BRPI0207447B1 - polipeptídeo recombinante isolado, seu uso e processo de produção, vetor de expressão, célula hospedeira microbiana transgênica, composição farmacêutica, uso da dita composição, métodos de detecção e kit - Google Patents
polipeptídeo recombinante isolado, seu uso e processo de produção, vetor de expressão, célula hospedeira microbiana transgênica, composição farmacêutica, uso da dita composição, métodos de detecção e kitInfo
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Abstract
"polipeptídeos e fragmentos de dna correspondentes de streptococcus pyogenes úteis como componentes de vacina". a presente invenção está relacionada a antígenos, mas particularmente antígenos de patógeno bacteriano de streptococcus pyogenes (também chamado streptococcus de grupo a (gas)) que são úteis como componentes de vacina para profilaxia, terapia e/ou diagnóstico.
Description
POLIPEPTÍDEO RECOMBINANTE ISOLADO, SEU USO E PROCESSO DE PRODUÇÃO, VETOR DE EXPRESSÃO, CÉLULA HOSPEDEIRA MICROBIANA TRANSGÊNICA, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, USO DA DITA COMPOSIÇÃO, MÉTODOS DE DETECÇÃO E KIT
CAMPO DA INVENÇÃO [001] A presente invenção é relacionada a polipeptideos de Streptococcus pyoqenes (Estreptococos de Grupo A) que pode ser usada para prevenir, diagnosticar e/ou tratar infecção estreptocócica.
FUNDAMENTO DA INVENÇÃO [002] Estreptococos são bactérias gram (+) que são diferenciadas por antigenos A a O de carboidrato especifico que são encontrados na superfície celular. Isolados de S. pyogenes são também distinguidos por antigenos de proteína M tipo-específicos. Proteínas M são fatores de virulência importantes que são altamente variáveis nos pesos moleculares e nas sequências. De fato, mais que 80 tipos de proteína M foram identificados com base em diferenças antigênicas. [003] S. pyogenes é responsável por diversos tipos de infecção, incluindo faringite, erisipela e impetigo, escarlatina, e doenças invasivas tal como bacteremia e fascite necrotizante. Um ressurgimento de doença invasiva nos anos recentes tem sido documentado em vários países, incluindo aqueles na América do Norte e Europa. Embora o organismo seja sensível a antibióticos, a alta taxa de ataque e rápida instalação de sepsis resulta em alta morbidade e mortalidade. [004] Para desenvolver uma vacina que protegerá hospedeiros de infecção por S. pyogenes, os esforços se focalizaram em fatores de virulência tal como as proteínas M tipo-específicas. No entanto, descobriu-se que a porção amino terminal de Proteínas M induz anticorpos de reação cruzada que reagiram com miocárdio, tropomiosina, miosina, e vimentina humanos, que podem estar relacionados a doenças autoimunes. Outros têm usado técnicas recombinantes para produzir proteínas híbridas complexas que contêm peptídeos de terminal amino de proteínas M de sorotipos diferentes. No entanto, uma vacina segura contendo todos os sorotipos de S. pyogenes será de produção e padronização altamente complexas. [005] Em adição aos antígenos específicos a sorotipo, outras proteínas de S. pyogenes geraram interesse como potenciais candidatos para vacina. A peptidase C5a, que é expressa por pelo menos 40 sorotipos de S. pyogenes, mostrou ser imunogênica em camundongos, mas sua capacidade de reduzir o nível de colonização nasofaríngea foi limitada. Outros pesquisadores também se focalizaram nas exotoxinas pirogênicas estreptocócicas que parece possuírem um importante papel na patogênese da infecção. A imunização com essas proteínas evitou os sintomas fatais de choque tóxico, mas não evitou a colonização. [006] A Universidade de Oklahoma estabeleceu um projeto de sequenciamento de genoma para S. pyogenes cepa Ml GAS (http://dnal.chem.ou.edu/strep.html). [007] Portanto permanece uma necessidade não resolvida por antígenos de S. pyogenes que possam ser usados como componentes de vacinas para a profilaxia e/ou terapia de infecção por S. pyogenes.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO [008] De acordo com um aspecto, a presente invenção fornece um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptideo tendo pelo menos 70% de identidade a um segundo polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2 ou fragmentos ou análogos desse. [009] De acordo com um aspecto, a presente invenção está relacionada a polipeptideos que compreendem uma sequência de aminoácidos de Seq Id. No: 2 ou fragmentos ou análogos desses. [010] Em outros aspectos, são fornecidos polipeptideos codificados por polinucleotideos da invenção, composições farmacêuticas, vetores que compreendem polinucleotideos, da invenção operacionalmente ligados a uma região de controle de expressão, assim como células hospedeiras transfectadas com os vetores e processos para produção de polipeptideos que compreendem o cultivo das células hospedeiras sob condições adequadas para expressão.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS [011] A Figura 1 representa a sequência de DNA do gene BVH-P7 do serotipo Ml de cepa ATCC7 002 94 de S. pyogenes; Seq Id. No: 1. A porção sublinhada da sequência representa a região que codifica para o peptideo lider. [012] A Figura 2 representa a proteína BVH-P7 de sequência de aminoácidos do sorotipo Ml de cepa ATCC700294 de S. pyogenes; Seq Id. No: 2. A sequência sublinhada representa o peptideo líder de 21 aminoácidos. [013] A Figura 3 descreve a comparação da sequência de aminoácidos prevista das estruturas de leitura aberta de BVH-P7 de Spy74 (Seq Id. No: 3), Spy70 (Seq Id. No: 4), Spy69 (Seq Id. No: 5), Spy68 (Seq Id. No: 6), Spy 60 (Seq Id. No: 7), ATCC12357 (Seq Id. No: 8), ATCC700294 (Seq Id. No: 2), cepas de S. pyogenes pelo uso do programa Clustal W de programa de análise de sequência MacVector (versão 6.5). Debaixo do alinhamento, há uma linha de consenso onde os caracteres * e . indicam residuos de aminoácidos idênticos e similares, respectivamente.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO [014] A presente invenção fornece polinucleotideos purificados e isolados, que codificam polipeptideos estreptocócicos que podem ser usados para diagnosticar, prevenir e/ou tratar Infecção estreptocócica. [015] De acordo com um aspecto, a presente invenção fornece um polinucleotideo isolado que codifica um polipeptideo tendo pelo menos 70% de identidade a um segundo polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2 ou fragmentos ou análogos desse. [016] De acordo com um aspecto, a presente invenção fornece um polinucleotideo isolado que codifica um polipeptideo tendo pelo menos 80% de identidade a um segundo polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2 ou fragmentos ou análogos desse. [017] De acordo com um aspecto da presente invenção é fornecido um polipeptideo isolado que compreende um polipeptideo escolhido de: (a) um polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2; (b) um polipeptideo que compreende um fragmento antigênico ou imunogênico tendo pelo menos 10 residuos de aminoácido contíguos do polipeptideo de (a) ; (c) um polipeptideo que compreende um análogo antigênico ou imunogênico tendo pelo menos 70% de identidade ao polipeptideo de (a) ou (b) ; (d) um polipeptideo que compreende um análogo antigênico ou imunogênico tendo pelo menos 95% de identidade ao polipeptideo de (a) ou (b) ; (e) um polipeptideo capaz de gerar anticorpos tendo especificidade de ligação para o polipeptideo de qualquer um de (a), (b), (c) e (d); (f) uma porção que sustenta epitopo do polipeptideo de qualquer um de (a) , (b) , (c) e (d) ; (g) o polipeptideo de qualquer um de (a) , (b) , (c) , (d) , (e) e (f) onde o resíduo Met de terminal-N é deletado; e (h) o polipeptideo de qualquer um de (a) , (b) , (c) , (d) , (e) , (f) e (g) onde a sequência de aminoácidos secretora é deletada; [018] De acordo com um outro aspecto da presente invenção é fornecido um polipeptideo isolado que compreende um polipeptideo escolhido de: (a) um polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2; (b) um polipeptideo tendo pelo menos 7 0% de identidade ao polipeptideo de (a) ; (c) um polipeptideo tendo pelo menos 95% de identidade ao polipeptideo de (a) ; (d) um polipeptideo capaz de gerar anticorpos tendo especificidade de ligação para o polipeptideo de (a); (e) uma porção que sustenta epitopo do polipeptideo de (a) ; (f) o polipeptideo de qualquer um de (a), (b), (c), (d) e (e) onde o resíduo Met de terminal-N é deletado; e (g) o polipeptideo de qualquer um de (a), (b), (c), (d), (e) e (f) onde a sequência de aminoácidos secretora é deletada. [019] De acordo com um aspecto, a presente invenção fornece um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptideo tendo pelo menos 90% de identicidade a um segundo polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2 ou fragmentos ou análogos desse. [020] De acordo com um aspecto, a presente invenção fornece um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptideo tendo pelo menos 95% de identidade a um segundo polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2 ou fragmentos ou análogos desse. [021] De acordo com um aspecto, a presente invenção está relacionada a polipeptideos caracterizados pela sequência de aminoácidos que compreende Seq Id. No: 2 ou fragmentos ou análogos desses. [022] De acordo com um aspecto, a presente invenção fornece um polinucleotídeo que codifica uma porção que sustenta um epítopo de um polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2 ou fragmentos ou análogos desse. [023] De acordo com um aspecto, a presente invenção está relacionada a uma porção que sustenta um epítopo de um polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2 ou fragmentos ou análogos dessa. [024] De acordo com um aspecto, a presente invenção fornece um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptideo tendo pelo menos 70% de identidade a um segundo polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2. [025] De acordo com um aspecto, a presente invenção fornece um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptideo tendo pelo menos 80% de identidade a um segundo polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2. [026] De acordo com um aspecto, a presente invenção fornece um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptideo tendo pelo menos 90% de identidade a um segundo polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2. [027] De acordo com um aspecto, a presente invenção fornece um polinucleotideo isolado que codifica um polipeptideo tendo pelo menos 95% de identidade a um segundo polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2. [028] De acordo com um aspecto, a presente invenção está relacionada a polipeptideos caracterizados pela sequência de aminoácidos que compreende Seq Id. No: 2. [029] De acordo com um aspecto, a presente invenção fornece um polinucleotideo que codifica uma porção que sustenta um epitopo de um polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2. [030] De acordo com um aspecto, a presente invenção está relacionada a porções que sustentam um epitopo de um polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2. [031] De acordo com um aspecto, a presente invenção fornece um polinucleotideo isolado que compreende um polinucleotideo escolhido de: (a) um polinucleotideo que codifica um polipeptideo tendo pelo menos 7 0% de identidade a um segundo polipeptideo que compreende uma sequência escolhida de: Seq Id. No: 2 ou fragmentos ou análogos desse; (b) um polinucleotideo que codifica um polipeptideo tendo pelo menos 95% de identidade a um segundo polipeptideo que compreende uma sequência escolhida de: Seq Id. No: 2 ou fragmentos ou análogos desse; (c) um polinucleotideo que codifica um polipeptideo que compreende uma sequência escolhida de: Seq Id. No: 2 ou fragmentos ou análogos desse; (d) um polinucleotideo que codifica um polipeptideo capaz de gerar anticorpos tendo especificidade de ligação para um polipeptideo que compreende uma sequência escolhida de: Seq Id. No: 2 ou fragmentos ou análogos desse; (e) um polinucleotideo que codifica uma porção que sustenta um epitopo de um polipeptideo que compreende uma sequência escolhida de Seq Id. No: 2 ou fragmentos ou análogos desse; (f) um polinucleotideo que compreende uma sequência escolhida de Seq Id. No: 1 ou fragmentos ou análogos desse; (g) um polinucleotideo que é complementar a um polinucleotideo em (a), (b), (c), (d), (e) ou (f) [032] De acordo com um aspecto, a presente invenção fornece um polinucleotideo isolado que compreende um polinucleotideo escolhido de: (a) um polinucleotideo que codifica um polipeptideo tendo pelo menos 7 0% de identidade a um segundo polipeptideo que compreende uma sequência escolhida de: Seq Id. No: 2; (b) um polinucleotideo que codifica um polipeptideo tendo pelo menos 95% de identidade a um segundo polipeptideo que compreende uma sequência escolhida de: Seq Id. No: 2; (c) um polinucleotideo que codifica um polipeptideo que compreende uma sequência escolhida de: Seq Id. No: 2; (d) um polinucleotideo que codifica um polipeptideo capaz de despertar anticorpos tendo especificidade de ligação para um polipeptideo que compreende uma sequência escolhida de: Seq Id. No: 2; (e) um polinucleotideo que codifica uma porção que sustenta um epitopo de um polipeptideo que compreende uma sequência escolhida de Seq Id. No: 2; (f) um polinucleotideo que compreende uma sequência escolhida de Seq Id. No: 1; (g) um polinucleotídeo que é complementar a um polinucleotideo em (a), (b), (c), (d), (e) ou (f). [033] De acordo com um aspecto, a presente invenção fornece um polipeptídeo isolado que compreende um polipeptideo escolhido de: (a) um polipeptideo tendo pelo menos 70% de identidade a um segundo polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2, ou fragmentos ou análogos desse; (b) um polipeptideo tendo pelo menos 95% de identidade a um segundo polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2, ou fragmentos ou análogos desse; (c) um polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2, ou fragmentos ou análogos desse; (d) um polipeptideo capaz de despertar anticorpos tendo especificidade de ligação para um polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2, ou fragmentos ou análogos desse; (e) uma porção que sustenta um epitopo de um polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2, ou fragmentos ou análogos dessa; (f) o polipeptideo de (a) , (b) , (c) , (d) , (e) ou (f) onde o resíduo Met de terminal-N é deletado; (g) o polipeptídeo de (a) , (b) , (c) , (d) , (e) ou (f) onde a sequência de aminoácidos secretora é deletada. [034] De acordo com um aspecto, a presente invenção fornece um polipeptídeo isolado que compreende um polipeptídeo escolhido de: (a) um polipeptídeo tendo pelo menos 70% de identidade a um segundo polipeptídeo que compreende Seq Id. No: 2; (b) um polipeptídeo tendo pelo menos 95% de identidade a um segundo polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2; (c) um polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2; (d) um polipeptideo capaz de despertar anticorpos tendo especificidade de ligação para um polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2; (e) uma porção que sustenta um epitopo de um polipeptideo que compreende Seq Id. No: 2; (f) o polipeptideo de (a) , (b) , (c) , (d) , (e) ou (f) onde o resíduo Met de terminal-N é deletado; (g) o polipeptideo de (a) , (b) , (c) , (d) , (e) ou (f) onde a sequência de aminoácidos secretora é deletada. [035] Aqueles experientes na técnica perceberão que a invenção inclui moléculas de DNA, ou seja, polinucleotídeos e suas sequências complementares que codificam análogos, tais como mutantes, variantes, homólogos e derivados de tais polipeptídeos, como descrito aqui na presente aplicação de patente. A invenção também inclui moléculas de RNA que correspondem às moléculas de DNA da invenção. Em adição às moléculas de DNA e RNA, a invenção inclui os polipeptídeos correspondentes e anticorpos monoespecíficos que se ligam especificamente a tais polipeptídeos. [036] Em uma modalidade adicional, os polipeptídeos de acordo com a presente invenção são antigênicos. [037] Em uma modalidade adicional, os polipeptídeos de acordo com a presente invenção são imunogênicos. [038] Em uma modalidade adicional, os polipeptídeos de acordo com a presente invenção podem elicitar uma resposta imune em um hospedeiro. [039] Em uma modalidade adicional, a presente invenção também está relacionada a polipeptídeos que são capazes de despertar anticorpos tendo especificidade de ligação aos polipeptideos da presente invenção como acima definido. [040] Um anticorpo que "tem especificidade de ligação" é um anticorpo que reconhece e se liga ao polipeptideo selecionado mas que não reconhece substancialmente nem se liga a outras moléculas em uma amostra, por exemplo, uma amostra biológica. A ligação especifica pode ser medida usando um ensaio de ELISA no qual o polipeptideo selecionado é usado como um antigeno. [041] De acordo com a presente invenção, "proteção" nos estudos biológicos é definida por um aumento significativo na curva, taxa ou período de sobrevivência. Análise estatística usando o teste de Log rank para comparar curvas de sobrevivência, e teste exato de Fisher para comparar taxas de sobrevivência e número de dias até a morte, respectivamente, podem ser úteis para calcular valores de P e determinar se a diferença entre os dois grupos é estatisticamente significativa. Valores de P de 0,05 são vistos como não significativos. [042] Em um aspecto adicional da invenção são fornecidos fragmentos antigênicos/imunogênicos dos polipeptideos da invenção, ou de análogos desses. [043] Os fragmentos da presente invenção devem incluir uma ou mais de tais regiões epitópicas ou serem suficientemente similares a tais regiões para reter suas propriedades antigênicas/imunogênicas. Portanto, para fragmentos de acordo com a presente invenção o grau de identidade é talvez irrelevante, já que eles podem ser 100% idênticos a uma parte particular de um polipeptideo ou análogo desse como acima descrito. A presente invenção também fornece fragmentos tendo pelo menos 10 resíduos de aminoácidos contíguos das sequências de polipeptídeos da presente invenção. Em uma modalidade, pelo menos 15 resíduos de aminoácidos contíguos. Em uma modalidade, pelo menos 20 resíduos de aminoácidos contíguos. [044] O ponto chave, novamente, é que o fragmento retenha as propriedades antigênicas/imunogênicas. [045] A pessoa experiente perceberá que análogos dos polipeptídeos da invenção também terão uso no contexto da presente invenção, ou seja como material antigênico/ imunogênico. Assim, para proteínas de exemplo ou polipeptídeos que incluem uma ou mais adições, deleções, substituições ou semelhantes, são englobados pela presente invenção. [046] Como aqui utilizado, "fragmentos", "análogos" ou "derivados" dos polipeptídeos da invenção incluem aqueles polipeptídeos nos quais um ou mais dos resíduos de aminoácidos são substituídos com um resíduo de aminoácidos conservado ou não conservado (preferivelmente conservado) e que pode ser natural ou não natural. Em uma modalidade, derivados e análogos de polipeptídeos da invenção terão cerca de 70% de identidade com aquelas sequências ilustradas nas figuras ou fragmentos desses. Ou seja, 70% dos resíduos são os mesmos. Em uma modalidade adicional, polipeptídeos terão mais que 80% de identidade. Em uma modalidade adicional, polipeptídeos terão mais que 85% de identidade. Em uma modalidade adicional, polipeptídeos terão mais que 90% de identidade. Em uma modalidade adicional, polipeptídeos terão mais que 95% de identidade. Em uma modalidade adicional, polipeptídeos terão mais que 99% de identidade. Em uma modalidade adicional, análogos de polipeptideos da invenção terão menos que cerca de 20 substituições, modificações, ou deleções de residuo de aminoácido e mais preferentemente menos que 10. [047] Essas substituições são aquelas tendo uma influência minima sobre a estrutura secundaria e natureza hidropática do polipeptideo. Substituições preferidas são aquelas conhecidas na técnica como conservadas, ou seja, os residuos substituídos partilham propriedades físicas e químicas tais como hidrofobicidade, tamanho, carga ou grupos funcionais. Essas incluem substituições tais como aquelas descritas por Dayhoff, M. em Atlas, of Protein Sequence and Structure 5, 197 8 e por Argos, P. in EMBO J. 8, 779-785,1989. Por exemplo, aminoácidos, sejam naturais ou não naturais, que pertencem a um dos grupos a seguir representam mudanças conservadoras: ala, pro, gly, gin, asn, ser, thr, vai; cys, ser, tyr, thr; vai, ile, leu, met, ala, phe; lys, arg, orn, his; e phe, tyr, trp, his. [048] As substituições preferidas também incluem substituições de D-enantiômeros para os L-aminoácidos correspondentes. [049] Em uma abordagem alternativa, os análogos dos polipeptideos da invenção compreendem as substituições reveladas na Figura 3. [050] Em uma abordagem alternativa, os análogos podem ser proteínas de fusão, que incorporam porções que tornam a purificação mais fácil, por exemplo por rotulagem eficaz do polipeptideo desejado. Pode ser necessário remover o "rótulo" ou pode ser o caso que o polipeptídeo de fusão por si retenha suficiente antigenicidade para ser útil. [051] A percentagem de homologia é definida como a soma da percentagem de identidade mais a percentagem de similaridade ou conservação de tipo de aminoácido. [052] Em uma modalidade, análogos de polipeptideos da invenção terão cerca de 70% de identidade com aquelas sequências ilustradas nas figuras ou fragmentos desses. Ou seja, 7 0% dos resíduos são os mesmos. Em uma modalidade adicional, polipeptideos terão mais que 75% de homologia. Em uma modalidade adicional, polipeptideos terão mais que 80% de homologia. Numa modalidade adicional, polipeptideos terão mais que 85% de homologia. Numa modalidade adicional, polipeptideos terão mais que 90% de homologia. Em uma modalidade adicional, polipeptideos terão mais que 95% de homologia. Em uma modalidade adicional, polipeptideos terão mais que 99% de homologia. Em uma modalidade adicional, análogos de polipeptideos da invenção terão menos que cerca de 20 substituições, modificações ou deleções de resíduo de aminoácido e mais preferentemente menos que 10. [053] Uma pessoa pode usar um programa tal como o programa CLUSTAL para comparar sequências de aminoácidos. Esse programa compara sequências de aminoácidos e encontra o alinhamento ótimo por inserção de espaços em cada sequência como adequado. É possível calcular identidade ou similaridade de aminoácidos (identidade mais conservação de tipo de aminoácido) para um alinhamento ótimo. Um programa tal como BLASTx irá alinhar o maior alongamento de sequências similares e determinar um valor para a combinação. É portanto possível obter uma comparação onde várias regiões de similaridade são encontradas, cada uma tendo uma pontuação diferente. Ambos os tipos de análise de identidade são contemplados na presente invenção. [054] Em uma abordagem alternativa, os análogos ou derivados podem ser polipeptideos de fusão, que incorporam porções que tornam a purificação mais fácil, por exemplo, por rotulagem eficaz da proteína ou polipeptídeo desejado. Pode ser necessário remover o "rótulo" ou pode ser o caso em que o polipeptideos de fusão retenha por si antigenicidade suficiente para ser útil. [055] É bem conhecido que é possível a escolha de um polipeptídeo antigênico para identificar regiões epitópicas, ou seja, aquelas regiões que são responsáveis pela antigenicidade ou imunogenicidade do polipeptídeo. Métodos para realização de tal escolha são bem conhecidos na técnica. Portanto, os fragmentos da presente invenção devem incluir uma ou mais de tais regiões epitópicas ou serem suficientemente similares a tais regiões para reter suas propriedades antigênicas/imunogênicas. [056] Assim, para fragmentos de acordo com a presente invenção o grau de identidade é talvez irrelevante, já que eles podem ser 100% idênticos a uma parte particular de um polipeptídeo, análogo como acima descrito. [057] Portanto, o que é importante para análogos, derivados e fragmentos é que eles possuam pelo menos um graus de antigenicidade/imunogenicidade da proteína ou polipeptídeo do qual eles são derivados. [058] Também estão incluídos polipeptideos que se fundiram a esses outros compostos que alteram as propriedades biológicas ou farmacológicas dos polipeptideos, ou seja, polietilenoglicol (PEG) para aumentar a meia vida; sequências de aminoácidos lideres ou secretoras para facilitação da purificação; prepro- e pro-sequências; e (poli) sacarideos. [059] Além disso, naquelas situações onde regiões de aminoácidos são polimórficas, pode ser desejável variar um ou mais aminoácidos particulares para se assemelhar de forma mais eficaz aos diferentes epitopos das diferentes cepas de estreptococos. [060] Ademais, os polipeptideos da presente invenção podem ser modificados por acilação de terminal -NH2 (por exemplo, acetilação ou amidação de ácido tioglicólico, amidação de terminal carboxi, por exemplo, com amônia ou metilamina) para fornecer estabilidade, aumento de hidrofobicidade para ligação ou união a um suporte ou a outra molécula. [061] Também são contemplados homo ou heteromultimeros de polipeptideo dos fragmentos e análogos do polipeptideo. Essas formas poliméricas incluem, por exemplo, um ou mais polipeptideos que tenham sido entrecruzados com agentes de entrecruzamento tais como avidina/biotina, gluteraldeido ou dimetilsuperimidato. Tais formas poliméricas também incluem polipeptideos que contêm dois ou mais tandem ou sequências contíguas invertidas, produzidos por mRNA multicistrônicos gerados por tecnologia de DNA recombinante. Em uma modalidade adicional, a presente invenção também está relacionada a polipeptideos quiméricos que compreendem um ou mais polipeptideos ou fragmentos ou análogos desses como definido nas figuras da presente aplicação. [062] Em uma modalidade adicional, a presente invenção também está relacionada a polipeptideos quiméricos que compreendem dois ou mais polipeptideos tendo uma sequência escolhida de Seq Id. No: 2, ou fragmentos ou análogos desses; desde que os polipeptideo sejam ligados de modo a formar um polipeptideo quimérico. [063] Em uma modalidade adicional, a presente invenção também está relacionada a polipeptideos quiméricos que compreendem dois ou mais polipeptideos tendo uma sequência escolhida de Seq Id. No: 2, desde que os polipeptideo sejam ligados de modo a formar um polipeptideo quimérico. [064] Preferivelmente, um fragmento, análogo ou derivado de um polipeptideo da invenção compreenderá pelo menos uma região antigênica, ou seja, pelo menos um epitopo. [065] A fim de obter a formação de polímeros antigênicos (ou seja, multímeros sintéticos), os polipeptideos podem ser utilizados tendo grupos bishaloacetil, nitroarilhaletos, ou semelhantes, onde os reagentes são específicos para grupos tio. Portanto, a ligação entre dois grupos mercapto dos diferentes peptídeos pode ser uma ligação única ou pode ser composta de um grupo de ligação de pelo menos dois, tipicamente pelo menos quatro, e não mais do que 16, mas usualmente não mais do que cerca de 14 átomos de carbono. [066] Em uma modalidade em particular, fragmentos e análogos de polipeptideo da invenção não contêm um resíduo de iniciação de metionina (Met). Preferivelmente, os polipeptideos não irão incorporar uma sequência líder ou secretora (sequência sinalizadora). A porção sinalizadora de um polipeptideo da invenção pode ser determinada de acordo com técnicas estabelecidas de biologia molecular. Em geral, o polipeptideo de interesse pode ser isolado de uma cultura de estreptococo e subsequentemente sequenciado para determinar o resíduo inicial da proteína madura e dessa forma a sequência do polipeptideo maduro. [067] Entende-se que polipeptídeos podem ser produzidos e/ou usados sem seu códon de iniciação (metionina ou valina) e/ou sem seu peptídeo líder para favorecer a produção e purificação de polipeptídeos recombinantes. Sabe-se que genes de clonagem sem sequências que codificam peptídeos líderes restringirão os polipeptídeos ao citoplasma de E. coli e facilitarão sua recuperação (Glick, B. R. e Pasternak, J. J. (1998) Manipulation of gene expression in prokaryotes). Em "Molecular biotechnology: Principies and applications of recombinant DNA", 2a. edição, ASM Press, Washington DC, p. 109-143). [068] De acordo com um outro aspecto da invenção, também são fornecidos (i) uma composição de matéria que contém um polipeptideo da invenção, junto com um transportador, diluente, ou adjuvante; (ii) uma composição farmacêutica que compreende um polipeptideo da invenção e um transportador, diluente, ou adjuvante; (iii) uma vacina que compreende um polipeptideo da invenção e um transportador, diluente, ou adjuvante; (iv) um método para indução de uma resposta imune contra Streptococcus, em um hospedeiro, por administração ao hospedeiro, de uma quantidade imunogenicamente eficaz de um polipeptideo da invenção para elicitar uma resposta imune, por exemplo, uma resposta imune protetora ao Streptococcus; e particularmente, (v) um método para prevenir e/ou tratar uma infecção por Streptococcus, por administração de uma quantidade profilática ou terapêutica de um polipeptideo da invenção a um hospedeiro em necessidade. [069] De acordo com um outro aspecto da invenção, são fornecidos (i) uma composição de matéria que contém um polinucleotideo da invenção, junto com um transportador, diluente, ou adjuvante; (ii) uma composição farmacêutica que compreende um polinucleotideo da invenção e um transportador, diluente, ou adjuvante; (iii) um método to indução de uma resposta imune contra Strepcococcus, em um hospedeiro, por administração ao hospedeiro, de uma quantidade imunogenicamente eficaz de um polinucleotideo da invenção para elicitar uma resposta imune, por exemplo, uma resposta imune protetora ao Streptococcus; e particularmente, (iv) um método para prevenir e/ou tratar a Infecção estreptocócica, por administração de uma quantidade profilática ou terapêutica de um polinucleotideo da invenção a um hospedeiro em necessidade. [070] Antes da imunização, os polipeptideos da invenção podem ser também ligados ou conjugados a proteínas transportadoras tais como a toxina tetânica, toxina diftérica, antígeno de superfície de vírus da hepatite B, antígeno VPl do vírus da poliomielite ou qualquer outra toxina ou antígeno viral ou bacteriano ou quaisquer outras proteínas adequadas para estimular o desenvolvimento de uma resposta imune mais forte. Essa ligação ou conjugação pode ser feita quimicamente ou geneticamente. Uma descrição mais detalhada da conjugação peptídeo-transportador está disponível em Van Regenmortel, Μ. Η. V., Briand J. P., Muller S., Plaue S., Synthetic Polipeptides as antigens in Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, Vol. 19 (ed.) Burdou, R. H. & Van Knippenberg P. H. (1988), Elsevier New York. [071] De acordo com um outro aspecto, são fornecidas composições farmacêuticas que compreendem um ou mais Polipeptideos estreptocócicos da invenção numa mistura com um adjuvante farmaceuticamente aceitável. Adjuvantes adequados incluem (1) formulações de emulsão óleo-em-água tais como MF5TM, SAFTM, RibiTM ; (2) adjuvante de Freund completo ou incompleto; (3) sais, ou seja, A1K(S04)2, AlNa(SC>4)2/· A1NH4 (SO4) 2/ Al (OH) 3, A1P04, silica, caulim; (4) derivados de saponina tal como Stimulon™ ou partículas geradas desses tal como ISCOMs (complexos imuno-estimulantes); (5) citocinas tais como interleucinas, interferons, fator estimulante de colônia de macrófago (M-CSF) , fator de necrose tumoral (TNF); (6) outras substâncias tais como polinucleotídeos de carbono, ou seja, poli IC e poli AU, toxina colérica desintoxicada (CTB) e toxina instável ao calor de E. coli para indução de imunidade de mucosa. Uma descrição mais detalhada de adjuvante está disponível em uma revisão por Μ. Z. I Khan e cols. Em Pharmaceutical Research, vol. 11, No. 1 (1994) pp2-ll, e também em uma outra revisão por Gupta e cols., em Vacina, Vol. 13, No. 14, ppl263-1276 (1995) e em WO 99/24578, que estão aqui incorporadas por referência, adjuvantes preferidos incluem Quila™, QS21TM, Alhydrogel™ e Adjuphos™. [072] Composições farmacêuticas da invenção podem ser administradas por via parenteral por injeção, infusão rápida, absorção nasofaríngea, absorção dérmica, ou bucal ou oral. [073] As composições de vacina da invenção são usadas para o tratamento ou profilaxia de infecção por estreptococo e/ou doenças e sintomas mediados por infecção estreptocócica como descrito em P.R. Murray (ed, principalmente), E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover e R.H. Yolken. Manual of Clinicai Microbiology, ASM Press, Washington, D.C., sexta edição, 1995, p. 1482 que são aqui incorporados por referência. Em uma modalidade, composições farmacêuticas da presente invenção são usadas para a profilaxia ou tratamento de faringite, erisipelas e impetigo, escarlatina, e doenças invasivas tais como bacteremia e fascite necrotizante e também choque tóxico. Em uma modalidade, as composições farmacêuticas da invenção são usadas para o tratamento ou profilaxia de infecção e/ou doenças por Streptococcus e sintomas mediados por infecção por Streptococcus, em particular S. pneumoniae, streptococcus do grupo A (Streptococcus pyogenes) , streptococcus do grupo B (GBS ou S. agalactiae), S. pneumoniae, S. disgalactiae, S. uberis, S. nocardia, bem como Staphylococcus aureus. Em uma modalidade adicional, a infecção por estreptococo é S. pyogenes. [074] Em uma modalidade adicional, a invenção fornece um método para profilaxia ou tratamento de Infecção estreptocócica em um hospedeiro suscetível a infecção por Streptococcus que compreende administração ao referido hospedeiro de uma quantidade terapêutica ou profilática de uma composição da invenção. [075] Como usado na presente aplicação, o termo "hospedeiro" inclui mamíferos. Em uma modalidade adicional, o mamífero é humano. [076] Em uma modalidade particular, composições farmacêuticas são administradas a esses hospedeiros em riso de infecção estreptocócica tais como bebês, idosos e hospedeiros imunocomprometidos. As composições farmacêuticas são preferivelmente em forma de dosagem unitária de cerca de 0,001 a 100 ocg/kg (antígeno/peso corporal) e mais preferivelmente 0,01 a 10 ocg/kg, e mais preferivelmente 0,1 a 1 ocg/kg, 1 a 3 vezes com um intervalo de cerca de 1 a 6 semanas entre imunizações. [077] As composições farmacêuticas são preferivelmente em forma de dosagem unitária de cerca de 0,1 ocg a 10 mg e mais preferivelmente 1 ocg a 1 mg e ainda mais preferivelmente 10 a 100 ocg 1 a 3 vezes com um intervalo de cerca de 1 a 6 semanas entre imunizações. [078] De acordo com outro aspecto, são fornecidos polinucleotídeos que codificam polipeptídeos caracterizados pela sequência de aminoácidos que compreende Seq Id. No: 2 ou fragmentos ou análogos dessas. [079] Em uma modalidade, polinucleotídeos são aqueles ilustrados em Seq Id. No: 1 que podem incluir as estruturas de leitura aberta (ORF), que codificam os polipeptídeos da invenção. [080] Deve ser observado que as sequências de polinucleotídeo ilustradas nas figuras podem ser alteradas sem degenerar códons, embora ainda codifique os polipeptídeos da invenção. Consequentemente, a presente invenção também fornece polinucleotídeos que hibridizam às sequências de polinucleotídeos acima descritas nessa (ou as sequências complementares dessa) tendo 50% de identidade entre sequências. Em uma modalidade, pelo menos 7 0% de identidade entre sequências. Em uma modalidade, pelo menos 75% de identidade entre sequências. Em uma modalidade, pelo menos 80% de identidade entre sequências. Em uma modalidade, pelo menos 85% de identidade entre sequências. Em uma modalidade, pelo menos 90% de identidade entre sequências. Em uma modalidade adicional, polinucleotideos são hibridizáveis sob condições rigorosas, ou seja, tendo pelo menos 95% de identidade. Em uma modalidade adicional, mais que 97% de identidade. [081] Condições rigorosas adequadas para hibridização podem ser facilmente determinadas por uma pessoa experiente na técnica (veja, por exemplo, Sambrook e cols., (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a edição, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989; Current Protocols in Molecular Biology, (1999) Editado por Ausubel F.M. e cols., John Wiley and Sons, Inc., N.Y.). [082] Numa modalidade adicional, a presente invenção fornece polinucleotideos que hibridizam sob condições rigorosas a: (a) uma sequência de DNA que codifica um polipeptideo ou (b) o complemento de uma sequência de DNA que codifica um polipeptideo; onde o polipeptideo compreende Seq Id. No: 2 ou fragmentos ou análogos desses. [083] Em uma modalidade adicional, a presente invenção fornece polinucleotideos que hibridizam sob condições rigorosas a: (a) uma sequência de DNA que codifica um polipeptideo ou (b) o complemento de uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo; onde o polipeptídeo compreende Seq Id. No: 2. [084] Em uma modalidade adicional, a presente invenção fornece polinucleotídeos que hibridizam sob condições rigorosas a (a) uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo ou (b) o complemento de uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo; onde o polipeptídeo compreende pelo menos 10 resíduos de aminoácidos contíguos de um polipeptídeo que compreende Seq Id. No: 2, ou fragmentos ou análogos desse. [085] Em uma modalidade adicional, a presente invenção fornece polinucleotídeos que hibridizam sob condições rigorosas a (a) uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo ou (b) o complemento de uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo; onde o polipeptídeo compreende pelo menos 10 resíduos de aminoácidos contíguos de um polipeptídeo que compreende Seq Id. No: 2. em uma modalidade adicional, polinucleotídeos são aqueles que codificam polipeptídeos da invenção ilustrados em Seq Id. No: 2 ou fragmentos ou análogos desses. [086] Em uma modalidade adicional, polinucleotídeos são aqueles ilustrados em Seq Id. No: 1 que codifica polipeptídeos da invenção ou fragmentos ou análogos desse. [087] Em uma modalidade adicional, polinucleotídeos são aqueles que codificam polipeptídeos da invenção ilustrados em Seq Id. No: 2. [088] Em uma modalidade adicional, polinucleotídeos são aqueles ilustrados em Seq Id. No: 1 que codifica polipeptideos da invenção. [089] Como será facilmente observado por alguém experiente na técnica, polinucleotideos incluem tanto DNA como RNA. [090] A presente invenção também inclui polinucleotideos complementares aos polinucleotideos descritos na presente aplicação. [091] Em um aspecto adicional, os polinucleotideos que codificam polipeptideos da invenção, ou seus fragmentos, análogos, ou derivados, podem ser usados em um método de imunização de DNA. Ou seja, eles podem ser incorporados em um vetor que seja replicável e passível de expressão sob injeção, produzindo desse modo o polipeptídeo antigênico in vivo. Por exemplo, os polinucleotideos podem ser incorporados em um vetor de plasmídeo sob o controle do promotor de CMV que é funcional em células eucarióticas. Preferentemente o vetor é injetado de forma intramuscular. [092] De acordo com um outro aspecto, é fornecido um processo para a produção de polipeptideos da invenção por técnicas recombinantes por expressão de um polinucleotídeo que codifica o polipeptídeo em uma célula hospedeira e recuperação do produto de polipeptídeo expresso.
Alternativamente, os polipeptideos podem ser produzidos de acordo com técnicas químicas sintéticas estabelecidas, ou seja, síntese de fase de solução ou de fase sólida de oligopeptídeos que são ligados para produzir o peptídeo completo (ligação em bloco). [093] Métodos gerais para obtenção e avaliação de polinucleotideos e polipeptideos são descritos nas seguintes referências: Sambrook e cols., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a edição, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989; Current Protocols in Molecular Biology, Editado por Ausubel F.M. e cols., John Wiley and Sons, Inc., New York; PCR Cloning Protocols, from Molecular Cloning to Genetic Engineereing, Editado por White B.A., Humana Press, Totowa, New Jersey, 1997, 490 páginas; Protein Purification, Principies and Practices, Scopes R.K., Springer-Verlag, Nova Iorque, 3a Edição, 1993; Current Protocols in Immunology, Editado por Coligan J.E. e cols., John Wiley & Sons Inc., New York, que são aqui incorporados por referência. [094] Para produção recombinante, as células hospedeiras são transfectadas com vetores que codificam o polipeptideo, e então cultivadas em um meio nutriente modificado de forma apropriada para ativação de promotores, seleção de transformantes ou amplificação dos genes. Vetores adequados são aqueles que são viáveis e replicáveis no hospedeiro escolhido e incluem sequências de DNA cromossômicas, não-cromossômicas e sintéticas, ou seja, plasmideos bacterianos, DNA de fago, baculovirus, plasmideos de levedura, vetores derivados de combinações de plasmideos e DNA de fago. A sequência de polipeptideos pode ser incorporada no vetor no locus apropriado usando enzimas de restrição de tal forma que ele seja operacionalmente ligado a uma região de controle de expressão que compreende um promotor, um locus de ligação de ribossomo (região de consenso ou sequência de Shine-Dalgarno), e opcionalmente um operador (elemento de controle). Pode-se selecionar componentes individuais da região de controle de expressão que sejam adequados para um certo hospedeiro e vetor de acordo com princípios de biologia molecular estabelecidos (Sambrook e cols., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a edição, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989; Current Protocols in Molecular Biology, Editado por Ausubel F.M. e cols., John Wiley and Sons, Inc., New York, aqui incorporados por referência). Promotores adequados incluem, mas não se limitam ao promotor LTR ou SV40, promotores lac, tac, ou trp de E. coli e promotor lambda PL de fago. Os vetores preferivelmente incorporarão uma origem de replicação bem como marcadores de seleção, ou seja, gene de resistência a ampicilina. Vetores bacterianos adequados incluem pET, pQE70, pQE60, pQE-9, pDlO phagescript, psiX174, pbluescript SK, pbsks, pNH8A, pNH16a, pNH18A, pNH46A, ptrc99a, pKK223-3, pKK233-3, pDR540, pRIT5 e vetores eucarióticos pBlueBacIII, pWLNEO, pSV2CAT, pOG44, pXTl, pSG, pSVK3, pBPV, pMSG e pSVL. As células hospedeiras podem ser bacterianas, ou seja, de E, coli, Bacillus subtilis, Streptomyces; fúngicas, ou seja, de Aspergillus niger, Aspergillus nidulins; de levedura, ou seja, de Saccharomyces ou eucarióticas, ou seja, CHO, COS. [095] Sob expressão do polipeptídeo em cultura, as células são tipicamente colhidas por centrifugação e então rompidas por meios físicos ou químicos (se o polipeptídeo expresso não for secretado no meio) e o extrato bruto resultante é retido para isolar o polipeptídeo de interesse. A purificação do polipeptídeo do meio de cultura ou do lisado pode ser obtida por técnicas estabelecidas dependendo das propriedades do polipeptídeo, ou seja, usando precipitação de sulfato de amônio ou de etanol, extração por ácido, cromatografia por troca de ânion ou cátion, cromatografia por fosfocelulose, cromatografia por interação hidrofóbica, cromatografia por hidroxilapatita e cromatografia por lectina. A purificação final pode ser obtida usando-se HPLC. [096] O polipeptideo pode ser expresso com ou sem uma sequência lider ou de secreção. No primeiro caso o lider pode ser removido usando-se processamento pós-tradução (veja US 4.431.739; 4.425.437 e 4.338.397 aqui incorporadas por referência) ou ser removido quimicamente subsequente à purificação do polipeptideo expresso. [097] De acordo com um aspecto adicional, os polipeptideos de estreptococo da invenção podem ser usados em um teste diagnóstico para infecção por Streptococus, em particular infecção por S. pneumoniae. Vários métodos diagnósticos são possíveis, por exemplo, para a detecção do organismo estreptococo em uma amostra biológica, o seguinte procedimento pode ser seguido: a) Obtenção de uma amostra biológica de um paciente; b) Incubação de um anticorpo, ou seu fragmento, reativo com um polipeptideo de estreptococo da invenção com a amostra biológica para formar uma mistura; e c) Detecção do anticorpo ou do fragmento especificamente ligado na mistura o que indica a presença de estreptococo. [098] Alternativamente, um método para detecção de anticorpo específico para um antígeno de estreptococo em uma amostra biológica contendo ou suspeita de conter o referido anticorpo, pode ser realizado como se segue: a) obtenção de uma amostra biológica de um hospedeiro; b) incubação de um ou mais polipeptideos de Streptococcus da invenção ou fragmentos desses com a amostra biológica para formar a mistura; e c) Detecção de antigeno ou do fragmento especificamente ligado ou fragmento na mistura o que indica a presença de anticorpo especifico para Streptococcus. [099] Aquele experiente na técnica irá reconhecer que este teste diagnóstico pode tomar várias formas, incluindo um teste imunológico tal como um ensaio de imunoabsorção ligado à enzima (ELISA), um radioimunoensaio ou um ensaio de aglutinação de látex, essencialmente para determinar se anticorpos específicos para a proteína estão presentes em um organismo. [100] As sequências de DNA que codificam os polipeptídeos da invenção também podem ser usadas para projetar marcador de DNA para uso na detecção da presença de estreptococo em uma amostra biológica suspeita de conter tal bactéria. O método de detecção dessa invenção compreende: a) Obtenção de uma amostra biológica de um paciente; b) Incubação de um ou mais marcadores de DNA tendo uma sequência de DNA que codifica um polipeptídeo da invenção, ou seus fragmentos, com a amostra biológica para formar uma mistura; e c) detecção do marcador de DNA especificamente ligado na mistura, o que indica a presença da bactéria estreptococo. [101] Os marcadores de DNA dessa invenção também podem ser usados para detectar estreptococo circulante, ou seja, ácidos nucléicos de S. pyogenes em uma amostra, por exemplo, usando uma reação em cadeia de polimerase, como um método de diagnosticar infecções por estreptococo. 0 marcador pode ser sintetizado usando-se técnicas convencionais e pode ser imobilizado em uma fase sólida, ou pode ser rotulado com um rótulo detectável. Um marcador de DNA de preferência para essa aplicação é um oligômero que tem uma sequência complementar a pelo menos 6 nucleotideos contíguos dos polipeptídeos de Streptococcus pyogenes da invenção. [102] Outro método diagnóstico para a detecção de estreptococo em um paciente compreende: a) rotulação de um anticorpo reativo com um polipeptídeo da invenção ou seu fragmento com um rótulo detectável; b) administração do anticorpo rotulado ou fragmento rotulado ao hospedeiro; e c) detecção de anticorpo rotulado ou fragmento rotulado especificamente ligado no hospedeiro, o que indica a presença de estreptococo. [103] De acordo com um aspecto, a presente invenção fornece o uso de um anticorpo para tratamento e/ou profilaxia de infecções estreptocócicas. [104] Um aspecto adicional da invenção é o uso dos polipeptídeos de estreptococo da invenção como imunógenos para produção de anticorpos específicos para o diagnóstico e em particular para o tratamento de infecção por estreptococo. Anticorpos adequados podem ser determinados usando-se métodos de rastreamento apropriados, por exemplo, medindo-se a capacidade de um anticorpo em particular para proteger passivamente contra infecção por estreptococo em um modelo de teste. Um exemplo de um modelo animal é o modelo de camundongo descrito nos exemplos dessa. 0 anticorpo pode ser o anticorpo inteiro ou um fragmento de ligação de antigeno deste e pode pertencer a qualquer classe de imunoglobulina. 0 anticorpo ou fragmento pode ser de origem animal, especificamente de origem mamífera e mais especificamente de origem murídea, de rato ou humana. Ele pode ser um anticorpo natural ou um fragmento deste, ou, se desejado, um anticorpo recombinante ou fragmento de anticorpo recombinante. 0 termo anticorpo recombinante ou fragmento de anticorpo recombinante significa um anticorpo ou fragmento de anticorpo que foi produzido usando-se técnicas de biologia molecular. 0 anticorpo ou fragmentos de anticorpo pode ser policlonal, ou preferivelmente monoclonal. Ele pode ser específico para inúmeros epítopos associados com os polipeptídeos de Streptococcus pyogenes, mas preferentemente é específico para um. [105] Um aspecto adicional da invenção é o uso dos anticorpos direcionados aos polipeptídeos de estreptococo da invenção para imunização passiva. Pode-se usar os anticorpos descritos na presente aplicação. [106] Um aspecto adicional da invenção é um método para imunização, por onde um anticorpo despertado por um polipeptídeo da invenção é administrado a um hospedeiro em uma quantidade suficiente para fornecer uma imunização passiva. [107] Em uma modalidade adicional, a invenção fornece o uso de uma composição farmacêutica na manufatura de um medicamento para o tratamento profilático ou terapêutico de infecção estreptocócica. [108] Em uma modalidade adicional, a invenção fornece um kit que compreende um polipeptideo da invenção para detecção ou diagnóstico de infecção estreptocócica. [109] A menos que definido de outro modo, todos os termos técnicos e científicos usados nessa têm o mesmo significado como comumente entendido por alguém de experiência comum na técnica à qual essa invenção pertence. Todas as publicações, aplicações de patente, patentes e outras referências aqui mencionadas são incorporadas por referência em suas totalidades. Em caso de conflito, a presente especificação, incluindo definições, irá controlar. Adicionalmente, os materiais, métodos e exemplos são somente ilustrativos e não visam ser limitante. EXEMPLO 1 [110] Esse exemplo ilustra as características moleculares e de clonagem do gene BVH-P7 e polipeptideo correspondente. [111] A região codificadora do gene BVH-P7 de S.
Claims (11)
1. Polipeptideo recombinante isolado caracterizado por ser escolhido a partir de: (a) um polipeptideo recombinante isolado que consiste na sequência de aminoácidos do aminoácido 22 ao aminoácido 1008, como estabelecida na SEQ ID NO: 2; ou (b) um polipeptideo recombinante isolado que consiste em uma sequência de aminoácidos pelo menos 99% idêntica à sequência de aminoácidos do aminoácido 22 ao aminoácido 1008, como estabelecida na SEQ ID NO: 2, em que o polipeptideo recombinante isolado de (a) ou (b) é acoplado a uma proteína transportadora que estimula uma resposta imune ao polipeptideo recombinante.
2. Vetor de expressão caracterizado por compreender um polinucleotídeo recombinante que compreende a sequência de nucleotídeos estabelecida na SEQ ID NO: 1, e em que o referido polinucleotídeo recombinante é operavelmente ligado a uma região de controle de expressão heteróloga que compreende um promotor.
3. Célula hospedeira microbiana transgênica caracterizada por ser transfectada com o vetor de expressão como definido na reivindicação 2.
4. Processo para a produção de um polipeptideo recombinante codificado pelo polinucleotídeo recombinante do vetor de expressão como definido na reivindicação 2, caracterizado por compreender o cultivo da célula hospedeira microbiana, como definida na reivindicação 3, sob condições adequadas para expressão do referido polipeptideo.
5. Composição farmacêutica caracterizada por compreender: (a) (i) o polipeptideo recombinante isolado, como definido na reivindicação 1; (ii) um polipeptideo recombinante isolado que consiste na sequência de aminoácidos do aminoácido 22 ao aminoácido 1008, como estabelecida na SEQ ID NO: 2; ou (iii) um polipeptideo recombinante isolado que consiste em uma sequência de aminoácidos pelo menos 99% idêntica à sequência de aminoácidos do aminoácido 22 ao aminoácido 1008, como estabelecida na SEQ ID NO: 2 e; (b) um veiculo, diluente ou adjuvante farmaceuticamente aceitável.
6. Uso da composição, como definida na reivindicação 5, caracterizado pelo fato de ser para a manufatura de um medicamento para tratar faringite, erisipela e impetigo, escarlatina, bacteremia, fascite necrotizante e choque tóxico
7. Uso da composição, como definida na reivindicação 5, caracterizado pelo fato de ser para a manufatura de um medicamento para tratar uma infecção por bactéria Streptococcus pyogenes.
8. Método de detecção de Streptococcus em uma amostra biológica de um hospedeiro suscetível a infecção estreptocócica caracterizado por compreender: (a) a incubação de um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo reativo com o polipeptideo recombinante, como definido na reivindicação 1, com uma amostra biológica para formar uma mistura; e (b) a detecção de anticorpo especificamente ligado ou fragmento de ligação de antigeno ligado na mistura, o que indica a presença de Streptococcus.
9. Método de detecção de um anticorpo especifico ao antigeno do Streptococcus em uma amostra biológica caracterizado por compreender: (a) a incubação do polipeptideo recombinante isolado, como definido na reivindicação 1, com uma amostra biológica para formar uma mistura; e (b) a detecção do polipeptideo recombinante especificamente ligado na mistura, o que indica a presença de anticorpo especifico para o antigeno de Streptococcus.
10. Uso do polipeptideo recombinante isolado, como definido na reivindicação 1, caracterizado por ser para a manufatura de um medicamento para o tratamento profilático ou terapêutico de infecções estreptocócicas.
11. Kit caracterizado por compreender o polipeptideo recombinante isolado, como definido na reivindicação 1, para detecção ou diagnóstico de infecções estreptocócicas.
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