BR112021008714A2 - compostos de anel espiroaromático de fórmula i, método de preparação, composição farmacêutica e uso dos mesmos - Google Patents

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Jing Li
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Abstract

COMPOSTOS DE ANEL ESPIROAROMÁTICO DE FÓRMULA I, MÉTODO DE PREPARAÇÃO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA E USO DOS MESMOS. A presente invenção refere-se a um composto da Fórmula I ou um sal, enantiômero, diastereômero, tautômero, solvato, substituinte isotópico, polimorfo, profármaco ou metabólito farmaceuticamente aceitável do mesmo. Além disso, é fornecido um método para preparar o composto da Fórmula I. O composto da Fórmula I tem maior atividade inibitória contra a SHP2 e pode ser, então, usado para prevenção ou o tratamento contra uma doença relacionada à SHP2.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COM- POSTOS DE ANEL ESPIROAROMÁTICO DE FÓRMULA I, MÉTODO DE PREPARAÇÃO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA E USO DOS MESMOS".
CAMPO DA TÉCNICA
[001] A presente invenção refere-se a compostos de anel espiro- aromático. Em particular, a divulgação se refere a compostos de anel espiroaromático que podem ser usados como um inibidor de SHP2, aos sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, ou enantiômeros, diastereoisômeros, tautômeros, solvatos, derivado substituído por isó- topo, profármacos ou metabólitos dos mesmos. Além disso, a divulga- ção também se refere a métodos para a preparação dos compostos, composições farmacêuticas que compreendem os compostos e uso dos compostos na preparação de medicamentos para a prevenção ou o tratamento de doenças ou afecções relacionadas à atividade anor- mal de SHP2.
ANTECEDENTES
[002] A proteína tirosina fosfatase SHP2 exerce uma função im- portante na sinalização celular e é um alvo para o tratamento de doen- ças maiores, tais como diabetes, doenças autoimunes e cânceres. A SHP2 sofre mutação ou é altamente expressa em várias doenças, tais como Síndrome de Noonan, Síndrome Leopard, leucemia mielomono- cítica juvenil, neuroblastoma, melanoma, leucemia mieloide aguda, câncer de mama, câncer de esôfago, câncer de pulmão, câncer de có- lon, câncer de cabeça, neuroblastoma, carcinoma de células escamo- sas de cabeça e pescoço, câncer gástrico, linfoma anaplásico de célu- las grandes e glioblastoma etc. Estudos de biologia molecular mostram que a SHP2 está envolvida em múltiplas vias de sinalização de células tumorais, tais como MAPK, JAK/STAT e PI3K/Akt etc. Ao mesmo tem- po, a SHP2 também é responsável pela transdução de sinal da via imunossupressora de PD1-PDL1. Portanto, a inibição da atividade de SHP2 pode reverter a imunossupressão no microambiente tumoral.
[003] A SHP2 consiste em dois domínios de Homologia a Src 2 N-terminais (N-SH2 e C-SH2) e em um domínio catalítico da proteína tirosina fosfatase (PTP). No estado de autoinibição, a N-SH2 é combi- nada com PTP para formar uma estrutura de anel, que impede a liga- ção de PTP ao substrato, desse modo, inibindo a atividade catalítica enzimática; quando a tirosina de uma proteína de receptor a montante é fosforilada e se liga ao domínio catalítico de N-SH2, a PTP é liberado para exibir atividade de fosfatase.
[004] Atualmente, o desenvolvimento de inibidores de SHP2 está voltado principalmente para inibidores alostéricos na região não catalí- tica, tais como os compostos divulgados nos documentos n° WO2015107493A1, WO2016203404A1, WO2016203406A1, WO2017216706A1, WO2017211303A1, CN201710062495, WO2018136265A1, WO2018057884 etc. A pesquisa desse ano mos- tra a SHP2, como um novel alvo que pode ter drugabilidade, tem atraí- do cada vez mais atenção. Portanto, há uma necessidade urgente na técnica de desenvolver inibidores de SHP2 com estruturas inovadoras, boa atividade biológica e alta drugabilidade.
SUMÁRIO
[005] Um objeto da divulgação é fornecer um composto da Fór- mula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, uma compo- sição farmacêutica que compreende o composto ou o sal farmaceuti- camente aceitável do mesmo, e uso do composto ou a composição farmacêutica na prevenção ou o tratamento contra doenças ou afec- ções relacionadas à atividade anormal de SHP2.
[006] O primeiro aspecto da divulgação fornece um composto da Fórmula I:
, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou um enantiômero, diastereoisômero, tautômero, solvato, derivado substituído por isótopo, polimorfo, profármaco ou metabólito do mesmo, em que: X1 e X2 são selecionados independentemente a partir de uma ligação, O, CRaRb ou NRc; X3 é selecionado a partir de uma ligação CRaRb, NRc, S ou O; X4 é selecionado a partir de um N ou CRc; e Ra, Rb e Rc são selecionados independentemente a partir de H, halogênio, C1-6 alquila substituída ou não substituída ou C1-6 alcoxila substituída ou não subs- tituída; R1, R2, R3, R4 e R7 são selecionados independentemente a partir de H, -OH, halogênio, amino substituído ou não substituído, C1-6 alquila substituída ou não substituída ou C1-6 alcoxila substituída ou não substituída; e R1, R2, R3, R4 e R7 não podem ser -OH ou -NH2 si- multaneamente; anel A é selecionado a partir de C4-8 hidrocarbila cíclica substituída ou não substituída, heterociclila com 4 a 8 membros substi- tuídos ou não substituídos, C5-10 arila substituída ou não substituída ou heteroarila com 5 a 10 membros substituída ou não substituída, em que a heterociclila ou heteroarila compreende 1 a 3 heteroátomos se- lecionados a partir dos seguintes átomos: N, O, S ou P; o anel C é selecionado a partir de C4-8 hidrocarbila cíclica substituída ou não substituída, heterociclila monocíclica com 5 a 6 membros substituída ou não substituída, heterociclila bicíclica com 8 a
10 membros substituída ou não substituída, C5-10 arila monocíclica ou bicíclica substituída ou não substituída, heteroarila monocíclica com 5 a 6 membros substituída ou não substituída, ou heteroarila bicíclica com 8 a 10 membros substituída ou não substituída, em que a hetero- ciclila ou heteroarila compreende 1-4 heteroátomos selecionados a partir dos seguintes átomos: N, O, S ou P; R5 e R6 são selecionados independentemente a partir de H, -OH, halogênio, ciano, amino substituído ou não substituído, C1-6 alqui- la substituída ou não substituída ou C1-6 alcoxila substituída ou não substituída; n é qualquer número inteiro de 0 a 3; e e "substituído(a)" se refere a um ou mais átomos de hidro- gênio no grupo que são substituídos por um substituinte selecionado a partir dos seguintes substituintes: halogênio, -OH, -NO2, -NH2, -NH(C1- 6 alquila não substituída ou halogenada), -N(C1-6 alquila não substituí- da ou halogenada)2, -CN, C1-8 alquila não substituída ou halogenada, C1-8 alcoxila não substituída ou halogenada, C1-8 alcoxil-C1-8 alquila não substituída ou halogenada, C3-8 cicloalquil-C1-8 alquila não substi- tuída ou halogenada, C1-6 alquil carbonila não substituída ou haloge- nada, C1-6 alcoxil carbonila não substituída ou halogenada, grupo ácido hidroxâmico, C1-6 alquil tiol não substituída ou halogenada, -S(O)2N( C1-6 alquila não substituída ou halogenada)2, -S(O)2 C1-6 alquila não substituída ou halogenada, -N(C1-6 alquila não substituída ou haloge- nada)S(O)2N(C1-6 alquila não substituída ou halogenada)2, -S(O)N(C1-6 alquila não substituída ou halogenada)2, -S(O)(C1-6 alquila não substi- tuída ou halogenada), -N(C1-6 alquila não substituída ou halogena- da)S(O)N(C1-6 alquila não substituída ou halogenada)2, -N(C1-6 alquila não substituída ou halogenada)S(O)(C1-6 alquila não substituída ou halogenada), C5-10 arila não substituída ou halogenada, heteroarila com 5 a 10 membros não substituída ou halogenada, C4-8 hidrocarbila cíclica não substituída ou halogenada ou heterociclila com 4 a 8 mem- bros não substituída ou halogenada, em que a heterociclila e heteroari- la compreendem 1-4 heteroátomos selecionados a partir de dos se- guintes átomos: N, O ou S.
[007] Como uma modalidade preferencial, um dentre X1 e X2 é CH2, e o outro é uma ligação.
[008] Como uma modalidade preferencial, X3 é S.
[009] Como uma modalidade preferencial, X4 é selecionado a partir de N ou CH.
[0010] Como uma modalidade preferencial, R1, R2, R3, R4 e R7 são selecionados independentemente a partir de H, -OH, -F, -Cl, -Br, -NH2, -NHC1-3 alquila, metila, etila, propila, isopropila, butila, metóxi, etóxi, propóxi ou isopropóxi; C1-3 alquila substituída por halogênio, -NH2, - OH, C1-3 alquila ou C1-3 alcoxila; ou C1-3 alcoxila substituída por halo- gênio, -NH2, -OH, C1-3 alquila ou C1-3 alcoxila.
[0011] Como uma modalidade preferencial, R5 e R6 são seleciona- dos independentemente a partir de H, -OH, -F, -Cl, -Br, -CN, -NH2, - NHC1-3 alquila, metila, etila, propila, isopropila, butila, metóxi, etóxi, propóxi ou isopropóxi; C1-3 alquila substituída por halogênio, -NH2, - OH, C1-3 alquila ou C1-3 alcoxila; ou C1-3 alcoxila substituída por halo- gênio, -NH2, -OH, C1-3 alquila ou C1-3 alcoxila.
[0012] Como uma modalidade preferencial, o substituinte é seleci- onado a partir de –F, -Cl, -Br, -OH, -NO2, -NH2, -NH(C1-6 alquila), - N(C1-6 alquila)2, -CN, C1-6 alquila, C1-4 alcoxila, C1-4 alcoxil-C1-6 alquila, C3-8 cicloalquil-C1-8 alquila, C1-6 alquil carbonila, C1-6 alcoxil carbonila, C1-6 alquil tiol, -S(O)2N(C1-6 alquila)2, -S(O)2 C1-6 alquila, -N(C1-6 al- quil)S(O)2N(C1-6 alquila)2, -S(O)N(C1-6 alquila)2, -S(O)(C1-6 alquila), - N(C1-6 alquil)S(O)N(C1-6 alquila)2, -N(C1-6 alquil)S(O)(C1-6 alquila), C5-10 arila substituída ou não substituída, heteroarila com 5 a 10 membros substituída ou não substituída, C4-8 hidrocarbila cíclica substituída ou não substituída ou heterociclila com 4 a 8 membros substituída ou não substituída, em que a heterociclila e heteroarila compreendem 1-4 he- teroátomos selecionados a partir dos seguintes átomos: N, O ou S.
[0013] Como uma modalidade preferencial, o substituinte é seleci- onado a partir de –F, -Cl, -Br, -OH, -NO2, -NH2, -NH(C1-3 alquila), - N(C1-3 alquila)2, -CN, C1-3 alquila, C1-3 alcoxila, C1-3 alquil carbonila, ci- clopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclopentenila, ciclo-hexila, ciclo- hexenila, ciclo-hexadienila, ciclo-heptila, ciclo-octila, pirrolidinila, morfo- linila, piperazinila, homopiperazinila, piperidinila, tiomorfolinila, fenila, naftila, antracila, fenantrila, fluorenila, tiofenila, imidazolila, pirazolila, tiazolila, oxazolila, oxadiazolila, isoxazolila, piridila, pirimidinila, pirazini- la, piridazinila, benzimidazolila, benzopirazolila, indolila, furanila, pirroli- la, triazolila, tetrazolila, triazinila, indolizinila, isoindolila, indazolila, isoindazolila, purinila, quinolinila ou isoquinolinila.
[0014] Como uma modalidade preferencial, o substituinte é seleci- onado a partir de –F, -Cl, -Br, -OH, -NO2, -NH2, -NH(C1-3 alquila), - N(C1-3 alquil)2, -CN, metila, etila, propila, isopropila, butila, metóxi, etó- xi, propóxi, isopropóxi ou fenila.
[0015] Como uma modalidade preferencial, o anel C é selecionado a partir de qualquer um dos seguintes grupos: , ou ; em que: X5, X6, X7, X8 e X9 são selecionados independentemente a partir de N ou CRd; e, no máximo, 3 dentre X5, X6, X7, X8 e X9 são N simultaneamente; X10, X11, X12, X13, X14, X15, X16 e X17 são selecionados inde- pendentemente a partir de N ou CRd; e, no máximo, 5 dentre X10, X11, X12, X13, X14, X15, X16 e X17 são N simultaneamente; X18, X19, X20 e X21 são selecionados independentemente a partir de N ou CRd, e, no máximo, 3 dentre X18, X19, X20 e X21 são N simultaneamente; R6 e R8 são selecionados independentemente a partir de H, -NH2, -CN, -OH, -NO2, halogênio, C1-6 alquila não substituída ou halo- genada ou C1-6 alcoxila não substituída ou halogenada; e Rd é selecionado a partir de H, halogênio, C1-6 alquila não substituída ou halogenada ou C1-6 alcoxila não substituída ou haloge- nada.
[0016] Como uma modalidade preferencial, o anel C é selecionado a partir de qualquer um dos seguintes grupos: ou ; em que: 0, 1 ou 2 dentre X5, X6, X7, X8 e X9 são N, os outros são CRd; 0, 1 ou 2 dentre X18, X19, X20 e X21 são N, os outros são CRd; R6 é selecionado a partir de H, -NH2, -CN, -OH, -NO2, -F, - Cl, -Br, metila, etila, propila, isopropila, butila, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, C1-3 alquila fluorada ou bromada, C1-3 alcoxila fluorada ou bromada; e Rd é selecionado a partir de H, -F, -Cl, -Br, metila, etila, pro- pila, isopropila, butila, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, C1-3 alquila fluorada ou bromada ou C1-3 alcoxila fluorada ou bromada.
[0017] Como uma modalidade preferencial, o anel C é selecionado a partir de qualquer um dos seguintes grupos: , , . ou
[0018] Como uma modalidade preferencial, o anel A é selecionado a partir de C4-6 hidrocarbila cíclica substituída ou não substituída, hete- rociclila com 4 a 6 membros substituída ou não substituída, C5-6 arila substituída ou não substituída ou heteroarila com 5 a 6 membros subs- tituída ou não substituída, em que a heterociclila ou heteroarila com- preendem 1-3 átomos de N.
[0019] Como uma modalidade preferencial, o anel A é selecionado a partir de qualquer um dos seguintes grupos: , , ou .
[0020] Como uma modalidade preferencial, o anel A é selecionado a partir de qualquer um dos seguintes grupos: ou
[0021] Como uma modalidade preferencial adicional, o composto tem uma estrutura selecionada a partir de: , ou
[0022] Como uma modalidade preferencial, a substituição isotópi- ca do derivado substituído por isótopo do composto no presente do- cumento se refere a um átomo que compreende, porém sem limitação, hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, flúor, fósforo, cloro ou iodo e, de preferência, é 2H, 3H, 11 C, 13 C, 14 C, 15 N, 17 O, 18 O, 18 F, 31 P, 32 P, 35 S, 36 Cl ou 125I.
[0023] O segundo aspecto da divulgação fornece um método para preparação de um composto da Fórmula I da divulgação, em que o método compreende: (i) realizar a reação de substituição nucleofílica entre a Fórmula Ib e a Fórmula Ic para obter a Fórmula Id; (ii) realizar a reação de substituição entre a Fórmula Id e a Fórmula Ie para obter a Fórmula If; e (iii) desproteger a Fórmula If por ácido a fim de obter o composto da Fórmula I: .
[0024] O terceiro aspecto da divulgação fornece uso de um com- posto da Fórmula I da divulgação em um método para: (a) preparar um medicamento para a prevenção ou o trata- mento contra doenças ou afecções relacionadas à atividade anormal de SHP2; (b) preparar um medicamento para a prevenção ou o trata- mento contra doenças ou afecções mediadas por SHP2;
(c) preparar um medicamento inibidor para a inibição da ati- vidade de SHP2; (d) inibir de maneira não terapêutica a atividade de SHP2 in vitro; (e) inibir de maneira não terapêutica a proliferação de célu- las tumorais in vitro; ou (f) tratar doenças ou afecções relacionadas à SHP2 anor- mal.
[0025] Como uma modalidade preferencial, a doença é câncer, de preferência, é a Síndroma de Noonan, Síndrome Leopard, leucemia mielomonocítica juvenil, neuroblastoma, melanoma, leucemia mieloide aguda, câncer de mama, câncer de esôfago, câncer de pulmão, cân- cer de cólon, câncer de cabeça, neuroblastoma, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, câncer gástrico, linfoma anaplásico de células grandes ou glioblastoma.
[0026] O quarto aspecto da divulgação fornece uma composição farmacêutica que compreende: (i) uma quantidade eficaz de um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável, enantiômero, diastereoisômero, tautômero, solvato, derivado substituído por isótopo, polimorfo, pro- fármaco ou metabólito do mesmo; e (ii) um veículo farmaceuticamente aceitável.
[0027] O quinto aspecto da divulgação fornece um método para inibir atividade de SHP2, em que o método compreende a seguinte etapa: administrar a um indivíduo com necessidade do mesmo uma quantidade eficaz de um composto da Fórmula I da divulgação ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou administrar a um indiví- duo com necessidade do mesmo uma quantidade eficaz de uma com- posição farmacêutica da divulgação.
[0028] Deve ser entendido que os recursos técnicos da divulgação e os recursos técnicas descritos especificamente a seguir (tais como as modalidades) podem ser combinados no escopo da divulgação pa- ra formar novas soluções técnicas preferenciais. A título de simplicida- de, esses recursos serão descritos um a um no presente documento.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA DIVULGAÇÃO
[0029] Após longa e intensa pesquisa, os inventores prepararam compostos de inibidor alostérico inovadores da Fórmula I, que podem alcançar o objetivo de inibir a atividade de SHP2 por meio da ligação à região não catalítica de SHP2 e do "travamento" do estado de autoini- bição com baixa atividade de SHP2. Os compostos da divulgação exi- bem atividade biológica e drugabilidade muito satisfatórias e têm boas expectativas de desenvolvimento de fármaco; os mesmos têm um efei- to inibitório na SHP2 em concentrações muito baixas (tão baixas quan- to ≤100 nM/l), e a atividade inibitória é excelente, logo, podem ser usados para tratar doenças ou afecções relacionadas à SHP2, tais como tumores. Com base na constatação acima, os inventores com- pletaram a invenção.
TERMO
[0030] Salvo quando definido de outro modo, todos os termos téc- nicos e científicos usados no presente documento têm significado igual ao comumente entendido pelas pessoas de habilidade comum na téc- nica à qual a matéria das reivindicações pertence. Salvo quando espe- cificado de outro modo, todas as patentes, pedidos de patente e mate- riais divulgados citados no presente documento são incorporados na presente divulgação a título de referência em sua totalidade.
[0031] Deve-se entender que a breve descrição acima e a descri- ção detalhada a seguir são exemplificativas e servem a apenas a título de interpretação, sem qualquer limitação à matéria da divulgação. Na presente divulgação, salvo quando especificado de outro modo, o plu- ral também está incluído quando o singular é usado. Deve ser obser-
vado que salvo quando declarado de outro modo no texto, a forma singular usada no presente relatório descritivo e nas reivindicações incluem a forma plural da matéria citada. Além disso, deve ser obser- vado que, salvo quando especificado de outro modo, o termo "ou" é usado para representar "e/ou". Além disso, o termo "inclui" e suas va- riantes gramáticas, tais como "compreender", "conter" e "ter", não são limitativas e podem estar abertos, semifechados e fechados. Em ou- tras palavras, o termo "inclui" e suas variantes gramaticais também incluem o significado de "consiste substancialmente em" ou "consiste em".
[0032] As definições de termos químicos padrão podem ser encon- tradas nas referências (incluindo Carey e Sundberg "ADVANCED OR- GANIC CHEMISTRY 4TH ED." volumes A (2000) e B (2001), Plenum Press, Nova York). Salvo quando especificado de outro modo, méto- dos convencionais no escopo da técnica, por exemplo, espectrometria de massa, RMN, IR e espectroscopia de UV/VIS e métodos de farma- cologia são usados. Salvo quando definido especificamente, os termos usados na presente divulgação que se referem à química analítica, química sintética orgânica, química na medicina e farmacêutica no presente documento são conhecidos na técnica. Técnicas padrão po- dem ser usadas em síntese química, análise química, preparação de fármacos, preparações e entregas e no tratamento de pacientes. Por exemplo, as reações e purificações podem ser realizadas, de acordo com as instruções do fabricante, para uso do kit ou de maneira bem conhecida na técnica ou de acordo com a descrição da divulgação. De modo geral, as técnicas acima e métodos podem ser implantados em conformidade com os métodos convencionais bem conhecidos na téc- nica de acordo com as descrições em múltiplas literaturas gerais e mais específicas citadas e discutidas na presente descrição. Na pre- sente descrição, os grupos e substituintes podem ser selecionados por uma pessoa versada na técnica para fornecer partes estruturas e compostos estáveis.
[0033] Quando um substituinte é descrito por uma fórmula con- vencional escrita da esquerda para a direita, o substituinte também inclui o substituinte quimicamente equivalente obtido com a fórmula estrutural é escrita da direita para esquerda. Por exemplo, -CH2O- é igual a -OCH2-.
[0034] Os cabeçalhos das seções, conforme usado no presente documento, servem para organizar o artigo apenas e não devem ser interpretados como limitação à matéria. Todas as literaturas ou partes de literatura citadas no presente documento, incluindo, porém sem li- mitação, patentes, pedidos de patente, artigos, livros, manuais de ope- ração, e trabalhos publicados são incorporados na presente divulga- ção a título de referência em suas totalidades.
[0035] Alguns grupos químicos definidos no presente documento são precedidos por símbolos simplificados para representar o número total de átomos de carbono no grupo. Por exemplo, C1-C6 alquila se refere a uma alquila, como definido a seguir, que tem um total de 1 a 6 átomos de carbono. O número total de átomos de carbono nos símbo- los simplificados não compreende átomos de carbono que podem exis- tir nos substituintes do grupo.
[0036] Além do supracitado, quando suado no presente relatório descritivo e nas reivindicações da divulgação, salvo quando indicado especificamente de outro modo, os termos a seguir têm os significados a seguir.
[0037] Na presente divulgação, o termo "halogênio" se refere um flúor, cloro, bromo ou iodo.
[0038] "Hidroxila" se refere um grupo -OH.
[0039] "Hidroxil alquila" se refere a uma alquila, como definido a seguir, substituída por hidroxila (-OH).
[0040] "Carbonila" se refere um grupo -C(=O)-.
[0041] "Nitrila" se refere um -NO2.
[0042] "Ciano" se refere um -CN.
[0043] "Amino" se refere um -NH2.
[0044] "Amino substituído" se refere a um amino substituído por uma ou duas dentre a alquila, alquila carbonila, aril alquila, heteroaril alquila, como definido a seguir, por exemplo, amino substituído pode ser monoalquilamino, dialquilamino, alquilacilamino, aril alquilamino, heteroaril alquila.
[0045] "Carboxila" se refere a -COOH.
[0046] Na presente divulgação, como um grupo ou parte de outros grupos (por exemplo, usados no grupos, tais como alquila halogenada (tal como alquila fluorada, clorada, bromada ou iodada)), o termo "al- quila" se refere a um grupo de cadeia de hidrocarbonetos linear ou ra- mificada completamente saturada que consiste apenas em átomos de carbono e átomos de hidrogênio, por exemplo, que compreendem 1 a 12 (de preferência, 1 a 8, com mais preferência, 1 a 6) átomos de car- bono e conectados ao resto da molécula por uma ligação única. Por exemplo, "alquila" inclui, porém sem limitação metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila, sec-butila, terc-butila, n-amila, 2- metilbutila, 2,2-dimetilpropila, n-hexila, heptila, 2-metil-hexila, 3-metil- hexila, octila, nonila e decila etc. No caso da presente divulgação, o termo "alquila" se refere a um grupo alquila que contém 1 a 8 átomos de carbono.
[0047] Na presente divulgação, como um grupo ou parte de outros grupos, o termo "alquenila" se refere a um grupo de cadeia de hidro- carbonetos linear ou ramificada que consiste apenas em átomos de carbono e átomos de hidrogênio, por exemplo, que compreende 2 a 20 (de preferência, 2 a 10, com mais preferência, 2 a 6) átomos de carbo- no que compreendem pelo menos uma ligação dupla e conectadas ao resto da molécula por uma ligação única. Exemplos, incluem, porém sem limitação, vinila, propenila, alila, but-1-enila, but-2-enila, pent-1- enila, pent-1,4-dienila etc.
[0048] Na presente divulgação, como um grupo ou parte de outros grupos, o termo "hidrocarbila cíclica" se refere a uma hidrocarbila mo- nocíclica ou policíclica estável não aromática (tal como alquila, alque- nila ou alquinila) que consiste apenas nos átomos de carbono e áto- mos de hidrogênio, que podem compreender sistema de anel fusiona- do, sistema de anel em ponte ou espiro sistema de anel, podem com- preender 3 a 15 átomos de carbono, de preferência, podem compre- ender 3 a 10 átomos de carbono, com mais preferência, podem com- preender 3 a 8 átomos de carbono, por exemplo, podem compreender 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 átomos de carbono e que são saturados ou não satu- rados e podem ser conectados ao restante da molécula por meio de qualquer átomo de carbono adequado por uma ligação única. Salvo quando indicado especificamente na descrição, os átomos de carbono na hidrocarbila cíclica pode ser oxidada opcionalmente. As modalida- des de hidrocarbila cíclica incluem, porém sem limitação, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclopentenila, ciclo-hexila, ciclo-hexenila, ciclo- hexadienila, ciclo-heptila, ciclo-octila, 1H-indenila, 2,3-di-hidroindenila, 1,2,3,4-tetra-hidro-naftila, 5,6,7,8-tetra-hidro-naftila, 8,9-di-hidro-7H- benzociclo-hepteno-6-ila, 6,7,8,9-tetra-hidro-5H-benzociclo-heptenila, 5,6,7,8,9,10-hexa-hidro-benzociclo-octenila, fluorenila, bici- clo[2.2.1]heptila, 7,7-dimetil-biciclo[2.2.1]heptila, biciclo[2.2.1]heptenila, biciclo[2.2.2]octila, biciclo[3.1.1]heptila, biciclo[3.2.1]octila, bici- clo[2.2.2]octenila, biciclo[3.2.1]octenila, adamantila, octa-hidro-4,7- metileno-1H-indenila e octa-hidro-2,5-metileno-diciclopentadienila etc.
[0049] Na presente divulgação, como um grupo ou parte de outros grupos, o termo "heterociclila" se refere a um grupo cíclico não aromá- tico com 3 a 20 membros estável que consiste em 2 a átomos de car-
bono (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 átomos de carbono) e 1 a 6 heteroátomos selecionados a partir de nitrogênio, fósforo, oxigênio ou enxofre.
Salvo quando indicado especificamente na descrição, uma heterociclila pode ser um sistema de anel monocí- clico, um sistema de anel dicíclico, um sistema de anel tricíclico ou um sistema de anel com mais anéis e pode compreender sistema de anel fusionado, sistema de anel em ponte ou espiro sistema de anel; os átomos de nitrogênio, fósforo ou enxofre na heterociclila podem ser oxidados opcionalmente; os átomos de nitrogênio na heterociclila po- dem ser opcionalmente quaternizados; e a heterociclila pode ser satu- rada parcial ou completamente.
A heterociclila pode ser conectada ao restante da molécula por meio de um átomo de carbono ou um hetero- átomo por uma ligação única.
Em uma heterociclila que contém anel fusionado, um ou mais anéis podem ser arila ou heteroarila, como de- finido a seguir, desde que o ponto de conexão entre o grupo e o resto da molécula é um átomo de anel não aromático.
Para efeito da presen- te divulgação, uma heterociclila é, de preferência, um grupo estável de anel em ponte ou espiro com 4 a 11 membros não aromáticos monocí- clicos, dicíclicos que compreende 1 a 3 heteroátomos selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio ou enxofre, com mais preferência, um grupo estável de anel em ponte ou espiro com 4 a 8 membros não aromático, monocíclico, dicíclico que compreende 1 a 3 heteroátomos selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio ou enxofre.
Heterociclilas exemplificativas incluem, porém sem limitação: pirrolidinila, morfolinila, piperazinila, homopiperazinila, piperidinila, tiomorfolinila, 2,7-diaza- espiro[3.5]nonano-7-ila, 2-oxa-6-aza-espiro[3.3]heptano-6-ila, 2,5- diaza-biciclo[2.2.1]heptano-2-ila, azaciclobutanila, piranila, tetra- hidropiranila, tiopiranila, tetra-hidrofuranila, oxazinila, dioxolanila, tetra- hidroisoquinolinila, deca-hidroisoquinolinila, imidazolinila, imidazolidini- la, quinolizinila, tiazolidinila, isotiazolidinila, isoxazolidinila, di-
hidroindolila, octa-hidroindolila, octa-hidroisoindolila, pirrolidinila, pira- zolidinila, ftalimido etc.
[0050] Na presente divulgação, como um grupo ou parte de outros grupos, o termo "arila" se refere a um grupo de sistema de anel de hi- drocarbonetos conjugados que compreende 6 a 18 átomos de carbono (de preferência, que compreendem 6 a 10 átomos de carbono, por exemplo, 6, 7, 8, 9 ou 10 átomos de carbono). Para efeito da presente divulgação, arila pode ser um sistema de anel monocíclico, um sistema de anel dicíclico, um sistema de anel tricíclico ou um sistema de anel com mais anéis e podem ser fusionados com a hidrocarbila cíclica ou heterociclila, como definido acima, desde que a arila e o restante da molécula são conectados por um átomo no anel aromático por uma única ligação. As arilas exemplificativas incluem, porém sem limitação, fenila, naftila, antracila, fenantrenila, fluorenila, 2,3-di-hidro-1H- isoindolila, 2-benzoxazolinona, 2H-1,4-benzoxazin-3(4H)-ona-7-ila etc.
[0051] Na presente divulgação, o termo "aril alquila" se refere a uma alquila, como definido acima, que é substituída por uma arila, co- mo definido acima.
[0052] Na presente divulgação, como um grupo ou parte de outros grupos, o termo "heteroarila" se refere a um grupo de sistema de anel conjugado com 5 a 16 membros que compreendem 1 a 15 átomos de carbono (de preferência, que compreendem 1 a 10 átomos de carbo- no, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 átomos de carbono) e 1 a 6 heteroátomos selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio ou en- xofre. Salvo quando indicado especificamente na descrição, uma hete- roarila pode ser um sistema de anel monocíclico, um sistema de anel dicíclico, um sistema de anel tricíclico ou um sistema de anel com mais anéis e pode ser fusionado à cicloalquila ou heterociclila, desde que a heteroarila e o restante da molécula sejam conectados por meio de um átomo no anel aromático por uma ligação única. Os átomos de nitro-
gênio, carbono ou enxofre na heteroarila podem ser oxidados opcio- nalmente; os átomos de nitrogênio na heteroarila podem ser opcional- mente quaternizados. Para efeito da divulgação, a heteroarila é, de preferência, um grupo aromático com 5 a 12 membros estáveis que compreendem 1 a 5 heteroátomos selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio ou enxofre e é, com mais preferência, um grupo aromático com 5 a 10 membros estáveis que compreende 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio ou enxofre ou um grupo aromático com 5 a 6 membros que compreende 1 a 3 heteroátomos selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Heteroarilas exemplificativas incluem, porém sem limitação, tiofenila, imidazolila, pirazolila, tiazolila, oxazolila, oxadiazolila, isoxazolila, piridila, pirimidini- la, pirazinila, piridazinila, benzimidazolila, benzopirazolila, indolila, fu- ranila, pirrolila, triazolila, tetrazolila, triazinila, indolizinila, isoindolila, indazolila, isoindazolila, purinila, quinolinila, isoquinolinila, diazanafta- lenila, naftiridinila, quinoxalinila, pteridinila, carbazolila, carbolinila, fe- nantridinila, fenantrolinila, acridinila, fenazinila, isotiazolila, benzoti- azolila, benzotiofenila, oxatriazolila, cinolinila, quinazolila, feniltio, indo- lizinila, fenantrolinila, isoxazolila, fenoxazinila, fenotiazinila, 4,5,6,7- tetra-hidrobenzo[b]tiofenila, naftopiridinila, [1,2,4]triazol[4,3- b]piridazina, [1,2,4]triazol[4,3-a]pirazina, [1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidina, [1,2,4]triazol[4,3-a]piridina, imidazo[1,2-a]piridina, imidazo[1,2- b]piridazina, imidazo[1,2-a]pirazina etc.
[0053] Na presente divulgação, o termo "heteroarila alquila" se re- fere a uma alquila, como definido acima, que é substituído por hetero- arila, como definido acima.
[0054] Na presente divulgação, "opcional" ou "opcionalmente" sig- nifica que o evento ou afecção descrito subsequentemente pode ou não ocorrer e tal descrição inclui tanto ocorrência quanto não ocorrên- cia do evento ou afecção. Por exemplo, "arila opcionalmente substituí-
da" significa uma arila que é substituída ou que não é substituída e tal descrição inclui tanto arila substituída quanto arila não substituída. O substituinte "opcional" empregado nas reivindicações e na descrição da divulgação é selecionado a partir de alquila, alquenila, alquinila, ha- logênio, haloalquila, haloalquenila, haloalquinila, ciano, nitro, arila op- cionalmente substituída, heteroarila opcional substituída, hidrocarbila cíclica opcionalmente substituída ou heterociclila opcionalmente subs- tituída.
[0055] A "SHP2" se refere uma "fosfatase contendo Homologia a Src 2", também denominada de SH-PTP2, SH-PT3, Syp, PTP1D, PTP2C, SAP-2 ou PTPN11.
[0056] Os termos "parte", "parte estrutural", "parte química", "gru- po", "grupo químico", conforme empregado no presente documento, se referem a uma parte específica ou a um grupo funcional na molécula. A parte química é geralmente considerada como a entidade química incorporada ou fixada à molécula.
[0057] "Estereoisômero" se refere a um composto que é formado pelos mesmos átomos, ligado pelos mesmos átomos, porém que tem diferentes estruturas tridimensionais. A presente divulgação cobrirá vários estereoisômeros e misturas dos mesmos.
[0058] Quando um composto da presente divulgação contém uma ligação olefínica, salvo quando especificado de outro modo, o compos- to da presente divulgação deve incluir isômeros geométricos E e Z.
[0059] "Tautômero" se refere a um isômero formado pela transfe- rência do próton de um átomo de uma molécula para outro átomo da mesma molécula. Todas as formas tautoméricas de um composto da divulgação também serão incluídas no escopo da divulgação.
[0060] Um composto da divulgação ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo podem compreender um ou mais átomos de car- bono quirais e, então, podem produzir enantiômeros, diastereômeros e outras formas estereoisoméricas. Cada átomo de carbono quiral pode definido como (R)- ou (s)- com em estereoquímica. A divulgação deve incluir todos os possíveis isômeros, assim como racemos e formas op- ticamente puras dos mesmos. Um composto da divulgação pode ser preparado com o uso de racemo, diastereômero ou enantiômero como matéria-prima ou intermediário. Os isômeros opticamente ativos po- dem ser preparados com o uso de síntons quirais ou reagentes quirais ou separados por técnicas convencionais, tais como cristalização e cromatografia quiral.
[0061] Técnicas convencionais para preparar/separar isômeros individuais incluem síntese quiral de precursores opticamente puros adequados ou separação de racemos (ou racematos de sais ou deri- vados) com o uso, por exemplo, de cromatografia quiral líquida de alto desempenho, por exemplo, consultar Gerald Gübitz e Martin G. Sch- mid (Edições), Chiral Separations, Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology, Volume 243, 2004; A.M. Stalcup, Chiral Separa- tions, Annu. Rev. Anal. Chem. 3:341-63, 2010; Fumiss et al. (eds.), VOGEL’S ENCYCLOPEDIA OF PRACTICAL ORGANIC CHEMISTRY
5.sup.TH ED., Longman Scientific and Technical Ltd., Essex, 1991, 809-816; Heller, Acc. Chem. Res. 1990, 23, 128.
[0062] A divulgação também inclui todas as variações isotópicas adequadas dos compostos da presente divulgação ou sais farmaceuti- camente aceitáveis dos mesmos. Variações isotópicas dos compostos da presente divulgação ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos são definidos como aqueles em que pelo menos um átomo é substituído por um átomo que tem o mesmo número atômico, porém uma massa atômica diferente da massa atômica muitas vezes na natu- reza. Os isótopos que podem ser incorporados nos compostos da pre- sente divulgação e os sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos incluem, porém sem limitação H, C, N e O, por exemplo, 2H, 3H, 11 C,
C, C, N, O, O, S, F, Cl e I. Variações isotópicas ade- quadas dos compostos ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos da presente divulgação podem ser preparados por técnicas convencionais com o uso de variantes isotópicas apropriadas de rea- gentes adequados.
[0063] Na presente divulgação, o termo "sal farmaceuticamente aceitável " inclui sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis e sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis.
[0064] "Sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável" se refere a um sal formado com um ácido inorgânico ou um ácido orgâni- co que podem reter a eficácia biológica da base livre sem outro efeitos colaterais. Sais de ácido inorgânico incluem porém sem limitação clo- ridrato, bromidrato, sulfato, nitrato, fosfato etc.; sais de ácido orgânico incluem, porém sem limitação formato, acetato, 2,2-dicloroacetato, tri- fluoroacetato, propionato, hexanoato, caprilato, caprato, undecilenato, glicolato, gliconato, lactato, sebacato, adipato, glutarato, malonato, oxalato, maleato, succinato, fumarato, tartrato, citrato, palmitato, estea- rato, oleato, cinamato, laurato, malato, glutamato, piroglutamato, as- partato, benzoato, metanossulfonato, benzenossulfonato, p- toluenossulfonato, alginato, ascorbato, salicilato, 4-aminossalicilato, dissulfonato de naftaleno etc. Esses sais podem ser preparados por métodos conhecidos na técnica.
[0065] "Sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis" se referem a um sal formado com uma base inorgânica ou uma base or- gânica que pode reter a eficácia biológica do ácido livre sem outros efeitos laterais. Os sais derivados de bases inorgânicas incluem, po- rém sem limitação sal de sódio, sal de potássio, sal de lítio, sal de amônio, sal de cálcio, sal de magnésio, sal de ferro, sal de zinco, sal de cobre, sal de manganês, sal de alumínio etc. Sais inorgânicos pre- ferenciais são sal de amônio, sal de sódio, sal de potássio, sal de cál-
cio e sal de magnésio. Os sais derivados de bases orgânicas incluem, porém sem limitação, os seguintes sais: aminas primárias, aminas se- cundárias e aminas terciárias, aminas substituídas, incluindo aminas naturais substituídas, aminas cíclicas e resinas de troca iônica básica, tais como resina de amônia, isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, dimetiletanolamina, 2-dimetilaminoetanol, 2-dietilaminoetanol, diciclo- hexilamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, procaína, colina, betaína, etilenodiamina, glicosamina, metilglicosamina, teobromina, purina, pi- perazina, piperidina, N-etilpiperidina, poliamina etc. As bases orgâni- cas preferenciais incluem isopropilamina, dietilamina, etanolamina, tri- metilamina, diciclo-hexilamina colina e cafeína. Esses sais podem ser preparados por métodos conhecidos na técnica.
[0066] Na presente divulgação, "composição farmacêutica" se re- fere a uma formulação de um composto da presente divulgação e um meio geralmente aceito na técnica para entregar um composto biologi- camente ativo a um mamífero (por exemplo, ser humano). O meio in- clui um veículo farmaceuticamente aceitável. O propósito da composi- ção farmacêutica deve promover a administração de organismos vivos, o que facilita a absorção de ingredientes ativos e, então, exerce ativi- dade biológica.
[0067] O termo "farmaceuticamente aceitável", conforme usado no presente documento, se refere a uma substância (tal como um veículo ou diluente) que não afeta a atividade biológica ou propriedades do composto da presente divulgação e é relativamente não tóxica, ou se- ja, a substância pode ser administrada a um indivíduo sem causar rea- ções biológicas adversas ou sem interagir com quaisquer componen- tes contidos na composição de maneira indesejável.
[0068] Na presente divulgação, "excipiente farmaceuticamente aceitável" inclui, porém sem limitação qualquer adjuvante, veículo, ex-
cipiente, deslizante, adoçante, diluente, conservante, coran- te/colorante, corretivo, tensoativo, agente umectante, dispersante, agente suspensor, estabilizante, agente isotônico, solvente ou emulsi- ficador que é aprovado por uma agência reguladora governamental como aceitável para uso em seres humanos ou em animais domésti- cos.
[0069] "Tumor" na divulgação inclui, porém sem limitação Síndro- me de Noonan, Síndrome Leopard, leucemia mielomonocítica juvenil, neuroblastoma, sarcoma, melanoma, condroma articular, colangioma, leucemia, câncer de mama, tumor estromal gastrointestinal, linfoma histiocítico, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de pulmão de células pequenas, câncer de esôfago, câncer pancreático, câncer de pulmão de células escamosas, adenocarcinoma de pulmão, câncer de mama, câncer de próstata, câncer no fígado, câncer de pe- le, câncer de células epiteliais, câncer cervical, câncer de ovário, cân- cer no intestino, câncer de nasofaringe, câncer no cérebro, câncer nos ossos, câncer no rim, câncer oral/câncer de cabeça, neuroblastoma, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, linfoma ana- plásico de células grandes ou glioblastoma e outras doenças.
[0070] Os termos "preventivo", "prevenir" e "prevenção", conforme empregado no presente documento, incluem reduzir a possibilidade da ocorrência ou deterioração de uma doença ou afecção em um pacien- te.
[0071] O termo "tratamento" e outros sinônimos semelhantes, con- forme empregado no presente documento, incluem os seguintes signi- ficados: (i) prevenção da ocorrência de uma doença ou afecção em mamíferos, especialmente quando tais mamíferos são suscetíveis à doença ou afecção, porém não foram diagnosticados com a doença ou afecção;
(ii) supressão de uma doença ou afecção, ou seja, inibição do desenvolvimento da doença ou afecção; (iii) alívio de uma doença ou afecção, ou seja, diminuição do estado da doença ou afecção; ou (iv) alívio dos sintomas causados pela doença ou afecção.
[0072] O termo "quantidade eficaz", "quantidade terapeuticamente eficaz" ou "quantidade farmaceuticamente eficaz", conforme usado no presente documento, se referem à quantidade de pelo menos um me- dicamento ou composto suficiente para aliviar um ou mais sintomas da doença ou da doença que é tratada até determinado ponto após a ad- ministração. O resultado pode ser redução e/ou remissão de sinais, sintomas ou causas ou quaisquer outras mudanças desejadas no sis- tema biológico. Por exemplo, um "quantidade eficaz" para tratamento é a quantidade de uma composição que compreende um composto con- forme divulgado no presente documento necessário para fornecer um efeito clinicamente significativo de alívio da doença. Técnicas, tais co- mo testes de aumento de dose, podem ser usadas para determinar a quantidade eficaz adequada para qualquer caso individual.
[0073] Os termos "tomar", "aplicação", "administração" e seme- lhantes se referem a um método com capacidade para entregar um composto ou composição a um sítio desejado para ação biológica. Es- ses métodos incluem, porém sem limitação via oral, via transduodenal, injeção parenteral (incluindo injeção ou infusão intravenosa, subcutâ- nea, intraperitoneal, intramuscular, intra-arterial), administração local e administração transretal. Uma pessoa versada na técnica está familia- rizada com as técnicas de administração que podem ser usadas para os compostos e métodos, conforme descrito no presente documento, tais como aquelas discutidas em Goodman e Gilman, The Pharmaco- logical Basis of Therapeutics, edição atual; Pergamon; e Remington’s, Pharmaceutical Sciences (edição atual), Mack Publishing Co., Easton,
Pa. Em uma modalidade preferencial, os compostos e composições discutidos no presente documento são administrados por via oral.
[0074] Os termos "combinação de medicamentos", "coadministra- ção de medicamento", "medicação combinada", "administração de ou- tros tratamentos", "administração de outros agentes terapêuticos" e semelhantes, conforme empregue no presente documento, se referem ao tratamento médico obtido misturando-se ou combinando-se mais de um ingrediente ativo e incluem combinações fixas e não fixas de in- gredientes ativos. O termo "combinação fixa" se refere à administração simultânea de pelo menos um composto descrito no presente docu- mento e pelo menos um medicamento sinérgico a um paciente na for- ma de uma entidade única ou uma forma de dosagem única. O termo "combinação não fixa" se refere à administração simultânea, à coad- ministração ou à administração sequencial em intervalos variáveis de pelo menos um composto descrito no presente documento e pelo me- nos uma formação sinérgica a um paciente na forma de entidades se- paradas. Esses termos também se aplicam à terapia de coquetel, tais como a administração de três ou mais ingredientes ativos.
[0075] Uma pessoa versada na técnica também deve entender que no método descrito a seguir o grupo funcional de um composto intermediário pode precisar de proteção por um grupo protetor apropri- ado. Tais grupos funcionais incluem hidroxila, amino, sulfidrila e ácido carboxílico. Os grupos de proteção hidroxila adequados incluem trial- quilsilila ou diarilalquilsilila (por exemplo, terc-butildimetilsilila, terc- butildifenilsilila ou trimetilsilila), tetra-hidropiranila, benzila etc. Grupos protetores adequados para amino, amidino e guanidino incluem terc- butoxicarbonila, benziloxicarbonila etc. Grupos de proteção sulfidrila incluem -C(O)-R" (em que R" é alquila, arila ou aralquila), p- metoxibenzila, tritila etc. Grupos de proteção carbóxi incluem ésteres alquílicos, arílicos ou aralquílicos.
[0076] Grupos protetores podem ser introduzidos e removidos de acordo com técnicas padrão conhecidas por uma pessoa versada na técnica e conforme descrito no presente documento. O uso de grupos protetores é descrito detalhadamente em Greene, T. W. e P. G. M. Wuts, Protective grupos in Organic Synthesis, (1999), 4ª Edição Wiley. Grupos protetores também podem ser resinas poliméricas.
PREPARAÇÃO DO COMPOSTO DA FÓRMULA I
[0077] O composto da Fórmula I fornecido pela presente divulga- ção pode ser preparado pelo seguinte método: realizar a reação de substituição nucleofílica entre a Fórmula Ib e a Fórmula Ic para obter a Fórmula Id; realizar a reação de substituição entre a Fórmula Id e a Fórmula Ie para obter a Fórmula If; e desproteger a Fórmula If com o uso de ácido para obter o composto da Fórmula I: ;
[0078] Na fórmula, a definição de cada grupo é, conforme descrito acima.
FARMACOLOGIA E USO
[0079] A fosfatase contendo Homologia a Src 2 (SHP2) é uma pro- teína tirosina fosfatase codificada pelo gene PTPN11, que promove várias funções celulares, incluindo proliferação, diferenciação, manu- tenção do ciclo celular e migração. A SHP2 está envolvida na sinaliza- ção por meio da via de proteína quinase ativada por mitógeno Ras, JAK-STAT ou fosfoinositídeo 3-quinase-AKT. A SHP2 medeia a ativa-
ção das receptores tirosina quinases, tais como ErbB1 e ErbB2 e Erk1 e Erk2 MAP quinases de c-Met.
[0080] A SHP2 tem dois domínios de Homologia a Src 2 N- terminais (N-SH2 e C-SH2), um domínio catalítico (PTP) e uma cauda C-terminal. Os dois domínios SH2 controlam a localização subcelular e a regulação funcional de SHP2. A molécula existe em uma conforma- ção inativa, inibindo sua própria atividade por meio de uma rede de ligação que envolve resíduos dos domínios de N-SH2 e PTP. Em res- posta ao estímulo do fator de crescimento, a SHP2 se liga a sítios es- pecíficos de fosforilação de tirosina, tais como Gab1 e Gab2 em prote- ínas de ancoragem por meio do domínio SH2 da SHP2. Isso causa uma mudança conformacional, o que causa ativação da SHP2.
[0081] Foram identificadas mutações em PTPN11 em várias doen- ças humanas, tais como Síndrome Noonan, Síndrome Leopard, leu- cemia mielomonocítica juvenil, neuroblastoma, melanoma, leucemia mieloide aguda e cânceres de mama, pulmão e cólon. A SHP2 é uma molécula de sinalização importante a jusante importante para várias receptores tirosina quinases, incluindo os receptores de fator de cres- cimento derivado de plaquetas (PDGF-R), fator de crescimento de fi- broblastos (FGF-R) e fator de crescimento epidérmico (EGF-R). A SHP2 também é uma molécula de sinalização a jusante importante que ativa a via da proteína quinase ativada por mitógeno (MAP), o que pode causar transformação celular (uma condição necessária para de- senvolvimento de câncer). O knockdown da SHP2 inibe significativa- mente o crescimento celular de linhagens celulares de câncer de pul- mão que têm mutações de SHP2 ou translocação de EML4/ALK, as- sim como câncer de mama e de esôfago amplificado por EGFR. A SHP2 também é um gene a jusante da ativação de oncogenes em um câncer gástrico, linfoma anaplásico de células grandes e glioblastoma.
[0082] A medição da Síndrome de Noonan (NS) e Síndrome Leo-
pard (LS)-PTPNll causa LS (síndrome do nevo pigmentado múltiplo, condução de ECG anormal, distância muito grande entre os olhos, es- tenose da válvula pulmonar, genitália ambígua, retardado do cresci- mento, perda de audição neurossensorial) e NS (incluindo anormalida- des congênitas de problemas cardíacos, deformidade craniofacial e baixa estatura). Esses dois distúrbios são partes da família da síndro- me de dominância autossômica causada por mutações em linhagem germinativa nos componentes da via de proteína quinase ativada por mitógeno RAS/RAF/MEK/ERK (necessário para crescimento e diferen- ciação de células normais). A regulação anormal dessa via tem efeitos de longo alcance, especialmente no desenvolvimento do coração, causando várias anormalidades, incluindo defeitos na válvula septal e/ou cardiomiopatia hipertrófica (HCM). Foi determinado que a altera- ção da via de sinalização de MAPK é importante para esses distúrbios, e alguns genes candidatos que seguem essa via foram identificados em seres humanos, incluindo mutações em KRAS, NRAS, SOS1, RAF1, BRAF, MEK1, MEK2, SH0C2 e CBL. O gene que sofre mutação com mais frequência em NS e LS é o PTPN11. Mutações de linhagem germinativa de PTPN11 (SHP2) foram constatadas em aproximada- mente 50% dos casos de NS e em quase todos os pacientes com LS que têm determinadas características de NS. Para NS, Y62D e Y63C na proteína são as mutações mais comuns. Essas duas mutações afe- tam a conformação de atividade não catalítica da SHP2, porém não interferem com a ligação de fosfatase e seu ligante de sinalização fos- forilado.
[0083] Leucemia mielomonocítica juvenil (JMML) - Mutações so- máticas em PTPN11 (SHP2) ocorrem em aproximadamente 35% de pacientes com JMML (uma doença mielodisplásica na infância (MPD)). Essas mutações de ganho de função são normalmente mutações pon- tuais no domínio da N-SH2 ou no domínio da fosfatase, que impedem a autoinibição entre o domínio catalítico e o domínio de N-SH2 para produzir a atividade de SHP2.
[0084] Leucemia mieloide aguda - mutações de PTPNll foram identificadas em aproximadamente 10% de leucemias agudas pediátri- cas, tais como síndromas mielodisplásicas (MDS), aproximadamente 7% de leucemia linfoblástica aguda de células B (B-ALL) e aproxima- damente 4% de leucemia mieloide aguda (AML).
[0085] Mutações de NS e de leucemia causam mudanças dos aminoácidos na interface formadas pelos domínios de N-SH2 e PTP na conformação de SHP2 de autoinibição, alteram prejudicam inibitó- rias intramoleculares e resultam na hiperatividade do domínio catalíti- co.
[0086] A SHP2 atua como um regulador positivo na sinalização do receptor tirosina quinase (RTK). Cânceres que contêm mudanças de RTK (EGFRamp, Her2amp, FGFRamp, Metamp, RTK translocada/ativada, a saber, ALK, BCR/ABL) incluem câncer de esôfago, câncer de mama, câncer de pulmão, câncer de cólon, câncer gástrico, glioma e câncer de cabeça e pescoço.
[0087] Câncer de esôfago (ou câncer esofágico) é uma doença maligna do esôfago. Há muitos subtipos de câncer de esôfago, princi- palmente, carcinoma de células escamosas (<50%) e adenocarcino- ma. Há uma taxa mais alta de expressão de RTK em adenocarcinoma esofágico e carcinoma de células escamosas. Portanto, o inibidor de SHP2 da divulgação pode ser usado para estratégias de tratamento inovadoras.
[0088] O câncer de mama é um tipo importante de câncer e o a causa principal de morte em mulheres, em que pacientes desenvolvem resistência aos fármacos existentes. Há quatro subtipos principais de câncer de mama, incluindo luminal A, luminal B, Her21ik e triplo nega- tivo/ do tipo Basal. O câncer de mama triplo negativo (TNBC) é um câncer de mama invasivo para o qual não há terapias direcionadas específicas. O receptor de fator de crescimento epidérmico I (EGFR) foi mostrado como um alvo promissor em TNBC. A inibição de HER2 e EGFR por meio da SHP2 pode ser um tratamento promissor contra câncer de mama.
[0089] O câncer de pulmão - NSCLC é atualmente um causa im- portante de mortalidade relacionada a câncer. Este câncer é respon- sável por aproximadamente 85% do câncer de pulmão (principalmen- te, adenocarcinoma e carcinoma de células escamosas). Embora a quimioterapia tóxica ainda seja uma parte importante do tratamento, terapias direcionadas com base em mudanças genéticas (tais como EGFR e ALK) em tumores estão mais propensas a se beneficiarem da terapia direcionada.
[0090] Câncer de cólon - Aproximadamente 30% a 50% de tumo- res colorretais são conhecidos por terem KRAS mutante (anormal), e as mutações de BRAF ocorrem em 10% a 15% de cânceres colorre- tais. Para um subgrupo de pacientes cujos tumores colorretais mostra- ram superexpressar EGFR, esses pacientes apresentam uma resposta clínica favorável para terapia anti-EGFR.
[0091] O câncer gástrico é um dos tipos mais populares de câncer. A expressão anormal de tirosina quinase (conforme refletido pela fos- forilação de tirosina nas células de câncer gástrico) é conhecida na técnica. Três receptores tirosina quinases, a saber, c-met (receptor de HGF), receptor FGF-2 e erbB2/neu, são muitas vezes amplificados no câncer gástrico. Portanto, a destruição de diferentes vias de sinaliza- ção pode promover a progressão de diferentes tipos de câncer gástri- co.
[0092] O neuroblastoma é um tumor pediátrico do sistema nervoso simpático em desenvolvimento, que se responsabiliza por aproxima- damente 8% de cânceres na infância. Foram propostas mudanças ge-
nômicas do gene da linfoma anaplásico quinase (ALK) para promover a patogênese do neuroblastoma.
[0093] Altos níveis da expressão de EGFR em carcinoma de célu- las escamosas de cabeça e pescoço (SCCHN) estão associados a prognóstico insuficiente e à resistência à radioterapia em uma varieda- des de cânceres, mais comumente, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (SCCHN). O bloqueio do sinal de EGFR causa a inibição do estímulo do receptor e na diminuição da proliferação celu- lar, invasão e metástase. Portanto, a EGFR é o melhor alvo de terapia anticâncer em SCCHN.
[0094] A presente divulgação se refere a compostos com capaci- dade para inibir a atividade de SHP2. A divulgação também fornece um método de preparação do composto da divulgação e uma prepara- ção farmacêutica que contém o composto. Outro aspecto da divulga- ção se refere a um método para tratar uma doença ou afecção media- da por SHP2 que compreende uma etapa de administrar a um pacien- te com necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente efi- caz do composto da Fórmula I da divulgação.
[0095] Em algumas modalidades, a divulgação se refere ao méto- do, conforme descrito acima, em que a doença ou afecção mediada por SHP2 é selecionada, porém sem limitação aos seguintes cânce- res: JMML, AML, MDS, B-ALL, neuroblastoma, câncer de esôfago, câncer de mama, câncer de pulmão, câncer de cólon, câncer de estô- mago, câncer de cabeça e pescoço.
[0096] O composto da divulgação também pode ser usado para tratar outras doenças ou condições relacionadas à atividade anormal de SHP2. Portanto, como uma modalidade preferencial, a divulgação se refere a um método de tratamento contra uma doença ou afecção selecionada a partir de: NS, LS, JMML, AML, MDS, B-ALL, neuroblas- toma, câncer de esôfago, câncer de mama, câncer de pulmão, câncer de cólon, câncer de estômago, câncer de cabeça e pescoço.
[0097] Os inibidores de SHP2 da presente divulgação podem ser combinados com outro composto farmacologicamente ativo ou com dois ou mais compostos farmacologicamente ativos, especialmente no tratamento contra câncer. Por exemplo, o composto da Fórmula (I) da presente divulgação ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma pode ser administrado simultânea, separada ou sequencialmente em combinação com uma ou mais substâncias selecionadas a partir de: agentes quimioterápicos, tais como inibidores mitóticos, tais como ta- xano, alcaloides de vinca , paclitaxel, docetaxel, vincristina, vinblastina, vinorelbina ou vinflunina e outros agentes anticâncer, tais como cispla- tina, 5-fluorouracila ou 5-fluoro-2-4(1H,3H)-pirimidinadiona (5FU), flu- tamida ou gemcitabina.
[0098] Algumas combinações podem fornecer benefícios significa- tivos na terapia, incluindo atividade sinérgica.
[0099] Em algumas modalidades, a divulgação se refere ao méto- do, conforme descrito acima, em que o composto é administrado por via parenteral.
[00100] Em algumas modalidades, a divulgação se refere ao méto- do, conforme descrito acima, em que o composto é administrado por via intramuscular, intravenosa , subcutânea, oral, pulmonar, intratecal, tópica ou intranasal.
[00101] Em algumas modalidades, a divulgação se refere ao méto- do, conforme descrito acima, em que o composto é administrado sis- temicamente.
[00102] Em algumas modalidades, a divulgação se refere ao méto- do, conforme descrito acima, em que o paciente é um mamífero.
[00103] Em algumas modalidades, a divulgação se refere ao méto- do, conforme descrito acima, em que o paciente é um primata.
[00104] Em algumas modalidades, a divulgação se refere ao méto-
do, conforme descrito acima, em que o paciente é um ser humano.
[00105] Em algumas modalidades, a divulgação se refere ao méto- do para tratar uma doença ou afecção mediata por SHP2, em que o método compreende a seguinte etapa: administrar a um paciente com necessidade do mesmo uma combinação de uma quantidade terapeu- ticamente eficaz de agente quimioterápico e uma quantidade terapeu- ticamente eficaz do composto da Fórmula I da divulgação. AS PRINCIPAIS VANTAGENS DA DIVULGAÇÃO INCLUEM:
[00106] 1. A divulgação fornece um composto da Fórmula I.
[00107] 2. A divulgação fornece um inibidor de SHP2 de estrutura inovadora e sua preparação e uso, e o inibidor tem alta atividade inibi- tória na SHP2.
[00108] 3. A divulgação fornece uma composição farmacêutica para o tratamento de doenças ou afecções relacionadas à SHP2.
[00109] A divulgação é descrita adicionalmente abaixo em combi- nação com exemplos específicos. Deve ser entendido eu esses exem- plos são usados apenas para ilustrar a presente divulgação e não para limitar o escopo da presente divulgação. Os métodos experimentais sem condições específicas nos exemplos a seguir geralmente seguem as condições convencionais ou as condições recomendadas pelo fa- bricante. Salvo quando declarado de outro modo, as porcentagens e as partes são calculadas em peso.
[00110] Os materiais primários usados nos exemplos a seguir po- dem ser comprados de distribuidores químicos, tais como Aldrich, TCI, Alfa Aesar, Bide, Energy etc. ou podem ser sintetizados por métodos conhecidos.
[00111] Os significados das abreviações em inglês envolvidos nos exemplos a seguir são descritos na tabela a seguir.
Ti(OEt)4 Titanato de tetraetila DMF N,N- dimetilformamida LiBH4 Boro-hidreto de lítio Na2CO3 Carbonato de Só- dio TFA Ácido trifluoroacético EtOH Álcool etílico LDA Di-isopropilamina de lítio CBr4 Tetrabrometo de carbono Pd(AmP bis(di-terc-butil(4- Ph3P trifenilfosfina hos)2Cl2 dimetilaminofe- nil)fosfina)dicloropaládio(II) Cs2CO3 Carbonato de césio NBS N-bromossucci- nimida DMAc N,N-dimetilacetamida BPO Peróxido de ben- ou DMA zoíla THF tetra-hidrofurano TMP 2,2,6,6-tetrametil- piperidina DCM Diclorometano PBr3 tribrometo de fós- foro Ms2O anidrido metil sulfônico CCl4 tetracloreto de carbono n-BuLi n-butil-lítio N2H4 hidrazina Dibal-H hidreto de di-isobutil- H2SO4 ácido sulfúrico alumínio Dioxano 1,4-dioxano POCl3 Oxicloreto de fós- foro PPA Ácido polifosfórico Pd(OAc)2 acetato de paládio NaBH4 Boro-hidrato de sódio EtONa Etóxido de sódio MeOH Álcool metílico Pd2(dba) tris(dibenzilidenoa 3 cetona)dipaládio Et3N ou trietilamina Xan- 4,5- TEA tPhos bis(difenilfosfino)- 9,9-dimetilxanteno DIPEA N,N-di-isopropiletilamina CH3CN Acetonitrila
HCl Cloreto de hidrogênio Boc2O Dicarbonato de di- terc-butila PMB-Br Brometo de 4-metoxibenzila K2CO3 Carbonato de po- tássio
[00112] Nos exemplos a seguir, o banho gelado se refere a -5 °C a 0 °C, a temperatura ambiente se refere a 10 °C a 30 °C, e a tempera- tura de refluxo geralmente se refere à temperatura de refluxo do sol- vente sob pressão normal. Reação de um dia para outro se refere ge- ralmente a um período de 8 a 15 horas. Nos exemplos a seguir, todas as operações sem uma temperatura operacional específica são reali- zadas à temperatura ambiente.
[00113] Nos exemplos a seguir, a separação e purificação do inter- mediário e produtos finais são realizados por separação em coluna de cromatografia em fase normal ou fase reversa ou outros métodos ade- quados. As colunas de cromatografia instantâneas em fase normal usam acetato de etila e n-hexano ou metanol e cloreto de metileno como fases móveis. A cromatografia líquida de alta pressão preparati- va em fase reversa (HPLC) usa uma coluna C18 e UV a 214 nm e 254 nm com fases móveis A (água e 0,1% de ácido fórmico) e B (acetonitri- la) ou fases móveis A (água e 0,1% de bicarbonato de amônio) e B (acetonitrila).
[00114] Nos exemplos: Instrumento de LCMS: Pump Agilent 1260, detector UV: Espectrômetro de massa Agilent 1260 DAD API 3000;
[00115] Coluna de Cromatografia: Waters sunfire C18, 4,6×50 mm, 5 µm;
[00116] Fases móveis: A-H2O (0.1% HCOOH); B-acetonitrila
[00117] Instrumento de NMR: Bruker Ascend 400M (RMN de 1H: 400 mHz; RMN de 13C: 100 MHz). Síntese do intermediário A1: (R)-N-((S)-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4’- piperidin]-1-il)-2-metilpropano-2-sulfinamida
[00118] Etapa 1: Éster terc-butílico de ácido 1-oxo-1,3-di- hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1'-carboxílico (1,51 g, 5 mmol), tita- nato de tetraetila (6,84 g, 30 mmol) e (R)-(+)-terc-butilsulfinamida (2,41 g, 20 mmol) foram adicionados sucessivamente a um frasco com gar- galo único de 100 ml seco e a mistura foi agitada sob aquecimento e refluxo durante 15 horas. Após o sistema de reação ser resfriado à temperatura ambiente, salmoura saturada (60 ml) foi adicionada ao resíduo de reação, após isso a mistura resultante foi agitada durante 15 minutos e, em seguida, filtrada por diatomita. A mistura aquosa foi extraída com acetato de etila (3x80 ml). A fase orgânica foi seca em Na2SO4 e filtrada, e os produtos voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0 a 30% de acetato de etila: éter de petróleo) para obter éster terc-butílico de ácido (R,Z)-1-((terc-butilsulfinil)imino)- 1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1'-carboxílico (A1-1, 1,61 g, rendimento: 80%) como um sólido branco.
[00119] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,34 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,48 – 7,39 (m, 1H), 7,35 – 7,28 (m, 2H), 4,21 – 3,92 (m, 2H), 3,00 (s, 2H), 2,88 (t, J = 11,9 Hz, 2H), 2,00 – 1,80 (m, 2H), 1,48 – 1,30 (m, 11H), 1,24 (d, J = 13,1 Hz, 9H); LCMS: m/z 405,1 [M+H]+.
[00120] Etapa 2: Éster terc-butílico de ácido (R,Z)-1-((terc- butilsulfinil)imino)-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1'- carboxílico (A1-1, 0,802 g, 2 mmol) e THF (10 ml) foram adicionados sucessivamente a um frasco com gargalo único de 100 ml seco, a mis- tura foi resfriada a 0 °C e, em seguida, boro-hidreto de lítio (66 mg, 3 mmol) foi adicionado. Em seguida, a mistura resultante foi agitada du- rante 1 hora. O metanol foi lentamente adicionado para arrefecer brus-
camente o excesso de boro-hidreto. A solução de reação foi filtrada e concentrada, e os produtos voláteis foram removidos pressão reduzi- da. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em gel de síli- ca (gradiente de 0 a 50% de acetato de etila: éter de petróleo) para obter éster terc-butílico de ácido (S)-1-(((R)-terc-butilsulfinil)amino)-1,3- di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1'-carboxílico (A1-2, 0,63 g, ren- dimento: 78%) como um sólido amarelo-claro.
[00121] RMN de 1H (400 MHz, DMSO) δ 7,30 – 7,15 (m, 4H), 5,64 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 4,38 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 3,86 (s, 2H), 3,05 (d, J = 15,8 Hz, 1H), 2,87 (s, 2H), 2,62 (d, J = 15,8 Hz, 1H), 1,89 (s, 1H), 1,61 – 1,35 (m, 12H), 1,27 – 1,10 (m, 11H); LCMS: m/z 407,1 [M+H]+.
[00122] Etapa 3: Éster terc-butílico de ácido (S)-1-(((R)-terc- butilsulfinil)amino)-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1'- carboxílico (A1-2, 0,406 g, 1 mmol), diclorometano (5 ml) e TFA (1ml) foram adicionados sucessivamente a um frasco com único gargalo de 50 ml seco, e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Solução aquosa saturada de Na2CO3 foi adicionada até que o pH atingisse 7, e a mistura aquosa foi extraída com DCM (3×30 ml). A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura, seca em Na2SO4 e filtrada, e os produtos voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi resfriado para obter (R)-N- ((S)-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4’-piperidina]-1-il)-2-metilpropano-2- sulfinamida (A1, 0,183 g, rendimento: 70%) como uma matéria oleosa incolor.
[00123] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,26 – 7,11 (m, 5H), 4,45 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 3,77 (s, 1H), 3,18 (s, 2H), 3,04 (d, J = 15,9 Hz, 3H), 2,67 (d, J= 15,8 Hz, 1H), 2,20 (td, J = 12,7, 3,5 Hz, 1H), 1,82 (t, J = 11,1 Hz, 1H), 1,61 (d, J = 12,9 Hz, 1H), 1,34 – 1,11 (m, 10H);
[00124] LCMS: m/z 307,1 [M+H]+. Síntese do intermediário A2: R-N-((S)-5,7-di-
hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4’ -piperidina]-5-il)-2-metilpropano-2- sulfinamida
[00125] Etapa 1: Éster terc-butílico de ácido 4-cianopiperidina-1- carboxílico (1,05 g, 5 mmol) e THF (20 ml) foram adicionados sucessi- vamente a um frasco seco de 100 ml. Sob a proteção de nitrogênio, a mistura foi resfriada a -78 °C e, em seguida, 2 M de LDA (3,3 ml, 6,5 mmol) foram adicionados lentamente à mistura de reação. A mistura de reação pôde reagir durante 1 hora e, em seguida, 3-bromo-2- (bromometil)piridina (1,24 g, 5 mmol) foi adicionada à mesma e, em seguida, a mistura de reação pôde continuar a reagir durante 2 horas. Após a reação, solução saturada de cloreto de amônio (15 ml) foi adi- cionada para arrefecer bruscamente a reação, a mistura resultante foi extraída com acetato de etila (3×30 ml), as camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura saturada, secas em sulfato de só- dio anidro e filtradas, e o resíduo obtido por concentração sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de
0 a 30% de acetato de etila/éter de petróleo) para obter éster terc- butílico de ácido 4-((3-bromopiridina-2-il)metil)-4-cianopiperidina-1'- carboxílico (A2-1, 1,40 g, rendimento: 75%) como um sólido branco.
[00126] Etapa 2: Sob a proteção de nitrogênio, éster terc-butílico de ácido 4-((3-bromopiridina-2-il)metil)-4-cianopiperidina-1'-carboxílico (A2-1, 379 mg, 1 mmol), trimetilamina (404 mg, 4 mmol), bis(di-terc- butil(4-dimetilaminofenil)fosfina)dicloropaládio(II) Pd(AmPhos)2Cl2 (71 mg, 0,1 mmol) e DMA: H2O=10: 1 (6 ml) foram adicionados sucessi- vamente a um frasco seco com gargalo único de 25 ml e, em seguida, a mistura foi agitada a 130 °C durante 18 horas. Após a reação ter sido concluída, o resíduo obtido foi filtrado, e o resíduo obtido por concen- tração sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0 a 50% de acetato de etila: éter de petróleo) para obter éster terc-butílico de ácido 5-oxo-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4'-piperidina]-1'-carboxílico (A2-2, 180 mg, rendimento: 60%) como um sólido amarelo. LCMS: m/z 303,1 [M+H]+.
[00127] Etapa 3: Éster terc-butílico de ácido 5-oxo-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4'-piperidina]-1'-carboxílico (A2-2, 0,302 g, 1 mmol), titanato de tetraetila (1,37 g, 6 mmol) e (R)-(+)-terc- butilsulfinamida (0,480 g, 4 mmol) foram adicionados sucessivamente a um frasco com gargalo único de 100 ml seco, e a mistura foi agitada sob aquecimento e refluxo durante 15 horas. Após o sistema de rea- ção ser resfriado à temperatura ambiente, salmoura saturada (15 ml) foi adicionada ao resíduo de reação, após isso a mistura resultante foi agitada durante 15 minutos e, em seguida, filtrada por diatomita. A mistura aquosa foi extraída com acetato de etila (3x300 ml). A fase or- gânica foi seca em Na2SO4 e filtrada, e os produtos voláteis foram re- movidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0 a 50% de acetato de etila: éter de petróleo) para obter éster terc-butílico de ácido (R,Z)-5- ((terc-butilsulfinil)imino)-5,7- di-hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4'- piperidina]-1'-carboxílico (A2-3, 0,333 g, rendimento: 82%) como um sólido amarelo. LCMS: m/z 406,1 [M+H]+.
[00128] Etapa 4: Éster terc-butílico de ácido (R,Z)-5-((terc- butilsulfinil)imino)-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[b]piridina- 6,4'- piperidina]-1'-carboxílico (A2-3, 0,20 g, 0,491 mmol) e THF (50 ml) fo- ram adicionados sucessivamente um frasco com gargalo único de 100 ml seco, a mistura foi resfriada a 0 °C e, em seguida, boro-hidreto de lítio (0,018 g, 0,737 mmol) foi adicionado. A mistura resultante continu- ou a reagir com agitação durante 1 hora. O metanol foi lentamente adicionado para arrefecer bruscamente o excesso de boro-hidreto. A solução de reação foi filtrada e concentrada, e os produtos voláteis fo- ram removidos pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0 a 80% de acetato de etila: éter de petróleo) para obter éster terc-butílico de ácido (S)-5-((R)- terc-butilsulfonamido)-di-hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4'- piperidina]-1'-carboxílico (A2-4, 0,130 g, rendimento: 65%) como um sólido branco. LCMS: m/z 408,1 [M+H]+.
[00129] Etapa 5: Éster terc-butílico de ácido (S)-5-((R)-terc- butilsulfonamido)-di-hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4'-piperidina]-1'- carboxílico (A2-4, 0,100 g, 0,245 mmol), diclorometano (5 ml) e TFA (1ml) foram adicionados sucessivamente a um frasco seco com único gargalo de 50 ml, e a mistura resultante reagiu com agitação à tempe- ratura ambiente durante 1 hora. Solução aquosa saturada de Na2CO3 foi adicionada até que o pH atingisse 7, e a mistura aquosa foi extraída com DCM (3×30 ml). A fase orgânica combinada foi lavada com sal- moura, seca em Na2SO4 e filtrada, e os produtos voláteis foram remo- vidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi resfriado para ob- ter R-N-((S)-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4’-piperidina]-5-
il)-2-metilpropano-2-sulfinamida (A2, 0,056 g, rendimento: 75%) como uma matéria oleosa incolor. LCMS: m/z 308,1 [M+H]+. Síntese do intermediário A3: (S)-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4’- piperidina]-1-amina
[00130] Etapa: Álcool metílico (1 ml), diclorometano (1ml) e A1-2 (540 mg, 1,33 mmol, 1,0 eq.) foram adicionados a um frasco seco de fundo redondo de 100 ml. HCl/1,4-dioxano (3,3 ml, 4 M) foi adicionado por gotejamento à temperatura ambiente, o sólido branco foi precipita- do, e o sistema de reação foi aquecido a 50 °C e agitado durante 2 ho- ras. Após a reação foi concluída, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter (S)-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4’- piperidina]-1-amina (A3, 373 mg, rendimento: 97,1%, sal de HCl) como um sólido branco. LCMS: m/z 203,1 [M+H]+. Síntese do intermediário A4: (S)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4’-piperidina]-5-amina
[00131] O intermediário (S)-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[b]piridina- 6,4’-piperidina]-5-amina (A4) foi sintetizado de acordo com o protocolo de síntese do intermediário A3, com o uso do intermediário A2-4 em vez do intermediário A1-2. LCMS: m/z 204,1 [M+H]+. Síntese do intermediário A5: (S)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[c]piridina-6,4’-piperidina]-7-amina
[00132] A5 foi sintetizado de acordo com o protocolo de síntese do intermediário A2 e A3. LCMS: m/z 204,1 [M+H]+. Síntese do intermediário A6: (S)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4’-piperidina]-7-amina
[00133] Etapa 1: A6-1 (11,1 g, 60 mmol) e NaBH4 (2,51 g, 66 mmol) foram adicionados sucessivamente a 300 ml de THF e 60 ml de H2O em um frasco de 1 l, e a mistura reagiu a 20 °C durante 2 horas. Após a confirmação de que as matérias-primas reagiram completamente por detecção em placa pontual, a mistura de reação foi arrefecida brusca- mente com solução saturada de NH4Cl, diluída com água e extraída com acetato de etila. A fase orgânica combinada foi lavada com solu- ção saturada de NaCl, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e con- centrada sob pressão reduzida para obter 2-bromo-piridin-3-ilmetanol (A6-2, 11,2 g, rendimento: 100%) como um sólido branco.
[00134] Etapa 2: A6-2 (6,73 g, 36 mmol) e Ms2O (6,96 g, 40 mmol) foram adicionados sucessivamente a 120 ml de diclorometano em um frasco seco com gargalo único de 250 ml, em seguida, a mistura foi resfriada a 0 °C, em seguida, TEA (5,45 g, 54 mmol) foi adicionado lentamente e, em seguida, a mistura foi aquecida à temperatura ambi- ente e agitada durante 3 horas. Após a reação ter sido concluída, a solução de reação foi lavada com água. A fase orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0 a 10% de acetato de etila/ diclorometano) para obter éster (2-bromopiridin-3-il)metílico de ácido metilsulfônico (A6-3, 8,02 g, rendimento: 84%) como uma matéria oleosa incolor.
[00135] Etapa 3: Éster terc-butílico de ácido 4- etoxicarbonilapiperidina-1-carboxílico (9,3 g, 36,2 mmol) e THF (133 ml) foram adicionados sucessivamente a um frasco seco com três gar- galos de 500 ml. Sob a proteção de nitrogênio, a mistura foi resfriada a -70 °C e, em seguida, 2 M de LDA (21,1 ml, 42,3 mmol) foram adicio- nados lentamente à mistura de reação. A mistura de reação pôde rea- gir durante 1 hora, em seguida, éster (2-bromopiridin-3-il)metílico de ácido metilsulfônico (A6-3, 8,0 g, 30,2 mmol) dissolveu em 65 ml de THF foi adicionado ao mesmo, em seguida, a mistura de reação pôde continuar a reagir durante 0,5 hora e, em seguida, a mistura de reação foi aquecida lentamente à temperatura ambiente e agitada durante 1 hora. Após a reação foi concluída, a mistura de reação foi arrefecida bruscamente por salmoura saturada e extraída com acetato de etila. As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura satura- das, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas. O re- síduo obtido foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 8 a 12% de acetato de etila/ diclorometano) para obter éster terc- butílico de ácido 4-etoxicarbonila-4-(2-bromo-3-piridil)metil-piperidina- 1-carboxílico (A6-4, 10,5 g, rendimento: 81%) como uma matéria ole- osa incolor.
[00136] Etapa 4: Éster terc-butílico de ácido 4-etoxicarbonila-4-(2-
bromo-3-piridil)metil-piperidina-1-carboxílico (A6-4, 7,85 g, 18,4 mmol) e THF (120 ml) foram adicionados sucessivamente a um frasco seco com três gargalos de 250 ml. Sob a proteção de nitrogênio, a mistura foi resfriada a -70 °C e, em seguida, 2,5 M de n-butil-lítio (11 ml, 27,6 mmol) foi adicionada lentamente à mistura de reação. A mistura de reação pôde reagir durante 1,5 hora. Após a reação ter sido concluída, solução aquosa saturada de cloreto de amônio foi adicionada à mes- ma para arrefecer bruscamente a reação e, em seguida, salmoura sa- turada foi adicionada para diluir e separar o líquido. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila. As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura saturadas, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas. O resíduo obtido foi purificado por cromato- grafia em gel de sílica (gradiente de 0 a 60% de acetato de etila/éter de petróleo) para obter éster terc-butílico de ácido 7-oxo-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4’-piperidina]-1'-carboxílico (A6-5, 1,4 g, rendimento: 25%) como um sólido amarelo-claro.
[00137] Etapa 5: Intermediário éster terc-butílico de ácido (R,Z)-7- ((terc-butilsulfinil)imino)-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4’- piperidina]-1'-carboxílico (A6-6, 1,46 g, rendimento: 68%) foi sintetiza- do de acordo com o protocolo de síntese do intermediário A2-3, com o uso do intermediário A6-5 em vez do intermediário A2-2.
[00138] Etapa 6: Éster terc-butílico de ácido (R,Z)-7-((terc- butilsulfinil)imino)-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4’- piperidina]-1'-carboxílico (A6-6, 530 mg, 1,31 mmol) e THF (10 ml) fo- ram adicionados sucessivamente a um frasco seco com três gargalos de 50 ml. Sob a proteção de nitrogênio, a mistura foi resfriada a -70 °C e, em seguida, 1,5 M de hidreto de di-isobutilalumínio em tolueno (1,3 ml, 1,95 mmol) foi adicionada lentamente à mistura de reação. A mis- tura de reação pôde reagir durante 0,5 hora e, em seguida, a mistura foi aquecida lentamente à temperatura ambiente, arrefecida brusca-
mente com solução aquosa saturada de tartarato de sódio e potássio e agitada durante 0,5 hora. A mistura de reação foi extraída com acetato de etila. As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura saturadas, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gra- diente de 0 a 5% de álcool metílico/diclorometano) para obter éster terc-butílico de ácido (S)-7-((R)-terc-butilsulfonamido)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4’-piperidina]-1'-carboxílico (A6-7, 466 mg, rendimento: 87%) como um sólido amarelo-claro.
[00139] Etapa 7: Éster terc-butílico de ácido (S)-7-((R)-terc- butilsulfonamido)-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4’- piperidina]-1'-carboxílico (A6-7, 312 mg, 0,766 mmol), MeOH (5 ml) e 4 M de solução de HCl/1,4-dioxano (3,83 ml, 15,3 mmol) foram adicio- nados sucessivamente a um frasco seco com gargalo único de 25 ml e, em seguida, a mistura foi aquecida a 50 °C e reagiu durante 8 horas para obter uma suspensão branca. A suspensão foi concentrada sob pressão reduzida para obter sal de HCl (S)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4’-piperidina]-7-amina (A6, 232 mg, rendimento: 97%) como um sólido branco. LCMS: m/z 204,1 [M+H]+. Síntese do intermediário A7: (S)-6-fluoro-1,3-di-hiroespiro[indeno-2,4'- piperidina]-1-amina
[00140] Etapa 1: O intermediário éster terc-butílico de ácido 4-
etoxicarbonila-4-(4-fluorobenzil)-piridina-1-carboxílico A7-1 foi sinteti- zado de acordo com o protocolo de síntese do intermediário A2, com o uso da matéria-prima brometo de 4-fluorobenzila em vez de matéria- prima 3-bromo-2(bromometil)piridina.
[00141] Etapa 2: Éster terc-butílico de ácido 4-etoxicarbonila-4-(4- fluorobenzil)-piridin-1-carboxílico (A7-1, 3,40 g, 9,30 mmol) e hidróxido de sódio (1,86 g, 46,5 mmol) foram adicionados sucessivamente a 20 ml de álcool metílico e 20 ml de água em um frasco com gargalo único de 100 ml. A solução de reação reagiu a 70 °C durante 17 horas. A mistura de reação foi resfriada à temperatura ambiente e, em seguida, concentrada sob pressão reduzida para remover os produtos voláteis. O resíduo obtido foi diluído com água (50 ml), e o ácido clorídrico dilu- ído foi adicionado para ajustar o pH para 3 e, em seguida, a mistura foi extraída 3 vezes com acetato de etila (80 ml). As fases orgânicas fo- ram combinadas, lavadas com salmoura saturada, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para obter ácido 1-terc-butoxicarbonila-4-(4-fluorobenzil)-piridina-4-carboxílico (A7-2, 3,0 g, produto bruto) como um sólido amarelo.
[00142] Etapa 3: Ácido 1-terc-butoxicarbonila-4-(4-fluorobenzil)- piridina-4-carboxílico (A7-2, 2,0 g, 5,93 mmol) e PPA (15 ml) foram adicionados sucessivamente a um frasco seco com único gargalo de 50 ml. A solução de reação reagiu a 120 °C durante 2 horas. A solução de reação foi vertida em mistura de gelo-água (50 ml) enquanto ainda estava quente, e sólido de NaOH foi adicionado para ajustar o pH para
10. Em seguida, Boc2O (1,94 g, 8,90 mmol) foi adicionado à mistura resultante, e a solução de reação foi agitada a 20 °C durante 1 hora. A solução de reação foi extraída 3 vezes com acetato de etila (80 ml). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura saturadas, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em gel de sílica (éter de petró-
leo/acetato de etila= 5:1) para obter éster terc-butílico de ácido 6- fluoro-1-oxo-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1'-carboxílico (A7-3, 1,20 g, rendimento: 63,5%) como um sólido amarelo.
[00143] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,46 – 7,38 (m, 2H), 7,37 – 7,30 (m, 1H), 4,20 – 4,06 (m, 2H), 3,07 – 2,95 (m, 4H), 1,96 – 1,85 (m, 2H), 1,48 (s,9H), 1,44 – 1,35 (m, 2H).
[00144] Etapa 4: O intermediário (R,Z)-1-((terc-butilsulfinil)imino)-6- fluoro-1-oxo-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1'-formato A7-4 foi sintetizado de acordo com o protocolo de síntese do intermediário A2, com o uso do intermediário A7-3 em vez do intermediário A2-2.
[00145] Etapa 5: (R,Z)-1-((terc-butilsulfinil)imino)-6-fluoro-1-oxo-1,3- di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1'-formato (A7-4,1.59 g, 3,76 mmol), tetra-hidrofurano/água (98:2, 32 ml) e boro-hidreto de sódio (427 mg, 11,3 mmol) foram adicionados sucessivamente a um frasco de fundo redondo a -50 °C, e a solução de reação foi aquecida a 20 °C em 3 horas sob agitação. Foi confirmado que a reação é concluída por placa pontual de TLC. A solução de reação foi diluída com água (30 ml), e extraída 3 vezes com acetato de etila (30 ml). As fases orgâni- cas foram combinadas, lavadas com salmoura saturadas, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em gel de sílica (éter de petróleo/acetato de etila= 2:1) para obter éster terc-butílico de ácido (S)-1-(((R)-terc- butilsulfinil)amino)-6-fluoro-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1'- carboxílico (A7-5, 850 mg, rendimento: 53%) como um sólido branco.
[00146] Etapa 6: O intermediário (S)-6-fluoro-1,3-di- hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1-amina A7 foi sintetizado de acor- do com o protocolo de síntese do intermediário A3, com o uso do in- termediário A7-5 em vez do intermediário A1-2. LCMS: m/z 220,1 [M+H]+. Intermediário A8: (S)-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[c]piridina-6,4’-
piperidina]-7-amina
[00147] Etapa 1: Sal de bromidrato de 4-bromonicotinicaldeído (A8- 1, 2,5 g, 9,36 mmol) foi dissolvido em álcool metílico (50 ml), boro- hidreto de sódio (0,72 g, 18,93 mmol, 2,0 eq.) foi adicionado em bate- lada em um banho gelado, e a mistura reagiu a 0 °C durante 1 hora. Após a reação ter sido concluída, a solução aquosa saturada de clore- to de amônio (50 ml) foi adicionada em um banho gelado para arrefe- cer bruscamente a reação, e a mistura de reação foi extraída com ace- tato de etila (100 ml x 2). As fases orgânicas foram combinadas, lava- das com solução aquosa de cloreto de sódio saturado. A fase orgânica foi separada, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada para obter (4-bromopiridin-3-il)metanol (A8-2, 1,7 g, rendimento: 100%) como um sólido branco. LCMS: m/z 190,3 [M+H]+
[00148] Etapa 2: (4-Bromopiridin-3-il)metanol (A8-2, 1,7 g, 9,04 mmol) foi dissolvido em diclorometano (100 ml), 3, e trietilamina (2,30 g, 22,7 mmol) foi adicionada em um banho gelado. Sob a proteção de nitrogênio, anidrido metanossulfônico (1,95 g, 11,2 mmol) foi adiciona- do em batelada, a mistura reagiu a 0 °C durante 2 horas e, em segui- da, a reação foi concluída. Cloreto de sódio saturado (50 ml) foi adici- onado para arrefecer bruscamente a reação em um banho gelado, e a fase orgânica foi separada e lavada com solução aquosa de cloreto de sódio saturado. A fase orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada para obter éster (4-bromopiridin-3-il)metílico de ácido metanossulfônico (A8-3, 1,7 g, rendimento: 70,7%) como um só- lido marrom avermelhado. LCMS: m/z 266,2 [M+H]+
[00149] Etapa 3: Éster terc-butílico de ácido 4-cianopiperidina-1- carboxílico (1,61 g, 7,67 mmol) foi dissolvido em tetra-hidrofurano ani- dro (60 ml). Em um banho de acetona e gelo seco (-78 °C) e na prote- ção de nitrogênio, LDA (4,6 ml, 9,2 mmol) foi adicionada lentamente por gotejamento, a mistura reagiu por 0,5 hora ao passo que a tempe- ratura foi mantida, e grande parte do sólido branco precipitou a solu- ção de reação. Uma solução de éster (4-bromopiridin-3-il)metílico de ácido metanossulfônico (A8-3, 1,7 g, 6,39 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (50 ml) foi adicionado lentamente por gotejamento a -78 °C, a continuou a reagir durante 2 horas ao passo que a temperatura foi mantida e, em seguida, a reação foi concluída. Cloreto de amônio sa- turado (100 ml) foi adicionado para arrefecer bruscamente a reação, e a mistura foi extraída com acetato de etila (100 ml x3). As fases orgâ- nicas foram combinadas e lavadas com solução aquosa de cloreto de sódio saturado. A fase orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0 a 50% de diclorometano/éter de petróleo) para obter éster terc-butílico de ácido 4-((4-bromopiridin-3-il)metil)-4- cianopiperidina-1-carboxílico (A8-4, 1,58 g, rendimento: 54%) como um sólido branco. LCMS: m/z 326,0 [M+H-56]+
[00150] Etapa 4: Éster terc-butílico de ácido 4-((4-bromopiridin-3-
il)metil)-4-cianopiperidina-1-carboxílico (A8-4, 1,5 g, 3,95 mmol) foi dissolvido em DMAc/H2O (100 ml/10 ml), DIPEA (1,34 g, 15,8 mmol) e Pd(AmPhos)2Cl2 (142 mg, 0,20 mmol) foram adicionados, a atmosfera no sistema de reação foi substituída por nitrogênio três vezes, a mistu- ra reagiu a 130 °C durante 2 horas e, em seguida, a reação foi conclu- ída. Água (50 ml) foi adicionada, e a mistura foi extraída com acetato de etila (100 ml x3). As fases orgânicas foram combinadas e lavadas com solução aquosa de cloreto de sódio saturado. A fase orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica para obter éster terc- butílico de ácido 5-oxo-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[c]piridina-6,4’- piperidina]-1'-carboxílico (A8-5, 750 mg, rendimento: 62%) como um sólido. LCMS: m/z 303,3 [M+H]+
[00151] Etapa 5: Éster terc-butílico de ácido 5-oxo-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[c]piridina-6,4’-piperidina]-1'-carboxílico (A8-5, 750 mg, 2,48 mmol) foi dissolvido em THF (10 ml), e (R)-(+)- terc- butilsulfinamida (390 mg, 3,22 mmol) e titanato de tetraetila (10 ml) fo- ram adicionados. Sob a proteção de nitrogênio, a mistura foi aquecida a 90 °C e submetida a refluxo durante 18 horas. Após a reação ter sido concluída, a mistura de reação foi resfriada à temperatura ambiente e diluída com acetato de etila (50 ml), salmoura saturada (10 ml) foi adi- cionada, e o sólido branco foi precipitado. A mistura foi filtrada, e a tor- ta de filtro foi lavada com acetato de etila. O filtrado foi lavado com salmoura saturada, e a fase orgânica foi seca em sulfato de sódio ani- dro, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromato- grafia em gel de sílica para obter éster terc-butílico de (R,Z)-5-((terc- butilsulfinil)imino)-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[c]piridina-6,4'- piperidina]-1'-carboxílico (A8-6, 800 mg, rendimento: 80%) como um sólido branco. LCMS: m/z 406,2 [M+H]+
[00152] Etapa 6: Éster terc-butílico de ácido (R,Z)-5-((terc-
butilsulfinil)imino)-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[c]piridina-6,4'- piperidina]-1'-carboxílico (A8-6, 800 mg, 1,98 mmol) foi dissolvido em THF (50 ml), e a mistura foi resfriada a -78 °C sob a proteção de nitro- gênio. 1,5 M de DIBAL-H (2 ml, 3 mmol) foi lentamente gotejado na solução de reação. Após a conclusão do gotejamento, a mistura reagiu a -78 °C durante 1 hora e, em seguida, a reação foi concluída. Água foi adicionada para arrefecer bruscamente a reação, solução saturada de tartarato de potássio e sódio (20 ml) foi adicionada, e a mistura foi ex- traída com acetato de etila (100 ml x 2). A fase orgânica foi lavada uma vez com solução aquosa de cloreto de sódio saturado. A fase or- gânica foi separada, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e con- centrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica para obter éster terc-butílico de ácido (S)-5-(((R)-terc- butilsulfinil)amino)-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[c]piridina-6,4'- piperidina]-1'-carboxílico (A8-7, 680 mg, rendimento: 84%) como um sólido branco. LCMS: m/z 408,3 [M+H]+
[00153] Etapa 7: Éster terc-butílico de ácido (S)-5-(((R)-terc- butilsulfinil)amino)-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[c]piridina-6,4'- piperidina]-1'-carboxílico (A8-7, 680 mg, 1,67 mmol) foi dissolvido em MeOH (50 ml), a mistura foi resfriada a 0 °C, 4 M de solução de ácido clorídrico/dioxano (10 ml, 40 mmol) foi adicionado por gotejamento, a mistura resultante reagiu à temperatura ambiente durante 3 horas e, em seguida, a reação foi concluída. A solução de reação foi concen- trada para obter cloridrato de (S)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[c]piridina-6,4'-piperidina]-7-amina (A8, 400 mg, rendimento: 99%) como um sólido branco. LCMS: m/z 204,1 [M+H]+ Intermediário A9: (S)-1-amino-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidin]- 4-ol
[00154] Etapa 1: 2-Bromo-6-hidroxibenzaldeído (5 g, 24,9 mmol) foi dissolvido em DMF (100 ml), carbonato de potássio anidro (6,88 g, 49,8 mmol) e brometo de 4-metoxibenzila (5,26 g, 26,1 mmol) foi adi- cionado, a mistura reagiu à temperatura ambiente durante 18 horas sob proteção de nitrogênio e, em seguida, a reação foi concluída. A solução de reação foi vertida em água gelada e extraída com acetato de etila (250 ml) duas vezes. As fases orgânicas foram combinadas e lavadas com salmoura saturada. A fase orgânica foi separada, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica para obter 2-bromo-6-((4- metoxibenzil)oxi)benzaldeído (A9-1, 8 g, rendimento: 100%) como um sólido amarelo-claro. LCMS: m/z 343,0 [M+Na]+
[00155] Etapa 2: 2-Bromo-6-((4-metoxibenzil)oxi)benzaldeído (A9-1, 8 g, 24,9 mmol) foi dissolvido em etanol (100 ml) e a mistura foi resfri- ada a 0 °C em um banho gelado. Boro-hidrato de sódio (942 mg, 24,9 mmol) foi adicionado cuidadosamente em múltiplas bateladas. A mistu- ra reagiu a 0 °C durante 0,5 hora e, em seguida, a reação foi concluí- da. A solução de reação foi vertida em água gelada e extraída duas vezes com acetato de etila (200 ml). As fases orgânicas foram combi- nadas, lavadas com salmoura saturada, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas para obter (2-bromo-6-((4- metoxibenzil)oxi)fenil)metanol (A9-2, 7,3 g, rendimento: 90%) como um sólido. LCMS: m/z 345,0 [M+Na]+
[00156] Etapa 3: (2-Bromo-6-((4-metoxibenzil)oxi)fenil)metanol (A9- 2, 7,3 g, 22,6 mmol) foi dissolvido em diclorometano (200 ml), e a mis- tura foi resfriada em um banho gelado a 0 °C. Tetrabrometo de carbo- no (11,2 g, 33,9 mmol) e trifenilfosfina (8,88 g, 33,9 mmol) foram adici- onados sob proteção de nitrogênio. A mistura foi reagida a 0 °C duran- te 5 hora e, em seguida, a reação foi concluída. A solução de reação foi vertida em água gelada e extraída duas vezes com acetato de etila (200 ml). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com salmou- ra saturada, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e concentra- das. O produto bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica para obter 1-bromo-2-(bromometil)-3-((4-metoxibenzil)oxi)benzeno (A9-3, 4 g, rendimento: 46%) como um sólido.
[00157] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,40 (t, J = 4,4 Hz, 2H), 7,17-7,20 (m, 1H), 7,11 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 6,92-6,95 (m, 2H), 6,87- 6,89 (m, 1H), 5,30 (s, 2H), 4,76 (s, 2H), 3,83 (s, 3H);
[00158] Etapa 4: Éster terc-butílico de ácido 4-cianopiperidina-1- carboxílico (2,6 g, 12,4 mmol) foi dissolvido em THF anidro (60 ml), e a mistura foi resfriada a -78 °C. 2 M de LDA (7,5 ml, 14,9 mmol) foram adicionados lentamente por gotejamento. A mistura reagiu a -78 °C durante 0,5 hora e, em seguida, uma solução de 1-bromo-2- (bromometil)-3-((4-metoxibenzil)oxi)benzeno (A9-3, 4 g, 10,4 mmol) em THF anidro (40 ml) foi adicionada por gotejamento. A mistura rea- giu a -78 °C durante 2 horas e, em seguida, aquecida lentamente a 0 °C. A reação foi concluída. A solução de reação foi vertida em água gelada e extraída duas vezes com acetato de etila (200 ml). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura saturada, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas. O produto bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica para obter éster terc- butílico de ácido 4-(2-bromo-6-((4-metoxibenzil)oxi)benzil)-4- cianopiperidina-1-carboxílico (A9-4, 2,8 g, rendimento: 44%) como um sólido. LCMS: m/z 537,0 [M+Na]+
[00159] Etapa 5: Éster terc-butílico de ácido 4-(2-bromo-6-((4- metoxibenzil)oxi)benzil)-4-cianopiperidina-1-carboxílico (A9-4, 2,6 g, 5,0 mmol) foi dissolvido em DMAc (100 ml), H2O (10 ml), DIPEA (3,225 g, 25,0 mmol) e PdCl2(AmPhos)2 (354 mg, 0,5 mmol) foram adiciona- dos. A mistura reagiu a 130 °C sob proteção de argônio durante 18 horas e, em seguida, a reação foi concluída. Após resfriada à tempera- tura ambiente, a solução de reação foi vertida em água gelada e extra- ída duas vezes com acetato de etila (300 ml). As fases orgânicas fo- ram combinadas, lavadas uma vez com água e salmoura saturada, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas. O produto bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica para obter éster terc-butílico de ácido 4-((4-metoxibenzil)oxi)-1-oxo-1,3-di- hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1'-carboxílico (A9-5, 1,8 g, rendi- mento: 82%) como um sólido. LCMS: m/z 382,2 [M-56]+
[00160] Etapa 6: Éster terc-butílico de ácido 4-((4-metoxibenzil)oxi)- 1-oxo-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1'-carboxílico (A9-5, 1,8 g, 4,12 mmol) foi dissolvido em THF (20 ml), (R)-2-metilpropano-2- sulfinamida (748 mg, 6,18 mmol) e titanato de tetraetila (50 ml) foram adicionados. A mistura de reação foi aquecida a 100 °C e submetida a refluxo durante 18 horas sob proteção de nitrogênio. A reação foi con- cluída, e após a mistura ter sido resfriada à temperatura ambiente, acetato de etila (200 ml) foi adicionado para diluição, salmoura satura- da (50 ml) foi adicionada, e o sólido branco foi precipitado. A mistura foi filtrada e a torta de filtro foi lavada com acetato de etila. O filtrado foi lavado com salmoura saturada, e a fase orgânica foi separada, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica para obter éster terc- butílico de ácido (R,Z)-1-((terc-butilsulfinil)imino)-4-((4- metoxibenzil)oxi)-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1'-
carboxílico (A9-6, 1,7 g, rendimento: 76%) como um sólido branco. LCMS: m/z 541,3 [M+H]+
[00161] Etapa 7: Éster terc-butílico de ácido (R,Z)-1-((terc- butilsulfinil)imino)-4-((4-metoxibenzil)oxi)-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'- piperidina]-1'-carboxílico (A9-6, 1,7 g, 3,15 mmol) foi dissolvido em THF (100 ml), e a mistura foi resfriada a -78 °C sob proteção de nitro- gênio. 1,5 M de DIBAL-H (3,15 ml, 4,7 mmol) foi adicionado lentamen- te por gotejamento à solução de reação. Após a adição ter sido conclu- ída, a solução de reação reagiu a -78 °C durante 1 hora até que a rea- ção foi concluída. A água foi adicionada para arrefecer bruscamente a reação, a solução saturada de tartarato de potássio e sódio (50 ml) foi adicionada, a mistura foi extraída com acetato de etila (200 ml x 2), e a fase orgânica foi lavada uma vez com solução aquosa de cloreto de sódio saturado. A fase orgânica foi separada, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por croma- tografia em gel de sílica para obter éster terc-butílico de ácido (S)-1- (((R)-terc-butilsulfinil)amino)-4-((4-metoxibenzil)oxi)-1,3-di- hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1'-carboxílico (A9-7, 1,5 g, rendi- mento: 88%) como um sólido branco. LCMS: m/z 543,3 [M+H]+
[00162] Etapa 8: Éster terc-butílico de ácido (S)-1-(((R)-terc- butilsulfinil)amino)-4-((4-metoxibenzil)oxi)-1,3-di-hidroespiro[indeno- 2,4'-piperidina]-1'-carboxílico (A9-7, 1,5 g, 2,77 mmol) foi dissolvido em MeOH (50 ml), a mistura foi resfriada a 0 °C e 4 M de solução de ácido clorídrico/dioxano (10 ml, 40 mmol) foi adicionada por gotejamento. A mistura reagiu à temperatura ambiente durante 3 horas e, em seguida, a reação foi concluída. A solução de reação foi concentrada para obter cloridrato de (S)-1-amino-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidin]-4-ol (A9, 600 mg, rendimento: 85%) como um sólido branco. LCMS: m/z 219,2 [M+H]+ Intermediário A10: (S)-1-(((R)-terc-butilsulfinil)amino)-4-ciano-1,3-di-
hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]
[00163] Etapa 1: 2-Metil-3-cianobromobenzeno (3,0 g, 15,3 mmol, 1,0 eq.), N-bromosuccinimida (2,72 g, 15,3 mmol, 1,0 eq.), peróxido de benzoíla (371 mg, 1,53 mmol, 0,1 eq.) e tetracloreto de carbono (40 ml) foram adicionados sucessivamente a um frasco de fundo redondo de 100 ml, e a mistura assentou a 80 °C durante 16 horas. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resí- duo. O resíduo foi dissolvido em acetato de etila (200 ml), lavado duas vezes com 2 N de solução aquosa de NaOH (50 ml) e uma vez com salmoura saturada (50 ml), seco em sulfato de sódio anidro e filtrado. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica para obter 1-bromo-2-(bromometil)-3-cianobenzeno (A10-1, 2,0 g, ren- dimento: 47,5%) como um sólido branco.
[00164] Etapa 2: Tetra-hidrofurano (30 ml) e éster terc-butílico de ácido 4-cianopiperidina-1-carboxílico (1,84 g, 8,73 mmol, 1,2 eq.) fo- ram adicionados sucessivamente a um frasco de fundo redondo de 100 ml, a mistura foi resfriada a -78 °C, em seguida 2,0 M de LDA (5,1 ml, 10,2 mmol, 1,4 eq.) foram adicionados, e a mistura foi agitada a - 78 °C durante uma hora. Em seguida, a solução de 1-bromo-2- (bromometil)-3-cianobenzeno (A10-1, 2,0 g, 7,27 mmol, 1,0 eq.) em tetra-hidrofurano (15 ml) foi adicionada, e a mistura foi agitada a -78 °C durante 0,5 hora. Em seguida, o banho de baixa temperatura foi remo- vido, a mistura pôde retornar à temperatura ambiente e, em seguida,
continuou a ser agitada durante uma hora. Após a confirmação de que a matéria-prima reagiu completamente pela TLC, foi adicionada sal- moura saturada (30 ml) para arrefecimento brusco e, em seguida, a mistura foi extraída com acetato de etila (100 ml*2). A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura saturada (50 ml), seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão redu- zida para obter um produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica para obter terc-butil-4-(2-bromo-6- cianobenzil)-4-cianopiperidina-1-carboxilato (A10-2, 1,5 g, rendimento: 51%) como uma matéria oleosa amarelo-claro. LC-MS: m/z 404,1, 406,1 [M+H]+.
[00165] Etapa 3: Terc-butil-4-(2-bromo-6-cianobenzil)-4- cianopiperidina-1-carboxilato (A10-2, 1,5 g, 3,71 mmol, 1,0 eq.), Pd(AmPhos)2Cl2 (262 mg, 0,37 mmol. 0,1 eq.), di-isopropiletilamina (2,4 g, 18,5 mmol, 5,0 eq.), N,N-dimetil acetamida (30 ml) e água (4 ml) foram adicionados sucessivamente a um frasco seco com três gar- galos de fundo redondo de 100 ml. Sob agitação, a atmosfera no sis- tema de reação foi substituída por nitrogênio três vezes e, em seguida, a mistura de reação foi aquecida a 140 °C e reagiu por 16 horas. Após a reação ter sido concluída, a solução de reação foi resfriada à tempe- ratura ambiente, diluída com acetato de etila (100 ml) e filtrada sob pressão reduzida. A torta de filtro foi lavada com acetato de etila (20 ml), e o filtrado resultante foi lavado com salmoura saturada (30 ml) 3 vezes, seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concen- trado sob pressão reduzida para obter um produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica para obter terc- butil-4-ciano-1-oxo-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1-formato (A10-3, 0,90 g, rendimento: 74,3%) como um sólido branco. LC-MS: m/z 327,2 [M+H]+.
[00166] Etapa 4: Terc-butil-4-ciano-1-oxo-1,3-di-hidroespiro[indeno-
2,4'-piperidina]-1-formato (A10-3, 900 mg, 2,76 mmol), tetraetoxilato de titânio (3,78 g, 16,6 mmol), (R)-(+)-terc-butilsulfinamida (401 mg, 3,31 mmol) e tetra-hidrofurano (20 ml) foram adicionados sucessivamente a um frasco com gargalo único de 100 ml seco, e a mistura foi agitada sob aquecimento e refluxo durante 16 horas. Após o resfriamento à temperatura ambiente, salmoura saturada (60 ml) foi adicionada ao resíduo de reação e, em seguida, a mistura resultante foi agitada du- rante 15 minutos e, em seguida, filtrada através de diatomita. A mistu- ra aquosa foi extraída com acetato de etila (3x80 ml). A fase orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0 a 30% de acetato de etila: éter de petróleo) para obter éster terc-butílico de ácido (R,Z)-1-((terc-butilsulfinil)imida)- 4-ciano-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1'-carboxílico (A10-4, 980 mg, rendimento: 82,7%) como um sólido branco. LCMS: m/z 430,2 [M+H]+.
[00167] Etapa 5: Tetra-hidrofurano (15 ml) e éster terc-butílico de ácido (R,Z)-1-((terc-butilsulfinil)imida)-4-ciano-1,3-di- hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1'-carboxílico (A10-4, 980 mg, 2,28 mmol, 1,0 eq.) foram adicionados sucessivamente a um frasco seco com três gargalos de 50 ml. Hidreto de di-isobutil-alumínio (6,8 ml, 1,5 M em tolueno, 10,3 mmol, 4,5 eq.) foi adicionado por gotejamento a - 78 °C e sob proteção de nitrogênio, e a mistura continuou a ser agitada durante meia hora. Em seguida, a mistura foi aquecida a 0 °C e conti- nuou a ser agitada durante meia hora. Após a reação ter sido concluí- da, a mistura de reação foi arrefecida bruscamente com tartarato de potássio e sódio (4 g dissolvido em 20 ml de água), agitada durante meia hora e extraída com acetato de etila (30 ml*3). A fase orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada (30 ml), seca com sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-70% de acetato de etila: éter de petróleo) para obter éster terc-butílico de ácido (S)-1-((R)-terc-butilsulfinil)amino)-4-ciano-1,3-di- hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1'-carboxílico (A10-5, 800 mg, ren- dimento: 81,3%) como um sólido amarelo. LC-MS: m/z 432,2 [M+H]+.
[00168] Etapa 6: Éster terc-butílico de ácido (S)-1-((R)-terc- butilsulfinil)amino)-4-ciano-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1'- carboxílico (A10-5, 800 mg, 1,85 mmol), diclorometano (15 ml) e ácido trifluoroacético (5 ml) foram adicionados sucessivamente a um frasco seco único de 50 ml, e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A solução aquosa saturada Na2CO3 foi adici- onada até o pH = 7, e a mistura aquosa foi extraída com diclorometano (3x50 ml). A fase orgânica combinada foi lavada com solução salina, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-70% de acetato de etila: éter de petróleo) para obter (R)-N-((S)-4-ciano-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1-il)-2- metilpropil-2-sulfinamida (A10, 490 mg, rendimento: 79,8%) como um sólido amarelo. LCMS: m/z 332,2 [M+H]+. Intermediário A11: (S)-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4'- piperidina]-5-amina
[00169] Etapa 1: 2,2,6,6-tetrametilpiperidina (5,33 g, 37,8 mmol) foi dissolvida em 100 ml de tetra-hidrofurano, a mistura foi resfriada a -65 °C sob proteção de argônio em um banho de acetona e gelo seco, n- butil-lítio (2,5 M, 15,8 ml, 39,5 mmol) foi adicionado por gotejamento, em seguida, a temperatura da mistura foi mantida a 0 °C durante 30 minutos e em seguida diminuída a -65 °C novamente, a mistura de 2- bromopirazina (5,0 g, 31,4 mmol) e 10 ml de tetra-hidrofurano foi adici- onada por gotejamento, a temperatura foi mantida durante 30 minutos, uma mistura de DMF (5,75 g, 78,6 mmol) e 10 ml de tetra-hidrofurano foi adicionada por gotejamento, a mistura resultante continuou a ser agitada durante 2 horas e, em seguida, a reação foi concluída. Em se- guida, 75 ml de metanol foram adicionados por gotejamento a -65 °C, a mistura foi agitada durante 10 minutos, NaBH4 (2,38 g, 62,9 mol) foi adicionada lentamente, a temperatura da mistura foi elevada lenta- mente a 0 °C e mantida 1 hora e, em seguida, a reação foi concluída. O líquido de reação foi vertido em 500 ml de solução aquosa gelada de NH4Cl e extraída com acetato de etila três vezes. A fase orgânica foi lavada uma vez com salmoura saturada. As fases orgânicas foram combinadas, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas, concentradas e passaram através da coluna para obter (3-bromopiridin-2-il)metanol (A11-1, 4,33 g, rendimento: 72,9%) como um sólido amarelo. LCMS: m/z 191 [M+H]+
[00170] Etapa 2: (3-bromopiridin-2-il)metanol (A11-1, 4,33 g, 22,9 mmol) foi dissolvido em 80 ml de éter, PBr3 (6,83 g, 25,2 mmol) foi adi- cionado por gotejamento a 0 °C sob a proteção de nitrogênio, em se- guida, a mistura foi aquecida até refluxo a aproximadamente 40 °C e reagida durante 4 horas, e, em seguida, a reação foi concluída. O lí- quido de reação foi vertido em uma solução aquosa gelada de NaHCO3, extraído duas vezes com diclorometano e lavado uma vez com salmoura saturada. As fases orgânicas foram combinadas, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas, concentradas e passaram através da coluna para obter 2-bromo-3-(bromometil)pirazina (A11-2, 5,14 g, rendimento: 89,0%) com uma matéria oleosa transparente quase inco- lor. LCMS: m/z 252,9 [M+H]+
[00171] Etapa 3: Etil formato de N-boc-4-piperidina (6,81 g, 26,5 mmol) foi dissolvido em 160 ml de tetra-hidrofurano anidro, a mistura foi resfriada a -65 °C em um banho de acetona e gelo seco sob a pro- teção de argônio, LDA (2,0 M, 16,8 ml, 33,6 mmol) foi adicionado len- tamente por gotejamento, e a mistura reagiu durante 1 hora enquanto a temperatura foi mantida. Uma solução de 2-bromo-3- (bromometil)pirazina (A11-2, 5,14 g, 24,1 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (30 ml) foi adicionada por gotejamento a -65 °C, a reação conti- nuou durante 2 horas enquanto a temperatura foi mantida e, em se- guida, a reação foi concluída. A solução de reação foi vertida em 300 ml de solução aquosa gelada de NH4Cl, e extraída com acetato de eti- la três vezes. A fase orgânica foi lavada com salmoura saturada uma vez. As fases orgânicas foram combinadas, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas, concentradas e passaram através da coluna para ob- ter 1-(terc-butil)-4-etil-4-((3-bromopirazin-2-il)metil)piperidina-1,4- dicarboxilato (A11-3, 5,81 g, rendimento: 56,4%). LCMS: m/z 328,1 [M+H-100]+
[00172] Etapa 4: 1-(terc-butil)-4-etil-4-((3-bromopirazin-2- il)metil)piperidina-1,4-dicarboxilato (A11-3, 5,8 g, 13,5 mmol) foi dissol- vido em 300 ml de tetra-hidrofurano, a mistura foi resfriada a -65 °C em um banho de acetona e gelo seco sob a proteção de argônio, n-butil- lítio (2,5 M, 8,2 ml, 203 mmol) foi adicionado por gotejamento, a mistu- ra foi aquecida naturalmente até -10 °C e mantida durante 3 horas e, em seguida, a reação foi concluída. O líquido de reação foi vertido em 300 ml de solução aquosa gelada de NH4Cl e extraída com acetato de etila três vezes. A fase orgânica foi lavada com salmoura saturada uma vez. As fases orgânicas foram combinadas, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas, concentradas e passaram através da coluna para obter éster terc-butílico de ácido 5-oxo-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]pirazina-6,4'-piperidina]-1'-carboxílico (A11-4, 2,23 g, rendimento: 54,4%) como um sólido amarelo.
[00173] LCMS: m/z 304.2 [M+H]+ fraco
[00174] Etapa 5: Éster terc-butílico de ácido 5-oxo-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]pirazina-6,4'-piperidina]-1'-carboxílico (A11-4, 2,23 g, 7,35 mmol) foi dissolvido em 350 ml de tetra-hidrofurano, e fo- ram adicionados (R)-2-metilpropano-2-sulfinamida (980 mg, 8,09 mmol) e titanato de tetraetila (21,8 g, 95,6 mmol). Sob proteção de ni- trogênio, a mistura foi aquecida a 80 °C e submetida a refluxo durante 10 horas. A reação foi concluída. A mistura de reação foi resfriada à temperatura ambiente, vertida em 400 ml de água gelada, e extraída com 300 ml de acetato de etila 3 vezes (a fase aquosa conteve uma grande quantidade de sólido branco floculento, e a fase orgânica qua- se não teve sólidos). A fase orgânica foi lavada uma vez com 200 ml de água e uma vez com 200 ml de salmoura saturada. As fases orgâ- nicas foram combinadas, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas, concentradas e passaram através da coluna para obter éster terc- butílico de ácido (R,Z)-5-((terc-butilsulfinil)imino)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]pirazina-6,4'-piperidina]-1'-carboxílico (A11-5, 2,38 g, rendimento: 79,6%) como um sólido espumado laranja claro. LCMS: m/z 407,1 [M+H]+
[00175] Etapa 6: Éster terc-butílico de ácido (R,Z)-5-((terc- butilsulfinil)imino)-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[b]pirazina-6,4'- piperidina]-1'-carboxílico (A11-5, 2,38 g, 5,85 mmol) foi dissolvido em 280 ml de tetra-hidrofurano, e a mistura foi resfriada a -65 °C em um banho de acetona e gelo seco sob a proteção de argônio. 1,5 M de DIBAL-H (5,07 ml, 7,61 mmol) foi adicionado lentamente por goteja-
mento, e a temperatura da mistura continuou a ser mantida durante 2 horas e, em seguida, a reação é concluída. A solução de reação foi vertida em 300 ml da solução aquosa saturada de tartarato sódico de potássio, extraída com acetato de etila 3 vezes. As fases orgânicas foram combinadas, secas em sulfato de sódio, filtradas e concentradas até secura para obter um produto bruto de éster terc-butílico de ácido (S)-5-((R)-terc-butilsulfinil)amino)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]pirazina-6,4'-piperidina]-1'-carboxílico (A11-6, 2,48 g) como um sólido espumado amarelo-dourado. LCMS: m/z 309,3 [M+H-100]+
[00176] Etapa 7: O produto bruto de éster terc-butílico de ácido (S)- 5-((R)-terc-butilsulfinil)amino)-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[b]pirazina- 6,4'-piperidina]-1'-carboxílico (A11-6, 2,48 g, 5,85 mmol) foi dissolvido em 120 ml de metanol, a mistura foi resfriada em água gelada a apro- ximadamente 0 °C sob a proteção de argônio, 4 M de solução de clori- drato em dioxano (18 ml, 72 mmol) foram adicionados por gotejamen- to, a mistura reagiu à temperatura ambiente durante 2 horas e, em se- guida, a reação foi concluída. A solução de reação foi concentrada até secura, acetonitrila anidra foi adicionada para polpação, e a mistura foi filtrada sob a proteção de argônio para obter cloridrato de (S)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]pirazina-6,4'-piperidina]-5-amina (A11, 1,77 g, rendimento: 99%) como um pó sólido verde-escuro (muito fácil de ab- sorver umidade e se tornar uma gota de óleo verde-escuro), que foi preservado sob proteção de argônio. LCMS: m/z 205,3 [M+H]+ Intermediário A12: (S)-1-(((R)-terc-butilsulfinil)amino)-4-metóxi-1,3-di- hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]
[00177] Etapa 1: 2-Metil-3-metoxibromobenzeno (2,0 g, 9,95 mmol, 1,0 eq.), N-bromossuccinimida (1,77 g, 9,95 mmol, 1,0 eq.), peróxido de benzoíla (241 mg, 0,995 mmol, 0,1 eq.) e tetracloreto de carbono (40 ml) foram adicionados sucessivamente a um frasco de fundo re- dondo de 100 ml, a mistura foi agitada a 80 °C durante 16 horas, e a solução de reação é concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi dissolvido em acetato de etila (200 ml), lavado duas vezes com 2 N de NaOH solução aquosa (50 ml*2) e uma vez com salmoura saturada (50 ml), seco em sulfato de sódio anidro e fil- trado. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica para obter 1-bromo-2-(bromometil)-3-metoxibenzeno (A12-1, 2,0 g, rendimento: 71,8%) como um sólido branco.
[00178] Etapa 2: Tetra-hidrofurano (30 ml) e N-Boc-4-cianopiridina (1,8 g, 8,57 mmol, 1,2 eq.) foram adicionados a um frasco de fundo redondo de 100 ml sucessivamente, a mistura foi resfriada a -78 °C, em seguida, 2,0 M de LDA (5 ml, 10 mmol, 1,4 eq.) foi adicionado, e a mistura foi agitada a -78 °C durante uma hora. Em seguida, uma solu- ção de 1-bromo-2-(bromometil)-3-metoxibenzeno (A12-1, 2,0 g, 7,14 mmol, 1,0 eq.) em tetra-hidrofurano (15 ml) foi adicionado, e a mistura foi agitada a -78 °C durante 0,5 hora. Em seguida, o banho de baixa temperatura foi removido. A mistura pôde aquecer naturalmente à temperatura ambiente e continuou a ser agitada durante uma hora.
Após a confirmação de que as matérias-primas reagiram completa- mente pela TLC, salmoura saturada (30 ml) foi adicionada para arrefe- cer bruscamente a reação e, em seguida, a mistura foi extraída com acetato de etila (100 ml*2). A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura saturada (50 ml), seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica para obter N-boc-4-(2-bromo-6-metoxibenzil)-4-cianopiridina (A12-2, 1,5 g, rendimento: 51,3%) como uma matéria oleosa amarelo-clara. LCMS: m/z 409,1, 411,1 [M+H]+.
[00179] Etapa 3: N-boc-4-(2-bromo-6-metoxibenzil)-4-cianopiridina (A12-2, 1,5 g, 3,66 mmol, 1,0 eq.), Pd(AmPhos)2Cl2 (259 mg, 0,37 mmol, 0,1 eq.), di-isopropiletilamina (2,37 g, 18,3 mmol, 5,0 eq.), N,N- dimetilacetamida (30 ml) e água (4 ml) foram adicionados a um frasco seco de fundo redondo de 100 ml sucessivamente. Sob agitação, a atmosfera no sistema de reação foi substituída por nitrogênio três ve- zes e, em seguida, a mistura de reação foi aquecida a 140 °C e reagiu por 16 horas. Após a reação ter sido concluída, o líquido de reação foi resfriado à temperatura ambiente, diluída com acetato de etila (100 ml) e filtrada sob pressão reduzida. A torta de filtro foi lavada com acetato de etila (20 ml). O filtrado obtido foi lavado com salmoura saturada (30 ml*3) três vezes, seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para obter um produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica para ob- ter N-boc-4-metóxi-1-oxo-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina] (A12-3, 0,90 g, rendimento: 74,1%) como um sólido branco.
[00180] LC-MS: m/z 332,2 [M+H]+.
[00181] Etapa 4: N-Boc-4-metóxi-1-oxo-1,3-di-hidroespiro[indeno- 2,4'-piperidina] (A12-3, 900 mg, 2,72 mmol), tetraetoxi titânio (3,72 g, 16,3 mmol), (R)-(+)-terc-butilsulfinamida (395 mg, 3,26 mmol) e tetra-
hidrofurano (20 ml) foram adicionados a um frasco com gargalo único de 100 ml seco sucessivamente, e a mistura foi agitada durante 16 ho- ras sob aquecimento e submetida à refluxo. Após a mistura de reação ser resfriada à temperatura ambiente, salmoura saturada (60 ml) foi adicionada ao resíduo de reação e, em seguida, a mistura resultante foi agitada durante 15 minutos e filtrada através de diatomita. A mistu- ra aquosa foi extraída com acetato de etila (3x80 ml). A fase orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-30% de acetato de etila: éter de petróleo) para obter N-Boc-(R,Z)-1-((terc-butilsulfinil)imida)-4-metóxi-1,3-di- hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina] (A12-4, 800 mg, rendimento: 67,8%) como um sólido branco.
[00182] LC-MS: m/z 435,2 [M+H]+.
[00183] Etapa 5: Tetra-hidrofurano (15 ml) e N-Boc-(R,Z)-1-((terc- butilsulfinil)imida)-4-metóxi-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina] (A12-4, 800 mg, 1,84 mmol, 1,0 eq.) foram adicionados sucessivamen- te a um frasco seco com três gargalos de 50 ml. Hidreto de di-isobutil- alumínio (5,52 ml, 1,5 M em tolueno, 8,28 mmol, 4,5 eq.) foi adicionado por gotejamento a -78 °C sob proteção de nitrogênio, e a mistura con- tinuou a ser a agitada durante meia hora. Em seguida, a mistura foi aquecida a 0 °C e continuou a ser agitada durante meia hora. Após a reação ter sido concluída, a mistura de reação foi arrefecida brusca- mente com tartarato de potássio e sódio (4 g dissolvidos em 20 ml de água), agitada durante meia hora e extraída com acetato de etila (30 ml*3). A fase orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada (30 ml), seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pres- são reduzida. O resíduo é purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-70% de acetato de etila: éter de petróleo) para obter (S)-1-(((R)-terc-butilsulfinil)amino)-4-metóxi-1,3-di-hidroespiro[indeno-
2,4'-piperidina]-1'-formato de terc-butila (A12-5, 720 mg, rendimento: 89,6%) como um sólido amarelo. LCMS: m/z 437,2 [M+H]+.
[00184] Etapa 6: (S)-1-(((R)-Terc-butilsulfinil)amino)-4-metóxi-1,3-di- hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1'-formato de terc-butila (A12-5, 720 mg, 1,65 mmol), diclorometano (15 ml) e ácido trifluoroacético (5 ml) foram adicionados a um frasco seco com único gargalo de 50 ml su- cessivamente, e a mistura resultante foi agitada durante 1 hora à tem- peratura ambiente. A solução aquosa saturada Na2CO3 foi adicionada até o pH = 7, e a mistura aquosa foi extraída com diclorometano (3x50 ml). A fase orgânica combinada foi lavada com água salina, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0 a 70% de acetato de etila: éter de petróleo) para obter (R)-N-((S)-4- metóxi-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidin]-1-il)-2-metilpropil-2- sulfinamida (A12, 520 mg, rendimento: 93,7%) como um sólido ama- relo. LCMS: m/z 337,2 [M+H]+. Intermediário A13: (S)-2-cloro-4,6-di-hidroespiro[ciclopenta[d]tiazol- 5,4'-piperidina]-4-amina
[00185] Etapa 1: 4-Etilpiperidina-1,4-dicarboxilato de 1-terc-butila (10,7 g, 41,6 mmol, 1,2 eq.) foi dissolvido em THF (50 ml), LDA (2 M, 9,8 ml, 19,6 mmol, 1,1 eq.) foi adicionado por gotejamento a -78 °C, a mistura foi agitada durante 2 horas a essa temperatura, e 2-cloro-5-
(clorometil)tiazol (A13-1, 3 g, 34,7 mmol, 1,0 eq.) dissolvido em THF (10 ml) foi adicionado por gotejamento ao sistema. Em seguida, a rea- ção continuou à temperatura durante 1,5 hora. O teste de TLC indicou que uma baixa quantidade de matéria-prima não reagiu. A mistura de reação foi arrefecida bruscamente com água, extraída com acetato de etila (100 mlx2). As fases orgânicas foram combinadas e, em seguida, lavadas com solução aquosa de cloreto de sódio saturado. A fase or- gânica foi separada, em seguida, seca em sulfato de sódio anidro, fil- trada e concentrada, misturada com gel de sílica e passou através da coluna (PE: EA: DCM = 4:1:1) para obter 4-(2-clorotiazol-5- il)metil)piperidina-1,4-dicarboxilato de 1-terc-butil-4-etila (A13-2, 2,4 g, rendimento: 35%) como uma matéria oleosa amarela.
[00186] Etapa 2: 4-(2-Clorotiazol-5-il)metil)piperidina-1,4- dicarboxilato de 1-terc-butil-4-etila (A13-2, 4 g, 10,3 mmol) foi dissolvi- do em THF (100 ml), e LDA (2 m, 8,5 ml, 16,6 mmol) foi adicionado por gotejamento a -78 °C. A mistura reagiu durante 1 hora e, em seguida, a reação foi concluída. Cloreto de amina saturado (100 ml) foi adicio- nado para arrefecer bruscamente a reação e a mistura foi extraída com acetato de etila (100 ml x 3). As fases orgânicas foram combina- das e lavadas com solução aquosa de cloreto de sódio saturado. A fase orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro. O filtrado foi purifi- cado por cromatografia em gel de sílica para obter éster terc-butílico de ácido 2-cloro-4-oxo-4,6-di-hidroespiro[ciclopenta[d]tiazol-5,4'- piperidina]-1'-carboxílico (A13-3, 1,9 g, rendimento: 54%) como uma matéria oleosa amarela. LCMS: m/z 343 [M+H]+
[00187] Etapa 3: Éster terc-butílico de ácido 2-cloro-4-oxo-4,6-di- hidroespiro[ciclopenta[d]tiazol-5,4'-piperidina]-1'-carboxílico (A13-3, 710 mg, 2,07 mmol), Ti(OEt)4 e (R)-2-metilpropano-2-sulfinamida (276 mg, 2,28 mmol) foram adicionados a um frasco de reação, e a mistura foi aquecida a 100 °C sob proteção de nitrogênio durante 5 horas. A reação foi concluída. A mistura foi resfriada à temperatura ambiente e diluída com acetato de etila (50 ml), salmoura saturada (15 ml) foi adi- cionada, e o sólido branco foi removido por precipitação. A mistura foi filtrada. A torta de filtro foi lavada com acetato de etila. O filtrado foi lavado com salmoura saturada. A fase orgânica foi separada e, em seguida, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica para ob- ter éster terc-butílico de ácido (E)-4-((terc-butilsulfinil)imino)-2-cloro- 4,6-di-hidroespiro[ciclopenta[d]tiazol-5,4'-piperidina]-1'-carboxílico de terc-butila (A13-4, 600 mg, rendimento: 68%) como um sólido amarelo- claro. LCMS: m/z 426 [M+H]+
[00188] Etapa 4: Éster terc-butílico de ácido (E)-4-((terc- butilsulfinil)imino)-2-cloro-4,6-di-hidroespiro[ciclopenta[d]tiazol-5,4'- piperidina]-1'-carboxílico de terc-butila (A13-4, 200 mg, 0,47 mmol) foi dissolvido em THF (10 ml), e a mistura foi resfriada a -78 °C sob prote- ção de nitrogênio. 1,5 M de DIBAL-H (0,5 ml, 0,75 mmol) foi adiciona- do lentamente por gotejamento à solução de reação, e após a adição de DIBAL-H ter sido concluída, a mistura reagiu a -78 °C durante 1 ho- ra e, em seguida, a reação foi concluída. A água foi adicionada para arrefecer bruscamente a reação e, em seguida, a solução saturada de tartarato de potássio e sódio (20 ml) foi adicionada. A mistura foi extra- ída com acetato de etila (50 ml x 2), e a fase orgânica foi lavado com solução aquosa de cloreto de sódio saturado uma vez. A fase orgânica foi separada, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica para obter éster terc-butílico de ácido (S)-4-(((R)-terc-butilsulfinil)amino)-2- cloro-4,6-di-hidroespiro[ciclopenta[d]tiazol-5,4'-piperidina]-1'-carboxílico de terc-butila A13-5 (155 mg, rendimento: 76%) como um sólido ama- relo-claro. LCMS: m/z 448 [M+H]+
[00189] Etapa 5: Éster terc-butílico de ácido (S)-4-(((R)-terc-
butilsulfinil)amino)-2-cloro-4,6-di-hidroespiro[ciclopenta[d]tiazol-5,4'- piperidina]-1'-carboxílico de terc-butila (A13-5, 155 mg, 0,35 mmol) foi dissolvido em 4 M de solução de cloridrato em dioxano (5 ml, 20 mmol), e a mistura reagiu à temperatura ambiente durante 3 horas. A reação foi concluída. A solução de reação foi concentrada para obter (S)-2-cloro-4,6-di-hidroespiro[ciclopenta[d]tiazol-5,4'-piperidina]-4- amina (A13, 145 mg, cloridrato) como um óleo amarelo-claro. LCMS: m/z 244 [M+H]+ Síntese do intermediário B2: 5-cloro-8-iodo-[1,2,4]triazol[4,3- c]pirimidina
[00190] Etapa 1: 2,4-dicloro-5-iodopirimidina (1,1 g, 4 mmol) e 20 ml de etanol anidro foram adicionados a um frasco seco de 100 ml. Uma mistura de hidrato de hidrazina a 80% (601 mg, 12 mmol) foi adiciona- da lentamente ao mesmo a 0 °C sob a proteção de nitrogênio, e a mis- tura continuou a ser agitada durante 1 hora. Após a reação ter sido concluída, a mistura foi filtrada e lavada com etanol anidro para obter 2-cloro-4-hidrazino-5-iodopirimidina (B2-1, 850 mg, rendimento: 78,7%).
[00191] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,29 (s, 1H), 6,67 (s, 1H), 4,08 (s, 2H);
[00192] LCMS: m/z 271,1 [M+H]+.
[00193] Etapa 2: 2-Cloro-4-hidrazino-5-iodopirimidina (810 mg, 3 mmol) e ortoformato de trimetila (10 ml) foram adicionados a um frasco seco de 100 ml sucessivamente. Sob a proteção de nitrogênio, a mis- tura foi aquecida a 85 °C e agitada durante 5 horas. Após a reação ser concluída, o resíduo obtido foi vertido na solução saturada de NaCl (50 ml), extraída com acetato de etila (3×30 ml), e lavada com salmoura saturada. As camadas orgânicas foram combinadas, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O re- síduo obtido foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-50% de acetato de etila/éter de petróleo) para obter 5-cloro-8- iodo-[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidina (B2, 420 mg, rendimento: 50%) co- mo um sólido amarelo-claro.
[00194] LCMS: m/z 280,9 [M+H]+. Síntese do intermediário B3: 5-cloro-8-iodoimidazo[1,2-c]pirimidina
[00195] Etapa 1: 2,4-dicloro-5-iodopirimidina (1,37 g, 5 mmol), 2,2- dimetoxietilamina (8,4 g, 10 mmol) e etanol anidro (50 ml) foram adici- onados a um frasco seco de 100 ml sucessivamente. Em seguida, a trietilamina (1,01 g, 10 mmol) foi adicionada lentamente por goteja- mento à mistura de reação sob a proteção de nitrogênio a 0 °C e, em seguida, a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 10 ho- ras. Após a reação ser concluída, a mistura de reação foi concentrada in vácuo. 15 ml da água foram adicionados ao concentrados obtido, e a mistura foi extraída com diclorometano (3×50 ml) e lavada com sal- moura saturada. As camadas orgânicas foram combinadas, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas para obter 2-cloro-N- (2,2-dimetoxietil)-5-iodopirimidina-4-amina (B3-1, 1,46 g, rendimento: 85%) como um sólido branco.
[00196] LC-MS: m/z 344,2 [M+H]+.
[00197] Etapa 2: 2-Cloro-N-(2,2-dimetoxietil)-5-iodopirimidina-4- amina (B3-1, 1,03 g, 3 mmol) e 10 ml de ácido sulfúrico concentrado foram adicionadas sucessivamente a um frasco seco de 100 ml. Sob a proteção de nitrogênio, a mistura foi aquecida a 65 °C e agitada duran- te 2 horas. Após a reação ter sido concluída, o líquido de reação foi resfriado à temperatura ambiente. A mistura foi vertida lentamente em água gelada, em seguida, o pH da mistura foi ajustado a aproximada- mente 6 a 7 com 4 M de solução de NaOH e, em seguida, a mistura foi filtrada para obter 8-iodoimidazo[1,2-c]pirimidin-5-ol (B3-2, 407 mg, rendimento: 52%) como um sólido esbranquiçado.
[00198] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,81 (s, 1H), 7,93 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,40 (d, J = 1,4 Hz, 1H);
[00199] LC-MS: m/z 262,2 [M+H]+.
[00200] Etapa 3: 8-iodoimidazo[1,2-c]pirimidin-5-ol (B3-2, 522 mg, 2 mmol) e oxicloreto de fósforo (8 ml) foram adicionados sucessivamen- te a um frasco seco com único gargalo de 50 ml. Sob a proteção de nitrogênio, N,N-di-isopropiletilamina (1 ml) foi lentamente adicionado por gotejamento e, em seguida, a mistura foi aquecida a 120 °C e agi- tada durante 5 horas. Após a reação ser concluída, o líquido de reação foi resfriado à temperatura ambiente e concentrado em vácuo, em se- guida, arrefecido bruscamente com solução de bicarbonato de sódio saturado, extraído com acetato de etila (3×40 ml), seco em sulfato de sódio anidro, filtrado e concentrado. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-30% de acetato de etila: éter de petróleo) para obter 5-cloro-8-iodoimidazo[1,2-c]pirimidina (B3, 360 mg, rendimento: 55%) como um sólido amarelo-claro.
[00201] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,24 (s, 1H), 8,20 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 7,81 (d, J = 1,4 Hz, 1H);
[00202] LC-MS: m/z 280,1 [M+H]+. Síntese do intermediário C1: sulfeto de 2-amino-3-cloropiridina-4-sódio
[00203] Etapa 1: 3-cloro-4-iodopiridina-2-amina (2,5 g, 9,82 mmol, 1,0 eq.), XantPhos (341 mg, 0,59 mmol. 0,06 eq.), acetato de paládio
(110 mg, 0,49 mmol, 0,05 eq.), DIPEA (3,25 ml, 19,6 mmol, 2,0 eq.), 3- mercaptopropionato de metila (1,19 ml, 10,8 mmol, 1,1 eq.) e 1,4- dioxano (32,5 ml) foram adicionados a um frasco seco com três garga- los de fundo redondo de 100 ml sucessivamente. Sob agitação, a at- mosfera no sistema de reação foi substituída por nitrogênio três vezes e, em seguida, a mistura foi aquecida a 100 °C e reagiu durante 3 ho- ras. Após a reação ter sido concluída, o líquido de reação foi resfriado à temperatura ambiente, diluído com acetato de etila (50 ml) e filtrado sob pressão reduzida, e a torta de filtro foi lavada com acetato de etila (25 ml). O filtrado obtido foi concentrado em vácuo, e o resíduo obtido foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-30% de acetato de etila: éter de petróleo) para obter 3-((2-amino-3- cloropiridin-4-il)tio)propionato de metila (C1-1, 2,0 g, rendimento: 78%) como um sólido amarelo.
[00204] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,89 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 6,53 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 4,87 (s, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,24 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 2,75 (t, J = 7,5 Hz, 2H).
[00205] Etapa 2: O composto C1-1 (2 g, 8,11 mmol, 1,0 eq.) foi dis- solvido em tetra-hidrofurano (28 ml) em um frasco seco com três gar- galos de fundo redondo de 100 ml, e etanol de sódio (2,9 g, 8,51 mmol, 1,05 equivalente, 20% em peso) foi adicionado por gotejamento à solução de reação à temperatura ambiente sob a proteção de nitro- gênio e, em seguida, a mistura foi agitada durante uma hora. Após a reação ser concluída, a mistura foi diluída com diclorometano (60 ml) e tratada com ultrassom durante 5 minutos e, em seguida, filtrada sob pressão reduzida. A torta de filtro foi seca em vácuo para obter 2- amino-3 cloropiridina-4-sulfeto de sódio (C1, 1,4 g, rendimento: 89%) como um sólido amarelo. Síntese do intermediário C2: 2,3-dicloropiridina-4-sulfeto de sódio
[00206] Etapa 1: 2,3-Dicloro-4-iodopiridina (1,0 g, 3,65 mmol, 1,0 eq.), 3-mercaptopropionato de metila (480 mg, 4,02 mmol, 1,1 eq.) e N,N-di-isopropiletilamina (950 mg, 7,3 mmol) foram dissolvidos em 1,4- dioxano (15 ml), a atmosfera no sistema de reação foi substituída por argônio três vezes e acetato de paládio (82 mg, 0,37 mmol, 0,1 eq.) e XantPhos (211 mg, 0,37 mmol, 0,1 eq.) foram adicionados sob a pro- teção de argônio. Em seguida, a mistura foi aquecida a 100 °C e rea- gida durante 3 horas e, em seguida, a reação foi concluída. A mistura foi extraída com acetato de etila (100 ml), filtrada através de diatomita e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia líquida de alto desempenho para obter 3-((2,3-dicloropiridin-4-il)tio)propionato de metila (C2-1, 550 mg, rendimento: 56,5%) como um sólido esbranqui- çado. LCMS: m/z 266,0 [M+H]+
[00207] Etapa 2: 3-((2,3-Dicloropiridin-4-il)tio)propionato de metila (C2-1, 100 mg, 0,37 mmol, 1,0 eq.) foi dissolvido em tetra-hidrofurano (10 ml) e etanol (0,5 ml). Álcool de sódio (27 mg, 0,39 mmol, 1,05 eq.) foi adicionado sob a proteção de nitrogênio, a mistura reagiu à tempe- ratura ambiente durante 3 horas, a reação não foi concluída, álcool de sódio (27 mg, 0,39 mmol, 1,05 eq.) foi adicionado, a mistura reagiu à temperatura ambiente durante 3 horas e, em seguida, a reação foi concluída. A água purificada foi adicionada, e a mistura foi liofilizada para obter um produto bruto de 2,3-dicloropiridina-4-sulfeto de sódio (C21, 50 mg, rendimento: 100%) como um sólido amarelo-claro. LCMS: m/z 180,0 [M+H]+ Síntese do intermediário C3: 2-(trifluorometil)piridina-3-sulfeto de sódio
[00208] Etapa 1: 3-Bromo-2-trifluorometilpiridina (400 mg, 1,77 mmol, 1,0 eq.), 3-mercaptopropionato de metila (235 mg, 1,95 mmol, 1,1 eq.) e N,N-di-isopropiletilamina (460 mg, 3,54 mmol, 2,0 eq.) foram dissolvidos em 1,4-dioxano (15 ml), a atmosfera no sistema de reação foi substituída por argônio três vezes, e Pd2(dba)3 (160 mg, 0,18 mmol, 0,1 eq.) e XantPhos (205 mg, 0,36 mmol, 0,2 eq.) foram adicionados sob a proteção de argônio. Em seguida, a mistura foi aquecida a 110 °C e reagiu durante uma hora, e a reação foi concluída. A mistura foi extraída com acetato de etila (100 ml), filtrada através de diatomita, concentrada e passou através da coluna (PE: EA = 8/1~6/1) para obter 3-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)propionato de metila (C3-1, 450 mg, rendimento: 95,7%) como uma matéria oleosa amarelo-clara. LCMS: m/z 266,1 [M+H]+
[00209] Etapa 2: 3-((2-(Trifluorometil)piridin-3-il)tio)propionato de metila (C3-1, 300 mg, 1,13 mmol, 1,0 eq.) foi dissolvido em tetra- hidrofurano (10 ml) e etanol (0,5 ml). Álcool de sódio (84 mg, 1,23 mmol, 1,1 eq.) foi adicionado sob a proteção de nitrogênio, a mistura reagiu à temperatura ambiente durante 3 horas, a reação não foi con- cluída, álcool de sódio (83 mg, 1,23 mmol, 1,1 eq.) foi adicionado, a mistura reagiu à temperatura ambiente durante 3 horas e, em seguida, a reação foi concluída. Tetra-hidrofurano foi removido sob pressão re- duzida à temperatura ambiente. Água purificada foi adicionada, e a mistura foi liofilizada para obter um produto bruto de 2- (trifluorometil)piridina-3-sulfeto de sódio (C3, 500 mg, rendimento: su- perior a 100%) como um sólido amarelo-claro. LCMS: m/z 179,9 [M+H]+
Síntese do intermediário C4: 2-(trifluorometil)piridina-4-sulfeto de sódio
[00210] Etapa 1: 4-Bromo-2-trifluorometilpiridina (1,0 g, 4,4 mmol, 1,0 eq.), 3-mercaptopropionato de metila (760 mg, 6,3 mmol, 1,4 eq.) e N,N-di-isopropiletilamina (2,17 g, 16,8 mmol, 3,8 eq.) foram dissolvidos em 1,4-dioxano (25 ml), a atmosfera no sistema de reação foi substitu- ída por argônio três vezes, e Pd2(dba)3 (200 mg, 0,22 mmol, 0,05 eq.) e XantPhos (124 mg, 0,22 mmol, 0,05 eq.) foram adicionados sob a proteção de argônio. Em seguida, a mistura foi aquecida a 110 °C e reagiu durante 1 hora e, em seguida, a reação foi concluída. A mistura foi extraída com acetato de etila (100 ml), filtrada através de diatomita, concentrada e passou através da coluna (PE:EA=5/1) para obter 3-((2- (trifluorometil)piridin-4-il)tio)propionato de metila (C4-1, 1,08 g, rendi- mento: 97%) como uma matéria oleosa amarelo-clara. LCMS: m/z 266,2 [M+H]+
[00211] Etapa 4: 3-((2-(Trifluorometil)piridin-4-il)tio)propionato (C4- 1, 230 mg, 0,85 mmol, 1,0 eq.) foi dissolvido em tetra-hidrofurano (10 ml) e etanol (0,5 ml). Álcool de sódio (294 mg, 0,87 mmol, 1,02 eq.) foi adicionado sob a proteção de nitrogênio, a mistura reagiu à temperatu- ra ambiente durante 1 hora, e a reação foi concluída. Tetra-hidrofurano foi removido sob pressão reduzida à temperatura ambiente. Água puri- ficada foi adicionada, e a mistura foi liofilizada para obter um produto bruto de 2-(trifluorometil)piridina-4-sulfeto de sódio (C4, 150 mg) como um sólido amarelo-claro. LCMS: m/z 180,0 [M+H]+ Síntese do intermediário C5: 2-(trifluorometil)piridina-4-sulfeto de sódio
[00212] Etapa 1: 2-Fluoro-4-iodopiridina (2,0 g, 8,97 mmol) foi dis- solvido em THF (30 ml). A atmosfera no sistema de reação foi substitu- ída por nitrogênio três vezes, em seguida, a temperatura foi reduzida a -65 °C, e LDA (2,0 M em THF, 5,4 ml, 10,80 mmol) foi adicionada por gotejamento. A solução de reação se tornou marrom gradualmente. Após a adição de LDA ter sido concluída, a temperatura foi mantida durante 1,5 hora. Uma solução de 1,3,2-dioxotiofeno-2,2-dióxido (1,45 g, 11,7 mmol) em THF (30 ml) foi adicionado por gotejamento. Em se- guida, a mistura foi aquecida naturalmente à temperatura ambiente e agitada de um dia para outro. Foi confirmado que a matéria-prima de- sapareceu por TLC (éter de petróleo/acetato de etila = 1 / 1). A mistura de reação foi resfriada a 0 °C, e o ácido clorídrico concentrado (4,48 ml, 40,2 mmol) foi adicionado por gotejamento. Em seguida, a mistura foi aquecida à temperatura ambiente e agitada durante 3 horas. O lí- quido de reação foi vertido em solução aquosa saturada NaHCO3 (50 ml), extraído com acetato de etila (3 × 30 ml), lavado com salmoura saturada (50 ml), seco em sulfato de sódio anidro, filtrado e concentra- do até secura e, em seguida, purificado por cromatografia em gel de sílica para obter 2-(2-fluoro-4-iodopiridin-3-il)etano-1-ol (C5-1, 2,07 g, rendimento: 86,2%).
[00213] Etapa 2: Carbonato de potássio (4,28 g, 30,9 mmol) foi adi- cionado a uma solução de 2-(2-fluoro-4-iodopiridin-3-il)etano-1-ol (C5- 1, 2,07 g, 8,97 mmol) em dioxano (60 ml). A mistura foi agitada a 115 °C durante 48 horas sob a proteção de nitrogênio. LCMS e TLC (éter de petróleo/acetato de etila = 1/1) indicaram que houve basicamente matérias-primas e apenas uma quantidade pequena de produtos no sistema de reação. Carbonato de césio (7,56 g, 23,2 mmol) foi adicio- nado, e a reação continuou a 115 °C durante 6 horas. Foi confirmado que as matérias-primas reagiram quase completamente pela LCMS e TLC (éter de petróleo/acetato de etila = 1/1). A solução de reação foi resfriada à temperatura ambiente, diluída com acetato de etila, filtrada com diatomita e eluída com acetato de etila. O filtrado foi lavado com salmoura saturada (2 × 50 ml), seco em sulfato de sódio anidro, filtra- do, concentrado até secura e, em seguida, purificado por cromatogra- fia em coluna de gel de sílica (acetato de etila/éter de petró- leo/diclorometano = 0/5/2 a 1/5/2) para obter 4-iodo-2,3-di- hidrofurano[2,3-b]piridina (C5-2, 1,21 g, rendimento: 63,2 %) como um sólido branco. LCMS: m/z 248,2 [M+H]+
[00214] Etapa 3: 3-Mercaptopropionato de metila (437 mg, 3,64 mmol), DIPEA (1,26 g, 9,71 mmol), XantPhos (70 mg, 0,12 mmol) e Pd(OAC)2 (30 mg, 0,13 mmol) foram adicionados a uma solução de 4- iodo-2,3-di-hidrofurano[2,3-b]piridina (C5-2, 600 mg, 2,43 mmol) em dioxano (10 ml). Sob a proteção de nitrogênio, a mistura foi aquecida a 100 °C e reagiu durante 3 horas. TLC (éter de petróleo/acetato de etila = 1/1) e LCMS indicaram que a reação foi concluída. A solução de re- ação foi diluída com acetato de etila e filtrada. O filtrado foi concentra- do até secura e purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica para obter 3-((2,3-di-hidrofurano[2,3-b]piridin-4-il)tio)propionato de me- tila (C5-3, 565 mg, rendimento: 97,2%). LCMS: m/z 240,3 [M+H]+
[00215] Etapa 4: Solução de etóxido de sódio de etanol (20% (p/p), 185 mg, 0,54 mmol) foi adicionada a uma solução de 3-((2,3-di- hidrofurano[2,3-b]piridin-4-il)tio)propionato de metila (C5-3, 145 mg, 0,61 mmol) em THF (5 ml) a 0 °C. A mistura reagiu à temperatura am- biente durante 2 horas, e a TLC (acetato de etila/éter de petróleo =
1/1) e LCMS indicou que a reação foi concluída. Sem processamento adicional, o líquido de reação foi usado diretamente para a próxima reação. Síntese do intermediário C6: 2-metilamino-3 cloropiridina-4-sulfeto de sódio
[00216] Etapa 1: 2,3-Dicloro-4-iodopiridina (1,0 g, 3,65 mmol) reagiu com solução de metilamina/etanol (27%, 25 ml) em um tanque fechado a 100 °C durante 12 horas. O monitoramento por TLC indicou que a reação foi concluída (éter de petróleo: acetato de etila = 5:1). A solu- ção de reação foi concentrada sob pressão reduzida e purificada por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-5% de acetato de etila: éter de petróleo) para obter 3-cloro-4-iodo-N-metilpiridina-2-amina (C6- 1, 400 mg, rendimento: 41%). LCMS: m/z 268,9 [M+H]+
[00217] Etapa 2: XantPhos (72 mg, 0,15 mmol), Pd(OAC)2 (34 mg, 0,15 mmol), DIPEA (770 mg, 5,96 mmol) e 3-mercaptopropionato de metila (270 mg, 2,23 mmol) foram adicionados a uma solução de 3- cloro-4-iodo-N-metilpiridina-2-amina (C6-1, 400 mg, 1,49 mmol) em 1,4-dioxano anidro (20 ml). A mistura reagiu durante 5 horas a 100 °C. TLC (éter de petróleo: acetato de etila=5/1) indicou que a reação foi concluída. Após a mistura de reação ter sido resfriada à temperatura ambiente, foram adicionados água (50 ml) e acetato de etila (30 ml), e as camadas foram separadas. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila (2×40 ml). A fase orgânica foi combinada, lavada com salmou- ra saturada (3×50 ml), seca em sulfato de sódio anidro, filtrada, con- centrada e purificada por cromatografia em gel de sílica (éter de petró- leo: acetato de etila=10:1) para obter 3-((3-cloro-2-(metilamino)piridin- 4-il)tio)propionato de metila (C6-2, 250 mg, rendimento: 65%). LCMS:
m/z 261,0 [M+H]+
[00218] Etapa 3: 3-((3-Cloro-2-(metilamino)piridin-4-il)tio)propionato de metila (C6-2, 114 mg, 0,44 mmol) foi dissolvido em dioxano (6 ml). Sob a proteção de argônio, uma solução de EtONa (20%(p/p), 150 mg, 0,44 mmol) em etanol foi adicionado por gotejamento, e a mistura foi agitada à temperatura ambiente por aproximadamente 2,5 horas. A LCMS indicou que a reação foi concluída. A solução de reação foi usada diretamente para a próxima reação (rendimento: 100%). LCMS: m/z 174,8 [M+H-23]+ Síntese do intermediário C7: 1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H- pirazol[3,4-b]piridina-4-mercaptano de sódio
[00219] Etapa 1: Hidrato de hidrazina (3032 mg, 60,56 mmol) foi adicionado a uma solução de 2-fluoro-3-formil-4-iodopiridina (1900 mg, 7,57 mmol) em isopropanol (30 ml), e a mistura foi agitada a 60 °C du- rante 3 horas. A solução de reação foi concentrada sob pressão redu- zida para remover parte do solvente, em seguida, vertida em água e filtrada. A torta de filtro foi lavada com água para obter 4-iodo-1H- pirazol[3,4-b]piridina (C7-1, 1,8 g, rendimento: 97%) como um sólido amarelo-claro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 8,19 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,68 (d, J = 4,8 Hz, 1H).
[00220] Etapa 2: Ácido p-toluenossulfônico (28 mg, 0,16 mmol) e DHP (206 mg, 2,45 mmol) foram adicionados a uma solução de 4- iodo-1H-pirazol[3,4-b]piridina (C7-1, 400 mg, 1,63 mmol) em tetra- hidrofurano (10 ml) sucessivamente. A mistura foi agitada a 60 °C du- rante 16 horas. A solução de reação foi diluída com acetato de etila (40 ml), lavada com salmoura saturada (2 × 40 ml), seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida.
O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gra- diente de 0-50% de acetato de etila: éter de petróleo) para obter 4- iodo-1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol[3,4-B]piridina (C7-2, 390 mg, rendimento: 73%) como um sólido amarelo-claro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 8,17 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,58 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 6,10 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 4,14-4,10 (m, 1H), 3,82 (td, J = 11,6, 2,8 Hz, 1H), 2,69 2,59 (m, 1H), 2,17-2,13 (m, 1H), 2,00-1,96 (m, 1H), 1,83-1,74 (m, 2H), 1,64-1,62 (m, 1H).
[00221] Etapa 3: 4-iodo-1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol[3,4- B]piridina (C7-2, 390 mg, 1,18 mmol), 3-mercaptopropionato de metila (157 mg, 1,30 mmol) e N,N-di-isopropiletilamina (306 mg, 2,37 mmol) foram dissolvidos em 1,4-dioxano (10 ml), a atmosfera no sistema de reação foi substituída por argônio três vezes, e Pd(OAc)2 (27 mg, 0,12 mmol) e Xantphos (137 mg, 0,24 mmol) foram adicionados sob a pro- teção de argônio. Após a adição foi concluída, a mistura foi aquecida a 110 °C e reagida durante 2 horas, e a reação foi concluída. A mistura foi extraída com acetato de etila (30 ml), lavada com salmoura satura- da (2 × 30 ml), seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-50% de acetato de etila: éter de petróleo) para obter 3-((1H-pirazol[3,4-b]piridin-4- il)tio)propionato de metila (C7-3, 280 mg, rendimento: 74%) como uma matéria oleosa marrom amarelada. LCMS: m/z 322,3 [M+H]+
[00222] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3): δ 8,40 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,08 (s, 1H), 6,95 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 6,10 (dd, J = 10,8, 2,4 Hz, 1H), 4,14 ~ 4,10 (m, 1H), 3,83 (td, J = 11,2 Hz, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,40 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,79 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,68-2,58 (m, 1H), 2,16-2,13 (m, 1H), 2,00-1,55 (m, 2H), 1,63-1,60 (m, 1H).
[00223] Etapa 4: 3-((1H-pirazol[3,4-b]piridin-4-il)tio)propionato de metila (C7-3, 280 mg, 0,87 mmol) foi dissolvido em 1,4-dioxano (7 ml)
em um frasco de três gargalos com um tubo condensador. Sob a pro- teção de nitrogênio, a mistura foi resfriada a 0 °C, e solução de etóxido de sódio de etanol (20%(p/p), 266 mg, 0,78 mmol) foi adicionada. A mistura foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. O teste de TLC (diclorometano/metanol=20/1) indicou que a reação foi concluída, e o líquido de reação que contém 1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H- pirazol[3,4-b]piridina-4-mercaptano de sódio (C7) foi usado diretamen- te para a próxima etapa. EXEMPLO 1: SÍNTESE DO COMPOSTO 1 (S)-1'-((2,3-DI-HIDROFURAN[2,3-B]PIRIDIN-4-IL)TIO)IMIDAZOL[1,2- C]PIRIMIDIN-5-IL)-5,7-DI-HIDROESPIROCICLOPENTA[B]PIRIDINA- 6,4'-PIPERIDINA]-5-AMINA
[00224] Etapa 1: Sob a proteção de nitrogênio, a 5-cloro-8- iodoimidazo[1,2-c]pirimidina (B3, 80 mg, 0,285 mmol), a ((R)-N-((S)- 1,3-di-hidroespiro[ideno-2,4'-piperidin]-1-il)-2-metilpropano-2- sulfinamida (A4, 105 mg, 0,342 mmol), a DIEA (55 mg, 0,428 mmol) e CH3CN(5 ml) foram adicionadas sucessivamente a um frasco seco com gargalo único de 25 ml e, em seguida, a mistura foi agitada a 95 °C durante 3 horas. Após a reação ter sido concluída, a solução de reação obtida foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resí- duo obtido foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-10% de metanol/acetato de etila) a fim de obter um composto (1- 1, 101 mg, rendimento: 65%). LCMS: m/z 551,1 [M+H]+.
[00225] Etapa 2: 2,3-Di-hidrofuran[2,3-b]piridin-4-tioformato de só-
dio (107 mg, 0,61 mmol) foi adicionado a dioxano (15 ml) para diluição e, em seguida, foram adicionados (S)-N-((S)-1'-(8-iodoimidazol[1,2- C]pirimidin-5-il)-5,7-di-hidroespiro[ciclopentano[B]piridin-6,4'-piperidin]- 5-il)-2-metilpropano-2-sulfinamida (1-1, 200 mg, 0,36 mmol), DIPEA (141 mg, 1,09 mmol), XantPhos (63 mg, 0,11 mmol) e Pd2(dba)3 (50 mg, 0,06 mmol). Sob a proteção de nitrogênio, a mistura foi aquecida a 100 °C e agitada durante 3 horas. TLC (éter de petróleo/acetato de etila = 1/1) e LCMS indicaram que a reação foi concluída. A solução de reação foi diluída com acetato de etila e filtrada. O resíduo de filtro foi eluído com acetato de etila. O filtrado foi concentrado até secura e pu- rificado por cromatografia de coluna em gel de sílica a fim de obter (S)- N-((S)-1'-(8-((2,3-di-hidrofuran[2,3-b]piridin-4-il)tio)imidazol[1,2- c]pirimidin-5-il)-5,7-di-hidroespirociclopenta[b]piridin-6,4'-piperidin]-5-il)- 2-metilpropano-2-sulfanilamida (1-2, 217 mg, rendimento: 98,9%). LCMS: m/z 576,6 [M+H]+
[00226] Etapa 3: Sob a proteção de nitrogênio, HCl/dioxano (4 M, 0,2 ml, 0,80 mmol) foi adicionada lentamente a uma solução de (S)-N- ((S)-1'-(8-((2,3-di-hidrofuran[2,3-b]piridin-4-il)tio)imidazol[1,2- c]pirimidin-5-il)-5,7-di-hidroespirociclopenta[b]piridin-6,4'-piperidin]-5-il)- 2-metilpropano-2-sulfanilamida(50 mg, 0,29 mmol) em diclorometano (5 ml) a 0 °C, a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas, e TLC (diclorometano/metanol=8/1) e LCMS indicaram que a reação foi concluída. A solução de reação foi resfriada a 0 °C, a solu- ção de amônia-metanol foi adicionada lentamente a fim de ajustar o pH para aproximadamente 10 e, em seguida, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida e purificada por HPLC preparativa para obter um formato de (S)-1'-(8-((2,3-di-hidrofuran[2,3-b]piridin-4-il)tio)imidazol[1,2- c]pirimidin-5-il)-5,7-di-hidroespirociclopentadieno[b]piridina-6,4'- piperidina]-5-amina (composto 1, 8,86 mg, rendimento:: 20,0%). LCMS: m/z 472,5 [M+H]+
[00227] RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δ 8,47 (d, J = 4,0 Hz, 2 H), 8,09 (s, 1H), 7,92 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,85 (d, J = 1,6 Hz, 1 H), 7,59 (d, J = 1,6 Hz, 1 H), 7,55 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 7,37 ~ 7,34 (m, 1 H), 6,21 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,72 ~ 4,67 (m, 2 H), 4,38 (s, 1 H), 4,06 ~ 4,03 (m, 2 H), 3,48 ~ 3,42 (m, 2 H), 3,28 (s, 2 H), 3,14 (d, J = 16,8 Hz, 2 H) , 2,11 ~ 2,078 (m, 2 H), 1,76 ~ 1,70 (m, 2 H). EXEMPLO 2: SÍNTESE DO COMPOSTO 2 (S)-1'-(8-((2-AMINO-3-CLOROPIRIDIN-4-IL)TIO)-[1,2,4]TRIAZOL[4,3- C]PIRIMIDIN-5-IL)-1,3-DI-HIDROESPIRO[IDENO-2,4'-PIPERIDINA]- 1-AMINA
[00228] Etapa 1: Sob a proteção de nitrogênio, 5-cloro-8-iodo- [1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidina (B2, 80 mg, 0,285 mmol), ((R)-N-((S)-1,3- di-hidroespiro[ideno-2,4'-piperidin]-1-il)-2-metilpropano-2-sulfinamida (A1, 105 mg, 0,342 mmol), DIEA (55 mg, 0,428 mmol) e CH3CN (5 ml) foram adicionadas sucessivamente a um frasco seco com gargalo úni- co de 25 ml, e, em seguida, a mistura foi agitada durante 3 horas a 95 °C. Após a reação ter sido concluída, o resíduo obtido foi filtrado e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-10% metanol/acetato de etila) a fim de obter (R)-N-((S)-1'-(8-iodo-[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidin-5- il)-1,3-di-hidroespiro[ideno-2,4'-piperidin]-1-il)-2-metilpropano-2- sulfinamida (2-1, 101 mg, rendimento: 65%) como um sólido amarelo. LCMS: m/z 551,1 [M+H]+.
[00229] Etapa 2: Sob a proteção de nitrogênio, (R)-N-((S)-1'-(8-iodo- [1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidin-5-il)-1,3-di-hidroespiro[ideno-2,4'-piperidin]- 1-il)-2-metilpropano-2-sulfinamida (2-1, 100 mg, 0,18 mmol), 2-amino- 3-cloropiridina-4-mercaptano de sódio (49 mg, 0,27 mmol), Pd2(dba)3 (16 mg, 0,018 mmol), Xantphos (21 mg, 0,036 mmol), DIPEA (58 mg, 0,45 mmol) e solução de 1,4-dioxano (10 ml) foram adicionados su- cessivamente a um frasco de reação de micro-ondas de 5 ml, e a mis- tura foi submetida a micro-ondas a 100 °C e agitada durante 3 horas sob a proteção de nitrogênio. Após a reação ter sido concluída, a mis- tura foi resfriada à temperatura ambiente, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-10% metanol/acetato de etila) para obter (R)-N-((R)-1'-(8-((2-amino-3-cloropiridin-4-il)tio)-[1,2,4]triazol[4,3- c]pirimidin-5-il)-1,3-di-hidroespiro[ideno-2,4'-piperidin]-1-il)-2- metilpropano-2-sulfinamida (2-2, 65 mg, rendimento: 63%). LC-MS: m/z 584,2 [M+H]+.
[00230] Etapa 3: Sob a proteção de nitrogênio, (R)-N-((R)-1'-(8-((2- amino-3-cloropiridin-4-il)tio)-[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidin-5-il)-1,3-di- hidroespiro[ideno-2,4'-piperidin]-1-il)-2-metilpropano-2-sulfinamida (2-2, 60 mg, 0,10 mmol) e metanol (0,6 ml) foram adicionados sucessiva- mente a um frasco com gargalo único de 50 ml, uma solução de ácido clorídrico/1,4-dioxano (0,06 ml, 4 M) foi adicionada por gotejamento à temperatura ambiente, e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Após a reação ter sido concluída, a mistura foi resfria- da à temperatura ambiente, filtrada e concentrada sob pressão reduzi- da. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia líquida de alto de- sempenho preparativa para obter (S)-1'-(8-((2-amino-3-cloropiridin-4- il)tio)-[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidin-5-il)-1-1,3-di-hidroespiro[ideno-2,4'- piperidina]-1-amina (composto 2, 20 mg, rendimento: 42%).
[00231] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,38 (s, 1H), 7,98 (s,
1H), 7,58 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 7,22 (dt, J = 8,0, 4,0 Hz, 3H), 6,33 (s, 2H), 5,96 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 4,22 – 4,07 (m, 2H), 4,00 (s, 1H), 3,49 (dd, J = 22,5, 11,2 Hz, 2H), 3,12 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 2,75 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 2,03 – 1,86 (m, 2H), 1,63 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 1,39 – 1,29 (m, 1H);
[00232] LC-MS: m/z 479,1 [M+H]+. EXEMPLO 3: SÍNTESE DO COMPOSTO 3 (S)-1'-(8-((2-AMINO-3-CLOROPIRIDIN-4-IL)TIO)-[1,2,4]TRIAZOL[4,3- C]PIRIMIDIN-5-IL)-5,7-DI-HIDROESPIRO[CICLOPENTA[B]PIRIDINA- 6,4'-PIPERIDINA]-5-AMINA
[00233] O composto 3 foi sintetizado através de três etapas de acordo com o método de síntese do composto 2, com o uso do inter- mediário A2 em vez do intermediário A1.
[00234] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6)) δ 9,40 (s, 1H), 8,35 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,71 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,58 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 7,21 (dd, J = 7,4, 5,0 Hz, 1H), 6,36 (s, 2H), 5,96 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 4,23 – 4,08 (m, 2H), 4,02 (s, 1H), 3,51 (dd, J = 23,3, 11,6 Hz, 2H), 3,16 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 2,84 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 2,04 – 1,91 (m, 2H), 1,65 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 1,32 (d, J = 14,8 Hz, 1H);
[00235] LC-MS: m/z 480,1 [M+H]+. EXEMPLO 4: SÍNTESE DO COMPOSTO 4 (S)-1'-(8-((2-AMINO-3-CLOROPIRIDIN-4-IL)TIO)IMIDAZOL[1,2-
C]PIRIMIDIN-5-IL)-1,3-DI-HIDROESPIRO[IDENO-2,4'-PIPERIDINA]- 1-AMINA
[00236] O composto 4 (formato, sólido branco) foi sintetizado atra- vés de três etapas de acordo com o método de síntese do composto 2, com o uso do intermediário B3 em vez do intermediário B2 .
[00237] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,03 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,64 – 7,49 (m, 2H), 7,43 (s, 1H), 7,30-7,17 (m, 3H), 6,33 (s, 2H), 5,79 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,12 (s, 1H), 3,95 (d, J = 12,8 Hz, 2H), 3,33 (dd, J = 20,0, 10,8 Hz, 2H), 3,14 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 2,82 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 1,98 (d, J = 9,6 Hz, 2H), 1,61 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 1,42 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 1,23 (s, 2H);
[00238] LC-MS: m/z 478,1 [M+H]+. EXEMPLO 5: SÍNTESE DO COMPOSTO 5 (S)-1'-(8-((3-CLORO-2-(METILAMINO)PIRIDIN-4- IL)TIO)IMIDAZO[1,2-C]PIRIMIDIN-5-IL)-5,7-DI- HIDROESPIRO[CICLOPENTA[B]PIRIDINA-6,4'-PIPERIDINA]-5-
AMINA
[00239] Etapa 1: 2-Metilamino-3-cloropiridin-4 sulfeto de sódio (C6, 86 mg) foi dissolvido em 10 ml da solução de dioxano, e (R)-N-((S)-1'-
(8-iodoimidazol[1,2-C]pirimidin-5-il)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]piridin-6,4'-piperidin]-5-il)-2-metilpropano-2- sulfinamida (161 mg, 0,29 mmol), Pd2(dba)3 (86 mg, 0,094 mmol), Xan- tphos (108 mg, 0,19 mmol) e DIPEA (400 mg, 3,12 mmol) foram adici- onados. A mistura reagiu a 100 °C durante 5 horas sob a proteção de argônio. O teste de LCMS indicou que a reação foi concluída. Após a mistura ter resfriado à temperatura ambiente, diclorometano (30 ml) foi adicionado, e a mistura foi filtrada. Água (40 ml) foi adicionada ao licor- mãe, e as camadas foram separadas. A fase aquosa foi extraída com diclorometano (2×30 ml). As fases orgânicas foram combinadas, lava- das com salmoura saturada (3×40 ml), secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e purificadas por cromatografia em gel de sílica (diclo- rometano: metanol = 15:1) para obter (R)-N-((s)-1'-(8-((3-cloro-2- (metilamino)piridin-4-il)tio)imidazo[1,2-c]pirimidin-5-il)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]piridin-6,4'-piperidin]-5-il)-2-metilpropano-2- sulfinamida (5-1, 135 mg, rendimento: 73%) como um sólido amarelo- claro. LCMS: m/z 596,9 [M+H]+.
[00240] Etapa 2: (R)-N-((s)-1'-(8-((3-cloro-2-(metilamino)piridin-4- il)tio)imidazo[1,2-c]pirimidin-5-il)-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[b]piridin- 6,4'-piperidin]-5-il)-2-metilpropano-2-sulfinamida (135 mg, 0,23 mmol) foi dissolvida em metanol (20 ml), HCl/dioxano (4 M, 1,2 ml) foram adi- cionados lentamente por gotejamento sob a proteção de nitrogênio, e a mistura reagiu à temperatura ambiente durante 40 minutos. O teste de LCMS indicou que a reação foi concluída. A solução de reação foi vertida em solução de bicarbonato de sódio saturada gelada. A solu- ção misturada foi liofilizada, e diclorometano/metanol (10:1, 20 ml) foi adicionado. A mistura foi filtrada. O filtrado foi concentrado até secura e, em seguida, purificado por HPLC preparativa para obter um sólido branco (composto 5, 33 mg, rendimento: 30 %). LCMS: m/z 493,0 [M+H]+
[00241] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,33 (d, J = 4,4 Hz, 1 H), 8,03 (s, 1 H), 7,84 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 7,69 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,65 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), 7,57 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 7,20 (dd, J = 7,2, 5,2 Hz, 1 H), 6,60 (q, J = 4,4 Hz, 1 H), 5,81 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), 3,98 -3,89 (m, 3 H), 3,38-3,22 (m, 2 H), 3,15-3,11 (d, J = 16,0 Hz, 1 H), 2,85 (d, J = 4,8 Hz, 3 H), 2,81 (d, J = 16,4 Hz, 1 H), 2,50-2,39 (m, 1H), 2,05-1,90 (m, 3 H), 1,67 (d, J = 13,2 Hz, 1 H), 1,28 ~ 1,25 (d, J = 13,2 Hz, 1 H). EXEMPLO 6: SÍNTESE DO COMPOSTO 6 (S)-1'-(8-((2-AMINO-3-CLOROPIRIDIN-4-IL)TIO)IMIDAZO[1,2- C]PIRIMIDIN-5-IL)-5,7-DI-HIDROESPIRO[CICLOPENTA[B]PIRIDINA- 6,4'-PIPERIDINA]-5-AMINA
[00242] Etapa 1: B3 (1,37 g, 4,9 mmol), A4 (1,35 g, 4,9 mmol) e DI- PEA (4,86 ml, 29,41 mmol) foram adicionados sucessivamente a 3 ml de acetonitrila em uma frasco com gargalo único de 25 ml e, em se- guida, a mistura foi agitada durante 2 horas a 80 °C. Após a reação ter sido concluída, a mistura foi resfriada à temperatura ambiente, em se- guida, Boc2O (1,6 g, 7,35 mmol, 1,5 eq.) foi adicionado, e a mistura foi aquecida a 50 °C e reagiu até que a reação fosse concluída. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um resí- duo. O resíduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradi- ente de 0-100% de acetato de etila/éter de petróleo) para obter 6-1 (1,7 g, rendimento: 63,4%) como um sólido amarelo. LC-MS: m/z = 547,0 [M +H+]
[00243] Etapa 2: Sob a proteção de nitrogênio, 6-1 (1,7 g, 3,11 mmol), 2-amino-3-cloropiridina-4-mercaptano de sódio (596 mg, 3,27 mmol), Pd2(dba)3 (285 mg, 0,311 mmol), Xantphos (360 mg, 0,622 mmol), DIPEA (804 mg, 6,22 mmol) e solução de 1,4-dioxano (30 ml) foram adicionados sucessivamente a um frasco de reação de micro- ondas de 5 ml, e a mistura foi submetida a micro-ondas a 100 °C e agi- tada durante 3 horas sob a proteção de nitrogênio. Após a reação ter sido concluída, a mistura foi resfriada à temperatura ambiente, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-10% de acetato de etila/metanol) para obter (1'-(8-((2-amino-3-cloropiridin- 4-il)tio)imidazol[1,2-c]pirimidin-5-il)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]piridin-6,4'-piperidin]-5-il)-carbonato de (S)- terc-butila (6-2, 1,2 g, 66,7%).
[00244] Etapa 3: Sob a proteção de nitrogênio, TFA (5 ml) foi adici- onado lentamente a uma solução de (1'-(8-((2-amino-3-cloropiridin-4- il)tio)imidazol[1,2-c]pirimidin-5-il)-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[b]piridin- 6,4'-piperidin]-5-il)-carbonato de (S)-terc-butila (6-2, 1,2 g, 2,07 mmol) em diclorometano (5 ml) a 0 °C, a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora, e TLC e LCMS indicaram que a reação foi concluída. A solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida, em seguida, a solução misturada de diclorometano/metanol foi adicio- nada para dissolução, e o pH da mistura foi ajustado de modo que se tornasse neutro com NaHCO3. A mistura foi purificada passando-se através de uma coluna de gel de sílica para obter (S)-1'-(8-((2-amino- 3-cloropiridin-4-il)tio)imidazo[1,2-c]pirimidin-5-il)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4'-piperidina]-5-amina (composto 6, 400 mg, rendimento: 40,0%).
[00245] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,35 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,83 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 7,6 Hz, 1H),
7,56 (dd, J = 10,4, 3,4 Hz, 2H), 7,20 (dd, J = 7,6, 5,2 Hz, 1H), 6,33 (s, 2H), 5,80 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 4,02 (s, 1H), 3,95 (dd, J = 11,6, 7,6 Hz, 2H), 3,31 (d, J = 13,6 Hz, 2H), 3,15 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 2,83 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 2,00 (tt, J = 12,4, 6,4 Hz, 2H), 1,64 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 1,48 (dd, J = 13,6, 6,4 Hz, 1H), 1,34-1,29 (m, 2H);
[00246] LCMS: m/z 479,0 [M+H]+. EXEMPLO 7: SÍNTESE DO COMPOSTO 7 (S)-1'-(8-((2-AMINO-3-CLOROPIRIDIN-4-IL)TIO)-[1,2,4]TRIAZOL[4,3- C]PIRIMIDIN-5-IL)-5,7-DI-HIDROESPIRO[CICLOPENTA[C]PIRIDINA- 6,4'-PIPERIDINA]-7-AMINA
[00247] O composto 7 foi sintetizado através de três etapas de acordo com o método de síntese do composto 6, com o uso do inter- mediário B2 em vez do intermediário 6 e com o uso do intermediário A5 em vez do intermediário A4.
[00248] RMN de 1H (400 MHz, DMSO) δ 8,51 (s, 2H), 8,38 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,57 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 6,36 (s, 2H), 5,88 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 4,92 (t, J = 13,6 Hz, 2H), 4,03 (s, 1H), 3,61 (dd, J = 26,8, 12,0 Hz, 2H), 3,16 (d, J = 16,8 Hz, 1H), 2,78 (s, 1H), 1,92 (td, J = 11,2, 4,0 Hz, 2H), 1,63 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 1,33–1,24 (m, 1H).
[00249] LCMS: m/z 480,1 [M+H]+. EXEMPLO 8: SÍNTESE DO COMPOSTO 8
(S)-1'-(8-((2-AMINO-3-CLOROPIRIDIN-4-IL)TIO)IMIDAZO[1,2- C]PIRIMIDIN-5-IL)-5,7-DI-HIDROESPIRO[CICLOPENTA[C]PIRIDINA- 6,4'-PIPERIDINA]-7-AMINA
[00250] O composto 8 foi sintetizado de acordo com o método de síntese do composto 6, com o uso do intermediário A5 e vez do inter- mediário A4.
[00251] RMN de 1H (400 MHz, DMSO) δ 8,53 (s, 1H), 8,39 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,84 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,58 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 6,34 (s, 2H), 5,80 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 4,07 (s, 1H), 3,93 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 3,37 (dd, J = 19,6, 8,0 Hz, 2H), 3,13 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 2,76 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 1,98 (d, J = 11,6 Hz, 2H), 1,62 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 1,30 (s, 1H).
[00252] LCMS: m/z 479,1 [M+H]+. EXEMPLO 9: SÍNTESE DO COMPOSTO 9 (S)-1'-(8-(2,3-DICLOROPIRIDIN-4-IL)TIO-[1,2,4]-TRIAZOL[4,3- C]PIRIMIDIN-5-IL)-5,7-DI-HIDROESPIRO[CICLOPENTA[B]PIRIDINA- 6,4'-PIPERIDINA]-7-AMINA v
[00253] Etapa 1: Cloridrato de (S)-5,7-di-
hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4'-piperidina]-7-amina (A6, 200 mg, 1,28 mmol) foi dissolvido em acetonitrila (20 ml), DIPEA (1,6 ml, 9,68 mmol) e 5-cloro-8-iodo-[1,2,4]-triazol[4,3-c]pirimidina (B2, 180 mg, 0,64 mmol) foram adicionadas, a mistura foi aquecida a 90 °C e submetida à refluxo durante 3 horas sob a proteção de nitrogênio, e a reação foi concluída. O líquido de reação foi resfriado à temperatura ambiente, vertido em solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e extraí- da duas vezes com diclorometano (80 ml). As fases orgânicas foram combinadas e lavadas com salmoura saturada. A fase orgânica foi se- parada e, em seguida, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e con- centrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica (DCM: MeOH = 20/1) para obter (S)-1'-(8-iodo[1,2,4]triazol[4,3- c]pirimidin-5-il)-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4'-piperidina]- 7-amina (9-1, 260 mg, rendimento: 90%) como um sólido amarelo- claro. LCMS: m/z 448,2 [M+H]+
[00254] Etapa 2: (S)-1'-(8-iodo[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidin-5-il)-5,7- di-hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4'-piperidina]-7-amina (9-1, 55 mg, 0,12 mmol) foi dissolvida em 1,4-dioxano (3 ml), e DIPEA (35 mg 0,27 mmol) e 2,3-dicloropiridina-4-mercaptano de sódio (C2, 100 mg, produto bruto) foram adicionados. XantPhos (30 mg, 0,05 mmol) e Pd2(dba)3 (17 mg, 0,02 mmol) foram adicionados sob a proteção de nitrogênio. Após a atmosfera no sistema de reação ter sido substituída por nitrogênio três vezes, a mistura reagiu a 100 °C durante 3 horas, e a reação foi concluída. A solução de reação foi concentrada e purifica- da por cromatografia líquida de alto desempenho para obter (S)-1'-(8- (2,3-dicloropiridin-4-il)tio-[1,2,4]-triazol[4,3-c]pirimidin-5-il)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4'-piperidina]-7-amina (composto 9, 27 mg, sal de TFA, rendimento: 40%) como um sólido amarelo-claro. LCMS: m/z 499,1 [M+H]+
[00255] RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δ 9,35 (s, 1H), 8,56 (d, J =
4,8 Hz, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,95 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,44-7,41 (m, 1H), 6,80 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,53 (s, 1H), 4,36 – 4,32 (m, 2H), 3,69-3,60 (m, 2H), 3,40 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 3,19 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 2,26-2,19(m, 1H),2,05-1,93 (m, 2H), 1,73-1,70(m, 1H). EXEMPLO 10: SÍNTESE DO COMPOSTO 10 (S)-1'-(8-((2-AMINO-3-CLOROPIRIDIN-4-IL)TIO)IMIDAZO[1,2- C]PIRIMIDIN-5-IL)-5,7-DI-HIDROESPIRO[CICLOPENTA[B]PIRIDINA- 6,4'-PIPERIDINA]-7-AMINA
[00256] O composto 10 foi sintetizado através de três etapas de acordo com o método de síntese do composto 6, com o uso do inter- mediário A6 em vez do intermediário A4.
[00257] RMN de 1H (400 MHz, DMSO) δ 8,38 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,84 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,56 (dd, J = 9,1, 3,4 Hz, 2H), 7,29 – 7,13 (m, 1H), 6,33 (s, 2H), 5,80 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 4,01 (s, 1H), 3,95 – 3,86 (m, 2H), 3,38 (dd, J = 23,6, 11,2 Hz, 3H), 3,11 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 2,75 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 2,05 – 1,91 (m, 2H), 1,69 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 1,31 (d, J = 14,0 Hz, 2H).
[00258] LC-MS: m/z = 478,0 [M +H+] . EXEMPLO 11: SÍNTESE DO COMPOSTO 11 (S)-1'-(8-((2-AMINO-3-CLOROPIRIDIN-4-IL)TIO)-[1,2,4]TRIAZOL[4,3- C]PIRIMIDIN-5-IL)-5,7-DI-HIDROESPIRO[CICLOPENTA[B]PIRIDINA-
6,4'-PIPERIDINA]-7-AMINA
[00259] (S)-1'-(8-((2-amino-3-cloropiridin-4-il)tio)-[1,2,4]triazol[4,3- c]pirimidin-5-il)-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4'-piperidina]- 7-amina (11, formato, sólido branco) foi sintetizada através de três etapas de acordo com o protocolo de síntese do composto 6, com o uso do intermediário B2 em vez do intermediário B3 e do intermediário A6 em vez do intermediário A4.
[00260] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,40 (s, 1H), 8,48 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,76 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,58 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 7,33 (dd, J = 7,5, 5,0 Hz, 1H), 6,35 (s, 2H), 5,94 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 4,31 (s, 1H), 4,26 – 4,09 (m, 2H), 3,53 (dd, J = 27,1, 12,0 Hz, 2H), 3,24 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 2,92 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 2,09 (s, 1H), 1,92 (s, 1H), 1,76 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 1,42 (d, J = 13,2 Hz, 1H).
[00261] LCMS: m/z = 479,0 [M+H+] . EXEMPLO 12: SÍNTESE DO COMPOSTO 12 (S)-1'-(8-((2-AMINO-3-CLOROPIRIDIN-4-IL)TIO)-[1,2,4]TRIAZOL[4,3- C]PIRIMIDIN-5-IL)-6-FLUORO-1,3-DI-HIDROESPIRO[INDENO-2,4'- PIPERIDINA]-1-AMINA
[00262] (S)-1'-(8-((2-amino-3-cloropiridin-4-il)tio)-[1,2,4]triazol[4,3- c]pirimidin-5-il)-6-fluoro-1,3-di-hidroespiro[indene-2,4'-piperidina]-1- amina (12, formato, sólido branco) foi sintetizada através de três eta- pas de acordo com o protocolo de síntese do composto 6, com o uso do intermediário B2 em vez do intermediário B3 e do intermediário A7 em vez do intermediário A4.
[00263] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,38 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,57 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 7,31 – 7,20 (m, 1H), 7,16 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,01 (t, J = 8,7 Hz, 1H), 6,34 (s, 2H), 5,95 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 4,14 (t, J = 12,0 Hz, 2H), 4,00 (s, 1H), 3,47 (dd, J = 25,4, 12,0 Hz, 3H), 3,10 (d, J = 15,5 Hz, 1H), 2,71 (d, J = 15,5 Hz, 1H), 2,08 – 1,85 (m, 2H), 1,64 (d, J = 13,3 Hz, 1H), 1,30 (d, J = 13,5 Hz, 1H). LCMS: m/z = 495,0 [M+H+] . EXEMPLO 13: SÍNTESE DO COMPOSTO 13 (S)-1'-(8-((2-AMINO-3-CLOROPIRIDIN-4-IL)TIO)IMIDAZO[1,2- C]PIRIMIDIN-5-IL)-6-FLUORO-1,3-DI-HIDROESPIRO[INDENO-2,4'- PIPERIDINA]-1-AMINA
[00264] Éster terc-butílico de ácido (S)-(1'-(8-((2-amino-3- cloropiridin-4-il)tio)imidazo[1,2-c]pirimidin-5-il)-5-fluoro-1,3-di- hidroespiro[indeno-2,4'-piperidin]-3-il)carboxílico (13-2) foi sintetizado através de duas etapas de acordo com o protocolo de síntese do com- posto 6, com o uso do intermediário A7 em vez do intermediário A4.
[00265] Etapa 3: Éster terc-butílico de ácido (S)-(1'-(8-((2-amino-3- cloropiridin-4-il)tio)imidazo[1,2-c]pirimidin-5-il)-5-fluoro-1,3-di- hidroespiro[indeno-2,4'-piperidin]-3-il)carboxílico (13-2, 60 mg, 0,101 mmol), diclorometano (1 ml) e ácido trifluoroacético (0,2 ml) foram adi- cionados sucessivamente a um frasco seco com gargalo único. A so- lução de reação foi agitada a 20 °C durante 1 hora. O líquido de rea- ção foi concentrado sob pressão reduzida. O pH do líquido de reação residual obtido foi ajustado para 8 com a solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. A mistura foi extraída com solvente misturado de DCM/MeOH (10:1) (10 ml) três vezes, e a fase orgânica combinada foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi purificado por preparação de HPLC para obter (S)-1'-(8-((2-amino-3-cloropiridin-4- il)tio)imidazo[1,2-c]pirimidin-5-il)-6-fluoro-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'- piperidina]-1-amina (13, 32 mg, formato, rendimento: 58,2%) como um sólido branco.
[00266] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,15 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,83 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,58 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 7,32 – 7,26 (m, 1H), 7,23 – 7,18 (m, 1H), 7,12 – 7,02 (m, 1H),
6,32 (s, 2H), 5,80 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,14 (s, 1H), 4,00 – 3,90 (m, 2H), 3,40 – 3,30 (m, 2H), 3,15 – 3,05 (m, 1H), 2,85 – 2,75 (m, 1H), 2,05 – 1,85 (m, 2H), 1,70 – 1,55 (m, 1H), 1,45 – 1,36 (m, 1H); LC-MS: m/z 496,0 [M+H]+. EXEMPLO 14: SÍNTESE DO COMPOSTO 14 (S)-1'-(8-((2-AMINO-3-CLOROPIRIDIN-4-IL)TIO)IMIDAZO[1,2- C]PIRIMIDIN-5-IL)-5,7-DI-HIDROESPIRO[CICLOPENTA[C]PIRIDINA- 6,4'-PIPERIDINA]-5-AMINA
[00267] Etapa 1: Cloridrato de (S)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[c]piridina-6,4'-piperidina]-5-amina (A8, 200 mg, 0,83 mmol) foi dissolvido em acetonitrila (20 ml), DIPEA (1,07 g, 8,3 mmol) e 5-cloro-8-iodoimidazo[1,2-c]pirimidina (B3, 208 mg, 0,75 mmol) foram adicionados, a mistura foi aquecida a 90 °C e submetida à refluxo durante 5 horas sob proteção de nitrogênio, e a reação foi concluída. O líquido de reação foi resfriado à temperatura ambiente, vertido em solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e extraí- da duas vezes com diclorometano (50 ml). As fases orgânicas foram combinadas e, em seguida, lavada com salmoura saturada. A fase or- gânica foi separada e, em seguida, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica para obter 1-(8-iodoimidazo[1,2-c]pirimidin-5-il)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[c]piridina-6,4'-piperidina]-4-amina (14-1, 250 mg, rendimento: 74%) como um sólido amarelo-claro. LCMS: m/z 447,1 [M+H]+
[00268] Etapa 2: 1'-(8-iodoimidazo[1,2-c]pirimidin-5-il)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[c]piridina-6,4'-piperidina]-4-amina (14-1, 50 mg, 0,11 mmol) foi dissolvida em 1,4-dioxano (10 ml), DIPEA (36 mg, 0,28 mmol) e 2-amino-3-cloropiridina-4-mercaptano de sódio (C1, 31 mg, 0,17 mmol) foram adicionados. XantPhos (13 mg, 0,02 mmol) e Pd2(dba)3 (10 mg, 0,01 mmol) foram adicionados sob a proteção de nitrogênio. Após a atmosfera no sistema de reação ser substituída por nitrogênio três vezes, a mistura reagiu a 100 °C durante 3 horas, e a reação ser concluída. O líquido de reação foi concentrado e, em se- guida, purificado por cromatografia líquida de alto desempenho para obter (S)-1'-(8-((2-amino-3-cloropiridin-4-il)tio)imidazo[1,2-c]pirimidin-5- il)-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[c]piridina-6,4'-piperidina]-5-amina (14, 12 mg, rendimento: 22,4%) como um sólido amarelo-claro.
[00269] LCMS: m/z 479,2 [M+H]+
[00270] RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δ 8,64 (s, 1H), 8,56 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,62-7,60(m, 2H), 7,60-7,50 (m, 1H), 5,95- 5,94 (m, 1H), 4,64 (s, 1H), 4,22-4,07 (m, 2H), 3,60 (s, 2H),3,6-3,49 (m, 2H), 2,20-2,10(m, 2H),2,10-2,00 (m, 1H), 1,85-1,63(m, 2H). EXEMPLO 15: SÍNTESE DO COMPOSTO 15 (S)-1'-(8-((2-AMINO-3-CLOROPIRIDIN-4-IL)TIO)-[1,2,4]TRIAZOL[4,3- C]PIRIMIDIN-5-IL)-5,7-DI-HIDROESPIRO[CICLOPENTA[C]PIRIDINA- 6,4'-PIPERIDINA]-5-AMINA
[00271] (S)-1'-(8-((2-amino-3-cloropiridin-4-il)tio)-[1,2,4]triazol[4,3- c]pirimidin-5-il)-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[c]piridina-6,4'-piperidina]- 5-amina (15) foi sintetizada através de duas etapas de acordo com o protocolo de síntese do composto 14, com o uso do intermediário B2 em vez do intermediário B3.
[00272] LCMS: m/z 480,0 [M+H]+
[00273] RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δ 9,31 (s, 1H), 8,43-8,46 (m, 2H), 8,02 (s, 1H), 7,49-7,54(m, 2H), 6,05 (d, J = 5,6 MHz, 1H), 4,17-
4,29 (m, 3H), 3,48-3,60 (m, 3H), 2,96 (d, J = 16,0 MHz, 1H), 1,98-2,15 (m, 2H),1,76-1,79 (m, 1H), 1,22-1,25 (m, 1H). EXEMPLO 16: SÍNTESE DO COMPOSTO 16 (S)-1-AMINO-1'-(8-((2-AMINO-3-CLOROPIRIDIN-4-IL)TIO)- [1,2,4]TRIAZOL[4,3-C]PIRIMIDIN-5-IL)-1,3-DI- HIDROESPIRO[INDENO-2,4'-PIPERIDIN]-4-OL
[00274] Etapa 1: Cloridrato de (S)-1-amino-1,3-di- hidroespiro[indeno-2,4'-piperidin]-4-ol (A9, 200 mg, 0,79 mmol) foi dis- solvido em acetonitrila (40 ml), DIPEA (1,07 g, 8,3 mmol) e 5-cloro-8- iodo-[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidina (B2, 208 mg, 0,75 mmol) foram adi- cionados, a mistura reagiu à temperatura ambiente sob proteção de nitrogênio durante 18 horas, e a reação foi concluída. O líquido de rea- ção foi resfriado à temperatura ambiente, vertido em solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e extraído com diclorometano (100 ml) duas vezes. As fases orgânicas foram combinadas e, em seguida, com salmoura saturada. A fase orgânica foi separada e, em seguida, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada. O produto bru- to foi purificado por cromatografia em gel de sílica para obter (S)-1- amino-1'-(8-iodo-[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidin-5-il)-1,3-di- hidroespiro[indeno-2,4'-piperidin]-4-ol (16-1, 220 mg, rendimento: 63%) como um sólido amarelo-claro. LCMS: m/z 463,0 [M+H]+
[00275] Etapa 2: (S)-1-amino-1'-(8-iodo-[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidin- 5-il)-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidin]-4-ol (16-1, 200 mg, 0,43 mmol) foi dissolvido em 1,4-dioxano (30 ml) e DIPEA (111 mg, 0,86 mmol) e 2-amino-3-cloropiridin-4-mercaptano de sódio (C1, 118 mg, 0,65 mmol) foram adicionados. Sob proteção de nitrogênio, XantPhos (52,0 mg, 0,08 mmol) e Pd2(dba)3 (41 mg, 0,04 mmol) foram adiciona-
dos. Após a atmosfera no sistema de reação ser substituída por nitro- gênio três vezes, a mistura reagiu a 100 °C durante 3 horas, e a rea- ção foi concluída. O líquido de reação foi concentrado e, em seguida, purificado por cromatografia líquida de alto desempenho para obter (S)-1-amino-1'-(8-((2-amino-3-cloropiridin-4-il)tio)-[1,2,4]triazol[4,3- c]pirimidin-5-il)-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidin]-4-ol (16,100 mg, rendimento: 47%) como um sólido branco. LCMS: m/z 495,3 [M+H]+
[00276] RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δ 9,32 (s, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,53 (d, J = 5,6 MHz, 1H), 7,04 (t, J = 7,6 MHz, 1H), 6,84 (d, J = 5,6 MHz, 1H), 6,64 (d, J = 8,0 MHz, 1H), 6,06 (d, J = 5,6 MHz, 1H), 4,20- 4,24 (m, 2H), 3,95 (s, 1H), 3,54-3,62 (m, 2H), 3,13(d, J = 15,6 MHz, 1H), 2,74 (d, J = 15,6 MHz, 1H), 1,93-2,06(m, 2H), 1,70(d, J = 12,8 MHz, 1H), 1,55(d, J = 12,8 MHz, 1H). EXEMPLO 17: SÍNTESE DO COMPOSTO 17 COMPOSTO (S)-1-AMINO-1'-(8-((2-AMINO-3-CLOROPIRIDIN-4- IL)TIO)-[1,2,4]TRIAZOL[4,3-C]PIRIMIDIN-5-IL)-1,3-DI- HIDROESPIRO[INDENO-2,4'-PIPERIDINA]-4-NITRILA
[00277] Etapa 1: (S)-1-(((R)-terc-butilsulfinil)amino)-4-ciano-1,3-di- hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina] (A10, 490 mg, 1,48 mmol) foi dis- solvida em acetonitrila (20 ml), DIPEA (1,91 g, 14,8 mmol) e 5-cloro-8- iodo-[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidina (B2, 415 mg, 1,48 mmol) foram adi- cionados, a mistura reagiu a 85 °C sob proteção de nitrogênio durante
3 horas, e a reação foi concluída. O resíduo obtido por concentração sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-10% de metanol/acetato de etila) para obter (R)-N-((S)- 1'-(8-iodo-[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidin-5-il)-4-ciano-1,3-di- hidroespiro[indeno-2,4'-piperidin]-1-il)-2-terc-butilsulfonamida (17-1, 360 mg, rendimento: 42,3%) como um sólido amarelo. LCMS: m/z 576,1 [M+H]+.
[00278] Etapa 2: (R)-N-((S)-1'-(8-iodo-[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidin-5- il)-4-ciano-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidin]-1-il)-2-terc- butilsulfonamida (17-1, 360 mg, 0,63 mmol) foi dissolvida em 1,4- dioxano (10 ml), e DIPEA (202 mg, 1,56 mmol), e 2-amino-3- cloropiridin-4-mercaptano de sódio (C1, 171 mg, 0,94 mmol) foram adicionados. XantPhos (73 mg, 0,126 mmol) e Pd2(dba)3 (57,7 mg, 0,063 mmol) foram adicionados sob a proteção de nitrogênio. Após a atmosfera no sistema de reação ser substituída por nitrogênio três ve- zes, a mistura reagiu a 100 °C durante 3 horas, e a reação foi concluí- da. A solução de reação foi concentrada e, em seguida, purificada por cromatografia em gel de sílica para obter (R)-N-((S)-1'-((8-((2-amino-3- cloropiridin-4-il)tio)-[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidin-5-il)-4-ciano-1,3-di- hidroespiro[indeno-2,4'-piperidin]-1-il)-2-terc-butilsulfonamida (17-2, 130 mg, 34,2%) como um sólido branco. LC-MS: m/z 608,2 [M+H]+.
[00279] Etapa 3: (R)-N-((S)-1'-((8-((2-amino-3-cloropiridin-4-il)tio)- [1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidin-5-il)-4-ciano-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'- piperidin]-1-il)-2-terc-butilsulfonamida (17-2, 130 mg, 0,21 mmol) e me- tanol (6 ml) foram adicionados sucessivamente a um frasco com único gargalo de 50 ml sob a proteção de nitrogênio, e uma solução de ácido clorídrico, 1,4-dioxano (2 ml, 4 M) foi adicionada por gotejamento à temperatura ambiente, e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Após a reação ter sido concluída, a mistura foi resfria- da à temperatura ambiente, filtrada e concentrada sob pressão reduzi-
da. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia líquida de alto de- sempenho para obter (S)-1-amino-1'-(8-((2-amino-3-cloropiridin-4- il)tio)-[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidin-5-il)-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'- piperidina]-4-nitrila (17, 10 mg, rendimento: 9,3%).
[00280] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,32 (s, 1H), 8,02(s, 1H), 7,71 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,06 (d, J = 5,6 Hz,1H), 4,23 (d, J = 10,8 Hz, 2H), 4,12 (s, 1H), 3,60 (m, 2H), 3,37 (m, 1H), 3,03 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 2,06 (m, 2H), 1,74 (t, 2H), 1,57 (d, J = 19,2 Hz, 2H), 1,52 (s, 2H).
[00281] LCMS: m/z 504,1 [M+H]+. EXEMPLO 18: SÍNTESE DO COMPOSTO 18 (S)-1'-(8-((2-AMINO-3-CLOROPIRIDIN-4-IL)TIO)IMIDAZO[1,2- C]PIRIMIDIN-5-IL)-5,7-DI- HIDROESPIRO[CICLOPENTA[B]PIRAZINA-6,4'-PIPERIDINA]-5-
AMINA
[00282] Etapa 1: Cloridrato de (S)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4'-piperidina]-5-amina (A11, 1,50 g, 4,95 mmol) foi dissolvido em 150 ml de acetonitrila, DIPEA (5,68 g, 44,0 mmol) e 5-cloro-8-iodoimidazo[1,2-c]pirimidina (B3, 1,28 g, 4,59 mmol) foram adicionados, a mistura foi aquecida a 95 °C e submetida à refluxo durante 3 horas sob proteção de nitrogênio, e a reação foi concluída. A mistura foi resfriada à temperatura ambiente e filtrada. O filtrado foi concentrado até secura, misturado com gel de sílica e pas- sou através da coluna para obter (S)-1'-(8-iodoimidazo[1,2-c]pirimidina- 5-il)-5,7-di-hidroespiro[ciclopenta[b]pirazina-6,4'-piperidina]-5-amina (18-1, 2,05 g, rendimento: 92,7%) como um pó bege. LCMS: m/z 448,0 [M+H]+
[00283] Etapa 2: (S)-1'-(8-iodoimidazo[1,2-c]pirimidin-5-il)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]pirazina-6,4'-piperidina]-5-amina (18-1, 2,05 g, 4,59 mmol) foi dissolvida em 120 ml de 1,4-dioxano em um tubo de vidro de 350 ml, DIPEA (1,78 g, 13,8 mmol), 2-amino-3-cloropiridina-4- mercaptano de sódio (C1, 1,26 g, 6,9 mmol), XantPhos (797 mg, 1,38 mmol) e Pd2(dba)3 (630 mg, 0,69 mmol) foram adicionados sucessi- vamente, a mistura de reação foi aspergida com argônio durante 30 segundos e foi aquecida a 100 °C sob argônio e mantido durante 3 ho- ras até que a reação fosse concluída. A mistura foi resfriada à tempe- ratura ambiente, diluída com diclorometano e filtrada por filtração por sucção. O filtrado foi seco por centrifugação e passou através da colu- na. O ponto puro obtido foi seco por centrifugação, misturado com di- clorometano/n-hexano (1/1) e submetido à polpação de um dia para outro e, em seguida, filtrado e seco para obter (S)-1'-(8-((2-amino-3- cloropiridin-4-il)tio)imidazo[1,2-c]pirimidin-5-il)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]pirazina-6,4'-piperidina]-5-amina (composto 18, 440 mg, rendimento: 19,9%). LCMS: m/z 480,1 [M+H]+
[00284] RMN de 1H (400 MHz, MeOD):δ 8,44-8,39 (m, 2 H), 8,05 (s, 1 H), 7,85 (d, J= 1,6 Hz, 1 H), 7,56 (d, J= 1,6 Hz, 1 H), 7,49 (d, J= 5,6 Hz, 1 H), 5,89 (d, J= 5,6 Hz, 1 H), 4,14 (s, 1 H), 4,06-4,02 (m, 2 H), 3,49-3,40 (m, 2 H), 3,33 (s, 1 H), 3,01 (d, J= 16,8 Hz, 1H), 2,24-2,10 (m, 2 H), 1,82 (d, J= 13,2 Hz, 1 H), 1,50 (d, J= 13,6 Hz, 1 H). EXEMPLO 19: SÍNTESE DO COMPOSTO 19 (S)-1'-(8-((2-AMINO-3-CLOROPIRIDIN-4-IL)TIO)-[1,2,4]TRIAZOL[4,3- C]PIRIMIDIN-5-IL)-4-METÓXI-1,3-DI-HIDROESPIRO[INDENO-2,4'- PIPERIDINA]-1-AMINA
[00285] Etapa 1: (S)-1-(((R)-terc-butilsulfinil)amino)-4-metóxi-1,3-di- hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina] (A12, 520 mg, 1,55 mmol) foi dis- solvido em acetonitrila (20 ml), DIPEA (2,0 g, 15,5 mmol) e 5-cloro-8- iodo-[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidina (B2, 435 mg, 1,55 mmol) foram adi- cionadas, e a mistura reagiu a 85 °C durante 3 horas sob a proteção de nitrogênio, e a reação foi concluída. O resíduo obtido por concen- tração sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-10% de metanol/acetato de etila) para obter (R)- N-((S)-1'-(8-iodo-[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidina-5-il)-4-metóxi-1,3-di- hidroespiro[indeno-2,4'-piperidin]-1-il)-2-terc-butilsulfonamida (19-1, 420 mg, rendimento: 46,8%) como um sólido amarelo.
[00286] LCMS: m/z 581,1 [M+H]+.
[00287] Etapa 2: (R)-N-((S)-1'-(8-iodo-[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidin-5- il)-4-metóxi-1,3-di-hidroespiro[indeno-2,4'-piperidin]-1-il)-2-terc- butilsulfonamida (19-1, 420 mg, 0,72 mmol) foi dissolvida em 1,4- dioxano (10 ml), e DIPEA (234 mg, 1,81 mmol) e 2-amino-3- cloropiridina-4-mercaptano de sódio (C1, 198 mg, 1,09 mmol) foram adicionados. XantPhos (83 mg, 0,144 mmol) e Pd2(dba)3 (66 mg, 0,072 mmol) foram adicionados sob a proteção de nitrogênio. Após a atmos- fera no sistema de reação ser substituída por nitrogênio três vezes, a mistura reagiu a 100 °C durante 3 horas, e a reação foi concluída. A solução de reação foi concentrada e, em seguida, purificada por cro-
matografia em gel de sílica para obter (R)-N-((S)-1'-(8-((2-amino-3- cloropiridin-4-il)tio)-[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidin-5-il)-4-metóxi-1,3-di- hidroespiro[indeno-2,4'-piperidin]-1-il)-2-terc-butilsulfonamida (19-2, 310 mg, rendimento: 69,9%) como um sólido branco.
[00288] LCMS: m/z 613,2 [M+H]+.
[00289] Etapa 3: (R)-N-((S)-1'-(8-((2-amino-3-cloropiridin-4-il)tio)- [1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidin-5-il)-4-metóxi-1,3-di-hidroespiro[indeno- 2,4'-piperidin]-1-il)-2-terc-butilsulfonamida (19-2, 310 mg, 0,51 mmol) e metanol (6 ml) foram adicionados sucessivamente a um frasco com único gargalo de 50 ml sob a proteção de nitrogênio, solução de ácido clorídrico/1,4-dioxano (2 ml, 4 M) foram adicionados por gotejamento à temperatura ambiente, e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Após a reação ter sido concluída, a mistura foi resfria- da à temperatura ambiente, filtrada e concentrada sob pressão reduzi- da. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia líquida de alto de- sempenho preparativa para obter (S)-1'-(8-((2-amino-3-cloropiridin-4- il)tio)-[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidin-5-il)-4-metóxi-1,3-di- hidroespiro[indeno-2,4'-piperidina]-1-amina (composto 19, 114 mg, rendimento: 44,3%).
[00290] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,80 (s, 1H), 7,95(s, 1H), 7,65 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 7,26 (t, 2H), 6,96 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,02 (d, J = 5,6 Hz,1H), 4,89 (s, 2H), 4,13-4,04 (m, 4H), 3,86 (s, 3H), 3,53-3,48 (m, 2H), 3,11 (d, J = 16 Hz, 1H), 2,70 (d, J = 16 Hz, 1H), 2,08-2,01 (m, 3H), 1,76 (d, J = 14 Hz, 1H), 1,53 (d, J = 14 Hz, 2H).
[00291] LCMS: m/z 509,2 [M+H]+. EXEMPLO 20: SÍNTESE DO COMPOSTO 20 (S)-1'-(8-((2-AMINO-3-CLOROPIRIDIN-4-IL)TIO)-[1,2,4]TRIAZOL[4,3- C]PIRIMIDIN-5-IL)-5,7-DI- HIDROESPIRO[CICLOPENTA[B]PIRAZINA-6,4'-PIPERIDINA]-5-
AMINA
[00292] Etapa 1: Cloridrato de (S)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4'-piperidina]-5-amina (A11, 89 mg, 0,29 mmol) foi dissolvida em 20 ml de acetonitrila, DIPEA (212 mg, 1,64 mmol) e 5-cloro-8-iodo-[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidina (B2, 77 mg, 0,275 mmol) foram adicionadas, a mistura foi aquecida a 95 °C e sub- metida à refluxo durante 3 horas sob a proteção de nitrogênio, e a rea- ção foi concluída. A mistura foi resfriada à temperatura ambiente e fil- trada. O filtrado foi concentrado até secura, misturado com gel de síli- ca e passou através da coluna para obter (S)-1'-(8-iodo- [1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidin-5-il)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]pirazina-6,4'-piperidina]-5-amina (20-1, 65 mg, rendimento: 52,7%). LCMS: m/z 449,2 [M+H]+
[00293] Etapa 2: (S)-1'-(8-iodo-[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidin-5-il)-5,7- di-hidroespiro[ciclopenta[b]pirazina-6,4'-piperidina]-5-amina (20-1, 65 mg, 0,145 mmol) foi dissolvida em 5 ml de 1,4-dioxano em um tubo de micro-ondas de 5 ml, e DIPEA (56 mg, 0,434 mmol), sulfeto de 2- amino-3-cloropiridina-4 sódio (C1, 40 mg, 0,219 mmol), XantPhos (34 mg, 0,059 mmol) e Pd2(dba)3 (27 mg, 0,029 mmol) foram adicionados sucessivamente, a mistura de reação foi aspergida com argônio duran- te 30 segundos e foi aquecida a 100 °C sob a atmosfera de argônio e mantida durante 3 horas até que a reação fosse concluída. A mistura foi resfriada à temperatura ambiente, diluída com diclorometano e fil- trada por filtração por sucção. O filtrado foi seco por centrifugação e purificado com placa de gel de sílica preparativa. O ponto puro obtido foi enviado para preparação a fim de obter um produto puro de (S)-1'- (8-((2-amino-3-cloropiridin-4-il)tio)-[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidin-5-il)-5,7-
di-hidroespiro[ciclopenta[b]pirazina-6,4'-piperidina]-5-amina (composto 20, 19,4 mg, rendimento: 27,8%). LCMS: m/z 481,2 [M+H]+
[00294] RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δ 9,35 (s, 1 H), 8,59-8,57 (m, 2 H), 8,11 (s, 1 H), 7,53 (d, J= 6,8 Hz, 1 H), 6,37 (d, J= 6,4 Hz, 1 H), 4,65 (s, 1 H), 4,37-4,35 (m, 2 H), 3,69-3,62 (m, 2 H), 3,47 (d, J= 17,2 Hz, 1 H), 3,26 (s, 1 H), 2,31-2,23 (m, 1 H), 2,07-1,97 (m, 2 H), 1,68 (d, J= 11,6 Hz, 1H). EXEMPLO 21: SÍNTESE DO COMPOSTO 21 (S)-1'-(8-((2-(TRIFLUOROMETIL)PIRIDIN-3-IL)TIO)-[1,2,4]- TRIAZOL[4,3-C]PIRIMIDIN-5-IL)-5,7-DI- HIDROESPIRO[CICLOPENTA[B]PIRIDINA-6,4'-PIPERIDINA]-7-
AMINA
[00295] (S)-1'-(8-iodo[1,2,4]triazol[4,3-c]pirimidin-5-il)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4'-piperidina]-7-amina (9-1, 100 mg, 0,22 mmol) foi dissolvido em 1,4-dioxano (12 ml) e DIPEA (300 mg, 2,32 mmol) e 2-(trifluorometil)piridina-3-mercaptano de sódio (C3, 200 mg, produto bruto) foram adicionados. XantPhos (100 mg, 0,17 mmol) e Pd2(dba)3 (100 mg, 0,11 mmol) foram adicionados sob a proteção de nitrogênio. Após a atmosfera no sistema de reação ter sido substituída por nitrogênio três vezes, a mistura reagiu a 100 °C durante 3 horas, e a reação foi concluída. A solução de reação passou através da coluna (EA:MeOH=5/1, 0,5% de hidróxido de amônio) para obter (S)-1'-(8-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)-[1,2,4]-triazol[4,3-c]pirimidin-5-il)-5,7-di- hidroespiro[ciclopenta[b]piridina-6,4'-piperidina]-7-amina (composto 21, 35 mg, rendimento: 31%) como um sólido branco. LCMS: m/z 499,1 [M+H]+
[00296] RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δ 9,32 (s, 1H), 8,41-8,37 (m, 2H), 8,03 (s, 1H), 7,72 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,38-7,35 (m, 1H), 7,28-7,25 (m, 1H), 4,18 – 4,14 (m, 2H),4,04 (s, 1H), 3,62-3,59 (m, 2H), 3,23 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 2,90 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 2,11-2,06(m, 2H),1,79-1,75 (m, 1H), 1,56-1,53(m, 1H). EXEMPLO 22: SÍNTESE DO COMPOSTO 22 (S)-1'-(8-((2-AMINO-3-CLOROPIRIDIN-4-IL)TIO)IMIDAZO[1,2- C]PIRIMIDIN-5-IL)-2-CLORO-4,6-DI- HIDROESPIRO[CICLOPENTA[D]TIAZOL-5,4'-PIPERIDINA]-4-
AMINA
[00297] Etapa 1: Cloridrato de (S)-2-cloro-4,6-di- hidroespiro[ciclopenta[d]tiazol-5,4'-piperidina]-4-amina (A13, 155 mg, 0,35 mmol) foi dissolvido em acetonitrila (10 ml), e DIPEA (450 mg, 3,5 mmol) e 5-cloro-8-iodoimidazo[1,2-c]pirimidina (B3, 108 mg, 0,39 mmol) foram adicionadas, a mistura foi aquecida a 100 °C e submetida à refluxo durante 5 horas sob a proteção de nitrogênio, e a reação foi concluída. A solução de reação foi resfriada à temperatura ambiente, vertida em solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e extraí- da com diclorometano (50 ml x 2). As fases orgânicas foram combina- das e, em seguida, com salmoura saturada. A fase orgânica foi sepa- rada e, em seguida, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concen- trada. O produto bruto foi purificado por cromatografia em gel de sílica para obter (S)-2-cloro-1'-(8-iodoimidazo[1,2-c]pirimidin-5-il)-4,6-di- hidroespiro[ciclopenta[d]tiazol-5,4'-piperidina]-4-amina (22-1, 72 mg, rendimento: 43%) como um sólido amarelo-claro. LCMS: m/z 487 [M+H]+
[00298] Etapa 2: (S)-2-cloro-1'-(8-iodoimidazo[1,2-c]pirimidina-5-il)-
4,6-di-hidroespiro[ciclopenta[d]tiazol-5,4'-piperidina]-4-amina (22-1, 50 mg, 0,1 mmol) foi dissolvida em 1,4-dioxano (5 ml), e DIPEA (30 mg, 0,25 mmol) e 2-amino-3-cloropiridina-4-mercaptano de sódio (C1, 30 mg, 0,15 mmol) foram adicionados. XantPhos (13 mg, 0,02 mmol) e Pd2(dba)3 (20 mg, 0,02 mmol) foram adicionados sob a proteção de nitrogênio. Após a atmosfera no sistema de reação ter sido substituída por nitrogênio três vezes, a mistura reagiu a 100 °C durante 3 horas. A solução de reação foi concentrada e, em seguida, purificada por cro- matografia líquida de alto desempenho para obter (S)-1'-(8-((2-amino- 3-cloropiridin-4-il)tio)imidazo[1,2-c]pirimidin-5-il)-2-cloro-4,6-di- hidroespiro[ciclopenta[d]tiazol-5,4'-piperidina]-4-amina (composto 22, 3 mg, rendimento: 5%) como um sólido amarelo-claro. LCMS: m/z 519 [M+H]+
[00299] RMN de 1H (400 MHz, MeOD) δ 8,06 (s, 1H),7,85 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,50-7,49 (d, 1H), 5,89-5,87 (d, 1H), 4,15 (s, 1H), ,4,07- 3,99(dd, 2H), 3,53 – 3,39 (m, 4H),3,11-3,09 (d, 2H), 2,21-2,04(m, 4H) EXEMPLO 23: SÍNTESE DO COMPOSTO 23
[00300] Etapa 1: Dioxano (20 ml) foi adicionado a 1-(tetra-hidro-2H- piran-2-il)-1H-pirazol[3,4-b]piridina-4-mercaptano de sódio (C7, 224 mg, 0,8 mmol) em um frasco de reação e, em seguida, (S)-N-((S)-1'-(8- iodoimidazol[1,2-C]pirimidin-5-il)-5,7-di- hidroespiro[ciclopentano[B]piridina-6,4'-piperidin]-5-il)-2-metilpropano- 2-sulfinamida (1-1, 287 mg, 0,52 mmol), DIPEA (304 mg, 2,35 mmol), XantPhos (91 mg, 0,16 mmol) e Pd2(dba)3 (72 mg, 0,08 mmol) foram adicionados. A mistura foi aquecida a 100 °C e agitada durante 3 ho- ras sob a proteção de nitrogênio, e TLC (diclorometano/metanol= 20/1)
e LCMS indicaram que a reação foi concluída. A solução de reação foi diluída com acetato de etila e filtrada. O resíduo de filtro foi eluído com acetato de etila. O filtrado foi concentrado até secura e purificado por cromatografia em gel de sílica para obter (R)-2-metil-N-((5S)-1'-((8-((1- (tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol[3,4-b]piridin-4-il)tio)imidazo[1,2- c]pirimidin-5-il)-5,7-di-hidroespiro[ciclopentadieno[b]piridina-6,4'- piperidin]-5-il)propano-2-sulfinamida (23-1, 352 mg, rendimento: 97,2%).
[00301] LCMS: m/z 658,4 [M+H]+
[00302] Etapa 2: Sob a proteção de nitrogênio, HCl/dioxano (4 M, 1,3 ml, 5,20 mmol) foi adicionado lentamente a uma solução de (R)-2- metil-N-((5S)-1'-((8-((1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol[3,4- b]piridin-4-il)tio)imidazo[1,2-c]pirimidin-5-il)-5,7-di- hidroespiro[ciclopentadieno[b]piridina-6,4'-piperidin]-5-il)propano-2- sulfinamida (23-1, 176 mg, 0,26 mmol) em diclorometano (10 ml) a 0 °C, a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas, e TLC (diclorometano/metanol=8/1) e LCMS indicaram que a reação foi concluída. A solução de reação foi resfriada a 0 °C, solução de amô- nia-metanol foi adicionada lentamente a fim de ajustar o pH para apro- ximadamente 10 e, em seguida, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida e purificada por TLC preparativa para obter (S)-1'-(8-(((1H- pirazol[3,4-b]piridin-4-il]tio]imidazo[1,2-c]pirimidin-5-il)-5,7-di- hidroespiro[ciclopentadieno[b]piridina-6,4'-piperidina]-5-amina (23, 73,01 mg, rendimento: 58,1%). LCMS: m/z 470,5 [M+H]+
[00303] RMN de 1H (400 MHz, MeOD): δ 8,42 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 8,16 ~ 8,14 (m, 2 H), 8,10 (s, 1H), 7,91 ~ 7,87 (m, 2 H), 7,56 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 7,34 ~ 7,31 (m, 1 H), 4,26 (s, 1 H), 4,11 ~ 4,06 (m, 1 H), 3,49 ~ 3,43 (m, 2 H), 3,28 (s, 1 H), 3,07 (d, J = 16,8 Hz, 1 H), 2,15 ~ 2,07 (m, 2 H), 1,76 (d, J = 12,8 Hz, 2 H), 1,64 (d, J = 13,6 Hz, 2 H). SÍNTESE DO COMPOSTO DE CONTROLE: NO MOMENTO DE
APLICAÇÃO DA DIVULGAÇÃO, O COMPOSTO DE CONTROLE MAIS PRÓXIMO DA DIVULGAÇÃO É O EXEMPLO 25 DO DOCU- MENTO N° WO2018136265. DE ACORDO COM A VIA SINTÉTICA E COM AS ETAPAS DE OPERAÇÃO DO EXEMPLO 25 DO DOCU- MENTO N° WO2018136265, O COMPOSTO DE CONTROLE AA FOI OBTIDO.
[00304] A função biológica do composto da divulgação foi compro- vada pelos testes na atividade enzimática e no nível celular. Por exemplo, no teste de inibição de atividade enzimática da SHP2, o composto da divulgação pode obter uma forte atividade de inibição (IC50 pode atingir 1 nM). No nível celular, o composto da divulgação também mostrou uma atividade muito boa na inibição da proliferação de células cancerosas, e a atividade inibitória na proliferação da linha- gem de células MV4-11 pôde atingir 1 nM. Em comparação à SHP099 (6-(4-amino-4-metilpiperidina-1-il)-3-(2,3-diclorofenil)pirazina-2-amina) ou ao composto de controle aa, o composto da divulgação mostrou atividade superior tanto a nível enzimático quanto a nível celular. EXEMPLO DE TESTE 1: MÉTODO DE TESTE DA ATIVIDADE EN- ZIMÁTICA DA SHP2
[00305] Método de teste da atividade enzimática da SHP2:
[00306] O pó de composto foi dissolvido em DMSO para produzir o licor-mãe. Durante o experimento, a solução-mãe do composto foi dilu- ída com DMSO por um gradiente triplo, e 10 concentrações de teste diferentes foram estabelecidas para cada composto. 1 µl dos compos- tos em cada ponto de concentração foi colocado no poço da placa de detecção (Corning, Costa 3915), e cada concentração foi testada em duas réplicas. O fosfato de 6,8-difluoro-4-metil-7-hidroxicoumarina
(DiFMUP) foi usado como o substrato e pode ser hidrolisado sob a ca- tálise de SHP2 E72A para produzir 6,8-difluoro-4-metil-7- hidroxicoumarina (DiFMU). A fim de determinar a atividade enzimática da SHP2, o valor de fluorescência a 455 nm foi detectado pelo leitor multifuncional PE Enspire com o uso de um comprimento de onda de excitação de 358 nm.
[00307] O tampão de SHP2 para a reação consistiu em Hepes a 60 mmol/l, pH 7,2, NaCl a 75 mmol/l, Kcl a 75 mmol/l, EDTA a 1 mmol/l, DTT a 5 mmol/l.
[00308] O sistema de triagem consistiu no tampão SHP2, na proteí- na enzimática SHP2 E76A, no substrato DiFMUP e nos compostos de teste.
[00309] Método de Teste de IC50:
[00310] Em uma placa de triagem com 96 poços, a proteína SHP2 E76A a 50 ng reagiu com o composto de teste no tampão SHP2 du- rante 20 minutos e, em seguida, foi incubada com DiFMUP a 10 uM à temperatura ambiente durante 20 minutos. A intensidade da luz a 455 nm foi lida pelo leitor multifuncional PE Enspire com uma luz excitação de 358 nm. A taxa de inibição da amostra na atividade enzimática foi calculada como a razão entre o valor de fluorescência medido do gru- po de tratamento com o composto e aquele do poço de controle de DMSO. Os valores de IC50 dos compostos foram calculados com o uso do software Prism da Graphpad ajustando-se de maneira não li- near a taxa de inibição em relação à concentração do inibidor. A curva de atividade enzimática com uma função do composto concentração foi ajustada com a equação Y=Fundo+(Topo-Fundo)/(1+10^((LogIC50- X)*Coeficiente de Hill)). Um valor de IC50 de cada composto foi calcu- lado. A Tabela 1 mostra valores de IC50 de alguns compostos da di- vulgação.
TABELA 1 Número do Com- Atividade Enzi- Número do Atividade Enzi- posto mática (nM) Composto mática (nM) SHP099 263 Composto 12 2 Controle positivo aa 26 Composto 13 1 Composto 1 11 Composto 14 8 Composto 2 4 Composto 15 3 Composto 3 11 Composto 16 2 Composto 4 7 Composto 17 10 Composto 5 5 Composto 18 7 Composto 6 6 Composto 19 7 Composto 7 3 Composto 20 6 Composto 8 10 Composto 21 11 Composto 9 7 Composto 22 9 Composto 10 3 Composto 23 9 Composto 11 1 EXEMPLO DE TESTE 2: EXPERIMENTO DE INIBIÇÃO DE PROLI- FERAÇÃO DE CÉLULAS MV4-11
[00311] O número de células vivas na cultura foi determinado por determinação quantitativa de ATP intracelular com o uso do kit de En- saio de Viabilidade Celular Luminescente CellTiter-Glo®.
[00312] Na primeira etapa, as células MV4-11 foram inoculadas em placas com 96 poços com uma densidade de 2500 células por poço e um volume de 100 µl por poço. As placas foram colocadas em 37 °C, 5% de incubador de dióxido de carbono de um dia para o outro.
[00313] Na segunda etapa, as células foram tratadas com compos- tos. Os compostos a serem testados foram diluídos 3 vezes, e 8 gradi- entes de concentração foram preparados. Cada poço foi adicionado com um determinado volume de DMSO ou ao composto a ser testado, e cada concentração foi testada em 2 réplicas, e a concentração final de DMSO foi 0,5%. As placas foram colocadas em 37 °C, 5% de incu- bador de dióxido de carbono durante 72 horas.
[00314] Na terceira etapa, a viabilidade celular dos grupos de con- trole, e os grupos de tratamento foi determinado com o uso de kit de Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente CellTiter-Glo® (Promega, G7570). Cada poço foi adicionado com CellTiter-Glo a 50 µl. A cultura foi bem misturada e incubada à temperatura ambiente durante 10 mi- nutos. Os sinais foram lidos com o uso de EnSpire (Perkin Elmer). As porcentagens de inibição (%) foram calculadas pela seguinte fórmula:
[00315] Porcentagem de Inibição (%) = (1 - valor de sinal do grupo de tratamento com composto / valor de sinal do grupo de tratamento com DMSO) * 100. Os resultados são mostrados na Tabela 2. TABELA 2 Número do Com- Inibição da proli- Número do Inibição da proli- posto feração celular Composto feração celular Atividade (nM) Atividade (nM) SHP099 1600 Composto 10 7 Controle positivo aa 423 Composto 11 30 Composto 1 68 Composto 12 30 Composto 2 11 Composto 13 1 Composto 3 99 Composto 14 36 Composto 4 7 Composto 15 94 Composto 5 6 Composto 16 52 Composto 6 4 Composto 17 35 Composto 7 29 Composto 18 42 Composto 8 33 Composto 19 1 Composto 9 60 EXEMPLO DE TESTE 3: EXPERIMENTO FARMACOCINÉTICO DO
COMPOSTO
[00316] A farmacocinética do composto da divulgação foi determi- nada. O método a seguir foi usado para determinar os parâmetros farmacocinéticos do composto da divulgação.
[00317] Camundongos adultos machos saudáveis foram usados no estudo. Cada grupo recebeu administração por via intragástrica com uma dose única de 5 a 100 mg/kg. O jejum durou de 10 horas antes da administração até 4 horas após a administração. Amostras sanguíneas foram coletadas em diferentes instantes do tempo após administração e o teor do composto no plasma foi determinado por LC-MS/MS. A re- lação entre concentração plasmática e tempo foi analisada por softwa- re profissional (winnonlin), e os parâmetros farmacocinéticos dos com- postos foram calculados. De acordo com a Tabela 3, os compostos da divulgação têm excelentes propriedades farmacocinéticas. TABELA 3 Número Dosagem de Exposição Concentra- Meia- Biodisponi- do Com- administra- de Plasma ção Plasmá- vida bilidade oral posto ção oral AUC:uM*h tica Máxima T1/2:h % (mg/Kg) Cmax:uM 4 5 29 7 5,4 34 6 5 35 6 3,1 37 7 5 43 7,5 3 98 10 5 48 5 3,8 51 18 5 40 6,5 3,5 72
[00318] Todas as publicações mencionadas no presente documento são citadas a título de referência na presente divulgação como se cada publicação fosse citada separadamente a título de referência. As mo- dalidades preferenciais da presente divulgação dão descritas detalha- damente acima, porém a divulgação não se limita aos detalhes especí- ficos nas modalidades acima. No escopo do conceito técnico da pre- sente divulgação, várias modificações simples podem ser feitas às so- luções técnicas da divulgação, e todas as modificações são abrangi- das pelo escopo da divulgação.
[00319] Além disso, deve-se verificar que cada recurso técnico es- pecífico descrito nas modalidades específicas pode ser combinado de qualquer maneira sem contradição. A fim de evitar duplicação desne- cessária, a presente divulgação não descreve separadamente as vá- rias combinações possíveis. Além disso, várias modalidades diferentes da presente divulgação também podem ser combinadas de qualquer maneira, e as combinações também devem ser consideradas como sendo divulgadas pela divulgação sem haver afastamento do espírito e do escopo da divulgação.

Claims (23)

REIVINDICAÇÕES
1. Composto, caracterizado pelo fato de apresenta a Fór- mula I: , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou um enantiômero, diastereoisômero, tautômero, solvato, derivado substituído por isótopo, polimorfo, profármaco ou metabólito do mesmo, caracterizado pelo fa- to de que: X1 e X2 são selecionados independentemente a partir de uma ligação, O, CRaRb ou NRc; X3 é selecionado a partir de uma ligação CRaRb, NRc, S ou O; X4 é selecionado a partir de um N ou CRc; e Ra, Rb e Rc são selecionados independentemente a partir de H, halogênio, C1-6 alquila substituída ou não substituída ou C1-6 alcoxila substituída ou não subs- tituída; R1, R2, R3, R4 e R7 são selecionados independentemente a partir de H, -OH, halogênio, amino substituído ou não substituído, C1-6 alquila substituída ou não substituída ou C1-6 alcoxila substituída ou não substituída; e R1, R2, R3, R4 e R7 não podem ser -OH ou -NH2 si- multaneamente; o anel A é selecionado a partir de C4-8 hidrocarbila cíclica substituída ou não substituída, heterociclila com 4 a 8 membros substi- tuídos ou não substituídos, C5-10 arila substituída ou não substituída ou heteroarila com 5 a 10 membros substituída ou não substituída, em que a heterociclila ou heteroarila compreende 1-3 heteroátomos sele-
cionados a partir de: N, O, S ou P; o anel C é selecionado a partir de C4-8 hidrocarbila cíclica substituída ou não substituída, heterociclila monocíclica com 5 a 6 membros substituída ou não substituída, heterociclila bicíclica com 8 a 10 membros substituída ou não substituída, C5-10 arila monocíclica ou bicíclica substituída ou não substituída, heteroarila monocíclica com 5 a 6 membros substituída ou não substituída, ou heteroarila bicíclica com 8 a 10 membros substituída ou não substituída, em que a hetero- ciclila ou heteroarila compreende 1-4 heteroátomos selecionados a partir de: N, O, S ou P; R5 e R6 são selecionados independentemente a partir de H, -OH, halogênio, ciano, amino substituído ou não substituído, C1-6 alqui- la substituída ou não substituída ou C1-6 alcoxila substituída ou não substituída; n é qualquer número inteiro de 0 a 3; e em que o termo "substituído(a)" se refere a um ou mais átomos de hidrogênio no grupo que são substituídos por um substituin- te selecionado a partir de: halogênio, -OH, -NO2, -NH2, -NH(C1-6 alquila não substituída ou halogenada), -N(C1-6 alquila não substituída ou ha- logenada)2, -CN, C1-8 alquila não substituída ou halogenada, C1-8 alco- xila não substituída ou halogenada, C1-8 alcoxil-C1-8 alquila não substi- tuída ou halogenada, C3-8 cicloalquil-C1-8 alquila não substituída ou ha- logenada, C1-6 alquil carbonila não substituída ou halogenada, C1-6 al- coxil carbonila não substituída ou halogenada, grupo ácido hidroxâmi- co, C1-6 alquil tiol não substituída ou halogenada, -S(O)2N( C1-6 alquila não substituída ou halogenada)2, -S(O)2 C1-6 alquila não substituída ou halogenada, -N(C1-6 alquila não substituída ou halogenada)S(O)2N(C1-6 alquila não substituída ou halogenada)2, -S(O)N(C1-6 alquila não substi- tuída ou halogenada)2, -S(O)(C1-6 alquila não substituída ou halogena- da), -N(C1-6 alquila não substituída ou halogenada)S(O)N(C1-6 alquila não substituída ou halogenada)2, -N(C1-6 alquila não substituída ou ha- logenada)S(O)(C1-6 alquila não substituída ou halogenada), C5-10 arila não substituída ou halogenada, heteroarila com 5 a 10 membros não substituída ou halogenada, C4-8 hidrocarbila cíclica não substituída ou halogenada ou heterociclila com 4 a 8 membros não substituída ou halogenada, em que a heterociclila e heteroarila compreendem 1-4 heteroátomos selecionados a partir de: N, O ou S.
2. Composto da Fórmula I, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que um dentre X1 e X2 é CH2, e o outro é uma ligação.
3. Composto da Fórmula I, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que X3 é S.
4. Composto da Fórmula I, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que X4 é selecionado a partir de N ou CH.
5. Composto da Fórmula I, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1, R2, R3, R4 e R7 são selecionados independentemente a partir de H, -OH, -F, -Cl, -Br, -NH2, -NHC1-3 al- quila, metila, etila, propila, isopropila, butila, metóxi, etóxi, propóxi ou isopropóxi; C1-3 alquila substituída por halogênio, -NH2, -OH, C1-3 alqui- la ou C1-3 alcoxila; ou C1-3 alcoxila substituída por halogênio, -NH2, - OH, C1-3 alquila ou C1-3 alcoxila.
6. Composto da Fórmula I, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R5 e R6 são selecionados indepen- dentemente a partir de H, -OH, -F, -Cl, -Br, -CN, -NH2, -NHC1-3 alquila, metila, etila, propila, isopropila, butila, metóxi, etóxi, propóxi ou isopro- póxi; C1-3 alquila substituída por halogênio, -NH2, -OH, C1-3 alquila ou C1-3 alcoxila; ou C1-3 alcoxila substituída por halogênio, -NH2, -OH, C1-3 alquila ou C1-3 alcoxila.
7. Composto da Fórmula I, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o substituinte é selecionado a partir de –F, -Cl, -Br, -OH, -NO2, -NH2, -NH(C1-6 alquila), -N(C1-6 alquila)2, - CN, C1-6 alquila, C1-4 alcoxila, C1-4 alcoxil-C1-6 alquila, C3-8 cicloalquil-C1- 8 alquila, C1-6 alquil carbonila, C1-6 alcoxil carbonila, C1-6 alquil tiol, - S(O)2N(C1-6 alquil)2, -S(O)2 C1-6 alquila, -N(C1-6 alquila)S(O)2N(C1-6 al- quila)2, -S(O)N(C1-6 alquila)2, -S(O)(C1-6 alquila), -N(C1-6 alqui- la)S(O)N(C1-6 alquila)2, -N(C1-6 alquil)S(O)(C1-6 alquila), C5-10 arila subs- tituída ou não substituída, heteroarila com 5 a 10 membros substituída ou não substituída, C4-8 hidrocarbila cíclica substituída ou não substitu- ída ou heterociclila com 4 a 8 membros substituída ou não substituída, em que a heterociclila e heteroarila compreendem 1-4 heteroátomos selecionados a partir de: N, O ou S.
8. Composto da Fórmula I, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o substituinte é selecionado a partir de –F, -Cl, -Br, -OH, -NO2, -NH2, -NH(C1-3 alquila), -N(C1-3 alquila)2, - CN, C1-3 alquila, C1-3 alcoxila, C1-3 alquil carbonila, ciclopropila, ciclobu- tila, ciclopentila, ciclopentenila, ciclo-hexila, ciclo-hexenila, ciclo- hexadienila, ciclo-heptila, ciclo-octila, pirrolidinila, morfolinila, piperazi- nila, homopiperazinila, piperidinila, tiomorfolinila, fenila, naftila, antraci- la, fenantrila, fluorenila, tiofenila, imidazolila, pirazolila, tiazolila, oxa- zolila, oxadiazolila, isoxazolila, piridila, pirimidinila, pirazinila, piridazini- la, benzimidazolila, benzopirazolila, indolila, furanila, pirrolila, triazolila, tetrazolila, triazinila, indolizinila, isoindolila, indazolila, isoindazolila, pu- rinila, quinolinila ou isoquinolinila.
9. Composto da Fórmula I, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o substituinte é selecionado a partir de –F, -Cl, -Br, -OH, -NO2, -NH2, -NH(C1-3 alquila), -N(C1-3 alquil)2, -CN, metila, etila, propila, isopropila, butila, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi ou fenila.
10. Composto da Fórmula I, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o anel C é selecionado a partir de qualquer dentre os seguintes grupos: , ou ; em que: X5, X6, X7, X8 e X9 são selecionados independentemente a partir de N ou CRd; e, no máximo, 3 dentre X5, X6, X7, X8 e X9 são N simultaneamente; X10, X11, X12, X13, X14, X15, X16 e X17 são selecionados inde- pendentemente a partir de N ou CRd; e, no máximo, 5 dentre X10, X11, X12, X13, X14, X15, X16 e X17 são N simultaneamente; X18, X19, X20 e X21 são selecionados independentemente a partir de N ou CRd, e, no máximo, 3 dentre X18, X19, X20 e X21 são N simultaneamente; R6 e R8 são selecionados independentemente a partir de H, -NH2, -CN, -OH, -NO2, halogênio, C1-6 alquila não substituída ou halo- genada ou C1-6 alcoxila não substituída ou halogenada; e Rd é selecionado a partir de H, halogênio, C1-6 alquila não substituída ou halogenada ou C1-6 alcoxila não substituída ou haloge- nada.
11. Composto da Fórmula I, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o anel C é selecionado a partir de qualquer dentre os seguintes grupos: ou ; em que: 0, 1 ou 2 dentre X5, X6, X7, X8 e X9 são N, e os outros são CRd; 0, 1 ou 2 dentre X18, X19, X20 e X21 são N, e os outros são CRd;
R6 é selecionado a partir de H, -NH2, -CN, -OH, -NO2, -F, - Cl, -Br, metila, etila, propila, isopropila, butila, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, C1-3 alquila fluorada ou bromada, C1-3 alcoxila fluorada ou bromada; e Rd é selecionado a partir de H, -F, -Cl, -Br, metila, etila, pro- pila, isopropila, butila, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, C1-3 alquila fluorada ou bromada ou C1-3 alcoxila fluorada ou bromada.
12. Composto da Fórmula I, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o anel C é selecionado a partir de qualquer dentre os seguintes grupos: , ou
13. Composto da Fórmula I, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o anel A é selecionado a partir de C4- 6 hidrocarbila cíclica substituída ou não substituída, heterociclila com 4 a 6 membros substituída ou não substituída, C5-6 arila substituída ou não substituída ou heteroarila com 5 a 6 membros substituída ou não substituída, em que a heterociclila ou heteroarila compreendem 1-3 átomos de N.
14. Composto da Fórmula I, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o anel A é selecionado a partir de qualquer dentre os seguintes grupos: , ou
15. Composto da Fórmula I, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o anel A é selecionado a partir de qualquer dentre os seguintes grupos: , ou
16. Composto da Fórmula I, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto tem uma estrutura sele- cionada a partir de: ou
17. Composto da Fórmula I, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que um átomo do isótopo compreende, porém sem limitação, hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, flúor, fósforo, cloro ou iodo; e, de preferência, é 2H, 3H, 11 C, 13 C, 14 C, 15 N, 17 O, 18O, 18F, 31P, 32P, 35S, 36Cl ou 125I.
18. Método para preparar o composto da Fórmula I, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pe- lo fato de que compreende: (i) realizar a reação de substituição nucleofílica entre a Fórmula Ib e a Fórmula Ic para obter a Fórmula Id; (ii) realizar a reação de substituição entre a Fórmula Id e a Fórmula Ie para obter a Fórmula If; e
(iii) desproteger a Fórmula If por ácido a fim de obter o composto da Fórmula I:
O
N
S O I Cl O R3 HN R4
S S N N X2 R3 HN R4 R3 HN C R4 N (R6)n SNa X3 N X2 N X2 C A X4 n(R ) Ie N X1 7 HN Ic I N R2 R1 (R5)n
N X1 A A N X1 (R6)n X4 n(R ) 7 R2 R1 R2 R1 (R5)n N If X4 n(R ) Ib 7 Id R4 R3 NH2 N X2 X3 N C N X1 A (R6)n R2 (R5)n R1
N X4 n(R ) 7 I .
19. Uso do composto da Fórmula I, como definido em qual- quer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de ser pa- ra preparar um medicamento para prevenção ou tratamento: (a) de doenças ou afecções relacionadas à atividade anor- mal de SHP2; (b) de doenças ou afecções mediadas por SHP2; (c) para a inibição da atividade de SHP2; (d) para inibir de maneira não terapêutica a atividade de SHP2 in vitro; (e) para inibir de maneira não terapêutica a proliferação de células tumorais in vitro; ou (f) de doenças ou afecções relacionadas à SHP2 anormal.
20. Uso, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que a doença é câncer que compreende, porém sem limi- tação Síndrome de Noonan, Síndrome Leopard, leucemia mielomono- cítica juvenil, neuroblastoma, melanoma, leucemia mieloide aguda, câncer de mama, câncer de esôfago, câncer de pulmão, câncer de có- lon, câncer de cabeça, neuroblastoma, carcinoma de células escamo- sas de cabeça e pescoço, câncer gástrico, linfoma anaplásico de célu- las grandes ou glioblastoma.
21. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende: (i) uma quantidade eficaz do composto da Fórmula I, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 17, ou um sal farma- ceuticamente aceitável do mesmo ou um enantiômero, diastereoisô- mero, tautômero, solvato, derivado substituído por isótopo, polimorfo, pró-fármaco ou metabólito do mesmo; e (ii) um veículo farmaceuticamente aceitável.
22. Método para inibir atividade de SHP2, caracterizado pe- lo fato de que compreende: administrar a um indivíduo com necessi- dade do mesmo uma quantidade eficaz do composto da Fórmula I, como definido nas reivindicações 1 a 17, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou administrar a um indivíduo com necessidade do mesmo uma quantidade eficaz da composição farmacêutica, como definido na reivindicação 21.
23. Invenção, caracterizada por quaisquer de suas concre- tizações ou categorias de reivindicação englobadas pela matéria inici- almente revelada no pedido de patente ou em seus exemplos aqui apresentados.
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