BR112021005540A2

BR112021005540A2 - vacinas autólogas bi-haptenizadas e seus usos

Info

Publication number: BR112021005540A2
Application number: BR112021005540-1A
Authority: BR
Inventors: David Berd
Original assignee: Biovaxys Llc
Priority date: 2018-09-24
Filing date: 2019-09-24
Publication date: 2021-06-29
Also published as: KR20210076016A; US20220047703A1; EP3856895A1; CN113272423A; JP2022502493A; CA3113683A1; EP3856895A4; AU2019346403A1; WO2020068786A1

Abstract

VACINAS AUTÓLOGAS BI-HAPTENIZADAS E SEUS USOS. Em algumas modalidades, são revelados métodos de tratamento de câncer, incluindo cânceres metastáticos, cânceres que são resistentes à terapia com inibidor do ponto de verificação imune e cânceres que não respondem à terapia com inibidor do ponto de verificação imune ou possuem resistência adquirida à terapia com inibidor do ponto de verificação imune.

Description

VACINAS AUTÓLOGAS BI-HAPTENIZADAS E SEUS USOS REFERÊNCIA CRUZADA COM PEDIDOS RELACIONADOS

[001] Esse pedido reivindica o benefício do Pedido de Patente U.S. Provisório Nº 62/735.381, depositado em 24 de setembro de 2018, e Pedido de Patente U.S. Provisório Nº 62/746.066, depositado em 16 de outubro de 2018, que são incorporados nesse relatório descritivo por referência em suas totalidades.

CAMPO DA INVENÇÃO

[002] A invenção descrita nesse relatório descritivo está relacionada de forma geral ao método de tratamento de câncer metastático, e mais particularmente, mas não exclusivamente, ao uso de vacinas autólogas em combinação com outros tratamentos.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[003] Regimes de imunoterapia que utilizam células tumorais intactas, não modificadas, preparadas a partir de tumores retirados do paciente, foram intensamente descritas na literatura (veja, por exemplo, Berd e cols., Cancer Research 1986; 46: 2.572-2.577; Hoover e cols., Cancer 1985; 55: 1.236-1.243; e Patente U.S. Nº 5.484.596 para Hanna e cols.). composições de vacina alternativas baseadas em células rompidas também foram sugeridas incluindo, por exemplo, membranas de célula tumoral (veja, por exemplo, Levin e cols., “Human Tumors in Short Term Culture: Techniques and Clinical Applications”, P.P. Dendy, Ed., 1976, Academic Press, Londres, páginas 277-280) ou peptídeos tumorais extraídos de tumores (veja, por exemplo, Patente U.S. Nº 5.550.214 para Eberlein, e Patente U.S. Nº 5.487.556 para Elliot e cols.). As células tumorais também podem ser modificadas de alguma forma para alterar ou aumentar a resposta imune (veja, por exemplo, Hostetler e cols., Cancer Research 1989; 49: 1.207-1.213; e Muller e cols., Anticancer Research 1991; 11: 925-930).

[004] Uma forma particular de modificação da célula tumoral que possui um efeito pronunciado sobre a imunoterapia é o acoplamento de um hapteno às células tumorais. Uma vacina célula-inteira autóloga modificada com o hapteno dinitrofenil (DNP) demonstrou que produz respostas inflamatórias em locais metastáticos de pacientes com melanoma. A terapia adjuvante com vacina modificada com DNP produz taxas de sobrevida pós-cirúrgica acentuadamente maiores do que aquelas relatadas após cirurgia isoladamente. A Patente U.S. Nº 5.290.551 para Berd revela e reivindica composições de vacina que compreendem células de melanoma haptenizadas. Pacientes com melanoma que foram tratados com essas células desenvolveram uma resposta imune forte. Essa resposta pode ser detectada em uma resposta hipersensibilidade do tipo retardada (DTH) às células tumorais haptenizadas e não haptenizadas. Mais importante ainda, a resposta imune resultou em taxas aumentadas de sobrevida de pacientes com melanoma.

[005] Vacinas de célula tumoral haptenizadas também foram descritas para outros tipos de cânceres, incluindo câncer de pulmão, câncer de mama, câncer do cólon, câncer pancreático, câncer ovariano e leucemia (veja as Publicações de Patente Internacional Nos WO 96/40173 e WO 00/09140, e Patente U.S. Nº 6.333.028, e as técnicas associadas e regimes de tratamento otimizados (veja as Publicações de Patente Internacional Nos WO 00/38710, WO 00/31542, WO 99/52546 e WO

98/14206). Por exemplo, foi demonstrado que a adição de albumina sérica humana (HSA) aumenta a estabilidade de preparações de célula tumoral haptenizada (veja WO 00/29554 e Patente U.S. Nº 6.248.585).

[006] Também foi determinado que a haptenização de extratos de célula tumoral, por exemplo, membranas plasmáticas ou peptídeos, pode gerar vacinas para imunoterapia (veja as Publicações de Patente Internacional Nos WO 96/40173 e WO 99/40925, ambas por Berd e cols.).

[007] Também têm sido desenvolvidos em paralelo anticorpos terapêuticos dirigidos contra produtos do gene do ponto de verificação. Veja, por exemplo, Ribas e Wolchok, “Cancer Immunotherapy Using Checkpoint Blockade”, Science 359: 1.350-55 (2018). Embora essas terapias do ponto de verificação tenham sido relativamente eficazes, ainda há o problema da insensibilidade inicial do tumor, resistência adquirida ou um tumor previamente responsivo que se torna refratário à terapia do ponto de verificação.

[008] O tratamento desses pacientes que possuem tumores insensíveis, tumores que possuem resistência adquirida, ou se tornam de algum modo geralmente refratário à terapia do ponto de verificação é um problema técnico importante no campo de tratamento do câncer.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[009] Modalidades reveladas nesse relatório descritivo são métodos de tratamento de câncer, o método compreendendo a administração de uma vacina tumoral autóloga bi- haptenizada em combinação com pelo menos uma terapia do ponto de verificação. Em algumas modalidades, o câncer é câncer metastático. Em algumas modalidades, o câncer possui resistência adquirida a um inibidor do ponto de verificação imune. Em algumas modalidades, o câncer é insensível a um inibidor do ponto de verificação imune.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[010] O sumário anterior, bem como a descrição detalhada da invenção seguinte, será mais bem compreendido quando lido em conjunto com os desenhos em anexo.

[011] A Figura 1-A mostra uma resposta de hipersensibilidade do tipo retardada pós-vacina, positiva, típica. A Figura 1-B mostra uma resposta de DTH típica ao controle negativo (veículo) e controle positivo (BCG).

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[012] Salvo definição em contrário, todos os termos técnicos e científicos usados nesse relatório descritivo possuem os mesmos significados como comumente compreendidos por aqueles técnicos no assunto à qual essa invenção pertence. Todas as patentes e publicações citadas nesse relatório descritivo são incorporadas por referência em suas totalidades.

[013] Em uma modalidade, a invenção fornece um método de tratamento de câncer, o método compreendendo: (i) a administração de uma quantidade eficaz de pelo menos um inibidor do ponto de verificação imune; e, (ii) a administração de uma quantidade eficaz de uma vacina autóloga bi-haptenizada.

[014] Em algumas modalidades, a vacina autóloga bi- haptenizada é administrada a cada duas semanas por pelo menos oito semanas. Em algumas modalidades, a vacina autóloga bi- haptenizada é administrada uma vez por semana por pelo menos seis semanas. Em algumas modalidades, o método ainda compreende pelo menos uma injeção de reforço da vacina autóloga bi-haptenizada cerca de seis meses após a primeira injeção. Em algumas modalidades, injeções de reforço continuam a cada seis meses até progressão da doença.

[015] Em uma modalidade, a invenção fornece um método de tratamento de câncer, o método compreendendo: a co- administração de uma ou mais composições que compreendem quantidades terapeuticamente eficazes de: (i) pelo menos um inibidor do ponto de verificação imune; e, (ii) uma vacina autóloga bi-haptenizada.

[016] Em algumas modalidades, a quantidade eficaz de uma vacina autóloga bi-haptenizada é administrada a cada duas semanas até que o teste diagnóstico de hipersensibilidade do tipo retardada seja positivo.

[017] Em algumas modalidades, o câncer é selecionado do grupo que consiste em câncer ovariano, câncer uterino, câncer vaginal, câncer vulvar e câncer endometrial.

[018] Em algumas modalidades, o (pelo menos um) inibidor do ponto de verificação imune é selecionado do grupo que consiste em CTLA-4, PD-1, PD-L1, LAG3, B7-H3, B7-H4, KIR, OX40, IDO-1, IDO-2, CEACAM1, INFR5F4, BTLA, OX4OL e TIM3, ou combinações destes. Em algumas modalidades preferidas, o inibidor do ponto de verificação imune é PD-1. Em algumas modalidades, o inibidor do ponto de verificação imune de PD- 1 é selecionado do grupo que consiste em nivolumab, pembrolizumab, atezolizumab, avelumab e durvalumab.

[019] Em algumas modalidades preferidas, o inibidor do ponto de verificação imune é CTLA-4. Em algumas modalidades, o inibidor do ponto de verificação imune de CTLA-4 é selecionado do grupo que consiste em ipilimumab e tremelimumab.

[020] Em algumas modalidades, o (pelo menos um) inibidor do ponto de verificação imune compreende um inibidor do ponto de verificação imune de PD-1 e um inibidor do ponto de verificação imune de CTLA-4.

[021] Em uma modalidade, a invenção fornece um kit de teste diagnóstico personalizado, o kit compreendendo: (i) uma ou mais seringas preenchidas de dose única, em que o enchimento da seringa compreende células tumorais autólogas bi-haptenizadas em um carreador farmaceuticamente aceitável; (ii) uma ou mais seringas preenchidas de dose única, em que o enchimento da seringa compreende um controle negativo de teste em um carreador farmaceuticamente aceitável; (iii) instruções por escrito; e (iv) um guia para pontuação dos resultados do teste.

[022] Em uma modalidade, a invenção fornece um método de tratamento de câncer, o método compreendendo: (i) a administração de uma quantidade eficaz de pelo menos um inibidor do ponto de verificação imune; e, (ii) a administração de uma quantidade eficaz de uma vacina autóloga bi-haptenizada, em que a vacina autóloga bi- haptenizada é preparada por um processo que compreende as etapas de: (a) lavagem de um fragmento tumoral dissecado, em que o fragmento possui pelo menos cerca de um cm de diâmetro; (b) dissociação do fragmento tumoral em uma suspensão de células; (c) irradiação da suspensão de células com radiação gama; (d) divisão da suspensão de células irradiada em pelo menos duas porções aproximadamente iguais; (e) haptenização de uma primeira porção com um primeiro reagente de haptenização e uma segunda porção com um segundo reagente de haptenização; (f) fixação de cada porção; (g) combinação das porções; e, (h) divisão em alíquotas de células que compreendem o produto da etapa (g) em alíquotas de cerca de 6 x 106 até cerca de 50 x 106 célula/ml.

[023] Em uma modalidade, a dose da radiação gama é cerca de 1.000, 1.500, 2.000, 2.500, 3.000, 3.500, 4.000, 4.500 ou

5.000 cGy. Em uma modalidade, cada porção é fixada com etanol a cerca de 35%, 37,5%, 40%, 42,5%, 45%, 47,5% ou 50%. Definições

[024] O termo “autóloga” significa que as próprias células de um paciente são usadas para preparar as modalidades reveladas nesse relatório descritivo.

[025] O termo “inibidor do ponto de verificação imune” significa um terapêutico que reduz ou diminui a função celular de um gene do ponto de verificação imune ou produto do gene. Qualquer inibidor do ponto de verificação imune adequado é contemplado para uso com os métodos revelados nesse relatório descritivo. “Inibidores do ponto de verificação imune”, como usados nesse relatório descritivo, se referem a qualquer modulador que inibe a atividade da molécula do ponto de verificação imune. Inibidores do ponto de verificação podem incluir, sem limitação, proteínas de ligação à molécula do ponto de verificação imune, inibidores de pequena molécula, anticorpos, derivados de anticorpo (incluindo fragmentos Fab e scFvs), conjugados anticorpo- fármaco, oligonucleotídeos anti-senso, siRNA, aptâmeros, peptídeos e miméticos de peptídeo ácidos nucleicos. Ácidos nucleicos inibidores que diminuem a expressão e/ou atividade de moléculas do ponto de verificação imune também podem ser usados nos métodos revelados nesse relatório descritivo. Nesse relatório descritivo, o termo “inibidor do ponto de verificação imune” e “inibidor do ponto de verificação” são usados de forma intercambiável.

[026] Os termos “co-administração”, “co-administrado”, “administrado em combinação com”, “administração em combinação com”, “simultânea” e “concomitante”, como usados nesse relatório descritivo, englobam a administração de dois ou mais ingredientes farmacêuticos ativos a um indivíduo de modo que ambos os ingredientes farmacêuticos ativos e/ou seus metabólitos estejam presentes no indivíduo ao mesmo tempo. A co-administração inclui administração simultânea em composições separadas, administração em momentos diferentes em composições separadas, ou administração em uma composição na qual dois ou mais ingredientes farmacêuticos ativos estão presentes. A administração em momentos diferentes em composições separadas é preferida.

[027] O termo “in vivo” se refere a um evento que ocorre no corpo de um indivíduo.

[028] O termo “in vitro” se refere a um evento que ocorre fora do corpo de um indivíduo. Ensaios in vitro englobam ensaios baseado em células nos quais células vivas ou mortas são empregadas, e também podem englobar um ensaio livre de células no qual nenhuma célula intacta é empregada.

[029] O termo “quantidade eficaz” ou “quantidade terapeuticamente eficaz” se refere àquela quantidade de um composto ou combinação de compostos como descritos nesse relatório descritivo que é suficiente para efetuar a aplicação desejada incluindo, sem limitação, tratamento de doença. Uma quantidade terapeuticamente eficaz pode variar dependendo da aplicação desejada (in vitro ou in vivo), ou do indivíduo e condição de doença que está sendo tratada (por exemplo, do peso, idade e sexo do indivíduo), da severidade da condição de doença, da forma de administração etc., que podem ser prontamente determinados por aqueles técnicos no assunto. O termo também se aplica a uma dose que induzirá uma resposta particular em células-alvo (por exemplo, a redução da adesão plaquetária e/ou migração celular). A dose específica irá variar dependendo dos compostos particulares escolhidos, do regime de dosagem a ser seguido, se o composto é administrado em combinação com outros compostos, do momento da administração, do tecido ao qual ele é administrado, e do sistema físico de liberação no qual o composto é transportado.

[030] Um “efeito terapêutico”, como aquele termo é usado nesse relatório descritivo, engloba a benefício terapêutico e/ou um benefício profilático. Um efeito profilático inclui o retardo ou eliminação do aparecimento de uma doença ou condição, o retardo ou eliminação do surgimento de sintomas de uma doença ou condição, tornar mais lenta, impedir ou reverter a progressão de uma doença ou condição, ou qualquer combinação destes.

[031] O termo “carreador farmaceuticamente aceitável” ou “excipiente farmaceuticamente aceitável” visa incluir qualquer um e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotônicos e de retardo da absorção, e ingredientes inertes. O uso desses carreadores farmaceuticamente aceitáveis ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis para ingredientes farmacêuticos ativos é bem conhecido na técnica. Exceto quando qualquer carreador farmaceuticamente aceitável ou excipiente farmaceuticamente aceitável convencional for incompatível com o ingrediente farmacêutico ativo, seu uso nas composições terapêuticas da invenção é contemplado. Ingredientes farmacêuticos ativos adicionais, por exemplo, outros fármacos, também podem ser incorporados nas composições e métodos descritos.

[032] Quando são usadas faixas nesse relatório descritivo para descrever, por exemplo, propriedades físicas ou químicas como, por exemplo, peso molecular ou fórmulas químicas, todas as combinações e subcombinações de faixas e modalidades específicas destas visam ser incluídas. O uso do termo “cerca de”, quando se refere a um número ou uma faixa numérica significa que o número ou faixa numérica referida é uma aproximação dentro da variabilidade experimental (ou dentro do erro experimental estatístico) e, dessa forma, o número ou faixa numérica pode variar. A variação é tipicamente de 0% a 15%, preferivelmente de 0% a 10%, mais preferivelmente de 0% a 5% do número ou faixa numérica estabelecida. O termo “que compreende” (e termos relacionados como, por exemplo, “compreendem” ou “compreende” ou “que possui” ou “que inclui”) inclui aquelas modalidades como, por exemplo, uma modalidade de qualquer composição de matéria, método ou processo que “consiste em ou “que consiste basicamente das características descritas.

[033] Os compostos da invenção também incluem anticorpos. Os termos “anticorpo” e sua forma no plural “anticorpos” se referem às imunoglobulinas inteiras e a qualquer fragmento de ligação ao antígeno (“porção de ligação ao antígeno”) ou cadeias únicas destas. Um “anticorpo” ainda se refere a uma glicoproteína que compreende pelo menos duas cadeias pesadas (H) e duas cadeias leves (L) interconectadas por ligações dissulfeto, ou uma porção de ligação ao antígeno destas. Cada cadeia pesada é composta por uma região variável da cadeia pesada (abreviada nesse relatório descritivo como VH) e uma região constante da cadeia pesada. A região constante da cadeia pesada é composta por três domínios, CH1, CH2 e CH3. Cada cadeia leve é composta por uma região variável da cadeia leve (abreviada nesse relatório descritivo como VL) e uma região constante da cadeia leve. A região constante da cadeia leve é composta por um domínio, CL. As regiões VH e VL de um anticorpo podem ainda ser subdividida em regiões de hipervariabilidade, que são referidas como regiões determinantes de complementaridade (CDR) ou regiões hipervariáveis (HVR), e que podem ser intercaladas com regiões que são mais conservadas, denominadas regiões framework (FR). Cada VH e VL é composta por três CDRs e quatro FRs, dispostas do terminal amino para o terminal carbóxi na seguinte ordem: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. As regiões variáveis das cadeias pesadas e leves contêm um domínio de ligação que interage com um epitopo ou epitopos de antígeno. As regiões constantes dos anticorpos podem mediar a ligação da imunoglobulina aos tecidos ou fatores do hospedeiro, incluindo várias células do sistema imune (por exemplo, células efetoras) e o primeiro componente (Clq) do sistema complemento clássico.

[034] Os termos “anticorpo monoclonal”, “mAb”, “composição de anticorpo monoclonal”, ou suas formas no plural, se referem a uma preparação de moléculas de anticorpo de composição molecular única. Uma composição de anticorpo monoclonal exibe uma especificidade e afinidade de ligação únicas para um epitopo particular. Anticorpos monoclonais específicos para, por exemplo, CTLA-4, PD-1, PD-L1, LAG3, B7-H3, B7-H4, KIR, OX40, IDO-1, IDO-2, CEACAM1, INFR5F4, BTLA, OX4OL ou TIM3, podem ser feitos como uso de conhecimento e habilidade na técnica de injeção de indivíduos de teste com antígeno de CTLA-4, PD-1, PD-L1, LAG3, B7-H3, B7-H4, KIR, OX40, IDO-1, IDO-2, CEACAM1, INFR5F4, BTLA, OX4OL ou TIM3, e depois isolamento de hibridomas que expressam anticorpos que possuem a sequência ou características funcionais desejadas. DNA que codifica os anticorpos monoclonais é prontamente isolado e sequenciado usando procedimentos convencionais (por exemplo, por utilização de sondas de oligonucleotídeos que são capazes de se ligar especificamente aos genes que codificam as cadeias pesadas e leves dos anticorpos monoclonais). As células de hibridoma servem como uma fonte preferida desse DNA. Uma vez isolado, o DNA pode ser colocado em vetores de expressão, que são então transfectados em células hospedeiras como, por exemplo, células de E. coli, células COS de símios, células de ovário de hamster chinês (CHO) ou células de mieloma que, de outro modo, não produzem proteína de imunoglobulina, para obter a síntese de anticorpos monoclonais nas células hospedeiras recombinantes. A produção recombinante de anticorpos será descrita em mais detalhe abaixo.

[035] Os termos “porção de ligação ao antígeno” ou “fragmento de ligação ao antígeno” de um anticorpo (ou simplesmente “porção de anticorpo”), como usado nesse relatório descritivo, se refere a um ou mais fragmentos de um anticorpo que retêm a habilidade para se ligar especificamente a um antígeno (por exemplo, CTLA-4, PD-1, PD-L1, LAG3, B7-H3, B7-H4, KIR, OX40, IDO-1, IDO-2, CEACAM1, INFR5F4, BTLA, OX4OL ou TIM3). Foi demonstrado que a função de ligação ao antígeno de um anticorpo pode ser realizada por fragmentos de um anticorpo de comprimento total. Exemplos de fragmentos de ligação englobados dentro do termo “porção de ligação ao antígeno” de um anticorpo incluem (i) um Fab fragmento, um fragmento monovalente que consiste nos domínios VL, VH, CL e CH1; (ii) um fragmento F(ab’)2, um fragmento bivalente que compreende dois fragmentos Fab ligados por uma ponte dissulfeto na região de dobradiça; (iii) um fragmento Fd que consiste nos domínios VH e CH1; (iv) um fragmento Fv que consiste nos domínios VL e VH de um braço único de um anticorpo, (v) um fragmento de anticorpo de domínio (dAb) (Ward e cols., Nature, 1989, 341, 544-546), que pode consistir em um domínio VH ou VL; e (vi) uma região determinante de complementaridade (CDR) isolada. Além disso, embora os dois domínios do fragmento Fv, VL e VH, sejam codificados por genes separados, eles podem ser unidos, usando métodos recombinantes, por um ligante sintético que permite que eles sejam feitos como uma cadeia de proteína única na qual as regiões VL e VH pareiam para formar moléculas monovalentes conhecidas como Fv de cadeia única (scFv); veja, por exemplo, Bird e cols., Science 1988, 242, 423-426; e

Huston e cols., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1988, 85, 5.879-

5.883). Esses anticorpos scFv também visam ser englobados dentro dos termos “porção de ligação ao antígeno” ou “fragmento de ligação ao antígeno” de um anticorpo. Esses fragmentos de anticorpo são obtidos usando metodologias convencionais conhecidas por aqueles técnicos no assunto, e os fragmentos são avaliados quanto à utilidade da mesma forma como são os anticorpos intactos.

[036] O termo “anticorpo humano”, como usado nesse relatório descritivo, visa incluir anticorpos que possuem regiões variáveis nas quais tanto as regiões framework quanto as regiões CDR são derivadas de sequências de imunoglobulina da linhagem germinativa humana. Além disso, se o anticorpo contém uma região constante, a região constante também é derivada de sequências de imunoglobulina da linhagem germinativa humana. Os anticorpos humanos da invenção podem incluir resíduos de aminoácidos não codificados por sequências de imunoglobulina da linhagem germinativa humana (por exemplo, mutações introduzidas por mutagênese aleatória ou sítio-específica in vitro ou por mutação somática in vivo). O termo “anticorpo humano”, como usado nesse relatório descritivo, não visa incluir anticorpos nos quais sequências da CDR derivadas da linhagem germinativa de outra espécie de mamífero, por exemplo, um camundongo, foram enxertadas sobre sequências framework humanas.

[037] O termo “anticorpo monoclonal humano” se refere aos anticorpos que exibem uma especificidade de ligação única que possuem regiões variáveis nas quais tanto as regiões framework e quanto as regiões CDR são derivadas de sequências de imunoglobulina da linhagem germinativa humana. Em uma modalidade, os anticorpos monoclonais humanos são produzidos por um hibridoma que inclui uma célula B obtida de um animal não humano transgênico, por exemplo, um camundongo transgênico, que possui um genoma que compreende um transgene da cadeia pesada humana e um transgene da cadeia leve fundidos a uma célula imortalizada.

[038] O termo “anticorpo humano recombinante”, como usado nesse relatório descritivo, inclui todos os anticorpos humanos que são preparados, expressos, criados ou isolados por meios recombinantes, por exemplo, (a) anticorpos isolados de um animal (por exemplo, um camundongo) que é transgênico ou transcromossômico para genes de imunoglobulina humana ou um hibridoma preparado a partir deles (descrito adicionalmente abaixo), (b) anticorpos isolados de uma célula hospedeira transformada para expressar o humano anticorpo, por exemplo, por um transfectoma, (c) anticorpos isolados de uma biblioteca combinatória de anticorpos humanos, recombinantes, e (d) anticorpos preparados, expressos, criados ou isolados por qualquer outro meio que envolva splicing de sequências do gene de imunoglobulina humana com outras sequências de DNA. Esses anticorpos humanos recombinantes possuem regiões variáveis nas quais as regiões framework e regiões CDR são derivadas de sequências de imunoglobulina da linhagem germinativa humana. Em certas modalidades, no entanto, esses anticorpos humanos recombinantes podem ser submetidos à mutagênese in vitro (ou, quando um animal transgênico para sequências de Ig humana é usado, mutagênese somática in vivo) e, dessa forma, as sequências de aminoácidos das regiões VH e VL dos anticorpos recombinantes são sequências que, embora derivadas e relacionadas com sequências de VH e VL da linhagem germinativa humana, podem não existir naturalmente dentro do repertório da linhagem germinativa humana de anticorpo in vivo.

[039] Como usado nesse relatório descritivo, o termo “isótipo” se refere a uma classe de anticorpo (por exemplo, IgM ou IgG1) que é codificada pelos genes da região constante da cadeia pesada. Em mamíferos, há cinco isótipos de anticorpo: IgA, IgD, IgG, IgM e IgE. Em humanos, há quatro subclasses do isótipo IgG: IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4, e duas subclasses do isótipo IgA: IgA1 e IgA2.

[040] As frases “um anticorpo que reconhece um antígeno” e “um anticorpo específico para um antígeno” são usados de forma intercambiável nesse relatório descritivo com o termo “um anticorpo que se liga especificamente a um antígeno”.

[041] O termo “derivados de humano anticorpo” se refere a qualquer forma modificada do humano anticorpo, por exemplo, um conjugado do anticorpo e outro ingrediente farmacêutico ativo ou anticorpo. Os termos “conjugado”, “conjugado anticorpo-fármaco”, “ADC” ou “imunoconjugado” se refere a um anticorpo, ou um fragmento deste, conjugado a uma porção terapêutica, por exemplo, uma toxina bacteriana, um fármaco citotóxico ou uma toxina que contém um radionuclídeo. porções tóxicas pode ser conjugadas aos anticorpos da invenção usando métodos disponíveis na técnica.

[042] Os termos “anticorpo humanizado”, “anticorpos humanizados” e “humanizado” visam se referir aos anticorpos nos quais sequências da CDR derivadas da linhagem germinativa de outra espécie de mamífero, por exemplo, um camundongo, foram enxertadas sobre sequências framework humanas.

Modificações adicionais da região framework podem ser feitas dentro das sequências framework humanas.

Formas humanizadas de anticorpos não humanos (por exemplo, murídeos) são anticorpos quiméricos que contêm sequência mínima derivada de imunoglobulina não humana.

Pela maior parte, anticorpos humanizados são imunoglobulinas humanas (anticorpo receptor) nas quais resíduos de uma região hipervariável do receptor são substituídos por resíduos de uma região 15 hipervariável de uma espécie não humana (anticorpo doador), por exemplo, camundongo, rato, coelho ou primata não humano que possui a especificidade, afinidade e capacidade desejadas.

Em alguns casos, os resíduos da região framework Fv (FR) da imunoglobulina humana são substituídos por resíduos não humanos correspondentes.

Além disso, anticorpos humanizados podem compreender resíduos que não são encontrados no anticorpo receptor ou no anticorpo doador.

Essas modificações são feitas para refinar ainda mais o desempenho do anticorpo.

Em geral, o anticorpo humanizado compreenderá substancialmente tudo de pelo menos um, e tipicamente dois, domínios variáveis, nos quais todas ou substancialmente todas as alças hipervariáveis correspondem àquelas de uma imunoglobulina não humana e todas ou substancialmente todas as regiões FR são aquelas de uma sequência de imunoglobulina humana.

O anticorpo humanizado opcionalmente também compreenderá pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina (Fc), tipicamente aquela de uma imunoglobulina humana.

Para mais detalhes, veja Jones e cols., Nature 1986, 321, 522-525; Riechmann e cols., Nature 1988, 332, 323-329; e Presta, Curr.

Op.

Struct.

Biol. 1992, 2, 593-596.

[043] O termo “anticorpo quimérico” visa se referir aos anticorpos nos quais as sequências da região variável são derivadas de uma espécie e as sequências da região constante são derivadas de outra espécie, por exemplo, um anticorpo no qual as sequências da região variável são derivadas de um anticorpo de camundongo e as sequências da região constante são derivadas de um humano anticorpo.

[044] Um “diabody” é um pequeno fragmento de anticorpo com dois sítios de ligação ao antígeno. Os fragmentos compreendem um domínio variável da cadeia pesada (VH) conectado a um domínio variável da cadeia leve (VL) na mesma cadeia polipeptídica (VH-VL ou VL-VH). Por utilização de um ligante que é muito curto para permitir o pareamento entre os dois domínios na mesma cadeia, os domínios são forçados a parear com os domínios complementares de outra cadeia e criar dois sítios de ligação ao antígeno. Diabodies são descritos mais completamente, por exemplo, na Patente Européia Nº EP 404.097, Publicação de Patente Internacional Nº WO 93/11161; e Bolliger e cols., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1993, 90, 6.444-6.448.

[045] O termo “glicosilação” se refere a um derivado modificado de um anticorpo. Um anticorpo aglicosilado não possui glicosilação. A glicosilação pode ser alterada, por exemplo, para aumentar a afinidade do anticorpo para o antígeno. Essas modificações em carboidrato podem ser obtidas, por exemplo, por alteração de um ou mais sítios de glicosilação dentro da sequência do anticorpo. Por exemplo, podem ser feitas uma ou mais substituições de aminoácidos que resultam na eliminação de um ou mais sítios de glicosilação framework da região variável para, dessa forma,

eliminar a glicosilação naquele sítio.

Uma glicosilação pode aumentar a afinidade do anticorpo pelo antígeno, como descrito nas Patentes U.S.

Nos 5.714.350 e 6.350.861. Adicionalmente, ou alternativamente, pode ser feito um anticorpo que possui um tipo alterado de glicosilação, por exemplo, um anticorpo hipofucosilado que possui quantidades reduzidas de resíduos fucosil ou um anticorpo que possui estruturas bisseccionadas de GlcNac aumentadas.

Foi demonstrado que esses padrões de glicosilação alterados aumentam a habilidade de anticorpos.

Essas modificações de carboidratos podem ser obtidas, por exemplo, por expressão do anticorpo em uma célula hospedeira com maquinário de glicosilação alterado.

Células com maquinário de glicosilação alterado foram descritas na técnica e podem ser usadas como células hospedeiras nas quais se expressam anticorpos recombinantes da invenção para, dessa forma, produzir um anticorpo com glicosilação alterada.

Por exemplo, as linhagens de células Ms704, Ms705 e Ms709 não possuem o gene de fucosiltransferase, FUT8 (α(1,6)fucosiltransferase), de modo que os anticorpos expressos nas linhagens de células Ms704, Ms705 e Ms709 não possuem fucose em seus carboidratos.

As linhagens de células Ms704, Ms705 e Ms709 FUT8-/- foram criadas pela ruptura direcionada do gene FUT8 em células CHO/DG44 usando dois vetores de substituição (veja, por exemplo, a Publicação Patente U.S.

Nº 2004/0110704 ou Yamane-Ohnuki, e cols.

Biotechnol.

Bioeng., 2004, 87, 614-622). Como outro exemplo, a Patente Européia Nº EP 1.176.195 descreve uma linhagem de célula com um gene FUT8 funcionalmente rompido, que codifica uma fucosil transferase, de modo que os anticorpos expressos nessa linhagem de célula exibem hipofucosilação por redução ou eliminação da enzima com ligação α-1,6 relacionada, e também descreve linhagens de células que possuem uma atividade enzimática baixa para adição de fucose à N- acetilglucosamina que se liga à região Fc do anticorpo ou não possui a atividade da enzima, por exemplo, a linhagem de célula de mieloma de rato YB2/0 (ATCC CRL 1662). A Publicação de Patente Internacional WO 03/035835 descreve uma linhagem de célula CHO variante, células Lec 13, com habilidade reduzida para anexar fucose aos carboidratos ligados em Asn(297), também resultando em hipofucosilação de anticorpos expressos naquela célula hospedeira (veja também Shields, e cols., J. Biol. Chem. 2002, 277, 26.733-26.740). A Publicação de Patente Internacional WO 99/54342 descreve linhagens de células modificadas geneticamente para expressar glicosil transferases modificadoras de glicoproteínas (por exemplo, β-(1,4)-N-acetilglucosaminiltransferase III (GnTIII)), de modo que os anticorpos expressos nas linhagens de células modificadas geneticamente exibem estruturas bisseccionadas de GlcNac aumentadas, o que resulta em atividade de ADCC aumentada dos anticorpos (veja também Umana, e cols., Nat. Biotech. 1999, 17, 176-180). Alternativamente, os resíduos de fucose do anticorpo podem ser retirados por clivagem usando uma enzima fucosidase. Por exemplo, a fucosidase α- L-fucosidase remove resíduos fucosil de anticorpos, como descrito em Tarentino, e cols., Biochem. 1975, 14, 5.516-

5.523.

[046] O termo “peguilação” se refere a um anticorpo modificado, ou um a fragmento deste, que tipicamente é reagido com polietileno glicol (PEG), por exemplo, um éster reativo ou derivado aldeído de PEG, sob condições nas quais um ou mais grupos PEG se tornam anexados ao anticorpo ou fragmento de anticorpo. A peguilação pode, por exemplo, aumentar a meia-vida biológica (por exemplo, sérica) do anticorpo. De preferência, a peguilação é realizada por meio de uma reação de acilação ou uma reação de alquilação com uma molécula reativa ao PEG (ou um polímero hidrossolúvel reativo análogo). Como usado nesse relatório descritivo, o termo “polietileno glicol” visa englobar qualquer uma das formas de PEG que têm sido usadas para derivatizar outras proteínas, por exemplo, mono (C1-C10) alcóxi- ou ariloxi- polietileno glicol ou polietileno glicol-maleimida. O anticorpo a ser peguilado pode ser um anticorpo aglicosilado. Métodos para a peguilação são conhecidos na técnica e podem ser aplicados aos anticorpos da invenção, como descrito, por exemplo, nas Patentes Européias Nos EP 0154316 e EP 0401384.

[047] O termo “biossimilar” significa um produto biológico que é altamente similar a um produto biológico de referência licenciado nos Estados Unidos, apesar de pequenas diferenças em componentes clinicamente inativos, e para o qual não há diferenças clinicamente significativas entre o produto biológico e o produto de referência em termos da segurança, pureza e potência do produto. Além disso, um medicamento biológico similar ou “biossimilar” é um medicamento biológico que é similar a outro medicamento biológico que já foi autorizado para uso pela “European Medicines Agency”. O termo “biossimilar” também é usado sinonimamente por outras agências reguladoras nacionais e regionais. Produtos biológicos ou medicamentos biológicos são medicamentos que são feitos ou derivados de uma fonte biológica, por exemplo, uma bactéria ou levedura.

Eles podem consistir em moléculas relativamente pequenas como, por exemplo, insulina ou eritropoietina humanas, ou moléculas complexas como, por exemplo, anticorpos monoclonais.

Por exemplo, se o anticorpo monoclonal anti-CD20 de referência é rituximab, um anticorpo monoclonal anti-CD20 biossimilar aprovado por autoridades reguladoras de fármacos com referência ao rituximab é um “biossimilar” ao rituximab ou é um “biossimilar deste” de rituximab.

Na Europa, um medicamento biológico similar ou “biossimilar” é um medicamento biológico que é similar a outro medicamento biológico que já foi autorizado para uso pela “European Medicines Agency” (EMA). A base legal relevante para aplicações biológicas similares na Europa é o Artigo 6 da Regulação (EC) Nº 726/2004 e Artigo 10(4) da Diretiva 2001/83/EC, como emendado e, portanto, na Europa, o biossimilar pode ser autorizado, aprovado para autorização ou sujeito a um pedido para autorização sob o Artigo 6 da Regulação (EC) Nº 726/2004 e Artigo 10(4) da Diretiva 2001/83/EC.

O produto biológico medicinal original já autorizado pode ser referido como um “produto medicinal de referência” na Europa.

Algumas das exigências para que um produto seja considerado um biossimilar são apresentadas na “CHMP Guideline on Similar Biological Medicinal Products”. Além disso, diretrizes específicas do produto, incluindo diretrizes relacionadas aos biossimilares de anticorpo monoclonal, são fornecidas em termos de produto-por-produto pela EMA e publicadas em sua página da Internet.

Um “biossimilar”, como descrito nesse relatório descritivo, pode ser similar ao produto medicinal de referência em termos de características de qualidade, atividade biológica, mecanismo de ação, perfis de segurança e/ou eficácia.

Além disso, o biossimilar pode ser usado ou ser destinado ao uso para tratar as mesmas condições que o produto medicinal de referência.

Dessa forma, um “biossimilar”, como descrito nesse relatório descritivo, pode ser considerado como tendo características de qualidade similares ou altamente similares a um produto medicinal de referência.

Alternativamente, ou além disso, um “biossimilar”, como descrito nesse relatório descritivo, pode ser considerado como tendo atividade biológica similar ou altamente similar a um produto medicinal de referência.

Alternativamente, ou além disso, um “biossimilar”, como descrito nesse relatório descritivo, pode ser considerado como tendo um perfil de segurança similar ou altamente similar a um produto medicinal de referência.

Alternativamente, ou além disso, um “biossimilar”, como descrito nesse relatório descritivo, pode ser considerado como tendo eficácia similar ou altamente similar a um produto medicinal de referência.

Como descrito nesse relatório descritivo, um biossimilar na Europa é comparado com um produto medicinal de referência que foi autorizado pela EMA.

No entanto, em alguns casos, o biossimilar pode ser comparado com um produto biológico medicinal que foi autorizado fora da Área Econômica Européia (EEA) (um “comparador” não autorizado pela EEA) em certos estudos.

Esses estudos incluem, por exemplo, certos estudos clínicos e não clínicos in vivo.

Como usado nesse relatório descritivo, o termo “biossimilar” também está relacionado a um produto biológico medicinal que foi ou pode ser comparado com um comparador não autorizado pela EEA.

Certos biossimilares são proteínas como, por exemplo, anticorpos, fragmentos de anticorpo (por exemplo, porções de ligação ao antígeno) e proteínas de fusão.

Um biossimilar de proteína pode ter uma sequência de aminoácidos que possui pequenas modificações na estrutura de aminoácidos (incluindo, por exemplo, deleções, adições e/ou substituições de aminoácidos) que não afetam significantemente a função do polipeptídeo.

O biossimilar pode compreender uma sequência de aminoácidos que possui uma identidade de sequência de 97% ou maior para a sequência de aminoácidos de seu produto medicinal de referência, por exemplo, 97%, 98%, 99% ou 100%. O biossimilar pode compreender uma ou mais modificações pós- tradução, por exemplo, sem limitação, glicosilação, oxidação, desamidação e/ou truncamento, que são diferentes das modificações pós-tradução do produto medicinal de referência, desde que as diferenças não resultem em uma alteração na segurança e/ou eficácia do produto medicinal.

O biossimilar pode ter um padrão de glicosilação idêntico ou diferente em relação ao produto medicinal de referência.

Particularmente, embora não exclusivamente, o biossimilar pode ter um padrão de glicosilação diferente se as diferenças abordam ou visam abordar questões de segurança associadas ao produto medicinal de referência.

Adicionalmente, o biossimilar pode se desviar do produto medicinal de referência, por exemplo, em sua força, forma farmacêutica, formulação, excipientes e/ou apresentação, desde que a segurança e eficácia do produto medicinal não sejam comprometidas.

O biossimilar pode compreender diferenças, por exemplo, nos perfis farmacocinéticos (PK) e/ou farmacodinâmicas (PD), comparado com o produto medicinal de referência, mas ainda é considerado suficientemente similar ao produto medicinal de referência de modo a ser autorizado ou considerado adequado para autorização. Em certas circunstâncias, o biossimilar exibe características de ligação diferentes, comparado com o produto medicinal de referência, em que as características de ligação diferentes são consideradas por uma Autoridade Reguladora, por exemplo, a EMA, como não sendo uma barreira para autorização como um produto biológico similar. O termo “biossimilar” também é usado sinonimamente por outras agências reguladoras nacionais e regionais.

[048] O termo “malignidade hematológica” se refere aos cânceres e tumores de mamíferos dos tecidos hematopoiéticos e linfóides incluindo, sem limitação, tecidos do sangue, medula óssea, linfonodos e sistema linfático. Malignidades hematológicas também são referidos como “tumores líquidos”. Malignidades hematológicas incluem, sem limitação, ALL, CLL, SLL, leucemia mielógena aguda (AML), leucemia mielógena crônica (CML), leucemia monocítica aguda (AMoL), linfoma de Hodgkin, e linfomas não-Hodgkin. O termo “malignidade hematológica de célula B” se refere às malignidades hematológicas que afetam células B.

[049] O termo “tumor sólido” se refere a uma massa anormal de tecido que normalmente não contém cistos ou áreas de líquido. Os tumores sólidos podem ser benignos ou malignos. O termo “câncer de tumor sólido” se refere aos tumores sólidos malignos, neoplásicos ou cancerosos. Os cânceres de tumor sólido incluem, sem limitação, sarcomas, carcinomas e linfomas, por exemplo, cânceres do pulmão, mama, próstata, cólon, reto e bexiga. A estrutura tecidual de tumores sólidos inclui compartimentos teciduais interdependentes, incluindo o parênquima (células de câncer) e as células estromais de suporte nas quais as células de câncer estão dispersas e que podem fornecer um microambiente de suporte.

[050] O termo “microambiente”, como usado nesse relatório descritivo, pode se referir ao microambiente tumoral como um todo ou a um subconjunto individual de células dentro do microambiente.

[051] Os termos “identidade de sequência”, “percentual de identidade” e “percentual de identidade de sequência”, no contexto de dois ou mais ácidos nucleicos ou polipeptídeos, se referem a duas ou mais sequências ou subsequências que são as mesmas ou possuem uma percentagem especificada de nucleotídeos ou resíduos de aminoácidos que é a mesma, quando comparadas e alinhadas (com introdução de lacunas, se necessário) para correspondência máxima, não considerando quaisquer substituições de aminoácidos conservativas como parte da identidade de sequência. O percentual de identidade pode ser medido usando software ou algoritmos de comparação de sequências ou por inspeção visual. São conhecidos na técnica vários algoritmos e softwares que podem ser usados para obter alinhamentos de sequências de aminoácidos ou nucleotídeos. Programas adequados para determinar o percentual de identidade de sequência incluem, por exemplo, o pacote de programas BLAST disponível pela página na Internet de BLAST do “U.S. Government's National Center for Biotechnology Information”. Comparações entre duas sequências podem ser realizadas usando o algoritmo BLASTN ou BLASTP. BLASTN é usado para comparar sequências de ácidos nucleicos, enquanto BLASTP é usado para comparar sequências de aminoácidos. ALIGN, ALIGN-2 (Genentech, South San Francisco, Califórnia) ou MegAlign, disponíveis por DNASTAR, são programas de software adicionais disponíveis publicamente que podem ser usados para o alinhamento de sequências. Aqueles técnicos no assunto podem determinar parâmetros apropriados para alinhamento máximo por software de alinhamento particular. Em certas modalidades, os parâmetros-padrão do software de alinhamento são usados.

[052] Certas modalidades da presente invenção compreendem uma variante de um anticorpo, por exemplo, um anticorpo anti-CTLA-4 ou anti-LAG3 e/ou um anticorpo anti- IDO-1 e/ou um anticorpo anti-PD-1, um anticorpo anti-PD-L1 e/ou anti-PD-L2. Como usado nesse relatório descritivo, o termo “variante” engloba, sem limitação, anticorpos que compreendem uma sequência de aminoácidos que difere da sequência de aminoácidos de um anticorpo de referência por meio de uma ou mais substituições, deleções e/ou adições em certas posições dentro ou adjacente à sequência de aminoácidos do anticorpo de referência. A variante pode compreender uma ou mais substituições conservativas em sua sequência de aminoácidos, comparada com a sequência de aminoácidos de um anticorpo de referência. Substituições conservativas podem envolver, por exemplo, a substituição de aminoácidos similarmente carregados ou não carregados. A variante retém a habilidade para se ligar especificamente ao antígeno do anticorpo de referência.

[053] Para evitar dúvidas, pretende-se, nesse relatório descritivo, que características particulares (por exemplo, números inteiros, características, valores, usos, doenças,

fórmulas, compostos ou grupos) descritas em conjunto com um aspecto, modalidade ou exemplo particular da invenção sejam subentendias como aplicáveis a qualquer outro aspecto, modalidade ou exemplo descrito nesse relatório descritivo, salvo se incompatível com esta. Dessa forma, essas características podem ser usadas quando apropriadas em conjunto com qualquer uma das definições, reivindicações ou modalidades definidas nesse relatório descritivo. Todas as características reveladas nesse relatório descritivo (incluindo quaisquer reivindicações, resumo e desenhos que o acompanham), e/ou todas as etapas de qualquer método ou processo assim revelado, podem ser combinadas em qualquer combinação, exceto combinações nas quais pelo menos algumas das características e/ou etapas sejam mutualmente exclusivas. A invenção não está restrita a quaisquer detalhes de quaisquer modalidades reveladas. A invenção se estende a qualquer nova característica, ou nova combinação, das características reveladas nesse relatório descritivo (incluindo quaisquer reivindicações, resumo e desenhos que a acompanham), ou a qualquer nova característica, ou nova combinação, das etapas de qualquer método ou processo assim revelado. Métodos de preparação de vacinas autólogas

[054] A preparação de vacinas autólogas usando um único reagente de hapteno é conhecida por aqueles técnicos no assunto. Por exemplo, a Patente U.S. 5.290.551 para Berd revela a preparação de vacinas autólogas a partir de amostras de tumor de melanoma de pacientes usando um único reagente de hapteno. A Patente U.S. 5.290.551 é incorporada por referência em sua totalidade. Métodos de conservação de amostras de tumor são discutidos por Berd no Pedido de Patente U.S. US 2003-0170756 A1, que é incorporado por referência, particularmente quanto aos métodos de conservação de células tumorais.

[055] Em uma modalidade, a invenção fornece uma vacina autóloga bi-haptenizada personalizada, de modo que uma vacina tumoral pode ser preparada da seguinte forma: a vacina autóloga bi-haptenizada é preparada por um processo que compreende as etapas de: (a) lavagem de um fragmento tumoral dissecado, em que o fragmento possui pelo menos cerca de um cm de diâmetro; (b) dissociação do fragmento tumoral em uma suspensão de células; (c) irradiação da suspensão de células com radiação gama; (d) divisão da suspensão de células irradiada em pelo menos duas porções aproximadamente iguais; (e) haptenização de uma primeira porção com um primeiro reagente de haptenização e uma segunda porção com um segundo reagente de haptenização; (f) fixação de cada porção; (g) combinação das porções; e, (h) divisão em alíquotas de células que compreendem o produto da etapa (g) em alíquotas de cerca de 6 x 106 até cerca de 50 x 106 célula/ml.

[056] Em uma modalidade, a dose da radiação gama é cerca de 1.000, 1.500, 2.000, 2.500, 3.000, 3.500, 4.000, 4.500 ou

5.000 cGy. Em uma modalidade, cada porção é fixada com etanol a cerca de 35%, 37,5%, 40%, 42,5%, 45%, 47,5% ou 50%.

[057] A etapa de haptenização pode ser realizada por modificação de uma primeira alíquota de células com DNP por uma incubação de 30 minutos com o primeiro reagente de haptenização, 2,4-difluornitrobenzeno (DNFB), e depois modificação de uma segunda alíquota de células com o segundo reagente de haptenização, ácido sulfanílico (SA), por uma incubação de 5 minutos com o sal de diazônio de SA. As células haptenizadas são lavadas com HBSS, contadas e fixadas com etanol em uma concentração final de cerca de 37,5% por cerca de 10 minutos. Um segundo reagente de haptenização pode ser selecionado daqueles conhecidos na técnica, por exemplo, aqueles descritos em Nahas e Leskowitz, “The Ability of Hapten-Conjugated Cells to Induce Cell-Mediated Cytotoxicity is Affected by the Mode of Hapten Linkage”, Cell. Immunol., 54: 241-247 (1980). Reagentes de haptenização preferidos podem visar o grupo ɛ-amino de aminoácido.

[058] A dissociação do fragmento tumoral em uma suspensão de células pode ser obtida por métodos conhecidos na técnica. Em modalidades preferidas, o fragmento tumoral é dissociado em uma suspensão de células por um meio para dissociação mecânica.

[059] Em algumas modalidades, cada um do primeiro reagente de haptenização e do segundo reagente de haptenização é selecionado independentemente de trinitroclorobenzeno (TNCB), 2,4-difluornitrobenzeno (DNFB), N-iodoacetil-N'-(5-sulfônico-1- naftil)etilenodiamina (AED), ácido sulfanílico (SA), trinitrofenol (TNP), ácido 2,4,6-trinitrobenzenossulfônico (TNBS) e combinações destes. Em uma modalidade, o primeiro reagente de haptenização é diferente do segundo reagente de haptenização.

[060] Em algumas modalidades, uma dose da vacina bi- haptenizada está na faixa entre cerca de 4 x 106 células e cerca de 50 x 106 células. Em algumas modalidades, uma dose da vacina bi-haptenizada é cerca de 8 x 106 células; cerca de 9 x 106 células; cerca de 10 x 106 células; cerca de 11 x 106 células; cerca de 12 x 106 células; cerca de 13 x 106 células; cerca de 14 x 106 células; cerca de 15 x 106 células; cerca de 16 x 106 células; cerca de 17 x 106 células; cerca de 18 x 106 células; cerca de 19 x 106 células; cerca de 20 x 106 células; cerca de 21 x 106 células; 22 x 106 células; cerca de 23 x 106 células; cerca de 24 x 106 células; cerca de 25 x 106 células; cerca de 26 x 106 células; cerca de 27 x 106 células; cerca de 28 x 106 células; cerca de 29 x 106 células; ou cerca de 30 x 106 células. Em algumas modalidades, uma dose da vacina bi-haptenizada é cerca de 12 x 106 células. Criopreservação de vacinas

[061] Métodos para a criopreservação de células haptenizadas são conhecidos por aqueles técnicos no assunto. Por exemplo, Berd e cols. revelam abordagens para proteção osmótica e congelamento sob temperatura controlada de células haptenizadas na Patente U.S. 8.435.784, que é incorporada por referência em sua totalidade. Co-administração de compostos

[062] A co-administração de compostos é uma abordagem valiosa, particularmente para os agentes inibidores do ponto de verificação imune emergentes. A predição, antes do tratamento, de quais pacientes podem se beneficiar de um inibidor do ponto de verificação imune particular permanece incerta. Por exemplo, Snyder e cols., “Genetic Basis for Clinical Response to CTLA-4 Blockade in Melanoma”, N. Engl. J. of Med. 371: 2.189-2.199 (2014).

[063] Um aspecto da invenção é uma composição, por exemplo, uma composição farmacêutica, que compreende uma combinação de um inibidor do ponto de verificação imune e uma vacina tumoral autóloga bi-haptenizada. Um método de tratamento de câncer que compreende: (i) a administração de uma quantidade eficaz de pelo menos um inibidor do ponto de verificação imune; e (ii) a administração de uma quantidade eficaz de uma vacina autóloga bi-haptenizada. Em uma modalidade, a vacina autóloga bi-haptenizada é administrada a cada duas semanas por pelo menos oito semanas. Em uma modalidade, a vacina autóloga bi-haptenizada é administrada toda semana por pelo menos sete semanas. Em uma modalidade, a vacina autóloga bi-haptenizada é administrada com ou sem adjuvante. Em uma modalidade, o adjuvante é bacilo de Calmette-Guerin. Em uma modalidade, o adjuvante é selecionado do grupo que consiste em lipopolissacarídeos bacterianos, lipoproteínas bacterianas, peptídeos antimicrobianos, saponinas, ácido lipoteicóico, esqualeno, oligonucleotídeos imunoestimulantes, de fita RNA simples, fosfolipídeos sintéticos, MF59, E6020, IC31, lipopeptídeos, compostos de imidazoquinolina, compostos de benzonaftiridina, e combinações destes.

[064] Em uma modalidade o câncer é selecionado do grupo que consiste em câncer ovariano, câncer uterino, câncer vaginal, câncer vulvar e câncer endometrial.

[065] Em algumas modalidades, o (pelo menos um) inibidor do ponto de verificação imune é selecionado do grupo que consiste em CTLA-4, PD-1, PD-L1, LAG3, B7-H3, B7-H4, KIR, OX40, IDO-1, IDO-2, CEACAM1, INFR5F4, BTLA, OX4OL e TIM3, ou combinações destes.

[066] Em uma modalidade, o (pelo menos um) inibidor do ponto de verificação imune é um inibidor do ponto de verificação imune PD-1. Em uma modalidade, o (pelo menos um) inibidor do ponto de verificação imune é um inibidor do ponto de verificação imune CTLA-4. Inibidores do ponto de verificação imune

[067] Um método para o tratamento de câncer em uma mulher, que compreende a administração de uma quantidade eficaz de pelo menos um inibidor do ponto de verificação imune, em que o (pelo menos um) inibidor do ponto de verificação imune é selecionado do grupo que consiste em CTLA-4, PD-1, PD-L1, LAG3, B7-H3, B7-H4, KIR, OX40, IDO-1, IDO-2, CEACAM1, INFR5F4, BTLA, OX4OL e TIM3, ou combinações destes.

[068] Moore fornece um resumo conciso dos inibidores do ponto de verificação imune aprovados pelo FDA (“Food and Drug Administration” - agência governamental americana que regula e fiscaliza a fabricação de comestíveis, drogas e cosméticos) em “Immunotherapy in Cancer Treatment: A Review of Checkpoint Inhibitors”, U.S. Pharm., 43 (2): 27-31 (2018). As composições, métodos e processos da invenção são subentendidos como funcionais em combinação com inibidores de pontos de verificação imune. Inibidores de PD-L1

[069] Em algumas modalidades, o inibidor do ponto de verificação imune é um inibidor de PD-L1. Em algumas modalidades, o inibidor do ponto de verificação imune é um anticorpo contra PD-1. Em algumas modalidades, o inibidor do ponto de verificação imune é um anticorpo monoclonal contra PD-1. Em outras modalidades ou em modalidades adicionais, o inibidor do ponto de verificação imune é um anticorpo humano ou humanizado contra PD-1. Por exemplo, os inibidores da atividade biológica de PD-1 (ou seus ligantes) revelados nas Patentes U.S.

Nos 7.029.674; 6.808.710; ou nos Pedidos de Patente U.S.

Nos: 20050250106 e 20050159351 podem ser usados nos métodos fornecidos nesse relatório descritivo.

Anticorpos contra PD-1 exemplares incluem: Anticorpo anti- PD-1 de camundongo Clone J43 (Nº de catálogo BE0033-2) de Bio X Cell; Anticorpo anti-PD-1 de camundongo Clone RMP1-14 (Nº de catálogo BE0146) de Bio X Cell; anticorpo anti-PD-1 de camundongo Clone EH12; Anticorpo anti-PD-1 de camundongo MK-3475 da Merck (KeytrudaTM, pembrolizumab, lambrolizumab); e anticorpo anti-PD-1 de AnaptysBi, conhecido como ANB011; anticorpo MDX-1106 (ONO-4538); anticorpo monoclonal de IgG4 humana nivolumab de Bristol-Myers Squibb (OpdivoTM, BMS- 936558, MDX1106); AMP-514 de AstraZeneca e AMP-224; e Pidilizumab (CT-011), CureTech Ltd.

Anticorpos anti-PD-1 exemplares adicionais e métodos para seu uso são descritos por Goldberg e cols., “Role of PD-1 and its Ligand, B7-H1, in Early Fate Decisions of CD8 T+ Cells”, Blood, 110: 186- 192 (2007), Thompson e cols., “PD-1 Is Expressed by Tumor- Infiltrating Immune Cells and Is Associated with Poor Outcome for Patients with Renal Cell Carcinoma”, Clin.

Cancer Res. 13 (6): 1.757-1.761 (2007), e Korman e cols., Pedido Internacional Nº PCT/JP2006/309606 (Publicação Nº WO 2006/121168 A1), cada um deles expressamente incorporado por referência nesse relatório descritivo.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é um anticorpo anti-PD-1 revelado em qualquer uma das seguintes publicações de patentes (incorporadas nesse relatório descritivo por referência): WO 014557; WO 2011110604; WO 2008156712; US2012023752; WO 2011110621; WO 2004072286; WO 2004056875; WO 20100036959; WO 2010029434; WO 2016/057898; PCT/U52015/054899 WO 201213548; WO 2002078731; WO 2012145493; WO 2010089411; WO 2001014557; WO 2013022091; WO 2013019906; WO 2003011911; US20140294898; e WO 2010001617.

[070] Em algumas modalidades, o inibidor de PD-1 é uma proteína de ligação a PD-1 como revelada em WO 200914335 (incorporado nesse relatório descritivo por referência).

[071] Em algumas modalidades, o inibidor de PD-1 é um inibidor peptidomimético de PD-1 como revelado em WO 2013132317 (incorporado nesse relatório descritivo por referência).

[072] Em algumas modalidades, o inibidor de PD-1 é um mAb anti-PD-1 de camundongo: clone J43, Bio X Cell (West Lebanon, NH). Em algumas modalidades, o inibidor do ponto de verificação imune é o anticorpo terapêutico anti-PD-1 cemiplimam-rwlc (Libtayo), comercializado em conjunto por Regneron e Sanofi.

[073] Em algumas modalidades, o inibidor de PD-1 é uma proteína PD-L1, uma proteína PD-L2, ou fragmentos, bem como o anticorpo MDX-1106 (ONO-4538) testado em estudos clínicos para o tratamento de certas malignidades (Brahmer e cols., “Phase I Study of Single-Agent Anti-Programmed Death-1 (MDX- 1106) in Refractory Solid Tumors: Safety, Clinical Activity, Pharmacodynamics, and Immunologic Correlates”, J. Clin. Oncol. 28 (19): 3.167-75 (2010)). Outros anticorpos de bloqueio podem ser prontamente identificados e preparados por aqueles técnicos no assunto com base no domínio conhecido da interação entre PD-1 e PD-L1/PD-L2, como descrito acima. Inibidores de CTLA-4

[074] Em algumas modalidades, o (pelo menos um) inibidor do ponto de verificação imune é um inibidor de CTLA-4. Em algumas modalidades, o (pelo menos um) inibidor do ponto de verificação imune é um anticorpo contra CTLA-4. Em algumas modalidades, o (pelo menos um) inibidor do ponto de verificação imune é um anticorpo monoclonal contra CTLA-4. Em outras modalidades ou em modalidades adicionais, o (pelo menos um) inibidor do ponto de verificação imune é um anticorpo humano ou humanizado contra CTLA-4. Em uma modalidade, o anticorpo anti-CTLA-4 bloqueia a ligação de CTLA-4 ao CD80 (B7-1) e/ou CD86 (B7-2) expresso em células apresentadoras de antígeno. Anticorpos contra CTLA-4 exemplares incluem: anticorpo anti-CTLA-4 de Bristol Meyers Squibb ipilimumab (também conhecido como YervoyTM MDX-010, BMS-734016 e MDX-101); Anticorpo anti-CTLA4, clone 9H10 de Millipore; tremelimumab de Pfizer (CP-675.206, ticilimumab); e anticorpo anti-CTLA4 clone BNI3 de Abcam.

[075] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CTLA-4 é um anticorpo anti-CTLA-4 revelado em qualquer uma das seguintes publicações de patentes (que são incorporadas por referência em suas totalidades): WO 2001014424; WO 2004035607; US2005/0201994; EP 1212422 B1; WO 2003086459; WO 2012120125; WO 2000037504; WO 2009100140; WO 200609649; WO 2005092380; WO 2007123737; WO 2006029219; WO 20100979597; WO 200612168; e WO 1997020574. Anticorpos contra CTLA-4 adicionais são descritos nas Patentes U.S. Nos 5.811.097.

5.855.887. 6.051.227. e 6.984.720; nas Publicações PCT Nos WO 01/14424 e WO 00/37504; e nas Publicações U.S. Nos 2002/0039581 e 2002/086014; e/ou Patentes U.S. Nos 5.977.318,

6.682.736, 7.109.003 e 7.132.281, incorporadas nesse relatório descritivo por referência).

[076] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CTLA-4 é, por exemplo, um daqueles revelados em: WO 98/42752; Patentes U.S. Nos 6.682,736 e 6.207.156; Hurwitz e cols., “CTLA-4 Blockade Synergizes with Tumor-Derived Granulocyte- Macrophage Colony-Stimulating Factor for Treatment of an Experimental Mammary Carcinoma”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95 (17): 10.067-10.071 (1998); Camacho e cols., “Phase 1 Clinical Trial of Anti-CTLA4 Human Monoclonal Antibody CP- 675,206 in Patients (pts) with Advanced Solid Malignancies”, J. Clin. Oncol., 22 (145): Resumo Nº 2505 (2004) (anticorpo CP-675206); Mokyr e cols., “Realization of the Therapeutic Potential of CTLA-4 Blockade in Low-Dose Chemotherapy- Treated Tumor-Bearing Mice”, Cancer Res., 58: 5.301-5.304 (1998).

[077] Em algumas modalidades, o inibidor de CTLA-4 é um ligante de CTLA-4, como revelado em WO 1996040915. Em outras modalidades, o inibidor de CTLA-4 consistir em moléculas peptídeos ou de ácido nucleico do tipo B7 reveladas na Patente U.S. 6.630.575. Métodos de tratamento de câncer

[078] Em algumas modalidades, os métodos de tratamento da presente invenção são para uso no tratamento de um câncer selecionado do grupo que consiste em câncer da bexiga, carcinoma de célula escamosa, incluindo câncer da cabeça e pescoço, adenocarcinoma pancreático ductal (PDA), câncer pancreático, carcinoma do cólon, carcinoma mamário, câncer de mama, fibrossarcoma, mesotelioma, carcinoma de célula renal, carcinoma do pulmão, timoma, câncer de próstata, câncer cólon-retal, câncer ovariano, leucemia mielóide aguda, câncer do timo, câncer do cérebro, câncer de célula escamosa, câncer de pele, câncer ocular, retinoblastoma, melanoma, melanoma intra-ocular, cânceres da cavidade oral e orofaríngeos, câncer gástrico, câncer do estômago, câncer cervical, câncer renal, câncer do rim, câncer do fígado, câncer ovariano, câncer esofágico, câncer testicular, câncer ginecológico, câncer da tireóide, câncer induzido por vírus, glioblastoma, tumores esofágicos, neoplasias hematológicas, câncer de pulmão de célula não pequena, leucemia mielocítica crônica, linfoma de célula B grande difuso, tumor do esôfago, linfoma do centro folicular, tumor da cabeça e pescoço, infecção por vírus da hepatite C, carcinoma hepatocelular, doença de Hodgkin, câncer do cólon metastático, mieloma múltiplo, linfoma não-Hodgkin, linfoma não-Hodgkin indolente, tumor do ovário, tumor do pâncreas, carcinoma de célula renal, câncer de pulmão de pequena célula, melanoma em estágio IV, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfoblástica aguda de célula B (ALL), ALL de célula B madura, linfoma folicular, linfoma da célula do manto e linfoma de Burkitt.

[079] Uma modalidade da invenção fornece um método de tratamento de câncer, o método compreendendo: (i) a administração de uma quantidade eficaz de pelo menos um inibidor do ponto de verificação imune; e, (ii) a administração de uma quantidade eficaz de uma vacina autóloga bi-haptenizada. Em algumas modalidades, as etapas (i) e etapas (ii) ocorrem dentro do mesmo período de tempo. Em algumas modalidades, a vacina autóloga bi-haptenizada é administrada a cada duas semanas por pelo menos oito semanas. Em algumas modalidades, a vacina autóloga bi-haptenizada é administrada uma vez por semana por pelo menos seis semanas.

[080] Em uma modalidade, a invenção fornece um método de tratamento de câncer, o método compreendendo: a co- administração de uma ou mais composições que compreendem quantidades terapeuticamente eficazes de: (i) pelo menos um inibidor do ponto de verificação imune; e, (ii) uma vacina autóloga bi-haptenizada.

[081] Em algumas modalidades, o método ainda compreende pelo menos uma injeção de reforço da vacina autóloga bi- haptenizada cerca de seis meses após a primeira injeção. Em algumas modalidades, a quantidade eficaz de uma vacina autóloga bi-haptenizada é administrada a cada duas semanas até que o teste diagnóstico de hipersensibilidade do tipo retardada seja positivo.

[082] Em algumas modalidades, a invenção fornece um método de tratamento de câncer, em que o câncer é selecionado do grupo que consiste em câncer ovariano, câncer uterino, câncer vaginal, câncer vulvar e câncer endometrial. Em algumas modalidades, o câncer é um tumor sólido. Em algumas modalidades, o câncer é metastático. Em algumas modalidades, o câncer possui resistência adquirida a um inibidor do ponto de verificação.

[083] Uma modalidade da invenção fornece um método de tratamento de câncer, o método compreendendo: (i) a administração de uma quantidade eficaz de pelo menos um inibidor do ponto de verificação imune; e, (ii) a administração de uma quantidade eficaz de uma vacina autóloga bi-haptenizada, em que o (pelo menos um) inibidor do ponto de verificação imune é selecionado do grupo que consiste em CTLA-4, PD-1, PD-L1, LAG3, B7-H3, B7-H4, KIR, OX40, IDO-1, IDO-2, CEACAM1, INFR5F4, BTLA, OX4OL e TIM3 ou combinações destes. Em algumas modalidades, o (pelo menos um) inibidor do ponto de verificação imune compreende PD-1. Em algumas modalidades, o inibidor do ponto de verificação imune de PD- 1 é selecionado do grupo que consiste em nivolumab, pembrolizumab, atezolizumab, avelumab e durvalumab.

[084] Em algumas modalidades, o (pelo menos um) inibidor do ponto de verificação imune compreende CTLA-4. Em algumas modalidades, o inibidor do ponto de verificação imune de CTLA-4 é selecionado do grupo que consiste em ipilimumab e tremelimumab.

[085] Em algumas modalidades, o (pelo menos um) inibidor do ponto de verificação compreende um inibidor do ponto de verificação imune de PD-1 e um inibidor do ponto de verificação imune de CTLA-4.

[086] Em algumas modalidades, o câncer é resistente à terapia com inibidor do ponto de verificação imune. Em algumas modalidades os cânceres não respondem à terapia com inibidor do ponto de verificação imune. Em algumas modalidades, o câncer possui resistência adquirida à terapia com inibidor do ponto de verificação imune. Terapia combinada

[087] Em algumas modalidades, uma vacina bi-haptenizada é administrada antes que comece um ciclo de tratamento com inibidor do ponto de verificação (ciclo de tratamento). Um ciclo de tratamento se refere a um período de tratamento,

seguido por um período de repouso (sem tratamento) que é repetido em um intervalo regular.

Por exemplo, tratamento dado por 10 semanas, seguidas por três semanas de repouso é um ciclo de tratamento.

Quando esse ciclo é repetido várias vezes em um intervalo regular, ele constitui um esquema de tratamento.

O ciclo de tratamento da vacina bi-haptenizada compreende 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 ou 28 semanas de tratamento, seguidas por 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 ou 28 semanas de repouso (sem tratamento com vacina bi-haptenizada). O ciclo de tratamento do inibidor do ponto de verificação compreende 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 ou 28 semanas de tratamento, seguidas por 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 ou 28 semanas de repouso (sem tratamento com o inibidor do ponto de verificação). Em algumas modalidades, tanto o ciclo de tratamento do inibidor do ponto de verificação quanto a vacina bi-haptenizada podem ser repetidos independentemente 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, ou mais vezes.

Em algumas modalidades, o ciclo de tratamento do inibidor do ponto de verificação e o ciclo de tratamento de vacina bi-haptenizada não se sobrepõe.

Em algumas modalidades, o ciclo de tratamento do inibidor do ponto de verificação e o ciclo de tratamento de vacina bi-haptenizada se sobrepõem por 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 semanas.

Em algumas modalidades, uma vacina bi- haptenizada é administrada uma semana antes; duas semanas antes; três semanas antes; quatro semanas antes; cinco semanas antes; seis semanas antes; sete semanas antes; oito semanas antes; nine semanas antes; dez semanas antes; onze semanas antes; ou doze semanas antes que comece um ciclo de terapia com inibidor do ponto de verificação. Em algumas modalidades, a primeira dose de uma vacina bi-haptenizada é administrada e cerca de dez semanas mais tarde, uma primeira dose de um inibidor do ponto de verificação imune é administrada, começando o ciclo de tratamento do inibidor do ponto de verificação imune.

[088] Em algumas modalidades, um indivíduo recebeu terapia prévia com inibidor do ponto de verificação antes de uma primeira administração de uma vacina bi-haptenizada. Em algumas modalidades, um indivíduo possui progressão da doença após tratamento anterior com inibidor do ponto de verificação.

[089] Em algumas modalidades, uma vacina bi-haptenizada é administrada em uma série de sete doses, em que uma dose é administrada aproximadamente a cada sete dias durante um período de tempo de cerca de sete-semanas. Em algumas modalidades, ciclofosfamida é administrada durante o ciclo de tratamento da vacina bi-haptenizada. Em algumas modalidades, ciclofosfamida é administrada por volta do dia 2, 3, 4, 5, 6 ou 7 do ciclo de tratamento de vacina bi- haptenizada. Em algumas modalidades, ciclofosfamida é administrada por volta do dia sete das sete-semanas do ciclo de tratamento de vacina bi-haptenizada. Em algumas modalidades, ciclofosfamida é administrada 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7 dias antes da segunda dose da vacina bi-haptenizada. Em algumas modalidades, ciclofosfamida é administrada 1, 2, 3,

4, 5, 6 ou 7 dias após a primeira dose da vacina bi- haptenizada. Em algumas modalidades, ciclofosfamida é administrada 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7 dias antes da primeira dose da vacina bi-haptenizada. Uma dose de ciclofosfamida exemplar é cerca de 300 mg/m2.

[090] Em algumas modalidades, a vacina bi-haptenizada é administrada a um indivíduo semanalmente, a cada duas semanas, a cada três semanas, mensalmente, bimestralmente, a cada três meses, a cada quatro meses, a cada cinco meses, ou a cada seis meses para o tratamento de um câncer. Em uma modalidade, o indivíduo é um humano.

[091] Em algumas modalidades, doses de reforço periódicas da vacina bi-haptenizada são administradas. Em algumas modalidades, um reforço é administrado primeiro em torno de 26 semanas após a primeira administração da vacina bi- haptenizada. Em algumas modalidades, após um primeiro ciclo completo de tratamento com vacina bi-haptenizada, doses de reforço da vacina são administradas aproximadamente a cada três meses. Em algumas modalidades, após um primeiro ciclo completo de tratamento com vacina bi-haptenizada, doses de reforço da vacina são administradas aproximadamente a cada seis meses. Em algumas modalidades, após um primeiro ciclo completo de tratamento com vacina bi-haptenizada, doses de reforço da vacina são administradas aproximadamente uma vez por ano.

[092] Em algumas modalidades, um ou mais inibidores do ponto de verificação são co-administrados com uma vacina bi- haptenizada.

[093] Durante o regime de uma vacina tumoral bi- haptenizada, uma ou mais terapias com inibidor do ponto de verificação são administradas para se beneficiar das alterações na sinalização imune. Em algumas modalidades, o paciente recebe um agente anti-CTLA-4 (por exemplo, ipilimumab ou tremelimumab) e/ou um agente anti-PD-1 (por exemplo, nivolumab, pembrolizumab ou cemiplimab). O inibidor do ponto de verificação imune pode ser administrado parenteralmente, por exemplo, em algumas modalidades, por via subcutânea, por via intratumoral, por via intravenosa. Por exemplo, em várias modalidades o inibidor do ponto de verificação imune é administrado em uma dose de cerca de 1 mg/kg até cerca de 10 mg/kg por via intravenosa. Em várias modalidades, o inibidor do ponto de verificação imune é administrado em uma dose de cerca de 1 mg/kg até cerca de 5 mg/kg por via intravenosa. A dose inicial do inibidor do ponto de verificação imune pode ser administrada pelo menos seis semanas após a dose inicial da vacina bi-haptenizada, por exemplo, em torno das semanas 6, 7, 8, 9 ou 10. Em algumas modalidades, o agente imunoterápico é administrado de cerca de 2 até cerca de 6 vezes (por exemplo, cerca de 4 vezes, preferivelmente a cada três semanas).

[094] Em algumas modalidades, o paciente recebe um inibidor de PD-L1, por exemplo, atezolizumab (Tecentriq), Avelumab (Bavencio) e/ou Durvalumab (Imfinzi).

[095] Em algumas modalidades, a vacina tumoral bi- haptenizada é administrada por via subcutânea a um paciente com câncer metastático previamente constatado como sendo não responsivo ou somente parcialmente responsivo à terapia por bloqueio do ponto de verificação imune. Por exemplo, a vacina tumoral bi-haptenizada é administrada em uma dose de cerca de 8 x 106 células até cerca de 22 x 106 células nas semanas

1, 2, 3, 4, 5, 6 e 7, com ipilimumab administrado i.v. a 3 mg/kg. Ipilimumab pode ser administrado a cada três semanas, começando na semana 10. Alternativamente, pembrolizumab pode ser administrado i.v. a 2 mg/kg a cada três semanas, começando na semana 10.

[096] Em algumas modalidades, a vacina tumoral bi- haptenizada é administrada por via subcutânea a um paciente com câncer metastático previamente constatado como sendo não responsivo ou somente parcialmente responsivo à terapia por bloqueio do ponto de verificação imune. Por exemplo, a vacina tumoral bi-haptenizada é administrada em uma dose de cerca de 8 x 106 células até cerca de 22 x 106 células nas semanas 1, 2, 3, 4, 5, 6 e 7, com 350 mg de cemiplimab (Libtayo) administrado por infusão i.v. ao longo de um intervalo de 30 minutos, a cada três semanas, começando da semana 10 até progressão da doença ou toxicidade inaceitável. Composições farmacêuticas

[097] Em uma modalidade, a invenção fornece uma composição farmacêutica para uso no tratamento das doenças e condições descritas nesse relatório descritivo. Em uma modalidade preferida, a invenção fornece composições farmacêuticas, incluindo aquelas descritas abaixo, para uso no tratamento de câncer que é resistente ao tratamento com inibidor do ponto de verificação imune.

[098] Em algumas modalidades, a invenção fornece composições farmacêuticas para o tratamento de câncer que possui resistência adquirida a um tratamento com inibidor do ponto de verificação imune. Em algumas modalidades, a invenção fornece composições farmacêuticas para o tratamento de câncer metastático. Em algumas modalidades, a invenção fornece composições farmacêuticas para o tratamento de câncer que é resistente ao tratamento com inibidor do ponto de verificação imune. Em algumas modalidades, a invenção fornece composições farmacêuticas para o tratamento de câncer que foi tratado previamente por pelo menos um inibidor do ponto de verificação imune. Em algumas modalidades, o câncer não responde à terapia com inibidor do ponto de verificação imune isoladamente.

[099] As composições farmacêuticas são tipicamente formuladas para fornecer uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma combinação como descrita nesse relatório descritivo, por exemplo, uma combinação que compreende pelo menos um inibidor do ponto de verificação imune e uma vacina tumoral autóloga bi-haptenizada. Em algumas modalidades, o (pelo menos um) inibidor do ponto de verificação imune é administrado antes da primeira dose de uma vacina tumoral autóloga bi-haptenizada. Em algumas modalidades, a primeira dose de uma vacina tumoral autóloga bi-haptenizada é administrada antes do (pelo menos um) inibidor do ponto de verificação imune.

[100] Quando desejado, as composições farmacêuticas contêm um sal farmaceuticamente aceitável e/ou complexo de coordenação de um ou mais dos ingredientes ativos. Tipicamente, as composições farmacêuticas também compreendem um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis, carreadores, incluindo diluentes e enchimentos sólidos inertes, diluentes, incluindo solução aquosa estéril e vários solventes orgânicos, intensificadores da permeação, solubilizantes e adjuvantes.

[101] As composições farmacêuticas descritas acima são preferivelmente para uso no tratamento das doenças e condições descritas nesse relatório descritivo.

[102] Em modalidades preferidas, as composições farmacêuticas da presente invenção são para uso no tratamento de câncer ovariano, câncer uterino, câncer vaginal, câncer vulvar e câncer endometrial.

[103] Em algumas modalidades, os métodos e composições farmacêuticas da presente invenção são para uso no tratamento de um câncer selecionado do grupo que consiste em câncer da bexiga, carcinoma de célula escamosa, incluindo câncer da cabeça e pescoço, adenocarcinoma pancreático ductal (PDA), câncer pancreático, carcinoma do cólon, carcinoma mamário, câncer de mama, fibrossarcoma, mesotelioma, carcinoma de célula renal, carcinoma do pulmão, timoma, câncer de próstata, câncer cólon-retal, câncer ovariano, leucemia mielóide aguda, câncer do timo, câncer do cérebro, câncer de célula escamosa, câncer de pele, câncer ocular, retinoblastoma, melanoma, melanoma intra-ocular, cânceres da cavidade oral e orofaríngeos, câncer gástrico, câncer do estômago, câncer cervical, câncer renal, câncer do rim, câncer do fígado, câncer ovariano, câncer esofágico, câncer testicular, câncer ginecológico, câncer da tireóide, câncer induzido por vírus, glioblastoma, tumores esofágicos, neoplasias hematológicas, câncer de pulmão de célula não pequena, leucemia mielocítica crônica, linfoma de célula B grande difuso, tumor do esôfago, linfoma do centro folicular, tumor da cabeça e pescoço, infecção por vírus da hepatite C, carcinoma hepatocelular, doença de Hodgkin, câncer do cólon metastático, mieloma múltiplo, linfoma não-Hodgkin, linfoma não-Hodgkin indolente, tumor do ovário, tumor do pâncreas,

carcinoma de célula renal, câncer de pulmão de pequena célula, melanoma em estágio IV, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfoblástica aguda de célula B (ALL), ALL de célula B madura, linfoma folicular, linfoma da célula do manto e linfoma de Burkitt.

[104] As composições que compreendem uma vacina tumoral autóloga bi-haptenizada podem ser administradas por via subcutânea. As composições que compreendem uma vacina tumoral autóloga bi-haptenizada podem ser preferencialmente administradas por via intradérmica. Em algumas modalidades as composições que compreendem uma vacina tumoral autóloga bi-haptenizada são administradas por via intramuscular. Em algumas modalidades, as composições que compreendem uma vacina tumoral autóloga bi-haptenizada são administradas por meio da via intramuscular no deltóide ou no aspecto anterolateral da coxa. Métodos conhecidos por aqueles habilitados nas ciências clínicas permitem a injeção intramuscular confiável, até mesmo com a variação da espessura da camada de gordura subcutânea e variações entre homens e mulheres. Por exemplo, Zuckerman, “The Importance of Injecting Vaccines into Muscle: Different Patients Need Different Needle Sizes”, BMJ 321: 1.237-1.238 (2000).

[105] São descritas abaixo composições farmacêuticas não limitantes e métodos para sua preparação Composições farmacêuticas para injeção

[106] Em modalidades preferidas, a invenção fornece uma composição farmacêutica de uma vacina tumoral autóloga bi- haptenizada para injeção que compreende um adjuvante de vacina.

[107] Outros componentes conhecidos na técnica podem ser usados nas composições descritas nesse relatório descritivo. Algumas modalidades de uma vacina tumoral autóloga bi- haptenizada podem ainda compreender adjuvantes, por exemplo, bacilo de Calmette-Guérin (BCG), citocinas (por exemplo não limitante, fator estimulante de colônia de granulócitos- macrófagos (GM-CSF)), géis de alumínio ou sais de alumínio, ou outros adjuvantes conhecidos na técnica por estimularem de forma não específica a resposta imune e aumentarem a eficácia da resposta imune à vacina. Em pelo menos uma modalidade preferida, o adjuvante é BCG Tice.

[108] Uma vacina tumoral autóloga bi-haptenizada pode ainda compreender conservantes conhecidos na técnica incluindo, sem limitação, formaldeído, antibióticos, glutamato monossódico, 2-fenoxietanol, fenol e cloreto de benzetônio. Uma vacina tumoral autóloga bi-haptenizada pode ainda compreender água estéril para injeção, soluções salinas balanceadas para injeções. Kits diagnósticos personalizados

[109] A invenção também fornece kits. Os kits incluem cada um de: (i) uma ou mais seringas preenchidas de dose única, em que o enchimento da seringa compreende células tumorais autólogas bi-haptenizadas em um carreador farmaceuticamente aceitável; (ii) uma ou mais seringas preenchidas de dose única, em que o enchimento da seringa compreende um controle negativo de teste em um carreador farmaceuticamente aceitável; (iii) instruções por escrito; e (iv) um guia para pontuação dos resultados do teste.

[110] Esses kits também podem incluir informação, por exemplo, referências da literatura científica, materiais para bula, resultados de experimento clínico, e/ou resumos desses e semelhantes, que indicam ou estabelecem as atividades e/ou vantagens da composição, e/ou que descrevem a dosagem, administração, efeitos colaterais, interações farmacológicas, ou outra informação útil para o profissional de saúde. Essa informação pode ser baseada nos resultados de vários estudos, por exemplo, estudos que utilizam animais experimentais que envolvem modelos in vivo e estudos baseados em experimentos clínicos humanos. O kit pode ainda conter outro ingrediente farmacêutico ativo. Em algumas modalidades, o outro ingrediente farmacêutico ativo pode estar em composições separadas em recipientes separados dentro do kit.

[111] Em uma modalidade, o guia para a pontuação dos resultados do teste diagnóstico personalizado pode ser uma medidor para a medição do diâmetro de induração, pápula e flare. Em uma modalidade, o guia pode ser uma série de pictogramas, fotos exemplares ou diagramas que ilustram pápula e flare, induração, ou outros traços característicos de respostas aos reagentes diagnósticos, por exemplo, controles positivos e negativos. Em uma modalidade, o kit pode ainda compreender um marcador para definição das bordas da superfície cutânea responsiva.

[112] Em uma modalidade, o kit pode ainda compreender um código QR único que representa um código de identificação único e que permite a comunicação ligada exclusivamente ao kit diagnóstico personalizado.

[113] Artigos de embalagem e adicionais adequados para uso (por exemplo, embalagem de folha metálica para minimizar exposição ao ar e semelhantes) são conhecidos na técnica e podem ser incluídos no kit. Os kits descritos nesse relatório descritivo podem ser fornecidos, comercializados e/ou promovidos para profissionais de saúde, incluindo médicos, enfermeiros, farmacêuticos, profissionais responsáveis pela formulação e semelhantes. Avaliação da eficácia

[114] A eficácia dos métodos, compostos e combinações de compostos descritos nesse relatório descritivo no tratamento, prevenção e/ou gerenciamento das doenças ou distúrbios indicados pode ser testada usando vários modelos animais conhecidos na técnica. Modelos para a determinação da eficácia de tratamentos para câncer pancreático são descritos em Herreros-Villanueva, e cols., World J. Gastroenterol. 2012, 18, 1.286-1.294. Modelos para a determinação da eficácia de tratamentos para câncer de mama são descritos, por exemplo, em Fantozzi, Breast Cancer Res. 2006, 8, 212. Modelos para a determinação da eficácia de tratamentos para câncer ovariano são descritos, por exemplo, em Mullany, e cols., Endocrinology 2012, 153, 1.585-92; e Fong, e cols., J. Ovarian Res. 2009, 2, 12. Modelos para a determinação da eficácia de tratamentos para melanoma são descritos, por exemplo, em Damsky, e cols., Pigment Cell & Melanoma Res. 2010, 23, 853-859. Modelos para a determinação da eficácia de tratamentos para câncer de pulmão são descritos, por exemplo, em Meuwissen, e cols., Genes & Development, 2005, 19, 643-664. Modelos para a determinação da eficácia de tratamentos para câncer de pulmão são descritos, por exemplo, em Kim, Clin. Exp. Otorhinolaryngol. 2009, 2, 55-60; e Sano, Head Neck Oncol. 2009, 1, 32. Modelos para a determinação da eficácia de tratamentos para câncer cólon-retal, incluindo o modelo de CT26, são descritos em

Castle, e cols., BMC Genomics, 2013, 15, 190; Endo, e cols., Cancer Gene Therapy, 2002, 9, 142-148; Roth e cols., Adv. Immunol. 1994, 57, 281-351; Fearon, e cols., Cancer Res. 1988, 48, 2.975-2.980. A eficácia em DLBCL pode ser avaliada usando o modelo murídeo de PiBCL1 e camundongos BALB/c (haplótipo H-2d). Illidge, e cols., Cancer Biother. & Radiopharm. 2000, 15, 571-80. A eficácia em NHL pode ser avaliada usando o modelo murídeo de 38C13a com camundongos C3H/HeN (haplótipo 2-Hk) ou, alternativamente, o modelo de 38C13 Her2/neu. Timmerman, e cols., Blood, 2001, 97, 1.370- 77; Penichet, e cols., Cancer Immunolog. Immunother. 2000, 49, 649-662. A eficácia em CLL pode ser avaliada usando o modelo de BCL1 usando camundongos BALB/c (haplótipo H-2d). Dutt, e cols., Blood, 2011, 117, 3.230-29.

[115] A hipersensibilidade do tipo retardada (DTH) pode ser usada para monitorar a eficácia. Se DTH é realizada para avaliar a imunidade antitumoral, os tempos da testagem de DTH são: (a) resposta no nível de base testada cerca de 14 até cerca de 21 dias antes da primeira dose de vacina; (b) em torno da semana 10 de tratamento com vacina, que é antes da primeira dose de um inibidor do ponto de verificação co- administrado; e (c) em torno da semana 28 de tratamento com vacina, que é após pelo menos duas doses co-administradas de pelo menos um inibidor do ponto de verificação. Em algumas modalidades, DTH é realizada aproximadamente a cada três meses após um regime de co-administração completo de vacina e inibidor do ponto de verificação.

[116] Em algumas modalidades, a invenção fornece um método de tratamento de um tumor sólido com uma composição que inclui uma combinação de um inibidor do ponto de verificação imune e uma vacina autóloga bi-haptenizada. Em algumas modalidades o tumor sólido é selecionado do grupo que consiste em câncer ovariano, câncer uterino, câncer vaginal, câncer vulvar e câncer endometrial.

[117] A dose de cada um do inibidor do ponto de verificação imune e da vacina autóloga bi-haptenizada é tal que a dose seja eficaz para inibir a sinalização entre as células do tumor sólido e pelo menos um microambiente selecionado do grupo que consiste em macrófagos, monócitos, mastócitos, células T helper, células T citotóxicas, células T reguladoras, células natural killer, células supressoras derivadas do sistema mielóide, células B reguladoras, neutrófilos, células dendríticas e fibroblastos. Em algumas modalidades, a invenção fornece um método de tratamento de câncer pancreático, câncer de mama, câncer ovariano, melanoma, câncer de pulmão, carcinoma de célula escamosa, incluindo câncer da cabeça e pescoço e câncer cólon-retal.

[118] Embora modalidades preferidas da invenção sejam mostradas e descritas nesse relatório descritivo, essas modalidades são fornecidas apenas como exemplo, e não visam, de outro modo, limitar o escopo da invenção. Várias alternativas às modalidades descritas da invenção podem ser empregadas na prática da invenção. Portanto, o espírito e escopo das reivindicações em anexo não devem ser limitados à descrição das versões preferidas aqui contidas.

[119] A atenção do leitor é dirigida a todos os artigos científicos e documentos que são depositados concomitantemente com esse relatório descritivo e que são abertos à inspeção pública com esse relatório descritivo, e o conteúdo de todos os artigos científicos e documentos incorporado nesse relatório descritivo por referência. Todas as características reveladas no relatório descritivo (incluindo quaisquer reivindicações, resumo e desenhos que o acompanham) podem ser substituídas por características alternativas que servem à mesma finalidade, a uma finalidade equivalente ou similar, salvo quando expressamente declarado em contrário. Dessa forma, salvo quando expressamente declarado em contrário, cada característica revelada é apenas um exemplo de uma série genérica de características equivalentes ou similares.

EXEMPLOS

[120] As modalidades englobadas nesse relatório descritivo são agora descritas com referência aos exemplos seguintes. Esses exemplos são fornecidos apenas com finalidade ilustrativa e a revelação englobada nesse relatório descritivo não deve, de forma alguma, ser considerada como estando limitada a esses exemplos, mas sim deve ser considerada como englobando qualquer uma e todas as variações que ficam evidentes como resultado dos ensinamentos fornecidos nesse relatório descritivo. Exemplo 1. Preparação de uma vacina tumoral autóloga bi- haptenizada. Processamento de amostras tumorais frescas

[121] Uma amostra fresca de tumor dissecado é colocada em um recipiente descartável estéril, ao qual foram adicionados cerca de 150 ml de solução salina balanceada de Hanks (HBSS) com 20 µg/ml de gentamicina. A amostra tumoral é armazenada a 4°C até processamento adicional. Nunca uma amostra é armazenada por mais do que cerca de 96 horas antes do início do processamento adicional.

[122] Em uma coifa de biossegurança, o tecido tumoral é pinçado e depois mecanicamente dissociado para produzir uma suspensão de células tumorais. A suspensão de células tumorais é contada, dividida em alíquotas em criofrascos estéreis, congelada em uma congelador com taxa controlada, e armazenada em nitrogênio líquido. Bi-haptenização

[123] As células são descongeladas e lavadas usando HBSS. As células são então irradiadas até uma dose total de radiação gama de 2.500 cGy. A seguir, as células inativadas são divididas em duas alíquotas iguais: uma primeira alíquota é modificada com DNP por uma incubação de 30 minutos com difluornitrobenzeno (DNFB). Uma segunda alíquota é modificada com ácido sulfanílico (SA) por uma incubação de 5 minutos com o sal de diazônio de SA. As células haptenizadas são lavadas com HBSS, contadas e fixadas com etanol em uma concentração final de cerca de 37,5% por cerca de 10 minutos. Criopreservação

[124] As células haptenizadas de cada alíquota são combinadas, contadas, divididas em alíquotas e congeladas em um meio de criopreservação que compreende cerca de 7% de sacarose e cerca de 10% de albumina sérica humana em HBSS. As alíquotas de vacina são então congeladas e são armazenadas em nitrogênio líquido até necessárias para administração. Exemplo 2. Teste diagnóstico personalizado

[125] O teste diagnóstico personalizado compreende a avaliação da reação de hipersensibilidade do tipo retardada (DTH) à vacina tumoral autóloga personalizada e sua comparação com um controle negativo.

[126] O diagnóstico é personalizado porque o reagente que provoca a reação de DTH é uma vacina tumoral autóloga personalizada fabricada usando o próprio tecido do tumor do paciente.

[127] Na superfície lateral de um braço do paciente, uma área de pele é selecionada para o teste diagnóstico. Essa região é denominada a área de teste. Um controle negativo, que tipicamente compreende Solução Salina Balanceada de Hank e albumina sérica humana, é injetado por via intradérmica para formar uma pequena bolha. Em uma área adjacente, cerca de 3 x 106 células da vacina tumoral autóloga personalizada são injetadas por via intradérmica, para formar uma pequena bolha.

[128] Cerca de 48 horas mais tarde, a área de teste é inspecionada visualmente e o diâmetro da induração, pápula e flare para o controle positivo é medido. O diâmetro da induração, pápula e flare para o local de injeção da vacina tumoral autóloga personalizada é medido. Uma resposta positiva é uma induração que resulta da vacina autóloga de tumor que tem pelo menos 5 mm de diâmetro.

[129] A Figura 1 mostra uma resposta de hipersensibilidade do tipo retardada pós-vacina, positiva, típica.

[130] A resposta diagnóstica de DTH é comparada com uma resposta de DTH no nível de base realizada antes da administração da primeira dose da vacina. Tipicamente, essa avaliação de DTH no nível de base é realizada em torno de 14 a 21 dias antes da primeira dose da vacina autóloga bi- haptenizada personalizada ser administrada. Essa resposta é denominada a resposta de DTH no nível de base.

[131] A resposta de DTH é reavaliada em torno de 10 semanas após a primeira dose de vacina e antes da primeira dose de um inibidor do ponto de verificação imune. A resposta de DTH é reavaliada em torno de 28 semanas após a primeira dose de vacina. Exemplo 3. Esquema de co-administração típico

[132] A tabela abaixo mostra um esquema de administração exemplar para vacina bi-haptenizada e um inibidor do ponto de verificação imune, nesse exemplo, KeytrudaTM (pembrolizumab). Evento e momento Descrição Semana 1 Dia 1 Primeira vacina bi-haptenizada administrada sem adjuvante Semana 1 Dia 7 Ciclofosfamida 300 mg/m2 por meio de infusão IV rápida Semana 2 Dia 10 Segunda dose da vacina bi- haptenizada administrada com adjuvante Semana 3 Dia 17 Terceira dose da vacina bi- haptenizada administrada com adjuvante Semana 4 Dia 24 Quarta dose da vacina bi- haptenizada administrada com adjuvante Semana 5 Dia 31 Quinta dose da vacina bi- haptenizada administrada com adjuvante Semana 6 Dia 38 Sexta dose da vacina bi- haptenizada administrada com adjuvante

Semana 7 Dia 45 Sétima dose da vacina bi- haptenizada administrada com adjuvante Semanas 10, 13, 16, 19, 22 e KeytrudaTM (pembrolizumab) 25 administrado Semana 26 Oitava dose da vacina bi- haptenizada administrada com adjuvante; essa é uma dose de reforço.

Semana 28 KeytrudaTM (pembrolizumab) administrado, continuando de acordo com um esquema de dosagem típico.

Exemplo 4. Experimento clínico de terapia combinada

[133] O experimento clínico descrito compara a eficácia da combinação de uma vacina tumoral bi-haptenizada e YervoyTM (ipilimumab), um inibidor do ponto de verificação imune. Esse é um experimento multicêntrico de Fase III, randomizado, controlado por placebo, duplo-cego, em pacientes com câncer ovariano metastático com metástases mensuráveis. Para serem elegíveis para avaliação, os pacientes foram submetidos à cirurgia para intervenção terapêutica, o que gera uma quantidade adequada de células tumorais ovarianas para preparação de vacinas.

[134] Os pacientes são designados de uma forma duplo- cega para Vacina Ativa ou Vacina de Placebo em uma proporção de 2:1 (Vacina Ativa:Vacina de Placebo). A dose de Vacina Ativa é de 12 ± 8 x 106 células tumorais de melanoma autólogas bi-haptenizadas. A Vacina de Placebo consiste somente em diluente.

[135] Uma dose inicial de Vacina Ativa ou Vacina de Placebo é administrada sem BCG, seguida por uma dose baixa de ciclofosfamida (300 mg/m2 por via intravenosa). As doses posteriores, dependendo do grupo de randomização, de Vacina Ativa ou Vacina de Placebo são misturadas com bacilo de Calmette-Guerin (BCG) são administradas semanalmente por pelo menos 6 semanas. Pelo menos quatro doses de YervoyTM são administradas a todos os pacientes, começando cerca de 3 semanas após a última dose de vacina. Esse tempo é por volta da semana 10. YervoyTM é administrado a 10 mg/kg por via intravenosa ao longo de 90 minutos a cada três semanas por quatro doses, seguidas por 10 mg/kg a cada 12 semanas por até 3 anos. Em caso de toxicidade, as doses de YervoyTM são omitidas, não retardadas.

[136] Os pacientes são avaliados quanto à resposta antitumoral pelos critérios de RECIST modificados entre as semanas 24 e 25. No ponto de 6 meses, os pacientes que permanecem no estudo recebem uma dose única de reforço adicional de Vacina Ativa ou Vacina de Placebo misturada com BCG. Esses reforço é seguido por doses de YervoyTM a cada 12 semanas por até 3 anos. Duas avaliações adicionais para a resposta antitumoral são feitas em 9 meses e um ano. A seguir, os pacientes são avaliados regularmente quanto ao estado do tumor e eventos adversos até a ocorrência de evidências de doença progressiva (PD) que potencialmente necessite de terapia adicional. Pacientes sem PD permanecem no estudo por até 5 anos.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método de tratamento de câncer para um indivíduo, o método caracterizado por compreender a co-administração ao indivíduo necessitado de uma ou mais composições que compreendem quantidades terapeuticamente eficazes de: (i) pelo menos um inibidor do ponto de verificação imune; e, (ii) uma vacina autóloga bi-haptenizada.

2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o (pelo menos um) inibidor do ponto de verificação imune é administrado antes da administração da vacina autóloga bi-haptenizada.

3. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o (pelo menos um) inibidor do ponto de verificação imune é administrado depois da administração da vacina autóloga bi-haptenizada.

4. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a vacina autóloga bi- haptenizada é administrada a cada duas semanas por pelo menos oito semanas.

5. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a vacina autóloga bi- haptenizada é administrada uma vez por semana por pelo menos seis semanas.

6. Método de acordo com a reivindicação 4 ou 5, o método ainda caracterizado por compreender pelo menos uma injeção de reforço da vacina autóloga bi-haptenizada cerca de seis meses após a primeira injeção.

7. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a vacina autóloga bi-haptenizada é administrada a cada duas semanas até que o teste diagnóstico de hipersensibilidade do tipo retardada seja positivo.

8. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a vacina autóloga bi-haptenizada é administrada semanalmente até que o teste diagnóstico de hipersensibilidade do tipo retardada seja positivo.

9. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado do grupo que consiste em câncer ovariano, câncer uterino, câncer vaginal, câncer vulvar, câncer endometrial e melanoma.

10. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o (pelo menos um) inibidor do ponto de verificação imune é selecionado do grupo que consiste em CTLA-4, PD-1, PD-L1, LAG3, B7-H3, B7-H4, KIR, OX40, IDO-1, IDO-2, CEACAM1, INFR5F4, BTLA, OX4OL, TIM3, e combinações destes.

11. Método de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o inibidor do ponto de verificação imune é inibidor de PD-1.

12. Método de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o inibidor do ponto de verificação imune de PD-1 é selecionado do grupo que consiste em nivolumab, pembrolizumab, atezolizumab, avelumab e durvalumab.

13. Método de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o inibidor do ponto de verificação imune é inibidor de CTLA-4.

14. Método de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o inibidor do ponto de verificação imune de CTLA-4 é selecionado do grupo que consiste em ipilimumab e tremelimumab.

15. Método de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o (pelo menos um) inibidor do ponto de verificação imune compreende um inibidor do ponto de verificação imune de PD-1 e um inibidor do ponto de verificação imune de CTLA-4.

16. Kit de teste diagnóstico personalizado, o kit caracterizado por compreender: (i) uma ou mais seringas preenchidas de dose única, em que o enchimento da seringa compreende células tumorais autólogas bi-haptenizadas em um carreador farmaceuticamente aceitável; (ii) uma ou mais seringas preenchidas de dose única, em que o enchimento da seringa compreende um controle negativo de teste em um carreador farmaceuticamente aceitável; (iii) instruções por escrito; e (iv) um guia para pontuação dos resultados do teste.

17. Método de tratamento de câncer, o método caracterizado por compreender: (i) a administração de uma quantidade eficaz de pelo menos um inibidor do ponto de verificação imune; e, (ii) a administração de uma quantidade eficaz de uma vacina autóloga bi-haptenizada, em que a vacina autóloga bi- haptenizada é preparada por um processo que compreende as etapas de: (a) lavagem de um fragmento tumoral dissecado, em que o fragmento possui pelo menos cerca de um cm de diâmetro; (b) dissociação do fragmento tumoral em uma suspensão de células; (c) irradiação da suspensão de células com radiação gama;

(d) divisão da suspensão de células irradiada em pelo menos duas porções aproximadamente iguais; (e) haptenização de uma primeira porção com um primeiro reagente de haptenização e uma segunda porção com um segundo reagente de haptenização; (f) fixação de cada porção; (g) combinação das porções; e, (h) divisão em alíquotas de células que compreendem o produto da etapa (g) em alíquotas de cerca de 6 x 106 até cerca de 50 x 106 célula/ml.

18. Método de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o primeiro reagente de haptenização é dinitrofluorbenzeno (DNFB).

19. Método de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o segundo reagente de haptenização é selecionado do grupo que consiste em trinitroclorobenzeno (TNCB), 2,4-difluornitrobenzeno (DNFB), N-iodoacetil-N'-(5-sulfônico-1- naftil)etilenodiamina (AED), ácido sulfanílico (SA), trinitrofenol (TNP), ácido 2,4,6-trinitrobenzenossulfônico (TNBS) e combinações destes.

20. Método de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a dose da radiação gama é cerca de 2.500 cGy.

21. Método de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que cada porção é fixada com cerca de 37,5% de etanol.

22. Método de acordo com a qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado do grupo que consiste em câncer ovariano e melanoma.