BRPI0621609A2

BRPI0621609A2 - composição, usos de pelo menos um composto, e de uma composição, e, compostos

Info

Publication number: BRPI0621609A2
Application number: BRPI0621609-9A
Authority: BR
Inventors: Marc Heidl; Martin Stoeckli; Dominik Imfeld; Hugo Ziegler
Original assignee: Dsm Ip Assets Bv
Priority date: 2006-04-28
Filing date: 2006-04-28
Publication date: 2012-09-11
Also published as: JP2009535310A; CA2650578A1; US20090155347A1; KR101332578B1; EP2015726A1; DE502006008630D1; BRPI0621609B1; WO2007124770A1; US8293712B2; CA2650578C; JP5028474B2; US8722852B2; ES2358605T3; KR20090003363A; US20130012686A1; ATE493110T1; EP2015726B1

Abstract

COMPOSIçãO, USOS DE PELO MENOS UM COMPOSTO, E DE UMA COMPOSIçãO, E, COMPOSTOS. A composição cosmética que pode ser aplicada topicamente, compreende pelo menos um composto da fórmula geral (1) OH3 (OH2)14 (CH2) NH2 NH2 em que R' é H, alquila C1-C20, cicloalquila ou aril alquila C1-C4, n é 1-4, X é - O-, -Nu ou e R2 H ou alquila C1-C20, e pelo menos cita o composto II correspondente à fórmula acima (1) mas em que XR com X tendo o significado possível de -NH- é o resíduo de um alfa-aminoácido; o uso destes compostos e da composição para estimular a síntese das proteínas da membrana básica; e também tanto aqueles compostos da fórmula (1) em que X é ùNR - e quanto R e R são diferentes do H, e os compostos correspondentes à fórmula (i) mas em que XR' com X tendo o significado possível de NH é o resíduo tal como de um alfa-aminoácido.

Description

"COMPOSIÇÃO, USOS DE PELO MENOS UM COMPOSTO, E DE UMA COMPOSIÇÃO, E, COMPOSTOS"

A presente invenção diz respeito a uma composição cosmética, em particular a composição cosmética que pode ser aplicada topicamente, compreendendo pelo menos dois derivados de peptídeo particulares, para estimular a síntese das moléculas da membrana básica, em proteínas particular destes, e o uso destes derivados de peptídeos particulares para estimular a síntese das moléculas da membrana básica, em proteínas particular destas.

A membrana basal (BM) no campo epidérmico-dérmico tem diversas funções, pelo qual a função mais óbvia é fechar a ligação da epiderme à derme, e neste caminho garantir coerência estável mecanicamente de duas camadas de tecido. A "polaridade" e a construção da epiderme também são influenciadas pela membrana básica, e ao mesmo tempo a BM é uma demarcação clara entre a epiderme e derme. É assumido que a BM inicia a diferenciação epidérmica de queratinócitos e mantém o estado proliferativo da camada celular de base. Sob condições normais a BM também evita o contato direto de células epidérmicas com a derme. Após um dano com perda à BM, entretanto, origina-se o contato direto com a derme, após pelo qual as células muda seu comportamento e inicia o processo de cura do ferimento.

Ainda uma função importante de uma BM é a comunicação correta entre as células epidérmicas e dérmicas. Visto que a não função da epiderme e derme independentemente de um adicional, homeostase de pele normal requer a passagem regular de sinais bioquímicos em ambas direções entre os dois tipos de células. Em geral, este são moléculas pequenas que são produzidas em um compartimento e pode ser transportada seletivamente por intermédio da BM a fim de passar sua "mensagem" ao outro lado. Neste contexto, a BM tem a importante função de ativar como um filtro ativo e de passagem nas moléculas de sinal ou bloquear corretamente como requerido. A comunicaçao epidérmica-dérmica funcionando corretamente por intermédio da BM é essencial para a pele.

Uma própria BM pode voltar a ser dividida morfologicamente em três camadas, a camada lúcida, a camada densa e uma camada fibrorreticular. A camada lúcida é a região entre a células epidérmicas e uma camada densa e contém os hemidesmossomas, que são visíveis em uma BM como placas elétron-densa. Os hemidesmossomas ligam os queratinócitos de base, que são capazes de proliferação, a uma BM e são feitos até, inter alia, a partir de colágeno XVII (ou bpl80) e as integrinas alfa 6/beta 4. As anulações em colágeno XVII pode levar a pele frágil com formação de bolha freqüente (epidermólise bolhosa simples). A camada densa é uma estrutura plana (chapa) que consiste principalmente de colágeno IV.

Os constituintes de uma BM são proteínas essencialmente, proteoglicanos e glicosaminoglicanos. Um dos componentes importantes do complexo de ancoragem é laminina V. A laminina V é, inter alia, essencial para adesão epidérmica ao tecido dérmico, visto que as mutações em laminina V de outra maneira leva para diversas formas de formações de bolha da pele (ligação epidermólise bolhosa de Herlitz). A laminina V ligam-se as integrinas alfa 6/beta 4 de transmembrana dos hemidesmossomas em uma mão, e na outra mão a laminina V é ligada ao colágeno VII, que volta em forma de fibrilas de ancoragem na derme. O colágeno VII é o principal componente da camada fibrorreticular. Os colágenos das proteínas estruturais IV, VII, XVII e laminina V e as integrinas alfa 6, beta 4 são conseqüentemente, ao lado das proteínas adicionais, componentes principais essenciais para a construção de uma BM e os hemidesmossomas e são portanto importante para as funções corretas e diversas de uma BM na pele.

E conhecido que o período de idade do endógeno (idade relatada) ou exógeno (claramente relatado) manifesta no próprio em uma degeneração irreversível do tecido, em particular a pele, e torna-se crescente macroscopicamente visível na forma de dobras, flacidez, superfície áspera, pigmentação irregular etc. Estas mudanças originam-se devido à redução nas reações anabólicas (síntese) e um aumento na reação catabólica (análise) de colágenos e inter alia, também os componentes das proteínas da BM. As mudanças visíveis histologicamente são a concentração de fibras de elastina não estruturada diminuída (elastose), uma redução em fibras de colágeno, infiltração de mediadores de inflamação e atrofia da epiderme com queratinócitos não polares atípicos, por exemplo, diversas fibrilas de ancoragem a partir de uma BM na derme e a quantidade de colágeno VII, que as fibrilas são feitas de, diminuição rapidamente em idade da pele pela luz, e a estabilidade da ligação de uma BM à derme é portanto prejudicada. As outras proteínas de uma BM também irão parcialmente na redução da idade da pele e a organização estrutural de uma BM degenera com o aumento da idade.

As proteínas estruturais de uma BM mencionada são predominantemente expressadas pelos queratinócitos e também parcialmente pelos fibroblastos. As reações da síntese na matriz da pele são principalmente reguladas pelos polipeptídeos, denominados fatores e citocinas de desenvolvimento. Entre estes peptídeos, TGF-βΙ é um dos reguladores mais importantes envolvidos na reações da síntese desta matriz da pele. E também secretado na matriz pelos queratinócitos e fibroblastos. Compostos ativos fornecidos externamente que estimulam a síntese das proteínas de BM que devem em uma mão compensar a idade de degeneração relatada de uma BM e também já terá um caráter preventivo pela diminuição baixa lentamente em um conteúdo de uma proteína BM associado com a idade.

Foi observado agora que, surpreendentemente, uma clara melhora na aparência da pele e uma disseminação baixa da idade relatada da análise das proteínas de membrana básica são prosperamente atingidos com uma combinação de pelo menos um tri ativo cosmeticamente particular e pelo menos um derivado de tetrapeptídeo ativo cosmeticamente particular (denominados "compostos de acordo com a invenção" no seguinte) que estão presentes em composições cosméticas que podem ser aplicadas topicamente. Este é efetivo visto que os compostos de acordo com a invenção, podem ser difundidos rapidamente e uma concentração suficiente através do estrato córneo e a epiderme ao local de ação no limite da região entre a epiderme e a derme e conduzirá até lá uma estimulação rápida e poderosa na síntese das proteínas da membrana básica. Pode ser deste modo demonstrado que a concentração de colágeno IV, VII, XVII, a laminina V e que da integrina beta 4 é diminuída significativamente com uma combinação de pelo menos um derivado de tripeptídeo particular e pelo menos um derivado de tetrapeptídeo particular.

A presente invenção é definida nas reivindicações. Em particular, a presente invenção diz respeito a uma composição cosmética, em particular uma composição cosmética que pode ser aplicada topicamente, que compreende pelo menos um composto da fórmula geral (I)

<formula>formula see original document page 5</formula>

em que

R1 indica H, alquila C1-C20, cicloalquila ou aril alquila C1-C4,

η indica 1-4,

X indica-O-,-NH-ou-NR2-e

R indica H

ou alquila C1-C20;

e pelo menos um composto correspondente à fórmula acima (I), mas em que

XR1 com X no significado possível -NH- indica o radical de um alfa-aminoácido. A presente invenção também relata o uso dos compostos da fórmula acima (I) junto com os compostos correspondentes à fórmula acima (I), mas em que XR1 com X no significado possível -NH-, indica o radical de um alfa-aminoácido, para a preparação da composição definida acima e o cujo uso para estimular a síntese das moléculas da membrana básica, em proteínas particular destes.

A presente invenção também relata o uso dos compostos da fórmula acima (I) junto com compostos correspondentes à fórmula acima (I), mas em que XR1 com X no significado possível -NH- indica o radical de um alfa-aminoácido, para estimular a síntese das moléculas da membrana básica, em proteínas particular destes.

A presente invenção também relata aqueles compostos da fórmula geral acima (I) em que X indica -NR2- e tanto R1 quanto R2 são outros do que H, e também são os compostos correspondentes à fórmula geral acima (I), mas em que XR1 com X no significado possível -NH- indica o radical tal como de um alfa-aminoácido.

Nos compostos da fórmula (I) e nos compostos correspondentes à fórmula geral acima (I), mas em que XR¹ com X no significado possível -NH- indica o radical de um alfa-aminoácido, os aminoácidos podem estar presentes como racematos ou em sua forma DeL pura enantiomericamente.

As expressões gerais usadas acima são definidas como

seguintes:

"Alquila" é a ser entendido como significando radicais de hidrocarboneto saturado tato ramificado quanto linear. Os exemplos são metila, etila, propila, n-butila, n-pentila, n-hexila, n-heptila, n-octila, n-nonila, n-undecanila, n-dodecanila, n-tridecanila, n-hexadecanila, n-heptadecanila, n- octadecanila ou n-nonadecanila como não ramificada e isopropila, terc-butila, isobutila, sec-butila ou isoamila como radicais ramificados. "Cicloalquila" é a ser entendido como significando radicais de hidrocarboneto saturados cíclicos tendo até 8 átomos de carbono, tal como, por exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila ou ciclo- heptila.

"Arila" é a ser entendido como significando radicais de hidrocarboneto mono ou polinucleares aromáticos tendo até 10 átomos de carbono, que podem ser mono ou polissubstituído por, por exemplo, alquila, alcóxi, halogênio e/ou trifluorometila, tal como, por exemplo, fenila, p-tolila, o-tolila, m-tolila, 3,4-dimetoxifenila, 2-naftila ou 3-naftila. Além disso a "arila" também inclui radicais de grupos heteroarila, isto é de radicais heterocíclicos aromáticos mono ou polinucleares substituídos correspondente opcionalmente, tal como, por exemplo, 2-piridila, 3-piridila, 4-piridila, 2- quinolinila ou 3-isoquinolinila.

Os compostos de acordo com a invenção podem formar sais misturados ou uniformes mono ou polivalentes com ácidos, por exemplo com ácidos inorgânicos, tal como cloreto de hidrocarboneto, brometo de hidrogênio, ácido sulfürico ou ácido fosfórico; ou com ácidos carboxílicos adequados, por exemplo ácidos mono ou dicarboxílicos alifáticos, tal como ácido fórmico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido tricloroacético, ácido propiônico, ácido glicólico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido malônico, ácido maleico, ácido oxálico, ácido itálico, ácido cítrico, ácido láctico ou ácido tartárico; ou com ácidos carboxílicos aromáticos, tal como ácido benzóico ou ácido salicílico; ou com ácidos carboxílicos alifáticos aromáticos, tal como ácido mandélico ou ácido cinâmico; ou com ácidos carboxílicos heteroaromáticos, tal como ácido nicotínico; ou com ácidos sulfônicos alifáticos ou aromáticos, tal como ácido metassulfônico ou ácido tolueno sulfônico. Sais dermatologicamente aceitáveis são preferidos.

A fórmula geral (I) inclui todas as formas isoméricas e misturas destes, por exemplo misturas racêmicas e misturas de rotâmeros. As combinações dos compostos da fórmula geral (I) em que R1 indica H ou alquila CrC2O, η indica 2 ou 4 e X indica oxigênio com compostos correspondentes à fórmula geral (I), mas em que XR1 com X no significado possível -NH- indica o radical de um alfa-aminoácido natural e η indica que 2 são preferidos.

A combinação dos compostos da seguinte Tabela 1 são particularmente preferidos:

1.1 Palm-Lys-Val-Lys-OH 1.2.1 Palm-Lys-Val-Orn-OH 1.3 Palm-Lys-Val-Dab-OH 1.4 Palm-Lys-Val-Dab-OMe 1.5 Palm-Lys-Val-Dab-Ooctila 1.6 Palm-Lys-Val-Dab-Ocetila 1.7 Palm-Lys-Val-Dab-NH2 1.8 Palm-Lys-Val-Dab-NHbutila 1.9 Palm-Lys-Val-Dab-N(butila)2 1.10 Palm-Lys-Val-Dab-NHoctyl 1.11 Palm-Lys-Val-Dab-N(OCtila)2 1.12 Palm-Lys-Val-Dab-NHcetila 1.13 Palm-Lys-Val-Dab-N(Cetila)2 ou 1.14 Palm-Lys-Val-Dap-OH com 2.1 Palm-Lys-Val-Lys-Ala-OH 2.2 Palm-Lys-Val-Lys-Arg-OH 2.3 Palm-Lys-Val-Lys-Gln-OH 2.4 Palm-Lys-Val-Lys-Ser-OH 2.5 Palm-Lys-Val-Dab-Glu-OH 2.6 Palm-Lys-Val-Dab-Asp-OH 2.7 Palm-Lys-Val-Dab-Thr-OH 2.8 Palm-Lys-Val-Dab-Lys-OH 2.9 Palm-Lys-Val-Dab-Met-OH 2.10 Palm-Lys-Val-Dab-Asn-OH 2.11 Palm-Lys-Val-Dab-His-OH 2.12 Palm-Lys-Val-Dab-Nle-OH ou 2.13 Palm-Lys-Val-Dab-Phe-OH

Muito particularmente as combinações associadas preferidas são Palm-Lys-Val-Dab-OH (1.3) e Palm-Lys-Val-Dab-Thr-OH (2.7).

Os compostos de acordo com a invenção podem ser usados em concentrações que variam entre 0,5 e 5,000 ppm (p/p), preferivelmente entre 1 e 1.000 ppm (p/p) no produto final do cosmético.

Os compostos de acordo com a invenção podem ser usados na forma de um solução, uma dispersão ou uma emulsão ou encapsulados em carreadores, tal como macro, micro ou nanocápsulas, em lipossomas ou quilomícrons, ou encerrar em macro, micro ou nanopartículas ou em microesponjas ou absorvidos em polímeros orgânicos pulverulentos, talco, bentonita e outros carreadores minerais.

Os compostos de acordo com a invenção podem ser usados em qualquer forma galênica: emulsões óleo/água e água/óleo, leite, loções, ungüentos, superfície ativa em forma de gel ou viscosa e polímeros de emulsificação, pomadas, xampus, sabões, géis, pós, bastões e lápis, pulverizadores, óleos corporais, máscaras faciais, emplastros.

Os compostos de acordo com a invenção podem ser usados com qualquer outro substituinte convencionalmente usado. Tais composições podem compreender lipídeos extraídos e/ou lipídeos sintéticos, superfície ativa em forma de gel ou viscosa e polímeros de emulsificação, princípios ativos solúveis em água ou gordura, extratos vegetais, extratos de tecido, extratos marinhos, agentes protetores solares, antioxidantes, agentes retentores e de barreira contra umidade, compostos ativos que revitalizam a pele, compostos ativos de cuidado adicional com a pele ou agentes protetores da pele.

Os compostos de acordo com a invenção podem ser usados em combinação com qualquer outro cosmético de composto ativo de cuidado da pele convencionalmente usado. Aqui pode ser mencionado pelo caminho do exemplo de um composto ativo de cuidado adicional da pele dos compostos ativos anti-rugas/compostos ativos anti-atrofia: A composiçao de acordo com a invenção pode compreender uma quantidade ativa e segura de um ou mais compostos ativos anti-rugas ou compostos ativos anti-atrofia. Os exemplos de compostos ativos anti-rugas/anti-atrofia que são adequados para o uso nas composições de acordo com a invenção incluem aminoácidos DeL contendo enxofre e seus derivados e sais, em particular os derivados de N-acetila, um exemplo preferido deste sendo N-acetil-L-cisteína; tióis; hidróxi ácidos (por exemplo α-hidróxi ácidos, tal como ácido láctico e ácido glicólico, ou β- hidróxi ácidos, tal como ácido salicílico e derivados de ácido salicílico, tal como derivados de octanoila), ácido fítico, ácido lipônico; ácido lisofosfatídico, agentes de escascamento da pele (por exemplo fenol e outros), compostos de vitamina B3 e retinóides, que melhoram as vantagens da presente invenção para o alisamento da pele.

a) Compostos de vitamina B^

As composições de acordo com a invenção podem compreender uma quantidade ativa e segura dos compostos de vitamina B3. Os compostos de vitamina B3 são particularmente úteis para regular o estado da pele, como descrito no Pedido de Patente U.S. pendente ao mesmo período com Pedido N0 08/834.010, depositado em 11 de Abril de 1997 (correspondente ao Pedido Internacional WO 97/39733 Al, publicado em 30 de Outubro de 1997). Exemplos de derivados dos compostos de vitamina B3 mencionados incluem ésteres de ácido nicotínico, incluindo ésteres de vaso de não dilatação de ácido nicotínico (por exemplo nicotinato de tocoferila), nicotinilaminoácidos, ésteres de álcool nicotílico de ácidos carboxílicos, N- óxido de ácido nicotínico e N- óxido de niacinamida.

b) Retinóides

As composições de acordo com a invenção também pode compreender um retinóide. O "retinóide", como usado neste, inclui todos os análogos naturais e/ou sintéticos da vitamina A ou compostos semelhantes ao retinol que tem a atividade biológica da vitamina A na pele, e os isômeros geométricos e estereoisômeros destes compostos. O retinóide é preferivelmente retinol, ésteres retinóicos (por exemplo ésteres de alquila C2 a C22 de retinol, incluindo palmitato de retinila, acetato de retinila, propionato de retinila), ácido retinal e/ou rético (incluindo todo o ácido trans-rético e/ou ácido rético 13-eis), em retinóides particulares, outro do que ácido rético. Outros retinóides adequados são retionato de tocoferila [éster de tocoferol do ácido rético (trans ou eis)], adaptaleno {ácido de 6-[3-(l-adamantila)-4- metoxifenil]-2-naftóico} e tazaroteno (6-[2-(4,4-dimetiltiocroman-6-il)- etinil]nicotinato de etila). Os retinóides preferidos são retinol, palmitato de retinila, acetato de retinila, propionato de retinila, retinal e combinações destes. As composições de acordo com a invenção pode compreender uma quantidade ativa e segura do retinóide, de modo que a composição resultante é segura e ativa para regular o estado do tecido córneo, preferivelmente para regular a descontinuidade palpável e/ou visível da pele, em particular por sinais que regulam a idade da pele, mais preferivelmente para regular a descontinuidade palpável e/ou visível da superfície da pele natural relatando a idade da pele.

c) Hidroxiácidos

As composições de acordo com a invenção podem compreender uma quantidade ativa e segura de um hidróxi ácido. Os hidróxi ácidos preferidos para o uso nas composições de acordo com a invenção incluem ácido salicílico e derivados de ácido salicílico. d) Peptídeos

As composições de acordo com a invenção podem compreender pelo menos um peptídeo adicional, incluindo, mas não limitando a, di-, tri-, tetra-, penta- e hexapeptídeos. Tais peptídeos e/ou derivados destes podem ser adicionados às composições de acordo com a invenção em quantidades seguras e ativas. Os "peptídeos" aqui requerem-se tanto a peptídeos de ocorrência natural quanto a peptídeos sintéticos e também inclui peptidomiméticos e complexos metálicos de "peptídeos". As composições obtidas comercialmente e de ocorrência natural que compreendem os peptídeos também podem ser usadas aqui:

Os dipeptídeos que são adequados para o uso nas composições de acordo com a invenção incluem carnosina (β-Ala-His). Os tripeptídeos que são adequados para isto incluem Gly-His-Lys, Arg-Lys-Arg e His-Gly-Gly. Os tripeptídeos preferidos e derivados destes incluem palmitoil-Gly-His-Lys, que podem ser adquiridos como Biopeptídeo CLTM (100 ppm de palmitoil- Gly-His-Lys, comercialmente obtido de Sederma, France), peptídeo CK (Arg- Lys-Arg), peptídeo CK+ (ac-Arg-Lys-Arg-NH2) e β-Ala-Pro-Dab-NH- benzila, que é marcada sob o nome de SYN®-AKE por Pentapharm, Switzerland. Os tetrapeptídeos que são adequados para o uso nas composições de acordo com a invenção incluem peptídeo E. Exemplos de pentapeptídeos adequados são Matrixila (palmitoil-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser), obtido de Sederma, France, e aquele descrito no WO 03/037933 (Pentapharm, Switzerland). Um hexapeptídeo que é adequado para o uso é Argirelina (Ac- Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2), fabricado por Lipotec, Espanha.

Os compostos de acordo com a invenção e a composição cosmética que os compreende são utilizadas para produtos de cuidado da pele, em particular para melhorar a aparência da pele e contra efeitos adversos da idade da pele causada pela análise das proteínas da membrana básica.

Os seguintes exemplos são pretendidos para explicar a invenção sem a limitar. As abreviações usadas no texto e nos Exemplos 1 a 9

significam: AcOH: Ácido acético ACN: Acetonitrila AB: Anticorpo Ala: Alanina Arg: Arginina Asn: Asparagina Asp: r Acido aspártico Boc: terc-Butoxicarbonila BSA: albumina de soro bovino de albumina CTR: Resina de Clorotritila Dab: Aeido 2,4-Diaminobutítico Dap: r Aeido 2,3-Diaminopropriônico DBU: 1,8-Diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno (1,5-5) DCC: Ν,Ν'-Diciclo-hexilcarbodiimida MC: Cloreto de metileno DIC: Ν,Ν'-Diisopropilcarbodiimida DIPEA: Diisopropiletilamina DMEM: Meio de Eagle modificado por Dulbecco DMF: Dimetilformamida EM: Microscópio de elétron EtOAc: Acetato de etila FCS: Soro fetal de bezerro Fmoc: 9-Fluorenilmetoxicarbonila GF/A: Microfiltro de fibra de vidro Gln: Glutamina Glu: r Acido glutâmico HaCaT: Queratinócitos imortalizados humanos <table>table see original document page 14</column></row><table> Exemplo 1 (Determinação da estimulação da síntese de laminina V em cultura celular de queracinócito da linha celular HaCaT pelo tratamento com os derivados de peptídeos de acordo com a invenção.

A produção de laminina V por célula de queratinócitos HaCaT cultivados in vitro foi deletado por meios de um ELISA (ensaio imunosorbente ligado pela enzima). O aumento na produção de laminina V pelas células na presença dos compostos ativos de peptídeos foram quantificados por este método.

Os queratinócitos HaCaT humanos foram doados pelo Prof. Fusenig de Deutsche Krebsforschungszentrum em Heidelberg e foram cultivados em meio de cultura pelos métodos de cultura celular padrão. Após o período de incubação de 72 horas com os peptídeos correspondentes (composto ativo), a determinação quantitativa é carregada com um anticorpo específico por laminina V. Após a determinação do conteúdo da laminina V, a contagem celular é determinada pelos meios de CyQUANT® de Molecular Probes. O conteúdo da laminina V por célula é calculada como unidades a partir dos valores individuais.

Material:

<table>table see original document page 15</column></row><table> <table>table see original document page 16</column></row><table>

1° AB (P3H9-2; Santa Cruz Biotechnology, Inc.) é diluído em 1/60.000 e o 2° AB (31430; Socochim S.A.) é diluído em 1/500 com solução de diluição AB.

Método:

Os queratinócitos são espalhados em placas de 96 reservatórios com uma densidade de aproximadamente 5.000 células/reservatório e incubado em meio de cultura por 3 dias até a confluência (37°C / 10% de CO2). O meio é trocado por meio de teste com três concentrações diferentes em triplicar a substância de teste. Os controles seguintes são também testados em cada placa:

<table>table see original document page 16</column></row><table>

C) Um reservatório sem células é testado para cada peptídeo a fim de regular a ligação não específica de dois AB.

As placas são incubadas por umas 72 horas adicionais. Após a conclusão deste período de incubação, a laminina V depositada é detectada e quantificada de acordo com o protocolo seguinte: • Meio de descarte e lavagem com 200 μl/reservatório de PBS

• fixo com 100 μl/reservatório de metanol —> 15 minutos / temperatura ambiente / agitador 600 rpm

• metanol descartado e bloqueado com 200 μl/reservatório de solução de leite —> 30 minutos / temperatura ambiente / agitador 600 rpm

• solução de leite descartada e incubada com 100 μl/reservatório de I0 AB diluído — 2 horas / temperatura ambiente / agitador 600 rpm

• Io AB diluído descartado e lavado 3 χ com 200 μΐ/reservatório de tampão de lavagem

• incubado com 100 μl/reservatório de 2o AB diluído —» 3 horas / temperatura ambiente / agitador 600 rpm

• descarte do 2o AB diluído; lavado 3 χ com 200 μl/reservatório de tampão de lavagem e 1 χ 100 μl/reservatório de PBS

• adicionado 100 μl/reservatório de solução de substrato —> 15 minutos / temperatura ambiente / agitador 600 rpm

• interrupção da reação com 50 μl/reservatório de H2SO4 (2 M) e medido a 492 nm.

• a solução corante é descartada, a placa é lavada com H2O bi- destilado e congelado a -80°C por aproximadamente 16 horas.

• a placa é descongelada e a contagem celular é medida pelos meios do ensaio CyQUANT de acordo com as instruções do fabricante.

A produção de laminina V por célula é calculada de acordo com a seguinte fórmula:

(valor de ODiamInina v / valor de contagem de RFUceiuiar) x 100

Os valores calculados são unidades arbitrárias. Tabela 2: Estimulação de laminina V no ELISA

<table>table see original document page 18</column></row><table>

Exemplo 2: Determinação da estimulação da síntese de colágeno IV em culturas celulares de queracinócitos da linha celular HaCaT pelo tratamento com os derivados de peptídeos de acordo com a invenção.

A produção de colágeno IV por célula de queratinócitos HaCaT cultivados in vitro foi deletado por meios de um ELISA (ensaio imunosorbente ligado à enzima). O aumento na produção de colágeno IV pelas células na presença dos compostos ativos de peptídeos foram quantificadas por este método. Os queratinócitos HaCaT humanos foram doados pelo Prof. Fusenig de Deutsche Krebsforschungszentrum em Heidelberg e foram cultivados em meio de cultura pelos métodos de cultura celular padrão. Após um período de incubação de 72 horas com os peptídeos correspondentes (compostos ativos), a determinação quantitativa é carregada com um anticorpo específico para o colágeno IV. Após a determinação do conteúdo do colágeno IV, a contagem celular é determinada pelos meios de CyQUANT® de Molecular Probes. O conteúdo de colágeno IV por célula é calculado como unidades a partir dos valores individuais.

Material:

<table>table see original document page 18</column></row><table> <table>table see original document page 19</column></row><table>

1° AB (H-234; Santa Cruz Biotechnology, Inc.) é diluído em 1/200 e 2o AB (31460; Socochim S.A.) é diluído em 1/500 com solução de diluição AB.

Método:

Os queratinócitos são espalhados em placas de 96 reservatórios com uma densidade de aproximadamente 5.000 células/reservatório e incubados em meio de cultura por 3 dias até a confluência (37°C / 10% de CO2). O meio é trocado por meio de teste com três concentrações diferentes em triplicar a substância de teste. Os controles seguintes são também testados em cada placa:

<table>table see original document page 19</column></row><table> - com 10 ng/ml de TGF-P2

C) Um reservatório sem células é testado para cada peptídeo a fim de regular ligação não específica de dois AB.

As placas são incubadas por umas 72 horas adicionais. Após a conclusão deste período de incubação, o colágeno IV depositado é detectado e quantificado de acordo com o protocolo seguinte:

• Meio de descarte e lavagem com 200 μl/reservatório de PBS

• fixo com 100 μl/reservatório de metanol ->15 minutos / temperatura ambiente / agitador 600 rpm

• metanol descartado e bloqueado com 200 μl/reservatório de solução de leite —» 30 minutos / temperatura ambiente / agitador 600 rpm

• solução de leite descartada e incubada com 100 μl/reservatório de 1° AB diluído 2 horas / temperatura ambiente / agitador 600 rpm

• 1° AB diluído descartado e lavado 3 χ com 200 μl/reservatório de tampão de lavagem

• incubado com 100 μΐ/reservatório de 2o AB diluído -> 3 horas / temperatura ambiente / agitador 600 rpm

• 2o AB diluído descartado; lavado 3 χ com 200 μΐ/reservatório de tampão de lavagem e 1 χ 100 μl/reservatório de PBS

• a solução corante é descartada, a placa é lavada com H2O bi- destilado e congelada a -80°C por aproximadamente 16 horas.

• a placa é descongelada e a contagem celular é medida pelo meio do ensaio CyQUANT de acordo com as instruções do fabricante.

• A produção de colágeno IV por célula é calculada de acordo com a seguinte fórmula:

(valor OD coiágeno iv / valor de contagem RFU ceiuiar) x 100 Os valores calculados são unidades arbitrárias.

Compostos 1.1, 1.10, 1.11 e 2.5 a 2.7 da Tabela 1 mostra uma ação de estimulação boa a muito boa aqui.

Exemplo 3: Determinação da estimulação da síntese de colágeno VII em culturas celulares de queracinócito da linha celular HaCaT pelo tratamento com os derivados de peptídeos de acordo com a invenção.

A produção de colágeno VII por célula de queratinócitos HaCaT cultivados in vitro foi deletado por meios de um ELISA (ensaio imunosorbente ligado à enzima). O aumento na produção de colágeno VII pelas células na presença dos compostos ativos de peptídeos foram quantificados por este método. Os queratinócitos HaCaT humanos foram doados pelo Prof. Fusenig de Deutsche Krebsforschungszentrum em Heidelberg e foram cultivados em meio de cultura pelos métodos de cultura celular padrão. Após o período de incubação de 72 horas com os peptídeos correspondentes (composto ativos), a determinação quantitativa é carregada com um anticorpo específico para o colágeno VII. Após a determinação do conteúdo de colágeno VII, a contagem celular é 4 determinada pelos meios de CyQUANT® de Molecular Probes. O conteúdo de colágeno VII por célula é calculada como unidades a partir dos valores individuais.

Material:

<table>table see original document page 21</column></row><table> <table>table see original document page 22</column></row><table>

1° AB (C-16; Santa Cruz Biotechnology, Inc.) é diluído em 1/200 e 2° AB (31402; Socochim S.A.) é diluído em 1/500 com solução de diluição AB.

Método:

<table>table see original document page 22</column></row><table>

As placas são incubadas por umas 72 horas adicionais, após a conclusão deste período de incubação, o colágeno VII depositado é detectado e quantificado de acordo com o protocolo seguinte:

• Meio de descarte e lavagem com 200 μl/reservatório de PBS

• solução de leite descartada e incubada com 100 μl/reservatório de 1° AB diluído -> 2 horas / temperatura ambiente / agitador 600 rpm

• incubado com 100 μl/reservatório de 2o AB diluído —> 3 horas / temperatura ambiente / agitador 600 rpm

• 2° AB diluído descartado; lavado 3 χ com 200 μΐ/reservatório de tampão de lavagem e 1 χ 100 μl/reservatório de PBS

• adicionado 100 μl/reservatório de solução de substrato -> 15 minutos / temperatura ambiente / agitador 600 rpm

• a solução corante é descartada, a placa é lavada com H2O bi- destilada e congelada a -80°C por aproximadamente 16 horas.

(valor de ODcolágeno VII / valor de contagem RFUceiuiar) x 100 Os valores calculados são unidades arbitrárias.

Compostos 1.10 e 2.5 a 2.7 da Tabela 1 mostram uma ação de estimulação boa a muito boa aqui.

Exemplo 4: Determinação da estimulação da síntese de integrina beta 4 em culturas celulares de queracinócitos da linha celular HaCaT pelo tratamento com os derivados de peptídeos de acordo com a invenção.

A produção da integrina beta 4 por célula de queratinócitos HaCaT cultivados in vitro foi deletado por meios de um ELISA (ensaio imunosorbente ligado pela enzima). O aumento na produção de integrina beta 4 pelas células na presença dos compostos ativos de peptídeos foram quantificadas por este método. Os queratinócitos HaCaT humanos foram doados pelo Prof. Fusenig de Deutsche Krebsforschungszentrum em Heidelberg e foram cultivados em meio de cultura pelos métodos de cultura celular padrão. Após o período de incubação de 72 horas com os peptídeos correspondentes (composto ativo), a determinação quantitativa é carregada com um anticorpo específico para a integrina beta 4. Após a determinação do conteúdo da integrina beta 4, a contagem celular é determinada pelos meios de CyQUANT® de Molecular Probes. O conteúdo da integrina beta 4 por célula é calculada como unidades a partir dos valores individuais.

Material:

<table>table see original document page 24</column></row><table> <table>table see original document page 25</column></row><table>

1° AB (A9; Santa Cruz Biotechnology, Inc.) é diluído em 1/200 e 2° AB (31430; Socochim S.A.) é diluído em 1/500 com solução de diluição AB.

Método:

<table>table see original document page 25</column></row><table>

As placas são incubadas por umas 72 horas adicionais. Após a conclusão deste período de incubação, a integrina β4 depositada é detectada e quantificada de acordo com o seguinte protocolo:

• Meio de descarte e lavagem com 200 μl/reservatório de PBS

• solução de leite descartada e incubada com 100 μl/reservatório de 1° AB diluído —> 2 horas / temperatura ambiente / agitador 600 rpm

• 2° AB diluído descartado; lavado 3 χ com 200 μl/reservatório de tampão de lavagem e 1 χ 100 μl/reservatório de PBS

• adicionado 100 μl/reservatório de solução de substrato 15 minutos / temperatura ambiente / agitador 600 rpm

• A produção de integrina β4 por célula é calculada de acordo com a seguinte fórmula:

(valor de ODintegrina β4 / valor de contagem de RFUcelular) χ 100

Os valores calculados são unidades arbitrárias.

Os compostos 1.1 e 2.5 a 2.7 da Tabela 1 mostra uma ação de estimulação boa a muito boa aqui. Exemplo 5: Determinação da estimulação da síntese de colágeno XVII em culturas celulares de queracinócitos da linha celular HaCaT pelo tratamento com os derivados de peptídeos de acordo com a invenção

A produção de colágeno XVII por célula de queratinócitos HaCaT cultivados in vitro foi deletado por meios de um ELISA (ensaio imunosorbente ligado pela enzima). O aumento na produção do colágeno XVII pelas células na presença dos compostos ativos de peptídeos foram quantificados por este método. Os queratinócitos HaCaT humanos foram doados pelo Prof. Fusenig de Deutsche Krebsforschungszentrum em Heidelberg e foram cultivados em meio de cultura pelos métodos de cultura celular padrão. Após o período de incubação de 72 horas com os peptídeos correspondentes (compostos ativos), a determinação quantitativa é carregada com um anticorpo específico para o colágeno XVII. Após a determinação do conteúdo do colágeno XVII, a contagem celular é determinada pelos meios de CyQUANT® de Molecular Probes. O conteúdo de colágeno XVII por célula é calculado como unidades a partir dos valores individuais.

Material:

<table>table see original document page 27</column></row><table> <table>table see original document page 28</column></row><table>

1° AB (STO-115; Davids Biotechnologie) é diluído em 1/200 e 2° AB (31430; Socochim S.A.) é diluído em 1/500 com solução diluída de AB.

Método:

<table>table see original document page 28</column></row><table>

As placas são incubadas por umas 72 horas adicionais. Após a conclusão deste período de incubação, o colágeno XVII depositado é detectado e quantificado de acordo com o protocolo seguinte:

• Meio de descarte e lavagem com 200 μl/reservatório de PBS

• fixo com 100 μΐ/reservatório de metanol ->15 minutos / temperatura ambiente / agitador 600 rpm

• metanol descartado e bloqueado com 200 μl/reservatório de solução de leite ->30 minutos / temperatura ambiente / agitador 600 rpm

• incubado com 100 μl/reservatório de 2° AB diluído —> 3 horas / temperatura ambiente / agitador 600 rpm

• adicionado 100 μl/reservatório de solução de substrato —>15 minutos / temperatura ambiente / agitador 600 rpm

• interrupção da reação com 50 μΐ/reservatório de H2SO4 (2 M) e medido a 492 nm.

(valor de ODcoiágeno vn / valor de contagem RFUceiuiar) x 100

Os valores calculados são unidades arbitrárias.

Os compostos 1.1, 1.10, 1.11 e 2.5 a 2.7 mostram uma ação de estimulação boa a muito boa aqui.

Exemplo 6: Formulação de um ungüento

Procedimento: Os constituintes 1 a 5 (A) são aquecidos a 70°C. Os constituintes 6 a 7 (B) são aquecidos a 75°C. B é adicionado a A, com agitação, e a mistura é esfriada a 50°C, homogeneizada e esfriada a 30°C. Os constituintes 8 e 9 (C) e os constituintes 10 e ll (D) são adicionados em sucessão e a mistura é agitada fria.

<table>table see original document page 30</column></row><table>

Exemplo 7: Formulação de um gel

Procedimento: Os constituintes 2 a 6 (A) são dissolvidos em sucessão com água deionizada. A solução é ajustada ao pH 6,0 com constituinte 7 (B). Os constituintes 8 e 9 (C) são então adicionados.

<table>table see original document page 30</column></row><table>

Exemplo 8: Preparação dos compostos de acordo com a invenção da fórmula (I) em que X indica -NR2 - e tanto R1 e quanto R2 são outros do que H, e dos compostos de acordo com a invenção correspondente à fórmula (I), mas em que XR1 com X no significado possível -NH- indica o radical de um alfa- aminoácido, e os sais de tais compostos.

A análise dos eluatos e produtos obtidos de acordo com este exemplo foi realizado com próton NMR, eletropulverizador HPLC MS ou análise elementar. Os compostos podem ser preparados pelos processos conhecidos por ser descrito no seguinte (instruções gerais de M. Bodanszky "The Practice of Peptide Synthesis" Springer Verlag, 2a edição 1994). O aminoácido, por exemplo lisina, é conseqüentemente ligada a uma resina em uma síntese de fase sólida no terminal final carbóxi, o grupo amino portanto sendo protegido por um grupo protetor, por exemplo pelo grupo protetor Fmoc. A cadeia secundária é protegida por exemplo com Boc ou t-butila. Os grupos protetores são divididos seletivamente como requerido, a fim de ligar os derivados de aminoácidos adicionais com os reagentes convencionais em síntese de peptídeo até a seqüência desejada é construído completamente. O peptídeo é então dividido a partir da resina no terminal final carbóxi e o peptídeo bruto é precipitado pela adição às gotas em uma mistura de solvente adequado. A mistura é purificada por intermédio de HPLC, opcionalmente trocado nas contagens de íons e a substância é liofilizada.

Exemplo 8.1: Preparação dos Palm-Lys(Boc)-Val-Dab(Boc)-Thr(tBu)-CTR em uma fase sólida

Os aminoácidos protegidos Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc- Dab(Boc)-OH5 Fmoc-Val-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH e ácido palmítico são ligados a 1,75 g (carregam: 0,8 mmol/g) de resina do cloreto de 2-Clorotritila pelo peptídeo sucessivo ligado e o peptídeo protegido é construído no caminho.

Exemplo 8.2: Preparação dos Palm-Lys-Val-Dab-Thr-OH · 2TFA em uma fase sólida

O peptídeo é dividido a partir da resina pelo meio de tratamento com 10 ml de 95% de TFA por 30 minutos. A resina é filtrada e a solução é adicionada às gotas em 100 ml de Et2O. O precipitado formado é filtrado com sucção, lavado e, após secagem, purificado com a ajuda do HPLC preparativo e então liofilizado. 391 mg (34%) de um pó incolor são obtidos. A massa teórica de 686 foi confirmado com a descoberta de 687.

Exemplo 8.3: Preparação dos compostos de acordo com a invenção da fórmula (I) em que X indica -NR2 - e tanto R1 quanto R2 são outros do que H

Tais compostos podem ser preparados analogamente ao processo descrito no Exemplo 7 de WO 2004/099237 Al.

Claims

1. Composição, em particular uma composição que pode ser aplicada topicamente, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos um composto da fórmula geral (I) <formula>formula see original document page 33</formula> em que R1 indica H, alquila C1-C20, cicloalquila ou aril alquila C1-C4, η indica 1-4, X indica-O-,-NH-ou-NR2-e R indica H ou alquila C1-C20; e pelo menos um composto correspondente à fórmula acima (I), mas em que XR1 com X no significado possível -NH- indica o radical de um alfa-aminoácido.

2. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que os compostos definidos na reivindicação 1 estão presentes na forma de sais dermatologicamente aceitáveis.

3. Composição de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que nos compostos definidos na reivindicação 1 os radicais de aminoácido estão presentes como racematos ou em sua forma D e L enantiomericamente pura.

4. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 3, caracterizada pelo fato de que um composto da fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1 em que R1 indica H ou alquila C1-C20, η indica 2 ou 4 e X indica -O- é combinado com um composto correspondente à fórmula geral (I) definido na reivindicação 1, mas em que XR1 com X no significado possível -NH- indica o radical de um alfa- aminoácido natural e η indica 2.

5. Composição de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que as combinações associadas são Palm-Lys-Val-Dab-OH e Palm-Lys-Val-Dab-Thr-OH.

6. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 5, caracterizada pelo fato de que estes compreendem os compostos mencionados nesta reivindicações em uma concentração na faixa de 0,5 a 5.000 ppm (p/p), preferivelmente na faixa a partir de 1 a 1.000 ppm (p/p)·

7. Composição, em particular uma composição que pode ser aplicada topicamente, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente uma quantidade ativa e segura de pelo menos um outro composto ativo de cuidado da pele escolhido a partir do grupo que consiste de composto ativo para esfoliação, composto ativos anti-acne, compostos de vitamina B3, retinóides, di-, tri-, tetra-, penta- e hexapeptídeos e derivados destes, hidróxi ácidos, agentes que prendem radicais livres, agentes anti-inflamatórios, composto ativos de curtimento da pele, agentes de iluminação da pele, agentes anti-celulite, flavonóides, composto ativos anti-microbianos, agentes de cura da pele, composto ativos anti-micóticos, composto ativos de filtro solar, farnesol, fitantriol, alantoína, glucosamina e misturas destes.

8. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente um carreador dermatológico.

9. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 8, caracterizada pelo fato de que este compreende o composto ativo na solução, como uma dispersão, como uma emulsão ou encapsulado em carreadores, preferivelmente como macro, micro ou nanocápsulas, em lipossômeros ou quilomícrons ou incluído em macro, micro ou nanopartícuias ou em microesponjas ou absorvidos em polímeros orgânicos pulverulentos, talco, bentonita e carreadores minerais relatados.

10. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, caracterizada pelo fato de que este está presente na forma de uma emulsão (óleo/água e água/óleo), como um leite, como uma loção, como um ungüento, em uma superfície ativo de forma de gel e viscoso e polímeros de emulsificação, como uma pomada, como um xampu, como um sabão, como um gel, como um pó, como um bastão ou lápis, como um pulverizador, como um óleo corporal, como uma máscara facial ou como um emplastro.

11. Uso de pelo menos um composto da fórmula (I) junto com pelo menos um composto correspondente à fórmula (I), mas em que XR1 com X no significado possível -NH- indica o radical de um alfa-aminoácido, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de uma composição como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 10.

12. Uso de uma composição como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 10, caracterizado pelo fato de ser para estimular a síntese das moléculas da membrana básica, em proteínas particular destes.

13. Uso de pelo menos um composto da fórmula (I) junto com pelo menos um composto correspondente à fórmula (I), mas em que XR1 com X no significado possível -NH- indica o radical de um alfa-aminoácido, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser para estimular a síntese das moléculas da membrana básica, em particular proteínas destes.

14. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações de 12 e 13, caracterizado pelo fato de ser para estimular a síntese da laminina V, a síntese de colágeno IV, a síntese de colágeno VII, a síntese de colágeno XVII e/ou a síntese de integrina β4.

15. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações de 12 a 14, caracterizado pelo fato de ser para melhorar a flacidez, aspereza e ruga da pele causada pela degeneração endógena ou exógena da membrana básica.

16. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações de 12 a 14, caracterizado pelo fato de ser para evitar a formação da flacidez, aspereza e ruga da pele.

17. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações de 11 a 16, caracterizado pelo fato de ser em combinação com pelo menos ainda um composto ativo de cuidado da pele.

18. Compostos, caracterizados pelo fato de que são da fórmula geral (I) como definido na reivindicação 1, em que X indica -NR2- e tanto R1 quanto R2 são outros do que H.

19. Compostos, caracterizados pelo fato de que são correspondentes à fórmula geral (I) de acordo com a reivindicação 1, mas em que XR1 com X no significado possível -NH indica o radical de um alfa- aminoácido.