BR112021010936A2 - Conjugados anticorpo-fármaco de herboxidieno e métodos de uso - Google Patents

Conjugados anticorpo-fármaco de herboxidieno e métodos de uso Download PDF

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BR112021010936A2
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compound
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neoantigen
antigen
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Nathan Fishkin
Thiwanka Samarakoon
James Palacino
Kenzo Arai
Yoshihiko Kotake
Shinya Okubo
Norio Murai
Masayuki Miyano
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Abstract

conjugados anticorpo-fármaco de herboxidieno e métodos de uso. a presente invenção refere-se a compostos ligante-fármaco e conjugados anticorpo-fármaco que se ligam a alvos oncológicos humanos. os compostos ligante-fármaco e conjugados anticorpo-fármaco compreendem uma porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno. a revelação se refere adicionalmente a métodos e composições para uso no tratamento de distúrbios neoplásicos pela administração dos conjugados anticorpo-fármaco fornecidos no presente documento

Description

CONJUGADOS ANTICORPO-FÁRMACO DE HERBOXIDIENO E MÉTODOS DE USO
[0001] A presente revelação reivindica o benefício de prioridade de Pedido de Patente Provisório dos US nº 62/779.400, depositado em 13 de dezembro de 2018; Pedido de Patente Provisório US nº 62/779.406, depositado em 13 de dezembro de 2018; e Pedido de Patente Provisório US nº 62/941.220, depositado em 27 de novembro de 2019. Todos os pedidos anteriormente mencionados estão incorporados no presente documento a título de referência em sua totalidade.
[0002] A presente revelação se refere a conjugados anticorpo- fármaco (ADCs) que compreendem um modulador de splicing de herboxidieno e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, por exemplo, que se liga a um alvo de antígeno oncológico humano. A revelação se refere adicionalmente a métodos e composições úteis no tratamento ou diagnóstico de cânceres que expressam um antígeno alvo e/ou são passíveis de tratamento por interrupção de splicing de RNA, bem como métodos de preparação dessas composições.
[0003] A maior parte dos genes de codificação de proteínas no genoma humano é composta por vários éxons (regiões codificantes) que são separados por íntrons (regiões não codificantes). A expressão do gene resulta em um único RNA mensageiro precursor (pré-mRNA). As sequências de íntrons são subsequentemente removidas do pré-mRNA por um processo chamado splicing, que resulta no RNA mensageiro maduro (mRNA). Com a inclusão de diferentes combinações de éxons, o splicing alternativo dá origem a mRNAs que codificam isoformas de proteínas distintas.
[0004] O splicing do RNA é catalisado pelo spliceossoma, um complexo multiproteína-RNA dinâmico composto por cinco pequenos RNAs nucleares (snRNAs U1, U2, U4, U5 e U6) e proteínas associadas. O spliceossoma se agrupa em pré-mRNAs para estabelecer uma cascata dinâmica de múltiplas interações de RNA e proteínas que catalisam a excisão dos íntrons e a ligação dos éxons (Matera e Wang (2014) Nat Rev Mol Cell Biol. 15(2):108 a 121). O acúmulo de evidências associou as doenças humanas à desregulação no splicing de RNA que afetam muitos genes (Scotti e Swanson (2016) Nat Rev Genet. 17(1):19 a 32).
[0005] O spliceossoma é um alvo importante na biologia do câncer. Vários estudos já documentaram alterações significativas no perfil de splicing das células cancerosas, bem como nos próprios fatores de splicing (Agrawal et al. (2018) Curr Opin Genet Dev. 48:67 a 74). O splicing alternativo pode levar à inclusão/exclusão de éxon diferencial, retenção de íntron ou uso de sítios de splicing críptico (Seiler et al. (2018) Cell Rep. 23(1):282 a 296). Em conjunto, esses eventos são responsáveis por alterações funcionais que podem contribuir para a tumorigênese ou resistência à terapia (Siegfried e Karni (2018) Curr Opin Genet Dev. 48:16 a 21).
[0006] Certos produtos naturais podem ligar o complexo de spliceossoma SF3b. Essas pequenas moléculas modulam o splicing, promovendo-se a retenção de íntron e/ou salto de éxon (Teng et al. (2017) Nat Commun. 8:15.522). Por exemplo, herboxidieno, um policetídeo de ocorrência natural isolado de Streptomyces sp. A7847 (Isaac et al. (1992) J. Org. Chem. 57:7220-26) e derivados do mesmo mostraram modular o splicing. Consultar, por exemplo, Imaizumi et al. (2017) J. Antibiot. 70:675-79. Uma porção significativa dos transcritos resultantes contém códons de parada prematuros que ativam a degradação de mRNA mediada por mutação sem sentido (NMD). Além disso, visto que o splicing canonical é prejudicado, os transcritos canonicais são consideravelmente reduzidos, o que pode afetar negativamente a função e a viabilidade celular. Por esta razão, os moduladores de splicing tornaram-se uma classe promissora de fármacos para o tratamento de câncer (Puthenveetil et al. (2016) Bioconjugate Chem. 27:1.880 a 1.888).
[0007] O receptor 2 do fator de crescimento epidérmico humano de proto-oncogene (HER2) codifica um receptor de tirosina quinase transmembranar que pertence à família do receptor do fator de crescimento epidérmico humano (EGFR) (King et al. (1985) Science 229: 9746). A superexpressão de HER2 permite a ativação constitutiva de vias de sinalização do fator de crescimento, como a via PI3K-AKT-mTOR e, portanto, serve como um condutor oncogênico em vários tipos de cânceres, incluindo aproximadamente 20% dos carcinomas de mama invasivos (Slamon et al. (1989) ) Science 244: 70712; Gajria e Chandarlapaty (2011) Expert Rev Anticancer Ther. 11:263-75). Dado que a amplificação de HER2 medeia o fenótipo transformado, e devido ao fato de a expressão de HER2 ser amplamente restrita a células malignas, HER2 é um antígeno promissor para alvejar determinados tipos de câncer e/ou entregar tratamentos de câncer inovadores (Parakh et al. (2017) Cancer Treat Rev. 59: 121). Antígenos adicionais para administração alvejada de terapias contra o câncer incluem, porém sem limitação, CD138 (também chamado de sindecano-1) e receptor de efrina 2 tipo A (EPHA2).
[0008] CD138 é um proteoglicano de sulfato de heparano de superfície celular que é essencial para manter a morfologia celular e a interação com o microambiente circundante (Akl et al. (2015) Oncotarget 6 (30): 28693715; Szatmári et al. (2015) Dis Markers 2015: 796052). Em geral, a perda de expressão de CD138 em células de carcinoma reduz a adesão celular à matriz extracelular e aumenta a motilidade e a invasão celular (Teng et al. (2012) Matrix Biol. 31: 316). A expressão aumentada de CD138 no estroma também altera a produção de fibronectina e a organização da matriz extracelular (Yang et al. (2011) Am J Pathol. 178:325 35). Adicionalmente, a expressão aumentada de CD138 em fibroblastos estromais está associada à angiogênese e à progressão de câncer (Maeda et al. (2006) Oncogene 25:1408-12). A expressão de CD138 aumenta durante o desenvolvimento de células B e sua presença é uma característica das células plasmáticas (Ribatti (2017) Immunol Lett. 188: 647). A expressão de CD138 é mantida no mieloma múltiplo, uma malignidade de células plasmáticas. CD138 é, portanto, um antígeno atraente para o tratamento alvejado de vários cânceres e outras doenças hematológicas (Sherbenou et al. (2015) Blood Rev. 29 (2): 8191; Wijdenes et al. (1996) Br J Haematol. 94(2):318-23).
[0009] EPHA2 é uma glicoproteína transmembranar que é abundantemente superexpressa em várias linhagens celulares derivadas de câncer maligno e em formas avançadas de câncer (Wykosky e Debinski (2008) Mol Cancer Ref. 6 (12): 17951806). Por exemplo, EPHA2 é fortemente superexpresso em aproximadamente 61% de tumores em pacientes com GBM (Wykosky et al. (2008) Clin Cancer Res. 14:199-208), 76% de cânceres de ovário (Thaker et al. (2004) Clin Cancer Res. 10:5145-50) e 85% de adenocarcinomas de próstata (Zeng et al. (2003) Am J Pathol. 163:2271-6). A proteína EPHA2 é altamente superexpressa em relação à porcentagem de tumores de paciente e à porcentagem de células dentro de um tumor, e é um receptor localizado na membrana plasmática que pode internalizar na ligação do ligante (Walker-Daniels et al. (2002) Mol Cancer Res. 1:79-87). Além disso, a expressão de EPHA2 está associada a mau prognóstico, metástase aumentada e sobrevida reduzida. Dessa forma, devido ao seu padrão de expressão, localização e importância funcional no resultado de pacientes com câncer, EPHA2 é outro antígeno atraente para a entrega alvejada de terapias anticâncer inovadoras.
[0010] Em várias modalidades, a presente revelação fornece, em parte, moduladores de splicing de herboxidieno inovadores com atividade biológica contra células neoplásicas. Os moduladores de splicing de herboxidieno podem ser usados individualmente ou como parte de ADCs para retardar, inibir e/ou reverter o crescimento de tumor em mamíferos e podem ser úteis para o tratamento de pacientes humanos com câncer. Em várias modalidades, a revelação fornece conjugados anticorpo-fármaco inovadores que empregam os moduladores de splicing de herboxidieno.
[0011] A presente revelação se refere mais especificamente, em várias modalidades, a compostos de conjugado anticorpo-fármaco (ADC) que têm capacidade para se ligar e exterminar células neoplásicas. Em várias modalidades, os compostos de ADC revelados no presente documento compreendem um ligante que liga um modulador de splicing de herboxidieno a um anticorpo de comprimento total ou a um fragmento de ligação ao antígeno. Em várias modalidades, os compostos de ADC também têm capacidade de internalização em uma célula alvo após a ligação.
[0012] Em algumas modalidades, o conjugado anticorpo-fármaco é um conjugado anticorpo-fármaco da Fórmula (I): Ab-(L-H)p, em que Ab é um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno que alveja uma célula neoplásica; H é um modulador de splicing de herboxidieno; L é um ligante que liga covalentemente Ab a H; e p é um número inteiro de 1 a 15.
[0013] Em algumas modalidades, H, o modulador de splicing de herboxidieno, compreende um composto da Fórmula (I): (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente a L através de qualquer átomo, em que: Y é escolhido dentre O, S, NR6 e CR6R7; R1, R2 e R3 são cada um independentemente escolhidos dentre hidrogênio, hidroxila, grupos -O-(C1-C6 alquila), grupos -O-C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila) e grupos C1-C6 alquila; R4 é escolhido dentre hidrogênio, grupos C1-C6 alquila, grupos - C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila) e -C(=O)-NR6R7; R5 é escolhido dentre hidrogênio, hidroxila, -CH2-OH, -CO2H, grupos
-C(=O)-O-(C1-C6 alquila), -C(=O)-NR6R7, -NR6-C(=O)-R8, -O-C(=O)-NR6R7, - NR6-C(=O)-R8 e -NR6-C(=O)-NR6R7; R6 e R7 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, -R8, -C(=O)-R8 e -C(=O)-O-R8; e R8 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila e grupos C3-C8 heterociclila, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 e R8 são, cada um, independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C 1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila), -NR6R7, grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila, cada um dos quais pode ser independentemente substituído por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, grupos C1-C3 haloalquila, - NH-C(=O)(C1-C3 alquila) e -NH-C(=O)-O-(C1-C3 alquila), e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
[0014] Em algumas modalidades, H, o modulador de splicing de herboxidieno, compreende um composto da Fórmula (Ia): (Ia), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente a L através de qualquer átomo, em que: R9 é escolhido dentre grupos C3-C8 heterociclila; R10 é escolhido dentre H e grupos C1-C6 alquila, em que R9 e R10 são, cada um, independentemente substituídos por
0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, -NH2, -NH-(C1-C3 alquila) e -N-(C1-C3 alquila)2, e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
[0015] Em algumas modalidades, H, o modulador de splicing de herboxidieno, compreende um composto da Fórmula (Ib): (Ib), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente a L através de qualquer átomo, em que: R11 é escolhido dentre , e , em que * denota o ponto de conectividade de R11 ao restante do composto; R12 e R13 são, cada um, independentemente escolhidos dentre H e metila; e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
[0016] Em algumas modalidades, H, o modulador de splicing de herboxidieno, compreende um composto da Fórmula (II): (II), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente através de qualquer átomo a
L, em que: X é hidroxila ou NR6R7; R6 e R7 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, -R8, -C(=O)-R8, -C(=O)-O-R8, -(C1-C6 alquila)-O-C(=O)-R8 e -(C1-C6 alquila)-NH-C(=O)-R8; e R8 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila e grupos C3-C8 heterociclila, em que R6, R7 e R8 são, cada um, independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila), -NR6R7, grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila, cada um dos quais pode ser independentemente substituído por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, grupos C1-C3 haloalquila, -NH-C(=O)(C1-C3 alquila) e -NH-C(=O)- O-(C1-C3 alquila), e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
[0017] Em algumas modalidades, H, o modulador de splicing de herboxidieno, compreende um composto da Fórmula (IIa): (IIa), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente através de qualquer átomo a L, em que: Z é escolhido dentre NR9 e O; R9 é escolhido dentre hidrogênio e grupos C1-C6 alquila; R10 e R11 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, halogênios, hidroxila, grupos C1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila), grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila; R12 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila, grupos C3-C8 heterociclila, em que R9, R10, R11 e R12 são, cada um, independentemente substituídos por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C 1- C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi e grupos C1-C3 haloalquila; t é um número inteiro escolhido dentre 1, 2, 3, 4, 5 e 6; e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
[0018] Em algumas modalidades, H, o modulador de splicing de herboxidieno, compreende um composto da Fórmula (IIb): (IIb), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente através de qualquer átomo a L, em que: R13 é escolhido dentre , , , , ,
, , , , e em que * denota 13 o ponto de conectividade de R ao restante do composto; R14 e R15 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio e metila; e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
[0019] Em algumas modalidades, H, o modulador de splicing de herboxidieno, compreende um composto da Fórmula (III): (III), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente através de qualquer átomo a L, em que: R1, R2 e R3 são cada um independentemente escolhidos dentre hidrogênio, hidroxila, grupos -O-(C1-C6 alquila), grupos -O-C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila) e grupos C1-C6 alquila; R6 e R7 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, -R8, -C(=O)-R8 e -C(=O)-O-R8; R8 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila e grupos C3-C8 heterociclila; e
R9 é escolhido dentre H, ,
, ,
, ,
, ,
, e
; em que R , R , R3, R6, R7 e R8 são, cada um, independentemente 1 2 substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos - C(=O)-(C3-C8 heterociclila), -NR6R7, grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila, cada um dos quais pode ser independentemente substituído por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, grupos C1-C3 haloalquila, -NH-C(=O)(C1-C3 alquila) e -NH-C(=O)-
O-(C1-C3 alquila), em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida; e em que * denota o ponto de conectividade de R9 ao restante do composto.
[0020] Em algumas modalidades, o ligante compreende uma porção química de peptídeo clivável. Em algumas modalidades, a porção química de peptídeo clivável é clivável por uma enzima. Em algumas modalidades, a porção química de peptídeo clivável ou ligante compreende uma unidade de aminoácido. Em algumas modalidades, a unidade de aminoácido compreende valina-citrulina ("Val-Cit" ou "VC"). Em algumas outras modalidades, a unidade de aminoácido compreende valina-alanina ("Val-Ala" ou "VA"). Em algumas outras modalidades, a unidade de aminoácido compreende ácido glutâmico-valina-citrulina ("Glu-Val-Cit" ou "EVC"). Em algumas outras modalidades, a unidade de aminoácido compreende alanina- alanina-asparagina ("Ala-Ala-Asn" ou "AAN").
[0021] Em algumas modalidades, o ligante compreende uma porção química de glicuronídeo clivável. Em algumas modalidades, a porção química de glicuronídeo clivável é clivável por uma enzima. Em algumas modalidades, a porção química de glicuronídeo clivável é clivável por uma glicuronidase. Em algumas modalidades, a porção química de glicuronídeo -glicuronidase.
[0022] Em algumas modalidades, o ligante compreende pelo menos uma unidade espaçadora. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora ou ligante compreende uma porção química de polietilenoglicol (PEG). Em algumas modalidades, a porção química de PEG compreende - (PEG)m- e m é um número inteiro de 1 a 10. Em algumas modalidades, m é 2. Em algumas outras modalidades, a unidade espaçadora ou ligante compreende uma porção alquila. Em algumas modalidades, a porção alquila compreende -(CH2)n- e n é um número inteiro de 1 a 10. Em algumas modalidades, n é 2. Em algumas modalidades, n é 5. Em algumas modalidades, n é 6.
[0023] Em algumas modalidades, a unidade espaçadora se liga ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno através de uma porção química de maleimida (Mal) ("unidade espaçadora Mal"). Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal é reativa com um resíduo de cisteína no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal é unida ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno através de um resíduo de cisteína no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno.
[0024] Em algumas modalidades, o ligante compreende a unidade espaçadora Mal e uma porção química de peptídeo clivável. Em algumas modalidades, a porção química de peptídeo clivável compreende uma unidade de aminoácido. Em algumas modalidades, a porção química de peptídeo clivável ou unidade de aminoácido compreende Val-Cit. Em algumas modalidades, a porção química de peptídeo clivável ou unidade de aminoácido compreende Val-Ala. Em algumas modalidades, a porção química de peptídeo clivável ou unidade de aminoácido compreende Glu-Val-Cit. Em algumas modalidades, a porção química de peptídeo clivável ou unidade de aminoácido compreende Ala-Ala-Asn. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal compreende uma porção química alquila. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal compreende uma porção química de PEG. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal compreende uma maleimidocaproíla (MC).
[0025] Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal liga o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno à porção química clivável no ligante. Em algumas modalidades, a porção química clivável no ligante compreende uma porção química de peptídeo clivável. Em algumas modalidades, a porção química de peptídeo clivável compreende uma unidade de aminoácido. Em algumas modalidades, a porção química de peptídeo clivável ou unidade de aminoácido compreende Val-Cit, Val-Ala, Glu-Val-Cit ou Ala-Ala-Asn. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Val-Cit. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Val-Ala. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Glu-Val-Cit. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Ala-Ala-Asn. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal compreende uma porção química alquila. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal compreende uma porção química de PEG. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal compreende uma maleimidocaproíla (MC).
[0026] Em algumas modalidades, a porção química clivável no ligante está diretamente ligada ao modulador de splicing de herboxidieno, ou uma unidade espaçadora liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing de herboxidieno. Em algumas modalidades, a clivagem do conjugado libera o modulador de splicing de herboxidieno do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e ligante. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora que liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing de herboxidieno é autoimolativa.
[0027] Em algumas modalidades, a unidade espaçadora que liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing de herboxidieno compreende uma p-aminobenziloxicarbonila (pABC). Em algumas modalidades, o pABC liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing de herboxidieno. Em algumas modalidades, a porção química clivável no ligante compreende uma porção química de peptídeo clivável. Em algumas modalidades, a porção química de peptídeo clivável compreende uma unidade de aminoácido. Em algumas modalidades, a porção química de peptídeo clivável ou unidade de aminoácido compreende Val-Cit, Val-Ala, Glu-Val-Cit ou Ala-Ala-Asn. Em algumas modalidades, o ligante compreende Val-Cit-pABC.
Em algumas outras modalidades, o ligante compreende Val-Ala-pABC. Em algumas modalidades, o ligante compreende Glu-Val-Cit-pABC. Em algumas modalidades, o ligante compreende Ala-Ala-Asn-pABC.
[0028] Em algumas modalidades, a unidade espaçadora que liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing de herboxidieno compreende uma p-aminobenzila (pAB). Em algumas modalidades, o pAB liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing de herboxidieno. Em algumas modalidades, a porção química clivável no ligante compreende uma porção química de peptídeo clivável. Em algumas modalidades, a porção química de peptídeo clivável compreende uma unidade de aminoácido. Em algumas modalidades, a porção química de peptídeo clivável ou unidade de aminoácido compreende Val-Cit, Val-Ala, Glu-Val-Cit ou Ala-Ala-Asn. Em algumas modalidades, o ligante compreende Val-Cit-pAB. Em algumas outras modalidades, o ligante compreende Val-Ala-pAB. Em algumas outras modalidades, o ligante compreende Glu-Val-Cit-pAB. Em algumas outras modalidades, o ligante compreende Ala-Ala-Asn-pAB.
[0029] Em várias modalidades, o ligante é um ligante não clivável. Em algumas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno do ADC é liberado pela degradação do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, o ligante permanece covalentemente associado a pelo menos um aminoácido do anticorpo e fármaco após internalização e degradação na célula alvo.
[0030] Em algumas modalidades, o ligante é um ligante não clivável que compreende pelo menos uma unidade espaçadora. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora ou ligante compreende uma porção química de polietilenoglicol (PEG). Em algumas modalidades, a porção química de PEG compreende - (PEG)m- e m é um número inteiro de 1 a 10. Em algumas modalidades, m é 2. Em algumas outras modalidades, a unidade espaçadora ou ligante compreende uma porção alquila. Em algumas modalidades, a porção alquila compreende - (CH2)n- ou - (CH2)n-O-(CH2)n e n é um número inteiro de 1 a 10. Em algumas modalidades, n é 2. Em algumas modalidades, n é 5. Em algumas modalidades, n é 6.
[0031] Em algumas modalidades, a unidade espaçadora em um ligante não clivável se liga ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno através de uma porção química de maleimida (Mal) ("unidade espaçadora Mal"). Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal é reativa com um resíduo de cisteína no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal é unida ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno através de um resíduo de cisteína no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal compreende uma porção química alquila. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal compreende uma porção química de PEG. Em algumas modalidades, o ligante ou unidade espaçadora Mal compreende uma maleimidocaproíla (MC). Em algumas modalidades, o ligante ou unidade espaçadora Mal compreende uma maleimidocaproíla (MC) e pelo menos uma unidade espaçadora adicional. Em algumas modalidades, o ligante ou unidade espaçadora Mal compreende MC-(PEG)2. Em algumas modalidades, o ligante ou unidade espaçadora Mal compreende MC- (PEG)2 e pelo menos uma unidade espaçadora adicional. Em algumas modalidades, o ligante ou unidade espaçadora Mal compreende Mal-Hex. Em algumas modalidades, o ligante ou unidade espaçadora Mal compreende Mal-Hex e pelo menos uma unidade espaçadora adicional. Em algumas modalidades, o ligante ou unidade espaçadora Mal compreende Mal-Et. Em algumas modalidades, o ligante ou unidade espaçadora Mal compreende Mal-Et e pelo menos uma unidade espaçadora adicional. Em algumas modalidades, o ligante ou unidade espaçadora Mal compreende Mal-Et-O-Et. Em algumas modalidades, o ligante ou unidade espaçadora Mal compreende Mal-Et-O-Et e pelo menos uma unidade espaçadora adicional. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal liga o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno ao modulador de splicing de herboxidieno.
[0032] Em algumas modalidades, Ab é selecionado a partir de qualquer um dentre o anticorpo ou sequências de domínio de ligação revelados no presente documento. Em algumas modalidades, Ab é um anticorpo ou sequência de domínio de ligação que tem como alvo HER2 e/ou uma célula neoplásica que expressa HER2. Em algumas modalidades, Ab é um anticorpo ou sequência de domínio de ligação que tem como alvo CD138 e/ou uma célula neoplásica que expressa CD138. Em algumas modalidades, Ab é um anticorpo ou sequência de domínio de ligação que tem como alvo EPHA2 e/ou uma célula neoplásica que expressa EPHA2. Em algumas modalidades, Ab é um anticorpo ou sequência de domínio de ligação que tem como alvo MSLN e/ou uma célula neoplásica que expressa MSLN. Em algumas modalidades, Ab é um anticorpo ou sequência de domínio de ligação que tem como alvo FOLH1 e/ou uma célula neoplásica que expressa FOLH1. Em algumas modalidades, Ab é um anticorpo ou sequência de domínio de ligação que tem como alvo CDH6 e/ou uma célula neoplásica que expressa CDH6. Em algumas modalidades, Ab é um anticorpo ou sequência de domínio de ligação que tem como alvo CEACAM5 e/ou uma célula neoplásica que expressa CEACAM5. Em algumas modalidades, Ab é um anticorpo ou sequência de domínio de ligação que tem como alvo CFC1B e/ou uma célula neoplásica que expressa CFC1B. Em algumas modalidades, Ab é um anticorpo ou sequência de domínio de ligação que tem como alvo ENPP3 e/ou uma célula neoplásica que expressa ENPP3. Em algumas modalidades, Ab é um anticorpo ou sequência de domínio de ligação que tem como alvo FOLR1 e/ou uma célula neoplásica que expressa FOLR1. Em algumas modalidades, Ab é um anticorpo ou sequência de domínio de ligação que tem como alvo HAVCR1 e/ou uma célula neoplásica que expressa HAVCR1. Em algumas modalidades, Ab é um anticorpo ou sequência de domínio de ligação que tem como alvo KIT e/ou uma célula neoplásica que expressa KIT. Em algumas modalidades, Ab é um anticorpo ou sequência de domínio de ligação que tem como alvo MET e/ou uma célula neoplásica que expressa MET. Em algumas modalidades, Ab é um anticorpo ou sequência de domínio de ligação que tem como alvo MUC16 e/ou uma célula neoplásica que expressa MUC16. Em algumas modalidades, Ab é um anticorpo ou sequência de domínio de ligação que tem como alvo SLC39A6 e/ou uma célula neoplásica que expressa SLC39A6. Em algumas modalidades, Ab é um anticorpo ou sequência de domínio de ligação que tem como alvo SLC44A4 e/ou uma célula neoplásica que expressa SLC44A4. Em algumas modalidades, Ab é um anticorpo ou sequência de domínio de ligação que tem como alvo STEAP1 e/ou uma célula neoplásica que expressa STEAP1. Em algumas modalidades, Ab é um anticorpo ou sequência de domínio de ligação que tem como alvo outro antígeno de câncer.
[0033] Em algumas modalidades, L é selecionado dentre qualquer um dos ligantes revelados no presente documento, ou qualquer combinação de componentes de ligante revelados no presente documento. Em algumas modalidades, L é um ligante que compreende MC-Val-Cit-pABC, Mal-(PEG)2- CO, MC-Val-Ala-pAB, MC-Val-Ala-pABC, MC-Val-Cit-pAB, Mal-Hex, Mal-Et ou Mal-Et-O-Et. Em algumas modalidades, o ligante pode também compreender uma ou mais unidades espaçadoras adicionais. Em algumas modalidades, L é um ligante ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL10, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21, ADL22 ou ADL23. Em algumas modalidades, L é um ligante ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21 ou ADL23. Em algumas modalidades, L é um ligante ADL12, ADL14 ou ADL15. Em algumas modalidades, o ligante ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21 ou ADL23 pode compreender também uma ou mais unidades espaçadoras adicionais. Em algumas modalidades, L é um ligante ADL1 e pode, opcionalmente, compreender uma ou mais unidades espaçadoras adicionais. Em algumas modalidades, L é um ligante ADL2 e pode, opcionalmente, compreender uma ou mais unidades espaçadoras adicionais. Em algumas modalidades, L é um ligante ADL5 e pode, opcionalmente, compreender uma ou mais unidades espaçadoras adicionais.
Em algumas modalidades, L é um ligante ADL6 e pode, opcionalmente, compreender uma ou mais unidades espaçadoras adicionais. Em algumas modalidades, L é um ligante ADL7 e pode, opcionalmente, compreender uma ou mais unidades espaçadoras adicionais. Em algumas modalidades, L é um ligante ADL12 e pode, opcionalmente, compreender uma ou mais unidades espaçadoras adicionais. Em algumas modalidades, L é um ligante ADL14 e pode, opcionalmente, compreender uma ou mais unidades espaçadoras adicionais. Em algumas modalidades, L é um ligante ADL15 e pode, opcionalmente, compreender uma ou mais unidades espaçadoras adicionais. Em várias modalidades dos ADCs descritos no presente documento, p é de 1 a
10. Em várias modalidades, p é de 2 a 8. Em várias modalidades, p é de 4 a 8. Em algumas modalidades, p é 4. Em algumas modalidades, p é 8.
[0034] Em algumas modalidades, um grupamento de ADCs é fornecido por meio do qual ocorre a conjugação aleatória e o p médio no grupamento é entre cerca de 2 e cerca de 8. Em algumas modalidades, um grupamento de ADCs é fornecido por meio do qual ocorre a conjugação aleatória e o p médio no grupamento é entre cerca de 4 e cerca de 8. Em algumas modalidades, um grupamento de ADCs é fornecido, por meio do qual ocorre a conjugação aleatória e o p médio no grupamento é cerca de 4. Em algumas modalidades, um grupamento de ADCs é fornecido, por meio do qual ocorre a conjugação aleatória e o p médio no grupamento é cerca de 8. As composições (por exemplo, composições farmacêuticas) que compreendem várias cópias de qualquer um dos ADCs descritos, em que a carga média de fármaco ( pmédio) dos ADCs na composição é de cerca de 3,5 a cerca de 5,5 (por exemplo, cerca de 4), ou de cerca de 7 a cerca de 9 (por exemplo, cerca de 8) são fornecidos no presente documento.
[0035] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno (Ab) do ADC tem como alvo uma célula neoplásica derivada de uma malignidade hematológica ou um tumor sólido. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula neoplásica derivada de uma malignidade hematológica. Em algumas modalidades, a malignidade hematológica é selecionada dentre uma malignidade de células B, uma leucemia (por exemplo, leucemia mieloide aguda), um linfoma e um mieloma (por exemplo, mieloma múltiplo). Em algumas modalidades, a malignidade hematológica é selecionada dentre leucemia mieloide aguda e mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula neoplásica derivada de um tumor sólido. Em algumas modalidades, o tumor sólido é selecionado dentre câncer de mama (por exemplo, câncer de mama positivo para HER2), câncer gástrico (por exemplo, adenocarcinoma gástrico), câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão (por exemplo, adenocarcinoma de pulmão), câncer uterino (por exemplo, carcinoma endometrial seroso uterino), carcinoma do ducto salivar, melanoma, câncer de cólon, câncer cervical, câncer pancreático, câncer de rins, câncer colorretal e câncer de esôfago. Em algumas modalidades, o tumor sólido é selecionado dentre câncer de mama positivo para HER2, adenocarcinoma gástrico, câncer de próstata e osteossarcoma.
[0036] Em várias modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno (Ab) do ADC é um anticorpo anti-HER2 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno se liga a HER2 e tem como alvo células neoplásicas que expressam HER2 (ou seja, o ADC tem como alvo células neoplásicas que expressam HER2). Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do ADC é um anticorpo anti-HER2 de internalização ou fragmento de ligação ao antígeno de internalização do mesmo.
[0037] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno compreende três regiões determinantes de complementaridade de cadeia pesada (HCDR1, HCDR2 e HCDR3) compreendendo sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:1 (HCDR1), SEQ ID NO:2 (HCDR2) e SEQ ID NO:3 (HCDR3); e três regiões determinantes de complementaridade da cadeia leve (LCDR1, LCDR2 e LCDR3) compreendendo sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:4 (LCDR1), SEQ ID NO:5 (LCDR2) e SEQ ID NO:6 (LCDR3). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo de internalização ou fragmento de ligação ao antígeno de internalização. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno compreende sequências de estrutura humana. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 19 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 20. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG humana. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG1 humana. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante de cadeia leve kappa ou lambda de Ig humana. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno compete pela ligação e/ou liga o mesmo epítopo que um anticorpo que compreende um domínio variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 19 e um domínio variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 20.
[0038] Em várias modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno (Ab) do ADC é um anticorpo anti-CD138 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno se liga a CD138 e tem como alvo células neoplásicas que expressam CD138 (ou seja, o ADC tem como alvo células neoplásicas que expressam CD138). Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do ADC é um anticorpo anti-CD138 de internalização ou fragmento de ligação ao antígeno de internalização do mesmo.
[0039] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno compreende três regiões determinantes de complementaridade de cadeia pesada (HCDR1, HCDR2 e HCDR3) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:7 (HCDR1), SEQ ID NO:8 (HCDR2) e SEQ ID NO:9 (HCDR3); e três regiões determinantes de complementaridade de cadeia leve (LCDR1, LCDR2 e LCDR3) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:10 (LCDR1), SEQ ID NO:11 (LCDR2) e SEQ ID NO:12 (LCDR3). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo de internalização ou fragmento de ligação ao antígeno de internalização. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno compreende sequências de estrutura humana. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 22. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG2a murina. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante de cadeia leve kappa de Ig murina. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG humana. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG2a humana. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante de cadeia leve kappa ou lambda de Ig humana. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno compete pela ligação e/ou liga o mesmo epítopo que um anticorpo que compreende um domínio variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 21 e um domínio variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 22.
[0040] Em várias modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno (Ab) do ADC é um anticorpo anti-EPHA2 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno se liga a EPHA2 e tem como alvo células neoplásicas que expressam EPHA2 (ou seja, o ADC tem como alvo células neoplásicas que expressam EPHA2). Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do ADC é um anticorpo anti-EPHA2 de internalização ou fragmento de ligação ao antígeno de internalização do mesmo.
[0041] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno compreende três regiões determinantes de complementaridade de cadeia pesada (HCDR1, HCDR2 e HCDR3) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:13 (HCDR1), SEQ ID NO:14 (HCDR2) e SEQ ID NO:15 (HCDR3); e três regiões determinantes de complementaridade de cadeia leve (LCDR1, LCDR2 e LCDR3) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:16 (LCDR1), SEQ ID NO:17 (LCDR2) e SEQ ID NO:18 (LCDR3). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo de internalização ou fragmento de ligação ao antígeno de internalização. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno compreende sequências de estrutura humana. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 23 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 24. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG humana. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG1 humana. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante de cadeia leve kappa ou lambda de Ig humana. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno compete pela ligação e/ou liga o mesmo epítopo que um anticorpo que compreende um domínio variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 23 e um domínio variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 24.
[0042] Em algumas modalidades, são revelados no presente documento compostos da Fórmula (I): (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Y é escolhido dentre O, S, NR6 e CR6R7; R1, R2 e R3 são cada um independentemente escolhidos dentre hidrogênio, hidroxila, grupos -O-(C1-C6 alquila), grupos -O-C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila) e grupos C1-C6 alquila; R4 é escolhido dentre hidrogênio, grupos C1-C6 alquila, grupos - C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila) e -C(=O)-NR6R7; R5 é escolhido dentre hidrogênio, hidroxila, -CH2-OH, -CO2H, grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila), -C(=O)-NR6R7, -NR6-C(=O)-R8, -O-C(=O)-NR6R7, - NR6-C(=O)-R8 e -NR6-C(=O)-NR6R7; R6 e R7 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, -R8, -C(=O)-R8 e -C(=O)-O-R8; e R8 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila e grupos C3-C8 heterociclila, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 e R8 são, cada um, independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 6 7 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila), -NR R , grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila, cada um dos quais pode ser independentemente substituído por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, grupos C1-C3 haloalquila, - NH-C(=O)(C1-C3 alquila) e -NH-C(=O)-O-(C1-C3 alquila).
[0043] Em algumas modalidades, são fornecidos no presente documento compostos da Fórmula (Ia): (Ia), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: R9 é escolhido dentre grupos C3-C8 heterociclila; e R10 é escolhido dentre H e grupos C1-C6 alquila, em que R9 e R10 são, cada um, independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, -NH2, -NH-(C1-C3 alquila) e -N-(C1-C3 alquila)2.
[0044] Em algumas modalidades, são fornecidos no presente documento compostos da Fórmula (Ib):
(Ib), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: R11 é escolhido dentre , e , em que * denota o ponto de conectividade de R11 ao restante do composto; e R12 e R13 são, cada um, independentemente escolhidos dentre H e metila.
[0045] Em algumas modalidades, são fornecidos no presente documento compostos da Fórmula (II): (II), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: X é NR6R7; R6 e R7 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, -R8, -C(=O)-R8, -C(=O)-O-R8, -(C1-C6 alquila)-O-C(=O)-R8 e -(C1-C6 alquila)-NH-C(=O)-R8; e R8 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila e grupos C3-C8 heterociclila, em que R6, R7 e R8 são, cada um, independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila), -NR6R7, grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila, cada um dos quais pode ser independentemente substituído por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, grupos C1-C3 haloalquila, -NH-C(=O)(C1-C3 alquila) e -NH-C(=O)-O-(C1-C3 alquila).
[0046] Em algumas modalidades, são fornecidos no presente documento compostos da Fórmula (IIa): (IIa), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: Z é escolhido dentre NR9 e O; R9 é escolhido dentre hidrogênio e grupos C1-C6 alquila; R10 e R11 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, halogênios, hidroxila, grupos C1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila), grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila; R12 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila, grupos C3-C8 heterociclila, em que R9, R10, R11 e R12 são, cada um, independentemente substituídos por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C 1- C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi e grupos C1-C3 haloalquila; e t é um número inteiro escolhido dentre 1, 2, 3, 4, 5 e 6.
[0047] Em algumas modalidades, são fornecidos no presente documento compostos da Fórmula (IIb): (IIb), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que:
R13 é escolhido dentre , , , , , , , , , e , em que * 13 denota o ponto de conectividade de R ao restante do composto; e R14 e R15 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio e metila.
[0048] Em algumas modalidades, são fornecidos no presente documento compostos da Fórmula (III): (III), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1, R2 e R3 são cada um independentemente escolhidos dentre hidrogênio, hidroxila, grupos -O-(C1-C6 alquila), grupos -O-C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila) e grupos C1-C6 alquila; R6 e R7 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, -R8, -C(=O)-R8 e -C(=O)-O-R8; R8 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila e grupos C3-C8 heterociclila; e
R9 é escolhido dentre H, ,
, ,
, ,
, ,
, e
; em que R1, R2, R3, R6, R7 e R8 são, cada um, independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos - C(=O)-(C3-C8 heterociclila), -NR6R7, grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila, cada um dos quais pode ser independentemente substituído por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, grupos C1-C3 haloalquila, -NH-C(=O)(C1-C3 alquila) e -NH-C(=O)- O-(C1-C3 alquila); e em que * denota o ponto de conectividade de R9 ao restante do composto.
[0049] Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento um composto escolhido dentre: ; ;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
, e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos,
em que L é um ligante que se liga covalentemente a um anticorpo.
[0050] Além disso, em várias modalidades, são fornecidos no presente documento usos terapêuticos para os compostos, compostos de herboxidieno e composições de ADC descritos, por exemplo, no tratamento de um distúrbio neoplásico, por exemplo, um câncer. Em determinados aspectos, a presente revelação fornece métodos de tratamento de um distúrbio neoplásico, por exemplo, um câncer que expressa um antígeno alvejado pelo anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do ADC, como HER2, CD138, EPHA2, MSLN, FOLH1, CDH6, CEACAM5, CFC1B, ENPP3, FOLR1, HAVCR1, KIT, MET, MUC16, SLC39A6, SLC44A4 ou STEAP1.
[0051] Em determinados aspectos, a presente revelação fornece métodos de tratamento de um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico por meio da administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz e/ou regime de qualquer um dos ADCs ou composições descritos. Em algumas modalidades, o distúrbio neoplásico é uma malignidade hematológica ou um tumor sólido. Em algumas modalidades, o distúrbio neoplásico é uma malignidade hematológica. Em algumas modalidades, a malignidade hematológica é selecionada dentre uma malignidade de célula B, uma leucemia, um linfoma e um mieloma. Em algumas modalidades, a malignidade hematológica é selecionada dentre leucemia mieloide aguda e mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, o distúrbio neoplásico é um tumor sólido. Em algumas modalidades, o tumor sólido é selecionado dentre câncer de mama (por exemplo, câncer de mama positivo para HER2), câncer gástrico (por exemplo, adenocarcinoma gástrico), câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão (por exemplo, adenocarcinoma de pulmão), câncer uterino (por exemplo, carcinoma endometrial seroso uterino), carcinoma do ducto salivar, melanoma, câncer de cólon, câncer cervical, câncer pancreático, câncer de rins, câncer colorretal e câncer de esôfago. Em algumas modalidades, o tumor sólido é selecionado dentre câncer de mama positivo para HER2, adenocarcinoma gástrico, câncer de próstata e osteossarcoma.
[0052] Em algumas modalidades, o tratamento com o conjugado anticorpo-fármaco ou composição induz a morte por espectador de células neoplásicas que não expressam um antígeno alvo, mas são adjacentes a células neoplásicas que expressam um antígeno alvo. Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma ou mais células neoplásicas que expressam um antígeno alvo.
[0053] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é HER2. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são de um câncer de mama que expressa HER2, câncer de ovário, câncer gástrico, câncer de pulmão (por exemplo, adenocarcinoma pulmonar), câncer de útero (por exemplo, carcinoma uterino endometrial seroso), osteossarcoma, ou carcinoma do ducto salivar. Em algumas modalidades, o indivíduo é não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com (a) um anticorpo anti-HER2 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing de herboxidieno quando administrado individualmente. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com um modulador de splicing de herboxidieno quando administrado individualmente.
[0054] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é CD138. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são de um mieloma múltiplo que expressa CD138. Em algumas modalidades, o indivíduo é não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com (a) um anticorpo anti- CD138 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing de herboxidieno quando administrado individualmente. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com um modulador de splicing de herboxidieno quando administrado individualmente.
[0055] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é EPHA2. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são de um câncer de mama que expressa EPHA2, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão, melanoma, câncer de cólon ou câncer de esôfago. Em algumas modalidades, o indivíduo é não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com (a) um anticorpo anti-EPHA2 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing de herboxidieno quando administrado individualmente. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com um modulador de splicing de herboxidieno quando administrado individualmente.
[0056] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é MSLN. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são de um câncer de ovário que expressa MSLN, câncer cervical, câncer pancreático ou câncer de pulmão (por exemplo, adenocarcinoma de pulmão). Em algumas modalidades, o indivíduo é não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com (a) um anticorpo anti-MSLN quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0057] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é FOLH1. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são de um câncer de próstata que expressa FOLH1. Em algumas modalidades, o indivíduo é não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com (a) um anticorpo anti- FOLH1 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0058] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é CDH6. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são de um câncer renal que expressa CDH6. Em algumas modalidades, o indivíduo é não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com (a) um anticorpo anti- CDH6 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0059] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é CEACAM5. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são de um câncer colorretal que expressa CEACAM5. Em algumas modalidades, o indivíduo é não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com (a) um anticorpo anti-CEACAM5 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0060] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é CFC1B. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são de um câncer pancreático que expressa CFC1B. Em algumas modalidades, o indivíduo é não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com (a) um anticorpo anti- CFC1B quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0061] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é ENPP3. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são de um câncer renal que expressa ENPP3. Em algumas modalidades, o indivíduo é não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com (a) um anticorpo anti- ENPP3 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0062] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é FOLR1. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são de um câncer de ovário que expressa FOLR1. Em algumas modalidades, o indivíduo é não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com (a) um anticorpo anti- FOLR1 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0063] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é HAVCR1. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são de um câncer renal ou câncer de esôfago que expressa HAVCR1. Em algumas modalidades, o indivíduo é não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com (a) um anticorpo anti-HAVCR1 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0064] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é KIT. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são de um câncer renal que expressa KIT. Em algumas modalidades, o indivíduo é não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com (a) um anticorpo anti-KIT quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0065] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é MET. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são de um câncer renal ou câncer de esôfago que expressa MET. Em algumas modalidades, o indivíduo é não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com (a) um anticorpo anti-MET quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0066] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é MUC16. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são de um câncer de ovário, câncer cervical ou câncer de mama que expressa MUC16. Em algumas modalidades, o indivíduo é não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com (a) um anticorpo anti-MUC16 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0067] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é SLC39A6. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são de um câncer de mama ou câncer de próstata que expressa SLC39A6. Em algumas modalidades, o indivíduo é não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com (a) um anticorpo anti-SLC39A6 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0068] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é SLC44A4. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são de um câncer de próstata que expressa SLC44A4. Em algumas modalidades, o indivíduo é não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com (a) um anticorpo anti- SLC44A4 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0069] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é STEAP1. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são de um câncer de próstata que expressa STEAP1. Em algumas modalidades, o indivíduo é não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com (a) um anticorpo anti- STEAP1 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0070] Em determinados outros aspectos, a presente revelação fornece métodos de redução ou inibição de um tumor em um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico por meio da administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz e/ou regime de qualquer um dos ADCs ou composições descritos.
[0071] Em algumas modalidades, o tratamento com o conjugado anticorpo-fármaco ou composição induz a morte por espectador de células tumorais neoplásicas que não expressam um antígeno alvo, mas são adjacentes a células tumorais neoplásicas que expressam um antígeno alvo. Em algumas modalidades, o tumor compreende uma ou mais células neoplásicas que expressam um antígeno alvo.
[0072] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é HER2. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de mama que expressa HER2, câncer de ovário, câncer gástrico, câncer de pulmão (por exemplo, adenocarcinoma pulmonar), câncer de útero (por exemplo, carcinoma uterino endometrial seroso), osteossarcoma, ou carcinoma do ducto salivar. Em algumas modalidades, o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com (a) um anticorpo anti-HER2 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing de herboxidieno quando administrado individualmente.
[0073] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é CD138. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um mieloma múltiplo que expressa CD138. Em algumas modalidades, o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com (a) um anticorpo anti-CD138 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing de herboxidieno quando administrado individualmente.
[0074] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é EPHA2. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de mama que expressa EPHA2, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão, melanoma, câncer de cólon ou câncer de esôfago. Em algumas modalidades, o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com (a) um anticorpo anti-EPHA2 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing de herboxidieno quando administrado individualmente.
[0075] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é MSLN. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de ovário que expressa MSLN, câncer cervical, câncer pancreático ou câncer de pulmão (por exemplo, adenocarcinoma de pulmão). Em algumas modalidades, o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com (a) um anticorpo anti-MSLN quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0076] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é FOLH1. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de próstata que expressa FOLH1. Em algumas modalidades, o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com (a) um anticorpo anti-FOLH1 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0077] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é CDH6. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer renal que expressa CDH6. Em algumas modalidades, o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com (a) um anticorpo anti-CDH6 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0078] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é CEACAM5. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer colorretal que expressa CEACAM5. Em algumas modalidades, o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com (a) um anticorpo anti- CEACAM5 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0079] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é CFC1B. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer pancreático que expressa CFC1B. Em algumas modalidades, o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com (a) um anticorpo anti-CFC1B quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0080] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é ENPP3. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer renal que expressa ENPP3. Em algumas modalidades, o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com (a) um anticorpo anti-ENPP3 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0081] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é FOLR1. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de ovário que expressa FOLR1. Em algumas modalidades, o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com (a) um anticorpo anti-FOLR1 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0082] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é HAVCR1. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer renal ou câncer de esôfago que expressa HAVCR1. Em algumas modalidades, o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com (a) um anticorpo anti-HAVCR1 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0083] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é KIT. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer renal que expressa KIT. Em algumas modalidades, o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com (a) um anticorpo anti-KIT quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0084] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é MET. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer renal ou câncer de esôfago que expressa MET. Em algumas modalidades, o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com (a) um anticorpo anti-MET quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0085] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é MUC16. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de ovário, câncer cervical ou câncer de mama que expressa MUC16. Em algumas modalidades, o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com (a) um anticorpo anti-MUC16 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0086] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é SLC39A6. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de mama ou câncer de próstata que expressa SLC39A6. Em algumas modalidades, o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com (a) um anticorpo anti-SLC39A6 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0087] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é SLC44A4. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de próstata que expressa SLC44A4. Em algumas modalidades, o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com (a) um anticorpo anti-SLC44A4 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0088] Em algumas modalidades, o antígeno alvo é STEAP1. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de próstata que expressa STEAP1. Em algumas modalidades, o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com (a) um anticorpo anti-STEAP1 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente.
[0089] Em ainda outros aspectos, a presente revelação fornece métodos para determinar se um indivíduo que tem ou se suspeita que tem um distúrbio neoplásico será responsivo ao tratamento com qualquer um dos ADCs ou composições descritos, fornecendo uma amostra biológica do indivíduo e colocando a amostra biológica em contato com o ADC ou composição. Em algumas modalidades, a amostra biológica é uma amostra de tumor. Em algumas modalidades, a amostra de tumor é uma biópsia de tumor ou amostra sanguínea. Em algumas modalidades, a amostra sanguínea é selecionada dentre sangue, uma fração de sangue ou uma célula obtida do sangue ou fração de sangue. Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma ou mais células neoplásicas que expressam um antígeno alvo. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é HER2. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de mama que expressa HER2, câncer de ovário, câncer gástrico, câncer de pulmão (por exemplo,
adenocarcinoma pulmonar), câncer de útero (por exemplo, carcinoma uterino endometrial seroso), osteossarcoma, ou carcinoma do ducto salivar.
Em algumas modalidades, o antígeno alvo é CD138. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um mieloma múltiplo que expressa CD138. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é EPHA2. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de mama que expressa EPHA2, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão, melanoma, câncer de cólon ou câncer de esôfago.
Em algumas modalidades, o antígeno alvo é MSLN.
Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de ovário que expressa MSLN, câncer cervical, câncer pancreático ou câncer de pulmão (por exemplo, adenocarcinoma de pulmão). Em algumas modalidades, o antígeno alvo é FOLH1. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de próstata que expressa FOLH1. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é CDH6. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer renal que expressa CDH6. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é CEACAM5. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer colorretal que expressa CEACAM5. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é CFC1B.
Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer pancreático que expressa CFC1B.
Em algumas modalidades, o antígeno alvo é ENPP3. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer renal que expressa ENPP3. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é FOLR1. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de ovário que expressa FOLR1. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é HAVCR1. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer renal ou câncer de esôfago que expressa HAVCR1. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é KIT.
Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer renal que expressa KIT. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é MET. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer renal ou câncer de esôfago que expressa MET. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é MUC16. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de ovário, câncer cervical ou câncer de mama que expressa MUC16. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é SLC39A6. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de mama ou câncer de próstata que expressa SLC39A6. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é SLC44A4. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de próstata que expressa SLC44A4. Em algumas modalidades, o antígeno alvo é STEAP1. Em algumas modalidades, a uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de próstata que expressa STEAP1.
[0090] Além disso, são fornecidas no presente documento, em várias modalidades, composições farmacêuticas que compreendem um ADC e um diluente, carreador e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Também são revelados métodos de produção dos compostos e composições de ADC.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0091] As Figuras 1A-1D mostram a viabilidade de resposta à dosagem de compostos de carga útil exemplificativos em células de câncer de mama amplificadas por HER2 (HCC1954) e células de câncer gástrico (NCI- N87). As células foram incubadas com o composto por 72 horas (3 dias) ou 144 horas (6 dias) e a viabilidade foi lida no reagente CellTiter-Glo® 2.0. A Figura 1A mostra a viabilidade de resposta à dosagem em células HCC1954 após uma incubação de 72 horas. A Figura 1B mostra a viabilidade de resposta à dosagem em células NCI-N87 após uma incubação de 72 horas. A Figura 1C mostra a viabilidade de resposta à dosagem em células HCC1954 após uma incubação de 144 horas. A Figura 1D mostra a viabilidade de resposta à dosagem em células NCI-N87 após uma incubação de 144 horas. Os dados são mostrados como o SD ± da média.
[0092] A Figura 2A e a Figura 2B mostram os resultados de um ensaio de splicing de SLC25A19 em células de câncer de mama amplificadas por HER2 (HCC1954) (Figura 2A) e células de câncer gástrico (NCI-N87) (Figura 2B). As células foram incubadas com compostos por 6 horas e o splicing de transcrito SLC25A19 foi medido em uma reação qPCR em tempo real com um conjunto específico de iniciador-sonda Taqman. O eixo geométrico y representa a porcentagem (%) de resposta em relação a um controle DMSO (0,1%). Os dados são mostrados como o SD ± da média.
DESCRIÇÃO DETALHADA DE MODALIDADES ILUSTRATIVAS
[0093] As composições e métodos revelados podem ser entendidos mais prontamente a título de referência à seguinte descrição detalhada.
[0094] Ao longo deste texto, as descrições se referem a composições e métodos de uso das composições. Quando a revelação descreve ou reivindica uma característica ou modalidade associada a uma composição, tal característica ou modalidade é igualmente aplicável aos métodos de uso da composição. De modo semelhante, quando a revelação descreve ou reivindica uma característica ou modalidade associada a um método de uso de uma composição, tal característica ou modalidade é igualmente aplicável à composição.
[0095] Quando uma faixa de valores é expressa, ela inclui modalidades que usam qualquer valor específico dentro da faixa. Além disso, a referência aos valores indicados nas faixas inclui cada um dos valores dentro dessa faixa. Todas as faixas incluem seus parâmetros e podem ser combináveis. Quando os valores forem expressados como aproximações, pelo uma outra modalidade. A referência a um determinado valor numérico inclui pelo menos esse valor específico, exceto onde o contexto indique claramente em contrário. O uso de "ou" significará "e/ou" exceto onde o contexto específico de seu uso indique em contrário.
[0096] Deve-se considerar que determinadas características das composições e métodos revelados que são, para maior clareza, descritas no presente documento no contexto de modalidades separadas, também podem ser fornecidas em combinação em uma única modalidade. Por outro lado, várias características das composições e métodos revelados que são, por uma questão de brevidade, descritos no contexto de uma única modalidade, também podem ser fornecidas separadamente ou em qualquer subcombinação.
[0097] Todas as referências citadas no presente documento estão incorporadas a título de referência para qualquer propósito. Quando uma referência e o relatório descritivo estiverem em conflito, o relatório descritivo prevalecerá. Definições
[0098] Vários termos relacionados a aspectos da descrição são usados ao longo do relatório descritivo e das reivindicações. Tais termos devem ter seu significado comum na técnica, exceto onde indicado em contrário. Outros termos especificamente definidos devem ser interpretados de uma maneira consistente com as definições fornecidas no presente documento.
[0099] Conforme usado no presente documento, as formas no ceto onde o contexto indique claramente em contrário.
[0100] Os termos "cerca de" ou "aproximadamente" no contexto de valores e faixas numéricas se referem a valores ou faixas que se aproximam ou estão próximos dos valores ou faixas recitados, de modo que a modalidade possa ter o desempenho pretendido, como ter uma quantidade desejada de ácidos nucleicos ou polipeptídeos em uma mistura de reação, como é evidente para o versado na técnica a partir dos ensinamentos contidos no presente documento. Em algumas modalidades, cerca de significa mais ou menos 10% de uma quantidade numérica.
[0101] Os termos "conjugado anticorpo-fármaco", "conjugado de anticorpo", "conjugado", "imunoconjugado" e "ADC" são usados de forma intercambiável e se referem a um ou mais compostos terapêuticos (por exemplo, um modulador de splicing de herboxidieno) que está ligado a um ou mais anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno e é definido pela fórmula genérica: Ab-(L-H)p (Fórmula I), em que Ab = um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, L = uma porção química de ligante, H = um modulador de splicing de herboxidieno (por exemplo, herboxidieno ou derivado do mesmo), e p = o número de porções químicas de fármaco por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Um ADC que compreende um modulador de splicing de herboxidieno pode também ser chamado no presente documento mais especificamente de um "anticorpo carregado com modulador de splicing de herboxidieno" ou um "SMLA". Em ADCs que compreendem um modulador de splicing de herboxidieno, "p" se refere ao número de moduladores de splicing de herboxidieno ligados ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, o ligante L pode incluir uma porção química clivável entre o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e o modulador de splicing de herboxidieno. Em algumas modalidades, o ligante L pode incluir uma porção química clivável que pode ser ligada a um ou ambos o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e modulador de splicing de herboxidieno por unidade espaçadora (ou unidades espaçadoras). Em algumas modalidades, quando uma unidade espaçadora liga a porção química clivável ao modulador de splicing de herboxidieno, a mesma é uma unidade espaçadora autoimolativa. Em outras modalidades, o ligante L não inclui uma porção química clivável e é um ligante não clivável. Em algumas modalidades, o ligante L pode incluir pelo menos uma unidade espaçadora que pode se ligar diretamente ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e ao modulador de splicing de herboxidieno. Ligantes cliváveis e não cliváveis exemplificativos são descritos e exemplificados no presente documento.
[0102] para se referir a uma molécula de imunoglobulina que reconhece e se liga especificamente a um alvo, como uma proteína, polipeptídeo, carboidrato, polinucleotídeo, lipídeo, ou combinações dos itens anteriormente mencionados através de pelo menos um sítio de reconhecimento de antígeno dentro da região variável da molécula de imunoglobulina. A cadeia pesada de um anticorpo é composta por um domínio variável de cadeia pesada (V H) e uma região constante de cadeia pesada (CH). A cadeia leve é composta por um domínio variável de cadeia leve (VL) e um domínio constante de cadeia leve (CL). Com os propósitos deste pedido, os domínios variáveis de cadeia pesada e de cadeia leve maduros compreendem, cada um, três regiões determinantes de complementaridade (CDR1, CDR2 e CDR3) dentro de quatro regiões de estrutura (FR1, FR2, FR3 e FR4) dispostas a partir da terminação N até a terminação C: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 e FR4. Um "anticorpo" pode ser de ocorrência natural ou artificial, como anticorpos monoclonais produzidos por tecnologia de hibridoma convencional. O termo "anticorpo" inclui anticorpos monoclonais de comprimento total e anticorpos policlonais de comprimento total, bem como fragmentos de anticorpo como Fab, Fab', F(ab') 2, Fv e anticorpos de cadeia única. Um anticorpo pode ser uma das cinco principais classes de imunoglobulinas: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, ou subclasses das mesmas (por exemplo, isótipos IgG1, IgG2, IgG3, IgG4). O termo abrange adicionalmente anticorpos humanos, anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados e qualquer molécula de imunoglobulina modificada contendo um sítio de reconhecimento de antígeno, desde que demonstre a atividade biológica desejada (por exemplo, se ligue ao antígeno-alvo, se internalize dentro de uma célula de expressão de antígeno-alvo).
[0103] O termo "anticorpo monoclonal", como usado no presente documento, se refere a um anticorpo obtido de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, ou seja, os anticorpos individuais que compreendem a população são idênticos, exceto por possíveis mutações de ocorrência natural que podem estar presentes em pequenas quantidades. Os anticorpos monoclonais são altamente específicos, sendo dirigidos contra um único epítopo antigênico. Em contrapartida, as preparações convencionais de anticorpos (policlonais) incluem tipicamente uma variedade de anticorpos dirigidos contra (ou específicos para) epítopos diferentes. O modificador "monoclonal" indica o caráter do anticorpo como sendo obtido de uma população substancialmente homogênea de anticorpos, e não deve ser interpretado como exigindo a produção do anticorpo por qualquer método específico. Por exemplo, os anticorpos monoclonais que serão usados de acordo com a presente revelação podem ser produzidos pelo método de hibridoma primeiramente descrito por Kohler et al. (1975) Nature 256: 495, ou podem ser produzidos por métodos de DNA recombinante (consultar, por exemplo, Patente US nº 4.816.567). Os anticorpos monoclonais podem também ser isolados de bibliotecas de anticorpos de fago usando as técnicas descritas em Clackson et al. (1991) Nature 352: 6248 e Marks et al. (1991) J Mol Biol. 222: 58197, por exemplo.
[0104] Os anticorpos monoclonais descritos no presente documento incluem especificamente anticorpos "quiméricos", em que uma porção de cadeia pesada e/ou leve é idêntica ou homóloga às sequências correspondentes em anticorpos derivados de uma espécie específica ou pertencente a uma classe ou subclasse de anticorpo específica, enquanto o restante da cadeia (ou cadeias) é idêntico ou homólogo às sequências correspondentes em anticorpos derivados de outra espécie ou pertencentes a outra classe ou subclasse de anticorpos, bem como fragmentos de tais anticorpos, desde que se liguem especificamente ao antígeno alvo e/ou exibam a atividade biológica desejada.
[0105] O termo "anticorpo humano", conforme usado no presente documento, se refere a um anticorpo produzido por um ser humano ou um anticorpo que tem uma sequência de aminoácidos de um anticorpo produzido por um ser humano.
[0106] O termo "anticorpo quimérico", como usado no presente documento, se refere a anticorpos em que a sequência de aminoácidos da molécula de imunoglobulina é derivada de duas ou mais espécies. Em alguns casos, as regiões variáveis de ambas as cadeias pesadas e leves correspondem às regiões variáveis de anticorpos derivados de uma espécie com a especificidade, afinidade e atividade desejadas, enquanto as regiões constantes são homólogas a anticorpos derivados de outra espécie (por exemplo, ser humano) para minimizar uma resposta imunológica na última espécie.
[0107] Como usado no presente documento, o termo "anticorpo humanizado" se refere a formas de anticorpos que contêm sequências de anticorpos não humanos (por exemplo, murinos), bem como anticorpos humanos. Tais anticorpos são anticorpos quiméricos que contêm uma sequência mínima derivada de imunoglobulina não humana. Em geral, o anticorpo humanizado compreenderá substancialmente todos ou pelo menos um, e tipicamente dois, domínios variáveis, em que todas ou substancialmente todas as alças hipervariáveis correspondem àquelas de uma imunoglobulina não humana e todas ou substancialmente todas as regiões de estrutura (FR) são aquelas de uma sequência de imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado também compreenderá, opcionalmente, pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina (Fc), tipicamente aquela de uma imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado pode ser adicionalmente modificado pela substituição de resíduos, na região de estrutura Fv e/ou dentro dos resíduos não humanos substituídos para refinar e otimizar a especificidade, afinidade e/ou atividade do anticorpo.
[0108] O termo "fragmento de ligação ao antígeno" ou "porção de ligação ao antígeno" de um anticorpo, como usado no presente documento, se refere a um ou mais fragmentos de um anticorpo ou proteína que retêm a capacidade de se ligar especificamente a um antígeno (por exemplo, HER2, CD138, EPHA2 , MSLN, FOLH1, CDH6, CEACAM5, CFC1B, ENPP3, FOLR1, HAVCR1, KIT, MET, MUC16, SLC39A6, SLC44A4 ou STEAP1). Os fragmentos de ligação a antígeno também podem reter a capacidade de internalizar em uma célula que expressa o antígeno.
Em algumas modalidades, os fragmentos de ligação a antígeno também retêm a atividade imunoefetora.
Foi demonstrado que fragmentos de um anticorpo de comprimento total podem realizar a função de ligação a antígeno de um anticorpo de comprimento total.
Exemplos de fragmentos de ligação abrangidos pelo termo "fragmento de ligação ao antígeno" ou "porção de ligação ao antígeno" de um anticorpo incluem (i) um fragmento Fab, um fragmento monovalente que consiste nos domínios VL, VH, CleLe CH1; (ii) um fragmento F(ab')2 , um fragmento bivalente que compreende dois fragmentos Fab ligados por uma ponte de dissulfeto na região de dobradiça; (iii) um fragmento Fd que consiste nos domínios V H e CH1; (iv) um fragmento Fv que consiste nos domínios V L e VH de um único braço de um anticorpo; (v) um fragmento dAb, que compreende um único domínio variável, por exemplo, um domínio VH (consultar, por exemplo, Ward et al. (1989) Nature 341:544-6; e Pub.
Intl. nº WO 1990/005144); e (vi) uma região determinante de complementaridade (CDR) isolada.
Além disso, embora os dois domínios dos fragmentos Fv, VL e VH, sejam codificados por genes separados, os mesmos podem ser unidos pelo uso de métodos recombinantes, por um vinculador sintético que permite que os mesmos sejam fabricados como uma única cadeia de proteína na qual o par de regiões V L e VH para formar moléculas monovalentes (conhecidas como Fv de cadeia única (scFv). Consultar, por exemplo, Bird et al. (1988) Science 242:423-6; e Huston et al. (1988) Proc Natl Acad Sci.
USA 85:5879-83. Tais anticorpos de cadeia única também se destinam a ser abrangidos pelo termo "fragmento de ligação a antígeno" ou "porção de ligação a antígeno" de um anticorpo e são conhecidos na técnica como um tipo exemplificativo de fragmento de ligação que pode internalizar nas células após a ligação (consultar, por exemplo, Zhu et al. (2010)9:2131-41; He et al. (2010) J Nucl Med. 51:427-32; e Fitting et al. (2015) MAbs 7:390-402). Em certas modalidades, as moléculas de scFv podem ser incorporadas a uma proteína de fusão. Outras formas de anticorpos de cadeia única, como diacorpos, também são abrangidas. Diacorpos são anticorpos bivalentes biespecíficos em que os domínios V H e VL são expressos em uma única cadeia polipeptídica, porém, com o uso de um ligante que é muito curto para permitir o pareamento entre os dois domínios na mesma cadeia, assim, se induz o pareamento dos domínios com domínios complementares de outra cadeia e a criação de dois sítios de ligação a antígeno (consultar, por exemplo, Holliger et al. (1993) Proc Natl Acad Sci. E.U.A. 90:6.444 a 6.448; e Poljak et al. (1994) Structure 2:1.121 a 1.123). Os fragmentos de ligação a antígeno são obtidos com o uso de técnicas convencionais conhecidas pelos versados na técnica, e os fragmentos de ligação são analisados quanto à utilidade (por exemplo, afinidade de ligação, internalização) da mesma maneira que os anticorpos intactos. Os fragmentos de ligação a antígeno podem ser preparados por clivagem da proteína intacta, por exemplo, por protease ou clivagem química.
[0109] referência a um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, se refere a um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno que tem capacidade de ser conduzido através da membrana da bicamada lipídica da célula para um compartimento interno (ou seja, "internalizado") após a ligação à célula, de preferência, em um compartimento degradante na célula. Por exemplo, um anticorpo anti-HER2 de internalização é aquele que tem capacidade de ser conduzido para a célula após a ligação a HER2 na membrana celular. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno usado nos ADCs revelados no presente documento tem como alvo um antígeno de superfície celular (por exemplo, HER2) e é um anticorpo de internalização ou fragmento de ligação ao antígeno de internalização (ou seja, o ADC é transferido através da membrana celular após a ligação ao antígeno). Em algumas modalidades, o anticorpo de internalização ou fragmento de ligação ao antígeno se liga a um receptor na superfície da célula. Um anticorpo de internalização ou fragmento de ligação ao antígeno de internalização que tem como alvo um receptor na membrana celular pode induzir endocitose mediada por receptor. Em algumas modalidades, o anticorpo de internalização ou fragmento de ligação ao antígeno de internalização é conduzido para a célula através de endocitose mediada por receptor.
[0110] em referência a um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, se refere a um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno que permanece na superfície da célula após a ligação à célula. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno usado nos ADCs revelados no presente documento tem como alvo um antígeno de superfície celular e é um anticorpo não internalizante ou fragmento de ligação ao antígeno não internalizante (ou seja, o ADC permanece na superfície celular e não é transferido através membrana celular após a ligação ao antígeno). Em algumas modalidades, o anticorpo não internalizante ou fragmento de ligação ao antígeno se liga a um receptor não internalizante ou outro antígeno de superfície celular. Antígenos de superfície celular não internalizantes exemplificativos incluem, porém sem limitação, CA125 e CEA, e os anticorpos que se ligam a alvos de antígenos não internalizantes também são conhecidos na técnica (consultar, por exemplo, Bast et al. (1981) J Clin Invest. 68(5):1331- 7; Scholler e Urban (2007) Biomark Med. 1(4):513-23; e Boudousq et al. (2013) PLoS One 8(7):e69613).
[0111] O termo "receptor 2 do fator de crescimento epidérmico humano", "HER2" ou "HER2/NEU", como usado no presente documento, se refere a qualquer forma nativa de HER2 humano. O termo abrange HER2 de comprimento total (por exemplo, Sequência de Referência UniProt: P04626; SEQ ID NO:31), bem como qualquer forma de HER2 humano que possa resultar do processamento celular. O termo abrange também variantes ou fragmentos funcionais de HER2 humano, incluindo, porém sem limitação, variantes de splicing, variantes alélicas e isoformas que retêm uma ou mais funções biológicas de HER2 humano (isto é, variantes e fragmentos são abrangidos, exceto onde o contexto indicar que o termo é usado para se referir apenas à proteína do tipo selvagem). HER2 pode ser isolado de seres humanos ou pode ser produzido de forma recombinante ou por métodos sintéticos.
[0112] O termo "anticorpo anti-HER2" ou "anticorpo que se liga a HER2" se refere a qualquer forma de anticorpo ou fragmento do mesmo que se liga, por exemplo, se liga especificamente, a HER2 e abrange anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento total), anticorpos policlonais e fragmentos de anticorpos biologicamente funcionais, desde que se liguem, por exemplo, se liguem especificamente, a HER2. A Patente US nº 5.821.337 fornece e está incorporada no presente documento a título de referência para sequências de ligação a HER2 exemplificativas, incluindo sequências de anticorpos anti-HER2 exemplificativas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-HER2 usado nos ADCs revelados no presente documento é um anticorpo de internalização ou fragmento de anticorpo de internalização. Trastuzumabe (Patente US nº 5.821.337; Molina et al. (2001) Cancer Res. 61(12):4744-9) é um anticorpo HER2 anti-humano exemplificativo.
[0113] O termo "sindecano-1", "SDC1" ou "CD138", conforme usado no presente documento, se refere a qualquer forma nativa de CD138 humano. O termo abrange CD138 de comprimento total (por exemplo, Sequência de Referência UniProt: P18827; SEQ ID NO:32), bem como qualquer forma de CD138 humano que possa resultar do processamento celular. O termo abrange também variantes ou fragmentos funcionais de
CD138 humano, incluindo, porém sem limitação , variantes de splicing, variantes alélicas e isoformas que retêm uma ou mais funções biológicas de CD138 humano (isto é, variantes e fragmentos são abrangidos, exceto onde contexto indicar que o termo é usado para se referir apenas à proteína do tipo selvagem). CD138 pode ser isolado de um ser humano ou pode ser produzido de forma recombinante ou por métodos sintéticos.
[0114] O termo "anticorpo anti-CD138" ou "anticorpo que se liga a CD138" se refere a qualquer forma de anticorpo ou fragmento do mesmo que se liga, por exemplo, se liga especificamente, a CD138 e abrange anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento total), anticorpos policlonais e fragmentos de anticorpos biologicamente funcionais, desde que se liguem, por exemplo, se liguem especificamente, a CD138. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD138 usado nos ADCs revelados no presente documento é um anticorpo de internalização ou fragmento de anticorpo de internalização. B-B4 (Tassone et al. (2004) Blood 104:3688-96) é um anticorpo CD138 anti-humano exemplificativo.
[0115] O termo "receptor 2 de efrina tipo A" ou "EPHA2", como usado no presente documento, se refere a qualquer forma nativa de EPHA2 humano. O termo abrange EPHA2 de comprimento total (por exemplo, Sequência de Referência UniProt: P29317; SEQ ID NO:33), bem como qualquer forma de EPHA2 humano que possa resultar do processamento celular. O termo abrange também variantes ou fragmentos funcionais de EPHA2 humano, incluindo, porém sem limitação , variantes de splicing, variantes alélicas e isoformas que retêm uma ou mais funções biológicas de EPHA2 humano (ou seja, variantes e fragmentos são abrangidos, exceto onde contexto indicar que o termo é usado para se referir apenas à proteína do tipo selvagem). EPHA2 pode ser isolado de um ser humano ou pode ser produzido de forma recombinante ou por métodos sintéticos.
[0116] O termo "anticorpo anti-EPHA2" ou "anticorpo que se liga a
EPHA2" se refere a qualquer forma de anticorpo ou fragmento do mesmo que se liga, por exemplo, se liga especificamente, a EPHA2 e abrange anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento total), anticorpos policlonais e fragmentos de anticorpos biologicamente funcionais, desde que se liguem, por exemplo, se liguem especificamente, a EPHA2. O documento nº WO 2007/030642 fornece e está aqui incorporada no presente documento a título de referência para sequências de ligação a EPHA2 exemplificativas, incluindo sequências de anticorpos anti-EPHA2 exemplificativas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-EPHA2 usado nos ADCs revelados no presente documento é um anticorpo de internalização ou fragmento de anticorpo de internalização. 1C1 (WO 2007/030642; Jackson et al. (2008) Cancer Res. 68(22): 9367-74) é um anticorpo EPHA2 anti-humano exemplificativo.
[0117] O termo "mesotelina" ou "MSLN", conforme usado no presente documento, se refere a qualquer forma nativa de MSLN humana. O termo abrange MSLN de comprimento total (por exemplo, Sequência de Referência UniProt: Q13421; SEQ ID NO:94), bem como qualquer forma de MSLN humana que possa resultar do processamento celular. O termo também abrange variantes ou fragmentos funcionais de MSLN humana, incluindo, porém sem limitação, variantes de splicing, variantes alélicas e isoformas que retêm uma ou mais funções biológicas de MSLN humana (ou seja, variantes e fragmentos são abrangidos, exceto onde contexto indicar que o termo é usado para se referir apenas à proteína do tipo selvagem). MSLN pode ser isolada de um ser humano ou pode ser produzida de forma recombinante ou por métodos sintéticos.
[0118] O termo "anticorpo anti-MSLN" ou "anticorpo que se liga a MSLN" se refere a qualquer forma de anticorpo ou fragmento do mesmo que se liga, por exemplo, se liga especificamente, a MSLN e abrange anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento total),
anticorpos policlonais e fragmentos de anticorpos biologicamente funcionais, desde que se liguem, por exemplo, se liguem especificamente, à MSLN. O documento nº WO 2011/074621 fornece e está incorporada no presente documento a título de referência para sequências de ligação à MSLN exemplificativas, incluindo sequências de anticorpos anti-MSLN exemplificativas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-MSLN usado nos ADCs revelados no presente documento é um anticorpo de internalização ou fragmento de anticorpo de internalização. 11-25, IC14-30, IC7-4, IC17-35 e 2-9 são anticorpos MSLN anti-humanos.
[0119] O termo "glutamato carbóxi peptidase 2" ou "FOLH1", conforme usado no presente documento, se refere a qualquer forma nativa de FOLH1 humano. O termo abrange FOLH1 de comprimento total (por exemplo, Sequência de Referência UniProt: Q04609; SEQ ID NO:95), bem como qualquer forma de FOLH1 humano que possa resultar do processamento celular. O termo também abrange variantes ou fragmentos funcionais de FOLH1 humano, incluindo, porém sem limitação, variantes de splicing, variantes alélicas e isoformas que retêm uma ou mais funções biológicas de FOLH1 humano (ou seja, variantes e fragmentos são abrangidos, exceto onde contexto indicar que o termo é usado para se referir apenas à proteína do tipo selvagem). FOLH1 pode ser isolado de um ser humano ou pode ser produzido de forma recombinante ou por métodos sintéticos.
[0120] O termo "anticorpo anti-FOLH1" ou "anticorpo que se liga a FOLH1" se refere a qualquer forma de anticorpo ou fragmento do mesmo que se liga, por exemplo, se liga especificamente, a FOLH1 e abrange anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento total), anticorpos policlonais e fragmentos de anticorpos biologicamente funcionais, desde que se liguem, por exemplo, se liguem especificamente, a FOLH1. O documento n° WO 2019/012260 e documento n° WO 2017/212250 fornecem e estão incorporados no presente documento a título de referência para sequências de ligação a FOLH1 exemplificativas, incluindo sequências de anticorpos anti-FOLH1 exemplificativas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FOLH1 usado nos ADCs revelados no presente documento é um anticorpo de internalização ou fragmento de anticorpo de internalização. J591 (desimunizado) é um anticorpo FOLH1 anti-humano exemplificativo.
[0121] O termo "caderina-6" ou "CDH6", conforme usado no presente documento, se refere a qualquer forma nativa de CDH6 humano. O termo abrange CDH6 de comprimento total (por exemplo, Sequência de Referência UniProt: P55285; SEQ ID NO:96), bem como qualquer forma de CDH6 humano que possa resultar do processamento celular. O termo também abrange variantes ou fragmentos funcionais de CDH6 humano, incluindo, porém sem limitação, variantes de splicing, variantes alélicas e isoformas que retêm uma ou mais funções biológicas de CDH6 humano (ou seja, variantes e fragmentos são abrangidos, exceto onde contexto indicar que o termo é usado para se referir apenas à proteína do tipo selvagem). CDH6 pode ser isolado de um ser humano ou pode ser produzido de forma recombinante ou por métodos sintéticos.
[0122] O termo "anticorpo anti-CDH6" ou "anticorpo que se liga a CDH6" se refere a qualquer forma de anticorpo ou fragmento do mesmo que se liga, por exemplo, se liga especificamente, a CDH6 e abrange anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento total), anticorpos policlonais e fragmentos de anticorpos biologicamente funcionais, desde que se liguem, por exemplo, se liguem especificamente, a CDH6. O documento nº WO 2018/185618 fornece e está aqui incorporada no presente documento a título de referência para sequências de ligação a CDH6 exemplificativas, incluindo sequências de anticorpos anti-CDH6 exemplificativas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CDH6 usado nos ADCs revelados no presente documento é um anticorpo de internalização ou fragmento de anticorpo de internalização.
[0123] O termo "molécula 5 de adesão celular relacionada ao antígeno carcinoembriônico" ou "CEACAM5", como usado no presente documento, se refere a qualquer forma nativa de CEACAM5 humano. O termo abrange CEACAM5 de comprimento total (por exemplo, Sequência de Referência UniProt: P06731; SEQ ID NO:97), bem como qualquer forma de CEACAM5 humano que possa resultar do processamento celular. O termo também abrange variantes ou fragmentos funcionais de CEACAM5 humano, incluindo, porém sem limitação, variantes de splicing, variantes alélicas e isoformas que retêm uma ou mais funções biológicas de CEACAM5 humano (ou seja, variantes e fragmentos são abrangidos, exceto onde contexto indicar que o termo é usado para se referir apenas à proteína do tipo selvagem). CEACAM5 pode ser isolado de um ser humano ou pode ser produzido de forma recombinante ou por métodos sintéticos.
[0124] O termo "anticorpo anti-CEACAM5" ou "anticorpo que se liga a CEACAM5" se refere a qualquer forma de anticorpo ou fragmento do mesmo que se liga, por exemplo, se liga especificamente, a CEACAM5 e abrange anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento total), anticorpos policlonais e fragmentos de anticorpos biologicamente funcionais, desde que se liguem, por exemplo, se liguem especificamente, a CEACAM5. O documento nº US 2015/0125386 fornece e está incorporado no presente documento a título de referência para sequências de ligação a CEACAM5 exemplificativas, incluindo sequências de anticorpos anti-CEACAM5 exemplificativas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti- CEACAM5 usado nos ADCs revelados no presente documento é um anticorpo de internalização ou fragmento de anticorpo de internalização. hMN14 é um anticorpo CEACAM5 anti-humano exemplificativo.
[0125] conforme usado no presente documento, se refere a qualquer forma nativa de CFC1B humano. O termo abrange CFC1B de comprimento total (por exemplo,
Sequência de Referência UniProt: P0CG36; SEQ ID NO:98), bem como qualquer forma de CFC1B humano que possa resultar do processamento celular. O termo também abrange variantes ou fragmentos funcionais de CFC1B humano, incluindo, porém sem limitação, variantes de splicing, variantes alélicas e isoformas que retêm uma ou mais funções biológicas de CFC1B humano (ou seja, variantes e fragmentos são abrangidos, exceto onde contexto indicar que o termo é usado para se referir apenas à proteína do tipo selvagem). CFC1B pode ser isolado de um ser humano ou pode ser produzido de forma recombinante ou por métodos sintéticos.
[0126] O termo "anticorpo anti-CFC1B" ou "anticorpo que se liga a CFC1B" se refere a qualquer forma de anticorpo ou fragmento do mesmo que se liga, por exemplo, se liga especificamente, a CFC1B e abrange anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento total), anticorpos policlonais e fragmentos de anticorpos biologicamente funcionais, desde que se liguem, por exemplo, se liguem especificamente, a CFC1B. O documento nº WO 2002/088170 fornece e está aqui incorporada no presente documento a título de referência para sequências de ligação a CFC1B exemplificativas, incluindo sequências de anticorpos anti-CFC1B exemplificativas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CFC1B usado nos ADCs revelados no presente documento é um anticorpo de internalização ou fragmento de anticorpo de internalização.
[0127] O termo "ectonucleotídeo pirofosfatase/membro da família fosfodiesterase 3" ou "ENPP3", como usado no presente documento, se refere a qualquer forma nativa de ENPP3 humano. O termo abrange ENPP3 de comprimento total (por exemplo, Sequência de Referência UniProt: O14638; SEQ ID NO:99), bem como qualquer forma de ENPP3 humano que possa resultar do processamento celular. O termo também abrange variantes ou fragmentos funcionais de ENPP3 humano, incluindo, porém sem limitação, variantes de splicing, variantes alélicas e isoformas que retêm uma ou mais funções biológicas de ENPP3 humano (ou seja, variantes e fragmentos são abrangidos, exceto onde contexto indicar que o termo é usado para se referir apenas à proteína do tipo selvagem). ENPP3 pode ser isolado de um ser humano ou pode ser produzido de forma recombinante ou por métodos sintéticos.
[0128] O termo "anticorpo anti-ENPP3" ou "anticorpo que se liga a ENPP3" se refere a qualquer forma de anticorpo ou fragmento do mesmo que se liga, por exemplo, se liga especificamente, a ENPP3 e abrange anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento total), anticorpos policlonais e fragmentos de anticorpos biologicamente funcionais, desde que se liguem, por exemplo, se liguem especificamente, a ENPP3. Donate et al. ((2016) Clin Cancer Res. 22(8):1989-99) fornecem e estão incorporados no presente documento a título de referência para sequências de ligação a ENPP3 exemplificativas, incluindo sequências de anticorpos anti- ENPP3 exemplificativas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-ENPP3 usado nos ADCs revelados no presente documento é um anticorpo de internalização ou fragmento de anticorpo de internalização.
[0129] O termo "receptor alfa de folato" ou "FOLR1", conforme usado no presente documento, se refere a qualquer forma nativa de FOLR1 humano. O termo abrange FOLR1 de comprimento total (por exemplo, Sequência de Referência UniProt: P15328; SEQ ID NO:100), bem como qualquer forma de FOLR1 humano que possa resultar do processamento celular. O termo também abrange variantes ou fragmentos funcionais de FOLR1 humano, incluindo, porém sem limitação, variantes de splicing, variantes alélicas e isoformas que retêm uma ou mais funções biológicas de FOLR1 humano (ou seja, variantes e fragmentos são abrangidos, exceto onde contexto indicar que o termo é usado para se referir apenas à proteína do tipo selvagem). FOLR1 pode ser isolado de um ser humano ou pode ser produzido de forma recombinante ou por métodos sintéticos.
[0130] O termo "anticorpo anti-FOLR1" ou "anticorpo que se liga a FOLR1" se refere a qualquer forma de anticorpo ou fragmento do mesmo que se liga, por exemplo, se liga especificamente, a FOLR1 e abrange anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento total), anticorpos policlonais e fragmentos de anticorpos biologicamente funcionais, desde que se liguem, por exemplo, se liguem especificamente, a FOLR1. O documento nº WO 2005/080431 e Coney et al. ((1991) Cancer Res. 51(22):6125-32) fornecem e estão incorporados no presente documento a título de referência para sequências de ligação a FOLR1exemplificativas, incluindo sequências de anticorpos anti-FOLR1 exemplificativas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FOLR1 usado nos ADCs revelados no presente documento é um anticorpo de internalização ou fragmento de anticorpo de internalização. Farletuzumabe e MOv19 são anticorpos FOLR1 anti-humanos exemplificativos.
[0131] O termo "receptor celular do vírus A da hepatite" ou "HAVCR1", como usado no presente documento, se refere a qualquer forma nativa de HAVCR1 humano. O termo abrange HAVCR1 de comprimento total (por exemplo, Sequência de Referência UniProt: Q96D42; SEQ ID NO:101), bem como qualquer forma de HAVCR1 humano que possa resultar do processamento celular. O termo também abrange variantes ou fragmentos funcionais de HAVCR1 humano, incluindo, porém sem limitação, variantes de splicing, variantes alélicas e isoformas que retêm uma ou mais funções biológicas de HAVCR1 humano (ou seja, variantes e fragmentos são abrangidos, exceto onde contexto indicar que o termo é usado para se referir apenas à proteína do tipo selvagem). HAVCR1 pode ser isolado de um ser humano ou pode ser produzido de forma recombinante ou por métodos sintéticos.
[0132] O termo "anticorpo anti-HAVCR1" ou "anticorpo que se liga a HAVCR1" se refere a qualquer forma de anticorpo ou fragmento do mesmo que se liga, por exemplo, se liga especificamente, a HAVCR1 e abrange anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento total), anticorpos policlonais e fragmentos de anticorpos biologicamente funcionais, desde que se liguem, por exemplo, se liguem especificamente, a HAVCR1. Thomas et al. ((2016) Mol Cancer Ther. 15(12):2946-54) fornecem e estão incorporados no presente documento a título de referência para sequências de ligação a HAVCR1 exemplificativas, incluindo sequências de anticorpos anti-HAVCR1 exemplificativas.. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-HAVCR1 usado nos ADCs revelados no presente documento é um anticorpo de internalização ou fragmento de anticorpo de internalização.
[0133] O termo "receptor Kit de fator de crescimento de mastócitos/células-tronco" ou "KIT", como usado no presente documento, se refere a qualquer forma nativa de KIT humano. O termo abrange KIT de comprimento total (por exemplo, Sequência de Referência UniProt: P10721; SEQ ID NO:102), bem como qualquer forma de KIT humana que possa resultar do processamento celular. O termo também abrange variantes ou fragmentos funcionais de KIT humana, incluindo, porém sem limitação, variantes de splicing, variantes alélicas e isoformas que retêm uma ou mais funções biológicas de KIT humana (ou seja, variantes e fragmentos são abrangidos, exceto onde contexto indicar que o termo é usado para se referir apenas à proteína do tipo selvagem). KIT pode ser isolada de um ser humano ou pode ser produzida de forma recombinante ou por métodos sintéticos.
[0134] O termo "anticorpo anti-KIT" ou "anticorpo que se liga a KIT" se refere a qualquer forma de anticorpo ou fragmento do mesmo que se liga, por exemplo, se liga especificamente, a KIT e abrange anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento total), anticorpos policlonais e fragmentos de anticorpos biologicamente funcionais, desde que se liguem, por exemplo, se liguem especificamente, a KIT. Shi et al. ((2016) Proc Natl Acad Sci USA 113(33):E4784-93) e Abrams et al. ((2018) Clin
Cancer Res. 24(17):4297-308) fornecem e estão incorporados no presente documento a título de referência para sequências de ligação a KIT exemplificativas, incluindo sequências de anticorpos anti-KIT exemplificativas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-KIT usado nos ADCs revelados no presente documento é um anticorpo de internalização ou fragmento de anticorpo de internalização.
[0135] O termo "receptor de fator de crescimento de hepatócito" ou "MET", como usado no presente documento, se refere a qualquer forma nativa de MET humano. O termo abrange MET de comprimento total (por exemplo, Sequência de Referência UniProt: P08581; SEQ ID NO:103), bem como qualquer forma de MET humana que possa resultar do processamento celular. O termo também abrange variantes ou fragmentos funcionais de MET humana, incluindo, porém sem limitação, variantes de splicing, variantes alélicas e isoformas que retêm uma ou mais funções biológicas de MET humana (ou seja, variantes e fragmentos são abrangidos, exceto onde contexto indicar que o termo é usado para se referir apenas à proteína do tipo selvagem). MET pode ser isolada de um ser humano ou pode ser produzida de forma recombinante ou por métodos sintéticos.
[0136] O termo "anticorpo anti-MET" ou "anticorpo que se liga a MET" se refere a qualquer forma de anticorpo ou fragmento do mesmo que se liga, por exemplo, se liga especificamente, a MET e abrange anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento total), anticorpos policlonais e fragmentos de anticorpos biologicamente funcionais, desde que se liguem, por exemplo, se liguem especificamente, a MET. Yang et al. ((2019) Acta Pharmacol Sin.) fornecem e estão incorporados no presente documento a título de referência para sequências de ligação a MET exemplificativas, incluindo sequências de anticorpos anti-MET exemplificativas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-MET usado nos ADCs revelados no presente documento é um anticorpo de internalização ou fragmento de anticorpo de internalização.
[0137] O termo "mucina-16" ou "MUC16", conforme usado no presente documento, se refere a qualquer forma nativa de MUC16 humana. O termo abrange MUC16 de comprimento total (por exemplo, Sequência de Referência UniProt: Q8WXI7; SEQ ID NO:104), bem como qualquer forma de MUC16 humano que possa resultar do processamento celular. O termo também abrange variantes ou fragmentos funcionais de MUC16 humano, incluindo, porém sem limitação, variantes de splicing, variantes alélicas e isoformas que retêm uma ou mais funções biológicas de MUC16 humano (ou seja, variantes e fragmentos são abrangidos, exceto onde contexto indicar que o termo é usado para se referir apenas à proteína do tipo selvagem). MUC16 pode ser isolado de um ser humano ou pode ser produzido de forma recombinante ou por métodos sintéticos.
[0138] O termo "anticorpo anti-MUC16" ou "anticorpo que se liga a MUC16" se refere a qualquer forma de anticorpo ou fragmento do mesmo que se liga, por exemplo, se liga especificamente, a MUC16 e abrange anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento total), anticorpos policlonais e fragmentos de anticorpos biologicamente funcionais, desde que se liguem, por exemplo, se liguem especificamente, a MUC16. Liu et al. ((2016) Ann Oncol. 27(11):2124-30) fornecem e estão incorporados no presente documento a título de referência para sequências de ligação à MUC16 exemplificativas, incluindo sequências de anticorpos anti-MUC16 exemplificativas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-MUC16 usado nos ADCs revelados no presente documento é um anticorpo de internalização ou fragmento de anticorpo de internalização.
[0139] conforme usado no presente documento, se refere a qualquer forma nativa de SLC39A6 humano. O termo abrange SLC39A6 de comprimento total (por exemplo, Sequência de Referência UniProt:Q13433; SEQ ID NO:105), bem como qualquer forma de SLC39A6 humano que possa resultar do processamento celular. O termo também abrange variantes ou fragmentos funcionais de SLC39A6 humano, incluindo, porém sem limitação, variantes de splicing, variantes alélicas e isoformas que retêm uma ou mais funções biológicas de SLC39A6 humano (ou seja, variantes e fragmentos são abrangidos, exceto onde contexto indicar que o termo é usado para se referir apenas à proteína do tipo selvagem). SLC39A6 pode ser isolado de um ser humano ou pode ser produzido de forma recombinante ou por métodos sintéticos.
[0140] O termo "anticorpo anti-SLC39A6" ou "anticorpo que se liga a SLC39A6" se refere a qualquer forma de anticorpo ou fragmento do mesmo que se liga, por exemplo, se liga especificamente, a SLC39A6 e abrange anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento total), anticorpos policlonais e fragmentos de anticorpos biologicamente funcionais, desde que se liguem, por exemplo, se liguem especificamente, a SLC39A6. Sussman et al. ((2014) Mol Cancer Ther. 13(12):2991-3000) fornecem e estão incorporados no presente documento a título de referência para sequências de ligação a SLC39A6 exemplificativas, incluindo sequências de anticorpos anti-SLC39A6 exemplificativas.. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SLC39A6 usado nos ADCs revelados no presente documento é um anticorpo de internalização ou fragmento de anticorpo de internalização.
[0141] O termo "proteína 4 semelhante a transportador de colina" forma nativa de SLC44A4 humano. O termo abrange SLC44A4 de comprimento total (por exemplo, Sequência de Referência UniProt: Q53GD3; SEQ ID NO:106), bem como qualquer forma de SLC44A4 humano que possa resultar do processamento celular. O termo também abrange variantes ou fragmentos funcionais de SLC44A4 humano, incluindo, porém sem limitação,
variantes de splicing, variantes alélicas e isoformas que retêm uma ou mais funções biológicas de SLC44A4 humano (ou seja, variantes e fragmentos são abrangidos, exceto onde contexto indicar que o termo é usado para se referir apenas à proteína do tipo selvagem). SLC44A4 pode ser isolado de um ser humano ou pode ser produzido de forma recombinante ou por métodos sintéticos.
[0142] O termo "anticorpo anti-SLC44A4" ou "anticorpo que se liga a SLC44A4" se refere a qualquer forma de anticorpo ou fragmento do mesmo que se liga, por exemplo, se liga especificamente, a SLC44A4 e abrange anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento total), anticorpos policlonais e fragmentos de anticorpos biologicamente funcionais, desde que se liguem, por exemplo, se liguem especificamente, a SLC44A4. Mattie et al. ((2016) Mol Cancer Ther. 15(11):2679-87) fornecem e estão incorporados no presente documento a título de referência para sequências de ligação a SLC44A4 exemplificativas, incluindo sequências de anticorpos anti-SLC44A4 exemplificativas.. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-SLC44A4 usado nos ADCs revelados no presente documento é um anticorpo de internalização ou fragmento de anticorpo de internalização.
[0143] O termo "metalorreductase STEAP1" ou "STEAP1", conforme usado no presente documento, se refere a qualquer forma nativa de STEAP1 humano. O termo abrange STEAP1 de comprimento total (por exemplo, Sequência de Referência UniProt: Q9UHE8; SEQ ID NO:107), bem como qualquer forma de STEAP1 humano que possa resultar do processamento celular. O termo também abrange variantes ou fragmentos funcionais de STEAP1 humano, incluindo, porém sem limitação, variantes de splicing, variantes alélicas e isoformas que retêm uma ou mais funções biológicas de STEAP1 humano (ou seja, variantes e fragmentos são abrangidos, exceto onde contexto indicar que o termo é usado para se referir apenas à proteína do tipo selvagem). STEAP1 pode ser isolado de um ser humano ou pode ser produzido de forma recombinante ou por métodos sintéticos.
[0144] O termo "anticorpo anti-STEAP1" ou "anticorpo que se liga a STEAP1" se refere a qualquer forma de anticorpo ou fragmento do mesmo que se liga, por exemplo, se liga especificamente, a STEAP1 e abrange anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento total), anticorpos policlonais e fragmentos de anticorpos biologicamente funcionais, desde que se liguem, por exemplo, se liguem especificamente, a STEAP1. O documento nº WO 2008/052187 fornece e está aqui incorporada no presente documento a título de referência para sequências de ligação a STEAP1 exemplificativas, incluindo sequências de anticorpos anti-STEAP1 exemplificativas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-STEAP1 usado nos ADCs revelados no presente documento é um anticorpo de internalização ou fragmento de anticorpo de internalização.
[0145] Como usado no presente documento, o termo "específico", ligação entre um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno (por exemplo, um anticorpo anti-HER2) e um antígeno alvo (por exemplo, HER2) em uma população heterogênea de proteínas e outros produtos biológicos. Os anticorpos podem ser testados quanto à especificidade de ligação, comparando-se a ligação a um antígeno adequado com a ligação a um antígeno ou mistura de antígeno irrelevante sob um determinado conjunto de condições. Se o anticorpo se liga ao antígeno adequado com pelo menos 2, 5, 7 e de preferência, 10 ou mais vezes mais afinidade do que o antígeno ou mistura de antígeno irrelevante, então o mesmo é considerado específico. Um "anticorpo específico" ou um "anticorpo alvo-específico" é aquele que se liga apenas ao antígeno alvo (por exemplo, HER2), mas não se liga (ou exibe ligação mínima) a outros antígenos. Em certas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno que se liga especificamente a um antígeno alvo (por exemplo, HER2) tem uma KD menor que 1x10-6 M, menor que 1x10-7 M, menor que 1x10-8 M, menor que 1x10-9 M, menor que 1x10-10 M, menor que 1x10-11 M, menor que 1x10-12 M ou menor que 1x10-13 M. Em certas modalidades, a KD é 1 pM a 500 pM. Em algumas modalidades, a K D é entre 500 pM a 1 µM, 1 µM a 100 nM ou 100 mM a 10 nM.
[0146] O termo "epítopo" se refere à porção de um antígeno com capacidade de ser reconhecido e especificamente ligado por um anticorpo. Quando o antígeno é um polipeptídeo, os epítopos podem ser formados a partir de aminoácidos contíguos ou aminoácidos não contíguos justapostos por enovelamento terciário do polipeptídeo. O epítopo ligado por um anticorpo pode ser identificado usando qualquer técnica de mapeamento de epítopo conhecida na técnica, incluindo cristalografia de raios-X para identificação de epítopo por visualização direta do complexo antígeno-anticorpo, bem como monitoramento da ligação do anticorpo a fragmentos ou variações mutadas do antígeno ou monitoramento da acessibilidade ao solvente de diferentes partes do anticorpo e do antígeno. Estratégias exemplificativas usadas para mapear epítopos de anticorpos incluem, porém sem limitação, varredura de oligopeptídeo baseada em arranjo, proteólise limitada, mutagênese sítio-dirigida, mapeamento de mutagênese de alto rendimento, troca de hidrogênio-deutério e espectrometria de massa (consultar, por exemplo, Gershoni et al. (2007) 21:145-56; e Hager- Braun e Tomer (2005) Expert Rev Proteomics 2:745-56).
[0147] A ligação competitiva e a classificação de epítopos também podem ser usadas para determinar anticorpos que compartilham epítopos idênticos ou sobrepostos. A ligação competitiva pode ser avaliada usando um ensaio de bloqueio cruzado, como o ensaio descrito em Lane (1a edição 1988, 2a edição 2014). Em algumas modalidades, a ligação competitiva é identificada quando um anticorpo de teste ou proteína de ligação reduz a ligação de um anticorpo de referência ou proteína de ligação a um antígeno alvo, como HER2 (por exemplo, uma proteína de ligação que compreende CDRs e/ou domínios variáveis selecionados dentre aqueles identificados nas Tabelas 2 a 4), em pelo menos cerca de 50% no ensaio de bloqueio cruzado (por exemplo, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 99,5%, ou mais, ou qualquer porcentagem entre as mesmas) e/ou vice-versa. Em algumas modalidades, a ligação competitiva pode ser devido a epítopos compartilhados ou similares (por exemplo, parcialmente sobrepostos), ou devido a um impedimento estérico em que anticorpos ou proteínas de ligação se ligam a epítopos próximos (consultar, por exemplo, Tzartos, Methods in Molecular Biology (Morris, ed . (1998) vol. 66, páginas 55-66)). Em algumas modalidades, a ligação competitiva pode ser usada para classificar grupos de proteínas de ligação que compartilham epítopos similares. Por exemplo, as proteínas de ligação que competem pela ligação podem ser "classificadas" como um grupo de proteínas de ligação que têm epítopos sobrepostos ou próximos, enquanto aquelas que não competem são colocadas em um grupo separado de proteínas de ligação que não têm epítopos sobrepostos ou próximos.
[0148] O termo "kon" ou "ka" se refere à constante de taxa de associação para associação de um anticorpo ao antígeno para formar o complexo anticorpo/antígeno. A taxa pode ser determinada usando ensaios padrão, como ressonância plasmônica de superfície, inferometria de biocamada ou ensaio ELISA.
[0149] O termo "koff" ou "kd" se refere à constante de taxa de dissociação para dissociação de um anticorpo do complexo anticorpo/antígeno. A taxa pode ser determinada usando ensaios padrão, como ressonância plasmônica de superfície, inferometria de biocamada ou ensaio ELISA.
[0150] O termo "KD" se refere à constante de dissociação de equilíbrio de uma interação anticorpo-antígeno específica. KD é calculada por ka/kd. A taxa pode ser determinada usando ensaios padrão, como ressonância plasmônica de superfície, inferometria de biocamada ou ensaio ELISA.
[0151] O termo "p" ou "carregamento de modulador de splicing de herboxidieno" ou "razão modulador de splicing de herboxidieno:anticorpo" ou "razão modulador de splicing de herboxidieno para anticorpo" ou "HAR" se refere ao número de moduladores de splicing de herboxidieno por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, ou seja, carregamento de modulador de splicing de herboxidieno, ou o número de porções químicas -L-H por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno (Ab) em ADCs revelados no presente documento. Em ADCs que compreendem um modulador de splicing de herboxidieno, "p" se refere ao número de moduladores de splicing de herboxidieno ligados ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Por exemplo, se dois moduladores de splicing de herboxidieno (por exemplo, dois compostos, cada um com a estrutura de H3) estiverem ligados a um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, p = 2. Em composições que compreendem múltiplas cópias de ADCs, conforme descrito no presente p médio" se refere ao número médio de porções químicas -L-H por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, também chamado de "carregamento médio de modulador de splicing de herboxidieno".
[0152] Um "ligante" ou "porção química de ligante" é usado no presente documento para se referir a qualquer porção química que tem capacidade de se ligar covalentemente a um composto, geralmente uma porção química de fármaco, como uma porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno, a outra porção química como um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Os ligantes podem ser suscetíveis ou substancialmente resistentes à clivagem induzida por ácido, clivagem induzida por peptidase, clivagem à base de luz, clivagem induzida por esterase e/ou clivagem por ligação dissulfeto, em condições sob as quais o composto ou o anticorpo permanece ativo.
[0153] referir a um composto químico, uma mistura de compostos químicos, uma macromolécula biológica, ou um extrato produzido a partir de materiais biológicos. O termo "agente terapêutico" ou "fármaco" se refere a um agente que tem capacidade para modular um processo biológico e/ou tem atividade biológica. O modulador de splicing de herboxidieno descrito no presente documento consiste em agentes terapêuticos exemplificativos.
[0154] O termo "agente quimioterápico" ou "agente anticâncer" é usado no presente documento para se referir a todos os agentes que são eficazes no tratamento de câncer, independentemente do mecanismo de ação. A inibição de metástase ou angiogênese é frequentemente uma propriedade de um agente quimioterápico. Os agentes quimioterápicos incluem anticorpos, moléculas biológicas e moléculas pequenas e abrangem os compostos moduladores de splicing de herboxidieno descritos no presente documento. Um agente quimioterápico pode ser um agente citotóxico ou citostático. O termo "agente citostático" se refere a um agente que inibe ou suprime o crescimento celular e/ou multiplicação de células. O termo "agente citotóxico" se refere a uma substância que causa a morte celular principalmente por interferir na atividade de expressão e/ou funcionamento de uma célula.
[0155] Como usado no presente documento, os termos "modulador de splicing de herboxidieno", "modulador de spliceossoma de herboxidieno" ou "modulador de splice de herboxidieno" se referem a compostos que têm atividade anticâncer por interação com componentes do spliceossoma e estruturalmente relacionados a herboxidieno. Em algumas modalidades, um modulador de splicing de herboxidieno altera a taxa ou forma de splicing em uma célula alvo. Moduladores de splicing de herboxidieno que funcionam como agentes inibidores, por exemplo, têm capacidade de reduzir a proliferação celular descontrolada. Em algumas modalidades, os moduladores de splicing de herboxidieno podem agir se ligando ao complexo de spliceossoma SF3b. Tais moduladores podem ser derivados de ocorrência natural ou sintéticos ou análogos de herboxidieno. Como usado no presente documento, os termos "derivado" e "análogo" quando se referem a um modulador de splicing de herboxidieno, ou similares, significam qualquer composto que retém essencialmente a mesma função ou atividade biológica, similar ou intensificada que herboxidieno, mas tem um estrutura química ou biológica alterada. Em algumas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno é um derivado de herboxidieno.
[0156] Como usado no presente documento, uma "porção química de modulador de splicing de herboxidieno" se refere ao componente de um ADC ou composição que fornece a estrutura de um composto modulador de splicing de herboxidieno, por exemplo, o componente modulador de splicing de herboxidieno (H) em um ADC da Fórmula (I), ou em uma composição que compreende -L-H.
[0157] Como usado no presente documento, um "spliceossoma" se refere a um complexo de ribonucleoproteína que remove íntrons de um ou mais segmentos de RNA, como segmentos de pré-mRNA.
[0158] O termo "homólogo" se refere a uma molécula que exibe homologia a outra molécula, por exemplo, que tem sequências de resíduos químicos que são iguais ou similares nas posições correspondentes.
[0159] O termo "inibir" ou "inibição de", como usado no presente documento, significa reduzir em uma quantidade mensurável e pode incluir, mas não exige prevenção ou inibição completa.
[0160] O termo "negativo para alvo", "negativo para antígeno alvo" ou "negativo para antígeno" se refere à ausência de expressão de antígeno alvo por uma célula ou tecido. O termo "positivo para alvo", "positivo para antígeno alvo" ou "positivo para antígeno" se refere à presença de expressão de antígeno alvo. Por exemplo, uma célula ou linhagem celular que não expressa um antígeno alvo pode ser descrita como negativa para alvo,
enquanto uma célula ou linhagem celular que expressa um antígeno alvo pode ser descrita como positiva para alvo.
[0161] O termo "extermínio por espectador" ou "efeito de espectador" se refere ao extermínio de células negativas para alvo na presença de células positivas para alvo, em que o extermínio de células negativas para alvo não é observado na ausência de células positivas para alvo. O contato célula a célula, ou pelo menos a proximidade entre células positivas para alvo e negativas para alvo permite o extermínio por espectador. Este tipo de extermínio é distinguível de "extermínio fora do alvo", que se refere ao alvo" pode ser observado na ausência de células positivas para alvo.
[0162] Os termos "distúrbio neoplásico" e "câncer" são usados no presente documento de forma intercambiável para se referir à presença de células que têm características típicas de células causadoras de câncer, como proliferação descontrolada, imortalidade, potencial metastático, crescimento rápido e taxa de proliferação e/ou determinadas características morfológicas. Frequentemente, as células cancerosas podem estar sob a forma de um tumor ou massa, mas essas células podem existir sozinhas em um indivíduo ou podem circular na corrente sanguínea como células independentes, como células leucêmicas ou de linfoma. Os termos "distúrbio neoplásico" e "câncer" incluem todos os tipos de cânceres e metástases de câncer, incluindo malignidade hematológica, tumores sólidos, sarcomas, carcinomas e outros cânceres de tumor sólido e não sólido. As neoplasias hematológicas podem incluir neoplasias de células B, cânceres do sangue (leucemias), cânceres de células plasmáticas (mielomas, por exemplo, mieloma múltiplo) ou cânceres dos gânglios linfáticos (linfomas). As malignidades de células B exemplificativas incluem leucemia linfocítica crônica (CLL), linfoma folicular, linfoma de células do manto e linfoma difuso de grandes células B. As leucemias podem incluir leucemia linfoblástica aguda (LLA), leucemia mielogênica aguda (AML),
leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia mieloide crônica (CML), leucemia mielomonocítica crônica (CMML), leucemia monocítica aguda (AMoL), etc. Os linfomas podem incluir linfoma de Hodgkin e linfoma não Hodgkin. Outras malignidades hematológicas podem incluir síndrome mielodisplásica (MDS). Os tumores sólidos incluem carcinomas como adenocarcinoma, por exemplo, câncer de mama, câncer de pâncreas, câncer de próstata, câncer de cólon ou colorretal, câncer de pulmão, câncer gástrico, câncer cervical, câncer endometrial, câncer de ovário, colangiocarcinoma, glioma, melanoma, etc.
[0163] Os termos "tumor" e "neoplasma" se referem a qualquer massa de tecido que resulte do crescimento excessivo ou proliferação celular, benigna ou maligna, incluindo lesões pré-cancerosas.
[0164] Os termos "célula tumoral" e "célula neoplásica" são usados de forma intercambiável e se referem a células individuais ou à população total de células derivadas de um tumor ou neoplasma, incluindo células não tumorigênicas e células-tronco cancerosas. Como usado no presente documento, o termo "célula tumoral" será modificado pelo termo "não tumorigênico" quando se refere apenas às células tumorais sem a capacidade de renovação e diferenciação para distinguir essas células tumorais de células- tronco cancerosas.
[0165] Os termos "indivíduo" e "paciente" são usados de forma intercambiável no presente documento para se referir a qualquer animal, como qualquer mamífero, incluindo, porém sem limitação, seres humanos, primatas não humanos, roedores e similares. Em algumas modalidades, o mamífero é um camundongo. Em algumas modalidades, o mamífero é um ser humano. Em algumas modalidades, o indivíduo é um camundongo. Em algumas modalidades, o indivíduo é um ser humano.
[0166] O termo "coadministração" ou administração "em combinação com" um ou mais agentes terapêuticos inclui a administração simultânea e a administração consecutiva em qualquer ordem.
[0167] Uma "composição farmacêutica" se refere a uma preparação que está em uma forma para permitir a administração e, subsequentemente, fornecer a atividade biológica pretendida do ingrediente ativo (ou ingredientes ativos) e/ou para obter um efeito terapêutico, e que não contém componentes adicionais que são inaceitavelmente tóxicos para um indivíduo ao qual a formulação seria administrada. A composição farmacêutica pode ser estéril.
[0168] Um "excipiente farmacêutico" compreende um material como um adjuvante, um carreador, agentes de ajuste e tampão de pH, agentes de ajuste de tonicidade, agentes umectantes, conservantes e similares.
[0169] amente aceitável" significa aprovado ou aprovável por uma agência reguladora do governo federal ou estadual, ou mencionado na Farmacopeia dos EUA ou outra farmacopeia geralmente reconhecida, para uso em animais e mais particularmente em seres humanos
[0170] Um "sal farmaceuticamente aceitável" é um sal que retém a atividade biológica desejada do composto parente e não confere efeitos toxicológicos indesejados. Exemplos de tais sais são: (a) sais de adição ácidos formados com ácidos inorgânicos, por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido nítrico e similares; e sais formados com ácidos orgânicos, por exemplo, ácido acético, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido glucônico, ácido cítrico, ácido málico, ácido ascórbico, ácido benzoico, ácido tânico, ácido palmítico, ácido algínico, ácido poliglutâmico, ácido naftalenossulfônico, ácido metanossulfônico, ácido p-toluenossulfônico, ácido naftalenodissulfônico, ácido poligalacturônico e similares; e (b) sais formados a partir de ânions elementares, como cloro, bromo e iodo. Consultar, por exemplo, Haynes et al., "Commentary: Occurrence of Pharmaceutically Acceptable Anions and Cations in the Cambridge Structural Database," J Pharmaceutical Sciences, vol. 94, no. 10 (2005) e Berge et al., "Pharmaceutical Salts," J Pharmaceutical Sciences,
vol. 66, no. 1 (1977), que estão incorporados a título de referência no presente documento.
[0171] O termo "quantidade eficaz", como usado no presente documento, se refere à quantidade de um composto, ADC ou composição descrita no presente documento (por exemplo, um modulador de splicing de herboxidieno ou um ADC) que é suficiente para realizar um propósito especificamente determinado, por exemplo, para produzir um efeito terapêutico após a administração, como uma redução na taxa de crescimento do tumor ou volume do tumor, uma redução em um sintoma de câncer ou alguns outros indícios de eficácia do tratamento. Um valor eficaz pode ser determinado de maneira rotineira em relação ao objetivo estabelecido. O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" se refere a uma quantidade de um composto, um ADC ou composição descrita no presente documento eficaz para extermínio, redução e/ou inibição detectável do crescimento ou espalhamento de células tumorais, o tamanho ou número de tumores e/ou outra medida do nível, estágio, progressão e/ou gravidade do câncer. A quantidade terapeuticamente eficaz pode variar dependendo da aplicação pretendida (in vitro ou in vivo), ou do indivíduo e afecção de doença a ser tratada, por exemplo, o peso e a idade do indivíduo, a gravidade da afecção da doença, a forma de administração e similares, que pode ser facilmente determinada pelo versado na técnica. O termo também se aplica a uma dose que irá induzir uma resposta específica nas células alvo, por exemplo, inibição do crescimento celular. A dose específica pode variar dependendo, por exemplo, da composição farmacêutica específica, do indivíduo e sua idade e condições de saúde existentes ou risco para condições de saúde, o regime de dosagem a ser seguido, a gravidade da doença, se é administrada em combinação com outros agentes, tempo de administração, o tecido ao qual é administrada e o sistema de distribuição física no qual é transportada. No caso de câncer, uma quantidade terapeuticamente eficaz de ADC pode reduzir o número de células cancerosas, reduzir o tamanho do tumor, inibir (por exemplo, diminuir ou parar) a metástase do tumor, inibir (por exemplo, retardar ou parar) o crescimento do tumor e/ou aliviar um ou mais sintomas.
[0172] quantidade eficaz, em dosagens e durante os intervalos de tempo necessários, para obter o resultado profilático desejado. Tipicamente, uma vez que uma dose profilática é usada em indivíduos antes ou em um estágio inicial da doença, a quantidade profilaticamente eficaz será menor do que a quantidade terapeuticamente eficaz.
[0173] Como usado no presente documento, "tratar" ou "terapêutico" e termos gramaticalmente relacionados, se referem a qualquer melhora de qualquer consequência da doença, como sobrevida prolongada, menos morbidade e/ou uma redução dos efeitos colaterais que resultam de uma modalidade terapêutica alternativa. Como é prontamente entendido na técnica, a erradicação completa da doença é abrangida, mas não é necessária presente documento, se refere à administração de um ADC ou composição descrita a um indivíduo, por exemplo, um paciente. O tratamento pode ser para sanar, curar, aliviar, atenuar, alterar, remediar, melhorar, paliar, melhorar ou afetar o distúrbio, os sintomas do distúrbio ou a predisposição para o distúrbio, por exemplo, um câncer. Em algumas modalidades, além de tratar um indivíduo com uma condição, uma composição revelada no presente documento também pode ser fornecida profilaticamente para prevenir ou reduzir a probabilidade de desenvolver essa condição.
[0174] Em algumas modalidades, um ADC marcado é usado. s" adequados incluem radionuclídeos, enzimas, substratos, cofatores, inibidores, porções químicas fluorescentes, porções químicas quimiluminescentes, partículas magnéticas e similares.
[0175] Por "proteína", como usado no presente documento, entende-se pelo menos dois aminoácidos covalentemente ligados. O termo abrange polipeptídeos, oligopeptídeos e peptídeos. Em algumas modalidades, os dois ou mais aminoácidos covalentemente ligados são ligados por uma ligação peptídica. A proteína pode ser constituída de aminoácidos de ocorrência natural e ligações peptídicas, por exemplo, quando a proteína é produzida de forma recombinante usando sistemas de expressão e células hospedeiras. Alternativamente, a proteína pode incluir aminoácidos sintéticos (por exemplo, homofenilalanina, citrulina, ornitina e norleucina), ou estruturas peptidomiméticas, ou seja, "peptídeos ou análogos de proteínas", como peptoides. Os peptoides são uma classe exemplificativa de peptidomiméticos cujas cadeias laterais são ligadas ao átomo de nitrogênio da estrutura do -carbonos (visto que estas estão em aminoácidos), e têm ligações de hidrogênio diferentes e características conformacionais em comparação com os peptídeos (consultar, por exemplo, Simon et al. (1992) Proc Natl Acad Sci. USA 89:9367). Como tal, os peptoides podem ser resistentes à proteólise ou outras condições fisiológicas ou de armazenamento e eficazes na permeação de membranas celulares. Tais aminoácidos sintéticos podem ser incorporados em particular quando o anticorpo é sintetizado in vitro por métodos convencionais bem conhecidos na técnica. Além disso, qualquer combinação de resíduos/estruturas peptidomiméticos, sintéticos e de iminoácido, como prolina e hidroxiprolina. O aminoácido "grupo R" ou "cadeia lateral" pode estar na configuração (L) - ou (S). Em uma modalidade específica, os aminoácidos estão na configuração (L) - ou (S).
[0176] Uma "proteína recombinante" é uma proteína produzida usando técnicas recombinantes que usam quaisquer técnicas e métodos conhecidos na técnica, ou seja, através da expressão de um ácido nucleico recombinante. Métodos e técnicas para a produção de proteínas recombinantes são bem conhecidos na técnica.
[0177] Uma proteína "isolada" não é acompanhada por pelo menos uma parte do material com o qual está normalmente associada em seu estado natural, por exemplo, constituindo pelo menos cerca de 5%, ou pelo menos cerca de 50% em peso da proteína total em uma determinada amostra. Entende-se que a proteína isolada pode constituir de 5% a 99,9% em peso do teor total de proteína dependendo das circunstâncias. Por exemplo, a proteína pode ser produzida em uma concentração significativamente mais alta através do uso de um promotor induzível ou promotor de alta expressão, de modo que a proteína seja produzida em níveis de concentração aumentados. A definição inclui a produção de um anticorpo em uma ampla variedade de organismos e/ou células hospedeiras que são conhecidos na técnica.
[0178] Para sequências de aminoácidos, a identidade e/ou similaridade de sequência pode ser determinada usando técnicas padrão conhecidas na técnica, incluindo, porém sem limitação, o algoritmo de identidade de sequência local de Smith e Waterman (1981) Adv Appl Math. 2:482, o algoritmo de alinhamento de identidade de sequência de Needleman e Wunsch (1970) J Mol Biol. 48:443, a pesquisa de método de similaridade de Pearson e Lipman (1988) Proc Nat Acad Sci. USA 85:2444, implementações computadorizadas desses algoritmos (GAP, BESTFIT, FASTA e TFASTA no Pacote de software Wisconsin Genetics, Genetics Computer Group, 575 Science Drive, Madison, Wis.), o programa de sequência Best Fit descrito por Devereux et al. (1984) Nucl Acid Res. 12:387-95, de preferência, usando as configurações padrão ou por inspeção. De preferência, a porcentagem de identidade é calculada por FastDB com base nos seguintes parâmetros: penalidade por incompatibilidade de 1; penalidade por lacuna de 1; penalidade por tamanho de lacuna de 0,33; e penalidade por união de 30 ("Current Methods in Sequence Comparison and Analysis," Macromolecule Sequencing and Synthesis, Selected Methods and Applications, pp. 127149 (1988), Alan R. Liss, Inc).
[0179] Um exemplo de algoritmo útil é PILEUP. PILEUP cria um alinhamento de sequência múltipla a partir de um grupo de sequências relacionadas usando alinhamentos progressivos em pares. O mesmo também pode plotar uma árvore mostrando as relações de agrupamento usados para criar o alinhamento. PILEUP usa uma simplificação do método de alinhamento progressivo de Feng & Doolittle (1987) J Mol Evol. 35:35160; o método é similar ao descrito por Higgins e Sharp (1989) CABIOS 5:151-3. Parâmetros PILEUP úteis, incluindo um peso de lacuna padrão de 3,00, um peso de comprimento de lacuna padrão de 0,10 e lacunas finais ponderadas.
[0180] Um outro exemplo de um algoritmo útil é o algoritmo BLAST, descrito em: Altschul et al. (1990) J Mol Biol. 215:403-10; Altschul et al. (1997) Nucl Acid Res. 25:3389-402; e Karin et al. (1993) Proc Natl Acad Sci. USA 90:5873-87. Um programa BLAST particularmente útil é o programa WU- BLAST-2 que foi obtido de Altschul et al. (1996) Methods in Enzymology 266:460-80. WU-BLAST-2 usa vários parâmetros de pesquisa, a maioria dos quais são definidos para os valores padrão. Os parâmetros ajustáveis são definidos com os seguintes valores: amplitude de sobreposição = l, fração de sobreposição = 0,125, limiar de palavra (T)=II. Os parâmetros HSP S e HSP S2 são valores dinâmicos e são estabelecidos pelo próprio programa dependendo da composição da sequência específica e composição do banco de dados específico contra o qual a sequência de interesse está sendo pesquisada; no entanto, os valores podem ser ajustados para aumentar a sensibilidade.
[0181] Um algoritmo útil adicional é o BLAST com lacuna, conforme relatado por Altschul et al. (1997) Nucl Acid Res. 25:3389-402. BLAST com lacuna usa pontuações de substituição BLOSUM-62; parâmetro de limiar T ajustado para 9; o método de dois acertos para acionar extensões sem lacuna, carrega comprimentos de lacuna de custo ka de 10+k; Xu ajustado para 16 e Xg ajustado para 40 para o estágio de pesquisa de banco de dados e 67 para o estágio de saída dos algoritmos. Os alinhamentos com lacuna são acionados por uma pontuação correspondente a cerca de 22 bits.
[0182] Em geral, a homologia, similaridade ou identidade de aminoácidos entre as proteínas reveladas no presente documento e variantes das mesmas, incluindo variantes de antígenos alvo (como HER2, CD138 ou EPHA2, MSLN, FOLH1, CDH6, CEACAM5, CFC1B, ENPP3, FOLR1, HAVCR1, KIT, MET, MUC16, SLC39A6, SLC44A4 ou STEAP1) e variantes de domínios variáveis de anticorpo (incluindo CDRs variantes individuais), são pelo menos 80% das sequências representadas no presente documento, por exemplo, homologias ou identidades de pelo menos 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, quase 100% ou 100%.
[0183] De maneira similar, "porcentagem (%) de identidade de sequência de ácido nucleico" em relação à sequência de ácido nucleico dos anticorpos e outras proteínas identificadas no presente documento é definida como a porcentagem de resíduos de nucleotídeo em uma sequência candidata que é idêntica aos resíduos de nucleotídeo na sequência de codificação da proteína de ligação ao antígeno. Um método específico utiliza o módulo BLASTN de WU-BLAST-2 definido para os parâmetros padrão, com amplitude de sobreposição e fração de sobreposição definida para 1 e 0.125, respectivamente.
[0184] Embora o local ou região para a introdução de uma variação da sequência de aminoácidos seja predeterminado, a mutação por si não precisa ser predeterminada. Por exemplo, para otimizar o desempenho de uma mutação em um determinado local, a mutagênese aleatória pode ser conduzida no códon ou região alvo e as variantes de CDR da proteína de ligação ao antígeno expressas selecionadas para a combinação ideal da atividade desejada. As técnicas para realizar mutações de substituição em locais predeterminados no DNA com uma sequência conhecida são bem conhecidas, por exemplo, mutagênese de iniciador MI3 e mutagênese por PCR
[0185] "Alquila" ou "grupo alquila", como usado no presente documento, significa um hidrocarboneto de cadeia linear, ramificada ou cíclica que é completamente saturada. Em certas modalidades, os grupos alquila podem conter 1 a 8 átomos de carbono ("C1-C8alquila"). Em certas modalidades, os grupos alquila podem conter 1 a 6 átomos de carbono ("C 1- C6alquila"). Em certas modalidades, os grupos alquila contêm 1 a 3 átomos de carbono. Em ainda outras modalidades, os grupos alquila contêm 2 a 3 átomos de carbono e, em ainda outras modalidades, os grupos alquila contêm 1 a 2 átomos de carbono.
[0186] significa um grupo alquila substituído por um grupo alcóxi.
[0187] "Alcóxi", como usado no presente documento, se refere a um grupo alquila, conforme anteriormente definido, ligado à cadeia de carbono
[0188] significa um grupo alquila substituído por um grupo hidroxila.
[0189] documento, se refere a -OH.
[0190] documento, inclui tanto grupos aromáticos (por exemplo, arila) como não aromáticos (por exemplo, cicloalquila). Em certas modalidades, os grupos carbociclo contêm 3 a 10 átomos de carbono ("carbociclo de 3 a 10 membros"). Em certas modalidades, os grupos carbociclo contêm 3 a 8 átomos de carbono ("carbociclo de 3 a 8 membros"). Em certas modalidades, os grupos carbociclo contêm 3 a 6 átomos de carbono ("carbociclo de 3 a 6 membros"). Em certas modalidades, os grupos carbociclo contêm 3 a 5 átomos de carbono ("carbociclo de 3 a 5 membros").
[0191] refere a um grupo alquila substituído por um ou mais átomos de halogênio.
[0192] por exemplo, -F, -Cl, -Br ou -I.
[0193] Os termos "heterociclo", "heterociclila" e "heterocíclico", como usado no presente documento, significam um heterociclo monocíclico, um heterociclo bicíclico ou um heterociclo tricíclico contendo pelo menos um heteroátomo no anel.
[0194] O heterociclo monocíclico é um anel de 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 membros contendo pelo menos um heteroátomo independentemente escolhido dentre O, N e S. Em algumas modalidades, o heterociclo é um anel de 3 ou 4 membros contendo um heteroátomo escolhido dentre O, N e S. Em algumas modalidades, o heterociclo é um anel de 5 membros contendo zero ou uma ligação dupla e um, dois ou três heteroátomos escolhidos dentre O, N e S. Em algumas modalidades, o heterociclo é um anel de 6, 7 ou 8 membros contendo zero, uma ou duas ligações duplas e um, dois ou três heteroátomos escolhidos dentre O, N e S. Exemplos representativos de heterociclo monocíclico incluem, porém sem limitação, azetidinila, azepanila, aziridinila, diazepanila, 1,3- dioxanila, 1,3-dioxolanila, di-hidropiranila (incluindo 3,4-di-hidro-2H-piran-6-ila), 1,3-ditiolanila, 1,3-ditianila, imidazolinila, imidazolidinila, isotiazolinila, isotiazolidinila, isoxazolinila, isoxazolidinila, morfolinila, oxadiazolinila, oxadiazolidinila, oxazolinila, oxazolidinila, piperazinila, piperidinila, piranila, pirazolinila, pirazolidinila, pirrolinila, pirrolidinila, tetra-hidrofuranila, tetra- hidropiranila (incluindo tetra-hidro-2H-piran-4-ila), tetra-hidrotienila, tiadiazolinila, tiadiazolidinila, tiazolinila, tiazolidinila, tiomorfolinila, 1,1- dioxidotiomorfolinila (sulfona de tiomorfolina), tiopiranila e tritianila.
[0195] Os heterociclos bicíclicos da presente revelação pode incluir um heterociclo monocíclico fundido com um grupo arila, ou um heterociclo monocíclico fundido com uma cicloalquila monocíclica, ou um heterociclo monocíclico fundido com uma cicloalquenila monocíclica ou um heterociclo monocíclico fundido com um heterociclo monocíclico que tem um total de 5 a 12 átomos no anel. Exemplos de heterociclos bicíclicos incluem, porém sem limitação, 3,4-di-hidro-2H-piranila, 1,3-benzodioxolila, 1,3-
benzoditiolila, 2,3-di-hidro-1,4-benzodioxinila, 2,3-di-hidro-1-benzofuranola, 2,3- di-hidro-1-benzotienila, 2,3-di-hidro-1H-indolila e 1,2,3,4-tetra-hidroquinolinila.
[0196] Os termos "heterociclo", "heterociclila" e "heterocíclico" abrangem heteroarilas. "Heteroarila" se refere a uma porção química cíclica que tem um ou mais anéis fechados, com um ou mais heteroátomos (oxigênio, nitrogênio ou enxofre) em pelo menos um dos anéis, em que pelo menos um dos anéis é aromático, e em que o anel ou anéis podem ser independentemente fundidos e/ou em ponte. Exemplos incluem, sem limitação, fenila, tiofenila, triazolila, piridinila, pirimidinila, piridazinila e pirazinila.
[0197] Conforme descrito no presente documento, os compostos da revelação podem conter porções químicas "opcionalmente substituídas". Em geral, o termo "substituído", seja precedido ou não pelo termo "opcionalmente", significa que um ou mais hidrogênios da porção química designada são substituídos por um substituinte adequado. Exceto onde indicado em contrário, um grupo opcionalmente substituído pode ter um substituinte adequado em cada posição substituível do grupo, e quando mais de uma posição em qualquer dada estrutura puder ser substituída por mais de um substituinte escolhido dentre um grupo específico, o substituinte pode ser igual ou diferente em cada posição. Combinações de substituintes previstas sob esta revelação são, de preferência, aquelas que resultam na formação de compostos estáveis ou quimicamente viáveis.
[0198] Um versado na técnica entenderá que "substituição" ou "substituído por" ou "ausente" inclui a condição implícita sob a condição de que tal substituição ou ausência esteja de acordo com a valência permitida do átomo substituído e do substituinte, e que a substituição ou ausência resulte em um composto estável, por exemplo, que não sofre transformação espontaneamente, como por rearranjo, ciclização, eliminação, etc. Para os fins desta revelação, os heteroátomos, como nitrogênio podem ter substituintes de hidrogênio e/ou quaisquer substituintes permitidos de compostos orgânicos descritos no presente documento que satisfazem as valências dos heteroátomos.
[0199] "Estável" se refere a compostos que não são substancialmente alterados química e/ou fisicamente quando submetidos a condições para permitir sua produção, detecção e, em certas modalidades, sua recuperação, purificação, e uso para um ou mais dos propósitos revelados no presente documento. Em algumas modalidades, um composto estável ou composto quimicamente viável é um que não é substancialmente alterado quando mantido a uma temperatura de 40 C ou menos, na ausência de umidade ou outras condições quimicamente reativas, durante pelo menos uma semana. Em algumas modalidades, os compostos revelados no presente documento são estáveis.
[0200] Os enantiômeros ensinados no presente documento podem incluir isômeros "enantiomericamente puros" que compreendem substancialmente um único enantiômero, por exemplo, maior ou igual a 90%, 92%, 95%, 98% ou 99%, ou igual a 100% de um único enantiômero, em um centro ou centros assimétricos específicos. Um "centro assimétrico" ou "centro quiral" se refere a um átomo de carbono tetraédrico que compreende quatro substituintes diferentes.
[0201] Os compostos descritos no presente documento podem também conter proporções não naturais de isótopos atômicos em um ou mais átomos que constituem tais compostos. Por exemplo, os compostos podem ser radiomarcados com isótopos radioativos, como, por exemplo, deutério ( 2H), trítio (3H), carbono-13 (13C) ou carbono-14 (14C). Todas as variações isotópicas dos compostos revelados no presente documento, sejam ou não radioativos, se destinam a ser abrangidas dentro do escopo da presente revelação. Além disso, todas as formas tautoméricas dos compostos descritos no presente documento se destinam a estar dentro do escopo da revelação reivindicada. Conjugados Anticorpo-Fármaco
[0202] Os compostos de conjugado anticorpo-fármaco (ADC) da presente revelação incluem aqueles com atividade anticâncer. Em particular, os compostos de ADC incluem um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno (incluindo um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) conjugado (ou seja, covalentemente ligado por um ligante) a um modulador de splicing de herboxidieno, por exemplo, em que o modulador de splicing de herboxidieno quando não conjugado a um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem um efeito citotóxico ou citostático. Em várias modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno, quando não conjugado a um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, tem capacidade para se ligar e/ou interagir com o complexo de spliceossoma SF3b. Em várias modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno, quando não conjugado a um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, tem capacidade para modular o splicing de RNA in vitro e/ou in vivo. Com o alvejamento de splicing de RNA, em várias modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno e ADCs revelados no presente documento são agentes antiproliferativos potentes. Em várias modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno e ADCs revelados no presente documento podem alvejar células em divisão ativa e quiescentes.
[0203] Em várias modalidades, a presente revelação se baseia, pelo menos em parte, na constatação de que certos moduladores de splicing de herboxidieno biologicamente ativos podem fornecer propriedades aprimoradas quando usados em ADCs. Embora um modulador de splicing de herboxidieno possa mostrar características desejavelmente aprimoradas (por exemplo, ligação robusta de complexo de spliceossoma SF3b, modulação potente de splicing de RNA) quando usado por si só, em várias modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno pode exibir menos das mesmas características desejavelmente aprimoradas quando conjugado a um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Dessa forma, o desenvolvimento e a produção de um ADC para uso como um agente terapêutico humano, por exemplo, como um agente oncológico, pode exigir mais do que a identificação de um anticorpo com capacidade de se ligar a um alvo ou alvos desejados e se ligar a um fármaco usado por si só para tratar câncer. A ligação do anticorpo ao modulador de splicing de herboxidieno pode ter efeitos significativos sobre a atividade de um ou tanto do anticorpo como do modulador de splicing de herboxidieno, efeitos que variarão dependendo do tipo de ligante e/ou modulador de splicing de herboxidieno escolhido. Em algumas modalidades, portanto, os componentes do ADC são selecionados para (i) reter uma ou mais propriedades terapêuticas exibidas pelo anticorpo e porções químicas de modulador de splicing de herboxidieno em isolamento, (ii) manter as propriedades de ligação específicas do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno; (iii) otimizar o carregamento de modulador de splicing de herboxidieno e as razões de modulador de splicing de herboxidieno para anticorpo; (iv) permitir a entrega, por exemplo, entrega intracelular, da porção química de modulador de splicing de herboxidieno por meio de ligação estável ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno; (v) reter a estabilidade de ADC como um conjugado intacto até o transporte ou entrega a um sítio alvo; (vi) minimizar a agregação do ADC antes ou após a administração; (vii) permitir o efeito terapêutico, por exemplo, efeito citotóxico, da porção química de modulador de splicing de herboxidieno após clivagem ou outro mecanismo de liberação no ambiente celular; (viii) exibir eficácia de tratamento anticâncer in vivo comparável ou superior àquela do anticorpo e porções químicas de modulador de splicing de herboxidieno em isolamento; (ix) minimizar o extermínio fora do alvo pela porção química de modulador de splicing de herboxidieno; e/ou (x) exibir propriedades farmacocinéticas e farmacodinâmicas, formulabilidade e perfis toxicológicos/imunológicos desejados. Cada uma dessas propriedades pode ser necessária para identificar um ADC aprimorado para uso terapêutico (Ab et al. (2015) Mol Cancer Ther. 14:1605-13).
[0204] Em várias modalidades, os ADCs revelados no presente documento exibem propriedades inesperadamente favoráveis em algumas ou cada uma das categorias mencionadas acima. Por exemplo, em algumas modalidades, os construtos de ADC revelados no presente documento exibem carregamento de modulador de splicing de herboxidieno, agregação e/ou perfis de estabilidade surpreendentemente favoráveis e/ou preservam a função de ligação ao anticorpo, atividade de fármaco e/ou extermínio por espectador aprimorado, enquanto reduz o extermínio fora do alvo, em comparação com ADCs que compreendem um ligante alternativo e/ou porção química de fármaco (por exemplo, um modulador de splicing de herboxidieno alternativo). Em algumas modalidades, os construtos de ADC revelados no presente documento demonstram estabilidade, atividade, potência superior, ou outro efeito (medido in vivo ou in vitro) em comparação com ADCs que usam um ligante alternativo e/ou porção química de modulador de splicing de herboxidieno. Em algumas modalidades, os construtos de ADC revelados no presente documento exibem eficácia de tratamento in vivo quando administrados como uma dose única. Em algumas modalidades, os construtos de ADC revelados no presente documento são surpreendentemente estáveis em comparação com ADCs que usam um ligante alternativo e/ou porção química de modulador de splicing de herboxidieno.
[0205] Os compostos de ADC da presente revelação podem entregar seletivamente uma dose eficaz de um agente citotóxico ou citostático às células cancerosas ou ao tecido tumoral. Foi constatado que os ADCs revelados têm atividade citotóxica e/ou citostática potente contra células que expressam o respectivo antígeno alvo (por exemplo, HER2, CD138, EPHA2, MSLN, FOLH1, CDH6, CEACAM5, CFC1B, ENPP3, FOLR1, HAVCR1, KIT, MET, MUC16, SLC39A6, SLC44A4 ou STEAP1). Em algumas modalidades, a atividade citotóxica e/ou citostática do ADC é dependente da expressão de antígeno alvo em uma célula. Em algumas modalidades, os ADCs revelados são particularmente eficazes no extermínio de células cancerosas que expressam um antígeno alvo, minimizando ao mesmo tempo o extermínio fora do alvo. Em algumas modalidades, os ADCs revelados não exibem um efeito citotóxico e/ou citostático em células cancerosas que não expressam um antígeno alvo.
[0206] Cânceres que expressam HER2 exemplificativos incluem, porém sem limitação, câncer de mama, câncer gástrico, câncer de bexiga, carcinoma de células uroteliais, câncer de esôfago, câncer de pulmão (por exemplo, adenocarcinoma de pulmão), câncer uterino (por exemplo, carcinoma endometrial seroso uterino), carcinoma do ducto salivar, câncer cervical, câncer endometrial e câncer de ovário (English et al. (2013) Mol Diagn Ther. 17:85- 99).
[0207] Cânceres que expressam CD138 exemplificativos incluem, porém sem limitação, câncer intratorácico (por exemplo, câncer de pulmão, mesotelioma), câncer de pele (por exemplo, carcinoma de células basais, carcinoma de células escamosas), câncer de cabeça e pescoço (por exemplo, laríngeo, hipofaríngeo, nasofaríngeo), câncer de mama, câncer urogenital (por exemplo, câncer cervical, câncer de ovário, câncer endometrial, câncer de próstata, câncer de bexiga, câncer urotelial), malignidades hematológicas (por exemplo, mieloma como mieloma múltiplo, malignidades de células B, linfoma de Hodgkin) e câncer de tireoide (Szatmári et al. (2015) Dis Markers 2015:796052).
[0208] Cânceres que expressam EPHA2 exemplificativos incluem câncer de mama, câncer cerebral, câncer de ovário, câncer de bexiga, câncer pancreático, câncer de esôfago, câncer de pulmão, câncer de próstata, melanoma e câncer gástrico (Tandon et al. (2011) Expert Opin Ther Targets 15(1):31-51).
[0209] Em algumas modalidades, a clivagem de um ADC libera o modulador de splicing de herboxidieno do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e ligante. Em algumas modalidades, o ligante e/ou modulador de splicing de herboxidieno é projetado para facilitar o extermínio por espectador
(o extermínio de células vizinhas). Em algumas modalidades, o ligante e/ou modulador de splicing de herboxidieno é projetado para facilitar o extermínio por espectador através de clivagem após internalização celular e difusão da porção química de ligante-modulador de splicing de herboxidieno e/ou da porção química de modulador de splicing de herboxidieno individualmente para células vizinhas. Em algumas modalidades, o ligante promove a internalização celular. Em algumas modalidades, o ligante é projetado para minimizar a clivagem no ambiente extracelular e, assim, reduzir a toxicidade ao tecido fora do alvo (por exemplo, tecido não canceroso), enquanto preserva a ligação de ADC ao tecido alvo e extermínio por espectador de tecido canceroso que não expressa um antígeno alvejado pelo anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de um ADC, porém circunda o tecido canceroso alvo que expressa esse antígeno. Em algumas modalidades, a porção química de modulador de splicing de herboxidieno, ou o catabólito da porção química de modulador de splicing de herboxidieno produzido pela clivagem de um ADC, é projetado para facilitar a absorção por células alvo ou por células vizinhas (ou seja, permeável a células). Tais porções químicas de modulador de splicing de herboxidieno e catabólitos podem ser chamados no presente documento de "ativos por espectador", enquanto porções químicas de fármaco ou catabólitos com espectador"
[0210] Em algumas modalidades, os ADCs revelados também demonstram atividade de extermínio por espectador, mas baixa citotoxicidade fora do alvo. Sem se ater à teoria, a atividade de extermínio por espectador de um ADC pode ser particularmente benéfica em que sua penetração em um tumor sólido é limitada e/ou a expressão de antígeno alvo entre as células tumorais é heterogênea. Em algumas modalidades, um ADC que compreende um ligante clivável é particularmente eficaz no extermínio por espectador e/ou demonstra atividade de extermínio por espectador aprimorada, em relação ao tratamento comparável com um ADC que compreende um ligante não clivável.
Em algumas modalidades, os ADCs revelados no presente documento exibem solubilidade e penetrância de célula alvo aprimoradas sobre as porções químicas de fármaco por si só.
Em algumas modalidades, os ADCs revelados no presente documento exibem citotoxicidade aprimorada em relação à porção química de modulador de splicing de herboxidieno por si só.
Em algumas modalidades, os ADCs revelados no presente documento usam porções químicas de fármaco que exibem citotoxicidade mais baixa, quando avaliados como um modulador de splicing de herboxidieno independente, mas são surpreendentemente melhores do que ADCs que compreendem outras porções químicas de modulador de splicing de herboxidieno que têm citotoxicidade mais alta quando avaliadas como um modulador de splicing de herboxidieno independente.
Em algumas modalidades, a clivagem e a liberação do modulador de splicing de herboxidieno aprimoram a citotoxicidade do ADC, em relação ao tratamento comparável com um ADC que compreende um ligante não clivável.
Em outras modalidades, a clivagem e a liberação do modulador de splicing de herboxidieno não são necessárias para que um ADC tenha uma atividade biológica desejável.
Em algumas modalidades, um ADC que compreende um ligante não clivável com comprimento de espaçador aumentado (por exemplo, ADL12) fornece citotoxicidade igual ou similar em relação ao tratamento comparável com um ADC que compreende um ligante clivável (por exemplo, ADL1, ADL5) e citotoxicidade surpreendentemente superior a um tratamento comparável com um ADC que compreende um ligante não clivável mais curto.
Em algumas modalidades, um ADC que compreende um ligante não clivável com comprimento de espaçador aumentado sem um grupo carbonila (por exemplo, ADL12) fornece citotoxicidade igual ou similar em relação ao tratamento comparável com um ADC que compreende um ligante clivável (por exemplo, ADL1, ADL5) e citotoxicidade surpreendentemente superior em relação ao tratamento comparável com um ADC que compreende um ligante não clivável com comprimento de espaçador igual ou similar com um grupo carbonila (por exemplo, ADL10). Em algumas modalidades, a remoção de um grupo carbonila de um ligante MC não clivável (por exemplo, ADL12) pode resultar em um aumento de mais de 50 vezes, mais de 75 vezes, mais de 100 vezes, mais de 150 vezes ou mais de 200 vezes na citotoxicidade, em relação ao tratamento comparável com um ADC que compreende um ligante MC não clivável não modificado (por exemplo, ADL10). Em algumas modalidades, a remoção de um grupo carbonila de um ligante MC não clivável (por exemplo, ADL12) e comprimento do espaçador aumentado (por exemplo, a adição de pelo menos uma unidade espaçadora) pode resultar em um aumento de mais de 50 vezes, mais de 75 vezes, mais de 100 vezes, mais de 150 vezes ou mais de 200 vezes na citotoxicidade, em relação ao tratamento comparável com um ADC que compreende um ligante MC não clivável não modificado (por exemplo, ADL10).
[0211] São fornecidos no presente documento compostos ADC que compreendem um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo (Ab) que tem como alvo uma célula tumoral, uma porção química de fármaco de modulador de splicing (D) e uma porção química de ligante (L) que liga covalentemente Ab a D. Em certos aspectos, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem capacidade de se ligar a um antígeno associado ao tumor (por exemplo, HER2, CD138, EPHA2, MSLN, FOLH1, CDH6, CEACAM5, CFC1B, ENPP3, FOLR1, HAVCR1, KIT, MET, MUC16, SLC39A6, SLC44A4 ou STEAP1) com alta especificidade e alta afinidade. Em certas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é internalizado em uma célula alvo após a ligação, por exemplo, em um compartimento de degradação na célula. Em várias modalidades, podem ser usados ADCs que internalizam após a ligação a uma célula alvo, sofrem degradação e liberam a porção química de modulador de splicing de herboxidieno para exterminar células cancerosas. A porção química de modulador de splicing de herboxidieno pode ser liberada do anticorpo e/ou porção química de ligação do ADC por ação enzimática, hidrólise, oxidação ou qualquer outro mecanismo.
[0212] Um ADC exemplificativo tem a Fórmula (I): Ab-(L-H)p (I) em que Ab = um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, L = uma porção química de ligação, H = uma porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno e p = o número de porções químicas de fármaco de modulador de splicing por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno.
[0213] Em certas modalidades, a porção química de alvejamento de modulador de splicing de herboxidieno para uso nos ADCs e composições descritos é um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Outras porções químicas de alvejamento de fármaco exemplificativas para uso nos ADCs e composições descritos também são fornecidas e descritas no presente documento. Em algumas modalidades, uma porção química de alvejamento de modulador de splicing de herboxidieno pode ser qualquer um dentre uma variedade de agentes de ligação celular e arcabouços sem anticorpo. Em algumas modalidades, a porção química de alvejamento de modulador de splicing de herboxidieno é um agente de ligação celular. Tal como aqui utilizado, o termo "agente de ligação celular" se refere a qualquer agente que tenha capacidade de se ligar a uma célula animal (por exemplo, humana) e entregar uma porção química de modulador de splicing de herboxidieno (por exemplo, uma porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno como revelado no presente documento). O termo abrange os anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno exemplificativos revelados no presente documento (por exemplo, anticorpos monoclonais e fragmentos dos mesmos como Fabs e scFVs). O termo abrange adicionalmente agentes de ligação celular exemplificativos como DARPins, duocorpos, peptídeos bicíclicos, nanocorpos, centirinas, MSH (hormônio estimulante de melanócitos), moléculas de fusão de receptor-Fc, estruturas de receptor de células T, hormônios esteroides, como androgênios e estrogênios, fatores de crescimento, fatores estimulantes de colônias, como EGF, e outros arcabouços sem anticorpos. Em várias modalidades, os arcabouços sem anticorpos podem estar incluídos amplamente em duas classes estruturais, ou seja, compostos dimensionados por domínio (aproximadamente 6 a 20 kDa) e peptídeos restritos (aproximadamente 2 a 4 kDa). Arcabouços dimensionados por domínio exemplificativos incluem, porém sem limitação, aficorpos, afilinas, anticalinas, atrímeros, DARPins, arcabouços FN3 (por exemplo, adnectinas e centirinas), finômeros, domínios Kunitz, pronectinas, O-corpos e proteínas de fusão de receptor-Fc, enquanto peptídeos restritos exemplificativos incluem avímeros, peptídeos bicíclicos e nós Cys. Em algumas modalidades, a porção química de alvejamento de fármaco usada nos ADCs e composições descritos é selecionada a partir de um affibody, uma afilina, uma anticalina, um atrímero, um DARPin, um arcabouço FN3 como uma adnectina ou uma centirina, um finômero, um domínio Kunitz, uma pronectina, um O-corpo, um avímero, um peptídeo bicíclico e um nó Cys. Em algumas modalidades, a porção química de alvejamento de fármaco usada nos ADCs e composições descritos é uma proteína de fusão de receptor-Fc, por exemplo, uma proteína de fusão quimérica HER2-Fc. Os arcabouços sem anticorpos são revisados, por exemplo, em Vazquez-Lombardi et al. (2015) Drug Dis Today 20 (10): 127183. Anticorpos
[0214] O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno (Ab) da Fórmula (I) inclui dentro de seu escopo qualquer anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno que se liga especificamente a um antígeno alvo em uma célula cancerosa. O anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno pode se ligar a um antígeno alvo com uma constante de dissociação (K D o, por exemplo, por análise BIAcore® . Em certas modalidades, a KD é de 1 pM a 500 pM. Em algumas modalidades, a K D é entre 500 pM a 1 µM, 1 µM a 100 nM ou 100 mM a 10 nM.
[0215] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo de quatro cadeias (também chamado de uma imunoglobulina ou um anticorpo de comprimento total ou intacto), que compreende duas cadeias pesadas e duas cadeias leves. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um meio corpo de duas cadeias (uma cadeia leve e uma cadeia pesada) ou um fragmento de ligação ao antígeno de uma imunoglobulina. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um fragmento de ligação ao antígeno de uma imunoglobulina que retém a capacidade de se ligar a um antígeno de câncer alvo e/ou fornecer uma função de uma imunoglobulina.
[0216] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo de internalização ou fragmento de ligação ao antígeno de internalização do mesmo. Em algumas modalidades, o anticorpo internalizante ou fragmento de ligação a antígeno internalizante do mesmo se liga a um antígeno de câncer-alvo expresso na superfície de uma célula e entra na célula após a ligação. Em algumas modalidades, a porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno do ADC é liberada do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do ADC após o ADC entrar e estar presente em uma célula que expressa o antígeno de câncer alvo (ou seja, após o ADC ter sido internalizado), por exemplo, por clivagem, por degradação do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, ou por qualquer outro mecanismo de liberação adequado.
[0217] As sequências de aminoácidos de anticorpos exemplificativas da presente revelação são apresentadas nas Tabelas 2 a 4.
TABELA 1. ANTICORPOS mAb Tipo Alvo trastuzumabe (AB185) humanizado HER2/NEU B-B4 (AB205) murino CD138 (sindecano-1) 1C1 (AB206) humanizado EPHA2 TABELA 2. SEQUÊNCIAS DE AMINOÁCIDOS DE REGIÕES VARIÁVEIS DE
MAB cadeia de mAb SEQ ID NO Sequência de aminoácidos IgG trastuzumabe Cadeia 19 EVQLVESGGGLVQPGGSLRL (AB185) pesada SCAASGFNIKDTYIHWVRQAP
GKGLEWVARIYPTNGYTRYA DSVKGRFTISADTSKNTAYLQ MNSLRAEDTAVYYCSRWGG
DGFYAMDYWGQGTLVTVSS trastuzumabe Cadeia 20 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTI (AB185) leve TCRASQDVNTAVAWYQQKP
GKAPKLLIYSASFLYSGVPSRF SGSRSGTDFTLTISSLQPEDF ATYYCQQHYTTPPTFGQGTK
VEIKRT B-B4 Cadeia 21 QVQLQQSGSELMMPGASVKI (AB205) pesada SCKATGYTFSNYWIQRPGHG
LEWIGEILPGTGRTIYNEKFKG KATFTADISSNTVQMQLSSLT SEDSAVYYCARRDYYGNFYY AMDYWGQGTSVTVSS
B-B4 Cadeia 22 DIQMTQSTSSLSASLGDRVTI (AB205) leve SCSASQGINNYLNWYQQKPD
GTVELLIYYTSTLQSGVPSRFS GSGSGTDYSLTISNLEPEDIGT YYCQQYSKLPRTFGGGTKLEI
K 1C1 Cadeia 23 EVQLLESGGGLVQPGGSLRL (AB206) pesada SCAASGFTFSHYMMAWVRQ
APGKGLEWVSRIGPSGGPTH YADSVKGRFTISRDNSKNTLY LQMNSLRAEDTAVYYCAGYD SGYDYVAVAGPAE-
YFQHWGQGTLVTVSS 1C1 Cadeia 24 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTI (AB206) leve TCRASQSISTWLAWYQQKPG
KAPKLLIYKASNLHTGVPSRFS GSGSGTEFSLTISGLQPDDFA TYYCQQYNSYS-
RTFGQGTKVEIK TABELA 3. SEQUÊNCIAS DE AMINOÁCIDOS DE CDRS DE MAB cadeia de mAb SEQ ID NO Sequência de aminoácidos IgG trastuzumabe HCDR1 1 GFNIKDTYIH (AB185) trastuzumabe HCDR2 2 RIYPTNGYTRYADSVKG (AB185) trastuzumabe HCDR3 3 WGGDGFYAMDV (AB185)
trastuzumabe LCDR1 4 RASQDVNTAVAW (AB185) trastuzumabe LCDR2 5 SASFLES (AB185) trastuzumabe LCDR3 6 QQHYTTPPT (AB185) B-B4 HCDR1 7 NYWIE (AB205) B-B4 HCDR2 8 ILPGTGRTIYNEKFKGKA (AB205) B-B4 HCDR3 9 RDYYGNFYYAMDY (AB205) B-B4 LCDR1 10 ASQGINNYLN (AB205) B-B4 LCDR2 11 TSTLQS (AB205) B-B4 LCDR3 12 QQYSKLPRT (AB205) 1C1 HCDR1 13 HYMMA (AB206) 1C1 HCDR2 14 RIGPSGGPTHYADSVKG (AB206) 1C1 HCDR3 15 YDSGYDYVAVAGPAE-YFQH (AB206) 1C1 LCDR1 16 RASWSISTWLA (AB206) 1C1 LCDR2 17 KASNLHT (AB206) 1C1 LCDR3 18 QQYNSYS-RT (AB206)
TABELA 4. SEQUÊNCIAS DE AMINOÁCIDOS DE CADEIAS DE IG DE MAB
DE COMPRIMENTO TOTAL cadeia de Classe Sequência de mAb SEQ ID NO IgG aminoácidos trastuzumabe Cadeia IgG1 25 EVQLVESGGGLVQ (AB185) pesada PGGSLRLSCAASG
FNIKDTYIHWVRQA PGKGLEWVARIYPT NGYTRYADSVKGR FTISADTSKNTAYL QMNSLRAEDTAVY YCSRWGGDGFYA MDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAP SSKSTSGGTAALG CLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTF PAVLQSSGLYSLSS VVTVPSSSLGTQTY ICNVNHKPSNTKVD KKVEPPKSCDKTH TCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVVVD VSHEDPEVKFNWY VDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRVVS VLTVLHQDWLNGK EYKCKVSNKALPAP IEKTISKAKGQPRE PQVYTLPPSRDELT KNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDK SRWQQGNVFSCS VMHEALHNHYTQK
SLSLSPGK trastuzumabe Cadeia leve kappa 26 DIQMTQSPSSLSA (AB185) SVGDRVTITCRAS
QDVNTAVAWYQQ KPGKAPKLLIYSAS FLYSGVPSRFSGS RSGTDFTLTISSLQ PEDFATYYCQQHY TTPPTFGQGTKVEI KRTVAAPSVFIFPP SDEQLKSGTASVV CLLNNFYPREAKV QWKVDNALQSGN SQESVTEQDSKDS TYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTH QGLSSPVTKSFNR
GEC B-B4 Cadeia IgG2a 27 QVQLQQSGSELM (AB205) pesada MPGASVKISCKAT
GYTFSNYWIQRPG HGLEWIGEILPGTG RTIYNEKFKGKATF TADISSNTVQMQL SSLTSEDSAVYYC ARRDYYGNFYYA MDYWGQGTSVTV SSAKTTPPSVYPL APGSAAQTNSMVT LGCLVKGYFPEPV TVTWNSGSLSSGV HTFPAVLQSDLYTL SSSVTVPSSTWPS ETVTCNVAHPASS TKVDKKIVPRDCG CKPCICTVPEVSSV FIFPPKPKDVLTITL TPKVTCVVVDISKD DPEVQFSWFVDD VEVHTAQTQPREE QFNSTFRSVSELPI MHQDWLNGKEFK CRVNSAAFPAPIEK TISKTKGRPKAPQ VYTIPPPKEQMAK DKVSLTCMITDFFP EDITVEWQWNGQ PAENYKNTQPIMD TDGSYFVYSKLNV QKSNWEAGNTFT CSVLHEGLHNHHT
EKSLSHSPG B-B4 Cadeia leve kappa 28 DIQMTQSTSSLSA (AB205) SLGDRVTISCSAS
QGINNYLNWYQQK PDGTVELLIYYTST LQSGVPSRFSGSG SGTDYSLTISNLEP EDIGTYYCQQYSK LPRTFGGGTKLEIK RADAAPTVSIFPPS SEQLTSGGASVVC FLNNFYPKDINVK WKIDGSERQNGVL NSWTDQDSKDST YSMSSTLTLTKDE YERHNSYTCEATH KTSTSPIVKSFNRN
EC 1C1 Cadeia IgG1 29 EVQLLESGGGLVQ (AB206) pesada PGGSLRLSCAASG
FTFSHYMMAWVR QAPGKGLEWVSRI GPSGGPTHYADSV KGRFTISRDNSKN TLYLQMNSLRAED TAVYYCAGYDSGY DYVAVAGPAEYFQ HWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAP SSKSTSGGTAALG CLVKDYFPEPVTV SWNSGALTSGVHT FPAVLQSSGLYSL SSVVTVPSSSLGT QTYICNVNHKPSN TKVDKKVEPKSCD KTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHN AKTKPREEQYNST YRVVSVLTVLHQD WLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTL PPSRDELTKNQVS LTCLVKGFYPSDIA VEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGS FFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVM HEALHNHYTQKSL
SLSPG 1C1 Cadeia leve kappa 30 DIQMTQSPSSLSA (AB206) SVGDRVTITCRAS
QSISTWLAWYQQK PGKAPKLLIYKASN LHTGVPSRFSGSG SGTEFSLTISGLQP DDFATYYCQQYNS YSRTFGQGTKVEI KRTVAAPSVFIFPP SDEQLKSGTASVV CLLNNFYPREAKV QWKVDNALQSGN SQESVTEQDSKDS TYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTH QGLSSPVTKSFNR
GEC TABELA 5. SEQUÊNCIAS DE AMINOÁCIDOS DE ANTÍGENO ALVO
EXEMPLIFICATIVAS Antígeno SEQ ID NO Sequência de aminoácidos HER2/NEU 31 MELAALCRWGLLLALLPPGAASTQVCTGTDM
KLRLPASPETHLDMLRHLYQGCQVVQGNLEL TYLPTNASLSFLQDIQEVQGYVLIAHNQVRQV PLQRLRIVRGTQLFEDNYALAVLDNGDPLNNT TPVTGASPGGLRELQLRSLTEILKGGVLIQRNP QLCYQDTILWKDIFHKNNQLALTLIDTNRSRAC HPCSPMCKGSRCWGESSEDCQSLTRTVCAG GCARCKGPLPTDCCHEQCAAGCTGPKHSDC LACLHFNHSGICELHCPALVTYNTDTFESMPN PEGRYTFGASCVTACPYNYLSTDVGSCTLVC PLHNQEVTAEDGTQRCEKCSKPCARVCYGL GMEHLREVRAVTSANIQEFAGCKKIFGSLAFL PESFDGDPASNTAPLQPEQLQVFETLEEITGY LYISAWPDSLPDLSVFQNLQVIRGRILHNGAYS LTLQGLGISWLGLRSLRELGSGLALIHHNTHLC FVHTVPWDQLFRNPHQALLHTANRPEDECVG EGLACHQLCARGHCWGPGPTQCVNCSQFLR GQECVEECRVLQGLPREYVNARHCLPCHPE CQPQNGSVTCFGPEADQCVACAHYKDPPFC VARCPSGVKPDLSYMPIWKFPDEEGACQPCP INCTHSCVDLDDKGCPAEQRASPLTSIISAVVG ILLVVVLGVVFGILIKRRQQKIRKYTMRRLLQET ELVEPLTPSGAMPNQAQMRILKETELRKVKVL GSGAFGTVYKGIWIPDGENVKIPVAIKVLRENT SPKANKEILDEAYVMAGVGSPYVSRLLGICLT STVQLVTQLMPYGCLLDHVRENRGRLGSQDL LNWCMQIAKGMSYLEDVRLVHRDLAARNVLV KSPNHVKITDFGLARLLDIDETEYHADGGKVPI KWMALESILRRRFTHQSDVWSYGVTVWELM TFGAKPYDGIPAREIPDLLEKGERLPQPPICTID VYMIMVKCWMIDSECRPRFRELVSEFSRMAR DPQRFVVIQNEDLGPASPLDSTFYRSLLEDDD MGDLVDAEEYLVPQQGFFCPDPAPGAGGMV HHRHRSSSTRSGGGDLTLGLEPSEEEAPRSP LAPSEGAGSDVFDGDLGMGAAKGLQSLPTHD PSPLQRYSEDPTVPLPSETDGYVAPLTCSPQP EYVNQPDVRPQPPSPREGPLPAARPAGATLE RPKTLSPGKNGVVKDVFAFGGAVENPEYLTP QGGAAPQPHPPPAFSPAFDNLYYWDQDPPE RGAPPSTFKGTPTAENPEYLGLDVPV
CD138 32 MRRAALWLWLCALALSLQPALPQIVATNLPPED
QDGSGDDSDNFSGSGAGALQDITLSQQTPSTW KDTQLLTAIPTSPEPTGLEATAASTSTLPAGEGP KEGEAVVLPEVEPGLTAREQEATPRPRETTQLP TTHLASTTTATTAQEPATSHPHRDMQPGHHET STPAGPSQADLHTPHTEDGGPSATERAAEDGA SSQLPAAEGSGEQDFTFETSGENTAVVAVEPD RRNQSPVDQGATGASQGLLDRKEVLGGVIAGG LVGLIFAVCLVGFMLYRMKKKDEGSYSLEEPKQ
ANGGAYQKPTKQEEFYA EPHA2 33 MELQAARACFALLWGCALAAAAAAQGKEVVLL
DFAAAGGELGWLTHPYGKGWDLMQNIMNDMPI YMYSVCNVMSGDQDNWLRTNWVYRGEAERIFI ELKFTVRDCNSFPGGASSCKETFNLYYAESDLD YGTNFQKRLFTKIDTIAPDEITVSSDFEARHVKLN VEERSVGPLTRKGFYLAFQDIGACVALLSVRVY YKKCPELLQGLAHFPETIAGSDAPSLATVAGTC VDHAVVPPGGEEPRMHCAVDGEWLVPIGQCLC QAGYEKVEDACQACSPGFFKFEASESPCLECP EHTLPSPEGATSCECEEGFFRAPQDPASMPCT RPPSAPHYLTAVGMGAKVELRWTPPQDSGGR EDIVYSVTCEQCWPESGECGPCEASVRYSEPP HGLTRTSVTVSDLEPHMNYTFTVEARNGVSGL VTSRSFRTASVSINQTEPPKVRLEGRSTTSLSVS WSIPPPQQSRVWKYEVTYRKKGDSNSYNVRRT EGFSVTLDDLAPDTTYLVQVQALTQEGQGAGS KVHEFQTLSPEGSGNLAVIGGVAVGVVLLLVLA GVGFFIHRRRKNQRARQSPEDVYFSKSEQLKP LKTYVDPHTYEDPNQAVLKFTTEIHPSCVTRQK VIGAGEFGEVYKGMLKTSSGKKEVPVAIKTLKA GYTEKQRVDFLGEAGIMGQFSHHNIIRLEGVISK YKPMMIITEYMENGALDKFLREKDGEFSVLQLV GMLRGIAAGMKYLANMNYVHRDLAARNILVNSN LVCKVSDFGLSRVLEDDPEATYTTSGGKIPIRWT APEAISYRKFTSASDVWSFGIVMWEVMTYGER PYWELSNHEVMKAINDGFRLPTPMDCPSAIYQL MMQCWQQERARRPKFADIVSILDKLIRAPDSLK TLADFDPRVSIRLPSTSGSEGVPFRTVSEWLESI KMQQYTEHFMAAGYTAIEKVVQMTNDDIKRIGV
RLPGHQKRIAYSLLGLKDQVNTVGIPI MSLN 94 MALPTARPLLGSCGTPALGSLLFLLFSLGWVQP
SRTLAGETGQEAAPLDGVLANPPNISSLSPRQL LGFPCAEVSGLSTERVRELAVALAQKNVKLSTE QLRCLAHRLSEPPEDLDALPLDLLLFLNPDAFSG PQACTRFFSRITKANVDLLPRGAPERQRLLPAA LACWGVRGSLLSEADVRALGGLACDLPGRFVA ESAEVLLPRLVSCPGPLDQDQQEAARAALQGG GPPYGPPSTWSVSTMDALRGLLPVLGQPIIRSIP QGIVAAWRQRSSRDPSWRQPERTILRPRFRRE VEKTACPSGKKAREIDESLIFYKKWELEACVDAA LLATQMDRVNAIPFTYEQLDVLKHKLDELYPQG YPESVIQHLGYLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKA LLEVNKGHEMSPQAPRRPLPQVATLIDRFVKGR GQLDKDTLDTLTAFYPGYLCSLSPEELSSVPPS SIWAVRPQDLDTCDPRQLDVLYPKARLAFQNM NGSEYFVKIQSFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDL ATFMKLRTDAVLPLTVAEVQKLLGPHVEGLKAE ERHRPVRDWILRQRQDDLDTLGLGLQGGIPNG YLVLDLSMQEALSGTPCLLGPGPVLTVLALLLAS
TLA FOLH1 95 MWNLLHETDSAVATARRPRWLCAGALVLAGGF
FLLGFLFGWFIKSSNEATNITPKHNMKAFLDELK AENIKKFLYNFTQIPHLAGTEQNFQLAKQIQSQW KEFGLDSVELAHYDVLLSYPNKTHPNYISIINED GNEIFNTSLFEPPPPGYENVSDIVPPFSAFSPQG MPEGDLVYVNYARTEDFFKLERDMKINCSGKIVI ARYGKVFRGNKVKNAQLAGAKGVILYSDPADYF APGVKSYPDGWNLPGGGVQRGNILNLNGAGD PLTPGYPANEYAYRRGIAEAVGLPSIPVHPIGYY DAQKLLEKMGGSAPPDSSWRGSLKVPYNVGP GFTGNFSTQKVKMHIHSTNEVTRIYNVIGTLRGA VEPDRYVILGGHRDSWVFGGIDPQSGAAVVHEI VRSFGTLKKEGWRPRRTILFASWDAEEFGLLGS TEWAEENSRLLQERGVAYINADSSIEGNYTLRV DCTPLMYSLVHNLTKELKSPDEGFEGKSLYES WTKKSPSPEFSGMPRISKLGSGNDFEVFFQRL GIASGRARYTKNWETNKFSGYPLYHSVYETYEL VEKFYDPMFKYHLTVAQVRGGMVFELANSIVLP FDCRDYAVVLRKYADKIYSISMKHPQEMKTYSV SFDSLFSAVKNFTEIASKFSERLQDFDKSNPIVL RMMNDQLMFLERAFIDPLGLPDRPFYRHVIYAP SSHNKYAGESFPGIYDALFDIESKVDPSKAWGE VKRQIYVAAFTVQAAAETLSEVA
CDH6 96 MRTYRYFLLLFWVGQPYPTLSTPLSKRTSGFPA
KKRALELSGNSKNELNRSKRSWMWNQFFLLEE YTGSDYQYVGKLHSDQDRGDGSLKYILSGDGA GDLFIINENTGDIQATKRLDREEKPVYILRAQAIN RRTGRPVEPESEFIIKIHDINDNEPIFTKEVYTATV PEMSDVGTFVVQVTATDADDPTYGNSAKVVYSI LQGQPYFSVESETGIIKTALLNMDRENREQYQV VIQAKDMGGQMGGLSGTTTVNITLTDVNDNPP RFPQSTYQFKTPESSPPGTPIGRIKASDADVGE NAEIEYSITDGEGLDMFDVITDQETQEGIITVKKL LDFEKKKVYTLKVEASNPYVEPRFLYLGPFKDS ATVRIVVEDVDEPPVFSKLAYILQIREDAQINTTIG SVTAQDPDAARNPVKYSVDRHTDMDRIFNIDSG NGSIFTSKLLDRETLLWHNITVIATEINNPKQSSR VPLYIKVLDVNDNAPEFAEFYETFVCEKAKADQL IQTLHAVDKDDPYSGHQFSFSLAPEAASGSNFTI QDNKDNTAGILTRKNGYNRHEMSTYLLPVVISD NDYPVQSSTGTVTVRVCACDHHGNMQSCHAE ALIHPTGLSTGALVAILLCIVILLVTVVLFAALRRQ RKKEPLIISKEDIRDNIVSYNDEGGGEEDTQAFDI GTLRNPEAIEDNKLRRDIVPEALFLPRRTPTARD NTDVRDFINQRLKENDTDPTAPPYDSLATYAYE GTGSVADSLSSLESVTTDADQDYDYLSDWGPR
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ALI CFC1B 98 MTWRHHVRLLFTVSLALQIINLGNSYQREKHNG
GREEVTKVATQKHRQSPLNWTSSHFGEVTGSA EGWGPEEPLPYSWAFGEGASARPRCCRNGGT CVLGSFCVCPAHFTGRYCEHDQRRSECGALEH GAWTLRACHLCRCIFGALHCLPLQTPDRCDPK DFLASHAHGPSAGGAPSLLLLLPCALLHRLLRP
DAPAHPRSLVPSVLQRERRPCGRPGLGHRL ENPP3 99 MESTLTLATEQPVKKNTLKKYKIACIVLLALLVIM
SLGLGLGLGLRKLEKQGSCRKKCFDASFRGLE NCRCDVACKDRGDCCWDFEDTCVESTRIWMC NKFRCGETRLEASLCSCSDDCLQRKDCCADYK SVCQGETSWLEENCDTAQQSQCPEGFDLPPVI LFSMDGFRAEYLYTWDTLMPNINKLKTCGIHSK YMRAMYPTKTFPNHYTIVTGLYPESHGIIDNNMY DVNLNKNFSLSSKEQNNPAWWHGQPMWLTAM YQGLKAATYFWPGSEVAINGSFPSIYMPYNGSV PFEERISTLLKWLDLPKAERPRFYTMYFEEPDS SGHAGGPVSARVIKALQVVDHAFGMLMEGLKQ RNLHNCVNIILLADHGMDQTYCNKMEYMTDYFP RINFFYMYEGPAPRIRAHNIPHDFFSFNSEEIVR NLSCRKPDQHFKPYLTPDLPKRLHYAKNVRIDK VHLFVDQQWLAVRSKSNTNCGGGNHGYNNEF RSMEAIFLAHGPSFKEKTEVEPFENIEVYNLMCD LLRIQPAPNNGTHGSLNHLLKVPFYEPSHAEEV SKFSVCGFANPLPTESLDCFCPHLQNSTQLEQV NQMLNLTQEEITATVKVNLPFGRPRVLQKNVDH CLLYHREYVSGFGKAMRMPMWSSYTVPQLGD TSPLPPTVPDCLRADVRVPPSESQKCSFYLADK NITHGFLYPPASNRTSDSQYDALITSNLVPMYEE FRKMWDYFHSVLLIKHATERNGVNVVSGPIFDY NYDGHFDAPDEITKHLANTDVPIPTHYFVVLTSC KNKSHTPENCPGWLDVLPFIIPHRPTNVESCPE GKPEALWVEERFTAHIARVRDVELLTGLDFYQD
KVQPVSEILQLKTYLPTFETTI FOLR1 100 MAQRMTTQLLLLLVWVAVVGEAQTRIAWARTE
LLNVCMNAKHHKEKPGPEDKLHEQCRPWRKN ACCSTNTSQEAHKDVSYLYRFNWNHCGEMAP ACKRHFIQDTCLYECSPNLGPWIQQVDQSWRK ERVLNVPLCKEDCEQWWEDCRTSYTCKSNWH KGWNWTSGFNKCAVGAACQPFHFYFPTPTVLC NEIWTHSYKVSNYSRGSGRCIQMWFDPAQGNP NEEVARFYAAAMSGAGPWAAWPFLLSLALMLL
WLLS HAVCR1 101 MHPQVVILSLILHLADSVAGSVKVGGEAGPSVTL
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[0218] Em várias modalidades, um ADC revelado no presente documento pode compreender qualquer conjunto de domínios variáveis de cadeia pesada e leve mencionados nas tabelas acima, ou o conjunto de seis sequências de CDR do conjunto de cadeia pesada e leve, por exemplo, por meio de transplante de seis CDRs em uma estrutura de anticorpo de doador humano escolhida. Em várias modalidades, um ADC revelado no presente documento pode compreender sequências de aminoácidos que são homólogas às sequências mencionadas nas tabelas acima, desde que o ADC retenha a capacidade de se ligar a seu antígeno de câncer alvo (por exemplo, com uma
KD menor que 1x10-8 M) e retenha uma ou mais propriedades funcionais dos ADCs revelados no presente documento (por exemplo, capacidade de internalizar, modular splicing de RNA, inibir o crescimento celular, etc.).
[0219] Em algumas modalidades, o ADC compreende adicionalmente domínios constantes de cadeia pesada e leve humanos ou fragmentos dos mesmos. Por exemplo, o ADC pode compreender um domínio constante de cadeia pesada de IgG humana (como uma IgG1) e um domínio constante de cadeia leve kappa ou lambda humana. Em várias modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno dos ADCs descritos compreende um domínio constante de cadeia pesada de subtipo 1 de imunoglobulina G humana (IgG1) com um domínio constante de cadeia leve kappa de Ig humana.
[0220] Em várias outras modalidades, o antígeno de câncer alvo para um ADC é o receptor 2 de fator de crescimento epidérmico humano (HER2).
[0221] Em várias modalidades, o anticorpo anti-HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende três CDRs de cadeia pesada e três CDRs de cadeia leve da seguinte forma: CDR1 de cadeia pesada (HCDR1) que consiste na SEQ ID NO:1, CDR2 de cadeia pesada (HCDR2) que consiste na SEQ ID NO:2, CDR3 de cadeia pesada (HCDR3) que consiste na SEQ ID NO:3; CDR1 de cadeia leve (LCDR1) que consiste na SEQ ID NO:4, CDR2 de cadeia leve (LCDR2) que consiste na SEQ ID NO:5 e CDR3 de cadeia leve (LCDR3) que consiste na SEQ ID NO:6, conforme definido pelo sistema de numeração de Kabat.
[0222] Em várias modalidades, o anticorpo anti-HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:19 e uma região variável de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:20. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-
HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende a sequência de aminoácidos de região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO:19 e a sequência de aminoácidos de região variável de cadeia leve da SEQ ID NO:20 ou sequências que são pelo menos 95% idênticas às sequências reveladas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo tem uma sequência de aminoácidos de região variável de cadeia pesada que é pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO : 19 e/ou uma sequência de aminoácidos de região variável de cadeia leve que é pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO: 20.
[0223] Em várias modalidades, o anticorpo anti-HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um anticorpo de internalização ou fragmento de ligação ao antígeno de internalização. Em várias modalidades, o anticorpo anti-HER2 compreende um domínio constante de cadeia pesada de IgG1 humana e um domínio constante de cadeia leve kappa de Ig humana.
[0224] Em várias modalidades, o anticorpo anti-HER2 compreende a sequência de aminoácidos de cadeia pesada da SEQ ID NO:19 ou uma sequência que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO:19 e a sequência de aminoácidos de cadeia leve da SEQ ID NO:20 ou uma sequência que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO:20. Em modalidades específicas, o anticorpo anti-HER2 compreende a sequência de aminoácidos de cadeia pesada da SEQ ID NO:19 e a sequência de aminoácidos de cadeia leve da SEQ ID NO:20, ou sequências que são pelo menos 95% idênticas às sequências reveladas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-HER2 tem uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada que é pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO:19 e um aminoácido de cadeia leve sequência de ácido que é pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO:20.
Em várias modalidades, o anticorpo anti-HER2 é trastuzumabe, ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
[0225] Em várias modalidades, o anticorpo anti-HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende as três CDRs de cadeia pesada e três CDRs de cadeia leve de trastuzumabe ou em que as CDRs incluem não mais que uma, duas, três, quatro, cinco ou seis adições, deleções ou substituições de aminoácidos de HCDR1 (SEQ ID NO:1), HCDR2 (SEQ ID NO:2), HCDR3 (SEQ ID NO:3); LCDR1 (SEQ ID NO:4), LCDR2 (SEQ ID NO:5) e LCDR3 (SEQ ID NO:6).
[0226] Em várias outras modalidades, o antígeno de câncer alvo para um ADC é sindecano-1 humano (CD138).
[0227] Em várias modalidades, o anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende três CDRs de cadeia pesada e três CDRs de cadeia leve da seguinte forma: CDR1 de cadeia pesada (HCDR1) que consiste na SEQ ID NO:7, CDR2 de cadeia pesada (HCDR2) que consiste na SEQ ID NO:8, CDR3 de cadeia pesada (HCDR3) que consiste na SEQ ID NO:9; CDR1 de cadeia leve (LCDR1) que consiste na SEQ ID NO:10, CDR2 de cadeia leve (LCDR2) que consiste na SEQ ID NO:11 e CDR3 de cadeia leve (LCDR3) que consiste na SEQ ID NO:12, conforme definido pelo sistema de numeração de Kabat.
[0228] Em várias modalidades, o anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:21 e uma região variável de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22. Em algumas modalidades, o anticorpo anti- CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende a sequência de aminoácidos de região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO:21 e a sequência de aminoácidos de região variável de cadeia leve da SEQ ID NO:22 ou sequências que são pelo menos 95% idênticas às sequências reveladas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo tem uma sequência de aminoácidos de região variável de cadeia pesada que é pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO : 21 e/ou uma sequência de aminoácidos de região variável de cadeia leve que é pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO: 22.
[0229] Em várias modalidades, o anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um anticorpo de internalização ou fragmento de ligação ao antígeno de internalização. Em várias modalidades, o anticorpo anti-CD138 compreende um domínio constante de cadeia pesada de IgG2a murina e um domínio constante de cadeia leve kappa de Ig murina. Em várias modalidades, o anticorpo anti-CD138 compreende um domínio constante de cadeia pesada de IgG2a humana e um domínio constante de cadeia leve kappa de Ig humana.
[0230] Em várias modalidades, o anticorpo anti-CD138 compreende a sequência de aminoácidos de cadeia pesada da SEQ ID NO:21 ou uma sequência que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO:21 e a sequência de aminoácidos de cadeia leve da SEQ ID NO:22 ou uma sequência que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO:22. Em modalidades específicas, o anticorpo anti-CD138 compreende a sequência de aminoácidos de cadeia pesada da SEQ ID NO:21 e a sequência de aminoácidos de cadeia leve da SEQ ID NO:22, ou sequências que são pelo menos 95% idênticas às sequências reveladas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD138 tem uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada que é pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO:21 e um aminoácido de cadeia leve sequência de ácido que é pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO:22. Em várias modalidades, o anticorpo anti-CD138 é B-B4, ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
[0231] Em várias modalidades, o anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende as três CDRs de cadeia pesada e três CDRs de cadeia leve de B-B4 ou em que as CDRs incluem não mais que uma, duas, três, quatro, cinco ou seis adições, deleções ou substituições de aminoácidos de HCDR1 (SEQ ID NO:7), HCDR2 (SEQ ID NO:8), HCDR3 (SEQ ID NO:9); LCDR1 (SEQ ID NO:10), LCDR2 (SEQ ID NO:11) e LCDR3 (SEQ ID NO:12).
[0232] Em várias outras modalidades, o antígeno de câncer alvo para um ADC é o receptor 2 de efrina tipo A humana (EPHA2).
[0233] Em várias modalidades, o anticorpo anti-EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende três CDRs de cadeia pesada e três CDRs de cadeia leve da seguinte forma: CDR1 de cadeia pesada (HCDR1) que consiste na SEQ ID NO:13, CDR2 de cadeia pesada (HCDR2) que consiste na SEQ ID NO:14, CDR3 de cadeia pesada (HCDR3) que consiste na SEQ ID NO:15; CDR1 de cadeia leve (LCDR1) que consiste na SEQ ID NO:16, CDR2 de cadeia leve (LCDR2) que consiste na SEQ ID NO:17 e CDR3 de cadeia leve (LCDR3) que consiste na SEQ ID NO:18, conforme definido pelo sistema de numeração de Kabat.
[0234] Em várias modalidades, o anticorpo anti-EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:23 e uma região variável de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:24. Em algumas modalidades, o anticorpo anti- EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende a sequência de aminoácidos de região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO:23 e a sequência de aminoácidos de região variável de cadeia leve da SEQ ID NO:24 ou sequências que são pelo menos 95% idênticas às sequências reveladas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo tem uma sequência de aminoácidos de região variável de cadeia pesada que é pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO : 23 e/ou uma sequência de aminoácidos de região variável de cadeia leve que é pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO: 24.
[0235] Em várias modalidades, o anticorpo anti-EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um anticorpo de internalização ou fragmento de ligação ao antígeno de internalização. Em várias modalidades, o anticorpo anti-EPHA2 compreende um domínio constante de cadeia pesada de IgG1 humana e um domínio constante de cadeia leve kappa de Ig humana.
[0236] Em várias modalidades, o anticorpo anti-EPHA2 compreende a sequência de aminoácidos de cadeia pesada da SEQ ID NO:23 ou uma sequência que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO:23 e a sequência de aminoácidos de cadeia leve da SEQ ID NO:24 ou uma sequência que é pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO:24. Em modalidades específicas, o anticorpo anti-EPHA2 compreende a sequência de aminoácidos de cadeia pesada da SEQ ID NO:23 e a sequência de aminoácidos de cadeia leve da SEQ ID NO:24, ou sequências que são pelo menos 95% idênticas às sequências reveladas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-EPHA2 tem uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada que é pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO:23 e um aminoácido de cadeia leve sequência de ácido que é pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à SEQ ID NO:24. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-EPHA2 compreende uma cadeia pesada codificada pela sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:23; e uma cadeia leve codificada pela sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO:24. Em várias modalidades, o anticorpo anti-EPHA2 é 1C1, ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.
[0237] Em várias modalidades, o anticorpo anti-EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende as três CDRs de cadeia pesada e três CDRs de cadeia leve de 1C1 ou em que as CDRs incluem não mais que uma, duas, três, quatro, cinco ou seis adições, deleções ou substituições de aminoácidos de HCDR1 (SEQ ID NO:13), HCDR2 (SEQ ID NO:14), HCDR3 (SEQ ID NO:15); LCDR1 (SEQ ID NO:16), LCDR2 (SEQ ID NO:17) e LCDR3 (SEQ ID NO:18).
[0238] Em várias modalidades, as substituições de aminoácidos são de resíduos únicos. As inserções geralmente estarão na ordem de cerca de 1 a cerca de 20 resíduos de aminoácidos, embora inserções consideravelmente maiores possam ser toleradas, desde que a função biológica seja mantida (por exemplo, ligação a um antígeno alvo). As deleções geralmente variam de cerca de 1 a cerca de 20 resíduos de aminoácidos, embora em alguns casos as deleções possam ser muito maiores. Substituições, deleções, inserções ou qualquer combinação dos mesmos podem ser usadas para chegar a um derivado ou variante final. Em geral, essas mudanças são feitas em alguns aminoácidos para minimizar a alteração da molécula, particularmente a imunogenicidade e especificidade da proteína de ligação ao antígeno. No entanto, mudanças maiores podem ser toleradas em certas circunstâncias. Substituições conservativas são geralmente feitas de acordo com o gráfico a seguir mostrado na Tabela 6. TABELA 6 Resíduo Original Substituições Exemplificativas Ala Ser Arg Lys Asn Gln, His Asp Glu Cys Ser Gln Asn
Glu Asp Gly Pro His Asn, Gln Ile Leu, Val Leu Ile, Val Lys Arg, Gln, Glu Met Leu, Ile Phe Met, Leu, Tyr Ser Thr Thr Ser Trp Tyr Tyr Trp, Phe Val Ile, Leu
[0239] Alterações substanciais na função ou identidade imunológica são feitas selecionando-se substituições que são menos conservativas do que aquelas mostradas na Tabela 6. Por exemplo, podem ser feitas substituições que afetem mais significativamente: a estrutura da cadeia principal de polipeptídeo na área da alteração, por exemplo, a estrutura alfa- helicoidal ou de folha beta; a carga ou hidrofobicidade da molécula no sítio alvo; ou o volume da cadeia lateral. As substituições que, em geral, podem produzir as maiores alterações nas propriedades do polipeptídeo são aquelas em que (a) um resíduo hidrofílico, por exemplo, serila ou treonila, é substituído com (ou por) um resíduo hidrofóbico, por exemplo, leucila, isoleucila, fenilalanila, valila ou alanila; (b) uma cisteína ou prolina é substituída com (ou por) qualquer outro resíduo; (c) um resíduo que tem uma cadeia lateral eletropositiva, por exemplo, lisila, arginila ou histidila, é substituído com (ou por) um resíduo eletronegativo, por exemplo, glutamila ou aspartila; ou (d) um resíduo que tem uma cadeia lateral volumosa, por exemplo, fenilalanina, é substituído com (ou por) um que não tem uma cadeia lateral, por exemplo, glicina.
[0240] Em várias modalidades em que as sequências de anticorpos variantes são usadas em um ADC, as variantes tipicamente exibem a mesma atividade biológica qualitativa e provocarão a mesma resposta imunológica, embora as variantes também possam ser selecionadas para modificar as características das proteínas de ligação ao antígeno conforme necessário. Alternativamente, a variante pode ser projetada de modo que a atividade biológica da proteína de ligação ao antígeno seja alterada. Por exemplo, os sítios de glicosilação podem ser alterados ou removidos.
[0241] Vários anticorpos podem ser usados com os ADCs usados no presente documento para alvejar as células cancerosas. Conforme mostrado abaixo, as cargas úteis de ligante nos ADCs revelados no presente documento são surpreendentemente eficazes com anticorpos de alvejamento a antígeno tumoral diferentes. Os antígenos adequados expressos em células tumorais, mas não em células saudáveis, ou expressos em células tumorais em um nível mais alto do que em células saudáveis, são conhecidos na técnica, assim como os anticorpos dirigidos contra os mesmos. Estes anticorpos podem ser usados com os ligantes e cargas úteis de modulador de splicing de herboxidieno revelados no presente documento. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo HER2 e o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é trastuzumabe. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo CD138 e o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é B-B4. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo EPHA2, e o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é 1C1. Em algumas modalidades, embora os ligantes e cargas úteis de modulador de splicing de herboxidieno revelados sejam surpreendentemente eficazes com vários anticorpos de alvejamento a tumor diferentes, anticorpos de alvejamento a HER2, como trastuzumabe, anticorpos de alvejamento a CD138, como B-B4, e anticorpos de alvejamento a EPHA2, como 1C1, forneceram razão fármaco:anticorpo, nível de agregação, estabilidade (ou seja, estabilidade in vitro e in vivo), alvejamento de tumor (ou seja, citotoxicidade, potência) e/ou eficácia de tratamento particularmente aprimorados. A eficácia de tratamento aprimorada pode ser medida in vitro ou in vivo e pode incluir taxa de crescimento de tumor reduzido e/ou volume do tumor reduzido.
[0242] Em certas modalidades, anticorpos alternativos para os mesmos alvos ou anticorpos para alvos de antígeno diferentes são usados e fornecem pelo menos algumas das propriedades funcionais favoráveis descritas acima (por exemplo, estabilidade aprimorada, alvejamento de tumor aprimorado, eficácia de tratamento aprimorada, etc.). Em algumas modalidades, algumas ou todas essas propriedades funcionais favoráveis são observadas quando os ligantes e cargas úteis de modulador de splicing de herboxidieno revelados são conjugados a um anticorpo alternativo de alvejamento a HER2, CD138 ou EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas outras modalidades, algumas ou todas essas propriedades funcionais favoráveis são observadas quando os ligantes e cargas úteis de modulador de splicing de herboxidieno revelados são conjugados a um anticorpo de alvejamento a HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo HER2. Em algumas modalidades, o anticorpo de alvejamento a HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno é trastuzumabe. Em algumas outras modalidades, algumas ou todas essas propriedades funcionais favoráveis são observadas quando os ligantes e cargas úteis de modulador de splicing de herboxidieno revelados são conjugados a um anticorpo de alvejamento a CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo CD138. Em algumas modalidades, o anticorpo de alvejamento a CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno é B-B4. Em algumas outras modalidades, algumas ou todas essas propriedades funcionais favoráveis são observadas quando os ligantes e cargas úteis de modulador de splicing de herboxidieno revelados são conjugados a um anticorpo de alvejamento a EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo EPHA2. Em algumas modalidades, o anticorpo de alvejamento a EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno é 1C1. Ligantes
[0243] Em várias modalidades, o ligante em um ADC é estável extracelularmente de maneira suficiente para ser terapeuticamente eficaz. Em algumas modalidades, o ligante é estável fora de uma célula, de modo que o ADC permaneça intacto quando presente em condições extracelulares (por exemplo, antes do transporte ou entrega em uma célula). O termo "intacto", usado no contexto de um ADC, significa que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno permanece ligado à porção química de fármaco (por exemplo, o modulador de splicing de herboxidieno). Como usado no presente documento, "estável", no contexto de um ligante ou ADC que compreende um ligante, significa que não mais que 20%, não mais que cerca de 15%, não mais que cerca de 10%, não mais que cerca de 5%, não mais que cerca de 3%, ou não mais que cerca de 1% dos ligantes (ou qualquer porcentagem entre as mesmas) em uma amostra de ADC são clivados (ou no caso de um ADC geral não estar intacto) quando o ADC está presente em condições extracelulares. Em algumas modalidades, os ligantes e/ou ADCs revelados no presente documento são surpreendentemente estáveis em comparação com ligantes alternativos e/ou ADCs com ligantes alternativos e/ou cargas úteis de modulador de splicing de herboxidieno. Em algumas modalidades, os ADCs revelados no presente documento podem permanecer intactos por mais de cerca de 48 horas, mais de 60 horas, mais de cerca de 72 horas, mais de cerca de 84 horas ou mais de cerca de 96 horas.
[0244] Se um ligante é estável extracelularmente pode ser determinado, por exemplo, incluindo um ADC no plasma por um período de tempo predeterminado (por exemplo, 2, 4, 6, 8, 16, 24, 48 ou 72 horas) e, então, quantificar a quantidade da porção química de fármaco livre presente no plasma. A estabilidade pode permitir que o ADC tenha tempo para localizar as células tumorais alvo e prevenir a liberação prematura da porção química de fármaco, o que poderia reduzir o índice terapêutico do ADC danificando indiscriminadamente os tecidos normais e tumorais. Em algumas modalidades, o ligante é estável fora de uma célula alvo e libera a porção química de fármaco do ADC uma vez dentro da célula, de modo que o fármaco possa se ligar ao seu alvo (por exemplo, ao complexo de spliceossoma SF3b). Dessa forma, um ligante eficaz irá: (i) manter as propriedades de ligação específicas do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno; (ii) permitir a entrega, por exemplo, entrega intracelular, da porção química de fármaco por meio de ligação estável ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno; (iii) permanecer estável e intacto até que o ADC seja transportado ou entregue a seu sítio alvo; e (iv) permitir o efeito terapêutico, por exemplo, efeito citotóxico, da porção química de fármaco após a clivagem ou mecanismo de liberação alternativo.
[0245] Os ligantes podem impactar as propriedades físico- químicas de um ADC. Como muitos agentes citotóxicos são de natureza hidrofóbica, a ligação dos mesmos ao anticorpo com uma porção química hidrofóbica adicional pode levar à agregação. Os agregados de ADC são insolúveis e, frequentemente, limitam o carregamento de fármaco alcançável no anticorpo, o que pode afetar negativamente a potência do ADC. Os agregados de proteínas de produtos biológicos, em geral, também têm sido associados à imunogenicidade aumentada. Como mostrado abaixo, os ligantes revelados no presente documento resultam em ADCs com baixos níveis de agregação e níveis desejáveis de carregamento de fármaco.
[0246] Um ligante pode ser "clivável" ou "não clivável" (Ducry e Stump (2010) Bioconjugate Chem. 21:5-13). Os ligantes cliváveis são projetados para liberar a porção química de fármaco (por exemplo, o modulador de splicing de herboxidieno) quando submetido a determinados fatores ambientais, por exemplo, quando internalizados na célula alvo, enquanto os ligantes não cliváveis geralmente dependem da degradação do próprio anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno.
[0247] Em algumas modalidades, o ligante é um ligante não clivável. Em algumas modalidades, a porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno do ADC é liberada pela degradação do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Os ligantes não cliváveis tendem a permanecer covalentemente associados a pelo menos um aminoácido do anticorpo e do fármaco após internalização e degradação na célula alvo. Vários ligantes não cliváveis exemplificativos são descritos no presente documento e outros são conhecidos na técnica. Ligantes não cliváveis exemplificativos podem compreender tioéter, ciclo-hexila, ciclo-hexano-1 carboxilato de N- succinimidil 4-(N-maleimidometila) (SMCC) ou N-hidroxisuccinimida (NHS), uma ou mais porções químicas de polietilenoglicol (PEG), por exemplo, 1 , 2, 3, 4, 5 ou 6 porções químicas de PEG, ou uma ou mais porções químicas de alquila.
[0248] Em algumas modalidades, o ligante é um ligante clivável. Um ligante clivável se refere a qualquer ligante que compreende uma porção química clivável. Como usado no presente documento, o termo "porção química clivável" se refere a qualquer ligação química que pode ser clivada. As ligações químicas cliváveis adequadas são bem conhecidas na técnica e incluem, porém sem limitação, ligações lábeis de ácido, ligações lábeis de protease/peptidase, ligações fotolábeis, ligações dissulfeto e ligações lábeis de esterase. Os ligantes que compreendem uma fração clivável podem permitir a liberação da porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno do ADC por meio de clivagem em um sítio específico no ligante.
[0249] Em algumas modalidades, o ligante é clivável sob condições intracelulares, de modo que a clivagem do ligante libere suficientemente a porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno no ambiente intracelular para ativar o fármaco e/ou tornar o fármaco terapeuticamente eficaz. Em algumas modalidades, a porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno não é clivada do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno até que o ADC entre em uma célula que expressa um antígeno específico para o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do ADC, e a porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno é clivada o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno após entrar na célula. Em algumas modalidades, o ligante compreende uma porção química clivável que é posicionada de modo que nenhuma parte do ligante ou do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno permaneça ligado à porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno após a clivagem. Os ligantes cliváveis exemplificativos incluem ligantes do tipo ácido lábil, ligantes sensíveis à protease/peptidase, ligantes fotolábeis, ligantes contendo dimetila, dissulfeto ou sulfonamida.
[0250] Em algumas modalidades, o ligante é um ligante sensível a pH e é sensível à hidrólise em determinados valores de pH. Normalmente, o ligante sensível a pH é clivável sob condições ácidas. Esta estratégia de clivagem geralmente tira vantagem do pH mais baixo nos compartimentos intracelulares endossômicos (pH ~ 5 a 6) e lisossômicos (pH ~ 4,8), em comparação com o citosol (pH ~ 7,4), para ativar a hidrólise de um grupo tipo ácido lábil no ligante, como uma hidrazona (Jain et al. (2015) Pharm Res 32:3526-40). Em algumas modalidades, o ligante é um ligante do tipo ácido lábil e/ou hidrolisável. Por exemplo, um ligante do tipo ácido lábil que é hidrolisável no lisossoma e contém um grupo ácido lábil (por exemplo, uma hidrazona, uma semicarbazona, uma tiossemicarbazona, uma amida cis- aconítica, um ortoéster, um acetal, um cetal ou similares) pode ser usado. Consultar, por exemplo, Patente US nº 5.122.368; nº 5.824.805; nº 5.622.929;
Dubowchik e Walker (1999) Pharm Therapeutics 83: 67-123; Neville et al. (1989) Biol Chem. 264: 14653-61. Tais ligantes são relativamente estáveis sob condições de pH neutro, como no sangue, mas são instáveis abaixo de pH 5,5 ou 5,0, o pH aproximado do lisossoma. Em certas modalidades, o ligante hidrolisável é um ligante tioéter (como, por exemplo, um tioéter ligado ao agente terapêutico por meio de uma ligação acil-hidrazona) (consultar, por exemplo,, Patente nº US 5.622.929).
[0251] Em algumas modalidades, o ligante é clivável sob condições de redução. Em algumas modalidades, o ligante é clivável na presença de um agente redutor, como glutationa ou ditiotreitol. Em algumas modalidades, o ligante é um ligante dissulfeto clivável ou um ligante sulfonamida clivável.
[0252] Em algumas modalidades, o ligante é um ligante dissulfeto clivável. Uma variedade de ligantes dissulfeto é conhecida na técnica, incluindo, por exemplo, aqueles que podem ser formados usando SATA ((propionato de N-succinimidil-5-acetiltioacetato), SPDP (N-succinimidil-3- (2- piridilditio)), SPDB ((butirato de N-succinimidil-3- (2-piridilditio)) e SMPT (N- succinimidiloxicarbonil-alfa-metil-alfa- (2-piridil-ditio)tolueno). Consultar, por exemplo, Thorpe et al. (1987) Cancer Res. 47:5924-31; Wawrzynczak et al., In Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer (C. W. Vogel ed., Oxford U. Press, 1987). Consultar também Patente nº US 4.880.935. Ligantes dissulfeto são tipicamente usados para explorar a abundância de tióis intracelulares, o que pode facilitar a clivagem de suas ligações dissulfeto. As concentrações intracelulares do tiol intracelular mais abundante, glutationa reduzida, estão geralmente na faixa de 1 a 10 nM, que é cerca de 1.000 vezes maior que a do tiol de baixo peso molecular mais abundante no sangue (ou seja, cisteína) em cerca de 5 µM (Goldmacher et al., In Cancer Drug Discovery and Development: Antibody-Drug Conjugates and Immunotoxins (G. L. Phillips ed., Springer, 2013)). As enzimas intracelulares da família da proteína dissulfeto isomerase também podem contribuir para a clivagem intracelular de um ligante dissulfeto. Como usado no presente documento, um ligante dissulfeto clivável se refere a qualquer ligante que compreende uma porção química de dissulfeto clivável. O termo "porção química de dissulfeto clivável" se refere a uma ligação dissulfeto que pode ser clivada e/ou reduzida, por exemplo, por um tiol ou enzima.
[0253] Em algumas modalidades, o ligante é um ligante sulfonamida clivável. Como usado no presente documento, um ligante sulfonamida clivável se refere a qualquer ligante que compreende uma porção química de sulfonamida clivável. O termo "porção química de sulfonamida clivável" se refere a um grupo sulfonamida, ou seja, grupo sulfonila conectado a um grupo amina, em que a ligação enxofre-nitrogênio pode ser clivada.
[0254] Em algumas modalidades, o ligante pode ser um ligante do tipo dendrítico para ligação covalente de mais de uma porção química de fármaco a um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno através de uma porção química de ligante multifuncional de ramificação. Consultar, por exemplo, Sun et al. (2002) Bioorg Med Chem Lett. 12:2213-5; Sun et al. (2003) Bioorg Med Chem. 11:1761-8. Os ligantes dendríticos podem aumentar a razão molar da fármaco para anticorpo, ou seja, o carregamento de fármaco, que está relacionado à potência do ADC. Dessa forma, quando um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno contém apenas um grupo tiol de cisteína reativo, por exemplo, uma grande variedade de porções químicas de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno pode ser ligada através de um ligante dendrítico. Em algumas modalidades, a porção química de ligante ou porção química de ligante-fármaco pode ser ligada ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno por meio de química de ponte dissulfeto reduzida ou tecnologia de utilização de lisina limitada. Consultar, por exemplo, Publ. Intl. nº WO 2013/173391 e nº WO 2013/173393.
[0255] Em algumas modalidades, o ligante é clivável por um agente de clivagem, por exemplo, uma enzima, que está presente no ambiente intracelular (por exemplo, dentro de um lisossoma ou endossomo ou cavéola). O ligante pode ser, por exemplo, um ligante peptídico que é clivado por uma peptidase intracelular ou enzima protease, incluindo, porém sem limitação, uma protease lisossômica ou endossômica.
[0256] Em algumas modalidades, o ligante é um ligante peptídico clivável. Como usado no presente documento, um ligante peptídico clivável se refere a qualquer ligante que compreende uma porção química de peptídeo clivável. O termo "porção química de peptídeo clivável" se refere a qualquer ligação química que liga aminoácidos (derivada de aminoácidos naturais ou sintéticos) que pode ser clivada por um agente que está presente no ambiente intracelular. Por exemplo, um ligante pode compreender uma sequência de valina-alanina (Val-Ala) ou uma sequência de valina-citrulina (Val-Cit) que é clivável por uma peptidase, como catepsina, por exemplo, catepsina B. Em algumas modalidades, um ligante pode compreender uma sequência de ácido glutâmico-valina-citrulina (Glu-Val-Cit). Em algumas modalidades, o ligante é um ligante clivável por enzima e uma porção química de peptídeo clivável no ligante é clivável pela enzima. Em algumas modalidades, a porção química de peptídeo clivável é clivável por uma enzima lisossômica, por exemplo, catepsina. Em algumas modalidades, o ligante é um ligante clivável de catepsina. Em algumas modalidades, a porção de peptídeo clivável no ligante é clivável por uma cisteína catepsina lisossômica, como catepsina B, C, F, H, K, L, O, S, V, X ou W. Em algumas modalidades, a porção química peptídica clivável é clivável por catepsina B. Um dipeptídeo exemplificativo que pode ser clivado por catepsina B é valina-citrulina (Val-Cit) (Dubowchik et al. (2002) Bioconjugate Chem. 13: 85569).
[0257] Em algumas modalidades, o ligante ou a porção química de peptídeo clivável no ligante compreende uma unidade de aminoácido. Em algumas modalidades, a unidade de aminoácido permite a clivagem do ligante por uma protease, facilitando assim a liberação da porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno do ADC após a exposição a uma ou mais proteases intracelulares, como uma ou mais enzimas lisossômicas (Doronina et al . (2003) Nat Biotechnol. 21:778-84; Dubowchik e Walker (1999) Pharm Therapeutics 83:67-123). Unidades de aminoácidos exemplificativas incluem, porém sem limitação, dipeptídeos, tripeptídeos, tetrapeptídeos e pentapeptídeos.
Dipeptídeos exemplificativos incluem, porém sem limitação, valina-alanina (Val-Ala), valina-citrulina (Val-Cit), alanina-asparagina (Ala-Asn), alanina-fenilalanina (Ala-Phe), fenilalanina-lisina ( Phe-Lys), alanina-lisina (Ala- Lys), alanina-valina (Ala-Val), valina-lisina (Val-Lys), lisina-lisina (Lys-Lys), fenilalanina-citrulina (Phe-Cit), leucina-citrulina (Leu-Cit), isoleucina-citrulina (Ile-Cit), triptofano-citrulina (Trp-Cit) e fenilalanina-alanina (Phe-Ala). Tripeptídeos exemplificativos incluem, porém sem limitação, alanina-alanina- asparagina (Ala-Ala-Asn), glicina-valina-citrulina (Gly-Val-Cit), glicina-glicina- glicina (Gly-Gly-Gly), fenilalanina -fenilalanina-lisina (Phe-Phe-Lys), ácido glutâmico-valina-citrulina (Glu-Val-Cit) (consultar Anami et al. (2018) Nat.
Comm. 9:2512) e glicina-fenilalanina-lisina (Gly-Phe-Lys). Outras unidades de aminoácidos exemplificativas incluem, porém sem limitação, Gly-Phe-Gly-Gly (SEQ ID NO:34), Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID NO:35), Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO:36), Phe-N9-tosil-Arg e Phe-N9-Nitro-Arg, como descrito, por exemplo, na Patente US nº 6.214.345. Em algumas modalidades, a unidade de aminoácido no ligante compreende Val-Ala.
Em algumas modalidades, a unidade de aminoácido no ligante compreende Val-Cit.
Em algumas modalidades, a unidade de aminoácido no ligante compreende Glu-Val-Cit.
Uma unidade de aminoácido pode compreender resíduos de aminoácidos de ocorrência não natural e/ou aminoácidos menores e/ou análogos de aminoácidos de ocorrência não natural, como a citrulina.
As unidades de aminoácidos podem ser projetadas e otimizadas para clivagem enzimática por uma enzima específica, por exemplo, uma protease associada a tumor, uma protease lisossômica, como catepsina B, C, D ou S, ou uma plasmina protease.
[0258] - - glicuronídeo clivável se refere a qualquer ligante que compreende uma porção - -glicuronídeo clivável exemplificativo compreende a estrutura:
[0259] -glicuronídeo clivável" se refere a uma ligação glicosídica que pode ser clivada por um agente com -glicuronidase. Em algumas modalidades, o ligante compreende u - - glicuronidase é uma UDP-glicuronosil transferase que catalisa a hidrólise da
[0260] Em algumas modalidades, um ADC revelado no presente -glicuronídeo clivável no ligante que é clivável pela enzima. Em algumas modalidades, a porção química -glicuronídeo clivável no ligante é clivável por uma enzima lisossômica, por -glicuronidase. Em algumas modalidades, o ligante é um -glicuronidase clivável. Em algumas modalidades, a porção química de - - glicuronidase após internalização do ADC, facilitando assim a liberação da porção química de fármaco do ADC no ambiente celular.
[0261] Em algumas modalidades, o ligante em qualquer um dos ADCs revelados no presente documento pode compreender pelo menos uma unidade espaçadora que une o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno à porção química de fármaco (por exemplo, a porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno). Em algumas modalidades, uma unidade espaçadora entre o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e a porção química clivável, quando presente, se une a um sítio de clivagem (por exemplo, uma porção química de peptídeo clivável) no ligante ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, uma unidade espaçadora entre a porção química de fármaco e a porção química clivável, quando presente, se une a um sítio de clivagem (por exemplo, uma porção química de peptídeo clivável) no ligante à porção química de fármaco. Em algumas modalidades, nenhum sítio de clivagem está presente e a unidade espaçadora é usada para ligar o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno à porção química de fármaco.
[0262] Em algumas modalidades, o ligante e/ou unidade espaçadora no ligante é substancialmente hidrofílico. Um ligante hidrofílico pode ser usado para reduzir a extensão em que o fármaco pode ser bombeado para fora das células cancerosas resistentes através de resistência a múltiplos fármacos (MDR) ou transportadores funcionalmente similares. Em algumas modalidades, um ligante hidrofílico pode incluir uma ou mais porções químicas de polietilenoglicol (PEG), por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 porções químicas de PEG. Em algumas modalidades, o ligante compreende 2 porções químicas de PEG.
[0263] Em algumas modalidades, a unidade espaçadora no ligante compreende uma ou mais porções químicas de PEG. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora compreende um ou mais -(PEG)m- e m é um número inteiro de 1 a 10 (ou seja, m pode ser 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10). Em algumas modalidades, m está na faixa de 1 a 10; de 2 a 8; de 2 a 6; de 2 a 5; de 2 a 4; ou de 2 a 3. Em algumas modalidades, m é 2. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora compreende (PEG)2, (PEG)3, (PEG)4, (PEG)5, (PEG)6, (PEG)7, (PEG)8, (PEG)9ou (PEG)10. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora compreende (PEG)2.
[0264] Em algumas modalidades, a unidade espaçadora no ligante compreende uma porção química de alquila. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora compreende um ou mais -(CH2)n- e n é um número inteiro de 1 a 10 (ou seja, n pode ser 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10). Em algumas modalidades, n está na faixa de 1 a 10; de 2 a 8; de 2 a 6; de 2 a 5; de 2 a 4; ou de 2 a 3. Em algumas modalidades, n é 2. Em algumas modalidades, n é 5. Em algumas modalidades, n é 6. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora compreende (CH2)2, (CH2)3, (CH2)4, (CH2)5, (CH2)6, (CH2)7, (CH2)8, (CH2)9ou (CH2)10. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora compreende (CH2)2 ("Et"). Em algumas modalidades, a unidade espaçadora compreende (CH2)6 ("Hex"). Em algumas modalidades, a unidade espaçadora compreende (CH2)2-O-(CH2)2 ("Et-O-Et").
[0265] Uma unidade espaçadora pode ser usada, por exemplo, para ligar o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno à porção química de fármaco, seja direta ou indiretamente. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora liga o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno diretamente à porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e a porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno são ligados através de uma unidade espaçadora que compreende uma ou mais porções químicas De PEG (por exemplo, (PEG) 2), ou uma ou mais porções químicas de alquila (por exemplo, (CH2)2, (CH2)6ou (CH2)2-O-(CH2)2). Em algumas modalidades, a unidade espaçadora liga o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno à porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno indiretamente. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora liga o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno à porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno indiretamente através de - glicuronídeo clivável) e/ou uma porção química de ligação para unir a unidade espaçadora a o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, por exemplo, uma porção química de maleimida.
[0266] A unidade espaçadora, em várias modalidades, se liga ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno (ou seja, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno) através de uma porção química de maleimida (Mal).
[0267] Uma unidade espaçadora que se liga ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno através de uma Mal é chamada no presente documento de uma "unidade espaçadora Mal". O termo "Mal" ou "porção química de maleimida", como usado no presente documento, significa um composto que contém um grupo maleimida e que é reativo com um grupo sulfidrila, por exemplo, um grupo sulfidrila de um resíduo de cisteína no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Outros grupos funcionais que são reativos com grupos sulfidrila (tióis) incluem, porém sem limitação, iodoacetamida, bromoacetamida, vinil piridina, dissulfeto, dissulfeto de piridila, isocianato e isotiocianato. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal é reativa com um resíduo de cisteína no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal é unida ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno através do resíduo de cisteína. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal compreende uma porção química de PEG. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal compreende uma porção química alquila.
[0268] Em determinadas modalidades, o ligante compreende a unidade espaçadora Mal e uma porção química de peptídeo clivável. Em algumas modalidades, a porção química de peptídeo clivável compreende uma unidade de aminoácido. Em algumas modalidades, a unidade de aminoácido compreende Val-Cit. Em algumas modalidades, a unidade de aminoácido compreende Val-Ala. Em algumas modalidades, a unidade de aminoácido compreende Glu-Val-Cit. Em algumas modalidades, o ligante compreende a unidade espaçadora Mal e Val-Cit. Em algumas modalidades, o ligante compreende a unidade espaçadora Mal e Val-Ala. Em algumas modalidades, o ligante compreende a unidade espaçadora Mal e Val-Cit, em que a unidade espaçadora Mal compreende uma maleimidocaproíla (MC). Em algumas modalidades, o ligante compreende a unidade espaçadora Mal e Val-Ala, em que a unidade espaçadora Mal compreende uma maleimidocaproíla (MC). Em algumas modalidades, o ligante compreende a unidade espaçadora Mal e uma -glicuronídeo clivável.
[0269] Em algumas modalidades, o ligante compreende a estrutura: unidade espaçadora Mal. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal compreende uma maleimidocaproíla (MC). Em algumas modalidades, o ligante compreende a estrutura: MC. Em algumas modalidades, o ligante compreende a estrutura: Mal-(CH2)2 - modalidades, o ligante compreende a estrutura: Mal-(CH2)6 ( - algumas modalidades, o ligante compreende a estrutura: Mal-(CH2)2-O-(CH2)2 -Et-O- Mal-(PEG)2. Em algumas modalidades, o ligante compreende a estrutura: Mal- (PEG)2-CO.
[0270] Em várias modalidades, a unidade espaçadora Mal liga o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno a uma porção química de peptídeo clivável. Em algumas modalidades, o ligante compreende a unidade espaçadora Mal-peptídeo. Em algumas modalidades, o ligante compreende a estrutura: unidade espaçadora Mal -Val-Cit. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal compreende uma maleimidocaproíla (MC). Em algumas modalidades, o ligante compreende a estrutura: MC-Val-Cit.
[0271] Em algumas modalidades, o ligante compreende a estrutura: unidade espaçadora Mal -Val-Ala. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal compreende uma maleimidocaproíla (MC). Em algumas modalidades, o ligante compreende a estrutura: MC-Val-Ala.
[0272] Em várias modalidades, a unidade espaçadora Mal liga o -
glicuronídeo clivável. Em algumas modalidades, o ligante compreende a unidade espaçadora Mal- -glicuronídeo. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC- -glicuronídeo.
[0273] Em várias modalidades, a porção química clivável no ligante é unida diretamente à porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno. Em outras modalidades, uma unidade espaçadora é usada para ligar a porção química clivável no ligante à porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno. Em várias modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno é ligado à porção química clivável no ligante por uma unidade espaçadora.
[0274] Uma unidade espaçadora pode ser "autoimolativa" ou "não autoimolativa". Uma unidade espaçadora "não autoimolativa" é aquela em que parte ou toda a unidade espaçadora permanece ligada à porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno após a clivagem do ligante. Exemplos de unidades espaçadoras não autoimolativas incluem, porém sem limitação, uma unidade espaçadora de glicina e uma unidade espaçadora de glicina-glicina. As unidades espaçadoras não autoimolativas podem eventualmente se degradar ao longo do tempo, mas não liberam prontamente uma porção química de fármaco nativa ligada inteiramente sob condições celulares. Uma unidade espaçadora "autoimolativa" permite a liberação da porção química de fármaco nativa sob condições intracelulares. Um "fármaco nativo" ou "porção química de fármaco nativa" é aquela em que nenhuma parte da unidade espaçadora ou outra modificação química permanece após a clivagem/degradação da unidade espaçadora.
[0275] A química de autoimolação é conhecida na técnica e pode ser prontamente selecionada para os ADCs revelados. Em várias modalidades, a unidade espaçadora que liga a porção química no ligante à porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno é autoimolativa e sofre autoimolação simultaneamente com ou logo antes/após a clivagem da porção química clivável sob condições intracelulares. Em algumas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno é ligado à porção química clivável no ligante por uma unidade espaçadora autoimolativa. Em certas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno é ligado à porção química clivável no ligante por uma unidade espaçadora autoimolativa, a porção química clivável compreende Val-Cit e uma maleimidocaproíla (MC) une a porção química clivável ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em certas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno é ligado à porção química clivável no ligante por uma unidade espaçadora autoimolativa, a porção química clivável compreende Val-Ala e uma maleimidocaproíla (MC) une a porção química clivável ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em certas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno é ligado à porção química clivável no ligante por uma unidade espaçadora autoimolativa, a porção química clivável compreende Glu-Val-Cit e uma maleimidocaproíla (MC) une a porção química clivável ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em certas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno é unido ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno por meio de uma unidade espaçadora Mal (por exemplo, MC) no ligante unido a uma porção química clivável Val-Cit e uma unidade espaçadora pABC ou pAB autoimolativa. Em certas outras modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno é unido ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno através de uma unidade espaçadora Mal (por exemplo, MC) no ligante unido a uma porção química clivável Val-Ala e uma unidade espaçadora pABC ou pAB autoimolativa Em certas outras modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno é unido ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno por meio de uma unidade espaçadora Mal (por exemplo, MC) no ligante unido a uma porção química clivável Glu-Val-Cit e uma unidade espaçadora pABC ou pAB autoimolativa.
[0276] Em certas modalidades, a unidade espaçadora autoimolativa no ligante compreende uma unidade p-aminobenzila. Em algumas modalidades, um álcool p-aminobenzílico (pABOH) é ligado a uma unidade de aminoácido ou outra porção química clivável no ligante por meio de uma ligação amida e um carbamato, metilcarbamato ou carbonato é produzido entre o pABOH e a porção químicas de fármaco (Hamann et al. (2005) Expert Opin Ther Patents 15:1087-103). Em algumas modalidades, a unidade espaçadora autoimolativa é ou compreende p-aminobenziloxicarbonila (pABC). Sem se ater à teoria, acredita-se que a autoimolação de pABC envolva uma reação de eliminação 1,6 espontânea (Jain et al. (2015) Pharm Res. 32:3526- 40).
[0277] Em várias modalidades, a estrutura da p- aminobenziloxicarbonila (pABC) usada nos ADCs revelados é mostrada abaixo:
[0278] Em várias modalidades, a unidade espaçadora que liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing de herboxidieno é autoimolativa. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora autoimolativa é pABC. Em algumas modalidades, o pABC liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing de herboxidieno. Em algumas modalidades, o pABC é submetido à autoimolação após clivagem da porção química clivável e o modulador de splicing de herboxidieno é liberado do ADC em sua forma ativa nativa.
[0279] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno é unido ao modulador de splicing de herboxidieno por um ligante que compreende MC-Val-Cit-pABC. Em outras modalidades, um anticorpo anti-HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno é unido ao modulador de splicing de herboxidieno por um ligante que compreende MC-Val-Ala-pABC.
[0280] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno é unido ao modulador de splicing de herboxidieno por um ligante que compreende MC-Val-Cit-pABC. Em outras modalidades, um anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno é unido ao modulador de splicing de herboxidieno por um ligante que compreende MC-Val-Ala-pABC.
[0281] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno é unido ao modulador de splicing de herboxidieno por um ligante que compreende MC-Val-Cit-pABC. Em outras modalidades, um anticorpo anti-EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno é unido ao modulador de splicing de herboxidieno por um ligante que compreende MC-Val-Ala-pABC.
[0282] Em algumas modalidades, o pABC é submetido à autoimolação após clivagem de uma porção química de peptídeo clivável no ligante. Em algumas modalidades, a porção química de peptídeo clivável compreende uma unidade de aminoácido. Em algumas modalidades, o ligante compreende unidade de aminoácido-pABC. Em algumas modalidades, a unidade de aminoácido é Val-Cit. Em algumas modalidades, o ligante compreende Val-Cit-pABC. Em algumas modalidades, a unidade de aminoácido é Glu-Val-Cit. Em algumas modalidades, o ligante compreende Glu-Val-Cit-pABC. Em algumas modalidades, a unidade de aminoácido é Val- Ala. Em algumas modalidades, o ligante compreende Val-Ala-pABC. Em algumas modalidades, a unidade de aminoácido é Ala-Ala-Asn. Em algumas modalidades, o ligante compreende Ala-Ala-Asn-pABC.
[0283] Em algumas modalidades, o pABC é submetido à -glicuronídeo clivável -glicuronídeo- pABC.
[0284] Em certas modalidades, a unidade espaçadora autoimolativa no ligante compreende uma unidade p-aminobenzila. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora autoimolativa no ligante compreende uma p-aminobenzila (pAB). Em algumas modalidades, a autoimolação de pAB envolve uma reação de eliminação 1,6 espontânea.
[0285] Em várias modalidades, a estrutura da p-aminobenzila (pAB) usada nos ADCs revelados é mostrada abaixo:
[0286] Em várias modalidades, a unidade espaçadora que liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing de herboxidieno é autoimolativa. Em algumas modalidades, o espaçador autoimolativo é pAB. Em algumas modalidades, o pAB liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing de herboxidieno. Em algumas modalidades, o pAB é submetido à autoimolação após clivagem da porção química clivável e o modulador de splicing de herboxidieno é liberado do ADC em sua forma ativa nativa.
[0287] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno é unido ao modulador de splicing de herboxidieno por um ligante que compreende MC-Val-Cit-pAB. Em outras modalidades, um anticorpo anti-HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno é unido ao modulador de splicing de herboxidieno por um ligante que compreende MC-Val-Ala-pAB.
[0288] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno é unido ao modulador de splicing de herboxidieno por um ligante que compreende MC-Val-Cit-pAB. Em outras modalidades, um anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno é unido ao modulador de splicing de herboxidieno por um ligante que compreende MC-Val-Ala-pAB.
[0289] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno é unido ao modulador de splicing de herboxidieno por um ligante que compreende MC-Val-Cit-pAB. Em outras modalidades, um anticorpo anti-EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno é unido ao modulador de splicing de herboxidieno por um ligante que compreende MC-Val-Ala-pAB.
[0290] Em algumas modalidades, o pAB é submetido à autoimolação após clivagem de uma porção química de peptídeo clivável no ligante. Em algumas modalidades, a porção química de peptídeo clivável compreende uma unidade de aminoácido. Em algumas modalidades, o ligante compreende unidade de aminoácido-pAB. Em algumas modalidades, a unidade de aminoácido é Val-Cit. Em algumas modalidades, o ligante compreende Val- Cit-pAB. Em algumas modalidades, a unidade de aminoácido é Val-Ala. Em algumas modalidades, o ligante compreende Val-Ala-pAB. Em algumas modalidades, a unidade de aminoácido é Glu-Val-Cit. Em algumas modalidades, o ligante compreende Glu-Val-Cit-pAB. Em algumas modalidades, a unidade de aminoácido é Ala-Ala-Asn. Em algumas modalidades, o ligante compreende Ala-Ala-Asn-pAB.
[0291] Em algumas modalidades, o pAB é submetido à -glicuronídeo clivável -glicuronídeo- pAB.
[0292] Em algumas outras modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno é ligado à porção química clivável no ligante por uma unidade espaçadora não autoimolativa. Em certas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno é ligado à porção química clivável no ligante por uma unidade espaçadora não autoimolativa, a porção química clivável compreende Val-Cit e uma maleimidocaproíla (MC) une a porção química clivável ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em certas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno é ligado à porção química clivável no ligante por uma unidade espaçadora não autoimolativa, a porção química clivável compreende Val-Ala e uma maleimidocaproíla (MC) une a porção química clivável ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno.
[0293] Em vários aspectos, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do ADC é conjugado à porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno através de um ligante, em que o ligante compreende uma unidade espaçadora Mal (por exemplo, MC), uma unidade de aminoácido clivável e um pABC. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora compreende uma porção química alquila. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal compreende uma maleimidocaproíla (MC). Em algumas modalidades, o ligante compreende unidade espaçadora- Mal-unidade de aminoácido-pABC. Em algumas modalidades, o ligante compreende unidade de aminoácido-MC-pABC. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Val-Cit-pABC. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Val-Ala-pABC. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Glu-Val-Cit-pABC. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Ala-Ala-Asn-pABC.
[0294] Em vários outros aspectos, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do ADC é conjugado à porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno através de um ligante, em que o ligante compreende uma unidade espaçadora Mal (por exemplo, MC), uma unidade de aminoácido clivável e um pAB. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora compreende uma porção química alquila. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal compreende uma maleimidocaproíla (MC). Em algumas modalidades, o ligante compreende unidade espaçadora- Mal-unidade de aminoácido-pAB. Em algumas modalidades, o ligante compreende unidade de aminoácido-MC-pAB. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Val-Cit-pAB. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Val-Ala-pAB. Em algumas modalidades, o ligante compreende
MC-Glu-Val-Cit-pAB. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Ala- Ala-Asn-pAB.
[0295] Em vários outros aspectos, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do ADC é conjugado à porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno através de um ligante, em que o ligante - glicuronídeo clivável e um pABC. Em algumas modalidades, o ligante compreende a unidade espaçadora Mal- -glicuronídeo-pABC. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC- -glicuronídeo-pABC.
[0296] Em ainda outros aspectos, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do ADC é conjugado à porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno através de um ligante, em que o ligante - glicuronídeo clivável e um pABC. Em algumas modalidades, o ligante compreende a unidade espaçadora Mal- -glicuronídeo-pAB. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC- -glicuronídeo-pAB.
[0297] Em várias modalidades, o composto de ADC tem a Fórmula (I): Ab-(L-H)p (I) em que Ab é um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno que tem como alvo uma célula neoplásica; H é um modulador de splicing de herboxidieno; L é um ligante que liga covalentemente Ab a D; e p é um número inteiro de 1 a 15.
[0298] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno (Ab) do ADC é conjugado à porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno por meio de um ligante, em que o ligante é qualquer um dos ligantes revelados ou incorporados a título de referência no presente documento, ou compreende um ou mais componentes de qualquer um dos ligantes revelados ou incorporados a título de referência no presente documento.
[0299] Em algumas modalidades, o ligante compreende uma porção química clivável que é posicionada de modo que nenhuma parte do ligante ou do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno permaneça ligado ao modulador de splicing de herboxidieno após a clivagem. Em algumas modalidades, a porção química clivável é uma fração de peptídeo clivável, por exemplo, uma unidade de aminoácido, como Val-Cit ou Val-Ala. Em algumas modalidades, a unidade de aminoácido ou ligante compreende Val-Cit. Em algumas modalidades, a unidade de aminoácido ou ligante compreende Val- Ala. Em algumas modalidades, a unidade de aminoácido ou ligante compreende Glu-Val-Cit.
[0300] Em algumas modalidades, o ligante compreende pelo menos uma unidade espaçadora que une o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno à porção química clivável. Em algumas modalidades, o ligante compreende pelo menos uma unidade espaçadora que une o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno à porção química de fármaco. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora ou ligante compreende pelo menos uma porção química alquila.
[0301] Em algumas modalidades, uma unidade espaçadora no ligante se liga ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno através de uma porção química de Mal ("unidade espaçadora Mal"). Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal compreende pelo menos uma porção química alquila. Em algumas modalidades, o ligante compreende uma maleimidocaproíla (MC). Em algumas modalidades, o ligante compreende Mal- (CH2)2 ("Mal-Et"). Em algumas modalidades, o ligante compreende Mal-(CH2)6 ("Mal-Hex"). Em algumas modalidades, o ligante compreende Mal-(CH2)2-O- (CH2)2 ("Mal-Et-O-Et"). Em algumas modalidades, o ligante compreende Mal- (PEG)2-CO. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal liga o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno à porção química de fármaco.
[0302] Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal ou ligante compreende Mal-(PEG)2, Mal-(PEG)3, Mal-(PEG)4, Mal-(PEG)5, Mal- (PEG)6, Mal-(PEG)7ou Mal-(PEG)8. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal ou ligante compreende Mal-(PEG)2. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal ou ligante compreende Mal-(PEG)2-CO, Mal-(PEG)3- CO, Mal-(PEG)4-CO, Mal-(PEG)5-CO, Mal-(PEG)6-CO, Mal-(PEG)7-CO ou Mal- (PEG)8-CO. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal ou ligante compreende Mal-(PEG)2-CO. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal ou ligante compreende Mal-(PEG)2-CO e pelo menos uma unidade espaçadora adicional. Em algumas modalidades, a Mal-(PEG)2-CO liga o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno à porção química de fármaco. Em algumas modalidades, o ligante compreende ou consiste em Mal-(PEG)2- CO. Um exemplo de um ligante "Mal-(PEG)2-CO" também é chamado no presente documento de "ADL2" ou um ligante de "ADL2".
[0303] Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal ou ligante compreende MC. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal ou ligante compreende MC e pelo menos uma unidade espaçadora adicional. Em algumas modalidades, a MC liga o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno à porção química de fármaco. Em algumas modalidades, o ligante compreende ou consiste em MC. Um exemplo de um ligante "MC" também é chamado no presente documento de "ADL10" ou um ligante de "ADL10".
[0304] Em algumas modalidades, a unidade espaçadora ou ligante Mal compreende Mal-(CH2)6 ("Mal-Hex"). Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal ou ligante compreende Mal-Hex e pelo menos uma unidade espaçadora adicional. Em algumas modalidades, a Mal-Hex liga o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno à porção química de fármaco. Em algumas modalidades, o ligante compreende Mal-Hex. Um exemplo de um ligante "Mal-Hex" também é chamado no presente documento de "ADL12" ou um ligante de "ADL12".
[0305] Em algumas modalidades, a unidade espaçadora ou ligante Mal compreende Mal-(CH2)2 ("Mal-Et"). Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal ou ligante compreende Mal-Et e pelo menos uma unidade espaçadora adicional. Em algumas modalidades, a Mal-Het liga o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno à porção química de fármaco. Em algumas modalidades, o ligante compreende Mal-Et. Um exemplo de um ligante "Mal-Et" também é chamado no presente documento de "ADL14" ou um ligante de "ADL14".
[0306] Em algumas modalidades, a unidade espaçadora ou ligante Mal compreende Mal-(CH2)2-O-(CH2)2 ("Mal-Et-O-Et"). Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal ou ligante compreende Mal-Et-O-Et e pelo menos uma unidade espaçadora adicional. Em algumas modalidades, a Mal-Et-O-Et liga o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno à porção química de fármaco. Em algumas modalidades, o ligante compreende Mal-Et- O-Et. Um exemplo de um ligante "Mal-Et-O-Et" também é chamado no presente documento de "ADL15" ou um ligante de "ADL15".
[0307] Em algumas outras modalidades, a unidade espaçadora Mal liga o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno à porção química clivável no ligante. Em algumas modalidades, a porção química clivável no ligante é uma porção química de peptídeo clivável, por exemplo, uma unidade de aminoácido. Em algumas modalidades, a porção química de peptídeo clivável é Val-Cit ou Val-Ala. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora Mal ou ligante compreende MC. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Val-Cit. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC- Val-Ala. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Glu-Val-Cit. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Ala-Ala-Asn.
[0308] Em algumas modalidades, a unidade espaçadora liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing de herboxidieno.
Em algumas modalidades, a unidade espaçadora que liga a porção química clivável ao modulador de splicing de herboxidieno é autoimolativa.
[0309] Em algumas modalidades, a unidade espaçadora compreende pABC. Em algumas modalidades, o pABC liga a porção química clivável ao modulador de splicing de herboxidieno. Em algumas modalidades, a porção química clivável é uma porção de peptídeo clivável, por exemplo, uma unidade de aminoácido. Em algumas modalidades, o ligante compreende unidade de aminoácido-pABC.
[0310] Em algumas modalidades, o ligante compreende Val-Cit- pABC. Em algumas modalidades, o ligante compreende Val-Cit-pABC e uma unidade espaçadora Mal que une o ligante ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Val- Cit-pABC. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Val-Cit-pABC e pelo menos uma unidade espaçadora adicional. Um exemplo de um ligante de MC-Val-Cit-pABC também é chamado no presente documento de "ADL1" ou um ligante de "ADL1".
[0311] Em algumas modalidades, o ligante compreende Val-Ala- pABC. Em algumas modalidades, o ligante compreende Val-Ala-pABC e uma unidade espaçadora MC Mal que une o ligante ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Val- Ala-pABC. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Val-Ala-pABC e pelo menos uma unidade espaçadora adicional. Um exemplo de um ligante de MC-Val-Ala-pABC também é chamado no presente documento de "ADL6" ou um ligante de "ADL6".
[0312] Em algumas modalidades, o ligante compreende Glu-Val- Cit-pABC. Em algumas modalidades, o ligante compreende Glu-Val-Cit-pABC e uma unidade espaçadora MC Mal que une o ligante ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC- Glu-Val-Cit-pABC. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Glu-
Val-Cit-pABC e pelo menos uma unidade espaçadora adicional. Um exemplo de um ligante de MC-Glu-Val-Cit-pABC também é chamado no presente documento de "ADL23" ou um ligante de "ADL23".
[0313] Em algumas modalidades, o ligante compreende Ala-Ala- Asn-pABC. Em algumas modalidades, o ligante compreende Ala-Ala-Asn-pABC e uma unidade espaçadora MC Mal que une o ligante ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Ala-Ala-Asn-pABC. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Ala-Ala-Asn-pABC e pelo menos uma unidade espaçadora adicional. Um exemplo de um ligante de MC-Ala-Ala-Asn-pABC também é chamado no presente documento de "ADL21" ou um ligante de "ADL21".
[0314] Em algumas outras modalidades, a unidade espaçadora compreende pAB. Em algumas modalidades, o pAB liga a porção química clivável ao modulador de splicing de herboxidieno. Em algumas modalidades, a porção química clivável é uma porção de peptídeo clivável, por exemplo, uma unidade de aminoácido. Em algumas modalidades, o ligante compreende unidade de aminoácido-pAB.
[0315] Em algumas modalidades, o ligante compreende Val-Ala- pAB. Em algumas modalidades, o ligante compreende Val-Ala-pAB e uma unidade espaçadora MC Mal que une o ligante ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Val- Ala-pAB. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Val-Ala-pAB e pelo menos uma unidade espaçadora adicional. Um exemplo de um ligante de MC-Val-Ala-pAB também é chamado no presente documento de "ADL5" ou um ligante de "ADL5".
[0316] Em algumas modalidades, o ligante compreende Val-Cit- pAB. Em algumas modalidades, o ligante compreende Val-Cit-pAB e uma unidade espaçadora MC Mal que une o ligante ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Val-
Cit-pAB. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC-Val-Cit-pAB e pelo menos uma unidade espaçadora adicional. Um exemplo de um ligante de MC-Val-Cit-pAB também é chamado no presente documento de "ADL7" ou um ligante de "ADL7".
[0317] - glicuronídeo- - glicuronídeo-pABC e uma unidade espaçadora MC Mal que une o ligante ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC- -glicuronídeo-pABC. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC- -glicuronídeo-pABC e pelo menos uma unidade espaçadora adicional. Um exemplo de um MC- -glicuronídeo-pABC também é chamado no presente documento de "ADL13" ou um ligante de "ADL13".
[0318] - glicuronídeo- - glicuronídeo-pAB e uma unidade espaçadora MC Mal que une o ligante ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, o ligante compreende MC- -glicuronídeo-pAB.
[0319] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é conjugado à porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno através de um ligante de ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21 ou ADL23. Foi constatado, em várias modalidades, que ADCs que compreendem um ligante ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21 ou ADL23 e uma porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno revelados no presente documento demonstram propriedades desejáveis para um ADC terapêutico. Em várias modalidades, essas propriedades incluem, porém sem limitação, níveis eficazes de carregamento de fármaco, baixos níveis de agregação, estabilidade sob condições de armazenamento ou quando em circulação no corpo (por exemplo, estabilidade em soro), afinidade retida para células que expressam alvo comparáveis para anticorpo não conjugado, citotoxicidade potente contra células que expressam alvo, baixos níveis de extermínio celular fora do alvo, altos níveis de extermínio por de espectador e/ou atividade anticâncer in vivo eficaz, todos em comparação com ADCs que usam outras cargas úteis de ligante. Por exemplo, em várias modalidades, ADCs que compreendem um ligante ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21 ou ADL23 e uma porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno revelados no presente documento exibem uma capacidade aumentada para inibir o crescimento e/ou proliferação em células que expressam alvo, em comparação com ADCs que usam outras cargas úteis de ligante (por exemplo, um ligante ADL10 e uma porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno). Em várias modalidades, os ADCs compreendem um ligante ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21 ou ADL23 e uma porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno revelados no presente documento exibem estabilidade in vivo surpreendentemente aumentada (por exemplo, estabilidade de plasma), em comparação com outros ADCs à base de modulador de splicing (por exemplo, um ADC à base de talanstatina A, por exemplo, como relatado em Puthenveetil et al . Bioconjugate Chem. (2016) 27:1880-8).
[0320] Em algumas modalidades, as propriedades funcionais satisfatórias ou superiores fornecidas pela combinação específica de um ligante ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21 ou ADL23 e uma porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno revelados no presente documento podem ser observadas com a carga útil de ligante conjugada a, por exemplo, um anticorpo anti-HER2, como trastuzumabe; um anticorpo anti-CD138 como B-B4; ou um anticorpo anti-EPHA2, como 1C1.
[0321] Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL1 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno que compreende um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que retém a capacidade de alvejar e internalizar em uma célula neoplásica.
Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL2 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno que compreende um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que retém a capacidade de alvejar e internalizar em uma célula neoplásica.
Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL5 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno que compreende um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que retém a capacidade de alvejar e internalizar em uma célula neoplásica.
Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL6 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno que compreende um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que retém a capacidade de alvejar e internalizar em uma célula neoplásica.
Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL7 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno que compreende um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que retém a capacidade de alvejar e internalizar em uma célula neoplásica.
Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL12 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno que compreende um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que retém a capacidade de alvejar e internalizar em uma célula neoplásica.
Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL13 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno que compreende um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que retém a capacidade de alvejar e internalizar em uma célula neoplásica.
Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL14 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno que compreende um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que retém a capacidade de alvejar e internalizar em uma célula neoplásica. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL15 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno que compreende um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que retém a capacidade de alvejar e internalizar em uma célula neoplásica.
[0322] Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL1 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa HER2. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL2 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa HER2. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL5 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa HER2. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL6 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa HER2. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL7 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa HER2. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL12 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa HER2. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL13 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa HER2. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL14 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa HER2. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL15 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa HER2.
[0323] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa HER2 é um anticorpo de internalização ou fragmento de ligação ao antígeno de internalização Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa HER2 compreende três regiões determinantes de complementaridade de cadeia pesada (HCDRs) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:1 (HCDR1), SEQ ID NO:2 (HCDR2) e SEQ ID NO:3 (HCDR3); e três regiões determinantes de complementaridade de cadeia leve (LCDRs) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:4 (LCDR1), SEQ ID NO:5 (LCDR2) e SEQ ID NO:6 (LCDR3).
[0324] Em algumas modalidades, o ADC tem a Fórmula (I): Ab-(L-H)p (I) em que: (i) Ab é um anticorpo anti-HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que compreende três regiões determinantes de complementaridade de cadeia pesada (HCDRs) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:1 (HCDR1), SEQ ID NO:2 (HCDR2) e SEQ ID NO:3 (HCDR3); e três regiões determinantes de complementaridade de cadeia leve (LCDR1, LCDR2 e LCDR3) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:4 (LCDR1), SEQ ID NO:5 (LCDR2) e SEQ ID NO:6 (LCDR3); (ii) H é um modulador de splicing de herboxidieno; (iii) L é um ligante que compreende ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21 ou ADL23; e (iv) p é um número inteiro de 1 a 15.
[0325] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa HER2 compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:19 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:20. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa HER2 compreende um domínio constante de cadeia pesada de IgG1 humana e um domínio constante de cadeia leve kappa de Ig humana. Em algumas modalidades, o anticorpo é trastuzumabe. Em algumas modalidades, p é um número inteiro de 1 a 10, de 2 a 8 ou de 4 a 8. Em algumas modalidades, p é 4. Em algumas modalidades, p é 8.
[0326] Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL1 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa CD138. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL2 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa CD138. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL5 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa CD138. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL6 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa CD138. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL7 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa CD138. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL12 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa CD138. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL13 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa CD138. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL14 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa CD138. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL15 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa CD138.
[0327] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa CD138 é um anticorpo de internalização ou fragmento de ligação ao antígeno de internalização Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa CD138 compreende três regiões determinantes de complementaridade de cadeia pesada (HCDRs) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:7 (HCDR1), SEQ ID NO:8 (HCDR2) e SEQ ID NO:9 (HCDR3); e três regiões determinantes de complementaridade de cadeia leve (LCDRs) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:10 (LCDR1), SEQ ID NO:11 (LCDR2) e SEQ ID NO:12 (LCDR3).
[0328] Em algumas modalidades, o ADC tem a Fórmula (I): Ab-(L-H)p (I) em que: (i) Ab é um anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que compreende três regiões determinantes de complementaridade de cadeia pesada (HCDRs) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:7 (HCDR1), SEQ ID NO:8 (HCDR2) e SEQ ID NO:9 (HCDR3); e três regiões determinantes de complementaridade de cadeia leve (LCDR1, LCDR2 e LCDR3) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:10 (LCDR1), SEQ ID NO:11 (LCDR2) e SEQ ID NO:12 (LCDR3); (ii) H é um modulador de splicing de herboxidieno; (iii) L é um ligante que compreende ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21 ou ADL23; e (iv) p é um número inteiro de 1 a 15.
[0329] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa CD138 compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:21 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa CD138 compreende um domínio constante de cadeia pesada de IgG2a murina e um domínio constante de cadeia leve kappa de Ig murina. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa CD138 compreende um domínio constante de cadeia pesada de IgG2a humana e um domínio constante de cadeia leve kappa de Ig humana. Em algumas modalidades, o anticorpo é B-B4. Em algumas modalidades, p é um número inteiro de 1 a 10, de 2 a 8 ou de 4 a 8. Em algumas modalidades, p é 4. Em algumas modalidades, p é 8.
[0330] Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL1 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa EPHA2. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL2 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que alveja uma célula neoplásica que expressa EPHA2. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL5 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que alveja uma célula neoplásica que expressa EPHA2. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL6 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que alveja uma célula neoplásica que expressa EPHA2. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL7 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que alveja uma célula neoplásica que expressa EPHA2. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL12 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que alveja uma célula neoplásica que expressa EPHA2. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL13 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que alveja uma célula neoplásica que expressa EPHA2. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL14 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que alveja uma célula neoplásica que expressa EPHA2. Em algumas modalidades, o ADC compreende modulador de splicing de herboxidieno de ADL15 e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que alveja uma célula neoplásica que expressa EPHA2.
[0331] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa EPHA2 é um anticorpo de internalização ou fragmento de ligação ao antígeno de internalização Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa EPHA2 compreende três regiões determinantes de complementaridade de cadeia pesada (HCDRs) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:13 (HCDR1), SEQ ID NO:14 (HCDR2) e SEQ ID NO:15 (HCDR3); e três regiões determinantes de complementaridade de cadeia leve (LCDRs) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:16 (LCDR1), SEQ ID NO:17 (LCDR2) e SEQ ID NO:18 (LCDR3).
[0332] Em algumas modalidades, o ADC tem a Fórmula (I): Ab-(L-H)p (I) em que: (i) Ab é um anticorpo anti-EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que compreende três regiões determinantes de complementaridade de cadeia pesada (HCDRs) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:13 (HCDR1), SEQ ID NO:14 (HCDR2) e SEQ ID NO:15 (HCDR3); e três regiões determinantes de complementaridade de cadeia leve (LCDR1, LCDR2 e LCDR3) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:16 (LCDR1), SEQ ID NO:17 (LCDR2) e SEQ ID NO:18 (LCDR3); (ii) H é um modulador de splicing de herboxidieno; (iii) L é um ligante que compreende ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21 ou ADL23; e (iv) p é um número inteiro de 1 a 15.
[0333] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa EPHA2 compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:23 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:24. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que tem como alvo uma célula neoplásica que expressa EPHA2 compreende um domínio constante de cadeia pesada de IgG1 humana e um domínio constante de cadeia leve kappa de Ig humana. Em algumas modalidades, o anticorpo é 1C1. Em algumas modalidades, p é um número inteiro de 1 a 10, de 2 a 8 ou de 4 a 8. Em algumas modalidades, p é 4. Em algumas modalidades, p é 8.
Moduladores de Splicing de Herboxidieno
[0334] Em algumas modalidades, o conjugado anticorpo-fármaco é um conjugado anticorpo-fármaco da Fórmula (I): Ab-(L-H)p, em que Ab é um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno que alveja uma célula neoplásica; H é um modulador de splicing de herboxidieno; L é um ligante que liga covalentemente Ab a H; e p é um número inteiro de 1 a 15.
[0335] Em algumas modalidades, H, o modulador de splicing de herboxidieno, compreende um composto da Fórmula (I): (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente a L através de qualquer átomo, em que: Y é escolhido dentre O, S, NR6 e CR6R7; R1, R2 e R3 são cada um independentemente escolhidos dentre hidrogênio, hidroxila, grupos -O-(C1-C6 alquila), grupos -O-C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila) e grupos C1-C6 alquila; R4 é escolhido dentre hidrogênio, grupos C1-C6 alquila, grupos - C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila) e -C(=O)-NR6R7; R5 é escolhido dentre hidrogênio, hidroxila, -CH2-OH, -CO2H, grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila), -C(=O)-NR6R7, -NR6-C(=O)-R8, -O-C(=O)-NR6R7, - NR6-C(=O)-R8 e -NR6-C(=O)-NR6R7; R6 e R7 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, -R8, -C(=O)-R8 e -C(=O)-O-R8; e R8 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila e grupos C3-C8 heterociclila, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 e R8 são, cada um,
independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C 1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila), -NR6R7, grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila, cada um dos quais pode ser independentemente substituído por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, grupos C1-C3 haloalquila, - NH-C(=O)(C1-C3 alquila) e -NH-C(=O)-O-(C1-C3 alquila), e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
[0336] Em algumas modalidades, H, o modulador de splicing de herboxidieno, compreende um composto da Fórmula (Ia): (Ia), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente a L através de qualquer átomo, em que: R9 é escolhido dentre grupos C3-C8 heterociclila; R10 é escolhido dentre H e grupos C1-C6 alquila, em que R9 e R10 são, cada um, independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, -NH2, -NH-(C1-C3 alquila) e -N-(C1-C3 alquila)2, e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
[0337] Em algumas modalidades, H, o modulador de splicing de herboxidieno, compreende um composto da Fórmula (Ib):
(Ib), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente a L através de qualquer átomo, em que: R11 é escolhido dentre , e , em que * denota o ponto de conectividade de R11 ao restante do composto; R12 e R13 são, cada um, independentemente escolhidos dentre H e metila; e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
[0338] Em algumas modalidades, H, o modulador de splicing de herboxidieno, compreende um composto da Fórmula (II): (II), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente através de qualquer átomo a L, em que: X é hidroxila ou NR6R7; R6 e R7 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, -R8, -C(=O)-R8, -C(=O)-O-R8, -(C1-C6 alquila)-O-C(=O)-R8 e -(C1-C6 alquila)-NH-C(=O)-R8; e R8 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila e grupos C3-C8 heterociclila,
em que R6, R7 e R8 são, cada um, independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila), -NR6R7, grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila, cada um dos quais pode ser independentemente substituído por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, grupos C1-C3 haloalquila, -NH-C(=O)(C1-C3 alquila) e -NH-C(=O)- O-(C1-C3 alquila), e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
[0339] Em algumas modalidades, H, o modulador de splicing de herboxidieno, compreende um composto da Fórmula (IIa): (IIa), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente através de qualquer átomo a L, em que: Z é escolhido dentre NR9 e O; R9 é escolhido dentre hidrogênio e grupos C1-C6 alquila; R10 e R11 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, halogênios, hidroxila, grupos C1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila), grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila; R12 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila, grupos C3-C8 heterociclila, em que R9, R10, R11 e R12 são, cada um, independentemente substituídos por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C 1- C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi e grupos C1-C3 haloalquila; t é um número inteiro escolhido dentre 1, 2, 3, 4, 5 e 6; e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
[0340] Em algumas modalidades, H, o modulador de splicing de herboxidieno, compreende um composto da Fórmula (IIb): (IIb), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente através de qualquer átomo a L, em que: R13 é escolhido dentre , , , , , , , , ,
e , em que * denota o ponto de conectividade de R13 ao restante do composto; R14 e R15 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio e metila; e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
[0341] Em algumas modalidades, H, o modulador de splicing de herboxidieno, compreende um composto da Fórmula (III): (III), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente através de qualquer átomo a L, em que: R1, R2 e R3 são cada um independentemente escolhidos dentre hidrogênio, hidroxila, grupos -O-(C1-C6 alquila), grupos -O-C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila) e grupos C1-C6 alquila; R6 e R7 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, -R8, -C(=O)-R8 e -C(=O)-O-R8; R8 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila e grupos C3-C8 heterociclila; e R9 é escolhido dentre H, , , ,
, , , , , e ; em que R1, R2, R3, R6, R7 e R8 são, cada um, independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos - C(=O)-(C3-C8 heterociclila), -NR6R7, grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila, cada um dos quais pode ser independentemente substituído por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, grupos C1-C3 haloalquila, -NH-C(=O)(C1-C3 alquila) e -NH-C(=O)- O-(C1-C3 alquila), em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida; e em que * denota o ponto de conectividade de R9 ao restante do composto.
[0342] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno alveja uma célula que expressa HER2, CD138, EPHA2,
MSLN, FOLH1, CDH6, CEACAM5, CFC1B, ENPP3, FOLR1, HAVCR1, KIT, MET, MUC16, SLC39A6, SLC44A4 e/ou STEAP1.
[0343] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno alveja uma célula que expressa HER2. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende três regiões determinantes de complementaridade de cadeia pesada (HCDR1, HCDR2 e HCDR3) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:1 (HCDR1), SEQ ID NO:2 (HCDR2) e SEQ ID NO:3 (HCDR3); e três regiões determinantes de complementaridade de cadeia leve (LCDR1, LCDR2 e LCDR3) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:4 (LCDR1), SEQ ID NO:5 (LCDR2) e SEQ ID NO:6 (LCDR3). Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:19 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:20. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG1 humana. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante de cadeia leve kappa de Ig humana.
[0344] Em algumas outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa CD138. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende três regiões determinantes de complementaridade de cadeia pesada (HCDR1, HCDR2 e HCDR3) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:7 (HCDR1), SEQ ID NO:8 (HCDR2) e SEQ ID NO:9 (HCDR3); e três regiões determinantes de complementaridade de cadeia leve (LCDR1, LCDR2 e LCDR3) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:10 (LCDR1), SEQ ID NO:11 (LCDR2) e SEQ ID NO:12 (LCDR3). Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:21 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:22. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG2a murina. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante de cadeia leve kappa de Ig murina. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG2a humana. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante de cadeia leve kappa de Ig humana.
[0345] Em algumas outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa EPHA2. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende três regiões determinantes de complementaridade de cadeia pesada (HCDR1, HCDR2 e HCDR3) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:13 (HCDR1), SEQ ID NO:14 (HCDR2) e SEQ ID NO:15 (HCDR3); e três regiões determinantes de complementaridade de cadeia leve (LCDR1, LCDR2 e LCDR3) que compreendem sequências de aminoácidos da SEQ ID NO:16 (LCDR1), SEQ ID NO:17 (LCDR2) e SEQ ID NO:18 (LCDR3). Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:23 e uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:24. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante de cadeia pesada de IgG1 humana. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante de cadeia leve kappa de Ig humana.
[0346] Em algumas outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa MSLN. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-MSLN ou fragmento de ligação ao antígeno.
[0347] Em algumas outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa FOLH1. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-FOLH1 ou fragmento de ligação ao antígeno.
[0348] Em algumas outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa CDH6. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-CDH6 ou fragmento de ligação ao antígeno.
[0349] Em algumas outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa CEACAM5. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-CEACAM5 ou fragmento de ligação ao antígeno.
[0350] Em algumas outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa CFC1B. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-CFC1B ou fragmento de ligação ao antígeno.
[0351] Em algumas outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa ENPP3. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-ENPP3 ou fragmento de ligação ao antígeno.
[0352] Em algumas outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa FOLR1. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-FOLR1 ou fragmento de ligação ao antígeno.
[0353] Em algumas outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa HAVCR1. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-HAVCR1 ou fragmento de ligação ao antígeno.
[0354] Em algumas outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa KIT. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-KIT ou fragmento de ligação ao antígeno.
[0355] Em algumas outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa MET. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-MET ou fragmento de ligação ao antígeno.
[0356] Em algumas outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa MUC16. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-MUC16 ou fragmento de ligação ao antígeno.
[0357] Em algumas outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa SLC39A6. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-SLC39A6 ou fragmento de ligação ao antígeno.
[0358] Em algumas outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa SLC44A4. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-SLC44A4 ou fragmento de ligação ao antígeno.
[0359] Em algumas outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa STEAP1. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-STEAP1 ou fragmento de ligação ao antígeno.
[0360] Em algumas modalidades, L é selecionado dentre qualquer um dos ligantes revelados no presente documento, ou qualquer combinação de componentes de ligante revelados no presente documento. Em algumas modalidades, L é um ligante que compreende MC-Val-Cit-pABC, Mal-(PEG)2- CO, MC-Val-Ala-pAB, MC-Val-Ala-pABC, MC-Val-Cit-pAB, Mal-Hex, Mal-Et ou Mal-Et-O-Et. Em algumas modalidades, o ligante pode também compreender uma ou mais unidades espaçadoras adicionais. Em algumas modalidades, L é um ligante ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21 ou ADL23. Em algumas modalidades, L é um ligante ADL12, ADL14 ou ADL15. Em algumas modalidades, o ligante ADL1, ADL2, ADL5, ADL6, ADL7, ADL12, ADL13, ADL14, ADL15, ADL21 ou ADL23 pode compreender também uma ou mais unidades espaçadoras adicionais.
[0361] Em certas modalidades, um intermediário, que é o precursor da porção química de ligante, é reagido com a porção química de modulador de splicing de herboxidieno sob condições adequadas. Em certas modalidades, grupos reativos são usados no modulador de splicing de herboxidieno e/ou no intermediário ou ligante. O produto da reação entre o modulador de splicing de herboxidieno e o intermediário, ou o modulador de splicing de herboxidieno derivatizado (modulador de splicing de herboxidieno mais ligante), é subsequentemente reagido com o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno sob condições adequadas. Alternativamente, o intermediário ou ligante pode ser primeiramente reagido com o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, ou um anticorpo derivatizado ou fragmento de ligação ao antígeno e, então, reagido com o fármaco ou fármaco derivatizado.
[0362] Várias reações diferentes estão disponíveis para ligação covalente da porção química de modulador de splicing de herboxidieno e/ou porção química de ligante ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Isso é frequentemente realizado pela reação de um ou mais resíduos de aminoácidos do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, incluindo os grupos amina de lisina, os grupos de ácido carboxílico livre de ácido glutâmico e ácido aspártico, os grupos sulfidrila de cisteína e as várias porções químicas dos aminoácidos aromáticos. Por exemplo, a ligação covalente não específica pode ser realizada usando uma reação de carbodiimida para ligar um grupo carbóxi (ou amino) em uma porção química de modulador de splicing de herboxidieno a um grupo amino (ou carbóxi) em um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Adicionalmente, agentes bifuncionais como dialdeídos ou imidoésteres podem também ser usados para ligar o grupo amino em uma porção química de modulador de splicing de herboxidieno a um grupo carbóxi em um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Também disponível para ligação de fármacos (por exemplo, um modulador de splicing de herboxidieno) a agentes de ligação está a reação de base de Schiff. Este método envolve a oxidação de periodato de um fármaco que contém grupos glicol ou hidroxila, formando assim um aldeído que é, então, reagido com o agente de ligação. A ligação ocorre através da formação de uma base de Schiff com grupos amino do agente de ligação. Os isotiocianatos podem também ser usados como agentes de acoplamento para ligar covalentemente fármacos a agentes de ligação. Outras técnicas são conhecidas pelos versados na técnica e estão dentro do escopo da presente revelação. Exemplos de porções químicas de fármaco que podem ser geradas e ligadas a um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno usando várias químicas conhecidas na técnica incluem moduladores de splicing de herboxidieno, por exemplo, os moduladores de splicing modulador de herboxidieno descritos e exemplificados no presente documento. Ligante-Moduladores de Splicing de Herboxidieno / Compostos de Modulador de Splicing de Herboxidieno
[0363] Além disso, são revelados no presente documento compostos de ligante-modulador de splicing de herboxidieno (L-H) exemplificativos, bem como composições que compreendem várias cópias de tais compostos. Em várias modalidades, os compostos de ligante-modulador de splicing de herboxidieno revelados no presente documento podem ser definidos pela fórmula genérica: L-H, em que L= uma porção de ligante, e H = um modulador de splicing de herboxidieno. Em certas modalidades, os compostos L-H revelados são adequados para uso nos ADCs descritos no presente documento.
[0364] Em algumas modalidades, são revelados no presente documento compostos da Fórmula (I): (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Y é escolhido dentre O, S, NR6 e CR6R7; R1, R2 e R3 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, hidroxila, grupos -O-(C1-C6 alquila), grupos -O-C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila) e grupos C1-C6 alquila; R4 é escolhido dentre hidrogênio, grupos C1-C6 alquila, grupos - C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila) e -C(=O)-NR6R7; R5 é escolhido dentre hidrogênio, hidroxila, -CH2-OH, -CO2H, grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila), -C(=O)-NR6R7, -NR6-C(=O)-R8, -O-C(=O)-NR6R7, - NR6-C(=O)-R8 e -NR6-C(=O)-NR6R7; R6 e R7 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, -R8, -C(=O)-R8 e -C(=O)-O-R8; e R8 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila e grupos C3-C8 heterociclila, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 e R8 são, cada um,
independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C 1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila), -NR6R7, grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila, cada um dos quais pode ser independentemente substituído por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, grupos C1-C3 haloalquila, - NH-C(=O)(C1-C3 alquila) e -NH-C(=O)-O-(C1-C3 alquila).
[0365] Em algumas modalidades, são fornecidos no presente documento compostos da Fórmula (Ia): (Ia), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente a L através de qualquer átomo, em que: R9 é escolhido dentre grupos C3-C8 heterociclila; e R10 é escolhido dentre H e grupos C1-C6 alquila, em que R9 e R10 são, cada um, independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, -NH2, -NH-(C1-C3 alquila) e -N-(C1-C3 alquila)2.
[0366] Em algumas modalidades, são fornecidos no presente documento compostos da Fórmula (Ib):
(Ib), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: R11 é escolhido dentre , e , em que * denota o ponto de conectividade de R11 ao restante do composto; R12 e R13 são, cada um, independentemente escolhidos dentre H e metila.
[0367] Em algumas modalidades, são fornecidos no presente documento compostos da Fórmula (II): (II), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: X é hidroxila ou NR6R7; R6 e R7 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, -R8, -C(=O)-R8, -C(=O)-O-R8, -(C1-C6 alquila)-O-C(=O)-R8 e -(C1-C6 alquila)-NH-C(=O)-R8; e R8 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila e grupos C3-C8 heterociclila, em que R6, R7 e R8 são, cada um, independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila), -NR6R7, grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila, cada um dos quais pode ser independentemente substituído por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, grupos C1-C3 haloalquila, -NH-C(=O)(C1-C3 alquila) e -NH-C(=O)- O-(C1-C3 alquila).
[0368] Em algumas modalidades, são fornecidos no presente documento compostos da Fórmula (IIa): (IIa), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: Z é escolhido dentre NR9 e O; R9 é escolhido dentre hidrogênio e grupos C1-C6 alquila; R10 e R11 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, halogênios, hidroxila, grupos C1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila), grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila; R12 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila, grupos C3-C8 heterociclila, em que R9, R10, R11 e R12 são, cada um, independentemente substituídos por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C 1- C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi e grupos C1-C3 haloalquila; e t é um número inteiro escolhido dentre 1, 2, 3, 4, 5 e 6.
[0369] Em algumas modalidades, são fornecidos no presente documento compostos da Fórmula (IIb): (IIb), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que:
R13 é escolhido dentre , , , , , , , , , e , em que * 13 denota o ponto de conectividade de R ao restante do composto; e R14 e R15 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio e metila.
[0370] Em algumas modalidades, são fornecidos no presente documento compostos da Fórmula (III): (III), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1, R2 e R3 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, hidroxila, grupos -O-(C1-C6 alquila), grupos -O-C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila) e grupos C1-C6 alquila; R6 e R7 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, -R8, -C(=O)-R8 e -C(=O)-O-R8; R8 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila e grupos C3-C8 heterociclila; e
R9 é escolhido dentre H, ,
, ,
, ,
,
, e
, em que R1, R2, R3, R6, R7 e R8 são, cada um, independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos - C(=O)-(C3-C8 heterociclila), -NR6R7, grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila, cada um dos quais pode ser independentemente substituído por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, grupos C1-C3 haloalquila, -NH-C(=O)(C1-C3 alquila) e -NH-C(=O)- O-(C1-C3 alquila); e em que * denota o ponto de conectividade de R9 ao restante do composto.
[0371] Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H4, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H5, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H6, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H7, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H8, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H9, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H10, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H2, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H13, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H14, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H15, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H16, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H17, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H18, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H19, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H20, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H21, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H22, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H23, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H24, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento o composto H25, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0372] Em algumas modalidades, é fornecido no presente documento um composto escolhido dentre:
;
;
;
;
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;
;
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;
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;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
; e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, em que L é um ligante que se liga covalentemente a um anticorpo.
[0373] Em algumas modalidades, o ligante compreende pelo menos uma porção química de peptídeo clivável. Em algumas modalidades, a pelo menos uma porção química de peptídeo clivável é clivável por uma enzima. Em algumas modalidades, o ligante ou porção química de peptídeo clivável compreende pelo menos uma unidade de aminoácido. Em algumas modalidades, a pelo menos uma unidade de aminoácido é escolhida dentre arginina, histidina, lisina, ácido aspártico, ácido glutâmico, serina, treonina, asparagina, glutamina, cisteína, selenocisteína, glicina, prolina, alanina, valina, isoleucina, metionina, fenilalanina, tirosina, triptofano e citrulina. Em algumas modalidades, a pelo menos uma unidade de aminoácido é escolhida dentre alanina, citrulina e valina. Em algumas modalidades, o ligante compreende citrulina e valina. Em algumas modalidades, o ligante compreende alanina e valina.
[0374] Em algumas modalidades, o ligante compreende uma -glicuronídeo, um dissulfeto e uma carbonila. Em algumas modalidades, o ligante compreende uma sulfonamida. Em algumas modalidades, o ligante compre - glicuronídeo. Em algumas modalidades, o ligante compreende um dissulfeto.
Em algumas modalidades, o ligante compreende uma carbonila.
[0375] Em algumas modalidades, o ligante compreende uma unidade espaçadora. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora é escolhida dentre grupos alquila e porções químicas de polietilenoglicol (PEG). Em algumas modalidades, o grupo alquila é um grupo C1-C12 alquila. Em algumas modalidades, o grupo alquila é um grupo C1-C6 alquila. Em algumas modalidades, o grupo alquila é metileno. Em algumas modalidades, o grupo alquila é etileno. Em algumas modalidades, o grupo alquila é n-propileno. Em algumas modalidades, o grupo alquila é n-butileno. Em algumas modalidades, o grupo alquila é n-pentileno. Em algumas modalidades, o grupo alquila é n- hexileno. Em algumas modalidades, a porção química PEG compreende - (PEG)m-, em que m é um número inteiro de 1 a 10. Em algumas modalidades, m é 1. Em algumas modalidades, m é 2. Em algumas modalidades, m é 3. Em algumas modalidades, m é 4. Em algumas modalidades, m é 5. Em algumas modalidades, m é 6.
[0376] Em algumas modalidades, o ligante compreende uma porção química de maleimida (Mal) ("unidade espaçadora Mal"). Em algumas modalidades, o ligante compreende uma unidade espaçadora autoimolativa. Em algumas modalidades, a unidade espaçadora autoimolativa é escolhida dentre p-aminobenziloxicarbonila (pABC) e p-aminobenzila (pAB).
[0377] Em algumas modalidades, o ligante compreende uma unidade espaçadora Mal, um grupo alquila, pelo menos uma unidade de aminoácido e um espaçador autoimolativo. Em algumas modalidades, pelo menos uma unidade de aminoácido é escolhida dentre alanina, citrulina e valina. Em algumas modalidades, a pelo menos uma unidade de aminoácido compreende alanina e valina. Em algumas modalidades, a pelo menos uma unidade de aminoácido compreende citrulina e valina. Em algumas modalidades, o espaçador autoimolativo é escolhido dentre pAB e pABC. Em algumas modalidades, o espaçador autoimolativo compreende pAB. Em algumas modalidades, o espaçador autoimolativo compreende pABC. Em algumas modalidades, o grupo alquila compreende um grupo C1-C6 alquila.
[0378] Em algumas modalidades, o ligante compreende uma unidade espaçadora Mal, uma porção química PEG, pelo menos uma unidade de aminoácido e um espaçador autoimolativo. Em algumas modalidades, pelo menos uma unidade de aminoácido é escolhida dentre alanina, citrulina e valina. Em algumas modalidades, a pelo menos uma unidade de aminoácido compreende alanina e valina. Em algumas modalidades, a pelo menos uma unidade de aminoácido compreende citrulina e valina. Em algumas modalidades, o espaçador autoimolativo é escolhido dentre pAB e pABC. Em algumas modalidades, o espaçador autoimolativo compreende pAB. Em algumas modalidades, o espaçador autoimolativo compreende pABC. Em algumas modalidades, a porção química PEG compreende -(PEG)m-, em que m é um número inteiro de 1 a 6. Carregamento de fármaco
[0379] O carregamento de fármaco é representado por p e também é chamado no presente documento da razão modulador de splicing de herboxidieno para anticorpo (HAR). O carregamento de fármaco pode estar na faixa de 1 a 10 porções químicas de fármaco por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, p é um número inteiro de 1 a
10. Em algumas modalidades, p é um número inteiro de 1 a 10, 1 a 9, 1 a 8, 1 a 7, 1 a 6, 1 a 5, 1 a 4, 1 a 3 ou 1 a 2. Em algumas modalidades, p é um número inteiro de 2 a 10, 2 a 9, 2 a 8, 2 a 7, 2 a 6, 2 a 5, 2 a 4 ou 2 a 3. Em algumas modalidades, p é um número inteiro de 1 a 8. Em algumas modalidades, p é um número inteiro de 2 a 5. Em algumas modalidades, p é um número inteiro de 2 a 4. Em algumas modalidades, p é um número inteiro de 3 a 4. Em outras modalidades, p é um número inteiro de 4 a 8. Em outras modalidades, p é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8, de preferência, 4 ou 8.
[0380] O carregamento de fármaco pode ser limitado pelo número de sítios de ligação no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, a porção química de ligante (L) do ADC se liga ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno através de um grupo quimicamente ativo em um ou mais resíduos de aminoácidos no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Por exemplo, o ligante pode ser ligado ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno através de um grupo amino, imino, hidroxila, tiol ou carboxila livre (por exemplo, à terminação B ou C, ao grupo amino épsilon de um ou mais resíduos de lisina, ao grupo de ácido carboxílico livre de um ou mais resíduos de ácido glutâmico ou ácido aspártico ou ao grupo sulfidrila de um ou mais resíduos de cisteína). O sítio ao qual o ligante está ligado pode ser um resíduo natural na sequência de aminoácidos do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, ou pode ser introduzido no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, por exemplo, por tecnologia de DNA recombinante (por exemplo, introduzindo um resíduo de cisteína na sequência de aminoácidos) ou por bioquímica de proteínas (por exemplo, por redução, ajuste de pH ou hidrólise).
[0381] Em algumas modalidades, o número de porções químicas de fármaco que podem ser conjugadas a um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é limitado pelo número de resíduos de cisteína livre. Por exemplo, quando a ligação é um grupo tiol de cisteína, um anticorpo pode ter apenas um ou alguns grupos tiol de cisteína, ou pode ter apenas um ou alguns grupos tiol suficientemente reativos através dos quais um ligante pode ser ligado. Em geral, os anticorpos não contêm muitos grupos tiol de cisteína livre e reativos que podem estar ligados a uma porção química de fármaco. De fato, a maioria dos resíduos de tiol de cisteína em anticorpos está envolvida em ligações dissulfeto intercadeia ou intracadeia. A conjugação com cisteínas pode, em algumas modalidades, portanto, exigir pelo menos redução parcial do anticorpo. A superligação de ligante-toxina a um anticorpo pode desestabilizar o anticorpo, reduzindo os resíduos de cisteína disponíveis para formar ligações dissulfeto. Portanto, uma razão ideal de fármaco:anticorpo deve aumentar a potência do ADC (aumentando o número de porções químicas de fármaco ligadas por anticorpo) sem desestabilizar o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, uma razão ideal pode ser 2, 4, 6 ou 8.
[0382] Em algumas modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é exposto a condições de redução antes da conjugação para de gerar um ou mais resíduos de cisteína livre. Um anticorpo, em algumas modalidades, pode ser reduzido com um agente redutor, como ditiotreitol (DTT) ou tris(2-carboxietil)fosfina (TCEP), sob condições de redução parcial ou total, para gerar grupos tiol de cisteína reativos. Cisteínas não pareadas podem ser geradas através da redução parcial com equivalentes molares limitados de TCEP, o que pode reduzir as ligações dissulfeto intercadeia que ligam a cadeia leve e a cadeia pesada (um par por pareamento HL) e as duas cadeias pesadas na região de dobradiça (dois pares por pareamento de HH no caso de IgG1 humana), embora deixando as ligações dissulfeto intracadeia intactas (Stefano et al. (2013) Methods Mol Biol. 1045:145-71). Em modalidades, as ligações dissulfeto dentro dos anticorpos são reduzidas eletroquimicamente, por exemplo, empregando um eletrodo de trabalho que aplica uma tensão de redução e oxidação alternada. Esta abordagem pode permitir o acoplamento em linha de redução de ligação dissulfeto a um dispositivo analítico (por exemplo, um dispositivo de detecção eletroquímica, um espectrômetro de RMN ou um espectrômetro de massa) ou um dispositivo de separação química (por exemplo, um cromatógrafo líquido (por exemplo, um HPLC) ou um dispositivo de eletroforese (consultar, por exemplo, Publ. US nº 20140069.822). Em certas modalidades, um anticorpo é submetido a condições desnaturantes para revelar grupos nucleofílicos reativos em resíduos de aminoácidos, como a cisteína.
[0383] O carregamento de fármaco de um ADC pode ser controlado de maneiras diferentes, por exemplo, ao: (i) limitar o excesso molar de intermediário de fármaco-ligante ou reagente de ligante em relação ao anticorpo; (ii) limitar o tempo ou temperatura de reação de conjugação; (iii) condições redutivas parciais ou limitantes para modificação de tiol de cisteína; e/ou (iv) manipular por técnicas recombinantes a sequência de aminoácidos do anticorpo de modo que o número e a posição dos resíduos de cisteína sejam modificados para controle do número e/ou posição de ligações ligante-fármaco.
[0384] Em algumas modalidades, resíduos de cisteína livre são introduzidos na sequência de aminoácidos do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Por exemplo, os anticorpos manipulados com cisteína podem ser preparados em que um ou mais aminoácidos de um anticorpo parental são substituídos por um aminoácido cisteína. Qualquer forma de anticorpo pode ser modificada, isto é, mutada. Por exemplo, um fragmento de anticorpo Fab parental pode ser manipulado para formar um Fab manipulado de cisteína denominado "ThioFab". De modo similar, um anticorpo monoclonal parental pode ser manipulado para formar um "ThioMab". Uma mutação de sítio único produz um único resíduo de cisteína manipulado em um ThioFab, enquanto uma mutação de sítio único produz dois resíduos de cisteína manipulados em um ThioMab, devido à natureza dimérica do anticorpo IgG. O DNA que codifica uma sequência de aminoácidos variante do polipeptídeo parental pode ser preparado por uma variedade de métodos conhecidos na técnica (consultar, por exemplo, os métodos descritos na Pub. Intl. nº 2006/034488). Estes métodos incluem, porém sem limitação, preparação por mutagênese sítio-dirigida (ou mediada por oligonucleotídeo), mutagênese por PCR e mutagênese de cassete de um DNA preparado anteriormente que codifica o polipeptídeo. As variantes de anticorpos recombinantes podem também ser construídas por manipulação de fragmentos de restrição ou por PCR de extensão de sobreposição com oligonucleotídeos sintéticos. ADCs da Fórmula (I) incluem, porém sem limitação, anticorpos que têm 1, 2, 3 ou 4 aminoácidos de cisteína manipulados (Lyon et al. (2012) Methods Enzymol. 502:123-38). Em algumas modalidades, um ou mais resíduos de cisteína livre já estão presentes em um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, sem o uso de manipulação, em tal caso os resíduos de cisteína livre existentes podem ser usados para conjugar o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno a uma porção química de fármaco.
[0385] Quando mais de um grupo nucleofílico reage com um intermediário de fármaco-ligante ou um reagente de porção química de ligante seguido de reagente de porção química de fármaco, em uma mistura de reação que compreende várias cópias do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e porção química de ligante, então o produto resultante pode ser uma mistura de compostos de ADC com uma distribuição de uma ou mais porções químicas de fármaco ligadas a cada cópia do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno na mistura. Em algumas modalidades, o carregamento de fármaco em uma mistura de ADCs resultante de uma reação de conjugação está na faixa de 1 a 10 porções químicas de fármaco ligadas por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. O número médio de porções químicas de fármaco por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno (ou seja, o carregamento médio de fármaco ou p) pode ser calculado por qualquer método convencional conhecido na técnica, por exemplo, por espectrometria de massa (por exemplo, LC-MS em fase reversa ) e/ou cromatografia líquida de alta eficiência (por exemplo, HIC-HPLC). Em algumas modalidades, o número médio de porções químicas de fármaco por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é determinado por cromatografia de interação hidrofóbica- cromatografia líquida de alta eficiência (HIC-HPLC). Em algumas modalidades, o número médio de porções químicas de fármaco por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é determinado por espectrometria de massa e cromatografia líquida em fase reversa (LC-MS). Em algumas modalidades, o número médio de porções químicas de fármaco por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é de cerca de 1,5 a cerca de 3,5, cerca de 2,5 a cerca de 4,5, cerca de 3,5 a cerca de 5,5, cerca de 4,5 a cerca de 6,5, cerca de 5,5 a cerca de 7,5, cerca de 6,5 a cerca de 8,5 ou cerca de 7,5 a cerca de 9,5. Em algumas modalidades, o número médio de porções químicas de fármaco por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é de cerca de 2 a cerca de 4, cerca de 3 a cerca de 5, cerca de 4 a cerca de 6, cerca de 5 a cerca de 7, cerca de 6 a cerca de 8, cerca de 7 a cerca de 9, cerca de 2 a cerca de 8 ou cerca de 4 a cerca de 8.
[0386] Em algumas modalidades, o número médio de porções químicas de fármaco por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é de cerca de 2. Em algumas modalidades, o número médio de porções químicas de fármaco por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é cerca de 1,5, cerca de 1,6, cerca de 1,7, cerca de 1,8, cerca de 1,9, cerca de 2, cerca de 2,1, cerca de 2,2, cerca de 2,3, cerca de 2,4 ou cerca de 2,5 . Em algumas modalidades, o número médio de porções químicas de fármaco por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é 2.
[0387] Em algumas modalidades, o número médio de porções químicas de fármaco por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é de cerca de 4. Em algumas modalidades, o número médio de porções químicas de fármaco por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é cerca de 3,5, cerca de 3,6, cerca de 3,7, cerca de 3,8, cerca de 3,9, cerca de 4, cerca de 4,1, cerca de 4,2, cerca de 4,3, cerca de 4,4 ou cerca de 4,5 . Em algumas modalidades, o número médio de porções químicas de fármaco por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é 4.
[0388] Em algumas modalidades, o número médio de porções químicas de fármaco por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é de cerca de 8. Em algumas modalidades, o número médio de porções químicas de fármaco por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é cerca de 7,5, cerca de 7,6, cerca de 7,7, cerca de 7,8, cerca de 7,9, cerca de 8, cerca de 8,1, cerca de 8,2, cerca de 8,3, cerca de 8,4 ou cerca de 8,5 . Em algumas modalidades, o número médio de porções químicas de fármaco por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é 8.
[0389] Em várias modalidades, o termo "cerca de", conforme usado em relação ao número médio de porções químicas de fármaco por anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, significa mais ou menos 10%.
[0390] Os compostos individuais de ADC, ou "espécies", podem ser identificados na mistura por espectroscopia de massa e separados por UPLC ou HPLC, por exemplo, cromatografia de interação hidrofóbica (HIC- HPLC). Em certas modalidades, um produto de ADC homogêneo ou quase homogêneo com um único valor de carregamento pode ser isolado da mistura de conjugação, por exemplo, por eletroforese ou cromatografia.
[0391] Em algumas modalidades, o carregamento de fármaco mais elevado (por exemplo, p > 8) pode causar agregação, insolubilidade, toxicidade ou perda de permeabilidade celular de certos conjugados anticorpo- fármaco. Um carregamento de fármaco mais alto pode também afetar negativamente a farmacocinética (por exemplo, depuração) de certos ADCs. Em algumas modalidades, o carregamento de fármaco mais baixo (por exemplo, p <2) pode reduzir a potência de certos ADCs contra células que expressam alvo e/ou células espectadoras. Em algumas modalidades, o carregamento de fármaco para um ADC da presente revelação está na faixa de cerca de 2 a cerca de 8; de cerca de 2 a cerca de 6; de cerca de 2 a cerca de 5; de cerca de 3 a cerca de 5; de cerca de 2 a cerca de 4; ou de cerca de 4 a cerca de 8.
[0392] Em algumas modalidades, um carregamento de fármaco e/ou um carregamento médio de fármaco de cerca de 2 é obtido, por exemplo, usando a redução parcial de dissulfetos intracadeia no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e fornece propriedades benéficas. Em algumas modalidades, um carregamento de fármaco e/ou um carregamento médio de fármaco de cerca de 4 é obtido, por exemplo, usando a redução parcial de dissulfetos intracadeia no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e fornece propriedades benéficas. Em algumas modalidades, um carregamento de fármaco e/ou um carregamento médio de fármaco de cerca de 8 é obtido,
por exemplo, usando a redução parcial de dissulfetos intracadeia no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e fornece propriedades benéficas. Em algumas modalidades, um carregamento de fármaco e/ou um carregamento médio de fármaco menor que cerca de 2 pode resultar em um nível inaceitavelmente alto de espécies de anticorpos não conjugados, que podem competir com o ADC pela ligação a um antígeno alvo e/ou fornecer eficácia de tratamento reduzida. Em algumas modalidades, um carregamento de fármaco e/ou carregamento médio de fármaco de mais que cerca de 8 pode resultar em um nível inaceitavelmente alto de heterogeneidade do produto e/ou agregação de ADC. Um carregamento de fármaco e/ou um carregamento médio de fármaco de mais que cerca de 8 também pode afetar a estabilidade do ADC, devido à perda de uma ou mais ligações químicas necessárias para estabilizar o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno.
[0393] A presente revelação inclui métodos de produção dos ADCs descritos. Brevemente, os ADCs compreendem um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno como o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno, uma porção química de fármaco (por exemplo, um modulador de splicing de herboxidieno) e um ligante que une a porção química de fármaco e o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, os ADCs podem ser preparados usando um ligante com funcionalidades reativas para se ligar covalentemente à porção química de fármaco e ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Por exemplo, em algumas modalidades, um tiol de cisteína de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno pode formar uma ligação com um grupo funcional reativo de um ligante ou um intermediário fármaco-ligante (por exemplo, uma porção química de maleimida) para produzir um ADC. A geração dos ADCs pode ser realizada por qualquer técnica conhecida pelo versado na técnica.
[0394] Em algumas modalidades, um ADC é produzido pelo contato de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno com um ligante e uma porção química de fármaco (por exemplo, um modulador de splicing de herboxidieno) de maneira sequencial, de modo que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno seja covalentemente ligado ao ligante primeiro e, então, o intermediário anticorpo-ligante pré-formado reage com a porção química de fármaco. O intermediário anticorpo-ligante pode ou não ser submetido a uma etapa de purificação antes do contato com a porção química de fármaco. Em outras modalidades, um ADC é produzido pelo contato de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno com um composto ligante-fármaco pré- formado pela reação de um ligante com uma porção química de fármaco. O composto ligante-fármaco pré-formado pode ou não ser submetido a uma etapa de purificação antes do contato com o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. Em outras modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno entra em contato com o ligante e a porção química de fármaco em uma mistura de reação, permitindo a formação simultânea das ligações covalentes entre o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e o ligante e entre o ligante e a porção química de fármaco. Este método de produção de ADCs pode incluir uma reação, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno entra em contato com o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno antes da adição do ligante à mistura de reação e vice-versa. Em certas modalidades, um ADC é produzido pela reação de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno com um ligante unido a uma porção química de fármaco, como modulador de splicing de herboxidieno de ADL1 (por exemplo, ADL1-79392) ou modulador de splicing de herboxidieno de ADL5 (por exemplo, ADL5-0349) , sob condições que permitem a conjugação.
[0395] Os ADCs preparados de acordo com os métodos descritos acima podem ser submetidos a uma etapa de purificação. A etapa de purificação pode envolver quaisquer métodos bioquímicos conhecidos na técnica para purificar proteínas, ou qualquer combinação de métodos dos mesmos. Estes incluem, porém sem limitação, filtração de fluxo tangencial (TFF), cromatografia de afinidade, cromatografia de troca iônica, qualquer carga ou cromatografia baseada em ponto isoelétrico, cromatografia de modo misto, por exemplo, CHT (hidroxiapatita cerâmica), cromatografia de interação hidrofóbica, cromatografia de exclusão por tamanho, diálise, filtração, precipitação seletiva ou qualquer combinação doa mesmas. Usos e Composições Terapêuticos
[0396] São revelados no presente documento métodos de uso dos ADCs e composições revelados no tratamento de um indivíduo para um distúrbio, por exemplo, um distúrbio neoplásico. Os ADCs podem ser administrados individualmente ou em combinação com um segundo agente terapêutico e podem ser administrados em qualquer formulação, dosagem e regime de dosagem farmaceuticamente aceitável. A eficácia de tratamento com ADC pode ser avaliada quanto à toxicidade, bem como indicadores de eficácia e ajustada em conformidade. As medições de eficácia incluem, porém sem limitação, um efeito citostático e/ou citotóxico observado in vitro ou in vivo, volume tumoral reduzido, inibição de crescimento tumoral e/ou sobrevivência prolongada.
[0397] Métodos para determinar se um ADC exerce um efeito citostático e/ou citotóxico em uma célula são conhecidos. Por exemplo, a atividade citotóxica ou citostática de um ADC pode ser medida ao: expor células de mamíferos que expressam uma proteína alvo do ADC em um meio de cultura de células; cultivar as células por um período de cerca de 6 horas a cerca de 6 dias; e medir a viabilidade celular. Os ensaios in vitro baseados em células podem também ser usados para medir a viabilidade (proliferação), citotoxicidade e indução de apoptose (ativação de caspase) do ADC.
[0398] Para determinar se um ADC exerce um efeito citostático, um ensaio de incorporação de timidina pode ser usado. Por exemplo, as células cancerosas que expressam um antígeno alvo a uma densidade de
5.000 células/poço de uma placa de 96 poços podem ser cultivadas por um período de 72 horas e expostas a 0,5 µCi de 3H-timidina durante as 8 horas finais do período de 72 horas. A incorporação de 3H-timidina em células da cultura é medida na presença e ausência do ADC.
[0399] Para determinar a citotoxicidade, a necrose ou apoptose (morte celular programada) pode ser medida. A necrose é tipicamente acompanhada por permeabilidade aumentada da membrana plasmática; expansão da célula e ruptura da membrana plasmática. A apoptose pode ser quantificada, por exemplo, medindo-se a fragmentação do DNA. Métodos fotométricos comerciais para a determinação quantitativa in vitro da fragmentação de DNA estão disponíveis. Exemplos de tais ensaios, incluindo TUNEL (que detecta a incorporação de nucleotídeos marcados em DNA fragmentado) e ensaios baseados em ELISA, são descritos em Biochemica (1999) No. 2, pp. 34-37 (Roche Molecular Biochemicals).
[0400] A apoptose pode também ser determinada medindo-se as alterações morfológicas em uma célula. Por exemplo, como com a necrose, a perda de integridade da membrana plasmática pode ser determinada medindo- se a absorção de certos corantes (por exemplo, um corante fluorescente como, por exemplo, laranja de acridina ou brometo de etídio). Um método para medir o número de células apoptóticas foi descrito por Duke e Cohen, Current Protocols in Immunology (Coligan et al., Eds. (1992) pp. 3.17.1-3.17.16). As células podem também ser marcadas com um corante de DNA (por exemplo, laranja de acridina, brometo de etídio ou iodeto de propídio) e as células observadas quanto à condensação de cromatina e marginação ao longo da membrana nuclear interna. A apoptose pode também ser determinada, em algumas modalidades, pela triagem da atividade da caspase. Em algumas modalidades, um Ensaio Caspase-Glo® pode ser usado para medir a atividade de caspase-3 e caspase-7. Em algumas modalidades, o ensaio fornece um substrato luminogênico de caspase-3/7 em um reagente otimizado para atividade de caspase, atividade de luciferase e lise celular. Em algumas modalidades, a adição de Reagente Caspase-Glo® 3/7 em um formato de
"adicionar-misturar-medir" pode resultar em lise celular, seguido de clivagem de caspase do substrato e geração de um sinal luminescente "tipo brilho", produzido por luciferase. Em algumas modalidades, a luminescência pode ser proporcional à quantidade de atividade de caspase presente e pode servir como um indicador de apoptose. Outras alterações morfológicas que podem ser medidas para determinar a apoptose incluem, por exemplo, condensação citoplasmática, formação de bolhas na membrana e encolhimento celular. A determinação de qualquer um desses efeitos nas células cancerosas indica que um ADC é útil no tratamento de cânceres.
[0401] A viabilidade celular pode ser medida, por exemplo, determinando-se em uma célula a absorção de um corante, como vermelho neutro, azul de tripano, violet exemplo, Page et al. (1993) Intl J Oncology 3:473-6). Em tal ensaio, as células são incubadas em meio contendo o corante, as células são lavadas e o corante restante, refletindo a absorção celular do corante, é medido espectrofotometricamente. A viabilidade celular pode também ser medida, por exemplo, por quantificação de ATP, um indicador de células metabolicamente ativas. Em certas modalidades, a potência in vitro e/ou a viabilidade celular de ADCs preparados ou compostos moduladores de splicing de herboxidieno podem ser avaliadas usando um Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente CellTiter-Glo®, conforme descrito nos exemplos fornecidos no presente documento. Neste ensaio, em certas modalidades, o único reagente (Reagente CellTiter-Glo®) é adicionado diretamente às células cultivadas em meio suplementado com soro. A adição de reagente resulta em lise celular e geração de um sinal luminescente proporcional à quantidade de ATP presente. A quantidade de ATP é diretamente proporcional ao número de células presentes na cultura. O corante de ligação à proteína sulfo rodamina B (SRB) pode também ser usado para medir a citotoxicidade (Skehan et al. (1990) J Natl Cancer Inst. 82:1107-12).
[0402] Os ADCs revelados podem também ser avaliados quanto à atividade de extermínio por espectador. A atividade de extermínio por espectador pode ser determinada, por exemplo, por um ensaio que emprega duas linhagens celulares, uma positiva para um antígeno alvo e uma negativa para um antígeno alvo. Em certas modalidades, o projeto do ensaio permite o rastreamento apenas de células negativas para alvo. Em certas modalidades, as células são plaqueadas sob três condições: (i) alvejar apenas células negativas para alvo (etiquetadas ou marcadas); (ii) alvejar apenas células positivas para alvo; e (iii) cocultura de células negativas para alvo e células positivas para alvo. As células são, então, tratadas com um ADC seguido de monitoramento da citotoxicidade. Quando as placas são lidas com o reagente CellTiter-Glo®, a viabilidade de todas as populações de células pode ser monitorada. Quando as placas são lidas com o reagente OneGlo®, apenas as células negativas para alvo etiquetadas ou marcadas produzem um sinal. O extermínio das células negativas para alvo quando misturadas com células positivas para alvo é indicativo de extermínio por espectador, enquanto o extermínio das células negativas para alvo na ausência de células positivas para alvo é indicativo de extermínio fora do alvo.
[0403] Em certos aspectos, a presente revelação apresenta um método para exterminar, inibir ou modular o crescimento ou interferir no metabolismo de uma célula ou tecido cancerígeno, interrompendo o splicing de RNA. O método pode ser usado com qualquer indivíduo em que a interrupção do splicing de RNA fornece um benefício terapêutico. Os indivíduos que podem se beneficiar da interrupção do splicing de RNA incluem, porém sem limitação, aqueles que têm ou estão em risco de ter um distúrbio neoplásico, como uma malignidade hematológica ou um tumor sólido. Em certas modalidades, a malignidade hematológica é uma malignidade de células B, um câncer do sangue (leucemia), um câncer de células plasmáticas (mieloma, por exemplo, mieloma múltiplo) ou um câncer dos gânglios linfáticos (linfoma). Em certas modalidades, a malignidade hematológica é leucemia mieloide aguda ou mieloma múltiplo. Em certas modalidades, a leucemia é leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mielógena aguda (AML), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia mielógena crônica (CML), leucemia mielomonocítica crônica (CMML) ou leucemia monocítica aguda (AMoL). Em certas modalidades, o linfoma é linfoma de Hodgkin ou linfoma não-Hodgkin. Em certas modalidades, a malignidade hematológica é síndrome de mielodisplasia (MDS). Em certas modalidades, o tumor sólido é um carcinoma como câncer de mama, câncer pancreático, câncer de próstata, câncer de cólon ou colorretal, câncer de pulmão, câncer gástrico, câncer cervical, câncer endometrial, câncer de ovário, colangiocarcinoma, glioma ou melanoma. Em certas modalidades, o tumor sólido é câncer de mama, câncer gástrico, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão (por exemplo, adenocarcinoma de pulmão), câncer uterino (por exemplo, carcinoma endometrial seroso uterino), carcinoma do ducto salivar, melanoma, câncer de cólon, câncer cervical, câncer pancreático, câncer renal, câncer colorretal ou câncer de esôfago. Em certas modalidades, o câncer de pulmão é adenocarcinoma de pulmão. Em certas modalidades, o câncer uterino é carcinoma endometrial seroso uterino.
[0404] Em várias modalidades, os ADCs revelados podem ser administrados em qualquer célula ou tecido que expressa HER2, como uma célula ou tecido neoplásico que expressa HER2. Uma modalidade exemplificativa inclui um método para inibir a sinalização celular mediada por HER2 ou um método para exterminar uma célula. O método pode ser usado com qualquer célula ou tecido que expressa HER2, como uma célula cancerosa ou uma lesão metastática. Exemplos não limitadores de cânceres que expressam HER2 incluem câncer de mama, câncer gástrico, câncer de bexiga, carcinoma de células uroteliais, câncer de esôfago, câncer de pulmão (por exemplo, adenocarcinoma de pulmão), câncer uterino (por exemplo, carcinoma endometrial seroso uterino), carcinoma do ducto salivar, câncer cervical, câncer endometrial e câncer de ovário (English et al. (2013) Mol Diagn
Ther. 17:85-99). Exemplos não limitadores de células que expressam HER2 incluem células de carcinoma ductal de mama humano HCC1954 e SKBR3, células de carcinoma gástrico humano N87 e células que compreendem um ácido nucleico recombinante que codifica HER2 ou uma porção das mesmas.
[0405] Em várias modalidades, os ADCs revelados podem ser administrados em qualquer célula ou tecido que expressa CD138, como uma célula ou tecido neoplásico que expressa CD138. Uma modalidade exemplificativa inclui um método para inibir a sinalização celular mediada por CD138 ou um método para exterminar uma célula. O método pode ser usado com qualquer célula ou tecido que expressa CD138, como uma célula cancerosa ou uma lesão metastática. Exemplos não limitantes de cânceres que expressam CD138 incluem câncer intratorácico (por exemplo, câncer de pulmão, mesotelioma), câncer de pele (por exemplo, carcinoma de células basais, carcinoma de células escamosas), câncer de cabeça e pescoço (por exemplo, laríngeo, hipofaríngeo, nasofaríngeo), câncer de mama, câncer urogenital (por exemplo, câncer cervical, câncer de ovário, câncer endometrial, câncer de próstata, câncer de bexiga, câncer urotelial), malignidades hematológicas (por exemplo, mieloma como mieloma múltiplo, linfoma de Hodgkin) e câncer de tireoide (Szatmári et al. (2015) Dis Markers 2015:796052). Exemplos não limitadores de células que expressam CD138 incluem células de mieloma múltiplo humano MOLP8 e células que compreendem um ácido nucleico recombinante que codifica CD138 ou uma porção do mesmo.
[0406] Em várias modalidades, os ADCs revelados podem ser administrados em qualquer célula ou tecido que expressa EPHA2, como uma célula ou tecido neoplásico que expressa EPHA2. Uma modalidade exemplificativa inclui um método para inibir a sinalização celular mediada por EPHA2 ou um método para exterminar uma célula. O método pode ser usado com qualquer célula ou tecido que expressa EPHA2, como uma célula cancerosa ou uma lesão metastática. Exemplos não limitadores de cânceres que expressam EPHA2 exemplificativos incluem câncer de mama, câncer cerebral, câncer de ovário, câncer de bexiga, câncer pancreático, câncer de esôfago, câncer de pulmão, câncer de próstata, melanoma e câncer gástrico (Tandon et al. (2011) Expert Opin Ther Targets 15(1):31-51). Exemplos não limitadores de células que expressam EPHA2 incluem células de câncer de próstata PC3 e células que compreendem um ácido nucleico recombinante que codifica EPHA2 ou uma porção do mesmo.
[0407] Métodos exemplificativos incluem as etapas de colocar uma célula em contato com um ADC, conforme descrito no presente documento, em uma quantidade eficaz, ou seja, quantidade suficiente para exterminar a célula. O método pode ser usado em células em cultura, por exemplo, in vitro, in vivo, ex vivo ou in situ. Por exemplo, as células que expressam HER2 (por exemplo, células coletadas por biópsia de um tumor ou lesão metastática; células de uma linhagem celular de câncer estabelecida; ou células recombinantes), podem ser cultivadas in vitro no meio de cultura e a etapa de contato pode ser afetada pela adição do ADC ao meio de cultura. O método resultará no extermínio de células que expressam HER2, incluindo, em particular, células tumorais que expressam HER2. Alternativamente, o ADC pode ser administrado a um indivíduo por qualquer via de administração adequada (por exemplo, intravenosa, subcutânea ou contato direto com um tecido tumoral) para ter um efeito in vivo. Esta abordagem pode ser usada para anticorpos que têm como alvo outros antígenos de superfície celular (por exemplo, CD138, EPHA2).
[0408] O efeito in vivo de uma composição terapêutica de ADC revelada pode ser avaliado em um modelo animal adequado. Por exemplo, modelos de câncer xenogênico podem ser usados, em que explantes de câncer ou tecidos de xenoenxerto subcultivados são introduzidos em animais imunocomprometidos, como camundongos nus ou SCID (Klein et al. (1997)
Nature Med. 3:402-8). A eficácia pode ser prevista usando ensaios que medem a inibição de formação de tumor, regressão ou metástase do tumor e similares.
[0409] Ensaios in vivo que avaliam a promoção de extermínio de tumor por mecanismos como a apoptose podem também ser usados. Em uma modalidade, xenoenxertos de camundongos com tumor tratados com a composição terapêutica podem ser examinados quanto à presença de focos apoptóticos e comparados com camundongos portadores de xenoenxerto de controle não tratados. A extensão em que os focos apoptóticos são encontrados nos tumores dos camundongos tratados fornece uma indicação da eficácia terapêutica da composição.
[0410] Além disso, são fornecidos no presente documento métodos de tratamento de um distúrbio neoplásico, por exemplo, um câncer. Os ADCs revelados no presente documento podem ser administrados a um mamífero não humano ou indivíduo humano com propósitos terapêuticos. Os métodos terapêuticos envolvem a administração a um indivíduo com ou suspeito de ter um distúrbio neoplásico de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ADC ou composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ligado a um anticorpo de alvejamento que se liga a um antígeno expresso, é acessível para ligação ou está localizado em uma superfície de célula cancerosa. Em algumas modalidades, o tratamento com o conjugado anticorpo-fármaco ou composição induz a morte por espectador de células neoplásicas que não expressam um antígeno alvo, mas são adjacentes a células neoplásicas que expressam um antígeno alvo.
[0411] Uma modalidade exemplificativa é um método de entrega de um modulador de splicing de herboxidieno a uma célula que expressa HER2, que compreende conjugar o modulador de splicing de herboxidieno a um anticorpo que se liga imunoespecificamente a um epítopo HER2 e expor a célula ao ADC. Células tumorais exemplificativas que expressam HER2 para as quais os ADCs da presente revelação são indicados incluem células de carcinoma gástrico e células de carcinoma ductal de mama.
[0412] Uma outra modalidade exemplificativa é um método de entrega de um modulador de splicing de herboxidieno a uma célula que expressa CD138, que compreende conjugar o modulador de splicing de herboxidieno a um anticorpo que se liga imunoespecificamente a um epítopo de CD138 e expor a célula ao ADC. Células tumorais exemplificativas que expressam CD138 para as quais os ADCs da presente revelação são indicados incluem células de mieloma múltiplo.
[0413] Uma outra modalidade exemplificativa é um método de entrega de um modulador de splicing de herboxidieno a uma célula que expressa EPHA2, que compreende conjugar o modulador de splicing de herboxidieno a um anticorpo que se liga imunoespecificamente a um epítopo EPHA2 e expor a célula ao ADC. Células tumorais exemplificativas que expressam EPHA2 para as quais os ADCs da presente revelação são indicados incluem células de câncer de próstata.
[0414] Uma outra modalidade exemplificativa é um método para reduzir ou inibir o crescimento de um tumor (por exemplo, um tumor que expressa HER2, um tumor que expressa CD138, um tumor que expressa EPHA2), que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ADC ou composição que compreende um ADC. Em algumas modalidades, o tratamento é suficiente para reduzir ou inibir o crescimento do tumor do paciente, reduzir o número ou tamanho das lesões metastáticas, reduzir a carga tumoral, reduzir a carga do tumor primário, reduzir a invasividade, prolongar o tempo de sobrevivência e/ou manter ou melhorar a qualidade de vida. Em algumas modalidades, o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do ADC (por exemplo, um anticorpo anti-HER2, um anticorpo anti-CD138, um anticorpo anti-EPHA2) quando administrado individualmente e/ou o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com a porção química de fármaco de modulador de splicing de herboxidieno quando administrado individualmente.
[0415] Em certos aspectos, a presente revelação fornece um método para reduzir ou inibir o crescimento de um tumor que expressa HER2. Em certas modalidades, o tratamento com o conjugado ou composição anticorpo-fármaco induz o extermínio por espectador de células tumorais que não expressam HER2, mas que são adjacentes a células tumorais neoplásicas que expressam HER2. Tipos exemplificativo de tumores que expressam HER2 incluem, porém sem limitação, tumores derivados de um câncer de mama, câncer gástrico, câncer de bexiga, carcinoma de células uroteliais, câncer de esôfago, câncer de pulmão (por exemplo, adenocarcinoma de pulmão), câncer uterino (por exemplo, carcinoma endometrial seroso uterino), carcinoma do ducto salivar, câncer cervical, câncer endometrial e câncer de ovário que expressa HER2. Em certas modalidades, o tumor que expressa HER2 é um tumor derivado de um câncer de mama, câncer de ovário, câncer gástrico, câncer de pulmão (por exemplo, adenocarcinoma pulmonar), câncer de útero (por exemplo, carcinoma uterino endometrial seroso), osteossarcoma, ou carcinoma do ducto salivar que expressa HER2. Em certas modalidades, o tumor que expressa HER2 é um adenocarcinoma de pulmão ou carcinoma endometrial seroso uterino.
[0416] Em certos aspectos, a presente revelação fornece um método para reduzir ou inibir o crescimento de um tumor que expressa CD138. Em certas modalidades, o tratamento com o conjugado ou composição anticorpo-fármaco induz o extermínio por espectador de células tumorais que não expressam CD138, mas que são adjacentes a células tumorais neoplásicas que expressam CD138. Tipos exemplificativos de tumores que expressam CD138 incluem, porém sem limitação, tumores derivados de um câncer intratorácico que expressa CD138 (por exemplo, câncer de pulmão, mesotelioma), câncer de pele (por exemplo, carcinoma de células basais, carcinoma de células escamosas), câncer de cabeça e pescoço (por exemplo,
laríngeo, hipofaríngeo, nasofaríngeo), câncer de mama, câncer urogenital (por exemplo, câncer cervical, câncer de ovário, câncer endometrial, câncer de próstata, câncer de bexiga, câncer urotelial) e câncer de tireoide.
[0417] Em certos aspectos, a presente revelação fornece um método para reduzir ou inibir o crescimento de um tumor que expressa EPHA2. Em certas modalidades, o tratamento com o conjugado ou composição anticorpo-fármaco induz o extermínio por espectador de células tumorais que não expressam EPHA2, mas que são adjacentes a células tumorais neoplásicas que expressam EPHA2. Exemplos de tipos de tumor que expressam EPHA2 incluem, porém sem limitação, tumores derivados de um câncer de mama, câncer cerebral, câncer de ovário, câncer de bexiga, câncer de pâncreas, câncer de esôfago, câncer de pulmão, câncer de próstata, melanoma e câncer gástrico que expressa EPHA2. Em certas modalidades, o tumor que expressa EPHA2 é um tumor derivado de um câncer de mama, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão, melanoma, câncer de cólon ou câncer de esôfago que expressa EPHA2.
[0418] Além disso, os anticorpos da presente revelação podem ser administrados a um mamífero não humano que expressa um antígeno com o qual o ADC tem capacidade de se ligar com propósitos veterinários ou como um modelo animal de doença humana. Em relação ao último, tais modelos animais podem ser úteis para avaliar a eficácia terapêutica dos ADCs revelados (por exemplo, teste de dosagens e cursos de tempo de administração).
[0419] São fornecidos adicionalmente no presente documento usos terapêuticos dos ADCs e composições revelados. Uma modalidade exemplificadora é o uso de um ADC no tratamento de um distúrbio neoplásico (por exemplo, um câncer que expressa HER2, um câncer que expressa CD138, um câncer que expressa EPHA2). Uma outra modalidade exemplificativa é um ADC para uso no tratamento de um distúrbio neoplásico
(por exemplo, um câncer que expressa HER2, um câncer que expressa CD138, um câncer que expressa EPHA2). Métodos para identificar indivíduos que têm cânceres que expressam um antígeno alvo (por exemplo, HER2, CD138, EPHA2, MSLN, FOLH1, CDH6, CEACAM5, CFC1B, ENPP3, FOLR1, HAVCR1, KIT, MET, MUC16, SLC39A6, SLC44A4 ou STEAP1) são conhecidos na técnica e podem ser usados para identificar pacientes adequados ao tratamento com um ADC revelado.
[0420] Uma outra modalidade exemplificadora é o uso de um ADC em um método de fabricação de um medicamento para o tratamento de um distúrbio neoplásico (por exemplo, um câncer que expressa HER2, um câncer que expressa CD138, um câncer que expressa EPHA2).
[0421] As composições terapêuticas usadas na prática dos métodos anteriores podem ser formuladas em composições farmacêuticas que compreendem um carreador farmaceuticamente aceitável adequado para o método de entrega desejado. Uma modalidade exemplificadora é uma composição farmacêutica que compreende um ADC da presente revelação e um carreador farmaceuticamente aceitável. Os carreadores adequados incluem qualquer material que, quando combinado com a composição terapêutica, retém a função antitumoral da composição terapêutica e é geralmente não reativo com o sistema imunológico do paciente. Os carreadores farmaceuticamente aceitáveis incluem qualquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes de retardo de absorção e isotônicos e similares que são fisiologicamente compatíveis. Exemplos de carreadores farmaceuticamente aceitáveis incluem um ou mais dentre água, solução salina, solução salina tamponada com fosfato, dextrose, glicerol, etanol, sal mesilato e similares, bem como combinações dos mesmos. Em muitos casos, agentes isotônicos estão incluídos, por exemplo, açúcares, poliálcoois, como manitol, sorbitol ou cloreto de sódio na composição. Os carreadores farmaceuticamente aceitáveis podem compreender adicionalmente quantidades menores de substâncias auxiliares, como agentes umectantes ou emulsificantes, conservantes ou tampões, que aumentam a vida útil ou a eficácia do ADC.
[0422] As formulações terapêuticas podem ser solubilizadas e administradas por meio de qualquer via com capacidade de entregar a composição terapêutica ao local do tumor. As vias de administração potencialmente eficazes incluem, porém sem limitação, intravenosa, parenteral, intraperitoneal, intramuscular, intratumoral, intradérmica, intraórgão, ortotópica e similares. As preparações de proteínas terapêuticas podem ser liofilizadas e armazenadas como pós estéreis, por exemplo, sob vácuo e, então, reconstituídas em água bacteriostática (contendo, por exemplo, conservante de álcool benzílico) ou em água estéril antes da injeção. As formulações terapêuticas podem compreender um ADC ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, por exemplo, um sal mesilato.
[0423] Em algumas modalidades, o ADC é administrado ao paciente diariamente, quinzenalmente ou em qualquer período entre os mesmos. As dosagens e protocolos de administração para o tratamento de cânceres usando os métodos anteriores variarão com o método e o câncer alvo, e geralmente dependerão de vários outros fatores entendidos na técnica.
[0424] Vários sistemas de entrega são conhecidos e podem ser usados para administrar um ou mais ADCs da presente revelação. Os métodos de administração dos ADCs incluem, porém sem limitação, administração parenteral (por exemplo, intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa e subcutânea), administração epidural, administração intratumoral e administração mucosa (por exemplo, vias intranasal e oral). Além disso, a administração pulmonar pode ser empregada, por exemplo, pelo uso de um inalador ou nebulizador e formulação com um agente de aerossolização. Consultar, por exemplo, as composições e métodos para administração pulmonar descritos na Patente US nº 6.019.968, nº 5.985.320, nº 5.985.309, nº
5.934.272, nº 5.874.064, nº 5.855.913, nº 5.290.540 e nº 4.880.078; e Publ. Intl. nº WO 1992/019244, nº WO 1997/032572, nº WO 1997/044013, nº WO 1998/031346 e nº WO 1999/066903. Os ADCs podem ser administrados por qualquer via conveniente, por exemplo, por infusão ou injeção em bolus ou por absorção através de revestimentos epiteliais ou mucocutâneos (por exemplo, mucosa oral, mucosa retal e intestinal, etc.). A administração pode ser sistêmica ou local.
[0425] As composições terapêuticas reveladas no presente documento podem ser estéreis e estáveis sob as condições de fabricação e armazenamento. Em algumas modalidades, um ou mais dos ADCs, ou composições farmacêuticas, são fornecidos como um pó liofilizado esterilizado a seco ou concentrado isento de água em um recipiente hermeticamente fechado e podem ser reconstituídos (por exemplo, com água ou solução salina) para a concentração adequada para administração a um indivíduo. Em algumas modalidades, um ou mais dos agentes profiláticos ou terapêuticos ou composições farmacêuticas são fornecidos como um pó liofilizado estéril seco em um recipiente hermeticamente fechado em uma dosagem unitária de pelo menos 5 mg, pelo menos 10 mg, pelo menos 15 mg, em pelo menos 25 mg, pelo menos 35 mg, pelo menos 45 mg, pelo menos 50 mg, pelo menos 75 mg, ou pelo menos 100 mg, ou qualquer quantidade entre as mesmas. Em algumas modalidades, os ADCs liofilizados ou composições farmacêuticas são armazenados entre 2 °C e 8 °C no recipiente original. Em algumas modalidades, um ou mais dos ADCs ou composições farmacêuticas descritos no presente documento são fornecidos sob a forma líquida em um recipiente hermeticamente fechado, por exemplo, um recipiente indicando a quantidade e a concentração do agente. Em algumas modalidades, a forma líquida da composição administrada é fornecida em um recipiente hermeticamente fechado de pelo menos 0,25 mg/ml, pelo menos 0,5 mg/ml, pelo menos 1 mg/ml, pelo menos 2,5 mg/ml, pelo menos 5 mg/ml, pelo menos 8 mg/ml, pelo menos 10 mg/ml, pelo menos 15 mg/ml, pelo menos 25 mg/ml, pelo menos 50 mg/ml, pelo menos 75 mg/ml ou pelo menos 100 mg/ml de ADC. A forma líquida pode ser armazenada entre 2 °C e 8 °C no recipiente original.
[0426] Em algumas modalidades, os ADCs revelados podem ser incorporados em uma composição farmacêutica adequada para administração parenteral. A solução injetável pode ser composta de uma forma de dosagem líquida ou liofilizada em um frasco de sílex ou âmbar, ampola ou seringa pré- carregada ou outro dispositivo de entrega ou armazenamento conhecido.
[0427] As composições descritas no presente documento podem estar em uma variedade de formas. Estes incluem, por exemplo, formas de dosagem líquidas, semissólidas e sólidas, como soluções líquidas (por exemplo, soluções injetáveis e infusíveis), dispersões ou suspensões, comprimidos, pílulas, pós, lipossomas e supositórios. A forma preferida depende do modo de administração tencionado e da aplicação terapêutica.
[0428] Em várias modalidades, o tratamento envolve um bolus único ou administração repetida da preparação de ADC por meio de uma via de administração aceitável.
[0429] Os pacientes podem ser avaliados quanto aos níveis de antígeno alvo em uma determinada amostra (por exemplo, os níveis de células que expressam o antígeno alvo) para auxiliar na determinação do regime de dosagem mais eficaz, etc. Uma modalidade exemplificativa é um método para determinar se um paciente será responsivo ao tratamento com um ADC da presente revelação, que compreende fornecer uma amostra biológica do paciente e colocar a amostra biológica em contato com o ADC. Amostras biológicas exemplificativas incluem tecido ou fluido corporal, como exsudado inflamatório, sangue, soro, fluido intestinal, amostra de fezes ou biópsia de tumor (por exemplo, uma biópsia de tumor derivada de um paciente com ou em risco de ter um câncer que expressa o antígeno alvo, por exemplo, um câncer que expressa HER2, um câncer que expressa CD138, um câncer que expressa EPHA2). Em algumas modalidades, uma amostra (por exemplo, um tecido e/ou fluido corporal) pode ser obtida de um indivíduo, e um método imunológico adequado pode ser usado para detectar e/ou medir a expressão da proteína do antígeno alvo (por exemplo, HER2, CD138, EPHA2, MSLN, FOLH1, CDH6, CEACAM5, CFC1B, ENPP3, FOLR1, HAVCR1, KIT, MET, MUC16, SLC39A6, SLC44A4 ou STEAP1). Tais avaliações também são usadas com propósitos de monitoramento ao longo da terapia e são úteis para avaliar o sucesso terapêutico em combinação com a avaliação de outros parâmetros.
[0430] Em algumas modalidades, a eficácia de um ADC pode ser avaliada pelo contato de uma amostra de tumor de um indivíduo com o ADC e avaliando a taxa ou volume de crescimento do tumor. Em algumas modalidades, quando um ADC foi determinado como eficaz, o mesmo pode ser administrado ao indivíduo.
[0431] As abordagens terapêuticas acima podem ser combinadas com qualquer uma dentre uma ampla variedade de regimes adicionais de cirurgia, quimioterapia ou radioterapia. Em algumas modalidades, os ADCs ou composições revelados no presente documento são coformulados e/ou coadministrados com um ou mais agentes terapêuticos adicionais, por exemplo, um ou mais agentes quimioterápicos. Exemplos não limitativos de agentes quimioterápicos incluem agentes alquilantes, por exemplo, mostardas de nitrogênio, compostos de etilenoimina e sulfonatos de alquila; antimetabólitos, por exemplo, antagonistas de ácido fólico, purina ou pirimidina; agentes antimitóticos, por exemplo, agentes antitubulina, como eribulina ou citotóxicos; compostos que danificam ou interferem na expressão ou replicação de DNA, por exemplo, aglutinantes de sulco menor de DNA; e antagonistas de receptor de fator de crescimento. Em algumas modalidades, um agente quimioterápico pode ser um agente citotóxico ou citostático. Exemplos de agentes citotóxicos incluem, porém sem limitação, agentes antimitóticos, como auristatina de monometila E (MMAE), auristatina de monometila F (MMAF)), maitansinoides (por exemplo, maitansina), dolastatinas, duostatinas, criptoficinas, vinca alcaloides (por exemplo, vincristina, vinblastina), taxanos, taxóis e colchicina; antraciclinas (por exemplo, daunorrubicina, doxorrubicina, di-hidroxiantracindiona); antibióticos citotóxicos (por exemplo, mitomicinas, actinomicinas, duocarmicinas (por exemplo, CC-1065), auromicinas, duomicinas, caliqueamicinas, endomicinas, fenomicinas); agentes alquilantes (por exemplo, cisplatina); agentes intercalantes (por exemplo, brometo de etídio); inibidores da topoisomerase (por exemplo, etoposido, tenoposido); radioisótopos, como At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212 ou 213 , P32 e isótopos radioativos de lutécio (por exemplo, Lu 177); e toxinas de origem bacteriana, fúngica, vegetal ou animal (por exemplo, ricina (por exemplo, cadeia A da ricina), toxina da difteria, exotoxina A de Pseudomonas (por exemplo, PE40), endotoxina, mitogelina, combrestatina, restringocina, gelonina, alfa-sarcina, abrina (por exemplo, cadeia A de abrina), modeccina (por exemplo, cadeia A de modecina), curicina, crotina, inibidor de Sapaonaria officinalis, glicocorticoide).
[0432] Também são revelados no presente documento usos de um ou mais dos ADCs revelados na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer, por exemplo, de acordo com os métodos descritos acima. Em algumas modalidades, os ADCs revelados no presente documento são usados para o tratamento de câncer, por exemplo, de acordo com os métodos descritos acima.
[0433] Em várias modalidades, os kits para uso em aplicações laboratoriais e terapêuticas descritos no presente documento estão dentro do escopo da presente revelação. Tais kits podem compreender um carreador, pacote ou recipiente que é compartimentado para receber um ou mais recipientes, como frascos, tubos e similares, sendo que cada um dos recipientes compreende um dos elementos separados que serão usados em um método revelado no presente documento, juntamente com um rótulo ou bula que compreende instruções de uso, como um uso aqui no presente documento. Os kits podem compreender um recipiente que compreende uma porção química de fármaco. A presente revelação fornece também um ou mais dos ADCs, ou composições farmacêuticas dos mesmos, embalados em um recipiente hermeticamente fechado, como uma ampola ou sachê, indicando a quantidade do agente.
[0434] Os kits podem compreender o recipiente descrito acima e um ou mais outros recipientes associados ao mesmo que compreendem materiais desejáveis a partir do ponto de vista comercial e do usuário, incluindo tampões, diluentes, filtros, agulhas, seringas; rótulo de carreador, pacote, recipiente, frasco e/ou tubo listando os teores e/ou instruções de uso e bulas com instruções de uso.
[0435] Um rótulo pode estar presente no ou com o recipiente para indicar que a composição é usada para uma terapia específica ou aplicação não terapêutica, como uma aplicação prognóstica, profilática, diagnóstica ou laboratorial. Um marcador pode também indicar instruções para uso in vivo ou in vitro, como aqueles descritos no presente documento. Instruções e/ou outras informações também podem ser incluídas em uma bula (ou bulas) ou rótulo (ou rótulos), que está incluído com ou no kit. O rótulo pode estar no ou associado ao recipiente. Um rótulo pode estar em um recipiente quando letras, números ou outros caracteres que formam o rótulo são moldados ou gravados no próprio recipiente. Um rótulo pode ser associado a um recipiente quando está presente dentro de um receptáculo ou suporte que também contém o recipiente, por exemplo, como uma bula. O rótulo pode indicar que a composição é usada para diagnosticar ou tratar uma condição, como um câncer descrito no presente documento. Neoantígenos e Métodos de Uso
[0436] Também são revelados no presente documento, em várias modalidades, métodos de tratamento de um paciente induzindo neoantígenos em células tumorais que podem ser alvejadas pelo sistema imunológico do paciente para depuração. Sem se ater à teoria, em várias modalidades, a administração de um modulador de splicing de herboxidieno, individualmente e/ou como parte de um ADC ou composição, pode produzir neoantígenos que induzem uma resposta imunológica, induzem uma resposta imunológica de RNA de fita dupla, por exemplo, como resultado de retrovírus endógenos residentes em íntron reexpressos e/ou produzir neoantígenos que induzem morte celular imunogênica.
[0437] Como usado no presente documento, o termo "neoantígeno" se refere a qualquer antígeno ao qual o sistema imunológico não foi anteriormente exposto que surge de uma ou mais mutações tumor- específicas e/ou da exposição de um tumor a um modulador de splicing de herboxidieno (por exemplo, qualquer um ou mais dos moduladores de splicing de herboxidieno revelados no presente documento, individualmente e/ou como parte de um ADC ou composição). Mutações de tumor específico podem incluir mutações missense, mudanças de matriz de leitura, translocações e variantes de splicing de mRNA, bem como mutações que influenciam o processamento pós-traducional, como fosforilação e glicosilação. Estas mutações exemplificativas, em várias modalidades, podem ser derivadas de mudanças e/ou mutações de codificação não sinônimas que alteram o processamento de mRNA (por exemplo, splicing). Todas essas mutações exemplificativas, em várias modalidades, podem resultar em mudanças moleculares que podem ser discriminadas por um receptor de células T adequado. Em várias modalidades, um neoantígeno exemplificativo é um neoantígeno induzido pela entrega de um modulador de splicing de herboxidieno, individualmente e/ou como parte de um ADC ou composição. Em várias modalidades, a entrega de um modulador de splicing de herboxidieno (por exemplo, qualquer um ou mais dos moduladores de splicing de herboxidieno revelados no presente documento) pode induzir um splicing de mRNA inovador que resulta na tradução de proteínas contendo um ou mais domínios de peptídeo inovadores aos quais o sistema imunológico não foi anteriormente exposto. Em várias modalidades, as mutações tumor- específicas podem ser variantes de splicing de mRNA resultantes da entrega ou administração de um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC.
[0438] Sem se ater à teoria, em várias modalidades, a entrega de moduladores de splicing de herboxidieno, individualmente e como parte de um ADC ou composição, pode induzir um splicing de mRNA inovador (por exemplo, salto de éxon, retenção de íntron) que resulta na alteração dos quadros de leitura abertos e/ou sequências de codificação de vários genes. Em várias modalidades, esses genes alterados são traduzidos em proteínas contendo um ou mais domínios de peptídeo inovadores reconhecidos pelo sistema imunológico como estranhos. Em várias modalidades, o um ou mais domínios de peptídeo inovadores não existem nas proteínas ou em qualquer outra parte do proteoma humano na ausência de tratamento com modulador de splicing de herboxidieno. Em várias modalidades, as proteínas contendo o um ou mais domínios de peptídeo inovadores podem ser degradados pelo proteassoma para criar fragmentos de peptídeo inovadores que atuam como substratos para o mecanismo de apresentação de imunopeptídeo, por exemplo, através de apresentação de MHC. Em várias modalidades, os fragmentos de peptídeo inovadores que representam neoantígenos podem ser apresentados no peptidoma ligado a MHC1, por exemplo, em células tumorais.
[0439] Em várias modalidades, a entrega de moduladores de splicing de herboxidieno, individualmente e como parte de um ADC ou composição, pode levar a um ou mais eventos intrínsecos às células tumorais (por exemplo, parada do crescimento celular). Em várias modalidades, o evento (ou eventos) intrínseco de células tumorais pode levar a (1) interação aprimorada por células fagocíticas (Bracci et al. (2014) Cell Death Differ.
21(1):15-25); (2) o transporte de fragmentos de peptídeo inovadores para um linfonodo de drenagem tumoral para interagir com células apresentadoras de antígeno; (3) fragmentos de peptídeo inovadores que processam células apresentadoras de antígeno de uma célula tumoral fagocitada e apresentam os fragmentos como neoantígenos a populações de células T naïve circulantes; (4) fragmentos de peptídeo inovadores que interagem com receptores que expressam células T que reconhecem os fragmentos como neoantígenos; (5) maturação e ativação de respostas de células T efetoras (por exemplo, células T CD4+ e/ou CD8+; e/ou (6) interação de células T com células tumorais adicionais expostas ao tratamento com modulador de splicing de herboxidieno e apresentando fragmentos de peptídeos inovadores que representam neoantígenos em seus complexos MHC1 de superfície. Em várias modalidades, o evento (ou eventos) intrínseco de célula tumoral pode resultar, direta ou indiretamente, na interação de células T de função efetora e/ou extermínio de células tumorais que apresentam neoantígeno.
[0440] Além disso, sem se ater à teoria, em várias modalidades, a entrega de moduladores de splicing de herboxidieno, individualmente e como parte de um ADC ou composição, pode causar a reexpressão de retrovírus endógenos residentes no íntron, levando a uma resposta imunológica de RNA de fita dupla.
[0441] Além disso, sem se ater à teoria, em várias modalidades, a entrega de moduladores de splicing de herboxidieno, individualmente e como parte de um ADC ou composição, pode levar à morte celular imunogênica ativada pela liberação induzida por modulador de splicing de neoantígenos derivados de mutação. Em várias modalidades, a entrega de moduladores de splicing de herboxidieno, individualmente e como parte de um ADC ou composição, pode induzir uma resposta imunológica de RNA de fita dupla. Em várias modalidades, a resposta imunológica de RNA dupla fita pode resultar da reexpressão de retrovírus endógenos residentes em íntrons. Em várias modalidades, a resposta imunológica de RNA dupla fita pode resultar em morte de células tumorais. Em várias modalidades, a entrega de moduladores de splicing de herboxidieno, individualmente e como parte de um ADC ou composição, pode induzir a morte celular imunogênica. Em várias modalidades, a morte celular imunogênica pode resultar de liberação de neoantígenos derivados de mutação e/ou uma resposta imunológica de hospedeiro contra células tumorais.
[0442] Consequentemente, em várias modalidades, são revelados métodos de tratamento que compreendem a indução de neoantígenos pela administração de um ou mais moduladores de splicing de herboxidieno e/ou ADCs e/ou composições que compreendem um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC, por exemplo, qualquer modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição revelada no presente documento. Em várias modalidades, o método compreende a administração de uma dosagem reduzida do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição do que seria necessário na ausência da indução de neoantígenos. Em algumas modalidades, o método compreende a administração de uma ou mais doses de indução iniciais para produzir neoantígenos e induzir uma resposta imunológica (por exemplo, conversão de células T naïve em células de memória), seguido de uma dosagem ou frequência de administração reduzida (ou seja, devido ao efeito combinatório do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e de alvejamento imunológico dos neoantígenos). Em algumas modalidades, o tratamento pode compreender uma combinação de administração do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição para induzir uma resposta imunológica baseada em neoantígeno e pelo menos uma terapia adicional (por exemplo, uma segunda terapia anticâncer). Por exemplo, em algumas modalidades, o tratamento pode compreender uma combinação de administração do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição para induzir uma resposta imunológica à base de neoantígeno e um ou mais inibidores de ponto de verificação. Em algumas modalidades, o tratamento pode compreender uma combinação de administração do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição para induzir uma resposta imunológica à base de neoantígeno e uma ou mais citocinas ou análogos de citocinas. Em algumas modalidades, o tratamento pode compreender uma combinação de administração do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição para induzir uma resposta imunológica baseada em neoantígeno e uma ou mais vacinas de neoantígeno. Em algumas outras modalidades, o tratamento pode compreender uma combinação de administração do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição para induzir uma resposta imunológica baseada em neoantígeno e uma ou mais células T de alvejamento de tumor manipuladas (por exemplo, CAR-T).
[0443] Em algumas modalidades, os neoantígenos podem ser usados para monitorar a eficácia de tratamento com um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição. Por exemplo, após a administração de um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição, uma amostra de paciente (por exemplo, uma biópsia de tumor) pode ser obtida e analisada quanto a neoantígenos ou quanto a identificadores de uma resposta imunológica ou inflamatória. Tratamento adicional pode ser fornecido, por exemplo, em dosagem reduzida, se uma resposta de neoantígeno e/ou imunológica for detectada.
[0444] Em várias modalidades, são revelados métodos de tratamento que compreendem a indução de uma resposta imunológica de RNA de fita dupla pela administração de um ou mais moduladores de splicing de herboxidieno e/ou ADCs e/ou composições que compreendem um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC, por exemplo, qualquer modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição revelada no presente documento.
[0445] Em várias modalidades, são revelados métodos de tratamento que compreendem a indução de morte celular imunogênica pela administração de um ou mais moduladores de splicing de herboxidieno e/ou ADCs e/ou composições que compreendem um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC, por exemplo, qualquer modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição revelada no presente documento.
[0446] Em várias modalidades, a administração de um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno pode ser combinada com qualquer terapia anticâncer conhecida. Exemplos de estratégias de ativação imunológica atuais disponíveis para tratamento oncológico incluem, porém sem limitação, tratamento com moléculas de inibidor imunológico de ponto de verificação (ICI), tratamento com citocinas ou análogos de citocinas, vacinação com vacinas associadas a tumores e manipulação de células T de alvejamento de tumor (por exemplo, expansão de linfócitos infiltrantes de tumor ou CAR-T). Essas tecnologias são predominantemente concentradas no aumento ou indução de uma resposta imunológica a antígenos tumorais já existentes (mutações ou expressão aberrante de proteínas de superfície celular). Uma ou mais dessas estratégias podem envolver uma ou mais mutações que têm capacidade para induzir uma resposta de célula T antigênica. Por exemplo, as respostas do paciente à inibição de ponto de verificação podem se correlacionar com a carga mutacional não sinônima. Além disso, podem ser usadas abordagens de vacinas para câncer que dependem de mutações pré-existentes e da antigenicidade dessas mutações.
[0447] Moduladores de splicing de herboxidieno e/ou ADCs que compreendem tais moduladores podem induzir alterações abrangentes no transcriptoma que ocorrem em múltiplas linhagens. A tradução dessas alterações de mRNA pode produzir alterações de proteínas robustas e reproduzíveis que produzem neopeptídeos ligados a MHC1 com alta afinidade através de vários isótipos de HLA. Sem se ater à teoria, devido ao grande número de alterações no transcriptoma e proteoma, o tratamento com moduladores de splicing de herboxidieno e/ou ADCs pode enriquecer o número de neoantígenos potencialmente reativos para maior interação com a resposta imunológica adaptativa.
[0448] Conforme descrito no presente documento, os termos "modulador de splicin de spliceossoma" ou "modulador de splice" se referem a compostos que têm atividade anticâncer por interação com componentes do spliceossoma. Em algumas modalidades, um modulador de splicing altera a taxa ou forma de splicing em uma célula alvo. Moduladores de splicing de herboxidieno que funcionam como agentes inibidores, por exemplo, têm capacidade de reduzir a proliferação celular descontrolada. Em particular, em algumas modalidades, os moduladores de splicing de herboxidieno podem agir inibindo o complexo de spliceossoma SF3b. Em algumas modalidades, um modulador de splicing de herboxidieno é escolhido dentre qualquer um ou mais moduladores de splicing de herboxidieno revelados no presente documento. Em algumas modalidades, um modulador de splicing de herboxidieno é usado, entregue a uma célula e/ou administrado a um indivíduo como um agente independente. Em algumas outras modalidades, um modulador de splicing de herboxidieno é usado, entregue a uma célula e/ou administrado a um indivíduo como parte de um ADC (por exemplo, um ADC escolhido dentre qualquer um dos ADCs exemplificativos revelados no presente documento). Em algumas outras modalidades, um modulador de splicing de herboxidieno é usado, entregue a uma célula e/ou administrado a um indivíduo como parte de uma composição que compreende várias cópias do modulador de splicing de herboxidieno ou várias cópias de um ADC contendo o modulador de splicing de herboxidieno. Essas composições são reveladas no presente documento.
[0449] Em algumas modalidades, um modulador de splicing de herboxidieno usado, entregue a uma célula e/ou administrado a um indivíduo como parte de um ADC (por exemplo, um ADC escolhido dentre qualquer um dos ADCs exemplificativos revelados no presente documento) fornece benefícios terapêuticos adicionais em relação a um modulador de splicing de herboxidieno usado, entregue a uma célula e/ou administrado a um indivíduo como um agente independente. Por exemplo, em algumas modalidades, um modulador de splicing de herboxidieno usado, entregue a uma célula e/ou administrado a um indivíduo como parte de um ADC fornece a entrega alvejada do modulador de splicing de herboxidieno a uma célula neoplásica que expressa o antígeno alvo (ou seja, o antígeno alvejado pela porção de anticorpo do ADC). Em algumas modalidades, tal entrega alvejada do modulador de splicing de herboxidieno reduz o tratamento fora do alvo e/ou citotoxicidade fora do alvo. Em algumas modalidades, tal entrega alvejada promove a apresentação de neoantígenos seletivos para tumor em células neoplásicas, mas não em células saudáveis que não expressam o antígeno alvo. Em algumas modalidades, tal entrega alvejada leva a, por exemplo, pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 99%, do splicing alternativo e indução de mRNAs inovadores e peptídeos associados a MHC que representam neoantígenos em células neoplásicas alvejadas em vez de células fora do alvo. Dessa forma, sem se ater à teoria, em algumas modalidades, após a iniciação e/ou expansão de células T efetoras (por exemplo, usando uma vacina de neoantígeno), o sistema imunológico pode atacar, de preferência, células neoplásicas que apresentam neoantígeno em vez de células saudáveis devido à expressão preferencial de neoantígenos em células tumorais após tratamento com um ADC, conforme revelado no presente documento. Indução Imunológica e Regime de Tratamento:
[0450] Em várias modalidades, a presente revelação fornece um método de induzir pelo menos um neoantígeno colocando-se uma célula neoplásica em contato com uma quantidade eficaz de um modulador de splicing de herboxidieno, um conjugado anticorpo-fármaco baseado em modulador de splicing de herboxidieno (ADC) ou uma composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC. Em várias modalidades, a presente revelação fornece um método de induzir uma resposta imunológica de RNA de fita dupla colocando-se uma célula neoplásica em contato com uma quantidade eficaz de um modulador de splicing de herboxidieno, um conjugado anticorpo-fármaco baseado em modulador de splicing de herboxidieno (ADC) ou uma composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC. Em várias modalidades, a presente revelação fornece um método de induzir a morte celular imunogênica colocando-se uma célula neoplásica em contato com uma quantidade eficaz de um modulador de splicing de herboxidieno, um conjugado anticorpo-fármaco baseado em modulador de splicing de herboxidieno (ADC) ou uma composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC.
[0451] Em algumas modalidades, a célula neoplásica está presente em uma cultura celular in vitro. Em algumas modalidades, a célula neoplásica é obtida a partir de um indivíduo. Em algumas modalidades, a célula neoplásica está presente em um indivíduo. Em algumas modalidades, a célula neoplásica é derivada de uma malignidade hematológica ou um tumor sólido. Em algumas modalidades, a malignidade hematológica é selecionada dentre uma malignidade de célula B, uma leucemia, um linfoma e um mieloma. Em algumas modalidades, a malignidade hematológica é selecionada dentre leucemia mieloide aguda e mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, o tumor sólido é selecionado dentre câncer de mama (por exemplo, câncer de mama positivo para HER2), câncer gástrico (por exemplo, adenocarcinoma gástrico), câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão (por exemplo, adenocarcinoma de pulmão), câncer uterino (por exemplo, carcinoma endometrial seroso uterino), carcinoma do ducto salivar, melanoma, câncer de cólon, câncer cervical, câncer pancreático, câncer de rins, câncer colorretal e câncer de esôfago. Em algumas modalidades, o tumor sólido é selecionado dentre câncer de mama positivo para HER2, adenocarcinoma gástrico, câncer de próstata e osteossarcoma.
[0452] Em várias modalidades, a presente revelação fornece adicionalmente um método de indução de pelo menos um neoantígeno e/ou uma resposta de células T em um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico por administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um modulador de splicing de herboxidieno, um ADC, ou uma composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC. Também é fornecido no presente documento, em várias modalidades, um método de tratamento de um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico, por administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um modulador de splicing de herboxidieno, um ADC ou uma composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC, em que a administração do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo- fármaco ou composição induz pelo menos um neoantígeno e/ou uma resposta de células T.
[0453] Em várias modalidades, a presente revelação fornece um método de induzir uma resposta imunológica de RNA de fita dupla em um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico por administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um modulador de splicing de herboxidieno, um ADC ou uma composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC. Também é fornecido no presente documento, em várias modalidades, um método de tratamento de um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico, por administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um modulador de splicing de herboxidieno, um ADC ou uma composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC, em que a administração do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição induz uma resposta imunológica de RNA de fita dupla.
[0454] Em ainda outras modalidades, a presente revelação fornece um método de indução de morte celular imunogênica em um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico por administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um modulador de splicing de herboxidieno, um ADC ou uma composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC. É adicionalmente fornecido no presente documento, em várias modalidades, um método de tratamento de um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico, por administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um modulador de splicing de herboxidieno, um ADC ou uma composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC, em que a administração do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição induz morte celular imunogênica.
[0455] Em algumas modalidades, a presente revelação fornece adicionalmente um método de tratamento de um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico pela administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um modulador de splicing de herboxidieno, um ADC ou uma composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC, em que a administração do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição induz a morte celular imunogênica, em combinação com uma ou mais terapias adicionais que compreendem um segundo agente.
[0456] Em algumas modalidades dos métodos terapêuticos descritos no presente documento, a quantidade do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco, composição ou segundo agente administrado é reduzida devido à indução de pelo menos um neoantígeno e/ou uma resposta de célula T, em comparação com uma dosagem padrão do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco, composição ou segundo agente. Em algumas modalidades, a quantidade administrada do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo- fármaco, composição ou segundo agente é reduzida em 10%, 15%, 20%, 25%,
30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90%, em comparação com uma dosagem padrão do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo- fármaco, composição ou segundo agente. Em algumas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco, composição ou segundo agente é administrado pelo menos 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90% menos frequentemente, em comparação com um regime de dosagem padrão do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco, composição ou segundo agente. Em algumas modalidades, a quantidade e/ou dosagem administrada do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco, composição ou segundo agente resulta em toxicidade sistêmica mais baixa e/ou tolerância aumentada.
[0457] Como usado no presente documento, o termo "dosagem padrão" ou "regime de dosagem padrão" se refere a qualquer regime de dosagem normal ou rotineiro de um agente terapêutico, por exemplo, um regime proposto pelo fabricante, aprovado por autoridades reguladoras ou, de outro modo, testado em indivíduos humanos para satisfazer as necessidades do paciente normal. Em algumas modalidades, o agente terapêutico é um modulador de splicing de herboxidieno, um anticorpo ou um conjugado anticorpo-fármaco com atividade anticâncer.
[0458] Por exemplo, um regime de dosagem padrão para trastuzumabe, um anticorpo anti-HER2 exemplificativo revelado no presente documento, pode ser 8 mg/kg administrado por via intravenosa durante 90 min (semana 1) seguido de 6 mg/kg administrado por via intravenosa durante 30 a 90 min a cada 3 semanas (semana 4 até o final do ciclo de terapia) (Herceptin® (trastuzumabe) FDA Label Supplement, 2017).
[0459] Como outro exemplo, um regime de dosagem padrão para ipilimumabe, um anticorpo de inibidor de ponto de verificação anti-CTLA4 exemplificativo, pode ser 3 mg/kg administrado por via intravenosa durante 90 minutos a cada 3 semanas para 4 doses (Yervoy® (ipilimumabe) FDA Label Supplement, 2018). Outro regime de dosagem padrão para ipilimumabe pode ser 10 mg/kg administrado por via intravenosa durante 90 minutos a cada 3 semanas para 4 doses, seguido de 10 mg/kg a cada 12 semanas por até 3 anos (Yervoy® (ipilimumabe) FDA Label Supplement, 2018).
[0460] Como outro exemplo, um regime de dosagem padrão para nivolumabe, um anticorpo de inibidor de ponto de verificação anti-PD1 exemplificativo, pode ser 3 mg/kg administrado por via intravenosa durante 60 minutos a cada 2 semanas (Opdivo® (nivolumabe) FDA Label Supplement, 2015).
[0461] Como outro exemplo, um regime de dosagem padrão para atezolizumabe, um anticorpo de inibidor de ponto de verificação anti-PDL1 exemplificativo, pode ser 1.200 mg administrado por via intravenosa por 60 minutos a cada 3 semanas (Tecentriq® (atezolizumabe) FDA Label Supplement, 2018).
[0462] Como outro exemplo, um regime de dosagem padrão para T-DM1, um conjugado de anticorpo-fármaco anti-HER2 exemplificativo, pode ser 3,6 mg/kg administrado por via intravenosa durante 90 minutos a cada 3 semanas (Kadcyla® (T-DM1)) FDA Label Supplement, 2016).
[0463] Em algumas modalidades, os métodos descritos no presente documento podem compreender adicionalmente administrar pelo menos uma terapia adicional (por exemplo, um inibidor de ponto de verificação, uma vacina de neoantígeno, uma citocina ou análogo de citocina, CAR-T, etc.). Em algumas modalidades, a quantidade do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco, composição e/ou pelo menos uma terapia adicional administrada é reduzida devido à indução de pelo menos um neoantígeno e/ou uma resposta de célula T, em comparação com uma dosagem padrão do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco, composição e/ou pelo menos uma terapia adicional. Em algumas modalidades, a quantidade do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco, composição e/ou pelo menos uma terapia adicional administrada é reduzida devido à indução de uma resposta imunológica de RNA de fita dupla, em comparação com uma dosagem padrão do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco, composição e/ou pelo menos uma terapia adicional. Em algumas modalidades, a quantidade do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo- fármaco, composição e/ou pelo menos uma terapia adicional administrada é reduzida devido à indução de morte celular imunogênica, em comparação com uma dosagem padrão do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo- fármaco, composição e/ou pelo menos uma terapia adicional. Em algumas modalidades, a quantidade administrada do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco, composição e/ou pelo menos uma terapia adicional é reduzida em 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90%, em comparação com uma dosagem padrão do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco, composição e/ou pelo menos uma terapia adicional. Em algumas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco, composição e/ou a pelo menos uma terapia adicional é administrada pelo menos 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90%, menos frequentemente, em comparação com um regime de dosagem padrão do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco, composição e/ou pelo menos uma terapia adicional. Em algumas modalidades, a quantidade e/ou dosagem administrada do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo- fármaco, composição e/ou a pelo menos uma terapia adicional resulta em toxicidade sistêmica mais baixa e/ou tolerância aumentada.
[0464] Em algumas modalidades, a administração do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é iniciada antes da administração da pelo menos uma terapia adicional. Em outras modalidades, a administração do modulador de splicing de herboxidieno,
conjugado anticorpo-fármaco ou composição é iniciada após a administração da pelo menos uma terapia adicional. Em ainda outras modalidades, a administração do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo- fármaco ou composição é iniciada concomitantemente com a administração da pelo menos uma terapia adicional.
[0465] Em algumas modalidades, a administração do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é repetida pelo menos uma vez após a administração inicial. Em algumas modalidades, a quantidade do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição usada para administração repetida é reduzida em comparação com a quantidade usada para a administração inicial. Em algumas modalidades, a quantidade do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição usada para administração repetida é reduzida em comparação com uma dosagem padrão do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição. Em algumas modalidades, a quantidade do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição usada para administração repetida é reduzida em 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90%, em comparação com uma dosagem padrão ou dosagem inicial do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição.
[0466] Em algumas modalidades, a administração da pelo menos uma terapia adicional é repetida pelo menos uma vez após a administração inicial. Em algumas modalidades, a quantidade da pelo menos uma terapia adicional usada para administração repetida é reduzida em comparação com a quantidade usada para a administração inicial. Em algumas modalidades, a quantidade da pelo menos uma terapia adicional usada para administração repetida é reduzida em comparação com uma dosagem padrão da pelo menos uma terapia adicional. Em algumas modalidades, a quantidade da pelo menos uma terapia adicional usada para administração repetida é reduzida em 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90%, em comparação com uma dosagem padrão ou dosagem inicial da pelo menos uma terapia adicional.
[0467] Em algumas modalidades, a administração repetida do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é concomitante com a administração repetida da pelo menos uma terapia adicional. Em algumas modalidades, a administração do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é sequencial ou escalonada com a administração repetida da pelo menos uma terapia adicional.
[0468] Em algumas modalidades, a pelo menos uma terapia adicional compreende administrar um inibidor de ponto de verificação, por exemplo, qualquer inibidor de ponto de verificação revelado no presente documento. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao inibidor de ponto de verificação quando administrado sozinho. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é alvejado em PD1/PDL1, CTLA4, OX40, CD40, LAG3, TIM3, GITR e/ou KIR. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é alvejado em CTLA4, OX40, CD40 e/ou GITR. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é um anticorpo que tem atividade inibitória ou agonista para seu alvo. Em algumas modalidades, um inibidor de ponto de verificação é alvejado com um anticorpo inibitório ou outra molécula inibitória similar. Em outras modalidades, um inibidor de ponto de verificação é alvejado com um anticorpo agonista ou outra molécula inibitória similar.
[0469] Em algumas outras modalidades, a pelo menos uma terapia adicional compreende administrar uma vacina de neoantígeno, por exemplo, qualquer vacina de neoantígeno revelada no presente documento. Em algumas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição é administrado antes da administração da vacina de neoantígeno. Em algumas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição é administrado após a administração da vacina de neoantígeno. Em algumas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição é administrado concomitantemente com a administração da vacina de neoantígeno. Em algumas modalidades, a administração do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição é repetida pelo menos uma vez após a administração inicial. Em algumas modalidades, a quantidade do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição usada para administração repetida é reduzida em comparação com a quantidade usada para a administração inicial.
[0470] Em algumas modalidades, a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno. Em algumas modalidades, o pelo menos um peptídeo de neoantígeno está na faixa de cerca de 10 a cerca de 50 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o pelo menos um peptídeo de neoantígeno está na faixa de cerca de 10 a cerca de 35 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o pelo menos um peptídeo de neoantígeno está na faixa de cerca de 15 a cerca de 25 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o pelo menos um peptídeo de neoantígeno compreende uma ou mais de uma sequência de neoantígeno.
[0471] Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos e/ou porção antigênica está na faixa de cerca de 10 a cerca de 50 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o pelo menos um peptídeo de neoantígeno está na faixa de cerca de 10 a cerca de 35 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos e/ou porção antigênica está na faixa de cerca de 15 a cerca de 25 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígeno e/ou porção antigênica está na faixa de cerca de 10 a cerca de 20 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos e/ou porção antigênica não se sobrepõe ou consiste exclusivamente na sequência peptídica canonical (por exemplo, qualquer uma das sequências peptídicas canonicais exemplificativas sublinhadas na Tabela 8).
[0472] O termo "porção antigênica" ou "fragmento antigênico" de uma sequência de neoantígeno, como usado no presente documento, se refere a um ou mais fragmentos de uma sequência de neoantígeno que mantém a capacidade de induzir uma resposta de célula T (por exemplo, expansão antígeno-específica e/ou maturação de população (ou populações) de células T efetoras). Uma porção antigênica, em algumas modalidades, pode também manter a capacidade de ser internalizada, processada e/ou apresentada por células apresentadoras de antígeno (por exemplo, células dendríticas). Em algumas modalidades, uma porção antigênica também mantém a função de iniciação de célula T. Em algumas modalidades, uma porção antigênica de uma sequência de neoantígenos está na faixa de cerca de 10 a cerca de 50 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, uma porção antigênica de uma sequência de neoantígenos está na faixa de cerca de 10 a cerca de 35 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, uma porção antigênica de uma sequência de neoantígenos está na faixa de cerca de 15 a cerca de 25 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, uma porção antigênica de uma sequência de neoantígenos está na faixa de cerca de 10 a cerca de 20 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, uma porção antigênica de uma sequência de neoantígenos (por exemplo, uma porção antigênica de qualquer uma das SEQ ID NOs: 66 a 93), ou seu mRNA de codificação, é formulada como uma vacina de neoantígeno.
[0473] Uma modalidade exemplificativa de uma porção antigênica é a região (ou regiões) que flanqueiam os aminoácidos 45 a 53 da SEQ ID NO:
66. Uma outra modalidade exemplificativa de uma porção antigênica é a região (ou regiões) que flanqueiam os aminoácidos 82 a 90 da SEQ ID NO: 66. Em algumas modalidades, a porção antigênica tem capacidade de ligação a pelo menos um alelo HLA expresso em um indivíduo (por exemplo, HLA-A*02:01). Em algumas outras modalidades, a porção antigênica tem capacidade de ligação a pelo menos um alelo HLA expresso em pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40% ou pelo menos 45% de indivíduos em uma população de indivíduos que sofre de um distúrbio neoplástico. Em algumas modalidades, a porção antigênica tem capacidade para elicitar uma resposta de células T contra um tumor presente em pelo menos 1%, pelo menos 5% ou pelo menos 10% de uma população de indivíduos que sofre de um distúrbio neoplástico.
[0474] Em algumas modalidades, uma porção antigênica não se sobrepõe ou consiste exclusivamente em uma sequência peptídica canonical. O termo "sequência de peptídeo canonical", como usado no presente documento, se refere a qualquer sequência de peptídeo contígua presente no proteoma humano na ausência de contato com um modulador de splicing de herboxidieno (por exemplo, na ausência de contato com um modulador de splicing de herboxidieno individualmente e/ou como parte de um ADC ou composição) e/ou ao qual o sistema imunológico foi anteriormente exposto. Em algumas modalidades, a sequência peptídica canonical é derivada e/ou codificada pelo quadro de leitura aberto de transcrição canonical. As sequências peptídicas canonicais exemplificativas são sublinhadas na Tabela
8.
[0475] Em algumas modalidades, quando um modulador de splicing de herboxidieno é administrado (por exemplo, individualmente e/ou como parte de um ADC ou composição), uma sequência de peptídeo canonical - frame que precedem um evento de splicing aberrante induzido pelo modulador de splicing de herboxidieno. Dessa forma, em algumas modalidades, a sequência de peptídeo canonical compreende ou consiste nos 8 aminoácidos imediatamente N-terminais para a sequência de neoantígeno induzida pelo modulador de splicing de herboxidieno. Em algumas modalidades, quando uma sequência peptídica canonical termina no final do éxon. Em algumas outras ou dois dos três nucleotídeos de um códon, a sequência peptídica canonical é derivada e/ou codificada pelos 24 nucleotídeos que precedem o códon incompleto. Em aberrante podem ser traduzidas no mesmo quadro de leitura aberto derivado do éxon 5' até atingir um códon de parada, portanto a tradução pode terminar. Em algumas modalidades, quando o evento de splicing aberrante (por exemplo, salto de éxons) resulta em uma conservação do quadro de leitura aberto de transcrição canonical, a sequência C-terminal pode ser traduzida para um adicional de 24 nucleotídeos, que codifica 8 aminoácidos C-terminais. Nesse contexto, em algumas modalidades, apenas a região através da junção de éxon aberrante pode codificar uma sequência de neoantígenos. Em algumas modalidades, quando o quadro de leitura aberto é deslocado (por exemplo, retenção de íntrons), a sequência C-terminal completa (codificada pelo mRNA 3') pode codificar uma sequência de neoantígenos.
[0476] Em algumas modalidades, uma porção antigênica de uma sequência de neoantígenos é escolhida comparando-se a sequência de neoantígenos com a sequência de peptídeos canonical; e selecionando-se uma porção da sequência de neoantígenos que não se sobrepõe, consiste e/ou se alinha exclusivamente com a sequência peptídica canonical. Uma porção antigênica de uma sequência de neoantígenos, em algumas modalidades, pode ser examinada quanto à antigenicidade e/ou função de iniciação de células T da mesma maneira que as sequências de neoantígenos de comprimento total (por exemplo, a sequência de neoantígenos da qual a porção antigênica é derivada). Em algumas modalidades, uma porção antigênica de uma sequência de neoantígenos é avaliada quanto à antigenicidade e/ou função de iniciação de células T usando um ensaio de iniciação de células T, como os experimentos de iniciação de células T exemplificativos descritos no presente documento.
[0477] Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos é uma sequência de neoantígenos específica para o indivíduo. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos é uma sequência de neoantígenos personalizada para o indivíduo. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos usada para criar uma vacina de neoantígeno personalizada para um indivíduo tem capacidade de ligação a pelo menos um alelo HLA expresso no indivíduo. Em algumas modalidades, uma vacina de neoantígeno personalizada é selecionada identificando-se neoantígenos expressos no tumor de um indivíduo, por exemplo, após a administração de um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC, e selecionando-se uma vacina que compreende uma sequência de neoantígenos observada no tumor do paciente.
[0478] O termo "personalizado", quando usado para descrever uma vacina de neoantígeno, se refere a uma vacina criada pela identificação de um ou mais neoantígenos produzidos em um paciente, de preferência, um identificado no paciente após uma exposição a um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição, e, então, usando um ou mais desses neoantígenos como base da vacina para o mesmo paciente. Consequentemente, em algumas modalidades, um paciente recebe um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e é analisado quanto a neoantígenos produzidos pelo tratamento. Em algumas modalidades, a vacina de neoantígeno selecionada compreende um peptídeo de neoantígeno ou mRNA revelado no presente documento e confirmado para estar presente no paciente após a exposição ao modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição. Em algumas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e/ou peptídeo ou vacina de mRNA pode ser administrado ao paciente uma vez ou repetidamente.
Subsequentemente, em algumas modalidades, um ou mais desses neoantígenos são usados para criar uma vacina personalizada que é administrada ao paciente. Em algumas modalidades, o um ou mais neoantígenos usados para criar uma vacina personalizada tem afinidade de ligação a um ou mais alelos de HLA específicos de paciente. Em algumas modalidades, o paciente expressa um ou mais alelos de MHC1 que se ligam ao um ou mais neoantígenos. A previsão da possibilidade de um determinado neoantígeno se ligar a um alelo MHC1 específico pode ser determinada usando qualquer método de predição computacional conhecido na técnica. São revelados métodos de predição computacional exemplificativos, por exemplo, em Meydan et al. (2013) BMC Bioinformatics 14(Suppl. 2):S13, que está incorporada no presente documento a título de referência para tais métodos.
[0479] Em algumas outras modalidades, a sequência de neoantígenos é uma sequência de neoantígenos universal. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos é um sequência de neoantígenos universal.
[0480] O termo "universal", quando usado para descrever uma vacina de neoantígeno, se refere a uma vacina que tem uma sequência de peptídeo ou mRNA que é baseada em neoantígenos comuns ou conhecidos observados por sequenciamento de neoantígenos produzidos em múltiplos pacientes e/ou amostras de tecidos de pacientes, de preferência, após uma exposição a um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição. A sequência de peptídeo ou de mRNA usada na vacina não precisa estar presente em cada paciente, mas sim observada em pelo menos alguns pacientes ou amostras de tecido do paciente. Em algumas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e/ou peptídeo ou vacina de mRNA pode ser administrado ao paciente uma vez ou repetidamente. Subsequentemente, em algumas modalidades, essa sequência de peptídeo ou de mRNA é usada para vacinar outros pacientes. Em algumas modalidades, um paciente recebe um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e, então, recebe um peptídeo ou vacina de mRNA de neoantígeno conhecido para aumentar a resposta imunológica intensificada aos neoantígenos produzidos pelo modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição. Em algumas modalidades, um paciente recebe um peptídeo universal ou vacina de mRNA e, então, recebe um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição uma vez ou repetidamente. Em algumas modalidades, a sequência (ou sequências) de neoantígenos usada para criar uma vacina com neoantígeno universal é selecionada com base na frequência de alelo MHC1 total em uma determinada população de pacientes (Maiers et al. (2007) Hum. Immunol. 68(9):779-88).
[0481] Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos (por exemplo, um neoantígeno universal) tem capacidade de ligação a pelo menos um alelo HLA expresso em pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40% ou pelo menos 45% de indivíduos em uma população de indivíduos que sofre do distúrbio neoplástico. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos tem capacidade para elicitar uma resposta de células T contra um tumor presente em pelo menos 1%, pelo menos 5% ou pelo menos 10% de uma população de indivíduos que sofre do distúrbio neoplástico.
[0482] Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos foi identificada por sequenciamento de pelo menos um peptídeo de neoantígeno, ou seu mRNA de codificação, induzido no indivíduo pela administração de uma quantidade eficaz do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição. Em algumas modalidades, o pelo menos um peptídeo de neoantígeno compreende uma sequência de neoantígenos induzida pelo contato de uma célula neoplásica com uma quantidade eficaz do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição. Em algumas modalidades, a célula neoplásica está presente em uma cultura celular in vitro. Em algumas modalidades, a célula neoplásica é obtida a partir do indivíduo. Em algumas modalidades, a célula neoplásica está presente no indivíduo.
[0483] Em algumas modalidades, a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno e um carreador farmaceuticamente aceitável (por exemplo, qualquer um dos carreadores descritos no presente documento). Em algumas modalidades, o pelo menos um peptídeo de neoantígeno está ligado ao carreador farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, o carreador farmaceuticamente aceitável é selecionado dentre um peptídeo, uma albumina sérica, uma hemocianina de lapa, uma imunoglobulina, uma tiroglobulina, uma ovalbumina, um toxoide ou um derivado de toxoide atenuado, uma citocina e uma quimiocina. Em algumas modalidades, o peptídeo de neoantígeno e o carreador farmaceuticamente aceitável estão ligados covalentemente através de um ligante. Em algumas modalidades, o peptídeo de neoantígeno e o carreador farmaceuticamente aceitável são expressos como uma proteína de fusão. Em algumas modalidades, a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno e um diluente farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno e um adjuvante farmaceuticamente aceitável.
[0484] Em algumas modalidades, a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno. Em algumas modalidades, o pelo menos um mRNA de neoantígeno codifica uma ou mais de uma sequência de neoantígeno.
[0485] Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos é uma sequência de neoantígenos específica para o indivíduo. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos é uma vacina de neoantígenos personalizada para o indivíduo. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos tem capacidade de ligação a pelo menos um alelo HLA expresso no indivíduo.
[0486] Em algumas outras modalidades, a sequência de neoantígenos é uma sequência de neoantígenos universal. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos é um vacina de neoantígenos universal. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos tem capacidade de ligação a pelo menos um alelo HLA expresso em pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40% ou pelo menos 45% de indivíduos em uma população de indivíduos que sofre do distúrbio neoplástico. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos tem capacidade para elicitar uma resposta de células T contra um tumor presente em pelo menos 1%, pelo menos 5% ou pelo menos 10% de uma população de indivíduos que sofre do distúrbio neoplástico.
[0487] Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos foi identificada por sequenciamento da sequência proteica de pelo menos um neoantígeno. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos foi identificada por sequenciamento de pelo menos um mRNA que codifica um neoantígeno induzido no indivíduo pela administração de uma quantidade eficaz do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição. Em algumas modalidades, o pelo menos um mRNA de neoantígeno codifica uma sequência de neoantígenos induzida pelo contato de uma célula neoplásica com uma quantidade eficaz do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição. Em algumas modalidades, a célula neoplásica está presente em uma cultura celular in vitro. Em algumas modalidades, a célula neoplásica é obtida a partir do indivíduo. Em algumas modalidades, a célula neoplásica está presente no indivíduo.
[0488] Em algumas modalidades, a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno e um carreador farmaceuticamente aceitável (por exemplo, qualquer um dos carreadores exemplificativos descritos no presente documento). Em algumas modalidades, o pelo menos um mRNA de neoantígeno está ligado ao carreador farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, o carreador farmaceuticamente aceitável é selecionado dentre um peptídeo, uma albumina sérica, uma hemocianina de lapa, uma imunoglobulina, uma tiroglobulina, uma ovalbumina, um toxoide ou um derivado de toxoide atenuado, uma citocina e uma quimiocina. Em algumas modalidades, a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno e um diluente farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno e um adjuvante farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, o mRNA de neoantígeno é encapsulado por um agente de encapsulação. Em algumas modalidades, o agente de encapsulação é um lipossoma. Em algumas modalidades, o agente de encapsulação é uma nanopartícula.
[0489] Em algumas modalidades, a pelo menos uma terapia adicional compreende administrar uma citocina ou análogo de citocina, por exemplo, qualquer citocina ou análogo de citocina revelado no presente documento. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo à citocina ou análogo de citocina quando administrado sozinho. Em algumas modalidades, a citocina ou análogo de citocina compreende um intensificador de célula T. Em algumas modalidades, a citocina ou análogo de citocina compreende IL-2, IL-10, IL-12, IL- compreende IL-2, IL-10, IL-12 e/ou IL-15. Em algumas modalidades, a administração da citocina ou análogo de citocina aumenta a iniciação de células T após a administração de um modulador de splicing de herboxidieno, conjugado de anticorpo-fármaco ou composição devido à indução e apresentação de neoantígenos.
[0490] Em algumas modalidades, a pelo menos uma terapia adicional compreende administrar células T de alvejamento de tumor manipuladas (ou seja, CAR-T), por exemplo, qualquer terapia com CAR-T revelada no presente documento.
[0491] Em algumas modalidades, os métodos descritos no presente documento podem compreender adicionalmente detectar um ou mais neoantígenos e/ou uma resposta de células T no indivíduo após a administração do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo- fármaco ou composição e, opcionalmente, continuar a administração do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição se um ou mais neoantígenos e/ou uma resposta de células T forem detectados. Em algumas modalidades, a detecção de um ou mais neoantígenos e/ou uma resposta de células T no indivíduo indica a eficácia de tratamento com o modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo- fármaco ou composição. Em algumas modalidades, o tratamento com a terapia adicional, juntamente com o modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição, é continuado se um ou mais neoantígenos e/ou uma resposta de células T forem detectados. Em algumas modalidades, o tratamento é continuado em uma dosagem e/ou frequência reduzida se um ou mais neoantígenos e/ou uma resposta de célula T forem detectados.
[0492] Em algumas modalidades, os métodos descritos no presente documento podem compreender adicionalmente detectar uma resposta imunológica de RNA de fita dupla no indivíduo após a administração do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição e, opcionalmente, continuar a administração do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição se uma resposta imunológica de RNA de fita dupla for detectada. Em algumas modalidades, a detecção de uma resposta imunológica de RNA de fita dupla no indivíduo indica a eficácia do tratamento com o modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição. Em algumas modalidades, o tratamento com a terapia adicional, juntamente com o modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição, é continuado se uma resposta imunológica de RNA de fita dupla for detectada. Em algumas modalidades, o tratamento é continuado em uma dosagem e/ou frequência reduzida se uma resposta imunológica de RNA dupla fita for detectada.
[0493] Em algumas modalidades, os métodos descritos no presente documento podem compreender adicionalmente detectar morte celular imunogênica no indivíduo após a administração do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição e, opcionalmente, continuar a administração do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição se a morte celular imunogênica for detectada. Em algumas modalidades, a detecção de morte celular imunogênica no indivíduo indica a eficácia do tratamento com o modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição. Em algumas modalidades, o tratamento com a terapia adicional, juntamente com o modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo- fármaco ou composição, é continuado se a morte celular imunogênica for detectada. Em algumas modalidades, o tratamento é continuado em uma dosagem e/ou frequência reduzida se morte celular imunogênica for detectada.
[0494] Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma carga mutacional não sinônima de cerca de 150 mutações ou menos. Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma carga mutacional não sinônima de cerca de 100 mutações ou menos. Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma carga mutacional não sinônima de cerca de 50 mutações ou menos. Em algumas modalidades, o indivíduo tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico, por exemplo, uma malignidade hematológica ou um tumor sólido. Em algumas modalidades, a malignidade hematológica é selecionada dentre uma malignidade de célula B, uma leucemia, um linfoma e um mieloma. Em algumas modalidades, a malignidade hematológica é selecionada dentre leucemia mieloide aguda e mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, o tumor sólido é selecionado dentre câncer de mama, câncer gástrico, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão, câncer uterino, carcinoma do ducto salivar, melanoma, câncer de cólon, câncer cervical, câncer pancreático, câncer de rins, câncer colorretal e câncer de esôfago. Em algumas modalidades, o tumor sólido é selecionado dentre câncer de mama positivo para HER2, adenocarcinoma gástrico, câncer de próstata e osteossarcoma.
[0495] Em várias modalidades, a presente revelação fornece adicionalmente um método de tratamento de um indivíduo que tem ou que se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico, que compreende: (a) administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um modulador de splicing de herboxidieno, um ADC ou composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC, em que a administração do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição induz pelo menos um neoantígeno e/ou uma resposta de células T; (b) detectar um ou mais neoantígenos e/ou uma resposta de células T no indivíduo após a administração do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo- fármaco ou composição; e (c) continuar a administração do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição se um ou mais neoantígenos e/ou uma resposta de células T forem detectados. Em algumas modalidades, a detecção de um ou mais neoantígenos e/ou uma resposta de células T no indivíduo indica a eficácia de tratamento com o modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição. Em algumas modalidades, o um ou mais neoantígenos compreendem uma sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 37 a 65. Em algumas modalidades, o um ou mais neoantígenos compreendem uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 37. Em algumas modalidades, o um ou mais neoantígenos compreendem uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 39. Em algumas modalidades, o um ou mais neoantígenos compreendem uma sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 46 a 49. Combinação Modulador de Splicing de Herboxidieno / ADC e Inibição de Ponto de Verificação Imune:
[0496] Em várias modalidades, um paciente com câncer, conforme descrito no presente documento, pode ser tratado com uma combinação de um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e uma terapia com inibidor de ponto de verificação. Os pontos de verificação imunológicos são vias inibitórias que retardam ou interrompem as reações imunológicas e evitam danos excessivos aos tecidos causados por atividade descontrolada de células imunológicas. Como usado no presente qualquer agente terapêutico, incluindo qualquer composto químico de molécula pequena, anticorpo, molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, ou quaisquer fragmentos dos mesmos, que iniba uma ou mais vias inibitórias, permitindo assim uma atividade imunológica mais extensa.
[0497] O tratamento de pacientes com inibição de ponto de verificação imunológico revelou ter eficácia robusta em determinadas indicações clínicas. Recentemente, a FDA aprovou o uso de um inibidor de ponto de verificação em pacientes com tumores que exibem alta instabilidade de microssatélites, agnósticos à linhagem de tecido. Essa aprovação foi com base, em parte, na observação que as taxas de resposta se correlacionam positivamente com a carga mutacional (Rizvi et al. (2015) Science 348(6230):124-8; Hellmann et al. (2018) Cancer Cell 33(5):853-861). As estimativas da literatura variam em números absolutos e por linhagem, porém geralmente suportam que acima de um limiar de ~ 150 a 250 mutações, a probabilidade de resposta aumenta. A análise dos dados TCGA mostra que uma grande porcentagem de linhagens de tumor de início adulto tem carga mutacional não sinônima comparativamente baixa (Vogelstein et al. (2013)
Science 339:1549-58). A maioria das linhagens tem taxas de mutação não sinônimas médias de ~ 30 a 80 por paciente, bem abaixo dos limiares para melhores chances de resposta aos inibidores de ponto de verificação.
[0498] Por exemplo, o câncer de mama positivo para HER2 demonstrou ter uma mediana de ~ 60 mutações não sinônimas presentes por amostra de paciente. Entretanto, estima-se que o limiar de eficácia de tratamento com inibidor de ponto de verificação, como mencionado acima, esteja na faixa de ~150 a 250 mutações não sinônimas, ou seja, pacientes acima desse limiar têm maior probabilidade de apresentar remissão completa, remissão parcial e/ou doença estável, enquanto os pacientes abaixo desse limiar têm maior probabilidade de apresentar doença progressiva. Estratégias para aumentar o número aparente de mutações não sinônimas e/ou neoantígenos que são apresentados em células tumorais são, portanto, desejáveis e podem aumentar a probabilidade de resposta total, por exemplo, a terapias com inibidor de ponto de verificação. Como as citocinas (e seus análogos) atuam através de um mecanismo de ação similar, tais estratégias podem também aumentar a probabilidade de resposta total a terapias à base de citocinas.
[0499] As taxas de resposta atuais em câncer de mama positivo para HER2 são ~15 a 25% (CTI NCT02129556). Em várias modalidades reveladas no presente documento, o tratamento com um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição em combinação com um inibidor de ponto de verificação e/ou terapia com citocinas pode melhorar tais taxas de resposta. Em várias modalidades, o tratamento com um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição em combinação com um inibidor de ponto de verificação e/ou terapia com citocinas pode se aplicar a qualquer tumor de início adulto, particularmente aqueles em que a taxa de mutação não sinônima média está abaixo do limiar de ~ 150 mutações estimado. Em várias modalidades, os tipos de câncer exemplificativos adequados para o tratamento com um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição da presente revelação, individualmente ou em combinação com uma terapia adicional (por exemplo, uma terapia com inibidor de ponto de verificação, uma terapia com citocinas) incluem, porém sem limitação, câncer esofágico, linfoma não-Hodgkin, câncer colorretal, câncer de cabeça e pescoço, câncer gástrico, câncer endometrial, adenocarcinoma pancreático, câncer de ovário, câncer de próstata, câncer hepatocelular, glioblastoma, câncer de mama (por exemplo, câncer de mama HER2-positivo), câncer de pulmão (por exemplo, câncer de pulmão de células não pequenas), leucemia linfocítica crônica e leucemia mieloide aguda. Outros tipos de câncer adequados exemplificativos são identificados, por exemplo, em Vogelstein et al. (2013) Science 339:1549-58, que está incorporado no presente documento a título de referência.
[0500] Visto que muitas terapias com inibidor de ponto de verificação são com base na expressão crônica de antígenos associados a tumor, reforços regulares de tratamento são necessários para a eficácia e para "reforçar novamente" populações de células T reativas. A natureza induzível de modulador de splicing de herboxidieno ou neoantígenos derivados de ADC descritos no presente documento fornecem regimes de dosagem terapêutica que podem ser projetados para aumentar a resposta imunológica de células T reativas a neoantígenos, limitando ao mesmo tempo a exaustão de células T frequentemente causada por estimulação de antígeno crônica. Por exemplo, em algumas modalidades, uma dose inicial de um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição é administrada a um indivíduo para reativar o splicing aberrante e a produção de peptídeos de neoantígeno. Após um período de tempo para permitir a produção de proteína e apresentação de antígeno, em algumas modalidades, o indivíduo é, então, administrado com uma dose inicial de um inibidor de ponto de verificação para reforçar e/ou aumentar a iniciação e expansão de células T efetoras. Em algumas modalidades, o período de espera entre as doses de modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e inibidor de ponto de verificação é de cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4, cerca de 5, cerca de 6 ou cerca de 7 dias. Em algumas modalidades, o período de espera é de entre cerca de 3 dias e cerca de 5 dias. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é alvejado em CTLA4, OX40, CD40 e/ou GITR. Em algumas modalidades, o benefício terapêutico de combinação de um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e um inibidor de ponto de verificação pode ser aditivo ou superaditivo.
[0501] Em algumas modalidades, após um período para permitir a iniciação e expansão de células T, o indivíduo é, então, administrado com uma segunda dose ou dose subsequente do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição para ativar a reapresentação de peptídeos de neoantígeno. Em algumas modalidades, o período de espera entre uma dose inicial de um inibidor de ponto de verificação e uma segunda ou dose ou dose subsequente de um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição é de cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4 ou cerca de 5 semanas. Em algumas modalidades, o período de espera é de cerca de 3 semanas. Após uma segunda dose ou dose subsequente do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição, em algumas modalidades, o sistema imunológico pode interagir com as células tumorais que apresentam neoantígenos e/ou provocar o extermínio de células tumorais. Em algumas modalidades, o indivíduo é, então, administrado com uma segunda dose ou dose subsequente do inibidor de ponto de verificação para expandir ainda mais a população de células T efetoras de memória, após permitir a iniciação e expansão de células T secundárias.
[0502] Em algumas modalidades, a dosagem do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição após este regime de tratamento inicial exemplificativo pode ser pulsátil, ou seja, o modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição pode ser dosado em intervalos prolongados (por exemplo, a cada 4 semanas, a cada 5 semanas, aproximadamente a cada
6 semanas) para permitir a apresentação do antígeno, interação de células T e/ou extermínio de células tumorais e/ou recuperação da população de células T de memória. Em pontos de tempo posteriores, em algumas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou tratamento de composição pode ser combinado com um ou mais inibidores de ponto de verificação alvejados para restaurar a funcionalidade efetora para populações de células T esgotadas. Por exemplo, em algumas modalidades, em pontos de tempo posteriores, o modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou tratamento de composição pode ser combinado com um ou mais inibidores de ponto de verificação alvejados em PD1/PDL1, LAG3 e/ou TIM3. Em algumas modalidades, a natureza pulsada de apresentação e iniciação do neoantígeno pode permitir que um inibidor de ponto de verificação e/ou um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição seja administrado com menos frequência e/ou em doses mais baixas. Em algumas modalidades, a natureza pulsada da apresentação de neoantígeno pode fornecer um ou mais benefícios de tratamento para um inibidor de ponto de verificação (por exemplo, um anticorpo anti-CTLA4 como ipilimumabe), em comparação com o inibidor de ponto de verificação quando administrado sem modulador de splicing de herboxidieno simultâneo, ADC ou tratamento de composição, por exemplo, reduzindo o risco potencial de reações adversas frequentemente observadas com o regime de dosagem padrão do inibidor de ponto de verificação.
[0503] Em certas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é um inibidor da trajetória de antígeno associado a linfócito T citotóxico (CTLA4). CTLA4, também conhecido como CD152, é um receptor de proteína que regula descendentemente as respostas imunológicas. CTLA4 é constitutivamente expresso em células T reguladoras, porém apenas regulado ascendentemente em células T convencionais após a ativação. Como usado no presente documento, o termo "inibidor de CTLA4" pretende se referir a qualquer inibidor de CTLA4 e/ou da via CTLA4. Inibidores de CTLA4 exemplificativos incluem, porém sem limitação, anticorpos anti-CTLA4. Os anticorpos de bloqueio de CTLA4 para uso em seres humanos foram desenvolvidos com base na atividade pré-clínica observada em modelos de camundongo de imunidade antitumoral. Os anticorpos anti-CTLA4 exemplificativos incluem, porém sem limitação, ipilimumabe (MDX-010) e tremelimumabe (CP-675,206), ambos os quais são completamente humanos. Ipilimumabe é uma IgG1 com uma meia-vida de plasma de aproximadamente 12 a 14 dias; tremelimumabe é uma IgG2 com uma meia-vida de plasma de aproximadamente 22 dias. Consultar, por exemplo, Phan et al. (2003) Proc Natl Acad Sci E.U.A. 100:8372-7; Ribas et al. (2005) J Clin Oncol. 23:8968-77; Weber et al. (2008) J Clin Oncol. 26:5950-6. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CTLA4 é ipilimumabe.
[0504] Em certas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é um inibidor da trajetória de morte programada-1 (PD1). A trajetória de morte celular 1 (PD1) representa um representa um importante switch de controle imunológico que pode ser ativado por células tumorais para superar a vigilância imunológica de células T ativas. Os ligantes de PD1 (PDL1 e PDL2) são constitutivamente expressos ou podem ser induzidos em vários tumores. Verificou-se que a alta expressão de PDL1 em células tumorais (e em menor extensão de PDL2) se correlaciona com mau prognóstico e sobrevivência em vários outros tipos de tumor sólido. Além disso, foi sugerido que PD1 regula a expansão de células T tumor-específicas em pacientes com melanoma maligno. Essas observações sugerem que a via PD1/PDL1 exerce uma função crítica na evasão imune de tumor e pode ser considerada um alvo atraente para intervenção terapêutica. Como usado no presente documento, o termo "inibidor de PD1" pretende se referir a qualquer inibidor de PD1 e/ou da via PD1. Inibidores de PD1 exemplificativos incluem, porém sem limitação, anticorpos anti-PD1 e anti-PDL1. Em certas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é um anticorpo anti-PD1. Anticorpos anti-PD1 exemplificativos incluem, porém sem limitação, nivolumabe e pembrolizumabe (MK-3475). Nivolumabe, por exemplo, é um anticorpo de inibidor de ponto de verificação imunológico PD1 de imunoglobulina completamente humana G4 (IgG4) que interrompe a interação do receptor de PD1 com seus ligantes PDL1 e PDL2, inibindo assim a resposta imunológica celular (Guo et al.(2017) J Cancer 8(3):410-6). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD1 é nivolumabe. Pembrolizumabe, por exemplo, é um mAb humanizado potente e altamente seletivo do isótipo IgG4 /kappa projetado para bloquear diretamente a interação entre PD1 e seus ligantes, PDL1 e PDL2. Pembrolizumabe aumenta fortemente as respostas imunológicas de linfócitos T em células sanguíneas cultivadas de doadores humanos saudáveis, pacientes com câncer e primatas. Também foi relatado que pembrolizumabe modula o nível de interleucina-2 (IL-2), fator alfa anticorpos anti-PDL1 exemplificativos incluem, porém sem limitação atezolizumabe, avelumabe e durvalumabe. Atezolizumabe, por exemplo, é um mAb humanizado com IgG1 que é relatado para bloquear a interação de PD1/PDL1, alvejando o PDL1 expresso em vários tipos de células malignas. O bloqueio da via de PD1/PDL1 pode estimular os mecanismos de defesa imunológica contra tumores (Abdin et al. (2018) Cancers (Basel) 10(2):32). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 é atezolizumabe.
[0505] Em certas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é alvejado em PD1/PDL1, CTLA4, OX40, CD40, LAG3, TIM3, GITR e/ou KIR. Em certas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é alvejado em CTLA4, OX40, CD40 e/ou GITR. Em certas modalidades, um inibidor de ponto de verificação é alvejado com um anticorpo inibitório ou outra molécula inibitória similar (por exemplo, um anticorpo inibitório anti-CTLA4 ou anti- PD1/PDL1). Em certas outras modalidades, um inibidor de ponto de verificação é alvejado com um agonista para o alvo; exemplos dessa classe incluem os alvos estimulatórios OX40, CD40 e/ou GITR. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação alvejado em OX40, CD40, e/ou GITR é um anticorpo agonista. Os anticorpos agonistas dirigidos contra OX40 podem ter uma função dupla, inibindo a supressão de células T regulatórias, enquanto aumentam as funções de células T efetoras. Os anticorpos agonistas anti-GITR também revelaram tornar as células T efetoras mais resistentes à inibição induzida por células T reguladoras (Karaki et al. (2016) Vaccines (Basel) 4(4):37). De modo semelhante, os anticorpos CD40 agonistas demonstram atividade antitumoral dependente de célula T. A ativação de CD40 em células dendríticas aumentar a apresentação cruzada de antígenos tumorais e consequentemente o número de células T efetoras dirigidas contra tumor (Ellmark et al. (2015) Oncoimmunol. 4(7):e1011484).
[0506] Em certas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é alvejado em CTLA4 (por exemplo, um anticorpo anti-CTLA4). Em certas modalidades, o alvejamento de CTLA4 facilita a iniciação e a ativação de células T virgens. Em certas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é alvejado em OX40 (por exemplo, um anticorpo anti-OX40). Em certas modalidades, o alvejamento de OX40 aumenta a expansão de células T efetoras. Em certas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é alvejado em CD40 (por exemplo, um anticorpo anti-CD40). Em certas modalidades, o alvejamento de CD40 inibe a iniciação "tolerogênica" de células T e/ou a formação de células T reguladoras. Em certas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é alvejado em GITR (por exemplo, um anticorpo anti-GITR). Em certas modalidades, o alvejamento de GITR inibe a atividade de células T reguladoras. Em certas modalidades, o benefício da terapia de combinação (por exemplo, o efeito sobre pelo menos um sintoma ou o risco/taxa de progressão da doença) com um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e um agente alvejado por CTLA4-, OX40-, CD40- e/ou GITR) é aditivo. Em algumas modalidades, o benefício da terapia de combinação com um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e um agente alvejado por CTLA4-, OX40-, CD40- e/ou GITR é superaditivo (ou seja, sinérgico).
[0507] As estratégias de tratamento com inibidores de ponto de verificação são baseadas na hipótese de que o tratamento facilita e/ou aumenta a iniciação de respostas de células T a tumores pouco ou fracamente antigênicos (por exemplo, CTLA4) ou de que o tratamento restaura e/ou revigora as células T que respondem aos antígenos tumorais, porém se tornaram "esgotados" devido à natureza crônica da apresentação de antígenos (por exemplo, PD1, PDL1) (Chen e Mellman (2013) Immunity 39(1):1-10). Exemplos de terapias e agentes com inibição de ponto de verificação adequados, por exemplo, anticorpos anti-PD1, anti-PDL1 ou anti-CTLA4, são conhecidos na técnica. Consultar, por exemplo, o documento n° WO 2001/014424, o documento n° WO 2013/173223, o documento n° WO 2016/007235.
[0508] A combinação dessas respostas de células T iniciadas após terapia com inibidor de ponto de verificação com tratamento para induzir neoantígenos em células tumorais com as quais o sistema imunológico iniciado pode reagir pode fornecer sinergia benéfica. Como o modulador de splicing de herboxidieno ou neoantígenos derivados de ADC ainda não foram apresentados para a iniciação de células T, a combinação com um inibidor de CTLA4 pode ser particularmente benéfica. Em algumas modalidades, o tratamento compreende a administração de um ou mais moduladores de splicing de herboxidieno, ADC ou composição para induzir a produção de neoantígenos, seguido antes, simultaneamente ou posteriormente por uma administração inicial de um inibidor de CTLA4 para estimular a iniciação de células T CD8. Em algumas modalidades, administrações adicionais de um inibidor de CTLA4 são fornecidas ao paciente, por exemplo, para estimular ainda mais a iniciação e/ou ativação de populações de CD8 reativas a neoantígeno. Em algumas modalidades, as administrações adicionais de modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição podem ser fornecidas ao paciente para aumentar a apresentação de neoantígeno pelo tumor. As administrações repetidas de modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou terapia de composição e inibidor de ponto de verificação podem ocorrer simultaneamente ou em intervalos escalonados. Em algumas modalidades, o tratamento compreende adicionalmente administrar um cotratamento com inibidor de PD1/ PDL1, por exemplo, para restaurar a função efetora de células T alvejadas em neoantígeno esgotado dentro do microambiente de tumor.
[0509] Os termos "combinação" ou "terapia de combinação", como usado no presente documento, se referem à administração de um ou mais moduladores de splicing de herboxidieno, ADC ou composição juntamente com um agente ou terapia adicional (por exemplo, um inibidor de ponto de verificação, uma citocina ou análogo de citocina, uma vacina de neoantígeno, CAR-T), como parte de um regime de tratamento destinado a fornecer um efeito benéfico (ou seja, aditivo ou sinérgico) da co-ação de um ou mais dos agentes administrados. Em algumas modalidades, a combinação pode também incluir um ou mais agentes adicionais, incluindo, porém sem limitação, agentes quimioterápicos, agentes antiangiogênese, e agentes que reduzem a imunossupressão (por exemplo, um segundo inibidor de ponto de verificação). O efeito benéfico da combinação inclui, porém sem limitação, ação conjunta farmacocinética ou farmacodinâmica resultante da combinação de agentes terapêuticos. A administração desses agentes terapêuticos em combinação é tipicamente realizada durante um período de tempo definido (por exemplo, minutos, horas, dias ou semanas dependendo da combinação selecionada).
[0510] Administrado "em combinação" ou "coadministração," como usado no presente documento, significa que dois ou mais tratamentos diferentes são administrados a um indivíduo durante a aflição do indivíduo com uma afecção médica (por exemplo, um distúrbio neoplásico). Por exemplo, em algumas modalidades, os dois ou mais tratamentos são administrados após o indivíduo ser diagnosticado com uma doença ou distúrbio, e antes de a doença ou distúrbio ser curado ou eliminado, ou quando um indivíduo é identificado como estando em risco, porém antes de o indivíduo desenvolver sintomas da doença. Em algumas modalidades, a administração de um tratamento ainda está ocorrendo quando a administração do segundo tratamento começa, de modo que haja sobreposição. Em algumas modalidades, o primeiro e o segundo tratamentos são iniciados ao mesmo tempo. Esses tipos de administração são, às vezes, chamados no presente documento de administração "simultânea", "conjunta" ou "concomitante". Em outras modalidades, a administração de um tratamento termina antes de a administração do segundo tratamento começar. Este tipo de administração é, às vezes, chamada no presente documento de administração "sucessiva" ou "sequencial".
[0511] Em algumas modalidades, os dois tratamentos (por exemplo, um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e um inibidor de ponto de verificação) estão compreendidos na mesma composição. Tais composições podem ser administradas de qualquer forma adequada e por qualquer via adequada. Em outras modalidades, os dois tratamentos (por exemplo, um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e um inibidor de ponto de verificação) são administrados em composições separadas, em qualquer forma adequada e por qualquer via adequada. Por exemplo, em algumas modalidades, uma composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC e uma composição que compreende um inibidor de ponto de verificação podem ser administradas simultaneamente ou sequencialmente, em qualquer ordem em diferentes pontos no tempo; em ambos os casos, os mesmos devem ser administrados em um intervalo de tempo suficientemente curto de modo a fornecer o efeito terapêutico ou profilático desejado.
[0512] Em modalidades de administração simultânea ou sequencial, o tratamento pode ser mais eficaz devido à administração combinada. Em algumas modalidades, o primeiro tratamento é mais eficaz, por exemplo, um efeito equivalente é observado com menos do primeiro tratamento (por exemplo, com uma dose mais baixa), do que poderia ser observado se o primeiro tratamento fosse administrado na ausência do segundo tratamento. Em algumas modalidades, o primeiro tratamento é mais eficaz de modo que a redução em um sintoma, ou outro parâmetro associado à doença ou distúrbio, seja maior do que poderia ser observado com o primeiro tratamento administrado na ausência do segundo tratamento. Em outras modalidades, uma situação análoga é observada com o segundo tratamento. Em algumas modalidades, o benefício de terapia de combinação (por exemplo, o efeito sobre pelo menos um sintoma ou o risco/taxa de progressão da doença) é aditivo. Em algumas modalidades, o benefício de terapia de combinação é superaditivo.
[0513] Em várias modalidades, a presente revelação fornece um método de tratamento de um indivíduo com ou suspeito de ter um distúrbio neoplásico, administrando-se ao indivíduo uma quantidade eficaz de um modulador de splicing de herboxidieno, um ADC ou uma composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC; e pelo menos uma terapia adicional (por exemplo, uma terapia de inibidor de ponto de verificação, uma citocina ou análogo de citocina, uma vacina de neoantígeno, CAR-T). Em algumas modalidades, a administração do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição induz pelo menos um neoantígeno e/ou uma resposta de células T. Em algumas modalidades, a administração do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição induz uma resposta imunológica de RNA de fita dupla. Em algumas modalidades, a administração do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição induz a morte celular imunogênica. Em algumas modalidades, a pelo menos uma terapia adicional pode compreender pelo menos uma, pelo menos duas, pelo menos três, pelo menos quatro ou pelo menos cinco terapias adicionais. Por exemplo, em algumas modalidades, um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição pode ser administrado em combinação com duas terapias de ponto de verificação, ou seja, usando dois inibidores de ponto de verificação diferentes. Em algumas outras modalidades, um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição pode ser administrado em combinação com uma terapia de inibidor de ponto de verificação e uma vacina de neoantígeno.
[0514] Em algumas modalidades de terapia de combinação, a quantidade administrada do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição e/ou a pelo menos uma terapia adicional é reduzida em 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90%, em comparação com uma dosagem padrão do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição e/ou a pelo menos uma terapia adicional. Em algumas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição e/ou a pelo menos uma terapia adicional é administrada pelo menos 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90%, menos frequentemente, em comparação com um regime de dosagem padrão do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição e/ou a pelo menos uma terapia adicional. Em algumas modalidades, a quantidade e/ou dosagem administrada do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição e/ou a pelo menos uma terapia adicional resulta em toxicidade sistêmica mais baixa e/ou tolerância aumentada.
[0515] Em algumas modalidades, a administração do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é iniciada antes da administração da pelo menos uma terapia adicional. Em algumas modalidades, a administração do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é iniciada após a administração da pelo menos uma terapia adicional. Em algumas modalidades, a administração do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é iniciada concomitantemente com a administração da pelo menos uma terapia adicional.
[0516] Em algumas modalidades, a administração do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é repetida pelo menos uma vez após a administração inicial. Em algumas modalidades, a quantidade do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição usada para administração repetida é reduzida em comparação com a quantidade usada para a administração inicial. Em algumas modalidades, a quantidade do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição usada para administração repetida é reduzida em comparação com uma dosagem padrão do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição. Em algumas modalidades, a quantidade do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição usada para administração repetida é reduzida em 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90%, em comparação com uma dosagem padrão do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição.
[0517] Em algumas modalidades, a administração da pelo menos uma terapia adicional é repetida pelo menos uma vez após a administração inicial. Em algumas modalidades, a quantidade da pelo menos uma terapia adicional usada para administração repetida é reduzida em comparação com a quantidade usada para a administração inicial. Em algumas modalidades, a quantidade da pelo menos uma terapia adicional usada para administração repetida é reduzida em comparação com uma dosagem padrão da pelo menos uma terapia adicional. Em algumas modalidades, a quantidade da pelo menos uma terapia adicional usada para administração repetida é reduzida em 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90%, em comparação com uma dosagem padrão da pelo menos uma terapia adicional.
[0518] Em algumas modalidades, a administração repetida do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é concomitante com a administração repetida da pelo menos uma terapia adicional. Em algumas modalidades, a administração repetida do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é sequencial ou escalonada com a administração repetida da pelo menos uma terapia adicional.
[0519] Em várias modalidades, a presente revelação fornece um método de tratamento de um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico, pela administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um modulador de splicing de herboxidieno, um ADC ou uma composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC; e uma terapia com inibidor de ponto de verificação. Em algumas modalidades, a terapia com inibidor de ponto de verificação compreende administrar pelo menos um inibidor de ponto de verificação. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao pelo menos um inibidor de ponto de verificação quando administrado sozinho. Em algumas modalidades, um indivíduo pode ser considerado não-responsivo ou pouco responsivo ao pelo menos um inibidor de ponto de verificação como determinado com o uso, por exemplo, dos Critérios de Resposta imunorrelacionados (irRC) e/ou dos Critérios de Avaliação de Resposta imunorrelacionados em Tumores Sólidos (irRECIST). Consultar, por exemplo, Wolchok et al. (2009) Clin Cancer Res. 15(23):7412-20; Bohnsack et al. "Adaptation of the Immune-Related Response Criteria:irRECIST" (Abstract 4958) ESMO 2014. Critérios exemplificativos podem incluir aqueles usados na técnica para definir quando os tumores em pacientes com câncer melhoram ("respondem"), permanecem os mesmos ("estabilizam") ou pioram ("progridem") durante o tratamento, quando o tratamento que está sendo avaliado é um fármaco imuno-oncológico (por exemplo, um inibidor de ponto de verificação). Em algumas modalidades, um indivíduo pode ser considerado intolerante ao pelo menos um inibidor de ponto de verificação se o indivíduo apresentar um ou mais eventos adversos (grau 2+) identificados para o respectivo inibidor de ponto de verificação (por exemplo, ipilimumabe). Em algumas modalidades, por exemplo, um indivíduo pode ser considerado intolerante ao tratamento com ipilimumabe se o indivíduo apresentar um ou mais eventos adversos selecionados dentre enterocolite, hepatite, dermatite (incluindo necrólise epidérmica tóxica), neuropatia e endocrinopatia (Yervoy® (ipilimumab) FDA Label Supplement, 2018).
[0520] Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é alvejado em PD1/PDL1, CTLA4, OX40, CD40, LAG3, TIM3, GITR e/ou KIR. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é alvejado em CTLA4, OX40, CD40 e/ou GITR. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é alvejado com um anticorpo inibitório ou outra molécula inibitória similar. Em algumas outras modalidades, o inibidor de ponto de verificação é alvejado com um anticorpo agonista ou outra molécula inibitória similar. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação compreende um inibidor de trajetória de antígeno associado a linfócito T citotóxico 4 (CTLA4). Em algumas modalidades, o inibidor de CTLA4 é um anticorpo anti-CTLA4. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CTLA4 é ipilimumabe. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação compreende um inibidor de trajetória de morte programada 1 (PD1). Em algumas modalidades, o inibidor de PD1 é um anticorpo anti-PD1. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD1 é nivolumabe. Em algumas modalidades, o inibidor de PD1 é um anticorpo anti-PDL1. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PDL1 é atezolizumabe. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação compreende um inibidor de CTLA4 e um inibidor de PD1. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é alvejado em OX40. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é alvejado em CD40. Em algumas modalidades, o inibidor de ponto de verificação é alvejado em GITR. Em algumas modalidades, o benefício da terapia de combinação (por exemplo, o efeito sobre pelo menos um sintoma ou o risco/taxa de progressão da doença) com um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e um inibidor de ponto de verificação (por exemplo, um anticorpo ou molécula alvejada por CTLA4-, PD1/PDL1-, OX40-, CD40- e/ou GITR) é aditivo. Em algumas modalidades, o benefício da terapia de combinação com um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e um inibidor de ponto de verificação (por exemplo, um CTLA4-, PD1 / PDL1, OX40-, CD40- e/ou anticorpo ou molécula alvejada a GITR) é superaditivo (ou seja, sinérgico).
[0521] Em várias modalidades, a presente revelação fornece um método de tratamento de um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico, pela administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um modulador de splicing de herboxidieno, um ADC ou uma composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC; e uma terapia com citocina ou análogo de citocina. Em algumas modalidades, a terapia com citocina ou análogo de citocina compreende administrar pelo menos uma citocina ou análogo de citocina. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo à pelo menos uma citocina ou análogo de citocina quando administrado sozinho.
[0522] Em algumas modalidades, a citocina ou análogo de citocina compreende um intensificador de célula T. Em algumas modalidades, a citocina ou análogo de citocina compreende IL-2, IL-10, IL-12, IL- compreende IL-2, IL-10, IL-12 e/ou IL-15. Em algumas modalidades, a administração da citocina ou análogo de citocina aumenta a iniciação de células T após a administração de um modulador de splicing de herboxidieno, conjugado de anticorpo-fármaco ou composição devido à indução e apresentação de neoantígenos.
[0523] Em algumas modalidades, a citocina ou análogo de citocina compreende IL-2. Em algumas modalidades, IL-2 reforça os sinais para as células efetoras promovendo sua expansão (Rosenberg (2014) J Immunol. 192(12):5451-8). Em algumas modalidades, a citocina ou análogo de citocina compreende IL-10. Em algumas modalidades, IL-10 reforça a iniciação e a ativação de célula T CD8+ (Mumm et al. (2011) Cancer Cell 20(6):781-96). Em algumas modalidades, a citocina ou análogo de citocina compreende IL-12. Em algumas modalidades, IL-12 liga as respostas imunológicas inatas e adaptativas para reforçar a iniciação e o alvejamento antígeno-específico (Tugues et al. (2015) Cell Death Differ. 22(2):237 a 246). Em algumas modalidades, a citocina ou análogo de citocina compreende IL-15. Em algumas modalidades, IL-15 reforça a iniciação e/ou ativação de célula T-efetora (CD8). Em algumas modalidades, -efetora de de célula T-
[0524] Em algumas modalidades, uma dose inicial de um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição é administrada a um indivíduo para reativar o splicing aberrante e a produção de peptídeos de neoantígeno. Após um período de tempo para permitir a produção de proteína e apresentação de antígeno, em algumas modalidades, o indivíduo é, então, administrado com uma dose inicial de uma citocina ou análogo de citocina para reforçar e/ou aumentar a iniciação e expansão de células T efetoras. Em algumas modalidades, o período de espera entre as doses de modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e citocina ou análogo de citocina é de cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4, cerca de 5, cerca de 6 ou cerca de 7 dias. Em algumas modalidades, o período de espera é de entre cerca de 3 dias e cerca de 5 dias. Em algumas modalidades, a citocina ou análogo de citocina é IL-2, IL-10, IL-12, IL- benefício terapêutico da combinação de um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e uma citocina ou análogo de citocina pode ser aditivo ou superaditivo.
[0525] Em algumas outras modalidades, uma dose inicial de uma citocina ou análogo de citocina é administrada a um indivíduo para reforçar e/ou aumentar a iniciação e expansão de células T efetoras. Após um período de espera, em algumas modalidades, o indivíduo é, então, administrado com uma dose inicial de um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição para ativar splicing aberrante e produção de peptídeos de neoantígeno. Em algumas modalidades, o período de espera entre as doses de citocina ou análogo de citocina e modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição é de cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4, cerca de 5, cerca de 6 ou cerca de 7 dias. Em algumas modalidades, o período de espera é de entre cerca de 3 dias e cerca de 5 dias. Em algumas modalidades, a citocina ou análogo de citocina é IL-2, IL-10, IL-12, IL- modalidades, o benefício terapêutico da combinação de uma citocina ou análogo de citocina e um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição pode ser aditivo ou superaditivo.
[0526] Em algumas modalidades, após um período para permitir a iniciação e expansão de células T, o indivíduo é, então, administrado com uma segunda dose ou dose subsequente do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição para ativar a reapresentação de peptídeos de neoantígeno. Em algumas modalidades, o período de espera entre uma dose inicial de uma citocina ou análogo de citocina e uma segunda dose ou dose subsequente de um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição é de cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4 ou cerca de 5 semanas. Em algumas modalidades, o período de espera é de cerca de 3 semanas. Em algumas modalidades, doses subsequentes da citocina ou análogo de citocina podem ser administradas, por exemplo, intercaladas entre as doses subsequentes do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição. Após uma segunda dose ou dose subsequente do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição, em algumas modalidades, o sistema imunológico pode interagir com as células tumorais que apresentam neoantígenos e/ou provocar o extermínio de células tumorais. Em algumas modalidades, a dosagem do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição após este regime de tratamento inicial exemplificativo pode ser pulsátil, ou seja, o modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição pode ser dosado em intervalos prolongados (por exemplo, a cada 4 semanas, a cada 5 semanas, aproximadamente a cada 6 semanas) para permitir a apresentação do antígeno, interação de células T e/ou extermínio de células tumorais e/ou recuperação da população de células T de memória.
[0527] Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma carga mutacional não sinônima de cerca de 150 mutações ou menos. Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma carga mutacional não sinônima de cerca de 100 mutações ou menos. Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma carga mutacional não sinônima de cerca de 50 mutações ou menos. Em algumas modalidades, o indivíduo tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico, por exemplo, uma malignidade hematológica ou um tumor sólido. Em algumas modalidades, a malignidade hematológica é selecionada dentre uma malignidade de célula B, uma leucemia, um linfoma e um mieloma. Em algumas modalidades, a malignidade hematológica é selecionada dentre leucemia mieloide aguda e mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, o tumor sólido é selecionado dentre câncer de mama, câncer gástrico, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão, câncer uterino, carcinoma do ducto salivar, melanoma, câncer de cólon, câncer cervical, câncer pancreático, câncer de rins, câncer colorretal e câncer de esôfago. Em algumas modalidades, o tumor sólido é selecionado dentre câncer de mama positivo para HER2, adenocarcinoma gástrico, câncer de próstata e osteossarcoma. Combinação de Modulador de Splicing de Herboxidieno / ADC e Vacina de Neoantígeno:
[0528] Em várias modalidades, um paciente com câncer, conforme descrito no presente documento, pode ser tratado com uma combinação de um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e uma vacina de neoantígeno. Sem se limitar à teoria, as vacinas, usadas individualmente ou em combinação com moléculas de inibidor de ponto de verificação imunológico (ICI), revelaram ser promissoras em ensaios iniciais (Ott et al. (2017) Nature 547 (7662): 21721; Sahin et al. (2017) Nature 547 (7662): 2226), mas geralmente exigem sequenciamento de mutações tumorais em pacientes (Ott et al. (2017) Nature 547 (7662): 217-21; Aldous e Dong (2018) Bioorg. Med. Chem. 26 (10): 2842-9). Com isso, as vacinas são frequentemente dependentes de números suficientes de mutações não sinônimas que são antigênicas. Em geral, os tumores com carga de mutação muito baixa fornecem poucos antígenos candidatos e aqueles com crescimento rápido fornecem tempo limitado para identificar e produzir vacinas específicas para o paciente.
[0529] Até o momento, tentativas de desenvolver vacinas que poderiam ser amplamente imunogênicas em uma grande porcentagem de pacientes se concentraram em proteínas que são frequentemente mutadas, ectopicamente superexpressas ou amplificadas e/ou que existem como proteínas "próprias" dentro do organismo. Além disso, essas proteínas são frequentemente expressas em tecidos imunologicamente restritos (por exemplo, marcadores neuronais expressos em tipos de tumores neuroendócrinos), enquanto outros podem ser normalmente expressos durante a embriogênese (por exemplo, antígenos oncofetais). Dessa forma, a utilidade de vacinas que usam tais proteínas como antígenos é frequentemente limitada a linhagens ou subconjuntos de tumores específicos em que um ou mais dos antígenos são apresentados. A utilidade da vacina também precisaria ser confirmada pelo sequenciamento de amostras de tumor de pacientes, o que pode ser demorado.
[0530] "próprias", o sistema imunológico provavelmente estaria preparado para reconhecer as mesmas como "próprias" e, dessa forma, não responderia. Ou, alternativamente, se o sistema imunológico tiver capacidade de produzir uma resposta efetora a esses antígenos, isso pode levar a efeitos colaterais no alvo em tecidos em que o antígeno pode ser expresso. Em ambos os casos, um dos principais desafios é que a maioria dos peptídeos antigênicos é derivada de o curso de tumorigênese, porém que não exercem uma função crítica na sobrevivência ou proliferação contínuas do próprio tumor). Como tal, esses genes podem ser silenciados sem consequências significativas para a progressão do tumor e, dessa forma, permitiriam que um tumor "evitasse" uma resposta imunológica contra esses antígenos. Sem se ater à teoria, este mecanismo pode exercer uma função na evolução do tumor, em que mutações aleatórias que são fortemente antigênicas são frequentemente "selecionadas contra" pelo tumor durante os estágios iniciais da tumorigênese (Dunn et al. (2004) Annu. Rev. Immunol. 22:329-60).
[0531] Além disso, certas evidências também indicam que a apresentação de antígeno crônica e a estimulação imune podem levar à anergia e exaustão das células imunes (Pardoll (2012) Nat. Rev. Cancer 12(4):252-64). Esses fenótipos fundamentam a lógica terapêutica por trás dos tratamentos atuais de ICI, visto que o ICI demonstrou reprimir o fenótipo de -PD1/PD-L1) ou facilitar respostas de células imunes -CTLA4 -CTLA4, um certo subconjunto de pacientes foi relatado por exibir eventos adversos imunológicos graves que podem ser atribuídos à promoção da ativação de células T e à quebra dos mecanismos de tolerância imunológica que restringem as respostas imunológicas autorreativas.
[0532] Ambas essas abordagens (ou seja, ativar ou acentuar as respostas imunológicas de novo aos neoantígenos ou desreprimir a anergia ou exaustão das respostas imunológicas existentes) estão ligadas a uma ativação imune crônica. Como tal, essas abordagens são sensíveis a anergia, edição e outros mecanismos mediados por tumor projetados para suprimir o envolvimento imunológico.
[0533] Em contrapartida, o tratamento com um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição revelada no presente documento pode induzir uma resposta imunológica a sequências que representam neoantígenos. Em algumas modalidades, a apresentação de neoantígenos fornece o sistema imunológico adaptativo com mais alvos divergentes com os quais interagem e ativam. Em algumas modalidades, a capacidade de um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição de induzir agudamente splicing alternativo e os neoantígenos resultantes podem reduzir o risco de fadiga do sistema imunológico devido à exposição crônica a neoantígenos ativados por mutação e/ou limitar a capacidade de as células tumorais se adaptarem para evitar a terapia. Em algumas modalidades, a administração de um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição em combinação com uma vacina de neoantígeno aumenta a resposta imunológica aos neoantígenos produzidos pelo modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição. Em algumas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição é administrado antes, durante ou após a vacinação. Em algumas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e/ou vacina pode ser administrado uma ou mais de uma vez durante o curso de tratamento. Em algumas modalidades, a vacina é administrada uma vez e o modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição é administrado mais de uma vez durante o curso de tratamento. Em algumas modalidades, a vacina é administrada uma vez e, então, um ou mais reforçadores são administrados durante o curso de tratamento.
[0534] Como usado no presente documento, o termo "vacina de neoantígeno" se refere a uma amostra agrupada de um ou mais peptídeos de neoantígenos imunogênicos ou mRNAs, por exemplo, pelo menos dois, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco ou mais peptídeos de neoantígenos. O termo "vacina" se refere a uma composição para gerar imunidade para a profilaxia e/ou tratamento de uma doença (por exemplo, um distúrbio neoplásico, por exemplo, uma malignidade hematológica ou tumor sólido). Consequentemente, vacinas são medicamentos que compreendem agentes imunogênicos e se destinam a ser usados em seres humanos ou animais para gerar defesas imunológicas específicas e substâncias protetoras após a vacinação. Uma vacina de neoantígeno pode incluir adicionalmente um carreador, diluente, excipiente e/ou adjuvante farmaceuticamente aceitável.
[0535] Como usado no presente documento, o termo "imunogênico" se refere a qualquer agente ou composição que possa elicitar uma resposta imunológica, por exemplo, uma resposta de células T. A resposta imunológica pode ser mediada por anticorpo ou mediada por células, ou ambas.
[0536] Em algumas modalidades, um paciente recebe um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e, então, recebe um peptídeo ou vacina de mRNA de neoantígeno conhecido para aumentar a resposta imunológica intensificada aos neoantígenos produzidos pelo modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição. Em algumas outras modalidades, um paciente recebe um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e é analisado quanto a neoantígenos produzidos pelo tratamento. Subsequentemente, um ou mais desses neoantígenos são usados para criar uma vacina personalizada que é administrada ao paciente. Em cada uma dessas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e/ou peptídeo ou vacina de mRNA pode ser administrado ao paciente uma vez ou repetidamente.
[0537] Em várias modalidades, um neoantígeno adequado para uma vacina pode ser identificado examinando-se um painel de transcrições com splicing alterado e expressão robusta de uma ou mais amostras de tecido em um paciente (por exemplo, de uma biópsia de tumor). Em algumas modalidades, sequências de proteínas variantes são identificadas na amostra examinada com base na tradução através da junção de mRNA submetida a splicing de forma aberrante enquanto retêm porções da sequência de proteínas (até 12 aminoácidos) que flanqueiam as alterações de aminoácido geradoras de junção. Em algumas modalidades, os fragmentos de peptídeo geradores de junção são examinados quanto à ligação de alta afinidade a alelos MHC1, por exemplo, usando uma ferramenta como NetMHC1 (Nielsen et al. (2003) Protein Sci 12(5):1007-17; Andreatta e Neilsen (2016) Bioinformatics 32(4):511-7). Estes resultados permitem a filtragem dos neopeptídeos para aqueles que são ligantes de alta afinidade previstos para uma composição de alelo HLA de paciente exclusivo, bem como a montagem de grupos de neopeptídeos previstos para se ligarem amplamente aos alelos HLA que estão presentes com altas frequências em diferentes populações (Maiers et al. (2007) Hum Immunol 68(9):779 a 788). Em várias modalidades, os neopeptídeos identificados são, então, formulados como uma vacina, por exemplo, por conjugação a um carreador ou adjuvante adequado (Ott et al. (2017) Nature 547(7662):217-21), ou para entrega como um mRNA (Sahin et al. (2017) Nature 547(7662):222-6).
[0538] Em algumas modalidades, o neoantígeno selecionado é baseado em uma triagem de resposta de tumor de uma patente individual ao modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição para identificar um ou mais neoantígenos resultantes do tratamento para uso na vacinação subsequente. Em outras modalidades, um neoantígeno é escolhido, por exemplo, com base na triagem de um painel de amostras de pacientes diferentes para identificar neoantígenos comuns produzidos pelo modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e, então, usado como uma vacina universal para futuros pacientes.
[0539] Sem se ater à teoria,, em algumas modalidades, o uso de uma vacina de neoantígeno universal poderia evitar a necessidade de sequenciar e analisar a situação de mutação exclusiva do tumor de cada paciente, pois os neoantígenos escolhidos não são dependentes de mutação de tumor, mas em vez disso, imitam um neoantígeno produzido por um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e geralmente reconhecido pelo corpo como estranho. Além disso, em algumas modalidades, o uso de uma vacina de neoantígeno pode ser particularmente eficaz, uma vez que as células tumorais de um paciente podem ser mais propensas a sofrer mutação, evitando a produção de um ou mais neoantígenos que são dependentes da mutação tumoral, em comparação com aqueles que imitam um neoantígeno produzido por um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição. Isso pode permitir a formulação de uma vacina a granel que seria amplamente imunogênica para uma grande porcentagem de pacientes, acelerando o início de um regime de tratamento. Os pacientes podem ser vacinados de acordo com os esquemas descritos no presente documento e, antes da conclusão da vacinação, podem ser adicionalmente tratados com um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição, por exemplo, para induzir a expressão dos peptídeos de neoantígeno. Em algumas modalidades, os pacientes podem ser administrados com um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição antes, ao mesmo tempo ou após a vacinação. Em algumas modalidades, os pacientes são administrados com um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição, examinados quanto a um ou mais neoantígenos encontrados em um painel de neoantígenos universais e vacinados com uma vacina de neoantígenos universais que compreende pelo menos um neoantígeno universal identificado no indivíduo. Em algumas modalidades, os pacientes podem ser administrados com um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição uma ou mais de uma vez após a vacinação. O modulador de splicing de herboxidieno ou ADC ou composição e/ou vacina pode ser administrado uma ou mais de uma vez durante o curso do tratamento.
[0540] Em várias modalidades, uma vacina pode compreender um ou mais de um peptídeo ou mRNA de neoantígeno. Em várias modalidades, uma vacina pode compreender um ou mais de um peptídeo ou de neoantígeno longo. Tais peptídeos de neoantígeno "longos", em várias modalidades, são submetidos à internalização, processamento e apresentação cruzada eficientes em células apresentadoras de antígenos profissionais como células dendríticas. De modo similar, peptídeos de vacina longos revelaram, em outros contextos, induzir células T citotóxicas em seres humanos (Melief e van der Burg (2008) Nat Rev Cancer 8(5):351-60). Em várias modalidades, um peptídeo de neoantígeno é estendido para compreender a própria sequência de peptídeos de neoantígeno além das sequências de aminoácidos flanqueadoras. Em várias modalidades, a sequência de peptídeos estendida facilita a absorção de proteína por células apresentadoras de antígenos, por exemplo, células dendríticas. Em várias modalidades, a sequência de peptídeos estendidas permite a apresentação de antígeno e iniciação de células T eficientes em modelos com isótipos de HLA diferentes. Em várias modalidades, uma sequência de peptídeos de neoantígeno mais longa e/ou sequência de peptídeos estendida exibe absorção aumentada por células apresentadoras de antígenos (por exemplo, células dendríticas), apresentação de antígeno aumentada e/ou iniciação de células T aumentada, em comparação com uma sequência de peptídeos de neoantígeno mais curta e/ou sequência de peptídeos mais curta (por exemplo, uma sequência de peptídeos menor que cerca de 10 ou menor que cerca de 5 aminoácidos de comprimento). Em algumas modalidades, um peptídeo de neoantígeno longo está na faixa de cerca de 5 a cerca de 50 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, um peptídeo de neoantígeno longo está na faixa de cerca de 10 a cerca de 50 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o pelo menos um peptídeo de neoantígeno está na faixa de cerca de 10 a cerca de 35 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, um peptídeo de neoantígeno longo está na faixa de cerca de 15 a cerca de 25 aminoácidos de comprimento.
[0541] Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos e/ou porção antigênica está na faixa de cerca de 10 a cerca de 35 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígeno e/ou porção antigênica está na faixa de cerca de 15 a cerca de 25 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígeno e/ou porção antigênica está na faixa de cerca de 10 a cerca de 20 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos e/ou porção antigênica não se sobrepõe ou consiste exclusivamente na sequência peptídica canonical (por exemplo, qualquer uma das sequências peptídicas canonicais exemplificativas sublinhadas na Tabela 8).
[0542] As sequências de aminoácidos de peptídeos de neoantígenos longos exemplificativos são apresentadas na Tabela 8.
[0543] Esses peptídeos de neoantígenos exemplificativos são gerados após a administração de ADCs contendo moduladores de splicing de pladienolida, entretanto, dado o mecanismo de ação similar (ou seja, mecanismos de modulação de splicing similares), peptídeos de neoantígenos similares podem ser produzidos por moduladores de splicing de herboxidieno. TABELA 7. NEOPEPTÍDEOS SEQ ID Tipo de Observado Neopeptídeo Junção (HG19) Gene NO evento em chr12:49663470- Retenção 1 SPTLPPRSL 37 TUBA1C H1568 49663610:+ de íntrons chr12:42729776- Salto de 2 HPSIKRGLSSL 38 PPHLN1 H1568 42781257:+ éxons 3 LLLPHHVL 39 chr12:49663470- TUBA1C Retenção H1568
49663610:+ de íntrons chr14:35182767- Retenção 4 RTAPGVRPPF 40 CFL2 H1568 35183743:- de íntrons chr10:28822963- Retenção 5 RPQKSIQAL 41 WAC H1568 28823162:+ de íntrons chr17:80009840- Retenção 6 APAPPPLPA 42 GPS1 H1568 80011149:+ de íntrons chr7:55087058- Retenção 7 RPRPSFPVSL 43 EGFR H1568 55134942:+ de íntrons chr11:57472287- Retenção 8 RPKHGDGFSL 44 MED19 H1568 57472444:- de íntrons chr7:75932393- Retenção 9 GPAPGKTGL 45 HSBP1 H1568 75933118:+ de íntrons chr1:53480715- Salto de 10 EAARKGNSL 46 SCP2 H1568 53504588:+ éxons chr9:72897499- Salto de 11 RIKEKIEEL 47 SMC5 H1568 72912881:+ éxons chr1:28531860- Salto de 12 EIKKRFRQF 48 DNAJC8 H1568 28541450:- éxons chr11:102272937- Salto de 13 HESAAMAET 49 TMEM123 HCC1954 102323254:- éxons chr1:153610924- Salto de 14 ALKLKQVGV 50 CHTOP H1568 153617539:+ éxons chr13:41323417- Salto de 15 DLKKRHITF 51 MRPS31 H1568 41331008:- éxons chr1:41213277- Salto de 16 DVKRNDIAM 52 NFYC H1568 41218822:+ éxons chr6:149718900- Salto de 17 IPSDHILTPA 53 TAB2 H1568 149720239:+ éxons chr11:61197654- Salto de 18 TVFSTSSLK 54 SDHAF2 H1568 61213412:+ éxons chr5:137892555- Retenção 19 ITSCLLNF 55 HSPA9 H1568 137893090:- de íntrons chr7:75677544- Retenção 20 RASPVRGQL 56 MDH2 H1568 75677893:+ de íntrons chr1:36923582- Salto de 21 VVRKPVIAL 57 MRPS15 H1568 36929406:- éxons chr6:31750622- Retenção 22 LLSEKKKIS 58 VARS H1568 31750872:- de íntrons chr19:3573798- Retenção 23 APASKPRPRL 59 HMG20B H1568 3574380:+ de íntrons chr19:33076813- Salto de 24 RYGQLSEKF 60 PDCD5 HCC1954 33078158:+ éxons chr3:53920961- Salto de 25 VYISNVSKL 61 SELK HCC1954 53925796:- éxons chr2:85133241- 26 LPTKETPSF 62 TMSB10 HCC1954 85133394:+ chr17:80223672- Retenção 27 GEAPPPPPA 63 CSNK1D HCC1954 80231181:- de íntrons chr17:27804724- Salto de 28 LEEISKQEI 64 TAOK1 HCC1954 27807385:+ éxons chr4:2886393- Salto de 29 IYNHITVKI 65 ADD1 HCC1954 2896308:+ éxons
[0544] As sequências de proteínas dos vinte e nove neopeptídeos mencionados na Tabela 7 podem ser estendidas. A sequência de proteínas estendida incorpora as próprias sequências de neopeptídeos além de flanquear as sequências de aminoácidos. A sequência de proteínas estendida facilita a absorção de proteína por células dendríticas e permite a apresentação de antígeno e iniciação de células T em modelos com isótipos de HLA diferentes. As sequências de aminoácidos dos vinte e nove neopeptídeos estendidos são apresentados na Tabela 8. TABELA 8. SEQUÊNCIAS DE AMINOÁCIDOS DE NEOPEPTÍDEOS
ESTENDIDOS Sequência de aminoácidos de neopeptídeos Gene SEQ ID NO estendidos* TUBA1C 66 VDLEPTVIGELTSVTQVRSQGAGTGGLSWGGS
AGHSPTLPPRSLSLLLLPHHVLQMKFALALTASS STLSNSSQARKMLPITMPEGTTPLARRSLTSCW TEFASWLTSAPVFRASWFSTALVGELVLGSPR
CSWNVSQLIMARSPSWSSPFTRRPRFPQL PPHLN1 67 APPRSHPSIKRGLSSL CFL2 68 MVRRARWPGGRGEARKAPRTAPGVRPPF WAC 69 WVNCLFVSGRAAAGGGGGGAVPPYLELAGPP
FLLLTLIRIGLGRRSGRAGGRAGTQCGGERGPG FAAFRPLRPFRRLRVCAVCVRGSALGRSVGLP RGGAAGAPFSSSPAPHPRRVLCRCLLFLFFSC HDRRGDSQPYQVPAEAGVEGLEGAGGGREGL LLERRPQKSIQALRCNTSETSTADPLKIPGLVPL
ALSSKV GPS1 70 MPLPVQVFNLQVTSRGRPGPPRPRAPRHWGR
AEVEQGRGACARSRSGTLRAGPPRAARVGGC RAEGASPPWLRAAIGGRRAAPAPPPLPAAHGR
GSRPPRR EGFR 71 QPAQPRTGAPARRPRPRPSFPVSLRSAAPPTG
TAGGTGRFVLRPGESGAGGGGDAWDTGLQAR RGTAAGTSGAPNRSQLSSLTFPAQLRRIGVSG RKPGAGGRLGPGSRTCAPRCLPRARRGPGAH PRGGRCPPAETALFREAEEGTQKYSLPSDPAG
QAAF MED19 72 FRLHTGPVSPVGGRRQMGRPKHGDGFSLQVC
SFIMEQNG HSBP1 73 GVVEITGEPPCSCRGEEEASRAGRAGGVRLKR
GSRGPGELNVGPAPGKTGLLIPLLRNWECGSL
LRALSAL SCP2 74 KMGFPEAARKGNSL SMC5 75 LEARIKEKIEELQQALI DNAJC8 76 EIKKRFRQFKQAVYKQ TMEM123 77 AHESAAMAETLQHVPS CHTOP 78 NRPSVQAALKLKQVGV MRPS31 79 KTDDLKKRHITFTLGCGIC NFYC 80 MKLDEDVKRNDIAMAI TAB2 81 NSISQIPSDHILTPALFITFMTILDL SDHAF2 82 TVFSTSSLKLNQPQKYLKMKSWPC HSPA9 83 AEEDRRKKVITSCLLNFNLSKAQS MDH2 84 RSFSTSAQVGQTRGGLQAEAPRPGPRASPVR
GQL MRPS15 85 RGYVVRKPVIALSVKI VARS 86 VDMDFGTGGQGAGPVGRGKDWSCTLAVHLLS
EKKKISFSQIDRAWGGSQGTVLDKWGPGVVSE
LHPSAKEVSVGRNSVESLMTWAS HMG20B 87 EKGSHEEEVRVPALSWGRPRAPAPASKPRPRL
DLNCLWLRPQPIFLWKLRPRPVPAATPLTGPLP
L PDCD5 88 RYGQLSEKFNRRKVMDS SELK 89 MVYISNVSKLCFSKM
TMSB10 90 NTLPTKETPSFLLNPHTSWVPRPHREAPRLRVG
VAAPLQRPLPALHSH CSNK1D 91 FGDIYLGEAPPPPPAARRPGPCGCQDQARSRK
EVVAPAGSPRKSRHRRIVARTQRPLG TAOK1 92 GSASDLLEEISKQEISF ADD1 93 QLIYNHITVKINLQGD * O sublinhado indica aminoácidos derivados do quadro de leitura aberto de transcrição canonical (ou seja, a sequência de peptídeos canonical).
[0545] Como usado no presente documento, um peptídeo de neoantígeno ou vacina de mRNA abrange o uso de um fragmento de um peptídeo de neoantígeno ou seu mRNA de codificação, desde que esse fragmento retenha potencial imunogênico.
[0546] Em algumas modalidades, uma vacina de neoantígeno compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno. Em algumas modalidades, uma vacina de neoantígeno compreende pelo menos 2, pelo menos 3, pelo menos 4, pelo menos 5, pelo menos 6, pelo menos 7, pelo menos 8, pelo menos 9, pelo menos 10, pelo menos 12, pelo menos 15 ou pelo menos 20 peptídeos de neoantígeno. Em algumas modalidades, o peptídeo (ou peptídeos) de neoantígeno está na faixa de cerca de 5 a cerca de 50 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o peptídeo (ou peptídeos) de neoantígeno está na faixa de cerca de 10 a cerca de 50 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o pelo menos um peptídeo de neoantígeno está na faixa de cerca de 10 a cerca de 35 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o peptídeo (ou peptídeos) de neoantígeno está na faixa de cerca de 15 a cerca de 25 aminoácidos de comprimento.
[0547] Em várias modalidades, a presente revelação fornece um método de tratamento de um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico, pela administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um modulador de splicing de herboxidieno, um ADC ou uma composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC; e uma vacina de neoantígeno. Uma vacina de neoantígeno pode ser, por exemplo, uma vacina de peptídeo ou de neoantígeno de mRNA. Em algumas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição é administrado antes da administração da vacina de neoantígeno. Em algumas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição é administrado após a administração da vacina de neoantígeno. Em algumas modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição é administrado concomitantemente com a administração da vacina de neoantígeno. Em algumas modalidades, a administração do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição é repetida pelo menos uma vez após a administração inicial. Em algumas modalidades, a quantidade do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição usada para administração repetida é reduzida em comparação com a quantidade usada para a administração inicial.
[0548] Em várias modalidades, a presente revelação fornece adicionalmente uma combinação que compreende um modulador de splicing de herboxidieno, um ADC ou uma composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC; e uma vacina de neoantígeno (por exemplo, uma vacina de neoantígeno universal) para uso no tratamento de um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico. Em algumas modalidades, a vacina de neoantígeno é um vacina de peptídeo ou neoantígeno de mRNA. Em algumas modalidades, a combinação compreende adicionalmente pelo menos uma terapia adicional. Em algumas modalidades, a pelo menos uma terapia adicional compreende pelo menos uma, pelo menos duas, pelo menos três, pelo menos quatro ou pelo menos cinco terapias adicionais.
[0549] Em várias modalidades, a presente revelação fornece adicionalmente um método de tratamento de um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico ao (a) administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um modulador de splicing de herboxidieno, um ADC ou uma composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC; (b) detectar um ou mais neoantígenos no indivíduo após a administração do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição; (c) comparar um ou mais neoantígenos com um painel de neoantígenos universais; e (d) administrar ao indivíduo uma vacina de neoantígeno universal que compreende pelo menos um neoantígeno universal presente no indivíduo. Em algumas modalidades, a vacina de neoantígeno universal é administrada individualmente ou em combinação com pelo menos uma terapia adicional. Em algumas modalidades, a pelo menos uma terapia adicional compreende pelo menos uma, pelo menos duas, pelo menos três, pelo menos quatro ou pelo menos cinco terapias adicionais.
[0550] Em algumas modalidades, a pelo menos uma terapia adicional compreende a administração repetida do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição. Em algumas modalidades, a administração repetida do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição é iniciada antes da administração da vacina de neoantígeno universal. Em algumas modalidades, a repetida do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição é iniciada após a administração da vacina de neoantígeno universal. Em algumas modalidades, a administração repetida do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição é iniciada concomitantemente com a administração da vacina de neoantígeno universal. Em algumas modalidades, a quantidade do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição usada para administração repetida é reduzida em comparação com a quantidade usada para a administração inicial. Em algumas modalidades, a quantidade do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição usada para a administração inicial e/ou repetida é reduzida em comparação com uma dosagem padrão do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição quando usado sem um tratamento de vacina. Em algumas modalidades, a quantidade do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição usada para administração inicial e/ou repetida é reduzida em 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90%, em comparação com uma dosagem padrão do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição.
[0551] Em algumas modalidades, a pelo menos uma terapia adicional compreende administrar um inibidor de ponto de verificação (por exemplo, qualquer um dos inibidores de ponto de verificação descritos no presente documento). Em algumas modalidades, a administração do inibidor de ponto de verificação é iniciada antes da administração da vacina de neoantígeno universal e/ou administração repetida do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição. Em algumas modalidades, a administração do inibidor de ponto de verificação é iniciada após a administração da vacina de neoantígeno universal e/ou repetida do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição. Em algumas modalidades, a administração do inibidor de ponto de verificação é iniciada concomitantemente com a administração da vacina de neoantígeno universal e/ou administração repetida do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição. Em algumas modalidades, a administração do inibidor de ponto de verificação é repetida pelo menos uma vez após a administração inicial. Em algumas modalidades, a quantidade do inibidor de ponto de verificação usada para administração repetida é reduzida em comparação com a quantidade usada para a administração inicial. Em algumas modalidades, a quantidade do inibidor de ponto de verificação usada para administração repetida é reduzida em comparação com uma dosagem padrão do inibidor de ponto de verificação. Em algumas modalidades, a quantidade do inibidor de ponto de verificação usada para administração repetida é reduzida em 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90%, em comparação com uma dosagem padrão do inibidor de ponto de verificação. Em algumas modalidades, o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao inibidor de ponto de verificação quando administrado sozinho.
[0552] Também são fornecidas no presente documento, em várias modalidades, vacinas de neoantígeno que compreendem pelo menos um peptídeo de neoantígeno ou pelo menos um mRNA de neoantígeno. Em algumas modalidades, uma vacina de neoantígeno compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno. Em algumas outras modalidades, uma vacina de neoantígeno compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno.
[0553] Também são fornecidos no presente documento, em várias modalidades, kits que compreendem um modulador de splicing de herboxidieno, um ADC ou uma composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC; e uma vacina de neoantígeno (por exemplo, uma vacina de neoantígeno universal). Em algumas modalidades, a vacina de neoantígeno é um vacina de peptídeo ou neoantígeno de mRNA. Em algumas modalidades, o kit compreende adicionalmente um ou mais componentes adicionais, incluindo, porém sem limitação: instruções de uso; outros agentes, por exemplo, um ou mais agentes terapêuticos adicionais; dispositivos, recipientes ou outros materiais para preparar o modulador de splicing, ADC, composição e/ou vacina de neoantígeno para administração terapêutica; carreadores farmaceuticamente aceitáveis; e dispositivos, recipientes ou outros materiais para administrar o modulador de splicing de herboxidieno, ADC, composição e/ou vacina de neoantígeno a um paciente. As instruções de uso podem incluir orientação para aplicações terapêuticas, incluindo dosagens sugeridas e/ou modos de administração, por exemplo, em um paciente que tem ou que se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico. Em várias modalidades, o kit contém adicionalmente instruções para uso terapêutico, por exemplo, uso do modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e a vacina de neoantígeno para tratar ou prevenir um distúrbio neoplásico em um paciente. Em várias modalidades, o kit contém adicionalmente pelo menos um agente terapêutico adicional (por exemplo, para administração em conjunto com o modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e a vacina de neoantígeno, por exemplo, um inibidor de ponto de verificação). Em várias modalidades, o modulador de splicing de herboxidieno, ADC, composição e/ou vacina de neoantígeno é formulado como uma composição farmacêutica.
[0554] Em algumas modalidades dos métodos e composições revelados no presente documento, a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno. Em algumas modalidades, o pelo menos um peptídeo de neoantígeno está na faixa de cerca de 10 a cerca de 50 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o pelo menos um peptídeo de neoantígeno está na faixa de cerca de 10 a cerca de 35 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o pelo menos um peptídeo de neoantígeno está na faixa de cerca de 15 a cerca de 25 aminoácidos de comprimento.
[0555] Em algumas modalidades, o pelo menos um peptídeo de neoantígeno compreende uma ou mais de uma sequência de neoantígeno revelada no presente documento.
[0556] Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos e/ou porção antigênica está na faixa de cerca de 10 a cerca de 35 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígeno e/ou porção antigênica está na faixa de cerca de 15 a cerca de 25 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígeno e/ou porção antigênica está na faixa de cerca de 10 a cerca de 20 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos e/ou porção antigênica não se sobrepõe ou consiste exclusivamente na sequência peptídica canonical (por exemplo, qualquer uma das sequências peptídicas canonicais exemplificativas sublinhadas na Tabela 8).
[0557] Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos é uma sequência de neoantígenos específica para o indivíduo. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos é uma vacina de neoantígenos personalizada para o indivíduo. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos tem capacidade de ligação a pelo menos um alelo HLA expresso no indivíduo.
[0558] Em algumas outras modalidades, a sequência de neoantígenos é uma sequência de neoantígenos universal. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos é um vacina de neoantígenos universal. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos tem capacidade de ligação a pelo menos um alelo HLA expresso em pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40% ou pelo menos 45% de indivíduos em uma população de indivíduos que sofre do distúrbio neoplástico. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos tem capacidade para elicitar uma resposta de células T contra um tumor presente em pelo menos 1%, pelo menos 5% ou pelo menos 10% de uma população de indivíduos que sofre do distúrbio neoplástico.
[0559] Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos foi identificada por sequenciamento de pelo menos um peptídeo de neoantígeno induzido no indivíduo pela administração de uma quantidade eficaz do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição. Em algumas modalidades, o pelo menos um peptídeo de neoantígeno compreende uma sequência de neoantígenos induzida pelo contato de uma célula neoplásica com uma quantidade eficaz do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição. Em algumas modalidades, a célula neoplásica está presente em uma cultura celular in vitro. Em algumas modalidades, a célula neoplásica é obtida a partir do indivíduo. Em algumas modalidades, a célula neoplásica está presente no indivíduo.
[0560] Em algumas modalidades, a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um peptídeo ou mRNA de neoantígeno e um carreador farmaceuticamente aceitável. Em várias modalidades, um peptídeo de neoantígeno ou mRNA pode estar ligado a um carreador adequado para ajudar a elicitar uma resposta imunológica. Carreadores exemplificativos para ligação a agentes imunogênicos (por exemplo, um peptídeo de neoantígeno ou mRNA) incluem albuminas séricas, hemocianina de lapa, moléculas de imunoglobulina, tireoglobulina, ovalbumina, toxoide do tétano ou um toxoide de outra bactéria patogênica, como difteria, E. coli, cólera, ou H. pylori, ou um derivado de toxina atenuada. Outros carreadores para estimular ou acentuar uma resposta imunológica incluem citocinas, como IL-1, IL- IL- -10, GM- agentes imunogênicos podem também ser ligados a peptídeos que acentuam o transporte através de tecidos, conforme descrito, por exemplo, no documento nº WO 97/17613 e documento nº WO 97/17614. Em algumas modalidades, o carreador farmaceuticamente aceitável é selecionado dentre um peptídeo, uma albumina sérica, uma hemocianina de lapa, uma imunoglobulina, uma tiroglobulina, uma ovalbumina, um toxoide ou um derivado de toxoide atenuado, uma citocina e uma quimiocina.
[0561] Em algumas modalidades, o peptídeo de neoantígeno ou mRNA pode ser ligado ao carreador farmaceuticamente aceitável. Os agentes imunogênicos podem ser ligados a carreadores por reticulação química. As técnicas para ligar um peptídeo imunogênico a um carreador incluem a formação de ligações dissulfeto com o uso de propionato de N-succinimidil-3- (2-piridil-tio) (SPDP) e cicloexano-1-carboxilato de succinimidil 4-(N- maleimidometila) (SMCC) (se o peptídeo for desprovido de um grupo sulfidrila, isso pode ser fornecido pela adição de um resíduo de cisteína). Esses reagentes criam uma ligação dissulfeto entre os mesmos e a cisteína de peptídeo reside em uma proteína e uma ligação amida através do épsilon- amino em uma lisina, ou outro grupo amino livre em outros aminoácidos. Uma variedade de tais agentes formadores de dissulfeto/amida é descrita em
Jansen et al. ((1982) Immun Rev. 62:185). Outros agentes de acoplamento bifuncionais formam um tioéter em vez de uma ligação dissulfeto. Muitos desses agentes formadores de tioéter estão comercialmente disponíveis e incluem ésteres reativos de ácido 6-maleimidocaproico, ácido 2-bromoacético e ácido 2-iodoacético, ácido 4- (N-maleimido-metil)cicloexano-1-carboxílico. Os grupos carboxila podem ser ativados combinando os mesmos com succinimida ou ácido 1-hidroxil-2-nitro-4-sulfônico, sal de sódio. Em algumas modalidades, o peptídeo de neoantígeno e o carreador farmaceuticamente aceitável estão ligados covalentemente através de um ligante.
[0562] Neoantígeno e outros peptídeos imunogênicos podem também ser expressos como proteínas de fusão com carreadores. O peptídeo imunogênico pode ser ligado na terminação amino, terminação carboxila ou em um local em qualquer parte do peptídeo (internamente) ao carreador. Em algumas modalidades, múltiplas repetições do peptídeo imunogênico podem estar presentes na proteína de fusão. Em algumas modalidades, o peptídeo de neoantígeno e o carreador farmaceuticamente aceitável são expressos como uma proteína de fusão.
[0563] Em algumas modalidades, a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno ou seu mRNA de codificação e um diluente farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno ou seu mRNA de codificação e um adjuvante farmaceuticamente aceitável (por exemplo, um adjuvante conforme descrito no presente documento).
[0564] Em algumas modalidades dos métodos e composições revelados no presente documento, a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno. Em algumas modalidades, o pelo menos um mRNA de neoantígeno codifica uma ou mais de uma sequência de neoantígeno.
[0565] Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos e/ou porção antigênica está na faixa de cerca de 10 a cerca de 50 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o pelo menos um peptídeo de neoantígeno está na faixa de cerca de 10 a cerca de 35 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos e/ou porção antigênica está na faixa de cerca de 15 a cerca de 25 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígeno e/ou porção antigênica está na faixa de cerca de 10 a cerca de 20 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos e/ou porção antigênica não se sobrepõe ou consiste exclusivamente na sequência peptídica canonical (por exemplo, qualquer uma das sequências peptídicas canonicais exemplificativas sublinhadas na Tabela 8).
[0566] Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos é uma sequência de neoantígenos específica para o indivíduo. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos é uma vacina de neoantígenos personalizada para o indivíduo. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos tem capacidade de ligação a pelo menos um alelo HLA expresso no indivíduo.
[0567] Em algumas outras modalidades, a sequência de neoantígenos é uma sequência de neoantígenos universal. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos é um vacina de neoantígenos universal. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos tem capacidade de ligação a pelo menos um alelo HLA expresso em pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40% ou pelo menos 45% de indivíduos em uma população de indivíduos que sofre do distúrbio neoplástico. Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos tem capacidade para elicitar uma resposta de células T contra um tumor presente em pelo menos 1%, pelo menos 5% ou pelo menos 10% de uma população de indivíduos que sofre do distúrbio neoplástico.
[0568] Em algumas modalidades, a sequência de neoantígenos foi identificada por sequenciamento de pelo menos um mRNA de neoantígeno induzido no indivíduo pela administração de uma quantidade eficaz do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição. Em algumas modalidades, o pelo menos um mRNA de neoantígeno codifica uma sequência de neoantígenos induzida pelo contato de uma célula neoplásica com uma quantidade eficaz do modulador de splicing de herboxidieno, conjugado anticorpo-fármaco ou composição. Em algumas modalidades, a célula neoplásica está presente em uma cultura celular in vitro. Em algumas modalidades, a célula neoplásica é obtida a partir do indivíduo. Em algumas modalidades, a célula neoplásica está presente no indivíduo.
[0569] Em algumas modalidades, a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno e um carreador farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, o pelo menos um mRNA de neoantígeno está ligado ao carreador farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, o carreador farmaceuticamente aceitável é selecionado dentre um peptídeo, uma albumina sérica, uma hemocianina de lapa, uma imunoglobulina, uma tiroglobulina, uma ovalbumina, um toxoide ou um derivado de toxoide atenuado, uma citocina e uma quimiocina.
[0570] Em algumas modalidades, a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno e um diluente farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno e um adjuvante farmaceuticamente aceitável (por exemplo, um adjuvante conforme descrito no presente documento).
[0571] Em algumas modalidades, o mRNA de neoantígeno é encapsulado por um agente de encapsulação. Em algumas modalidades, o agente de encapsulação protege o mRNA de neoantígeno contra a degradação e aprimora a entrega de vacina (McNamara et al. (2015) J Immunol Res. 2015:794528). Em algumas modalidades, o agente de encapsulação é um lipossoma. Em algumas modalidades, o lipossoma é um lipossoma catiônico como cloreto de N-[1-(2,3-dioleoloxi)propil]-N,N,N-trimetil amônio 1 (DOTAP). Em algumas modalidades, o agente de encapsulação é uma nanopartícula. Em algumas modalidades, a nanopartícula protege o mRNA de neoantígeno contra a degradação de nuclease e/ou aumenta a absorção celular e/ou a eficiência de entrega. Em algumas modalidades, a nanopartícula pode ser manipulada para ser completamente degradável. Em algumas modalidades, a nanopartícula é uma nanopartícula estruturada de núcleo-casca biodegradável com um núcleo de poli (b-aminoéster) (PBAE) responsivo ao pH envelopado por uma casca de fosfolipídeo (Su et al. (2011) Mol Pharm. 8(3):774 a 787). Em algumas modalidades, tais nanopartículas são particularmente eficientes para entregar mRNA in vivo e elicitar uma resposta imunológica antitumor.
[0572] Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma carga mutacional não sinônima de cerca de 150 mutações ou menos. Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma carga mutacional não sinônima de cerca de 100 mutações ou menos. Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma carga mutacional não sinônima de cerca de 50 mutações ou menos. Em algumas modalidades, o indivíduo tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico, por exemplo, uma malignidade hematológica ou um tumor sólido. Em algumas modalidades, a malignidade hematológica é selecionada dentre uma malignidade de célula B, uma leucemia, um linfoma e um mieloma. Em algumas modalidades, a malignidade hematológica é selecionada dentre leucemia mieloide aguda e mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, o tumor sólido é selecionado dentre câncer de mama, câncer gástrico, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão, câncer uterino, carcinoma do ducto salivar, melanoma, câncer de cólon, câncer cervical, câncer pancreático, câncer de rins, câncer colorretal e câncer de esôfago. Em algumas modalidades, o tumor sólido é selecionado dentre câncer de mama positivo para HER2, adenocarcinoma gástrico, câncer de próstata e osteossarcoma.
[0573] Como usado no presente documento, "adjuvante" se refere a uma substância que tem capacidade de aumentar, amplificar ou modular uma resposta imunológica a um agente imunogênico correspondente, por exemplo, um peptídeo de neoantígeno ou mRNA. Em certas modalidades, um neoantígeno da presente revelação pode ser administrado em combinação com adjuvantes, ou seja, substâncias que não causam respostas imunológicas adaptativas, porém amplificam ou modulam a resposta a um neoantígeno correspondente. Uma variedade de adjuvantes pode ser usada em combinação com os neoantígenos revelados para elicitar uma resposta imunológica. Em algumas modalidades, o adjuvante (ou adjuvantes) é escolhido para aumentar a resposta intrínseca ao neoantígeno sem causar alterações conformacionais no neoantígeno que poderiam afetar a forma qualitativa da resposta. Em algumas modalidades, o adjuvante (ou adjuvantes) é escolhido para acentuar a iniciação e/ou ativação de células T efetoras (por exemplo, CD8).
[0574] Em certas modalidades, o adjuvante é um sal de alumínio (alume), como hidróxido de alumínio, fosfato de alumínio e sulfato de alumínio. Tais adjuvantes podem ser usados com ou sem outros agentes imunoestimuladores como monofosforil lipídeo A 3 des-O-acilado (MPL) ou 3- DMP, aminoácidos poliméricos ou monoméricos como ácido poliglutâmico ou polilisina. Tais adjuvantes podem ser usados com ou sem outros agentes imunoestimuladores específicos como peptídeos de muramila (por exemplo, N- acetilmuramil-L-treonil-D-isoglutamina (thr-MDP), N-acetil-normuramil-L-alanil- D-isoglutamina ( nor-MDP), N-acetilmuramil-L-alanil-D- isoglutaminil-L-alanina- 2- - -dipalmitoil-sn-glicero-3-hidroxifosforiloxi) -etilamina (MTP-PE), N- acetilglucsaminil-N-acetilmuramil-L-Al-D- isoglu-L-Ala-dipalmitóxi propilamida (DTP-DPP)), ou outros componentes da parede celular bacteriana. Outros adjuvantes são emulsões de óleo em água e incluem (a) MF59 (WO 90/14837), contendo 5% de esqualeno, 0,5% de Tween 80 e 0,5% de Span 85 (contendo opcionalmente várias quantidades de MTP-PE) formuladas em partículas submicrônicas usando um microfluidizador como o microfluidizador Modelo 110Y (Microfluidics), (b) SAF, contendo Esqualeno a 10%, Tween 80 a 0,4%, polímero bloqueado com pluronic L121 e thr-MDP a 5%, microfluidizado em uma emulsão submicrônica ou vortexado para gerar uma emulsão de tamanho de partícula maior, e (c) si ImmunoChem) contendo esqualeno a 2%, Tween 80 a 0,2% e um ou mais componentes de parede celular bacteriana do grupo que consiste em monofosforilipídeo A (MPL), dimicolato de trealose (TDM) e esqueleto de parede celular (CWS), por exemplo, MPL- partículas geradas a partir do mesmo como ISCOMs (complexos imunoestimulantes) e ISCOMATRIX. Outros adjuvantes incluem Adjuvante Completo de Freund (CFA) e Adjuvante Incompleto de Freund (IFA), citocinas, como interleucinas (IL-1, IL-2 e IL-12), fator estimulante de colônia de macrófagos (M-CSF) e fator de necrose tumoral (TNF).
[0575] Um adjuvante pode ser administrado com um agente imunogênico (por exemplo, um peptídeo de neoantígeno ou mRNA) como uma única composição, ou pode ser administrado antes, durante ou após a administração do agente imunogênico. Em algumas modalidades, o agente imunogênico e o adjuvante podem ser acondicionados e fornecidos no mesmo frasco ou podem ser acondicionados em frascos separados e misturados antes do uso. Em algumas modalidades, o agente imunogênico e o adjuvante podem ser acondicionados com uma identificação, indicando a aplicação terapêutico destinada. Em algumas modalidades, se o agente imunogênico e o adjuvante forem acondicionados separadamente, o empacotamento pode incluir instruções para mistura antes do uso. A seleção de um adjuvante e/ou veículo depende da estabilidade da formulação imunogênica contendo o adjuvante, da via de administração, do programa de dosagem, da eficácia do adjuvante para a espécie a ser vacinada e, em seres humanos, um adjuvante farmaceuticamente aceitável é um que foi aprovado ou é aprovável para administração humana por corpos reguladores pertinentes. Por exemplo, o adjuvante Completo de Freund não é adequado para administração humana. Entretanto, alume, MPL ou adjuvante Incompleto de Freund (Chang et al. (1998) Adv Drug Deliv Rev. 32:173-186) individualmente ou opcionalmente em combinação com qualquer um dentre alume, QS21 e MPL e todas as combinações dos mesmos são adequadas para administração humana.
[0576] Em várias modalidades, a presente revelação fornece adicionalmente métodos de triagem e identificação de pelo menos um neoantígeno. Mais especificamente, em várias modalidades, a presente revelação fornece um método de identificação de pelo menos um neoantígeno ao (a) colocar uma célula neoplásica em contato com uma quantidade eficaz de um modulador de splicing de herboxidieno, um ADC ou uma composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC; (b) detectar pelo menos um transcrito de mRNA de splicing alternativo após colocar a célula neoplásica em contato com o modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição; (c) prever a tradução de pelo menos um transcrito de mRNA submetido a splicing alternativo em pelo menos um peptídeo; e (d) comparar o pelo menos um peptídeo com um proteoma de referência, em que pelo menos um neoantígeno é identificado se o pelo menos um peptídeo não corresponder a nenhum peptídeo no proteoma de referência. Em várias modalidades, o método compreende adicionalmente colocar uma ou mais células neoplásicas adicionais em contato para identificar pelo menos um neoantígeno universal. Em várias modalidades, o método é repetido em uma ou mais células neoplásicas adicionais ou amostras (por exemplo, uma biópsia de tecido) para confirmar os neoantígenos adequados (por exemplo, para uso em uma vacina de neoantígeno) e/ou para identificar um ou mais neoantígenos adicionais.
[0577] Em várias outras modalidades, a presente revelação fornece um método de identificação de pelo menos um neoantígeno ao (a)
colocar uma célula neoplásica em contato com uma quantidade eficaz de um modulador de splicing de herboxidieno, um ADC ou uma composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC; (b) detectar pelo menos um peptídeo que compreende uma sequência de neoantígeno potencial após colocar a célula neoplásica em contato com o modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição; e (c) comparar o pelo menos um peptídeo com um proteoma de referência, em que pelo menos um neoantígeno é identificado se pelo menos um peptídeo não corresponder a nenhum peptídeo no proteoma de referência. Em várias modalidades, o método compreende adicionalmente colocar uma ou mais células neoplásicas adicionais em contato para identificar pelo menos um neoantígeno universal. Em várias modalidades, o método é repetido em uma ou mais células neoplásicas adicionais ou amostras (por exemplo, uma biópsia de tecido) para confirmar os neoantígenos adequados (por exemplo, para uso em uma vacina de neoantígeno) e/ou para identificar um ou mais neoantígenos adicionais.
[0578] Em algumas modalidades dos métodos de identificação de neoantígeno descritos no presente documento, a detecção de pelo menos uma transcrição de mRNA alternativamente submetida a splicing compreende RNAseq. Em algumas modalidades, a previsão da tradução de pelo menos uma transcrição de mRNA alternativamente submetida a splicing compreende quantificar a mudança no valor percentual de splicing (dPSI) para a pelo menos uma transcrição. Em algumas modalidades, a previsão de tradução da pelo menos uma transcrição de mRNA alternativamente submetida a splicing compreende RiboSeq e/ou perfil ribossômico.
[0579] Em algumas modalidades dos métodos de identificação de neoantígeno descritos no presente documento, o método compreende adicionalmente avaliar o pelo menos um peptídeo quanto à ligação de complexo principal de histocompatibilidade (MHC) previsto. Em algumas modalidades, a ligação de MHC previsto é determinada pela medição de força de ligação prevista de afinidade bruta do pelo menos um peptídeo. Em algumas modalidades, uma força de ligação prevista de afinidade bruta de cerca de 500 nM ou mais indica ligação de MHC. Em algumas modalidades, a ligação de MHC prevista é determinada pela identificação de uma distribuição de forças de ligação previstas para uma série de peptídeos aleatórios; e comparação de força de ligação prevista do pelo menos um peptídeo à distribuição. Em algumas modalidades, uma força de ligação prevista nos primeiros 2% da distribuição indica ligação de MHC fraca. Em algumas modalidades, uma força de ligação prevista no primeiro 0,5% da distribuição indica ligação de MHC forte.
[0580] Em algumas modalidades dos métodos de identificação de neoantígeno descritos no presente documento, a célula neoplásica está presente em uma cultura celular in vitro. Em algumas modalidades, a célula neoplásica é obtida a partir do indivíduo. Em algumas modalidades, a célula neoplásica está presente no indivíduo.
[0581] Também são fornecidos no presente documento, em várias modalidades, métodos de fabricação de uma vacina de neoantígeno ao (a) identificar pelo menos um neoantígeno (por exemplo, pelo menos um peptídeo de neoantígeno ou seu mRNA de codificação) usando qualquer um dos métodos de identificação exemplificativos revelados no presente documento; e (b) formular o pelo menos um neoantígeno juntamente com um carreador, diluente ou adjuvante farmaceuticamente aceitável (por exemplo, qualquer um dos carreadores, diluentes ou adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis descritos no presente documento).
[0582] Em algumas modalidades, o pelo menos um neoantígeno e/ou porção antigênica está na faixa de cerca de 10 a cerca de 50 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o pelo menos um peptídeo de neoantígeno está na faixa de cerca de 10 a cerca de 35 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o pelo menos um neoantígeno e/ou porção antigênica está na faixa de cerca de 15 a cerca de 25 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o pelo menos um neoantígeno e/ou porção antigênica está na faixa de cerca de 10 a cerca de 20 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o pelo menos um neoantígeno e/ou porção antigênica não se sobrepõe ou consiste exclusivamente na sequência peptídica canonical (por exemplo, qualquer uma das sequências peptídicas canonicais exemplificativas sublinhadas na Tabela 8).
[0583] Em algumas modalidades, o pelo menos um neoantígeno usado na vacina está ligado ao carreador farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, o carreador farmaceuticamente aceitável é selecionado dentre um peptídeo, uma albumina sérica, uma hemocianina de lapa, uma imunoglobulina, uma tiroglobulina, uma ovalbumina, um toxoide ou um derivado de toxoide atenuado, uma citocina e uma quimiocina. Combinação de Modulador de Splicing de Herboxidieno / ADC e Células T Geneticamente Modificadas (CAR-T):
[0584] Em várias modalidades, um paciente com câncer, conforme descrito no presente documento, pode ser tratado com uma combinação de um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e uma ou mais células T de alvejamento de tumor geneticamente modificadas (ou seja CAR-T). Dessa forma, em várias modalidades, a presente revelação fornece um método de tratamento de um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico, pela administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um modulador de splicing de herboxidieno, um ADC ou uma composição que compreende um modulador de splicing de herboxidieno ou ADC; e células T de alvejamento de tumor geneticamente modificadas (ou seja, CAR-T). Em várias modalidades, um receptor de células T quiméricas pode ser manipulado usando sequências de reconhecimento de antígeno que são reativas com um neoantígeno identificado.
[0585] Por exemplo, em várias modalidades, para alvejar o modulador de splicing de herboxidieno- ou alterações induzidas por ADC nos domínios extracelulares de proteínas de superfície celular, um receptor de célula T reativo a antígeno quimérico (CAR) pode ser geneticamente modificado primeiramente identificando-se anticorpos que reconhecem um domínio de proteína de neoantígeno expresso na superfície celular. As sequências de reconhecimento de antígeno de tais anticorpos podem ser, então, fundidas com um domínio de receptor de células T para alvejamento e ativação seletivos.
[0586] Em várias outras modalidades, é empregada uma estratégia que integra a maquinaria de apresentação de antígeno de células tumorais juntamente com modulador de splicing de herboxidieno- ou neoantígenos derivados de ADC. Em algumas modalidades, as células contendo alelos HLA conhecidos e frequentemente representados (por exemplo, HLA-A*02:01) podem ser tratadas com um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição e os neoantígenos ligados a MHC1 são identificados por ligandômicos. Em algumas modalidades, esses peptídeos podem ser usados para iniciar e/ou expandir células T de doadores saudáveis que expressam o mesmo alelo HLA. Tais células T, em algumas modalidades, sequenciadas para identificar o reconhecimento de antígeno cognato/regiões variáveis.. Em algumas modalidades, um CAR cognato pode ser, então, manipulado.
[0587] Em algumas modalidades, as sequências de CAR são clonadas em populações de células T derivadas de paciente e expandidas usando protocolos atualmente disponíveis. Em algumas modalidades, as células T manipuladas são, então, transfundidas de volta para a circulação do paciente, após o tratamento com um modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição. Após o tratamento com o modulador de splicing de herboxidieno, ADC ou composição, em algumas modalidades, as células tumorais podem começar a apresentar antígeno. Em algumas modalidades, a população de células T manipuladas pode interagir e exterminar células tumorais apresentadoras de antígeno.
[0588] Será prontamente evidente para os versados na técnica que outras modificações e adaptações adequadas dos métodos da revelação descritos no presente documento são óbvias e podem ser feitas usando equivalentes adequados sem que se afaste do escopo da revelação ou das modalidades reveladas no presente documento. Tendo agora descrito a revelação em detalhes, a mesma será mais claramente entendida a título de referência aos exemplos a seguir, que estão incluídos apenas com propósitos de ilustração e não se destinam a ser limitantes.
EXEMPLOS EXEMPLO 1
[0589] São descritos métodos de síntese para cargas úteis, ligantes e compostos ligante-carga útil (ligante-fármaco, L-H) conjugáveis, que têm as estruturas mostradas nas Tabelas 9 a 11. Cargas úteis de ligante conjugáveis foram usadas na preparação de conjugados de anticorpo-fármaco (ADCs). ADCs exemplificativos são descritos nos Exemplos 3 a 5.
1.1 Reagentes e Materiais
[0590] Os materiais de partida usados nos seguintes métodos de síntese estão comercialmente disponíveis ou podem ser prontamente preparados por métodos padrão a partir de materiais conhecidos. As cargas úteis de ligante conjugáveis reveladas podem ser preparadas usando as reações e técnicas descritas no presente documento. Na descrição dos métodos sintéticos descritos abaixo, deve-se entender que todas as condições de reação propostas, incluindo a escolha do solvente, a atmosfera da reação, a temperatura da reação, a duração do experimento e os procedimentos de análise, podem ser selecionados escolhidas como as condições padrão para essa reação, salvo indicação em contrário. Será entendido por um versado na técnica de síntese orgânica que a funcionalidade presente em várias porções da molécula deve ser compatível com os reagentes e reações propostos. Substituintes não compatíveis com as condições de reação são evidentes para o versado na técnica, e métodos alternativos são, portanto, indicados no presente documento.
[0591] A cromatografia líquida preparativa-espectrometria de massa (LC/MS) foi conduzida usando um Waters AutoPurification System e uma coluna XTerra MS C18 (5 µm, 19 mm x 100 mm) sob condições de fase móvel ácidas. Os espectros de ressonância magnética nuclear (RMN) foram registrados em 400 MHz usando um instrumento Varian (Agilent Technologies). O aquecimento por micro-ondas foi realizado usando um micro-ondas Biotage Emrys Liberator ou Initiator. A cromatografia em coluna foi realizada usando um Teledyne Isco Combiflash Rf200d. A remoção do solvente foi realizada com o uso de um evaporador rotativo Büchi ou um evaporador centrífugo Genevac.
[0592] Termos/Abreviações: Conforme usado no presente documento, o termo "inerte" se refere à substituição do ar em um reator (por exemplo, um vaso de reação, um frasco, um reator de vidro) por um gás inerte essencialmente isento de umidade, como nitrogênio ou argônio. As seguintes abreviações são usadas no presente documento: DCM=diclorometano, DMF= dimetilformamida, HPLC=cromatografia líquida de alta eficiência, KHMDS=bis(trimetilsilil)amida de potássio, LC/MS=cromatografia líquida espectrometria de massa, MeOH=metanol, RT=temperatura ambiente, TBSCl=cloreto de terc-butildimetilsilila, THF=tetraidrofurano, TLC=cromatografia em camada delgada. As multiplicidades são indicadas usando as seguintes abreviações: s=singleto, d=dupleto, t=tripleto, q=quarteto, quint=quinteto, sxt=sexteto, m=multipleto, dd=dupleto de dupletos, ddd=dupleto de dupletos de dupletos, dt=dupleto de tripletos, br s=um singleto largo.
[0593] LC/MS: Fases móveis=A (ácido fórmico a 0,1% em H2O) e B (ácido fórmico a 0,1% em acetonitrila). Gradiente=B a 5% a 95% em 1,8 min.
Coluna = coluna Waters Acquity BEH C18 (1,7 µm, 2,1 x 50 mm). TABELA 9. ESTRUTURAS DE PORÇÕES QUÍMICAS DE FÁRMACO (CARGAS ÚTEIS) Estrutura de Carga Útil / ID
H1
H2
H3
H4
H5
H6
H7
H8
H9
H10
H11
H12
H13
H14
H15
H16
H17
H18
H19
H20
H21
H22
H23
H24
H25
TABELA 10. ESTRUTURAS DE LIGANTES EXEMPLIFICATIVAS Estrutura de Ligante / ID (Nome IUPAC)
-Val-Cit- (Formiato de {4 [(2S) 5 (carbamoilamino) 2 [(2S) 2 [6 (2,5 dioxo 2,5 di-hidro 1H pirrol 1 il)hexanamido] 3 metilbutanamido]pentanamido]fenil}metila)
-(PEG)2- (3 {2 [2 (2,5 dioxo 2,5 di-hidro 1H pirrol 1-il)etóxi]etóxi}propanal)
-Val-Ala- (6 (2,5 dioxo 2,5 di-hidro 1H pirrol 1 il) N [(1S) 2 metil 1 {[(1S) 1 [(4 metilfenil)carbamoil]etil]carbamoil}propil]hexanamida)
-Val-Ala- (Formiato de {4 [(2S) 2 [(2S) 2 [6 (2,5 dioxo 2,5 di-hidro 1H pirrol 1 il)hexanamido] 3 metilbutanamido]propanamido]fenil}metila)
-Val-Cit- (N [(1S) 1 {[(1S) 4 (carbamoilamino) 1 [(4- metilfenil)carbamoil]butil]carbamoil} 2 metilpropil] 6 (2,5 dioxo 2,5 di-hidro 1H pirrol 1 il)hexanamida)
(6 (2,5 dioxo 2,5 di-hidro 1H pirrol 1 il)hexanal)
- (1 hexil 2,5 di-hidro 1H pirrol 2,5 diona)
- - (Ácido (2S,3S,4S,5R,6S) 6 (2 {3 [6 (2,5 dioxo 2,5 di-hidro 1H pirrol 1 il)hexanamido]propanamido} 4 [(formiloxi)metil]fenóxi) 3,4,5 tri-hidroxioxano 2 carboxílico)
- (1 etil 2,5 di-hidro 1H pirrol 2,5 diona)
-Et-O- (1 (2 etoxietil) 2,5 di-hidro 1H pirrol 2,5 diona)
-Ala-Ala-Asp-
-(PEG)2-Val-Cit- -Glu-Val-Cit- TABELA 11. ESTRUTURAS DE COMPOSTOS LIGANTE-CARGA ÚTIL (L-H)
CONJUGÁVEIS EXEMPLIFICATIVAS ADL1-H1
ADL1-H2
ADL1-H3
ADL1-H4
ADL1-H5
ADL1-H6
ADL1-H7
ADL1-H8
ADL1-H9
ADL1-H10 ADL2-H11 ADL2-H1
1.2 Preparação de ADL1-H1, ADL1-H2, ADL1-H3 e ADL1-H4
1.2.1 Visão Geral - Procedimento geral 1 Esquema 1 Etapa 1: Fermentação e Bioconversão
[0594] Solução estoque de glicerol a vinte por cento de Saccharothrix sp. EAS-AB4564, isolada do solo no Japão, foi inoculada em uma primeira cultura de semente em um tubo de ensaio contendo 10 ml de meio SY-32 (D-glicose a 1%, amido solúvel a 1%, bactosoytone a 0,5%, extrato de levedura a 0,5%, sulfato de amônio a 0,2%, NaCl a 0,2% e TES a 2,3%, em pH 8,0). A primeira cultura de semente foi agitada por 2 dias a 28°C em um agitador reciprocante a 200 rpm. Após a fermentação, a primeira cultura de semente foi inoculada em uma segunda cultura de semente estéril em frascos Erlenmeyer com 1% v/v, cada um contendo 100 ml de novo meio SY-32. As segundas culturas de semente foram agitadas por 2 dias a 28 oC em um agitador giratório (Iwashiya bioscience SC-144-GR), a 200 rpm. Após a fermentação, 250 ml da segunda cultura foram inoculados em um fermentador de 15 l (Sanki seiki MAT-15), contendo 10 l de novo meio SY-32 e 2 ml de antiespumante PE-M. A fermentação foi conduzida a 28°C sob a condição de agitação e aeração (450 rpm, 10 l/min). Após 48 horas, o caldo de cultura foi centrifugado a 3.000 rpm por 10 minutos. Após a remoção de sobrenadante, 10 l de tampão de fosfato 20 mM (pH 7,0) foram adicionados ao pélete microbiano para a lavagem de células microbianas. A suspensão foi centrifugada a 3.000 rpm durante 10 minutos. Após a remoção de tampão de lavagem, 10 l de tampão de reação (D-glicose a 1%, cloreto de magnésio hexa-hidratado a 0,2%, TES a 2,3% e 1,3 g de Herboxidieno, pH 8,0) foram adicionados ao pélete microbiano, e a suspensão foi transferida para um fermentador de 15 l. A bioconversão foi conduzida por 6 horas a 28°C durante agitação e aeração (450 rpm, 10 l/min). Isolamento de 5-hidróxi herboxidieno
[0595] XAD-7HP (400 g) foi adicionado à mistura mencionada acima (10 l), e a mistura foi agitada (EYELA MAZELA Z) por 30 minutos a 300 rpm. Após a agitação, a separação de XAD-7HP foi determinada usando coloração e uma peneira de teste (0,25 mm de abertura e 0,16 mm de diâmetro de fio). A mesma operação foi repetida. O XAD-7HP coletado foi extraído por 1 l de acetona, e o solvente foi removido a vácuo. O extrato foi purificado por MPLC de fase reversa (Yamazen EPCLC-W-prep 2XY) com eluição de gradiente (YMC-DispoPack AT ODS-25 120 g, acetonitrila a 25 a 55% em água adicionada com ácido fórmico a 0,1%, durante 15 minutos) para produzir 5-OH herboxidieno (397,47 mg), com um rendimento de conversão de 29,5%. Os dados de RMN de 1H e espectrometria de massa foram compatíveis com a literatura. Consultar, por exemplo, EP0781772 B1 e Ghosh et al. (2014) Org. Lett. 16:3154-57. Etapa 2: Síntese de acetato de 2-((2R,4R,5S,6S)-4-hidroxi-6- ((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2- metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il) metila
[0596] A uma solução de ácido 2-((2R,4R,5S,6S)-4-hidroxi-6- ((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2- metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)acético (45 mg, 0,099 mmol) em THF (2 ml) e MeOH (0,5 ml) trimetilsilildiazometano (2,0 M em hexanos, 0,148 ml, 0,297 mmol) por gotejamento. A mistura resultante foi, então, gradualmente aquecida até a temperatura ambiente e foi agitada por 1 h antes do resfriamento até 0°C. Ácido acético (0,017 ml, 0,297 mmol) foi, então, adicionado e agitado por 30 minutos. A mistura foi, então, diluída com AcOEt e bicarbonato de sódio aquoso saturado. A camada orgânica foi isolada, lavada com água e salmoura, seca com sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo isolado foi purificado por cromatografia em gel de sílica para produzir acetato de 2- ((2R,4R,5S,6S)-4-hidroxi-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3- metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro- 2H-piran-2-il) metila como um óleo incolor (36,1 mg, 78% de rendimento). 1 H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) 0,80 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,86 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 1,03 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 1,16 (d, J=6,3 Hz, 3 H) 1,20-
1,24 (m, 1H) 1,26 (s, 3H) 1,31- 1,34 (m, 3 H) 1,40 - 1,59 (m, 2 H) 1,63 (s l, 2 H) 1,69 (s, 3 H) 1,87 (dd, J=13,66, 4,88 Hz, 1 H) 2,03 (ddd, J=10,37, 4,02, 2,20 Hz, 1 H) 2,42 (dd, J=15,61, 6,34 Hz, 2 H) 2,54 (d, J=9,8 Hz, 2 H) 2,62 (dd, J=15,6, 6,3 Hz, 1 H) 2,95 (t, J=5,37 Hz, 1 H) 3,33 - 3,44 (m, 2 H) 3,52 (s, 3 H) 3,65 (s, 3 H) 3,79 - 3,90 (m, 2 H) 5,45 (dd, J=15,12, 8,78 Hz, 1 H) 5,88 (d, J=11,22 Hz, 1 H) 6,21 (dd, J=15,12, 10,73 Hz, 1 H). Etapa 3: Síntese de Carbamato
[0597] A uma mistura de acetato de 2-((2R,4R,5S,6S)-4-hidroxi-6- ((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2- metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)metila (1,0 eq., ,075 mmol), carbonocloridato de 4-nitrofenila (2 eq.), base de Hunig (0,065 ml, 4,5 eq.) em diclorometano (0,04 M) a 0 °C foi adicionado DMAP (0,05 eq.). A mistura foi, então, aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 16 h. Piperazina (10 eq.) foi adicionada à mistura e a mistura resultante foi agitada durante mais 1 h. A mistura foi, então, diluída com DCM e a camada orgânica foi isolada, lavada com água e salmoura, seca com sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em gel de sílica e, então, por cromatografia em gel de sílica funcionalizada com amino para produzir o produto desejado. Etapa 4: Síntese de Ácido Carboxílico
[0598] A uma mistura do éster metílico obtida a partir da Etapa 3 (1,0 eq., 0,039 mmol) em MeOH (0,02M ml) foi adicionado hidróxido de sódio aquoso (1,0 eq., 2N). A mistura foi aquecida até 40°C e foi agitada àquela temperatura por 4 h. A mistura resultante foi, então, resfriada até 0°C e neutralizada com ácido clorídrico aquoso (200 µl, 2N). A mistura foi, então, concentrada a vácuo e o resíduo resultante foi purificado por HPLC preparativa (H2O/MeCN/HCOOH = 80/20/0.1 a 60/40/0.1) para produzir o produto desejado.
1.2.2 Síntese de H1
Piperazina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,6R)-2-((S,2E,4E)-7- ((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6- metilepta-2,4-dien-2-il)-6-(2-metoxi-2-oxoetil)-3-metiltetraidro-2H-piran-4-ila
[0599] O composto do título foi sintetizado de acordo com a Etapa 3 da seção 1.2.1 para produzir um óleo amarelo pálido (22,3 mg, 52% de rendimento). 1 H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,71 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,85 (d, J=6,8 Hz, 3 H) 1,03 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 1,16 (d, J=6,8 Hz, 3 H) 1,20 - 1,25 (m, 1H) 1,26 (s, 3H) 1,37 (q, J=11,55 Hz, 1 H) 1,51 (dt, J=8,90, 6,52 Hz, 1 H) 1,63 - 1,67 (m, 1 H) 1,69 (s, 3H) 1,83 - 2,07 (m, 10 H) 2,11 - 2,17 (m, 1 H) 2,36 - 2,45 (m, 2 H) 2,51 - 2,62 (m, 2 H) 2,81 (s, 4 H) 2,95 (t, J=5,12 Hz, 1 H) 3,40 - 3,49 (m, 4 H) 3,52 (s, 3 H) 3,65 (s, 3 H) 3,80 - 3,94 (m, 2 H) 4,56 (td, J=10,98, 4,39 Hz, 1 H) 5,46 (dd, J=15,12, 8,78 Hz, 1 H) 5,90 (d, J=10,24 Hz, 1 H) 6,21 (dd, J=15,12, 10,73 Hz, 1 H). Ácido 2-((2R,4R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4- hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4-dien-2-il)-5- metil-4-((piperazina-1-carbonil)oxi)tetraidro-2H-piran-2-il)acético (H1)
[0600] O composto do título foi sintetizado de acordo com a Etapa 4 da seção 1.2.1 para produzir um óleo incolor (16,0 mg, 73% de rendimento).
LC/MS (ESI, m/z), 567,77 [M+H]+. 1 H RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 0,72 (d, J=6,3 Hz, 3 H) 0,80 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 1,03 (d, J=6,3 Hz, 3 H) 1,08 (d, J=6,3 Hz, 3 H) 1,17 (dd, J=13,2, 11,2 Hz, 1 H) 1,25 (s, 3H) 1,36 (q, J=11,4 Hz, 1 H) 1,45-1,50 (m, 2 H) 1,68 (s, 3 H) 1,90 (dd, J=13,42, 4,15 Hz, 1 H) 2,14 (dd, J=11,71, 3,90 Hz, 1 H) 2,36 - 2,52 (m, 3 H) 2,63 (d, J=9,27 Hz, 1 H) 2,95 (dd, J=5,85, 4,39 Hz, 1 H) 3,17 (s l, 4 H) 3,46 - 3,53 (m, 4 H) 3,56 - 3,60 (m, 1 H) 3,69 nr. s, 4 H) 3,74 - 3,82 (m, 2 H) 3,85 - 3,92 (m, 1 H) 4,58 (td, J=10,49, 4,39 Hz, 1 H) 5,49 (dd, J=15,12, 8,78 Hz, 1 H) 5,94 (d, J=10,73 Hz, 1 H) 6,28 (dd, J=14,88, 10,98 Hz, 1 H).
1.2.3 Síntese de H2 1,4-Diazepano-1-carboxilato de (2S,3S,4R,6R)-2-((S,2E,4E)-7- ((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6- metilepta-2,4-dien-2-il)-6-(2-metoxi-2-oxoetil)-3-metiltetraidro-2H-piran-4-ila
[0601] O composto do título foi sintetizado de acordo com a Etapa 3 da seção 1.2.1 (30,3 mg, 60% de rendimento). 1 H RMN (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,71 (d, J=6,11 Hz, 3 H) 0,84 (d, J=6,73 Hz, 3 H) 1,00 - 1,05 (m, 4 H) 1,16 (d, J=6,11 Hz, 3 H) 1,19 - 1,24 (m, 1 H) 1,26 (s, 3 H) 1,32 - 1,40 (m, 1 H) 1,51 (dt, J=9,17, 6,42 Hz, 1 H) 1,63 - 1,67 (m, 1 H) 1,69 (s, 3 H) 1,73 - 1,81 (m, 3 H) 1,83 - 1,90 (m, 2 H) 2,07 - 2,18 (m, 1 H) 2,41 (dd, J=15,28, 6,11 Hz, 2 H) 2,51 - 2,60 (m, 2 H) 2,82 2,95 (m, 5 H) 3,41 - 3,49 (m, 4 H) 3,51 (s, 3 H) 3,64 (s, 3 H) 3,79 - 3,95 (m, 2 H) 4,57 (td, J=10,70, 4,28 Hz, 1 H) 5,45 (dd, J=14,98, 8,86 Hz, 1 H) 5,90 (d, J=11,00 Hz, 1 H) 6,20 (dd, J=14,98, 10,70 Hz, 1 H).
Ácido 2-((2R,4R,5S,6S)-4-((1,4-diazepano-1-carbonil)oxi)-6- ((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2- metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2- il)acético (H2)
[0602] O composto do título foi sintetizado de acordo com a Etapa 4 da seção 1.2.1 para produzir um óleo incolor (20,9 mg, 71% de rendimento). LC/MS (ESI, m/z), 581,81 [M+H]+. 1 H RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 0,74 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 0,80 (d, J=7,32 Hz, 3 H) 1,03 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,08 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,12 - 1,23 (m, 1 H) 1,25 (s, 3 H) 1,31 - 1,41 (m, 1 H) 1,41 - 1,53 (m, 1 H) 1,63 - 1,74 (m, 4 H) 1,84 - 1,93 (m, 1 H) 2,04 (s l, 2 H) 2,11 - 2,21 (m, 1 H) 2,34 - 2,54 (m, 3 H) 2,63 (d, J=9,27 Hz, 1 H) 2,90 - 2,98 (m, 2 H) 3,21 - 3,36 (m, 7 H) 3,50 (s, 3 H) 3,53 - 3,66 (m, 2 H) 3,69 - 3,79 (m, 3 H) 3,83 - 3,95 (m, 1 H) 4,57 (s l, 1 H) 5,49 (dd, J=14,88, 9,03 Hz, 1 H) 5,94 (d, J=10,73 Hz, 1 H) 6,24 - 6,36 (m, 1 H).
1.2.4 Síntese de H3 3-(Metilamino)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,6R)-2- ((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2- metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4-dien-2-il)-6-(2-metoxi-2-oxoetil)-3- metiltetraidro-2H-piran-4-ila
[0603] O composto do título foi sintetizado de acordo com a Etapa 3 da seção 1.2.1 para produzir um óleo incolor (9,6 mg, 19% de rendimento). 1H RMN (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,71 (d, J=6,3 Hz, 3 H) 0,85 (d, J=6,73 Hz, 3 H) 0,99 - 1,05 (m, 4 H) 1,17 (d, J=6,11 Hz, 4 H) 1,27 (s, 3 H) 1,32 - 1,45 (m, 1 H) 1,49 - 1,68 (m, 6 H) 1,70 (s, 3 H) 1,88 (dd, J=13,45, 4,89 Hz, 1 H) 2,00 - 2,08 (m, 1 H) 2,10 - 2,17 (m, 1 H) 2,38 - 2,47 (m, 5 H) 2,52 - 2,61 (m, 2 H) 2,94 (t, J=5,50 Hz, 1 H) 3,17 - 3,26 (m, 1 H) 3,43 (d, J=10,4 Hz, 2 H) 3,52 (s, 4 H) 3,65 (s, 3 H) 3,78 - 3,86 (m, 1 H) 3,87 - 3,95 (m, 1 H) 4,51 - 4,57 (m, 1 H) 5,45 (dd, J=14,98, 8,86 Hz, 1 H) 5,90 (d, J=10,39 Hz, 1 H) 6,21 (dd, J=14,98, 10,70 Hz, 1 H). Ácido 2-((2R,4R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4- hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4-dien-2-il)-5- metil-4-((3-(metilamino)pirrolidina-1-carbonil)oxi)tetraidro-2H-piran-2- il)acético (H3)
[0604] O composto do título foi sintetizado de acordo com a Etapa 4 da seção 1.2.1 para produzir um óleo incolor (9,8 mg, rendimento quantitativo). LC/MS (ESI, m/z), 581,81 [M+H]+. 1 H RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 0,71 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 0,85 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 1,02 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,16 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,22 - 1,24 (m, 1 H) 1,26 (s, 3 H) 1,31 - 1,42 (m, 1 H) 1,45 - 1,66 (m, 4 H) 1,69 (s, 3 H) 1,87 (dd, J=13,66, 4,88 Hz, 1 H) 2,02 - 2,20 (m, 2 H) 2,38 - 2,51 (m, 4 H) 2,51 - 2,60 (m, 2 H) 2,94 (t, J=5,12 Hz, 1 H) 3,08 - 3,26 (m, 2 H) 3,33 - 3,40 (m, 1 H) 3,43 (d, J=9,76 Hz, 2 H) 3,51 (s, 3 H) 3,64 (s, 3 H) 3,83 - 3,94 (m, 1 H) 4,51 - 4,59 (m, 1 H) 5,45 (dd, J=15,12, 8,78 Hz, 1 H) 5,89 (d, J=10,73 Hz, 1 H) 6,20
(dd, J=15,12, 10,73 Hz, 1 H).
1.2.5 Síntese de H12
[0605] O composto do título foi sintetizado de acordo com a Etapa 3 (13,8 mg, 91% de rendimento) e a Etapa 4 da seção 1.2.1 para produzir um sólido amorfo branco (4,58 mg, 76% de rendimento). LC/MS (ESI, m/z), 581,55 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,71 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,85 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 1,03 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,16 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,26 (s, 4 H) 1,48 - 1,57 (m, 1 H) 1,61 - 1,68 (m, 1 H) 1,89 (dd, J=13,66, 4,39 Hz, 1 H) 2,20 (d l, J=8,29 Hz, 1 H) 2,30 (s, 4 H) 2,33 - 2,51 (m, 6 H) 2,52 - 2,57 (m, 2 H) 2,57 - 2,63 (m, 1 H) 2,78 - 3,21 (m, 9 H) 3,35 - 3,66 (m, 9 H) 3,70 - 3,99 (m, 2 H) 4,52 (d l, J=3,90 Hz, 1 H) 5,41 - 5,58 (m, 1 H) 5,92 (d l, J=11,22 Hz, 1 H) 6,13 - 6,29 (m, 1 H).
1.2.6 Síntese de H4
[0606] H4 foi sintetizado de acordo com o Esquema 2:
Esquema 2 Etapa 1: Acetato de 2,5-dioxopirrolidin-1-il 2-((2R,5S,6S)-6- ((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2- metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-ila)
[0607] A uma mistura de ácido 2-((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7- ((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6- metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)acético (herboxidieno, 300 mg, 0,684 mmol) em DCM (10 ml) a 0°C foi adicionado DCC (310 mg, 1,505 mmol) e a mistura resultante foi agitada por 15 minutos. Então, N- hidroxisuccinamida (173 mg, 1,505 mmol) foi adicionada à mistura. A mistura resultante foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 16 horas. Subsequentemente, a mistura foi filtrada através de celite e a torta do filtro foi lavada com DCM. O filtrado foi concentrado a vácuo e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em gel de sílica (12 g, Heptano/AcOEt = 50/50 a 0/100) para produzir o composto do título como um sólido incolor. (357 mg, 97% de rendimento).
H RMN (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,66 (d, J=6,73 Hz, 3 H) 0,83 - 0,89 (m, 3 H) 1,03 (d, J=6,73 Hz, 3 H) 1,17 (d, J=6,1 Hz, 3 H) 1,19 - 1,25 (m, 4 H) 1,27 (s, 3H) 1,39 - 1,56 (m, 3 H) 1,59 (s, 3H) 1,70 (s, 3 H) 1,79 - 1,93 (m, 3 H) 2,36 - 2,43 (m, 1 H) 2,52 - 2,55 (m, 2 H) 2,70 (dd, J=15,28, 7,34 Hz, 1 H) 2,81 (s l, 3 H) 2,83 - 2,90 (m, 1 H) 2,95 (t, J=5,50 Hz, 1 H) 3,34 (d, J=9,78 Hz, 1 H) 3,52 (s, 3 H) 3,79 - 3,87 (m, 2 H) 5,43 (dd, J=15,28, 9,17 Hz, 1 H) 5,88 (d, J=11,00 Hz, 1 H) 6,21 - 6,26 (m, 1 H). Etapa 2: Ácido (S)-5-hidroxi-2-(2-((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7- ((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6- metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)acetamido)pentanoico
[0608] A uma mistura do composto obtida na Etapa 1 (40 mg, 0,075 mmol) e ácido (S)-2-amino-5-hidroxipentanoico (19,88 mg, 0,149 mmol) em DMF (2 ml) foi adicionado DIPEA (0,065 ml, 0,373 mmol). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas e, então, diluída com AcOEt. A camada orgânica foi isolada, lavada com água e salmoura, seca com sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo resultante foi usado na Etapa 3 sem purificação adicional. 1 H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,66 (d, J = 6,3 Hz, 3 H) 0,85 (d, J = 6,8 Hz, 3 H) 1,03 (d, J = 6,8 Hz, 3 H) 1,15 (d, J = 6,3 Hz, 3 H) 1,19 1,23 (m, 2 H) 1,27 (s, 3H) 1,40 1,61 (m, 6H) 1,72 (s, 3H) 1,82 - 1,93 (m, 3 H) 2,37 - 2,43 (m, 2 H) 2,56 (d, J = 9,8 Hz, 1 H) 2,99 (t, J = 5,3 Hz, 1 H) 3,33 (d, J = 9,8 Hz, 1 H) 3,52 (s, 3H) 3,54 3,70 (m, 4 H) 3,81 3,87 (m, 2 H) 4,56 (d, J = 5,4 Hz, 1 H) 5,48 (dd, J=15,12, 8,29 Hz, 1 H) 5,89 (d, J=11,2 Hz, 1 H) 6,22 (dd, J=15,1, 10,7 Hz, 1 H) 7,30 (d, J = 7,3 Hz 1 H). Etapa 3: Pentanoato de (S)-5-hidroxi-2-(2-((2R,5S,6S)-6- ((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2- metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-
il)acetamido)metila
[0609] A uma mistura do composto obtido a partir da Etapa 2 (35 mg, 0,063 mmol) em THF (2 ml) e metanol (0,5 ml) a 0°C foi adicionado trimetilsilildiazometano (2,0 M em hexanos, 0,095 ml, 0,19 mmol). A mistura foi, então, aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 1 hora. Subsequentemente, a mistura foi resfriada até 0°C e bruscamente arrefecida pela adição de ácido acético. A mistura resultante foi agitada durante 30 minutos e foi, então, concentrada a vácuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em gel de sílica (12 g, Heptano/AcOEt = 90/10 a 30/70) para produzir o composto do título (15,7 mg, 44% de rendimento). 1 H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,66 (d, J = 6,8 Hz, 3 H) 0,85 (d, J = 6,8 Hz, 3 H) 1,03 (d, J = 6,3 Hz, 3 H) 1,16 (d, J = 6,8 Hz, 3 H) 1,19 1,23 (m, 3 H) 1,27 (s, 3 H) 1,47 - 1,70 (m, 7 H) 1,73 (s, 3 H) 1,77 - 1,94 (m, 6 H) 2,34 - 2,59 (m, 5 H) 2,96 (t, J = 5,4 Hz 1 H) 3,29 - 3,40 (m, 1 H) 3,52 (s, 3 H) 3,56 - 3,66 (m, 3 H) 3,70 (s, 3 H) 3,77 - 3,89 (m, 1 H) 4,61 (td, J=8,05, 4,88 Hz, 1 H) 5,46 (dd, J=15,12, 8,78 Hz, 1 H) 5,89 (d, J=10,73 Hz, 1 H) 6,23 (dd, J=15,12, 10,73 Hz, 1 H) 7,10 (d, J=8,29 Hz, 1 H). Etapa 4: Piperazina-1-carboxilato de (S)-4-(2-((2R,5S,6S)-6- ((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2- metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2- il)acetamido)-5-metoxi-5-oxopentila
[0610] A uma mistura do composto produzido na Etapa 3 (15,7 mg, 0,028 mmol), 4-nitrofenilcloroformiato (11,15 mg, 0,055 mmol) e base de Hunig (0,024 ml, 0,138 mmol) em DCM (1 ml) à temperatura ambiente foi adicionado DMAP (1,689 mg, 0,014 mmol). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. Subsequentemente, piperazina (23,82 mg, 0,277 mmol) foi adicionada e a mistura foi agitada por mais 1 h. Então, a mistura foi diluída com DCM e a camada orgânica foi isolada, lavada com água e salmoura, seca com sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo cru foi usado na etapa seguinte sem purificação. Etapa 5: Ácido (S)-2-(2-((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3- ((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6-metilepta- 2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)acetamido)-5-((piperazina-1- carbonil)oxi)pentanoico (H4)
[0611] A uma mistura do resíduo obtido na Etapa 4 (15 eq., 0,022 mmol) em MeOH (1 ml) foi adicionado hidróxido de sódio aquoso (2 N, 100 µl, 0,20 mmol). A mistura foi aquecida até 40°C e agitada durante 2 h. A mistura foi, então, resfriada até 0°C e ácido clorídrico aquoso (100 µl, 2N) foi adicionado. A mistura resultante foi, então, concentrada a vácuo e o resíduo resultante foi purificado por HPLC preparativa (H2O/MeCN/NH3 aq. = 60/40/0,1 a 30/70/0,1) para produzir o composto do título como um óleo incolor. (7,0 mg, 48% de rendimento nas Etapas 4 e 5). LC/MS (ESI, m/z), 666,90 [M+H] +. 1 H RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 0,65 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,81 (d, J=7,32 Hz, 3 H) 0,98 - 1,04 (m, 3 H) 1,08 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,17 (d, J=11,71 Hz, 1 H) 1,22 - 1,28 (m, 4 H) 1,35 (d, J=6,83 Hz, 1 H) 1,46 - 1,66 (m, 10 H) 1,70 (s 3 H) 1,82 - 1,94 (m, 3 H) 2,25 - 2,31 (m, 1 H) 2,36 - 2,45 (m, 2 H)
2,61 - 2,65 (m, 1 H) 2,95 (dd, J=6,10, 4,15 Hz, 1 H) 3,14 (s l, 2 H) 3,50 (s, 3 H) 3,62 3,71 (m, 4 H) 3,76 (t, J = 6,3 Hz, 1 H) 4,03 (dd, J=4,15, 1,71 Hz, 1 H) 4,29 (s l, 1 H) 5,45 (d, J=6,34 Hz, 1 H) 5,87 (d, J=10,73 Hz, 1 H) 6,27 (dd, J=15,12, 10,73 Hz, 1 H).
1.2.7 Procedimento Geral para Síntese de Ligante-Cargas Úteis de MC-Val-Cit-pABC
[0612] O procedimento geral para a síntese de ligante-cargas úteis de MC-Val-Cit-pABC é descrito no Esquema 3.
Esquema 3
[0613] A uma mistura da carga útil (por exemplo, um composto sintetizado de acordo com as etapas supracitadas; 1,0 eq.) e carbonato de 4- ((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido)-3- metilbutanamido)-5-ureidopentanamido)benzil (4-nitrofenila) (1,0 eq.) em DMF (0,028 M) foi adicionado DIPEA (3,03 eq.) à temp. ambiente. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h, concentrada a vácuo e o resíduo resultante foi purificado por HPLC preparativa em fase reversa (H2O/MeCN/HCOOH = 60/40/0,1 a 40/60/0,1) para produzir o composto desejado.
1.2.8 Síntese de ADL1-H1
[0614] ADL1-H1 (ácido 2-((2R,4R,5S,6S)-4-((4-(((4-((R)-2-((S)-2- (6-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido)-3-methylbutanamido)-5- ureidopentanamido)benzil)oxi) carbonil)piperazina-1-carbonil)oxi)-6-((S,2E,4E)- 7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6- metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)acético) foi sintetizado de acordo com o procedimento geral descrito na seção 1.2.7 e obtido como um óleo incolor (12,7 mg, 39% de rendimento). 1 H RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 0,71 (d, J=5,85 Hz, 4 H) 0,80 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 0,94 (dd, J= 6,1, 3,2 Hz, 6H) 1,01 (d, J=6,3 Hz, 3 H) 1,08 (d, J=6,6 Hz, 3 H) 1,13-1,19 (m, 1H) 1,25 (s, 4 H) 1,29 - 1,36 (m, 2 H) 1,46 - 1,65 (m, 7H) 1,68 (s, 3H) 1,71-1,76 (m, 1H) 1,84 - 1,93 (m, 2 H) 2,02 - 2,15 (m, 2 H) 2,25 (t, J=7,32 Hz, 2 H) 2,37 - 2,51 (m, 3 H) 2,58 - 2,67 (m, 2 H) 2,79 (s, 4 H) 2,82 - 2,96 (m, 2 H) 3,08 - 3,23 (m, 8 H) 3,39 - 3,54 (m, 15 H) 3,76 (t, J=6,34 Hz, 1 H) 3,85 - 3,97 (m, 2 H) 4,13 (d, J=7,32 Hz, 1 H) 4,46 - 4,58 (m, 2 H) 5,07 (s, 2 H) 5,48 (dd, J=14,88, 9,03 Hz, 1 H) 5,93 (d, J=10,73 Hz, 1 H) 6,28 (dd, J=14,88, 10,98 Hz, 1 H) 7,30 (d, J=7,81 Hz, 2 H) 7,57 (d, J=7,81 Hz, 2 H).
1.2.9 ADL1-H4
[0615] ADL1-H4 (ácido (S)-5-((4-(((4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-dioxo- 2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido)-3-metilbutanamido)-5- ureidopentanamido)benzil)oxi)carbonil)piperazina-1-carbonil)oxi)-2-(2- ((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan- 2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2- il)acetamido)pentanoico) foi sintetizado de acordo com o procedimento geral descrito na seção 1.2.7 e obtido como um óleo incolor (2,4 mg, 44% de rendimento). 1 H RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 0,64 (d, J=6,50 Hz, 3 H) 0,80 (d, J=6,80 Hz, 3 H) 0,84 - 0,89 (m, 1 H) 0,89 - 0,97 (m, 6 H) 0,97 - 1,03 (m, 2 H) 1,08 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,10 - 1,16 (m, 1 H) 1,22 - 1,25 (m, 3 H) 1,25 - 1,32 (m, 6 H) 1,49 - 1,66 (m, 9 H) 1,69 (s, 3 H) 1,80 - 1,95 (m, 3 H) 1,95 - 2,15 (m, 2 H) 2,25 (t, J=7,20 Hz, 2 H) 2,33 - 2,48 (m, 1 H) 2,62 (d, J=9,76 Hz, 1 H) 2,91 - 2,98 (m, 1 H) 3,04 - 3,13 (m, 1 H) 3,39 - 3,47 (m, 7 H) 3,49 (s, 3 H) 3,63 (s, 1 H) 3,76 (t, J=6,50 Hz, 1 H) 3,99 (s l, 1 H) 4,14 (d, J=7,20 Hz, 1 H) 4,44 - 4,51 (m, 1 H) 4,44 - 4,51 (m, 1 H) 5,07 (s l, 2 H) 5,43 (dd, J=15,37, 9,03 Hz, 1 H) 5,82 - 5,90 (m, 1 H) 6,19 - 6,36 (m, 1 H) 6,77 (s, 1 H) 7,30 (d, J=8,29 Hz, 2 H) 7,57 (d, J=8,78 Hz, 2 H).
1.2.10 ADL1-H2
[0616] ADL1-H2 (ácido 2-((2R,4R,5S,6S)-4-((4-(((4-((R)-2-((R)-2- (6-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido)-3-metilbutanamido)-5- ureidopentanamido)benzil)oxi)carbonil)-1,4-diazepano-1-carbonil)oxi)-6- ((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2- metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)acético) foi sintetizado de acordo com o procedimento geral descrito na seção 1.2.7 e obtido como um óleo incolor (10,4 mg, 34% de rendimento). 1 H RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 0,61 0,68 (m, 3 H) 0,79 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,94 (t, J=6,10 Hz, 6 H) 1,02 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,04 - 1,10 (m, 3 H) 1,10 - 1,17 (m, 1 H) 1,19 - 1,31 (m, 8 H) 1,42 - 1,49 (m, 2 H) 1,51 - 1,65 (m, 8 H) 1,67 (s, 3 H) 1,69 - 1,78 (s l, 3 H) 1,83 - 1,93 (m, 2 H) 1,94 (s, 1 H) 2,00 - 2,10 (m, 2 H) 2,25 (t, J=7,32 Hz, 2 H) 2,30 - 2,38 (m, 1 H) 2,38 - 2,49 (m, 2 H) 2,63 (d, J=9,27 Hz, 1 H) 2,94 (t, J=5,12 Hz, 1 H) 3,05 - 3,21 (m, 2 H) 3,39 - 3,48 (m, 7 H) 3,49 (s, 3 H) 3,52 - 3,63 (m, 5 H) 3,67 - 3,81 (m, 2 H) 3,90 (s l, 1 H) 4,17 (t, J=7,30 Hz, 1 H) 4,45 - 4,55 (m, 2 H) 5,00 - 5,08 (m, 2 H) 5,48 (dd, J=14,88, 9,51 Hz, 1 H) 5,87 - 5,95 (m, 1 H) 6,23 - 6,32 (m, 1 H) 6,76 (s, J=4,01 Hz, 2 H) 7,28 (q, J=7,81 Hz, 2 H) 7,58 (t, J=7,07 Hz, 2 H).
1.2.11 ADL1-H3
[0617] ADL1-H3 (ácido 2-((2R,4R,5S,6S)-4-((3-((((4-((R)-2-((R)-2- (6-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido)-3-metilbutanamido)-5- ureidopentanamido)benzil)oxi)carbonil) (metil)amino)pirrolidina-1-carbonil)oxi)- 6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2- metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)acético) foi sintetizado de acordo com o procedimento geral descrito na seção 1.2.7 e obtido como um óleo incolor (18,8 mg, 37% de rendimento). 1 H RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 0,72 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,80 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,90 - 0,97 (m, 6 H) 1,02 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,08 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,16 (dd, J=12,93, 11,46 Hz, 1 H) 1,22 - 1,28 (m, 4 H) 1,28 - 1,37 (m, 2 H) 1,44 - 1,67 (m, 8 H) 1,68 (s, 3 H) 1,90 (dd, J=13,42, 4,15 Hz, 2 H) 2,00 - 2,15 (m, 4 H) 2,25 (t, J=7,32 Hz, 2 H) 2,38 - 2,52 (m, 3 H) 2,63 (d, J=9,27 Hz, 1 H) 2,84 (s, 3 H) 2,93 - 2,97 (m, 1 H) 3,08 (d, J=6,34 Hz, 1 H) 3,16 (d, J=6,83 Hz, 1 H) 3,42 - 3,47 (m, 3 H) 3,49 (s, 3 H) 3,51 - 3,57 (m, 2 H) 3,76 (t, J=6,34 Hz, 1 H) 3,85 - 3,92 (m, 1 H) 4,14 - 4,19 (m, 1 H) 4,47 - 4,55 (m, 2 H) 4,71 (d, J=7,32 Hz, 1 H) 5,06 (s, 2 H) 5,48 (dd, J=14,88, 9,03 Hz, 1 H) 5,93 (d, J=11,22 Hz, 1 H) 6,28 (dd, J=14,88, 10,98 Hz, 1 H) 6,76 (s, J=5,13 Hz, 2 H) 7,30 (d, J=8,29 Hz, 2 H) 7,56 (d, J=8,29 Hz, 2 H).
1.3 Preparação de ADL1-H5, ADL1-H6 e ADL1-H7
1.3.1 Visão Geral - Procedimento Geral 2
Esquema 3 Etapa 1: 2-((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4- hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4-dien-2-il)-5- metiltetraidro-2H-piran-2-il)acetamida
[0618] A uma mistura de ácido 2-((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7- ((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6- metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)acético (herboxidieno, 750 mg, 1,71 mmol) e trietilamina (1,192 ml, 8,55 mmol) em THF (15 ml) foi adicionado cloroformato de etila (0,767 ml, 5,13 mmol) a 0°C. A uma mistura resultante foi agitada a 0°C por 30 minutos e, então, amônia em metanol (7 M, 3,66 ml, 25,65 mmol) foi adicionada. A mistura resultante foi agitada por mais 30 minutos à mesma temperatura antes da concentração a vácuo e purificação do resíduo resultante por cromatografia em gel de sílica (Heptano/AcOEt = 50/50 a 0/100, então, AcOEt = 80/20) para produzir o composto do título como um sólido incolor (632 mg, 85% de rendimento). 1 H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,67 (d, J=6,34 Hz, 3
H) 0,85 (d, J = 6,7 Hz, 3 H) 1,05 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,16 (d, J=6,7 Hz, 3 H) 1,20 - 1,25 (m, 3 H) 1,27 (s, 3 H) 1,34 - 1,45 (m, 1 H) 1,49 - 1,65 (m, 7 H) 1,71 (s, 3 H) 1,82 - 1,97 (m, 2 H) 2,01 - 2,05 (m, 1 H) 2,33 - 2,48 (m, 3 H) 2,54 (d, J=9,27 Hz, 2 H) 2,95 - 2,99 (m, 1 H) 3,34 (d, J = 10,0 Hz, 1 H) 3,52 (s, 3 H) 3,63 - 3,70 (m, 1 H) 3,80 - 3,87 (m, 1 H) 4,08 - 4,14 (m, 1 H) 5,24 - 5,33 (m, 1 H) 5,47 (dd, J=15,12, 9,27 Hz, 1 H) 5,90 (d, J=10,73 Hz, 1 H) 6,22 (dd, J=14,88, 10,98 Hz, 1 H) 6,61 (s l, 1 H). Etapa 2: 2-((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-3- metoxi-4-((trietilsilil)oxi)pentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4- dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)acetamida
[0619] A uma mistura do composto isolado da Etapa 1 (719 mg, 1,446 mmol) em DCM (15 ml) e trietilamina (2,015 ml, 14,458 mmol) a 0°C foi adicionado clorotrietilsilano (1090 mg, 7,229 mmol) e N,N-dimetilpiridin-4-amina (177 mg, 1,446 mmol). A mistura resultante foi, então, aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 16 horas. Após a agitação, a mistura foi diluída com DCM (100 ml) e a mistura foi lavada com água e salmoura, seca com sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo resultante foi combinado com em AcOEt (100 ml) e sílica funcionalizada com amino (50 g). A suspensão resultante foi agitada em temperatura ambiente por 16 horas e, então, filtrada. O filtrado foi lavado com AcOEt/MeOH (9/1, 150 ml). O licor-mãe foi concentrado a vácuo e o resíduo isolado foi purificado por cromatografia em gel de sílica (40 g, Heptano/AcOEt = 70/30 a 0/100) para produzir o composto do título como um sólido incolor (807 mg, quant.). 1 H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,60 (q, J = 7,8 Hz, 6 H) 0,67 (d, J = 6,3 Hz, 3 H) 0,76 (d, J=7,32 Hz, 3 H) 0,95 (t, J = 7,8 Hz, 9 H) 1,04 (td, J = 3,3, 1,7 Hz, 6 H) 1,17 - 1,20 (m, 1 H) 1,24 (s, 3 H) 1,34 - 1,46 (m, 2
H) 1,50 - 1,58 (m, 1 H) 1,61 (s, 3 H) 1,70 (s, 3 H) 1,82 - 1,92 (m, 2 H) 2,33 - 2,45 (m, 3 H) 2,63 (d, J=9,27 Hz, 1 H) 3,05 - 3,09 (m, 1 H), 3,34 (d, J=9,76 Hz, 1 H) 3,50 (s, 3 H) 3,62 - 3,70 (m, 1 H) 3,85 (t, J=6,59 Hz, 1 H) 5,29 (s l, 1 H) 5,48 (dd, J=14,88, 8,54 Hz, 1 H) 5,90 (d, J=10,73 Hz, 1 H) 6,21 (dd, J=14,64, 11,22 Hz, 1 H) 6,63 (s l, 1 H). Etapa 3: Carbamato de (((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3- ((2R,3R,4R)-3-metoxi-4-((trietilsilil)oxi)pentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6- metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)metil)alila
[0620] Uma mistura do composto isolado na Etapa 2 (807 mg, 1,462 mmol) e diacetato de iodobenzeno (1413 mg, 4,387 mmol) em álcool alílico (20 ml) foi aquecida até 60°C e agitada por 3 horas. A mistura foi, então, resfriada até a temperatura ambiente, e à mesma foram adicionados AcOEt e bicarbonato de sódio aquoso (100 ml cada). A fase orgânica foi isolada e a fase aquosa foi extraída com AcOEt. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água e salmoura, secas com sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em gel de sílica (40g, Heptano/AcOEt = 90/10 a 50/50) para produzir o composto do título como um óleo incolor (663 mg, 75% de rendimento). 1 H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,55 - 0,67 (m, 9 H) 0,77 (d, J = 6,7 Hz, 3 H) 0,87 (t, J = 6,5 Hz, 2 H) 0,95 (t, J = 7,8 Hz, 9 H) 1,04 (t, J = 5,5 Hz, 6 H) 1,16 - 1,32 (m, 9 H) 1,39 - 1,53 (m, 2 H) 1,58 (s, 3 H) 1,69 (s, 3 H) 1,80 - 1,91 (m, 2 H) 2,40 (s l, 1 H) 2,64 (d, J=9,27 Hz, 1 H) 3,01 - 3,10 (m, 2 H) 3,26 (d, J=10,24 Hz, 1 H) 3,35 - 3,44 (m, 2 H) 3,50 (s, 3 H) 3,85 (t, J = 6,5 Hz, 1 H) 4,54 (d, J=5,37 Hz, 2 H) 5,12 (s l, 1 H) 5,19 (dt, J=10,49, 1,10 Hz, 1 H) 5,25 - 5,33 (m, 1 H) 5,45 (dd, J=15,12, 8,78 Hz, 1 H) 5,85 - 5,97 (m, 2 H) 6,22 (dd, J=14,88, 10,98 Hz, 1 H).
Etapa 4: ((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-3- metoxi-4-((trietilsilil)oxi)pentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4- dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)metanamina
[0621] A uma mistura do composto obtido na Etapa 3 (663 mg, 1,091 mmol) e THF (15 ml, 183,065 mmol) foi adicionado o complexo borano- dimetilamina (643 mg, 10,906 mmol). Após a purga do vaso com nitrogênio, tetraquis(trifenilfosfina) paládio(0) (37,8 mg, 0,033 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura foi, então, diluída com AcOEt e bicarbonato de sódio aquoso saturado (100 ml cada), e as fases foram separadas. A camada aquosa foi extraída com AcOEt (50 ml x 3) e, então, as frações orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secas com sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em gel de sílica funcionalizada com amino (40g, Heptano/AcOEt = 70/30 a 0/100) para produzir o composto do título como um sólido branco (525 mg, 92% de rendimento). 1 H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,60 (q, J=7,80 Hz, 6 H) 0,65 (d, J = 6,8 Hz, 3 H) 0,77 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,95 (t, J=7,8 Hz, 9 H) 1,03 (dd, J = 9,0, 6,6 Hz, 6 H) 1,14 - 1,21 (m, 1 H) 1,23 (s, 3 H), 1,30 1,34 (m, 1 H) 1,42 (ddd, J = 9,4, 7, 2,7 Hz, 1 H) 1,48 - 1,59 (m, 6 H) 1,70 (s, 3 H) 1,81 - 1,91 (m, 2 H) 2,34 - 2,44 (m, 1 H) 2,62 - 2,74 (m, 3 H) 3,06 (dd, J=6,83, 2,93 Hz, 1 H) 3,25 - 3,31 (m, 2 H) 3,50 (s, 3 H) 3,81 - 3,89 (quin, J = 6,5 Hz, 1 H) 5,44 (dd, J=15,12, 8,78 Hz, 1 H) 5,88 (d, J=10,73 Hz, 1 H) 6,22 (dd, J=15,12, 10,73 Hz, 1 H). Etapa 5: 6-hidroxi-N-(((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3- ((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6-metilepta-
2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)metil)-N-metilexanamida
[0622] A uma mistura do composto isolado na Etapa 5 (133 mg, 0,254 mmol) e ácido 6-metoxi-6-oxoexanoico (0,056 ml, 0,381 mmol) em THF (2 ml) foi adicionado HATU (145 mg, 0,381 mmol) e a mistura foi, então, agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. Subsequentemente, AcOEt foi adicionado e a mistura resultante foi lavada com água e salmoura, seca com sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo obtido foi combinado em THF (2 ml) e resfriado até 0oC. Então, boroidreto de lítio (22,1 mg, 1,016 mmol) foi adicionado, e a mistura foi agitada à mesma temperatura durante 30 minutos. Subsequentemente, a mistura foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante mais 1 hora. À mistura foi adicionado cloreto de amônio aquoso saturado, seguido de AcOEt e água. A fase orgânica foi isolada, lavada com água e salmoura, seca com sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo resultante foi, então, dissolvido em THF (5 ml, 61,02 mmol) e TBAF (solução 1 M em THF, 0,508 ml, 0,508 mmol) foi adicionado a 0°C. A mistura resultante foi agitada a 0°C durante 30 minutos, então, aquecida até a temperatura ambiente, seguido de agitação à temperatura ambiente durante mais 2 horas. A mistura foi, então, diluída com AcOEt e a fase orgânica foi isolada, lavada com água e salmoura, seca com sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em gel de sílica (40 g de sílica, heptano/EtOAc a 0 a 100%) para produzir o composto do título como um óleo incolor (113 mg, 85% de rendimento). 1 H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,64 (d, J = 6,3 Hz, 3 H) 0,84 (d, J = 6,8 Hz, 3 H) 1,03 (d, J = 6,3 H, 3 H) 1,14 (d, J = 6,3 H, 3 H) 1,17 - 1,21 (m, 3 H) 1,25 (s, 3 H) 1,27 - 1,40 (m, 3 H) 1,46 - 1,60 (m, 6 H) 1,60 - 1,67
(m, 2 H) 1,69 (s, 3 H) 1,77 - 1,92 (m, 3 H) 2,15 (t, J = 7,3 Hz, 2 H) 2,40 (s l, 1 H) 2,53 (d, J=9,76 Hz, 2 H) 2,92 - 3,02 (m, 2 H) 3,26 (d, J=9,76 Hz, 1 H) 3,34 - 3,45 (m, 1 H) 3,50 (s, 3 H) 3,52 - 3,62 (m, 3 H) 3,80 - 3,83 (m, 1 H) 5,45 (dd, J=15,12, 8,78 Hz, 1 H) 5,89 (d, J=10,73 Hz, 1 H) 5,96 (s l, 1 H) 6,23 (dd, J=14,88, 10,98 Hz, 1 H). Etapa 6: Procedimento Geral Síntese de Carbamato
[0623] A uma mistura do composto isolado da Etapa 5 (28,3 mg, 0,054 mmol), cloroformato de 4-nitrofenila (2,0 eq.) e base de Hunig (5 eq.) em DCM (0,05 M) foi adicionado DMAP (0,5 eq.). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. Então, amina (2,0 eq.) foi adicionada, e a mistura foi agitada durante mais 1 hora. Então, a mistura foi diluída com diclorometano e a camada orgânica foi isolada, lavada com água e salmoura, seca com sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo resultante foi, então, purificado por cromatografia em gel de sílica funcionalizada com amino para produzir o composto desejado.
1.3.2 Síntese de ADL1-H5
1.3.2.1 Síntese de H5 Piperazina-1-carboxilato de 6-((((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7- ((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6- metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)metil)amino)-6- oxoexila (H5)
[0624] As Etapas 1 a 6 descritas na seção 1.3.1 foram empregadas para produzir o composto do título como um óleo incolor (24,5 mg, 71% de rendimento). LC/MS (ESI, m/z), 636,89 [M+H]+. 1 H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,65 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 0,85 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,95 (dd, J = 16,8, 6,6 Hz, 1 H) 1,03 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,15 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,18 - 1,25 (m, 2 H) 1,26 (s, 3 H) 1,29 - 1,40 (m, 3
H) 1,47 - 1,69 (m, 8 H) 1,70 (s, 3 H) 1,79 - 1,92 (m, 2 H) 1,92 - 2,07 (m, 4 H) 2,15 (t, J=7,56 Hz, 2 H) 2,36 - 2,45 (m, 1 H) 2,54 (d, J=9,27 Hz, 1 H) 2,80 (s l, 4 H) 2,89 - 3,04 (m, 2 H) 3,27 (d, J=10,24 Hz, 1 H) 3,35 - 3,46 (m, 5 H) 3,51 (s, 3 H) 3,52 - 3,58 (m, 2 H) 3,83 (t, J=6,34 Hz, 1 H) 4,05 (t, J=6,34 Hz, 2 H) 5,46 (dd, J=15,12, 8,78 Hz, 1 H) 5,82 - 5,95 (m, 2 H) 6,24 (dd, J=15,12, 10,73 Hz, 1 H).
1.3.2.2 Síntese de ADL1-H5 Piperazina-1,4-dicarboxilato de 1-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-dioxo- 2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido)-3-metilbutanamido)-5- ureidopentanamido)benzil) 4-(6-((((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3- ((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6-metilepta- 2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)metil)amino)-6-oxoexila) (ADL1- H5)
[0625] O procedimento descrito na seção 1.2.7 foi empregado para produzir o composto do título como um óleo incolor (25,8 mg, 54% de rendimento). 1 H RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 0,65 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,80 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,94 (dd, J=6,34, 4,39 Hz, 7 H) 1,01 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,07 (d, J=6,30 Hz, 4 H) 1,11 - 1,38 (m, 14 H) 1,45 - 1,66 (m, 14 H) 1,69 (s, 3 H) 1,70 - 1,79 (m, 1 H) 1,80 - 1,92 (m, 3 H) 2,00 - 2,09 (m, 1 H) 2,17 (t, J=7,07 Hz, 2 H) 2,25 (t, J=7,32 Hz, 3 H) 2,42 (s l, 1 H) 2,63 (d, J=9,76 Hz, 1 H) 2,95 (dd, J=5,85, 4,39 Hz, 1 H) 3,02 - 3,11 (m, 2 H) 3,17 (d, J=6,83 Hz, 1 H) 3,37 - 3,48 (m, 14 H) 3,50 (s, 4 H) 3,53 (t, J=4,50 Hz, 2 H) 3,63 - 3,67 (m, 2 H) 3,76 (t, J=6,34 Hz, 1 H) 4,05 (t, J=6,34 Hz, 3 H) 4,14 (d, J=7,32 Hz, 1 H) 4,48 (dd, J=8,78, 4,88 Hz, 1 H) 5,06 (s, 2 H) 5,46 (dd, J=15,12, 8,78 Hz, 1 H) 5,90 (d,
J=10,73 Hz, 1 H) 6,20 - 6,38 (m, 1 H) 6,76 (s 2 H) 7,30 (d, J=8,29 Hz, 2 H) 7,57 (d, J=8,29 Hz, 2 H).
1.3.3 Síntese de ADL1-H6
1.3.3.1 Síntese de H6 1,4-Diazepano-1-carboxilato de 6-((((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7- ((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6- metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)metil)amino)-6- oxoexila (H6)
[0626] As Etapas 1 a 6 descritas na seção 1.3.1 foram empregadas para produzir o composto do título como um óleo incolor (15,3 mg, 43% de rendimento). LC/MS (ESI, m/z), 650,92[M+H]+. 1 H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,65 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 0,85 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 0,93 - 1,00 (m, 1 H) 1,03 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 1,16 (d, J = 6,83 Hz, 3 H) 1,18 - 1,24 (m, 2 H) 1,27 (s, 3 H) 1,29 - 1,41 (m, 3 H) 1,49 - 1,55 (m, 2 H) 1,59 - 1,68 (m, 5 H) 1,71 (s, 3 H) 1,73 - 1,92 (m, 7 H) 2,16 (t, J=7,56 Hz, 2 H) 2,36 - 2,46 (m, 1 H) 2,54 (d, J=9,27 Hz, 1 H) 2,81 - 2,93 (m, 4 H) 2,93 - 3,04 (m, 2 H) 3,27 (d, J=9,76 Hz, 1 H) 3,37 - 3,49 (m, 4 H) 3,52 (s, 3 H) 3,54 3,59 (m, 2 H) 3,79 - 3,88 (m, 1 H) 4,05 (t, J=6,34 Hz, 2 H) 5,46 (dd, J=15,12, 8,78 Hz, 1 H) 5,82 - 5,96 (m, 2 H) 6,24 (dd, J=15,12, 10,73 Hz, 1 H).
1.3.3.2 Síntese de ADL1-H6 1,4-Diazepano-1,4-dicarboxilato de 1-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5- dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido)-3-methylbutanamido)-5-
ureidopentanamido)benzil) 4-(6-((((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3- ((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6-metilepta- 2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)metil)amino)-6-oxoexila) (ADL- H6)
[0627] O procedimento descrito na seção 1.2.7 foi empregado para produzir o composto do título como um óleo incolor (11,6 mg, 52% de rendimento). 1 H RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 0,65 (d, J = 6,34 Hz, 3 H) 0,80 (d, J = 6,83 Hz , 2 H) 0,94 (dd, J=6,83, 4,39 Hz, 6 H) 0,98 - 1,16 (m, 9 H) 1,19 - 1,36 (m, 9 H) 1,44 - 1,65 (m, 14 H) 1,69 (s, 3 H) 1,71 - 1,78 (m, 4 H) 1,80 - 1,92 (m, 3 H) 2,00 - 2,10 (m, 1 H) 2,11 - 2,19 (m, 2 H) 2,25 (t, J=7,56 Hz, 3 H) 3,03 - 3,21 (m, 4 H) 3,36 - 3,49 (m, 10 H) 3,49 - 3,51 (m, 3 H) 3,51 - 3,57 (m, 12 H) 3,62 - 3,67 (m, 8 H) 3,70 - 3,82 (m, 1 H) 3,97 - 4,05 (m, 2 H) 4,14 (d, J=7,32 Hz, 1 H) 4,46 - 4,52 (m, 1 H) 5,00 - 5,08 (m, 3 H) 5,35 - 5,52 (m, 1 H) 5,35 - 5,52 (m, 1 H) 5,87 - 5,95 (m, 1 H) 6,24 - 6,33 (m, 1 H) 6,76 (s, 2 H) 7,26 - 7,37 (m, 3 H) 7,57 (d, J=7,32 Hz, 3 H) 8,19 - 8,24 (m, 1 H).
1.3.4 Síntese de ADL1-H7
1.3.4.1 Síntese de H7 Pirrolidina-1-carboxilato de 6-((((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7- ((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6- metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)metil)amino)-6-oxoexil 3-(metilamino) (H7)
[0628] As Etapas 1 a 6 descritas na seção 1.3.1 foram empregadas para produzir o composto do título como um óleo incolor (26,6 mg, 76% de rendimento). LC/MS (ESI, m/z), 650,88[M+H]+. 1 H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,65 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 0,85 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 0,93-0,99 (m, 1 H) 1,04 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,16
(dd, J=6,34, 0,98 Hz, 3 H) 1,19 1,22 (m, 2 H) 1,27 (s, 3 H) 1,31 - 1,41 (m, 3 H) 1,47 - 1,67 (m, 8 H) 1,70 (s, 4 H) 1,80 - 1,87 (m, 2 H) 1,89 (d, J=3,90 Hz, 1 H) 2,03 (dd, J=12,68, 6,34 Hz, 1 H) 2,15 (t, J=7,32 Hz, 2 H) 2,41 (m, 3 H) 2,54 (d, J=9,76 Hz, 1 H) 2,94 - 3,13 (m, 2 H) 3,20 (m, 1 H) 3,27 (d, J=9,76 Hz, 1 H) 3,35 - 3,50 (m, 3 H) 3,51 (s, 3 H) 3,53 - 3,60 (m, 2 H) 3,79 - 3,88 (m, 1 H) 4,04 (t, J=6,34 Hz, 2 H) 5,46 (dd, J=15,12, 8,78 Hz, 1 H) 5,82 - 5,96 (m, 2 H) 6,24 (dd, J=14,88, 10,98 Hz, 1 H).
1.3.4.2 Síntese de ADL1-H7 Pirrolidina-1-carboxilato de 6-((((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7- ((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6- metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)metil)amino)-6-oxoexil 3-((((4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido)-3- methylbutanamido)-5-ureidopentanamido)benzil)oxi)carbonil) (metil)amino) (ADL1-H7)
[0629] O procedimento descrito na seção 1.2.7 foi empregado (a mistura foi agitada por 16 horas em vez de 2 horas) para produzir o composto do título como um óleo incolor (20,1 mg, 54% de rendimento). 1 H RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 0,65 (d, J=6,30 Hz, 3 H) 0,80 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,94 (dd, J=6,59, 4,63 Hz, 7 H) 1,01 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,08 (d, J=6,34 Hz, 4 H) 1,11 - 1,23 (m, 4 H) 1,23 - 1,27 (m, 6 H) 1,27 - 1,38 (m, 5 H) 1,43 - 1,65 (m, 14 H) 1,69 (s, 3 H) 1,70 - 1,77 (m, 1 H) 1,80 - 1,92 (m, 3 H) 2,00 - 2,09 (m, 3 H) 2,17 (t, J=7,32 Hz, 2 H) 2,25 (t, J=7,30 Hz, 3 H) 2,38 - 2,46 (m, 1 H) 2,63 (d, J=9,27 Hz, 1 H) 2,83 (s, 3 H) 2,84 (s, 3 H) 2,92 - 2,96 (m, 1 H) 2,97 (s, 3 H) 3,02 - 3,21 (m, 4 H) 3,30 - 3,42 (m, 3 H) 3,45 (t, J=7,07 Hz, 3 H) 3,50 (s, 3 H) 3,51 - 3,58 (m, 3 H) 3,72 - 3,80 (m, 1 H) 4,03 (t, J=6,34 Hz, 2 H)
4,15 (d, J=7,32 Hz, 1 H) 4,49 (dd, J=9,03, 5,12 Hz, 1 H) 5,06 (s, 2 H) 5,46 (dd, J=14,88, 9,03 Hz, 1 H) 5,90 (d, J=11,22 Hz, 1 H) 6,28 (dd, J=14,88, 10,98 Hz, 1 H) 6,76 (s, 2 H) 7,30 (d, J=5,90 Hz, 2 H) 7,57 (d, J=8,29 Hz, 2 H) 7,95 (s, 1 H).
1.4 Síntese de ADL1-H8, ADL1-H9 e ADL1-H10
1.4.1 Visão Geral - Procedimento Geral 4 Esquema 4 Etapa 1: 3-hidroxipropanoato de terc-butila
[0630] A uma mistura de hidreto de sódio (269 mg, 6,157 mmol) em DMF (30 ml) foi adicionado 3-hidroxipropanoato de terc-butila (0,909 ml, 6,157 mmol) a 0°C. A mistura foi agitada a 0°C durante 1 hora e, então, foi adicionado bromoacetato de metila (0,624 ml, 6,157 mmol) por gotejamento. A mistura resultante foi aquecida até a temperatura ambiente e foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. Subsequentemente, cloreto de amônio aquoso saturado foi adicionado e a mistura foi extraída com AcOEt. Os extratos orgânicos combinados foram, então, lavados com água e salmoura, secas com sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo. O resíduo isolado foi purificado por cromatografia em gel de sílica (80 g, Heptano/AcOEt = 80/20 a 50/50) para produzir o composto do título (97 mg, 7% de rendimento) como um óleo incolor. 1 H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 1,42 (s, 9 H) 2,49 -
2,58 (m, 2 H) 3,41 (s, 3 H) 3,69 - 3,79 (m, 2 H) 4,05 - 4,13 (m, 2 H). Etapa 2: Ácido 3-(2-metoxi-2-oxoetoxi)propanoico
[0631] Uma mistura de 3-(2-metoxi-2-oxoetoxi)propanoato de terc- butila (66 mg, 0,302 mmol) em diclorometano (2 ml) e TFA (2 ml) foi agitado à temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura foi, então, concentrada até secar para produzir o composto do título como um óleo incolor (58 mg, 100%): 1 H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 2,62 - 2,78 (m, 2 H) 3,76 (s, 3 H) 3,78 - 3,85 (m, 2 H) 4,14 (d, J=1,95 Hz, 2 H). Etapa 3: N-(((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4- hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4-dien-2-il)-5- metiltetraidro-2H-piran-2-il)metil)-3-(2-hidroxietoxi)propenamida
[0632] A uma mistura de ((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3- ((2R,3R,4R)-3-metoxi-4-((trietilsilil)oxi)pentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6- metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)metanamina (133 mg, 0,254 mmol) e ácido 3-(2-metoxi-2-oxoetoxi)propanoico (61,7 mg, 0,381 mmol) em THF (5 ml) foram adicionados HATU (145 mg, 0,381 mmol) e DIPEA (221 µl, 1,27 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada por 16 horas e, então, diluída com AcOEt. A camada orgânica foi isolada, lavada com água e salmoura, seca com sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo.
[0633] O resíduo isolado foi dissolvido em THF (5 ml) e resfriado até 0°C e, então, boroidreto de lítio (22,12 mg, 1,016 mmol) foi adicionado. A mistura resultante foi agitada à mesma temperatura durante 30 minutos e, então, aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante mais 2 horas. Subsequentemente, cloreto de amônio aquoso saturado e água foram adicionados e a camada aquosa foi extraída com AcOEt. As camadas orgânicas foram lavadas com água e salmoura, secas com sulfato de sódio e concentradas a vácuo. O resíduo isolado foi, então, dissolvido em THF (5 ml) e TBAF (1 M em solução de THF, 0,508 ml, 0,508 mmol) foi adicionado a 0°C. Após agitação a 0ºC durante 30 minutos, a mistura foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 2 horas. Subsequentemente, a mistura foi diluída com AcOEt e a camada orgânica foi isolada, lavada com água e salmoura, seca com sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em gel de sílica (24 g, Heptano/AcOEt = 70/30 a 0/100, então AcOEt/MeOH = 80/20) para produzir o composto do título (68 mg, 51% de rendimento) como um óleo incolor. 1 H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,65 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 0,85 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 1,04 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,16 (d, J = 6,8 Hz, 4 H) 1,19 - 1,22 (m, 2 H) 1,27 (s, 3 H) 1,42 - 1,65 (m, 4 H) 1,71 (s, 3 H) 1,79 - 1,92 (m, 2 H) 2,37 - 2,50 (m, 4 H) 2,54 (d, J = 9,27 Hz, 2 H) 2,89 - 3,05 (m, 2 H) 3,28 (d, J=10,24 Hz, 1 H) 3,41 (td, J=8,54, 2,44 Hz, 1 H) 3,52 (s, 3 H) 3,54 - 3,59 (m, 2 H) 3,61 - 3,68 (m, 2 H) 3,69 - 3,76 (m, 2 H) 3,78 - 3,91 (m, 2 H) 5,43 - 5,52 (m, 1 H) 5,92 (d, J=10,73 Hz, 1 H) 6,24 (dd, J=15,12, 10,73 Hz, 1 H) 6,77 (m, 1 H). Etapa 4: Síntese de Carbamato
[0634] A uma mistura de N-(((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)- 3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4- dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)metil)-3-(2-hidroxietoxi)propanamida (1,0 eq., 0,043 mmol), cloroformato de 4-nitrofenila (2,0 eq., 0,086 mmol) e DIPEA (5,0 eq.) em DCM (0,04 M) foi adicionado DMAP (5,0 eq.) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada por 16 horas à temperatura ambiente e, então, piperazina (10,0 eq.) foi adicionada, e a mistura foi agitada por mais 1 hora. A mistura resultante foi, então, diluída com diclorometano e a camada orgânica foi isolada, lavada com água e salmoura, seca com sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em gel de sílica funcionalizada com amino (Heptano/AcOEt = 50/50 a 0/100) para fornecer o composto desejado.
1.4.2 Síntese de ADL1-H8
1.4.2.1 Síntese de H8 Piperazina-1-carboxilato de 2-(3-((((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7- ((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6- metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)metil)amino)-3- oxopropoxi)etila (H8)
[0635] As Etapas 1 a 4 descritas na seção 1.4.1 foram empregadas para produzir o composto do título como um óleo amarelo pálido (19,2 mg, 70% de rendimento). LC/MS (ESI, m/z), 638,78[M+H]+. 1 H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,65 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,85 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,96 (dd, J=18,54, 6,34 Hz, 1 H) 1,03 (d, J=5,85 Hz, 3 H) 1,16 (d, J=5,85 Hz, 4 H) 1,18 - 1,25 (m, 2 H) 1,27 (s, 3 H) 1,29 - 1,39 (m, 1 H) 1,41 - 1,63 (m, 4 H) 1,70 (s, 3 H) 1,77 - 1,97 (m, 7 H) 2,44 (t, J=5,61 Hz, 2 H) 2,47 - 2,57 (m, 1 H) 2,80 (s l, 4 H) 2,85 - 2,99 (m, 1 H) 2,99 - 3,09 (m, 1 H) 3,27 (d, J=9,76 Hz, 1 H) 3,36 - 3,48 (m, 5 H) 3,52 (s, 3 H) 3,54 - 3,59 (m, 1 H) 3,59 - 3,68 (m, 2 H) 3,68 - 3,74 (m, 2 H) 3,77 - 3,90 (m, 1 H) 4,15 - 4,23 (m, 2 H) 4,36 (t, J=6,10 Hz, 1 H) 5,44 (dd, J=14,88, 8,54 Hz, 1 H) 5,88 (d, J=10,73 Hz, 1 H) 6,23 (dd, J=14,88, 10,98 Hz, 1 H) 6,41 (s l, 1 H).
1.4.2.2 Síntese de H8 Piperazina-1,4-dicarboxilato de 1-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-dioxo- 2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido)-3-methylbutanamido)-5-
ureidopentanamido)benzil) 4-(2-(3-((((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3- ((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6-metilepta- 2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)metil)amino)-3-oxopropoxi)etila) (ADL1-H8)
[0636] Um procedimento similar ao descrito na seção 1.2.7 foi empregado para produzir o composto do título como um óleo incolor (18,3 mg, 60% de rendimento). 1 H RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 0,65 (d, J=6,30 Hz, 3 H) 0,80 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,94 (dd, J=6,59, 4,15 Hz, 7 H) 1,01 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 1,08 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,10 - 1,23 (m, 4 H) 1,25 (s, 3 H) 1,26 - 1,32 (m, 3 H) 1,44 - 1,65 (m, 10 H) 1,68 (s, 3 H) 1,70 - 1,75 (m, 1 H) 1,80 - 1,92 (m, 3 H) 2,00 - 2,09 (m, 1 H) 2,25 (t, J=7,56 Hz, 2 H) 2,41 (t, J=5,85 Hz, 2 H) 2,63 (d, J=9,27 Hz, 1 H) 2,95 (dd, J=6,34, 4,39 Hz, 1 H) 3,08 (dt, J=13,05, 6,40 Hz, 1 H) 3,14 - 3,21 (m, 1 H) 3,38 - 3,48 (m, 14 H) 3,49 (s, 4 H) 3,58 - 3,65 (m, 2 H) 3,69 (t, J=6,10 Hz, 2 H) 3,72 - 3,80 (m, 1 H) 4,13 - 4,19 (m, 3 H) 4,48 (dd, J=9,02, 5,12 Hz, 1 H) 5,07 (s, 2 H) 5,46 (dd, J=15,12, 9,27 Hz, 1 H) 5,90 (d, J=10,24 Hz, 1 H) 6,28 (dd, J=14,88, 10,98 Hz, 1 H) 6,76 (s, 2 H) 7,30 (d, J=8,78 Hz, 2 H) 7,57 (d, J=7,25 Hz, 2 H).
1.4.3 Síntese de ADL1-H9
1.4.3.1 Síntese de H9 1,4-Diazepano-1-carboxilato de 2-(3-((((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7- ((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6- metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)metil)amino)-3- oxopropoxi)etila (H9)
[0637] As Etapas 1 a 4 descritas na seção 1.4.1 foram empregadas para produzir o composto do título como um óleo incolor (21,1 mg, 75% de rendimento). LC/MS (ESI, m/z), 652,86[M+H]+.
H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,65 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,85 (d, J=7,32 Hz, 3 H) 0,92 - 1,00 (m, 1 H) 1,03 (d, J = 6,8 H, 3 H) 1,16 (d, J = 6,8 H, 3 H) 1,20 - 1,24 (m, 1 H) 1,27 (s, 4 H) 1,47 - 1,60 (m, 4 H) 1,70 (s, 3 H) 1,73 - 1,90 (m, 8 H) 2,37 - 2,47 (m, 3 H) 2,53 (d, J = 9,8 Hz, 1 H) 2,81 2,86 (m, 2 H) 2,87 2,92 (m, 2 H) 2,94 2,97 (m, 1 H) 2,99 3,07 (m, 1 H) 3,27 (d, J=9,76 Hz, 1 H) 3,38 - 3,50 (m, 4 H) 3,52 (s, 3 H) 3,55 - 3,59 (m, 1 H) 3,61 - 3,68 (m, 2 H) 3,68 - 3,74 (m, 2 H) 3,77 - 3,91 (m, 1 H) 4,19 (s l, 2 H) 4,37 (t, J=6,10 Hz, 1 H) 5,41 - 5,50 (m, 1 H) 5,89 (d, J=11,22 Hz, 1 H) 6,23 (dd, J=14,88, 10,98 Hz, 1 H) 6,46 (dd, J=3,17, 1,22 Hz, 1 H).
1.4.3.2 Síntese de ADL1-H9 1,4-Diazepano-1,4-dicarboxilato de 1-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5- dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido)-3-metilbutanamido)-5- ureidopentanamido)benzil) 4-(2-(3-((((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3- ((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6-metilepta- 2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)metil)amino)-3-oxopropoxi)etila) (ADL1-H9)
[0638] Um procedimento similar ao descrito na seção 1.2.7 foi empregado para produzir o composto do título (25,2 mg, 72% de rendimento). 1 H RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 0,65 (d, J=6,30 Hz, 3 H) 0,80 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,93 (t, J=5,85 Hz, 7 H) 1,01 (d, J=6,30 Hz, 3 H) 1,08 (d, J=6,30 Hz, 3 H) 1,11 - 1,21 (m, 2 H) 1,21 - 1,32 (m, 7 H) 1,43 - 1,65 (m, 10 H) 1,69 (s, 3 H) 1,70 - 1,91 (m, 5 H) 2,05 (q, J=6,8 Hz, 1 H) 2,25 (t, J=7,32 Hz, 2 H) 2,36 - 2,48 (m, 3 H) 2,63 (d, J=9,27 Hz, 1 H) 2,95 (dd, J=5,85, 4,39 Hz, 1 H) 3,03 - 3,13 (m, 2 H) 3,13 - 3,21 (m, 1 H) 3,37 - 3,48 (m, 7 H) 3,48 - 3,59 (m, 8 H) 3,62 - 3,70 (m, 2 H) 3,76 (quin, J=6,46 Hz, 1 H) 4,11 - 4,22 (m, 2 H) 4,47 -
4,53 (m, 1 H) 5,02 - 5,09 (m, 2 H) 5,45 (dd, J=14,88, 9,03 Hz, 1 H) 5,90 (d, J=10,73 Hz, 1 H) 6,28 (dd, J=14,64, 11,22 Hz, 1 H) 6,76 (s, 2 H) 7,26 - 7,37 (m, 2 H) 7,57 (d, J=7,81 Hz, 2 H).
1.4.4 Síntese de ADL1-H10
1.4.4.1 Síntese de H10 3-(Metilamino)pirrolidina-1-carboxilato de 2-(3-((((2R,5S,6S)-6- ((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2- metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2- il)metil)amino)-3-oxopropoxi)etila (H10)
[0639] As Etapas 1 a 4 descritas na seção 1.4.1 foram empregadas para produzir o composto do título como um óleo incolor (24,8 mg, 88% de rendimento). LC/MS (ESI, m/z), 652,91 [M+H]+. 1 H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,65 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 0,85 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,96 (dd, J=18,78, 6,59 Hz, 1 H) 1,03 (d, J=6,8 Hz, 3 H) 1,16 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,18 - 1,25 (m, 3 H) 1,27 (s 3 H) 1,20 - 1,32 (m, 5 H) 1,41 - 1,63 (m, 4 H) 1,70 (s, 3 H) 1,72 - 1,90 (m, 4 H) 2,02 (dd, J=12,44, 6,10 Hz, 2 H) 2,41 (s 3 H) 2,43 - 2,50 (m, 2 H)2,54 (d, J = 9,76 Hz, 1 H) 2,95 (t, J=5,37 Hz, 1 H) 3,01 - 3,14 (m, 1 H) 3,18 - 3,24 (m, 1 H) 3,27 (d, J=9,7 Hz, 1 H) 3,38 - 3,49 (m, 2 H) 3,52 (s, 6 H) 3,61 - 3,65 (m, 2 H) 3,69 - 3,74 (m, 2 H) 3,83 (quin, J=5,98 Hz, 1 H) 4,15 - 4,22 (m, 1 H) 4,34 (t, J=6,10 Hz, 1 H) 5,44 (dd, J=15,12, 8,78 Hz, 1 H) 5,88 (d, J=11,22 Hz, 1 H) 6,23 (dd, J=14,88, 10,98 Hz, 1 H) 6,43 -6,51 (m, 1 H).
1.4.4.2 Síntese de ADL1-H10
[0640] Um procedimento similar ao descrito na seção 1.2.7 foi empregado para produzir o composto do título como um óleo incolor (22,1 mg, 57% de rendimento). 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 0,65 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 0,80 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,94 (dd, J=6,34, 4,88 Hz, 8 H) 1,01 (dd, J=3,90, 2,93 Hz, 4 H) 1,08 (d, J=6,30 Hz, 3 H) 1,11 - 1,22 (m, 3 H) 1,22 - 1,31 (m, 7 H) 1,44 - 1,65 (m, 10 H) 1,68 (s 3 H) 1,71 - 1,91 (m, 4 H) 1,99 - 2,09 (m, 3 H) 2,25 (t, J=7,56 Hz, 2 H) 2,41 (t, J=5,85 Hz, 2 H) 2,62 (d, J=9,27 Hz, 1 H) 2,84 (m, 4 H) 2,93 - 2,99 (m, 2 H) 3,04 - 3,13 (m, 2 H) 3,13 - 3,21 (m, 1 H) 3,43 (t, J=7,07 Hz, 2 H) 3,50 (s, 3 H) 3,52 - 3,56 (m, 2 H) 3,61 (t, J=4,39 Hz, 2 H) 3,69 (t, J=5,37 Hz, 2 H) 3,73 - 3,79 (m, 1 H) 4,15 (d, J=7,32 Hz, 3 H) 4,49 (dd, J=9,03, 5,12 Hz, 1 H) 5,06 (s, 2 H) 5,45 (dd, J=14,88, 9,03 Hz, 1 H) 5,90 (d, J=11,22 Hz, 1 H) 6,28 (dd, J=14,88, 10,98 Hz, 1 H) 6,76 (s, J=4,56 Hz, 2 H) 7,30 (d, J=8,29 Hz, 2 H) 7,57 (d, J=8,29 Hz, 2 H).
1.5 Síntese de ADL2-H1 Ácido 2-((2R,4R,5S,6S)-4-((4-(3-(2-(2-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H- pirrol-1-il)etoxi)etoxi)propanoil)piperazina-1-carbonil)oxi)-6-((S,2E,4E)-7- ((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6- metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)acético (ADL2-H1)
[0641] A uma mistura de H1 (consultar, por exemplo, seção 1.2.2; 22,5 mg, 0,03 mmol) em DMF (1 ml) foi adicionado 2,5 dioxopirrolidin 1 il 3 {2 [2 (2,5 dioxo 2,5 di-hidro 1H pirrol 1 il)etoxi]etoxi}propanoato (10,55 mg, 0,03 mmol) e DIPEA (0,016 ml, 0,089 mmol). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas. Então, o solvente foi removido a vácuo e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em fase reversa (ODS, 24 g, H2O/MeCN = 95/5 a 60/40) para produzir o composto do título como um óleo incolor (15,7 mg, 65% de rendimento). 1 H RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 0,73 (d, J=6,34 Hz, 4 H) 0,97 - 1,15 (m, 13 H) 1,21 (s, 2 H) 1,28 - 1,41 (m, 1 H) 1,42 - 1,62 (m, 2 H) 1,69 (d, J=4,39 Hz, 4 H) 2,08 - 2,20 (m, 1 H) 2,33 - 2,39 (m, 1 H) 2,42 - 2,58 (m, 3 H) 2,63 (t, J=5,30 Hz, 2 H) 2,91 - 2,94 (m, 1 H) 3,33 (d, J=3,41 Hz, 1 H) 3,36 (d, J=1,95 Hz, 2 H) 3,44 - 3,60 (m, 18 H) 3,60 - 3,67 (m, 4 H) 3,69 (t, J=5,37 Hz, 2 H) 3,75 - 3,78 (m, 1 H) 3,81 - 4,00 (m, 2 H) 4,22 - 4,31 (m, 1 H) 4,52 - 4,60 (m, 1 H) 5,58 - 5,72 (m, 1 H) 5,89 - 6,00 (m, 1 H) 6,13 - 6,31 (m, 1 H) 6,71 - 6,89 (m, 2 H).
1.6 Síntese de ADL2-H11 Etapa 1: Síntese de (2R,3R,4R)-4-((2R,3R)-3-((S,3E,5E)-6- ((2S,3S,6R)-6-(aminometil)-3-metiltetraidro-2H-piran-2-il)-2-metilepta-3,5- dien-1-il)-3-metiloxiran-2-il)-3-metoxipentan-2-ol (H11)
[0642] A uma mistura de ((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3- ((2R,3R,4R)-3-metoxi-4-((trietilsilil)oxi)pentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6- metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-il)metanamina (32 mg, 0,061 mmol) em THF (1 ml) foi adicionado TBAF (solução 1 M em THF, 0,183 ml, 0,183 mmol). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas e, então, diluída com AcOEt. A fase orgânica foi isolada, lavada com água e salmoura, seca com sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo isolado foi purificado por cromatografia em gel de sílica funcionalizada com amino (24 g, Heptano/AcOEt = 50/50 a 0/100, então, AcOEt/MeOH = 80/20) para fornecer o composto do título como um óleo incolor (15,1 mg, 60,4% de rendimento). LC/MS (ESI, m/z), 410,07 [M+H]+. 1 H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,65 (d, J=6,80 Hz, 3
H) 0,86 (d, J=6,80 Hz, 3 H) 1,03 (d, J=6,80 Hz, 3 H) 1,16 (d, J=6,30 Hz, 4 H) 1,19 - 1,24 (m, 2 H) 1,27 (s, 3 H) 1,29 - 1,38 (m, 1 H) 1,44 - 1,57 (m, 3 H) 1,62 - 1,66 (m, 1 H) 1,71 (s, 5 H) 1,74 - 1,93 (m, 3 H) 2,34 - 2,45 (m, 1 H) 2,54 (d, J=9,00 Hz, 1 H) 2,62 - 2,74 (m, 2 H) 2,92 - 2,98 (m, 1 H) 3,24 - 3,32 (m, 2 H) 3,52 (s, 3 H) 3,79 - 3,88 (m, 1 H) 5,39 - 5,48 (m, 1 H) 5,88 (d, J=10,73 Hz, 1 H) 6,23 (ddd, J=14,64, 11,22, 3,41 Hz, 1 H). Etapa 2: Síntese de 3-(2-(3-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1- il)propoxi)etoxi)-N-(((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4- hidroxi-3-metoxipentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4-dien-2-il)-5- metiltetraidro-2H-piran-2-il)metil)propanamida (ADL2-H11)
[0643] A uma mistura do composto obtido a partir da Etapa 1 (15,1 mg, 0,037 mmol) em DMF (1 ml, 12,915 mmol) foi adicionado 2,5 dioxopirrolidin 1 il 3 {2 [2 (2,5 dioxo 2,5 di-hidro 1H pirrol 1 il)etoxi]etoxi}propanoato (13,1 mg, 0,037 mmol) e DIPEA (0,019 ml, 0,111 mmol). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. Subsequentemente, a mistura foi concentrada a vácuo e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em fase reversa (ODS, 24 g, H2O/MeCN = 95/5 a 60/40) para produzir o composto do título como um óleo incolor (14,9 mg, 62% de rendimento).
1.7 Síntese de H18, H20, H23, H16, H15, H24, H13, H14, H17, H19 e H21
[0644] H18, H20, H23, H16, H15, H24, H13, H14, H17, H19 e H21 foram preparados por meio do procedimento geral abaixo (procedimento geral
1.7).
[0645] A uma solução de acetato de 2,5-dioxopirrolidin-1-il 2- ((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxipentan- 2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-ila) (1,0 equiv.) em DMF (0,028M) foram adicionados amina (16 mg, 0,056 mmol) e DIPEA (2,0 equiv.). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas, então, a mistura foi purificada por HPLC para fornecer o produto desejado.
1.7.1 Síntese de H20
[0646] O procedimento geral 1.7 foi empregado para produzir H20 como um produto amorfo incolor (15,7 mg, 0,022 mmol, 79% de rendimento). LC/MS (ESI, m/z), 707,99 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,66 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,85 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 1,04 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 1,16 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,18 - 1,25 (m, 2 H) 1,27 (s, 4 H) 1,30 - 1,59 (m, 8 H) 1,71 - 1,80 (m, 2 H) 1,81 - 1,89 (m, 2 H) 2,35 (d l, J=3,90 Hz, 2 H) 2,38 - 2,44 (m, 1 H) 2,52 - 2,60 (m, 4 H) 2,79 - 2,86 (m, 4 H) 2,96 (t, J=5,37 Hz, 1 H) 3,06 - 3,16 (m, 1 H) 3,24 - 3,30 (m, 1 H) 3,32 (d, J=9,76 Hz, 1 H) 3,52 (s, 3 H) 3,64 (d l, J=4,39 Hz, 5 H) 3,71 (s, 3 H) 3,83 (t, J=5,85 Hz, 1 H) 4,30 - 4,42 (m, 1 H) 5,40 - 5,53 (m, 3 H) 5,89 (d l, J=10,73 Hz, 1 H) 6,16 - 6,28 (m, 1 H) 6,75 (t l, J=5,85 Hz, 1 H).
1.7.2 Síntese de H23
[0647] H23 (6,9 mg, 37% de rendimento) foi obtido a partir do procedimento geral 1.7. LC/MS (ESI, m/z), 665,96 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 0,66 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 0,80 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 1,02 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,08 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,12 - 1,23 (m, 2 H) 1,25 (s, 4 H) 1,31 - 1,37 (m, 1 H) 1,43 - 1,55 (m, 2 H) 1,63 (d l, J=13,17 Hz, 1 H) 1,67 (s, 3 H) 1,81 - 1,93 (m, 3 H) 2,21 - 2,40 (m, 1 H) 2,63 (d, J=9,76 Hz, 1 H) 2,74 (s, 2 H) 2,92 - 2,97 (m, 1 H) 3,05 (s l, 3 H) 3,12 - 3,22 (m, 1 H) 3,31 - 3,38 (m, 2 H) 3,50 (s, 3 H) 3,63 (s l, 4 H) 3,68 - 3,78 (m, 2 H) 4,23 (d l, J=4,39 Hz, 1 H) 5,45 (dd, J=15,12, 8,78 Hz, 1 H) 5,89 (d l, J=10,73 Hz, 1 H) 6,27 (dd, J=14,88, 10,98 Hz, 1 H).
1.7.3 Síntese de H16
[0648] O procedimento geral 1.7 foi empregado para produzir H16 como um produto amorfo incolor (6,4 mg, 34% de rendimento). LC/MS (ESI, m/z), 679,86[M+H]+. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,67 (d l, J=6,34 Hz, 3 H) 0,85 (d l, J=6,83 Hz, 3 H) 1,01 - 1,06 (m, 3 H) 1,14 - 1,19 (m, 3 H) 1,19 - 1,28 (m, 5 H) 1,43 (dd l, J=12,20, 9,76 Hz, 1 H) 1,47 - 1,55 (m, 1 H) 1,61 - 1,64 (m, 1 H) 1,71 (d l, J=7,32 Hz, 3 H) 1,83 - 1,90 (m, 2 H) 2,03 - 2,20 (m, 1 H) 2,37 - 2,44 (m, 3 H) 2,49 - 2,56 (m, 5 H) 2,75 (s l, 1 H) 2,78 - 2,84 (m, 3 H) 2,87 - 2,94 (m, 1 H) 2,94 - 2,98 (m, 1 H) 3,35 (dd l, J=13,41, 10,00 Hz, 2 H) 3,52 (s, 4 H) 3,60 (s l, 4 H) 3,69 (s l, 3 H) 3,71 (s, 4 H) 3,83 (td, J=12,56, 6,59 Hz, 2 H) 4,06 - 4,20 (m, 1 H) 4,57 - 4,68 (m, 1 H) 5,47 (td, J=15,98, 8,54 Hz, 1 H) 5,81 -
5,96 (m, 1 H) 6,14 - 6,36 (m, 1 H).
1.7.4 Síntese de H15
[0649] O procedimento geral 1.7 produziu H15 como um produto secundário durante a síntese de H16 (6,6 mg, 35% de rendimento). LC/MS (ESI, m/z), 665,46 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 0,66 (d l, J=6,34 Hz, 4 H) 0,81 (d l, J=5,85 Hz, 3 H) 0,99 - 1,04 (m, 4 H) 1,07 - 1,10 (m, 4 H) 1,17 (s l, 1 H) 1,19 - 1,27 (m, 5 H) 1,46 - 1,55 (m, 2 H) 1,65 (s l, 1 H) 1,68 (s, 4 H) 1,82 - 1,95 (m, 2 H) 2,00 - 2,18 (m, 1 H) 2,29 - 2,49 (m, 4 H) 2,61 - 2,67 (m, 4 H) 2,92 - 3,03 (m, 5 H) 3,34 (d l, J=10,24 Hz, 1 H) 3,50 (s, 3 H) 3,58 - 3,77 (m, 8 H) 4,28 (t, J=9,76 Hz, 1 H) 5,40 - 5,53 (m, 1 H) 5,83 - 5,99 (m, 1 H) 6,28 (dd, J=14,63, 10,73 Hz, 1 H).
1.7.5 Síntese de H24
[0650] O procedimento geral 1.7 foi empregado para produzir H24 como um produto amorfo incolor (12,1 mg, 94% de rendimento). LC/MS (ESI, m/z), 693,72 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 0,66 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 0,80 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 1,02 (d, J=6,83 Hz, 4 H) 1,08 (d, J=6,34 Hz, 4 H) 1,32 - 1,37 (m, 8 H) 1,44 - 1,50 (m, 4 H) 1,65 - 1,68 (m, 5 H) 1,75 - 1,96 (m, 4 H) 2,19 - 2,39 (m, 3 H) 2,40 - 2,52 (m, 2 H) 2,63 (d, J=9,27 Hz, 1 H) 2,80 (s, 3 H) 2,95 (dd, J=6,34, 4,39 Hz, 1 H) 3,06 - 3,15 (m, 1 H) 3,31 - 3,40 (m, 2 H) 3,50 (s, 3 H) 3,65 - 3,72 (m, 7 H) 3,73 - 3,80 (m, 2 H) 4,10 - 4,24 (m, 1 H) 5,47 (dd, J=15,12,
9,27 Hz, 1 H) 5,89 (d, J=10,24 Hz, 1 H) 6,28 (dd, J=15,12, 10,73 Hz, 1 H).
1.7.6 Síntese de H18
[0651] O procedimento geral 1.7 foi empregado para produzir H18 como um produto amorfo incolor (8,1 mg, 53% de rendimento). LC/MS (ESI, m/z), 678,68[M-H]+. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,67 (d l, J=6,34 Hz, 3 H) 0,87 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 1,03 (d l, J=6,83 Hz, 3 H) 1,15 - 1,24 (m, 5 H) 1,28 (s, 3 H) 1,50 - 1,67 (m, 5 H) 1,75 (s l, 1 H) 1,82 - 1,94 (m, 3 H) 2,37 - 2,44 (m, 3 H) 2,56 - 2,60 (m, 4 H) 2,71 - 2,93 (m, 3 H) 3,00 (t l, J=5,12 Hz, 1 H) 3,37 (d l, J=10,24 Hz, 1 H) 3,53 (s, 3 H) 3,55 - 3,63 (m, 1 H) 3,65 - 3,76 (m, 3 H) 3,83 - 3,91 (m, 1 H) 4,04 (d l, J=4,39 Hz, 1 H) 4,08 - 4,16 (m, 1 H) 4,41 - 4,53 (m, 2 H) 5,42 - 5,55 (m, 1 H) 5,91 (d l, J=10,73 Hz, 1 H) 6,14 - 6,28 (m, 1 H) 7,21 (d l, J=7,32 Hz, 1 H).
1.7.7 Síntese de H13
[0652] O procedimento geral 1.7 foi empregado para produzir H13 como um produto amorfo incolor (6,7 mg, 36,7% de rendimento). LC/MS (ESI, m/z), 652,86 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 0,66 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 0,81 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,02 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,05 - 1,10 (m, 3 H) 1,14 - 1,23 (m, 2 H) 1,26 (s, 4 H) 1,34 - 1,52 (m, 2 H) 1,52 - 1,59 (m, 1 H) 1,65 (s l, 1 H) 1,70 (s, 4 H) 1,82 - 1,92 (m, 2 H) 2,41 (qd, J=14,39, 6,10 Hz, 3 H) 2,63 (d, J=9,76 Hz, 1 H) 2,73 (d l, J=4,39 Hz, 3 H) 2,95 (t l, J=5,12 Hz, 2 H) 2,99 - 3,09 (m, 3 H) 3,30 - 3,36 (m, 1 H) 3,50 (s, 3 H) 3,53 - 3,65 (m, 2 H) 3,65 - 3,78 (m, 4 H) 4,24 - 4,42 (m, 2 H) 4,55 (s l, 1 H) 5,36 - 5,55 (m, 1 H) 5,89 (d l, J=10,73 Hz,
1 H) 6,21 - 6,43 (m, 1 H).
1.7.8 Síntese de H14
[0653] O procedimento geral 1.7 foi empregado para produzir H14 como um sólido amorfo incolor (15,5 mg, 83% de rendimento). LC/MS (ESI, m/z), 666,90 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,65 (d l, J=6,34 Hz, 3 H) 0,85 (d l, J=6,83 Hz, 3 H) 1,02 (d l, J=6,34 Hz, 3 H) 1,14 - 1,28 (m, 8 H) 1,38 - 1,57 (m, 2 H) 1,57 - 1,65 (m, 2 H) 1,81 - 1,89 (m, 2 H) 2,04 - 2,19 (m, 2 H) 2,41 (d l, J=4,88 Hz, 3 H) 2,54 (d, J=9,76 Hz, 1 H) 2,65 (s, 3 H) 2,91 - 3,03 (m, 5 H) 3,33 (d l, J=9,76 Hz, 1 H) 3,52 (s, 3 H) 3,70 (s l, 5 H) 3,81 - 3,87 (m, 1 H) 4,08 - 4,18 (m, 2 H) 4,52 (d l, J=6,34 Hz, 1 H) 5,45 (dd l, J=15,12, 8,78 Hz, 1 H) 5,89 (d l, J=10,73 Hz, 1 H) 6,21 (dd l, J=14,88, 10,98 Hz, 2 H) 7,15 (d l, J=7,32 Hz, 1 H).
1.7.9 Síntese de H17
[0654] O procedimento geral 1.7 foi empregado para produzir H17 como um sólido amorfo incolor (12,94 mg, 68% de rendimento). LC/MS (ESI, m/z), 680,66 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 0,66 (d, J=6,83 Hz, 4 H) 0,81 (d, J=7,32 Hz, 3 H) 0,97 - 1,04 (m, 5 H) 1,08 (d, J=6,34 Hz, 5 H) 1,10 - 1,16 (m, 2 H) 1,20 - 1,23 (m, 1 H) 1,25 (s, 4 H) 1,69 (d, J=0,98 Hz, 4 H) 1,83 (d l, J=3,41 Hz, 1 H) 1,87 (d l, J=4,39 Hz, 1 H) 1,90 (d l, J=4,39 Hz, 1 H) 2,24 - 2,30 (m, 1 H) 2,40 (dd l, J=13,90, 9,02 Hz, 2 H) 2,58 - 2,62 (m, 5 H) 2,64 (s, 1 H) 2,84 (t l, J=4,88 Hz, 5 H) 2,95 (dd, J=6,34, 4,39 Hz, 1 H) 3,30 - 3,32 (m, 1 H)
3,50 (s, 3 H) 3,56 - 3,64 (m, 6 H) 3,74 - 3,79 (m, 1 H) 4,02 (t l, J=5,37 Hz, 3 H) 4,32 - 4,35 (m, 1 H) 4,35 - 4,37 (m, 1 H) 5,45 (dd, J=15,12, 8,78 Hz, 1 H) 5,85 - 5,91 (m, 1 H) 6,27 (dd, J=15,12, 10,73 Hz, 1 H).
1.7.10 Síntese de H19
[0655] O procedimento geral 1.7 foi empregado para produzir H19 como um sólido amorfo incolor (5,53 mg, 56,4 % de rendimento). LC/MS (ESI, m/z), 694,08 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 0,66 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,81 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 0,95 - 0,95 (m, 1 H) 1,02 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 1,08 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,12 - 1,22 (m, 2 H) 1,26 (s, 4 H) 1,34 - 1,52 (m, 7 H) 1,62 (d l, J=13,66 Hz, 2 H) 1,68 (s, 4 H) 1,81 - 1,93 (m, 3 H) 2,08 - 2,08 (m, 1 H) 2,20 - 2,39 (m, 2 H) 2,39 - 2,50 (m, 1 H) 2,61 - 2,68 (m, 4 H) 2,90 - 2,97 (m, 5 H) 3,11 - 3,15 (m, 2 H) 3,30 - 3,34 (m, 1 H) 3,50 (s, 3 H) 3,56 - 3,62 (m, 4 H) 3,76 (t, J=6,34 Hz, 1 H) 4,11 - 4,22 (m, 1 H) 5,45 (dd, J=15,12, 8,78 Hz, 1 H) 5,90 (d l, J=11,22 Hz, 1 H) 6,29 (dd, J=14,88, 10,98 Hz, 1 H).
1.7.11 Síntese de H21 H19
[0656] O procedimento geral 1.7 foi empregado para produzir H21 obtido como um sólido amorfo incolor (12,3 mg, 62,1 % de rendimento). LC/MS (ESI, m/z), 708,03 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,67 (d l, J=6,34 Hz, 3 H) 0,85 (d l, J=6,83 Hz, 3 H) 1,02 (d l, J=6,83 Hz, 3 H) 1,15 - 1,29 (m, 9 H) 1,29 - 1,42 (m, 3 H) 1,47 - 1,63 (m, 6 H) 1,74 - 1,79 (m, 1 H) 1,86 (dd l, J=13,17, 3,90 Hz, 2 H) 2,40 (d l, J=5,37 Hz, 3 H) 2,51 - 2,55 (m, 4 H) 2,78 (s l, 4 H) 2,96
(t l, J=5,12 Hz, 1 H) 3,18 (td, J=12,07, 6,10 Hz, 2 H) 3,37 (d l, J=9,76 Hz, 1 H) 3,52 (s, 3 H) 3,57 (s l, 4 H) 3,69 (s, 4 H) 3,84 (t l, J=5,85 Hz, 1 H) 4,50 - 4,57 (m, 1 H) 4,85 - 4,93 (m, 2 H) 5,44 (dd l, J=15,12, 8,78 Hz, 1 H) 5,92 (d l, J=10,24 Hz, 1 H) 6,15 - 6,38 (m, 1 H) 7,24 - 7,29 (m, 2 H) 8,24 (s l, 1 H).
1.8 Síntese de H22 e H25
[0657] H22 e H25 foram preparados através do procedimento geral abaixo.
[0658] Etapa 1: A uma solução de ((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7- ((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-3-metoxi-4-((trietilsilil)oxi)pentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)- 6-metilepta-2,4-dien-2-il)-5-metiltetraidro-2H-piran-2-l)metanamina (16,6 mg, 0,027 mmol) e 4-Carboxi-1-cicloexanometanol (mistura de cis e trans, 5,11 mg, 0,032 mmol) em diclorometano (2 ml) foram adicionados EDC (6,20 mg, 0,032 mmol) e HOBT (4,54 mg, 0,03 mmol) à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada à temp. ambiente durante 16 horas. Então, a mistura foi diluída com diclorometano e a camada orgânica foi lavada com água e salmoura, então, seca com sulfato de sódio anidro. O sólido foi filtrado, e o filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em gel de sílica para obter o produto desejado como um óleo incolor (8,3 mg, 47% de rendimento)
[0659] Etapa 2: A uma solução de mistura cis, trans de 4- (hidroximetil)-N-(((2R,5S,6S)-6-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3R,4R)-3-metoxi- 4-((trietilsilil)oxi)pentan-2-il)-2-metiloxiran-2-il)-6-metilepta-2,4-dien-2-il)-5-
metiltetraidro-2H-piran-2-il)metil)cicloexanocarboxamida (21 mg, 0,032 mmol) e DIPEA (0,028 ml, 0,158 mmol) em diclorometano (1 ml) à temperatura ambiente foram adicionados carbonocloridato de 4-nitrofenila (12,75 mg, 0,063 mmol) e DMAP (1,932 mg, 0,016 mmol) em porções. A mistura resultante foi agitada à mesma temperatura por 16 horas. Então, 1-metilpiperazina (31,7 mg, ,316 mmol) foi adicionada e foi agitada por mais 1 hora. A mistura de reação foi diluída com diclorometano e a camada orgânica foi lavada com água e salmoura, então, seca com Na2SO4. O sólido foi filtrado e o filtrado foi concentrado até secar. O resíduo obtido foi dissolvido em 1,0 ml de MeOH e 10 mg de p-TsOH e agitado por 2 horas à temperatura ambiente. A reação foi bruscamente arrefecida pela adição de 100ul de DIPEA, e o solvente foi, então, removido a vácuo. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em gel de sílica-NH (Hep/AcOEt = 50/50 a 0/100) para produzir H25 e H22.
1.8.1 Síntese de H25
[0660] H25 foi obtido como um produto amorfo incolor (7,0 mg, 32,7% de rendimento). LC/MS (ESI, m/z), 676,94 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,68 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 1,02 (d, J=7,32 Hz, 3 H) 1,10 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 1,17 (d, J=6,34 Hz, 4 H) 1,25 (s, 3 H) 1,47 - 1,62 (m, 11 H) 1,71 (s, 3 H) 1,80 - 1,86 (m, 4 H) 2,13 (s, 1 H) 2,27 - 2,36 (m, 10 H) 2,49 - 2,65 (m, 1 H) 2,99 - 3,12 (m, 1 H) 3,29 (d, J=10,20 Hz, 1 H) 3,32 (s, 4 H) 3,47 (t l, J=4,88 Hz, 4 H) 3,72 - 3,73 (m, 1 H) 3,73 - 3,74 (m, 1 H) 3,99 (d, J=6,83 Hz, 2 H) 4,21 - 4,36 (m, 1 H) 5,56 - 5,71 (m, 1 H) 5,92 (s, 1 H) 6,18 - 6,31 (m, 1 H).
1.8.2 Síntese de H22
[0661] H22 foi obtido como um produto amorfo incolor (5,6 mg, 26,2 % de rendimento). LC/MS (ESI, m/z), 676,89[M+H]+. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) ppm 0,68 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 1,02 (d, J=6,83 Hz, 3 H) 1,10 (d, J=7,32 Hz, 3 H) 1,14 (d, J=6,34 Hz, 3 H) 1,17 (s, 3 H) 1,21 - 1,41 (m, 2 H) 1,49 - 1,55 (m, 5 H) 1,58 - 1,62 (m, 6 H) 1,70 (s, 3 H) 1,80 - 1,86 (m, 4 H) 2,26 - 2,30 (m, 4 H) 2,35 (s l, 4 H) 2,46 - 2,57 (m, 1 H) 2,89 (dd, J=3,66, 2,20 Hz, 1 H) 3,01 - 3,11 (m, 1 H) 3,27 (d, J=9,76 Hz, 1 H) 3,38 (s, 3 H) 3,47 (t l, J=4,88 Hz, 4 H) 3,53 (ddd, J=10,24, 6,83, 3,41 Hz, 1 H) 3,76 (d, J=5,37 Hz, 1 H) 3,89 (dd, J=6,34, 1,95 Hz, 1 H) 3,99 (d, J=7,32 Hz, 2 H) 5,68 - 5,77 (m, 1 H) 5,91 (d, J=11,22 Hz, 1 H) 6,18 (dd, J=14,88, 10,98 Hz, 1 H). EXEMPLO 2
[0662] Cargas úteis de modulador de spliceossoma de herboxidieno exemplificativas usadas na preparação de ADCs foram descritas. As cargas úteis foram avaliadas quanto à ligação ao complexo SF3b, atividade de splicing in vitro e capacidade de inibir o crescimento celular.
2.1 Splicing In Vitro (IVS)
[0663] Para avaliar a atividade de carga útil em um sistema isento de células, foi realizado um ensaio de splicing in vitro. As cargas úteis foram incubadas com extratos nucleares e minigenes de substrato pré-mRNA.
[0664] Preparação de extrato nuclear de HeLa: Os péletes de células HeLa S3 foram ressuspensos em tampão hipotônico (10 mM de HEPES pH 7,9, 1,5 mM de MgCl2, 10 mM de KCl, 0,2 mM de PMSF, 0,5 mM de DTT) e a suspensão foi reduzida a um total de 5 volumes de concentrado de células (PCV). Após a centrifugação, o sobrenadante foi descartado, e as células foram conduzidas até 3 PCV com tampão hipotônico e incubadas em gelo por 10 min.
As células foram lisadas usando um homogeneizador Dounce e, então, centrifugadas. Os sobrenadante foi descartado, e o pélete foi ressuspenso com ½ volume de concentrado nuclear (PNV) de tampão de baixa concentração de sal (HEPES 20 mM pH 7,9, MgCl21,5 mM, KCl 20 mM, EDTA 0,2 mM, glicerol a 25%, PMSF 0,2 mM, DTT 0,5 mM), seguido de ½ PNV de tampão de baixa concentração de sal (mesmo tampão de baixa concentração de sal exceto KCl 1,4 M). Os núcleos foram suavemente misturados por 30 minutos antes da centrifugação. O sobrenadante (extrato nuclear) foi, então, dialisado em tampão de armazenamento (HEPES 20 mM pH 7,9, KCl 100 mM, EDTA 0,2 mM, glicerol a 20%, PMSF 0,2 mM, 0DTT 0,5 mM). A concentração de proteína foi determinada usando espectrofotômetro NanoDrop 8000 UV-Vis (ThermoFisher Scientific).
[0665] IVS: Todas as sequências derivadas de Ad2 (Pellizzoni et al. (1998) Cell 95 (5): 61524) foram clonadas no vetor pcDNA3.1 (+) (Promega) usando XbaI e usados como modelos de DNA em reações de transcrição in -42) foi linearizado usando EcoRI. Todos os RNAs foram transcritos in vitro e, então, purificados usando kits MEGAScript T7 (Invitrogen) e MegaClear (Invitrogen), respectivamente. Para reações de splicing que usam pré-mRNAs variantes Ad2, reações de 1 µl foram preparadas usando 8 µg de extratos nucleares preparados a partir de HeLa S3, 2 ng de pré- concentrações variadas de compostos ou DMSO. Após uma pré-incubação de 15 minutos a 30 °C, 1 µl de tampão de ativação de splicing (ATP 0,5 mM, fosfato de creatina 20 mM, MgCl2) 1,6 mM foi adicionado, e as reações foram incubadas por 90 minutos a 30 °C. As reações foram, então, bruscamente arrefecidas com 13 µl de DMSO e 25 nl foram usados para RT-qPCR. Reações de RT-qPCR foram preparadas usando kit de TaqMan RNA-to-CT de 1 etapa (Life Technologies), RNA de reações de splicing, Ad2 (direto: ACTCTCTTCCGCATCGCTGT; reverso: CCGACGGGTTTCCGATCCAA;
sonda: CTGTTGGGCTCGCGGTTG) e Ftz (direto: TGGCATCAGATTGCAAAGAC; reverso: ACGCCGGGTGATGTATCTAT; sonda: CGAAACGCACCCGTCAGACG) conjuntos de iniciador de mRNA- sonda. Prism 7 (Graphpad) foi usado para ajuste de curva de regressão não linear do produto submetido a splicing formado e normalizado para a amostra de controle (DMSO).
[0666] Dado que todas as cargas úteis testadas se ligam especificamente ao complexo SF3b e demonstram perfis de ligação similares, levantou-se a hipótese de que todas as cargas úteis também devem modular o splicing a um grau comparável. Todas as cargas úteis modularam significativamente o splicing de pré-mRNA de Ad2.2 (consultar a Tabela 13). Na presença de carga útil, foi observada uma redução na quantidade de produto submetido a splicing.
2.2 Viabilidade Celular
[0667] Células de carcinoma ductal da mama HCC1954 (American Type Culture Collection (ATCC)) foram plaqueadas em 2.000 células/poço em placas de cultura de tecidos de 96 poços de fundo plano (Corning) em um volume total de 90 µl de meio de cultura de tecidos suplementado com 10% de soro fetal bovino (ThermoFisher Scientific). As células foram tratadas com uma diluição em série de 3 vezes de composto de ata. No momento do tratamento, uma placa de células não tratadas foi avaliada usando Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente CellTiter-Glo®2.0 de acordo com as recomendações do fabricante (Promega; #G9241). O reagente CellTiter-Glo®
2.0 foi adicionado ao meio, incubado e testado em um Leitor EnVision Multilabel (PerkinElmer). Osvalores representam tempo zero (T0). O número de células viáveis após 144 horas (T144) de tratamento com o composto foi também determinado usando o Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente CellTiter-Glo®2.0. Usando o valor de luminescência no tempo zero (T0),
crescimento de controle de DMSO (C) e crescimento de teste na presença de composto (T144), a porcentagem de crescimento foi calculada em cada um dos níveis de concentração de composto. A porcentagem de inibição do crescimento foi calculada como: [(T144-T0)/(C-T0)] x 100 para concentrações para as quais T144>/= T0 ou [(T144-T0)/T0] x 100 para concentrações para as quais T144<T0. Os gráficos da curva de resposta à dosagem foram gerados usando Prism 7 (Graphpad) e ajustados usando análise de regressão não linear e o log (inibidor) versus resposta coeficiente angular variável (quatro parâmetros).
[0668] A resposta à dosagem de viabilidade celular foi determinada para todas as cargas úteis em células de câncer de mama HCC1954 amplificadas por HER2. A maioria das cargas testadas exibiu valores de GI50 (ou seja, concentração de composto para causar redução de 50% na proliferação celular) na faixa nanomolar baixa (consultar a Tabela 13). EXEMPLO 3
[0669] Compostos de carga útil exemplificativos avaliados no Exemplo 2 foram conjugados a um anticorpo anti-HER2 exemplificativo (trastuzumabe) por meio de resíduos de cisteína no anticorpo. A preparação e avaliação de ADCs anti-HER2 exemplificativos é descrita abaixo.
3.1 Anticorpo
[0670] O anticorpo trastuzumabe ("AB185") (Molina et al. (2001) Cancer Res. 61(12):4744-9) foi usado para a preparação de ADCs anti-HER2 (também chamado no presente documento de SMLAs).
3.2 Bioconjugação
[0671] O anticorpo (trastuzumabe) a 10 mg/ml em tampão PBS (pH 7,0) foi misturado com TCEP 5 mM (2 a 4 equivalentes molares) (ThermoFisher Scientific; #77720) para quebrar ligações dissulfeto intercadeia. A reação foi suavemente misturada a 22 oC durante 3 horas. Propilenoglicol (15% v/v) foi, então, adicionado seguido de 8 equivalentes molares de carga útil de ligante (estoque 6 mM em DMSO), e a solução foi bem misturada. A reação foi colocada em uma placa rotativa em uma incubadora a 22 oC. Após uma conjugação de 2 horas, a mistura de reação foi purificada para remover a carga útil não conjugada por AKTA GE M150 (coluna de dessalinização HiTrapTM 26/10; taxa de fluxo: 3 ml/min) (GE Healthcare Bio-Sciences) em DPBS (pH 7,5). O conjugado resultante foi concentrado por ultrafiltração Amicon (30 kDa, Ultra-4) (EMD Millipore) e submetido à filtração estéril através de um filtro desca transparente final foi medida por UV-VIS para determinar a concentração de anticorpos ([mAb]; mol/l) e concentração de carga útil conjugada ([LD]; mol/l) de acordo com a lei de Beer-Lambert (A=E*c*l) e as seguintes equações: A280nm = EmAb280nm * [mAb] * l+ELD280nm * [LD] * l A252nm = EmAb252nm * [mAb] * l+ELD252nm * [LD] * l EmAb280nm: trastuzumabe = 213,380 cm-1M-1 EmAb252nm: trastuzumabe = 79,112 cm-1M-1 ELD280nm = 800 cm-1M-1 ELD252nm = 31.000 cm-1M-1 Abreviaturas: c - concentração molar; l - comprimento do trajetória de luz (Nanodrop: 0,1 cm); E - coeficiente de extinção molar; A - absorbância.
3.3 Caracterização Biofísica
[0672] A razão modulador de splicing de herboxidieno-anticorpo (HAR), porcentagem de agregação e porcentagem de carga útil não conjugada foram analisadas para ADCs anti-HER2 exemplificativos por cromatografia líquida-espectrometria de massa (LC/MS), cromatografia de exclusão por tamanho (SEC) e cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (HPLC), respectivamente. Em geral, os conjugados continham menos de 2% de fármaco livre e continham menos de 10% de agregado.
3.3.1 Análise LC/MS - HAR
[0673] A análise LC/MS foi realizada usando um sistema Agilent
1290 UPLC interfaceado a um espectrômetro de massa Agilent G6224A Accurate Mass TOF. O conjugado foi desglicosilado com PNGase F (New England Biolabs; # P0705L) por 4 horas a 37 oC, desnaturado com Gdn-HCl 8 M (Sigma; # G9284) e, por fim, separado em domínios de cadeia leve e pesada usando DTT (concentração final 5 mM) (Promega; #V3151). A amostra preparada foi injetada em uma coluna Agilent PLRP-S (2,1 x 150 mm, 8 µm) e eluída com um gradiente de 25% de B a 50% de B durante 28 minutos à temperatura ambiente (RT). A fase móvel A era água com 0,05% de TFA, a fase móvel B era acetonitrila com 0,04% de TFA e a taxa de fluxo era de 1 ml/min. O HAR foi calculado a partir do espectro de massa desconvolucionado pela média ponderada das intensidades dos picos não conjugados e conjugados com fármaco para a cadeia leve (L0 ou L1) e a cadeia pesada (H0, H1, H2 e H3). O HAR total do conjugado intacto foi calculado usando a equação: (HARLC* 2) + (HARHC*2) = HAR total. Os valores de HAR para os ADCs anti-HER2 exemplificativos são relatados na Tabela 12.
3.3.2 Análise SEC - Agregação
[0674] A cromatografia de exclusão por tamanho foi realizada usando uma coluna TOSON-G3000SWXL (#008541) em fosfato de potássio 0,2 M (pH 7) com cloreto de potássio 0,25 mM e 15% (v/v) de IPA a uma taxa de fluxo de 0,75 ml/min. A absorbância da área do pico a 280 nm foi determinada para os componentes de alto peso molecular e conjugado monomérico por área sob a integração da curva. A porcentagem de monômero para ADCs anti-HER2 exemplificativos é relatada na Tabela 12.
3.3.3 Análise por HPLC - Moduladores de Splicing de Herboxidieno Livre
[0675] Um conjugado de interesse foi precipitado com 10 volumes de acetonitrila em gelo por 2 horas e centrifugado. Os sobrenadantes contendo carga útil residual não conjugada foram, então, injetados em uma coluna Agilent Poroshell 120 SB-C18 120A (4,6 x 100 mm, 2,7 µm) e eluídos com um gradiente de 45% de B a 70% de B ao longo de 10 minutos à temperatura ambiente. A fase móvel A era 100% de água, a fase móvel B era 100% de acetonitrila e a taxa de fluxo era de 0,6 ml/min com detecção a 252 nm. A quantidade de modulador de splicing de herboxidieno livre residual foi quantificada por meio de detecção de UV em comparação com a curva padrão externa de ligante-carga útil não conjugado. A porcentagem de modulador de splicing de herboxidieno livre para ADCs anti-HER2 exemplificativos é relatada na Tabela 12.
3.4 Caracterização de Ligação
3.4.1 Ligação FACS a Células positivas para Alvo
[0676] A ligação de anticorpo anti-HER2 não conjugado e ADCs anti-HER2 a células positivas para alvo foi avaliada por citometria de fluxo usando imunofluorescência indireta. As células JIMT1 (DSMZ), uma linhagem celular de câncer de mama que expressa HER2 endogenamente, foram plaqueadas (5x104 células/poço) em uma placa de 96 poços de fundo em v (Greiner Bio- diluídos em várias concentrações em meio de ensaio (RPMI-1640 suplementado com albumina de soro fetal bovino a 10% (p/v) (Thermo Fisher Scientific)). As células foram, então, lavadas com PBS + 2% de FBS (tampão FACS) e coradas com anticorpo imunoglobulina G anti-humano de cabra (IgG) marcado com ficoeritrina (PE) (Invitrogen) por 40 min a 4 °C no escuro. As células foram lavadas com tampão FACS frio e fixadas com tampão FluroFix (Biolegend) por 30 min à temperatura ambiente. O fixador foi removido por lavagem com tampão FACS. As células fixas foram analisadas quanto à fluorescência média geométrica de PE usando um citômetro de fluxo LSRFortessa (BD Bioscience). Trastuzumabe e T-DM1 (DM1 conjugado a trastuzumabe) foram incluídos como controles.
3.5 Análise In Vitro
3.5.1 Viabilidade Celular
[0677] Os ADCs anti-HER2 foram testados em várias linhagens celulares amplificadas por HER2 quanto à sua capacidade de inibir o crescimento celular. O HCC1954 (ATCC), 2.000 células/poço), a linhagem celular foi usada. A análise de viabilidade celular foi realizada conforme descrito na seção 2.3.
[0678] Surpreendentemente, nem todos os ADCs eram ativos em células HCC1954, apesar de terem perfis de ligação similares (consultar a Tabela 13) e cargas úteis com propriedades bioquímicas similares. Por exemplo, ADCs com o ligante ADL2 tiveram menos capacidade de inibir o crescimento celular (por exemplo, comparar a atividade de ADL1-H1 e ADL2- H1).
TABELA 12. CARACTERIZAÇÃO FÍSICA DE CARGAS ÚTEIS DE MODULADOR DE SPLICING DE HERBOXIDIENO.
Permeabilidade Estabilidade Estabilidade Modulador % de Porcentagem Média Média Média de Splicing Concentração Permeabilidade SMLA Ligante Fármaco de Caco-2 A-B ER Estabilidade % de
Petição 870210050749, de 04/06/2021, pág. 1660/1786 de (mg/ml) -6 Média Livre Monômero Perm (10 t1/2 pH5,5 Estabilidade Herboxidieno cm/s) (d) pH5,5 t24h (%) AB185- ADL1- H3 ADL1 Nd 99 1,380 nd nd nd nd nd H3
AB185- ADL1- H1 ADL1 0,300 97 2,550 0,263 0,334 1,270 3,5 79 384/391
H1 AB185- ADL1- H8 ADL1 Nd 98 0,320 nd nd nd nd nd H8 AB185- ADL1- H5 ADL1 Nd 98 2,490 1,040 23,6 22,692 >7 >100 H5 AB185- ADL1- H7 ADL1 Nd 97 2,570 nd nd nd nd nd H7 AB185- ADL1- H10 ADL1 Nd 98 2,380 nd nd nd nd nd H10
AB185- ADL1- H9 ADL1 Nd 98 2,550 11,596 nd nd nd nd H9 AB185- ADL1- H4 ADL1 0,400 91 2,740 19,263 nd nd nd nd
Petição 870210050749, de 04/06/2021, pág. 1661/1786 H4 AB185- ADL1- H6 ADL1 Nd 99 2,050 5,725 nd nd nd nd H6 AB185- ADL2- H1 ADL2 Nd nd 2,090 0,263 0,334 1,270 3,5 79 H1 385/391
AB185- ADL2- H11 ADL2 Nd nd 3,060 nd nd nd nd nd H11
TABELA 13. CARACTERIZAÇÃO DE ADCS ANTI-HER2 E CARGAS ÚTEIS DE MODULADOR DE SPLICING DE HERBOXIDIENO CORRESPONDENTES EXEMPLIFICATIVOS.
Ligação de carga útil SF3B1 e Atividade de SMLA Potência de célula de modulador de splicing de herboxidieno modulação de splicing de mRNA CTGlo-ATS CTGlo- CTGlo CTGlo CTGlo- CTGlo-ATS SPA-ATS qPCR-IVS- qPCR-IVS- CTGlo-ATS Média ATS
Petição 870210050749, de 04/06/2021, pág. 1662/1786 Média G Média G CTGlo-ATS ATS Média CTGlo-ATS Média G ATS ATS Média G % de Média Modula-dor GI50 (nM) LD50 (nM) Média G Média G % de Média G IC50 (nM) Média G Média G GI50 (nM) Resposta % de SMLA de Splicing de Ligante HAR Análise de Análise de GI50 (nM) LD50 Resposta LD50 (nM) SF3B1 IC50 (nM) IC50 (nM) 72h Mín Resposta Herboxidieno SMLA de SMLA de 72h (nM) Mín 72h (WT) Ad2.1 Ad2.2 NCIH1650. 72h Mín HER2 HER2 THP1.1 72h 72h NCIH1650.1 HELA.2 HELA.2 HELA.2 1 NCIH1650. 72h HCC1954.1 HCC1954.1 THP1.1 THP1.1 1 OPM2.1 AB185-ADL1-H3 H3 ADL1 4,520 0,067 0,246 nd 562,476 35,185 54,563 478,332 -92,943 114,915 >10000 19,182 -98,873 AB185-ADL1-H1 H1 ADL1 4,800 0,048 0,310 11,671 72,619 33,667 114,194 697,273 -84,238 182,271 >10000 10,179 -83,666 AB185-ADL1-H8 H8 ADL1 5,920 0,030 0,980 nd 12,902 12,916 1,218 11,851 -102,030 1,105 >10000 17,053 -103,148 386/391
AB185-ADL1-H5 H5 ADL1 4,920 0,180 1,040 12,903 30,268 17,764 0,433 3,415 -103,352 0,407 >10000 -25,308 -103,609 AB185-ADL1-H7 H7 ADL1 5,160 0,305 1,388 nd 14,452 12,059 0,650 6,756 -99,328 0,772 >10000 5,754 -100,376 AB185-ADL1-H10 H10 ADL1 4,710 0,162 3,963 nd 21,704 16,500 2,058 21,021 -98,789 3,036 >10000 9,194 -100,672 AB185-ADL1-H9 H9 ADL1 4,770 0,323 36,1 nd 9,679 8,659 1,337 14,441 -101,645 0,481 2,681 2,327 >10000 AB185-ADL1-H4 H4 ADL1 4,010 0,516 200 14,497 31,583 29,555 649,406 5337,399 -40,902 463,968 2575,18 728,583 >10000 AB185-ADL1-H6 H6 ADL1 6,090 3,952 400 nd 9,514 7,188 0,701 6,522 -101,275 0,219 1,336 0,978 >10000 AB185-ADL2-H1 H1 ADL2 3,200 355 400 11,671 72,619 33,667 114,194 697,273 -84,238 182,271 >10000 10,179 -83,666 AB185-ADL2-H11 H11 ADL2 2,600 235 400 nd nd nd nd nd nd nd nd nd nd nd = não determinado
3.5.2 Permeabilidade de Caco-2 de Carga Útil de ADC
[0679] Células Caco-2 foram cultivadas durante 21 dias em placas de 24 poços de transpoço a 37 °C, 95% de umidade, CO 2a 5%. A integridade da monocamada celular foi confirmada por TEER (resistência elétrica transepitelial) e amarelo de Lúcifer. As cargas úteis foram aumentadas em duplicata a 10 µM, separadamente, em ambos os lados da monocamada celular. As taxas de permeabilidade da direção apical para basolateral (AB) e da direção basolateral para apical (BA) foram determinadas por amostragem de alíquotas de ambas as câmaras imediatamente após o tratamento (t=0) e após incubação por 2 horas. As amostras foram precipitadas com proteína com solvente orgânico contendo padrão interno e analisadas por LC-MS/MS (SCIEX; API 5500). As respostas de razão de área de carga útil/padrão interno ao longo do tempo em ambas as direções foram usadas para gerar valores de permeabilidade (cm/s). A razão de efluxo foi calculada dividindo-se BA/AB. Os compostos de controle para baixa e alta permeabilidade e efluxo se comportaram como esperado. Os valores de permeabilidade são relatados na Tabela 12.
3.5.3 Estabilidade Química de Carga Útil de ADC
[0680] Os moduladores de splicing de herboxidieno foram incubados em tampão Mcilvane (Citrato-Fosfato), pH 5,5 (Boston Bioproducts; # BB-2466) a uma concentração final de 20 M (menos de 0,5% de DMSO da solução estoque). A solução de modulador de splicing de herboxidieno e o padrão interno foram pipetados em placas de 96 poços, executados em UPLC (Waters Aquity classe H) e analisados quanto ao sinal cromatográfico inicial (t=0). A coluna era uma coluna Waters UPLC HSS T3 1,8 m 2,1 x 50 mm (#186003538). Um gradiente de fase móvel A de 95% a 10% foi empregado ao longo de 1 min, em que A era 0,1% de ácido fórmico em água e a fase móvel B era 0,1% de ácido fórmico em acetonitrila (taxa de fluxo de 0,9 ml/min). O restante da solução de modulador de splicing de herboxidieno foi mantido em um agitador de placas a 37 °C (Eppendorf ThermoMixer). As análises de amostras por UPLC foram repetidas 24, 72 e 96 horas após a incubação a 37 °C. A resposta da razão de área do modulador de splicing de herboxidieno e do padrão interno foi determinada durante três pontos no tempo: tempo 0, dia 1 e dia 3 ou dia 4. O tempo 0 foi ajustado para 100. As respostas de razão de área dos pontos no tempo posteriores foram comparadas com o tempo 0. A porcentagem de CDC foi calculada da seguinte forma: (Razão de área dia X / Tempo de razão de área 0) * 100 = % restante. O coeficiente angular da linha foi calculado no Excel comparando o log de % restante e o ponto no tempo. As meias-vidas foram calculadas no Excel por ln(2)/coeficiente angular e são relatadas na Tabela 12. EXEMPLO 4
[0681] Os compostos de carga útil exemplificativos foram avaliados conforme descrito a seguir.
4.1 Análise In Vitro
4.1.1 Viabilidade Celular
[0682] A resposta à dosagem de viabilidade celular foi determinada para compostos de carga útil exemplificativos em células de câncer de mama HCC1954 amplificadas por HER2 e células de câncer gástrico NCI-N87.
[0683] Células de carcinoma ductal da mama HCC1954 (American Type Culture Collection (ATCC)) ou células de carcinoma ductal gástrico foram plaqueadas em 500 células/poço em placas de cultura de tecidos de 384 poços de fundo plano (Corning) em um volume total de 30 µl de meio de cultura de tecidos suplementado com 10% de soro fetal bovino (ThermoFisher Scientific). As células foram tratadas com uma diluição em série testada em triplicata. No momento do tratamento, uma placa de células não tratadas foi avaliada usando Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente
CellTiter-Glo® 2.0 de acordo com as recomendações do fabricante (Promega; #G9241). O reagente CellTiter-Glo® 2.0 foi adicionado ao meio, incubado e testado em um Leitor EnVision Multilabel (PerkinElmer). Osvalores representam tempo zero (T0). O número de células viáveis após 72 (T72) ou 144 horas (T144) de tratamento com o composto foi também determinado usando o Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente CellTiter-Glo®2.0. Usando o valor de luminescência no tempo zero (T0), crescimento de controle de DMSO (C) e crescimento de teste na presença de composto (T72 ou T144), a porcentagem de crescimento foi calculada em cada um dos níveis de concentração de composto. A porcentagem de inibição do crescimento foi calculada como (por exemplo): [(T144-T0)/(C-T0)] x 100 para concentrações para as quais T144>/= T0 ou [(T144-T0)/T0] x 100 para concentrações para as quais T144<T0. Os gráficos da curva de resposta à dosagem foram gerados usando Prism 8 (Graphpad) e ajustados usando análise de regressão não linear e o log (inibidor) versus resposta coeficiente angular variável (quatro parâmetros).
[0684] As Figuras 1A-1D mostram a viabilidade de resposta à dosagem de compostos de carga útil exemplificativos em células de câncer de mama amplificadas por HER2 (HCC1954) e células de câncer gástrico (NCI- N87). A Figura 1A mostra a viabilidade de resposta à dosagem em células HCC1954 após uma incubação de 72 horas. A Figura 1B mostra a viabilidade de resposta à dosagem em células NCI-N87 após uma incubação de 72 horas. A Figura 1C mostra a viabilidade de resposta à dosagem em células HCC1954 após uma incubação de 144 horas. A Figura 1D mostra a viabilidade de resposta à dosagem em células NCI-N87 após uma incubação de 144 horas. A Tabela 14 mostra o GI50, LD50 e valores Rmin para todos os compostos testados.
4.1.2 Ensaio de PD de Splicing em Célula
[0685] O splicing do transcrito maduro SLC25A19 foi também examinado em células HCC1954 e NCI-N87 tratadas com concentrações crescentes de compostos de carga útil exemplificativos.
[0686] As células HCC1954 ou NCI-N87 (ATCC) foram plaqueadas em meio RPMI+FBS a 10% (ATCC) em 1.000 células por poço em 20 µl por poço. As células foram tratadas com compostos em uma resposta à dosagem com diluição de 4 vezes. Após 6 horas, as células foram lavadas com PBS e lisadas com 30 µl de tampão CL (IgePal CA-630, NaCl 5M, Tris HCl 1M pH 7,4 em água) contendo 25 µl/ml de RNAsina (Promega) e incubadas por 20 minutos à RT em um oscilador. A mistura resultante (1 µl) foi usada para avaliar a modulação de splicing em uma reação de PCR de transcrição reversa Taqman Fast Virus 1-Step MasterMix (Applied Biosystems) com os seguintes iniciadores Taqman de acordo com as recomendações do fabricante: SLC25A19 (Invitrogen, Hs00222265_m1); RPLPO (Invitrogen, Hs99999902_m1).
[0687] A Figura 2A e a Figura 2B mostram os resultados do ensaio de splicing em células de câncer de mama amplificadas por HER2 (HCC1954) (Figura 2A) e células de câncer gástrico (NCI-N87) (Figura 2B). A Tabela 14 mostra os valores de IC50 para todos os compostos testados.
TABELA 14. CARACTERIZAÇÃO DE CARGAS ÚTEIS DE MODULADOR DE SPLICING DE HERBOXIDIENO EXEMPLIFICATIVAS.
HCC1954 NCI-N87 Composto CTG por CTG CTG CTG por CTG por CTG Splicing CTG por CTG CTG CTG por CTG por CTG Splicing 72 h com por 72 por 72 144 h 144 h com por 144 por 6 h 72 h com por 72 por 72 144 h 144 h por 144 por 6 h GI50 (nM) h com h de com LD50 (nM) h de com GI50 h com h de com GI50 com h de com
Petição 870210050749, de 04/06/2021, pág. 1667/1786 LD50 Rmin G150 Rmin IC50 (nM) LD50 Rmin (nM) LD50 Rmin IC50 (nM) (%) (nM) (%) (nM) (nM) (%) (nM) (%) (nM) H17 138,654 10,000 -48,872 125.718 275,218 -96,54 135,1 46,97 10,000 -15,164 81,28 912,895 -65,458 113,6 H22 10.000 10,000 82,229 10,000 10,000 71.431 10,000 10,000 10,000 48,181 5,102,126 10,000 29,113 10,000 H18 624,477 10,000 -20,785 435,9 1,606,048 -88.195 1,679 299,847 10,000 -12,297 313,328 3,937,618 -60,543 463,6 H20 40,416 10,000 -44,802 36,417 98,861 -94,301 51,44 29,413 10,000 -62,676 21,01 532,734 -94,539 56,23 H13 189,939 10,000 -54,164 209.534 690.614 -97,151 319,7 53,935 10,000 -15,164 114,882 2,784,969 -80,613 108,3 H14 626,028 10,000 -42,359 681,616 2,055,923 -95,522 1,346 415,335 10,000 -2.467 729,758 7,944,263 -63,41 961,8 H21 81,436 10,000 -54,164 50.008 127.893 -97,761 157,4 35.451 10,000 -7,791 40.936 654.736 -86,347 87,47 H16 11,844 10,000 -65,968 8,985 22,316 -98,779 16,7 6,758 10,000 -21,717 3,624 98,186 -86,757 8,552 391/391
H15 18,051 10,000 -44,191 11,718 31,77 -95,522 37,06 6,002 10,000 -18,031 3,499 106,186 -82,661 15,41 H19 8,989,184 10,000 32,813 7,928,26 10,000 27,17 10,000 10,000 10,000 44,396 3,266,803 10,000 17,442 10,000
Os valores em 10,000 estavam acima da dose máxima (>10 µM).

Claims (751)

REIVINDICAÇÕES
1. Conjugado anticorpo-fármaco da Fórmula (I): Ab-(L-H)p (I) caracterizado pelo fato de que: Ab é um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno que tem como alvo uma célula neoplásica; H é um modulador de splicing de herboxidieno; L é um ligante que liga covalentemente Ab a H; e p é um número inteiro de 1 a 15.
2. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno compreende um composto da Fórmula (I): (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente a L através de qualquer átomo, em que: Y é escolhido dentre O, S, NR6 e CR6R7; R1, R2 e R3 são cada um independentemente escolhidos dentre hidrogênio, hidroxila, grupos -O-(C1-C6 alquila), grupos -O-C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila) e grupos C1-C6 alquila; R4 é escolhido dentre hidrogênio, grupos C1-C6 alquila, grupos - C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila) e -C(=O)-NR6R7; R5 é escolhido dentre hidrogênio, hidroxila, -CH2-OH, -CO2H, grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila), -C(=O)-NR6R7, -NR6-C(=O)-R8, -O-C(=O)- NR6R7, -NR6-C(=O)-R8 e -NR6-C(=O)-NR6R7; R6 e R7 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, -R8, -C(=O)-R8 e -C(=O)-O-R8; e R8 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila e grupos C3-C8 heterociclila, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 e R8 são, cada um, independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 6 7 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila), -NR R , grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila, cada um dos quais pode ser independentemente substituído por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, grupos C1-C3 haloalquila, - NH-C(=O)(C1-C3 alquila) e -NH-C(=O)-O-(C1-C3 alquila), e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
3. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno compreende um composto da Fórmula (Ia): (Ia), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente a L através de qualquer átomo, em que: R9 é escolhido dentre grupos C3-C8 heterociclila; R10 é escolhido dentre H e grupos C1-C6 alquila, em que R9 e R10 são, cada um, independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, -NH2, -NH-(C1-C3 alquila) e -N-(C1-C3 alquila)2, e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
4. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno compreende um composto da Fórmula (Ib): (Ib), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente a L através de qualquer átomo, em que: R11 é escolhido dentre , e , em que * denota o ponto de conectividade de R 11 ao restante do composto; R12 e R13 são, cada um, independentemente escolhidos dentre H e metila; e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
5. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno se liga covalentemente através de qualquer átomo a L em que o modulador de splicing de herboxidieno é escolhido dentre H1, H2, H3 e H12; e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
6. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que L se liga covalentemente ao modulador de splicing de herboxidieno ("L-H") e L-H tem uma estrutura escolhida dentre as seguintes estruturas: ; ;
; , e um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
7. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é um modulador de splicing da Fórmula (II): (II), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente através de qualquer átomo a L, em que: X é hidroxila ou NR6R7; R6 e R7 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, -R8, -C(=O)-R8, -C(=O)-O-R8, -(C1-C6 alquila)-O-C(=O)-R8 e -(C1-C6 alquila)-NH-C(=O)-R8; e R8 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila e grupos C3-C8 heterociclila, em que R6, R7 e R8 são, cada um, independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)- (C3-C8 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila), -NR6R7, grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila, cada um dos quais pode ser independentemente substituído por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, grupos C1-C3 haloalquila, - NH-C(=O)(C1-C3 alquila) e -NH-C(=O)-O-(C1-C3 alquila), e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
8. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é um modulador de splicing da Fórmula (IIa): (IIa), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente através de qualquer átomo a L, em que: Z é escolhido dentre NR9 e O; R9 é escolhido dentre hidrogênio e grupos C1-C6 alquila; R10 e R11 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, halogênios, hidroxila, grupos C 1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila), grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila; R12 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila, grupos C3-C8 heterociclila, em que R9, R10, R11 e R12 são, cada um, independentemente substituídos por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C 1- C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi e grupos C1-C3 haloalquila; t é um número inteiro escolhido dentre 1, 2, 3, 4, 5 e 6; e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
9. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 1, 7 ou 8, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é um modulador de splicing da Fórmula (IIb): (IIb), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente através de qualquer átomo a L, em que: R13 é escolhido dentre , , , , ,
, , , , e , em que * 13 denota o ponto de conectividade de R ao restante do composto; R14 e R15 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio e metila; e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
10. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 1, 7, 8 ou 9, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno se liga covalentemente através de qualquer átomo a L; em que o modulador de splicing de herboxidieno é escolhido dentre H4, H13, H14, H15, H16, H17, H18, H19, H20, H21, H23 e H24; e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
11. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que L se liga covalentemente ao modulador de splicing de herboxidieno ("L-H") e L-H tem uma estrutura escolhida dentre a seguinte estrutura:
e um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
12. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é um modulador de splicing da Fórmula (III): (III), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que se liga covalentemente através de qualquer átomo a L, em que: R1, R2 e R3 são cada um independentemente escolhidos dentre hidrogênio, hidroxila, grupos -O-(C1-C6 alquila), grupos -O-C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila) e grupos C1-C6 alquila; R6 e R7 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, -R8, -C(=O)-R8 e -C(=O)-O-R8; R8 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila e grupos C3-C8 heterociclila; e R9 é escolhido dentre H, , , , , ,
, , , e ; em que R1, R2, R3, R6, R7 e R8 são, cada um, independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos - C(=O)-(C3-C8 heterociclila), -NR6R7, grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila, cada um dos quais pode ser independentemente substituído por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, grupos C1-C3 haloalquila, -NH-C(=O)(C1-C3 alquila) e -NH-C(=O)- O-(C1-C3 alquila), em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida; e em que * denota o ponto de conectividade de R9 ao restante do composto.
13. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno se liga covalentemente através de qualquer átomo a L; em que o modulador de splicing de herboxidieno é escolhido dentre H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H22 e H25; e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
14. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o ligante se liga covalentemente ao modulador de splicing de herboxidieno ("L-H") e L-H tem uma estrutura escolhida dentre as seguintes estruturas: ; ; ; ; ;
; e um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
15. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno se liga covalentemente através de qualquer átomo a L; em que o modulador de splicing de herboxidieno é escolhido dentre H1, H2, H3, H4, H5, H6, H7, H8, H9, H10, H11, H12, H13, H14, H15, H16, H17, H18, H19, H20, H21, H22, H23, H24 e H25; e em que a valência do átomo que é covalentemente ligado a L não é excedida.
16. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H1.
17. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H2.
18. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H3.
19. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H4.
20. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H5.
21. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H6.
22. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H7.
23. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H8.
24. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H9.
25. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H10.
26. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H11.
27. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H12.
28. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H13.
29. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H14.
30. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H15.
31. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H16.
32. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H17.
33. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H18.
34. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H19.
35. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H20.
36. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H21.
37. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H22.
38. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H23.
39. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o modulador de splicing de herboxidieno é H24.
40. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 39, caracterizado pelo fato de que o ligante é um ligante clivável.
41. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende uma porção química de peptídeo clivável.
42. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável é clivável por uma enzima.
43. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 40 a 42, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável ou ligante compreende uma unidade de aminoácido.
44. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que a unidade de aminoácido compreende valina-citrulina (Val-Cit).
45. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que a unidade de aminoácido compreende valina-alanina (Val-Ala).
46. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que a unidade de aminoácido compreende glutamina-valina-citrulina (Glu-Val-Cit).
47. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que a unidade de aminoácido compreende alanina-alanina-asparagina (Ala-Ala-Asn).
48. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende uma porção química de glicuronídeo clivável.
49. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 48, caracterizado pelo fato de que a porção química de glicuronídeo clivável é clivável por uma enzima.
50. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 48 ou reivindicação 49, caracterizado pelo fato de que a porção química de glicuronídeo clivável é clivável por uma glicuronidase.
51. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 50, caracterizado pelo fato de que a porção química de glicuronídeo clivável é clivável por β-glicuronidase.
52. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 51, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende pelo menos uma unidade espaçadora.
53. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 52, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora ou ligante compreende uma porção química de polietilenoglicol (PEG).
54. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 53, caracterizado pelo fato de que a porção química de PEG compreende -(PEG)m- e m é um número inteiro de 1 a 10.
55. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que m é 2.
56. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 52, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora ou ligante compreende uma porção química de alquila.
57. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 56, caracterizado pelo fato de que a porção química de alquila compreende -(CH2)n- e n é um número inteiro de 1 a 10.
58. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato de que n é 2.
59. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato de que n é 5.
60. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato de que n é 6.
61. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 60, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora se liga ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno através de uma porção química de maleimida (Mal) ("unidade espaçadora Mal").
62. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 61, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal é reativa com um resíduo de cisteína no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno.
63. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 61 ou reivindicação 62, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal é unida ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno através de um resíduo de cisteína no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno.
64. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 61 a 63, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende a unidade espaçadora Mal e uma porção química de peptídeo clivável.
65. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável compreende uma unidade de aminoácido.
66. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 64 ou reivindicação 65, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável ou unidade de aminoácido compreende Val-Cit.
67. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 64 ou reivindicação 65, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável ou unidade de aminoácido compreende Val-Ala.
68. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 64 ou reivindicação 65, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável ou unidade de aminoácido compreende Glu-Val- Cit.
69. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 64 ou reivindicação 65, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável ou unidade de aminoácido compreende Ala-Ala- Asn.
70. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 61 a 69, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal compreende uma porção química de alquila.
71. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 61 a 69, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal compreende uma porção química de PEG.
72. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 61 a 71, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal compreende uma maleimidocaproíla (MC).
73. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 61 a 72, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal liga o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno à porção química clivável no ligante.
74. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 73, caracterizado pelo fato de que a porção química clivável no ligante compreende uma porção química de peptídeo clivável.
75. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 74, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável compreende uma unidade de aminoácido.
76. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 74 ou reivindicação 75, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável ou unidade de aminoácido compreende Val-Cit,
Val-Ala, Glu-Val-Cit ou Ala-Ala-Asn.
77. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 73 a 76, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende MC-Val-Cit.
78. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 73 a 76, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende MC-Val-Ala.
79. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 73 a 76, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende MC-Glu-Val-Cit.
80. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 73 a 76, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende MC-Ala-Ala-Asn.
81. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 73 a 80, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal compreende uma porção química de alquila.
82. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 73 a 80, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal compreende uma porção química de PEG.
83. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 73 a 82, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal compreende uma maleimidocaproíla (MC).
84. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 83, caracterizado pelo fato de que a porção química clivável no ligante é diretamente unida ao modulador de splicing, ou em que uma unidade espaçadora liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing.
85. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que a clivagem do conjugado libera o modulador de splicing do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e ligante.
86. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 84 ou reivindicação 85, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora que liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing é autoimolativa.
87. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 84 a 86, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora que liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing compreende uma p-aminobenziloxicarbonila (pABC).
88. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 87, caracterizado pelo fato de que a pABC liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing.
89. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 87 ou reivindicação 88, caracterizado pelo fato de que a porção química clivável no ligante compreende uma porção química de peptídeo clivável.
90. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 89, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável compreende uma unidade de aminoácido.
91. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 89 ou reivindicação 90, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável ou unidade de aminoácido compreende Val-Cit, Val-Ala, Glu-Val-Cit ou Ala-Ala-Asn.
92. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 91, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende Val-Cit-pABC.
93. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 91, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende Val-Ala-pABC.
94. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 91, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende Glu-Val-Cit-pABC.
95. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 91, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende Ala-Ala-Asn-pABC.
96. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 84 a 86, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora que liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing compreende uma p-aminobenzila (pAB).
97. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 96, caracterizado pelo fato de que a pAB liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing.
98. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 96 ou reivindicação 97, caracterizado pelo fato de que a porção química clivável no ligante compreende uma porção química de peptídeo clivável.
99. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 98, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável compreende uma unidade de aminoácido.
100. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 98 ou reivindicação 99, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável ou unidade de aminoácido compreende Val-Cit, Val-Ala, Glu-Val-Cit ou Ala-Ala-Asn.
101. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 96 a 100, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende Val-Cit-pAB.
102. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 96 a 100, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende Val-Ala-pAB.
103. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 96 a 100, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende Glu-Val-Cit-pAB.
104. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 96 a 100, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende Ala-Ala-Asn-pAB.
105. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 39, caracterizado pelo fato de que o ligante é um ligante não clivável.
106. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 105, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende pelo menos uma unidade espaçadora.
107. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 105 ou reivindicação 106, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora ou ligante compreende uma porção química de polietilenoglicol (PEG).
108. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 107, caracterizado pelo fato de que a porção química de PEG compreende -(PEG)m- e m é um número inteiro de 1 a 10.
109. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 108, caracterizado pelo fato de que m é 2.
110. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 105 ou reivindicação 106, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora ou ligante compreende uma porção química de alquila.
111. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 110, caracterizado pelo fato de que a porção química de alquila compreende -(CH2)n- e n é um número inteiro de 1 a 10.
112. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 111, caracterizado pelo fato de que n é 2.
113. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 111, caracterizado pelo fato de que n é 5.
114. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 111, caracterizado pelo fato de que n é 6.
115. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 106 a 114, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora se liga ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno através de uma porção química de maleimida (Mal) ("unidade espaçadora Mal").
116. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 115, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal é reativa com um resíduo de cisteína no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno.
117. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 115 ou reivindicação 116, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal é unida ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno através de um resíduo de cisteína no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno.
118. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 115 a 117, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal compreende uma porção química de alquila.
119. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 115 a 117, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal compreende uma porção química de PEG.
120. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 115 a 119, caracterizado pelo fato de que o ligante ou unidade espaçadora Mal compreende uma maleimidocaproíla (MC).
121. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 120, caracterizado pelo fato de que o ligante ou unidade espaçadora Mal compreende uma maleimidocaproíla (MC) e pelo menos uma unidade espaçadora adicional.
122. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 115 a 119, caracterizado pelo fato de que o ligante ou unidade espaçadora Mal compreende MC-(PEG)2.
123. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 122, caracterizado pelo fato de que o ligante ou unidade espaçadora Mal compreende MC-(PEG)2 e pelo menos uma unidade espaçadora adicional.
124. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 115 a 119, caracterizado pelo fato de que o ligante ou unidade espaçadora Mal compreende Mal-Hex.
125. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 124, caracterizado pelo fato de que o ligante ou unidade espaçadora Mal compreende Mal-Hex e pelo menos uma unidade espaçadora adicional.
126. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 115 a 119, caracterizado pelo fato de que o ligante ou unidade espaçadora Mal compreende Mal-Et.
127. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 126, caracterizado pelo fato de que o ligante ou unidade espaçadora Mal compreende Mal-Et e pelo menos uma unidade espaçadora adicional.
128. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 115 a 119, caracterizado pelo fato de que o ligante ou unidade espaçadora Mal compreende Mal-Et-O-Et.
129. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 128, caracterizado pelo fato de que o ligante ou unidade espaçadora Mal compreende Mal-Et-O-Et e pelo menos uma unidade espaçadora adicional.
130. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 115 a 129, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal liga o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno ao modulador de splicing.
131. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 115 a 130, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende MC-Val-Cit-pABC.
132. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 115 a 130, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende MC-(PEG)2-CO.
133. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 132, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula neoplásica derivada de uma malignidade hematológica ou um tumor sólido.
134. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 133, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula neoplásica derivada de uma malignidade hematológica.
135. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 133 ou reivindicação 134, caracterizado pelo fato de que a malignidade hematológica é selecionada dentre uma malignidade de célula B, uma leucemia, um linfoma e um mieloma.
136. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 133 a 135, caracterizado pelo fato de que a malignidade hematológica é selecionada dentre leucemia mieloide aguda e mieloma múltiplo.
137. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 133, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula neoplásica derivada de um tumor sólido.
138. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 133 ou reivindicação 137, caracterizado pelo fato de que o tumor sólido é selecionado dentre câncer de mama, câncer gástrico, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão, câncer uterino, carcinoma do ducto salivar, melanoma, câncer de cólon, câncer cervical, câncer pancreático, câncer de rins, câncer colorretal e câncer de esôfago.
139. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 138, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa HER2.
140. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 139, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-HER2 ou fragmento de ligação ao antígeno.
141. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 139 ou reivindicação 140, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende três regiões determinantes de complementaridade de cadeia pesada (HCDR1, HCDR2 e HCDR3) compreendendo sequências de aminoácidos da SEQ ID NO: 1 (HCDR1), SEQ ID NO: 2 (HCDR2) e SEQ ID NO: 3 (HCDR3); e três regiões determinantes de complementaridade da cadeia leve (LCDR1, LCDR2 e LCDR3) compreendendo sequências de aminoácidos da SEQ ID NO: 4 (LCDR1), SEQ ID NO: 5 (LCDR2) e SEQ ID NO: 6 (LCDR3).
142. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 139 a 141, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 19 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 20.
143. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 139 a 142, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante da cadeia pesada de IgG1 humana.
144. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 139 a 143, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante da cadeia leve kappa de Ig humana.
145. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 138, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa CD138.
146. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 145, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-CD138 ou fragmento de ligação ao antígeno.
147. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 145 ou reivindicação 146, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende três regiões determinantes de complementaridade de cadeia pesada (HCDR1, HCDR2 e HCDR3) compreendendo sequências de aminoácidos da SEQ ID NO: 7 (HCDR1), SEQ ID NO: 8 (HCDR2) e SEQ ID NO: 9 (HCDR3); e três regiões determinantes de complementaridade da cadeia leve (LCDR1, LCDR2 e LCDR3) compreendendo sequências de aminoácidos da SEQ ID NO: 10 (LCDR1), SEQ ID NO: 11 (LCDR2) e SEQ ID NO: 12 (LCDR3).
148. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 145 a 147, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 22.
149. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 145 a 148, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante da cadeia pesada de IgG2a humana.
150. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 145 a 149, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante da cadeia leve kappa de Ig humana.
151. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 138, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa EPHA2.
152. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 151, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-EPHA2 ou fragmento de ligação ao antígeno.
153. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 151 ou reivindicação 152, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende três regiões determinantes de complementaridade de cadeia pesada (HCDR1, HCDR2 e HCDR3) compreendendo sequências de aminoácidos da SEQ ID NO: 13 (HCDR1), SEQ ID NO: 14 (HCDR2) e SEQ ID NO: 15 (HCDR3); e três regiões determinantes de complementaridade da cadeia leve (LCDR1, LCDR2 e LCDR3) compreendendo sequências de aminoácidos da SEQ ID NO: 16 (LCDR1), SEQ ID NO: 17 (LCDR2) e SEQ ID NO: 18 (LCDR3).
154. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 151 a 153, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável da cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 23 e uma região variável da cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 24.
155. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 151 a 154, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante da cadeia pesada de IgG1 humana.
156. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 151 a 155, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região constante da cadeia leve kappa de Ig humana.
157. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 138, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa MSLN.
158. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 157, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-MSLN ou fragmento de ligação ao antígeno.
159. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 138, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa FOLH1.
160. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 159, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-FOLH1 ou fragmento de ligação ao antígeno.
161. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 138, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa CDH6.
162. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 161, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-CDH6 ou fragmento de ligação ao antígeno.
163. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 138, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa CEACAM5.
164. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 163, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-CEACAM5 ou fragmento de ligação ao antígeno.
165. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 138, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa CFC1B.
166. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 165, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-CFC1B ou fragmento de ligação ao antígeno.
167. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 138, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa ENPP3.
168. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 167, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-ENPP3 ou fragmento de ligação ao antígeno.
169. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 138, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa FOLR1.
170. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 169, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-FOLR1 ou fragmento de ligação ao antígeno.
171. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 138, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa HAVCR1.
172. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 171, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-HAVCR1 ou fragmento de ligação ao antígeno.
173. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 138, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa KIT.
174. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 173, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-KIT ou fragmento de ligação ao antígeno.
175. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 138, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa MET.
176. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 175, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-MET ou fragmento de ligação ao antígeno.
177. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 138, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa MUC16.
178. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 177, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-MUC16 ou fragmento de ligação ao antígeno.
179. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 138, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa SLC39A6.
180. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 179, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-SLC39A6 ou fragmento de ligação ao antígeno.
181. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 138, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa SLC44A4.
182. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 181, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-SLC44A4 ou fragmento de ligação ao antígeno.
183. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 138, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno tem como alvo uma célula que expressa STEAP1.
184. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com a reivindicação 183, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é um anticorpo anti-STEAP1 ou fragmento de ligação ao antígeno.
185. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 184, caracterizado pelo fato de que p é de 1 a 10.
186. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 185, caracterizado pelo fato de que p é de 2 a 8.
187. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 186, caracterizado pelo fato de que p é de 4 a 8.
188. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 187, caracterizado pelo fato de que p é 4.
189. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 187, caracterizado pelo fato de que p é 8.
190. Composto da Fórmula (I): (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: Y é escolhido dentre O, S, NR6 e CR6R7; R1, R2 e R3 são cada um independentemente escolhidos dentre hidrogênio, hidroxila, grupos -O-(C1-C6 alquila), grupos -O-C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila) e grupos C1-C6 alquila; R4 é escolhido dentre hidrogênio, grupos C1-C6 alquila, grupos - C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila) e -C(=O)-NR6R7; R5 é escolhido dentre hidrogênio, hidroxila, -CH2-OH, -CO2H, grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila), -C(=O)-NR6R7, -NR6-C(=O)-R8, -O-C(=O)- NR6R7, -NR6-C(=O)-R8 e -NR6-C(=O)-NR6R7; R6 e R7 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, -R8, -C(=O)-R8 e -C(=O)-O-R8; e R8 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila e grupos C3-C8 heterociclila, em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 e R8 são, cada um, independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 6 7 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila), -NR R , grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila, cada um dos quais pode ser independentemente substituído por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, grupos C1-C3 haloalquila, - NH-C(=O)(C1-C3 alquila) e -NH-C(=O)-O-(C1-C3 alquila).
191. Composto, de acordo com a reivindicação 190, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é um composto da Fórmula (Ia): (Ia), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, compreende: R9 é escolhido dentre grupos C3-C8 heterociclila; e R10 é escolhido dentre H e grupos C1-C6 alquila, em que R9 e R10 são, cada um, independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, -NH2, -NH-(C1-C3 alquila) e -N-(C1-C3 alquila)2.
192. Composto, de acordo com a reivindicação 190 ou reivindicação 191, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é um composto da Fórmula (Ib): (Ib), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, compreende:
R11 é escolhido dentre , e , em que * denota o ponto de conectividade de R 11 ao restante do composto; e R12 e R13 são, cada um, independentemente escolhidos dentre H e metila.
193. Composto, de acordo com a reivindicação 190, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
194. Composto, de acordo com a reivindicação 190, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H2, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
195. Composto, de acordo com a reivindicação 190, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
196. Composto, de acordo com a reivindicação 190, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
197. Composto da Fórmula (II): (II), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: X é NR6R7; R6 e R7 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, -R8, -C(=O)-R8, -C(=O)-O-R8, -(C1-C6 alquila)-O-C(=O)-R8 e -(C1-C6 alquila)-NH-C(=O)-R8; e R8 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila e grupos C3-C8 heterociclila, em que R6, R7 e R8 são, cada um, independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)- (C3-C8 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila), -NR6R7, grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila, cada um dos quais pode ser independentemente substituído por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, grupos C1-C3 haloalquila, - NH-C(=O)(C1-C3 alquila) e -NH-C(=O)-O-(C1-C3 alquila).
198. Composto, de acordo com a reivindicação 197, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é um composto da Fórmula (IIa): (IIa), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Z é escolhido dentre NR9 e O; R9 é escolhido dentre hidrogênio e grupos C1-C6 alquila; R10 e R11 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, halogênios, hidroxila, grupos C 1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos -C(=O)-(C3-C8 heterociclila), grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila; R12 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila, grupos C3-C8 heterociclila, em que R9, R10, R11 e R12 são, cada um, independentemente substituídos por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C 1- C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi e grupos C1-C3 haloalquila; e t é um número inteiro escolhido dentre 1, 2, 3, 4, 5 e 6.
199. Composto, de acordo com a reivindicação 197 ou reivindicação 198, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é um composto da Fórmula (IIb): (IIb), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R13 é escolhido dentre , , , , , , , , , e , em que * 13 denota o ponto de conectividade de R ao restante do composto; e
R14 e R15 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio e metila.
200. Composto, de acordo com a reivindicação 197, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H4, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
201. Composto, de acordo com a reivindicação 197, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H13, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
202. Composto, de acordo com a reivindicação 197, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H14, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
203. Composto, de acordo com a reivindicação 197, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H15, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
204. Composto, de acordo com a reivindicação 197, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H16, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
205. Composto, de acordo com a reivindicação 197, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H17, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
206. Composto, de acordo com a reivindicação 197, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H18, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
207. Composto, de acordo com a reivindicação 197, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H19, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
208. Composto, de acordo com a reivindicação 197, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H20, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
209. Composto, de acordo com a reivindicação 197, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H21, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
210. Composto, de acordo com a reivindicação 197, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H23, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
211. Composto, de acordo com a reivindicação 197, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H24, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
212. Composto da Fórmula (III): (III), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: R1, R2 e R3 são cada um independentemente escolhidos dentre hidrogênio, hidroxila, grupos -O-(C1-C6 alquila), grupos -O-C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-O-(C1-C6 alquila) e grupos C1-C6 alquila; R6 e R7 são, cada um, independentemente escolhidos dentre hidrogênio, -R8, -C(=O)-R8 e -C(=O)-O-R8; R8 é escolhido dentre grupos C1-C6 alquila, grupos C3-C8 carbociclila e grupos C3-C8 heterociclila; e R9 é escolhido dentre H, , , , , ,
, , e ; em que R1, R2, R3, R6, R7 e R8 são, cada um, independentemente substituídos por 0 a 3 grupos independentemente escolhidos dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C6 alquila, grupos -O-(C1-C6 alquila), -CO2H, grupos -C(=O)-(C1-C6 alquila), grupos -C(=O)-(C3-C8 carbociclila), grupos - C(=O)-(C3-C8 heterociclila), -NR6R7, grupos C3-C8 carbociclila, grupos C1-C6 alquil hidróxi, grupos C1-C6 alquilalcóxi, grupos benzila e grupos C3-C8 heterociclila, cada um dos quais pode ser independentemente substituído por 0 ou 1 grupo escolhido dentre halogênios, hidroxila, grupos C1-C3 alquila, grupos C1-C3 alcóxi, grupos C1-C3 haloalquila, -NH-C(=O)(C1-C3 alquila) e -NH-C(=O)- O-(C1-C3 alquila); e em que * denota o ponto de conectividade de R9 ao restante do composto.
213. Composto, de acordo com a reivindicação 212, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H5, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
214. Composto, de acordo com a reivindicação 212, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H6, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
215. Composto, de acordo com a reivindicação 212, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H7, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
216. Composto, de acordo com a reivindicação 212, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H8, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
217. Composto, de acordo com a reivindicação 212, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H9, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
218. Composto, de acordo com a reivindicação 212, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H10, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
219. Composto, de acordo com a reivindicação 212, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é H22, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
220. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende o composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 190 a 219, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um carreador farmaceuticamente aceitável.
221. Composição que compreende várias cópias do conjugado anticorpo-fármaco, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 189, caracterizada pelo fato de que o p médio dos conjugados anticorpo- fármaco na composição é de cerca de 3,5 a cerca de 5,5.
222. Composição, de acordo com a reivindicação 221, caracterizada pelo fato de que o p médio dos conjugados anticorpo-fármaco na composição é cerca de 4.
223. Composição que compreende várias cópias do conjugado anticorpo-fármaco, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 189, caracterizada pelo fato de que o p médio dos conjugados anticorpo- fármaco na composição é de cerca de 7 a cerca de 9.
224. Composição, de acordo com a reivindicação 223,
caracterizada pelo fato de que o p médio dos conjugados anticorpo-fármaco na composição é cerca de 8.
225. Método de tratamento de um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz do conjugado anticorpo-fármaco, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 189, do composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 190 a 219, ou da composição, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 220 a 224.
226. Método, de acordo com a reivindicação 225, caracterizado pelo fato de que o distúrbio neoplásico é uma malignidade hematológica ou um tumor sólido.
227. Método, de acordo com a reivindicação 225 ou reivindicação 226, caracterizado pelo fato de que o distúrbio neoplásico é uma malignidade hematológica.
228. Método, de acordo com a reivindicação 227, caracterizado pelo fato de que a malignidade hematológica é selecionada dentre leucemia mieloide aguda e mieloma múltiplo.
229. Método, de acordo com a reivindicação 225 ou reivindicação 226, caracterizado pelo fato de que o distúrbio neoplásico é um tumor sólido.
230. Método, de acordo com a reivindicação 229, caracterizado pelo fato de que o tumor sólido é selecionado dentre câncer de mama, câncer gástrico, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão, câncer uterino, carcinoma do ducto salivar, melanoma, câncer de cólon, câncer cervical, câncer pancreático, câncer de rins, câncer colorretal e câncer de esôfago.
231. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 225 a 230, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem uma ou mais células neoplásicas que expressam um antígeno alvo.
232. Método, de acordo com a reivindicação 231, caracterizado pelo fato de que o antígeno alvo é HER2.
233. Método de acordo com a reivindicação 231 ou reivindicação 232, caracterizado pelo fato de que as uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de mama, câncer de ovário, câncer gástrico, câncer de pulmão, câncer de útero, osteossarcoma ou carcinoma do ducto salivar que expressa HER2.
234. Método, de acordo com a reivindicação 233, caracterizado pelo fato de que o câncer de pulmão é adenocarcinoma de pulmão e/ou o câncer uterino é carcinoma endometrial seroso uterino.
235. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 232 a 234, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com (a) um anticorpo anti-HER2 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente.
236. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 232 a 235, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com um modulador de splicing quando administrado individualmente.
237. Método, de acordo com a reivindicação 231, caracterizado pelo fato de que o antígeno alvo é CD138.
238. Método, de acordo com a reivindicação 231 ou reivindicação 237, caracterizado pelo fato de que as uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um mieloma múltiplo que expressa CD138.
239. Método, de acordo com a reivindicação 237 ou reivindicação 238, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com (a) um anticorpo anti-CD138 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente.
240. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações
237 a 239, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com um modulador de splicing quando administrado individualmente.
241. Método, de acordo com a reivindicação 231, caracterizado pelo fato de que o antígeno alvo é EPHA2.
242. Método, de acordo com a reivindicação 231 ou reivindicação 241, caracterizado pelo fato de que as uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de mama, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão, melanoma, câncer de cólon ou câncer de esôfago que expressa EPHA2.
243. Método, de acordo com a reivindicação 241 ou reivindicação 242, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com (a) um anticorpo anti-EPHA2 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente.
244. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 241 a 243, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao tratamento com um modulador de splicing quando administrado individualmente.
245. Método de redução ou inibição de crescimento de um tumor em um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz do conjugado anticorpo- fármaco, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 189, do composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 190 a 219, ou da composição, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 220 a 224.
246. Método, de acordo com a reivindicação 245, caracterizado pelo fato de que o tumor compreende uma ou mais células neoplásicas que expressam um antígeno alvo.
247. Método, de acordo com a reivindicação 246, caracterizado pelo fato de que o antígeno alvo é HER2.
248. Método, de acordo com a reivindicação 246 ou reivindicação 247, caracterizado pelo fato de que as uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de mama, câncer de ovário, câncer gástrico, câncer de pulmão, câncer de útero, osteossarcoma ou carcinoma do ducto salivar que expressa HER2.
249. Método, de acordo com a reivindicação 248, caracterizado pelo fato de que o câncer de pulmão é adenocarcinoma de pulmão e/ou o câncer uterino é carcinoma endometrial seroso uterino.
250. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 247 a 249, caracterizado pelo fato de que o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com (a) um anticorpo anti-HER2 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente.
251. Método, de acordo com a reivindicação 246, caracterizado pelo fato de que o antígeno alvo é CD138.
252. Método, de acordo com a reivindicação 246 ou reivindicação 251, caracterizado pelo fato de que as uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um mieloma múltiplo que expressa CD138.
253. Método, de acordo com a reivindicação 251 ou 252, caracterizado pelo fato de que o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com (a) um anticorpo anti-CD138 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente.
254. Método, de acordo com a reivindicação 246, caracterizado pelo fato de que o antígeno alvo é EPHA2.
255. Método, de acordo com a reivindicação 246 ou reivindicação 254, caracterizado pelo fato de que as uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de mama, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão, melanoma, câncer de cólon ou câncer de esôfago que expressa EPHA2.
256. Método, de acordo com a reivindicação 254 ou reivindicação 255, caracterizado pelo fato de que o tumor é resistente ou refratário ao tratamento com (a) um anticorpo anti-EPHA2 quando administrado individualmente e/ou (b) um modulador de splicing quando administrado individualmente.
257. Método para determinar se um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico será responsivo ao tratamento com o conjugado anticorpo-fármaco, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 189, com o composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 190 a 219 ou com a composição, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 220 a 224, caracterizado pelo fato de que compreende fornecer uma amostra biológica do indivíduo e colocar a amostra biológica em contato com o conjugado anticorpo-fármaco, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 189, o composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 190 a 219 ou a composição, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 220 a 224.
258. Método, de acordo com a reivindicação 257, caracterizado pelo fato de que a amostra biológica é uma amostra de tumor.
259. Método, de acordo com a reivindicação 258, caracterizado pelo fato de que a amostra de tumor é uma biópsia de tumor ou amostra de sangue.
260. Método, de acordo com a reivindicação 259, caracterizado pelo fato de que a amostra de sangue é selecionada dentre sangue, uma fração de sangue ou uma célula obtida do sangue ou fração de sangue.
261. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 257 a 260, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem uma ou mais células neoplásicas que expressam um antígeno alvo.
262. Método, de acordo com a reivindicação 261, caracterizado pelo fato de que o antígeno alvo é HER2.
263. Método, de acordo com a reivindicação 261 ou reivindicação 262, caracterizado pelo fato de que as uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de mama, câncer de ovário, câncer gástrico, câncer de pulmão, câncer de útero, osteossarcoma ou carcinoma do ducto salivar que expressa HER2.
264. Método, de acordo com a reivindicação 263, caracterizado pelo fato de que o câncer de pulmão é adenocarcinoma de pulmão e/ou o câncer uterino é carcinoma endometrial seroso uterino.
265. Método, de acordo com a reivindicação 261, caracterizado pelo fato de que o antígeno alvo é CD138.
266. Método, de acordo com a reivindicação 261 ou reivindicação 265, caracterizado pelo fato de que as uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um mieloma múltiplo que expressa CD138.
267. Método, de acordo com a reivindicação 261, caracterizado pelo fato de que o antígeno alvo é EPHA2.
268. Método, de acordo com a reivindicação 261 ou reivindicação 267, caracterizado pelo fato de que as uma ou mais células neoplásicas são derivadas de um câncer de mama, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão, melanoma, câncer de cólon ou câncer de esôfago que expressa EPHA2.
269. Conjugado anticorpo-fármaco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 189, composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 190 a 219, ou composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 220 a 224, caracterizada pelo fato de que se destina ao uso no tratamento de um distúrbio neoplásico.
270. Conjugado anticorpo-fármaco, composto ou composição para uso, de acordo com a reivindicação 269, sendo que o distúrbio neoplásico é caracterizado pelo fato de que tem uma ou mais células neoplásicas que expressam um antígeno alvo.
271. Conjugado anticorpo-fármaco, composto ou composição para uso, de acordo com a reivindicação 270, caracterizado pelo fato de que o antígeno alvo é HER2.
272. Conjugado anticorpo-fármaco, composto ou composição para uso, de acordo com a reivindicação 270 ou reivindicação 271, caracterizada pelo fato de que o distúrbio neoplásico é um câncer de mama, câncer de ovário, câncer gástrico, câncer de pulmão, câncer de útero, osteossarcoma ou carcinoma do ducto salivar que expressa HER2.
273. Conjugado anticorpo-fármaco, composto ou composição, de acordo com a reivindicação 272, caracterizada pelo fato de que o câncer de pulmão é adenocarcinoma de pulmão e/ou o câncer uterino é carcinoma endometrial seroso uterino.
274. Conjugado anticorpo-fármaco, composto ou composição para uso, de acordo com a reivindicação 270, caracterizada pelo fato de que o antígeno alvo é CD138.
275. Conjugado anticorpo-fármaco, composto ou composição para uso, de acordo com a reivindicação 270 ou reivindicação 274, caracterizada pelo fato de que o distúrbio neoplásico é um mieloma múltiplo que expressa CD138.
276. Conjugado anticorpo-fármaco, composto ou composição para uso, de acordo com a reivindicação 270, caracterizada pelo fato de que o antígeno alvo é EPHA2.
277. Conjugado anticorpo-fármaco, composto ou composição para uso, de acordo com a reivindicação 270 ou reivindicação 276, caracterizada pelo fato de que o distúrbio neoplásico é um câncer de mama, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão, melanoma, câncer de cólon ou câncer de esôfago que expressa EPHA2.
278. Uso de um conjugado anticorpo-fármaco, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 189, do composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 190 a 219, ou da composição, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 220 a 224, caracterizado pelo fato de que se destina ao tratamento de um distúrbio neoplásico.
279. Uso, de acordo com a reivindicação 278, caracterizado pelo fato de que o distúrbio neoplásico tem uma ou mais células neoplásicas que expressam um antígeno alvo.
280. Uso, de acordo com a reivindicação 279, caracterizado pelo fato de que o antígeno alvo é HER2.
281. Uso, de acordo com a reivindicação 279 ou reivindicação 280, caracterizado pelo fato de que o distúrbio neoplásico é um câncer de mama, câncer de ovário, câncer gástrico, câncer de pulmão, câncer de útero, osteossarcoma ou carcinoma do ducto salivar que expressa HER2.
282. Uso, de acordo com a reivindicação 281, caracterizado pelo fato de que o câncer de pulmão é adenocarcinoma de pulmão e/ou o câncer uterino é carcinoma endometrial seroso uterino.
283. Uso, de acordo com a reivindicação 279, caracterizado pelo fato de que o antígeno alvo é CD138.
284. Uso, de acordo com a reivindicação 279 ou reivindicação 283, caracterizado pelo fato de que o distúrbio neoplásico é um mieloma múltiplo que expressa CD138.
285. Uso, de acordo com a reivindicação 279, caracterizado pelo fato de que o antígeno alvo é EPHA2.
286. Uso, de acordo com a reivindicação 279 ou reivindicação 285, caracterizado pelo fato de que o distúrbio neoplásico é um câncer de mama, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão, melanoma, câncer de cólon ou câncer de esôfago que expressa EPHA2.
287. Uso de um conjugado anticorpo-fármaco, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 189, do composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 190 a 219, ou da composição, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 220 a 224, caracterizado pelo fato de que é em um método de fabricação de um medicamento para o tratamento de um distúrbio neoplásico.
288. Uso, de acordo com a reivindicação 287, caracterizado pelo fato de que o distúrbio neoplásico tem uma ou mais células neoplásicas que expressam um antígeno alvo.
289. Uso, de acordo com a reivindicação 288, caracterizado pelo fato de que o antígeno alvo é HER2.
290. Uso, de acordo com a reivindicação 288 ou reivindicação 289, caracterizado pelo fato de que o distúrbio neoplásico é um câncer de mama, câncer de ovário, câncer gástrico, câncer de pulmão, câncer de útero, osteossarcoma ou carcinoma do ducto salivar que expressa HER2.
291. Uso, de acordo com a reivindicação 290, caracterizado pelo fato de que o câncer de pulmão é adenocarcinoma de pulmão e/ou o câncer uterino é carcinoma endometrial seroso uterino.
292. Uso, de acordo com a reivindicação 288, caracterizado pelo fato de que o antígeno alvo é CD138.
293. Uso, de acordo com a reivindicação 288 ou reivindicação 292, caracterizado pelo fato de que o distúrbio neoplásico é um mieloma múltiplo que expressa CD138.
294. Uso, de acordo com a reivindicação 288, caracterizado pelo fato de que o antígeno alvo é EPHA2.
295. Uso, de acordo com a reivindicação 288 ou reivindicação 294, caracterizado pelo fato de que o distúrbio neoplásico é um câncer de mama, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão, melanoma, câncer de cólon ou câncer de esôfago que expressa EPHA2.
296. Método de produção do conjugado anticorpo-fármaco, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 189, caracterizado pelo fato de que compreende reagir um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno com um ligante unido a um modulador de splicing sob condições que permitem a conjugação.
297. Método de indução de pelo menos um neoantígeno caracterizado pelo fato de que compreende colocar uma célula neoplásica em contato com uma quantidade eficaz do conjugado anticorpo-fármaco, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 189, do composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 190 a 219, ou da composição, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 220 a 224, induzindo assim a produção de pelo menos um neoantígeno.
298. Método, de acordo com a reivindicação 297, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica está presente em uma cultura celular in vitro.
299. Método, de acordo com a reivindicação 297 ou reivindicação 298, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica é obtida de um indivíduo.
300. Método, de acordo com a reivindicação 297, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica está presente em um indivíduo.
301. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 297 a 300, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica é derivada de uma malignidade hematológica ou um tumor sólido.
302. Método, de acordo com a reivindicação 301, caracterizado pelo fato de que a malignidade hematológica é selecionada dentre uma malignidade de célula B, uma leucemia, um linfoma e um mieloma.
303. Método, de acordo com a reivindicação 301 ou reivindicação 302, caracterizado pelo fato de que a malignidade hematológica é selecionada dentre leucemia mieloide aguda e mieloma múltiplo.
304. Método, de acordo com a reivindicação 301, caracterizado pelo fato de que o tumor sólido é selecionado dentre câncer de mama, câncer gástrico, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão, câncer uterino, carcinoma do ducto salivar, melanoma, câncer de cólon, câncer cervical, câncer pancreático, câncer de rins, câncer colorretal e câncer de esôfago.
305. Método de indução de pelo menos um neoantígeno e/ou uma resposta de células T em um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do conjugado anticorpo- fármaco, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 189, do composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 190 a 219, ou da composição, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 220 a 224.
306. Método de tratamento de um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do conjugado anticorpo-fármaco, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 189, o composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 190 a 219, ou a composição, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 220 a 224, em que a administração do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição induz pelo menos um neoantígeno e/ou uma resposta de células T.
307. Método, de acordo com a reivindicação 305 ou reivindicação 306, caracterizado pelo fato de que a quantidade do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição administrada é reduzida devido à indução de pelo menos um neoantígeno e/ou uma resposta de células T, em comparação com um dosagem padrão do composto, conjugado anticorpo- fármaco ou composição.
308. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 305 a 307, caracterizado pelo fato de que a quantidade administrada do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é reduzida em 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90%, em comparação com uma dosagem padrão do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição.
309. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 305 a 308, caracterizado pelo fato de que o composto, conjugado anticorpo-
fármaco ou composição é administrado pelo menos 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90% menos frequentemente, em comparação com um regime de dosagem padrão do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição.
310. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 305 a 309, caracterizado pelo fato de que a quantidade e/ou dosagem administrada do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição resulta em toxicidade sistêmica mais baixa e/ou tolerância aprimorada.
311. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 305 a 310, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente administrar pelo menos uma terapia adicional.
312. Método, de acordo com a reivindicação 311, caracterizado pelo fato de que o composto, conjugado anticorpo-fármaco, composição e/ou a pelo menos uma terapia adicional administrada é reduzida devido à indução de pelo menos um neoantígeno e/ou uma resposta de célula T, em comparação com uma dosagem padrão do composto, conjugado anticorpo-fármaco, composição e/ou a pelo menos uma terapia adicional.
313. Método, de acordo com a reivindicação 311 ou reivindicação 312, caracterizado pelo fato de que a quantidade administrada do composto, conjugado anticorpo-fármaco, composição e/ou a pelo menos uma terapia adicional é reduzida em 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90%, em comparação com uma dosagem padrão do modulador de splicing, conjugado anticorpo-fármaco, composição e/ou a pelo menos uma terapia adicional.
314. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 311 a 313, caracterizado pelo fato de que o composto, conjugado anticorpo- fármaco, composição e/ou a pelo menos uma terapia adicional é administrada pelo menos 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90% menos frequentemente, em comparação com um regime de dosagem padrão do composto, conjugado anticorpo-fármaco, composição e/ou a pelo menos uma terapia adicional.
315. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 311 a 314, caracterizado pelo fato de que a quantidade e/ou dosagem administrada do composto, conjugado anticorpo-fármaco, composição e/ou a pelo menos uma terapia adicional resulta em toxicidade sistêmica mais baixa e/ou tolerância aprimorada.
316. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 311 a 315, caracterizado pelo fato de que a administração do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é iniciada antes da administração da pelo menos uma terapia adicional.
317. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 311 a 315, caracterizado pelo fato de que a administração do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é iniciada após a administração da pelo menos uma terapia adicional.
318. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 311 a 315, caracterizado pelo fato de que a administração do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é iniciada simultaneamente com a administração da pelo menos uma terapia adicional.
319. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 305 a 318, caracterizado pelo fato de que a administração do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é repetida pelo menos uma vez após a administração inicial.
320. Método, de acordo com a reivindicação 319, caracterizado pelo fato de que a quantidade do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição usada para administração repetida é reduzida em comparação com a quantidade usada para administração inicial.
321. Método, de acordo com a reivindicação 319 ou reivindicação 320, caracterizado pelo fato de que a quantidade do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição usada para administração repetida é reduzida em comparação com uma dosagem padrão do composto,
conjugado anticorpo-fármaco ou composição.
322. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 319 a 321, caracterizado pelo fato de que a quantidade do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição usado para administração repetida é reduzida em 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90%, em comparação com uma dosagem padrão do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição.
323. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 311 a 322, caracterizado pelo fato de que a administração da pelo menos uma terapia adicional é repetida pelo menos uma vez após a administração inicial.
324. Método, de acordo com a reivindicação 323, caracterizado pelo fato de que a quantidade da pelo menos uma terapia adicional usada para administração repetida é reduzida em comparação com a quantidade usada para a administração inicial.
325. Método, de acordo com a reivindicação 323 ou reivindicação 324, caracterizado pelo fato de que a quantidade da pelo menos uma terapia adicional usada para administração repetida é reduzida em comparação com uma dosagem padrão da pelo menos uma terapia adicional.
326. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 323 a 325, caracterizado pelo fato de que a quantidade da pelo menos uma terapia adicional usada para administração repetida é reduzida em 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90%, em comparação com uma dosagem padrão da pelo menos uma terapia adicional.
327. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 319 a 326, caracterizado pelo fato de que a administração repetida do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é concomitante com a administração repetida da pelo menos uma terapia adicional.
328. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 319 a 326, caracterizado pelo fato de que a administração repetida do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é sequencial ou escalonada com a administração repetida da pelo menos uma terapia adicional.
329. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 311 a 328, caracterizado pelo fato de que a pelo menos uma terapia adicional compreende administrar um inibidor de ponto de verificação.
330. Método, de acordo com a reivindicação 329, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao inibidor de ponto de verificação quando administrado sozinho.
331. Método, de acordo com a reivindicação 329 ou reivindicação 330, caracterizado pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação tem como alvo CTLA4, PD1, PDL1, OX40, CD40, GITR, LAG3, TIM3 e/ou KIR.
332. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 329 a 331, caracterizado pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação tem como alvo CTLA4, OX40, CD40 e/ou GITR.
333. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 329 a 332, caracterizado pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação compreende um inibidor de trajetória de antígeno associado a linfócito T citotóxico 4 (CTLA4).
334. Método, de acordo com a reivindicação 333, caracterizado pelo fato de que o inibidor de CTLA4 é um anticorpo anti-CTLA4.
335. Método, de acordo com a reivindicação 334, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-CTLA4 é ipilimumabe.
336. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 329 a 332, caracterizado pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação compreende um inibidor de trajetória de morte programada 1 (PD1).
337. Método, de acordo com a reivindicação 336, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PD1 é um anticorpo anti-PD1.
338. Método, de acordo com a reivindicação 337, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PD1 é nivolumabe.
339. Método, de acordo com a reivindicação 336, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PD1 é um anticorpo anti-PDL1.
340. Método, de acordo com a reivindicação 339, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PDL1 é atezolizumabe.
341. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 329 a 332, caracterizado pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação compreende um inibidor de CTLA4 e um inibidor de PD1.
342. Método, de acordo com a reivindicação 341, caracterizado pelo fato de que o inibidor de CTLA4 é um anticorpo anti-CTLA4.
343. Método, de acordo com a reivindicação 342, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-CTLA4 é ipilimumabe.
344. Método, de acordo com a reivindicação 341, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PD1 é um anticorpo anti-PD1.
345. Método, de acordo com a reivindicação 344, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PD1 é nivolumabe.
346. Método, de acordo com a reivindicação 341, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PD1 é um anticorpo anti-PDL1.
347. Método, de acordo com a reivindicação 346, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PDL1 é atezolizumabe.
348. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 311 a 328, caracterizado pelo fato de que a pelo menos uma terapia adicional compreende administrar uma vacina de neoantígeno.
349. Método, de acordo com a reivindicação 348, caracterizado pelo fato de que o composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é administrado antes da administração da vacina de neoantígeno.
350. Método, de acordo com a reivindicação 348, caracterizado pelo fato de que o composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é administrado após a administração da vacina de neoantígeno.
351. Método, de acordo com a reivindicação 348, caracterizado pelo fato de que o composto, conjugado de anticorpo-fármaco ou composição é administrado concomitantemente com a administração da vacina de neoantígeno.
352. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 348 a 351, caracterizado pelo fato de que a administração do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é repetida pelo menos uma vez após a administração inicial.
353. Método, de acordo com a reivindicação 352, caracterizado pelo fato de que a quantidade do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição usada para administração repetida é reduzida em comparação com a quantidade usada para administração inicial.
354. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 348 a 353, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno.
355. Método, de acordo com a reivindicação 354, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um peptídeo de neoantígeno está na faixa de cerca de 10 a cerca de 35 aminoácidos de comprimento.
356. Método, de acordo com a reivindicação 354 ou reivindicação 355, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um peptídeo de neoantígeno está na faixa de cerca de 15 a cerca de 25 aminoácidos de comprimento.
357. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 354 a 356, caracterizado pelo fato de que pelo menos um peptídeo de neoantígeno compreende uma ou mais de uma sequência de neoantígeno.
358. Método, de acordo com a reivindicação 357, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígeno é uma sequência de neoantígeno específica para o indivíduo.
359. Método, de acordo com a reivindicação 357, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígeno é uma sequência de neoantígeno universal.
360. Método, de acordo com a reivindicação 358, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígeno é uma vacina de neoantígeno personalizada para o indivíduo.
361. Método, de acordo com a reivindicação 360, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígenos foi identificada por sequenciamento de pelo menos um neoantígeno induzido no indivíduo pela administração de uma quantidade eficaz do composto, conjugado anticorpo- fármaco ou composição.
362. Método, de acordo com a reivindicação 360 ou reivindicação 361, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígenos tem capacidade para se ligar a pelo menos um alelo HLA expresso no indivíduo.
363. Método, de acordo com a reivindicação 359, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígeno é uma vacina de neoantígeno universal.
364. Método, de acordo com a reivindicação 363, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígenos tem capacidade de ligação a pelo menos um alelo HLA expresso em pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40% ou pelo menos 45% de indivíduos em uma população de indivíduos que sofre do distúrbio neoplásico.
365. Método, de acordo com a reivindicação 363 ou reivindicação 364, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígenos tem capacidade para elicitar uma resposta de células T contra um tumor presente em pelo menos 1%, pelo menos 5% ou pelo menos 10% de uma população de indivíduos que sofrem do distúrbio neoplásico.
366. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 354 a 365, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um peptídeo de neoantígeno compreende uma sequência de neoantígenos induzida pelo contato de uma célula neoplásica com uma quantidade eficaz do modulador de splicing, conjugado anticorpo-fármaco ou composição.
367. Método, de acordo com a reivindicação 348, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno e um carreador farmaceuticamente aceitável.
368. Método, de acordo com a reivindicação 367, caracterizado pelo fato de que pelo menos um peptídeo de neoantígeno está ligado ao carreador farmaceuticamente aceitável.
369. Método, de acordo com a reivindicação 367 ou reivindicação 368, caracterizado pelo fato de que o carreador farmaceuticamente aceitável é selecionado dentre um peptídeo, uma albumina sérica, uma homocianina de lapa, uma imunoglobulina, uma tiroglobulina, uma ovalbumina, um toxoide ou um derivado de toxoide atenuado, uma citocina e uma quimiocina.
370. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 367 a 369, caracterizado pelo fato de que o peptídeo de neoantígeno e o carreador farmaceuticamente aceitável são covalentemente ligados através de um ligante.
371. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 367 a 369, caracterizado pelo fato de que o peptídeo de neoantígeno e o carreador farmaceuticamente aceitável são expressos como uma proteína de fusão.
372. Método, de acordo com a reivindicação 348, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno e um diluente farmaceuticamente aceitável.
373. Método, de acordo com a reivindicação 348, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno e um adjuvante farmaceuticamente aceitável.
374. Método, de acordo com a reivindicação 366, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica está presente em uma cultura celular in vitro.
375. Método, de acordo com a reivindicação 366 ou reivindicação 374, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica é obtida do indivíduo.
376. Método, de acordo com a reivindicação 366, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica está presente no indivíduo.
377. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 348 a 353, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno.
378. Método, de acordo com a reivindicação 377, caracterizado pelo fato de que pelo menos um mRNA de neoantígeno codifica uma ou mais de uma sequência de neoantígeno.
379. Método, de acordo com a reivindicação 378, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígeno é uma sequência de neoantígeno específica para o indivíduo.
380. Método, de acordo com a reivindicação 378, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígeno é uma sequência de neoantígeno universal.
381. Método, de acordo com a reivindicação 379, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígeno é uma vacina de neoantígeno personalizada para o indivíduo.
382. Método, de acordo com a reivindicação 381, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígenos foi identificada por sequenciamento de pelo menos um neoantígeno induzido no indivíduo pela administração de uma quantidade eficaz do composto, conjugado anticorpo- fármaco ou composição.
383. Método, de acordo com a reivindicação 381 ou reivindicação 382, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígenos tem capacidade para se ligar a pelo menos um alelo HLA expresso no indivíduo.
384. Método, de acordo com a reivindicação 380, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígeno é uma vacina de neoantígeno universal.
385. Método, de acordo com a reivindicação 384, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígenos tem capacidade de ligação a pelo menos um alelo HLA expresso em pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40% ou pelo menos 45% de indivíduos em uma população de indivíduos que sofre do distúrbio neoplásico.
386. Método, de acordo com a reivindicação 384 ou reivindicação 385, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígenos tem capacidade para elicitar uma resposta de células T contra um tumor presente em pelo menos 1%, pelo menos 5% ou pelo menos 10% de uma população de indivíduos que sofrem do distúrbio neoplásico.
387. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 378 a 386, caracterizado pelo fato de que pelo menos um mRNA de neoantígeno codifica uma sequência de neoantígenos induzida pelo contato de uma célula neoplásica com uma quantidade eficaz do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição.
388. Método, de acordo com a reivindicação 377, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno e um carreador farmaceuticamente aceitável.
389. Método, de acordo com a reivindicação 388, caracterizado pelo fato de que pelo menos um mRNA de neoantígeno está ligado ao carreador farmaceuticamente aceitável.
390. Método, de acordo com a reivindicação 388 ou reivindicação 389, caracterizado pelo fato de que o carreador farmaceuticamente aceitável é selecionado dentre um peptídeo, uma albumina sérica, uma homocianina de lapa, uma imunoglobulina, uma tiroglobulina, uma ovalbumina, um toxoide ou um derivado de toxoide atenuado, uma citocina e uma quimiocina.
391. Método, de acordo com a reivindicação 377, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno e um diluente farmaceuticamente aceitável.
392. Método, de acordo com a reivindicação 377, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno e um adjuvante farmaceuticamente aceitável.
393. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 377 a 392, caracterizado pelo fato de que o mRNA do neoantígeno é encapsulado por um agente de encapsulação.
394. Método, de acordo com a reivindicação 393, caracterizado pelo fato de que o agente de encapsulação é um lipossoma.
395. Método, de acordo com a reivindicação 393, caracterizado pelo fato de que o agente de encapsulação é uma nanopartícula.
396. Método, de acordo com a reivindicação 387, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica está presente em uma cultura celular in vitro.
397. Método, de acordo com a reivindicação 387 ou reivindicação 396, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica é obtida do indivíduo.
398. Método, de acordo com a reivindicação 387, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica está presente no indivíduo.
399. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 311 a 328, caracterizado pelo fato de que a pelo menos uma terapia adicional compreende administrar uma citocina ou análogo de citocina.
400. Método, de acordo com a reivindicação 399, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo à citocina ou análogo de citocina quando administrada sozinha.
401. Método, de acordo com a reivindicação 399 ou reivindicação 400, caracterizado pelo fato de que a citocina ou análogo de citocina compreende um intensificador de célula T.
402. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 399 a 401, caracterizado pelo fato de que a citocina ou análogo de citocina compreende IL-2, IL-10, IL-12, IL-15, IFNγ e/ou TNFα.
403. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 311 a 328, caracterizado pelo fato de que a pelo menos uma terapia adicional compreende administrar células T geneticamente modificadas que têm como alvo um tumor.
404. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 305 a 403, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente detectar um ou mais neoantígenos e/ou uma resposta de células T no indivíduo após a administração do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição.
405. Método, de acordo com a reivindicação 404, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente continuar a administração do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição se um ou mais neoantígenos e/ou uma resposta de células T forem detectados.
406. Método, de acordo com a reivindicação 404 ou reivindicação 405, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente continuar a administração do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição com menos frequência e/ou em uma dosagem reduzida se um ou mais neoantígenos e/ou uma resposta de células T forem detectados.
407. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 404 a 406, caracterizado pelo fato de que detecta um ou mais neoantígenos e/ou uma resposta de células T no indivíduo indica a eficácia de tratamento com o composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição.
408. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 305 a 407, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem uma carga mutacional não sinônima de cerca de 150 mutações ou menos.
409. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 305 a 408, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem uma carga mutacional não sinônima de cerca de 100 mutações ou menos.
410. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações
305 a 409, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem uma carga mutacional não sinônima de cerca de 50 mutações ou menos.
411. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 305 a 410, caracterizado pelo fato de que o distúrbio neoplásico é uma malignidade hematológica ou um tumor sólido.
412. Método, de acordo com a reivindicação 411, caracterizado pelo fato de que a malignidade hematológica é selecionada dentre uma malignidade de célula B, uma leucemia, um linfoma e um mieloma.
413. Método, de acordo com a reivindicação 411 ou 412, caracterizado pelo fato de que a malignidade hematológica é selecionada dentre leucemia mieloide aguda e mieloma múltiplo.
414. Método, de acordo com a reivindicação 411, caracterizado pelo fato de que o tumor sólido é selecionado dentre câncer de mama, câncer gástrico, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão, câncer uterino, carcinoma do ducto salivar, melanoma, câncer de cólon, câncer cervical, câncer pancreático, câncer de rins, câncer colorretal e câncer de esôfago.
415. Método de tratamento de um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do conjugado anticorpo-fármaco, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 189, o composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 190 a 219, ou a composição, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 220 a 224, em que a administração do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição induz pelo menos um neoantígeno e/ou uma resposta de células T; (b) detectar um ou mais neoantígenos e/ou uma resposta de células T no indivíduo após a administração do composto, conjugado anticorpo- droga ou composição; e
(c) continuar a administração do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição se um ou mais neoantígenos e/ou uma resposta de células T forem detectados.
416. Método, de acordo com a reivindicação 415, caracterizado pelo fato de que detectar um ou mais neoantígenos e/ou uma resposta de células T no indivíduo indica a eficácia de tratamento com o composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição.
417. Método de tratamento de um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do conjugado anticorpo-fármaco, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 189, do composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 190 a 219, ou da composição, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 220 a 224; e pelo menos uma terapia adicional.
418. Método, de acordo com a reivindicação 417, caracterizado pelo fato de que a pelo menos uma terapia adicional compreende pelo menos uma, pelo menos duas, pelo menos três, pelo menos quatro ou pelo menos cinco terapias adicionais.
419. Método, de acordo com a reivindicação 417 ou reivindicação 418, caracterizado pelo fato de que a administração do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição induz pelo menos um neoantígeno e/ou uma resposta de célula T.
420. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 417 a 419, caracterizado pelo fato de que a quantidade administrada do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição e/ou a pelo menos uma terapia adicional é reduzida em 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90%, em comparação com uma dosagem padrão do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição e/ou da pelo menos uma terapia adicional.
421. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações
417 a 420, caracterizado pelo fato de que o composto, conjugado anticorpo- fármaco ou composição e/ou a pelo menos uma terapia adicional é administrada pelo menos 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90% menos frequentemente, em comparação com um regime de dosagem padrão do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição e/ou da pelo menos uma terapia adicional.
422. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 417 a 421, caracterizado pelo fato de que a quantidade e/ou dosagem administrada do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição e/ou da pelo menos uma terapia adicional resulta em toxicidade sistêmica mais baixa e/ou tolerância aprimorada.
423. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 417 a 422, caracterizado pelo fato de que a administração do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é iniciada antes da administração da pelo menos uma terapia adicional.
424. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 417 a 422, caracterizado pelo fato de que a administração do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é iniciada após a administração da pelo menos uma terapia adicional.
425. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 417 a 422, caracterizado pelo fato de que a administração do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é iniciada simultaneamente com a administração da pelo menos uma terapia adicional.
426. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 417 a 425, caracterizado pelo fato de que a administração do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é repetida pelo menos uma vez após a administração inicial.
427. Método, de acordo com a reivindicação 426, caracterizado pelo fato de que a quantidade do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição usada para administração repetida é reduzida em comparação com a quantidade usada para administração inicial.
428. Método, de acordo com a reivindicação 426 ou reivindicação 427, caracterizado pelo fato de que a quantidade do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição usada para administração repetida é reduzida em comparação com uma dosagem padrão do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição.
429. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 426 a 428, caracterizado pelo fato de que a quantidade do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição usado para administração repetida é reduzida em 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90%, em comparação com uma dosagem padrão do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição.
430. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 417 a 429, caracterizado pelo fato de que a administração da pelo menos uma terapia adicional é repetida pelo menos uma vez após a administração inicial.
431. Método, de acordo com a reivindicação 430, caracterizado pelo fato de que a quantidade da pelo menos uma terapia adicional usada para administração repetida é reduzida em comparação com a quantidade usada para a administração inicial.
432. Método, de acordo com a reivindicação 430 ou reivindicação 431, caracterizado pelo fato de que a quantidade da pelo menos uma terapia adicional usada para administração repetida é reduzida em comparação com uma dosagem padrão da pelo menos uma terapia adicional.
433. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 430 a 432, caracterizado pelo fato de que a quantidade da pelo menos uma terapia adicional usada para administração repetida é reduzida em 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90%, em comparação com uma dosagem padrão da pelo menos uma terapia adicional.
434. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 426 a 433, caracterizado pelo fato de que a administração repetida do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é concomitante com a administração repetida da pelo menos uma terapia adicional.
435. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 426 a 433, caracterizado pelo fato de que a administração repetida do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é sequencial ou escalonada com a administração repetida da pelo menos uma terapia adicional.
436. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 417 a 435, caracterizado pelo fato de que a pelo menos uma terapia adicional compreende administrar um inibidor de ponto de verificação.
437. Método, de acordo com a reivindicação 436, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao inibidor de ponto de verificação quando administrado sozinho.
438. Método, de acordo com a reivindicação 436 ou reivindicação 437, caracterizado pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação tem como alvo CTLA4, PD1, PDL1, OX40, CD40, GITR, LAG3, TIM3 e/ou KIR.
439. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 436 a 438, caracterizado pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação tem como alvo CTLA4, OX40, CD40 e/ou GITR.
440. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 436 a 439, caracterizado pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação compreende um inibidor de trajetória de antígeno associado a linfócito T citotóxico 4 (CTLA4).
441. Método, de acordo com a reivindicação 440, caracterizado pelo fato de que o inibidor de CTLA4 é um anticorpo anti-CTLA4.
442. Método, de acordo com a reivindicação 441, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-CTLA4 é ipilimumabe.
443. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 436 a 439, caracterizado pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação compreende um inibidor de trajetória de morte programada 1 (PD1).
444. Método, de acordo com a reivindicação 443, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PD1 é um anticorpo anti-PD1.
445. Método, de acordo com a reivindicação 444, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PD1 é nivolumabe.
446. Método, de acordo com a reivindicação 443, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PD1 é um anticorpo anti-PDL1.
447. Método, de acordo com a reivindicação 446, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PDL1 é atezolizumabe.
448. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 436 a 439, caracterizado pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação compreende um inibidor de CTLA4 e um inibidor de PD1.
449. Método, de acordo com a reivindicação 448, caracterizado pelo fato de que o inibidor de CTLA4 é um anticorpo anti-CTLA4.
450. Método, de acordo com a reivindicação 449, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-CTLA4 é ipilimumabe.
451. Método, de acordo com a reivindicação 448, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PD1 é um anticorpo anti-PD1.
452. Método, de acordo com a reivindicação 451, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PD1 é nivolumabe.
453. Método, de acordo com a reivindicação 448, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PD1 é um anticorpo anti-PDL1.
454. Método, de acordo com a reivindicação 453, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PDL1 é atezolizumabe.
455. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 417 a 435, caracterizado pelo fato de que a pelo menos uma terapia adicional compreende administrar uma vacina de neoantígeno.
456. Método, de acordo com a reivindicação 455, caracterizado pelo fato de que o composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é administrado antes da administração da vacina de neoantígeno.
457. Método, de acordo com a reivindicação 455, caracterizado pelo fato de que o composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é administrado após a administração da vacina de neoantígeno.
458. Método, de acordo com a reivindicação 455, caracterizado pelo fato de que o composto, conjugado de anticorpo-fármaco ou composição é administrado concomitantemente com a administração da vacina de neoantígeno.
459. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 455 a 458, caracterizado pelo fato de que a administração do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é repetida pelo menos uma vez após a administração inicial.
460. Método, de acordo com a reivindicação 459, caracterizado pelo fato de que a quantidade do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição usada para administração repetida é reduzida em comparação com a quantidade usada para administração inicial.
461. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 455 a 460, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno.
462. Método, de acordo com a reivindicação 461, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um peptídeo de neoantígeno está na faixa de cerca de 10 a cerca de 35 aminoácidos de comprimento.
463. Método, de acordo com a reivindicação 461 ou reivindicação 462, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um peptídeo de neoantígeno está na faixa de cerca de 15 a cerca de 25 aminoácidos de comprimento.
464. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 461 a 463, caracterizado pelo fato de que pelo menos um peptídeo de neoantígeno compreende uma ou mais de uma sequência de neoantígeno.
465. Método, de acordo com a reivindicação 464, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígeno é uma sequência de neoantígeno específica para o indivíduo.
466. Método, de acordo com a reivindicação 464, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígeno é uma sequência de neoantígeno universal.
467. Método, de acordo com a reivindicação 465, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígeno é uma vacina de neoantígeno personalizada para o indivíduo.
468. Método, de acordo com a reivindicação 467, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígenos foi identificada por sequenciamento de pelo menos um neoantígeno induzido no indivíduo pela administração de uma quantidade eficaz do composto, conjugado anticorpo- fármaco ou composição.
469. Método, de acordo com a reivindicação 467 ou reivindicação 468, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígenos tem capacidade para se ligar a pelo menos um alelo HLA expresso no indivíduo.
470. Método, de acordo com a reivindicação 466, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígeno é uma vacina de neoantígeno universal.
471. Método, de acordo com a reivindicação 470, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígenos tem capacidade de ligação a pelo menos um alelo HLA expresso em pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40% ou pelo menos 45% de indivíduos em uma população de indivíduos que sofre do distúrbio neoplásico.
472. Método, de acordo com a reivindicação 470 ou reivindicação 471, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígenos tem capacidade para elicitar uma resposta de células T contra um tumor presente em pelo menos 1%, pelo menos 5% ou pelo menos 10% de uma população de indivíduos que sofrem do distúrbio neoplásico.
473. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações
464 a 472, caracterizado pelo fato de que pelo menos um peptídeo de neoantígeno compreende uma sequência de neoantígenos induzida pelo contato de uma célula neoplásica com uma quantidade eficaz do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição.
474. Método, de acordo com a reivindicação 455, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno e um carreador farmaceuticamente aceitável.
475. Método, de acordo com a reivindicação 474, caracterizado pelo fato de que pelo menos um peptídeo de neoantígeno está ligado ao carreador farmaceuticamente aceitável.
476. Método, de acordo com a reivindicação 474 ou reivindicação 475, caracterizado pelo fato de que o carreador farmaceuticamente aceitável é selecionado dentre um peptídeo, uma albumina sérica, uma homocianina de lapa, uma imunoglobulina, uma tiroglobulina, uma ovalbumina, um toxoide ou um derivado de toxoide atenuado, uma citocina e uma quimiocina.
477. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 474 a 476, caracterizado pelo fato de que o peptídeo de neoantígeno e o carreador farmaceuticamente aceitável são covalentemente ligados através de um ligante.
478. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 474 a 476, caracterizado pelo fato de que o peptídeo de neoantígeno e o carreador farmaceuticamente aceitável são expressos como uma proteína de fusão.
479. Método, de acordo com a reivindicação 455, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno e um diluente farmaceuticamente aceitável.
480. Método, de acordo com a reivindicação 455, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno e um adjuvante farmaceuticamente aceitável.
481. Método, de acordo com a reivindicação 473, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica está presente em uma cultura celular in vitro.
482. Método, de acordo com a reivindicação 473 ou 481, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica é obtida do indivíduo.
483. Método, de acordo com a reivindicação 473, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica está presente no indivíduo.
484. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 455 a 460, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno.
485. Método, de acordo com a reivindicação 484, caracterizado pelo fato de que pelo menos um mRNA de neoantígeno codifica uma ou mais de uma sequência de neoantígeno.
486. Método, de acordo com a reivindicação 485, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígeno é uma sequência de neoantígeno específica para o indivíduo.
487. Método, de acordo com a reivindicação 485, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígeno é uma sequência de neoantígeno universal.
488. Método, de acordo com a reivindicação 486, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígeno é uma vacina de neoantígeno personalizada para o indivíduo.
489. Método, de acordo com a reivindicação 488, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígenos foi identificada por sequenciamento de pelo menos um neoantígeno induzido no indivíduo pela administração de uma quantidade eficaz do composto, conjugado anticorpo- fármaco ou composição.
490. Método, de acordo com a reivindicação 488 ou reivindicação 489, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígenos tem capacidade para se ligar a pelo menos um alelo HLA expresso no indivíduo.
491. Método, de acordo com a reivindicação 487, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígeno é uma vacina de neoantígeno universal.
492. Método, de acordo com a reivindicação 491, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígenos tem capacidade de ligação a pelo menos um alelo HLA expresso em pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40% ou pelo menos 45% de indivíduos em uma população de indivíduos que sofre do distúrbio neoplásico.
493. Método, de acordo com a reivindicação 491 ou reivindicação 492, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígenos tem capacidade para elicitar uma resposta de células T contra um tumor presente em pelo menos 1%, pelo menos 5% ou pelo menos 10% de uma população de indivíduos que sofrem do distúrbio neoplásico.
494. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 484 a 493, caracterizado pelo fato de que pelo menos um mRNA de neoantígeno codifica uma sequência de neoantígenos induzida pelo contato de uma célula neoplásica com uma quantidade eficaz do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição.
495. Método, de acordo com a reivindicação 484, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno e um carreador farmaceuticamente aceitável.
496. Método, de acordo com a reivindicação 495, caracterizado pelo fato de que pelo menos um mRNA de neoantígeno está ligado ao carreador farmaceuticamente aceitável.
497. Método, de acordo com a reivindicação 495 ou reivindicação 496, caracterizado pelo fato de que o carreador farmaceuticamente aceitável é selecionado dentre um peptídeo, uma albumina sérica, uma homocianina de lapa, uma imunoglobulina, uma tiroglobulina, uma ovalbumina, um toxoide ou um derivado de toxoide atenuado, uma citocina e uma quimiocina.
498. Método, de acordo com a reivindicação 484, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno e um diluente farmaceuticamente aceitável.
499. Método, de acordo com a reivindicação 484, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno e um adjuvante farmaceuticamente aceitável.
500. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 484 a 499, caracterizado pelo fato de que o mRNA do neoantígeno é encapsulado por um agente de encapsulação.
501. Método, de acordo com a reivindicação 500, caracterizado pelo fato de que o agente de encapsulação é um lipossoma.
502. Método, de acordo com a reivindicação 500, caracterizado pelo fato de que o agente de encapsulação é uma nanopartícula.
503. Método, de acordo com a reivindicação 494, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica está presente em uma cultura celular in vitro.
504. Método, de acordo com a reivindicação 494 ou 503, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica é obtida do indivíduo.
505. Método, de acordo com a reivindicação 494, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica está presente no indivíduo.
506. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 417 a 435, caracterizado pelo fato de que a pelo menos uma terapia adicional compreende administrar uma citocina ou análogo de citocina.
507. Método, de acordo com a reivindicação 506, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo à citocina ou análogo de citocina quando administrada sozinha.
508. Método, de acordo com a reivindicação 506 ou reivindicação 507, caracterizado pelo fato de que a citocina ou análogo de citocina compreende um intensificador de célula T.
509. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 506 a 508, caracterizado pelo fato de que a citocina ou análogo de citocina compreende IL-2, IL-10, IL-12, IL-15, IFNγ e/ou TNFα.
510. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 417 a 435, caracterizado pelo fato de que a pelo menos uma terapia adicional compreende administrar células T geneticamente modificadas que têm como alvo um tumor.
511. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 417 a 510, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem uma carga mutacional não sinônima de cerca de 150 mutações ou menos.
512. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 417 a 511, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem uma carga mutacional não sinônima de cerca de 100 mutações ou menos.
513. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 417 a 512, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem uma carga mutacional não sinônima de cerca de 50 mutações ou menos.
514. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 417 a 513, caracterizado pelo fato de que o distúrbio neoplásico é uma malignidade hematológica ou um tumor sólido.
515. Método, de acordo com a reivindicação 514, caracterizado pelo fato de que a malignidade hematológica é selecionada dentre uma malignidade de célula B, uma leucemia, um linfoma e um mieloma.
516. Método, de acordo com a reivindicação 514 ou reivindicação 515, caracterizado pelo fato de que a malignidade hematológica é selecionada dentre leucemia mieloide aguda e mieloma múltiplo.
517. Método, de acordo com a reivindicação 514, caracterizado pelo fato de que o tumor sólido é selecionado dentre câncer de mama, câncer gástrico, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão, câncer uterino, carcinoma do ducto salivar, melanoma, câncer de cólon, câncer cervical, câncer pancreático, câncer de rins, câncer colorretal e câncer de esôfago.
518. Método para identificar pelo menos um neoantígeno caracterizado pelo fato de que compreende: (a) colocar uma célula neoplásica em contato com uma quantidade eficaz do conjugado anticorpo-fármaco, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 189, o composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 190 a 219, ou a composição, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 220 a 224; (b) detectar pelo menos um transcrito de mRNA com splicing alternativo após colocar a célula neoplásica em contato com o composto, conjugado de anticorpo-fármaco ou composição; (c) prever a tradução do pelo menos um transcrito de mRNA com splicing alternativo em pelo menos um peptídeo; e (d) comparar o pelo menos um peptídeo com um proteoma de referência, em que pelo menos um neoantígeno é identificado se pelo menos um peptídeo não corresponder a nenhum peptídeo no proteoma de referência.
519. Método, de acordo com a reivindicação 518, caracterizado pelo fato de que a detecção de pelo menos um transcrito de mRNA com splicing alternativo compreende RNAseq.
520. Método, de acordo com a reivindicação 518 ou reivindicação 519, caracterizado pelo fato de que prever a tradução do pelo menos um transcrito de mRNA com splicing alternativo compreende quantificar da mudança no valor de porcentagem de índice de splicing (dPSI) para o pelo menos um transcrito.
521. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 518 a 520, caracterizado pelo fato de que prever a tradução do pelo menos um transcrito de mRNA com splicing alternativo compreende RiboSeq e/ou perfil ribossômico.
522. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações
518 a 521, sendo que o método é caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente avaliar o pelo menos um peptídeo para ligação do complexo de histocompatibilidade principal (MHC) prevista.
523. Método, de acordo com a reivindicação 522, caracterizado pelo fato de que a ligação de MHC prevista é determinada pela medição da força de ligação prevista por afinidade bruta de pelo menos um peptídeo.
524. Método, de acordo com a reivindicação 523, caracterizado pelo fato de que uma força de ligação prevista por afinidade bruta de cerca de 500 nM ou mais indica ligação de MHC.
525. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 522 a 524, caracterizado pelo fato de que a ligação de MHC prevista é determinada pela identificação de uma distribuição de forças de ligação previstas para uma série de peptídeos aleatórios; e comparação de força de ligação prevista do pelo menos um peptídeo à distribuição.
526. Método, de acordo com a reivindicação 525, caracterizado pelo fato de que uma força de ligação prevista nos primeiros 2% da distribuição indica uma ligação de MHC fraca.
527. Método, de acordo com a reivindicação 525, caracterizado pelo fato de que uma intensidade de ligação prevista no primeiro 0,5% da distribuição indica uma ligação de MHC forte.
528. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 518 a 527, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica está presente em uma cultura celular in vitro.
529. Método, de acordo com a reivindicação 528, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica é obtida a partir do indivíduo.
530. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 518 a 527, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica está presente no indivíduo.
531. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 518 a 530, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente colocar uma ou mais células neoplásicas adicionais em contato para identificar pelo menos um neoantígeno universal.
532. Método para identificar pelo menos um neoantígeno, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) colocar uma célula neoplásica em contato com uma quantidade eficaz do conjugado anticorpo-fármaco, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 189, o composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 190 a 219, ou a composição, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 220 a 224; (b) detectar pelo menos um peptídeo que compreende uma sequência potencial de neoantígenos após colocar a célula neoplásica em contato com o composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição; e (c) comparar o pelo menos um peptídeo com um proteoma de referência, em que pelo menos um neoantígeno é identificado se pelo menos um peptídeo não corresponder a nenhum peptídeo no proteoma de referência.
533. Método, de acordo com a reivindicação 532, sendo que o método é caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente avaliar o pelo menos um peptídeo para ligação do complexo de histocompatibilidade principal (MHC) prevista.
534. Método, de acordo com a reivindicação 533, caracterizado pelo fato de que a ligação de MHC prevista é determinada pela medição da força de ligação prevista por afinidade bruta de pelo menos um peptídeo.
535. Método, de acordo com a reivindicação 534, caracterizado pelo fato de que uma força de ligação prevista por afinidade bruta de cerca de 500 nM ou mais indica ligação de MHC.
536. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 533 a 535, caracterizado pelo fato de que a ligação de MHC prevista é determinada pela identificação de uma distribuição de forças de ligação previstas para uma série de peptídeos aleatórios; e comparação de força de ligação prevista do pelo menos um peptídeo à distribuição.
537. Método, de acordo com a reivindicação 536, caracterizado pelo fato de que uma força de ligação prevista nos primeiros 2% da distribuição indica uma ligação de MHC fraca.
538. Método, de acordo com a reivindicação 536, caracterizado pelo fato de que uma intensidade de ligação prevista no primeiro 0,5% da distribuição indica uma ligação de MHC forte.
539. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 532 a 538, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica está presente em uma cultura celular in vitro.
540. Método, de acordo com a reivindicação 539, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica é obtida a partir do indivíduo.
541. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 532 a 538, caracterizado pelo fato de que a célula neoplásica está presente no indivíduo.
542. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 532 a 541, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente colocar uma ou mais células neoplásicas adicionais em contato para identificar pelo menos um neoantígeno universal.
543. Método de fabricação de uma vacina de neoantígeno caracterizado pelo fato de que compreende: (a) identificar pelo menos um neoantígeno que usa o método, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 518 a 542; e (b) formular o pelo menos um neoantígeno juntamente com um carreador, diluente ou adjuvante farmaceuticamente aceitável.
544. Método, de acordo com a reivindicação 543, caracterizado pelo fato de que pelo menos um neoantígeno está ligado ao carreador farmaceuticamente aceitável.
545. Método, de acordo com a reivindicação 544, caracterizado pelo fato de que o carreador farmaceuticamente aceitável é selecionado dentre um peptídeo, uma albumina sérica, uma homocianina de lapa, uma imunoglobulina, uma tiroglobulina, uma ovalbumina, um toxoide ou um derivado de toxoide atenuado, uma citocina e uma quimiocina.
546. Método de tratamento de um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico caracterizado pelo fato de que compreende: (a) administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do conjugado anticorpo-fármaco, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 189, do composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 190 a 219, ou da composição, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 220 a 224; (b) detectar um ou mais neoantígenos no indivíduo após a administração do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição; (c) comparar um ou mais neoantígenos a um painel de neoantígenos universais; e (d) administrar ao indivíduo uma vacina de neoantígeno universal que compreende pelo menos um neoantígeno universal presente no indivíduo.
547. Método, de acordo com a reivindicação 546, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno universal é administrada individualmente ou em combinação com pelo menos uma terapia adicional.
548. Método, de acordo com a reivindicação 547, caracterizado pelo fato de que a pelo menos uma terapia adicional compreende pelo menos uma, pelo menos duas, pelo menos três, pelo menos quatro ou pelo menos cinco terapias adicionais.
549. Método, de acordo com a reivindicação 547 ou reivindicação 548, caracterizado pelo fato de que a pelo menos uma terapia adicional compreende a administração repetida do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição.
550. Método, de acordo com a reivindicação 549, caracterizado pelo fato de que a administração repetida do composto, conjugado anticorpo- fármaco ou composição é iniciada antes da administração da vacina de neoantígeno universal.
551. Método, de acordo com a reivindicação 549, caracterizado pelo fato de que a repetida do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição é iniciada após a administração da vacina de neoantígeno universal.
552. Método, de acordo com a reivindicação 549, caracterizado pelo fato de que a administração repetida do composto, conjugado de anticorpo-fármaco ou composição é iniciada concomitantemente com a administração da vacina de neoantígeno universal.
553. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 549 a 552, caracterizado pelo fato de que a quantidade do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição usada para administração repetida é reduzida em comparação com a quantidade usada para administração inicial.
554. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 549 a 553, caracterizado pelo fato de que a quantidade do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição usada para administração repetida é reduzida em comparação com uma dosagem padrão do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição.
555. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 549 a 554, caracterizado pelo fato de que a quantidade do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição usado para administração repetida é reduzida em 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90%, em comparação com uma dosagem padrão do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição.
556. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 547 a 555, caracterizado pelo fato de que a pelo menos uma terapia adicional compreende administrar um inibidor de ponto de verificação.
557. Método, de acordo com a reivindicação 556, caracterizado pelo fato de que a administração do inibidor de ponto de verificação é iniciada antes da administração da vacina de neoantígeno universal e/ou administração repetida do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição.
558. Método, de acordo com a reivindicação 556, caracterizado pelo fato de que a administração do inibidor de ponto de verificação é iniciada após a administração da vacina de neoantígeno universal e/ou repetida do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição.
559. Método, de acordo com a reivindicação 556, caracterizado pelo fato de que a administração do inibidor de ponto de verificação é iniciada concomitantemente com a administração da vacina de neoantígeno universal e/ou administração repetida do composto, conjugado anticorpo-fármaco ou composição.
560. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 556 a 559, caracterizado pelo fato de que a administração do inibidor de ponto de verificação é repetida pelo menos uma vez após a administração inicial.
561. Método, de acordo com a reivindicação 560, caracterizado pelo fato de que a quantidade do inibidor de ponto de verificação usada para administração repetida é reduzida em comparação com a quantidade usada para a administração inicial.
562. Método, de acordo com a reivindicação 560 ou reivindicação 561, caracterizado pelo fato de que a quantidade do inibidor de ponto de verificação usado para administração repetida é reduzida em comparação com uma dosagem padrão do inibidor de ponto de verificação.
563. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 560 a 562, caracterizado pelo fato de que a quantidade do inibidor de ponto de verificação usado para administração repetida é reduzida em 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% ou 90%, em comparação com uma dosagem padrão do inibidor de ponto de verificação.
564. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações
556 a 563, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é intolerante, não responsivo ou pouco responsivo ao inibidor de ponto de verificação quando administrado individualmente.
565. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 556 a 564, caracterizado pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação tem como alvo CTLA4, PD1, PDL1, OX40, CD40, GITR, LAG3, TIM3 e/ou KIR.
566. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 556 a 565, caracterizado pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação tem como alvo CTLA4, OX40, CD40 e/ou GITR.
567. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 556 a 566, caracterizado pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação compreende um inibidor de trajetória de antígeno associado a linfócito T citotóxico 4 (CTLA4).
568. Método, de acordo com a reivindicação 567, caracterizado pelo fato de que o inibidor de CTLA4 é um anticorpo anti-CTLA4.
569. Método, de acordo com a reivindicação 568, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-CTLA4 é ipilimumabe.
570. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 556 a 566, caracterizado pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação compreende um inibidor de trajetória de morte programada 1 (PD1).
571. Método, de acordo com a reivindicação 570, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PD1 é um anticorpo anti-PD1.
572. Método, de acordo com a reivindicação 571, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PD1 é nivolumabe.
573. Método, de acordo com a reivindicação 570, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PD1 é um anticorpo anti-PDL1.
574. Método, de acordo com a reivindicação 573, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PDL1 é atezolizumabe.
575. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 556 a 566, caracterizado pelo fato de que o inibidor de ponto de verificação compreende um inibidor de CTLA4 e um inibidor de PD1.
576. Método, de acordo com a reivindicação 575, caracterizado pelo fato de que o inibidor de CTLA4 é um anticorpo anti-CTLA4.
577. Método, de acordo com a reivindicação 576, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-CTLA4 é ipilimumabe.
578. Método, de acordo com a reivindicação 575, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PD1 é um anticorpo anti-PD1.
579. Método, de acordo com a reivindicação 578, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PD1 é nivolumabe.
580. Método, de acordo com a reivindicação 575, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PD1 é um anticorpo anti-PDL1.
581. Método, de acordo com a reivindicação 580, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PDL1 é atezolizumabe.
582. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 546 a 581, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno universal compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno.
583. Método, de acordo com a reivindicação 582, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um peptídeo de neoantígeno está na faixa de cerca de 10 a cerca de 35 aminoácidos de comprimento.
584. Método, de acordo com a reivindicação 582 ou reivindicação 583, caracterizado pelo fato de que o pelo menos um peptídeo de neoantígeno está na faixa de cerca de 15 a cerca de 25 aminoácidos de comprimento.
585. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 582 a 584, caracterizado pelo fato de que pelo menos um peptídeo de neoantígeno compreende uma ou mais de uma sequência de neoantígeno universal.
586. Método, de acordo com a reivindicação 585, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígenos universal tem capacidade de ligação a pelo menos um alelo HLA expresso em pelo menos 10%, pelo menos
15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40% ou pelo menos 45% de indivíduos em uma população de indivíduos que sofre do distúrbio neoplásico.
587. Método, de acordo com a reivindicação 585 ou reivindicação 586, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígenos universal tem capacidade para elicitar uma resposta de células T contra um tumor presente em pelo menos 1%, pelo menos 5% ou pelo menos 10% de uma população de indivíduos que sofrem do distúrbio neoplásico.
588. Método, de acordo com a reivindicação 582, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno universal compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno e um carreador farmaceuticamente aceitável.
589. Método, de acordo com a reivindicação 588, caracterizado pelo fato de que pelo menos um peptídeo de neoantígeno está ligado ao carreador farmaceuticamente aceitável.
590. Método, de acordo com a reivindicação 588 ou reivindicação 589, caracterizado pelo fato de que o carreador farmaceuticamente aceitável é selecionado dentre um peptídeo, uma albumina sérica, uma homocianina de lapa, uma imunoglobulina, uma tiroglobulina, uma ovalbumina, um toxoide ou um derivado de toxoide atenuado, uma citocina e uma quimiocina.
591. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 588 a 590, caracterizado pelo fato de que o peptídeo de neoantígeno e o carreador farmaceuticamente aceitável são covalentemente ligados através de um ligante.
592. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 588 a 590, caracterizado pelo fato de que o peptídeo de neoantígeno e o carreador farmaceuticamente aceitável são expressos como uma proteína de fusão.
593. Método, de acordo com a reivindicação 582, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno universal compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno e um diluente farmaceuticamente aceitável.
594. Método, de acordo com a reivindicação 582, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno universal compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno e um adjuvante farmaceuticamente aceitável.
595. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 546 a 581, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno universal compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno.
596. Método, de acordo com a reivindicação 595, caracterizado pelo fato de que pelo menos um mRNA de neoantígeno codifica uma ou mais de uma sequência de neoantígenos universal.
597. Método, de acordo com a reivindicação 596, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígenos universal tem capacidade de ligação a pelo menos um alelo HLA expresso em pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40% ou pelo menos 45% de indivíduos em uma população de indivíduos que sofre do distúrbio neoplásico.
598. Método, de acordo com a reivindicação 596 ou reivindicação 597, caracterizado pelo fato de que a sequência de neoantígenos universal tem capacidade para elicitar uma resposta de células T contra um tumor presente em pelo menos 1%, pelo menos 5% ou pelo menos 10% de uma população de indivíduos que sofrem do distúrbio neoplásico.
599. Método, de acordo com a reivindicação 595, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno universal compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno e um carreador farmaceuticamente aceitável.
600. Método, de acordo com a reivindicação 599, caracterizado pelo fato de que pelo menos um mRNA de neoantígeno está ligado ao carreador farmaceuticamente aceitável.
601. Método, de acordo com a reivindicação 599 ou reivindicação 600, caracterizado pelo fato de que o carreador farmaceuticamente aceitável é selecionado dentre um peptídeo, uma albumina sérica, uma homocianina de lapa, uma imunoglobulina, uma tiroglobulina, uma ovalbumina, um toxoide ou um derivado de toxoide atenuado, uma citocina e uma quimiocina.
602. Método, de acordo com a reivindicação 595, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno universal compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno e um diluente farmaceuticamente aceitável.
603. Método, de acordo com a reivindicação 595, caracterizado pelo fato de que a vacina de neoantígeno universal compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno e um adjuvante farmaceuticamente aceitável.
604. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 595 a 603, caracterizado pelo fato de que o mRNA do neoantígeno é encapsulado por um agente de encapsulação.
605. Método, de acordo com a reivindicação 604, caracterizado pelo fato de que o agente de encapsulação é um lipossoma.
606. Método, de acordo com a reivindicação 604, caracterizado pelo fato de que o agente de encapsulação é uma nanopartícula.
607. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 546 a 606, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem uma carga mutacional não sinônima de cerca de 150 mutações ou menos.
608. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 546 a 607, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem uma carga mutacional não sinônima de cerca de 100 mutações ou menos.
609. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 546 a 608, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem uma carga mutacional não sinônima de cerca de 50 mutações ou menos.
610. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 546 a 609, caracterizado pelo fato de que o distúrbio neoplásico é uma malignidade hematológica ou um tumor sólido.
611. Método, de acordo com a reivindicação 610, caracterizado pelo fato de que a malignidade hematológica é selecionada dentre uma malignidade de célula B, uma leucemia, um linfoma e um mieloma.
612. Método, de acordo com a reivindicação 610 ou reivindicação 611, caracterizado pelo fato de que a malignidade hematológica é selecionada dentre leucemia mieloide aguda e mieloma múltiplo.
613. Método, de acordo com a reivindicação 610, caracterizado pelo fato de que o tumor sólido é selecionado dentre câncer de mama, câncer gástrico, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer de pulmão, câncer uterino, carcinoma do ducto salivar, melanoma, câncer de cólon, câncer cervical, câncer pancreático, câncer de rins, câncer colorretal e câncer de esôfago.
614. Vacina de neoantígeno que compreende pelo menos um peptídeo de neoantígeno, caracterizada pelo fato de que pelo menos um peptídeo de neoantígeno compreende uma sequência de neoantígenos induzida pelo contato de uma célula neoplásica com uma quantidade eficaz do conjugado anticorpo-fármaco, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 189, do composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 190 a 219, ou da composição, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 220 a 224.
615. Vacina de neoantígeno, de acordo com a reivindicação 614, caracterizada pelo fato de que o pelo menos um peptídeo de neoantígeno está na faixa de cerca de 10 a cerca de 35 aminoácidos de comprimento.
616. Vacina de neoantígeno, de acordo com a reivindicação 614 ou reivindicação 615, caracterizada pelo fato de que o pelo menos um peptídeo de neoantígeno está na faixa de cerca de 15 a cerca de 25 aminoácidos de comprimento.
617. Vacina de neoantígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 614 a 616, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente um carreador farmaceuticamente aceitável.
618. Vacina de neoantígeno, de acordo com a reivindicação 617, caracterizada pelo fato de que o pelo menos um peptídeo de neoantígeno está ligado ao carreador farmaceuticamente aceitável.
619. Vacina de neoantígeno, de acordo com a reivindicação 617 ou reivindicação 618, caracterizada pelo fato de que o carreador farmaceuticamente aceitável é selecionado dentre um peptídeo, uma albumina sérica, uma homocianina de lapa, uma imunoglobulina, uma tiroglobulina, uma ovalbumina, um toxoide ou um derivado de toxoide atenuado, uma citocina e uma quimiocina.
620. Vacina de neoantígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 617 a 619, caracterizada pelo fato de que o peptídeo de neoantígeno e o carreador farmaceuticamente aceitável são covalentemente ligados através de um ligante.
621. Vacina de neoantígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 617 a 619, caracterizada pelo fato de que o peptídeo de neoantígeno e o carreador farmaceuticamente aceitável são expressos como uma proteína de fusão.
622. Vacina de neoantígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 614 a 616, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente um diluente farmaceuticamente aceitável.
623. Vacina de neoantígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 614 a 616, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente um adjuvante farmaceuticamente aceitável.
624. Vacina de neoantígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 614 a 623, caracterizada pelo fato de que a célula neoplásica está presente em uma cultura celular in vitro.
625. Vacina de neoantígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 614 a 624, caracterizada pelo fato de que a célula neoplásica é obtida a partir de um indivíduo.
626. Vacina de neoantígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 614 a 623, caracterizada pelo fato de que a célula neoplásica está presente em um indivíduo.
627. Vacina de neoantígeno que compreende pelo menos um mRNA de neoantígeno, caracterizada pelo fato de que pelo menos um mRNA de neoantígeno codifica uma sequência de neoantígenos induzida pelo contato de uma célula neoplásica com uma quantidade eficaz do conjugado anticorpo- fármaco, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 189, do composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 190 a 219, ou da composição, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 220 a 224.
628. Vacina de neoantígeno, de acordo com a reivindicação 627, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente um carreador farmaceuticamente aceitável.
629. Vacina de neoantígeno, de acordo com a reivindicação 628, caracterizada pelo fato de que o pelo menos um mRNA de neoantígeno está ligado ao carreador farmaceuticamente aceitável.
630. Vacina de neoantígeno, de acordo com a reivindicação 628 ou reivindicação 629, caracterizada pelo fato de que o carreador farmaceuticamente aceitável é selecionado dentre um peptídeo, uma albumina sérica, uma homocianina de lapa, uma imunoglobulina, uma tiroglobulina, uma ovalbumina, um toxoide ou um derivado de toxoide atenuado, uma citocina e uma quimiocina.
631. Vacina de neoantígeno, de acordo com a reivindicação 627, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente um diluente farmaceuticamente aceitável.
632. Vacina de neoantígeno, de acordo com a reivindicação 627, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente um adjuvante farmaceuticamente aceitável.
633. Vacina de neoantígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 627 a 632, caracterizada pelo fato de que o mRNA do neoantígeno é encapsulado por um agente de encapsulação.
634. Vacina de neoantígeno, de acordo com a reivindicação
633, caracterizada pelo fato de que o agente de encapsulação é um lipossoma.
635. Vacina de neoantígeno, de acordo com a reivindicação 633, caracterizada pelo fato de que o agente de encapsulação é uma nanopartícula.
636. Vacina de neoantígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 627 a 635, caracterizada pelo fato de que a célula neoplásica está presente em uma cultura celular in vitro.
637. Vacina de neoantígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 627 a 636, caracterizada pelo fato de que a célula neoplásica é obtida a partir de um indivíduo.
638. Vacina de neoantígeno, de acordo com qualquer uma das reivindicações 627 a 635, caracterizada pelo fato de que a célula neoplásica está presente em um indivíduo.
639. Método de tratamento de um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 190 a 219, ou da composição, conforme definido na reivindicação 220.
640. Método de redução ou inibição de crescimento de um tumor em um indivíduo que tem ou se suspeita que tenha um distúrbio neoplásico caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 190 a 219, ou da composição, conforme definido na reivindicação 220.
641. Composto caracterizado pelo fato de que é escolhido dentre:
;
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; e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, em que L é um ligante que se liga covalentemente a um anticorpo.
642. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
643. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
644. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
645. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
646. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
647. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
648. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é
, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
649. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
650. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
651. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
652. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
653. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é
, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
654. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
655. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
656. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
657. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é
, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
658. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
659. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
660. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
661. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é
, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
662. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
663. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
664. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
665. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é
, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
666. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
667. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
668. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
669. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
670. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
671. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
672. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é
, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
673. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
674. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
675. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
676. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é
, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
677. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
678. Composto, de acordo com a reivindicação 641, sendo que o composto é caracterizado pelo fato de que é , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
679. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 641 a 678, caracterizado pelo fato de que o ligante é um ligante clivável.
680. Composto, de acordo com a reivindicação 679, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende uma porção química de peptídeo clivável.
681. Composto, de acordo com a reivindicação 680, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável é clivável por uma enzima.
682. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 679 a 681, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável ou ligante compreende uma unidade de aminoácido.
683. Composto, de acordo com a reivindicação 682, caracterizado pelo fato de que a unidade de aminoácido compreende valina- citrulina (Val-Cit).
684. Composto, de acordo com a reivindicação 682, caracterizado pelo fato de que a unidade de aminoácido compreende valina- alanina (Val-Ala).
685. Composto, de acordo com a reivindicação 682, caracterizado pelo fato de que a unidade de aminoácido compreende glutamina-valina-citrulina (Glu-Val-Cit).
686. Composto, de acordo com a reivindicação 682, caracterizado pelo fato de que a unidade de aminoácido compreende alanina- alanina-asparagina (Ala-Ala-Asn).
687. Composto, de acordo com a reivindicação 679, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende uma porção química de glicuronídeo clivável.
688. Composto, de acordo com a reivindicação 687, caracterizado pelo fato de que a porção química de glicuronídeo é clivável por uma enzima.
689. Composto, de acordo com a reivindicação 687 ou reivindicação 688, caracterizado pelo fato de que a porção química de glicuronídeo clivável é clivável por uma glicuronidase.
690. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 687 a 689, caracterizado pelo fato de que a porção química de glicuronídeo clivável é clivável por β-glicuronidase.
691. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 641 a 690, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende pelo menos uma unidade espaçadora.
692. Composto, de acordo com a reivindicação 691, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora ou ligante compreende uma porção química de polietilenoglicol (PEG).
693. Composto, de acordo com a reivindicação 692, caracterizado pelo fato de que a porção química de PEG compreende - (PEG)m- e m é um número inteiro de 1 a 10.
694. Composto, de acordo com a reivindicação 693, caracterizado pelo fato de que m é 2.
695. Composto, de acordo com a reivindicação 693, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora ou ligante compreende uma porção química de alquila.
696. Composto, de acordo com a reivindicação 695, caracterizado pelo fato de que a porção química de alquila compreende -(CH2)n- e n é um número inteiro de 1 a 10.
697. Composto, de acordo com a reivindicação 696, caracterizado pelo fato de que n é 2.
698. Composto, de acordo com a reivindicação 696, caracterizado pelo fato de que n é 5.
699. Composto, de acordo com a reivindicação 696, caracterizado pelo fato de que n é 6.
700. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 691 a 699, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora se liga ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno através de uma porção química de maleimida (Mal) ("unidade espaçadora Mal").
701. Composto, de acordo com a reivindicação 700, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal é reativa com um resíduo de cisteína no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno.
702. Composto, de acordo com a reivindicação 700 ou reivindicação 701, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal é unida ao anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno através de um resíduo de cisteína no anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno.
703. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 700 a 702, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende a unidade espaçadora Mal e uma porção química de peptídeo clivável.
704. Composto, de acordo com a reivindicação 703, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável compreende uma unidade de aminoácido.
705. Composto, de acordo com a reivindicação 703 ou reivindicação 704, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável ou unidade de aminoácido compreende Val-Cit.
706. Composto, de acordo com a reivindicação 703 ou reivindicação 704, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável ou unidade de aminoácido compreende Val-Ala.
707. Composto, de acordo com a reivindicação 703 ou reivindicação 704, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável ou unidade de aminoácido compreende Glu-Val-Cit.
708. Composto, de acordo com a reivindicação 703 ou reivindicação 704, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável ou unidade de aminoácido compreende Ala-Ala-Asn.
709. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 700 a 708, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal compreende uma porção química de alquila.
710. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 700 a 708, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal compreende uma porção química de PEG.
711. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 700 a 710, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal compreende uma maleimidocaproíla (MC).
712. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 700 a 711, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal liga o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno à porção química clivável no ligante.
713. Composto, de acordo com a reivindicação 712, caracterizado pelo fato de que a porção química clivável no ligante compreende uma porção química de peptídeo clivável.
714. Composto, de acordo com a reivindicação 713, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável compreende uma unidade de aminoácido.
715. Composto, de acordo com a reivindicação 713 ou reivindicação 714, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável ou unidade de aminoácido compreende Val-Cit, Val-Ala, Glu- Val-Cit ou Ala-Ala-Asn.
716. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 712 a 715, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende MC-Val-Cit.
717. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 712 a 715, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende MC-Val-Ala.
718. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 712 a 715, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende MC-Glu-Val-Cit.
719. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 712 a 715, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende MC-Ala-Ala-Asn.
720. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 712 a 719, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal compreende uma porção química de alquila.
721. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7125 a 719, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal compreende uma porção química de PEG.
722. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 712 a 721, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora Mal compreende uma maleimidocaproíla (MC).
723. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 691 a 722, caracterizado pelo fato de que a porção química clivável no ligante é diretamente unida ao modulador de splicing, ou em que uma unidade espaçadora liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing.
724. Composto, de acordo com a reivindicação 723, caracterizado pelo fato de que a clivagem do conjugado libera o modulador de splicing do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno e ligante.
725. Composto, de acordo com a reivindicação 723 ou reivindicação 724, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora que liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing é autoimolativa.
726. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 723 a 725, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora que liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing compreende uma p-aminobenziloxicarbonila (pABC).
727. Composto, de acordo com a reivindicação 726, caracterizado pelo fato de que a pABC liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing.
728. Composto, de acordo com a reivindicação 726 ou reivindicação 727, caracterizado pelo fato de que a porção química clivável no ligante compreende uma porção química de peptídeo clivável.
729. Composto, de acordo com a reivindicação 728, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável compreende uma unidade de aminoácido.
730. Composto, de acordo com a reivindicação 728 ou reivindicação 729, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável ou unidade de aminoácido compreende Val-Cit, Val-Ala, Glu- Val-Cit ou Ala-Ala-Asn.
731. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 726 a 730, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende Val-Cit-pABC.
732. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 726 a 730, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende Val-Ala-pABC.
733. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 726 a 730, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende Glu-Val-Cit-pABC.
734. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 726 a 730, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende Ala-Ala-Asn-pABC.
735. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 723 a 725, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora que liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing compreende uma p-aminobenzila (pAB).
736. Composto, de acordo com a reivindicação 735, caracterizado pelo fato de que a pAB liga a porção química clivável no ligante ao modulador de splicing.
737. Composto, de acordo com a reivindicação 735 ou reivindicação 736, caracterizado pelo fato de que a porção química clivável no ligante compreende uma porção química de peptídeo clivável.
738. Composto, de acordo com a reivindicação 737, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável compreende uma unidade de aminoácido.
739. Composto, de acordo com a reivindicação 737 ou reivindicação 738, caracterizado pelo fato de que a porção química de peptídeo clivável ou unidade de aminoácido compreende Val-Cit, Val-Ala, Glu-
Val-Cit ou Ala-Ala-Asn.
740. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 735 a 739, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende Val-Cit-pAB.
741. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 735 a 739, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende Val-Ala-pAB.
742. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 735 a 739, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende Glu-Val-Cit-pAB.
743. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 735 a 739, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende Ala-Ala-Asn-pAB.
744. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 641 a 678, caracterizado pelo fato de que o ligante é um ligante não clivável.
745. Composto, de acordo com a reivindicação 744, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende pelo menos uma unidade espaçadora.
746. Composto, de acordo com a reivindicação 744 ou reivindicação 745, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora ou ligante compreende uma porção química de polietilenoglicol (PEG).
747. Composto, de acordo com a reivindicação 746, caracterizado pelo fato de que a porção química de PEG compreende - (PEG)m- e m é um número inteiro de 1 a 10.
748. Composto, de acordo com a reivindicação 747, caracterizado pelo fato de que m é 2.
749. Composto, de acordo com a reivindicação 744 ou reivindicação 745, caracterizado pelo fato de que a unidade espaçadora ou ligante compreende uma porção química de alquila.
750. Composto, de acordo com a reivindicação 749, caracterizado pelo fato de que a porção química de alquila compreende -(CH2)n- e n é um número inteiro de 1 a 10.
751. Método de produção de um conjugados anticorpo-fármaco caracterizado pelo fato de que compreende reagir um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno com o composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 641 a 750, sob condições quer permitem a conjugação.
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