BRPI0712682A2 - métodos para controle de erva daninha - Google Patents

Abstract

MéTODOS PARA CONTROLE DE ERVA DANINHA. A invenção fornece métodos para controle de erva daninha com dicamba e herbicidas relacionados. Descobriu-se que aplicações de pré-emergência de dicamba em ou próximo da plantação podem ser feitas sem dano de colheita ou perda de produção significante. As técnicas podem ser combinadas com o glifosato de herbicida para melhorar o grau de controle de erva daninha e permitir o controle de ervas daninhas tolerantes a herbicida.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MÉTODOS PARA CONTROLE DE ERVA DANINHA".

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Este pedido reivindica a prioridade de Pedido de Patente Provi- sório dos Estados Unidos Número de Série 60/811.276, depositado em 6 de junho de 2006, e Pedido de Patente dos Estados Unidos Número de Série 11/758.653, depositado em 5 de junho de 2007, as descrições dos quais es- tão aqui incorporadas por referência em sua totalidade.

1. Campo da Invenção

A invenção geralmente se refere ao campo de controle de erva daninha. Mais especificamente, a invenção se refere aos métodos para usar herbicidas do tipo auxina tal como dicamba para controlar ervas daninhas.

2. Descrição da Técnica Relacionada

As ervas daninhas custam bilhões de dólares aos fazendeiros anualmente em perdas de colheita e despesa de esforços para manter as ervas daninhas sob controle. As ervas daninhas também servem como hos- pedeiros para doenças de colheita e pestes de inseto. As perdas causadas por ervas daninhas em ambientes de produção agrícola incluem diminuições na produção de colheita, qualidade de colheita reduzida, custos de irrigação aumentados, custos de colheita aumentados, valor de terra diminuído, dano ao gado, e dano de colheita de insetos e doenças abrigadas pelas ervas da- ninhas. Os meios principais pelos quais as ervas daninhas causam estes efeitos são: 1) competir com plantas de colheita para os essenciais de cres- cimento e desenvolvimento, 2) produção de substâncias químicas tóxicas ou irritantes que causam problema de saúde a humano ou animal, 3) produção de imensas quantidades de partes reprodutivas de semente ou vegetativas ou ambas que contaminam produtos agrícolas e perpetuam as espécies em terras agrícolas, e 4) produção em terras agrícolas e não agrícolas de quan- tidades vastas de vegetação que deva estar disposta. O dano causado pode ser significante. Por exemplo, é calculado que entre 1972 e 1976 as produ- ções de milho foram reduzidas em cerca de 10% devido às ervas daninhas (Chandler, 1981). Entre ervas daninhas que servem como hospedeiros para pestes de colheita, por exemplo, mastruço ordinário e tansymustard (Descurainia sp.) mantêm populações grandes de mariposas das costas de diamante du- rante o fim do outono, inverno, e primavera. Elas também são os hospedei- ros ao afídeo de nabo e afídeo de pêssego verde. Várias espécies de erva daninha da família de erva-moura (SoIanaceae) são hospedeiras para inse- tos que geralmente atacam berinjela, pimenta, batata, e tomate. Por exem- plo, horsenettle (Solanum carolinense L.) é um hospedeiro do besouro da batata do Colorado, e erva-moura preta (S. nigrum L.) é hospedeiro da larva de repolho. Ipoméia é hospedeira importante de insetos que atacam batata- doce, especialmente o gorgulho de batata-doce altamente destrutivo. Erva- de-santiago serve como um hospedeiro para mosquitos de Mansonia, um vetor de inseto para as encefalites de doenças humanas e filaríase rural.

Algumas ervas daninhas são indesejáveis em feno, pastos, e terras de pastagem natural por causa do dano mecânico que eles infligem no gado. Troncos de madeira, espinhos, e barba da espiga de cereais de se- mente dura causam dano à boca e trato digestivo do gado; e os cabelos e fibras de algumas plantas tendem a embolar e obstruir os intestinos, especi- almente em cavalos, causando problemas sérios. Ingerido por vacas de leite, algumas ervas daninhas tal como erva-de-santiago, alho selvagem (Allium vineale L), e mostarda, entre outros, transmitem um odor ou sabor distinta- mente desagradável para ordenhar e untar com manteiga. As unidades de separação de semente farpadas podem se tornar tão emaranhadas na lã de ovelha de modo a diminuir seu valor de mercado. As plantas parasitárias, tal como trema (Cuscuta sp.), erva toura (Orobanche sp.), e erva de bruxa, rou- bam suas planta hospedeiras de comestíveis orgânicos.

Herbicidas químicos forneceram um método efetivo de controle de erva daninha durante anos. Os herbicidas podem geralmente ser aplica- dos pré-emergência e/ou pós-emersão. Os herbicidas de pré-emergência são aplicados em um campo antes de uma colheita emergir da terra. Tais aplicações são tipicamente aplicadas a terra antes, ao mesmo tempo, ou logo após o plantio da colheita. Tais aplicações podem matar ervas daninhas que estejam crescendo no campo antes da emergência da colheita, e tam- bém podem prevenir ou reduzir a germinação de ervas daninhas que estão presente na terra. Os herbicidas pós-emergência são tipicamente usados para matar ervas daninhas após uma colheita ter emergido no campo. Tais aplicações podem matar ervas daninhas no campo e podem prevenir ou re- duzir a futura germinação de erva daninha. Em qualquer caso, os herbicidas podem ser aplicados à superfície da terra, misturados com a terra, sobre topo da planta, ou aplicados por qualquer outro método conhecido por aque- les de experiência na técnica.

Uma estratégia de controle de erva daninha é aplicar um herbi- cida tal como dicamba a um campo antes de semear as sementes. Porém, depois de aplicar o herbicida a um campo, um fazendeiro tonde esperar pelo menos várias semanas antes de semear o campo com sementes de colheita tal que o herbicida tenha matado a maioria das ervas daninhas e tenha de- gradado para não prejudique a colheita semeada. Por exemplo, plantas são especialmente sensíveis a dicamba e foi recomendado que formulações de dicamba tal como Banvel™ ou Sterling™ sejam aplicadas 30 dias antes do plantio para controlar ervas daninhas. Uma lista inclusiva de ervas daninhas que são controladas através de dicamba está disponível (Anônimo, 2007). O herbicida é particularmente útil para controle de ervas daninhas mais altas e ervas daninhas mais difíceis de controlar tal como beldroga, sicklepod, mor- ninglory e trigo-mouro selvagem. Dicamba pode ser usado para controlar ervas daninhas não suscetíveis a outros herbicidas. Seguinte a aplicação de Clarity™, outra formulação de dicamba, um acúmulo mínimo de uma pole- gada de chuva ou irrigação aérea seguido por um período de espera de 14 dias para as taxas de 4 a 8 ounce/acre ou um período de espera de 28 dias para as taxas de 16 ounce/acre foi recomendado para controlar ervas dani- nhas em um campo de soja (veja, Tabela em VanGesseI e Majek, 2005). Também, o rótulo de Clarity® recomenda que seja aplicado pelo menos 15 dias antes da plantação de sorgo. Semelhantemente, para algodão, um pe- ríodo de espera de 21 dias é recomendado depois de aplicar Clarity® ou Banvel® ao campo, antes de plantar as sementes de algodão (Craig e ou- tros, 2005, Crop Profile for Cotton (Gossypium hirsutum) no Tennessee, www.ipmcenters.org/cropprofiles/docs/tncotton.html) e nenhuma aplicação de pré-emergência e pós-emergência é recomendada. O período de espera também é dependente do ambiente de crescimento de colheita em qualquer tempo determinado, tal como o tipo de terra (terra que tem atividade orgâni- ca degradará dicamba mais rápido), conteúdo de umidade, chuva, tempera- tura, como também tipo de formulação e taxa de aplicação.

O herbicida 2,4-D foi recomendado para controlar certas ervas daninhas em um campo de soja tal como mustard spp., um tipo de bananei- ra, marestail, e ervas daninhas de folha larga anuais suscetíveis a 2,4-D a- plicando 7 a 30 dias antes do plantio, dependendo da taxa e formulação (és- ter ou amina) (veja, Tabela 22 em VanGesseI e Majek, 2005).

Um método que foi prosperamente usado para controlar ervas daninhas combina tratamentos com herbicida com colheitas que são toleran- tes aos herbicidas. Desta maneira, os herbicidas que normalmente prejudi- cariam uma colheita podem ser aplicados antes e durante o crescimento da colheita sem causar dano. Desse modo, as ervas daninhas podem ser con- troladas efetivamente e novas opções de controle de erva daninha se tornam disponíveis para o cultivador. Nos últimos anos, as colheitas tolerantes a vários herbicidas foram desenvolvidas. Por exemplo, colheitas tolerantes a ácido 2,4-diclorofenoxiacético (Streber e Willmitzer, 1989), bromoxinil (Stal- ker e outros, 1988), glifosato (Cornai e outros, 1985) e fosfinotricina (De Block e outros, 1987) têm sido desenvolvidas.

Recentemente, um gene para dicamba monooxigenase (DMO) foi isolado de Pseudomonas maltophilia (Pedido de Patente dos Estados Unidos No: 20030135879) que está envolvido na conversão de uma forma herbicida do dicamba de herbicida (ácido 3,6-dicloro-o-anísico) para um áci- do 3,6-diclorossalicílico não tóxico. Os inventores reportaram a transforma- ção do gene de DMO em tabaco e Arabidopsis. O tecido de planta transfor- mado foi selecionado em canamicina e regenerado em uma planta. Porém, tolerância de herbicida não foi demonstrada ou sugerida em tecidos imaturos ou mudas ou em outras plantas. Tolerância herbicida de pré-emergência a dicamba não foi descrita. As plantas de soja transgênicas e outras plantas tolerantes a aplicação de dicamba são descritas em Behrens e outros (2007).

Dicamba é um membro de uma classe de herbicidas geralmente chamadas herbicidas "do tipo auxina" ou "auxinas sintéticas". Estes herbici- das imitam ou agem como os reguladores de crescimento de planta naturais chamados auxinas. Os herbicidas do tipo auxina parecem afetar a plastici- dade de parede de célula e metabolismo de ácido nucléico, que pode levar a divisão e crescimento de célula descontrolados. Os sintomas de dano cau- sados por herbicidas do tipo auxina incluem dobragem e torção epinástica de talos e hastes, ventosas e enrolando de folha, e forma de folha e nerva- ção anormal.

Dicamba é um dos muitos herbicidas do tipo auxina que é um herbicida barato, benéfico ao meio ambiente que foi usado como um herbici- da de pré-emergência (isto é, 30 dias antes do plantio) em dicotilédones e como um herbicida pré- e/ou pós-emergência em colheitas de semente mi- lho, sorgo, grãos pequenos, pasto, feno, terra de pastagem natural, cana-de- açúcar, aspargos, relva, e de grama para efetivamente controlar ervas dani- nhas de folha larga anuais e perenes e várias ervas daninhas gramíneas (Crop Protection Chemicals Reference, 1995). Infelizmente, dicamba pode prejudicar muitas colheitas comerciais inclusive feijões, sojas, algodão, ervi- lhas, batatas, girassóis, tomates, tabaco, e árvores frutíferas, plantas orna- mentais e árvores, e outras plantas de folha larga quando entrar em contato com elas. A soja e algodão são particularmente sensíveis a dicamba. Desse modo, as aplicações de dicamba geralmente têm que ocorrer várias sema- nas antes do plantio de colheitas sensíveis para garantir que dicamba resi- dual é removido suficientemente do ambiente de colheita antes da emergên- cia das colheitas. Para controle de erva daninha pós-emergência em milho, dicamba é o 5S herbicida mais amplamente usado para ervas daninhas de folhas largas. Porém, embora a taxa ideal para controle de erva daninha de folha larga seja entre 280 a 560 g/h (gramas/hectare), a taxa de uso médio em milho é 168 g/h como em taxas de uso mais altas e sob certas condições ambientais, dicamba pode prejudicar o milho.

Como notado acima, as normas atuais do fabricante tipicamente requerem pelo menos uma demora de 30 dias entre a aplicação de dicamba e o plantio de colheitas sensíveis. Esta incapacidade de aplicar dicamba próximo do tempo que as colheitas são plantadas retarda o tempo de seme- adura e encurta a estação de crescimento, desse modo aumentando o risco de expor as colheitas a congelar no outono. A demora também significa que os fazendeiros têm que passar duas vezes pelo campo; uma vez para plan- tar e uma vez para borrifar, desse modo aumentando os custos de combus- tível e desgaste para os fazendeiros. As melhorias sobre o estado da técnica que eliminariam a demora positivamente impactariam a qualidade e quanti- dade da colheita que poderia resultar e reduzir perdas econômicas aos fa- zendeiros. O controle de erva daninha mais efetivo também reduziria o risco de ervas daninhas desenvolvendo resistência aos herbicidas existentes.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Em um aspecto, a invenção fornece um método para controlar crescimento de erva daninha em um campo que compreende: a) aplicar uma quantidade herbicidamente efetiva de um herbicida do tipo auxina a um am- biente de crescimento de colheita; e plantar uma semente transgênica de uma planta de dicotilédones expressando um ácido nucléico que codifica dicamba monooxigenase na terra do ambiente de crescimento de colheita, onde a semente germine dentro de 30 dias ou menos de aplicação do herbi- cida e onde o dicamba monooxigenase compreenda pelo menos 70% de identidade de seqüência com a seqüência de polipeptídeo de SEQ ID NO:2; e c) permitir a semente germinar em uma planta. Em certas modalidades, a semente germina dentro de quatro semanas, três semanas, duas semanas, ou menos de uma semana depois de tratar o ambiente de crescimento com o herbicida do tipo auxina. O ambiente de crescimento tratado pode ser, por exemplo, um campo no qual uma colheita esteja plantada. Uma população de sementes de uma planta tolerante ao herbicida do tipo auxina pode ser plantada no campo. O tratamento do ambiente pode ser realizado de acordo com técnicas conhecidas na técnica usando, por exemplo, formulações co- mercialmente disponíveis de herbicidas do tipo auxina tal como dicamba. O ambiente inclui uma área para qual o controle de ervas daninhas é desejado e na qual a semente de uma planta tolerante ao herbicida do tipo auxina possa ser plantada. Uma erva daninha pode ser contatada diretamente com herbicida no ambiente, e a terra no ambiente pode ser contatada com o her- bicida, prevenindo ou reduzindo crescimento de erva daninha na terra. A etapa de tratar o ambiente com um herbicida pode ser realizada antes, após, ou simultaneamente com a etapa de plantar a terra com a semente transgê- nica. A semente transgênica pode ser plantada na terra no ambiente, por exemplo, dentro de três semanas antes de ou depois do tratamento, incluin- do dentre cerca de duas semanas, uma semana e 0 semanas antes ou de- pois do tratamento, também incluindo dentre cerca de 1, 2, 3, 4, 5, ou 6 dias antes ou depois do tratamento, incluindo simultaneamente com tratamento. No método, a semente pode germinar, por exemplo, dentre cerca de 30 dias e O dias depois de tratar o ambiente, incluindo entre cerca de 21, 18, 16, 14, 12, 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2, 1 e cerca de 0 dias depois de tratar o ambiente. O método pode também compreender aplicar um ou mais tratamentos adicio- nais de um herbicida do tipo auxina depois que a semente germine e/ou que a planta esteja crescendo. Em certas modalidades, um segundo tratamento é realizado em uma ocasião selecionada do grupo que consiste nos estágios dentre cercas de 1 a 2 folhas e 3 a 4 folhas, antes de florescer, ao florescer, depois de florescer, e na formação de semente. Em uma modalidade, o se- gundo tratamento compreende aplicar dicamba e/ou um composto de 2,4- diclorofenoxiacético (2,4-D).

Em um método da invenção, o herbicida do tipo auxina pode ser selecionado do grupo que consiste em um composto de ácido fenóxi carbo- xílico, composto de ácido benzóico, composto de ácido carboxílico de piridi- na, composto de ácido carboxílico de quinolina, e composto de benazolineti- la. Os exemplos de um composto de ácido fenóxi carboxílico incluem ácido 2,4-diclorofenoxiacético e ácido (4-cloro-2-metilfenóxi) acético. Em certas modalidades, uma quantidade herbicidamente efetiva de 2,4-D e/ou ácido (4- cloro-2-metilfenóxi) acético usada está entre cerca de 2 g/ha (gramas/hecta- re) a cerca de 5000 g/ha, incluindo cerca de 50g/ha a cerca de 2500 g/ha, cerca de 60 g/ha a cerca de 2000 g/ha, cerca de 100g/ha a cerca de 2000 g/ha, cerca de 75 g/ha a cerca de 1000 g/ha, cerca de 100g/ha a cerca de 500 g/ha, e de cerca de 100g/ha a cerca de 280 g/ha. Em uma modalidade constatada funcionar particularmente bem com a invenção, dicamba é usado como o herbicida. Em certas modalidades, uma quantidade herbicidamente efetiva de dicamba usada pode ser de cerca de 2,5 g/ha a cerca de 10,080 g/ha, incluindo cerca de 2,5 g/ha a cerca de 5,040 g/ha, cerca de 5 g/ha a cerca de 2,020 g/ha, cerca de 10 g/a a cerca de 820 g/h e cerca de 50 g/ha a cerca de 1,000 g/ha, cerca de 100 g/ha a cerca de 800 g/ha e cerca de 250 g/ha a cerca de 800 g/ha.

Em um método da invenção uma planta pode ser usada exibindo tolerância aos herbicidas do tipo auxina incluindo dicamba. Uma tal planta pode compreender um ácido nucléico que codifica uma dicamba monooxi- genase. Em uma modalidade, a planta é definida como compreendendo um ácido nucléico que codifica uma dicamba monooxigenase que tem pelo me- nos 70% de identidade com uma seqüência de polipeptídeo de qualquer uma ou mais das SEQ ID NOs:2, 4, 6, 8, 10 ou 12, incluindo pelo menos a- cerca de 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% e maior identidade de seqüência com estas seqüências. As comparações de polipeptídeo ou poli- nucleotídeo podem ser realizadas e a identidade determinada como é co- nhecido na técnica, por exemplo, usando MEGAIign (DNAStar, Inc., 1228 S. Park St., Madison, Wis. 53715) com parâmetros básicos. Tal software com- bina seqüências semelhantes designando graus de semelhança ou identida- de.

Os métodos da invenção podem ser usados com relação às plantas que exibem suscetibilidade aos herbicidas do tipo auxina tal como plantas dicotiledôneas (dicot). Em certas modalidades, uma planta dicotile- dônea é usada selecionada do grupo que consiste em alfafa, feijões, bróco- lis, repolho, cenoura, couve-flor, aipo, algodão, pepino, berinjela, alface, me- lão, ervilha, pimenta, abóbora, rabanete, colza, espinafre, soja, abóbora, to- mate, e melancia. Em algumas modalidades, o dicotilédone é soja, algodão, ou canola.

Em outro aspecto, a invenção fornece um método para controlar uma erva daninha em um campo que compreende: a) plantar uma semente transgênica em um campo, onde a semente compreende transgenes que conferem tolerância a um herbicida do tipo auxina e um segundo herbicida; b) cultivar a semente em uma planta; e c) tratar o campo com uma quantida- de do herbicida do tipo auxina e do segundo herbicida em quantidades efeti- vas para controlar crescimento de erva daninha. Em algumas modalidades, o segundo herbicida pode ser herbicida glifosinato (De Block e outros, 1987), um sulfoniluréia (Sathasiivan e outros, 1990), uma imidazolinona (U.S. 5.633.437; U.S. 6.613.963), bromoxinil (Stalker e outros, 1988), dalapon ou ácido 2,2-Dicloropropiônico (Buchanan-Wollaston e outros, 1989), cicloexa- nodiona (U.S. 6.414.222), um inibidor de protoporfirinogênio oxidase (U.S. 5.939.602), norflurazon (Misawa e outros, 1993 e Misawa e outros, 1994), ou isoxaflutol (WO 96/38567), entre outros. O herbicida do tipo auxina e o se- gundo herbicida podem ser aplicados simultaneamente ou separadamente. Em uma modalidade particular, o segundo herbicida é glifosato e o herbicida do tipo auxina é dicamba. Em uma modalidade, a planta compreende um ácido nucléico que tem pelo menos 70% de identidade de seqüência com uma seqüência de ácido nucléico de qualquer uma ou mais das SEQ ID NOs: 1, 3, 5, 7, 9, ou 11, incluindo pelo menos cerca de 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% e maior identidade de seqüência com estas se- qüências.

Em modalidades adicionais, uma planta tal como a anterior é definida como compreendendo um transgene que confere tolerância de gli- fosato. 5-Enolpiruvilchiquimato-3-fosfato sintase (EPSPS) resistente a glifo- sato é bem conhecido na técnica e descrito, por exemplo, na Patente U.S. 5.627.061, Patente U.S. 5.633.435, Patente U.S. 6.040.497, Patente U.S. 5.094.945, W004074443, e W004009761. Os ácidos nucléicos que codifi- cam enzimas de degradação de glifosato, por exemplo, glifosato oxidoreduc- tase (GOX, Patente U.S. 5.463.175), e ácidos nucléicos que codificam enzi- mas de inativação de glifosato, tal como glifosato-N-acetil transferase (GAT, Publicação Patente U.S. 20030083480; Publicação de Patente U.S. 20070079393) e glifosato descarboxilase (W005003362 e Pedido de Paten- te U.S. 20040177399) também são conhecidos. Em certas modalidades, a enzima GAT compreende a seqüência de GAT4601 (SEQ ID NO: 19), ou é codificada por um transgene que compreende a seqüência de ácido nucléico de SEQ ID N0.18. Em uma modalidade particular, o polipeptídeo de GAT é expressado usando o promotor de SCP1.

No método, o tratamento do campo pode ser realizado em uma ocasião selecionada do grupo que consiste dentre estágios de cerca de 1 a 2 folhas e 3 a 4 folhas, antes de florescer, ao florescer, depois de florescer, e a formação de semente. O tratamento do campo pode ser também definido como realizado em uma ocasião próxima da etapa a) tal que a semente germine enquanto o herbicida do tipo auxina permanece na terra em uma quantidade efetiva para controlar o crescimento da erva daninha. No méto- do, o tratamento do campo pode ser realizado cerca de três semanas, duas semanas 1 semana ou 0 semanas antes da etapa a). O herbicida do tipo auxina pode ser selecionado do grupo que consiste em um composto de á- cida fenóxi carboxílico, composto de ácido benzóico, composto de ácido car- boxílico de piridina, composto de ácidp carboxílico de quinolina, e composto de benazolinetila.

O composto de ácido fenóxi carboxílico pode ser selecionado do grupo que consiste em ácido 2,4-diclorofenoxiacético, ácido (4-cloro-2- metilfenóxi) acético, e ácido 4-(2,4-diclorofenóxi) butírico (2,4-DB). A quanti- dade de composto 2,4-diclorofenoxiacético usada pode ser mais baixa do que cerca de 280 g/ha. A quantidade de ácido 4-(2,4-diclorofenóxi) butírico (2,4-DB) usada pode ser mais baixa do que cerca de 1120 g/ha. A quantida- de de composto de ácido (4-cloro-2-metilfenóxi) acético usada pode ser mais baixa do que cerca de 280 g/ha. Em uma modalidade, o herbicida do tipo auxin é dicamba. A quantidade de dicamba usada pode ser, por exemplo, de cerca de 2,5 g/ha a cerca de 10.080 g/ha, incluindo cerca de 2,5 g/ha a cer- ca de 1040 g/ha, cerca de 5 g/ha a cerca de 2040 g/ha, cerca de 10 g/a a cerca de 820 g/h, e cerca de 50 g/ha a cerca de 1000 g/ha. A quantidade de glifosato pode ser de cerca de 200 g/ha a cerca de 1.600 g/h, incluindo de cerca de 200 g/ha a cerca de 1.000 g/h, de cerca de 200 g/ha a cerca de 800 g/h, de cerca de 200 g/ha a cerca de 400 g/h, e de cerca de 400 g/ha a cerca de 800 g/h.

Em ainda outro aspecto, a invenção fornece um método para controlar crescimento de erva daninha em um ambiente de crescimento de colheita que compreende: a) aplicar uma quantidade herbicidamente efetiva de um herbicida do tipo auxina a um ambiente de crescimento de colheita; b) plantar uma semente transgênica de uma planta monocotiledônea que com- preende um ácido nucléico que codifica uma atividade enzimática de degra- dação de dicamba, tal como dicamba monooxigenase, em terra do ambiente de crescimento de colheita dentro de 21 dias de aplicação herbicida do tipo auxina, onde a quantidade herbicidamente efetiva é uma quantidade que não danifica a semente transgênica ou uma planta que germina dela porém danificará uma semente ou uma planta que germinam dela do mesmo genó- tipo que necessite do ácido nucléico e seja plantada sob as mesmas condi- ções como a semente transgênica, onde o ácido nucléico é selecionado do grupo que consiste em (1) uma seqüência de ácido nucléico que codifica o polipeptídeo de SEQ ID NO:8, (2) uma seqüência de ácido nucléico que compreende a seqüência de SEQ ID NO:7, (3) uma seqüência de ácido nu- cléico que hibridiza para um complemento da seqüência de ácido nucléico de SEQ ID NO:7 sob condições de 5X de SSC, 50% de formamida e 42°C, (4) uma seqüência de ácido nucléico que tem pelo menos 70% de identidade de seqüência com a seqüência de ácido nucléico de SEQ ID NO:7, e (5) uma seqüência de ácido nucléico que codifica um polipeptídeo que tem pelo menos 70% de identidade de seqüência com a seqüência de polipeptídeo de SEQ ID NO:8; e c) permitir a semente germinar em uma planta. A seqüência de ácido nucléico que tem pelo menos 70% de identidade de seqüência com a seqüência de ácido nucléico de SEQ ID NO:7 pode codificar um polipeptí- deo que compreende um resíduo de cisteína na posição 112. Esta modali- dade pode ser combinada com quaisquer dos métodos e composições for- necidos acima. Em modalidades particulares da invenção, os tratamentos de herbicida para plantas de monocotilédones podem ser feitos em taxas mais altas e/ou em proximidade mais íntima com a emergência de colheitas do que previamente poderia ser feito sem prejudicar as colheitas. Em modalida- des específicas, uma quantidade herbicidamente efetiva de 2,4-D e/ou MC- PA, como, por exemplo, pelo menos cerca de 200, 300, 300, 500, 590, 650, 700, 800 ou mais g/ha de qualquer um ou ambos os herbicidas, incluindo de cerca de 300 a cerca de 1200 g/ha, de cerca de 500 as cerca de 1200 g/ha, de cerca de 600 a cerca de 1200 g/ha, de cerca de 590 a cerca de 1400 g/ha, e de cerca de 700 a cerca de 1100 g/ha de qualquer um ou ambos os herbicidas. O herbicida também pode ser dicamba e a quantidade herbici- damente efetiva pode ser, por exemplo, pelo menos cerca de 168, 175, 190, 200, 225, 250, 280, 300, 400, 500, 560 ou mais g/ha de dicamba, incluindo de cerca de 200 g/ha a cerca de 600 g/ha, de cerca de 250 g/ha a cerca de 600 g/ha, de cerca de 250 g/ha a cerca de 800 g/ha, de cerca de 225 g/ha a cerca de 1120 g/ha, e de cerca de 250 g/ha a cerca de 1200 g/ha, de cerca de 280 g/ha a cerca de 1120 g/ha e de cerca de 560 g/ha a cerca de 1120 g/ha. Em modalidade particular, a planta monocotiledônea é selecionada do grupo que consiste em milho, arroz, sorgo, trigo, centeio, milho miúdo, cana- de-açúcar, aveia, triticale, serva de bruxa, e turfa. A expressão da atividade enzimática de degradação de dicamba transgênica tal como uma monooxi- genase, em uma planta de colheita monocotiledônea, tal como milho, permi- te aplicação de um nível mais elevado de dicamba à colheita com a finalida- de de controle de erva daninha em qualquer estágio de crescimento de plan- ta, quando comparado ao nível de dicamba que pode ser aplicado a uma planta de colheita monocotiledônea que não compreende um transgene que codifica tal atividade enzimática de degradação de dicamba.

Em ainda outro aspecto, a invenção fornece um método para controlar crescimento de erva daninha em um campo que compreende: a) aplicar uma quantidade herbicidamente efetiva de um herbicida do tipo auxi- na diferente de dicamba a um campo, onde o campo compreende uma plan- ta dicotiledônea transgênica compreendendo um ácido nucléico que codifica dicamba monooxigenase ou é plantada com uma semente que germina na referida planta dicotiledônea transgênica em 21 dias de aplicação do herbici- da, onde a quantidade herbicidamente efetiva é uma quantidade que não danifica a planta dicotiledônea transgênica porém danificará uma planta do mesmo genótipo que é desprovido do ácido nucléico que codifica dicamba monooxigenase, onde o ácido nucléico é selecionado do grupo que consiste em (1) uma seqüência de ácido nucléico que codifica o polipeptídeo da SEQ ID NO:8, (2) uma seqüência de ácido nucléico que compreende a seqüência de SEQ ID NO:7, (3) uma seqüência de ácido nucléico que hibridiza para um complemento da seqüência de ácido nucléico de SEQ ID NO:7 sob as con- dições de 5X de SSC1 50% de formamida e 42°C, (4) uma seqüência de áci- do nucléico que tem pelo menos 70% de identidade de seqüência com a se- qüência de ácido nucléico de SEQ ID NO:7, e (5) uma seqüência de ácido nucléico que codifica um polipeptídeo que tem pelo menos 70% de identida- de de seqüência com a seqüência de polipeptídeo de SEQ ID NO:8; e b) permitir a planta dicotiledônea transgênica crescer. No método, a etapa a) pode compreender aplicar a quantidade herbicidamente efetiva de um herbi- cida do tipo auxina a um ambiente de crescimento adjacente a um ambiente de crescimento que compreende a planta dicotiledônea transgênica e permi- tir o herbicida vaguear sobre a planta ou terra na qual a cresce. O herbicida do tipo auxina pode ser qualquer herbicida como descrito aqui. No método, a etapa b) pode compreender permitir a planta dicotiledônea transgênica cres- cer para maturar. Em modalidades específicas, a quantidade herbicidamente efetiva pode ser definida como uma quantidade que não danifica a planta transgênica. Em ainda outro aspecto, a invenção fornece um método para aumentar a eficiência de uso de um dispositivo de liberação de herbicida que compreende: um) obter um dispositivo que foi usado para liberar uma primei- ra composição compreendendo um herbicida do tipo auxina; e b) liberar uma segunda composição ao campo usando o dispositivo sem primeiro comple- tamente lavar o dispositivo de forma que um resíduo de herbicida que com- preende o herbicida do tipo auxina permaneça no dispositivo e seja liberado com a segunda composição ao campo, onde o campo compreende uma planta dicotiledônea transgênica expressando um ácido nucléico que codifica dicamba monooxigenase ou é plantado com uma semente que germina na referido planta dicotiledônea transgênica em 21 dias de liberação da segun- da composição, onde o resíduo de herbicida está presente em uma quanti- dade que não danifica a planta dicotiledônea transgênica porém danificará uma planta do mesmo genótipo que necessite do ácido nucléico que codifica dicamba monooxigenase, onde o ácido nucléico é selecionado do grupo que consiste em (1) uma seqüência de ácido nucléico que codifica o polipeptídeo de SEQ ID NO:8, (2) uma seqüência de ácido nucléico que compreende a seqüência de SEQ ID NO:7, (3) uma seqüência de ácido nucléico que hibri- diza para um complemento da seqüência de ácido nucléico de SEQ ID NO:7 sob condições de 5X de SSC, 50% de formamida e 42°C, (4) uma seqüência de ácido nucléico que tem pelo menos 70% de identidade de seqüência com a seqüência de ácido nucléico de SEQ ID NO:7, e (5) uma seqüência de áci- do nucléico que codifica um polipeptídeo que tem pelo menos 70% de iden- tidade de seqüência com a seqüência de polipeptídeo de SEQ ID NO:8.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

A invenção se refere, em um aspecto, a descoberta inesperada que aplicações de pré-emergência de herbicidas do tipo auxina tal como di- camba podem ser feitas perto de, ou mesmo simultaneamente com o plantio de colheitas. A invenção fornece opções de controle de erva daninha superi- ores, incluindo prevenção e/ou redução de tolerância de herbicida em ervas daninhas. As aplicações de pré-emergência de herbicidas do tipo auxina tal como dicamba têm aplicações de herbicida previamente requeridas bem com antecedência de plantio e germinação de plantas suscetíveis aos herbi- cidas tipo auxina para permitir desarranjo do herbicida no ambiente e evitar dano ou morte de colheita significante. A maioria das plantas de colheita, e particularmente planta dicotiledônea tal como sojas e algodão é extrema- mente sensível a dicamba. Desse modo, os atrasos de pós-aplicação reco- mendados no plantio pelos fabricantes deve ser estritamente seguido.

As plantinhas jovens e sementes são particularmente sensíveis aos herbicidas. Até mesmo em sementes e plantas transgênicas, os tecidos imaturos podem insuficientemente expressar o gene necessário para torná- lo tolerante ao herbicida, ou pode não ter níveis suficientes acumulados da proteína para conferir tolerância. Por exemplo, descobriu-se que as plantas maduras exibem níveis elevados de tolerância aos herbicidas Harness™ (acetoclor), Lasso™ (alaclor), Treflan™ (Trifluralin), Eptam™ (EPTC), e/ou Longe-Go™ (trialato; / / pmep.cce.cornell.edu/profiles/herb-growthreg/ se- thoxydim-vernolate/triallate/herb-prof-triallate.html) porém suscetibilidade aos herbicidas em germinação. Como resultado desta variabilidade em tecidos jovens, a resposta da colheita às aplicações de pós-emergência (por exem- plo, em tecidos vegetativos mais maduros) de herbicidas de dicamba pode diferir significantemente da resposta de colheita a aplicações de pré- emergência de herbicidas nos quais tecidos sensíveis mais jovens estão ex- postos. O primeiro não necessariamente prediga o último. Isto é ressaltado no caso de plantas altamente sensíveis a um determinado herbicida, tal co- mo dicotilédones o herbicida dicamba. Desse modo, a presente invenção inesperadamente mostra que níveis mais elevados do que os níveis preditos de segurança de colheita podem ser obtidos de aplicações de pré-emer- gência de dicamba.

A presente invenção emprega herbicidas do tipo auxina, que também são chamados herbicidas auxínicos ou reguladores de crescimento, ou herbicidas do Grupo 4 (com base no seu modo de ação). Estes tipos de herbicidas imitam ou agem como os reguladores de crescimento de planta naturais chamados auxinas. A ação de herbicidas auxínicos parece afetar a plasticidade da parede celular e metabolismo de ácido nucléico, que levar ao crescimento e divisão de célula descontrolados.

Os herbicidas do tipo auxina incluem quatro famílias químicas: fenóxi, ácido de carboxílico (ou piridina), ácido benzóico, e ácido carboxílico de quinalina. Os herbicidas de fenóxi são muito comuns e têm sido usados como herbicidas desde os anos quarenta quando ácido (2,4-diclorofenóxi) acético (2,4-D) foi descoberto. Outros exemplos incluem ácido 4-(2,4- diclorofenóxi) butírico (2,4-DB), ácido 2-(2,4-diclorofenóxi) propanóico (2,4-DP), ácido (2,4,5-triclorofenóxi)acético (2,4,5-T), ácido 2-(2,4,5-Triclorofenóxi) pro- piônico (2,4,5-TP), 2-(2,4-dicloro-3-metilfenóxi)-N-fenilpropanamida (clome- prop), ácido (4-cloro-2-metilfenóxi) acético (MCPA), ácido 4-(4-cloro-o-toli- lóxi) butírico (MCPB), e ácido 2-(4-cloro-2-metilfenóxi) propanóico (MCPP).

A próxima família química maior são os herbicidas de ácido car- boxílico, também chamados herbicidas de piridina. Os exemplos incluem ácido 3,6-dicloro-2-piridinacarboxílico (Clopyralid), ácido 4-amino-3,5,6-tri- cloro-2-piridinacarboxílico (picloram), ácido (2,4,5-triclorofenóxi) acético (tri- clopir), e ácido 4-amino-3,5-dicloro-6-fluoro-2-piridiloxiacético (fluroxipir). Os exemplos de ácidos benzóicos incluem ácido 3,6-dicloro-o-anísico (dicamba) e ácido 3-amino-2,5-diclorobenzóico (choramben). Dicamba é um herbicida particularmente útil para uso na presente invenção. Uma quarta família quí- mica de herbicidas auxínicos é a família de ácido carboxílico de quinalina. O exemplo inclui ácido 3,7-dicloro-8-quinolinecarboxílico (quinclorac). Este herbicida também é único pelo fato de que controlará algumas ervas dani- nhas de grama, diferente dos outros herbicidas do tipo auxina que essenci- almente controlam somente as plantas de folha larga ou dicotiledônea. O outro herbicida nesta categoria é ácido 7-cloro-3-metil-8-quinolinecarboxílico (quinmerac).

Descobriu-se, por exemplo, que as plantas de soja transforma- das com construções de polinucleotídeo de codificação de dicamba monoo- xigenase (DMO) eram tolerantes a aplicação de pré-emergência de dicamba mesmo que precocemente, com menos de 10% de taxa de dano a até mes- mo 9x a taxa de aplicação rotulada (5.040 g/ha, 4,5 lb/acre; Tabela 1). Os inventores descobriram que, até mesmo usando uma taxa de aplicação 18x de 10.080 g/ha (9 lb/acre), o dano às plantas tolerantes a dicamba transgê- nica foi menos do que 20% (Tabela 4). Em uma taxa de aproximadamente 2x de aplicação 1122 g/ha, menos de 2% de dano foi observado. Foi então indicado que o controle de erva daninha melhorado associado com aplica- ções de pré- e pós-emergência de herbicidas pode ser usado sem qualquer diminuição significante em produtividade devido ao dano de herbicida. As aplicações pré-emergência de dicamba de acordo com a invenção podem então ser combinadas com uma ou mais aplicações de herbicida pós- emergência às plantas tolerantes a dicamba, mantendo a produção da co- lheita e obtendo controle de erva daninha melhorado. Por exemplo, um tal regime de aplicação de herbicida envolveu uma última aplicação de pré- emergência de dicamba junto com uma aplicação pós-emergência de di- camba no estágio V2 de desenvolvimento. Em certas modalidades, a aplica- ção pós-emergência pode ser realizada em qualquer ponto da emergência para colher. Particularmente benéfica será aplicação pós-emergência em qualquer estágio V até que a cobertura de soja feche, por exemplo, aproxi- madamente nos estágios V1, V2, V3, V4, V5, V6 e/ou posteriores.

De acordo com a invenção, os métodos e composições para o controle de ervas daninhas são fornecidos compreendendo o uso de plantas que exibem tolerância a glifosato e herbicidas do tipo auxina tal como di- camba. Como mostrado nos exemplos de funcionamento, dicamba e glifosa- to permitem uso de quantidades diminuídas de herbicida para alcançar o mesmo nível de controle de ervas daninhas tolerantes a glifosato e desse modo esta modalidade fornece um avanço significante para o controle de tolerância de herbicida em campos de produção comercial. Em uma modali- dade, uma mistura em tanque de glifosato e dicamba é aplicada pré- e/ou pós-emergência às plantas. Glifosato e dicamba podem adicionalmente ser aplicados separadamente. Para obter a capacidade de usar quantidade di- minuída de herbicida, o glifosato e dicamba são preferivelmente aplicados dentro de um intervalo suficiente que ambos os herbicidas permanecem ati- vos e capazes de controlar o crescimento de erva daninha.

Esta modalidade então permite uso de quantidades mais baixas de qualquer herbicida para alcançar o mesmo grau de controle de erva dani- nha como uma aplicação de somente um dos herbicidas. Por exemplo, a invenção fornece métodos de controle erva daninha compreendendo aplicar em um campo plantado com plantas transgênicas que têm tolerância a di- camba e glifosato uma composição herbicida que compreende menos do que uma taxa de 1x de glifosato e/ou dicamba, relativo à taxa rotulada pelo fabricante padrão. Os exemplos de taxas de aplicação de glifosato e dicam- ba respectivos incluem de cerca de um 0,5x-0,95x de qualquer herbicida, especificamente incluindo cerca de 0,5x, 0,6x, 0,7x, 0,8x. 0,85x, 0,9x, e 0,95x de qualquer herbicida e todas as combinações deriváveis destes, co- mo também taxas mais altas tal como 0,97x e 0,99x. Alternativamente, no caso de mais difícil controle de ervas daninhas ou onde um maior grau de controle de erva daninha é desejado, taxas de aplicação de 1x e mais altas podem ser feitas devido à descoberta que até mesmo taxas de aplicação elevadas de dicamba não danificam significantemente as plantas. As taxas de aplicação de 1x são fixadas pelo fabricante de uma formulação herbicida comercialmente disponível e são conhecidas por aqueles versados na técni- ca. Por exemplo, o rótulo para Fallow Master™, uma mistura de glifosato e dicamba tendo uma relação de glifosato:dicamba de cerca de 2:1 recomenda taxas de aplicação de cerca de 451 g/ha (311 ae g/ha de glifosato:140 ae g/ha de dicamba) a 621 ae g/ha (428 ae g/ha de glifosato: 193 ae g/ha de dicamba) dependendo das espécies de erva daninha e altura de erva dani- nha.

"Glifosato" se refere a N-fosfonometilglicina e sais. Glifosato é comercialmente disponível em numerosas formulações. Os exemplos destas formulações de glifosato incluem, sem limitação, aquelas vendidas por Mon- santo Company como herbicidas ROUNDUP®, EXTREMISTA de ROUN- DUP®, ROUNDUP® ULTRAMAX, ROUNDUP® CT, EXTRA de ROUN- DUP®, ROUNDUP® BIACTIVE, ROUNDUP® BIOFORCE, RODEO®, PO- LARIS®, SPARK® e ACCORD® todos dos quais contêm glifosato como seu sal de isopropilamônio, ROUNDUP® WEATHERMAX que contém glifosato como seu sal de potássio; herbicidas de ROUNDUP® DRY e RIVAL® que contêm glifosato como seu sal de amônio; ROUNDUP® GEOFORCE que contém glifosato como seu sal de sódio; e herbicida de TOUCHDOWN® que contém glifosato como seu sal de trimetilsulfônio. "Dicamba" se refere ao ácido 3,6-dicloro-o-anísico ou ácido 3,6-dicloro-2-metóxi benzóico e seus ácidos e sais. Seus sais incluem isopropilamina, diglicoamina, dimetilamina, potássio e sódio. Os exemplos de formulações comerciais de dicamba inclu- em, sem limitação, Banvel™ (como sal de DMA salgue), Clarity™ (como sal de DGA), VEL-58-CS-11™ e Vanquish™ (como sal de DGA, BASF). Os exemplos não limitantes de ervas daninhas que podem ser efetivamente controladas usando dicamba são os seguintes: erva do queijo, erva do pinto, trevo de época, cardo, dayflower Asiático, lamium, filaree de talo vermelho, a gerânio Carolina, cânhamo de sesbania, planta da família da menta, cavalinha do campo (marestail), sanguinária, kochia, ançarinha branca, ipomoea, mostarda da índia, mostarda selvagem, anserina de raiz vermelha, anserina lisa, sida espinhosa, prímula da noite cutleaf, beldroga comum, erva-de-santiago comum, erva-de-santiago gaint, cardo de russian, Capsella bursa, erva forte da Pensilvânia, eufórbio, folha aveludada, violeta do campo, trigo-mouro selvagem, rabanete selvagem, soybeanbeldroga, sic- klepod, morninglory, trigo-mouro selvagem, erva-de-santiago comum, cony- za (marestail), pulicária cabeluda, tipo de bananeira de chifre de veado, e anserina de Palmer. Os exemplos não Iimitantes de ervas daninhas que po- dem ser controladas usando dicamba e glifosato são os seguintes: grama de quintal, capim cevadinha penugento, cereais voluntários, joio Persa, sandbur de campo, rabo de raposa verde, aveia selvagem, trigo-mouro selvagem, óleo de colza voluntário, cowcockle, flixweed, kochia, ladysthumb, anserina, mostarda selvagem, alface espinhosa, anserina de raiz vermelha, erva forte, grama de mau cheiro, erva daninha de mau cheiro, cardo da Rússia, rabo de raposa, e erva de bruxa. A combinação de glifosato e dicamba alcança o mesmo nível de controle de erva daninha com quantidades de herbicida re- duzidas e desse modo o espectro de ervas daninhas que podem ser contro- ladas em qualquer determinada taxa de aplicação de herbicida pode ser au- mentado quando os herbicidas são combinados.

A planta transgênica tendo tolerância de herbicida pode ser feita como descrito na técnica. A tolerância de dicamba pode ser conferida, por exemplo, por um gene para dicamba monooxigenase (DMO) de Pseudomo- nas maltophilia (Pedido de Patente dos Estados Unidos No: 20030135879). Os exemplos de seqüências que podem ser usadas nesta consideração são ácido nucléico que codifica os polipeptídeos de SEQ ID Nos: 2, 4, 6, 8, 10, e 12. Os exemplos de seqüências que codificam estes polipeptídeos são de- terminados como SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, e 11. SEQ ID NO: 1 mostra DMO de Pseudomonas maltophilia otimizado para expressão em dicotilédo- nes usando uso de código de Arabidopsis thaliana. O polipeptídeo, predito ter um Ala, Thr1 Cys nas posições 2, 3, 112, respectivamente, são determi- nados em SEQ ID NO:2. SEQ ID NO:3 mostra outro DMO de Pseudomonas maltophilia otimizado para expressão em dicotilédones e codificando o poli- peptídeo de SEQ ID N0:4, predito ter um Leu, Thr, Cys nas posições 2, 3, 112, respectivamente. SEQ ID NO:5 mostra a seqüência de codificação para SEQ ID N0:6 o polipeptídeo para DMO de dicotilédone otimizado predito ter um Leu, Thr, Trp nas posições 2, 3, 112, respectivamente. SEQ ID NOs:7 e 8 mostram as seqüências codificação e de polipeptídeo para DMO predito ter um Ala, Thr, Cys na posição 2, 3, 112, respectivamente. SEQ ID NOS:9 e 10 mostram a seqüência de codificação de dicotilédone aperfeiçoado e se- qüências de polipeptídeo para DMO preditas ter um Ala, Thr, Trp nas posi- ções 2, 3, 112, respectivamente. SEQ ID NOS: 11 e 12 mostram seqüências de codificação e seqüências de polipeptídeo para DMO de Pseudomonas maltophilia (Pedido de Patente dos Estados Unidos NO: 20030135879). Ou- tra seqüência de DMO exemplar pode ser um DMO predito ter um Leu, Thr, Cys na posição 2, 3, 112, respectivamente com uso de códon de Pseudomo- nas maltophilia (Pedido de Patente dos Estados Unidos No: 20030135879).

As seqüências que conferem tolerância de glifosato também são conhecidas, inclusive de 5-enolpiruvilchiquimato-3-fosfato sintase resistente glifosato (EPSPS) como descrito na Patente dos Estados Unidos 5.627.061, Patente dos Estados Unidos 5.633.435, Patente dos Estados Unidos 6.040.497, Patente dos Estados Unidos 5.094.945, W004074443, W004009761 todas das quais estão desse modo incorporadas por referência; por expres- são de ácidos nucléicos que codificam enzimas degradantes de glifosato, por exemplo, glifosato oxidorreductase (GOX, Patente U.S. 5.463.175, incor- porada aqui por referência), glifosato descarboxilase (W005003362; Pedido de Patente U.S. 20040177399, aqui incorporado por referência); e por ex- pressão de ácidos nucléico que codificam enzimas de inativação de glifosa- to, tal como glifosato-N-acetila transferase (GAT, por exemplo Publicações de Patentes dos Estados Unidos 20030083480 e 20070079393, aqui incor- poradas por referência).

As variantes de proteínas que têm uma capacidade para degra- dar herbicidas do tipo auxina, glifosato ou outros herbicidas podem ser facil- mente preparadas e ensaiadas quanto à atividade de acordo com métodos padrões. Tais seqüências também podem ser identificadas através de técni- cas conhecida na técnica, por exemplo, de organismos adequados inclusive bactérias que degradam herbicidas do tipo auxina tal como dicamba ou ou- tros herbicidas (Patente dos Estados Unidos 5.445.962; Cortiça e Krueger, 1991; Cortiça e Khalil, 1995). Um meio de isolar um DMO ou outra seqüên- cia é por hibridação de ácido nucléico, por exemplo, para uma biblioteca construída do organismo de fonte, ou por RT PCR que usa mRNA do orga- nismo fonte e iniciadores com base na dessaturases descrita. A invenção então abrange uso de ácidos nucléicos que hibridizam sob condições estri- tas para um DMO que codifica as seqüências descritas aqui. Alguém de ex- periência na técnica entende que as condições podem se tornar menos estri- tas aumentando a concentração de sal e diminuindo a temperatura. Desse modo, as condições de hibridação podem ser facilmente manipuladas, e desse modo geralmente será um método de escolha que depende dos resul- tados desejados. Um exemplo de condições de severidade altas é 5X de SSC, 50% de formamida e 42°C. Conduzindo-se uma lavagem sob tal con- dição, por exemplo, durante 10 minutos, essas seqüências não hibridizando para uma seqüência alvo particular sob estas condições podem ser removi- das.

As variantes também podem ser sintetizadas quimicamente, por exemplo, usando as seqüências de polinucleotídeo de DMO conhecidas de acordo com técnicas bem conhecidas na técnica. Por exemplo, as seqüên- cias de DNA podem ser sintetizadas através de química de fosfoamidita em um sintetizador de DNA automatizado. A síntese química tem várias vanta- gens. Em particular, a síntese química é desejável porque os códons preferi- dos pelo hospedeiro no qual a seqüência de DNA será expressada, podem ser usados para otimizar a expressão. Nem todos os códons necessitam ser alterados para obter expressão melhorada, porém preferivelmente pelo me- nos o códons raramente usados no hospedeiro são mudados para códons de hospedeiro preferido. Os níveis elevados de expressão podem ser obti- dos mudando mais do que cerca de 50%, preferivelmente pelo menos cerca de 80%, dos códons para códons de hospedeiros preferidos. As preferências de códons de muitas células hospedeiras são conhecidas (PCT WO 97/31115; PCT WO 97/11086; EP 646643; EP 553494; e Patentes dos Esta- dos Unidos N2s: 5.689.052; 5.567.862; 5.567.600; 5.552.299 e 5.017.692). As preferências de códon de outras células hospedeiras podem ser deduzi- das por métodos conhecidos na técnica. Também, usando síntese química, a seqüência da molécula de DNA ou sua proteína codificada pode ser mu- dada facilmente para, por exemplo, otimizar expressão (por exemplo, elimi- nar as estruturas secundárias de mRNA que interferem com transcrição ou translação), adicionar sítios de restrição únicos em pontos convenientes, e deletar sítios de clivagem de protease.

Modificações e mudanças podem ser feitas à seqüência de poli- peptídeo de uma proteína tal como as seqüências de DMO fornecidas aqui enquanto retendo atividade enzimática. O seguinte é uma descrição com base na mudança dos aminoácidos de uma proteína para criar um polipeptí- deo modificado equivalente, ou até mesmo melhorado e seqüências de codi- ficação correspondentes. Sabe-se, por exemplo, que certos aminoácidos podem ser substituídos por outros aminoácidos em uma estrutura de proteí- na sem perda apreciável de capacidade de ligação interativa com estruturas tal como sítios de ligação em moléculas de substrato. Considerando que é a capacidade interativa e natureza de uma proteína que definem a atividade funcional biológica daquela proteína, certas substituições de seqüência de aminoácido podem ser feitas em uma seqüência de proteína, e, claro que, sua seqüência de codificação de DNA subjacente, e não obstante obtém uma proteína com propriedades iguais. É contemplado desse modo que po- dem ser feitas várias mudanças nas seqüências de peptídeo de DMO descri- tas aqui ou outros polipeptídeos de tolerância herbicida e seqüências de co- dificação de DNA correspondentes sem perda apreciável da sua utilidade ou atividade biológica. Ao fazer tais mudanças, o índice hidrofático de aminoácidos po- de ser considerado. A importância do índice de aminoácido hidrofático em conferir função biológica interativa em uma proteína é geralmente compre- endida na técnica (Kyte e outros, 1982). È aceito que o caráter hidrofático relativo do aminoácido contribui com a estrutura secundária da proteína re- sultante, que em troca define a interação da proteína com outras moléculas, por exemplo, enzimas, substratos, receptores, DNA, anticorpos, antígenos, e outros. Cada aminoácido foi designado um índice hidrofático na base de sua hidrofobicidade e características de custo (Kyte e outros, 1982), estes são: isoleucina (+4,5); valina (+4,2); Ieucina (+3,8); fenilalanina (+2,8); cisteína/ cistina (+2,5); metionina (+1,9); alanina (+1,8); glicina (-0,4); treonina (0,7); serina (-0,8); triptofano (-0,9); tirosina (-1,3); prolina (-1,6); histidina (-3,2); gIutamato (-3,5); glutamina (-3,5); aspartato (-3,5); asparagina (-3,5); Iisina (-3,9); e arginina (-4,5).

Sabe-se na técnica que os aminoácidos podem ser substituídos por outros aminoácidos tendo um escore ou índice hidrofático semelhante e ainda resulta em uma proteína com atividade biológica semelhante, isto é, ainda obtém uma proteína funcionalmente equivalente biológica. Ao fazer tais mudanças, a substituição de aminoácidos cujos índices hidrofáticos es- tão em ± 2 são preferidos, aqueles estão em ± 1 são particularmente preferi- dos, e aqueles em ± 0,5 são até mesmo mais particularmente preferidos.

Também é compreendido na técnica que a substituição de ami- noácidos semelhantes pode ser feita efetivamente em base de hidrofilicida- de. A Patente dos Estados Unidos 4.554.101 declara que a maior hidrofilici- dade média local de uma proteína, quando administrada pela hidrofilicidade de seus aminoácidos adjacentes, se correlaciona com uma propriedade bio- lógica da proteína. Como detalhado na Patente dos Estados Unidos 4.554.101, os seguintes valores de hidrofilicidade foram designados para resíduos de aminoácido: arginina (+3,0); Iisina (+3,0); aspartato (+3,0 (1); glutamato (+3,0 (1); serina (+0,3); asparagina (+0,2); glutamina (+0,2); glici- na (0); treonina (-0,4); prolina (-0,5 (1); alanina (-0,5); histidina (-0,5); cisteína (-1,0); metionina (-1,3); valina (-1,5); Ieucina (-1,8); isoleucina (-1,8); tirosina (-2,3); fenilalanina (-2,5); triptofano (-3,4). É compreendido que um aminoá- cido pode ser substituído para outro que tenha um valor de hidrofilicidade semelhante e ainda obter uma proteína biologicamente equivalente. Em tal mudança, a substituição de aminoácidos cujos valores de hidrofilicidade es- tão em ± 2 são preferidos, aqueles que estão em ± 1 são particularmente preferidos, e aqueles em ± 0,5 são até mesmo mais particularmente preferi- dos. As substituições exemplares que consideram estas e várias das carac- terísticas precedentes em consideração são bem conhecidas por aqueles de experiência na técnica e incluem: arginina e lisina; glutamato e aspartato; serina e treonina; glutamina e asparagina; e valina, Ieucina e isoleucina.

Um gene que confere tolerância herbicida tipicamente será unido a uma expressão impulsionadora do promotor da planta do gene em uma quantidade suficiente para conferir a tolerância herbicida. Os promotores adequados para este e outros usos são bem conhecidos na técnica. Os e- xemplos que descrevem tais promotores incluem Patente dos Estados Uni- dos 6.437.217 (promotor de RS81 de milho), Patente dos Estados Unidos 5.641.876 (promotor de actina de arroz), Patente dos Estados Unidos 6.426.446 (promotor de RS324 de milho), Patente dos Estados Unidos 6.429.362 (o promotor PR-1 de milho), Patente dos Estados Unidos 6.232.526 (promotor de A3 de milho), Patente dos Estados Unidos 6.177.611 (os promotores de milho constitutivos), Patente dos Estados Unidos 5.322.938, 5.352.605, 5.359.142 e 5.530.196 (promotor 35S), Patente dos Estados Unidos 6.433.252 (promotor de oleosina L3 de milho), Patente dos Estados Unidos 6.429.357 (promotor de actina 2de arroz como também um íntron de actina 2 de arroz), Patente dos Estados Unidos 5.837.848 (o pro- motor específico de raiz), Patente dos Estados Unidos 6.294.714 (os promo- tores induzíveis de luz), Patente dos Estados Unidos 6.140.078 (os promoto- res induzíveis de sal), Patente dos Estados Unidos 6.252.138 (os promoto- res induzíveis de patógeno), Patente dos Estados Unidos 6.175.060 (os promotores induzíveis de deficiência de fósforo), Patente dos Estados Uni- dos 6.388.170 (o promotor de PCISV), Patente dos Estados Unidos 6.635.806 (promotor gama-coixin), e Pedido de Patente dos Estados Unidos No. de Série 09/757.089 (promotor de cloroplasto aldolase de milho). Os promotores adicionais que podem encontrar uso são um promotor de nopali- na sintase (NOS) (Ebert e outros, 1987), o promotor octopina sintase (OCS) (que é carregado em plasmídeos de indução de tumor de Agrobacterium tumefaciens), os promotores de caulimovirus tal como o promotor 19S de vírus de couve-flor mosaico (CaMV) (Lawton e outros, 1987), o promotor de CaMV 35S (Odell e outros, 1985), o promotor 35S de vírus de figueira mo- saico (Walker e outros, 1987), o promotor de sacarose sintase (Yang e ou- tros, 1990), o promotor de complexo de gene R (Chandler e outros, 1989), o promotor de gene de proteína de ligação a/b de clorofila, CaMV35S (Paten- tes dos Estados Unidos Nos. 5.322.938; 5.352.605; 5.359.142; e 5.530.196), FMV35S (Patente dos Estados Unidos 6.051.753; 5.378.619), um promotor de PCISV (Patente dos Estados Unidos 5.850.019; ou SEQ ID N0:20), o promotor de SCP (a Pat dos Estados Unidos. No. 6.677.503), e os promoto- res AGRtu.nos (Acessão de GenBank V00087; Depicker e outros, 1982; Be- van e outros, 1983), e outros (também veja, Tabela 1).

O benefício pode ser obtido para a expressão de genes de tole- rância de herbicida por uso de uma seqüência que codifica para um peptídeo de trânsito. Por exemplo, a incorporação de um peptídeo de trânsito de clo- roplasto adequado, tal como, o CTP de EPSPS de Arabidopsis thaliana (Klee e outros, 1987), e o CTP de EPSPS de Petunia hybrida (della-Cioppa e outros, 1986), foi mostrada alvejar as seqüências de proteína de EPSPS he- terólogas para cloroplastos em plantas transgênicas. Os peptídeos de trânsi- to de cloroplasto (CTPs) são criado para serem fundidos ao terminal de N de uma proteína para direcionar a proteína no cloroplasto de planta. Tais se- qüências podem encontrar uso com relação a um ácido nucléico que confere tolerância de dicamba em particular. Muitas proteínas localizadas em cloro- plasto são expressas de genes nucleares como precursores e são alvejadas para o cloroplasto por um peptídeo de trânsito de cloroplasto que é removido durante o processo de importação. Os exemplos de proteínas de cloroplasto incluem a subunidade pequeno (RbcS2) de ribulose-1,5,-bisfosfato carboxi- lase, ferredoxina, ferredoxina oxidoreductase, a proteína I e proteína II de complexo de colheita de luz, e tiorredoxina F. Outras seqüências de alveja- mento de cloroplasto exemplares incluem a seqüência de sinal cab-m7 de milho (Becker e outros, 1992; PCT WO 97/41228), a seqüência de sinal de glutationa reductase de ervilha (Creissen e outros, 1995; PCT WO 97/41228), e o CTP do peptídeo de trânsito de cloroplasto de subunidade pequena de ribulose 1,5-bisfosfato carboxilase de Nicotiana tabacum (SSU- CTP) (Mazur, e outros, 1985). O uso de AtRbcS4 (CTP1; Patente dos Esta- dos Unidos 5.728.925), AtShkG (CTP2; Klee e outros, 1987), AtShkGZm (CTP2synthetic; veja SEQ ID N0:14 de W004009761), e PsRbcS (Coruzzi e outros, 1984), como também outras descritas, por exemplo, no Pedido de Patente Provisório dos Estados Unidos 60/891.675, seqüências de ácido nucléico e peptídeo para que sejam listadas aqui as SEQ ID NOs:21-32, po- de ser de benefício para uso com a invenção.

Um 5 ' UTR que funciona como uma seqüência líder de transla- ção é um elemento genético de DNA localizado entre a seqüência promotora de um gene e a seqüência de codificação. A seqüência líder de translação está presente no mRNA completamente processado a montante da seqüên- cia de partida de translação. A seqüência líder de translação pode afetar o processamento da transcrição primária para mRNA, estabilidade de mRNA ou eficiência de translação. Os exemplos de seqüências líderes de transla- ção incluem líderes de proteína de choque térmico de milho e petúnia (Pa- tente dos Estados Unidos No. 5.362.865), líderes de proteína de revestimen- to de vírus de planta, líderes de rubisco de planta, entre outros (Turner e Foster, 1995). Os exemplos não Iimitantes de 5 ' UTRs que podem ser em particular de benefício para uso de GmHsp (Patente dos Estados Unidos 5.659.122), PhDnaK (Patente dos Estados Unidos 5.362.865), AtAntI, TEV (Carrington e Freed, 1990), e AGRtunos (Acessão de GenBank V00087; Be- van e outros, 1983).

A seqüência não transladada 3', região de terminação de trans- crição 3', ou região de poli adenilação significa uma molécula de DNA unida e localizada a jusante de uma molécula de polinucleotídeo estrutural e inclui polinucleotídeos que fornecem sinal de poliadenilação e outros sinais regu- Iadores capazes de afetar a transcrição, processamento de mRNA ou ex- pressão de gene. O sinal de poliadenilação funciona em plantas para causar a adição de nucleotídeos poliadenilados à extremidade 3 ' do precursor de mRNA. A seqüência de poliadenilação pode ser derivada do gene natural, de uma variedade de genes de planta, ou de genes de T-DNA. Um exemplo de uma região de terminação de transcrição 3 ' é a região 3 ' de nopalina sinta- se (nos 3 '; Fraley e outros, 1983). O uso de regiões não transladadas 3 'di- ferentes é exemplificado (lngelbrecht e outros, 1989). As moléculas de polia- denilação de um gene de RbcS2 de Pisum sativum (Ps.RbcS2-E9; Coruzzi e outros, 1984) e AGRtu.nos (Rojiyaa e outros, 1987, Acessão de Genbank E01312) em particular pode ser de benefício para uso com a invenção.

As seqüências íntron são conhecidas na técnica por ajudar na expressão de transgenes em células de planta de monocotilédone. Os e- xemplos de íntrons incluem o íntron de actina de milho (Patente dos Estados Unidos 5.641.876), o íntron de HSP70 de milho (ZmHSP70; Patente dos Es- tados Unidos 5.859.347; Patente dos Estados Unidos 5.424.412), e íntron de TPI de arroz (OsTPI; Patente dos Estados Unidos No. 7.132.528), e são de benefício na prática desta invenção.

Quaisquer das técnicas conhecidas na técnica para introdução de transgenes em plantas podem ser usadas para preparar uma planta tole- rante a herbicida de acordo com a invenção (veja, por exemplo, Miki e ou- tros, 1993). Acredita-se que os métodos adequados para transformação de plantas incluem virtualmente qualquer método pelo qual o DNA possa ser introduzido em uma célula, tal como através de eletroporação tal como ilus- trado na Patente dos Estados Unidos No. 5.384.253; bombardeio de micro- projéteis como ilustrado na Patente dos Estados Unidos NsS 5.015.580; 5.550.318; 5.538.880; 6.160.208; 6.399.861; e 6.403.865; transformação mediada por Agrobacterium como ilustrado nas Patentes dos Estados Uni- dos NsS 5.635.055; 5.824.877; 5.591.616; 5.981.840; e 6.384.301; e trans- formação de protoplasto como ilustrado na Patente dos Estados Unidos N9 5.508.184, etc. Pela aplicação de técnicas tal como estas, as células de vir- tualmente qualquer espécie de planta podem ser estavelmente transforma- dos, e estas células desenvolvidas em plantas transgênicas. As técnicas que podem ser particularmente úteis no contexto de transformação de algodão são descritas nas Patentes dos Estados Unidos Nos. 5.846.797. 5.159.135. 5.004.863. e 6.624.344; e técnicas para transformar plantas Brassica em particular são descritas, por exemplo, na Patente dos Estados Unidos 5.750.871; e técnicas para transformar soja são descritas, por exemplo, em Zhang e outros, 1999 e Patente dos Estados Unidos 6.384.301). O milho pode ser transformado usando métodos descritos em W09506722 e Pedido de Patente dos Estados Unidos 20040244075.

Depois de efetuar liberação de DNA exógeno às células recipi- entes, as próximas etapas geralmente estão relacionadas com identificar as células transformadas para cultivo adicional e regeneração da plantam. Para melhorar a capacidade de identificar os transformantes, alguém pode dese- jar empregar um gene marcador selecionável ou analisável com um vetor de transformação preparado de acordo com a invenção. Neste caso, alguém então analisaria geralmente a população de célula potencialmente transfor- mada expondo as células ao agente ou agentes seletivos, ou alguém anali- saria as células quanto as característica de gene de marcador desejadas.

As células que sobrevivem a exposição ao agente seletivo, ou celas que foram marcadas positivas em um ensaio de avaliação, podem ser cultivadas em meios que suportam a regeneração de plantas. Em uma mo- dalidade exemplar, qualquer meio de cultura de tecido de planta adequado, por exemplo, meios MS e N6, pode ser modificado incluindo substâncias adicionais tal como reguladores de crescimento. Tecido pode ser mantido em um meio básico com reguladores de crescimento até que tecido suficien- te esteja disponível para começar os esforços de regeneração de planta, ou seguindo círculos repetidos de seleção manual, até que a morfologia do te- cido seja adequada para regeneração, tipicamente pelo menos 2 semanas, então transferidas para meio conducente para formação de broto. As cultu- ras são transferidas periodicamente até que formação de broto suficiente ocorra. Uma vez que o broto é formado, eles são transferidos para o meio conducente para formação de raiz. Uma vez que raízes suficientes são for- madas, as plantas podem ser transferidas para terra para crescimento e ma- turidade adicionais.

Para confirmar a presença do DNA exógeno ou "transgene(s)" na regeneração de plantas, uma variedade de ensaios pode realizada. Por exemplo, tais ensaios incluem ensaios "moleculares biológicos", tal como manchamento do Sul e do Norte e PCR™; ensaios "bioquímicos", tal como detectar a presença de um produto de proteína, por exemplo, através de meios imunológicos (ELISAs e Manchas do Oeste) ou através de função en- zimática; ensaios de parte de planta, tal como ensaios de folha ou raiz; e também, analisando o fenótipo do toda planta regenerada.

Uma vez que um transgene foi introduzido em uma planta, aque- le gene pode ser introduzido em qualquer planta sexualmente compatível com a primeira planta cruzando, sem a necessidade de ainda transformar diretamente a segunda planta. Então, como usado aqui o termo "progênie" significa a descendência de qualquer geração de uma planta origem prepa- rada de acordo com a presente invenção, onde a progênie compreende uma construção de DNA selecionada preparada de acordo com a invenção. Uma "planta transgênica" pode ser desse modo de qualquer geração. O "cruza- mento" de uma planta para fornecer uma linhagem de planta tendo um ou mais transgenes ou alelos adicionados relativos a uma linhagem de planta de partida, como descoberto aqui, é definido como as técnicas que resultam em uma seqüência particular que é introduzida em uma linhagem de planta cruzando uma linha inicial com uma linhagem de planta doadora que com- preende um transgene ou alelo da invenção. Para alcançar isto, alguém po- de, por exemplo, realizar as seguintes etapas: (a) plantar sementes da pri- meira (linhagem inicial) e segunda (linha de planta doadora que compreende um transgene ou alelo desejado) planta origem; (b) cultivar as sementes da primeira e segunda plantas origem em plantas que produzam florescimento; (c) polinizar uma flor da primeira planta origem com pólen da segunda planta origem; e (d) colher as sementes produzidas na planta origem que transporta a flor fertilizada.

A preparação de composições de herbicida para uso com rela- ção à invenção atual será evidente para aqueles de experiência na técnica devido à descrição. Tais composições, que são comercialmente disponíveis incluirão tipicamente, além do ingrediente ativo, componentes tais como ten- soativos, portadores sólidos ou líquidos, solventes e aglutinantes. Os exem- pios de tensoativos que podem ser usados para aplicação em plantas inclu- em os sais de metal de álcali, metal de terra alcalina ou amônio de ácidos sulfônicos aromáticos, por exemplo, ligno-, fenol-, naftaleno- e ácido dibutil- naftalenossulfônico, e de ácidos graxos de arilsulfonatos, de éteres de alqui- la, de éteres de laurila, de sulfatos de álcool graxo e de sulfatos de éter de glicol de álcool graxo, condensados de naftaleno sulfonado e seus derivados com formaldeído, condensados de naftalina ou dos ácidos naftalenossulfôni- cos com fenol e formaldeído, condensados de fenol ou ácido fenolsulfônico com formaldeído, condensados de fenol com formaldeído e sulfito de sódio, éter de octilfenila de polioxietileno, isooctil, octil- ou nonilfenol etoxilado, éter de poliglicol de tributilfenila, álcoois de poliéter de alquilarila, álcool de isotri- decila, óleo de rícino etoxilado, triarilfenóis etoxilados, sais de triarilfenoleto- xilados de fosfatado, acetato de éter de poliglicol de álcool de laurila, ésteres de sorbitol, licores de resíduos de lignina-sulfito ou metilcelulose, ou misturas destes. A prática comum no caso de uso de tensoativos é cerca de 0,25% a 1,0% em peso, e mais geralmente cerca de 0,25% a 0,5% em peso.

As composições para aplicação às plantas podem ser sólidas ou líquidas. Onde composições sólidas são usadas, podia ser desejado incluir um ou mais materiais portadores com o composto ativa. Os exemplos de portadores incluem terras minerais tal como sílicas, géis de sílica, silicatos, talco, caulim, attaclay, pedra calcária, giz, loess, barro, dolomita, terra de diatomácea, sulfato de cálcio, sulfato de magnésio, óxido de magnésio, ma- teriais sintéticos moídos, fertilizantes tais como sulfato de amônio, fosfato de amônio, nitrato de amônio, tiouréia e uréia, produtos de origem vegetal tais como farinhas de cereal, farinhas de casca de árvore, farinhas de madeira e farinhas de casca de noz, pós de celulose, atapulgitas, montmorilonitas, mi- ca, vermiculitas, sílicas sintéticas e silicatos de cálcio sintéticos, ou misturas destes. Para soluções líquidas, compostos solúveis em água ou sais podem ser incluídos, tais como sulfato de sódio, sulfato de potássio, cloreto de sódio, cloreto de potássio, acetato de sódio, sulfato de hidrogênio de a- mônio, cloreto de amônio, acetato de amônio, formato de amônio, oxalato de amônio, carbonato de amônio, carbonato de hidrogênio de amônio, tiossulfa- to de amônio, difosfato de hidrogênio de amônio, monofosfato de diidrogênio de amônio, fosfato de hidrogênio de sódio de amônio, tiocianato de amônio, sulfamato de amônio ou carbamato de amônio.

Outros componentes exemplares em composições herbicidas incluem aglutinantes tais como polivinilpirrolidona, álcool de polivinila, aceta- to de polivinila parcialmente hidrolisado, carboximetilcelulose, amido, copo- límeros de vinilpirrolidona/acetato de vinila e acetato de polivinila, ou mistu- ras destes; lubrificantes tais como estearato de magnésio, estearato de só- dio, talco ou polietileno glicol, ou misturas destes; antiespumantes tais como emulsões de silicone, álcoois de cadeia longa, ésteres fosfóricos, acetileno dióis, ácidos graxos ou compostos de organoflúor, e agentes complexantes tais como: sais de ácido etilenodiaminatetraacético (EDTA), sais de ácido trinitrilotriacético ou sais de ácido polifosfórico, ou misturas destes.

Equipamento e métodos conhecidos na técnica são usados para aplicar vários tratamentos de herbicida como descrito aqui. As taxas de apli- cação de herbicidas podem ser variadas, por exemplo, como descrito acima, dependendo da textura de terra, pH, conteúdo de material orgânico, siste- mas de lavoura, e do tamanho da erva daninha, e pode ser determinada consultando o rótulo de herbicida quanto à taxa de herbicida apropriada.

EXEMPLOS

Os seguintes exemplos são incluídos para ilustrar modalidades da invenção. Deveria ser apreciado por aqueles versados na técnica que as técnicas descritas nos exemplos que seguem representem técnicas descri- tas pelo inventor para funcionar bem na prática da invenção. Porém, aqueles versados na técnica devem, levando em consideração a presente descrição, apreciar que muitas mudanças podem ser feitas nas modalidades específi- cas que são descritas e ainda obtêm um resultado igual ou semelhante sem afastar-se do conceito, espírito e escopo da invenção. Mais especificamente, será evidente que certos agentes que são tanto quimicamente quanto fisio- logicamente relacionados podem ser substituídos pelos agentes descritos aqui ao mesmo tempo onde resultados iguais ou semelhantes sejam alcan- çados. Todos tais substitutos e modificações semelhantes evidentes para aqueles versados na técnica são considerados estarem no espírito, escopo e conceito da invenção como definido pelas reivindicações anexas.

Exemplo 1

Tolerância de plantas de soja que contêm construção de polinu- cleotídeo de codificação de DMO a aplicação de pré-emerqência inicial de dicamba.

As plantas de soja transgênicas foram obtidas por transformação de Agrobacterium de nodos de cotiledonários de soja usando procedimentos padrões e um vetor binário contendo o polinucleotídeo de codificação de DMO determinado como SEQ ID N0:7, que codifica o polipeptídeo de SEQ ID N0:8. Quatro eventos de soja transgênica foram preparados e designa- dos Eventos 1-4. As plantas de soja transgênica contendo os eventos foram testado quanto à sua tolerância a herbicida de dicamba relativo aos contro- les, confirmando tolerância de herbicida. As plantas de soja não transgêni- cas foram usadas como controles.

As sementes de soja de controle e transgênicas foram plantadas em potes plásticos de 3,5-polegadas quadradas contendo Redi-earth™ (Scotts-Sierra Horticultural Products Cia., Marysville, Ohio). A superfície de terra foi tratada com várias quantidades (561 a 5040 g/ha, 0,5 a 4,5 lb/acre, ou taxas rotuladas 1x a 9x) de formulações de dicamba (Clarity™ ou Ban- vel™, BASF, Raleigh, NC). Os potes foram colocados em esteiras capilares em bandejas de irrigação de fibra de vidro de 88,9 cm x 152,4 cm para irri- gação aéra e/ou sub-irrigação durante a duração do período de teste para manter umidade de terra ideal para crescimento de planta, e foram fertiliza- dos com Osmocote (14-14-14 liberação lenta; Scotts-Sierra Horticultural Products Cia., Marysville, Ohio) na taxa de 100 gm/cu.ft. para manter o cres- cimento de planta durante a duração de experiências de estufa. As plantas foram crescidas em estufas em 27°/21°C de tempera- tura de dia/noite com umidade relativa entre 25%-75% para simular condi- ções de crescimento de estação morna de primavera tardia. Um fotoperíodo mínimo de 14 h foi fornecido com luz suplementar a cerca de 600 μΕ quando necessário. As experiências foram estabelecidas em um desígnio de bloco aleatorizado por taxa com 4 a 6 réplicas de cada tratamento dependendo da qualidade, disponibilidade de planta, e sendo responsável por qualquer vari- abilidade ambiental que possa ter ocorrido dentro dos confins de cada estu- fa.

As plantas tratadas em experiências de estufa foram avaliadas visualmente em um dia particular após o tratamento (DAT) para dano em uma escala de 0 a 100 por cento relativo às plantas de controle sem trata- mento, com zero representando "nenhum" dano e 100% representando dano ou morte "completa". Os dados foram coletados e analisados usando méto- dos estatísticos adequados.

Os resultados do estudo mostraram surpreendentemente que as plantas de soja transformadas com as construções de polinucleotídeo de codificação de DMO foram tolerante a aplicação de pré-emergência ainda mais precoces de dicamba. Como indicado na Tabela 1 abaixo, o dano para as plantas transgênicas foi menor do que 10% mesmo na taxa de aplicação mais elevada, isto é, 5040 g/ha, 4,5 Ib/acre, ou taxas rotuladas 9x de dicam- ba. Tabela 1. Percentual de dano para plantas de soja não transgênicas ou transgênicas de aplicação de pré-emergência precoce de dicamba em se- meadura. O % de dano foi representado como comparações médias de A- NOVA. As letras semelhantes representam nenhuma diferença estatística ao nível de p=0,05.

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Exemplo 2

Tolerância de plantas de soja que contêm uma construção de polinucleotídeo de codificação de DMO para aplicação de pré-emergência inicial de dicamba em semeadura seguida por aplicação pós-emergência de dicamba

Além do método descrito no Exemplo 2 para aplicação pré- emergência inicial (em semeadura) de dicamba, aplicação pós-emergência (estágio V2 de desenvolvimento de soja) de dicamba foi feita com um pulve- rizador de traço usando bocal de fã plano Teejet 9501E (Spraying Systems Co, Wheaton, IL) com a pressão de ar fixada a um mínimo de 24 psi (165kpa). O bocal de spray foi mantido em uma altura de cerca de 40,64 cm sobre o topo do material de planta para borrifar. O volume de spray foi 10 galões por acre ou 93 litros por hectare.

Como mostrado na Tabela 2, as plantas de soja transformadas com as construções de polinucleotídeo de codificação de DMO foram tole- rantes a aplicações de pré-emergência iniciais de dicamba em semeadura seguido por aplicação pós-emergência de dicamba. Surpreendentemente, o dano para plantas transgênicas foi menos do que 20% na taxa de dicamba global de 10080 g/ha, 9 lb/acre ou taxa rotulada 18x. Tabela 2. Percentual de dano para plantas de soja não transgênicas ou transgênicas de aplicação de dicamba em semeadura seguido por aplicação pós-emergência em estágio V2. *

<table>table see original document page 36</column></row><table>

* O % de dano foi representado como comparações médias de ANOVA. Le- tras semelhantes representam nenhuma diferença estatística no nível de p=0,05.

Exemplo 3

Tolerância de plantas de soja que contêm construção de polinu- cleotídeo de codificação de DMO em aplicação de pré-emergência tardio de dicamba

Uma análise foi realizada do efeito aplicações de pré-emer- gência tardios de dicamba em terra quebrando devido a emergência de hi- pocotilédones de muda de soja. As aplicações de dicamba foram feitas u- sando um pulverizador de traço como descrito nos exemplos anteriores.

Como mostrado na Tabela 3, as plantas de soja transformadas com as cons- truções de polinucleotídeo de codificação de DMO foram constatadas serem tolerantes a aplicação de pré-emergência de dicamba tardia em craquea- mento do solo. Significantemente, o dano nos eventos transgênicos foi me- nor do que 5% mesmo em taxas mais altas, isto é, 5040 g/ha, 4,5 Ib/acre, ou taxas rotuladas de dicamba 9x. Tabela 3. Percentual de dano para plantas de soja transgênicas ou não transgênicas de aplicação de pré-emergência tardia de dicamba em craque- amento do solo. *

<table>table see original document page 37</column></row><table>

* O % de dano foi representado como comparações médias de ANOVA. Le- tras semelhantes representam nenhuma diferença estatística no nível de p=0,05.

Exemplo 4

Tolerância de plantas de soja que contêm construções de poli- nucleotídeo de codificação de DMO para aplicações de pré-emergência tar- dias de dicamba seguidas por aplicações de pós-emergência de dicamba

Além dos estudos acima, uma análise foi realizada do efeito de aplicações de pré-emergência tardias de dicamba em craqueamento do solo seguido por aplicação pós-emergência de dicamba no estágio V2 de desen- volvimento. Como mostrado na Tabela 4, as plantas de soja transformadas com a construção de polinucleotídeo de codificação de DMO foram toleran- tes a aplicação de pré-emergência tardia de dicamba em craqueamento do solo e aplicação pós-emergência de dicamba. Os danos para eventos trans- gênicos foram menores do que 20% mesmo na taxa de dicamba global de 10080 g/ha, 9 lb/acre, ou taxa rotulada18x. Mesa 4. Percentual de dano para plantas de soja transgênicas ou não transgênicas de aplicação de pré-emergência tardia de dicamba em craqueamento do solo seguido por aplicação pós-emergência em estágio V2. *

<table>table see original document page 38</column></row><table>

* O % de dano foi representado como comparações médias de ANOVA. Le- tras semelhantes representam nenhuma diferença estatística ao nível de p=0,05.

Exemplo 5

Tolerância de plantas de soja que contêm construções de poli- nucleotídeo de codificação de DMO a aplicação de pré- e pós-emergência de dicamba no campo

As sementes de soja não transgênicas e transgênicas foram plantadas aproximadamente no começo da estação crescente no tempo de condições de crescimento ideais dependendo da umidade da terra, tempera- tura, e profundidade da semeadura. Por todos os locais as sementes foram plantadas sob o esquema de plotagem de separação com tratamentos de dicamba como efeitos de plotagem total e eventos como efeitos de plotagem de separação. Os detalhes de desígnio foram como segue: 6 locais, 2 repli- cações/local, 2 raízes/plotagen, comprimento de fileira 12 pés (+3 ft de rue- la), 9 sementes/pés, 108 sementes/fileira, 5 eventos (Eventos 1-4 e um quin- to evento que estava segregando); e 4 tratamentos como mostrado abaixo na Tabela 5. Em todos, as 240 plotagens foram plantadas em 6 locais (40 por local). Tabela 5. Detalhes de 4 tratamentos aplicados ara mostrar a tolerância de soja transgênica a dicamba.

<table>table see original document page 39</column></row><table>

Quatro fileiras de borda não transgênica foram plantadas todas ao redor da experiência usando uma linha comercial conhecida tal como A3525. As práticas de produção e administração ideais conhecidas na técni- ca foram seguidas. O controle de peste e controle de doença máximo foram praticados quando necessário para prevenir efeitos de confusão de aplica- ções de dicamba. O campo foi irrigado quando necessário de acordo com práticas padrões.

Todas as plantas no campo foram tratadas com aplicações de pré-emergência e pós-emergência de dicamba e visualmente avaliadas em um dia particular depois de plantio quanto ao dano em uma escala de 0 a 100 por cento relativo às plantas de controle não tratadas, com zero repre- sentando "nenhum" dano e 100% representando dano ou morte "completo".

A plantação de semente e o tratamento de pré-emergência foram realizados aproximadamente um mês separadamente no fim da primavera em Mon- mouth, IL. Como mostrado na Tabela 6, descobriu-se que todas as plantas de soja transgênica tiveram nenhum ou muito pequeno dano. Um quinto e- vento transgênico usado pareceu estar segregando, então uma certa por- centagem de plantas morreu depois dos tratamentos. <table>table see original document page 40</column></row><table> <table>table see original document page 41</column></row><table> Exemplo 6

Controle de ervas daninhas tolerantes a glifosato através de di- camba

Marestail é um das ervas daninhas principais em um campo de colheita. Marestail é efetivamente controlado através de glifosato, porém o desenvolvimento de métodos para controlar esta erva daninha comum com outros herbicidas é importante para minimizar oportunidades para tolerância de herbicida se desenvolver. Uma análise foi realizada para determinar até que ponto esta erva daninha tolerante a glifosato poderia ser controlada por aplicações de dicamba. As plantas de marestail (Conyza canadensis) de dois biotipos, cada de uma região geográfica diferente, Califórnia (CA) e Kentucky (KY)1 foram desenvolvidas, e tratadas em estágio de folha de rose- ta de 10,16-15,24 cm de diâmetro com dicamba como descrito nos Exemplo 2 e 3. Os resultados do estudo, como mostrado na Tabela 7, demonstraram que dicamba foi igualmente efetivo controlando biótipos tanto suscetíveis quanto tolerantes de marestail da CA e KY. Dicamba foi mais efetivo contro- lando biotipos resistentes a taxa mais baixa de aplicação que glifosato. Por exemplo, 2100 g/ha de glifosato foi exigido para obter cerca de 77% e 91% de inibição de biotipos resistentes a CA e KY, considerando que somente 280 g/ha de dicamba foi exigido obter cerca de 83% e cerca de 91% de con- trole de biotipos resistentes a CA e KY. Tabela 7. Controle de ervas daninhas tolerantes a glifosato através de dicamba.

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Exemplo 7

Desenvolvimento de um método paa controlar ervas daninhas tolerantes a glifosato em um campo

As sementes transgênicas tendo tolerância de dicamba foram plantadas em um campo que foi tratado com glifosato antes de plantar as sementes transgênicas. O campo é então tratado com uma quantidade her- bicidamente efetiva de dicamba antes ou depois de plantar as sementes pa- ra controlar ervas daninhas resistentes a glifosato. A quantidade herbicida- mente efetiva de dicamba é tal que o crescimento de ervas daninhas resis- tentes a glifosato seja controlado, porém não é prejudicial à colheita plantada como mostrado nos exemplos descritos aqui. Desse modo, as sementes transgênicas tendo tolerância de dicamba em combinação com uma quanti- dade efetiva de dicamba são úteis para controle de ervas daninhas resisten- tes a glifosato. O método pode ser implementado sem retardar a plantação das plantas de colheita tolerantes a dicamba, desse modo fornecendo um avanço significante sobre a técnica anterior na qual dicamba deve ser apli- cada suficientemente antes do plantio tal que dicamba degrada suficiente- mente no ambiente para evitar dano às plantas de colheita.

Exemplo 8

Composto de dicamba e glifosato para controlar ervas daninhas resistentes a glifosato para permitir taxas de aplicação de herbicida reduzi- das Como mostrado na Tabela 8, dicamba sozinho foi mais efetivo controlando biotipos resistentes em taxas de aplicação mais baixas do que glifosato. Além disso, descobriu-se inesperadamente que dicamba em com- binação com glifosato permite controle de ervas daninhas tolerantes a glifo- sato e suscetíveis a taxas de aplicação mais baixas. Por exemplo, conside- rando que 200 g/ha de glifosato pôde controlar somente 6% de marestail (biotipo resistente a KY) em 18 DAT e 40 g/ha de dicamba pôde controlar 52% do biotipo de KY em 18 DAT, uma mistura de 200 g/ha de glifosato e 40 g/ha de dicamba pôde controlar cerca de 79% do biotipo de KY a 18 DAT.

Em geral, qualquer formulação que contém dicamba parecia ser mais eficaz que glifosato sozinho no biotipo resistente. Em geral, também a tendência seguinte em efetividade de relação de glifosato para dicamba em biotipo resistente descobriu-se ser verdade em: 4:1 >10:1 > 20:1 >40:1 > 80:1. Os resultados mostram que uma relação de mistura de glifosato para dicamba de 4:1 contendo 200 g/h de glifosato e 50 g/h de dicamba forneceu controle superior que glifosato ou dicamba sozinho. <table>table see original document page 45</column></row><table> <table>table see original document page 46</column></row><table> <table>table see original document page 47</column></row><table> Exemplo 9

Produção de sementes transqênicas que têm tolerância a di- ca mba e glifosato

Métodos para produzir sementes transgênicas que têm tolerân- cia a glifosato são conhecidos na técnica e tais sementes podem ser produ- zidas por pessoas versadas na técnica usando um 5-enolpiruvilquiquimato-3- fosfato sintase resistente a glifosato de codificação de polinucleotídeo (EPSPS) como descrito na Patente dos Estados Unidos 5.627.061, Patente dos Estados Unidos 5.633.435, Patente dos Estados Unidos 6.040.497 e na Patente dos estados Unidos 5.094.945, W004074443 e W004009761 todas das quais estão desse modo incorporadas por referência. As linhagens de produção de soja que contêm o evento traço de Roundup Ready® 40-3-2 (Padgette e outros, 1995) foram produzidas. As sementes de planta de soja designada como MON19788 foram depositadas sob Acessão de ATCC No. PTA-6708.

As plantas tolerantes a glifosato também podem ser produzidas incorporando polinucleotídeos que codificam enzimas degradantes de glifo- sato como glifosato oxidoreductase (GOX, Patente dos Estados Unidos 5.463.175, incorporada aqui por referência), um glifosato-N-acetila transfera- se (GAT, Publicação de Patente dos Estados Unidos 20030083480, incorpo- rado aqui por referência), e um glifosato descarboxilase (W005003362; o Pedido de Patente dos estados Unidos 20040177399, aqui incorporado por referência).

As plantas tolerantes a dicamba são descritas aqui. Uma linha- gem adequada de cada é cruzada e sementes de progênie avaliadas com aplicações de herbicida de glifosato e dicamba para obter progênie expres- sando genes e exibindo tolerância a dicamba e glifosato. Alternativamente, as seqüências de codificação que conferem tolerância a um ou ambos os herbicidas são introduzidas diretamente em uma determinada linhagem. As sementes destas plantas são usadas para desenvolver um método para con- trolar desenvolvimento de resistência de erva daninha em um campo como descrito abaixo. As sementes transgênicas tendo tolerâncias à dicamba e glifosa- to foram testadas quanto à sua tolerância a dicamba, glifosato, ou ambos os herbicidas. A Tabela 9 mostra tolerância de sojas de transgênica que carre- gam transgenes de tolerância a glifosato e dicamba para glifosato, dicamba, e glifosato e dicamba em vários estágios de crescimento de planta. O dano não foi visto em plantas quando qualquer um ou ambos os herbicidas foram aplicados em estágio de pré-emersão. Os tratamentos de pós-emergência de qualquer um ou ambos os herbicidas em V3, R1, e R3-4 mostraram so- mente pequeno dano.

Tabela 9. Tolerância de sojas transgênicas que carregam tolerância a glifosato e dicamba transgenes para glifosato, dicamba, e glifosato e dicamba.

<table>table see original document page 49</column></row><table> Continuação

<table>table see original document page 50</column></row><table>

Exemplo 10

Desenvolvimento de um método para controlar desenvolvimento de resistência de erva daninha em um campo

As sementes transgênica tendo tolerância a dicamba e glifosato preparadas como descrito acima são plantadas em um campo. O campo é tratado com dicamba e glifosato antes ou depois de plantar as sementes que usam uma mistura de dicamba e glifosato em uma quantidade efetiva para controlar crescimento de erva daninha. Tipicamente acima de uma taxa de aplicação de 1x de qualquer herbicida será efetivo para controlar crescimen- to de erva daninha, porém a taxa pode ser variada, dependendo das condi- ções ambientais e do tipo de ervas daninhas que são controladas, como é conhecido na técnica. A taxa de aplicação também pode ser aumentada ou pode ser diminuída dependendo da taxa de controle desejada. Em geral, o aumento da taxa de um herbicida permitirá uma diminuição na taxa do se- gundo herbicida para obter o mesmo nível de controle de semente. Em mo- dalidades específicas, uma aplicação de cerca de 200 a cerca de 1600 g/ha de glifosato é combinada com cerca de 20 a cerca de 400 g/ha de dicamba.

Uma taxa de aplicação desejada pode ser otimizada em qual- quer ambiente particular ou no contexto de uma erva daninha particular pode ser determinada usando o plano experimental de Exemplo 9 com as taxas de formulação diferentes descritas aqui. Além de nível desejado de controle de erva daninha, o nível de herbicida é selecionado para evitar usar mais herbicida do que é necessário por um lado, e evitar fraco controle de erva daninha que pode levar às plantas tolerantes a herbicida. Durante a aplica- ção, os herbicidas poderiam danificar também a colheita tolerante a herbici- da. Como mostrado, porém no Exemplo 9 acima, a combinação de aplica- ções otimizadas destes herbicidas fornece níveis significantes de controle de ervas daninhas tolerantes a herbicida plano, e desse modo representa um avanço principal na técnica.

Exemplo 11

Desenvolvimento de um método para controlar ervas daninhas em uma única passagem em um campo

Os procedimentos nos Exemplos 9 e 10 são aplicados para de- senvolver um método para controlar crescimento de erva daninha em um ambiente de crescimento de colheita que envolve plantação de uma semen- te transgênica em um campo contendo uma erva daninha ou uma semente desta e tratar o campo em uma única passagem pelo campo. O tratamento compreende uma quantidade herbicidamente efetiva de dicamba, glifosato, ou uma mistura destes, contemporaneamente administrado com a plantação da semente. A plantação, tratamento, e crescimento da semente transgênica são alcançados através de métodos agrícolas padrões.

Um tal método de plantar a semente transgênica e tratar a se- mente transgênica em uma passagem elimina a necessidade do fazendeiro fazer passagens múltiplas pelo campo, incluindo uma vez por plantio e uma vez para borrifação. A técnica então reduz custos de combustível e desgaste para os fazendeiros.

Exemplo 12

Tolerância de plantas que contêm molécula de polinucleotídeo de codificação de DMO a outros herbicidas do tipo auxina

Vento de herbicida e contaminação de equipamento de liberação de herbicida são uma preocupação séria em agricultura e podem prejudicar colheitas não alvo que resultam em perdas aos fazendeiros. Porém, algum nível de vento é freqüentemente inevitável devido à mudança das condições ambientais tal como vento e a proximidade dos campos de cultivo. Além dis- so, é freqüentemente difícil e caro eliminar todos os níveis residuais de um herbicida em um tanque seguinte aplicação de herbicida, e herbicidas resi- duais geralmente resultam em dano inadvertido às colheitas. Freqüentemen- te vários enxágües de equipamento de liberação de herbicida são requeridos antes que ele possa ser usado para outro herbicida, o que desperdiça água e substâncias químicas de limpeza.

Como herbicidas como 2,4-D e MCPA são herbicidas pós- emergência para algumas colheitas, porém podem causar dano sério a co- lheitas não alvo, a contaminação residual com estes herbicidas é de preocu- pação particular. Uma colheita transgênica tolerante a pelo menos baixos níveis destes herbicidas seria então de valor significante administrando da- nos devido ao vento de spray e contaminação de equipamento de herbicida. Isto também poderia reduzir a extensão de lavagem de equipamento neces- sária para equipamento de liberação de herbicida.

Uma análise foi então realizada para determinar se as plantas de soja tendo polinucleotídeo de codificação de DMO poderiam desativar outros herbicidas do tipo auxina além de dicamba, incluindo 2,4-D e MCPA. Isto foi realizado aplicando várias concentrações de formulações comercialmente disponíveis de outros herbicidas do tipo auxina como 2,4-D (Helena, Collier- ville, TN), MCPA (Agriliance, St., Paul, MN), triclopir (GARLON 3A; Dow E- lanco, Indianapolis, EM), clopiralid (STINGER; Dow Elanco, Indianapolis, EM), picloram (TORDON 22K; Dow Elanco, Indianapolis, EM), ou Banvel ou CLARITY (BASF, Raleigh, NC) ao DMO que contém tecidos de planta ou plantas.

As plantas de soja transgênicas foram obtidas para transforma- ção mediada por Agrobacterium de explantes de soja com um polinucleotí- deo de codificação de DMO como descrito acima para os eventos designa- dos Eventos 1-4. Uma linhagem não transgênica foi usada como um contro- le. As sementes de soja não transgênicas e transgênicas foram plantadas em potes plásticos quadrados de 8,89 cm contendo Redi-earthTM (cotts- Sierra Horticultural Products Cia., Marysville, Ohio). Os potes foram coloca- dos em esteiras capilares em bandejas de irrigação de fibra de vidro de 88,9 cm χ 152,4 cm para irrigação aéra e/ou sub-irrigação durante a duração do período de teste para manter umidade de terra ideal para crescimento de planta, e foram fertilizados com Osmocote (14-14-14 liberação lenta; Scotts- Sierra Horticultural Products Cia., Marysville, Ohio) na taxa de 100 gm/cu.ft. para manter o crescimento de planta durante a duração de experiências de estufa, e crescidas em estufas em 27°/21°C de temperatura de dia/noite com umidade relativa entre 25%-75% para simular condições de crescimento de estação morna de primavera tardia. Um fotoperíodo mínimo de 14 h foi for- necido com luz suplementar a cerca de 600 μΕ quando necessário.

Todas as aplicações de herbicida foram feitas com o pulveriza- dor de traço usando um bocal de fã plano Teejet 9501E (Spraying Systems Co, Wheaton, IL) com a pressão de ar fixada a um mínimo de 24 psi (165kpa). O bocal de spray foi mantido em uma altura de cerca de 40,64 cm sobre o topo do material de planta para borrifar. O volume de spray foi 10 galões por acre ou 93 litros por hectare. Todas as experiências foram esta- belecidas em um desígnio de bloco aleatorizado (aleatorizado por taxa) com 4 a 6 replicações de cada tratamento dependendo da qualidade, disponibili- dade de planta, e sendo responsável por qualquer variabilidade ambiental que possa ter ocorrido dentro dos confins de cada estufa.

Todas as plantas tratadas em experiências de estufa foram ava- liadas visualmente em cerca de 4, 14, 18 e 21 dias após o tratamento (DAT) quanto ao dano em uma escala de 0 a 100 por cento relativo às plantas de controle não tratadas, com zero representando "nenhum" dano e 100% re- presentando dano ou morte "completa". Os dados foram coletados e anali- sados usando métodos estatísticos padrões. Os resultados mostrados em Tabela 10 claramente indicam tolerância de soja transgênica a outros herbi- cidas do tipo auxina tal como 2,4-D e MCPA relativo a linhagem não transgênica. Tabela 10. Percentual de dano relativo aos controles não tratados em aplicações 25 DAT pós-V3 de herbicidas do tipo auxina diferentes para plantas de soja transgênicas ou não transgênicas.

<table>table see original document page 54</column></row><table> Continuação

<table>table see original document page 55</column></row><table>

* O % de dano foi representado como comparações médias de ANOVA. * * gramas de ácido ativo equivalent/ehectare

Outro herbicida do tipo auxina Butyrac 200 (2,4-DB; Albaugh) também foi testado em plantas de soja transgênica carregando um gene de DMO para testar a tolerância de plantas a este. O herbicida foi aplicado co- mo um tratamento de pós-emergência em três taxas de aplicação em dois eventos de soja transgênica e comparado com uma linhagem não transgêni- ca para dano de colheita total por toda as três taxas de aplicação: 280 g/ha (0,25 Ib/a), 561 g/ha (0,5 Ib/a) e 841 g/ha (0,75 Ib/a) (veja Tabela 11). Ambas as linhagens de soja transgênica mostraram baixo nível de tolerância a 2,4- DB. Este exemplo mostra que soja tolerante a dicamba também é tolerante a níveis baixos de 2,4-DB e deveria ser útil no controle de dano de vento de spray dos mesmos ou campos vizinhos para prevenir perda de colheita, e exibiria tolerância a níveis residuais de 2,4-DB seguinte lavagem incompleto de equipamento de liberação de herbicida.

Tabela 11. Percentual de dano relativo ao controle não tratado em 16 DAT pela aplicação de 2,4-DB a plantas de soja de não transgênicas ou transgê- nicas.

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Este exemplo mostra que planta de soja transgênica mostram tolerância a outros herbicida do tipo auxina, indicando um mecanismo de desativação comum provável para dicamba e outros herbicidas do tipo auxi- na tal como 2,4-D e MCPA. No caso de triclopir, clopiralid, e picloram, a taxa de aplicação de 280 g ae/ha pareceu muito estrita neste estudo e desse mo- do concentrações mais baixas podem ser desejadas na maioria das coloca- ções para reduzir dano de planta. Desse modo, um polinucleotídeo de DMO que contém soja que é tolerante a dicamba também é tolerante a níveis bai- xos de 2,4-D e MCPA e deveria prevenir ou minimizar dano de vento de s- pray de mesmos ou campos vizinhos para prevenir perdas de colheita, e e- xibiria tolerância a níveis residuais destes herbicidas seguinte lavagem in- completa de equipamento de liberação de herbicida. O equipamento de libe- ração de herbicida poderia incluir um tanque, recipiente, mangueira, coador, estrondo, pulverizador, bocal, bomba, e acessórios tais como acoplamentos, cotoveleiras, caneleiras, e válvulas. O equipamento de liberação é manual- mente ou mecanicamente operável, por exemplo, em um veículo, avião, e helicóptero de fazenda, entre outros.

Exemplo 13

Produção de plantas de milho transgênicas tolerantes a dicamba

Para testar o uso de um gene de DMO no fornecimento de tole- rância de dicamba a monocotilédones, as plantas de milho transgênicas fo- ram produzidas compreendendo um gene de DMO como descrito acima com ou sem um peptídeo de trânsito (por exemplo, TaWaxy, CTP1, CTP2synthetic, CTP4) sob controle de elementos de expressão de gene de planta como um promotor (por exemplo, PCISV, e35S, OsActI, OsTPI, O- sAct15), e um íntron (por exemplo, OsActI, OsActI5, OsTPI, ZmHSP70).

Este elemento de expressão contém primeiro seqüências de exon de flan- queando de UTR e íntron do gene 1 de actina de arroz e inclui 12 nt de exon 1 na extremidade 5' e 7 nt de exon 2 na extremidade 3'), e um 3'UTR (por exemplo, TaHspI7). As seqüências de nucleotídeo e/ou referências patentes para vários elementos de expressão são descritas em aplicação de co- pendência dos Estados Unidos. No. de Série 60/891.675.

As plantas de milho transgênica foram produzidas pelos méto- dos conhecidos na técnica tal como W09506722 e Pedido de Patente dos Estados Unidos 20040244075. Os eventos de milho transgênicos tendo úni- ca cópia foram avaliados quanto à tolerância de dicamba em uma experiên- cia replicada de local único. Seis eventos de cada uma das seis construções foram usados. O desígnio experimental foi como segue: fileiras/entradas: 1; tratamento: 0,5 lb/a de dicamba em estágio V3 seguido por 1 lb/a de dicam- ba em estágio V8 (Clarity®, BASF, Raleigh, NC); replicações: 2; espaçamen- to de fileira: 76,2 cm; comprimento de plotagem: mínimo 20 pés; densidade de planta: aproximadamente 30 plantas/17,5 pés; ruelas: 2,5 pés. A plota- gem total foi fertilizada uniformemente para obter uma colheita agronomica- mente aceitável. Um inseticida de terra tal como Force® 3G (Syngenta Crop Protection1 Greensboro, NC, E.U.A.) a 5 oz. por 1000 pés de fileira para con- trole de lagarta de raiz de milho foi aplicado em tempo de plantio. Se infesta- ção de bicha amarela preta foi observada, POUNCE® 3,2EC a 4 a 8 oz. por taxa de acre (FMC Corporation, Filadélfia, PA) foi usado. Além disso, um programa de spray inseticida foi usado para controlar todas as pestes de lepidopteran de chão anteriores inclusive borer de milho europeu, earworm de milho, e lagarta do cereal do outono. POUNCE® 3.2EC a 4 a 8 oz. por acre foi aplicado a cada 3 semanas para controlar pestes de lepidopteran; foram feitas aproximadamente 4 aplicações. A plotagem foi mantida livre de erva daninha com uma aplicação de pré-emergência de um herbicida tal co- mo Harness® Xtra 5,6L (Monsanto, St., Louis, MO) e Grau Xtra® (Monsanto, St., Louis, MO). Se fossem observadas fugas de erva daninha na verificação não tratada, elas eram controladas capinando à mão ou por uma aplicação pós-emergência de PERMIT (Monsanto, St., Louis, MO) ou BUCTRIL® (Ba- yer, Research Triangle Park, NC) durante toda a experiência.

As linhagens de milho inatas transformadas com construções de DNA compreendendo um transgene de DMO foram testadas quanto à tole- rância de dicamba medindo dano de raiz de cinta quando tratado com 0,5 lb/a de dicamba em estágio V3 seguido por 1 lb/a de dicamba em estágio V8. O dano de raiz de cinta foi avaliado visualmente contando o número de plantas em uma fileira mostrando uma morfologia "atípica" tendo as raízes de cinta fundidas quando comparadas a uma morfologia típica de estrutura "do tipo dedo". Como mostrado na Tabela 12, as plantas de milho transfor- madas com construções de DNA codificando para um DMO sem unir a um CTP (ρΜΟΝ73699, ρΜΟΝ73704) mostrou nível mais alto de dano de raiz de cinta, isto é nível mais baixo de proteção em tratamento de dicamba. As construções codificando para um DMO unido a um CTP (pMON73716, pMON73700, pMON73715, pMON73703) mostraram nível mais baixo de dano de raiz de cinta, isto é nível mais alto de proteção em tratamento de dicamba.

Tabela 12. Percentual de dano de raiz de cinta como uma medida de tolerância de dicamba exibida por plantas de milho transgênicas trans- formadas com construções de DNA carregando DMO.

<table>table see original document page 58</column></row><table>

Exemplo 14

Produção de plantas de algodão transgênicas tolerantes a dicamba

Para testar o uso de gene de DMO fornecendo tolerância de di- camba ao algodão, as plantas de algodão transgênicas foram produzidas. Várias construções de DNA carregando uma região de codificação de DMO como descrito aqui com um peptídeo de trânsito (por exemplo, PsRbcS CTP, CTP1, CTP2) sob o controle de elementos de expressão de gene de planta tal como um promotor (por exemplo, PCISV, FMV, ou e35S), e um 3'UTR (por exemplo E6; No. de Acessão U30508) foram produzidos e transforma- dos em algodão (Gossypium hirsutum) como segue. As seqüências de nu- cleotídeo e/ou referências de patente são descritas para vários elementos de expressão em Pedido de Co-pendência dos Estados Unidos. No. de Série 60/891.675. Os meios usados são notados na Tabela 13.

A transformação de algodão foi realizada, por exemplo, como descrito de acordo com a Publicação de Pedido de Patente dos Estados U- nidos 20040087030, por uma aproximação embriogênica. Os explantes de algodão cv Coker 130 foram crescidos in vitro e com uma suspensão líquida de Agrobacterium tumefaciens carregando uma construção de DNA de inte- resse, usando seleção em meio contendo canamicina. As plantinhas trans- gênicas putativas foram então transferidas para terra para obter plantas de algodão maduras. A natureza transgênica de transformantes foi confirmada por teste de DNA. <table>table see original document page 60</column></row><table> As plantas de algodão transformadas que compreendem uma construção de DNA, isto é, cada compreendendo um composto diferente de uma região de codificação de DMO com um peptídeo de trânsito, um promo- tor, e um 3'UTR, foram tratadas com dicamba (Clarity®, BASF, Raleigh, o NC) como um tratamento pós-emergência em estágio de crescimento V4-5 em taxa de 561 g ae/ha (0,5 lb/a) e constatadas serem tolerantes conside- rando que as plantas de algodão não transformadas mostraram uma taxa de dano de 79% a 86%. As plantas transgênicas mostrando mais de 95% de tolerância (igual a menos do que 5% de dano) foram selecionadas para es- tudos adicionais. As plantas transgênica também foram tolerantes a um tra- tamento pós-emergência subseqüente de dicamba. Por exemplo, as plantas que foram tratadas com 0,5 lb/acre de dicamba em estágio V3-4 seguido por 1 ou 2 lb/acre de dicamba em estágio V5 ou estágios posteriores ainda fo- ram tolerantes a dicamba. As plantas e sementes transgênicas R1 também foram submetidas a tratamento de pré-emergência e pré-emergência ou pós- emergência e dicamba e constatadas serem tolerantes. Este exemplo mos- tra que um gene de DMO pode fornecer tolerância de dicamba para algodão em vários estágios de crescimento desse modo permitindo aplicação de di- camba em vários estágios para obter controle de erva daninha efetivo.

Todos os métodos e/ou de composições descritos e reivindica- dos aqui podem ser feitos e executados sem experimentação imprópria le- vando em conta a presente descrição. Ao mesmo tempo onde as composi- ções e métodos desta invenção foram descritos em termos de modalidades preferidas, será evidente para aqueles de experiência na técnica que varia- ções possam ser aplicadas aos métodos e/ou de composições e nas etapas ou na seqüência de etapas do método descrito aqui sem afastar-se do con- ceito, espírito e escopo da invenção. Mais especificamente, será evidente que certos agentes que são quimicamente ambos fisiologicamente relacio- nados podem ser substituídos pelos agentes descritos aqui ao mesmo tem- po onde os mesmos ou semelhantes resultados seriam alcançados. Todo tais substitutos semelhantes e modificações aparentes para aqueles versa- dos na técnica são julgados estar dentro do espírito, escopo e conceito da invenção como definido pelas reivindicações anexas.

REFERÊNCIAS

As referências listadas abaixo são aqui incorporadas por refe- rência na medida que eles se completam, explicam, fornecem base para, ou ensinam metodologia, técnicas, e/ou composições empregadas aqui.

Patente dos Estados Unidos 4.554.101; Patente dos Estados Unidos 5.004.863; Patente dos Estados Unidos 5.015.580; Patente dos Es- tados Unidos 5.017.692; Patente dos Estados Unidos 5.094.945; Patente dos Estados Unidos 5.159.135; Patente dos Estados Unidos 5.322.938; Pa- tente dos Estados Unidos 5.352.605; Patente dos Estados Unidos 5.359.142; Patente dos Estados Unidos 5.384.253; Patente dos Estados U- nidos 5.424.412; Patente dos Estados Unidos 5.445.962; Patente dos Esta- dos Unidos 5.463.175; Patente dos Estados Unidos 5.508.184; Patente dos Estados Unidos 5.530.196; Patente dos Estados Unidos 5.538.880; Patente dos Estados Unidos 5.550.318; Patente dos Estados Unidos 5.552.299; Pa- tente dos Estados Unidos 5.567.600; Patente dos Estados Unidos 5.567.862; Patente dos Estados Unidos 5.591.616; Patente dos Estados U- nidos 5.627.061; Patente dos Estados Unidos 5.633.435; Patente dos Esta- dos Unidos 5.633.437; Patente dos Estados Unidos 5.635.055; Patente dos Estados Unidos 5.641.876; Patente dos Estados Unidos 5.689.052; Patente dos Estados Unidos 5.750.871; Patente dos Estados Unidos 5.824.877; Pa- tente dos Estados Unidos 5.837.848; Patente dos Estados Unidos 5.846.797; Patente dos Estados Unidos 5.859.347; Patente dos Estados U- nidos 5.939.602; Patente dos Estados Unidos 5.981.840; Patente dos Esta- dos Unidos 6.040.497; Patente dos Estados Unidos 6.140.078; Patente dos Estados Unidos 6.160.208; Patente dos Estados Unidos 6.175.060; Patente dos Estados Unidos 6.177.611; Patente dos Estados Unidos 6.232.526; Pa- tente dos Estados Unidos 6.252.138; Patente dos Estados Unidos 6.294.714; Patente dos Estados Unidos 6.384.301; Patente dos Estados U- nidos 6.388.170; Patente dos Estados Unidos 6.399.861; Patente dos Esta- dos Unidos 6.403.865; Patente dos Estados Unidos 6.414.222; Patente dos Estados Unidos 6.426.446; Patente dos Estados Unidos 6.429.357; Patente dos Estados Unidos 6.429.362; Patente dos Estados Unidos 6.433.252; Pa- tente dos Estados Unidos 6.437.217; Patente dos Estados Unidos 6.613.963; Patente dos Estados Unidos 6.635.806; a Patente dos Estados Unidos. No. 6.677.503; Patente dos Estados Unidos 7.132.528 Pedido dos Estados Unidos No. de Série 09/757.089 Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos 20030083480 Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos 20030135879 Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos 2004087030 Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos 20070079393 Pedido Provisório de Patente dos Estados Unidos. No. de Série 60/891.675 Anônimo, Greenbook Crop Protection Reference, 23a edição, Greenbook Products, Lenexa, KS, 2007. Becker e outros, Plant Mol. Biol., 20(1 ):49-60, 1992. Behrens e outros, Science 316:1185-1188, 2007. Buchanan-Wollaston e outros, J. CeH Biochem., Supp. 13D, 330, 1989. Chandler e outros, Plant Cell, 1:1175-1183, 1989. Chandler, In: CRC Handbook of Pest Management in Agriculture, Pimentel (Ed.), 1:95-109, 1981.

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<110> FENG, PAUL C. C.

BRINKER, RONALD J.

<120> MÉTODOS PARA CONTROLE DE ERVA DANINHA

<130> MONS:083US

<140> DESCONHECIDO

<141> 2007-06-05

<150> 60/811,276 <151> 2006-06-06

<160> 32

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 1023

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> Com base em gene de monooxigenase de dicamba de Pseudomonas malto- philia

<400> 1

atggccactt tcgttagaaa cgcttggtac gttgctgcac ttcctgagga gttgagcgag 60

aagcctctag gaagaactat cctcgatact ccactagctc tctatcgtca acctgacgga 120

gttgtcgctg ccctgcttga tatttgtccg catcgcttcg ctccgttgag tgacggtatt 180

ctagtcaacg gacatctcca gtgtccatat cacggtctgg aatttgacgg aggtggccag 240

tgtgtccaca acccgcacgg caacggagcc cgccctgctt ctctgaacgt gcgatcattc 300

cctgtcgtgg aaagagacgc attgatctgg atctgccctg gagatccagc actcgcagat 3 60

cccggtgcta tccctgactt tgggtgtcgt gttgatccag cttaccgtac tgtcggaggt 420

tacggtcacg tggactgcaa ctacaagctc cttgtggata acctcatgga tcttggacac 480

gctcagtacg tgcaccgcgc taacgcccaa acagacgcct tcgatagact tgagcgtgag 540

gtgatcgttg gcgacggcga gatccaggcg ctcatgaaga tccctggtgg cacaccctca 600

gttctcatgg ctaagttctt gcgtggtgct aacacaccag ttgacgcctg gaacgacatc 660

cggtggaata aggtgtcggc tatgctgaac ttcatcgcgg tcgcgccgga agggacgccg 720

aaggagcagt caatccactc ccgaggaacc catatcctta ctcctgagac cgaggcaagc 780

tgccattact tcttcggtag ttcccgcaac ttcggtatag acgatccaga gatggacggt 840

gttctcagga gctggcaagc tcaagccctg gtgaaggagg acaaagtggt cgttgaagct 900

atcgaaaggc ggagggctta cgtcgaagcg aacgggatca gacccgccat gttgtcctgc 960

gacgaggcag ccgtcagggt atccagggag attgagaagc tcgaacaact agaagcggcg 1020

tga 1023 <210> 2

<211> 340

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Com base em gene de monooxigenase de dicamba de Pseudomonas maltophilia

<400> 2

Met Ala Thr Phe Val Arg Asn Ala Trp Tyr Val Ala Ala Leu Pro Glu

1 5 10 15

Glu Leu Ser Glu Lys Pro Leu Gly Arg Thr Ile Leu Asp Thr Pro Leu 20 25 30

Ala Leu Tyr Arg Gln Pro Asp Gly Val Val Ala Ala Leu Leu Asp Ile 35 40 45

Cys Pro His Arg Phe Ala Pro Leu Ser Asp Gly Ile Leu Val Asn Gly 50 55 60

His Leu Gln Cys Pro Tyr His Gly Leu Glu Phe Asp Gly Gly Gly Gln 65 70 75 80

Cys Val His Asn Pro His Gly Asn Gly Ala Arg Pro Ala Ser Leu Asn 85 90 95

Val Arg Ser Phe Pro Val Val Glu Arg Asp Ala Leu Ile Trp Ile Cys 100 105 110

Pro Gly Asp Pro Ala Leu Ala Asp Pro Gly Ala Ile Pro Asp Phe Gly 115 120 125

Cys Arg Val Asp Pro Ala Tyr Arg Thr Val Gly Gly Tyr Gly His Val 130 135 140

Asp Cys Asn Tyr Lys Leu Leu Val Asp Asn Leu Met Asp Leu Gly His 145 150 155 160

Ala Gln Tyr Val His Arg Ala Asn Ala Gln Thr Asp Ala Phe Asp Arg 165 170 175

Leu Glu Arg Glu Val Ile Val Gly Asp Gly Glu Ile Gln Ala Leu Met 180 185 190

Lys Ile Pro Gly Gly Thr Pro Ser Val Leu Met Ala Lys Phe Leu Arg 195 200 205

Gly Ala Asn Thr Pro Val Asp Ala Trp Asn Asp Ile Arg Trp Asn Lys 210 215 220 Val Ser Ala Met Leu Asn Phe Ile Ala Val Ala Pro Glu Gly Thr Pro 225 230 235 240

Lys Glu Gln Ser Ile His Ser Arg Gly Thr His Ile Leu Thr Pro Glu 245 250 255

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Ile Asp Asp Pro Glu Met Asp Gly Val Leu Arg Ser Trp Gln Ala Gln 275 280 285

Ala Leu Val Lys Glu Asp Lys Val Val Val Glu Ala Ile Glu Arg Arg 290 295 300

Arg Ala Tyr Val Glu Ala Asn Gly Ile Arg Pro Ala Met Leu Ser Cys 305 310 315 320

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Leu Glu Ala Ala 340

<210> 3

<211> 1023

<212> DNA

<213> Artificial

<22 0>

<223> Com base em gene de monooxigenase de dicamba de Pseudomonas malto- philia

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atgctcactt tcgttagaaa cgcttggtac gttgctgcac ttcctgagga gttgagcgag 60

aagcctctag gaagaactat cctcgatact ccactagctc tctatcgtca acctgacgga 120

gttgtcgctg ccctgcttga tatttgtccg catcgcttcg ctccgttgag tgacggtatt 180

ctagtcaacg gacatctcca gtgtccatat cacggtctgg aatttgacgg aggtggccag 240

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cctgtcgtgg aaagagacgc attgatctgg atctgccctg gagatccagc actcgcagat 360

cccggtgcta tccctgactt tgggtgtcgt gttgatccag cttaccgtac tgtcggaggt 420

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cggtggaata aggtgtcggc tatgctgaac ttcatcgcgg tcgcgccgga agggacgccg 720 aaggagcagt caatccactc ccgaggaacc catatcctta ctcctgagac cgaggcaagc 780 tgccattact tcttcggtag ttcccgcaac ttcggtatag acgatccaga gatggacggt 840 gttctcagga gctggcaagc tcaagccctg gtgaaggagg acaaagtggt cgttgaagct 900 atcgaaaggc ggagggctta cgtcgaagcg aacgggatca gacccgccat gttgtcctgc 960 gacgaggcag ccgtcagggt atccagggag attgagaagc tcgaacaact agaagcggcg 1020 tga 1023

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<212> PRT

<213> Artificial

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<223> Com base em gene de monooxigenase de dicamba de Pseudomonas maltophilia

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Met Leu Thr Phe Val Arg Asn Ala Trp Tyr Val Ala Ala Leu Pro Glu 1 5 10 15

Glu Leu Ser Glu Lys Pro Leu Gly Arg Thr Ile Leu Asp Thr Pro Leu 20 25 30

Ala Leu Tyr Arg Gln Pro Asp Gly Val Val Ala Ala Leu Leu Asp Ile 35 40 45

Cys Pro His Arg Phe Ala Pro Leu Ser Asp Gly Ile Leu Val Asn Gly 50 55 60

His Leu Gln Cys Pro Tyr His Gly Leu Glu Phe Asp Gly Gly Gly Gln 65 70 75 80

Cys Val His Asn Pro His Gly Asn Gly Ala Arg Pro Ala Ser Leu Asn 85 90 95

Val Arg Ser Phe Pro Val Val Glu Arg Asp Ala Leu Ile Trp Ile Cys 100 105 110

Pro Gly Asp Pro Ala Leu Ala Asp Pro Gly Ala Ile Pro Asp Phe Gly 115 120 125

Cys Arg Val Asp Pro Ala Tyr Arg Thr Val Gly Gly Tyr Gly His Val 130 135 140

Asp Cys Asn Tyr Lys Leu Leu Val Asp Asn Leu Met Asp Leu Gly His 145 150 155 160

Ala Gln Tyr Val His Arg Ala Asn Ala Gln Thr Asp Ala Phe Asp Arg 165 170 175 Leu Glu Arg Glu Val Ile Val Gly Asp Gly Glu Ile Gln Ala Leu Met 180 185 190

Lys Ile Pro Gly Gly Thr Pro Ser Val Leu Met Ala Lys Phe Leu Arg 195 200 205

Gly Ala Asn Thr Pro Val Asp Ala Trp Asn Asp Ile Arg Trp Asn Lys 210 215 220

Val Ser Ala Met Leu Asn Phe Ile Ala Val Ala Pro Glu Gly Thr Pro 225 230 235 240

Lys Glu Gln Ser Ile His Ser Arg Gly Thr His Ile Leu Thr Pro Glu 245 250 255

Thr Glu Ala Ser Cys His Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Arg Asn Phe Gly 260 265 270

Ile Asp Asp Pro Glu Met Asp Gly Val Leu Arg Ser Trp Gln Ala Gln 275 280 285

Ala Leu Val Lys Glu Asp Lys Val Val Val Glu Ala Ile Glu Arg Arg 290 295 300

Arg Ala Tyr Val Glu Ala Asn Gly Ile Arg Pro Ala Met Leu Ser Cys 305 310 315 320

Asp Glu Ala Ala Val Arg Val Ser Arg Glu Ile Glu Lys Leu Glu Gln 325 330 335

Leu Glu Ala Ala 340

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<212> DNA

<213> Artificial

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<223> Com base em gene de monooxigenase de dicamba de Pseudomonas maltophi- Iia

<400> 5 atgctcactt tcgttagaaa cgcttggtac gttgctgcac ttcctgagga gttgagcgag 60 aagcctctag gaagaactat cctcgatact ccactagctc tctatcgtca acctgacgga 120 gttgtcgctg ccctgcttga tatttgtccg catcgcttcg ctccgttgag tgacggtatt 180 ctagtcaacg gacatctcca gtgtccatat cacggtctgg aatttgacgg aggtggccag 240 tgtgtccaca acccgcacgg caacggagcc cgccctgctt ctctgaacgt gcgatcattc 300 cctgtcgtgg aaagagacgc attgatctgg atctggcctg gagatccagc actcgcagat 360 cccggtgcta tacggtcacg gctcagtacg gtgatcgttg gttctcatgg cggtggaata aaggagcagt tgccattact gttctcagga atcgaaaggc gacgaggcag tga

tccctgactt tggactgcaa tgcaccgcgc gcgacggcga ctaagttctt aggtgtcggc caatccactc tcttcggtag gctggcaagc ggagggctta ccgtcagggt

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tgtcggaggt tcttggacac tgagcgtgag cacaccctca gaacgacatc agggacgccg cgaggcaagc gatggacggt cgttgaagct gttgtcctgc agaagcggcg

420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1023

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<213> Artificial

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<223> Com base em gene de monooxigenase de dicamba de Pseudomonas maltophi- Iia

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Met Leu Thr Phe Val Arg Asn Ala Trp Tyr Val Ala Ala Leu Pro Glu 1 5 10 15

Glu Leu Ser Glu Lys Pro Leu Gly Arg Thr Ile Leu Asp Thr Pro Leu 20 25 30

Ala Leu Tyr Arg Gln Pro Asp Gly Val Val Ala Ala Leu Leu Asp Ile 35 40 45

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Asp Cys Asn Tyr Lys Leu Leu Val Asp Asn Leu Met Asp Leu Gly His 145 150 155 160

Ala Gln Tyr Val His Arg Ala Asn Ala Gln Thr Asp Ala Phe Asp Arg 165 170 175

Leu Glu Arg Glu Val Ile Val Gly Asp Gly Glu Ile Gln Ala Leu Met 180 185 190

Lys Ile Pro Gly Gly Thr Pro Ser Val Leu Met Ala Lys Phe Leu Arg 195 200 205

Gly Ala Asn Thr Pro Val Asp Ala Trp Asn Asp Ile Arg Trp Asn Lys 210 215 220

Val Ser Ala Met Leu Asn Phe Ile Ala Val Ala Pro Glu Gly Thr Pro 225 230 235 240

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Ile Asp Asp Pro Glu Met Asp Gly Val Leu Arg Ser Trp Gln Ala Gln 275 280 285

Ala Leu Val Lys Glu Asp Lys Val Val Val Glu Ala Ile Glu Arg Arg 290 295 300

Arg Ala Tyr Val Glu Ala Asn Gly Ile Arg Pro Ala Met Leu Ser Cys 305 310 315 320

Asp Glu Ala Ala Val Arg Val Ser Arg Glu Ile Glu Lys Leu Glu Gln 325 330 335

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<213> Artificial

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<223> Com base em gene de monooxigenase de dicamba de Pseudomonas maltophilia

<400> atggccacct tcgtccgcaa tgcctggtat gtggcggcgc tgcccgagga actgtccgaa 60

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gtgctgatgg ccaagttcct gcgcggcgcc aatacccccg tcgacgcttg gaacgacatc 660

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aaggagcaga gcatccactc gcgcggtacc catatcctga cccccgagac ggaggcgagc 780

tgccattatt tcttcggctc ctcgcgcaat ttcggcatcg acgatccgga gatggacggc 840

gtgctgcgca gctggcaggc tcaggcgctg gtcaaggagg acaaggtcgt cgtcgaggcg 900

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<210> 8 <211> 340 <212> PRT <213> Artificial

<220>

<223> Com base em gene de monooxigenase de dicamba de Pseudomonas maltophi- Iia

<400> 8

Met Ala Thr Phe Val Arg Asn Ala Trp Tyr Val Ala Ala Leu Pro Glu

Glu Leu Ser Glu Lys Pro Leu Gly Arg Thr Ile Leu Asp Thr Pro Leu 20 25 30

Ala Leu Tyr Arg Gln Pro Asp Gly Val Val Ala Ala Leu Leu Asp Ile 35 40 45

Cys Pro His Arg Phe Ala Pro Leu Ser Asp Gly Ile Leu Val Asn Gly

His Leu Gln Cys Pro Tyr His Gly Leu Glu Phe Asp Gly Gly Gly Gln 65 70 75 80 Cys Val His Asn Pro His Gly Asn Gly Ala Arg Pro Ala Ser Leu Asn 85 90 95

Val Arg Ser Phe Pro Val Val Glu Arg Asp Ala Leu Ile Trp Ile Cys 100 105 110

Pro Gly Asp Pro Ala Leu Ala Asp Pro Gly Ala Ile Pro Asp Phe Gly 115 120 125

Cys Arg Val Asp Pro Ala Tyr Arg Thr Val Gly Gly Tyr Gly His Val 130 135 140

Asp Cys Asn Tyr Lys Leu Leu Val Asp Asn Leu Met Asp Leu Gly His 145 150 155 160

Ala Gln Tyr Val His Arg Ala Asn Ala Gln Thr Asp Ala Phe Asp Arg 165 170 175

Leu Glu Arg Glu Val Ile Val Gly Asp Gly Glu Ile Gln Ala Leu Met 180 185 190

Lys Ile Pro Gly Gly Thr Pro Ser Val Leu Met Ala Lys Phe Leu Arg 195 200 205

Gly Ala Asn Thr Pro Val Asp Ala Trp Asn Asp Ile Arg Trp Asn Lys 210 215 220

Val Ser Ala Met Leu Asn Phe Ile Ala Val Ala Pro Glu Gly Thr Pro 225 230 235 240

Lys Glu Gln Ser Ile His Ser Arg Gly Thr His Ile Leu Thr Pro Glu 245 250 255

Thr Glu Ala Ser Cys His Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Arg Asn Phe Gly 260 265 270

Ile Asp Asp Pro Glu Met Asp Gly Val Leu Arg Ser Trp Gln Ala Gln 275 280 285

Ala Leu Val Lys Glu Asp Lys Val Val Val Glu Ala Ile Glu Arg Arg 290 295 300

Arg Ala Tyr Val Glu Ala Asn Gly Ile Arg Pro Ala Met Leu Ser Cys 305 310 315 320

Asp Glu Ala Ala Val Arg Val Ser Arg Glu Ile Glu Lys Leu Glu Gln 325 330 335

Leu Glu Ala Ala 340 <210> 9 <211> 1023 <212> DNA <213> Artificial

<220>

<223> Com base em gene de monooxigenase de dicamba de Pseudomonas maltophilia

<400> 9

atggccactt tcgttagaaa cgcttggtac gttgctgcac ttcctgagga gttgagcgag 60

aagcctctag gaagaactat cctcgatact ccactagctc tctatcgtca acctgacgga 120

gttgtcgctg ccctgcttga tatttgtccg catcgcttcg ctccgttgag tgacggtatt 180

ctagtcaacg gacatctcca gtgtccatat cacggtctgg aatttgacgg aggtggccag 240

tgtgtccaca acccgcacgg caacggagcc cgccctgctt ctctgaacgt gcgatcattc 300

cctgtcgtgg aaagagacgc attgatctgg atctggcctg gagatccagc actcgcagat 360

cccggtgcta tccctgactt tgggtgtcgt gttgatccag cttaccgtac tgtcggaggt 420

tacggtcacg tggactgcaa ctacaagctc cttgtggata acctcatgga tcttggacac 480

gctcagtacg tgcaccgcgc taacgcccaa acagacgcct tcgatagact tgagcgtgag 540

gtgatcgttg gcgacggcga gatccaggcg ctcatgaaga tccctggtgg cacaccctca 600

gttctcatgg ctaagttctt gcgtggtgct aacacaccag ttgacgcctg gaacgacatc 660

cggtggaata aggtgtcggc tatgctgaac ttcatcgcgg tcgcgccgga agggacgccg 720

aaggagcagt caatccactc ccgaggaacc catatcctta ctcctgagac cgaggcaagc 780

tgccattact tcttcggtag ttcccgcaac ttcggtatag acgatccaga gatggacggt 840

gttctcagga gctggcaagc tcaagccctg gtgaaggagg acaaagtggt cgttgaagct 900

atcgaaaggc ggagggctta cgtcgaagcg aacgggatca gacccgccat gttgtcctgc 960

gacgaggcag ccgtcagggt atccagggag attgagaagc tcgaacaact agaagcggcg 1020

tga 1023

<210> 10

<211> 340

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Com base em gene de monooxigenase de dicamba de Pseudomonas maltophilia

<400> 10

Met Ala Thr Phe Val Arg Asn Ala Trp Tyr Val Ala Ala Leu Pro Glu 1 5 10 15

Glu Leu Ser Glu Lys Pro Leu Gly Arg Thr Ile Leu Asp Thr Pro Leu 20 25 30 Ala Leu Tyr Arg Gln Pro Asp Gly Val Val Ala Ala Leu Leu Asp Ile 35 40 45

Cys Pro His Arg Phe Ala Pro Leu Ser Asp Gly Ile Leu Val Asn Gly 50 55 60

His Leu Gln Cys Pro Tyr His Gly Leu Glu Phe Asp Gly Gly Gly Gln 65 70 75 80

Cys Val His Asn Pro His Gly Asn Gly Ala Arg Pro Ala Ser Leu Asn 85 90 95

Val Arg Ser Phe Pro Val Val Glu Arg Asp Ala Leu Ile Trp Ile Trp 100 105 110

Pro Gly Asp Pro Ala Leu Ala Asp Pro Gly Ala Ile Pro Asp Phe Gly 115 120 125

Cys Arg Val Asp Pro Ala Tyr Arg Thr Val Gly Gly Tyr Gly His Val 130 135 140

Asp Cys Asn Tyr Lys Leu Leu Val Asp Asn Leu Met Asp Leu Gly His 145 150 155 160

Ala Gln Tyr Val His Arg Ala Asn Ala Gln Thr Asp Ala Phe Asp Arg 165 170 175

Leu Glu Arg Glu Val Ile Val Gly Asp Gly Glu Ile Gln Ala Leu Met 180 185 190

Lys Ile Pro Gly Gly Thr Pro Ser Val Leu Met Ala Lys Phe Leu Arg 195 200 205

Gly Ala Asn Thr Pro Val Asp Ala Trp Asn Asp Ile Arg Trp Asn Lys 210 215 220

Val Ser Ala Met Leu Asn Phe Ile Ala Val Ala Pro Glu Gly Thr Pro 225 230 235 240

Lys Glu Gln Ser Ile His Ser Arg Gly Thr His Ile Leu Thr Pro Glu 245 250 255

Thr Glu Ala Ser Cys His Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Arg Asn Phe Gly 260 265 270

Ile Asp Asp Pro Glu Met Asp Gly Val Leu Arg Ser Trp Gln Ala Gln 275 280 285

Ala Leu Val Lys Glu Asp Lys Val Val Val Glu Ala Ile Glu Arg Arg 290 295 300 Arg Ala Tyr Val Glu Ala Asn Gly Ile Arg Pro Ala Met Leu Ser Cys 305 310 315 320

Asp Glu Ala Ala Val Arg Val Ser Arg Glu Ile Glu Lys Leu Glu Gln 325 330 335

Leu Glu Ala Ala 340

<210> 11 <211> 1020 <212> DNA

<213> Pseudomonas maltophilia <400> 11

atgaccttcg tccgcaatgc ctggtatgtg gcggcgctgc ccgaggaact gtccgaaaag 60

ccgctcggcc ggacgattct cgacacaccg ctcgcgctct accgccagcc cgacggtgtg 120

gtcgcggcgc tgctcgacat ctgtccgcac cgcttcgcgc cgctgagcga cggcatcctc 180

gtcaacggcc atctccaatg cccctatcac gggctggaat tcgatggcgg cgggcagtgc 240

gtccataacc cgcacggcaa tggcgcccgc ccggcttcgc tcaacgtccg ctccttcccg 300

gtggtggagc gcgacgcgct gatctggatc tggcccggcg atccggcgct ggccgatcct 360

ggggcgatcc ccgacttcgg ctgccgcgtc gatcccgcct atcggaccgt cggcggctat 420

gggcatgtcg actgcaacta caagctgctg gtcgacaacc tgatggacct cggccacgcc 480

caatatgtcc atcgcgccaa cgcccagacc gacgccttcg accggctgga gcgcgaggtg 540

atcgtcggcg acggtgagat acaggcgctg atgaagattc ccggcggcac gccgagcgtg 600

ctgatggcca agttcctgcg cggcgccaat acccccgtcg acgcttggaa cgacatccgc 660

tggaacaagg tgagcgcgat gctcaacttc atcgcggtgg cgccggaagg caccccgaag 720

gagcagagca tccactcgcg cggtacccat atcctgaccc ccgagacgga ggcgagctgc 7 80

cattatttct tcggctcctc gcgcaatttc ggcatcgacg atccggagat ggacggcgtg 840

ctgcgcagct ggcaggctca ggcgctggtc aaggaggaca aggtcgtcgt cgaggcgatc 900

gagcgccgcc gcgcctatgt cgaggcgaat ggcatccgcc cggcgatgct gtcgtgcgac 960

gaagccgcag tccgtgtcag ccgcgagatc gagaagcttg agcagctcga agccgcctga 1020

<210> 12 <211> 339 <212> PRT

<213> Pseudomonas maltophilia <400> 12

Met Thr Phe Val Arg Asn Ala Trp Tyr Val Ala Ala Leu Pro Glu Glu 1 5 10 15

Leu Ser Glu Lys Pro Leu Gly Arg Thr Ile Leu Asp Thr Pro Leu Ala 20 25 30 Leu Tyr Arg Gln Pro Asp Gly Val Val Ala Ala Leu Leu Asp Ile Cys 35 40 45

Pro His Arg Phe Ala Pro Leu Ser Asp Gly Ile Leu Val Asn Gly His 50 55 60

Leu Gln Cys Pro Tyr His Gly Leu Glu Phe Asp Gly Gly Gly Gln Cys 65 70 75 80

Val His Asn Pro His Gly Asn Gly Ala Arg Pro Ala Ser Leu Asn Val 85 90 95

Arg Ser Phe Pro Val Val Glu Arg Asp Ala Leu Ile Trp Ile Trp Pro 100 105 110

Gly Asp Pro Ala Leu Ala Asp Pro Gly Ala Ile Pro Asp Phe Gly Cys 115 120 125

Arg Val Asp Pro Ala Tyr Arg Thr Val Gly Gly Tyr Gly His Val Asp 130 135 140

Cys Asn Tyr Lys Leu Leu Val Asp Asn Leu Met Asp Leu Gly His Ala 145 150 155 160

Gln Tyr Val His Arg Ala Asn Ala Gln Thr Asp Ala Phe Asp Arg Leu 165 170 175

Glu Arg Glu Val Ile Val Gly Asp Gly Glu Ile Gln Ala Leu Met Lys 180 185 190

Ile Pro Gly Gly Thr Pro Ser Val Leu Met Ala Lys Phe Leu Arg Gly 195 200 205

Ala Asn Thr Pro Val Asp Ala Trp Asn Asp Ile Arg Trp Asn Lys Val 210 215 220

Ser Ala Met Leu Asn Phe Ile Ala Val Ala Pro Glu Gly Thr Pro Lys 225 230 235 240

Glu Gln Ser Ile His Ser Arg Gly Thr His Ile Leu Thr Pro Glu Thr 245 250 255

Glu Ala Ser Cys His Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Arg Asn Phe Gly Ile 260 265 270

Asp Asp Pro Glu Met Asp Gly Val Leu Arg Ser Trp Gln Ala Gln Ala 275 280 285

Leu Val Lys Glu Asp Lys Val Val Val Glu Ala Ile Glu Arg Arg Arg 290 295 300 Ala Tyr Val Glu Ala Asn Gly Ile Arg Pro Ala Met Leu Ser Cys Asp 305 310 315 320

Glu Ala Ala Val Arg Val Ser Arg Glu Ile Glu Lys Leu Glu Gln Leu 325 330 335

Glu Ala Ala

<210> 13 <211> 455 <212> PRT

<213> Agrobacterium tumefaciens <400> 13

Met Leu His Gly Ala Ser Ser Arg Pro Ala Thr Ala Arg Lys Ser Ser 1 5 10 15

Gly Leu Ser Gly Thr Val Arg Ile Pro Gly Asp Lys Ser Ile Ser His 20 25 30

Arg Ser Phe Met Phe Gly Gly Leu Ala Ser Gly Glu Thr Arg Ile Thr 35 40 45

Gly Leu Leu Glu Gly Glu Asp Val Ile Asn Thr Gly Lys Ala Met Gln 50 55 60

Ala Met Gly Ala Arg Ile Arg Lys Glu Gly Asp Thr Trp Ile Ile Asp 65 70 75 80

Gly Val Gly Asn Gly Gly Leu Leu Ala Pro Glu Ala Pro Leu Asp Phe 85 90 95

Gly Asn Ala Ala Thr Gly Cys Arg Leu Thr Met Gly Leu Val Gly Val 100 105 110

Tyr Asp Phe Asp Ser Thr Phe Ile Gly Asp Ala Ser Leu Thr Lys Arg 115 120 125

Pro Met Gly Arg Val Leu Asn Pro Leu Arg Glu Met Gly Val Gln Val 130 135 140

Lys Ser Glu Asp Gly Asp Arg Leu Pro Val Thr Leu Arg Gly Pro Lys 145 150 155 160

Thr Pro Thr Pro Ile Thr Tyr Arg Val Pro Met Ala Ser Ala Gln Val 165 170 175

Lys Ser Ala Val Leu Leu Ala Gly Leu Asn Thr Pro Gly Ile Thr Thr 180 185 190 Val Ile Glu Pro Ile Met Thr Arg Asp His Thr Glu Lys Met Leu Gln 195 200 205

Gly Phe Gly Ala Asn Leu Thr Val Glu Thr Asp Ala Asp Gly Val Arg 210 215 220

Thr Ile Arg Leu Glu Gly Arg Gly Lys Leu Thr Gly Gln Val Ile Asp 225 230 235 240

Val Pro Gly Asp Pro Ser Ser Thr Ala Phe Pro Leu Val Ala Ala Leu 245 250 255

Leu Val Pro Gly Ser Asp Val Thr Ile Leu Asn Val Leu Met Asn Pro 260 265 270

Thr Arg Thr Gly Leu Ile Leu Thr Leu Gln Glu Met Gly Ala Asp Ile 275 280 285

Glu Val Ile Asn Pro Arg Leu Ala Gly Gly Glu Asp Val Ala Asp Leu 290 295 300

Arg Val Arg Ser Ser Thr Leu Lys Gly Val Thr Val Pro Glu Asp Arg 305 310 315 320

Ala Pro Ser Met Ile Asp Glu Tyr Pro Ile Leu Ala Val Ala Ala Ala 325 330 335

Phe Ala Glu Gly Ala Thr Val Met Asn Gly Leu Glu Glu Leu Arg Val 340 345 350

Lys Glu Ser Asp Arg Leu Ser Ala Val Ala Asn Gly Leu Lys Leu Asn 355 360 365

Gly Val Asp Cys Asp Glu Gly Glu Thr Ser Leu Val Val Arg Gly Arg 370 375 380

Pro Asp Gly Lys Gly Leu Gly Asn Ala Ser Gly Ala Ala Val Ala Thr 385 390 395 400

His Leu Asp His Arg Ile Ala Met Ser Phe Leu Val Met Gly Leu Val 405 410 415

Ser Glu Asn Pro Val Thr Val Asp Asp Ala Thr Met Ile Ala Thr Ser 420 425 430

Phe Pro Glu Phe Met Asp Leu Met Ala Gly Leu Gly Ala Lys Ile Glu 435 440 445

Leu Ser Asp Thr Lys Ala Ala 450 455 <210> 14

<211> 448

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Varoamte EPSPS derivada de alface <400> 14

Lys Pro Ser Thr Ala Pro Glu Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu 1 5 10 15

Ile Ser Gly Thr Val Asn Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg

20 25 30

Ile Leu Leu Leu Ala Ala Leu Ser Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn 35 40 45

Leu Leu Asn Ser Asp Asp Val His Tyr Met Leu Gly Ala Leu Arg Ala 50 55 60

Leu Gly Leu His Val Glu Glu Asn Gly Ala Leu Lys Arg Ala Ile Val 65 70 75 80

Glu Gly Cys Gly Gly Val Phe Pro Val Gly Arg Glu Ser Lys Asp Glu 85 90 95

Ile Gln Leu Phe Leu Gly Asn Ala Gly Ile Ala Met Arg Ala Leu Thr 100 105 110

Ala Ala Val Thr Ala Ala Gly Gly Ser Ser Ser Tyr Ile Leu Asp Gly 115 120 125

Val Pro Arg Met Arg Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Thr Gly Leu 130 135 140

Lys Gln Leu Gly Ala Asp Val Asp Cys Phe Leu Gly Thr Asp Cys Pro 145 150 155 160

Pro Val Arg Val Val Gly Ser Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys 165 170 175

Leu Ser Gly Ser Ile Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala 180 185 190

Ala Pro Leu Ala Leu Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Ile Asp Lys Leu 195 200 205

Ile Ser Ile Pro Tyr Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe 210 215 220

Gly Val Ser Val Gln His Ser Asp Thr Trp Asp Arg Phe His Val Gln 225 230 235 240

Gly Gly Gln Lys Tyr Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp 245 250 255

Ala Ser Ser Ala Ser Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Ile Thr Gly Gly 260 265 270

Thr Ile Thr Val Glu Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val 275 280 285

Lys Phe Ala Glu Val Leu Gly Gln Met Gly Ala Gln Val Thr Trp Thr 290 295 300

Glu Asn Ser Val Thr Val Lys Gly Pro Pro Arg Asp Pro Ser Gly Arg 305 310 315 320

Lys His Leu Arg Pro Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val 325 330 335

Ala Met Thr Leu Ala Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala 340 345 350

Ile Arg Asp Val Ala Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile 355 360 365

Ala Ile Cys Thr Glu Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly 370 375 380

Pro Asp Tyr Cys Ile Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Val Thr Ala 385 390 395 400

Ile Asp Thr Tyr Asp Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala 405 410 415

Ala Cys Ala Asp Val Ala Val Thr Ile Lys Asp Pro Gly Cys Thr Arg 420 425 430

Lys Thr Phe Pro Asp Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Ala Lys His 435 440 445

<210> 15 <211> 434 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Varoamte EPSPS <400> 15

Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr Val Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu 1 5 10 15 Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu Ala Ala Leu Ser Glu Gly Thr Thr Val 20 25 30

Val Asp Asn Leu Leu Asn Ser Glu Asp Val His Tyr Met Leu Gly Ala 35 40 45

Leu Arg Thr Leu Gly Leu Ser Val Glu Ala Asp Lys Ala Ala Lys Arg 50 55 60

Ala Val Val Val Gly Cys Gly Gly Lys Phe Pro Val Glu Asp Ala Lys 65 70 75 80

Glu Glu Val Gln Leu Phe Leu Gly Asn Ala Gly Ile Ala Met Arg Ala 85 90 95

Leu Thr Ala Ala Val Thr Ala Ala Gly Gly Asn Ala Thr Tyr Val Leu 100 105 110

Asp Gly Val Pro Arg Met Arg Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val 115 120 125

Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala Asp Val Asp Cys Phe Leu Gly Thr Asp 130 135 140

Cys Pro Pro Val Arg Val Asn Gly Ile Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys 145 150 155 160

Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile Ser Ser Gln Tyr Leu Ser Ala Leu Leu 165 170 175

Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Ile Asp 180 185 190

Lys Leu Ile Ser Ile Pro Tyr Val Glu Met Thr Leu Arg Leu Met Glu 195 200 205

Arg Phe Gly Val Lys Ala Glu His Ser Asp Ser Trp Asp Arg Phe Tyr 210 215 220

Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr Lys Ser Pro Lys Asn Ala Tyr Val Glu 225 230 235 240

Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Ile Thr 245 250 255

Gly Gly Thr Val Thr Val Glu Gly Cys Gly Thr Thr Ser Leu Gln Gly 260 265 270

Asp Val Lys Phe Ala Glu Val Leu Glu Met Met Gly Ala Lys Val Thr 275 280 285 Trp Thr Glu Thr Ser Val Thr Val Thr Gly Pro Pro Arg Glu Pro Phe 290 295 300

Gly Arg Lys His Leu Lys Ala Ile Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro 305 310 315 320

Asp Val Ala Met Thr Leu Ala Val Val Ala Leu Phe Ala Asp Gly Pro 325 330 335

Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg 340 345 350

Met Val Ala Ile Arg Thr Glu Leu Thr Lys Leu Gly Ala Ser Val Glu 355 360 365

Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Ile Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Val 370 375 380

Thr Ala Ile Asp Thr Tyr Asp Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser 385 390 395 400

Leu Ala Ala Cys Ala Glu Val Pro Val Thr Ile Arg Asp Pro Gly Cys 405 410 415

Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp Tyr Phe Asp Val Leu Ser Thr Phe Val 420 425 430

Lys Asn

<210> 16 <211> 428 <212> PRT

<213> Xanthomonas campestris <400> 16

Met Lys Ile Tyr Lys Leu Gln Thr Pro Val Asn Ala Ile Leu Glu Asn 1 5 10 15

Ile Ala Ala Asp Lys Ser Ile Ser His Arg Phe Ala Ile Phe Ser Leu 20 25 30

Leu Thr Gln Glu Glu Asn Lys Ala Gln Asn Tyr Leu Leu Ala Gln Asp 35 40 45

Thr Leu Asn Thr Leu Glu Ile Ile Lys Asn Leu Gly Ala Lys Ile Glu 50 55 60

Gln Lys Asp Ser Cys Val Lys Ile Ile Pro Pro Lys Glu Ile Leu Ser 65 70 75 80 Pro Asn Cys Ile Leu Asp Cys Gly Asn Ser Gly Thr Ala Met Arg Leu 85 90 95

Met Ile Gly Phe Leu Ala Gly Ile Ser Gly Phe Phe Val Leu Ser Gly 100 105 110

Asp Lys Tyr Leu Asn Asn Arg Pro Met Arg Arg Ile Ser Lys Pro Leu 115 120 125

Thr Gln Ile Gly Ala Arg Ile Tyr Gly Arg Asn Glu Ala Asn Leu Ala 130 135 140

Pro Leu Cys Ile Glu Gly Gln Lys Leu Lys Ala Phe Asn Phe Lys Ser 145 150 155 160

Glu Ile Ser Ser Ala Gln Val Lys Thr Ala Met Ile Leu Ser Ala Phe 165 170 175

Arg Ala Asp Asn Val Cys Thr Phe Ser Glu Ile Ser Leu Ser Arg Asn 180 185 190

His Ser Glu Asn Met Leu Lys Ala Met Lys Ala Pro Ile Arg Val Ser 195 200 205

Asn Asp Gly Leu Ser Leu Glu Ile Asn Pro Leu Lys Lys Pro Leu Lys 210 215 220

Ala Gln Asn Ile Ile Ile Pro Asn Asp Pro Ser Ser Ala Phe Tyr Phe 225 230 235 240

Val Leu Ala Ala Ile Ile Leu Pro Lys Ser Gln Ile Ile Leu Lys Asn 245 250 255

Ile Leu Leu Asn Pro Thr Arg Ile Glu Ala Tyr Lys Ile Leu Gln Lys 260 265 270

Met Gly Ala Lys Leu Glu Met Thr Ile Thr Gln Asn Asp Phe Glu Thr 275 280 285

Ile Gly Glu Ile Arg Val Glu Ser Ser Lys Leu Asn Gly Ile Glu Val 290 295 300

Lys Asp Asn Ile Ala Trp Leu Ile Asp Glu Ala Pro Ala Leu Ala Ile 305 310 315 320

Ala Phe Ala Leu Ala Lys Gly Lys Ser Ser Leu Ile Asn Ala Lys Glu 325 330 335

Leu Arg Val Lys Glu Ser Asp Arg Ile Ala Val Met Val Glu Asn Leu 340 345 350 Lys Leu Cys Gly Val Glu Ala Arg Glu Leu Asp Asp Gly Phe Glu Ile 355 360 365

Glu Gly Gly Cys Glu Leu Lys Ser Ser Lys Ile Lys Ser Tyr Gly Asp 370 375 380

His Arg Ile Ala Met Ser Phe Ala Ile Leu Gly Leu Leu Cys Gly Ile 385 390 395 400

Glu Ile Asp Asp Ser Asp Cys Ile Lys Thr Ser Phe Pro Asn Phe Ile 405 410 415

Glu Ile Leu Ser Asn Leu Gly Ala Arg Ile Asp Tyr 420 425

<210> 17 <211> 443 <212> PRT

<213> Caulobacter crescentus <400> 17

Met Ser Leu Ala Gly Leu Lys Ser Ala Pro Gly Gly Ala Leu Arg Gly 1 5 10 15

Ile Val Arg Ala Pro Gly Asp Lys Ser Ile Ser His Arg Ser Met Ile 20 25 30

Leu Gly Ala Leu Ala Thr Gly Thr Thr Thr Val Glu Gly Leu Leu Glu 35 40 45

Gly Asp Asp Val Leu Ala Thr Ala Arg Ala Met Gln Ala Phe Gly Ala 50 55 60

Arg Ile Glu Arg Glu Gly Val Gly Arg Trp Arg Ile Glu Gly Lys Gly 65 70 75 80

Gly Phe Glu Glu Pro Val Asp Val Ile Asp Cys Gly Asn Ala Gly Thr 85 90 95

Gly Val Arg Leu Ile Met Gly Ala Ala Ala Gly Phe Ala Met Cys Ala 100 105 110

Thr Phe Thr Gly Asp Gln Ser Leu Arg Gly Arg Pro Met Gly Arg Val 115 120 125

Leu Asp Pro Leu Ala Arg Met Gly Ala Thr Trp Leu Gly Arg Asp Lys 130 135 140

Gly Arg Leu Pro Leu Thr Leu Lys Gly Gly Asn Leu Arg Gly Leu Asn 145 150 155 160 Tyr Thr Leu Pro Met Ala Ser Ala Gln Val Lys Ser Ala Val Leu Leu 165 170 175

Ala Gly Leu His Ala Glu Gly Gly Val Glu Val Ile Glu Pro Glu Ala 180 185 190

Thr Arg Asp His Thr Glu Arg Met Leu Arg Ala Phe Gly Ala Glu Val 195 200 205

Ile Val Glu Asp Arg Lys Ala Gly Asp Lys Thr Phe Arg His Val Arg 210 215 220

Leu Pro Glu Gly Gln Lys Leu Thr Gly Thr His Val Ala Val Pro Gly 225 230 235 240

Asp Pro Ser Ser Ala Ala Phe Pro Leu Val Ala Ala Leu Ile Val Pro 245 250 255

Gly Ser Glu Val Thr Val Glu Gly Val Met Leu Asn Glu Leu Arg Thr 260 265 270

Gly Leu Phe Thr Thr Leu Gln Glu Met Gly Ala Asp Leu Val Ile Ser 275 280 285

Asn Val Arg Val Ala Ser Gly Glu Glu Val Gly Asp Ile Thr Ala Arg 290 295 300

Tyr Ser Gln Leu Lys Gly Val Val Val Pro Pro Glu Arg Ala Pro Ser 305 310 315 320

Met Ile Asp Glu Tyr Pro Ile Leu Ala Val Ala Ala Ala Phe Ala Ser 325 330 335

Gly Glu Thr Val Met Arg Gly Val Gly Glu Met Arg Val Lys Glu Ser 340 345 350

Asp Arg Ile Ser Leu Thr Ala Asn Gly Leu Lys Ala Cys Gly Val Gln 355 360 365

Val Val Glu Glu Pro Glu Gly Phe Ile Val Thr Gly Thr Gly Gln Pro 370 375 380

Pro Lys Gly Gly Ala Thr Val Val Thr His Gly Asp His Arg Ile Ala 385 390 395 400

Met Ser His Leu Ile Leu Gly Met Ala Ala Gln Ala Glu Val Ala Val 405 410 415

Asp Glu Pro Gly Met Ile Ala Thr Ser Phe Pro Gly Phe Ala Asp Leu 420 425 430 Met Arg Gly Leu Gly Ala Thr Leu Ala Glu Ala 435 440

<210> 18

<211> 441

<212> DNA

<213> Artificial

<22 0>

<223> Iniciador artificial

<220>

<221> CDS <222> (1) . . (441)

<400> 18

atg ata gag gtg aaa ccg att aac gca gag gat acc tat gaa cta agg 48

Met Ile Glu Val Lys Pro Ile Asn Ala Glu Asp Thr Tyr Glu Leu Arg 1 5 10 15

cat aga ata ctc aga cca aac cag ccg ata gaa gcg tgt atg ttt gaa 96

His Arg Ile Leu Arg Pro Asn Gln Pro Ile Glu Ala Cys Met Phe Glu 20 25 30

age gat tta ctt cgt ggt gca ttt cac tta ggc ggc ttt tac agg ggc 144

Ser Asp Leu Leu Arg Gly Ala Phe His Leu Gly Gly Phe Tyr Arg Gly 35 40 45

aaa ctg att tcc ata gct tca ttc cac cag gcc gag cac tcg gaa ctc 192

Lys Leu Ile Ser Ile Ala Ser Phe His Gln Ala Glu His Ser Glu Leu 50 55 60

caa ggc cag aaa cag tac cag ctc cga ggt atg gct acc ttg gaa ggt 240

Gln Gly Gln Lys Gln Tyr Gln Leu Arg Gly Met Ala Thr Leu Glu Gly 65 70 75 80

tat cgt gag cag aaa gcg gga tca act cta gtt aaa cac gct gaa gaa 288

Tyr Arg Glu Gln Lys Ala Gly Ser Thr Leu Val Lys His Ala Glu Glu 85 90 95

ate ctt cgt aag agg ggg gcg gac atg ctt tgg tgt aat gcg agg aca 336

Ile Leu Arg Lys Arg Gly Ala Asp Met Leu Trp Cys Asn Ala Arg Thr 100 105 110

tcc gcc tca ggc tac tac aaa aag tta ggc ttc age gag cag gga gag 384

Ser Ala Ser Gly Tyr Tyr Lys Lys Leu Gly Phe Ser Glu Gln Gly Glu 115 120 125

ata ttt gac aeg ccg cca gta gga cct cac ate ctg atg tat aaa agg 432

Ile Phe Asp Thr Pro Pro Val Gly Pro His Ile Leu Met Tyr Lys Arg 130 135 140

ate aca taa 441

Ile Thr

145

<210> 19

<211> 146

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construção Sintética <400> 19

Met Ile Glu Val Lys Pro Ile Asn Ala Glu Asp Thr Tyr Glu Leu Arg 1 5 10 15

His Arg Ile Leu Arg Pro Asn Gln Pro Ile Glu Ala Cys Met Phe Glu 20 25 30

Ser Asp Leu Leu Arg Gly Ala Phe His Leu Gly Gly Phe Tyr Arg Gly 35 40 45

Lys Leu Ile Ser Ile Ala Ser Phe His Gln Ala Glu His Ser Glu Leu 50 55 60

Gln Gly Gln Lys Gln Tyr Gln Leu Arg Gly Met Ala Thr Leu Glu Gly 65 70 75 80

Tyr Arg Glu Gln Lys Ala Gly Ser Thr Leu Val Lys His Ala Glu Glu 85 90 95

Ile Leu Arg Lys Arg Gly Ala Asp Met Leu Trp Cys Asn Ala Arg Thr 100 105 110

Ser Ala Ser Gly Tyr Tyr Lys Lys Leu Gly Phe Ser Glu Gln Gly Glu 115 120 125

Ile Phe Asp Thr Pro Pro Val Gly Pro His Ile Leu Met Tyr Lys Arg 130 135 140

Ile Thr 145

<210> 20 <211> 433 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Com base na seqüência promotora de PClSV <400> 20 agatcttgag ccaatcaaag aggagtgatg tagacctaaa gcaataatgg agccatgacg 60 taagggctta cgcccatacg aaataattaa aggctgatgt gacctgtcgg tctctcagaa 120 cctttacttt ttatgtttgg cgtgtatttt taaatttcca cggcaatgac gatgtgaccc 180 aacgagatct tgagccaatc aaagaggagt gatgtagacc taaagcaata atggagccat 240 gacgtaaggg cttacgccca tacgaaataa ttaaaggctg atgtgacctg tcggtctctc 300 agaaccttta ctttttatat ttggcgtgta tttttaaatt tccacggcaa tgacgatgtg 360 acctgtgcat ccgctttgcc tataaataag ttttagtttg tattgatcga cacggtcgag 420 aagacacggc cat 433 <210> 21 <211> 57 <212> PRT

<213> Pisum sativum <400> 21

Met Ala Ser Met Ile Ser Ser Ser Ala Val Thr Thr Val Ser Arg Ala 1 5 10 15

Ser Arg Gly Gln Ser Ala Ala Met Ala Pro Phe Gly Gly Leu Lys Ser 20 25 30

Met Thr Gly Phe Pro Val Arg Lys Val Asn Thr Asp Ile Thr Ser Ile 35 40 45

Thr Ser Asn Gly Gly Arg Val Lys Cys 50 55

<210> 22 <211> 85 <212> PRT

<213> Arabidopsis thaliana <400> 22

Met Ala Ser Ser Met Leu Ser Ser Ala Thr Met Val Ala Ser Pro Ala 1 5 10 15

Gln Ala Thr Met Val Ala Pro Phe Asn Gly Leu Lys Ser Ser Ala Ala 20 25 30

Phe Pro Ala Thr Arg Lys Ala Asn Asn Asp Ile Thr Ser Ile Thr Ser 35 40 45

Asn Gly Gly Arg Val Asn Cys Met Gln Val Trp Pro Pro Ile Glu Lys 50 55 60

Lys Lys Phe Glu Thr Leu Ser Tyr Leu Pro Asp Leu Thr Asp Ser Gly 65 70 75 80

Gly Arg Val Asn Cys 85

<210> 23

<211> 76

<212> PRT

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 23

Met Ala Gln Val Ser Arg Ile Cys 1 5

Ile Ser Asn Leu Ser Lys Ser Ser 20

Ser Leu Lys Thr Gln Gln His Pro 35 40

Trp Gly Leu Lys Lys Ser Gly Met 50 55

Pro Leu Lys Val Met Ser Ser Val 65 70

Asn Gly Val Gln Asn Pro Ser Leu 10 15

Gln Arg Lys Ser Pro Leu Ser Val 25 30

Arg Ala Tyr Pro Ile Ser Ser Ser 45

Thr Leu Ile Gly Ser Glu Leu Arg 60

Ser Thr Ala Cys 75

<210> 24 <211> 76 <212> PRT

<213> Arabidopsis thaliana <400> 24

Met Ala Gln Val Ser Arg Ile Cys 1 5

Ile Ser Asn Leu Ser Lys Ser Ser 20

Ser Leu Lys Thr Gln Gln His Pro

35 40

Trp Gly Leu Lys Lys Ser Gly Met 50 55

Pro Leu Lys Val Met Ser Ser Val 65 70

Asn Gly Val Gln Asn Pro Ser Leu 10 15

Gln Arg Lys Ser Pro Leu Ser Val 25 30

Arg Ala Tyr Pro Ile Ser Ser Ser 45

Thr Leu Ile Gly Ser Glu Leu Arg 60

Ser Thr Ala Cys 75

<210> 25 <211> 72 <212> PRT

<213> Petunia hybrida <400> 25

Met Ala Gln Ile Asn Asn Met Ala Gln Gly Ile Gln Thr Leu Asn Pro

1 5

Asn Ser Asn Phe His Lys Pro Gln Val Pro Lys Ser Ser Ser Phe Leu 20 25 30

Val Phe Gly Ser Lys Lys Leu Lys Asn Ser Ala Asn Ser Met Leu Val 35 40 45

Leu Lys Lys Asp Ser Ile Phe Met Gln Lys Phe Cys Ser Phe Arg Ile 50 55 60

Ser Ala Ser Val Ala Thr Ala Cys 65 70

<210> 26

<211> 69

<212> PRT

<213> Triti

aestivum

<400> 26

Met Ala Ala Leu Val Thr Ser Gln Leu Ala Thr Ser Gly Thr Val Leu 1 5 10 15

Ser Val Thr Asp Arg Phe Arg Arg Pro Gly Phe Gln Gly Leu Arg Pro 20 25 30

Arg Asn Pro Ala Asp Ala Ala Leu Gly Met Arg Thr Val Gly Ala Ser 35 40 45

Ala Ala Pro Lys Gln Ser Arg Lys Pro His Arg Phe Asp Arg Arg Cys 50 55 60

Leu Ser Met Val Val 65

<210> 27 <211> 171 <212> DNA

<213> Pisum sativum

<400> 27

atggcttcta tgatatcctc ttccgctgtg acaacagtca gccgtgcctc tagggggcaa 60

tccgccgcaa tggctccatt cggcggcctc aaatccatga ctggattccc agtgaggaag 120

gtcaacactg acattacttc cattacaagc aatggtggaa gagtaaagtg c 171

<210> 28 <211> 255 <212> DNA

<213> Arabidopsis thaliana <400> 28

atggcttcct ctatgctctc ttccgctact atggttgcct ctccggctca ggccactatg 60 gtcgctcctt tcaacggact taagtcctcc gctgccttcc cagccacccg caaggctaac 120 aacgacatta cttccatcac aagcaacggc ggaagagtta actgtatgca ggtgtggcct 180 ccgattgaaa agaagaagtt tgagactctc tcttaccttc ctgaccttac cgattccggt 240 ggtcgcgtca actgc 255

<210> 29 <211> 228 <212> DNA

<213> Arabidopsis thaliana <400> 29

atggcgcaag ttagcagaat ctgcaatggt gtgcagaacc catctcttat ctccaatctc 60 tcgaaatcca gtcaacgcaa atctccctta tcggtttctc tgaagacgca gcagcatcca 120 cgagcttatc cgatttcgtc gtcgtgggga ttgaagaaga gtgggatgac gttaattggc 180 tctgagcttc gtcctcttaa ggtcatgtct tctgtttcca cggcgtgc 228

<210> 30 <211> 228 <212> DNA

<213> Artificial sequence <220>

<223> Iniciador artificial <400> 30

atggcgcaag ttagcagaat ctgcaatggt gtgcagaacc catctcttat ctccaatctc 60 tcgaaatcca gtcaacgcaa atctccctta tcggtttctc tgaagacgca gcagcatcca 120 cgagcttatc cgatttcgtc gtcgtgggga ttgaagaaga gtgggatgac gttaattggc 180 tctgagcttc gtcctcttaa ggtcatgtct tctgtttcca cggcgtgc 228

<210> 31

<211> 216

<212> DNA

<213> Artificial sequence <220> <223> Iniciador artificial

<400> 31

atggcccaga tcaacaacat ggcccagggc atccagaccc tgaaccctaa ctctaacttc 60

cacaagccgc aagtgcccaa gtctagctcc ttcctcgtgt tcggctccaa gaagctcaag 120

aatagcgcca attccatgct ggtcctgaag aaagactcga tcttcatgca gaagttctgc 180

tcctttcgca tcagtgcttc ggttgcgact gcctgc 216

<210> 32 <211> 207 <212> DNA

<213> Artificial sequence <220>

<223> Iniciador artificial <400> 32

atggcggcac tggtgacctc ccagctcgcg acaagcggca ccgtcctgtc ggtgacggac 60 cgcttccggc gtcccggctt ccagggactg aggccacgga acccagccga tgccgctctc 120 gggatgagga cggtgggcgc gtccgcggct cccaagcaga gcaggaagcc acaccgtttc 180 gaccgccggt gcttgagcat ggtcgtc 207

Claims (85)

1. Método, para controlar crescimento de erva daninha em um ambiente de crescimento de colheita compreendendo: a) aplicar uma quantidade herbicidamente efetiva de um her- bicida do tipo auxina a um ambiente de crescimento de colheita; b) plantar uma semente transgênica de uma planta dicotile- dônea que compreende um ácido nucléico que codifica uma atividade enzimática de degradação de dicamba em terra do ambiente de crescimento de colheita dentro de 21 dias de aplicação do herbicida; e c) permitir a semente germinar em uma planta.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, onde o herbicida é aplicado antes de, simultaneamente com, ou depois da plantação da semente.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, onde a semente transgênica é plantada na terra dentro de cerca de 12, 10, 7, ou 3 dias antes ou após o herbicida foi aplicado.

4. Método, de acordo com a reivindicação 1, onde a semente transgênica germina dentre cerca de 18 dias e 0 dias depois de tratar a terra.

5. Método, de acordo com a reivindicação 1, onde a semente transgênica germina dentre cerca de 14 dias e 0 dia depois de tratar a terra.

6. Método, de acordo com a reivindicação 1, onde a semente transgênica germina dentre aproximadamente 7 dias e 0 dias depois de tra- tar a terra.

7. Método, de acordo com a reivindicação 1, onde o herbicida do tipo auxina é selecionado do grupo que consiste em composto de ácido fe- nóxi carboxílico, composto de ácido benzóico, composto de ácido carboxílico de piridina, composto de ácido carboxílico de quinolina, e composto de be- nazolinetila.

8. Método, de acordo com a reivindicação 7, onde o composto de ácido fenóxi carboxílico é selecionada do grupo que consiste em: ácido -2,4-diclorofenoxiacético, ácido (4-cloro-2-metilfenóxi) acético (MCPA), e áci- do 4-(2,4-diclorofenóxi) de butírico (2,4-DB).

9. Método, de acordo com a reivindicação 8, onde a quantidade herbicidamente efetiva de 2,4-diclorofenoxiacético, ácido (4-cloro-2-metil- fenóxi) acético (MCPA)1 ou ácido 4-(2,4-diclorofenóxi) butírico (2,4-DB) é mais baixa do que aproximadamente 1120 g/ha.

10. Método, de acordo com a reivindicação 7, onde a composto de ácido benzóico é dicamba.

11. Método, de acordo com a reivindicação 10, onde a quantida- de herbicidamente efetiva de dicamba é de aproximadamente 2,5 g/ha a a- proximadamente 10.080 g/ha.

12. Método, de acordo com a reivindicação 1, onde o ácido nu- cléico é selecionado do grupo que consiste de (1) uma seqüência de ácido nucléico que codifica o polipeptídeo de SEQ ID NO:8, (2) uma seqüência de ácido nucléico que compreende a seqüência de SEQ ID NO:7, (3) uma se- qüência de ácido nucléico que hibridiza para um complemento da seqüência de ácido nucléico de SEQ ID NO:7 sob as condições de 5X de SSC, 50% de formamida e 42°C, (4) uma seqüência de ácido nucléico que tem pelo menos -70% de identidade de seqüência com a seqüência de ácido nucléico de SEQ ID NO:7, e (5) uma seqüência de ácido nucléico que codifica um polipeptí- deo que tem pelo menos 70% de identidade de seqüência com a seqüência de polipeptídeo de SEQ ID NO:8.

13. Método, de acordo com a reivindicação 1, onde a planta di- cotiledônea é selecionada do grupo que consiste em alfafa, feijões, brócolis, repolho, cenoura, couve-flor, aipo, algodão, pepino, berinjela, alface, melão, ervilha, pimenta, abóbora, rabanete, colza, espinafre, soja, abóbora, tomate, e melancia.

14. Método, de acordo com a reivindicação 13, onde a planta dicotiledônea é uma planta de soja, algodão ou colza.

15. Método, de acordo com a reivindicação 1, compreendendo também aplicar um segundo tratamento de um herbicida do tipo auxina de- pois que a semente germine.

16. Método, de acordo com a reivindicação 15, onde o segundo tratamento é realizado em uma ocasião selecionada do grupo que consiste dentre acima dos estágios V1 a V2 e V3 a V4, antes de florescer, ao flores- cer, depois de florescer, e na formação de semente.

17. Método, de acordo com a reivindicação 1, compreendendo permitir um vento de spray de uma aplicação de herbicida do tipo auxina a um segundo ambiente de crescimento de colheita para contatar a referida planta, onde a planta é tolerante ao vento de spray.

18. Um método para controlar crescimento de erva daninha em um ambiente de crescimento de colheita compreendendo: a) aplicar uma quantidade herbicidamente efetiva de um her- bicida do tipo auxina a um ambiente de crescimento de co- lheita; b) plantar uma semente transgênica de uma planta monocoti- ledônea que expressa um ácido nucléico que codifica di- camba monooxigenase em terra do ambiente de cresci- mento de colheita dentro de 15 dias de aplicação do herbi- cida do tipo auxina, onde a quantidade herbicidamente efe- tiva seja uma quantidade que não danifique a semente transgênica ou uma planta que germina desta porém dani- ficará uma semente ou uma planta que germinam dela do mesmo genótipo em falta de ácido nucléico e que seja plantada sob as mesmas condições como a semente transgênica; e c) permitir a semente germinar em uma planta.

19. Método, de acordo com a reivindicação 18, onde o ácido nu- cléico é selecionado do grupo que consiste de (1) uma seqüência de ácido nucléico que codifica o polipeptídeo de SEQ ID NO:8, (2) uma seqüência de ácido nucléico que compreende a seqüência de SEQ ID NO:7, (3) uma se- qüência de ácido nucléico que hibridiza para um complemento da seqüência de ácido nucléico de SEQ ID NO:7 sob condições de 5X de SSC, 50% de formamida e 42°C, (4) uma seqüência de ácido nucléico que tem pelo menos - 70% de identidade de seqüência com a seqüência de ácido nucléico de SEQ ID NO:7, e (5) uma seqüência de ácido nucléico que codifica um polipeptí- deo que tem pelo menos 70% de identidade de seqüência com a seqüência de polipeptídeo de SEQ ID NO:8

20. Método, de acordo com a reivindicação 18, onde o herbicida é aplicado antes de, simultaneamente com, ou depois da plantação da semente.

21. Método, de acordo com a reivindicação 18, onde a semente transgênica é plantada na terra dentro de aproximadamente 12, 10, 7, ou 3, dias antes de ou após o herbicida ter sido aplicado.

22. Método, de acordo com a reivindicação 18, onde a semente transgênica germina dentre aproximadamente 18 dias e 0 dias depois de tratar a terra.

23. Método, de acordo com a reivindicação 18, onde a semente transgênica germina dentre aproximadamente 14 dias e 0 dia depois de tra- tar a terra.

24. Método, de acordo com a reivindicação 18, onde a semente transgênica germina dentre aproximadamente 7 dias e 0 dias depois de tra- tar a terra.

25. Método, de acordo com a reivindicação 18, onde o herbicida do tipo auxina foi selecionado do grupo que consiste em composto de ácido fenóxi carboxílico, composto de ácido benzóico, composto de ácido carboxí- lico de piridina, composto de ácido carboxílico de quinolina, e composto de benazolinetila.

26. Método, de acordo com a reivindicação 25, onde o composto de ácido fenóxi carboxílico é selecionada do grupo que consiste em: ácido - 2,4-diclorofenoxiacético, ácido (4-cloro-2-metilfenóxi) acético (MCPA), e áci- do 4-(2,4-diclorofenóxi) de butírico (2,4-DB).

27. Método, de acordo com a reivindicação 26, onde a quantida- de herbicidamente efetiva de composto 2,4-diclorofenoxiacético é de apro- ximadamente 280 g/ha a aproximadamente 1200 g/ha, ou a quantidade her- bicidamente efetiva de ácido 4-(2,4-diclorofenóxi) butírico (2,4-DB) é menor de 1120 g/ha.

28. Método, de acordo com a reivindicação 26, onde a quantida- de herbicidamente efetiva de composto 2,4-diclorofenoxiacético é pelo me- nos aproximadamente 590 g/ha.

29. Método, de acordo com a reivindicação 25, onde o composto de ácido fenóxi carboxílico é ácido (4-cloro-2-metilfenóxi) acético (MCPA).

30. Método, de acordo com a reivindicação 29, onde a quantida- de herbicidamente efetiva de MCPA é pelo menos aproximadamente 200 gramas/hectare.

31. Método, de acordo com a reivindicação 29, onde a quantida- de herbicidamente efetiva de MCPA é de aproximadamente 500 g/ha a a- proximadamente 1120 g/ha.

32. Método, de acordo com a reivindicação 25, onde o composto de ácido benzóico é dicamba.

33. Método, de acordo com a reivindicação 32, onde a quantida- de herbicidamente efetiva de dicamba é pelo menos aproximadamente 175 g/ha.

34. Método, de acordo com a reivindicação 32, onde a quantida- de herbicidamente efetiva de dicamba é de aproximadamente 250 g/ha a aproximadamente 600 g/ha.

35. Método, de acordo com a reivindicação 18, onde a planta monocotiledônea é selecionada do grupo que consiste em milho, arroz, sor- go, trigo, centeio, milho miúdo, cana-de-açúcar, aveia, triticale, serva de bru- xa, e turfa.

36. Método, de acordo com a reivindicação 35, onde a planta monocotiledônea é uma planta de milho ou sorgo.

37. Método, de acordo com a reivindicação 18, compreendendo também aplicar um segundo tratamento de um herbicida do tipo auxina de- pois que a semente germine.

38. Método, de acordo com a reivindicação 37, onde o segundo tratamento é realizado em uma ocasião selecionada do grupo que consiste em estágios acima de V1 a V2 e V3 a V4, antes de florescer, ao florescer, depois de florescer, e a formação de semente.

39. Método para controlar uma erva daninha tolerante a glifosato em um campo compreendendo: a) plantar uma semente transgênica em um campo que com- preende uma erva daninha tolerante a glifosato ou uma semente desta, onde a semente compreende um transge- ne que confere tolerância a glifosato e um transgene que codifica dicamba monooxigenase, o transgene que codifica dicamba monooxigenase compreendendo uma seqüência de ácido nucléico selecionada do grupo que consiste em (1) uma seqüência de ácido nucléico que codifica o poli- peptídeo de SEQ ID NO:8, (2) uma seqüência de ácido nu- cléico que compreende a seqüência de SEQ ID NO:7, (3) uma seqüência de ácido nucléico que hibridiza para um complemento da seqüência de ácido nucléico de SEQ ID NO:7 sob condições de 5X de SSC, 50% de formamida e 42°C, (4) uma seqüência de ácido nucléico que tem pelo menos 70% de identidade de seqüência com a seqüência de ácido nucléico de SEQ ID NO:7, e (5) uma seqüência de ácido nucléico que codifica um polipeptídeo que tem pe- lo menos 70% de identidade de seqüência com a seqüên- cia de polipeptídeo de SEQ ID NO:8; b) cultivar a semente em uma planta; e c) tratar o campo com uma quantidade de um herbicida do tipo auxina e glifosato efetivo para controlar crescimento de erva daninha da erva daninha tolerante a glifosato.

40. Método, de acordo com a reivindicação 39, onde o transgene que confere tolerância a glifosato codifica uma proteína selecionada do gru- po que consiste em 5-enolpiruvilchiquimato-3-fosfato sintase resistente a glifosato (EPSPS), glifosato oxidoreductase (GOX), glifosato-N-acetil transfe- rase (GAT) e glifosato descarboxilase.

41. Método, de acordo com a reivindicação 40, onde o transgene que codifica GAT compreende a seqüência de ácido nucléico de SEQ ID NO:18, ou codifica o polipeptídeo de SEQ ID NO:19.

42. Método, de acordo com a reivindicação 39, onde a semente é de uma planta dicotiledônea selecionada do grupo que consiste em alfafa, feijões, brócolos, repolho, cenoura, couve-flor, aipo, algodão, pepino, berinje- la, alface, melão, ervilha, pimenta, abóbora, rabanete, colza, espinafre, soja, abóbora, tomate, e melancia.

43. Método, de acordo com a reivindicação 42, onde a planta dicotiledônea é uma planta de soja, algodão ou colza.

44. Método, de acordo com a reivindicação 39, onde a semente é de uma planta monocotiledônea selecionada do grupo que consiste em milho, arroz, sorgo, trigo, centeio, milho miúdo, cana-de-açúcar, aveia, tritica- le, serva de bruxa, e turfa.

45. Método, de acordo com a reivindicação 44, onde a planta monocotiledônea é uma planta de milho ou sorgo.

46. Método, de acordo com a reivindicação 39, onde o tratamen- to do campo é realizado em uma ocasião selecionada do grupo que consiste dentre acima dos estágios folha V1 a V2 e V3 a V4, antes de florescer, ao florescer, depois de florescer, e na formação de semente.

47. Método, de acordo com a reivindicação 39, onde o tratamen- to do campo é realizado depois que a semente germina.

48. Método, de acordo com a reivindicação 39, onde tratamento do campo é realizado aproximadamente quatro semanas, três semanas, du- as semanas, 1 semana, ou 0 semanas antes da etapa a).

49. Método, de acordo com a reivindicação á9, onde tratando o campo é realizado simultaneamente com a plantação da semente.

50. Método, de acordo com a reivindicação 39, onde a semente transgênica é plantada na terra dentro de aproximadamente 15, 12, 10, 7 ou aproximadamente 3 dias antes ou depois de aplicar o herbicida.

51. Método, de acordo com a reivindicação 39, onde a semente transgênica germina dentre aproximadamente 0 e aproximadamente 18, 14, -7, ou 1 dias depois de tratar a terra.

52. Método, de acordo com a reivindicação 39, onde o herbicida do tipo auxina foi selecionado do grupo que consiste em composto de ácido fenóxi carboxílico, composto de ácido benzóico, composto de ácido carboxí- lico de piridina, composto de ácido carboxílico de quinolina, e composto de benazolinetila.

53. Método, de acordo com a reivindicação 52, onde o composto de ácido fenóxi carboxílico é selecionada do grupo que consiste em ácido 2,4-diclorofenoxiacético e ácido (4-cloro-2-metilfenóxi) acético.

54. Método, de acordo com a reivindicação 53, onde a quantida- de de composto 2,4-diclorofenoxiacético é mais baixa que aproximadamente 1120 g/ha.

55. Método, de acordo com a reivindicação 53, onde a quantida- de de composto 2,4-diclorofenoxiacético é mais baixa que aproximadamente 280 g/ha.

56. Método, de acordo com a reivindicação 53, onde a quantida- de de composto de ácido (4-cloro-2-metilfenóxi) acético é mais baixa que aproximadamente 1120 g/ha.

57. Método, de acordo com a reivindicação 53, onde a quantida- de de composto de ácido (4-cloro-2-metilfenóxi) acético é mais baixa que aproximadamente 280 g/ha.

58. Método, de acordo com a reivindicação 52, onde o ácido benzóico é dicamba.

59. Método, de acordo com a reivindicação 58, onde a quantida- de de dicamba é de aproximadamente 2.5 g/ha a aproximadamente 10,080 g/ha.

60. Método, de acordo com a reivindicação 46, onde a quantida- de de glifosato é de aproximadamente 200 g/ha a aproximadamente 1,600 g/ha.

61. Método, de acordo com a reivindicação 39, onde o herbicida do tipo auxina e glifosato são aplicados substancialmente simultaneamente.

62. Método para controlar crescimento de erva daninha em um campo compreendendo: a) aplicar uma quantidade herbicidamente efetiva de um her- bicida do tipo auxina diferente de dicamba a um campo, onde o campo compreende uma planta dicotiledônea transgênica compreendendo um ácido nucléico que codifi- ca atividade enzimática de degradação de dicamba ou é plantada com uma semente que germina na referida planta dicotiledônea transgênica dentro de 21 dias de aplicação do herbicida, onde a quantidade herbicidamente efetiva é uma quantidade que não danifica a planta dicotiledônea transgênica porém danificará uma planta do mesmo genó- tipo que necessita do ácido nucléico que codifica dicamba monooxigenase, onde o ácido nucléico é selecionado do grupo que consiste em (1) uma seqüência de ácido nucléi- co que codifica o polipeptídeo de SEQ ID NO:8, (2) uma seqüência de ácido nucléico que compreende a seqüência de SEQ ID NO:7, (3) uma seqüência de ácido nucléico que hibridiza para um complemento da seqüência de ácido nu- cléico de SEQ ID NO:7 sob condições de 5X de SSC1 50% de formamida e 42°C, (4) uma seqüência de ácido nucléico que tem pelo menos 70% de identidade de seqüência com a seqüência de ácido nucléico de SEQ ID NO:7, e (5) uma seqüência de ácido nucléico que codifica um polipeptídeo que tem pelo menos 70% de identidade de seqüência com a seqüência de polipeptídeo de SEQ ID NO:8; e b) permitir a planta dicotiledônea transgênica crescer.

63. Método, de acordo com a reivindicação 62, onde etapa a) compreende aplicar a quantidade herbicidamente efetiva de um herbicida do tipo auxina a um ambiente de crescimento adjacente a um ambiente de crescimento que compreende a planta dicotiledônea transgênica e permitir o herbicida se espalhar sobre a planta ou terra no qual a planta cresce.

64. Método, de acordo com a reivindicação 62, onde o herbicida do tipo auxina é selecionado do grupo que consiste em composto de ácido fenóxi carboxílico, composto de ácido benzóico, composto de ácido carboxí- Iico de piridina, composto de ácido carboxílico de quinolina, e composto de benazolinetila.

65. Método, de acordo com a reivindicação 62, onde o composto de ácido fenóxi carboxílico é selecionado do grupo que consiste em ácido -2,4-diclorofenoxiacético ácido, (4-cloro-2-metilfenóxi) acético e ácido 4 -(2,4- diclorofenóxi) butírico (2,4-DB).

66. Método, de acordo com a reivindicação 62, onde etapa b) compreende permitir a planta dicotiledônea transgênica crescer para maturi- dade.

67. Método, de acordo com a reivindicação 62, onde a planta dicotiledônea transgênica é uma selecionada do grupo que consiste em alfa- ia, feijões, brócolos, repolho, cenoura, couve-flor, aipo, algodão, pepino, be- rinjela, alface, melão, ervilha, pimenta, abóbora, rabanete, colza, espinafre, soja, abóbora, tomate, e melancia.

68. Método, de acordo com a reivindicação 62, onde a planta dicoti- ledônea transgênica é uma planta de soja, algodão ou colza.

69. Método para aumentar a eficiência de uso de um dispositivo de liberação de herbicida compreendendo: a) obter um dispositivo que foi usado para liberar uma primei- ra composição compreendendo um herbicida do tipo auxi- na; b) liberar uma segunda composição ao campo usando o dis- positivo sem primeiro lavar o dispositivo completamente de forma que um resíduo de herbicida que compreende os restos de herbicida do tipo auxina permaneça no dispositi- vo e seja liberado com a segunda composição ao campo, onde o campo compreende uma planta dicotiledônea transgênica expressando um ácido nucléico que codifica dicamba monooxigenase ou é plantada com uma semente que germina na referida planta dicotiledônea transgênica, e onde o resíduo de herbicida está presente em uma quanti- dade que não danifica a planta dicotiledônea transgênica porém danificará uma planta do mesmo genótipo que ne- cessite de ácido nucléico que codifica dicamba monooxigenase.

70. Método, de acordo com a reivindicação 69, onde o ácido nu- cléico é selecionado do grupo que consiste de (1) uma seqüência de ácido nucléico que codifica o polipeptídeo de SEQ ID NO:8, (2) uma seqüência de ácido nucléico que compreende a seqüência de SEQ ID NO:7, (3) uma se- qüência de ácido nucléico que hibridiza para um complemento da seqüência de ácido nucléico de SEQ ID NO:7 sob condições de 5X de SSC1 50% de formamida e 42°C, (4) uma seqüência de ácido nucléico que tem pelo menos 70% de identidade de seqüência com a seqüência de ácido nucléico de SEQ ID NO:7, e (5) uma seqüência de ácido nucléico que codifica um polipeptí- deo que tem pelo menos 70% de identidade de seqüência com a seqüência de polipeptídeo de SEQ ID NO:8.

71. Método, de acordo com a reivindicação 69, onde o herbicida do tipo auxina é selecionado do grupo que consiste em composto de ácido fenóxi carboxílico, composto de ácido benzóico, composto de ácido carboxí- lico de piridina, composto de ácido carboxílico de quinolina, e composto de benazolinetila.

72. Método, de acordo com a reivindicação 71, onde o composto de ácido fenóxi carboxílico é selecionada do grupo que consiste em: ácido 2,4-diclorofenoxiacético, ácido (4-cloro-2-metilfenóxi) acético (MCPA), e áci- do 4-(2,4-diclorofenóxi) de butírico (2,4-DB).

73. Método, de acordo com a reivindicação 71, onde o composto de ácido benzóico é dicamba.

74. Método, de acordo com a reivindicação 71, onde a planta dicotiledônea é selecionada do grupo que consiste em alfafa, feijões, bróco- los, repolho, cenoura, couve-flor, aipo, algodão, pepino, berinjela, alface, melão, ervilha, pimenta, abóbora, rabanete, colza, espinafre, soja, abóbora, tomate, e melancia.

75. Método, de acordo com a reivindicação 74, onde a planta dicotiledônea é uma planta de soja, algodão ou colza.

76. Método para controlar o crescimento de erva daninha em um ambiente de crescimento de colheita compreendendo: a) plantar uma semente transgênica em um campo que com- preende uma erva daninha ou uma semente desta, onde a semente transgênica compreende um transgene que con- fere tolerância a glifosato e um transgene que conferem to- lerância a dicamba; b) tratar o referido campo com uma quantidade herbicidamen- te efetiva de dicamba, glifosato, ou uma mistura, onde a plantação e o tratamento são fetos em uma única passa- gem pelo campo; e c) cultivando a semente transgênica em uma planta.

77. Método, de acordo com a reivindicação 76, onde o transgene que confere tolerância a glifosato codifica uma proteína selecionada do gru- po que consiste em 5-enolpiruvilchiquimato-3-fosfato sintase resistente a glifosato, glifosato oxidoreductase, e glifosato-N-acetila transferase, e glifo- sato descarboxilase.

78. Método, de acordo com a reivindicação 77, onde o transgene que codifica GAT compreende a seqüência de ácido nucléico de SEQ ID NO:18, ou codifica o polipeptídeo de SEQ ID NO:19.

79. Método, de acordo com a reivindicação 76, onde o transgene que confere tolerância a dicamba codifica um dicamba monooxigenase que compreende uma seqüência de ácido nucléico selecionada do grupo que consiste de (a) uma seqüência de ácido nucléico que codifica o polipeptídeo de SEQ ID NO:8, (b) uma seqüência de ácido nucléico que compreende a seqüência de SEQ ID NO:7, (c) uma seqüência de ácido nucléico que hibri- diza para um complemento da seqüência de ácido nucléico de SEQ ID NO:7 sob condições de 5X de SSC, 50% de formamida e 42°C, (d) uma seqüência de ácido nucléico que tem pelo menos 70% de identidade de seqüência com a seqüência de ácido nucléico de SEQ ID NO:7, e e) uma seqüência de áci- do nucléico que codifica um polipeptídeo que tem pelo menos 70% de iden- tidade de seqüência com a seqüência de polipeptídeo de SEQ ID NO:8.

80. Método, de acordo com a reivindicação 76, onde a semente transgênica de uma planta dicotiledônea é selecionada do grupo que consis- te em alfafa, feijões, brócolos, repolho, cenoura, couve-flor, aipo, algodão, pepino, berinjela, alface, melão, ervilha, pimenta, abóbora, rabanete, colza, espinafre, soja, abóbora, tomate, e semente de melancia.

81. Método, de acordo com a reivindicação 80, onde a planta dicotiledônea é um planta de soja, algodão ou colza.

82. Método, de acordo com a reivindicação 76, onde a semente transgênica de uma planta monocotiledônea é selecionada do grupo que consiste em semente de milho, arroz, sorgo, trigo, centeio, milho miúdo, ca- na-de-açúcar, aveia, triticale, serva de bruxa, e turfa.

83. Método, de acordo com a reivindicação 82, onde a planta monocotiledônea é uma planta de milho ou sorgo.

84. Método, de acordo com a reivindicação 76, onde a quantida- de de dicamba é de aproximadamente 2,5 g/ha a aproximadamente 10.080 g/ha.

85. Método, de acordo com a reivindicação 76, onde a quantida- de de glifosato é de aproximadamente 200 g/ha a aproximadamente 1.600 g/ha.