BRPI0611489A2

BRPI0611489A2 - derivados de ergolina e seu uso como ligantes de receptores de quimiocinas

Info

Publication number: BRPI0611489A2
Application number: BRPI0611489-0A
Authority: BR
Inventors: Rolf Baenteli; Fraser Glickman; Ian Lewis; Markus Streiff; Gebhard Thoma; Hans-Guenter Zerwes; Jiri Kovarik
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 2005-05-31
Filing date: 2006-05-29
Publication date: 2010-11-23
Also published as: CN101184754A; EP1893611A1; RU2007147597A; JP2008545725A; RU2416613C2; GB0511060D0; CN101184754B; WO2006128658A1; MX2007015084A; US20090018127A1; AU2006254395B2; JP5121703B2; KR20080013971A; AU2006254395A1; US7666877B2; CA2608702A1; CA2608702C

Abstract

ADERIVADOS DE ERGOLINA E SEU USO COMO LIGANTES DE RECEPTORES DE QUIMIOCINAS. A presente invenção descreve derivados de ergolina da Fórmula (1), em que cada um entre R~ 1~ e R~ 2~ é independentemente H; fenila ou fenil-alquila de C~ 1-4~ opcionalmente substituida com R~ 10~ e/ou R~ 11~; heteroarila ou heteroaril-alquila de C~ 1-4~ opcionalmente substituida com R~ 10~ e/ou R~ 11~; N-óxido de heteroarila opcionalmente substituído com R~ 10~ e/ou R~ 11~; alquila de C~ 1~-C~ 8~ opcionalmente substituida com R~ 10~; alquenila de C~ 2~-C~ 8~ opcionalmente substituida com R~ 10~, alquinila de C~ 2~-C~ 8~ opcionalmente substituida com R~ 10~; ciclo-alquila de C~ 2~-C~ 8~ opcionalmente substituida com R~ 10~, ou ciclo-alquenila de C~ 4~-C~ 8~ opcionalmente substituida com R~ 10~; ou R~ 1~ e R~ 2~ formam, em conjunto com o átomo de nitrogénio ao qual eles estão anexados, um anel com 3-8 membros, opcionalmente substituído com R~ 10~, contendo, além do átomo de nitrogénio, até 2 heteroátomos selecionados independentemente entre N, O e S; R~ 3~ é H; OR~ 1~; CH~ 2~R~ 1~R~ 2~; (CH~ 2~)~ 1-2~NR~ 1~R~ 2~; CH~ 2~-CH~ 2~-OR~ 1~; CH~ 2~-CONR~ 1~R~ 2~; ou CO-CH~ 2~R~ 1~R~ 2~; R~ 4~ é F; CI; Br; I; OR~ 1~; NR~ 1~R~ 2~ ou tem um dos significados fornecidos para R~ 1~; e R~ 5~ tem um dos significados fornecidos para R~ 1~, na forma livre ou na forma de sal, para prevenir ou tratar distúrbios ou doenças mediadas por interações entre receptores de quimiocinas e seus ligantes.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "DERIVADOSDE ERGOLtNA E SEU USO COMO LIGANTES DE RECEPTORES DE QUIMIOCINAS".

A presente invenção refere-se a derivados de ergolina, um pro-cesso para sua produção, seus usos como um produto farmacêutico, ecomposições farmacêuticas que os contêm.

Mais particularmente, a presente invenção fornece um compostoda fórmula I

<formula>formula see original document page 2</formula>

em que

cada um entre Ri e R2 é independentemente H; fenila ou fenil-alquila de C1.4 opcionalmente substituída com R1O e/ou Rn; heteroarila ouheteroaril-alquila de C1-4 opcionalmente substituída com Ri0 e/ou Rn; N-óxido de heteroarila opcionalmente substituído com R10 e/ou Rn; alquila deC1-C8 opcionalmente substituída com R10; alquenila de C2-Ce opcionalmentesubstituída com R10, alquinila de C2-C8 opcionalmente substituída com Ri0;ciclo-alquila de C8-C8 opcionalmente substituída com R10, ou ciclo-alquenilade C4-C8 opcionalmente substituída com R10;

ou R1 e R2 formam, em conjunto com o átomo de nitrogênio aoqual eles estão anexados, um anel com 3-8 membros, opcionalmente substi-tuído com R10, contendo, além do átomo de nitrogênio, até 2 heteroátomosselecionados independentemente entre N1OeS;

onde R10 representa 1 a 4 substituintes selecionados indepen-dentemente entre alquila de CrC6; hidróxi-alquila de Ci-C6; alcóxi-alquila deC1-C6; halo-alquila de CrC6; ciclo-alquila de C3-C6; alquenila de C2-C6; ciclo-alquenila de C3-C6; alquinila de C2-C6; fenila; heteroarila; N-óxido de hetero-arila; F; Cl; Br; I; OH; OR9; OCOR9; OCOOR9; OCONHR9; OCONR9R9; O-SO2R9; COR9; COOH; COOR9; CONH2; CONHR9; CONR9R9; CF3; CHF2;CH2F; alquil(Ci.4)-NH2; alquil(Ci-4)-NHR9; alquil(Ci-4)-NR9R9; CN; NO2; NH2;

NHR9; NR9R9; NHCOR9; NR9COR9; NHCONHR9; NHCONH2; NR9CONHR9;NR9CONR9R9; NHCOOR9; NR9COOR9; NHSO2R9; N(SO2R9)2; NR9SO2R9;SR9; SOR9; SO2R9; SO2NH2; SO2NHR9; SO2NR9R9; ou

R10 está anexado em =O a um átomo de carbono da fenila ouheteroarila, ou pode estar anexado em um ou dois =O ao mesmo átomo deS da hetaroarila, caso haja algum;

R11 representa dois substituintes adjacentes que formam umanel não-aromático de 4-7 membros anelados, contendo opcionalmente atédois heteroátomos selecionados independentemente entre Ν, O e S;

cada R9 é independentemente alquila de Ci-C6; hidróxi-alquilade CrC6; ciclo-alquila de C3-C6; alquenila de C2-C6; alquinila de C2-C6; feni-la; benzila; heteroarila; -CH2-heteroarila; ou CF3; ou dois R9, em conjuntocom o átomo de N ao qual eles estão anexados, formam um anel de 4-8membros opcionalmente substituído com Rio, contendo, além do átomo deN, até 2 heteroátomos selecionados entre Ν, O e S;

R3 é H; OR1; CH2R1R2; (CH2)1-ZNR1R2; CH2-CH2-OR1; CH2-CO-NR1R2; ou CO-CH2R1R2;

R4 é F; Cl; Br; I; ORi; NR1R2 ou tem um dos significados forneci-dos para R1Ie

R5 tem um dos significados fornecidos para R1,na forma livre ou na forma de sal.

Qualquer alquila, alquenila ou alquinila pode ser linear ou ramificada.O termo "heteroarila" significa um sistema anelar aromático quecompreende sistemas mono-, bi- ou tricíclicos, que contém até 4 heteroáto-mos selecionados independentemente entre Ν, O e S, tal como, por exem-pio, furila, tienila, pirrolila, imidazolila, pirazolila, tiazolila, isotiazolila, oxazoli-la, isoxazolila, oxadiazolila, tiadiazolila, triazolila, tetrazolila, piridila, piridazi-nila, pirimidinila, pirazinila, triazinila, tetrazinila, indolila, benzotiofenila, ben-zofuranila, benzimidazolila, indazolila, benzotriazolila, benzotiazolila, benzo-xazolila, quinolinila, isoquinolinila, ftalazinila, quinoxalinila, quinazolinila, cino-Iinila ou naftiridinila.

O anel não-aromático de 4-7 membros anelados, como repre-sentado por Rn, é um anel não-aromático de 5 ou 6 membros anelados,contendo opcionalmente 1 ou 2 átomos de oxigênio e inclui, por exemplo -O-CH2-O- ou -O-CH2-CH2-O-, anexado a 2 átomos de carbono adjacentes.

Os compostos da fórmula I podem existir na forma livre ou naforma de sal, por exemplo, sais de adição com, por exemplo, ácidos orgâni-cos ou inorgânicos, por exemplo, ácido clorídrico, ácido acético, quando Ri,R2, e/ou R3 compreende um grupo amino substituído ou um resíduo hetero-cíclico que pode formar sais de adição. Quando os compostos da fórmula Itêm um ou mais centros assimétricos na molécula, por exemplo, quando umanel piperidina é substituído, a presente invenção deve ser entendida comoenglobando os vários isômeros ópticos, bem como racematos, diastereoi-sômeros e misturas deles.

Nos compostos da fórmula I, os seguintes significados são pre-feridos individualmente ou em qualquer subcombinação:

1. Cada um entre Ri e R2 é independentemente H; fenila opcio-nalmente substituída com R10; heteroarila opcionalmente substituída comR10; N-óxido de heteroarila opcionalmente substituído com Ri0; alquila de CrC6 opcionalmente substituída com Ri0; alquenila de C2-C6 opcionalmentesubstituída com R10, alquinila de C2-C6 opcionalmente substituída com Ri0;ciclo-alquila de C3-C8 opcionalmente substituída com R10, ou ciclo-alquenilade C4-C8 opcionalmente substituída com Ri0;

2. Ri e R2 formam, em conjunto com o átomo de N ao qual elesestão anexados, um anel com 3-6 membros, opcionalmente substituído comR10, contendo, além do átomo de N, até 1 heteroátomo selecionado inde-pendentemente entre N, O e S. De preferência, esse anel de 3-6 membros,opcionalmente substituído com Ri0, contém apenas um átomo de N ou umátomo de N e um átomo de O; mais preferivelmente, ele é não-aromático.Os exemplos são, por exemplo, anéis derivados de azetidina, pirrolina, pirro-lidina, piperidina, piperazina, cetopiperazina, tiazina, dióxido de tiazina, te-traidropiridina, piperidona, morpfolino ou azepina, opcionalmente substituí-dos com R10· De preferência, esse anel é substituído com um ou dois OH1alquila de Ci-4) alcóxi de C1-4, CO-alquila de C1-4 ou carbamoíla;

3. R10 representa 1 a 3 substituintes selecionados independen-temente entre alquila de CrC3; hidróxi-alquila de CrC3; alcóxi-alquila de C1-C6; halo-alquila de CrC3; fenila; heteroarila; F; Cl; OH;

4. R3 é H; OR1;-CH2-CH2-NR1R2;-CH2-CH2-OR1;-CH2-C(O)-NR1R2;

5. R4 é F; Cl; Br; I; -OR1; -NR1R2 ou tem um dos significados for-necidos para R1;

6. R5 tem um dos significados fornecidos para R1.

A presente invenção inclui também um processo para a prepa-ração de um composto da fórmula I, processo este que compreende

a) para a preparação de um composto da fórmula I no qual cada um entre R3 e R4 é H,

reagir um composto da fórmula II

<formula>formula see original document page 5</formula>

onde R1 e R2 são como definidos acima,com um agente formador de uréia; ou

b) para a preparação de um composto da fórmula I no qual cada

um entre R3 e R4 é H, amidando um composto da fórmula III

<formula>formula see original document page 5</formula>onde R5 é como definido acima, ou um seu derivado funcional; ou

c) para a preparação de um composto da fórmula I no qual cadaum entre R3 e R4 é diferente de H, convertendo um composto da fórmula Ino qual cada um entre R3 e R4 é H;

e, quando necessário, converter o composto da fórmula I resultante, obtidona forma livre na forma de sal desejada, ou vice-versa.

O agente formador de uréia, usado na etapa (a) do processo,pode ser, por exemplo, fosgênio, trifosgênio, ou formiato de tricloro-metila, eem seguida, adicionando uma amina. A formação de uréia pode ser obtidatambém quando o composto da fórmula Il é reagido com isocianato.

A amidação na etapa (b) do processo pode ser realizada conve-nientemente formando um derivado com funcionalidade carboxila, ativado,por exemplo, um cloreto de ácido, um anidrido misto ou anidrido simétrico, eem seguida, a reagindo com uma amina ou pela reação direta, por exemplo,de um ester metílico com uma amina sob aquecimento, ou com irradiaçãode microondas.

Os compostos da fórmula II, usados como matérias-primas, po-dem ser preparados da seguinte maneira:

<formula>formula see original document page 6</formula>

R1 e R2 sendo como definidos acima.

Os compostos da fórmula III, usados como matérias-primas, po-dem ser preparados da seguinte maneira:

<formula>formula see original document page 7</formula>

onde R5 é como definido acima e P é um grupo protetor, por exemplo, meti-la, etila, t-butila, tritila, benzila, fluorenila, trimetil-silil-etila ou alil-éster.

As reações acima podem ser conduzidas de acordo com méto-dos conhecidos nessas técnicas ou como aqui descrito abaixo. A remoçãodo grupo protetor P pode ser conduzida por hidrólise ácida ou básica, trata-mento com íon fluoreto ou por hidrogenação.

Apesar de a produção das matérias-primas não ter sido particu-larmente descrita, os compostos são conhecidos ou podem ser preparadosde forma análoga aos métodos conhecidos nessas técnicas ou como aquidescrito abaixo.

Os exemplos que se seguem são ilustrativos da invenção, semlimitações.

Exemplo 1

7-Fenil-amida 9-dietil-amida do ácido (6aR,9R)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7,9-dicarboxílico

Uma mistura do mesilato de dietil-amida do ácido (6aR,9R)-4,6,6a,7,8,9-hexaidro-indolo[4,3-fg]quinolino-9-carboxílico (122 mg, 0,30mmol) e isocianato-benzeno (36 mg, 0,30 mmol) em acetona (5 mL) é agita-da por 3 h a 25°C. O solvente é removido, e o resíduo é submetido a umacromatografia instantânea (instantânea) (SiO2, ciclo-hexano/t-butil-metil-éter1:0—>2:3) para dar ο compost do título. MS/ES: 429 [M+H]+

Os compostos da formula

<formula>formula see original document page 8</formula>

onde R5 tem os significados fornecidos na Tabela 1, são preparados decordo com um procedimento similar.

Tabela I

<table>table see original document page 8</column></row><table>Exemplo 13

Fenil-amida do ácido (6aR.9R)-9-(pirrolidino-l-carboniO-e.ea.S.Q-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico

Etapa 1: Éster metílico do ácido (6aR,9R)-7-cÍano-4,6,6a,7,8,9-hexaidro-indolo[4,3-fg]quinolino-9-carboxílico

Adicionou-se lentamente brometo de cianogênio (2,02 g, 19,11mmols) a um frasco de 50 mL com fundo redondo contendo uma solução deéster metílico do ácido lisérgico (1,0 g, 3,54 mmols) em diclorometano anidro(50mL), e a mistura reativa resultante com coloração negra é agitada à tem-peratura ambiente por 4 horas, e nesta hora uma TLC em 10% de meta-nol/diclorometano indicou conversão parcial do material de partida, para dardois produtos menos viscosos. A mistura reativa é deixada agitando duranteo fim de semana e monitorada por TLC, não indicando qualquer mudança. Amistura reativa é então agitada a 50°C por 4 horas e é então extraída entreácido tartárico e diclorometano. A fase aquosa é extraída novamente comdiclorometano (100 mL) e as fases orgânicas combinadas são lavadas comsalmoura (200mL), secadas com MgSO4, filtradas e concentradas sob vá-cuo, para dar um óleo marrom-escuro (cor de alcatrão). A purificação é con-duzida por cromatografia em coluna flash em fase normal (Biotage Flash 40,cartucho de 90 g), usando 40% de acetato de etila hexano, para conseguir aseparação do produto menos viscose que é isolado como um sólido amare-lo-pálido. O produto é cristalizado em t-butil-metil-éter e evaporado lenta-mente. O material cristalizado resultante é filtrado na bomba para dar cris-tais amarelo-pálidos.

Etapa 2: Éster metílico do ácido (6aR,9R)-4,6,6a,7,8,9-hexaidro-indolo[4,3-fg]quinolino-9-carboxílico

Adicionou-se água (4 mL) e zinco (1,5 g) a um frasco de 100 mLcom fundo redondo contendo uma solução de éster metílico do ácido(6aR,9R)-7-ciano-4,6,6a,7,8,9- hexaidro-indolo[4,3-fg]quinolino-9-carboxílico(1,57 g, 5,35 mmols) em ácido acético (20mL). A mistura reativa é refluxadaa 100°C por 3 horas, quando uma TLC em 20% de metanol/DCM indicou aconversão do material de partida, para dar um produto como uma mistura dediastereoisômeros. A mistura reativa é filtrada para remover o zinco e o pa-pel de filtro é lavado intensamente com água (200 mL) e acetato de etila(200 mL). A fase aquosa é tornada básica com a adição de bicarbonato desódio sólido. As fases são então extraídas e deixadas separar. A fase aquo-sa é extraída novamente com acetato de etila (2 χ 100mL) e as fases orgâ-nicas combinadas são lavadas com salmoura (200 mL), secadas (MgSO4),filtradas na bomba e concentradas sob vácuo, para dar uma espuma bege.A purificação é conduzida por cromatografia de coluna flash em fase normal(Biotage Flash 40, cartucho de 40 g), usando 10% de meta-nol/diclorometano, para conseguir a separação. O produto é isolado comouma espuma bege.

Etapa 3: Éster metílico do ácido (6aR,9R)-7-fenil-carbamoil-4,6,6a,7,8,9-hexaidro-indolo[4,3-fg]quinolino-9-carboxílico

Adicionou-se isocianato de fenila (0,45 mL, 4,5 mmols, 1,5 eq) aum frasco de 100 mL com fundo redondo, contendo uma solução de éstermetílico do ácido (6aR,9R)-4,6,6a,7,8,9-hexaidro-indolo[4,3-fg]quinolino-9-carboxílico (0,8 g, 2,98 mmol) em diclorometano (20 mL). A mistura reativa éagitada à temperatura ambiente por 16 h, quando uma TLC em 10% de me-tanol/DCM indicou a conversão do material de partida para dar o produtocomo uma mistura de diastereoisômeros. Os voláteis são concentrados sobvácuo e purificados diretamente usando cromatografia de coluna flash emfase normal (Biotage Flash 40, cartucho de 90 g), usando 30% de acetatode etila/hexano, para isolar o produto como uma mistura diastereoisomérica 1:1.

Etapa 4: Ácido (6aR,9R)-7-fenil-carbamoil-4,6,6a,7,8,9-hexaidro-indolo[4,3-fg]quinolino-9-carboxílico

Adicionou-se metanol (12 mL), THF (24 mL) e uma solução dehidróxido de lítio (247 mg) em água (12 mL) a um frasco de 100 mL comfundo redondo, contendo éster metílico do ácido (6aR,9R)-7-fenil-carbamoil-4,6,6a,7,8,9-hexaidro-indolo[4,3-fg]quinolino-9-carboxílico (0,8 g, 2,06mmols). A mistura reativa é agitada à temperatura ambiente por 20 min,quando uma TLC em 20% de metanol/diclorometano indicou a conversãocompleta do material de partida. A cor da mistura reativa bruta mudou deamarelo-claro para um violeta avermelhado. Os voláteis são removidos sobvácuo (deixando apenas água) e a solução aquosa é tornada ácida com aadição de HCI 1 Μ. O precipitado bege resultante é filtrado na bomba e atorta do filtro é lavada com água destilada (50 ml_). A torta do filtro é entãosecada em uma estufa com alto vácuo a 50°G por 16 h, produzindo o produto.

Etapa 5: Fenil-amida do ácido (6aR,9R)-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico

A um frasco de 50 ml_ com fundo redondo, contendo uma sus-pensão de ácido (6aR,9R)-7-fenil-carbamoil-4,6,6a,7,8,9-hexaidro-indolo[4,3-fg]quinolino-9-carboxílico (0,2 g, 0,54 mmol), adicionou-se PYBOP(0,307 g), diclorometano (10 mL), pirrolidina (0,054 ml_, 0,64 mmol, 1,2 eq) ebase de Hünig (0,187 mL, 1,07 mmol, 2 eq). A mistura reativa é agitada àtemperatura ambiente. A purificação é conduzida por cromatografia em co-luna instantânea em fase normal (Biotage Flash 40, cartucho de 40 g), u-sando 50% de acetato de etila/hexano como solvente. A fenil-amida do áci-do (6aR,9R)-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico é isolada como um sólido bege. MS/ES: 427(M+H)+

Os compostos da fórmula

<formula>formula see original document page 11</formula>

onde R1 e R2 têm os significados fornecidos na Tabela 2, são preparadosusando procedimentos similares e as aminas apropriadas.

Tabela 2

<table>table see original document page 11</column></row><table><table>table see original document page 12</column></row><table><table>table see original document page 13</column></row><table>

Exemplo 45

(2-Metóxi-fenil-amida do ácido (6aR,9R)-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico

Etapa 1: (eaR^RJ-y-Metil^.e.ea.y.e.g-hexaidro-indoloK.S-fglquinolin-g-il)-pirrolidin-1-il-metanona

30 g (111,80 mmols) de ácido lisérgico são dissovidos em 400mL de diclorometano e resfriados até 0°-5°C, adicionou-se 31,16 mL(223,61 mmols, 2 eq) de trietil-amina e 18,66 mL (223,61 mmols, 2 eq) depirrolidina, e dentro de 15 min, 1,5 equivalentes anidrido do ácido propano-fosfônico (50% em acetato de etila). A mistura reativa é agitada por 1 h àtemperatura ambiente, e depois ela é vertida sobre gelo e extraída com di-clorometano, a camada orgânica é secada com Na2S04, evaporada, e oresíduo (28,6 g) é purificado por cromatografia em sílica, eluindo com diclo-rometano:metanol 9:1, ara dar a ((6aR,9R)-7-metil-4,6,6a,7,8,9-hexaidro-indolo[4,3-fg]quinolin-9-il)-pirrolidin-1 -il-metanona.

Etapa 2: (6aR,9R)-4,6,6a,7,8,9-Hexaidro-indolo[4,3-fg]quinolin-9-il-pirrolidin-1-il-metanona

6 g (18,67 mmols) do produto da Etapa 1 são dissolvidos em180 mL de diclorometano a O0C1 e 5,522 g (22,40 mmols, 1,2 eq) de ácidometa-cloro-perbenzóico a 70% são adicionados. Depois de 10 min, o N-óxido intermediário se formou e 2,594 g (9,33 mmols, 0,5 eq) de Fe-S04.7H20 em 12 mL de metanol são adicionados, o resfriamento é removi-do e a mistura é agitada à temperatura ambiente. Depois de 1 h e 25 min, amistura reativa é extraída com solução 0,1 M de EDTA (pH previamente a-justado para 9), secada com Na2SO4, evaporada e purificada por cromato-grafia em sílica-gel, eluindo com diclorometano:metanol:amônea 93:6:1, pa-ra dar a (6aR,9R)-4,6,6a,7,8,9-hexaidro-indolo[4,3-fg]quinolin-9-il-pirrolidin-1-il-metanona.

Etapa 3: (2-Metóxi-fenil)-amida do ácido (6aR,9R)-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico

5,087 g (16,54 mmols) do produto da Etapa 2 são dissolvidosem 80 mL de tetraidrofurano, e adiciona-se 1,79 mL (16,5 mmols) de 1-isocianato-2-metóxi-benzeno, agitando à temperatura ambiente. Para reter oexcesso de isocianato, adiciona-se 0,3 equivalente de 3-amino-1,2-propanodiol e agita-se por 2,5 h. Depois disso, a mistura reativa é lavadacom solução saturada de bicarbonato de sódio e salmoura, secada comNa2SO4 e parcialmente evaporada. A cristalização deu a (2-metóxi-fenil)-amida do ácido (6aR,9R)-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico. MS/ES: 457 (M+H)+

Os compostos da fórmula

<formula>formula see original document page 14</formula>

onde R5 tem os significados fornecidos na Tabela 3, são preparados se-guindo procedimentos similares.Tabela 3

<table>table see original document page 15</column></row><table>

Exemplo 56

Fenil-amida do ácido 5-metil-9-(piperidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-

A fenil-amida do ácido 5-metil-9-(piperidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico é preparada seguindo pro-cedimentos similares aos descritos no Exemplo 45, usando ácido 2-metil-lisérgico (em vez de ácido lisérgico) e piperidina (em vez de pirrolidina) naEtapa 1, e isocianato de fenila na Etapa 3. MS: 455 (M+H)+

Exemplo 57

(3-Flúor-fenil-amida do ácido 9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico

62 mg (0,20 mmol) do produto da Etapa 2 do Exemplo 45 sãodissolvidos em 3 mL de diclorometano, e adiciona-se 0,14 mL (10 eq) detrietil-amina e 0,042 mL de cloro-formiato de tricloro-metila em 2 mL de di-clorometano. Depois de 30 min à temperatura ambiente, adiciona-se 0,14mL de trietil-amina (10 eq) e 0,040 ml (2 eq) de 2-flúor-anilina. Depois deagitar por 22 h à temperatura ambiente, a mistura reativa é separada entre100 mL de diclorometano e solução saturada de bicarbonato de sódio. Acamada orgânica é secada com Na2SO4 e evaporada. O produto bruto épurificado por cromatografia em sílica-gel, eluindo com acetato de etila/ciclo-hexano 3:1, para dar a (3-flúor-fenil)-amida do ácido (6aR,9R)-9-(pirrolidino-1 -carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílÍco.MS/ES: 445 (M+H)+

Os compostos da formula

<formula>formula see original document page 16</formula>

onde R5 tem os significados fornecidos na Tabela 4, são preparados se-guindo procedimentos similares, usando os reagentes amínicos apropriados.

Tabela 4

<table>table see original document page 16</column></row><table><table>table see original document page 17</column></row><table>

Exemplo 72

Fenil-amida do ácido (6aR,9R)-5-cloro-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico

64 mg do Exemplo 13 (0,15 mmol) são dissolvidos em 1 mL deDMF, e 36 mg (0,27 mmol, 1,8 eq) de N-cloro-succinimida são adicionados,e agita-se à temperatura ambiente. Depois de 55 min, a mistura reativa épurificada por cromatografia em sílica-gel, eluindo com acetato de etila, paradar a fenil-amida do ácido (6aR,9R)-5-cloro-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico. MS: 461 (M+H)+

Exemplo 73

Fenil-amida do ácido (6aR,9R)-5-iodo-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico

A fenil-amida do ácido (6aR,9R)-5-iodo-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico é preparada se-guindo um procedimento similar àquele descrito no Exemplo 72, usando N-iodo-succinimida em vez de N-cloro-succinimida. MS: 553 (M+H)+

Exemplo 74

Fenil-amida do ácido (6aR,9R)-5-bromo-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico

Etapa 1: Ácido (6aR,9R)-5-brotao-7-metil-4,6,6a,7,8,9-hexaidro-indolo[4,3-fg]quinolino-9-carboxílico

O ácido lisérgico (8,05 g, 30 mmol) é colocado em suspensãoem dioxano e é tratado com TFA sob a forma de gotas (reação exotérmica).Adiciona-se bromo (1,54 mL, 30 mmols, 1,0 eq) em clorofórmio sob a formade gotas. A reação é resfriada até 5 0C e o produto cristaliza. O ácido(6aR,9R)-5-bromo-7-metil-4,6,6a,7,8,9-hexaidro-indolo[4,3-fg]quinolino-9-carboxílico é isolado por filtração e recristalizado em etóxi-etano. Rf=O,5,10% de MeOH:DCM, M+H+=346,348, ponto de fusão (p.f.) > 245 (decompo-sição).

Etapa 2: (6aR,9R)-5-Bromo-7-metil-4,6,6a,7,8,9-hexaidro-indolo[4,3-fg]quinolin-9-il)-pyrrolidin-1 -il-metanona

Adiciona-se HATU (6,10 g, 16,06 mmols, 1,2 eq) a um frasco de50mL com fundo redondo, contendo ácido (6aR,9R)-5-bromo-7-metil-4,6,6a,7,8,9-hexaidro-indolo[4,3-fg]quinolino-9-carboxílico (5,0 g, 13,38mmols) em DMF (20 mL), e a mistura reativa é agitada por 1 h à temperatu-ra ambiente. Adiciona-se pirrolidina (2,24 mL, 26,78 mmols, 2,0 eq) e a mis-tura reativa é agitada por mais 2 h à temperatura ambiente. A TLC em 10%de metanol/DCM indica a conversão completa do material de partida (visua-lizada por reagente de cloro/TBDM e por UV). Adiciona-se HCI 4 M (150 mL)e água (150 mL) à mistura reativa e adiciona-se acetato de etila (200 mL).Depois da extração, a fase aquosa é extraída novamente com acetato deetila (2 χ 200mL) e os extratos combinados são lavados com solução satu-rada de bicarbonato de sódio (2 χ 200mL), água (200 mL), salmoura satura-da (200 mL), filtrados (na bomba), secados (MgSO4) e concentrados sobvácuo, para dar um óleo marrom-escuro. A purificação é conduzida por cro-matografia em coluna instantânea em fase normal (Biotage Flash 40, cartu-cho de 90 g), usando 20% de acetato de etila/hexano, subindo para 100%de acetato de etila e depois 5% de metanol/acetato de etila sobre 5 litros. Asfrações relevantes são combinadas, concentradas sob vácuo e deixadas emuma estufa com alto vácuo por 3 h a 50°C, para dar uma mistura de ácido(eaR^RJ-õ-bromo-y-metil^.e^aJ.e.g-hexaidro-indoloK.S-fglquinolino-Q-carboxílico e um diastereoisômero.

Etapa 3: ((R)-5-Bromo-7-metil-7-oxi-4,6,6a,7,8,9-hexaidro-indolo[4,3-fg]quinolin-9-il)-pirrolidin-1-il-metanona

1,1g (2,75 mmols) do produto da Etapa 2 é dissolvido em THF(40 mL) com o auxílio de um aparelho de ultra-som, e depois a solução éresfriada até -40°C, usando um banho de acetona/gelo seco. Adiciona-se m-CPBA (0,640 g, 3,75 mmols, 1,35 eq) em parcelas (durante 30 min) e a mis-tura reativa marrom-escura resultante é deixada aquecer até 0°C sob agita-ção constante (aproximadamente 1,5 h). Uma solução de cloreto de ferro (II)(0,174 g, 1,37 mmol, 0,5 eq) em água (10 mL) é adicionada sob a forma degotas à mistura reativa a 0°C. Depois de 1 h, a mistura reativa é deixadaaquecer lentamente até a temperatura ambient, e depois a agitação foi con-tinuada por 2 h. A TLC em 20% de metanol/DCM indicou o consumo com-pleto do N-óxido intermediário. Uma solução de bissulfito de sódio (1 g) emágua (5 mL) é adicionada à mistura reativa e depois os voláteis são removi-dos sob vácuo, para dar uma espuma preta. Este material é purificado nosistema Biotage Flash 40, usando 2% de metanol/DCM, elevando para 8%de metanol/DCM em incrementos de 2% por litro de solvente, produzindo a((R)-5-bromo-7-metil-7-oxi-4,6,6a,7,8,9-hexaidro-indolo[4,3-fg]quinolin-9-il)-pirrolidin-1-il-metanona.

Etapa 4: Fenil-amida do ácido (6aR,9R)-5-bromo-9-(pirrolidino*1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico

O produto da Etapa 3 (0,504 g, 1,32 mmol) é dissolvido em di-clorometano anidro (20 mL), e a solução é resfriada até 0°C com um banhode gelo/sal. A base de Hünig (0,940 mL, 0,21 mmol) e isocianato de fenila(0,388ml, 3,9 mmol) são então adicionados e a mistura reativa é deixadaaquecer até a temperatura ambiente. A agitação é continuada por 16 horas.

A TLC em 20% de metanol/DCM indica o consumo completo do material departida. A purificação é conduzida por cromatografia em coluna flash emfase normal (Biotage Flash 40, cartucho de 40 g), usando um sistema comgradiente iniciando com 20% de acetato de etila/hexano (1 litro), subindopara 30% de acetato de etila/hexano (1 litro), e depois para 50% de acetatode etila/hexano (1 litro), e finalmente, até 60% de acetato de etila/hexano (1litro). As frações relevantes são combinadas, concentradas sob vácuo e dei-xadas em uma estufa com alto vácuo por 3 h a 50°C. A fenil-amida do ácido(6aR,9R)-5-bromo-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico β é isolada como um sólido incolor. MS/ES: 505(M+H)+

Exemplo 75

Fenil-amida do ácido (6aR,9R)-5-fenil-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico

Adiciona-se ácido fenil-borônico (46 mg, 0,37 mmol, 1,4 eq) esolução 2 M de carbonato de sódio (1,50 mL) a um frasco de reação de 5ml_ de um microondas, contendo o Exemplo 74 (0,05 g, 0,27 mmol) em DME(1 mL). A mistura reativa é purgada com nitrogênio por 5 min, sob agitação,e depois o catalisador (30 mg) é adicionado. As paredes do frasco são lava-das com etanol lavado com nitrogênio (0,75 mL), e a mistura reativa é dei-xada purgando com nitrogênio por mais 5 min. O frasco é vedado com umatampa e a mistura reativa é operada no microondas a 100°C por 300 segun-dos (tempo de retenção fixo). A TLC em 10% de metanol/DCM indica con-sumo total do material de partida (visualizado por reagente de cloro/TBDM epor UV). A mistura reativa é fracionada entre solução saturada de bicarbo-nato de sódio e (20 mL) e diclorometano (20 mL). As frações orgânicas sãoaplicadas diretamente a uma coluna instantânea e purificadas por cromato-grafia em coluna de fase normal (Biotage Flash 40, cartucho de 40 g), usan-do 30% de acetato de etila/hexano (1 litro) subindo para 40% de acetato deetila/hexano (1 litro) como solvente. As frações relevantes são combinadas,concentradas sob vácuo e deixadas em uma estufa com alto vácuo por 3 h a50°C e o produto é isolado. MS: 503 (M+H)+

Os compostos da fórmula<formula>formula see original document page 21</formula>

procedimentos similares.

Tabela 5

<table>table see original document page 21</column></row><table>

Exemplo 78

Ácido (6aR,9R)-5-(3-hidróxi-prop-1-inil)-9-(pirrolidino-1 -carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico

Adiciona-se álcool propargílico (0,007 mL, 0,12 mmol, 1,2 eq) aum frasco de reação de 5 mL de um microondas, contendo uma solução doExemplo 74 (50 mg, 0,1 mmol), trifenil-fosfina (3 mg, 0,001 mmol, 0,1 eq),iodeto de cobre (1 mg, 0,005 mmol, 0,05 eq), trietil-amina (1 mL), e piridina(1 mL), e a mistura reativa é purgada com nitrogênio por 5 min sob agitação.O catalisador dicloro-bis-(trifenil-fosfina)-paládio (7 mg, 0,01 mmol, 0,1 eq) éadicionado e a reação é deixada purgando com nitrogênio por mais 5 min. Ofrasco é vedado com uma tampa e a mistura reativa é operada em um mi-croondas a 100°C por 300 segundos (tempo de retenção fixo). A LC-MS in-dica alguma conversão ao produto. O catalisador (7 mg, 0,01 mmol, 0,1 eq),álcool propargílico (7 pL, 0,12 mmol, 1,2 eq) e iodeto de cobre (I) (1 mg,0,005 mmol, 0,05 eq) são adicionados e a mistura reativa é operada em ummicroondas por mais 300 s a 100°C. A LC-MS indica uma conversão apro-ximada de 1:1 do material de partida:produto. A mistura reativa é operadapor mais 600 s a 100°C, após o que a LC-MS indica consumo consumo vir-tual do material de partida ao produto. A purificação é conduzida por croma-tografia de coluna flash em fase normal (Biotage Flash 40, cartucho de 40g), usando 50% de acetato de etila/hexano (2 litros). As frações relevantessão combinadas, concentradas sob vácuo, e secadas em uma estufa de altovácuo por 3 h a 50°C, e o produto resultante é isolado. MS/ES: 481 (M+H)+

Exemplo 79

Éster isopropílico do ácido [(6aR,9R)-7-fenil-carbamoil-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6a,7,8,9-tetraidro-6H-indolo[4,3-fg]quinolin-4-il]-acético

5 g (11,72 mmols) do Exemplo 13 são dissolvidos em 100 mL dediclorometano. À temperatura ambiente, 30 mL de uma solução aquosa dehidróxido de sódio a 40% são adicionados, bem como 400 mg de cloreto debenzil-trietil-amônio. A mistura reativa é resfriada até 0-5°C, e 6,23 mL(46,89 mmols, 4 eq) de bromo-acetato de isopropila são adicionados, e agi-ta-se por 1 hora. A mistura reativa é vertida sobre gelo e extraída comCH2CI2, a camada orgânica é lavada com água, secada com Na2SO4 e eva-porada. O resíduo é purificado por cromatografia em sílica, eluindo com t-butil-metil-éter, para dar o éster isopropílico do ácido [(6aR,9R)-7-fenil-carbamoil-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6a,7,8,9-tetraidro-6H-indolo[4,3-fg]quinolin-4-il]-acético. MS/ES: 527 (M+H)+

Exemplo 80

Ácido [(6aR,9R)-7-fenil-carbamoil-9-(pirrolidino-1 -carbonil)-6a,7,8,9-tetraidro-6H-indolo[4,3-fg]quinolin-4-il]-acético

O ácido [(6aR,9R)-7-fenil-carbamoil-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6a,7,8,9-tetraidro-6H-indolo[4,3-fg]quinolin-4-il]-acético é isolado como sub-produto da síntese do do Exemplo 79. MS/ES: 485 (M+H)+

Os compostos da fórmula

<formula>formula see original document page 22</formula>

onde R3 tem os significados fornecidos na Tabela 6, são preparados se-guindo um procedimento similar ao do Exemplo 79.Tabela 6

<table>table see original document page 23</column></row><table>

onde R3 tem os significados fornrnecidos na Tabela 7, sao preparados de a- cordo com um procedimento similar ao Exemplo 79, partindo do Exemplo 1em vez do Exemplo 13, e usando os halogenetos de alquila apropriados.

Tabela 7

<table>table see original document page 23</column></row><table>

Exemplo 87

Fenil-amida do ácido (6aR,9R)-4-(2-hidróxi-etil)-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico

3,99 g (7,57 mmols) do Exemplo79 são dissolvidos em 100 mLde tetraidrofurano e adiciona-se 989 mg (45,43 mmols, 4 eq) de boridreto delítio a 0-5°C. A mistura reativa é agitada à temperatura ambiente por 4,5 h.Depois, a mistura reativa é vertida sobre uma mistura de gelo/ácido acético(evolução intensa de CO2) e extraída com diclorometano. A camada orgâni-ca é avada com água, secada com Na2SCXi e evaporada. O resíduo é purifi-cado por cromatografia em sílica, eluindo com diclorometano:metanol 95:5,para dar, na ordem de eluição, o isômero β desejado de fenil-amida do ácido(6aR,9R)-4-(2-hidróxi-etil)-9-(pirrolidino-1 -carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico. MS/ES: 471 (M+H)+

Exemplo 88

Fenil-amida do ácido (6aR,9R)-4-(2-morfolin-4-il-etil)-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico

Etapa 1: Éster 2-[(6aR,9R)-7-fenil-carbamoil-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6a,7,8,9-tetraidro-6H-indolo[4,3-fg]quinolin-4-il]-etílico do ácido tolueno-4-sulfônico

Dissolve-se 1,12 g (2,38 mmols) do Exemplo 87 em 40 mL dediclorometano e adiciona-se 437 mg (3,58 mmols, 1,5 eq) de dimetil-amino-piridina à temperatura ambiente, e a mistura é resfriada até 0-5°C. 683 mg(3,589 mmols, 1,5 eq) de cloreto de 4-metil-benzenossulfonila são adiciona-dos e a mistura reativa é agitada à temperatura ambiente por 3,5 h. A mistu-ra reativa é vertida sobre gelo e um pouco de ácido sulfúrico 6 N, e extraídacom diclorometano. A camada orgânica é secada com Na2SCXl e evaporada.

O resíduo é purificado por cromatografia em sílica, para dar o éster 2-[(6aR,9R)-7-fenil-carbamoil-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6a,7,8,9-tetraidro-6H-indolo[4,3-fg]quinolin-4-il]-etílico do ácido tolueno-4-sulfônico.

Etapa 2: Fenil-amida do ácido (6aR,9R)-4-(2-morfolin-4-il-etil)-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico

80 mg (0,128 mmol) do produto da Etapa 1 e 1 mL de morfolinasão agitados à temperatura ambiente por 16 horas. A mistura reativa é puri-ficada por cromatografia em sílica-gel, eluindo com acetona:ciclo-hexano6:4, para dar a fenil-amida do ácido (6aR,9R)-4-(2-morfolin-4-il-etil)-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico. MS/ES: 540 (M+H)+

Os compostos da fórmula<formula>formula see original document page 25</formula>

onde R3 tem os significados forneceidos na Tabela 8, sao preparados se-guindo um procedimento similar ao da Etapa 2 do Exemplo 88.

Tabela 8

<table>table see original document page 25</column></row><table>

Exemplo 97

Fenil-amida do ácido (6aR,9R)-4-acetil-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico

80 mg do Exemplo 13 (0,18 mmol) e 69 mg (0,56 mmol, 3 eq) dedimetil-amino-pirimidina são dissolvidos em 3 mL de dicloro-etano, e adicio-na-se 0,036 mL (0,37 mmol, 2 eq) de anidrido acético. A mistura reativa éagitada a 65°C por 4 horas. A mistura reativa é fracionada entre diclorome-tano e solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. A camada orgâni-ca é secada com Na2SO4 e evaporada. O produto bruto é purificado porcromatografia em sílica, eluindo com diclorometano:metanol 97:3, para dar afenii-amida do ácido (6aR,9R)-4-acetil-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico. MS/ES: 469 (M+H)+

Exemplo 98

Fenil-amida do ácido (6aR,9R)-4-hidróxi-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico

Etapal: Fenil-amida do ácido (5aS,6aR,9R)-9-(pirrolidino-1-carbonil)-S.õa.e.ea.e.g-hexaidro^H-indoloK.S-fglquinolino^-carboxílico

351 mg (0,82 mmol) do Exemplo 13 são dissolvidos em 6 mL deácido triflúor-acético, e adiciona-se 0,407 mL (2,47 mmols, 3 eq) de trietil-silano. A mistura reativa é agitada à temperatura ambiente por 1 hora e 10minutos. Depois, a mistura reativa é fracionada entre acetato de etila e solu-ção aquosa saturada de bicarbonato de sódio, a camada orgânica é lavadacom salmoura, secada com Na2SO4, e evaporada e cristalizada em t-butil-metil-éter, para dar a fenil-amida do ácido (5aS,6aR,9R)-9-(pirrolidino-1-carbonil)-5,5a,6,6a,8,9-hexaidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico.

Etapa 2: Fenil-amida do ácido (6aR,9R)-4-hidróxi-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxnico

212 mg (0,49 mmol) do produto da Etapa 1 são dissolvidos em12 mL de metanol, e 41 mg (0,12 mmol, 0,25 eq) de wolframato de sódiodesidratado em algumas gotas de água são adicionados. Depois, 670 μL deH2O2 a 30% (10 eq) são adicionados a 0°C, e agita-se à temperatura ambi-ente por 50 minutos. A mistura reativa é fracionada entre diclorometano esolução aquosa saturada de bicarbonato de sódio, a camada orgânica é la-vada com salmoura, secada com Na2SO4 e evaporada e purificada por cro-matografia em sílica, eluindo com t-butil-metil-éter:ciclo-hexano 9:1, para dara fenil-amida do ácido (6aR,9R)-4-hidróxy-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico. MS/ES: 441 (M+H)+

Exemplo 99

Fenil-amida do ácido (6aR,9R)-4-metóxi-9-(pirrolidino-1-carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico17 mg (0,038 mmol) do Exemplo 98 são dissolvidos em 2 mL demetanokdiclorometano 1:1, e uma uma solução recém-preparada de diazo-metano é destilada para dentro da mistura reativa por 10 minutos até quepersista uma cor amarela. A mistura reativa é evaporada e purificada porcromatografia em sílica, usando t-butil-metil-éter:ciclo-hexano 9:1 como elu-ente. O produto cristaliza após a evaporação, para dar a feni-amida do ácido(6aR,9R)-4-metóxi-9-(pirrolidino-1 -carbonil)-6,6a,8,9-tetraidro-4H-indolo[4,3-fg]quinolino-7-carboxílico. MS/ES: 458 (M+H)+

Os compostos da fórmula I na forma livre ou na forma de salfarmaceuticamente aceitável apresentam propriedades farmacológicas vali-osas, por exemplo, como antagonistas de CXCR3, por exemplo, como indi-cado em testes in vitro, e portanto, são indicados para terapia.

a) Ensaio de ligação a membrana com CXCR3

Um ensaio de ligação de Iigantes é usado para identificar inibi-dores da ligação de I-TAC a membranas que expressam CXCR3. As mem-branas celulares são preparadas a partir de células CHO transfectadas comCXCR3 humano. A ligação de Iigante de CXCR3 marcado com 125I, por e-xemplo, I-TAC (CXCL11) a CXCR3 é valiada usando a tecnologia do Ensaiode Proximidade de Cintilação (SPA) (Amersham Pharmacia Biotech). Umtampão ou diluições seriais do composto são incubadas por 2 horas à tem-peratura ambiente com Iigante de CXCR3 marcado (por exemplo, l-TAC),membranas que expressam CXCR3 e pérolas de PVT revestidas com WGA.

As placas são então centrifugadas e contadas em um instrumento Topcount(Packard). Os dados são relatados como a concentração do composto, ne-cessária para atingir 50% de inibição da ligação do Iigante 125I. Neste ensaio,os compostos da fórmula I têm um valor de Cl50 entre 1 μΜ e 1 nM. Por e-xemplo, os compostos dos Exemplos 18, 23, 43, 59 e 79 nM têm uma Cl50de 54, 61, 23, 43 and 145 nM, respectively.

b) Ensaio funcional de CXCR3 - mobilização de Ca2+

A mobilização de Ca2+ induzida pelo Iigante de CXCR3 é avalia-da em células L1.2 transfectadas com CXCR3 (uma pré-linhagem de célulasB do camundongo). Para esta finalidade, as células são carregadas com ofluorocromo sensível a Ca2+, Fluo-4 (Molecular Probes). Depois da lavagem,as células são pré-incubadas com inibidores de baixo peso molecular por 2h à temperatura ambiente. O aumento transiente em Ca2+ intracelular depoisda adição do Iigante de CXCR3 (por exemplo, l-TAC) é monitorado em umaleitora de placas com imagens de fluorescência (FLIPR). A inibição da mobi-lização de Ca2+ induzida pelo Iigante de CXCR3 na presença de antagonis-tas de CXCR3 está relatada como valores de CI5o, isto é, a concentração docomposto que reduz a resposta máxima de Ca2+ para 50%. Neste ensaio, oscompostos da formula I têm um valor de CI5o entre 1 μΜ-1 nM. Por exemplo,os compostos dos Exemplos 18, 23, 43, 59 e 79 têm uma CI5o de 18, 8, 16,20 e 53 nM, respectivamente.

c) Ensaio funcional de CXCR3 - quimiotaxia

A migração direcionada de células induzida por Iigantes de CX-CR3, por exemplo, l-TAC, é avaliada usando câmaras de quimiotaxia des-cartáveis com 96 cavidades (Multiscreen MIC, Costar) com membranas depolicarbonato, contendo poros com 5 μιτι de diâmetro. A quimiocina (por e-xemplo, l-TAC) é colocada no cavidade do fundo da câmara e as células(por exemplo, células -1.2 transfectadas com CXCR3) são colocadas nocompartimento do topo da câmara de quimiotaxia. A migração das célulasatravés da membrana porosa é permitida por 4 h a 37°C. As células que mi-graram do compartimento do topo para o compartimento do fundo são quan-tificadas por citometria de fluxo. Quando os inibidores de baixo peso mole-cular são testados, os compostos são adicionados a ambos compartimentosem concentrações idênticas; diluições seriais dos compostos são testadaspara avaliar seu efeito inibitório sobre a migração celular dependente deCXCR3. A concentração dos inibidores de CXCR3 de baixo peso molecular,que leva a uma redução das células migradas em 50%, está relatada comoCl50. Neste ensaio, os compostos da fórmula I têm um valor de CI5o entre1μΜ-1ηΜ. Por exemplo, os compostos dos Exemplos 18 e 43 têm uma CI5ode 74 e 75 nM, respectivamente.

d) Experimentos realizados em modelos animais murinos indicam que a re-modelagem da parede de vasos depois de lesão experimental (por exemplo,induzida por alotransplante) é reduzida significativamente na ausência deCXCR3 funcional.

Os compostos da fórmula I são, portanto, úteis na prevençãoe/ou tratamento de doenças ou distúrbios mediados por interações entrereceptores de quimiocinas, por exemplo, CXCR3, e seus ligantes, por e-xemplo, em doenças auto-imunes, por exemplo, artrite reumatóide, lúpuseritematoso sistêmico, tireoidite de Hashimoto, esclerose múltipla, miasteniagrave, diabetes tipo I ou Il e os distúrbios associados com elas, vasculite,anemia perniciosa, síndrome de Sjoegren, uveíte, psoríase, alopecia emáreas e outras, doenças alérgicas, por exemplo, asma alérgica, dermatiteatópica, rinite/conjuntivite alérgica, dermatite de contato alérgica, doençasinflamatórias opcionalmente com reações aberrantes subjacentes, por e-xemplo, doença inflamatória do intestino, doença de Crohn ou colite ulcera-tiva, asma intrínsecalesão pulmonar inflamatória, lesão hepática inflamató-ria, lesão glomerular inflamatória, aterosclerose, osteoartrite, dermatite decontato irritante, e outras dermatites eczematosas, dermatite seborréica,manifestações cutâneas de distúrbios mediados de forma imunológica, do-ença ocular inflamatória, ceratoconjuntivite, miocardite ou hepatite, lesão porisquemia/reperfusão.por exemplo, infarto do miocárdio, acidente vascularcerebral, isquemia intestinal, insuficiência renal ou choque hemorrágico,choque traumático e outros, câncer, por exemplo, tumores sólidos ou câncerlinfático, tais como Iinfomas de células T ou Ieucemias de células T, metas-táticas ou angiogênese, doenças infecciosas, por exemplo choque tóxico(por exemplo, induzido por superantígenos), choque séptico, síndrome daangústia respiratória no adulto, ou transplante, tal como rejeição aguda oucrônica de aloenxertos ou xenoenxertos de órgãos, tecidos ou células, fun-ção retardada de enxertos. O termo "transplante" significa aloenxertos ouxenoenxertos de, por exemplo, células, tecidos ou órgãos sólidos, por e-xemplo, ilhotas pancreáticas, células-tronco, medula óssea, tecido cornea-no, tecido neuronal, coração, pulmão, coração-pulmão combinado, rim, fíga-do, intestino, pâncreas, traquéia ou esôfago. A rejeição crônica é denomina-da também doenças vasculares de enxertos.Para os usos acima, a dosagem necessária, evidentemente, va-riará dependendo do modo de administração, da condição específica a sertratada e do efeito desejado. Genericamente, resultados satisfatórios sãoobtidos por via sistêmica com dosagens diárias entre cerca de 0,01 e 10mg/kg de peso corporal. Uma dosagem diária indicada em mamíferos supe-riores, por exemplo, humanos, fica na faixa entre cerca de 0,5 mg e cerca de1.000 mg, administrada convenientemente, por exemplo, em doses divididasde até quatro vezes ao dia ou na forma retardada. As formas de dosagemunitária apropriadas para administração oral compreendem entre cerca de 1e 500 mg de ingrediente ativo.

Os compostos da fórmula I podem ser adminsitrados por qual-quer via convencional, particularmente por via entérica, por exemplo, por viaoral, por exemplo, na forma de comprimidos ou cápsulas, ou por via parenrteral, por exemplo, na forma de soluções ou suspensões injetáveis, por viatópica, por exemplo, na forma de loções, géis, pomadas ou cremes, ou emuma forma nasal ou de supositório. As composições farmacêuticas quecompreendem um composto da fórmula I na forma livre ou na forma de salfarmaceuticamente aceitável em associação com pelo menos um veículo oudiluente farmaceuticamente aceitável podem ser fabricadas de maneira con-vencional misturando com um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.

Os compostos da fórmula I podem ser administrados na formalivre ou na forma de sal farmacuticamente aceitável, por exemplo, como in-dicado acima. Tais sais podem ser preparados de maneira convencional eapresentam a mesma ordem de atividade que os os compostos livres.De acordo com o precedente, a presente invenção fornece ainda:

1.1 Um método para prevenir ou tratar distúrbios ou doençasmediadas por interações entre receptores de quimiocinas e seus ligantes,por exemplo, tal como indicado acima, em um indivíduo que necessita dessetratamento, método este que compreende administrar ao dito indivíduo umaquantidade eficaz de um composto da fórmula I ou um sal farmaceuticamen-te aceitável do mesmo;1.2 Um método para prevenir ou tratar doenças inflamatórias ouauto-imunes, por exemplo, como indicado acima, em um indiivíduo que ne-cessita desse tratamento, método este que compreende administrar ao ditoindivíduo uma quantidade eficaz de um composto da fórmula I ou um salfarmaceuticamente aceitável do mesmo;

2. Um composto da fórmula I ou um sal farmaceuticamente acei-tável do mesmo, para uso como um produto farmacêutico, por exemplo, emqualquer um dos métodos indicados nos itens 1.1 ou 1.2 acima.

3. Uma composição farmacêutica, por exemplo, para uso emqualquer um dos métodos indicados nos itens 1.1 ou 1.2 acima, compreen-dendo um composto da fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável domesmo, em associação com um diluente ou veículo farmaceuticamente a-ceitável.

4. Um composto da fórmula I ou um sal farmaceuticamente acei-tável do mesmo para uso na preparação de uma composição farmacêuticapara uso em qualquer um dos métodos indicados nos itens 1.1 ou 1.2 acima.

Os compostos da fórmula I podem ser administrados como oúnico ingrediente ativo ou em conjunto com, por exemplo, como um adju-vante a outros fármacos, por exemplo, em esquemas imunossupressores ouimunomoduladores, ou outros agentes antiinflamatórios, por exemplo, para otratamento ou prevenção de rejeição aguda ou crônica de aloenxertos ouxenoenxertos ou distúrbios auto-imunes, um agente quimioterápico ou umagente antiinfeccioso, por exemplo, como um agente antiviral, tal como, porexemplo, um agente anti-retroviral ou um antibiótico. Por exemplo, os com-postos da fórmula I podem ser usados em combinação com um inibidor decalcineurina, por exemplo, ciclosporina A ou FK 506; um inibidor de mTOR,por exemplo, rapamicina, 40-0-(2-hidróxi-etil)-rapamicina, CCI779, ABT578ou um rapalog, por exemplo, AP23573, AP23464, AP23675, AP23841, TA-FA-93, biolimus 7 or biolimus 9; uma ascomicina que tem propriedades imu-nossupressoras, por exemplo, ABT-281, ASM981, etc.; corticosteróides; ci-clofosfamida; azatioprina; metotrexato; leflunomida; mizoribina; ácido mico-fenólico; micofenolato mofetil; 15-desoxiespergualina ou um homólogo im-munosupressor, um seu análogo ou derivado; um agonista ou modulador dereceptor S1P, por exemplo, FTY720 ou um seu análogo; um inibidor dePKC, por exemplo, como descrito nos documentos n- WO 02/38561 ou WO03/82859, por exemplo, o composto do Exemplo 56 ou 70; anticorpos mo-noclonais para receptores de leucócitos, por exemplo, MHC, CD2, CD3,CD4, CD7, CD8, CD11a/CD18, CD25, CD27, CD28, CD40. CD45, CD52,CD58, CD80, CD86, CD137, ICOS, CD150 (SLAM)1 0X40, 4-1BB ou paraseus ligantes, por exemplo, CD154, ou seus antagonistas; outros compostosimunomoduladores, por exemplo, uma molécula Iigante recombinante quetem pelo menos uma parte do domínio extracelular de CTLA4 ou um seumutante, por exemplo, pelo menos a parte extracelular de CTLA4 ou um seumutante unida a uma seqüência da proteína não-CTLA4, por exemplo, C-TLA4lg (por exemplo, designado ATCC 68629) ou em seu mutante, por e-xemplo, LEA29Y; inibidores de moléculas de adesão, por exemplo, antago-nistas de LFA-1, antagonistas de ICAM-1 ou -3, antagonistas de VCAM-4 ouantagonistas de VLA-4; ou anticorpos antiquimiocinas, por exemplo, anticor-pos anti-MCP-1, ou anticorpos de receptores antiquimiocinas ou antagonis-tas de receptores de quimiocinas de baixo peso molecular.

Quando os compostos da fórmula I são administrados em con-junto com outra terapia imunossupressora/imunomoduladoras antiinflamató-ria ou quimioterápica, as dosagens do composto imnossupressor, imunomo-dulador, antiinflamatório ou quimioterápico co-administrado evidentementevariará dependendo do tipo de co-fármaco empregado, por exemplo, se eleé um esteróide ou um inibidor de calcineurina, do fármaco específico em-pregado, da condição que está sendo tratada, e assim por diante.

De acrodo com o precedente, a presente invenção fornece emainda outro aspecto:

5. Um método como definido acima, compreendendo a co-administração, por exemplo, concomitantemente ou seqüencialmente, deuma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da fórmula I epelo menos uma segunda substância farmacológica, por exemplo, um fár-maco imunossupressor, imunomodulador, antiinflamatório, antiinfeccioso ouquimioterápico, por exemplo, como indicado acima.

6. Uma composição farmacêutica, por exemplo, um kit, quecompreende (a) um primeiro agente que é um antagonista de CXCR3, porexemplo, um composto da fórmula I como aqui descrito, na forma livre ou naforma de sal farmaceuticamente aceitável, e (b) pelo menos um co-agente,por exemplo, um fármaco imunossuppressor, imunomodulador, antiinflama-tório, antiinfeccioso ou quimioterápico. O kit pode compreender instruçõespara sua administração.

Os termos "co-administração" ou "administração combinada", outermos similares, como aqui utilizados, pretendem englobar a administraçãodos agentes terapêuticos selecionados a um único paciente, e pretendemincluir esquemas de tratamento nos quais os agentes não são administradosnecessariamente pela mesma via de administração ou na mesma hora.

O termo "combinação farmacêutica", como aqui utilizado, signifi-ca um produto que resultada da misturação ou combinação de mais do queum ingrediente ativo, e inclui combinações fixas e não-fixas dos ingredientesativos. O termo "combinação fixa" significa que os ingredientes ativos, porexemplo, um composto da fórmula I e um co-agente, são ambos administra-dos a um paciente simultaneamente na forma de uma única entidade oudosagem. O termo "combinação não-fixa" significa que os ingredientes ati-vos, por exemplo, um composto da fórmula I e um co-agente, são ambosadministrados a um paciente em entidades separadas, seja simultaneamen-te, concomitantemente ou seqüencialmente, com nenhum limite de tempoespecífico, onde tal administração proporciona níveis terapeuticamente efi-cazes dos 2 compostos no corpo do paciente. Este último caso se aplicatambém a terapias em coquetel, por exemplo, a administração de 3 ou maisingredientes ativos.

Claims

1 .Composto da fórmula I<formula>formula see original document page 34</formula>em quecada um entre Ri e R2 é independentemente H; fenila ou fenil-alquila de C1.4 opcionalmente substituída com Ri0 e/ou Rn; heteroarila ouheteroaril-alquila de C1-4 opcionalmente substituída com Ri0 e/ou Rn; N-óxido de heteroarila opcionalmente substituído com Ri0 e/ou Rn; alquila deCrCe opcionalmente substituída com Ri0; alquenila de C2-C8 opcionalmentesubstituída com R10, alquinila de C2-C8 opcionalmente substituída com R10;ciclo-alquila de C3-C8 opcionalmente substituída com R10, ou ciclo-alquenilade C4-C8 opcionalmente substituída com R1O;ou Ri e R2 formam, em conjunto com o átomo de nitrogênio aoqual eles estão anexados, um anel com 3-8 membros, opcionalmente substi-tuído com R10, contendo, além do átomo de nitrogênio, até 2 heteroátomosselecionados independentemente entre Ν, O e S;onde R10 representa 1 a 4 substituintes selecionados indepen-dentemente entre alquila de CrC6; hidróxi-alquila de CrC6; alcóxi-alquila deC1-C6; haio-alquila de CrC6; ciclo-alquila de C3-C6; alquenila de C2-C6; ciclo-alquenila de C3-C6; alquinila de C2-C6; fenila; heteroarila; N-óxido de hetero-arila; F; Cl; Br; I; OH; OR9; OCOR9; OCOOR9; OCONHR9; OCONR9R9; O-SO2R9; COR9; COOH; COOR9; CONH2; CONHR9; CONR9R9; CF3; CHF2;CH2F; alquil(Ci.4)-NH2; alquiKC^-NHRg; alquil(Ci.4)-NR9R9; CN; NO2; NH2;NHR9; NR9R9; NHCOR9; NR9COR9; NHCONHR9; NHCONH2; NR9CONHR9;NR9CONR9R9; NHCOOR9; NR9COOR9; NHSO2R9; N(SO2R9)2; NR9SO2R9;SR9; SOR9; SO2R9; SO2NH2; SO2NHR9; SO2NR9R9; ouR-ιο está anexado em =O a um átomo de carbono da fenila ouheteroarila, ou pode estar anexado em um ou dois =O ao mesmo átomo deS da hetaroarila, caso haja algum;Rn representa dois substituintes adjacentes que formam umanel não-aromático de 4-7 membros anelados, contendo opcionalmente atédois heteroátomos selecionados independentemente entre N1OeS;cada R9 é independentemente alqüila de CrC6; hidróxi-alquilade CrC6; ciclo-alquila de C3-C6; alquenila de C2-C6; alquinila de C2-C6; feni-Ia; benzila; heteroarila; -CH2-heteroarila; ou CF3; ou dois R9, em conjuntocom o átomo de N ao qual eles estão anexados, formam um anel de 4-8membros opcionalmente substituído com Rio, contendo, além do átomo deN, até 2 heteroátomos selecionados entre Ν, O e S;R3 é H; OR1; CH2R1R2; (CH2)v2NR1R2; CH2-CH2-OR1; CH2-CO-NR1R2; ou CO-CH2R1R2;R4 é F; Cl; Br; I; OR1; NR1R2 ou tem um dos significados forneci-dos para R1JeR5 tem um dos significados fornecidos para R-i,na forma livre ou na forma de sal.

2. Processo para a preparação de um composto da fórmula Icomo definido na reivindicação 1, processo este que compreendea) para a preparação de um composto da fórmula I no qual cadaum entre R3 e R4 é H,reagir um composto da fórmula Il <formula>formula see original document page 35</formula> onde R1 e R2 são como definidos acima,com um agente formador de uréia; oub) para a preparação de um composto da fórmula I no qual cadaum entre R3 e R4 é H, amidando um composto da fórmula Ill <formula>formula see original document page 36</formula> onde R5 é como definido acima, ou um seu derivado funcional;ouc) para a preparação de um composto da fórmula I no qual cadaum entre R3 e R4 é diferente de H1 convertendo um composto da fórmula Ino qual cada um entre R3 e R4 é H;e, quando necessário, converter o composto da fórmula I resultante, obtidona forma livre na forma de sal desejada, ou vice-versa.

3. Composto da fórmula I, de acordo com a reivindicação 1, ouum seu sal farmaceuticamente aceitável, para uso como um produto farma-cêutico.

4. Composição farmacêutica que compreende um composto dafórmula I como definido na reividicação 1 ou um sal farmaceuticamente acei-tável do mesmo, junto com um ou mais diluentes ou veículos farmaceutica-mente aceitáveis para ele.

5. Uso de um composto da fórmula I como definido na reivindi-cação 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na preparaçãode um medicamento para prevenir ou tratar distúrbios ou doenças mediadaspor interações entre receptores de quimiocinas e seus ligantes.

6. Combinação que compreende (a) um primeiro agente que éum composto da fórmula I como definido na reivindicação 1 ou um sal far-maceuticamente aceitável do mesmo, e (b) pelo menos um co-agente.

7. Método para prevenir ou tratar distúrbios ou doenças media-das por interações entre receptores de quimiocinas e seus ligantes, em umindivíduo que necessita de tal tratamento, método este que compreendeadministrar ao dito indivíduo uma quantidade eficaz de um composto dafórmula I como definido na reivindicação 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.