composto da invenção ou o segundo agente terapêutico pode ser administrado primeiro. Quando a administração é simultânea, a combinação pode ser administrada na mesma ou diferente composição farmacêutica. Quando combinado na mesma formulação será apreciado que os dois compostos devem ser estáveis e compatíveis com cada um outro e os outros componentes da formulação. Quando formulado separadamente este pode ser fornecido em qualquer formulação conveniente, convenientemente em tal maneira como são conhecidos para tais compostos na técnica.
As composições farmacêuticas da invenção podem ser produzidas em uma maneira conhecida por si àquela pessoa como descrito,
o
por exemplo, em Remington's Pharmaceutical Sciences, 15 Ed., Mack Publishing Co., New Jersey (1991).
As doenças que podem ser tratadas com os compostos da presente invenção podem ser associadas com a formulação das estruturas das proteínas anormais, em particular estruturas de β lâmina anormal. No contexto da presente invenção, uma estrutura de proteína anormal é uma proteína de estrutura que origina-se quando uma proteína ou peptídeo redobra-se a partir da estrutura tri-dimensional, que esta geralmente adota em indivíduos saudáveis, em uma estrutura tri-dimensional diferente, que é associada com uma condição patológica. De outra maneira, uma estrutura β lâmina anormal no contexto da presente invenção é uma estrutura β lâmina que origina-se quando uma proteína ou peptídeo redobra-se a partir da estrutura tri-dimensional, que esta geralmente adota em indivíduos saudáveis, em uma estrutura de β lâmina, que é associada com uma condição patológica.
Em particular, em uma forma de realização das doenças que podem ser tratadas com os compostos da presente invenção são as doenças ou condições associadas com amilóide ou proteínas semelhantes a amilóide.
Este grupo de doenças e distúrbios incluem distúrbios neurológicos tal como Mal de Alzheimer (AD), doenças ou condições caracterizadas pela perda de capacidade de memória cognitiva tal como, por exemplo, deterioração cognitiva branda (MCI), demência do corpo de Lewy, síndrome de Down, hemorragia cerebral hereditária com amiloidose (tipo Dutch); o complexo do Parkinson-Demeência de Guam. Outras doenças que 5 são fundamentadas em ou associadas com proteínas semelhantes a amilóide são paralisia supranuclear progressiva, esclerose múltipla; doença de Creutzfeld Jacob, mal de Parkinson, demência relacionada com o HIV, ALS (esclerose lateral amiotrófica), miosite corporal de inclusão (IBM), diabete de Início Adulto; amiloidose cardíaca senil; tumores endócrinos e outras 10 doenças, incluindo doenças oculares associadas com amilóide que alvejam tecidos diferentes do olho, tal como o córtex visual, incluindo déficits visuais córticos; a câmara anterior e o nervo óptico, incluindo glaucoma; as lentes, incluindo catarata devido à deposição de beta-amilóide; o vítreo, incluindo amiloidose ocular; a retina, incluindo degenerações retinais primárias e 15 degeneração macular, em particular degeneração macular relacionada com a idade; o nervo óptico, incluindo corpo hialino do nervo óptico, neuropatia óptica e neurite óptica e a córnea, incluindo distrofia de treliça.
Em uma forma de realização preferida dos compostos da presente invenção pode ser utilizado para o tratamento do Mal de Alzheimer, 20 deterioração cognitiva branda (MCI), demência do corpo de Lewy (LBD), esclerose lateral amiotrófica (ALS), miosite corporal de inclusão (IBM) e degeneração macular relacionada com a idade (AMD). Em uma forma de realização particular preferida dos compostos da presente invenção podem ser utilizados para o tratamento do Mal de Alzheimer.
A capacidade do composto para inibir a agregação de β pode,
por exemplo, ser determinado usando espectroscopia de correlação de fluorescência como descrito em Rzepecki et al., J. Biol. Chem., 2004, 279(46), 47497-47505 ou pelo uso do ensaio de espectrofluorescência T de tioflavina. Em uma outra forma de realização, os compostos da presente invenção podem ser usados para o tratamento ou alívio dos efeitos das doenças oculares associadas com anormalidades/mudanças patológicas nos tecidos do sistema visual, particularmente associadas com anormalidades/mudanças patológicas relacionadas com amilóide-beta nos tecidos do sistema visual, tal como, por exemplo, degradação neural. As ditas anormalidades patológicas podem ocorrer, por exemplo, em tecidos diferentes do olho, tal como o córtex visual que leva à déficits visuais córticos; a câmara anterior e o nervo óptico que leva à glaucoma; as lentes que leva à catarata devido à deposição de beta-amilóide; o vítreo que leva à amiloidose ocular; a retina que leva à degeneração retinal primária e degeneração macular, por exemplo degeneração macular relacionada com a idade; o nervo óptico que leva à corpo hialino do nervo óptico, neuropatia óptica e neurite óptica e a córnea que leva à distrofia de treliça.
Os compostos de acordo com a presente invenção também podem ser fornecidos na forma da mistura com pelo menos ainda um composto ativo biologicamente e/ou um carreador aceitável farmaceuticamente e/ou um diluente e/ou um excipiente. O composto e/ou os compostos ativos adicionais biologicamente são preferivelmente presentes em uma quantidade efetiva terapeuticamente.
A natureza dos compostos ativos adicionais biologicamente dependerá do uso pretendido da mistura. A substância biologicamente adicional ou composto pode mostrar este efeito biológico pelo mesmo ou um mecanismo similar como o composto de acordo com a invenção ou por um mecanismo não relacionado da ação ou pela multiplicidade da ação dos mecanismos não relacionados e/ou relacionados.
Geralmente, os compostos ativos adicionais biologicamente podem incluir intensificadores de transmissão de nêutron, medicamentos psicoterapêuticos, inibidores de acetilcolina esterase, bloqueadores dos canais de cálcio, aminas biogênicas, tranquilizadores de benzodiazepina, síntese de acetilcolina, intensificadores de armazenagem e liberação, agonistas receptores pós-sinápticos de acetilcolina, inibidores A ou B de monoamina oxidada, antagonistas receptores de glutamato de N-metil-D-aspartato, 5 medicamentos anti-inflamatórios não esteroidais, antioxidantes, e antagonistas receptores serotonérgicos. Em particular, os compostos ativos adicionais biologicamente podem ser selecionados do grupo que consiste do composto usado no tratamento de amiloidose, compostos contra a tensão oxidativa, compostos anti-apoptópticos, queladores metálicos, inibidores de reparo de 10 DNA tal como pirenzepina e metabólitos, ácido 3-amino-l-propanossulfônico (3 APS), 1,3-propanodissulfonato (1,3PDS), ativadores de a-secretase, inibidores de β e γ-secretase, proteínas de tau, neurotransmissores, quebradores de β lâmina, atrativos para ajuste de beta amilóide / componentes celulares esgotados, inibidores de beta amilóide truncado pelo terminal N 15 incluindo beta amilóide piroglutamatado 3 a 42, moléculas anti-inflamatórias, ou inibidores de colinesterase (ChEIs) tal como tacrina, rivastigmina, donapezil, e/ou galantamina, agonistas Ml, outros medicamentos incluindo qualquer amilóide ou medicamento que modifica o tau e suplementos nutritivos, um anticorpo, incluindo qualquer anticorpos funcionalmente 20 equivalentes ou partes funcionais destes, um fragmento de peptídeo antigênico Αβ que consiste de uma extensão simples ou repetitiva da pluralidade dos resíduos de aminoácido contínuos a partir da parte do terminal N do peptídeo Αβ.
Ainda em uma forma de realização, as misturas de acordo com a invenção podem compreender niacina ou memantina juntas com um composto de acordo com a presente invenção e, opcionalmente, um carreador aceitável farmaceuticamente e/ou um diluente e/ou um excipiente.
Ainda em uma outra forma de realização da invenção as misturas são fornecidas compreendendo como um composto ativo adicional biologicamente "anti-psicópticos ativos" tal como, por exemplo clozapina, ziprasidona, risperidona, aripiprazol ou olanzapina para o tratamento dos sintomas psicópticos negativos e positivos incluindo alucinações, ilusões, através de distúrbios (manifestado pela incoerência marcada, descarrilamento, 5 de modo tangencial), e maneiras desorganizadas ou estranhas, bem como anedonia, afeto enfraquecido, apatia, e afastamento social, junto com um composto de acordo com a invenção e, opcionalmente, um carreador aceitável farmaceuticamente e/ou um diluente e/ou um excipiente.
Outros compostos que podem ser adequadamente usados nas misturas em combinação com os compostos de acordo com a presente invenção são, por exemplo, descritos em WO 2004/058258 (ver especialmente as páginas 16 e 17) incluindo alvos de medicamentos terapêuticos (páginas 36 a 39), ácidos alcanossulfônicos e ácidos alcanolsulfüricos (páginas 39 a 51), inibidores de colinesterase (páginas 51a 56), antagonistas receptores de NMDA (páginas 56 a 58), estrogênios (páginas 58 a 59), medicamentos anti-inflamatórios não esteroidais (páginas 60 e 61), antioxidantes (páginas 61 e 62), agonistas receptores ativados de proliferadores de peroxissoma (PPAR) (páginas 63 a 67), agentes ameaçadores de colesterol (páginas 68 a 75), inibidores amilóides (páginas 75 a 77), inibidores de formação amilóide (páginas 77 a 78), queladores metálicos (páginas 78 e 79), anti-psicópticos e anti-depressivos (páginas 80 a 82), suplementos nutricionais (páginas 83 a 89) e compostos que aumentam a disponibilidade das substâncias biologicamente ativas no cérebro (ver páginas 89 a 3) e pró-medicamentos (páginas 93 e 94), que o documento é incorporado neste por referência.
Em uma forma preferida de realização os compostos ativos adicionais biologicamente são um anticorpo incluindo quaisquer anticorpos funcionalmente equivalentes ou partes funcionais destes O anticorpo pode ser preferivelmente monoclonal, quimérico ou humanizado. Ainda em um aspecto da invenção, uma mistura é fornecida que compreende além disso o composto da invenção de um anticorpo incluindo partes funcionais destes, ou, mais particularmente, um anticorpo monoclonal incluindo partes funcionais destes, que reconhecem e ligam-se ao 5 amilóide β (Αβ), particularmente a conformação natural do amilóide β, que é pelo oligômero e fibras de amilóide, mas não linearizado por espécies amilóide.
Em particular, os ditos anticorpos são capazes de inibir, em vitro e in vivo, a agregação desmiloidogênica de peptídeos monoméricos, 10 especialmente peptídeos β-amilóide monoméricos tal como, por exemplo, peptídeos Αβ monoméricos 1-39; 1-40, 1-41, 1-42, ou 1-43, mas especialmente peptídeos Αβι_42 monoméricos, em fibrilas ou filamentos amilóide polimérico molecular alto. Através da inibição da agregação desmiloidogênica de peptídeos monoméricos estes anticorpos são capazes de 15 prevenir ou baixar levemente a formulação das placas amilóides, particularmente a forma amilóide (1-42), que é conhecida por iniciar insolúvel pela mudança da conformação secundária e será a maior parte das placas amilóides no cérebro dos animais ou humanos doentes.
Em um outro aspecto da invenção, a mistura compreende 20 anticorpos que, na co-incubação com fibrilas ou filamentos amilóides poliméricos molecular alto pré-formados formados pela agregação de peptídeos monoméricos desmilóides, especialmente peptídeos β-amilóide monoméricos tal como, por exemplo, peptídeos Αβ monoméricos 1-39; 1-40, 1-41, 1-42, ou 1-43, mas especialmente peptídeos Αβι.42 monoméricos, são 25 capazes da desagregação da dita fibrilas e filamentos amilóides moleculares altos. Através das fibrilas ou filamentos poliméricos amiloidogênicos de desagregação, estes anticorpos são capazes de prevenir ou baixar levemente a formulação das placas amilóides que levam a um alívio dos sintomas associadas com a doença e um atraso ou reversão desta progressão. Ainda em um outro aspecto da invenção, a mistura compreende um anticorpo, mas especialmente um anticorpo monoclonal ou partes funcionais destes, pelo qual o anticorpo é bifuncional ou biespecífico em que este exibe ambos em uma propriedade de inibição de agregação bem como uma propriedade de desagregação como definido neste acima, particularmente em forma de par com um alto grau de sensibilidade de conformação.
Em uma forma de realização, a mistura compreende um anticorpo que reconhece e liga-se a um epítopo conformacional, particularmente epítopo conformacional que está presente na parte do terminal N do peptídeo β amilóide, particularmente embebido em uma região de contagem seguinte da parte do terminal N do peptídeo β amilóide:
VaI- His- His- Gln- Lys- Leu- Val- Phe- Phe- Aia- Glu- Asp- 12 O 14 15 16 I? IB 19 20 21 22 23
Particularmente um epítopo localizado na região da proteína β amilóide entre os resíduos de aminoácidos 12 a 24, particularmente entre os resíduos 14 a 23, mais particularmente entre os resíduos de aminoácidos 14 e 20, que compreende três identificações distintas e locais de ligação que os resíduos são predominantemente envolvidos na ligação da proteína β amilóide e localizado na posição 16, 17, e na posição 19 e 20, e na posição 14, respectivamente.
Em uma forma específica de realização a mistura da presente invenção compreende, além disso, ao composto da invenção, um anticorpo, particularmente um anticorpo bifimcioanl, mas especialmente um anticorpo monoclonal, particularmente um anticorpo monoclonal bifuncional, incluindo quaisquer anticorpos funcionalmente equivalentes ou partes funcionais destes, pelo qual o anticorpo tem as propriedades características de um anticorpo produzido por uma linha celular de hibridoma selecionada do grupo que consiste de FP 12H3, FP 12H3-C2, e FP 12H3-G2 depositado em 01 de Dezembro de 2005 e 09 de Dezembro de 2005, respectivamente, como DSM ACC2752, DSM ACC 2750 e DSM ACC2751, respectivamente, ET 7E3 depositado em 08 de Dezembro de 2005 como DSM ACC2755, e EJ 7H3 depositado em 08 de Dezembro de 2005 como DSM ACC2756.
Mais particularmente, a invenção diz respeito a um anticorpo 5 incluindo quaisquer anticorpos funcionalmente equivalentes ou partes funcionais destes produzidas por uma linha celular de hibridoma selecionados do grupo que consiste de FP 12H3, FP 12H3-C2, e FP 12H3-G2 depositado em 01 de Dezembro de 2005 e 09 de Dezembro de 2005, respectivamente, como DSM ACC2752, DSM ACC 2750 e DSM ACC2751, respectivamente, 10 ET 7E3 depositado em 08 de Dezembro de 2005 como DSM ACC2755, e EJ 7H3 depositado em 08 de Dezembro de 2005 como DSM ACC2756.
Os anticorpos acima são descritos no Pedido Internacional Publicado WO 2007/068412, que é incorporado neste por referência.
Ainda em um aspecto, o anticorpo que é compreendido em 15 uma mistura de acordo com a invenção é um anticorpo quimérico ou um fragmento deste, ou um anticorpo humanizado ou um fragmento deste. Estes e anticorpos adicionais que podem ser adequadamente usados dentro das misturas de acordo com a presente invenção são descritos, por exemplo, no Pedido Internacional PCT/US2007/073504 depositado em 13 de Julho de 20 2007.
Se o anticorpo é um anticorpo humanizado, este preferivelmente exibe uma cadeia leve e uma cadeia pesada como descrito na SEQ ID N°. 2 e SEQ ID N°. 4 do Pedido Internacional N°. PCT/US2007/073504 ou exibe uma região variável de cadeia leve e uma 25 região variável de cadeia pesada como descrito na SEQ ID N°. I e SEQ ID N°. 3 do Pedido Internacional N°. PCT/US2007/073504. Estas seqüências também são mostradas na listagem de seqüência anexa.
Ainda em um outro aspecto da invenção, uma mistura é fornecida que compreende, além disso, ao composto de acordo com a invenção e como descrito neste acima, um fragmento de peptídeo a partir da parte do terminal N do peptídeo Αβ, particularmente um fragmento de peptídeo Αβ que consiste de uma extensão simples ou repetitiva entre 13 e 15 resíduos de aminoácido contínuos a partir da parte do terminal N do peptídeo 5 Αβ, mas particularmente um fragmento de peptídeo Αβ que consiste de resíduos de aminoácidos selecionados do grupo que consiste de resíduos 1-15,
1-14, e 1-13 a partir da parte do terminal N do peptídeo Αβ, mais particularmente do resíduo 1-15, incluindo fragmentos funcionalmente equivalentes destes, mas especialmente um fragmento de peptídeo Αβ como 10 mencionado neste acima anexo, ou incorporado ou reconstituído em uma partícula de carreador/adjuvante tal como, por exemplo, um lipossoma. O fragmento de peptídeo pode ser compreendido em uma composição da vacina. Em particular, o antígeno do peptídeo é modificado por uma metade lipofílica ou hidrofílica, que facilita a inserção na bicamada de lipídeo do carreador de 15 lipossomo/adjuvante imune, particularmente por uma metade lipofílica ou hidrofílica funciona como uma âncora para o peptídeo na bicamada lipossômica e tem uma dimensão que leva ao peptídeo ser posicionado e estabilizado na proximidade final à superfície de lipossomo.
Ainda em uma forma de realização da invenção, a metade 20 lipofílica ou hidrofílica é um ácido graxo, um triglicerídeo ou um fosfolipídeo, mas especialmente um ácido graxo, um triglicerídeo ou um fosfolipídeo. Em particular, a metade hidrofóbica é ácido palmítico e a preparação lipossômica pode conter além disso, um adjuvante tal como, por exemplo, lipídeo A, alume, fosfato de cálcio, interleucina 1, e/ou 25 microcápsulas de polissacarídeos e proteínas, mas particularmente um lipídeo A desintoxicado A, tal como lipídeo A difosforila ou monofosforila, ou alume.
Estes e as composições adicionais que podem ser adequadamente usados nas misturas da presente invenção são descritos, por exemplo, no Pedido Internacional Publicado WO 2007/068411.
A diagnose de uma doença ou condição associada ao amilóide ou de uma pré-disposição a uma doença associada ao amilóide ou condição em um paciente pode ser atingido pela detecção da ligação específica de um 5 composto de acordo com a invenção à proteína amilóide em uma amostra ou in situ, que inclui levar a amostra ou uma parte do corpo específico ou área corporal presumida a conter o antígeno amilóide em contato com um composto da invenção que liga-se a proteína amilóide, deixando o composto da invenção ligar-se a uma proteína amilóide para formar um complexo do 10 composto/proteína, detectando a formulação do complexo do composto/proteína e correlacionado a presença ou ausência do complexo do composto/proteína com a presença ou ausência da proteína amilóide na amostra ou parte ou área do corpo específico, opcionalmente comparando a quantidade do dito complexo do composto/proteína a um valor de controle 15 normal, em que um aumento na quantidade do dito agregado comparado a um valor de controle normal pode indicar que o dito paciente está sofrendo de ou está em alto risco de desenvolvimento de uma doença ou condição associada à amilóide.
A doença residual mínima de monitoramento em um paciente 20 seguindo pelo tratamento com um composto ou uma mistura de acordo com a invenção pode ser atingida pela detecção da ligação específica de um composto de acordo com a invenção à proteína amilóide em uma amostra ou in situ, que inclui levar a amostra ou uma parte do corpo específico ou área corporal presumida a conter o antígeno amilóide em contato com um 25 composto da invenção que liga-se a proteína amilóide, deixando o composto ligar-se à proteína amilóide para formar um complexo do composto/proteína, detectando a formulação do complexo do composto/proteína e correlacionado a presença ou ausência do complexo do composto/proteína com a presença ou ausência da proteína amilóide na amostra ou parte ou área do corpo específico, opcionalmente comparando a quantidade do dito complexo do composto/proteína a um valor de controle normal, em que um aumento na quantidade do dito agregado comparado a um valor de controle normal pode indicar que o dito paciente ainda pode sofrer a partir de uma doença residual mínima.
A predição à sensibilidade de um paciente a um tratamento com um composto ou composição ou uma mistura de acordo com a invenção pode ser atingido pela detecção da ligação específica de um composto de acordo com a invenção à proteína amilóide em uma amostra ou in situ, que inclui levar a amostra ou uma parte do corpo específico ou área corporal presumida a conter a proteína amilóide em contato com um composto da invenção que liga-se a proteína amilóide, deixando o composto ligar-se à proteína amilóide para formar um complexo do composto/proteína, detectando a formulação do complexo do composto/proteína e correlacionado a presença ou ausência do complexo do composto/proteína com a presença ou ausência da proteína amilóide na amostra ou parte ou área do corpo específico, opcionalmente comparando a quantidade do dito complexo do composto/proteína antes e depois do início do tratamento, em que uma diminuição na quantidade do dito agregado pode indicar que o dito paciente tem um alto potencial de ser responsivo ao tratamento.
As amostras biológicas que podem ser usadas em uma diagnose de uma doença ou condição associada ao amilóide para a diagnosticar uma pré-disposição a uma doença ou condição associada ao amilóide ou para uma doença residual mínima de monitoramento em um paciente ou a uma predição à sensibilidade de um paciente a um tratamento com um composto ou a composição ou uma mistura de acordo com a invenção e como descrito neste acima são, por exemplo, fluidos tal como soro, plasma, saliva, secreções gástricas, muco, fluido cerebroespinhal, fluido linfático e outros ou tecido ou amostras celulares obtidas a partir de um organismo tal como tecido vascular, cardíaco, cerebral ou neural. Para a determinação da presença ou ausência da proteína amilóide em uma amostra qualquer de imunoensaio conhecido aquelas pessoas habilitadas na técnica (ver Harlow e Lane, Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor 5 Laboratory, New York, 1988, 555 a 612) podem ser usados tal como, por exemplo, ensaios que utilizam os métodos de detecção indireta usando reagentes secundários para a detecção, ensaios de aglutinação e imunoprecipitação e de ELISA. Uma descrição detalhada deste ensaio é, por exemplo, dado em W096/13590 por Maertens e Stuyver, Zrein et al. (1998) e 10 W096/29605.
Para diagnose in situ, o composto ou composição ou mistura de acordo com a invenção e como descrito neste acima pode ser administrado ao organismo a ser diagnosticado pelos métodos conhecidos na técnica tal como, por exemplo, injeção intraarterial, intracerebral, intraperitoneal, 15 intranasal, intravenosa tal que a ligação específica entre o composto de acordo com a invenção e o antígeno amilóide pode ocorrer. O complexo do composto/proteína pode ser detectado através de um rótulo anexo ao composto.
Os imunoensaios usados nos pedidos de diagnósticos ou nos 20 pedidos para diagnosticar uma pré-disposição a uma doença ou condição associada ao amilóide ou para uma doença residual mínima de monitoramento em um paciente ou a uma predição à sensibilidade de um paciente a um tratamento com um composto ou composição ou uma mistura de acordo com a invenção e como descrito neste acima, tipicamente confia em antígenos 25 rotulados, anticorpos, ou reagentes secundários para a detecção. Estas proteínas ou reagentes podem ser rotulados com compostos geralmente conhecidos aqueles habilitados na técnica incluindo enzimas, radioisótopos, e substâncias cromogênicas, luminescentes e fluorescente incluindo partículas coloridas, tal como ouro coloidal e pérolas de látex. Destes, a rotulação radioativa pode ser usados por quase todos os tipos de ensaios e com mais variações. Os rótulos conjugados pela enzima são particularmente úteis quando a radioatividade pode ser evitada ou quando os rápidos resultados são necessários. Fluorocromos, embora o requerimento do caro equipamento para seu uso, fornece um método muito sensível de detecção. Os anticorpos úteis nestes ensaios incluem anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, e anticorpos policlonais purificados por afinidade.
Alternativamente, o composto da invenção pode ser rotulado indiretamente pela reação com as substâncias rotuladas que tem uma afinidade para a imunoglobulina, tal como proteína A ou G ou anticorpos secundários. O anticorpo pode ser conjugado com uma segunda substância e detectada com uma terceira substância rotulada tendo uma afinidade pela segunda substância conjugada ao anticorpo. Por exemplo, o anticorpo pode ser conjugado a biotina e o conjugado da biotina do anticorpo detectada usando avidina ou estreptavidina rotulados. Similarmente, o anticorpo pode ser conjugado a um hapteno e o conjugado do anticorpo-hapteno detectado usando anticorpo anti-hapteno rotulado.
Aqueles com habilitada comum na técnica conhecerão estes e outros rótulos adequados que podem ser utilizado de acordo com a presente invenção. A ligação destes rótulos aos anticorpos ou fragmentos destes podem ser realizados usando técnicas padrão comumente conhecidas por aquelas pessoas habilitadas na técnica. As técnicas típicas são descritas por Kennedy, J. H., et al., 1976 (Clin. Chim. Acta 70:1-31), e Schurs, A. H. W. M., et al. 1977 (Clin. Chim Acta 81:1-40). As técnicas de ligação mencionadas por último são os métodos do glutaraldeído, o método periodato, o método dimaleimida, e outros, todos de que são incorporados neste por referência.
Os imunoensaios correntes utiliza um método de anticorpo duplo para detectar a presença de um analítico, em que o anticorpo é rotulado indiretamente pela reatividade com um segundo anticorpo que foi rotulado com um rótulo detectável. O segundo anticorpo é preferivelmente um que liga-se ao anticorpo do animal de que o anticorpo monoclonal é derivado. Em outras palavras, se o anticorpo monoclonal é um anticorpo de camundongo, então o rotulado, segundo anticorpo é um anticorpo anti-camundongo. Para o 5 anticorpo monoclonal ser usado em uma ensaio descrito abaixo, este rótulo é preferivelmente uma pérola revestida de anticorpo, particularmente uma pérola magnética. Para o anticorpo policlonal ser utilizado no imunoensaio descrito neste, o rótulo é preferivelmente uma molécula detectável tal como uma substância eletroquimioluminescente, fluorescente ou radioativa.
Um sistema de anticorpo duplo alternativo, frequentemente
refere-se como os rápidos sistemas de formato porque estes são adaptados às rápidas determinações da presença de um analítico, também pode ser utilizado dentro do escopo da presente invenção. O sistema requer alta afinidade entre o anticorpo e o analítico. De acordo com uma forma de realização da presente 15 invenção, a presença do antígeno amilóide é determinada usando um par de anticorpos, cada um específico para um antígeno amilóide. Um dos ditos pares de anticorpos é referido a em que um "anticorpo detector" e o outro do dito par de anticorpos é referido em que um é "anticorpo de captura". O anticorpo monoclonal pode ser usada como um anticorpo de captura ou um 20 anticorpo detector. O anticorpo monoclonal também pode ser usado tanto como anticorpo de captura quanto detector, juntos em um ensaio simples. Uma forma de realização da presente invenção deste modo usa o método de sanduíche do anticorpo duplo para detectar o antígeno amilóide em uma amostra do fluido biológico. Neste método, o analítico (antígeno amilóide) é 25 entre duas coisas entre o anticorpo detector e o anticorpo de captura, o anticorpo de captura é irreversivelmente imobilizado em um suporte sólido. O detector do anticorpo conteria um rótulo detectável, a fim de identificar a presença de um sanduíche de anticorpo analítico e deste modo a presença de um analítico. As substâncias de fase sólida exemplar incluem, mas não são limitadas a, placas microtituladoras, tubos de teste de poliestireno, pérolas magnéticas, plásticas ou de vidro e lâminas que são bem conhecidas no campo do radioimunoensaio e imunoensaio de enzima. Os métodos para os 5 anticorpos de ligação para as fases sólidas também são bem conhecidas por aqueles habilitados na técnica. Mais recentemente, um número de materiais porosos tal como náilon, nitrocelulose, acetato de celulose, fibra de vidro e outros polímeros porosos foram utilizados como suportes sólidos.
A carga da placa no tecido e/ou fluido corporal (tal como a 10 camada celular de gânglio retinal de um animal, particularmente um mamífero, mas especialmente um humano que sofre de um doença ocular associadas com anormalidades/mudanças patológicas nos tecidos do sistema visual, particularmente associadas com anormalidades/mudanças patológicas relacionadas com amilóide-beta nos tecidos do sistema visual) podem ser 15 calculados pelos métodos conhecidos na técnica tal como que são divulgados em Ding, J. -D. et al., "Targeting age-related macular degeneration with Alzheimer’s disease based immunotherapies: Anti-amyloid-b antibody attenuates pathologies in an age-related macular degeneration mouse model", Vision Research (2007), doi:10,1016/j.visres.2007.07.025.
Um composto de acordo com a presente invenção também
pode ser incorporado em um kit de teste para a detecção de uma proteína amilóide. O kit de teste tipicamente compreende um recipiente para aquecer um ou mais compostos de acordo com a presente invenção e as instruções para o uso do composto para o propósito da ligação de uma proteína amilóide 25 para formar um complexo do composto/proteína e detectar a formulação do complexo do composto/proteína tal que a presença ou ausência do complexo do composto/proteína correlacionada com a presença ou ausência da proteína amilóide.
O termo "kit de teste" refere-se no geral a qualquer kit de diagnóstico conhecido na técnica. Mais especialmente, o último termo refere- se a um kit de diagnóstico como descrito em Zrein et al. (1998).
EXEMPLOS
A presente invenção é ilustrada pelos seguintes exemplos não
limitantes.
Preparação de 2a:
dicloridreto de 5p-Tolil-N-((5-p-Tolil-lH-pirazol-3-il)metil-lH-pirazol-3- amina
McOH / HjO(2:l)
T.A.
Ϊ) J .4-Düdropirajio. TFA» MeCH PefluXO
2) KDH BOH / H2Q fçfkixo
Cloreto de acetila (6,16 mL, 86,60 mmol) foi adicionado à 10 gotas a uma suspensão de 5-amino-3-(4-metilfenil)pirazol (5 g, 28,86 mmol) e carbonato de potássio (14 g, 101,03 mmol) em MeCN anidroso (100 mL). A mistura de reação foi novamente submetida a refluxo por 16 horas. O solvente foi evaporado e o resíduo foi recolocado em suspensão em CHCI3, e lavado com I N de HCl, NaHCOs aquoso saturado, H2O e salmoura e secado em 15 Na2SO^ O solvente foi evaporado e o N-(l-acetil-5-p-Tolil-lH-pirazol-3- il)acetamida bruta foi usada sem qualquer purificação adicional na próxima etapa.
N-(l-acetil-5-p-Tolil-lH-pirazol-3-il)acetamida bruto foi dissolvido em uma mistura de Mc0H/THF/H20 (2:2:1, 150 mL) com 2 gotas de 33 % de solução de amônia. A mistura de reação foi agitada por 16 horas, então os solventes foram evaporados e o N-(5-p-Tolil-lH-pirazol-3- il)acetamida bruto foi usada sem qualquer purificação adicional na próxima etapa.
MS (ESI): m/z: 216,29 [MH+].
Uma mistura de N-(5-p-Tolil-lH-pirazol-3-il)acetamida bruto 5 (28,86 mmol), 3,4-diidro-2H-pirano (6,7 mL, 72,15 mmol) e ácido trifluoroacético (43 μί, 0,58 mmol) em MeCN anidroso (60 mL) foi novamente submetida a refluxo por 16 horas. O solvente foi evaporado e o resíduo foi recolocado em suspensão em CH2Cl2 (50 mL), lavado com H2O e salmoura e secado em Na2SO4, O solvente foi evaporado e o N-(5·-Tolil-1 - 10 (tetraidro-2H-piran-2-il)-lH-pirazol-3-il)acetamida bruto foi usado sem qualquer purificação adicional na próxima etapa.
MS (ESI): m/z: 300,33 [MH+].
N-(5-metil-1 -(tetraidro-2H-piran-2-il)-1 H-pirazol-3 - il)acetamida bruto (28,86 mmol) foi dissolvido em Et0H/H20 (2:3, 100 mL) 15 junto com hidróxido de potássio (llg, 202 mmol) e foi novamente submetido a refluxo por 16 horas. A mistura de reação foi concentrada e então extraída com CHCl3j As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura e secadas em Na2SO4j A evaporação do solvente e a purificação por cromatografia de coluna em gel de sílica (PE-EtOAc, 7:3 a 3:7) dão 5-Tolil-1 - 20 (tetraidro-2H-piran-2-il)-lH-pirazol-3-amina (2,99 g regioisômero A e 4,39 g regioisômero B, 99 % em 4 etapas).
Regioisômero A:
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm) = 7,63 (d, J= 7,7 Bz, 2 H), 7,16 (d, J= 8,6 Hz, 2 H), 5,81 (s, 1 H), 5,38 (dd, J = 8,9 Hz, J = 2,6 Hz, 1 H), 4,01 (bm, 3 H), 3,68 (dt, J= 11,5 Hz, J = 2,6 Hz, 1 H), 2,38 (m, 1 H), 2,35 (s, 3 H), 2,03-2,14 (m, 2 H), 1,62-1,71 (m, 3H).
MS (ESI): m/z: 258,37 [MH+].
Regioisômero B:
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm) = 7,36 (d, J= 8,0 Hz, 2 Η), 7,24 (d, J= 8,0 Hz, 2 Η), 5,69 (s, I Η), 5,03 (dd, J = 10,2 Hz, J = 2,5 Hz, I Η), 4,11 (m, IH ), 3,69 (bs, 2 Η), 3,54 (dt, J= 12,0 Hz, J= 2,5 Hz, I Η), 2,46 (m, 1 Η), 2,41 (s, 3 Η), 1,70-1,79 (m, 2 Η), 1,50-1,59 (m, 3Η). MS (ESI): m/z: 258,37 [MH+].
re agente de Mukadyama,
Dt EA, DCML RT
I) BMS1THF, refluxo
2) HCl metajióIieo
Ácido 5p-Tolil-lH-pirazol-3-carboxílico (250 mg, 1,24 mmol)
e ácido sulfurico (120 μι, 1,48 mmol) em metanol (5 mL) foram aquecidos por refluxo por 16 horas. O solvente foi evaporado e o resíduo foi recolocado em suspensão em CH2Cl2. O resíduo foi filtrado e o filtrado foi lavado com água e salmoura e secado em Na2SO4, O solvente foi evaporado e o sólido 10 branco foi combinado com o precipitado previamente coletado. 5p-Tolil-lH- pirazol-3-carboxilato de metila (224 mg, 84 %) foi obtido como um sólido branco. 1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm) = 7,56 (d, J = 7,6 Hz, 2 H), 7,22 (d, J = 8,0 Hz, 2 H), 7,02 (s, 1 H), 3,91 (s, 3 H), 2,36 (s, 3H).
13C-RMN (100 MHz, CDCl3): δ (ppm) = 129,61, 125,45, 105,03,52,02,21,19. Uma mistura de 5p-Tolil-lH-pirazol-3-carboxilato de metila (224 mg, 1,03 mmol), 3,4-diidro-2H-piran (190 μί, 2,07 mmol) e ácido trifluoroacético (2 μί, 0,02 mmol) em MeCN anidroso (3 mL) foi novamente submetida a refluxo por 2 horas. O solvente foi evaporado. O resíduo foi recolocado em suspensão em CH2Cl2 (50 mL) e foi lavado com H2O e salmoura. Após a secagem com Na2SO4, a evaporação do solvente e cromatografía de coluna em gel de sílica (PE-EtOAc, 6:4) 1-(tetraidro-2H- piran-2-il)-5-p-Tolil-lH-pirazol-3-carboxilato de metila (363 mg, 68 %) foi obtido.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm) = 7,40 (d, J = 8,0 Hz, 2 H), 7,27 (d, J = 8,0 Hz, 2 H), 6,82 (s, 1 H), 5,25 (d, J = 10,0 Hz, 1 H), 4,11 (m, 1 H), 3,92 (s, 3 H), 3,57 (t, J = 10,8 Hz, 1 H), 2,61 (m, 1 H), 2,41 (s, 3 H), 2,03 (m, 1 H), 1,82 (d, J= 8,06 Hz, 1 H), 1,58-1,52 (m, 3H).
l-(tetraidro-2H-piran-2-il)-5-p-Tolil-l H-pirazol-3-carboxilato de metila (363 mg, 0,70 mmol) foi dissolvido em uma mistura de MeOH / THE / H2O (1:2:1, 4 mL). Hidróxido de lítio foi adicionado e a mistura de reação foi agitada por 16 horas. A mistura de reação foi diluída com água e lavada com DCM. A fase aquosa foi evaporada. Ácido l-(Tetraidro-2H-piran-
2-il)-5-p-Tolil-l H-pirazol-3-carboxílico (205 mg, quantitativo) foi obtido como um sólido branco que foi usado sem purificação adicional na próxima etapa.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm) = 7,13 (d, J= 6,8 Hz, 2 H), 7,04 (d, J= 6,8 Hz, 2 H), 6,60 (s, 1 H), 4,92 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 3,89 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 3,35 (t, J = 10,8 Hz, 1 H), 2,40 (m, 1 H), 2,31 (s, 3 H), 1,75 (m, 1 H), 1,54 (m, 2 H), 1,25 (m, 2H).
5-Tolil-l-(tetraidro-2H-piran-2-il)-l H-pirazol-3-amina (composto A, 81 mg, 0,31 mmol) foi adicionado a uma solução de ácido 1- (tetraidro-2H-piran-2-il)-5-p-Tolil-lH-pirazol-3-carboxílico (100 mg, 0,34 mmol), iodeto de 2-cloro-l-metilpiridínio (122 mg, 0,47 mmol) e N,N'- diisopropiletilamina (163 \iL, 0,94 mmol) em DCM (10 mL). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 16 horas. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com DCM. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada. O produto bruto foi purificado 5 por cromatografia de coluna em gel de sílica (PE-EtOAc, 9:1) e dá 1- (tetraidro-2H-piran-2-il)-N-( 1 -(tetraidro-2H-piran-2-il)-5-p-Tolil-1 H-pirazol-
3-il)-5-p-tolil-lH-pirazol-3-carboxamida (70 mg, 43 %).
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm) = 9,37 (s, 0,5 H), 9,34 (s, 0,5 H), 7,43 (m, 4 H), 7,28 (m, 4 H), 6,95 (s, 0,5 H), 6,94 (s, 0,5 H), 6,90 (s, 1 H), 5,24 (m, 2 H), 4,15 (m, 2 H), 3,60 (m, 2 H), 2,45 (m, 2 H), 2,42 (s, 611), 1,80 (m, 2 H), 1,56 (m, 4 H), 1,25 (m, 4H).
I -(T etraidro-2H-piran-2-il)-N-( I -(T etraidro-2H-piran-2-il)-5- p-Tolil-1 H-pirazol-3-il)-5-p-tolil-1 H-pirazol-3-carboxamida (142 mg, 0,27 mmol) foi recolocado em suspensão em THF anidroso (10 mL) e complexo de dimetilsulfeto de borano (177 μι, 1,86 mmol) foi adicionado à gotas. A mistura de reação foi agitada sob refluxo por 16 horas. A mistura de reação foi então esfriada abaixo a 0 0C e MeOH (500 μΕ) foi adicionado. A mistura foi então agitada por 10 minutos. Ácido clorídrico concentrado (12 N) foi adicionado, até um pH < 2 foi obtido, e a mistura resultante foi agitada sob refluxo por 16 horas. A mistura foi esfriada em temperatura ambiente e o precipitado foi filtrado e adicionado em uma solução aquosa de hidróxido de sódio (1M). A fase aquosa foi extraída com DCM (3 x 10 mL) após a secagem de uma camada orgânica com Na2SO4. O solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado pela coluna de cromatografia em gel de sílica (eluente: EtOAc); 5p-Tolil-N-((5-p-Tolil-l H-pirazol-3-il)metil-l H-pirazol-3-amina foi obtido como um sólido branco.
5p-Tolil-N-((5 -p-Tolil-1 H-pirazol-3 -il)metil-1 H-pirazol-3 - amina (27 mg, 0,078 mmol) foi re-cristalizado em HCl metanólico (3 N, 1 mL). O sólido foi filtrado, lavado com Et2O e secado á vácuo; sólido branco. Mp = 132 °C.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7,73 (d, J= 8,0 Hz, 2 Η),
(3mL) foram adicionados a uma mistura de 6-aminonicotinato de metila 1 (760 mg, 5 mmol) e ácido 6-bromonicotínico 2 (1 g, 5 mmol) em THF (150mL). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente (= 15 temperatura ambiente) por 4 dias. Na conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada a 1/3 deste volume e o produto precipitado foi filtrado. O filtrado foi concentrado, diluído com clorofórmio (100 ml), lavado com
7.62 (d, J= 8,0 Hz, 2 H), 7,33 (d, J = 8,0 Hz, 2 H), 7,22 (d, J= 8,0 Hz, 211),
6.63 (s, 1 H), 6,30 (s, 1 H), 4,42 (s, 2 H), 2,36 (s, 3 H), 2,31 (s, 3H).
Preparação de 2c:
5 · 2 · ·
N -Propil-N -((6-((6-(propilamino)piridin-3-il)metilamino)piridin-3- il)metilpiridina-2,5-diamina
Reagentes: i) iodeto de 2-cloro-l-metilpiridínio ii) KOFiyEtOHZH2O iii) iodeto de 5 / 2-cloro-l-metilpiridínio iv) n-propil
amina/refluxo, 16 horas v) BMS/THF/32 horas.
Iodeto de 2-cloro-l-metilpiridínio (2,99 g, 10 mmol) e DIPEA água e salmoura e secado em Na2SO4. A evaporação do solvente dá um produto amarelo bruto, que cristalizado em EtOAc dá o 6-(6- bromonicotinamido)nicotinato de metila 3 como um sólido branco (1 g, 65,4 %). Pf. 234 - 235 0C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ = 11,5 (s, 1 H), 8,96 (d, J =
2,0 Hz, III), 8,93 (s, 1 H), 8,36 (dd, J = 2,0Hz, J = 8,0 Hz, 1 H), 8,33 (d, J = 12Hz, 1 H), 8,28 (dd, J = 2,4 Hz, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,83 (d, J = 8,4 Hz, 1 H),
3,88 (s, 3H).
MS (ESI): m/z = 338 (M+2H)
Os grânulos KOH (5 g) foram adicionados a uma suspensão de
6-(6-bromonicotinamido)nicotinato de metila 3 (5 g, 14,8 mmol) em metanol e água (150/50 ml). A mistura de reação foi agitada por 4 horas. Então o solvente foi evaporado e o pH foi ajustado abaixo 2. O sólido branco foi filtrado e lavado com água fria e secado sob vácuo dá ácido 6-(6- bromonicotinamido)nicotínico 4 (1,8 g, 37 %).Pf. 270-272 °C.
1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ =11,52 (s, 1 H), 8,95 (s, 1 H), 8,91 (s, 1 H), 8,29 (m, 3 H), 7,83 (d, J = 8,0 Hz, 1H).MS (ESI): m/z = 322 (M+).
Iodeto de 2-cloro-l-metilpiridínio (2,37 g, 18,6 mmol) foi 20 adicionado a uma suspensão de ácido 6-(6-bromonicotinamido)nicotínico 4 (2 g, 6,21 mmol) e 2-amino-5-bromopiridina 5 (1,07 g, 6,21 mmol) em THF (100 ml), seguido por DIPEA (2,4 g, 18,6 mmol). A mistura de reação foi agitada por 4 dias em temperatura ambiente. A suspensão foi filtrada e lavada com água (25 ml). O filtrado foi concentrado, diluído em clorofórmio, lavado 25 com água e salmoura, e então secado em Na2SO4. O produto precipitado durante a evaporação e secado sob vácuo dá 6-bromo-N-(5-(5-bromopiridin- 2-ilcarbamoil)piridin-2-il)nicotinamida 6 como um sólido amarelo (400 mg,
14 %). Pf. 245-247 °C.
1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ = 11,1 (br s, 1 H), 10,8 (br s, I Η), 9,0 (s, I Η), 8,7 (s, 1 Η), 8,53 (s, 1 Η), 8,41 (d, J = 8,4 Hz, 1 Η), 8,30 (d, J = 8,8 Hz, 1 Η), 8,21 (d, J = 8,4 Hz, 1 Η), 8,1 (d, J = 9,2 Hz, 1 Η), 8,01 (d, J = 8,8 Hz, 1 Η), 7,32 (br s, I Η), 6,51 (d, J = 8,8 Hz), 3,2 (d, J = 6,0 Hz, 4 Η),
1,57 (q, J = 7,2 Hz, 4 Η), 0,92 (t, J = 7,2 Hz, 6Η)
MS (ESI): m/z = 478 (Μ + H).
6-Bromo-N-(5-(5-bromopiridin-2-ilcarbamoil)piridin-2- il)nicotinamida 6 (350 mg, 0,73 mmol) foi dissolvido em n-propilamina limpa. A mistura de reação foi aquecida por 3 dias em temperatura de refluxo. Então o solvente foi evaporado dá um produto bruto, que foi cristalizado em 10 EtOAc para dar 6-(propilamino)-N-(5-(5-(propilamino)piridin-2-ilcarbamoil) piridin-2-il)nicotinamida 7 (122 mg, 38 % de rendimento) como um sólido branco. Pf. 249-250 0C.
1H-RMN (400 MHz, D2O+ DMSO-d6): δ = 8,95 (d, J = 2,0 Hz,
1 H), 8,68 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 8,50 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 8,36 (dd, J 1 = 2,2, J2= 8,8 Hz, 1 H), 8,24 (d, J = 8,8 Hz 1 H), 8,15 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 8,06 (dd, Jf 2,2, J2 = 9,2 Hz, 1 H), 7,96 (dd, J1= 1,6, J2 = 8,8 Hz 1 H), 6,51 (d, J = 8,8 Hz, 111), 3,25 (t, J = 4,0 Hz, 4 H), 1,54 (m, 4 H), 0,90 (t, J = 7,3 Hz, 6H).
MS (ESI): m/z = 457 (M+Na).
BMS (129 μΕ 1,73 mmol) foi adicionado a uma solução 20 de 6-(propilamino)-N-(5-(5-(propilamino)piridin-2-ilcarbamoil)piridin-2-il) nicotinamida 7 (75 mg, 0,173 mmol) em THF (15 ml). A mistura de reação foi novamente submetida a refluxo durante a noite e esfriada, então MeOH foi adicionado seguido pelo HCl concentrado. A mistura foi novamente submetida a refluxo contra uma outra por 16 horas. Então a mistura de reação 25 foi concentrada, o resíduo foi diluído em água (5 ml) e o pH foi ajustado a 14 usando solução de NaOH. A camada aquosa foi extraída com clorofórmio (50 ml x 3) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura e então secada em Na2SO4. A evaporação do solvente produziu um resíduo que foi purificado em gel de sílica (2:98, MeOH:EtOAc) que dá um material viscoso marrom (5 mg, 7 %). Então este foi tratado com HCl/MeOH que dá sal de cloridreto de N5-propil-N2-((6-((6-(propilamino)piridin-3- il)metilamino)piridin-3-il)metil piridina-2,5-diamina 8 (5 mg) como um material de goma.
1H-RMN (400 MHz, D2O+ DMSO-d6): δ = 8,48 (s, 3 H), 7,88
(d, J = 8,8 Hz 3 H), 6,33 (d, J = 8,8 Hz, 3 H), 6,08 (brs, 2H) 5,04 (brs, 2 H),
3,42 (m, 2 H), 3,27 (m, 2 H), 1,63 (m, 4 H), 1,03 (m, 6H)
MS (ESI): m/z = 408 (Μ + 3H)
Preparação de 2h:
Dicloridreto de N-Benzil-5-((5-p-toliltiazol-2-ilamino)metiltiazol-2-amina
5-p-toliltiazol-2-aiiuna ácido de 2-1)romotiazol-S-cubo3álico
Iodeto de 2-cloro-l-metilpiridínio (0,55 g, 2,2 mmol), DIEA (0,37 g, 2,9 mmol) e 5-p-toliltiazol-2-amina (0,27 g, 1,44 mmol) foram adicionados a uma suspensão de ácido 2-bromotiazol-5-carboxílico (0,30 g, 1,44 mmol) em DMF (5 mL). A solução resultante foi agitada em temperatura 15 ambiente até a reação estar completa. A mistura foi então diluída com AcOEt, lavada com água, secada com Na2SO4 e concentrada. O produto bruto foi purificado por coluna (30 % de AcOEt/PE), produzindo 2-bromo-N-(5-p- toliltiazol-2-il)tiazol-5-carboxamida (250 mg, 46 %) como um sólido.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 8,19 (s, 1 H), 7,6 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7,15 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7,04 (s, 1 H), 2,31 (s, 3 H).
13C-RMN (100 MHz, CDCl3): δ (ppm): 157,89, 149,44, 147,77, 144,33, 143,16, 141,99, 138,10, 137,38, 131,07, 129,32, 125,87, 107,34, 20,93,
MS (ESI): m/z (%): 379,87 [MH+].
Benzilamina (0,143 mL, 1,32 mmol) foi adicionado a uma solução de 2-bromo-N-(5-p-toliltiazol-2-il)tiazol-5-carboxamida (250 mg, 10 0,66 mmol) em DMF (4 mL). A mistura de reação foi agitada em refluxo por 2 horas. Então este foi diluído com AcOEt e lavado com água, secado com Na2SO4 e concentrado. O produto bruto foi purificado pela precipitação (AcOEt/PE), produzindo 2-(benzilamino)-N-(5-p-toliltiazol-2-il)tiazol-5- carboxamida (190 mg, 71 %) como um sólido.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 8,85 (bs, 1 H), 8,25 (s,
1 H), 7,80 (d, J= 8 Hz, 2 H), 7,46 (s, 1 H), 7,35 (m, 3 H), 7,28, (m, 2 H), 7,23 (d, J= 8 Hz, 2 H), 4,53 (s, 1 H), 2,33 (s, 3H).
13C-RMN (100 MHz, CDCl3): δ (ppm): 172,44, 158,89, 148,82, 145,74, 145,06, 137,99, 136,75, 131,58, 128,97, 128,15, 127,19, 126,92, 125,46, 118,98, 106,83, 47,44, 20,49, MS (ESI): m/z (%): 407,36 [MH+].
BMS (0,2 mL, 2,1 mmol) foi adicionado a uma solução de 2- (benzilamino)-N-(5-p-toliltiazol-2-il)tiazol-5-carboxamida (170 mg, 0,42 mmol) em THF (6 mL) em temperatura ambiente. A solução resultante foi 25 agitada em refluxo durante a noite. A reação foi então apagada com MeOH (2 mL) e I N de HCl foi adicionado até o pH atingir 2. Após a agitação a mistura de reação em temperatura de refluxo por 12 horas, os solventes orgânicos foram evaporados e a solução aquosa foi neutralizada com IN de NaOH, extraída com CHCl3, secada com Na2SO4 e concentrada. O produto bruto foi purificado por coluna (AcOEt), produzindo N-benzil-5-((5-p-toliltiazol-2- ilamino)metiltiazol-2-amina (30 mg, 18 %).
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7,59 (d, J= 8 Hz, 2 H),
7,23 (m, 5 H), 7,11 (d, J= 8 Hz5 2 H), 6,93 (s, 1 H), 6,58 (s, 1 H), 4,40 (s, 2 H), 4,32 (s, 2 H), 3,41 (bs, 2 H), 2,29 (s, 3 H).
13C-RMN (100 MHz, CDCl3): δ (ppm): 197,01, 170,75, 151,05, 137,39, 137,26, 137,03, 131,82, 129,07, 128,48, 127,48, 127,41,
125,75, 121,99, 100,46, 49,30, 41,95, 20,99, MS (ESI): m/z: 393,28 [MH+].
N-Benzil-5-((5-p-toliltiazol-2-ilamino)metiltiazol-2-amina (20 10 mg, 0,05 mmol) foi dissolvido em HCl metanólico (3 N, 1 mL) e CHCl3/AcOEt foi adicionado. O sólido precipitado foi filtrado pela decantação e secado à vácuo, produzindo dicloridreto de N-benzil-5-((5-p- toliltiazol-2-ilamino)metiltiazol-2-amina como um sólido branco (11 mg, 10%). Pf. 105-106 0C 15 Preparação de 2j:
Dicloridreto de N-Benzil-5-((4-p-toliltiazol-2-ilamino)metiltiazol-2-amina
O composto 2j foi preparado como descrito por 2 horas de partida a partir de 4-p-toliltiazol-2-amina e ácido 2-bromotiazol-5- carboxílico: (3,5 mg, 59 %). Pf. 106-108 °C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7,61 (d, J= 8 Hz, 2 H),
7,28 (m, 5 H), 7,13 (d, J= 8 Hz, 2 H), 6,95 (s, 1 H), 6,60 (s, 1 H), 4,42 (s, 2 H), 4,34 (s, 2 H), 3,01 (bs, 2 H), 2,31 (s, 3 H).
13C-RMN (100 MHz, CDCl3): δ (ppm): 170,68, 168,62,
151,11, 138,15, 137,48, 137,23, 131,86, 129,12, 128,55, 127,56, 127,74, 125,80, 122,076, 100,53, 49,33, 40,07, 21,07. MS (ESI): m/z (%): 393,29 [MH+]. Preparação de 2k:
Dicloridreto de N-Benzil-5-((5-(4-fluorofenil)-lH-pirazol-3-ilamino)
metiltiazol-2-amina
Boc
O
'Cl
e νφ Q i I
DiEA, DMF.ta.
Boc
BMS
THF ta.
Α-χ,ίΚΧ.
HN-/ a
3N I iaiMeCH
Iodeto de 2-cloro-l-metilpiridínio (0,84 g, 3,3 mmol), DIPEA (0,78 mL, 4,4 mmol) e 3-amino-5-(4-fluorofenil)-lH-pirazol-l-carboxilato de terc-butila (0,5 g, 2,2 mmol) foram adicionados a uma solução de ácido 2- bromotiazol-5-carboxílico (0,45 g, 2,2 mmol) em DMF (6 mL). A solução resultante foi agitada em temperatura ambiente até a reação estar completa. Então a mistura foi diluída com AcOEt, lavada com água, secada com Na2SO4 e concentrada. O produto bruto foi purificado por coluna (50 % a 100 % do gradiente AcOEt/PE), produzindo 3-(2-bromotiazol-5-carboxamido)-5-(4- fluorofenil)-lH-pirazol-l-carboxilato de terc-butila (160 mg, 20 %) como um sólido branco.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 11,39 (s, I N H), 8,56 (s, 1 H), 7,79 (t, Γ 7 Hz, 2 H), 7,31 (t, J= 8,6 Hz, 2 H), 6,96 (s, 1 H), 1,71 (s, 9H).
Benzilamina (0,1 mL, 0,87 mmol) foi adicionado a uma solução de 3 -(2-bromotiazol-5 -carboxamido)-5-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-1 - carboxilato de terc-butila (160 mg, 0,43 mmol) em dioxano (3 mL). A solução resultante foi agitada a 85 0C por 24 horas. O solvente foi evaporado e o produto bruto foi purificado por coluna (0 a 10 % gradiente McOH/AcOEt), produzindo 2-(benzilamino)-N-(5-(4-fluorofenil)-lH-pirazol-3-il)tiazol-5- carboxamida (180 mg, 90 %) como um sólido.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7,85 (s, 1 H), 7,64 (s, 2 H), 7,34-7,27 (m, 5 H), 7,08 (t, J = 8,6 Hz, 2 H), 6,71 (s, 1 H), 4,51 (s, 2 H),
4,39 (s, 2 H).
MS (ESI): m/z : 394,37 [MH+].
BMS foi adicionado a uma solução de 2-(benzilamino)-N-(5- (4-fluorofenil)-lH-pirazol-3-il)tiazol-5-carboxamida (50 mg, 0,13 mmol) em THF (I mL). A solução resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A reação foi então apagada com MeOH (0,5 mL) e I N de HCl foi adicionado até o pH = 2. Após a agitação a mistura de reação em temperatura ambiente por 3 horas, os solventes orgânicos foram evaporados e a solução aquosa foi neutralizada com a solução aquosa saturada NaHCO3, extraída com AcOEt, secada com Na2SO4 e concentrada. O produto bruto foi purificado por coluna (0 a 2 % de gradiente MeOH/AcOEt), produzindo N- benzil-5-((5-(4-fluorofenil)-lH-pirazol-3-ilamino)metiltiazol-2-amina (59 mg, 98 %).
1H-RMN (400 MHz, CDCl3/CD3OD): δ (ppm): 7,49 (s, 2 H), 7,30-7,27 (m, 5 H), 7,03 (t, J= 8 Hz, 2 H), 6,94 (s, 1 H), 5,82 (s, 1 H), 4,35 (s,
2 H), 4,28 (s, 2 H).
MS (ESI): m/z : 380,34 [MH+].
N-Benzil-5-((5-(4-fluorofenil)-lH-pirazol-3-ilamino) metiltiazol-2-amina (59 mg, 0,13 mmol) foi dissolvido em HCl metanólico (3 N, I mL) e AcOEt foi adicionado. O sólido precipitado foi filtrado pela decantação e secado à vácuo, produzindo dicloridreto de N-benzil-5-((5-(4- fluorofenil)-lH-pirazol-3-ilamino)metiltiazol-2-amina como um sólido 10
15
20
amarelo (14 mg, 25 %). Pf. 78 a 80 °C.
Preparação de 2n:
Dicloridreto de N-metil-5-((4-p-toliltiazol-2-ilamino)metiltiazol-2-amina
O composto 2n foi preparado como descrito por 2w, de partida a partir de 4-p-toliltiazol-2-amina e 2-(metil(tetraidro-2H-piran-2- il)amino)tiazol-5-carbaldeído: (28 mg, 80 %). Pf. 114 a 116 °C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7,97 (t, J = 5,6 Hz, 1 H), 7,75 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7,33 (m, 1 H), 7,18 (d, J= 8 Hz, 2 H), 6,99 (s, 1 H), 6,96 (s, 1 H), 4,46 (d, J= 5,6 Hz, 2 H), 2,76 (d, J= 4,3 Hz, 3 H), 2,30 (s, 3H).
13C-RMN (100 MHz, CDCl3): δ (ppm): 169,73, 167,45,
149.76, 137,43, 136,43, 132,15, 128,97, 125,53, 121,96, 100,52, 40,52,30,62,
20.76. MS (ESI): m/z : 317,24 ([MH+].
Preparação de 2o:
Dicloridreto de N-metil-5-((5-p-toliltiazol-2-ilamino)metiltiazol-2-amina
O composto 2o foi preparado como descrito por 2w, de partida a partir de 5-p-toliltiazol-2-amina e 2-(metil(tetraidro-2H-piran-2- il)amino)tiazol-5-carbaldeído: (70 mg, 78 %). Pf. não determinado (este decompõe-se acima de 140 °C).
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7,97 (t, J= 5,6 Hz, 1 H), 7,75 (d, J= 8 Hz, 2 H), 7,33 (m, 1 H), 7,19 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7,00 (s, 1 H), 6,96 (s, 1 H), 4,46 (d, J= 5,6 Hz, 2 H), 2,75 (d, J= 5 Hz, 3 H), 2,31 (s, 3H). 13C-RMN (100 MHz, CDCl3): δ (ppm): 170,65, 168,37, 150.68, 138,36, 137,35, 133,08, 129,89, 126,45, 122,89, 101,45, 41,44, 31,55,
21.68. MS (ESI): m/z: 317,38 ([MH+].
Preparação de 2p:
Tricloridreto de N-(Piridin-2-il)-5-((tiazol-2-ilamino)metiltiazoI-2-amina
2-bromotiazol-5-caií)oxilaio de etila.
DIBAL-H (1M em hexanos, 16,88 mL, 16,88 mmol) foi
adicionado a uma solução de 2-bromotiazol-5-carboxilato de etila (2 g, 8,44 mmol) em CH2Cl2 (16 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 6 horas. Após extinguir com MeOH (6 mL), Et2O e uma solução saturada de sal de Rochelle foram adicionados, a mistura de reação foi agitada até as duas fases serem claramente separadas. A fase orgânica foi secada, concentrada e purificada pela cromatografia de coluna (30 % a 100 % do gradiente AcOEt/PE), produzindo (2-bromotiazol-5-il)metanol (1,44 g, 88 %) como um óleo.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7,25 (s, 1 H), 4,93 (bs,
1 H), 4,69 (s, 2 H). 13C-RMN (100 MHz, CDCl3): S(ppm): 144,25, 139,58, 136,89, 57,19. MS (ESI): m/z : 193,83 [MH+].
MnO2 (3,8 g, 37,10 mmol) foi adicionado a uma solução de (2- bromotiazol-5-il)metanol (1,44 g, 7,42 mmol) em CHCl3 (20 mL). A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 3 dias. Então a solução foi filtrada através de Celite e concentrada, produzindo 2-bromotiazol-5- carbaldeído (870 mg, 61 %) como um sólido branco.
mmol) e 2-amino-tiazol (78 mg, 0,78 mmol) em tolueno (7 mL) e 3A peneiras moleculares foram agitadas em refluxo durante a noite. A solução amarelo forte da imina correspondente foi então vertida em NaBH4 (147 mg, 3,9 mmol) em EtOH por calor (50 mL). A solução incolor foi filtrada,
produzindo N-((2-bromotiazol-5-il)metiltiazol-2-amina (110 mg, 51 %) como um sólido.
suspensão de NaH (64 mg, 1,6 mmol) em THF (4 mL). A solução resultante foi agitada a 65 0C por 45 minutos. Então N-((2-bromotiazol-5-il)metiltiazol- 2-amina (110 mg, 0,4 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a 65 0C durante a noite. A reação foi apagada com água e a mistura de reação 25 foi extraída com AcOEt. A fase orgânica foi secada, concentrada e purificada pela cromatografia de coluna (em AcOEt). A precipitação de CHCl3 foi conduzido para eliminar o excesso de 2-aminopiridina N-(Piridin-2-il)-5- ((tiazol-2-ilamino)metiltiazol-2-amina foi obtido como um sólido amarelo fraco (15 mg, 14 %).
5
concentrada e purificada pela cromatografia de coluna (30 % de AcOEt/PE)
15
1H-RMN (400 MHz, CD3OD/CDCl3): δ (ppm): 7,33 (s, 1H) 6,95 (d, Γ 3,7 Hz, 1 H), 6,40 (d, J = 3,7 Hz, 1 H), 4,49 (s, 2 H), 2,9 (bs, 1H).
13C-RMN (100 MHz, CD3OD/CDCl3): δ (ppm): 169,00,
140,64, 139,95, 138,38, 136,27, 107,53, 41,29.MS (ESI): m/z : 276,30 ([MH+]).
20
2-Aminopiridina (0,150 g, 1,6 mmol) foi adicionado a uma 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 11,12 (bs, I Η), 8,24 (d, J = 4,4 Hz, I Η), 7,97 (s, I Η), 7,67 (t, J= 8 Hz, I Η), 7,26 (s, I Η), 7,05 (d, J= 3,2 Hz, I Η), 7,02 (d, J= 8,4 Hz, I Η), 6,88 (t, J = 5,6 Hz, I Η), 6,64 (d, J = 4,4 Hz, I Η), 4,53 (d, J = 4,8 Hz, 2H).
13C-RMN (100 MHz, DMSOd6): δ (ppm): 168,17, 159,06, 151,41, 146,15, 138,34, 137,51, 135,44, 126,24, 115,52, 110,34, 106,35, 39,96.
MS (ESI): m/z : 290,32 ([MH+].
N-(Piridin-2-il)-5-((tiazol-2-ilamino)metiltiazol-2-amina (15 mg, 0,05 mmol) foi dissolvido em HCl metanólico (3 N, I mL) e Et2O foi adicionado. O sólido precipitado foi filtrado pela decantação e secado à vácuo, produzindo tricloridreto de N-(piridin-2-il)-5-((tiazol-2- ilamino)metiltiazol-2-amina (14 mg, 2 %, 95,5 % puro por HPLC). decomposição Pf. >145 °C.
Preparação de 2q:
N-Benzil-5-((5-fluoropiridin-2-ilamino)metilpiridin-2-amina
Reagentes: i) Iodeto de 2-cloro-l-metilpiridínio /DIPEA/THF/ temperatura ambiente 24h ii) Benzilamina/140 0C iii) BMS/THF/refluxo, 24h iv) MeOHZHCl/temperatura ambiente/lh
Iodeto de 2-cloro-l-metilpiridínio (2,2 g, 9,8 mmol) e DIPEA (1 ml) foram adicionados a uma mistura de 5-fluoropiridin-2-amina 1 (554 mg, 4,9 mmol) e ácido 6-bromonicotínico 2 (1 g, 4,9 mmol) em THF. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 2 dias. Na conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada a 1 /3 deste volume e o produto precipitado foi filtrado. O filtrado foi concentrado, diluído com 5 clorofórmio (100 ml), lavado com água e salmoura e então secado em Na2SO4. A evaporação do solvente dá um produto amarelo bruto, que cristalizado em EtOAc dá 6-bromo-N-(5-fluoropiridin-2-il)nicotinamida 3 (l,05g, 71 %) como um sólido branco. Pf. 173 a 174 °C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ = 11,27 (s, 1 H), 8,94 (s, 1 H), 8,43 (s, 1 H), 8,27 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 8,2 (d, J = 12 Hz, 1 H), 7,83 (m, 2H).
64 MS (ESI): m/z = (297, M + H).
O 6-bromo-N-(5-fluoropiridin-2-il)nicotinamida 3 (500 mg, 1,68 mmol) foi dissolvido em benzil amina (2 ml), e aquecido a 140 0C por 48 horas. Então a mistura de reação foi concentrada. O produto foi recristalizado a partir de acetato de etila e pet-éter dá 6-(benzilamino)-N-(5-fluoropiridin-2- il)nicotinamida 4 (500mg, 92 %) como um sólido branco.
Pf. 167 a 168 °C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ = 10,5 (s, 1 H), 8,69 (s, 1 H), 8,36 (s, 1 H), 8,17 (s, 1 H), 7,79 (s, 1H) 7,24 - 7,70(m, 7 H), 6,57 (d, J = 8,0 Hz, 1H) 4,18 (s, 2H). MS (ESI): m/z = (323, M + H)
BMS (400 μΙ.) foi adicionado a uma solução de 6- (benzilamino)-N-(5-fluoropiridm-2-il)nicotinamida 4 em THF (20 mL). A mistura de reação foi novamente submetida a refluxo por 16 horas. Então a mistura de reação foi esfriada em temperatura ambiente. O MeOH (2 mL), 25 seguido pelo HCl concentrado foram adicionados. A mistura de reação foi novamente submetida a refluxo por 8 horas, concentrado e diluído com água (2 mL). O pH foi ajustado a 14 e a mistura de reação foi extraída com clorofórmio (50 mL x 2). Todas as fases orgânicas foram lavadas com salmoura e secadas em Na2SO4. A evaporação do solvente dá um produto 10
bruto que foi purificado em gel de sílica (1:1, EtOAc: Pet-éter) que dá N- benzil-5-((5-fluoropiridin-2-ilamino)metilpiridin-2-amina 5. Este foi tratado com HCl/MeOH dando o sal correspondente (50 mg 13 %) como um sólido branco. Pf. 166 a 168 °C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ = 8,11 (d, J = 1,6, 1H) 7,99 (d, J = 2,8, 1H) 7,46 (dd, J = 2,4, J= 8,4 Hz, 1H) 7,33-7,37 (m, 3 H),7,28 (m,3H), 7,20 (dt, J= 3,2, J = 8,0 Hz, 1H) 6,35- 6,40 (m, 2H) 4,96 (brs, 1H) 4,61 (s, 1 H), 4,53 (d, J = 6,0 Hz, 2 H), 4,34 (d, J = 5,2 Hz 2H) MS (ESI): m/z = (309, M + H)
Preparação de 2s:
H2N
N
.2 HCl
Reagentes: i) iodeto de iodeto de 2-cloro-l-metilpiridínio /DIPEA/temperatura ambiente/3 dias ii) Benzilamina/110 0C/ durante a noite iii) BMS/ THF/ MeOH/HCl iv) MeOH/HCl.
A uma suspensão de ácido 5-(4-fluorofenil)-l-(tetraidro-2H- 15 piran-2-il)-lH-pirazol-3-carboxílico 1 (400 mg, 1,37 mmol) e iodeto de 2- cloro-1-metilpiridínio (524 mg, 2,0 mmol) em THF (20 ml), DIPEA (0,46 ml) seguido por 6-bromopiridin-2-amina 2 (237 mg, 1,37 mmol) foram adicionados. A suspensão foi agitada por 72 horas. Então a mistura de reação foi concentrada, diluída em água (10 ml) e extraída com diclorometano (50 ml 20 x 2). Todas as fases orgânicas foram lavadas com água e salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas. O resíduo foi purificado em uma coluna em gel de sílica (EtOAc: pet-éter 1:4) dando o N-(6-bromopiridin-2-il)-5-(4- fluorofenil)-1 -(tetraidro-2H-piran-2-il)-1 H-pirazol-3-carboxamida 3 (180mg) como um sólido branco. Pf. 151 a 152 °C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ =9,53 (s, 1 H), 8,31 (d, J =8,0 Hz, 1 H), 7,83 (dd, J = 5,2, J = 8,8 Hz, 2 H), 7,64 (t, J = 8,0 Hz, 211), 7,30 (m, 2H) 7,13 (t, J = 9,2 Hz, 2 H), 6,04 (dd, J = 2,4 Hz, J = 10 Hz, 1 H), 4,26 (d, J = 11,0 Hz, 1 H), 3,86 (t, J= 11,6 Hz, 1 H), 2,52-2,60 (m, 1 H), 2,11 2,16 (m,
2 H), 1,27-1,57 (m, 2H).
N-(6-Bromopiridin-2-il)-5-(4-fluorofenil)-1 -(Tetraidro-2H- piran-2-il)-lH-pirazol-3-carboxamida 3 (300 mg, 0,67 mmol) foi dissolvido 10 em benzilamina (3 ml). A mistura de reação foi aquecida por 24 horas a 130 °C. Então a mistura de reação foi purificada em uma coluna em gel de sílica (1:5 EtOAc: Pet-éter) dá N-(6-(benzilamino)piridin-2-il)-5-(4-fluorofenil)-l- (tetraidro-2H-piran-2-il)-lH-pirazol-3-carboxamida 4 como um sólido branco (187 mg, 59 %). Pf. 139 a 140 °C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ = 7,79 (brs, 2 H), 7,18-7,39
(m, 8 H), 7,09 (t, J = 7,6 Hz, 2 H), 6,94 (s, 1 H), 6,84 (d, J = 8,0 Hz, 1 H),
6,43 (d, J= 8,0Hz, 1 H), 5,98 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 4,64 (s, 2 H), 3,96 (d, J = 10,8 Hz, 1 H), 3,54 (t, J = 10,4 Hz, 1 H), 2,54 (m, 1 H), 2,02- 2,10 (m, 2 H), 1,56- 1,67 (m, 3H).
Dimetilsulfeto de borano (50 μι) foi adicionado a uma
solução de N-(6-(benzilamino)piridin-2-il)-5-(4-fluorofenil)-1 -(tetraidro-2H- piran-2-il)-lH-pirazol-3-carboxamida 4 (180 mg, 0,38 mmol) em THF (10 ml). A mistura de reação foi novamente submetida a refluxo durante a noite e esfriada. MeOH foi adicionado, seguido pelo HCl concentrado e a mistura de 25 reação foi aquecida por 5 horas. Então a mistura de reação foi concentrada à vácuo, diluída com água (5 ml) e extraída com clorofórmio (50 ml x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, então secadas em Na2SO4 e concentradas sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado em gel de sílica (50 % de EtOAc: pet-éter) dá N2-benzil-N6-((5-(4- fluorofenil)-lH-pirazol-3-il)metilpiridina-2,6-diamina 5 (20 mg) como um material oleoso, que foi tratado com ácido clorídrico metanólico por 2 horas.
O solvente foi evaporado sob pressão reduzida dá um material de goma (20 mg).
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ = 7,75 (dd, J = 5,6 Hz, J = 8,4 Hz, 2 H), 7,28- 7,37 (m, 8 H), 7,11 (t, J = 8,8 Hz, 2 H), 6,44 (s, 1 H), 3,93 (s,
2 H), 3,87 (s, 2H). MS (ESI): m/z = 374 (Μ + H)
Preparação de 2t:
N-Benzil-6-((5-(4-fluorofenil)-lH-pirazol-3-ilamino) metilpiridin-2-amina
,NHi
-O-hCT
Boc
1
50%
HN'
84%
ii>
3HCI
Reagentes: i) iodeto de 2-cloro-l-metilpiridínio
/DIPEA/temperatura ambiente/3 dias ii) Benzilamina/110 0C/ durante a noite iii) BMS/ THF/ MeOH/HCl.
Iodeto de 2-cloro-l-metilpiridínio (950 mg, 3,7 mmol) e DIPEA ( 0,7 mL) foram adicionados a uma solução de ácido 6- 15 bromopicolínico 2 (500 mg, 2,47 mmol) em DCM/DMF seco (30/5 mL). A mistura de reação foi agitada por 1 hora. O 3-amino-5-(4-fluorofenil)-lH- pirazol-l-carboxilato de terc-butila 1 foi adicionado (650 mg, 2,47 mmol). A mistura de reação amarelo resultante foi agitada por 3 dias. Então a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, o resíduo foi diluído em clorofórmio e lavado com água e salmoura, e então secado em Na2SO4. A mistura bruta resultante foi purificada em gel de sílica (EtOAc: pet-éter, 1:3) dá o 6-bromo-N-(5-(4-fluorofenil)-lH-pirazol-3-il) picolinamida 3 (450 mg, 50 %) como um sólido branco.
Pf. 245 a 247 °C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ = 10,3 (s, 1 H), 8,15(d, J = 7,6 Hz, 1 H), 8,02 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,95 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,82 (dd, J = 5,2 Hz, J= 8,0 Hz, 2 H), 7,32 (t, J = 8,8 Hz 1 H), 7,05 (s, 1H).
MS (ESI): m/z = 361 (Μ + H).
6-Bromo-N-(5-(4-fluorofenil)-lH-pirazol-3-il)picolinamida 3 (200 mg, 0,55 mmol) foi dissolvido em benzilamina limpa (5 ml). A mistura de reação foi aquecida por 24 horas. Então o solvente foi evaporado e o resíduo foi purificado em gel de sílica (EtOAc: pet-éter, 1:4) dá o 6- (benzilamino)-N-(5-(4-fluorofenil)-lH-pirazol-3-il) picolinamida 4 (180 mg, 84 %). Pf. 185 a 187 °C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ 10,1 (brs, 1 H), 7,81 (d, J = 5,6, J = 8,4 Hz, 2 H), 7,60 (t, J = 7,6 2 H), 7,44 (d, J = 7,2 Hz 2 H), 7,28-7,36 (m, 5 H), 7,23 (t, J = 7,2 Hz 1 H), 7,02 (brs, 1 H), 6,79 (d, J = 8,4 Hz 1 H),
4,58 (s, 2H). MS (ESI): m/z = 388 (Μ + H).
Dimetilsulfeto de boro (50 mg, 0,66 mmol) foi adicionado a uma solução de 6-(benzilamino)-N-(5-(4-fluorofenil)-lH-pirazol-3-il) picolinamida 4 (150 mg, 0,37 mmol). A mistura de reação foi novamente submetida a refluxo por 16 horas. Após o esfriamento a mistura de reação em temperatura ambiente MeOH (2mL), seguido pelo HCl concentrado foram adicionados. A mistura de reação foi novamente submetida a refluxo por uma outra 12 horas. A mistura de reação foi concentrada e diluída com água (4 ml) e o pH foi ajustado a 12 usando solução de NaOH. A mistura de reação foi extraída com clorofórmio (40 x 3 mL). Todas as camadas orgânicas foram 10
então lavadas com água e salmoura, então secadas em Na2SO4 e o produto bruto foi purificado em coluna em gel de sílica (100 % de EtOAc) dá um material oleoso (40 mg, 27 %), que foi então tratado com HCl/MeOH dá sal de cloridreto de N-benzil-6-((5-(4-fluorofenil)-lH-pirazol-3-ilamino) metilpiridin-2-amina 6 (20 mg, 39 %). Pf. 133 a 134 °C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ = 8,88 (br, 1H) 7,82 (brs, 2 H), 7,40 (m, 5 H), 6,99 (d, J = 5,2 Hz 1 H), 6,87 (brs, 1 H), 6,2 (brs, 1 H), 5,76 (brs, 1 H), 4,69 (brs, 2 H), 4,52 (brs, 2H). MS (ESI): m/z = 374 (Μ + H). Preparação de 2u:
Preparação de 3-(2,3-diidrotiofen-2-il)-N-((5-(4-fluorofenil)-lH-pirazol-3- il)metil-lH-pirazol-5-amina (7)
Reagentes: i) EtOH, H2SO4/ Refluxo 16 h ii) DHP/TFAITHF/Refluxo 16h iii) LiOHZH2OZMeOH
Boc
c^pr
Boc
THP
Reagentes: i) iodeto de 2-cloro-1-metilpiridínio/DCM/DIPEA ii) BMS/THF/refluxo iii) HCl/MeOH
3 a 4 gotas de H2SO4 concentrado foram adicionados a uma solução de ácido 5-(4-fluorofenil)-lH-pirazol-3-carboxílico I em EtOH. A mistura de reação foi novamente submetida a refluxo por 2 dias. A 5 mistura de reação foi concentrada e diluída com clorofórmio (100 ml) e lavada com solução de NaHCO3 saturada, água e salmoura, e secada em Na2SO4. A evaporação do solvente sob á vácuo dá um 5-(4-fluorofenil)-lH-pirazol-3-carboxilato de etila 2 como um sólido marrom (1,05 g, 93 %). Pf. 148 a 150 °C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ = 7,77 (dd, J = 5,6 Hz, J = 8,4
Hz, 2 H), 7,13 (t, J = 8,4 Hz, 2 H), 7,06 (s, 1 H), 4,41 (q, J = 7,2 Hz, 2 H),
1,40 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
13C-RMN (100 MHz, CDCl3): δ 164,5, 162,1, 160,6, 127,9, 127,8, 116,3, 116,1, 105,8,61,8, 14,6. MS (ESI): m/z = 235 (Μ + H).
DHP (20,4 mmol, 1,7 ml) foi adicionado a uma solução de 5-
(4-fluorofenil)-lH-pirazol-3-carboxilato de etila 2 (800 mg, 3,4 mmol) em THF seco (50 ml), seguido por uma quantidade catalítica de TFA (20 μι). Então a mistura de reação foi novamente submetida a refluxo por 2 dias. A mistura de reação foi concentrada, diluída com clorofórmio (100 ml), lavada 20 com água e salmoura, e secada em Na2SO4. A purificação do produto bruto em gel de sílica (Pet-éter:EtOAc, 9:1) dá um 5-(4-fluorofenil)-l-(tetraidro- 2H-piran-2-il)-lH-pirazol-3-carboxilato de etila 3 (600mg, 55,5 %) como um sólido branco. Pf. 95 a 96 °C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ = 7,84 (dd, J = 5,6, J = 8,4 Hz, 2 H), 7,15 (s, 1 H), 7,10 ^ J = 8,8 Hz, 2 H), 6,33 (dd, J = 2,4, J = 9,6 Hz, 1 H), 4,40 (q, J= 7,2 Hz 2 H), 4,09-4,16 (m, 2 H), 3,75-3,80 (m, 1 H), 2,56-2,61 (m, 1 H), 2,15 (m, 1 H), 2,0 (d, J= 12,8 Hz, 1 H), 1,56-1,78 (m, 2 H), 1,42 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
LiOH (120 mg, 5 mmol) foi adicionado a uma solução de 5-(4- fluorofenil)-l-(tetraidro-2H-piran-2-il)-lH-pirazol-3-carboxilato de etila 3 (1,1 g 3,4 mmol) em THF/H20 (1:1,5 ml). A mistura de reação foi agitada durante a noite. A solução clara foi concentrada, e recolocada em suspensão em clorofórmio (25 ml). O sólido foi filtrado e secado sob vácuo dá um ácido 5 5-(4-fluorofenil)-l-(tetraidro-2H-piran-2-il)-lH-pirazol-3-carboxílico 4 (987 mg, 99 %) como um sólido branco. Pf. 188 a 190 °C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ = 7,88 (dd, J = 5,6 Hz, J = 8,8Hz, 2 H), 7,20 (t, J = 8,8 Hz, 2 H), 6,82 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6,71 (s, 1 H), 3,90 (d, J = 11,2 Hz, 1 H), 3,55 (m, 1 H), 2,31 (m, 1 H), 2,02 (d, J = 12Hz, 1 H), 1,76 (d, J = 12,8 Hz, 1 H), 1,52 -1,65 (m, 2H). MS (ESI): m/z = 291 (M+).
Iodeto de 2-cloro-l-metilpiridínio (650 mg, 2,5 mmol) foi adicionado a uma solução de ácido 5-(4-fluorofenil)-l-(tetraidro-2H-piran-2- il)-lH-pirazol-3-carboxílico 4 (500 mg, 1,72 mmol) em THF/DMF (20/2 ml), seguido por DIPEA (0,5 ml). A mistura de reação foi agitada por 30 minutos, 15 então 3-amino-5-(tiofen-2-il)-lH-pirazol-l-carboxilato de terc-butila 5 (456mg, 1,72 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada por 2 dias. A mistura de reação foi concentrada, diluída com clorofórmio (100 ml) e lavada com água e salmoura, secada em Na2SO4 e o solvente foi evaporado. O produto bruto foi bem secado e dissolvido em THF (10 ml), 20 subsequentemente o BMS (0,3 ml) foi adicionado. A mistura de reação foi aquecida durante a noite e esfriada, então MeOH e HCl concentrado foram adicionados. A mistura de reação foi novamente aquecida por uma outra 5 horas. A mistura de reação foi esfriada, concentrada e diluída com água (5 ml), o pH foi ajustado a 14 com grânulos de NaOH, e extraídos com 25 clorofórmio (50 ml x 2). Todas as camadas orgânicas foram lavadas com água e salmoura, secadas em Na2SO4 e o solvente foi evaporado. O produto bruto foi purificado em uma coluna em gel de sílica (4:1, EtOAc: pet-éter) dando um N-((5-(4-fluorofenil)-lH-pirazol-3-il)metil-5-(tiofen-2-il)-lH-pirazol-3 - amina 7 (66 mg, 11 % total). Pf. 128 a 130 °C. 1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ =4,76 (s, 2 Η), 6,33 (s, 2 Η), 7,02-7,06 (m, 3 Η), 7,28-7,50 (m, 2 Η), 7,73-7,74 (m, 2Η). MS (ESI): m/z = 340 (Μ + Η)
Preparação de 2w:
Dicloridreto de N-metil-5-((tiazol-2-ilamino)metiltiazol-2-amina
CVnh
ίη2
LiAlH4 / S' tC MttCX rVY peneira» Hu1Uc1Uares \7 S'
—---- HO kiD -2—- O THP rtfIuxo_P- s Γ
THF.0C ™P CHCIj ta- THP HNaBH4 THP
EtOHpor calor
TFA (22 μ!., 0,3 mmol) e DHP (3,9 mL, 43,5 mmol) foram adicionados a uma suspensão de 2-aminotiazol-5-carboxilato de etila (5 g, 29 mmol) em CH3CN (40 mL) em temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada em refluxo durante a noite. A mistura de reação foi concentrada e 10 dissolvida em AcOEt/PE e mantida a 4 0C durante a noite. O sólido branco resultante foi filtrado e lavado com PE, produzindo 2-(tetraidro-2H-piran-2- ilamino)tiazol-5-carboxilato de etila (4,73 g, 64 %).
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7,85 (s, 1 H), 6,69 (bs,
1 H), 4,75 (t, J = 3,5 Hz, 1 H), 4,29 (q, J = 4,5 Hz, 2 H), 3,97 (m, 1 H), 3,60 (m, 1 H), 1,96 (m, 2 H), 1,58 (m, 4 H), 1,34 (t, J = 4,5 Hz, 3H).
13C-RMN (100 MHz, CDCI3): δ (ppm): 173,26, 161,98, 145,98, 117,41, 83,63, 65,19, 60,82, 30,39, 24,88, 21,62, 14,33. MS (ESI): m/z (%): 257,31 ([MH+], 100 %)
2-(tetraidro-2H-piran-2-ilamino)tiazol-5-carboxilato de etila (4,73 g, 18,5 mmol) foi adicionado a uma suspensão de NaH (740 mg, 18,5 mmol) em THF (20 mL) a 0 °C, seguido por iodeto de metila (1,15 mL, 18,5 mmol). A mistura resultante foi aquecida em refluxo durante 3 horas. Após extinguir com água e a extração com AcOEt, o produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna (50 % de AcOEt/PE), produzindo 2- (metil(tetraidro-2H-piran-2-il)amino)tiazol-5-carboxilato de etila (2,02 g, 40 %) como um óleo.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7,89 (s, 1 H), 5,29 (t, J = 3,8 Hz, 1 H), 4,29 (q, J = 4,5 Hz, 2 H), 4,07 (d, J = 7,3Hz , 1 H), 3,65 (td, J = 7 Hz, 2 Hz, 1 H), 3,09 (s, 3 H), 1,96 (m, 1 H), 1,75-1,55 (m, 511), 1,34 (t, J= 4,5Hz, 3H).
13C-RMN (100 MHz, CDCl3): δ (ppm): 174,19, 162,02, 147,40, 116,83, 87,06, 68,37, 60,61, 32,47, 28,69, 24,97, 23,03, 14,30. MS (ESI): m/z (%): 271,38 ([MHf], 100 %).
LiAlH4 (425 mg, 11,20 mmol) foi adicionado a uma solução de 2-(metil(tetraidro-2H-piran-2-il)amino)tiazol-5-carboxilato de etila (2,02 g, 7,47 mmol) em THF (20 mL) a 0 0C em pequenas porções. Após a agitação a
0 0C por 30 minutos, a reação foi apagada levemente por H2O (1 mL), 5 % de NaOH (3 mL) e novamente H2O (5 mL). Então AcOEt foi adicionado. A
mistura de reação foi secada com Na2SO4 e filtrada através de Celite. O filtrado foi concentrada e purificado pela cromatografia de coluna (30 % a 50 % do gradiente AcOEt/PE), produzindo (2-(metil-(tetraidro-2H-piran-2- il)amino)tiazol-5-il)metanol (1,5 g, 93 %) como um óleo.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7,00 (s, 1 H), 5,16 (m,
1 H), 4,65 (s, 2 H), 4,06 (d, J= 7 Hz, 1 H), 3,63 (td, J= 7,3 Hz, 2 Hz, 1 H), 3,46 (s, 1 H), 3,04 (s, 3 H), 1,95-1,52 (m, 611).
13C-RMN (100 MHz, CDCl3): δ (ppm): 171,68, 137,27, 126,45, 87,64, 68,308, 57,61, 32,34, 28,91, 25,11, 23,30. MS (ESI): m/z (%): 229,29 ([MH+], 100%).
MnO2 (3 g, 34,82 mmol) foi adicionado a uma solução de (2- (metil(tetraidro-2H-piran-2-il)amino)tiazol-5-il)metanol (1,59 g, 6,96 mmol) em CHCl3 (50 mL). A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 2 dias. Então a solução foi filtrada através de Celite e concentrada, produzindo 2-(metil-(tetraidro-2H-piran-2-il)amino)tiazol-5- carbaldeído (1,5 g, 96 %) como um óleo amarelo.
1 H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 9,70 (s, 1 H), 7,88 (s,
1 H), 5,35 (t, J = 3,8 Hz, 1 H), 4,08 (d, J= 7 Hz , 1 H), 3,65 (td, J= 7,3 Hz, 2 Hz, 1 H), 3,12 (s, 3 H), 1,97-1,55 (m, 611).
13C-RMN (100 MHz, CDCl3): δ (ppm): 180,21, 175,18, 152,36, 128,35, 86,66, 67,92, 32,38, 28,11, 24,44, 22,44. MS (ESI): m/z (%): 227,31 ([MH+], 100%).
Uma solução de 2-(metil(tetraidro-2H-piran-2-il)amino)tiazol- 5-carbaldeído (250 mg, 1,10 mmol) e 2-aminotiazol (110 mg, 1,10 mmol) em tolueno (11 mL) e peneiras moleculares 3A foram agitadas em refluxo durante a noite. A solução fortemente amarelo da imina correspondente foi então vertida em NaBH4 (212 mg, 5,61 mmol) em EtOH por calor (80 mL). A solução incolor foi filtrada, concentrada e purificada pela cromatografia de coluna produzindo N-metil-N-(tetraidro-2H-piran-2-il)-5-((tiazol-2- ilamino)metiltiazol-2-amina (50 mg, 17 %) como um sólido.
1H-RMN (400 MHz, CD3OD/CDCl3): δ (ppm): 7,11 (d, J = 2,5 Hz , 2 H), 6,50 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 5,73 (bs, 1 H), 5,14 (dd, J = 5,8Hz, 1,8 Hz, 1 H), 4,50 (s, 2 H), 4,03 (d, J = 7,3 Hz , 1 H), 3,61 (td, J= 7,0 Hz, 2 Hz, 1 H), 3,02 (s, 3 H), 1,97-1,52 (m, 6H).
13C-RMN (100 MHz, CD3OD/CDCl3): δ (ppm): 171,31, 169,33, 138,83, 138,08, 122,57, 106,98, 87,54, 68,32, 42,34, 32,31, 28,89,
25,11, 23,28. MS (ESI): m/z (%): 311,35 ([MH+], 100 %).
Uma solução de N-metil-N-(tetraidro-2H-piran-2-il)-5-((tiazol- 2-ilamino)metil tiazol-2-amina (50 mg, 0,16 mmol) em 10 % TFA em CHCl3 (5 mL) foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Após a evaporação do solvente, o resíduo foi dissolvido em MeOH, neutralizado com Na2CO3 e extraído com CHCl3, a fase orgânica foi secada, concentrada e purificada pela cromatografia de coluna produzindo N-metil-5-((tiazol-2- 10
15
20
ilamino)metiltiazol-2-amina (28 mg, 77 %) como um sólido.
1H-RMN (400 MHz, CD3OD/CDCl3): δ (ppm): 7,02 (d, J= 2,3 Hz , 1 H), 6,92 (s, 1 H), 6,44 (d, J= 2,3 Hz, 1 H), 4,38 (s, 2 H), 3,37 (bs, 2 H), 2,84 (s, 3H).
13C-RMN (100 MHz, CD3OD/CDCl3): δ (ppm): 171,95, 169,74, 138,18, 137,23, 121,48, 106,87, 42,08, 31,6. MS (ESI): m/z (%): 227,29 ([MH+], 100 %).
N-metil-5-((tiazol-2-ilamino)metiltiazol-2-amina (28 mg, 0,12 mmol) foi dissolvido em HCl metanólico (3 N, I mL) e Et2O foi adicionado. O sólido precipitado foi filtrado pela decantação e secado à vácuo, produzindo dicloridreto de N-metil-5-((tiazol-2-ilamino)metiltiazol-2-amina como um sólido branco (29 mg, 79 %). Pf. 128 a 130 °C.
Preparação de 2y:
2 ,
N -((6-(benzilamino)piridin-3-il)metilpiridina-2,6-diamina
Bf'
N
1
NH2
54%
Br
N
3
62.3%
Br
Cx
H2N ""n íj
>'TI
N NH
Ill
r
4HC]
5
Reagentes: i) reagente de Mukayama/THF/DIPEA/RT 2 dias ii) Benzilamina/140 0C 16h iii) BMSITHF/24h iv) HCl/MeOH/temperatura ambiente/3h
Iodeto de 2-cloro-l-metilpiridínio (2,18 g, 9,8 mmol) e DIPEA (2,1 ml 11,5 mmol) foram adicionados a uma mistura de 6-bromo piridin-2- amina 1 (1 g, 5,7 mmol) e ácido 6-bromonicotínico 2 (1,16 g, 5,7 mmol) em THF. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 2 dias. Na conclusão da reação, a mistura de reação foi concentrada, diluída com clorofórmio (150 ml) e lavada com água e salmoura, e então secada em Na2SO4. A evaporação do solvente dá um produto amarelo bruto, que cristalizado em EtOAc dá um 6-bromo-N-(6-bromopiridin-2-il)nicotinamida 3 (1,1 g, 54 %) como um sólido branco. Pf. 171 a 173 °C.
1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8,94 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 8,26 (dd, J = 2,4, J = 8,0 Hz, 2 H), 7,80- 7,84 (m, 2 H), 7,45 (d; J = 7,6 Hz, 1H).
MS (ESI): m/z = (357 M + H)
6-Bromo-N-(6-bromopiridin-2-il)nicotinamida (650 mg, 1,8
mmol) 3 foi dissolvido em benzilamina (2 ml) e foi aquecido a 140 0C por 24 horas. Então a mistura de reação foi concentrada, e o produto foi recristalizado a partir de acetato de etila e pet-éter dá um 6- (benzilamino)-N- (6-(benzilamino)piridina-2-il)nicotinamida 4 (450 mg, 62 %) como um sólido branco. Pf. 132 a 133 °C.
1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8,72 (bs, 1 H), 8,54 (s, 1 H), 7,86 (s, 1 H), 7,61 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,61 (s, 1H) 7,23-7,32 (m, 11 H), 6,53 (d, J = 8,8 Hz 1 H), 4,53 (s, 2 H), 4,44 (s, 2H). MS (ESI): m/z = 410 (M + H).
BMS (2,2 mmol, 165 μΕ) (400 μΕ) foi adicionado a uma
solução de 6-bromo-N-(6-bromopiridin-2-il)nicotinamida 4 (300 mg, 0,73 mmol) em THF (20 ml). A mistura de reação foi novamente submetida a refluxo por 16 horas. Então a mistura de reação foi esfriada em temperatura ambiente, MeOH (2 mL) foi adicionado, seguido pelo HCl concentrado, e a 25 mistura de reação foi novamente submetida a refluxo por 8 horas. A mistura de reação foi concentrada e diluída com água (2 ml), o pH ajustado a 14 e a mistura de reação foi extraída com clorofórmio (50 ml x 2). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4. A evaporação do solvente dá um produto bruto que foi purificado em gel de sílica (1:1, EtOAc: pet-éter) dá a sólido branco que foi tratado com MeOHIHCl dá um sal de cloridreto de N2-((6-(benzilamino)piridin-3- il)metilpiridina-2,6-diamina 5 (50 mg, 49 %) como um sólido branco. Pf. 261 a 262 0C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ = 9,62 (brs, 1 H), 8,1 (s, 1 H),
7,86 (brs, 1 H), 7,54 (m, 2 H), 7,28- 7,37(m, 7 H), 6,89 (brs, 1 H), 4,61 (brs, 2 H), 4,13 (brs, 2 H), 4,06 (brs, 2H). MS (ESI): m/z = 304(M + H).
Preparação de 2z:
Tricloridreto de N-(Piridin-2-il)-5-((4-p-toliltiazol-2-ilamino)metiltiazol-2- amina
O composto 2z foi preparado como descrito pelo 2p de partida a partir de 2-bromotiazol-5-carbaldeído e 4-p-toliltiazol-2-amina: (29 mg, 38 %). Pf. 169 a 170 °C.
1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 11,13 (s, 1 H), 8,19 (d, JT 4,83 Hz, 1 H), 8,09 (t, J= 6,4 Hz, 11-1)7,79 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7,67 (t, J = 8 Hz, 1 H), 7,32 (s, 1 H), 7,20 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7,05 (s, 1 H), 7,02 (s, 1 H),
6,88 (t, J = 6,4 Hz, 1 H), 4,60 (d, J = 4,8 Hz, 2 H), 2,33 (s, 3H). MS (ESI): m/z (%): 380,34 ([MH+], 100 %).
Preparação de 2aa:
Dicloridreto de 4-(4-Clorofenil)-N-((2-(metilamino)tiazol-5-il)metil tiazol-2- amina
« HCl_/ 'N HCl
<x
s' 'N' S H
O composto 2aa foi preparado como descrito pelo 2w de partida a partir de 2-(metil-(tetraidro-2H-piran-2-il)amino) tiazol-5-carbaldeído e 4-(4-cloro fenil)tiazol-2-amina: (30 mg, 77 %). Pf. 122 a 123 °C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7,65 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7,27 (d, J = 8 Hz, 2 H), 6,93 (s, 1 H), 6,63 (s, 1 H), 4,43 (s, 2 H), 2,8 (s, 3H).
13C-RMN (100 MHz, CDCl3): δ (ppm): 172,03, 168,77, 149,84, 136,63, 133,19, 133,11, 128,52, 127,13, 121,69, 101,67, 41,84, 31,65. MS (ESI): m/z (%): 337,38 ([MH+], 100 %).
Preparação de 2ab:
N5-Propil-N2-((6-(propilamino)piridin-3-il)metilpiridina-2,5-diamina
'Xx Λι ·
1
81%
2
ü)
-
N N * H
91 %
Reagentes:
metilpiridínio/DIPEA/temperatura ambiente/4 dias ii) n- propilaminaTHF/DMSO/60 a 70 0C/ 2 dias iii) BMS/THF/HC1 24 horas iv) MeOH/HCl /temperatura ambiente /3 horas DIPEA (5,5 ml, 29 mmol) e iodeto de 2-cloro-l-metilpiridínio
(8 g, 26 mmol) foram adicionados a uma solução de 5-bromopiridin-2-amina
1 (2,56 g, 14,8 mmol) e ácido 6-bromonicotínico (3 g, 14,8 mmol) 2 em THF (150 ml). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 4 dias. Então o precipitado foi filtrado. O filtrado foi concentrado e dissolvido em clorofórmio (250 ml), lavado com água e salmoura e secado em Na2SO4. O solvente foi evaporado dá um produto bruto, que foi recristalizado a partir de acetato de etila dá 6-bromo-N-(5-bromopiridin-2-il)nicotinamida 3 (4,3 g, 81 %) como um sólido branco. Pf. 204 a 205 °C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ = 11,33 (s, 1 H), 8,93 (s, 1 H), 5 8,54 (s, 1 H), 8,25 (d, J= 8,8 Hz 1 H), 8,17(d, J= 8,8 Hz 1 H), 8,11 (d, J = 6,4Hz, 1 H), 7,82 (d, J= 8,4Hz 1H). MS (ESI): m/z = 357 (M+)
Uma solução de 6-bromo-N-(5-bromopiridin-2-il)nicotinamida
3 (1,1 g, 3,0 mmol) em npropilamina (limpo, 5 ml) foi aquecido a 80 0C por 2 dias. Então o solvente foi evaporado dando um 6-(propilamino)-N-(5- (propilamino)piridin-2-il)nicotinamida 4 como um sólido branco (880 mg, 91 %). Pf. 134 a 135 °C.
1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ = 10,6 (s, 1 H), 8,69 (d, J = 2,4 Hz, 1 H), 8,47 (d, J = 2,4Hz, 1 H), 8,16 (d, J^ 8,8 Hz, 1 H), 8,03 (dd, Jl = 2,4, J2= 8,8 Hz, 1 H), 7,97 (d, J = 8,8Hz, 1 H), 7,67 (brs, 2 H), 7,30 (t, J= 15 5,2Hz, 1 H), 6,5 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 3,27 (q, J = 6,8 Hz, 2 H), 2,74 (t, J = 7,2 Hz, 2 H), 1,54 (m, 4 H), 0,91 (t, J = 5,6 Hz, 6H). MS (ESI): m/z = 335 (M+Na)
BMS (215 μΙ>) foi adicionado a uma solução de 4 (180 mg, 0,575 mmol) em THF (10 ml). A mistura de reação foi agitada em 20 temperatura de refluxo durante a noite. A mistura de reação foi esfriada em temperatura ambiente. Então metanol (2 ml) foi adicionado levemente seguido pelo HCl concentrado (3 mL). A mistura de reação foi novamente submetida a refluxo por uma outra 5 horas. Então a mistura de reação foi esfriada, concentrada sob pressão reduzida, e diluída com água fria e o pH foi 25 ajustado a 14 com os grânulos KOH e extraído com clorofórmio (50 ml x 3). A fase orgânica foi lavada com solução de salmoura e secada em Na2SO4. O solvente foi evaporado dando um produto bruto, que foi purificado em uma coluna em gel de sílica (EtOAc: PE, 80:20) para dar o produto (10 mg, 6,3 %). Pf. 129 a 130 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSOd6): δ = 8,14 (d, J =1,6Ηζ, 1 Η), 8,0 (s, 1 Η), 6,42 (d, J = 8,8Ηζ, 1 Η), 6,32 (d, J 8,8 Hz, 1 Η), 5, 0 (br s, I Η), 4,9 (br s, I Η), 4,33 (d, J =5,2 Hz, 2 Η), 3,25 (q, J =6,4 Hz, 4 Η), 1,66 (q, J = 7,2 Hz, 4 Η), 1,01 (t, J = 7,2 Hz 6Η). MS (ESI): m/z = 321 (M+ Na). Preparação de 2ac:
Preparação de N-benzil-6-((5-(tiofen-2-il)-lH-pirazol-3-ilamino)metilpiridin- 2-amina (5)
N Br
(Λ~/ύνύ
S ΗΝ"·Ν °
HN'
H
N" " 'N' 'NH XHCl
Reagentes:
metilpiridínio/DIPEA/temperatura ambiente/3 dias ii) Benzilamina/ 120 0C/ 10 16 horas iii) BMS/ THF/ MeOH/HCl iv) HCl/MeOH
Iodeto de 2-cloro-l-metilpiridínio (580 mL, 2,2 mmol) e DIPEA (0,4 mL) foram adicionados a uma solução de ácido 6- bromopicolínico 2 (304 mg, 1,5 mmol) em uma mistura de DCM/DMF seco (20/2 mL). A mistura de reação foi agitada por 1 hora antes do 3-amino-5- 15 (tiofen-2-il)-lH-pirazol-l-carboxilato de terc-butila 1 (400 mg, 1,5 mmol) foi adicionado. A mistura de reação amarelo resultante foi agitada por 3 dias. Então a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído em clorofórmio e lavado com água e salmoura, e secado em Na2SO4. Após a evaporação do solvente, o produto bruto foi purificado em uma coluna 20 em gel de sílica (EtOAc: pet-éter, 1:1) dando um 6-bromo-N-(5-(tiofen-2-il)- lH-pirazol-3-il)picolinamida 3, (307 mg, 58 %). MS (ESI): m/z = 349 (M + Η) 350,8 (Μ+2Η)
O 6-bromo-N-(5-(4-fluorofenil)-lH-pirazol-3-il) picolinamida
3 (307 mg, 0,88 mmol) foi dissolvido em benzilamina limpa (3 mL) comum na caracterização adicional. A mistura de reação foi aquecida a 130 0C por 24 horas. Então o solvente foi evaporado e o resíduo foi purificado em gel de sílica (EtOAc: pet-éter, 1:4) dando 6-(benzilamino)-N-(5-(tiofen-2-il)-lH- pirazol-3-il)picolinamida 4 como um sólido viscoso (200 mg, 58 %).
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ = 10,1 (s, 1 H), 7,59 (m, 2 H), 7,33 (m, 5 H), 7,09 (s, 1 H), 6,64 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 5,11 (brs, 1 H), 4,60 (s, 2H). MS (ESI): m/z = 376 (Μ + H).
Dimetilsulfeto de borano (85 \iL, 1,06 mmol) foi adicionado a uma solução de 6-(benzilamino)-N-(5-(4-fluorofenil)-lH-pirazol-3- il)picolinamida 4 (200 mg, 0,53 mmol). A mistura de reação foi novamente submetida a refluxo por 16 horas. A mistura de reação foi esfriada em
temperatura ambiente e MeOH (2 mL) seguida pelo HCl concentrado (2 mL) foram adicionados e a mistura de reação foi novamente submetida a refluxo por uma outra 4 horas. A mistura de reação foi concentrada e diluída com água (4 ml) e o pH foi ajustado a 14 usando solução de NaOH e subsequentemente a mistura de reação foi extraída com clorofórmio (40 ml x 20 3). Todas as camadas orgânicas foram então lavadas com água e salmoura, secadas em Na2SO4. Após a evaporação do solvente, o produto bruto foi recristalizado a partir de EtOAc e pet-éter dando N-benzil-6-((5-(4- fluorofenil)-lH-pirazol-3-ilamino)metilpiridin-2-amina, (80 mg, 41 %). Pfil 17 a 118 0C.
20 mg da composição foram então tratadas com HCl/MeOH
dando o sal de cloridreto de 5,N-benzil-6-((5-(4-fluorofenil)-lH-pirazol-3- ilamino)metilpiridin-2-amina. Pf. 120 a 122 °C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ = 7,23-7,42 (m, 8H) 7,06 (d, J = 1,6 Hz, 1 H), 6,63 (d, J = 6,8 Hz, 1 H), 6,30 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 5,79 (s, 1 Η), 5,11 (brs, I Η), 4,74 (brs, 1 Η), 4,52 (brs, 2 Η), 4,30 (s, 2Η).
MS (ESI): m/z = 362 (Μ + Η)
Preparação de 2ad:
Tricloridreto de N-Propil-5-((5-((4-p-toliltiazol-2-ilamino)metiltiazol-2- 5 ilamino)metiltiazol-2-amina
SrQ** r Vvl- -SSSp
|p Clw
2'amiiiotiazol-cail)oxílaio de etila
vi. propilamina
refluxx)
HCi/MctfflL HCJ
H
DMAP (35 mg, 0,29 mmol), Et3N (16 mL, 116 mmol) e dicarbonato de di-terc-butila (13 mL, 58 mmol) foram adicionados a uma solução de 2-aminotiazol-5-carboxilato de etila (10 g, 58,1 mmol) em THF (100 mL). A solução resultante foi agitada em temperatura ambiente até a 10 reação ser completa. Os solventes foram evaporados e o produto bruto foi purificado pela precipitação com PE, produzindo 2-(terc- butoxicarbonilamino)tiazol-5-carboxiIato de etila (14,2 g, 90 %) como um sólido branco.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 8,03 (s, 1 H), 4,32 (q, J = 7,2 Hz, 2 H), 1,597 (s, 9 H), 1,35 (t, J- 6,8 Hz, 3H). MS (ESI): m/z (%>): 273,37 [MH+].
Uma solução de 2-(terc-butoxicarbonilamino)tiazol-5- carboxilato de etila (5 g, 18,36 mmol) e KOH (10,3 g, 184 mmol) em Et0H/H20 (1:1) (60 mL) foi agitada em temperatura ambiente por 12 horas. A solução foi acidificada com I N de HCl e o precipitado foi filtrado e 10 secado, produzindo ácido 2-(terc-butoxicarbonilamino)tiazol-5-carboxílico (3,84 g, 86 %) como um sólido branco.
'H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 12,0 (bs, 1 H), 7,94 (s, 1 H), 1,5 (s, 9H). MS (ESI): m/z (%): 245,35 [MH+].
Iodeto de 2-cloro-1-metilpiridínio (0,47 g, 1,84 mmol), DIEA 15 (0,44 mL, 2,5 mmol) e 4-p-toliltiazol-2-amina (0,24 g, 1,23 mmol) foram adicionados a uma solução de ácido 2-(terc-butoxicarbonilamino)tiazol-5- carboxílico (0,30 g, 1,23 mmol) em DMF (5 mL). A solução resultante foi agitada em temperatura ambiente até a reação ser completa. Então a mistura de reação foi diluída com AcOEt, lavada com água, secada com Na2SO4 e 20 concentrada. O produto bruto foi purificado por coluna (100 % de AcOEt), produzindo 5-(4-p-toliltiazol-2-ilcarbamoil)tiazol-2-ilcarbamato de terc-butila (80 mg, 17 %) como um sólido.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 10,8 (bs, 2 H), 7,76 (s, 1 H), 7,61 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7,15 (d, J= 8 Hz, 2 H), 7,09 (s, 1 H), 2,35 (s, 3 H), 1,42 (s, 9H). MS (ESI): m/z (%): 417,32 [MH+].
TFA (0,100 mL) foi adicionado a uma solução de 5-(4-p- toliltiazol-2-ilcarbamoil)tiazol-2-ilcarbamato de terc-butila (80 mg, 0,19 mmol) em CHCl3 (I mL). A solução resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Então os solventes foram evaporados e o produto bruto foi dissolvido em H2O. Após a neutralização com solução aquosa saturada de NaHCO3, esta foi extraída com AcOEt, secada e concentrada. A purificação por cromatografía de coluna (100 % de AcOEt) produzindo 2- amino-N-(4-p-toliltiazol-2-il)tiazol-5-carboxamida (40 mg, 67 %) como um sólido branco.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3/CD3OD): δ (ppm): 7,67 (s, 1 H), 7,47 (d, J = 8 Hz, 2 H), 6,97 (d, J = 8 Hz, 2 H), 6,87 (s, 1 H), 2,13 (s, 3H).
13C-RMN (100 MHz, CDCl3/CD3OD): δ (ppm): 173,92, 159,45, 158,36, 149,58, 143,45, 137,53, 131,35, 129,00, 125,59, 119,89, 106,58, 20,60. MS (ESI): m/z (%): 317,33 [MH+].
Iodeto de 2-cloro-1-metilpiridínio (0,048 g, 0,18 mmol), DIEA (0,045 mL, 0,25 mmol) e 2-amino-N-(4-p-toliltiazol-2-il)tiazol-5- carboxamida (0,04 g, 0,126 mmol) foram adicionados a uma solução de ácido 2-bromotiazol-5-carboxílico (26 mg, 0,126 mmol) em DMF (I mL). A 15 solução resultante foi agitada em temperatura ambiente até a reação ser completa. Então um sólido foi precipitado com AcOEt e o sólido foi separado pela centrifugação, produzindo 2-bromo-N-(5-(4 p-toliltiazol-2- ilcarbamoil)tiazol-2-il)tiazol-5-carboxamida (20 mg, 30 %) como um sólido que foi usado em THF na seguinte etapa sem purificação adicional.
1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 8,65 (s, 1 H), 7,95
(s, 1 H), 7,82 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7,61 (s, 1 H), 7,25 (d, J= 8 Hz, 2 H), 2,33 (s, 3H).
Uma solução de 2-bromo-N-(5-(4p-toliltiazol-2- ilcarbamoil)tiazol-2-il)tiazol-5-carboxamida (15 mg, 0,03 mmol) em propilamina limpa (0,5 mL) foi agitada em refluxo por 24 horas. O solvente foi evaporado e o produto bruto foi purificado por cromatografía de coluna (0 % a 5 % de MeOH/AcOEt) produzindo 2-(propilamino)-N-(5-(4p-toliltiazol-
2-ilcarbamoil)-tiazol-2-il)tiazol-5-carboxamida (15 mg, 17 %).
1H-RMN (400 MHz, CDCl3/CD3OD): δ (ppm): 8,12 (s, 1 H), 7,86 (s, I Η), 7,56 (d, J= 8 Hz, 2 Η), 7,08 (d, J = 8 Hz, 2 Η), 6,98 (s, I Η), 3,63 (bs, I Η), 3,13 (t, J = 6,4 Hz, 2 Η), 2,23 (s, 3 Η), 1,55 (q, J= 6,4 Hz, 2 Η),
0,86 (t, J= 6,4 Hz, 3Η). MS (ESI): m/z (%): 485,33 [MH+].
BMS (0,015 mL, 0,15 mmol) foi adicionado a uma solução de 2-(propilamino)-N-(5-(4p-toliltiazol-2-ilcarbamoil)tiazol-2-il)tiazol-5-
carboxamida (15 mg, 0,03 mmol) em THF (1 mL) em temperatura ambiente. A solução resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A reação foi então apagada com MeOH (0,5 mL). I N de HCl foi adicionado até o pH = 2. Após a agitação a mistura de reação em temperatura ambiente por 10 12 horas, os solventes orgânicos foram evaporados e a solução aquosa foi neutralizada com a solução aquosa saturada de NaHCO3, extraída com AcOEt, secada com Na2SO4 e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna (0 % a 5 % de McOH/AcOEt), produzindo N- propil-5-((5-((4-p-toliltiazol-2-ilamino)metiltiazol-2-ilamino)metiltiazol-2- 15 amina (5 mg, 32 %).
1H-RMN (400 MHz, CDCl3/CD3OD): δ (ppm): 7,68 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7,17 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7,05 (s, 1 H), 6,96 (s, 1 H), 6,66 (s, 1 H), 4,52 (s, 2 H), 4,42 (s, 2 H), 3,41 (bs, 1 H), 3,15 (t, J = 6,4 Hz, 2 H), 2,34 (s, 3 H), 1,62 (m, 2 H), 0,96 (t, J= 6,4 Hz,3H). MS (ESI): m/z (%): 457,29 [MH+]. N-Propil-5-((5-((4ptoliltiazol-2-ilamino)metiltiazol-2-
ilamino)metil-tiazol-2-amina (5 mg, 0,01 mmol) foi dissolvido em HCl metanólico (3 N, 0,5 mL) e Et2O foi adicionado. O sólido precipitado foi filtrado pela decantação e secado à vácuo, produzindo tricloridreto N-propil- 5-((5-((4-p-toliltiazol-2-ilamino)metiltiazol-2-ilamino)metiltiazol-2-amina 25 como um sólido branco (1,6 mg, 32 %). Pf. > 135 0C de decomposição. Preparação de 2ae:
Dicloridreto de 4-Benzil-N-((2-(benzilamino)tiazol-5-il)metiltiazol-2-amina HCf
O composto 2ae foi preparado como descrito por 2h, de partida a partir de ácido 4-benziltiazol-2-amina e 2-bromotiazol-5-carboxílico: (10 mg, 29 %). Pf. 78 a 79 0C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3/CD3OD): δ (ppm): 7,34-7,20 (m, 10 H), 6,99 (s, 1 H), 5,99 (s, 1 H), 4,42 (s, 4 H), 3,88 (s, 2 H). MS (ESI): m/z (%): 393,30 ([MHt], 100 %).
Preparação de 2af:
Dicloridreto de 4-Benzil-N-((2-(metilamino)tiazol-5-il)metiltiazol-2-amina
HCi
o composto 2af foi preparado como descrito por 2w de partida a partir de 4-benziltiazol-2-amina e 2-(metil(tetraidro-2H-piran-2- il)amino)tiazol-5-carbaldeído: (50 mg, 46 %). Pf. 126 a 127 °C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7,19-7,13 (m, 5 H), 6,85 (s, 1 H), 5,87 (s, 1 H), 4,28 (s, 2 H), 3,81 (s, 2 H), 3,76 (s, 2 H), 2,78 (s, 2 H). MS (ESI): m/z (%): 317,30 ([MH+], 100 %).
Preparação de 2ag:
Dicloridreto de 5-Benzil-N-((2-(benzilamino)tiazol-5-il)metiltiazol-2-amina
O composto 2ag foi preparado como descrito por 2h, de partida a partir de 5-benziltiazol-2-amina e ácido 2-bromotiazol-5- carboxílico: (25 mg, 69 %). Pf. 96 a 97 °C. 1H-RMN (400 MHz, CDCl3/CD3OD): δ (ppm): 7,27-7,14 (m, 10 Η), 6,88 (s, I Η), 6,73 (s, I Η), 4,33 (s, 2 Η), 4,29 (s, 2 Η), 3,88 (s, 2 Η). MS (ESI): m/z (%): 393,30 ([MH+], 100 %).
Preparação de 2ah:
Dieloridreto de 5-Benzil-N-((2-(metilamino)tiazol-5-il)metiltiazol-2-amina
O composto 2ah foi preparado como descrito por 2w de partida a partir de 5-benziltiazol-2-amina e 2-(metil-(tetraidro-2H-piran-2- il)amino)tiazol-5-carbaldeído (55 mg, 69 %). Pf. 76 a 77 °C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7,20-7,13 (m, 5 H), 6,84 (s, 1 H), 6,71 (s, 1 H), 4,28 (s, 2 H), 3,85 (s, 4 H), 2,78 (s, 3 H).
13C-RMN (100 MHz, CDCl3): δ (ppm): 171,79, 168,97, 139,47, 136,87, 134,74, 128,30, 128,08, 126,35, 125,83, 121,50,41,65,33,01, 31,38. MS (ESI): m/z (%): 317,30 ([MH+], 100 %).
Preparação de 2ai:
Tricloridreto de 5p-Tolil-N-((5-((5p-Tolil-l H-pirazol-3-il)metilamino)-IH- pirazol-3-il)metil-lH-pirazol-3-amina
1. Síntese de l-(tetraidro-2H-piran-2-il)-5-p-Tolil-lH-pirazol-3-amina:
l-(tetraidro-2H-piran-2-il)-5-p-Tolil-lH-pirazol-3-amina foi preparado como descrito por composto 2a.
ácido l-(tetraidro-2H-piran-2-il)-5-p-Tolil-lH-pirazol-3-
carboxílico foi preparado como descrito previamente por 2a.
2. Síntese de tricloridreto de 5-p-Tolil-N-((5-((5p-Tolil-lH-pirazol-3- il)metilamino)-1 H-pirazol-3 -il)metil-1 H-pirazol-3 -amina 3,4-diipiraiLo, TFA - - ......m~
MeCN, Reflwco
IiOR TMF/ MeOH / H2O T.À.
JiHj
JyjY
THP
re agente de MvJraipiita
DJEA, DCM
T.A.
O-pr
JHP
O2
H2, Pd/C
THF / MeOH
Ácido 5-Nitro-3-pirazol-carboxílico (8 g, 50,90 mmol) e ácido sulfurico (5 mL, 1,48 mmol) em metanol (200 mL) foram aquecidos por refluxo for 4 h. O solvente foi evaporado e o resíduo foi recolocado em suspensão em CH2Cl2 e lavado com água e salmoura e secado Na2SO4. 5- nitro-1 H-pirazol-3-carboxilato de metila (7,5 g, 86 %) foi obtido como um sólido branco.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm) = 7,40 (s, 1 H), 4,00 (s,
3H).
Uma mistura de 5-nitro-l H-pirazol-3-carboxilato de metila (7,5 g, 43,8 mmol), 3,4-diidro-2H-piran (8 mL, 87,7 mmol) e ácido trifluoroacético (65 μΕ, 0,9 mmol) em MeCN anidroso (100 mL) foi novamente submetida a refluxo por 16 horas. O solvente foi evaporado e o 10 resíduo foi recolocado em suspensão em CH2Cl2 (50 mL) e lavado com H2O e salmoura. Após a secagem com Na2SO4, a evaporação do solvente e a cromatografia de coluna em gel de sílica (PE-EtOAc, 9:1) l-(tetraidro-2H- piran-2-il)-5-nitro-lH-pirazol-3-carboxilato de metila (3,71 mg, 33 %) foi obtido.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm) = 7,41 (s, 1 H), 6,35
(dd, J = 9,2 Hz, J = 2,4 Hz ,1 H), 4,01 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 3,94 (s, 3 H), 3,73 (t, J= 8,0 Hz, 1 H), 2,43 (m, 1 H), 2,13 (m, 1 H), 2,01 (m, 1 H), 1,74-1,62 (m, 3H).
1 -(tetraidro-2H-piran-2-il)-5-nitro-1 H-pirazol-3-carboxilato de 20 metila (500 mg, 0,70 mmol) foi dissolvido em uma mistura de MeOH / THE / H2O (1:2:1, 20 mL). Hidróxido de lítio (56,3 mg, 2,35 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada por 16 horas. A mistura de reação foi diluída com água e lavada com DCM. A fase aquosa foi evaporada dando ácido 1- (tetraidro-2H-piran-2-il)-5-nitro-1 H-pirazol-3-carboxílico (300 mg, 64 %) 25 como um sólido branco que foi usado sem purificação adicional na próxima etapa.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm) = 7,22 (s, 1 H), 6,61 (dd, J= 9,2 Hz, J= 2,4 Hz ,1 H), 3,94 (d, J= 11,2 Hz, 1 H), 3,65 (t, J= 10,4 Hz, 1 H), 2,35 (m, 1 H), 2,09 (m, 1 H), 1,92 (m, 1 H), 1,71-1,54 (m, 3H). 5-Tolil-l-(tetraidro-2H-piran-2-il)-lH-pirazol-3-amina (97 mg, 0,38 mmol) foi adicionado a uma solução de ácido l-(tetraidro-2H-piran-2-il)- 5-nitro-lH-pirazol-3-carboxílico (100 mg, 0,41 mmol), iodeto de 2-cloro-l- metilpiridínio (145 mg, 0,56 mmol) e Af/V-diisopropiletilamina (193 μΙ-, 1,13 5 mmol) em DCM (10 mL). A mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente por 16 horas. A reação foi diluída com água e extraída com DCM. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada com Na2SO4 e concentrada.
O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna em gel de sílica (PE-EtOAc, 8:2) e dá um 5-nitro-l-(tetraidro-2H-piran-2-il)-N-(l-(tetraidro- 2H-piran-2-il)-5-p-Tolil-lH-pirazol-3-il)-lH-pirazol-3-carboxamida (60 mg, 33 %).
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm) = 9,50 (s, 0,5 H), 9,39 (s, 0,5 H), 7,43 (d, J= 6,4 Hz, 2 H), 7,38 (s, 0,5 H), 7,34 (s, 0,5 H), 7,28 (d, J= 8,0 Hz, 2 H), 6,87 (s, 1 H), 6,16 (dd, J= 10,0 Hz, J= 2,4 Hz ,1 H), 6,14 (dd, J 15 = 10,0 Hz, J = 2,0 Hz ,1 H), 5,17 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 5,16 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 3,80 (m, 2 H), 3,60 (m, 2 H), 2,42 (s, 3 H), 2,13 (m, 2 H), 1,78-1,56 (m, 8H).
O metanol (5 mL) e Pd/C foram adicionados a uma solução de 5-nitro-1 -(tetraidro-2H-piran-2-il)-N-( I -(Tetrai dro-2H-piran-2-il)-5-p-Tolil- 20 1 H-pirazol-3-il)-lH-pirazol-3-carboxamida (183 mg, 0,38 mmol) em THF. O frasco foi então evacuado e enchido com hidrogênio. A mistura de reação foi agitada por 16 horas. O catalisador foi filtrado em Celite e a solução foi concentrada e secada dando 5-amino-l-(tetraidro-2H-piran-2-il)-N-(l- (tetraidro-2H-piran-2-il)-5-p-Tolil-lH-pirazol-3-il)-lH-pirazol-3-carboxamida 25 (170 mg, quantitativo).
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm) = 8,94 (s, 0,5 H), 8,83 (s, 0,5 H), 7,43 (d, J= 6,8 Hz, 2 H), 7,28 (d, J= 8,0 Hz, 2 H), 6,95 (s, 1 H), 6,41 (s, 1H, 1 H), 6,06 (m, 2 H), 5,17 (d, J= 10,0 Hz, 2 H), 3,73 (m, 2 H), 3,59 (t, J= 11,2 Hz, 2 H), 2,42 (s, 3 H), 2,05 (m, 2 H), 1,80-1,54 (m, 8H). MS (ESI): m/z: 451,32 [MH+].
5-Amino-1 -(tetraidro-2H-piran-2-il)-N-( I -(T etraidro-2H- piran-2-il)-5-p-T olil-1 H-pirazol-3 -il)-1 H-pirazol-3 -carboxamida (102 mg,
0,23 mmol) foi adicionado a uma solução de ácido 1 -(tetraidro-2H-piran-2-il)- 5 5-p-Tolil-l H-pirazol-3-carboxíIico (59 mg, 0,20 mmol), iodeto de 2-cloro-l- metilpiridínio (79 mg, 0,31 mmol) e N,N'-diisopropiletilamina (105 μί, 0,62 mmol) em DCM (10 mL). A mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente por 16 horas. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com DCM. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada com Na2SO4 10 e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna em gel de sílica (PE-EtOAc, 7:3) e dá o l-(tetraidro-2H-piran-2-il)-N-(l- (tetraidro-2H-piran-2-il)-3-(l-(Tetraidro-2H-piran-2-il)-5-p-Tolil-lH-pirazol-
3-ilcarbamoil)-lH-pirazol-5-il)-5-p-Tolil-l H-pirazol-3-carboxamida (25 mg, 15 %).
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm) = 9,42 (s, 1 H), 9,40 (s,
1 H), 7,43 (m, 4 H), 7,37 (s, 0,5H, 0,5 H), 7,28 (m, 4 H), 6,93 (s, 1 H), 6,88 (s, 1 H), 5,20 (m, 3 H), 4,14 (m, 3 H), 3,77 (t, J= 11,2 Hz, 1 H), 3,62 (t, J =
11,6 Hz, 1 H), 3,59 (t, J = 10,0 Hz, 1 H), 2,43 (s, 6 H), 2,06 (m, 3 H), 1,74 (m, 3 H), 1,54 (m, 6 H), 1,24 (m, 6H).
MS (ESI): m/z: 719,39 [MH+].
I -(T etraidro-2H-piran-2-il)-N-( I -(T etraidro-2H-piran-2-il)-3 - (l-(tetraidro-2H-piran-2-il)-5-p-Tolil-lH-pirazol-3-ilcarbamoil)-lH-pirazol-5- il)-5-p-Tolil-lH-pirazol-3-carboxamida (28 mg, 0,04 mmol) foi recolocado em suspensão em THF anidroso (500 μι) e complexo de dimetilsulfeto de 25 borano (26 \iL, 0,27 mmol) foi adicionado à gotas. A mistura de reação foi agitada sob refluxo por 16 horas. A mistura de reação foi então esfriada abaixo a 0 0C e MeOH (50 μί) foi adicionada e a mistura foi agitada por 10 minutos. Ácido clorídrico concentrado (12 N) foi adicionado até o pH < 2 ser obtido. A mistura resultante foi agitada a 50 0C por 16 horas. A mistura foi esfriada em temperatura ambiente e o solvente foi evaporado. O resíduo foi recolocado em suspensão em THF e o precipitado foi filtrado e lavado com THF frio. 5-p-Tolil-N-((5-((5p-Tolil-lH- pirazol-3 -il)metilamino)-1 H-pirazol-3 -il)metil-1 H-pirazol-3-amina foi obtido como um sólido branco.
-p-T olil-N-((5-((5p-T olil-1 H-pirazol-3 -il)metilamino)-1H- pirazol-3-il)metil-lH-pirazol-3-amina (10 mg, 0,023 mmol) foi re-cristalizado em HCl metanólico (3 N, 0,5 mL). O sólido foi filtrado, lavado com Et2O e secado à vácuo dá a sólido branco. Pf. = 167 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO- d6): δ = 7,68 (d, Γ 8,0 Hz, 2 H), 7,60 (d, J= 8,0 Hz, 2 H), 7,29 (d, J = 8,0 Hz,
2 H), 7,21 (d, J = 8,0 Hz, 2 H), 6,57 (s, 1 H), 6,23 (s, 1 H), 5,80 (s, 1 H), 4,40 (s, 2 H), 4,34 (s, 2 H), 2,34 (s, 3 H), 2,31 (s, 3H). MS (ESI): m/z: 439,36 [MH+].
Preparação de 2ak:
Dicloridreto de N-Benzil-5-((4-(4-clorofenil)tiazol-2-ilamino)metiltiazol-2- amina
O composto 2ak foi preparado como descrito por 2h de partida a partir de 4-(4-clorofenil)tiazol-2-amina e ácido 2-bromotiazol-5-carboxílico (31 mg, 49 %). Pf. 105 a 106 °C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): □ (ppm): 7,64 (d, J= 8 Hz, 2 H),
7,27-7,24 (m, 7 H), 6,91 (s, 1 H), 6,63 (s, 1 H), 4,42 (s, 2 H), 4,33 (s, 1 H), 4,21 (bs, 4 H). MS (ESI): m/z (%): 413,35 ([MH+], 100 %).
Preparação de 2al:
Dicloridreto de N-Benzil-5-((4-(tiofen-2-il)tiazol-2-ilamino)metiltiazol-2- amina O composto 2al foi preparado como descrito por 2h, de partida a partir de 4-(tiofen-2-il)tiazol-2-amina e ácido 2-bromotiazol-5-carboxílico (6 mg, 50 %); mp 97 a 99 °C.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7,29-7,25 (m, 6 H), 7,17 (d, Γ 4,8 Hz, 1 H), 6,98 (d, J= 5,2 Hz, 2 H), 6,56 (s, 1 H), 4,42 (s, 2 H), 4,36 (s, 2 H). MS (ESI): m/z (%): 385,38 ([MH+], 100 %).
Preparação de 2am:
N-Butil-6-((5-(4-fluorofenil)-lH-pirazol-3-ilamino) metilpiridin-2-amina
O composto 2am foi sintetizado como descrito por 2s (59 %).
Pf. 93 a 94 0C.
1H-RMN (500 MHz, CDCl3): δ = 7,57 (dd, J = 7,0 Hz, J = 11 Hz 2 H), 7,40 (t, J = 10,5 Hz, 1 H), 7,05 (t, 10,5 Hz, 2 H), 6,58 (d, J = 9,0 Hz,
1 H), 6,58 (d, J = 9,0, 1 H), 6,26 (d, J = 10,5 Hz, 1 H), 5,81 (s, 1 H), 4,72 (brs,
1 H), 4,29 (s, 2H) 3,22 (m, 2 H), 1,60 (m, 2 H), 1,43 (m, 2 H), 0,95 (t, J = 9,5 Hz 3H). MS (ESI): m/z = 340 (Μ + H)
Exemplo 1
O valores milogP e TPSA de vários compostos são indicados na Tabela 1, valores milogP e TPSA foram calculados de acordo com o software disponível na rede mundial (http://www.molinspiration.com), fornecido por P. Ertl da Novartis Pharma AG. Tabela I
Composto milogP TPSA 2a 4,56 69,39 2c 3,40 86,78 2h 5,16 49,84 2j 4,92 49,84 2k 4,08 ^ 65,63 2n 3,52 49,84 2o 3,77 49,84 2p 2,63 62,73 2q 2,99 49,84 2s 4,35 65,63 2t 3,96 65,63 2u 3,61 69,39 2w 1,40 49,84 2y 2,48 75,86 2z 4,75 62,73 2aa 3,75 49,84 2ab 3,04 61,86 2ac 3,58 65,63 2ad 4,95 74,76 2ae 4,99 49,84 2af 3,60 49,84 2ag 4,99 49,84 2ah 3,60 49,84 2ai 4,56 110,10 2aj 4,44 61,87 2ak 5,15 49,84 2al 4,25 49,84 2am 4,00 65,63 Exemplo 2:
Um número de pequenas moléculas foram testadas por sua capacidade de inibir a agregação de beta amilóide (Αβ) 1 a 42 peptídeos usando um ensaio de espectrofluorescência T tioflavina.
Preparação de película de peptídeo (Αβ)
Um pó liofilizado Αβί a 42 (Bachem) foi reconstituído em hexafluoroisopropanol (HFIP) por I mM. A solução de peptídeo foi sonificada por 15 minutos em temperatura ambiente, agitada durante a noite, e 10 as alíquotas foram colocadas em tubos microcentrifugadores não siliconizados. O HFIP foi então evaporado sob uma corrente de argônio. A película de peptídeo resultante foi secada sob vácuo por 10 minutos, firmemente selada e armazenada a -80 0C até usado.
Inibição da agregação de Αβί a 42
Por um ensaio para a inibição mediada pela pequena molécula da agregação Αβί a 42, as pequenas moléculas foram dissolvidas antes de cada experimento em sulfóxido de dimetila anidroso (DMSO, Sigma-Aldrich) para atingir uma concentração de 7,4 mM. a película de peptídeo Αβ 1 a 42 foi dissolvida em DMSO para atingir 400 μΜ. A solução de ensaio em tampão PBS foi preparada em tubos de incubação não siliconizados para atingir as seguintes concentrações: 330 μΜ de moléculas pequenas, 33 Αβί a 42, 10 μΜ de tioflavina T (ThT), e 12,8 % de DMSO. Portanto, a razão molar fmal da molécula pequena por Αβί a 42 foi de 10:1. Um controle positivo sem uma molécula pequena foi preparado para medir RFU máximo. Um controle negativo sem Αβί a 42 foi preparado para cada molécula pequena. O trímero de 3-Aminopirazol (Trímero) foi testados em todos os ensaios para determinar a reprodutibilidade entre os experimentos independentes. As soluções foram incubadas por 24 horas a 37 0C, e a espectro fluorescência (unidades de fluorescência relativa; RFU) foi lida em seis réplicas em placas de ensaio de 384 reservatórios pretos (Perkin-Elmer) em um espectrofluorômetro de Perkin-Elmer FluoroCount. A inibição da agregação é expressada como meio de % de inibição ou ± 1 desvio padrão (SD) de acordo com a seguinte equação:
(RFU de controle positivo - RFU de controle negativo) - (RFU da amostra com Αβί - 42 - RFU da amostra com Αβί - 42)
% de inibição=----UU
(RFU de controle positivo - RFU de controle negativo)
O critério de corte para a seleção das moléculas funcionais foi definida a 50 % da capacidade de inibição.
Resultados
As pequenas moléculas foram testadas por sua capacidade de inibir a agregação de Αβί a 42 no ensaio THF ThT. Os resultados para as moléculas são resumidos na seguinte tabela THF. Todas as pequenas moléculas sintetizadas inibem a agregação de Αβί a 42 no ensaio THF ThT para alguma extensão e um número de moléculas testadas demonstram uma
capacidade de inibição em 50 %.
Composto % de inibição 2a* 65,3 ± 2,6 2c 77,0 ± 5,3 2h 31,9± 10,1 2j 70,7 ± 6,8 2k 81,2 ±7,3 2n 27,8 ± 9,9 2o 39,6 ±2,8 2p 43,6 ±2,1 2q 45,0 ±8,3 2s* 55,1± 6,4 2t 86,8 ± 2,9 2u 55,3 ± 1,0 2w 13,9 ± 12,9 2y 57,0 ± 15,9 2z 58,7 ±3,0 2aa 41,5 ±9,6 2ab 1,7 ± 11 2ac 78,5 ± 1,3 2ad 82,1 ±2,2 2ae 51,2 ± 1,5 2af 41,3 ±9,2 2ag 34,2 ± 1,6 2ah 35,7 ±5,6 2ai 84,8± 0,0 2ak 37,2 ± 14,8 2al 66,1±15,4 2am 68,2 ±9,7 * O composto fluorescente na ausência de Amilóide βΐ a 42
Tabela: Inibição da Agregação Αβί a 42 e desagregação das fibras Αβί a 42 pré-formadas por moléculas pequenas As pequenas moléculas foram avaliadas por sua capacidade de
medir a inibição da agregação Αβί a 42 a uma molécula pequena de 10:1 pela razão molar Αβί a 42. Os resultados são expressados como meio de ± desvio padrão de dois experimentos independentes.
Exemplo 3
Ensaio FCS com 5 nM de peptídeo Αβ rotulado por Oregon Green
A fim de analisar as propriedades de desagregação dos compostos, os agregados pré-formados foram usados, que foram induzidos retos antes da medição de FCS pela diluição de 500 nM de soluções de estoque de DMSO de Αβ- a 42 rotulado por Oregon Green 1:1 com água deionizada. A concentração final de peptídeo Αβ rotulado por Oregon Green foi de 5 nM em 1 x PBS e 3 % de DMSO. A fim de melhorar a 5 reprodutibilidade das medições das dependências da concentração de todas as amostras foram preparadas quatro vezes.
Tabela: Medições de FCS: porcentagens dos valores de "números de picos" obtidos para a reação de controle sem o composto adicionado.
Composto 200 nM IOOnM 2t 67,2 nd 2c 51,2 29,4 nd: não feito
Tabela: Medições de FCS: porcentagens dos valores de "picos x altura" obtidos para a reação de controle sem o composto adicionado.
Composto 200 nM 100 nM 2t 53,3 nd 2c 45,1 26,6 nd: não feito
Exemplo 4
Efeito de um composto da invenção em apoptose da célula do gânglio retinal (RGC) cultivada
Para avaliar a capacidade in vitro do composto da invenção 15 para reduzir a morte celular do gânglio retinal (RGC) relacionado às doenças oculares associadas com anormalidades patológicas/mudanças nos tecidos THF do sistema visual, particularmente associado com anormalidades patológicas relacionados por beta amilóide/mudanças nos tecidos THF do sistema visual, tal como, por exemplo, degradação neural, RGCs cultivadas a 20 partir de ratos e camundongos são usados.
Para isolar as células, em sacrifício, os animais são anestesiados, seus olhos são removidos e a retina é dissecada e incubada em 2 mg/ml de solução de papaína por 25 minutos a 37 0C para quebrar a matriz extracelular. No final do tratamento, as células são lavadas três vezes com o meio RCG na presença THF de um inibidor de protease para parar a ação da papaína. O tecido é então triturado pela passagem e vai rapidamente para cima e para baixo através de uma pipeta de Pasteur até as células serem dispersadas. Um contador Coulter comercialmente disponível é usado para determinar a densidade celular na suspensão celular de THF, antes da cultura 5 nas células em 95 % de ar/5 % de CO2 a 37 °C.
A fim de imitar o dano a partir das doenças oculares associadas com anormalidades patológicas/mudanças nos tecidos THF do sistema visual, particularmente associadas com anormalidades patológicas relacionadas por beta amilóide/mudanças nos tecidos THF do sistema visual, 10 tal como, por exemplo, degradação neural, e avaliação do efeito preventivo de um composto da invenção, as células são incubadas com L-glutamato por 3 dias na presença THF ou ausência de um composto da invenção. As células cultivadas em tampão sozinhas servem como controle.
Para determinar a sobrevivência de RGC, no final do período 15 de incubação as células são fixadas com 3,7 % de formaldeído em solução salina tamponada por fosfato (PBS) em temperatura ambiente por 30 minutos, enxaguando três vezes em PBS e incubadas por 1 hora em PBS contendo marcadores específicos por RGC do anticorpo Thy 1.1 ou NF-L. O anticorpo é então removido pela lavagem e as células são incubadas por 30 minutos com 20 IgG anti-camundongo de cabra de anticorpos secundários rotulados pela fluorescência, IgG anti-coelho de cabra ou IgG anti-cabra de coelho. No fmal da incubação, as células são lavadas, tingidas por 5 minutos com solução de DAPI e enxaguadas. Os RGCs que sobrevivem são contados pelo microscópio de fluorescência.
Exemplo 5
Efeito de um composto da invenção na apoptose da célula do gânglio retinal (RGC) in vivo
Para avaliar a capacidade in vivo de um composto da invenção para reduzir a morte da célula de gânglio retinal (RGC) em indivíduos afetados pelas doenças oculares associadas com anormalidades patológicas/mudanças nos tecidos THF do sistema visual, particularmente associadas com anormalidades patológicas relacionadas por beta amilóide/mudanças nos tecidos THF do sistema visual, tal como, por exemplo, degradação neural, ratos e camundongos são usados por umas 2 à 16 longas semanas induzidos pela estudo da pressão intra-ocular (IOP). A morte da célula do gânglio retinal é medida no final do estudo tanto pela imagem in vivo quando pela análise do ponto final histológica.
A fim de imitar o aumento na pressão intra-ocular associada com certas doenças oculares associadas com anormalidades patológicas/mudanças nos tecidos THF do sistema visual, particularmente associadas com anormalidades patológicas relacionados por beta amilóide/mudanças nos tecidos THF do sistema visual, tal como, por exemplo, degradação neural, glaucoma em particular, os animais primeiro são anestesiados com quetamina intraperitoneal (75 mg/kg) e xilazina (5 mg/kg) e proparacaína tópica 1 % das gotas nos olhos. Dois métodos alternativos são então usados para elevar artificialmente o IOP em um olho (unilateralmente) em ratos e camundongos. No primeiro método de THF, os animais anestesiados recebem a injúria induzida por laser à malha trabecular pelo tratamento da área de fluxo aquosa com um laser de diodo de 532-nm na fenda da lâmpada perpendicular ao trabecular e paralelo à íris. Os animais recebem um tratamento inicial de 40 a 50 marcas de 50-μηι de tamanho, 0,4 W, e 0,6 segundos de duração. No segundo método de para aumentar artificialmente o IOP, os animais anestesiados recebem uma injeção de 50 μΐ de solução salina hipertônica nas veias episclerais em um olho usando uma microagulha com uma força adequada suficiente para curar a veia.
Para medir o IOP, um tonômero manual comercialmente disponível (Tonopen XL-VET) é usado. As medições são tirados enquanto os animais estão sob anestesia como uma média de 10 leituras imediatamente antes do tratamento do laser, 1 dia após, e então semanalmente para a duração do experimento. Se, em um intervalo de uma semana, a diferença em THF IOP entre os dois olhos dos animais é menor do que 6 mm de Hg, os animais ainda não são incluídos no estudo THF.
5 A fim de avaliar o efeito preventivo de um composto da
invenção na apoptose RGC, metade dos animais recebem o tratamento induzido por IOP recebendo uma injeção intravítrea ou intravenosa do composto da invenção no período da elevação de IOP. Metades dos animais servem como controle. 0 número de RGCs é medido tanto pela imagem in 10 vivo quanto pela análise do ponto final histológica em 2, 4, 8 e 16 semanas após a elevação induzida de IOP. A análise de RGCs que sofreram apoptose in vivo é realizada pelo método DARC. O método DARC consiste em administrar a anexina 5 conjugada por fluoroforo intravitrealmente, que especificamente liga-se às células apoptópticas, aos animais e a visualização 15 dos RCGs que sofreram apoptose in vivo. Se necessário, este método pode ser usado em conjugação com retro-rotulação do nervo óptico de SCN para identificar os RCGs vivos que não são mais longos em um axônio intacto e tem menos conectividade com seus alvos.
Além disso, a fim de medir o número total de RCGs, a análise 20 histológica do ponto final da retina e nervo óptico é realizado em sacrifício. As retinas dos animais são fixadas em 4 % de para-formaldeído e tingidas em seções ou elevados enquanto usa os marcadores específicos de RGC, tal como Thy 1.1, NF-L e SMI 32, bem como anticorpos específicos para as células que sofreram de apoptose. Em cada um destes métodos, o número total de RGCs é 25 medido em 2, 4, e 8, e 16 semanas após a elevação cirúrgica de IOP.
Para medir o número de axônio de RGC remanescente no nervo óptico de THF após a elevação de IOP, os nervos ópticos dos animais são dissecados e os nervos são fixados em 4 % de para-formaldeído, seccionados, e tingidos com toluidina azul para análise. I LISTAGEM DE SEOUêNCIAS
<110> AC Immune
<120> Novos compostos para o tratamento de doenças associadas com amilóides ou proteínas tipo amilóide
<130> M3150 PCT
<150> EP 06024427.4
<151> 2006-11-24
<160> 4
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 112
<212> PRT
<213> seqüência artificial
<220>
<221> fonte
<223> /nota = "Descrição de seqüência artificial: cadeia leve variável de C2 HuVK 1 humanizada artificial"
<4 00> 1
Asp He Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 10 15
Glu Pro Ala Ser He Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser 20 25 30
Asn
Gly Asp Thr Tyr 35
Leu
His Trp Tyr 40
Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 45
Pro Gln Leu Leu He Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 7 0 7 5 8 0
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95
Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu He Lys 100 105 110
<210> 2
<211> 219
<212> PRT
<213> seqüência artificial <220>
<221> fonte
<223> /nota = "Descrição de seqüência artificial: cadeia leve variável de C2 humanizada artificial"
<4 00> 2
Asp He Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 10 15
Glu Pro Ala Ser He Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser 20 25 30
Asn Gly Asp Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45
Pro Gln Leu Leu He Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95
Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu He Lys 100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 3
<211> 112
<212> PRT
<213> seqüência artificial <220>
<221> fonte
<223> /nota = "Descrição de seqüência artificial: cadeia pesada variável
de C2 HuVH AF 4 humanizada artificial"
<400> 15
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val 35 40 45
Ala Ser He Asn Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ser Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 100 105 110
<210> 4
<211> 439
<212> PRT
<213> seqüência artificial <22 0>
<221> fonte
<223> /nota = "Descrição de seqüência artificial: cadeia pesada de C2 humanizada artificial"
<4 00> 4
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val 35 40 45 Ala Ser He Asn Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Ser Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 115 120 125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 180 185 190
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 195 200 205
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 210 215 220
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 225 230 235 240
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 245 250 255
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 260 265 270
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
275 280 285
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
290 295 300 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 305 310 315 320
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 325 330 335
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 340 345 350
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 355 360 365
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 370 375 380
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 385 390 395 400
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 405 410 415
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 420 425 430
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435

Claims (16)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que é da fórmula geral (II) <formula>formula see original document page 117</formula> (Π) em que independentemente representa uma ligação simples ou uma ligação dupla; pé 1, 2 ou 3; cada ligador K é independentemente alquileno Ci_3 que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos alquila Ci_4; cada B é independentemente um anel carbocíclico saturado ou insaturado de 5 ou 6 membros, em que o anel heterocíclico B é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados de alquila Ci_4, alcóxi Ci_4, mono- e di-alquila Ci_4 amino, cicloalquila C3.7 amino e heterociclila saturada de 5 ou 6 membros ou dois substituintes podem ser unidos para formar um anel de 5 a 7 membros saturado, insaturado ou aromático que é fundido com o anel heterocíclico B e em que o anel heterocíclico B pode conter, além das unidades V e W um ou mais heteroátomos, selecionados de N, NR, S e O, em que R é selecionado de H e alquila Cm; cada unidade W é independentemente um receptor de ligação H; cada unidade V é independentemente opcional e, se presente, é independentemente um doador de ligação H; R1 é selecionado de -H, -halogênio, -alquila Cm, NH2, -NH-alquila Cm, -alquileno Ci_4-NH2, -alquileno Ci.4-NH-alquila Cm, -arila, -aril- R3 , -alquileno Ci.4-arila, -alquileno Ci_4aril-R3 , -heteroarila, -heteroaril-R , - NH-alquileno Ci.4-arila, -NH-alquileno Ci_4-aril-R , -OH e -O-alquila Cm e R3 é alquila Cm, halogênio, OH ou O-alquila Cm; R2 é -H, -alquila Cm, -aril ou um grupo da fórmula <formula>formula see original document page 118</formula> em que B, V, W e K são como definidos acima, qéOouleré0 ou 1.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que cada unidade W é independentemente N ou C=O, e/ou em que cada unidade V é NH, e/ou em que cada ligador K é -CH2-, -CH2CH2- ou -CH2CH2CH2-, e/ou em que cada anel B heterocíclico é independentemente selecionado de pirazolileno, piridinileno opcionalmente substituído, 2- piridinonileno opcionalmente substituído, 2-piperidonileno opcionalmente substituído, tiazolileno opcionalmente substituído e isotiazolileno opcionalmente substituído, e/ou em que R1 é -H, -CH3, -NH-alquila Cm ou - CH2-NH-CH3, e/ou em que R2 é H ou arila.
3. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto como definido na reivindicação 1 ou 2.
4. Uso de composto como definido na reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para tratar ou prevenir uma doença ou condição associada com um amilóide e/ou proteína semelhante a amilóide.
5. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que é para tratar ou prevenir uma doença ou condição associada com um amilóide e/ou proteína semelhante a amilóide.
6. Uso de acordo com a reivindicação 4 ou composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a doença é um distúrbio neurológico, preferivelmente selecionado de Mal de Alzheimer (AD), demência do corpo de Lewy (LBD), síndrome de Down, hemorragia cerebral hereditária com amiloidose (tipo Dutch), o complexo de Parkinson- Demência de Guam ou deterioração cognitiva branda (MCI), paralisia supranuclear progressiva, esclerose múltipla, miosite corporal de inclusão (IBM), doença de Creutzfeld Jacob, mal de Parkinson5 demência relacionada com o HIV, esclerose lateral amiotrófica (ALS), miosite corporal de inclusão (IBM), diabete de início adulto, amiloidose cardíaca senil, tumores endócrinos, glaucoma, amiloidose ocular, degeneração retinal primária, degeneração macular (tal como degeneração macular relacionada com a idade (AMD)), corpo hialino do nervo óptico, neuropatia óptica, neurite óptica ou distrofia de treliça.
7. Mistura, caracterizada pelo fato de que compreende um composto como definido na reivindicação 1 ou 2 e, opcionalmente, pelo menos um composto biologicamente ativo adicional e/ou um carreador farmaceuticamente aceitável e/ou um diluente e/ou um excipiente.
8. Método para coletar dados para o diagnóstico de uma doença ou condição associada com amilóide em uma amostra ou um paciente, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) colocar uma amostra ou uma parte do corpo específica ou área do corpo suspeita de conter uma proteína amilóide em contato com um composto como definido na reivindicação 1 ou 2; (b) deixar o corpo ligar-se com a proteína amilóide; (c) detectar o composto ligado à proteína e (d) correlacionar opcionalmente a presença ou ausência de ligação de composto com a proteína amilóide com a presença ou ausência de proteína amilóide na amostra ou parte do corpo ou área do corpo específica.
9. Método para determinar a extensão da carga de placa amiloidogênica em um tecido e/ou um fluido corporal caracterizado pelo fato de que compreende: (a) fornecer uma amostra representativa do tecido e/ou fluido corporal sob investigação; (b) testar a amostra quanto à presença de proteína amilóide com um composto como definido na reivindicação 1 ou 2; (c) determinar a quantidade de composto ligado à proteína amilóide e (d) calcular a carga de placa no tecido e/ou fluido corporal.
10. Método para coletar dados para determinar a predisposição a uma doença ou condição associada com amilóide em um paciente, caracterizado pelo fato de que compreende detectar a ligação específica de um composto como definido na reivindicação 1 ou 2 a uma proteína amilóide em uma amostra ou in situ que compreende as etapas de: (a) colocar a amostra ou uma parte do corpo específica ou área do corpo suspeita de conter a proteína amilóide em contato com um composto como definido na reivindicação 1 ou 2, cujo composto liga-se especificamente à proteína amilóide; (b) deixar o corpo ligar-se com a proteína amilóide para formar um complexo de composto/proteína; (c) detectar a formação do complexo de composto/proteína; (d) correlacionar opcionalmente a presença ou ausência do complexo de composto/proteína com a presença ou ausência de proteína amilóide na amostra ou parte do corpo ou área do corpo específica e (e) comparar opcionalmente a quantidade do complexo de composto/proteína a um valor de controle normal.
11. Método para coletar dados para monitorar a doença residual mínima em um paciente seguindo o tratamento com um anticorpo ou uma composição de vacina, caracterizado pelo fato de que compreendem: (a) colocar uma amostra ou uma parte do corpo específica ou área do corpo suspeita de conter uma proteína amilóide em contato com um composto como definido na reivindicação 1 ou 2, cujo composto liga-se especificamente à proteína amilóide; (b) deixar o corpo ligar-se com a proteína amilóide para formar um complexo de composto/proteína; (c) detectar a formação do complexo de composto/proteína; (d) correlacionar opcionalmente a presença ou ausência do complexo de composto/proteína com a presença ou ausência de proteína amilóide na amostra ou parte do corpo ou área do corpo específica e (e) comparar opcionalmente a quantidade do complexo de composto/proteína a um valor de controle normal.
12. Método para coletar dados para predizer a responsividade de um paciente sendo tratado com um anticorpo ou uma composição de vacina, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) colocar uma amostra ou uma parte do corpo específica ou área do corpo suspeita de conter uma proteína amilóide em contato com um composto como definido na reivindicação 1 ou 2, cujo composto liga-se especificamente à proteína amilóide; (b) deixar o corpo ligar-se com a proteína amilóide para formar um complexo de composto/proteína; (c) detectar a formação do complexo de composto/proteína; (d) correlacionar opcionalmente a presença ou ausência do complexo de composto/proteína com a presença ou ausência de proteína amilóide na amostra ou parte do corpo ou área do corpo específica e (e) comparar opcionalmente a quantidade do complexo de composto/proteína a um valor de controle normal.
13. Kit de teste para detecção e/ou diagnóstico de uma doença ou condição associada com amilóide, caracterizado pelo fato de que compreende um composto como definido na reivindicação 1 ou 2.
14. Uso de composto como definido na reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para tratar ou prevenir uma doença ou condição ocular associada com uma anormalidade/mudança patológica no tecido do sistema visual, particularmente associadas com uma anormalidade/mudança patológica relacionada com amilóide-beta no tecido do sistema visual.
15. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que é para tratar ou prevenir uma doença ou condição ocular associada com a mudança/anormalidade patológica no tecido do sistema visual, particularmente associadas com uma mudança/anormalidade patológica relacionado com amilóide-beta no tecido do sistema visual.
16. Uso de acordo com a reivindicação 14 ou o composto de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição ocular é selecionada do grupo que consiste de degradação neuronal, déficits visuais córticos, glaucoma, catarata devido à deposição de beta- amilóide, amiloidose ocular, degeneração retinal primária, degeneração macular, por exemplo degeneração macular relacionada com a idade, corpo hialino do nervo óptico, neuropatia óptica, neurite óptica e distrofia de treliça.
BRPI0719379-3A 2006-11-24 2007-11-23 Composto, composição farmacêutica, uso de composto, mistura, métodos para coletar dados para o diagnóstico de uma doença ou condição associada com amilóide em uma amostra ou um paciente, para determinar a extensão da carga de placa amiloidogênica em um tecido e/ou um fluido corporal, para coletar dados para determinar a predisposição a uma doença ou condição associada com amilóide em um paciente, para coletar dados para monitorar a doença residual mínima em um paciente seguindo o tratamento com um anticorpo ou uma composição de vacina e para coletar dados para predizer a responsividade de um paciente sendo tratado com um anticorpo ou uma composição de vacina, e, kit de teste BRPI0719379A2 (pt)

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BRPI0719379-3A BRPI0719379A2 (pt) 2006-11-24 2007-11-23 Composto, composição farmacêutica, uso de composto, mistura, métodos para coletar dados para o diagnóstico de uma doença ou condição associada com amilóide em uma amostra ou um paciente, para determinar a extensão da carga de placa amiloidogênica em um tecido e/ou um fluido corporal, para coletar dados para determinar a predisposição a uma doença ou condição associada com amilóide em um paciente, para coletar dados para monitorar a doença residual mínima em um paciente seguindo o tratamento com um anticorpo ou uma composição de vacina e para coletar dados para predizer a responsividade de um paciente sendo tratado com um anticorpo ou uma composição de vacina, e, kit de teste

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