CN101500421B

CN101500421B - 用于控制杂草的方法

Info

Publication number: CN101500421B
Application number: CN200780029235.1A
Authority: CN
Inventors: P·C·C·冯; R·J·布林克
Original assignee: Monsanto Technology LLC
Current assignee: Monsanto Technology LLC
Priority date: 2006-06-06
Filing date: 2007-06-06
Publication date: 2015-04-15
Anticipated expiration: 2027-06-06
Also published as: CN101500421A; AR100429A2; AR061249A1; ZA200809908B

Abstract

本发明提供了用麦草畏和相关的除草剂来控制杂草的方法。发现在种植时或接近种植时可以进行麦草畏的发芽前施用而无明显的农作物损害或产量损失。该技术可以与除草剂草甘膦组合，以改善杂草控制的程度且允许控制除草剂耐受性杂草。

Description

用于控制杂草的方法

发明背景

本申请要求2006年6月6日提交的美国临时专利申请序列号60/811,276和2007年6月5日提交的美国专利申请序列号11/758,653的优先权，所述专利申请的公开内容整体引入本文作为参考。

1.发明背景

总的来说，本发明涉及杂草控制领域。更具体而言，本发明涉及使用生长素样除草剂例如麦草畏来控制杂草的方法。

2.相关领域的描述

杂草每年在农作物损失和使杂草处于控制下的努力付出中耗费农民数十亿美元。杂草还充当农作物疾病和昆虫害虫的宿主。在农业生产环境中由杂草引起的损失包括农作物产量的减少、降低的农作物品质、增加的灌溉成本、增加的收获成本、减少的土地价值、对家畜的损害、以及来自由杂草携带的昆虫和疾病的农作物损害。杂草引起这些作用的主要方式是：1)与农作物植物竞争生长和发育的必需物质，2)引起人或动物健康问题的毒性或刺激化学物质的产生，3)污染农业产品和使农业土地中的物种永存的极大量种子或营养生殖部分的产生，和4)必须被处理的非常大量植物的农业和非农业土地的产生。引起的损害可以是显著的。例如，据估计由于杂草的原因，在1972-1976年间玉米产量减少约10％(Chandler，1981)。

在充当农作物害虫的宿主的杂草中，例如辣辣菜(pepperweed)和葶苈子(tansymustard)(播娘蒿属物种(Descurainia sp.))在深秋、冬季和春季期间维持大群的小菜蛾。它们还是芜菁蚜虫和绿桃蚜虫的宿主。茄科(Solanaceae)的几个杂草物种是通常攻击茄子、胡椒、马铃薯和番茄的昆虫的宿主。例如，马茄(Solanum carolinense L.)是科罗拉多薯虫的宿主，龙葵(S.nigrum L.)是甘蓝银纹夜蛾的宿主。牵牛花是攻击番薯的昆虫特别是高毁灭性番薯象鼻虫的重要宿主。豚草充当关于曼蚊属蚊子的宿主，和人疾病脑炎和农村丝虫病的昆虫载体。

几种杂草是干草、牧草和牧场中不希望有的，因为它们使家畜遭受机械性损伤。木质茎、荆棘和僵硬的种芒引起对于家畜的口和消化道的损伤；并且某些植物的绒毛和纤维常常聚成球且阻塞肠，特别是在马中引起严重问题。由奶牛摄入，某些杂草尤其例如豚草、野生大蒜(鸦蒜(Allium vineale L.))和芥菜，对于乳和黄油赋予显然讨厌的气味或味道。有倒钩的种子散布单位可以变得缠绕在绵羊的羊毛中，使得极大减少它的市场价值。寄生植物例如菟丝子(菟属物种(Cuscuta sp.))、肉蓰蓉(列当属物种(Orobanche sp.))和独脚金，掠夺它们的宿主植物的有机粮食。

化学除草剂多年来已提供了杂草控制的有效方法。除草剂一般可以发芽前和/或发芽后施用。发芽前除草剂在农作物从土壤中出现前施用于田地。此类施用一般在农作物种植之前、同时或之后不久施用于土壤。此类施用可以在农作物发芽之前杀死田地中生长的杂草，并且还可以阻止或减少土壤中存在的杂草发芽。发芽后除草剂一般在农作物已在田地中发芽后用于杀死杂草。此类施用可以杀死田地中的杂草且阻止或减少未来的杂草发芽。在任一情况下，除草剂可以施用于土壤的表面，与土壤混合，在植物的顶部，或通过本领域技术人员已知的任何其他方法进行施用。

一种杂草控制策略是在播种前将除草剂例如麦草畏施用于田地。然而，将除草剂施用于田地后，农夫在用农作物种子播种田地前必须等待至少数周，从而使得除草剂已杀死大多数杂草且已降解以便不损伤播种的农作物。例如，植物对于麦草畏特别敏感，且已建议麦草畏制剂例如Banvel^TM或Sterling^TM在种植前30天施用，以便控制杂草。可以由麦草畏控制的广泛杂草列表是可获得的(Anonymous，2007)。除草剂对于控制较高的杂草特别有用，且更难以控制诸如马齿苋、镰刀豆、牵牛花和金荞麦的杂草。麦草畏可以用于控制对于其他除草剂不敏感的杂草。在施用Clarity^TM后，另一种麦草畏制剂，对于控制大豆田地中的杂草已推荐对于4-8盎司/英寸比率，1英寸降雨的最低限度积聚或过顶的灌溉随后为14天等待期，或对于16盎司/英寸比率，28天等待期(参见VanGessel和Majek，2005中的表22)。同样，标签建议它在高粱种植前至少15天施用。类似地，对于棉花，建议在将或施用于田地后在种植棉花种子前21天的等待期(Craig等人，2005，Crop Profile for Cotton(Gossypium hirsutum)in Tennessee，www.ipmcenters.org/cropprofiles/docs/tncotton.html)，并且不建议发芽前和发芽后施用。等待期还依赖在任何给定时间的农作物生长环境，例如土壤的类型(具有有机活性的土壤将更快速地降解麦草畏)、含湿量、降雨、温度以及制剂的类型和施用比率。

已推荐除草剂2，4-D用于控制大豆田地中的某些杂草，例如芥菜属种、车前草、加拿大蓬和2，4-D敏感性一年生阔叶杂草，这是通过在种植前7-30天施用，其依赖比率和制剂(酯或胺)(参见VanGessel和Majek，2005中的表22)。

已成功用于控制杂草的一种方法将除草剂处理与对于除草剂耐受的农作物组合。以这种方式，通常将损害农作物的除草剂可以在农作物的生长前和期间施用而不引起损害。因此，杂草可以得到有效控制，并且新杂草控制选择可以被栽培者得到。近年来，已开发了对于几种除草剂耐受的农作物。例如，已开发了对于2，4-二氯苯氧基乙酸(Streber和Willmitzer，1989)、溴苯腈(Stalker等人，1988)、草甘膦(Comai等人，1985)和草丁膦(phosphinothricin)(De Block等人，1987)耐受的农作物。

近来，已分离了来自嗜麦芽假单胞菌(Pseudomonas maltophilia)(美国专利申请号：20030135879)的麦草畏单加氧酶(DMO)的基因，其涉及除草剂形式的除草剂麦草畏(3，6-二氯邻茴香酸)转化成无毒的3，6-二氯水杨酸。本发明人报道DMO基因转化到烟草和拟南芥(Arabidopsis)内。转化的植物组织在卡那霉素上进行选择且再生成植物。然而，除草剂耐受性在未成熟的组织或幼苗或其他植物中未得到证实或提出。关于麦草畏的发芽前除草剂耐受性未得到描述。对于麦草畏的施用耐受的转基因大豆植物和其他植物在Behrens等人，(2007)中得到描述。

麦草畏是通常称为“生长素样”除草剂或“合成生长素”的一类除草剂的一个成员。这些除草剂模拟或如同称为生长素的天然植物生长调节剂起作用。生长素样除草剂看起来影响细胞壁可塑性和核酸代谢，这可以导致不受控制的细胞分裂和生长。由生长素样除草剂引起的损伤症状包括茎和柄的偏上性弯曲和扭曲，叶成杯形和卷曲，以及异常的叶形状和叶脉。

麦草畏是低成本、环境友好的除草剂的许多生长素样除草剂之一，其已在双子叶植物中用作发芽前除草剂(即种植前30天)，以及在玉米、高粱、小谷粒、牧草、干草、牧场、甘蔗、芦笋、草坪和草籽农作物中用作发芽前和/或发芽后除草剂，以有效控制一年生和多年生阔叶杂草和几种似草的杂草(Crop Protection Chemicals Reference，1995)。不幸的是，麦草畏可以损害许多商用农作物，包括菜豆、大豆、棉花、豌豆、马铃薯、向日葵、番茄、烟草和果树、观赏植物和树木、以及与之接触的其他阔叶植物。大豆和棉花对麦草畏特别敏感。因此，麦草畏的施用一般必须在敏感农作物的种植前数周发生，以确保残留的麦草畏在农作物发芽前从农作物环境中充分清除。对于玉米中的发芽后杂草控制，麦草畏是用于阔叶杂草的第5种最广泛使用的除草剂。然而，尽管阔叶杂草控制的最佳比率是280-560g/h(克/公顷)，但玉米中的平均使用比率是168g/h，因为在较高的使用比率和在某些环境下，麦草畏可以损伤玉米。

如上所述，目前制造商的指导在麦草畏的施用和敏感农作物的种植之间一般需要至少30天延迟。无法接近农作物种植的时间施用麦草畏延迟了播种时间且缩短了生长季节，从而增加了使农作物暴露于秋天的霜冻的危险。延迟还意味着农民必须经过田地2次；1次用于种植和1次用于喷雾，从而增加了对于农民的燃料和穿着损耗(wear-tear)成本。将消除延迟的超过现有技术的改善将正面影响农作物的质量和数量，这可以导致且减少对于农民的经济损失。更有效的杂草控制还将减少杂草发展对于现有除草剂的抗性的危险。

发明概述

在一个方面，本发明提供了用于控制田地中的杂草生长的方法，其包括：a)将除草有效量的生长素样除草剂施用于农作物生长环境；和b)将双子叶植物的转基因种子种植在农作物生长环境的土壤中，所述双子叶植物表达的转基因种子编码麦草畏单加氧酶的核酸，其中所述种子在施用除草剂的30天或更短时间内发芽，并且其中麦草畏单加氧酶包含与SEQ ID NO：2的多肽序列的至少70％的序列同一性；和c)允许种子发芽成植物。在某些实施方案中，种子在用生长素样除草剂处理生长环境后4周、3周、2周或小于1周内发芽。处理的生长环境可以是例如其中种植农作物的田地。可以将对于生长素样除草剂耐受的植物的种子群体种植在田地中。处理环境可以根据本领域的已知技术来进行，其中使用例如商购可得的生长素样除草剂的制剂例如麦草畏。环境包括这样的区域，即对于其希望控制杂草以及其中可以种植对于生长素样除草剂耐受的植物的种子。杂草可以在环境中与除草剂直接接触，并且环境中的土壤可以与除草剂接触，预防或减少土壤中的杂草生长。用除草剂处理环境的步骤可以在用转基因种子种植土壤的步骤之前、之后或同时进行。转基因种子可以种植到环境中的土壤内，例如在处理前或后3周内，包括处理前或后约2周、1周到0周，进一步包括处理前或后约1、2、3、4、5或6天，包括与处理同时。在该方法中，种子可以例如在处理环境后约30天-0天发芽，包括处理环境后约21、18、16、14、12、10、8、6、5、4、3、2、1到约0天。该方法可以进一步包括在种子发芽和/或植物生长后施用生长素样除草剂的一次或多次另外处理。在某些实施方案中，第二次处理在选自下述的时间进行：约1-2叶和3-4叶阶段之间、在开花前、在开花时、在开花后和在种子形成时。在一个实施方案中，第二次处理包含施用麦草畏和/或2，4-二氯苯氧基乙酸化合物(2，4-D)。

在本发明的方法中，生长素样除草剂可以选自苯氧基羧酸化合物、苯甲酸化合物、吡啶羧酸化合物、喹啉羧酸化合物和草除灵乙基(benazolinethyl)化合物。苯氧基羧酸化合物的例子包括2，4-二氯苯氧基乙酸和(4-氯-2-甲基苯氧基)乙酸。在某些实施方案中，除草有效量的2，4-D和/或(4-氯-2-甲基苯氧基)乙酸以约2g/ha(克/公顷)-约5000g/ha使用，包括约50g/ha-约2500g/ha、约60g/ha-约2000g/ha、约100g/ha-约2000g/ha、约75g/ha-约1000g/ha、约100g/ha-约500g/ha、和约100g/ha-约280g/ha。在发现对本发明特别作用良好的一个实施方案中，麦草畏作为除草剂使用。在某些实施方案中，使用的除草有效量的麦草畏可以是约2.5g/ha-约10,080g/ha，包括约2.5g/ha-约5,040g/ha、约5g/ha-约2,020g/ha、约10g/a-约820g/h-约50g/ha-约1,000g/ha、约100g/ha-约800g/ha和约250g/ha-约800g/ha。

在本发明的方法中，可以使用显示出对于生长素样除草剂包括麦草畏的耐受性的植物。此种植物可以包含编码麦草畏单加氧酶的核酸。在一个实施方案中，植物定义为包含编码麦草畏单加氧酶的核酸，所述麦草畏单加氧酶与SEQ ID NOs：2、4、6、8、10或12中的任何一个或多个的多肽序列具有至少70％的同一性，包括与这些序列具有至少约75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％和更大的序列同一性。可以进行多肽或多核苷酸比较并且如本领域已知的测定同一性，例如使用MEGAlign(DNAStar，Inc.，1228 S.Park St.，Madison，Wis.53715)与缺省参数。此种软件通过指定相似性或同一性的程度来匹配相似序列。

本发明的方法可以与显示出对于生长素样除草剂的敏感性的植物例如双子叶的(双子叶)植物结合使用。在某些实施方案中，使用选自下述的双子叶植物：苜蓿、菜豆、嫩茎花椰菜、甘蓝、胡萝卜、花椰菜、芹菜、棉花、黄瓜、茄子、莴苣、甜瓜、豌豆、胡椒、西葫芦、萝卜、油菜籽、菠菜、大豆、南瓜、番茄和西瓜。在某些实施方案中，双子叶植物是大豆、棉花或油菜籽植物。

在另一个方面，本发明提供了用于控制田地中的杂草的方法，其包括：a)在田地中种植转基因种子，其中所述种子包含赋予对于生长素样除草剂和第二种除草剂的耐受性的转基因，b)使种子生长成植物；和c)用有效控制杂草生长的量的生长素样除草剂和第二种除草剂处理田地。在某些实施方案中，第二种除草剂可以是草铵膦(glufosinate)(De Block等人，1987)、磺酰脲(Sathasiivan等人，1990)、咪唑啉酮(U.S.5,633,437；U.S.6,613,963)、溴苯腈(Stalker等人，1988)、茅草枯或2，2-二氯丙酸(Buchanan-Wollaston等人，1989)、环己二酮(U.S.6,414,222)、原卟啉原氧化酶抑制剂(U.S.5,939,602)、达草灭(Misawa等人，1993和Misawa等人，1994)或异噁唑草酮(isoxaflutole)(WO 96/38567)除草剂及其它。生长素样除草剂和第二种除草剂可以同时或分开施用。在一个具体实施方案中，第二种除草剂是草甘膦，且生长素样除草剂是麦草畏。在一个实施方案中，植物包含与SEQ ID NOs：1、3、5、7、9或11中的任何一个或多个的核酸序列具有至少70％的同一性，包括与这些序列具有至少约75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％和更大的序列同一性的核酸。

在进一步的实施方案中，诸如前述的植物定义为包含赋予草甘膦耐受性的转基因。草甘膦抗性5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶(EPSPS)是本领域众所周知的，且例如公开于美国专利5,627,061、美国专利5,633,435、美国专利6,040,497、美国专利5,094,945、WO04074443和WO04009761中。编码草甘膦降解酶例如草甘膦氧化还原酶(GOX，美国专利5,463,175)的核酸以及编码草甘膦灭活酶例如草甘膦-N-乙酰转移酶(GAT，美国专利公开20030083480；美国专利公开20070079393)和草甘膦脱羧酶(WO05003362和美国专利申请20040177399)的核酸也是已知的。在某些实施方案中，GAT酶包含GAT4601的序列(SEQ IDNO：19)，或由包含SEQ ID NO：18的核酸序列的转基因编码。在一个具体实施方案中，GAT多肽使用SCP1启动子进行表达。

在该方法中，处理田地可以在选自下述的时间进行：约1-2叶和3-4叶阶段之间、在开花前、在开花时、在开花后和在种子形成时。处理田地可以进一步定义为在接近步骤a)的时间进行，从而使得种子发芽，同时生长素样除草剂以有效控制杂草生长的量保留在土壤中。在该方法中，处理田地可以在步骤a)前约3周、2周、1周或0周进行。生长素样除草剂可以选自苯氧基羧酸化合物、苯甲酸化合物、吡啶羧酸化合物、喹啉羧酸化合物和草除灵乙基化合物。

苯氧基羧酸化合物可以选自2，4-二氯苯氧基乙酸、(4-氯-2-甲基苯氧基)乙酸和4-(2，4-二氯苯氧基)丁酸(2，4-DB)。使用的2，4-二氯苯氧基乙酸化合物的量可以小于约280g/ha。使用的4-(2，4-二氯苯氧基)丁酸(2，4-DB)的量可以小于约1120g/ha。使用的(4-氯-2-甲基苯氧基)乙酸化合物的量可以小于约280g/ha。在一个实施方案中，生长素样除草剂是麦草畏。使用的麦草畏的量可以是例如约2.5g/ha-约10,080g/ha，包括约2.5g/ha-约1040g/ha、约5g/ha-约2040g/ha、约10g/a-约820g/h、和约50g/ha-约1000g/ha。草甘膦的量可以是约200g/ha-约1,600g/h，包括约200g/ha-约1,000g/h、约200g/ha-约800g/h、约200g/ha-约400g/h、和约400g/ha-约800g/h。

在另外一个方面，本发明提供了用于控制农作物生长环境中的杂草生长的方法，其包括：a)将除草有效量的生长素样除草剂施用于农作物生长环境；b)在施用生长素样除草剂的21天内将单子叶植物的转基因种子种植在农作物生长环境的土壤中，所述单子叶植物的转基因种子包含编码麦草畏降解酶活性例如麦草畏单加氧酶的核酸，其中所述除草有效量是不损害转基因种子或由其发芽的植物但损害具有相同基因型但缺乏所述核酸、且与所述转基因种子在相同的条件下种植的种子或由其发芽的植物的量，其中所述核酸选自(1)编码SEQ ID NO：8的多肽的核酸序列，(2)包含SEQ ID NO：7的序列的核酸序列，(3)在5XSSC、50％甲酰胺和42℃的条件下，与SEQ ID NO：7的核酸序列的互补序列杂交的核酸序列，(4)与SEQ ID NO：7的核酸序列具有至少70％序列同一性的核酸序列，和(5)编码与SEQ ID NO：8的多肽序列具有至少70％序列同一性的多肽的核酸序列；和c)允许种子发芽成植物。与SEQ ID NO：7的核酸序列具有至少70％序列同一性的核酸序列可以编码在112位处包含半胱氨酸残基的多肽。这个实施方案可以与上文提供的任何方法和组合物组合。

在本发明的具体实施方案中，对于单子叶植物的除草剂处理可以以比先前可以进行的更高的比率和/或更接近农作物的发芽进行而不损害农作物。在具体实施方案中，除草有效量的2，4-D和/或MCPA，例如至少约200、300、300、500、590、650、700、800或更多g/ha的任一或两种除草剂，包括约300-约1200g/ha、约500-约1200g/ha、约600-约1200g/ha、约590-约1400g/ha、和约700-约1100g/ha的任一或两种除草剂。除草剂还可以是麦草畏并且除草有效量可以是例如至少约168、175、190、200、225、250、280、300、400、500、560或更多g/ha麦草畏，包括约200g/ha-约600g/ha、约250g/ha-约600g/ha、约250g/ha-约800g/ha、约225g/ha-约1120g/ha和约250g/ha-约1200g/ha、约280g/ha-约1120g/ha和约560g/ha-约1120g/ha。在具体实施方案中，单子叶植物选自玉米、稻、高粱、小麦、黑麦、粟、甘蔗、燕麦、黑小麦、柳枝稷和草坪草。与可以施用于不包含编码麦草畏降解酶活性的转基因的单子叶农作物植物的麦草畏水平比较，在单子叶农作物植物例如玉米中表达转基因麦草畏降解酶活性例如单加氧酶，允许将更高水平的麦草畏施用于农作物，从而实现在植物生长的任何阶段控制杂草的目的。

在另外一个方面，本发明提供了用于控制田地中的杂草生长的方法，其包括：a)将除草有效量的除麦草畏外的生长素样除草剂施用于田地，其中所述田地包含含有编码麦草畏单加氧酶的核酸的转基因双子叶植物，或用在施用所述除草剂的21天内发芽成所述转基因双子叶植物的种子进行种植，其中所述除草有效量是不损害所述转基因双子叶植物但将损害具有相同基因型但缺乏所述编码麦草畏单加氧酶的核酸的植物的量，其中所述核酸选自(1)编码SEQ ID NO：8的多肽的核酸序列，(2)包含SEQ ID NO：7的序列的核酸序列，(3)在5X SSC、50％甲酰胺和42℃的条件下，与SEQ ID NO：7的核酸序列的互补序列杂交的核酸序列，(4)与SEQ ID NO：7的核酸序列具有至少70％序列同一性的核酸序列，和(5)编码与SEQ ID NO：8的多肽序列具有至少70％序列同一性的多肽的核酸序列；和b)允许转基因双子叶植物生长。在该方法中，步骤a)可以包括将除草有效量的生长素样除草剂施用于与包含转基因双子叶植物的生长环境邻接的生长环境，且允许除草剂漂移到植物上或植物生长的土壤上。生长素样除草剂可以是如本文所描述的任何除草剂。在该方法中，步骤b)可以包括允许转基因双子叶植物生长至成熟。在具体实施方案中，除草有效量可以定义为不损害转基因植物的量。

在另外一个方面，本发明提供了用于增加除草剂送递装置的使用效率的方法，其包括：a)获得已用于送递包含生长素样除草剂的第一种组合物的装置；b)使用所述装置将第二种组合物送递给田地而无需首先彻底洗涤所述装置，从而使得包含所述生长素样除草剂的除草剂残留物保留在所述装置中且与所述第二种组合物一起送递给田地，其中所述田地包含表达编码麦草畏单加氧酶的核酸的转基因双子叶植物，或用在送递第二种组合物21天内发芽成所述转基因双子叶植物的种子进行种植，其中所述除草剂残留物以不损害所述转基因双子叶植物但将损害具有相同基因型但所述缺乏编码麦草畏单加氧酶的核酸的植物的量存在，其中所述核酸选自(1)编码SEQ ID NO：8的多肽的核酸序列，(2)包含SEQ ID NO：7的序列的核酸序列，(3)在5X SSC、50％甲酰胺和42℃的条件下，与SEQ ID NO：7的核酸序列的互补序列杂交的核酸序列，(4)与SEQ ID NO：7的核酸序列具有至少70％序列同一性的核酸序列，和(5)编码与SEQ ID NO：8的多肽序列具有至少70％序列同一性的多肽的核酸序列。

发明详述

在一个实施方案中，本发明涉及下述未预料到的发现：生长素样除草剂例如麦草畏的发芽前施用可以接近农作物的种植或甚至与农作物的种植同时进行。本发明提供了优良的杂草控制选择，包括杂草中除草剂耐受性的减少和/或预防。生长素样除草剂例如麦草畏的发芽前施用先前要求除草剂施用充分提前于对生长素样除草剂敏感的植物的种植和发育，以允许环境中的除草剂分解且避免显著的农作物损害或死亡。大多数农作物植物且特别是双子叶植物例如大豆和棉花对于麦草畏极端敏感。因此，由制造商推荐的在种植中的施用后延迟必须严密遵循。

年幼的小植株和种子对于除草剂特别敏感。即使在转基因种子和植物中，未成熟的组织也无法充分地表达使得其对于除草剂耐受的基因，或可能无法具有积聚的足够水平的蛋白质以赋予耐受性。例如，已发现成熟的植物显示出对于除草剂Harness^TM(乙草胺)、Lasso^TM(甲草胺)、Treflan^TM(氟乐灵)、Eptam^TM(EPTC)和/或Far-Go^TM(野麦畏；//pmep.cce.cornell.edu/profiles/herb-growthreg/sethoxydim-vernolate/triallate/herb-prof-triallate.html)的高水平耐受性，但在发芽时对于除草剂的敏感性。由于年幼组织中的这种变异性，对于麦草畏除草剂的发芽后施用(例如，在更成熟的营养组织中)的农作物响应可以显著不同于对更年幼的更敏感的组织所暴露的除草剂的发芽前施用的农作物响应。前者不一定预测后者。这在植物对于给定除草剂高度敏感例如双子叶植物和除草剂麦草畏的情况下得到强调。因此，本发明出乎意料地显示由麦草畏的发芽前施用可以达到高于预测水平的农作物安全性。

本发明使用生长素样除草剂，它也称为生长素或生长调节剂除草剂，或第4组除草剂(基于其作用方式)。这些类型的除草剂模拟或如同称为生长素的天然植物生长调节剂起作用。生长素样除草剂的作用看起来影响细胞壁可塑性和核酸代谢，这可以导致不受控制的细胞分裂和生长。

生长素样除草剂包括4个化学家族：苯氧基、羧酸(或吡啶)、苯甲酸和喹啉羧酸。苯甲基除草剂是最常用的，且自从二十世级四十年代(当(2，4-二氯苯氧基)乙酸(2，4-D)被开发时)以来已用作除草剂。其他例子包括4-(2，4-二氯苯氧基)丁酸(2，4-DB)、4-(2，4-二氯苯氧基)丙酸(2，4-DP)、(2，4，5-三氯苯氧基)乙酸(2，4，5-T)、2-(2，4，5-三氯苯氧基)丙酸(2，4，5-TP)、2-(2，4-二氯-3-甲基苯氧基)-N-苯基丙酰胺(氯甲酰草胺)、(4-氯-2-甲基苯氧基)乙酸(MCPA)、4-(4-氯-邻甲苯氧基)丁酸(MCPB)和2-(4-氯-2-甲基苯氧基)丙酸(MCPP)。

下一个最大的化学制品家族是羧酸除草剂，也称为吡啶除草剂。例子包括3，6-二氯-2-吡啶羧酸(二氯吡啶酸)、4-氨基-3，5，6-三氯-3-吡啶羧酸(氨氯吡啶酸)、(2，4，5-三氯苯氧基)乙酸(定草酯)、和4-氨基-3，5-二氯-6-氟-2-吡啶氧基乙酸(氯草烟)。苯甲酸的例子包括3，6-二氯对茴香酸(麦草畏)和3-氨基-2，5-二氯苯甲酸(choramben)。麦草畏是用于本发明中的特别有用的除草剂。生长素除草剂的第4个化学家族是喹啉羧酸家族。例子包括3，7-二氯-8-喹啉羧酸(二氯喹啉酸)。这种除草剂是独特的，因为它还将控制某些禾本科杂草，与基本上仅控制阔叶或双子叶植物的其他生长素样除草剂不同。这个类别中的其他除草剂是7-氯-3-甲基-8-喹啉羧酸(氯甲喹啉酸)。

发现例如用编码麦草畏单加氧酶(DMO)的多核苷酸构建体转化的大豆植物对于麦草畏甚至早期发芽前施用耐受，在甚至9倍标记的施用比率时具有小于10％的损伤比率(5,040g/ha，4.5lb/英亩；表1)。本发明人发现，即使使用10,080g/ha的18倍施用比率(9lb/英亩)，对于转基因麦草畏耐受植物的损害也小于20％(表4)。在1122g/ha的约2倍施用比率时，观察到小于2％的损伤。因此，指出可以使用与除草剂的发芽前和发芽后施用相关的改善的杂草控制，而没有由于除草剂损害导致的生产力的任何显著减少。根据本发明麦草畏的发芽前施用因此可以与对麦草畏耐受的植物发芽后的一次或多次除草剂施用组合，同时维持农作物产量和获得改善的杂草控制。例如，一个此种除草剂施用方案涉及在发育的V2阶段时麦草畏的晚期发芽前施用与麦草畏的发芽后施用结合。在某些实施方案中，发芽后施用可以在从发芽到收获的任何点上进行。特别有利的将是在直至大豆株冠关闭的任何V阶段时的发芽后施用，例如在约V1、V2、V3、V4、V5、V6和/或更晚的阶段。

依照本发明，提供了用于控制杂草的方法和组合物，其包括显示出对于草甘膦和生长素样除草剂例如麦草畏的耐受性的植物的使用。如工作实施例中显示的，麦草畏和草甘膦允许使用减少量的除草剂以达到相同水平的草甘膦耐受性杂草的控制，且因此这个实施方案提供了用于在商业生产领域中控制除草剂耐受性的显著进步。在一个实施方案中，将草甘膦和麦草畏的罐装混合物在发芽前和/或发芽后施用于植物。此外，草甘膦和麦草畏可以分开施用。为了获得使用减少量的除草剂的能力，草甘膦和麦草畏优选在两种除草剂保持活性和能够控制杂草生长的足够时间间隔内施用。

因此，这个实施方案允许使用较低量的任一除草剂，达到与仅一种除草剂的施用相同程度的杂草控制。例如，本发明提供了杂草控制的方法，其包括在用对麦草畏和草甘膦具有耐受性的转基因植物种植的田地中施用除草剂组合物，所述除草剂组合物相对于标准制造商标记的比率，包含1倍比率的草甘膦和/或麦草畏。分别的草甘膦和麦草畏施用比率的例子包括约0.5x-0.95x的任一除草剂，特别包括约0.5x、0.6x、0.7x、0.8x.0.85x、0.9x和0.95x的任一除草剂以及其所有可推导的组合，以及更高的比率例如0.97x和0.99x。可替代地，在更难以控制杂草或需要更大程度的杂草控制的情况下，考虑到本文的甚至更高的麦草畏施用比率也不会显著损害植物的发现，可以进行1x和更高的施用比率。1x施用比率由商购可得的除草剂制剂的制造商设定且是本领域技术人员已知的。例如，对于Fallow Master^TM的标签，具有约2∶1的草甘膦∶麦草畏比的草甘膦和麦草畏混合物建议约451g/ha(311ae g/ha草甘膦∶140ae g/ha麦草畏)-621ae g/ha(428ae g/ha草甘膦∶193ae g/ha麦草畏)的施用比率，这取决于杂草物种和杂草高度。

“草甘膦”指N-膦酰甲基甘氨酸及其盐。草甘膦可以众多制剂商购。草甘膦的这些制剂的例子包括但不限于，作为 ULTRA、ULTRAMAX、CT、EXTRA、BIACTIVE、BIOFORCE、和除草剂由Monsanto公司销售的那些，所有这些都包含作为异丙铵盐的草甘膦，WEATHERMAX包含作为钾盐的草甘膦；DRY和除草剂，其包含作为铵盐的草甘膦；GEOFORCE，其包含作为钠盐的草甘膦；和除草剂，其包含作为三甲基锍盐的草甘膦。“麦草畏”指3，6-二氯邻茴香酸或3，6-二氯-2-甲氧基苯甲酸及其酸和盐。它的盐包括异丙胺、二甘醇胺(diglycoamine)、二甲胺、钾和钠。麦草畏的商业制剂的例子包括但不限于，Banvel^TM(作为DMA盐)、Clarity^TM(作为DGA盐)、VEL-58-CS-11^TM和Vanquish^TM(作为DGA盐，BASF)。

可以使用麦草畏有效控制的杂草的非限制性例子是下述：乳酪杂草、鸡杂草、白三叶草、苍耳、亚洲鸭跖草、死亡荨、红茎菲拉雷(filaree)、卡罗来纳天竺葵、大麻田菁、宝盖草、野生马尾(加拿大蓬)、蓼科杂草、地肤、lambsquarter、牵牛花、芥菜、野生芥菜、红根藜、光滑藜、多刺金午时花、切叶月见草、普通马齿苋、普通豚草、三裂叶豚草、俄罗斯蓟、shepardspurse、宾夕法尼亚荨麻、大戟、苘麻、野生紫罗兰、金荞麦、野生萝卜、大豆马齿苋(soybeanpurslane)、镰刀豆、牵牛花、金荞麦、普通豚草、加拿大蓬(加拿大蓬)、多毛蚤草、鹿角车前草和帕尔默藜。可以使用麦草畏和草甘膦加以控制的杂草的非限制性例子是下述：稗子、早雀麦、自生谷物、波斯毒麦、野生蒺藜草、绿色狐尾草、野生燕麦、金荞麦、自生低芥酸菜子、麦仙翁(cowcockle)、葶苈子、地肤、春蓼、墙藜、野生芥菜、多刺莴苣、红根藜、荨麻、大画眉草、曼陀螺、俄罗斯蓟、狐尾草和黍。组合的草甘膦和麦草畏在除草剂的量减少的情况下达到相同水平的杂草控制，且因此当除草剂组合时，可以增加在任何给定除草剂施用比率时可以加以控制的杂草谱。

具有除草剂耐受性的转基因植物可以如本领域描述的进行制备。例如通过来自嗜麦芽假单胞菌的麦草畏单加氧酶(DMO)的基因可以赋予麦草畏耐受性(美国专利申请号：20030135879)。在这方面可以使用的序列的例子是编码SEQ ID Nos：2、4、6、8、10和12的多肽的核酸。编码这些多肽的序列的例子作为SEQ ID NOS：1、3、5、7、9和11给出。SEQ ID NO：1显示使用拟南芥密码子选择，为在双子叶植物中表达而优化的来自嗜麦芽假单胞菌的DMO。预测分别在位置2、3、112具有Ala、Thr、Cys的多肽在SEQ ID NO：2中给出。SEQ ID NO：3显示为在双子叶植物中表达而优化且编码SEQ ID NO：4的多肽的另一种嗜麦芽假单胞菌DMO，SEQ ID NO：4预测在位置2、3、112处分别具有Leu、Thr、Cys。SEQ ID NO：5显示双子叶植物优化的DMO的编码序列，SEQ ID NO：6显示双子叶植物优化的DMO的多肽，预测在位置2、3、112处分别具有Leu、Thr、Trp。SEQ ID NOS：7和8显示预测在位置2、3、112处分别具有Ala、Thr、Cys的DMO的编码和多肽序列。SEQ ID NOS：9和10显示预测在位置2、3、112处分别具有Ala、Thr、Trp的DMO的双子叶植物优化的编码序列和多肽序列。SEQ IDNOS：11和12显示来自嗜麦芽假单胞菌的DMO的编码序列和多肽序列(美国专利申请号：20030135879)。另一个示例性DMO序列可以是预测在位置2、3、112处分别具有Leu、Thr、Cys的DMO，其具有嗜麦芽假单胞菌的密码子选择(美国专利申请号：20030135879)。

赋予草甘膦耐受性的序列也是已知的，包括草甘膦抗性5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶(EPSPS)，如美国专利5,627,061、美国专利5,633,435、美国专利6,040,497、美国专利5,094,945、WO04074443、WO04009761中描述，所有这些专利引入本文作为参考；通过表达编码草甘膦降解酶例如草甘膦氧化还原酶(GOX，引入本文作为参考的美国专利5,463,175)，草甘膦脱羧酶(引入本文作为参考的WO05003362；美国专利申请20040177399)的核酸；以及通过表达编码草甘膦灭活酶例如草甘膦-N-乙酰转移酶(GAT，例如引入本文作为参考的美国专利公开20030083480和20070079393)的核酸。

具有降解生长素样除草剂、草甘膦或其他除草剂的能力的蛋白质的变体可以根据标准方法容易地制备和测定活性。此种序列还可以通过本领域已知的技术例如由合适的生物包括细菌进行鉴定，所述生物降解生长素样除草剂例如麦草畏或其他除草剂(美国专利5,445,962；Cork和Krueger，1991；Cork和Khalil，1995)。分离DMO或其他序列的一种方法是通过核酸杂交，例如与由来源生物构建的文库杂交，或基于所公开的去饱和酶，使用来自来源生物的mRNA和引物，通过RT-PCR。本发明因此包含了使用在严格条件下与本文描述的DMO编码序列杂交的核酸。本领域技术人员应当理解通过增加盐浓度和降低温度可以使得条件较不严格。因此，杂交条件可以容易地操纵，且因此一般将是依赖所需结果选择的方法。高严格性条件的例子是5X SSC、50％甲酰胺和42℃。通过在此种条件下进行洗涤，例如10分钟，可以去除在这些条件下不与特定靶序列杂交的那些序列。

变体还可以例如使用已知的DMO多核苷酸序列根据本领域众所周知的技术进行化学合成。例如，DNA序列可以通过亚磷酰胺化学在DNA自动合成仪中进行合成。化学合成具有许多优点。特别地，化学合成是理想，因为表达DNA序列的宿主优选的密码子可以用于优化表达。并非所有密码子都必须改变以获得改善的表达，但优选至少将在宿主中很少使用的密码子变成宿主优选的密码子。通过将超过约50％、最优选至少约80％的密码子变成宿主优选密码子可以获得高水平的表达。许多宿主细胞的密码子优先性是已知的(PCT WO 97/31115；PCT WO97/11086；EP 646643；EP 553494；和美国专利号：5,689,052；5,567,862；5,567,600；5,552,299和5,017,692)。其他宿主细胞的密码子优先性可以通过本领域已知的方法进行推导。此外，使用化学合成，可将容易地改变DNA分子或其编码的蛋白质的序列，例如以优化表达(例如，消除干扰转录或翻译的mRNA二级结构)，在方便的点上添加独特限制位点，且删除蛋白酶切割位点。

可以对蛋白质的多肽序列例如本文提供的DMO序列进行修饰和改变，同时保留酶活性。下述是基于改变蛋白质的氨基酸以制备等价的，或甚至是改善的、修饰的多肽和相应的编码序列的讨论。已知例如在蛋白质结构中的某些氨基酸可以置换其他氨基酸，而不造成与结构，例如底物分子上的结合位点的相互作用结合能力的相当损失。因为是蛋白质的相互作用能力和性质限定蛋白质的生物功能活性，所以可以在蛋白质序列中进行某些氨基酸序列置换，以及当然在它作为基础的DNA编码序列进行置换，且仍然获得具有相似性质的蛋白质。因此预期可以在本文描述的DMO肽序列或其他除草剂耐受性多肽和相应的DNA编码序列中进行各种改变，而无其生物效用或活性的相当损失。

在进行此类改变时，可以考虑氨基酸的亲水指数。亲水氨基酸指数在对蛋白质赋予相互作用生物功能中的重要性是本领域公知的(Kyte etal.，1982)。公认氨基酸的相对亲水特征对所得蛋白质的二级结构有贡献，所述二级结构又确定了该蛋白质与其他分子如酶、底物、受体、DNA、抗体、抗原等等的相互作用。每个氨基酸已经基于它们的疏水性和电荷特征被分配了疏水性指数(Kyte et al.，1982)，这些为：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)；和精氨酸(-4.5)。

本领域已知氨基酸可以被具有相似亲水指数或得分的其他氨基酸替代并且仍然得到具有相似的生物活性的蛋白质，即仍然得到生物学功能等同的蛋白质。在进行此类改变时，亲水指数在±2以内的氨基酸替代是优选的，在±1以内是尤其优选的，在±0.5是尤其更优选的。

本领域也理解基于亲水性可以有效进行类似氨基酸的替代。美国专利4,554,101公开了蛋白质的最大的局部平均亲水性(如通过其相邻氨基酸的亲水性控制)与蛋白质的生物学性质相关。如美国专利4,554,101中详述，下面的亲水性值被分配给氨基酸残基：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0±1)；谷氨酸(+3.0±1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；苏氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5±1)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)；色氨酸(-3.4)。可以理解氨基酸可以替代具有相似亲水性值的另一氨基酸并且仍然得到生物学等同的蛋白质。在此类改变中，亲水性值在±2以内的氨基酸替代是优选的，±1以内的氨基酸替代是尤其优选的，在±0.5以内的氨基酸替代是甚至更尤其优选的。考虑这些和多种前述特征的示例性替代是本领域技术人员公知的并且包括：精氨酸和赖氨酸；谷氨酸和天冬氨酸；丝氨酸和苏氨酸；谷氨酰胺和天冬酰胺；以及缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。

赋予除草剂耐受性的基因一般将与驱动基因表达的植物启动子连接，其量足以赋予除草剂耐受性。适合于这个和其他用途的启动子是本领域众所周知的。描述此种启动子的例子包括美国专利6,437,217(玉米RS81启动子)，美国专利5,641,876(稻肌动蛋白启动子)，美国专利6,426,446(玉米RS324启动子)，美国专利6,429,362(玉米PR-1启动子)，美国专利6,232,526(玉米A3启动子)，美国专利6,177,611(组成型玉米启动子)，美国专利5,322,938、5,352,605、5,359,142和5,530,196(35S启动子)，美国专利6,433,252(玉米L3油质蛋白启动子)，美国专利6,429,357(稻肌动蛋白2启动子以及稻肌动蛋白2内含子)，美国专利5,837,848(根特异性启动子)，美国专利6,294,714(光诱导型启动子)，美国专利6,140,078(盐诱导型启动子)，美国专利6,252,138(病原体诱导型启动子)，美国专利6,175,060(磷缺乏诱导型启动子)，美国专利6,388,170(PC1SV启动子)，美国专利6,635,806(γ-coixin启动子)，和美国专利申请序列号09/757,089(玉米叶绿体醛缩酶启动子)。可以使用的另外启动子是胭脂碱合酶(NOS)启动子(Ebert等人，1987)，章鱼碱合酶(OCS)启动子(其携带在根癌土壤杆菌的肿瘤诱导质粒上)，花椰菜花叶病毒启动子，如花椰菜花叶病毒(CaMV)19S启动子(Lawton等人，1987)，CaMV 35S启动子(Odell等人，1985)，玄参花叶病毒35S-启动子(Walker等人，1987)，蔗糖合酶启动子(Yang等人，1990)，R基因复合体启动子(Chandler等人，1989)，叶绿素a/b结合蛋白基因启动子，CaMV35S(美国专利号5,322,938；5,352,605；5,359,142；和5,530,196)，FMV35S(美国专利6,051,753；5,378,619)，PC1SV启动子(美国专利5,850,019；或SEQ ID NO：20)，SCP启动子(美国专利号6,677,503)和AGRtu.nos(GenBank登记V00087；Depicker等人，1982；Bevan等人，1983)启动子等(还参见表1)。

通过使用编码转运肽的序列可以获得用于表达除草剂耐受性基因的利益。例如，合适的叶绿体转运肽例如拟南芥EPSPS CTP(Klee等人，1987)和牵牛花EPSPS CTP(della-Cioppa等人，1986)的掺入已显示使异源EPSPS蛋白质序列靶向转基因植物中的叶绿体。叶绿体转运肽(CTPs)被改造成与蛋白质的N末端融合以指导蛋白质进入植物叶绿体内。此种序列可以特别与赋予麦草畏耐受性的核酸结合使用。许多叶绿体定位的蛋白质作为前体由核基因表达，且通过在输入过程期间被去除的叶绿体转运肽靶向叶绿体。叶绿体蛋白质的例子包括核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶的小亚基(RbcS2)、铁氧还蛋白、铁氧还蛋白氧化还原酶、捕获光的复合体蛋白质I和蛋白质II以及硫氧还蛋白F。其他示例性叶绿体靶向序列包括玉米cab-m7信号序列(Becker等人，1992；PCT WO97/41228)，豌豆谷胱甘肽还原酶信号序列(Creissen等人，1995；PCTWO 97/41228)和烟草(Nicotiana tabacum)核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶小亚基叶绿体转运肽的CTP(SSU-CTP)(Mazur，等人，1985)。AtRbcS4(CTP1；美国专利5,728,925)，AtShkG(CTP2；Klee等人，1987)，AtShkGZm(CTP2synthetic；参见WO04009761的SEQ ID NO：14)和PsRbcS(Coruzzi等人，1984)以及例如在美国临时申请公开60/891,675中公开的那些(其肽和核酸序列在本文中在SEQ ID NOs：21-32处列出)的使用对于本发明的使用可能有益。

充当翻译前导序列的5’UTR是位于基因的启动子序列和编码序列之间的DNA遗传元件。翻译前导序列存在于翻译起始序列上游的完全加工的mRNA中。翻译前导序列可以影响一级转录物加工成mRNA、mRNA稳定性或翻译效率。翻译前导序列的例子包括玉米和牵牛花热激蛋白前导序列(美国专利号5,362,865)、植物病毒包膜蛋白质前导序列、植物核酮糖二磷酸羧化酶前导序列(Turner和Foster，1995)及其它。对于使用来说可以特别有利的5’UTRs的非限制性例子是GmHsp(美国专利5,659,122)、PhDnaK(美国专利5,362,865)、AtAnt1、TEV(Carrington和Freed，1990)和AGRtunos(GenBank登记V00087；Bevan等人，1983)。

3′非翻译序列、3′转录终止区或聚腺苷酸化区意指与结构多核苷酸分子连接且位于其下游的DNA分子，并且包括提供聚腺苷酸化信号和能够影响转录、mRNA加工或基因表达的其他调节信号的多核苷酸。聚腺苷酸化信号在植物中用于引起给mRNA前体的3′末端添加聚腺苷酸核苷酸。聚腺苷酸化序列可以来源于天然基因、各种植物基因或T-DNA基因。3′转录终止区的例子是胭脂碱合酶3′区域(nos 3’；Fraley等人，1983)。不同3′非翻译区的使用得到例示(Ingelbrecht等人，1989)。来自豌豆(Pisum sativum)RbcS2基因(Ps.RbcS2-E9；Coruzzi等人，1984)和AGRtu.nos(Rojiyaa等人，1987，Genbank登记E01312)的聚腺苷酸化分子对于本发明的使用可能特别有益。

本领域已知内含子序列帮助在单子叶植物细胞中表达转基因。内含子的例子包括玉米肌动蛋白内含子(美国专利5,641,876)、玉米HSP70内含子(ZmHSP70；美国专利5,859,347；美国专利5,424,412)和稻TPI内含子(OsTPI；美国专利号7,132,528)，并且在实践本发明中有益。

本领域已知用于将转基因引入植物内的任何技术可以用于制备依照本发明的除草剂耐受性植物(参见例如Miki等人，1993)。用于转化植物的合适方法被认为包括可以将DNA引入细胞内的基本上任何方法，例如通过如美国专利号5,384,253中举例说明的电穿孔；如美国专利号5,015,580；5,550,318；5,538,880；6,160,208；6,399,861；和6,403,865中举例说明的微粒轰击；如美国专利号5,635,055；5,824,877；5,591,616；5,981,840；和6,384,301中举例说明的土壤杆菌介导的转化；以及如美国专利号5,508,184中举例说明的原生质体转化等。通过诸如这些的技术的施用，可以稳定转化基本上任何植物物种的细胞，并且使这些细胞发育成转基因植物。在棉花转化的背景中可能特别有用的技术公开于美国专利号5,846.797，5,159,135，5,004,863和6,624,344中；用于转化芸苔属植物的技术特别公开于例如美国专利5,750,871中；用于转化大豆的技术例如公开于Zhang等人，1999和美国专利6,384,301)中。玉米可以使用WO9506722和美国专利申请20040244075中描述的方法进行转化。

实现将外源DNA送递给受体细胞后，接下来的步骤一般涉及鉴定经转化的细胞用于进一步培养和植物再生。为了改善鉴定转化体的能力，可能希望使用选择或筛选标记基因与依照本发明制备的转化载体。在这种情况下，随后通常通过使细胞暴露于一种或多种选择剂来测定潜在转化的细胞群体，或筛选细胞的所需标记基因性状。

暴露于选择剂后存活的细胞或在筛选测定法中已评为阳性的细胞可以在支持植物再生的培养基中进行培养。在一个示例性实施方案中，通过包括进一步的物质例如生长调节剂可以修改任何合适的植物组织培养基，例如MS和N6。组织可以维持在具有生长调节剂的基础培养基上，直至足够的组织可用于开始植物再生努力，或进行手工选择的重复循环，直至组织的形态学适合于再生，一般至少2周，然后转移至有助于芽形成的培养基。定期转移培养物直至已发生足够的芽形成。一旦芽形成，就将它们转移至有助于根形成的培养基。一旦足够的根形成，就可以将植物转移至土壤用于进一步的生长和成熟。

为了证实再生植物中外源DNA或“转基因”的存在，可以进行各种测定法。此种测定法包括例如“分子生物学”测定法，例如DNA和RNA印迹和PCR^TM；“生物化学”测定法，例如通过免疫学方法(ELISAs和蛋白质印迹)或通过酶功能检测蛋白质产物的存在；植物部分测定法，例如叶或根测定法；以及通过分析整个再生植物的表型。

一旦转基因已引入植物内，该基因就可以通过杂交引入与第一种植物性相容的任何植物内，无需曾经直接转化第二种植物。因此，如本文所使用的，术语“后代”指依照本发明制备的亲本植物的任何代的子孙，其中所述后代包含依照本发明制备的所选择的DNA构建体。“转基因植物”因此可以是任何代。如本文公开的，使植物“杂交”以提供相对于起始植物品系具有一种或多种添加的转基因或等位基因的植物品系，定义为通过使起始品系与包含本发明的转基因或等位基因的供体植物品系杂交来导致特定序列引入植物品系内的技术。为了达到这点，例如可以执行下述步骤：(a)种植第一种(起始品系)和第二种(包含所需转基因或等位基因的供体植物品系)亲本植物的种子；(b)使第一种和第二种亲本植物的种子生长成具有花的植物；(c)用来自第二种亲本植物的花粉给来自第一种亲本植物的花授粉；和(d)收获在具有受精花的亲本植物上产生的种子。

考虑到本公开内容，用于与本发明结合使用的除草剂组合物的制备对于本领域技术人员将是显而易见的。商购可得的此种组合物除活性成分外一般还将包括诸如表面活性剂、固体或液体载体、溶剂和粘合剂的组分。可以用于施用于植物的表面活性剂的例子包括芳香族磺酸，例如木素(ligno)-、苯酚-、萘-和二丁基萘磺酸的碱金属、碱土金属或铵盐，以及芳基磺酸酯的脂肪酸的碱金属、碱土金属或铵盐，烷基醚的脂肪酸的碱金属、碱土金属或铵盐，月桂基醚的脂肪酸的碱金属、碱土金属或铵盐，脂肪醇硫酸酯的脂肪酸的碱金属、碱土金属或铵盐和脂肪醇乙二醇醚硫酸酯的脂肪酸的碱金属、碱土金属或铵盐，磺化萘及其衍生物与甲醛的缩合物，萘或萘磺酸与苯酚和甲醛的缩合物，苯酚或苯酚磺酸与甲醛的缩合物，苯酚与甲醛和亚硫酸钠的缩合物，聚氧乙烯辛基苯基醚，乙氧基化异辛基-、辛基或壬基酚，三丁基苯基聚乙二醇醚，烷基芳基聚醚醇，异十三醇，乙氧基化蓖麻油，乙氧基化三芳基酚，磷酸化三芳基酚乙氧基化物的盐，月桂醇聚乙二醇醚乙酸酯，山梨糖醇酯，木质素-亚硫酸盐废液或甲基纤维素或这些的混合物。在表面活性剂使用的情况下的常规实践是约0.25重量％-1.0重量％，且更通常是约0.25重量％-0.5重量％

施用于植物的组合物可以是固体的或液体的。当使用固体组合物时，可能希望包括一种或多种载体材料与活性化合物。载体的例子包括矿物土例如二氧化硅、硅胶、硅酸盐、滑石粉、高岭土、镁质粘土、石灰石、白垩、黄土、陶土、白云石、硅藻土、硫酸钙、硫酸镁、氧化镁、磨碎的合成材料，肥料例如硫酸铵、磷酸铵、硝酸铵、硫脲和尿素，植物来源的产物例如谷物粗粉、树皮粗粉、木粗粉和壳粗粉、纤维素粉、绿坡缕石、蒙脱石、云母、蛭石、合成二氧化硅和合成硅酸钙或这些的混合物。

对于液体溶液，可以包括水溶性化合物或盐，例如硫酸钠、硫酸钾、氯化钠、氯化钾、乙酸钠、硫酸氢铵、氯化铵、乙酸铵、甲酸铵、草酸铵、碳酸铵、碳酸氢铵、硫代硫酸铵、二磷酸氢铵、一磷酸二氢铵、磷酸氢钠铵、硫氰酸铵、氨基磺酸铵或氨基甲酸铵。

在除草组合物中的其他示例性组分包括粘合剂例如聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯醇，部分水解的聚乙酸乙烯酯，羧甲基纤维素，淀粉，乙烯吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物和聚乙酸乙烯酯，或这些的混合物；润滑剂例如硬脂酸镁，硬脂酸钠，滑石粉或聚乙二醇，或这些的混合物；消泡剂例如硅酮乳状液，长链醇，磷酸酯，乙炔二醇，脂肪酸或有机氟化合物，以及络合剂例如：乙二胺四乙酸(EDTA)的盐，三次氮基三乙酸的盐或聚磷酸的盐，或这些的混合物。

如本文公开的，本领域已知的设备和方法用于施用各种除草剂处理。除草剂的施用比率可以改变，例如如上文描述的，依赖土壤质地、pH、有机物质含量、耕地系统和杂草的大小，并且对于合适的除草剂比率可以通过参考除草剂标签进行测定。

实施例

包括下面的实施例用于阐明本发明的实施方案。本领域技术人员将理解下面实施例中公开的技术代表本发明人发现的在本发明的实践中良好地发挥作用的技术。然而，本领域技术人员根据本公开将理解可以在公开的特定实施方案中进行许多改变并且仍然得到相似或类似的结果而不背离本发明的概念、精神和范围。更具体地，将显而易见的是化学或生理学相对的某些物质可以代替本文所述的物质而实现相同或相似的结果。认为本领域技术人员显而易见的所有此类相似的替代方案和修饰在所附权利要求定义的本发明的精神、范围和概念之内。

实施例1

包含DMO编码多核苷酸构建体的大豆植物对于麦草畏的早期发芽前施用的耐受性

使用标准操作和包含作为SEQ ID NO：7给出的DMO编码多核苷酸(其编码SEQ ID NO：8的多肽)的二元载体通过大豆子叶节的土壤杆菌转化来获得转基因大豆植物。制备4个转基因大豆事件且指定为事件1-4。相对于对照，包含该事件的转基因大豆植物就其对于麦草畏除草剂的耐受性进行测试，证实除草剂耐受性。非转基因大豆植物用作对照。

将转基因和对照大豆种子种植到包含Redi-earth^TM的3.5英寸方形塑料罐(Scotts-Sierra Horticultural Products Co.，Marysville，Ohio)内。用各种量(561-5040g/ha、0.5-4.5lb/英亩或1x-9x标记的比率)的麦草畏制剂(Clarity^TM或Banvel^TM，BASF，Raleigh，NC)处理土壤表面。将罐置于在35英寸×60英寸纤维玻璃添水托盘的毛细垫上，用于高架和/或地下灌溉用于测试期的持续时间，以便维持最佳土壤湿度用于植物生长，且用Osmocote(14-14-14缓慢释放；Scotts-Sierra HorticulturalProducts Co.，Marysville，Ohio)以100gm/cu.ft.的比率进行施肥，以维持植物生长用于温室试验的持续时间。

使植物在温室中在27℃/21℃日/夜温度和25％-75％相对湿度下生长，以模拟深秋的温暖季节生长条件。需要时用约600μE的补充光提供14小时最低限度光周期。通过用每次处理的4-6次重复在通过比率随机化的随机区组设计中建立实验，这依赖植物质量、可用性，且考虑可能已在每个温室的范围内发生的任何环境变异性。

相对于未处理的对照植物，在温室实验中处理的植物在处理后的特定日期(DAT)以0-100的等级对损伤进行肉眼评估，其中0表示“无”损伤，100％表示“完全”损伤或死亡。收集数据且使用合适的统计方法进行分析。

研究结果令人惊讶地显示用DMO编码多核苷酸构建体转化的大豆植物对于麦草畏的甚至早期发芽前施用也是耐受的。如下表1中所示，即使在最高的施用比率即5040g/ha、4.5lb/英亩或9x标记的麦草畏比率时，对于转基因植物的损伤也小于10％。

表1.来自在播种时麦草畏的早期发芽前施用的、对非转基因或转基因大豆植物的损伤百分比。损伤％表示为ANOVA平均值比较。相似字母表示在p＝0.05水平时无统计学差异。

实施例2

包含DMO编码多核苷酸构建体的大豆植物对于在播种时麦草畏的早期发芽前施用及随后麦草畏的发芽后施用的耐受性

除了实施例2中关于麦草畏的早期发芽前(在播种时)施用描述的方法外，使用Teejet 9501E扁平风扇喷嘴(Spraying Systems Co，Wheaton，IL)用轨道喷雾器进行麦草畏的发芽后(大豆发育的V2阶段)施用，其中气压设定为24psi(165kpa)的最小值。喷嘴保持在植物材料的顶部上约16英寸的高度处用于喷雾。喷雾体积是10加仑/英亩或93升/公顷。

如表2中所示，用DMO编码多核苷酸构建体转化的大豆植物对于在播种时麦草畏的早期发芽前施用以及随后的麦草畏的发芽后施用是耐受的。令人惊讶的是，在10080g/ha的总麦草畏比率、9lb/英亩或18x标记的比率时，对于转基因植物的损伤小于20％。

表2.来自在播种时麦草畏的施用以及随后在V2阶段时的发芽后施用的、对于非转基因或转基因大豆植物的损伤百分比。*

*损伤％表示为ANOVA平均值比较。相似字母表示在p＝0.05水平时无统计学差异。

实施例3

包含DMO编码多核苷酸构建体的大豆植物对于麦草畏的晚期发芽前施用的耐受性

进行在由于大豆幼苗下胚轴的出现而土壤裂缝时麦草畏的晚期发芽前施用的作用的分析。如先前实施例中所述，使用轨道喷雾器进行麦草畏施用。如表3中所示，发现用DMO编码多核苷酸构建体转化的大豆植物对于在土壤裂缝时麦草畏的晚期发芽前施用是耐受的。重要的是，即使在最高比率即5040g/ha、4.5lb/英亩或9x标记的麦草畏比率时，转基因事件中的损伤也小于5％。

表3.来自在土壤裂缝时麦草畏的晚期发芽前施用的、对于非转基因或转基因大豆植物的损伤百分比。*

实施例4

包含DMO编码多核苷酸构建体的大豆植物对于麦草畏的晚期发芽前施用以及随后的麦草畏的发芽后施用的耐受性

除了上文研究外，还进行在土壤裂缝时麦草畏的晚期发芽前施用以及随后在发育的V2阶段时麦草畏的发芽后施用的作用的分析。如表4中所示，用DMO编码多核苷酸构建体转化的大豆植物对于在土壤裂缝时麦草畏的晚期发芽前施用和麦草畏的发芽后施用是耐受的。即使在最高比率即10080g/ha的总麦草畏比率、9lb/英亩或18x标记的比率时，对于转基因事件的损伤也小于20％。

表4.来自在土壤裂缝时麦草畏的晚期发芽前施用以及随后在V2阶段时的发芽后施用的、对于非转基因或转基因大豆植物的损伤百分比。*

实施例5

包含DMO编码多核苷酸构建体的大豆植物对于田地中的麦草畏的发芽前和发芽后施用的耐受性

在最佳生长条件时大约生长季节开始时种植非转基因和转基因大豆种子，这依赖土壤湿度、温度和种植深度。在裂区设计下经过所有位置种植种子，用麦草畏处理作为全区效应并且事件作为裂区效应。设计细节如下：6个位置、2次重复/位置、2行/区块、行长12英尺(+3ft小径)、9粒种子/英尺、108粒种子/行、5个事件(事件1-4和分离的第5个事件)；以及如下表5中所示的4种处理。在6个位置上种植总共240个区块(40/位置)。

表5.显示转基因大豆对于麦草畏的耐受性的施用的4种处理的细节。

实验自始至终使用已知商业品系例如A3525种植4个非转基因边缘行。遵循本领域已知的最佳生产和管理实践。需要时实践实施的害虫控制和疾病控制，以阻止麦草畏施用的混淆效应。需要时根据标准实践灌溉田地。

田地中的所有植物都用麦草畏的发芽前或发芽后施用进行处理，并且相对于未处理的对照植物，在种植后的特定日期以0-100％的等级肉眼评估损伤，其中0表示“无”损伤，100％表示“完全”损伤或死亡。在Monmouth，IL中在晚春隔开约1个月进行种子种植和发芽前处理。如表6中所示，发现所有转基因大豆植物无损伤或极少损伤。使用的第5个转基因事件看起来是分离的，因此一定百分比的植物在处理后死亡。

表6.包含DMO编码多核苷酸构建体的大豆植物对于在田地中的麦草畏的发芽前和发芽后施用的耐受性。*

*无喷雾意指无麦草畏施用于植物。播种时发芽前意指在种植时施用1.5lb/英亩的麦草畏。在V3时发芽后意指在种植后4周施用1.5lb/英亩的麦草畏。发芽前和发芽后意指在种植时施用1.5lb/英亩的麦草畏和在种植后4周施用1.5lb/英亩的麦草畏。损伤％意指在给定日期时的损伤百分比。生长下降％意指生长下降的百分比。

实施例6

通过麦草畏控制草甘膦耐受性杂草

加拿大蓬(marestail)是农作物田地中的主要杂草之一。加拿大蓬通过草甘膦得到有效控制，但关于用其他除草剂控制这种常见杂草的方法的开发是重要的，以使除草剂耐受性发展的机会降到最低。进行分析，以测定这种草甘膦耐受性杂草可以通过麦草畏的施用加以控制的程度。各自来自不同地理区，即加利福尼亚(CA)和肯塔基(KY)的2个生物型的加拿大蓬(Conyza canadensis)植物进行生长，且如实施例2和3中所述，在4-6英寸直径莲座叶阶段时用麦草畏进行处理。如表7中所示，研究的结果证实麦草畏在控制来自CA和KY的敏感性和耐受性生物型的加拿大蓬方面同样有效。麦草畏在较低施用比率时在控制抗性生物型方面比草甘膦更有效。例如，需要2100g/ha的草甘膦以获得CA和KY抗性生物型的约77％和91％的抑制，而仅需要280g/ha的麦草畏以获得CA和KY抗性生物型的约83％和约91％的抑制。

表7.草甘膦耐受性杂草经由麦草畏的控制。

实施例7

用于控制田地中的草甘膦耐受性杂草的方法的开发

将具有麦草畏耐受性的转基因种子种植在田地中，所述田地在种植转基因种子前已用草甘膦进行处理。该田地随后在种植种子前和后用除草有效量的麦草畏进行处理，以控制草甘膦抗性杂草。除草有效量的麦草畏是这样的，即使得草甘膦抗性杂草的生长得到控制，但对于种植的农作物无害，如本文描述的实施例中所示。因此，具有麦草畏耐受性的转基因种子与有效量的麦草畏组合对于控制草甘膦抗性杂草有用。无需麦草畏耐受性农作物植物的延迟种植即可实现该方法，因此提供了超过现有技术的显著进步，现有技术中麦草畏必须充分提前于种植，使得麦草畏在环境中充分降解以避免对于农作物植物的损伤。

实施例8

麦草畏和草甘膦的组合用于控制草甘膦抗性杂草以允许减少的除草剂施用比率

如表8中所示，单独的麦草畏在较低施用比率时在控制抗性生物型方面比草甘膦更有效。此外，出乎意料地发现麦草畏与草甘膦组合允许在较低施用比率时控制草甘膦耐受性和敏感性杂草。例如，尽管200g/ha的草甘膦在18DAT时能够控制仅6％的加拿大蓬(KY抗性生物型)，并且40g/ha的麦草畏在18DAT时能够控制约52％的KY生物型，但200g/ha草甘膦和40g/ha麦草畏混合物在18DAT时能够控制约79％的KY生物型。

一般而言，包含麦草畏的任何制剂看起来对于抗性生物型比单独的草甘膦更有效。此外，一般而言，发现草甘膦与麦草畏比率对于抗性生物型的有效性方面的下述趋势是真实的，即4∶1＞10∶1＞20∶1＞40∶1＞80∶1。该结果显示包含200g/h草甘膦和50g/h麦草畏的4∶1的草甘膦与麦草畏混合比提供比单独的草甘膦或麦草畏的更好的控制。

表8.麦草畏和草甘膦用于控制草甘膦抗性杂草的作用。

实施例9

具有麦草畏和草甘膦耐受性的转基因种子的生产

用于生产具有草甘膦耐受性的转基因种子的方法是本领域已知的，并且此种种子可以由本领域技术人员通过使用编码草甘膦抗性5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶(EPSPS)的多核苷酸进行生产，如美国专利5,627,061、美国专利5,633,435、美国专利6,040,497以及美国专利5,094,945、WO04074443和WO04009761中所述，所有这些专利引入本文作为参考。已生产了包含Roundup性状事件40-3-2的大豆育种品系(Padgette等人，1995)。来自命名为MON19788的大豆植物的种子已在ATCC保藏号PTA-6708下进行保藏。

草甘膦耐受性植物还可以通过掺入编码草甘膦降解酶的多核苷酸进行生产，所述酶例如草甘膦氧化还原酶(GOX，引入本文作为参考的美国专利5,463,175)、草甘膦-N-乙酰转移酶(GAT，引入本文作为参考的美国专利公开20030083480)和草甘膦脱羧酶(引入本文作为参考的WO05003362；美国专利申请20040177399)。

麦草畏耐受性植物公开于本文。使来自各自的合适品系进行杂交，且用草甘膦和麦草畏的除草剂施用筛选后代种子，以获得表达两种基因且显示出对于麦草畏和草甘膦的耐受性的后代。可替代地，将赋予对于一种或两种除草剂的耐受性的编码序列直接引入给定品系内。如下文描述的，来自这些植物的种子用于开发用于控制田地中的杂草抗性发展的方法。

测试具有麦草畏和草甘膦耐受性的转基因种子对于麦草畏、草甘膦或这两种除草剂的耐受性。表9显示携带草甘膦和麦草畏耐受性转基因的转基因大豆在植物生长的各个阶段时对于草甘膦、麦草畏、以及草甘膦和麦草畏的耐受性。当任一或两种除草剂在发芽前阶段时施用时，未见对于植物的损伤。在V3、R1和R3-4时任一或两种除草剂的发芽后处理仅显示很少的损伤。

表9.携带草甘膦和麦草畏耐受性转基因的转基因大豆对于草甘膦、麦草畏、以及草甘膦和麦草畏的耐受性。

实施例10

用于控制田地中的杂草抗性发展的方法的开发

将如上所述制备的具有麦草畏和草甘膦耐受性的转基因种子种植在田地中。该田地在种植种子前或后用麦草畏和草甘膦进行处理，其中使用有效量的麦草畏和草甘膦的混合物以控制杂草生长。一般约1x施用比率的任一除草剂在控制杂草生长方面将是有效的，但如本领域已知的，比率可以依环境条件和待控制的杂草类型而变。施用比率还可以增加或减少，这依赖希望的控制比率。一般来说，增加一种除草剂的比率将允许减少第二种除草剂的比率，以便获得相同水平的种子控制。在具体实施方案中，约200-约1600g/ha草甘膦的施用与约20-约400g/ha麦草畏组合。

所需施用比率可以在任何特定环境中进行优化，或在特定杂草的背景中可以使用实施例9的实验设计进行测定，其中使用本文描述的不同制剂比率。除了所需水平的杂草控制外，选择除草剂水平以一方面避免使用比所需更多的除草剂，且避免可能导致除草剂耐受性植物的弱杂草控制。除草剂的过度施用还可能损害除草剂耐受性农作物。然而，如上文实施例9中所示，这些除草剂的组合优化施用提供甚至除草剂耐受性杂草的显著控制水平，且因此代表本领域中的主要进步。

实施例11

用于在单次通过中控制田地中的杂草的方法的开发

施用实施例9和10中的操作以开发用于控制在农作物生长环境中的杂草生长的方法，其涉及在包含杂草或其种子的田地中种植转基因种子，且在经过田地的单次通过中处理田地。处理包含除草有效量的麦草畏、草甘膦或其混合物，其与种子的种植同时施用。转基因种子的种植、处理和生长通过标准农业方法来达到。

在一次通过中种植转基因种子和处理转基因种子的此种方法消除了农民进行经过田地的多次通过的需要，包括1次用于种植和1次用于喷雾。该技术因此减少了对于农民的燃料和穿着损耗成本。

实施例12

包含DMO编码多核苷酸分子的植物对于其他生长素样除草剂的耐受性

除草剂漂移和除草剂送递设备的污染是农业中的严重问题，并且可以损伤非靶农作物，导致农民的损失。然而，由于改变环境条件例如风和生长田地的接近，某些水平的漂移通常是不可避免的。此外，在除草剂施用后消除罐中所有残留水平的除草剂通常是困难和昂贵的，并且残留除草剂通常导致对于农作物的非故意损伤。在可以用于另一种除草剂前通常需要除草剂送递设备的几次冲洗，这浪费水和清洁化学制品。

因为诸如2，4-D和MCPA的除草剂是某些农作物的发芽后除草剂，但可以引起对于非靶农作物的严重损害，所以这些除草剂的残留污染具有特别的关注。对于至少低水平的这些除草剂耐受的转基因农作物因此在控制由于喷雾偏差和除草剂设备污染的损伤中将具有重要价值。这还可以减少除草剂送递设备所需的设备洗涤的程度。

因此进行分析，以测定具有DMO编码多核苷酸的大豆植物是否能够灭活除麦草畏外的其他生长素样除草剂(包括2，4-D和MCPA)。这通过对包含DMO的植物组织或植物施用各种浓度的其他生长素样除草剂的商购可得制剂来进行，所述除草剂例如2，4-D(Helena，Collierville，TN)、MCPA(Agriliance，St.Paul，MN)、定草酯(GARLON 3A；Dow Elanco，Indianapolis，IN)、二氯吡啶酸(STINGER；Dow Elanco，Indianapolis，IN)、毒莠定(TORDON 22K；Dow Elanco，Indianapolis，IN)或者Banvel或CLARITY(BASF，Raleigh，NC)。

如上文对于命名为事件1-4的事件所述的，用DMO编码多核苷酸通过土壤杆菌属介导的大豆外植体转化来获得转基因大豆植物。非转基因品系用作对照。将非转基因和转基因大豆种子种植到包含Redi-earth^TM的3.5英寸方形塑料罐内(Scotts-Sierra Horticultural Products Co.，Marysville，Ohio)。将罐置于在35英寸×60英寸纤维玻璃添水托盘的毛细垫上，用于高架和/或地下灌溉用于测试期的持续时间，以便维持最佳土壤湿度用于植物生长。罐用Osmocote(14-14-14缓慢释放；Scotts-Sierra Horticultural Products Co.，Marysville，Ohio)以100gm/cu.ft.的比率进行施肥，以维持植物生长用于温室试验的持续时间，且在温室中在27℃/21℃日/夜温度和25％-75％相对湿度下生长，以模拟深秋的温暖季节生长条件。需要时用约600μE的补充光提供14小时最低限度光周期。

使用Teejet 9501E扁平风扇喷嘴(Spraying Systems Co，Wheaton，IL)用轨道喷雾器进行所有除草剂施用，其中气压设定为24psi(165kpa)的最小值。喷嘴保持在植物材料的顶部上约16英寸的高度处用于喷雾。喷雾体积是10加仑/英亩或93升/公顷。当植物已达到V-3阶段时进行施用。所有实验在随机区组设计(通过比率随机化)中建立，具有每次处理的4-6次重复，这依赖植物质量、可用性，且考虑可能已在每个温室的范围内发生的任何环境变异性。

相对于未处理的对照植物，在温室实验中所有处理的植物在处理后的约4、14、18和21天时(DAT)以0-100的等级肉眼评估损伤，其中0表示“无”损伤，100％表示“完全”损伤或死亡。使用掌上电脑收集数据且使用标准统计学方法进行分析。表10中所示的结果清楚地指出相对于非转基因品系，转基因大豆对于其他生长素样除草剂例如2，4-D和MCPA的耐受性。

表10.相对于未处理的对照，在25DAT时不同生长素样除草剂的V3后施用对于非转基因或转基因大豆植物的损伤百分比。*

*损伤％表示为ANOVA平均值比较。**活性酸等价物的克/公顷

另一种生长素样除草剂Butyrac 200(2，4-DB；Albaugh)也在携带DMO基因的转基因大豆植物上进行测试，用于测试对它的植物耐受性。除草剂作为发芽后处理以3个施用比率施用于2种转基因大豆事件，且针对所有3个施用比率：280g/ha(0.25lb/a)、561g/ha(0.5lb/a)和841g/ha(0.75lb/a)(参见表11)，与非转基因品系比较总体农作物损伤。2种转基因大豆品系都显示出对于2，4-DB低水平的耐受性。这个实施例显示麦草畏耐受性大豆对于低水平的2，4-DB也是耐受的，并且在控制来自相同或邻近田地的喷雾偏差的损害中应当是有用的，以阻止农作物损失，并且将显示出在除草剂送递设备的不彻底洗涤后对于残留水平的2，4-DB的耐受性。

表11.通过将2，4-DB施用于非转基因或转基因大豆植物在16DAT时相对于未处理的对照的损伤百分比。

这个实施例显示转基因大豆植物显示出对于其他生长素样除草剂的耐受性，指出关于麦草畏和其他生长素样除草剂例如2，4-D和MCPA的可能共有的灭活机制。在定草酯、二氯吡啶酸和毒莠定的情况下，280g ae/ha的施用比率在这个研究中看起来太严格了，且因此在大多数背景中可能需要更低的浓度以减少植物损害。因此，对于麦草畏耐受的包含DMO多核苷酸的大豆对于低水平的2，4-D和MCPA也是耐受的，且应阻止或使来自相同或邻近田地的喷雾偏差的损害降到最低，以阻止农作物损失，并且应显示出在除草剂送递设备的不彻底洗涤后对于残留水平的这些除草剂的耐受性。除草剂送递设备应包括罐、容器、软管、滤过器、杆、喷雾器、喷嘴、泵以及配件，例如联接器、弯管、柄和阀。送递设备可手动操作或例如在农场车辆、飞机和直升机等上机械操作。

实施例13

麦草畏耐受性转基因玉米植物的生产

为了测试DMO基因在给单子叶植物提供麦草畏耐受性中的用途，生产转基因玉米植物，其包含植物基因表达元件例如启动子(例如PC1SV、e35S、OsAct1、OsTPI、OsAct15)和内含子(例如OsAct1、OsAct15、OsTPI、ZmHSP70)控制下的如上文公开的DMO基因，其中含或不含转运肽(例如TaWaxy、CTP1、CTP2synthetic、CTP4)。这个表达元件包含来自稻肌动蛋白1基因的第一个内含子和侧翼UTR外显子序列，并且在5′末端处包括外显子1的12nt并且在3′末端处包含外显子2的7nt)以及3’UTR(例如TaHsp17)。各种表达元件的核苷酸序列和/或专利参考文献公开于共同未决的申请美国序列号60/891,675中。

通过本领域已知的方法例如WO9506722和美国专利申请20040244075生产转基因玉米植物。具有单拷贝的转基因玉米事件在单位置重复实验中评估麦草畏耐受性。使用来自6种构建体中的每一种的6个事件。实验设计如下：行/条目：1；处理：在V3阶段时0.5lb/a的麦草畏随后为在V8阶段时1lb/a的麦草畏(BASF，Raleigh，NC)；重复：2；行距：30英寸；区块长度：最小20英尺；植物密度：约30棵植物/17.5ft；小径：2.5英尺。整个区块均匀地施肥以获得农业上可接受的农作物。在种植时以5oz./1000ft.行施用土壤杀虫剂例如3G(Syngenta Crop Protection，Greensboro，NC，USA)用于控制玉米根虫。如果观察到黑色切根虫侵袭，那么使用4-8oz./英亩比率的3.2EC(FMC Corporation，Philadelphia，PA)。此外，杀虫剂喷雾方案用于控制所有地上鳞翅目害虫，包括欧洲玉米螟、玉米穗蛾和秋夜蛾。3.2EC以4-8oz./英亩每3周进行施用以控制鳞翅目害虫；进行约4次施用。区块用除草剂例如Xtra 5.6L(Monsanto，St.Louis，MO)和Degree(Monsanto，St.Louis，MO)的发芽前施用维持无杂草。如果在未处理的检查中观察到杂草逃逸，那么在整个实验中通过手工除草或PERMIT(Monsanto，St.Louis，MO)或(Bayer，Research Triangle Park，NC)的发芽后施用来控制它们。

当在V3阶段时用0.5lb/a的麦草畏随后在V8阶段时用1lb/a的麦草畏处理时，用包含DMO转基因的DNA构建体转化的玉米自交品系通过测量支柱根损伤而测试麦草畏耐受性。支柱根损伤通过与“指状”结构的一般形态比较，对行中显示具有融合的支柱根的“非典型”形态的植物数目进行计数而肉眼评估。如表12中所示，用编码未与CTP连接的DMO的DNA构建体(pMON73699、pMON73704)转化的玉米植物显示更高水平的支柱根损伤，即在麦草畏处理后更低水平的保护。编码与CTP连接的DMO的构建体(pMON73716、pMON73700、pMON73715、pMON73703)显示更低水平的支柱根损伤，即在麦草畏处理后更高水平的保护。

表12.作为用携带DMO的DNA构建体转化的转基因玉米植物所显示的麦草畏耐受性测量值的支柱根损伤百分比。

近交/构建体	细节	支柱根损伤
			01CSI6	对于麦草畏敏感的近交	95.4
LH244	对于麦草畏抗性的近交	93.8
			pMON73699	PC1SV/I-OsAct1/DMO-Wmc/TaHsp17	93.2
pMON73704	e35S/I-OsAct1/DMO-Wmc/TaHsp17	91.3
			pMON73716	PC1SV/I-OsAct1/TaWaxy/DMO-Wmc/TaHsp17	78.8
pMON73700	PC1SV/I-OsAct1/CTP1/DMO-Wmc/TaHsp17	74.4
			pMON73715	PC1SV/I-OsAct1/CTP2syn/DMO-Wmc/TaHsp17	68.2
pMON73703	e35S/I-OsAct1/CTP1/DMO-Wmc/TaHsp17	68.8

实施例14

麦草畏耐受性转基因棉花植物的生产

为了测试DMO基因在给棉花提供麦草畏耐受性中的用途，生产转基因棉花植物。如下产生了携带植物基因表达元件例如启动子(例如PC1SV、FMV或e35S)和3’UTR(例如E6；登记#U30508)控制下的如本文公开的DMO编码区的几种DNA构建体，其中含转运肽(例如PsRbcS CTP，CTP1，CTP2)，且转化到棉花(Gossypium hirsutum)内。关于各种表达元件的核苷酸序列和/或专利参考文献公开于共同未决的申请美国序列号60/891,675中。使用的材料在表13中指出。

例如如根据美国专利申请公开20040087030中所述，经由胚胎发生方法进行棉花转化。使棉花cv Coker 130的外植体在体外且在携带目的DNA构建体的根癌土壤杆菌的液体悬浮液存在下进行生长，使用包含卡那霉素的培养基上的选择。然后将推定的转基因幼苗转移至土壤以获得成熟的棉花植物。转化体的转基因性质通过DNA测试加以证实。

表13.用于棉花转化的各种培养基的组成。

包含DNA构建体(即各自包含DMO编码区与转运肽、启动子和3′UTR的不同组合)的经转化的棉花植物用麦草畏(BASF，Raleigh，NC)进行处理，以561g ae/ha(0.5lb/a)的比率在V4-5生长阶段时作为发芽后处理，且发现是耐受的，而未转化的棉花植物显示79％-86％的损伤比率。选择显示超过95％耐受性(等于小于5％损伤)的转基因植物用于进一步的研究。转基因植物对于麦草畏的后续发芽后处理也是耐受的。例如，在V3-4阶段时用0.5lb/英亩的麦草畏随后在V5或稍后阶段时用1或2lb/英亩的麦草畏处理的植物对于麦草畏仍是耐受的。还对R1转基因种子和植物实施发芽前或发芽前和发芽后麦草畏处理，且发现是耐受的。这个实施例显示DMO基因在生长的各个阶段时可以对棉花提供麦草畏耐受性，因此使得能够在各个阶段时施用麦草畏以获得有效的杂草控制。

******

本文公开和要求保护的所有组合物和/或方法可以根据本公开不用过度实验进行和实施。尽管已经按照优选实施方案描述了本发明的组合物和方法，但是本领域技术人员显而易见的是改变的方案可施用于所述组合物和/或方法和本文公开的方法的步骤或步骤的顺序中而不背离本发明的概念、精神和范围。更特别地，将显而易见的是化学和生理学相关的某些物质可以代替本文描述的物质而将实现相同或相似的结果。认为本领域技术人员显而易见的所有此类相似的替代和修饰都在所附权利要求限定的本发明的精神、范围和概念之内。

参考文献

下文列出的参考文献引入本文作为参考，其程度至它们补充、解释、提供关于本文使用的方法、技术和/或组合物的背景，或教导本文使用的方法、技术和/或组合物。

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美国申请序列09/757,089

美国专利申请公开20030083480

美国专利申请公开20030135879

美国专利申请公开2004087030

美国专利申请公开20070079393

美国临时专利申请序列号60/891,675

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欧洲申请646643

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序列表

<110>FENG，PAUL C.C.

BRINKER，RONALD J.

<120>用于控制杂草的方法

<130>MONS：083US

<140>未知

<141>2007-06-05

<150>60/811,276

<151>2006-06-06

<160>32

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>1023

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>基于来自嗜麦芽假单胞菌的麦草畏单加氧酶基因

<400>1

atggccactt tcgttagaaa cgcttggtac gttgctgcac ttcctgagga gttgagcgag 60

aagcctctag gaagaactat cctcgatact ccactagctc tctatcgtca acctgacgga 120

gttgtcgctg ccctgcttga tatttgtccg catcgcttcg ctccgttgag tgacggtatt 180

ctagtcaacg gacatctcca gtgtccatat cacggtctgg aatttgacgg aggtggccag 240

tgtgtccaca acccgcacgg caacggagcc cgccctgctt ctctgaacgt gcgatcattc 300

cctgtcgtgg aaagagacgc attgatctgg atctgccctg gagatccagc actcgcagat 360

cccggtgcta tccctgactt tgggtgtcgt gttgatccag cttaccgtac tgtcggaggt 420

tacggtcacg tggactgcaa ctacaagctc cttgtggata acctcatgga tcttggacac 480

gctcagtacg tgcaccgcgc taacgcccaa acagacgcct tcgatagact tgagcgtgag 540

gtgatcgttg gcgacggcga gatccaggcg ctcatgaaga tccctggtgg cacaccctca 600

gttctcatgg ctaagttctt gcgtggtgct aacacaccag ttgacgcctg gaacgacatc 660

cggtggaata aggtgtcggc tatgctgaac ttcatcgcgg tcgcgccgga agggacgccg 720

aaggagcagt caatccactc ccgaggaacc catatcctta ctcctgagac cgaggcaagc 780

tgccattact tcttcggtag ttcccgcaac ttcggtatag acgatccaga gatggacggt 840

gttctcagga gctggcaagc tcaagccctg gtgaaggagg acaaagtggt cgttgaagct 900

atcgaaaggc ggagggctta cgtcgaagcg aacgggatca gacccgccat gttgtcctgc 960

gacgaggcag ccgtcagggt atccagggag attgagaagc tcgaacaact agaagcggcg 1020

tga 1023

<210>2

<211>340

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>基于来自嗜麦芽假单胞菌的麦草畏单加氧酶基因

<400>2

Met Ala Thr Phe Val Arg Asn Ala Trp Tyr Val Ala Ala Leu Pro Glu

1 5 10 15

Glu Leu Ser Glu Lys Pro Leu Gly Arg Thr Ile Leu Asp Thr Pro Leu

20 25 30

Ala Leu Tyr Arg Gln Pro Asp Gly Val Val Ala Ala Leu Leu Asp Ile

35 40 45

Cys Pro His Arg Phe Ala Pro Leu Ser Asp Gly Ile Leu Val Asn Gly

50 55 60

His Leu Gln Cys Pro Tyr His Gly Leu Glu Phe Asp Gly Gly Gly Gln

65 70 75 80

Cys Val His Asn Pro His Gly Asn Gly Ala Arg Pro Ala Ser Leu Asn

85 90 95

Val Arg Ser Phe Pro Val Val Glu Arg Asp Ala Leu Ile Trp Ile Cys

100 105 110

Pro Gly Asp Pro Ala Leu Ala Asp Pro Gly Ala Ile Pro Asp Phe Gly

115 120 125

Cys Arg Val Asp Pro Ala Tyr Arg Thr Val Gly Gly Tyr Gly His Val

130 135 140

Asp Cys Asn Tyr Lys Leu Leu Val Asp Asn Leu Met Asp Leu Gly His

145 150 155 160

Ala Gln Tyr Val His Arg Ala Asn Ala Gln Thr Asp Ala Phe Asp Arg

165 170 175

Leu Glu Arg Glu Val Ile Val Gly Asp Gly Glu Ile Gln Ala Leu Met

180 185 190

Lys Ile Pro Gly Gly Thr Pro Ser Val Leu Met Ala Lys Phe Leu Arg

195 200 205

Gly Ala Asn Thr Pro Val Asp Ala Trp Asn Asp Ile Arg Trp Asn Lys

210 215 220

Val Ser Ala Met Leu Asn Phe Ile Ala Val Ala Pro Glu Gly Thr Pro

225 230 235 240

Lys Glu Gln Ser Ile His Ser Arg Gly Thr His Ile Leu Thr Pro Glu

245 250 255

Thr Glu Ala Ser Cys His Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Arg Asn Phe Gly

260 265 270

Ile Asp Asp Pro Glu Met Asp Gly Val Leu Arg Ser Trp Gln Ala Gln

275 280 285

Ala Leu Val Lys Glu Asp Lys Val Val Val Glu Ala Ile Glu Arg Arg

290 295 300

Arg Ala Tyr Val Glu Ala Asn Gly Ile Arg Pro Ala Met Leu Ser Cys

305 310 315 320

Asp Glu Ala Ala Val Arg Val Ser Arg Glu Ile Glu Lys Leu Glu Gln

325 330 335

Leu Glu Ala Ala

340

<210>3

<211>1023

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>基于来自嗜麦芽假单胞菌的麦草畏单加氧酶基因

<400>3

atgctcactt tcgttagaaa cgcttggtac gttgctgcac ttcctgagga gttgagcgag 60

aagcctctag gaagaactat cctcgatact ccactagctc tctatcgtca acctgacgga 120

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tgtgtccaca acccgcacgg caacggagcc cgccctgctt ctctgaacgt gcgatcattc 300

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cccggtgcta tccctgactt tgggtgtcgt gttgatccag cttaccgtac tgtcggaggt 420

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aaggagcagt caatccactc ccgaggaacc catatcctta ctcctgagac cgaggcaagc 780

tgccattact tcttcggtag ttcccgcaac ttcggtatag acgatccaga gatggacggt 840

gttctcagga gctggcaagc tcaagccctg gtgaaggagg acaaagtggt cgttgaagct 900

atcgaaaggc ggagggctta cgtcgaagcg aacgggatca gacccgccat gttgtcctgc 960

gacgaggcag ccgtcagggt atccagggag attgagaagc tcgaacaact agaagcggcg 1020

tga 1023

<210>4

<211>340

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>基于来自嗜麦芽假单胞菌的麦草畏单加氧酶基因

<400>4

Met Leu Thr Phe Val Arg Asn Ala Trp Tyr Val Ala Ala Leu Pro Glu

1 5 10 15

Glu Leu Ser Glu Lys Pro Leu Gly Arg Thr Ile Leu Asp Thr Pro Leu

20 25 30

Ala Leu Tyr Arg Gln Pro Asp Gly Val Val Ala Ala Leu Leu Asp Ile

35 40 45

Cys Pro His Arg Phe Ala Pro Leu Ser Asp Gly Ile Leu Val Asn Gly

50 55 60

His Leu Gln Cys Pro Tyr His Gly Leu Glu Phe Asp Gly Gly Gly Gln

65 70 75 80

Cys Val His Asn Pro His Gly Asn Gly Ala Arg Pro Ala Ser Leu Asn

85 90 95

Val Arg Ser Phe Pro Val Val Glu Arg Asp Ala Leu Ile Trp Ile Cys

100 105 110

Pro Gly Asp Pro Ala Leu Ala Asp Pro Gly Ala Ile Pro Asp Phe Gly

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Cys Arg Val Asp Pro Ala Tyr Arg Thr Val Gly Gly Tyr Gly His Val

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Asp Cys Asn Tyr Lys Leu Leu Val Asp Asn Leu Met Asp Leu Gly His

145 150 155 160

Ala Gln Tyr Val His Arg Ala Asn Ala Gln Thr Asp Ala Phe Asp Arg

165 170 175

Leu Glu Arg Glu Val Ile Val Gly Asp Gly Glu Ile Gln Ala Leu Met

180 185 190

Lys Ile Pro Gly Gly Thr Pro Ser Val Leu Met Ala Lys Phe Leu Arg

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Lys Glu Gln Ser Ile His Ser Arg Gly Thr His Ile Leu Thr Pro Glu

245 250 255

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Ile Asp Asp Pro Glu Met Asp Gly Val Leu Arg Ser Trp Gln Ala Gln

275 280 285

Ala Leu Val Lys Glu Asp Lys Val Val Val Glu Ala Ile Glu Arg Arg

290 295 300

Arg Ala Tyr Val Glu Ala Asn Gly Ile Arg Pro Ala Met Leu Ser Cys

305 310 315 320

Asp Glu Ala Ala Val Arg Val Ser Arg Glu Ile Glu Lys Leu Glu Gln

325 330 335

Leu Glu Ala Ala

340

<210>5

<211>1023

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>基于来自嗜麦芽假单胞菌的麦草畏单加氧酶基因

<400>5

atgctcactt tcgttagaaa cgcttggtac gttgctgcac ttcctgagga gttgagcgag 60

aagcctctag gaagaactat cctcgatact ccactagctc tctatcgtca acctgacgga 120

gttgtcgctg ccctgcttga tatttgtccg catcgcttcg ctccgttgag tgacggtatt 180

ctagtcaacg gacatctcca gtgtccatat cacggtctgg aatttgacgg aggtggccag 240

tgtgtccaca acccgcacgg caacggagcc cgccctgctt ctctgaacgt gcgatcattc 300

cctgtcgtgg aaagagacgc attgatctgg atctggcctg gagatccagc actcgcagat 360

cccggtgcta tccctgactt tgggtgtcgt gttgatccag cttaccgtac tgtcggaggt 420

tacggtcacg tggactgcaa ctacaagctc cttgtggata acctcatgga tcttggacac 480

gctcagtacg tgcaccgcgc taacgcccaa acagacgcct tcgatagact tgagcgtgag 540

gtgatcgttg gcgacggcga gatccaggcg ctcatgaaga tccctggtgg cacaccctca 600

gttctcatgg ctaagttctt gcgtggtgct aacacaccag ttgacgcctg gaacgacatc 660

cggtggaata aggtgtcggc tatgctgaac ttcatcgcgg tcgcgccgga agggacgccg 720

aaggagcagt caatccactc ccgaggaacc catatcctta ctcctgagac cgaggcaagc 780

tgccattact tcttcggtag ttcccgcaac ttcggtatag acgatccaga gatggacggt 840

gttctcagga gctggcaagc tcaagccctg gtgaaggagg acaaagtggt cgttgaagct 900

atcgaaaggc ggagggctta cgtcgaagcg aacgggatca gacccgccat gttgtcctgc 960

gacgaggcag ccgtcagggt atccagggag attgagaagc tcgaacaact agaagcggcg 1020

tga 1023

<210>6

<211>340

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>基于来自嗜麦芽假单胞菌的麦草畏单加氧酶基因

<400>6

Met Leu Thr Phe Val Arg Asn Ala Trp Tyr Val Ala Ala Leu Pro Glu

1 5 10 15

Glu Leu Ser Glu Lys Pro Leu Gly Arg Thr Ile Leu Asp Thr Pro Leu

20 25 30

Ala Leu Tyr Arg Gln Pro Asp Gly Val Val Ala Ala Leu Leu Asp Ile

35 40 45

Cys Pro His Arg Phe Ala Pro Leu Ser Asp Gly Ile Leu Val Asn Gly

50 55 60

His Leu Gln Cys Pro Tyr His Gly Leu Glu Phe Asp Gly Gly Gly Gln

65 70 75 80

Cys Val His Asn Pro His Gly Asn Gly Ala Arg Pro Ala Ser Leu Asn

85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

Cys Arg Val Asp Pro Ala Tyr Arg Thr Val Gly Gly Tyr Gly His Val

130 135 140

Asp Cys Asn Tyr Lys Leu Leu Val Asp Asn Leu Met Asp Leu Gly His

145 150 155 160

Ala Gln Tyr Val His Arg Ala Asn Ala Gln Thr Asp Ala Phe Asp Arg

165 170 175

Leu Glu Arg Glu Val Ile Val Gly Asp Gly Glu Ile Gln Ala Leu Met

180 185 190

Lys Ile Pro Gly Gly Thr Pro Ser Val Leu Met Ala Lys Phe Leu Arg

195 200 205

Gly Ala Asn Thr Pro Val Asp Ala Trp Asn Asp Ile Arg Trp Asn Lys

210 215 220

Val Ser Ala Met Leu Asn Phe Ile Ala Val Ala Pro Glu Gly Thr Pro

225 230 235 240

Lys Glu Gln Ser Ile His Ser Arg Gly Thr His Ile Leu Thr Pro Glu

245 250 255

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Ile Asp Asp Pro Glu Met Asp Gly Val Leu Arg Ser Trp Gln Ala Gln

275 280 285

Ala Leu Val Lys Glu Asp Lys Val Val Val Glu Ala Ile Glu Arg Arg

290 295 300

Arg Ala Tyr Val Glu Ala Ash Gly Ile Arg Pro Ala Met Leu Ser Cys

305 310 315 320

Asp Glu Ala Ala Val Arg Val Ser Arg Glu Ile Glu Lys Leu Glu Gln

325 330 335

Leu Glu Ala Ala

340

<210>7

<211>1023

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>基于来自嗜麦芽假单胞菌的麦草畏单加氧酶基因

<400>7

atggccacct tcgtccgcaa tgcctggtat gtggcggcgc tgcccgagga actgtccgaa 60

aagccgctcg gccggacgat tctcgacaca ccgctcgcgc tctaccgcca gcccgacggt 120

gtggtcgcgg cgctgctcga catctgtccg caccgcttcg cgccgctgag cgacggcatc 180

ctcgtcaacg gccatctcca atgcccctat cacgggctgg aattcgatgg cggcgggcag 240

tgcgtccata acccgcacgg caatggcgcc cgcccggctt cgctcaacgt ccgctccttc 300

ccggtggtgg agcgcgacgc gctgatctgg atctgtcccg gcgatccggc gctggccgat 360

cctggggcga tccccgactt cggctgccgc gtcgatcccg cctatcggac cgtcggcggc 420

tatgggcatg tcgactgcaa ctacaagctg ctggtcgaca acctgatgga cctcggccac 480

gcccaatatg tccatcgcgc caacgcccag accgacgcct tcgaccggct ggagcgcgag 540

gtgatcgtcg gcgacggtga gacacaggcg ctgatgaaga ttcccggcgg cacgccgagc 600

gtgctgatgg ccaagttcct gcgcggcgcc aatacccccg tcgacgcttg gaacgacatc 660

cgctggaaca aggtgagcgc gatgctcaac ttcatcgcgg tggcgccgga aggcaccccg 720

aaggagcaga gcatccactc gcgcggtacc catatcctga cccccgagac ggaggcgagc 780

tgccattatt tcttcggctc ctcgcgcaat ttcggcatcg acgatccgga gatggacggc 840

gtgctgcgca gctggcaggc tcaggcgctg gtcaaggagg acaaggtcgt cgtcgaggcg 900

atcgagcgcc gccgcgccta tgtcgaggcg aatggcatcc gcccggcgat gctgtcgtgc 960

gacgaagccg cagtccgtgt cagccgcgag atcgagaagc ttgagcagct cgaagccgcc 1020

tga 1023

<210>8

<211>340

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>基于来自嗜麦芽假单胞菌的麦草畏单加氧酶基因

<400>8

Met Ala Thr Phe Val Arg Asn Ala Trp Tyr Val Ala Ala Leu Pro Glu

1 5 10 15

Glu Leu Ser Glu Lys Pro Leu Gly Arg Thr Ile Leu Asp Thr Pro Leu

20 25 30

Ala Leu Tyr Arg Gln Pro Asp Gly Val Val Ala Ala Leu Leu Asp Ile

35 40 45

Cys Pro His Arg Phe Ala Pro Leu Ser Asp Gly Ile Leu Val Asn Gly

50 55 60

His Leu Gln Cys Pro Tyr His Gly Leu Glu Phe Asp Gly Gly Gly Gln

65 70 75 80

Cys Val His Asn Pro His Gly Asn Gly Ala Arg Pro Ala Ser Leu Asn

85 90 95

Val Arg Ser Phe Pro Val Val Glu Arg Asp Ala Leu Ile Trp Ile Cys

100 105 110

Pro Gly Asp Pro Ala Leu Ala Asp Pro Gly Ala Ile Pro Asp Phe Gly

115 120 125

Cys Arg Val Asp Pro Ala Tyr Arg Thr Val Gly Gly Tyr Gly His Val

130 135 140

Asp Cys Asn Tyr Lys Leu Leu Val Asp Asn Leu Met Asp Leu Gly His

145 150 155 160

Ala Gln Tyr Val His Arg Ala Asn Ala Gln Thr Asp Ala Phe Asp Arg

165 170 175

Leu Glu Arg Glu Val Ile Val Gly Asp Gly Glu Ile Gln Ala Leu Met

180 185 190

Lys Ile Pro Gly Gly Thr Pro Ser Val Leu Met Ala Lys Phe Leu Arg

195 200 205

Gly Ala Asn Thr Pro Val Asp Ala Trp Asn Asp Ile Arg Trp Asn Lys

210 215 220

Val Ser Ala Met Leu Asn Phe Ile Ala Val Ala Pro Glu Gly Thr Pro

225 230 235 240

Lys Glu Gln Ser Ile His Ser Arg Gly Thr His Ile Leu Thr Pro Glu

245 250 255

Thr Glu Ala Ser Cys His Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Arg Asn Phe Gly

260 265 270

Ile Asp Asp Pro Glu Met Asp Gly Val Leu Arg Ser Trp Gln Ala Gln

275 280 285

Ala Leu Val Lys Glu Asp Lys Val Val Val Glu Ala Ile Glu Arg Arg

290 295 300

Arg Ala Tyr Val Glu Ala Asn Gly Ile Arg Pro Ala Met Leu Ser Cys

305 310 315 320

Asp Glu Ala Ala Val Arg Val Ser Arg Glu Ile Glu Lys Leu Glu Gln

325 330 335

Leu Glu Ala Ala

340

<210>9

<211>1023

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>基于来自嗜麦芽假单胞菌的麦草畏单加氧酶基因

<400>9

atggccactt tcgttagaaa cgcttggtac gttgctgcac ttcctgagga gttgagcgag 60

aagcctctag gaagaactat cctcgatact ccactagctc tctatcgtca acctgacgga 120

gttgtcgctg ccctgcttga tatttgtccg catcgcttcg ctccgttgag tgacggtatt 180

ctagtcaacg gacatctcca gtgtccatat cacggtctgg aatttgacgg aggtggccag 240

tgtgtccaca acccgcacgg caacggagcc cgccctgctt ctctgaacgt gcgatcattc 300

cctgtcgtgg aaagagacgc attgatctgg atctggcctg gagatccagc actcgcagat 360

cccggtgcta tccctgactt tgggtgtcgt gttgatccag cttaccgtac tgtcggaggt 420

tacggtcacg tggactgcaa ctacaagctc cttgtggata acctcatgga tcttggacac 480

gctcagtacg tgcaccgcgc taacgcccaa acagacgcct tcgatagact tgagcgtgag 540

gtgatcgttg gcgacggcga gatccaggcg ctcatgaaga tccctggtgg cacaccctca 600

gttctcatgg ctaagttctt gcgtggtgct aacacaccag ttgacgcctg gaacgacatc 660

cggtggaata aggtgtcggc tatgctgaac ttcatcgcgg tcgcgccgga agggacgccg 720

aaggagcagt caatccactc ccgaggaacc catatcctta ctcctgagac cgaggcaagc 780

tgccattact tcttcggtag ttcccgcaac ttcggtatag acgatccaga gatggacggt 840

gttctcagga gctggcaagc tcaagccctg gtgaaggagg acaaagtggt cgttgaagct 900

atcgaaaggc ggagggctta cgtcgaagcg aacgggatca gacccgccat gttgtcctgc 960

gacgaggcag ccgtcagggt atccagggag attgagaagc tcgaacaact agaagcggcg 1020

tga 1023

<210>10

<211>340

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>基于来自嗜麦芽假单胞菌的麦草畏单加氧酶基因

<400>10

Met Ala Thr Phe Val Arg Asn Ala Trp Tyr Val Ala Ala Leu Pro Glu

1 5 10 15

Glu Leu Ser Glu Lys Pro Leu Gly Arg Thr Ile Leu Asp Thr Pro Leu

20 25 30

Ala Leu Tyr Arg Gln Pro Asp Gly Val Val Ala Ala Leu Leu Asp Ile

35 40 45

Cys Pro His Arg Phe Ala Pro Leu Ser Asp Gly Ile Leu Val Asn Gly

50 55 60

His Leu Gln Cys Pro Tyr His Gly Leu Glu Phe Asp Gly Gly Gly Gln

65 70 75 80

Cys Val His Asn Pro His Gly Asn Gly Ala Arg Pro Ala Ser Leu Asn

85 90 95

Val Arg Ser Phe Pro Val Val Glu Arg Asp Ala Leu Ile Trp Ile Trp

100 105 110

Pro Gly Asp Pro Ala Leu Ala Asp Pro Gly Ala Ile Pro Asp Phe Gly

115 120 125

Cys Arg Val Asp Pro Ala Tyr Arg Thr Val Gly Gly Tyr Gly His Val

130 135 140

Asp Cys Asn Tyr Lys Leu Leu Val Asp Asn Leu Met Asp Leu Gly His

145 150 155 160

Ala Gln Tyr Val His Arg Ala Asn Ala Gln Thr Asp Ala Phe Asp Arg

165 170 175

Leu Glu Arg Glu Val Ile Val Gly Asp Gly Glu Ile Gln Ala Leu Met

180 185 190

Lys Ile Pro Gly Gly Thr Pro Ser Val Leu Met Ala Lys Phe Leu Arg

195 200 205

Gly Ala Asn Thr Pro Val Asp Ala Trp Asn Asp Ile Arg Trp Asn Lys

210 215 220

Val Ser Ala Met Leu Asn Phe Ile Ala Val Ala Pro Glu Gly Thr Pro

225 230 235 240

Lys Glu Gln Ser Ile His Ser Arg Gly Thr His Ile Leu Thr Pro Glu

245 250 255

Thr Glu Ala Ser Cys His Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Arg Asn Phe Gly

260 265 270

Ile Asp Asp Pro Glu Met Asp Gly Val Leu Arg Ser Trp Gln Ala Gln

275 280 285

Ala Leu Val Lys Glu Asp Lys Val Val Val Glu Ala Ile Glu Arg Arg

290 295 300

Arg Ala Tyr Val Glu Ala Asn Gly Ile Arg Pro Ala Met Leu Ser Cys

305 310 315 320

Asp Glu Ala Ala Val Arg Val Ser Arg Glu Ile Glu Lys Leu Glu Gln

325 330 335

Leu Glu Ala Ala

340

<210>11

<211>1020

<212>DNA

<213>嗜麦芽假单胞菌

<400>11

atgaccttcg tccgcaatgc ctggtatgtg gcggcgctgc ccgaggaact gtccgaaaag 60

ccgctcggcc ggacgattct cgacacaccg ctcgcgctct accgccagcc cgacggtgtg 120

gtcgcggcgc tgctcgacat ctgtccgcac cgcttcgcgc cgctgagcga cggcatcctc 180

gtcaacggcc atctccaatg cccctatcac gggctggaat tcgatggcgg cgggcagtgc 240

gtccataacc cgcacggcaa tggcgcccgc ccggcttcgc tcaacgtccg ctccttcccg 300

gtggtggagc gcgacgcgct gatctggatc tggcccggcg atccggcgct ggccgatcct 360

ggggcgatcc ccgacttcgg ctgccgcgtc gatcccgcct atcggaccgt cggcggctat 420

gggcatgtcg actgcaacta caagctgctg gtcgacaacc tgatggacct cggccacgcc 480

caatatgtcc atcgcgccaa cgcccagacc gacgccttcg accggctgga gcgcgaggtg 540

atcgtcggcg acggtgagat acaggcgctg atgaagattc ccggcggcac gccgagcgtg 600

ctgatggcca agttcctgcg cggcgccaat acccccgtcg acgcttggaa cgacatccgc 660

tggaacaagg tgagcgcgat gctcaacttc atcgcggtgg cgccggaagg caccccgaag 720

gagcagagca tccactcgcg cggtacccat atcctgaccc ccgagacgga ggcgagctgc 780

cattatttct tcggctcctc gcgcaatttc ggcatcgacg atccggagat ggacggcgtg 840

ctgcgcagct ggcaggctca ggcgctggtc aaggaggaca aggtcgtcgt cgaggcgatc 900

gagcgccgcc gcgcctatgt cgaggcgaat ggcatccgcc cggcgatgct gtcgtgcgac 960

gaagccgcag tccgtgtcag ccgcgagatc gagaagcttg agcagctcga agccgcctga 1020

<210>12

<211>339

<212>PRT

<213>嗜麦芽假单胞菌

<400>12

Met Thr Phe Val Arg Asn Ala Trp Tyr Val Ala Ala Leu Pro Glu Glu

1 5 10 15

Leu Ser Glu Lys Pro Leu Gly Arg Thr Ile Leu Asp Thr Pro Leu Ala

20 25 30

Leu Tyr Arg Gln Pro Asp Gly Val ValAla Ala Leu Leu Asp Ile Cys

35 40 45

Pro His Arg Phe Ala Pro Leu Ser Asp Gly Ile Leu Val Asn Gly His

50 55 60

Leu Gln Cys Pro Tyr His Gly Leu Glu Phe Asp Gly Gly Gly Gln Cys

65 70 75 80

Val His Asn Pro His Gly Asn Gly Ala Arg Pro Ala Ser Leu Asn Val

85 90 95

Arg Ser Phe Pro Val Val Glu Arg Asp Ala Leu Ile Trp Ile Trp Pro

100 105 110

Gly Asp Pro Ala Leu Ala Asp Pro Gly Ala Ile Pro Asp Phe Gly Cys

115 120 125

Arg Val Asp Pro Ala Tyr Arg Thr Val Gly Gly Tyr Gly His Val Asp

130 135 140

Cys Asn Tyr Lys Leu Leu Val Asp Asn Leu Met Asp Leu Gly His Ala

145 150 155 160

Gln Tyr Val His Arg Ala Asn Ala Gln Thr Asp Ala Phe Asp Arg Leu

165 170 175

Glu Arg Glu Val Ile Val Gly Asp Gly Glu Ile Gln Ala Leu Met Lys

180 185 190

Ile Pro Gly Gly Thr Pro Ser Val Leu Met Ala Lys Phe Leu Arg Gly

195 200 205

Ala Asn Thr Pro Val Asp Ala Trp Asn Asp Ile Arg Trp Asn Lys Val

210 215 220

Ser Ala Met Leu Asn Phe Ile Ala Val Ala Pro Glu Gly Thr Pro Lys

225 230 235 240

Glu Gln Ser Ile His Ser Arg Gly Thr His Ile Leu Thr Pro Glu Thr

245 250 255

Glu Ala Ser Cys His Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Arg Asn Phe Gly Ile

260 265 270

Asp Asp Pro Glu Met Asp Gly Val Leu Arg Ser Trp Gln Ala Gln Ala

275 280 285

Leu Val Lys Glu Asp Lys Val Val Val Glu Ala Ile Glu Arg Arg Arg

290 295 300

Ala Tyr Val Glu Ala Asn Gly Ile Arg Pro Ala Met Leu Ser Cys Asp

305 310 315 320

Glu Ala Ala Val Arg Val Ser Arg Glu Ile Glu Lys Leu Glu Gln Leu

325 330 335

Glu Ala Ala

<210>13

<211>455

<212>PRT

<213>根癌土壤杆菌

<400>13

Met Leu His Gly Ala Ser Ser Arg Pro Ala Thr Ala Arg Lys Ser Ser

1 5 10 15

Gly Leu Ser Gly Thr Val Arg Ile Pro Gly Asp Lys Ser Ile Ser His

20 25 30

Arg Ser Phe Met Phe Gly Gly Leu Ala Ser Gly Glu Thr Arg Ile Thr

35 40 45

Gly Leu Leu Glu Gly Glu Asp Val Ile Asn Thr Gly Lys Ala Met Gln

50 55 60

Ala Met Gly Ala Arg Ile Arg Lys Glu Gly Asp Thr Trp Ile Ile Asp

65 70 75 80

Gly Val Gly Asn Gly Gly Leu Leu Ala Pro Glu Ala Pro Leu Asp Phe

85 90 95

Gly Asn Ala Ala Thr Gly Cys Arg Leu Thr Met Gly Leu Val Gly Val

100 105 110

Tyr Asp Phe Asp Ser Thr Phe Ile Gly Asp Ala Ser Leu Thr Lys Arg

115 120 125

Pro Met Gly Arg Val Leu Asn Pro Leu Arg Glu Met Gly Val Gln Val

130 135 140

Lys Ser Glu Asp Gly Asp Arg Leu Pro Val Thr Leu Arg Gly Pro Lys

145 150 155 160

Thr Pro Thr Pro Ile Thr Tyr Arg Val Pro Met Ala Ser Ala Gln Val

165 170 175

Lys Ser Ala Val Leu Leu Ala Gly Leu Asn Thr Pro Gly Ile Thr Thr

180 185 190

Val Ile Glu Pro Ile Met Thr Arg Asp His Thr Glu Lys Met Leu Gln

195 200 205

Gly Phe Gly Ala Asn Leu Thr Val Glu Thr Asp Ala Asp Gly Val Arg

210 215 220

Thr Ile Arg Leu Glu Gly Arg Gly Lys Leu Thr Gly Gln Val Ile Asp

225 230 235 240

Val Pro Gly Asp Pro Ser Ser Thr Ala Phe Pro Leu Val Ala Ala Leu

245 250 255

Leu Val Pro Gly Ser Asp Val Thr Ile Leu Asn Val Leu Met Asn Pro

260 265 270

Thr Arg Thr Gly Leu Ile Leu Thr Leu Gln Glu Met Gly Ala Asp Ile

275 280 285

Glu Val Ile Asn Pro Arg Leu Ala Gly Gly Glu Asp Val Ala Asp Leu

290 295 300

Arg Val Arg Ser Ser Thr Leu Lys Gly Val Thr Val Pro Glu Asp Arg

305 310 315 320

Ala Pro Ser Met Ile Asp Glu Tyr Pro Ile Leu Ala Val Ala Ala Ala

325 330 335

Phe Ala Glu Gly Ala Thr Val Met Asn Gly Leu Glu Glu Leu Arg Val

340 345 350

Lys Glu Ser Asp Arg Leu Ser Ala Val Ala Asn Gly Leu Lys Leu Asn

355 360 365

Gly Val Asp Cys Asp Glu Gly Glu Thr Ser Leu Val Val Arg Gly Arg

370 375 380

Pro Asp Gly Lys Gly Leu Gly Asn Ala Ser Gly Ala Ala Val Ala Thr

385 390 395 400

His Leu Asp His Arg Ile Ala Met Ser Phe Leu Val Met Gly Leu Val

405 410 415

Ser Glu Asn Pro Val Thr Val Asp Asp Ala Thr Met Ile Ala Thr Ser

420 425 430

Phe Pro Glu Phe Met Asp Leu Met Ala Gly Leu Gly Ala Lys Ile Glu

435 440 445

Leu Ser Asp Thr Lys Ala Ala

450 455

<210>14

<211>448

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>来源于莴苣的变体TIPA EPSPS

<400>14

Lys Pro Ser Thr Ala Pro Glu Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu

1 5 10 15

Ile Ser Gly Thr Val Asn Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg

20 25 30

Ile Leu Leu Leu Ala Ala Leu Ser Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn

35 40 45

Leu Leu Asn Ser Asp Asp Val His Tyr Met Leu Gly Ala Leu Arg Ala

50 55 60

Leu Gly Leu His Val Glu Glu Asn Gly Ala Leu Lys Arg Ala Ile Val

65 70 75 80

Glu Gly Cys Gly Gly Val Phe Pro Val Gly Arg Glu Ser Lys Asp Glu

85 90 95

Ile Gln Leu Phe Leu Gly Asn Ala Gly Ile Ala Met Arg Ala Leu Thr

100 105 110

Ala Ala Val Thr Ala Ala Gly Gly Ser Ser Ser Tyr Ile Leu Asp Gly

115 120 125

Val Pro Arg Met Arg Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Thr Gly Leu

130 135 140

Lys Gln Leu Gly Ala Asp Val Asp Cys Phe Leu Gly Thr Asp Cys Pro

145 150 155 160

Pro Val Arg Val Val Gly Ser Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys

165 170 175

Leu Ser Gly Ser Ile Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala

180 185 190

Ala Pro Leu Ala Leu Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Ile Asp Lys Leu

195 200 205

Ile Ser Ile Pro Tyr Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe

210 215 220

Gly Val Ser Val Gln His Ser Asp Thr Trp Asp Arg Phe His Val Gln

225 230 235 240

Gly Gly Gln Lys Tyr Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp

245 250 255

Ala Ser Ser Ala Ser Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Ile Thr Gly Gly

260 265 270

Thr Ile Thr Val Glu Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val

275 280 285

Lys Phe Ala Glu Val Leu Gly Gln Met Gly Ala Gln Val Thr Trp Thr

290 295 300

Glu Asn Ser Val Thr ValLys Gly Pro Pro Arg Asp Pro Ser Gly Arg

305 310 315 320

Lys His Leu Arg Pro Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val

325 330 335

Ala Met Thr Leu Ala Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala

340 345 350

Ile Arg Asp Val Ala Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile

355 360 365

Ala Ile Cys Thr Glu Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly

370 375 380

Pro Asp Tyr Cys Ile Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Val Thr Ala

385 390 395 400

Ile Asp Thr Tyr Asp Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala

405 410 415

Ala Cys Ala Asp Val Ala Val Thr Ile Lys Asp Pro Gly Cys Thr Arg

420 425 430

Lys Thr Phe Pro Asp Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Ala Lys His

435 440 445

<210>15

<211>434

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>来源于玉米的变体TIPA EPSPS

<400>15

Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr Val Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu

1 5 10 15

Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu Ala Ala Leu Ser Glu Gly Thr Thr Val

20 25 30

Val Asp Asn Leu Leu Asn Ser Glu Asp Val His Tyr Met Leu Gly Ala

35 40 45

Leu Arg Thr Leu Gly Leu Ser Val Glu Ala Asp Lys Ala Ala Lys Arg

50 55 60

Ala Val Val Val Gly Cys Gly Gly Lys Phe Pro Val Glu Asp Ala Lys

65 70 75 80

Glu Glu Val Gln Leu Phe Leu Gly Asn Ala Gly Ile Ala Met Arg Ala

85 90 95

Leu Thr Ala Ala Val Thr Ala Ala Gly Gly Asn Ala Thr Tyr Val Leu

100 105 110

Asp Gly Val Pro Arg Met Arg Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val

115 120 125

Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala Asp Val Asp Cys Phe Leu Gly Thr Asp

130 135 140

Cys Pro Pro Val Arg Val Asn Gly Ile Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys

145 150 155 160

Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile Ser Ser Gln Tyr Leu Ser Ala Leu Leu

165 170 175

Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Ile Asp

180 185 190

Lys Leu Ile Ser Ile Pro Tyr Val Glu Met Thr Leu Arg Leu Met Glu

195 200 205

Arg Phe Gly Val Lys Ala Glu His Ser Asp Ser Trp Asp Arg Phe Tyr

210 215 220

Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr Lys Ser Pro Lys Asn Ala Tyr Val Glu

225 230 235 240

Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Ile Thr

245 250 255

Gly Gly Thr Val Thr Val Glu Gly Cys Gly Thr Thr Ser Leu Gln Gly

260 265 270

Asp Val Lys Phe Ala Glu Val Leu Glu Met Met Gly Ala Lys Val Thr

275 280 285

Trp Thr Glu Thr Ser Val Thr Val Thr Gly Pro Pro Arg Glu Pro Phe

290 295 300

Gly Arg Lys His Leu Lys Ala Ile Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro

305 310 315 320

Asp Val Ala Met Thr Leu Ala Val Val Ala Leu Phe Ala Asp Gly Pro

325 330 335

Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg

340 345 350

Met Val Ala Ile Arg Thr Glu Leu Thr Lys Leu Gly Ala Ser Val Glu

355 360 365

Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Ile Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Val

370 375 380

Thr Ala Ile Asp Thr Tyr Asp Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser

385 390 395 400

Leu Ala Ala Cys Ala Glu Val Pro Val Thr Ile Arg Asp Pro Gly Cys

405 410 415

Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp Tyr Phe Asp Val Leu Ser Thr Phe Val

420 425 430

Lys Asn

<210>16

<211>428

<212>PRT

<213>野油菜黄单胞菌

<400>16

Met Lys Ile Tyr Lys Leu Gln Thr Pro Val Asn Ala Ile Leu Glu Asn

1 5 10 15

Ile Ala Ala Asp Lys Ser Ile Ser His Arg Phe Ala Ile Phe Ser Leu

20 25 30

Leu Thr Gln Glu Glu Asn Lys Ala Gln Asn Tyr Leu Leu Ala Gln Asp

35 40 45

Thr Leu Asn Thr Leu Glu Ile Ile Lys Asn Leu Gly Ala Lys Ile Glu

50 55 60

Gln Lys Asp Ser Cys Val Lys Ile Ile Pro Pro Lys Glu Ile Leu Ser

65 70 75 80

Pro Asn Cys Ile Leu Asp Cys Gly Asn Ser Gly Thr Ala Met Arg Leu

85 90 95

Met Ile Gly Phe Leu Ala Gly Ile Ser Gly Phe Phe Val Leu Ser Gly

100 105 110

Asp Lys Tyr Leu Asn Asn Arg Pro Met Arg Arg Ile Ser Lys Pro Leu

115 120 125

Thr Gln Ile Gly Ala Arg Ile Tyr Gly Arg Asn Glu Ala Asn Leu Ala

130 135 140

Pro Leu Cys Ile Glu Gly Gln Lys Leu Lys Ala Phe Asn Phe Lys Ser

145 150 155 160

Glu Ile Ser Ser Ala Gln Val Lys Thr Ala Met Ile Leu Ser Ala Phe

165 170 175

Arg Ala Asp Asn Val Cys Thr Phe Ser Glu Ile Ser Leu Ser Arg Asn

180 185 190

His Ser Glu Asn Met Leu Lys Ala Met Lys Ala Pro Ile Arg Val Ser

195 200 205

Asn Asp Gly Leu Ser Leu Glu Ile Asn Pro Leu Lys Lys Pro Leu Lys

210 215 220

Ala Gln Asn Ile Ile Ile Pro Asn Asp Pro Ser Ser Ala Phe Tyr Phe

225 230 235 240

Val Leu Ala Ala Ile Ile Leu Pro Lys Ser Gln Ile Ile Leu Lys Asn

245 250 255

Ile Leu Leu Asn Pro Thr Arg Ile Glu Ala Tyr Lys Ile Leu Gln Lys

260 265 270

Met Gly Ala Lys Leu Glu Met Thr Ile Thr Gln Asn Asp Phe Glu Thr

275 280 285

Ile Gly Glu Ile Arg Val Glu Ser Ser Lys Leu Asn Gly Ile Glu Val

290 295 300

Lys Asp Asn Ile Ala Trp Leu Ile Asp Glu Ala Pro Ala Leu Ala Ile

305 310 315 320

Ala Phe Ala Leu Ala Lys Gly Lys Ser Ser Leu Ile Asn Ala Lys Glu

325 330 335

Leu Arg Val Lys Glu Ser Asp Arg Ile Ala Val Met Val Glu Asn Leu

340 345 350

Lys Leu Cys Gly Val Glu Ala Arg Glu Leu Asp Asp Gly Phe Glu Ile

355 360 365

Glu Gly Gly Cys Glu Leu Lys Ser Ser Lys Ile Lys Ser Tyr Gly Asp

370 375 380

His Arg Ile Ala Met Ser Phe Ala Ile Leu Gly Leu Leu Cys Gly Ile

385 390 395 400

Glu Ile Asp Asp Ser Asp Cys Ile Lys Thr Ser Phe Pro Asn Phe Ile

405 410 415

Glu Ile Leu Ser Asn Leu Gly Ala Arg Ile Asp Tyr

420 425

<210>17

<211>443

<212>PRT

<213>新月柄杆菌

<400>17

Met Ser Leu Ala Gly Leu Lys Ser Ala Pro Gly Gly Ala Leu Arg Gly

1 5 10 15

Ile Val Arg Ala Pro Gly Asp Lys Ser Ile Ser His Arg Ser Met Ile

20 25 30

Leu Gly Ala Leu Ala Thr Gly Thr Thr Thr Val Glu Gly Leu Leu Glu

35 40 45

Gly Asp Asp Val Leu Ala Thr Ala Arg Ala Met Gln Ala Phe Gly Ala

50 55 60

Arg Ile Glu Arg Glu Gly Val Gly Arg Trp Arg Ile Glu Gly Lys Gly

65 70 75 80

Gly Phe Glu Glu Pro Val Asp Val Ile Asp Cys Gly Asn Ala Gly Thr

85 90 95

Gly Val Arg Leu Ile Met Gly Ala Ala Ala Gly Phe Ala Met Cys Ala

100 105 110

Thr Phe Thr Gly Asp Gln Ser Leu Arg Gly Arg Pro Met Gly Arg Val

115 120 125

Leu Asp Pro Leu Ala Arg Met Gly Ala Thr Trp Leu Gly Arg Asp Lys

130 135 140

Gly Arg Leu Pro Leu Thr Leu Lys Gly Gly Asn Leu Arg Gly Leu Asn

145 150 155 160

Tyr Thr Leu Pro Met Ala Ser Ala Gln Val Lys Ser Ala Val Leu Leu

165 170 175

Ala Gly Leu His Ala Glu Gly Gly Val Glu Val Ile Glu Pro Glu Ala

180 185 190

Thr Arg Asp His Thr Glu Arg Met Leu Arg Ala Phe Gly Ala Glu Val

195 200 205

Ile Val Glu Asp Arg Lys Ala Gly Asp Lys Thr Phe Arg His Val Arg

210 215 220

Leu Pro Glu Gly Gln Lys Leu Thr Gly Thr His Val Ala Val Pro Gly

225 230 235 240

Asp Pro Ser Ser Ala Ala Phe Pro Leu Val Ala Ala Leu Ile Val Pro

245 250 255

Gly Ser Glu Val Thr Val Glu Gly Val Met Leu Asn Glu Leu Arg Thr

260 265 270

Gly Leu Phe Thr Thr Leu Gln Glu Met Gly Ala Asp Leu Val Ile Ser

275 280 285

Asn Val Arg Val Ala Ser Gly Glu Glu Val Gly Asp Ile Thr Ala Arg

290 295 300

Tyr Ser Gln Leu Lys Gly Val Val Val Pro Pro Glu Arg Ala Pro Ser

305 310 315 320

Met Ile Asp Glu Tyr Pro Ile Leu Ala Val Ala Ala Ala Phe Ala Ser

325 330 335

Gly Glu Thr Val Met Arg Gly Val Gly Glu Met Arg Val Lys Glu Ser

340 345 350

Asp Arg Ile Ser Leu Thr Ala Asn Gly Leu Lys Ala Cys Gly Val Gln

355 360 365

Val Val Glu Glu Pro Glu Gly Phe Ile Val Thr Gly Thr Gly Gln Pro

370 375 380

Pro Lys Gly Gly Ala Thr Val Val Thr His Gly Asp His Arg Ile Ala

385 390 395 400

Met Ser His Leu Ile Leu Gly Met Ala Ala Gln Ala Glu Val Ala Val

405 410 415

Asp Glu Pro Gly Met Ile Ala Thr Ser Phe Pro Gly Phe Ala Asp Leu

420 425 430

Met Arg Gly Leu Gly Ala Thr Leu Ala Glu Ala

435 440

<210>18

<211>441

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工引物

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(441)

<400>18

atg ata gag gtg aaa ccg att aac gca gag gat acc tat gaa cta agg 48

Met Ile Glu Val Lys Pro Ile Asn Ala Glu Asp Thr Tyr Glu Leu Arg

1 5 10 15

cat aga ata ctc aga cca aac cag ccg ata gaa gcg tgt atg ttt gaa 96

His Arg Ile Leu Arg Pro Asn Gln Pro Ile Glu Ala Cys Met Phe Glu

20 25 30

agc gat tta ctt cgt ggt gca ttt cac tta ggc ggc ttt tac agg ggc 144

Ser Asp Leu Leu Arg Gly Ala Phe His Leu Gly Gly Phe Tyr Arg Gly

35 40 45

aaa ctg att tcc ata gct tca ttc cac cag gcc gag cac tcg gaa ctc 192

Lys Leu Ile Ser Ile Ala Ser Phe His Gln Ala Glu His Ser Glu Leu

50 55 60

caa ggc cag aaa cag tac cag ctc cga ggt atg gct acc ttg gaa ggt 240

Gln Gly Gln Lys Gln Tyr Gln Leu Arg Gly Met Ala Thr Leu Glu Gly

65 70 75 80

tat cgt gag cag aaa gcg gga tca act cta gtt aaa cac gct gaa gaa 288

Tyr Arg Glu Gln Lys Ala Gly Ser Thr Leu Val Lys His Ala Glu Glu

85 90 95

atc ctt cgt aag agg ggg gcg gac atg ctt tgg tgt aat gcg agg aca 336

Ile Leu Arg Lys Arg Gly Ala Asp Met Leu Trp Cys Asn Ala Arg Thr

100 105 110

tcc gcc tca ggc tac tac aaa aag tta ggc ttc agc gag cag gga gag 384

Ser Ala Ser Gly Tyr Tyr Lys Lys Leu Gly Phe Ser Glu Gln Gly Glu

115 120 125

ata ttt gac acg ccg cca gta gga cct cac atc ctg atg tat aaa agg 432

Ile Phe Asp Thr Pro Pro Val Gly Pro His Ile Leu Met Tyr Lys Arg

130 135 140

atc aca taa 441

Ile Thr

145

<210>19

<211>146

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成构建体

<400>19

Met Ile Glu Val Lys Pro Ile Asn Ala Glu Asp Thr Tyr Glu Leu Arg

1 5 10 15

His Arg Ile Leu Arg Pro Asn Gln Pro Ile Glu Ala Cys Met Phe Glu

20 25 30

Ser Asp Leu Leu Arg Gly Ala Phe His Leu Gly Gly Phe Tyr Arg Gly

35 40 45

Lys Leu Ile Ser Ile Ala Ser Phe His Gln Ala Glu His Ser Glu Leu

50 55 60

Gln Gly Gln Lys Gln Tyr Gln Leu Arg Gly Met Ala Thr Leu Glu Gly

65 70 75 80

Tyr Arg Glu Gln Lys Ala Gly Ser Thr Leu Val Lys His Ala Glu Glu

85 90 95

Ile Leu Arg Lys Arg Gly Ala Asp Met Leu Trp Cys Asn Ala Arg Thr

100 105 110

Ser Ala Ser Gly Tyr Tyr Lys Lys Leu Gly Phe Ser Glu Gln Gly Glu

115 120 125

Ile Phe Asp Thr Pro Pro Val Gly Pro His Ile Leu Met Tyr Lys Arg

130 135 140

Ile Thr

145

<210>20

<211>433

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>基于PClSV启动子序列

<400>20

agatcttgag ccaatcaaag aggagtgatg tagacctaaa gcaataatgg agccatgacg 60

taagggctta cgcccatacg aaataattaa aggctgatgt gacctgtcgg tctctcagaa 120

cctttacttt ttatgtttgg cgtgtatttt taaatttcca cggcaatgac gatgtgaccc 180

aacgagatct tgagccaatc aaagaggagt gatgtagacc taaagcaata atggagccat 240

gacgtaaggg cttacgccca tacgaaataa ttaaaggctg atgtgacctg tcggtctctc 300

agaaccttta ctttttatat ttggcgtgta tttttaaatt tccacggcaa tgacgatgtg 360

acctgtgcat ccgctttgcc tataaataag ttttagtttg tattgatcga cacggtcgag 420

aagacacggc cat 433

<210>21

<211>57

<212>PRT

<213>豌豆

<400>21

Met Ala Ser Met Ile Ser Ser Ser Ala Val Thr Thr Val Ser Arg Ala

1 5 10 15

Ser Arg Gly Gln Ser Ala Ala Met Ala Pro Phe Gly Gly Leu Lys Ser

20 25 30

Met Thr Gly Phe Pro Val Arg Lys Val Asn Thr Asp Ile Thr Ser Ile

35 40 45

Thr Ser Asn Gly Gly Arg Val Lys Cys

50 55

<210>22

<211>85

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>22

Met Ala Ser Ser Met Leu Ser Ser Ala Thr Met Val Ala Ser Pro Ala

1 5 10 15

Gln Ala Thr Met Val Ala Pro Phe Asn Gly Leu Lys Ser Ser Ala Ala

20 25 30

Phe Pro Ala Thr Arg Lys Ala Asn Asn Asp Ile Thr Ser Ile Thr Ser

35 40 45

Asn Gly Gly Arg Val Asn Cys Met Gln Val Trp Pro Pro Ile Glu Lys

50 55 60

Lys Lys Phe Glu Thr Leu Ser Tyr Leu Pro Asp Leu Thr Asp Ser Gly

65 70 75 80

Gly Arg Val Asn Cys

85

<210>23

<211>76

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>23

Met Ala Gln Val Ser Arg Ile Cys Asn Gly Val Gln Asn Pro Ser Leu

1 5 10 15

Ile Ser Asn Leu Ser Lys Ser Ser Gln Arg Lys Ser Pro Leu Ser Val

20 25 30

Ser Leu Lys Thr Gln Gln His Pro Arg Ala Tyr Pro Ile Ser Ser Ser

35 40 45

Trp Gly Leu Lys Lys Ser Gly Met Thr Leu Ile Gly Ser Glu Leu Arg

50 55 60

Pro Leu Lys Val Met Ser Ser Val Ser Thr Ala Cys

65 70 75

<210>24

<211>76

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>24

Met Ala Gln Val Ser Arg Ile Cys Asn Gly Val Gln Asn Pro Ser Leu

1 5 10 15

Ile Ser Asn Leu Ser Lys Ser Ser Gln Arg Lys Ser Pro Leu Ser Val

20 25 30

Ser Leu Lys Thr Gln Gln His Pro Arg Ala Tyr Pro Ile Ser Ser Ser

35 40 45

Trp Gly Leu Lys Lys Ser Gly Met Thr Leu Ile Gly Ser Glu Leu Arg

50 55 60

Pro Leu Lys Val Met Ser Ser Val Ser Thr Ala Cys

65 70 75

<210>25

<211>72

<212>PRT

<213>牵牛花

<400>25

Met Ala Gln Ile Asn Asn Met Ala Gln Gly Ile Gln Thr Leu Asn Pro

1 5 10 15

Asn Ser Asn Phe His Lys Pro Gln Val Pro Lys Ser Ser Ser Phe Leu

20 25 30

Val Phe Gly Ser Lys Lys Leu Lys Asn Ser Ala Asn Ser Met Leu Val

35 40 45

Leu Lys Lys Asp Ser Ile Phe Met Gln Lys Phe Cys Ser Phe Arg Ile

50 55 60

Ser Ala Ser Val Ala Thr Ala Cys

65 70

<210>26

<211>69

<212>PRT

<213>小麦

<400>26

Met Ala Ala Leu Val Thr Ser Gln Leu Ala Thr Ser Gly Thr Val Leu

1 5 10 15

Ser Val Thr Asp Arg Phe Arg Arg Pro Gly Phe Gln Gly Leu Arg Pro

20 25 30

Arg Asn Pro Ala Asp Ala Ala Leu Gly Met Arg Thr Val Gly Ala Ser

35 40 45

Ala Ala Pro Lys Gln Ser Arg Lys Pro His Arg Phe Asp Arg Arg Cys

50 55 60

Leu Ser Met Val Val

65

<210>27

<211>171

<212>DNA

<213>豌豆

<400>27

atggcttcta tgatatcctc ttccgctgtg acaacagtca gccgtgcctc tagggggcaa 60

tccgccgcaa tggctccatt cggcggcctc aaatccatga ctggattccc agtgaggaag 120

gtcaacactg acattacttc cattacaagc aatggtggaa gagtaaagtg c 171

<210>28

<211>255

<212>DNA

<213>拟南芥

<400>28

atggcttcct ctatgctctc ttccgctact atggttgcct ctccggctca ggccactatg 60

gtcgctcctt tcaacggact taagtcctcc gctgccttcc cagccacccg caaggctaac 120

aacgacatta cttccatcac aagcaacggc ggaagagtta actgtatgca ggtgtggcct 180

ccgattgaaa agaagaagtt tgagactctc tcttaccttc ctgaccttac cgattccggt 240

ggtcgcgtca actgc 255

<210>29

<211>228

<212>DNA

<213>拟南芥

<400>29

atggcgcaag ttagcagaat ctgcaatggt gtgcagaacc catctcttat ctccaatctc 60

tcgaaatcca gtcaacgcaa atctccctta tcggtttctc tgaagacgca gcagcatcca 120

cgagcttatc cgatttcgtc gtcgtgggga ttgaagaaga gtgggatgac gttaattggc 180

tctgagcttc gtcctcttaa ggtcatgtct tctgtttcca cggcgtgc 228

<210>30

<211>228

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工引物

<400>30

atggcgcaag ttagcagaat ctgcaatggt gtgcagaacc catctcttat ctccaatctc 60

tcgaaatcca gtcaacgcaa atctccctta tcggtttctc tgaagacgca gcagcatcca 120

cgagcttatc cgatttcgtc gtcgtgggga ttgaagaaga gtgggatgac gttaattggc 180

tctgagcttc gtcctcttaa ggtcatgtct tctgtttcca cggcgtgc 228

<210>31

<211>216

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工引物

<400>31

atggcccaga tcaacaacat ggcccagggc atccagaccc tgaaccctaa ctctaacttc 60

cacaagccgc aagtgcccaa gtctagctcc ttcctcgtgt tcggctccaa gaagctcaag 120

aatagcgcca attccatgct ggtcctgaag aaagactcga tcttcatgca gaagttctgc 180

tcctttcgca tcagtgcttc ggttgcgact gcctgc 216

<210>32

<211>207

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工引物

<400>32

atggcggcac tggtgacctc ccagctcgcg acaagcggca ccgtcctgtc ggtgacggac 60

cgcttccggc gtcccggctt ccagggactg aggccacgga acccagccga tgccgctctc 120

gggatgagga cggtgggcgc gtccgcggct cccaagcaga gcaggaagcc acaccgtttc 180

gaccgccggt gcttgagcat ggtcgtc 207

Claims

1.用于控制农作物生长环境中的杂草生长的方法，其包括：

a)将除草有效量的麦草畏除草剂施用于农作物生长环境；

b)在施用所述除草剂的21天内将双子叶植物的转基因种子种植在所述农作物生长环境的土壤中，所述双子叶植物的转基因种子包含编码麦草畏降解酶活性的核酸，所述核酸选自SEQ ID NOs：1、3、5、7、9和11或编码选自SEQ ID NOs：2、4、6、8、10和12的多肽的核酸序列；和

c)允许所述种子发芽成植物。

2.权利要求1的方法，其中所述除草剂在种子种植之前、同时或之后施用。

3.权利要求1的方法，其中在所述除草剂施用前或后12、10、7或3天内将所述转基因种子种植到土壤内。

4.权利要求1的方法，其中所述转基因种子在处理土壤后18天-0天发芽。

5.权利要求1的方法，其中所述转基因种子在处理土壤后14天-0天发芽。

6.权利要求1的方法，其中所述转基因种子在处理土壤后7天-0天发芽。

7.权利要求1的方法，其中所述除草有效量的麦草畏是2.5g/ha-10,080g/ha。

8.权利要求1的方法，其中所述核酸选自(1)编码SEQ ID NO：8的多肽的核酸序列，和(2)由SEQ ID NO：7的序列所示的核酸序列。

9.权利要求1的方法，其中所述双子叶植物选自苜蓿、菜豆、嫩茎花椰菜、甘蓝、胡萝卜、花椰菜、芹菜、棉花、黄瓜、茄子、莴苣、甜瓜、豌豆、胡椒、西葫芦、萝卜、油菜籽、菠菜、大豆、南瓜、番茄和西瓜。

10.权利要求9的方法，其中所述双子叶植物是大豆、棉花或油菜籽植物。

11.权利要求1的方法，其进一步包括在所述种子发芽后施用麦草畏除草剂的第二次处理。

12.权利要求11的方法，其中所述第二次处理在选自下述的时间进行：1-2叶和3-4叶阶段之间、在开花前、在开花时、在开花后和在种子形成时。

13.权利要求1的方法，其包括允许从麦草畏除草剂的施用到第二种农作物生长环境的喷雾偏差接触所述植物，其中所述植物对于所述喷雾偏差耐受。

14.用于控制农作物生长环境中的杂草生长的方法，其包括：

a)将除草有效量的麦草畏除草剂施用于农作物生长环境；

b)在施用所述麦草畏除草剂的15天内将单子叶植物的转基因种子种植在所述农作物生长环境的土壤中，所述单子叶植物的转基因种子表达编码麦草畏单加氧酶的核酸，所述核酸编码选自SEQ ID NO：2、4、6、8、10和12的多肽，其中所述除草有效量是不损害转基因种子或由其发芽的植物但将损害具有相同基因型但缺乏所述核酸、且与所述转基因种子在相同的条件下种植的种子或由其发芽的植物的量；和

c)允许所述种子发芽成植物。

15.权利要求14的方法，其中所述核酸选自(1)编码SEQ ID NO：8的多肽的核酸序列，和(2)由SEQ ID NO：7的序列所示的核酸序列。

16.权利要求14的方法，其中所述除草剂在所述种子种植之前、同时或之后施用。

17.权利要求14的方法，其中在所述除草剂施用前或后12、10、7或3天内将所述转基因种子种植到土壤内。

18.权利要求14的方法，其中所述转基因种子在处理土壤后18天-0天发芽。

19.权利要求14的方法，其中所述转基因种子在处理土壤后14天-0天发芽。

20.权利要求14的方法，其中所述转基因种子在处理土壤后7天-0天发芽。

21.权利要求14的方法，其中所述除草有效量的麦草畏是至少175g/ha。

22.权利要求14的方法，其中所述除草有效量的麦草畏是250g/ha-600g/ha。

23.权利要求14的方法，其中所述单子叶植物选自玉米、稻、高粱、小麦、黑麦、粟、甘蔗、燕麦、黑小麦、柳枝稷和草坪草。

24.权利要求23的方法，其中所述单子叶植物是玉米或高粱植物。

25.权利要求14的方法，其进一步包括在所述种子发芽后施用麦草畏除草剂的第二次处理。

26.权利要求25的方法，其中所述第二次处理在选自下述的时间进行：1-2叶和3-4叶阶段之间、在开花前、在开花时、在开花后和在种子形成时。

27.用于控制田地中的草甘膦耐受性杂草的方法，其包括：

a)在包含草甘膦耐受性杂草或其种子的田地中种植转基因种子，其中所述种子包含赋予草甘膦耐受性的转基因和编码麦草畏单加氧酶的转基因，编码麦草畏单加氧酶的转基因包含选自下述的核酸序列(1)编码SEQ ID NO：8的多肽的核酸序列，和(2)由SEQ ID NO：7的序列所示的核酸序列；

b)使所述种子生长成植物；和

c)用有效控制所述草甘膦耐受性杂草的杂草生长的量的麦草畏除草剂和草甘膦处理田地。

28.权利要求27的方法，其中赋予草甘膦耐受性的转基因编码选自下述的蛋白质：草甘膦抗性5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶、草甘膦氧化还原酶、草甘膦-N-乙酰转移酶和草甘膦脱羧酶。

29.权利要求28的方法，其中编码草甘膦-N-乙酰转移酶的转基因由SEQ ID NO：18的核酸序列所示或编码SEQ ID NO：19的多肽。

30.权利要求27的方法，其中所述种子来自选自下述的双子叶植物：苜蓿、菜豆、嫩茎花椰菜、甘蓝、胡萝卜、花椰菜、芹菜、棉花、黄瓜、茄子、莴苣、甜瓜、豌豆、胡椒、西葫芦、萝卜、油菜籽、菠菜、大豆、南瓜、番茄和西瓜。

31.权利要求30的方法，其中所述双子叶植物是大豆、棉花或油菜籽植物。

32.权利要求27的方法，其中所述种子来自选自下述的单子叶植物：玉米、稻、高粱、小麦、黑麦、粟、甘蔗、燕麦、黑小麦、柳枝稷和草坪草。

33.权利要求32的方法，其中所述单子叶植物是玉米或高粱植物。

34.权利要求27的方法，其中处理田地在选自下述的时间进行：1-2叶和3-4叶阶段之间、在开花前、在开花时、在开花后和在种子形成时。

35.权利要求27的方法，其中处理田地在种子发芽后进行。

36.权利要求27的方法，其中处理田地在步骤a)前4周、3周、2周、1周或0周进行。

37.权利要求27的方法，其中处理田地与种子的种植同时进行。

38.权利要求27的方法，其中在所述除草剂施用前或后15、12、10、7或3天内将所述转基因种子种植到土壤内。

39.权利要求27的方法，其中所述转基因种子在处理土壤后0-18、14、7或1天发芽。

40.权利要求27的方法，其中麦草畏的量是2.5g/ha-10,080g/ha。

41.权利要求34的方法，其中草甘膦的量是200g/ha-1,600g/ha。

42.权利要求27的方法，其中所述麦草畏除草剂和草甘膦同时施用。

43.用于增加除草剂送递装置的使用效率的方法，其包括：

a)获得已用于送递包含麦草畏除草剂的第一种组合物的装置；

b)使用所述装置将第二种组合物送递给田地而无需首先彻底洗涤所述装置，从而使得包含麦草畏除草剂的除草剂残留物保留在所述装置中且与所述第二种组合物一起送递给田地，其中所述田地包含表达编码麦草畏单加氧酶的核酸的转基因双子叶植物，所述核酸选自(1)编码SEQ ID NO：8的多肽的核酸序列，和(2)由SEQ ID NO：7的序列所示的核酸序列，或用发芽成所述转基因双子叶植物的种子进行种植，并且其中所述除草剂残留物以不损害所述转基因双子叶植物但将损害具有相同基因型但缺乏所述编码麦草畏单加氧酶的核酸的植物的量存在。

44.权利要求43的方法，其中所述双子叶植物选自苜蓿、菜豆、嫩茎花椰菜、甘蓝、胡萝卜、花椰菜、芹菜、棉花、黄瓜、茄子、莴苣、甜瓜、豌豆、胡椒、西葫芦、萝卜、油菜籽、菠菜、大豆、南瓜、番茄和西瓜。

45.权利要求44的方法，其中所述双子叶植物是大豆、棉花或油菜籽植物。

46.用于控制农作物生长环境中的杂草生长的方法，其包括：

a)在包含杂草或其种子的田地中种植转基因种子，其中所述转基因种子包含赋予草甘膦耐受性的转基因和赋予麦草畏耐受性的转基因，所述赋予麦草畏耐受性的转基因编码包含选自SEQ ID NO：2、4、6、8、10和12的多肽序列的麦草畏单加氧酶；

b)用除草有效量的麦草畏、草甘膦或其混合物处理田地，其中所述种植和所述处理在单次经过所述田地中完成；和

c)使所述转基因种子生长成植物。

47.权利要求46的方法，其中赋予草甘膦耐受性的转基因编码选自下述的蛋白质：草甘膦抗性5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶、草甘膦氧化还原酶、和草甘膦-N-乙酰转移酶以及草甘膦脱羧酶。

48.权利要求47的方法，其中编码GAT的转基因由SEQ ID NO：18的核酸序列所示，或编码SEQ ID NO：19的多肽。

49.权利要求46的方法，其中赋予麦草畏耐受性的转基因编码包含选自下述的核酸序列：(a)编码SEQ ID NO：8的多肽的核酸序列，和(b)由SEQ ID NO：7的序列所示的核酸序列。

50.权利要求46的方法，其中所述转基因种子如果来自双子叶植物，那么选自苜蓿、菜豆、嫩茎花椰菜、甘蓝、胡萝卜、花椰菜、芹菜、棉花、黄瓜、茄子、莴苣、甜瓜、豌豆、胡椒、西葫芦、萝卜、油菜籽、菠菜、大豆、南瓜、番茄和西瓜。

51.权利要求50的方法，其中所述双子叶植物是大豆、棉花或油菜籽植物。

52.权利要求46的方法，其中所述转基因种子如果来自单子叶植物，那么选自玉米、稻、高粱、小麦、黑麦、粟、甘蔗、燕麦、黑小麦、柳枝稷和草坪草。

53.权利要求52的方法，其中所述单子叶植物是玉米或高粱植物。

54.权利要求46的方法，其中所述麦草畏的量是2.5g/ha-10,080g/ha。

55.权利要求46的方法，其中所述麦草畏的量是200g/ha-1,600g/ha。