BRPI0617952A2 - composição antigênica compreendendo um antìgeno de um patógeno de um animal de uma primeira espécie, bem como uso de vacinas para o tratamento/prevenção da transmissão de patógenos da gripe entre espécies - Google Patents

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Abstract

COMPOSIçãO ANTIGêNICA COMPREENDENDO UM ANTìGENO DE UM PATóGENO DE UM ANIMAL DE UMA PRIMEIRA ESPéCIE, BEM COMO USO DE VACINAS PARA O TRATAMENTO/ PREVENçãO DA TRANSMISSãO DE PATóGENOS DA GRIPE ENTRE ESPéCIES<D> A presente invenção refere-se a um método para a prevenção da transmissão de um patógeno de um animal de uma primeira espécie a um animal de uma segunda espécie caracterizado pelo fato de que o antígeno de um patógeno de um animal de uma primeira espécie é usado para a imunização de um animal de uma segunda espécie contra o patógeno do animal da primeira espécie, em que a administração do referido antígeno resulta na redução ou na ausência da reprodução de patógeno do animal da primeira espécie em um animal da segunda espécie.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSI-ÇÃO ANTIGÊNICA COMPREENDENDO UM ANTÍGENO DE UM PATÓ-GENO DE UM ANIMAL DE UMA PRIMEIRA ESPÉCIE, BEM COMO USODE VACINAS PARA O TRATAMENTO/PREVENÇÃO DA TRANSMISSÃODE PATÓGENOS DA GRIPE ENTRE ESPÉCIES".CAMPO DA INVENÇÃO
A presente invenção refere-se ao campo da medicina, de prefe-rência ao campo das doenças infecciosas. Em particular, a presente inven-ção refere-se à vacinação de animais de uma primeira espécie a fim de pre-venir transmissão intra-espécies ("transmissão horizontal·'), bem como astransmissões interespécies ("transmissão verticat') de patógenos. Mais par-ticularmente, a presente invenção refere-se às vacinas contra a gripe e seuuso para o tratamento e prevenção de infecções da gripe, e também para aprevenção da transmissão intra- e interespécies de gripe.
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
A infecção da gripe permanece uma infecção importante emanimais e seres humanos. A gripe é causada por vírus que passam por alte-rações/modificações antigênicas contínuas e que possuem um reservatórioanimal. Dessa forma, podem ocorrer novas epidemias e pandemias no futu-ro, e a erradicação da doença será de difícil obtenção. Os vírus da gripe sãobem conhecidos na técnica e são descritos com mais detalhes, por exemplo,por P. Palese, "Nature Medicine", vol. 10, n9 12, pp. S 82 a S 86 de dezem-bro de 2004, com referências adicionais. Resumidamente, o genoma do ví-rus da gripe A consiste em oito segmentos de fita única, e as partículas viraispossuem duas glicoproteínas principais em sua superfície: hemaglutinina (H)e neuraminidase (N). Com pelo menos 15 subtipos diferentes de hemagluti-nina (H1 a H15) e 9 subtipos diferentes de neuraminidase (N1 a N9), há umavariação antigênica considerável entre os vírus da gripe.
Demonstrou-se que o vírus da gripe do tipo H5N1, o vírus daPraga Aviária, infecta tanto porcos quanto o homem. Os vírus também po-dem ser transmitidos diretamente de espécies aviárias aos seres humanos(Claas et ai, Lancet 1998, 351: 472; Suarez et ai, J. Viroi 1998, 72:6.678; Subbarao et aí., Science 1998, 279: 393; Shortridge, Vaccine 1999,17 (Suppl. 1): S26-S29). A mortalidade em casos clínicos humanos conheci-dos se aproxima de cerca de 50%.
Ao longo do último século, os porcos têm sido um vetor impor-tante para pandemias de gripe. Porcos, camelos e focas, de preferência por-cos, podem servir como uma "câmara de mistura" para os vírus da gripe avi-ária e, portanto, representam um fator de risco potencial para a superaçãoda barreira entre espécies das aves domésticas, o reservatório natural dosvírus da gripe, aos mamíferos. Isso ocorre normalmente por infecções du-pias dos animais suscetíveis, por exemplo, porco, com ambos os vírus, umvírus estabelecido de gripe mamífera (suínos) e um vírus da gripe aviária.
Essa infecção dupla pode criar novos vírus recombinantes que podem ser acausa de pandemias humanas ou suínas. No entanto, evidências recentesindicam que uma recombinação de cepas aviárias H5 atuais com vírus dagripe mamífera não resultariam em recombinantes altamente virulentos. Poroutro lado, o vírus da gripe aviária pode infectar porcos e, por mutações es-pontâneas, pode se adaptar aos mesmos. A barreira crítica será superadalogo que o vírus puder causar infecções horizontais dentro de uma popula-ção de porcos (ou de outro mamífero).
No entanto, uma parte importante dos porcos do sudeste asiáti-co foi infectada com cepas do vírus da gripe aviária (H5) que se originam decriações vizinhas de aves domésticas. Como essas infecções até hoje foramsubclínicas, elas só podem ser diagnosticadas por métodos laboratoriais e,desse modo, podem passar freqüentemente despercebidas. Há um riscoelevado de que esses porcos infectados de forma subclínica possam ofere-cer uma oportunidade para que o vírus se adapte ao sistema mamífero, seespalhe dentro da população suína, e também infecte seres humanos.
Na medida em que se espera que a barreira entre espécies en-tre porcos e seres humanos seja baixa, o risco de infecções horizontais davariante "suína" dos vírus da gripe dentro de humanos aumenta dramatica-mente. As vacinas disponíveis atualmente contra infecção por gripe A sãopreparações de vacina com vírus morto que contêm variantes dos subtiposde gripe H1, H2 e H3. O uso dessas vacinas limita-se à vacinação de sereshumanos a fim de prevenir a transmissão de homem para homem. Dessaforma, essas vacinas, incluindo a estratégia de vacinação atual para evitar atransmissão homem para homem, não são preventivas com relação àtransmissão e adaptação dos vírus da gripe não mamífera a mamíferos. Es-sas vacinas, incluindo a estratégia de vacinação atual, não consideram sufi-cientemente o fato de que os vírus da gripe não mamífera, por exemplo, ovírus da gripe aviária, são capazes de infectar mamíferos não humanos, porexemplo, porcos, camelos, focas etc., e de recombinar com vírus da gripemamífera naqueles mamíferos não humanos.
Dessa forma, é necessário o aumento da disponibilidade de no-vas vacinas superiores e novas abordagens de vacinação para a geração deabordagens melhores para o controle de infecções por gripe e para ter umimpacto positivo sobre a carga da doença.
DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
A Figura 1 mostra a idéia da invenção aqui apresentada. A imu-nização de animais de uma segunda espécie (por exemplo, porco) contra umpatógeno (por exemplo, gripe H5N1) de um animal de uma primeira espécie(aves domésticas) evita, ou pelo menos reduz, a transmissão do patógenoda primeira espécie para um outro animal da mesma espécie (por exemplo,de porco para porco) ou para uma terceira espécie (por exemplo, do porcopara o homem).
A Figura 2 mostra as seqüências de aminoácidos de dois poli-peptídeos H5.
DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO
Foi verificado surpreendentemente que os porcos podem servacinados eficazmente contra o vírus da gripe aviária (veja o Exemplo 2,RESULTADOS). Com a vacinação de porcos com uma vacina adequadaque compreende um antígeno do vírus da gripe aviária, de preferência H1,H3, H5, H7 e/ou H9, principalmente H5 e/ou H7, o risco de geração de cepasvariantes de gripe adaptadas aos porcos pode ser reduzido ou completa-mente eliminado. Conseqüentemente, a adaptação de um vírus da gripe avi-ária em seres humanos pode ser reduzida ou completamente eliminada emfunção da eliminação do vírus dentro de um reservatório naturalmente mamí-fero do vírus da gripe. Dessa forma, um aspecto da presente invenção per-tence à geração de uma vacina, de preferência uma vacina recombinante,qué se baseia na hemaglutinina da gripe aviária dos subtipos 1, 3, 5, 7 e/ou9 (ou seja, H1, H3, H5, H7 e/ou H9) para a vacinação de porcos a fim deprevenir ou reduzir a reprodução do vírus da gripe aviária em porcos, quan-do infectados com um vírus da gripe aviária que compreende o mesmo antí-geno ou um antígeno que apresenta reatividade cruzada com o(s) antíge-no(s) usados para a vacinação.
O termo "reprodução", como aqui usado, inclui, sem limitação, areplicação do genoma viral e/ou do conjunto de partículas. O termo "reduz"ou "redução da reprodução", como aqui usado, significa que a taxa de repli-cação em animais-vaeinados é mais baixa de forma estatisticamente signifi-cativa do que em animais não vacinados. Em outras palavras, as-titulaçõesdo vírus da gripe aviária em porcos atacados com um vírus da gripe infec-cioso estão na média aritmética mais baixa do que em porcos que não foramvacinados antes do ataque. O termo "na média aritmética mais baixa" signifi-ca uma redução de mais de 20%, de preferência, mais de 40%, ainda maispreferido, de mais de 50%, ainda mais preferido, de mais de 80%, aindamais preferido, mais de 100%. Em relação a isso, o termo "eliminado" signi-fica que nenhuma replicação viral é detectável em porcos vacinados ataca-dos com o vírus da gripe infeccioso após o 10s dia, de preferência após o 9Sdia, mais preferivelmente após o 8S dia, ainda mais preferivelmente após o7- dia, ainda mais preferivelmente após o 69 dia, ainda mais preferivelmenteapós o 5S dia, ainda mais preferivelmente após o 4S dia, ainda mais preferi-velmente após o 6S dia, ainda mais preferivelmente após o 3e dia, ainda maispreferivelmente após o 2° dia, principalmente após o 1s dia do ataque.
De acordo com um aspecto mais geral, a presente invenção re-fere-se ao uso de uma composição antigênica que compreende um antígenode um patógeno de um animal de uma primeira espécie para a preparaçãode uma composição farmacêutica para a imunização de um animal de umasegunda espécie, em que a referida composição farmacêutica, quando ad-ministrada ao animal da segunda espécie, resulta em uma redução ou naausência da reprodução de um patógeno infeccioso para um animal da pri-meira espécie, em um animal da segunda espécie, quando o referido animalda segunda espécie estiver infectado com o referido patógeno infeccioso doanimal da primeira espécie, de preferência, provido que o antígeno da com-posição antigênica da composição farmacêutica esteja presente no ou sobreo patógeno infeccioso.
A primeira espécie e a segunda espécie podem ser da mesma espécie ou de espécies diferentes. De preferência, a primeira e a segundaespécie são diferentes, ainda mais preferivelmente, a primeira espécie éuma ave doméstica, por exemplo, pássaro, galinha, pato, peru etc., e a se-gunda espécie é um mamífero, de preferência, um porco, gado, cavalo, fo-cas, camelos, cachorro, gato, hamster, camundongo, um ser humano, prin- cipalmente um porco.
Dessa forma, de acordo com outro aspecto, a presente invençãorefere-se ao uso de uma composição antigênica que compreende um antí-geno de um patógeno de aves domésticas para a preparação de uma com-posição farmacêutica para a imunização de um mamífero, em que a referidacomposição farmacêutica, quando administrada ao mamífero, resulta emuma redução ou na ausência da reprodução do patógeno infeccioso a avesdomésticas em um mamífero, quando o referido mamífero estiver infectadocom o referido patógeno infeccioso de aves domésticas, desde que o antí-geno da composição antigênica da composição farmacêutica esteja presente no ou sobre o patógeno infeccioso.
O termo "composição farmacêutica", como aqui descrito, inclui,sem limitação, vacinas para a redução ou prevenção de uma infecção oupara uma composição de interesse para o tratamento e atenuação de umainfecção.
O termo "patógeno", como aqui usado, inclui, sem limitação, ummicroorganismo ou qualquer parte patogênica do mesmo, que normalmentecausa doenças ou enfermidades ao seu hospedeiro, ou pelo menos rompe afisiologia normal de seu hospedeiro. Por exemplo, um patógeno de avesdomésticas è o vírus da gripe aviária.
Dessa forma, de acordo com um aspecto adicional da presenteinvenção, o patógeno de acordo com a invenção, que é infeccioso para avesdomésticas, é um vírus da gripe, de preferência o vírus da gripe aviária. Deacordo com um aspecto adicional da presente invenção, o patógeno que éinfeccioso para as aves domésticas é um vírus da gripe aviária dos subtiposH1, H3, H5, H7 ou H9, mais preferivelmente um vírus da gripe aviária dossubtipos H5 ou H7, principalmente, um vírus da gripe aviária do subtipoH5N1.
O termo "composição antigênica", como aqui usado, significauma composição de interesse que compreende um ou mais antígenos.
O termo "antígeno", como aqui usado, significa, sem limitação,peptídeos, polipeptídeos, glicopeptídeos ou polissacarídeos que são capa-zes de interagir especificamente com uma molécula de reconhecimento deantígeno do sistema imunológico, por exemplo, uma imunoglobulina (anti-corpo) ou um receptor de antígeno de célula T, a fim de despertar, ativar ouestimular uma resposta imunológica dirigida ao referido antígeno em umhospedeiro ao qual o referido antígeno é administrado. O termo "antígeno"também se refere às moléculas de ácido nucléico, de preferência moléculasde DNA ou RNA, em que cada um delas codifica e expressa um peptídeo,polipeptídeo ou glicopeptídeo que é capaz de interagir especificamente comuma molécula de reconhecimento de antígeno do sistema imunológico, porexemplo, imunoglobulina (anticorpo) ou receptor de antígeno de célula T, afim de despertar, ativar ou estimular uma resposta imunológica contra o an-tígeno que é codificado pela molécula de ácido nucléico. O antígeno usadopara a preparação da composição farmacêutica que é utilizada de acordocom a invenção é um microorganismo ou uma parte antigênica e/ou prepa-ração do referido microorganismo. Em relação a isso, o termo "imunização,como aqui usado, significa, sem limitação, qualquer causa ou aumento deuma resposta imunológica.
O termo "resposta imunológica", como aqui usado, significa,sem limitação, uma resposta imunológica celular e/ou mediada por anticor-pos a uma composição ou vacina de interesse. Normalmente, uma "respostaimunológica" inclui, sem limitação, um ou mais dos seguintes efeitos: a pro-dução ou ativação de anticorpos, células B, células T auxiliares, células Tsupressoras e/ou células T citotóxicas e/ou células T yd, dirigidos especifi-camente a um antígeno ou antígenos incluídos na composição ou na vacinade interesse. De preferência, o hospedeiro irá apresentar uma resposta imu-nológica terapêutica ou protetora, por exemplo, a resistência a uma novainfecção será aumentada e/ou a gravidade clínica da doença reduzida. Essaproteção será demonstrada por uma redução ou ausência dos sintomas as-sociados às infecções do hospedeiro, como descrito anteriormente.
O termo "parte antigênica e/ou preparação da mesma", comoaqui usado, significa que pelo menos uma molécula da referida parte e/oupreparação é antigênica ou possui propriedades antigênicas. A parte antigê-nica e/ou a preparação de um microorganismo inclui, sem limitação, peptí-deos, polipeptídeos, glicopeptídeos e/ou polissacarídeos que incluem quais-quer fragmentos dos mesmos, que possuem propriedade antigênica.
Uma molécula é "antigênica" ou possui "propriedades antigêni-cas" quando for capaz de interagir especificamente com uma molécula dereconhecimento de antígeno do sistema imunológico, por exemplo, uma i-munoglobulina (anticorpo) ou receptor de antígeno de célula T. Um polipep-tídeo antigênico, por exemplo, contém um epitopo de pelo menos cerca decinco e, de preferência, pelo menos cerca de 10 aminoácidos. Uma porçãoantigênica de um polipeptídeo, também aqui denominada "epitopo", pode seraquela porção do polipeptídeo que é imunodominante para reconhecimentode anticorpos ou de receptor de célula T, ou ela pode ser uma porção de umpolipeptídeo usado para gerar um anticorpo para a molécula por conjugaçãoda porção antigênica a um polipeptídeo portador para imunização. Uma mo-lécula que é antigênica não precisa ser, ela própria, imunogênica, ou seja,capaz de despertar uma resposta imunológica sem um portador. Em outraspalavras, uma porção antigênica também inclui, sem limitação, um haptenoque precisa ser conjugado a um portador a fim de se tornar imunogênico.Como mencionado anteriormente, o antígeno pode ser um mi-croorganismo ou uma parte antigênica e/ou preparação do mesmo. De pre-ferência, o referido microorganismo é um vírus, ou uma parte antigênica e/oupreparação do mesmo e, principalmente, um vírus da gripe, ou uma parteantigênica e/ou preparação do mesmo. De acordo com um aspecto adicionalda invenção, o antígeno usado para a preparação da composição farmacêu-tica é um vírus da gripe aviária ou uma parte antigênica e/ou preparação domesmo.
De acordo com um aspecto adicional da invenção, o antígenousado para a preparação da composição farmacêutica é a hemaglutinina (H)e/ou a neuraminidase (N) do vírus da gripe. De preferência, o referido antí-geno é H1, H3, H5, H7 e/ou H9 do vírus da gripe aviária. Nesse contexto, otermo "e/ou" significa que um único antígeno ou quaisquer combinações dosantígenos mencionados anteriormente podem ser usados para a preparaçãoda composição farmacêutica. Em contraste com as cepas H1 ou H3 atual-mente presentes na população de porcos/o H5 e, provavelmente, o H7 pa-recem ser mais conservados. Dessa forma, a probabilidade de proteção cru-zada parece ser mais favorável. Conseqüentemente, H5 e/ou H7, principal-mente H5, do vírus da gripe aviária, são usados como antígenos para a pre-paração da composição farmacêutica.
O termo "hemaglutinina 5 (H5)" ou "H5 do vírus da gripe aviá-ria", como aqui usado, significa, sem limitação, qualquer H5 de ocorrêncianatural e quaisquer formas modificadas de H5, incluindo qualquer mutantepor eliminação, substituição e/ou inserção de H5. Significa ainda qualquerparte antigênica de H5, o que significa qualquer fragmento peptídico queexiba propriedades antigênicas em um ensaio padronizado de inibição dehemaglutinina. Normalmente, a referida parte antigênica do mesmo compre-ende 35, 30, 25, 20, 18, 15, 13, 10, 9 ou, principalmente, 8 aminoácidos con-tíguos da seqüência de aminoácidos que codifica o H5, modificado ou nãomodificado, que exibe propriedades antigênicas em um ensaio padronizadode inibição de hemaglutinina. Um ensaio padronizado de inibição de hema-glutinina, por exemplo, é descrito em Stephenson et ai, Virus Research vol.103, pp. 91-95 (2004), com referências adicionais, ou descrito nos Exem-plos. No caso de resultados questionáveis, o ensaio de inibição de hemaglu-tinina, como descrito no Exemplo 2. deve ser interpretado como sendo o en-saio de referência relevante em relação a todos os aspectos da invençãocomo aqui descrita.
Antígenos H5 preferidos que podem ser usados de acordo coma invenção incluem quaisquer antígenos H5 modificados que exibam propri-edades antigênicas superiores quando comparados com um H5 não modifi-cado, em que a propriedade antigênica é medida em um ensaio padronizadode inibição de hemaglutinina, por exemplo, como descrito no Exemplo 2. Re-sumidamente, o ensaio de inibição de hemaglutinina foi realizado para de-tectar a presença de anticorpos específicos para HA. Um vírus heterólogoH5N1, A/galinha/México/232/94, foi usado em uma concentração de quatrounidades de hemaglutinação [4 unidades HA] no ensaio de inibição de he-maglutinina. Em placas de microtitulação com fundo em "U", diluições séri-cas seriais de duas vezes em PBS foram subseqüentemente misturadascom volumes iguais (25 μl) contendo 4 unidades HA de vírus, e incubadas a37°C por uma hora. Células sangüíneas vermelhas de galinha, em uma con-centração de 0,5% em PBS, foram adicionadas aos poços contendo soro-vírus, e incubadas por 40 minutos em temperatura ambiente. As titulaçõesde inibição de hemaglutinina foram determinadas como recíprocas das maio-res diluições séricas nas quais foi observada a inibição da hemaglutinação.
Vale ressaltar que Haesebrouck e Pensaert (1986) verificaram"que pode existir uma correlação entre as titulações de inibição de hemaglu-tinina contra o vírus de ataque e a proteção contra o ataque". Haesebrouck ePensaert (1986) também determinaram que porcos com titulações de inibi-ção de hemaglutinina de ≥ 40 eram "completamente resistentes ao ataque, enão ocorreu replicação do vírus no trato respiratório no ataque". Dessa for-ma, o desenvolvimento de titulações de inibição de hemaglutinina de ≥ 40nos suínos vacinados estaria relacionado à proteção (F. Haesebrouck e M.B.Pensaert. 1986. "Effect of intratracheal challenge of fattening pigs previouslyimmunised with an inactivated influenza H1N1 vaccine" (Veterinary Microbio-logy, 11 (1986) 239-249 239)). Deve-se presumir que titulações de inibiçãode hemaglutinina H5 equivalentes ou pelo menos quase equivalentes tam-bém resultarão em uma proteção imune completa de suínos contra o vírusda gripe aviária. Titulações menores resultam pelo menos em uma serocon-versão dos animais vacinados e causam uma proteção imune parcial daque-les animais, o que também pode reduzir dramaticamente o risco de umapandemia.
De preferência, os antígenos H5 usados de acordo com a in-venção incluem antígenos H5 modificados, que exibem aumento da proprie-dade antigênica quando comparados com o antígeno H5 codificado pela se-qüência do SEQ ID N9:2, em que a propriedade antigênica é medida em umensaio padronizado de inibição de hemaglutinina, por exemplo, como descri-to em Lüschow et ai, Vaçcine 19 (2001), pp. 4.249-4.259, com referênciasadicionais. O termo "propriedade antigênica superior ou aumentada", comoaqui usado, refere-se a uma inibição de hemaglutinina que é pelo menos20%, de preferência pelo menos 50%, mais preferivelmente pelo menos75%, ainda mais preferivelmente pelo menos 100% maior do que aquela doantígeno H5 de referência, ou seja, o antígeno H5 não modificado ou o antí-geno H5 que possui a seqüência do SEQ ID Ne: 2.
Antígenos H5 preferidos adicionais que podem ser usados deacordo com a invenção incluem antígenos H5 que compreendem um peptí-deo que compreende:
(i) as seqüências de aminoácidos do SEQ ID NQ:1, SEQ ID Ne:2,SEQ ID N9:3; SEQ ID Ne:4; SEQ ID NQ:5 ou SEQ ID Ns:6 ou;
(ii) qualquer peptídeo que tenha pelo menos 85% de homologiade seqüência, mais preferivelmente pelo menos cerca de 90% de homologiade seqüência, ainda mais preferivelmente pelo menos cerca de 95% de ho-mologia de seqüência, ainda mais preferivelmente pelo menos cerca de 97%de homologia de seqüência, ainda mais preferivelmente pelo menos cercade 98% de homologia de seqüência, e ainda mais preferivelmente pelo me-nos cerca de 99% de homologia de seqüência para o polipeptídeo de (i) quecompreende a inibição de hemaglutinina em um ensaio padronizado de inibi-ção de hemaglutinina padronizada, como descrito anteriormente; ou
(iii) qualquer parte antigênica dos polipeptídeos de (i) ou (ii) quecompreende pelo menos 35, 30, 25, 20, 18, 15, 13, 10, 9 ou, principalmente,8 aminoácidos contíguos de qualquer um dos peptídeos de (i) ou (ii).
(iv) quaisquer peptídeos de (i), (ii) ou (iii) que possuam os ami-noácidos 223N, 36T/223N, 36K/223N, 83A/223N, 83T/223N, 83D/223N,86A/223N, 86V/223N, 120N/223N, 120S/223N, 155N/223N.155S/223N,156A/223N, 156T/223N, 189R/223N, 189K/223N, 212K/223N, 212R/223N,212E/223N, 223N/263A, 223N/263T ou 120N/155N/223N.
(v) qualquer peptídeo de (i), (ii), (iii) ou (iv) que possua o amino-ácido 223N e um ou mais dos seguintes agrupamentos de aminoácidos se-lecionados do grupo que consiste em:
a. aa 93 - 95: GNF
b. aa 123- 125: SDH
c. aa 128-130: SSG
d. aa 138- 140: GSS
e. aa 226 - 228:MDF
f. aa 270 - 272:EVE
g. aa 309 -311: N KL; ou
(vi) qualquer peptídeo de (i), (ii), ( iii) ou (iv) que possua o amino-ácido 223N e um ou mais dos seguintes agrupamentos de aminoácidos se-lecionados do grupo que consiste em:
a. aa 93 - 95: GNF
b. aa 128- 130: SSG
c. aa 138- 140: GSS.
Antígenos H5 preferidos adicionais que podem ser usados deacordo com a invenção incluem antígenos H5 que compreendem os peptí-deos apresentados na tabela 1, ou qualquer parte imunogênica dos mes-mos:TABELA 1 - Antíqenos H5
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# as posições de aminoácidos apresentadas na TABELA 1 refe-rem-se às posições exemplares definidas no SEQ ID Ne:1. Em outras pala-vras, o aminoácido 223 da TABELA 1 refere-se ao aminoácido 223 da se-qüência do SEQ ID Ns:1.- significa que os aminoácidos nessas posições são variáveisquando comparados com a seqüência de referência.
Antígenos H5 preferidos adicionais que podem ser usados deacordo com a invenção incluem antígenos H5 que compreendem:
(i) um peptídeo que possui as seqüências do Ns de Acesso noNCBI AAT65209, CAJ32556, ABC47656, CAF21874, CAF21870,AAC58998, AAC58997, AAC58996, AAC58994, AAC58993, AAC58992,AAC58991, AAC58990, AAC58995, AAS45134, AAN17270, AAN17269,AAN17268, AAN17267, AAN17266, AAN17265, AAN17264, AAN17263,AAN17262, AAN17261, AAN17260, AAN17259, AAN17257, AAN17256,AAN17255, AAN17254, AAA43083, AAA43082, AAB19079, BAE48696,BAE48693, BAE48696, BAE48695, BAE48694, BAE48692, BAE48691,BAE48690, BAE48689, BAE48688, BAE48687, BAE48686, BAE48685,BAE48684, BAE48683, AAC58999, ABC72082, AAV91149, AAP71993,AAP71992, AAP71991, AAP71990, AAP71989, AAP72011, AAP72010,AAP72009, AAP72008, AAP72007, AAP72006, AAP72005, AAP72004,AAP72003, AAP72002, AAP72001, AAP72000, AAP71999, AAP71998,AAP71997, AAP71996, AAP71995, AAP71994, AAF99718, ABF58847,AAG38534, AAC32102, AAC32099, AAL75847, AAC32101, AAC32098,AAC32088, AAC32078, AAR99628, AAC32100, AAM49555, AAL75843,AAL75839, AAD13573, AAD13568, AAF04720, AAF04719, AAC34263,AAR16155, AAD13574, AAD13570, AAD13575, AAD13572, AAD13569,AAD13567, AAD13566, AAK57506, AAG01225, AAG01215, AAG01205,AAG01195 ou ABD83813, ou(ii) qualquer peptídeo que tenha pelo menos 85% de homologia
de seqüência, mais preferivelmente pelo menos cerca de 90% de homologiade seqüência, ainda mais preferivelmente pelo menos cerca de 95% de ho-mologia de seqüência, ainda mais preferivelmente pelo menos cerca de 97%de homologia de seqüência, ainda mais preferivelmente pelo menos cercade 98% de homologia de seqüência, e ainda mais preferivelmente pelo me-nos cerca de 99% de homologia de seqüência para o polipeptídeo de (i) eque exiba inibição de hemaglutinina em uma inibição de hemaglutinina pa-dronizada, como descrito anteriormente;
(iii) qualquer um dos peptídeos de (i) ou (ii) que possua os ami-noácidos 223N, 36T/223N, 36K/223N, 83A/223N, 83T/223N, 83D/223N,86A/223N, 86V/223N, 120N/223N, 120S/223N, 155N/223N.155S/223N,156A/223N, 156T/223N, 189R/223N, 189K/223N, 212K/223N, 212R/223N,212E/223N, 223N/263A, 223N/263T ou 120N/155N/223N; ou
(iv) qualquer parte antigênica dos peptídeos de (i), (ii) que com-preenda pelo menos 35, 30, 25, 20, 18, 15, 13, 10, 9 ou, principalmente, 8aminoácidos contíguos de qualquer um desses peptídeos de (i), (ii) ou (iii);ou
(v) qualquer uma dessas partes antigênicas de (iv), em que es-sas partes antigênicas compreendem o aminoácido 223 de H5; ou
(vi) qualquer uma dessas partes antigênicas de (v), em que es-sas partes antigênicas compreendem o aminoácido 223N; ou
(vii) qualquer um desses peptídeos de (i), (ii), (iii), (iv), (v) ou (vi)que possua o aminoácido 223N, e um ou mais dos seguintes agrupamentosde aminoácidos selecionados do grupo que consiste em:
h. aa 93 - 95: GNF
i. aa 123-125: SDH
j. aa 128-130: SSG
k. aa 138 -140: GSS
I. aa 226-228: MDF
m. aa 270 - 272: EVE
n. aa 309 - 311: NKL; ou
(viii) qualquer peptídeo de (i), (ii) (iii) ou (iv) que possua o ami-noácido 223N, e um ou mais dos seguintes agrupamentos de aminoácidosselecionados do grupo que consiste em:
d. aa 93 - 95: GNF
e. aa 128- 130: SSG
f. aa 138- 140: GSS
O termo "homologia de seqüência", como aqui usado, refere-sea um método de determinação da similaridade de duas seqüências. Paradeterminar a homologia de seqüência, duas ou mais seqüências são alinha-das otimamente, e são introduzidas lacunas, caso necessário. Em contrastecom a identidade de seqüência, substituições conservadoras de aminoáci-dos são contadas como coincidentes (match) quando se determina a homo-Iogia de seqüência. Em outras palavras, para se obter um polipeptídeo oupolinucleotídeo que possua 95% de homologia de seqüência com uma se-qüência de referência, 85%, de preferência 90%, ainda mais preferivelmente95% dos resíduos de aminoácidos ou nucleotídeos na seqüência de referên-cia devem coincidir ou compreender uma substituição conservadora comoutro aminoácido ou nucleotídeo, ou diversos aminoácidos ou nucleotídeosaté 15%, de preferência até 10%, ainda mais preferivelmente até 5% dosresíduos de aminoácidos ou nucleotídeos totais, que não incluem substitui-ções conservadoras na seqüência de referência, podem ser inseridos naseqüência de referência. De preferência, a seqüência homóloga compreendepelo menos um trecho de 50, ainda mais preferido de 100, ainda mais prefe-rido de 250, ainda mais preferido de 500 nucleotídeos. Com esse alinhamen-to, a homologia de seqüência é confirmada analisando-se posição por posi-ção, por exemplo, as seqüências são "homólogas" em uma posição particu-lar caso, naquela posição, os nucleotídeos ou os resíduos de aminoácidossejam idênticos. O número total dessas identidades de posição é então divi-dido pelo número total de nucleotídeos ou de resíduos de aminoácidos naseqüência de referência, gerando % de homologia de seqüência. A homolo-gia de seqüência pode ser facilmente calculada por métodos conhecidos,incluindo, sem limitação, aqueles descritos em "Computational MolecularBiology", Lesk, A. N., ed., Oxford University Press, Nova Iorque (1988), "Bio-computing: Informatics and Genome Projects", Smith, D.W., ed., AcademicPress, Nova York (1993); "Computer Analysis of Sequence Data, Part I",Griffin, A.M., e Griffin, H. G., eds., Humana Press, Nova Jersey (1994); "Se-quence Analysis in Molecular Biology", von Heinge, G., Academic Press(1987); "Sequence Analysis Primer", Gribskov, M. e Devereux, J., eds., M.Stockton Press, Nova York (1991); e Carillo, H., e Lipman, D., SIAM J. Appli-ed Math., 48: 1.073 (1988), cujos ensinamentos são aqui incorporados porreferência. Métodos preferidos para determinar a homologia de seqüênciasão projetados para gerar a maior coincidência entre as seqüências testa-das. Métodos para determinar a homologia de seqüência são codificados emprogramas de computador disponíveis publicamente que determinam a iden-tidade de seqüência entre certas seqüências. Exemplos desses programasincluem, sem limitação, a pacote de programas GCG (Devereux, J., et al.,Nucleic Acids Research, 12(1): 387 (1984)), BLASTP, BLASTN e FASTA(Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 215:403-410 (1990)). O programaBLASTX está disponível publicamente pelo NCBI e por outras fontes
("BLAST Manual", Altschul, S. et al., NCVI NLM NIH Bethesda1 MD 20894,Altschul, S. F. et ai., J. Molec. Biol., 215:403-410 (1990), cujos ensinamentossão aqui incorporados por referência). Esses programas alinham otimamenteseqüências com o uso de ponderações-padrão de lacunas a fim de produziro maior nível de homologia de seqüência entre a seqüência pesquisada e aseqüência de referência.
Antígenos H5 preferidos adicionais que podem ser usados deacordo com a invenção são:
(i) qualquer um dos mencionados supra que possua o aminoáci-do 223N e a modificação 328K+;
(ii) qualquer um dos mencionados supra que possua o aminoá-cido 94N/223N e a modificação 328K+;
(iii) qualquer antígeno H5 de origem aviária que possua o ami-noácido 223N e a modificação 328K+, em que "origem aviária" significa quea seqüência de H5 foi derivada de um isolado viral que foi originalmente iso-lado de uma ave doméstica infectada com o vírus da gripe aviária tipo 5; ou
(iv) qualquer antígeno H5 de origem aviária que possua os ami-noácidos 94N/223N e a modificação 328K+, em que "origem aviária" signifi-ca que a seqüência de H5 foi derivada de um isolado viral que foi original-mente isolado de uma ave doméstica infectada com o vírus da gripe aviáriatipo 5; ou
(v) qualquer antígeno H5 de origem aviária que possua os ami-noácidos 155N/223N e a modificação 328K+, em que "origem aviária" signi-fica que a seqüência de H5 foi derivada de um isolado viral que foi original-mente isolado de uma ave doméstica infectada com o vírus da gripe aviáriatipo 5; ou
(vi) qualquer antígeno H5 de origem aviária que possua o ami-noácido 120N/155N/223N e a modificação 328K+, em que "origem aviária"significa que a seqüência de H5 foi derivada de um isolado viral que foi origi-nalmente isolado de uma ave doméstica infectada com o vírus da gripe aviá-ria tipo 5; ou
(vii) qualquer antígeno H5 que possua as modificações94N/223N e a modificação 328K+; ou
(viii) qualquer antígeno H5 que possua as modificações94N/155N/223N e a modificação 328K+; ou
(ix) qualquer antígeno H5 que possua as modificações94N/120N/155N/223N e a modificação 328K+; ou
(x) qualquer H5 que possua a modificação 223N/ a modificação328K+, e um ou mais dos seguintes agrupamentos de aminoácidos selecio-nados do grupo que consiste em:
a. aa 93 - 95: GNFb. aa 123- 125: SDHc. aa 128-130: SSGd. aa 138 -140: GSSe. aa 226 - 228: MDFf. aa 270-272: EVEg. aa 309 -311: N KL; ou(xi) qualquer antígeno H5 que possua o aminoácido 223N e a
modificação 328K+, e um ou mais dos seguintes agrupamentos de aminoá-cidos selecionados do grupo que consiste em:
a. aa 93 - 95: GNF
b. aa 128- 130: SSG
c. aa 138-140: GSS; ou
(xii) qualquer antígeno H5 que possua a seqüência de aminoá-cidos do SEQ ID Ns: 4.Antígenos H5 preferidos adicionais que podem ser usados deacordo com a invenção incluem antígenos H5, como descritos por Hoffmannet ai, PNAS1 vol. 106, no.36, pp. 12.915-12.920 de 6 de setembro de 2005.As descrições dessa referência devem ser inteiramente aqui incluídas porreferência.
A numeração das posições de aminoácidos da proteína H5, co-mo aqui usadas, refere-se à posição de aminoácido como apresentada e-xemplarmente no SEQ ID Ns:1. O SEQ ID Ne:1 representa a seqüência deaminoácidos da hemaglutinina da cepa pato/China/E319-2/03, mas despro-vida do peptídeo sinalizador. Em outras palavras, caso seja feita referênciaao aminoácido na posição 223 (aminoácido 223), o resíduo de aminoácidodeverá corresponder ao aminoácido 223 do SEQ ID Ns: 1. No caso presente,o aminoácido 223 seria Serina (S). Os termos "223N" ou Ί55Ν" significamexemplarmente que as posições de aminoácidos 223 e 155, respectivamen-te - numeradas de acordo com as posições de aminoácidos do SEQ ID Ne:1-, devem codificar o aminoácido Asparagina (N). Em outras palavras, casoseja feita referência ao "antígeno H5 que possui o aminoácido 223N", umamolécula de aminoácido de H5 que normalmente codifica Serina na posiçãode aminoácido 223 - numerada de acordo com as posições de aminoácidosdo SEQ ID N9: 1 - aquele aminoácido deverá ser substituído por uma Aspa-ragina (Ν). O termo "328K+" ou "modificação 328K+" significa que, na posi-ção de aminoácido 328 do antígeno H5 - numerada de acordo com as posi-ções de aminoácidos do SEQ ID Ns:1 -, é inserida uma segunda Lisina (K+J.Nos casos em que seqüências de aminoácidos nas posições 328 e 329 codi-ficam naturalmente Lisina-Lisina, não deve ser inserida Lisina (K) adicional.No entanto, a maioria das seqüências de H5 conhecidas codifica Lisina-Arginina nas posições de aminoácidos 328 e 329. Em qualquer um dessescasos, o termo modificação 328K+ significa que uma segunda Lisina (K) de-ve ser inserida entre Lisina na posição 328 e Arginina na posição 329. A se-qüência modificada leria, então, Lisina-Lisina-Arginina (KKR).
Também está incluído na presente invenção que qualquer outroantígeno, particularmente qualquer antígeno HeN, pode ser usado em umaversão modificada ou não modificada. Como mencionado com relação aoantígeno H5, são preferidos antígenos modificados que exibem uma proprie-dade antigênica elevada em um ensaio padronizado de inibição de hemaglu-tinina, comparados com os antígenos não modificados.
Métodos de como introduzir qualquer uma das modificaçõesmencionadas anteriormente dentro da seqüência de nucleotídeos de um ví-rus da gripe são bem conhecidos na técnica. A seqüência genômica de todoo vírus da gripe pode ser modificada de acordo com a invenção, por exem-plo, de acordo com os métodos descritos na U.S. 6.951.754, com referênciasadicionais.
Além disso, podem ser empregadas técnicas convencionais debiologia molecular, microbiologia e DNA recombinante incluídas no conheci-mento da técnica para a modificação de uma seqüência de ácidos nucléicosque codifica um antígeno como aqui descrito. Tais técnicas são totalmenteexplicadas na literatura. Veja, por exemplo, Sambrook et ai, "Molecular Clo-ning: A Laboratory Manual", Segunda Edição (1989) Cold Spring Harbor La-boratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; 'DNA Cloning: A Practical Approa-ch", Volumes I e II (D. N. Glover ed. 1985); 'Oligonucleotide Synthesis" (M. J.Gait ed. 1984); "Nucleic Acid Hybridization" [B. D. Hames & S. J. Higginseds.(1985)]; "Transcription And Translation" [B. D. Hames & S. J. Higgins,eds. (1984)]; "Animal Cell Culture" [R. I. Freshney, ed. (1986)]; "ImmobilizedCells And Enzymes" [IRL Press, (1986)]; B. Perbal, "A Practical Guide ToMolecular Cloning" (1984); F. M. Ausubel et al. (eds.), "Current Protocols inMolecular Biology", John Wiley & Sons, Inc. 1994).
A resposta imunológica contra um antígeno de hemaglutinina,por exemplo, H5, em um animal vacinado pode ser medida por métodos pa-dronizados bem conhecidos na técnica, por exemplo, como descrito no E-xemplo 2. Resumidamente, titulações séricas de anticorpos, principalmenteaquelas determinadas por ensaios de inibição de hemaglutinina e/ou de neu-tralização viral, são medidas acessórias aceitas de proteção imune. Ensaiospadronizados de inibição de hemaglutinina e de neutralização viral podemser realizados em células renais caninas Madin Darby, como descrito emPalmer et al., 1975, "Advanced Laboratory Techniques for Influenza Diagno-sis", "U.S. Department of Health, Education and Welfare", Washington, DCe/ou Kida et ai, 1982, Virology, vol. 122, pp. 38-47. O teste de referênciausado em relação à presente invenção é descrito em Lüschow et ai, Vacci-ne 19 (2001), pp. 4.249-4.259, com referências adicionais. Como já foi men-cionado anteriormente, no caso de resultados questionáveis, o ensaio deinibição de hemaglutinina, como descrito no Exemplo 2, deve ser interpreta-do como sendo o ensaio de referência relevante em relação a todos os as-pectos da invenção como aqui descrita.
De acordo com um aspecto geral adicional, a presente invençãorefere-se ao uso de uma composição antigênica que compreende um antí-geno de um patógeno de um animal de uma primeira espécie para a prepa-ração de uma composição farmacêutica para a imunização de um animal deuma segunda espécie; caracterizado pelo fato de que a administração deuma composição farmacêutica, que compreende um antígeno de um pató-geno de um animal de uma primeira espécie, a um animal da segunda espé-cie resulta em uma redução ou ausência da replicação de um patógeno queé infeccioso para um animal da primeira espécie, em um animal da segundaespécie, quando o referido animal da segunda espécie estiver infectado como patógeno infeccioso do animal da primeira espécie, desde que o antígenoda composição antigênica da composição farmacêutica esteja presente nopatógeno infeccioso. O termo "replicação", como aqui usado, significa, entreoutras coisas, a duplicação/multiplicação do genoma do patógeno. O signifi-cado do termo "redução da replicação" foi descrito supra.
De acordo com um aspecto geral adicional, a presente invençãorefere-se ao uso de uma composição antigênica que compreende um antí-geno de um patógeno de um animal de uma primeira espécie para a prepa-ração de uma composição farmacêutica para a imunização de um animal deuma segunda espécie, caracterizado pelo fato de que a administração dacomposição farmacêutica, que compreende um antígeno de um patógeno deum animal de uma primeira espécie, ao animal da segunda espécie resultana prevenção da adaptação do patógeno infeccioso do primeiro animal aosegundo animal, quando o animal da segunda espécie estiver infectado como referido patógeno infeccioso do animal da primeira espécie. O termo "a-daptação", como aqui usado, significa, entre outras coisas, que o patógenoestá adaptado à replicação na nova espécie, o que significa que o patógenosuperou as barreiras entre espécies. Considera-se que a barreira entre es-pécies esteja ultrapassada caso o patógeno se dissemine verticalmente, oque significa de animal para animal da mesma espécie (também denomina-da transmissão interespécies ou transmissão vertical).
De acordo com um aspecto adicional, a invenção refere-se aouso da hemaglutinina H1, H3, H5, H7 e/ou H9 do vírus da gripe aviária paraa preparação de uma composição farmacêutica para a administração a umporco, em que a referida composição farmacêutica, quando administrada aum porco, resulta em uma redução ou ausência da reprodução de um vírusinfeccioso da gripe aviária do subtipo H1, H3, H5, H7 ou Ή9 em um porco,quando infectado com o referido vírus infeccioso da gripe aviária do subtipoH1, H3, H5, H7 ou H9. Prefere-se, principalmente, o uso de antígeno H5e/ou H7.
De acordo com um aspecto adicional, a invenção refere-se aouso da hemaglutinina H1, H3, H5, H7 e/ou H9 do vírus da gripe aviária paraa preparação de uma composição farmacêutica que, quando administrada aum porco, resulta na prevenção da adaptação de um vírus infeccioso da gri-pe aviária do subtipo 5 de aves em um porco, quando infectado com o refe-rido vírus infeccioso da gripe aviária do subtipo H1, H3, H5, H7 ou H9. Prefe-re-se, principalmente, o uso de antígeno H5 e/ou H7. De acordo com umaspecto adicional, o uso da hemaglutinina H5 e/ou H7 do vírus da gripe aviá-ria para a preparação da referida composição farmacêutica é ainda mais pre-ferido.
De acordo com um aspecto adicional, a presente invenção refe-re-se ao uso de uma composição farmacêutica que compreende um antíge-no do vírus da gripe aviária dos subtipos H1, H3, H5, H7 e/ou H9 para a pre-paração de uma vacina para o tratamento e/ou prevenção de um animal con-tra a gripe aviária. De preferência, o antígeno a ser usado é H1, H3, H5, H7e/ou H9 do vírus da gripe aviária. De preferência, o antígeno a ser usado é oH5 e/ou H7 do vírus da gripe aviária. De acordo com um aspecto adicionaldessa modalidade, os animais a serem tratados são aves domésticas, porexempio, pássaros, patos ou gansos. De acordo com um aspecto adicionalda invenção, os animais a serem tratados são mamíferos, de preferência,porcos, gado, cavalos, focas, camelos, cachorros, gatos, hamsters, camun-dongos ou seres humanos.
De acordo com um aspecto adicional, a presente invenção refe-re-se a um método para a prevenção da transmissão de um patógeno de umanimal de uma primeira espécie a um animal de uma segunda espécie, ca-racterizado pelo fato de que o antígeno de um patógeno de um animal daprimeira espécie é usado para a imunização de um animal da segunda es-pécie contra o referido patógeno do animal da primeira espécie, em que aadministração do referido._antígenoresulta na redução ou na ausência dareprodução do referido patógeno do animal da primeira espécie em um ani-mal da segunda espécie.
De acordo com uma modalidade adicional do método descritosupra, a primeira espécie é uma ave doméstica. De acordo com um aspectoadicional do referido método, o animal de segunda espécie é um mamífero,de preferência um porco, gado, cavalo, foca, camelo, cachorro, gato, hams-ter, camundongo ou ser humano, principalmente um porco. Os antígenos deacordo com esses métodos são aqueles descritos supra. De preferência, oreferido antígeno é um microorganismo ou uma parte antigênica e/ou prepa-ração do referido microorganismo. De preferência, o referido microorganismoé de origem viral, mais preferivelmente, o referido microorganismo é o vírusda gripe aviária.
Os patógenos do animal da primeira espécie de preferência sãoaqueles mencionados supra. Resumidamente, esse patógeno é o vírus dagripe aviária. De acordo com um aspecto adicional, o referido patógeno é ovírus da gripe aviária do subtipo H1, H3, H5, H7 ou H9. De preferência, oreferido patógeno é o vírus da gripe aviária do subtipo H5N1.
De acordo com um aspecto adicional, a presente invenção refe-re-se a um método para a prevenção da transmissão de um patógeno de umanimal de uma primeira espécie a um animal de uma segunda espécie, ca-racterizado pelo fato de que o antígeno de um patógeno de um animal deuma primeira espécie é usado para a imunização de um animal de uma se-gunda espécie contra o patógeno do animal da primeira espécie, em que aadministração do referido antígeno resulta na redução ou na ausência dareprodução de patógeno do animal da primeira espécie em um animal dasegunda espécie, em que o antígeno é a hemaglutinina (H) e/ou a neuramí-nidase (N) do vírus da gripe, de preferência de origem aviária. De acordocom um aspecto adicional do referido método, o antígeno é o H1, H3, H5, H7e/ou H9 do vírus da gripe aviária, embora H5 e/ou H7 sejam mais preferidos.Uma descrição mais detalhada desses antígenos é encontrada supra.
De acordo com um aspecto importante adicional, a presenteinvenção refere-se a um método para a prevenção da transmissão de umpatógeno de um animal de uma primeira espécie ao ser humano, caracteri-zado pelo fatú de que um antígeno de um patógeno de um animal de umaprimeira espécie é usado para a imunização de um outro animal que não umser humano de uma segunda espécie, que não é um contra o patógeno doanimal da primeira espécie, em que a administração do antígeno resulta naredução ou na ausência da reprodução de patógeno do animal da primeiraespécie no referido animal da segunda espécie. De preferência, a primeiraespécie é uma ave doméstica, por exemplo, pássaro, galinha, pato, etc., e oanimal da segunda espécie é outro mamífero que não o ser humano, de pre-ferência porco, gado, cavalo, foca, camelo, cachorro, gato, hamster, camun-dongo, principalmente porco.
Os patógenos do animal da primeira espécie de preferência sãoaqueles mencionados supra. Resumidamente, esse patógeno é o vírus dagripe aviária. De acordo com um aspecto adicional, o referido patógeno é ovírus da gripe aviária do subtipo H1, H3, H5, H7 ou H9. De preferência, oreferido patógeno é o vírus da gripe aviária do subtipo H5N1.
De acordo com um aspecto adicional, a presente invenção refe-re-se a um método para a prevenção da transmissão de um patógeno de umanimal de uma primeira espécie ao ser humano, caracterizado pelo fato deque o antígeno de um patógeno de um animal de uma primeira espécie éusado para a imunização de um animal da segunda espécie contra o pató-geno do animal da primeira espécie, em que a administração do referido an-tígeno resulta na redução ou na ausência da reprodução de patógeno doanimal da primeira espécie em um animal da segunda espécie, em que oantígeno é a hemaglutinina (H) e/ou a neuraminidase (N) do vírus da gripe,de preferência de origem aviária. De acordo com um aspecto adicional doreferido método, o antígeno é o H1, H3, H5, H7 e/ou H9 do vírus da gripeaviária, embora H5 e/ou H7 sejam mais preferidos. Uma descrição mais de-talhada desses antígenos é encontrada supra.
Um aspecto adicional da presente invenção refere-se a um mé-todo para a prevenção ou redução da recombinação entre patógenos de umanimal de uma primeira espécie e um animal de uma segunda espécie emum animal, em que uma composição farmacêutica que compreende antíge-no do patógeno de um animal da primeira espécie é usada para a imuniza-ção de animais da segunda espécie contra o patógeno do animal da primeiraespécie. O evento de recombinação é freqüentemente responsável pela su-peração das barreiras entre espécies. A redução ou prevenção desses even-tos de recombinação reduziria o risco de superação das barreiras entre es-pécies. Considera-se que a barreira entre espécies está superada caso opatógeno se dissemine verticalmente, o que significa de animal para animalda mesma espécie (também denominada transmissão interespécies outransmissão vertical).
De preferência, os patógenos são da mesma família ou gênero.De preferência, esses patógenos são vírus, de preferência o vírus da gripe.De acordo com uma modalidade adicional desse método, o primeiro patóge-no é o vírus da gripe aviária, e o segundo patógeno é um vírus da gripe ma-mífera. Além disso, caso o primeiro patógeno seja o vírus da gripe aviária eo segundo patógeno seja um vírus da gripe mamífera, uma composição far-macêutica preferida compreenderá antígeno do vírus da gripe aviária H1,H3, H5, H7 e/ou H9, mais preferivelmente, H5 e/ou H7.De acordo com um aspecto adicional, a invenção refere-se a ummétodo para a redução ou prevenção da recombinação entre um patógenode um animal de uma primeira espécie e um patógeno de um animal de umasegunda espécie em um animal, em que uma composição farmacêutica quecompreende antígeno do patógeno de um animal da primeira espécie é usa-da para a imunização de um animal da segunda espécie contra o patógenodo animal da primeira espécie, e em que a administração do referido antíge-no resulta na redução ou na ausência da reprodução de patógeno do animalda primeira espécie em um animal da segunda espécie. De preferência, es-ses patógenos são da mesma família ou gênero. De preferência, esses pa-tógenos são vírus, de preferência o vírus da gripe. Além disso, caso o pri-meiro patógeno seja o vírus da gripe aviária e o segundo patógeno seja umvírus da gripe mamífera, uma composição farmacêutica preferida compreen-derá antígeno do vírus da gripe aviária H1, H3, H5, H7 e/ou H9, mais preferi-velmente, H5 e/ou H7.
O(s) antígeno(s) e as composição(ões) antigênica(s) usados deacordo com a invenção podem ser feitos de forma recombinante, por exem-plo, pelo uso do sistema de expressão de baculovírus em células de inseto.Exemplos adicionais de sistemas de expressão recombinante bem estabele-cidos são sistemas de expressão bacteriana, por exemplo, E. coli ou B. sub-tilis, sistemas de expressão baseados em leveduras, por exemplo, S. cerevi-siae ou S. pombe, ou sistemas de expressão e células mamíferas, por e-xemplo, os sistemas de expressão baseados nas células BHK, CHO e/ouNSO. Tais sistemas são bem conhecidos na técnica e sãò disponíveis co-mercialmente, por exemplo, geralmente através de Clontech Laboratories,Inc. 4030 Fabian Way, Palo Alto, Califórnia 94303-4607, EUA. Estratégias deexpressão adicionais são descritas, por exemplo, em Lüschow et ai, Vacci-ne no. 19 (2001), pp. 4.249-4.259, ou Veit et ai., PAMS vol. 103 (2006), pp.8.197-8.202. Além disso, sistemas recombinantes de vírus adenoassociadosão bem estabelecidos e descritos, por exemplo, na U.S. 5.436.146 ou noWO 200203872 com referências adicionais. Além disso, sistemas de expres-são baseados no vírus da vacínia (pox), como descritos, por exemplo, naU.S. 6.265.183, com referências adicionais, também são bem estabelecidose adequados para a produção de antígeno(s) recombinante(s) e de compo-sição(ões) antigênica(s) usados de acordo com a invenção. Sistemas de ex-pressão adequados adicionais se utilizam dos vírus popova recombinantes,por exemplo, SV40, vírus fowl pox, vírus da pseudo-raiva e retrovírus.
De acordo com um aspecto adicional preferido da presente in-venção, o(s) antígeno(s), ou pelo menos um antígeno, é(são) produzido(s)em células de inseto com a utilização do sistema de expressão de baculoví-rus. De preferência, o baculovírus recombinante codifica o antígeno e produzo antígeno. Dessa forma, de acordo com um aspecto adicional da invenção,os antígenos H1, H3, H5, H7 e/ou H9 do vírus da gripe aviária são codifica-dos e produzidos pelo baculovírus recombinante.
No entanto, o(s) antígeno(s) e a(s) composição(ões) antigêni-ca(s) relevantes também podem ser vírus inativado que compreende um an-tígeno, uma versão não patogênica de um vírus vivo que compreende umantígeno, preparação e/ou fragmentos de um vírus, em que a referida prepa-ração e/ou fragmento compreende antígeno(s).
Outro aspecto importante da presente invenção é a preparaçãodas composições farmacêuticas, por exemplo, vacinas, que compreendempelo menos um antígeno de um patógeno como descrito anteriormente. A-queles versados na técnica têm conhecimento de componentes adicionaisque podem fazer parte das referidas composições/vacinas, junto com o antí-geno (veja, por exemplo, "Remington1S Pharmaceutical Sciences". (1990).18â edição, Mack Publ., Easton). Aqueles versados na técnica podem utilizarsoluções injetáveis estéreis fisiologicamente aceitáveis conhecidas. Para apreparação de soluções prontas para serem utilizadas, soluções aquosasisotônicas como, por exemplo, soro fisiológico ou soluções de proteínasplasmáticas correspondentes, são facilmente disponíveis. A composiçãofarmacêutica/vacina pode estar presente como Iiofilizados ou preparaçõessecas, que podem ser reconstituídas com uma solução injetável conhecida,imediatamente antes da utilização, sob condições estéreis, por exemplo,como um estojo de partes.Além disso, as composições farmacêuticas/de vacinas da pre-sente invenção podem incluir um ou mais portadores veterinários aceitáveis.Como aqui utilizado, "um portador veterinário aceitável" inclui, sem limitação,qualquer um e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, adju-vantes, agentes estabilizantes, diluentes, conservantes, agentes antibacteri-anos e antifúngicos, agentes isotônicos, agentes que retardam a adsorção, eoutros mais.
Diluentes podem incluir água, soro fisiológico, dextrose, etanol,glicerol, e outros mais. Agentes isotônicos podem incluir cloreto de sódio,dextrose, manitol, sorbitol e lactose, dentre outros. Estabilizantes incluemalbumina e sais alcalinos de ácido etilenodiaminatetracético, dentre simila-res.
O termo "adjuvante", como aqui usado, pode incluir hidróxido de-alumínio e fosfato de alumínio, saponinas, por exemplo, Quil A, QS-21(Cambridge Biotech Inc., Cambridge MA), GPI-0100 (Galenica Pharmaceuti-cals, Inc., Birmingham, AL), emulsão água em óleo, emulsão óleo em água,emulsão água em óleo em água.
A emulsão pode ser baseada, em particular, em óleo leve deparafina líquida (do tipo Farmacopéia Européia); óleo isoprenóide, por e-xemplo, esqualano ou esqualeno; óleos resultantes da oligomerização dealquenos, em particular de isobuteno ou deceno; ésteres de ácidos ou deálcoois que contêm um grupo alquila linear, mais particularmente óleos deplantas, oleato de etila, di-(caprilato/caprato) de propileno glicol, tri-(caprilato/caprato) de glicerila ou dioleato de propileno glicol; ésteres de áci-dos ou álcoois graxos ramificados, em particular ésteres de ácido isoesteári-co. O óleo é usado em combinação com emulsificantes para formar a emul-são. Os emulsificantes são, de preferência, tensoativos aniônicos, em parti-cular ésteres de sorbitano, de manida (por exemplo, oleato de manitol ani-dro), de glicol, de poliglicerol, de propileno glicol e de ácido oléico, isoesteá-rico, ricinoléico ou hidroxiesteárico, que são opcionalmente etoxilados, e co-polímeros em bloco de polioxipropileno-polioxietileno, em particular os pro-dutos Pluronic, especialmente L121. Veja Hunter et al., "The Theory andPractical Application of Adjuvants" (Ed.Stewart-Tull, D. E. S.), John Wiley eSons, Nova York, pp. 51-94 (1995) e Todd et ai, Vaccine 15: 564-570(1997). Exemplos para emulsões óleo em água adequadas são adjuvantesbaseados em Emulsigen, por exemplo, EMULSIGEN®, EMULSIGEN-D®, EMULSIGEN-P®, EMULSIGEN-75® (MVP Laboratories, Inc. Omaha, NE,EUA). Verificou-se surpreendentemente que composições farmacêuticas/devacinas que compreendem antígeno H5, de preferência antígeno H5 recom-binante, eram veiculadas eficazmente com emulsões óleo em água, de pre-ferência com adjuvantes baseados em Emulsigen, mais preferivelmente com EMULSIGEN® e EMULSIGEN-P®.
Além disso, é possível usar a emulsão SPT descrita na página147 de "Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach", editado porM. Powell e M. Newman, Plenum Press, 1995, e a emulsão MF59 descritana página 183 desse mesmo livro. Um exemplo adicional de um adjuvante é um composto escolhi-do entre os polímeros de ácido acrílico ou metacrílico, e os copolímeros deanidrido maléico e derivado de alquenila. Compostos adjuvantes vantajosossão os polímeros de ácido acrílico ou metacrílico que são reticulados, espe-cialmente com éteres de polialquenila de açúcares ou poliálcoois. Essescompostos são conhecidos pelo termo carbômero {Phameuropa Vol. 8, Ne 2,junho de 1996). Aqueles versados na técnica também podem consultar aPatente U.S. Ne 2.909.462, que descreve esses polímeros acrílicos reticula-dos com um composto poliidroxilado que possui pelo menos 3 grupos hidro-xila, de preferência no máximo 8, os átomos de hidrogênio de pelo menostrês hidroxilas sendo substituídos por radicais alifáticos insaturados que pos-suem pelo menos 2 átomos de carbono. Os radicais preferidos são aquelesque contêm de 2 a 4 átomos de carbono, por exemplo, vinilas, alilas e outrosgrupos etilenicamente insaturados. Os próprios radicais insaturados podemconter outros substituintes, por exemplo, metila. Os produtos vendidos sob o nome comercial Carbopol (BF Goodrich, Ohio, EUA) são particularmenteapropriados. Eles são reticulados com uma alil sacarose ou com alil pentae-ritritol. Dentre esses, podem ser mencionados Carbopol 974P, 934P e 971P.Prefere-se, principalmente, o uso de Carbopol 971P. Dentre os copolímerosde anidrido maléico e derivados de alquenila, os copolímeros EMA (Monsan-to), que são copolímeros de anidrido maléico e etileno. A dissolução dessespolímeros na água gera uma solução ácida que será neutralizada, de prefe-rência, até o pH fisiológico, a fim de fornecer a solução adjuvante na qual aprópria composição imunogênica, imunológica ou de vacina será incorpora-da.
Adjuvantes adequados adicionais incluem, sem limitação, o sis-tema adjuvante RIBl (Ribi Inc.), copolímero em bloco (CytRx, Atlanta GA),SAF-M (Chiron, Emeryville CA), monofosforil lipídeo A, adjuvante lipídeo-arnina Avridine, enterotoxina termolábil de E. coli (recombinante ou de outraforma), toxina colérica ou muramil dipeptídeo, entre muitos outros.
De preferência, o adjuvante é adicionado em uma quantidade decerca de 100 pg a cerca de 10 mg por dose. Prefere-se ainda mais que oadjuvante seja adicionado em uma quantidade de cerca de 100 μς a cercade 10 mg por dose. Prefere-se ainda mais que o adjuvante seja adicionadoem uma quantidade de cerca de 500 pg a cerca de 5 mg por dose. Prefere-se ainda mais que o adjuvante seja adicionado em uma quantidade de cercade 750 pg a cerca de 2,5 mg por dose. Principalmente, o adjuvante é adicio-nado em uma quantidade de cerca de 1 mg por dose.
As composições farmacêuticas/de vacinas podem ainda incluirum ou mais outros agentes imunomoduladores como, por exemplo, interleu-cinas, interferons ou outras citocinas. As composições farmacêuticas/de va-cinas também podem incluir Gentamicina e Mertiolato. Embora as quantida-des e concentrações de adjuvantes e aditivos úteis no contexto da presenteinvenção possam ser facilmente determinadas por aqueles versados na téc-nica, a presente invenção contempla composições que compreendem decerca de 50 μg a cerca de 2.000 μg de adjuvante e, de preferência, cerca de250 μο/Ι ml de dose da composição de vacina. Em outra modalidade preferi-da, a presente invenção contempla composições de vacina que compreen-dem de cerca de 1 μg/ml a cerca de 60 μg/ml de antibióticos e, mais preferi-velmente, menos de cerca de 30 μg/ml de antibióticos.Estratégias de administração para vacinas contra a gripe sãobem conhecidas na técnica. Estratégias de vacinação mucosa para vacinasde vírus inativado e atenuado são contempladas. Embora a mucosa possaser direcionada por liberação local de uma vacina, foram empregadas váriasestratégias para a liberação de proteínas imunogênicas à mucosa.
Em uma modalidade específica, a vacina pode ser administradaem uma mistura com, ou como uma proteína de fusão conjugada ou quimé-rica com, toxina colérica, por exemplo, uma quimera de toxina colérica B ouuma quimera dè toxina colérica A/B (Hajishengallis, J Immunol., 154: 4.322-32, 1995; Jobling e Holmes, Infect Immun., 60: 4.915-24, 1992). Foram des-critas vacinas mucosas baseadas no uso da subunidade B da toxina colérica(Lebens e Holmgren, Dev. Biol. Stand. 82: 215-27, 1994). Em outra modali-dade, uma mistura com enterotoxina termolábil (LT) pode ser preparada paravacinação mucosa.
Outras estratégias de imunização mucosa incluem a encapsula-ção do vírus em microcápsulas (U.S. 5.075.109, U.S. 5.820.883 e U.S.5.853.763), e a utilização de um portador membranoso imunopotencializador(WO 98/0558). A imunogenicidade de imunógenos administrados oralmentepode ser intensificada através do uso de células sangüíneas vermelhas (rbc)ou (rbc) fantasmas (U.S. 5.643.577), ou pelo uso do antígeno da língua azul(U.S. 5.690.938).
EXEMPLOS
Os exemplos que serão apresentados a seguir definem materi-ais e procedimentos preferidos de acordo com a presente invenção. No en-tanto, deve-se entender que estes exemplos são fornecidos somente comoforma de ilustração, e não devem ser considerados como Iimitantes do es-copo global da invenção.
EXEMPLO 1
CONSTRUÇÃO DE BACULOVÍRUS RECOMBINANTES QUE CODIFICAME EXPRESSAM ANTÍGENOS HA H5
O baculovírus recombinante que contém o antígeno HA H5 foigerado da seguinte forma: as seqüências codificadoras do HA H5 (SEQ IDNs:2) foram sintetizadas quimicamente e subclonadas no vetor de transfe-rência pVL1392 (BD Biosciences Pharmingen, San Diego, CA). O HA H5MutK+ (SEQ ID Ne:4) foi gerado pelo uso de iniciadores de oligonucleotídeose o estojo de Mutagênese Sitio-Dirigida QuikChange® (Stratagene, La Jolla,CA), e subelonado no vetor de transferência pVL1392 (BD BiosciencesPharmingen, San Diego, CA). Os plasmídeos pVL1392 contendo os genesque codificam os antígenos HA H5 (SEQ ID N9:2) e HA H5 MutK+ (SEQ IDNs:4) foram então co-transfectados com DNA de baculovírus DiamondBac®(Sigma) em células de inseto Sf9 (BD Biosciences Pharmingen) para gerar obaculovírus recombinante contendo os genes HA H5 que codificam o SEQID Ns:2 e HA H5 rnutK+ que codificam SEQ ID Ne:4. Os baculovírus recom-binantes contendo os genes que codificam HA H5 (SEQ ID Ne:2) e HA H5MutK+ (SEQ ID NQ:4) foram purificados em placa, e os Master Seed Viruses(MSVs) foram propagados na linhagem de células SF9, divididos em alíquo-tas e estocados a -70eC. Células de inseto infectadas com baculovírus HAH5, como descrito acima, para a geração de MSV, ou Working Seed Viruses,expressam o antígeno HA H5 (SEQ ID N9 2) e o antígeno HA H5 MutK+(SEQ ID Ns:4), como detectado por anticorpos séricos policlonais ou mono-clonais em um ensaio indireto de anticorpo fluorescente ou Western blot.
Após serem semeados com as quantidades adequadas de ba-culovírus recombinantes (H5 HA e HA H5 MutK+, respectivamente), frascosgiratórios contendo células SF+ (Protein Sciences, Inc., Meriden, CT) foramentão incubados a 27 ± 2°C por 7 dias e com agitação a 100 rpm duranteaquele período. Os frascos utilizaram tampas ventiladas para permitir o fluxode ar. A cultura bruta de células inteiras contendo células SF+ infectadascom baculovírus e os sobrenadantes da cultura de células de cada culturaforam coletados.
EXEMPLO 2
PREPARAÇÃO DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS (VACINAS) QUECOMPREENDEM ANTÍGENOS HA H5
A proteína HA H5 e a proteína HA H5 Mutk+ brutas de célulainteira expressas em células de inseto por sistema de expressão baseadoem baculovírus foram coletadas. Os baculovírus foram inativados na presen-ça de 5 mM de etilenimina binária ciclizada (BEI) (concentração final) entrecerca de 32 e 39°C por 72 a 96 horas. Após o término da inativação, foi adi-cionada uma solução de 0,3 M de tiossulfato de sódio, até uma concentra-ção final de 5 mM para neutralizar qualquer BEI residual. Após a neutraliza-ção, foram adicionados vários adjuvantes e foram geradas as seguintescomposições de vacina/farmacêuticas.
VACINAS
<table>table see original document page 36</column></row><table><table>table see original document page 37</column></row><table><table>table see original document page 38</column></row><table><table>table see original document page 39</column></row><table><table>table see original document page 40</column></row><table>
EXEMPLO 3
VACINAÇÃO DE SUÍNOS (PORCOS) CONTRA GRIPE AVIARIA1. INTRODUÇÃO
A finalidade deste estudo foi determinar a habilidade de vacinasexperimentais contendo um extrato bruto de antígeno de hemaglutinina (HA)recombinante H5 para induzir titulações de inibição da hemaglutinação (HI)em suínos. Foram avaliados vários adjuvantes com os antígenos HA H5.
Os protótipos de HA H5 avaliados neste estudo continham antí-geno de HA H5 convencional ou HA H5 MutK+. O HA H5 convencional eraderivado de A/patò/China/E319-2/03, enquanto HA H5 MutK+ consiste emHA H5 convencional que foi projetado para conter três alterações de amino-ácidos específicas em S120N, D150N, S223N e 328mutK+. Ele tambémContém aminoácido 94N. As alterações de aminoácidos específicas em HAH5 Mut K+ resultam em um HA H5 que se parece mais intimamente com oHA de A/HK/213/03. Acredita-se atualmente que a composição de aminoáci-dos do HA H5 de A/HK/213/03 ajude no reconhecimento de anticorpo do H5HA.
2. PROJETO DO ESTUDO:TABELA 1. VISÃO GERAL DO ESTUDO
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Os leitões tinham 3 semanas ± 5 dias de idade no início do estudo. Osleitões eram clinicamente saudáveis no início do estudo. Foram obtidas amostrasde sangue no Dia O e nos 21s e 35e Dias do Estudo.
Todos os estudos animais foram observados diariamente do 1sao 35e Dias do Estudo em relação ao estado da saúde geral. Por sete diasapós cada vacinação, os locais de injeção foram investigados diariamente eas reações visíveis foram registradas. Na conclusão da fase animal do estu-do, no 35s Dia de Estudo, todos os animais foram submetidos à eutanásiahumanamente.
3. VACINAS
Foram usadas as vacinas 501 a 514, como descrito no EXEM-PLO 2, para o estudo de vacinação em porcos.
4. ENSAIO DE INIBICÃO DE HEMAGLUTININA
Os suínos foram vacinados com os protótipos contendo HA H5no Dia 0 e no 21Q Dia. Os soros dos suínos foram coletados para avaliaçãopor ensaio de inibição da hemaglutinação (HI) no Dia O e nos 21° e 35° Dias.O ensaio de inibição de hemaglutinina foi realizado para detectar a presençade anticorpos específicos para HA. Um vírus H5N1 heterólogo,A/galinha/México/232/94, foi usado em uma concentração de quatro unida-des de hemaglutinação [4 unidades HA] no ensaio de inibição de hemagluti-nina. Em placas de microtitulação com fundo em "U", diluições de soro seri-ais de duas vezes em PBS foram subseqüentemente misturadas com volu-mes iguais (25 μΙ) contendo 4 unidades HA de vírus, e incubadas a 37°C poruma hora. Células sangüíneas vermelhas de galinha, em uma concentraçãode 0,5% em PBS, foram adicionadas aos poços contendo soro-vírus, e incu-badas por 40 minutos em temperatura ambiente. As titulações de inibição dehemaglutinina foram determinadas como recíprocas das maiores diluiçõesséricas nas quais foi observada a inibição da hemaglutinação.
5. RESULTADOS
O teste de inibição de hemaglutinina utilizou o regime de vaci-nação com antígeno H5N1 oficial do governo mexicano(A/galinha/México/232/94) [4 unidades HA] de 1 χ 1 ml no Dia 0 e no 21- Dia.
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BIV H5 (derivado do vírus Influenza A (A/pato/China/E319-2/03(H5N1))
BIV H5 K+ (BIV H5 mutado para incluir S120N, D155N, S223N e328Κ+adicionado)
Os resultados demonstram que a maioria das composições devacina desperta uma resposta imunológica nos porcos vacinados. Em parti-cular, a maioria das composições de vacina resulta em uma seroconversão,o que significa que a maioria dos porcos vacinados desenvolveu anticorposespecíficos contra o vírus da gripe aviária usado no ensaio de inibição dehemaglutinina. Em conjunto, os resultados provam nitidamente e sem som-bra de dúvidas que a idéia reivindicada da invenção funciona muito bem. Orisco de infecção pandêmica de porcos (animal de uma segunda espécie)com o vírus da gripe aviária (patógeno de uma primeira espécie) pode serdramaticamente reduzido pela vacinação de porcos com um antígeno rele-vante do vírus da gripe aviária. Isso foi claramente demonstrado. Além disso,por esse conceito de vacinação, a transmissão e a adaptação do vírus dagripe aviária em mamíferos, incluindo seres humanos, são dramaticamentereduzidas. Os porcos são um dos reservatórios mais importantes para pató-genos aviários, incluindo o vírus da gripe aviária. Caso a replicação viral emporcos e, portanto, o risco de adaptação da gripe aviária em porcos, sejamdramaticamente reduzidos e controlados, o risco para qualquer adaptaçãodo vírus da gripe aviária em seres humanos também será dramaticamentereduzido. Nos casos em que a administração de antígeno resulta em umamenor titulação de inibição de hemaglutinina, o que significa titulação abaixode 30, serão necessários reforços adicionais com antígeno para aumentarainda mais a titulação de inibição de hemaglutinina e para aumentar a prote-ção imune nos porcos vacinados. Portanto, titulação baixa não significa quenão possa ser obtida proteção, apenas ensina que são necessários reforçosadicionais para aumentar a resposta imunológica. O fato de que uma respos-ta imunológica possa ser medida em porcos vacinados demonstra que oprincípio que serve de base para a presente invenção funciona muito bem.Em outras palavras, os experimentos aqui apresentados fornecem evidên-cias claras e inequívocas de que o princípio da presente invenção funciona.LISTAGEM DE SEQUENCiAS
<110> Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH
<120> Uso de vacinas para o tratamento/prevenção da transmissão de patógénos
<130> Case 1-1959
<150> 60/730998
<151> 2005-10-28
<160> 6
<170> Patente em versão 3.3
<210> 1
<211> 551
<212> PRT
<213> Vírus da gripe aviária
<400> 1
Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val1 5 10 15
Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile20 25 30
Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu Asp Gly Val Lys35 40 45
Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn50 55 60
Pro Met Cys Asp Glu Phe Ile Asn Val Pro Glu Trp_gjer Tyr Ile Val65 70 75 80
Glu Lys Ala Asn Pro Ala Asn Asp Leu Cys Tyr Pro Gly Asn Phe Asn85 90 95
Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Arg Ile Asn His Phe Glu100 105 110
Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Ser Ser Trp Ser Asp His Glu Ala Ser115 120 125
Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Gln Gly Ser Ser Ser Phe Phe130 135 140
Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Asp Ala Tyr Pro Thr Ile145 150 155 160Liys Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Iieu Iieu Val I»eu Trp165 170 175
Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Arg Leu Tyx Gln180 185 190
Asn Pro Thr Thr Tyr Xle Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg195 200 205
Leu Val Pro Lys Xle Ala Thr Arg Ser Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly210 215 220
Arg Met Asp Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Xle Asn225 230 235 240
Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr- L.ys lie245 250 255
Val Lys Lys Gly Asp Ser Ala Ile Met Lys Ser Glu Val Glu Tyr Gly260 265 270
Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser275 280 285
Met Pro Phe His Asn Xle His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys290 295 300
Tyr Val Lys Ser Asn Lys Iieu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser305 310 315 320
Pro Gln Arg Glu Arg Arg Arg Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala325 330 335
Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly340 345 350
Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu355 360 365
Ser Thr Gln Lys Ala Xle Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile370 375 380
Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe Asn385 390 395 400Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly405 410 415
Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Iieu Leu Val Leu Met Glu420 425 430
Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr435 440 445
Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly Asn450 455 460
Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Ser465 470 475 480
Val Arg Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg485 490 495
Leu Lys Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Ile Gly Thr500 505 510
Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala Leu515 520 525
Ala Ile Met Val Ala Gly Leu Ser Leu Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser530 535 540
Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile545 550
<210> 2
<211> 567^
<212> PRT
<213> Virus da gripe aviária
<400> 2
Met Glu Lys Thr Val Leu Leu Leu Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser1 5 10 15
Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val20 25 30
Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile35 40 45
Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu Asp Gly Val Lys50 55 60
Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn65 70 75 80
Pro Met Cys Asp Glu Phe Ile Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val85 90 95
Glu Lys Ala Asn Pro Ala Asn Asp Leu Cys Tyr Pro Gly Asn Phe Asn100 105 110
Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Arg Ile Asn His Phe Glu115 120 125
Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Ser Ser Trp Ser Asp His Glu Ala Ser130 135 140
Ser Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Gln Gly Ser Ser Ser Phe Phe145 150 155 160
Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Asp Ala Tyr Pro Thr Ile165 170 175
Lys Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Val Leu Trp180 185 190
Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Arg Leu Tyr Gln195 200 205
Asn Pro Thr Thr Tyr Ile Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg210 215 220
Leu Val Pro Lys Ile Ala Thr Arg Ser Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly225 230 235 240
Arg Met Asp Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn245 250 255
Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Lys Ile260 265 270
Val Lys Lys Gly Asp Ser Ala Ile Met Lys Ser Glu Val Glu Tyr Gly275 280 285
Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser290 295 300Met Pro Phe His Asn Xle His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys305 310 315 320
Tyr Val Lys Ser Asn Lys Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser325 330 335
Pro Gln Arg Glu Arg Arg Arg Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala340 345 350
Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly355 360 365
Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys Glu370 375 380
Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser Ile385 390 395 400
Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe Asn405 410 415
Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly420 425 430
Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu435 440 445
Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr450 455 460
Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly Asn465 470 475 ^ 480
Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu Ser485 490 495
Val Arg Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala Arg500 505 510
Leu Lys Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Ile Gly Thr515 520 525
Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala Leu530 535 540Ala Ile Met Val Ala Gly Leu Ser Leu Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser545 550 555 560
Leu Gln Cys Arg Xle Cys Ile565
<210> 3
<211> 568
<212> PRT
<213> Vírus da gripe aviária
<400> 3
Met Glu Lys Ile Val Leu Leu Phe Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser1 5 10 15
Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val20 25 30
Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile35 40 45
Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu Asp Gly Val Lys50 55 60
Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Ijeu Gly Asn65 70 75 80
Pro Met Cys Asp Glu Phe Ile Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val85 90 95
Glu Lys Ala Asn Pro Ala Asn Asp Leu Cys Tyr Pro Gly Asp Phe Asn100 105 110
Asp Tyr Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Arg Ile Asn His Phe Glu115 120 125
Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Asn Ser Trp Ser Ser His Glu Ala Ser130 135 140
Leu Gly Val Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Gln Gly Lys Ser Ser Phe Phe145 150 155 160
Arg Asn Val Val Trp Ijeu Ile Lys Lys Asn Asn Ala Tyr Pro Thr Ile165 170 175
Lys Arg Ser Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Val Leu Trp180 185 190
Gly Ile His His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Arg Leu Tyr Gln195 200 205
Asn Pro Thr Thr Tyr lie Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg210 215 220
Leu Val Pro Lys Xle Ala Thr Arg Ser Lys Val Asn Gly Gln Asn Gly225 230 235 240
Arg Met Glu Phe Phe Trp Thr Xle Leu Lys Pro Asn Asp Ala Xle Asn245 250 255
Phe Glu Ser Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Lys Xle260 265 270
Val Lys Lys Gly Asp Ser Ala Ile Met Lys Ser Glu Leu Glu Tyr Gly275 280 285
Asn Cys Asn Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser290 295 300
Met Pro Phe His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys305 310 315 320
Tyr Val Lys Ser Asn Arg Leu Val Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Ser325 330 335
Pro Gln Arg Glu Arg Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Xle340 345 350
Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr355 360 365
Gly Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys370 375 380
Glu Ser Thr Gln Lys Ala ile Asp Gly Val Thr Asn Lys Val Asn Ser385 390 395 400
Ile Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe405 410 415
Asn Asn Leu Glu Arg Arg Xle Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp420 425 430Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu l»eu Val Leu Met435 440 445
Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu450 455 460
Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly465 470 475 480
Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Glu Cys Met Glu485 490 495
Ser Val Arg Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Gln Tyr Ser Glu Glu Ala500 505 510
Arg Leu Lys Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Ile Gly515 520 525
Thr Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Vál Ala Ser Ser Leu Ala530 535 540
Leu Ala Ile Met Val Ala Gly Leu Ser Leu Trp Met Cys Ser Asn Gly545 550 555 560
Ser Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile565
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Met Glu Lys Thr Val Leu Leu Leu Ala Ile Val Ser Leu Val Lys Ser1 5 10 15
Asp Gln Ile Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val20 25 30
Asp Thr Ile Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile35 40 45
Leu Glu Lys Thr His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu Asp Gly Val Lys50 55 60Pro Leu Ile Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn65 70 75 80
Pro Met Cys Asp Glu Phe Xle Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val85 90 95
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Lys Ile Gln Ile Ile Pro Lys Asn Ser Tzp Ser Asp His Glu Ala Ser130 135 140
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Arg Asn Val Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Asn Ala Tyr Pro Thr Ile165 170 175
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Leu Val Pro Lys Ile Ala Thr Arg Ser Lys Val Asn Gly Gln Asn Gly225 230 235 240'
Arg Met Asp Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn245 250 255
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Pro Gln Arg Glu Arg Arg Arg Lys Lys Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile340 345 350
Ala Gly Phe Xle Glu Gly Gly Trp Gln Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr355 360 365
Gly Tyr His His Ser Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Lys370 375 380
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Ile Ile Asp Lys Met Asn Thr Gln Phe Glu Ala Val Gly Arg Glu Phe405 410 415
Asn Asn Leu Glu Arg Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp420 425 430
Gly Phe Leu Asp Val Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met435 440 445
Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu450 455 460
Tyr Asp Lys Val Arg Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala Lys Glu Leu Gly465 470 475 480
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Arg Leu Lys Arg Glu Glu Ile Ser Gly Val Lys Leu Glu Ser Ile Gly515 520 525
Thr Tyr Gln Ile Leu Ser Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Ala530 535 540
Ijeu Ala Ile Met Val Ala Gly Leu Ser Leu Trp Met Cys Ser Asn Gly545 550 555 560

Claims (28)

1. Método para prevenção da transmissão de um patógeno deum animal de uma primeira espécie a um animal de uma segunda espécie,caracterizado pelo fato de que o antígeno de um patógeno de um animal deuma primeira espécie é usado para a imunização de um animal de uma se-gunda espécie contra o patógeno do animal da primeira espécie, em que aadministração do referido antígeno resulta na redução ou na ausência dareprodução de patógeno do animal da primeira espécie em um animal dasegunda espécie.
2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que a primeira espécie é uma ave doméstica.
3. Método de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelofato de que a segunda espécie é um mamífero.
4. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que o antígeno é um microorganismo ou uma parte antigênica doreferido microorganismo.
5. Método de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelofato de que o microorganismo é um vírus.
6. Método de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelofato de que o vírus é o vírus da gripe aviária.
7. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelofato de que o patógeno é o vírus da gripe aviária do subtipo H1, H3, H5, H7,H9 ou uma combinação dos mesmos.
8. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que o antígeno é um antígeno recombinante.
9. Método de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelofato de que o antígeno recombinante é produzido por um baculovírus recom-binante.
10. Método de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelofato de que o baculovírus recombinante expressa o antígeno H1, H3, H5, H7e/ou H9 do vírus da gripe aviária.
11. Método para a prevenção da transmissão de um patógenode um animal de uma primeira espécie ao ser humano, caracterizado pelofato de que o antígeno de um patógeno de um animal de uma primeira espé-cie é usado para a imunização de um animal de uma segunda espécie quenão seja um ser humano, em que a administração do antígeno resulta naredução ou na ausência da reprodução de patógeno do animal da primeiraespécie no referido animal da segunda espécie, e reduz/evita transmissãoposterior do patógeno a um ser humano.
12. Método de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pe-lo fato de que a primeira espécie é uma ave doméstica.
13. Método de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pe-lo fato de que a segunda espécie é outro mamífero que não o ser humano.
14. Método de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pe-lo fato de que o antígeno é um microorganismo ou uma parte antigênica doreferido microorganismo.
15. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pe-lo fato de que o microorganismo é um vírus.
16. Método de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pe-lo fato de que o vírus é o vírus da gripe aviária.
17. Método de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pe-lo fato de que o patógeno é o vírus da gripe aviária do subtipo H1, H3, H5,H7, H9 ou uma combinação dos mesmos.
18. Método de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pe-lo fato de que o antígeno é um antígeno recombinante.
19. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pe-lo fato de que o antígeno recombinante é produzido por um baculovírus re-combinante.
20. Método de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pe-lo fato de que o baculovírus recombinante expressa o antígeno H1, H3, H5,H7 e/ou H9 do vírus da gripe aviária.
21. Método para a prevenção ou a redução da recombinaçãoentre um patógeno de um animal de uma primeira espécie e um patógeno deum animal de uma segunda espécie em um animal, caracterizado pelo fatode que uma composição farmacêutica que compreende um antígeno do pa-tógeno de um animal da primeira espécie é usada para a imunização de umanimal da segunda espécie contra o patógeno do animal da primeira espé-cie.
22. Método de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pe-lo fato de que a administração do referido antígeno resulta na redução ou naausência da reprodução de patógeno do animal da primeira espécie no ani-mal da segunda espécie.
23. Método de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pe-lo fato de que o primeiro patógeno é um vírus da gripe aviária e o segundopatógeno é um vírus da gripe mamífera.
24. Método de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pe-lo fato de que a composição farmacêutica compreende um antígeno do vírusda gripe aviária Η1, H3, H5, H7, H9 ou uma combinação dos mesmos.
25. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de quecompreende uma composição antigênica, que compreende um antígeno deum patógeno de um animal de uma primeira espécie, e um veículo veterina-riamente aceitável, para imunização de um animal de segunda espécie con-tra o patógeno de um animal da primeira espécie.
26. Uso de uma composição antigênica, que compreende umantígeno de um patógeno de um animal de uma primeira espécie, caracteri-zado pelo fato de ser para a preparação de uma composição farmacêuticapara a imunização de um animal de uma segunda espécie, sendo que a ditacomposição farmacêutica, quando administrada ao animal da segunda es-pécie, resulta em uma redução ou na ausência da reprodução de um pató-geno infeccioso ao animal da primeira espécie, em um animal da segundaespécie, quando o dito animal da segunda espécie é infectado com o ditopatógeno infeccioso do animal de uma primeira espécie, de preferência,desde que o antígeno da composição antigênica da composição farmacêuti-ca esteja presente dentro do ou no patógeno infeccioso.
27. Uso de uma composição antigênica, que compreende umantígeno de um patógeno de um animal de uma primeira espécie, caracteri-zado pelo fato de ser para preparação de uma composição farmacêutica pa-ra a imunização de um animal de uma segunda espécie que não seja um serhumano, sendo que a dita composição farmacêutica, quando administradaao animal da segunda espécie, resulta na redução ou na ausência da repro-dução de patógeno infeccioso de um animal da primeira espécie, em um a -nimal da segunda espécie, quando o dito animal da segunda espécie é infec-tado com o dito patógeno infeccioso do animal da primeira espécie, de prefe-rência, desde que o antígeno da composição antigênica da composição far-macêutica esteja presente dentro do ou no patógeno infeccioso, e redu-za/previna transmissões adicionais do patógeno ao humano.
28. Uso de uma composição antigênica, que compreende umantígeno do patógeno de um animal de uma primeira espécie, caracterizadopelo fato de ser para preparação de uma composição farmacêutica para aimunização de um animal da segunda espécie, sendo que a administraçãode uma composição farmacêutica, que compreende um antígeno de um pa-tógeno de uma animal de uma primeira espécie, a um animal de uma se-gunda espécie, resulte em uma redução ou ausência da replicação de umpatógeno, que é infeccioso a um animal da primeira espécie, em um animalda segunda espécie, quando o dito animal da segunda espécie é infectadocom o patógeno infeccioso do animal da primeira espécie, desde que o antí-geno da composição antigênica da composição farmacêutica esteja presentedentro do ou no patógeno infeccioso.
BRPI0617952-5A 2005-10-28 2006-10-27 composição antigênica compreendendo um antìgeno de um patógeno de um animal de uma primeira espécie, bem como uso de vacinas para o tratamento/prevenção da transmissão de patógenos da gripe entre espécies BRPI0617952A2 (pt)

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