BR112021000399A2 - Anticorpos antimesotelina - Google Patents

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Remi Fertin
Francisca Wollerton
Mihriban Tuna
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Abstract

anticorpos antimesotelina. o presente pedido se refere a moléculas de anticorpo que se ligam à mesotelina (msln). as moléculas de anticorpo têm aplicação no tratamento e diagnóstico de doenças e transtornos, como câncer. figura 4

Description

“ANTICORPOS ANTIMESOTELINA” Campo da Invenção
[0001] A presente invenção se refere a moléculas de anticorpo que se ligam à mesotelina (MSLN). As moléculas de anticorpo têm aplicação no tratamento e diagnóstico de doenças e transtornos, como câncer. Antecedentes da Invenção
[0002] MSLN é expresso em níveis relativamente baixos em células mesoteliais que alinham a pleura, peritônio e pericárdio (Hassan et al., 2005) de indivíduos saudáveis, mas é altamente expresso em diversos cânceres diferentes, incluindo mesoteliomas, carcinomas de célula escamosa, câncer pancreático, câncer de pulmão, gástrico, de mama, endometrial e ovário. A função biológica normal de mesotelina não é conhecida. No contexto de câncer, os níveis de expressão altos de MSLN foram correlacionados ao prognóstico insatisfatório em câncer de ovário, colangiocarcinoma, adenocarcinoma de pulmão e câncer de mama triplo negativo. A expressão de MSLN limitada em células normais versus a alta expressão em células tumorais torna esse um alvo terapêutico atraente com o uso de anticorpos monoclonais (Hassan et al., 2016).
[0003] MSLN é expresso como uma proteína precursora de 69 kDa (628 aminoácidos). A proteína precursora é, então, clivada pela endoprotease furina para liberar a região N- terminal secretada chamada fator de potenciação de megacariócito (MPF), enquanto a MSLN madura de proteína de 40 kDa permanece fixada à membrana celular por meio de um ligante glicosilfosfatidilinositol (GPI). MSLN humana compartilha 60 % e 87 % de identidade de aminoácidos com os ortólogos de murino e cinomolgo de MSLN, respectivamente.
[0004] MSLN madura ligada à membrana é removida de células como resultado de splicing alternativo, ao criar variantes que não tem sequência de âncora de membrana, ou clivagem de protease por enzima que converte fator de necrose tumoral α (TACE) (Sapede et al., 2008, Zhang et al., 2011). A MSLN expelida solúvel é encontrada nos soros do paciente e em estroma de tumores incluindo mesotelioma maligno, cânceres ovarianos ou cânceres altamente metastáticos. A medição de níveis de MSLN solúvel no sangue e nas efusões de pacientes de mesotelioma foi aprovada pela FDA dos EUA para monitorar a resposta de paciente ao tratamento e à progressão (Hollevoet et al., 2012, Creany et al., 2015).
[0005] Diversas terapias com base em anticorpo que alvejam MSLN foram desenvolvidas e testadas em testes clínicos, predominantemente em mesotelioma, câncer pancreático e de pulmão de célula não pequena (Hassan et al., 2016). As estratégias empregadas incluem morte de célula tumoral direto através do uso de anticorpos anti- MSLN, como amatuximabe, com atividade de citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC), bem como através do uso de conjugados de fármaco de anticorpo (ADCs) como SS1P- PE38 e anetumabe-ravtansina, compreendendo um anticorpo ou fragmento de anticorpo conjugado com uma toxina. Além disso, fragmentos Fv de ligação à anti-MSLN foram usados em terapias de célula T de receptor de antígeno quimérico e biespecíficos, como ABBV-428, estão surgindo de estudos pré-clínicos para ensaios clínicos.
[0006] Amatuximabe é um mAb kappa de IgG1 quimérica de camundongo que bloqueia a interação de MSLN-MUC16 e depende da função de ADCC para eliminar células tumorais. Os ensaios da fase I mostraram um bom perfil de segurança, mas eficácia clínica limitada quando combinados com quimioterapia (gemcitabina ou pemetrexede/cisplatina) com aprimoramento mínimo/nenhum aprimoramento em sobrevivência livre de progressão em mesotelioma maligno (documento NCT00738582, Hassan et al., 2014) e nenhuma resposta geral em comparação com o braço comparador em câncer pancreático (documento NCT00570713). SS1-PE-38 é uma imunotoxina recombinante, contendo o scFv anti-MSLN presente em amatuximabe, ligado ao inibidor de síntese de proteína PE38. Apesar da alta atividade antitumoral observada em ensaios da fase I (77 % de resposta parcial quando combinada com quimioterapia, documento NCT01445392), o uso clínico de SS1P é limitado por imunogenicidade e por uma síndrome de vazamento vascular dose-limitante. LMB-100, uma versão otimizada de SS1P-PE38 com imunogenicidade reduzida in vitro, está sendo testada atualmente em ensaio da fase I e II em separado ou em combinação com quimioterapia (documentos NCT02798536, NCT02810418).
[0007] O alvejamento de anti-MSLN é usado mais frequentemente para entregar fármacos citotóxicos a células tumorais. Anetumabe-ravtansina, uma IgG1 completamente humana ligada covalentemente ao agente antimitótico DM4, mostrou uma taxa de resposta geral de 31 % (ORR) em ensaios da fase I com câncer de ovário, peritoneal primário, de trompa de falópio e mesotelioma peritoneal predominantemente epitelioide avançado (documento
NCT01439152). Em mesotelioma, anetumabe-ravtansina mostrou uma ORR de 50 % em combinação com dosagem padrão de quimioterapia (documento NCT02639091). Como outro fármaco de anticorpo ADC, RG7600, anetumabe-ravtansina mostrou um perfil de segurança tolerável, mas toxicidades dose- limitantes foram observadas nesses estudos em linha com aqueles relatados para as respectivas frações de ADC. Até o momento, os dados da fase I de BMS86148 ainda não estão disponíveis.
[0008] Em suma, anticorpos não conjugados que alvejam MSLN mostraram perfis de segurança favoráveis, mas sua eficácia terapêutica foi limitada, enquanto ADCs se mostraram mais potentes em atividade antitumoral, mas foram associados às toxicidades dose-limitantes. Em relação à segurança, ADCs podem ter uma janela terapêutica maior que as terapias de imunotoxina (Zhao et al., 2016). Para diversos desses elementos terapêuticos de MSLN à base de anticorpo, os ensaios clínicos da fase II que combinam o elemento terapêutico com quimioterapia ou com inibidores de ponto de verificação imunológico como PD-1 ou PD-L1 estão em andamento. Diversas moléculas biespecíficas destinadas a se engatarem ao sistema imunológico também estão em desenvolvimento, incluindo ABBV-428, que alveja MSLN bem como a proteína coestimulatória CD40, o acoplador de célula T biespecífica MSLN-CD3 (BITE) e uma molécula biespecífica MSLN-CD47. Declarações da invenção
[0009] Como explicado acima, sabe-se que a MSLN madura, como outros antígenos associados ao tumor (TAAs), deve ser removida da superfície celular por clivagem enzimática. A porção removida/solúvel de MSLN é, então, retirada do sítio tumoral. Isso representa um desafio para elementos terapêuticos que alvejam MSLN, à medida que a porção removida/solúvel pode atuar como um dissipador para o elemento terapêutico, retirando o elemento terapêutico do sítio tumoral antes de se ligar ao tumor.
[0010] Os presentes inventores conduziram um programa de seleção extensivo para isolar moléculas de anticorpo que se ligam com afinidade superior à MSLN imobilizada que à MSLN na solução.
[0011] “Afinidade”, como denominado no presente documento, pode se referir à força da interação de ligação entre uma molécula de anticorpo e seu antígeno cognato, como medido por KD. Como seria prontamente aparente ao elemento versado na técnica, em que a molécula de anticorpo tem a capacidade para formar múltiplas interações de ligação com um antígeno (por exemplo, em que a molécula de anticorpo tem a capacidade para se ligar o antígeno de modo bivalente e, opcionalmente, o antígeno é dimérico) a afinidade, como medida por KD, também pode ser influenciada por avidez, em que avidez se refere à força geral de um complexo de anticorpo-antígeno.
[0012] Especificamente, acredita-se que as moléculas de anticorpo da invenção se ligam à MSLN com alta avidez e, desse modo, ligam MSLN mais fortemente onde o anticorpo tem a capacidade para se ligar a duas moléculas de MSLN, como no caso em que múltiplas cópias do antígeno são imobilizadas em uma superfície, que onde a MSLN está na forma monomérica, como espera-se ser o caso com MSLN em solução. Sem desejar se ligar por teoria, portanto,
considera-se que as moléculas de anticorpo da invenção não permanecerão ligadas à MSLN removida em solução in vivo devido à baixa afinidade dos anticorpos em relação à MSLN monomérica, desse modo, não serão retiradas do sítio tumoral tão rapidamente, e, por conseguinte, terão mais tempo para exercer seu efeito terapêutico por ligação de MSLN na superfície de células tumorais. O alvejamento preferencial de MSLN ligada à membrana foi relatado anteriormente, embora as moléculas em questão tenham sido isoladas com o uso de diferentes abordagens daquelas empregadas pelos presentes inventores. Especificamente, o alvejamento preferencial de MSLN ligada à membrana foi relatado através de isolamento de moléculas que alvejam diferentes regiões de MSLN (Asgarov et al., 2017; Tang et al., 2013). Por exemplo, foi relatado um anticorpo de domínio único (apenas domínio VH) fusionado com Fc humano, SD1-Fc, que alveja um epítopo próximo à membrana celular para promover a atividade de CDC (Tang et al., 2013). Entretanto, não fica óbvio como tais epítopos expostos estão em diferentes cenários de câncer. Além disso, o engatador de célula T biespecífica de MSLN-CD3 (BITE) também foi relatado para se ligar, de preferência, à MSLN ligada à célula. Entretanto, nenhuma dessas moléculas são moléculas de IgG completas e nenhuma tem a capacidade para se ligar bivalentemente à MSLN, pois ambas têm ligação monovalente ao alvo (através do domínio VH em SD1-Fc ou do scFv do BITE).
[0013] As moléculas de anticorpo isoladas pelos presentes inventores ligam diferentes epítopos/regiões em MSLN. Isso é evidente a partir do fato de que algumas dentre as moléculas de anticorpo têm a capacidade para bloquear a ligação do ligante MUC16 à MSLN enquanto outras não têm. O bloqueio de MUC16 para MSLN é considerado como sendo vantajoso para inibir metástase de células cancerígenas que expressam MUC16 para superfícies que expressam MSLN na pleura e no peritônio (Chen et al., 2013). Outras regiões de ligação mais próximas à membrana celular podem facilitar a atividade de ADCC e CDC.
[0014] As moléculas de anticorpo anti-MSLN da invenção foram mostradas como tendo atividade de ADCC e, desse modo, espera-se que tenham aplicação em tratamento de câncer. Especificamente, as moléculas de anticorpo têm se mostrado como tendo capacidade para alvejar células tumorais que compreendem MSLN em sua superfície celular e mediar a morte da célula tumoral através de ADCC.
[0015] As moléculas de anticorpo da invenção também podem ser úteis para preparar ADCs compreendendo a molécula de anticorpo da invenção e uma molécula bioativa, como uma toxina. Também se espera que tais moléculas tenham aplicação no tratamento de cânceres compreendendo MSLN em sua superfície celular através de entrega alvejada da molécula bioativa à célula tumoral.
[0016] Os presentes inventores reconheceram que os anticorpos anti-MSLN da invenção podem ser usados para preparar moléculas multiespecíficas, por exemplo, biespecíficas que se ligam a um segundo antígeno além de à MSLN. De preferência, a molécula biespecífica se liga bivalentemente ao segundo antígeno. Em particular, os presentes inventores prepararam moléculas de anticorpo anti-MSLN compreendendo um sítio de ligação a antígeno adicional em cada um dos domínios CH3 da molécula de anticorpo que têm capacidade para se ligar bivalentemente a um segundo antígeno.
[0017] O segundo antígeno ligado pela molécula de anticorpo pode ser um antígeno de célula imunológica, como um membro da superfamília de receptor de fator de necrose tumoral (TNFRSF). Os receptores de fator de necrose tumoral (TNF) exigem agrupamento para ativação. Especificamente, a ligação inicial de um ligante de receptor de TNF ao seu receptor inicia uma cadeia de eventos que leva à trimerização de receptor de TNF, seguida por agrupamento de receptores, ativação da via de sinalização intracelular de NFkB e ativação de célula imunológica subsequente. Para um agente terapêutico ativar eficientemente um receptor de TNFR, vários monômeros de receptor de TNF, portanto, precisam ser ligados de forma que imite o ligante trimérico. Muitos anticorpos agonistas de receptor de anti- TNF exigem reticulação por receptores Fcγ para sua atividade agonista ou exibem atividade agonista na ausência de reticulação. Em ambos os casos, a atividade agonista do anticorpo não se limita a um sítio particular, uma vez que receptores Fcγ são constatados ao longo do corpo humano.
[0018] Espera-se que moléculas de anticorpo anti-MSLN biespecíficas compreendendo sítios de ligado ao domínio constante para um antígeno de célula imunológica tenham capacidade para ativar de modo condicional o antígeno de célula imunológica na presença de MSLN sem a necessidade de, por exemplo, reticulação mediada por receptor Fcγ, como exigido por moléculas de anticorpo convencionais. Considera-se que a ligação das moléculas de anticorpo à
MSLN causaria a reticulação das moléculas de anticorpo no sítio de MSLN, o que, por sua vez, levaria ao agrupamento de antígeno de célula imunológica na superfície celular imunológica. Espera-se, portanto, que a atividade agonística das moléculas de anticorpo seja dependente tanto do antígeno de célula imunológica quanto da MSLN que estão presentes. Em outras palavras, espera-se que a atividade agonística seja condicional. Além disso, considera-se que a reticulação dos anticorpos na presença de MSLN assista o agrupamento do antígeno de célula imunológica ligado através dos sítios de ligação ao antígeno de domínio constante da molécula de anticorpo. Como MSLN é um antígeno tumoral, espera-se, portanto, que as moléculas de anticorpo tenham capacidade para ativar células imunológicas de maneira dependente de doença, por exemplo, no microambiente tumoral. Espera-se que essa ativação alvejada de células imunológicas seja benéfica em evitar efeitos colaterais sem alvo. Os presentes inventores mostraram que moléculas de anticorpo biespecíficas compreendendo um sítio de ligação à anti-MSLN e a anti-CD137 tiveram capacidade para inibir crescimento tumoral e aumentar a sobrevivência na ausência de ligação de receptor Fcγ em um modelo tumoral.
[0019] As moléculas de anticorpo compreendendo um Fab anti-MSLN e sítios de domínio CH3 específicos para um segundo antígeno se ligam bivalentemente tanto à MSLN quanto ao segundo antígeno. Quando o segundo antígeno é um antígeno de célula imunológica, espera-se que a ligação bivalente de ambos os alvos torne a ligação em ponte entre a célula imunológica que expressa o antígeno de célula imunológica e MSLN mais estável e, desse modo, estende o tempo durante o qual a célula imunológica está localizada em um sítio particular, como um microambiente tumoral, e pode atuar sobre a doença, por exemplo, o tumor. Isto é diferente da grande maioria de formatos de anticorpo biespecífico convencionais que são heterodiméricos e que ligam cada antígeno-alvo de modo monovalente por meio de um braço de Fab. Espera-se que tal interação monovalente não seja apenas menos estável, mas, em muitos casos, seja insuficiente para induzir agrupamento de antígenos de célula imunológica como receptores de TNF em primeiro lugar.
[0020] Um recurso adicional das moléculas de anticorpo anti-MSLN da invenção compreendendo sítios de ligação de domínio CH3 específicos para um segundo antígeno é que os dois sítios de ligação ao antígeno para MSLN e o segundo antígeno são ambos contidos na própria estrutura de anticorpo. Em particular, as moléculas de anticorpo não exigem que outras proteínas sejam fusionadas com a molécula de anticorpo por meio de ligantes ou outros meios para resultar na molécula que se liga de modo bivalente a ambos os seus alvos. Isso tem uma diversidade de vantagens. Especificamente, as moléculas de anticorpo podem ser produzidas com o uso de métodos similares àqueles empregados para a produção de anticorpos padrão, visto que os mesmos não compreendem quaisquer porções fusionadas. Espera-se também que a estrutura resulte em estabilidade de anticorpo aprimorada, visto que os ligantes podem se degradar com o tempo, o que resulta em uma população heterogênea de moléculas de anticorpo. Aqueles anticorpos na população que têm apenas uma proteína fusionada podem não ter a capacidade para induzir agonismo condicional de antígenos de célula imunológica, como receptores de TNF, tão eficientemente quanto aqueles que têm duas proteínas fusionadas. A clivagem/degradação do ligante pode ocorrer antes da administração ou após a administração do produto terapêutico ao paciente (por exemplo, através de clivagem enzimática ou do pH in vivo do paciente), portanto, que resulta em uma redução de sua eficácia enquanto circula no paciente. Como não há ligantes nas moléculas de anticorpo, espera-se que as moléculas de anticorpo retenham o mesmo número de sítios de ligação tanto antes quanto após a administração. Adicionalmente, a estrutura das moléculas de anticorpo também é preferencial a partir da perspectiva de imunogenicidade das moléculas, como a introdução de proteínas fusionadas ou ligantes ou ambos podem induzir a imunogenicidade quando as moléculas são administradas a um paciente, que resulta em eficácia reduzida da terapia.
[0021] Desse modo, a presente invenção fornece:
[1] Uma molécula de anticorpo que se liga à mesotelina (MSLN), em que o sítio de ligação a antígeno da molécula de anticorpo compreende regiões de determinação de complementaridade (CDRs) 1-6 de anticorpo: (i) FS28-256-271 apresentado em SEQ ID NOs 98, 73, 99, 20, 21 e 44, respectivamente; (ii) FS28-024-052 apresentado em SEQ ID NOs 10, 11, 41, 20, 21 e 22, respectivamente; (iii) FS28-256-021 apresentado em SEQ ID NOs 98, 73, 99, 20, 21 e 34, respectivamente; (iv) FS28-256-012 apresentado em SEQ ID NOs 98, 73, 99, 20, 21 e 25, respectivamente;
(v) FS28-256-023 apresentado em SEQ ID NOs 101, 73, 103, 20, 21 e 34, respectivamente; (vi) FS28-256-024 apresentado em SEQ ID NOs 98, 73, 99, 20, 21 e 43, respectivamente; (vii) FS28-256-026 apresentado em SEQ ID NOs 101, 73, 103, 20, 21 e 43, respectivamente; (viii) FS28-256-027 apresentado em SEQ ID NOs 98, 73, 99, 20, 21 e 44, respectivamente; (ix) FS28-256-001 apresentado em SEQ ID NOs 85, 73, 75, 20, 21 e 34, respectivamente; (x) FS28-256-005 apresentado em SEQ ID NOs 85, 73, 75, 20, 21 e 43, respectivamente; (xi) FS28-256-014 apresentado em SEQ ID NOs 111, 73, 113, 20, 21 e 25, respectivamente; (xii) FS28-256-018 apresentado em SEQ ID NOs 101, 73, 103, 20, 21 e 25, respectivamente; (xiii) FS28-256 apresentado em SEQ ID NOs 71, 73, 75, 20, 21 e 25, respectivamente; (xiv) FS28-024-051 apresentado em SEQ ID NOs 10, 11, 32, 20, 21 e 22, respectivamente; (xv) FS28-024-053 apresentado em SEQ ID NOs 10, 11, 51, 20, 21 e 22, respectivamente; ou (xvi) FS28-024 apresentado em SEQ ID NOs 10, 11, 12, 20, 21 e 22, respectivamente; e em que as sequências de CDR são definidas de acordo com o esquema de numeração ImMunoGeneTics (IMGT).
[2] Uma molécula de anticorpo que se liga à MSLN, em que o sítio de ligação a antígeno da molécula compreende CDRs 1-6 de anticorpo: (i) FS28-256-271 apresentado em SEQ ID NOs 97, 182, 100,
23, 24 e 44, respectivamente; (ii) FS28-024-052 apresentado em SEQ ID NOs 13, 14, 42, 23, 24 e 22, respectivamente; (iii) FS28-256-021 apresentado em SEQ ID NOs 97, 74, 100, 23, 24 e 34, respectivamente; (iv) FS28-256-012 apresentado em SEQ ID NOs 97, 74, 100, 23, 24 e 25, respectivamente; (v) FS28-256-023 apresentado em SEQ ID NOs 102, 74, 104, 23, 24 e 34, respectivamente; (vi) FS28-256-024 apresentado em SEQ ID NOs 97, 74, 100, 23, 24 e 43, respectivamente; (vii) FS28-256-026 apresentado em SEQ ID NOs 102, 74, 104, 23, 24 e 43, respectivamente; (viii) FS28-256-027 apresentado em SEQ ID NOs 97, 74, 100, 23, 24 e 44, respectivamente; (ix) FS28-256-001 apresentado em SEQ ID NOs 86, 74, 76, 23, 24 e 34, respectivamente; (x) FS28-256-005 apresentado em SEQ ID NOs 86, 74, 76, 23, 24 e 43, respectivamente; (xi) FS28-256-014 apresentado em SEQ ID NOs 112, 74, 114, 23, 24 e 25, respectivamente; (xii) FS28-256-018 apresentado em SEQ ID NOs 102, 74, 104, 23, 24 e 25, respectivamente; (xiii) FS28-256 apresentado em SEQ ID NOs 72, 74, 76, 23, 24 e 25, respectivamente; (xiv) FS28-024-051 apresentado em SEQ ID NOs 13, 14, 33, 23, 24 e 22, respectivamente; (xiv) FS28-024-053 apresentado em SEQ ID NOs 13, 14, 52, 23, 24 e 22, respectivamente; ou (xvi) FS28-024 apresentado em SEQ ID NOs 13, 14, 15, 23, 24 e 22, respectivamente; e em que as sequências de CDR são definidas de acordo com o esquema de numeração Kabat.
[3] A molécula de anticorpo, de acordo com [1] ou [2], em que a molécula de anticorpo compreende um domínio variável de cadeia pesada (VH) e/ou domínio variável de cadeia leve (VL), de preferência, um domínio VH e um domínio VL.
[4] A molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de
[1] a [3], em que a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada de imunoglobulina e/ou uma cadeia leve de imunoglobulina, preferencialmente uma cadeia pesada de imunoglobulina e uma cadeia leve de imunoglobulina.
[5] A molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de
[3] a [4], em que a molécula de anticorpo compreende o domínio VH e/ou domínio VL, de preferência, o domínio VH e o domínio VL de anticorpo: (i) FS28-256-271 apresentado em SEQ ID NOs 180 e 56, respectivamente; (ii) FS28-024-052 apresentado em SEQ ID NOs 39 e 18, respectivamente; (iii) FS28-256-021 apresentado em SEQ ID NOs 109 e 93, respectivamente; (iv) FS28-256-012 apresentado em SEQ ID NOs 109 e 79, respectivamente; (v) FS28-256-023 apresentado em SEQ ID NOs 121 e 93, respectivamente; (vi) FS28-256-024 apresentado em SEQ ID NOs 109 e 53, respectivamente; (vii) FS28-256-026 apresentado em SEQ ID NOs 121 e 53, respectivamente;
(viii) FS28-256-027 apresentado em SEQ ID NOs 109 e 56, respectivamente; (ix) FS28-256-001 apresentado em SEQ ID NOs 63 e 93, respectivamente; (x) FS28-256-005 apresentado em SEQ ID NOs 63 e 53, respectivamente; (xi) FS28-256-014 apresentado em SEQ ID NOs 115 e 79, respectivamente; (xii) FS28-256-018 apresentado em SEQ ID NOs 121 e 79, respectivamente; (xiii) FS28-256 apresentado em SEQ ID NOs 69 e 79, respectivamente; (xiv) FS28-024-051 apresentado em SEQ ID NOs 30 e 18, respectivamente; (xv) FS28-024-053 apresentado em SEQ ID NOs 49 e 18, respectivamente; ou (xvi) FS28-024 apresentado em SEQ ID NOs 8 e 18, respectivamente.
[6] A molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de
[1] a [5], em que a molécula de anticorpo compreende a cadeia pesada [sem LALA] e cadeia leve de anticorpo: (i) FS28-256-271 apresentado em SEQ ID NOs 176 e 95, respectivamente; (ii) FS28-024-052 apresentado em SEQ ID NOs 35 e 16, respectivamente; (iii) FS28-256-021 apresentado em SEQ ID NOs 105 e 83, respectivamente; (iv) FS28-256-012 apresentado em SEQ ID NOs 105 e 77, respectivamente; (v) FS28-256-023 apresentado em SEQ ID NOs 123 e 83,
respectivamente; (vi) FS28-256-024 apresentado em SEQ ID NOs 105 e 90, respectivamente; (vii) FS28-256-026 apresentado em SEQ ID NOs 123 e 90, respectivamente; (viii) FS28-256-027 apresentado em SEQ ID NOs 105 e 95, respectivamente; (ix) FS28-256-001 apresentado em SEQ ID NOs 81 e 83, respectivamente; (x) FS28-256-005 apresentado em SEQ ID NOs 87 e 90, respectivamente; (xi) FS28-256-014 apresentado em SEQ ID NOs 117 e 77, respectivamente; (xii) FS28-256-018 apresentado em SEQ ID NOs 123 e 77, respectivamente; (xiii) FS28-256 apresentado em SEQ ID NOs 65 e 77, respectivamente; (xiv) FS28-024-051 apresentado em SEQ ID NOs 26 e 16, respectivamente; (xv) FS28-024-053 apresentado em SEQ ID NOs 45 e 16, respectivamente; ou (xvi) FS28-024 apresentado em SEQ ID NOs 4 e 16, respectivamente.
[7] A molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de
[1] a [5], em que a molécula de anticorpo compreende a cadeia pesada [com LALA] e cadeia leve de anticorpo: (i) FS28-256-271 apresentado em SEQ ID NOs 178 e 95, respectivamente; (ii) FS28-024-052 apresentado em SEQ ID NOs 37 e 16, respectivamente;
(iii) FS28-256-021 apresentado em SEQ ID NOs 107 e 83, respectivamente; (iv) FS28-256-012 apresentado em SEQ ID NOs 107 e 77, respectivamente; (v) FS28-256-023 apresentado em SEQ ID NOs 125 e 83, respectivamente; (vi) FS28-256-024 apresentado em SEQ ID NOs 107 e 90, respectivamente; (vii) FS28-256-026 apresentado em SEQ ID NOs 125 e 90, respectivamente; (viii) FS28-256-027 apresentado em SEQ ID NOs 107 e 95, respectivamente; (ix) FS28-256-001 apresentado em SEQ ID NOs 89 e 83, respectivamente; (x) FS28-256-005 apresentado em SEQ ID NOs 89 e 90, respectivamente; (xi) FS28-256-014 apresentado em SEQ ID NOs 119 e 77, respectivamente; (xii) FS28-256-018 apresentado em SEQ ID NOs 125 e 77, respectivamente; (xiii) FS28-256 apresentado em SEQ ID NOs 67 e 77, respectivamente; (xiv) FS28-024-051 apresentado em SEQ ID NOs 28 e 16, respectivamente; (xv) FS28-024-053 apresentado em SEQ ID NOs 47 e 16, respectivamente; ou (xvi) FS28-024 apresentado em SEQ ID NOs 5 e 16, respectivamente.
[8] A molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de
[1] a [7], em que a molécula de anticorpo compreende CDRs
1-6, o domínio VH, domínio VL, cadeia leve e/ou cadeia pesada de anticorpo FS28-256-271.
[9] A molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de
[1] a [7], em que a molécula de anticorpo compreende CDRs 1-6, o domínio VH, domínio VL, cadeia leve e/ou cadeia pesada de anticorpo FS28-024-052.
[10] A molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de [1] a [9], em que a MSLN é MSLN ligada à superfície celular.
[11] A molécula de anticorpo, de acordo com [10], em que a molécula de anticorpo se liga à MSLN imobilizada com uma afinidade superior que à MSLN em solução.
[12] A molécula de anticorpo, de acordo com [11], em que a molécula de anticorpo se liga à MSLN imobilizada com uma afinidade (kD) de 8 nM ou com uma afinidade superior.
[13] A molécula de anticorpo, de acordo com [11] ou [12], em que a molécula de anticorpo se liga à MSLN em solução com uma afinidade (kD) de 15 nM ou com uma afinidade inferior.
[14] A molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de
[1] a [13], em que a MSLN é MSLN humana.
[15] A molécula de anticorpo, de acordo com [14], em que o MSLN consiste em ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 169.
[16] A molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de
[1] a [13], em que a MSLN é MSLN de cinomolgo.
[17] A molécula de anticorpo, de acordo com [16], em que o MSLN consiste em ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 170.
[18] A molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de
[1] a [17], em que a molécula de anticorpo compreende CDRs 1-6, o domínio VH, domínio VL, cadeia leve e/ou cadeia pesada de anticorpo FS28-024-051, FS28-024-052, FS28-024- 053 ou FS28-024, e em que o anticorpo bloqueia a ligação de MUC16 para MSLN.
[19] A molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de
[1] a [17], em que a molécula de anticorpo compreende CDRs 1-6, o domínio VH, domínio VL, cadeia leve e/ou cadeia pesada de anticorpo FS28-256-271, FS28-256-021, FS28-256- 012, FS28-256-023, FS28-256-024, FS28-256-026 ou FS28-256- 027, FS28-256-001, FS28-256-005, FS28-256-014, FS28-256-018 ou FS28-256, e em que o anticorpo não bloqueia a ligação de MUC16 à MSLN.
[20] A molécula de anticorpo, de acordo com [18] ou [19], em que o MUC16 é MUC16 humano.
[21] A molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de
[1] a [20], em que a molécula de anticorpo é uma molécula de anticorpo multiespecífica e compreende um segundo sítio de ligação a antígeno que se liga a um segundo antígeno.
[22] A molécula de anticorpo, de acordo com [21], em que a molécula de anticorpo é uma molécula de anticorpo biespecífica, triespecífica ou tetraespecífica.
[23] A molécula de anticorpo, de acordo com [22], em que a molécula de anticorpo é uma molécula biespecífica.
[24] A molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de
[21] a [23], em que o segundo sítio de ligação a antígeno está localizado em um domínio constante da molécula de anticorpo.
[25] A molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de
[21] a [24], em que o segundo antígeno é um antígeno de célula imunológica.
[26] A molécula de anticorpo, de acordo com [25], em que o antígeno de célula imunológica é um membro da superfamília de receptor de fator de necrose tumoral (TNFRSF).
[27] A molécula de anticorpo, de acordo com [26], em que o membro da TNFRSF é OX40 ou CD137.
[28] A molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de
[21] a [27], em que o segundo sítio de ligação a antígeno compreende uma primeira sequência, uma segunda sequência e/ou uma terceira sequência, em que a primeira sequência, segunda sequência e terceira sequência estão localizadas na alça estrutural AB, na alça estrutural CD e na alça estrutural EF do domínio constante, respectivamente.
[29] A molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de
[24] a [28], em que o domínio constante é um domínio CH3.
[30] A molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de
[26] a [29], em que a molécula de anticorpo tem a capacidade para ativar o membro de TNFRSF em uma célula imunológica na presença de MSLN ligada à superfície celular tumoral.
[31] A molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de
[26] a [30] em que a ligação da molécula de anticorpo ao membro de TNFRSF e à MSLN ligada à superfície celular tumoral, causa o agrupamento do membro de TNFRSF na superfície celular imunológica.
[32] A molécula de anticorpo, de acordo com [30] ou [31], em que a célula imunológica é uma célula T, célula B, célula exterminadora natural (NK), célula T exterminadora natural (NKT) ou célula dendrítica (DC).
[33] A molécula de anticorpo, de acordo com [32], em que a célula imunológica é uma célula T.
[34] A molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de
[1] a [33], em que a molécula de anticorpo tem, ou tem a capacidade para elicitar, citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC).
[35] A molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de
[1] a [33], em que a molécula de anticorpo foi modificada para reduzir ou anular a ligação do domínio CH2 da molécula de anticorpo a um ou mais receptores Fcγ.
[36] A molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de
[1] a [33] ou [35], em que a molécula de anticorpo não se liga a receptores Fcγ.
[37] A molécula de anticorpo, de acordo com [35] ou [36], em que o receptor Fcγ é selecionado a partir do grupo que consiste em: FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb e FcγRIII.
[38] Um conjugado que compreende a molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de [1] a [37] e uma molécula bioativa.
[39] Um conjugado que compreende a molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de [1] a [37] e uma identificação detectável.
[40] Uma molécula ou moléculas de ácido nucleico que codificam a molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de [1] a [37].
[41] A molécula (ou moléculas) de ácido nucleico, de acordo com [40], em que a molécula (ou moléculas) de ácido nucleico compreende a sequência de ácido nucleico de domínio VH e/ou domínio VL de anticorpo: (i) FS28-256-271 apresentado em SEQ ID NOs 181 e 57, respectivamente;
(ii) FS28-024-052 apresentado em SEQ ID NOs 40 e 19, respectivamente; (iii) FS28-256-021 apresentado em SEQ ID NOs 110 e 94, respectivamente; (iv) FS28-256-012 apresentado em SEQ ID NOs 110 e 80, respectivamente; (v) FS28-256-023 apresentado em SEQ ID NOs 122 e 94, respectivamente; (vi) FS28-256-024 apresentado em SEQ ID NOs 110 e 54, respectivamente; (vii) FS28-256-026 apresentado em SEQ ID NOs 122 e 54, respectivamente; (viii) FS28-256-027 apresentado em SEQ ID NOs 110 e 57, respectivamente; (ix) FS28-256-001 apresentado em SEQ ID NOs 64 e 94, respectivamente; (x) FS28-256-005 apresentado em SEQ ID NOs 64 e 54, respectivamente; (xi) FS28-256-014 apresentado em SEQ ID NOs 116 e 80, respectivamente; (xii) FS28-256-018 apresentado em SEQ ID NOs 122 e 80, respectivamente; (xiiii) FS28-256 apresentado em SEQ ID Nos 70 e 80, respectivamente; (xiv) FS28-024-051 apresentado em SEQ ID NOs 31 e 19, respectivamente; (xv) FS28-024-053 apresentado em SEQ ID NOs 50 e 19, respectivamente; ou (xvi) FS28-024 apresentado em SEQ ID NOs 9 e 19, respectivamente.
[42] A molécula (ou moléculas) de ácido nucleico, de acordo com [40] ou [41], em que a molécula (ou moléculas) de ácido nucleico compreende: (i) a sequência de ácido nucleico de cadeia pesada de anticorpo FS28-256-271 apresentado em SEQ ID NO: 179 ou 177, e/ou a sequência de ácido nucleico de cadeia leve de anticorpo FS28-256-271 apresentado em SEQ ID NO: 96; (ii) a sequência de ácido nucleico de cadeia pesada de anticorpo FS28-024-052 apresentado em SEQ ID NO: 38 ou 36, e/ou a sequência de ácido nucleico de cadeia leve de anticorpo FS28-024-052 apresentado em SEQ ID NO: 17; (iii) a sequência de ácido nucleico de cadeia pesada de anticorpo FS28-256-021 apresentado em SEQ ID NO: 108 ou 106, e/ou a sequência de ácido nucleico de cadeia leve de anticorpo FS28-256-021 apresentado em SEQ ID NO: 92; (iv) a sequência de ácido nucleico de cadeia pesada de anticorpo FS28-256-012 apresentado em SEQ ID NO: 108 ou 106, e/ou a sequência de ácido nucleico de cadeia leve de anticorpo FS28-256-012 apresentado em SEQ ID NO: 78; (v) a sequência de ácido nucleico de cadeia pesada de anticorpo FS28-256-023 apresentado em SEQ ID NO: 126 ou 124, e/ou a sequência de ácido nucleico de cadeia leve de anticorpo FS28-256-023 apresentado em SEQ ID NO: 92; (vi) a sequência de ácido nucleico de cadeia pesada de anticorpo FS28-256-024 apresentado em SEQ ID NO: 108 ou 106, e/ou a sequência de ácido nucleico de cadeia leve de anticorpo FS28-256-024 apresentado em SEQ ID NO: 91; (vii) a sequência de ácido nucleico de cadeia pesada de anticorpo FS28-256-026 apresentado em SEQ ID NO: 126 ou 124, e/ou a sequência de ácido nucleico de cadeia leve de anticorpo FS28-256-026 apresentado em SEQ ID NO: 91; (viii) a sequência de ácido nucleico de cadeia pesada de anticorpo FS28-256-027 apresentado em SEQ ID NO: 108 ou 106, e/ou a sequência de ácido nucleico de cadeia leve de anticorpo FS28-256-027 apresentado em SEQ ID NO: 96; (ix) a sequência de ácido nucleico de cadeia pesada de anticorpo FS28-256-001 apresentado em SEQ ID NO: 84 ou 82, e/ou a sequência de ácido nucleico de cadeia leve de anticorpo FS28-256-001 apresentado em SEQ ID NO: 92; (x) a sequência de ácido nucleico de cadeia pesada de anticorpo FS28-256-005 apresentado em SEQ ID NO: 84 ou 88, e/ou a sequência de ácido nucleico de cadeia leve de anticorpo FS28-256-005 apresentado em SEQ ID NO: 91; (xi) a sequência de ácido nucleico de cadeia pesada de anticorpo FS28-256-014 apresentado em SEQ ID NO: 120 ou 118, e/ou a sequência de ácido nucleico de cadeia leve de anticorpo FS28-256-014 apresentado em SEQ ID NO: 78; (xii) a sequência de ácido nucleico de cadeia pesada de anticorpo FS28-256-018 apresentado em SEQ ID NO: 126 ou 124, e/ou a sequência de ácido nucleico de cadeia leve de anticorpo FS28-256-018 apresentado em SEQ ID NO: 78; (xiii) a sequência de ácido nucleico de cadeia pesada de anticorpo FS28-256 apresentado em SEQ ID NO: 68 ou 66, e/ou a sequência de ácido nucleico de cadeia leve de anticorpo FS28-256 apresentado em SEQ ID NO: 78; (xiv) a sequência de ácido nucleico de cadeia pesada de anticorpo FS28-024-051 apresentado em SEQ ID NO: 29 ou 27, e/ou a sequência de ácido nucleico de cadeia leve de anticorpo FS28-024-051 apresentado em SEQ ID NO: 17; (xv) a sequência de ácido nucleico de cadeia pesada de anticorpo FS28-024-053 apresentado em SEQ ID NO: 48 ou 46, e/ou a sequência de ácido nucleico de cadeia leve de anticorpo FS28-024-053 apresentado em SEQ ID NO: 17; ou (xvi) a sequência de ácido nucleico de cadeia pesada de anticorpo FS28-024 apresentado em SEQ ID NO: 7 ou 6, e/ou a sequência de ácido nucleico de cadeia leve de anticorpo FS28-024 apresentado em SEQ ID NO: 17.
[43] Um vetor ou vetores que compreendem a molécula ou moléculas de ácido nucleico, de acordo com qualquer um de
[40] a [42].
[44] Uma célula hospedeira recombinante que compreende a molécula (ou moléculas) de ácido nucleico, de acordo com qualquer um de [40] a [42], ou o vetor (ou vetores), de acordo com [43].
[45] Um método de produção da molécula de anticorpo, de acordo com qualquer um de [1] a [37], que compreende cultivar a célula hospedeira recombinante de [44] sob condições para produção da molécula de anticorpo.
[46] O método, de acordo com [45], que compreende adicionalmente isolar e/ou purificar a molécula de anticorpo.
[47] Uma composição farmacêutica que compreende a molécula de anticorpo ou conjugado, de acordo com qualquer um de [1] a [39], e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[48] A molécula de anticorpo ou conjugado, de acordo com qualquer um de [1] a [39], para uso em um método de tratamento de câncer em um indivíduo.
[49] Um método de tratamento de câncer em um indivíduo que compreende administrar ao indivíduo a quantidade terapeuticamente eficaz da molécula de anticorpo ou conjugado, de acordo com qualquer um de [1] a [39].
[50] O uso da molécula de anticorpo ou conjugado, de acordo com qualquer um de [1] a [39], na preparação de um medicamento para o tratamento de câncer.
[51] A molécula ou conjugado de anticorpo para uso, o método ou o uso, de acordo com qualquer um de [48] a [50], em que células do câncer expressam MSLN em suas superfícies celulares.
[52] A molécula ou conjugado de anticorpo para uso, o método ou o uso, de acordo com qualquer um de [48] a [50], em que o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em: mesotelioma, câncer pancreático, câncer de ovário e câncer pulmonar.
[53] A molécula ou conjugado de anticorpo para uso, de acordo com [48], em que o método de tratamento compreende administrar a molécula ou conjugado de anticorpo ao indivíduo em combinação com uma segunda terapia.
[54] O método, de acordo com [49], em que o método compreende adicionalmente administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma segunda terapia ao indivíduo.
[55] A molécula ou conjugado de anticorpo, de acordo com qualquer um de [1] a [37] ou [39], para uso em um método de detecção, diagnóstico, prognóstico ou monitoramento do prognóstico de câncer em um indivíduo.
[56] Um método de detecção, diagnóstico, prognóstico ou monitoramento do prognóstico de câncer em um indivíduo, sendo que o método compreende o uso da molécula ou conjugado de anticorpo, de acordo com qualquer um de [1] a
[37] ou [39].
[57] O uso da molécula ou conjugado de anticorpo, de acordo com qualquer um de [1] a [37] ou [39] na fabricação de um produto de diagnóstico para detectar, diagnosticar, prognosticar ou monitorar o prognóstico de câncer em um indivíduo.
[58] Um kit para uso em um método de detecção, diagnóstico, prognóstico ou monitoramento do prognóstico de câncer em um indivíduo, sendo que o kit compreende uma molécula ou conjugado de anticorpo, de acordo com qualquer um de [1] a
[37] ou [39].
[59] A molécula ou conjugado de anticorpo para uso, o método, o uso ou kit, de acordo com qualquer um de [55] a
[58], em que o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em: mesotelioma, câncer pancreático, câncer de ovário e câncer pulmonar. Breve Descrição das Figuras
[0022] A Figura 1 mostra a ligação de mAbs anti-MSLN a células NCI-H226. Os mAbs MSLN anti-humanos FS28-024, FS28- 026, FS28-091, FS28-185 e FS28-256 (todos em formato de LALA de IgG1) mostraram ligação dependente de dose a células NCI-H226. FS28-024, FS28-026 e FS28-091 mostraram ligação de alta afinidade com MSLN de superfície celular com baixos valores nanomolares de EC50, similar ao SS1 de mAb anti-MSLN de controle positivo. Os mAbs de FS28-185 e FS28-256 mostraram ligação mais fraca à MSLN de superfície celular com valores de EC50 acima de 30 nM e valores de Emáx inferiores em comparação com FS28-024, FS28-026 e FS28-091.
[0023] A Figura 2 mostra a atividade de ADCC de mAb² anti-MSLN. O mAb² MSLN anti-humano FS28-024-052 e FS28-256- 271 bem como o SS1 de anticorpo de controle positivo foram testados em formato de LALA de hIgG1 (nenhuma função efetora) e hIgG1 de estrutura principal competente efetora. FS28-024-052 teve a atividade de ADCC mais alta dos anticorpos testados, com FS28-256-271 tendo atividade de ADCC comparável ao anticorpo de controle. Em todos os casos, a introdução de mutações LALA na estrutura principal de IgG1 anulou completamente qualquer atividade de ADCC como esperado.
[0024] A Figura 3 mostra medições de volume tumoral individuais no modelo tumoral singênico CT26.G10 tratado com (A) G1-AA/HelD1.3 (controle de IgG1 humana), (B) FS22m- 063-AA/HelD1.3 (Fcab CD137 anti-murino em formato de mAb2), (C) combinação de FS22m-063-AA/HelD1.3 e G1-AA/FS28m-228- 010 (Fcab CD137 anti-murino mais Fab MSLN anti-murino), (D) FS22m-063-AA/FS28m-228-010 (mAb2 CD137/MSLN anti-murino) (E) FS22m-063-AA/4420 (Fcab CD137 anti-murino em formato de mAb2) e (F) G1-AA/FS28m-228-010 (Fab MSLN anti-murino). FS22m-063-AA/FS28m-228-010 mostrou crescimento tumoral reduzido em comparação com o controle de isótipo bem como outros grupos de tratamento.
[0025] A Figura 4 mostra uma curva de sobrevivência Kaplan Meier para o modelo tumoral singênico CT26.G10 tratado com G1-AA/HelD1.3 (controle de IgG), FS22m-063- AA/HelD1.3 (Fcab CD137 anti-murino em formato de mAb2), FS22m-063-AA/4420 (Fcab CD137 anti-murino em formato de mAb2),G1-AA/FS28m-228-010 (Fab MSLN anti-murino), combinação de FS22m-063-AA/HelD1.3 e G1-AA/FS28m-228-010 (Fcab CD137 anti-murino mais Fab MSLN anti-murino), e FS22m-063-AA/FS28m-228-010 (mAb2 CD137/MSLN anti-murino). Os resultados mostram que o tratamento de FS22m-063-
AA/FS28m-228-010 resultou em sobrevivência significativamente aprimorada em comparação com camundongos tratados com o controle de isótipo ou outros grupos de tratamento. Descrição Detalhada
[0026] A presente invenção se refere a moléculas de anticorpo que se ligam à MSLN. A molécula de anticorpo se liga preferencialmente a MSLN humana, mais preferencialmente, MSLN humana e de cinomolgo. A molécula de anticorpo da presente invenção tem, preferencialmente, a capacidade para se ligar à MSLN expressa na superfície de uma célula. A célula é, preferencialmente, uma célula tumoral.
[0027] A molécula de anticorpo se liga, de preferência, especificamente à MSLN. O termo “específico” pode se referir à situação na qual a molécula de anticorpo não mostrará qualquer ligação significativa a moléculas diferentes de sua parceira (ou suas parceiras) de ligação específico, aqui, MSLN. O termo “específico” também é aplicável quando a molécula de anticorpo é específica para epítopos particulares, como epítopos em MSLN, que são portados por diversos antígenos, caso em que a molécula de anticorpo terá a capacidade para se ligar aos vários antígenos que portam o epítopo. A molécula de anticorpo não se liga, de preferência, ou não mostra qualquer ligação significativa a outras moléculas envolvidas em adesão celular, como CEACAM-5, E-Caderina, trombomodulina e/ou EpCAM.
[0028] Como explicado na seção de antecedentes acima, MSLN madura é retirada das células tumorais e é liberada do sítio de tumor. Essa MSLN expelida pode atuar como um dissipador para moléculas de ligação anti-MSLN que após a ligação à MSLN expelida também são liberadas do sítio de tumor. A fim de selecionar moléculas que se ligam preferencialmente a MSLN presente na superfície de células tumorais, os presentes inventores selecionaram moléculas de anticorpo com alta avidez para MSLN. Especificamente, os presentes inventores selecionaram moléculas de anticorpo que se ligaram à MSLN imobilizada com afinidade maior que à MSLN em solução. Considera-se que moléculas de anticorpo que se ligam à MSLN com alta avidez se ligam preferencialmente à MSLN presente em células tumorais quando se espera que múltiplas cópias de MSLN estejam presentes e disponíveis para ligação bivalente pela molécula de anticorpo, em oposição à mesotelina removida das células tumorais que se espera que esteja em forma monomérica. Sem desejar se ligar por teoria, espera-se, portanto, que as moléculas de anticorpo da invenção sejam retiradas menos rapidamente do sítio tumoral, e, dessa forma, tenham uma janela de tempo mais longa na qual exercer seu efeito terapêutico.
[0029] A molécula de anticorpo se liga preferencialmente à MSLN imobilizada com uma afinidade maior que à MSLN em solução. A MSLN imobilizada pode ser MSLN imobilizada em uma superfície, como chip para uso em ressonância de plasmon de superfície. MSLN em solução também é denominada MSLN solúvel no presente documento e não é imobilizada. A MSLN solúvel está, preferencialmente, na forma monomérica, isto é, mesotelina monomérica.
[0030] A afinidade de um anticorpo para seu antígeno cognato pode ser expressa como a constante de dissociação de equilíbrio (KD) com a qual o anticorpo se liga ao dito antígeno. Quanto maior for o valor de KD, menor será a afinidade da molécula de anticorpo para o antígeno.
[0031] A molécula de anticorpo se liga, de preferência, à MSLN imobilizada com uma afinidade (KD) de pelo menos 9 nM, 8 nM, 7 nM ou 6 nM ou com uma afinidade superior. De preferência, a molécula de anticorpo se liga à MSLN imobilizada com uma afinidade (KD) de pelo menos 7 nM, 6 nM ou com uma afinidade superior.
[0032] A molécula de anticorpo se liga, de preferência, à MSLN imobilizada com uma afinidade (KD) de 15 nM ou com uma afinidade que é inferior. Mais preferencialmente, a molécula de anticorpo se liga à MSLN imobilizada com uma afinidade (KD) de 16 nM, 17 nM, ou 18 nM, ou com uma afinidade que é inferior.
[0033] Em uma modalidade preferida, a molécula de anticorpo se liga á MSLN imobilizada com uma afinidade (KD) de 6 nM ou com uma afinidade superior, e se liga à MSLN em solução com uma afinidade (KD) de 18 nM ou com uma afinidade inferior.
[0034] A afinidade de ligação de uma molécula de anticorpo para células que compreendem MSLN ligada à superfície pode ser medida determinando-se a concentração da molécula de anticorpo necessária para obter a ligação máxima média (EC50) da molécula de anticorpo às células. Os métodos adequados para determinar a concentração de uma molécula de anticorpo necessária para obter ligação máxima média de uma molécula de anticorpo a células são conhecidos na técnica e revelados nos presentes Exemplos (consultar,
por exemplo, Exemplo 4). Como explicado acima, moléculas de anticorpo cuja ligação a células tumorais que compreendem MSLN ligada à superfície não são afetadas ou são menos afetadas pela presença de mesotelina solúvel são preferenciais tendo em vista a presença de MSLN removida no ambiente tumoral. Desse modo, em uma modalidade preferencial, a concentração da molécula de anticorpo necessária para alcançar a metade de ligação máxima (EC50) do anticorpo a células (por exemplo, células tumorais) que compreendem MSLN ligada à superfície na presença de MSLN solúvel é menor que 20 vezes, menor que 15 vezes, menor que 10 vezes, menor que 9 vezes, menor que 8 vezes, menor que 7 vezes, menor que 6 vezes, menor que 5 vezes, menor que 4 vezes ou menor que 3 vezes superior à concentração da molécula de anticorpo necessária para alcançar a metade de ligação máxima (EC50) do anticorpo às células na ausência de MSLN solúvel.
[0035] A ligação de moléculas de anticorpo, que não bloqueiam a ligação de MUC16 à MSLN, às células que compreendem MSLN ligada à célula mostrou-se que essa foi menos afetada pela presença de MSLN solúvel. Desse modo, uma molécula de anticorpo que não tem a capacidade para, ou não bloqueia, ligar MUC16 à MSLN pode ser preferida.
[0036] Alternativamente, a molécula de anticorpo pode bloquear a ligação de MUC16 à MSLN.
[0037] A MSLN imobilizada pode ter a sequência estabelecida em SEQ ID NO: 169. A MSLN em solução pode ter a sequência estabelecida em SEQ ID NO: 169.
[0038] Mostrou-se também que as moléculas de anticorpo da invenção se ligam à MSLN de cinomolgo. Considera-se que a ligação à MSLN de cinomolgo bem como à MSLN humana seja benéfica para executar estudos de eficácia e toxicidade com a molécula de anticorpo em macacos-cinomolgos, que podem ser preditivos de eficácia e toxicidade da molécula de anticorpo em seres humanos.
[0039] A molécula de anticorpo pode se ligar à MSLN humana imobilizada e MSLN de cinomolgo imobilizada com afinidade similar. Além disso, a molécula de anticorpo pode se ligar à MSLN humana em solução e MSLN de cinomolgo em solução com afinidade similar. Acredita-se que isso seja benéfico por garantir que os estudos de eficácia e toxicidade realizados com a molécula de anticorpo em macacos cinomolgo sejam indicativos da eficácia e da toxicidade da molécula de anticorpo em seres humanos.
[0040] Desse modo, em uma modalidade preferencial, a molécula de anticorpo se liga a MSLN de cinomolgo imobilizada com uma afinidade que é não maior que 10 vezes, preferencialmente, não maior que 5 vezes, mais preferencialmente, não maior que 2 vezes menor ou maior que a afinidade com a qual a molécula de anticorpo se liga à MSLN humana imobilizada. Além disso, a molécula de anticorpo se liga preferencialmente à MSLN de cinomolgo em solução com uma afinidade que é não maior que 10 vezes, preferencialmente, não maior que 5 vezes, mais preferencialmente, não maior que 2 vezes menor ou maior que a afinidade com a qual a molécula de anticorpo se liga à MSLN humana em solução.
[0041] A afinidade de ligação de uma molécula de anticorpo a um antígeno cognato, como MSLN humana ou de cinomolgo pode ser determinada por ressonância de plasmon de superfície (SPR), como Biacore, por exemplo.
[0042] A molécula de anticorpo pode ser quimérica, humanizada ou humana. De preferência, a molécula de anticorpo é uma molécula de anticorpo humano.
[0043] A molécula de anticorpo é, de preferência, monoclonal.
[0044] A molécula de anticorpo pode ser isolada, no sentido de ser livre de contaminantes, como anticorpos com a capacidade para se ligarem a outros polipeptídeos e/ou componentes séricos.
[0045] A molécula de anticorpo pode ser natural ou parcial ou completamente produzida de modo sintético. Por exemplo, a molécula de anticorpo pode ser uma molécula de anticorpo recombinante.
[0046] A molécula de anticorpo compreende um ou mais sítios de ligação ao antígeno com base em CDR para MSLN.
[0047] A molécula de anticorpo pode ser uma imunoglobulina ou um fragmento de ligação a antígeno da mesma. Por exemplo, a molécula de anticorpo pode ser uma molécula IgG, IgA, IgE ou IgM, preferencialmente, uma molécula IgG, como uma molécula IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4, mais preferencialmente, uma molécula IgG1 ou IgG2, com máxima preferência, uma molécula IgG1, ou um fragmento das mesmas. Em uma modalidade preferida, a molécula de anticorpo é uma molécula de imunoglobulina completa.
[0048] Em outras modalidades, a molécula de anticorpo pode ser um fragmento de ligação ao antígeno que compreende um sítio de ligação a antígeno com base em CDR para MSLN. Por exemplo, o fragmento de ligação ao antígeno pode ser um fragmento de ligação ao (Fab), IgG∆CH2, F(ab’)2, Fab de cadeia única (scFab), um fragmento variável estabilizado com dissulfeto (dsFv), um fragmento variável de cadeia única (scFv), (scFv)2, um scFv-CH3 (minicorpo), scFv-Fc, scFv-zipper, um diacorpo, um triacorpo, um tetracorpo ou um anticorpo de domínio único (sdAb), como um domínio VHH ou nanocorpo. Os fragmentos de ligação ao antígeno preferenciais compreendem mais de um sítio de ligação a antígeno com base em CDR para MSLN, isto é, podem ser multivalentes. Desse modo, o fragmento de ligação ao antígeno pode ser, de preferência, uma IgG∆CH2, F(ab’)2, um diacorpo, um tricorpo ou um tetracorpo. (Brinkmann e Kontermann, (2017) e Powers et al, (2012))
[0049] Anticorpos e métodos para suas construções e usos são bem conhecidos na técnica e são descritos, por exemplo, Holliger e Hudson, 2005. É possível considerar anticorpos monoclonais e outros e usar técnicas de tecnologia de DNA recombinante para produzir outros anticorpos ou moléculas quiméricas que retêm a especificidade do anticorpo original. Tais técnicas podem envolver introduzir CDRs ou regiões variáveis de uma molécula de anticorpo em uma molécula de anticorpo diferente (documentos EP-A-184187, GB 2188638A e EP-A-239400).
[0050] Um sítio de ligação a antígeno à base de CDR é um sítio de ligação a antígeno em uma região variável de anticorpo. Um sítio de ligação a antígeno à base de CDR, pode ser formado por três CDRs, como as três CDRs de domínio variável de cadeia leve (VL) ou três CDRs de domínio variável de cadeia pesada (VH). Preferencialmente, o sítio de ligação a antígeno à base de CDR é formado por seis CDRs, três CDRs de VL e três CDRs de VH. As contribuições das CDRs diferentes com a ligação do antígeno podem variar em sítios de ligação do antígeno diferentes.
[0051] As três CDRs de domínio VH do sítio de ligação a antígeno podem estar localizadas em um domínio VH de imunoglobulina e as três CDRs de domínio VL podem estar localizadas em um domínio VL de imunoglobulina. Por exemplo, o sítio de ligação a antígeno à base de CDR pode estar localizado em uma região variável de anticorpo.
[0052] A molécula de anticorpo tem um ou, preferencialmente, mais que um, por exemplo, dois, sítios de ligação a antígeno com base em CDR para MSLN. A molécula de anticorpo, desse modo, pode compreender um domínio VH e um domínio VL, mas, preferencialmente, compreende dois domínios VH e dois domínios VL, isto é, dois pares de domínio VH/VL, como é o caso em moléculas de IgG de ocorrência natural, por exemplo.
[0053] O sítio de ligação a antígeno com base em CDR pode compreender as três CDRs de VH ou três CDRs de VL, de preferência, as três de CDRs de VH e as três CDRs de VL, de anticorpo FS28-256-271, FS28-024-052, FS28-256-021, FS28- 256-012, FS28-256-023, FS28-256-024, FS28-256-026, FS28- 256-027, FS28-256-001, FS28-256-005, FS28-256-014, FS28- 256-018, FS28-256, FS28-024-051, FS28-024-053 ou FS28-024, de preferência, anticorpo FS28-256-271 ou FS28-024-052, com mais preferência, anticorpo FS28-256-271.
[0054] As sequências dos CDRs podem ser prontamente determinadas a partir das sequências de domínio VH e VL de uma molécula de anticorpo com o uso de técnicas de rotina. As sequências de e domínio VH e VL de anticorpos FS28-256- 271, FS28-024-052, FS28-256-021, FS28-256-012, FS28-256-
023, FS28-256-024, FS28-256-026, FS28-256-027, FS28-256- 001, FS28-256-005, FS28-256-014, FS28-256-018, FS28-256, FS28-024-051, FS28-024-053 e FS28-024, são descritas no presente documento, e as três CDRs de domínio VH e três CDRs de domínio VL dos ditos anticorpos podem, desse modo, ser determinadas a partir das ditas sequências. As sequências de CDR podem, por exemplo, ser determinadas de acordo com Kabat et al., 1991 ou o sistema de informações internacional ImMunoGeneTics (IMGT) (Lefranc et al., 2015).
[0055] As sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de domínio VH da molécula de anticorpo, de acordo com a numeração IMGT, podem ser as sequências localizadas nas posições 27-38, 56- 65 e 105-117, do domínio VH da molécula de anticorpo, respectivamente.
[0056] As sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de domínio VH da molécula de anticorpo, de acordo com a numeração Kabat, podem ser as sequências localizadas nas posições 31-35, 50- 65 e 95-102 do domínio VH, respectivamente.
[0057] As sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de domínio VL da molécula de anticorpo, de acordo com a numeração IMGT, podem ser as sequências localizadas nas posições 27-38, 56- 65 e 105-117, do domínio VL, respectivamente.
[0058] As sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de domínio VL da molécula de anticorpo, de acordo com a numeração Kabat, podem ser as sequências localizadas nas posições 24-34, 50- 56 e 89-97 do domínio VL, respectivamente.
[0059] Por exemplo, a sequência do domínio CDR1, CDR2 e CDR3 de VH, de: (i) FS28-256-271 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 98, 73, e 99, respectivamente;
(ii) FS28-024-052 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 10, 11, e 41, respectivamente; (iii) FS28-256-021 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 98, 73 e 99, respectivamente; (iv) FS28-256-012 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 98, 73 e 99, respectivamente; (v) FS28-256-023 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 101, 73 e 103, respectivamente; (vi) FS28-256-024 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 98, 73 e 99, respectivamente; (vii) FS28-256-026 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 101, 73 e 103, respectivamente; (viii) FS28-256-027 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 98, 73 e 99, respectivamente; (ix) FS28-256-001 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 85, 73 e 75, respectivamente; (x) FS28-256-005 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 85, 73 e 75, respectivamente; (xi) FS28-256-014 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 111, 73 e 113, respectivamente; (xii) FS28-256-018 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 101, 73 e 103, respectivamente; (xiii) FS28-256 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 71, 73 e 75, respectivamente; (xiv) FS28-024-051 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 10, 11 e 32, respectivamente; (xv) FS28-024-053 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 10, 11 e 51, respectivamente; e (xvi) FS28-024 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 10, 11 e 12, respectivamente;
em que as sequências de CDR são definidas de acordo com o esquema de numeração IMGT.
[0060] A sequência do domínio CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de: (i) FS28-256-271 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 20, 21, e 44, respectivamente; (ii) FS28-024-052 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 20, 21 e 22, respectivamente; (iii) FS28-256-021 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 20, 21 e 34, respectivamente; (iv) FS28-256-012 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 20, 21 e 25, respectivamente; (v) FS28-256-023 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 20, 21 e 34, respectivamente; (vi) FS28-256-024 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 20, 21 e 43, respectivamente; (vii) FS28-256-026 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 20, 21 e 43, respectivamente; (viii) FS28-256-027 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 20, 21 e 44, respectivamente; (ix) FS28-256-001 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 20, 21 e 34, respectivamente; (x) FS28-256-005 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 20, 21 e 43, respectivamente; (xi) FS28-256-014 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 20, 21 e 25, respectivamente; (xii) FS28-256-018 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 20, 21 e 25, respectivamente; (xiii) FS28-256 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 20, 21 e 25, respectivamente;
(xiv) FS28-024-051 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 20, 21 e 22, respectivamente; (xv) FS28-024-053 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 20, 21 e 22, respectivamente; e (xvi) FS28-024 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 20, 21 e 22, respectivamente; em que as sequências de CDR são definidas de acordo com o esquema de numeração IMGT.
[0061] Por exemplo, a sequência do domínio CDR1, CDR2 e CDR3 de VH, de: (i) FS28-256-271 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 97, 182, e 100, respectivamente; (ii) FS28-024-052 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 13, 14 e 42, respectivamente; (iii) FS28-256-021 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 97, 74 e 100, respectivamente; (iv) FS28-256-012 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 97, 74 e 100, respectivamente; (v) FS28-256-023 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 102, 74 e 104, respectivamente; (vi) FS28-256-024 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 97, 74 e 100, respectivamente; (vii) FS28-256-026 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 102, 74 e 104, respectivamente; (viii) FS28-256-027 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 97, 74 e 100, respectivamente; (ix) FS28-256-001 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 86, 74 e 76, respectivamente; (x) FS28-256-005 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 86, 74 e 76, respectivamente;
(xi) FS28-256-014 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 112, 74 e 114, respectivamente; (xii) FS28-256-018 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 102, 74 e 104, respectivamente; (xiii) FS28-256 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 72, 74 e 76, respectivamente; (xiv) FS28-024-051 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 13, 14 e 33, respectivamente; (xv) FS28-024-053 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 13, 14 e 52, respectivamente; e (xvi) FS28-024 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 13, 14 e 15, respectivamente; em que as sequências de CDR são definidas de acordo com o esquema de numeração Kabat.
A sequência do domínio CDR1, CDR2 e CDR3 de VL de: (i) FS28-256-271 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 23, 24, e 44, respectivamente; (ii) FS28-024-052 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 23, 24 e 22, respectivamente; (iii) FS28-256-021 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 23, 24 e 34, respectivamente; (iv) FS28-256-012 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 23, 24 e 25, respectivamente; (v) FS28-256-023 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 23, 24 e 34, respectivamente; (vi) FS28-256-024 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 23, 24 e 43, respectivamente; (vii) FS28-256-026 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 23, 24 e 43, respectivamente; (viii) FS28-256-027 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs
23, 24 e 44, respectivamente; (ix) FS28-256-001 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 23, 24 e 34, respectivamente; (x) FS28-256-005 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 23, 24 e 43, respectivamente; (xi) FS28-256-014 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 23, 24 e 25, respectivamente; (xii) FS28-256-018 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 23, 24 e 25, respectivamente; (xiii) FS28-256 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 23, 24 e 25, respectivamente; (xiv) FS28-024-051 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 23, 24 e 22, respectivamente; (xv) FS28-024-053 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 23, 24 e 22, respectivamente; e (xvi) FS28-024 pode ser como apresentado em SEQ ID NOs 23, 24 e 22, respectivamente; em que as sequências de CDR são definidas de acordo com o esquema de numeração Kabat.
[0062] O sítio de ligação a antígeno com base em CDR pode compreender os domínios VH ou VL, de preferência, os domínios VH e VL, de anticorpo FS28-256-271, FS28-024-052, FS28-256-021, FS28-256-012, FS28-256-023, FS28-256-024, FS28-256-026, FS28-256-027, FS28-256-001, FS28-256-005, FS28-256-014, FS28-256-018, FS28-256, FS28-024-051, FS28- 024-053 ou FS28-024, de preferência, anticorpo FS28-256-271 ou FS28-024-052, com mais preferência, anticorpo FS28-256-
271.
[0063] O domínio VH de anticorpos FS28-256-271, FS28- 024-052, FS28-256-021, FS28-256-012, FS28-256-023, FS28-
256-024, FS28-256-026, FS28-256-027, FS28-256-001, FS28- 256-005, FS28-256-014, FS28-256-018, FS28-256, FS28-024- 051, FS28-024-053 e FS28-024, pode ter a sequência apresentada em SEQ ID NOs 180, 39, 109, 109, 121, 109, 121, 109, 63, 63, 115, 121, 69, 30, 49 e 8, respectivamente.
[0064] O domínio VL de anticorpos FS28-256-271, FS28- 024-052, FS28-256-021, FS28-256-012, FS28-256-023, FS28- 256-024, FS28-256-026, FS28-256-027, FS28-256-001, FS28- 256-005, FS28-256-014, FS28-256-018, FS28-256, FS28-024- 051, FS28-024-053 e FS28-024 pode ter a sequência apresentada em SEQ ID NOs 56, 18, 93, 79, 93, 53, 53, 56, 93, 53, 79, 79, 79, 18, 18 e 18, respectivamente.
[0065] A molécula de anticorpo pode compreender a cadeia pesada ou leve, de preferência, a cadeia pesada ou leve, de anticorpo FS28-256-271, FS28-024-052, FS28-256-021, FS28- 256-012, FS28-256-023, FS28-256-024, FS28-256-026, FS28- 256-027, FS28-256-001, FS28-256-005, FS28-256-014, FS28- 256-018, FS28-256, FS28-024-051, FS28-024-053 ou FS28-024, de preferência, anticorpo FS28-256-271, ou FS28-024-052, com mais preferência, anticorpo FS28-256-271.
[0066] A cadeia pesada (com mutação LALA) de anticorpos FS28-256-271, FS28-024-052, FS28-256-021, FS28-256-012, FS28-256-023, FS28-256-024, FS28-256-026, FS28-256-027, FS28-256-001, FS28-256-005, FS28-256-014, FS28-256-018, FS28-256, FS28-024-051, FS28-024-053 e FS28-024, pode ter a sequência apresentada em SEQ ID NOs 178, 37, 107, 107, 125, 107, 125, 107, 89, 89, 119, 125, 67, 28, 47, 5, respectivamente.
[0067] A cadeia pesada (sem mutação LALA) de anticorpos FS28-256-271, FS28-024-052, FS28-256-021, FS28-256-012,
FS28-256-023, FS28-256-024, FS28-256-026, FS28-256-027, FS28-256-001, FS28-256-005, FS28-256-014, FS28-256-018, FS28-256, FS28-024-051, FS28-024-053 e FS28-024, pode ter a sequência apresentada em SEQ ID NOs 176, 35, 105, 105, 123, 105, 123, 105, 81, 87, 117, 123, 65, 26, 45 e 4, respectivamente.
[0068] A cadeia leve de anticorpos FS28-256-271, FS28- 024-052, FS28-256-021, FS28-256-012, FS28-256-023, FS28- 256-024, FS28-256-026, FS28-256-027, FS28-256-001, FS28- 256-005, FS28-256-014, FS28-256-018, FS28-256, FS28-024- 051, FS28-024-053 e FS28-024, pode ter a sequência apresentada em SEQ ID NOs 95, 16, 83, 77, 83, 90, 90, 95, 83, 90, 77, 77, 77, 16, 16 e 16, respectivamente.
[0069] A molécula de anticorpo também pode compreender uma variante de uma CDR, domínio VH, domínio VL, sequência de cadeia pesada ou cadeia leve como descrito no presente documento. Variantes adequadas podem ser obtidas por meio de métodos de alteração de sequência, ou mutação e triagem. Em uma modalidade preferencial, uma molécula de anticorpo que compreende uma ou mais de tais sequências de variante retém um ou mais das características funcionais da molécula de anticorpo parental, como especificidade de ligação e/ou afinidade de ligação com MSLN, de preferência, MSLN humana e/ou de cinomolgo. Por exemplo, uma molécula de anticorpo que compreende uma ou mais sequências de variante se liga, de preferência, à MSLN com a mesma afinidade que, ou uma afinidade superior, a molécula de anticorpo (parental). A molécula de anticorpo parental é a molécula de anticorpo que não compreende a substituição (ou substituições), deleção (ou deleções) e/ou inserção (ou inserções) de aminoácido que foi incorporada na molécula de anticorpo variante.
[0070] Uma molécula de anticorpo que compreende CDRs 1- 6, o domínio VH e/ou a cadeia pesada de anticorpo FS28-256- 021, FS28-256-012, FS28-256-023, FS28-256-024, FS28-256- 026, FS28-256-027, FS28-256-001, FS28-256-005, FS28-256- 014, FS28-256-018 ou FS28-256 pode compreender uma substituição de aminoácido na posição 55 ou 57 do domínio VH, em que a numeração de resíduo de aminoácido está de acordo com o esquema de numeração IMGT.
[0071] Por exemplo, a molécula de anticorpo pode compreender CDRs 1-6, o domínio VH, e/ou a cadeia pesada de anticorpo FS28-256-027, em que a molécula de anticorpo compreende uma substituição de aminoácido na posição 55 do domínio VH, em que a numeração de resíduo de aminoácido está de acordo com o esquema de numeração IMGT.
[0072] A molécula de anticorpo da invenção pode compreender um domínio VH, domínio VL, cadeia pesada ou cadeia leve, que tem pelo menos 70 %, pelo menos 75 %, pelo menos 80 %, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, pelo menos 95 %, pelo menos 96 %, pelo menos 97 %, pelo menos 98 %, pelo menos 99 %, pelo menos 99.1 %, pelo menos 99,2 %, pelo menos 99,3 %, pelo menos 99,4 %, pelo menos 99,5 %, pelo menos 99,6 %, pelo menos 99,7 %, pelo menos 99,8 % ou pelo menos 99,9 % de identificação de sequência com o domínio VH, domínio VL, cadeia pesada ou cadeia leve de anticorpo FS28-256-271, FS28-024-052, FS28-256-021, FS28-256-012, FS28-256-023, FS28-256-024, FS28-256-026, FS28-256-027, FS28-256-001, FS28-256-005, FS28-256-014, FS28-256-018, FS28-256, FS28-024-051, FS28-024-053 ou FS28-024, de preferência, anticorpo FS28-256-271 ou FS28-024-052, com mais preferência, anticorpo FS28-256-271.
[0073] A identidade de sequência é comumente definida com referência ao algoritmo GAP (pacote GCG Wisconsin, Accelerys Inc, San Diego, EUA). GAP usa o algoritmo de Needleman e Wunsch para alinhar duas sequências completas que maximiza o número de correspondências e minimiza o número de intervalos. De modo geral, parâmetros padrão são usados, com uma penalidade de criação de intervalo igual a 12 e uma penalidade de extensão de intervalo igual a 4. O uso de GAP pode ser preferencial, mas outros algoritmos podem ser usados, por exemplo, BLAST (que usa o método de Altschul et al., 1990), FASTA (que usa o método de Pearson e Lipman, 1988), ou o algoritmo de Smith-Waterman (Smith e Waterman, 1981), ou o programa TBLASTN, de Altschul et al., 1990 supra, empregando, em geral, parâmetros padrão. Em particular, o algoritmo psi-Blast (Altschul et al., 1997) pode ser usado.
[0074] A molécula de anticorpo pode compreender uma CDR1 de VH, CDR2 de VH, CDR3 de VH, CDR1 de VL, CDR2 de VL e/ou CDR3 de VL que tem uma ou mais alterações de sequência de aminoácido (adição, deleção, substituição e/ou inserção de um resíduo de aminoácido), de preferência, 3 alterações ou menos, 2 alterações ou menos ou 1 alteração em comparação à CDR1 de VH, CDR2 de VH, CDR3 de VH, CDR1 de VL, CDR2 de VL e/ou CDR3 de VL de anticorpo FS28-256-271, FS28-024-052, FS28-256-021, FS28-256-012, FS28-256-023, FS28-256-024, FS28-256-026, FS28-256-027, FS28-256-001, FS28-256-005, FS28-256-014, FS28-256-018, FS28-256, FS28-024-051, FS28- 024-053 ou FS28-024, de preferência, anticorpo FS28-256-271 ou FS28-024-052, com mais preferência, anticorpo FS28-256-
271.
[0075] A molécula de anticorpo pode compreender um domínio VH, domínio VL, cadeia pesada ou cadeia leve, que tem uma ou mais alterações de sequência de aminoácido (adição, deleção, substituição e/ou inserção de um resíduo de aminoácido), de preferência, 20 alterações ou menos, 15 alterações ou menos, 10 alterações ou menos, 5 alterações ou menos, 4 alterações ou menos, 3 alterações ou menos, 2 alterações ou menos ou 1 alteração em comparação com o domínio VH, domínio VL, cadeia pesada ou cadeia leve de anticorpo FS28-256-271, FS28-024-052, FS28-256-021, FS28- 256-012, FS28-256-023, FS28-256-024, FS28-256-026, FS28- 256-027, FS28-256-001, FS28-256-005, FS28-256-014, FS28- 256-018, FS28-256, FS28-024-051, FS28-024-053 ou FS28-024, de preferência, anticorpo FS28-256-271 ou FS28-024-052, com mais preferência, anticorpo FS28-256-271. Em particular, as alterações de sequência de aminoácido podem estar localizadas em uma ou mais regiões estruturais das moléculas de anticorpo, como uma ou mais regiões estruturais das cadeias pesadas e/ou leves da molécula de anticorpo.
[0076] Em modalidades preferenciais em que um ou mais aminoácidos são substituídos com outro aminoácido, as substituições podem ser substituições conservativas, por exemplo, de acordo com a seguinte Tabela. Em algumas modalidades, aminoácidos na mesma categoria na coluna intermediária são substituídos por outro, isto é, um aminoácido não polar é substituído com outro aminoácido não polar, por exemplo. Em algumas modalidades, os aminoácidos na mesma linha na coluna da direita são substituídos por outros. ALIFÁTICO Não polar G A P
I L V Polar - não carregado C S T M
N Q Polar - carregado D E
K R AROMÁTICO H F W Y
[0077] Em algumas modalidades, substituição (ou substituições) pode ser funcionalmente conservativa. Isto é, em algumas modalidades a substituição pode não afetar (ou pode não afetar substancialmente) uma ou mais propriedades funcionais (por exemplo, afinidade de ligação) da molécula de anticorpo que compreende a substituição como em comparação com a molécula de anticorpo não substituída equivalente.
[0078] A cadeia pesada da molécula de anticorpo pode compreender opcionalmente um resíduo de lisina adicional (K) no terminal C imediato da sequência de domínio CH3 de cadeia pesada.
[0079] O domínio CH2 é conhecido por se ligar aos receptores Fcγ e complemento. A ligação do domínio CH2 aos receptores Fcγ é exigida por citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo (ADCC), enquanto a ligação ao complemente é exigida por citotoxicidade dependente de complemento (CDC). Quando a molécula de anticorpo é usada no tratamento de câncer e não está na forma de um ADC, espera-se que a atividade de ADCC leve à morte das células cancerígenas e deve, portanto, ser, de preferência, retida. Entretanto, quando a molécula de anticorpo está na forma de um ADC e é conjugada com uma molécula bioativa, espera-se que as mutações para reduzir ou anular a atividade de ADCC sejam benéficas para evitar a morte das células cancerígenas alvo através de ADCC antes de a molécula bioativa ser entregue à célula. Além disso, espera-se que as mutações para reduzir ou anular atividade de ADCC e/ou CDC sejam úteis quando a molécula de anticorpo compreende um segundo sítio de ligação a antígeno para um antígeno de célula imunológica como descrito no presente documento, quando a morte mediada por ADCC e/ou CDC de células imunológicas ligadas pela molécula de anticorpo deve ser evitada.
[0080] O domínio CH2 da molécula de anticorpo pode, desse modo, compreender uma ou mais mutações que reduzem ou anulam a ligação do domínio CH2 a um ou mais receptores Fcγ, como FcγRI, FcγRlla, FcγRllb, FcγRIII e/ou para complementar. Os inventores postularam que reduzir ou anular a ligação aos receptores Fcγ diminuirá ou eliminará ADCC mediado pela molécula de anticorpo. De modo similar, espera-se que reduzir ou anular a ligação ao complemento reduza ou elimine CDC mediado pela molécula de anticorpo. As mutações para diminuir ou anular a ligação do domínio CH2 a um ou mais receptores Fcγ e/ou complemento são conhecidas na técnica (Wang et al., 2018). Essas mutações incluem a "mutação LALA" descrita em Bruhns et al., 2009 e Hezareh et al., 2001, que envolve a substituição dos resíduos de leucina nas posições 1,3 e 1,2 do domínio CH2 com alanina (L1.3A e L1.2A). Alternativamente, a geração de anticorpos de a-glicosila através de mutação do sítio de glicosilação ligado por N conservado mutando-se a aparagina (N) na posição 84,4 do domínio CH2 para alanina, glicina ou glutamina (N84.4A, N84.4G ou N84.4Q) também é conhecida por diminuir a função efetor de IgG1 (Wang et al., 2018). Como uma alternativa adicional, a ativação de complemento (ligação de C1q) e ADCC são conhecidos por serem reduzidos através de mutação da prolina na posição 114 do domínio CH2 para alanina ou glicina (P114A ou P114G) (Idusogie et al., 2000; Klein et al., 2016). Essas mutações também podem ser combinadas a fim de gerar moléculas de anticorpo com atividade de ADCC ou CDC adicionalmente reduzida ou nenhuma atividade.
[0081] Desse modo, a molécula de anticorpo pode compreender um domínio CH2, em que o domínio CH2 compreende preferencialmente: (i) resíduos de alanina nas posições 1,3 e 1,2; e/ou (ii) uma alanina ou glicina na posição 114; e/ou (iii) uma alanina, glutamina ou glicina na posição 84,4; em que a numeração de resíduo de aminoácido está de acordo com o esquema de numeração IMGT.
[0082] Em uma modalidade preferencial, a molécula de anticorpo compreende um domínio CH2, em que o domínio CH2 compreende: (i) um resíduo de alanina na posição 1.3; e (ii) um resíduo de alanina na posição 1.2; em que a numeração de resíduo de aminoácido está de acordo com o esquema de numeração IMGT.
[0083] Por exemplo, o domínio CH2 pode compreender uma mutação LALA e tem a sequência apresentada em SEQ ID NO:
173.
[0084] Em uma modalidade alternativa preferencial, a molécula de anticorpo compreende um domínio CH2, em que o domínio CH2 compreende: (i) um resíduo de alanina na posição 1.3; (ii) um resíduo de alanina na posição 1.2; e (iii) uma alanina na posição 114; em que a numeração de resíduo de aminoácido está de acordo com o esquema de numeração IMGT.
[0085] Por exemplo, o domínio CH2 pode compreender uma mutação LALA-PA e tem a sequência apresentada em SEQ ID NO:
174.
[0086] Também é contemplada a molécula de anticorpo que compreende um sítio de ligação a antígeno com base em CDR para MSLN e que compete com uma molécula de anticorpo, como descrito no presente documento, ou que se liga ao mesmo epítopo em MSLN como uma molécula de anticorpo, como descrito no presente documento. Métodos para determinar a competição para um antígeno por dois anticorpos são conhecidos na técnica. Por exemplo, a competição de ligação a um antígeno por dois anticorpos pode ser determinada por ressonância de plasmon de superfície, por exemplo, com o uso de um instrumento de Biacore. Métodos para mapear o epítopo ligado por um anticorpo são similarmente conhecidos.
[0087] A região N terminal de MSLN foi relatada como interagindo com MUC16. Foi relatado que essa interação pode desempenhar um papel em adesão de célula cancerígena.
[0088] Mostrou-se que as moléculas de anticorpo têm faixa de atividades em ligação de ligante. Por exemplo, a molécula de anticorpo pode ter a capacidade para bloquear, ou pode não ter a capacidade para bloquear a ligação de MUC16 à MSLN. Alternativamente, a molécula de anticorpo pode ter a capacidade para melhorar a ligação de MUC16 à MSLN. Por exemplo, a molécula de anticorpo pode compreender CDRs 1-6, o domínio VH, domínio VL, cadeia pesada e/ou cadeia leve de anticorpo FS28-024-051, FS28-024-052, FS28- 024-053 ou FS28-024 ou uma variante do mesmo, em que a molécula de anticorpo bloqueia a ligação de MUC16 à MSLN.
[0089] Em uma modalidade preferencial, a molécula de anticorpo não bloqueia a ligação de MUC16 à MSLN. Por exemplo, a molécula de anticorpo pode compreender CDRs 1-6, o domínio VH, domínio VL, cadeia pesada e/ou cadeia leve de anticorpo FS28-256-271, FS28-256-021, FS28-256-012, FS28- 256-023, FS28-256-024, FS28-256-026, FS28-256-027, FS28- 256-001, FS28-256-005, FS28-256-014, FS28-256-018, FS28-256 ou uma variante do mesmo, em que a molécula de anticorpo não bloqueia a ligação de MUC16 à MSLN.
[0090] Métodos que são adequados para determinar a capacidade para uma molécula de anticorpo bloquear a ligação de MUC16 à MSLN são conhecidos na técnica e incluem ensaios de ELISAs e com base em célula, por exemplo, um ensaio em que o anticorpo compete por ligação com MUC16 para se ligar a células que expressam MSLN, como células NCI-H226.
[0091] Em uma modalidade preferencial, a molécula de anticorpo pode compreender um ou mais sítios de ligação ao antígeno adicionais que se ligam a um ou mais antígenos adicionais, além do sítio de ligação a antígeno com base em
CDR para MSLN. Os um ou mais sítios de ligação ao antígeno adicionais, se ligam, de preferência, especificamente a seus antígenos cognatos.
[0092] Os um ou mais sítios de ligação ao antígeno adicionais não se ligam, de preferência, à MSLN. A molécula de anticorpo pode ser, desse modo, uma molécula multiespecífica, por exemplo, uma molécula biespecífica, triespecífica ou tetraespecífica, de preferência, uma molécula biespecífica. Em uma modalidade preferencial, a molécula de anticorpo tem a capacidade para se ligar simultaneamente à MSLN e aos um ou mais antígenos adicionais.
[0093] As moléculas de anticorpo são conhecidas por ter uma arquitetura modular que compreende domínios distintos, que podem ser combinadas em uma variedade de formas diferentes para criar formatos de anticorpo multiespecíficos, por exemplo, biespecíficos, triespecíficos ou tetraespecíficos. Formatos de anticorpo multiespecíficos são descritos em Spiess et al. (2015) e Kontermann (2012), por exemplo. As moléculas de anticorpo da presente invenção podem ser empregadas em tais formatos multiespecíficos.
[0094] Por exemplo, a molécula de anticorpo da invenção pode ser uma molécula de anticorpo heterodimérica, como uma molécula de imunoglobulina completa heterodimérica ou um fragmento da mesma. Nesse caso, uma parte da molécula de anticorpo terá uma sequência ou sequências, como descrito no presente documento. Por exemplo, quando a molécula de anticorpo da invenção é uma molécula de anticorpo heterodimérica biespecífica, a molécula de anticorpo pode compreender uma cadeia pesada e uma cadeia leve como descritas no presente documento emparelhadas com uma cadeia pesada e uma cadeia leve que compreende um domínio VH e um domínio VL, respectivamente, que se liga a um antígeno diferente da MSLN ou se liga adicionalmente a outro epítopo no MSLN. As técnicas para preparar anticorpos heterodiméricos são conhecidas na técnica e incluem tecnologia botões em orifícios [knobs-into-holes] (KIHs), que envolve modificar geneticamente os domínios CH3 de uma molécula de anticorpo para criar um “botão (knob)” ou um “orifício (hole)” para promover a heterodimerização de cadeia. Alternativamente, anticorpos heterodiméricos podem ser preparados através da introdução de pares de carga na molécula de anticorpo para evitar a homodimerização de domínios CH3 por repulsão eletrostática e para direcionar a heterodimerização por atração eletrostática. Exemplos de formatos de anticorpo heterodimérico incluem CrossMab, mAb- Fv, SEED-corpo e IgG de kih.
[0095] Alternativamente, uma molécula de anticorpo multiespecífica pode compreender molécula de imunoglobulina ou um fragmento da mesma e uma fração ou frações de ligação ao antígeno adicional. A fração de ligação ao antígeno pode, por exemplo, ser um Fv, scFv ou anticorpo de domínio único, e pode ser fusionada com a molécula de imunoglobulina completa ou um fragmento da mesma. Exemplos de moléculas de anticorpo multiespecíficas que compreendem frações de ligação a antígeno adicionais fusionadas a uma molécula de imunoglobulina completa incluem moléculas de DVD-IgG, DVI-IgG, scFv4-IgG, IgG-scFv, e scFv-IgG (Spiess et al., 2015; Figura 1). Exemplos de moléculas de anticorpo multiespecíficas que compreendem frações de ligação ao antígeno adicionais fusionadas com um fragmento de imunoglobulina incluem moléculas de BiTE, diacorpos e moléculas de DART, por exemplo (Spiess et al., 2015; Figura 1). Outros formatos adequados seriam prontamente evidentes para o elemento versado na técnica.
[0096] Em uma modalidade preferencial, a molécula de anticorpo compreende um segundo sítio de ligação a antígeno que se liga a um segundo antígeno, em que o segundo sítio de ligação a antígeno está localizado em um domínio constante da molécula de anticorpo. Por exemplo, a molécula de anticorpo pode se um anticorpo biespecífico mAb2 (TM). Um anticorpo biespecífico mAb2 (TM), como denominado no presente documento, é uma imunoglobulina IgG que inclui um sítio de ligação a antígeno com base em CDR em cada uma de suas regiões variáveis e pelo menos um sítio de ligação a antígeno em um domínio constante da molécula de anticorpo.
[0097] Em uma modalidade preferencial, o anticorpo é uma molécula de anticorpo que se liga a MSLN e um segundo antígeno, em que a molécula de anticorpo compreende: (i) dois sítios de ligação a antígeno com base em CDR para MSLN, cada um formado por um domínio VH de imunoglobulina e um domínio VL de imunoglobulina; e (ii) dois sítios de ligação ao antígeno que se ligam a um segundo antígeno localizado nos dois domínios CH3 da molécula de anticorpo.
[0098] Em uma modalidade mais preferencial, o anticorpo é uma molécula de imunoglobulina completa, por exemplo, uma molécula de IgG1 completa que se liga a MSLN e um segundo antígeno, em que a molécula de anticorpo que compreende:
(i) dois sítios de ligação a antígeno com base em CDR para MSLN, cada um formado por um domínio VH de imunoglobulina e um domínio VL de imunoglobulina; e (ii) dois sítios de ligação ao antígeno que se ligam a um segundo antígeno localizado nos dois domínios CH3 da molécula de anticorpo; e em que a molécula de imunoglobulina compreende adicionalmente domínios CH1, CH2 e CL.
[0099] O sítio de ligação a antígeno para o segundo antígeno pode estar localizado em qualquer domínio constante da molécula de anticorpo. Por exemplo, o sítio de ligação a antígeno para o segundo antígeno pode estar localizado em um ou mais dentre os domínios CH4, CH3, CH2, CH1 ou CL, de preferência, o domínio CH3 ou CH2, com mais preferência, o domínio CH3.
[0100] O sítio de ligação a antígeno pode ser composto de uma ou mais, por exemplo, uma, duas, três ou mais, alças estruturais do domínio constante da molécula de anticorpo.
[0101] As alças estruturais de um domínio constante de anticorpo incluem as alças estruturais AB, BC, CD, DE, EF e FG. O sítio de ligação a antígeno pode compreender duas ou mais alças estruturais AB, BC, CD, DE, EF e FG do domínio constante, de preferência, as alças estruturais AB e EF, ou as alças estruturais AB, CD e EF.
[0102] As posições das alças estruturais em domínios constantes de anticorpo são bem conhecidas na técnica. Por exemplo, as alças estruturais do domínio CH3 estão localizadas entre as posições 10 e 19 (alça de AB), 28 e 39 (alça BC), 42 e 79 (alça de CD), 82 e 85 (alça DE), 91 e 102 (alça de EF) e 106 e 117 (alça FG) do domínio CH3, em que os resíduos são numerados de acordo com o esquema de numeração IMGT. As localizações das posições de alça estrutural em outros domínios constantes podem ser determinadas facilmente.
[0103] As alças estruturais do domínio constante podem compreender uma ou mais modificações de aminoácido a fim de formar o sítio de ligação a antígeno para o segundo antígeno. Uma ou mais modificações de aminoácido podem incluir substituições, adições ou deleções de aminoácido. A introdução de modificações de aminoácido no interior de regiões de alça estrutural de domínios constantes de anticorpo para criar sítios de ligação ao antígeno para antígenos-alvo é bem conhecida na técnica e é descrita, por exemplo, em Wozniak-Knopp G et al., 2010, documentos WO2006/072620 e WO2009/132876. Exemplos de sítios de ligação de domínio constante são fornecidos abaixo.
[0104] Em uma modalidade preferencial, a molécula de anticorpo compreende uma ou mais modificações de aminoácido (substituições, adições e/ou deleções) nas alças estruturais AB, CD e/ou EF, de preferência, nas alças estruturais AB e EF ou nas alças estruturais AB, CD e EF. Por exemplo, a molécula de anticorpo pode compreender uma ou mais modificações de aminoácido (substituições, adições e/ou deleções) em posições 11-18, 43-78 e/ou 92-101 do domínio CH3, de preferência, em posições 11-18 e 92-101, ou em posições 11-18, 43-78 e 92-101 do domínio CH3 para fornecer um sítio de ligação a antígeno para um segundo antígeno como apresentado no presente documento. Com mais preferência, a molécula de anticorpo compreende uma ou mais modificações de aminoácido (substituições, adições e/ou deleções) em posições 12-18, 45,1 a 78, 92 a 94 e/ou 97-98 do domínio CH3, com mais preferência, em posições 12-18, 92 a 94 e 97-98, ou em posições 12-18, 45,1 a 78, 92 a 94 e 97-98 do domínio CH3 para fornecer um sítio de ligação a antígeno para um segundo antígeno como apresentado no presente documento. O domínio CH3 não modificado compreende ou consiste, de preferência, na sequência apresentada em SEQ ID NO: 172. A numeração de resíduo está de acordo com o esquema de numeração IMGT.
[0105] O segundo antígeno ligado pelo segundo sítio de ligação a antígeno da molécula de anticorpo pode ser um antígeno de célula imunológica, de preferência, um membro da superfamília de receptor de fator de necrose tumoral (TNFRSF). Receptores de TNFRSF são receptores de citocina ligados à membrana que compreendem um domínio rico em cisteína extracelular que se liga a um ou mais ligantes da superfamília de fator de necrose tumoral (TNFSF).
[0106] O receptor de TNFRSF está, de preferência, localizado sobre a superfície de uma célula imunológica, como uma célula T, uma célula que apresenta antígeno (APC), uma célula NK e/ou uma célula B, de preferência, uma célula T. Mediante a ligação de um ligante de TNFRSF, os receptores de TNFRSF formam agrupamentos na superfície celular imunológica que ativa a célula imunológica. Por exemplo, receptores de TNFRSF ligados por ligante podem formar multímeros, como trímeros, ou agrupamentos de multímeros. A presença de agrupamentos de receptores de TNFRSF ligados por ligante estimula vias de sinalização intracelular que ativam a célula imunológica.
[0107] Sem desejar se ligar por teoria, considera-se que ao engatar tanto MSLN em uma superfície celular tumoral quanto um receptor de TNFRSF em uma superfície celular imunológica, as moléculas de anticorpo serão reticuladas através de ligação à MSLN e aciona, desse modo, agrupamento e ativação do receptor de TNFRSF e, dessa forma, a ativação da célula imunológica (ou células imunológicas). Em outras palavras, a molécula de anticorpo atuará como um agonista de receptor de TNFRSF quando ambos os alvos estão ligados. As células imunológicas podem, então, iniciar, promover ou participar em uma resposta imunológica contra a MSLN ligada à superfície celular que expressa câncer. Uma visão geral do papel que o sistema imunológico desempenha no reconhecimento e erradicação de células cancerígenas é fornecida por Chen e Mellman (2013).
[0108] A molécula de anticorpo pode ser reticulada através de ligação a receptores Fcγ, mas é tanto ineficiente quanto não pode ser alvejada para uma localização particular, por exemplo, o sítio de uma doença, uma vez que as células que expressam receptor Fcγ estão presentes ao longo do corpo humano. Em uma modalidade preferencial, uma molécula de anticorpo que compreende um segundo sítio de ligação a antígeno para um receptor de TNFRSF compreende, portanto, uma ou mais mutações para reduzir ou anular a ligação a um ou mais receptores Fcγ como descrito no presente documento.
[0109] Os presentes inventores mostraram o uso de moléculas biespecíficas que compreendem sítios tanto para MSLN quanto para receptor de TNFRSF, especificamente, moléculas de mAb2 que compreendem dois sítios de ligação de domínio constante para um receptor de TNFRSF e dois sítios de ligação ao antígeno com base em CDR para MSLN que ligam a molécula de anticorpo tanto à MSLN quanto ao receptor de TNFRSF induz ou melhora a ativação de célula T.
[0110] Uma molécula de anticorpo que compreende um segundo sítio de ligação a antígeno para um receptor de TNFRSF que ativa células imunológicas, como células T, apenas na ligação à MSLN e ao receptor de TNFRSF, ou cuja atividade de ativação de célula imunológica é melhorada na ligação à MSLN e ao receptor de TNFRSF, também é denominada como um agonista condicional. Essa atividade de ativação de célula imunológica é independente da ligação da molécula de anticorpo a receptores Fcγ e/ou agentes de reticulação externos, como proteína A ou G ou anticorpos secundários, e, portanto, permite que a atividade agonista condicional da molécula de anticorpo seja alvejada para sítios em que tanto MSLN quanto TNFRSF estão presentes. Uma vez que a MSLN é um antígeno tumoral, a molécula de anticorpo pode ativar células imunológicas, como células T, seletivamente no sítio do tumor e não em qualquer outro lugar em um indivíduo.
[0111] Uma molécula de anticorpo que ativa células imunológicas, como células T, apenas na ligação a uma MSLN e ao receptor de TNFRSF, pode ter atividade de ativação celular imunológica aumentada em comparação com moléculas de anticorpo que dependem de reticulação por outros mecanismos, como agentes de reticulação externos, ou reticulação através de interação de receptor Fcγ. Devido ao fato de que a ativação do receptor de TNFRSF é mais eficiente, a ativação de célula imunológica pode ser alcançada em concentrações inferiores de moléculas de anticorpo descritas no presente documento em relação a outras moléculas de anticorpo anti-TNFRSF.
[0112] Quando a molécula de anticorpo da invenção compreende um segundo sítio de ligação a antígeno para um receptor de TNFRSF presente em uma célula T, a molécula de anticorpo induz, de preferência, a ativação de células imunológicas, como células T, quando a molécula de anticorpo é reticulada, por exemplo, através de ligação à MSLN, que quando a molécula de anticorpo não é reticulada.
[0113] A habilidade de uma molécula de anticorpo para ativar células T pode ser medida com o uso de um ensaio de ativação de célula T. As células T liberam IL-2 na ativação. Um ensaio de ativação de célula T pode, portanto, medir a liberação de IL-2 para determinar o nível de ativação de célula T induzido pela molécula de anticorpo.
[0114] Por exemplo, a habilidade da molécula de anticorpo para ativar células T pode ser determinada medindo-se a concentração da molécula de anticorpo exigida para obter liberação máxima média de IL-2 pelas células T em um ensaio de ativação de células T quando a molécula de anticorpo é reticulada. Isso também é denominado como o EC50 da molécula de anticorpo. Um EC50 inferior indica que uma concentração inferior da molécula de anticorpo é necessária para obter a liberação máxima média de IL-2 pelas células T no ensaio de ativação de células T, e, desse modo, que a molécula de anticorpo tem uma atividade de ativação de célula T superior. A molécula de anticorpo pode ser reticulada com o uso de anticorpo anti-CH2, por exemplo.
[0115] Além disso, ou alternativamente, a habilidade de uma molécula de anticorpo para ativar células T pode ser determinada medindo-se a concentração máxima de IL-2 liberada pelas células T em um ensaio de ativação de célula T na presença da molécula de anticorpo, em que a molécula de anticorpo é reticulada.
[0116] Em uma modalidade preferencial, a molécula de anticorpo (por exemplo, em formato de mAb2 que compreende Fcab FS22-172-003) quando reticulada, por exemplo, através de ligação a células NCI-H226 tem um EC50 em um ensaio de ativação de célula T que está dentro 50 vezes, 40 vezes, 30 vezes, 20 vezes, 10 vezes, ou 5 vezes da EC50 de FS22-172- 003-AA/FS28-256-271 no mesmo ensaio, em que FS22-172-003- AA/FS28-256-271 consiste na cadeia pesada de SEQ ID NO: 187 e na cadeia leve de SEQ ID NO: 188.
[0117] Por exemplo, a molécula de anticorpo, quando reticulada, pode ter um EC50 em um ensaio primário de ativação de células T de 30 nM ou menos, 25 nM ou menos, 20 nM ou menos, 14 nM ou menos, 10 nM ou menos, 5 nM ou menos, 4 nM ou menos, 3 nM ou menos, 2 nM ou menos, 1,5 nM, 1 nM ou 0,5 nM ou menos, de preferência, 1,5 nM ou menos, com mais preferência 1 nM, com mais preferência 0,5 nM ou menos, quando reticulada.
[0118] Adicional ou alternativamente, a capacidade para uma molécula de anticorpo para ativar células T pode ser determinada medindo-se a concentração máxima de IL-2 liberada pelas células T em um ensaio de ativação de células T na presença da molécula de anticorpo reticulada.
[0119] Em uma modalidade preferencial, a concentração máxima de IL-2 liberada pelas células T em um ensaio de ativação de células T na presença da molécula de anticorpo
(por exemplo, em formato mAb2 que compreende Fcab FS22-172- 003), quando reticulada, por exemplo, por meio de ligação a células NCI-H226, está dentro de 20 % ou 10 % da concentração máxima de IL-2 liberada pelas células T na presença de FS22-172-003-AA/FS28-256-271 no mesmo ensaio, em que FS22-172-003-AA/FS28-256-271 consiste na cadeia pesada de SEQ ID NO: 187 e na cadeia leve de SEQ ID NO:
188.
[0120] Por exemplo, o ensaio de células T pode ser um ensaio de ativação de células pan T ou um ensaio de ativação de células T CD8+, dependendo do receptor de TNFRSF ligado pelo segundo sítio de ligação a antígeno. Por exemplo, um ensaio de células pan T é adequado quando o receptor de TNFRSF for OX40, enquanto um ensaio de células T CD8+ é adequado quando o receptor de TNFRSF for CD137.
[0121] Por exemplo, um ensaio de ativação de células pan T pode compreender o isolamento de PBMCs humanas de cones de depleção de leucócitos. Métodos para isolar PBMCs são conhecidos na técnica. As células T podem, então, ser isoladas das PBMCs. Métodos para isolar células T de PBMCs também são conhecidos na técnica.
[0122] O ensaio de ativação de células T pode compreender a preparação do número necessário de células T, por exemplo, em um meio adequado, como um meio de células T. O número exigido de células T pode ser preparado em uma concentração de 1,0 x 106 células/ml. As células T podem, então, ser estimuladas com o uso de um reagente de ativação de célula T adequado que fornece os sinais exigidos para ativação de célula T. Por exemplo, o reagente de ativação de célula T pode ser um reagente que compreende CD3 e CD28,
como microesferas que compreendem CD3 e CD28. As células T isoladas podem ser incubadas durante a noite com o reagente de ativação de célula T para ativar as células T. Após isso, as células T ativadas podem ser lavadas para separar as células T do reagente de ativação de célula T e serem ressuspensas em meio de célula T em uma concentração adequada, como 2,0 x 106 células/ml. As células T ativadas podem, então, ser adicionadas a placas revestidas com um anticorpo CD3 anti-humano.
[0123] Uma diluição adequada de cada molécula de anticorpo de teste pode ser preparada e adicionada aos poços. As células T podem, então, ser incubadas a 37 °C, 5 % de CO2 por 24 horas com o anticorpo de teste. Os tensoativos podem ser coletados e ensaiados para determinar a concentração de IL-2 no tensoativo. Métodos para determinar a concentração de IL-2 em uma solução são conhecidos na técnica e são descritos nos presentes exemplos. A concentração de IL-2 humano pode ser plotada versus a concentração de log da molécula de anticorpo. As curvas resultantes podem ser ajustadas com o uso do log (agonista) versus equação de resposta.
[0124] Por exemplo, um ensaio de ativação de células T CD8+ pode compreender o isolamento de PBMCs humanas de cones de depleção de leucócitos. Métodos para isolar PBMCs são conhecidos na técnica. As células T CD8+ podem, então, ser isoladas das PBMCs. Métodos para isolar células T CD8+ de PBMCs também são conhecidos na técnica.
[0125] As células T CD8+ pode, então, ser adicionadas a placas de múltiplas paredes revestidas com um anticorpo anti-CD3 humano. Uma diluição adequada de cada molécula de anticorpo de teste pode ser preparada e adicionada aos poços. As células T podem, então, ser incubadas a 37 °C, 5 % de CO2 por 24 horas com o anticorpo de teste. Os tensoativos podem ser coletados e ensaiados para determinar a concentração de IL-2 no tensoativo. Métodos para determinar a concentração de IL-2 em uma solução são conhecidos na técnica e são descritos nos presentes exemplos. A concentração de IL-2 humano pode ser plotada versus a concentração de log da molécula de anticorpo. As curvas resultantes podem ser ajustadas com o uso do log (agonista) versus equação de resposta.
[0126] Receptores de TNFRSF incluem CD27, CD40, EDA2R, EDAR, FAS, LTBR, RELT, TNFRSF1A, TNFRSF1B, TNFRSF4 (OX40), TNFRSF6B, TNFRSF8, TNFRSF9 (CD137), TNFRSF10A-10D, TNFRSF11A, TNFRSF11B, TNFRSF12A, TNFRSF13B, TNFRSF13C, TNFRSF14, TNFRSF17, TNFRSF18, TNFRSF19, TNFRSF21 e TNFRSF25.
[0127] Em uma modalidade preferencial, o receptor de TNFRSF é TNFRSF4 (OX40).
[0128] Em uma modalidade preferencial alternativa, o receptor de TNFRSF é TNFRSF9 (CD137).
[0129] CD27 (TNFRSF7: Gene ID 939) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_001233.1 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_001242.4. CD40 (TNFRSF5: Gene ID 958) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_001241.1 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_001250.5. EDA2R (TNFRSF27: Gene ID 60401) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_001186616.1 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_001199687.2. EDAR (Gene ID 10913) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_071731.1 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_022336, 3. FAS (TNFRSF6: Gene ID 355) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_000034.1 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_000043.5. LTBR (TNFRSF3: Gene ID 4055) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_001257916.1 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_001270987.1. RELT (TNFRSF19L: Gene ID 84957) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_116260.2 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_032871.3. TNFRSF1A (Gene ID 7132) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_001056.1 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_001065.3. TNFRSF1B (Gene ID 7133) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_001057.1 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_001066.2.
[0130] TNFRSF4 (Gene ID 7293) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_003318 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_003327). TNFRSF6B (Gene ID 8771) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_003814.1 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_003823.3. TNFRSF8 (Gene ID 943) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_001234.3 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_001243.4. TNFRSF9 (Gene ID 3604) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_001552 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM001561). TNFRSF10A (Gene ID 8797) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_003835.3 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_003844.3. TNFRSF10B (Gene ID 8795) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_003833.4 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_003842.4. TNFRSF10C (Gene ID 8794) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_003832.2 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_003841.4. TNFRSF10D (Gene ID 8793) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_003831.2 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_003840.4. TNFRSF11A (Gene ID 8792) tem a sequência de aminoácido de referência de XP_011524547.1 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de XM_11526245.2. TNFRSF11B (Gene ID 4982) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_002537.3 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_002546.3. TNFRSF12A (Gene ID 51330) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_057723.1 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_016639.2. TNFRSF13B (Gene ID 23495) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_0036584.1 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_012452.2. TNFRSF13C (Gene ID 115650) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_443177.1 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_052945.3. TNFRSF14 (Gene ID 8764) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_001284534.1 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_001297605.1. TNFRSF17 (Gene ID 608) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_001183.2 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_001192.2. TNFRSF18 (Gene ID 8784) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_004195.2 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_004186.1. TNFRSF19 (Gene ID 55504) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_001191387.1 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_001204458.1. NFRSF21 (Gene ID 27242) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_055267.1 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_014452.4. TNFRSF25 (DR3: ID de gene 8718) que se liga ao ligante TNFSF15 (TL1A) tem a sequência de aminoácido de referência de NP_001034753.1 e pode ser codificado pela sequência de nucleotídeo de referência de NM_001039664.1.
[0131] Em algumas modalidades, a molécula de anticorpo pode não compreender um sítio de ligação a antígeno em um domínio constante, por exemplo, um domínio CH3 da molécula de anticorpo. Por exemplo, a molécula de anticorpo pode não compreender um sítio de ligação a antígeno que se liga ao CD137 em um domínio constante, como um domínio CH3, da molécula de anticorpo. Em particular, a molécula de anticorpo pode não compreender um sítio de ligação a antígeno CD137 em um domínio constante da molécula de anticorpo, em que o sítio de ligação a antígeno compreende modificações em uma ou mais alças estruturais do domínio constante, como uma ou mais modificações nas alças estruturais AB, CD e/ou EF do domínio constante. Em uma modalidade particular, a molécula de anticorpo pode não compreender um sítio de ligação a antígeno CD137 localizado em um domínio CH3 da molécula de anticorpo que compreende uma primeira sequência e uma segunda sequência localizadas nas alças estruturais AB e EF do domínio CH3, respectivamente, em que a primeira e a segunda sequências têm a sequência apresentada em SEQ ID NOs 198 e 199, respectivamente, [FS22-172-003]. Por exemplo, a molécula de anticorpo pode não compreender as sequências de cadeia leve e pesada apresentadas em SEQ ID NOs 200 e 201 [FS22-172- 003-AA/FS28-256-271].
[0132] A molécula de anticorpo pode ser conjugada a uma molécula bioativa ou uma identificação detectável. Nesse caso, a molécula de anticorpo pode ser referida como um conjugado. Tais conjugados têm aplicação no tratamento e/ou no diagnóstico de doenças como descrito no presente documento.
[0133] Por exemplo, a molécula bioativa pode ser um modulador de sistema imunológico, como uma citocina, preferencialmente, uma citocina humana. Por exemplo, a citocina pode ser uma citocina que estimula a ativação e/ou proliferação de célula T. Exemplos de citocinas para conjugação à molécula de anticorpo incluem IL-2, IL-10, IL- 12, IL-15, IL-21, GM-CSF e IFN-gama.
[0134] Alternativamente, a molécula bioativa pode ser uma armação de ligante, como uma armação de ligante de uma citocina, por exemplo, de TGF-beta ou IL-6.
[0135] Como uma alternativa adicional, a molécula bioativada pode ser um ligante como CD137L, OX40L, TRAIL, CD40L, CD27L ou GITRL.
[0136] Como uma alternativa adicional, a molécula bioativada pode ser um fármaco como um inibidor de polimerização de tubulina (por exemplo, uma auristatina), um agente de despolimerização de tubulina (por exemplo, uma maitansina), um agente indutor de cisão de fita de DNA (por exemplo, caliqueamicina), um agente alquilante de DNA (por exemplo, duocarmicina), ou um inibidor de RNA polimerase (como alfa-amanitina).
[0137] Como uma alternativa adicional, a molécula bioativa pode ser um radioisótopo terapêutico.
[0138] A radioimunoterapia é usada em tratamento de câncer, por exemplo. Radioisótopos terapêuticos adequados para radioimunoterapia são conhecidos na técnica e incluem ítrio-90, iodo-131, bismuto-213, ástato-211, lutécio-177, rênio-188, cobre-67, actínio-225, iodo-125.
[0139] As identificações detectáveis adequadas que podem ser conjugadas a moléculas de anticorpo são conhecidas na técnica e incluem radioisótopos como iodo-125, iodo-131, ítrio-90, índio-111 e tecnécio-99; fluorocromos, como fluoresceína, rodamina, ficoeritrina, vermelho Texas e derivados de corante ciano, por exemplo, Cy7 e Alexa750; corantes cromogênicos, como diaminobenzidina; microesferas de látex; identificações de enzima como rábano peroxidase; corantes de fósforo ou laser com absorção espectralmente isolada ou características de emissão; E frações químicas, como biotina, que podem ser detectadas por meio de ligação a uma fração detectável de cognato específico, por exemplo, avidina identificada.
[0140] A molécula de anticorpo pode ser conjugada à molécula bioativa ou identificação detectável por meio de qualquer ligação covalente ou não covalente adequada, como uma ligação de dissulfeto ou peptídeo. Em que a molécula bioativa é uma citocina, a citocina pode ser ligada à molécula de anticorpo por meio de um ligante de peptídeo. Os ligantes de peptídeo adequados são conhecidos na técnica e podem ser de 5 a 25, 5 a 20, 5 a 15, 10 a 25, 10 a 20, ou 10 a 15 aminoácidos em comprimento.
[0141] Em algumas modalidades, a molécula bioativa pode ser conjugada à molécula de anticorpo por um ligante clivável. O ligante pode permitir a liberação da molécula bioativa da molécula de anticorpo em um sítio de terapia. Os ligantes podem incluir ligações de amida (por exemplo, ligantes peptídicos), ligações de dissulfeto ou hidrazonas. Os ligantes de peptídeo, por exemplo, podem ser clivados por proteases específicas de sítio, as ligações de dissulfeto podem ser clivadas pelo ambiente de redução do citosol e hidrazonas podem ser clivadas por hidrólise mediada por ácido.
[0142] O conjugado pode ser uma proteína de fusão que compreende a molécula de anticorpo e a molécula bioativada. Nesse caso a molécula bioativada pode ser conjugada à molécula de anticorpo por meio de um ligante peptídico ou ligação peptídica. Em que a molécula de anticorpo é uma molécula de múltiplas cadeias, como em que a molécula de anticorpo é ou compreende um Fcab ou é uma mAb2, em que a molécula bioativada pode ser conjugada para uma ou mais cadeias da molécula de anticorpo. Por exemplo, a molécula bioativada pode ser conjugada para uma ou ambas as cadeias pesadas da molécula de mAb2. As proteínas de fusão têm a vantagem de serem mais fáceis de serem produzidas e purificadas, facilitando a produção de material de grau clínico.
[0143] A invenção também fornece uma molécula ou moléculas de ácido nucleico isoladas que codificam uma molécula de anticorpo da invenção. A pessoa versada não teria dificuldade em preparar essas moléculas de ácido nucleico com o uso de métodos bem conhecidos na técnica.
[0144] A molécula ou moléculas de ácido nucleico pode codificar o domínio VH e/ou domínio VL, de preferência, o domínio VH e domínio VL de: anticorpo FS28-256-271, FS28- 024-052, FS28-256-021, FS28-256-012, FS28-256-023, FS28- 256-024, FS28-256-026, FS28-256-027, FS28-256-001, FS28- 256-005, FS28-256-014, FS28-256-018, FS28-256, FS28-024- 051, FS28-024-053 ou FS28-024, de preferência, anticorpo FS28-256-271 ou FS28-024-052, com mais preferência, anticorpo FS28-256-271.
[0145] Por exemplo, a molécula de ácido nucleico que codifica o domínio VH de anticorpo FS28-256-271, FS28-024- 052, FS28-256-021, FS28-256-012, FS28-256-023, FS28-256- 024, FS28-256-026, FS28-256-027, FS28-256-001, FS28-256- 005, FS28-256-014, FS28-256-018, FS28-256, FS28-024-051, FS28-024-053 e FS28-024 é apresentada em SEQ ID NOs: 181, 40, 110, 110, 122, 110, 122, 110, 64, 64, 116, 122, 70, 31, 50 e 9, respectivamente.
[0146] Uma molécula de ácido nucleico que codifica o domínio VL de anticorpo FS28-256-271, FS28-024-052, FS28- 256-021, FS28-256-012, FS28-256-023, FS28-256-024, FS28- 256-026, FS28-256-027, FS28-256-001, FS28-256-005, FS28- 256-014, FS28-256-018, FS28-256, FS28-024-051, FS28-024-053 e FS28-024 é apresentada em SEQ ID NOs: 57, 19, 94, 80, 94,
54, 54, 57, 94, 54, 80, 80, 80, 19, 19 e 19, respectivamente.
[0147] Em uma modalidade preferencial, a molécula (ou moléculas) de ácido nucleico codifica a cadeia pesada e/ou cadeia leve, de preferência, a cadeia pesada e cadeia leve de: anticorpo FS28-256-271, FS28-024-052, FS28-256-021, FS28-256-012, FS28-256-023, FS28-256-024, FS28-256-026, FS28-256-027, FS28-256-001, FS28-256-005, FS28-256-014, FS28-256-018, FS28-256, FS28-024-051, FS28-024-053 ou FS28- 024, de preferência, anticorpo FS28-256-271 ou FS28-024- 052, com mais preferência, anticorpo FS28-256-271.
[0148] Por exemplo, uma molécula de ácido nucleico que codifica a cadeia pesada (com mutação LALA) de anticorpo FS28-256-271, FS28-024-052, FS28-256-021, FS28-256-012, FS28-256-023, FS28-256-024, FS28-256-026, FS28-256-027, FS28-256-001, FS28-256-005, FS28-256-014, FS28-256-018, FS28-256, FS28-024-051, FS28-024-053 e FS28-024 é apresentada em SEQ ID NOs: 179, 38, 108, 108, 126, 108, 126, 108, 84, 84, 120, 126, 68, 29, 48, e 7, respectivamente.
[0149] Por exemplo, uma molécula de ácido nucleico que codifica a cadeia pesada (sem mutação LALA) de anticorpo FS28-256-271, FS28-024-052, FS28-256-021, FS28-256-012, FS28-256-023, FS28-256-024, FS28-256-026, FS28-256-027, FS28-256-001, FS28-256-005, FS28-256-014, FS28-256-018, FS28-256, FS28-024-051, FS28-024-053 e FS28-024 é apresentada em SEQ ID NOs: 177, 36, 106, 106, 124, 106, 124, 106, 82, 88, 118, 124, 66, 27, 46 e 6 respectivamente.
[0150] Uma molécula de ácido nucleico que codifica a cadeia leve de anticorpo FS28-256-271, FS28-024-052, FS28-
256-021, FS28-256-012, FS28-256-023, FS28-256-024, FS28- 256-026, FS28-256-027, FS28-256-001, FS28-256-005, FS28- 256-014, FS28-256-018, FS28-256, FS28-024-051, FS28-024-053 e FS28-024 é apresentada em SEQ ID NOs: 96, 17, 92, 78, 92, 91, 91, 96, 92, 91, 78, 78, 78, 17, 17, e 17, respectivamente.
[0151] Em que um ácido nucleico codifica o domínio VH e VL, ou cadeia pesada e leve, de uma molécula de anticorpo da invenção, em que os dois domínios ou as duas cadeias podem ser codificadas em duas moléculas de ácido nucleico separadas.
[0152] Uma molécula de ácido nucleico isolada pode ser usada para expressar uma molécula de anticorpo da invenção. O ácido nucleico geralmente será fornecido na forma de um vetor recombinante para expressão. Outro aspecto da invenção, desse modo, fornece um vetor que compreende um ácido nucleico como descrito acima. Os vetores adequados podem ser escolhidos ou construídos, em que contêm sequências regulatórias adequadas, que incluem sequências promotoras, fragmentos terminadores, sequências de poliadenilação, sequências intensificadoras, genes marcadores e outras sequências, como apropriado. Preferencialmente, o vetor contém sequências regulatórias adequadas para acionar a expressão do ácido nucleico em uma célula hospedeira. Os vetores podem ser plasmídeos, virais, por exemplo, fago ou fagemídeo, como adequado.
[0153] Uma molécula de ácido nucleico ou vetor, como descrito no presente documento, pode ser introduzida em uma célula hospedeira. As técnicas para a introdução de ácido nucleico ou vetores em células hospedeiras são bem apresentadas na técnica e qualquer técnica adequada pode ser empregada. Uma faixa de células hospedeiras adequada para a produção de moléculas de anticorpo recombinantes são conhecidas na técnica, e incluem células hospedeiras bacterianas, de levedura, de inseto ou de mamífero. Uma célula hospedeira preferencial é uma célula de mamífero, como uma célula CHO, NS0 ou HEK, por exemplo, uma célula HEK293.
[0154] Outro aspecto da invenção fornece um método de produção de uma molécula de anticorpo da invenção que compreende expressar um ácido nucleico que codifica a molécula de anticorpo em uma célula hospedeira e opcionalmente isolar e/ou purificar a molécula de anticorpo assim produzida. Métodos para cultivar células hospedeiras são bem conhecidos na técnica. O método pode compreender adicionalmente isolar e/ou purificar a molécula de anticorpo. As técnicas para a purificação de moléculas de anticorpo recombinantes são bem conhecidas na técnica e incluem, por exemplo, HPLC, FPLC ou cromatografia por afinidade, por exemplo, com o uso de Proteína A ou Proteína L. Em algumas modalidades, a purificação pode ser realizada com o uso de uma etiqueta de afinidade na molécula de anticorpo. O método também pode compreender formular a molécula de anticorpo em uma composição farmacêutica, opcionalmente com um excipiente farmaceuticamente aceitável ou outra substância conforme descrito abaixo.
[0155] Como explicado acima, MSLN é expresso na superfície de células tumorais e os níveis de expressão altos de MSLN solúvel foram correlacionados com prognóstico insatisfatório em diversos cânceres. Investigou-se os anticorpos anti-MSLN quanto a terapias anticâncer. Esses anticorpos anti-MSLN induzem a morte celular direta através de sua atividade de ADCC ou são usados na forma de ADCs.
[0156] Espera-se, portanto, que as moléculas de anticorpo descritas no presente documento tenham aplicação no tratamento de câncer. Os aspectos relacionados da invenção, dessa forma, fornecem: (i) uma molécula de anticorpo descrita no presente documento para uso em um método de tratamento de câncer em um indivíduo, (ii) o uso de uma molécula de anticorpo descrita no presente documento na fabricação de um medicamento para uso no tratamento de câncer em um indivíduo; e, (iv) um método de tratamento de câncer em um indivíduo, em que o método compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma molécula de anticorpo como descrito no presente documento.
[0157] O indivíduo pode ser um paciente, preferencialmente, um paciente humano.
[0158] Mostrou-se que as moléculas de anticorpo da invenção se ligam preferencialmente à MSLN presente na superfície de uma célula cancerígena em comparação com MSLN solúvel. O câncer a ser tratado com o uso de uma molécula de anticorpo da invenção, portanto, preferencialmente, expressa, ou foi determinado para expressar, MSLN. Mais preferencialmente, as células do câncer a ser tratado compreendem, ou foram determinadas para compreender, MSLN em suas superfícies celulares, isto é, para compreenderem MSLN ligada a superfície celular.
[0159] Quando a molécula de anticorpo compreende um segundo sítio de ligação a antígeno para um antígeno de célula imunológica, como um membro de TNFRSF, por exemplo, em um domínio constante da molécula de anticorpo, o câncer compreende, de preferência, ou determinou-se como compreendendo, linfócitos de infiltração tumorais (TILs) que expressam o membro de TNFRSF. Especificamente, os TILs compreendem, de preferência, ou determinou-se como compreendendo, o membro de TNFRSF em sua superfície celular.
[0160] Métodos para determinar a presença de um antígeno em uma superfície celular são conhecidos na técnica e incluem, por exemplo, citometria de fluxo.
[0161] O câncer pode ser um câncer primário ou secundário. Desse modo, uma molécula de anticorpo como descrito no presente documento pode ser para uso em um método de tratamento de câncer em um indivíduo, em que o câncer é um tumor primário e/ou uma metástase tumoral.
[0162] O câncer a ser tratado com o uso de uma molécula de anticorpo da invenção pode ser um câncer sólido.
[0163] O câncer pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em: mesotelioma, câncer pancreático, câncer de ovário, câncer de pulmão (como câncer de pulmão de célula pequena e câncer de pulmão de célula não pequena), câncer oesofageal, câncer de mama, câncer gástrico, colangiocarcinoma, câncer de cólon, carcinoma tímico, endometrial câncer, câncer de cabeça e pescoço, sarcoma (como sarcoma sinovial bifásico, sarcoma de Kaposi, sarcoma osteogênico, rabdomiossarcoma, ou sarcoma de tecido mole), tumores desmoplásticos de célula redonda pequena, leucemia (como leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crônica, leucemia granulocítica aguda, leucemia granulocítica crônica, leucemia de célula capilar, ou leucemia mieloide), câncer de córtex adrenal, câncer de bexiga, câncer do cérebro, cervical câncer, hiperplasia cervical, coriocarcinoma testicular, trombocitose essencial, carcinoma geniturinário, glioma, glioblastoma, linfoma (como doença de Hodgkin ou linfoma de não Hodgkin), carcinoma carcinoide maligno, hipercalcemia maligna, melanoma (também denominado melanoma maligno), insulinoma pancreático maligno, carcinoma de tireoide medular, mieloma múltiplo, micoses fungoide, neuroblastoma, vera policitemia, carcinoma de cérebro primário, macroglobulinemia primária, câncer de próstata, câncer de célula renal, câncer de pele, câncer de célula escamosa, câncer de estômago, câncer testicular, câncer de tireoide, e tumor de Wilms.
[0164] Preferencialmente, o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em: mesotelioma, câncer pancreático, câncer de ovário, câncer de pulmão, câncer oesofageal, câncer de mama, câncer gástrico, colangiocarcinoma, câncer de cólon, carcinoma tímico, endometrial câncer, câncer de cabeça e pescoço, sarcomas sinovais bifásicos, e tumores desmoplásticos de célula redonda pequena.
[0165] Mais preferencialmente, o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em: mesotelioma, câncer pancreático, câncer de ovário e câncer de pulmão.
[0166] O câncer é caracterizado pela proliferação anormal de células cancerígenas malignas. Em que um tipo particular de câncer, como câncer de mama, é denominado, se refere a uma proliferação anormal de células malignas do tecido relevante, como tecido de mama. Um câncer secundário que está localizado na mama, mas é o resultado de proliferação anormal de células malignas de outro tecido, como tecido de ovário, não é um câncer de mama, como denominado no presente documento, mas é um câncer de ovário.
[0167] No contexto de câncer, tratamento pode incluir inibir crescimento de câncer, incluir remissão completa de câncer e/ou inibir a metástase de câncer, bem como inibir a recorrência de câncer. O crescimento de câncer se refere, de modo geral, a qualquer um dentre um número de índices que indicam a alteração no câncer para uma forma mais desenvolvida. Desse modo, índices para medir uma inibição de crescimento de câncer incluem uma diminuição em sobrevivência de célula cancerígena, uma diminuição em volume de tumor ou morfologia (por exemplo, como determinado com o uso de tomografia computadorizada (CT), sonografia ou outro método de imageamento), um crescimento tumoral atrasado, uma destruição de vasculatura de tumor, desempenho aprimorado em teste de pele com hipersensitividade atrasada, um aumento na atividade de células anticancerígenas imunológicas ou outras respostas imunológicas anticâncer, e uma diminuição em níveis de antígenos específicos de tumor. As respostas imunológicas de ativação e intensificação para tumores cancerígenos em um indivíduo pode aprimorar a capacidade do indivíduo para resistir ao crescimento de câncer, em particular, o crescimento de um câncer já presente no indivíduo e/ou para diminuir a propensão para crescimento de câncer no indivíduo.
[0168] Embora uma molécula de anticorpo possa ser administrada por si só, as moléculas de anticorpo serão frequentemente administradas na forma de uma composição farmacêutica, que pode compreender pelo menos um componente além da molécula de anticorpo. Outro aspecto da invenção, por tanto, fornece uma composição farmacêutica que compreende uma molécula de anticorpo, como descrito no presente documento. Um método que compreende formular uma molécula de anticorpo em uma composição farmacêutica também é fornecido.
[0169] As composições farmacêuticas podem compreender, além da molécula de anticorpo, um excipiente farmaceuticamente aceitável, carreador, tampão, estabilizante ou outros materiais bem conhecidos pelos elementos versados na técnica. O termo “farmaceuticamente aceitável” como usado no presente documento pertence a compostos, materiais, composições e/ou formas de dosagem que são, dentro do escopo de julgamento médico, adequados para o uso em contato com os tecidos de um indivíduo (por exemplo, ser humano) sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica ou outro problema ou complicação, compatível com uma razão de benefício/risco razoável. Cada carreador, excipiente, etc. também deve ser “aceitável” no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação. A natureza precisa do carreador ou outro material dependerá da via de administração, que pode ser por infusão, injeção ou qualquer outra via adequada, como discutido abaixo.
[0170] Para administração parenteral, por exemplo,
subcutânea ou intravenosa, por exemplo, por injeção, a composição farmacêutica que compreende a molécula de anticorpo pode estar na forma de uma solução aquosa parenteralmente aceitável que é isenta de pirogênio e tem pH adequado, isotonicidade e estabilidade.
Aqueles de conhecimento relevante na técnica são bem capazes de preparar soluções adequadas com o uso, por exemplo, de veículos isotônicos como Injeção de Cloreto de Sódio, Injeção de Ringer, Injeção de Ringer com Lactato.
Os conservantes, estabilizantes, tampões, antioxidantes e/ou outros aditivos podem ser empregados como exigido, incluindo tampões como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes, como ácido ascórbico e metionina; conservantes (como cloreto de amônio de octadecildimetilbenzila; cloreto de hexametônio; cloreto de benzalcônio; cloreto de benzetônio; álcool fenílico, butílico ou benzílico; alquil parabenos como metil ou propil parabeno; catecol; resorcinol; ciclo-hexanol; 3’- pentanol; e m-cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular; proteínas, como albumina sérica, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos como polivinilpirrolidona; aminoácidos como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos que incluem glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes como EDTA; açúcares como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contra-íons de formação de sal como sódio; complexos metálicos (por exemplo, complexos de proteína Zn); e/ou tensoativos não iônicos, como TWEENTM, PLURONICSTM ou polietileno glicol (PEG).
[0171] Em algumas modalidades, moléculas de anticorpo podem ser fornecidas em uma forma liofilizada para reconstituição antes da administração. Por exemplo, moléculas de anticorpo liofilizadas podem ser reconstituídas em água estéril e misturadas com solução salina antes da administração a um indivíduo.
[0172] A administração pode ser em uma "quantidade terapeuticamente eficaz", que é suficiente para mostrar benefício a um indivíduo. A quantidade real administrada, e taxa e período de tempo de administração, dependerão da natureza e severidade do que está sendo tratado, o indivíduo particular que está sendo tratado, a condição clínica do indivíduo, a causa do distúrbio, o sítio de entrega da composição, o tipo de molécula de anticorpo, o método de administração, a programação de administração e outros fatores conhecidos por profissionais da área médica. A prescrição do tratamento, por exemplo, decisões em dosagem etc., está dentro da responsabilidade dos profissionais em geral e outros profissionais da área médica, e muitos dependem da severidade dos sintomas e/ou progressão de uma doença que está sendo tratada. Doses adequadas de moléculas de anticorpo são bem conhecidas na técnica (Ledermann et al., 1991; Bagshawe et al., 1991). Dosagens específicas indicadas no presente documento, ou no Physician's Desk Reference (2003) conforme apropriado para uma molécula de anticorpo que está sendo administrada, podem ser usadas. A quantidade terapeuticamente eficaz ou dose adequada de uma molécula de anticorpo pode ser determinada por comparação com a atividade in vitro e atividade in vivo em um modelo animal. Métodos para extrapolação de dosagens eficazes em camundongos e outros animais de teste para seres humanos são conhecidos. A dose precisa dependerá de vários fatores, incluindo o tamanho e localização da área a ser tratada, e a natureza precisa da molécula de anticorpo.
[0173] Uma dose de anticorpo típica está na faixa 100 µg a 1 g para aplicações sistêmicas, e 1 µg a 1 mg para aplicações tópicas. Uma dose de carga superior inicial, seguida por uma ou mais doses inferiores, pode ser administrada. Essa é uma dose para um tratamento simples de um indivíduo adulto, que pode ser proporcionalmente ajustado para crianças e jovens, e também ajustado para outros formatos de anticorpo em proporção ao peso molecular.
[0174] Os tratamentos podem ser repetidos em intervalos diários, duas vezes por semana, semanais ou mensais, a critério do médico. O cronograma de tratamento para um indivíduo pode ser dependente das propriedades farmacocinéticas e farmacodinâmicas da composição de anticorpo, em que a via de administração e a natureza da condição é tratada.
[0175] O tratamento pode ser periódico, e o período entre administrações pode ser de cerca de duas semanas ou mais, por exemplo, cerca de três semanas ou mais, cerca de quatro semanas ou mais, cerca de uma vez por mês ou mais, cerca de cinco semanas ou mais, ou cerca de seis semanas ou mais. Por exemplo, o tratamento pode ser a cada duas a quatro semanas ou a cada quatro a oito semanas. As formulações e vias adequadas de administração são descritas acima.
[0176] No contexto de tratamento de câncer, uma molécula de anticorpo como descrito no presente documento pode ser administrado a um indivíduo em combinação com outra terapia anticâncer ou agente terapêutico, como uma terapia anticâncer ou agente terapêutico que mostrou ser adequado, ou espera-se que sejam adequados, para o tratamento do câncer em questão. Por exemplo, a molécula de anticorpo pode ser administrada ao indivíduo em combinação com um agente quimioterápico, radioterapia, um agente imunoterápico, uma vacina antitumoral, um vírus oncolítico, uma terapia de transferência de célula adotiva (ACT) (como terapia de célula NK adotiva ou terapia com células T de receptor de antígeno quimérico (CAR), linfócitos de infiltração de tumor (TILs) autólogos, ou células T gama/delta, ou um agente para terapia hormonal.
[0177] Sem desejar se ligar por teoria, acredita-se que a molécula de anticorpo como descrito no presente documento, em que as moléculas de anticorpo compreendem um segundo sítio de ligação a antígeno para uma célula imunológica antígeno, como um receptor TNFRSF, pode atuar como um adjuvante em terapia anticâncer. Especificamente, acredita-se que administração da molécula de anticorpo a um individual em combinação com quimioterapia e/ou radioterapia, ou em combinação com uma vacina antitumoral, por exemplo, acionará uma resposta imunológica maior contra o câncer que é obtida com quimioterapia e/ou radioterapia, ou com uma vacina antitumoral, por si só.
[0178] Um ou mais agentes quimioterápicos para administração em combinação com uma molécula de anticorpo como descrito no presente documento podem ser selecionados a partir do grupo que consiste em: taxanos, antibióticos citotóxicos, inibidores de tirosina quinase, inibidores de PARP, inibidores de enzima de B-Raf, inibidores de MEK, inibidores de c-MET, inibidores de VEGFR, inibidores de PDGFR, agentes alquilantes, análogos de platina, análogos de nucleosídeo, antifolatos, derivados de talidomídeo, agentes quimioterápicos antineoplásicos e outros. Taxanos incluem docetaxel, paclitaxel e nab-paclitaxel; antibióticos citotóxicos incluem actinomicina, bleomicina, e antraciclinas como doxorubicina, mitoxantrona e valrubicina; inibidores de tirosina quinase incluem erlotinibe, gefitinibe, axitinibe, PLX3397, imatinibe, cobemitinibe e trametinibe; inibidores de PARP incluem piraparibe; inibidores da enzima B-Raf incluem vemurafenibe e dabrafenibe; agentes alquilantes incluem dacarbazina, ciclofosfamida e temozolomida; análogos de platina incluem carboplatina, cisplatina e oxaliplatina; análogos de nucleosídeo incluem azacitidina, capecitabina, fludarabina, fluorouracila e gemcitabina; antifolatos incluem metotrexato e pemetrexede. Outros agentes quimioterápicos adequados para uso na presente invenção incluem defactinibe, entinostate, eribulina, irinotecano e vinblastina.
[0179] Os agentes terapêuticos preferidos para administração com uma molécula de anticorpo como descrito no presente documento são pentostatina, ciclofosfamida, cis-platina, pemetrexeda, paclitaxel, carboplatina, gemcitabina, doxorubicina, vinorelbina, docetaxel ou etoposídeo
[0180] Uma radioterapia para administração em combinação com uma molécula de anticorpo como descrito no presente documento pode ser radioterapia com feixe externo (como radioterapia modulada por intensidade (IMRT), radioterapia estereotáxica corporal (SBRT), radioterapia guiada por imagem (IGRT), radioterapia intraoperatória (IORT), terapia por elétron ou terapia por feixe de elétron (EBT), radioterapia superficial (SRT)), ou radioterapia interna (como braquiterapia, radioisótopo ou terapia por radionuclideo, SIRT. Preferencialmente, a radioterapia é radioterapia com feixe externo convencional, terapia com radiação de feixe externo (EBRT), radioterapia estereotáxica ou braquiterapia
[0181] Um agente imunoterápico para administração em combinação com uma molécula de anticorpo como descrito no presente documento pode ser uma molécula de anticorpo terapêutica, ácido nucleico, citocina ou terapia à base de citocina. Por exemplo, a molécula de anticorpo terapêutica pode se ligar a uma molécula regulatória imunológica, por exemplo, uma molécula de ponto de verificação inibitório ou uma molécula coestimulatória imunológica, um receptor do sistema imunológico inato, ou um antígeno de tumor, por exemplo, um antígeno de tumor de superfície de célula ou um antígeno de tumor solúvel. Exemplos de moléculas regulatórias imunológicas às quais a molécula de anticorpo terapêutica pode se ligar incluem moléculas de ponto de verificação inibitórias, como CTLA-4, LAG-3, TIGIT, TIM-3, VISTA, PD-L1, PD-1 ou KIR, moléculas coestimulatórias imunológicas, como OX40, CD40, CD137, GITR, CD27 ou ICOS, outras moléculas regulatórias imunológicas, como CD47, CD73, CSF-1R, HVEM, TGFB ou CSF-1. Exemplos de receptores do sistema imunológico inato aos quais a molécula de anticorpo terapêutica pode se ligar incluem receptores TLR1, TLR2, TLR4, TLR5, TLR7, TLR9, semelhante a RIG-I (por exemplo, RIG-I e MDA-5), e STING.
[0182] O ácido nucleico para administração em combinação com uma molécula de anticorpo como descrito no presente documento pode ser um siRNA.
[0183] As citocinas ou terapia à base de citocina podem ser selecionadas a partir do grupo que consiste em: IL-2, pró-fármaco de IL-2, GM-CSF, IL-7, IL-12, IL-9, IL-15, IL- 18, IL-21 conjugados, e interferon tipo I.
[0184] Vacinas antitumorais para o tratamento de câncer foram ambas implantadas na clínica e discutidas em detalhes na literatura científica (como Rosenberg, S. 2000). Isso envolve principalmente estratégias para estimular o sistema imunológico a responder a vários marcadores celulares expressos por células cancerosas autólogas ou alogênicas com o uso daquelas células como um método de vacinação, com ou sem fator estimulante de colônias de granulócitos e macrófagos (GM-CSF). O GM-CSF provoca uma forte resposta na apresentação de antígenos e trabalha particularmente bem quando empregado com as ditas estratégias.
[0185] O agente quimioterápico, radioterapia, agente imunoterápico, vacina antitumoral, vírus oncolítico, terapia de ACT, ou agente para terapia hormonal é, preferencialmente, um agente quimioterápico, radioterapia, agente imunoterápico, vacina antitumoral, vírus oncolítico, ACT terapia, ou agente para terapia hormonal para o câncer em questão, isto é, um agente quimioterápico, radioterapia, agente imunoterápico, vacina antitumoral, vírus oncolítico,
terapia de ACT, ou agente para terapia hormonal que foi mostrado como eficaz no tratamento do câncer em questão. A seleção de um agente quimioterápico adequado, radioterapia, agente imunoterápico, vacina antitumoral, vírus oncolítico, terapia de ACT, ou agente para terapia hormonal que foi mostrado como eficaz para o câncer em questão está nas capacidades do elemento versado na técnica.
[0186] As moléculas de anticorpo da invenção podem ser úteis na detecção de MSLN, em particular, na detecção de MSLN imobilizada, como MSLN ligada à superfície celular. A molécula de anticorpo pode ser conjugada a uma identificação detectável como descrito em outro lugar no presente documento.
[0187] Assim, a presente invenção refere-se ao uso de uma molécula de anticorpo para detectar a presença de MSLN imobilizada, de preferência, a presença de células que compreendem MSLN em sua superfície celular, em uma amostra.
[0188] Também é fornecido um método in vitro de detecção de MSLN, em que o método compreende incubar a molécula de anticorpo com uma amostra de interesse e detectar a ligação da molécula de anticorpo à amostra, em que a ligação do anticorpo à amostra indica a presença de MSLN imobilizada. A ligação da molécula de anticorpo a uma amostra pode ser detectada com o uso de um ELISA, por exemplo.
[0189] Em uma modalidade preferencial, a presente invenção refere-se a um método in vitro de detecção de células que compreendem MSLN em sua superfície celular, em que o método compreende incubar a molécula de anticorpo com uma amostra celular de interesse e determinar a ligação da molécula de anticorpo às células presentes na amostra, em que a ligação do anticorpo às células na amostra indica a presença de células que compreendem MSLN em sua superfície celular. Métodos para detectar a ligação de uma molécula de anticorpo às células são conhecidos na técnica e incluem ELISAs e citometria de fluxo.
[0190] As moléculas de anticorpo da invenção podem ter aplicação na detecção, diagnóstico e/ou prognóstico de câncer. O câncer pode ser um câncer que pode ser tratado com uma molécula de anticorpo da invenção como descrito no presente documento.
[0191] Aspectos relacionados da invenção fornecem, assim; (i) uma molécula de anticorpo descrita no presente documento para uso em um método de detecção de câncer, diagnóstico de câncer, determinação de prognóstico de câncer ou monitoramento de prognóstico de câncer em um indivíduo; (ii) o uso de uma molécula de anticorpo descrita no presente documento na fabricação de um produto de diagnóstico para uso na detecção de câncer, diagnóstico de câncer, determinação de prognóstico de câncer ou monitoramento de prognóstico de câncer; (iii) um método de detecção de câncer, diagnóstico de câncer, determinação de prognóstico de câncer ou monitoramento de prognóstico de câncer em um indivíduo com o uso de uma molécula de anticorpo como descrito no presente documento; e (iv) um kit para uso em um método de detecção, diagnóstico, prognóstico ou monitoramento de prognóstico de câncer em um indivíduo, em que o kit compreende uma molécula de anticorpo como descrito no presente documento.
[0192] O método pode compreender a administração de uma molécula de anticorpo da invenção a um indivíduo e a determinação da presença da molécula de anticorpo em um sítio no corpo do indivíduo, em que a presença da molécula de anticorpo em um sítio no corpo indica a presença de um tumor, em particular, a presença de um tumor que compreendem células que expressam MSLN em sua superfície celular.
[0193] Em uma modalidade preferencial, o método compreende a determinação da presença de células que expressam MSLN em sua superfície celular em uma amostra obtida a partir de um indivíduo, em que a presença de células que expressam MSLN em sua superfície celular indica que o indivíduo tem câncer.
[0194] Em uma modalidade preferencial alternativa, o método compreende a determinação da presença de células tumorais que expressam MSLN em sua superfície celular em uma amostra tumoral obtida a partir de um indivíduo, em que a presença de células tumorais que expressam MSLN em sua superfície celular indica que o indivíduo tem um prognóstico pior, como um risco maior de metástase de câncer, do que um indivíduo com o mesmo câncer que não compreende células que expressam MSLN em sua superfície celular.
[0195] O câncer pode ser um câncer como denominado no presente documento. Preferencialmente, o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em: mesotelioma, câncer pancreático, câncer de ovário, câncer de pulmão, câncer oesofageal, câncer de mama, câncer gástrico,
colangiocarcinoma, câncer de cólon, carcinoma tímico, endometrial câncer, câncer de cabeça e pescoço, sarcomas sinovais bifásicos, e tumores desmoplásticos de célula redonda pequena. Mais preferencialmente, o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em: mesotelioma, câncer pancreático, câncer de ovário e câncer de pulmão.
[0196] Aspectos e modalidades adicionais da invenção ficarão evidentes para aqueles versados na técnica fornecida na presente revelação, incluindo a exemplificação experimental a seguir.
[0197] Todos os documentos mencionados neste relatório descritivo estão incorporados ao presente documento a título de referência em sua totalidade.
[0198] “E/ou”, quando usado no presente documento, deve ser considerado como revelação específica de cada um dos dois componentes ou recursos especificados com ou sem o outro. Por exemplo, “A e/ou B” deve ser considerado como revelação específica de cada um dentre (i) A, (ii) B e (iii) A e B, como se cada um fosse apresentado individualmente no presente documento.
[0199] A menos que o contexto indique de outro modo, as descrições e definições dos recursos apresentados acima não se limitam a qualquer aspecto ou modalidade particular da invenção e se aplicam igualmente a todos os aspectos e modalidades que são descritos.
[0200] Outros aspectos e modalidades da invenção fornecem os aspectos e modalidades descritos acima com o termo “que compreende” substituído pelo termo “que consiste em” ou ”que consiste essencialmente em”, salvo caso o contexto dite o contrário.
[0201] Determinados aspectos e modalidades da invenção serão agora ilustrados por meio de exemplo e com referência às figuras descritas acima. Exemplos Exemplo 1: Isolamento de anticorpos MSLN anti-humano: antígenos, seleção e triagem
[0202] A mesotelina é uma glicoproteína ligada a glicosilfosfatidilinositol (GPI) sintetizada como um precursor de 69 kDa e proteoliticamente processada em uma forma secretada de NH2-terminal de 30 kDa (denominada fator de potencialização de megacariócito ou MPF) e uma mesotelina ligada a membrana de 40 kDa (MSLN). As formas solúveis de MSLN, removidas da superfície de célula tumoral e geradas por divisão alternativa ou enzimas de conversão de fator α de necrose tumoral (TACE) da MSLN ligada à membrana, são constatadas no soro de paciente. Esse antígeno de tumor removido é conhecido por criar um “dissipador” que pode atuar como um chamariz para anticorpos terapêuticos (Lee et al., 2018), de modo que esse deva ser superado para permitir que os anticorpos se liguem à MSLN no tumor. Para evitar esse efeito dissipador, os inventores se propuseram a isolar anticorpos antimesotelina inovadores que preferencialmente se ligam à MSLN imobilizada em comparação com MSLN solúvel, com a intenção de que isso se traduza em ligação preferencial à MSLN ligada à membrana em vez de MSLN solúvel. Para esse fim, formas diferentes de antígenos MSLN foram empregadas em seleções de fago e campanhas de triagem subsequentes.
1.1 Produção de antígenos de mesotelina humano, de cinomolgo e murino
[0203] O antígeno MSLN-His humano biotinilado recombinante, designado “hMSLN-His Acro”, foi obtido a partir de Acrobiosystems (nº de catálogo MSN-H8223) que carece de 18 aminoácidos C-terminais. Para maximizar a diversidade de ligantes selecionados em todo o antígeno, o antígeno de MSLN humano monomérico de comprimento completo foi gerado e biotinilado internamente para seleções de fago. MSLN de cinomolgo e de camundongo foram produzidas para permitir o isolamento de ligantes que tivessem a capacidade para se ligarem à MSLN humana, bem como de cino, e também para o isolamento de ligantes MSLN de murino, respectivamente.
[0204] Resumidamente, antígenos de MSLN foram produzidos por clonagem de DNA que codifica MSLN humana (SEQ ID NO: 169) (hMSLN-His-Avi), de cinomolgo (SEQ ID NO: 170) (cMSLN- His-Avi) ou de murino (SED ID NO: 171) (mMSLN-His-Avi) juntamente com seis resíduos de histidina C terminal e uma sequência de Avi em vetores de pFUSE modificados (Invivogen número de catálogo pfuse-mg2afc2) com o uso de enzima de restrição EcoRI-HF e BamHI-HF. Os vetores foram transfectados em células HEK293-6E (Conselho de Pesquisa Nacional do Canadá), e MSLN expressa foi purificada com o uso de uma coluna de níquel HisTrap™ excel (GE LifeSciences, 29048586). Cada um dos antígenos foi biotinilado com o uso de kit de reação de proteína ligase de BirA biotina-biotina (Avidity LLC, BirA500) para produzir antígenos de MSLN monoméricos identificados com uma única molécula de biotina. Especificamente, cinco a dez mg de antígeno foram misturados com mistura de enzima BirA em uma razão molar de enzima para substrato de 1:50.
Aditivos foram, então, adicionados de acordo com as recomendações do fabricante, incubados durante a noite à temperatura ambiente e MSLN humana, de cino ou de murino recombinante foi purificada subsequentemente com o uso de uma coluna de níquel HisTrap™ excel (GE LifeSciences, 29048586) para remover o excesso de biotina livre.
[0205] As propriedades biofísicas de cada antígeno foram caracterizadas por análise de SEC-HPLC para determinar se os agregados estão presentes e por PAGE para verificar o tamanho das moléculas. SEC-HPLC desses antígenos mostraram menos que 10 % de agregação e PAGE verificou que os antígenos foram monoméricos. ELISA e ressonância de plasmon de superfície (SPR) foram usados para confirmar que os antígenos de MSLN biotinilados poderiam ser ligados por anticorpos de controle positivo específicos de MSLN (SS1, consultar a seção 1.3; Hassan et al 2002 e MOR6626 consultar a seção 7.1, Publicação de Patente n° WO 2009/068204 A1). Com base nesses dados, todos os antígenos foram considerados adequados para seleções naïve.
1.2 Seleções de biblioteca de fagomídeo
[0206] As bibliotecas de fagomídeo naïve sintético que exibem o domínio de Fab humano de linhas germinativas com aminoácidos aleatorizados na CDR1, CDR2 e CDR3 (MSM Technologies) foram usadas para seleções com os antígenos de MSLN descritos na seção 1.1.
[0207] As bibliotecas de Fab foram inicialmente selecionadas em múltiplas campanhas, cada uma em três ou quatro ciclos com o uso de Dynabeads de Estreptavidina (Thermo Fisher, 11205D), proteína de ligação a Neutravidina acoplada a Dynabeads (Thermo Fisher, 31000) ou Dynabeads anti-His (Thermo Fisher, 10103D) para isolar o fago ligado a MSLN-His-Avi ou hMSLN-His Acro humano, de cino ou de camundongo biotinilado. As campanhas de seleção também foram realizadas com o uso de antígenos MSLN de comprimento total produzidos internamente, nos quais ciclos de seleção de MSLN humana foram alterados com antígeno MSLN de cino com um objetivo de isolar clones de reação cruzada humanos e de cino. As seleções para ligantes a MSLN de camundongo (R&D mMSLN-His 8604-MS) também foram realizadas. A seleção de fago padrão e procedimentos de recuperação de fago foram usados.
[0208] Em um esforço para obter clones que se ligam a regiões diferentes de antígeno MSLN, uma estratégia de mascaramento de epítopo foi adotada com o uso de anticorpos anti-MSLN das campanhas de seleção iniciais, descritas acima. Resumidamente, um primeiro ciclo de seleção das bibliotecas de Fab naïve foi realizado com o uso de MSLN- His-Avi humana biotinilada a 500 nM. Nos ciclos 2 e 3, a ligação de fago de MSLN-His-Avi de cino biotinilado a 500 nM (ciclo 2) ou 100 nM (ciclo 3) foi testada na presença de uma mistura de proteínas de mAb antimesotelina naïve isoladas da campanha de seleção inicial (FS28-004, FS28- 024, FS28-026, FS28-091 e FS28-97, 500 nM de cada mAb). Essa seleção de mascaramento de epítopo resultou em tituladores de saída reduzidos, indicando que a estratégia de seleção estava funcionando à medida que menos ligantes foram identificados. Isso levou à identificação de clones (FS28-243, FS28-255 e FS28-256, consultar a seção 2.1.3) que alvejam áreas adicionais de MSLN em comparação com os clones da campanha de seleção anterior.
1.3 Triagem para identificar anticorpos anti-MSLN
[0209] Cerca de 2000 clones das saídas de ciclo 3 e 4 de toda seleção foram triados por ELISA de fago quanto à ligação a 25 nM hMSLN-His Acro biotinilado imobilizado, MSLN-His-Avi humano ou de cino biotinilado de comprimento completo, consistente com o antígeno usado no ciclo de seleção. As placas de Estreptavidina ou placas imobilizadas com antígenos etiquetados com His biotinilados irrelevantes foram incluídos como controles negativos. Os clones que tiveram um sinal de ligação à MSLN pelo menos 4 vezes superior ao sinal para controles negativos foram selecionados e suas regiões variáveis sequenciadas, levando à identificação de 156 combinações de sequência de VH/VL únicas, que foram selecionadas subsequentemente para expressão solúvel. Os clones foram escolhidos a partir de todas as campanhas de seleção incluindo as seleções de mascaramento de epítopo. Para cada clone, a VH e a VL foram clonadas individualmente em um vetor de expressão pTT5 (Conselho de Pesquisa Nacional do Canadá) que contêm CH1, CH2 (com uma mutação LALA no domínio CH2 (Bruhns et al., 2009; Hezareh et al., 2001) e CH3, ou domínios CL respectivamente. O VH pTT5-FS28 resultante com mutação LALA (AA) e vetores VL pTT5-FS28 foram transientemente co- transfectados em células HEK293-6E e os clones foram produzidos como moléculas IgG1 completas. Os anticorpos foram mantidos no tensoativo ou purificados por colunas de Proteína A mAb Select SuRe e submetidos ao teste adicional como descrito abaixo]. Ao usar o mesmo método, as regiões de VH e VL de SS1 e anticorpo de lisozima de clara de ovo anti-hen HelD1.3 foram clonados e expressos em formato de
LALA de IgG1, produzindo G1-AA/SS1 (SEQ ID NO 167 e 168) e G1-AA/HelD1.3 (SEQ ID NO 165 e 166), para servir como controles positivos e negativos, respectivamente. Exemplo 2: Identificação de painel de mAbs anti-MSLN naïve
[0210] mAbs antimesotelina têm uma faixa ampla de aplicações potenciais incluindo seu uso como elementos terapêuticos que têm capacidade para induzir ADCC, como um braço de alvejamento de tumor para a entrega de imunotoxina, ADC e para a geração de anticorpos biespecíficos dentre outros. As características desejadas dos mAbs antimesotelina são dependentes da aplicação e os inventores apresentaram, portanto, para identificar um painel de mAbs que se liga à MSLN humana e de cino ligada à membrana, com uma variedade de afinidades, e que tiveram capacidade para alvejar diferentes áreas de MSLN. Com essa finalidade, um conjunto de ensaios de triagem incluindo ELISA, ensaios de bloqueio Biacore e ligação celular foram realizados, bem como ensaios nos quais as regiões de ligação à MSLN foram comparadas.
2.1 Triagem quanto à ligação a MSLN recombinante
2.1.1 ELISA de ligação
[0211] Os tensoativos HEK293-6E que contêm clones de ligação anti-MSLN solúveis ou clones purificados foram triados quanto à ligação a MSLN-His humana Acro, hMSLN-His- Avi e, para algumas campanhas, cMSLN-His-Avi por ELISA. Resumidamente, hMSLN-His Acro, hMSLN-His-Avi, cMSLN-His-Avi ou um antígeno alvejado por His irrelevante foram revestidos em placas maxisorp a 25 nM durante a noite a 4 °C. O próximo dia, as placas foram bloqueadas com 300 µl de PBS contendo Tween20 a 0,05 % e leite Marvel a 2 % (leite seco Marvel). Os mAb anti-MSLN que contêm tensoativos ou proteínas purificadas foram incubados por 1 hora à temperatura ambiente e suas ligações foram detectadas com um anticorpo Fc-IgG anti-humano de camundongo conjugado a peroxidase de rábano (HRP). Clones que mostraram ligação ao antígeno irrelevante ou não tiveram transreatividade com ambos os antígenos humanos e de cinomolgo foram descartados. Além disso, os clones que se ligam ao antígeno de MSLN truncado, hMSLN-His Acro, mas não ao antígeno de MSLN de comprimento completo, MSLN-His-Avi, também não foram levados adiante, pois se espera que o antígeno de comprimento completo seja mais representativo de conformação de antígeno na superfície celular de células que expressam MSLN.
[0212] A mesotelina é uma glicoproteína e seu padrão de glicosilação pode variar dependendo da espécie e tecido. Para garantir que os anticorpos tiveram especificidade quanto à ligação a MSLN, os clones de ligação anti-MSLN também foram testados para ligação diferencial a MSLN glicosilada e desglicosilada. hMSLN-His-Avi biotinilada foi desglicosilada com o uso de enzima PNGase F (NEB, P0704L) por 24 h a 37 °C, purificada com o uso de filtros ultra centrifugais Amicon (Millipore, UFC901024) e revestidos em placas maxisorp a 25 nM. Ligação de ELISA dos mAbs anti- mesotelina único à MSLN foi detectada com o uso de Fc-IgG- HRP anti-humano de camundongo (Sigma, A0170). Os clones que mostraram uma redução maior que 2 vezes no sinal de ligação para antígeno MSLN desglicosilado em comparação com antígeno MSLN glicosilado foram excluídos do painel de mAbs de ligação a anti-MSLN naïve.
2.1.2 Triagem BIAcore
[0213] MSLN-His-Avi humana foi imobilizada em célula de fluxo 2 em um chip de sensor CM5 Série S BIAcore (GE Healthcare, BR100530) com o uso de um kit de acoplamento de amina (GE Healthcare, BR10050) a aproximadamente 200 unidades de resposta (RU). A célula de fluxo 1 foi deixada em branco para subtração. Os tensoativos HEK293-6E ou proteínas purificadas foram ajustados com HBS-EP+ (GE Healthcare) a aproximadamente 50 nM de mAb anti-MSLN por amostra. A amostras foram injetadas em célula de fluxo 1 e 2 por 2,5 min a 30 µl/min e, então, permitiu-se que as mesmas se dissociassem em tampão de HBS-EP por 2,5 min. A regeneração foi obtida injetando-se 10 mM de glicina, pH 1,5 (GE Healthcare, BR100354) for 30 segundos em uma faixa de 30 µl/min. Os dados subtraídos (célula de fluxo 2 – célula de fluxo 1) foram analisados com o uso de Software BIAevaluation 3.2 (GE Healthcare). Dos 86 clones testados nesse ensaio do ELISA de ligação, 39 clones mostraram uma resposta de ligação maior que 10 RU a 50 nM e foram, portanto, selecionados para re-expressão, purificação e triagem adicional.
2.1.3 Armazenamento de anticorpos com base na região de MSLN ligadas
[0214] Com base nos dados de triagem ELISA e Biacore, os clones foram, então, testados em ensaios de compartimentação nos quais a ligação dos mAbs a MSLN humana foi testada na presença de outro mAb por Interferometria de Biocamada (BLI) em um Octet (ForteBio).
[0215] Resumidamente, hMSLN-His-Avi biotinilado (5 µg/ml) foi ligado a pontas de estreptavidina (ForteBIO, 18-
5020) por 5 min. G1-AA/SS1 foi diluído a 200 nM em um tampão cinético 1x (FortéBIO, 18-1092) e foi deixado ligado à hMSLN-His-Avi por 5 minutos. Em seguida, a ligação de uma mistura que contêm 200 nM do mAb de teste e 200 nM de G1- AA/SS1, foi avaliada por 5 minutos. Isso foi comparado à ligação do mAb de teste a hMSLN-His-Avi na ausência de G1- AA/SS1 ligado para determinar a extensão máxima de ligação possível na ausência de SS1 (isto é, em que não houve competição para ligação). Se ambos os anticorpos competiram quanto à ligação à mesma região de MSLN, o anticorpo de teste não teria a capacidade para se ligar.
[0216] Esses experimentos de compartimentação com G1- AA/SS1 revelaram que a maioria (19 dos 23) dos anticorpos da linha F28 testados não tiveram capacidade para se ligar à MSLN na presença de G1-AA/SS1 e poderiam ser atribuídos a se ligar a uma região similar como G1-AA/SS1. O sítio de ligação à MSLN para o anticorpo SS1 no formato Fab foi relatado (Ma et al., 2012) e é definido como uma região N- terminal que compreende 7 a 64 aminoácidos que também estão envolvidos na ligação de MUC16. O fato de a maior parte dos ligantes anti-MSLN isolados se ligar a essa ou a uma região similar sugere que esses aminoácidos estão bem expostos nos antígenos recombinantes. Foram identificados quatro outros clones, FS28-185, FS28-243, FS28-255 e FS28-256, que apresentaram competição parcial ou nenhuma competição com G1-AA/SS1 para ligação à MSLN. A compartimentação desses clones uns contra os outros revelou que esses clones representavam dois compartimentos independentes adicionais, isto é, tinham capacidade para se ligar a duas outras regiões diferentes de MSLN. FS28-185, FS28-243 e FS28-255 foram todos atribuídos a um compartimento (“compartimento 2”), enquanto FS28-256 foi atribuído a um compartimento separado (“compartimento 3”). Esses resultados mostraram que as seleções de mascaramento de epítopo na seção 1.2 foram bem sucedidas visto que anticorpos que se ligam a múltiplas regiões de MSLN foram identificados.
2.1.4 Afinidades
[0217] Para cada compartimento descrito em 2.1.3, a cinética de ligação foi determinada com o uso do mesmo método como descrito na seção 2.1.2, exceto que MSLN-His- Avi humano ou de cino foi imobilizado a 50 ou 100 RU. Clones foram testados em uma faixa de concentração de 81 nM a 0,33 nM em diluições de 3 vezes. Os ligantes foram classificados e o melhor dentre cada um dos compartimentos foi selecionado: FS28-024, FS28-026 e FS28-091, todos do compartimento 1, FS28-185, do compartimento 2, e FS28-256, do compartimento 3. Todos esses clones mostraram ter transreativo a cino, mas as afinidades não foram calculadas sob essas condições de teste. As afinidades dos anticorpos selecionados são mostradas na Tabela 1, que mostra que as afinidades obtidas a 50 RU de MSLN imobilizada foram inferiores àquelas a 100 RU de antígeno de MSLN imobilizada, o que mostra aumento de ligação a níveis mais altos de MSLN. Tabela 1: Afinidades de mAbs antimesotelina naïve com mesotelina humana imobilizada mAb (em formato Afinidade para MSLN-His-Avi humana de G1-AA) imobilizada KD (nM) 50 de RU 100 de RU FS28-024 0,77 0,23 mAb (em formato Afinidade para MSLN-His-Avi humana de G1-AA) imobilizada KD (nM) 50 de RU 100 de RU FS28-026 0,21 0,12 FS28-091 1,24 0,76 FS28-185 37,00 29,57 FS28-256 26,20 23,16
2.2 Ensaios de bloqueio de MUC16-MSLN
[0218] Foi relatado que a região N-terminal de MSLN (aminoácidos 296-359) interage com a glicoproteína MUC16, e essa interação pode desempenhar um papel na adesão de células cancerígenas (Kaneko et al., 2009). FS28-024, FS28- 026, FS28-091, FS28-185 e FS28-256 foram testados quanto a sua capacidade para bloquear a ligação de MUC16 à mesotelina em um ensaio de bloqueio. SS1 é conhecido a partir da literatura por bloquear a ligação de MUC16 à MSLN (Ma et al., 2012). Como anteriormente descrito, converteu- se esse em um formato G1-AA/SS1 com a expectativa de que isso não impactaria sua capacidade para bloquear a ligação de MUC16. G1-AA/SS1 e um anticorpo IgG1 de controle (G1- AA/HelD1.3) foram incluídos como controles positivo e negativo, respectivamente.
[0219] Resumidamente, MUC16 humano recombinante (R&D Systems, 5809-MU-050) foi revestido em placas maxisorp a 0,65 µg/ml em 1x PBS durante a noite a 4 °C. A placas foram lavadas 3 vezes com 1xPBS e bloqueadas com 300 µl de PBS contendo Tween20 a 2 % e 2 % de Leite Marvel. Uma concentração de mAbs anti-MSLN (0,23 nM a 500 nM, diluições de 3 vezes) foram pré-misturadas com antígeno hMSLN-His-Avi biotinilado (concentração final de 2 µg/ml) em um volume de 100 µl por 1 h à temperatura ambiente. Após a remoção da solução de bloqueio, a mistura de mAb/MSLN foi adicionada às placas e incubada por 1 h à temperatura ambiente. As placas foram lavadas 3 vezes com PBST (1x PBS e Tween20 a 0,05 %) e incubadas com estreptavidina-HRP (Thermo Scientific, 21126, 1:1000 de diluição em 1xPBS) por 1 h à temperatura ambiente. Finalmente, as placas foram lavadas 3 vezes com PBST e 3 vezes com PBS. MSLN ligada a MUC16 foi visualizada adicionando-se 100 µl de TMB por 15 min, seguido por 100 µl de solução de ácido sulfúrico a 1 M. As absorbâncias foram lidas a 450-630 nm (software Gen5, BioTek). Tabela 2: Atividade de mAbs antimesotelina naïve em ensaio de bloqueio de MUC16-MSLN mAb (em formato de Atividade de bloqueio de MUC16-MSLN G1-AA) IC50 (nM) FS28-024 2,9 FS28-026 5,2 FS28-091 4,4 FS28-185 Ligação melhorada FS28-256 Nenhuma atividade SS1 4,8 HelD1.3 Nenhuma atividade
[0220] Clones do compartimento 1 FS28-024, FS28-026 e FS28-091 mostraram bloqueio dependente de dose da interação MUC16-MSLN com IC50 de 2,9 nM, 5,2 nM e 4,4 nM, respectivamente (Tabela 2). A atividade de bloqueio observada foi similar àquela de G1-AA/SS1. FS28-256 não mostrou qualquer atividade de bloqueio de modo similar ao controle negativo G1-AA/HelD1.3. Enquanto FS28-185 promoveu a ligação de MUC16 à MSLN. Esse fenômeno foi relatado (Patente n° US 8.911.732 B2). Esses resultados foram consistentes com os dados de compartimentação na seção
2.1.3, em que clones que se ligam a três regiões diferentes de MSLN mostraram três comportamentos diferentes no ensaio de bloqueio de ligante.
[0221] Por fim, os resultados mostram que foi selecionado um painel de clones que se ligam a 3 regiões (compartimentos) diferentes de MSLN; anticorpos que se ligam a uma região de MSLN bloqueiam a ligação de MUC16 à MSLN, enquanto anticorpos que se ligam a outras duas regiões não.
2.3 Especificidade
[0222] Em vista das áreas diferentes de MSLN ligadas pelo painel de anticorpos, suas especificidades quanto à ligação a MSLN foram testadas. A especificidade de FS28- 024, FS28-026, FS28-091, FS28-185 e FS28-256 foi testada por ELISA comparando-se a ligação à MSLN com a ligação a outras moléculas envolvidas na adesão celular como CEACAM- 5, E-Caderina, Trombomodulina e EpCAM.
[0223] Um protocolo similar foi usado como descrito na seção 1.2.1, em que placas maxisorp foram revestidas com 1 µg/ml de MSLN-His-Avi humano recombinante, CEACAM-5-His-Fc humano (Sino Biological, 1077-H03H), E-Caderina humana (R&D systems, 8505-EC), Trombomodulina humana (Peprotech, 100- 58) ou EpCAM-hFc humana (produção interna). A ligação dos mAbs anti-MSLN, testada em uma faixa de concentração de 0,02 a 1000 nM (diluições de 3 vezes) foi detectada com o uso de Fab-HRP anti-humano (Sigma, A0293). Controles positivos para as respectivas moléculas incluíam anticorpo EpCAM humano (clone 2G8 da patente n° US8236308 B2) anticorpo CEACAM-5 (clone hMN15 da patente n° US8771690 B2), anticorpo de E-Caderina humana, clone 180215 de IgG2b de camundongo (R&D systems, MAB1838), anticorpo de Trombomodulina humana, IgG1 de camundongo, clone 501733 (R&D systems, MAB3947). Os últimos dois foram detectados com o uso de Fc-HRP anti-murino de cabra (Sigma, A9309) como mAb secundário.
[0224] FS28-024, FS28-026, FS28-091 e FS28-185 se ligaram a MSLN-His-Avi humano (EC50 em torno de 0,5 nM e sinal de ligação máxima de 3), mas nenhuma ligação foi observada a qualquer uma das moléculas de adesão celular testadas até 1000 nM. Anticorpos de controle positivo ligados a seus respectivos alvos, como esperado. Desse modo, os anticorpos anti-MSLN mostraram um alto nível de especificidade.
2.4 Ligação celular
[0225] O painel de cinco mAbs antimesotelina selecionados foi analisado quanto à ligação à MSLN de superfície celular endógena na linhagem celular NCI-H226 de câncer de pulmão humano.
[0226] Resumidamente, as células NCI-H226 (ATCC CRL- 5826) foram colhidas de frascos de cultura de células T175 com o uso de StemPro Accutase (Gibco, A11105-01). As células foram centrifugadas a 1200 rpm por 3 min e ressupensas em tampão de FACS gelado made up de DPBS (Life Technologies, 14190169) e 1 % de BSA (Sigma-Aldrich, A7906) a 2x106 células/ml e 50 µl por poço foi semeada em uma placa de 96 poços com fundo em V (Costar, 3894). Todos os mAbs testados foram diluídos em tampão de FACS em 120 µl em uma faixa de concentração de 0,01-200 nM (diluições em 4 vezes). As células NCI-H226 foram, então, centrifugadas, o tensoativo removido e as células ressuspensas em 100 µl de cada diluição de mAb e incubadas a 4 °C por 45 min. As células foram lavadas duas vezes por centrifugação com 150 µl de tampão de FACS, ressuspensas em 100 µl que contêm anticorpo de fragmento-R-Ficoeritrina de F(ab')2 anti-IgG humano de cabra (específico de cadeia-γ) (Sigma, P8047) diluído em 1:1000 em tampão de FACS e incubado a 4 °C por 45 min. As células foram lavadas uma vez com 150 µl de tampão de FACS e, então, com 150 µl de DPBS, ressuspensas em 150 µl de DPBS que contêm DAPI (Biotium, 40043) a 1:10.000 e lido no BDCantoII ou iQue (Intellicyt). Os dados foram analisados com o uso de FlowJo v10 para determinar a média geométrica de sinal para PE para células vivas em cada poço.
[0227] Os dados de ligação celular (Tabela 3) mostraram que FS28-024, FS28-026 e FS28-091 todos se ligaram à MSLN de superfície celular em NCI-H226 com EC50 em uma faixa de 0,62 a 1,22 nM, bem como o controle positivo G1-AA/SS1. Em comparação, FS28-185 e FS28-256 demonstraram ligação fraca com EC50 maior que 30 nM e um baixo sinalização de ligação máxima (Emáx). Um ensaio de ligação representativo é mostrado na Figura 1.
Tabela 3: Ligação celular de mAbs antimesotelina naïve a células cancerígenas NCI-H226 mAb (em formato de Ligação celular a NCI-H226 (n=3) G1-AA) EC50 (nM) Emáx (sinal MFI) FS28-024 0,62 14647 FS28-026 1,08 13650 FS28-091 1,22 11926 FS28-185 37,47 2435 FS28-256 33,13 4246 SS1 0,90 19385
2.5 Sumário de procedimento de triagem de naïve
[0228] Dos 156 mAbs identificados pela triagem inicial das bibliotecas de fagos naïve, cinco clones de mAb MSLN anti-humano (FS28-024, FS28-026, FS28-091, FS28-185 e FS28- 256) foram selecionados com base em um conjunto de ensaios de triagem que primeiro confirmaram a ligação à MSLN recombinantes desglicosilada de comprimento total, bem como a capacidade para se ligar à MSLN de cino. Em segundo lugar, os clones foram agrupados com base em diversidade da região de MSLN que os mesmos ligam (compartimentos) e atividade de bloqueio de MUC16 e a partir desses grupos, os ligantes de maior afinidade foram selecionados. O painel resultante de clones de mAb FS28-024, FS28-026, FS28-091, FS28-185 e FS28-256 ligou três regiões diferentes de MSLN, uma das quais (compartimento 1, incluindo FS28-024, FS28- 026 e FS28-091) bloqueia a ligação de MUC16 à MSLN in vitro. O painel de cinco mAbs anti-MSLN mostrou ligação específica à MSLN, afinidades diferentes para MSLN recombinante e de superfície celular e foi selecionado para caracterização e/ou otimização adicional como descrito nos Exemplos 3 e 4 abaixo. Exemplo 3: Maturação de afinidade e sequência otimização de mAbs anti-MSLN naïve
3.1 Maturação de afinidade de FS28-185 e FS28-256
[0229] Em comparação com os FS28-024, FS28-026 e FS28- 091, FS28-185 e FS28-256 tiveram afinidade mais fraca tanto para MSLN recombinante quanto para MSLN de superfície celular e foram, portanto, submetidos à maturação por afinidade.
3.1.1 Maturação e triagem de afinidade de FS28-185 e FS28- 256
[0230] As regiões CDR3 de VH e VL foram maturadas por afinidade em paralelo em formato de scFv por aleatorização de cassetes de sobreposição de cinco a seis aminoácidos com o uso de iniciadores de NNK. As regiões aleatorizadas por FS28-185 foram VH G95-M100F e VL S91-A95 e para FS28-256 essas foram VH Y95-L100B e VL S91-I96 (numeração Kabat). Antes da geração de biblioteca, mutagênese parcimoniosa foi realizada em sítios potenciais de oxidação e desamidação de metionina nos CDR1 e CDR3 regiões (exceto pela biblioteca de CDR3 de VL FS28-256). Bibliotecas de fagemídeo foram geradas independentemente e agrupadas para produzir uma biblioteca de CDR3 de VH e uma biblioteca de CDR3 de VL para cada clone. Dois ciclos de seleção foram realizados como descrito para campanhas de naïve, com o uso de 20 nM de MSLN-His-Avi humana biotinilada no ciclo 1 e 20 ou 2 nM de MSLN de cino-His-Avi no ciclo 2. scFv solúveis (concentração de ponto único) foram, então, testadas quanto à ligação a uma linhagem celular de câncer de ovário OVCAR- 3 (ATCC® HTB-161™). Células OVCAR-3 foram colhidas com o uso de StemPro Accutase (Gibco, A11105-01), centrifugadas a 1200 rpm por 3 min e ressuspensas em tampão de FACS (DPBS contendo BSA a 2 %) em 2x106 células/ml. 100 µl de células OVCAR-3 foram adicionados às placas de 96 poços com fundo em V. As placas foram centrifugadas a 1200 rpm por 3 min e o tampão foi descartado. 150 µl de scFv foram adicionados às células e incubados a 4 °C por uma hora. ScFvs de clones parentais FS28-185 e 256 foram incluídos como controles. Após a lavagem, as células foram ressuspensas em 100 µl de Penta His Alexa-Fluor 647 (Qiagen, 109-546-098), e lavadas antes de serem ressuspensas em 100 µl de DPBS que contêm Colorização por Ácido Nucleico Sytox Green (Invitrogen S7020, diluição de 1:10000). As amostras foram executadas no iQue (Intellicyt Corporation, IQue Plus) e a média geométrica para APC foi registrada.
[0231] Tanto para FS28-185 quanto para FS28-256, os clones maturados por afinidade com ligação aprimorada a células OVCAR-3 foram identificados. Com base na ligação de célula (MFI maior que 850) e diversidade de sequência, 10 clones foram selecionados a partir de CDR3 de VH FS28-256 e 9 a partir de seleções de CDR3 de VL. Nos 38 clones maturados por afinidade FS28-185 testados nesse ensaio, 14 foram selecionados a partir das seleções de CDR3 de VH e um a partir das seleções de CDR3 de VL. Os clones selecionados foram adicionalmente caracterizados em um formato de anticorpo biespecífico mAb2.
3.1.2 Geração de mAb2 com base em FS28-185 e FS28-256
[0232] Para caracterização adicional de ligantes de anti-MSLN, a região de VH ou VL maturada por afinidade de FS28-185 ou FS28-256 bem como os clones parentais foram produzidas em formato de mAb2. O mAb2 resultante é anticorpos de IgG1 que compreendem as CDRs de clones de FS28-185 ou FS28-256 ou as variantes maturadas por afinidade derivadas dos mesmos, a mutação LALA no domínio CH2, e um sítio de ligação ao receptor de CD137 humano no domínio CH3. Essas moléculas de mAb2 foram designadas FS22- 053-008-AA/FS28-185 (SEQ ID NO: 154 e 195) e FS22-053-008- AA/FS28-256 (SEQ ID NO: 156 e 77) e FS22-053-008-AA/FS28- 256-x para a progênie maturada por afinidade. O mAb2 foi produzido por expressão transiente em células HEK293-6E e, quando indicado, purificado com o uso de colunas de proteína A mAb Select SuRe.
3.1.3 Triagem de afinidade de clones maturados por afinidade de FS28-185 e FS28-256 para MSLN imobilizada
[0233] As ligações do mAb2 que contém regiões de CDR maturadas por afinidade foram triadas a seguir para ligação à MSLN-His-Avi humano e de cino imobilizado por Biacore. Tensoativos de HEK293-6E que contêm clones maturados por afinidade FS22-053-008-AA/FS28-185 e FS22-053-008-AA/FS28- 256 foram analisados para ligação à MSLN imobilizada a 200 RU como descrito na seção 2.1.2. Duas concentrações de mAb2 foram testadas, isto é, 50 e 100 nM, e a ligação foi comparada à ligação do anticorpo parental também em formato de mAb2. Os ligantes foram classificados e os seis melhores ligantes transreativo a cino de cada linhagem foram re- expressos, purificados e testados em ensaios de ligação celular como descrito na seção 3.1.4 abaixo. Para a linhagem de FS28-256, clones com CDR3 de VH aprimorada foram, então, embaralhados com clones com CDR3s de VL aprimoradas, criando nove pares de VH/VL adicionais, que foram produzidos como mAb2 e também foram testados.
3.1.4 Ligação celular na presença de MSLN solúvel
[0234] Como anteriormente discutido na seção 1, a MSLN solúvel pode atuar como um dissipador para a ligação de qualquer anticorpo anti-MSLN. Os clones maturados por afinidade foram, portanto, triados para ligação à MSLN recombinante e de superfície celular na presença e ausência de MSLN humana solúvel. Uma vez solúvel, a MSLN removida carece de resíduos C-terminal 7 ou 13 (Zhang et al., 2011), um antígeno de MSLN humana comercialmente disponível, MSLN- His Acro, que carece de aminoácidos de terminal C 18 foi usada como uma imitação. Esse antígeno foi usado em uma concentração de 20 nM, que é cerca de 10-20 vezes o nível de MSLN solúvel constatado como sendo o valor de diagnóstico para definir pacientes de mesotelioma maligno e câncer pulmonar como MSLN positiva (Cui et al., 2014).
[0235] Ensaios de ligação celular com o uso de células OVCAR-3 foram realizados similarmente aos ensaios descritos na seção 2.4. O efeito da presença de MSLN solúvel foi testado por pré-incubação dos anticorpos na presença ou ausência de MSLN solúvel antes de misturar com células e determinar se a pré-incubação afetou a ligação à MSLN na superfície celular. Os clones maturados por afinidade e moléculas parentais (todos em formato de mAb2 como anteriormente descrito) foram diluídos em tampão de FACS para gerar uma concentração final de 2x em uma placa de fundo em V de 96 poços. 60 µl de cada poço foram, então, adicionados ao tampão de FACS sozinho ou ao tampão de FACS que contém 60 µl de hMSLN recombinante a 40 nM (R&D systems, 3265-MS-050) (para gerar uma concentração final de 20 nM de hMSLN) e pré-incubados à temperatura ambiente por 1 hora antes de 100 µl serem adicionados às células. O anticorpo ligado foi detectado com o uso de anti-Fcγ anti- humano de cabra Alexa-Fluor 488 (Jackson Immunoresearch, 109-546-098).
[0236] Para a linhagem de FS28-185, todos os clones maturados por afinidade mostraram ligação celular aprimorada a OVCAR-3 (cerca de 7 vezes em EC50) em comparação à ligação pelo clone parental. Essa ligação foi, entretanto, reduzida na presença de MSLN solúvel a 20 nM, resultando em um EC50 3 a 7 vezes superior (de 1,6-1,8 nM a aproximadamente 5-7,8 nM). Quanto à linhagem de FS28-256, cinco clones foram selecionados como representativos dessa linhagem, em que todos tiveram uma faixa de EC50 variando de 0,9 a 8,6 nM. Mais importante ainda, a afinidade de ligação foi retida e houve uma alteração menor que 2 vezes em ligação na presença de MSLN solúvel a 20 nM em comparação com quando a mesma está ausente. A partir desses dados, os clones selecionados para teste adicional incluíram FS28-256-012, FS28-256-021, FS28-256-023 e FS28- 256-024.
3.2 Maturação de afinidade de clone FS28-024 com o uso de estratégia de via de NNK
[0237] Enquanto FS28-024 se ligou à MSLN humana com uma afinidade sub-nanomolar, sua afinidade com MSLN de cino foi cerca de 5 vezes inferior (consultar Exemplo 4, Tabela 4). Para aprimorar a ligação a MSLN de cino, uma estratégia de execução de NKK em cinco resíduos na região CDR3 de VH foi usada.
[0238] A sequência da VH e VL de FS28-024 foi otimizada no mesmo formato de mAb2 como descrito na seção 3.1.2. Bibliotecas de mutagênese parsimoniosa foram geradas por diversificação de um resíduo de aminoácido em um momento dos resíduos de RATLF (numeração kabat 95-99) na CDR3 de VH, levando a um total de cinco bibliotecas individuais. As bibliotecas foram feitas com códons de NNK de baixa redundância para representar todos os aminoácidos possíveis na posição de interesse. Os iniciadores dianteiros e reversos foram designados, de acordo com as diretrizes de Kit de Mutagênese Direcionada por Sítio Luminoso Quickchange (Agilent, 200518), que foi usado para criar as bibliotecas. Cada mutante foi expresso em escala pequena em células HEK293-6E e os tensoativos foram triados por BIAcore para ligação mantida ou aprimorada a MSLN-His-Avi humano e de cino. Dos 84 clones triados, alguns mantiveram a ligação, em que a maior parte dos mesmos são substitutos de resíduo T98. Quatro clones, FS28-024-51, FS28-024-52, FS28-024-53 e FS28-024-060 foram re-expressos, purificados e suas afinidades com MSLN humana e de cino determinadas. Apenas um clone, FS28-024-53, mostrou um aprimoramento em transreatividade a cino que foi alcançado por uma única mutação T98V (numeração Kabat, consultar Tabela 4, Exemplo 4). Todos os quatro clones foram levados adiante, pois podem fornecer sequências e características alternativas dependendo da aplicação.
3.3 Sumário de maturação por afinidade
[0239] No geral, as estratégias de maturação por afinidade e otimização de sequência para as linhagens de
FS28-024, FS28-185 e FS28-256 foram bem sucedidas por expansão adicional do painel e diversidade de mAbs anti- MSLN. Exemplo 4: Caracterização de clones de anti-MSLN
4.1 Afinidades
[0240] A ligação dos clones de anti-MSLN selecionados em formato de mAb2 ao antígeno de MSLN-His-Avi humano e de cino recombinante foi medida por SPR com o uso de uma unidade de processamento Biacore T200 (GE Healthcare). Como anteriormente descrito, foi desejável se ligar mais fortemente ao antígeno imobilizado que ao antígeno solúvel. Para avaliar as propriedades de ligação dos clones, cinéticas de ligação ao antígeno de MSLN imobilizada foram determinadas como descrito na seção 2.1.2 e comparadas às cinéticas obtidas quando antígenos de MSLN em solução ligados a clones capturados.
[0241] Para experimentos de captura, clones em formato de mAb2 foram capturados com o uso de um chip de Proteína G de série S de sensor BIAcore (GE Healthcare, 29179315). O mAb2 diluído em tampão de HBS-EP (GE Healthcare, BR100188) que contém 900 mM de NaCl2 a 1 µg/ml foi injetado individualmente na célula de fluxo 2, 3 e 4 a 30 µl/min para alcançar uma resposta de aproximadamente 100 RU. G1- AA/HelD1.3 foi capturado na célula de fluxo 1. A MSLN-His- Avi humano e de cino recombinante (seção 1.1), diluído em tampão de HBS-EP que contém 900 mM de NaCl2 foi injetado na célula de fluxo 1, 2, 3 ou 4 quando apropriado em uma faixa de concentração de 1000 nM a 0,051 nM com diluições de 3 vezes por 5 minutos a 70 µl/min e, então, deixado para dissociar em tampão por 5 minutos. A regeneração foi alcançada por injeção de glicina a 10 mM pH 1,5 (GE Healthcare, BR100354) e tensoativo P20 (GE Healthcare, BR- 1000-54) por 20 segundos em uma taxa de 30 µl/min.
Dados subtraídos (célula de fluxo 2 – célula de fluxo 1, célula de fluxo 3 – célula de fluxo 1 ou célula de fluxo 4 – célula de fluxo 1) foram analisados com o uso do Software BIAevaluation 3.2 (GE Healthcare) para identificar a ligação com o uso da ligação modelo 1:1, Rmáx local e com constante 0 de índice refrativo (RI). Tabela 4: Afinidades com mesotelina humana imobilizada e em solução bem como com transreatividade a cino Clone Afinidade Afinidade Razão de KD em Afinidade (em para MSLN- para solução/imobilizada para formato His-Avi MSLN-His- para MSLN-His-Avi MSLN-His- de mAb2 humana Avi humana Avi de FS22- imobilizada humana em cino em 053-008- KD (nM) solução solução KD AA) KD (nM) (nM) FS28-024 0,39 46,5 119,2 240,0 FS28- 0,31 47,5 154,2 148,1 024-51 FS28- 0,36 33,1 92,3 185,4 024-52 FS28- 0,89 49,2 55,3 78,3 024-53 FS28- 0,07 5,2 78,6 265,9 024-060 FS28-026 0,14 700,2 5001,4 886,0 FS28-091 1,1 614,9 580,1 >1000 FS28-185 30,1 452,4 15 361,5 FS28-256 23,7 888,8 37,5 737,9
Clone Afinidade Afinidade Razão de KD em Afinidade (em para MSLN- para solução/imobilizada para formato His-Avi MSLN-His- para MSLN-His-Avi MSLN-His- 2 de mAb humana Avi humana Avi de FS22- imobilizada humana em cino em 053-008- KD (nM) solução solução KD AA) KD (nM) (nM) FS28- 4,1 861,1 209 716,7 256-012 FS28- 3,3 23,2 7,0 16,2 256-021 FS28- 3,3 68,6 20,8 32,6 256-023 FS28- 6,7 95,4 14,3 56,7 256-024 FS28- 3,2 62,3 19,5 33,2 256-026 FS28- 1,1 6,0 5,3 0,7 256-027 *Afinidade de FS28-026 para MSLN imobilizada de 100 RU é provavelmente superestimada, pois as medições de taxa de ativação estão fora dos limites do Biacore T200.
[0242] Os dados de cinética demonstraram que todos os clones testados, com a exceção de FS28-024-060, foram transreativos à MSLN-His-Avi de cino, tendo afinidade com o antígeno de cino dentro de 5 vezes dessa afinidade com MSLN-His-Avi humano.
[0243] Além disso, para cada grupo de clones que se ligam a uma região de ligação à MSLN diferente, foram identificados clones que se ligam com baixa afinidade nanomolar à MSLN-His-Avi humano imobilizado.
[0244] Os clones de progênie de FS28-256 tiveram uma afinidade maior que seus respectivos anticorpos parentais, confirmando que a maturação por afinidade desses clones foi bem sucedida. De interesse, todos os clones tiveram uma afinidade superior com MSLN imobilizada que com MSLN-His- Avi humano em solução, uma característica que foi quantificada por cálculo da diferença de vezes da KD em solução versus a KD imobilizada (consultar a Tabela 4). Pode-se, portanto, levantar a hipótese de que os anticorpos anti-MSLN não se ligam com alta afinidade com o alvo, como observado pela baixa afinidade para ligação à MSLN solúvel, mas considera-se que sejam ligados mais fortemente à MSLN imobilizada devido a interações de atividade melhoradas com o antígeno imobilizado. A avidez parece ser específica de anticorpo.
4.2 Ligação celular a NCI-H226 na presença de MSLN solúvel
[0245] Todos os clones selecionados, suplementados com outros clones maturados de FS28-256 não embaralhados por afinidade (consultar a Tabela 5) foram, então, testados para ligação à MSLN superfície celular em células NCI-H226 na ausência e presença de 20 nM de MSLN. O método usado foi exatamente como descrito na seção 3.1.4. Tanto valores de EC50 quanto de Emáx foram determinados (Tabela 5). Tabela 5: Ligação celular na ausência e presença de mesotelina solúvel Clone (em formato NCI-H226 NCI-H226 + 20 nM de mAb2 CD137) solúvel EC50 (nM) Emáx (MFI) EC50 (nM) Emáx (MFI) FS28-024 1,47 980955 5,04 1023695
Clone (em formato NCI-H226 NCI-H226 + 20 nM de mAb2 CD137) solúvel EC50 (nM) Emáx (MFI) EC50 (nM) Emáx (MFI) FS28-024-051 0,78 800589 7,47 1100503 FS28-024-052 1,32 957685 4,28 985916 FS28-024-053 1,19 914344 7,52 964941 FS28-024-060 1,46 1011600 25,69 1225277 FS28-026 1,91 729876 2,65 701999 FS28-091 2,72 739899 3,97 744939 FS28-185* 16,3 5155 14,3 5031 FS28-256 15,78 275841 39,41 351430 FS28-256-001 4,98 703342 5,36 608248 FS28-256-005 5,30 759574 3,91 653731 FS28-256-012 8,48 968727 4,83 790055 FS28-256-014 3,11 771117 2,72 616427 FS28-256-018 6,98 637266 4,60 493728 FS28-256-021 3,29 919116 7,65 838717 FS28-256-023 3,29 856041 3,90 716321 FS28-256-024 3,88 812760 3,91 668584 FS28-256-026 2,43 741080 4,59 714886 FS28-256-027 3,93 986870 21,82 964426 * dados de FS28-185 foram obtidos no BD CantoII em vez de iQue (Intellicyt) resultando em valores de Emáx inferiores devido às diferenças em tensões de PMT entre máquinas.
[0246] Os dados mostraram que os braços Fab de ligação à anti-MSLN do mAb2 testado ligado com afinidades variadas com células NCI-H226 que estão em uma faixa de 0,78 a mais de 16 nM, em que a maioria de clones exibe baixas afinidades de ligação celular nanomolar, consistente com as afinidades relatadas para a MSLN imobilizada recombinante. A classificação de afinidades de ligação celular dos FS28- 024, FS28-026, FS28-091, FS28-185 e FS28-256 naïve também foi consistente com os dados de classificação obtidos em formato de mAb (Tabela 3, seção 2.4). De interesse, o efeito de MSLN recombinante de 20 nM na afinidade de ligação celular foi baixo com aumentos mínimos (menor que 2,5 vezes) em EC50 observados para a maior parte dos clones. Em particular, as afinidades de ligação celular de clones derivados de FS28-256, como FS28-256-001, FS28-256- 005, FS28-256-012, FS28-256-014, FS28-256-018, FS28-256- 023, FS28-256-024 e FS28-256-026 não foram afetadas pela presença de MSLN solúvel. Isso demonstrou que, mesmo na presença de um excesso de MSLN solúvel, a maior parte dos clones se ligou, de preferência, à forma de MSLN ligada à membrana.
[0247] Para clones derivados de FS28-024, um efeito mais variável de MSLN solúvel foi observado com aumentos em EC50 que estão em uma faixa de 3,4 a 17,6 vezes.
[0248] Dois clones com a afinidade mais alta com MSLN solúvel recombinante (consultar a Tabela 4), isto é, FS28- 024-060 e FS28-256-027 (ambos tendo KD em nM de único dígito com MSLN-His-Avi em solução) foram mais afetados ao se ligarem a células na presença de MSLN solúvel, indicando que ligantes de afinidade superior são mais prováveis de serem afetados por MSLN removida. Como resultado, aumentos em EC50 na presença de MSLN solúvel são menos preferenciais, uma vez que é a EC50 final na presença de MSLN solúvel que se considera como sendo a mais refletiva da afinidade do mAb com essas células tumorais no paciente. A afinidade exigida real dos anticorpos anti-MSLN é dependente de aplicação. Exemplo 5: Otimização de sequência de clones maturados por afinidade FS28-256
5.1 Otimização de sequência de clones maturados por afinidade FS28-256
[0249] Todos os clones de linhagem FS28-256 contiveram um sítio de glicosilação ligado a N potencial no CDR2 de VH (numeração IMGT N55-X-S57, em que X é qualquer resíduo). Além disso, FS28-256-001, FS28-256-021 e FS28-256-023 abrigavam um sítio de desamidação potencial na região CDR3 de VL na posição N116-T117 (numeração IMGT). Similar ao procedimento descrito na seção 3.2, uma estratégia de via de NNK foi empregada para identificar substituições de aminoácido no clone FS28-256-021 que removeriam esses sítios de glicosilação e desamidação potenciais. Inicialmente, o resíduo de CDR2 de VH N55 e o resíduo de CDR3 de VL N116 foram mutados nos respectivos clones, e os mutantes foram triados para retenção para ligação otimizada à MSLN humana e de cino. Para FS28-256-021, as alterações no resíduo de CDR3 de VL N116 resultaram em uma perda de ligação ao antígeno. Das alterações na CDR2 de VH em N55, apenas quatro mutantes (N55A, N55H, N55S e N55T) retiveram a ligação à MSLN humana, apesar de sua ligação ter sido fraca em comparação com o clone parental.
[0250] Uma vez que não foi possível remover o sítio de desamidação potencial na CDR3 de VL por mutação da sequência, estratégias alternativas foram adotadas. Uma vez que alguns dos outros clones maturados por afinidade derivados de FS28-256 compartilharam a mesma sequência de cadeia pesada como FS28-256-021, mas tiveram diferentes sequências de cadeia leve, esses outros clones foram explorados adicionalmente.
Especificamente, FS28-256-027 foi selecionado para teste.
Como anteriormente descrito, FS28-256-027 teve uma afinidade maior com MSLN solúvel que FS28-256-021 (6,0 nM, Tabela 4), resultando em ligação reduzida à MSLN expressa em superfície celular na presença de MSLN solúvel (Tabela 5) e, consequentemente, não foi selecionado como um clone preferencial no momento.
Para explorar se esse clone poderia ser otimizado para ligação à MSLN expressa em superfície celular, as mutações de N55A, N55H, N55S ou N55T identificadas para o clone de FS28-256- 021 foram introduzidas na cadeia pesada de FS28-256-027 e a ligação dos 4 clones resultantes foi medida por SPR, de maneira similar ao protocolo usado no Exemplo 4.1, mas com uma RU de aproximadamente 40 em vez de 100, para ligação à MSLN imobilizada e em solução.
Os resultados são mostrados na Tabela 6. A introdução da mutação N55T no FS28-256-027 resultou em um clone, FS28-256-274, que teve uma afinidade muito mais fraca com MSLN imobilizada que os outros clones e, portanto, não progrediu adicionalmente.
A introdução das mutações N55H e N55S no FS28-256-027 resultou em clones FS28-256-272 e FS28-256-273, respectivamente, que se ligaram à MSLN solúvel com uma afinidade superior ou comparável à MSLN imobilizada.
Consequentemente, considerou-se provável que a ligação de ambos esses clones à MSLN expressa em superfície celular seria impactada negativamente pela presença de MSLN solúvel.
Em contrapartida, a introdução da mutação N55A no FS28-256-027 resultou em um clone, FS28-256-271, que mostrou a afinidade mais alta com MSLN imobilizada dos quatro clones testados e ligação mais fraca à MSLN solúvel.
Esses resultados mostraram que, surpreendentemente, a mutação N55A na CDR2 de VH do clone parental FS28-256-027 reduziu a afinidade de ligação tanto à MSLN imobilizada quanto à MSLN solúvel de modo que FS28-258-271 alveje, de preferência, a MSLN imobilizada em vez da MSLN solúvel.
Consistente com outros clones, como FS28-256-021, que se ligaram com uma KD de 10 nM ou menos à MSLN imobilizada e 10 nM ou KD maior com MSLN solúvel, espera-se que a ligação de FS28-258-271 à MSLN em superfícies celulares será menos impactada pela presença de MSLN solúvel.
Tabela 6: Afinidades com mesotelina humana imobilizada e em solução Clone Mutação Afinidade Afinidade Razão de KD em (em em CDR2 para MSLN- para solução/imobilizada formato de His-Avi MSLN-His- para MSLN-His-Avi de mAb2 Cadeia humana Avi humana CD137) Pesada imobilizada humana em KD (nM) solução KD (nM) FS28- - 4,7 3,2 0,68 256-027 FS28- N55A 5,9 18,2 3 256-271 FS28- N55H 10,7 7,6 0,7 256-272 FS28- N55S 6,0 7,4 1,2 256-273
Clone Mutação Afinidade Afinidade Razão de KD em (em em CDR2 para MSLN- para solução/imobilizada formato de His-Avi MSLN-His- para MSLN-His-Avi de mAb2 Cadeia humana Avi humana CD137) Pesada imobilizada humana em KD (nM) solução KD (nM) FS28- N55T 19,8 55,9 2,8 256-274
[0251] Para mAb² FS22-172-003-AA/FS28-256-271, a transreatividade de cino foi determinada por SPR com o uso de uma análise de cinética de estado de equilíbrio. Um chip CM5 (GE Healthcare BR-1005-30) foi revestido com hMSLN-His- Avi ou cMSLN-His-Avi a aproximadamente 50 RU de acordo com as instruções do fabricante. mAb² foram injetados a uma faixa de concentrações em uma série de diluições de três vezes que começa a 243 nM, a uma taxa de fluxo de 10 µl/min. O tempo de associação foi de 1000 seg para estado de equilíbrio e o tempo de dissociação foi de 30 seg. O tampão de execução foi HBS-EP (GE Healthcare BR100188). As células de fluxo foram regeneradas injetando- se Glicina-HCl, pH 1,5 a uma taxa de fluxo de 30 µl/min por 30 segundos. Os dados foram analisados por referenciação dupla contra uma célula de fluxo que foi intencionalmente deixada em branco (nenhum revestimento de antígeno). O modelo de afinidade de estado de equilíbrio foi usado para analisar dados cinéticos com o uso do software BiaEvaluation versão 3.2. A ligação à MSLN de cino foi dentro de 3 vezes a ligação à MSLN humana.
5.2 Atividade de Citotoxicidade Celular Dependente de Anticorpo (ADCC)
[0252] Para avaliar a função efetora dos mAbs MLSN, as moléculas foram testadas em um ensaio in vitro de ADCC. Com esse propósito, os anticorpos FS28-256-271 e FS28-024-052 foram produzidos em formato de IgG1 humana com ou sem mutações LALA (LALA ou G1, respectivamente).
[0253] As células Raji que expressam MSLN humana (células Raji.hMSLN) foram geradas por transdução lentiviral com o uso do sistema Lenti-X HTX Packaging (Takara, nº de catálogo 631253). O vetor de expressão de Lenti-X (pLVX) (Takara, n° de catálogo 631253) contendo cDNA que codifica MLSN humana foi co-transferida com um Misturador Lenti-X HTX Packaging na linhagem celular Lenti- X 293T (Takara, n° de catálogo 632180) para gerar vírus. Uma linhagem celular Raji (ATCC® CCL-86™) foi, então, transduzida com esses vetores lentivirais. A expressão de MLSN humana nessas células foi confirmada por ligação de anticorpo de controle positivo de G1/SS1 por 1 hora e, então, um anticorpo de detecção de Fc anti-humano identificado de modo fluorescente (Stratech Scientific Ltd, n° de catálogo 109-546-098-JIR) foi usado para detectar ligação celular.
[0254] Um kit de bioensaio de repórter de ADCC (Promega, n° de catálogo G7010) foi usado seguindo o protocolo do fabricante. Células efetoras do kit de ADCC foram misturadas em uma razão de 20:1 com células Raji.hMSLN. mAb² ou SS1 de anticorpo de controle foi titulado em uma placa de 96 poços e incubado a 37 °C com CO2 a 5 % por 6 horas. A atividade de ADCC foi medida por adição de um substrato de luciferase do kit de sistema de ensaio Bio-Glo (Promega, n° de catálogo G7941) de acordo com as instruções do fabricante. O sinal de luminescência foi plotado vs a concentração em log de anticorpo e as curvas resultantes foram ajustadas com o uso do log (agonista) vs equação de resposta em GraphPad Prism. Os resultados são mostrados na Figura 2 e demonstram que tanto FS28-256-271 quanto FS28- 024-052 tiveram capacidade para elicitar atividade de ADCC quando em formato de IgG1 humana. Como esperado, a atividade de ADCC foi perdida quando a mutação LALA foi introduzida na estrutura principal de hIgG1 desses anticorpos. Esses dados demonstram que os anticorpos MSLN descritos aqui podem ser usados para elicitar funções efetoras para modular respostas imunológicas.
5.3 Potência de FS28-256-271 em ensaios de célula T primária
5.3.1 Potência de FS28-256-271 em um formato de mAb² OX40 in vitro ensaio de célula T primária
[0255] As células pan T foram isoladas de células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) obtidas a partir de cones de depleção de leucócito, um subproduto de doações de plaqueta. Resumidamente, teores de cone de leucócito foram lavados com PBS e revestidos em um gradiente Ficoll (GE Lifesciences nº de catálogo 17144002). PBMCs foram isoladas por centrifugação e recuperadas de células que não cruzaram o gradiente Ficoll. PBMCs foram lavadas adicionalmente com PBS e as hemácias foram lisadas através da adição de 10 ml de tampão de lise de hemácia (eBioscience) de acordo com as instruções do fabricante. PBMCs foram contadas e ressuspensas a 2,0 x 10^6 células/ml em meio de célula T (meio de RPMI (Life Technologies) com FBS a 10 % (Life Technologies), 1x Penicilina Estreptomicina (Life Technologies), Piruvato de Sódio (Gibco), Hepes a 10 mM (Gibco), L-Glutamina a 2 mM (Gibco) e 2-mercaptoetanol a 50 µM (Gibco).
[0256] As células T foram, então, isoladas das PBMCs com o uso de um Kit de Isolamento de Célula Pan T II (Miltenyi Biotec Ltd), de acordo com as instruções do fabricante. Dynabeads de CD3/CD28 Ativadores de Célula T Humana (Invitrogen 111.32D) foram ressuspensos por vórtex. As microesferas foram lavadas duas vezes com meio de célula T (meio de RPMI (Life Technologies) com FBS a 10 % (Life Technologies), 1x Penicilina Estreptomicina (Life Technologies), Piruvato de Sódio (Gibco), Hepes a 10 mM (Gibco), L-Glutamina a 2 mM (Gibco) e 2-mercaptoetanol a 50 µM (Gibco). As células T em uma concentração de 1,0 x 106 células/ml no meio de célula T foram estimuladas com os Dynabeads de CD3/CD28 Ativadores de Célula T humana lavados em uma razão de célula para microesfera de 2:1 em um frasco T-25 (Sigma) e incubadas durante a noite a 37 oC, CO2 a 5 % para ativar as células T. As células T ativadas foram lavadas dos Dynabeads e ressupensas em meio de célula T em uma concentração de 2,0 x 106 células/ml. Placas de fundo plano de 96 poços foram revestidas com anticorpo CD3 anti- humano através de incubação com anticorpo CD3 anti-humano a 2,5 µg/ml (clone UHCT1 de R&D Systems) diluídas em PBS por 2 horas a 37oC, CO2 a 5 % e, então, lavadas duas vezes com PBS. As células t ativadas foram adicionadas às placas em 6 x 105 células/poço. Células que expressam mesotelina, NCI- H226, foram adicionadas a 20.000 células\poço. Um mAb² compreendendo um Fcab anti-OX40 bem como o Fab anti-MSLN FS28-256-271 foram testados nesse ensaio, em conjunto com anticorpos de controle. As placas de ensaio foram incubadas a 37 oC, CO2 a 5 % por 72 horas. Os tensoativos foram coletados e a liberação de IL-2 foi medida por ELISA de IL- 2 Humana (Life Technologies, 88-7025-88). A concentração de IL-2 humano (hIL-2) foi plotada vs a concentração de log de anticorpo e as curvas resultantes foram ajustadas com o uso do log (agonista) vs equação de resposta em GraphPad Prism. Os resultados são mostrados na Tabela 7 e demonstram que FS28-256-271 em um formato de mAb2 tem a capacidade para se ligar à MSLN expressa em uma superfície celular e reticular o anticorpo de modo que o sítio de ligação a OX40 possa se ligar e ativar OX40.
5.3.2 Potência de FS28-256-271 em um formato de mAb² CD137 em um ensaio de célula T primária in vitro
[0257] Células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) foram obtidas como descrito em 5.2. Células T CD8+ foram isoladas com o uso do kit de isolamento de célula T CD8+ II (Miltenyi Biotec Ltd, 130-096-495) de acordo com as instruções de fabricante. As placas de cultura de tecido de fundo plano de 96 poços foram revestidas com 8 µg/ml anticorpo anti-CD3 (Clone UCHT1, R&D Systems, MAB100-SP) em PBS durante a noite em 4 °C. As placas foram, então, lavadas 3 vezes com 200 µl de PBS. As células NCI-H226 foram plaqueadas a 2 × 104 células por poço para o placas de 96 poços de fundo plano de anticorpo revestido com anti- CD3 (8 µg/ml) em 100 µl de meio de cultura de célula T (meio RPMI (Life Technologies, 61870-044) com 10 % de FBS (Life Technologies), 1X Estreptomicina de Penicilina (Life
Technologies, 15140122), 1 mM de Piruvato de Sódio (Gibco, 11360-070), 10 mM de Hepes (Sigma-Aldrich, H0887), 2 mM de L-Glutamina (Sigma-Aldrich, G7513) e 50 µM de 2- mercaptoetanol (Gibco, M6250)). Uma vez que as células tenham aderido após 4 horas de incubação, todos os meios de cultura de célula T foram removidos e substituídos com 50 µl de meio de cultura de célula T que contêm células T em uma concentração de 4,0 × 105 células/ml, resultando em 2,0 x 104 células/poço. Os anticorpos de controle ou um mAb² compreendendo um Fcab CD137 e o FS28-256-271 de Fab MSLN foram diluídos em meio de célula T em uma concentração final de 4× partindo de 60 nM e diluições em série de 1:3 ou 1:7 foram executadas. 50 µl de titulação de anticorpo foram adicionados às células para um volume de ensaio total de 200 µl e concentração de anticorpo de 1X. O ensaio foi incubado a 37 °C, 5 % de CO2 por 72 horas. Os tensoativos foram coletados e ensaiados com um kit de IL-2 V-PLEX da Meso Scale Discovery (K151QQD-4) seguindo as instruções do fabricante. A concentração de IL-2 humano (hIL-2) foi plotada vs a concentração de log de anticorpo e as curvas resultantes foram ajustadas com o uso do log (agonista) vs equação de resposta em GraphPad Prism. Os resultados são mostrados na Tabela 7 e demonstram que FS28-256-271 em um formato de mAb2 tem capacidade para se ligar à MSLN na superfície celular e reticular o anticorpo de modo que o sítio de ligação a CD137 possa se ligar e ativar CD137.
5.3.3 Sumário de FS28-256-271 de clone de MSLN otimizado por sequência e seu uso para acionar agonismo de membros de TNFRSF.
[0258] A Tabela 7 mostra os resultados dos ensaios de célula T descritos em 5.3.1 e 5.3.2 que demonstram a capacidade de Fabs anti-MSLN como FS28-256-271 em um formato de mAb2 para reticular e ativar diferentes TNFSFRs como OX40- ou CD137 para induzir agonismo em células T. Tabela 7: Ensaio de ativação de célula T com o uso de FS28- 256-271 como Fab de ligação à mesotelina em um formato de mAb2, e com o uso de células NCI-H226 para reticulação Clone EC50 (nM) Emáx (pg/ml IL-2) OX40 / FS28-256-271 0,11 6509 mAb² CD137 / FS28-256-271 0,096 4871 mAb² Sumário de mAbs mesotelina anti-humana de isolamento (Exemplos 1 a 5)
[0259] As estratégias de seleção de fago e a triagem de anticorpo têm o objetivo de isolar anticorpos MSLN anti- humana que se ligam à MSLN de superfície celular, levaram à identificação de um painel de anticorpos de ligação à antimesotelina específicos com uma faixa de afinidades, atividades de bloqueio de MUC16-MSLN, compartimentos de região de MSLN e características de ligação celular. Devido à triagem em cascata realizada, a maior parte dos Fabs de ligação à anti-MSLN, quando testados em um formato de mAb ou mAb2, se liga, de preferência, à MSLN de superfície celular. Exemplo 6: Seleção e caracterização de anticorpos MSLN anti-camundongo
6.1 Seleção de naïve de mAbs MSLN anti-camundongo
[0260] A identidade de aminoácido entre MSLN de camundongo e humana é baixa (60 %). Para possibilitar estudos de Prova de Conceito in vivo (PoC) em camundongos, os inventores apresentaram isolar mAbs MSLN anti-murino com propriedades similares aos mAbs MSLN anti-humano descritos nos Exemplos 1 a 5.
[0261] Seleções de fago, com o uso das bibliotecas de fagemídeos naïve sintéticos que exibem o domínio de Fab de linhas germinativas de IgG1 humana com aleatorização na CDR1, CDR2 e CDR3 (MSM Technologies) foram usadas para seleções com MSLN-His-Avi murino biotinilado (SEQ ID NO 171, consultar a seção 1.1) como descrito na seção 1.2. Quatro ciclos de seleção foram realizados com concentrações decrescentes de mMSLN-His-Avi biotinilado e de modo similar à seleção anti-MSLN humana, em que estratégias de mascaramento de epítopo foram realizados em uma campanha subsequente. Além disso, após um primeiro ciclo de uso de antígeno recombinante, as células HEK293-mMSLN foram geradas e usadas no ciclo 2, 3 e 4.
[0262] Resumidamente, a sequência de MSLN de murino foi subclonada no vector de pcDNA5/FRT/TO (Life technologies, V652020) e, então, co-transferida com o plasmídeo de expressão de Flp recombinase, pOG44 (Life Technologies, V600520) para o interior de linhagens celulares Flp-In TREx 293 (Life Technologies, R78007). As células foram cultivadas em DMEM que contêm 10 % de FBS, 100 µg/ml de Higromicina B (Melford Laboratories Ltd, Z2475) e 15 µg/ml de Blasticidina (Melford Laboratories Ltd, B1105) por 3-4 semanas até que as colônias de células estavelmente transformadas tenham se formado. Essas colônias foram amplificadas na presença de 1 µg/ml de Doxiciclina (Sigma Aldrich, D9891) e testadas para expressão de MSLN com o uso de anti-MSLN de camundongo (LS Bio, LS-C179484).
[0263] No total 47 mAbs individuais de populações enriquecidas foram triados por ligação a antígeno e 45 ligantes positivos únicos foram subclonados e expressos como mAbs solúveis em formato de LALA IgG1 como anteriormente descrito no Exemplo 1.3. mAbs foram caracterizados por ligação específica a mMSLN-His-Avi imobilizada por ELISA e classificados com base em afinidade a cerca de 50 ou 200 RU de mMSLN-His-Avi imobilizada em experimentos cinéticos com o uso de análise Biacore. Isso identificou um painel de mAbs, incluindo FS28m-194, FS28m- 201, FS28m-209, FS28m-216, FS28m-228, FS28m-261 e FS28m-265 com afinidades que estão situadas na faixa de 1 a 25 nM. Além disso, a ligação a regiões diferentes de MSLN foi testada como descrito na seção 2.1.3. Um mAb G1-AA/MOR6626 de transreatividade a camundongo gerado por clonagem das VH e VL do clone MOR6626 (Publicação de patente n° WO 2009/068204 A1) foi usado como um controle positivo. A maior parte dos clones, dentre os quais, FS28m-228 falhou em se ligar à MSLN que já estava ligada ao MOR6626, enquanto outros semelhantes ao FS28-194 ou ao FS28-026 mostraram ligação parcial ou completa, respectivamente. Desse modo, a ligação de clones a regiões diferentes (compartimentos) foi isolada. As regiões de ligação à anti- MSLN de MOR6626 foram usadas para estudos de PoC in vivo (Publicação de patente n° US 2017/0342169 A1). Com base nos dados obtidos, FS28m-228 pode ser ligar a uma região similar em MSLN como MOR6626.
6.2 Maturação de afinidade de mAbs MSLN anti-murino
[0264] As regiões de CDR3 de VH e VL de FS28m-228 foram otimizadas em paralelo em formato de scFv por aleatorização de cassetes de sobreposição de cinco aminoácidos com o uso de iniciadores de NNK como descrito no exemplo 3.1.1. Dois ciclos de seleções foram realizados com o uso de mMSLN-His- Avi biotinilado a 50 nM no ciclo 1 e mMSLN-His-Avi a 0,2 nM no ciclo 2. Para o segundo ciclo, uma pressão de seleção de dissociação também foi aplicada por adição de um excesso de 1000 vezes (200 nM) de mMSLN-His-Avi (não biotinilado) e incubando a mistura de antígeno/fago por 2,5 horas à temperatura ambiente. O scFv solúvel (concentração de ponto único) foi, então, testado para ligação à mMSLN-His-Avi com o uso de Octeto. Resumidamente, sensores de estreptavidina (ForteBio, 18-5019) foram incubados com mMSLN-His-Avi (10 µg/ml) por 5 min. A associação de scFv solúvel, diluído com tampão cinético 10x em uma concentração final de tampão 1x (ForteBio, 18-1092)à mMSLN foi analisada por 5 min, seguida por uma etapa de dissociação de 5 min. Em comparação com o scFv de FS28m-228 parental, cerca de 66 dos 85 clones testados mostraram ligação aprimorada. Nove clones foram levados adiante para expressão no formato de mAb2, combinando os braços de Fab com um Fcab que se liga ao CD137 murino, denominado FS22-063-AA, com o uso do mesmo método de clonagem e expressão como descrito (seção 3.1.2). O mAb2 resultante designado foram testados para suas afinidades de ligação à MSLN.
6.3 Afinidade de ligação de mAb2 MSLN anti-murino à MSLN de murino imobilizada e solúvel
[0265] Como os ligantes de MSLN anti-humana, as variantes maturadas por afinidade derivadas de FS28m-228 foram testadas para ligação à MSLN imobilizada e solúvel com o uso do Biacore. O procedimento para ligação à MSLN imobilizada foi similar ao método descrito na seção 2.1.4 com mMSLN-His-Avi imobilizado a 50 RU. Para determinar a afinidade com MSLN solúvel, o mAb2 foi capturado através de Fc anti-humano. Resumidamente, anticorpo de IgG anti-humana (Fc) a 25 µg/ml (GE Healthcare, Kit de Captura de Anticorpo Humano, BR100839) foi revestido em células de fluxo 1, 2, 3 e 4 de um chip CM5 de sensor Biacore (GE Healthcare, BR100530) alcançando uma resposta final de aproximadamente 750 RU. Os clones de mAb2, diluídos em tampão de HBS-EP (GE Healthcare, BR100188) a 50 nM, foram injetados individualmente nas células de fluxo 2, 3 e 4 a 30 µl/min para alcançar uma resposta de aproximadamente 100 RU. Os antígenos de mMSLN-His-Avi recombinante, diluídos em tampão de HBS-EP, foram injetados na célula de fluxo 1, 2, 3 ou 4 quando apropriado em uma faixa de concentração de 243 nM a 0,11 nM com diluições de 3 vezes por 5 minutos a 70 µl/min e, então, deixados para dissociar em tampão por 5 minutos. A regeneração foi obtida injetando-se 3 M cloreto de magnésio (GE Healthcare, Kit de Captura de Anticorpo Humano, BR100839) por 30 segundos em uma faixa de 30 µl/min.
[0266] Os dados cinéticos tanto das afinidades imobilizadas quanto afinidades em solução (Tabela 8) mostraram que, em comparação com o braço de Fab de FS28m- 228 parental, os clones maturados por afinidade mostraram ligação aprimorada ao antígeno de MSLN-His-Avi murino. Além disso, todos os clones mostraram cinéticas de ligação com uma afinidade com MSLN imobilizada que foi superior à MSLN solúvel, com razões variadas. Como os clones humanos descritos nas seções 4.1 e 5.1, considerou-se que esses clones teriam ligação mais forte à membrana ligada que a MSLN removida solúvel devido a interações de ligação ávida melhoradas. Assim, a maturação por afinidade de FS28m-228 levou a um painel de clones maturados por afinidade que tiveram afinidade aumentada com MSLN de murino e todos se ligaram mais fortemente à MSLN imobilizada que à MSLN solúvel. O clone FS28m-228-010 foi selecionado como o clone preferencial, pois teve a afinidade mais alta com MSLN de murino imobilizada e baixa afinidade com MSLN de murino em solução. Tabela 8 Afinidades com mesotelina humana imobilizada e em solução Clone (em Afinidade Afinidade Razão de KD em formato de para mMSLN- para solução/imobilizada mAb2 FS22- His-Avi mMSLN-His- para MSLN-His-Avi de 063AA) imobilizada Avi em murino KD (nM) solução KD (nM) FS28m-228 7,90 252 31,9 FS28m-228- 2,6 60,24 23,2 010
6.4 Sumário de mAbs de mesotelina anti-murino de isolamento
[0267] As estratégias de seleção de fago e a triagem de anticorpo resultaram na identificação de um painel de mesotelina anti-camundongo que se liga a clones com uma faixa de afinidades e que se ligam a regiões diferentes de mMSLN. Como os ligantes MSLN anti-humana, os clones mostraram características de ligação que favorecem a ligação a mMSLN imobilizada mais que mMSLN solúvel que torna as mesmas em moléculas adequadas para o estudo em estudos de PoC in vivo de murino.
6.5 Eficácia in vivo de mAb² contendo o mAb de MSLN anti- murino FS28m-228-010
[0268] Tendo mostrado que mAbs de anti-MLSN em isótipo de hIgG1 tiveram capacidade para elicitar atividade de ADCC, foi desejável demonstrar que os mAbs de anti-MLSN tiveram capacidade para acionar reticulação dependente de MLSN in vivo em um formato de mAb² de CD137.
[0269] Um modelo tumoral murino singênico que expressa MSLN de murino foi construído. Células de carcinoma de cólon CT26 (ATCC, CRL-2638) que expressam mesotelina de murino de comprimento total (SEQ ID NO: 171) foram produzidas por lipofecção (Lipofectamina 3000, Thermo Fisher Scientific, número de catálogo L3000008) com o uso do vetor de pcDNA3.1 (+) (Thermo Fisher Scientific, número de catálogo V79020). Seguindo o protocolo do fabricante, as células CT26 foram transfectadas com os vetores de pcDNA3.1 contendo o cDNA de MSLN de murino. Uma transfecção estável foi alcançada com o uso de geneticina como o antibiótico de seleção (a 600 µg/ml) em meios completos (RPMI, FBS a 10 %). A expressão de MSLN de murino nas células CT26 foi confirmada pela citometria de fluxo por uso do anticorpo de controle positivo MOR6626 (documento WO 2009/068204 A1). Especificamente, as células foram incubadas com o anticorpo de controle positivo por 1 hora e, então, um anticorpo de detecção de IgG anti-humana identificada de modo fluorescente (Stratech Scientific Ltd, n° de catálogo 109- 546-098-JIR) foi usado para detectar ligação celular. Populações clonais foram expandidas e analisadas subsequentemente para determinar os níveis de expressão relativos com o uso do mesmo procedimento citométrico de fluxo, após o qual um clone foi selecionado e denominado CT26.G10.
[0270] O crescimento tumoral de CT26.G10 foi confirmado in vivo. Camundongos fêmeas Balb/c (Charles River) com idade de 8-10 semanas receberam microchips e receberam um identificador exclusivo. Cada coorte teve 17 camundongos e cada animal recebeu 1 x 105 células injetadas subcutaneamente no flanco dorsal esquerdo em 100 µl de meio livre de soro. As medições de volume tumoral foram realizadas três vezes por semana com compassos para determinar o eixo geométrico mais longo e o eixo geométrico mais curto do tumor. A fórmula a seguir foi usada para calcular o volume tumoral: Volume = 22 em que L = eixo geométrico mais longo; S = eixo geométrico mais curto
[0271] O ensaio foi interrompido quando o volume tumoral atingiu o desfecho humano de acordo com a Lei de Animais do Reino Unido (Procedimentos Científicos) e a Diretiva de UE EU86/609. Os tecidos tumorais foram coletados no término do estudo, e a expressão de mesotelina ligada à membrana foi confirmada por coloração imuno-histoquímica em tecidos tumorais embebidos em parafina fixa por formalina (FFPE) como a seguir: 4 µm de seções de tecido de FFPE foram desparafinadas e o antígeno recuperado com o uso de um pH baixo de 6,1 a 97 °C (Dako PT Link) seguido por um bloco de peroxidase e bloco de proteína antes de incubação com um anticorpo antimesotelina primário (LifeSpan Biosciences, n° de catálogo LS-C407883) em uma concentração de 1 µg/ml. O anticorpo antimesotelina foi detectado com o uso de um reagente secundário de anti-coelho de HRP polimérica identificado e um desfecho cromogênico de DAB (3,3'- diaminobenzidina) (Dako EnVision+ System).
[0272] Para avaliar anticorpo FS28m-228-010, as seguintes moléculas ou combinações foram testadas in vivo: anticorpo FS28m-228-010 em isótipo de IgG1 humana com mutações LALA (G1-AA/FS28m-228-010), dois mAb2 CD137 “simulados” (FS22m-063-AA/HelD1.3 e FS22m-063-AA/4420), uma combinação do anticorpo FS28m-228-010 com um mAb2 CD137 simulado com mutações LALA (G1-AA/FS28m-228-010 + FS22m- 063-AA/HelD1.3), um anticorpo de controle de isótipo humano (G1-AA/HelD1.3), e, finalmente, um mAb² CD137/MSLN (FS22m- 063-AA/FS28m-228-010) com mutações LALA (SEQ ID NOs 196 e 197).
[0273] Os camundongos fêmeas Balb/c (Charles River) com 8-10 semanas de idade e pesando 20-25 g, cada, foram aclimatizados por uma semana antes do estudo começar. Todos os animais receberam microchips e um identificador único. Com a exceção de FS22m-063-AA/4420 (n=10 camundongos), cada coorte compreendeu 20 camundongos. A linhagem celular de carcinoma de cólon de CT26.G10 foi expandida e os bancos celulares gerados. Cada animal recebeu 1 x 105 células injetadas subcutaneamente no flanco esquerdo em meios livres de soro de 100 µl. Quaisquer camundongos que não tiveram tumores 12 dias após a inoculação de célula tumoral foram removidos do estudo.
[0274] Doses de 200 µg de cada anticorpo (~10 mg/kg) foram preparadas e injetadas intraperitonealmente (IP) em camundongos. Além disso, ambos os G1-AA/FS28m-228-010 + FS22m-063-AA/HelD1.3 foram, cada um, preparados a 200 µg por dose (~10 mg/kg) para grupo de combinações. Doses de 200 µl foram administradas aos camundongos nos dias 12, 14 e 16 (q2dx3), após a inoculação tumoral. As medições de volume tumoral foram feitas três vezes por semana com o uso de calibres e os camundongos foram monitorados de perto. O ponto final do estudo foi determinado por pontos finais humanos com base em volume tumoral e condição dos camundongos.
[0275] Como mostrado na Figura 3, o mAb2 FS22m-063- AA/FS28m-228-010 inibiu significativamente o crescimento tumoral em comparação com o controle de isótipo G1- AA/HelD1.3. A Tabela 9 mostra comparação de pares das taxas de crescimento tumoral para todos os grupos de tratamento ao longo do curso completo do estudo com o uso de análise de Modelo Misturado, comparando todos os grupos ao controle de isótipo G1-AA/HelD1.3.
[0276] Todos os animais que portam tumores com medição igual ou abaixo de 62,5 mm3 no fim do estudo foram contabilizados como animais de resposta completa (consultar Tabela 10). 35 % de animais tratados com mAb2 anti- CD137/MSLN responderam completamente ao tratamento no final de estudo, em comparação com 0 % no controle de isótipo G1- AA/HelD1.3, grupos de combinações de FS22m-063-AA/HelD1.3, FS22m-063-AA/4420, e FS22m-063-AA/HelD1.3 e G1-AA/FS28m- 228-010.
[0277] A análise de sobrevivência (Erro! Fonte de referência não encontrada. e Erro! Fonte de referência não encontrada.) mostrou que os mAb2 FS22m-063-AA/FS28m-228-010 induziram um benefício de sobrevivência significativo em comparação com o anticorpo G1-AA/HelD1.3, enquanto o G1- AA/FS28m-228-010, FS22m-063-AA/HelD1.3 e FS22m-063-AA/4420) não demonstraram uma vantagem de sobrevivência. Além disso, o mAb2 FS22m-063-AA/FS28m-228-010 resultou em um tempo de sobrevivência médio aprimorado de 42,5 dias em comparação com G1-AA/HelD1.3 (29 dias), FS22m-063-AA/HelD1.3 (30 dias), FS22m-063-AA/4420 (29 dias), G1-AA/FS28m-228-010 (30 dias) e combinação de FS22m-063-AA/HelD1.3 com G1-AA/FS28m- 228-010 (29 dias).
[0278] Esses dados sugerem que a reticulação do mAb2 através de MSLN tem a capacidade para acionar agonismo de CD137 no tumor; uma ação do anticorpo biespecífico que é superior ao alvejamento de CD137 e/ou MSLN por si só (e ainda em combinação), resultando em sobrevivência significativamente aprimorada em camundongos com tumor. O mAb por si só (G1-AA/FS28m-228-010) com mutação LALA não mostrou nenhuma atividade intrínseca nesse estudo. Sem desejar se ligar por teoria, espera-se que uma versão competente de efetor de anticorpo FS28m-228-010 (excluindo a mutação LALA) mostraria atividade de ADCC e eficácia antitumoral consistentes com os resultados in vitro observados na seção 5.2. Tabela 9: Resultados de comparação de pares do crescimento tumoral com o uso de análise de Modelo Misturado, comparando todos os grupos ao controle de isótipo G1- AA/HelD1.3.
Grupos Análise de Modelo Misturado G1-AA/HelD1.3 de 10 mg/kg (controle Valor Significância negativo) P G1-AA/FS28m-228-010 de 10 mg/kg 0,4367 NS FS22m-063-AA/HelD1.3 de 10 mg/kg 0,0017 *** FS22m-063-AA/4420 de 10 mg/kg 0,7067 NS G1-AA/FS28m-228-010 de 10 mg/kg + 0,2093 NS FS22m-063-AA/HelD1.3 de 10 mg/kg FS22m-063-AA/FS28m-228-010 de 0,0000 **** 10 mg/kg NS – não significante p≥0,05; **** - p-valor<0,0001; *** - p-valor 0,0001-0,001 Tabela 10: Número e porcentagem de camundongos livres de tumor (tumores ≤ 62 mm3) ao final do estudo no modelo tumoral singênico CT26.G10.
Grupos Camundongos livres de tumor no fim do estudo G1-AA/HelD1.3 de 10 mg/kg (controle 0/20 (0 %) negativo) G1-AA/FS28m-228-010 de 10 mg/kg 1/20 (5 %) FS22m-063-AA/HelD1.3 de 10 mg/kg 0/20 (0 %) FS22m-063-AA/4420 de 10 mg/kg 0/10 (0 %)
Grupos Camundongos livres de tumor no fim do estudo
G1-AA/FS28m-228-010 de 10 mg/kg + FS22m-063-AA/HelD1.3 de 0/20 (0 %) 10 mg/kg
FS22m-063-AA/FS28m-228-010 de 7/20 (35 %) 10 mg/kg
Tabela 11: Tempos de sobrevivência médios para animais tratados com cada composto, e resultados de análise estatística de pares (classificação de Log) em modelo tumoral singênico CT26.G10
Grupos Sobrevivência Classificação de log Média (Dias)
G1-AA/HelD1.3 de 10 29 Valor P Significância mg/kg
G1-AA/FS28m-228-010 30 0,993 NS de 10 mg/kg
FS22m-063-AA/HelD1.3 30 0,3952 NS de 10 mg/kg
FS22m-063-AA/4420 de 29 0,9645 NS 10 mg/kg
G1-AA/FS28m-228-010 29 0,4706 NS de 10 mg/kg + FS22m-063-
Grupos Sobrevivência Classificação de log Média (Dias) AA/HelD1.3 de 10 mg/kg FS22m-063-AA/FS28m- 42,5 <0,0001 **** 228-010 de 10 mg/kg NS – não significante p≥0,05; **** - p-valor<0,0001
6.6 Mecanismo de ação de um mAb2 CD137/MSLN anti-murino contendo o mAb MLSN anti-murino FS28m-228-010
[0279] Para entender adicionalmente a farmacologia da resposta antitumoral observada com FS22m-063-AA/FS28m-228- 010 contendo o mAb MLSN anti-murino FS28m-228-010, o mecanismo de ação de mAb2 CD137/MSLN em um modelo tumoral singênico positivo de MSLN foi investigado.
[0280] Os camundongos foram preparados como descrito no Exemplo 6.5, e inoculados com a linhagem celular de carcinoma de cólon de CT26.G10. Cada coorte consistiu em 20 camundongos. mAb2 FS22m-063-AA/FS28-228-010 (CD137/MSLN), controle de isotipo de IgG1 humana (G1-AA/4420) e um anti- anticorpo agonista CD137 (clone 3H3; G1/3H3; Rickert et al., 2016) também foi incluído a título de comparação. Todos os três anticorpos foram preparados a 134 µg por dose (aproximadamente 6,7 mg/kg em um camundongo de 20 g) em DPBS + 1 mM de arginina + 0,05 % de Tween 80 e injetados intraperitonealmente (IP) em camundongos. Cada camundongo recebeu os anticorpos por uma injeção intraperitoneal de 200 µl a uma dose fixa de 134 µg no dia 20 após a inoculação de tumor. As medições de volume tumoral foram realizadas três vezes por semana com o uso de compassos como descrito no Exemplo 6.5, e os camundongos foram monitorados de perto.
[0281] Seis camundongos por grupo passaram por necrópsia 24, 72, 144 e 192 horas após a dose no dia 20 após a inoculação de tumor. Os tecidos de baço, sangue e tumor foram tomados para análise de camundongos que portam tumor CT26.G10 tratados com FS22m-063-AA/FS28-228-010, G1- AA/4420, ou G1/3H3. Todas as amostras foram investigadas para abundância e proliferação de célula T por citometria de fluxo, visto que a ativação de célula T e os marcadores de proliferação são conhecidos por terem efeitos a jusantes de agonismo de CD137 (Fisher et al., 2012). Além disso, soro do sangue também foi coletado para detecção e quantificação de expressão de MSLN solúvel. Os tecidos de baço e tumor foram desagregados para suspensão de célula única por métodos mecânicos e enzimáticos padrão, e as hemácias foram lisadas uma vez em tampão de lise de hemácias (Miltenyi Biotec Ltd., 130-094-183). O sangue foi coletado por sangramento cardíaco terminal, e metade foi coletado em tubos que contêm EDTA para análise de célula única por citometria de fluxo e metade de sangue foi coletado em ativador de coagulação/tubos de soro para análise de MSLN solúvel. O sangue total coletado em tubos que contêm EDTA foi lisado três vezes em tampão de lise de hemácias (Miltenyi Biotec Ltd., 130-094-183) de acordo com as instruções do Fabricante. O sangue coletado em tubos de soro foi fracionado por centrifugação e o soro removido para análise de MSLN solúvel.
[0282] As células simples do baço, tumor e sangue foram, então, tratadas da mesma forma, e as células foram lavadas uma vez com PBS e as amostras colorizadas com corante de viabilidade fixável (eBioscience, 65-0865-14). As células foram, subsequentemente, colorizadas para marcadores de superfície celular com um painel de colorização de anticorpo mostrado na Tabela 12 (todos, menos os marcadores intracelulares Ki67 e FoxP3), na presença de bloco Fc (eBioscience, 16-0161-85 a 1:25) por 45 minutos a 4 °C. As células foram, então, fixadas e permeabilizadas com o kit de colorização FoxP3 eBioscience (eBioscience, 00-5523-00) de acordo com as instruções do fabricante. As células foram ressuspensas em 100 µl de tampão de permeabilização com anticorpos de marcadores intracelulares Ki67 e FoxP3 e incubadas durante a noite a 4 °C no escuro. Antes da aquisição em um citômetro de fluxo BD Fortessa, as células foram lavadas uma vez com tampão de permeabilização e ressuspensas em 120 µl de PBS que contêm 0,5 % de BSA. Os dados foram adquiridos com o uso de software BD FACS Diva, e analisados com FlowJo (V10), e Microsoft Excel. Os dados mostram a abundância e proliferação de células T CD8+ a 144 horas após a dosagem, como uma porcentagem da população parental. Tabela 12: Painel de Citometria de Fluxo Nº de Alvo Clone Fluoroforo Fabricante Catálogo CD45 30-F11 Alexa700 eBioscience 56-0451 145- CD3e PE-Cy7 eBioscience 25-0031-82 2C11
BD CD8 53-6,7 BUV737 564297 Bioscience CD4 RM4-5 BUV395 BD 740208
Nº de Alvo Clone Fluoroforo Fabricante Catálogo Bioscience PerCP- FoxP3 FJK-16s eBioscience 45-5773 Cy5.5 CD49b DX5 BV421 Biolegend 563063
BD CD103 M290 BV786 564322 Bioscience CD137 17B5 APC eBioscience 106110 CD69 H1.2F3 BV510 Biolegend 104505 29F.1A1 PD1 FITC Biolegend 135220 2 Ki67 SolA15 PE eBioscience 12-5698-82 Viabilidad N/A eFluor780 eBioscience 65-0865-14 e
[0283] Como mostrado na Tabela 13, um aumento na porcentagem de células T CD8+ no tumor foi observado em 144 horas após a dosagem com mAb2 G1/3H3 e FS22m-063-AA/FS28- 228-010, em comparação com o grupo de tratamento de controle (G1-AA/4420). A porcentagem média de células T CD8+ no tumor aumentou de 32,1 % (G1-AA/4420) a 56,1 % com G1/3H3 e 58,4 % com FS22m-063-AA/FS28m-228-010 a 144 horas após a dose.
[0284] Além disso, um aumento na abundância de células T CD8+ também foi observado no sangue e no baço, mas apenas com G1/3H3 em comparação com controle IgG1. No sangue a 144 horas após a dose, a porcentagem média de células T CD8+ aumentou de 22,6 % (G1-AA/4420) a 57,0 % (G1/3H3), porém esse aumento não foi observado com FS22m-063-AA/FS28m-228-
010 (25,8 %). De modo similar, no baço, a porcentagem média de células T CD8+ aumentou de 28,8 % (G1-AA/4420) a 38,0 % com G1/3H3, porém esse aumento não foi observado com FS22m- 063-AA/FS28m-228-010 (29 %).
[0285] Isso sugere que o mAb2 FS22m-063-AA/FS28m-228-010 aumenta células T CD8+ especialmente no tumor, em que MSLN é expresso, enquanto o anticorpo que alveja CD137, G1/3H3, também demonstra aumentos periféricos (sangue e baço) nas células T CD8+.
[0286] Para identificar a possibilidade de haver quaisquer diferenças na proliferação de células T CD8+ após a dosagem, o marcador de proliferação, Ki67, foi analisado em células T CD8+ no tumor, no sangue e no baço. Como mostrado na Tabela 14, uma alta proporção de células T CD8+ expressou Ki67+ no grupo de controle (expressão média de 75,1 %), sugerindo um alto nível de proliferação de células T CD8+ no tumor no modelo CT26.G10. Isso pode contribuir com as diferenças pouco claras em expressão de Ki67 em células T CD8+ entre grupos de dose no tumor.
[0287] Em comparação, um aumento evidente na expressão de Ki67+ em células T CD8+ no sangue e no baço foi observada a 144 horas após a dosagem com G1/3H3 em comparação com o controle IgG1. No sangue, embora os camundongos tratados com controle de isotipo mostrem uma expressão de Ki67+ média em células T CD8+ de 10,4 %, a expressão de Ki67 média em células T CD8+ após a dosagem com G1/3H3 é mostrada como 86,3 % a 144 horas após a dose. Em comparação, esse aumento não foi observado com FS22m- 063-AA/FS28m-228-010, em que a expressão de Ki67+ média em células T CD8+ foi observada a 13,1 % após a dosagem com mAb2 no sangue. De modo similar, no baço, expressão de Ki67+ média foi observada em 36,1 % de células T CD8+ após a dosagem com G1/3H3, em comparação com 8,1 % observados após a dosagem com controle de isotipo e 11,4 % observados com FS22m-063-AA/FS28m-228-010. Tabela 13: A porcentagem média de células T CD8+ de células CD3+ totais no tumor, sangue e baço a 144 horas após a dosagem com G1-AA/4420, G1/3H3 ou FS22m-063-AA/FS28m-228-
010. Os dados mostram porcentagem média de células T CD8+ de ± erro padrão de células T CD3+ totais da média. G1-AA/4420 G1/3H3 FS22m-063-AA/FS28m- 228-010 % de ± SEM % de ± SEM % de ± SEM Tumor 32,1 ± 5,8 56,1 ± 2,8 58,4 ± 5,0 Sangue 22,6 ± 0,6 57,0 ± 1,6 25,8 ± 0,6 Baço 28,8 ± 0,4 38,0 ± 0,8 29,0 ± 0,9 Tabela 14: A porcentagem média de Ki67 expresso em células T CD8+ no tumor, sangue e baço a 144 horas após a dosagem com G1-AA/4420, G1/3H3 ou FS22m-063-AA/FS28m-228-010. Os dados mostram porcentagem média de Ki67+ de ± erro padrão de células T CD8+ total da média. G1-AA/4420 G1/3H3 FS22m-063-AA/FS28m- 228-010 % de ± SEM % de ± SEM % de ± SEM Tumor 75,1 % de ± 85,1 % de 77,6 % de ± 5,0 2,9 ± 2,8 Sangue 10,4 % de ± 86,3 % de 13,1 ± 3,4 1,0 ± 0,7
G1-AA/4420 G1/3H3 FS22m-063-AA/FS28m- 228-010 % de ± SEM % de ± SEM % de ± SEM Baço 8,1 % de ± 36,1 ± 1,7 11,4 % de ± 1,4 0,3
[0288] Considerados em conjunto, esses dados mostram que os mAb² contendo o mAb MLSN anti-murino FS28m-228-010, FS22m-063-AA/FS28m-228-010 mediam um aumento específico de tumor em células T CD8+ citotóxicas no tumor. Embora isso também possa ser observado com G1/3H3, esse agonista alvejado por CD137 também promove um aumento periférico em células T CD8+ no sangue e no baço. Adicionalmente, essas células T CD8+ também mostram proliferação aumentada após dosagem com G1/3H3. Listagem de Sequências
[0289] A sequência de aminoácido de cadeia pesada do clone parental FS28-256 que mostra a sequência de CDR2 “principal” aplicável ao clone parental e os clones maturados por afinidade FS28-256-001, FS28-256-005, FS28- 256-012, FS28-256-014, FS28-256-018, FS28-256-021, FS28- 256-023, FS28-256-024, FS28-256-026 e FS28-256-027. Os “X”s duplamente sublinhados representam todas as substituições potenciais para remover uma possível glicosilação ligada por N. Clones resultantes contêm uma ou outra substituição, ou ambas SEQ ID NO: 1 AA de cadeia pesada (sem LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTETYMSWVRQAPGKGLEWVSXIXPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 2 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTETYMSWVRQAPGKGLEWVSXIXPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEA AGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG Sequência de aminoácido de cadeia leve principal aplicável aos clones FS28-256-001, FS28-256-021 e FS28-256-023. Os “X”s duplamente sublinhados representam todas as substituições potenciais para remover um possível sítio de desamidação. Clones resultantes podem conter uma ou outra substituição, ou ambas. SEQ ID NO: 3 Cadeia leve de
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHNQYPXXFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia pesada de mAb FS28-024 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 4 AA de cadeia pesada (sem LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALTFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK
SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 6 DNA de cadeia pesada (sem LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAC GGGCGCTGACGTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGC ACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTAC CGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGA ACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGC CTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTA TATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGA AGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGT CCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCC CGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATT GGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTAC AACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGG GAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTA TCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCTCCCTCTCGG GACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATTCTACCCATC GGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACAAGACGACTC CGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACCGTCGACAAG AGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAA
CCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 5 AA de Cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALTFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK
SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 7 DNA de Cadeia pesada (com LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAC GGGCGCTGACGTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGC ACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTAC CGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGA ACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGC CTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTA TATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGA AGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGT CCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCC CGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATT GGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTAC AACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGG GAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTA TCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCTCCCTCTCGG GACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATTCTACCCATC GGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACAAGACGACTC CGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACCGTCGACAAG AGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAA
CCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 8 AA de domínio variável
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH
YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALTFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 9 DNA de domínio variável
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAC
GGGCGCTGACGTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCGAGT SEQ ID NO: 10 CDR1 (AA) (IMGT) GFTLSYSS SEQ ID NO: 13 CDR1 (AA) (Kabat) YSSMS SEQ ID NO: 11 CDR2 (AA) (IMGT) ITPSTGYT SEQ ID NO: 14 CDR2 (AA) Kabat) FITPSTGYTHYADSVKG SEQ ID NO: 12 CDR3 (AA) (IMGT) ARRALTFDY SEQ ID NO: 15 CDR3 (AA) (Kabat) RALTFDY Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia leve de mAb FS28- 024 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 16 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQASSYPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 17 DNA de cadeia leve
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTCTTCTTATCCTCTCACGT TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATT TTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAA CAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCG GAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCC TCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGT
GACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT SEQ ID NO: 18 AA de domínio variável
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI
PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQASSYPLTFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 19 DNA de domínio variável
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTCTTCTTATCCTCTCACGT
TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA SEQ ID NO: 20 CDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY SEQ ID NO: 23 CDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA SEQ ID NO: 21 CDR2 (AA) (IMGT) GAS SEQ ID NO: 24 CDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT SEQ ID NO: 22 CDR3 (AA) (IMGT) QQASSYPLT SEQ ID NO: 22 CDR3 (AA) (Kabat) QQASSYPLT Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia pesada de mAb FS28-024-051 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 26 AA de cadeia pesada (sem LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALIFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK
SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 27 DNA de cadeia pesada (sem LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAC GGGCGCTGATTTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGC ACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTAC CGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGA ACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGC CTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTA TATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGA AGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGT CCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCC CGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATT GGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTAC AACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGG GAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTA TCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCTCCCTCTCGG GACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATTCTACCCATC GGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACAAGACGACTC CGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACCGTCGACAAG AGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAA
CCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 28 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALIFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK
SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 29 DNA de cadeia pesada (com LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAC GGGCGCTGATTTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGCTAGC ACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTAC CGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGA ACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGC CTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTA TATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGA AGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGT CCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCC CGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATT GGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTAC AACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGG GAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTA TCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCTCCCTCTCGG GACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATTCTACCCATC GGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACAAGACGACTC CGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACCGTCGACAAG AGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAA
CCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 30 AA de domínio variável
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH
YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALIFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 31 DNA de domínio variável
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAC
GGGCGCTGATTTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT SEQ ID NO: 10 CDR1 (AA) (IMGT) GFTLSYSS SEQ ID NO: 13 CDR1 (AA) (Kabat) YSSMS SEQ ID NO: 11 CDR2 (AA) (IMGT) ITPSTGYT SEQ ID NO: 14 CDR2 (AA) Kabat) FITPSTGYTHYADSVKG SEQ ID NO: 32 CDR3 (AA) (IMGT) ARRALIFDY SEQ ID NO: 33 CDR3 (AA) (Kabat) RALIFDY Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia leve de mAb FS28-024-051 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 16 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQASSYPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 17 DNA de cadeia leve
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTCTTCTTATCCTCTCACGT TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATT TTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAA CAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCG GAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCC TCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGT
GACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT SEQ ID NO: 18 AA de domínio variável
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI
PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQASSYPLTFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 19 DNA de domínio variável
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTCTTCTTATCCTCTCACGT
TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA SEQ ID NO: 20 CDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY SEQ ID NO: 23 CDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA SEQ ID NO: 21 CDR2 (AA) (IMGT) GAS SEQ ID NO: 24 CDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT SEQ ID NO: 22 CDR3 (AA) (IMGT) QQASSYPLT SEQ ID NO: 22 CDR3 (AA) (Kabat) QQASSYPLT Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia pesada de mAb FS28-024-052 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs
SEQ ID NO: 35 AA de cadeia pesada (sem LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALLFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK
SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 36 DNA de cadeia pesada (sem LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAC GGGCGCTGCTTTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGTCGGCTAGC ACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTAC CGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGA ACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGC CTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTA TATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGA AGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGT CCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCC CGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATT GGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTAC AACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGG GAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTA TCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCTCCCTCTCGG GACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATTCTACCCATC GGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACAAGACGACTC CGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACCGTCGACAAG AGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAA
CCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 37 AA de Cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALLFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK
SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 38 DNA de cadeia pesada (com LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAC GGGCGCTGCTTTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGTCGGCTAGC ACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTAC CGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGA ACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGC CTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTA TATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGA AGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGT CCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCC CGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATT GGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTAC AACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGG GAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTA TCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCTCCCTCTCGG GACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATTCTACCCATC GGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACAAGACGACTC CGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACCGTCGACAAG AGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAA
CCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 39 AA de domínio variável
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH
YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALLFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 40 DNA de domínio variável
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAC
GGGCGCTGCTTTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGTCG SEQ ID NO: 10 CDR1 (AA) (IMGT) GFTLSYSS SEQ ID NO: 13 CDR1 (AA) (Kabat) YSSMS SEQ ID NO: 11 CDR2 (AA) (IMGT) ITPSTGYT SEQ ID NO: 14 CDR2 (AA) Kabat) FITPSTGYTHYADSVKG SEQ ID NO: 41 CDR3 (AA) (IMGT) ARRALLFDY SEQ ID NO: 42 CDR3 (AA) (Kabat) RALLFDY Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia leve de mAb FS28-024-052 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 16 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQASSYPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 17 DNA de cadeia leve
AAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCACT CTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAAA ACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATTC CAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCTG GAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTCTTCTTATCCTCTCACGTT CGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATTT TTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAAC AACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCGG AAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCCT CGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGTG
ACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT SEQ ID NO: 18 AA de domínio variável
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI
PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQASSYPLTFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 19 DNA de domínio variável
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTCTTCTTATCCTCTCACGT
TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA SEQ ID NO: 20 CDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY SEQ ID NO: 23 CDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA SEQ ID NO: 21 CDR2 (AA) (IMGT) GAS SEQ ID NO: 24 CDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT SEQ ID NO: 22 CDR3 (AA) (IMGT) QQASSYPLT SEQ ID NO: 22 CDR3 (AA) (Kabat) QQASSYPLT Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia pesada de mAb FS28-024-053 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 45 AA de cadeia pesada (sem LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALVFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK
SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 46 DNA de cadeia pesada (sem LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAC GGGCGCTGGTGTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGTCGGCTAGC ACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTAC CGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGA ACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGC CTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTA TATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGA AGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTGCTGGGTGGT CCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCC CGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATT GGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTAC AACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGG GAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTA TCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCTCCCTCTCGG GACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATTCTACCCATC GGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACAAGACGACTC CGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACCGTCGACAAG AGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAA
CCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 47 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALVFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK
SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 48 DNA de cadeia pesada (com LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAC GGGCGCTGGTGTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGTCGGCTAGC ACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATCAGGGGGTAC CGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAGTGTCCTGGA ACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAGTCCTCTGGC CTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTA TATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGTCGAGCCGA AGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCTGCCGGTGGT CCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTCACGGACCCC CGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGAAATTCAATT GGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAAGAACAGTAC AACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTGGCTGAACGG GAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTGAGAAAACTA TCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCTCCCTCTCGG GACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATTCTACCCATC GGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACAAGACGACTC CGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACCGTCGACAAG AGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGCGCTGCACAA
CCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 49 AA de domínio variável
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH
YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALVFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 50 DNA de domínio variável
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCCTCAGTTATTCTTCTATGTCATGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCTTTATTACTCCGTCTACTGGCTATACCCAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAC
GGGCGCTGGTGTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGTCG SEQ ID NO: 10 CDR1 (AA) (IMGT) GFTLSYSS SEQ ID NO: 13 CDR1 (AA) (Kabat) YSSMS SEQ ID NO: 11 CDR2 (AA) (IMGT) ITPSTGYT SEQ ID NO: 14 CDR2 (AA) Kabat) FITPSTGYTHYADSVKG SEQ ID NO: 51 CDR3 (AA) (IMGT) ARRALVFDY SEQ ID NO: 52 CDR3 (AA) (Kabat) RALVFDY Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia leve de mAb FS28-024-053 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 16 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQASSYPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 17 DNA de cadeia leve
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTCTTCTTATCCTCTCACGT TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATT TTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAA CAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCG GAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCC TCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGT
GACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT SEQ ID NO: 18 AA de domínio variável
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI
PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQASSYPLTFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 19 DNA de domínio variável
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTCTTCTTATCCTCTCACGT
TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA SEQ ID NO: 20 CDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY SEQ ID NO: 23 CDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA SEQ ID NO: 21 CDR2 (AA) (IMGT) GAS SEQ ID NO: 24 CDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT SEQ ID NO: 22 CDR3 (AA) (IMGT) QQASSYPLT SEQ ID NO: 22 CDR3 (AA) (Kabat) QQASSYPLT Sequências de aminoácido da cadeia pesada ou leve de mAb FS28-024-060 (com LALA) SEQ ID NO: 55 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALWFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK
SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 16 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQASSYPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequências de aminoácido da cadeia pesada ou leve de mAb FS28-026 (com LALA) SEQ ID NO: 58 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMTWVRQAPGKGLEWVSSITPYYSKTD YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNWYRFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK
SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 59 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYSSYPITFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequências de aminoácido da cadeia pesada ou leve de mAb FS28-091 (com LALA) SEQ ID NO: 60 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTNYAMSWVRQAPGKGLEWVSSIKPYDGNTY YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNRWVFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK
SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO 61 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYSSSPFTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequências de aminoácido da cadeia pesada e leve de mAb FS28-185(com LALA) SEQ ID NO: 62 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTTSAMSWVRQAPGKGLEWVSRINPYEGETN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGWSIATYYKSAMDYWGQGTL VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP AVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCP APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY
SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 195 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSSYSAPVTFGQGTKVEIKRTVAAPSVF IFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSL
SSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia pesada de mAb FS28-256 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 65 AA de cadeia pesada (sem LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTNTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 66 DNA de cadeia pesada (sem LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTAACACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTG CTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC
GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 67 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTNTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEA AGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 68 DNA de cadeia pesada (com LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTAACACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCT GCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC
GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 69 AA de domínio variável
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTNTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDYWGQGTLVTVS
S SEQ ID NO: 70 DNA de domínio variável
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTAACACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCG
AGT SEQ ID NO: 71 CDR1 (AA) (IMGT) GFTFTNTY SEQ ID NO: 72 CDR1 (AA) (Kabat) NTYMS SEQ ID NO: 73 CDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT SEQ ID NO: 74 CDR2 (AA) Kabat) NISPTYSTTNYADSVKG SEQ ID NO: 75 CDR3 (AA) (IMGT) ARYNSYQGGLDY SEQ ID NO: 76 CDR3 (AA) (Kabat) YNSYQGGLDY
Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia leve de mAb FS28-256 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 77 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSYYYPITFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 78 DNA de cadeia leve
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTATTATTATCCTATCACGT TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATT TTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAA CAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCG GAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCC TCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGT
GACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT SEQ ID NO: 79 AA de domínio variável
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI
PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSYYYPITFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 80 DNA de domínio variável
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTATTATTATCCTATCACGT TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
SEQ ID NO: 20 CDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY SEQ ID NO: 23 CDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA SEQ ID NO: 21 CDR2 (AA) (IMGT) GAS SEQ ID NO: 24 CDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT SEQ ID NO: 25 CDR3 (AA) (IMGT) QQSYYYPIT SEQ ID NO: 25 CDR3 (AA) (Kabat) QQSYYYPIT Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia pesada de mAb FS28-256-001 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 81 AA de cadeia pesada (sem LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTETYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 82 DNA de cadeia pesada (sem LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTG CTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC
GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 89 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTETYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEA AGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 84 DNA de cadeia pesada (com LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCT GCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC
GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 63 AA de domínio variável
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTETYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDYWGQGTLVTVS
S SEQ ID NO: 64 DNA de domínio variável
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCG
AGT SEQ ID NO: 85 CDR1 (AA) (IMGT) GFTFTETY SEQ ID NO: 86 CDR1 (AA) (Kabat) ETYMS SEQ ID NO: 73 CDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT
SEQ ID NO: 74 CDR2 (AA) Kabat) NISPTYSTTNYADSVKG SEQ ID NO: 75 CDR3 (AA) (IMGT) ARYNSYQGGLDY SEQ ID NO: 76 CDR3 (AA) (Kabat) YNSYQGGLDY Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia leve de mAb FS28-256-001 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 83 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHNQYPNTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 92 DNA de cadeia leve
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAACATAATCAGTATCCGAATACGT TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTAGCAGCTCCTTCCGTGTTCATC TTTCCGCCCAGTGATGAGCAGCTGAAGTCAGGTACTGCTTCCGTGGTTTGCCTGCTCAA CAACTTTTACCCCAGAGAAGCCAAAGTCCAGTGGAAAGTGGACAATGCGTTGCAAAGCG GGAACTCTCAGGAATCCGTCACAGAGCAGGACTCTAAGGACTCCACCTATAGCCTCTCT AGTACGCTGACACTGAGCAAAGCCGATTACGAGAAGCACAAGGTGTATGCCTGTGAGGT
TACCCATCAAGGCCTTAGCTCACCAGTGACCAAGAGCTTCAATAGGGGAGAATGC SEQ ID NO: 93 AA de domínio variável
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI
PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHNQYPNTFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 94 DNA de domínio variável
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAACATAATCAGTATCCGAATACGT
TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA SEQ ID NO: 20 CDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY SEQ ID NO: 23 CDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA SEQ ID NO: 21 CDR2 (AA) (IMGT) GAS SEQ ID NO: 24 CDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT SEQ ID NO: 34 CDR3 (AA) (IMGT) QQHNQYPNT SEQ ID NO: 34 CDR3 (AA) (Kabat) QQHNQYPNT Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia pesada de mAb FS28-256-005 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 87 AA de cadeia pesada (sem LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTETYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 88 DNA de cadeia pesada (sem LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTG CTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC
GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 89 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTETYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEA AGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 84 DNA de cadeia pesada (com LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCT GCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC
GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 63 AA de domínio variável
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTETYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNSYQGGLDYWGQGTLVTVS
S SEQ ID NO: 64 DNA de domínio variável
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACTCTTACCAGGGTGGCTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCTTGGTCACCGTCTCG AGT
SEQ ID NO: 85 CDR1 (AA) (IMGT) GFTFTETY SEQ ID NO: 86 CDR1 (AA) (Kabat) ETYMS SEQ ID NO: 73 CDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT SEQ ID NO: 74 CDR2 (AA) Kabat) NISPTYSTTNYADSVKG SEQ ID NO: 75 CDR3 (AA) (IMGT) ARYNSYQGGLDY SEQ ID NO: 76 CDR3 (AA) (Kabat) YNSYQGGLDY Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia leve de mAb FS28-256-005 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 90 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQALGYPHTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 91 DNA de cadeia leve
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTTGGGTTATCCTCATACGT TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTAGCAGCTCCTTCCGTGTTCATC TTTCCGCCCAGTGATGAGCAGCTGAAGTCAGGTACTGCTTCCGTGGTTTGCCTGCTCAA CAACTTTTACCCCAGAGAAGCCAAAGTCCAGTGGAAAGTGGACAATGCGTTGCAAAGCG GGAACTCTCAGGAATCCGTCACAGAGCAGGACTCTAAGGACTCCACCTATAGCCTCTCT AGTACGCTGACACTGAGCAAAGCCGATTACGAGAAGCACAAGGTGTATGCCTGTGAGGT
TACCCATCAAGGCCTTAGCTCACCAGTGACCAAGAGCTTCAATAGGGGAGAATGC SEQ ID NO: 53 AA de domínio variável
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI
PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQALGYPHTFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 54 DNA de domínio variável
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTTGGGTTATCCTCATACGT
TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA SEQ ID NO: 20 CDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY SEQ ID NO: 23 CDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA SEQ ID NO: 21 CDR2 (AA) (IMGT) GAS SEQ ID NO: 24 CDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT SEQ ID NO: 43 CDR3 (AA) (IMGT) QQALGYPHT SEQ ID NO: 43 CDR3 (AA) (Kabat) QQALGYPHT Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia pesada de mAb FS28-256-012 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 105 AA de cadeia pesada (sem LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 106 DNA de cadeia pesada (sem LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTG CTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC
GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 107 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEA AGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 108 DNA de cadeia pesada (com LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCT GCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC
GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 109 AA de domínio variável
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVS
S SEQ ID NO: 110 DNA de domínio variável
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG
AGT SEQ ID NO: 98 CDR1 (AA) (IMGT) GFTFTHTY SEQ ID NO: 97 CDR1 (AA) (Kabat) HTYMS SEQ ID NO: 73 CDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT SEQ ID NO: 74 CDR2 (AA) Kabat) NISPTYSTTNYADSVKG SEQ ID NO: 99 CDR3 (AA) (IMGT) ARYNAYHAALDY SEQ ID NO: 100 CDR3 (AA) (Kabat) YNAYHAALDY Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia leve de mAb FS28-256-012 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 77 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSYYYPITFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 78 DNA de cadeia leve
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTATTATTATCCTATCACGT TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATT TTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAA CAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCG GAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCC TCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGT
GACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT SEQ ID NO: 79 AA de domínio variável
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI
PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSYYYPITFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 80 DNA de domínio variável
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTATTATTATCCTATCACGT
TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA SEQ ID NO: 20 CDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY SEQ ID NO: 23 CDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA SEQ ID NO: 21 CDR2 (AA) (IMGT) GAS SEQ ID NO: 24 CDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT SEQ ID NO: 25 CDR3 (AA) (IMGT) QQSYYYPIT SEQ ID NO: 25 CDR3 (AA) (Kabat) QQSYYYPIT Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia pesada de mAb FS28-256-014 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 117 AA de cadeia pesada (sem LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYAAGLDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 118 DNA de cadeia pesada (sem LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCGTATGCGGCGGGTCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTG CTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC
GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 119 AA de Cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYAAGLDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEA AGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
SEQ ID NO: 120 DNA de Cadeia pesada (com LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCGTATGCGGCGGGTCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCT GCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC
GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 115 AA de domínio variável
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYAAGLDYWGQGTLVTVS
S SEQ ID NO: 116 DNA de domínio variável
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTGATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCGTATGCGGCGGGTCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG
AGT SEQ ID NO: 111 CDR1 (AA) (IMGT) GFTFTDTY SEQ ID NO: 112 CDR1 (AA) (Kabat) DTYMS SEQ ID NO: 73 CDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT SEQ ID NO: 74 CDR2 (AA) Kabat) NISPTYSTTNYADSVKG SEQ ID NO: 113 CDR3 (AA) (IMGT) ARYNAYAAGLDY SEQ ID NO: 114 CDR3 (AA) (Kabat) YNAYAAGLDY Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia leve de mAb FS28-256-014 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 77 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSYYYPITFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 78 DNA de cadeia leve
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTATTATTATCCTATCACGT TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATT TTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAA CAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCG GAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCC TCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGT
GACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT SEQ ID NO: 79 AA de domínio variável
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI
PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSYYYPITFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 80 DNA de domínio variável
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTATTATTATCCTATCACGT
TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA SEQ ID NO: 20 CDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY SEQ ID NO: 23 CDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA SEQ ID NO: 21 CDR2 (AA) (IMGT) GAS SEQ ID NO: 24 CDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT SEQ ID NO: 25 CDR3 (AA) (IMGT) QQSYYYPIT SEQ ID NO: 25 CDR3 (AA) (Kabat) QQSYYYPIT Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia pesada de mAb FS28-256-018 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 123 AA de cadeia pesada (sem LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
SEQ ID NO: 124 DNA de cadeia pesada (sem LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCTTATCAGATTGGGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTG CTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC
GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 125 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEA AGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 126 DNA de cadeia pesada (com LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCTTATCAGATTGGGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCT GCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC
GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 121 AA de domínio variável
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDYWGQGTLVTVS
S SEQ ID NO: 122 DNA de domínio variável
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCTTATCAGATTGGGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG
AGT SEQ ID NO: 101 CDR1 (AA) (IMGT) GFTFTQTY SEQ ID NO: 102 CDR1 (AA) (Kabat) QTYMS SEQ ID NO: 73 CDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT SEQ ID NO: 74 CDR2 (AA) Kabat) NISPTYSTTNYADSVKG SEQ ID NO: 103 CDR3 (AA) (IMGT) ARYNAYQIGLDY SEQ ID NO: 104 CDR3 (AA) (Kabat) YNAYQIGLDY Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia leve de mAb FS28-256-018 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 77 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSYYYPITFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 78 DNA de cadeia leve
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTATTATTATCCTATCACGT TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATT TTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAA CAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCG GAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCC TCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGT
GACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT SEQ ID NO: 79 AA de domínio variável
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI
PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSYYYPITFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 80 DNA de domínio variável
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAATCTTATTATTATCCTATCACGT
TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA SEQ ID NO: 20 CDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY SEQ ID NO: 23 CDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA SEQ ID NO: 21 CDR2 (AA) (IMGT) GAS SEQ ID NO: 24 CDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT SEQ ID NO: 25 CDR3 (AA) (IMGT) QQSYYYPIT SEQ ID NO: 25 CDR3 (AA) (Kabat) QQSYYYPIT Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia pesada de mAb FS28-256-021 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 105 AA de cadeia pesada (sem LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 106 DNA de cadeia pesada (sem LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTG CTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC
GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 107 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEA AGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 108 DNA de cadeia pesada (com LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCT GCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA
SEQ ID NO: 109 AA de domínio variável
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVS
S SEQ ID NO: 110 DNA de domínio variável
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG
AGT SEQ ID NO: 98 CDR1 (AA) (IMGT) GFTFTHTY SEQ ID NO: 97 CDR1 (AA) (Kabat) HTYMS SEQ ID NO: 73 CDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT SEQ ID NO: 74 CDR2 (AA) Kabat) NISPTYSTTNYADSVKG SEQ ID NO: 99 CDR3 (AA) (IMGT) ARYNAYHAALDY SEQ ID NO: 100 CDR3 (AA) (Kabat) YNAYHAALDY Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia leve de mAb FS28-256-021 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 83 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHNQYPNTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 92 DNA de cadeia leve
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAACATAATCAGTATCCGAATACGT TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTAGCAGCTCCTTCCGTGTTCATC TTTCCGCCCAGTGATGAGCAGCTGAAGTCAGGTACTGCTTCCGTGGTTTGCCTGCTCAA CAACTTTTACCCCAGAGAAGCCAAAGTCCAGTGGAAAGTGGACAATGCGTTGCAAAGCG GGAACTCTCAGGAATCCGTCACAGAGCAGGACTCTAAGGACTCCACCTATAGCCTCTCT AGTACGCTGACACTGAGCAAAGCCGATTACGAGAAGCACAAGGTGTATGCCTGTGAGGT
TACCCATCAAGGCCTTAGCTCACCAGTGACCAAGAGCTTCAATAGGGGAGAATGC SEQ ID NO: 93 AA de domínio variável
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI
PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHNQYPNTFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 94 DNA de domínio variável
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAACATAATCAGTATCCGAATACGT
TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA SEQ ID NO: 20 CDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY SEQ ID NO: 23 CDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA SEQ ID NO: 21 CDR2 (AA) (IMGT) GAS SEQ ID NO: 24 CDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT SEQ ID NO: 34 CDR3 (AA) (IMGT) QQHNQYPNT SEQ ID NO: 34 CDR3 (AA) (Kabat) QQHNQYPNT Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia pesada de mAb FS28-256-023 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 123 AA de cadeia pesada (sem LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 124 DNA de cadeia pesada (sem LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCTTATCAGATTGGGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTG CTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA
SEQ ID NO: 125 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEA AGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 126 DNA de cadeia pesada (com LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCTTATCAGATTGGGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCT GCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC
GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 121 AA de domínio variável
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDYWGQGTLVTVS
S SEQ ID NO: 122 DNA de domínio variável
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCTTATCAGATTGGGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG
AGT SEQ ID NO: 101 CDR1 (AA) (IMGT) GFTFTQTY SEQ ID NO: 102 CDR1 (AA) (Kabat) QTYMS SEQ ID NO: 73 CDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT SEQ ID NO: 74 CDR2 (AA) Kabat) NISPTYSTTNYADSVKG SEQ ID NO: 103 CDR3 (AA) (IMGT) ARYNAYQIGLDY SEQ ID NO: 104 CDR3 (AA) (Kabat) YNAYQIGLDY Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia pesada de mAb FS28-256-026 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 123 AA de cadeia pesada (sem LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 124 DNA de cadeia pesada (sem LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCTTATCAGATTGGGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTG CTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC
GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 125 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEA AGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 126 DNA de cadeia pesada (com LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCTTATCAGATTGGGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCT GCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA
SEQ ID NO: 121 AA de domínio variável
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTQTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYQIGLDYWGQGTLVTVS
S SEQ ID NO: 122 DNA de domínio variável
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCAGACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAGCAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCTTATCAGATTGGGTTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG
AGT SEQ ID NO: 101 CDR1 (AA) (IMGT) GFTFTQTY SEQ ID NO: 102 CDR1 (AA) (Kabat) QTYMS SEQ ID NO: 73 CDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT SEQ ID NO: 74 CDR2 (AA) Kabat) NISPTYSTTNYADSVKG SEQ ID NO: 103 CDR3 (AA) (IMGT) ARYNAYQIGLDY SEQ ID NO: 104 CDR3 (AA) (Kabat) YNAYQIGLDY Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia leve de mAb FS28-256-023 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 83 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHNQYPNTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 92 DNA de cadeia leve
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAACATAATCAGTATCCGAATACGT TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTAGCAGCTCCTTCCGTGTTCATC TTTCCGCCCAGTGATGAGCAGCTGAAGTCAGGTACTGCTTCCGTGGTTTGCCTGCTCAA CAACTTTTACCCCAGAGAAGCCAAAGTCCAGTGGAAAGTGGACAATGCGTTGCAAAGCG GGAACTCTCAGGAATCCGTCACAGAGCAGGACTCTAAGGACTCCACCTATAGCCTCTCT AGTACGCTGACACTGAGCAAAGCCGATTACGAGAAGCACAAGGTGTATGCCTGTGAGGT
TACCCATCAAGGCCTTAGCTCACCAGTGACCAAGAGCTTCAATAGGGGAGAATGC SEQ ID NO: 93 AA de domínio variável
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI
PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQHNQYPNTFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 94 DNA de domínio variável
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAACATAATCAGTATCCGAATACGT
TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA SEQ ID NO: 20 CDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY SEQ ID NO: 23 CDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA SEQ ID NO: 21 CDR2 (AA) (IMGT) GAS SEQ ID NO: 24 CDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT SEQ ID NO: 34 CDR3 (AA) (IMGT) QQHNQYPNT SEQ ID NO: 34 CDR3 (AA) (Kabat) QQHNQYPNT Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia pesada de mAb FS28-256-024 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 105 AA de cadeia pesada (sem LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 106 DNA de cadeia pesada (sem LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTG CTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA
SEQ ID NO: 107 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEA AGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 108 DNA de cadeia pesada (com LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCT GCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC
GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 109 AA de domínio variável
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVS
S SEQ ID NO: 110 DNA de domínio variável
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG
AGT SEQ ID NO: 98 CDR1 (AA) (IMGT) GFTFTHTY SEQ ID NO: 97 CDR1 (AA) (Kabat) HTYMS SEQ ID NO: 73 CDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT SEQ ID NO: 74 CDR2 (AA) Kabat) NISPTYSTTNYADSVKG SEQ ID NO: 99 CDR3 (AA) (IMGT) ARYNAYHAALDY SEQ ID NO: 100 CDR3 (AA) (Kabat) YNAYHAALDY Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia leve de mAb FS28-256-024 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 90 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQALGYPHTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 91 DNA de cadeia leve
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTTGGGTTATCCTCATACGT TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTAGCAGCTCCTTCCGTGTTCATC TTTCCGCCCAGTGATGAGCAGCTGAAGTCAGGTACTGCTTCCGTGGTTTGCCTGCTCAA CAACTTTTACCCCAGAGAAGCCAAAGTCCAGTGGAAAGTGGACAATGCGTTGCAAAGCG GGAACTCTCAGGAATCCGTCACAGAGCAGGACTCTAAGGACTCCACCTATAGCCTCTCT AGTACGCTGACACTGAGCAAAGCCGATTACGAGAAGCACAAGGTGTATGCCTGTGAGGT
TACCCATCAAGGCCTTAGCTCACCAGTGACCAAGAGCTTCAATAGGGGAGAATGC SEQ ID NO: 53 AA de domínio variável
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI
PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQALGYPHTFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 54 DNA de domínio variável
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTTGGGTTATCCTCATACGT
TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA SEQ ID NO: 20 CDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY SEQ ID NO: 23 CDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA SEQ ID NO: 21 CDR2 (AA) (IMGT) GAS SEQ ID NO: 24 CDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT SEQ ID NO: 43 CDR3 (AA) (IMGT) QQALGYPHT SEQ ID NO: 43 CDR3 (AA) (Kabat) QQALGYPHT Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia leve de mAb FS28-256-026 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs
SEQ ID NO: 90 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQALGYPHTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 91 DNA de cadeia leve
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTTGGGTTATCCTCATACGT TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTAGCAGCTCCTTCCGTGTTCATC TTTCCGCCCAGTGATGAGCAGCTGAAGTCAGGTACTGCTTCCGTGGTTTGCCTGCTCAA CAACTTTTACCCCAGAGAAGCCAAAGTCCAGTGGAAAGTGGACAATGCGTTGCAAAGCG GGAACTCTCAGGAATCCGTCACAGAGCAGGACTCTAAGGACTCCACCTATAGCCTCTCT AGTACGCTGACACTGAGCAAAGCCGATTACGAGAAGCACAAGGTGTATGCCTGTGAGGT
TACCCATCAAGGCCTTAGCTCACCAGTGACCAAGAGCTTCAATAGGGGAGAATGC SEQ ID NO: 53 AA de domínio variável
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI
PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQALGYPHTFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 54 DNA de domínio variável
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAGCTTTGGGTTATCCTCATACGT
TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA SEQ ID NO: 20 CDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY SEQ ID NO: 23 CDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA SEQ ID NO: 21 CDR2 (AA) (IMGT) GAS
SEQ ID NO: 24 CDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT SEQ ID NO: 43 CDR3 (AA) (IMGT) QQALGYPHT SEQ ID NO: 43 CDR3 (AA) (Kabat) QQALGYPHT Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia pesada de mAb FS28-256-027 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 105 AA de cadeia pesada (sem LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 106 DNA de cadeia pesada (sem LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTG CTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC
GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 107 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEA AGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 108 DNA de cadeia pesada (com LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCT GCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGACAGCCTCGAGAGCCTCAAGTGTACACCCTGCCT CCCTCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAAGTCTCCCTGACCTGTCTGGTCAAGGGATT CTACCCATCGGATATCGCCGTGGAATGGGAAAGCAACGGACAGCCCGAGAACAACTACA AGACGACTCCGCCCGTGCTGGATTCCGACGGGAGCTTCTTCTTGTACTCCAAGCTGACC GTCGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGC
GCTGCACAACCACTACACTCAGAAGAGCTTGTCCCTGTCGCCCGGA SEQ ID NO: 109 AA de domínio variável
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSNISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVS
S SEQ ID NO: 110 DNA de domínio variável
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCAATATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG
AGT SEQ ID NO: 98 CDR1 (AA) (IMGT) GFTFTHTY SEQ ID NO: 97 CDR1 (AA) (Kabat) HTYMS SEQ ID NO: 73 CDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT SEQ ID NO: 74 CDR2 (AA) Kabat) NISPTYSTTNYADSVKG SEQ ID NO: 99 CDR3 (AA) (IMGT) ARYNAYHAALDY SEQ ID NO: 100 CDR3 (AA) (Kabat) YNAYHAALDY
Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia leve de mAb FS28-256-027 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 95 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQTVPYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 96 DNA de cadeia leve
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAACTGTGCCGTATCCGTATACGT TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATT TTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAA CAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCG GAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCC TCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGT
GACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT SEQ ID NO: 56 AA de domínio variável
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI
PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQTVPYPYTFGQGTKVEIK SEQ ID NO: 57 DNA de domínio variável
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAACTGTGCCGTATCCGTATACGT TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
SEQ ID NO: 20 CDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY SEQ ID NO: 23 CDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA SEQ ID NO: 21 CDR2 (AA) (IMGT) GAS SEQ ID NO: 24 CDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT SEQ ID NO: 44 CDR3 (AA) (IMGT) QQTVPYPYT SEQ ID NO: 44 CDR3 (AA) (Kabat) QQTVPYPYT SEQ ID NO: 175 pré-proteína de MSLN humana cDNAAAGCTTGAATTCGCCGCCACCATGGCCCTGCCTACCGCTAGGCCTCTGCTCGGAT
CCTGCGGCACACCTGCCCTGGGAAGCCTCCTGTTCCTGCTGTTCTCCCTGGGCTGGGTG CAGCCCTCCAGAACACTGGCCGGCGAAACAGGACAAGAGGCTGCCCCTCTCGATGGCGT GCTCGCTAACCCCCCCAACATCAGCTCCCTGTCCCCTAGGCAGCTCCTGGGCTTTCCCT GTGCCGAGGTCAGCGGCCTCTCCACCGAGAGGGTGAGGGAGCTGGCTGTGGCCCTGGCT CAGAAGAACGTGAAACTGAGCACCGAGCAACTCAGGTGCCTGGCTCATAGGCTGTCCGA GCCCCCCGAGGATCTGGATGCCCTGCCTCTCGACCTGCTGCTGTTCCTGAACCCCGACG CTTTTAGCGGCCCCCAGGCCTGCACAAGGTTCTTCAGCAGAATCACCAAGGCCAACGTG GATCTGCTGCCCAGAGGCGCTCCCGAGAGGCAAAGACTGCTGCCCGCCGCTCTCGCCTG TTGGGGCGTCAGAGGATCCCTGCTGAGCGAGGCCGACGTGAGAGCCCTGGGCGGCCTGG CTTGTGATCTGCCCGGCAGGTTTGTCGCTGAGAGCGCCGAAGTGCTCCTGCCCAGACTG GTGAGCTGCCCTGGACCTCTGGACCAGGATCAACAGGAGGCCGCCAGAGCTGCTCTGCA GGGAGGAGGACCCCCCTACGGACCTCCTAGCACCTGGTCCGTGAGCACAATGGACGCCC TGAGAGGCCTGCTGCCTGTGCTGGGACAGCCCATCATTAGGAGCATTCCCCAGGGCATT GTGGCCGCCTGGAGACAGAGGAGCAGCAGGGACCCCTCCTGGAGGCAGCCTGAGAGAAC AATCCTGAGGCCCAGATTCAGAAGAGAGGTGGAGAAAACCGCCTGCCCTAGCGGCAAGA AGGCCAGAGAGATTGACGAGAGCCTGATCTTCTATAAAAAGTGGGAGCTCGAAGCCTGC GTGGATGCTGCCCTGCTGGCCACACAGATGGACAGGGTGAACGCCATCCCCTTCACCTA CGAGCAGCTGGACGTCCTGAAGCACAAGCTCGATGAGCTGTACCCCCAGGGCTACCCCG AGTCCGTGATTCAGCATCTCGGCTACCTGTTCCTGAAAATGAGCCCCGAAGACATCAGG AAGTGGAACGTGACAAGCCTGGAGACCCTCAAGGCCCTGCTGGAAGTGAACAAGGGACA CGAGATGAGCCCCCAGGTGGCCACCCTCATCGACAGATTTGTGAAGGGAAGGGGACAGC TGGATAAGGACACCCTCGACACCCTGACCGCCTTCTACCCTGGATACCTCTGCAGCCTG TCCCCCGAAGAGCTGTCCAGCGTGCCTCCCTCCTCCATCTGGGCCGTCAGACCCCAGGA TCTCGACACATGCGACCCCAGACAGCTGGATGTGCTGTACCCCAAGGCTAGGCTGGCCT TCCAGAACATGAACGGATCCGAATATTTCGTCAAAATCCAGAGCTTTCTGGGCGGAGCC CCCACAGAGGACCTCAAAGCCCTGAGCCAGCAGAACGTCAGCATGGACCTGGCCACCTT TATGAAACTGAGAACCGACGCCGTCCTCCCTCTGACAGTGGCCGAAGTGCAGAAGCTCC TGGGCCCCCATGTGGAAGGCCTGAAGGCCGAGGAGAGACACAGACCCGTGAGAGACTGG ATTCTGAGGCAGAGGCAGGACGATCTGGATACCCTGGGCCTGGGACTGCAGGGCGGCAT TCCTAACGGATACCTGGTCCTCGACCTGAGCATGCAGGAAGCCCTGAGCGGCACACCTT GTCTGCTGGGACCTGGCCCTGTCCTCACCGTGCTCGCTCTGCTGCTGGCTTCCACCCTC
GCCTGATGAGCGGCCGC Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia pesada de mAb FS28-256-271 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 176 AA de cadeia pesada (sem LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSAISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 177 DNA de cadeia pesada (sem LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCGCGATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAACTG CTGGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCC CCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTT CTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACA AGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGATCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACC GTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCCTGCAGCGTGATGCATGAGGC
TCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT SEQ ID NO: 178 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSAISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEA AGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 179 DNA de cadeia pesada (com LALA)
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCGCGATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG AGTGCTAGCACTAAGGGCCCGTCGGTGTTCCCGCTGGCCCCATCGTCCAAGAGCACATC AGGGGGTACCGCCGCCCTGGGCTGCCTTGTGAAGGATTACTTTCCCGAGCCCGTCACAG TGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCTCCGGAGTGCATACTTTCCCGGCTGTGCTTCAG TCCTCTGGCCTGTACTCATTGTCCTCCGTGGTCACCGTCCCTTCGTCCTCCCTGGGCAC CCAGACCTATATCTGTAATGTCAACCATAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGG TCGAGCCGAAGTCGTGCGACAAGACTCACACTTGCCCGCCTTGCCCAGCCCCGGAAGCT GCCGGTGGTCCTTCGGTGTTCCTCTTCCCGCCCAAGCCGAAGGATACCCTGATGATCTC ACGGACCCCCGAAGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGACCCGGAAGTGA AATTCAATTGGTACGTGGATGGAGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCACGGGAA GAACAGTACAACTCTACCTACCGCGTGGTGTCCGTGCTCACTGTGCTGCACCAAGACTG GCTGAACGGGAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGTCCAACAAGGCGCTGCCTGCCCCAATTG AGAAAACTATCTCGAAAGCCAAGGGCCAGCCTCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCC CCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTT CTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACA AGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGATCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACC GTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCCTGCAGCGTGATGCATGAGGC
TCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT SEQ ID NO: 180 AA de domínio variável
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSAISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVS
S SEQ ID NO: 181 DNA de domínio variável
GAAGTGCAACTGCTGGAGTCCGGTGGTGGTCTGGTACAGCCGGGTGGTTCTCTGCGTCT GAGTTGCGCGGCCAGTGGCTTTACCTTCACTCATACTTATATGAGCTGGGTGCGTCAGG CTCCGGGCAAAGGTCTGGAATGGGTTAGCGCGATTTCTCCGACTTATAGCACTACCAAC TATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCTCGCGACAACAACAAGAACACGCT GTACCTGCAGATGAACTCACTGCGTGCCGAAGATACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAT ACAACGCGTATCATGCTGCTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG
AGT SEQ ID NO: 98 CDR1 (AA) (IMGT) GFTFTHTY SEQ ID NO: 97 CDR1 (AA) (Kabat) HTYMS SEQ ID NO: 73 CDR2 (AA) (IMGT) ISPTYSTT SEQ ID NO: 182 CDR2 (AA) Kabat) AISPTYSTTNYADSVKG SEQ ID NO: 99 CDR3 (AA) (IMGT) ARYNAYHAALDY SEQ ID NO: 100 CDR3 (AA) (Kabat) YNAYHAALDY Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia leve de mAb FS28-256-271 e seu domínio variável e sequência de aminoácido de CDRs SEQ ID NO: 95 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQTVPYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 96 DNA de cadeia leve
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAACTGTGCCGTATCCGTATACGT TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACTGTGGCCGCTCCTAGCGTGTTCATT TTTCCGCCATCCGACGAGCAGCTCAAGTCCGGCACCGCCTCCGTGGTCTGCCTGCTCAA CAACTTCTACCCTCGCGAAGCTAAGGTCCAGTGGAAGGTCGACAATGCCCTGCAGTCCG GAAACTCGCAGGAAAGCGTGACTGAACAGGACTCCAAGGACTCCACCTATTCACTGTCC TCGACTCTGACCCTGAGCAAGGCGGATTACGAAAAGCACAAAGTGTACGCATGCGAAGT
GACCCACCAGGGTCTTTCGTCCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACAGAGGAGAGTGT SEQ ID NO: 56 AA de domínio variável
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQTVPYPYTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO: 57 DNA de domínio variável
GAAATTGTGCTGACCCAGTCTCCGGGCACGTTATCTCTGAGCCCTGGTGAGCGCGCCAC TCTGTCATGCCGGGCTTCTCAAAGTGTTAGCAGTAGCTACCTGGCGTGGTATCAGCAAA AACCGGGCCAGGCCCCGCGTCTGCTGATTTACGGTGCATCCAGCCGTGCCACCGGCATT CCAGATCGTTTTTCCGGTAGTGGTTCTGGGACGGACTTCACTCTGACAATCTCACGCCT GGAACCGGAGGATTTTGCGGTGTATTACTGCCAGCAAACTGTGCCGTATCCGTATACGT
TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA SEQ ID NO: 20 CDR1 (AA) (IMGT) QSVSSSY SEQ ID NO: 23 CDR1 (AA) (Kabat) RASQSVSSSYLA SEQ ID NO: 21 CDR2 (AA) (IMGT) GAS SEQ ID NO: 24 CDR2 (AA) (Kabat) GASSRAT SEQ ID NO: 44 CDR3 (AA) (IMGT) QQTVPYPYT SEQ ID NO: 44 CDR3 (AA) (Kabat) QQTVPYPYT Sequências de aminoácido das cadeia pesada e leve de mAb2 FS22-053-008/FS28-024 SEQ ID NO: 143 AA de cadeia pesada (sem LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALTFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK
LTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 144 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALTFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK
LTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 16 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQASSYPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequência de aminoácido da cadeia pesada e leve de mAb2 FS22-053-008/FS28-024-051 SEQ ID NO: 145 AA de cadeia pesada (sem LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALIFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK
LTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 146 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALIFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK
LTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 16 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQASSYPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequência de aminoácido da cadeia pesada e leve de mAb2 FS22-053-008/FS28-024-052 SEQ ID NO: 147 AA de cadeia pesada (sem LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALLFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK
LTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 148 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALLFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK
LTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 16 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQASSYPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequência de aminoácido da cadeia pesada e leve de mAb2 FS22-053-008/FS28-024-053
SEQ ID NO: 149 AA de cadeia pesada (sem LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALVFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK
LTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 150 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALVFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK
LTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 16 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQASSYPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequências de aminoácido da cadeia pesada ou leve de mAb2 FS22-053-008-AA/FS28-024-060 (com LALA) SEQ ID NO: 151 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSYSSMSWVRQAPGKGLEWVSFITPSTGYTH YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRALWFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK
LTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 16 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQASSYPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequências de aminoácido da cadeia pesada ou leve de mAb2 FS22-053-008-AA/FS28-026 (com LALA) SEQ ID NO: 152 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMTWVRQAPGKGLEWVSSITPYYSKTD YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNWYRFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK
LTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 59 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYSSYPITFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequências de aminoácido da cadeia pesada ou leve de mAb2 FS22-053-008-AA/FS28-091 (com LALA) SEQ ID NO: 153 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTNYAMSWVRQAPGKGLEWVSSIKPYDGNTY YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNRWVFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELNPPYLFSNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK
LTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 61 AA de cadeia leve
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STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequências de aminoácido da cadeia pesada ou leve de mAb2 FS22-053-008-AA/FS28-185 (com LALA) SEQ ID NO: 154 AA de cadeia pesada (com LALA)
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SFFLYSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 195 AA de cadeia leve
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SSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequências de aminoácidos das cadeia pesada e leve de mAb2 FS22-053-008/FS28-256 SEQ ID NO: 155 AA de cadeia pesada (sem LALA)
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YSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 156 AA de cadeia pesada (com LALA)
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YSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 77 AA de cadeia leve
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YSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 158 AA de cadeia pesada (com LALA)
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YSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 83 AA de cadeia leve
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STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequências de aminoácido e cDNA da cadeia pesada ou leve de mAb2 FS22-053-008/FS28-256-005 SEQ ID NO: 159 AA de cadeia pesada (sem LALA)
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YSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 160 AA de cadeia pesada (com LALA)
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YSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 90 AA de cadeia leve
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YSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 128 AA de cadeia pesada (com LALA)
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YSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 77 AA de cadeia leve
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YSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 130 AA de cadeia pesada (com LALA)
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YSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 77 AA de cadeia leve
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YSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 132 AA de cadeia pesada (com LALA)
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YSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 77 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSYYYPITFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequências de aminoácido e cDNA da cadeia pesada ou leve de mAb2 FS22-053-008/FS28-256-021 SEQ ID NO: 133 AA de cadeia pesada (sem LALA)
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YSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 134 AA de cadeia pesada (com LALA)
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YSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 83 AA de cadeia leve
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YSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 83 AA de cadeia leve
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YSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 138 AA de cadeia pesada (com LALA)
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GSFFLYSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 90 AA de cadeia leve
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TYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequências de aminoácido da cadeia pesada ou leve de FS22-053-008/FS28-256-026 SEQ ID NO: 139 AA de cadeia pesada (sem LALA)
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YSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO:140 AA de cadeia pesada (com LALA)
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YSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 90 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQALGYPHTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
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YSKLTVDYWRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 95 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQTVPYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequências de aminoácido das sequências de cadeia pesada ou leve de mAb2 FS22-172-003-AA/FS28-256-271 SEQ ID NO: 187 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSAISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEA AGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP
PSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL YSKLTVGADRWLEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSEQ ID NO: 188 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQTVPYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequências de aminoácido das sequências de cadeia pesada ou leve de mAb2 OX40 (FS20-022-049)/FS28-256-271 SEQ ID NO: 189 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSAISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEA AGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDEYWDQEVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGDEQFAYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDQYRWNPADYFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 190 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQTVPYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequências de aminoácido da cadeia pesada ou leve de mAb FS28m-228 (com LALA) SEQ ID NO: 161 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYFMVWVRQAPGKGLEWVSMISPKSSNTY YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARWFTPARFDYWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV
DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 162 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQPFPFSFTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequência de aminoácido da cadeia pesada ou leve de mAb2 FS22-063-AA/FS28m-228 com LALA) SEQ ID NO: 163 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYFMVWVRQAPGKGLEWVSMISPKSSNTY YADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARWFTPARFDYWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SRDEPYWSYVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV
MNYRWELGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 164 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQPFPFSFTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequência de aminoácido da cadeia pesada ou leve de mAb2 FS22m-063-AA/FS28m-228-010 SEQ ID NO: 196 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYFMVWVRQAPGKGLEWVSMISPK SSNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYHISPRFDYWGQGTL VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP AVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCP APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSRDEPYWSYVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY
SKLTVMNYRWELGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 197 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASS RATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQPFPFSFTFGQGTKVEIKRTVAA PSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDS
TYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequência de aminoácido da cadeia pesada ou leve de mAb2 FS22m-063-AA/HelD1.3 (com LALA) SEQ ID NO: 191 AA de cadeia pesada (com LALA)
QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDY NSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DEPYWSYVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVMN
YRWELGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 192 AA de cadeia leve
DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASGNIHNYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLADGVP SRFSGSGSGTQYSLKINSLQPEDFGSYYCQHFWSTPRTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIF PPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSS
TLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequência de aminoácido da cadeia pesada ou leve de mAb2 FS22m-063-AA/4420 (com LALA) SEQ ID NO: 193 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVKLDETGGGLVQPGRPMKLSCVASGFTFSDYWMNWVRQSPEKGLEWVAQIRNKPYNYE TYYSDSVKGRFTISRDDSKSSVYLQMNNLRVEDMGIYYCTGSYYGMDYWGQGTSVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SRDEPYWSYVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV
MNYRWELGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 194 AA de cadeia leve
DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLRWYLQKPGQSPKVLIYKVSNR FSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPWTFGGGTKLEIKRTVAAP SVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST
YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequência de aminoácido da cadeia pesada ou leve de mAb G1-AA/HelD1.3 (com LALA) SEQ ID NO: 165 AA de cadeia pesada (com LALA)
QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGSTFSGYGVNWVRQPPGRGLEWIGMIWGDGNTDY NSALKSRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARERDYRLDYWGQGSLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSG LYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK
SRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 166 AA de cadeia leve
DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASGNIHNYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLADGVP SRFSGSGSGTQYSLKINSLQPEDFGSYYCQHFWSTPRTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIF PPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSS
TLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Sequência de aminoácido da cadeia pesada ou leve do mAb G1-AA/SS1 (com LALA) SEQ ID NO: 167 Cadeia pesada (com LALA)
QVQLQQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKSLEWIGLITPYNGASS YNQKFRGKATLTVDKSSSTAYMDLLSLTSEDSAVYFCARGGYDGRGFDYWGSGTPVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEA AGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT
VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 168 Cadeia leve
DIELTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPG RFSGSGSGNSYSLTISSVEAEDDATYYCQQWSKHPLTFGSGTKVEIKRTVAAPSVFIFP PSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSST
LTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC MSLN-His-Avi Mesotelina (sem MPF e terminação C) (mostrado) Etiquetas His e Avi (não mostrado) SEQ ID NO: 169 Humano
EVEKTACPSGKKAREIDESLIFYKKWELEACVDAALLATQMDRVNAIPFTYEQLDVLKH KLDELYPQGYPESVIQHLGYLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLEVNKGHEMSPQVAT LIDRFVKGRGQLDKDTLDTLTAFYPGYLCSLSPEELSSVPPSSIWAVRPQDLDTCDPRQ LDVLYPKARLAFQNMNGSEYFVKIQSFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRTDAV LPLTVAEVQKLLGPHVEGLKAEERHRPVRDWILRQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGYLVLD
LSMQEALS SEQ ID NO: 170 Cino
DVERTTCPPEKEVHEIDESLIFYKKRELEACVDAALLAAQMDRVDAIPFTYEQLDVLKH KLDELYPQGYPESVIRHLGHLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLKVSKGHEMSAQVAT LIDRVVVGRGQLDKDTADTLTAFCPGCLCSLSPERLSSVPPSIIGAVRPQDLDTCGPRQ LDVLYPKARLAFQNMSGSEYFVKIRPFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRREAV LPLSVAEVQKLLGPHVEGLKVEEQHSPVRDWILKQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGYLILD
LSVREALS SEQ ID NO: 171 Murino
DAEQKACPPGKEPYKVDEDLIFYQNWELEACVDGTMLARQMDLVNEIPFTYEQLSIFKH KLDKTYPQGYPESLIQQLGHFFRYVSPEDIHQWNVTSPDTVKTLLKVSKGQKMNAQAIA LVACYLRGGGQLDEDMVKALGDIPLSYLCDFSPQDLHSVPSSVMWLVGPQDLDKCSQRH LGLLYQKACSAFQNVSGLEYFEKIKTFLGGASVKDLRALSQHNVSMDIATFKRLQVDSL VGLSVAEVQKLLGPNIVDLKTEEDKSPVRDWLFRQHQKDLDRLGLGLQGGIPNGYLVLD
FNVREAFS Sequência de aminoácido de domínio CH3 do tipo selvagem SEQ ID NO: 172
GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD
SDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK Sequência de aminoácido de domínio CH2 contendo mutação LALA (mutação LALA em negrito e sublinhada) SEQ ID NO: 173
APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT
KPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK Sequência de aminoácido de domínio CH2 contendo mutação LALA-PA (mutação LALA-PA em negrito e sublinhada) SEQ ID NO: 174
APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT
KPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALAAPIEKTISKAK Sequências de aminoácidos de sequências de alças estruturais de domínio CH3 de Fcab FS22-172-003 primeira sequência de FS22-172-003 – PYIIPPY (SEQ ID NO: 198) segunda sequência de FS22-172-003 – GADRWLE (SEQ ID NO: 199) Sequências de aminoácido e cDNA de cadeia leve de FS22-172-003-AA/FS28-256-271 SEQ ID NO: 200 AA de cadeia leve
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQTVPYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 201 AA de cadeia pesada (com LALA)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTHTYMSWVRQAPGKGLEWVSAISPTYSTTN YADSVKGRFTISRDNNKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYNAYHAALDYWGQGTLVTVS SASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEA AGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELPYIIPPYNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL
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Claims (23)

REIVINDICAÇÕES
1. Molécula de anticorpo que se liga à mesotelina (MSLN) caracterizada pelo fato de que o sítio de ligação a antígeno da molécula de anticorpo compreende regiões de determinação de complementaridade (CDRs) 1-6 de anticorpo: (i) FS28-256-271 apresentado em SEQ ID NOs 98, 73, 99, 20, 21 e 44, respectivamente; (ii) FS28-024-052 apresentado em SEQ ID NOs 10, 11, 41, 20, 21 e 22, respectivamente; (iii) FS28-256-021 apresentado em SEQ ID NOs 98, 73, 99, 20, 21 e 34, respectivamente; (iv) FS28-256-012 apresentado em SEQ ID NOs 98, 73, 99, 20, 21 e 25, respectivamente; (v) FS28-256-023 apresentado em SEQ ID NOs 101, 73, 103, 20, 21 e 34, respectivamente; (vi) FS28-256-024 apresentado em SEQ ID NOs 98, 73, 99, 20, 21 e 43, respectivamente; (vii) FS28-256-026 apresentado em SEQ ID NOs 101, 73, 103, 20, 21 e 43, respectivamente; (viii) FS28-256-027 apresentado em SEQ ID NOs 98, 73, 99, 20, 21 e 44, respectivamente; (ix) FS28-256-001 apresentado em SEQ ID NOs 85, 73, 75, 20, 21 e 34, respectivamente; (x) FS28-256-005 apresentado em SEQ ID NOs 85, 73, 75, 20, 21 e 43, respectivamente; (xi) FS28-256-014 apresentado em SEQ ID NOs 111, 73, 113, 20, 21 e 25, respectivamente; (xii) FS28-256-018 apresentado em SEQ ID NOs 101, 73, 103, 20, 21 e 25, respectivamente;
(xiii) FS28-256 apresentado em SEQ ID NOs 71, 73, 75, 20, 21 e 25, respectivamente; (xiv) FS28-024-051 apresentado em SEQ ID NOs 10, 11, 32, 20, 21 e 22, respectivamente; (xv) FS28-024-053 apresentado em SEQ ID NOs 10, 11, 51, 20, 21 e 22, respectivamente; ou (xvi) FS28-024 apresentado em SEQ ID NOs 10, 11, 12, 20, 21 e 22, respectivamente; e em que as sequências de CDR são definidas de acordo com o esquema de numeração ImMunoGeneTics (IMGT).
2. Molécula de anticorpo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por compreender o domínio VH e o domínio VL de anticorpo: (i) FS28-256-271 apresentado em SEQ ID NOs 180 e 56, respectivamente; (ii) FS28-024-052 apresentado em SEQ ID NOs 39 e 18, respectivamente; (iii) FS28-256-021 apresentado em SEQ ID NOs 109 e 93, respectivamente; (iv) FS28-256-012 apresentado em SEQ ID NOs 109 e 79, respectivamente; (v) FS28-256-023 apresentado em SEQ ID NOs 121 e 93, respectivamente; (vi) FS28-256-024 apresentado em SEQ ID NOs 109 e 53, respectivamente; (vii) FS28-256-026 apresentado em SEQ ID NOs 121 e 53, respectivamente; (viii) FS28-256-027 apresentado em SEQ ID NOs 109 e 56, respectivamente; (ix) FS28-256-001 apresentado em SEQ ID NOs 63 e 93,
respectivamente; (x) FS28-256-005 apresentado em SEQ ID NOs 63 e 53, respectivamente; (xi) FS28-256-014 apresentado em SEQ ID NOs 115 e 79, respectivamente; (xii) FS28-256-018 apresentado em SEQ ID NOs 121 e 79, respectivamente; (xiii) FS28-256 apresentado em SEQ ID NOs 69 e 79, respectivamente; (xiv) FS28-024-051 apresentado em SEQ ID NOs 30 e 18, respectivamente; (xvv) FS28-024-053 apresentado em SEQ ID NOs 49 e 18, respectivamente; ou (xvi) FS28-024 apresentado em SEQ ID NOs 8 e 18, respectivamente.
3. Molécula de anticorpo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o sítio de ligação a antígeno da molécula de anticorpo compreende CDRs 1-6, e/ou o domínio VH e VL de anticorpo FS28-256-271.
4. Molécula de anticorpo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o sítio de ligação a antígeno da molécula de anticorpo compreende CDRs 1-6, e/ou o domínio VH e VL de anticorpo FS28-024-052.
5. Molécula de anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, sendo a molécula de anticorpo caracterizada por ser uma molécula de anticorpo multiespecífica e compreender um segundo sítio de ligação a antígeno que se liga a um segundo antígeno.
6. Molécula de anticorpo, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que o segundo sítio de ligação a antígeno está localizado em um domínio constante da molécula de anticorpo.
7. Molécula de anticorpo, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o domínio constante é um domínio CH3.
8. Molécula de anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 7, caracterizada pelo fato de que o segundo sítio de ligação a antígeno se liga a um antígeno de célula imunológica.
9. Molécula de anticorpo, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que o antígeno de célula imunológica é um membro da superfamília de receptor de fator de necrose tumoral (TNFRSF).
10. Molécula de anticorpo, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que o membro da TNFRSF é CD137.
11. Molécula de anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 10, caracterizada pelo fato de que o segundo sítio de ligação a antígeno compreende uma primeira sequência, uma segunda sequência e/ou uma terceira sequência, em que a primeira sequência, segunda sequência e terceira estão localizadas na alça estrutural AB, na alça estrutural CD e na alça estrutural EF do domínio constante, respectivamente.
12. Molécula de anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 11, sendo a molécula de anticorpo caracterizada por ter a capacidade para ativar uma célula imunológica na presença de MSLN.
13. Molécula de anticorpo, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que a célula imunológica é uma célula T, célula B, célula exterminadora natural (NK), célula T exterminadora natural (NKT) ou célula dendrítica (DC).
14. Molécula de anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, sendo a molécula de anticorpo caracterizada por ter sido modificada para reduzir ou anular a ligação do domínio CH2 da molécula de anticorpo para um ou mais receptores Fcγ.
15. Molécula de anticorpo, de acordo com a reivindicação 14, sendo a molécula de anticorpo caracterizada por não se ligar a um ou mais receptores Fcγ.
16. Conjugado caracterizado por compreender a molécula de anticorpo conforme definida em qualquer uma das reivindicações anteriores e uma molécula bioativa.
17. Molécula, ou moléculas, de ácido nucleico caracterizada por codificar a molécula de anticorpo conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a
15.
18. Vetor, ou vetores, caracterizado por compreender a molécula, ou as moléculas, de ácido nucleico conforme definida na reivindicação 17.
19. Célula hospedeira recombinante caracterizada por compreender a molécula (ou moléculas) de ácido nucleico conforme definida na reivindicação 17 ou vetor (ou vetores) conforme definido na reivindicação 18.
20. Método de produção da molécula de anticorpo conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 15 caracterizado por compreender cultivar a célula hospedeira recombinante conforme definida na reivindicação 19, sob condições para produção da molécula de anticorpo.
21. Composição farmacêutica caracterizada por compreender a molécula, ou conjugado, de anticorpo, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16 e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
22. Molécula, ou conjugado, de anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizada por ser para uso em um método de tratamento de câncer em um indivíduo.
23. Método de detecção ou diagnóstico de um câncer em um indivíduo, sendo o método caracterizado por compreender o uso da molécula de anticorpo conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 15.
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