BRPI0514124B1 - anticorpos monoclonais específicos para il-4 humana, seu uso, composição farmacêutica que os comprende e polinucleotídeos - Google Patents

Abstract

anticorpos monoclonais humanos contra a il-4 humana. a invenção refere-se a anticorpos os quais são específicos para a interleucina 4 humana e seu uso no tratamento de doenças mediadas por il-4 e/ou ige.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ANTICORPOS MONOCLONAIS ESPECÍFICOS PARA IL-4 HUMANA, SEU USO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA QUE OS COMPRENDE E POLINUCLEOTÍDEOS". A presente invenção refere-se aos anticorpos os quais são específicos para a interleucina-4 (hlL-4).

Doenças alérgicas tais como dermatite atópica, rinite alérgica, asma e alergias a comida são caracteristicamente associadas com respostas das células Th2 exacerbadas a antígenos ambientais inócuos (alérgenos). Alérge-nos são capturados por células apresentadoras de antígenos, processados e apresentados no contexto das moléculas de Classe II de MHC para células T auxiliadoras específicas para alérgenos. Células Th específicas para alérgenos pertencem ao fenótipo Th2 e se desenvolvem das células T precursoras sob a influência da interleucina 4 (IL-4). Uma vez que as células Th2 são ativadas, elas secretam IL-4 e interleucina-13 (IL-13), as quais juntamente com sinais de ligação à superfície induzem as células B a desviarem para a produção de células plasmáticas. Moléculas de IgE se ligam ao FcsR de alta afinidade nas células dos mastócitos e, depois do subseqüente encontro com o alérgeno, induzem a ativação das células dos mastócitos e a liberação dos mediadores de reações alérgicas. As citocinas Th2 também promovem a sobrevivência dos eosinófilos e o crescimento das células mastócitos as quais, depois da desgra-nulação, também liberam citocinas Th2 adicionais capazes de aumentar a produção de IgE, a diferenciação da célula Th2 e a sobrevivência eosinofílica. Sendo assim, as células Th2 desempenham um papel fundamental na indução e desenvolvimento de resposta alérgicas e, sendo assim, antagonizam o seu desenvolvimento e/ou suas funções efetoras poderíam ser uma maneira eficiente de interferir nas respostas alérgicas. IL-4 e IL-3 compartilham muitas atividades biológicas devido ao fato de que ambas as citocinas usam o receptor de IL-4 cadeia alfa de (IL-4R) como um componente dos seus respectivos complexos receptores. Sinais de IL-13 através de um complexo heterodimérico consistindo em uma cadeia de ligação de IL-13 (IL-13Ra1) e a cadeia IL-4Ra. IL-4 utiliza esse complexo IL-4Ra/IL-13Ra1, chamado de IL-4R tipo II, como uma alternativa ao IL-4R do tipo I, consistindo em cadeia IL-4Ra e da cadeia γ comum (cy) compartilhada pelos receptores para IL-22, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 e a linfopro-teína estromal tímica (TSLP). Devido ao fato das células T não expressarem IL-13Ra1, IL-13 em contraste com a IL-4 não suporta a proliferação de células T e não pode induzir a diferenciação de células Th humanas naturais para o fenótipo Th2 (vide, por exemplo, J. E. de vries et al„ Encyclopedia of Hormones and related cell regulators, Academic Press, 2002). IL-4 desempenha um papel fundamental na proliferação de células T e, dessa forma, no desenvolvimento e manutenção de doenças alérgicas. Camundongos deficientes do gene da IL-4 sem IL-4 (vide, por exemplo, Kuhn R. eí a/., Science, 1991 (5032) 707:10) ou o fator de sinalização à jusante STAT6 (vide, por exemplo, Kaplan Μ. H. et a/., Immunity, 1996 (3) 313-9) não desenvolvem quantidades significativas de células Th2 e têm respostas de IgE reduzidas.

Foi descoberto anticorpos com uma alta afinidade para a IL-4 humana e um forte potencial inibitório da IL-4 mediado pela síntese de IgE por células B humanas naturais.

Um aspecto da presente invenção fornece um anticorpo específico para a IL-4 humana o qual se liga à IL-4 humana com uma constante de dissociação «d igual ou menor do que 800 pM, tal como, por exemplo, igual ou menor do que 200 pM.

Outro aspecto da presente invenção fornece um anticorpo com um primeiro domínio compreendendo, na sequência das regiões hipervariá-veis CDR1, CDR2 e CDR3 e um segundo domínio compreendendo na sequência das regiões hipervariáveis CDRT, CDR2’ e CDR3’ selecionados do grupo consistindo em um anticorpo, em que a) o referido CDR1 tem a sequência de aminoácidos Gly-Phe-Thr-Phe-Ser-Ser-Tyr-Ala-Met-His (GFTFSSYAMH) o referido CDR2 tem a seqüência de aminoácidos Phe-lle-Trp-Asp-Asp-Gly-Ser-Phe-Lys-Tyr-Tyr-Ala-Glu-Ser-Val-Lys-Gly (FIWDDGSFKY-YAESVKG), o referido CDR3 tem a seqüência de aminoácidos Glu-Gly-Ser-Trp-Ser-Pro-Asp-lle-Phe (EGSWSPDIF), o referido CDR1 ’ tem a sequência de aminoácidos Ser-GIn-Gly-Ile-Ser-Arg-Ala (SQGISRA), o referido CDR2’ tem a sequência de aminoácidos Asp-Ala-Ser (DAS), o referido CDR3’ tem a sequência de aminoácidos Phe-Asn-Ser-Tyr-Pro-lle (FNSYPI), b) o referido CDR1 tem a seqüência de aminoácidos Gly-Phe-Thr-Leu-Ser-Ser-Phe-Gly-Met-His (GFTLSSFGMH), o referido CDR2 tem a seqüência de aminoácidos Val-lle-Trp-Tyr-Asp-Gly-Ser-Asn-Glu-Tyr-Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Gly (VIWYDGSNEY-YADSVKG), o referido CDR3 tem a seqüência de aminoácidos Glu-Gly-Ser-Trp-Ser-Pro-Asp-lle-Phe (EGSWSPDIF), o referido CDR1 ’ tem a seqüência de aminoácidos Ser-GIn-Gly-Ile-Arg-Ser-Ala (SQGIRSA), o referido CDR2’ tem a seqüência de aminoácidos Asp-Ala-Ser (DAS), o referido CDR3’ tem a seqüência de aminoácidos Phe-Asn-Ser-Tyr-Pro-Val (FNSYPV), c) o referido CDR1 tem a seqüência de aminoácidos Gly-Phe-Thr-Leu-Ser-Ser-Tyr-Gly-Met-His (GFTLSSYGMH), o referido CDR2 tem a seqüência de aminoácidos Val-lle-Trp-Tyr-Asp-Gly-Asn-Asn-Gln-Tyr-Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Gly (VIWYDGNNQYYADSCKG), o referido CDR3 tem a seqüência de aminoácidos Glu-Gly-Ser-Trp-Ser-Pro-Asp-lle-Phe (EGSWSPDIF), o referido CDR1’ tem a seqüência de aminoácidos Ser-GIn-Gly-Ile-Ser-Ser-Tyr (SQGISSY), o referido CDR2' tem a seqüência de aminoácidos Asp-Ala-Ser (DAS), o referido CDR3’ tem a seqüência de aminoácidos Phe-Asn-Ser-Tyr-Pro (FNSYP), d) o referido CDR1 tem a seqüência de aminoácidos Gly-Asp-Thr-Phe-Ser-Ser-Tyr-Ala-lle-Ser (GDTFSSYAIS), o referido CDR2 tem a seqüência de aminoácidos Gly-lle-lle-lle-Pro-Val-lle-Gly-Thr-Val-Asn-Tyr-Glu-Glu-Arg-Phe-GIn-Asp-Arg (GIIIP-VIGTVNYEERFQD), o referido CDR3 tem a seqüência de aminoácidos Glu-Glu-Gly-Phe-Leu (EEGFL), o referido CDR1 ’ tem a seqüência de aminoácidos Ser-GIn-Gly-Ile-Ser-Ser-Ala (SQGISSA), o referido CDR2’ tem a seqüência de aminoácidos Asp-Ala-Ser (DAS), o referido CDR3' tem a seqüência de aminoácidos Phe-Asn-Ser-Tyr-Pro-Leu (FNSYPL), e) o referido CDR1 tem a seqüência de aminoácidos Gly-Phe-Thr-Phe-Ser-Cys-Cys-Gly-Met-His (GFTFSCCGMH), o referido CDR2 tem a seqüência de aminoácidos Val-lle-Trp-Tyr-Asp-Gly-Ser-Asn-Lys-Tyr-Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Gly (VIWYDGSNKY-YADSVKG), o referido CDR3 tem a seqüência de aminoácidos Asp-Ser-Ser-Gly-Ser-Phe-Tyr-Glu—Tyr-Phe(DSSGSFYEYF), o referido CDR1’ tem a seqüência de aminoácidos Ser-GIn-Gly-Ile-Asn-Ser-Ala (SQGiNSA), o referido CDR2’ tem a seqüência de aminoácidos Asp-Ala-Ser (DAS), o referido CDR3' tem a seqüência de aminoácidos Phe-Asn-Ser-Tyr-Pro-Tyr(FNSYPY), e f) o referido CDR1 tem a seqüência de aminoácidos Gly-Phe-Thr-Phe-Ser-Gly-Tyr-Gly-Met-His(GFTFSGYGMH), o referido CDR2 tem a seqüência de aminoácidos Val-Val-Trp-Tyr-Asp-Gly-Gly-Tyr-Lys-Phe-Tyr-Ala-Asp-Ser-Val-Lys-Gly (WWYDGGYKF YADS VKG), o referido CDR3 tem a seqüência de aminoácidos Asp-Ser-Ser- G ly-Ser-Phe-Ty r-G I u-T y r-Le u (DSSGSFYEYL), o referido CDR1 ’ tem a seqüência de aminoácidos Ser-GIn-Gly-Ile-Ser-Ser-Aia (SQGISSA), o referido CDR2’ tem a seqüência de aminoácidos Asp-Ala-Ser (DAS), o referido CDR3’ tem a seqüência de aminoácidos Phe-Asn-Ser-Tyr-Pro-His (FNSYPH). CDR1, CDR2 e CDR3 são partes da seqüência de aminoácidos da cadeia pesada de tal anticorpo e CDR1’, CDR2’, e CDR3’ são partes da seqüência de aminoácidos da cadeia leve de tal anticorpo.

Foi descoberto um anticorpo compreendendo: - a seqüência de aminoácidos da cadeia pesada de um polipep-tídeo maduro de SEQ ID NO: 1 e a seqüência de aminoácidos da cadeia leve de um polipeptídeo maduro da SEQ ID NO: 2, ou - a seqüência de aminoácidos da cadeia pesada de um polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 9 e a seqüência de aminoácidos da cadeia leve de um polipeptídeo maduro da SEQ ID NO: 10, ou - a seqüência de aminoácidos da cadeia pesada de um polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 17 e a seqüência de aminoácidos da cadeia leve de um polipeptídeo maduro da SEQ ID NO: 18, ou - a seqüência de aminoácidos da cadeia pesada de um polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 25 e a seqüência de aminoácidos da cadeia leve de um polipeptídeo maduro da SEQ ID NO: 26, ou - a seqüência de aminoácidos da cadeia pesada de um polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 33 e a seqüência de aminoácidos da cadeia leve de um polipeptídeo maduro da SEQ ID NO: 34, ou - a seqüência de aminoácidos da cadeia pesada de um polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 41 e a seqüência de aminoácidos da cadeia leve de um polipeptídeo maduro da SEQ ID NO: 42.

Em um outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo compreendendo a) um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1 e um polipeptídeo de SEQ ID NO: 2, ou b) um polipeptídeo de SEQ ID NO: 9 e um polipeptídeo de SEQ ID NO: 10, ou c) um polipeptídeo de SEQ ID NO: 17 e um polipeptídeo de SEQ ID NO: 18, ou d) um polipeptídeo de SEQ ID NO: 25 e um polipeptídeo de SEQ ID NO: 26, ou e) um polipeptídeo de SEQ ID NO: 33 e um polipeptídeo de SEQ ID NO: 34, ou f) um polipeptídeo de SEQ ID NO: 41 e um polipeptídeo de SEQ ID NO: 42.

Foi descoberto um anticorpo compreendendo: - a seqüência de aminoácidos da cadeia pesada de um polipeptídeo da SEQ ID NO: 1 contendo ainda uma seqüência líder (= SEQ ID NO: 3) e a seqüência de aminoácidos da cadeia leve de um polipeptídeo da SEQ ID NO: 2 contendo ainda uma seqüência líder (= SEQ ID NO: 4), ou - a seqüência de aminoácidos da cadeia pesada de um polipeptídeo da SEQ ID NO: 9 contendo ainda uma seqüência líder (= SEQ ID NO: 11) e a seqüência de aminoácidos da cadeia leve de um polipeptídeo da SEQ ID NO: 10 contendo ainda uma seqüência líder (= SEQ ID NO: 12), ou - a seqüência de aminoácidos da cadeia pesada de um polipeptídeo da SEQ ID NO: 17 contendo ainda uma seqüência líder (= SEQ ID NO: 19) e a seqüência de aminoácidos da cadeia leve de um polipeptídeo da SEQ ID NO: 18 contendo ainda uma seqüência líder (= SEQ ID NO: 20), ou - a seqüência de aminoácidos da cadeia pesada de um polipeptídeo da SEQ ID NO: 25 contendo ainda uma seqüência líder (= SEQ ID NO: 27) e a seqüência de aminoácidos da cadeia leve de um polipeptídeo da SEQ ID NO: 26 contendo ainda uma seqüência líder (= SEQ ID NO: 28), ou - a seqüência de aminoácidos da cadeia pesada de um polipeptídeo da SEQ ID NO: 33 contendo ainda uma seqüência líder (= SEQ ID NO: 35) e a seqüência de aminoácidos da cadeia leve de um polipeptídeo da SEQ ID NO: 34 contendo ainda uma seqüência líder (= SEQ ID NO: 36), ou - a seqüência de aminoácidos da cadeia pesada de um polipep-tídeo da SEQID NO: 41 contendo ainda uma seqüência líder (= SEQID NO: 43) e a seqüência de aminoácidos da cadeia leve de um polipeptídeo da SEQ ID NO: 42 contendo ainda uma seqüência líder (= SEQ ID NO: 44).

Em um outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo compreendendo a) um polipeptídeo de SEQ ID NO: 3 e um polipeptídeo de SEQ ID NO: 4, ou b) um polipeptídeo de SEQ ID NO: 11 e um polipeptídeo de SEQ ID NO: 12, ou c) um polipeptídeo de SEQ ID NO: 19 e um polipeptídeo de SEQ ID NO: 20, ou d) um polipeptídeo de SEQ ID NO: 27 e um polipeptídeo de SEQ ID NO: 28, ou e) um polipeptídeo de SEQ ID NO: 35 e um polipeptídeo de SEQ ID NO: 36, ou f) um polipeptídeo de SEQ ID NO: 43 e um polipeptídeo de SEQ ID NO: 44.

Anticorpos fornecidos pela presente invenção são, de agora em diante, designados como "composto(s) de (acordo com) a presente invenção".

Em outro aspecto, a presente invenção fornece um composto da presente invenção o qual é selecionado do grupo consistindo em um anticorpo monoclonal específico da IL-4 humana (hlL-4 mAB), um fragmento seu e um análogo seu.

Um hlL-4 mAB é um anticorpo o qual reconhece especificamente a IL-4 humana, isto é, inclui sítios de ligação a antígeno para a IL-4 humana, e os quais têm especificamente seus CDRs mas também outras partes das cadeias pesada e leve derivadas de imunoglobulinas humanas. O anticorpo pode ser de um isotipo incluindo lgG1, lgG2, lgG3 e lgG4, preferivelmente do isotipo lgG1. "Um fragmento seu" significa uma parte da seqüência variávei da cadeia pesada e leve de um hll_-4 mAB, a qual retém a mesma especificidade de ligação a antígeno e/ou capacidade de neutralização que a molécula da qual os fragmentos são derivados, por exemplo, um fragmento fab ou um fragmento F(ab')2 derivado da hlL-4 mAB. Um fragmento Fab contém a cadeia leve inteira e as porções aminoterminais da cadeia pesada; um fragmento F(ab’)2 é o fragmento formado por 2 fragmentos Fab ligados por pontes dissulfeto. Tais fragmentos podem ser obtidos de maneiras convencionais, por exemplo, divagem dos anticorpos monoclonais com as enzimas proteolíticas apropriadas, papaína e/ou pepsina, ou por métodos recombi-nantes, e os próprios fragmentos são úteis como agentes terapêuticos e/ou profiláticos. "Um análogo seu" significa um hlL-4 mAB com uma seqüência de aminoácidos a qual é modificada por, pelo menos, uma aminoácido fora das regiões CDR, por exemplo, fora da CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada ou fora da CDRT, CDR2’ e CDR3’ da cadeia leve. A referida modificação inclui uma modificação química, uma substituição ou rearranjo de um ou de alguns aminoácidos, isto é, não mais do que 10 aminoácidos, cuja modificação permite a seqüência de aminoácidos reter as características biológicas, por exemplo, especificiddade e afinidade a antígeno, da seqüência não-modificada. Por exemplo, mutações silenciosas podem ser construídas através de substituição para criar sítios de restrição à endonuclease nas ou ao redor das regiões CDR.

Um análogo também pode surgir como uma variação alélica. Uma "variação ou modificação alélica" é uma alteração na seqüência de ácidos nucléicos que codifica um anticorpo da presente invenção fora das regiões CDR. Tais alterações ou modificações podem ser devido às degenera-ções do código genético ou podem ser liberadamente projetadas para fornecer características desejadas. Tais variações ou modificações podem ou não resultar em alterações em qualquer seqüência de aminoácidos codificada, mas retêm as atividades biológicas, por exemplo, especificidade e afinidade por antígeno.

Foi descoberto polinucleotídeos que codificam compostos da presente invenção.

Em outro aspecto, a presente invenção fornece polinucleotídeos isolados que compreendem polinucleotídeos que codificam um composto da presente invenção.

Em outro aspecto, a presente invenção fornece polinucleotídeos que codificam a sequência de aminoácidos do CDR1, CDR2 e CDR3 de um composto da presente invenção e polinucleotídeos que codificam a sequência de aminoácidos de CDR1 CDR2’ e CDR3’ de um composto da presente invenção.

Em outro aspecto, a presente invenção fornece polinucleotídeos compreendendo a) um poiipeptídeo de SEQ iD NO: 5 e um polipeptídeo de SEQ ID NO: 6, ou b) um polipeptídeo de SEQ ID NO: 13 e um polipeptídeo de SEQ ID NO: 14, ou c) um polipeptídeo de SEQ ID NO: 21 e um polipeptídeo de SEQ ID NO: 22, ou d) um polipeptídeo de SEQ ID NO: 29 e um polipeptídeo de SEQ ID NO: 30, ou e) um polipeptídeo de SEQ ID NO: 37 e um polipeptídeo de SEQ ID NO: 38, ou f) um polipeptídeo de SEQ ID NO: 45 e um polipeptídeo de SEQ ID NO: 46.

Em outro aspecto, a presente invenção fornece polinucleotídeos que codificam a) um polipeptídeo da SEQ ID NO: 7 e SEQ ID NO: 8, ou b) um polipeptídeo da SEQ ID NO: 15 e SEQ ID NO: 16, ou c) um polipeptídeo da SEQ ID NO: 23 e SEQ ID NO: 24, ou d) um polipeptídeo da SEQ ID NO: 31 e SEQ ID NO: 32, ou e) um polipeptídeo da SEQ ID NO: 39 e SEQ ID NO: 40, ou f) um polipeptídeo da SEQ ID NO: 47 e SEQ ID NO: 48. SEQ ID NO: 5 é um polinucleotídeo que codifica uma seqüência de aminoácidos da SEQID NO: 1. SEQ ID NO: 6 é um polinucleotídeo que codifica uma seqüência de aminoácidos da SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 7 é um polinucleotídeo que codifica uma seqüência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3. SEQ ID NO: 8 é um polinucleotídeo que codifica uma seqüência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4. SEQ ID NO: 13 é um polinucleotídeo que codifica uma seqüência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9. SEQ ID NO: 14 é um polinucleotídeo que codifica uma seqüência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10. SEQ ID NO: 15 é um polinucleotídeo que codifica uma seqüência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11. SEQ ID NO: 16 é um polinucleotídeo que codifica uma seqüência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12. SEQ ID NO: 21 é um polinucleotídeo que codifica uma seqüência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17. SEQ ID NO: 22 é um polinucleotídeo que codifica uma seqüência de aminoácidos da SEQ ID NO: 18. SEQ ID NO: 23 é um polinucleotídeo que codifica uma seqüência de aminoácidos da SEQ ID NO: 19. SEQ ID NO: 24 é um polinucleotídeo que codifica uma seqüência de aminoácidos da SEQ ID NO: 20. SEQ ID NO: 29 é um polinucleotídeo que codifica uma seqüência de aminoácidos da SEQ ID NO: 25. SEQ ID NO: 30 é um polinucleotídeo que codifica uma seqüência de aminoácidos da SEQ ID NO: 26. SEQ ID NO: 31 é um polinucleotídeo que codifica uma seqüência de aminoácidos da SEQ ID NO: 27. SEQ ID NO: 32 é um polinucleotídeo que codifica uma seqüência de aminoácidos da SEQ ID NO: 28. SEQ ID NO: 37 é um polinucleotídeo que codifica uma seqüên- cia de aminoácidos da SEQ ID NO: 33. SEQ ID NO: 38 é um polinucleotídeo que codifica uma seqüên-cia de aminoácidos da SEQ ID NO: 34. SEQ ID NO: 39 é um polinucleotídeo que codifica uma seqüên-cia de aminoácidos da SEQ ID NO: 35. SEQ ID NO: 40 é um polinucleotídeo que codifica uma seqüên-cia de aminoácidos da SEQ ID NO: 36. SEQ ID NO: 45 é um polinucleotídeo que codifica uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 41. SEQ ID NO: 46 é um polinucleotídeo que codifica uma seqüên-cia de aminoácidos da SEQ ID NO: 42. SEQ ID NO: 47 é um polinucleotídeo que codifica uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 43. SEQ ID NO: 48 é um polinucleotídeo que codifica uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 44.

Um composto da presente invenção pode ser produzido por técnica de DNA recombinante. Sendo assim, uma ou mais moléculas de DNA que codificam o anticorpo, um fragmento seu ou um análogo seu podem ser construídas, colocadas sob seqüências de controle apropriadas e num vetor apropriado e transferidas num hospedeiro adequado (organismo) para expressão. O composto da presente invenção pode ser obtido de acordo, por exemplo, analogamente, a um método como convencional junto com a informação fornecida nessa maneira, por exemplo, com o conhecimento da sequência de aminoácidos das regiões hipervariáveis e/ou variáveis e com os polinucleotíceos que codificam essas regiões. Um método para construir um gene de domínio variávei é, por exemplo, descrito na EP 239 400 e pode ser resumidamente sumariado como se segue: Um vetor de expressão replicável incluindo um promotor adequado operativamente ligado a uma seqüência de polinucleotídeos de interesse, por exemplo, codificando pelo menos um domínio variável de uma cadeia leve ou pesada de imunoglobulina compreendendo CDRs, é preparado, uma linhagem celular adequada é transformada com o referido vetor de expressão, a linhagem celular transformada é cultivada e a imunoglobulina correspondente é obtida.

Em outro aspecto, a presente invenção fornece um vetor de expressão compreendendo um polinucleotídeo que codifica um composto da presente invenção,por exemplo, pelo menos um polinucleotídeo de SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ 1D NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 ou SEQ ID NO: 48.

Naturalmente, um vetor de expressão pode compreender mais de um polinucleotídeo.

Em outro aspecto a presente invenção fornece - Um sistema de expressão compreendendo um polinucleotídeo que codifica um composto da presente invenção em que o referido sistema de expressão ou parte sua é capaz de produzir um composto da presente invenção, por exemplo, um hlL-4 mAB, quando o referido sistema de expressão ou parte sua está presente numa célula hospedeira compatível; e - Uma célula hospedeira isolada compreendendo um sistema de expressão conforme definido acima.

Vetores de expressão, por exemplo, compreendendo promotores) adequados e genes que codificam partes constantes da cadeia leve e pesada são conhecidos, por exemplo, e são comercialmente disponíveis e incluem, por exemplo, o vetor lgG1 de cadeia pesada e o vetor humano capa da cadeia leve. Um vetor de expressão convencional ou plasmídeo recombi-nante pode ser produzido pela colocação do respectivo polinucleotídeo em associação operativa com sequências de controle regulatórias convencionais capazes de controlar a replicação e expressão em, w/ou secreção de uma célula hospedeira. As sequências regulatórias incluem seqüências promotoras, por exemplo, o promotor CMV, o promotor LCK e seqüências de sinalização apropriadas.

Uma célula hospedeira selecionada pode ser transfectada por técnicas convencionais com o vetor de interesse para criar uma célula hospedeira transfectada, a qual, dessa forma, pode ser cultivada por técnicas convencionais para produzir os compostos da presente invenção.

Linhagens celulares apropriadas podem ser encontradas de acordo, por exemplo, analogamente, a um método como convencional. Hospedeiros apropriados são conhecidos ou podem ser encontrados, concor-dantemente, por exemplo, analogamente, a um método como convencionai e inclui culturas de células ou animais transgênicos. Células hospedeiras adequadas ou linhagens de células para a expressão dos compostos da presente invenção são preferivelmente células eucarióticas, tais como, por exemplo, CHO, COS uma célula de fibroblasto (por exemplo, 3T3) e células mielóides dentre outras, preferivelmente uma célula de mamífero, tal como uma célula CHO ou SP2/0.

Os compostos da presente invenção exibem atividade farmaco-lógica e são, dessa forma, úteis como farmacêuticos. Por exemplo, os compostos da presente invenção interferem fortemente com a ligação da IL-4 a um receptor IL-4 e são, aqui, também referidos como compostos bloqueado-res ou neutralizadores de IL-4 da presente invenção, incluindo hlL-4 mAB(s). Compostos da presente invenção apresentam atividade e sua afinidade pode ser determinada no TESTE: MEDIDA DE FINIDADE conforme descrito no Exemplo 1.

Um composto da presente invenção, dessa forma, mostra atividade terapêutica contra doenças mediadas por IL-4 e/ou IgE, tais como - várias doenças alérgicas, por exemplo, incluindo urticária, reações alérgicas a medicamentos, rinite, por exemplo, rinite alérgica, conjunti-vite, por exemplo, rinoconjuntivite, dermatite, por exemplo, dermatite atópica, asma, por exemplo, asma atópica e asma alérgica, choque anafilático;

Preferivelmente dermatite atópica, asma alérgica, rinite alérgica, rinoconjuntivite alérgica, tais como asma alérgica ou dermatite atópica; - doenças auto-imunes, incluindo, por exemplo, a doença de Kawasaki, a doença de Grave, a síndrome de Sjorgen, a síndrome linfoprolí-ferativa auto-imune, anemia hemolítica auto-imune, uveíte auto-imune, mias- tenia grave, lúpus eritematoso e penfogóide bolhosa. - distúrbios do sistema digestivo no qual IL-4 e/ou IgE desempenham um papel, incluindo, por exemplo, úlceras, inflamação gástrica, inflamação da mucosa, colite ulcerativa, doença de Crohn, doença do intestino inflamatória e outros distúrbios do sistema digestivo no qual IL-4 e/ou IgE desempenham um papel; - doenças em que IL-4 e/ou IGE são superproduzidas e consideradas como contribuidoras de patologia, incluindo, por exemplo, esclerose sistêmica (escleroderma), artrite séptica e artrite reativa.

Em outro aspecto a presente invenção fornece um composto da presente invenção, por exemplo, uma hlL-4 mAB, para uso como medicamento, por exemplo, contra doenças mediadas por IL-4 e/ou IgE, por exemplo, doenças alérgicas, por exemplo, dermatite atópica, asma alérgica, rinite alérgica, preferivelmente dermatite atópica.

Em outro aspecto, a presente invenção fornece o uso da presente invenção de um composto da presente invenção o qual é selecionado do grupo consistindo que hlL-4 mAB, um fragmento seu e um análogo seu.

Para uso farmacêutico, um composto da presente invenção inclui um ou mais, preferivelmente um, compostos da presente invenção, por exemplo, uma combinação de dois ou mais compostos da presente invenção.

Em outro aspecto, a presente invenção fornece o uso de um composto da presente invenção para a produção de um medicamento, por exemplo, uma composição farmacêutica, para o tratamento de doenças mediadas por IL-4 e/ou IgE, por exemplo, doenças alérgicas, por exemplo, rino-conjuntivite alérgica, dermatite atópica, asma alérgica, rinite alérgica, preferivelmente asma alérgica ou dermatite atópica, tais como dermatite atópica.

Em outro aspecto a presente invenção fornece o uso de um composto da presente invenção para a produção de um medicamento, por exemplo, uma composição farmacêutica, para o tratamento de uma doença conforme descrita acima, por exemplo, selecionada do grupo consistindo em dermatite atópica, asma alérgica e rinite alérgica.

Em um outro aspecto, a presente invenção fornece um composto da presente invenção para os usos conforme mencionados acima, em que o composto da presente invenção é selecionado do grupo consistindo em hlL-4 mAB„ um fragmento seu e um análogo seu, Foi, por exemplo, determinado que a constante de afinidade de um composto da presente invenção, por exemplo, um hlL-4 mAB, um fragmento seu ou um análogo seu, para a IL-4 humana, seja igual ou inferior a 800 pM, por exemplo, igual ou inferior a 200 pM, tal como cerca de 30 pM a cerca de 200 pM, preferivelmente de cerca de 45 pM a cerca de 170 pM, tal como cerca de 100 pM, mais preferivelmente cerca de 50 pM, tal como cerca de 45 pM.

Foi, por exemplo, também determinado que a constante de afinidade de um composto da presente invenção, por exemplo, um hlL-4 mAB, um fragmento seu ou um análogo seu, para a IL-4 humana, é de 30 pM a 200 pM, preferivelmente de 45 pM a 170 pM, tal como 10 pM, mais preferivelmente 50 pM, tal como 45 pM. É, dessa forma, indicado que para o tratamento de doenças mediadas por IL-4, os compostos da presente invenção podem ser administrados a mamíferos superiores, por exemplo humanos, por métodos similares de administração em dosagens similares do que s convencionalmente usadas com anticorpos monoclonais.

Em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo o qual se liga a uma IL-4 humana com uma constante de dissociação igual ou menor do que 200 pM, por exemplo, de 30 a 200 pM.

Em um outro aspecto da presente invenção o anticorpo pra os usos conforme mencionados acima é o hlL-4 mAB, um fragmento seu ou um análogo seu o qual se liga a uma IL-4 humana com uma constante de dissociação Kd igual ou menor do que 200 pm, por exemplo, 30 a 200 pM.

Em outro aspecto, a presente invenção fornece um método para o tratamento de doenças as quais são mediadas por uma IL-4 e/ou IgE, por exemplo, doenças alérgicas, por exemplo, dermatite atópica, asma alérgica, rinite alérgica, preferivelmente dermatite atópica, cujo tratamento compreende a administração a um indivíduo necessitado de tal tratamento de uma quantidade eficaz de um composto da presente invenção; por exemplo, na forma de uma composição farmacêutica.

Em um outro aspecto da presente invenção o composto da presente invenção é administrado juntamente com outro agente farmaceutica-mente ativo que simultaneamente ou em sequência.

Tratamento inclui tratamento e profilaxia.

Para tal tratamento, a dosagem apropriada irá, claramente, variar dependendo, por exemplo, da natureza química e dos dados farmacociné-ticos de um anticorpo da presente invenção empregado, do hospedeiro individual, da forma de administração e da natureza e da severidade das condições sendo tratadas. Entretanto, em geral, para resultados satisfatórios em mamíferos superiores, por exemplo humanos, uma dose diária indicada está na faixa de, por exemplo, cerca de 0,1 ng/Kg a, por exemplo, cerca de 10 mg/Kg, tais como de, por exemplo, cerca de 100 ng/Kg a, por exemplo, cerca de 2 mg/Kg de um composto da presente invenção; convenientemente administrada, por exemplo, em doses divididas de até quatro vezes por dia. Um composto da presente invenção pode ser administrado por qualquer via convencional, por exemplo, parentalmente, por exemplo, incluindo administração intravenosa, intradérmica, intramuscular, subcutânea ou intranasal, soluções injetáveis ou suspensões ou pó inalável.

Em outro aspecto a presente invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo um composto da presente invenção em associação com pelo menos um excipiente farmacêutico, por exemplo, veículo e/ou diluente apropriado, por exemplo, incluindo enchimentos, ligantes, de-sintegradores, condicionadores de fluxo, lubrificantes, açúcares e adoçantes, fragrâncias, conservantes, estabilizantes, agentes umidificantes e/ou emulsi-ficantes, solubilizantes, sais para regular a pressão osmótica e/ou tampões.

Em outro aspecto, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica de acordo com a presente invenção compreendendo ainda outro agente farmaceuticamente ativo.

Tais composições podem ser produzidas de acordo, por exemplo, de maneira análoga a um método como convencional, por exemplo, por processos de mistura, granulação, revestimento, dissolução ou liofilização. Formas de dosagem unitárias podem conter, por exemplo, de, por exemplo, cerca de 0,5 mg a,por exemplo, cerca de 1.000 mg, tais como 1 mg a cerca de 500 mg.

Um composto da presente invenção pode ser usado para tratamento farmacêutico de acordo com a presente invenção sozinho ou em combinação com um ou mais outros agentes farmaceuticamente ativos. Tais outros agentes farmaceuticamente ativos incluem, por exemplo, outros anticorpos, por exemplo, tais como anticorpos neutralizadores de IgE, citocinas ou receptores de citocinas, os quais são escolhidos de acordo com a condição particular a ser tratada.

Combinações incluem combinações fixas, nas quais dois ou mais agentes farmaceuticamente ativos estão na mesma formulação; kits, nos quais dois ou mais agentes farmaceuticamente ativos em formulações separadas são vendidos na mesma embalagem, por exemplo, com instrução para a co-administração; e combinações livres nas quais os agentes farmaceuticamente ativos são embalados separadamente, mas instruções para a administração simultânea ou sequencial são dadas.

Em outro aspecto, a presente invenção também fornece um método para diagnosticar alergias e outras condições associadas com excesso de produção de IgE num humano o qual compreende a) o contato da amostra e um fluido biológico com um anticorpo da presente invenção, e b) a testagem para a ocorrência de ligação entre o referido anticorpo e a IL-4 humana.

Nos seguintes exemplos todas as temperaturas estão em graus Celsius (°C) e não estão corrigidas.

As seguintes abreviaões são usadas: Tampão FACS PBS, FCS 2% e NaN3 0,2% FCS Soro de bezerro fetal FITC Isotiocianato de fluoresceína IC50 Concentração inibitória KLH hemocianina de lapa de buraco de fechadura mAB Anticorpo monoclonal MTX Metotrexato PBS Salina tamponada com fosfato slgD Superfície de imunoglobulina D rmlL-3 lnterleucina-3 de murino recombinante rhlL-4 lnterleucina-4 humana recombinante rhlL-13 lnter!eucina-13 humana recombinante rpm Ciclos por minuto RPMI Instituto Médico Memorial Roswell Park RT Temperatura ambiente Tampão-TF 272 mM de sacarose, 1 mM de MgCh, 7 mM de tampão fosfato pH 7,4 EXEMPLOS EXEMPL01 a) Produção de anticorpos Plasmídeos que codificam as regiões variáveis da sequência SEQ ID NO: 5 ou 7 (= cadeia pesada) e a seqüência SEQ ID NO: 6 ou 8 (= cadeia leve) do anticorpo são clonados nos cassetes de expressão para cadeias leves capa humanas e cadeias pesadas lgG1 humanas. As regiões determinantes de especificidade são combinadas com elementos necessários para gerar anticorpos monoclonais completos, isto é, promotor, seqüência líder e sítios de doação de união para unir aos éxons da região constante do anticorpo que são necessários para a expressão de proteínas de imunoglobulina funcionais. Os cassetes de região variável para os anticorpos de cadeia pesada e leve que codificam as seqüências líder, região variável e os sítios doadores de união de iniciadores 3’ para unir os éxons da região constante CH1-CH4 e capa, são transferidos para vetores de expressão de mamíferos HC (vetor de cadeia pesada, lgG1 humana) e LC (vetor de cadeia leve, capa humana). A cadeia leve contendo plasmídeo e a cadeia pesada contendo plasmídeo são introduzidas nas células Sp2/0 numa tentativa de co- transfecção. Por exemplo, para a transfecção, células em fase exponencial de crescimento com uma viabilidade de cerca de 95% são usadas. Células são lavadas duas vezes com tampão-TF gelado e a concentração de células é ajustada para 2 x 107 células em tampão-TF. 0,8 ml_ de suspensão celular obtida foi misturado com 15 pg cada com palsmídeo da cadeia pesada e da cadeia leve e colocado em gelo por 10 minutos. A transfecção é feita por eletroporação usando o Pulsador de Gene Biorad (280 V e 25 pF). Depois da eletroporação, as células são colocadas no gelo por 15 minutos, transferidas para 50 mL de meio de cultura gelado e incubadas por 1 dia a 37 °C e C02 a 5%. Para amplificação clonal, as células resistentes G418 obtidas são cultivadas na presença de MTX 200 nM. Uma alíquota da reunião de células heterogêneas é semeada em placas de 96 cavidades numa densidade dona! de 1 célula viável/cavidade em meio de cultura contendo 200 nM de MTX, permitindo a seleção de populações clonais de células amplificadas. A clonagem de diluição limitante é aplicada para gerar linhagens de células clonais depois da amplificação e adaptação às condições de cultura sem soro. As células são semeadas em placas de 96 cavidades numa concentração de 0,5 célula/cavidade. As cavidades foram varridos microscopicamente para a clonalidade um dia depois da semeadura. Somente anticorpos mono-clonais são usados para testagem adicional. O anticorpo obtido compreende uma seqüência de aminoácidos de SEQID NO: 1 e SEQ ID NO: 2. b) Medições de afinidade Medições de afinidade de mABs humanos da presente invenção foram executadas num instrumento BIAcore® 2000. IgG anti-humana é revestida num pastilha de sensor BIAcore CM-5 (BIAcore) de forma que a aplicação de quantidades definidas de mABs humanos resulta na captura nessa superfície preparada e, dessa forma, numa alteração de propriedades de refração que são medidas. Uma aplicação subseqüente de rhlL-4 resulta numa outra alteração das propriedades de refração, as quais permitem a determinação da taxa de associação (Kon, taxa de ocupação) assim como a taxa de dissociação (Kotf, taxa de desocupação) e o produto dessas duas, a afinidade (Kd, constante de dissociação, dada em pM) de acordo com o programa de computador BIAevaluation 3.0. Usando várias concentrações de rhlL-4 num tampão BIA, uma afinidade de 43 pM de um mAB conforme definido por CDRs conforme descrita na reivindicação 2a) é determinada. c) Determinação do potencial inibitório em loE mediada por IL-4 d) Fontes celulares As células B humanas são isoladas do sangue periférico, respectivamente, plasma coagulado por centrifugação por densidade Ficoll-paque, seguido por separação magnética com contas de MACS (Miltenyi Biotech) específicas para o CD19 humano ou o CD22 humano num dispositivo AutoMACS Células B humanas naturais são similarmente isoladas usando anticorpos F(ab’)2 de cabra marcados com slgD FITC anti-humano seguido por contas MACS anti-FÍTC. c2) Cultura celular/manutenção Transfectantes (Transfectantes BaF/3 carregando a ll_-4Ra e a IL-13Rct1) são cultivados em meio RPMI 1640 suplementado com Glutamax (Invitrogen), FCS 10%, penicilina/estreptomicina 1% e rhlL-4 10 ng/mL (Novartis). As células são divididas 1:1 semanaimente, lavadas com meio fresco sem rhlL-4 e mantidas em tal meio de um dia para o outro (= células em jejum).

Culturas de células B (simples) ex vivo humanas são incubadas em meio X-Vivo (Cambrex, XV15) suplementado com Glutamax, FCS 10%, penicilina/estreptomicina 1% em placas de 96 cavidades (Costar). c3) Ensaio de proliferação de células BAF Células em jejum conforme descritas em b) são coletadas, lavadas com meio fresco, contadas e ajustadas para 2 x 105 células/mL das quais 100 μΙ_ por cavidade são distribuídos em placas de 96 cavidades (Costar). Para séries de titulação as citocinas rhlL-4, rhlL-13 e rmlL-3 são preparadas em 4 vezes a concentração final desejada no mesmo meio.

Para séries de titulação os anticorpos ou são usados como so-brenadantes de cultura celular com concentrações determinadas de ELISA ou de material puro em 4 vezes as concentrações desejadas no mesmo meio. As pré-diluições das citocinas e dos anticorpos são misturadas em volumes iguais e 100 pL da pré-mistura são transferidos para a cavidade preparada com células. Os controles são ajustados para a proliferação de fundo {meio sem citocina e sem anticorpo = 100% de inibição) e a proliferação máxima (meio somente com citocina = 0% de inibição).

Depois da incubação de um dia para o outro a 37 °C na presença de 5% de CO2, [meti!-3H]timidina (Amersham TRK120) 1 pCi por cavidade é adicionado em 10 pL de meio e incubado por 8 horas. Depois de um ciclo de congelamento/descongelamento, as células são colhidas das placas em esteiras filtrantes usando um coletor Tomtek. As esteiras de filtros são secas num forno de microondas por 2 minutos a 650 W e transferidas para uma bolsa de amostra juntamente com uma folha de Cera de Cintilação Meltilex (Wallac). A cera é fundida pelo filtro e os filtros obtidos são colocados dentro de cassetes apropriados e inseridos num leitor micro-beta (Wallac) para a contagem de cintilação usando um programa medindo 30 segundos por campo e extrapolando para contagem por minutos.

Uma IC50 de 30 pM é medida nesse sistema de teste para 0 anticorpo.

c4) Super-requlação da CD23 induzida por IL-4 em células B Células B separadas por MACS são ajustadas para 0,5 -1 x 106 células/mL em XV15 e plaqueadas para fora em 100 μΙ_ por cavidade de placas de fundo redondo de 96 cavidades. Citocinas (1 ng/mL final) e mAb (2 pg/mL - 2 ng/mL final) são pré-diluídos e pré-misturados conforme descrito acima e adicionados em 100 pL para alcançar um volume fina! de 200 pL.

Depois de cultivar de um dia para 0 outro a 37 °C na presença de CO2 a 5%, as células são transferidas para placas de 96 cavidades (Costar) e centrifugadas a 2200 rpm (~ 1000 x g) por 1 minuto depois de expulsar 0 sobrenadante lavado com tampão FACS. mAbs marcados com florocromo [HLA-DR FITC (Cal-tag#MHLDR01 1:800), CD19 PE (Caltag#MHCD1904 1:200) e CD23 APC (Caltag#MHCD2305 1:200)] são preparados em tampão FACS e distribuídos em 50 pL por cavidade. Depois de 30 - 60 minutos de incubação à RT, as cavidades são cheias com tampão FACS, centrifugadas e o resíduo de cen-trifugação obtido é lavado com tampão FACS. As células são ressuspensas em tampão FACS com 2 μg/mL de iodeto de propídio e analisadas num ci-tômetro de fluxo FacsCalibur de laser duplo (BD Biosciences). As células são confinadas de acordo com as suas propriedades de espalhamento para frente e espalhamento para os lados assim como por sua capacidade de excluir iodeto de propídio e sua expressão de CD19. As intensidades de fluorescência média e a percentagem de células acima de um limiar arbitrário (ajustado em células não-induzidas) na expressão de CD23 são determinadas. A expressão de linha de base (100% de inibição) é determinada em células sem citocina, enquanto que 0% de inibição é ajustado em células incubadas com citocina, mas sem mAb.

Uma IC50 de 334 pM para esse anticorpo é determinada para a expressão de CD23 induzida por IL-4 nas células conforme descrito acima na presença de 70 pM de IL-4 recombinante humana. c5) Produção de ΙαΕ induzida por IL-4 por células B naturais Células B naturais magneticamente sorteadas são ajustadas para 3 x 105 células por mL em XV15 e plaqueadas para fora em 100 μι. por cavidade de placas de 96 cavidades numa ordem de 6 x 6 no centro da placa, envolvidas por cavidades cheias com PBS durante os 10 dias de cultivo a 37 °C na presença de C02 a 5%. Cada placa é preparada por mAb a ser testado, consistindo em 3 cavidades cada de controles não-índuzidos e induzidos e repetições em quintuplicata de titulações mAb iniciando a 7 pg/mL e correndo em diluição de 3 vezes até concentrações finais de 29 ng/mL adicionadas em pré-diluição de 50 pL quatro vezes concentradas. Condições de indução são rhlL-4 a 20 ng/mL mais mAb anti-CD40 (Novartis) em concentrações finais de 0,5 pg/mL também adicionadas em 50 pL de pré-diluições quatro vezes concentradas. Concentrações de IgE são determinadas no fim do período de cultura por um método de ELISA de sanduíche padrão.

Uma IC50 de 2806 pM para esse anticorpo é determinada para IgE induzida por IL4 nas células, conforme descrito acima.

Exemplos de 2 a 6: Anticorpos são obtidos de maneira análoga conforme descrito no exemplo 1 e compreendem as seguintes seqüências de aminoácidos: Exemplo 2 é um anticorpo compreendendo a seqüência de aminoácidos SEQ ID NO: 9 e SEQ ID NO: 10.

Exemplo 3 é um anticorpo compreendendo a seqüência de aminoácidos SEQ ID NO: 17 e SEQ ID NO: 18.

Exemplo 4 é um anticorpo compreendendo a seqüência de aminoácidos SEQ ID NO: 25 e SEQ ID NO: 26.

Exemplo 5 é um anticorpo compreendendo a seqüência de aminoácidos SEQ ID NO: 33 e SEQ ID NO: 34.

Exemplo 6 é um anticorpo compreendendo a seqüência de aminoácidos SEQ ID NO: 41 e SEQ ID NO: 42.

Tabela 1 resume os valores de IC50 dos anticorpos nos vários sistemas de teste conforme descrito no Exemplo 1 b a c. ______________TABELA 1:____________________________ REIVINDICAÇÕES

Claims (10)

1. Anticorpo específico para IL-4 humana, o qual se liga à IL-4 humana com uma constante de dissociação Kd igual ou inferior a 800 pM, caracterizado pelo fato de que um primeiro domínio compreendendo na sequência as regiões hipervariáveis CDR1, CDR2 e CDR3 e um segundo domínio compreendendo, na sequência, as regiões hipervariáveis CDR1’, CDR2’ e CDR3’ selecionadas do grupo consistindo em um anticorpo, em que a) o referido CDR1 tem a sequência de aminoácidos Gly-Phe-Thr-Phe-Ser-Ser-Tyr-Ala-Met-His, o referido CDR2 tem a sequência de aminoácidos Phe-lle-Trp-Asp-Asp-Gly-Ser-Phe-Lys-Tyr-Tyr-Ala-Glu-Ser-Val-Lys-Gly, o referido CDR3 tem a sequência de aminoácidos Glu-Gly-Ser-Trp-Ser-Pro-Asp-lle-Phe, o referido CDR1’ tem a sequência de aminoácidos Ser-GIn-Gly-Ile-Ser-Arg-Ala, o referido CDR2’ tem a sequência de aminoácidos Asp-Ala-Ser, o referido CDR3’ tem a sequência de aminoácidos Phe-Asn-Ser- Tyr-Pro-lle.

2. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende a) um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1 e um polipeptídeo de SEQ ID NO: 2.

3. Polinucleotídeos isolados, caracterizados pelo fato de que codificam a sequência de aminoácidos de um anticorpo como definido na reivindicação 1 ou 2.

4. Polinucleotídeos, de acordo com a reivindicação 3, caracterizados pelo fato de que compreendem a) Um polinucleotídeo da SEQ ID NO: 5 e um polinucleotídeo da SEQ ID NO: 6.

5. Vetor de expressão, caracterizado pelo fato de que compreende polinucleotídeos como definidos na reivindicação 3.

6. Uso de um anticorpo como definido na reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de ser como um produto farmacêutico.

7. Uso de um anticorpo como definido na reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de ser para a produção de um medicamento para o tratamento de doenças mediadas pela IL-4 e/ou IgE.

8. Uso, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a doença é selecionada do grupo consistindo em dermatite atópica, asma alérgica e rinite alérgica.

9. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 8, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo monoclonal de IL-4.

10. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um anticorpo como definido na reivindicação 1 ou 2 em associação com, pelo menos, um excipiente farmaceuticamente aceitável.