BRPI0613398A2 - composto, uso do mesmo, e, composição farmacêutica - Google Patents

composto, uso do mesmo, e, composição farmacêutica Download PDF

Info

Publication number
BRPI0613398A2
BRPI0613398A2 BRPI0613398-3A BRPI0613398A BRPI0613398A2 BR PI0613398 A2 BRPI0613398 A2 BR PI0613398A2 BR PI0613398 A BRPI0613398 A BR PI0613398A BR PI0613398 A2 BRPI0613398 A2 BR PI0613398A2
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
acid
formula
compound
cells
compounds
Prior art date
Application number
BRPI0613398-3A
Other languages
English (en)
Inventor
Giancarlo Naccari
Sergio Baroni
Original Assignee
Giuliani Int Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Giuliani Int Ltd filed Critical Giuliani Int Ltd
Publication of BRPI0613398A2 publication Critical patent/BRPI0613398A2/pt

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/77—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D307/78—Benzo [b] furans; Hydrogenated benzo [b] furans
    • C07D307/79—Benzo [b] furans; Hydrogenated benzo [b] furans with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/52—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton
    • C07C229/54—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino and carboxyl groups bound to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring
    • C07C229/64—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the same carbon skeleton with amino and carboxyl groups bound to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring the carbon skeleton being further substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C233/00—Carboxylic acid amides
    • C07C233/01—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C233/45—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups
    • C07C233/53—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by a carbon atom of a six-membered aromatic ring
    • C07C233/54—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by a carbon atom of a six-membered aromatic ring having the carbon atom of the carboxamide group bound to a hydrogen atom or to a carbon atom of a saturated carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C259/00—Compounds containing carboxyl groups, an oxygen atom of a carboxyl group being replaced by a nitrogen atom, this nitrogen atom being further bound to an oxygen atom and not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C259/04—Compounds containing carboxyl groups, an oxygen atom of a carboxyl group being replaced by a nitrogen atom, this nitrogen atom being further bound to an oxygen atom and not being part of nitro or nitroso groups without replacement of the other oxygen atom of the carboxyl group, e.g. hydroxamic acids
    • C07C259/10—Compounds containing carboxyl groups, an oxygen atom of a carboxyl group being replaced by a nitrogen atom, this nitrogen atom being further bound to an oxygen atom and not being part of nitro or nitroso groups without replacement of the other oxygen atom of the carboxyl group, e.g. hydroxamic acids having carbon atoms of hydroxamic groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D319/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D319/04—1,3-Dioxanes; Hydrogenated 1,3-dioxanes
    • C07D319/08—1,3-Dioxanes; Hydrogenated 1,3-dioxanes condensed with carbocyclic rings or ring systems

Abstract

COMPOSTO, USO DO MESMO, E, COMPOSIçãO FARMACêUTICA. A invenção refere-se a um composto da fórmula geral (I), em que R~1~ e R~2~, que podem ser iguais ou diferentes, são selecionados do grupo que compreende H, -C~n~H~2n-1~, um grupo alquil linear ou ramificado tendo de 1 a 6 átomos de carbono, ou juntos formam um anel aromático ou alifático com 5 ou 6 átomos; R~3~ é selecionado dentre -CO-CH~3~, -NHOH, -OH, -OR~6~ em que R~6~ é um grupo alquila linear ou ramificado tendo de 1 a 6 átomos de carbono; R~4~ é selecionado dentre H, um grupo alquil linear ou ramificado tendo de 1 a 6 átomos de carbono, fenil, benzil, -CF~3~ ou -CF~2~CF~3~, vinil ou alil; R~5~, R~7~, R~8~ são átomos de hidrogênio; ou R~3~ e R~4~, R~4~ e R~5~, ou R~7~ e R~8~ formam um anel, fúndido ao anel de benzeno, aromático ou alifático com 5 ou 6 átomos compreendendo de 1 a 2 heteroátomos selecionados independentemente do grupo que compreende N, O, e ao seu uso no campo médico.

Description

"COMPOSTO, USO DO MESMO, E, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA"
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
A presente invenção refere-se a compostos e a seus saisespecíficos para os receptores de PPAR e aos receptores de EGF e ao seu usono campo médico.
OBJETO DA INVENÇÃO
Os compostos e seus sais de acordo com a presente invençãopodem ser usados vantajosamente para a prevenção e para o tratamento detumores que expressam os receptores de PPARy (Receptores Ativados porProliferador de Peroxisoma) e os receptores de EGF (receptores de Fator deCrescimento Epidermal) tais como tumores do: esôfago, estômago, pâncreas,cólon, próstata, seio, útero e anexos, rins e pulmões. Além disso, oscompostos e seus sais de acordo com a presente invenção podem ser usadospara o tratamento de doenças inflamatórias crônicas, particularmente doençasintestinais crônicas, tais como doença de Chron e rectocolite ulcerativa.
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
Os receptores de PPARy são receptores nucleares (grupo decerca de 50 fatores de transcrição) que controlam a expressão de muitosgenes que são importantes para a regulação de metabolismo de lipídeos, asíntese de insulina e os processos de carcinogênese e inflamação (Buli AW,Arch Pathol Lab Med 2003;127: 1121-1123) (Koeffler HP, Clin CâncerRes 2003; 9: 1-9) (Youssef J et al., J Biomed Biotec 2004; 3: 156-166).
Há vários agonistas naturais e sintéticos que se ligam aosreceptores de PPARy e alteram sua conformação, fazendo surgir aativação. Os ligandos naturais e sintéticos são descritos em The Lancet2002; 360:1410-1418.
Estudos recentes mostraram que o tratamento de célulascom tumor com ligandos dos receptores de PPARy induz uma diminuiçãona proliferação celular, na diferenciação celular e na apoptose, sugerindouma aplicação potencial de tais compostos como agentes para a prevençãode carcinogênese (Osawa E et al., Gastroenterology 2003; 124:361-367).
Outros estudos mostraram que ligandos dos receptores dePPARy (e.g., troglitazona) têm efeitos antiinflamatórios e inibem aresposta inflamatória mucosal em modelos animais de IBD (Tanaka T etaí., Câncer Res 2001; 61: 2424-2428).
Além disso, evidência foi publicada muito recentemente deque a atividade antiinflamatória intestinal de 5-ASA (ácido 5-aminosalicílico, mesalazina), o padrão de ouro no tratamento de IBD, édependente da ligação, e conseqüente ativação, dos receptores de PPARy(Rousseaux C et al., J Exp Med 2005; 201: 1205-1215).
O receptor de transmembrana com atividade de tirosina-quinase EGF é expressado em um grau muito alto na forma ativada emvários tipos de neoplasmas (Mendelsohn J, Endocr Relat Câncer 2001; 8:3-9) (Harari PM, Endocr Relat Câncer 2004; 11: 689-708).
A sobre-expressão do receptor é também relacionada com acapacidade potencial de células carcinomatosas para metástase. Emconexão com isto, foi demonstrado que EGF promove a migração e ainvasividade de vários tipos de células conectados com lesões no nível deinterações com a matriz extracelular (Brunton et al., Oncogene 1997; 14: 283-293).
Vários estudos realizados em animais experimentais e emhomens têm estabelecido a eficácia de inibidores do receptor de EGF nocontrole da proliferação e no espalhamento de tumores (Mendelsohn J,Endocr Relat Câncer 2001; 8: 3-9) (Harari PM, Endocr Relat Câncer 2004; 11: 689-708).
Não há dúvidas de que os sinais intracelulares acionadopela ativação do receptor de EGF facilitam o crescimento e asobrevivência de células neoplásticas, contribuindo para odesenvolvimento da patologia, e que tais sinais são essenciais nadeterminação da capacidade de células com tumor de se espalhar ecolonizar órgãos remotos (Mendelsohn J, Endocr Relat Câncer 2001; 8: 3-9) (Kari C et al., Câncer Res 2003; 63: 1-5).
Do exposto acima e tendo em mente, além disso, que doponto de vista biológico, processos de inflamação crônicos exercem umaparte na carcinogênese, se torna claro que há uma necessidade real poruma pesquisa inovadora em novas entidades químicas que, por sua açãocomplementar nos receptores de PPARy e nos receptores de EGF, sãocapazes de exercer uma ação antiinflamatória e anti-tumor, do tipoquimio-preventivo, anti-proliferativo e anti-metastático.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
A presente invenção se refere a novos usos médicos eterapêuticos da presente invenção de uma série de compostos, uma vezque qualquer destes compostos não é conhecido, a presente invençãotambém se refere a estes compostos.
A presente invenção fornece uma nova classe de compostosque são adequados para a prevenção e para o tratamento de câncer e deinflamação crônica pela modulação de receptores específicos, tais comoreceptores de PPARy e os receptores de EGF.
Portanto, a presente invenção se refere especificamente aos
<formula>formula see original document page 4</formula>
em que
R1 e R2, que podem ser iguais ou diferentes, são selecionadosdo grupo que compreende H, -CnH2n-I, um grupo alquil linear ou ramificadotendo de 1 a 6 átomos de carbono, ou juntos formam um anel aromático oualifático com 5 ou 6 átomos;
R3 é selecionado dentre -CO-CH, -NHOH, -OH5 -OR6 em queR6 é um grupo alquila linear ou ramificado tendo de 1 a 6 átomos decarbono;
R4 é selecionado dentre H, um grupo alquil linear ouramificado tendo de 1 a 6 átomos de carbono, fenil, benzil, -CF3 ou -CF2CF3, vinil ou alil; R5, R7, R8 são átomos de hidrogênio; ou
R3 e R4, R4 e R5, ou R7 e R8 formam um anel, fundido ao anelde benzeno, aromático ou alifático com 5 ou 6 átomos compreendendo de 1 a2 heteroátomos selecionados independentemente do grupo que compreende N, O.
A presente invenção também se refere ao subgrupo específicode compostos da fórmula geral (Ia)
<formula>formula see original document page 5</formula>
em que:
R1 e R2, que podem ser iguais ou diferentes, são selecionadosdo grupo que compreende H, -CnH2n_i, um grupo alquil linear ou ramificadotendo de 1 a 6 átomos de carbono, ou juntos formam um anel aromático oualifático com 5 ou 6 átomos;
R3 é selecionado dentre -NHOH, -OH, -OR6 em que R6 é umgrupo alquila linear ou ramificado tendo de 1 a 6 átomos de carbono;
R4 é selecionado dentre H, um grupo alquil linear ouramificado tendo de 1 a 6 átomos de carbono; R5, R7, R8 são átomos dehidrogênio; ou
R3 e R4, R4 e R5, ou R7 e R8 formam um anel, fundido ao anelde benzeno, aromático ou alifático com 5 ou 6 átomos compreendendo de 1 a2 heteroátomos selecionados independentemente do grupo que compreendeN, O.
O grupo alquil linear ou ramificado mencionado acima dafórmula (I) ou (IIa) tendo de 1 a 6 átomos de carbono pode ser selecionadodentre -CH3, -C2H5, isopropil, propil, CnH2n.i.
A presente invenção também se refere a compostos citados nasfórmulas (I) e (Ia), exceto sem permitir, onde R3 = -COCH3. Há umapossibilidade teórica de que alguns derivados de acetil, tais como pelo menosalguns destes quando R3 = -COCH3, podem ser inativos, pois N-acetilação é osistema de desintoxicação metabólica para aminas aromáticas. A possibilidadeteórica surge da observação de que o metabólito inativo de 5-ASA é N-acetil 5-ASA.
Em algumas formas de realização de ambas as fórmulas (I) e(Ia) da presente invenção, R7 e R8 podem não formar um anel. Assim, R3 e R4ou R4 e R5 podem formar um anel, fundido ao benzeno, anel aromático oualifático com 5 ou 6 átomos compreendendo de 1 a 2 heteroátomosselecionados independentemente do grupo que compreende N, O. Emalgumas formas de realização, os compostos 29, 36 e 37 são excluídos. Emalgumas formas de realização de ambas as fórmulas (I) e (Ia), R7 e R8 podemnão formar um anel, exceto quando R4 for CH3. Em algumas formas derealização de ambas as fórmulas (I) e (Ia), R7 e R$ podem não formar um anelquando R4 for selecionado de H. Em algumas formas de realização, a presenteinvenção se refere aos cetolenos fornecidos pela presente invenção. Emalgumas formas de realização, o composto 29 é excluído.
Em algumas formas de realização, um ou mais compostosselecionados do grupo que consiste dos compostos 5, 6, 7, 8, 9, 12, 16, 18,19, 24, 25, 27, 30 e 41 são excluídos.
Em algumas formas de realização de ambas as fórmulas (I)e (Ia), Ri e R2 podem não formar um anel. Assim, Ri e R2, que podem seridênticos ou diferentes, podem ser selecionados do grupo que compreende H, -CnH2n-I, um grupo alquil linear ou ramificado tendo de 1 a 6 átomos decarbono. Em algumas formas de realização, o composto 41 é excluído.
Em algumas formas de realização de ambas as fórmulas (I) e(Ia), R4 pode não ser ramificado. Assim, R4 pode ser selecionado dentre H, umgrupo alquil linear ou ramificado tendo de 1 a 6 átomos de carbono; R5, R7 eRs são átomos de hidrogênio. Em tais formas de realização, os compostos 30 e31 são excluídos. Em algumas formas de realização, R4 pode ser ramificadoquando o grupo amino estiver na posição 4' no anel fenila. Em tais formas derealização, o composto 30 é excluído. Em algumas formas de realização, ogrupo alquil linear pode ter somente 1 átomo de carbono (i.e., CH3).
Em algumas formas de realização de ambas as fórmulas (I) e(Ia), Ri e R2 são H. Em algumas formas de realização, os compostos6,9,24,27, 3 8 e 41 são excluídos.
Em algumas formas de realização de ambas as fórmulas (I) e(Ia), R2 pode não ser diferente de R1.
Em algumas formas de realização de ambas as fórmulas (I) e(Ia), quando R3 for -OH5 R4 é selecionado do grupo que consiste de -H, umgrupo alquil linear ou ramificado tendo de 1 a 6 átomos de carbono, ou R3 e R4formam um anel, fundido ao benzeno, aromático ou anel com 5 ou 6 átomoscompreendendo de 1 a 2 heteroátomos selecionados independentemente dogrupo que compreende N e O. Em algumas formas de realização, o grupoalquil ramificado pode ser -CH(CH3)2. Em algumas formas de realização, ogrupo alquil ramificado pode ser -CH(CH3)2 na posição R8. Em algumasformas de realização, R3 e R4 formam um anel alifático com 5 membros comum único átomo de O. Em algumas formas de realização (tais como aquelasdescritas neste parágrafo), os compostos 7, 8, 18, 19 e 42 são excluídos.
Em algumas formas de realização de ambas as fórmulas (I) e(Ia), quando R3 for -OH e R4 for -Η, o grupo NRiR2 não pode estar na posição4' (e deve estar em R5 ou R8). Em algumas formas de realização, isto pode serparticularmente o caso onde Ri e R2 são -CH3. Em algumas formas derealização, o composto 24 é excluído.
Em algumas formas de realização de ambas as fórmulas (I) e(Ia) da presente invenção, Ri e R2 são iguais. Em algumas formas derealização, os compostos 9 e 12 são excluídos.
Em algumas formas de realização de ambas as fórmulas (I) e(Ia) da presente invenção, quando R3 for -OH e R4 for -Η, o grupo NRiR2não pode estar na posição R5 (e deve estar na posição R8). Em algumas formasde realização, este pode estar onde R1 e R2 forem -H. Em algumas formas derealização, o composto 6 é excluído.
Em algumas formas de realização de ambas as fórmulas (I) e(Ia) da presente invenção, quando R3 for -ΝΉΟΗ, R4 é um grupo alquillinear ou ramificado tendo de 1 a 6 átomos de carbono, (ou, se fórmula (I),fenil, benzil, -CF3 ou - CF2CF3, vinil ou alil), R3 e R4, juntos formam umanel, fundido ao benzeno, anel aromático ou alifático com 5 ou 6 átomoscompreendendo de 1 a 2 heteroátomos selecionados independentemente dogrupo que compreende N, O. Em algumas formas de realização, ocomposto 7 é excluído.
Em algumas formas de realização de ambas as fórmulas (I) e(Ia) da presente invenção, quando R3 for -NHOH e R4 for um grupo alquillinear ou ramificado tendo de 2 átomos de carbono, o grupo -NR1R2 podenão estar na posição 4' e pode estar na posição R8. Em algumas formas derealização, o composto 25 é excluído.
Em algumas formas de realização de ambas as fórmulas (I) e(Ia) da presente invenção, quando R3 for -NHOH e R4 for Η, o grupo -NR1R2 deve estar na posição 4'. Em algumas formas de realização, o composto5 é excluído.De acordo com uma forma de realização, R3 e R4 doscompostos da fórmula (I) e (Ia) podem formar um anel de acordo com aseguinte fórmula (II)
<formula>formula see original document page 9</formula>
em que Ri, R2, R5, R7 e R8 são definidos acima.
De acordo com outra forma de realização, R4 e R5 doscompostos das fórmula (I) e (Ia) podem formar um anel de acordo com aseguinte fórmula (III)
<formula>formula see original document page 9</formula>
em que R1, R2, R5, R7 e R8 são definidos acima.
De acordo com uma outra forma de realização, R7 e R8 doscompostos das fórmulas (I) e (Ia) podem formar um anel de acordo com aseguinte fórmula (IV) ou (V)
<formula>formula see original document page 9</formula>
em que R1, R2, R3, R4 e R5 são definidos acima.
Em particular, os compostos das fórmulas (I) e (Ia) de acordocom a presente invenção podem ser selecionados do grupo que compreende:
4-amino-N-hidróxi-2-metoxibenzamida (composto 13)
5-amino-N-hidróxi-2-metoxibenzamida (composto 14)
ácido 5-amino-2,3-diidrobenzofuran-7-carboxílico (composto 17)
5-amino-2-etóxi-N-hidroxibenzamida (composto 26)6-amino-2,2-dimetil-4H-benzo[l,3]dioxin-4-ona (composto 28)
ácido 1,2,3,4-tetraidro-6-hidroxiquinolino-5-carboxílico(composto 29)
ácido 5-amino-2-isopropoxibenzóico (composto 31)
ácido 6-metóxi quinolino-5-carboxílico (composto 36)
ácido 6-metóxi-1,2,3,4-tetraidroquinolino-5-carboxílico(composto 37)
ácido 5-diisopropiiaminosalicílico (composto 38)
ácido 4-diisopropilaminosalicílico (composto 42).
A presente invenção também fornece compostos em que R1 eR2 são selecionados do grupo que consiste de -H e -CH(CH3)2. Ri e R2podem ser idênticos. Em algumas formas de realização, Ri e R2 podem ser - CH(CH3)2.
Um exemplo compreende a seguinte estrutura (composto 38):
<formula>formula see original document page 10</formula>
Em outras formas de realização da presente invenção, R1 e R2 são -H.
A presente invenção também fornece compostos em que R3 éselecionado do grupo que consiste de -NHOH e -OH. Em algumas formas derealização, R3 pode ser -NHOH. Um exemplo compreende a seguinteestrutura (composto 13):
<formula>formula see original document page 10</formula>
Um outro exemplo compreende a seguinte estrutura(composto 14):<formula>formula see original document page 11</formula>
Um outro exemplo compreende a seguinte estrutura(composto 26):
<formula>formula see original document page 11</formula>
Em algumas formas de realização da presente invenção, R3pode ser -OH.
Um exemplo adequado compreende a seguinte estrutura(composto 17):
<formula>formula see original document page 11</formula>
Um outro exemplo compreende a seguinte estrutura (composto 31):
Em algumas formas de realização da presente invenção, R4pode ser -H. Em algumas formas de realização da presente invenção, R4 podeser CH3. Em algumas formas de realização da presente invenção, R4 pode ser-CH2CH3. Em algumas formas de realização da presente invenção, R4 podeser -CH(CH3)2.
Um outro exemplo compreende a seguinte estrutura (composto 28):
<formula>formula see original document page 11</formula>
Em algumas formas de realização da presente invenção, R3 eR4 podem formar um anel alifático, fundido ao benzeno, ou 5 ou 6 átomoscompreendendo um heteroátomo O (oxigênio).
Os compostos de acordo com a presente invenção podem serusados vantajosamente no campo médico.
Portanto, a presente invenção também se refere a umacomposição farmacêutica compreendendo um ou mais compostos de acordocom a presente invenção como princípios ativos em combinação com um oumais excipientes ou adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis.
Além disso, a presente invenção se refere ao uso doscompostos de acordo com a presente invenção para a preparação de umproduto medicinal para a prevenção e para o tratamento de tumoresexpressando receptores de PPARy e receptores de EGF, tais como tumor doesôfago, estômago, pâncreas, cólon, próstata, seio, útero e anexos, rins e dospulmões.
Além disso, a presente invenção se refere ao uso dos compostosde acordo com a presente invenção para a preparação de um produtomedicinal para o tratamento de doença inflamatória crônica, tais como doençade Crohn e rectolite ulcerativa. A presente invenção também se refere amétodos de tratamento de humanos e/ou mamíferos (incluindo roedores,animais de fazenda, animais domésticos, ratos, camundongos, hamsters,coelhos, cães, gatos, porcos, ovelha, vacas, cavalos).
Em particular, além dos compostos específicos mencionadosacima, os seguintes compostos podem ser usados para as aplicações descritasacima:
ácido 5-aminosalicil-hidroxâmico (composto 5)ácido 3-dimetilaminosalicílico (composto 6)ácido 2-metóxi-4-aminobenzóico (composto 7)ácido 2-metóxi-5-aminobenzóico (composto 8)ácido 5-metilaminosalicílico (composto 9)ácido 4-metilaminosalicílico (composto 12)
ácido 4-acetilaminosalicilic (composto 16)
ácido 2-etóxi-4-aminobenzóico (composto 18)
ácido 2-etóxi-5-aminobenzóico (composto 19)
ácido 4-dimetilaminosalicílico (composto 24)
ácido 2-etóxi-4-aminobenzoilhidroxâmico (composto 25)
ácido 6-hidroxiquinolino-5-carboxílico (composto 27)
ácido 2-(2-propil)óxi-4-aminobenzóico (composto 30)
ácido 4-(l-piperazinil)salicílico (composto 41).
As moléculas da presente invenção foram derivadas de trabalhode modelamento molecular usando mesalazina como uma base e todas asvariações quimicamente viáveis foram avaliadas de forma a alcançar o melhorresultado (afinidade e ativação do receptor) nos experimentos de computador.Conseqüentemente, acredita-se que os compostos da presente invenção quemostram função e/ou atividade comparável com mesalazina através de viasbiológicas similares. Acredita-se que características similares à mesalazinainerentes nas moléculas da presente invenção confiram nas moléculas umaatividade similar em relação à via de EGF.
Os experimentos dados aqui fazem bons modelos para uso naprevisão do uso dos compostos nos vários campos médicos já discutidos. Osmodelos usados dão resultados significativos independentemente domecanismo de ação.
Em adição aos compostos mencionados acima, a presenteinvenção fornece o uso dos seguintes compostos (número de composto apósprefixo "2_":
<table>table see original document page 13</column></row><table><formula>formula see original document page 14</formula>
A presente invenção vai agora ser descrita para propósitos deilustração, mas sem limitá-la, de acordo com suas formas de realizaçãopreferidas, com referência particular aos diagramas nos desenhos em anexo.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS E TABELA
A Figura IA mostra as estruturas dos compostos 13, 14, 17, 26, 31 e 38.
A Figura IB mostra a ativação dos receptores de PPARy pelasmoléculas 17 e 31 em relação às células tratadas com 5-ASA e rosiglitazona.As células de HT-29 STD transfectadas com o elemento de resposta paraPPARy (2XCYP) e tratadas com as moléculas 17 e 31 (30 mM) mostramindução de cerca de duas vezes o gene repórter indicando a capacidade de 5-ASA e novos compostos 17 e 31 para induzir a ativação do PPARy; osresultados são expressados como fator de aumento na ativação (média ±SEM) relativa às células não tratadas. As ativações para os compostos 13, 14,26 e 38 são também mostradas.
A Figura 2 mostra o aumento na expressão da proteína dePPARy pelas células epiteliais induzidas pelos compostos 17, 26 e 31; o nívelde expressão da proteína de PPARy foi avaliada por western blot em célulasHT-29 não tratadas (controle) e após 24 horas de tratamento com os novoscompostos ou 5-ASA (30 mM) ou rosiglitazona (IO"5 M) usados comocontroles positivos. Os valores de densidade óptica do PPARy foramcalculados para cada condição na proporção para a quantidade do controleinterno de β-actina na mesma amostra.
A Figura 3 mostra a inibição da proliferação de célulasepiteliais pelos compostos 17 e 31; similarmente para 5-ASA (30 mM) e pararosiglitazona (IO"5 M), compostos 17 e 31 inibem a proliferação das células deHT-29 STD5 testadas por manchamento com Ki-67 nuclear (cinza claro)relativa às células incubadas com o meio de cultura somente (controle); osnúcleos foram manchados com azul (cinza escuro na figura) com solução deHoechst 33342; os resultados são expressados como o número médio decélulas contadas em um experimento.
A Figura 4 mostra a indução de apoptose de células epiteliaispelo composto 31; similarmente a 5-ASA (30 mM) e a rosiglitazona (IO"5 M),a molécula 31 induziu apoptose identificada no ensaio TUNEL em célulasHT-29 STD. Apoptose espontânea de 3% foi observada nas células HT-29não tratadas; os resultados são expressados como número médio de célulascontadas em um experimento.A Figura 5 mostra simulação de docking da maneira de ligaçãode vários compostos com PPARy; comparado com a interação dos novoscompostos (de 13 a 38) manchados de acordo com o tipo de átomo nodomínio de ligação de ligando (LBD) representado por uma superfície brancana estrutura de cristal de raio X do PPARy; descrição das interações deligação de hidrogênio chave entre as novas moléculas e o PPARy.
A Figura 5B mostra uma simulação de docking detalhada damaneira de ligação de mesalazina com o receptor de PPARy.
A Figura 5C mostra uma simulação de docking detalhada damaneira de ligação do composto 17 com o receptor de PPARy.
A Figura 5D mostra uma simulação de docking detalhada damaneira de ligação do composto 31 com o receptor de PPARy.
A Figura 6 mostra a análise da atividade de PPARy doscompostos 13, 14, 17, 26, 28, 31 e 38 em células de HT-29 transfectadas. Istomostra que os novos métodos aumentam a atividade do gene repórter, destaforma exibindo uma atividade similar ou superior a 5-ASA.
As Figuras 7 e 8 mostram o efeito das substâncias especificadasna proliferação de três linhagens de células de carcinoma de cólon humanodiferentes (i.e., HT29, HTl 15 e DLD1). As células foram tratadas comconcentrações crescentes de substâncias (0,5-10 mM)) por 48 horas e aproliferação foi determinada pelo uso de um ensaio colorimétrico para amedição de incorporação de BrdU. A densidade óptica (OD) foi determinadaa 450 nm usando uma leitora de ELISA. Os dados indicam a média ± SD de 3experimentos separados.
A Figura 9 mostra a análise citométrica do efeito inibitório docomposto 14 na proliferação em células de DLD-1. Um dos três experimentosrepresentativos no qual resultados similares foram obtidos é mostrado. Ascélulas foram rotuladas com CFSE e sua fração proliferativa foi calculadaapós 48 horas de cultura por citometria de fluxo.A Figura IOA mostra que o composto 14 aumentasignificativamente a morte da célula de DLDl em concentrações de 1,5(p<0,01) e 3 mM (p<0,001). DLDl foram deixadas não estimuladas (Unst) outratadas com o composto 14 por 48 horas. Os dados expressam a média ± SDde 3 experimentos separados e indicam a percentagem de morte celularavaliada por análise FACS de células positivas em AV e/ou PI.
A Figura IOB mostra Z-VAD, um inibidor de pan-caspase,reverte o efeito do composto 14 na morte de células DLD-1. Os resultados sãoexibidos como histogramas biparamétricos de Annexin-V-FITC efluorescências de PI permitindo a discriminação entre células viáveis, célulasapoptóticas com uma membrana intacta e células que se submetem a umanecrose secundária. Um dos três experimentos representativos nos quaisresultados similares foram obtidos é mostrado.
Tabela 1. Percentagens da inibição de células DLD-I por dosesgraduadas (0,5-10 mM) dos compostos especificados. As células foramcultivadas na presença ou na ausência dos compostos, e crescimento celularfoi então avaliado pelo ensaio colorimétrico (BrdU) após 48 horas de cultura.
EXEMPLO 1
Método de Preparação de 4-Amino-N-Hidróxi-2-Metoxibenzamida(Composto 13)
<formula>formula see original document page 14</formula>
2-metóxi-4-aminobenzoato de metil (10 g, 55,25 mmol) ehidrocloreto de hidroxilamina (15,36 g, 221 mmol) foram colocado emMeOH (80 ml) e uma solução de KOH (15,4 g, 275 mmol) em MeOH (55ml) foi adicionado cuidadosamente. A mistura resultante foi agitada emrefluxo por 36 h. Os compostos voláteis foram removidos in vácuo. Oresíduo foi colocado em NaOH IM (50 ml) e lavado com acetato de etila(EtOAc, 50 ml). HCl concentrado foi adicionado vagarosamente até aprecipitação de um sólido (pH foi 10). O sólido foi filtrado, lavado com H2O,depois com metil-terc-butil éter (MTBE) e seco sob vácuo. 1H RMN mostrouque o sólido continha cerca de 1/3 equivalente molar de acetato de etila. Osólido foi colocado em NaOH IM (100 ml) e o EtOAc foi removido invácuo. HCl concentrado foi adicionado cuidadosamente até a precipitação deum sólido (o pH foi 8). O sólido foi coletado por filtração, lavado com H2O5depois com MTBE, e seco sob vácuo para dar 4,67 g (47%) do composto dotítulo como um sólido vermelho escuro.
1H RMN (δ, 250MHz, d6-DMSO): 3,75 (s, 3-H, OMe), 5,64 (s, 2-H, NH2),6,14 (dd, 1-H, aromático), 6,18 (brs, 1-H, aromático), 7,48 (d, 1-H,aromático), 8,73 (s, 1-H, NH), 10,06 (s, 1-H, OH).
EXEMPLO 2
Método de Preparação de 5-Amino-N-Hidróxi-2-Metoxibenzamida(Composto 14)
<formula>formula see original document page 18</formula>
2-metóxi-5-nitrobenzoato de metil (10 g, 47,39 mmol) ehidrocloreto de hidroxilamina (13,17 g, 189,56 mmol) foram colocados emMeOH (100 ml) e uma solução de KOH (13,27 g, 236 mmol) em MeOH (55ml) foi adicionada cuidadosamente. Nota - uma reação exotérmica foiobservada; os sólidos inicialmente foram dissolvidos, então um sólidoprecipitou da solução. TLC (corrido em EtOAc) de uma alíquota lavada comácido mostrou um traço do benzoato inicial e um novo produto. H2O (100 ml)foi adicionado e qualquer sólido não dissolvido coletado por filtração, lavadocom álcool isopropílico (IPA) e seco in vácuo para dar 10,23 g (>100%) deN-hidróxi-2-metóxi-5-nitrobenzamida como um sólido branco.
1H RMN (δ, 250MHz, MeOD): 4,18 (3-H, OMe), 7,43 (d, 1-H, aromático),8,39 (dd, 1-H, aromático), 8,83 (d, 1-H, aromático)N-hidróxi-2-metóxi-5-nitrobenzamida (aprox. 47,39 mmol)foi colocado em IMS (500 ml) e 10% Pd em C (50% de umidade) (1 g) foiadicionado. A mistura foi hidrogenada a 344 kPa por 1,5 h, depois filtradoatravés de celite, e o celite foi lavado com NaOH 2M (200 ml). O MeOH foiremovido in vácuo e o resíduo aquoso resultante lavado com MTBE (100ml). O pH do resíduo aquoso foi diminuído para 7 pela adição cuidadosa deHCl concentrado, e o sólido precipitado resultante coletado por filtração,lavado com H2O, depois com MTBE e seco sob vácuo durante a noite paradar 5,33 g do composto do título (62%) como um sólido marrom claro.
1H RMN (δ, 250MHz, d6-DMSO): 4,09 (3-H, OMe), 7,02 (1-H,aromático), 7,18 (1-H, aromático), 7,28 (1-H, aromático), 9,36 (1-H, NH),10,83 (1-H, OH).
EXEMPLO 3
Método de Preparação de ácido 5-amino-2,3-diidrobenzo[b]furan-7-carboxílico (Composto 17)
<formula>formula see original document page 14</formula>
Acido nítrico (9 ml) foi adicionado a uma solução resfriada(banho de gelo) de ácido 2,3-diidrobenzo[b]furan-7-carboxílico (5,1 g, 31mmol) em ácido trifluoroacético (45 ml). Após 4 horas, a mistura foi extintaem água com gelo (150 ml) e a mistura filtrada para dar ácido 5-amino-2,3-diidrobenzo[b]furan-7-carboxílico, que foi lavado com água e usado bruto(úmido) na etapa seguinte.
1H RivlN (Ô, 250MHz, CD3OD): 3,70 (2H, t, 8,7Hz), 5,21 (2H, t, 8,9Hz),8,67 (1 H, d, 2,7Hz), 8,83 (1 H, d, 2,4Hz).
O ácido 5-nitro-2,3-diidrobenzo[b]furan-7-carboxílico foidissolvido na quantidade mínima de metanol (1,3 1) e nitrogênio foiborbulhado na solução por 20 minutos. Uma mistura de 5% de paládio emcarvão vegetal (1,0 g) em água (20 ml) foi adicionada e a mistura carregadaem um autoclave de 21. Após purgas de N2 de evacuação seqüenciais, o vasofoi carregado até 5 bar de H2 e agitado por 4 dias. A mistura foi jateada comnitrogênio, filtrada através de celite e concentrada para dar ácido 5-amino-2,3-diidrobenzo[b]furan-7-carboxílico (3,5 g, 19,5 mmol, 63% durante 2 etapas).1H RMN (δ, 250MHz, CD3OD): 3,46 (2H, t, 8,5Hz), 4,85 (2H, t, 8,7Hz),7,19(1 H, br s), 7,27(1 H, br s).
EXEMPLO 4
Método de Preparação de ácido 5-amino-2-etóxi-N-hidroxibenzamida(Composto 26)
<formula>formula see original document page 20</formula>
Etapa 1
2-hidróxi-5-nitrobenzoato de metil (ll,82g, 60 mmol),trifenilfosfina (17,29g, 66 mmol) e EtOH (3,03g, 3,85 ml, 66 mmol) foramcolocados em THF (150 ml) e resfriados em gelo. Di-isopropil-azodicarboxilato (8,3 lg, 10 ml, 66 mmol) foi adicionado cuidadosamente,e a reação foi agitada à RT por 1 h. A reação foi concentrada in vácuo, e oresíduo foi triturado com EtOAc (50 ml). O sólido assim formado foicoletado por filtração, lavado com MTBE e seco in vácuo para dar 12,2 gde 2-etóxi-5-nitrobenzoato de metil bruto. O filtrado foi evaporado invácuo, e o resíduo resultante foi triturado com EtOAc (25 ml). O sólidoresultante foi coletado por filtração, lavado com MTBE e seco in vácuopara dar 6,31 g de um segundo grupo de 2-etóxi-5-nitrobenzoato de metilbruto. As porções combinadas de 2-etóxi-5-nitrobenzoato de metil foramcolocadas em IPA quente (50 ml) e resfriadas até a RT. O sólido resultantefoi coletado por filtração, lavado com MTBE e seco in vácuo para dar 2-etóxi-5-nitrobenzoato de metil puro (5,49g, 40,5%) como um sólidoamarelo.
1H RMN (δ, 250MHz, DMSO-d6): 1,38 (3H, t, CH3CH2O), 3,85 (3H, s,OMe), 4,28 (2H, q, CH3CH2O), 7,38 (1 H, d, aromático), 8,40 (1 H, dd,aromático), 8,48 (1 H, d, aromático).
Etapa 2
2-etóxi-5-nitrobenzoato de metil (6,099g, 26,99 mmol) e50% p/v de hidroxilamina aquosa (40 ml) foram colocados em MeOH(100 ml) e agitados à RT durante a noite. O sólido amarelo precipitadoresultante foi coletado por filtração, lavado com IPA e seco in vácuo. Ofiltrado foi evaporado in vácuo e o resíduo foi triturado com IPA (25 ml).
O sólido que não se dissolveu foi filtrado, lavado com uma quantidademínima de IPA e seco in vácuo. Os dois grupos de sólido foram suspensosem H2O (300 ml) e o pH foi diminuído para 2 por adição cuidadosa deHCl concentrado. O sólido foi filtrado, lavado com MTBE e seco in vácuopara dar 3,9 g de 2-etóxi-5-nitro-N-hidroxibenzamida bruta. Os licoresmãe de IPA acima foram combinados com a 2-etóxi-5-nitro-N-hidroxibenzamida bruta e evaporados in vácuo. O resíduo foi triturado comCH2Cl2 (25 ml) e o sólido foi filtrado e seco in vácuo para dar 2-etóxi-5-nitro-N-hidroxibenzamida (2,39 g, 39%) como um sólido amarelo.1H RMN (δ, 250MHz, DMSO-d6): 1,39 (t, 3-H, CH3CH2O), 4,28 (q, 2-H,CH3CH2O), 7,34 (d, 1-H, aromático), 8,38 (dd, 1-H, aromático), 8,48 (d, 1-H, aromático), 9,32 (s, 1-H, NH), 10,79 (s, 1-H, OH).
Etapa 3
2-Etóxi-5-nitro-N-hidroxibenzamida (2,39 g, 1,06 mmol) foisuspenso em EtOH (50 ml) e 10% Pd em carbono (base úmida) (240 mg)foi adicionado. A mistura foi hidrogenada em 344 kPa por 1,5 h. MeOH (50ml) foi adicionado e a mistura foi filtrada através de celite. Os compostosvoláteis foram removidos in vácuo e o resíduo foi colocado em IPA (50ml). A mistura foi aquecida a 60°C por 0,5 h, depois deixada à RT durante anoite. O sólido precipitado foi coletado por filtração, lavado com MTBE eseco in vácuo para dar 1,5 g de 5-amino-2-etóxi-N-hidroxibenzamida (73%)como um sólido branco sujo.
1H RMN (δ, 250MHz, DMSO-dó): 1,28 (t, 3-H, CH3CH2O), 3,97 (q, 2-H,CH3CH2O), 4,81 (s, 2-H, NH2), 6,61 (dd, 1-H, aromático), 6,80 (d, 1-H,aromático), 6,87 (d, 1-H, aromático), 9,00 (s, 1-H, NH), 10,35 (s, 1-H, OH).
EXEMPLO 5
Método de Preparação de ácido 6-Amino-2,2-dimetiI-4H-benzo[l,3]dioxin-4-ona (Composto 28)
<formula>formula see original document page 22</formula>
Etapa 1
Acido 5-nitrossalicílico (25 g, 136,6 mmol) foi colocado emacetona (20 ml) e ácido trifluoroacético (150 ml) e anidrido trifluoroacético(50 ml) foram adicionados. A mistura foi aquecida em refluxo. Após 1 h, maisacetona (30 ml) foi adicionada, e a reação foi aquecida em refluxo por 48 h. Areação foi resfriada até a RT e os compostos voláteis foram removidos invácuo. O óleo marrom resultante foi dissolvido em CH2Cl2 (400 ml) e lavadocom 1:1 H20/NaHC03 saturado (400 ml). A fase aquosa foi extraída comCH2Cl2 (2 χ 200 ml), e as camadas orgânicas combinadas foram secas(MgSO4) e evaporadas in vácuo. O resíduo sólido foi triturado com pentano(150 ml), coletado por filtração, lavado completamente com pentano e seco invácuo para dar 6-nitro-2,2-dimetil-4H-benzo[l,3]dioxin-4-ona (27,84g, 91%) como um sólido amarelo escuro.
1H RMN (δ, 250MHz, CDCl3): 1,79 (s, 6-H, CH3), 7,13 (d, 1-H,aromático), 8,43 (dd, 1-H, aromático), 8,87 (d, 1-H, aromático).
Etapa 26-Nitro-2,2-dimetil-4H-benzo[l,3]dioxin-4-ona (5g, 22,42mmol) foi colocado em EtOH (35 ml) e 10% Pd em C (base úmida) (2,37g)foi adicionado. A mistura foi hidrogenada em 344 kPa por 1 h. A mistura foifiltrada através de celite e os compostos voláteis foram removidos in vácuo.IPA (50 ml) foi adicionado e a mistura foi aquecida a 60°C por 5 min,depois deixada resfriar até a RT. O sólido resultante foi filtrado, lavado comMTBE e seco in vácuo para dar 2,93 g de 6-amino-2,2-dimetil-4H-benzo[l,3]dioxin-4-ona (68%) como um sólido amarelo.
1H RMN (δ, 250MHz, CDCl3): 1,71 (s, 6-H, CH3), 6,80 (d, 1-H, aromático),6,93 (dd, 1-H, aromático), 7,26 (d, 1-H, aromático).
EXEMPLO 6
Método de Preparação de ácido 5-Amino-2-isopropoxibenzóico(Composto 31)
<formula>formula see original document page 23</formula>
2-Hidróxi-5-nitrobenzoato de metil (ll,82g, 60 mmol),trifenilfosfina (17,29g, 66 mmol) e iPrOH (3,96g, 5 ml, 66 mmol) foramadicionados em THF (150 ml) e resinados em gelo. Di-isopropil-azodicarboxilato (8,3 lg, 10 ml, 66 mmol) foi adicionado cuidadosamente, ea reação foi agitada à RT durante a noite. Os compostos voláteis foramremovidos in vácuo e o resíduo tratado com EtOAc (50 ml). Os sólidos quenão se dissolveram foram removidos por filtração, e o filtrado evaporadoaté a secura in vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em colunapara dar 2-isopropóxi-5-nitrobenzoato de metil (6,92g, 48,5%) como umóleo amarelo.
2-Isopropóxi-5-nitrobenzoato de metil (6,92g, 28,95 mmol)foi colocado em TffiVH2O (35 ml de cada) e LiOH (1,39 g, 57,9 mmol) foiadicionado. A mistura foi agitada à RT durante a noite, depois o pH foidiminuído para 1 pela adição de HCl concentrado e o produto extraído emacetato de etila (50 ml). A camada orgânica foi seca (MgSO^ e evaporadapara dar ácido 2-isopropóxi-5-nitrobenzóico (6,02g, 92,5%) como umsólido amarelo.
1H RMN (δ, 250MHz, DMSO-d6): 1,32 (d, 6-H, CH3), 4,88 (septet, 1-H,CH), 7,37 (d, 1-H, aromático), 8,32 (dd, 1-H, aromático), 8,40 (d, 1-H,aromático), 13,13 (s, 1-H, CO2H).
Acido 2-isopropóxi-5-nitrobenzóico (6,02g, 26,75 mmol)foi suspenso em EtOH (100 ml) e 10% Pd em C (base úmida) (600 mg) foiadicionado. A mistura foi hidrogenada em 344 kPa por 2 h. A mistura foifiltrada através de celite e os compostos voláteis foram removidos invácuo. O resíduo foi triturado com IPA, e o sólido resultante filtrado,lavado com MTBE e seco in vácuo para dar 4,15 g de ácido 5-amino-2-isopropoxibenzóico (79,5%) como um sólido amarelo.
1H RMN (δ, 250MHz, DMSO-d6): 1,21 (d, 6-H, CH3), 4,33 (septet, 1-H,CH), 7,68 (dd, 1H, aromático), 6,84 (d, 1-H, aromático), 6,89 (d, 1 H,aromático).
EXEMPLO 7
Método de preparação de ácido 4-diisopropilaminosalicílico (Composto 38)
<formula>formula see original document page 24</formula>
Uma mistura ácido 5-aminosalicílico (3,3 g, 21,6 mmol), 2-iodopropano (9,lg, 53,9 mmol) e carbonato de potássio (7,4g, 54 mmol)foi agitada a 50°C em IMS (300 ml) e água (100 ml) por 4 dias. Oaquecimento foi parado e a mistura concentrada até um sólido, que foilavado com 100 ml de CH2Cl2. As lavagens foram descartadas e o sólidoaquecido em IMS (200 ml) por 30 minutos a 40°C. Quando o aquecimentoparou, sulfato de magnésio foi adicionado e agitação continuou por 25minutos. Após a filtração para remover os sólidos inorgânicos, a soluçãofoi concentrada e purificada por cromatografia de sílica (eluente 10-20%de metanol / CH2Cl2). Isto deu 0,51 g de ácido 4-diisopropilaminosalicílico.
1H RMN (δ, 250MHz, d6-DMSO): 1,51 (12H, br d, 5,75Hz), 3,9-3,5 (1 H,br), 4,41 (2H, br), 7,21 (1 H, d, 8,8Hz), 7,70 (1 H, dd, 8,8, 2,7Hz), 8,12 (1H, br s).
EXEMPLO 8
Estudo nos efeitos de novos compostos de acordo com a presenteinvenção na ativação/expressão de PPARy e na regulação da proliferaçãode células e apoptose
MATERIAIS E MÉTODOS
Compostos
5-ASA foi comprado na Sigma-Aldrich™ (St QuentinFallavier, França). Rosiglitazona foi adquirida na Spi BiOTM (Massy,França). As novas moléculas 13, 14, 17, 26, 31, 38 (Figure IA) foramdadas por Giuliani SpATM (Milano, Itália) e sintetizadas por SAFCPharmaTM (Manchester, Inglaterra).
Linhagens Celulares
A linhagem celular de carcinoma de cólon HT-29 STD(ATCC HTB-38) foi rotineiramente crescida em DMEM suplementadocom 10% de FCS com calor, e antibióticos. As células foram crescidasem monocamadas, incubadas a 37°C em 5% de CO2 e 95% de umidaderelativa.
Transfecção Transiente com PPARy e estimulação de células
As células de HT-29 STD foram transientementetransfectadas usando o reagente de transfecção Effectene™ (Qiagen™) deacordo com as instruções do fabricante. Para testar a ativação de PPARy,foi realizada a transfecção com 500 ng de um construto promotor mínimocontendo duas cópias de PPRE obtidas do citocromo p450 4A (2XCYP)(1). O plasmídeo de renilla luciferase (0,1 μg/poço) foi tambémtransfectado como um controle interno para monitoramento da eficiênciade transfecção e para normalizar a atividade de luciferase. As célulastransfectadas foram deixadas por 48 horas de incubação a 37°C. Asestimulações foram realizadas após a incubação de células durante 3-6-9-12-15-18-24 horas com os compostos 13, 14, 17, 26, 31, 38 em umaconcentração de 30 mM e comparado com os dois ligandos sintéticos dePPARy 5-ASA 30 mM (2) e rosiglitazona IO"5 M (2) usado comocontroles positivos. O pH das soluções de droga foi ajustado até 7,4 comNaOH. Os extratos de célula totais foram preparados usando o tampãoPassive Lysis (Promega™, Madison, Wis.). A atividade de luciferase foiavaliada em 20 ml do extrato usando o sistema de ensaio Promega " DualLuciferase de acordo com o protocolo do fabricante. As transfecçõesforam avaliadas em triplicata em pelo menos três experimentos separados.A atividade de luciferase foi expressada como o dobro da atividade obtidaem células tratadas com as diferentes moléculas divididas por atividade deluciferase de células não-estimuladas.
Avaliação de PPARy e de β-actina por análise de Western Blot
As proteínas totais foram obtidas por homogeneização celularem um tampão de extração consistindo de PBS com 2% de Triton™,Fluoreto de Fenil Metil Sulfonil (PMSF) 100 mM e um coquetel de inibidorde protease clássico (2). As proteínas totais foram então separadas poreletroforese de gel de poliacrilamida e eletro-manchadas. As membranas defluoreto de polivinilideno (PVDF) foram incubadas durante a noite comanticorpo primário policlonal de coelho direcionado contra PPARy (diluição1/500, TEBU, Le Perray en Yveline, França), β-actina foi detectada usandoum anticorpo primário monoclonal de coelho diluído em 1/10.000 (Sigma).
A imunodetecção com um anticorpo conjugado com peroxidase secundário(1/1000, Dako™, Trappes, França) e quimioluminescência foi realizada deacordo com o protocolo do fabricante (ECLTM, Amersham PharmaciaBiotech™, Orsay, França). Os valores de densidade óptica de PPARyforam dados para cada condição na proporção para a quantidade da β-actina de controle interno na mesma amostra (2).
Análise da proliferação celular por imuno-manchamento de Ki-67
Após 24 h de cultura, as células de HT-29 STD foram tratadasdurante 24 h com as novas moléculas 13, 14, 17, 26 e 31, a 30 mM. 5-ASA(30 mM) e resiglitazona (IO"5 M) foram usadas como controles positivos.
A molécula 38 (exemplo 7) não foi incluída neste experimento devido àsua baixa solubilidade. O pH das soluções de droga foi ajustado para 7,4com NaOH. As células foram fixadas em PFA 4%, permeabilizadas emPBS contendo 0,1% de Triton X-100™ a 4°C e então incubadas com soronormal de cabra e tampão de bloqueio (1% BSA em PBS) para minimizara adsorção não-específica do anticorpo.
A proliferação celular foi avaliada por um manchamento deKi-67 nuclear usando anticorpo primário monoclonal de rato direcionadocontra Ki-67 (diluição 1:50 durante a noite; ZYMED™, ClinisciencesTM,Montrouge, França). O anticorpo primário foi revelado com IgG anti-ratode burro Alexa 594 conjugado com fluorocromo vermelho de acridina(diluição 1:100, Molecular Probes™, lnvitrogen™, Cergy Pontoise,França). Os núcleos foram manchados com solução Hoescht 33342 (0,125mg/ mi) (Sigma-Aldrich™) e visualizados sob um microscópio defluorescência (Leica™, Bensheim, Alemanha). Os controles negativosconsistiam de manchamento com um soro de rato não-específico ao invésdo anticorpo específico. As contagens de pelo menos 500 células/amostraforam sistematicamente realizadas cegamente em um experimento. Osresultados foram expressados como a média ± SEM do número de célulasmanchadas.
Detecção de apoptose
Após 24 h de cultura, as células de HT-29 STD foram tratadasdurante 24 h com as novas moléculas 13, 14, 17, 26 e 31, em umaconcentração de 30 mM. 5-ASA (30 mM) e rosiglitazona (IO"5 M) foramusados como controles positivos. As moléculas 17 e 38 (exemplos 3, 7)não foram incluídas neste experimento devido à sua baixa solubilidade. OpH das soluções de droga foi ajustado para 7,4 com NaOH. As células quese submetem à apoptose foram identificadas por rotulagem enzimática defilamentos de DNA usando um ensaio de rotulagem de extremidade decorte transferase dUTP terminal (ensaio TÚNEL, Roche Diagnostics™,Meilan, França). As contagens de pelo menos 500 células/amostra foramsistematicamente realizadas cegamente em um experimento. Os resultadosforam expressados como a média ± SEM do número de célulasmanchadas.
RESULTADOS
Foi observado que as novas moléculas 17 (exemplo 3) e 31(exemplo 6) induzem a ativação de PPARy. O composto 26 (exemplo 4)também induz PPARy, mas até uma menor extensão. A ativação de PPARyresulta em uma cascata de reações, levando a uma ligação aos elementos deseqüência de DNA específicos chamados de elementos de respostaproliferadores de peroxisoma (PPRE) (7-9).
Foi investigada a atividade transcricional de PPARy portransfecções transientes de células epiteliais com os plasmídeos de PPRE derenilla luciferase. As células foram estimuladas com as diferentes moléculasdurante 24 h. A análise da atividade de PPARy em células HT-29transfectadas mostrou que as novas moléculas 17 (exemplo 3) e 31 (exemplo6) em uma concentração de 30 mM aumento a atividade de gene repórter emduas vezes, desta forma exibindo uma atividade similar a 5-ASA erosiglitazona (Figura 1B). As moléculas 13, 14 e 38 (exemplos 1, 2 7) emuma concentração de 30 mM exerceram um efeito citotóxico rápido nascélulas epiteliais, limitando a investigação da ativação de PPARy após 6horas (Figura 1B).
As novas moléculas 17, 26 e 31 induzem a expressão dePPARy. A capacidade de novas moléculas de induzirem a expressão dePPARy nos níveis de proteína na linhagem celular HT-29. Uma induçãomédia de 2 vezes dos níveis de proteína de PPARy quantificados por westernblot foi observada em células tratadas durante 24 horas com as moléculas 17,26 e 31 (Figura 2).
As novas moléculas 17 e 31 (exemplos 3 e 6) inibem aproliferação de células epiteliais. Foi avaliado na linhagem celular HT-29STD o papel de novas moléculas na regulação da proliferação celular (Figura3). A proliferação celular foi avaliada por manchamento de proteína nuclearKi-67 expressado em células proliferativas, a presença de Ki-67 sendonecessária para manter a proliferação celular (10). Comparado com as célulasnão tratadas, a incubação de células HT-29 por 24 h com as moléculas 17 e31 (30 mM) resultou em uma inibição de 67 a 75% da proliferação celular(Figura 3). Os efeitos da proliferação celular do composto 26 não foramtestados, pois ele tem um menor efeito como um ativador de PPAR-gama.
Os resultados similares foram obtidos com os dois controlespositivos rosiglitazona (10"5M) e 5-ASA (30 mM) usados em suasconcentrações ótimas. A demonstração do efeito antimitogênico potencialdas moléculas 13, 14 e 26 (exemplos 1, 2, 4) foi limitada por seus rápidosefeitos citotóxicos em células epiteliais nesta concentração (dados nãomostrados).
A nova molécula 31 (exemplo 6) induz apoptose de célulaepitelial através de PPARy. Similarmente a rosiglitazona e 5-ASA, amolécula 31 exibiu apoptose em 80% das células epiteliais identificadaspor rotulagem de quebras no filamento de DNA usando uma rotulagem deextremidade de corte de transferase dUTP terminal (TÚNEL) (Figura 4).Similarmente ao experimento prévio, as moléculas 13, 14 e 26 induziramum efeito citotóxico rápido em 30 mM impedindo a análise de apoptosecelular.
EXEMPLO 9
Estudo nos Efeitos de novos compostos na ativação de PPARy
MATERIAIS E MÉTODOS
Compostos
5-ASA foi comprado em Sigma-Aldrich™ (St QuentinFallavier, França). As novas moléculas 13, 14, 17, 26, 28, 31, 38 (FiguraIA) foram sintetizadas como descrito nos exemplo 1-7.
Linhagens Celulares
A linhagem celular de carcinoma do cólon HT-29 STD(ATCC HTB-38) foi rotineiramente crescida em DMEM suplementada com10% de FCS com calor, e antibióticos. As células foram crescidas emmonocamadas, incubadas a 37°C em 5% de CO2 e 95% de umidade relativa.Transfecção transiente com PPARy e estimulação de células
As células de HT-29 STD foram transientementetransfectadas usando o reagente de transfecção Effectene (Qiagen ) deacordo com as instruções do fabricante. Para testar a ativação de PPARy,foi realizada a transfecção com 500 ng de um construto promotor mínimocontendo duas cópias de PPRE obtidas do citocromo p450 4A (2XCYP)(1). O plasmídeo de reniila luciferase (0,1 μg/poço) foi tambémtransfectado como um controle interno para monitoramento da eficiênciade transfecção e para normalizar a atividade de luciferase. As célulastransfectadas foram deixadas por 48 horas de incubação a 37°C. Asestimulações foram realizadas após a incubação de células durante 18horas com os compostos 13, 14, 17, 26, 31, 38 (ver figura 6) em umaconcentração de 1 mM e comparado com os dois ligandos sintéticos dePPARy 5-ASA 30 mM (2) usado como controle positivo. O pH dassoluções de droga foi ajustado até 7,4 com NaOH. Os extratos de célulatotais foram preparados usando o tampão Passive Lysis (Promega™,Madison, Wis.). A atividade de luciferase foi avaliada em 20 ml doextrato usando o sistema de ensaio Promega™ Dual Luciferase de acordocom o protocolo do fabricante. As transfecções foram avaliadas emtriplicata em pelo menos três experimentos separados. A atividade deluciferase foi expressada como o dobro da atividade obtida em célulastratadas com as diferentes moléculas divididas por atividade de luciferasede células não-estimuladas.
RESULTADOS
A ativação de PPARy resulta em uma cascata de reações,levando a uma ligação a elemento de seqüência de DNA específicoschamados de elementos de resposta proliferadores de peroxisoma (PPRE) (7-9)·
Foi investigada a atividade transcricional de PPARy portransfecções transientes de células epiteliais com os plasmídeos de PPRE derenilla luciferase. Para avaliar se as novas moléculas têm mais eficácia doque 5-ASA para estimular a ativação de PPARy, foram testadas estasmoléculas em uma concentração de 1 mM. O efeito das novas moléculas emuma concentração de 1 mM foi comparado com 5-ASA, usado como ocontrole positivo em uma concentração ótima de 30 mM. As células foramestimuladas com as diferentes moléculas durante 24 h. A análise da atividadede PPARy em células HT-29 transfectadas mostrou que as novas moléculasaumentaram a atividade de gene repórter, desta forma exibindo umaatividade similar ou superior a 5-ASA (concentração das novas moléculas foivezes menor, ver Figura 6).EXEMPLO 10
Estudo no efeito dos compostos no crescimento de células de câncer decólon
As seguintes substâncias 13, 14, 17, 26, 28, 31 e 38 foramtestadas quanto à sua capacidade de modular o crescimento de células decâncer de cólon. Nenhum experimento foi realizado com o composto 28, poisesta substância não era solúvel no meio de cultura.
Para este propósito, três linhagens celulares de carcinoma decólon humano (i.e., HT-29, HT-115 e DLD1) foram usadas. Estes tipos decélulas foram selecionados na base da expressão de ciclooxigenase-2(COX-2). Na verdade, as células de HT-115 expressam um COX-2biologicamente ativo, as células de HT-29 expressam uma isoforma deCOX-2 não-funcional, e DLD-I são células deficientes em COX-2.
As células de HT-29 e DLD-I foram cultivadas nos meiosMcCoy e RPMI1640, respectivamente, suplementadas com 10% de sorobovino fetal (FBS), 1% de penicilina/estreptomicina (P/S) e 50 μg/ ml degentamicina. HT-115 foram cultivadas no meio DMEM suplementadocom 15% de FBS e 1% de P/S. As células foram mantidas em umaincubadora umedecida a 37°C, na presença de 5% de CO2.
Para análises do crescimento celular, as suspensões decélula única foram colocadas em placas em 2 χ 10 células/poço (4x10células/poço para HTl 15) em placas de cultura com 96 poços em meiocontendo 0,5% FBS e deixadas aderir. As células não-aderentes foramentão removidas, e meio fresco contendo 0,5% FBS foi adicionado emcada poço. As células foram cultivadas na presença ou na ausência dassubstâncias especificadas. Cada substância foi dissolvida como umasolução de carga de 25 mM no meio de cultura contendo 0,5% FBS, e opH de cada solução de carga foi ajustado para 7,4. Se necessário, comNaOH. As substâncias foram usadas em uma concentração final variandode 0,5 a 10 mM. A proliferação celular foi determinada pela medição daincorporação de 5-bromo-2'-desoxiuridina (BrdU) em DNA usando um kitde proliferação de célula comercialmente disponibilizado (RocheDiagnostics™, Monza, Itália). BrdU foi adicionado às culturas celularesdurante as últimas 6 horas de incubação, e o nível de células positivas deBrdU foi avaliado após 48 horas de cultura por ensaio imunossorventeligado por enzima (ELISA).
A densidade óptica (OD) foi determinada a 450 nm usandouma leitora de ELISA. Os experimentos foram realizados em triplicata eos resultados são relatados como a média ± desvio padrão (SD).
Para avaliar o efeito do composto 14 no crescimento decélulas epiteliais no cólon, as células de DLD-I famintas por soro foramincubadas em 0,2 μηι de carboxifluoresceína diacetato succinimidil éster(CFSE) (Invitrogen™, Milão, Itália) at 37°C por 30 minutos, depoisextensivamente lavadas e cultivadas com ou sem a adição do composto.Após 2 dias de cultura, fluorescência com CSFE foi avaliada e a proporçãode células que se submetem a divisões foi determinada, permitindo assimo cálculo de freqüência do precursor e do índice de proliferação.
O efeito do composto 14 na morte de células epiteliais docólon foi também avaliado. Para este fim, as células foram cultivadas comoindicado acima por 2 dias e então a fração de Annexin V (AV) e/ou iodeto depropídio (PI) - células positivas foi avaliada usando um kit comercialmentedisponibilizado (Beckmann Coulter™, Milão, Itália). Para avaliar se oefeito do composto 14 na morte de células epiteliais do cólon eradependente da atividade de caspase, as células foram pré-incubadas com z-VAD-fmk (40 μΜ), um inibidor de pan-caspase, por 1 hora antes da adiçãodo composto 14 (1,5 mM). A fração de células positivas para AV e PI foideterminada após 48 horas de cultura, como indicado acima.
RESULTADOSOs compostos diferiram em suas capacidade de inibir ocrescimento de células de câncer do cólon. Os resultados são mostrados nasFiguras 7 e 8. A tabela mostra a percentagem de inibição do crescimento decélulas de DLD-I pelos compostos especificados. As substâncias 13, 14, 17,26 e 38 exibem um efeito anti-proliferativo notável. Dentre estas substâncias,os compostos 13 e 14 significativamente reduziram o crescimento celular,em uma maneira dependente da dose, em cada uma das três linhagenscelulares testadas (Fig. 7A e 7B). Mais que 90% da inibição de crescimentocelular foram vistos quando os compostos foram usados em umaconcentração final de 10 mM. O efeito antimitogênico dos compostos 17, 26e 38 foi observado somente em concentrações de 2,5 mM ou maior (Fig. 8A,8C e 7D).
O composto 31 significativamente inibiu o crescimentocelular quando usado em altas doses (10 mM) (Fig. 7C).
Todos os dados acima indicam que as substâncias 13, 14 e 38são os mais poderosos supressores de crescimento celular de câncer de cólon.Contudo, os precipitados desenvolvidos em culturas celulares realizados napresença das substâncias 13 e 38. Isto foi seguido por uma morte celular emmassa, que torna difícil se julgar se o efeito antiproliferativo destescompostos foi devido à sua ação antimitogênica ou ao efeito tóxico. Combase nestas verificações, experimentos subseqüentes foram focalizados nouso do composto 14.
Primeiramente, o efeito inibidor do composto 14 nocrescimento de células de DLD-I foi confirmado por citometria de fluxo.Para rastrear a proliferação celular, as células foram rotuladas com CF SE. Nalinhagem com os dados de ensaio de BrdU, o composto 14 inibiu aproliferação de células de DLD-I (Figura 9). De forma importante, após 48horas de tratamento, a fração de células proliferativas diminuir de 90 ± 4%em culturas não tratadas para 48±7,21 ± 11 e 11 ±6% em culturastratadas com 0,5, 1 e 2,5 mM.
Para examinar se o composto 14 também regulou asobrevivência de células de câncer no cólon, as células de DLD-I foramcultivadas na presença ou na ausência de tal composto por 48 horas eentão a percentagem de células positivas com PI e/ou Annexin V foiavaliada por citometria de fluxo. Como mostrado na Figura 10A, ocomposto 14 aumentou significativamente a fração de morte celularquando usado em uma concentração final de 1,5 ou 3 mM. Para explorar oenvolvimento de caspases na morte celular de DLD-I 14-mediado, ascélulas foram pré-incubadas com um inibidor de pan-caspase, Z-VAD, eentão tratadas com 14. Como mostrado no experimento representativo naFigura 10B, o tratamento de células com Z-VAD reduziu muito apercentagem de células positivas para AV/PI.
A percentagem de inibição de células de DLD-I por dosesgraduadas (0,5-10 mM) dos compostos especificados está presente naTabela 1. As células foram cultivadas na presença ou na ausência doscompostos, e o crescimento celular foi então avaliado pelo ensaiocolorimétrico (BrdU) após cultura de 48 horas.
EXEMPLO 11
Modelagem Molecular
Os estudos de modelagem molecular foram realizados usandoum software SYBYL 6.9.1 (Tripos Associatos Inc™, St Louis, MO)correndo em estações de trabalho Silicon Grafics™. O modelotridimensional dos zwitterions de 5-ASA foi crescido de uma coleção defragmentos padrão, e sua geometria foi subseqüentemente otimizadausando o campo de força Tripos (3). Como o pKa dos compostos é aindadesconhecido, a calculadora online SPARC foi usada para determinar aespécie que ocorre em pH fisiológico (7,4) (http://ibmlc2.chem.uga/sparc/index.cfm). Os modelos tridimensionais decompostos ionizados foram crescidos de uma coleção de fragmentospadrão, e sua geometria foi subseqüentemente otimizados usando o campode força Tripos (3) incluindo o termo eletrostático calculado de cargasatômicas de Gasteiger and Hiickel. O método de Powell disponível noprocedimento Maximin2 foi usado para minimização de energia até ovalor de gradiente ser menor que 0,001 kcal/mol.Â. A estrutura dodomínio de ligação de ligando de PPARy foi obtida de sua estrutura decristal de raio X complexa com o tesaglitazar (AZ 242) disponibilizado noBanco de Dados de Proteína RCSB (1171) (4,5). A docking flexível doscompostos no sítio ativo receptor foi realizada usando software GOLD (6).Os modelos de docking mais estáveis foram selecionados de acordo com amelhor conformação conseguida prevista pelo Goldscore (6) e as funçõesde classificação X (7). Os complexos foram minimizados em energiausando o método de Powell no procedimento de Maximin2 com o campode força Tripos e uma constante dielétrica de 4,0 até que o valor degradiente alcançasse 0,01 kcal/mol. Â. A função de recozimento foi usadadefinindo o ligando em uma região quente (10 Â).
Estudos de Docking
Todas as novas moléculas se ajustam com a interação PPARy-LBD através de ligação de hidrogênio com His-323, His-449, Tyr-473 eSer-289 considerado como determinantes chave requeridos para oreconhecimento molecular e ativação de PPARy (11-12) (Figuras 5A, 5C e5D). Docking para 5-ASA é mostrado na Figura 5B.
CONCLUSÕES
Foi previamente mostrado que os efeitos antiinflamatórios de5-ASA foram mediados através de PPARy principalmente expressado nocólon pelas células epiteliais (2). O desenvolvimento racional das primeiras 6novas moléculas de 5-ASA otimizadas baseadas em análise de dockingrevelou que as 2 moléculas 31 e 17, usadas em uma concentração de 30 mM,ativam PPARy e induzem sua expressão por células epiteliais intestinais.
Estas novas 2 moléculas também inibem a proliferação de células epiteliais einduzem apoptose, dois mecanismos importantes envolvidos nodesenvolvimento de câncer de cólon e atribuídos à ativação de PPARy. Comreferência às 4 outras moléculas (13, 14, 26, 38), a maioria delas têm efeitoscitotóxicos diretos em células epiteliais em uma concentração de 30 mM,impedindo a análise da ativação de PPARy e a regulação e avaliação deproliferação celular e apoptose.
O primeiro conjunto de exemplos da presente invenção(Exemplo 8) mostra a capacidade de duas moléculas 31 e 17 de estimular aexpressão e ativação de PPARy e de regular a proliferação celular e apoptose.
Os efeitos citotóxicos em células epiteliais dos compostos 13, 14e26em30mM podem estar relacionados com a presença em sua estrutura de um grupode ácido hidroxâmico altamente reativo conhecido por exibir uma grandeafinidade por muitas enzimas.
O segundo conjunto de exemplos da presente invenção(Exemplo 9) indica que também no outro teste as moléculas exibem umaatividade similar a, ou superior a 5-ASA em uma concentração de trabalhotrinta vezes menor que aquela de 5-ASA, durante um período de 24 horas.
O conjunto final de exemplos da presente invenção (Exemplo10) mostra que os compostos afetam a inibição do crescimento das linhagensde células de câncer de cólon, HT-29, HT-115 e DLDl em graus variados,com os compostos 13, 14 e 38 mostrando os maiores efeitos. De forma aclarear a natureza da morte celular, o composto 14 foi também investigado efoi confirmado, por citometria de fluxo, inibir o crescimento de células decâncer de cólon DLD-I com concentração crescente com o tempo.
Estas moléculas são também ativas nas células que nãoexpressam COX-2, e assim as moléculas da presente invenção podem serusadas em células que não expressam COX-2 para os propósitos detratamento de tumores e outras aplicações descritas aqui.
CONCLUSÕES GERAIS
Os compostos com maior classificação sintetizados, indicadosdos estudos de modelagem, mostram uma atividade similar/superior àquelade mesalazina.
REFERÊNCIAS
1. Dubuquoy, L., E.A. Jansson, S. Deeb, S. Rakotobe, M.Karoui, J.F. Colombel, J. Auwerx, S. Pettersson, and P. Desreumaux. 2003,Impaired expression of peroxisome proliferator-activatod receptor gammain ulcerative colitis. Gastroenterology 124:1265-1276,
2. Rousseaux C, Lefebvre B, Dubuquoy L, Lefebvre P,Romano O, Auwerx J, Metzger D, Wahli W, Desvergne B, Naccari GC,Chavatte P, Farce A, Bulois P, Cortot A, Colombel JF, Desreumaux P.Intestinal anti-inflammatory effect of amino salicylic acid is dependent onPPARy. JExp Med; 201: 1205-15.
3. Clark, M.C.R.D.I.V.O., N. 1989, Validation of theGeneral Purpose Tripos 5,2 Field. J. Comput Chem. 10:982-1012,
4. Gampe, R.T., Jr., V.G. Montana, M.H. Lambem, A.B.Miller, R.K. Bledsoe, M.V. Milburn, S.A. Kliewer, T.M. Willson, andH.E. Xu. 2000, Asvmmetrv in the PPARgamma/RXRalpha crystalstructure reveals the molecular basis of heterodimerization among nuclearreceptors. Mol Cell 5:545-555.
5. Jones, G., P. Willett, R.C. Glen, A.R. Leach, and R.Taylor. 1997. Development and validation of a genetic algorithm forflexible docking. J Mol Biol 267:727-748.
6. Wang, R., L. Lai, and S. Wang. 2002. Furterdevelopment and validation of empirical scoring functions for structure-based binding affmity prediction. J Comput Aided Mol Des 16:11 -26.
7. Westin, S., R. Kurokawa, R.T. Noite, G.B. Wisely, E.M.Mclnerney, D.W. Rose, M.V. Milburn, M.G. Rosenfeld, and C.K. Glass.1998. Interactions controlling the assembly of nuclear-receptorheterodimers and co-activators. Nature 395:199-202.
8. Mangelsdorf, D.J., C. Tummel, M. Beato, P. Herrlich, G.Schutz, K. Umesono, B. Blumberg, P. Kastner, M. Mark, P. Chambon, andet ai. 1995. The nuclear receptor superfamily: the second decade. Cell83:835-839.
9. Misra, P., E.D. Owuor, W. Li, S. Yu, C. Qi, K. Meyer,Y.J. Zhu, M.S. Rao, A,N. Kong, and J.K. Reddv. 2002, Fosforilation oftranscriptional coactivator peroxisome proliferator-activatod receptor(PPAR)-binding protein (PBP). Stimulation of transcriptional regulationby mitogen-activatod protein kinase. J Biol Chem 277:48745-48754. Epub42002 Sep 48727.
10. Gerdes, J. et a/. 1986, Growt fractions in breast cancersdeterminad in situ with monoclonal antibody Ki-67, J Clin Patol 39, 977-80.
11. Noite, R.T., G.B. Wisely, S. Westin, J.E. Cobb, M.H.Lambem, R. Kurokawa, M.G. Rosenfeld, T.M. Willson, C.K. Glass, andM.V. Milburn. 1998, Ligand binding and co-activator assembly of theperoxisome proliferator-activated receptor-gamma. Nature 395:137-14
12. Xu, H.E., M.H. Lambert, V.G. Montana, K.D. Plunket,L.B. Moore, J.L. Collins, J.A. Oplinger, S.A. Kliewer, R.T. Gampe, Jr.,D.D. McKee, J.T. Moore, and T.M. Willson. 2001. Structural determinantsof ligand binding selectivity between the peroxisome proliferator-activatodreceptors. Proc Natl Acad Sci USA 98:1391913924, Epub 12001 Nov13916.

Claims (13)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que tem a fórmulageral (I)<formula>formula see original document page 40</formula>em queR1 e R2, que podem ser iguais ou diferentes, são selecionadosdo grupo que compreende H, -CnH2n-I, um grupo alquil linear ou ramificadotendo de 1 a 6 átomos de carbono, ou juntos formam um anel aromático oualifático com 5 ou 6 átomos;R3 é selecionado dentre -CO-CH3, -NHOH, -OH, -OR6 emque R6 é um grupo alquila linear ou ramificado tendo de 1 a 6 átomos decarbono;R4 é selecionado dentre H, um grupo alquil linear ouramificado tendo de 1 a 6 átomos de carbono, fenil, benzil, -CF3 ou-CF2CF3, vinil ou alil; R5, R7, R8 são átomos de hidrogênio; ouR3 e R4, R4 e R5, ou R7 e R8 formam um anel, fundido ao anelde benzeno, aromático ou alifático com 5 ou 6 átomos compreendendo de 1 a 2 heteroátomos selecionados independentemente do grupo que compreendeN, O.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que o grupo alquil linear ou ramificado tendo de 1 a 6 átomos decarbono é selecionado dentre -CH3, C2H5, isopropil, propil, -CnH2n.i.
3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2,caracterizado pelo fato de que R3 e R4 formam um anel de acordo com afórmula (II):<formula>formula see original document page 41</formula>
4. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2,caracterizado pelo fato de que R4 e R5 formam um anel de acordo com a
5. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2,caracterizado pelo fato de que R7 e R8 formam um anel de acordo com afórmula (IV) ou (V)<formula>formula see original document page 41</formula>
6. Composto da fórmula (I) de acordo com qualquer uma dasreivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que os ditoscompostos são selecionados do grupo que compreende:- 4-amino-N-hidróxi-2-metoxibenzamida- 5-amino-N-hidróxi-2-metoxibenzamidaÁcido 5-amino-2,3-diidrobenzofuran-7-carboxílico- 5-amino-2-etóxi-N-hidroxibenzamida- 6-amino-2,2-dimetil-4H-benzo[l,3]dioxin-4-onaÁcido l,2,3,4-tetraidro-6-hÍdroxíquinolino-5-carboxílicoAcido 5 -amino-2-isopropoxibenzóicoÁcido 6-metóxi quinolino-5-carboxílicoÁcido 6-metóxi-1,2,3,4-tetraidroquinolino-5-carboxílicoÁcido 5-diisopropiiaminosalicílicoÁcido 4-diisopropilaminosalicílico.
7. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que Rt e R2 são -CH(CH3)2 ou -H.
8. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que R3 é -NHOH ou -OH.
9. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que é selecionado do grupo compreendendo<formula>formula see original document page 42</formula>
10. Uso de um composto, caracterizado pelo fato de serselecionado do grupo que consiste emácido 5-aminosalicil-hidroxâmicoácido 3-dimetilaminosalicílicoácido 2-metóxi-4-aminobenzóicoácido 2-metóxi-5-aminobenzóicoácido 5-metilaminosalicílicoácido 4-metilaminosalicílicoácido 4-acetilaminossalicílicoácido 2-etóxi-4-aminobenzóicoácido 2-etóxi-5-aminobenzóicoácido 4-dimetilaminosalicílicoácido 2-etóxi-4-aminobenzoilhidroxâmicoácido 6-hidroxiquinolino-5-carboxílicoácido 2-(2-propil)óxi-4-aminobenzóicoácido 4-( 1 -piperazinil)salicílico,na preparação de um produto medicinal para o tratamento decâncer ou doenças inflamatórias crônicas incluindo doença de Crohn erectolite ulcerativa.
11. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de quecompreende um ou mais compostos como definidos em qualquer dasreivindicações 1 a 9 como princípios ativos em combinação com um ou maisexcipientes ou adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis.
12. Uso de um composto como definido em qualquer umadas reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de ser para a preparação deum produto medicinal para a prevenção e tratamento de tumores queexpressam os receptores de PPARy e os receptores de EGF incluindo tumordo esôfago, estômago, pâncreas, cólon, próstata, seio, útero e anexos, rins epulmões.
13. Uso de um composto como definido em qualquer uma dasreivindicação 1 a 9, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de umproduto medicinal para o tratamento de doenças inflamatórias crônicasincluindo doença de Crohn e rectolite ulcerativa.
BRPI0613398-3A 2005-07-22 2006-07-24 composto, uso do mesmo, e, composição farmacêutica BRPI0613398A2 (pt)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT000390A ITRM20050390A1 (it) 2005-07-22 2005-07-22 Composti e loro sali specifici per i recettori ppar ed i recettori per l'egf e loro uso in campo medico.
ITRM2005A000390 2005-07-22
PCT/IE2006/000076 WO2007010514A2 (en) 2005-07-22 2006-07-24 Compounds and their salts specific to the ppar receptors and the egf receptors and their use in the medical field

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BRPI0613398A2 true BRPI0613398A2 (pt) 2011-01-11

Family

ID=37574984

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BRPI0613398-3A BRPI0613398A2 (pt) 2005-07-22 2006-07-24 composto, uso do mesmo, e, composição farmacêutica

Country Status (11)

Country Link
US (2) US8138357B2 (pt)
EP (1) EP1910275B1 (pt)
JP (1) JP5193862B2 (pt)
CN (1) CN101243043B (pt)
AU (1) AU2006271163B2 (pt)
BR (1) BRPI0613398A2 (pt)
CA (1) CA2615978A1 (pt)
IT (1) ITRM20050390A1 (pt)
NO (1) NO20080323L (pt)
NZ (1) NZ566044A (pt)
WO (1) WO2007010514A2 (pt)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ITRM20050389A1 (it) * 2005-07-22 2007-01-23 Giuliani Spa Composti e loro sali specifici per i recettori ppar ed i recettori per l'egf e loro uso in campo medico.
ITRM20050390A1 (it) 2005-07-22 2007-01-23 Giuliani Spa Composti e loro sali specifici per i recettori ppar ed i recettori per l'egf e loro uso in campo medico.
IE20070129A1 (en) * 2007-02-28 2008-12-24 Giuliani Int Ltd Ppar-gamma agonists stimulate enteric defensin expression
ITMI20072429A1 (it) 2007-12-24 2009-06-25 Giuliani Int Ltd Composti per il trattamento selettivo della componente immuno-infiammatoria intestinale della malattia celiaca
UA107562C2 (uk) * 2008-12-05 2015-01-26 Спосіб лікування псоріазу
JP5715070B2 (ja) 2009-02-16 2015-05-07 ノグラ ファーマ リミテッド アルキルアミド化合物およびその使用
CA2864059C (en) * 2012-02-09 2020-04-28 Nogra Pharma Limited Methods of treating fibrosis
MX2014012652A (es) 2012-04-18 2014-11-25 Nogra Pharma Ltd Metodo de tratamiento de la intolerancia a la lactosa.
AR105911A1 (es) 2015-09-03 2017-11-22 Forma Therapeutics Inc Inhibidores de hdac8 bicíclicos fusionados [6,6]
US20220000818A1 (en) 2019-01-25 2022-01-06 Nogra Pharma Limited Compositions for use in preventing acne
AU2020217884A1 (en) 2019-02-08 2021-08-12 Nogra Pharma Limited Process of making 3-(4'-aminophenyl)-2-methoxypropionic acid, and analogs and intermediates thereof

Family Cites Families (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB767788A (en) 1953-12-28 1957-02-06 Schering Corp Polyiodinated phenyl fatty acid compounds and process for their manufacture
US3211610A (en) * 1961-09-29 1965-10-12 Merck & Co Inc Benzoic acid ester derivatives for treating coccidiosis and method of using same
US3444232A (en) * 1966-05-18 1969-05-13 Squibb & Sons Inc O-alkyl or phenylalkyl benzohydroxamic acids
US4036951A (en) * 1973-03-12 1977-07-19 Synergistics, Inc. Ultra-violet filtration with certain aminosalicylic acid esters
GB1561350A (en) * 1976-11-05 1980-02-20 May & Baker Ltd Benzamide derivatives
DE3164618D1 (en) * 1980-12-22 1984-08-09 Schering Ag 3-substituted 2,4,6-trihalogenobenzamides and their salts, their preparation and their use as substitutes for natural sweetening agents, and sweeteners containing them
IL69282A (en) 1982-09-02 1988-06-30 Euro Celtique Sa Method for the carboxylation of potassium phenoxide with carbon dioxide
NZ224087A (en) 1987-04-01 1990-08-28 Dak Lab As Topical pharmaceutical compositions containing 4- or 5- amino salicylic acid or a functional derivative thereof
ATE113209T1 (de) 1988-05-05 1994-11-15 Tillotts Pharma Ag Verwendung von 5-amino-salicylsäure für die behandlung von hautkrankheiten.
US5519014A (en) * 1990-10-22 1996-05-21 Borody; Thomas J. Treatment of non-inflammatory and non-infectious bowel disorders
US5262549A (en) * 1991-05-30 1993-11-16 Polaroid Corporation Benzpyrylium dyes, and processes for their preparation and use
US5302751A (en) * 1992-01-21 1994-04-12 Ethyl Corporation Profen resolution
AU674330B2 (en) 1992-06-30 1996-12-19 Howard K. Shapiro Composition containing amine and amine-related derivatives of benzoic acid and uses therefor including treating inflammatory diseases
WO1994002462A1 (en) * 1992-07-17 1994-02-03 Janssen Pharmaceutica N.V. 4-amino-n^_-(4-methyl-4-piperidinyl)-2-methoxybenzamides
US5594151A (en) * 1994-01-28 1997-01-14 Prolinx, Inc. Phenylboronic acid complexing reagents derived from aminosalicylic acid
CA2190107A1 (en) 1994-05-11 1995-11-23 Howard K. Shapiro Compositions for treatment of chronic inflammatory diseases
US5939442A (en) * 1995-06-07 1999-08-17 The Salk Institute For Biological Studies Modulations of peroxisome proliferator activated receptor-γ, and methods for the use thereof
GB9600464D0 (en) * 1996-01-09 1996-03-13 Smithkline Beecham Plc Novel method
GB9617001D0 (en) 1996-08-13 1996-09-25 Tillotts Pharma Ag Oral composition
DE19647582A1 (de) * 1996-11-18 1998-05-20 Hoechst Ag Verfahren zur Herstellung von aromatischen Olefinen mittels Katalyse durch Palladaphosphacyclobutane
AU6773598A (en) 1997-03-26 1998-10-20 Institut Pasteur Treatment of gastrointestinal disease with ppar modulators
US7098025B1 (en) * 1997-07-25 2006-08-29 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Human peroxisome proliferator activated receptor gamma (pparγ) gene regulatory sequences and uses therefor
WO1999015520A1 (fr) * 1997-09-19 1999-04-01 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Composes de benzene fusionnes ou non fusionnes
US6326364B1 (en) * 1999-02-08 2001-12-04 Cedars-Sinai Medical Center Use of 5-aminosalicylates as antimicrobial agents
FR2791671B1 (fr) 1999-04-01 2001-05-11 Oreal Nouveaux composes derives d'esters d'acide benzoique, composition les comprenant et utilisation
US20040034067A1 (en) * 1999-04-15 2004-02-19 Macphee Colin Houston Novel method of treatment
GB9914371D0 (en) 1999-06-18 1999-08-18 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
DE60013491T2 (de) 2000-04-19 2005-09-01 Neurotech Co., Ltd., Suwon Verbindungen, zusammensetzungen und verfahren zur vorbeugung der neurodegeneration bei akuten oder chronischen verletzungen des zentralen nervensystems
ATE407919T1 (de) 2000-05-29 2008-09-15 Kyorin Seiyaku Kk Substituierte phenylpropionsäure-derivate
ES2333337T3 (es) 2000-08-29 2010-02-19 Biocon Limited Uso de una composicion farmaceutica que contiene un derivado de acido para-aminofenilacetico para tratar afecciones inflamatorias del tracto gastrointestinal.
EP1348698A4 (en) 2000-12-05 2005-01-19 Kyorin Seiyaku Kk SUBSTITUTED CARBOXYLENE DERIVATIVES
FR2822955B1 (fr) * 2001-03-27 2003-10-03 Chru Lille Methode de diagnostic de maladies inflammatoires chroniques de l'intestin
CA2354921A1 (en) * 2001-05-24 2002-11-24 Yasuo Konishi Drug evolution: drug design at hot spots
JP2005527480A (ja) 2001-10-16 2005-09-15 ドクター・レディーズ・ラボラトリーズ・リミテッド ベンゾキサジンおよびベンゾチアジン誘導体、ならびにそれを含有する医薬組成物
GB0127916D0 (en) * 2001-11-21 2002-01-16 Rowett Res Inst Method
UA82835C2 (en) * 2001-12-03 2008-05-26 Reddys Lab Ltd Dr ?-aryl-?-oxysubstituted propionuc acid derivatives and pharmaceutical composition based thereon
US20030113815A1 (en) * 2001-12-19 2003-06-19 Pfizer Inc. Canine peroxisome proliferator activated receptor gamma
US20030220374A1 (en) 2002-01-14 2003-11-27 Pharmacia Corporation Compositions and methods of treatment involving peroxisome proliferator-activated receptor-gamma agonists and cyclooxygenase-2 selective inhibitors
US20040115127A1 (en) * 2002-04-12 2004-06-17 Wright Samuel D. Ppar-alpha-gamma ligands or agonists for the treatment of inflammation
GB0303609D0 (en) 2003-02-17 2003-03-19 Glaxo Group Ltd Novel therapeutic method and compositions
WO2004082715A1 (ja) * 2003-03-20 2004-09-30 Eisai Co., Ltd. 炎症性腸疾患治療剤としての併用医薬
WO2005012280A1 (en) * 2003-07-21 2005-02-10 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Alkynyl aryl carboxamides
PT1656139E (pt) * 2003-07-21 2011-11-04 Merck Serono Sa Arildicarboxamidas
WO2005072113A2 (en) 2004-01-20 2005-08-11 Harty Richard F Compositions and methods of treatment for inflammatory diseases
WO2005084658A1 (en) 2004-03-04 2005-09-15 Arakis Ltd. Derivatives of actarit and their therapeutic use
US20060286046A1 (en) 2005-01-05 2006-12-21 Haber C Andrew Skin care compositions
US20060270635A1 (en) * 2005-05-27 2006-11-30 Wallace John L Derivatives of 4- or 5-aminosalicylic acid
ITRM20050389A1 (it) * 2005-07-22 2007-01-23 Giuliani Spa Composti e loro sali specifici per i recettori ppar ed i recettori per l'egf e loro uso in campo medico.
ITRM20050390A1 (it) 2005-07-22 2007-01-23 Giuliani Spa Composti e loro sali specifici per i recettori ppar ed i recettori per l'egf e loro uso in campo medico.
DE102005061472A1 (de) * 2005-12-22 2007-07-05 Saltigo Gmbh Verfahren zur Herstellung von enantiomerenangereicherten 2-Alkoxy-3-phenylpropionsäuren
IE20070129A1 (en) 2007-02-28 2008-12-24 Giuliani Int Ltd Ppar-gamma agonists stimulate enteric defensin expression
ITMI20072429A1 (it) 2007-12-24 2009-06-25 Giuliani Int Ltd Composti per il trattamento selettivo della componente immuno-infiammatoria intestinale della malattia celiaca
UA107562C2 (uk) 2008-12-05 2015-01-26 Спосіб лікування псоріазу
JP5715070B2 (ja) 2009-02-16 2015-05-07 ノグラ ファーマ リミテッド アルキルアミド化合物およびその使用

Also Published As

Publication number Publication date
US8138357B2 (en) 2012-03-20
US8450506B2 (en) 2013-05-28
NZ566044A (en) 2012-06-29
CN101243043A (zh) 2008-08-13
AU2006271163A1 (en) 2007-01-25
WO2007010514A2 (en) 2007-01-25
ITRM20050390A1 (it) 2007-01-23
JP2009502775A (ja) 2009-01-29
US20090118357A1 (en) 2009-05-07
CN101243043B (zh) 2013-03-20
EP1910275B1 (en) 2013-02-13
EP1910275A2 (en) 2008-04-16
WO2007010514A3 (en) 2007-03-29
AU2006271163B2 (en) 2012-03-15
CA2615978A1 (en) 2007-01-25
US20120316230A1 (en) 2012-12-13
JP5193862B2 (ja) 2013-05-08
NO20080323L (no) 2008-04-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BRPI0613398A2 (pt) composto, uso do mesmo, e, composição farmacêutica
KR101317519B1 (ko) Ｐｐａｒ 수용체 및 ｅｇｆ 수용체에 특이적인 화합물 및이들의 염, 및 의학 분야에서의 이들의 용도
BRPI0407662B1 (pt) derivados do ácido 1-fenilalcanocarboxílico para o tratamento de doenças neurodegenerativas
US20090131527A1 (en) Novel anthranilic acid derivatives and chloride channel blocking agent containing the same
BRPI0613396B1 (pt) Composto, uso do mesmo, e, composição farmacêutica
JPWO2010098125A1 (ja) レチノイドｘ受容体パーシャルアゴニスト化合物

Legal Events

Date Code Title Description
B08F Application dismissed because of non-payment of annual fees [chapter 8.6 patent gazette]

Free format text: REFERENTE A 8A ANUIDADE.

B08K Patent lapsed as no evidence of payment of the annual fee has been furnished to inpi [chapter 8.11 patent gazette]

Free format text: REFERENTE AO DESPACHO 8.6 PUBLICADO NA RPI 2264 DE 27/05/2014.