CN113271920A

CN113271920A - 用于化妆品的肽和组合物

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Publication number: CN113271920A
Application number: CN202080008233.XA
Authority: CN
Inventors: A·格鲁-卡普斯坦尼; S·巴斯特; P·卡鲁利亚; J·C·埃斯古德罗
Original assignee: Lipotrue SL
Current assignee: Lipotrue SL
Priority date: 2019-01-08
Filing date: 2020-01-03
Publication date: 2021-08-17
Anticipated expiration: 2040-01-03
Also published as: KR20210113604A; WO2020144109A1; EP3908252A1; US20220062145A1; CN113271920B; JP2022516961A; AU2020206415A1

Abstract

本发明涉及预防和/或减少皮肤衰老(包括时程和/或环境衰老)体征并且可用于皮肤紧致的肽家族；包含所述肽的化妆品组合物以及所述肽或所述化妆品组合物的化妆用途和方法。

Description

用于化妆品的肽和组合物

技术领域

本发明涉及化妆品领域，更准确地是涉及具有紧致和抗衰老活性的肽和组合物，以及它们在化妆品领域中的方法和用途。

背景技术

过去几十年中，人群的预期寿命显著增加。另外，在人群中关于个人美容和试图延缓或尽量减小与衰老相关的体征外观存在增加的关注。

皮肤是人类的最大器官，并且因其处于机体分界面的位置，它遭受内在(时程)衰老和外在衰老，后者由环境因素(诸如，例如，UV照射、吸烟或污染)导致。这种持续暴露以及衰老显然导致皮肤改变和导致皮肤的缺陷外观(例如，丧失紧致度、起皱纹、粗糙和/或松弛)。

皮肤的主要构成成分之一是细胞外基质(下文称为ECM)。

公知ECM是分泌蛋白(主要是胶原蛋白和弹性纤维)的复杂混合物，其提供拉伸强度并且包埋在包含蛋白聚糖、糖蛋白(诸如，纤连蛋白、层粘连蛋白和生腱蛋白)和水的粘弹性凝胶中。

所述ECM负责皮肤的几种物理特性，例如，肿胀性(turgency)、紧致度和粘弹性。因此，皮肤衰老的大多数体征以及其紧致度的丧失均是由于皮肤的ECM改变引起(结构或含量损失或结构或含量改变)。当皮肤衰老时，观察到皮肤厚度以及真皮和表皮质量的改变。ECN中存在的糖胺聚糖的水平和组成(其中，我们发现例如，透明质酸)与含水量相关并且因此与皮肤的肿胀性有关，它们进行性降低。这导致皮肤越来越干燥和越来越薄。其他ECM成分，例如，胶原蛋白和弹性纤维变得紊乱和降解。这种完整性的共同损失导致皮肤僵硬和弹性消失(Farage M.A.和Miller K.W.,Structural characteristics of the ageing skin:areview(2007)Cutaneous and ocular toxicology,26,343-357)。

蛋白聚糖是ECM的主要组分之一。所有蛋白聚糖的特征是称为核心蛋白的蛋白部分，和一个或多个称为糖胺聚糖(下文称为GAG)的无支链的长的带负电荷的多糖链，该多糖连与核心蛋白共价连接。取决于GAG链，蛋白聚糖归类为硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(例如，基底膜蛋白聚糖)、硫酸软骨素蛋白聚糖(例如，聚集蛋白聚糖)、硫酸皮肤素蛋白聚糖(例如，多功能蛋白聚糖)和硫酸角质素蛋白聚糖(例如，光蛋白聚糖)。

在所述蛋白聚糖中，已显示在ECM的维持和机能中具有核心作用的一个蛋白聚糖是多功能蛋白聚糖(Uniprot参考编号:P13611(CSPG2_HUMAN)；SEQ ID NO:1)。所述蛋白是一种大的硫酸软骨素蛋白聚糖，由定位在人基因组中染色体5q 12-14上的单基因转录，并且延伸超过90kb。该基因包含15个外显子。多功能蛋白聚糖包含由多功能蛋白聚糖的mRNA的可变剪接产生的至少4个变体(V0、V1、V2和V3)。

所有变体包含氨基末端G1结构域，G1结构域与糖胺聚糖透明质酸(例如，存在于ECM中的糖胺聚糖透明质酸)相互作用，和称作G3结构域的羧基末端结构域，G3结构域包含C-型凝集素结合结构域、两个表皮生长因子重复区和补体调节区。四个变体之间的差异可以存在于核心区中，该核心区包含糖胺聚糖结合结构域。V0包含α和β结构域，V1包含β结构域，V2包含α结构域，V3不包含任一个结构域。

鉴于上述结构，如上面已经提到的，多功能蛋白聚糖已经显示是ECM的重要组分。其具有结构和生物力学方面的作用，因为它结合透明质酸、原纤维蛋白-微纤维和弹性蛋白，将弹性纤维连接到基底物质，而且影响多个细胞事件的细胞生物作用诸如细胞迁移和细胞增殖(Wight,T.N.,Versican:a versatile extracellular matrix proteoglycan incell biology(2002)Current Opinion in Cell Biology,14:617-623)。

如上面已经提到的，ECM的其他相关分子为：

-弹性纤维：公知弹性纤维的降解是衰老的主要促进因素，导致皮肤的弹性丧失、起皱纹、松弛和粗糙肌理。关于弹性纤维的组分，重要的是注意弹性蛋白原是形成成熟弹性蛋白所必需的，而原纤维蛋白-1似乎是微纤维的主要结构组分，其中其充当弹性蛋白在成体组织中沉积的支架，并且在皮肤中具有关键的生物力学和生物化学作用(Langton A.K.,Sherratt M.J.,Griffiths C.E.M.和Watson R.E.B.,A new wrinkle on old skin:therole of elastic fibres in skin ageing(2010)International Journal of CosmeticScience,32,330-339).

-透明质酸：它是ECM的组分，已经显示其与皮肤的水合作用相关，因此，作为其高保水能力的结果，其与皮肤的肿胀度相关(Nemoto T.,Kubota R.,Murasawa Y.和IsogaiZ.,Viscoelastic properties of the human dermis and other connective tissuesand its relevance to tissue aging and aging-related diseases(2012)Viscoelasticity-From Theory to Biological Applications,Juan de Vicente编辑的书籍)。另外，透明质酸与各种结合蛋白质(透明质酸粘附蛋白(hyaladherin)诸如蛋白聚糖，以说明一些)的相互作用使得透明质酸成为作用于皮肤的紧致度和紧绷度的关键分子，不仅局部起作用而且作为真皮填充物(Weindl G.,Schaller M.,

M.,Korting H.C.,Hyaluronic Acid in the Treatment and Prevention of SkinDiseases:Molecular,Biological,Pharmaceutical and Clinical Aspects(2004)SkinPharmacol Physiol,17,207-213)。

近年来，改善皮肤衰老体征诸如丧失紧致度、皮肤肌理和起皱纹的活性成分数目大大增加。此类活性成分的实例为维甲酸类化合物、维生素或植物提取物(Bradley E.J.,Griffiths C.E.M.,Sherratt M.J.,Bell M.和Watson R.E.B.,Over-the-counter anti-ageing topical agents and their ability to protect and repair photoaged skin(2015)Maturitas,80,265-272)。

在维甲酸类化合物的实例中，值得注意的是维甲酸，它是如今诱导ECM的几种分子合成的“金标准”(所述分子例如，胶原蛋白、纤连蛋白或层粘连蛋白；Varani J.,MitraR.S.,Gibbs D.,Phan S.H.,Dixit V.M.,Mitra R.,Wang T.,Siebert K.J.,NickoloffB.J.,Voorhees J.J.,All-Trans Retinoic Acid Stimulates Growth andExtracellular Matrix Production in Growth-Inhibited Cultured Human SkinFibroblasts(1990)The Journal of Investigative Dermatology,94,717-723)。因此，维甲酸已经被认为是治疗衰老体征的最有力化合物之一，因为它可以通过上调ECM的蛋白(诸如胶原蛋白和纤连蛋白)的转录和合成并抑制基质金属蛋白酶(下文称为MMP)来显著地改善面部皱纹的临床外观(Varani J.,Mitra R.S.,Gibbs D.,Phan S.H.,Dixit V.M.,MitraR.,Wang T.,Siebert K.J.,Nickoloff B.J.,Voorhees J.J.,All-Trans Retinoic AcidStimulates Growth and Extracellular Matrix Production in Growth-InhibitedCultured Human Skin Fibroblasts(1990)The Journal of InvestigativeDermatology,94,717-723)。然而，在维甲酸的应用中有一些缺点，例如：维甲酸不得不谨慎地使用，因为它可以很容易地产生皮肤刺激，并且不推荐维甲酸和日晒结合在一起。当使用维甲酸类化合物的另一个主要问题是它们的不稳定性，尤其是在氧和光的存在下(SorgO.,Antille C.,Kaya G.和Saurat J-H.,Retinoids in cosmeceuticals(2006)Dermatologic Therapy,19,289-296)。

还使用抗氧化剂以便减少皮肤中自由基的浓度，因此来对抗胶原蛋白降解。所述抗氧化剂的实例是抗坏血酸(也称为维生素C)。抗坏血酸除了它的抗氧化效应以外，尤其是还诱导ECM的蛋白(I和III型胶原蛋白和弹性蛋白)合成，同时促进表皮分化并抑制MMP1。不幸的是，抗坏血酸极度不稳定，尤其在高温下、有氧条件、高pH和/或当暴露于光时经历氧化(Manela-Azulay M.,Azulay V.,Aguinaga F.,Issa M.C.,Vitamins and otherAntioxidants(2017)Daily Routine in Cosmetic Dermatology,1-13)。

除了化学合成的化合物以外，在多个应用的市场上发现了大量的植物提取物和植物来源的化合物，诸如，例如，包含白藜芦醇(一种抗氧化剂)的葡萄提取物；包含多酚的绿茶；或包含异黄酮的大豆。然而，这些成分的体内功效和组成没有被充分地科学验证。

透明质酸，因其粘弹性特性和保持水的能力，还已经用于化妆品工业中用来保持皮肤水化、维持弹性和通过改善粗糙度或甚至用作真皮填充剂来治疗皱纹。然而，目前透明质酸获自几种来源，诸如鸡冠或植物提取物，因此，这些产品可以包含杂质并且需要充分表征(Kogan G.,Soltés L.,Stern R.和Gemeiner P.,Hyaluronic acid:a naturalbiopolymer with a broad range of biomedical and industrial applications(2007)Biotechnological Letters 29,17-25)。

另一方面，肽也可以掺入到化妆品配方中以改善皮肤衰老体征。生物活性肽可以模拟机体自身的分子并且影响诸如胶原蛋白合成的过程，优点是它们具有更好的耐受性和稳定性。另外，可以对它们开发宽范围的活性、化学和适应症(Zhang L.和Falla T.J.,Cosmeceuticals and peptides(2009)Clinics in dermatology,27,485-494)。

尽管在本领域中有大量的各种各样的化合物和/或提取物，仍然需要可替代组合物，该可替代组合物具有新作用机制并且对ECM具有整体效应(例如，作用于所述基质的一种或多种组分)，对皮肤的紧致度产生效应，并且允许预防和/或减少皮肤衰老(时程和/或环境衰老)体征，并改善皮肤的粘弹性和紧致度。

发明内容

本发明的发明人在经过广泛和全面的研究后，出人意料地发现来源于多功能蛋白聚糖(SEQ ID NO:1)的N-末端区中的信号肽序列的6个氨基酸的小肽，以及所述肽的衍生物或变体，它们显示与ECM的维持和产生直接相关的活性(如下面包括的实施例中所证明的那样)。因此，本发明的所述肽可用于预防和/或减少皮肤衰老的体征；和/或用于皮肤紧致。

发明人已经证明具有SEQ ID NO:2和3(属于多功能蛋白聚糖的N-末端区，其中，更准确地，信号肽分别位于SEQ ID NO:1的21-26和20-25位)的肽具有抑制弹性蛋白酶活性和抑制金属蛋白酶1和3的产生(即，抑制ECM的降解)的重要活性；以及促进多功能蛋白聚糖、弹性蛋白原(弹性蛋白的分泌前体)、原纤维蛋白-1和透明质酸(ECM的主要结构组分中的4个)的合成。另外，所述肽显示改善皮肤的紧致度质量。因此，所述肽具有紧致和抗衰老效应。

因此，所述肽可用于化妆品中以改善皮肤的粘弹性和紧致特性，并且因此，可用于通过直接作用于与ECM的结构完整性相关的各个方面来预防和/或减少与ECM的改变或缺陷相关的皮肤衰老体征。

来自上述衍生自多功能蛋白聚糖的肽(即，肽SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3)的保守取代的肽也在本发明的范围内。

因此，在第一个实施方案中，本发明是指一组肽，该组肽有效地改善皮肤的粘弹性和紧致特性，因为它可直接从下面包括的实验结果中推导出。因此，所述肽可用于预防和/或减少皮肤衰老体征。

在进一步的实施方案中，本发明是指包含本发明的肽中的一种或其组合的组合物。

在另外的实施方案中，本发明是指本发明的肽或化妆品组合物用作化妆品的用途。

本发明的进一步的实施方案是指本发明的肽或组合物改善皮肤的粘弹性和紧致度特性因此预防和/或减少皮肤衰老体征的化妆用途。

在另一个实施方案中，本发明是指预防和/或减少受试者中皮肤衰老体征的方法，其特征在于所述方法包括使用本发明的肽或组合物。

在最后一个实施方案中，本发明是指改善受试者的皮肤的粘弹性和紧致度特性的方法，其特征在于该方法包括使用本发明的肽或组合物。

如本文中使用的术语“非环脂肪族基团”和其复数形式，具有所述术语的现有技术中给出的一般意义。因此，这些术语是指，例如并且不限于，直链或支链烷基、烯基和炔基。

如本文中使用的术语“烷基”及其复数形式，是指具有1至24个、优选1至16个、更优选1至14个、甚至更优选1至12个、并且甚至更优选1、2、3、4、5或6个碳原子的饱和的、直链或支链基团，并且所述烷基通过单键与分子的剩余部分结合，所述烷基包括，例如并且不限于，甲基、乙基、异丙基、正丙基、i-丙基、异丁基、叔丁基、正丁基、仲丁基、正戊基、正己基、庚基、辛基、癸基、十二烷基、月桂基、十六烷基、十八烷基、戊基、2-乙基己基、2-甲基丁基、5-甲基己基和类似基团。所述烷基可以任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基如卤代、羟基、烷氧基、羧基、羰基、氰基、酰基、烷氧基-羰基、氨基、硝基、巯基和烷氧基硫代。

如本文中使用的术语“烯基”及其复数形式，是指具有2至24个、优选2至16个、更优选2至14个、甚至更优选2至12个、甚至更优选2、3、4、5或6个碳原子、具有一个或多个共轭的或非共轭的碳-碳双键、优选具有1、2或3个碳-碳双键的直链或支链基团，所述烯基通过单键与分子的剩余部分结合，包括，例如并且不限于，乙烯基、油烯基、亚油烯基和类似基团。所述烯基可以任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基如卤代、羟基、烷氧基、羧基、羰基、氰基、酰基、烷氧基-羰基、氨基、硝基、巯基和烷氧基硫代。

如本文中使用的术语“炔基”及其复数形式，是指具有2至24个、优选2至16个、更优选2至14个、甚至更优选2至12个、甚至更优选2、3、4、5或6个碳原子、具有一个或多个共轭的或非共轭的碳-碳三键、优选具有1、2或3个碳-碳三键的直链或支链基团，所述炔基通过单键与分子的剩余部分结合，包括，例如并且不限于，乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、戊炔基，如1-戊炔基和类似基团。所述炔基可以任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基如卤代、羟基、烷氧基、羧基、羰基、氰基、酰基、烷氧基-羰基、氨基、硝基、巯基和烷氧基硫代。

如本文中使用的术语“脂环基”及其复数形式，具有所述术语的现有技术中给出的一般意义。因此，这些术语用于指，例如并且不限于，环烷基或环烯基或环炔基。

如本文中使用的术语“环烷基”及其复数形式，是指具有3至24个、优选3至16个、更优选3至14个、甚至更优选3至12个、甚至更优选3、4、5或6个碳原子的饱和的单环或多环脂肪族基团，并且所述环烷基通过单键与分子的剩余部分结合，包括，例如并且不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、甲基环己基、二甲基环己基、八氢茚、十氢化萘、十二氢-非那烯、金刚烷基和类似基团，并且其可以任选地被一个或多个基团取代，所述基团如烷基、卤代、羟基、烷氧基、羧基、羰基、氰基、酰基、烷氧基-羰基、氨基、硝基、巯基和烷氧基硫代。

如本文中使用的术语“环烯基”及其复数形式，是指具有5至24个、优选5至16个、更优选5至14个、甚至更优选5至12个、甚至更优选5或6个碳原子的、具有一个或多个共轭的或非共轭的碳-碳双键、优选具有1、2或3个碳-碳双键的非芳香族单环或多环脂肪族基团，所述环烯基通过单键与分子的剩余部分结合，其包括，例如并且不限于，环戊-1-烯-1-基和类似基团，并且其可以任选地被一个或多个基团取代，所述基团如烷基、卤代、羟基、烷氧基、羧基、羰基、氰基、酰基、烷氧基-羰基、氨基、硝基、巯基和烷氧基硫代。

如本文中使用的术语“环炔基”及其复数形式，是指具有8至24个、优选8至16个、更优选8至14个、甚至更优选8至12个、甚至更优选8或9个碳原子的、具有一个或多个共轭的或非共轭的碳-碳三键、优选具有1、2或3个碳-碳三键的非芳香族单环或多环脂肪族基团，所述环炔基通过单键与分子的剩余部分结合，包括，例如并且不限于，环辛-2-炔-1-基和类似基团，并且其可以任选地被一个或多个基团取代，所述基团如烷基、卤代、羟基、烷氧基、羧基、羰基、氰基、酰基、烷氧基-羰基、氨基、硝基、巯基和烷氧基硫代。

如本文中使用的术语“芳基”及其复数形式，是指具有6至30个、优选6至18个、更优选6至10个、甚至更优选6或10个碳原子的芳香族基团，其包含1、2、3或4个芳环，通过碳-碳键结合或稠合，并且所述芳基通过单键与分子的剩余部分结合，包括，例如并且不限于，苯基、萘基、二苯基、茚基、菲基或蒽基等。所述芳基可以任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基如卤代、羟基、烷氧基、羧基、羰基、氰基、酰基、烷氧基-羰基、氨基、硝基、巯基和烷氧基硫代。

如本文中使用的术语“芳烷基”及其复数形式，是指具有7至24个碳原子的被芳香族基团取代的烷基，并且包括，例如并且不限于，-(CH₂)1-6-苯基、-(CH₂)1-6-(1-萘基)、-(CH₂)1-6-(2-萘基)、-(CH₂)1-6-CH(苯基)₂和类似基团。所述芳烷基可以任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基如卤代、羟基、烷氧基、羧基、羰基、氰基、酰基、烷氧基-羰基、氨基、硝基、巯基和烷氧基硫代。

如本文中使用的术语“杂环基团”及其复数形式，是指这样的3-10元杂环基或烃环，其中环原子中的一个或多个，优选环原子中的1、2或3个，是不同于碳的元素，如氮、氧或硫，并且可以是饱和的或不饱和的。为了本发明的目的，所述杂环基可以是环体系、单环、双环或三环体系，其可以包括稠合环体系；并且所述氮、碳或硫原子可以任选地在杂环基中被氧化；所述氮原子可以任选地被季铵化；并且所述杂环基可以是部分或完全饱和的或可以是芳香族的。随着偏好性增加，术语杂环是指5或6元环。所述杂环基团可以任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基如卤代、羟基、烷氧基、羧基、羰基、氰基、酰基、烷氧基-羰基、氨基、硝基、巯基和烷氧基硫代。

如本文中使用的术语“杂芳基烷基”及其复数形式，是指被取代或未取代的芳香族杂环基取代的烷基，所述烷基具有1至6个碳原子和2至24个碳原子以及1至3个非碳的原子的芳香族杂环基，并且包括，例如并且不限于，-(CH₂)1-6-咪唑基，-(CH₂)1-6-三唑基，-(CH₂)1-6-噻吩基，-(CH₂)1-6-呋喃基，-(CH₂)1-6-吡咯烷基和类似基团。所述杂芳基烷基可以任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基如卤代、羟基、烷氧基、羧基、羰基、氰基、酰基、烷氧基-羰基、氨基、硝基、巯基和烷氧基硫代。

如本文中使用的术语“卤代”或“卤素”，是指氟、氯、溴或碘，并且其阴离子称为卤化物。

如本文中使用的，术语“衍生物”及其复数形式，都是指化妆品可接受的化合物，这源自可以用于制备化妆品的目标化合物，以及指化妆品不可接受的衍生物，因为这些衍生物可以用于制备化妆品可接受的衍生物。

如本文中使用的，术语“盐”及其复数形式是指现有技术中已知的那些中的任何类型的盐，例如，卤化物盐，羟基酸盐(如含氧酸盐、酸式盐、碱式盐和复盐)、羟基盐、混合盐、含氧盐或其他水合盐。该术语包含化妆品可接受的盐和化妆品不可接受的盐，因为后者可以用于制备化妆品可接受的盐。

如本文中使用的，术语“异构体”及其复数形式是指光学异构体、对映异构体、立体异构体或非对映异构体。各个对映异构体或非对映异构体，以及它们的混合物，可以通过现有技术中已知的常规技术分离。

如本文中使用的，术语“溶剂化物”及其复数形式是指现有技术中已知的任意溶剂化物，如极性、非极性或两性溶剂化物，并且包括在施用或应用于目标受试者(直接地或间接地)时提供目标化合物(本发明的一种或多种肽)的任意化妆品可接受的溶剂化物。优选地，所述溶剂化物是水合物、具有醇(如甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇)的溶剂化物、具有酯(如乙酸乙酯)的溶剂化物、具有醚(如甲醚、乙醚或THF(四氢呋喃))的溶剂化物或具有DMF(二甲基甲酰胺)的溶剂化物，并且更优选具有醇(如乙醇)的水合物或溶剂化物。

此外，如本文中使用的，术语“氨基酸”及其复数形式包括由遗传密码编码的氨基酸和非编码氨基酸，不论它们是天然还是非天然的并且不论它们是D-氨基酸还是L-氨基酸。非编码氨基酸的实例，不受限制，是瓜氨酸、鸟氨酸、肌氨酸、锁链素、正缬氨酸、4-氨基丁酸、2-氨基丁酸、2-氨基异丁酸、6-氨基己酸、1-萘基丙氨酸、2-萘基丙氨酸、2-氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、4-氯代苯基丙氨酸、2,3-二氨基丙酸、2,4-二氨基丁酸、环丝氨酸、肉碱、半胱氨酸、青霉胺、焦谷氨酸、噻吩基丙氨酸、羟基脯氨酸、别构-异亮氨酸、别构-苏氨酸、异哌啶酸、异丝氨酸、苯基甘氨酸、抑制素、β-丙氨酸、正亮氨酸、N-甲基氨基酸、α-氨基酸和β-氨基酸等，以及它们的衍生物。尽管如此，在现有技术中已知其他非天然氨基酸(参见，例如，D.C.Roberts和F.Vellaccio的“Unusual amino acids in peptide synthesis”，ThePeptide，Vol.5(1983)，第VI章，Gross E.和Meienhofer J.编辑，Academic Press，NewYork，USA)。

如本文中所使用的关于肽、多肽和蛋白质的“同一性百分比”具有现有技术中普遍归纳的含义，因此，其涉及在对两个序列进行最佳比对后比较的这两个氨基酸序列之间相同的氨基酸的百分比，其中所述百分比仅是统计学的，且两个氨基酸序列之间的差异随机分布在整个序列中。“最佳比对”要理解为产生较大同一性百分比的氨基酸序列比对。按下述计算同一性百分比：确定在两个比较的序列中氨基酸相同的相同位置的数目，将相同位置的数目除以所比较的位置的数目并将获得的结果乘以100，从而获得两个序列之间的同一性百分比。两个氨基酸序列之间的序列比较可以手动执行或借助于现有技术中已知的计算机程序执行，所述计算机程序诸如BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)算法。

如上所述，在第一方面，本发明是指式(I)的肽:

R₁-(X)_m-AA₁-AA₂-AA₃-AA₄-AA₅-(Y)n-R₂(I)

其化妆品可接受的异构体、盐、溶剂化物和/或其衍生物和混合物，其中：

X是Ala；

AA₁是Leu；

AA₂是His；

AA₃是Lys；

AA₄是Val；

AA₅是Lys；

Y是Val；

n和m各自独立地选自0和1；

R₁选自H、取代的或未取代的非环脂肪族基团、取代的或未取代的脂肪族环基、取代的或未取代的杂环基、取代的或未取代的杂芳基烷基、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的芳烷基和R₅-CO-，其中R₅选自由取代的或未取代的C₁-C₂₄烷基、取代的或未取代的C₂-C₂₄烯基、取代的或未取代的C₂-C₂₄炔基、取代的或未取代的C₃-C₂₄环烷基、取代的或未取代的C₅-C₂₄环烯基、取代的或未取代的C₈-C₂₄环炔基、取代的或未取代的C₆-C₃₀芳基、取代的或未取代的C₇-C₂₄芳烷基、取代的或未取代的3-10元杂环基环和取代的或未取代的2-24个碳原子和1-3个碳以外的原子的杂芳基烷基和1-6个碳原子的烷基链形成的组；以及

R₂选自H、-NR₃R₄-、-OR₃和-SR₃-,其中R₃和R₄独立地选自H、取代的或未取代的非环脂肪族基团、取代的或未取代的脂肪族环基、取代的或未取代的杂环基、取代的或未取代的杂芳基烷基、取代的或未取代的芳基和取代的或未取代的芳烷基。

考虑本发明的肽中使用或存在的氨基酸是L-氨基酸、D-氨基酸或其组合。在优选的实施方案中，本发明的肽中使用或存在的氨基酸是L-氨基酸。

优选地，上面提到的异构体是立体异构体。考虑所述立体异构体是对映异构体或非对映异构体。因此，在本发明的优选的实施方案中，所述是肽是外消旋混合物、非对映混合物、纯的对映异构体或纯的非对映异构体。

关于本发明的式(I)的肽具有保守取代的肽也包括在本发明的范围内。因此，与本发明的式(I)的肽基本上同源的肽在本发明的范围内，所述肽与如本文所公开的本发明的式(I)的肽具有至少75％、优选80％、优选85％、优选90％、更优选95％和甚至更优选99％的同一性百分比，并且显示本文公开的本发明的肽的一种或多种活性和效应，优选本文公开的本发明的肽的全部活性和效应。

在优选的实施方案中，m是1,且优选n是0。

在另一个优选的实施方案中，n是1且优选m是0。

优选地，R₁选自H或R₅-CO-，其中R₅选自由取代的或未取代的C₁-C₂₄烷基、取代的或未取代的C₂-C₂₄烯基、取代的或未取代的C₂-C₂₄炔基、取代的或未取代的C₃-C₂₄环烷基、取代的或未取代的C₅-C₂₄环烯基、取代的或未取代的C₈-C₂₄环炔基、取代的或未取代的C₆-C₃₀芳基、取代的或未取代的C₇-C₂₄芳烷基、取代的或未取代的3-10元杂环基环和取代的或未取代的2-24个碳原子和1-3个碳以外的原子的杂芳基烷基和1-6个碳原子的烷基链形成的组。更优选地，R₁选自H、乙酰基(后文称为Ac)、叔丁酰基、己酰基、2-甲基己酰基、环己烷甲酸基、辛酰基、癸酰基、月桂酰基、肉豆蔻酰基、棕榈酰基，硬脂酰基、油酰基和亚油酰基。甚至更优选地，R₁是H、Ac、月桂酰基、肉豆蔻酰基或棕榈酰基。在甚至更优选的实施方案中，R₁是Ac或肉豆蔻酰基。

还优选R₂是H或NH₂，更优选NH₂。

因此，在最优选的实施方案中，R₁是Ac或肉豆蔻酰基且R₂是H或NH₂,更优选NH₂

在优选的实施方案中，式(I)的肽为：

R₁-Leu-His-Lys-Val-Lys-Val-R₂(R₁-SEQ ID NO:2-R₂)；或

R₁-Ala-Leu-His-Lys-Val-Lys-R₂(R₁-SEQ ID NO:3-R₂)。

更优选地，式(I)的肽为：

肉豆蔻酰基-Leu-His-Lys-Val-Lys-Val-NH₂(肉豆蔻酰基-SEQ ID NO:2-NH₂)；或

Ac-Ala-Leu-His-Lys-Val-Lys-NH₂(Ac-SEQ ID NO:3-NH₂)。

在一个最优选的实施方案中，式(I)的肽为：

R₁-Ala-Leu-His-Lys-Val-Lys-R₂(R₁-SEQ ID NO:3-R₂)，甚至更优选Ac-Ala-Leu-His-Lys-Val-Lys-NH₂(Ac-SEQ ID NO:3-NH₂)。

在另一个最优选的实施方案中，式(I)的肽为：

R₁-Leu-His-Lys-Val-Lys-Val-R₂(R₁-SEQ ID NO:2-R₂)，甚至更优选肉豆蔻酰基-Leu-His-Lys-Val-Lys-Val-NH₂(肉豆蔻酰基-SEQ ID NO:2-NH₂)。

根据上面已经注释的内容，本发明的范围还包括关于肽R₁-SEQ ID NO:2-R₂或R₁-SEQ ID NO:3-R₂具有保守取代的肽。因此，与R₁-SEQ ID NO:2-R₂和R₁-SEQ ID NO:3-R₂基本上同源的肽在本发明的范围内，所述肽与R₁-SEQ ID NO:2-R₂或R₁-SEQ ID NO:3-R₂具有至少75％、优选80％、优选85％、优选90％、更优选95％和甚至更优选99％的同一性百分比，并且保持本文对本发明的肽所述的一种或多种活性，更优选本文对本发明的肽所述的全部活性。R₁和R₂如上面所解释和公开的那样。

本发明的肽可以根据现有技术中已知的任一种方法制备或合成，例如，通过化学合成，生物发酵或转基因制备。更优选地，本发明的肽通过化学合成制备。

本发明的肽的活性，即，抑制弹性蛋白酶的活性和抑制金属蛋白酶1和3的产生；以及调节多功能蛋白聚糖、弹性蛋白原、原纤维蛋白-1和透明质酸的合成，如上面所述，证明了所述肽(及其衍生的肽)和包含所述肽的组合物适合于用作化妆品制剂或用在化妆品制剂中，目的是改善受试者的皮肤的粘弹性和紧致度特性，因此它们可用于预防和/或减少皮肤衰老体征(例如，皱纹、粗糙和/或松弛)。

所述肽的局部应用改善真皮的粘弹性和紧致度，因为它可以直接从下面包括的实例中推导出来：

-在多功能蛋白聚糖的合成中有明显的增加，表明其是参与皮肤的此特征的最相关的分子。

-还可以观察到，当原纤维蛋白-1和弹性蛋白原增加时弹性纤维的分布也改善。另外，显示弹性蛋白酶活性被本发明的肽抑制。如上所述，公知弹性纤维的降解是衰老的主要促进因素，导致皮肤的弹性丧失、起皱纹、松弛和粗糙肌理。因此，弹性纤维的关键组分的合成增加和抑制它们的降解提供了对衰老的上述体征的改善。

-透明质酸的合成增加，改善了皮肤的水合作用、紧致度和紧绷度。

-金属蛋白酶1和3的产生减少(它们的表达下调)，即，负责ECM降解的分子的产生减少。

另外，如从下面包括的实例可以直接推导出来，本发明的肽(及其衍生的肽)和包含所述肽的组合物提供了皮肤、优选面部皮肤的改善的质量和紧致度(例如，通过改善皮肤对外部刺激或侵袭的恢复能力)。

因此，本发明的肽解决了现有技术中存在的上述技术问题。

在第二方面，本发明是指包含如本文公开的本发明的肽的组合物。

在本发明的优选的实施方案中，所述组合物是提供预防和/或减少皮肤衰老(包括时程和/或环境衰老)体征的化妆品组合物。另外，本发明的化妆品组合物因本发明的肽的上述特征改善了皮肤的粘弹性和紧致度。

考虑本发明的化妆品组合物包含本发明的一种肽或本发明的肽的组合或混合物。

在一个实施方案中，上文公开的化妆品组合物包含0.1％-0.0001％(质量/体积；即mg/ml)的本发明的肽或本发明的肽的组合。更优选地，所述组合物包含0.05％-0.001％(m/v)的本发明的肽或本发明的肽的组合。

考虑本发明的化妆品组合物还包含另外的化妆品成分。所述另外的化妆品成分包含现有技术中通常使用的那些，如，例如，辅剂诸如稳定剂，增溶剂，维生素，着色剂和香料；载剂；和/或其他化妆品活性成分。

所述另外的化妆品成分必须与组合物的其余组分、特别是与本发明的组合物中包含的本发明的肽在物理学和化学上相容。同样，所述另外的化妆品成分的性质必须不是不可接受地改变本发明的化合物的益处。所述另外的化妆品成分可以是合成的或天然来源的，如，例如，植物提取物，或它们可以源自生物发酵过程(参见，例如，CTFACosmeticIngredient Handbook，第十一版(2006))。

考虑上文提及的另外的化妆品成分包含那些通常用于组合物中以护理和/或清洁皮肤/或毛发的成分，诸如，例如，抑制黑色素合成的药剂，美白或去色素剂，抗衰老剂，抑制NO-合酶的药剂，抗氧化剂，抗空气污染和/或自由基捕获剂，抗糖化剂，乳化剂，润滑剂，有机溶剂，液体推进剂，皮肤调理剂诸如例如润湿剂，保湿物质，α羟基酸，湿润剂，维生素，色素或着色剂，染料，凝胶聚合物，增稠剂，表面活性剂，软化剂，其他抗皱剂，能够减少或消除眼袋的药剂，去角质剂，抗微生物剂，抗真菌剂，杀菌剂，刺激真皮或表皮大分子合成和/或能够预防或抑制它们的降解的药剂，诸如例如刺激胶原蛋白合成的药剂，刺激弹性蛋白合成的药剂，刺激层粘连蛋白合成的药剂，抑制胶原蛋白降解的药剂，抑制弹性蛋白降解的化学剂，刺激成纤维细胞增殖的药剂，刺激角质形成细胞增殖的药剂，刺激角质形成细胞分化的药剂，刺激脂质合成和角质层的成分(神经酰胺，脂肪酸等)的合成的药剂，舒缓剂，刺激糖胺聚糖合成的药剂，DNA修复剂，DNA保护剂，刺激蛋白酶体活性的药剂，止痒剂，治疗敏感皮肤的药剂，紧致剂(reaffirming agents)，收敛剂，皮脂产生调节剂，刺激脂解的药剂，减脂剂(anti-cellulite agents)，镇静剂，抗炎剂，作用于毛细血管循环和/或微循环的药剂，作用于细胞线粒体的药剂，用于改善真皮-表皮连接的药剂，防腐剂，香料，螯合剂，植物提取物，精油，海洋提取物，源自生物发酵过程的药剂，矿物盐，细胞提取物和/或日光滤光剂(针对紫外A和B射线的有机或无机光保护剂)等。

在一个实施方案中，所述另外的化妆品成分中的至少一种是可以发挥与对于本发明的肽在上文公开的那些化妆活性相同、相似、补充的或不同的化妆活性的化妆品有效成分或物质。

在优选的实施方案中，本发明的化妆品组合物包含其他抗衰老剂，例如刺激胶原蛋白I、III、IV和/或VI和层粘连蛋白的表达和/或合成的药剂；刺激糖胺聚糖或透明质酸合成的药剂；刺激弹性蛋白和其他弹性纤维相关蛋白的表达和/或合成的药剂；抑制胶原蛋白和/或弹性纤维降解的药剂；刺激线粒体相关蛋白(例如乙酰化酶和顺乌头酸酶)表达和/或合成的药剂；刺激粘着斑蛋白表达和/或合成的药剂；刺激角质形成细胞和/或成纤维细胞增殖和/或分化的药剂；抗氧化剂；抗大气污染剂和/或自由基捕获剂；抗糖化剂；排毒剂；减少时程衰老、环境衰老和炎症衰老的药剂；以及降低黑色素生成和/或抑制酪氨酸酶的药剂和/或刺激脂质合成和表皮组分(角蛋白)更特别是角质层组分(角蛋白、神经酰胺、丝聚蛋白、兜甲蛋白(loricrin)和SPRR1B)的合成的药剂。

另外，本发明的化妆品组合物可以以现有技术中通常使用的任何形式配制为例如溶液剂、混悬剂、乳剂、糊剂、凝胶剂、霜剂、散剂、喷雾剂、洗剂、油剂、搽剂、精华液(serum)、摩丝(mousse)、软膏剂、棒或笔，包括“免洗(leave on)”和“冲洗”制剂。本发明的化妆品组合物还可以通过现有技术中已知的技术掺入到不同类型的固体附件中，例如小毛巾、水凝胶、粘合性(或非粘合性)贴剂或面膜，或者它可以掺入到不同的彩妆系列产品中，例如遮瑕膏，彩妆粉底液，洗剂或卸妆洗剂等。

还考虑如本文所公开的本发明的化妆品组合物或本发明的肽也可以掺入到化妆品持续释放系统和/或载剂中，诸如脂质体、毫米颗粒、微米颗粒和纳米颗粒，以及在海绵、囊泡、胶束、毫米球、微米球、纳米球、脂质球、毫米胶囊、微米胶囊和纳米胶囊中，以及在微乳剂和纳米乳剂中，目的是使活性成分获得更大的渗透性。

在优选的实施方案中，本发明的化妆品组合物适合或适应于局部地涂抹在受试者的面部和/或身体上，更优选地，涂抹在人的面部、颈部和/或双下巴上。

在第三方面，本发明涉及本发明的肽或化妆品组合物作为预防和/或减少受试者的皮肤衰老体征和/或用于受试者的皮肤紧致的化妆品的用途。

本发明的肽单独地或在本发明的组合物内，以化妆品有效量使用。更优选地，所述化妆品有效量为0.1％-0.0001％(m/v),甚至更优选地，所述化妆品有效量是0.05％-0.001％(m/v)。

在一个实施方案中，皮肤衰老是时程和/或环境衰老。

在优选的实施方案中，皮肤衰老的体征是皱纹、粗糙和/或松弛。

因此，在优选的实施方案中，本发明的肽或化妆品组合物作为化妆品的上述用途是预防和/或减少皮肤衰老(包括时程和/或环境衰老)的体征，更优选地，皱纹、粗糙和松弛。

在另一优选的实施方案中，本发明的肽或化妆品组合物作为化妆品的用途用于皮肤紧致，更优选地用于改善皮肤(优选面部皮肤)的紧致度质量，甚至更优选地，用于改善皮肤对外部刺激或侵袭的恢复能力。

如上面已经说明的那样，本发明的肽或化妆品组合物作为化妆品的用途还改善皮肤的粘弹性。

还在优选的实施方案中，受试者是人。

考虑在如上面所公开的本发明的作为化妆品的用途中，本发明的肽或组合物与一种或多种另外的有效成分和/或组合物联合使用。所述一种或多种有效成分和/或组合物可以在本发明的肽或组合物之前、一起或之后使用。

在优选的实施方案中，在如上面所公开的本发明的用途中，本发明的肽和/或化妆品组合物局部地涂抹在受试者的面部和/或身体上，更优选地，涂抹在人的面部、颈部和/或双下巴上。

在第四方面，本发明是指如上面所述，本发明的肽或化妆品组合物的化妆用途，所述用途用来预防和/或减少受试者的皮肤衰老的体征和/或用于受试者的皮肤紧致。

在一个实施方案中，皮肤衰老是时程和/或环境衰老。

在优选的实施方案中，皮肤衰老(时程和/或环境衰老)的体征是皱纹、粗糙和/或松弛。

因此，在优选的实施方案中，本发明的肽或组合物的化妆用途是预防和/或减少皮肤衰老(包括，如上所述，时程和/或环境衰老)的体征，更优选地，所述体征是皱纹、粗糙和松弛。

在另一优选的实施方案中，本发明的肽或组合物的化妆用途用于皮肤紧致，更优选地用于改善皮肤(优选面部皮肤)的紧致度质量，甚至更优选地，用于改善皮肤对外部刺激或侵袭的恢复能力。

如上面已经说明的那样，本发明的肽或化妆品组合物的化妆用途还改善皮肤的粘弹性。

还在优选的实施方案中，受试者是人。

考虑在如上面所公开的本发明的化妆用途中，本发明的肽或组合物与一种或多种另外的有效成分和/或组合物联合使用。所述一种或多种有效成分和/或组合物可以在本发明的肽或组合物之前、一起或之后使用。

在优选的实施方案中，在如上面所公开的本发明的化妆用途中，本发明的肽和/或化妆品组合物局部地涂抹在受试者的面部和/或身体上，更优选地，涂抹在人的面部、颈部和/或双下巴上。

在第五方面，本发明是指预防和/或减少有需要的受试者中的皮肤衰老的体征的方法，其特征在于该方法包括使用本发明的肽或化妆品组合物。

在一个实施方案中，皮肤衰老是时程和/或环境衰老。

在优选的实施方案中，受试者是人。

考虑在本发明的方法中本发明的肽或组合物通过直接应用于人体的皮肤区带来使用。在优选的实施方案中，本发明的肽或组合物可以以溶液剂、混悬剂、乳剂、糊剂、凝胶剂、霜剂、散剂、喷雾剂、洗剂、油剂、搽剂、精华液、摩丝、软膏剂、棒或笔，包括“免洗”和“冲洗”制剂的形式应用。如上所述，还考虑本发明的肽或组合物还可以通过现有技术中已知的技术掺入到不同类型的固体附件中，例如小毛巾、水凝胶、粘合性(或非粘合性)贴剂或面膜，或者它可以掺入到不同的彩妆系列产品中，诸如遮瑕膏，彩妆粉底液，洗剂或卸妆洗剂等；以及，因此以任一种所述形式用于本发明的方法中。

如上所述，上面公开的方法是具有化妆效果的化妆方法。

考虑在如上面所公开的本发明的方法中，本发明的肽或组合物与一种或多种另外的有效成分和/或组合物联合使用。所述一种或多种有效成分和/或组合物可以在本发明的肽或组合物之前、一起或之后使用。

在优选的实施方案中，在如上面所公开的本发明的方法中，本发明的肽和/或化妆品组合物局部地涂抹在受试者的面部和/或身体上，更优选地，涂抹在人的面部、颈部和/或双下巴上。

在最后的方面，本发明是指在有需要的受试者中用于皮肤紧致的方法，其特征在于该方法包括使用本发明的肽或组合物。

本发明的用于皮肤紧致的方法包括：预防皮肤的紧致度(和粘弹性)丧失，以及治疗或纠正皮肤的紧致度(和粘弹性)丧失两者。

在优选的实施方案中，本发明的方法用于改善皮肤(优选面部皮肤)的紧致度质量，甚至更优选地，用于改善皮肤对外部刺激或侵袭的恢复能力。

在一个实施方案中，皮肤衰老是时程和/或环境衰老。

在优选的实施方案中，受试者是人。

考虑在本发明的方法中本发明的肽或组合物通过直接应用于人体的皮肤区带来使用。在优选的实施方案中，本发明的肽或组合物以溶液剂、混悬剂、乳剂、糊剂、凝胶剂、霜剂、散剂、喷雾剂、洗剂、油剂、搽剂、精华液、摩丝、软膏剂、棒或笔，包括“免洗”和“冲洗”制剂的形式应用。如上所述，还考虑本发明的肽或组合物还可以通过现有技术中已知的技术掺入到不同类型的固体附件中，例如小毛巾、水凝胶、粘合性(或非粘合性)贴剂或面膜，或者它可以掺入到不同的彩妆系列产品中，诸如遮瑕膏，彩妆粉底液，洗剂或卸妆洗剂等；以及，因此以任一种所述形式用于本发明的方法中。

如上所述，上面公开的方法是具有化妆效果的化妆方法。

如上面已经解释的那样，本发明的肽(以及，因此，还有本发明的化妆品组合物)已经显示与ECM的维持和产生相关的宽范围的活性。因此，所述肽适合于在用于皮肤紧致和/或预防、减少和/或去除皮肤衰老体征的化妆品中使用。

为了能够更好的理解，本发明在下面参照附图并参照说明性和非限制性的实施例更详细地描述，所述附图作为实例呈现。

附图说明

图1示出了与阳性对照相比(即，将阳性对照样品的弹性蛋白酶抑制百分比设为100％，然后与其余样品进行比较)，本发明的肽对弹性蛋白酶抑制的百分比(以及，因此，针对细胞外基质降解的保护作用)。图1(A)示出了用测试的三个浓度的肽肉豆蔻酰基-SEQ IDNO:2-NH₂处理获得的弹性蛋白酶抑制的百分比结果。在x轴上从左到右的柱：抑制的阳性对照(苯基甲磺酰基(PMSF)),0.001mg/ml、0.005mg/ml和0.01mg/ml的本发明的肽。在其旁边，图1(B)示出了用测试的三个浓度的肽Ac-SEQ ID NO:3-NH₂处理获得的弹性蛋白酶抑制的百分比结果。在x轴上从左到右的柱：抑制的阳性对照(PMSF),0.005mg/ml、0.01mg/ml和0.05mg/ml的本发明的肽。对于图1(A)和1(B)两者，y轴示出了弹性蛋白酶活性抑制的百分比(相对于阳性对照样品)。

图2示出了Ac-SEQ ID NO:3-NH₂对多功能蛋白聚糖合成的调节。这通过与基础对照(未处理的细胞)中多功能蛋白聚糖的量相比，在测试的样品中多功能蛋白聚糖(分泌的和细胞内)的量来显示，其中基础对照中多功能蛋白聚糖的量设定为100％，然后对其余样品进行比较。在x轴上从左到右的柱指：基础对照，用0.1μM维甲酸处理的样品(阳性对照)和用不同浓度的Ac-SEQ ID NO:3-NH₂(分别为0.01mg/ml、0.05mg/ml和0.1mg/ml)处理的样品。y轴示出了相对于基础对照的多功能蛋白聚糖合成的百分比。

图3示出了Ac-SEQ ID NO:3-NH₂对弹性蛋白原合成的调节。这通过与基础对照(未处理的细胞)中弹性蛋白原的量相比，在测试的样品中弹性蛋白原(分泌的和细胞内)的量来显示，其中基础对照中弹性蛋白原的量设定为100％，然后对其余样品进行比较。在x轴上从左到右的柱指：基础对照和用不同浓度的Ac-SEQ ID NO:3-NH₂(分别为0.01mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml和0.5mg/ml)处理的样品。y轴示出了相对于基础对照的弹性蛋白原合成的百分比。

图4示出了Ac-SEQ ID NO:3-NH₂对原纤维蛋白-1合成的调节。这通过与基础对照(未处理的细胞)中原纤维蛋白-1的量相比，在测试的样品中分泌的原纤维蛋白-1的量来显示，其中基础对照中原纤维蛋白-1的量设定为100％，然后对其余样品进行比较。在x轴上从左到右的柱指：基础对照和用不同浓度的Ac-SEQ ID NO:3-NH₂(分别为0.01mg/ml、0.05mg/ml和0.1mg/ml)处理的样品。y轴示出了相对于基础对照的原纤维蛋白-1合成的百分比。

图5示出了Ac-SEQ ID NO:3-NH₂对透明质酸合成的调节。这通过与基础对照(未处理的细胞)中透明质酸的量相比，在测试的样品中分泌的透明质酸的量来显示，其中基础对照中透明质酸的量设定为100％，然后对其余样品进行比较。在x轴上从左到右的柱指：基础对照、阳性对照(用0.1μM维甲酸处理的样品)和用不同浓度的Ac-SEQ ID NO:3-NH₂(分别为0.01mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml和0.5mg/ml)处理的样品。y轴示出了相对于基础对照的透明质酸合成的百分比。

图6示出了在用0.05mg/ml(对于原纤维蛋白-1和多功能蛋白聚糖)和0.1mg/ml(对于纤连蛋白1和金属蛋白酶1和3)的肽浓度处理6小时后Ac-SEQ ID NO:3-NH₂肽对HDFa细胞的基因表达谱的效应。基因表达水平的改变表示为相对于基础对照(未处理细胞)的正或负倍数改变。y轴上从顶部至底部的条指：金属蛋白酶-1(MMP1)，金属蛋白酶-3(MMP3)，纤连蛋白1(FN1)，原纤维蛋白-1(FBN1)和多功能蛋白聚糖(VCAN)基因，x轴指相对于基础对照的倍数改变。负的倍数改变意味着对应的基因下调；正的倍数改变意味着对应的基因上调。

图7示出了0.005mg/ml的Ac-SEQ ID NO:3-NH₂在化妆品制剂(来自0.05％(m/v)储备液的1％(m/v))中局部应用于人皮肤外植体后对多功能蛋白聚糖合成的调节。这通过与基础对照(未处理的皮肤外植体)中多功能蛋白聚糖所占据的皮肤表面的量相比，被多功能蛋白聚糖蛋白质所占据的皮肤表面(表皮和真皮)的量来显示，其中基础对照中被多功能蛋白聚糖占据的皮肤表面的量设定为100％，然后与用Ac-SEQ ID NO:3-NH₂处理的皮肤外植体进行比较。在x轴上从左到右的柱分别指：未处理的皮肤外植体和用0.005mg/ml的Ac-SEQID NO:3-NH₂处理的皮肤外植体样品。y轴示出了相对于基础对照的被多功能蛋白聚糖蛋白质占据的皮肤表面的百分比。

图8示出了0.005mg/ml的Ac-SEQ ID NO:3-NH₂在化妆品制剂(来自0.05％(m/v)储备液的1％(m/v))局部应用于人皮肤外植体后对原纤维蛋白-1合成的调节。这通过与基础对照(未处理的皮肤外植体)中原纤维蛋白-1所占据的皮肤表面的量相比，被原纤维蛋白-1蛋白质所占据的皮肤表面(表皮和真皮)的量来显示，其中基础对照中被原纤维蛋白-1占据的皮肤表面的量设定为100％，然后与用Ac-SEQ ID NO:3-NH₂处理的皮肤外植体进行比较。在x轴上从左到右的柱分别指：未处理的皮肤外植体和用0.005mg/ml的Ac-SEQ ID NO:3-NH₂处理的皮肤外植体样品。y轴示出了相对于基础对照的被原纤维蛋白-1蛋白质占据的皮肤表面的百分比。

图9示出了在局部应用于女性白种人志愿者后Ac-SEQ ID NO:3-NH₂的功效。包含来自0.05％(m/v)储备液的3％(m/v)Ac-SEQ ID NO:3-NH₂肽的化妆品制剂或安慰剂各自涂抹在每个志愿者的一侧脸(面颊)上。图9(A)示出了通过Dynaskin(Dynaskin是dermaTop系统上的附加装置以利用完全非接触法提供紧致度评价；其通过垂直于目的区域或利用45°的专用角度吹空气产生接近于临床方式的变形；该系统可以在任何位置测量；3D传感器，使用条纹投影技术，刚好在变形之前、然后当施加变形时和刚好在变形之后俘获局部表面的形状)借助于相对于处理开始(时间＝0天)时颊部的体积，颊部的平均体积(mm³)改变百分比测量获得志愿者的颊部变形。在x-轴中，从左到右三个柱的组各自对应于：分别全部从处理开始第7天、第14天和第56天。还在x-轴中，在三组柱中的每一个中，从左到右所述柱对应于：利用化妆品制剂(安慰剂)处理的志愿者，利用还包含0.015mg/ml Ac-SEQ ID NO:3-NH₂的相同制剂处理的志愿者和仅响应性志愿者(来自利用包含0.015mg/ml Ac-SEQ ID NO:3-NH₂的化妆品制剂处理的那些)。y轴示出了对于相应的处理组或响应性志愿者的平均值，相对于初始时间的体积变化百分比。图9(B)示出了借助于相对于处理开始(时间＝0天)时的面积由Dynaskin变形的颊部区域的面积(mm²)变化百分比测量的志愿者的颊部变形。在x-轴中，从左到右三个柱的组各自对应于：分别全部从处理开始第7天、第14天和第56天。还在x-轴中，在三组柱中的每一个中，从左到右所述柱对应于：利用化妆品制剂(安慰剂)处理的志愿者，利用还包含0.015mg/ml Ac-SEQ ID NO:3-NH₂的相同制剂处理的志愿者和仅响应性志愿者(来自利用包含0.015mg/ml Ac-SEQ ID NO:3-NH₂的化妆品制剂处理的那些)。y轴示出了对于相应的处理组或响应性志愿者的平均值，相对于初始时间的面积变化百分比。在它们的旁边，图9(C)示出了借助于相对于处理开始(时间＝0天)时的面积由Dynaskin变形的颊部区域的深度(mm)变化百分比测量的志愿者的颊部变形。在x-轴中，从左到右三个柱的组各自对应于：分别全部从处理开始第7天、第14天和第56天。还在x-轴中，在三组柱中的每一个中，从左到右所述柱对应于：利用化妆品制剂(安慰剂)处理的志愿者，利用还包含0.015mg/ml Ac-SEQ ID NO:3-NH₂的相同制剂处理的志愿者和仅响应性志愿者(来自利用包含0.015mg/ml Ac-SEQ ID NO:3-NH₂的化妆品制剂处理的那些)。y轴示出了对于相应的处理组或响应性志愿者的平均值，相对于初始时间的深度变化百分比。在图9(A)至9(C)中，利用标志“vol”表示的百分比是指相对于利用包含本发明的肽的化妆品制剂处理的志愿者的总数，响应性志愿者的百分比。

具体实施方式

实施例

缩写：

用于氨基酸的缩写按照Eur.J.Biochem.(1984)138:937中所概述的1983IUPAC-IUB联合委员会对生物化学术语命名的建议。

2-CITrt，2-氯代三苯甲基；Ac，乙酰基；Ala,丙氨酸；Arg，精氨酸；Boc，叔丁氧基羰基；C-末端，羧基-末端；DCM，二氯甲烷；DIEA，N,N′-二异丙基乙胺；DIPCDI，N,N′-二异丙基碳二亚胺；DMF，N,N-二甲基甲酰胺；equiv，当量；ESI-MS，电喷雾离子化质谱；Fmoc，9-芴基甲氧基羰基；His，组氨酸；HOBt，1-羟基苯并三唑；HPLC，高效液相色谱；HDFa,人真皮成纤维细胞；Ile，异亮氨酸；INCI，国际化妆品成分命名；MBHA，对甲基二苯甲胺；Leu，亮氨酸；Lys，赖氨酸；Me，甲基；MeCN，乙腈；MeOH，甲醇；Myr,肉豆蔻酰基；N-末端，氨基-末端；Palm，棕榈酰基；Pbf，2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基；PMSF,苯基甲磺酰基；RT，室温；TFA，三氟乙酸；TIS，三异丙基硅烷；Trp，色氨酸；Trt，三苯基甲基或三苯甲基；Val，缬氨酸；Z，苄氧基羰基。

关于实施例中包括的化学合成过程，注意所有合成过程在装有多孔聚乙烯盘的聚丙烯注射筒或装有多孔板的

反应器中进行。所有的试剂和溶剂是合成质量的并且在不进行另外处理的情况下使用。溶剂和可溶性试剂通过抽吸去除。利用哌啶-DMF(2:8，v/v)(至少1×1分钟，2×10分钟，5mL/g树脂)去除Fmoc基团(Lloyd Williams P.等人，Chemical Approaches to the synthesis of peptides and Proteins，CRC，1997，BocaRaton(Fla.，USA))。在脱保护、偶联以及再次脱保护阶段之间，利用DMF(3×1分钟)和DCM(3×1分钟)进行洗涤，每次使用10ml溶剂/g树脂。偶联反应利用3ml溶剂/g树脂进行。通过进行茚三酮测试进行偶联的控制(Kaiser E.等人，Anal.Biochem.，1970，34：595598)。所有合成反应和洗涤在RT进行。

实施例1.本发明的肽的合成和制备

-获得Fmoc-(X)_m-AA₁-AA₂-AA₃-AA₄-AA₅-(Y)_n-R₂-Rink-MBHA-树脂，其中AA₁是L-Leu；AA₂是His；AA₃是L-Lys；AA₄是L-Val；AA₅是L-Lys；Y是L-Val；n是1；且m是0。

将重量标准化。根据所述的通用方案，用哌啶-DMF处理4.8g(2.5mmol)的官能度为0.52mmol/g的Fmoc-Rink-MBHA树脂，以除去Fmoc基团。在DIPCDI(1.17mL；7.5mmol；3当量)和HOBt(1.01g；7.5mmol；和3当量)的存在下，用DMF作为溶剂将2.55g的Fmoc-L-Val-OH(7.5mmol；3当量)掺入脱保护的树脂上达1小时。

然后如一般方法中描述的那样洗涤所述树脂，并重复Fmoc基团的脱保护处理以偶联下一个氨基酸。按照先前描述的方案，将3.51gFmoc-L-Lys(Boc)-OH(7.5mmol；3当量)、随后2.55g Fmoc-L-Val-OH(7.5mmol；3当量)、随后3.51g Fmoc-L-Lys(Boc)-OH(7.5mmol；3当量)、随后4.65g Fmoc-L-His(Trt)-OH(7.5mmol；3当量)和随后2.65gFmoc-L-Leu-OH(7.5mmol；3当量)顺序地偶联，每个偶联在1.01g HOBt(7.5mmol；3当量)和1.17mL DIPCDI(7.5mmol；3当量)的存在下进行。如上所述，在每个氨基酸添加步骤之间，进行Fmoc基团的脱保护处理。

合成后，将肽树脂用DCM洗涤(5次，每次3分钟)，并在真空下干燥。

-获得Fmoc-(X)_m-AA₁-AA₂-AA₃-AA₄-AA₅-(Y)_n-R₂-Rink-MBHA,其中X是L-Ala；AA₁是L-Leu；AA₂是His；AA₃是L-Lys；AA₄是L-Val；AA₅是L-Lys；m是1；且n是0。

将重量标准化。根据所述的通用方案，用哌啶-DMF处理4.8g(2.5mmol)的官能度为0.52mmol/g的Fmoc-Rink-MBHA树脂，以除去Fmoc基团。在DIPCDI(1.17mL；7.5mmol；3当量)和HOBt(1.01g；7.5mmol；和3当量)的存在下，用DMF作为溶剂将3.51g的Fmoc-L-Lys(Boc)-OH(7.5mmol；3当量)掺入脱保护的树脂上达1小时。

然后如一般方法中描述的那样洗涤所述树脂，并重复Fmoc基团的脱保护处理以偶联下一个氨基酸。按照先前描述的方案，将2.55gFmoc-L-Val-OH(7.5mmol；3当量)、随后3.51g Fmoc-L-Lys(Boc)-OH(7.5mmol；3当量)、随后4.65g Fmoc-L-His(Trt)-OH(7.5mmol；3当量)、随后2.65g Fmoc-L-Leu-OH(7.5mmol；3当量)和随后2.33gFmoc-L-Ala-OH(7.5mmol；3当量)顺序地偶联，每个偶联在1.01g HOBt(7.5mmol；3当量)和1.17mL DIPCDI(7.5mmol；3当量)的存在下进行。如上所述，在每个氨基酸添加步骤之间，进行Fmoc基团的脱保护处理。

使用上面提到的合成程序，根据需要选择氨基酸,合成下列的序列：

Leu-His-Lys-Val-Lys-Val(SEQ ID NO:2)；和

Ala-Leu-His-Lys-Val-Lys(SEQ ID NO:3)。

实施例2.去除根据实施例1合成的肽的Fmoc N末端保护基团

肽酰基树脂的N末端Fmoc基团用在DMF中的20％哌啶脱保护(1×1分钟+2×10分钟)(Lloyd Williams P.等人(1997)“Chemical Approaches to the Synthesis ofPeptidesand Proteins”CRC，Boca Raton(Fla.,USA))。用DMF(5×1分钟)、DCM(4×1分钟)洗涤肽酰基树脂，并在真空下干燥。

实施例3.将R₁乙酰基基团引入到根据实施例2获得的肽酰基树脂上的方法

在25当量的DIEA存在下，使用5mL的DMF作为溶剂，用25当量的乙酸酐处理根据实施例2获得的1mmol(1当量)的肽酰基树脂。将它们反应30分钟，然后将肽酰基树脂用DMF(5×1分钟)、DCM(4×1分钟)洗涤，并在真空下干燥。

实施例4.将R₁肉豆蔻酰基基团引入到实施例2中获得的肽酰基树脂上的方法

在10当量的HOBt和10当量的DIPCDI的存在下，将10当量的预先溶解在DMF(1mL)中的肉豆蔻酸掺合到1mmol(1当量)的实施例2中获得的肽酰基树脂中。让它们反应过夜(约15小时)，之后将树脂用DMF(5×1分钟)、DCM(4×1分钟)、MeOH(5×1分钟)洗涤并在真空下干燥。

实施例5.根据实施例2、3和4获得的肽酰基树脂的聚合支持物的裂解方法

将重量标准化。将200mg的实施例2、3或4中任一个中获得的干燥肽酰基树脂用5mLTFA/TIS/H₂O(90:5:5)在室温搅拌处理2小时。收集滤液并使用50mL(8至10-倍)的冷的二乙醚沉淀。将醚溶液在减压下并在室温蒸发至干燥，将沉淀物再溶解在H₂O中的50％MeCN中并冻干。

实施例6.根据实施例5合成和制备的肽的表征

根据实施例5获得的肽的HPLC分析利用Shimadzu设备(Kyoto，日本)使用反相柱(150x4.6 mm，XBridge Peptide BEH C18，3.5μm，Waters，USA)、以MeCN(+0.036％TFA)在H₂O(+0.045％TFA)中的梯度、以1.25mL/min的流速进行，并在220nm进行检测。所有肽显示超过80％的纯度。获得的肽的性质通过ESI-MS在Water ZQ 4000检测器中使用MeOH作为流动相以0.2mL/min的流速确认。获得的结果证明肽肉豆蔻酰基-Leu-His-Lys-Val-Lys-Val-NH₂(肉豆蔻酰基-SEQ ID NO:2-NH₂)和Ac-Ala-Leu-His-Lys-Val-Lys-NH₂(Ac-SEQ ID NO:3-NH₂)被有效地合成。

实施例7.弹性蛋白酶活性抑制的测量。

测量根据实施例1-5合成的肉豆蔻酰基-SEQ ID NO:2-NH₂和Ac-SEQ ID NO:3-NH₂两种肽抑制弹性蛋白酶活性的能力。

将肽Ac-SEQ ID NO:3-NH₂在H₂O中稀释到0.005mg/ml、0.01mg/ml和0.05mg/ml的浓度，并将肽肉豆蔻酰基-SEQ ID NO:2-NH₂稀释到0.001mg/ml、0.005mg/ml和0.01mg/ml的浓度。然后在受控的条件下将各个肽稀释液与弹性蛋白酶温育。TRIS缓冲液和苯基甲磺酰基(下文称为PMSF)分别用作抑制弹性蛋白酶活性的阴性和阳性对照。随后添加特异性酶底物开始酶反应，使用平板读数仪通过在405nm的吸光度监测反应。吸光度与酶活性关联，因此，可以容易地获得弹性蛋白酶抑制活性。

在此实施例中获得的结果总结在图1中。在该图中，可以看出所有测试浓度的Ac-SEQ ID NO:3-NH₂显示出在阳性对照样品中看到的活性的大约39％的显著弹性蛋白酶抑制活性。在它旁边，肽肉豆蔻酰基-SEQ ID NO:2-NH₂,在测试的两个较低浓度也显示出抑制弹性蛋白酶的活性，其活性为在阳性对照样品中看到的活性的35％-26％。在阴性对照中没有观察到对弹性蛋白酶活性的抑制，阴性对照即为用TRIS缓冲液处理或温育的样品(图1中未显示)。

因此，可以得出结论：所述肽在测试的条件下能够抑制弹性蛋白酶。

实施例8.在细胞培养中对多功能蛋白聚糖合成的调节

使用人真皮成纤维细胞(下文称为HDFa)在体外评价Ac-SEQ ID NO:3-NH₂肽(根据实施例1-3和5合成)对多功能蛋白聚糖产生的效果。

简言之，将HDFa细胞以1x 10⁴个细胞/孔接种在96孔板中的成纤维细胞生长培养基中并在标准培养条件(37℃,95％湿度,5％CO₂)下维持24小时。在上述孵育后，移除培养基并加入含有无细胞毒性浓度的Ac-SEQ ID NO:3-NH₂肽(0.01mg/ml、0.05mg/ml和0.1mg/ml)的新培养基并孵育24小时。包括0.1μM维甲酸作为多功能蛋白聚糖刺激的阳性对照，包括未处理细胞作为基础对照。在实验结束时从所有孔收集细胞培养基和细胞裂解物，并保存在-80℃。根据生产厂商的说明书通过夹心ELISA测量多功能蛋白聚糖的从头合成。

获得的结果显示在图2中。

如上所述，使用维甲酸作为诱导多功能蛋白聚糖合成的阳性对照。

如在图2中可以容易看出的，测试的所有浓度显示与基础对照相比多功能蛋白聚糖合成的显著增加。所述多功能蛋白聚糖合成的增加遵循剂量反应曲线(与基础对照相比，0.01mg/ml、0.05mg/ml和0.10mg/ml的浓度的肽分别使多功能蛋白聚糖合成增加24％、35％和62％)，在测试的最高浓度(即，0.10mg/ml)达到大于维甲酸的值。

实施例9.在细胞培养中对弹性蛋白原合成的调节

使用HDFa在体外评价Ac-SEQ ID NO:3-NH₂肽(根据实施例1-3和5合成)对弹性蛋白原合成的潜在效应。

将HDFa以1x 10⁴个细胞/孔的密度在96孔板中培养并与无细胞毒性的递增浓度的Ac-SEQ ID NO:3-NH₂肽(0.01mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml和0.5mg/ml)孵育24小时。包括未处理细胞作为基础对照。在监测的实验时间结束时从所有孔提取细胞培养基和细胞裂解物，并保存在-80℃。根据生产厂商的说明书通过夹心ELISA测量弹性蛋白原的从头合成。

此实验的结果总结在图3中，从中可以看出测试的肽Ac-SEQ ID NO:3-NH₂的所有浓度与基础对照相比均增加弹性蛋白原的合成。同样地，如对于多功能蛋白聚糖合成那样，上述的增加遵循剂量反应曲线(与基础对照相比，0.01mg/ml、0.05mg/ml、0.10mg/ml和0.50mg/ml的浓度的肽分别使弹性蛋白原合成增加3％、11％、20％和31％)。

实施例10.在细胞培养中对原纤维蛋白-1合成的调节

使用HDFa在体外评价Ac-SEQ ID NO:3-NH₂肽(根据实施例1-3和5合成)对原纤维蛋白-1合成的调节。

将HDFa以1x 10⁴个细胞/孔的密度接种在96孔板中并与三个无细胞毒性的浓度的Ac-SEQ ID NO:3-NH₂肽(0.01mg/ml、0.05mg/ml和0.1mg/ml)接触48小时。包括未处理细胞作为基础对照。在监测的实验结束时从所有孔提取细胞培养基，并保存在-80℃。根据生产厂商的说明书通过夹心ELISA分析对原纤维蛋白-1水平的调节。

此实验的结果总结在图4中，从中可以看出肽Ac-SEQ ID NO:3-NH₂在测试的所有浓度与基础对照相比均增加原纤维蛋白-1的合成。同样地，如在多功能蛋白聚糖和弹性蛋白原合成中看到的效应那样，上述的增加也遵循剂量反应曲线(与基础对照相比，0.01mg/ml、0.05mg/ml和0.10mg/ml的浓度的肽分别使原纤维蛋白-1合成增加18％、30％和41％)。

实施例11.在细胞培养中对透明质酸合成的调节

在体外评价Ac-SEQ ID NO:3-NH₂肽(根据实施例1-3和5合成)对HDFa的透明质酸产生的调节。

简言之，将HDFa以1x 10⁴个细胞/孔的密度接种在96孔板中，然后与无细胞毒性的浓度的Ac-SEQ ID NO:3-NH₂肽(即，0.01mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml和0.5mg/ml)孵育48小时。包括0.1μM维甲酸作为阳性对照，包括未处理细胞作为基础对照。在实验结束时从所有孔提取细胞培养基，并保存在-80℃。根据生产厂商的说明书通过竞争性ELISA测量透明质酸的从头合成。

图5示出了在此实验中获得的Ac-SEQ ID NO:3-NH₂肽体外对透明质酸合成的调节并与基础对照比较的结果。Ac-SEQ ID NO:3-NH₂肽诱导透明质酸产生有3％、8％、10％和18％的剂量反应性增加，在三个较高浓度下是统计学显著的。

实施例12.在细胞培养中的基因表达调节

在体外评价在HDFa上Ac-SEQ ID NO：3-NH₂肽(根据实施例1-3和5合成)对基因表达的调节。

简言之，将HDFa细胞以4x 10⁵个细胞/孔的密度一式两份接种在6-孔板中，并在标准培养条件(37℃，95％湿度，5％CO₂)维持24小时。然后，将细胞用无细胞毒性浓度(0.05和0.1mg/ml)的Ac-SEQ ID NO：3-NH₂肽处理另外6小时。未处理细胞用作基础对照。然后将细胞裂解，利用RNA纯化市售试剂盒(RNeasy mini kit-Qiagen，Netherlands)按照生产商的说明进行RNA提取。然后通过纳米滴定量RNA，调节浓度并且使用市售试剂盒(高容量cDNA反转录试剂盒–Thermofisher Scientific，USA)进行反转录得到cDNA。使用taqman技术和一组设计靶向与细胞外基质成分和结构相关的特异性基因的探针组，将得到的cDNA进行RTqPCR(实时定量聚合酶链式反应)。

该实施例的结果总结在图6中。所述图示出了Ac-SEQ ID NO:3-NH₂肽诱导金属蛋白酶1和3(金属蛋白酶1和3参与细胞外基质降解)的下调，倍数改变分别为-1.33和-1.20。此外，细胞外基质的成分纤连蛋白1、原纤维蛋白1和多功能蛋白聚糖上调，倍数改变分别为1.41、1.55和1.22。

所有上述实验显示本发明的肽在维持细胞外基质的完整性(通过抑制弹性蛋白酶活性和在基因水平下调金属蛋白酶的表达)和在基因和蛋白水平产生细胞外基质相关成分(例如，弹性蛋白原、多功能蛋白聚糖、原纤维蛋白-1和透明质酸)两方面发挥重要活性。因此，上述结果显示本发明的肽在化妆品领域中作为紧致剂(它可以用于抗衰老产品中)的有用性。

实施例13.在人皮肤外植体上对多功能蛋白聚糖合成的调节

在来自46岁白种人女性供体的人皮肤外植体上评价Ac-SEQ ID NO：3-NH₂肽(根据实施例1-3和5合成)对多功能蛋白聚糖产生的效应。

简言之，从经历整形外科手术的志愿者供体获得皮肤外植体。捐献多余的皮肤用于本研究。利用包含来自0.05％(m/v)储备液的1％(m/v)Ac-SEQ ID NO:3-NH₂(Ac-SEQ IDNO:3-NH₂的有效终浓度为0.005mg/ml)的化妆品制剂处理皮肤外植体。在第0、2、4和7天，将测试的产品以2μl/cm²局部涂抹在皮肤外植体上，并使用小压舌板抹开。除了在第2、4和7天更换一半培养基(即，1ml)以外，未处理的外植体不接受任何处理。

在第9天，收集来自每种条件的3个外植体并将其固定在缓冲福尔马林溶液中。在缓冲福尔马林中固定24小时后，将样品脱水并在石蜡中浸泡和包埋。使用Leica RM2125Minot-型切片机制备5-μm厚切片，在

组织学载玻片上封固切片。使用Leica DMLB或Olympus BX43显微镜进行显微观察。利用数字DP72 Olympus照相机利用CellD存储软件将图片数字化。

利用在0.3％(m/v)PBS-BSA-0.05％(v/v)Tween 20中以1/1000稀释的多克隆抗-多功能蛋白聚糖抗体(OriGene)在室温进行多功能蛋白聚糖免疫染色1小时，使用生物素/链霉亲和素系统(RTU,Kit vector)扩增，通过VIP(一种过氧化物酶底物)(Vector)显色。使用自动化载玻片处理系统(Dako,AutostainerPlus)进行免疫染色。通过显微观察和图像分析评价染色。

获得的结果显示在图7中。

如可以在图7中容易看到的，0.005mg/ml的Ac-SEQ ID NO:3-NH₂显示了与未处理外植体相比，被多功能蛋白聚糖蛋白质占据的皮肤表面的显著增加(与基础对照相比，被多功能蛋白聚糖蛋白质占据的表面增加了29％)。

实施例14.在人皮肤外植体上对原纤维蛋白-1合成的调节

在来自46岁白种人女性供体的人皮肤外植体上评价Ac-SEQ ID NO：3-NH₂肽(根据实施例1-3和5合成)对原纤维蛋白-1产生的效应。

简言之，利用包含来自0.05％(m/v)储备液的1％(m/v)Ac-SEQ ID NO:3-NH₂(Ac-SEQ ID NO:3-NH₂的有效终浓度为0.005mg/ml)的化妆品制剂处理皮肤外植体。在第0、2、4和7天，将测试的产品以2μl/cm²局部涂抹在皮肤外植体上，并使用小压舌板抹开。除了在第2、4和7天更换一半培养基(即，1ml)以外，未处理的外植体不接受任何处理。

在第9天，收集来自每种条件的3个外植体并冷冻在-80℃。使用Leica CM 3050低温恒温器将冷冻的样品切成7-μm厚切片。然后在

plus硅烷化载玻片上封固切片。使用Leica DMLB或Olympus BX43显微镜进行显微观察。利用数字DP72 Olympus照相机利用CellD存储软件将图片数字化。

利用在0.3％(m/v)PBS-BSA-0.05％(v/v)Tween 20中以1/500稀释的单克隆抗-原纤维蛋白-1抗体(Novus biologicals)在冰冻切片上在室温进行原纤维蛋白-1免疫染色1小时，使用生物素/链霉亲和素系统(RTU,Kit vector)扩增，通过FITC(Invitrogen)显色。细胞核使用碘化丙啶复染。使用自动化载玻片处理系统(Dako,AutostainerPlus)进行免疫染色。通过显微观察和图像分析评价染色。

获得的结果显示在图8中。

如可以在图8中容易看到的，0.005mg/ml的Ac-SEQ ID NO:3-NH₂显示了与未处理外植体相比，被原纤维蛋白-1蛋白质占据的皮肤表面显著增加(与基础对照相比，被原纤维蛋白-1蛋白质占据的表面增加了24％)。

实施例15.对女性志愿者的皮肤紧致和抗衰老功效的临床评价

对22名白种人女性志愿者评价Ac-SEQ ID NO:3-NH₂肽(根据实施例1-3和5合成)对面部皮肤紧致度的效应。

简言之，志愿者应用含有来自0.05％(m/v)储备液的3％(m/v)Ac-SEQ ID NO:3-NH₂(Ac-SEQ ID NO:3-NH₂的有效终浓度为0.015mg/ml)的化妆品制剂或不含Ac-SEQ ID NO:3-NH₂的化妆品制剂(安慰剂)。应用方案为每天两次持续56天，早晨和睡前各一次。在各一侧洁净的脸上应用化妆品制剂以便比较安慰剂和活性物质对同一志愿者的效应。

在第0、7、14和56天，对每个志愿者使用Dynaskin装置以便根据三个参数测量皮肤紧致度的质量：体积(mm³)/面积(mm²)和深度(mm)。Dynaskin使用空气束喷射到颊区导致皮肤变形。这种变形程度通过专用软件测量，该专用软件对每个志愿者和每侧脸收集上述三个参数的数据。

在处理的天数内三个参数中的任一个参数的减小指示脸的紧致度增加，因此具有抗衰老益处。

获得的结果显示在图9中。

如可以在图9(A)至图9(C)中容易看到的，化妆品制剂中的0.015mg/ml Ac-SEQ IDNO:3-NH₂显示与初始时间相比在所有研究的时间所研究的面部皮肤的区域上体积、面积和/或深度的减小(这三个参数中任一个或所有参数的减小表示皮肤紧致度和/或去皱效应的增加)。在处理56天后看到多达20％体积减小、7％面积减小和14.5％深度减小(在利用包含本发明的肽的化妆品制剂处理的全部组中；如果仅考虑响应性志愿者，则所述百分比甚至更高)。

序列表

<110> 利波特鲁有限公司

<120> 用于化妆品的肽和组合物

<130> 2018-141030

<160> 3

<170> BiSSAP 1.3.6

<210> 1

<211> 3396

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<220>

<223> 多功能蛋白聚糖（Versican）

<400> 1

Met Phe Ile Asn Ile Lys Ser Ile Leu Trp Met Cys Ser Thr Leu Ile

1 5 10 15

Val Thr His Ala Leu His Lys Val Lys Val Gly Lys Ser Pro Pro Val

20 25 30

Arg Gly Ser Leu Ser Gly Lys Val Ser Leu Pro Cys His Phe Ser Thr

35 40 45

Met Pro Thr Leu Pro Pro Ser Tyr Asn Thr Ser Glu Phe Leu Arg Ile

50 55 60

Lys Trp Ser Lys Ile Glu Val Asp Lys Asn Gly Lys Asp Leu Lys Glu

65 70 75 80

Thr Thr Val Leu Val Ala Gln Asn Gly Asn Ile Lys Ile Gly Gln Asp

85 90 95

Tyr Lys Gly Arg Val Ser Val Pro Thr His Pro Glu Ala Val Gly Asp

100 105 110

Ala Ser Leu Thr Val Val Lys Leu Leu Ala Ser Asp Ala Gly Leu Tyr

115 120 125

Arg Cys Asp Val Met Tyr Gly Ile Glu Asp Thr Gln Asp Thr Val Ser

130 135 140

Leu Thr Val Asp Gly Val Val Phe His Tyr Arg Ala Ala Thr Ser Arg

145 150 155 160

Tyr Thr Leu Asn Phe Glu Ala Ala Gln Lys Ala Cys Leu Asp Val Gly

165 170 175

Ala Val Ile Ala Thr Pro Glu Gln Leu Phe Ala Ala Tyr Glu Asp Gly

180 185 190

Phe Glu Gln Cys Asp Ala Gly Trp Leu Ala Asp Gln Thr Val Arg Tyr

195 200 205

Pro Ile Arg Ala Pro Arg Val Gly Cys Tyr Gly Asp Lys Met Gly Lys

210 215 220

Ala Gly Val Arg Thr Tyr Gly Phe Arg Ser Pro Gln Glu Thr Tyr Asp

225 230 235 240

Val Tyr Cys Tyr Val Asp His Leu Asp Gly Asp Val Phe His Leu Thr

245 250 255

Val Pro Ser Lys Phe Thr Phe Glu Glu Ala Ala Lys Glu Cys Glu Asn

260 265 270

Gln Asp Ala Arg Leu Ala Thr Val Gly Glu Leu Gln Ala Ala Trp Arg

275 280 285

Asn Gly Phe Asp Gln Cys Asp Tyr Gly Trp Leu Ser Asp Ala Ser Val

290 295 300

Arg His Pro Val Thr Val Ala Arg Ala Gln Cys Gly Gly Gly Leu Leu

305 310 315 320

Gly Val Arg Thr Leu Tyr Arg Phe Glu Asn Gln Thr Gly Phe Pro Pro

325 330 335

Pro Asp Ser Arg Phe Asp Ala Tyr Cys Phe Lys Pro Lys Glu Ala Thr

340 345 350

Thr Ile Asp Leu Ser Ile Leu Ala Glu Thr Ala Ser Pro Ser Leu Ser

355 360 365

Lys Glu Pro Gln Met Val Ser Asp Arg Thr Thr Pro Ile Ile Pro Leu

370 375 380

Val Asp Glu Leu Pro Val Ile Pro Thr Glu Phe Pro Pro Val Gly Asn

385 390 395 400

Ile Val Ser Phe Glu Gln Lys Ala Thr Val Gln Pro Gln Ala Ile Thr

405 410 415

Asp Ser Leu Ala Thr Lys Leu Pro Thr Pro Thr Gly Ser Thr Lys Lys

420 425 430

Pro Trp Asp Met Asp Asp Tyr Ser Pro Ser Ala Ser Gly Pro Leu Gly

435 440 445

Lys Leu Asp Ile Ser Glu Ile Lys Glu Glu Val Leu Gln Ser Thr Thr

450 455 460

Gly Val Ser His Tyr Ala Thr Asp Ser Trp Asp Gly Val Val Glu Asp

465 470 475 480

Lys Gln Thr Gln Glu Ser Val Thr Gln Ile Glu Gln Ile Glu Val Gly

485 490 495

Pro Leu Val Thr Ser Met Glu Ile Leu Lys His Ile Pro Ser Lys Glu

500 505 510

Phe Pro Val Thr Glu Thr Pro Leu Val Thr Ala Arg Met Ile Leu Glu

515 520 525

Ser Lys Thr Glu Lys Lys Met Val Ser Thr Val Ser Glu Leu Val Thr

530 535 540

Thr Gly His Tyr Gly Phe Thr Leu Gly Glu Glu Asp Asp Glu Asp Arg

545 550 555 560

Thr Leu Thr Val Gly Ser Asp Glu Ser Thr Leu Ile Phe Asp Gln Ile

565 570 575

Pro Glu Val Ile Thr Val Ser Lys Thr Ser Glu Asp Thr Ile His Thr

580 585 590

His Leu Glu Asp Leu Glu Ser Val Ser Ala Ser Thr Thr Val Ser Pro

595 600 605

Leu Ile Met Pro Asp Asn Asn Gly Ser Ser Met Asp Asp Trp Glu Glu

610 615 620

Arg Gln Thr Ser Gly Arg Ile Thr Glu Glu Phe Leu Gly Lys Tyr Leu

625 630 635 640

Ser Thr Thr Pro Phe Pro Ser Gln His Arg Thr Glu Ile Glu Leu Phe

645 650 655

Pro Tyr Ser Gly Asp Lys Ile Leu Val Glu Gly Ile Ser Thr Val Ile

660 665 670

Tyr Pro Ser Leu Gln Thr Glu Met Thr His Arg Arg Glu Arg Thr Glu

675 680 685

Thr Leu Ile Pro Glu Met Arg Thr Asp Thr Tyr Thr Asp Glu Ile Gln

690 695 700

Glu Glu Ile Thr Lys Ser Pro Phe Met Gly Lys Thr Glu Glu Glu Val

705 710 715 720

Phe Ser Gly Met Lys Leu Ser Thr Ser Leu Ser Glu Pro Ile His Val

725 730 735

Thr Glu Ser Ser Val Glu Met Thr Lys Ser Phe Asp Phe Pro Thr Leu

740 745 750

Ile Thr Lys Leu Ser Ala Glu Pro Thr Glu Val Arg Asp Met Glu Glu

755 760 765

Asp Phe Thr Ala Thr Pro Gly Thr Thr Lys Tyr Asp Glu Asn Ile Thr

770 775 780

Thr Val Leu Leu Ala His Gly Thr Leu Ser Val Glu Ala Ala Thr Val

785 790 795 800

Ser Lys Trp Ser Trp Asp Glu Asp Asn Thr Thr Ser Lys Pro Leu Glu

805 810 815

Ser Thr Glu Pro Ser Ala Ser Ser Lys Leu Pro Pro Ala Leu Leu Thr

820 825 830

Thr Val Gly Met Asn Gly Lys Asp Lys Asp Ile Pro Ser Phe Thr Glu

835 840 845

Asp Gly Ala Asp Glu Phe Thr Leu Ile Pro Asp Ser Thr Gln Lys Gln

850 855 860

Leu Glu Glu Val Thr Asp Glu Asp Ile Ala Ala His Gly Lys Phe Thr

865 870 875 880

Ile Arg Phe Gln Pro Thr Thr Ser Thr Gly Ile Ala Glu Lys Ser Thr

885 890 895

Leu Arg Asp Ser Thr Thr Glu Glu Lys Val Pro Pro Ile Thr Ser Thr

900 905 910

Glu Gly Gln Val Tyr Ala Thr Met Glu Gly Ser Ala Leu Gly Glu Val

915 920 925

Glu Asp Val Asp Leu Ser Lys Pro Val Ser Thr Val Pro Gln Phe Ala

930 935 940

His Thr Ser Glu Val Glu Gly Leu Ala Phe Val Ser Tyr Ser Ser Thr

945 950 955 960

Gln Glu Pro Thr Thr Tyr Val Asp Ser Ser His Thr Ile Pro Leu Ser

965 970 975

Val Ile Pro Lys Thr Asp Trp Gly Val Leu Val Pro Ser Val Pro Ser

980 985 990

Glu Asp Glu Val Leu Gly Glu Pro Ser Gln Asp Ile Leu Val Ile Asp

995 1000 1005

Gln Thr Arg Leu Glu Ala Thr Ile Ser Pro Glu Thr Met Arg Thr Thr

1010 1015 1020

Lys Ile Thr Glu Gly Thr Thr Gln Glu Glu Phe Pro Trp Lys Glu Gln

1025 1030 1035 1040

Thr Ala Glu Lys Pro Val Pro Ala Leu Ser Ser Thr Ala Trp Thr Pro

1045 1050 1055

Lys Glu Ala Val Thr Pro Leu Asp Glu Gln Glu Gly Asp Gly Ser Ala

1060 1065 1070

Tyr Thr Val Ser Glu Asp Glu Leu Leu Thr Gly Ser Glu Arg Val Pro

1075 1080 1085

Val Leu Glu Thr Thr Pro Val Gly Lys Ile Asp His Ser Val Ser Tyr

1090 1095 1100

Pro Pro Gly Ala Val Thr Glu His Lys Val Lys Thr Asp Glu Val Val

1105 1110 1115 1120

Thr Leu Thr Pro Arg Ile Gly Pro Lys Val Ser Leu Ser Pro Gly Pro

1125 1130 1135

Glu Gln Lys Tyr Glu Thr Glu Gly Ser Ser Thr Thr Gly Phe Thr Ser

1140 1145 1150

Ser Leu Ser Pro Phe Ser Thr His Ile Thr Gln Leu Met Glu Glu Thr

1155 1160 1165

Thr Thr Glu Lys Thr Ser Leu Glu Asp Ile Asp Leu Gly Ser Gly Leu

1170 1175 1180

Phe Glu Lys Pro Lys Ala Thr Glu Leu Ile Glu Phe Ser Thr Ile Lys

1185 1190 1195 1200

Val Thr Val Pro Ser Asp Ile Thr Thr Ala Phe Ser Ser Val Asp Arg

1205 1210 1215

Leu His Thr Thr Ser Ala Phe Lys Pro Ser Ser Ala Ile Thr Lys Lys

1220 1225 1230

Pro Pro Leu Ile Asp Arg Glu Pro Gly Glu Glu Thr Thr Ser Asp Met

1235 1240 1245

Val Ile Ile Gly Glu Ser Thr Ser His Val Pro Pro Thr Thr Leu Glu

1250 1255 1260

Asp Ile Val Ala Lys Glu Thr Glu Thr Asp Ile Asp Arg Glu Tyr Phe

1265 1270 1275 1280

Thr Thr Ser Ser Pro Pro Ala Thr Gln Pro Thr Arg Pro Pro Thr Val

1285 1290 1295

Glu Asp Lys Glu Ala Phe Gly Pro Gln Ala Leu Ser Thr Pro Gln Pro

1300 1305 1310

Pro Ala Ser Thr Lys Phe His Pro Asp Ile Asn Val Tyr Ile Ile Glu

1315 1320 1325

Val Arg Glu Asn Lys Thr Gly Arg Met Ser Asp Leu Ser Val Ile Gly

1330 1335 1340

His Pro Ile Asp Ser Glu Ser Lys Glu Asp Glu Pro Cys Ser Glu Glu

1345 1350 1355 1360

Thr Asp Pro Val His Asp Leu Met Ala Glu Ile Leu Pro Glu Phe Pro

1365 1370 1375

Asp Ile Ile Glu Ile Asp Leu Tyr His Ser Glu Glu Asn Glu Glu Glu

1380 1385 1390

Glu Glu Glu Cys Ala Asn Ala Thr Asp Val Thr Thr Thr Pro Ser Val

1395 1400 1405

Gln Tyr Ile Asn Gly Lys His Leu Val Thr Thr Val Pro Lys Asp Pro

1410 1415 1420

Glu Ala Ala Glu Ala Arg Arg Gly Gln Phe Glu Ser Val Ala Pro Ser

1425 1430 1435 1440

Gln Asn Phe Ser Asp Ser Ser Glu Ser Asp Thr His Pro Phe Val Ile

1445 1450 1455

Ala Lys Thr Glu Leu Ser Thr Ala Val Gln Pro Asn Glu Ser Thr Glu

1460 1465 1470

Thr Thr Glu Ser Leu Glu Val Thr Trp Lys Pro Glu Thr Tyr Pro Glu

1475 1480 1485

Thr Ser Glu His Phe Ser Gly Gly Glu Pro Asp Val Phe Pro Thr Val

1490 1495 1500

Pro Phe His Glu Glu Phe Glu Ser Gly Thr Ala Lys Lys Gly Ala Glu

1505 1510 1515 1520

Ser Val Thr Glu Arg Asp Thr Glu Val Gly His Gln Ala His Glu His

1525 1530 1535

Thr Glu Pro Val Ser Leu Phe Pro Glu Glu Ser Ser Gly Glu Ile Ala

1540 1545 1550

Ile Asp Gln Glu Ser Gln Lys Ile Ala Phe Ala Arg Ala Thr Glu Val

1555 1560 1565

Thr Phe Gly Glu Glu Val Glu Lys Ser Thr Ser Val Thr Tyr Thr Pro

1570 1575 1580

Thr Ile Val Pro Ser Ser Ala Ser Ala Tyr Val Ser Glu Glu Glu Ala

1585 1590 1595 1600

Val Thr Leu Ile Gly Asn Pro Trp Pro Asp Asp Leu Leu Ser Thr Lys

1605 1610 1615

Glu Ser Trp Val Glu Ala Thr Pro Arg Gln Val Val Glu Leu Ser Gly

1620 1625 1630

Ser Ser Ser Ile Pro Ile Thr Glu Gly Ser Gly Glu Ala Glu Glu Asp

1635 1640 1645

Glu Asp Thr Met Phe Thr Met Val Thr Asp Leu Ser Gln Arg Asn Thr

1650 1655 1660

Thr Asp Thr Leu Ile Thr Leu Asp Thr Ser Arg Ile Ile Thr Glu Ser

1665 1670 1675 1680

Phe Phe Glu Val Pro Ala Thr Thr Ile Tyr Pro Val Ser Glu Gln Pro

1685 1690 1695

Ser Ala Lys Val Val Pro Thr Lys Phe Val Ser Glu Thr Asp Thr Ser

1700 1705 1710

Glu Trp Ile Ser Ser Thr Thr Val Glu Glu Lys Lys Arg Lys Glu Glu

1715 1720 1725

Glu Gly Thr Thr Gly Thr Ala Ser Thr Phe Glu Val Tyr Ser Ser Thr

1730 1735 1740

Gln Arg Ser Asp Gln Leu Ile Leu Pro Phe Glu Leu Glu Ser Pro Asn

1745 1750 1755 1760

Val Ala Thr Ser Ser Asp Ser Gly Thr Arg Lys Ser Phe Met Ser Leu

1765 1770 1775

Thr Thr Pro Thr Gln Ser Glu Arg Glu Met Thr Asp Ser Thr Pro Val

1780 1785 1790

Phe Thr Glu Thr Asn Thr Leu Glu Asn Leu Gly Ala Gln Thr Thr Glu

1795 1800 1805

His Ser Ser Ile His Gln Pro Gly Val Gln Glu Gly Leu Thr Thr Leu

1810 1815 1820

Pro Arg Ser Pro Ala Ser Val Phe Met Glu Gln Gly Ser Gly Glu Ala

1825 1830 1835 1840

Ala Ala Asp Pro Glu Thr Thr Thr Val Ser Ser Phe Ser Leu Asn Val

1845 1850 1855

Glu Tyr Ala Ile Gln Ala Glu Lys Glu Val Ala Gly Thr Leu Ser Pro

1860 1865 1870

His Val Glu Thr Thr Phe Ser Thr Glu Pro Thr Gly Leu Val Leu Ser

1875 1880 1885

Thr Val Met Asp Arg Val Val Ala Glu Asn Ile Thr Gln Thr Ser Arg

1890 1895 1900

Glu Ile Val Ile Ser Glu Arg Leu Gly Glu Pro Asn Tyr Gly Ala Glu

1905 1910 1915 1920

Ile Arg Gly Phe Ser Thr Gly Phe Pro Leu Glu Glu Asp Phe Ser Gly

1925 1930 1935

Asp Phe Arg Glu Tyr Ser Thr Val Ser His Pro Ile Ala Lys Glu Glu

1940 1945 1950

Thr Val Met Met Glu Gly Ser Gly Asp Ala Ala Phe Arg Asp Thr Gln

1955 1960 1965

Thr Ser Pro Ser Thr Val Pro Thr Ser Val His Ile Ser His Ile Ser

1970 1975 1980

Asp Ser Glu Gly Pro Ser Ser Thr Met Val Ser Thr Ser Ala Phe Pro

1985 1990 1995 2000

Trp Glu Glu Phe Thr Ser Ser Ala Glu Gly Ser Gly Glu Gln Leu Val

2005 2010 2015

Thr Val Ser Ser Ser Val Val Pro Val Leu Pro Ser Ala Val Gln Lys

2020 2025 2030

Phe Ser Gly Thr Ala Ser Ser Ile Ile Asp Glu Gly Leu Gly Glu Val

2035 2040 2045

Gly Thr Val Asn Glu Ile Asp Arg Arg Ser Thr Ile Leu Pro Thr Ala

2050 2055 2060

Glu Val Glu Gly Thr Lys Ala Pro Val Glu Lys Glu Glu Val Lys Val

2065 2070 2075 2080

Ser Gly Thr Val Ser Thr Asn Phe Pro Gln Thr Ile Glu Pro Ala Lys

2085 2090 2095

Leu Trp Ser Arg Gln Glu Val Asn Pro Val Arg Gln Glu Ile Glu Ser

2100 2105 2110

Glu Thr Thr Ser Glu Glu Gln Ile Gln Glu Glu Lys Ser Phe Glu Ser

2115 2120 2125

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2130 2135 2140

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2145 2150 2155 2160

Lys Lys Thr Tyr Ser Asp Asp Lys Glu Met Lys Glu Glu Asp Thr Ser

2165 2170 2175

Leu Val Asn Met Ser Thr Pro Asp Pro Asp Ala Asn Gly Leu Glu Ser

2180 2185 2190

Tyr Thr Thr Leu Pro Glu Ala Thr Glu Lys Ser His Phe Phe Leu Ala

2195 2200 2205

Thr Ala Leu Val Thr Glu Ser Ile Pro Ala Glu His Val Val Thr Asp

2210 2215 2220

Ser Pro Ile Lys Lys Glu Glu Ser Thr Lys His Phe Pro Lys Gly Met

2225 2230 2235 2240

Arg Pro Thr Ile Gln Glu Ser Asp Thr Glu Leu Leu Phe Ser Gly Leu

2245 2250 2255

Gly Ser Gly Glu Glu Val Leu Pro Thr Leu Pro Thr Glu Ser Val Asn

2260 2265 2270

Phe Thr Glu Val Glu Gln Ile Asn Asn Thr Leu Tyr Pro His Thr Ser

2275 2280 2285

Gln Val Glu Ser Thr Ser Ser Asp Lys Ile Glu Asp Phe Asn Arg Met

2290 2295 2300

Glu Asn Val Ala Lys Glu Val Gly Pro Leu Val Ser Gln Thr Asp Ile

2305 2310 2315 2320

Phe Glu Gly Ser Gly Ser Val Thr Ser Thr Thr Leu Ile Glu Ile Leu

2325 2330 2335

Ser Asp Thr Gly Ala Glu Gly Pro Thr Val Ala Pro Leu Pro Phe Ser

2340 2345 2350

Thr Asp Ile Gly His Pro Gln Asn Gln Thr Val Arg Trp Ala Glu Glu

2355 2360 2365

Ile Gln Thr Ser Arg Pro Gln Thr Ile Thr Glu Gln Asp Ser Asn Lys

2370 2375 2380

Asn Ser Ser Thr Ala Glu Ile Asn Glu Thr Thr Thr Ser Ser Thr Asp

2385 2390 2395 2400

Phe Leu Ala Arg Ala Tyr Gly Phe Glu Met Ala Lys Glu Phe Val Thr

2405 2410 2415

Ser Ala Pro Lys Pro Ser Asp Leu Tyr Tyr Glu Pro Ser Gly Glu Gly

2420 2425 2430

Ser Gly Glu Val Asp Ile Val Asp Ser Phe His Thr Ser Ala Thr Thr

2435 2440 2445

Gln Ala Thr Arg Gln Glu Ser Ser Thr Thr Phe Val Ser Asp Gly Ser

2450 2455 2460

Leu Glu Lys His Pro Glu Val Pro Ser Ala Lys Ala Val Thr Ala Asp

2465 2470 2475 2480

Gly Phe Pro Thr Val Ser Val Met Leu Pro Leu His Ser Glu Gln Asn

2485 2490 2495

Lys Ser Ser Pro Asp Pro Thr Ser Thr Leu Ser Asn Thr Val Ser Tyr

2500 2505 2510

Glu Arg Ser Thr Asp Gly Ser Phe Gln Asp Arg Phe Arg Glu Phe Glu

2515 2520 2525

Asp Ser Thr Leu Lys Pro Asn Arg Lys Lys Pro Thr Glu Asn Ile Ile

2530 2535 2540

Ile Asp Leu Asp Lys Glu Asp Lys Asp Leu Ile Leu Thr Ile Thr Glu

2545 2550 2555 2560

Ser Thr Ile Leu Glu Ile Leu Pro Glu Leu Thr Ser Asp Lys Asn Thr

2565 2570 2575

Ile Ile Asp Ile Asp His Thr Lys Pro Val Tyr Glu Asp Ile Leu Gly

2580 2585 2590

Met Gln Thr Asp Ile Asp Thr Glu Val Pro Ser Glu Pro His Asp Ser

2595 2600 2605

Asn Asp Glu Ser Asn Asp Asp Ser Thr Gln Val Gln Glu Ile Tyr Glu

2610 2615 2620

Ala Ala Val Asn Leu Ser Leu Thr Glu Glu Thr Phe Glu Gly Ser Ala

2625 2630 2635 2640

Asp Val Leu Ala Ser Tyr Thr Gln Ala Thr His Asp Glu Ser Met Thr

2645 2650 2655

Tyr Glu Asp Arg Ser Gln Leu Asp His Met Gly Phe His Phe Thr Thr

2660 2665 2670

Gly Ile Pro Ala Pro Ser Thr Glu Thr Glu Leu Asp Val Leu Leu Pro

2675 2680 2685

Thr Ala Thr Ser Leu Pro Ile Pro Arg Lys Ser Ala Thr Val Ile Pro

2690 2695 2700

Glu Ile Glu Gly Ile Lys Ala Glu Ala Lys Ala Leu Asp Asp Met Phe

2705 2710 2715 2720

Glu Ser Ser Thr Leu Ser Asp Gly Gln Ala Ile Ala Asp Gln Ser Glu

2725 2730 2735

Ile Ile Pro Thr Leu Gly Gln Phe Glu Arg Thr Gln Glu Glu Tyr Glu

2740 2745 2750

Asp Lys Lys His Ala Gly Pro Ser Phe Gln Pro Glu Phe Ser Ser Gly

2755 2760 2765

Ala Glu Glu Ala Leu Val Asp His Thr Pro Tyr Leu Ser Ile Ala Thr

2770 2775 2780

Thr His Leu Met Asp Gln Ser Val Thr Glu Val Pro Asp Val Met Glu

2785 2790 2795 2800

Gly Ser Asn Pro Pro Tyr Tyr Thr Asp Thr Thr Leu Ala Val Ser Thr

2805 2810 2815

Phe Ala Lys Leu Ser Ser Gln Thr Pro Ser Ser Pro Leu Thr Ile Tyr

2820 2825 2830

Ser Gly Ser Glu Ala Ser Gly His Thr Glu Ile Pro Gln Pro Ser Ala

2835 2840 2845

Leu Pro Gly Ile Asp Val Gly Ser Ser Val Met Ser Pro Gln Asp Ser

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Phe Lys Glu Ile His Val Asn Ile Glu Ala Thr Phe Lys Pro Ser Ser

2865 2870 2875 2880

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2885 2890 2895

Lys Leu Glu Pro Ser Glu Asp Asp Gly Lys Pro Glu Leu Leu Glu Glu

2900 2905 2910

Met Glu Ala Ser Pro Thr Glu Leu Ile Ala Val Glu Gly Thr Glu Ile

2915 2920 2925

Leu Gln Asp Phe Gln Asn Lys Thr Asp Gly Gln Val Ser Gly Glu Ala

2930 2935 2940

Ile Lys Met Phe Pro Thr Ile Lys Thr Pro Glu Ala Gly Thr Val Ile

2945 2950 2955 2960

Thr Thr Ala Asp Glu Ile Glu Leu Glu Gly Ala Thr Gln Trp Pro His

2965 2970 2975

Ser Thr Ser Ala Ser Ala Thr Tyr Gly Val Glu Ala Gly Val Val Pro

2980 2985 2990

Trp Leu Ser Pro Gln Thr Ser Glu Arg Pro Thr Leu Ser Ser Ser Pro

2995 3000 3005

Glu Ile Asn Pro Glu Thr Gln Ala Ala Leu Ile Arg Gly Gln Asp Ser

3010 3015 3020

Thr Ile Ala Ala Ser Glu Gln Gln Val Ala Ala Arg Ile Leu Asp Ser

3025 3030 3035 3040

Asn Asp Gln Ala Thr Val Asn Pro Val Glu Phe Asn Thr Glu Val Ala

3045 3050 3055

Thr Pro Pro Phe Ser Leu Leu Glu Thr Ser Asn Glu Thr Asp Phe Leu

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Ile Gly Ile Asn Glu Glu Ser Val Glu Gly Thr Ala Ile Tyr Leu Pro

3075 3080 3085

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3090 3095 3100

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3105 3110 3115 3120

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3125 3130 3135

Arg Asn Gly Ala Thr Cys Val Asp Gly Phe Asn Thr Phe Arg Cys Leu

3140 3145 3150

Cys Leu Pro Ser Tyr Val Gly Ala Leu Cys Glu Gln Asp Thr Glu Thr

3155 3160 3165

Cys Asp Tyr Gly Trp His Lys Phe Gln Gly Gln Cys Tyr Lys Tyr Phe

3170 3175 3180

Ala His Arg Arg Thr Trp Asp Ala Ala Glu Arg Glu Cys Arg Leu Gln

3185 3190 3195 3200

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3205 3210 3215

Asn Arg Val Gly His Asp Tyr Gln Trp Ile Gly Leu Asn Asp Lys Met

3220 3225 3230

Phe Glu His Asp Phe Arg Trp Thr Asp Gly Ser Thr Leu Gln Tyr Glu

3235 3240 3245

Asn Trp Arg Pro Asn Gln Pro Asp Ser Phe Phe Ser Ala Gly Glu Asp

3250 3255 3260

Cys Val Val Ile Ile Trp His Glu Asn Gly Gln Trp Asn Asp Val Pro

3265 3270 3275 3280

Cys Asn Tyr His Leu Thr Tyr Thr Cys Lys Lys Gly Thr Val Ala Cys

3285 3290 3295

Gly Gln Pro Pro Val Val Glu Asn Ala Lys Thr Phe Gly Lys Met Lys

3300 3305 3310

Pro Arg Tyr Glu Ile Asn Ser Leu Ile Arg Tyr His Cys Lys Asp Gly

3315 3320 3325

Phe Ile Gln Arg His Leu Pro Thr Ile Arg Cys Leu Gly Asn Gly Arg

3330 3335 3340

Trp Ala Ile Pro Lys Ile Thr Cys Met Asn Pro Ser Ala Tyr Gln Arg

3345 3350 3355 3360

Thr Tyr Ser Met Lys Tyr Phe Lys Asn Ser Ser Ser Ala Lys Asp Asn

3365 3370 3375

Ser Ile Asn Thr Ser Lys His Asp His Arg Trp Ser Arg Arg Trp Gln

3380 3385 3390

Glu Ser Arg Arg

3395

<210> 2

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工合成的肽

<400> 2

Leu His Lys Val Lys Val

1 5

<210> 3

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工合成的肽

<400> 3

Ala Leu His Lys Val Lys

1 5

Claims

1.下式(I)的肽:

R₁-(X)_m-AA₁-AA₂-AA₃-AA₄-AA₅-(Y)n-R₂

(I)，

X是Ala；

AA₁是Leu；

AA₂是His；

AA₃是Lys；

AA₄是Val；

AA₅是Lys；

Y是Val；

n和m各自独立地选自0和1；

R₁选自H、取代的或未取代的非环脂肪族基团、取代的或未取代的脂肪族环基、取代的或未取代的杂环基、取代的或未取代的杂芳基烷基、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的芳烷基和R₅-CO-，其中R₅选自由取代的或未取代的C₁-C₂₄烷基、取代的或未取代的C₂-C₂₄烯基、取代的或未取代的C₂-C₂₄炔基、取代的或未取代的C₃-C₂₄环烷基、取代的或未取代的C₅-C₂₄环烯基、取代的或未取代的C₈-C₂₄环炔基、取代的或未取代的C₆-C₃₀芳基、取代的或未取代的C₇-C₂₄芳烷基、取代的或未取代的3-10元杂环基环和取代的或未取代的2-24个碳原子和1-3个碳以外的原子的杂芳基烷基和1-6个碳原子的烷基链形成的组，以及

2.根据权利要求1所述的肽，其特征在于所述氨基酸是L-氨基酸。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的肽，其特征在于m是1，n是0。

4.根据权利要求1或权利要求2所述的肽，其特征在于m是0，n是1。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的肽，其特征在于R₁是乙酰基或肉豆蔻酰基。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的肽，其特征在于R₂是H或NH₂。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的肽，其特征在于所述式(I)的肽为：

R₁-Leu-His-Lys-Val-Lys-Val-R₂(R₁-SEQ ID NO:2-R₂)；或

R₁-Ala-Leu-His-Lys-Val-Lys-R₂(R₁-SEQ ID NO:3-R₂)。

8.根据权利要求7所述的肽，其特征在于所述式(I)的肽为：

Ac-Ala-Leu-His-Lys-Val-Lys-NH₂(Ac-SEQ ID NO:3-NH₂)。

9.化妆品组合物，所述化妆品组合物包含根据权利要求1-8中任一项所述的肽。

10.根据权利要求1-8中任一项所述的肽或根据权利要求9所述的化妆品组合物作为化妆品的用途，用于预防和/或减轻受试者中的皮肤衰老体征和/或用于受试者的皮肤紧致。

11.根据权利要求1-8中任一项所述的肽或根据权利要求9所述的化妆组合物预防和/或减轻受试者中的皮肤衰老体征和/或用于受试者的皮肤紧致的化妆用途。

12.预防和/或减轻有需要的受试者中的皮肤衰老体征的方法，其特征在于所述方法包括使用根据权利要求1-8中任一项所述的肽或根据权利要求9所述的组合物。

13.用于有需要的受试者的皮肤紧致的方法，其特征在于所述方法包括使用根据权利要求1-8中任一项所述的肽或根据权利要求9所述的化妆品组合物。