CN115340545A - 双环杂芳基类衍生物及其制备方法和用途 - Google Patents

双环杂芳基类衍生物及其制备方法和用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及双环杂芳基类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用。具体而言，本发明涉及一种式(AI)所示的双环杂芳基类衍生物、其制备方法及其可药用的盐，以及它们作为治疗剂，特别是SHP2变构抑制剂的用途，其中式(AI)中的各取代基的定义与说明书中的定义相同。

Description

双环杂芳基类衍生物及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及一种新的双环杂芳基类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物以及其作为治疗剂特别是作为SHP2变构抑制剂的用途。
背景技术
Src同源域-2磷酸酶(SHP2)是蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)家族的重要成员之一，由蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型11(PTPN11)基因编码，催化蛋白质中酪氨酸的去磷酸化反应。SHP2的N端包含2个SH2结构域，这两个SH2结构域控制着SHP2的亚细胞定位和功能调节，C端包含1个具有催化活性的PTP结构域和2个与其活性相关的的酪氨酸残基。正常情况下，SHP2处于自抑制的状态，当受到生长因子、细胞因子或炎症因子等刺激时，如在血小板源性生长因子PDGF和FGF等刺激下，使得催化位点暴露，导致SHP2的酶的活化。
SHP2在人体内广泛存在，参与大鼠肉瘤(RAS)-胞外信号相关激酶(ERK)，磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B和NF-KB,激活成纤维细胞生长因子、表皮生长因子及胰岛素受体下游丝裂原活化蛋白激酶(MAPK/ERK)等多条信号通路，进而调节细胞的增殖、分化、迁移和凋亡。目前已经发现SHP2的激活突变与努南综合征、豹斑综合征、单核细胞白血病、黑色素瘤、实体瘤、心血管疾病、免疫紊乱、纤维化或视觉紊乱的发生有着密不可分的联系，SHP2的过表达会增加慢性粒细胞白血病、肥大细胞增多症、恶性胶质瘤、肺癌、乳腺癌等癌症的风险，表明SHP2在不同类型的癌症及癌症的不同阶段有着重要的作用。由于SHP2在肿瘤中的多种功能，针对SHP2靶点抑制剂的研究也为肿瘤的治疗带来新的希望和方向。
SHP2抑制剂按照作用机制的不同，可以分为竞争性抑制剂(包括变构霉素、苯基吡唑肼基磺酸盐和NSC-87877)、非竞争性抑制剂(包括吲哚水杨酸和呋莫素酮)和不可逆性抑制剂(包括葡萄酸锑钠和隐丹参酮)，据报道隐丹参酮作为SHP2不可逆性抑制剂，在体外可抑制横纹肌肉瘤、黑色素瘤、结肠癌和乳腺癌的增殖，体内研究则表明其可抑制小鼠前列腺癌的增殖，其是否能够进一步成为临床有效的药物还需要诸多试验验证。
目前REVOLUTION Medicines Inc公司研发的化合物RMC-4630已经进入临床Ⅱ期，用于实体瘤的治疗，同时还包括处于临床前的RMC-4550，另外还有3个临床Ⅰ期的化合物JAB-3068、JAB-3312和TNO-155，分别由加科思(Jacobio Pharmaceuticals Co Ltd)和诺华(Novartis AG)研发，同时包括诺华临床前药物SHP-099；REVOLUTION Medicines Inc和Novartis AG已经公开了一系列的SHP2抑制剂专利，其中包括WO-2019075265、WO-2018136265、WO-2018136264、WO-2017216706和WO-2018013597等，虽然SHP2的研究已经取得一定的进展，但是目前仍未有行之有效的药物上市，所以仍有必要继续研究和开发新的SHP2抑制剂。
发明内容
针对上述的技术问题，本发明提供一种式(AI)所示的一类新的双环杂芳基类化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
Figure BDA0003066760470000021
其中：
当Z选自-NH-时；V选自-N-或-CH-；或者；当Z选自-O-时；V选自-N-；
Q和T各自独立地选自N或CH；其中Q和T中至少一个选自N；
环A选自萘基、双环杂芳基；
R1相同或不同，各自独立地选自氢原子、烷基、烯基、炔基、氰基、卤素、硝基、环烷基、杂环基、-OR5、-C(O)R5、-SO2R5、-NR6R7、-SO2NR6R7、-NHSO2R5或-C(O)NR6R7，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基或杂环基任选进一步被一个或多个选自氘、卤素、硝基、氰基、烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-SO2R5、-NR6R7、-SO2NR6R7、-NHSO2R5或-C(O)NR6R7的取代基所取代；
R2选自氰基、四氮唑基、-C(O)R5、-C(O)OR5或-C(O)NR6R7；
R3和R4与其相连接的N原子一起形成4～11元杂环基，优选为5～11元杂环基，其中所述的杂环基内含有一个或多个N、O、S或SO2原子，并且杂环基上任选进一步被一个或多个选自卤素、硝基、氰基、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-CH2R5、-CH(OH)R5、-CH2OR5、＝O、-OR5、-SR5、-SOR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-SO2R5、-NR6R7、-SO2NR6R7、-NHC(＝NH)NH2、-NHSO2R5或-C(O)NR6R7的取代基所取代，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、氨基、卤素、硝基、氰基、烷基、卤代烷基、卤代烷氧基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-SO2R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
或者，R3和R4与其相连接的N原子一起形成基团：
Figure BDA0003066760470000022
Figure BDA0003066760470000023
为单键或双键；
当
Figure BDA0003066760470000024
表示单键时，G和M各自独立地选自N或CRj；
当
Figure BDA0003066760470000025
表示双键时，G和M各自独立地选自C；
环B选自环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
E选自NRk、(CRpRq)p、O或S；
F选自(CRpRq)q；
条件是，当E选自(CRpRq)p时，p为1，q为1；或者，p为2，q为0；当E选自NRk、O或S时，q为1；
J选自CRpRq；
K选自NRk、(CRpRq)r、O或S；
r为0或1；
Rm、Rn、Rp和Rq相同或不同，各自独立地选自RA；
或者，Rp和Rq与相连接的碳原子一起形成RB；
Rc和Rd相同或不同，各自独立地选自氢原子、卤素、烷基或-OR5，其中所述的烷基任选进一步被羟基、卤素、烷氧基、环烷基或-NR6R7的取代基所取代；
或者，Rc和Rd与相连接的碳原子一起形成RB；
Rg相同或不同，各自独立地选自氢原子、卤素、硝基、烷基、烯基、炔基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-SO2R5、-NR6R7、-SO2NR6R7、-NHC(＝NH)NH2、-NHSO2R5或-C(O)NR6R7，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被羟基、卤素、烷基、烷氧基、环烷基或-NR6R7的取代基所取代；
或者，两个Rg与相连接的同一个碳原子可以一起形成C＝O；
Rj和Rk相同或不同，各自独立地选自氢原子或烷基；
RA相同或不同，各自独立地选自氢原子、卤素、硝基、烷基、烯基、炔基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-SO2R5、-NR6R7、-SO2NR6R7、-NHC(＝NH)NH2、-NHSO2R5或-C(O)NR6R7，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被羟基、卤素、烷基、烷氧基、环烷基或-NR6R7的取代基所取代；
RB相同或不同，各自独立地选自3～10元环烷基或3～10元杂环基，其中所述的环烷基或杂环基任选进一步被一个或多个选自卤素、氰基、硝基、烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-SO2R5、-NR6R7、-SO2NR6R7、-NHC(＝NH)NH2、-NHSO2R5或-C(O)NR6R7的取代基所取代；
R5、R6和R7各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、氨基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-SO2R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
或者，R6和R7与其相连接的N原子一起形成3～8元杂环基，其中所述的3～8元杂环内含有一个或多个N、O、S或SO2原子，并且3～8元杂环上任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、氨基、烷基或烷氧基的取代基所取代；
R8、R9和R10各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧基或羧酸酯基的取代基所取代；
m为0、1、2、3、4或5；
n选自0，1，2，3或4；
p选自1或2。
在本发明的优选方案中，式(AI)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为式(AII)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，
Figure BDA0003066760470000041
其中：环A、m、V、R1～R4的定义如式(AI)中所述。
在本发明的优选方案中，式(AII)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，
Figure BDA0003066760470000042
其中：环A、V、m、R1、R3和R4的定义如式(AII)中所述。
在本发明的优选方案中，式(AI)、(AII)或(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：
R3和R4与其相连接的N原子一起形成4～8元单环杂环基，优选为5～6元单环杂环基，更优选为哌啶基，其中所述的单环杂环基任选进一步被一个或多个选自甲基、氨基、环烷基、苯基、卤代苯基、杂芳基、-CH2NH2、-CH2OH、-NHC(＝NH)NH2、＝O或-OR5的取代基所取代；其中所述的甲基、环烷基、苯基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自甲磺酰基、羟基、氨基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、吡啶基或嘧啶基的取代基所取代；其中所述的杂芳基优选为吡啶基、嘧啶甲基苯并吡唑基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基或苯并噁唑基；
R5的定义如式(AI)中所述。
在本发明的优选方案中，式(AI)、(AII)或(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：
R3和R4与其相连接的N原子一起形成7～11元螺杂环基，其中所述的螺杂环基任选进一步被一个或多个选自甲基、氨基、-CH2NH2、-CH2OH、-NHC(＝NH)NH2、＝O或-OR5的取代基所取代；R5的定义如式(AI)中所述；优选地，其中所述的螺杂环基选自：
Figure BDA0003066760470000051
Ra相同或不同，各自独立地选自甲基、氨基、-CH2NH2、-CH2OH、-NHC(＝NH)NH2或-OR5；或者，两个Ra与相连接的同一个碳原子一起形成C＝O；t为1、2或3；R5的定义如式(AI)中所述。
在本发明的优选方案中，式(AI)、(AII)或(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R3和R4与其相连接的N原子一起形成7～11元桥杂环基，其中所述的桥杂环基任选进一步被一个或多个选自甲基、氨基、-CH2NH2、-CH2OH、-NHC(＝NH)NH2、＝O或-OR5的取代基所取代；R5的定义如式(AI)中所述。
在本发明的优选方案中，式(AI)、(AII)或(I)化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R3和R4与其相连接的N原子一起形成7～11元稠杂环基，其中所述的稠杂环基任选进一步被一个或多个选自甲基、氨基、-CH2NH2、-CH2OH、-NHC(＝NH)NH2、＝O或-OR5的取代基所取代；R5的定义如式(AI)中所述。
在本发明的优选方案中，式(AII)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为式(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
Figure BDA0003066760470000052
其中：
环B选自苯基、3～8元环烷基、4～8元杂环基或5～6元杂芳基；
E选自NRk、(CRpRq)p、O或S；
F选自(CRpRq)q；
条件是，当E选自(CRpRq)p时，p为1，q为1；或者，p为2，q为0；当E选自NRk、O或S时，q为1；
Rm选自氨基、-CH2NH2或-NHC(＝NH)NH2；
Rn选自氢原子、甲基或-CH2OH；
Rp和Rq各自独立地选自氢原子、卤素、氨基、C1-C4烷基、羟基C1-C4烷基、氨基C1-C4烷基或-OR5；
Figure BDA0003066760470000063
、环A、V、G、M、m、n、R1～R2、R5、Rk和Rg的定义如式(AII)中所述。
在本发明的优选方案中，式(AII)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为式(III)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
Figure BDA0003066760470000061
其中：
环B选自苯基、3～8元环烷基、4～8元杂环基或5～6元杂芳基；
J选自CRpRq；
K选自NRk、(CRpRq)r、O或S；
r为0或1；
Rm选自氨基、-CH2NH2或-NHC(＝NH)NH2；
Rn选自氢原子、甲基或-CH2OH；
Rp和Rq各自独立地选自氢原子、卤素、氨基、C1-C4烷基、羟基C1-C4烷基、氨基C1-C4烷基或-OR5；
Figure BDA0003066760470000062
环A、V、G、M、m、n、R1～R2、R5、Rk和Rg的定义如式(AII)中所述。
在本发明的优选方案中，式(AII)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为式(IV)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
Figure BDA0003066760470000071
其中：
环B选自苯基、3～8元环烷基、4～8元杂环基或5～6元杂芳基；
Rc和Rd与相连接的原子一起形成3～8元环烷基；
Rm选自氨基、-CH2NH2或-NHC(＝NH)NH2；
Rn选自氢原子、甲基或-CH2OH；
Figure BDA0003066760470000072
环A、V、G、M、m、n、R1～R2和Rg的定义如式(AII)中所述。
在本发明的优选方案中，式(AII)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为式(V)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
Figure BDA0003066760470000073
其中：
L1选自不存在、-(C＝O)-、-(CRwRv)u-，其中任意的一个-(CRwRv)-任选进一步被-N(Rz)-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-所替代；
每个Rw和Rv相同或不同，各自独立地选自氢原子、卤素、羟基、烷基或烷氧基；
每个Rz相同或不同，各自独立选自氢原子或烷基；
环E选自4～11元含N的单环杂环基、4～11元含N的稠杂环基或4～11元含N的桥杂环基，其中所述的单环杂环基、稠杂环基、桥杂环基任选进一步被一个或多个选自卤素、烷基、-OR5或＝O的取代基所取代；
环K选自不存在，环烷基、芳基或杂芳基，其中所述的环烷基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、氨基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-SO2R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
其中-L1-环K和-(CH2)W-NH2连接于环E的同一个碳原子上；
w为0，1或2；
u为0，1，2或3；
环A、V、Q、T、m、R1～R2、R5、R8～R10的定义如式(AII)中所述。
在本发明的优选方案中，式(AI)、(AII)、(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R1选自氢原子、F、Cl、Br、氨基、羟基、氰基、硝基、甲氧基、乙氧基、甲基、乙基、二氟甲基、环丙基、d3-甲基、乙炔基、乙烯基、-NHCH3或-N(CH3)2。
在本发明的优选方案中，式(II)、(III)、(IV)或(V)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R2选自-C(O)NH2或氰基。
在本发明的优选方案中，式(AI)、(AII)、(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R5选自氢原子或烷基。
在本发明的优选方案中，式(AI)、(AII)、(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中环A选自萘基、苯并吡唑基或苯并噻唑基。
在本发明的优选方案中，式(II)、(III)或(IV)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中环B选自：
Figure BDA0003066760470000081
在本发明的优选方案中，式(II)、(III)或(IV)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中Rg相同或不同，各自独立地选自氢原子、F、Cl、Br、氨基、羟基、氰基、硝基、甲氧基、乙氧基、甲基、乙基、乙炔基、乙烯基、-NHCH3或-N(CH3)2；
或者，两个Rg与相连接的同一个碳原子可以一起形成C＝O。
在本发明的优选方案中，式(V)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中环E选自
Figure BDA0003066760470000091
在本发明的优选方案中，式(AI)所述的化合物选自：
Figure BDA0003066760470000092
Figure BDA0003066760470000101
Figure BDA0003066760470000111
Figure BDA0003066760470000121
Figure BDA0003066760470000131
Figure BDA0003066760470000141
Figure BDA0003066760470000151
Figure BDA0003066760470000161
Figure BDA0003066760470000171
或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐。
进一步，本发明提供一种制备式(AII)化合物或其立体异构体、互变异构体的方法，该方法包括：
Figure BDA0003066760470000172
式(AIIa)化合物与NHR3R4在碱性条件下进行亲核取代反应，得到式(Ib)化合物；式(AIIb)化合物与式(AIIc)化合物，在钯催化剂和碱性条件下进行Suzuki反应，得到的化合物任选进一步脱去保护基，得到式(AII)化合物；
其中：
M1选自-B(OH)2或
Figure BDA0003066760470000173
X1选自离去基团，所述的离去基团选自卤素或-SO2Rt；
X2选自卤素；
Rt选自烷基；
环A，V，m和R1～R4的定义如式(AII)中所述。
更进一步，本发明提供一种制备式(AII)化合物或其立体异构体、互变异构体的方法，该方法包括：
Figure BDA0003066760470000181
式(AIIa)化合物与式(AIIc)化合物，在钯催化剂和碱性条件下进行Suzuki反应，得到式(AIId)化合物；式(AIId)化合物与NHR3R4在碱性条件下进行亲核取代反应，得到的化合物任选进一步脱去保护基，得到式(AII)化合物；
其中：
M1选自-B(OH)2或
Figure BDA0003066760470000182
X1选自离去基团，所述的离去基团选自卤素或-SO2Rt；
X2选自卤素；
Rt选自烷基；
环A，V，m和R1～R4的定义如式(AII)中所述。
更进一步，本发明提供一种药物组合物，所述的药物组合物含有有效剂量的式(AI)、(AII)、(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，及可药用的载体、赋形剂或它们的组合。
本发明提供一种式(AI)、(AII)、(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备SHP2变构抑制剂中的用途。
本发明还提供一种式(AI)、(AII)、(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备治疗由SHP2介导的疾病的药物中的用途，其中所述的由SHP2介导的疾病优选为癌症、癌转移、心血管疾病、免疫紊乱、纤维化或视觉紊乱；其中所述的由SHP2介导的疾病优选选自努南综合征、豹斑综合征、青少年髓单核细胞白血病、成神经细胞瘤、黑色素瘤、急性髓性白血病、乳腺癌、食道癌、肺癌、结肠癌、头癌、成神经细胞瘤、头颈的鳞状细胞癌、胃癌、间变性大细胞淋巴瘤和成胶质细胞瘤。
本发明进一步提供一种式(AI)、(AII)、(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备治疗癌症、癌转移、心血管疾病、免疫紊乱、纤维化或视觉紊乱的药物中的用途。
本发明提供一种式(AI)、(AII)、(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备治疗努南综合征、豹斑综合征、青少年髓单核细胞白血病、成神经细胞瘤、黑色素瘤、急性髓性白血病、乳腺癌、食道癌、肺癌、结肠癌、头癌、成神经细胞瘤、头颈的鳞状细胞癌、胃癌、间变性大细胞淋巴瘤和成胶质细胞瘤的药物中的用途。
本发明提供一种体外抑制SHP2受体的方法，其中包括将所述的SHP2受体与式(AI)、(AII)、(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物相接触。
本发明提供一种治疗由SHP2介导的疾病的方法，该方法包括给予需要治疗的患者有效剂量的式(AI)、(AII)、(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物；其中所述的SHP2介导的疾病优选为癌症、癌转移、心血管疾病、免疫紊乱、纤维化或视觉紊乱；其中SHP2介导的疾病更优选选自努南综合征、豹斑综合征、青少年髓单核细胞白血病、成神经细胞瘤、黑色素瘤、急性髓性白血病、乳腺癌、食道癌、肺癌、结肠癌、头癌、成神经细胞瘤、头颈的鳞状细胞癌、胃癌、间变性大细胞淋巴瘤和成胶质细胞瘤。
发明的详细说明
除非有相反陈述，否则本发明在说明书和权利要求书中所使用的部分术语定义如下：
“烷基”当作一基团或一基团的一部分时是指包括C1-C20直链或者带有支链的脂肪烃基团。优选为C1-C10烷基，更优选为C1-C6烷基。烷基基团的实施例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代或未取代的。
“烯基”指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上定义的烷基，代表性实例包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-，2-或3-丁烯基等。烯基可以是任选取代的或未取代的。
“炔基”是指含有一个碳碳三键的脂肪烃基团，可为直链也可以带有支链。优先选择的是C2-C10的炔基，更优选C2-C6炔基，最优选C2-C4炔基。炔基基团的实施例包括，但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-、2-或3-丁炔基等。炔基可以是取代或未取代的。
“环烷基”是指饱和或部分饱和的单环、稠环、桥环和螺环的碳环。优选为C3-C12环烷基，更优选为C3-C8环烷基，最优选为C3-C6环烷基。单环环烷基的实施例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等，优选环丙基、环己烯基。环烷基可以是任选取代的或未取代的。
“螺环烷基”指5至18元，两个或两个以上环状结构，且单环之间彼此共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，环内含有1个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺、双螺或多螺环烷基，优选为单螺和双螺环烷基，优选为4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元。“螺环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：螺[4.5]癸基、螺[4.4]壬基、螺[3.5]壬基、螺[2.4]庚基。
“稠环烷基”指5至18元，含有两个或两个以上环状结构彼此公用一对碳原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，优选为6至12元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。“稠环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：二环[3.1.0]己基、二环[3.2.0]庚-1-烯基、二环[3.2.0]庚基、十氢化萘基或十四氢菲基。
“桥环烷基”指5至18元，含有两个或两个以上环状结构，彼此共用两个不直接相连接碳原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，优选为6至12元，更优选为7至10元。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。“桥环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：(1s,4s)-二环[2.2.1]庚基、二环[3.2.1]辛基、(1s,5s)-二环o[3.3.1]壬基、二环[2.2.2]辛基、(1r,5r)-二环[3.3.2]癸基。
“杂环基”、“杂环”或“杂环的”在本申请中可交换使用，都是指非芳香性杂环基，其中一个或多个成环的原子是杂原子，如氧、氮、硫原子等，包括单环、多环、稠环、桥环和螺环。优选4～11元杂环，其可以包含1，2或3个选自氮、氧和/或硫中的原子。“杂环基”的实例包括但不限于吗啉基，氧杂环丁烷基，硫代吗啉基，四氢吡喃基，1，1-二氧代-硫代吗啉基，哌啶基，2-氧代-哌啶基，吡咯烷基，2-氧代-吡咯烷基，哌嗪-2-酮，8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛基、哌嗪基、
Figure BDA0003066760470000201
杂环基可以是取代或未取代的。
“螺杂环基”指5至18元，两个或两个以上环状结构，且单环之间彼此共用一个原子的多环基团，环内含有1个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)n(其中n选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为7～11元螺杂环基。“螺杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：1,7-二氧杂螺[4.5]癸基、2-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬基、7-氧杂螺[3.5]壬基、5-氧杂螺[2.4]庚基、
Figure BDA0003066760470000202
“稠杂环基”指含有两个或两个以上环状结构彼此共用一对原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)n(其中n选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为7-11元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。“稠杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：八氢吡咯并[3,4-c]吡咯基、八氢-1H-异吲哚基，3-氮杂二环[3.1.0]己基，八氢苯并[b][1,4]二噁英(dioxine)和
Figure BDA0003066760470000211
“桥杂环基”指5至14元，5至18元，含有两个或两个以上环状结构，彼此共用两个不直接相连接的原子的多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)n(其中n选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为7-11元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。“桥杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：2-氮杂二环[2.2.1]庚基，2-氮杂二环[2.2.2]辛基、2-氮杂二环[3.3.2]癸基、
Figure BDA0003066760470000212
“芳基”是指含有一个或者两个环的碳环芳香系统，其中所述环可以以稠合的方式连接在一起。术语“芳基”包括单环或双环的芳基，比如苯基、萘基、四氢萘基的芳香基团。芳基可以是取代或未取代的。
“杂芳基”是指芳香族5至6元单环或8至10元双环，其可以包含1至4个选自氮、氧和/或硫中的原子。“杂芳基”的实施例包括但不限于呋喃基，吡啶基，2-氧代-1，2-二氢吡啶基，哒嗪基，嘧啶基，吡嗪基，噻吩基，异噁唑基，噁唑基，噁二唑基，咪唑基，吡咯基，吡唑基，三唑基，四氮唑基，噻唑基，异噻唑基，1，2，3-噻二唑基，苯并间二氧杂环戊烯基，苯并噻吩基、苯并咪唑基，吲哚基，异吲哚基，1，3-二氧代-异吲哚基，喹啉基，吲唑基，苯并异噻唑基，苯并噁唑基、苯并异噁唑基、
Figure BDA0003066760470000213
Figure BDA0003066760470000221
Figure BDA0003066760470000222
杂芳基可以是取代或未取代的。
“稠合环”是指两个或两个以上环状结构彼此共用一对原子的多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但至少一个环不具有完全共轭的π电子的芳香系统，同时，至少一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中环原子中选自0个、一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)n(其中n选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。稠合环优选包括双环或三环的稠合环，其中双环稠合环优选为芳基或杂芳基与单环杂环基或单环环烷基的稠合环。优选为7至14元，更优选为8至10元。“稠合环”的实施例包括但不限于：
Figure BDA0003066760470000223
“烷氧基”是指(烷基-O-)的基团。其中，烷基见本文有关定义。C1-C6的烷氧基为优先选择。其实例包括，但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等。
“羟基”指-OH基团。
“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
“氨基”指-NH2。
“氰基”指-CN。
“硝基”指-NO2。
“苄基”和“Bn”指-CH2-苯基。
“羧基”指-C(O)OH。
“羧酸酯基”指-C(O)O-烷基或-C(O)O-环烷基，其中烷基、环烷基的定义如上所述。
“DMSO”指二甲基亚砜。
“BOC”指叔丁氧基羰基。
“TFA”指三氟醋酸。
“羟基C1-C4烷基”指羟基取代的C1-C4烷基。
“氨基C1-C4烷基”指氨基取代的C1-C4烷基。
“SEM”指(三甲基硅烷基)乙氧甲基。
“THP”指四氢吡喃基。
“离去基团(leaving group)”，或称离去基，在化学反应中从一较大分子中脱离的原子或官能基，是亲核取代反应与消除反应中应用的术语。在亲核取代反应中，被亲核试剂进攻的反应物称为底物(substrate)，而从底物分子中带着一对电子断裂出去的原子或原子团称为离去基团。易接受电子、承受负电荷能力强的基团是好的离去基团。当离去基团共轭酸的pKa越小，离去基团越容易从其他分子中脱离。原因是因为当其共轭酸的pKa越小，相应离去基团不需和其他原子结合，以阴离子(或电中性离去基团)的形式存在的趋势也就增强。常见的离去基团包括但不限于卤素、甲磺酰基、-OTs或-OH。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
本说明书所述的“取代”或“取代的”，如无特别指出，均是指基团可被一个或多个选自以下的基团取代：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、疏基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基、羧酸酯基、＝O、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-SO2R5、-NR6R7、-SO2NR6R7、-NHC(＝NH)NH2、-NHSO2R5或-C(O)NR6R7的取代基所取代；
R5、R6和R7各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基或杂环基，其中所述烷基、环烷基或杂环基任选进一步被一个或多个选自羟基、氨基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-SO2R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
或者，R6和R7与其相连接的N原子一起形成3～8元杂环基，其中所述的3～8元杂环内含有一个或多个N、O、S或SO2原子，并且3～8元杂环上进一步被一个或多个选自羟基、卤素、氨基、烷基或烷氧基的取代基所取代；
R8、R9和R10各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧基或羧酸酯基的取代基所取代。
“可药用的盐”是指上述化合物能保持原有生物活性并且适合于医药用途的某些盐类。式(I)所表示的化合物的可药用的盐可以为金属盐、与合适的酸形成的胺盐。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
本发明化合物的合成方法
为了完成本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供了一种式(AII)化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，所述方法包括：
Figure BDA0003066760470000241
式(AIIa)化合物与NHR3R4在碱性条件下进行亲核取代反应，得到式(Ib)化合物；式(AIIb)化合物与式(AIIc)化合物，在钯催化剂和碱性条件下进行Suzuki反应，得到的化合物任选进一步脱去保护基，得到式(AII)化合物；
其中：
M1选自-B(OH)2或
Figure BDA0003066760470000242
X1选自离去基团，所述的离去基团选自卤素或-SO2Rt；
X2选自卤素；
Rt选自烷基；
环A，V，m和R1～R4的定义如式(AII)中所述。
更进一步，本发明提供一种制备式(AII)化合物或其立体异构体、互变异构体的方法，该方法包括：
Figure BDA0003066760470000251
式(AIIa)化合物与式(AIIc)化合物，在钯催化剂和碱性条件下进行Suzuki反应，得到式(AIId)化合物；式(AIId)化合物与NHR3R4在碱性条件下进行亲核取代反应，得到的化合物任选进一步脱去保护基，得到式(AII)化合物；
其中：
M1选自-B(OH)2或
Figure BDA0003066760470000252
X1选自离去基团，所述的离去基团选自卤素或-SO2Rt；
X2选自卤素；
Rt选自烷基；
环A，V，m和R1～R4的定义如式(AII)中所述。
本发明提供了一种式(I)化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，所述方法包括：
Figure BDA0003066760470000253
式(Ia)化合物与NHR3R4在碱性条件下进行亲核取代反应，得到式(Ib)化合物；式(Ib)化合物与式(AIIc)化合物，在钯催化剂和碱性条件下进行Suzuki反应，得到的化合物任选进一步脱去保护基，得到式(Ic)化合物；式(Ic)化合物水解，得到式(I)化合物；
其中：
M1选自-B(OH)2或
Figure BDA0003066760470000254
X1选自离去基团，所述的离去基团选自卤素或-SO2Rt；
X2选自卤素；
Rt选自烷基；
环A，V，m，R1，R3和R4定义如式(I)中所述。
本发明提供了一种式(I)化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，所述方法包括：
Figure BDA0003066760470000261
式(Ia)化合物与式(AIIc)化合物，在钯催化剂和碱性条件下进行Suzuki反应，得到式(Id)化合物；式(Id)化合物与NHR3R4在碱性条件下进行亲核取代反应，得到式(Ic)化合物；式(Ic)化合物水解，得到式(I)化合物；
其中：
M1选自-B(OH)2或
Figure BDA0003066760470000262
X1选自离去基团，所述的离去基团选自卤素或-SO2Rt；
X2选自卤素；
Rt选自烷基；
环A，V，m，R1，R3和R4定义如式(I)中所述。
具体实施方式
以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。
实施例
实施例给出了式(I)所表示的代表性化合物的制备及相关结构鉴定数据。必须说明，下述实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。1H NMR图谱是用Bruker仪器(400MHz)测定而得，化学位移用ppm表示。使用四甲基硅烷内标准(0.00ppm)。1H NMR的表示方法：s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，m＝多重峰，br＝变宽的，dd＝双重峰的双重峰，dt＝三重峰的双重峰。若提供偶合常数时，其单位为Hz。
质谱是用LC/MS仪测定得到，离子化方式可为ESI或APCI。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
在下列实施例中，除非另有指明，所有温度为摄氏温度，除非另有指明，各种起始原料和试剂来自市售或者是根据已知的方法合成，市售原料和试剂均不经进一步纯化直接使用，除非另有指明，市售厂家包括但不限于Aldrich Chemical Company，ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organics，广赞化工科技有限公司和景颜化工科技有限公司等处购买。
Methanol-d4：氘代甲醇。
CDCl3：氘代氯仿。
DMSO-d6：氘代二甲基亚砜。
氩气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气气球。
实施例中无特殊说明，反应中的溶液是指水溶液。
对化合物进行纯化，采用硅胶柱层析洗脱剂体系和薄层色谱法，其中洗脱剂体系选自：A：石油醚和乙酸乙酯体系；B：二氯甲烷和甲醇体系；C：二氯甲烷：乙酸乙酯；其中溶剂的体积比根据化合物的极性不同而不同，也可以加入少量的酸性或碱性试剂进行调节，如醋酸或三乙胺等。
实施例1
6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000271
第一步
6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将氰化四丁基铵1a(2.81g,10.48mmol)、4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶1b(1.8g,9.52mmol)和三乙烯二胺(213.65mg,1.90mmol)依次加入到二氯甲烷(30mL)中，室温条件下持续搅拌2小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：B体系)，向体系中加入少量三乙胺，得到6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1c(741mg)，产率：43.33％。
MS m/z(ESI):179.9[M+1]
第二步
3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1c(200mg,1.11mmol)，N-溴代琥珀酰亚胺(218.06mg,1.23mmol)依次加入到乙腈(4mL)中，加热至90℃，反应4小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：B体系)，得到3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(280mg)，产率：97.26％。
MS m/z(ESI):257.7[M+1]
第三步
(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(150mg,580.35μmol)、(4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯1e(186.56mg,870.53μmol)和二异丙基乙胺(375.03mg,2.90mmol,506.79μL)加入N,N-二甲基乙酰胺中(5mL)，升温至80℃，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯1f(200mg)，产率：78.99％。
MS m/z(ESI):436.1[M+1]
第四步
(1-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯1f(200mg,458.39μmol)、(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(336.74mg,1.38mmol，根据专利WO2019167000自制而得)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(76.77mg,91.68μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(85.56mg,183.36μmol)和磷酸钾(292.05mg,1.38mmol)加入到1,4-二氧六环(2.5mL)和水(0.5mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至110℃，反应16小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯1h(58mg)，产率：22.74％。MS m/z(ESI):556.2[M+1]
第五步
6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将三氟乙酸(0.5mL)加入到(1-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯1h(58mg,104.23μmol)的二氯甲烷(2.5mL)溶液中，继续反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1i(47.56mg)，产率：100％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):456.1[M+1]
第六步
6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将5M氢氧化钠溶液(0.25mL)加入到6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1i(47.56mg,104.22μmol)的甲醇溶液中(2mL)，随后加入30％的双氧水(0.5mL)，室温搅拌0.5小时，反应结束后，加入三氟醋酸调节pH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺1(20mg)，产率：31.85％。
MS m/z(ESI):474.1[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.05(s,1H),7.97(s,3H),7.53-7.61(m,2H),7.29(d,J＝8.8Hz,1H),4.44(s,2H),4.16(s,3H),1.74(t,J＝5.8Hz,4H),1.41(s,3H),1.24(d,J＝3.7Hz,2H).
实施例2
2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000291
第一步
2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将2,4-二氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶2a(4g,21.28mmol)，四三苯基膦钯(2.46g,2.13mmol)和氰化锌(5.00g,42.55mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(40mL)中，氩气置换，加热110℃，搅拌4小时。反应结束后，加入30mL水，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈2b(3.79g)，产率：99.76％。
MS m/z(ESI):179.1[M+1]
第二步
5-溴-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将N-溴代丁二酰亚胺(2.32g,13.03mmol)加入2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈2b(1.79g,10.02mmol)的乙腈溶液中(30mL)，加热至95℃，反应2小时，反应结束后，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到5-溴-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈2c(790mg)，产率：30.61％。
MS m/z(ESI):256.9[M+1]第三步
(1-(5-溴-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯1e(262.18mg,1.22mmol)、二异丙基乙胺(451.76mg,3.50mmol)和5-溴-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈2c(300mg,1.17mmol)加到N,N-二甲基乙酰胺(3mL)中，加热到80℃，搅拌1小时。反应结束后，加入乙酸乙酯(30mL)，依次以饱和氯化钠溶液(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(5-溴-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯2d(120mg)，产率：23.66％。
MS m/z(ESI):435.1[M+1]
第四步
(1-(5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(1-(5-溴-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯2d(120mg,275.66μmol)、(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(202.50mg,826.98μmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(46.17mg,55.13μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(51.45mg,110.26μmol)和磷酸钾(175.63mg,826.98μmol)加入到1,4-二氧六环(2.5mL)和水(0.5mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至110℃，反应16小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯2e(23mg)，产率：15.02％。
MS m/z(ESI):554.9[M+1]
第五步
2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将三氟乙酸(0.5mL)加入到(1-(5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯2e(23mg,41.41μmol)的二氯甲烷溶液中(2.5mL)，继续反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈2f(18mg)，产率：95.47％，反应未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):455.1[M+1]
第六步
2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
将5M氢氧化钠溶液(0.25mL)加入到2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈2f(18mg,39.53μmol)的甲醇(2mL)溶液中，随后加入30％双氧水(0.5mL)，室温搅拌0.5小时，反应结束后，加入三氟醋酸调节pH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺2(6mg)，产率：24.94％。
MS m/z(ESI):473.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.72-11.88(m,1H),8.01(s,2H),7.86(s,1H),7.49(d,J＝8.8Hz,1H),7.35(s,1H),7.29(d,J＝2.3Hz,1H),7.22(d,J＝8.8Hz,1H),4.39(dt,J＝14.5,4.7Hz,2H),4.14(s,3H),3.43(ddd,J＝13.6,8.3,4.8Hz,2H),1.74(dt,J＝9.7,5.0Hz,4H),1.40(s,3H).
实施例3
6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000311
第一步
5-溴-4-氯-1-甲基-吲唑
将5-溴-4-氯-1H-吲唑3a(2g,8.64mmol)加入到氢化钠(247.20mg,9.50mmol)的四氢呋喃中(20mL)，反应15分钟后，低温下加入碘甲烷(1.84g,12.96mmol,806.82μL)，0℃继续反应2小时。反应液加入1N稀盐酸(6mL)，以乙酸乙酯(30mL×2)萃取，分去水层，合并的有机相依次以饱和氯化钠溶液(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到5-溴-4-氯-1-甲基-吲唑3b(850mg)，产率：40.07％。
MS m/z(ESI):245.0[M+1]
第二步
5-溴-3,4-二氯-1-甲基-吲唑
将5-溴-4-氯-1-甲基-吲唑3b(980mg,3.99mmol)和氯代丁二酰亚胺(639.63mg,4.79mmol)加到N,N-二甲基甲酰胺中(15mL)，室温搅拌过夜。反应完全后，加入20mL水，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到5-溴-3,4-二氯-1-甲基-吲唑3c(1g)，产率：89.49％。MS m/z(ESI):278.9[M+1]
第三步
3,4-二氯-1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吲唑
将5-溴-3,4-二氯-1-甲基-吲唑3c(400mg,1.43mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(471.69mg,1.86mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(209.10mg,285.77μmol)和乙酸钾(420.68mg,4.29mmol)溶于二氧六环中(6mL)，置换氩气3次，升温至100℃，反应2小时。反应结束后，加入10mL水，以乙酸乙酯(30mL)萃取，分去水层，合并的有机相依次以饱和氯化钠溶液(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到3,4-二氯-1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吲唑3d(400mg)，产率：85.61％。MS m/z(ESI):327.1[M+1]
第四步
(1-(4-氰基-3-(3,4-二氯-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯1f(150mg,343.80μmol)、3,4-二氯-1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吲唑3d(337.28mg,1.03mmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(57.58mg,68.76μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(64.17mg,137.52μmol)和磷酸钾(219.04mg,1.03mmol)加入到1,4-二氧六环(6mL)和水(1mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至110℃，反应16小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(4-氰基-3-(3,4-二氯-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯3e(80mg)，产率：41.82％。
MS m/z(ESI):556.1[M+1]
第五步
6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将三氟乙酸(0.5mL)加入到(1-(4-氰基-3-(3,4-二氯-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯3e(80mg,143.77μmol)的二氯甲烷(2.5mL)溶液中，继续反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈3f(65.61mg)，产率：100％，反应未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):456.1[M+1]
第六步
6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将5M氢氧化钠溶液(0.25mL)加入到6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈3f(65mg,142.44μmol)的甲醇溶液中(2mL)，随后加入30％双氧水(0.5mL)，室温搅拌0.5小时，反应结束后，加入三氟醋酸调节pH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺3(30mg)，产率：35.02％。
MS m/z(ESI):474.1[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.55(s,1H),8.08(s,1H),7.96(s,3H),7.71(d,J＝8.7Hz,1H),7.61(s,1H),7.48(d,J＝8.7Hz,1H),4.45(s,2H),4.08(s,3H),1.99(s,1H),1.74(t,J＝5.8Hz,4H),1.41(s,3H).
实施例4
6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000331
第一步
(R)-N-((3S,4S)-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(150mg,580.35μmol)、(R)-2-甲基-N-((3S,4S)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)丙烷-2-亚磺酰胺4a(238.89mg,870.53μmol，根据专利CN110156786自制而得)和二异丙基乙胺(375.03mg,2.90mmol,506.79μL)加入N,N-二甲基乙酰胺(5mL)，升温至80℃，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到(R)-N-((3S,4S)-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺4b(200mg)，产率：69.42％。MS m/z(ESI):496.1[M+1]
第二步
(R)-N-((3S,4S)-8-(4-氰基-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将(R)-N-((3S,4S)-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺4b(100mg,201.44μmol)、(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(123.32mg,503.60μmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(33.74mg,40.29μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(37.60mg,80.58μmol)和磷酸钾(128.34mg,604.32μmol)加入到1,4-二氧六环(2.5mL)和水(0.5mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至110℃，反应16小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到(R)-N-((3S,4S)-8-(4-氰基-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺4c(36mg)，产率：28.99％。
MS m/z(ESI):616.2[M+1]
第三步
6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
室温下，向(R)-N-((3S,4S)-8-(4-氰基-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺4c(36mg,58.39μmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中，慢慢滴加4M盐酸甲醇溶液(4M,58.39μL)，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈4d(29mg)，产率：96.93％，反应未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):512.2[M+1]
第四步
6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将5M氢氧化钠溶液(0.15mL)加入到6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈4d(29mg,56.60μmol)的甲醇溶液中(2mL)，随后加入30％双氧水(0.3mL)，室温搅拌0.5小时，反应结束后，加入三氟醋酸调节pH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺4(10mg)，产率：27.21％。
MS m/z(ESI):530.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.04(s,1H),7.82-7.93(m,3H),7.53-7.61(m,2H),7.29(d,J＝8.8Hz,1H),4.60(s,3H),4.19-4.25(m,1H),4.16(s,3H),3.93(d,J＝9.1Hz,1H),3.73(d,J＝9.0Hz,1H),3.20(d,J＝11.4Hz,2H),1.74(d,J＝13.4Hz,4H),1.22(d,J＝6.5Hz,3H).
实施例5
(S)-6-(4-氨基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000351
第一步
(R)-N-((S)-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(150mg,580.35μmol)、(R)-2-甲基-N-((S)-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)丙烷-2-亚磺酰胺5a(196.46mg,754.46μmol，根据专利CN 110156786自制而得)和二异丙基乙胺(375.03mg,2.90mmol,506.79μL)加到N,N-二甲基乙酰胺中(1.49mL)，升温至80℃，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到(R)-N-((S)-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺5b(190mg)，产率：67.87％。
MS m/z(ESI):482.0[M+1]
第二步
(R)-N-((S)-8-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将(R)-N-((S)-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺5b(190mg,393.87μmol)、(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(192.89mg,787.73μmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(65.96mg,78.77μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(73.52mg,157.55μmol)和磷酸钾(250.94mg,1.18mmol)加入到1,4-二氧六环(2.5mL)和水(0.5mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至110℃，反应16小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到(R)-N-((S)-8-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺5c(40mg)，产率：16.85％。
MS m/z(ESI):601.9[M+1]
第三步
(S)-6-(4-氨基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
室温下，向(R)-N-((S)-8-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺5c(40mg,66.39μmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中，慢慢滴加盐酸甲醇溶液(4M,66.39μL)，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到(S)-6-(4-氨基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈5d(33mg)，产率：99.74％，反应未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):498.2[M+1]
第四步
(S)-6-(4-氨基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将5M氢氧化钠溶液(0.15mL)加入到(S)-6-(4-氨基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈5d(33mg,66.22μmol)的甲醇(2mL)溶液中，随后加入30％双氧水(0.3mL)，室温搅拌0.5小时，反应结束后，加入三氟醋酸调节pH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-6-(4-氨基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺5(8.5mg)，产率：20％。
MS m/z(ESI):516.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.50(s,1H),8.04(s,3H),7.57(s,1H),7.28(s,1H),6.86(s,1H),5.32(s,1H),4.52(s,2H),4.16(s,2H),3.61-3.88(m,4H),1.98(s,1H),1.63(s,3H),1.24(s,3H).
实施例6
(R)-6-(1-氨基-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000371
第一步
(R)-N-((R)-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(150mg,580.35μmol)、(R)-2-甲基-N-((R)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-基)丙烷-2-亚磺酰胺6a(209.97mg,812.50μmol，根据专利CN110156786自制而得)和二异丙基乙胺(375.03mg,2.90mmol)加到N,N-二甲基乙酰胺(3mL)中，升温至80℃，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到(R)-N-((R)-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺6b(180mg)，产率：64.56％。
MS m/z(ESI):479.9[M+1]
第二步
(R)-N-((R)-8-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将(R)-N-((R)-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺6b(180mg,374.67μmol)、(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(229.36mg,936.67μmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(62.75mg,74.93μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(69.93mg,149.87μmol)和磷酸钾(238.71mg,1.12mmol)加入到1,4-二氧六环(2.5mL)和水(0.5mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至110℃，反应16小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到(R)-N-((R)-8-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺6c(70mg)，产率：31.11％。
MS m/z(ESI):600.2[M+1]
第三步(R)-6-(1-氨基-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
室温下，向(R)-N-((R)-8-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂螺[4.5]癸-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺6c(70mg,116.56μmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中，慢慢滴加盐酸甲醇溶液(4M,116.56μL)，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到(R)-6-(1-氨基-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈6d(57.86mg)，产率：100％，反应未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):496.2[M+1]
第四步
(R)-6-(1-氨基-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将5M氢氧化钠(0.25mL)加入到(R)-6-(1-氨基-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈6d(57.86mg,116.56μmol)的甲醇(2.5mL)溶液中，随后加入30％双氧水(0.5mL)，室温搅拌0.5小时，反应结束后，加入三氟醋酸调节pH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mmI.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(R)-6-(1-氨基-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺6(19mg)，产率：25.72％。
MS m/z(ESI):514.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.45(s,1H),8.00(s,2H),7.21-7.32(m,2H),4.67(s,2H),4.17(s,3H),3.10-3.22(m,5H),2.06(d,J＝7.8Hz,1H),1.85(d,J＝11.2Hz,1H),1.59-1.79(m,5H),1.34-1.53(m,3H).
实施例7
(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000381
Figure BDA0003066760470000391
第一步
(R)-N-((S)-1'-(5-溴-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将(R)-N-((S)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺7a(301.5mg,983.80μmol，根据专利WO 2020156242自制而得)、5-溴-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈2c(253.30mg,983.80μmol)和N,N-二异丙基乙胺(635.73mg,4.92mmol)加到N,N-二甲基乙酰胺(5mL)中，加热至130℃，反应过夜。反应结束后，加入20mL水,乙酸乙酯(20mL×3)萃取，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到(R)-N-((S)-1'-(5-溴-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺7b(120mg)，产率：23.12％。MS m/z(ESI):527.1[M+1]
第二步
(R)-N-((S)-1'-(5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将(R)-N-((S)-1'-(5-溴-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺7b(120mg,227.50μmol)、(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(139.27mg,568.74μmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(38.10mg,45.50μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(42.46mg,91.00μmol)和磷酸钾(144.87mg,682.49μmol)加入到1,4-二氧六环(3mL)和水(0.3mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至130℃，反应过夜。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到(R)-N-((S)-1'-(5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺7c(20mg)，产率：13.57％。
MS m/z(ESI):647.2[M+1]
第三步
(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将浓盐酸(4.50mg,123.53μmol)加入(R)-N-((S)-1'-(5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺7c(20mg,30.88μmol)的二氯甲烷溶液中(1mL)，室温搅拌2小时。反应结束后，减压浓缩，得到(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈7d(16.7mg)，产率：99.51％，反应未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):543.2[M+1]
第四步(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
将5M氢氧化钠溶液(0.2mL)加入(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈7d(16mg,29.44μmol)的甲醇(2mL)溶液中，加入30％双氧水(0.5mL)，室温搅拌1.5小时，反应结束后，加入三氟醋酸调节pH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mmI.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺7(3.15mg)，产率：14.9％。
MS m/z(ESI):561.2[M+1]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.24-7.68(m,7H),7.17(s,1H),4.69(d,J＝13.7Hz,1H),4.37(s,1H),4.15(s,3H),3.37(t,J＝12.7Hz,2H),3.21(s,2H),1.66-1.93(m,3H),1.61(d,J＝13.1Hz,1H),1.29(s,1H).
实施例8
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000401
第一步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将4-苯基哌啶-4-胺8a(212mg,1.20mmol)、5-溴-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈2c(309.69mg,1.20mmol)和N,N-二异丙基乙胺(777.24mg,6.01mmol)加到N,N-二甲基乙酰胺中(6mL)，加热至130℃，反应2小时，反应结束后，减压浓缩，C18反相色谱柱分离(C18分离柱20-45μm；流动相A：H2O，流动相B：CH3CN)，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈8b(150mg)，产率：31.57％。
MS m/z(ESI):380.0[M-16]
第二步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈8b(150mg,377.58μmol)、(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(231.14mg,943.94μmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(63.23mg,75.52μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(70.48mg,151.03μmol)和磷酸钾(400.93mg,1.89mmol)加入到1,4-二氧六环(4mL)和水(0.4mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至130℃，反应4小时。反应结束后，减压浓缩，C18反相色谱柱分离(C18分离柱20-45μm；流动相A：H2O，流动相B：CH3CN)，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈8c(80mg)，产率：40.95％。
MS m/z(ESI):500.1[M-16]
第三步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
将2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈8c(80mg,108.23μmol)、5M氢氧化钠溶液(0.5mL)和30％双氧水(0.5mL)加到甲醇中(1.5mL)，室温搅拌1小时，反应结束后，加入三氟醋酸调节pH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺8(5.34mg)，产率：7.6％。
MS m/z(ESI):535.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.34(s,3H),7.85(d,J＝2.5Hz,1H),7.71(dd,J＝7.5,1.8Hz,2H),7.44-7.59(m,4H),7.35(d,J＝2.5Hz,1H),7.30(d,J＝2.3Hz,1H),7.22(d,J＝8.8Hz,1H),4.33(d,J＝13.5Hz,2H),4.14(s,3H),3.41(s,2H),2.51-2.61(m,2H),2.09(td,J＝10.9,10.1,5.5Hz,2H).
实施例9
6-(4-氨基-3-氟-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000421
第一步
6-(4-氨基-3-氟-4-苯基哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
向3-氟-4-苯基哌啶-4-胺9a(110mg,566.29μmol)的N,N-二甲基乙酰胺(2mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(219.56mg,1.70mmol)，室温搅拌5分钟后，加入3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(146.36mg,566.29μmol)，反应升温至90℃，搅拌1小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-3-氟-4-苯基哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈9b(170mg)，产率：72.12％。
MS m/z(ESI):416.0[M+1]
第二步
6-(4-氨基-3-氟-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-3-氟-4-苯基哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈9b(100mg,240.24μmol)、(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(176.48mg,720.72μmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(40.23mg,48.05μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(44.84mg,96.10μmol)和磷酸钾(152.98mg,720.72μmol)加入到1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至130℃，反应20小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-3-氟-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈9c(40mg)，产率：31.04％。
MS m/z(ESI):518.8[M-16]
第三步
6-(4-氨基-3-氟-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
向氢氧化钠溶液(5M,0.5mL)和6-(4-氨基-3-氟-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈9c(60mg,124.39μmol)的甲醇(2mL)中，缓慢滴加30％双氧水(0.5mL)，室温反应30分钟。反应结束后，加入三氟醋酸调节pH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-3-氟-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺9(30mg)，产率：39.25％。
MS m/z(ESI):553.8[M+1]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.76(dt,J＝6.4,1.2Hz,2H),7.51-7.67(m,4H),7.36(d,J＝8.8Hz,1H),5.67(d,J＝47.9Hz,1H),5.25(s,1H),4.98(dd,J＝12.6,6.1Hz,1H),4.18(s,3H),3.33-3.47(m,2H),2.80(d,J＝14.2Hz,1H),2.46(t,J＝12.6Hz,1H),1.92(d,J＝11.9Hz,2H),1.77(d,J＝8.5Hz,2H).
实施例10
6-(4-氨基-4-环丙基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000431
第一步
6-(4-氨基-4-环丙基哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(400mg,1.55mmol)、4-环丙基哌啶-4-胺10a(600mg,4.28mmol)和N,N-二异丙基乙胺(600.04mg,4.64mmol)加到N,N-二甲基乙酰胺(2.5mL)，升至100℃，反应1小时，反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-4-环丙基哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈10b(560mg)，产率：99.9％。
MS m/z(ESI):345.0[M-16]
第二步
6-(4-氨基-4-环丙基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-环丙基哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈10b(70mg,193.25μmol)、(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(189.28mg,773.00μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(32.36mg,38.65μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(36.02mg,77.30μmol)和磷酸钾(204.84mg,966.24μmol)加到1,4-二氧六环(2mL)和水(0.2mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至130℃，反应18小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-4-环丙基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈10c(28mg)，产率：30.04％。
MS m/z(ESI):464.9[M-16]
第三步
6-(4-氨基-4-环丙基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
向5M氢氧化钠溶液(0.5mL)和6-(4-氨基-4-环丙基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈10c(28mg,58.05μmol)的甲醇(3mL)溶液中，慢慢滴加30％双氧水(0.5mL)，室温反应30分钟。反应结束后，加入三氟醋酸调节pH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-环丙基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺10(11mg)，产率：39.25％。
MS m/z(ESI):499.9[M+1]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.70-7.78(m,2H),7.52-7.65(m,4H),7.32-7.41(m,2H),5.56-5.75(m,1H),5.25(s,1H),4.92-5.01(m,1H),3.32-3.43(m,2H),2.80(d,J＝14.2Hz,1H),2.38-2.52(m,1H).
实施例11
6-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000441
第一步
6-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
向(3R,4R)-3-氟哌啶-4-胺11a(270mg,2.29mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(3mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(450.04mg,3.48mmol)，室温搅拌10分钟后，加入3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(300mg,1.16mmol)，反应升温至90℃，搅拌1小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈11b(390mg)，产率：98.78％。
MS m/z(ESI):339.9[M+1]
第二步
6-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈11b(200mg,587.97μmol)、(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(359.94mg,1.47mmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(98.47mg,117.59μmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(109.60mg,235.19μmol)和磷酸钾(623.25mg,2.94mmol)加到1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至120℃，反应18小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈11c(150mg)，产率：55.42％。,
MS m/z(ESI):459.9[M+1]
第三步
6-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
向氢氧化钠溶液(5M,0.5mL)和6-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈11c(150mg,325.88μmol)的甲醇中(3mL)，慢慢滴加30％双氧水(1mL)，室温反应30分钟。反应结束后，加入三氟醋酸调节pH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺11(15mg)，产率：7.26％。
MS m/z(ESI):477.9[M+1]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.57(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),7.36(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),5.41(d,J＝13.1Hz,1H),5.09(d,J＝14.3Hz,1H),4.47-4.68(m,1H),4.18(d,J＝2.3Hz,3H),3.62(dt,J＝14.3,7.0Hz,1H),3.03-3.19(m,2H),2.23(d,J＝13.4Hz,1H),1.64-1.81(m,1H).
实施例12
(S)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000451
Figure BDA0003066760470000461
第一步
(R)-N-((S)-1'-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
向(R)-N-((S)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺7a(306mg,998.48μmol)的N,N-二甲基乙酰胺(3mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(107.54mg,832.07μmol)，室温搅拌10分钟后，加入3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(215.06mg,832.07μmol)，反应升温至90℃，搅拌1小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到(R)-N-((S)-1'-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺12a(280mg)，产率：63.68％。
MS m/z(ESI):528.1[M+1]
第二步(R)-N-((S)-1'-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将(R)-N-((S)-1'-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺12a(280mg,529.83μmol)、(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(324.35mg,1.32mmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(98.90mg,211.93μmol)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(88.73mg,105.97μmol)和磷酸钾(337.40mg,1.59mmol)加到1,4-二氧六环(10mL)和水(2mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至130℃，反应18小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(洗脱剂：A体系)，得到(R)-N-((S)-1'-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺12b(190mg)，产率：55.29％。
MS m/z(ESI):647.8[M+1]
第三步
(S)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-
d]嘧啶-4-腈
向(R)-N-((S)-1'-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺12b(190mg,292.94μmol)的二氯甲烷中(4mL)，慢慢滴加盐酸二氧六环溶液(4M,366.17μL)，反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到(S)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈12c(159mg)，产率：99.7％，反应未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):527.1[M-16]
第四步(S)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
向氢氧化钠溶液(5M,292.04μL)和(S)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈12c(159mg,292.04μmol)的甲醇中(4mL)，慢慢滴加30％双氧水(1mL)，室温反应1小时。反应结束后，加入三氟醋酸调节pH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到(S)-6-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺12(38mg)，产率：19.23％。
MS m/z(ESI):561.9[M+1]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.56(dd,J＝8.9,3.2Hz,1H),7.50(d,J＝7.5Hz,1H),7.29-7.45(m,4H),4.75-4.89(m,2H),4.40(s,1H),4.18(d,J＝2.8Hz,3H),3.35-3.51(m,2H),3.23(s,2H),1.57-1.89(m,4H).
实施例13
6-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000471
第一步
6-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将二异丙基乙胺(375mg,2.9mmol)和4-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-胺13a加入到3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(250mg,967μmol)的N-甲基吡咯烷酮(3mL)溶液中，加热至100℃搅拌1小时。反应完全后，C18反相色谱柱分离(C18分离柱20-45μm；流动相A：H2O，流动相B：CH3CN)，得到产物6-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈13b(300mg)，产率：80.3％。
MS m/z(ESI):385.9[M+1]
第二步
6-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈13b(130mg,337μmol)，(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(329.7mg,1.35mmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(56.4mg,67μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(62.8mg,135μmol)和磷酸钾(214.4mg,1.01mmol)加入到1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)的混合溶液中。氩气置换三次，100℃加热反应过夜。反应完全后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，萃取分层，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈13c(100mg)，产率：58.7％。
MS m/z(ESI):505.9[M+1]
第三步
6-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将氢氧化钾(22.2mg,395μmol)和6-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈13c(100mg,198μmol)加入到二甲亚砜(2mL)溶液中，缓慢滴加双氧水(30％,1mL)到反应液中，滴加完毕后搅拌1小时，反应完全后，滴加三氟乙酸调节PH至3～4，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺13(30mg)，产率：23.6％。
MS m/z(ESI):524.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(br,3H),8.06(s,1H),7.58(d,J＝8.8Hz,1H),7.54(s,1H),7.29(d,J＝8.8Hz,1H),6.19-6.66(m,1H),4.19-4.44(m,2H),4.16(s,3H),3.67-3.93(m,2H),2.38-2.49(m,2H),1.87-2.02(m,2H),1.71-1.86(m,2H).
实施例14
6-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000491
第一步
6-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈13b(120mg,311μmol)，7-氯-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯并[d]噻唑14a(144.3mg,466μmol，根据专利WO 2019167000自制而得)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(52.0mg,62μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(58.0mg,124μmol)和磷酸钾(197.9mg,0.93mmol)加入到1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)的混合溶液中。氩气置换三次，100℃加热反应过夜。反应完全后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，萃取分液，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈14b(55mg)，产率：36.2％。
MS m/z(ESI):490.9[M+1]
第二步
6-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将氢氧化钾(12.6mg,225μmol)和6-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈14b(55mg,112μmol)加入到二甲亚砜(1mL)溶液中，缓慢滴加双氧水(30％,0.5mL)到反应液中，滴加完毕后搅拌1小时，反应完全后，滴加三氟乙酸调节PH至3～4，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺14(22mg)，产率：31.1％。
MS m/z(ESI):508.9[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(br,3H),8.10(s,1H),7.90(d,J＝8.3Hz,1H),7.58(s,1H),7.54(d,J＝8.3Hz,1H),6.22-6.62(m,1H),4.12-4.47(m,2H),3.71-3.90(m,2H),2.87(s,3H),2.39-2.49(m,2H),1.87-2.03(m,2H),1.70-1.86(m,2H).
实施例15
6-((1R,3r,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000501
第一步
((1R,3r,5S)-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(656.82mg,2.54mmol)，((1R,3r,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯15a(400mg,1.77mmol)和N,N-二异丙基乙胺(456.85mg,3.53mmol)加入到N,N-二甲基乙酰胺(3mL)中，加热至100℃，反应1小时。反应结束后，用乙酸乙酯与水进行萃取，合并有机相，以饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步纯化(洗脱剂：A体系)，得到((1R,3r,5S)-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯15b(696mg)，产率：87.84％。MS m/z(ESI):447.9[M+1]
第二步
((1R,3r,5S)-8-(3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯
将7-氯-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯并[d]噻唑14a(207.19mg,669.17μmol)，((1R,3r,5S)-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯15b(150mg,334.59μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(56.03mg,66.92μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(62.45mg,133.83μmol)和磷酸钾(142.04mg,669.17μmol)加入到1,4-二氧六环(2mL)和水(0.2mL)的混合溶液中。氩气置换三次，110℃加热反应过夜。反应完全后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，萃取分液，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步纯化(洗脱剂：A体系)，得到((1R,3r,5S)-8-(3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯15c(88mg)，产率：47.73％。
MS m/z(ESI):550.9[M-16]
第三步
6-((1R,3r,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将((1R,3r,5S)-8-(3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯15c(138mg,250.43μmol)的二氯甲烷溶液(1.5mL)，加入三氟乙酸(0.5mL)，室温反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到6-((1R,3r,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈15d(110mg)，产率：97.41％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):450.9[M-16]
第四步
6-((1R,3r,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-((1R,3r,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈15d(110mg,243.93μmol)和氢氧化钠溶液(1M,975.73μL)加入到甲醇中(2mL)，缓慢滴加30％双氧水(1mL)，室温反应1小时，反应完全后，滴加三氟乙酸调节PH至3～4，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mmI.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-((1R,3r,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺15(6.3mg)，产率：4.3％。
MS m/z(ESI):469.1[M-16]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.89(d,J＝8.0Hz,1H),7.58(d,J＝8.0Hz,1H),5.02(s,2H),3.84-3.75Hz(m,1H),2.88(s,3H),2.14-2.28(m,2H),1.98-2.10(m,2H),1.93(d,J＝8.0Hz,4H).
实施例16
6-(4-氨基-4-(氟(苯基)甲基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000521
第一步
4-甲酰胺-4-(氟(苯基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-氰基-4-(氟(苯基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯16a(0.92g,2.89mmol，根据专利WO2010068881自制而得)，氢氧化钾(324.2mg,5.78mmol)依次加入到N,N-二甲基亚砜(10mL)中，水浴条件下逐滴加入双氧水(15mL)，室温反应过夜。反应结束后，将反应液加入少量水搅拌，有白色固体析出，过滤，得到4-甲酰胺-4-(氟(苯基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯16b(312mg)，产率：32.1％。
MS m/z(ESI):261.1[M-75]
第二步
4-胺-4-(氟(苯基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-甲酰胺-4-(氟(苯基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯16b(312mg,927.47μmol)，氢氧化钾(234.18mg,4.17mmol)依次加入到乙腈(5mL)和水(5mL)的混合溶液中，加入1,3-二溴-5,5-二甲基海因(132.59mg,463.73μmol),室温反应3小时，反应完全，反应液乙酸乙酯与水进行萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到4-胺-4-(氟(苯基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯16c(167mg)，产率：58.39％。
MS m/z(ESI):253.0[M-55]
第三步
4-(氟(苯基)甲基)哌啶-4-胺
将4-胺-4-(氟(苯基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯16c(167mg,541.52μmol)和三氟乙酸(0.5mL)加入到二氯甲烷(1.5mL)中，室温反应1小时，反应完全，加入少量水淬灭，加入饱和碳酸氢钠溶液，乙酸乙酯进行萃取，合并有机相无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到4-(氟(苯基)甲基)哌啶-4-胺16d(109mg)，产率：96.64％。
MS m/z(ESI):209.1[M+1]
第四步
6-(4-氨基-4-(氟(苯基)甲基)哌啶-1-基)-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将3-碘-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈16e(159.86mg,523.35μmol)，4-(氟(苯基)甲基)哌啶-4-胺16d(109mg,523.35μmol)，N,N-二异丙基乙胺(202.91mg,1.57mmol)依次加入到N,N-二甲基乙酰胺(2mL)中，加热至100℃，反应1小时。反应完全，以乙酸乙酯(30mL)与水萃取，合并有机相依次以饱和氯化钠溶液(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-4-(氟(苯基)甲基)哌啶-1-基)-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈16f(118mg)，产率：47.24％。
MS m/z(ESI):477.8[M+1]
第五步
6-(4-氨基-4-(氟(苯基)甲基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(60.54mg,247.24μmol)，6-(4-氨基-4-(氟(苯基)甲基)哌啶-1-基)-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈16f(59mg,123.62μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(20.70mg,24.72μmol)和2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(28.84mg,61.81μmol)和磷酸钾(52.48mg,247.24μmol)加入到1,4-二氧六环(2mL)和水(0.2mL)的混合溶液中。氩气置换三次，110℃加热反应3小时。反应完全后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，萃取分液，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-4-(氟(苯基)甲基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈16g(32mg)，产率：47.03％。
MS m/z(ESI):549.8[M+1]
第六步
6-(4-氨基-4-(氟(苯基)甲基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-(氟(苯基)甲基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈16g(64mg,116.28μmol)和氢氧化钠(1M,465.10μL)依次加入到甲醇(2mL)中，缓慢加入30％双氧水(1mL)，室温反应0.5小时，反应完全，滴加三氟乙酸调节PH至3～4，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-(氟(苯基)甲基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺16(9.45mg)，产率：10％。
MS m/z(ESI):567.8[M+1]
实施例17
6-((1R,3s,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000541
第一步
((1R,3s,5S)-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(411.14mg,1.59mmol)，((1R,3s,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯17a(300mg,1.33mmol)和N,N-二异丙基乙胺(342.64mg,2.65mmol)加入到N,N-二甲基乙酰胺(3mL)中，加热至100℃，反应1小时。反应结束后，用乙酸乙酯与水进行萃取，合并有机相，以饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步纯化(洗脱剂：A体系)，得到((1R,3s,5S)-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯17b(500mg)，产率：84.13％。MS m/z(ESI):448.1[M+1]
第二步
((1R,3s,5S)-8-(3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯
将7-氯-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯并[d]噻唑14a(276.25mg,892.23μmol)，((1R,3s,5S)-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯17b(150mg,334.59μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(74.71mg,89.22μmol)和2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(83.27mg,178.45μmol)和磷酸钾(189.39mg,892.23μmol)加入到1,4-二氧六环(2mL)和水(0.2mL)的混合溶液中。氩气置换三次，110℃加热反应过夜。反应完全后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，萃取分液，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步纯化(洗脱剂：A体系)，得到((1R,3s,5S)-8-(3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯17c(120mg)，产率：48.81％。
MS m/z(ESI):553.2[M+1]
第三步
6-((1R,3s,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将((1R,3s,5S)-8-(3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯17c(120mg,217.76μmol)，加入到二氯甲烷(1.5mL)中，再加入三氟乙酸(0.5mL)，室温反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到6-((1R,3s,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈17d(98mg)，产率：99.8％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):453.1[M+1]
第四步
6-((1R,3s,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-((1R,3s,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈17d(98mg,210.67μmol)的氢氧化钠溶液(1M,842.67μL)加入到甲醇(2mL)，缓慢加入30％双氧水(1mL)，室温反应1小时，反应完全后，滴加三氟乙酸调节PH至3～4，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mmI.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-((1R,3s,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺17(18.2mg)，产率：14.52％。
MS m/z(ESI):471.1[M+1]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.88(d,J＝9.0Hz,1H),7.58(d,J＝8.8Hz,1H),5.01(s,3H),2.87(s,3H),2.67-2.62(br,2H),2.24-2.37(m,2H),1.96(d,J＝8.2Hz,2H),1.74(dd,J＝16.0,4.0Hz,2H).
实施例18
6-((1R,3s,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000561
第一步
((1R,3s,5S)-8-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯
将(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(218.83mg,669.17μmol)，((1R,3s,5S)-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯17b(150mg,334.59μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(56.03mg,66.92μmol)和2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(62.45mg,133.83μmol)和磷酸钾(142.04mg,669.17μmol)加入到1,4-二氧六环(2mL)和水(0.2mL)的混合溶液中。氩气置换三次，110℃加热反应过夜。反应完全后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，萃取分液，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步纯化(洗脱剂：A体系)，得到((1R,3s,5S)-8-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯18a(95mg)，产率：49.95％。
MS m/z(ESI):568.2[M+1]
第二步
6-((1R,3s,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将((1R,3s,5S)-8-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯18a(95mg,167.12μmol)，加入到二氯乙烷(1.5mL)中，加入三氟乙酸(0.5mL)，室温反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到6-((1R,3s,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈18b(78mg)，产率：99％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):468.1[M+1]
第三步
6-((1R,3s,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-((1R,3s,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈18b(78mg,166.55μmol)和氢氧化钠溶液(1M,333.09μL)加入到甲醇(1.5mL)中，缓慢加入30％双氧水(0.5mL)，室温反应0.5小时。反应完全后，滴加三氟乙酸调节PH至3～4，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-((1R,3s,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺18(2.07mg)，产率：1.84％。
MS m/z(ESI):485.9[M+1]
实施例19
6-((1R,3r,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000571
第一步
((1R,3r,5S)-8-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯
将(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(218.83mg,669.17μmol)，((1R,3r,5S)-8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯15b(150mg,334.59μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(56.03mg,66.92μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(62.45mg,133.83μmol)和磷酸钾(142.04mg,669.17μmol)加入到1,4-二氧六环(2mL)和水(0.2mL)的混合溶液中。氩气置换三次，110℃加热反应过夜。反应完全后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，萃取分液，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步纯化(洗脱剂：A体系)，得到((1R,3r,5S)-8-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯19a(100mg)，产率：52.58％。
MS m/z(ESI):567.9[M+1]
第二步
6-((1R,3r,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将((1R,3r,5S)-8-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯19a(100mg,175.91μmol加入到二氯甲烷(1.5mL)中，加入三氟乙酸(0.5mL)，室温反应1小时，反应结束后，减压浓缩，得到6-((1R,3r,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈19b(82mg)，产率：99.53％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):467.9[M+1]
第三步
6-((1R,3r,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-((1R,3r,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈19b(82mg,175.09μmol)的氢氧化钠溶液(1M,350.17μL)加入到甲醇(1.5mL)中，加入30％双氧水(0.5mL)，室温反应时间到3小时。反应完全后，滴加三氟乙酸调节PH至3～4，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-((1R,3r,5S)-3-氨基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺19(14.06mg)，产率：11.89％。
MS m/z(ESI):485.9[M+1]
实施例20
6-(3-氨基-3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000581
Figure BDA0003066760470000591
第一步
(8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(225.83mg,873.76μmol)，(3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯20a(210mg,873.76μmol,根据专利WO2005042533自制而得)和N,N-二异丙基乙胺(225.85mg,1.75mmol)依次加入到N,N-二甲基乙酰胺(2mL)中,加热至100℃，反应1小时。反应结束后，用乙酸乙酯与水进行萃取，合并有机相，以饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步纯化(洗脱剂：A体系)，得到(8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯20b(210mg)，产率：51.98％。
MS m/z(ESI):461.9[M+1]
第二步
(8-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯
将(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(222.44mg,908.42μmol)，(8-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯20b(210mg,454.21μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(76.07mg,90.84μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(84.66mg,181.68μmol)和磷酸钾(192.83mg,908.42μmol)加入到1,4-二氧六环(3mL)和水(0.3mL)的混合溶液中。氩气置换三次，110℃加热反应3小时。反应完全后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，萃取分液，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步纯化(洗脱剂：A体系)，得到(8-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯20c(112mg)，产率：42.33％。
MS m/z(ESI):582.2[M+1]
第三步
6-(3-氨基-3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(8-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯20c(112mg,192.28μmol)，加入到二氯甲烷(1.5mL)中，加入三氟乙酸(0.5mL)，室温反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到6-(3-氨基-3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈20d(92mg)，产率：99％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):481.9[M+1]
第四步
6-(3-氨基-3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(3-氨基-3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈20d(92mg,190.73μmol)的氢氧化钠溶液(1M,381.45μL)加入到甲醇(1.5mL)中，加入30％双氧水(1mL)，室温反应4小时。反应完全后，滴加三氟乙酸调节PH至3～4，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mmI.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(3-氨基-3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺20(1.82mg)，产率：1.52％。MS m/z(ESI):483.0[M-16]
实施例21
6-(4-氨基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000601
Figure BDA0003066760470000611
第一步
1-苄基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-腈
将2-(2,4-二氟苯基)乙腈21a(3g,19.59mmol)，N-苄基-2-氯-N-(2-氯乙基)乙-1-胺21b(5.00g,21.55mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，0℃条件下搅拌10分钟，加入氢化钠(5.10g,127.41mmol,60％purity)，搅拌1小时，温度升高到60℃，反应过夜。反应结束后，将反应液倒入冰水中搅拌,有固体析出，过滤，将滤液用乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步纯化(洗脱剂：A体系)，得到1-苄基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-腈21c(2.2g)，产率：35.95％。
MS m/z(ESI):313.2[M+1]
第二步
1-苄基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-甲酰胺
将1-苄基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-腈21c(2.2g,7.04mmol)，氢氧化钾(790.39mg,14.09mmol)依次加入到二甲基亚砜(15mL)中，缓慢滴加双氧水(15mL)，室温反应过夜。反应结束后，将反应液倒入冰水中搅拌,有固体析出，过滤，将滤液用乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步纯化(洗脱剂：A体系)，得到1-苄基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-甲酰胺21d(1g)，产率：42.98％。
MS m/z(ESI):331.0[M+1]
第三步
1-苄基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-胺
将1-苄基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-甲酰胺21d(1g,3.03mmol)，氢氧化钾(764.28mg,13.62mmol)加入到乙腈(3mL)和水(3mL)混合溶液中中，加入1,3-二溴-5,5-二甲基海因(476.00mg,1.66mmol)。室温反应过夜。反应结束后，加入亚硫酸钠(38.15mg,302.69μmol)和磷酸钾(706.76mg,3.33mmol)，搅拌20分钟。以乙酸乙酯与水进行萃取，分去水层，合并的有机相依次以饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到1-苄基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-胺21e(500mg)，产率：54.63％。
MS m/z(ESI):303.2[M+1]
第四步
(1-苄基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将1-苄基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-胺21e(500mg,1.65mmol)，二叔丁基二碳酸酯(721.82mg,3.31mmol)和氢氧化钠(79.38mg,1.98mmol)加入到二氧六环(6mL)和水(3mL)混合溶液中，室温反应4小时，反应完全，用乙酸乙酯与水萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-苄基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯21f(430mg)，产率：64.61％。
MS m/z(ESI):403.0[M+1]
第五步
(4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(1-苄基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯21f(430mg,1.07mmol)，钯碳(129.76mg,1.07mmol)加入到甲醇(20mL)，氢气置换后，室温反应48小时。反应完全，将反应液硅藻土过滤，减压浓缩，得到(4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯21g(300mg)，产率：89.9％。
MS m/z(ESI):313.0[M+1]
第六步
(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(248.24mg,960.45μmol)，(4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯21g(300mg,960.45μmol)和N,N-二异丙基乙胺(124.13mg,960.45μmol)依次加入到N,N-二甲基乙酰胺(2mL)中，加热至100℃，过夜反应。反应完全，用乙酸乙酯与水进行萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯21h(151mg)，产率：29％。
MS m/z(ESI):534.1[M+1]
第七步
(1-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(91.65mg,374.28μmol)，(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯21h(100mg,187.14μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(34.93mg,74.86μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(31.34mg,37.43μmol)和磷酸钾(79.45mg,374.28μmol)加入到1,4-二氧六环(3mL)和水(0.3mL)的混合溶液中。氩气置换三次，110℃加热反应3小时。反应完全后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，萃取分液，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯21i(60mg)，产率：48.99％。
MS m/z(ESI):653.8[M+1]
第八步
6-(4-氨基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(1-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯21i(60mg,91.67μmol)加入到二氯甲烷(1.5mL)中，加入三氟乙酸(0.5mL)，室温反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到6-(4-氨基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈21j(50mg)，产率：98.38％。MS m/z(ESI):536.8[M-16]
第九步
6-(4-氨基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈21j(66mg,119.05μmol)和氢氧化钠(48.0mg,1.2mmol)加入到甲醇(1.5mL)中，缓慢加入30％双氧水(0.5mL)，室温反应4小时。反应完全后，滴加三氟乙酸调节PH至3～4，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺21(1.87mg)，产率：2.06％。
MS m/z(ESI):571.8[M+1]
实施例22
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000631
Figure BDA0003066760470000641
第一步
(1-(4-氰基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将N,N-二异丙基乙胺(1.27g,9.82mmol,1.62mL)加入到3-碘-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈16e(1g,3.27mmol)和(4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯22a(995mg,3.6mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(5mL)溶液中，加热100℃，搅拌1小时。反应结束后，混合液倒入100mL的水中，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(4-氰基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯22b(1.15g)，产率：64.41％。
MS m/z(ESI):546.1[M+1]
第二步
(1-(4-氰基3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(1-(4-氰基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯22b(100mg,183.36μmol)，(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(112.25mg,458.40μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(30.71mg,36.67μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(34.18mg,73.34μmol)，磷酸钾(194.36mg,916.80μmol)加入到1,4-二氧六环(2mL)和水(0.2mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至110℃，反应4小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(4-氰基3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯22c(80mg)，产率：70.54％。
MS m/z(ESI):618.2[M+1]
第三步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(1-(4-氰基3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯22c(80mg,129.34μmol)和三氟乙酸(1mL)加到二氯甲烷(3mL)中，室温搅拌1小时。反应结束后，减压浓缩，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈22d，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):518.1[M+1]
第四步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺将上述粗品6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈22d溶在甲醇(3mL)中，依次加入氢氧化钠(51.70mg,1.29mmol)，双氧水(0.5mL)，室温再搅拌2小时。反应结束后，用三氟乙酸调节pH＝7，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺22(25mg)，产率：36％。
MS m/z(ESI):536.1[M+1]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.72(d,J＝7.9Hz,2H),7.46-7.62(m,4H),7.35(d,J＝8.8Hz,1H),4.65-4.71(m,2H),4.17(d,J＝2.6Hz,3H),3.46(ddd,J＝13.7,10.2,2.9Hz,2H),2.77(dt,J＝14.3,3.2Hz,2H),2.16(ddd,J＝14.3,10.4,4.3Hz,2H).
实施例23
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000651
第一步
(1-(3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯
将(1-(4-氰基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯22b(100mg,183.36μmol)，(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸23a(96.46mg,458.40μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(30.71mg,36.67μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(34.18mg,73.34μmol)和磷酸钾(194.36mg,916.80μmol)加入到1,4-二氧六环(2.5mL)和水(0.25mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至110℃，反应4小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯23b(90mg)，产率：84.04％。
MS m/z(ESI):584.3[M+1]
第二步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(1-(3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-苯基哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯23b(100mg,171.21μmol)溶在三氟乙酸(1mL)和二氯甲烷(3mL)，室温搅拌1.5小时。反应结束后，减压浓缩，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈23c(80mg)，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):467.1[M-16]
第三步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈23c(80mg,165.30μmol)，氢氧化钠(66.12mg,1.65mmol)溶在甲醇(2mL)，加入双氧水(0.5mL)，室温搅拌1小时，反应结束后，用三氟乙酸调节pH＝7，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺23(41mg)，产率：39.7％。
MS m/z(ESI):501.9[M+1]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.33(s,1H),7.71-7.75(m,2H),7.49-7.61(m,4H),7.37(d,J＝8.8Hz,1H),4.69(d,J＝14.1Hz,2H),4.25(s,3H),3.45-3.50(m,2H),2.77(d,J＝13.6Hz,2H),2.13-2.18(m,2H).
实施例24
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000661
第一步
(1-(4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈2b(147mg,821.09μmol)，(4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯22a(249.62mg,903.20μmol)，N,N-二异丙基乙胺(529.60mg,4.11mmol)，N,N-二甲基乙酰胺(3mL)，加热到90℃，反应1.5小时，反应结束后，加入10mL水，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯24a(200mg)，产率：58.2％。
MS m/z(ESI):419.2[M+1]
第二步
(1-(4-氰基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(1-(4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯24a(200mg,477.91μmol)溶在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，加入碘代丁二酰亚胺(129.02mg,573.49μmol)，室温搅拌2小时，反应结束后，加入10mL水，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(4-氰基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯24b(150mg)，产率：57.66％。MS m/z(ESI):545.0[M+1]
第三步
(1-(4-氰基-5-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(1-(4-氰基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯24b(10mg,18.37μmol)，(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸23a(13.44mg,45.92μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(3.08mg,3.67μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(3.42mg,7.35μmol)和磷酸钾(11.68mg,55.11μmol)加入到1,4-二氧六环(1.5mL)和水(0.15mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至110℃，反应4小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(4-氰基-5-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯24c(100mg)，产率：66.69％。
MS m/z(ESI):583.2[M+1]
第四步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将(1-(4-氰基-5-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯24c(100mg,171.50μmol)和三氟乙酸(0.5mL)加到二氯甲烷(1.5mL)，室温反应2小时，反应结束后，减压浓缩，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈24d(80mg)，产率：96.58％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):466.1[M-16]
第五步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
将2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈24d(80mg,165.64μmol)和氢氧化钠(66.26mg,1.66mmol)加到甲醇(3mL)，加入双氧水(1mL)，室温搅拌2小时，反应结束后，用三氟乙酸调节pH＝7，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺24(24mg)，产率：22.92％。
MS m/z(ESI):501.2[M+1]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.23(s,1H),7.69-7.74(m,2H),7.57(t,J＝7.6Hz,2H),7.47-7.52(m,2H),7.31(d,J＝8.8Hz,1H),7.19(s,1H),4.57(d,J＝14.4Hz,2H),4.22(s,3H),3.42(ddd,J＝13.7,10.1,2.6Hz,2H),2.72(d,J＝14.1Hz,2H),2.16(td,J＝9.7,4.8Hz,2H).
实施例25
6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000681
第一步
(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将N,N-二异丙基乙胺(737.60mg,5.71mmol,943.22μL)加到3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(491.70mg,1.90mmol)和(4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯25a(560mg,1.90mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(3mL)，加热100℃，搅拌1小时，反应结束后，加入水和乙酸乙酯，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯25b(600mg)，产率：61.08％。
MS m/z(ESI):516.1[M+1]
第二步
(1-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯25b(150mg,290.49μmol)，(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(213.40mg,871.48μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(72.97mg,87.15μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(81.22mg,174.30μmol)和磷酸钾(307.92mg,1.45mmol)加入到1,4-二氧六环(5mL)和水(0.5mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至130℃，反应4小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯25c(40mg)，产率：21.63％。
MS m/z(ESI):636.1[M+1]
第三步
6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(1-(3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯25c(40mg,62.84μmol)和三氟乙酸(1mL)加到二氯甲烷(2mL)，室温搅拌2小时，反应结束后，减压浓缩，得到6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈25d(33mg)，未经纯化，直接进行下一步反应。MS m/z(ESI):519.1[M-16]
第四步
6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈25d(33mg,61.52μmol)溶在甲醇(2mL)中，加入氢氧化钠(24.61mg,615.22μmol)，再加入双氧水(0.5mL)，室温搅拌2小时。反应结束后，用三氟乙酸调节pH＝7，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺25(15mg)，产率：35.34％。
MS m/z(ESI):554.1[M+1]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.71(s,1H),7.56(d,J＝8.9Hz,2H),7.30-7.41(m,3H),4.55(d,J＝14.4Hz,2H),4.18(s,3H),3.74(t,J＝11.2Hz,2H),2.79(d,J＝14.6Hz,2H),2.21(t,J＝9.6Hz,2H).
实施例26
6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000701
第一步
(1-(3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯25b(180mg,348.59μmol)，7-氯-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯并[d]噻唑14a(198.24mg,871.48μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(58.38mg,69.72μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(64.98mg,139.44μmol)和磷酸钾(369.51mg,1.74mmol)加入到1,4-二氧六环(5mL)和水(0.5mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至130℃，反应4小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯26a(160mg)，产率：74.14％。MS m/z(ESI):619.0[M+1]
第二步
6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(1-(3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯26a(160mg,258.44μmol)和三氟乙酸(1mL)加到二氯甲烷中(2mL)，室温搅拌1小时，反应结束后，减压浓缩，得到6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈26b(130mg)，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):502.1[M-16]
第三步
6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈26b(130mg,250.48μmol)溶在甲醇中(2mL)，加入氢氧化钠(100.19mg,2.50mmol)，加入双氧水(0.6mL)，室温搅拌2小时，反应结束后，用三氟乙酸调节pH＝7，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺26(46mg)，产率：27.36％。
MS m/z(ESI):537.2[M+1]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.89(d,J＝8.3Hz,1H),7.71(s,1H),7.58(dd,J＝12.8,7.2Hz,2H),7.29-7.44(m,2H),4.55(d,J＝14.3Hz,2H),3.74(t,J＝11.2Hz,2H),2.87(s,3H),2.79(d,J＝14.5Hz,2H),2.21(t,J＝10.2Hz,2H).
实施例27
6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
Figure BDA0003066760470000711
第一步
(1-(3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯25b(150mg,290.49μmol)，(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸23a(140.07mg,665.64μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(44.59mg,53.25μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(49.63mg,106.50μmol)和磷酸钾(282.23mg,1.33mmol)加入到1,4-二氧六环(3mL)和水(0.3mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至110℃，反应4小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯27a(60mg)，产率：37.43％。
MS m/z(ESI):602.2[M+1]
第二步
6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈将(1-(3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯27a(20mg,33.22μmol)和三氟乙酸(1mL)加到二氯甲烷中(3mL)，室温搅拌1小时，反应结束后，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈27(5mg)，产率：22.24％。
MS m/z(ESI):485.2[M-16]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.45(s,1H),7.70(dd,J＝14.3,8.3Hz,2H),7.57(d,J＝6.6Hz,1H),7.30-7.43(m,3H),4.48(d,J＝14.2Hz,2H),4.29(d,J＝1.5Hz,3H),3.72(t,J＝11.8Hz,2H),2.79(d,J＝14.2Hz,2H),2.16-2.24(m,2H).
实施例28
6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000721
第一步
6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈27(35mg,69.73μmol)溶在甲醇(1.5mL)，加入氢氧化钠(27.89mg,697.29μmol)，加入双氧水(0.5mL)，室温反应1小时，反应结束后，用三氟乙酸调节pH＝7，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺28(13mg)，产率：28.67％。
MS m/z(ESI):520.2[M+1]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.32(s,1H),7.71(d,J＝1.6Hz,1H),7.58(dd,J＝8.8,0.9Hz,2H),7.30-7.41(m,3H),4.54(d,J＝14.0Hz,2H),4.25(s,3H),3.74(dd,J＝13.2,9.0Hz,2H),2.79(d,J＝14.1Hz,2H),2.21(td,J＝9.5,4.6Hz,2H).
实施例29
2-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000731
第一步
(1-(5-溴-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将5-溴-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈2c(400mg,1.55mmol)，N,N-二异丙基乙胺(602.34mg,4.66mmol,860.49μL)和(4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯25a(548.77mg,1.86mmol)加到N-甲基吡咯烷酮(4mL)，加热至115℃，反应18小时,反应结束后，加入水(40mL)和乙酸乙酯(30mL)搅拌，有机相分离，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(5-溴-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯29a(300mg)，产率：22.48％。
MS m/z(ESI):515.1[M+1]
第二步(1-(5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(1-(5-溴-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯29a(100mg,194.03μmol)，(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(118.78mg,485.08μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(32.50mg,38.81μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(36.17mg,77.61μmol)和磷酸钾(205.67mg,970.16μmol)加入到1,4-二氧六环(5mL)和水(0.5mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至110℃，反应4小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯29b(20mg)，产率：16.22％。
MS m/z(ESI):634.9[M+1]
第三步
2-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将(1-(5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯29b(20mg,31.47μmol)和三氟乙酸(0.7mL)加到二氯甲烷中(2mL)，加热到30℃，搅拌1小时，反应结束后，减压浓缩，得到2-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈29c(16mg)，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):518.1[M-16]
第四步
2-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
将2-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈29c(16mg,29.88μmol)和氢氧化钠(11.95mg,298.84μmol)溶在甲醇(2mL)，加入双氧水(0.7mL)，室温反应1小时，反应结束后，用三氟乙酸调节pH＝7，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到2-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺29(5mg)，产率：30％。
MS m/z(ESI):552.8[M+1]
实施例30
2-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000741
第一步
(1-(5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(1-(5-溴-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯29a(119mg,231.16μmol)，7-氯-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯并[d]噻唑14a(131.46mg,577.90μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(38.71mg,46.23μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(43.09mg,92.46μmol)和磷酸钾(245.03mg,1.16mmol)加入到1,4-二氧六环(3mL)和水(0.3mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至100℃，反应6小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯30a(50mg)，产率：21％。MS m/z(ESI):618.2[M+1]
第二步
2-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将(1-(5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯30a(100mg,97.07μmol)和三氟乙酸(0.6mL)加到二氯甲烷(2mL)，室温反应1小时，反应结束后，减压浓缩，得到2-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈30b(40mg)，未经纯化，直接进行下一步反应。MS m/z(ESI):501.0[M-16]
第三步
2-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
将2-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈30b(40mg,77.22μmol)和氢氧化钠(3.09mg,77.22μmol)溶在甲醇(2mL)，加入双氧水(0.7mL)，室温反应1小时，反应结束后，用三氟乙酸调节pH＝7，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到2-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺30(5mg)，产率：12.08％。
MS m/z(ESI):536.0[M+1]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.79(d,J＝8.3Hz,1H),7.70(t,J＝8.1Hz,1H),7.53(dd,J＝18.8,7.3Hz,2H),7.28-7.40(m,2H),7.23(s,1H),4.45(d,J＝13.6Hz,2H),3.67(q,J＝8.9,5.3Hz,2H),2.85(s,3H),2.75(d,J＝14.3Hz,2H),2.20(t,J＝10.0Hz,2H).
实施例31
2-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000761
第一步
(1-(5-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(1-(5-溴-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯29a(108mg,209.56μmol)，(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸23a(110.24mg,523.89μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(35.10mg,41.91μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(39.06mg,83.82μmol)和磷酸钾(222.13mg,1.05mmol)加入到1,4-二氧六环(5mL)和水(0.5mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至110℃，反应4小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(5-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯31a(35mg)，产率：27.79％。
MS m/z(ESI):601.3[M+1]
第二步
2-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将(1-(5-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-4-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-(2-氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯31a(43mg,71.54μmol)和三氟乙酸(0.7mL)加到二氯甲烷(2mL)，室温反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到2-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈31b(35mg)，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):501.1[M+1]
第三步
2-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
将2-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈31b(35mg,69.87μmol)和氢氧化钠(11.95mg,298.84μmol)溶在甲醇中(2mL)，加入双氧水(0.7mL)，室温反应1小时，反应结束后，用三氟乙酸调节pH＝7，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到2-(4-氨基-4-(2-氟苯基)哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺31(5mg)，产率：13.7％。
MS m/z(ESI):518.9[M+1]
实施例32
6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000771
第一步
(1-(4-氰基-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯1f(150mg,343.80μmol)，萘-2-基硼酸32a(177.39mg,1.03mmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(57.58mg,68.76μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(64.08mg,137.52μmol)和磷酸钾(364.42mg,1.72mmol)加入到1,4-二氧六环(1.5mL)和水(0.15mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至130℃，反应18小时。反应结束后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(4-氰基-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯32b(40mg)，产率：24.03％。
MS m/z(ESI):484.3[M+1]
第二步
6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(1-(4-氰基-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯32b(40mg,82.7μmol)和三氟乙酸(1mL)加到二氯甲烷(3mL)，室温反应1小时。反应结束后，减压浓缩，得到6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈32c(40mg)，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):384.2[M+1]
第三步
6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈32c(40mg,104.32μmol)和氢氧化钠(41.73mg,1.04mmol)溶在甲醇中(2mL)，加入双氧水(0.8mL)，室温反应2小时，反应结束后，用三氟乙酸调节pH＝7，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺32(15.99mg)，产率：29.41％。
MS m/z(ESI):402.2[M+1]
实施例33
6-(4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000781
第一步
4-氰基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将2-(2-甲氧基苯基)乙腈33a(1g,6.79mmol)和双(2-氯乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.81g,7.47mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)，分批加入60％氢化钠(1.06g,26.51mmol)，搅拌40分钟后加热至70℃，反应过夜。降至室温，加水(100mL)淬灭反应，用乙酸乙酯萃取(100mL×3)。合并有机相，用饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-氰基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯33b(1.7g)，产率：79.1％。
MS m/z(ESI):217.0[M-99]
第二步
4-氨基甲酰基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(283.75mg,5.06mmol)和4-氰基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯33b(0.8g,2.53mmol)溶于二甲基亚砜(5mL)中，缓慢滴加双氧水(5mL)。室温反应过夜。加入大量水(50mL),析出黄色固体。过滤，用水洗涤滤饼，干燥，得到4-氨基甲酰基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯33c(400mg)，产率：47.3％。
MS m/z(ESI):279.0[M-55]
第三步
4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢氧化钾(302.02mg,5.38mmol)加入到4-氨基甲酰基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯33c(400mg,1.20mmol)的乙腈(2mL)和水(3mL)的混合溶液中，分批加入1,3-二溴-5,5-二甲基海因(188.10mg,657.88μmol)，室温下搅拌1小时。加入水(100mL)和磷酸钾(279.30mg,1.32mmol)，搅拌15分钟，加入乙酸乙酯(20mL)和亚硫酸钠(15.07mg,119.61μmol)，分液，水相用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相并用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，干燥，减压浓缩，得到4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯33d(366mg)，产率：99.6％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):234.1[M-72]
第四步
4-(2-甲氧基苯基)哌啶-4-胺
将4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯33d(366mg,1.19mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，缓慢加入三氟乙酸(3g,26.31mmol)，室温搅拌过夜。反应完成后，减压浓缩，得到4-(2-甲氧基苯基)哌啶-4-胺33e，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):190.1[M-16]
第五步
6-(4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(283.17mg,1.10mmol)，上述粗品4-(2-甲氧基苯基)哌啶-4-胺33e和N,N-二异丙基乙胺(566.37mg,4.38mmol)依次加入到N-甲基吡咯烷酮(3mL)中，氩气置换后，100℃条件下搅拌2小时。加入水(30mL)淬灭反应，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：B体系)，得到产物6-(4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈33f(360mg)，产率：70.8％。
MS m/z(ESI):411.0[M-16]
第六步
6-(4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈33f(100mg,122μmol)，(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(229mg,934μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(39.1mg,46.7μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(43.6mg,93.4μmol)和磷酸钾(149mg,700μmol)加入到1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)的混合溶液中。氩气置换三次，100℃加热反应过夜。反应完全后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈33g(25mg)，产率：20％。
MS m/z(ESI):530.8[M-16]
第七步
6-(4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将氢氧化钾(5.1mg,91μmol)和6-(4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈33g(25mg,46μmol)加入到二甲基亚砜(1mL)溶液中，缓慢滴加双氧水(30％,0.5mL)到反应液中，滴加完毕后搅拌1小时，反应完全后，滴加三氟乙酸，调节PH至3-4，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-(2-甲氧基苯基)哌啶-1-基)-3-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺33(7mg)，产率：22％。
MS m/z(ESI):566.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.17(s,3H),8.01-8.09(m,1H),7.40-7.66(m,4H),7.29(d,J＝8.8Hz,1H),7.20(d,J＝8.2Hz,1H),7.04-7.12(m,1H),4.23-4.45(m,2H),4.16(s,3H),3.89(s,3H),3.63-3.77(m,2H),2.53-2.63(m,2H),2.05-2.23(m,2H).
实施例34
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000801
第一步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(0.7g,2.71mmol)，4-苯基哌啶-4-胺8a(470mg,2.67mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.38g,10.7mmol,1.77mL)依次加入到N-甲基吡咯烷酮(6.23mL)中。氩气置换，加热至100℃，反应4小时。反应完全后，降至室温，加入水溶液(30mL)淬灭反应，加入乙酸乙酯(30mL)，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈34a(0.8g)，产率：75％。MS m/z(ESI):380.9[M-16]
第二步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲腈
将6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈34a(100mg,251μmol)，7-氯-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯并[d]噻唑14a(155mg,502μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(42mg,50μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(46.9mg,100μmol)和磷酸钾(213mg,1.00mmol)加到1,4-二氧六环(3mL)和水(0.5mL)的混合溶液中。氩气置换三次，130℃加热反应24小时。反应完全后，减压浓缩，加入饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭反应，加入乙酸乙酯(30mL)，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲腈34b(40mg)，产率：32％。
MS m/z(ESI):484.1[M-16]
第三步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲腈34b(40mg,80μmol)溶于二甲基亚砜(1mL)中，加入氢氧化钾(8.96mg,160μmol)，缓慢加入双氧水(30％,0.4mL)，室温反应过夜。反应完成后，加入水(100ml)，搅拌15分钟，析出固体。制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mmI.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺34(6mg)，产率：14.4％。
MS m/z(ESI):519.1[M+1]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.88(d,J＝8.2Hz,1H),7.73(d,J＝7.8Hz,2H),7.58(dd,J＝10.2,7.9Hz,3H),7.50(t,J＝7.3Hz,1H),4.69(d,J＝13.9Hz,2H),3.46(t,J＝12.0Hz,2H),2.87(s,3H),2.77(d,J＝13.8Hz,2H),2.16(ddd,J＝14.3,10.7,3.8Hz,2H).
实施例35
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000811
Figure BDA0003066760470000821
第一步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈8b(200mg,503.43μmol)，7-氯-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯并[d]噻唑14a(468.36mg,1.51mmol),2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(141.17mg,302.54μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(126.67mg,151.27μmol)和磷酸钾(642.20mg,3.03mmol)加到1,4-二氧六环(3mL)和水(0.5mL)的混合溶液中。氩气置换三次，130℃加热反应16小时。反应完全后，减压浓缩，加入饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭反应，加入乙酸乙酯(30mL)，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈35a(40mg)，产率：
15.89％。
MS m/z(ESI):483.1[M-16]
第二步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
将2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈35a(40mg,80.00μmol)溶于二甲亚砜中(3mL)，加入氢氧化钾(8.98mg,159.99μmol)，慢慢加入双氧水(0.5mL)，室温下反应2小时。反应完成后，过滤，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺35(5.0mg)，产率：8.73％。
MS m/z(ESI):517.9[M+1]
实施例36
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000822
Figure BDA0003066760470000831
第一步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈34a(0.2g,502.19μmol),2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯并[d]噻唑36a(207.08m g,753.28μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(70.30mg,150.66μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(63.08mg,75.33μmol)和磷酸钾(319.80mg,1.51mmol)加到1,4-二氧六环(3mL)和水(0.5mL)的混合溶液中。氩气置换三次，130℃加热反应16小时。反应完全后，减压浓缩，加入饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭反应，加入乙酸乙酯(30mL)，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈36b(50mg)，产率：
28.45％。
MS m/z(ESI):450.1[M-16]
第二步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈36b(50mg,107.17μmol)溶于二甲亚砜(3mL)中，加入氢氧化钾(12.03mg,214.33μmol)，再慢慢加入双氧水(0.5mL)，室温下反应2小时。反应完成后，过滤，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺36(7mg)，产率：10.86％。
MS m/z(ESI):485.0[M+1]
实施例37
6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000832
Figure BDA0003066760470000841
第一步
(1-(3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(1-(3-溴-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯1f(330mg,756.35μmol)，7-氯-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯并[d]噻唑14a(468.36mg,1.51mmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(126.67mg,151.27μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(141.17mg,302.54μmol)和磷酸钾(642.20mg,3.03mmol)加到1,4-二氧六环(3mL)和水(0.5mL)的混合溶液中。氩气置换三次，130℃加热反应48小时。反应完全后，减压浓缩，加入饱和氯化铵水溶液(30mL)淬灭反应，加入乙酸乙酯(30mL)，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯37a(140mg)，产率：34.34％。
MS m/z(ESI):538.9[M+1]
第二步
6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(1-(3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-4-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯37a(140mg,259.72μmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，慢慢加入三氟乙酸(3g,26.31mmol)，室温下反应3小时。反应完成后，减压浓缩，用乙酸乙酯(100mL)萃取，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤(100mL×3)，以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈37b(100mg)，产率：87.72％。
MS m/z(ESI):438.9[M+1]
第三步
6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈37b(100mg,227.82μmol)溶于二甲基亚砜(3mL)中，加入氢氧化钾(25.57mg,455.65μmol)，再慢慢加入双氧水(0.5mL)，室温下反应3小时。反应完成后，过滤，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺37(22.0mg)，产率：21.13％。
MS m/z(ESI):456.9[M+1]
实施例38
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000851
第一步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈34a(100mg,251μmol)，2-甲基-2H-吲唑-5-硼酸38a(66.3mg,0.38mmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(42.1mg,50μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(46.9mg,100μmol)和磷酸钾(159.9mg,0.75mmol)加入到1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)的混合溶液中。氩气置换三次，100℃加热，反应过夜。反应完全后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，萃取分层，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈38b(50mg)，产率：44.3％。
MS m/z(ESI):433.0[M-16]
第二步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将氢氧化钾(12.5mg,222μmol)和6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈38b(50mg,111μmol)加入到二甲亚砜(2mL)溶液中，缓慢滴加双氧水(30％,1mL)到反应液中，滴加完毕后搅拌1小时，反应完全后，滴加三氟乙酸调节PH至3-4，制备液相分离(流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(2-甲基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺38(8mg)，产率：7.5％。MS m/z(ESI):468.0[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(br,3H),8.37(s,1H),8.08(s,1H),7.95(s,1H),7.66-7.78(m,3H),7.56-7.61(m,1H),7.50-7.56(m,3H),7.41-7.49(m,1H),4.27-4.43(m,2H),4.19(s,3H),3.49-3.56(m,2H),2.54-2.55(m,2H),2.04-2.16(m,2H).
实施例39
2-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000861
第一步
2-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将二异丙基乙基胺(211mg,1.63mmol)和4-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-胺13a(112.2mg,0.68mmol)加入到5-溴-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈2c(140mg,544μmol)的N-甲基吡咯烷酮(3mL)溶液中，加热至100℃，搅拌1小时。反应完全后，反相色谱柱分离(流动相A：H2O，流动相B：CH3CN)，得到2-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈39a(150mg)，产率：71.6％。
MS m/z(ESI):384.9[M+1]
第二步
2-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将2-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈39a(150mg,389μmol)，7-氯-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯并[d]噻唑14a(241.1mg,0.78mmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(65.2mg,78μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(72.7mg,156μmol)和磷酸钾(248.0mg,1.17mmol)加入到1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)的混合溶液中。氩气置换三次，100℃加热，反应过夜。反应完全后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，萃取分层，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到2-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈39b(140mg)，产率：73.7％。MS m/z(ESI):487.9[M+1]
第三步
2-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
将氢氧化钾(32.2mg,574μmol)和2-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈39b(140mg,287μmol)加入到二甲亚砜(2mL)溶液中，缓慢滴加双氧水(30％,1mL)到反应液中，滴加完毕后搅拌1小时，反应完全后，滴加三氟乙酸调节PH至3-4，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到2-(4-氨基-4-(2,2-二氟乙基)哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺39(4mg)，产率：2.2％。
MS m/z(ESI):505.8[M+1]
实施例40
6-(4-氨基-4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000871
第一步
1-(叔丁氧羰基)-4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-甲酸
将氢氧化钠(1.23g,30.65mmol)加入到1-(叔丁基)-4-乙基-4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-1,4-二甲酸酯40a(2.6g,7.66mmol，根据专利WO2010106081自制得到)的乙醇(10mL)和水(10mL)的混合溶液中，加热至60℃，反应20小时。浓缩除去乙醇，加入4N稀盐酸调节溶液PH＝1，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，分去水层，合并的有机相依次以饱和氯化钠溶液(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩至干，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到1-(叔丁氧羰基)-4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-甲酸40b(2.0g)，产率：83.9％。
MS m/z(ESI):256.0[M-55]
第二步
4-氨基甲酰基-4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(3.66g,9.64mmol)加入到1-(叔丁氧羰基)-4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-甲酸40b(2.0g,6.42mmol)和二异丙基乙基胺(124.6mg,0.96mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中，加热至60℃，反应半小时，滴加7M的氨甲醇溶液(20mL)，加热至60℃，反应20小时。反应完全后，加入100mL水，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，分去水层，合并的有机相依次以饱和氯化钠溶液(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩至干，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-氨基甲酰基-4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯40c(1.7g)，产率：85.3％。
MS m/z(ESI):255.0[M-55]
第三步
4-氨基-4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将[双(三氟乙酰氧基)碘]苯(2.59g,6.03mmol)加入到4-氨基甲酰基-4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯40c(1.7g,5.48mmol)的乙腈(15mL)和水(15mL)的混合溶液中，加热至60℃，反应2小时。反应完全后，加入饱和碳酸氢钠溶液(40mL),乙酸乙酯萃取(30mL×3)，饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-氨基-4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯40d(600mg)，产率：38.8％。
MS m/z(ESI):227.0[M-55]
第四步
4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-胺
将三氟乙酸(3mL)滴加到4-氨基-4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯40d(600mg,2.13mmol)的二氯甲烷(9mL)溶液中，室温搅拌1小时，减压浓缩，得到4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-胺40e，未经纯化，直接投下一步反应。
MS m/z(ESI):183.1[M+1]
第五步
6-(4-氨基-4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将二异丙基乙胺(675.1mg,5.22mmol)和上述粗品4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-胺40e加入到3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈1d(450mg,1.74mmol)的N-甲基吡咯烷酮(5mL)溶液中，加热至100℃，搅拌1小时。反应完全后，反相色谱柱分离(流动相A：H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈40f(600mg)，产率：85.3％。
MS m/z(ESI):403.9[M+1]
第六步
6-(4-氨基-4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈40f(80mg,198μmol)，7-氯-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯并[d]噻唑14a(122.6mg,396μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(33.2mg,40μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(36.9mg,79μmol)和磷酸钾(168.1mg,0.79mmol)加入到1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)的混合溶液中。氩气置换三次，100℃加热，反应过夜。反应完全后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，萃取分层，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈40g(50mg)，产率：49.8％。MS m/z(ESI):506.8[M+1]
第七步
6-(4-氨基-4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将氢氧化钾(11.1mg,197μmol)和6-(4-氨基-4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈40g(50mg,99μmol)加入到二甲亚砜(1mL)溶液中，缓慢滴加双氧水(30％,0.5mL)到反应液中，滴加完毕后搅拌1小时，反应完全后，滴加三氟乙酸调节PH至3-4，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-1-基)-3-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺40(13mg)，产率：20.4％。
MS m/z(ESI):525.1[M+1]
实施例41
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000891
第一步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈8b(100mg,251.72μmol),2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯并[d]噻唑36a(138.53mg,503.43μmol),磷酸钾(213.73mg,1.01mmol),2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(46.98mg,100.69μmol)和甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(42.16mg,50.34μmol)加入到1,4-二氧六环(2mL)和水(0.4mL)的混合溶液中，置换氩气三次，加热至130℃，反应24小时。减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分析纯化(洗脱剂：A体系)，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈41a(40mg)，产率：34.13％。
MS m/z(ESI):449.0[M-16]
第二步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
将2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈41a(40mg,85.92μmol)溶于二甲亚砜(2mL)，加入氢氧化钾(9.64mg,171.83μmol)，再慢慢加入双氧水(0.4mL)，室温反应3小时。反应完成后，过滤，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺41(15mg)，产率：36.15％。
MS m/z(ESI):467.0[M-16]
实施例42
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-(二氟甲基)-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000901
第一步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-(二氟甲基)-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈34a(100mg,251μmol)，(4-氯-2-(二氟甲基)-2H-吲唑-5-基)硼酸频哪醇酯42a(123.7mg,0.38mmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(42.1mg,50μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(46.9mg,100μmol)和磷酸钾(159.9mg,0.75mmol)加入到1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至100℃，反应过夜。反应完全后，减压浓缩，加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-(二氟甲基)-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈42b(40mg)，产率：30.6％。
MS m/z(ESI):502.9[M-16]
第二步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-(二氟甲基)-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将氢氧化钾(8.6mg,154μmol)和6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-(二氟甲基)-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈42b(40mg,77μmol)加入到二甲亚砜(1mL)溶液中，缓慢滴加双氧水(30％,0.5mL)到反应液中，滴加完毕后搅拌1小时，反应完全后，滴加三氟乙酸调节PH至3-4，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mmI.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-(二氟甲基)-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺42(6.7mg)，产率：13.1％。MS m/z(ESI):537.9[M+1]
实施例43
2-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000911
第一步
2-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基)-5-溴-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-腈
向(3R,4R)-3-氟哌啶-4-胺11a(259mg,2.19mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)，加入N,N-二异丙基乙胺(602.34mg,4.66mmol)，室温搅拌10分钟后，加入5-溴-2-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈2c(400mg,1.55mmol)，反应升温110℃，搅拌9小时。减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到2-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基)-5-溴-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-腈43a(200mg)，产率：37.96％。
MS m/z(ESI):338.9[M+1]
第二步
2-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-腈
将2-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基)-5-溴-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-腈43a(200mg,589.68μmol)，(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)硼酸1g(216.59mg,884.52μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(98.76mg,117.94μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(109.92mg,235.87μmol)和磷酸钾(625.06mg,2.95mmol)加入到1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)的混合溶液中。氩气置换三次，加热至130℃，反应18小时。反应完全后，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到2-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-腈43b(60mg)，产率：22.15％。
MS m/z(ESI):458.9[M+1]
第三步
2-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
向2-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-腈43b(60mg,130.63μmol)的甲醇(3mL)中加入氢氧化钠(5M,130.63μL)，后慢慢滴加双氧水(0.5mL)。室温反应1小时。反应结束后，加入三氟乙酸调节pH为3-4，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到2-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基)-5-(3,4-二氯-2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺43(2.5mg)，产率：3.14％。
MS m/z(ESI):476.9[M+1]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.48(d,J＝8.8Hz,1H),7.31(d,J＝8.8Hz,1H),7.23(s,1H),5.34(d,J＝13.0Hz,1H),5.01(d,J＝14.8Hz,1H),4.51-4.66(m,1H),4.16(s,3H),3.55-3.63(m,1H),3.04-3.09(m,2H),2.16-2.23(m,1H),1.67-1.76(m,1H).
实施例44
2-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000921
第一步
2-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基)-5-溴-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将2-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基)-5-溴-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-腈43a(350mg,1.03mmol)加入到四氢呋喃中(6mL)，低温下加入氢化钠(98.42mg,2.27mmol,60％purity)加入到上述混合溶液中，在0℃搅拌30分钟，将2-(三甲硅烷基)乙氧甲基氯(361.30mg,2.17mmol)加入到上述溶液中，室温条件下持续搅拌。反应1小时，反应完全后，将反应液乙酸乙酯与水进行萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到2-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基)-5-溴-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈44a(70mg)，产率：14.45％。
MS m/z(ESI):468.9[M+1]
第二步
2-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将2-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基)-5-溴-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈44a(70mg,149.12μmol)，7-氯-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯并[d]噻唑14a(115.42mg,372.80μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(12.49mg,14.91μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(13.90mg,29.82μmol)和磷酸钾(158.07mg,745.59μmol)加到N,N-二甲基乙酰胺(2mL)，氩气置换三次，升温至80℃，搅拌2小时。反应完全后，将反应冷却到室温，乙酸乙酯与水进行萃取，合并有机相，最后有机相用饱和氯化钠洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到2-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈44b(40mg)，产率：46.88％。
MS m/z(ESI):571.9[M+1]
第三步
2-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
将2-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈44b(40mg,69.91μmol)和三氟乙酸(1mL)加入到二氯甲烷中(2mL)，室温反应过夜，反应结束后，减压浓缩，将该浓缩物加入到胺甲醇溶液中(2mL)，调节PH至8-9，室温反应2小时，减压浓缩，将该浓缩物加入到甲醇中(2mL)，再加入5M的氢氧化钠溶液(0.5mL)，慢慢滴加双氧水(0.5mL)，室温反应1小时。反应完全，三氟乙酸调节pH至3-4，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBELKromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到2-((3R,4R)-4-氨基-3-氟哌啶-1-基)-5-(7-氯-2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺44(2mg)，产率：5.06％。
MS m/z(ESI):460.1[M+1]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.80(d,J＝8.3Hz,1H),7.51(d,J＝8.5Hz,1H),7.26(d,J＝1.3Hz,1H),5.34(d,J＝11.4Hz,1H),5.02(d,J＝14.4Hz,1H),4.58(d,J＝50.5Hz,1H),3.59(d,J＝11.0Hz,1H),3.01-3.07(m,2H),2.85(d,J＝1.2Hz,3H),2.20(d,J＝8.3Hz,1H),1.67-1.77(m,1H).
实施例45
2-(4-氨基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-1-基)-5-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000941
第一步
(1-(5-溴-4-氰基-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯
将5-溴-2-氯-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈45a(248.24mg,960.45μmol)，(4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯21g(300mg,960.45μmol)和N,N-二异丙基乙胺(124.13mg,960.45μmol)依次加入到N,N-二甲基乙酰胺(2mL)，100℃条件下持续搅拌，过夜反应。反应完全，将反应液冷却到室温，乙酸乙酯与水进行萃取，合并有机相，饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(5-溴-4-氰基-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯45b(151mg)，产率：29％。
MS m/z(ESI):663.1[M+1]
第二步
(1-(4-氰基-5-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯并[d]噻唑36a(158.23mg,575.02μmol)，(1-(5-溴-4-氰基-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯45b(318mg,479.18μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(80.25mg,95.84μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(89.44mg,191.67μmol)和磷酸钾(122.06mg,575.02μmol)依次加入到N,N-二甲基甲酰胺(3mL)，100℃过夜反应。反应完全，将反应液冷却到室温，用乙酸乙酯与饱和氯化钠萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(4-氰基-5-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯45c(180mg)，产率：51.32％。
MS m/z(ESI):732.3[M+1]
第三步
2-(4-氨基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-1-基)-5-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将(1-(4-氰基-5-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯45c(50mg,68.31μmol)加入到二氯甲烷(1.5mL)和三氟乙酸(0.5mL)混合溶液中，室温反应1小时，反应完全，减压浓缩，将反应液加入饱和碳酸氢钠进行中和，有机相无水硫酸钠干燥，减压蒸馏。将得到的浓缩物加入到胺甲醇溶液中(1.5mL)，调节pH＝8-9，室温反应2小时，反应完全，减压浓缩，得到2-(4-氨基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-1-基)-5-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈45d(33mg)，产率：96.23％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):485.1[M-16]
第四步
2-(4-氨基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-1-基)-5-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
将2-(4-氨基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-1-基)-5-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈45d(33mg,71.78μmol)和氢氧化钾(8.05mg,143.55μmol)依次加入到二甲基亚砜(1mL)，缓慢加入30％双氧水(0.5mL)，40℃反应1小时，反应完全，三氟乙酸调节pH至3-4，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到2-(4-氨基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-1-基)-5-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺45(6.45mg)，产率：13.33％。
MS m/z(ESI):520.1[M+1]
实施例46
6-(4-氨基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-1-基)-3-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000961
第一步
(1-(3-溴-4-氰基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯
将(4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯21g(190mg,608.28μmol)，3-溴-6-氯-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈46a(190mg,608.28μmol)和N,N-二异丙基乙胺(157.23mg,1.22mmol)依次加入到N-甲基吡咯烷酮(2mL)，100℃反应1小时，反应完全，将反应冷却到室温。用乙酸乙酯与水进行萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(3-溴-4-氰基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯46b(310mg)，产率：82.4％。
MS m/z(ESI):618.1[M+1]
第二步
(1-(3-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-4-氰基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯
将2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯并[d]噻唑36a(133.48mg,485.07μmol)，(1-(3-溴-4-氰基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯46b(150mg,242.53μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(40.62mg,48.51μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(45.27mg,97.01μmol)和磷酸钾(102.96mg,485.07μmol)依次加入到N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，氩气置换三次，加热至100℃，过夜反应。反应完全，将反应液冷却到室温，用乙酸乙酯与水进行萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(3-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-4-氰基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯46c(70mg)，产率：42.03％。
MS m/z(ESI):687.3[M+1]
第三步
6-(4-氨基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-1-基)-3-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(1-(3-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-4-氰基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯46c(70mg,101.93μmol，加入到二氯甲烷(1.5mL)，加入三氟乙酸(0.5mL)，室温反应1小时，反应完全，减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠溶液进行中和，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到6-(4-氨基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-1-基)-3-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈46d(51mg)，产率：99％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):502.9[M+1]
第四步
6-(4-氨基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-1-基)-3-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-1-基)-3-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈46d(51mg,101.48μmol)和氢氧化钾(11.39mg,202.97μmol)，依次加入到二甲基亚砜(1.5mL)，缓慢滴加30％的双氧水(0.5mL)，加热至40℃，反应6小时，反应完全，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-(2,4-二氟苯基)哌啶-1-基)-3-(2-甲基苯并[d]噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺46(4.32mg)，产率：4.63％。
MS m/z(ESI):521.2[M+1]
实施例47
6-(3-氨基-3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470000971
Figure BDA0003066760470000981
第一步
6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将4-氯-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶47a(4.0g,19.94mmol，根据专利WO2019158655自制而得)、四三苯基膦钯(2.30g,1.99mmol)和氰化锌(5.83g,49.84mmol)加到N-甲基吡咯烷酮(60mL)中，氩气置换三次，加热至120℃，反应0.5小时，反应结束后，加入水(40mL)和乙酸乙酯(30mL)，硅藻土过滤，滤液有机相分离，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈47b(1.1g)，产率：28.86％。
MS m/z(ESI):192.1[M+1]
第二步
3-碘-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈47b(1.2g,6.28mmol)和碘代丁二酰亚胺(1.55g,6.90mmol)加到N,N-二甲基甲酰胺中(15mL)，加热到90℃，反应4小时，反应结束后，加入冰水淬灭，滤液用乙酸乙酯萃取，滤液有机相分离，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到3-碘-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈47c(1.99g)，产率：100％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):318.0[M+1]
第三步
3-碘-6-(甲硫基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将3-碘-6-(甲硫基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈47c(1.99g,6.28mmol)加到N,N-二甲基甲酰胺中(25.84mL)，冷却到零摄氏度，缓慢加入氢化钠(326.45mg,7.53mmol)，反应0.5小时，再加入2-(三甲基硅烷基)乙氧甲基氯(1.57g,9.41mmol,1.67mL)，在冰浴下搅拌1小时，反应结束后，将反应液慢慢倒入冰水中淬灭，用乙酸乙酯萃取，滤液有机相分离，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到3-碘-6-(甲硫基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈47d(340mg)，产率：12.11％。
MS m/z(ESI):448.1[M+1]
第四步
3-(萘-2-基)-6-(甲硫基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将3-碘-6-(甲硫基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈47d(190mg,424.71μmol)，萘-2-基硼酸32a(109.57mg,637.06μmol)，双(三苯基膦)氯化钯(93.14mg,127.41μmol)和磷酸钾(135.06mg,637.06μmol)加到乙腈(3mL)，氩气置换三次，加热到80℃，反应3小时，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到3-(萘-2-基)-6-(甲硫基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈47e(90mg)，产率：47.34％。
MS m/z(ESI):448.2[M+1]
第五步
3-(萘-2-基)-6-(甲基磺酰基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将3-(萘-2-基)-6-(甲硫基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈47e(90mg,201.06μmol)，间氯过氧苯甲酸(173.48mg,1.01mmol)依次加入到二氯甲烷(2mL)，室温反应4小时，反应完全，向反应液中加入亚硫酸钠,搅拌20分钟,用乙酸乙酯与水进行萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到3-(萘-2-基)-6-(甲基磺酰基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈47f(56mg)，产率：58.07％。
MS m/z(ESI):480.1[M+1]
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.45(s,1H),8.06(d,J＝8.8Hz,1H),7.90-8.02(m,3H),7.54-7.65(m,2H),6.03(s,2H),3.82(t,J＝8.2Hz,2H),3.50(s,3H),0.98(t,J＝7.6Hz,2H),0.00(s,9H).
第六步
(8-(4-氰基-3-(萘-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯
将(3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯20a(28.06mg,116.76μmol)，3-(萘-2-基)-6-(甲基磺酰基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈47f(56mg,116.76μmol)和N,N-二异丙基乙胺(30.36mg,233.52μmol)加入到N-甲基吡咯烷酮(1.5mL)，加热至50℃，反应2小时，反应完全，冷却到室温，乙酸乙酯与水萃取，有机相以饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(8-(4-氰基-3-(萘-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯47g(50mg)，产率：66.93％。
MS m/z(ESI):640.3[M+1]
第七步
6-(3-氨基-3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将(8-(4-氰基-3-(萘-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-基)-3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)氨基甲酸叔丁酯47g(50mg,78.14μmol)加入到二氯甲烷(1.5mL)，加入三氟乙酸(0.5mL),室温反应1小时，反应完全，减压浓缩，加入少量水淬灭反应，加入饱和碳酸氢钠溶液，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，将得到的残留物加入到胺甲醇溶液中(2mL)，室温反应1小时，反应完全，减压浓缩，得到6-(3-氨基-3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈47h(31mg)，产率：97.86％，未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):410.2[M+1]
第八步
6-(3-氨基-3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(3-氨基-3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈47h(31mg,75.70μmol)和氢氧化钾(8.50mg,151.41μmol)依次加入到二甲基亚砜(1mL)，缓慢加入30％的双氧水(0.5mL)，加入至40℃，反应0.5小时，反应完全，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(3-氨基-3-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-3-(萘-2-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺47(6.32mg)，产率：14.95％。
MS m/z(ESI):411.2[M-16]
实施例48
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-(甲基-d3)-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470001001
第一步
5-溴-4-氯-2-(甲基-d3)-2H-吲唑
将5-溴-4-氯-1H-吲唑3a(5g,21.60mmol)溶于四氢呋喃(44.62mL)，低温下加入氢化钠(1.40g,32.40mmol)，搅拌30分钟，加入氘代碘甲烷(12.52g,86.40mmol,5.38mL)，室温反应过夜，反应完全。加入水淬灭(10ml)，用乙酸乙酯萃取(15ml×3)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到5-溴-4-氯-2-(甲基-d3)-2H-吲唑48b(1.2g)，产率：22.35％。
MS m/z(ESI):247.8[M+1]
第二步
4-氯-2-(甲基-d3)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2H-吲唑
将5-溴-4-氯-2-(甲基-d3)-2H-吲唑48b(200.00mg,804.76μmol)加入到1,4-二氧六环(6mL)，加入醋酸钾(236.94mg,2.41mmol)，加入1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(58.88mg,80.48μmol)，加热到100℃，反应1.5小时，反应完全。反应液冷至室温，硅藻土过滤，乙酸乙酯洗涤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-氯-2-(甲基-d3)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2H-吲唑48c(200mg)，产率：84.08％。
MS m/z(ESI):296.0[M+1]
第三步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-(甲基-d3)-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈34a(100mg,251.09μmol)，4-氯-2-(甲基-d3)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2H-吲唑48c(111.33mg,376.64μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(42.05mg,50.22μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(46.87mg,100.44μmol)和磷酸钾(133.25mg,627.73μmol)加入到1,4-二氧六环(3mL)和水(0.3mL)的混合溶液中，氩气置换气体后，加热至130℃，反应10小时，反应完全，反应冷却到室温，乙酸乙酯与水进行萃取，合并有机相，有机相饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-(甲基-d3)-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈48d(60mg)，产率：49.07％。
MS m/z(ESI):469.9[M-16]
第四步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-(甲基-d3)-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-(甲基-d3)-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈48d(60.00mg,123.21μmol)和5M的氢氧化钠溶液(0.5mL)加入到甲醇(3mL)，缓慢加入30％的双氧水(0.5mL)，室温反应1小时。反应完全，以三氟乙酸调节pH＝3-4，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-(甲基-d3)-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺48(35mg)，产率：45.23％。
MS m/z(ESI):505.0[M+1]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.32(s,1H),7.73(dd,J＝7.4,1.6Hz,2H),7.54-7.62(m,3H),7.47-7.53(m,1H),7.37(dd,J＝8.8,1.4Hz,1H),4.68(d,J＝14.1Hz,2H),3.48(ddd,J＝13.9,10.3,2.5Hz,2H),2.77(d,J＝13.6Hz,2H),2.17(ddd,J＝14.1,10.2,3.9Hz,2H).
实施例49
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-1-(甲基-d3)-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470001021
第一步
5-溴-4-氯-1-(甲基-d3)-1H-吲唑
将5-溴-4-氯-1H-吲唑3a(5g,21.60mmol,根据专利WO 2019167000自制而得)溶于四氢呋喃(44.62mL)，低温下加入氢化钠(1.40g,32.40mmol)，搅拌30分钟，加入氘代碘甲烷(12.52g,86.40mmol,5.38mL)，室温反应过夜，反应完全。加入水淬灭(10ml)，用乙酸乙酯萃取(15ml×3)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到5-溴-4-氯-1-(甲基-d3)-1H-吲唑49a(2.2g)，产率：40.98％。
MS m/z(ESI):247.8[M+1]
第二步
4-氯-1-(甲基-d3)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吲唑
将5-溴-4-氯-1-(甲基-d3)-1H-吲唑49a(250mg,1.01mmol)加入到1,4-二氧六环(6mL)，加入醋酸钾(296.17mg,3.02mmol)，加入1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(73.61mg,100.59μmol)，加热到100℃，反应1.5小时，反应完全。反应液冷至室温，硅藻土过滤，乙酸乙酯洗涤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-氯-1-(甲基-d3)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吲唑49b(220mg)，产率：73.99％。
MS m/z(ESI):296.0[M+1]
第三步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-1-(甲基-d3)-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈34a(100mg,251.09μmol)，4-氯-1-(甲基-d3)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吲唑49b(111.33mg,376.64μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(42.05mg,50.22μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(46.87mg,100.44μmol)和磷酸钾(133.25mg,627.73μmol)加入到1,4-二氧六环(3mL)和水(0.3mL)的混合溶液中，氩气置换气体后，加热至130℃，反应8小时，反应完全，反应冷却到室温，乙酸乙酯与水进行萃取，合并有机相，有机相饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-1-(甲基-d3)-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈49c(50mg)，产率：40.89％。
MS m/z(ESI):469.9[M-16]
第四步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-1-(甲基-d3)-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
将6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-1-(甲基-d3)-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈49c(50.00mg,102.68μmol)和5M的氢氧化钠(0.5mL)加到甲醇中(3mL)，缓慢滴加30％双氧水(0.5mL)，室温反应1小时，反应完全，以三氟乙酸调节pH＝3-4，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-1-(甲基-d3)-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺49(24mg)，产率：37.10％。
MS m/z(ESI):505.0[M+1]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.06(s,1H),7.73(dd,J＝7.4,1.6Hz,2H),7.54-7.61(m,3H),7.47-7.53(m,2H),4.68(d,J＝14.1Hz,2H),3.41-3.55(m,2H),2.77(d,J＝13.7Hz,2H),2.18(td,J＝10.0,5.0Hz,2H).
实施例50
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-环丙基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470001031
Figure BDA0003066760470001041
第一步
5-溴-4-氯-2-环丙基-2H-吲唑
低温下将5-溴-4-氯-1H-吲唑3a(2g,8.64mmol)、环丙基硼酸(1.11g,12.96mmol)、碳酸钠(2.29g,21.60mmol)、醋酸铜(2.35g,12.96mmol)和2,2-联吡啶(2.70g,17.28mmol)加入1,2-二氯乙烷(30mL)，室温反应48小时，反应结束后，硅藻土过滤，滤液浓缩，得到的残留物用硅胶柱层析法(洗脱剂：A体系)纯化，得到5-溴-4-氯-2-环丙基-2H-吲唑50a(1.27g)，产率：54.13％。
MS m/z(ESI):271.0[M+1]
第二步
4-氯-2-环丙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2H-吲唑
将5-溴-4-氯-2-环丙基-2H-吲唑50a(300mg,1.10mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)，加入醋酸钾(325.28mg,3.31mmol)，加入1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(80.84mg,110.48μmol)，加热至100℃，反应6小时，反应结束后，反应液冷至室温，垫硅藻土过滤，乙酸乙酯洗涤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-氯-2-环丙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2H-吲唑50b(240mg)，产率：68.18％。
MS m/z(ESI):319.0[M+1]
第三步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-环丙基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈
将6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈34a(100mg,251.09μmol)，4-氯-2-环丙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2H-吲唑50b(120.00mg,376.64μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(42.05mg,50.22μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(46.87mg,100.44μmol)和磷酸钾(133.25mg,627.73μmol)加入到1,4-二氧六环(3mL)和水(0.3mL)的混合溶液中，氩气置换三次，加热至130℃，反应15小时，反应完全，反应冷却到室温，乙酸乙酯与水进行萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-环丙基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈50c(55mg)，产率：42.95％。
MS m/z(ESI):492.9[M-16]
第四步
6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-环丙基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺将6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-环丙基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-腈50c(55mg,107.84μmol)和5M的氢氧化钠溶液(0.5mL)加入到甲醇(2mL)，缓慢滴加30％的双氧水(0.5mL)。室温反应1小时，反应完全，以三氟乙酸调节pH＝3-4，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到6-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-3-(4-氯-2-环丙基-2H-吲唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-甲酰胺50(25mg)，产率：35.36％。
MS m/z(ESI):527.9[M+1]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.03(s,1H),7.65-7.77(m,3H),7.54-7.62(m,2H),7.51(dd,J＝8.4,1.5Hz,2H),4.68(dt,J＝14.9,4.4Hz,2H),3.72(td,J＝5.1,1.8Hz,1H),3.48(ddd,J＝13.8,10.4,2.7Hz,2H),2.77(d,J＝13.3Hz,2H),2.18(ddd,J＝14.0,10.1,3.9Hz,2H),1.28-1.14(m,4H).
实施例51
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(2-(甲基-d3)-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470001051
第一步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(2-(甲基-d3)-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈8b(115mg,288.76μmol)，2-(甲基-d3)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2H-吲唑51a(113.11mg,433.14μmol，根据专利WO 2016180536自制而得)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(48.36mg,57.75μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(53.90mg,115.50μmol)和磷酸钾(153.24mg,721.89μmol)加入到1,4-二氧六环(3mL)和水(0.3mL)的混合溶液中，氩气置换气体后，加热至130℃，反应15小时，反应完全，反应冷却到室温，乙酸乙酯与水进行萃取，合并有机相，有机相饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(2-(甲基-d3)-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈51b(33mg)，产率：25.25％。
MS m/z(ESI):452.0[M+1]
第二步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(2-(甲基-d3)-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
将5M的氢氧化钠溶液(0.15mL)和2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(2-(甲基-d3)-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈51b(33mg,72.92μmol)加到甲醇(2mL)，缓慢加入30％的双氧水(0.3mL)，室温搅拌0.5小时，反应完全，加入三氟醋酸调节PH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(2-(甲基-d3)-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺51(26mg)，产率：67.6％。
MS m/z(ESI):470.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.39(s,1H),8.35(s,3H),8.09(d,J＝8.2Hz,2H),7.99(s,1H),7.76(s,1H),7.71(d,J＝8.0Hz,2H),7.67(d,J＝2.2Hz,2H),7.55(t,J＝7.6Hz,2H),7.48(d,J＝7.2Hz,1H),4.35(s,2H),3.41-3.54(m,2H),2.57(d,J＝9.7Hz,2H),2.09(dd,J＝12.5,8.2Hz,2H)
实施例52
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(1-(甲基-d3)-1H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470001061
第一步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(1-(甲基-d3)-1H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈8b(115mg,288.76μmol)，1-(甲基-d3)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吲唑52a(113.11mg,433.14μmol，根据专利WO 2016180536自制而得)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(48.36mg,57.75μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(53.90mg,115.50μmol)和磷酸钾(153.24mg,721.89μmol)加入到1,4-二氧六环(3mL)和水(0.3mL)的混合溶液中，氩气置换气体后，加热至130℃，反应15小时，反应完全，反应冷却到室温，乙酸乙酯与水进行萃取，合并有机相，有机相饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(1-(甲基-d3)-1H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈52b(50mg)，产率：38.26％。MS m/z(ESI):452.0[M+1]
第二步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(1-(甲基-d3)-1H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
将5M的氢氧化钠溶液(0.2mL)和2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(1-(甲基-d3)-1H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈52b(50.00mg,110.49μmol)加到甲醇(2mL)，缓慢加入30％的双氧水(0.4mL)，室温搅拌3小时，反应完全，加入三氟醋酸调节PH至酸性，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(1-(甲基-d3)-1H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺52(20mg)，产率：37.37％。
MS m/z(ESI):470.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.37(s,1H),8.38(s,3H),8.09(s,1H),7.96(s,1H),7.67-7.80(m,3H),7.51-7.62(m,4H),7.48(d,J＝6.9Hz,1H),4.35(s,2H),3.52(d,J＝13.9Hz,2H),2.56(d,J＝11.6Hz,2H),2.10(t,J＝9.7Hz,2H).
实施例53
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-环丙基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470001071
第一步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-溴-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将5-溴-2-氯-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈45a(600mg,1.55mmol)，4-苯基哌啶-4-胺8a(362.09mg,1.70mmol)和N,N-二异丙基乙胺(999.96mg,7.74mmol)加到N,N-二甲基乙酰胺(6mL)。加热至110℃，反应7小时，反应完全，加入30mL水，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-溴-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈53a(700mg)，产率：85.75％。
MS m/z(ESI):510.0[M-16]
第二步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-环丙基-2H-吲唑-5-基)-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-溴-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈53a(100mg,189.56μmol)，4-氯-2-环丙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2H-吲唑50b(90.59mg,284.34μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(31.75mg,37.91μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(35.38mg,75.82μmol)和磷酸钾(100.60mg,473.91μmol)加到N,N-二甲基甲酰胺(3mL)，氩气置换三次，加热至80℃，搅拌2小时。反应结束后，加入20mL水，以乙酸乙酯萃取(20mL×3)，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-环丙基-2H-吲唑-5-基)-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈53b(110mg)，产率：90.77％。
MS m/z(ESI):622.3[M-16]
第三步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-环丙基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将三氟乙酸(1.5mL)加入2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-环丙基-2H-吲唑-5-基)-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈53b(110mg,172.07μmol)的二氯甲烷(4.5mL)，室温搅拌2小时，反应完全，减压浓缩，得到的残留物加到胺甲醇溶液中(3mL)，室温反应2小时，反应完全。减压浓缩，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-环丙基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈53c(87.8mg)，产率：99％，产物未经纯化，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):492.2[M-16]
第四步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-环丙基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
将2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-环丙基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈53c(87mg,139.64μmol)和5M的氢氧化钠溶液(0.5mL)加到甲醇中(3mL)，缓慢加入30％的双氧水(0.5mL)，室温搅拌2小时，反应完全。加入三氟乙酸调PH＝6-7，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-环丙基-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺53(30mg)，产率：40.52％。
MS m/z(ESI):527.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.34(s,3H),7.98(s,1H),7.83(s,1H),7.71(d,J＝7.8Hz,2H),7.60(d,J＝8.5Hz,1H),7.54(t,J＝7.6Hz,2H),7.47(t,J＝7.2Hz,1H),7.38(d,J＝8.4Hz,1H),7.24-7.33(m,2H),4.33(d,J＝14.0Hz,2H),3.82(dt,J＝6.7,3.1Hz,1H),3.45(dd,J＝13.4,8.9Hz,2H),2.54(s,2H),2.10(dd,J＝12.3,8.1Hz,2H),1.07-1.22(m,4H).
实施例54
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-(甲基-d3)-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470001091
第一步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-(甲基-d3)-2H-吲唑-5-基)-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-溴-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈53a(100mg,189.56μmol)，4-氯-2-(甲基-d3)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2H-吲唑48c(120mg,406.78μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(31.75mg,37.91μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(35.38mg,75.82μmol)和磷酸钾(100.60mg,473.91μmol)加到N,N-二甲基甲酰胺(3mL)，氩气置换三次，加热至80℃，搅拌2小时。反应结束后，加入20mL水，以乙酸乙酯萃取(20mL×3)，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-(甲基-d3)-2H-吲唑-5-基)-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈54a(65mg)，产率：55.64％。MS m/z(ESI):599.0[M-16]
第二步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-(甲基-d3)-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-(甲基-d3)-2H-吲唑-5-基)-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈54a(61mg,98.99μmol)和三氟乙酸(1mL)加到二氯甲烷中(2mL)，室温搅拌过夜，反应完全，减压浓缩，得到的残留物加到7M的胺甲醇溶液中(2mL)，室温反应0.5小时。反应完全，减压浓缩，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-(甲基-d3)-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈54b(48mg)，产率：99％，产物未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):468.9[M-16]
第三步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-(甲基-d3)-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
将2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-(甲基-d3)-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈54b(48mg,98.77μmol)和5M的氢氧化钠溶液(0.5mL)加入甲醇中(3mL)，缓慢加入30％的双氧水(0.5mL)，室温反应1小时。反应完全，以三氟乙酸调节pH＝3-4，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-2-(甲基-d3)-2H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺54(35mg)，产率：57％。
MS m/z(ESI):504.0[M+1]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.22(s,1H),7.72(d,J＝7.8Hz,2H),7.57(t,J＝7.6Hz,2H),7.50(dd,J＝8.5,4.7Hz,2H),7.31(dd,J＝8.8,1.9Hz,1H),7.19(d,J＝1.9Hz,1H),4.57(d,J＝14.2Hz,2H),3.44(t,J＝12.2Hz,2H),2.72(d,J＝13.8Hz,2H),2.17(t,J＝11.1Hz,2H).
实施例55
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-1-(甲基-d3)-1H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003066760470001101
第一步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-1-(甲基-d3)-1H-吲唑-5-基)-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-溴-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈53a(200mg,379.12μmol)，4-氯-1-(甲基-d3)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吲唑49b(168.10mg,568.69μmol)，甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(63.49mg,75.82μmol)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(70.76mg,151.65μmol)和磷酸钾(201.19mg,947.81μmol)加到N,N-二甲基甲酰胺(3mL)，氩气置换三次，加热至80℃，搅拌2小时。反应结束后，加入20mL水，以乙酸乙酯萃取(20mL×3)，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，有机相以无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到的残留物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-1-(甲基-d3)-1H-吲唑-5-基)-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈55a(110mg)，产率：47.08％。
MS m/z(ESI):599.0[M-16]
第二步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-1-(甲基-d3)-1H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈
将2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-1-(甲基-d3)-1H-吲唑-5-基)-7-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈55a(110mg,178.50μmol)和三氟乙酸(1mL)加到二氯甲烷中(2mL)，室温搅拌过夜，反应完全，减压浓缩，得到的残留物加到7M的胺甲醇溶液中(2mL)，室温反应0.5小时。反应完全，减压浓缩，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-1-(甲基-d3)-1H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈55b(75mg)，产率：99％，产物未经纯化，直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):468.9[M-16]
第三步
2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-1-(甲基-d3)-1H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺
将2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-1-(甲基-d3)-1H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-腈55b(85g,174.90mmol)和5M的氢氧化钠溶液(0.5mL)加入甲醇(3mL)，缓慢滴加30％的双氧水(0.5mL)，室温反应1小时，反应完全，用三氟乙酸调节pH＝3-4，减压浓缩，制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到2-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)-5-(4-氯-1-(甲基-d3)-1H-吲唑-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-甲酰胺55(40mg)，产率：45.29％。
MS m/z(ESI):504.0[M+1]
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.99(d,J＝1.5Hz,1H),7.72(dd,J＝7.6,1.7Hz,2H),7.53-7.60(m,2H),7.40-7.52(m,3H),7.17(d,J＝1.6Hz,1H),4.56(dt,J＝14.3,4.4Hz,2H),3.43(ddd,J＝13.8,10.3,2.7Hz,2H),2.72(d,J＝13.7Hz,2H),2.17(ddd,J＝13.8,9.9,3.7Hz,2H).
生物学评价
测试例1、本发明化合物对SHP2变构抑制活性测定
以下方法用于测定本发明化合物在体外条件下对重组人源全长SHP2活性的抑制程度。SHP2通过二-酪氨酰-磷酸化肽与其Src同源2(SH2)结构域的结合而变构激活。后者的激活步骤导致SHP2的自抑制界面释放，随后使得SHP2蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)活化，可用于底物识别和反应催化。
将实验流程简述如下：受试化合物首先溶解于DMSO中制备为贮存液。反应在384孔Small VolumeTM HiBase微孔板(Greiner，784075)中进行，首先向孔中加入SHP2(signalchem，P38-20G-10ug)和SHP-2Activating Peptide(IRS1_pY1172(dPEG8)pY1222)(BPS，79319-1)，终浓度分别为0.5nM和0.5uM，继而加入待测化合物，浓度范围为0.00004-10uM，于25℃孵育60分钟。随后向反应中DiFMUP(Thermo，D6567)，于25℃孵育30分钟。孵育结束后，使用微量板读数仪(BMG)读数，激发和发射波长分别为340nm和450nm。通过与对照组(0.1％DMSO)的荧光强度比值进行比较，计算化合物在各浓度下的百分比抑制率，并通过GraphPad Prism 5软件以化合物浓度对数值-抑制率进行非线性回归分析，获得化合物的IC50值，见表1。
表1本发明化合物对全长SHP2酶活性抑制的IC50数据
Figure BDA0003066760470001121
Figure BDA0003066760470001131
结论：从表1可以看出，本发明的化合物对SHP2酶具有较好的变构抑制作用。
备注：SHP-099的结构(根据WO2015107493制备而得)如下：
Figure BDA0003066760470001132
测试例2、本发明化合物对NCI-H23细胞增殖抑制测定
以下方法用于测定本发明化合物对NCI-H23细胞增殖的影响。NCI-H23(含有KRASG12C突变)购于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，培养于含10％胎牛血清、100U青霉素，100μg/mL链霉素和1mM Sodium Pyruvate的RPMI 1640培养基中。细胞活力通过CellTiter-
Figure BDA0003066760470001133
Luminescent Cell Viability Assay试剂盒(Promega，货号G7573)进行测定。
实验方法按照试剂盒说明书的步骤操作，简述如下：受试化合物首先溶解于DMSO中制备为10mM贮存液，随后以培养基进行稀释，配制成测试样品，化合物的终浓度范围在10000nM-1.52nM。将处于对数生长期的细胞以1000个细胞每孔的密度接种至96孔细胞培养板中，在37℃，5％CO2培养箱中培养过夜，随后加入受试化合物后继续培养120小时。培养结束后，向每孔加入50μL体积的CellTiter-Glo检测液，震荡5分钟后静置10分钟，随后在酶标仪上使用Luminescence模式读取样品各孔发光值。通过与对照组(0.3％DMSO)的数值进行比较计算化合物在各浓度点的百分比抑制率，之后在GraphPad Prism 5软件中以化合物浓度对数-抑制率进行非线性回归分析，获得化合物抑制细胞增殖的IC50值，见表2。
表2本发明化合物对NCI-H23细胞增殖抑制的IC50数据
实施例编号 IC<sub>50</sub>(nM)/NCI-H23
RMC-4550 240
实施例2 87.83
实施例7 34.85
实施例8 12.67
实施例10 97.01
实施例12 47.85
实施例13 80.95
实施例17 83.52
实施例21 82.93
实施例22 8.591
实施例23 71.53
实施例24 75.41
实施例25 60.75
实施例26 57.15
实施例29 39.71
实施例30 46.05
实施例33 12.88
实施例34 4.41
实施例54 50.98
实施例55 68.79
从表2可以得出，本发明的化合物对NCI-H23具有较好的抑制作用。
备注：RMC-4550的结构(根据WO2018013597制备而得)如下：
Figure BDA0003066760470001151
测试例3、本发明化合物对NCI-H358细胞增殖抑制测定
以下方法用于测定本发明化合物对NCI-H358细胞增殖的影响。NCI-H358细胞(含有KRAS G12C突变)购于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，培养于含10％胎牛血清、100U青霉素，100μg/mL链霉素和1mM Sodium Pyruvate的RPMI 1640培养基中。细胞活力通过CellTiter-
Figure BDA0003066760470001152
Luminescent Cell Viability Assay试剂盒(Promega，货号G7573)进行测定。
实验方法按照试剂盒说明书的步骤操作，简述如下：受试化合物首先溶解于DMSO中制备为10mM贮存液，随后以培养基进行稀释，配制成测试样品，化合物的终浓度范围在10000nM-1.52nM。将处于对数生长期的细胞以1000个细胞每孔的密度接种至96孔细胞培养板中，在37℃，5％CO2培养箱中培养过夜，随后加入受试化合物后继续培养120小时。培养结束后，向每孔加入50μL体积的CellTiter-Glo检测液，震荡5分钟后静置10分钟，随后在酶标仪上使用Luminescence模式读取样品各孔发光值。通过与对照组(0.3％DMSO)的数值进行比较计算化合物在各浓度点的百分比抑制率，之后在GraphPad Prism 5软件中以化合物浓度对数-抑制率进行非线性回归分析，获得化合物抑制细胞增殖的IC50值，见表3。
表3本发明化合物对NCI-H358细胞增殖抑制的IC50数据
实施例编号 IC<sub>50</sub>(nM)/NCI-H358
RMC-4550 80
实施例7 20.07
实施例12 5.10
实施例21 42.01
实施例22 1.223
实施例23 17.67
实施例24 54.51
实施例25 13.85
实施例26 19.34
实施例29 27.23
实施例34 11.03
实施例54 21.27
从表3可以得出，本发明的化合物对NCI-H358具有较好的抑制作用。

Claims (26)

1.一种式(AI)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
Figure FDA0003066760460000011
其中：
当Z选自-NH-时；V选自-N-或-CH-；或者；当Z选自-O-时；V选自-N-；
Q和T各自独立地选自N或CH；其中Q和T中至少一个选自N；
环A选自萘基、双环杂芳基；
R1相同或不同，各自独立地选自氢原子、烷基、烯基、炔基、氰基、卤素、硝基、环烷基、杂环基、-OR5、-C(O)R5、-SO2R5、-NR6R7、-SO2NR6R7、-NHSO2R5或-C(O)NR6R7，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基或杂环基任选进一步被一个或多个选自氘、卤素、硝基、氰基、烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-SO2R5、-NR6R7、-SO2NR6R7、-NHSO2R5或-C(O)NR6R7的取代基所取代；
R2选自氰基、四氮唑基、-C(O)R5、-C(O)OR5或-C(O)NR6R7；
R3和R4与其相连接的N原子一起形成4～11元杂环基，优选为5～11元杂环基，其中所述的杂环基内含有一个或多个N、O、S或SO2原子，并且杂环基上任选进一步被一个或多个选自卤素、硝基、氰基、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-CH2R5、-CH(OH)R5、-CH2OR5、＝O、-OR5、-SR5、-SOR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-SO2R5、-NR6R7、-SO2NR6R7、-NHC(＝NH)NH2、-NHSO2R5或-C(O)NR6R7的取代基所取代，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、氨基、卤素、硝基、氰基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-SO2R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
或者，R3和R4与其相连接的N原子一起形成基团：
Figure FDA0003066760460000012
Figure FDA0003066760460000021
为单键或双键；
当
Figure FDA0003066760460000022
表示单键时，G和M各自独立地选自N或CRj；
当
Figure FDA0003066760460000023
表示双键时，G和M各自独立地选自C；
环B选自环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
E选自NRk、(CRpRq)p、O或S；
F选自(CRpRq)q；
条件是，当E选自(CRpRq)p时，p为1，q为1；或者，p为2，q为0；当E选自NRk、O或S时，q为1；
J选自CRpRq；
K选自NRk、(CRpRq)r、O或S；
r为0或1；
Rm、Rn、Rp和Rq相同或不同，各自独立地选自RA；
或者，Rp和Rq与相连接的碳原子一起形成RB；
Rc和Rd相同或不同，各自独立地选自氢原子、卤素、烷基或-OR5，其中所述的烷基任选进一步被羟基、卤素、烷氧基、环烷基或-NR6R7的取代基所取代；
或者，Rc和Rd与相连接的碳原子一起形成RB；
Rg相同或不同，各自独立地选自氢原子、卤素、硝基、烷基、烯基、炔基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-SO2R5、-NR6R7、-SO2NR6R7、-NHC(＝NH)NH2、-NHSO2R5或-C(O)NR6R7，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被羟基、卤素、烷基、烷氧基、环烷基或-NR6R7的取代基所取代；
或者，两个Rg与相连接的同一个碳原子可以一起形成C＝O；
Rj和Rk相同或不同，各自独立地选自氢原子或烷基；
RA相同或不同，各自独立地选自氢原子、卤素、硝基、烷基、烯基、炔基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-SO2R5、-NR6R7、-SO2NR6R7、-NHC(＝NH)NH2、-NHSO2R5或-C(O)NR6R7，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被羟基、卤素、烷基、烷氧基、环烷基或-NR6R7的取代基所取代；
RB相同或不同，各自独立地选自3～10元环烷基或3～10元杂环基，其中所述的环烷基或杂环基任选进一步被一个或多个选自卤素、氰基、硝基、烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-OC(O)R5、-SO2R5、-NR6R7、-SO2NR6R7、-NHC(＝NH)NH2、-NHSO2R5或-C(O)NR6R7的取代基所取代；
R5、R6和R7各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、氨基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-SO2R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
或者，R6和R7与其相连接的N原子一起形成3～8元杂环基，其中所述的3～8元杂环内含有一个或多个N、O、S或SO2原子，并且3～8元杂环上任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、氨基、烷基或烷氧基的取代基所取代；
R8、R9和R10各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧基或羧酸酯基的取代基所取代；
m为0、1、2、3、4或5；
n选自0，1，2，3或4；
p选自1或2。
2.根据权利要求1所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为式(AII)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，
Figure FDA0003066760460000031
其中：环A、m、V、R1～R4的定义如权利要求1中所述。
3.根据权利要求2所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，
Figure FDA0003066760460000041
其中：环A、V、m、R1、R3和R4的定义如权利要求2中所述。
4.根据权利要求1～3中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：
R3和R4与其相连接的N原子一起形成4～8元单环杂环基，优选为5～6元单环杂环基，更优选为哌啶基，其中所述的单环杂环基任选进一步被一个或多个选自甲基、氨基、环烷基、苯基、卤代苯基、杂芳基、-CH2NH2、-CH2OH、-NHC(＝NH)NH2、＝O或-OR5的取代基所取代；其中所述的甲基、环烷基、苯基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自甲磺酰基、羟基、氨基、卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、吡啶基或嘧啶基的取代基所取代；其中所述的杂芳基优选为吡啶基、嘧啶甲基苯并吡唑基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基或苯并噁唑基；
R5的定义如权利要求1中所述。
5.根据权利要求1～3中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：
R3和R4与其相连接的N原子一起形成7～11元螺杂环基，其中所述的螺杂环基任选进一步被一个或多个选自甲基、氨基、-CH2NH2、-CH2OH、-NHC(＝NH)NH2、＝O或-OR5的取代基所取代；
R5的定义如权利要求1中所述。
6.根据权利要求5所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中所述的螺杂环基选自：
Figure FDA0003066760460000042
Ra相同或不同，各自独立地选自甲基、氨基、-CH2NH2、-CH2OH、-NHC(＝NH)NH2或-OR5；
或者，两个Ra与相连接的同一个碳原子一起形成C＝O；
t为1、2或3；
R5的定义如权利要求1中所述。
7.根据权利要求1～3中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：
R3和R4与其相连接的N原子一起形成7～11元桥杂环基，其中所述的桥杂环基任选进一步被一个或多个选自甲基、氨基、-CH2NH2、-CH2OH、-NHC(＝NH)NH2、＝O或-OR5的取代基所取代；
R5的定义如权利要求1中所述。
8.根据权利要求1～3中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：
R3和R4与其相连接的N原子一起形成7～11元稠杂环基，其中所述的稠杂环基任选进一步被一个或多个选自甲基、氨基、-CH2NH2、-CH2OH、-NHC(＝NH)NH2、＝O或-OR5的取代基所取代；
R5的定义如权利要求1中所述。
9.根据权利要求2所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为式(II)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
Figure FDA0003066760460000051
其中：
环B选自苯基、3～8元环烷基、4～8元杂环基或5～6元杂芳基；
E选自NRk、(CRpRq)p、O或S；
F选自(CRpRq)q；
条件是，当E选自(CRpRq)p时，p为1，q为1；或者，p为2，q为0；当E选自NRk、O或S时，q为1；
Rm选自氨基、-CH2NH2或-NHC(＝NH)NH2；
Rn选自氢原子、甲基或-CH2OH；
Rp和Rq各自独立地选自氢原子、卤素、氨基、C1-C4烷基、羟基C1-C4烷基、氨基C1-C4烷基或-OR5；
Figure FDA0003066760460000061
环A、V、G、M、m、n、R1～R2、R5、Rk和Rg的定义如权利要求2中所述。
10.根据权利要求2所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为式(III)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
Figure FDA0003066760460000062
其中：
环B选自苯基、3～8元环烷基、4～8元杂环基或5～6元杂芳基；
J选自CRpRq；
K选自NRk、(CRpRq)r、O或S；
r为0或1；
Rm选自氨基、-CH2NH2或-NHC(＝NH)NH2；
Rn选自氢原子、甲基或-CH2OH；
Rp和Rq各自独立地选自氢原子、卤素、氨基、C1-C4烷基、羟基C1-C4烷基、氨基C1-C4烷基或-OR5；
Figure FDA0003066760460000063
环A、V、G、M、m、n、R1～R2、R5、Rk和Rg的定义如权利要求2中所述。
11.根据权利要求2所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为式(IV)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
Figure FDA0003066760460000071
其中：
环B选自苯基、3～8元环烷基、4～8元杂环基或5～6元杂芳基；
Rc和Rd与相连接的原子一起形成3～8元环烷基；
Rm选自氨基、-CH2NH2或-NHC(＝NH)NH2；
Rn选自氢原子、甲基或-CH2OH；
Figure FDA0003066760460000072
环A、V、G、M、m、n、R1～R2和Rg的定义如权利要求2中所述。
12.根据权利要求2所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为式(V)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
Figure FDA0003066760460000073
其中：
L1选自不存在、-(C＝O)-、-(CRwRv)u-，其中任意的一个-(CRwRv)-任选进一步被-N(Rz)-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-所替代；
每个Rw和Rv相同或不同，各自独立地选自氢原子、卤素、羟基、烷基或烷氧基；
每个Rz相同或不同，各自独立选自氢原子或烷基；
环E选自4～11元含N的单环杂环基、4～11元含N的稠杂环基或4～11元含N的桥杂环基，其中所述的单环杂环基、稠杂环基、桥杂环基任选进一步被一个或多个选自卤素、烷基、-OR5或＝O的取代基所取代；
环K选自不存在，环烷基、芳基或杂芳基，其中所述的环烷基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、氨基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-SO2R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
其中-L1-环K和-(CH2)W-NH2连接于环E的同一个碳原子上；
w为0，1或2；
u为0，1，2或3；
环A、V、m、R1～R2、R5、R8～R10的定义如权利要求2中所述。
13.根据权利要求1～3、9～12任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R1选自氢原子、F、Cl、Br、氨基、羟基、氰基、硝基、甲氧基、乙氧基、甲基、乙基、二氟甲基、环丙基、d3-甲基、乙炔基、乙烯基、-NHCH3或-N(CH3)2。
14.根据权利要求9～12任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R2选自-C(O)NH2或氰基。
15.根据权利要求1～12任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R5选自氢原子或烷基。
16.根据权利要求1～3、9～12任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中环A选自萘基、苯并吡唑基或苯并噻唑基。
17.根据权利要求9～11任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中环B选自：
Figure FDA0003066760460000081
18.根据权利要求9～11任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中Rg相同或不同，各自独立地选自氢原子、F、Cl、Br、氨基、羟基、氰基、硝基、甲氧基、乙氧基、甲基、乙基、乙炔基、乙烯基、-NHCH3或-N(CH3)2；
或者，两个Rg与相连接的同一个碳原子可以一起形成C＝O。
19.根据权利要求12所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中环E选自
Figure FDA0003066760460000091
20.根据权利要求1～19中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中所述的化合物选自：
Figure FDA0003066760460000092
Figure FDA0003066760460000101
Figure FDA0003066760460000111
Figure FDA0003066760460000121
21.一种制备根据权利要求2所述的式(AII)化合物或其立体异构体、互变异构体的方法，该方法包括：
Figure FDA0003066760460000122
式(AIIa)化合物与NHR3R4在碱性条件下进行亲核取代反应，得到式(AIIb)化合物；式(AIIb)化合物与式(AIIc)化合物，在钯催化剂和碱性条件下进行Suzuki反应，得到的化合物任选进一步脱去保护基，得到式(AII)化合物；
其中：
M1选自-B(OH)2或
Figure FDA0003066760460000123
X1选自离去基团，所述的离去基团选自卤素或-SO2Rt；
X2选自卤素；
Rt选自烷基；
环A，V，m和R1～R4的定义如权利要求2中所述。
22.一种制备根据权利要求2所述的式(AII)化合物或其立体异构体、互变异构体的方法，该方法包括：
Figure FDA0003066760460000124
式(AIIa)化合物与式(AIIc)化合物，在钯催化剂和碱性条件下进行Suzuki反应，得到式(AIId)化合物；式(AIId)化合物与NHR3R4在碱性条件下进行亲核取代反应，得到的化合物任选进一步脱去保护基，得到式(AII)化合物；
其中：
M1选自-B(OH)2或
Figure FDA0003066760460000131
X1选自离去基团，所述的离去基团选自卤素或-SO2Rt；
X2选自卤素；
Rt选自烷基；
环A，V，m和R1～R4的定义如权利要求2中所述。
23.一种药物组合物，所述的药物组合物含有有效剂量的根据权利要求1～20中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，及可药用的载体、赋形剂或它们的组合。
24.根据权利要求1～20中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或根据权利要求23所述的药物组合物在制备SHP2变构抑制剂中的用途。
25.根据权利要求1～20中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或根据权利要求23所述的药物组合物在制备治疗由SHP2介导的疾病的药物中的用途，其中所述的由SHP2介导的疾病优选为癌症、癌转移、心血管疾病、免疫紊乱、纤维化或视觉紊乱。
26.根据权利要求25所述的用途，其中所述的由SHP2介导的疾病选自努南综合征、豹斑综合征、青少年髓单核细胞白血病、成神经细胞瘤、黑色素瘤、急性髓性白血病、乳腺癌、食道癌、肺癌、结肠癌、头癌、成神经细胞瘤、头颈的鳞状细胞癌、胃癌、间变性大细胞淋巴瘤和成胶质细胞瘤。
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