BRPI0718937A2

BRPI0718937A2 - Uso de uma composição contendo célula tronco mesenquimal derivada de sangue de cordão umbilical para indução de diferenciação e proliferação de células precursoras neurais ou células tronco neurais para células neurais

Info

Publication number: BRPI0718937A2
Application number: BRPI0718937-0A
Authority: BR
Inventors: Wonil Oh; Yoon-Sun Yang; Jong Wook Chang; Soo Jin Choi; Ju-Yeon Kim
Original assignee: Medipost Co Ltd
Priority date: 2006-11-30
Filing date: 2007-11-29
Publication date: 2014-07-08
Also published as: ES2550456T3; KR20080049917A; KR100959995B1

Description

“USO DE UMA COMPOSIÇÃO CONTENDO CÉLULA TRONCO MESENQUIMAL DERIVADA DE SANGUE DE CORDÃO UMBILICAL PARA INDUÇÃO DE DIFERENCIAÇÃO E PROLIFERAÇÃO DE CÉLULAS PRECURSORAS NEURAIS OU CÉLULAS TRONCO NEURAIS PARA CÉLULAS NEURAIS”

Campo da Invenção

A presente invenção refere-se a um uso de uma composição compreendendo célula tronco mesenquimal derivada de sangue de cordão umbilical para indução de diferenciação e proliferação de células precursoras neurais ou células tronco neurais para células neurais.

Antecedentes da Invenção

Acidente vascular cerebral, mal de Parkinson1 mal de Alzheimer, mal de Pick, mal de Huntington, esclerose lateral amiotrófica, doença de sistema nervoso central traumática e doença de dano de cordão espinhal envolvem disneuria causada por dano de células de nervo, e elas têm sido tratadas genericamente através de medicação ou operação cirúrgica que pode danificar severamente células normais.

Recentemente uma terapia de substituição de célula na qual células normais são transplantadas para substituição de células destruídas ou danificadas foi reconhecida ser efetiva para tais doenças, e células tronco, em particular que podem ser diferenciadas e proliferadas em desejados tecidos estão sob estudos intensos.

Células tronco são células não-especializadas que podem ser proliferadas ilimitadamente no estágio não-diferenciado e podem ser diferenciadas em diversos tecidos em resposta a específicos estímulos.

Células tronco neurais, das quais neurônios e/ou glias tais como astrócitos, oligodendrócitos e/ou células Schwann se formam, também são células não-diferenciadas tendo potência de auto - reprodução. Elas diferenciam em células neurais, por exemplo, neurônios ou glia via células precursoras neurais ou células precursoras de glia.

Células tronco mesenquimais, que diferenciam em osso, cartilagem, tecido adiposo, músculo, tendão, ligamento, tecido neural e outros, são conhecidas serem viáveis para a terapia de substituição de células. Células tronco mesenquimais têm sido obtidas principalmente de medula óssea, mas tais células tronco mesenquimais provêm somente limitadas aplicações devido sua potência restritiva para diferenciação e proliferação. Ainda, operações complicadas e frequentemente dolorosas compostas por várias etapas têm de ser conduzidas para tal terapia de substituição de célula, além do problema de encontrar um doador que tenha histocompatibilidade de antígenos idêntica com aquela de um paciente para excluir reação de enxerto versus hospedeiro durante transplante de medula óssea.

Em anos recentes, o sangue de cordão umbilical tornou-se um alvo para pesquisadores devido suas altas concentrações de células tronco. Um número de experimentos para tratar doenças do sangue através de transplante de sangue de cordão umbilical para um paciente foram conduzidos, e bancos de sangue de cordão umbilical, que preservam sangue de cordão umbilical em uma forma congelada até uso, foram estabelecidos para a terapia de transplante autólogo.

Diferente de medula óssea, o sangue de cordão umbilical pode ser obtido através de uma operação simples a partir do cordão umbilical e ele causa pequena reação de enxerto versus hospedeiro. Por estas razões, estudos em todo o mundo para aplicação clínica do sangue de cordão umbilical têm sido recentemente realizados.

Os presentes inventores também estudaram extensivamente células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical e verificaram que elas são capazes de induzirem diferenciação e proliferação de células precursoras neurais ou células tronco neurais a células neurais.

Resumo da Invenção

Por isso, é um objeto da presente invenção prover um uso de uma composição compreendendo células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical para indução de diferenciação e proliferação de células precursoras neurais ou células tronco neurais a células neurais.

De acordo com um outro aspecto da presente invenção, é provido um processo para indução de diferenciação e proliferação de células precursoras neurais ou células tronco neurais em células neurais, que compreende co-cultura de células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical com as células precursoras neurais ou as células tronco neurais.

Ainda de acordo com um aspecto da presente invenção, é provida uma composição para indução de diferenciação e proliferação de células precursoras neurais ou células tronco neurais em células neurais, compreendendo células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical como um ingrediente ativo.

De acordo ainda com um aspecto da presente invenção, é provido um processo para tratamento de uma doença de dano de nervo que compreende administração da composição a uma região de dano de célula de nervo de um sujeito em necessidade de tratamento de doença de dano de nervo.

Breve Descrição dos Desenhos

Os objetos e características acima e outros da presente invenção tornar-se-ão aparentes da seguinte descrição da invenção, quando tomada em conjunção com os desenhos acompanhantes, que respectivamente mostram:

Fig. 1: um diagrama de uma câmara trans-cavidade usada para co-cultura de células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical e células precursoras neurais: Fig. 2: fotografias mostrando a diferenciação e proliferação de NG108-15 (NG108) observadas com um microscópio de contraste de fase (x100), 4 e 7dias após cultura de NG108-15 sozinhas ou co-cultivando com as mesmas células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical, respectivamente.

Fig. 3: fotografias mostrando o resultado de manchamento imuno para tubulina beta, um marcador inicial para diferenciação neuronal, 7 dias após cultura de NG108-15 sozinha ou co-cultivando as mesmas com células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical, respectivamente;

Fig. 4: fotografias mostrando a diferenciação e proliferação de NG108-15 observadas com um microscópio de contraste de fase (x100), 7 dias após cultura de células NG108- sozinhas, suplementadas com cAMP ou co-cultura com células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical obtidas de dois indivíduos diferentes (hUCB-MSC1 e hUCB-MSC-2), respectivamente;

Fig. 5: fotografias mostrando a diferenciação e proliferação de células tronco neurais derivadas do córtex de cérebro de um camundongo fetal observadas com um microscópio de contraste de fase (x100), 7 dias após co-cultura de células tronco neurais com hUCBMSC-1 e hUCB-MSC-2 de várias concentrações, respectivamente;

Fig. 6: fotografias mostrando o resultado de manchamento imuno proteína 2 associada a microtúbulo e beta tubulina (MAP2), marcadores iniciais de diferenciação neuronal, 7 dias após cultura de células tronco neurais derivadas do córtex de cérebro de camundongo fetal sozinhas ou co-cultura com células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical, respectivamente;

Fig. 7: um gráfico mostrando o número de células viáveis avaliadas pelo manchamento com azul tripano, 7 dias após co-cultura de NG108-5 com células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical de várias concentrações; e

Fig. 8: um gráfico mostrando o número de células viáveis avaliado através de manchamento com azul tripan, 7 dias após co-cultura de célula tronco neural, derivada do córtex de cérebro do camundongo fetal, com células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical de várias concentrações.

Descrição Detalhada da Invenção

A composição inventiva para indução de diferenciação e proliferação de células precursoras neurais ou células tronco neurais em células neurais caracteristicamente compreende células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical como um ingrediente ativo.

Como aqui usado, o termo “sangue de cordão umbilical” refere-se ao sangue tomado da veia de cordão umbilical que liga a placenta de um mamífero com um seu neném recém - nascido. O termo “células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical” como aqui usado refere-se a células tronco mesenquimais que são isoladas do sangue de cordão umbilical de um mamífero, preferivelmente humano.

O termo “uma doença de dano de nervo” como aqui usado refere-se a uma doença que acompanha, entre outras, disfunção de comportamento devido a nervos sensoriais ou motores danificados. Doenças de dano de nervo exemplares incluem acidente vascular cerebral, mal de Parkinson, mal de Alzheimer, mal de Pick, mal de Huntington, esclerose lateral amiotrófica, doença de sistema nervoso central traumática, e doença de dano de cordão espinhal.

O termo “tratando” refere-se a: prevenção de manifestação de uma doença ou distúrbio ainda não diagnosticada em um animal, preferivelmente um mamífero, mais preferivelmente humano, que é propenso a adquirir tal doença ou distúrbio; ou inibição de desenvolvimento de uma doença de dano de nervo.

O termo “uma célula neural” como aqui usado refere-se a um neurônio de sistema nervoso central ou periférico, e/ou glia tal como um astrócito, um oligodendrócito e/ou uma célula Schwann.

No isolamento de um monócito compreendendo células tronco mesenquimais a partir de sangue de cordão umbilical, um processo comum tal como o processo de gradiente de densidade Ficoll - Hypaque pode ser empregado. Especificamente, o dito processo compreende as etapas de reunião de sangue de cordão umbilical a partir da veia umbilical após parto até descolamento de placenta; centrifugação de sangue de cordão umbilical com um gradiente Ficoll - Hypaque para obter monócitos; e remoção de contaminantes do mesmo. Os monócitos obtidos podem ser submetidos a isolamento de células tronco mesenquimais dos mesmos, ou a ultracongelamento para uma manutenção segura de longo termo até uso.

O isolamento de células tronco mesenquimais dos monócitos derivados de sangue de cordão umbilical pode ser realizado através do processo de Yang SE et al. (Yang SE et al., Cytotherapy, 6(5):476-486, 2004). Especificamente, monócitos são suspensos em um meio contendo 5 a 30% em peso, preferivelmente 5 a 15% em peso de soro fetal bovino (FBS), o meio incluindo um convencional tal como DMEM, alfa-DMEM, meio basal de Eagle ou RPMI 1640. Então, as células na suspensão foram divididas em meios tendo a mesma composição como descrito acima e cultivadas em uma incubadora com 5% CO2 a 37'. Quando as células cultivadas formam uma monocamada, células tronco mesenquimais tendo uma forma de haste são observadas. Então, as células tronco mesenquimais são repetidamente subcultivadas até as células serem suficientemente amplificadas.

De acordo com a presente invenção, ambas, diferenciação e proliferação de células precursoras neurais ou células tronco neurais em células neurais podem ser induzidas através de co-cultura de células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical com células precursoras neurais ou células tronco neurais. Por exemplo, as células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical são simultaneamente efetivas não somente para indução de diferenciação das células precursoras neurais ou células tronco neurais em células neurais, mas também para sustentação e reforço de tais efeitos através de aumento de número das células neurais, para aperfeiçoar seus efeitos terapêuticos.

Por isso, a presente invenção provê um uso de células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical ou uma composição compreendendo as células para indução de diferenciação de células precursoras neurais ou células tronco neurais a células neurais e proliferação das resultantes células neurais.

Células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical ou uma composição compreendendo as células pode ser usada para citoterapia de um paciente sofrendo de uma doença de dano de nervo, por exemplo, acidente vascular cerebral, mal de Parkinson, mal de Alzheimer, mal de Pick, mal de Huntington, esclerose lateral amiotrófica, doenças traumáticas de sistema nervoso central e doença de dano de cordão espinhal, preferivelmente acidente vascular cerebral e doença de dano de cordão espinhal.

A composição da presente invenção ainda pode compreender um aditivo farmaceuticamente aceitável.

Uma formulação farmacêutica em uma forma de dosagem unitária pode ser preparada empregando a composição da presente invenção de acordo com os procedimentos convencionais na técnica. Uma formulação para administração parenteral tal como uma injeção ou uma forma de dosagem tópica é preferível. A formulação farmacêutica inventiva ainda pode incluir aditivos farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, materiais de enchimento, expansores, agentes ligantes, agentes umectantes, d es integrantes, diluentes tais como tensoativos e outros excipientes.

A formulação farmacêutica inventiva pode ser administrada parenteralmente de acordo com os procedimentos convencionais na técnica, por exemplo, via injeção direta em uma região de dano assim como injeção no fluido cérebro - espinhal, por exemplo, perfuração lombar e injeção parenquimal, veia ou artéria. Preferivelmente, ela pode ser administrada via injeção direta em uma região periférica ou oposta de região de dano de cordão espinhal ou cérebro. Ainda, o processo clínico de Douglas Kondziolka (Douglas Kondziolka, Pittsburgh, 1998) pode ser empregado para administrar as formulações farmacêuticas inventivas em uma região de dano. Especificamente, um crânio de um sujeito é incisado para fazer um orifício tendo um diâmetro de 1 cm e uma suspensão de cel ulas tronco mesenquimais em HBSS (solução de sal balanceada de Hank) é injetada no orifício através do emprego de uma seringa de agulha longa e uma armação estereotática.

Uma dose típica das células tronco mesenquimais pode variar de 1x105 a 1x107 células / kg de peso de corpo / injeção, preferivelmente de 5x105 a 5x106 células / kg de peso de corpo / injeção, que pode ser administrada em uma dose simples ou em doses divididas. Ainda, deve ser entendido que a quantidade do ingrediente efetivo realmente administrada para um certo paciente deve ser determinada à Iuz de vários fatores relevantes incluindo a quantidade de células neurais a serem diferenciadas e proliferadas, a rota de administração escolhida, e o peso de corpo, idade e sexo de um paciente individual.

A presente invenção também provê um processo para indução de diferenciação e proliferação de células precursoras neurais ou células tronco neurais a células neurais, que compreende co-cultura de células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical com as células precursoras neurais ou as células tronco neurais. A co-cultura pode ser realizada através de mistura de células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical com as células precursoras neurais ou as células tronco neurais em uma razão de 1:0,1 a 1:10, preferivelmente, 1:1 a 1:2 baseado em seu número de células e corte de mistura de células em um meio de cultura de células convencional tal como DMEM, alfaDMEM, alfa-MEM, meio basal de Eagle e RPMI 1640. O meio de cultura ainda pode compreender um antibiótico, por exemplo, gentamicina, e/ou 5 a 15% em peso de FBS. O período de cultura pode variar de 5 a 10 dias.

A presente invenção também provê um processo para tratamento de uma doença de dano de nervo que compreende administração de célula tronco mesenquimal derivada de sangue de cordão umbilical ou uma composição compreendendo a mesma à região de dano de célula de nervo em um sujeito em necessidade de tratamento de doença de dano de nervo. O sujeito pode ser um mamífero incluindo humano.

Quando administrada em uma quantidade terapeuticamente efetiva, a célula tronco mesenquimal derivada de sangue de cordão espinhal induz não somente diferenciação de células precursoras neurais ou células tronco neurais de sistema nervoso periférico ou central a células neurais, mas também a proliferação das resultantes células neurais, pelo que resultando na recuperação das funções neurais e tratamento de tal doença de dano de nervo. O efeito de tratamento da célula tronco mesenquimal derivada de sangue de cordão umbilical é grandemente aperfeiçoado e sustentado por um longo período através de sua capacidade de proliferação de células neurais regeneradas.

Os seguintes exemplos e exemplos testes são dados para o propósito de ilustração somente, e não são pretendidos limitarem o escopo da invenção.

Exemplo 1:lsolamento e cultura de células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão espinhal

(Etapa 1) Aquisição de sangue de cordão umbilical (UCB)

Uma amostra de UCB foi obtida da veia umbilical de uma mulher concebendo sob seu consentimento. Especificamente, uma agulha de medida 16 de uma bolsa de coleta UCB contendo 44 ' de anticoagulante CPDA-1 (GREEN CROSS) foi inserida na veia umbilical para permitir UCB fluir na bolsa. O sangue coletado foi processado dentro de 48 cal para permitir UCB fluir na bolsa. O sangue coletado foi processado dentro de 48 horas e a taxa de sobrevivência de células foi acima de 90%.

(Etapa 2) Isolamento e amplificação de células tronco mesenquimais

O UCB obtido na etapa 1 foi submetido a centrifugação usando um gradiente Ficoll 5 - Hypaque (densidade: 1,077 g/', Sigma) para obtenção de monócitos. Os monócitos foram então lavados várias vezes para remoção de impurezas e suspensos em um meio basal mínimo contendo 5 a 15% em peso de FBS (HyCIone) (alfa-MEM, Gibco BRL). Subsequentemente, uma quantidade pré-medida da suspensão foi adicionada ao mesmo meio como acima e cultivada em uma incubadora em 5% CO2 a 37', enquanto trocando os meios com 10 uma batelada nova de meio duas vezes por semana. Quando células cultivadas formaram uma monocamada, a geração de células tronco mesenquimais tendo uma forma de haste foi confirmada com um microscópio. As células tronco mesenquimais assim formadas foram repetidamente subcultivadas até as células serem suficientemente amplificadas (Yang SE et al., Cytotherapy, 6(5):476-486, 2004).

Exemplo 2:Cultura de NG108-15 (NG108)

Uma célula derivada de cérebro de camundongo, NG108-15 (Neuroblastoma X glioma híbrido) (ATCC, Cat. No. ATCC-CRL-HB-12317), tendo características morfológicas e fisiológicas similares com uma célula precursora neural foi cultivada em DMEM (meio Eagle modificado de Dulbecco) (glutamina 4 mM/L, glicose 4,5 g/L, piridoxina-HCI 4,0 mg/L, hipo20 xantina - guanina 0,1 mM, aminopterina 400 nM, timidina 0,016 mM, FBS 5 a 15% em peso).

Exemplo 3:Cultura de células tronco neurais

Células tronco neurais derivadas de um córtex de cérebro de um camundongo fetal (Chemicon, Cat. No. SCR029) foram cultivadas em um meio basal de célula tronco neural (20 ng/'FGF-2, 20 ng/' EGF e 2 mg/' heparina).

Exemplo 4:Co-cultura de células tronco mesenquimais derivadas de sanaue de cordão umbilical e NG108-15 (!)

As células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical humano (hUCB-MSCs) de Exemplo 1 foram co-cultivadas com NG108-15 de Exemplo 2 (hUCB30 MSCs: NG108-15 = 1:1) empregando uma câmara trans-cavidades (Fig. 1) e o meio de cultura de Exemplo 2. Como um grupo controle, NG-108-15 foi cultivada sozinha no meio de cultura de Exemplo 2. Como mostrado na Fig. 1, a câmara trans-cavidades foi composta por compartimentos inferior e superior que foram separados um do outro por uma membrana microporosa tendo poros de 1 '. hUCB-MSCs foram colocadas no compartimento superior, e 35 NG108-15, no compartimento inferior.

A diferenciação de NG108-15 foi observada com um microscópio de contraste de fase (x100) em 4 e 7 dias. Como mostrado na Fig. 2, NG108-15 co-cultivadas com hUCBMSCs diferenciaram para uma forma de células semelhantes a neurônios maturadas típicasna qual as células espalharam longas ramificações e diferenciaram para terem uma forma de haste.

As células diferenciadas foram ainda confirmadas serem células semelhantes a 5 neurônios em 7 dias empregando manchamento imuno para beta tubulina ', um marcador inicial de desenvolvimento neuronal. Especificamente, hUCB-MSCs, NG108-15 e uma sua mistura foram respectivamente cultivadas em uma lâmina coberta, e bloqueadas através de adição das mesmas a soro de cabra normal 10% contendo triton X-100 0,3% por 1 hora em temperatura ambiente. O 1o anticorpo empregado no manchamento imuno, um anticorpo 10 monoclonal camundongo ' beta - tubulina conjugado com ficoeritrina (Chemicon), foi diluído cem vezes com o soro de cabra e adicionado ao mesmo. A mistura foi então mantida por toda noite a 4', e a resultante mistura foi lavada três vezes (cada vez por 5 minutos) com PBS 0,01 M.

Como mostrado na Fig. 3, NG108-15 co-cultivada com as células tronco mesenquimais de Exemplo 1 exibiram uma distinta resposta ao manchamento imuno por I beta tubulina, verificando que as diferenciadas foram células semelhantes a neurônio.

Exemplo 5:Co-cultura de células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical e NG108-15 (II)

As células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical humano 20 foram obtidas através de processo de Exemplo 1 a partir de dois indivíduos diferentes (hUCB-MSCs-1 e hUCB-MSCs-2). NG108-15 de exemplo 2 foi cultivada sozinha ou cocultivada com hUCB-MSCs-1 ou hUCB-MSCs-2 de acordo com o processo de Exemplo 4 por 7 dias. Diferenciação e proliferação das células foram observadas com um microscópio de contraste de fase (x100).

Como um grupo comparativo, 1 mM de cAMP que induz diferenciação de NG108-

15 a células semelhantes a neurônios (NeuroReport 9, 1261-1265, 1998) foi adicionado ao meio de cultura de NG108-15.

Como mostrado na Fig. 4, NG108-15 co-cultivada com as células tronco mesenquimais foi diferenciada para uma forma de células semelhantes a neurônios maturadas. Não houve diferença significante entre hUCB-MSCs-1 e hUCB-MSCs-2 em suas atividades de indução de diferenciação.

Exemplo 6:Co-cultura de células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical e células tronco neurais (!)

As células tronco neurais de Exemplo 3 foram cultivadas sozinhas (grupo controle) ou co-cultivadas com hUCB-MSCs-1 ou hUCB-MSCs-2 de Exemplo 5 no meio de cultura de Exemplo 3, empregando a câmara de trans-cavidade. hUCB-MSCs foram colocadas no compartimento superior e as células tronco neurais, no compartimento inferior. hUCB-MSCs-1 e hUCB-MSCs-2 foram respectivamente adicionadas ao meio na concentração de 500, 1000, 2000, 4000 e 6000 células/', respectivamente, e as células tronco neurais foram co-cultivadas com a concnetração de 2000 células/'. A diferenciação e proliferação das células foram observadas com um microscópio de contraste de fase (x100) (Fig. 5) em 7 dias.

Como mostrado na Fig. 5, as células tronco neurais co-cultivadas com as células tronco mesenquimais foram diferenciadas para uma forma de neurônios maturados. Não houve diferença significante entre hUCB-MSCs-1 e hUCB-MSCs-2 em suas atividade de indução de diferenciação. Ainda, a extensão de diferenciação e proliferação das células 10 tronco neurais foi diretamente proporcional À concentração das células tronco mesenquimais com as quais co-cultivadas.

Exemplo 7:Co-cultura de células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical e células tronco neurais (II)

As células tronco neurais de Exemplo 3 foram cultivadas sozinhas (grupo controle) ou co-cultivadas com hUCB-MSCs de exemplo 1 (hUCB-MSCs: células tronco neurais = 1:1) no meio de cultura de exemplo 3, empregando uma câmara trans-membrana. hUCB-MSCs foram colocadas no compartimento superior e as células tronco neurais no compartimento inferior.

Manchamento imune foi realizado em 4 e 7 dias através de emprego de processo de Exemplo 4 para proteína 2 associada com microtúbulo e ' beta tubulina (MAP2), marcadores iniciais de desenvolvimento neural de modo que isto confirmou que o diferenciado foram neurônios.

Como mostrado na Fig. 6, as células tronco neurais co-cultivadas com as células tronco mesenquimais de Exemplo 1 exibiram uma resposta distinta para manchamento imune para ' beta tubulina e MAP2, verificando que o diferenciado foram neurônios.

Exemplo 8:Co-cultura de células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical com células precursoras neurais ou células tronco neurais

NG108-15 de Exemplo 2 foi cultivada sozinha (grupo controle) ou co-cultivada com hUCB-MSCs de Exemplo 1, e as células tronco neurais de Exemplo 3 foram cultivadas sozinhas (grupo controle) ou co-cultivadas com hUCB-MSCs-1 ou hUCB-MSCs-2 de Exemplo 5, de acordo com os processos de Exemplos 4 e 6, respectivamente. O número de células viáveis foi contado em 7 dias empregando o manchamento com azul tripan (Figs. 7 e 8).

Como mostrado em Figs. 7 e 8, os números de NG108-15 e as células tronco neurais aumentaram em proporção à concentração das células tronco mesenquimais com as quais co-cultivadas, implicando que as células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical podem ser simultaneamente efetivas não somente para indução de diferenciação das células precursoras neurais ou células tronco neurais a células neurais, mas também para sustentação e reforço de tais efeitos através de aumento do número das células neurais.

Embora a invenção tenha sido descrita com relação às realizações específicas acima, deve ser reconhecido que várias modificações e mudanças podem ser feitas na invenção por aqueles versados na técnica as quais também caem dentro do escopo da invenção como definido pelas reivindicações apostas.

Claims

1. Uso de uma composição compreendendo células tronco mesenquimais derivadas de sangue umbilical, CARACTERIZADO pelo fato de ser para indução de diferenciação e proliferação de células precursoras neurais ou células tronco neurais a células neurais.

2. Processo para indução de diferenciação e proliferação de células precursoras neurais ou células tronco neurais, CARACTERIZADO pelo fato de compreender co-cultura de células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical com as células precursoras neurais ou as células tronco neurais.

3. Processo, de acordo com a reivindicação 2, CARACTERIZADO pelo fato de que a razão de células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical para as células precursoras neurais ou as células tronco neurais empregadas está na faixa de 1:0,1 a 1:10.

4. Processo para tratamento de uma doença de dano de nervo, CARACTERIZADO pelo fato de compreender administração de UCB-MSC para uma região de dano de célula de nervo de um sujeito em necessidade de tratamento de doença de dano de nervo.

5. Processo, de acordo com a reivindicação 4, CARACTERIZADO pelo fato de que a doença de dano de nervo é acidente vascular cerebral, mal de Parkinson, mal de Alzheimer, mal de Pick, mal de Huntington, esclerose lateral amiotrófica, doença de sistema nervoso central traumática, ou doença de dano de cordão espinhal.

6. Processo, de acordo com a reivindicação 4, CARACTERIZADO pelo fato de que o sujeito é um mamífero.

7. Composição para indução de diferenciação e proliferação de células precursoras neurais ou células tronco neurais a células neurais, CARACTERIZADA pelo fato de compreender células tronco mesenquimais derivadas de sangue de cordão umbilical como um ingrediente ativo.