BR112021010893A2 - Conjugados de fumarato de monometila-carreador e métodos para seu uso - Google Patents

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Kathleen NUDEL
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Cheri Ross
Steven John Taylor
Koji Yasuda
David Arthur Berry
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Abstract

conjugados de fumarato de monometila-carreador e métodos para seu uso. a presente invenção refere-se a conjugados de fumarato de monometila e um grupo carreador ou grupo aminocarreador, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. nos conjugados, o acil do fumarato de monometila é ligado covalentemente ao grupo carreador ou grupo aminocarreador através de uma ligação carbono-oxigênio que é clivável in vivo. o grupo carreador pode incluir um núcleo, por exemplo, um monossacarídeo, um ácido de açúcar (por exemplo, monossacarídeo de ácido), um álcool de açúcar, ou um polifenol catequina. o grupo aminocarreador pode incluir um núcleo, por exemplo, um aminomonossacarídeo. o grupo carreador ou grupo aminocarreador pode incluir, por exemplo, pelo menos uma acila de ácido graxo de cadeia curta, pelo menos um análogo de triptofano, pelo menos um corpo cetônico ou pelo menos um corpo de pré-cetônico. são divulgadas também composições farmacêuticas contendo os conjugados e métodos de uso das mesmas.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “CONJUGADOS DE FUMARATO DE MONOMETILA-CARREADOR E MÉTODOS PARA SEU USO”.
CAMPO DA INVENÇÃO
[001] A presente invenção refere-se a conjugados de fumarato de monometila e um carreador ou grupo aminocarreador. A presente invenção também apresenta composições contendo os conjugados e métodos de uso dos conjugados.
ANTECEDENTES
[002] A microbiota de mamíferos pode se envolver em uma comunicação bidirecional com o sistema hospedeiro de mamíferos. Embora as abordagens terapêuticas aproveitando-se da microbiota de mamíferos tenham até agora se concentrado em probióticos (por exemplo, micro-organismos vivos) como agentes ativos, combinações de moléculas pequenas aproveitando a comunicação bidirecional permanecem amplamente subutilizadas.
[003] Há uma necessidade de aplicações farmacêuticas aproveitando as vantagens de conjugados baseados em moléculas pequenas.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[004] A Figura 1 é uma série de espectros de massa que apresentam a biotransformação e detecção de fumarato de monometila in vitro. A liberação de ácido fumárico de monometila foi monitorada em pontos de tempo de 0 h e 2 h e foi comparada com soluções puras de ácido fumárico de monometila. A presença de ácido fumárico de monometila é observada no ponto de tempo de 2 horas.
[005] A FIG. 2A é um gráfico que descreve os resultados de um curso de tratamento de propionato ou butirato em um modelo de encefalomielite autoimune (EAE) de esclerose múltipla em camundongos. Os dados são mostrados em uma escala de pontuação de 5 pontos e cada grupo de tratamento continha 10-12 camundongos. Os camundongos tratados com 200 mM de propionato (seta para baixo) e 200 mM de butirato (diamante) receberam pontuações mais baixas de EAE quando comparados aos camundongos de controle (apenas veículo).
[006] A FIG. 2B é um gráfico que representa a razão de célula TH17 esplênica (CD3+, IL7+)/células T reguladoras (CD3+,FoxP3+) com base na análise de FACS no final do estudo de esclerose múltipla de modelo EAE (n=8 camundongos por grupo). Os dados são apresentados como média ± SEM; ***p < 0,05, foram considerados estatisticamente significativos.
[007] A FIG. 2C é um gráfico que representa os resultados de um curso de tratamento usando fumarato de dimetila, composto 1, composto 6, composto 15 ou composto 20 em um modelo de encefalomielite autoimune (EAE) de esclerose múltipla em camundongos. Os dados são mostrados em uma escala de pontuação de 5 pontos. Os camundongos tratados com o composto 1, 6, 15 ou 20 receberam pontuações mais baixas de EAE quando comparados aos camundongos de controle (apenas veículo).
[008] A FIG. 2D é um gráfico que representa os resultados de um curso de tratamento usando fumarato de dimetila, composto 3 ou composto 24 em um modelo de encefalomielite autoimune (EAE) de esclerose múltipla em camundongos. Os dados são mostrados em uma escala de pontuação de 5 pontos. Os camundongos tratados com o composto 3 ou 24 receberam pontuações mais baixas de EAE quando comparados aos camundongos de controle (apenas veículo). Os camundongos tratados com o composto 3 receberam pontuações de EAE mais baixas ou semelhantes quando comparados aos camundongos tratados com fumarato de dimetila.
[009] A FIG. 3A é um gráfico que representa a concentração média de fumarato de monometila (ng/mL) medida em amostras de sangue de ratos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h ou 8h após a administração de fumarato de dimetila, composto 1, composto 6, composto 10 ou composto 15.
[0010] A FIG. 3B é um gráfico representando a concentração média de fumarato de monometila (ng/mL) medida em amostras de sangue de ratos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h e 8h após a administração de fumarato de dimetila, composto 3, composto 11, composto 20, composto 27 ou composto 28.
[0011] A FIG. 3C é um gráfico que representa a concentração média de fumarato de monometila (ng/mL) medida em amostras de sangue de ratos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h e 8h após a administração de fumarato de dimetila, composto 7, composto 24, composto 25 ou composto 26.
[0012] A FIG. 3D é um gráfico que representa a concentração média de fumarato de monometila (ng/mL) medida em amostras de sangue de ratos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h e 8h após a administração de fumarato de dimetila, composto 22, composto 23, composto 29 ou fumarato de diroximel.
[0013] A FIG. 3E é um gráfico que representa a concentração média de propionato deuterado (d3) (μM) medida em amostras de sangue de ratos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h e 8h após a administração de propionato de sódio-d3, composto 1-d9, composto 6- d9 ou composto 20-d9.
[0014] A FIG. 3F é um gráfico que representa a concentração média de butirato deuterado (d5) (μM) medida em amostras de sangue de ratos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h e 8h após a administração de butirato de sódio-d5 ou composto 15-d15.
[0015] A FIG. 3G é um gráfico que representa a concentração média de propionato deuterado (d3) (μM) medida em amostras de sangue de ratos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h e 8h após a administração de propionato de sódio-d3 ou composto 3-d12.
[0016] A FIG. 3H é um gráfico que representa a concentração média de butirato deuterado (d5) (μM) medida em amostras de sangue de ratos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h e 8h após a administração de butirato de sódio-d5 ou composto 24-d15.
[0017] A FIG. 4A é um gráfico representando a concentração de propionato deuterado (d3) (nmol/g) medida no tecido do estômago de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração de propionato de sódio-d3, composto 3-d12 ou composto 6-d9.
[0018] A FIG. 4B é um gráfico representando a concentração de propionato deuterado (d3) (nmol/g) medida no tecido proximal do intestino delgado de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração de propionato de sódio-d3, composto 3-d12 ou composto 6-d9.
[0019] A FIG. 4C é um gráfico representando a concentração de propionato deuterado (d3) (nmol/g) medida no tecido distal do intestino delgado de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração de propionato de sódio-d3, composto 3-d12 ou composto 6-d9.
[0020] A FIG. 4D é um gráfico representando a concentração de propionato deuterado (d3) (nmol/g) medida no tecido do ceco distal de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração de propionato de sódio-d3, composto 3-d12 ou composto 6-d9.
[0021] A FIG. 4E é um gráfico representando a concentração de propionato deuterado (d3) (nmol/g) medida no tecido do cólon proximal de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração de propionato de sódio-d3, composto 3-d12 ou composto 6-d9.
[0022] A FIG. 4F é um gráfico representando a concentração de propionato deuterado (d3) (nmol/g) medida no tecido do cólon distal de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração de propionato de sódio-d3, composto 3-d12 ou composto 6-d9.
[0023] A FIG. 4G é um gráfico representando a concentração de propionato deuterado (d3) (nmol/g) medida no plasma sanguíneo de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração de propionato de sódio-d3, composto 3-d12 ou composto 6-d9.
[0024] A FIG. 4H é um gráfico representando a concentração de propionato deuterado (d3) (nmol/g) medida no tecido cerebral de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração de propionato de sódio-d3, composto 3-d12 ou composto 6-d9.
[0025] A FIG. 5A é um gráfico representando a concentração de propionato deuterado (d3) (nmol/g) medida nos tecidos do estômago, intestino delgado proximal, intestino delgado distal, ceco, cólon proximal e cólon distal de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração de propionato de sódio-d3.
[0026] A FIG. 5B é um gráfico representando a concentração de propionato deuterado (d3) (nmol/g) medida nos tecidos do estômago, intestino delgado proximal, intestino delgado distal, ceco, cólon proximal e cólon distal de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração do composto 3-d12.
[0027] A FIG. 5C é um gráfico que representa a concentração de propionato deuterado (d3) (nmol/g) medida nos tecidos do estômago, intestino delgado proximal, intestino delgado distal, ceco, cólon proximal e cólon distal de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração do composto 6-d9.
[0028] A FIG. 6A é um gráfico representando a concentração de propionato deuterado (d3) (nmol/g) e concentração de fumarato de monometila (nmol/g) medida no tecido do estômago de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração do composto 3-d12.
[0029] A FIG. 6B é um gráfico representando a concentração de propionato deuterado (d3) (nmol/g) e concentração de fumarato de monometila (nmol/g) medida no tecido do intestino delgado proximal de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração do composto 3-d12.
[0030] A FIG. 6C é um gráfico representando a concentração de propionato deuterado (d3) (nmol/g) e concentração de fumarato de monometila (nmol/g) medida no tecido do intestino delgado distal de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração do composto 3-d12.
[0031] A FIG. 6D é um gráfico representando a concentração de propionato deuterado (d3) (nmol/g) e concentração de fumarato de monometila (nmol/g) medida no tecido do ceco distal de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração do composto 3-d12.
[0032] A FIG. 6E é um gráfico representando a concentração de propionato deuterado (d3) (nmol/g) e concentração de fumarato de monometila (nmol/g) medida no tecido do cólon proximal de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração do composto 3-d12.
[0033] A FIG. 6F é um gráfico representando a concentração de propionato deuterado (d3) (nmol/g) e concentração de fumarato de monometila (nmol/g) medida no tecido do cólon distal de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração do composto 3-d12.
[0034] A FIG. 7A é um gráfico representando a concentração de fumarato de monometila (nmol/g) medida no tecido do estômago de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração do composto 3-d12, composto 6-d9, fumarato de dimetila ou fumarato de diroximel.
[0035] A FIG. 7B é um gráfico representando a concentração de fumarato de monometila (nmol/g) medida no tecido do intestino delgado proximal de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração do composto 3-d12, composto 6-d9, fumarato de dimetila ou fumarato de diroximel.
[0036] A FIG. 7C é um gráfico representando a concentração de fumarato de monometila (nmol/g) medida no tecido do intestino delgado distal de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração do composto 3-d12, composto 6-d9, fumarato de dimetila ou fumarato de diroximel.
[0037] A FIG. 7D é um gráfico representando a concentração de fumarato de monometila (nmol/g) medida no tecido do ceco distal de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração do composto 3-d12, composto 6-d9, fumarato de dimetila ou fumarato de diroximel.
[0038] A FIG. 7E é um gráfico representando a concentração de fumarato de monometila (nmol/g) medida no tecido do cólon proximal de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e 12h após a administração do composto 3-d12, composto 6-d9, fumarato de dimetila ou fumarato de diroximel.
[0039] A FIG. 7F é um gráfico representando a concentração de fumarato de monometila (nmol/g) medida no tecido do cólon distal de camundongos coletados em 15 minutos, 30 minutos, 1h, 2h, 4h, 8h e
12h após a administração do composto 3-d12, composto 6-d9, fumarato de dimetila ou fumarato de diroximel.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0040] A invenção fornece conjugados, composições e métodos que podem ser usados no tratamento de esclerose múltipla. Um conjugado contém fumarato de monometila ligado covalentemente a um grupo carreador através de uma ligação carbono-oxigênio que é clivável in vivo. O grupo carreador inclui um núcleo com uma ou mais hidroxilas independentemente substituídas por pelo menos uma acila (por exemplo, pelo menos um acila de ácido graxo de cadeia curta, pelo menos um análogo de triptofano, pelo menos um corpo cetônico ou pelo menos um corpo pré-cetônico).
[0041] A administração de conjugados que são estáveis sob um intervalo de níveis de pH fisiológico e clivados seletivamente em um sítio desejado de absorção/ação (por exemplo, no trato GI (por exemplo, no estômago, intestino delgado ou intestino grosso)) pode aumentar a biodisponibilidade e produzir efeitos benéficos em participantes com uma doença, distúrbio ou condição descritos neste documento.
[0042] Os componentes dos conjugados descritos neste documento (por exemplo, um grupo carreador acilado (por exemplo, acila de ácido graxo de cadeia curta) e fumarato de monometila) podem agir sinergicamente para modular um marcador de autoimunidade, por exemplo, após hidrólise no trato GI do indivíduo que recebe o conjugado.
[0043] De modo vantajoso, os conjugados divulgados neste documento podem ter propriedades organolépticas superiores (por exemplo, palatabilidade). Isto fornece uma vantagem importante, uma vez que os componentes individuais (por exemplo, fumarato de monometila ou acila de ácido graxo de cadeia curta) podem apresentar propriedades organolépticas menos desejáveis (por exemplo,
palatabilidade). As propriedades organolépticas aprimoradas facilitam a administração oral e são particularmente vantajosas para a distribuição de dosagens de unidade alta.
[0044] De modo vantajoso, os conjugados divulgados neste documento (por exemplo, um grupo carreador acilado (por exemplo, acila de ácido graxo de cadeia curta) e fumarato de monometila), além de distribuir uma porção terapeuticamente ativa (por exemplo, fumarato de monometila), podem distribuir uma segunda porção terapeuticamente ativa (por exemplo, ácido graxo de cadeia curta) ao cérebro para conferir biodisponibilidade superior da porção ativa para o tratamento, por exemplo, da esclerose múltipla (por exemplo, esclerose múltipla progressiva primária ou secundária). Conjugados
[0045] Em algumas modalidades, os compostos da invenção são conjugados de fumarato de monometila (MMF) e um grupo carreador, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, em que o fumarato de monometila é ligado covalentemente ao grupo carreador através de uma ligação carbono-oxigênio que é clivável in vivo.
[0046] Em algumas modalidades, um grupo carreador inclui um núcleo e um ou mais substituintes ligados covalentemente ao núcleo, em que cada substituinte é independentemente uma acila. Núcleo: Monossacarídeos, Aminomossacarídeos, Ácidos de Açúcar e Álcoois de Açúcar
[0047] Em algumas modalidades, um núcleo é selecionado do grupo consistindo em: monossacarídeo, aminomossacarídeo, monossacarídeo ácido, polifenol catequina, álcool de açúcar e ácido de açúcar.
[0048] Em algumas modalidades, um núcleo é monossacarídeo. Em algumas modalidades, um núcleo de monossacarídeo é um núcleo de C5-6 piranose. Em algumas modalidades, um núcleo de monossacarídeo é um núcleo de C4-5 furanose. Em algumas modalidades, uma C5-6 piranose é o alfa-anômero da C5-6 piranose. Em algumas modalidades, uma C5-6 piranose é o beta-anômero da C5-6 piranose. Em algumas modalidades, um núcleo de monossacarídeo é selecionado do grupo consistindo em: arabinose, fucose, galactose, glicose, manose, ramnose, ribose, tagatose e xilose. Em algumas modalidades, um núcleo de monossacarídeo é selecionado dentre glicose ou ribose. Em algumas modalidades, um monossacarídeo é glicose.
[0049] Em algumas modalidades, um núcleo é aminomonossacarídeo. Em algumas modalidades, um núcleo de aminomonossacarídeo é um núcleo de C5-6 aminopiranose. Em algumas modalidades, uma C5-6 aminopiranose é o alfa-anômero da C5-6 aminopiranose. Em algumas modalidades, uma C5-6 aminopiranose é o beta-anômero da C5-6 aminopiranose. Em algumas modalidades, um núcleo de aminomossacarídeo é glicosamina.
[0050] Em algumas modalidades, um núcleo é um monossacarídeo ácido. Em algumas modalidades, um núcleo de monossacarídeo ácido é um núcleo de C5-6 piranose ácida. Em algumas modalidades, uma C5- 6 piranose ácida é o alfa-anômero da C5-6 piranose ácida. Em algumas modalidades, uma C5-6 piranose ácida é o beta-anômero da C5-6 piranose ácida. Em algumas modalidades, um núcleo de monossacarídeo ácido é ácido glicurônico.
[0051] Quando um núcleo é C5-6 piranose (por exemplo, monossacarídeo de C5-6 piranose de monossacarídeo, C5-6 aminossacarídeo, C5-6 monossacarídeo ácido), em algumas modalidades, a ligação carbono-oxigênio clivável in vivo entre fumarato de monometila e C5-6 piranose inclui um átomo de oxigênio ligado ao carbono anomérico (isto é, o carbono 1) de C5-6 piranose. Em algumas modalidades, a ligação carbono-oxigênio clivável in vivo entre fumarato de monometila e C5-6 piranose inclui um átomo de oxigênio ligado ao carbono 2 de C5-6 piranose. Em algumas modalidades, a ligação carbono-oxigênio in vivo entre fumarato de monometila e C5-6 piranose inclui um átomo de oxigênio ligado ao carbono 3 de C5-6 piranose. Em algumas modalidades, a ligação carbono-oxigênio clivável in vivo entre fumarato de monometila e C5-6 piranose inclui um átomo de oxigênio ligado ao carbono 4 de C5-6 piranose. Em algumas modalidades, a ligação carbono-oxigênio clivável in vivo entre fumarato de monometila e C5-6 piranose inclui um átomo de oxigênio ligado ao carbono 5 de C5-6 piranose. Em algumas modalidades, a ligação carbono-oxigênio clivável in vivo entre fumarato de monometila e C6 piranose inclui um átomo de oxigênio ligado ao carbono 6 de C6 piranose.
[0052] Em algumas modalidades, um núcleo é um álcool de açúcar da seguinte estrutura: HOCH2(CHOH)nCH2OH, em que n é 1, 2, 3 ou 4, e um ou mais dos grupos hidroxila é independentemente substituído por uma alquila, acila ou uma ligação a fumarato de monometila.
[0053] Em algumas modalidades, n é 1. Núcleo: Polifenóis catequina
[0054] Em algumas modalidades, um núcleo ou um conjugado é um polifenol catequina da seguinte estrutura: , em que é uma ligação carbono-carbono simples ou ligação carbono- carbono dupla; Q é –CH2– ou –C(O)–; cada R1 e cada R3 é independentemente H, halogênio ou –ORA;
R2 é H ou –ORA; cada RA é independentemente H, alquila, acila de ácido graxo de cadeia curta, acila de fumarato de monometila, uma ligação ao acila de fumarato de monometila, ou benzoil opcionalmente substituído por 1, 2, 3, ou 4 substitutos independentemente selecionados do grupo consistindo em H, hidróxi, halogênio, alquila opcionalmente substituído, alcóxi, acila de ácido graxo de cadeia curta, acil de fumarato de monometila ou uma ligação ao acila de fumarato de monometila; e cada um dentre n e m é independentemente 1, 2, 3, ou 4.
[0055] Em algumas modalidades, cada R1 e cada R3 é independentemente H ou –ORA. Em algumas modalidades, cada RA é independentemente H ou acila de fumarato de monometila. Em algumas modalidades, n é 1. Em algumas modalidades, n é 2. Em algumas modalidades, m é 1 ou 2. Em algumas modalidades, m é 1. Em algumas modalidades, m é 2. Acilas
[0056] Em algumas modalidades, um núcleo é peracilado, isto é, todas as hidroxilas disponíveis no núcleo são substituídas por acilas. Em algumas modalidades, um núcleo não é peracilado. Em algumas modalidades, o grupo carreador é um açúcar acilado. Em algumas modalidades, o grupo carreador é um açúcar alquilado. Acilas: Monossacarídeos, Aminomossacarídeos, Ácidos de Açúcar e Álcoois de Açúcar
[0057] Quando o núcleo de um grupo carreador é um monossacarídeo, em algumas modalidades, cada grupo hidroxila do monossacarídeo pode ser independentemente substituído conforme descrito neste documento.
[0058] Quando o núcleo de um grupo carreador é um aminomonossacarídeo, em algumas modalidades, cada grupo hidroxila e amina do aminomonossacarídeo pode ser independentemente substituído. Em algumas modalidades, quando o núcleo de um grupo carreador é um aminomonossacarídeo, cada grupo hidroxila do aminomonossacarídeo pode ser independentemente substituído conforme descrito neste documento.
[0059] Quando o núcleo de um grupo carreador é um monossacarídeo ácido, em algumas modalidades, cada grupo hidroxila e ácido do monossacarídeo ácido pode ser independentemente substituído. Em algumas modalidades, quando o núcleo de um grupo carreador é um monossacarídeo ácido, cada grupo hidroxila do monossacarídeo ácido pode ser independentemente substituído conforme descrito neste documento.
[0060] Quando um núcleo é um açúcar acilado (por exemplo, monossacarídeo acilado, monossacarídeo ácido ou álcool de açúcar), em algumas modalidades, o açúcar acilado inclui um ou mais hidroxilas independentemente substituídas por um grupo acila de ácido graxo. Em algumas modalidades, um açúcar acilado inclui uma ou mais hidroxilas independentemente substituídas por acila de ácido graxo. Em algumas modalidades, um açúcar acilado inclui uma ou mais hidroxilas independentemente substituídas por acila de ácido graxo de cadeia curta. Em algumas modalidades, um açúcar acilado inclui uma ou mais hidroxilas independentemente substituídas por propionila. Em algumas modalidades, um açúcar acilado inclui uma ou mais hidroxilas independentemente substituídas por butirila. Em algumas modalidades, um açúcar acilado inclui uma ou mais hidroxilas independentemente substituídas por ácido graxo de cadeia média. Acilas: Polifenóis Catequina
[0061] Quando o núcleo de um grupo carreador é um polifenol catequina, em algumas modalidades, cada grupo hidroxila de catequina do polifenol catequina pode ser independentemente substituído. Em algumas modalidades, quando o núcleo de um grupo é um polifenol catequina, cada grupo hidroxila pode ser independentemente substituído por acila fumarato de monometila ou acila de ácido graxo. Em algumas modalidades, quando o núcleo de um grupo é um polifenol catequina, cada grupo hidroxila pode ser independentemente substituído por acila fumarato de monometila. Conjugados
[0062] Os conjugados descritos neste documento, ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes, contêm fumarato de monometila ligado através de uma ligação carbono-oxigênio a um grupo carreador. A ligação carbono-oxigênio pode ser clivável in vivo. A ligação carbono- oxigênio pode ser uma ligação de éster ou uma ligação glicosídica.
[0063] O conjugado pode ser, por exemplo, um composto da fórmula (A): , (A) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde n é 0 ou 1; o grupo B é um monossacarídeo, aminomossacarídeo, ácido de açúcar (por exemplo, monossacarídeo de ácido), álcool de açúcar, polifenol catequina, ácido elágico, análogo de ácido elágico, estilbenoide, curcuminoide, chalconoide, piridoxina, ácido biliar, corpo cetônico ou corpo pré-cetônico; cada R’ é independentemente uma alquila ou acila (por exemplo, acila de ácido graxo de cadeia curta, acila de análogo de triptofano, acila de corpo cetônico ou acila de corpo pré-cetônico); e m é um número inteiro de 0 ao número total de grupos hidroxila disponíveis no grupo B (por exemplo, 0, 1, 2, 3, 4 ou 5); desde que o grupo B seja ligado a acila de fumarato de monometila através de uma ligação carbono-oxigênio.
[0064] Um versado na técnica reconhecerá que a ligação entre fumarato de monometila e o grupo B não inclui peróxido.
[0065] Um conjugado de fumarato de monometila e um açúcar acilado pode ser um composto de fórmula (A), no qual o grupo B é um monossacarídeo, ácido de açúcar (por exemplo, monossacarídeo ácido) ou álcool de açúcar, e pelo menos um R’ é acila. Um conjugado de fumarato de monometila e um açúcar acilado pode ser um composto de fórmula (A), em que o grupo B é um aminomonossacarídeo, e pelo menos um R’ é um alquila.
[0066] Em algumas modalidades, o grupo B é um monossacarídeo, ácido de açúcar, álcool de açúcar, polifenol catequina, ácido elágico, análogo de ácido elágico, estilbenoide, curcuminoide, chalconoide, piridoxina, ácido biliar, corpo cetônico ou corpo pré-cetônico. Em algumas modalidades, o grupo B é um monossacarídeo, aminomossacarídeo, ácido de açúcar (por exemplo, monossacarídeo ácido) ou álcool de açúcar. Em algumas modalidades, cada R’ é alquila, acila de ácido graxo de cadeia curta, acila de análogo de triptofano, acila de corpo cetônico ou acila de corpo pré-cetônico. Em algumas modalidades, quando B é um monossacarídeo, aminomossacarídeo, ácido de açúcar (por exemplo, monossacarídeo ácido) ou álcool de açúcar, cada R’ é independentemente um acila de ácido graxo de cadeia curta. Em algumas modalidades, quando B é um polifenol catequina, cada R’ é independentemente um acila de fumarato de monometila ou uma acila de ácido graxo de cadeia curta. Em algumas modalidades, quando B é um polifenol catequina, cada R’ é independentemente um acila de fumarato de monometila.
[0067] Em certas modalidades, o grupo de fórmula (A) inclui pelo menos um acila de ácido graxo.
[0068] Em algumas modalidades, as acilas de ácido graxo são individualmente acilas de ácido graxo de cadeia curta (por exemplo, acetila, propionila, butirila ou valerila).
[0069] Exemplos não limitativos de um grupo carreador incluem: , e , (i) (ii) (iii) onde n é 1, 2, 3 ou 4 (por exemplo, n é 1); R é H, -CH3, –CH2ORFA, ou -COORC; cada RFA é independentemente H, uma acila de ácido graxo (por exemplo, uma acila de ácido graxo de cadeia curta ou acila de ácido graxo de cadeia média), uma acila de corpo cetônico (por exemplo, acil de β-hidroxibutirato), uma acila de corpo pré-cetônico, ou uma acila de análogo de triptofano (por exemplo, indol-3-acetila, indol-3-aciloila, ou indol-3-piruvila); cada um dentre R1A e R1B é independentemente H, ORA, ou uma ligação à porção de fumarato de monometila; cada R2 é independentemente H, ORA, NHRA, ou uma ligação à porção de fumarato de monometila; cada um dentre R3A e R3B é independentemente H, ORA, CH2RB, ou -COORC; cada RA é independentemente H, alquila, uma acila de ácido graxo, uma acila de corpo cetônico, uma acila de corpo pré-cetônico, ou uma acila de análogo de triptofano; e cada RB é independentemente H, ORA, ou uma ligação à porção de fumarato de monometila; e cada RC é independentemente H ou alquila; e desde que o grupo carreador de fórmula (iii) inclua uma ligação à porção de fumarato de monometila e ORA.
[0070] Em certas modalidades, o grupo carreador é um grupo de fórmula (i). Em modalidades particulares, o grupo carreador é um grupo de fórmula (ii). Em outras modalidades, o grupo carreador é um grupo de fórmula (iii).
[0071] Em algumas modalidades, pelo menos um RFA é uma acila de ácido graxo, uma acila de corpo cetônico, uma acila de corpo pré- cetônico, ou uma acila de análogo de triptofano. Em algumas modalidades de um grupo contendo um acila de ácido graxo, pelo menos um RFA é um acila de ácido graxo. Em algumas modalidades de um grupo contendo um corpo cetônico ou um corpo pré-cetônico, pelo menos um RFA é uma acila de corpo cetônico, uma acila de corpo pré- cetônico. Em algumas modalidades de um grupo contendo um acil de metabólito de aminoácido, pelo menos um RFA é uma acila de análogo de triptofano. Em algumas modalidades, um dentre R3A e R3B é H.
[0072] O grupo carreador pode ser, por exemplo, um monossacarídeo com uma ou mais hidroxilas independentemente substituídas por uma alquila, acila de ácido graxo de cadeia curta, acila de fumarato de monometila, acila de análogo de triptofano, acila de corpo cetônico, ou acila de corpo pré-cetônico; desde que pelo menos uma hidroxila seja substituída por uma acila de ácido graxo de cadeia curta, acila de análogo de triptofano, acila de corpo cetônico ou acila de corpo pré-cetônico. O monossacarídeo pode ser, por exemplo, arabinose, xilose, frutose, galactose, glicose, ribose, tagatose, fucose ou ramnose.
[0073] O grupo carreador pode ser, por exemplo, um ácido de açúcar com uma ou mais hidroxilas independentemente substituídas por uma alquila, acila de ácido graxo de cadeia curta, acila de fumarato de monometila, acila de análogo de triptofano, acila de corpo cetônico, corpo cetônico opcionalmente acilado, acila de corpo pré-cetônico, ou corpo pré-cetônico opcionalmente acilado; desde que pelo menos uma hidroxila seja substituída por um acila de ácido graxo de cadeia curta, acila de análogo de triptofano, acila de corpo cetônico, corpo cetônico opcionalmente acilado, acila de corpo pré-cetônico, ou corpo pré- cetônico opcionalmente acilado. Quando a hidroxila substituída inclui um átomo de oxigênio de álcool, a hidroxila é substituída por uma alquila, acila de ácido graxo de cadeia curta, acila de fumarato de monometila, acila de análogo de triptofano, acila de corpo cetônico, ou acila de corpo pré-cetônico; desde que pelo menos uma hidroxila seja substituída por um acila de ácido graxo de cadeia curta, acila de análogo de triptofano, acila de corpo cetônico, ou acila de corpo pré-cetônico. Quando a hidroxila substituída inclui um átomo de oxigênio carboxilato, a hidroxila é substituída por uma alquila, corpo cetônico opcionalmente acilado, ou corpo pré-cetônico opcionalmente acilado. O ácido de açúcar pode ser, por exemplo, ácido aldônico, ácido ulosônico, ácido urônico ou ácido aldarico. O ácido de açúcar pode ser, por exemplo, ácido xilônico, ácido glicônico, ácido glicurônico, ácido galacturônico, ácido tartárico, ácido sacárico ou ácido mucico.
[0074] O grupo carreador pode ser, por exemplo, um álcool de açúcar com uma ou mais hidroxilas independentemente substituídas por uma alquila, acila de ácido graxo de cadeia curta, acila de fumarato de monometila, acila de análogo de triptofano, acila de corpo cetônico, ou acila de corpo pré-cetônico; contanto que pelo menos uma hidroxila seja substituída por um acila de ácido graxo de cadeia curta, acila de análogo de triptofano, acila de corpo cetônico ou acila de corpo pré-cetônico. O álcool de açúcar pode ser, por exemplo, glicerol, eritritol, treitol, arabitol, xilitol, tibitol, manitol, sorbitol, galactitol, fucitol, iditol ou inositol.
[0075] O conjugado pode ser, por exemplo, um composto de fórmula (B):
, (B) onde cada um dentre R1A e R1B é independentemente H, ORA, ou uma ligação à porção de fumarato de monometila; cada R2 é independentemente H, ORA, NHRA, ou uma ligação à porção de fumarato de monometila; cada um dentre R3A e R3B é independentemente H, ORA, CH2RB, ou -COORC; cada RA é independentemente H, alquila, uma acila de ácido graxo, uma acila de corpo cetônico, uma acila de corpo pré-cetônico, ou uma acila de análogo de triptofano; cada RB é independentemente H, ORA, ou uma ligação à porção de fumarato de monometila; e cada RC é independentemente H ou alquila; e desde que o composto de fórmula (B) inclua uma ligação à porção de fumarato de monometila e ORA.
[0076] Em algumas modalidades, os compostos da invenção são selecionados do grupo que consistindo em: ((2S,3S,4R,5R,6S)-6-metil- 3,4,5-tris(propionilóxi)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila,((2S,3R,4R,5S,6S)-6-metil-3,4,5-tris(propionilóxi)tetra-hidro-2H- piran-2-ila) fumarato de metila, ((2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5- tris(propionilóxi)-6-((propionilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila, ((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(propionilóxi)-6- ((propionilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila, ((2S,3R,4S,5S)-3,4,5-tris(propionilóxi)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila, ((2S,3R,4R,5R)-3,4,5-tris(propionilóxi)tetra-hidro- 2H-piran-2-ila) fumarato de metila, ((2S,3R,4S,5R)-3,4,5-
tris(butirilóxi)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila, ((2R,3R,4S,5R)-3,4,5-tris(butirilóxi)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila, ((2R,3R,4R,5R)-3,4,5-tris(propionilóxi)tetra-hidro-2H-piran-2- ila) fumarato de metila, ((2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(butirilóxi)-6- ((butirilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila, ((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(butirilóxi)-6-((butirilóxi)metila)tetra-hidro- 2H-piran-2-ila) fumarato de metila, ((2R,3R,4S,5S)-3,4,5- tris(butirilóxi)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila, ((2S,3S,4R,5R,6S)-3,4,5-tris(butirilóxi)-6-metiltetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila, ((2R,3R,4R,5S,6S)-3,4,5-tris(butirilóxi)-6-metiltetra- hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila, ((2S,3R,4R,5S,6S)-3,4,5- tris(butirilóxi)-6-metiltetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila, ((2R,3R,4S,5R)-3,4,5-tris(propionilóxi)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila, (R)-2,3-bis(propionilóxi)propil metil fumarato, (S)- 2,3-bis(propionilóxi)propil metil fumarato, (S)-2,3-bis(butirilóxi)propil metil fumarato, ((2S,3R,4S,5R)-3,4,5-tris(propionilóxi)tetra-hidro-2H- piran-2-ila) fumarato de metila, ((2R,3S,4R,5R,6S)-6-metil-3,4,5- tris(propionilóxi)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila, (((2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5,6-tetraquis(propionilóxi)tetra-hidro-2H-piran- 2-ila)metila) fumarato de metila, (((2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5,6- tetraquis(butirilóxi)tetra-hidro-2H-piran-2-ila)metila) fumarato de metila, ((2S,3R,4R,5R)-3,4,5-tris(butirilóxi)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila, ácido (2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(butirilóxi)-6-(((E)-4-metóxi- 4-oxobut-2-enoila)óxi)tetra-hidro-2H-piran-2-carboxílico, ácido (2S,3S,4S,5R,6R)-6-(((E)-4-metóxi-4-oxobut-2-enoila)óxi)-3,4,5- tris(propionilóxi)tetra-hidro-2H-piran-2-carboxílico, cloreto de (2S,3R,4R,5S,6R)-2-(((E)-4-metóxi-4-oxobut-2-enoila)óxi)-4,5- bis(propionilóxi)-6-((propionilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-3-amônio, cloreto de (2R,3R,4R,5S,6R)-4,5-bis(butirilóxi)-6-((butirilóxi)metila)-2- (((E)-4-metóxi-4-oxobut-2-enoila)óxi)tetra-hidro-2H-piran-3-amônio,
((2R,3R,4R,5S,6R)-3-propionamido-4,5-bis(propionilóxi)-6- ((propionilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila, ((2S,3R,4R,5S)-3,4,5-tris(butirilóxi)-2-((butirilóxi)metila)tetra-hidro-2H- piran-2-ila) fumarato de metila, ((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(butirilóxi)- 6-((butirilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila, ((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tris(butirilóxi)-6-((butirilóxi)metila)tetra-hidro- 2H-piran-2-ila) fumarato de metila, (2R,3R,4R,5S,6R)-3-butiramido-4,5- bis(butirilóxi)-6-((butirilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-il fumarato de metila, ((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tris(propionilóxi)-6- ((propionilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-ila), ((2R,3S,4S,5R,6R)- 3,4,5-tris(propionilóxi)-6-((propionilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila, (2S,3R,4S,5S)-3,4,5-tris(butanoilóxi)oxan-2-il (2E)- but-2-enodioato de 1-metila, (2R,3S,4R,5R,6S)-3,4,5-tris(butanoilóxi)-6- metiloxan-2-il (2E)-but-2-enodioato de -metila, (2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5- tris(butanoilóxi)-6-(hidroximetila)oxan-2-il (2E)-but-2-enodioato de 1- metila, (2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(butanoilóxi)-6-(hidroximetila)oxan- 2-il (2E)-but-2-enodioato de 1-metila, 4-[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5,6- tetraquis(butanoilóxi)oxan-2-il]metil (2E)-but-2-enodioato de 1-metila, 4- [(2R,3S,4S,5R,6S)-3,4,5,6-tetraquis(butanoilóxi)oxan-2-il]metil (2E)- but-2-enodioato de 1-metila, (2R,3R,4S,5R,6R)-6-(hidroximetila)-3,4,5- tris(propanoyloxy)oxan-2-il (2E)-but-2-enodioato de 1-metila, 4- [(2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5,6-tetraquis(butanoilóxi)oxan-2-il]metil (2E)- but-2-enodioato de 1-metila, (2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tris(butanoilóxi)-6- (hidroximetila)oxan-2-il (2E)-but-2-enodioato de 1-metila, (2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tris(butanoilóxi)-6-(hidroximetila)oxan-2-il (2E)- but-2-enodioato de 1-metila, (2S,3R,4S,5S,6R)-6-(hidroximetila)-3,4,5- tris(propanoilóxi)oxan-2-il (2E)-but-2-enodioato de 1-metila, (2S,3R,4S,5S,6R)-5-hidróxi-3,4-bis(propanoilóxi)-6- [(propanoilóxi)metil]oxan-2-il (2E)-but-2-enodioato de 1-metila, (2R,3R,4S,5S,6R)-6-(hidroximetila)-3,4,5-tris(propanoilóxi)oxan-2-il
(2E)-but-2-enodioato de 1-metila, (2R,3R,4S,5S,6R)-5-hidróxi-3,4- bis(propanoilóxi)-6-[(propanoilóxi)metil]oxan-2-il (2E)-but-2-enodioato de 1-metila, 4-[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5,6-tetraquis(propanoilóxi)oxan- 2-yl]metil (2E)-but-2-enodioato de 1-metila, (2R,3S,4S,5R,6S)-4,5,6- tris(propanoilóxi)-2-[(propanoilóxi)metil]oxan-3-il (2E)-but-2-enodioato de 1-metila e (2R,3S,4S,5R,6R)-4,5,6-tris(propanoilóxi)-2- [(propanoiloxy)metil]oxan-3-il (2E)-but-2-enodioato de 1-metila.
[0077] Em algumas modalidades, os compostos da invenção são selecionados do grupo consistindo em: O4-[2-[(E)-4-metóxi-4-oxo- but- 2-enoil]óxi-4-[(2R,3R)-3,5,7-tris[[(E)-4-metóxi-4-oxo-but-2- enoil]oxi]croman-2-il]fenil] (E)-but-2-enodioato de O1-metila, O4-[4- [3,5,7-tris[[(E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoil]oxi]-4-oxo-cromen-2-il]fenil] (E)-but-2-enodioato de O1-metila, O4-[2-[(E)-4-metóxi-4-oxo-but-2- enoil]óxi-4-[3,5,7-tris[[(E)-4- metóxi-4-oxo-but-2-enoil]oxi]-4-oxo- cromen-2-il]fenil] (E)-but-2-enodioato de O1-metila e O4-[4-[3-hidróxi- 5,7-bis[[(E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoil]oxi]-4-oxo-cromen-2-il]fenil] (E)- but-2-enodioato de O1-metila. Métodos
[0078] Os conjugados descritos neste documento podem ser usados para tratar uma doença, distúrbio ou condição (por exemplo, um distúrbio autoimune) em um indivíduo em necessidade deste.
[0079] Sem desejar estar vinculado pela teoria, os produtos metabólicos do microbioma podem interagir com o sistema imunológico do hospedeiro de várias maneiras. Os metabólitos podem ter efeitos remotos ao trato gastrointestinal, por exemplo, através de interações bidirecionais com o sistema nervoso central. Exemplos incluem SCFA interagindo com repórteres de ácido graxo livre. Ácidos graxos de cadeia curta podem afetar a autoimunidade expandindo células T reguladoras e suprimindo a via JNK1/P38. Um conjugado descrito neste documento pode biodegradar, por exemplo, no intestino delgado distal ou cólon, fornecendo assim altos níveis de fumarato de monometila e ácidos graxos (por exemplo, ácidos graxos de cadeia curta) no intestino distal, em que esses compostos podem interagir com o sistema imune.
[0080] Um método de tratamento de esclerose múltipla em um indivíduo em necessidade pode incluir a administração de um conjugado descrito neste documento (por exemplo, uma composição farmacêutica contendo o conjugado) a um indivíduo em necessidade deste. Exemplos não limitativos de esclerose múltipla incluem esclerose múltipla progressiva primária, esclerose múltipla progressiva secundária ou esclerose múltipla recidivante-remitente. Preferencialmente, a esclerose múltipla é esclerose múltipla progressiva primária.
[0081] Um método de tratamento de um distúrbio autoimune em um indivíduo em necessidade pode incluir a administração de um conjugado descrito neste documento (por exemplo, uma composição farmacêutica contendo o conjugado) a um indivíduo em necessidade. Exemplos não limitantes de doenças, distúrbios, e quadros clínicos incluem distúrbios autoimunes, conforme descrito neste documento, por exemplo, doenças autoimunes (por exemplo, esclerose múltipla, psoríase, artrite psoriática, artrite reumatoide, lúpus eritematoso sistêmico, doença de Crohn, síndrome de Sjogren, doença de Behcet, colite ulcerativa, ou síndrome de Guillain-Barré), adrenoleucodistrofia, dano no genoma induzido por AGE, a morte de Alexander, a doença de Alper, doença de Alzheimer, esclerose lateral amiotrófica, angina pectoris, artrite, asma, esclerose concêntrica de baló, doença de Canavan, insuficiência cardíaca, incluindo insuficiência ventricular esquerda, vasculite do sistema nervoso central, doença de Charcott-Marie-Tooth, ataxia infantil com hipomielinização do sistema nervoso central, neuropatia periférica idiopática crônica, doença pulmonar obstrutiva crônica, retinopatia diabética, doença de enxerto-versus-hospedeiro, infecção viral por hepatite C, infecção viral por herpes simples, infecção viral por imunodeficiência humana, doença de Huntington, síndrome do intestino irritável, isquemia, doença de Krabbe, líquen plano, degeneração macular, encefalomiopatia mitocondrial, amiotrofia monomérica, infarto do miocárdio, neurodegeneração com acúmulo de ferro no cérebro, neuromielite óptica, neurossarcoidose, neurite óptica, síndrome paraneoplásica, doença de Parkinson, doença de Pelizaeus- Merzbacher, esclerose lateral primária, paralisia supranuclear progressiva, lesão de reperfusão, retinopatia pigmentosa, doença de Schilder, mielopatia necrosante subaguda, síndrome de susac, mielite transversa, síndrome de Zellweger, granuloma anular, pênfigo, penfigoide da cânula, dermatite de contato, dermatite aguda, dermatite crônica, alopecia areata (totalis ou universalis), sarcoidose, sarcoidose cutânea, pioderma gangrenoso, lúpus cutâneo, doença de Crohn cutânea, apneia obstrutiva do sono, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica pequena, esclerose sistêmica-hipertensão pulmonar, glioblastoma multiforme, linfoma cutâneo de células T, leucoencefalopatia multifocal progressiva, poliartrite, início de diabetes juvenil, diabetes tipo II, tireoidite de Hashimoto, doença de Grave, anemia perniciosa, hepatite autoimune, neurodermatite, retinopatia pigmentosa ou formas de encefalomiopatia mitocondrial, esclerodermia sistêmica progressiva, osteocondrite sífilica (doença de Wegener), cutis marmorata (livedo reticularis), panarterite, vasculite, osteoartrite, gota, arteriosclerose, doença de Reiter, granulomatose pulmonar, choque endotóxico (choque tóxico-séptico), sepse, pneumonia, encefalomielite, anorexia nervosa, hepatite aguda, hepatite crônica, hepatite tóxica, hepatite induzida por álcool, hepatite viral, insuficiência hepática, hepatite citomegaloviral, Linfomatose T de Rennert, nefrite mesangial, reestenose pós-angioplásica, síndrome de reperfusão, retinopatia citomegaloviral, resfriado adenoviral, febre adenoviral faringoconjuntival, oftalmia adenoviral, AIDS, neuralgia pós-herpética ou pós-zoster, polineuropatia desmielinizante inflamatória, mononeuropatia múltipla, mucoviscidose, doença de Bechterew, esôfago de Barett, infecção pelo vírus Epstein-Barr, remodelação cardíaca, cistite intersticial, diabetes mellitus tipo II, radiossensibilização de tumor humano, resistência a múltiplos medicamentos na quimioterapia, carcinoma mamário, carcinoma do cólon, melanoma, carcinoma primário de células hepáticas, adenocarcinoma, sarcoma de Kaposi, carcinoma de próstata, leucemia, leucemia mieloide aguda, mieloma múltiplo (plasmocitoma), linfoma de Burkitt, tumor de Castleman, insuficiência cardíaca, infarto do miocárdio, angina pectoris, asma, doenças pulmonares obstrutivas crônicas, absorção de timidina induzida por PDGF de células do músculo liso bronquiais, proliferação de células do músculo liso brônquico, alcoolismo, doença de Alexander, doença de Alper, doença de Alzheimer, ataxia telangiectasia, Doença de Batten (também conhecida como doença de Spielmeyer-Vogt- Sjögren-Battendise), encefalopatia espongiforme bovina (BSE), paralisia cerebral, síndrome de Cockayne, degeneração corticobasal, Doença de Creutzfeldt-Jakob, insônia familiar fatal, degeneração lobar frontotemporal, doença de Huntington, demência associada ao HIV, doença de Kennedy, doença de Krabbe, demência por corpos de Lewy, neuroborreliose, doença de Machado-Joseph (ataxia espinocerebelar tipo 3), atrofia de múltiplos sistemas, narcolepsia, doença de Niemann Pick, doença de peleeus-Merzbacher, doença de Pick, esclerose lateral primária, doença de príon, paralisia supranuclear progressiva, doença de Refsum, doença de Sandhoff, degeneração combinada subaguda da medula espinhal secundária à anemia perniciosa, ataxia espinocerebelar, atrofia muscular espinhal, doença de Steele- Richardson-Olszewski, tabes dorsalis, encefalopatia tóxica, LHON (neuropatia óptica hereditária de Leber), MELAS (encefalomiopatia mitocondrial; acidose láctica; derrame), MERRF (epilepsia mioclônica;
fibras vermelhas rasgadas), PEO (optoalmoplegia externa progressiva), síndrome de Leigh, MNGIE (miopatia e oftalmoplegia externa; neuropatia; gastrointestinal; encefalopatia), síndrome de Kearns-Sayre (KSS), NARP, paraparesia espástica hereditária, miopatia mitocondrial, ataxia de Friedreich, neurite óptica, polineuropatia desmielinizante inflamatória aguda (AIDP), polineuropatia desmielinizante inflamatória crônica (CIDP), mielite transversa aguda, encefalomielite disseminada aguda (ADEM) e atrofia óptica de Leber.
[0082] Em algumas modalidades, os componentes do conjugado (por exemplo, fumarato de monometila e um ou mais componentes do grupo carreador) podem agir sinergicamente para tratar uma doença, distúrbio ou condição (por exemplo, esclerose múltipla), por exemplo, após hidrólise no trato GI do indivíduo que recebe o conjugado.
[0083] Adicional ou alternativamente, os conjugados descritos neste documento podem ser usados para modular um marcador de autoimunidade em um indivíduo em necessidade deste. Um método de modulação de um marcador de autoimunidade em um indivíduo em necessidade deste pode incluir a administração de um conjugado descrito neste documento (por exemplo, uma composição farmacêutica contendo o conjugado) a um indivíduo em necessidade deste.
[0084] Exemplos não limitativos de marcadores de autoimunidade incluem marcadores para uma doença inflamatória intestinal, doença de Addison, alopecia areata, espondilite anquilosante, síndrome antifosfolipídica, anemia hemolítica, hepatite autoimune, doença de Behcet, doença de Berger, penfigoide bolhoso, cardiomiopatia, espru celíaco, síndrome de disfunção imune por fadiga crônica (CFIDS), polineuropatia desmielinizante inflamatória crônica, síndrome de Churg- Strauss, penfigoide cicatricial, doença de aglutinina fria, diabetes tipo 1, lúpus discoide, crioglobulinemia mista essencial, doença de Graves, síndrome de Guillain-Barré, tireoidite de Hashimoto, hipotireoidismo,
síndrome linfoproliferativa autoimune (ALPS), fibrose pulmonar idiopática, púrpura trombocitopenia idiopática (ITP), artrite juvenil, líquen plano, lúpus eritematoso, doença de Ménière, doença mista do tecido conjuntivo, esclerose múltipla, miastenia grave, pênfigo vulgar, anemia perniciosa, policondrite, síndromes poliglandulares autoimunes, polimialgia reumática, polimiosite, dermatomiosite, agamaglobulinemia primária, cirrose biliar primária, psoríase, artrite psoriática, fenômeno de Raynaud, síndrome de Reiter, febre reumática, artrite reumatoide, sarcoidose, esclerodermia, Síndrome de Sjögren, síndrome da pessoa rígida, arterite de Takayasu, arterite de células gigantes, colite ulcerativa, uveíte, vasculite, e granulomatose com poliangeíte. Em algumas modalidades, o marcador de autoimunidade é um marcador para uma doença inflamatória intestinal (por exemplo, doença de Crohn ou colite ulcerativa).
[0085] Os marcadores de autoimunidade incluem, por exemplo, um nível de mRNA de CYP1A1, motilidade intestinal, secreção de muco, contagem de células Treg CD4+CD25+ (por exemplo, CD4+CD25+Foxp3+ Treg), contagem de células Th1, nível de interleucina-8 (IL8), nível de proteína 1α inflamatória de macrófagos (MIP-1α), nível de proteína 1β inflamatória de macrófagos (MIP-1β), nível de NFκB, nível de sintase de óxido nítrico (iNOS), nível de metalopeptidase de matriz 9 (MMP9), nível de interferon γ (IFNγ), nível de interleucina-17 (IL17), nível de molécula de adesão intercelular (ICAM), nível de CXCL13, nível de 8-iso-prostaglandina F2α (8-iso- PGF2α), nível de IgA, nível de calprotectina, nível de lipocalina-2, nível de ácidos graxos de cadeia curta e nível de sulfato de indoxila.
[0086] Os marcadores de autoimunidade podem ser medidos em uma amostra de um indivíduo usando métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, a contagem de células Treg CD4+CD25+ (por exemplo, CD4+CD25+Foxp3+ Treg) e contagem de células Th1 são medidas através de exame de sangue de rotina, seguidas por análise de citometria de fluxo de marcadores de células e/ou citocinas (por exemplo, CD4, CD25, Foxp3, IFNγ, IL2 e/ou IL4). Os níveis de NFκB e iNOS podem ser medidos usando exames de sangue de rotina. Análises de amostras de fezes podem ser realizadas para medir um nível de IgA, nível de calprotectina, nível de lipocalina-2 e nível de ácidos graxos de cadeia curta. A análise de amostra de urina pode ser realizada para medir um nível de sulfato de indoxila. A secreção de muco pode ser avaliada através de biópsia ou análise do teor de matéria fecal. A secreção de muco pode ser medida usando contagens de células HT- 29 ou pela medição da expressão gênica da mucina em amostras de biópsia, por exemplo, por PCR (Recio, The impact of Food Bioactive on Health: In vitro and ex vivo models, Capítulo 11, HT29 Cell line, (2015)). A motilidade intestinal pode ser avaliada usando cintilografia gastrointestinal (por exemplo, cápsulas de pH e motilidade sem fio) ou examinando o efeito de um artigo de teste sobre sua capacidade de aprimorar a resistência elétrica transepitelial (TEER) em uma linhagem celular (por exemplo, CACO-2) ou em um sistema complexo de co- cultura (por exemplo, MATEK epi-intestinal) (Kickman, J. Lab. Autom., 20:107-126, 2015). A permeabilidade gastrointestinal pode ser medida usando um teste de absorção de açúcar duplo conhecido na técnica. Por exemplo, o teste de absorção dupla de açúcar envolve a administração de uma quantidade predeterminada de uma bebida contendo lactulose e manitol e a medição da absorção desses dois açúcares ao longo de seis horas. A dor abdominal é normalmente avaliada por uma pesquisa. O sangramento gastrointestinal pode ser avaliado pela presença ou ausência de sangue em uma amostra de fezes de um indivíduo. A inflamação gastrointestinal pode ser avaliada por biopsia.
[0087] Em algumas modalidades, mediante administração a um indivíduo em necessidade deste, um conjugado descrito neste documento aumenta um marcador de autoimunidade, por exemplo, motilidade intestinal, contagem de células Treg CD4+CD25+, nível de ácidos graxos de cadeia curta ou secreção de muco em um indivíduo (por exemplo, pelo menos, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98% ou mais em relação a antes da administração). Em algumas modalidades, mediante administração a um indivíduo em necessidade deste, um conjugado descrito neste documento aumenta um marcador de autoimunidade, por exemplo, um nível de mRNA de CYP1A1 em um indivíduo (por exemplo, pelo menos 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98% ou mais em relação a antes da administração). Em certas modalidades, mediante administração a um indivíduo em necessidade deste, um conjugado descrito neste documento diminui um marcador de autoimunidade, por exemplo, iNOS, MMP9, IFNγ, IL17, ICAM, CXCL13, 8-iso-PGF2α em um indivíduo (por exemplo, pelo menos 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98% ou mais em relação a antes da administração). Em certas modalidades, mediante administração a um indivíduo em necessidade deste, um conjugado descrito neste documento diminui um nível de interleucina-8 (IL8) em um indivíduo (por exemplo, pelo menos 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98% ou mais em relação a antes da administração). Em certas modalidades, mediante administração a um indivíduo em necessidade deste, um conjugado descrito neste documento diminui um nível de proteína 1α inflamatória de macrófagos (MIP-1α) em um indivíduo (por exemplo, pelo menos 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98% ou mais em relação a antes da administração). Em certas modalidades, mediante administração a um indivíduo em necessidade deste, um conjugado descrito neste documento diminui um nível de proteína 1β inflamatória de macrófagos (MIP-1β) em um indivíduo (por exemplo, pelo menos 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98% ou mais em relação a antes da administração). Em outras modalidades, mediante administração a um indivíduo em necessidade deste, um conjugado descrito neste documento modula (aumenta ou diminui) um marcador de autoimunidade, por exemplo, contagem de células Th1 em um indivíduo (por exemplo, pelo menos 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98% ou mais em relação a antes da administração). A contagem de células Th1 aumenta ou diminui pode ser desejável dependendo da condição particular e seu estado. Um médico assistente ou enfermeiro pode determinar se é desejado um aumento ou diminuição na contagem de células Th1.
[0088] Em algumas modalidades, um conjugado descrito neste documento diminui a inflamação gastrointestinal (intestino superior, ceco, íleo, cólon, reto) em um indivíduo (por exemplo, pelo menos 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98% ou mais em relação à administração)). Em certas modalidades, um conjugado descrito neste documento diminui a dor abdominal (por exemplo, incidência e/ou intensidade) em um indivíduo (por exemplo, pelo menos 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98% ou mais em relação a antes da administração). Em modalidades particulares, um conjugado descrito neste documento diminui a permeabilidade gastrointestinal em um indivíduo (por exemplo, pelo menos 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%,
35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98% ou mais em relação à administração). Em outras modalidades, um conjugado descrito neste documento aumenta a motilidade intestinal ou frequência de defecação em um indivíduo (por exemplo, pelo menos 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98% ou mais em relação a antes da administração). Em ainda outras modalidades, um conjugado descrito neste documento diminui a motilidade intestinal ou frequência de defecação em um indivíduo (por exemplo, pelo menos 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98% ou mais em relação a antes da administração). Em ainda outras modalidades, um conjugado descrito neste documento diminui o sangramento gastrointestinal em um indivíduo (por exemplo, pelo menos 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98% ou mais em relação a antes da administração). Em outras modalidades, um conjugado descrito neste documento diminui ou aumenta a secreção de muco ou aprimora a saúde da mucosa em uma célula gastrointestinal, tecido ou em um indivíduo (por exemplo, pelo menos 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98% ou mais em relação a antes da administração).
[0089] Adicional ou alternativamente, os conjugados descritos neste documento podem ser usados para modular um marcador de esclerose múltipla em um indivíduo em necessidade deste. Um método de modulação de um marcador de esclerose múltipla em um indivíduo em necessidade deste pode incluir a administração de um conjugado descrito neste documento (por exemplo, uma composição farmacêutica contendo o conjugado) a um indivíduo em necessidade deste.
[0090] Exemplos não limitativos de marcadores de esclerose múltipla incluem um nível de expressão de Nrf2, nível de ácido cítrico, nível de serotonina, nível de ácido β-hidroxibutírico, nível de ácido docosa-hexaenoico, um nível de L-citrulina, nível de ácido picolínico, nível de ácido quinolínico, nível de ácido 2-quetoglutárico, razão de L- quinurenina/L-triptofano, nível de ácido quiunureico, nível de prostaglandina E2, leucotrieno B4, nível de ácido linolênico, nível de ácido linoleico, contagem de células T CD8+, contagem de células B de memória, contagem de células EM CD4+, número cumulativo de novas lesões Gd+, nível de L-fenilalanina, nível de ácido hipúrico, nível de ácido eicosapentaenoico, nível de putrescina, nível de ácido N-metil nicotínico, nível de ácido láurico e nível de ácido araquidônico.
[0091] Em algumas modalidades, mediante administração a um indivíduo em necessidade deste, um conjugado descrito neste documento aumenta um marcador de esclerose múltipla em um indivíduo, por exemplo, um nível de expressão de Nrf2, nível de ácido cítrico, nível de serotonina, nível de ácido β-hidroxibutírico, ou nível de ácido docosa-hexaenoico (por exemplo, pelo menos 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98% ou mais em relação a antes da administração).
[0092] Em algumas modalidades, um conjugado descrito neste documento diminui uma esclerose múltipla em um indivíduo, por exemplo, um nível de L-citrulina, nível de ácido picolínico, nível de ácido quinolínico, nível de ácido 2-cetoglutárico, razão de L-quinurenina/L- triptofano, nível de ácido ciunurênico, nível de prostaglandina E2, leucotrieno B4, nível de ácido linolênico, nível de ácido linoleico, contagem de células T CD8+, contagem de células B de memória, contagem de células EM CD4+, ou número cumulativo de novas lesões Gd+ (por exemplo, pelo menos 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%,
40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 98% ou mais em relação a antes da administração)). Composições Farmacêuticas
[0093] Os conjugados divulgados neste documento podem ser formulados em composições farmacêuticas para administração a indivíduos humanos em uma forma biologicamente compatível adequada para administração in vivo. As composições farmacêuticas incluem tipicamente um conjugado conforme descrito neste documento e um excipiente fisiologicamente aceitável (por exemplo, um excipiente farmaceuticamente aceitável).
[0094] O conjugado descrito neste documento também pode ser usado na forma do ácido/base livre, na forma de sais, zwitterions ou como solvatos. Todas as formas estão dentro do escopo da invenção. Os conjugados, sais, zwitterions, solvatos ou composições farmacêuticas destes podem ser administrados a um indivíduo em uma variedade de formas, dependendo da via de administração selecionada, como será compreendido pelos versados na técnica. Os conjugados descritos neste documento podem ser administrados, por exemplo, por administração oral, parentérica, bucal, sublingual, nasal, retal, por adesivo, bomba ou transdérmica e as composições farmacêuticas formuladas em conformidade. A administração parentérica inclui modos de administração intravenosa, intraperitoneal, subcutânea, intramuscular, transepitelial, nasal, intrapulmonar, intratecal, retal e tópica. A administração parentérica pode ser feita por infusão contínua durante um período de tempo selecionado.
[0095] Para uso humano, um conjugado divulgado neste documento pode ser administrado isoladamente ou em mistura com um carreador farmacêutico ou nutracêutico selecionado em relação à via de administração pretendida e prática farmacêutica padrão. Composições farmacêuticas para uso em conformidade com a presente invenção podem ser formuladas de forma convencional usando um ou mais carreadores fisiologicamente aceitáveis com excipientes e auxiliares que facilitam o processamento de conjugados divulgados neste documento em preparações que podem ser usadas farmaceuticamente.
[0096] Esta divulgação também inclui composições farmacêuticas que podem conter um ou mais carreadores fisiologicamente aceitáveis. Ao produzir as composições farmacêuticas da invenção, o ingrediente ativo é tipicamente misturado com um excipiente diluído por um excipiente ou envolvido dentro de tal carreador na forma de, por exemplo, uma cápsula, sachê, papel ou outro recipiente. Quando o excipiente serve como um diluente, ele pode ser um material sólido, semissólido ou líquido (por exemplo, solução salina normal), que atua como veículo, carreador ou meio para o ingrediente ativo. Assim, as composições podem estar na forma de comprimidos, pós, pastilhas, sachês, "cachets", elixires, suspensões, emulsões, soluções, xaropes e cápsulas gelatinosas moles e duras. Conforme é conhecido na técnica, o tipo de diluente pode variar dependendo da via de administração pretendida. As composições resultantes podem incluir agentes adicionais, por exemplo, conservantes. O excipiente ou carreador é selecionado com base no modo e via de administração. Carreadores farmacêuticos adequados, bem como necessidades farmacêuticas para uso em formulações farmacêuticas, são descritos em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Gennaro, Ed., Lippencott Williams & Wilkins (2005), um texto de referência bem conhecido neste campo e na USP/NF (United States Pharmacopeia and the National Formulary). Exemplos de excipientes adequados são lactose, dextrose, sacarose, sorbitol, manitol, amidos, goma acácia, fosfato de cálcio, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato de cálcio, celulose microcristalina, polivinilpirrolidona, celulose, água, xarope e metilcelulose. As formulações podem incluir adicionalmente: agentes lubrificantes, por exemplo, talco, estearato de magnésio e óleo mineral; agentes umectantes; agentes emulsificantes e de suspensão; agentes conservantes, por exemplo, metil e propil-hidróxi-benzoatos; agentes edulcorantes; e agentes aromatizantes. Outros excipientes exemplares são descritos em Handbook of Pharmaceutical Excipients, 6th Edition, Rowe et al., Eds., Pharmaceutical Press (2009).
[0097] Essas composições farmacêuticas podem ser fabricadas de uma maneira convencional, por exemplo, por processos de mistura convencional, dissolução, granulação, produção de drágea, maceração, emulsificação, encapsulamento, aprisionamento ou liofilização. Métodos bem conhecidos na técnica para produzir formulações são encontrados, por exemplo, em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21a Ed., Gennaro, Ed., Lippencott Williams & Wilkins (2005) e Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York. A formulação adequada depende da via de administração escolhida. A formulação e a preparação de tais composições são bem conhecidas por aqueles versados na técnica de formulação farmacêutica. Na preparação de uma formulação, os conjugados ativos podem ser moídos para fornecer o tamanho de partícula apropriado antes de combinar com os outros ingredientes. Se o conjugado for substancialmente insolúvel, ele pode ser moído a um tamanho de partícula inferior a 200 mesh. Se o conjugado for substancialmente solúvel em água, o tamanho de partícula pode ser ajustado por moagem para fornecer uma distribuição substancialmente uniforme na formulação, por exemplo, cerca de 40 mesh. Dosagens
[0098] A dosagem do conjugado usado nos métodos descritos neste documento, ou sais ou pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis destes, ou composições farmacêuticas destes, pode variar dependendo de muitos fatores, por exemplo, as propriedades farmacodinâmicas do conjugado; o modo de administração; a idade, a saúde e o peso do destinatário; a natureza e a extensão dos sintomas; a frequência do tratamento, e o tipo de tratamento simultâneo, se houver; e a taxa de depuração do conjugado no indivíduo a ser tratado. Um versado na técnica pode determinar a dosagem apropriada com base nos fatores acima. Os conjugados usados nos métodos descritos neste documento podem ser administrados inicialmente em uma dosagem adequada que pode ser ajustada conforme necessário, dependendo da resposta clínica. Em geral, uma dose diária adequada de um conjugado divulgado neste documento será aquela quantidade do conjugado que é a menor dose eficaz para produzir um efeito terapêutico. Tal dose eficaz geralmente dependerá dos fatores descritos acima.
[0099] Um conjugado divulgado neste documento pode ser administrado ao indivíduo em dose única ou em doses múltiplas. Quando doses múltiplas são administradas, as doses podem ser separadas umas das outras, por exemplo, por 1-24 horas, 1-7 dias ou 1-4 semanas. O conjugado pode ser administrado de acordo com um cronograma, ou o conjugado pode ser administrado sem um cronograma predeterminado. Deve ser entendido que, para qualquer indivíduo particular, regimes de dosagem específicos devem ser ajustados ao longo do tempo de acordo com a necessidade individual e o julgamento profissional da pessoa que está administrando ou supervisionando a administração das composições.
[00100] Os conjugados podem ser fornecidos em uma forma de dosagem. Em algumas modalidades, a forma de dosagem unitária pode ser uma forma de dosagem unitária oral (por exemplo, um comprimido, cápsula, suspensão, solução líquida, pó, cristais, pastilha, sachê, "cachet", elixir, xarope e similares) ou uma porção de produto alimentar
(por exemplo, os agentes ativos podem ser incluídos como aditivos alimentares ou ingredientes dietéticos). Em determinadas modalidades, a forma de dosagem unitária é projetada para administração de pelo menos um conjugado divulgado neste documento, em que a quantidade total de um conjugado administrado é de 0,1 g a 10 g (por exemplo, 0,5 g a 9 g, 0,5 g a 8 g, 0,5 g a 7 g, 0,5 g a 6 g, 0,5 g a 5 g, 0,5 g a 1 g, 0,5 g a 1,5 g, 0,5 g a 2 g, 0,5 g a 2,5 g, 1 g a 1,5 g, 1 g a 2 g, 1 g a 2,5 g, 1,5 g a 2 g, 1,5 g a 2,5 g, ou 2 g a 2,5 g). Em outras modalidades, o conjugado é consumido a uma taxa de 0,1 g a 10 g por dia (por exemplo, 0,5 g a 9 g, 0,5 g a 8 g, 0,5 g a 7 g, 0,5 g a 6 g, 0,5 g a 5 g, 0,5 g a 1 g por dia, 0,5 g a 1,5 g por dia, 0,5 g a 2 g por dia, 0,5 g a 2,5 g por dia, 1 g a 1,5 g por dia, 1 g a 2 g por dia, 1 g a 2,5 g por dia, 1,5 g a 2 g por dia, 1,5 g a 2,5 g por dia, ou 2 g a 2,5 g por dia) ou mais. O médico participante decidirá, em última análise, a quantidade apropriada e o regime de dosagem, uma quantidade eficaz do conjugado divulgado neste documento pode ser, por exemplo, uma dosagem diária total de, por exemplo, entre 0,5 g e 5 g (por exemplo, 0,5 a 2,5 g) de qualquer um dentre o conjugado acilado ou a combinação do conjugado descrito neste documento. Alternativamente, a quantidade de dosagem pode ser calculada usando o peso corporal do indivíduo. Preferencialmente, quando dosagens diárias excedem 5 g/dia, a dosagem dos conjugados pode ser dividida através de dois ou três eventos de administração diários.
[00101] Nos métodos da invenção, o período de tempo durante o qual múltiplas doses de um conjugado divulgado neste documento são administradas a um indivíduo pode variar. Por exemplo, em algumas modalidades, doses dos conjugados são administradas a um indivíduo durante um período de tempo de 1-7 dias; 1-12 semanas; ou 1-3 meses. Em outras modalidades, os conjugados são administrados ao indivíduo durante um período de tempo que é, por exemplo, 4-11 meses ou 1-30 anos. Em ainda outras modalidades, os conjugados divulgados neste documento são administrados a um indivíduo no início dos sintomas. Em qualquer uma dessas modalidades, a quantidade do conjugado que é administrada pode variar durante o período de tempo de administração. Quando um conjugado é administrado diariamente, a administração pode ocorrer, por exemplo, 1, 2, 3 ou 4 vezes por dia. Formulações
[00102] Um conjugado descrito neste documento pode ser administrado a um indivíduo com um diluente, carreador ou excipiente farmaceuticamente aceitável na forma de dosagem unitária. A prática farmacêutica convencional pode ser empregada para fornecer formulações ou composições adequadas para administrar o conjugado a indivíduos sofrendo de um distúrbio. A administração pode começar antes que o indivíduo seja sintomático.
[00103] As vias exemplares de administração dos conjugados divulgados neste documento ou composições farmacêuticas destes, usadas na presente invenção incluem oral, sublingual, bucal, transdérmica, intradérmica, intramuscular, parentérica, intravenosa, intra-arterial, intracraniana, subcutânea, intraorbital, intraventricular, intraespinhal, intraperitoneal, intranasal, inalatória e administração tópica. Os conjugados são administrados desejavelmente com um carreador fisiologicamente aceitável (por exemplo, um carreador farmaceuticamente aceitável). As formulações farmacêuticas dos conjugados descritos neste documento formuladas para tratamento dos distúrbios descritos neste documento também fazem parte da presente invenção. Em algumas modalidades preferenciais, os conjugados divulgados neste documento são administrados a um indivíduo oralmente. Em outras modalidades preferenciais, os conjugados divulgados neste documento são administrados a um indivíduo topicamente.
Formulações para Administração Oral
[00104] As composições farmacêuticas contempladas pela invenção incluem aquelas formuladas para administração oral ("formas de dosagem unitária"). As formas de dosagem orais podem ser, por exemplo, na forma de comprimidos, cápsulas, uma solução ou suspensão líquida, um pó, ou cristais líquidos ou sólidos, que contêm ingredientes ativos em uma mistura com excipientes fisiologicamente aceitáveis (por exemplo, excipientes farmaceuticamente aceitáveis). Esses excipientes podem ser, por exemplo, diluentes ou preenchedores inertes (por exemplo, sacarose, sorbitol, açúcar, manitol, celulose microcristalina, amidos incluindo amido de batata, carbonato de cálcio, cloreto de sódio, lactose, fosfato de cálcio, sulfato de cálcio ou fosfato de sódio); agentes de granulação e desintegração (por exemplo, derivados de celulose, incluindo celulose microcristalina, amidos, incluindo amido de batata, croscarmelose sódica, alginatos ou ácido algínico); agente aglutinantes (por exemplo, sacarose, glicose, sorbitol, acácia, ácido algínico, alginato de sódio, gelatina. amido, amido pré- gelatinizado, celulose microcristalina, silicato de magnésio e alumínio, carboximetilcelulose sódica. metilcelulose, hidroxipropil metilcelulose, etilcelulose, polivinilpirrolidona, ou polietilenoglicol); e agentes lubrificantes, deslizantes e antiaderentes (por exemplo, estearato de magnésio, estearato de zinco, ácido esteárico, sílicas, óleos vegetais hidrogenados, ou talco). Outros excipientes fisiologicamente aceitáveis (por exemplo, excipientes farmaceuticamente aceitáveis) podem ser corantes, agentes aromatizantes, plastificantes, umectantes, agentes tamponantes e similares.
[00105] As formulações para administração oral também podem ser apresentadas como comprimidos mastigáveis, como cápsulas gelatinosas duras onde o ingrediente ativo é misturado com um diluente sólido inerte (por exemplo, amido de batata, lactose, celulose microcristalina, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulim), ou como cápsulas gelatinosas moles onde o ingrediente ativo é misturado com água ou um meio oleoso, por exemplo, óleo de amendoim, parafina líquida ou azeite de oliva. Pós, granulados e péletes podem ser preparados usando os ingredientes mencionados acima sob comprimidos e cápsulas de uma maneira convencional usando, por exemplo, um misturador, um aparelho de leito fluído ou um equipamento de secagem por pulverização.
[00106] Composições de liberação controlada para uso oral podem ser construídas para liberar a fármaco ativa através do controle da dissolução e/ou da difusão da substância de fármaco ativa. Qualquer um de um número de estratégias pode ser buscado para obter liberação controlada e a concentração plasmática alvo versus perfil de tempo. Em um exemplo, a liberação controlada é obtida pela seleção apropriada de vários parâmetros e ingredientes de formulação, incluindo, por exemplo, vários tipos de composições e revestimentos de liberação controlada. Exemplos incluem comprimido unitário único ou múltiplo ou composições de cápsula, soluções oleosas, suspensões, emulsões, microcápsulas, microesferas, nanopartículas, fragmentos e lipossomas. Em certas modalidades, composições incluem revestimentos poliméricos sensíveis à temperatura e/ou pH biodegradáveis.
[00107] A dissolução ou liberação controlada por difusão pode ser obtida pelo revestimento apropriado de uma formulação de comprimido, cápsula, pellet ou granulado de conjugados ou pela incorporação do conjugado em uma matriz apropriada. Um revestimento de liberação controlada pode incluir uma ou mais das substâncias de revestimento mencionadas acima e/ou, por exemplo, goma-laca, cera de abelha, glicocera, cera de rícino, cera de carnaúba, álcool estearílico, monoestearato de glicerila, diestearato de glicerila, palmitostearato de glicerol, etilcelulose, resinas acrílicas, ácido dl-polilático, butirato de acetato de celulose, cloreto de polivinila, acetato de polivinila, vinil pirrolidona, polietileno, polimetacrilato, metilmetacrilato, 2- hidroximetacrilato, hidrogéis de metacrilato, 1,3 butileno glicol, etileno glicol metacrilato e/ou polietilenoglicóis. Em uma formulação de matriz de liberação controlada, o material de matriz também pode incluir, por exemplo, metilcelulose hidratada, cera de carnaúba e álcool estearílico, carbopol 934, silicone, triestearato de gliceril, metil acrilato-metil metacrilato, cloreto de polivinila, polietileno e/ou fluorocarbono halogenado.
[00108] As formas líquidas nas quais os conjugados e composições da presente invenção podem ser incorporados para administração por via oral incluem soluções aquosas, xaropes adequadamente aromatizados, suspensões aquosas ou oleosas, e emulsões aromatizadas com óleos comestíveis, por exemplo, óleo de algodão, óleo de gergelim, óleo de coco ou óleo de amendoim, bem como elixires e veículos farmacêuticos similares. Formulações para Administração Bucal
[00109] Dosagens para administração bucal ou sublingual são normalmente de 0,1 a 500 mg por dose única, conforme necessário. Na prática, o médico determina o regime de dosagem real que é mais adequado para um indivíduo individual, e a dosagem varia com a idade, peso e resposta do indivíduo em particular. As dosagens acima são exemplares do caso médio, mas instâncias individuais existem onde dosagens mais elevadas ou mais baixas são consideradas e estão dentro do escopo desta invenção.
[00110] Para administração bucal, as composições podem assumir a forma de comprimidos, pastilhas, etc. formuladas de uma maneira convencional. Formulações de fármacos líquidos adequados para uso com nebulizadores e dispositivos de pulverização de líquido e dispositivos de aerossol eletro-hidrodinâmicos (EHD) tipicamente incluirão um conjugado divulgado neste documento com um carreador farmaceuticamente aceitável. Preferencialmente, o carreador farmaceuticamente aceitável é um líquido, por exemplo, álcool, água, polietilenoglicol ou um perfluorocarbono. Opcionalmente, outro material pode ser adicionado para alterar as propriedades de aerossol da solução ou suspensão de conjugados divulgados neste documento. Desejavelmente, este material é líquido, por exemplo, um álcool, glicol, poliglicol ou um ácido graxo. Outros métodos de formulação de soluções de fármaco líquido ou suspensão adequada para uso em dispositivos de aerossol são conhecidos pelos versados na técnica (ver, por exemplo, Patente US Nº 5.112.598 e 5.556.611, cada um dos quais é incorporado neste documento por referência). Formulações para Administração Nasal ou Inalação
[00111] Os conjugados também podem ser formulados para administração nasal. As composições para administração nasal também podem convenientemente ser formuladas como aerossóis, gotas, géis e pós. As formulações podem ser fornecidas em uma forma única ou multidose. No caso de um conta-gotas ou pipeta, a dosagem pode ser alcançada pelo indivíduo que administrar um volume apropriado predeterminado da solução ou suspensão. No caso de um spray, isto pode ser conseguido, por exemplo, por meio de uma bomba de pulverização de atomização de medição.
[00112] Os conjugados podem ser adicionalmente formulados para a administração de aerossol, particularmente para o trato respiratório por inalação e incluindo administração intranasal. Os conjugados para administração nasal ou por inalação terão geralmente um tamanho de partícula pequeno, por exemplo, na ordem de cinco (5) micra ou menos. Tal tamanho de partícula pode ser obtido por meios conhecidos na técnica, por exemplo, por micronização. O ingrediente ativo é fornecido em um maço pressurizado com um propulsor adequado, por exemplo,
um clorofluorocarbono (CFC), por exemplo, diclorodifluormetano, triclorofluorometano, ou diclorotetrafluoretano, ou dióxido de carbono, ou outro gás adequado. O aerossol pode convenientemente conter também um surfactante, por exemplo, lecitina. A dose de fármaco pode ser controlada por uma válvula de medição. Alternativamente, os ingredientes ativos podem ser fornecidos em uma forma de um pó seco, por exemplo, uma mistura em pó do conjugado em uma base de pó adequada, por exemplo, lactose, amido e derivados de amido, por exemplo, hidroxipropilmetil celulose e polivinilpirrolidina (PVP). O carreador em pó formará um gel na cavidade nasal. A composição em pó pode ser apresentada em forma de dose unitária, por exemplo, em cápsulas ou cartuchos de, por exemplo, maços de gelatina ou blister a partir dos quais o pó pode ser administrado por meio de um inalador.
[00113] As formulações de aerossol normalmente incluem uma solução ou suspensão fina da substância ativa em um solvente aquoso ou não aquoso fisiologicamente aceitável e são geralmente apresentadas em quantidades únicas ou múltiplas em forma estéril em um recipiente vedado, que pode assumir a forma de um cartucho ou refil para uso com um dispositivo de atomização. Alternativamente, o recipiente vedado pode ser um dispositivo de distribuição unitária, por exemplo, um inalador nasal de dose única ou um dispenser de aerossol equipado com uma válvula de medição que se destina para descarte após o uso. Onde a forma de dosagem compreende um dispensador de aerossol, ela conterá um propulsor, que pode ser um gás comprimido, por exemplo, ar comprimido ou um propulsor orgânico, por exemplo, fluorocloro-hidrocarboneto. As formas de dosagem de aerossol também podem assumir a forma de um atomizador de bomba. Formulações para Administração Parentérica
[00114] Os conjugados descritos neste documento para uso nos métodos da invenção podem ser administrados em uma formulação parentérica farmaceuticamente aceitável (por exemplo, intravenosa ou intramuscular), conforme descrito neste documento. A formulação farmacêutica também pode ser administrada por via parentérica (intravenosa, intramuscular, subcutânea ou similar) em formas de dosagem ou formulações contendo carreadores e adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis, convencionais e não tóxicos. Em particular, formulações adequadas para administração parentérica incluem soluções injetáveis estéreis aquosa e não aquosa que podem conter antioxidantes, tampões, bacteriostatos e solutos que tornam a formulação isotônica com o sangue do destinatário pretendido; e suspensões estéreis aquosas e não aquosas que podem incluir agentes de suspensão e agentes espessantes. Por exemplo, para preparar tal composição, os conjugados divulgados neste documento podem ser dissolvidos ou suspensos em um veículo líquido parentericamente aceitável. Entre veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados estão água, água ajustada a um pH adequado pela adição de uma quantidade apropriada de ácido clorídrico, hidróxido de sódio ou um tampão adequado, 1,3-butanodiol, solução de Ringer e solução de cloreto de sódio isotônico. A formulação aquosa também pode conter um ou mais conservantes, por exemplo, metila, etila ou p- hidroxibenzoato de n-propila. Informações adicionais sobre formulações parentéricas podem ser encontradas, por exemplo, no Formulário Nacional da Farmacopeia dos Estados Unidos ("United States Pharmacopeia-National Formulary" - USP-NF), incorporado neste documento por referência.
[00115] A formulação parentérica pode ser qualquer um dos cinco tipos gerais de preparações identificadas pelo USP-NF como adequado para administração parentérica: (1) "Injeção de Fármacos”: uma preparação líquida que é uma substância farmacológica (por exemplo, um conjugado divulgado neste documento ou uma solução deste); (2) “Fármaco para Injeção”: a substância farmacológica (por exemplo, um conjugado divulgado neste documento) como um sólido seco que será combinado com o veículo estéril apropriado para administração parentérica como uma injeção farmacológica; (3) “Emulsão Injetável de Fármaco”: uma preparação líquida da substância farmacológica (por exemplo, um conjugado divulgado neste documento) que é dissolvida ou dispersa em um meio de emulsão adequado; (4) “Suspensão Injetável de Fármaco”: uma preparação líquida da substância farmacológica (por exemplo, um conjugado divulgado neste documento) suspensa em um meio líquido adequado; e (5) “Fármaco para Suspensão Injetável”: a substância farmacológica (por exemplo, um conjugado divulgado neste documento) como um sólido seco que será combinado com o veículo estéril apropriado para administração parentérica como uma suspensão injetável de fármaco.
[00116] Formulações exemplificativas para administração parentérica incluem soluções dos conjugados preparadas em água adequadamente misturadas com um surfactante, por exemplo, hidroxipropilcelulose. Dispersões também podem ser preparadas em glicerol, polietilenoglicóis líquidos, DMSO e misturas destes com ou sem álcool, e em óleos. Sob condições normais de armazenamento e uso, estas preparações podem conter um conservante para evitar o crescimento de micro-organismos. Os procedimentos e ingredientes convencionais para a seleção e preparação de formulações adequadas são descritos, por exemplo, em Remington: A Ciência e a Prática da Farmácia, 21ª Ed., Gennaro, Ed., Lippencott Williams & Wilkins (2005) e na United States Pharmacopeia: The National Formulary (USP 36 NF31), publicado em 2013.
[00117] As formulações para administração parentérica podem, por exemplo, conter excipientes, água estéril ou solução salina, polialquileno glicóis, por exemplo, polietilenoglicol, óleos de origem vegetal ou naftalenos hidrogenados. Polímero de lactídeo, copolímero de lactídeo/glicolídeo ou copolímero de polioxietileno-polioxipropileno biocompatíveis e biodegradáveis podem ser usados para controlar a liberação dos conjugados ou agentes biologicamente ativos dentro dos conjugados. Outros sistemas de distribuição parentérica potencialmente úteis para conjugados incluem partículas de copolímero de etileno- acetato de vinila, bombas osmóticas, sistemas de infusão implantáveis e lipossomas. Formulações para inalação podem conter excipientes, por exemplo, lactose, ou podem ser soluções aquosas que contêm, por exemplo, polioxietileno-9-lauril éter, glicocolato e desoxicolato, ou podem ser soluções oleosas para administração na forma de gotas nasais ou como um gel.
[00118] A formulação parentérica pode ser formulada para liberação imediata ou para liberação sustentada/estendida do conjugado. Formulações exemplificativas para liberação parentérica do conjugado incluem: soluções aquosas, pós para reconstituição, soluções de cossolvente, emulsões de óleo/água, suspensões, soluções à base de óleo, lipossomas, microesferas e géis poliméricos. Preparação de Conjugados
[00119] Compostos podem ser preparados usando métodos sintéticos e condições de reação conhecidas na técnica. As condições de reação e os tempos de reação ideais podem variar dependendo dos reagentes usados. A menos que especificado de outra forma, solventes, temperaturas, pressões e outras condições de reação podem ser selecionadas por um versado na técnica. Estratégia de preparação glicosídica nº 1: (Substituição) Esquema 1
Composto 1 Composto 2 Composto 3
[00120] No Esquema 1, um açúcar poliacetilado, o composto 1, em que n representa um número inteiro de 1 a 3, m representa um número inteiro de 0 a 1, R é igual a C1-10 alquil é tratado com fumarato de monometila, o composto 2, em um solvente apropriado, opcionalmente na presença de um catalisador. Catalisadores adequados incluem piridina, dimetilaminopiridina, trimetilamina e similares. O catalisador pode ser usado em quantidades que variam de 0,01 a 1,1 equivalentes em relação ao composto 2. Solventes adequados incluem cloreto de metileno, acetato de etila, éter dietílico, tetraidrofurano, 1,4-dioxano, 1,2-dimetoxietano, tolueno, combinações destes e similares. As temperaturas de reação variam de -10 °C até o ponto de ebulição do solvente usado; os tempos de conclusão da reação variam de 1 a 96 h. O fumarato de monometila pode ser usado em quantidades que variam de 0,5 a 15 equivalentes em relação ao composto 1.
[00121] O produto, composto 3, pode ser purificado por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica. Estratégia de preparação glicosídica nº 2: (Reação de Mitsunobu) Esquema 2 Composto 1 Composto 2 Composto 3
[00122] No Esquema 2, um açúcar poliacilado, o composto 1, em que n representa um número inteiro de 1 a 3, m representa um número inteiro de 0 a 1, R é igual a C1-10 alquil é tratado com trifenilfosfina e um composto diazo, tal como dietilazodicarboxilato (DEAD) e similares em um solvente apropriado. Solventes adequados incluem cloreto de metileno, THF, acetonitrila, tolueno, éter dietílico, combinações destes e similares. As temperaturas de reação variam de -10 °C até o ponto de ebulição do solvente usado; os tempos de conclusão da reação variam de 1 a 96 h. Após um intervalo de tempo, o composto 2 é adicionado ao mesmo solvente usado na transformação anterior. As temperaturas de reação variam de -10 °C até o ponto de ebulição do solvente usado; os tempos de conclusão da reação variam de 1 a 96 h. O produto, composto 3, pode ser purificado por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica. Estratégia de preparação glicosídica nº 3: (Acilação) Esquema 3 Composto 1 Composto 2 Composto 3
[00123] Na Etapa do Esquema 3, o composto 1 é tratado com um composto 2, em um solvente apropriado, opcionalmente na presença de um catalisador. Catalisadores adequados incluem piridina, dimetilaminopiridina, trimetilamina e similares. O catalisador pode ser usado em quantidades que variam de 0,01 a 1,1 equivalentes em relação ao composto 2. Solventes adequados incluem cloreto de metileno, acetato de etila, éter dietílico, tetraidrofurano, 1,4-dioxano, 1,2-dimetoxietano, tolueno, combinações destes e similares. As temperaturas de reação variam de -10 °C até o ponto de ebulição do solvente usado; os tempos de conclusão da reação variam de 1 a 96 h. Um agente de acilação adequado também pode ser gerado in situ por uma reação de um ácido carboxílico com um reagente de ativação, tal como EDC, DCC ou EEDQ ou similares. Os agentes de acilação podem ser usados em quantidades que variam de 0,5 a 15 equivalentes em relação ao composto 1. Estratégia de Preparação de Éster #1 (Acilação) Esquema 4 Composto 1 Composto 2 Composto 3
[00124] No Esquema 4, um composto polifenólico, o composto 1, em que n representa um número inteiro de 1 a 15, é tratado com um agente de acilação, o composto 2, em um solvente apropriado, opcionalmente na presença de um catalisador. Catalisadores adequados incluem piridina, dimetilaminopiridina, trimetilamina e similares. O catalisador pode ser usado em quantidades que variam de 0,01 a 1,1 equivalentes em relação ao composto 2. Solventes adequados incluem cloreto de metileno, acetato de etila, éter dietílico, tetraidrofurano, 1,4-dioxano, 1,2-dimetoxietano, tolueno, combinações destes e similares. As temperaturas de reação variam de -10 °C até o ponto de ebulição do solvente usado; os tempos de conclusão da reação variam de 1 a 96 h. Agentes de acilação adequados incluem cloretos de acila, fluoretos de acila, brometos de acila, anidridos de ácido carboxílico, sejam estes simétricos ou não. Um agente de acilação adequado também pode ser gerado in situ pela reação prévia de um ácido carboxílico com um reagente de ativação tal como EDC ou EEDQ ou similares. Os agentes de acilação podem ser usados em quantidades que variam de 0,5 a 15 equivalentes em relação ao composto 1.
[00125] O produto, composto 3, pode ser purificado por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica. Estratégia de Preparação de Éster #2 (Acilação)
[00126] Em alguns casos, o composto polifenólico 1 pode conter um grupo funcional Y, necessário para continuar a não reagir no curso da formação de éster. Neste caso, é apropriado proteger o grupo funcional Y no composto polifenólico da acilação. Esse grupo funcional pode ser um grupo amino ou um grupo hidroxila ou outra função com um hidrogênio lábil ligado a um heteroátomo. Tais ésteres de polifenol podem ser preparados de acordo com o Esquema 5. Esquema 5 Etapa 1 Composto 1 Composto 2 Etapa 2 Composto 2 Composto 3 Composto 4 Etapa 3 Composto 4 Composto 5
[00127] Na Etapa 1 do Esquema 5, o composto 1, um composto polifenólico que contém um grupo funcional Y com um hidrogênio lábil que necessita de proteção, é tratado com um reagente protetor, tal como anidrido de BOC, cloreto de benzioxicarbonila, cloreto de FMOC, brometo de benzila e similares em um solvente adequado, opcionalmente na presença de um catalisador para fornecer o composto 2 do esquema 2. O Composto 2 pode ser purificado por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica.
[00128] Na Etapa 2 do Esquema 5, o composto 2 é tratado com um agente de acilação, o composto 3, em um solvente apropriado, opcionalmente na presença de um catalisador. Catalisadores adequados incluem piridina, dimetilaminopiridina, trimetilamina e similares. O catalisador pode ser usado em quantidades que variam de 0,01 a 1,1 equivalentes em relação ao composto 2. Solventes adequados incluem cloreto de metileno, acetato de etila, éter dietílico, tetraidrofurano, 1,4-dioxano, 1,2-dimetoxietano, tolueno, combinações destes e similares. As temperaturas de reação variam de -10 °C até o ponto de ebulição do solvente usado; os tempos de conclusão da reação variam de 1 a 96 h. Agentes de acilação adequados incluem cloretos de acila, fluoretos de acila, brometos de acila, anidridos de ácido carboxílico, sejam estes simétricos ou não. Um agente de acilação adequado também pode ser gerado in situ pela reação prévia de um ácido carboxílico com um reagente de ativação tal como EDC ou EEDQ ou similares. Os agentes de acilação podem ser usados em quantidades que variam de 0,5 a 15 equivalentes em relação ao composto 3. O Composto 4 pode ser purificado por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica.
[00129] Na Etapa 3 do Esquema 5, o composto 4 é submetido a condições que clivam o grupo protetor, PG.
[00130] No caso de um grupo protetor BOC, o grupo protetor do composto 4 é removido sob condições ácidas para produzir o composto 5 da invenção. Ácidos adequados incluem ácido trifluoroacético, ácido clorídrico, ácido p-toluenossulfônico e similares.
[00131] No caso de um grupo protetor FMOC, o grupo protetor do composto 4 é removido sob condições básicas para produzir o composto 5 da invenção. Bases adequadas incluem piperidina, trietilamina e similares. Solventes adequados incluem DMF, NMP, diclorometano e similares. O grupo FMOC também é removido sob condições não básicas, tais como pelo tratamento com fluoreto de tetrabutilamônio tri-hidratado em um solvente adequado, tal como DMF. O grupo FMOC também é removido por hidrogenação catalítica. Catalisadores adequados para hidrogenação incluem 10% de paládio em carvão e acetato de paládio (II) e similares. Solventes adequados para hidrogenação incluem DMF, etanol e similares
[00132] No caso de um grupo protetor de benziloxicarbonil ou benzila, o grupo protetor do composto 4 é removido por hidrogenação para produzir o composto 5. Catalisadores adequados para hidrogenação incluem 10% de paládio em carvão e acetato de paládio e similares. Solventes adequados para hidrogenação incluem DMF, etanol, metanol, acetato de etila e similares. O produto, composto 5, pode ser purificado por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica. Estratégia de Preparação de Éster nº 3 (Acilação) Esquema 6 Etapa 1 Composto 1 Composto 2 Etapa 2 Composto 2 Composto 3 Etapa 3 Composto 4 Composto 3 Composto 5 Etapa 4 Etapa 6 Composto 5
[00133] Na Etapa 1 do Esquema 6, o composto 1, um composto acil que contém um grupo funcional Y com um hidrogênio lábil que necessita de proteção, é tratado com um reagente protetor, tal como anidrido de BOC, cloreto de benzioxicarbonila, cloreto de FMOC, brometo de benzila e similares em um solvente adequado, opcionalmente na presença de um catalisador para fornecer o composto 2 do esquema 3. O Composto 2 pode ser purificado por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica.
[00134] Na Etapa 2 do Esquema 6, o composto 2 é tratado com um reagente de ativação, tal como cloreto de tionila, oxicloreto de fósforo, EDC ou EEDQ ou similar para gerar o composto acil ativado 3.
[00135] Na Etapa 3 do Esquema 6, o composto de polifenol 4 é tratado com o composto acil ativado 3, em um solvente apropriado, opcionalmente na presença de um catalisador. Catalisadores adequados incluem piridina, dimetilaminopiridina, trimetilamina e similares para gerar o composto 5. O catalisador pode ser usado em quantidades que variam de 0,01 a 1,1 equivalentes em relação ao composto 3. Solventes adequados incluem cloreto de metileno, acetato de etila, éter dietílico, tetraidrofurano, 1,4-dioxano, 1,2-dimetoxietano, tolueno, combinações destes e similares. As temperaturas de reação variam de -10 °C até o ponto de ebulição do solvente usado; os tempos de conclusão da reação variam de 1 a 96 h. O composto acil ativado 3 pode ser usado em quantidades que variam de 0,5 a 15 equivalentes em relação ao composto 4.
[00136] Na Etapa 4 do Esquema 6, o composto 5 é submetido a condições projetadas para clivar o grupo protetor, PG, ilustrado no Esquema 2 acima. O produto, composto 6, pode ser purificado por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica. Estratégia de Preparação de Éster #4 (Acilação) Esquema 7
Composto 1 Composto 2 Composto 3
[00137] Na Etapa 1 do Esquema 7, um composto poliol, o composto 1, em que R representa uma porção cíclica ou acíclica não aromática e n representa um número inteiro de 1 a 15, é tratado com um agente de acilação, o composto 2, em um solvente apropriado, opcionalmente na presença de um catalisador. Catalisadores adequados incluem piridina, dimetilaminopiridina, trimetilamina e similares. O catalisador pode ser usado em quantidades que variam de 0,01 a 1,1 equivalentes em relação ao composto 2. Solventes adequados incluem cloreto de metileno, acetato de etila, éter dietílico, tetraidrofurano, 1,4-dioxano, 1,2-dimetoxietano, tolueno, combinações destes e similares. As temperaturas de reação variam de -10 °C até o ponto de ebulição do solvente usado; os tempos de conclusão da reação variam de 1 a 96 h. Agentes de acilação adequados incluem cloretos de acila, fluoretos de acila, brometos de acila, anidridos de ácido carboxílico, sejam estes simétricos ou não. Um agente de acilação adequado também pode ser gerado in situ pela reação prévia de um ácido carboxílico com um reagente de ativação tal como EDC ou EEDQ ou similares. Os agentes de acilação podem ser usados em quantidades que variam de 0,5 a 15 equivalentes em relação ao composto 1. O produto, composto 3, pode ser purificado por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica. Estratégia de Preparação de Éster #5 (Oxidação de Baeyer-Villiger) Esquema 8 Composto 1 peróxido ou Composto 2 perácido
[00138] Na Etapa 1 do Esquema 8, um composto de cetona, o composto 1, em que R e R1 representam frações cíclicas ou acíclicas não aromáticas, é tratado com um peróxido ou agente peroxiácido, tal como ácido metacloroperbenzoico, ácido perfórmico, ácido peracético, peróxido de hidrogênio, hidroperóxido de terc-butila e similares em um solvente apropriado, opcionalmente na presença de um catalisador. Solventes adequados incluem cloreto de metileno, éter dietílico, combinações destes e similares. Catalisadores adequados incluem BF3, ácidos carboxílicos e similares. As temperaturas de reação variam de - 10 °C até o ponto de ebulição do solvente usado; os tempos de conclusão da reação variam de 1 a 96 h. O produto, o composto 2, pode ser purificado por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica.
[00139] Os grupos R e R1 do composto 1 no Esquema 5 podem opcionalmente incluir funcionalidade de cetona adicional que pode ser submetida a reação. Além disso, os grupos R e R1 do composto 1 podem formar um anel. Estratégia de Preparação de Éster #6 (Reação de Mitsunobu) Esquema 9 Composto 1 Composto 2 Composto 3
[00140] Na Etapa 1 do Esquema 9, uma mistura de um composto de álcool, o composto 1, em que R representa uma porção cíclica ou acíclica não aromática, e um ácido carboxílico, o composto 2, em que R1 representa um grupo alcanoil opcionalmente substituído por um ou mais grupos hidroxila protegidos, ou oxo é tratado com trifenilfosfina e um composto diazo, tal como dietilazodicarboxilato (DEAD) e similares em um solvente apropriado. Solventes adequados incluem cloreto de metileno, THF, acetonitrila, tolueno, éter dietílico, combinações destes e similares. As temperaturas de reação variam de -10 °C até o ponto de ebulição do solvente usado; os tempos de conclusão da reação variam de 1 a 96 h. O produto, composto 3, pode ser purificado por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica.
[00141] Quando o composto 3 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos álcool protegidos, a desproteção é realizada pelos métodos ilustrados no Esquema 2 acima. Estratégia de preparação de éster nº 7 (Alquilação Nucleofílica) Esquema 10 Composto 1 Composto 3 Composto 2
[00142] Na Etapa 1 do Esquema 10, um composto de cloroformiato, o composto 1, em que R representa uma porção aromática ou uma porção cíclica ou acíclica não aromática é tratado, em um solvente apropriado, com um composto organometálico, o composto 2, em que R1 representa um grupo alquila opcionalmente substituído por um ou mais grupos hidroxila protegidos e X representa um metal, tal como Cu, Zn, Mg, que é opcionalmente coordenado por um ou mais contraíons, tais como cloreto. Solventes adequados incluem cloreto de metileno, THF, acetonitrila, tolueno, éter dietílico, combinações destes e similares. As temperaturas de reação variam de -10 °C até o ponto de ebulição do solvente usado; os tempos de conclusão da reação variam de 1 a 96h.
[00143] O produto, composto 3, pode ser purificado por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica.
[00144] O Composto 1 pode ser preparado a partir de compostos de álcool ou poliol correspondentes por métodos padrão conhecidos para uma pessoa versada na técnica.
[00145] Quando o composto 2 é opcionalmente substituído por um ou mais grupos álcool protegidos, a desproteção é realizada pelos métodos ilustrados no Esquema 2 acima.
[00146] Modificações adicionais do produto inicial por métodos conhecidos na técnica e ilustradas nos exemplos abaixo podem ser usadas para preparar compostos adicionais desta invenção. Estratégia de Preparação de Éster nº 8 (Acilação)
Esquema 11 Etapa 1 Composto 1 Composto 2 Etapa 2 Composto 2 Composto 3 Etapa 3 Composto 3 Composto 4 Etapa 4 Composto 4 Composto 5 Etapa 5 Composto 6 Composto 5 Composto 7
[00147] Na Etapa 1 do Esquema 11, o composto 1, um composto acil que contém um grupo hidroxila a ser acilado é tratado com um reagente protetor, tal como brometo de benzila e similares, em um solvente apropriado, opcionalmente na presença de um catalisador para fornecer o esquema 8 do composto 2. O Composto 2 pode ser purificado por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica.
[00148] Na Etapa 2 do Esquema 11, o composto 2 é tratado com um agente de acilação em um solvente apropriado, opcionalmente na presença de um catalisador. Catalisadores adequados incluem piridina, dimetilaminopiridina, trimetilamina e similares. O catalisador pode ser usado em quantidades que variam de 0,01 a 1,1 equivalentes em relação ao composto 2. Solventes adequados incluem cloreto de metileno, acetato de etila, éter dietílico, tetraidrofurano, 1,4-dioxano, 1,2-dimetoxietano, tolueno, combinações destes e similares. As temperaturas de reação variam de -10 °C até o ponto de ebulição do solvente usado; os tempos de conclusão da reação variam de 1 a 96 h.
Agentes de acilação adequados incluem cloretos de acila, fluoretos de acila, brometos de acila, anidridos de ácido carboxílico, sejam estes simétricos ou não. Um agente de acilação adequado também pode ser gerado in situ por uma reação de um ácido carboxílico com um reagente de ativação, tal como EDC ou EEDQ ou similares. Os agentes de acilação podem ser usados em quantidades que variam de 0,5 a 15 equivalentes em relação ao composto 1.
[00149] Na Etapa 3 do Esquema 11, o composto 3 é submetido a condições que clivam o grupo protetor, PG. No caso de um grupo protetor de benzila, o grupo protetor do composto 3 é removido por hidrogenação para produzir o composto 4. Catalisadores adequados para hidrogenação incluem 10% de paládio em carvão e acetato de paládio e similares. Solventes adequados para hidrogenação incluem DMF, etanol, metanol, acetato de etila e similares. O produto, composto 4, pode ser purificado por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica.
[00150] Na Etapa 4 do Esquema 11, o composto 4 é tratado com um reagente de ativação, tal como cloreto de tionila, oxicloreto de fósforo, EDC ou EEDQ ou similar para gerar o composto acila ativado 5.
[00151] Na Etapa 5 do Esquema 11, o composto de poli-hidroxila, o composto 6, em que R representa um núcleo aromático ou alifático cíclico ou acíclico, é tratado com o composto acil ativado 5 em um solvente apropriado, opcionalmente na presença de um catalisador. Catalisadores adequados incluem piridina, dimetilaminopiridina, trimetilamina e similares para gerar o composto 5. O catalisador pode ser usado em quantidades que variam de 0,01 a 1,1 equivalentes em relação ao composto 3. Solventes adequados incluem cloreto de metileno, acetato de etila, éter dietílico, tetraidrofurano, 1,4-dioxano, 1,2-dimetoxietano, tolueno, combinações destes e similares. As temperaturas de reação variam de -10 °C até o ponto de ebulição do solvente usado; os tempos de conclusão da reação variam de 1 a 96 h. O composto acil ativado 5 pode ser usado em quantidades que variam de 0,5 a 15 equivalentes em relação ao composto 6.
[00152] O produto composto 7 pode ser purificado por métodos conhecidos na técnica.
[00153] Os exemplos a seguir destinam-se a ilustrar a invenção. Estes não se destinam a limitar a invenção de nenhuma forma.
EXEMPLOS Exemplo 1: Preparação de Conjugados Exemplificativos da Invenção Composto 1: ((2S,3S,4R,5R,6S)-6-metil-3,4,5-tris(propionilóxi)tetra- hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila
[00154] A uma mistura de [(2S,3R,4R,5S)-6-hidróxi-2-metil-4,5- di(propanoilóxi)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (0,5 g, 1,50 mmol, 1 equiv.) e ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (234,87 mg, 1,81 mmol, 1,2 equiv.) em THF (5 mL) foi adicionado DCC (620,82 mg, 3,01 mmol, 2 equiv.) e DMAP (91,90 mg, 752,23 μmol, 0,5 equiv.) em uma porção a 20°C sob N2. A mistura foi agitada a 20°C por 12h. LC-MS mostrou que [(2S,3R,4R,5S)-6-hidróxi-2-metil-4,5-di(propanoilóxi)tetra- hidropiran-3-il] propanoato foi consumido completamente e um pico principal com m/z desejado foi detectado. A mistura de reação foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (água + 0,04% (v/v) HCl/MeOH), e
((2S,3S,4R,5R,6S)-6-metil-3,4,5-tris(propionilóxi)tetra-hidro-2H-piran-2- ila) fumarato de metila (0,1 g, 222,76 μmol, 14,81% de rendimento, 99% de pureza) foi obtido como um óleo incolor. LCMS: (M+Na)+: 467,1. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 6,9 (s, 2H), 6,4 (s, 1H), 5,3 (m, 3H), 4,3 (m, 1H), 3,8 (s, 3H), 2,5 (m, 2H), 2,2 (m, 4H), 1,2 (m, 6H) 1,0 (m, 6H) ppm.
Composto 2: ((2S,3R,4R,5S,6S)-6-metil-3,4,5-tris(propionilóxi)tetra- hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila
[00155] A uma solução de dipropionato de (2S,3S,4R,5R,6R)-5- acetóxi-6-hidróxi-2-metiltetra-hidro-2H-piran-3,4-di-ila (500 mg, 1,50 mmol, 1 equiv.), DCC (464,24 mg, 2,25 mmol, 455,14 μL, 1,5 equiv.) e DMAP (54,98 mg, 450,00 μmol, 0,3 equiv.) em THF (10 mL) foi adicionado (E)-4-ácido metóxi-4-oxo-but-2-enoico (292,72 mg, 2,25 mmol, 1,5 equiv.) e a mistura foi agitada a 25 °C por 12h. LCMS mostrou que o reagente inicial foi consumido. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por prep- HPLC (coluna: Waters Xbridge Prep OBD C18 150x40 10μ; fase móvel: água + 10 mM de NH4HCO3/ACN; B%: 40%-55%, 11 minutos) para gerar o composto do título (água + 10 mM NH4HCO3/ACN)(50 mg, 106,88 μmol, 7,13% de rendimento, 95% de pureza) como óleo incolor. 1 H RMN (CDCl3, 400 MHz): δ 6,9 (m, 2H), 6,1 (s, 1H) 5,3 (m, 2H), 5,1 (m, 1H), 3,9 (m, 1H), 3,8 (s, 3H), 2,4 (m, 6 H),1,5 (m, 3H), 1,3 (m, 3H), 1,1 (m, 3H), 1,0 (m, 3H) ppm LCMS:(M+Na)+ 467,1.
Composto 3: ((2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(propionilóxi)-6- ((propionilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila
[00156] A uma mistura de tripropionato de (2R,3R,4S,5R,6R)-2- hidróxi-6-((propionilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-3,4,5-tri-ila (0,5 g, 1,24 mmol, 1 equiv.) e ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (193,02 mg, 1,48 mmol, 1,2 equiv.) em THF (5 mL) foi adicionado DCC (510,20 mg, 2,47 mmol, 2 equiv.) e DMAP (75,52 mg, 618,19 μmol, 0,5 equiv.) em uma porção a 20 °C em N2. A mistura foi agitada a 20 °C por 12 horas. LC-MS mostrou que o material inicial foi consumido completamente e um pico principal com m/z desejado foi detectado. A mistura de reação foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (água + 10mM de NH4HCO3/ACN). Em seguida, o resíduo foi separado por SFC (H2O, 1% (v/v) NH3, EtOH) para gerar o composto do título (0,006 g, 10,46 μmol, 11,74% de rendimento, 90% de pureza) e seu anômero (0,012 g, 21,84 μmol, 24,52% de rendimento, 94% de pureza) como óleo incolor. 1 H RMN (CDCl3, 400 MHz): δ 7,0 (m, 2H), 6,6 (d, 1H), 5,5 (dd 1H), 5,1 (m, 2H), 3,8 (s, 3H), 2,3 (m, 9H), 1,1 (m, 12H)ppm LCMS:(M+Na)+ 539,1.
[00157] O Composto 3-d12 foi sintetizado de uma maneira semelhante à descrita neste documento, com exceção de que o ácido d3-propiônico foi usado em combinação com as condições de acoplamento de EDCl.
Composto 4: ((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(propionilóxi)-6- ((propionilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila
[00158] A uma mistura de tripropionato de (2S,3R,4S,5R,6R)-2- hidróxi-6-((propionilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-3,4,5-tri-ila (0,5 g, 1,24 mmol, 1 equiv.) e ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (193,02 mg, 1,48 mmol, 1,2 equiv.) em THF (5 mL) foi adicionado DCC (510,20 mg, 2,47 mmol, 2 equiv.) e DMAP (75,52 mg, 618,19 μmol, 0,5 equiv.) em uma porção a 20 °C em N2. A mistura foi agitada a 20 °C por 12 horas. LC-MS mostrou que o material inicial foi consumido completamente e um pico principal com m/z desejado foi detectado. A mistura de reação foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (água + 10mM de NH4HCO3/ACN). Em seguida, o resíduo foi separado por SFC (H2O, 0,1% (v/v) NH3, EtOH) para gerar o composto do título (0,006 g, 11,74% de rendimento) e seu anômero (0,012 g, 24,52%) como óleo incolor. LCMS: (M+18)+: 534,1. 1H RMN (CDCl3, 400 MHz): δ 7,0 (s, 2H), 6,4 (s, 1H), 5,3 (t, 1H), 5,5 (m, 2H), 4,1 (dd, 3H), 3,8 (s, 3H), 2,3 (m, 9H), 1,0 (m, 12 H) ppm.
Composto 5: ((2S,3R,4S,5S)-3,4,5-tris(propionilóxi)tetra-hidro-2H-piran- 2-ila) fumarato de metila
[00159] Este composto foi sintetizado da mesma maneira que o composto 2. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 7,07 – 6,73 (m, 1H), 5,78 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 5,39 – 5,27 (m, 1H), 5,20 (dd, J = 8,4, 3,5 Hz, 1H), 4,06 (dd, J = 12,8, 4,5 Hz, 1H), 3,82 (s, 3H), 2,56 – 2,19 (m, 6H), 1,28 – 0,97 (m, 9H) ppm. LCMS: (M+Na)+: 453,1.
Composto 6: ((2S,3R,4R,5R)-3,4,5-tris(propionilóxi)tetra-hidro-2H- piran-2-ila) fumarato de metila
[00160] A uma solução de (2R,3R,4R)-2,3,4,5-tetra-hidroxipentanal (5 g, 33,30 mmol, 1 equiv.) em piridina (50 mL) foi adicionado propanoato de propanoíla (26,01 g, 199,83 mmol, 25,75 mL, 6 equiv.) a 25°C. A mistura foi agitada a 25°C por 16h. O TLC indicou a formação de novas manchas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 20/1 a
10/1) para obter [(3R,4R,5R)-4,5,6-tri(propanoilóxi)tetra-hidropiran-3- il]propanoato (9 g, 24,04 mmol, 72,18% de rendimento, 100% de pureza) como um óleo incolor. A uma solução de [(3R,4R,5R)-4,5,6- tri(propanoilóxi)tetra-hidropiran-3-il]propanoato (8,95 g, 23,91 mmol, 1 equiv.) em THF (100 mL) foi adicionado MeNH2 (2,78 g, 35,86 mmol, 40% de pureza em H2O, 1,5 equiv.) a 25°C. A mistura foi agitada a 25°C por 16h. TLC indicou que novas manchas foram formadas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila=10/1 a 1/1) para obter [(3R,4R,5R)-6- hidróxi-4,5-di(propanoilóxi)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (3 g, 8,01 mmol, 33,51% de rendimento, 85% de pureza) como um óleo amarelo. A uma solução de [(3R,4R,5R)-6-hidróxi-4,5-di(propanoilóxi)tetra- hidropiran-3-il] propanoato (300 mg, 942,45 μmol, 1 equiv.) em DCM (5 mL) foi adicionado DCC (291,68 mg, 1,41 mmol, 285,96 μL, 1,5 equiv.), DMAP (57,57 mg, 471,23 μmol, 0,5 equiv.) e ácido (E)-4-metóxi-4-oxo- but-2-enoico (183,92 mg, 1,41 mmol, 1,5 equiv.) a 25 °C. A mistura foi agitada a 25 °C por 5h. LCMS mostrou que o composto desejado foi detectado. A mistura de reação foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (coluna: Luna C18 100 x30 5 µm; fase móvel: água + 0,05% (v/v) HCl/ACN; B%: 40%-65%, 11 minutos) para dar o composto desejado (200 mg) como um sólido branco, que foi adicionalmente separado por SFC (coluna: DAICEL CHIRALPAK IC 250mm x 30mm, 5 µm; fase móvel: 0,1% NH3,H2O, IPA; B%: 25%-25%, 5,1 minutos)(104 mg, 217,47 μmol, 23,08% de rendimento).LCMS: (M+18)+ & (M+Na)+ 448,1 & 453. 1 H RMN (CDCl3, 400 MHz): 6,8 (dd, 2H), 6,1 (d, 1H), 5,5 (m, 1H), 5,1 (m, 2H), 4,0 (dd, 2H), 3,8 (s, 3H), 2,3 (m, 6H), 1,1 (t, 9 H) ppm.
[00161] O Composto 6-d9 foi sintetizado de uma maneira similar à descrita neste documento, com exceção de que o ácido d3-propiônico foi usado em combinação com as condições de acoplamento de EDCl.
Composto 7: ((2S,3R,4S,5R)-3,4,5-tris(butirilóxi)tetra-hidro-2H-piran-2- ila) fumarato de metila Preparação 1 ((2S,3R,4S,5R)-3,4,5-tris(butirilóxi)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila
[00162] A uma solução de (3R,4S,5R)-tetra-hidropiran-2,3,4,5-tetrol (10,00 g, 66,61 mmol, 1 equiv.) em piridina (100 mL) foi adicionado anidrido butírico (84,30 g, 532,87 mmol, 87,17 mL, 8 equiv.). A mistura foi agitada a 15°C por 12 h. A TLC indicou que (3R,4S,5R)-tetra- hidropiran-2,3,4,5-tetrol foi consumido completamente. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 30/1 a 3:1). [(3R,4S,5R)-4,5,6- tri(butanoilóxi)tetra-hidropiran-3-il] butanoato (22 g, bruto) foi obtido como um líquido incolor. A uma solução de [(3R,4S,5R)-4,5,6- tri(butanoilóxi)tetra-hidropiran-3-il] butanoato (22 g, 51,10 mmol, 1 equiv.) em THF (150 mL) foi adicionado MeNH2/H2O (7,14 g, 91,99 mmol, 40% de pureza, 1,8 equiv.). A mistura foi agitada a 15°C por 12 h. LCMS mostrou que o composto desejado foi detectado. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 30/1 a 3:1). O composto [(3R,4S,5R)-4,5-
di(butanoilóxi)-6-hidróxi-tetra-hidropiran-3-il] butanoato (8 g, bruto) foi obtido como óleo incolor. A uma solução de [(3R,4S,5R)-4,5- di(butanoilóxi)-6-hidróxi-tetra-hidropiran-3-il] butanoato (4 g, 11,10 mmol, 1 equiv.), DCC (3,43 g, 16,65 mmol, 1,5 equiv.) e DMAP (406,78 mg, 3,33 mmol, 0,3 equiv.) em THF (50 mL) foi adicionado ácido (E)-4- metóxi-4-oxo-but-2-enoico (2,17 g, 16,65 mmol, 1,5 equiv.). A mistura foi agitada a 15 °C por 12 h. LCMS mostrou que o composto desejado foi detectado. A mistura de reação foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (água + 0,05% (v/v) HCl/ACN) para obter 2 g do racemato como um óleo preto, que foi separado adicionalmente por SFC (0,1%NH3, H2O IPA). ((2S,3R,4S,5R)-3,4,5-tris(butirilóxi)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila, 220 mg, 460,97 μmol, 21,78% de rendimento, 99% de pureza) foi obtido como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, metanol-d4): δ 6,85 – 6,64 (m, 2H), 5,78 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 5,23 (t, J = 8,3 Hz, 1H), 5,05 – 4,84 (m, 2H), 4,05 (dd, J = 11,9, 5,0 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,55 (dd, J = 12,0, 8,5 Hz, 1H), 2,19 (dtt, J = 9,4, 5,1, 2,3 Hz, 6H), 1,61 – 1,39 (m, 6H), 0,91 – 0,66 (m, 9H) ppm. LCMS: (M+Na)+: 495,2. Preparação 2
[00163] A uma solução de tributirato de (2R,3R,4S,5R)-2- hidroxitetra-hidro-2H-piran-3,4,5-tri-ila (500 mg, 1,39 mmol, 1 equiv.), DCC (429,38 mg, 2,08 mmol, 420,96 μL, 1,5 equiv.) e DMAP (50,85 mg, 416,21 μmol, 0,3 equiv.) em THF (10 mL) foi adicionado ácido (E)-4- metóxi-4-oxo-but-2-enoico (270,74 mg, 2,08 mmol, 1,5 equiv.) e a mistura foi agitada a 25 °C por 12h. LCMS mostrou que o reagente inicial foi consumido. A mistura de reação foi concentrada. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (água + 10 mM de NH4HCO3/ACN) para gerar o composto do título (104 mg, 18% de rendimento). 1H RMN (CDCl3, 400 MHz): δ 6,8 (m, 2H), 5,8 (m,1H), 5,3 (m, 3H), 4,0 (dd 2H), 3,7 (s, 3H), 2,2 (m, 6H), 1,6 (m, 6H), 0,9 (m, 9H) ppm. LCMS: (M+Na)+ 495,1.
Composto 8: ((2R,3R,4S,5R)-3,4,5-tris(butirilóxi)tetra-hidro-2H-piran-2- ila) fumarato de metila
[00164] A uma solução de tributirato de (2S,3R,4S,5R)-2-hidroxitetra- hidro-2H-piran-3,4,5-tri-ila (500 mg, 1,39 mmol, 1 equiv.), DCC (429,38 mg, 2,08 mmol, 420,96 μL, 1,5 equiv.) e DMAP (50,85 mg, 416,21 μmol, 0,3 equiv.) em THF (10 mL) foi adicionado ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but- 2-enoico (270,74 mg, 2,08 mmol, 1,5 equiv.) e a mistura foi agitada a 25 °C por 12 h. LCMS mostrou que o reagente inicial foi consumido. A mistura de reação foi concentrada. O resíduo foi purificado por prep- HPLC (água + 10mM de NH4HCO3)/ACN). O composto do título (206 mg, 414,20 μmol, 31% de rendimento, 95% de pureza) foi obtido como óleo incolor. LCMS: (M+Na)+: 495,1 1H RMN (d4-metanol, 400 MHz): δ 6,9 (d, 2H), 6,4 (d, 1H), 5,3 (m, 3 H), 4,2 (m, 1H), 3,8 (m, 4H), 2,4 (t, 3H), 2,2 (t, 3H), 1,6 m, 6H), 0,91 (m, 9H) ppm.
Composto 9: ((2R,3R,4R,5R)-3,4,5-tris(propionilóxi)tetra-hidro-2H-
piran-2-ila) fumarato de metila
[00165] O Composto 9 foi sintetizado da mesma maneira que o composto 8. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 7,09 – 6,79 (m, 1H), 6,26 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 5,69 (t, J = 3,3 Hz, 1H), 5,34 – 5,00 (m, 1H), 4,05 (t, J = 10,7 Hz, 1H), 3,87 (s, 2H), 3,83 – 3,73 (m, 1H), 2,61 – 2,11 (m, 6H), 1,31 – 1,02 (m, 9H) ppm. LCMS: (M+Na)+: 453,1.
Composto 10: ((2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(butirilóxi)-6- ((butirilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila
[00166] D-(+)-glicose foi dissolvido a 0,5M em uma mistura de diclorometano e piridina (50% de mistura) e anidrido butírico (7 equiv.) foi adicionado à solução a 0°C. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 8 horas. A mistura foi neutralizada com 1M de HCl e purificada por cromatografia flash em coluna. O óleo resultante foi dissolvido em 0,1 M de THF seco e tratado com 1,5 eq de metil amina em THF. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas, concentrada in vacuo e purificada por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila-n-hexano (50/50) como eluente. O óleo de visco resultante foi dissolvido em tetra-hidrofurano seco (THF) e, em seguida, ácido diciclo-hexilcarbodi-imida (DCC) (1,2 equiv.) e ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (1,5 equiv.) foi adicionado à solução a 0°C. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas. A mistura resultante foi filtrada e concentrada in vacuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila-n-hexano (30/70) como eluente para gerar o composto do título como um sólido ceroso. 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,01 – 6,68 (m, 2H), 5,79 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 5,40 – 5,12 (m, 3H), 4,25 (dd, J = 12,5, 4,7 Hz, 1H), 4,13 (dd, J = 12,6, 2,2 Hz, 1H), 3,91 – 3,85 (m, 1H), 3,81 (s, 3H), 2,40 – 2,15 (m, 8H), 1,74 – 1,48 (m, 8H), 0,90 (ddt, J = 17,5, 10,1, 7,4 Hz, 12H) ppm.
Composto 11: ((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(butirilóxi)-6- ((butirilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila
[00167] A uma mistura de tributilato de (2R,3R,4S,5R,6S)-2- ((butirilóxi)metila)-6-hidroxitetra-hidro-2H-piran-3,4,5-tri-ila (1 g, 2,17 mmol, 1 equiv.) e ácido (E)-4-metóxi-4-but-2-enoico (339,01 mg, 2,61 mmol, 1,2 equiv.) em THF (20 mL) foi adicionado DCC (896,07 mg, 4,34 mmol, 2 equiv.) e DMAP (132,64 mg, 1,09 mmol, 0,5 equiv.) em uma porção a 20°C em N2. A mistura foi agitada a 20°C por 12 h. LCMS mostrou que o reagente inicial foi consumido completamente. A mistura de reação foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (água + 0,1% (v/v) TFA/ACN) para obter 100 mg como um sólido branco, que foi separado ainda por SFC (0,1% NH3, H2O, MeOH; B%: 20%-20%, 5 min). O composto do título (0,030 g, 50,82 μmol, 2,34% de rendimento, 97% de pureza) foi obtido como óleo incolor. LCMS: (M+Na)+: 595.1H RMN (CDCl3, 400 MHz): 6.9 (m, 2H), 6,4 (s, 1H), 5,5 (m, 1H), 5,1 (m, 2H), 4,1 (m, 3H), 3,8, (s, 3H), 2,2 (m, 8H), 1,5 (m, 8 H), 0,93 (m, 12 H) ppm.
Composto 12: ((2R,3R,4S,5S)-3,4,5-tris(butirilóxi)tetra-hidro-2H-piran- 2-ila) fumarato de metila
[00168] A uma solução de (2S,3R,4S,5S)-tetra-hidro-2H-piran- 2,3,4,5-tetraol (3 g, 19,98 mmol, 1 equiv.) in piridina (30 mL) foi adicionado butanoato de butanoíla (25,29 g, 159,86 mmol, 26,15 mL, 8 equiv.) a 25°C. A mistura foi agitada a 25°C por 12 horas. LCMS mostrou que o composto desejado foi detectado. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1 a 3:1). O composto tetrabutirato de (2R,3R,4S,5S)-tetra- hidro-2H-piran-2,3,4,5-tetraíla (8 g, 18,58 mmol, 93,00% de rendimento) foi obtido como óleo incolor.
[00169] A uma solução de tetrabutirato de (2R,3R,4S,5S)-tetra-hidro- 2H-piran-2,3,4,5-tetraíla (8 g, 18,58 mmol, 1 equiv.) em THF (100 mL) foi adicionado MeNH2 aq. (2,74 g, 35,31 mmol, 40% de pureza, 1,9 equiv.) a 25 °C. A mistura foi agitada a 25 °C por 12 horas. TLC indicou que uma nova mancha foi formada. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1 a 1:1). O produto bruto tributirato de (2S,3R,4S,5S)-2-hidroxitetra- hidro-2H-piran-3,4,5-tri-ila (4 g, 9,43 mmol, 50,77% de rendimento, 85% de pureza) foi obtido como um óleo amarelo.
[00170] A uma solução de tributirato de (2S,3R,4S,5S)-2-hidroxitetra- hidro-2H-piran-3,4,5-tri-ila (600 mg, 1,66 mmol, 1 equiv.) em DCM (5 mL) foi adicionado ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (324,89 mg, 2,50 mmol, 1,5 equiv.), DCC (515,25 mg, 2,50 mmol, 505,15 μL, 1.5 equiv.) e DMAP (101,70 mg, 832,41 μmol, 0,5 equiv.) a 25°C. A mistura foi agitada a 25°C por 12 horas. LCMS mostrou que o composto desejado foi detectado. A mistura de reação foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (coluna: Waters Xbridge Prep OBD C18 150x40 10 μm; fase móvel: (água + 10mM de NH4HCO3/ACN); B%: 45%-70%, 11 min) para obter um resíduo. O resíduo foi purificado ainda por prep-HPLC (coluna: Xtimate C18 150x25mm 5um; fase móvel: (água + 10mM de NH4HCO3/ACN); B%: 50%-80%, 10 min). E então o produto foi separado por SFC (coluna: DAICEL CHIRALCEL OD-H 250mm x 30mm 5um; fase móvel: 0,1% NH3, H2O, MeOH; B%: 20%-20%, 1,5 min) para obter o composto do título (26 mg, 55,03 μmol, 21,67% de rendimento) como um óleo amarelo. LCMS: (M+18)+ 490,2. 1H RMN (d4-metanol, 400 MHz): δ 7,0 (m, 1H), 6,4 (m, 1H), 5,3 (m, 3 H), 4,2 (m, 1H), 3,8 (m, 3H), 2,4 (m, 6H), 1,5 (m, 6H), 0,9 (m, 9H) ppm.
Composto 13: ((2S,3S,4R,5R,6S)-3,4,5-tris(butirilóxi)-6-metiltetra-hidro- 2H-piran-2-ila) fumarato de metila
[00171] A uma solução de (2R,3S,4R,5S,6S)-6-metiltetra-hidro-2H-
piran-2,3,4,5-tetraol (3,00 g, 18,28 mmol, 1 equiv.) em piridina (30 mL) foi adicionado butanoato de butanoíla (17,35 g, 109,68 mmol, 17,94 mL, 6 equiv.) a 25°C. A mistura foi agitada a 25°C por 12 horas. LCMS mostrou que o composto desejado foi detectado. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. A mistura de reação foi diluída com H2O (30 mL) e extraído com 60 mL de acetato de etila (20 mL × 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 20 mL de salmoura, secas com sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para obter um resíduo. O composto tetrabutirato de (2S,3S,4R,5R,6S)-6-metiltetra-hidro-2H-pyran-2,3,4,5- tetraíla (8 g, bruto) foi obtido como um óleo incolor.
[00172] A uma solução de tetrabutirato de (2S,3S,4R,5R,6S)-6- metiltetra-hidro-2H-piran-2,3,4,5-tetraíla (8 g, 18,00 mmol, 1 equiv.) em THF (100 mL) foi adicionado MeNH2 aq. (2,66 g, 34,19 mmol, 40% de pureza, 1,9 equiv.) a 25 °C. A mistura foi agitada a 25 °C por 12 horas. TLC indicou que uma nova mancha foi formada. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1). O composto tributirato de (2R,3S,4R,5R,6S)-2-hidróxi- 6-metiltetra-hidro-2H-piran-3,4,5-tri-ila (5 g, bruto) foi obtido como óleo amarelo.
[00173] A uma solução de tributirato de (2R,3S,4R,5R,6S)-2-hidróxi- 6-metiltetra-hidro-2H-piran-3,4,5-tri-ila (500,00 mg, 1,34 mmol, 1 equiv.) em DCM (5 mL) foi adicionado DCC (413,29 mg, 2,00 mmol, 405,18 μL, 1,5 equiv.), DMAP (81,57 mg, 667,69 μmol, 0,5 equiv.) e ácido (E)-4- metóxi-4-oxo-but-2-enoico (260,60 mg, 2,00 mmol, 1,5 equiv.) a 25 °C. A mistura foi agitada a 25 °C por 12 horas. LCMS mostrou que o composto desejado foi detectado. A mistura de reação foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (coluna: Xtimate C18 150x25mm 5 μm; fase móvel: água + 10mM de NH4HCO3/ACN; B%: 65%-80%, 10 min) para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por SFC (coluna: DAICEL CHIRALPAK AD-H 250mm x 30mm, 5 μm); fase móvel: 0,1% NH3, H2O, IPA; B%: 15%-15%, 2 min) para obter o resíduo (62 mg, 121,95 μmol, 29,66% de rendimento, 95,69% de pureza) como um sólido amarelo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (coluna: HUAPU C8 Extreme BDS 150 x 30 5 μm;fase móvel: água + 10mM de NH4HCO3/ACN; B%: 55%- 75%, 10 min). O composto do título (23 mg, 45,24 μmol, 35,50% de rendimento, 95,69% de pureza) foi obtido como um óleo incolor. 1H RMN (CDCl3, 400 MHz): δ 6,9 (s, 2H), 6,4 (m, 1H), 5,4 (m, 3H), 4,3 (m, 1H), 3,8 (s, 3H), 2,4 (m, 2H), 2,2 (m, 4H), 1,7 (m, 2H), 1,5 (m, 8H), 1,0 (d, 3H), 0,9 (m, 9H) ppm. LCMS: (M+18)+ 504,3.
Composto 14: ((2R,3R,4R,5S,6S)-3,4,5-tris(butirilóxi)-6-metiltetra-hidro- 2H-piran-2-ila) fumarato de metila
[00174] A uma solução de (2S,3R,4R,5R,6S)-6-metiltetra-hidro-2H- piran-2,3,4,5-tetraol (1 g, 6,09 mmol, 1 equiv.) em piridina (10 mL) foi adicionado butanoato de butanoíla (5,78 g, 36,55 mmol, 5,98 mL, 6 equiv.) a 25 °C. A mistura foi agitada a 25 °C por 12 horas. As manchas em um cromatograma de camada fina (TLC) indicaram a formação de um novo composto. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. A mistura de reação foi diluída com solução de bicarbonato de sódio saturado (40 mL) e extraída com acetato de etila (40 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (20 mL), secas com sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para obter um resíduo. Tetrabutirato de (2R,3R,4R,5S,6S)-6-metiltetra-hidro-2H-piran-2,3,4,5- tetraíla (3,5 g, bruto) foi obtido como um óleo amarelo.
[00175] A uma solução de tetrabutirato de (2R,3R,4R,5S,6S)-6- metiltetra-hidro-2H-piran-2,3,4,5-tetraíla (3,5 g, 7,87 mmol, 1 equiv.) em THF (20 mL) foi adicionado MeNH2 aq. (1,10 g, 14,17 mmol, 40% de pureza, 1,8 equiv.) a 25 °C. A mistura foi agitada a 25 °C por 12 horas. As manchas em um cromatograma de camada fina (TLC) indicaram a formação de um novo composto. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1 a 1/1). O composto tributirato de (2S,3R,4R,5S,6S)-2-hidróxi-6- metiltetra-hidro-2H-piran-3,4,5-tri-ila (1,8 g, 4,81 mmol, 61,06% de rendimento) foi obtido como óleo amarelo.
[00176] A uma solução de tributirato de (2S,3R,4R,5S,6S)-2-hidróxi- 6-metiltetra-hidro-2H-piran-3,4,5-tri-ila (600 mg, 1,60 mmol, 1 equiv.) em DCM (10 mL) foi adicionado DCC (495,95 mg, 2,40 mmol, 486,23 μL, 1,5 equiv.), DMAP (97,89 mg, 801,23 μmol, 0,5 equiv.) e ácido (E)-4- metóxi-4-oxo-but-2-enoico (312,72 mg, 2,40 mmol, 1,5 equiv.) a 25 /C. A mistura foi agitada a 25 °C por 5 horas. LCMS mostrou que o composto desejado foi detectado. A mistura de reação foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para gerar um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (coluna: Waters Xbridge Prep OBD C18 150 x 40 10 μm;fase móvel: água + 10mM de NH4HCO3/ACN;B%: 50%- 75%,11 min) para fornecer o composto do título (70 mg, bruto) como um sólido amarelo, que foi purificado adicionalmente por prep-TLC (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 3:1) para obter o composto do título purificado (25 mg, 47,79 μmol, 33,21% de rendimento, 93% de pureza)
como um óleo incolor.1H RMN (CDCl3, 400 MHz): δ 6,95.1 (m, 2H), 3,8 (s, 3H), 3,6 (m, 1H) 2,4 (t, 2H), 2,2 (m, 4H) 1,6 (m, 6H), 1,3 (d, 3H), 1,0 (m, 9H) ppm. LCMS: (M+18)+: 504,2.
Composto 15: ((2S,3R,4R,5S,6S)-3,4,5-tris(butirilóxi)-6-metiltetra-hidro- 2H-piran-2-ila) fumarato de metila
[00177] A uma solução de (2R,3R,4R,5R,6S)-6-metiltetra-hidro-2H- piran-2,3,4,5-tetraol (1 g, 6,09 mmol, 1 equiv.) em piridina (10 mL) foi adicionado butanoato de butanoíla (5,78 g, 36,55 mmol, 5,98 mL, 6 equiv.) a 25°C. A mistura foi agitada a 25°C por 12 horas. As manchas em um cromatograma de camada fina (TLC) indicaram a formação de um novo composto. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. A mistura de reação foi diluída com solução de bicarbonato de sódio saturado (40 mL) e extraída com acetato de etila (40 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (20 mL), secas com sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para obter tetrabutirato de (2S,3R,4R,5S,6S)-6-metiltetra-hidro-2H-piran-2,3,4,5-tetraíla (3,5 g, bruto) como um óleo amarelo.
[00178] A uma solução de tetrabutirato de (2S,3R,4R,5S,6S)-6- metiltetra-hidro-2H-piran-2,3,4,5-tetraíla (3,5 g, 7,87 mmol, 1 equiv.) em THF (20 mL) foi adicionado MeNH2 aq. (1,10 g, 14,17 mmol, 40% de pureza, 1,8 equiv.) a 25 °C. A mistura foi agitada a 25 °C por 12 horas.
As manchas em um cromatograma de camada fina (TLC) indicaram a formação de um novo composto. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1 a 1/1). Tributirato de (2R,3R,4R,5S,6S)-2-hidróxi-6-metiltetra-hidro- 2H-piran-3,4,5-tri-ila (1,8 g, 4,81 mmol, 61,06% de rendimento) foi obtido como um óleo amarelo.
[00179] A uma solução de tributilato de (2R,3R,4R,5S,6S)-2-hidróxi- 6-metiltetra-hidro-2H-piran-3,4,5-tri-ila (600 mg, 1,60 mmol, 1 equiv.) em DCM (10 mL) foi adicionado DCC (495,95 mg, 2,40 mmol, 486,23 μL, 1,5 equiv.), DMAP (97,89 mg, 801,23 μmol, 0,5 equiv.) e ácido (E)-4- metóxi-4-oxo-but-2-enoico (312,72 mg, 2,40 mmol, 1,5 equiv.) a 25 °C. A mistura foi agitada a 25 °C por 5 horas.. LCMS mostrou que o composto desejado foi detectado. A mistura de reação foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para gerar um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (coluna: Waters Xbridge Prep OBD C18 150 x 40 10 μm; fase móvel: água + 10 mM de NH4HCO3/ACN; B%: 50%- 75%,11 min) para gerar o composto do título (210 mg, 353,95 μmol, 22,09% de rendimento, 82% de pureza) como um sólido amarelo. LCMS: (M+18)+: 504,2. 1H RMN (CDCl3, 400 MHz): δ 6,9 (m, 2H), 6,1 (s, 1H), 5.4 m, 2H), 5,2 (m, 1H), 3,9 (m, 1H), 3,8 (s, 3H), 2,2 (m, 6H), 1,6 (m, 6H), 1,2 (m, 3H), 0,9 (m, 9H) ppm.
[00180] O composto 15-d15 foi sintetizado de uma maneira semelhante à descrita neste documento, com exceção de que o ácido d5-butírico foi usado em combinação com, por exemplo, as condições de acoplamento de EDCl.
Composto 16: ((2R,3R,4S,5R)-3,4,5-tris(propionilóxi)tetra-hidro-2H- piran-2-ila) fumarato de metila
[00181] Uma mistura de (2S,3R,4S,5R)-tetra-hidro-2H-piran-2,3,4,5- tetraol (10 g, 66,61 mmol, 1 equiv.) e propanoato de propanoíla (52,01 g, 399,65 mmol, 51,50 mL, 6 equiv.) em piridina (50 mL) foi agitada a 25 °C por 12 horas. TLC indicou que (2S,3R,4S,5R)-tetra-hidro-2H-piran- 2,3,4,5-tetraol foi consumido completamente e duas novas manchas, formadas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. Em seguida, a mistura de reação foi diluída com H2O (25 mL) e extraída com EtOAc (10 mL × 4). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secas com Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1 a 5/1). Tetrapropionato de (2R,3R,4S,5R)-tetra-hidro-2H-piran-2,3,4,5-tetraíla (20 g, 53,42 mmol, 80,20% de rendimento) foi obtido como um óleo amarelo.
[00182] A uma solução de tetrapropionato de (2R,3R,4S,5R)-tetra- hidro-2H-piran-2,3,4,5-tetraíla (10 g, 26,71 mmol, 1 equiv.) em THF (100 mL) foi adicionado MeNH2 aq. (3,73 g, 48,08 mmol, 40% de pureza, 1.8 equiv.). A mistura foi agitada a 25°C por 12 horas sob N2. A TLC indicou que o material de partida foi consumido completamente e uma nova mancha, formada. A mistura de reação foi diluída com H 2O (25 mL) e extraída com EtOAc (10 mL × 4). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secas com Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1 a 5/1). Tripropionato de (2S,3R,4S,5R)-2-hidroxitetra- hidro-2H-piran-3,4,5-tri-ila (6 g, 18,85 mmol, 70,57% de rendimento) foi obtido como um óleo amarelo.
[00183] A uma solução de tripropionato de (2S,3R,4S,5R)-2- hidroxitetra-hidro-2H-piran-3,4,5-tri-ila (5 g, 15,71 mmol, 1 equiv.) e ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (3,07 g, 23,56 mmol, 1,5 equiv.) em DCM (50 mL) foi adicionado DCC (4,86 g, 23,56 mmol, 4,77 mL, 1,5 equiv.) e DMAP (575,69 mg, 4.71 mmol, 0,3 equiv.). A mistura foi agitada a 25°C por 12 hr. LC-MS mostrou que o material de partida (5 g, 15,71 mmol, 1 equiv.) foi consumido completamente e o m/z desejado foi detectado. A mistura de reação foi diluída com H2O (15 mL) e extraída com EtOAc (5 mL × 4). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (5 mL), secas com Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (coluna: Phenomenex Luna C18 200 x 40 mm 10 μm; fase móvel: água + 0,1% (v/v) TFA/ACN; B%: 50%-70%, 10 min). Em seguida, o resíduo foi separado por SFC (coluna: DAICEL CHIRALPAK AD-H 250 mm x 30 mm, 5 μm; fase móvel: 0,1% de NH3, H2O, EtOH; B%: 15%-15%, 3,1 min). O composto do título (46 mg, 101,00 μmol, rendimento de 0,643%) foi obtido como um óleo amarelo. LCMS: (M+Na)+: 453,1. 1H RMN (CDCl3, 400 MHz): δ 6,9 (m, 2H), 6,2 (m, 1H), 5,4 (m, 1H), 5,1 (m, 2H), 3,7 (m, 5H), 2,2 (m, 8H), 0,9 (m, 12H) ppm.
Composto 17: (R)-2,3-bis(propionilóxi)propil metil fumarato
[00184] A uma solução de (S)-(2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-ila)metanol (5 g, 37,83 mmol, 4,67 mL, 1 equiv.) em DCM (50 mL) foi adicionado ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (7,38 g, 56,75 mmol, 1,5 equiv.), DCC (11,71 g, 56,75 mmol, 11,48 mL, 1,5 equiv.) e DMAP (2,31 g, 18,92 mmol, 0,5 equiv.) a 25°C. A mistura foi agitada a 25 °C por 2 horas. As manchas em um cromatograma de camada fina (TLC) indicaram a formação de um novo composto. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1). O composto (R)-(2,2-dimetil-1,3- dioxolan-4-ila)metil metil fumarato (8 g, 32,75 mmol, 86,58% de rendimento) foi obtido como um sólido branco.
[00185] A uma solução de (R)-(2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-ila)metil metil fumarato (500 mg, 2,05 mmol, 1 equiv.) em MeOH (5 mL) foi adicionado p-TsOH (60 mg, 348,43 μmol, 0,17 equiv.) a 0 °C. A mistura foi agitada a 50°C por 2 horas. As manchas em um cromatograma de camada fina (TLC) indicaram a formação de um novo composto. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 3/1 a 0/1). (R)-2,3-di-hidroxipropil metil fumarato (330 mg, 1,62 mmol, 78,95% de rendimento) foi obtido como um sólido branco.
[00186] A uma solução de (R)-2,3-di-hidroxipropil metil fumarato (330 mg, 1,62 mmol, 1 equiv.) em piridina (5 mL) foi adicionado propanoato de propanoíla (841,37 mg, 6,46 mmol, 833,03 μL, 4 equiv.) a 25 °C. A mistura foi agitada a 25°C por 12 horas. As manchas em um cromatograma de camada fina (TLC) indicaram a formação de um novo composto. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1/0 a 0/1). O composto do título (270 mg, 828,00 μmol, 51,23% de rendimento, 97% de pureza) foi obtido como um óleo amarelo. 1H RMN (CDCl3, 400 MHz): δ 6,8 (m, 2H), 5,3 (m, 1H), 4,4 (m, 1H), 4,3 (m, 2H), 3,8 (m, 1H), 3,8 (s, 3H), 2,3 (m, 4H) 1,1 (t, 3H) ppm. LCMS: (M+18)+: 334,1.
Composto 18: (S)-2,3-bis(propionilóxi)propil metil fumarato
[00187] A uma solução de (R)-(2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-ila)metanol (5 g, 37,83 mmol, 186,92 μL, 1 equiv.) em DCM (50 mL) foi adicionado ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (7,38 g, 56,75 mmol, 1,5 equiv.), DCC (11,71 g, 56,75 mmol, 11,48 mL, 1,5 equiv.) e DMAP (2,31 g, 18,92 mmol, 0,5 equiv.) a 25 °C. A mistura foi agitada a 25°C por 2 horas. As manchas em um cromatograma de camada fina (TLC) indicaram a formação de um novo composto. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1). (S)-(2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-ila)metil metil fumarato (7,29 g, 29,85 mmol, 78,89% de rendimento) foi obtido como um sólido branco.
[00188] A uma solução de (S)-(2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-ila)metil metil fumarato (2,00 g, 8,19 mmol, 1 equiv.) em MeOH (30 mL) foi adicionado p-TsOH (200 mg, 1,16 mmol, 1,42e-1 equiv.) a 0 °C. A mistura foi agitada a 50 °C por 3 horas. As manchas em um cromatograma de camada fina (TLC) indicaram a formação de um novo composto. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 2/1 a 0/1). (S)-2,3-di- hidroxipropil metil fumarato (1 g, 4,90 mmol, 59,81% de rendimento) foi obtido como um sólido branco.
[00189] A uma solução de (S)-2,3-di-hidroxipropil metil fumarato (500 mg, 2,45 mmol, 1 equiv.) em piridina (10 mL) foi adicionado propanoato de propanoíla (1,27 g, 9,80 mmol, 1,26 mL, 4 equiv.) e 25 °C. A mistura foi agitada a 25°C por 12 horas. As manchas em um cromatograma de camada fina (TLC) indicaram a formação de um novo composto. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1 a 0/1). O composto do título (655 mg, 1,99 mmol, 81,18% de rendimento, 96% de pureza) foi obtido como óleo amarelo. 1H RMN (CDCl3, 400 MHz): δ 6,8 (m, 2H), 5,3 (m, 1H), 4,4 (m, 1H), 4,3 (m, 2H), 3,8 (m, 1H), 3,8 (s, 3H), 2,3 (q, 4H) 1,1 (t, 3H) ppm. LCMS: (M+18)+: 334,1.
Composto 19: (S)-2,3-bis(butirilóxi)propil metil fumarato
[00190] A uma solução de (R)-(2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-ila)metanol (5 g, 37,83 mmol, 186,92 μL, 1 equiv.) em DCM (50 mL) foi adicionado ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (7,38 g, 56,75 mmol, 1,5 equiv.), DCC (11,71 g, 56,75 mmol, 11,48 mL, 1,5 equiv.) e DMAP (2,31 g, 18,92 mmol, 0,5 equiv.) a 25 °C. A mistura foi agitada a 25 °C por 2 horas. As manchas em um cromatograma de camada fina (TLC) indicaram a formação de um novo composto. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para gerar um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10:1) para produzir (S)-(2,2-dimetil-1,3- dioxolan-4-ila)metil metil fumarato (7,29 g, 29,85 mmol, 78,89% de rendimento) como um sólido branco.
[00191] A uma solução (S)-(2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-ila)metil metil fumarato (2,00 g, 8,19 mmol, 1 equiv.) em MeOH (30 mL) foi adicionado p-TsOH (200 mg, 1,16 mmol, 1,42e-1 equiv.) a 0 °C. A mistura foi agitada a 50°C por 3 horas. As manchas em um cromatograma de camada fina (TLC) indicaram a formação de um novo composto. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 2/1 a 0/1). (S)-2,3-di-hidroxipropil metil fumarato (1 g, 4,90 mmol, 59,81% de rendimento) foi obtido como um sólido branco.
[00192] A uma solução de (S)-2,3-di-hidroxipropil metil fumarato (500 mg, 2,45 mmol, 1 equiv.) em piridina (6 mL) foi adicionado butanoato de butanoíla (1,55 g, 9,80 mmol, 1,60 mL, 4 equiv.) a 25 °C. A mistura foi agitada a 25 °C por 12 horas. Manchas em um cromatograma de camada fina (TLC) indicaram a formação de um novo composto. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila=10/0 a 0/1). O composto do título (606 mg, 1,69 mmol, 68,92% de rendimento, 95,9% de pureza) foi obtido como um óleo amarelo. 1H RMN (CDCl3, 400 MHz): δ 6,8 (m, 2H), 5,3 (m, 1H), 4,4 (m, 1H), 4,3 (m, 2H), 4,1 (m, 1H), 3,8 (s, 3H), 2,3 (m, 4H), 1,6 (m, 4H), 1,1 (t, 3H) ppm. LCMS: (M+18)+: 334,1.
Composto 20: ((2S,3R,4S,5R)-3,4,5-tris(propionilóxi)tetra-hidro-2H- piran-2-ila) fumarato de metila
[00193] Uma mistura de (2R,3R,4S,5R)-tetra-hidro-2H-piran-2,3,4,5- tetraol (10 g, 66,61 mmol, 1 equiv.) e propanoato de propanoíla (52,01 g, 399,65 mmol, 51,50 mL, 6 equiv.) em piridina (50 mL) foi agitada a 25 °C por 12 horas. A TLC indicou que o material de partida foi consumido completamente e duas novas manchas se formaram. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. Em seguida, a mistura de reação foi diluída com H2O (25 mL) e extraída com EtOAc (10 mL × 4). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secas com Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1 a 5/1). Tetrapropionato de (2S,3R,4S,5R)-tetra-hidro-2H-piran-2,3,4,5- tetraíla (20 g, 53,42 mmol, 80,20% de rendimento) foi obtido como um óleo amarelo.
[00194] A uma solução de tetrapropionato de (2S,3R,4S,5R)-tetra- hidro-2H-piran-2,3,4,5-tetraíla (10 g, 26,71 mmol, 1 equiv.) em THF (100 mL) foi adicionado MeNH2 aq. (3,73 g, 48,08 mmol, 40% de pureza, 1.8 equiv.). A mistura foi agitada a 25°C por 12 horas sob N2. A TLC indicou que o material de partida foi consumido completamente e uma nova mancha, formada. A mistura de reação foi diluída com H 2O (25 mL) e extraída com EtOAc (10 mL × 4). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secas com Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1 a 5/1). Tripropionato de (2R,3R,4S,5R)-2-hidroxitetra- hidro-2H-piran-3,4,5-tri-ila (6 g, 18,85 mmol, 70,57% de rendimento) foi obtido como um óleo amarelo.
[00195] A uma solução de tripropionato de (2R,3R,4S,5R)-2- hidroxitetra-hidro-2H-piran-3,4,5-tri-ila (5 g, 15,71 mmol, 1 equiv.) e ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (3,07 g, 23,56 mmol, 1,5 equiv.) em DCM (50 mL) foi adicionado DCC (4,86 g, 23,56 mmol, 4,77 mL, 1,5 equiv.) e DMAP (575,69 mg, 4.71 mmol, 0,3 equiv.). A mistura foi agitada a 25°C por 12 h. O m/z desejado foi detectado por LC-MS. A mistura de reação foi diluída com H2O (15 mL) e extraída com EtOAc (5 mL × 4). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (5 mL), secas com Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (coluna: Phenomenex Luna C18 200 x 40 mm 10 μm; fase móvel: água + 0,1% (v/v) TFA/ACN; B%: 50%-70%, 10 min). Em seguida, o resíduo foi separado por SFC (coluna: DAICEL CHIRALPAK AD-H 250 mm x 30 mm, 5 μm; B%: 15%-15%, 3,1 min). O composto do título (30 mg, 53,67 μmol, 0,342% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. LCMS: (M+Na)+: 453,1. 1H RMN (d6-DMSO, 400 MHz): δ 6,8 (m, 2H), 5,9 (m, 1H), 5,3 (m, 1H), 4,9 (m, 2H), 4,0 (m, 1H), 3,7 (m, 4H), 2,2 (m, 8 H), 0,9 (m, 12H) ppm.
[00196] O composto 20-d9 foi sintetizado de uma maneira semelhante conforme descrito neste documento, com exceção de que o ácido d3-propiônico foi usado em combinação com, por exemplo, as condições de acoplamento de EDCl.
Composto 21: ((2R,3S,4R,5R,6S)-6-metil-3,4,5-tris(propionilóxi)tetra- hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila
[00197] A L-fupiranose foi dissolvida para formar uma mistura de 0,5 M de diclorometano e piridina (mistura de 50%) e, em seguida, anidrido propiônico (6 equiv.) foi adicionado à solução a 0 °C. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 8 horas. A mistura resultante foi neutralizada com 1 M de HCl e purificada por cromatografia flash em coluna. O óleo resultante foi dissolvido em 0,1 M de THF seco e tratado com 1,5 equiv. de metil amina em THF. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas, concentrada in vacuo e foi purificada por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila-n- hexano (50: 50) como eluente. O óleo de visco resultante foi dissolvido em tetra-hidrofurano seco (THF) e, em seguida, diciclo-hexilcarbodi- imida (DCC, 1,2 equiv.) foi adicionado à solução a 0°C. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas. A mistura resultante foi filtrada e concentrada in vacuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila-n- hexano (40/60) como eluente para obter ((2R,3S,4R,5R,6S)-6-metil- 3,4,5-tris(propionilóxi)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila como um sólido ceroso. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d) δ 6,98 – 6,77 (m, 1H), 5,77 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,40 (dd, J = 10,4, 8,3 Hz, 1H), 5,31 (dd, J = 3,5, 1,1 Hz, 1H), 5,13 (dd, J = 10,4, 3,4 Hz, 1H), 4,07 – 3,96 (m, 1H), 2,49 (qd, J = 7,7, 3,3 Hz, 1H), 2,33 – 2,18 (m, 2H), 1,32 – 1,17 (m,
6H), 1,08 (td, J = 7,6, 3,5 Hz, 4H) ppm.
Composto 22: (((2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5,6-tetraquis(propionilóxi)tetra- hidro-2H-piran-2-ila)metila) fumarato de metila
[00198] Uma mistura de (3R,4S,5S,6R)-6-(hidroximetila)tetra- hidropiran-2,3,4,5-tetrol (20 g, 111,01 mmol, 1 equiv.) e [cloro(difenila)metil]benzeno (30,95 g, 111,01 mmol, 1 equiv.) em piridina (100 mL) foi desgaseificada e purificada com N2 3 vezes. Em seguida, a mistura foi agitada a 15°C por 10 horas sob atmosfera de N2. TLC indicou que (3R,4S,5S,6R)-6-(hidroximetila)tetra-hidropiran- 2,3,4,5-tetrol foi consumido completamente e três novas manchas, formadas. (3R,4S,5S,6R)-6-(tritiloximetila)tetra-hidropiran-2,3,4,5-tetrol (~111 mmol) como uma solução bruta em piridina foi usado diretamente na etapa seguinte.
[00199] À solução acima de (3R,4S,5S,6R)-6-(tritiloximetila)tetra- hidropiran-2,3,4,5-tetrol (~111 mmol, 1 equiv.) em piridina foi adicionado anidrido propiônico (72,23 g, 555,00 mmol, 71,51 mL, 5 equiv.) a 15°C, em seguida, a mistura foi aquecida a 65°C e agitada a 65°C por 10 horas sob atmosfera de N2. A TLC revelou três manchas significativas com polaridade mais baixa. A mistura de reação foi diluída com H 2O (500 mL) e extraída com EtOAc (150 mL × 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas com Na2SO4, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1 a 3/1). [(2R,3R,4S,5R)-4,5,6- tri(propanoilóxi)-2-(tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (29 g, 44,84 mmol, 40,40% de rendimento) foi obtido como um óleo incolor.
[00200] Uma solução de [(2R,3R,4S,5R)-4,5,6-tri(propanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (8 g, 12,37 mmol, 1 equiv.) em HOAc (60 mL) e H2O (30 mL) foi agitada a 65 °C por 2,5 sob atmosfera de N 2. TLC indicou que [(2R,3R,4S,5R)-4,5,6- tri(propanoilóxi)-2-(tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] propanoato foi consumido completamente, e duas novas manchas, formadas. A mistura de reação foi diluída com H2O (100 mL) e extraída com EtOAc (40 mL × 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (30 mL), secas com Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para obter um óleo incolor. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1 a 3/1). [(2R,3R,4S,5R)-2-(hidroximetila)-4,5,6-tri(propanoilóxi)tetra- hidropiran-3-il] propanoato (3,1 g, 7,67 mmol, 61,97% de rendimento) foi obtido como um óleo incolor.
[00201] Uma mistura de ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (1,50 g, 11,50 mmol, 1,5 equiv.), DCC (2,37 g, 11,50 mmol, 2,33 mL, 1,5 equiv.), DMAP (468,24 mg, 3,83 mmol, 0,5 equiv.) em DCM (100 mL) foi agitada a 15°C por 0,5 hora. [(2R,3R,4S,5R)-2-(hidroximetila)-4,5,6- tri(propanoilóxi)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (3,1 g, 7,67 mmol, 1 equiv.) foi adicionado à mistura e, em seguida, a mistura foi agitada a 15 °C por 9,5 horas sob atmosfera de N2. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO 2, Éter de petróleo/Acetato de etila = 3/1 a 1/1). Após a cromatografia em coluna, o produto bruto foi purificado por recristalização com éter de petróleo/EtOAc = 30/1 (10 mL) a 20 °C. O composto (((2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5,6-tetraquis(propionilóxi)tetra-hidro-2H-piran-
2-ila)metila)fumarato de metila (770 mg, 1,48 mmol, 19,28% de rendimento, 99,13% de pureza) foi obtido como um sólido branco da massa filtrante após a filtração. 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d): δ 6,88 (t, J = 1,0 Hz, 2H), 5,75 (dd, J = 8,3, 1,3 Hz, 1H), 5,35 – 5,25 (m, 1H), 5,23 – 5,10 (m, 2H), 4,35 – 4,26 (m, 2H), 3,90 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 3,82 (d, J = 1.3 Hz, 3H), 2,49 – 2,19 (m, 8H), 1,19 – 1,01 (m, 12H) ppm. LCMS (M+18)+: 534,2.
Composto 23: (((2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5,6-tetraquis(butirilóxi)tetra- hidro-2H-piran-2-ila)metila) fumarato de metila
[00202] A uma solução de [(2R,3R,4S,5R)-4,5,6-tri(butanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] butanoato (8 g, 11,38 mmol, 1 equiv.) em HOAc (50 mL) foi adicionado HBr (2,79 g, 11,38 mmol, 1,87 mL, 33% de pureza, 1 equiv.). A mistura foi agitada a 15°C por 0.5 h. O TLC indicou que o reagente foi consumido completamente. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 20/1 a 0/1). [(2R,3R,4S,5R)- 4,5,6-tri(butanoilóxi)-2-(hidroximetila)tetra-hidropiran-3-il] butanoato (2.5 g, 5,43 mmol, 47,69% de rendimento) foi obtido como um óleo incolor.
[00203] A uma solução de ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (1,41 g, 10,86 mmol, 2 equiv.) e DCC (1,68 g, 8,14 mmol, 1,5 equiv.) em DCM (20 mL) foi adicionado DMAP (331,61 mg, 2,71 mmol, 0,5 equiv.),
e a mistura foi agitada a 15 °C por 10 min. Em seguida, [(2R,3R,4S,5R)- 4,5,6-tri(butanoilóxi)-2-(hidroximetila)tetra-hidropiran-3-il] butanoato (2,5 g, 5,43 mmol, 1 equiv.) foi adicionado à mistura e a mistura foi agitada a 15°C por 12 horas. O TLC indicou que o reagente foi consumido completamente. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 20/1 a 5/1). O produto (((2R,3R,4S,5R,6S)- 3,4,5,6-tetraquis(butirilóxi)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila (1 g, 1,75 mmol, 32,17% de rendimento) foi obtido como um óleo incolor. Separação por SFC (Neu-IPA; B%: 40%-40%, 4 min) foi realizada para fornecer (((2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5,6-tetraquis(butirilóxi)tetra-hidro-2H- piran-2-ila)metila)fumarato de metila (900 mg) como um sólido branco. 1 H RMN (400 MHz, clorofórmio-d); δ 6,87 (s, 2H), 5,70 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,42 (dd, J = 10,3, 8,2 Hz, 1H), 5,05 (dd, J = 10,3, 3,1 Hz, 1H), 4,55 – 4,33 (m, 2H), 4,08 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 3,95 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 3,81 (s, 3H), 2,40 – 2,19 (m, 8H), 1,69 – 1,56 (m, 8H), 1,04 – 0,81 (m, 12H) ppm. LCMS (M+Na)+: 595,1.
Composto 24: ((2S,3R,4R,5R)-3,4,5-tris(butirilóxi)tetra-hidro-2H-piran- 2-ila) fumarato de metila
[00204] D-(−)-ribose foi dissolvido para fornecer uma mistura de 0,5 M em diclorometano e piridina (mistura 50/50) e, em seguida, anidrido propiônico (6 equiv.) foi adicionado à solução a 0 °C. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 8 horas. A mistura resultante foi neutralizada com 1 M de HCl e purificada por cromatografia flash em coluna. O óleo resultante foi dissolvido em THF seco e tratado com 1,5 equiv. de metil amina em THF. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas, concentrada in vacuo e purificada com sílica-gel usando acetato de etila/n-hexano (50/50) como eluente. O óleo de visco resultante foi dissolvido em mistura de diclorometano e piridina (50/50) e, em seguida, 2 equiv. de MMF foram adicionados e a mistura resfriada a 0 °C. 2 equiv. de cloridrato de N-(3-dimetilaminopropila)-N′-etilcarbodi- imida (EDCI) foram adicionados à solução seguido pela adição de 0,1 equiv. de DMAP e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas. A mistura resultante foi filtrada e concentrada in vacuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila/n-hexano (40/60) como eluente para obter ((2S,3R,4R,5R)-3,4,5-tris(butirilóxi)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila como um sólido ceroso. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 7,01 – 6,76 (m, 2H), 6,10 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 5,54 (t, J = 3,4 Hz, 1H), 5,25 – 5,02 (m, 2H), 4,11 – 3,86 (m, 2H), 3,82 (s, 3H), 2,42 – 2,22 (m, 6H), 1,66 (dqd, J = 8,3, 7,4, 5,8 Hz, 6H), 1,05 – 0,76 (m, 9H) ppm. LCMS (M+Na)+: 495,1.
[00205] O Composto 24-d15 foi sintetizado de uma maneira semelhante à descrita neste documento, com a exceção de que o ácido d5-butírico foi usado em combinação com, por exemplo, as condições de acoplamento de EDCl.
Composto 25: Ácido (2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(butirilóxi)-6-(((E)-4- metóxi-4-oxobut-2-enoila)óxi)tetra-hidro-2H-piran-2-carboxílico
[00206] A uma solução de (2S,3S,4S,5R)-3,4,5,6- tetra(butanoilóxi)tetra-hidropiran-2-carboxilato de benzila (25 g, 44,28 mmol, 1 equiv.) em THF (30 mL) foi adicionado MeNH2 aq. (5,04 g, 48,71 mmol, 30% de pureza, 1,1 equiv.). A mistura foi agitada a 15 °C por 12 h. O TLC indicou que o reagente foi consumido completamente. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 30/1 a 7/1). O (2S,3S,4S,5R)-3,4,5- tri(butanoilóxi)-6-hidróxi-tetra-hidropiran-2-carboxilato de benzila (14 g, 28,31 mmol, 63,94% de rendimento, pureza) foi obtido como um óleo amarelo.
[00207] A esta solução de (2S,3S,4S,5R)-3,4,5-tri(butanoilóxi)-6- hidróxi-tetra-hidropiran-2-carboxilato de benzila (5 g, 10,11 mmol, 1 equiv.) em THF (30 mL) foi adicionado Pd/C (1 g, 10% de pureza). A suspensão foi desgaseificada e purgada com H2 3 vezes. A mistura foi agitada sob H2 (15 Psi) a 15°C por 4 horas. O TLC indicou que o reagente foi consumido completamente. A mistura de reação foi filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. Ácido (2S,3S,4S,5R)-3,4,5-tri(butanoilóxi)-6-hidróxi-tetra-hidropiran-2- carboxílico (4 g, 9,89 mmol, 97,83% de rendimento) foi obtido como um sólido branco foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.
[00208] A uma solução de ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico
(643,40 mg, 4,95 mmol, 2 equiv.) e DCC (765,29 mg, 3,71 mmol, 750,29 μL, 1,5 equiv.) em DCM (10 mL) foi adicionado DMAP (151,05 mg, 1,24 mmol, 0,5 equiv.). A mistura resultante foi agitada a 15°C por 10 min. Em seguida, ácido (2S,3S,4S,5R)-3,4,5-tri(butanoilóxi)-6-hidróxi-tetra- hidropiran-2-carboxílico (1 g, 2,47 mmol, 1 equiv.) foi adicionado à mistura e a mistura foi agitada a 15°C por 12 horas. LC-MS detectou o composto desejado. A mistura de reação foi filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (água + 0,05% de HCl (v/v)/ACN). Ácido (2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(butirilóxi)-6-(((E)-4-metóxi-4-oxobut-2- enoila)óxi)tetra-hidro-2H-piran-2-carboxílico (96 mg, 184,01 μmol, 7,44% de rendimento, 99% de pureza) foi obtido como um sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 6,89 (d, J = 1,5 Hz, 2H), 6,46 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 5,51 (t, J = 9,9 Hz, 1H), 5,24 (t, J = 9,9 Hz, 1H), 5,11 (dd, J = 10,2, 3,6 Hz, 1H), 4,40 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 3,79 (s, 3H), 2,32 – 2,05 (m, 6H), 1,66 – 1,42 (m, 6H), 0,95 – 0,66 (m, 9H) ppm. LCMS (M-H)+: 514,8.
Composto 26: Ácido (2S,3S,4S,5R,6R)-6-(((E)-4-metóxi-4-oxobut-2- enoila)óxi)-3,4,5-tris(propionilóxi)tetra-hidro-2H-piran-2-carboxílico
[00209] A uma solução de (2S,3S,4S,5R)-3,4,5,6- tetra(propanoilóxi)tetra-hidropiran-2-carboxilato de benzila (5 g, 9,83 mmol, 1 equiv.) em THF (20 mL) foi adicionado MeNH2 aq. (1,12 g, 10,82 mmol, 30% de pureza, 1,1 equiv.). A mistura foi agitada a 15°C por 12 h. LCMS detectou o composto desejado. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/EtOAc = 20/1 a 3/1). (2S,3S,4S,5R)-6-hidróxi-3,4,5-tri(propanoilóxi)tetra- hidropirano-2-carboxilato de benzila (3,6 g, 6,76 mmol, 68,78% de rendimento, 85% de pureza) foi obtido como um óleo amarelo.
[00210] A uma solução de (2S,3S,4S,5R)-6-hidróxi-3,4,5- tri(propanoilóxi)tetra-hidropiran-2-carboxilato de benzila (3,6 g, 7,96 mmol, 1 equiv.) em THF (5 mL) foi adicionado Pd/C (300 mg, 10% de pureza). A suspensão foi desgaseificada e purgada com H2 3 vezes. A mistura foi agitada sob H2 (15 Psi) a 15°C por 4 horas. O TLC indicou que o reagente foi consumido completamente. A mistura foi filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. Ácido (2S,3S,4S,5R)-6-hidróxi-3,4,5-tri(propanoilóxi)tetra-hidropiran-2- carboxílico (3,6 g, bruto) foi obtido como um sólido branco, que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.
[00211] A uma solução de ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (718,12 mg, 5,52 mmol, 2 equiv.) em DCM (10 mL) foi adicionado DCC (854,17 mg, 4,14 mmol, 837,42 μL, 1,5 equiv.) e DMAP (168,59 mg, 1,38 mmol, 0,5 equiv.). Ácido (2S,3S,4S,5R)-6-hidróxi-3,4,5- tri(propanoilóxi)tetra-hidropiran-2-carboxílico (1 g, 2,76 mmol, 1 equiv.) foi adicionado à mistura a 15 °C. A mistura foi agitada a 15 °C por 12 horas. LCMS mostrou que o composto desejado foi detectado. A mistura de reação foi filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (água + 0,05% de HCl (v/v)/ACN). Ácido (2S,3S,4S,5R,6R)-6-(((E)-4-metóxi-4- oxobut-2-enoila)óxi)-3,4,5-tris(propionilóxi)tetra-hidro-2H-piran-2- carboxílico (170 mg, 358,34 μmol, 12,98% de rendimento) foi obtido como um sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 6,96 (d, J = 1,3 Hz, 2H), 6,52 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 5,56 (t, J = 9,8 Hz, 1H), 5,32 (t, J = 9,9 Hz, 1H), 5,19 (dd, J = 10,2, 3,7 Hz, 1H), 4,49 (d, J = 10,2 Hz,
1H), 3,85 (s, 3H), 2,43 – 2,15 (m, 6H), 1,09 (p, J = 7,7 Hz, 9H) ppm. LCMS (M-H)-: 472,8.
Composto 27: Cloreto de (2S,3R,4R,5S,6R)-2-(((E)-4-metóxi-4-oxobut- 2-enoila)óxi)-4,5-bis(propionilóxi)-6-((propionilóxi)metila)tetra-hidro-2H- piran-3-amínio
[00212] N-Boc-D-glicosamina foi dissolvido em uma mistura 50/50 de diclorometano e piridina, e anidrido propiônico (~6 equiv.) foi adicionado à solução a 0°C. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 8 horas. A mistura resultante foi neutralizada com 1 M de HCl e purificada por cromatografia flash em coluna. O óleo resultante foi dissolvido em 0,1 M de THF seco e tratado com 1,5 eq de metil amina em THF. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas, concentrada in vacuo e purificada por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila/n-hexano (50/50) como eluente. O óleo de visco resultante foi dissolvido em tetra-hidrofurano seco (THF). Em seguida, DMAP e MMF foram adicionados e a mistura resfriada até 0 °C. Diciclo- hexilcarbodi-imida (DCC, 1,2 eq mmol) foi adicionada à solução seguido por agitação em temperatura ambiente por 5 horas. A mistura resultante foi filtrada e concentrada in vacuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila/n- hexano (40/60) como eluente. O composto resultante foi dissolvido em metanol e 2 equiv. de uma solução de cloreto de hidrogênio (em dioxano) foram adicionados. A mistura resultante foi filtrada purificada por cromatografia em coluna de fase reversa para produzir o composto do título cloreto de (2S,3R,4R,5S,6R)-2-(((E)-4-metóxi-4-oxobut-2- enoila)óxi)-4,5-bis(propionilóxi)-6-((propionilóxi)metila)tetra-hidro-2H- piran-3-amínio como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, metanol-d4) δ 6,89 (ddd, J = 141,2, 15,5, 0,7 Hz, 2H), 5,38 (dd, J = 10,8, 9,3 Hz, 1H), 5,14 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 4,44 – 4,19 (m, 3H), 4,15 – 4,00 (m, 1H), 3,77 (d, J = 0,7 Hz, 3H), 2,52 – 2,09 (m, 6H), 1,21 – 0,68 (m, 9H) ppm. LCMS (M+Na)+: 482,1.
Composto 28: Cloreto de (2R,3R,4R,5S,6R)-4,5-bis(butirilóxi)-6- ((butirilóxi)metila)-2-(((E)-4-metóxi-4-oxobut-2-enoila)óxi)tetra-hidro-2H- piran-3-amínio
[00213] N-Boc-D-glicosamina foi dissolvido em uma mistura 50/50 de diclorometano e piridina. Anidrido butírico (~ 6 equiv.) foi adicionado à solução a 0 °C. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 8 horas. A mistura resultante foi neutralizada com 1 M de HCl e purificada por cromatografia flash em coluna. O óleo resultante foi dissolvido em 0,1 M de THF seco e tratado com 1,5 eq de metil amina em THF. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas, concentrada in vacuo e purificada por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila/n-hexano (50/50) como eluente. O óleo de visco resultante foi dissolvido em THF seco e, em seguida, DMAP e MMF foram adicionados e a mistura resfriada a 0°C. Diciclo-hexilcarbodi- imida (DCC, 1,2 eq mmol) foi adicionado à solução seguido por agitação em temperatura ambiente por 5 horas. A mistura resultante foi filtrada e concentrada in vacuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila/n-hexano (40/60) como eluente. O composto resultante foi dissolvido em metanol e 2 equiv. de solução de cloreto de hidrogênio (em dioxano) foram adicionados. O composto resultante foi filtrado purificado por cromatografia em coluna de fase reversa para produzir o composto do título cloreto de (2R,3R,4R,5S,6R)-4,5-bis(butirilóxi)-6- ((butirilóxi)metila)-2-(((E)-4-metóxi-4-oxobut-2-enoila)óxi)tetra-hidro-2H- piran-3-amínio como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, metanol-d4): δ 7,07 (d, J = 15,5 Hz, 1H), 6,71 (d, J = 15,5 Hz, 1H), 5,47 – 5,29 (m, 1H), 5,13 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 5,07 (t, J = 9,7 Hz, 1H), 4,39 – 4,16 (m, 4H), 4,13 – 4,06 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 2,47 – 2,10 (m, 6H), 1,76 – 1,39 (m, 6H), 1,13 – 0,63 (m, 9H) ppm. LCMS (M+Na)+: 524,4.
Composto 29: ((2R,3R,4R,5S,6R)-3-propionamido-4,5-bis(propionilóxi)- 6-((propionilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila
[00214] O cloridrato de D-(+)-glicosamina foi dissolvido em uma mistura 50/50 de diclorometano e piridina. Anidrido propiônico (~6 equiv.) e DMAP (0,1 equiv.) foram adicionados à solução a 0 °C. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 8 horas. A mistura resultante foi neutralizada por 1 M de HCl e purificada por cromatografia flash em coluna. O óleo resultante foi dissolvido em 0,1 M de THF seco e tratado com 2 equiv. de metil amina em THF. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas, concentrada in vacuo e purificada por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila/n- hexano (50/50) como eluente. O hemiacetal resultante foi dissolvido em diclorometano seco (0,5 M) e piridina. 2 equiv. de MMF foram adicionados e a mistura resfriada a 0 °C. 2 equiv. de cloridrato de N-(3- dimetilaminopropila)-N′-etilcarbodi-imida (EDCI) foi adicionada à solução seguido pela adição de 0,1 equiv. DMAP e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas. A mistura resultante foi filtrada e concentrada in vacuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila/n-hexano (40/60) para obter o composto alvo ((2R,3R,4R,5S,6R)-3-propionamido-4,5- bis(propionilóxi)-6-((propionilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) 1 fumarato de metila como um sólido ceroso. H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 7,02 – 6,87 (m, 2H), 6,31 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 5,58 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 5,32 – 5,21 (m, 2H), 4,52 (ddd, J = 11,8, 8,1, 3,4 Hz, 1H), 4,25 (dd, J = 12,5, 4,3 Hz, 1H), 4,19 – 3,95 (m, 4H), 3,85 (d, J = 1,0 Hz, 3H), 2,44 – 2,06 (m, 8H), 1,25 (td, J = 7,1, 1,0 Hz, 3H), 1,09 (dt, J = 16,6, 7,7 Hz, 9H) ppm. LCMS (M+Na)+: 538,1.
Composto 30: ((2S,3R,4R,5S)-3,4,5-tris(butirilóxi)-2- ((butirilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila
[00215] A D-(−)-tagatose foi dissolvida em uma mistura 50/50 de diclorometano e piridina. Anidrido butírico (~6 equiv.) e DMAP (0,1 equiv.) foram adicionados à solução a 0°C. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 8 horas. A mistura resultante foi neutralizada por 1 M de HCl e purificada por cromatografia flash em coluna. O óleo resultante foi dissolvido em THF seco e tratado com 2 equiv. de metil amina em THF. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas, concentrada in vacuo e purificada por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila/n-hexano (50/50) como eluente. O hemiacetal resultante foi dissolvido em DCM seco e piridina. MMF foi então adicionado e a mistura 0 °C. Cloridrato de N-(3- dimetilaminopropila)-N′-etilcarbodi-imida (EDCI) foi adicionado à solução seguido pela adição de DMAP e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas. A mistura resultante foi filtrada e concentrada in vacuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila/n-hexano (40/60) para obter o composto alvo ((2S,3R,4R,5S)-3,4,5-tris(butirilóxi)-2- ((butirilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila como um sólido ceroso. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 6,91 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 5,57 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 5,44 – 5,17 (m, 2H), 4,85 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 4,40 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 4,12 (dd, J = 11,2, 5,8 Hz, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,48 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 2,38 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,23 (dq, J = 10,8, 7,5 Hz, 6H), 1,74 – 1,49 (m, 8H), 1,06 – 0,83 (m, 12H) ppm. LCMS (M+Na)+: 595,3.
Composto 31: ((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(butirilóxi)-6- ((butirilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-ila)fumarato de metila
[00216] A D-(+)-manose foi dissolvida em uma mistura 50/50 de diclorometano e piridina. Anidrido butírico (~6 equiv.) e DMAP (0,1 equiv.) foram adicionados à solução a 0°C. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 8 horas. A mistura resultante foi neutralizada por 1 M de HCl e purificada por cromatografia flash em coluna. O óleo resultante foi dissolvido em 0,1 M de THF seco e tratado com 2 eq de metil amina em THF. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas, concentrada in vacuo e purificada por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila/n-hexano (50/50) como eluente. O hemiacetal resultante foi dissolvido em diclorometano seco (DCM) e piridina seguido pela adição de MMF e resfriamento até 0 °C. Cloridrato de N-(3-dimetilaminopropila)-N′-etilcarbodi-imida (EDCI) foi adicionado à solução seguido pela adição de 0,1 eq de DMAP e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas. A mistura resultante foi filtrada e concentrada in vacuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila/n-hexano (40/60) para obter o composto alvo ((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(butirilóxi)-6- ((butirilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila como um sólido ceroso. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 7,04 – 6,83 (m, 2H), 6,25 – 6,13 (m, 1H), 5,51 – 5,28 (m, 3H), 4,30 – 3,99 (m, 4H), 3,84 (d, J = 1,0 Hz, 3H), 2,50 – 2,14 (m, 8H), 1,80 – 1,51 (m, 8H), 1,07 – 0,82 (m, 12H) ppm. LCMS (M+Na)+: 572,1.
Composto 32: ((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tris(butirilóxi)-6- ((butirilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila
[00217] D-(+)-galactose foi dissolvido em uma mistura 50/50 de diclorometano e piridina. Anidrido butírico (~ 6 equiv.) e DMAP (0,1 equiv.) foram adicionados à solução a 0°C. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 8 horas. A mistura resultante foi neutralizada por 1 M de HCl e purificada por cromatografia flash em coluna. O óleo resultante foi dissolvido em 0,1 M de THF seco e tratado com 2 eq de metil amina em THF. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas, concentrada in vacuo e foi purificada por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila/n-hexano (50/50) como eluente. O hemiacetal resultante foi dissolvido em DCM seco e piridina seguido pela adição de 2 equiv. de MMF e resfriamento até 0°C. 2 equiv. de cloridrato de N-(3-dimetilaminopropila)-N′-etilcarbodi-imida (EDCI) foi adicionado à solução seguido pela adição de 0,1 eq DMAP e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas. A mistura resultante foi filtrada e concentrada in vacuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila/n- hexano (40/60) para obter o composto do título como um sólido ceroso. 1 H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 6,92 (s, 2H), 6,48 (d, J = 2,7 Hz, 2H), 5,55 (t, J = 2,0 Hz, 1H), 5,38 (t, J = 2,3 Hz, 1H), 4,42 – 4,29 (m, 2H), 4,10 (dd, J = 9,1, 6,9 Hz, 2H), 3,84 (s, 3H), 2,47 – 2,11 (m, 8H), 1,75 – 1,47 (m, 8H), 1,05 – 0,81 (m, 12H) ppm. LCMS (M+Na)+: 595,3.
Composto 33: (2R,3R,4R,5S,6R)-3-butiramida-4,5-bis(butirilóxi)-6- ((butirilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-il metil fumarato
[00218] O cloridrato de D-(+)-glicosamina foi dissolvido em uma mistura 50/50 de diclorometano e piridina. Anidrido butírico (~6 equiv.) e DMAP (0,1 equiv.) foram adicionados à solução a 0°C. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 8 horas. A mistura resultante foi neutralizada por 1 M de HCl e purificada por cromatografia flash em coluna. O óleo resultante foi dissolvido em 0,1 M de THF seco e tratado com 2 equiv. de metil amina em THF. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas, concentrada in vacuo e purificada por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila/n- hexano (50/50) como eluente. O hemiacetal resultante foi dissolvido em diclorometano seco (DCM) e piridina seguido pela adição de 2 equiv. de MMF e resfriamento até 0°C. 2 equiv. de cloridrato de N-(3- dimetilaminopropila)-N′-etilcarbodi-imida (EDCI) foi adicionado à solução seguido pela adição de 0,1 equiv. de DMAP e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas. A mistura resultante foi filtrada e concentrada in vacuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila/n- hexano (40/60) para obter o composto alvo (2R,3R,4R,5S,6R)-3- butiramida-4,5-bis(butirilóxi)-6-((butirilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-il metil fumarato como um sólido ceroso. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio- d): δ 6,95 (d, J = 3,9 Hz, 2H), 6,32 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 5,60 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,33 – 5,19 (m, 2H), 4,59 – 4,42 (m, 1H), 4,26 – 4,05 (m, 2H), 4,00 (ddd, J = 9,8, 4,2, 1,9 Hz, 1H), 3,85 (s, 3H), 2,38 – 1,96 (m, 8H), 1,72 – 1,53 (m, 8H), 1,01 – 0,81 (m, 12H) ppm. LCMS (M+Na)+: 595,2.
Composto 34: ((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tris(propionilóxi)-6- ((propionilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato
[00219] D-(+)-galactose foi dissolvido em uma mistura 50/50 de diclorometano e piridina. Anidrido propiônico (~ 6 equiv.) e DMAP (0,1 equiv.) foram adicionados à solução a 0 °C. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 8 horas. A mistura resultante foi neutralizada por 1 M de HCl e purificada por cromatografia flash em coluna. O óleo resultante foi dissolvido em 0,1 M de THF seco e tratado com 2 equiv. de metil amina em THF. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas, concentrada in vacuo e purificada por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila/n-hexano (50/50) como eluente. O hemiacetal resultante foi dissolvido em DCM seco e piridina seguido pela adição de 2 equiv. de MMF e resfriamento até 0 °C. 2 equiv. de cloridrato de N-(3-dimetilaminopropila)-N′-etilcarbodi-imida (EDCI) foi adicionado à solução seguido pela adição de 0,1 equiv. de DMAP. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas. A mistura resultante foi filtrada e concentrada in vacuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila/n-hexano (40/60) para produzir o composto do título como um sólido ceroso. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 6,92 (s, 2H), 6,48 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 5,63 – 5,50 (m, 1H), 5,46 – 5,32 (m, 2H), 4,38 (t, J = 6,7 Hz, 1H), 4,20 – 4,04 (m, 2H), 3,84 (s, 3H), 2,52 – 2,16 (m, 8H), 1,32 – 1,01 (m, 12H) ppm. LCMS (M+Na)+: 539,2.
Composto 35: ((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(propionilóxi)-6- ((propionilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila
[00220] D-(+)-manonose foi dissolvido em uma mistura 50/50 de diclorometano e piridina. Anidrido propiônico (~6 equiv.) e DMAP (0,1 equiv.) foram adicionados à solução a 0 °C. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 8 horas. A mistura resultante foi neutralizada por 1 M de HCl e purificada por cromatografia flash em coluna. O óleo resultante foi dissolvido em 0,1 M de THF seco e tratado com 2 equiv.
de metil amina em THF. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas, concentrada in vacuo e purificada por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila/n-hexano (50/50) como eluente. O hemiacetal resultante foi dissolvido em DCM seco e piridina seguido pela adição de MMF e resfriamento até 0 °C. Cloridrato de N- (3-dimetilaminopropila)-N′-etilcarbodi-imida (EDCI) foi adicionado à solução seguido pela adição de DMAP e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 horas. A mistura resultante foi filtrada e concentrada in vacuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica-gel usando acetato de etila/n-hexano (40/60) para obter o composto alvo ((2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(propionilóxi)- 6-((propionilóxi)metila)tetra-hidro-2H-piran-2-ila) fumarato de metila como um sólido ceroso. 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,03 – 6,83 (m, 2H), 6,19 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 5,53 – 5,29 (m, 3H), 4,29 (dd, J = 12,4, 4,8 Hz, 1H), 4,16 – 4,04 (m, 2H), 3,84 (s, 2H), 2,54 – 2,19 (m, 8H), 1,29 – 0,90 (m, 12H). LCMS (M+Na)+: 539,0 ppm.
Composto 36: (2S,3R,4S,5S)-3,4,5-tris(butanoilóxi)oxan-2-il (2E)-but-2- enedioato de 1-metila
[00221] A uma solução de [(3R,4S,5R)-4,5-di(butanoilóxi)-6-hidróxi- tetra-hidropiran-3-il] butanoato (500 mg, 1,39 mmol, 1 equiv.), DCC (429,38 mg, 2,08 mmol, 420,96 μL, 1,5 equiv.) e DMAP (50,85 mg, 416,21 μmol, 0,3 equiv.) em THF (10 mL) foi adicionado ácido (E)-4- metóxi-4-oxo-but-2-enoico (270,74 mg, 2,08 mmol, 1,5 equiv.). A mistura resultante foi agitada a 25°C por 12 h. LCMS mostrou que o reagente inicial foi consumido. A mistura de reação foi concentrada. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (água + 10mM de NH4HCO3/ACN) para obter (2S,3R,4S,5S)-3,4,5-tris(butanoilóxi)oxan-2-il (2E)-but-2- enedioato de 1-metila como um óleo incolor. LCMS (M+Na)+: 495,1 a 3,185 min & 495,2 a 3,453 min. 1H RMN (400 MHz, metanol-d4): δ 6,96 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 6,43 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 5,59 – 5,18 (m, 3H), 4,23 (dd, J = 13,5, 1,2 Hz, 1H), 3,85 (s, 4H), 2,52 – 2,13 (m, 6H), 1,82 – 1,44 (m, 6H), 1,12 – 0,71 (m, 9H) ppm.
Composto 37: (2R,3S,4R,5R,6S)-3,4,5-tris(butanoilóxi)-6-metiloxan-2-il (2E)-but-2-endioato de 1-metila
[00222] A uma solução de (3S,4R,5S,6S)-6-metiltetra-hidropiran- 2,3,4,5-tetrol (10 g, 60,92 mmol, 1 equiv.) em piridina (100 mL) foi adicionado anidrido butírico (57,82 g, 365,51 mmol, 59,79 mL, 6 equiv.). A mistura foi agitada a 15°C por 12 h. TLC mostrou que o reagente inicial foi consumido e duas novas manchas se formaram. A mistura foi lavada com H2O (100 mL) e extraída com EtOAc (100 mL x 3). Em seguida, a mistura foi concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 50/1). [(2S,3R,4R,5S)- 4,5,6-tri(butanoilóxi)-2-metil-tetra-hidropiran-3-il] butanoato (36,5 g, bruto) foi obtido como um óleo incolor.
[00223] A uma solução de [(2S,3R,4R,5S)-4,5,6-tri(butanoilóxi)-2- metil-tetra-hidropiran-3-il] butanoato (26 g, 58,49 mmol 1 equiv.) em THF (200 mL) foi adicionado MeNH2 aq. (10,90 g, 105,28 mmol, 30% de pureza, 1,8 equiv.). A mistura foi agitada a 15 °C por 12 h. A TLC mostrou que a maioria dos reagentes iniciais foi consumida e uma nova mancha se formou. A mistura foi concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 30/1 a 5/1). [(2S,3R,4R,5S)-4,5-di(butanoilóxi)-6-hidróxi-2-metil-tetra- hidropiran-3-il] butanoato (8,77 g, 23,42 mmol, 40,04% de rendimento) foi obtido como um óleo amarelo.
[00224] A uma solução de [(2S,3R,4R,5S)-4,5-di(butanoilóxi)-6- hidróxi-2-metil-tetra-hidropiran-3-il] butanoato (8,7 g, 23,24 mmol, 1 equiv.) em DCM (80 mL) foi adicionado DCC (7,19 g, 34,85 mmol, 7,05 mL, 1,5 equiv.) e DMAP (1,42 g, 11,62 mmol, 0,5 equiv.). Então ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (4,53 g, 34,85 mmol, 1,5 equiv.) foi adicionado à mistura. A mistura foi agitada a 15 °C por 12 h. TLC mostrou que o reagente inicial foi consumido e duas novas manchas se formaram. A mistura foi concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 50/1 a 10/1) primeiro e, em seguida, repurificado por prep-HPLC (coluna: Waters Xbridge Prep OBD C18 150 x 40 10 μm; fase móvel: água + 10mM de NH4HCO3/ACN; B%: 50%-70%, 11 min.). (2R,3S,4R,5R,6S)- 3,4,5-tris(butanoilóxi)-6-metiloxan-2-il (2E)-but-2-enedioato de 1-metila (227 mg, 461,92 μmol, 1,99% de rendimento, 99% de pureza) foi obtido como um óleo incolor. LCMS (M+18)+: 504,2 a 3,309 min. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 6,90 (s, 2H), 6,43 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 5,37 (d, J = 1,7 Hz, 3H), 4,28 (q, J = 6,5 Hz, 1H), 3,82 (s, 3H), 2,41 (t, J = 7,5 Hz, 3H), 2,28 – 2,07 (m, 3H), 1,79 – 1,36 (m, 6H), 1,14 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1,07 – 0,73 (m, 9H) ppm.
Composto 38: (2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(butanoilóxi)-6- (hidroximetila)oxan-2-il (2E)-but-2-enedioato de 1-metila
[00225] A uma solução de [(2R,3R,4S,5R)-4,5,6-tri(butanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] butanoato (18 g, 25,61 mmol, 1 equiv.) em THF (100 mL) foi adicionado MeNH2 aq. (2,65 g, 25,61 mmol, 30% de pureza, 1 equiv.). A mistura foi agitada a 15 °C por 18h. Uma nova mancha foi observada por TLC. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 30/1 a 7/1). [(2R,3R,4S,5R)-4,5-di(butanoilóxi)-6-hidróxi-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] butanoato (8 g, 12,64 mmol, 49,37% de rendimento) foi obtido como um sólido branco.
[00226] A uma solução de ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (1,64 g, 12,64 mmol, 2 equiv.) e DCC (1,96 g, 9,48 mmol, 1,5 equiv.) em DCM (20 mL) foi adicionado DMAP (386,16 mg, 3,16 mmol, 0,5 equiv.) e a mistura de reação foi agitada a 15 °C por 10 min. Em seguida, [(2R,3R,4S,5R)-4,5-di(butanoilóxi)-6-hidróxi-2-(tritiloximetila)tetra- hidropiran-3-il] butanoato (4 g, 6,32 mmol, 1 equiv.) foi adicionado à mistura e a mistura foi agitada a 15 °C por 12 horas. O TLC indicou que o reagente foi consumido completamente. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 20/1 a 6/1). O4-[(3R,4S,5R,6R)-3,4,5- tri(butanoilóxi)-6-(tritiloximetila)tetra-hidropiran-2-il](E)-but-2-enedioato de O1-metila (2,1 g, 2,82 mmol, 44,60% de rendimento) foi obtido como um óleo incolor. A uma solução de O4-[(3R,4S,5R,6R)-3,4,5-
tri(butanoilóxi)-6-(tritiloximetila)tetra-hidropiran-2-il](E)-but-2-enedioato de O1-metila (2,1 g, 2,82 mmol, 1 equiv.) em HOAc (20 mL) foi adicionado H2O (10,00 g, 555,08 mmol, 10 mL, 196,88 equiv.) a 15 °C e a mistura foi agitada a 65 °C por 4 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 20/1 a 0/1). O4-[(3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tri(butanoilóxi)-6- (hidroximetila)tetra-hidropiran-2-il](E)-but-2-enedioato de O1-metila (1,1 g, 2,19 mmol, 77,64% de rendimento) foi obtido como um óleo incolor. O4-[(3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tri(butanoilóxi)-6-(hidroximetila)tetra- hidropiran-2-il](E)-but-2-enedioato de O1-metila (1,39 g, 2,79 mmol, 1 equiv.) foi purificado por SFC (Neu-MeOH; B%: 13%-13%, 7 min.). (2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(butanoilóxi)-6-(hidroximetila)oxan-2-il (2E)- but-2-enedioato de 1-metila (37 mg, 47,86 μmol, 1,72% de rendimento, 65% de pureza) foi obtido como um sólido branco. LCMS (M+18)+: 520,1 a 3,12 min. 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d): δ 6,87 – 6,65 (m, 1H), 5,74 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,32 (t, J = 9,6 Hz, 1H), 5,22 – 4,95 (m, 1H), 3,83 – 3,71 (m, 3H), 2,27 – 2,06 (m, 4H), 1,70 – 1,40 (m, 5H), 1,02 – 0,61 (m, 8H) ppm.
Composto 39: (2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(butanoilóxi)-6- (hidroximetila)oxan-2-il (2E)-but-2-enedioato de 1-metila
[00227] A uma solução de [(2R,3R,4S,5R)-4,5,6-tri(butanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] butanoato (18 g, 25,61 mmol, 1 equiv.) em THF (100 mL) foi adicionado MeNH2 aq. (2,65 g, 25,61 mmol, 30% de pureza, 1 equiv.). A mistura foi agitada a 15 °C por 18h. O TLC indicou que uma nova mancha foi formada. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 30/1 a 7/1). [(2R,3R,4S,5R)-4,5-di(butanoilóxi)-6-hidróxi-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] butanoato (8 g, 12,64 mmol, 49,37% de rendimento) foi obtido como um sólido branco.
[00228] A uma solução de ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (1,64 g, 12,64 mmol, 2 equiv.) e DCC (1,96 g, 9,48 mmol, 1,5 equiv.) em DCM (20 mL) foi adicionado DMAP (386,16 mg, 3,16 mmol, 0,5 equiv.) e a mistura de reação foi agitada a 15 °C por 10 min. Em seguida, [(2R,3R,4S,5R)-4,5-di(butanoilóxi)- 6-hidróxi-2-(tritiloximetila)tetra- hidropirano-3-il] butanoato (4 g, 6,32 mmol, 1 equiv.) foi adicionado à mistura e a mistura foi agitada a 15°C por 12 horas. O TLC indicou que o reagente foi consumido completamente. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 20/1 a 6/1). O4-[(3R,4S,5R,6R)-3,4,5- tri(butanoilóxi)-6-(tritiloximetila)tetra-hidropiran-2-il](E)-but-2-enedioato de O1-metila (2,1 g, 2,82 mmol, 44,60% de rendimento) foi obtido como um óleo incolor. A uma solução de O4-[(3R,4S,5R,6R)-3,4,5- tri(butanoilóxi)-6-(tritiloximetila)tetra-hidropiran-2-il](E)-but-2-enedioato de O1-metila (2,1 g, 2,82 mmol, 1 equiv.) em HOAc (20 mL) foi adicionado H2O (10,00 g, 555,08 mmol, 10 mL, 196,88 equiv.) a 15 °C e a mistura foi agitada a 65°C por 4 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 20/1 a 0/1). O4-[(3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tri(butanoilóxi)-6- (hidroximetila)tetra-hidropiran-2-il](E)-but-2-enedioato de O1-metila (1,1 g, 2,19 mmol, 77,64% de rendimento) foi obtido como um óleo incolor. O4-[(3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tri(butanoilóxi)-6-(hidroximetila)tetra- hidropiran-2-il](E)-but-2-enedioato de O1-metila (1,39 g, 2,79 mmol, 1 equiv.) foi purificado por SFC (Neu-MeOH; B%: 13%-13%, 7 min). (2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tris(butanoilóxi)-6-(hidroximetila)oxan-2-il (2E)- but-2-enedioato de 1-metila (640 mg, 1,22 mmol, 43,89% de rendimento, 96% de pureza) foi obtido como um sólido branco. LCMS (M+18)+: 520,1 a 3,12 min. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 6,96 (s, 1H), 6,47 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 5,60 (t, J = 10,0 Hz, 1H), 5,26 – 5,07 (m, 1H), 3,99 – 3,46 (m, 4H), 2,45 – 2,10 (m, 4H), 1,82 – 1,43 (m, 3H), 1,12 – 0,71 (m, 5H) ppm.
Composto 40: 4-[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5,6-tetraquis(butanoilóxi)oxan- 2-il]metil (2E)-but-2-enedioato de 1-metila
[00229] A uma solução de [(2R,3R,4S,5R)-4,5,6-tri(butanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] butanoato (8 g, 11,38 mmol, 1 equiv.) em HOAc (50 mL) foi adicionado HBr (2,79 g, 11,38 mmol, 1,87 mL, 33% de pureza, 1 equiv.). A mistura foi agitada a 15 °C por 0.5 h. O TLC indicou que o reagente foi consumido completamente. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 20/1 a 0/1). O composto [(2R,3R,4S,5R)-4,5,6-tri(butanoilóxi)-2-(hidroximetila)tetra-hidropiran-3- il] butanoato (2,5 g, 5,43 mmol, 47,69% de rendimento) foi obtido como um óleo incolor.
[00230] A uma solução de ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (1,41 g, 10,86 mmol, 2 eq) e DCC (1,68 g, 8,14 mmol, 1,5 eq) em DCM (20 mL) foi adicionado DMAP (331,61 mg, 2,71 mmol, 0,5 eq), e a mistura foi agitada a 15°C por 10 min. Em seguida, [(2R,3R,4S,5R)-
4,5,6-tri(butanoilóxi)-2-(hidroximetila) tetra-hidropiran-3-il] butanoato (2,5 g, 5,43 mmol, 1 eq) foi adicionado à mistura e a mistura foi agitada a 15 °C por 12 horas. O TLC indicou que o reagente foi consumido completamente. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 20/1 a 5/1) e submetido a SFC (Neu-IPA; B%: 40%-40%, 4 min) para fornecer 4-[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5,6- tetraquis(butanoilóxi)oxan-2-il]metil (2E)-but-2-enedioato de 1-metila (2 g, 3,49 mmol) como um óleo incolor. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 6,81 (s, 2H), 6,29 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,65 – 5,30 (m, 1H), 5,23 – 4,86 (m, 2H), 4,30 – 3,92 (m, 3H), 3,75 (s, 3H), 2,45 – 2,07 (m, 8H), 1,81 – 1,40 (m, 8H), 1,02 – 0,70 (m, 12H). LCMS (M+18)+: 590,2 (3,371 min).
Composto 41: 4-[(2R,3S,4S,5R,6S)-3,4,5,6-tetraquis(butanoilóxi)oxan- 2-il]metil (2E)-but-2-enedioato de 1-metila
[00231] (2R,3S,4S,5R)-2,3,4,5,6-penta-hidroxihexanal (5 g, 27,75 mmol, 1 equiv.) e cloreto de tritila (7,74 g, 27,75 mmol, 1 equiv.) foram dissolvidos em piridina (100 mL) e a mistura foi agitada a 65 °C por 12 horas. TLC (éter de petróleo/acetato de etila = 0/1, Rf = 0,1) mostrou que o reagente inicial foi consumido. A mistura foi concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1/1 a 0/1). (3R,4S,5R,6R)-6- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-2,3,4,5-tetrol (7 g, 14,91 mmol, 53,73% de rendimento, 90% de pureza) foi obtido como sólido branco.
[00232] A uma solução de (3R,4S,5R,6R)-6-(tritiloximetila)tetra- hidropiran-2,3,4,5-tetrol (7 g, 16,57 mmol, 1 equiv.) em piridina (100 mL) foi adicionado butanoato de butanoíla (15,12 g, 95,60 mmol, 15,64 mL, 5,77 equiv.) e a mistura foi agitada a 15 °C por 18 horas. TLC (éter de petróleo/acetato de etila = 3/1, Rf = 0,6) mostrou que o reagente inicial foi consumido. A mistura foi concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 50/1 a 5/1). [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(butanoilóxi)-2-(tritiloximetila)tetra- hidropiran-3-il] butanoato foi obtido como um óleo incolor (5 g, 6,40 mmol, 38,64% de rendimento, 90% de pureza).
[00233] A uma solução de [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(butanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] butanoato (5 g, 7,11 mmol, 1 equiv.) em HOAc (50 mL) foi adicionado H2O (25 mL) a 65 °C e a mistura foi agitada a 65 °C por 2 horas. TLC (éter de petróleo/acetato de etila = 1/1, Rf = 0,5) mostrou que o reagente inicial foi consumido. A mistura foi concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 20/1 a 1/1). [(2R,3S,4S,5R)- 4,5,6-tri(butanoilóxi)-2-(hidroximetila)tetra-hidropiran-3-il] butanoato (2,7 g, 5,28 mmol, 74,17% de rendimento, 90% de pureza) foi obtido como um óleo incolor.
[00234] A uma solução de [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(butanoilóxi)-2- (hidroximetila)tetra-hidropiran-3-il] butanoato (2,7 g, 5,86 mmol, 1 equiv.) e ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (1,14 g, 8,79 mmol, 1,5 equiv.) em DCM (30 mL) foi adicionado DMAP (214,88 mg, 1,76 mmol, 0,3 equiv.) e DCC (1,81 g, 8,79 mmol, 1,5 equiv.). A mistura foi agitada a 15 °C por 12 h. TLC (éter de petróleo/acetato de etila = 3/1, Rf = 0,6) mostrou que o reagente inicial foi consumido. A mistura foi filtrada e a massa filtrante foi lavada com EtOAc (100 mL). O filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 50/1 a 5/1) e por SFC (coluna:
DAICEL CHIRALPAK IC 250mm x 30mm,10 μm); fase móvel: Neu-IPA; B%: 45%-45%, 8 min.). O4-[[(2R,3S,4S,5R,6S) -3,4,5,6-tetra (butanoilóxi) tetra-hidropiran-2-il]metil] (E)-but-2-enedioato de 1-metila (357 mg, 548,66 μmol, 9,36% de rendimento, 88% de pureza) foi obtido como um sólido branco. LCMS (M)+: 415,2 a 2,351 min. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 6,86 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 6,39 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 5,39 (ddd, J = 50,2, 10,7, 3,4 Hz, 2H), 4,57 – 4,08 (m, 3H), 3,81 (s, 3H), 2,48 – 2,14 (m, 6H), 1,80 – 1,49 (m, 6H), 1,11 – 0,78 (m, 12H) ppm.
Composto 42: (2R,3R,4S,5R,6R)-6-(hidroximetila)-3,4,5- tris(propanoilóxi)oxan-2-il 1-metil (2E)-but-2-enedioato
[00235] A uma mistura de [(2R,3R,4S,5R)-4,5,6-tri(propanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropirano-3-il] propanoato (10 g, 15,46 mmol, 1 equiv.) em THF (50 mL) foi adicionado em gotas MeNH2 aq. (2,40 g, 23,19 mmol, 30% de pureza, 1,5 equiv.) a 15 °C. A mistura resultante foi agitada a 15 °C por 10 horas sob atmosfera de N2. TLC mostrou que [(2R,3R,4S,5R)-4,5,6-tri(propanoilóxi)-2-(tritiloximetila) tetra-hidropiran- 3-il] propanoato foi consumido completamente. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1 a 1/1). [(2R,3R,4S,5R)-6-hidróxi-4,5-di(propanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (3,6 g, 6,09 mmol, 39,42% de rendimento) foi obtido como um óleo incolor. Uma mistura de ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (1,19 g, 9,14 mmol, 1,5 equiv.), DCC (1,89 g, 9,14 mmol, 1,85 mL, 1,5 equiv.) e DMAP (372,30 mg, 3,05 mmol, 0,5 equiv.) em DCM (100 mL) foi desgaseificada e purificada com N2 por 3 vezes a 15 °C. A mistura foi agitada a 15 °C por 0,5 hora. Em seguida, [(2R,3R,4S,5R)-6-hidróxi-4,5-di(propanoilóxi)-2-
(tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (3,6 g, 6,09 mmol, 1 equiv.) foi adicionado à mistura, que foi agitada a 15 °C por 9,5 horas.
TLC indicou que duas novas manchas significativas com polaridade mais baixa foram detectadas.
A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo.
O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1 a 1/1). O4-[(3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tri(propanoilóxi)-6- (tritiloximetila)tetra-hidropirano-2-il] (E)-but-2-enedioato de O1-metila (2,2 g, 2,02 mmol, 33,08% de rendimento, 64,40% de pureza) foi obtido como um óleo incolor.
Uma mistura de O4-[(3R,4S,5R,6R)-3,4,5- tri(propanoilóxi)-6-(tritiloximetila)tetra-hidropirano-2-il] (E)-but-2- enedioato de O1-metila (2,2 g, 3,13 mmol, 1 equiv.) em AcOH (30 mL) e H2O (15 mL) foi desgaseificada e purgada com N 2 3 vezes.
Em seguida, a mistura foi agitada a 65°C por 4 horas sob atmosfera de N2. TLC indicou que O4-[(3R,4S,5R,6R)-3,4,5-tri(propanoilóxi)-6- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-2-il] (E)-but-2-enedioato de O1-metila foi consumido completamente e duas novas manchas, formadas.
A mistura de reação foi diluída com H2O (100 mL) e extraída com EtOAc (50 mL × 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (20 mL), secas com Na2SO4, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo.
O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, Éter de petróleo/Acetato de etila = 3/1 a 1/1). (2R,3R,4S,5R,6R)-6-(hidroximetila)-3,4,5-tris(propanoilóxi)oxan-2- il 1-metil (2E)-but-2-enedioato (440 mg, 924,38 μmol, 47,29% de rendimento, 96,73% de pureza) foi obtido como um óleo incolor.
LCMS (M+18)+: 478,2. a 3,054 min. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 6,88 (s, 12H), 6,39 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 5,50 (t, J = 9,9 Hz, 1H), 5,16 – 4,91 (m, 1H), 3,87 (ddd, J = 10,3, 3,9, 2,2 Hz, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,59 (dddd, J = 58,2, 12,9, 7,0, 3,0 Hz, 1H), 2,40 – 2,08 (m, 6H), 1,18 – 0,87 (m, 9H) ppm.
Composto 43: 4-[(2R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5,6-tetraquis(butanoilóxi)oxan- 2-il]metil (2E)-but-2-enedioato de 1-metila
[00236] (2R,3S,4S,5R)-2,3,4,5,6-penta-hidroxihexanal (5 g, 27,75 mmol, 1 equiv.) e cloreto de tritila (7,74 g, 27,75 mmol, 1 equiv.) foram dissolvidos com piridina (100 mL) e a mistura foi agitada a 65 °C por 12 horas. TLC (éter de petróleo: acetato de etila = 0/1, Rf = 0,1) mostrou que o reagente inicial foi consumido. A mistura foi concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1/1 a 0/1). (3R,4S,5R,6R)-6- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-2,3,4,5-tetrol (7 g, 14,91 mmol, 53,73% de rendimento, 90% de pureza) foi obtido como sólido branco.
[00237] A uma solução de (3R,4S,5R,6R)-6-(tritiloximetila)tetra- hidropiran-2,3,4,5-tetrol (7 g, 16,57 mmol, 1 equiv.) em piridina (100 mL) foi adicionado butanoato de butanoíla (15,12 g, 95,60 mmol, 15,64 mL, 5,77 equiv.) e a mistura foi agitada a 15 °C por 18 horas. TLC (éter de petróleo: acetato de etila = 3/1, Rf = 0,6) mostrou que o reagente inicial foi consumido. A mistura foi concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 50/1 a 5/1). [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(butanoilóxi)-2-(tritiloximetila)tetra- hidropiran-3-il] butanoato (5 g, 6,40 mmol, 38,64% de rendimento, 90% de pureza) foi obtido como um óleo incolor. A uma solução de [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(butanoilóxi)-2-(tritiloximetila)tetra-hidropiran-3- il] butanoato (5 g, 7,11 mmol, 1 equiv.) em HOAc (50 mL) foi adicionado H2O (25 mL) a 65°C e a mistura foi agitada a 65 °C por 2 horas. TLC
(éter de petróleo/acetato de etila = 1/1, Rf = 0,5) mostrou que o reagente inicial foi consumido. A mistura foi concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 20/1 a 1/1). [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(butanoilóxi)-2-(hidroximetila)tetra- hidropiran-3-il] butanoato (2,7 g, 5,28 mmol, 74,17% de rendimento, 90% de pureza) foi obtido como um óleo incolor.
[00238] A uma solução de [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(butanoilóxi)-2- (hidroximetila)tetra-hidropiran-3-il] butanoato (2,7 g, 5,86 mmol, 1 equiv.) e ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (1,14 g, 8,79 mmol, 1,5 equiv.) em DCM (30 mL) foi adicionado DMAP (214,88 mg, 1,76 mmol, 0,3 equiv.) e DCC (1,81 g, 8,79 mmol, 1,5 equiv.). A mistura foi agitada a 15 °C por 12 h. TLC (éter de petróleo/acetato de etila = 3/1, Rf= 0,6) mostrou que o reagente inicial foi consumido. A mistura foi filtrada e a massa filtrante foi lavada com EtOAc (100 mL). O filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 50/1 a 5/1) e por SFC (coluna: DAICEL CHIRALPAK C 250 mm x 30 mm, 10 μm; fase móvel: Neu-IPA; B%: 45%-45%, 8 min.). O4-[[(2R,3S,4S,5R,6R) -3,4,5,6-tetra (butanoilóxi) tetra-hidropiran-2-il]metil] (E) -but-2-enedioato de 1-metila (213 mg, 360,83 μmol, 6,15% de rendimento, 97% de pureza) foi obtido como um óleo incolor. LCMS (M)+: 415,1 a 2,327 min. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 6,87 (d, J = 0,9 Hz, 2H), 5,77 – 5,61 (m, 1H), 5,43 (dd, J = 10,3, 8,3 Hz, 1H), 5,04 (td, J = 9,5, 8,7, 3,2 Hz, 1H), 4,56 – 4,31 (m, 2H), 4,09 (s, 3H), 3,95 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 3,81 (s, 3H), 2,44 – 2,12 (m, 6H), 1,77 – 1,43 (m, 6H), 1,05 – 0,76 (m, 12H) ppm.
Composto 44: (2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tris(butanoilóxi)-6-
(hidroximetila)oxan-2-il (2E)-but-2-enedioato de 1-metila
[00239] (2R,3S,4S,5R)-2,3,4,5,6-penta-hidroxihexanal (10 g, 55,51 mmol, 1 equiv.) e cloreto de tritila (15,47 g, 55,51 mmol, 1 equiv.) foram dissolvidos com piridina (100 mL) e a mistura foi agitada a 65 °C por 12 horas. TLC (éter de petróleo/acetato de etila = 0/1, Rf = 0,15) mostrou que o reagente inicial foi consumido. A mistura foi concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1/1 a 0/1). (3R,4S,5R,6R)-6- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-2,3,4,5-tetrol (17 g, 40,24 mmol, 72,49% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. Butanoato de butanoíla (36,73 g, 232,18 mmol, 37,98 mL, 5,77 equiv.) foi adicionado a uma solução de (3R,4S,5R,6R)-6-(tritiloximetila)tetra-hidropiran- 2,3,4,5-tetrol (17 g, 40,24 mmol, 1 equiv.) em piridina (200 mL) e a mistura foi agitada a 15 °C por 12 horas. TLC (éter de petróleo/acetato de etila = 3/1, Rf = 0,6) mostrou que o reagente inicial foi consumido. A mistura foi concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 20/1 a 3/1). [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(butanoilóxi)-2-(tritiloximetila)tetra-hidropiran-3- il] butanoato (13 g, 18,50 mmol, 45,97% de rendimento, 90% de pureza) foi obtido como um óleo incolor.
[00240] A uma solução de [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(butanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] butanoato (7,8 g, 11,10 mmol, 1 eq) em THF (20 mL) foi adicionado MeNH2 aq. (1,72 g, 16,65 mmol, 30% de pureza, 1,5 equiv.) e a mistura foi agitada a 15 °C por 12 horas. TLC mostrou que o reagente inicial foi consumido. A mistura foi concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 20/1 a 5/1). [(2R,3S,4S,5R)-4,5- di(butanoilóxi)-6-hidróxi-2-(tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] butanoato (2,2 g, 3,13 mmol, 28,20% de rendimento, 90% de pureza) foi obtido como um sólido branco.
[00241] A uma solução de [(2R,3S,4S,5R)-4,5-di(butanoilóxi)-6- hidróxi-2-(tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] butanoato (2,2 g, 3,48 mmol, 1 equiv.) e ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (678,52 mg, 5,22 mmol, 1,5 equiv.) em THF (20 mL) foi adicionado DCC (1,08 g, 5,22 mmol, 1,05 mL, 1,5 equiv.) e DMAP (127,43 mg, 1,04 mmol, 0,3 equiv.). A mistura de reação foi agitada a 15 °C por 12 horas. TLC (éter de petróleo: acetato de etila = 3/1, Rf = 0,6) mostrou que o reagente inicial foi consumido. A mistura foi filtrada e a massa filtrada foi lavada com EtOAc (100 mL), em seguida, o filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 50/1 a 5/1). O4-[(3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tri(butanoilóxi)-6- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-2-il](E)-but-2-enedioato de O1-metila (0,7 g, 845,84 mmol, 24,33% de rendimento, 90% de pureza) foi obtido como um óleo incolor.
[00242] A uma solução de O4-[(3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tri(butanoilóxi)- 6-(tritiloximetila) tetra-hidropiran-2-il] (E)-but-2-enedioato de O1-metila (0,7 g, 939,82 μmol, 1 equiv.) em HOAc (10 mL) foi adicionado H2O (5 mL) a 65°C, e, em seguida, a mistura foi agitada a 65 °C por 2 horas. TLC (éter de petróleo/acetato de etila = 3/1, Rf = 0,3) mostrou que o reagente inicial foi consumido e LCMS mostrou o mesmo resultado. A mistura foi filtrada, e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi primeiramente purificado por cromatografia de coluna (SiO 2, éter de petróleo/acetato de etila = 50/1 a 5/1). Em seguida, o resíduo foi repurificado por prep-HPLC (coluna: Nano-micro Kromasil C18 100 x 40 mm 10 μm; fase móvel: água + 0,1% (v/v) TFA/ACN; B%: 48%-68%, 9 min). O resíduo foi separado por prep-SFC (coluna: Phenomenex- Cellulose-2 250mm x 30mm, 10um; fase móvel: Neu-ACN; B%: 40%- 40%,10 min). (2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tris(butanoilóxi)-6- (hidroximetila)oxan-2-il (2E)-but-2-enedioato de 1-metila (55 mg, 101,79 μmol, 10,83% de rendimento, 93% de pureza) foi obtido como um sólido branco. LCMS (M)+: 415.1 a 3,706 min. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio- d): δ 6,88 – 6,67 (m, 2H), 5,77 (dd, J = 10,2, 8,2 Hz, 1H), 5,55 – 5,37 (m, 2H), 5,20 (dd, J = 10,4, 3,4 Hz, 1H), 4,02 – 3,85 (m, 1H), 3,81 (d, J = 2,9 Hz, 3H), 3,74 (dt, J = 11,8, 6,6 Hz, 1H), 3,51 (dt, J = 11,8, 7,0 Hz, 1H), 2,56 – 2,10 (m, 9H), 1,80 – 1,46 (m, 9H), 1,09 – 0,74 (m, 12H) ppm.
Composto 45: (2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tris(butanoilóxi)-6- (hidroximetila)oxan-2-il (2E)-but-2-enoioato de 1-metila
[00243] (2R,3S,4S,5R)-2,3,4,5,6-penta-hidroxihexanal (10 g, 55,51 mmol, 1 equiv.) e cloreto de tritila (15,47 g, 55,51 mmol, 1 equiv.) foram dissolvidos com piridina (100 mL) e a mistura foi agitada a 65 °C por 12 horas. TLC (éter de petróleo: acetato de etila = 0/1, Rf = 0,15) mostrou que o reagente inicial foi consumido. A mistura foi concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 1/1 a 0/1). (3R,4S,5R,6R)-6- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-2,3,4,5-tetrol (17 g, 40,24 mmol, 72,49% de rendimento) foi obtido como um sólido branco.
[00244] Butanoato de butanoíla (36,73 g, 232,18 mmol, 37,98 mL, 5,77 equiv.) foi adicionado a uma solução de (3R,4S,5R,6R)-6- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-2,3,4,5-tetrol (17 g, 40,24 mmol, 1 equiv.) em piridina (200 mL) e a mistura foi agitada a 15 °C por 12 horas. TLC (éter de petróleo/acetato de etila = 3/1, Rf = 0,6) mostrou que o reagente inicial foi consumido. A mistura foi concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 20/1 a 3/1). [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(butanoilóxi)-2-(tritiloximetila)tetra- hidropiran-3-il] butanoato (13 g, 18,50 mmol, 45,97% de rendimento,
90% de pureza) foi obtido como um óleo incolor.
[00245] A uma solução de [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(butanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] butanoato (7,8 g, 11,10 mmol, 1 eq) em THF (20 mL) foi adicionado MeNH2 aq. (1,72 g, 16,65 mmol, 30% de pureza, 1,5 equiv.) e a mistura foi agitada a 15 °C por 12 horas. TLC mostrou que o reagente inicial foi consumido. A mistura foi concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 20/1 a 5/1). [(2R,3S,4S,5R)-4,5- di(butanoilóxi)-6-hidróxi-2-(tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] butanoato (2,2 g, 3,13 mmol, 28,20% de rendimento, 90% de pureza) foi obtido como um sólido branco. A uma solução de [(2R,3S,4S,5R)-4,5- di(butanoilóxi)-6-hidróxi-2-(tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] butanoato (2,2 g, 3,48 mmol, 1 equiv.) e ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (678,52 mg, 5,22 mmol, 1,5 equiv.) em THF (20 mL) foi adicionado DCC (1,08 g, 5,22 mmol, 1,05 mL, 1,5 equiv.) e DMAP (127,43 mg, 1,04 mmol, 0,3 equiv.). A mistura de reação foi agitada a 15 °C por 12 horas. TLC (éter de petróleo/acetato de etila = 3/1, Rf = 0,6) mostrou que o reagente inicial foi consumido. A mistura foi filtrada e a massa filtrada foi lavada com EtOAc (100 mL), em seguida, o filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 50/1 a 5/1). O4-[(3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tri(butanoilóxi)-6- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-2-il](E)-but-2-enedioato de O1-metila (0,7 g, 845,84 mmol, 24,33% de rendimento, 90% de pureza) foi obtido como um óleo incolor.
[00246] A uma solução de O4-[(3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tri(butanoilóxi)- 6-(tritiloximetila) tetra-hidropiran-2-il] (E)-but-2-enedioato de O1-metila (0,7 g, 939,82 μmol, 1 equiv.) em HOAc (10 mL) foi adicionado H2O (5 mL) a 65°C, e, em seguida, a mistura foi agitada a 65 °C por 2 horas. TLC (éter de petróleo/acetato de etila=3/1, Rf = 0,3) e LCMS mostraram que o reagente inicial foi consumido. A mistura foi filtrada, e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi primeiramente purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 50/1 a 5/1). Em seguida, o resíduo foi repurificado por prep-HPLC (coluna: Nano-micro Kromasil C18 100 x 40 mm 10 μm; fase móvel: água + 0,1% (v/v) TFA/ACN; B%: 48%-68%, 9 min). O resíduo foi separado por prep-SFC (coluna: Phenomenex-Cellulose-2 250 mm x 30 mm, 10 μm); fase móvel: Neu-ACN; B%: 40%-40%, 10 min.). (2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5- tris(butanoilóxi)-6-(hidroximetila)oxan-2-il (2E)-but-2-enedioato de 1- metila (73 mg, 139,46 μmol, 14,84% de rendimento, 96% de pureza) foi obtido como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 6,92 – 6,64 (m, 2H), 6,41 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 5,62 – 5,42 (m, 3H), 5,30 (s, 1H), 4,20 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,78 – 3,61 (m, 2H), 3,47 (dt, J = 11,8, 7,0 Hz, 1H), 2,52 – 2,01 (m, 6H), 1,77 – 1,48 (m, 6H), 1,07 – 0,66 (m, 12H) ppm.
Composto 46: (2S,3R,4S,5S,6R)-6-(hidroximetila)-3,4,5- tris(propanoilóxi)oxan-2-il 1-metil (2E)-but-2-enedioato
[00247] Uma mistura de (2R,3S,4S,5R)-2,3,4,5,6-penta- hidroxihexanal (20 g, 111,01 mmol, 1 equiv.) e cloreto de tritila (30,95 g, 111,01 mmol, 1 equiv.) em piridina (100 mL) foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes. Em seguida, a mistura foi agitada a 65°C por 5 horas sob atmosfera de N2. TLC indicou que (2R,3S,4S,5R)-2,3,4,5,6- penta-hidroxihexanal foi consumido completamente e três novas manchas, formadas. O produto de reação, (3R,4S,5R,6R)-6- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-2,3,4,5-tetrol (111,01 mmol, 100 mL) em piridina como solução bruta e foi usado para a etapa seguinte diretamente.
[00248] A uma solução de (3R,4S,5R,6R)-6-(tritiloximetila)tetra- hidropiran-2,3,4,5-tetrol (111,01 mmol, 100 mL, 1 equiv.) em uma solução de piridina foi adicionado propanoato de propanoíla (36,96 g, 284,04 mmol, 36,6 mL, 6 equiv.) a 15°C. Em seguida, a mistura foi agitada a 15 °C por 10 horas sob atmosfera de N2. TLC indicou que (3R,4S,5R,6R)-6-(tritiloximetila)tetra-hidropirano-2,3,4,5-tetrol foi consumido completamente e três manchas, formadas. A mistura de reação foi interrompida pela adição de H2O (300 mL) a 15°C e extraída com 300 mL de EtOAc (100 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas com Na2SO4, filtradas, e, em seguida, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1 a 1/1). O composto [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(propanoilóxi)-2-(tritiloximetila)tetra-hidropiran- 3-il] propanoato (30 g, 46,39 mmol, 97,99% de rendimento) foi obtido como um óleo incolor.
[00249] A uma solução de [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(propanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il]propanoato (10 g, 15,46 mmol, 1 equiv.) em THF (100 mL) foi adicionado MeNH2 (2,40 g, 23,19 mmol, 30% de pureza, 1,5 equiv., em H2O). A mistura foi agitada a 15 °C por 10h. TLC indicou que [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(propanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropirano-3-il]propanoato permaneceu, e uma nova mancha se formou. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 50/1 a 0/1) para obter [(2R,3S,4S,5R)-6-hidróxi-4,5-di(propanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (3,7 g, 6,26 mmol, 40,51% de rendimento) como um sólido branco.
[00250] A uma solução de ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (1,22 g, 9,40 mmol, 1,5 equiv.) e DCC (1,94 g, 9,40 mmol, 1,90 mL, 1,5 equiv.) em DCM (37 mL) foi adicionado DMAP (382,64 mg, 3,13 mmol, 0,5 equiv.) e [(2R,3S,4S,5R)-6-hidróxi-4,5-di(propanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (3,7 g, 6,26 mmol, 1 equiv.). A mistura foi agitada a 15 °C por 10 horas sob N 2. TLC indicou que [(2R,3S,4S,5R)-6-hidróxi-4,5-di(propanoilóxi)-2-(tritiloximetila) tetra-hidropiran-3-il] propanoato permaneceu e uma nova mancha foi detectada. A LCMS mostrou que a massa desejada foi detectada. A mistura de reação foi filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 50/1 a 0/1) e prep-HPLC (água + 0,1% (v/v) TFA/ACN) para obter o pico 1 para O4-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tri(propanoilóxi)-6-(tritiloximetila) tetra-hidropiran-2-il] (E)-but-2-enedioato de O1-metila (1,6 g, 2,28 mmol, 36,35% de rendimento) como um sólido amarelo e o pico 2 para O4- [(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tri(propanoilóxi)-6-(tritiloximetila) tetra- hidropiran-2-il] (E)-but-2-enedioato de O1-metila (1,6 g, 2,28 mmol, 36,35% de rendimento) como um sólido amarelo.
[00251] O4-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tri(propanoilóxi)-6- (tritiloximetila)tetra-hidropirano-2-il](E)-but-2-enedioato de O1-metila (500 mg, 711,50 μmol, 1 equiv.) foi adicionado em HOAc (10 mL) a 15°C, em seguida, H2O (5,00 g, 277,54 mmol, 5 mL) foi adicionado à mistura a 65°C e a mistura foi agitada a 65°C por 3 horas. A LC-MS mostrou que o composto desejado foi detectado. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (água + 0,05% de HCl (v/v)/ACN). (2S,3R,4S,5S,6R)-6-(hidroximetila)-3,4,5-tris(propanoilóxi)oxan-2-il 1- metil (2E)-but-2-enedioato (150 mg, 325,78 μmol, 45,79% de rendimento) foi obtido como um sólido branco. LCMS (M+18) + 478,3 a 1,187 min. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 6,94 – 6,69 (m, 2H), 5,73 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,48 – 5,31 (m, 2H), 5,10 (dd, J = 10,4, 3,4 Hz,
1H), 3,88 (td, J = 6,5, 1,1 Hz, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,67 (dt, J = 11,7, 6,4 Hz, 1H), 3,46 (dt, J = 11,8, 6,8 Hz, 1H), 2,41 (qd, J = 7,5, 2,3 Hz, 2H), 2,28 – 2,01 (m, 4H), 1,26 – 0,90 (m, 9H) ppm.
Composto 47: (2S,3R,4S,5S,6R)-5-hidróxi-3,4-bis(propanoilóxi)-6- [(propanoilóxi)metil]oxan-2-il 1-metil (2E)-but-2-enedioato
[00252] Uma mistura de (2R,3S,4S,5R)-2,3,4,5,6-penta- hidroxihexanal (20 g, 111,01 mmol, 1 equiv.) e cloreto de tritila (30,95 g, 111,01 mmol, 1 equiv.) em piridina (100 mL) foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes e, em seguida, a mistura foi agitada a 65 °C por 5 horas sob atmosfera de N2. TLC indicou que (2R,3S,4S,5R)- 2,3,4,5,6-penta-hidroxihexanal foi consumido completamente e três novas manchas, formadas. A mistura de reação produziu (3R,4S,5R,6R)-6-(tritiloximetila)tetra-hidropiran-2,3,4,5-tetrol (111,01 mmol, 100 mL) em piridina como solução bruta e foi usada para a etapa seguinte diretamente.
[00253] A uma solução de (3R,4S,5R,6R)-6-(tritiloximetila)tetra- hidropiran-2,3,4,5-tetrol (111,01 mmol, 100 mL, 1 equiv.) em piridina foi adicionado propanoil propanoato (36,96 g, 284,04 mmol, 36,6 mL, 6 equiv.) a 15°C. Em seguida, a mistura foi agitada a 15°C por 10 horas sob atmosfera de N2. TLC indicou que (3R,4S,5R,6R)-6- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-2,3,4,5-tetrol foi consumido completamente e três novas manchas, formadas. A mistura de reação foi interrompida pela adição de H2O (300 mL) a 15°C e extraída com 300 mL de EtOAc (100 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas com Na2SO4, filtradas, e, em seguida, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1 a 1/1). [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6- tri(propanoilóxi)-2-(tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (30 g, 46,39 mmol, 97,99% de rendimento) foi obtido como óleo incolor.
[00254] A uma solução de [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(propanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il]propanoato (10 g, 15,46 mmol, 1 equiv.) em THF (100 mL) foi adicionado MeNH2 (2,40 g, 23,19 mmol, 30% de pureza, 1,5 equiv., em H2O). A mistura foi agitada a 15 °C por 10h. TLC indicou que [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(propanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropirano-3-il]propanoato permaneceu, e uma nova mancha se formou. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 50/1 a 0/1) para obter [(2R,3S,4S,5R)-6-hidróxi-4,5-di(propanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (3,7 g, 6,26 mmol, 40,51% de rendimento) como um sólido branco.
[00255] A uma solução de ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (1,22 g, 9,40 mmol, 1,5 equiv.) e DCC (1,94 g, 9,40 mmol, 1,90 mL, 1,5 equiv.) em DCM (37 mL) foi adicionado DMAP (382,64 mg, 3,13 mmol, 0,5 equiv.) e [(2R,3S,4S,5R)-6-hidróxi-4,5-di(propanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (3,7 g, 6,26 mmol, 1 equiv.). A mistura foi agitada a 15°C por 10 horas sob N2. TLC indicou que [(2R,3S,4S,5R)-6-hidróxi-4,5-di(propanoilóxi)-2-(tritiloximetila) tetra-hidropiran-3-il] propanoato permaneceu e uma nova mancha foi detectada. A LCMS mostrou que a massa desejada foi detectada. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 50/1 a 0/1) e prep-HPLC (água + 0,1% (v/v) TFA/ACN) para obter O4- [(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tri(propanoilóxi)-6-(tritiloximetila) tetra-
hidropiran-2-il] (E)-but-2-enedioato de O1-metila (1,6 g, 2,28 mmol, 36,35% de rendimento) como um sólido amarelo e O4- [(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tri(propanoilóxi)-6-(tritiloximetila) tetra- hidropiran-2-il] (E)-but-2-enedioato de O1-metila (1,6 g, 2,28 mmol, 36,35% de rendimento) como um sólido amarelo.
[00256] O 4-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tri(propanoilóxi)-6- (tritiloximetila)tetra-hidropirano-2-il](E)-but-2-enedioato de O1-metila (500 mg, 711,50 μmol, 1 equiv.) foi adicionado em HOAc (10 mL) a 15°C, em seguida, H2O (5,00 g, 277,54 mmol, 5 mL) foi adicionado à mistura a 65°C e a mistura foi agitada a 65°C por 3 horas. LCMS mostrou que o composto desejado foi detectado. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (água + 0,05% de HCl (v/v)/ACN). (2S,3R,4S,5S,6R)-5-hidróxi-3,4-bis(propanoilóxi)-6- [(propanoilóxi)metil]oxan-2-il 1-metil (2E)-but-2-enedioato (8 mg, 17,38 μmol, 2,96% de rendimento) foi obtido como um óleo incolor. LCMS (M+18)+: 478,2. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 6,95 – 6,58 (m, 2H), 5,70 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,42 (dd, J = 10,3, 8,3 Hz, 1H), 5,00 (dd, J = 10,2, 3,2 Hz, 1H), 4,33 (dd, J = 11,6, 6,1 Hz, 1H), 4,20 (dd, J = 11,6, 6,5 Hz, 1H), 4,10 – 3,95 (m, 1H), 3,87 (td, J = 6,3, 1,1 Hz, 1H), 3,74 (s, 3H), 2,43 – 2,05 (m, 6H), 1,04 (dt, J = 23,9, 7,6 Hz, 9H) ppm.
Composto 48: (2R,3R,4S,5S,6R)-6-(hidroximetila)-3,4,5- tris(propanoilóxi)oxan-2-il 1-metil (2E)-but-2-enedioato
[00257] Uma mistura de (2R,3S,4S,5R)-2,3,4,5,6-penta- hidroxihexanal (20 g, 111,01 mmol, 1 equiv.) e cloreto de tritila (30,95 g, 111,01 mmol, 1 equiv.) em piridina (100 mL) foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes. Em seguida, a mistura foi agitada a 65°C por 5 horas sob atmosfera de N2. TLC indicou que (2R,3S,4S,5R)-2,3,4,5,6- penta-hidroxihexanal foi consumido completamente e três novas manchas, formadas. A reação produziu (3R,4S,5R,6R)-6- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-2,3,4,5-tetrol como uma solução de piridina bruta (111,01 mmol, 100 ml)) e foi usada para na etapa seguinte diretamente.
[00258] A uma solução de piridina de (3R,4S,5R,6R)-6- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-2,3,4,5-tetrol (111,01 mmol, 100 mL, 1 equiv.) em piridina foi adicionado propanoil propanoato (36,96 g, 284,04 mmol, 36,6 mL, 6 equiv.) a 15°C, e, em seguida, a mistura foi agitada a 15°C por 10 horas sob atmosfera de N2. TLC indicou que (3R,4S,5R,6R)-6-(tritiloximetila)tetra-hidropirano-2,3,4,5-tetrol foi consumido completamente e três manchas, formadas. A mistura de reação foi interrompida pela adição de H2O (300 mL) a 15°C e extraída com 300 mL de EtOAc (100 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas com Na2SO4, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1 a 1/1). [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6- tri(propanoilóxi)-2-(tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (30 g, 46,39 mmol, 97,99% de rendimento) foi obtido como óleo incolor.
[00259] A uma solução de [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(propanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il]propanoato (10 g, 15,46 mmol, 1 equiv.) em THF (100 mL) foi adicionado MeNH2 (2,40 g, 23,19 mmol, 30% de pureza, 1,5 equiv., em H2O). A mistura foi agitada a 15 °C por 10h. TLC indicou que [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(propanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropirano-3-il]propanoato permaneceu, e uma nova mancha se formou. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 50/1 a 0/1) para obter [(2R,3S,4S,5R)-6-hidróxi-4,5-di(propanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (3,7 g, 6,26 mmol, 40,51% de rendimento) como um sólido branco.
[00260] A uma solução de ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (1,22 g, 9,40 mmol, 1,5 equiv.) e DCC (1,94 g, 9,40 mmol, 1,90 mL, 1,5 equiv.) em DCM (37 mL) foi adicionado DMAP (382,64 mg, 3,13 mmol, 0,5 equiv.) e [(2R,3S,4S,5R)-6-hidróxi-4,5-di(propanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (3,7 g, 6,26 mmol, 1 equiv.). A mistura foi agitada a 15 °C por 10 horas sob N 2. TLC indicou que [(2R,3S,4S,5R)-6-hidróxi-4,5-di(propanoilóxi)-2-(tritiloximetila) tetra-hidropiran-3-il] propanoato permaneceu e uma nova mancha foi detectada. A LCMS mostrou que a massa desejada foi detectada. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 50/1 a 0/1) e prep-HPLC (água + 0,1% (v/v) TFA/ACN) para obter O4- [(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tri(propanoilóxi)-6-(tritiloximetila) tetra- hidropiran-2-il] (E)-but-2-enedioato de O1-metila como um sólido amarelo e o pico 2 para O4-[(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tri(propanoilóxi)-6- (tritiloximetila) tetra-hidropiran-2-il] (E)-but-2-enedioato de O1-metila (1,6 g, 2,28 mmol, 36,35% de rendimento) como um sólido amarelo.
[00261] O4-[(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-tri(propanoilóxi)-6- (tritiloximetila)tetra-hidropirano-2-il](E)-but-2-enedioato de O1-metila (1,60 g, 2,28 mmol, 1 equiv.) foi adicionado em HOAc (20 mL) a 15 °C, em seguida, H2O (10,00 g, 555,08 mmol, 10 mL, 243,80 equiv.) foi adicionado à mistura a 65 °C. A mistura foi agitada a 65 °C por 3 horas. A LC-MS mostrou que o composto desejado foi detectado. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (água + 0,05% HCl (v/v)/ACN) para obter 200 mg de produto bruto que foi separado ainda por prep-TLC (SiO2, éter de petróleo/EtOAc = 3/1) e purificado novamente por SFC (Neu-IPA) para obter (2R,3R,4S,5S,6R)-6-(hidroximetila)-3,4,5- tris(propanoilóxi)oxan-2-yl 1-metil (2E)-but-2-enedioato puro (23 mg, 49,45 μmol, 75,90% de rendimento, 99% de pureza) como um óleo incolor. LCMS (M+18)+: 478,2 a 2,724 min. 1 H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 6,85 (s, 2H), 6,42 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 5,54 – 5,25 (m, 3H), 4,16 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,62 (dt, J = 12,3, 6,3 Hz, 1H), 3,43 (dt, J = 11,7, 6,7 Hz, 1H), 2,51 – 1,95 (m, 6H), 1,23 – 0,89 (m, 9H) ppm.
Composto 49: (2R,3R,4S,5S,6R)-5-hidróxi-3,4-bis(propanoilóxi)-6- [(propanoilóxi)metil]oxan-2-il 1-metil (2E)-but-2-enedioato
[00262] Uma mistura de (2R,3S,4S,5R)-2,3,4,5,6-penta- hidroxihexanal (20 g, 111,01 mmol, 1 equiv.) e cloreto de tritila (30,95 g, 111,01 mmol, 1 equiv.) em piridina (100 mL) foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes e, em seguida, a mistura foi agitada a 65 °C por 5 horas sob atmosfera de N2. TLC indicou que (2R,3S,4S,5R)- 2,3,4,5,6-penta-hidroxihexanal foi consumido completamente e três novas manchas, formadas. A mistura de reação bruta (3R,4S,5R,6R)-6- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-2,3,4,5-tetrol (111,01 mmol, 100 mL)) em piridina foi usada para a etapa seguinte diretamente.
[00263] A uma solução de piridina bruta de (3R,4S,5R,6R)-6- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-2,3,4,5-tetrol (111,01 mmol, 100 mL, 1 equiv.) foi adicionado propanoato de propanoíla (36,96 g, 284,04 mmol, 36,6 mL, 6 equiv.) a 15°C, e, em seguida, a mistura foi agitada a 15°C por 10 horas sob atmosfera de N2. TLC indicou que (3R,4S,5R,6R)-6-
(tritiloximetila)tetra-hidropirano-2,3,4,5-tetrol foi consumido completamente e três manchas, formadas. A mistura de reação foi interrompida pela adição de H2O (300 mL) a 15°C e extraída com 300 mL de EtOAc (100 mL x 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas com Na2SO4, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1 a 1/1). [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(propanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (30 g, 46,39 mmol, 97,99% de rendimento) foi obtido como óleo incolor.
[00264] A uma solução de [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(propanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il]propanoato (10 g, 15,46 mmol, 1 equiv.) em THF (100 mL) foi adicionado MeNH2 (2,40 g, 23,19 mmol, 30% de pureza, 1,5 equiv., em H2O). A mistura foi agitada a 15 °C por 10h. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (água + 0,05% de HCl (v/v)/ACN). O4- [(2R,3R,4S,5S,6R)-5-hidróxi-3,4-di(propanoilóxi)-6- (propanoiloximetila)tetra-hidropiran-2-il] O1-methyl (E)-but-2-enedioato (140 mg, 304,06 μmol, 13,35% de rendimento, 100% de pureza) foi obtido como um óleo incolor. LCMS (M+18)+: 478,2 a 2,724 min. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 6,85 (s, 2H), 6,40 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 5,44 (dd, J = 10,8, 3,8 Hz, 1H), 5,25 (dd, J = 10,7, 2,9 Hz, 1H), 4,34 (td, J = 9,1, 6,0 Hz, 1H), 4,13 (dq, J = 9,4, 4,9, 3,5 Hz, 3H), 3,77 (s, 3H), 2,50 – 2,06 (m, 8H), 1,19 – 0,95 (m, 9H) ppm.
Composto 50: 4-[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5,6- tetraquis(propanoilóxi)oxan-2-il]metil (2E)-but-2-enedioato de 1-metila
[00265] Uma mistura de (3R,4S,5S,6R)-6-(hidroximetila)tetra- hidropiran-2,3,4,5-tetrol (20 g, 111,01 mmol, 1 equiv.) e [cloro(difenila)metil]benzeno (30,95 g, 111,01 mmol, 1 equiv.) em piridina (100 mL) foi desgaseificada e purgada com N2 3 vezes. Em seguida, a mistura foi agitada a 15°C por 10 horas sob atmosfera de N2. TLC indicou que (3R,4S,5S,6R)-6-(hidroximetila)tetra-hidropiran- 2,3,4,5-tetrol foi consumido completamente e três novas manchas, formadas. (3R,4S,5S,6R)-6-(tritiloximetila)tetra-hidropiran-2,3,4,5-tetrol (bruto, ~111 mmol) em piridina como uma solução bruta foi usada diretamente na etapa seguinte.
[00266] À solução acima de (3R,4S,5S,6R)-6-(tritiloximetila)tetra- hidropiran-2,3,4,5-tetrol (~111 mmol, 1 equiv.) em piridina foi adicionado anidrido propiônico (72,23 g, 555,00 mmol, 71,51 mL, 5 equiv.) a 15°C. Em seguida, a mistura foi aquecida a 65°C e agitada a 65°C por 10 horas sob atmosfera de N2. TLC indicou que três manchas significativas com polaridade mais baixa foram detectadas. A mistura de reação foi diluída com H2O (500 mL) e extraída com EtOAc (150 mL × 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas com Na2SO4, filtradas, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1 a 3/1). [(2R,3R,4S,5R)-4,5,6-tri(propanoilóxi)-2-(tritiloximetila)tetra- hidropiran-3-il] propanoato (29 g, 44,84 mmol, 40,40% de rendimento)
foi obtido como um óleo incolor. Uma solução de [(2R,3R,4S,5R)-4,5,6- tri(propanoilóxi)-2-(tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (8 g, 12,37 mmol, 1 equiv.) em HOAc (60 mL) e H2O (30 mL) foi agitada a 65 °C por 2,5 horas sob atmosfera de N2 . TLC indicou que [(2R,3R,4S,5R)-4,5,6-tri(propanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran- 3-il] propanoato foi consumido completamente, e duas novas manchas, formadas. A mistura de reação foi diluída com H2O (100 mL) e extraída com EtOAc (40 mL × 3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (30 mL), secas com Na 2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para obter um óleo incolor. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 10/1 a 3/1). [(2R,3R,4S,5R)-2-(hidroximetila)- 4,5,6-tri(propanoilóxi)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (3,1 g, 7,67 mmol, 61,97% de rendimento) foi obtido como um óleo incolor.
[00267] Uma mistura de ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (1,50 g, 11,50 mmol, 1,5 equiv.), DCC (2,37 g, 11,50 mmol, 2,33 mL, 1,5 equiv.), DMAP (468,24 mg, 3,83 mmol, 0,5 equiv.) em DCM (100 mL) foi agitada a 15°C por 0,5 hora. [(2R,3R,4S,5R)-2-(hidroximetila)-4,5,6- tri(propanoilóxi)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (3,1 g, 7,67 mmol, 1 equiv.) foi adicionado à mistura e, em seguida, a mistura foi agitada a 15 °C por 9,5 horas sob atmosfera de N2. LC-MS detectou o composto desejado. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (SiO2, Éter de petróleo/Acetato de etila = 3/1 a 1/1). Após a cromatografia em coluna, o produto bruto foi purificado por recristalização com éter de petróleo/EtOAc = 30/1 (10 mL) a 20 °C. 4- [(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5,6-tetraquis(propanoilóxi)oxan-2-il]metil (2E)- but-2-enedioato de 1-metila (112 mg, 210,34 μmol, 43,46% de rendimento, 97,00% de pureza) foi obtido como um sólido branco. LCMS (M+18)+: 534,2 a 2,574 min. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 6,82
(d, J = 2,3 Hz, 2H), 6,29 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 5,44 (t, J = 9,9 Hz, 1H), 5,19 – 4,96 (m, 2H), 4,36 – 4,01 (m, 3H), 3,75 (s, 3H), 2,48 – 2,06 (m, 8H), 1,26 – 0,89 (m, 12H) ppm.
Composto 51: (2R,3S,4S,5R,6S)-4,5,6-tris(propanoilóxi)-2- [(propanoilóxi)metil]oxan-3-il (2E)-but-2-enedioato de 1-metila
[00268] A uma solução de [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(propanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (5 g, 7,73 mmol, 1 equiv.) em HOAc (30 mL) foi adicionado H2O (15,00 g, 832,41 mmol, 15 mL, 107,67 equiv.) a 15°C e a mistura foi agitada a 65°C por 5 horas. O TLC indicou que o reagente foi consumido completamente. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 20/1 a 0/1). [(2R,3S,4S,5R)-2- (hidroximetila)- 4,5,6-tri(propanoilóxi)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (1,4 g, 3,46 mmol, 44,78% de rendimento) foi obtido como um óleo incolor.
[00269] A uma solução de ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (900,76 mg, 6,92 mmol, 2 equiv.) e DCC (1,07 g, 5,19 mmol, 1,5 equiv.) em DCM (15 mL) foi adicionado DMAP (211,46 mg, 1,73 mmol, 0,5 equiv.). A mistura resultante foi agitada a 15 °C por 10 min. Em seguida, [(2R,3S,4S,5R)-2-(hidroximetila)-4,5,6-tri(propanoilóxi) tetra-hidropiran- 3-il]propanoato (1,4 g, 3,46 mmol, 1 equiv.) foi adicionado à mistura e a mistura foi agitada a 15°C por 12 horas. O TLC indicou que o reagente foi consumido completamente. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 20/1 a 1/1). O4-[[(2R,3S,4S,5R)-3,4,5,6- tetra(propanoilóxi) tetra-hidropiran-2-il]metil] (E)-but-2-enedioato de O1- metila (600 mg, 813,18 μmol, 23,49% de rendimento, 70% de pureza) foi obtido como um óleo incolor. O4-[[(2R,3S,4S,5R)-3,4,5,6- tetra(propanoilóxi)tetra-hidropiran-2-il]metil] (E)-but-2-enedioato de 1- metila (600 mg, 1,16 mmol, 1 equiv.) foi purificado ainda por separação por SFC (coluna: DAICEL CHIRALPAK IC 250mm x 30mm, 10 µm); fase móvel: Neu-IPA; B%: 20%-20%, 8 min). (2R,3S,4S,5R,6S)-4,5,6- tris(propanoilóxi)-2-[(propanoilóxi)metil]oxan-3-il (2E)-but-2-enedioato de 1-metila (170 mg, 325,85 μmol, 28,05% de rendimento, 99% de pureza) foi obtido como um óleo incolor. LCMS (M+18)+: 534,2 em 3,128. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 6,87 (d, J = 2,1 Hz, 2H), 5,68 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,47 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 5,40 – 5,17 (m, 1H), 5,09 (dd, J = 10,4, 3,4 Hz, 1H), 4,19 – 3,96 (m, 3H), 3,77 (s, 3H), 2,50 – 2,00 (m, 8H), 1,19 – 0,84 (m, 12H) ppm.
Composto 52: (2R,3S,4S,5R,6R)-4,5,6-tris(propanoilóxi)-2- [(propanoilóxi)metil]oxan-3-il (2E)-but-2-enedioato de 1-metila
[00270] A uma solução de [(2R,3S,4S,5R)-4,5,6-tri(propanoilóxi)-2- (tritiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (5 g, 7,73 mmol, 1 equiv.) em HOAc (30 mL) foi adicionado H2O (15,00 g, 832,41 mmol, 15 mL, 107,67 equiv.) a 15°C e a mistura foi agitada a 65°C por 5 horas. O TLC indicou que o reagente foi consumido completamente. A mistura de reação foi filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna
(SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 20/1 a 0/1). [(2R,3S,4S,5R)-2- (hidroximetila)-4,5,6-tri(propanoilóxi)tetra-hidropiran-3-il] propanoato (1,4 g, 3,46 mmol, 44,78% de rendimento) foi obtido como um óleo incolor.
[00271] A uma solução de ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoico (900,76 mg, 6,92 mmol, 2 equiv.) e DCC (1,07 g, 5,19 mmol, 1,5 equiv.) em DCM (15 mL) foi adicionado DMAP (211,46 mg, 1,73 mmol, 0,5 equiv.), e a mistura foi agitada a 15°C por 10 min. Em seguida, [(2R,3S,4S,5R)-2-(hidroximetila)-4,5,6-tri(propanoilóxi) tetra-hidropiran- 3-il] propanoato (1,4 g, 3,46 mmol, 1 equiv.) foi adicionado à mistura e a mistura foi agitada a 15 °C por 12 horas. O TLC indicou que o reagente foi consumido completamente. A mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etila = 20/1 a 1/1). O4-[[(2R,3S,4S,5R)-3,4,5,6- tetra(propanoilóxi) tetra-hidropiran-2-il]metil] (E)-but-2-enedioato de O1- metila (600 mg, 813,18 μmol, 23,49% de rendimento, 70% de pureza) foi obtido como um óleo incolor. O4-[[(2R,3S,4S,5R)-3,4,5,6- tetra(propanoilóxi) tetra-hidropiran-2-il]metil] (E)-but-2-enedioato de 1- metila (600 mg, 1,16 mmol, 1 equiv.) foi indivíduo ainda a separação por SFC (coluna: DAICEL CHIRALPAK IC 250mm x 30mm,10 µm); fase móvel: Neu-IPA; B%: 20%-20%, 8 min). O4-[(2R,3S,4S,5R,6R)-4,5,6- tri(propanoilóxi)-2-(propanoiloximetila)tetra-hidropiran-3-il] (E)-but-2- enedioato de O1-metila (45 mg, 84,51 μmol, 7,28% de rendimento, 97% de pureza) foi obtido como um óleo incolor. LCMS: (M+18)+: 534,2 a 3,159 min. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d): δ 6,94 – 6,71 (m, 2H), 6,18 (d, J = 26,4 Hz, 1H), 5,46 (dt, J = 7,6, 3,9 Hz, 1H), 4,99 (dd, J = 5,0, 1,7 Hz, 1H), 4,44 – 3,94 (m, 3H), 3,76 (d, J = 4,5 Hz, 3H), 2,43 – 2,00 (m, 8H), 1,20 – 0,86 (m, 12H) ppm.
15°C, 12 h Composto 53: O4-[2-[(E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoil]óxi-4-[(2R,3R)- 3,5,7-tris[[(E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoil]oxi]croman-2-il]fenil] O1- metil(E)-but-2-enodioato
[00272] A uma solução de (2R,3R)-2-(3,4-di-hidroxifenila)cromano- 3,5,7-triol (100 mg, 344,51 μmol, 1 equiv.) e ácido (E)-4-metóxi-4-oxo- but-2-enóico (313,74 mg, 2,41 mmol, 7 equiv.) em THF (5 mL) foi adicionado DCC (426,49 mg, 2,07 mmol, 418,13 µL, 6 equiv.) e DMAP (2,10 mg, 17,23 µmol, 0,05 equiv.). A mistura foi agitada a 15 °C por 12 h. LC-MS detectou o composto desejado. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (água + 0,04% (v/v) HCl/ACN) para gerar o composto do título como um sólido amarelo (23 mg, 26,77 μmol, 7,77% de rendimento, 99% de pureza). LCMS (M+H)+: 851,2.
15°C, 12 h Composto 54: O1-metil O4-[4-[3,5,7-tris[[(E)-4-metóxi-4-oxo-but-2- enoil]oxi]-4-oxo-cromen-2-il]fenil] (E)-but-2-enedioato
[00273] A uma solução de ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enóico (1 g, 7,69 mmol, 1 equiv.) em DCM (5 mL) foi adicionado DMF (95,00 mg, 1,30 mmol, 0,1 mL) e (COCl)2 (3,90 g, 30,75 mmol, 2,69 mL, 4 equiv.). A mistura foi agitada a 15°C por 12 h. TLC indicou que o ácido (E) -4-
metóxi-4-oxo-but-2-enóico foi consumido completamente. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O produto bruto metil (E)-4-cloro-4-oxo-but-2-enoato (260 mg, bruto) como um sólido branco foi usado na próxima etapa sem purificação adicional.
[00274] A uma solução de 3,5,7-tri-hidróxi-2-(4-hidroxifenila)cromen- 4-ona (100 mg, 349,36 μmol, 1 eq) em DCM (5 mL) foi adicionado Et3N (176,76 mg, 1,75 mmol, 243,14 μL, 5 equiv.) e metil (E)-4-cloro-4-oxo- but-2-enoato (260 mg, 5 equiv.) e 1,75 mmol. A mistura foi agitada a 15 °C por 12 h. A LC-MS mostrou que o composto desejado foi detectado. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (água + 0,05% (v/v) HCl/ACN). O composto do título foi obtido como um sólido branco (52 mg, 69,37 µmol, 19,86% de rendimento, 98% de pureza). LCMS (M+H)+: 735,2.
15°C, 12 h Composto 55: O4-[2-[(E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoil]óxi-4-[3,5,7- tris[[(E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enoil]oxi]-4-oxo-cromen-2-il]fenil] O1- metil (E)-but-2-enedioato
[00275] A uma solução de ácido (E)-4-metóxi-4-oxo-but-2-enóico (300 mg, 2,31 mmol, 1 equiv.) em DCM (5 mL) foi adicionado DMF (95,00 mg, 1,30 mmol, 0,1 mL, 0,56 equiv.) e (COCl)2 (1,17 g, 9,22 mmol, 807,41 µL, 4 equiv.). A mistura foi agitada a 15°C por 12 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para dar um metil (E)-4-cloro-4-oxo-but-2-enoato (260 mg, em bruto) como um sólido branco. A uma solução de 2- (3,4-di-hidroxifenila) -3,5,7-tri-hidróxi- cromen-4-ona (100 mg, 330,87 µmol, 1 equiv.) em DCM (5 mL) foi adicionado Et3N (174,10 mg, 1,72 mmol, 239,48 µL, 5,2 equiv.) e metil
(E)-4-cloro-4-oxo-but-2-enoato (255,57 mg, 1,72 mmol, 5,2 equiv.). A mistura foi agitada a 15 °C por 12 h. LCMS detectou o composto desejado. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (água + 0,05% (v/v) HCl/ACN). O composto do título foi obtido como um sólido branco (16 mg, 18,18 µmol, 5,49% de rendimento, 98% de pureza). LCMS (M+H)+: 863,0.
15°C, 12 h Composto 56: O4-[4-[3-hidróxi-5,7-bis[[(E)-4-metóxi-4-oxo-but-2- enoil]oxi]-4-oxo-cromen-2-il] fenil] O1-metil (E)-but-2-enedioato
[00276] Para uma solução de 3,5,7-trihidróxi-2-(4- hidroxifenila)cromen-4-ona (0,2 g, 698,72 µmol, 1 equiv.) e ácido (E)-4- metóxi-4-oxo-but-2-enóico (545,42 mg, 4,19 mmol, 6 equiv.) em THF (5 mL) foi adicionado DCC (720,83 mg, 3,49 mmol, 706,69 µL, 5 equiv.) e DMAP (4,27 mg, 34,94 µmol, 0,05 equiv.). A mistura foi agitada a 15 °C por 12 h. LCMS detectou o composto desejado. A mistura foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida para produzir um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (água + 0,05% (v/v) HCl/ACN) para gerar o composto do título como um sólido amarelo (40 mg, 133,82 μmol, 19,15% de rendimento, 98% de pureza). LCMS (M+H)+: 623,1. Exemplo 2: Ensaios de Degradação de DMPK in vitro
[00277] Os conjugados divulgados neste documento podem ser estáveis sob uma variedade de níveis fisiológicos de pH e clivados seletivamente em um local de ação desejado (por exemplo, no trato GI, por exemplo, no estômago, intestino delgado ou intestino grosso) por enzimas presentes no microambiente local. Os conjugados são testados quanto à estabilidade química em uma variedade de níveis de pH, bem como sua capacidade de serem degradados em sistemas in vitro representativos. Os dados para conjugados selecionados são mostrados abaixo.
[00278] Ensaio 1. Estabilidade dos conjugados no fluido gástrico simulado (SGF). Esse ensaio foi usado para avaliar a estabilidade de um conjugado no estômago.
[00279] O meio foi preparado dissolvendo 2 g de cloreto de sódio em 0,6 L em ultrapure water (MilliQ®, Millipore Sigma, Darmstadt, Alemanha). O pH foi ajustado para 1,6 com ácido clorídrico 1N e o volume foi então ajustado para 1 L com água purificada.
[00280] 60 mg de pó FaSSIF (Biorelevant™, London, Reino Unido) foram dissolvidos em tampão de 500 mL (acima). Pepsina foi adicionada (0,1 mg/mL) (Millipore Sigma, Darmstadt, Alemanha), e a solução foi agitada. Os meios SGF resultantes foram usados frescos para cada experimento.
[00281] Os compostos de teste foram dissolvidos em estoque de DMSO até 1 mM. Uma alíquota da solução-mãe de DMSO foi removida e diluída no Meio SGF em tubos falcon de 15 mL para gerar uma concentração de composto total de 1 µM. Uma alíquota de 1 mL foi imediatamente removida e diluída uma vez com 1 volume de acetonitrila para o ponto de tempo T0. A mistura foi vedada e misturada a 37 °C em uma incubadora. As alíquotas (1 mL) foram removidas em intervalos regulares e imediatamente interrompidas pela adição de 1 volume de acetonitrila. As amostras resultantes foram analisadas por LC/MS para determinar as taxas de degradação em SGF.
[00282] Ensaio 2. Estabilidade de conjugados no fluido intestinal simulado (SIF). Esse ensaio foi usado para avaliar a estabilidade de um conjugado no intestino delgado.
[00283] O tampão fosfato foi preparado dissolvendo 0,42 g de pellets de hidróxido de sódio e 3,95 g de fosfato de sódio monobásico monoidratado e 6,19 g de cloreto de sódio em água ultrapura (MilliQ®, Millipore Sigma, Darmstadt, Alemanha). O pH foi ajustado para 6,7 usando aq. HCl e aq. NaOH, conforme necessário, e a solução foi diluída com água ultrapura para produzir 1L do tampão pH 6,7.
[00284] 112 mg de pó FaSSIF (Biorelevant™, London, Reino Unido) foram dissolvidos em 50 mL do tampão pH 6,7. 2 a 3 mL da solução resultante foram então adicionados a 500 mg de pancreatina (Millipore Sigma, Darmstadt, Alemanha). A mistura resultante foi agitada pelo dedo que toca o recipiente contendo a mistura até a suspensão leitosa formada. Neste momento, o restante da solução tampão FaSSiF/pH 6,7 de 50 mL foi adicionado. A suspensão resultante foi virada de cabeça para baixo 10 vezes para produzir SIF, que foi usado fresco.
[00285] Os compostos de teste foram dissolvidos em estoque de DMSO até 1 mM. Uma alíquota da solução-mãe de DMSO foi removida e diluída no meio SIF em tubos falcon de 15 mL para produzir uma mistura com uma concentração de composto testada de 1 µM. Uma alíquota de 1 mL foi imediatamente removida e diluída uma vez com 1 volume de acetonitrila para o ponto de tempo T0. A mistura foi vedada e agitada em 37 ⁰C em uma incubadora. As alíquotas (1 mL) foram removidas em intervalos regulares e imediatamente interrompidas pela adição de 1 volume de acetonitrila. As amostras resultantes foram analisadas por LC/MS para determinar as taxas de degradação.
[00286] Ensaio 3. Ensaio de Estabilidade de Material Colônico In vitro. Esse ensaio foi usado para avaliar a estabilidade de um conjugado no intestino grosso. Todos os experimentos foram realizados em uma câmara anaeróbica contendo 90% de nitrogênio, 5% de hidrogênio e 5% de dióxido de carbono. O material colônico foi ressuspenso como uma pasta fluida (15% p/v de concentração final) em brancos de diluição pré-
reduzidos, anaerobicamente esterilizados (Anaerobe Systems AS-908). O material colônico foi, então, inoculado em placas de 96 poços contendo meio YCFAC (Anaerobe Systems AS-680) ou outro meio adequado (6,7 μL de pasta fluida em 1 mL de meio total). Os compostos ou grupos de compostos adicionados a cada poço individual para atingir uma concentração de analitos final de 1 ou 10 µM, e o material foi misturado por pipetagem.
A amostra foi removida após pontos no tempo definidos (0, 120, 240, 480, 1440, 2880 minutos após o início do ensaio), suprimida com acetonitrila contendo padrão interno e analisada por LC/MS.
Tabela 1 Composto Ensaio 1 (SGF) Ensaio 2 (SIF) Ensaio 3 (% Restante em 1 hora) (% Restante em 4 horas) (% Restante em 24 horas) 1 C C 2 C B C 3 C B C 4 B C B 5 C C A 6 C A 7 C A C 8 C A C 9 C A C 10 B B B 11 B B B 12 C A C 13 B A C 14 C A C 15 B A C 16 C 20 C A C 21 C B 22 C A 23 B A A 24 C A 26 C A 27 C B 28 B B 36 C A C 38 C A A 39 C A A 40 B A A 44 C A 45 C A 47 C A 48 C A 49 C A 50 C A 51 C A 52 C A 53 C A 54 C A
Composto Ensaio 1 (SGF) Ensaio 2 (SIF) Ensaio 3 (% Restante em 1 hora) (% Restante em 4 horas) (% Restante em 24 horas) 55 C A 56 C A Na Tabela 1, A: <25% do composto testado restante; B: 25-75% do composto testado restante; e C: >75% do composto testado restante.
[00287] Os compostos que são estáveis no ensaio 1 e instáveis no ensaio 2 podem distribuir bioativos para o intestino delgado. Os compostos que são estáveis nos ensaios 1 e 2 e instáveis no ensaio 3 podem distribuir bioativos para o intestino grosso. Exemplo 3: Biotransformação in vitro e detecção de ensaio de fumarato de monometila
[00288] Uma solução-mãe do composto 2 foi preparada a 10 mM em DMSO. FaSSIF foi feito misturando taurocolato de sódio (3,0 mM), lecitina (0,75 mM) e pancreatina (10 mg/mL) em solução preparada de fosfato de sódio monobásico (28,4 mM), hidróxido de sódio (8,7 mM), cloreto de sódio (105,9 mM), a pH 6,5. O Composto 2 foi adicionado a FaSSIF à concentração final de 100 µM. A liberação de ácido monometilfárico (MMF) foi monitorada através de UHPLC-MSMS e comparando o tempo de retenção e fragmentação correspondente de MMF liberado ao tempo de retenção e fragmentação de uma solução pura de MMF que foi analisada separadamente com o mesmo método descrito abaixo. A liberação de MMF foi medida nos pontos de tempo 0 h e 2 h. Em ambos os pontos de tempo, as amostras foram centrifugadas a 14000 rpm por 10 minutos a 4°C. Os sobrenadantes foram então transferidos para frascos de HPLC e analisados imediatamente. Os resultados deste ensaio são ilustrados em FIG. 1.
[00289] Esses dados demonstram que o fumarato de monometila é liberado ativamente do composto 2 no fluido intestinal simulado e sugere que também será liberado no intestino delgado de um indivíduo. Exemplo 4: Modelo de EAE in vivo de esclerose múltipla. Estudo 1
[00290] Para o estudo de encefalomielite autoimune experimental
(EAE), camundongos C57BL/6J com 8 a 11 semanas de idade foram anestesiados e injetados por via subcutânea com 200 mg de MOG35-55 e 200 mg de CFA. A toxina de coqueluche (200 ng/camundongo) foi aplicada i.p. no dia 0. A avaliação clínica diária foi realizada através de uma escala de 5 pontos e a progressão clínica foi observada ao longo de 28 dias (FIG. 2A). Os animais receberam 200 ml de veículo (metilcelulose) (linha preta) ou propionato de sódio (5 µM, BID) (linha vermelha pontilhada) diariamente por sonda oral, ou 200 mM de propionato de sódio (linha vermelha sólida) ou butirato de sódio (200 mM) propionato adicionado à água potável. Ao final do estudo, a análise de citometria de fluxo foi realizada no baço (n = 8 por grupo). A razão entre célula TH17 (definida como CD3+, IL7+) / células T regulatórias (Treg; definida como CD3+, Foxp3+) foi significativamente reduzida (P < 0,05) em camundongos recebidos 200 mM de proprionato de sódio em água potável (FIG. 2B). A análise estatística foi realizada com o software GraphPad Prism (GraphPad Software). O teste t não pareado foi usado para avaliar a significância entre o controle (veículo) e cada grupo de tratamento.
[00291] A redução na pontuação de EAE sugere que o tratamento com compostos da invenção seria eficaz na redução de sinais e sintomas em pacientes com esclerose múltipla e a razão TH17/Treg foi modificada para um estado mais tolerogênico consistente com a sugestão de que o propionato pode reduzir a inflamação sistêmica e seria eficaz no tratamento da esclerose múltipla. Estudo 2
[00292] Para estudos experimentais de encefalomielite autoimune (EAE), camundongos C57BL/6J com 8 a 11 semanas de idade foram anestesiados e injetados por via subcutânea com 200 mg de MOG35-55 e 200 mg de CFA. A toxina de coqueluche (200 ng/camundongo) foi aplicada por via intraperitoneal no dia 0. Avaliação clínica diária,
conforme realizada usando uma escala de 5 pontos e a progressão clínica foi observada ao longo de 28 dias (FIGS. 2C e 2D). Os animais foram administrados oralmente com 200 mL de veículo (metilcelulose), aproximadamente 100 mg/kg de dimetilfumarato (DMF) ou uma quantidade de conjugado que forneceu uma quantidade aproximadamente equimolar de DMF. A redução na pontuação de EAE sugere que o tratamento com compostos da invenção pode ser eficaz na redução de sinais e sintomas em pacientes com esclerose múltipla. Exemplo 5: Estudos farmacocinéticos de monometilfumarato e ácido graxo de cadeia curta
[00293] Para estudos farmacocinéticos de monometilfumarato, ratos Sprague Dawley machos com 9 a 10 semanas de idade receberam uma dose única de dimetilfumarato ou compostos da invenção (suspensão, 1% (p/v) de metilcelulose em água deionizada). A quantidade de composto dosado foi normalizada para fornecer quantidades aproximadamente equimolares de monometilfumarato. Aproximadamente 150 μL de amostras de sangue total foram coletados em 15 e 30 min; e 1, 2, 4, 8 e 24 horas após a administração da dose da veia jugular ou cauda. 100 μL de amostras foram adicionados aos tubos K2EDTA preenchidos com 300 μL de 100 mM de tiopronina em 100 mM de bicarbonato de amônio (pH 9,0). As amostras foram misturadas em vórtice por aproximadamente 5 min em temperatura ambiente para capturar frações livres de fumarato de monometila. As amostras foram subsequentemente analisadas por LC-MS/MS quanto à concentração plasmática média de fumarato de monometila (FIGS. 3A- 3D). Certos parâmetros farmacocinéticos são fornecidos abaixo na Tabela 2.
Tabela 2 Tmáx Cmáx AUCúltima Composto Dose (mg/kg) (h) (ng/mL) (h×ng/mL) Experimento 1 (FIG. 3A) DMF 30 0,25 10300 8330 Composto 10 120 1,00 1120 2310 Composto 1 92 0,75 3280 5040 Composto 6 90 0,33 6730 7250 Composto 15 100 1,00 3100 5170 Experimento 2 (FIG. 3B) DMF 30 0,58 9063 15042 Composto 11 120 1,00 2968 4592 Composto 28 112 0,25 441 261 Composto 27 103 0,50 19658 7487 Composto 20 90 0,25 21290 8890 Composto 3 108 0,42 5276 6408 Experimento 3 (FIG. 3C) DMF 30 0,25 5475 6112 Composto 26 100 0,58 283 349 Composto 25 110 0,75 287 381 Composto 7 100 0,42 1739 2611 Composto 24 100 0,50 3408 3359 Experimento 4 (FIG. 3D) DMF 30 0,25 10928 12490 Fumarato de Diroximel 53 0,25 17251 9381 Composto 29 107 0,33 1985 2958 Composto 22 107 0,67 4757 5502 Composto 23 100 0,42 900 1163
[00294] Para estudos farmacocinéticos de ácido graxo de cadeia curta (SCFA), ratos Sprague Dawley machos de 9 a 10 semanas de idade receberam uma dose única de SCFA deuterado (propionato de sódio-d3 ou butirato de sódio-d5) ou compostos da invenção compreendendo SCFA deuterado (suspensão, 1% (p/v) de metilcelulose em água deionizada). Os análogos de SCFA deuterados dos compostos da invenção (por exemplo, Composto 3-d12 e Composto 6-d9) foram sintetizados de uma maneira semelhante à descrita anteriormente, mas em vez disso, SCFA deuterado foi acoplado a um açúcar usando condições de acoplamento de EDCl. Para estudos farmacocinéticos de SCFA, a quantidade de composto dosado foi normalizada para fornecer quantidades aproximadamente equimolares de monometilfumarato. Aproximadamente 150 μL de amostras de sangue total foram coletados em 15 e 30 min; e 1, 2, 4, 8 e 24 horas após a administração da dose da veia jugular ou cauda. 100 μL de amostras foram adicionados aos tubos K2EDTA preenchidos com 300 μL de 100 mM de tiopronina em 100 mM de bicarbonato de amônio (pH 9,0). As amostras foram misturadas em vórtice por aproximadamente 5 minutos em temperatura ambiente para capturar frações livres de SCFA. As amostras foram subsequentemente analisadas por LC-MS/MS quanto à concentração plasmática média de SCFA (FIGS. 3A-3H).
[00295] Estudos farmacocinéticos sugerem que os compostos da invenção podem ser metabolizados in vivo para fornecer quantidades comparáveis de monometilfumarato no plasma quando comparados à administração de dimetilfumarato apenas. Estudos farmacocinéticos também sugerem que os compostos da invenção podem ser metabolizados in vivo para fornecer maior biodisponibilidade de SCFA no plasma (por exemplo, propionato ou butirato) em relação à administração de SCFA apenas. Além disso, estudos farmacocinéticos de SCFA demonstram exposição sistemática estendida dentro de uma faixa fisiológica de cada metabólito. Exemplo 6: Exposição gastrointestinal a monometilfumarato e propionato Estudo 1: Exposição gastrointestinal (GI) ao propionato
[00296] A fim de medir as concentrações de propionato ao longo da faixa GI, camundongos CD-1 foram administrados oralmente com uma dose única de propionato de sódio deuterado, Composto 3 compreendendo propionato deuterado, ou Composto 6 compreendendo propionato deuterado (Propionate-d3, Composto 3-d12 e Composto 6- d9, respectivamente; suspensão, 1% (p/v) de metilcelulose em água deionizada). As quantidades do composto dosado foram normalizadas para fornecer quantidades aproximadamente equimolares de monometilfumarato (Propionate-d3 a 62 mg/kg, Composto 3-d12 a 110 mg/kg e Composto 6-d9 a 91 mg/kg). As amostras de sangue total e amostras de digesta GI foram coletadas antes da administração da dose; 15 e 30 min; e 1, 2, 4, 8 e 12 horas após a administração da dose.
As amostras de sangue foram coletadas em tubos K 2EDTA e armazenadas em gelo úmido por não mais que 30 min e, em seguida, processadas até o plasma.
As amostras GI foram colocadas em tubos de coleta pré-pesados rotulados separados e congelados antes da análise.
As amostras cerebrais foram homogeneizadas antes da análise.
As amostras foram subsequentemente trabalhadas e analisa- das por LC-MS/MS para concentração de propionato deuterado.
As concentrações de propionato versus tempo para diferentes tecidos são representadas nas FIGS. 4A-4H e 5A-5C.
Certos parâmetros farmacocinéticos estão resumidos na Tabela 3 abaixo.
Tabela 3 Tecido Propionato-d3 derivado de... Tmáx (h) Cmáx (nmol/g) AUCúltima (h×nmol/g)
Propionato-d3 0,25 5540 7020
Estômago Composto 3-d12 1,00 1970 4950
Composto 6-d9 0,25 2140 2550
Propionato-d3 0,25 22 13 Intestino Composto 3-d12 0,25 3370 3160 Proximal Composto 6-d9 0,25 1190 841
Propionato-d3 0,50 9,2 6,6 Intestino Composto 3-d12 1,00 2690 3880 Distal Composto 6-d9 0,50 630 759
Propionato-d3 0,25 29 76
Ceco Composto 3-d12 2,00 1660 4010
Composto 6-d9 2,00 256 696
Propionato-d3 0,25 23 46 Cólon Composto 3-d12 2,00 995 2910 Proximal Composto 6-d9 2,00 133 489
Propionato-d3 0,25 12 31 Cólon Composto 3-d12 4,00 660 2310 Distal Composto 6-d9 4,00 135 447 abaixo do limite de detecção quantitativa Propionato-d3 0,25 Cérebro Composto 3-d12 0,25 1,02 1,18 Composto 6-d9 0,25 0,86 0,62
[00297] Os dados desses experimentos sugerem que os compostos da invenção podem ser metabolizados in vivo para fornecer grandes quantidades de ácido graxo de cadeia curta (SCFA) para diferentes regiões do intestino (Ver FIGS. 4A-4H, parâmetro AUCúltima). Além disso, nos intestinos a quantidade de SCFA derivada de compostos da invenção é maior do que a administração de SCFA apenas. Além disso, os compostos da invenção podem ser metabolizados in vivo para distribuir SCFA ao cérebro; a administração de SCFA só não resulta em quantidades detectáveis de SCFA no cérebro (ver, por exemplo, FIG. 4H e Tabela 2, Cérebro).
[00298] Os dados (Tmáx) sugerem que os compostos da invenção podem alcançar todo o intestino e liberar níveis mais altos de propionato, especialmente quando comparados à distribuição de apenas propionato de sódio. As concentrações mais altas (Cmáx) de propionato-d3 derivado do Composto 3-d12 e Composto 6-d9 foram observadas nos intestinos (proximal e distal). As concentrações mais altas de propionato-d3 administrado por gavash são observadas no estômago com concentrações relativamente mais baixas em outras regiões do intestino. Estudo 2: Exposição gastrointestinal (GI) ao monometilfumarato (MMF)
[00299] As amostras do Exemplo 6, Estudo 1 também foram analisadas por LC-MS/MS para concentrações de monometilfumarato. As concentrações de MMF versus o tempo para diferentes tecidos são representadas nas FIGS. 6A-6F. Certos parâmetros farmacocinéticos estão resumidos na Tabela 4 abaixo.
Tabela 4 Tmáx Cmáx AUCúltima Tecido (h) (nmol/g) (h×nmol/g) Estômago 1,00 1170 3180 Intestino 0,50 76,1 56,4 Proximal Intestino 1,00 142 156 Distal Ceco 2,00 112 297 Cólon 2,00 154 465 Proximal Cólon 4,00 157 568 Distal
[00300] Esses dados sugerem que os compostos da invenção são suficientemente estáveis para serem capazes de distribuir fumarato de monometila para regiões no intestino, incluindo particularmente o cólon. Estudo 3: Exposição gastrointestinal (GI) ao monometilfumarato (MMF)
[00301] Camundongos CD-1 foram administrados por via oral a uma dose única do Composto 3 compreendendo propionato deuterado (Composto 3-d12), Composto 6 compreendendo propionato deuterado (Composto 6-d9), dimetilfumarato ou fumarato de diroximel (todos como suspensões, 1% (p/v) de metilcelulose em água deionizada). As quantidades do composto dosado foram normalizadas para fornecer quantidades aproximadamente equimolares de MMF in vivo (Composto 3-d12 a 110 mg/kg, Composto 6-d9 a 91 mg/kg, dimetilfumarato a 30 mg/kg e fumarato de diroximel a 53 mg/kg). As amostras de sangue total e amostras de digestão GI foram coletadas antes da dosagem; aos 15 e 30 min; e 1, 2, 4, 8 e 12 h após a dosagem. As amostras de sangue foram coletadas em tubos K2EDTA, armazenadas em gelo úmido e, em seguida, processadas até o plasma. As amostras GI foram colocadas em tubos de coleta pré-pesados rotulados separados e congelados antes da análise. As amostras foram subsequentemente trabalhadas e analisadas por LC-MS/MS para concentrações de MMF. As concentrações de MMF versus o tempo para diferentes tecidos são representadas nas FIGS. 7A-7F.
[00302] Os dados desses experimentos sugerem que os compostos da invenção podem ser metabolizados in vivo e fornecer MMF para regiões do intestino. Além disso, os compostos da invenção podem distribuir quantidades mais elevadas de MMF às regiões do intestino quando comparados ao fumarato de dimetilfumarato ou diroximel. Exemplo 7: Ensaio de produção de quimiocina de neutrófilos
[00303] Um volume de 25 mL de sangue humano foi estratificado sobre 15 mL de Histopaque®-1077 e centrifugado a 500 g, RT, por 30 min sem ruptura aplicada à centrífuga. A banda de PBMC e a camada de Histopaque®-1077 foram removidas, deixando a camada vermelha inferior que foi misturada com 40 mL de tampão de lise 1x hemácias (RBC) (Sigma-Aldrich) e dividida em dois tubos de 50 mL. O volume para ambas as frações foi trazido para 50 mL com tampão de lise de RBC, misturado por inversão e, em seguida, incubado em RT por 10 min. As soluções foram centrifugadas a 250 g, por 10 min em RT e os líquidos sobrenadantes removidos. Os pellets avermelhados foram ressuspensos em 1 mL de tampão de lise de RBC e combinados. A suspensão celular foi incubada por 5 min em RT em tampão de lise de RBC. Após a incubação, foram adicionados 45 mL de Solução Salina Equilibrada Hanks sem cálcio, magnésio ou vermelho fenol (HBSS-), a suspensão celular foi girada (250 g por 10 min em RT) e líquidos sobrenadantes foram removidos. O pellet branco foi ressuspenso em 1 mL de HBSS-, e as contagens de células foram determinadas. A suspensão de células de neutrófilos foi trazida a uma concentração de 1,11e6 células/mL em RPMI completo (Sigma-Aldrich), e 180 μL de suspensão de células foram transferidos para todos os poços dentro de uma placa estéril tratada com cultura de tecido de 96 poços, resultando em 2,0 × 105 células/poço.
Os compostos de teste foram trazidos a uma concentração de 20X em RPMI com DMSO a 2% e 10 μL de soluções de composto foram adicionados aos poços respectivos para cada composto e incubados por 30 min.
Após a incubação, 10 μL de solução de LPS de 2 μg/mL em RPMI completa foram adicionados a cada poço, exceto para poços de controle, que receberam 10 μL adicionais de meio.
As células foram incubadas por 12 horas (37°C, 5% CO2), após o qual as placas foram centrifugadas a 250 g, RT, por 5 min e os líquidos sobrenadantes foram obtidos e armazenados a -80°C até serem analisados através do Luminex® Multiplex Assay para várias quimiocinas e citocinas.
Três pontos de dados foram adquiridos de dois doadores de sangue diferentes e calculados em média.
A análise estatística foi realizada usando um teste t bicaudal comparando a produção de quimiocinas/citocinas na presença de cada composto individual com o controle positivo DMSO+LPS.
Os resultados desse ensaio estão resumidos na Tabela 5. Tabela 5 % de IL-8 % de MIP-1α (Veículo + % de MIP-1β Composto Conc. (μM) (Veículo + LPS = 100%) LPS = 100%) (DMSO + LPS = 100%)
acetato 500,0 - + + acetato 1000,0 - ++ + acetato 3000,0 +++ +++ +++ L-arabinose 500,0 - - - L-arabinose 1000,0 - - - galato de epigalocatequina 0,1 - - - galato de epigalocatequina 1,0 - - - quercetina 0,1 - - - quercetina 1,0 - - - (R) 1,3-butanediol 100,0 - - + (R) 1,3-butanediol 500,0 - - + ácido β-hidroxibutírico 200,0 - - + ácido β-hidroxibutírico 2000,0 + ++ + resveratrol 10,0 - + ++ butirato 500,0 ++ +++ +++ butirato 1000,0 ++ +++ +++ propionato 500,0 - +++ +++ propionato 1000,0 ++ +++ +++ propionato 3000,0 +++ +++ +++
Veículo + LPS = 100% - = >90% Veículo + = <90% Veículo
++ = <70% Veículo +++ = <50% Veículo
[00304] Os neutrófilos são frequentemente a primeira resposta do sistema imunitário inato. Há uma ligação entre a presença de neutrófilos e a atividade da doença em, por exemplo, colite ulcerativa. IL-8, MIP1a e MIP1b são quimiocinas importantes produzidas a partir de neutrófilos. Esse trabalho mostra compostos da Tabela 5 redução da produção de neutrófilos de marcadores especificados e, portanto, pode ser útil em uma variedade de distúrbios autoimunes, incluindo esclerose múltipla e psoríase. Exemplos de esclerose múltipla incluem esclerose múltipla progressiva primária, esclerose múltipla progressiva secundária ou esclerose múltipla recidivante-remitente. Outras indicações incluem apneia obstrutiva do sono, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica pequena, hipertensão pulmonar e esclerose sistêmica, glioblastoma multiforme, linfoma cutâneo de células T, artrite reumatoide, artrite psoriática, lúpus e leucoencefalopatia multifocal progressiva. Exemplo 8: Investigação de ativação de AhR em células Caco-2 através da expressão de CYP1A1 mRNA:
[00305] Células Caco-2 da American Type Culture Collection (ATCC) foram plaqueadas em uma placa de 96 poços tratada com cultura de tecido estéril (TermoFisher) a 8,0 x 105 células por poço e cultivadas durante a noite em 37OC, 5% de CO2 em DMEM completo (Gibco) para atingir a confluência. Depois que o meio de incubação foi aspirado das monocamadas Caco-2, os tecidos foram então lavados com 200 μL de solução de PBS aquecida e, subsequentemente, 190μL de meio de crescimento pré-aquecido foram adicionados a cada poço. Os compostos de interesse foram diluídos a uma concentração de 20X no meio de crescimento contendo 2% de DMSO, e 10 μL de soluções de composto foram adicionados aos respectivos poços em triplicado. Os compostos foram incubados durante a noite a 37OC, 5% de CO2. O éster metílico de ácido 2-(1’H-indol-3'-carbonila)-tiazol-4-carboxílico (ITE) foi usado como controle positivo para ativação de AhR em concentrações de 1 e 100 μM. No final da incubação, o meio foi aspirado das células Caco-2 e lavado com 100 μL de solução PBS fria. RNA foi extraído com o TaqMan™ Gene Expression Cells-to-CT™ Kit (ThermoFisher) seguindo o protocolo do fabricante. O QuantStudio 6 Flex (Applied Biosciences) foi usado para analisar os níveis de mRNA de CYP1A1 usando GAPDH como o controle endógeno. Os conjuntos de sonda TaqMan™ para ambos os genes foram adquiridos da ThermoFisher. As amostras foram executadas em triplicado e os dados foram analisados usando o software QuantStudio e relatados como valores lineares (Tabela 6) e de log2(ΔΔCT). Análise estatística foi realizada usando um teste t bicaudal comparando os níveis de CYP1A1 na presença de cada composto individual com o controle negativo do veículo.
[00306] A ativação do receptor de hidrocarboneto de aril (AhR) foi associada à modulação imunológica e os compostos ativos (+, ++, +++) podem ser benéficos no tratamento de uma variedade de doenças inflamatórias e autoimunes, por exemplo, colite ulcerativa, esclerose múltipla, reumatoide artrite. Tabela 6 Conc. (μM) Níveis médios de CYP1A1 mRNA controle do veículo N/A - acetato 1000,0 - acetato 3000,0 - L-arabinose 1000,0 - galato de epigalocatequina 0,1 - galato de epigalocatequina 1,0 - quercetina 0,1 - quercetina 1,0 + butanodiol 500,0 - ácido β-hidroxibutírico 2000,0 - resveratrol 100,0 - butirato 1000,0 - butirato 3000,0 - propionato 1000,0 - propionato 3000,0 - Ácido indol-3-acético 500,0 -
Conc. (μM) Níveis médios de CYP1A1 mRNA Ácido indol-3-acético 1000,0 - Ácido indol-3-butírico 500,0 - Ácido indol-3-butírico 1000,0 - Ácido indol-3-propiônico 500,0 - Ácido indol-3-propiônico 1000,0 - indol 1000,0 + Indol-3-aldeído 1000,0 + indol-3-carbinol 1000,0 + Ácido indol-3-acético 500,0 +++ Ácido indol-3-acético 1000,0 ++ Ácido indol-3-carboxílico 1000,0 - Ácido indol-3-acrílico 1000,0 +++ Ácido indol-3-pirúvico 1000,0 +++ ITE 1μM 1,0 +++ Veículo = avaliação inicial; - = < 2 vezes Veículo; + = > 2 vezes Veículo; ++ = > 5 vezes Veículo; +++ = > 10 vezes Veículo Exemplo 9: Ensaio de Integridade da Barreira do Caco-2 Humano Estudo 1
[00307] Os colonócitos Caco-2 foram mantidos a 37˚C e 5% de CO2 em Meio Eagle Modificado por Dulbecco (DMEM) e suplementados com FBS a 10%, NEAA a 1%, penicilina-estreptomicina a 1%. A 70-80% de confluência, as células foram tripsinizadas e semeadas em membranas tipo transwell revestidas de colágeno I de 0,4 cm2 com DMEM suplementado em ambos os compartimentos apical e basolateral. As células foram semeadas a uma densidade de 200.000 células por poço e mantidas por 10 dias para formar uma barreira polarizada com uma leitura de Resistência Elétrica TransEpitelial (TransEpithelial Electrial Resistance, TEER) acima de 1000. No primeiro dia do ensaio, as leituras de TEER iniciais foram tomadas e as citocinas foram adicionadas ao meio basolateral (50 ng/mL TNF, 25ng/mL IFN e 10 ng/mL IL-1) para reduzir a integridade da barreira enquanto os compostos diluídos em DMSO (dimetilsulfóxido) foram adicionados ao meio apical em triplicado. Após 48 horas, as leituras de TEER foram tomadas novamente e a viabilidade foi medida pelo CellTiter 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay (Promega). A alteração percentual na TEER ao longo das 48 horas foi determinada e normalizada para o controle de DMSO a 0,1% (Tabela 7). Nenhum dos compostos reduziu a proliferação e, portanto, não alterou a viabilidade celular. Tabela 7 % de alteração na TEER em relação ao
DMSO ++ (170%) Sem tratamento - (100%) DMSO + citocinas - Acetato 1 mM+ citocinas - Acetato 3 mM + citocinas b - Arabinose 0,5 mM + citocinas - Arabinose 1 mM + citocinas - galato de epigalocatequina 100 nM + citocinas - galato de epigalocatequina 1 M + citocinas - Quercetina 100 nM + citocinas + Quercetina 1 M + citocinas - (R) 1,3-butanediol 100M + citocinas - (R) 1,3-butanediol 0.5 mM + citocinas + β-hidroxibutirato 200 M + citocinas - β-hidroxibutirato 2 mM + citocinas - Resveratrol 10 M + citocinas +++ Resveratrol 100 M + citocinas - Butirato 1 mM + citocinas - Butirato 3 mM + citocinas ++ Butirato 5 mM + citocinas + Propionato 1 mM + citocinas ++ Propionato 3 mM + citocinas As alterações estatísticas na TEER foram determinadas por meio de ANOVA e comparadas com DMSO. <125%: - 125% > <150%: + 150% > <200%: ++ 200%>: +++
[00308] A função e integridade de barreira são recursos importante de uma variedade de doenças e pode ser uma marca de um trato GI danificado. A inflamação pode conduzir a uma redução da função de barreira. Ao melhorar a função de barreira e, portanto, TEER, ocorre a translocação reduzida de bactérias e produtos bacterianos, reduzindo, assim, a inflamação e os danos ao trato GI e sistemas imunológicos sistêmicos. Os resultados deste ensaio sugerem que compostos ativos (+, ++, +++) podem ser eficazes para o tratamento de doenças autoimunes. Indicações exemplares incluem: Esclerose múltipla e psoríase, esclerose múltipla progressiva primária, esclerose múltipla progressiva secundária ou esclerose múltipla recidivante-remitente. As indicações adicionais incluem apneia obstrutiva do sono, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica pequena, hipertensão pulmonar e esclerose sistêmica, glioblastoma multiforme, linfoma cutâneo de células T, artrite reumatoide, artrite psoriática, lúpus e leucoencefalopatia multifocal progressiva, doença de Parkinson. Estudo 2
[00309] Os colonócitos Caco-2 foram mantidos a 37˚C e 5% de CO2 em Meio Eagle Modificado por Dulbecco (DMEM) e suplementados com FBS a 10%, NEAA a 1%, penicilina-estreptomicina a 1%. A 70-80% de confluência, as células foram tripsinizadas e semeadas em membranas tipo transwell revestidas de colágeno I de 0,4 cm2 com DMEM suplementado em ambos os compartimentos apical e basolateral. As células foram semeadas a uma densidade de 200.000 células por poço e mantidas por 10 dias para formar uma barreira polarizada com uma leitura de Resistência Elétrica TransEpitelial (TransEpithelial Electrial Resistance, TEER) acima de 1000. No primeiro dia do ensaio, as leituras iniciais de TEER foram feitas e dimetilfumarato e ácido propiônico foram adicionados ao meio apical em várias concentrações para afetar a integridade da barreira. As leituras de TEER foram feitas novamente a cada 24 horas e a viabilidade foi medida pelo CellTiter 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay (Promega). A mudança percentual no TEER ao longo das 72 horas foi determinada e normalizada (Tabela 8).
Tabela 8 Composto % de alteração no TEER -28% Dimetilfumarato (10 mM) (em relação ao controle) Dimetilfumarato (10mM) + +12% ácido propiônico (10 mM) (em relação ao dimetilfumarato apenas)
[00310] Em relação à administração de dimetilfumarato isoladamente, uma combinação de propionato e dimetifumarato melhorou a integridade da barreira, uma marca registrada da saúde gastrointestinal. O propionato pode restaurar a disfunção da barreira gastrointestinal causada pelo dimetilfumarato. Exemplo 10: Ensaio de diferenciação de células T reguladoras humanas
[00311] Células mononucleares do sangue periférico (Peripheral Blood Mononuclear Cells, PBMCs) de sangue total doado por voluntários saudáveis foram separadas por centrifugação por gradiente Ficoll-Paque e células T CD4+ não-expostas foram subsequentemente isoladas usando microesferas magnéticas (EasySep™ Human Naïve CD4+ T Cell Isolation Kit, Cambridge, MA). Para um ensaio de diferenciação de células T reguladoras (Treg), células T CD4+ não- expostas foram cultivadas (1-10  104 células) em meio CTS OpTmizer por 6 dias e estimuladas com 5 ng/ml de TGF-, 100 U/ml de IL-2 e o ImmunoCultTM Human CC3/CD28/CD2 T Cell Activator Stemcell #10990) com/sem nossos Compostos. A viabilidade celular foi determinada usando um corante de viabilidade (eBioscience Fixable Viability Dye eFluor 780: ThermoFisher 65-0865-14) com diluição de 1:500. As células foram sincronizadas com Treg, definidas como Vivas, CD11c, CD14, CD19, CD8, CD4+, CD3+, CD25+, FOXP3+. O percentual (%) de Tregs foi calculado como a porcentagem de células CD4+, CD25+, FOXP3+ sobre o total de Células T CD4+. A análise estatística foi realizada com o software GraphPad Prism usando ANOVA unidirecional. Os resultados deste ensaio estão resumidos na Tabela 9. Tabela 9 Indução de Treg Viabilidade celular Tratamento % de DMSO % de DMSO Ácido acético 1 mM + = Ácido acético 3 mM ++ = L-Arabinose 0,5 mM = = L-Arabinose 1 mM = = galato de epigalocatequina 100 nM = = galato de epigalocatequina 1 μM = = Quercetina 100 nM = = Quercetina 1 µM = = (R)-1,3-Butanodiol 100 uM = = (R)-1,3-Butanodiol 0,5 mM = = β-hidroxibutirato de sódio 2 mM + = β-hidroxibutirato de sódio 20 mM =  Ácido butírico 3 mM   Ácido propiônico 3 mM ++ = Rosiglitazona 10 µM = = Rosiglitazona 100 µM =  Resveratrol 1 µM +  Resveratrol 10 µM +  Ácido obeticólico 100 µM + = DMSO = (100,0) = (100%) <90%:  90%> <110%: = 110% > <130%: + 130%>: ++
[00312] A Tabela 9 mostra os compostos que aumentaram a diferenciação das células T CD4+ não-expostas em Tregs (+, ++) ou diminuíram a diferenciação de células T CD4+ não-expostas em Tregs (). As Tregs desempenham um papel importante na manutenção do equilíbrio do sistema imunológico e dos compostos que aumentam as Tregs (+, ++) podem ser úteis no tratamento de doenças autoimunes e inflamatórias. Exemplos de esclerose múltipla incluem esclerose múltipla progressiva primária, esclerose múltipla progressiva secundária ou esclerose múltipla recidivante-remitente. Outras indicações incluem apneia obstrutiva do sono, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica pequena, hipertensão pulmonar e esclerose sistêmica, glioblastoma multiforme, linfoma cutâneo de células T, artrite reumatoide, artrite psoriática, lúpus e leucoencefalopatia multifocal progressiva e doença de Parkinson. Exemplo 11: Efeito do tratamento do composto na liberação de citocinas a partir de monócitos de sangue periférico humano (PBMCs)
[00313] Sangue de doador humano (8 mL) foi coletado em tubos CPT de citrato de sódio e centrifugado a 1.600 g por 20 minutos em temperatura ambiente. O revestimento de tampão contendo PBMCs foi coletado e transferido para um tubo cônico de 50 mL contendo 30 mL de meio RPMI-1640 em temperatura ambiente (suplementado com penicilina-estreptomicina). Amostras PBMCs foram centrifugadas a 400 g por 10 minutos a 10C. Os PBMCs peletizados foram lavados duas vezes em 10 ml de meio RPMI-1640 (suplementado com penicilina- estreptomicina), em seguida, ressuspensas em meio RPMI-1640 (suplementado com penicilina-estreptomicina, soro fetal bovino e L- Glutamina). Os PBMCs foram filtrados com uma malha de 70 mícrons para remover quaisquer detritos celulares. O volume foi ajustado para chegar a 1,66  106 células/mL, do qual 180 L (300.000 PBMCs) foram adicionados em cada poço em uma placa de 96 poços (estéril, tratada com cultura de tecido, fundo redondo). Os PBMCs em uma placa de 96 poços foram deixados em repouso por 30 minutos em uma incubadora a 37C, 5% de CO2, então, posteriormente tratada com 10 L do composto indicado. Após 2 horas, 10 L de LPS (O111:B4) 1 mg/mL foram adicionados aos poços de teste. Após 24 horas de incubação a 37C, 5% de CO2,, 100 L de sobrenadante celular foram coletados e transferidos para uma placa de 96 poços (não tratada para tecidos, fundo plano). A placa foi centrifugada a 350 g por 5 minutos em temperatura ambiente e então o sobrenadante transparente foi transferido para uma nova placa de 96 poços (não tratada para tecidos, fundo plano). As células restantes foram testadas quanto à viabilidade usando CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay (Promega). O sobrenadante foi analisado para TNF, IL-6 e IL-1 (kit LXSAHM-03; R&D Systems), usando Luminex Imunoassay Technology (sistema MAGPIX). Os níveis de citocina das amostras de controle de DMSO tratadas com LPS foram definidos como 100% e as amostras tratadas com compostos foram expressas em relação a isso (Tabela 10). Tabela 10: IL6 IL1β TNFα Composto Concentração (µM) % de controle de % de controle de % de controle de DMSO
DMSO DMSO Propionato 100 + + + Arabinose 100 + + = (R) 1,3-butanediol 100 = = = β-hidroxibutirato 100 - = - Butirato 100 ++ + - Acetato 100 = = = Quercetina 100 + + + Resveratrol 100 + + = (-) >110% de DMSO; (=) 90% > <110% de DMSO (+) 50%> <90% de DMSO (++) < 50% de DMSO
[00314] Os compostos que são ativos neste ensaio (+, ++) mostram atividade anti-inflamatória em culturas de monócitos humanos, conforme indicado pela redução de citocinas pró-inflamatórias segregadas. No contexto da estimulação de células com LPS, isso desencadeia uma série de respostas pró-inflamatórias que são representativas de distúrbios autoimunes. Como resultado dessas vias sendo ativadas, moléculas de sinalização pró-inflamatórias são liberadas (IL-6, IL-1βe TNFα). A redução dessas citocinas sugere que os compostos seriam eficazes no tratamento de doenças autoimunes. Indicações exemplares incluem: Esclerose múltipla e psoríase, esclerose múltipla progressiva primária, esclerose múltipla progressiva secundária ou esclerose múltipla recidivante-remitente. As indicações adicionais incluem apneia obstrutiva do sono, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica pequena, hipertensão pulmonar e esclerose sistêmica, glioblastoma multiforme, linfoma cutâneo de células T, artrite reumatoide, artrite psoriática, lúpus e leucoencefalopatia multifocal progressiva, doença de Parkinson.
OUTRAS MODALIDADES
[00315] Várias modificações e variações da invenção descrita serão evidentes para aqueles versados na técnica sem se afastar do escopo e espírito da invenção. Embora a invenção tenha sido descrita em conexão com modalidades específicas, deve ser entendido que a invenção, conforme reivindicada, não deve ser indevidamente limitada a tais modalidades específicas. De fato, várias modificações dos modos descritos para a realização da invenção que são óbvias para aqueles versados na técnica destinam-se a estar dentro do escopo da invenção.
[00316] Outras modalidades estão nas reivindicações.

Claims (71)

REIVINDICAÇÕES
1. Conjugado de fumarato de monometila e um grupo carreador ou grupo aminocarreador, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o acil do fumarato de monometila é ligado covalentemente ao grupo carreador ou ao grupo aminocarreador através de uma ligação carbono-oxigênio que é clivável in vivo.
2. Conjugado, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o conjugado compreende um grupo carreador compreendendo um núcleo com uma ou mais hidroxilas independentemente substituídas por um acila.
3. Conjugado, de acordo com a reivindicação 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que a acila é uma acila de ácido graxo.
4. Conjugado, de acordo com a reivindicação 2 ou 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o núcleo é um monossacarídeo.
5. Conjugado, de acordo com a reivindicação 4, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o monossacarídeo é selecionado de um grupo que consiste em glicose, ribose, arabinose, fucose, galactose, manose, ramnose, tagatose e xilose.
6. Conjugado, de acordo com a reivindicação 4, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o monossacarídeo é glicose ou ribose.
7. Conjugado, de acordo com a reivindicação 2 ou 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o núcleo é um aminomonossacarídeo.
8. Conjugado, de acordo com a reivindicação 7, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o aminomonossacarídeo é glucosamina.
9. Conjugado, de acordo com a reivindicação 2 ou 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o núcleo é um monossacarídeo ácido.
10. Conjugado, de acordo com a reivindicação 9, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o monossacarídeo ácido é ácido glicurônico.
11. Conjugado, de acordo com a reivindicação 2 ou 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o núcleo é uma C5-6 piranose.
12. Conjugado, de acordo com a reivindicação 11, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que a C5- 6 piranose é um alfa-anômero.
13. Conjugado, de acordo com a reivindicação 11, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o núcleo de C5-6 piranose é um beta-anômero.
14. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que a ligação carbono-oxigênio que é clivável in vivo é uma ligação éster.
15. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 13, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que a ligação carbono-oxigênio que é clivável in vivo é uma ligação glicosídica ligada ao átomo de carbono anomérico da C5-6 piranose.
16. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 13, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que a ligação carbono-oxigênio que é clivável in vivo é uma ligação ligada à posição 4 da C5-6 piranose.
17. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 15, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que a ligação carbono-oxigênio que é clivável in vivo é uma ligação ligada à posição 6 da C5-6 piranose.
18. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o conjugado compreende uma acila de ácido graxo que é uma acila de ácido graxo de cadeia curta.
19. Conjugado, de acordo com a reivindicação 18, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que a acila de ácido graxo é propionila ou butirila.
20. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o conjugado compreende uma acila de ácido graxo que é um acil graxo de cadeia média.
21. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o núcleo é peracilado.
22. Conjugado de fumarato de monometila e um grupo carreador, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que a acila de fumarato de monometila é ligado covalentemente ao grupo carreador através de uma ligação carbono- oxigênio que é clivável in vivo, em que o grupo carreador compreende um núcleo de polifenol catequina.
23. Conjugado, de acordo com a reivindicação 22, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o conjugado é um composto da seguinte estrutura:
, em que é uma ligação carbono-carbono simples ou ligação carbono-carbono dupla; Q é –CH2– ou –C(O)–; cada R1 e cada R3 é independentemente H, halogênio, – ORA; R2 é H ou –ORA; cada RA é independentemente H, alquila, acila de ácido graxo de cadeia curta, acila de fumarato de monometila, ou benzoil opcionalmente substituídos por 1, 2, 3 ou 4 substitutos independentemente selecionados do grupo consistindo em H, hidróxi, halogênio, alquila opcionalmente substituído, alcóxi, acila de ácido graxo de cadeia curta, ou acila de fumarato de monometila; e cada um dentre n e m é independentemente 1, 2, 3, ou 4.
24. Conjugado, de acordo com a reivindicação 23, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que cada R1 e cada R3 é independentemente H ou –ORA.
25. Conjugado, de acordo com a reivindicação 22 ou 23, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que cada RA é independentemente H ou acila de fumarato de monometila.
26. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 25, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que n é 2.
27. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 26, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que m é 1 ou 2.
28. Conjugado de fumarato de monometila e um grupo carreador, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o acila de fumarato de monometila é ligado covalentemente ao grupo carreador através de uma ligação carbono- oxigênio que é clivável in vivo, em que o grupo carreador compreende um núcleo de álcool de açúcar da fórmula: HOCH2(CHOH)nCH2OH , em que n é 1, 2, 3 ou 4; e um ou mais dos grupos hidroxila é independentemente substituído por uma alquila, acila ou uma ligação ao fumarato de monometila.
29. Conjugado, de acordo com a reivindicação 28, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que n é
1.
30. Conjugado, de acordo com a reivindicação 28 ou 29, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o núcleo de álcool de açúcar tem uma ou mais hidroxilas independentemente substituídas por uma acila graxo de cadeia curta.
31. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 28 a 30, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o grupo acila de ácido graxo é propionila ou butirila.
32. Conjugado, caracterizado pelo fato de que apresenta a seguinte estrutura: ,
ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
33. Conjugado, caracterizado pelo fato de que apresenta a seguinte estrutura: , ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
34. Conjugado, caracterizado pelo fato de que apresenta a seguinte estrutura: , ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
35. Conjugado, caracterizado pelo fato de que apresenta a seguinte estrutura: ,
ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
36. Conjugado, caracterizado pelo fato de que apresenta a seguinte estrutura: , ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
37. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende: (i) conjugado, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 36, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, e (ii) um carreador farmaceuticamente aceitável.
38. Método de tratamento de um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz do conjugado, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 36, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, ou a composição, como definida na reivindicação 37, a um indivíduo em necessidade deste.
39. Método, de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que o indivíduo sofre de um distúrbio autoimune.
40. Método, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o distúrbio autoimune é esclerose múltipla, psoríase, artrite psoriática, artrite reumatoide, lúpus eritematoso sistêmico, doença de Crohn, síndrome de Sjogren, doença de Behcet, colite ulcerativa ou síndrome de Guillain-Barré.
41. Método, de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que o indivíduo sofre de esclerose múltipla.
42. Método, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que a esclerose múltipla é esclerose múltipla progressiva primária.
43. Método, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que a esclerose múltipla é esclerose múltipla progressiva secundária.
44. Método, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que a esclerose múltipla é esclerose múltipla recidivante- remitente.
45. Método, de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que o indivíduo sofre de apneia obstrutiva do sono, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfocítica pequena, hipertensão pulmonar de esclerose sistêmica, glioblastoma multiforme, linfoma cutâneo de células T ou leucoencefalopatia multifocal progressiva.
46. Método, de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que o indivíduo sofre de adrenoleucodistrofia, dano genômico induzido por idade, doença de Alexander, doença de Alper, doença de Alzheimer, esclerose lateral amiotrófica, angina pectoris, artrite, asma, esclerose concêntrica de baló, doença de Canavan, insuficiência cardíaca incluindo insuficiência ventricular esquerda, vasculite do sistema nervoso central, Doença de Charcott-Marie-Tooth, ataxia infantil com hipomielinação do sistema nervoso central, neuropatia periférica idiopática crônica, doença pulmonar obstrutiva crônica, retinopatia diabética, doença de enxerto-versus- hospedeiro, infecção viral de hepatite C, infecção viral de herpes simples, infecção viral de immunodeficiência humana, doença de Huntington, síndrome do intestino irritável, isquemia, doença de Krabbe, líquen plano, degeneração macular, encefalomiopatia mitocondrial, amiotrofia monomélica, infecção miocárdica, neurodegeneração com acúmulo de ferro no cérebro, neuromielite óptica, neurossarcoidose,
neurite óptica, síndrome paraneoplásica, doença de Parkinson, doença de Pelizaeus-Merzbacher, esclerose lateral primária, paralisia supranuclear progressiva, lesão por reperfusão, retinite pigmentosa, doença de Schilder, mielopatia necrotizante subaguda, síndrome de susac, mielite transversa, síndrome de Zellweger, granuloma anular, pênfigo, penfigoide bolhoso, dermatite de contato, dermatite aguda, dermatite crônica, alopecia areata (total ou universal), sarcoidose, sarcoidose subcutânea, pioderma gangrenoso, lúpus cutâneo, ou doença de Crohn cutânea.
47. Método, de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que o indivíduo sofre de poliartrite, diabetes de início juvenil, diabetes tipo II, tireoidite de Hashimoto, doença de Grave, anemia perniciosa, hepatite autoimune ou neurodermatite.
48. Método, de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que o indivíduo sofre de retinopatia pigmentosa ou formas de encefalomiopatia mitocondrial, esclerodermia sistêmica progressiva, osteocondrite sífilica (doença de Wegener), cutis marmorata (livedo reticularis), panarterite, vasculite, osteoartrite, gota, arteriosclerose, Doença de Reiter, granulomatose pulmonar, choque endotóxico (choque tóxico-séptico), sepse, pneumonia, encefalomielite, anorexia nervosa, hepatite aguda, hepatite crônica, hepatite tóxica, hepatite induzida por álcool, hepatite viral, insuficiência hepática, hepatite citomegaloviral, Linfomatose T de Rennert, nefrite mesangial, reestenose pós-angioplásica, síndrome de reperfusão, retinopatia citomegaloviral, resfriado adenoviral, febre adenoviral faringoconjuntival, oftalmia adenoviral, AIDS, neuralgia pós-herpética ou pós-zoster, polineuropatia desmielinizante inflamatória, mononeuropatia múltipla, mucoviscidose, doença de Bechterew, Esôfago de Barett, Infecção por vírus Epstein-Barr, remodelação cardíaca, cistite intersticial, diabetes mellitus tipo II, radiossensibilização de tumor humano, resistência a múltiplos medicamentos na quimioterapia, carcinoma mamário, carcinoma do cólon, melanoma, carcinoma primário de células hepáticas, adenocarcinoma, Sarcoma de Kaposi, carcinoma de próstata, leucemia, leucemia mieloide aguda, mieloma múltiplo (plasmocitoma), linfoma de Burkitt, Tumor de Castleman, insuficiência cardíaca, infarto do miocárdio, angina pectoris, asma, doenças pulmonares obstrutivas crônicas, absorção de timidina induzida por PDGF induziu a absorção de timidina de células do músculo liso brônquico, proliferação de células do músculo liso brônquico, alcoolismo, doença de Alexander, doença de Alper, doença de Alzheimer, ataxia telangiectasia, Doença de Batten (também conhecida como doença de Spielmeyer-Vogt-Sjögren-Battendise), encefalopatia espongiforme bovina (BSE), Paralisia cerebral, Síndrome de Cockayne, degeneração corticobasal, Doença de Creutzfeldt-Jakob, insônia familiar fatal, degeneração lobar frontotemporal, doença de Huntington, demência associada ao HIV, doença de Kennedy, doença de Krabbe, demência por corpos de Lewy, neuroborreliose, doença de Machado-Josef (Ataxia Espinocerebelar tipo 3), atrofia de múltiplos sistemas, narcolepsia, doença de Niemann Pick, doença de Pelizaeus-Merzbacher, Doença de Pick, esclerose lateral primária, doença de príon, paralisia supranuclear progressiva, doença de Refsum, doença de Sandhoff, degeneração combinada subaguda da medula espinhal secundária à anemia perniciosa, ataxia espinocerebelar, atrofia muscular espinhal, doença de Steele- Richardson-Olszewski, Tabes dorsalis, encefalopatia tóxica, LHON (neuropatia óptica hereditária de Leber), MELAS (Encefalomiopatia mitocondrial; Acidose láctica; AVC), MERRF (Epilepsia mioclônica; fibras vermelhas rasgadas), PEO (optoalmoplegia externa progressiva), síndrome de Leigh, MNGIE (miopatia e oftalmoplegia externa; neuropatia; gastrointestinal; encefalopatia), síndrome de Kearns-Sayre
(KSS), NARP, paraparesia espástica hereditária, miopatia mitocondrial, ataxia de Friedreich, neurite óptica, polineuropatia desmielinizante inflamatória aguda (AIDP), polineuropatia desmielinizante inflamatória crônica (CIDP), mielite transversa aguda, encefalomielite disseminada aguda (ADEM), ou atrofia óptica de Leber.
49. Método de modulação de um marcador de autoimunidade, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz do conjugado, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 36, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, ou a composição, como definida na reivindicação 37, a um indivíduo em necessidade deste.
50. Método, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado pelo fato de que o marcador de autoimunidade é para esclerose múltipla, psoríase, artrite psoriática, artrite reumatoide, lúpus eritematoso sistêmico, doença de Crohn, síndrome de Sjogren, doença de Behcet, colite ulcerativa ou síndrome de Guillain-Barré.
51. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 38 a 50, caracterizado pelo fato de que um nível de mRNA de CYP1A1, motilidade intestinal, contagem de células Treg CD4+CD25+, nível de ácido graxo de cadeia curta ou secreção de muco é aumentado após a etapa de administração.
52. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 38 a 51, caracterizado pelo fato de que dor abdominal, inflamação gastrointestinal, permeabilidade gastrointestinal, sangramento gastrointestinal, motilidade intestinal ou frequência de movimentos intestinais é reduzida após a etapa de administração.
53. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 38 a 52, caracterizado pelo fato de que um nível de interleucina-8 (IL8), nível de proteína inflamatória 1α de macrófagos (MIP-1α), nível de proteína inflamatória de macrófagos 1β (MIP-1β), nível de NFκB, nível de sintase de óxido nítrico induzível (iNOS), nível de metalopeptidase de matriz 9 (MMP9), nível de interferon γ (IFNγ), nível de interleucina- 17 (IL17), nível de molécula de adesão intercelular (ICAM), nível de CXCL13, nível de 8-iso-prostaglandina F2α (8-iso-PGF2α), nível de IgA, nível de calprotectina, nível de lipocalin-2, ou nível de sulfato de indoxila são reduzidos após a etapa de administração.
54. Método, de acordo com a reivindicação 53, caracterizado pelo fato de que um nível de interleucina-8 (IL8), nível de proteína inflamatória de macrófagos 1α (MIP-1α), ou nível de proteína inflamatória de macrófagos 1β (MIP-1β) são reduzidos após a etapa de administração.
55. Método de modulação de um marcador de esclerose múltipla, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz do conjugado, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 36, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, ou a composição, como definida na reivindicação 37, a um indivíduo em necessidade deste.
56. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 38 a 55, caracterizado pelo fato de que um nível de expressão de Nrf2, nível de ácido cítrico, nível de serotonina, nível de ácido β- hidroxibutírico, nível de ácido docosa-hexaenoico, nível de putrescina, nível de ácido N-metil nicotínico, nível de ácido láurico, ou nível de ácido araquidônico é aumentado após a etapa de administração.
57. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 38 a 56, caracterizado pelo fato de que um nível de L-citrulina, nível de ácido picolínico, nível de ácido quinolínico, nível de ácido 2- cetoglutárico, razão de L-quinurenina/L-triptofano, nível de ácido quiunurênico, nível de prostaglandina E2, nível de leucotrieno B4, nível de ácido linolênico, contagem de células T CD8+, contagem de células B de memória, contagem de células EM CD4+, ou número cumulativo de novas lesões de Gd+, nível de L-fenilalanina, nível de ácido hipúrico, ou nível de ácido eicosapentaenoico são reduzidos após a etapa de administração.
58. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 38 a 57, caracterizado pelo fato de que um nível de ácido 2-hidróxi- isovalérico está reduzido na urina do indivíduo.
59. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 38 a 58, caracterizado pelo fato de que um nível de ácido 2-hidróxi- isovalérico está reduzido no líquido cefalorraquidiano do indivíduo.
60. Método de distribuição de uma porção de fumarato de monometila a um local alvo em um indivíduo em necessidade deste, caracterizado pelo fato de que compreende a administração, ao indiví- duo do conjugado, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 36, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, ou composição, como definida na reivindicação 37.
61. Método, de acordo com a reivindicação 60, caracterizado pelo fato de que o local alvo é o intestino delgado do indivíduo.
62. Método, de acordo com a reivindicação 61, caracterizado pelo fato de que o local alvo é o intestino delgado proximal ou o intestino delgado distal do indivíduo.
63. Método, de acordo com a reivindicação 60, caracterizado pelo fato de que o local alvo é o ceco do indivíduo.
64. Método, de acordo com a reivindicação 60, caracterizado pelo fato de que o local alvo é o cólon do indivíduo.
65. Método, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado pelo fato de que o local alvo é o cólon proximal ou o cólon distal do indivíduo.
66. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 49 a 65, caracterizado pelo fato de que o indivíduo sofre de esclerose múltipla.
67. Método, de acordo com a reivindicação 66, caracterizado pelo fato de que a esclerose múltipla é esclerose múltipla progressiva primária.
68. Método, de acordo com a reivindicação 66, caracterizado pelo fato de que a esclerose múltipla é esclerose múltipla progressiva secundária.
69. Método, de acordo com a reivindicação 66, caracterizado pelo fato de que a esclerose múltipla é esclerose múltipla recidivante- remitente.
70. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 38 a 69, caracterizado pelo fato de que o método compreende a administração do conjugado ao indivíduo por via oral ou subcutânea.
71. Método, de acordo com a reivindicação 70, caracterizado pelo fato de que o método compreende a administração do conjugado ao indivíduo por via oral.
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