TW202413421A - 抗間皮素抗體 - Google Patents

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汪皛皛
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Abstract

本文公開了與間皮素結合的抗體及其抗原結合片段，以及它們的用途、編碼這些抗體和抗原結合片段的核酸、包含這些核酸的載體和包含這些核酸或這些載體的宿主細胞。還公開了包含這些抗體的藥物組合物和複合體，以及藉由施用這些抗體的治療方法。

Description

抗間皮素抗體
本發明涉及結合間皮素（mesothelin, MSLN）的抗體及其抗原結合片段。
癌如間皮瘤、胰腺癌、卵巢癌和肺腺癌是高度破壞性的，並且非常難以治療。例如，胰管腺癌占所有胰腺腫瘤的90%，並且其發病率正在上升，而預後非常差。缺乏可用的特定診斷測試和非常有限的治療機會帶來了嚴重的健康問題。
間皮素（MSLN）是一種細胞表面分子，其表現為71kD前體蛋白質，該前體蛋白質被進一步加工成40kD糖蛋白，該糖蛋白被糖基磷脂醯肌醇（glycosylphosphatidylinositol, GPI）錨固在細胞表面上。MSLN在正常組織中顯示出非常有限和低的表現。它在形成胸膜、心包和腹膜的間皮細胞中表現，其中它似乎在細胞黏附中起作用（Chang等人（1996年），PNAS，第93卷：第136-140頁）。還有研究提出可溶性切割的MSLN在巨核細胞刺激中起作用，但在小鼠中進行剔除後未顯示出發育中的任何缺陷，因此其生物學作用尚不清楚（Yamaguchi等人（1994年），第269卷第2期：第805-808頁；Bera等人（2000年），第20卷第8期：第2902-2906頁）。
相反，MSLN在幾種人類癌症中高度表現，這些癌症包括幾乎所有間皮瘤和胰腺癌以及大約70%的卵巢癌和50%的肺腺癌（Hassan和Ho（2008年），Eur.J. Cancer，第44卷：第46-53頁；Miettinen和Sarlomo-Rikala（2003年），Am. J. Surg.Pathol.，第27卷：第150-158頁；Ordonez（2003年），Am. J. Surg.Pathol.，第27卷：第1418-1428頁；Ho等人（2007年），Clin.Cancer Res.，第13卷：第1571-1575頁）。其高表現水平使MSLN成為用於標靶療法的有吸引力的候選物，因為它促進增殖和侵襲，在腫瘤進程中起重要作用（Servais等人（2012年），Clin.Cancer Res.，第18卷第9期：第2478-2489頁）。
MSLN與MUC16相互作用調節的細胞黏附在卵巢癌細胞腹膜種植中起重要作用並增加胰腺癌細胞的流動性和侵襲性（Rump等人（2004年），J Biol Chem.，第279卷第10期：第9190-9198頁；Gubbels等人（2006年），Mol Cancer，第5卷第1期：第50頁；Coehlo等人，Expert Rev Anticancer Ther.，第18卷第2期：第177-186頁；Chen等人（2013年），Sci Rep.，第3卷：第1870頁）。特別地，胰腺腫瘤常常在患者感覺到疾病的任何症狀之前已經進展到中晚期，並且平均存活時間短（通常少於一年）。這種預後不良，因為腫瘤通常不能藉由手術（完全）去除，並且已經轉移（通常不能檢測到）。化療也無法大幅延長存活時間或治癒疾病。儘管進行了若干嘗試，但是迄今為止還沒有成功的免疫療法。即使最著名的結合可溶形式的MSLN的抗間皮素單株抗體（Amatuximab）也不是特別成功（Baldo和Cecco（2017年），Onco.Targets Ther.，第10卷：第5337-5353頁；Nicolaides等人（2018年），Cancer Biology & Therapy，第19卷第7期：第622-630頁）。不幸的是，腫瘤引起的間皮素脫落會產生許多問題，儘管它可以用作疾病的生物標誌物（Hassan等人（2006年），Clin.Cancer Res.，第12卷：第447-453頁）。脫落會為腫瘤成像和潛在放射療法帶來問題。脫落到血流中的MSLN導致基於放射性標記抗體的成像的背景高，並且是有毒的，因為放射性標記的抗體在全身結合脫落的間皮素。這需要施用高劑量並因此毒性劑量的抗間皮素抗體。
本發明提供了特異性結合間皮素的抗體及其抗原結合片段，以及它們的用途、編碼這些抗體和抗原結合片段的核酸、包含這些核酸的載體和包含這些核酸或這些載體的宿主細胞。還公開了包含這些抗體的藥物組合物和複合體，以及藉由施用這些抗體的治療方法。
在第一方面，本發明提供了一種特異性結合間皮素的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含輕鏈可變區（VL）和重鏈可變區（VH），並且其中 (1) VH包含具有SEQ ID NO: 24所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 27所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (2) VH包含具有SEQ ID NO: 25所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 28所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (3) VH包含具有SEQ ID NO: 26所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 27所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (4) VH包含具有SEQ ID NO: 24所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 29所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (5) VH包含具有SEQ ID NO: 24所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 30所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (6) VH包含具有SEQ ID NO: 24所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 31所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (7) VH包含具有SEQ ID NO: 24所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 32所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (8) VH包含具有SEQ ID NO: 24所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 33所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (9) VH包含具有SEQ ID NO: 25所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 29所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (10) VH包含具有SEQ ID NO: 63所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 67所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (11) VH包含具有SEQ ID NO: 64所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 67所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (12) VH包含具有SEQ ID NO: 65所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 67所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (13) VH包含具有SEQ ID NO: 65所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 68所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (14) VH包含具有SEQ ID NO: 63所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 68所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (15) VH包含具有SEQ ID NO: 66所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 67所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (16) VH包含具有SEQ ID NO: 64所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 69所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (17) VH包含具有SEQ ID NO: 66所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 69所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (18) VH包含具有SEQ ID NO: 63所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 69所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3；或者 (19) VH包含具有SEQ ID NO: 65所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 69所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3。
在一些實施方案中，LCDR 1-3和HCDR 1-3由EU Kabat定義/編號系統定義。在一些實施方案中，LCDR 1-3和HCDR 1-3由Chothia定義/編號系統定義。在一些實施方案中，LCDR 1-3和HCDR 1-3由AbM定義/編號系統定義。在一些優選的實施方案中，LCDR 1-3和HCDR 1-3由Kabat和Chothia組合編號系統定義。
在一些實施方案中，本發明提供了一種特異性結合間皮素的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含輕鏈可變區（VL）和重鏈可變區（VH），並且其中 (1) VH包含分別包含SEQ ID NO: 2、4、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、13所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (2) VH包含分別包含SEQ ID NO: 15、16、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、18所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (3) VH包含分別包含SEQ ID NO: 15、17、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、13所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (4) VH包含分別包含SEQ ID NO: 2、4、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、19所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (5) VH包含分別包含SEQ ID NO: 2、4、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、20所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (6) VH包含分別包含SEQ ID NO: 2、4、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、21所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (7) VH包含分別包含SEQ ID NO: 2、4、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、22所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (8) VH包含分別包含SEQ ID NO: 2、4、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、23所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (9) VH包含分別包含SEQ ID NO: 15、16、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、19所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (10) VH包含分別包含SEQ ID NO: 45、47、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 52、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (11) VH包含分別包含SEQ ID NO: 58、47、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 52、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (12) VH包含分別包含SEQ ID NO: 58、59、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 52、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (13) VH包含分別包含SEQ ID NO: 58、59、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 61、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (14) VH包含分別包含SEQ ID NO: 45、47、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 61、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (15) VH包含分別包含SEQ ID NO: 58、60、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 52、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (16) VH包含分別包含SEQ ID NO: 58、47、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 62、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (17) VH包含分別包含SEQ ID NO: 58、60、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 62、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (18) VH包含分別包含SEQ ID NO: 45、47、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 62、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3；或者 (19) VH包含分別包含SEQ ID NO: 58、59、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 62、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3。
在一些實施方案中，本發明提供了一種特異性結合間皮素的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含輕鏈可變區（VL）和重鏈可變區（VH），並且其中： (1) VH包含與SEQ ID NO: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 27具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (2) VH包含與SEQ ID NO: 25具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 28具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (3) VH包含與SEQ ID NO: 26具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 27具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (4) VH包含與SEQ ID NO: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 29具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (5) VH包含與SEQ ID NO: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 30具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (6) VH包含與SEQ ID NO: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 31具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (7) VH包含與SEQ ID NO: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 32具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (8) VH包含與SEQ ID NO: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 33具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (9) VH包含與SEQ ID NO: 25具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 29具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (10) VH包含與SEQ ID NO: 63具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (11) VH包含與SEQ ID NO: 64具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (12) VH包含與SEQ ID NO: 65具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (13) VH包含與SEQ ID NO: 65具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 68具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (14) VH包含與SEQ ID NO: 63具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 68具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (15) VH包含與SEQ ID NO: 66具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (16) VH包含與SEQ ID NO: 64具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (17) VH包含與SEQ ID NO: 66具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (18) VH包含與SEQ ID NO: 63具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列；或者 (19) VH包含與SEQ ID NO: 65具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列。
在一些實施方案中，本發明提供了一種特異性結合間皮素的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含重鏈（heavy chain, HC）和輕鏈（light chain, LC），並且其中： (1) HC包含與SEQ ID NO: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 37具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (2) HC包含與SEQ ID NO: 35具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 38具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (3) HC包含與SEQ ID NO: 36具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 37具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (4) HC包含與SEQ ID NO: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 39具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (5) HC包含與SEQ ID NO: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 40具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (6) HC包含與SEQ ID NO: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 41具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (7) HC包含與SEQ ID NO: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 42具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (8) HC包含與SEQ ID NO: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 43具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (9) HC包含與SEQ ID NO: 35具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 39具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (10) HC包含與SEQ ID NO: 70具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (11) HC包含與SEQ ID NO: 71具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (12) HC包含與SEQ ID NO: 72具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (13) HC包含與SEQ ID NO: 72具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 75具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (14) HC包含與SEQ ID NO: 70具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 75具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (15) HC包含與SEQ ID NO: 73具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (16) HC包含與SEQ ID NO: 71具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (17) HC包含與SEQ ID NO: 73具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (18) HC包含與SEQ ID NO: 70具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列；或者 (19) HC包含與SEQ ID NO: 72具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列。
在一些優選的實施方案中，抗體或其抗原結合片段特異性結合膜結合的間皮素。在一些優選的實施方案中，抗體或其抗原結合片段以比其結合可溶性間皮素的親和力更高的親和力結合膜結合的間皮素。在一些優選的實施方案中，抗體或其抗原結合片段以其結合可溶性間皮素的親和力的至少兩倍、至少三倍、至少五倍、至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少50倍或至少100倍的親和力結合膜結合的間皮素。在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段基本上不結合可溶性MSLN。在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段不結合可溶性MSLN。
在一些實施方案中，抗體是鼠抗體、嵌合抗體、人源化抗體或人抗體。
在一些實施方案中，抗體是選自IgG、IgA、IgM、IgE和IgD的同種型。在優選的實施方案中，抗體是選自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的亞型。
在一些實施方案中，抗原結合片段選自Fab、Fab'、F(ab') 2、Fd、Fd'、Fv、scFv、ds-scFv和dAb。
在一些實施方案中，抗體是單株抗體、雙特異性抗體或多特異性抗體。
在一些實施方案中，抗體是單價的、二價的或多價的。
在一些實施方案中，抗體或抗原結合片段連接到螢光標記、放射性標記或細胞毒性劑。
在第二方面，本發明提供了一種雙特異性抗體，該雙特異性抗體包含本發明的第一方面的抗體或其抗原結合片段以及特異性結合腫瘤相關抗原、免疫細胞抗原或免疫檢查點分子的第二抗原結合區。
在第三方面，本發明提供了一種核酸，該核酸包含編碼本發明的第一方面的抗體或其抗原結合片段或本發明的第二方面的雙特異性抗體的核苷酸序列。
在第四方面，本發明提供了一種包含本發明的第三方面的核酸的載體。
在第五方面，本發明提供了一種包含本發明的第三方面的核酸或本發明的第四方面的載體的宿主細胞。
在第六方面，本發明提供了一種抗體藥物複合體（antibody drug conjugate, ADC），其中ADC包含本發明的第一方面的抗體或其抗原結合片段或本發明的第二方面的雙特異性抗體。
在第七方面，本發明提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包含(i)本發明的第一方面的抗體或其抗原結合片段、或本發明的第二方面的雙特異性抗體、或本發明的第三方面的核酸、或本發明的第四方面的載體、或本發明的第五方面的宿主細胞、或本發明的第六方面的抗體藥物複合體；和任選地(ii)藥學上可接受的載體或賦形劑。
在一些實施方案中，該組合物還包含選自抗體、化學治療劑、siRNA、反義寡核苷酸、多肽和小分子藥物的第二治療劑。
在第八方面，本發明提供了一種治療受試者的癌症的方法，該方法包括向該受試者施用有效量的本發明的抗體或其抗原結合片段、雙特異性抗體、核酸、載體、宿主細胞、抗體藥物複合體或藥物組合物。
在一些具體的實施方案中，癌症選自間皮瘤、前列腺癌、肺癌、胃癌、鱗狀細胞癌、胰腺癌、膽管癌、乳腺癌（例如，三陰性乳腺癌）和卵巢癌。
在一些實施方案中，該方法還包括向受試者施用第二治療劑。優選地，第二治療劑選自抗體、化學治療劑、siRNA、反義寡核苷酸、多肽和小分子藥物。
在第九方面，本發明提供了本發明的抗體或其抗原結合片段、雙特異性抗體、核酸、載體、宿主細胞、抗體藥物複合體或藥物組合物在製備用於治療受試者的癌症的藥物中的用途。
在一些實施方案中，癌症選自間皮瘤、前列腺癌、肺癌、胃癌、鱗狀細胞癌、胰腺癌、膽管癌、乳腺癌（例如，三陰性乳腺癌）和卵巢癌。
在一些實施方案中，該藥物還包含第二治療劑，任選地，第二治療劑選自抗體、化學治療劑、siRNA、反義寡核苷酸、多肽和小分子藥物。
在一些實施方案中，該藥物與第二治療劑組合施用，任選地，第二治療劑選自抗體、化學治療劑、siRNA、反義寡核苷酸、多肽和小分子藥物。
在第十方面，本發明提供了在治療受試者的癌症的方法中使用的本發明的抗體或其抗原結合片段、雙特異性抗體、核酸、載體、宿主細胞、抗體藥物複合體或藥物組合物。
在一些實施方案中，癌症選自間皮瘤、前列腺癌、肺癌、胃癌、鱗狀細胞癌、胰腺癌、膽管癌、乳腺癌（例如，三陰性乳腺癌）和卵巢癌。
在一些實施方案中，向受試者進一步施用第二治療劑，任選地，第二治療劑選自抗體、化學治療劑、siRNA、反義寡核苷酸、多肽和小分子藥物。
在第十一方面，本發明提供了一種用於診斷受試者的間皮素陽性癌症的方法，該方法包括： (a) 從受試者獲得生物樣本， (b) 使該樣本與本發明的抗體或其抗原結合片段接觸；以及 (c) 檢測該抗體與該樣本的結合， 其中相比於該抗體或其抗原結合片段與對照樣本的結合，該抗體或其抗原結合片段與該樣本的結合增加，鑑定出受試者患有間皮素陽性癌症。
在第十二方面，本發明提供了一種用於對受試者的間皮素陽性癌症進行成像的方法，該方法包括： (a) 向該受試者施用本發明的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體綴合到可檢測標誌物；以及 (b) 檢測該標誌物的存在。
在一些優選的實施方案中，(a) 可檢測標誌物是 111In，並且優選地該標誌物的檢測是藉由單光子發射電腦斷層掃描進行的，或者 (b) 可檢測標誌物是 89Zr，並且優選地該標誌物的檢測是藉由正電子發射斷層掃描進行的。
藉由結合附圖對以下實施方案的詳細描述，本發明的上述特徵和優點及其附加特徵和優點將在下文中得到更清楚的理解。
在此參考附圖描述的實施方案是說明性的、例示性的，並且用於一般地理解本發明。這些實施方案不應被解釋為限制本發明的範圍。在整個說明書中，相同或相似的元素以及具有相同或相似功能的元素由相同的圖式符號表示。
除非另有說明或定義，否則所用的所有術語具有它們在本領域中的常規含義，這對於所屬技術領域中具有通常知識者來說是清楚的。例如，參考標準手冊，諸如Leuenberger, H.G.W、Nagel, B.和Klbl, H.編撰，A multilingual glossary of biotechnological terms: (IUPAC Recommendations)，Helvetica Chimica Acta（1995年），CH-4010 Basel，Switzerland；Sambrook等人，Molecular Cloning: A Laboratory Manual（第2版），第1卷至第3卷，Cold Spring Harbor Laboratory Press（1989年）；F. Ausubel等人編撰，Current protocols in molecular biology，Green Publishing and Wiley InterScience，New York（1987年）；Roitt等人，Immunology（第6版），Mosby/Elsevier，Edinburgh（2001年）；和Janeway等人，Immunobiology（第6版），Garland Science Publishing/Churchill Livingstone，New York（2005年），以及上面引用的一般背景技術。
如本文所用，除非上下文另有明確說明，否則單數形式“一個”、“一種”以及“該”包括複數指代。因此，例如，提及“一種抗體”包括多種抗體。
除非另有說明或定義，否則術語“包括”及其變體諸如“包含”和“含有”應被理解為暗示包括所述元素或步驟或者元素或步驟的組，但不排除任何其他元素或步驟或者元素或步驟的組。術語“包含”涵蓋“包括”以及“由其組成”，例如，組合物“包含”X，可僅由X組成，或者可包含另外的一些物質，例如X+Y。
與數值 x相關的術語“約”是任選的，並且是指例如 x +10%或x±5%。
如本文所用，術語“抗體”是指具有特異性結合特定抗原的能力的免疫球蛋白分子。抗體通常在重鏈和輕鏈的每一者中包含可變區和恆定區。抗體的重鏈和輕鏈的可變區包含與抗原相互作用的結合結構域。抗體的恆定區可調節免疫球蛋白與宿主組織或因子的結合，該宿主組織或因子包括免疫系統的各種細胞（諸如效應細胞）和補體系統的組分，諸如補體活化的經典途徑中的第一組分CIq。大多數抗體具有重鏈可變區（VH）和輕鏈可變區（VL），這些重鏈可變區和輕鏈可變區一起形成抗體的結合抗原的部分。
“輕鏈可變區”（VL）或“重鏈可變區”（VH）由被三個“互補性決定區”或“CDR”中斷的四個“框架”區組成。框架區用於比對CDR，以特異性結合到抗原的表位。CDR包含抗體的胺基酸殘基，這些胺基酸殘基主要負責抗原結合。從胺基末端到羧基末端，VL結構域和VH結構域兩者都包含以下框架區（frame region, FR）和CDR區：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。VL結構域的CDR1、CDR2和CDR3在本文中還分別稱為LCDR1、LCDR2和LCDR3，VH結構域的CDR1、CDR2和CDR3在本文中還分別稱為HCDR1、HCDR2和HCDR3。
每個VL結構域和VH結構域的胺基酸分配與CDR的任何常規定義一致。常規定義包括Kabat定義（Kabat，Sequences of Proteins of Immunological Interest（National Institutes of Health，Bethesda，MD，1987年和1991年）、Chothia定義（Chothia和Lesk，J. Mol.Biol.，第196卷：第901-917頁，1987年；Chothia等人，Nature，第342卷：第878-883頁，1989年）；Chothia Kabat CDR的組合（也被稱為Chothia和Kabat組合CDR），其中每個CDR是Chothia和Kabat CDR的組合；牛津分子的抗體建模軟體所使用的AbM定義；以及Martin等人的接觸定義（world wide web bioinfo.org.uk/abs）。Kabat提供了一種廣泛使用的編號慣例（Kabat編號系統），其中不同重鏈之間或不同輕鏈之間的對應殘基被分配相同的編號。
儘管本公開涉及根據這些編號系統中的任一編號系統所定義的CDR，但優選的實施方案涉及Chothia和Kabat組合定義的CDR。
表5. 用於抗體的CDR的定義方法（參見http://bioinf.org.uk/abs/）
在表5中，Laa-Lbb可指從抗體輕鏈的N末端開始的從位置aa（根據Chothia編號系統）至位置bb（根據Chothia編號系統）的胺基酸序列；Haa-Hbb可指從抗體重鏈的N末端開始的從位置aa（根據Chothia編號系統）至位置bb（根據Chothia編號系統）的胺基酸序列。例如，L24-L34可指從抗體輕鏈的N末端開始的從位置24至位置34（根據Chothia編號系統）的胺基酸序列；H26-H32可指從抗體重鏈的N末端開始的從位置26至位置32（根據Chothia編號系統）的胺基酸序列。
如本文所用，術語“抗體”應以其最廣泛的含義理解，並且包括單株抗體（包括全長單株抗體）、多株抗體、抗體片段和含有至少兩個不同抗原結合區的多特異性抗體（例如，雙特異性抗體）。抗體可含有另外的修飾，諸如非天然存在的胺基酸、Fc區中的突變以及糖基化位點中的突變。抗體還包括轉譯後修飾的抗體、含有抗體的抗原決定位的融合蛋白以及含有對抗原識別位點的任何其他修飾的免疫球蛋白分子，只要這些抗體表現出所需的生物活性。
如本文所用，抗體的術語“抗原結合片段”是指抗體的一個或多個片段，其保留特異性結合抗原（例如，MSLN）的能力。研究表明抗體的抗原結合功能可藉由全長抗體的片段來實現。
涵蓋在抗體的術語“抗原結合部分”內的抗原結合片段的示例包括(i) Fab片段，即由VL結構域、VH結構域、CL結構域和CH1結構域組成的單價片段；(ii) F(ab')2片段，即包括在鉸鏈區處由二硫鍵連接的兩個Fab片段的二價片段；(iii) Fab'片段，其本質上是具有鉸鏈區的一部分的Fab（參見FUNDAMENTALIMMUNOLOGY（Paul編撰，補充版本3，1993年））；(iv) 由VH結構域和CH1結構域組成的Fd片段；(v) 具有VH結構域和CH1結構域以及位於CH1結構域的C末端的一個或多個半胱胺酸殘基的Fd'片段；(vi) 由抗體單臂的VL結構域和VH結構域組成的Fv片段；(vii) dAb片段（Ward等人，Nature（1989年），第341卷：第544-546頁），其由VH結構域組成；(viii) 分離的互補性決定區（complementarity determining region, CDR）；和(ix) 奈米抗體，即包含單個可變結構域和兩個恆定結構域的重鏈可變區。此外，儘管Fv片段的兩個結構域（VL和VH）由單獨的基因編碼，但仍可使用重組方法藉由合成接頭來連接這些結構域，使得這些結構域能夠被製成單條蛋白質鏈，其中VL區和VH區配對以形成單價分子（稱為單鏈Fv（scFv）；參見例如Bird等人（1988年），Science，第242卷：第423-426頁；和Huston等人（1988年），Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第85卷：第5879-5883頁）。此類單鏈抗體也旨在被涵蓋在抗體的術語“抗原結合片段”內。此外，該術語還包括“線性抗體”，該線性抗體包含一對串聯Fd區段（VH-CH1-VH-CH1）以及前述片段中的任一片段的修飾形式，這一對串聯Fd區段與互補輕鏈多肽一起形成抗原結合區，這些片段的修飾形式保留抗原結合活性。
這些抗原結合片段可使用所屬領域中具有通常知識者已知的常規技術獲得，並且以與完整抗體相同的方式來篩選片段的用途。
如本文所用，術語“結合”或“特異性結合”是指兩個分子之間的非隨機結合反應，諸如抗體與其靶抗原之間的非隨機結合反應。抗體的結合特異性可基於親和力和/或親合力來確定。由抗原與抗體解離的平衡常數（KD）表示的親和力是抗原決定位（表位）與抗體上的抗原結合位點之間的結合強度的量度：KD值越小，抗原決定位（表位）與抗體之間的結合強度越強。另選地，親和力還可表示為親和常數（KA），其為1/KD。
親合力是抗體與相關抗原之間的結合強度的量度。親合力與抗原決定位（表位）和其在抗體上的抗原結合位點之間的親和力以及抗體上存在的相關結合位點的數目兩者有關。通常，抗體將以10 -5M至10 -12M或以下，並且優選10 -7M至10 -12M或以下，並且更優選10 -8M至10 -12M的解離常數（KD），以及/或者以至少10 7M -1、優選至少10 8M -1、更優選至少10 9M -1（諸如至少10 12M -1）的結合親和力結合。任何K D值大於10 -4M通常都被認為是指示非特異性結合。抗體與抗原或抗原決定位的特異性結合可以本身已知的任何合適的方式測定，包括例如Scatchard分析和/或競爭性結合測定，諸如放射免疫測定（RIA）、酵素免疫測定（EIA）、生物膜干涉技術（BLI）測定和夾心競爭測定，以及本領域本身已知的這些方法的不同變型。
術語“表位”是指抗原上與抗體結合的位點。表位可由連續胺基酸形成，或者藉由一個或多個蛋白的三級折疊而併置的非連續胺基酸形成。由連續胺基酸形成的表位（也稱為線性表位）通常在暴露於變性溶劑時保留，而由三級折疊形成的表位（也稱為構象表位）通常在用變性溶劑處理時喪失。表位通常包括至少3個，更通常至少5個或者8至10個呈獨特空間構象的胺基酸。表位限定了抗體的最小結合位點，因此是抗體或其抗原結合片段的特異性靶標。
如本文所用，術語“序列同一性”是指兩個序列（胺基酸）在比對中的相同位置處具有相同殘基的程度。例如，“胺基酸序列與SEQ ID NO: Y具有X%相同”是指該胺基酸序列與SEQ ID NO: Y的%同一性，並且被詳細描述為該胺基酸序列中X%的殘基與SEQ ID NO: Y中公開的序列的殘基相同。通常，採用電腦程式進行此類計算。比較和比對序列對的示例性程式包括ALIGN（Myers和Miller，1988年）、FASTA（Pearson和Lipman，1988年；Pearson，1990年）和gapped BLAST（Altschul等人，1997年）、BLASTP、BLASTN或GCG（Devereux等人，1984年）。
此外，在確定兩個胺基酸序列之間的序列同一性程度時，技術人員可以考慮所謂的“保守”胺基酸取代，其通常可被描述為其中胺基酸殘基被具有相似化學結構的另一胺基酸殘基取代並且對多肽的功能、活性或其他生物學特性具有很少或基本上沒有影響的胺基酸取代。此類保守胺基酸取代是本領域公知的，例如根據WO 04/037999、GB-A-2 357 768、WO 98/49185、WO 00/46383和WO 01/09300；並且（優選的）類型和/或此類取代的組合可基於WO 04/037999以及WO 98/49185和其中引用的其他參考文獻的相關教示內容來選擇。
此類保守取代優選的是以下基團(a)至(e)中的一個胺基酸被同一基團中的另一個胺基酸殘基取代的取代：(a)小的脂族、非極性或輕微極性殘基：Ala、Ser、Thr、Pro和Gly；(b)極性、帶負電荷的殘基以及它們的（不帶電荷的）醯胺：Asp、Asn、Glu和Gln；(c)極性、帶正電荷的殘基：His、Arg和Lys；(d)大的脂族、非極性殘基：Met、Leu、He、Val和Cys；和(e)芳族殘基：Phe、Tyr和Trp。
特別優選的保守取代如下：Ala轉變為Gly或Ser；Arg轉變為Lys；Asn轉變為Gln或His；Asp轉變為Glu；Cys轉變為Ser；Gln轉變為Asn；Glu轉變為Asp；Gly轉變為Ala或Pro；His轉變為Asn或Gln；Ile轉變為Leu或Val；Leu轉變為Ile或Val；Lys轉變為Arg、Gln或Glu；Met轉變為Leu、Tyr或Ile；Phe轉變為Met、Leu或Tyr；Ser轉變為Thr；Thr轉變為Ser；Trp轉變為Tyr；Tyr轉變為Trp；以及/或者Phe轉變為Val、Ile或Leu。
應用於本文所述的多肽的任何胺基酸取代還可基於以下分析：Schulz等人，Principles of Protein Structure，Springer-Verlag，1978年開發的不同物種的同源蛋白質之間胺基酸變異頻率的分析；Chou和Fasman，Biochemistry，第13卷：第211頁，1974年和Adv.Enzymol.，第47卷：第45-149頁，1978年開發的結構形成電位的分析；以及Eisenberg等人，Proc.Nat. Acad Sci.USA，第81卷：第140-144頁，1984年；Kyte和Doolittle，J Mol.Biol.，第157卷：第105-132頁，1981年；和Goldman等人，Ann.Rev. Biophys.Chem.，第15卷：第321-353頁，1986年開發的蛋白質疏水性模式的分析，這些文獻全文以引用方式併入本文。
如本文所用，術語“單株抗體”是指從基本上同源的抗體群體獲得的抗體。即，構成群體的每種抗體是相同的，除了少量可能天然存在的突變。單株抗體是高度特異性的，並且針對的是單一抗原。術語“單株抗體”在本文中不限於藉由雜交瘤技術產生的抗體，並且不應理解為需要藉由任何特定方法來產生抗體。
術語“雙特異性抗體”在本發明的上下文中應理解為具有由不同抗體序列限定的兩個不同抗原結合區的抗體。這可理解為不同的靶結合，但也包括與一個靶中的不同表位的結合。
如本文所用，術語“腫瘤相關抗原”是指與正常細胞相比在癌細胞中差異表現的抗原，因此可用於標靶癌細胞。
如本文所用，術語“載體”意指能夠轉運已經與其連接的另一個核酸的核酸分子。
如本文所用，術語“宿主細胞”是指已經引入表現載體的細胞。
術語“藥學上可接受的”是指載體或佐劑與組合物的其他成分相容並且基本上對其接受者無害，並且/或者此類載體或佐劑被批准或可批准包含在用於對人腸胃外施用的藥物組合物中。
如本文所用，術語“治療”（treatment/treating）等是指為了獲得效果而施用藥劑或執行程序。該效果可以是完全或部分預防疾病或其症狀的預防性效果，並且/或者可以是部分或完全治癒疾病和/或疾病症狀的治療性效果。如本文所用，“治療”可包括治療哺乳動物，特別是人的疾病或障礙（例如，癌症），並且包括：(a)預防受試者的疾病或疾病症狀發生，該受試者可能易患該疾病但尚未被診斷為患有該疾病（例如，包括可能與原發性疾病相關或由原發性疾病導致的疾病）；(b)抑制該疾病，即阻止該疾病發展；以及(c)緩解該疾病，即導致該疾病的消退。治療可以指癌症的治療或改善或預防中的任何成功標記，包括任何客觀或主觀參數，諸如減輕；緩解；減少症狀或使患者更耐受疾病病症；減緩退化或衰退的速率；或使退化的終點不那麼衰弱。症狀的治療或改善基於一個或多個客觀或主觀參數；包括醫生檢查的結果。因此，術語“治療”包括施用本文所公開的抗體或組合物或複合體以預防或延遲、減輕或阻止或抑制與疾病（例如，癌症）相關的症狀或病症的發展。術語“治療效果”是指減少、消除或預防受試者的疾病、疾病症狀，或疾病的副作用。
如本文所用，術語“有效量”是指當施用於受試者以治療疾病時，足以實現對該疾病的治療的量。
如本文所用，術語“受試者”是指需要診斷、治療或療法的任何哺乳動物受試者。用於治療目的之“哺乳動物”是指歸類為哺乳動物的任何動物，包括人、家畜和農場動物，以及實驗室動物、動物園動物、運動動物或寵物動物，諸如狗、馬、貓、牛、綿羊、山羊、豬、小鼠、大鼠、兔、豚鼠、猴等。
術語“食蟹猴”（cyno/cynomolgus/Cynomolgus macaques）在本文中可互換使用，並且是指食蟹猴MSLN。該術語包括任何MSLN變體、同種型和物種同系物，它們由食蟹猴細胞天然表現，或者在用編碼食蟹猴MSLN的基因或cDNA轉染的細胞上表現，該食蟹猴MSLN在食蟹猴細胞上天然表現。
抗MSLN抗體 本發明提供了抗間皮素抗體。
在第一方面，本發明提供了一種特異性結合間皮素的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含輕鏈可變區（VL）和重鏈可變區（VH），並且其中 (1) VH包含具有SEQ ID NO: 24所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 27所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (2) VH包含具有SEQ ID NO: 25所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 28所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (3) VH包含具有SEQ ID NO: 26所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 27所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (4) VH包含具有SEQ ID NO: 24所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 29所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (5) VH包含具有SEQ ID NO: 24所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 30所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (6) VH包含具有SEQ ID NO: 24所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 31所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (7) VH包含具有SEQ ID NO: 24所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 32所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (8) VH包含具有SEQ ID NO: 24所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 33所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (9) VH包含具有SEQ ID NO: 25所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 29所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (10) VH包含具有SEQ ID NO: 63所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 67所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (11) VH包含具有SEQ ID NO: 64所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 67所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (12) VH包含具有SEQ ID NO: 65所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 67所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (13) VH包含具有SEQ ID NO: 65所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 68所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (14) VH包含具有SEQ ID NO: 63所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 68所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (15) VH包含具有SEQ ID NO: 66所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 67所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (16) VH包含具有SEQ ID NO: 64所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 69所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (17) VH包含具有SEQ ID NO: 66所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 69所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (18) VH包含具有SEQ ID NO: 63所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 69所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3；或者 (19) VH包含具有SEQ ID NO: 65所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且VL包含具有SEQ ID NO: 69所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3。
在一些實施方案中，LCDR 1-3和HCDR 1-3由EU Kabat定義/編號系統定義。在一些實施方案中，LCDR 1-3和HCDR 1-3由Chothia定義/編號系統定義。在一些實施方案中，LCDR 1-3和HCDR 1-3由AbM定義/編號系統定義。在一些優選的實施方案中，LCDR 1-3和HCDR 1-3由Kabat和Chothia組合編號系統定義。
在一些實施方案中，本發明提供了一種特異性結合間皮素的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含輕鏈可變區（VL）和重鏈可變區（VH），並且其中 (1) VH包含分別包含SEQ ID NO: 2、4、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、13所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (2) VH包含分別包含SEQ ID NO: 15、16、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、18所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (3) VH包含分別包含SEQ ID NO: 15、17、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、13所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (4) VH包含分別包含SEQ ID NO: 2、4、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、19所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (5) VH包含分別包含SEQ ID NO: 2、4、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、20所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (6) VH包含分別包含SEQ ID NO: 2、4、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、21所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (7) VH包含分別包含SEQ ID NO: 2、4、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、22所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (8) VH包含分別包含SEQ ID NO: 2、4、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、23所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (9) VH包含分別包含SEQ ID NO: 15、16、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、19所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (10) VH包含分別包含SEQ ID NO: 45、47、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 52、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (11) VH包含分別包含SEQ ID NO: 58、47、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 52、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (12) VH包含分別包含SEQ ID NO: 58、59、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 52、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (13) VH包含分別包含SEQ ID NO: 58、59、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 61、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (14) VH包含分別包含SEQ ID NO: 45、47、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 61、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (15) VH包含分別包含SEQ ID NO: 58、60、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 52、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (16) VH包含分別包含SEQ ID NO: 58、47、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 62、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (17) VH包含分別包含SEQ ID NO: 58、60、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 62、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (18) VH包含分別包含SEQ ID NO: 45、47、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 62、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3；或者 (19) VH包含分別包含SEQ ID NO: 58、59、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且VL包含分別包含SEQ ID NO: 62、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3。
在一些實施方案中，藉由Kabat Chothia組合系統定義CDRs。
在一些實施方案中，本發明提供了一種特異性結合間皮素的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含輕鏈可變區（VL）和重鏈可變區（VH），並且其中 (1) VH包含與SEQ ID NO: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 27具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (2) VH包含與SEQ ID NO: 25具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 28具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (3) VH包含與SEQ ID NO: 26具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 27具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (4) VH包含與SEQ ID NO: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 29具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (5) VH包含與SEQ ID NO: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 30具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (6) VH包含與SEQ ID NO: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 31具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (7) VH包含與SEQ ID NO: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 32具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (8) VH包含與SEQ ID NO: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 33具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (9) VH包含與SEQ ID NO: 25具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 29具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (10) VH包含與SEQ ID NO: 63具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (11) VH包含與SEQ ID NO: 64具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (12) VH包含與SEQ ID NO: 65具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (13) VH包含與SEQ ID NO: 65具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 68具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (14) VH包含與SEQ ID NO: 63具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 68具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (15) VH包含與SEQ ID NO: 66具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (16) VH包含與SEQ ID NO: 64具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (17) VH包含與SEQ ID NO: 66具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (18) VH包含與SEQ ID NO: 63具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列；或者 (19) VH包含與SEQ ID NO: 65具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且VL包含與SEQ ID NO: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列。
在一些實施方案中，VL包含如SEQ ID NO: 27至33和67至69中的任一者所示胺基酸序列的功能變體，該功能變體藉由一個或多個胺基酸在其中的插入、缺失和/或取代而形成，條件是包含該功能變體的VL的抗體保留結合MSLN的能力。在一些實施方案中，VH包含如SEQ ID NO: 24至26和63至66中的任一者所示胺基酸序列的功能變體，該功能變體藉由一個或多個胺基酸在其中的插入、缺失和/或取代而形成，條件是包含該功能變體的VH的抗體保留結合MSLN的能力。
該功能變體包含與母多肽的胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.1%、至少99.2%、至少99.3%、至少99.4%、至少99.5%、至少99.6%、至少99.7%、至少99.8%或至少99.9%序列同一性的胺基酸序列或由其組成。例如，SEQ ID NO: 27至33以及67至69中的任一者的功能變體包含分別與SEQ ID NO: 27至33以及67至69中的任一者具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.1%、至少99.2%、至少99.3%、至少99.4%、至少99.5%、至少99.6%、至少99.7%、至少99.8%或至少99.9%序列同一性的胺基酸序列或由其組成。例如，SEQ ID NO: 24至26和63至66中的任一者的功能變體包含與SEQ ID NO: 24至26和63至66中的任一者具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.1%、至少99.2%、至少99.3%、至少99.4%、至少99.5%、至少99.6%、至少99.7%、至少99.8%或至少99.9%序列同一性的胺基酸序列或由其組成。
在一些實施方案中，SEQ ID NO: 27至33和67至69中的任一者的功能變體包含與SEQ ID NO: 27至33和67至69中的任一者具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.1%、至少99.2%、至少99.3%、至少99.4%、至少99.5%、至少99.6%、至少99.7%、至少99.8%或至少99.9%序列同一性的胺基酸序列或由其組成，並且藉由一個或多個胺基酸在SEQ ID NO: 27至33和67至69中的任一者中的插入、缺失和/或取代而形成。在一些實施方案中，SEQ ID NO: 24至26和63至66中的任一者的功能變體包含與SEQ ID NO: 24至26和63至66中的任一者具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.1%、至少99.2%、至少99.3%、至少99.4%、至少99.5%、至少99.6%、至少99.7%、至少99.8%或至少99.9%序列同一性的胺基酸序列或由其組成，並且藉由一個或多個胺基酸在SEQ ID NO: 24至26和63至66中的任一者中的插入、缺失和/或取代而形成。
在功能變體的情況下，插入、缺失和/或取代的胺基酸的數目優選不超過母胺基酸序列中胺基酸總數的40%，更優選不超過35%，更優選為1%至33%，並且更優選為5%至30%，更優選為10%至25%，更優選為15%至20%。例如，插入、缺失和/或取代的胺基酸的數目可以為1至20，優選為1至10，更優選為1至7，還更優選為1至5，最優選為1至2。在一個優選的實施方案中，插入、缺失和/或取代的胺基酸的數目為1、2、3、4、5、6或7。
在一些實施方案中，插入、缺失和/或取代可在框架（FR）區處進行，例如在FR1、FR2、FR3和/或FR4處進行。
在一些實施方案中，一個或多個胺基酸的取代可以是一個或多個胺基酸的保守取代。此類保守取代優選的是以下基團(a)至(e)中的一個胺基酸被同一基團中的另一個胺基酸殘基取代的取代：(a)小的脂族、非極性或輕微極性殘基：Ala、Ser、Thr、Pro和Gly；(b)極性、帶負電荷的殘基以及它們的（不帶電荷的）醯胺：Asp、Asn、Glu和Gln；(c)極性、帶正電荷的殘基：His、Arg和Lys；(d)大的脂族、非極性殘基：Met、Leu、He、Val和Cys；和(e)芳族殘基：Phe、Tyr和Trp。
特別優選的保守取代如下：Ala轉變為Gly或Ser；Arg轉變為Lys；Asn轉變為Gln或His；Asp轉變為Glu；Cys轉變為Ser；Gln轉變為Asn；Glu轉變為Asp；Gly轉變為Ala或Pro；His轉變為Asn或Gln；Ile轉變為Leu或Val；Leu轉變為Ile或Val；Lys轉變為Arg、Gln或Glu；Met轉變為Leu、Tyr或Ile；Phe轉變為Met、Leu或Tyr；Ser轉變為Thr；Thr轉變為Ser；Trp轉變為Tyr；Tyr轉變為Trp；以及/或者Phe轉變為Val、Ile或Leu。
在一個優選的實施方案中，VL包含如SEQ ID NO: 27所示的胺基酸序列，並且VH包含如SEQ ID NO: 24所示的胺基酸序列；或者VL包含如SEQ ID NO: 28所示的胺基酸序列，並且VH包含如SEQ ID NO:25所示的胺基酸序列；或者VL包含如SEQ ID NO: 27所示的胺基酸序列，並且VH包含如SEQ ID NO: 26所示的胺基酸序列；或者VL包含如SEQ ID NO: 29所示的胺基酸序列，並且VH包含如SEQ ID NO: 24所示的胺基酸序列；或者VL包含如SEQ ID NO: 30所示的胺基酸序列，並且VH包含如SEQ ID NO: 24所示的胺基酸序列；或者VL包含如SEQ ID NO: 31所示的胺基酸序列，並且VH包含如SEQ ID NO: 24所示的胺基酸序列；或者VL包含如SEQ ID NO: 32所示的胺基酸序列，並且VH包含如SEQ ID NO: 24所示的胺基酸序列；或者VL包含如SEQ ID NO: 33所示的胺基酸序列，並且VH包含如SEQ ID NO: 24所示的胺基酸序列；或者VL包含如SEQ ID NO: 29所示的胺基酸序列，並且VH包含如SEQ ID NO: 25所示的胺基酸序列；或者VL包含如SEQ ID NO: 67所示的胺基酸序列，並且VH包含如SEQ ID NO: 63所示的胺基酸序列；或者VL包含如SEQ ID NO: 67所示的胺基酸序列，並且VH包含如SEQ ID NO: 64所示的胺基酸序列；或者VL包含如SEQ ID NO: 67所示的胺基酸序列，並且VH包含如SEQ ID NO: 65所示的胺基酸序列；或者VL包含如SEQ ID NO: 68所示的胺基酸序列，並且VH包含如SEQ ID NO: 65所示的胺基酸序列；或者VL包含如SEQ ID NO: 68所示的胺基酸序列，並且VH包含如SEQ ID NO: 63所示的胺基酸序列；或者VL包含如SEQ ID NO: 67所示的胺基酸序列，並且VH包含如SEQ ID NO: 66所示的胺基酸序列；或者VL包含如SEQ ID NO: 69所示的胺基酸序列，並且VH包含如SEQ ID NO: 64所示的胺基酸序列；或者VL包含如SEQ ID NO: 69所示的胺基酸序列，並且VH包含如SEQ ID NO: 66所示的胺基酸序列；或者VL包含如SEQ ID NO: 69所示的胺基酸序列，並且VH包含如SEQ ID NO: 63所示的胺基酸序列；或者VL包含如SEQ ID NO: 69所示的胺基酸序列，並且VH包含如SEQ ID NO: 65所示的胺基酸序列。
基於抗體的重鏈恆定區的胺基酸序列，免疫球蛋白分子可分為五類（同種型）：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，並且可進一步分為不同的亞型，諸如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2等。基於輕鏈的胺基酸序列，抗體的輕鏈可以分類為lambda（λ）鏈或kappa（κ）鏈。本文所公開的抗體可以是上述任何類型或亞型。
在一些實施方案中，抗體可以是選自IgG、IgA、IgM、IgE和IgD的同種型。在一些實施方案中，抗體可以是選自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的亞型。在一個優選的實施方案中，抗體是IgG1抗體。
本文所公開的抗體可以是完整抗體或其抗原結合片段。抗原結合片段可以是保留特異性結合MSLN能力的抗體的任何片段。抗原結合片段的示例包括但不限於Fab片段；F(ab')2片段；Fab'片段；Fd片段；Fd'片段；Fv片段；scFv片段；dAb片段；分離的互補性決定區（CDR）；奈米抗體；線性抗體，其包含一對串聯Fd區段（VH-CH1-VH-CH1）和前述片段中的任一片段的修飾形式，這些片段的修飾形式保留抗原結合活性。
在一些實施方案中，抗原結合片段可選自Fab、Fab’、F(ab') 2、Fv、scFv和ds-scFv。在一個優選的實施方案中，抗原結合片段是Fab或scFv。
在一些實施方案中，本發明提供了一種特異性結合間皮素的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含重鏈（HC）和輕鏈（LC），並且其中： (1) HC包含與SEQ ID NO: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 37具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (2) HC包含與SEQ ID NO: 35具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 38具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (3) HC包含與SEQ ID NO: 36具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 37具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (4) HC包含與SEQ ID NO: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 39具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (5) HC包含與SEQ ID NO: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 40具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (6) HC包含與SEQ ID NO: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 41具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (7) HC包含與SEQ ID NO: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 42具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (8) HC包含與SEQ ID NO: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 43具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (9) HC包含與SEQ ID NO: 35具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 39具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (10) HC包含與SEQ ID NO: 70具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (11) HC包含與SEQ ID NO: 71具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (12) HC包含與SEQ ID NO: 72具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (13) HC包含與SEQ ID NO: 72具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 75具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (14) HC包含與SEQ ID NO: 70具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 75具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (15) HC包含與SEQ ID NO: 73具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (16) HC包含與SEQ ID NO: 71具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (17) HC包含與SEQ ID NO: 73具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (18) HC包含與SEQ ID NO: 70具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列；或者 (19) HC包含與SEQ ID NO: 72具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且LC包含與SEQ ID NO: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列。
在一些實施方案中，輕鏈包含如SEQ ID NO: 37至43和74至76中的任一者所示胺基酸序列的功能變體，該功能變體藉由一個或多個胺基酸在其中的插入、缺失和/或取代而形成，條件是包含該功能變體的輕鏈的抗體保留結合MSLN的能力。在一些實施方案中，重鏈包含如SEQ ID NO: 34至36和70至73中的任一者所示胺基酸序列的功能變體，該功能變體藉由一個或多個胺基酸在其中的插入、缺失和/或取代而形成，條件是包含該功能變體的重鏈的抗體保留結合MSLN的能力。
例如，SEQ ID NO: 37至43以及74至76中的任一者的功能變體包含分別與SEQ ID NO: 37至43以及74至76中的任一者具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.1%、至少99.2%、至少99.3%、至少99.4%、至少99.5%、至少99.6%、至少99.7%、至少99.8%或至少99.9%序列同一性的胺基酸序列或由其組成。例如，SEQ ID NO: 34至36和70至73中的任一者的功能變體包含分別與SEQ ID NO: 34至36和70至73中的任一者具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.1%、至少99.2%、至少99.3%、至少99.4%、至少99.5%、至少99.6%、至少99.7%、至少99.8%或至少99.9%序列同一性的胺基酸序列或由其組成。
在一些實施方案中，插入、缺失和/或取代的胺基酸的數目優選不超過母胺基酸序列中胺基酸總數的40%，更優選不超過35%，更優選為1%至33%，並且更優選為5%至30%，更優選為10%至25%，更優選為15%至20%。例如，插入、缺失和/或取代的胺基酸的數目可以為1至50，優選為1至20，更優選為1至10，還更優選為1至5。在一個優選的實施方案中，插入、缺失和/或取代的胺基酸的數目為1、2、3、4、5、6或7。
在一些實施方案中，插入、缺失和/或取代可在框架（FR）區處進行，例如在FR1、FR2、FR3和/或FR4處進行；以及/或者在恆定區處進行，例如在CL、CH1、CH2和/或CH3處進行。
在一些實施方案中，一個或多個胺基酸的取代可以是一個或多個胺基酸的保守取代。保守取代的示例如上所述。
在一個優選的實施方案中，輕鏈包含如SEQ ID NO: 37所示的胺基酸序列，並且重鏈包含如SEQ ID NO: 34所示的胺基酸序列；或者輕鏈包含如SEQ ID NO: 38所示的胺基酸序列，並且重鏈包含如SEQ ID NO:35所示的胺基酸序列；或者輕鏈包含如SEQ ID NO: 37所示的胺基酸序列，並且重鏈包含如SEQ ID NO: 36所示的胺基酸序列；或者輕鏈包含如SEQ ID NO: 39所示的胺基酸序列，並且重鏈包含如SEQ ID NO: 34所示的胺基酸序列；或者輕鏈包含如SEQ ID NO: 40所示的胺基酸序列，並且重鏈包含如SEQ ID NO: 34所示的胺基酸序列；或者輕鏈包含如SEQ ID NO: 41所示的胺基酸序列，並且重鏈包含如SEQ ID NO: 34所示的胺基酸序列；或者輕鏈包含如SEQ ID NO: 42所示的胺基酸序列，並且重鏈包含如SEQ ID NO: 34所示的胺基酸序列；或者輕鏈包含如SEQ ID NO: 43所示的胺基酸序列，並且重鏈包含如SEQ ID NO: 34所示的胺基酸序列；或者輕鏈包含如SEQ ID NO: 39所示的胺基酸序列，並且重鏈包含如SEQ ID NO: 35所示的胺基酸序列；或者輕鏈包含如SEQ ID NO: 74所示的胺基酸序列，並且重鏈包含如SEQ ID NO: 70所示的胺基酸序列；或者輕鏈包含如SEQ ID NO: 74所示的胺基酸序列，並且重鏈包含如SEQ ID NO: 71所示的胺基酸序列；或者輕鏈包含如SEQ ID NO: 74所示的胺基酸序列，並且重鏈包含如SEQ ID NO: 72所示的胺基酸序列；或者輕鏈包含如SEQ ID NO: 75所示的胺基酸序列，並且重鏈包含如SEQ ID NO: 72所示的胺基酸序列；或者輕鏈包含如SEQ ID NO: 75所示的胺基酸序列，並且重鏈包含如SEQ ID NO: 70所示的胺基酸序列；或者輕鏈包含如SEQ ID NO: 74所示的胺基酸序列，並且重鏈包含如SEQ ID NO: 73所示的胺基酸序列；或者輕鏈包含如SEQ ID NO: 76所示的胺基酸序列，並且重鏈包含如SEQ ID NO: 71所示的胺基酸序列；或者輕鏈包含如SEQ ID NO: 76所示的胺基酸序列，並且重鏈包含如SEQ ID NO: 73所示的胺基酸序列；或者輕鏈包含如SEQ ID NO: 76所示的胺基酸序列，並且重鏈包含如SEQ ID NO: 70所示的胺基酸序列；或者輕鏈包含如SEQ ID NO: 76所示的胺基酸序列，並且重鏈包含如SEQ ID NO: 72所示的胺基酸序列。
在一些實施方案中，抗體包含Fc區。在一些實施方案中，Fc區可以是任何同種型，包括但不限於IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，並且可包含一個或多個突變或修飾。在一個實施方案中，Fc區是IgG1同種型或由其衍生，任選地具有一個或多個突變或修飾。在一個實施方案中，Fc區是人IgG1 Fc。
在一個實施方案中，Fc區是效應子功能缺陷型。例如，Fc區可以是IgG1同種型，或非IgG1型，例如IgG2、IgG3或IgG4，其已經突變，使得調節效應子功能諸如ADCC的能力已經降低或甚至消除。此類突變已在例如Dall'Acqua WF等人，J Immunol.第177卷第2期：第1129-1138頁（2006年）和Hezareh M，J Virol.，第75卷第24期：第12161-12168頁（2001年）中進行了描述。在一些實施方案中，抗體的Fc區包含具有L234A、L235A和G237A突變的野生型IgG1 Fc。
在一些實施方案中，抗體在一個或多個轉譯後修飾位點處突變。在一個實施方案中，Fc區包含去除Asn連接的糖基化的受體位點的突變，或者對Fc區進行操作以消除抗體的效應子功能。
在哺乳動物細胞中表現的蛋白質中廣泛地觀察到轉譯後修飾（PTM）。除了抗體中的保守PTM位點例如IgG1抗體CH2結構域上的保守N-糖基化位點之外，抗體的抗原結合位點內出現的其他PTM位點（即，CDR區）也可降低抗原結合活性或降低化學穩定性。例如，脫醯胺或異構化可能使分子不穩定和異質。為了降低序列易感性，可以藉由突變去除PTM基序。掃描VH序列或VL序列，觀察PTM基序例如異構化基序（例如，DG）的存在。然後使“熱點”殘基（例如，DG基序中的D或G）突變為種系序列中的對應殘基或具有相似生物物理特性的其他殘基。
雙特異性抗體 在第二方面，本申請提供了一種雙特異性或多特異性抗體。在一些實施方案中，抗體是雙特異性抗體，其還包含結合第二抗原的第二抗原結合區。在一些實施方案中，第二抗原可以是腫瘤相關抗原、免疫檢查點分子或免疫細胞抗原。
本領域已經鑑定了許多與特定癌症相關的腫瘤相關抗原。在一些實施方案中，腫瘤相關抗原是能夠潛在地刺激明顯的腫瘤特異性免疫反應的抗原。這些抗原中的一些抗原由正常細胞編碼，但不一定由正常細胞表現。這些抗原可表徵為在正常細胞中通常沉默（即不表現）的那些，僅在分化的某些階段表現的那些，以及隨時間推移表現的那些，諸如胚胎抗原和胎兒抗原。其他腫瘤抗原由突變細胞基因編碼，諸如致癌基因（例如，活化的ras致癌基因）、抑制基因（例如，突變體p53）以及藉由內部缺失或染色體易位產生的融合蛋白。其他腫瘤抗原可由病毒基因編碼，諸如RNA腫瘤病毒和DNA腫瘤病毒攜帶的那些。許多其他腫瘤相關抗原和針對它們的抗體是已知的和/或商業可得的，並且還可由所屬領域中具有通常知識者生產。
腫瘤相關抗原的示例包括但不限於5T4、甲胎蛋白、CA-125、癌胚抗原、CD19、CD20、CD22、CD23、CD30、CD33、CD40、CD56、CD79、CD78、CD123、CD138、c-Met、CSPG4、IgM、C型凝集素樣分子1（CLL-1）、EGFR、EGFRvIII、上皮腫瘤抗原、ERBB2、FLT3、葉酸結合蛋白、GD2、GD3、HIV-1包膜糖蛋白gp41、HIV-1包膜糖蛋白gpl20、黑色素瘤相關抗原、CD200R1、MUC-1、突變p53、突變Ras、ROR1、VEGFR2，以及它們的組合。
在一些實施方案中，第二抗原是T細胞抗原。在一些實施方案中，T細胞抗原可選自T細胞受體（TCR）、CD3、CD4、CD8、CD16、CD25、CD28、CD44、CD62L、CD69、ICOS、41-BB（CD137）和NKG2D，或它們的任意組合。
在一些實施方案中，第二抗原是免疫檢查點分子。在一些實施方案中，免疫檢查點分子可選自PD-1、PD-L1、CTLA-4等。
在一些實施方案中，雙特異性抗體包含單多肽鏈，該單多肽鏈包含第一抗原結合區和第二抗原結合區，以及任選地Fc區。
Fc區可以是任何同種型，包括但不限於IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，並且可以包含一個或多個突變或修飾。在一個實施方案中，Fc區是IgG1同種型或由其衍生，任選地具有一個或多個突變或修飾。在一個實施方案中，Fc區是人IgG1 Fc。
在一個實施方案中，Fc區是效應子功能缺陷型。例如，Fc區可以是IgG1同種型，或非IgG1型，例如IgG2、IgG3或IgG4，其已經突變，使得調節效應子功能諸如ADCC的能力已經降低或甚至消除。此類突變已在例如Dall'Acqua WF等人，J Immunol.第177卷第2期：第1129-1138頁（2006年）和Hezareh M，J Virol.，第75卷第24期：第12161-12168頁（2001年）中進行了描述。
在一個實施方案中，Fc區包含去除Asn連接的糖基化的受體位點的突變，或者對Fc區進行其他操作以改變糖基化特性。例如，在IgG1 Fc區中，可使用N297Q突變除去Asn連接的糖基化位點。因此，在一個具體實施方案中，Fc區包含具有N297Q突變的IgG1野生型序列。例如，在IgG1 Fc區中，可使用N297Q突變除去Asn連接的糖基化位點。因此，在一個具體實施方案中，Fc區包含具有N297Q突變的IgG1野生型序列。
在另一個實施方案中，Fc區被糖工程化以減少岩藻糖，因此增強ADCC，例如，藉由在抗體產生過程中向培養基中添加化合物，如US2009317869中所述或如van Berkel等人（2010年），Biotechnol.Bioeng.，第105卷：第350頁中所述，或者藉由使用FUT8剔除細胞，例如，如Yamane-Ohnuki等人（2004年），Biotechnol.Bioeng，第87卷：第614頁中所述。ADCC可另選地使用Umaña等人（1999年），Nature Biotech，第17卷：第176頁所述的方法來優化。在另一個實施方案中，Fc區已被工程化以增強補體活化，例如，如Natsume等人（2009年），Cancer Sci.，第100卷：第2411頁中所述。
核酸 在第三方面，本發明提供了一種核酸，該核酸包含編碼本文所公開的抗MSLN抗體或其抗原結合片段或者本文所公開的雙特異性抗體或其抗原結合片段的核苷酸序列。
術語“多核苷酸”或“核酸”包括單鏈核苷酸聚合物和雙鏈核苷酸聚合物兩者。包含核酸的核苷酸可以是核糖核苷酸或去氧核糖核苷酸或任一類型核苷酸的修飾形式。所述修飾包括鹼基修飾（諸如溴尿苷和肌苷衍生物）、核糖修飾（諸如2',3'-二去氧核糖）和核苷酸間連接修飾（諸如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、苯胺基硫代磷酸酯（phosphoroanilothioate）、苯胺基磷酸酯（phoshoraniladate）和胺基磷酸酯。
例如，本發明提供了編碼本文所公開的重鏈可變區序列中的任一重鏈可變區序列的核酸分子。本發明還提供了與編碼本文所公開的重鏈可變區序列中的任一重鏈可變區序列的核酸具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%相同的核酸分子。
例如，本發明提供了編碼本文所公開的輕鏈可變區序列中的任一輕鏈可變區序列的核酸分子。本發明還提供了與編碼本文所公開的輕鏈可變區序列中的任一輕鏈可變區序列的核酸具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%相同的核酸分子。
例如，本發明提供了編碼以下項的核酸分子：(i)本文所公開的重鏈可變區序列中的任一重鏈可變區序列；和(ii)本文所公開的輕鏈可變區序列中的任一輕鏈可變區序列。本發明還提供了與編碼以下項的核酸具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%相同的核酸分子：(i)本文所公開的重鏈可變區序列中的任一重鏈可變區序列；和(ii)本文所公開的輕鏈可變區序列中的任一輕鏈可變區序列。
例如，本發明提供了編碼重鏈可變區序列的核酸分子，該重鏈可變區序列包含本文所公開的重鏈可變區序列中的任一重鏈可變區序列的CDR序列。
在一些實施方案中，本發明提供了編碼重鏈可變區序列的核酸分子，該重鏈可變區序列包含本文所公開的三個CDR序列的組中的任一組。
本發明還提供了編碼重鏈可變區序列的核酸分子，該重鏈可變區序列包含與本文所公開的重鏈可變區序列中的任一重鏈可變區序列的CDR序列具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%相同的CDR序列。
在一些實施方案中，本發明提供了編碼重鏈可變區序列的核酸分子，該重鏈可變區序列包含分別與本文所公開的三個CDR序列的組中的任一組的CDR1、CDR2和CDR3具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%相同的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列。
例如，本發明提供了編碼輕鏈可變區序列的核酸分子，該輕鏈可變區序列包含本文所公開的輕鏈可變區序列中的任一輕鏈可變區序列的CDR序列。
在一些實施方案中，本發明提供了編碼輕鏈可變區序列的核酸分子，該輕鏈可變區序列包含本文所公開的三個CDR序列的組中的任一組。
本發明還提供了編碼輕鏈可變區序列的核酸分子，該輕鏈可變區序列包含與本文所公開的輕鏈可變區序列中的任一輕鏈可變區序列的CDR序列具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%相同的CDR序列。
在一些實施方案中，本發明提供了編碼輕鏈可變區序列的核酸分子，該輕鏈可變區序列包含分別與本文所公開的三個CDR序列的組中的任一組的CDR1、CDR2和CDR3具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%相同的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列。
例如，本發明提供了編碼以下項的核酸分子：(i)重鏈可變區序列，其包含本文所公開的重鏈可變區序列中的任一重鏈可變區序列的CDR序列；和(ii)輕鏈可變區序列，其包含本文所公開的輕鏈可變區序列中的任一輕鏈可變區序列的CDR序列。在一些實施方案中，本發明提供了編碼以下項的核酸分子：(i)重鏈可變區序列，其包含本文所公開的三個CDR序列的組中的任一組；和(ii)輕鏈可變區序列，其包含本文所公開的三個CDR序列的組中的任一組。本發明還提供了編碼以下項的核酸分子：(i)重鏈可變區序列，其包含與本文所公開的重鏈可變區序列中的任一重鏈可變區序列的CDR序列具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%相同的CDR序列；和(ii)輕鏈可變區序列，其包含與本文所公開的輕鏈可變區序列中的任一輕鏈可變區序列的CDR序列具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%相同的CDR序列。在一些實施方案中，本發明提供了編碼以下項的核酸分子：(i)重鏈可變區序列，其包含分別與本文所公開的三個CDR序列的組中的任一組的CDR1、CDR2和CDR3具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%相同的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列；和(ii)輕鏈可變區序列，其包含分別與本文所公開的三個CDR序列的組中的任一組的CDR1、CDR2和CDR3具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%相同的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列。
在一些實施方案中，核酸是核糖核酸（RNA）或去氧核糖核酸（DNA）。在一些實施方案中，本發明提供了一種核糖核酸（RNA），該核糖核酸包含編碼本文所公開的抗MSLN抗體或其抗原結合片段或者本文所公開的雙特異性抗體或其抗原結合片段的核苷酸序列。在一些實施方案中，本發明提供了一種去氧核糖核酸（DNA），該去氧核糖核酸包含編碼本文所公開的抗MSLN抗體或其抗原結合片段或者本文所公開的雙特異性抗體或其抗原結合片段的去氧核苷酸序列。
因此，包含編碼本文所公開的抗MSLN抗體或其抗原結合片段或者本文所公開的雙特異性抗體或其抗原結合片段的去氧核苷酸序列的去氧核糖核酸（DNA）用於治療疾病。在一些實施方案中，該疾病是癌症。在一些實施方案中，癌症選自間皮瘤、前列腺癌、肺癌、胃癌、鱗狀細胞癌、胰腺癌、膽管癌、乳腺癌（例如，三陰性乳腺癌）和卵巢癌。
在一些實施方案中，去氧核糖核酸（DNA）可在體內引入人體細胞中。在一些實施方案中，本發明的去氧核糖核酸（DNA）包含在載體或遞送劑中。在一些實施方案中，本發明的去氧核糖核酸（DNA）被整合到細胞的基因組中。
因此，包含編碼本文所公開的抗MSLN抗體或其抗原結合片段或者本文所公開的雙特異性抗體或其抗原結合片段的核苷酸序列的核糖核酸（RNA）可用於治療疾病。在一些實施方案中，該疾病是癌症。在一些實施方案中，癌症選自間皮瘤、前列腺癌、肺癌、胃癌、鱗狀細胞癌、胰腺癌、膽管癌、乳腺癌（例如，三陰性乳腺癌）和卵巢癌。
在一些實施方案中，核糖核酸（RNA）可在體內引入人體細胞中。在一些實施方案中，本發明的核糖核酸（RNA）包含在載體或遞送劑中。
在一些具體實施方案中，包含編碼本文所公開的抗MSLN抗體或其抗原結合片段或者本文所公開的雙特異性抗體或其抗原結合片段的核苷酸序列的核糖核酸（RNA）是mRNA。在一些實施方案中，本發明的mRNA包含在載體或遞送系統（諸如脂質體）中。在一些實施方案中，mRNA可在體內藉由載體或遞送系統（諸如脂質體）引入人體細胞中，並在體內表現本發明的MLSN抗體。
本發明的mRNA可用於治療疾病。在一些實施方案中，該疾病是癌症。在一些實施方案中，癌症選自間皮瘤、前列腺癌、肺癌、胃癌、鱗狀細胞癌、胰腺癌、膽管癌、乳腺癌（例如，三陰性乳腺癌）和卵巢癌。
載體 在第四方面，本發明還提供了一種包含核酸的載體，該核酸包含編碼本文所公開的抗MSLN抗體或其抗原結合片段或者本文所公開的雙特異性抗體或其抗原結合片段的核苷酸序列。
在一些實施方案中，載體是能夠表現多肽的重組表現載體，該多肽包含抗-MSLN抗體的重鏈可變區或輕鏈可變區。例如，本發明提供了包含上述核酸分子中的任一核酸分子的重組表現載體。
任何載體都可適用於本公開。在一些實施方案中，載體是病毒載體。在一些實施方案中，載體是反轉錄病毒載體、DNA載體、鼠白血病病毒載體、SFG載體、質粒、RNA載體、腺病毒載體、桿狀病毒載體、愛潑斯坦巴爾（Epstein Barr）病毒載體、乳頭多瘤空泡病毒載體、牛痘病毒載體、單純皰疹病毒載體、腺病毒相關載體（AAV）、慢病毒載體或它們的任何組合。合適的示例性載體包括例如pGAR、pBABE-puro、pBABE-neo largeTcDNA、pBABE-hygro-hTERT、pMKO.1 GFP、MSCV-IRES-GFP、pMSCV PIG（Puro IRES GFP空質粒）、pMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-Puro-WPRE、MSCV IRES螢光素酶、pMIG、MDH1-PGK-GFP_2.0、TtRMPVIR、pMSCV-IRES-mCherry FP、pRetroX GFP T2A Cre、pRXTN、pLncEXP和pLXIN-Luc。
重組表現載體可以是任何合適的重組表現載體。合適的載體包括設計用於增殖和擴增或用於表現或用於兩者的那些，諸如質粒和病毒。例如，載體可選自pUC系列（Fermentas Life Sciences, Glen Burnie, Md.）、pBluescript系列（Stratagene, LaJolla, Calif.）、pET系列（Novagen, Madison, Wis.）、pGEX系列（Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden）和pEX系列（Clontech, Palo Alto, Calif.）。還可使用噬菌體載體，諸如λGT10、λGT11、λZapII（Stratagene）、λEMBL4和λNM1149。在本公開的上下文中有用的植物表現載體的示例包括pBI01、pBI101.2、pBI101.3、pBI121和pBIN19（Clontech）。在本公開的上下文中有用的動物表現載體的示例包括pcDNA、pEUK-Cl、pMAM和pMAMneo（Clontech）。
重組表現載體可使用標準重組DNA技術製備，這些技術描述於例如Sambrook等人，“Molecular Cloning: A Laboratory Manual”，第3版，Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor，N.Y.2001；和Ausubel等人，“Current Protocols in Molecular Biology”，Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons，NY，1994。可製備環狀或線性表現載體的構建體，以含有在原核宿主細胞或真核宿主細胞中起作用的複製系統。複製系統可衍生自例如ColEl、2μ質粒、λ、SV40、牛乳頭瘤病毒等。
因此，載體可用於治療疾病。在一些實施方案中，該疾病是癌症。在一些實施方案中，癌症選自間皮瘤、前列腺癌、肺癌、胃癌、鱗狀細胞癌、胰腺癌、膽管癌、乳腺癌（例如，三陰性乳腺癌）和卵巢癌。本發明的載體可引入細胞中。在一些實施方案中，本發明的載體可在體外或離體引入細胞中。任選地，隨後可將用載體引入的細胞施用到受試者體內。在一些實施方案中，本發明的載體可在體內引入細胞中。
例如，載體可以是腺病毒載體，該腺病毒載體包含編碼本文所公開的抗MSLN抗體或其抗原結合片段或者本文所公開的雙特異性抗體或其抗原結合片段的核苷酸序列。可將載體施用到受試者體內，然後在體內進入受試者的細胞，從而將編碼本文所公開的抗MSLN抗體或其抗原結合片段或者本文所公開的雙特異性抗體或其抗原結合片段的核苷酸序列整合到細胞的基因組中，隨後該細胞表現本文所公開的抗MSLN抗體或其抗原結合片段，以便治療本文所公開的疾病。
宿主細胞 在第五方面，本發明還提供了包含本文所公開的核酸或者本文所公開的載體的宿主細胞。
任何細胞都可用作本公開的核酸或載體的宿主細胞。在一些實施方案中，細胞可以是原核細胞、真菌細胞、酵母細胞，或高等真核細胞諸如哺乳動物細胞。合適的原核細胞包括但不限於真細菌，諸如革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物體，例如腸桿菌科（ Enterobactehaceae），諸如埃希氏菌屬（ Escherichia），例如大腸桿菌（ E. coli）；腸桿菌屬（ Enterobacter）；歐文氏菌屬（ Erwinia）；克雷伯菌屬（ Klebsiella）；變形桿菌屬（ Proteus）；沙門氏菌屬（ Salmonella），例如鼠傷寒沙門氏菌（ Salmonella typhimurium）；沙雷氏菌屬（ Serratia），例如黏質沙雷氏菌（ Serratia marcescans）和志賀氏菌（ Shigella）；芽孢桿菌綱（ Bacilli），諸如枯草芽孢桿菌（ B. subtilis）和地衣芽孢桿菌（ B. licheniformis）；假單胞菌屬（ Pseudomonas），諸如銅綠假單胞菌（ P. aeruginosa）；和鏈黴菌屬（ Streptomyces）。在一些實施方案中，該細胞是人細胞。在一些實施方案中，該細胞是免疫細胞。在一些實施方案中，宿主細胞包括例如CHO細胞，諸如CHOS細胞和CHOK1細胞，或HEK293細胞，諸如HEK293A、HEK293T和HEK293FS。
本發明的宿主細胞藉由體外或離體引入本文所公開的載體或者本文所公開的核酸來製備。可將本發明的宿主細胞施用到受試者體內，並且該宿主細胞在體內表現本文所公開的抗MSLN抗體或其抗原結合片段，以便治療本文所公開的疾病。
本發明還提供了已經引入上述載體中的任一載體的宿主細胞。本發明還提供了藉由在允許抗體或抗體片段產生的條件下培養宿主細胞，並回收如此產生的抗體和抗體片段來產生本發明的抗體和抗體片段的方法。
抗體藥物複合體 在第六方面，本發明提供了一種抗體藥物複合體（ADC），該抗體藥物複合體包含本發明的第一方面的抗體或其抗原結合片段或本發明的第二方面的雙特異性抗體。
在本公開的上下文中，“複合體”是指抗體或抗體片段（諸如抗原結合片段）共價連接到效應分子或第二蛋白（諸如第二抗體）。效應分子可以是例如藥物、毒素、治療劑、可檢測標記、蛋白質、核酸、脂質、奈米顆粒、碳水化合物或重組病毒。抗體複合體通常被稱為“免疫複合體”。當複合體包含與藥物（例如，細胞毒性劑）連接的抗體時，該複合體通常被稱為“抗體藥物複合體”或“ADC”。其他抗體複合體包括例如多特異性（諸如雙特異性或三特異性）抗體。
在一些實施方案中，效應分子可以是可檢測標記或免疫毒素。毒素的具體的非限制性示例包括但不限於相思豆毒素、蓖麻毒素、假單胞菌外毒素（PE，諸如PE35、PE37、PE38和PE40）、白喉毒素（DT）、肉毒桿菌毒素或其經修飾的毒素，或者直接或間接抑制細胞生長或殺死細胞的其他毒性劑。例如，PE和DT是劇毒化合物，通常藉由肝毒性導致死亡。然而，PE和DT可藉由去除毒素的天然標靶成分（諸如PE的結構域la和DT的B鏈）並用不同的標靶部分（諸如抗體）替代而被修飾成用作免疫毒素的形式。術語“綴合的”或“連接的”可以指將兩個多肽製成一個連續的多肽分子。在一個實施方案中，抗體連接到效應分子。在另一個實施方案中，連接到效應分子的抗體進一步連接到脂質或其他分子，連接到蛋白質或肽，以增加其在體內的半衰期。連接可藉由化學或重組方式進行。在一個實施方案中，連接是化學的，其中抗體部分與效應分子之間的反應已經產生了在兩個分子之間形成的共價鍵，從而形成一個分子。肽接頭（短肽序列）可任選地包括在抗體與效應分子之間。
本發明提供了免疫複合體，其包括本文所公開的單株抗體或抗原結合片段以及效應分子。在一些實施方案中，效應分子是毒素，諸如但不限於假單胞菌外毒素或其變體。在其他實施方案中，效應分子是可檢測標記，諸如但不限於螢光團、酶或放射性同位素。
可將所公開的單株抗體綴合到治療劑或效應分子。免疫複合體包括但不限於其中治療劑與抗體共價連接的分子。治療劑是具有針對特定靶分子或攜帶靶分子的細胞的特定生物活性的藥劑。所屬領域中具有通常知識者將理解，治療劑可包括各種藥物，諸如長春花鹼、道諾黴素等；細胞毒素諸如天然或修飾的假單胞菌外毒素或白喉毒素；含有藥理學組合物的包封劑（諸如脂質體）；放射性試劑諸如 125I、 32P、 14C、 3H和 35S和其他標記；靶部分；和配體。
特定治療劑的選擇取決於特定的靶分子或細胞以及所需的生物學效應。因此，例如，治療劑可以是用於引起特定靶細胞（諸如腫瘤細胞）死亡的細胞毒素。相反，當需要引起非致死生物反應時，可將治療劑綴合到非致死藥用試劑或含有非致死藥用試劑的脂質體。
使用本文所述的治療劑和抗體，技術人員可容易地構建多種含有功能上等效的核酸的複製，這些核酸諸如序列不同但編碼相同效應部分或抗體序列的核酸。因此，本公開提供了編碼抗體及其複合體和融合蛋白的核酸。
效應分子可使用所屬領域中具有通常知識者已知的任何數量的方式連接到所關注的抗體。可使用共價連接方式和非共價連接方式兩者。將效應分子連接到抗體的方法根據效應子的化學結構而變化。多肽通常含有多種官能團；諸如羧酸（COOH）、游離胺（-NH 2）或巰基（-SH）基團，這些官能團可用於與抗體上的合適官能團反應以導致效應分子的結合。另選地，將抗體衍生化以暴露或連接另外的反應性官能團。衍生化可包括連接許多已知接頭分子中的任一接頭分子。接頭可以是用於將抗體連接到效應分子的任何分子。接頭能夠與抗體和效應分子兩者形成共價鍵。合適的接頭是所屬領域中具有通常知識者公知的，包括但不限於直鏈或支鏈碳接頭、雜環碳接頭或肽接頭。當抗體和效應分子是多肽時，接頭可藉由組成胺基酸的側基（諸如藉由與半胱胺酸的二硫鍵）連接到這些組成胺基酸，或者連接到末端胺基酸的α碳胺基基團和羧基基團。
在一些情況下，當免疫複合體已經到達其靶位點時，期望從抗體釋放效應分子。因此，在這些情況下，免疫複合體將包含在靶位點附近可切割的鍵。
可藉由酶活性或者免疫複合體在靶細胞內或在靶位點附近所經受的條件來促進接頭的切割，以從抗體釋放效應分子。
鑑於已報導的用於將多種放射性診斷化合物、放射性治療化合物、標記（諸如酶或螢光分子）、藥物、毒素和其他試劑連接到抗體的眾多方法，所屬領域中具有通常知識者將能夠確定用於將給定試劑連接到抗體或其他多肽的合適方法。
可將本文所公開的抗體衍生化或連接到另一個分子（諸如另一個肽或蛋白質）。通常，將抗體或其部分衍生化，使得與靶抗原的結合不受衍生化或標記的不利影響。例如，可將抗體官能性連接（藉由化學偶聯、基因融合、非共價締合或其他方式）到一個或多個其他分子實體，諸如另一個抗體（例如，雙特異性抗體或雙鏈抗體）、檢測劑、藥劑和/或可調節抗體或抗體部分與另一個分子（諸如鏈黴親和素核心區或聚組胺酸標籤）締合的蛋白質或肽。
一種類型的衍生化抗體藉由交聯兩種或更多種抗體（相同類型或不同類型，諸如產生雙特異性抗體）來產生。合適的交聯劑包括具有由合適的間隔區隔開的兩個明顯反應性基團的異雙官能團的那些交聯劑（諸如間馬來醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺酯），或者具有同雙官能團的那些交聯劑（諸如辛二酸二琥珀醯亞胺酯）。此類接頭是可商購獲得的。
抗體可與可檢測標誌物綴合；例如，可檢測標誌物能夠藉由ELISA、分光光度法、流式細胞術、顯微鏡檢查或診斷成像技術（諸如電腦斷層掃描（CT）、電腦軸向斷層掃描（CAT）掃描、磁共振造影（MRI）、核磁共振造影（NMRI）、磁共振斷層掃描（MTR）、超聲波、光纖檢查和腹腔鏡檢查）來檢測。可檢測標誌物的具體的非限制性示例包括螢光團、化學發光劑、酶連接、放射性同位素和重金屬或化合物（例如用於藉由MRI檢測的超順磁性氧化鐵奈米晶體）。例如，有用的可檢測標誌物包括螢光化合物，這些螢光化合物包括螢光素、異硫氰酸螢光素、羅丹明、5-二甲胺-l-萘磺醯氯、藻紅蛋白、鑭系元素磷光體等。生物發光標誌物也是有用的，諸如螢光素酶、綠色螢光蛋白（GFP）和黃色螢光蛋白（YFP）。抗體或抗原結合片段還可與用於檢測的酶綴合，這些酶諸如辣根過氧化物酶、β-半乳糖苷酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等。當抗體或抗原結合片段與可檢測的酶綴合時，可藉由添加額外的試劑來檢測，該酶使用該額外的試劑來產生可辨別的反應產物。例如，當試劑辣根過氧化物酶存在時，添加過氧化氫和二胺基聯苯胺產生可目視檢測的有色反應產物。抗體或抗原結合片段還可與生物素綴合，並藉由抗生物素蛋白或鏈黴親和素蛋白結合的間接測量來檢測。應當注意，抗生物素蛋白本身可與酶或螢光標記綴合。
抗體可與自我標記的蛋白質標籤（例如HaloTag）融合。例如，可在恆定區的末端處複製蛋白質標籤。HaloTag是衍生自細菌酶（鹵代烷烴脫鹵素酶）的自我標記的蛋白質標籤，其被設計為共價結合到合成配體。在一些情況下，該合成配體包含連接到螢光團諸如近紅外螢光團的氯烷烴接頭（Los等人（2008年），ACS Chem Biol.，第3卷第6期：第373-82頁）。
抗體可用磁性試劑諸如釓來標記。抗體還可用鑭系元素（諸如銪和鏑）和錳來標記。
順磁性顆粒諸如超順磁性氧化鐵也可用作標記。抗體還可用由二級報告基因（諸如亮胺酸拉鍊對序列、二級抗體的結合位點、金屬結合結構域、表位標籤）識別的預定多肽表位來標記。在一些實施方案中，標記藉由各種長度的間隔區臂連接以降低潛在的空間位阻。
抗體還可用放射性標記的胺基酸來標記。放射性標記可用於診斷目的和治療目的兩者。例如，放射性標記可用於藉由X射線、發射光譜或其他診斷技術來檢測靶抗原的表現。用於多肽的標記的示例包括但不限於以下放射性同位素或放射性核苷酸： 3H、 14C、 15N、 35S、 90Y、 99Tc、 111In、 125I、 131I。
抗體還可用化學基團諸如聚乙二醇（PEG）、甲基或乙基基團或者碳水化合物基團來衍生化。這些基團可用於改善抗體的生物學特性，諸如增加血清半衰期或增加組織結合。
毒素可與本文所述的單株抗體一起使用以產生免疫毒素。示例性毒素包括蓖麻毒素、相思豆毒素、白喉毒素以及它們的亞基，以及肉毒桿菌毒素A至F。這些毒素可容易地從商業來源（Sigma Chemical Company, St. Louis, MO）獲得。所考慮的毒素還包括本文所述毒素的變體（參見，例如參見美國專利號5,079,163和4,689,401）。在一個實施方案中，該毒素是假單胞菌外毒素（PE）（美國專利號5,602,095）。如本文所用，“假單胞菌外毒素”是指全長天然（天然存在的）PE或已經修飾的PE。此類修飾可包括但不限於：結構域la的消除，結構域lb、II和III中的各種胺基酸缺失，單個胺基酸取代，以及在羧基末端添加一個或多個序列（例如參見Siegall等人，Biol.Chem.264:14256-14261, 1989）。
本文所述的單株抗體所採用的PE可包括天然序列、天然序列的細胞毒性片段以及天然PE及其細胞毒性片段的經保守修飾的變體。PE的細胞毒性片段包括在靶細胞中具有或不具有隨後的蛋白水解或其他處理的細胞毒性片段。PE的細胞毒性片段包括PE40、PE38和PE35。關於PE及其變體的其他描述，參見例如美國專利號4,892,827；5,512,658；5,602,095；5,608,039；5,821,238；和5,854,044；美國專利申請公開號2015/0099707；PCT公開號WO 99/51643和WO 2014/052064；Pai等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第88卷：第3358-3362頁，1991年；Kondo等人，J. Biol.Chem.，第263卷：第9470-9475頁，1988年；Pastan等人，Biochim.Biophys.Acta，第1333卷：第C1-C6頁，1997年。
本文還考慮了蛋白酶抗性PE變體和具有降低免疫原性的PE變體，諸如但不限於PE-LR、PE-6X、PE-8X、PE-LR/6X和PE-LR/8X（參見例如，Weldon等人，Blood，第113卷第16期：第3792-3800頁，2009年；Onda等人，Proc Natl Acad Sci USA，第105卷第32期：第11311-11316頁，2008年；以及PCT公開號WO 2007/016150、WO 2009/032954和WO 2011/032022，這些文獻以引用方式併入本文）。
在一些示例中，PE是對溶酶體降解有抗性的變體，諸如PE-LR（Weldon等人，Blood，第113卷第16期：第3792-3800頁，2009年；PCT公開號WO 2009/032954）。在其他示例中，PE是命名為PE-LR/6X的變體（PCT公開號WO 2011/032022）。在其他示例中，PE變體是具有降低的免疫原性的PE。在另外的其他示例中，PE是命名為PE-LR/8M的變體（PCT公開號WO 2011/032022）。
PE的修飾可發生在任何前述變體中，包括PE的細胞毒性片段（例如PE38、PE-LR和PE-LR/8M）。經修飾的PE可包括任何取代，諸如PE的一個或多個T細胞表位和/或B細胞表位內的一個或多個胺基酸殘基的取代，或者一個或多個T細胞表位和/或B細胞表位的缺失（參見例如美國專利申請公開號2015/0099707）。所考慮的PE形式還包括PE的去免疫形式，例如結構域II缺失的形式（例如PE24）。PE的去免疫形式描述於例如PCT公開WO 2005/052006、WO 2007/016150、WO 2007/014743、WO 2007/031741、WO 2009/32954、WO 2011/32022、WO 2012/154530和WO 2012/170617中。
本文所述的抗體還可用於將任何數目的不同的診斷性或治療性化合物標靶於在表面上表現腫瘤或病毒抗原的細胞。因此，本公開的抗體可直接或經由接頭連接到藥物，該藥物將被直接遞送至表現細胞表面抗原的細胞。這可用於治療、診斷或研究目的。治療劑包括化合物諸如核酸、蛋白質、肽、胺基酸或衍生物、糖蛋白、放射性同位素、脂質、碳水化合物或重組病毒。核酸治療和診斷部分包括反義核酸、用於與單鏈或雙鏈DNA共價交聯的衍生化寡核苷酸以及形成三鏈體的寡核苷酸。
另選地，連接到抗體的分子可以是包封系統，諸如奈米顆粒、脂質體或膠束，該包封系統含有治療組合物，諸如藥物、核酸（例如反義核酸）或優選地被保護免於直接暴露於循環系統的另一種治療部分。製備連接到抗體的脂質體的方法是所屬領域中具有通常知識者公知的（參見例如美國專利號4,957,735；Connor等人，Pharm.Ther.，第28卷：第341-365頁，1985年）。
本文所述的抗體還可共價或非共價地連接到可檢測標記。適於此類用途的可檢測標記包括可藉由光譜、光化學、生物化學、免疫化學、電學、光學或化學方式檢測的任何組合物。有用的標記包括磁珠、螢光染料（例如異硫氰酸螢光素、德克薩斯紅、羅丹明、綠色螢光蛋白等）、放射性標記（例如 3H、 125I、 35S、 14C或 32P）、酶（諸如辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶以及ELISA中常用的其他酶）和比色標記諸如膠體金或有色玻璃或塑膠（諸如聚苯乙烯、聚丙烯、膠乳等）珠。
檢測此類標記的方式是所屬領域中具有通常知識者公知的。因此，例如，放射性標記可使用照相膠片或閃爍計數器來檢測，螢光標誌物可使用光檢測器檢測來檢測發射的照明。酶標記通常藉由向酶提供底物並檢測酶對底物的作用所產生的反應產物來檢測，而比色標記藉由簡單地使有色標記可視化來檢測。
藥物組合物 在第七方面，本發明提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包含(i)本發明的第一方面的抗體或其抗原結合片段、或本發明的第二方面的雙特異性抗體、或本發明的第三方面的核酸、或本發明的第四方面的載體、或本發明的第五方面的宿主細胞、或本發明的第六方面的ADC；和任選地(ii)藥學上可接受的載體或賦形劑。
本發明提供了包含本發明的抗體的藥物組合物。在一些實施方案中，該藥物組合物還包含藥學上可接受的載體。術語“藥學上可接受的載體”包括生理上相容的任何和所有溶劑、緩衝液、分散介質、包衣、抗細菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。優選地，該載體適於靜脈內、肌內、皮下、腸胃外、脊柱或表皮施用（例如，藉由注射或輸注）。例如，在一些實施方案中，用於靜脈內施用的組合物通常是無菌等滲緩衝水溶液。
可將本發明的抗體或試劑（本文也稱為“活性化合物”）及其衍生物、片段、類似物和同系物摻入適於施用的藥物組合物中。此類組合物通常包含抗體或試劑以及藥學上可接受的載體。如本文所用，術語“藥學上可接受的載體”旨在包括與藥物施用相容的任何和所有溶劑、分散介質、包衣、抗細菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。合適的載體描述於“Remington's Pharmaceutical Sciences”的最新版本中，該文獻為該領域的標準參考文獻文本，該文獻以引用方式併入本文。此類載體或稀釋劑的優選示例包括但不限於水、鹽水、林格氏溶液、葡萄糖溶液和5%人血清白蛋白。還可使用脂質體和非水性溶媒諸如固定油。此類介質和試劑用於藥物活性物質的用途是本領域公知的。除非任何常規介質或試劑與活性化合物不相容，否則考慮將這些介質或試劑用於組合物中。還可將補充性活性化合物摻入組合物中。
將本發明的藥物組合物配製成與其預期施用途徑相容。施用途徑的示例包括腸胃外施用，例如靜脈內、皮內、皮下、口服（例如吸入）、透皮（即局部）、透黏膜和直腸施用。用於腸胃外、皮內或皮下施用的溶液或懸浮液可包括以下組分：無菌稀釋劑，諸如注射用水、鹽水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶劑；抗菌劑，諸如苯甲醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，諸如乙二胺四乙酸（EDTA）；緩衝液，諸如醋酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；以及用於調節張力的試劑，諸如氯化鈉或葡萄糖。pH值可用酸或鹼諸如鹽酸或氫氧化鈉來調節。腸胃外製劑可封裝在由玻璃或塑膠製成的安瓿、一次性注射器或多劑量小瓶中。
適於可注射用途的藥物組合物包括無菌水溶液（如果是水溶性的）或分散體以及用於臨時製備無菌可注射溶液或分散體的無菌散劑。對於靜脈內施用，合適的載體包括生理鹽水、抑菌水、Cremophor EL™（BASF，Parsippany，N.J.）或磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）。在所有情況下，組合物必須是無菌的並且應當是流動的以達到易於注射的程度。它在製備和儲存條件下必須是穩定的；並且必須保存以抵抗微生物諸如細菌和真菌的污染作用。該載體可以是含有以下物質的溶劑或分散介質：例如，水、乙醇、多元醇（例如，甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等）及它們合適的混合物。可例如藉由使用包衣（諸如卵磷脂），藉由在分散體的情況下保持所需的粒徑，以及藉由使用表面活性劑來保持恰當的流動性。可藉由各種抗細菌劑和抗真菌劑（例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞等）來實現對微生物的預防作用。在許多情況下，將優選在組合物中包含等滲劑，例如糖、多元醇（諸如甘露糖醇、山梨糖醇）、氯化鈉。可藉由在組合物中包含延遲吸收的試劑（例如，單硬脂酸鋁和明膠）來實現可注射組合物的持續吸收。
無菌可注射溶液可藉由以下方式製備：根據需要將所需量的活性化合物與上文列舉的一種成分或多種成分的組合摻入到適當的溶劑中，隨後過濾滅菌。通常，藉由將活性化合物摻入到含有基本分散介質和來自上文列舉的成分的所需其他成分的無菌溶媒中來製備分散液。就用於製備無菌可注射溶液的無菌散劑而言，製備方法是真空乾燥和冷凍乾燥，這些方法從活性成分加任何附加期望成分的先前無菌過濾的溶液中產生該活性成分加任何附加期望成分的散劑。
口服組合物通常包含惰性稀釋劑或可食用載體。它們可封裝在明膠膠囊中或壓制成片劑。出於口服治療施用的目的，活性化合物可摻有賦形劑並以片劑、錠劑或膠囊劑的形式使用。還可使用用作漱口藥的流體載體來製備口服組合物，其中流體載體中的化合物經口服施用並在漱口後吐出或吞服。藥學上相容的結合劑和/或佐劑材料可作為組合物的一部分包括在內。片劑、丸劑、膠囊劑、錠劑等可含有以下成分或具有類似性質的化合物中的任一者：黏合劑，諸如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑，諸如澱粉或乳糖；崩解劑，諸如海藻酸、Primogel或玉米澱粉；潤滑劑，諸如硬脂酸鎂或Sterotes；助流劑諸如二氧化矽膠體；甜味劑，諸如蔗糖或糖精；或調味劑，諸如薄荷、水楊酸甲酯或橙子調味劑。
對於藉由吸入施用，這些化合物以氣溶膠噴霧劑的形式從含有合適的推進劑（例如氣體諸如二氧化碳）的壓力容器或分配器，或霧化器遞送。
全身性施用還可藉由透黏膜或透皮方式進行。對於透黏膜或透皮施用，在製劑中使用適於待滲透的屏障的滲透劑。此類滲透劑在本領域中通常是已知的，並且包括例如用於透黏膜施用的洗滌劑、膽汁鹽和夫西地酸衍生物。透黏膜施用可藉由使用鼻腔噴霧劑或栓劑來完成。對於透皮施用，將活性化合物配製成本領域眾所周知的軟膏劑、藥膏劑、凝膠或霜劑。
還可將化合物製備成栓劑形式（例如，具有常規栓劑基質諸如可可脂和其他甘油酯）或用於直腸遞送的保留灌腸劑。
在一個實施方案中，活性化合物用載體製備，這些載體將保護化合物免於從機體快速排出，這些載體諸如包括植入物和微膠囊化遞送系統的控釋製劑。可使用生物可降解、生物相容的聚合物，諸如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯和聚乳酸。用於製備此類製劑的方法對所屬領域中具有通常知識者來說是顯而易見的。這些材料還可從Alza Corporation和Nova Pharmaceuticals公司商購獲得。脂質體懸浮劑（包括標靶具有針對病毒抗原的單株抗體的感染細胞的脂質體）也可用作藥學上可接受的載體。這些材料可根據所屬領域中具有通常知識者已知的方法來製備，例如，如描述於美國專利號4,522,811中。
為了易於施用和劑量的均勻性，將口服或腸胃外組合物配製成劑量單位形式是特別有利的。如本文所用的劑量單位形式指適合作為用於待治療受試者的單位劑量的物理離散的單元；每個單元含有預定量的活性化合物，所述預定量的活性化合物經計算在與所需的藥用載體締合時產生所需的治療效果。本發明的劑量單位形式的規格取決於活性化合物的獨特特性和待達到的特定治療效果以及配混用於治療個體的此類活性化合物的領域中的固有局限性，並且直接取決於這些因素。
藥物組合物可與施用說明書一起包含在容器、包裝或分配器中。
本發明提供了治療組合物，這些治療組合物包含本發明的抗MSLN抗體或其抗原-結合片段。根據本發明的治療組合物將與合適的載體、賦形劑和其他試劑一起施用，將這些藥劑摻入到製劑中以改進轉移、遞送、耐受性等。在所有藥物化學家已知的處方集中可找到大量合適的製劑：Remington's Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，PA。這些製劑包括例如散劑、糊劑、軟膏、果凍、蠟、油、脂質、包含脂質（陽離子或陰離子）的囊泡（諸如LIPOFECTIN™）、DNA複合體、無水吸收糊劑、水包油和油包水乳液、卡波蠟乳液（各種分子量的聚乙二醇）、半固體凝膠和含有卡波蠟的半固體混合物。還參見Powell等人，“Compendium of excipients for parenteral formulations”，PDA（1998年），J Pharm Sci Technol，第52卷：第238-311頁。
產生方法 單株抗體可以使用雜交瘤方法諸如Kohler和Milstein，Nature，第256卷：第495頁（1975年）所述的那些方法製備。在雜交瘤方法中，通常用免疫劑對小鼠、倉鼠或其他合適的宿主動物進行免疫，以引發產生或能夠產生特異性結合免疫劑的抗體的淋巴細胞。另選地，可以在體外對淋巴細胞進行免疫。
免疫劑通常包括蛋白質抗原、其片段或其融合蛋白。通常，如果需要人源細胞，則使用外周血淋巴細胞，或者如果需要非人哺乳動物來源，則使用脾細胞或淋巴結細胞。然後使用合適的融合劑諸如聚乙二醇將淋巴細胞與永生化細胞系融合，以形成雜交瘤細胞（Goding，Monoclonal Antibodies: Principles and Practice，Academic Press（1986年），第59-103頁）。永生化細胞系通常是轉化的哺乳動物細胞，特別是齧齒動物、牛和人來源的骨髓瘤細胞。通常，採用大鼠或小鼠骨髓瘤細胞系。雜交瘤細胞可以在合適的培養基中培養，該培養基優選含有一種或多種抑制未融合的永生化細胞生長或存活的物質。例如，如果母細胞缺乏次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉移酶（HGPRT或HPRT），用於雜交瘤的培養基通常將包含次黃嘌呤、胺基蝶呤和胸苷（“HAT培養基”），這些物質阻止HGPRT缺陷型細胞的生長。
優選的永生化細胞系是那些能有效融合、支持所選抗體產生細胞穩定高水平表現抗體並對培養基諸如HAT培養基敏感的細胞系。更優選的永生化細胞系是鼠骨髓瘤細胞系，其可例如從加利福尼亞州聖地牙哥的索爾克研究所細胞分配中心和維吉尼亞州馬納薩斯的美國菌種保藏中心獲得。還已描述了用於產生人單株抗體的人骨髓瘤和小鼠-人種間骨髓瘤細胞系。（參見Kozbor，J. Immunol.，第133卷：第3001頁（1984年）；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，Marcel Dekker, Inc.，New York（1987年），第51-63頁）。
然後可以測定培養雜交瘤細胞的培養基中針對抗原的單株抗體的存在。優選地，由雜交瘤細胞產生的單株抗體的結合特異性藉由免疫沉澱或藉由體外結合測定，諸如放射免疫測定（RIA）或酶聯免疫吸附測定（ELISA）來測定。這些技術和測定是本領域已知的。單株抗體的結合親和力可以例如藉由Scatchard analysis of Munson and Pollard，Anal.Biochem.，第107卷：第220頁（1980年）來測定。此外，在單株抗體的治療應用中，重要的是鑑定對靶抗原具有高度特異性和高結合親和力的抗體。
在鑑定出所需的雜交瘤細胞後，選殖可以藉由有限稀釋程序次選殖，並藉由標準方法培養。（參見Goding，Monoclonal Antibodies: Principles and Practice，Academic Press（1986年），第59-103頁）。適用於此目的的培養基包括例如Dulbecco改良Eagle培養基和RPMI-1640培養基。另選地，雜交瘤細胞可以在哺乳動物體內生長為腹水。
由次選殖分泌的單株抗體可以藉由常規免疫球蛋白純化程序諸如例如蛋白質A-瓊脂糖、羥基磷灰石色譜、凝膠電泳、透析或親和層析從培養基或腹水中分離或純化。
單株抗體也可以藉由重組DNA方法諸如美國專利號4,816,567中描述的那些方法製備。編碼本發明的單株抗體的DNA可容易地使用常規程序分離和測序（例如，藉由使用能夠特異性結合編碼鼠抗體重鏈和輕鏈的基因的寡核苷酸探針）。本發明的雜交瘤細胞用作此類DNA的優選來源。在分離後，可將DNA置於表現載體中，然後將這些表現載體轉染到不另外產生免疫球蛋白蛋白質的宿主細胞諸如猿COS細胞、中國倉鼠卵巢（CHO）細胞或骨髓瘤細胞中，以在重組宿主細胞中實現單株抗體的合成。也可以修飾DNA，例如，藉由用人重鏈和輕鏈恆定區的編碼序列取代同源鼠序列（參見美國專利號4,816,567；Morrison，Nature，第368卷：第812-813頁（1994年））或藉由將免疫球蛋白編碼序列共價連接到非免疫球蛋白多肽的全部或部分編碼序列。此類非免疫球蛋白多肽可以取代本發明的抗體的恆定結構域，或者可以取代本發明的抗體的一個抗原結合位點的可變結構域，以產生嵌合二價抗體。
完全人抗體是其中輕鏈和重鏈兩者的整條序列（包括CDR）都來自人基因的抗體分子。此類抗體在本文中被稱為“人源化抗體”、“人抗體”或“完全人抗體”。人單株抗體可以藉由使用三源雜交瘤技術；人B細胞雜交瘤技術（參見Kozbor等人，1983年，Immunol Today，第4卷：第72頁）；和EBV雜交瘤技術製備，以產生人單株抗體（參見Cole等，1985年，在：MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY，Alan R. Liss, Inc.，第77-96頁）。可以利用人單株抗體，並且這些人單株抗體可以藉由使用人雜交瘤（參見Cote等人，1983年，Proc Natl Acad Sci USA，第80卷：第2026-2030頁）或藉由用愛潑斯坦巴爾（Epstein Barr）病毒在體外轉化人B細胞（參見Cole等人，1985年，在：MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY，Alan R. Liss, Inc.，第77-96頁）來產生。
此外，人源化抗體可以在基因轉殖植物中產生，作為現有哺乳動物系統的低價產生替代方案。例如，基因轉殖植物可以是煙草植物，即本氏煙草（Nicotiania benthamiana）和煙草（Nicotiana tabaccum）。抗體從植物葉片中純化。植物的穩定轉化可以藉由使用根癌農桿菌（Agrobacterium tumefacien）或粒子轟擊來實現。例如，藉由轉化，在細菌培養物，即根癌農桿菌菌株BLA4404中表現至少含有重鏈和輕鏈序列的核酸表現載體。植物的浸潤可以藉由注射完成。可溶性葉片萃取物可以藉由在研缽中研磨葉片組織並藉由離心來製備。抗體的分離和純化可以藉由所屬領域中具有通常知識者已知的許多方法容易地進行。在植物中產生抗體的其他方法在例如Fischer等人，Vaccine，2003年，第21卷：第820-825頁；和Ko等人，Current Topics in Microbiology and Immunology，第332卷，2009年，第55-78頁中有所描述。因此，本發明還提供了任何包含編碼本發明的抗體或產生本發明的抗體的載體的細胞或植物。
此外，可以在真菌中產生所關注的（人）抗體。例如，真菌可以是嗜熱毀絲黴（ Myceliophthora thermophila）（例如，嗜熱毀絲黴菌株C1；Visser等人（2011年），Industrial Biotechnology，第7卷第3期：第214-223頁）。其他示例包括麯黴屬（ Aspergillus）菌種（例如，米麯黴（ A. oryzae）（Huynh等人（2020年），Fungal Biology and Biotechnology，第7卷：第7頁）、黑麯黴（ A. niger）（Ward等人（2004年），Environ.Microbiol.，第70卷：第2567-2576頁）或泡盛麯黴（ A. awamori）（Joosten等人（2003年），Microb.Cell Fact，第2卷：第1頁））和木黴屬（ Trichoderma）菌種（例如，裡氏木黴（ T. reesei）（Nyyssönen等人（1993年），Biotechnology，第11卷：第591-595頁））。在其他情況下，真菌可以是酵母，諸如釀酒酵母（ Saccharomyces cerevisiae）、博伊丁氏假絲酵母（ Candida boidinii）、多形漢遜酵母（ Hansenula polymorpha）、甲醇畢赤酵母（ Pichia methanolica）、巴斯德畢赤酵母（ Pichia pastoris）、解脂耶氏酵母（ Yarrowia lipolytica）、乳酸克魯維酵母（ Kluyveromyces lactis）或微小漢遜酵母（ Ogataea minuta）（Joosten等人（2003年）；Suzuki等人（2017年），J Biosci Bioeng.，第124卷：第156-163頁）。
此外，人抗體也可以使用其他技術（包括噬菌體展示文庫）來產生。（參見Hoogenboom和Winter，J. Mol.Biol.，第227卷：第381頁（1991年）；Marks等人，J. Mol.Biol.，第222卷：第581頁（1991年））。類似地，人抗體可以藉由將人免疫球蛋白基因座引入到基因轉殖動物，例如其中內源免疫球蛋白基因已經部分或完全失活的小鼠中來製備。在攻擊時，觀察到人抗體產生，其在包括基因重排、組裝和抗體庫在內的所有方面都非常類似於在人中所觀察到的。該方法在例如WO 2006/008548、WO 2007/096779、WO 2010/109165、WO 2010/070263、WO 2014/141189和WO 2014/141192中有所描述。
美國專利號5,916,771中公開了一種用於產生所關注的抗體諸如人抗體的方法。該方法包括將含有編碼重鏈的核苷酸序列的表現載體導入到培養物中的一種哺乳動物宿主細胞中，將含有編碼輕鏈的核苷酸序列的表現載體導入到另一種哺乳動物宿主細胞中，並將這兩種細胞融合以形成雜交細胞。雜交細胞表現含有重鏈和輕鏈的抗體。
在對該程序的進一步改進中，PCT公開WO 99/53049中公開了用於鑑定免疫原上的臨床相關表位的方法和用於選擇以高親和力免疫特異性結合相關表位的抗體的關聯方法。
抗體可以用含有編碼上述單鏈抗體的DNA片段的載體表現。
這些可以包括載體、脂質體、裸DNA、佐劑輔助的DNA、基因槍、導管等。載體包括：化學複合體，諸如WO 93/64701中所述的，該化學複合體具有標靶部分（例如，細胞表面受體的配體）和核酸結合部分（例如，聚賴胺酸）；病毒載體（例如，DNA或RNA病毒載體）；融合蛋白，諸如PCT/US 95/02140（WO 95/22618）中所述的，該融合蛋白是含有靶部分（例如，對靶細胞特異性的抗體）和核酸結合部分（例如，魚精蛋白）的融合蛋白；質粒；噬菌體等。載體可以是染色體的、非染色體的或合成的。
優選的載體包括病毒載體、融合蛋白和化學複合體。反轉錄病毒載體包括莫洛尼鼠白血病病毒。優選的是DNA病毒載體。這些載體包括痘病毒載體諸如正痘病毒或禽痘病毒載體、皰疹病毒載體諸如單純皰疹病毒I型（HSV）載體（參見Geller, A. I.等人，J. Neurochem，第64卷：第487頁（1995年）；Lim, F.等人，在：DNA Cloning: Mammalian Systems，D. Glover編撰（Oxford Univ.Press，Oxford，England）（1995年）；Geller, A. I.等人，Proc Natl.Acad.Sci.: U.S.A.，第90卷：第7603頁（1993年）；Geller, A. I.等人，Proc Natl.Acad.Sci USA，第87卷：第1149頁（1990年）、腺病毒載體（參見LeGal LaSalle等人，Science，第259卷：第988頁（1993年）；Davidson等人，Nat. Genet，第3卷：第219頁（1993年）；Yang等人，J. Virol.，第69卷：第2004頁（1995年）和腺相關病毒載體（參見Kaplitt, M. G.等人，Nat. Genet.，第8卷：第148頁（1994年）。
痘病毒載體將基因導入到細胞質中。禽痘病毒載體導致核酸的僅短期表現。腺病毒載體、腺相關病毒載體和單純皰疹病毒（HSV）載體優選用於將核酸導入到神經細胞中。腺病毒載體導致比腺相關病毒（約4個月）更短期的表現（約2個月），這繼而比HSV載體更短。選擇的特定載體將取決於靶細胞和所治療的病症。引入可以藉由標準技術例如感染、轉染、轉導或轉化進行。基因轉移模式的示例包括例如裸DNA、CaPO4沉澱、DEAE葡聚糖、電穿孔、原生質體融合、脂轉染、細胞微注射和病毒載體。
載體可用於標靶基本上任何所需的靶細胞。例如，立體定向注射可用於將載體（例如，腺病毒、HSV）引導至所需位置。另外，可以使用微型泵輸注系統諸如SynchroMed輸注系統，藉由腦室內（icv）輸注來遞送顆粒。也已經證明稱之為對流的基於整體流動的方法在將大分子遞送至腦的擴展區域方面是有效的，並且可以用於將載體遞送至靶細胞。（參見Bobo等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第91卷：第2076-2080頁（1994年）；Morrison等人，Am. J. Physiol.，第266卷：第292-305頁（1994年））。可以使用的其他方法包括導管、靜脈內、腸胃外、腹膜內和皮下注射，以及口服或其他已知的施用途徑。
這些載體可用於表現大量可以多種方式使用的抗體。例如，以檢測樣本中MSLN的存在。抗體也可用於試圖結合MSLN並破壞MSLN與MUC16之間的相互作用。
在優選的實施方案中，本發明的抗體是全長抗體，含有與結合Fc受體的野生型Fc區相似的Fc區。
治療方法 可施用本文提供的抗體以減緩或抑制間皮素陽性癌症的進展，或抑制間皮素陽性癌症的轉移。在這些應用中，將治療有效量的組合物以足以抑制癌細胞的生長、複製或轉移或者抑制癌症的體征或症狀的量施用於受試者。合適的受試者可包括診斷患有表現間皮素的癌症諸如間皮瘤、前列腺癌、肺癌、胃癌、鱗狀細胞癌、胰腺癌、膽管癌、乳腺癌（例如，三陰性乳腺癌）或卵巢癌的那些受試者。
本文提供了一種藉由向受試者施用治療有效量的本文所述的抗體來治療該受試者的間皮素陽性癌症的方法。本文還提供了一種藉由向受試者施用治療有效量的本文所述的抗體來抑制該受試者的間皮素陽性癌症轉移的方法。在一些實施方案中，間皮素陽性癌症為間皮瘤、前列腺癌、肺癌、胃癌、鱗狀細胞癌、胰腺癌、膽管癌、乳腺癌（例如，三陰性乳腺癌）或卵巢癌。
本文所公開的抗體的施用還可伴有其他抗癌劑的施用或治療處理（諸如腫瘤的手術切除）。任何合適的抗癌劑都可與本文所公開的抗體組合施用。示例性抗癌劑包括但不限於化學治療劑，諸如，例如有絲分裂抑制劑、烷化劑、抗代謝物、嵌入抗生素、生長因子抑制劑、細胞週期抑制劑、酶、拓撲異構酶抑制劑、抗存活劑、生物反應調節劑、抗-激素（例如抗雄激素）和抗血管生成劑。其他抗癌治療包括放射療法以及特異性標靶癌細胞的其他抗體。
對於某些類型的癌症，另一種常見的治療是手術治療，例如轉移性腫瘤的手術切除。治療的另一個示例是放射性療法，例如向腫瘤部位施用放射性材料或能量（諸如外照射療法）以幫助根除腫瘤或在手術切除之前使其縮小。
診斷和檢測方法 本文提供了在體外或體內檢測間皮素蛋白質的方法。在一些情況下，在生物樣本中檢測到間皮素表現。該樣本可以是任何樣本，包括但不限於血液樣本，來自活檢、屍檢和病理標本的組織。生物樣本還包括組織切片，例如，用於組織學目的冷凍切片。生物樣本還包括體液，諸如血液、血清、血漿、痰、脊髓液或尿。生物樣本通常從哺乳動物獲得，諸如人或非人靈長類動物。
本文提供了一種藉由使來自受試者的樣本與本文所公開的間皮素特異性單株抗體接觸以及檢測該抗體與該樣本的結合，來確定受試者是否患有間皮素陽性癌症的方法。相比於該抗體與對照樣本的結合，該抗體與該樣本的結合增加，鑑定出受試者患有間皮素陽性癌症。
在另一個實施方案中，提供了一種藉由使來自診斷患有間皮素陽性癌症的受試者的樣本與本文所公開的間皮素特異性單株抗體接觸以及檢測該抗體與該樣本的結合，來確認受試者的間皮素陽性癌症的診斷的方法。相比於該抗體與對照樣本的結合，該抗體與該樣本的結合增加，確認受試者的間皮素陽性癌症的診斷。
在所公開的方法的一些示例中，單株抗體被直接標記。
在其他示例中，該方法還包括使特異性結合單株抗體的第二抗體與樣本接觸；以及檢測第二抗體的結合。相比於第二抗體與對照樣本的結合，第二抗體與該樣本的結合增加，檢測出受試者的間皮素陽性癌症或確認受試者的間皮素陽性癌症的診斷。
在一些情況下，癌症為間皮瘤、前列腺癌、肺癌、胃癌、鱗狀細胞癌、胰腺癌、膽管癌、乳腺癌（例如，三陰性乳腺癌）或卵巢癌。
在一些示例中，對照樣本是來自沒有癌症的受試者的樣本。在特定的示例中，樣本是血液或組織樣本。
在診斷和檢測方法的一些實施方案中，抗MSLN抗體用可檢測標記來直接標記。在另一個實施方案中，抗MSLN抗體（第一抗體）是未標記的，並且第二抗體或可結合第一抗體的其他分子被標記。如所屬領域中具有通常知識者所公知的，選擇能夠特異性結合第一抗體的特定種類和類別的二級抗體。例如，如果第一抗體是人IgG，那麼二級抗體可以是抗人IgG。可結合抗體的其他分子包括但不限於蛋白A和蛋白G，兩者均是商業可得的。
用於抗體或二級抗體的合適標記包括各種酶、輔基、螢光材料、發光材料、磁性試劑和放射性材料。合適的酶的非限制性示例包括辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙醯膽鹼酯酶。合適的輔基複合物的非限制性示例包括鏈黴親和素/生物素和抗生物素蛋白/生物素。合適的螢光材料的非限制性示例包括傘形酮、螢光素、異硫氰酸螢光素、羅丹明、二氯三嗪基胺螢光素、丹磺醯氯或藻紅蛋白。非限制性的示例性發光材料是魯米諾；非限制性的示例性磁性試劑是釓，並且非限制性的示例性放射性標記包括 125I、 131I、 35S或 3H。
在另一個實施方案中，可利用標記有可檢測物質的間皮素蛋白質標準品和未標記的抗MSLN抗體，藉由競爭免疫測定來測定生物樣本中的間皮素。在該測定中，將生物樣本、標記的MSLN蛋白質標準品和抗MSLN抗體合併，並測定與未標記的抗體結合的標記的MSLN蛋白質標準品的量。生物樣本中MSLN的量和與抗-MSLN抗體結合的標記的MSLN蛋白質標準品的量成反比。
本文所公開的免疫測定和方法可用於許多目的。在一個實施方案中，抗MSLN抗體可用於檢測細胞培養物中的細胞中MSLN的產生。在另一個實施方案中，該抗體可用於檢測生物樣本（諸如組織樣本或者血液或血清樣本）中MSLN的量。在一些示例中，MSLN是細胞表面MSLN。在其他示例中，MSLN蛋白質是可溶的（例如在細胞培養上清液中，或者在體液樣本諸如血液或血清樣本中）。
在一個實施方案中，提供了一種用於檢測生物樣本（諸如血液樣本或組織樣本）中MSLN的試劑盒。例如，為了驗證受試者的癌症診斷，可進行活檢以獲得用於組織學檢查的組織樣本。用於檢測多肽的試劑盒通常將包括單株抗MSLN抗體，諸如本文所公開的單株抗體中的任何單株抗體。在另一個實施方案中，抗體被標記（例如，用螢光、放射性物質或酶標記）。
在一個實施方案中，試劑盒包括說明材料，這些說明材料公開了使用抗-MSLN抗體的方法。說明材料可以電子形式（諸如電腦硬碟或光碟）書寫，或者可以是可視的（諸如影像檔）。試劑盒還可包括另外的組分以促進試劑盒被設計用於的特定應用。因此，例如，試劑盒可另外含有檢測標記的裝置（諸如用於酶標記的酶底物，檢測螢光標記、適當的二級標記（諸如二級抗體）的過濾器組等）。試劑盒可另外包括常規用於實施特定方法的緩衝液和其他試劑。這些試劑盒和適當的內容物是所屬領域中具有通常知識者公知的。
在一個實施方案中，診斷試劑盒包括免疫測定。儘管免疫測定的細節可隨所採用的特定形式而變化，但檢測生物樣本中MSLN的方法通常包括使生物樣本與抗-MSLN抗體接觸的步驟。使抗體在免疫反應條件下進行特異性結合以形成免疫複合物，並直接或間接檢測該免疫複合物（結合的抗體）的存在。
本文所公開的抗體也可用於免疫測定，諸如但不限於放射性免疫測定（RIA）、ELISA或免疫組織化學測定。抗體還可用於螢光活化的細胞分選（FACS）。FACS採用多個顏色通道、低角度和鈍角光散射檢測通道以及阻抗通道，以及其他更複雜的檢測水平，以分離或分選細胞（參見美國專利號5,061,620）。如本文所公開的，任何結合間皮素的單株抗體都可用於這些測定。因此，抗體可用於常規免疫測定，包括但不限於ELISA、RIA、FACS、組織免疫組織化學、Western印跡或免疫沉澱。
實施例 實施例1. 動物免疫方案  為了獲得MSLN特異性抗體，藉由不同的方法對Harbour H2L2基因轉殖小鼠（https://harbourantibodies.com/）進行免疫。這些免疫產生許多結合MSLN胞外（ECD）蛋白質和表現MSLN的細胞諸如COV644細胞（表現MSLN的卵巢上皮-黏液癌細胞系）的抗體。
具體地，重組人MSLN ECD His-標籤蛋白質（Acro Biosystem，目錄號MSN-H5223）或重組食蟹猴MSLN ECD His-標籤蛋白質（具有以下列出的序列，SEQ ID NO: 77）用作免疫原以對Harbour H2L2基因轉殖小鼠進行免疫。
食蟹猴MSLN ECD His-標籤蛋白質（SEQ ID NO: 77）
DVERTTCPPEKEVHEIDESLIFYKKRELEACVDAALLAAQMDRVDAIPFTYEQLDVLKHKLDELYPQGYPESVIRHLGHLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLKVSKGHEMSAQVATLIDRVVVGRGQLDKDTVDTLTAFCPGCLCSLSPERLSSVPPSVIGAVRPQDLDTCGPRQLDVLYPKARLAFQNMSGSEYFVKIRPFLGGAPTEDVKALSQQNVSMDLATFMKLRREAVLPLTVAEVQKLLGPHVEGLKVEEQHSPVRDWILKQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGYLILDLSVREALSGTPCLLGPGPVLTVLALLLASHHHHHH
藉由抗原免疫和雜交瘤株系篩選產生抗間皮素抗體的方案示於圖1中。
免疫方案的示例在下表6中列出。簡言之，藉由皮下或腹腔向每只小鼠施用50μg免疫原與佐劑（Sigma，S6322）一起進行第一次加強免疫，並施用25μg免疫原與佐劑一起進行隨後的加強免疫。每兩周進行一次免疫，共計6次。用稀釋在PBS中的免疫原藉由腹腔進行最終免疫。使用ELISA和FACS測試針對重組人MSLN ECD His-標籤蛋白質（Acro Biosystem，目錄號MSN-H5223）的血清滴度。
表6. 免疫方案
免疫原 動物群體規模 品系 途徑 佐劑
HuMSLN，his蛋白質 G1, N=10 H2L2 i.p.(250ul) CFA/RIBI/RIBI/RIBI/RIBI/RIBI
食蟹猴MSLN，his蛋白質 G3, G5，N=5 H2L2 i.p.(250ul) CFA/RIBI/RIBI/RIBI/RIBI/RIBI
實施例2. MSLN特異性抗體的篩選  2.1 雜交瘤的產生和MSLN特異性抗體的篩選  單株抗體可以使用雜交瘤方法諸如Kohler和Milstein，Nature，第256卷：第495頁（1975年）所述的那些方法製備。在雜交瘤方法中，淋巴細胞與永生化細胞系融合以形成雜交瘤細胞（Goding，Monoclonal Antibodies: Principles and Practice，Academic Press（1986年），第59-103頁）。永生化細胞系通常是轉化的哺乳動物細胞，特別是齧齒動物的骨髓瘤細胞。雜交瘤細胞可以在合適的培養基中培養，該培養基優選含有一種或多種抑制未融合的永生化細胞生長或存活的物質。可以藉由體外測定諸如酶聯免疫吸附測定（ELISA）來篩選由雜交瘤細胞產生的抗體上清液與靶MSLN的結合特異性。在鑑定出所需的雜交瘤細胞後，選殖可以藉由有限稀釋步驟進行次選殖，並藉由標準方法培養。（參見Goding，Monoclonal Antibodies: Principles and Practice，Academic Press（1986年），第59-103頁）。
2.2 MSLN特異性抗體的單B細胞篩選  Beacon® Optofluidic系統用於單B細胞篩選。該系統使用光電定位（OEPTM）技術來移動單個細胞，並且允許在細胞培養條件下同時進行生物功能測試、實驗分析、陽性株系選擇和其他操作。Beacon平臺可以對數千個細胞以大規模並行、自動化的方式執行這些任務。
在本示例中，使用漿細胞發現工作流程。在每個實驗中，針對MSLN特異性抗體的分泌情況，篩選多達14,000個單獨漿細胞。然後，將分泌抗原特異性抗體的漿細胞轉移到96孔板中以用於隨後的單B細胞測序，以鑑定由單B細胞（單株）產生的抗體的重鏈和輕鏈。圖2示出了篩選策略和過程。
本實施例使用單B細胞測序方法以從單個漿細胞中獲得抗體的重鏈和輕鏈的序列。一般程序包括從單個漿細胞裂解物中萃取和純化總RNA、cDNA的反轉錄合成、cDNA的擴增和純化、編碼抗體的重鏈和輕鏈的DNA序列的擴增、複製和轉染以及Sanger測序。對所獲得的序列進行獨特性和聚類分析，然後合成編碼抗體的成對重鏈和輕鏈的DNA序列。
實施例3. 抗體產生和純化  使用PEI（Polyscience，24885）將編碼靶抗體的重組質粒暫時性轉染（transient transfection）到HEK293-6E細胞或293-F細胞中。轉染後，將細胞在37℃ 5% CO 2條件下培養，120rpm振盪。在轉染後6天至7天，藉由離心和過濾收穫含有靶抗體的細胞培養上清液。使用蛋白質A磁珠（AmMag蛋白質A磁珠，Genscript，L00695）純化單株抗體。
藉由SEC-HPLC（Agilent 1260 Infinity II HPLC系統，Welch Xtimate SEC-300色譜柱，pH 7.4的1×PBS作為流動相）和SDS-PAGE（SurePAGE，Bis-Tris，10×8，4%-12%，12孔，Genscript，M00653）測試抗體的純度。重組抗體成功表現並純化以用於進一步表徵。
獲得兩種抗體PR300159和PR300186。抗體PR300159和PR300186的胺基酸序列在上表1至表4中列出。
同時，抗MSLN抗體Amatuximab採用來自IMGT的序列訊息也按照以上所示的程序生產製備（http://www.imgt.org/3Dstructure-DB/cgi/details.cgi?pdbcode=9343）。該抗體在隨後的研究中用作對照，並分配PR000685的代碼。
實施例4. 抗體對表現MSLN的細胞的結合活性 藉由流式細胞術測試重組抗MSLN抗體與表現人或食蟹猴MSLN的細胞的結合。在本實施例中，表現MSLN的細胞系包括CHOK1細胞系，這些細胞系已經被轉染以在表面上表現人MSLN（CHOK1-hu MSLN，供應商：Kyinno，目錄號：KC-1152）或食蟹猴MSLN（CHOK1-cyno MSLN，供應商：Kyinno，目錄號：KC-1174），還包括COV644細胞系（ECACC，目錄號：07071908）。
簡言之，將抗MSLN抗體在染色緩衝液（含有2% FBS的PBS緩衝液）中連續稀釋。將50μL稀釋的抗體溶液加入到50μL含有1-2×10 5個細胞的細胞懸浮液中，並在4℃下培養1小時。用染色緩衝液（含有2% FBS的PBS緩衝液）將細胞洗滌兩次，並將100μL的1:1000稀釋的螢光標記的抗人IgG抗體（Alexa Fluor® 488 AffiniPure山羊抗人IgG（H+L），Jackson ImmunoResearch，目錄號109-545-088）加入到每個孔中。在4℃下培養1小時後，用染色緩衝液將細胞洗滌兩次，並進行流式細胞術。PR000685（Amatuximab）和非相關IgG同種型對照（Crownbio）分別用作陽性對照和陰性對照。
結果示於下圖3至圖5中。結果表明，PR300159和PR300186都顯示出與表現人MSLN的細胞和表現食蟹猴MSLN的細胞強結合的活性，其中EC50值與PR000685（Amatuximab）相當。這些結果表明，抗MSLN抗體PR300159和PR300186能夠以高親和力結合細胞膜上的人MSLN和食蟹猴MSLN。
實施例5. 抗體工程化 抗MSLN抗體PR300159和PR300186的VH序列和VL序列藉由PTM去除程序進一步優化。
在哺乳動物細胞表現的蛋白質中廣泛地觀察到轉譯後修飾（PTM）。除了抗體中的保守PTM位點例如IgG1抗體CH2結構域上的保守N-糖基化位點之外，抗體的抗原結合位點內出現的其他PTM位點（即，CDR區）也可降低抗原結合活性或降低化學穩定性。例如，脫醯胺或異構化可能使分子不穩定和異質。為了降低序列易感性，可以藉由突變去除PTM基序。掃描VH序列或VL序列，觀察PTM基序例如異構化基序（例如，DG）的存在。然後使“熱點”殘基（例如，DG基序中的D或G）突變為種系序列中的對應殘基或具有相似生物物理特性的其他殘基。然後藉由成熟的分子生物學技術重組產生由去除PTM後的序列變體組成的抗體。
從PR300159和PR300186中去除PTM所獲得的設計變體示於表7中。這些抗MSLN抗體的胺基酸序列示於表1至表4中。PR300159-1、PR300159-3、PR300159-4、PR300159-5、PR300159-6、PR300159-7、PR300159-8和PR300159-9是衍生自PR300159的去除PTM的抗體。PR300186-2、PR300186-3、PR300186-4、PR300186-5、PR300186-6、PR300186-7、PR300186-8、PR300186-9和PR300186-10是衍生自PR300186的去除PTM的抗體。
表7. 所設計的PR300159衍生變體和PR300186衍生變體
母抗體 變體抗體 突變位點 Fc
PR300159 PR300159-1 重鏈G33A和D54E 輕鏈N92S hIgG1 Fc
PR300159-3 重鏈G33A和G55A hIgG1 Fc
PR300159-4 輕鏈S93A hIgG1 Fc
PR300159-5 輕鏈N92Q hIgG1 Fc
PR300159-6 輕鏈S93T hIgG1 Fc
PR300159-7 輕鏈N92T hIgG1 Fc
PR300159-8 輕鏈N92A hIgG1 Fc
PR300159-9 重鏈G33A和D54E 輕鏈S93A hIgG1 Fc
PR300186 PR300186-2 重鏈N30Q hIgG1 Fc
PR300186-3 重鏈N30Q和N58Q hIgG1 Fc
PR300186-4 重鏈N30Q和N58Q 輕鏈N30Q hIgG1 Fc
PR300186-5 輕鏈N30Q hIgG1 Fc
PR300186-6 重鏈N30Q和S59A hIgG1 Fc
PR300186-7 重鏈N30Q 輕鏈S31A hIgG1 Fc
PR300186-8 重鏈N30Q和S59A 輕鏈S31A hIgG1 Fc
PR300186-9 輕鏈S31A hIgG1 Fc
PR300186-10 重鏈N30Q和N58Q 輕鏈S31A hIgG1 Fc
實施例6. 抗體對人MSLN蛋白質和食蟹猴MSLN蛋白質的結合活性 將人MSLN（Acro Biosystems，目錄號MSN-H5223）或食蟹猴MSLN蛋白質（Harbourbiomed，批號：2019072202）在PBS中稀釋至1μg/mL的濃度。將每孔100μL稀釋的人MSLN或食蟹猴MSLN加入ELISA微孔板中，並將板在4℃下培養過夜。用ELISA阻斷液（含有2%重量/體積BSA，0.05%（體積/體積）Tween-20，pH為7.4的PBS緩衝液）在37℃下將板阻斷1小時，然後洗滌板，並與15μg/mL（100nM，10倍稀釋，8個點）稀釋的抗MSLN抗體（PR300186、PR300186-2、PR300186-3、PR300186-4、PR300186-5、PR300186-6、PR300186-7、PR300186-8、PR300186-9和PR300186-10）在37℃下培養1小時。然後洗滌板，並與HRP綴合的山羊抗人IgG（H+L）抗體（Jackson，目錄號：109-035-088）在37℃下一起培養1小時。加入100μL的3,3′,5,5′-四甲基聯苯胺（TMB）底物（Biopanda，目錄號：TMB-S-003），並將板在室溫下培養15分鐘。加入100μL的ELISA終止溶液（Solarbio，目錄號：C1058）以終止反應，並藉由ELISA讀板儀（Molecular Devices，Spectra max 384 plus）測定450nm處的光學密度（OD450nm）。
PR300186和PR300186 PTM去除抗體（PR300186-2、PR300186-3、PR300186-4、PR300186-5、PR300186-6、PR300186-7、PR300186-8、PR300186-9和PR300186-10）的結果示於圖6、圖7和下表8中。結果表明，所有衍生自PR300186的PTM去除抗體均顯示出對人類MSLN蛋白質和食蟹猴MSLN蛋白質兩者具有良好的結合活性，其中EC50值與PR300186相當。
表8. PR300186 PTM去除抗體與人MSLN蛋白質和食蟹猴MSLN蛋白質的結合
抗體 人MSLN 食蟹猴MSLN
EC50（nM） 跨度 EC50（nM） 跨度
PR300186 0.12 3.42 0.05 2.33
PR300186-2 0.14 3.36 0.05 2.43
PR300186-3 0.10 3.25 0.05 2.36
PR300186-4 0.18 3.47 0.07 2.53
PR300186-5 0.22 3.61 0.07 2.70
PR300186-6 0.21 3.66 0.07 2.67
PR300186-7 0.14 3.85 0.04 2.24
PR300186-8 0.13 3.87 0.04 2.18
PR300186-9 0.11 3.85 0.05 2.19
PR300186-10 0.10 3.71 0.04 2.19
實施例7. 抗體對表現MSLN的細胞的結合活性 藉由流式細胞術測試重組抗MSLN抗體與COV644細胞系（ECACC，目錄號：07071908）的結合。簡言之，將抗MSLN抗體在染色緩衝液（含有2% FBS的PBS緩衝液）中連續稀釋。將50μL稀釋的抗體溶液加入到50μL含有1-2×10 5個細胞的細胞懸浮液中，並在4℃下培養1小時。用染色緩衝液（含有2% FBS的PBS緩衝液）將細胞洗滌兩次，並將100μL的1:1000稀釋的螢光標記的抗人IgG抗體（Alexa Fluor® 488 AffiniPure山羊抗人IgG（H+L），Jackson ImmunoResearch，目錄號109-545-088）加入到每個孔中。在4℃下培養1小時後，用染色緩衝液將細胞洗滌兩次，並進行流式細胞術。
PR300159 PTM去除抗體的結果示於圖8和下表9中。結果表明，與PR300159相比，PTM去除抗體PR300159-1、PR300159-3、PR300159-5、PR300159-6和PR300159-8顯示出與COV644細胞的相當的結合活性。
表9. 藉由FACS的PR300159 PTM去除抗體與細胞表面MSLN的結合
抗體 COV644
EC50（nM） TOP（MFI）
PR300159 1.99 2072495
PR300159-1 1.64 2340478
PR300159-3 2.14 2062034
PR300159-5 2.75 2127765
PR300159-6 4.07 2189544
PR300159-8 2.33 2153079
PR300159-9 8.25 1561284
衍生自PR300186的PTM去除抗體的結果示於圖9中。結果表明，與PR300186相比，PTM去除抗體PR300186-3、PR300186-9和PR300186-10顯示出與COV644細胞的更好的結合活性。
實施例8 抗體被表現MSLN的細胞的內化 在該示例中，採用pHAb胺反應性染料（Promega，目錄號G9841）測定抗MSLN抗體在COV644細胞中的抗原內化。pHAb染料是在pH ＞ 7處具有非常低螢光並且當溶液變成酸性時螢光顯著增加的pH傳感器染料。當用pHAb染料標記的抗體在中性pH值下與細胞膜外結合時，可以監測到無螢光或很低的螢光。內化後，螢光在內體和溶酶體的低pH環境中會變得更強。
用pHAb染料標記抗體，並按照試劑盒說明書計算DAR。然後將標記的抗體與COV644在4℃（在該溫度下的內化活性非常低，其用作背景對照）或37℃下一起培養24小時。然後檢測在532nm處具有激發最大值（Ex）和在560nm處具有發射最大值（Em）的螢光。最終歸一化的結果顯示為37℃下的螢光強度減去4℃下背景的螢光強度，然後除以抗體的pHAb Dye的DARs。數值越高表示內化活性越高。
PR300159和衍生自PR300159的PTM去除抗體的內化速率結果示於圖10和表10中。結果表明，與PR300159相比，PR300159-1、PR300159-4、PR300159-5、PR300159-6、PR300159-7、PR300159-8抗體顯示出被COV644細胞相當的內化。
PR300186和衍生自PR300186的PTM去除抗體的內化速率結果示於圖11和表10中。結果表明，與PR300186相比，PR300186-3、PR300186-9和PR300186-10顯示出被COV644細胞更好的內化。
表10. PR300159和PR300186 PTM去除抗體被表現MSLN的細胞的內化
抗體 內化
FLU
PR300159 22214
PR300159-1 13720
PR300159-3 9180
PR300159-4 20888
PR300159-5 20912
PR300159-6 17753
PR300159-7 22440
PR300159-8 21172
PR300159-9 8299
PR300186 6049
PR300186-3 7042
PR300186-9 8069
PR300186-10 8219
實施例9. 藉由BLI方法的抗體與可溶性MSLN蛋白質的結合活性 在本實施例中，抗MSLN抗體與可溶性MSLN的結合動力學藉由Octet Red384（Fortebio）分析。在生物膜干涉技術（BLI）分析中，用1×動力學緩衝液（Fortebio）連續稀釋重組人MSLN-His標籤（Acro Biosystems，目錄號：MSN-H5223）。將抗MSLN抗體稀釋至5μg/mL。然後將稀釋的抗體、抗原和再生緩衝液（10mM甘胺酸，pH 1.75）加入96孔板（Greiner）。使用AHC傳感器（Fortebio）測量結合和解離的速率常數。在每次結合實驗後用再生緩衝液再生傳感器表面。使用Octet數據分析軟體（版本11.0，Pall ForteBio，CA，USA）處理蹤跡。抗體與可溶性人MSLN結合的K D值匯總於表11中。
如表11所示，在Octet分析中，與PR300159相比，衍生自PR300159的PTM去除抗體顯示出與可溶性MSLN相當的結合親和力。
PR300186和PR300186-10對可溶性MSLN顯示出低結合親和力，當作為治療性抗體應用時這是有利的，因為抗體最好結合腫瘤細胞上的細胞表面MSLN而不是循環系統中的可溶性MSLN。
表11. PR300159和PR300186 PTM去除抗體與可溶性人MSLN的結合
抗體 Octet親和力
KD（M） kon（1/Ms） 全R^2
PR300159 9.65E-12 1.28E+06 0.9977
PR300159-1 ＜1.0E-12 9.47E+05 0.9974
PR300159-3 ＜1.0E-12 8.28E+05 0.9919
PR300159-4 ＜1.0E-12 9.78E+05 0.9975
PR300159-5 ＜1.0E-12 1.05E+06 0.9965
PR300159-6 ＜1.0E-12 8.19E+05 0.99
PR300159-7 ＜1.0E-12 1.06E+06 0.9973
PR300159-8 ＜1.0E-12 9.56E+05 0.9934
PR300159-9 ＜1.0E-12 5.66E+05 0.9706
PR300186 1.86E-08 7.05E+05 0.93
PR300186-10 1.28E-07 4.31E+05 0.99
實施例10. 可溶性MSLN干擾測定 結合膜結合形式的MSLN的抗體對於診斷和治療目的是有利的。因為它們不結合可溶性MSLN，所以它們將具有較低背景以用於成像應用，並且它們可以較低劑量用於治療用途。
測試在存在或不存在90nM可溶性MSLN（sMSLN）的情況下，抗體PR300159和PR300186以及衍生自PR300159-8或PR300186-10的PTM去除抗體與表現COV644的間皮素的結合。按照實施例4中所示的類似程序進行實驗，不同的是將90nM可溶性MSLN加入系列稀釋的+sMSLN組抗體中。
如圖12所示，與不存在可溶性MSLN的情況相比，在存在90nM可溶性MSLN的情況下，PR300159與COV644細胞的結合降低。如圖13所示，PR300186顯示出較少的變化，這表明可溶性MSLN對PR300186與膜結合形式的MSLN的結合的干擾較小。
如圖14和圖15所示，與不存在可溶性MSLN的情況相比，在存在90nM可溶性MSLN的情況下，PR300159-8和PR300186-10與COV644細胞的結合降低。然而，PR300186-10顯示出較少的變化，這表明可溶性MSLN對這些抗體與膜結合形式的MSLN的結合的干擾較小。
無
圖1.產生抗間皮素抗體的方案。藉由用重組間皮素蛋白質反復注射免疫HarbourH2L2基因轉殖小鼠，隨後藉由雜交瘤產生和株系篩選以鑑定MSLN特異性四聚體（H2L2）抗體。 圖2.用於單B細胞株系篩選的篩選策略和方法的工作流程。 圖3.抗體PR300159和PR300186與CHOK1-人MSLN細胞表面上膜結合的人MSLN的結合。 圖4.抗體PR300159和PR300186與CHOK1-食蟹猴MSLN細胞表面上膜結合的食蟹猴MSLN的結合。 圖5.抗體PR300159和PR300186與在COV644細胞系上內源性表現的膜結合的人MSLN的結合。 圖6.PR300186抗體和PR300186 PTM去除抗體與人MSLN蛋白質的結合。 圖7.PR300186抗體和PR300186 PTM去除抗體與食蟹猴MSLN蛋白質的結合。 圖8.PR300159抗體和PR300159 PTM去除抗體與COV 644細胞的結合。 圖9.PR300186抗體和PR300186 PTM去除抗體與COV 644細胞的結合。 圖10.PR300159抗體和PR300159 PTM去除抗體在COV644細胞上的內化。 圖11.PR300186抗體和PR300186 PTM去除抗體在COV644細胞上的內化。 圖12.在存在或不存在可溶性MSLN（sMSLN）的情況下，抗體PR300159與COV644細胞的結合：(A)不存在sMSLN；(B)存在90nM sMSLN。 圖13.在存在或不存在可溶性MSLN（sMSLN）的情況下，抗體PR300186與COV644細胞的結合：(A)不存在sMSLN；(B)存在90nM sMSLN。 圖14.在存在或不存在可溶性MSLN（sMSLN）的情況下，抗體PR300159-8與COV644細胞的結合。 圖15.在存在或不存在可溶性MSLN（sMSLN）的情況下，抗體PR300186-10與COV644細胞的結合。
序列 輕鏈、重鏈、輕鏈可變區（VL）、重鏈可變區（VH）、輕鏈和重鏈的CDR和FWR的胺基酸序列如下表1至表4所示。
表1. 抗體的重鏈和輕鏈的序列
株系 重鏈 SEQ ID NO 輕鏈 SEQ ID NO
PR300159 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 34 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 37
PR300159-1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDAMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNEGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 35 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYSSYSRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 38
PR300159-3 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDAMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDASNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 36 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 37
PR300159-4 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 34 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYNAYSRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 39
PR300159-5 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 34 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYQSYSRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 40
PR300159-6 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 34 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYNTYSRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 41
PR300159-7 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 34 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYTSYSRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 42
PR300159-8 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 34 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYASYSRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 43
PR300159-9 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDAMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNEGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 35 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYNAYSRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 39
PR300186 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 70 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 74
PR300186-2 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 71 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 74
PR300186-3 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTQSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 72 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 74
PR300186-4 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTQSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 72 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVQSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 75
PR300186-5 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 70 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVQSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 75
PR300186-6 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNANPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 73 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 74
PR300186-7 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 71 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNANLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 76
PR300186-8 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNANPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 73 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNANLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 76
PR300186-9 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 70 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNANLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 76
PR300186-10 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTQSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 72 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNANLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 76
表2. 抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區的序列
株系 重鏈可變區 SEQ ID NO 輕鏈可變區 SEQ ID NO
PR300159 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSS 24 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIK 27
PR300159-1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDAMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNEGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSS 25 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYSSYSRTFGQGTKVEIK 28
PR300159-3 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDAMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDASNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSS 26 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYNSYSRTFGQGTKVEIK 27
PR300159-4 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSS 24 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYNAYSRTFGQGTKVEIK 29
PR300159-5 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSS 24 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYQSYSRTFGQGTKVEIK 30
PR300159-6 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSS 24 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYNTYSRTFGQGTKVEIK 31
PR300159-7 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSS 24 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYTSYSRTFGQGTKVEIK 32
PR300159-8 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSS 24 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYASYSRTFGQGTKVEIK 33
PR300159-9 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSDAMNWVRQAPGKGLEWVAVIWNEGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGPLWPLDYWGQGTLVTVSS 25 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISRWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYCQQYNAYSRTFGQGTKVEIK 29
PR300186 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSS 63 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIK 67
PR300186-2 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSS 64 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIK 67
PR300186-3 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTQSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSS 65 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIK 67
PR300186-4 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTQSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSS 65 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVQSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIK 68
PR300186-5 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSS 63 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVQSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIK 68
PR300186-6 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNANPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSS 66 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIK 67
PR300186-7 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSS 64 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNANLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIK 69
PR300186-8 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNANPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSS 66 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNANLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIK 69
PR300186-9 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTNSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSS 63 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNANLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIK 69
PR300186-10 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIQNYYWSWVRQPPGKGLEWIGYIFYSGSTQSNPSLKSRVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGRIAVAGWFFDLWGRGTLVTVSS 65 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVNANLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPLTFGQGTRLEIK 69
表3. 抗體的HCDR1-3和HFWR1-4的序列（根據Kabat和Chothia組合系統）
Ab SEQ ID NO: HFWR1 SEQ ID NO: 　 HCDR1 SEQ ID NO: 　 HFWR2 SEQ ID NO: 　 HCDR2 SEQ ID NO: 　 HFWR3 SEQ ID NO: 　 HCDR3 SEQ ID NO: 　 HFWR4
PR300159 1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS 2 GFTFSSDGMN 3 WVRQAPGKGLEWVA 4 VIWNDGSNKYYADSVKG 5 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR 6 DRGPLWPLDY 7 WGQGTLVTVSS
PR300159-1 1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS 15 GFTFSSDAMN 3 WVRQAPGKGLEWVA 16 VIWNEGSNKYYADSVKG 5 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR 6 DRGPLWPLDY 7 WGQGTLVTVSS
PR300159-3 1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS 15 GFTFSSDAMN 3 WVRQAPGKGLEWVA 17 VIWNDASNKYYADSVKG 5 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR 6 DRGPLWPLDY 7 WGQGTLVTVSS
PR300159-4 1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS 2 GFTFSSDGMN 3 WVRQAPGKGLEWVA 4 VIWNDGSNKYYADSVKG 5 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR 6 DRGPLWPLDY 7 WGQGTLVTVSS
PR300159-5 1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS 2 GFTFSSDGMN 3 WVRQAPGKGLEWVA 4 VIWNDGSNKYYADSVKG 5 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR 6 DRGPLWPLDY 7 WGQGTLVTVSS
PR300159-6 1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS 2 GFTFSSDGMN 3 WVRQAPGKGLEWVA 4 VIWNDGSNKYYADSVKG 5 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR 6 DRGPLWPLDY 7 WGQGTLVTVSS
PR300159-7 1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS 2 GFTFSSDGMN 3 WVRQAPGKGLEWVA 4 VIWNDGSNKYYADSVKG 5 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR 6 DRGPLWPLDY 7 WGQGTLVTVSS
PR300159-8 1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS 2 GFTFSSDGMN 3 WVRQAPGKGLEWVA 4 VIWNDGSNKYYADSVKG 5 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR 6 DRGPLWPLDY 7 WGQGTLVTVSS
PR300159-9 1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS 15 GFTFSSDAMN 3 WVRQAPGKGLEWVA 16 VIWNEGSNKYYADSVKG 5 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR 6 DRGPLWPLDY 7 WGQGTLVTVSS
PR300186 44 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS 45 GGSINNYYWS 46 WVRQPPGKGLEWIG 47 YIFYSGSTNSNPSLKS 48 RVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR 49 EVGRIAVAGWFFDL 50 WGRGTLVTVSS
PR300186-2 44 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS 58 GGSIQNYYWS 46 WVRQPPGKGLEWIG 47 YIFYSGSTNSNPSLKS 48 RVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR 49 EVGRIAVAGWFFDL 50 WGRGTLVTVSS
PR300186-3 44 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS 58 GGSIQNYYWS 46 WVRQPPGKGLEWIG 59 YIFYSGSTQSNPSLKS 48 RVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR 49 EVGRIAVAGWFFDL 50 WGRGTLVTVSS
PR300186-4 44 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS 58 GGSIQNYYWS 46 WVRQPPGKGLEWIG 59 YIFYSGSTQSNPSLKS 48 RVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR 49 EVGRIAVAGWFFDL 50 WGRGTLVTVSS
PR300186-5 44 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS 45 GGSINNYYWS 46 WVRQPPGKGLEWIG 47 YIFYSGSTNSNPSLKS 48 RVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR 49 EVGRIAVAGWFFDL 50 WGRGTLVTVSS
PR300186-6 44 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS 58 GGSIQNYYWS 46 WVRQPPGKGLEWIG 60 YIFYSGSTNANPSLKS 48 RVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR 49 EVGRIAVAGWFFDL 50 WGRGTLVTVSS
PR300186-7 44 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS 58 GGSIQNYYWS 46 WVRQPPGKGLEWIG 47 YIFYSGSTNSNPSLKS 48 RVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR 49 EVGRIAVAGWFFDL 50 WGRGTLVTVSS
PR300186-8 44 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS 58 GGSIQNYYWS 46 WVRQPPGKGLEWIG 60 YIFYSGSTNANPSLKS 48 RVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR 49 EVGRIAVAGWFFDL 50 WGRGTLVTVSS
PR300186-9 44 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS 45 GGSINNYYWS 46 WVRQPPGKGLEWIG 47 YIFYSGSTNSNPSLKS 48 RVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR 49 EVGRIAVAGWFFDL 50 WGRGTLVTVSS
PR300186-10 44 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS 58 GGSIQNYYWS 46 WVRQPPGKGLEWIG 59 YIFYSGSTQSNPSLKS 48 RVIISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR 49 EVGRIAVAGWFFDL 50 WGRGTLVTVSS
表4. 抗體的LCDR1-3和LFWR1-4的序列（根據Kabat和Chothia組合系統）
Ab SEQ ID NO:　 LFWR1 SEQ ID NO:　 LCDR1 SEQ ID NO: LFWR2 SEQ ID NO:　 LCDR2 SEQ ID NO: LFWR3 SEQ ID NO: LCDR3 SEQ ID NO:　 LFWR4
PR300159 8 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC 9 RASQSISRWLA 10 WYQQKPGKAPKLLIY 11 KASSLES 12 GVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYC 13 QQYNSYSRT 14 FGQGTKVEIK
PR300159-1 8 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC 9 RASQSISRWLA 10 WYQQKPGKAPKLLIY 11 KASSLES 12 GVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYC 18 QQYSSYSRT 14 FGQGTKVEIK
PR300159-3 8 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC 9 RASQSISRWLA 10 WYQQKPGKAPKLLIY 11 KASSLES 12 GVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYC 13 QQYNSYSRT 14 FGQGTKVEIK
PR300159-4 8 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC 9 RASQSISRWLA 10 WYQQKPGKAPKLLIY 11 KASSLES 12 GVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYC 19 QQYNAYSRT 14 FGQGTKVEIK
PR300159-5 8 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC 9 RASQSISRWLA 10 WYQQKPGKAPKLLIY 11 KASSLES 12 GVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYC 20 QQYQSYSRT 14 FGQGTKVEIK
PR300159-6 8 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC 9 RASQSISRWLA 10 WYQQKPGKAPKLLIY 11 KASSLES 12 GVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYC 21 QQYNTYSRT 14 FGQGTKVEIK
PR300159-7 8 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC 9 RASQSISRWLA 10 WYQQKPGKAPKLLIY 11 KASSLES 12 GVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYC 22 QQYTSYSRT 14 FGQGTKVEIK
PR300159-8 8 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC 9 RASQSISRWLA 10 WYQQKPGKAPKLLIY 11 KASSLES 12 GVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYC 23 QQYASYSRT 14 FGQGTKVEIK
PR300159-9 8 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC 9 RASQSISRWLA 10 WYQQKPGKAPKLLIY 11 KASSLES 12 GVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPDDFATFYC 19 QQYNAYSRT 14 FGQGTKVEIK
PR300186 51 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC 52 RASQSVNSNLA 53 WYQQKPGQAPRLLIY 54 GASTRAT 55 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC 56 QQYNNWPLT 57 FGQGTRLEIK
PR300186-2 51 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC 52 RASQSVNSNLA 53 WYQQKPGQAPRLLIY 54 GASTRAT 55 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC 56 QQYNNWPLT 57 FGQGTRLEIK
PR300186-3 51 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC 52 RASQSVNSNLA 53 WYQQKPGQAPRLLIY 54 GASTRAT 55 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC 56 QQYNNWPLT 57 FGQGTRLEIK
PR300186-4 51 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC 61 RASQSVQSNLA 53 WYQQKPGQAPRLLIY 54 GASTRAT 55 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC 56 QQYNNWPLT 57 FGQGTRLEIK
PR300186-5 51 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC 61 RASQSVQSNLA 53 WYQQKPGQAPRLLIY 54 GASTRAT 55 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC 56 QQYNNWPLT 57 FGQGTRLEIK
PR300186-6 51 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC 52 RASQSVNSNLA 53 WYQQKPGQAPRLLIY 54 GASTRAT 55 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC 56 QQYNNWPLT 57 FGQGTRLEIK
PR300186-7 51 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC 62 RASQSVNANLA 53 WYQQKPGQAPRLLIY 54 GASTRAT 55 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC 56 QQYNNWPLT 57 FGQGTRLEIK
PR300186-8 51 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC 62 RASQSVNANLA 53 WYQQKPGQAPRLLIY 54 GASTRAT 55 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC 56 QQYNNWPLT 57 FGQGTRLEIK
PR300186-9 51 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC 62 RASQSVNANLA 53 WYQQKPGQAPRLLIY 54 GASTRAT 55 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC 56 QQYNNWPLT 57 FGQGTRLEIK
PR300186-10 51 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSC 62 RASQSVNANLA 53 WYQQKPGQAPRLLIY 54 GASTRAT 55 GIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYC 56 QQYNNWPLT 57 FGQGTRLEIK
TW202413421A_112125677_SEQL.xml

Claims (36)

  1. 一種特異性結合間皮素的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體包含輕鏈可變區（VL）和重鏈可變區（VH），並且其中 (1) 所述VH包含具有SEQ ID NO: 24所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且所述VL包含具有SEQ ID NO: 27所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (2) 所述VH包含具有SEQ ID NO: 25所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且所述VL包含具有SEQ ID NO: 28所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (3) 所述VH包含具有SEQ ID NO: 26所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且所述VL包含具有SEQ ID NO: 27所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (4) 所述VH包含具有SEQ ID NO: 24所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且所述VL包含具有SEQ ID NO: 29所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (5) 所述VH包含具有SEQ ID NO: 24所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且所述VL包含具有SEQ ID NO: 30所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (6) 所述VH包含具有SEQ ID NO: 24所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且所述VL包含具有SEQ ID NO: 31所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (7) 所述VH包含具有SEQ ID NO: 24所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且所述VL包含具有SEQ ID NO: 32所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (8) 所述VH包含具有SEQ ID NO: 24所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且所述VL包含具有SEQ ID NO: 33所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (9) 所述VH包含具有SEQ ID NO: 25所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且所述VL包含具有SEQ ID NO: 29所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (10) 所述VH包含具有SEQ ID NO: 63所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且所述VL包含具有SEQ ID NO: 67所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (11) 所述VH包含具有SEQ ID NO: 64所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且所述VL包含具有SEQ ID NO: 67所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (12) 所述VH包含具有SEQ ID NO: 65所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且所述VL包含具有SEQ ID NO: 67所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (13) 所述VH包含具有SEQ ID NO: 65所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且所述VL包含具有SEQ ID NO: 68所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (14) 所述VH包含具有SEQ ID NO: 63所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且所述VL包含具有SEQ ID NO: 68所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (15) 所述VH包含具有SEQ ID NO: 66所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且所述VL包含具有SEQ ID NO: 67所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (16) 所述VH包含具有SEQ ID NO: 64所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且所述VL包含具有SEQ ID NO: 69所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (17) 所述VH包含具有SEQ ID NO: 66所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且所述VL包含具有SEQ ID NO: 69所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3； (18) 所述VH包含具有SEQ ID NO: 63所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且所述VL包含具有SEQ ID NO: 69所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3；或者 (19) 所述VH包含具有SEQ ID NO: 65所示胺基酸序列的VH的HCDR 1-3，並且所述VL包含具有SEQ ID NO: 69所示胺基酸序列的VL的LCDR 1-3。
  2. 根據請求項1所述的抗體或其抗原結合片段，其中 (1) 所述VH包含分別包含SEQ ID NO: 2、4、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且所述VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、13所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (2) 所述VH包含分別包含SEQ ID NO: 15、16、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且所述VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、18所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (3) 所述VH包含分別包含SEQ ID NO: 15、17、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且所述VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、13所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (4) 所述VH包含分別包含SEQ ID NO: 2、4、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且所述VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、19所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (5) 所述VH包含分別包含SEQ ID NO: 2、4、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且所述VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、20所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (6) 所述VH包含分別包含SEQ ID NO: 2、4、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且所述VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、21所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (7) 所述VH包含分別包含SEQ ID NO: 2、4、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且所述VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、22所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (8) 所述VH包含分別包含SEQ ID NO: 2、4、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且所述VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、23所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (9) 所述VH包含分別包含SEQ ID NO: 15、16、6所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且所述VL包含分別包含SEQ ID NO: 9、11、19所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (10) 所述VH包含分別包含SEQ ID NO: 45、47、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且所述VL包含分別包含SEQ ID NO: 52、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (11) 所述VH包含分別包含SEQ ID NO: 58、47、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且所述VL包含分別包含SEQ ID NO: 52、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (12) 所述VH包含分別包含SEQ ID NO: 58、59、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且所述VL包含分別包含SEQ ID NO: 52、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (13) 所述VH包含分別包含SEQ ID NO: 58、59、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且所述VL包含分別包含SEQ ID NO: 61、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (14) 所述VH包含分別包含SEQ ID NO: 45、47、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且所述VL包含分別包含SEQ ID NO: 61、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (15) 所述VH包含分別包含SEQ ID NO: 58、60、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且所述VL包含分別包含SEQ ID NO: 52、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (16) 所述VH包含分別包含SEQ ID NO: 58、47、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且所述VL包含分別包含SEQ ID NO: 62、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (17) 所述VH包含分別包含SEQ ID NO: 58、60、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且所述VL包含分別包含SEQ ID NO: 62、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3； (18) 所述VH包含分別包含SEQ ID NO: 45、47、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且所述VL包含分別包含SEQ ID NO: 62、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3；或者 (19) 所述VH包含分別包含SEQ ID NO: 58、59、49所示胺基酸序列的HCDR 1-3，並且所述VL包含分別包含SEQ ID NO: 62、54、56所示胺基酸序列的LCDR 1-3。
  3. 根據請求項1或2所述的抗體或其抗原結合片段，其中： (1) 所述VH包含與SEQ ID NO: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與SEQ ID NO: 27具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (2) 所述VH包含與SEQ ID NO: 25具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與SEQ ID NO: 28具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (3) 所述VH包含與SEQ ID NO: 26具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與SEQ ID NO: 27具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (4) 所述VH包含與SEQ ID NO: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與SEQ ID NO: 29具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (5) 所述VH包含與SEQ ID NO: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與SEQ ID NO: 30具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (6) 所述VH包含與SEQ ID NO: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與SEQ ID NO: 31具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (7) 所述VH包含與SEQ ID NO: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與SEQ ID NO: 32具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (8) 所述VH包含與SEQ ID NO: 24具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與SEQ ID NO: 33具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (9) 所述VH包含與SEQ ID NO: 25具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與SEQ ID NO: 29具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (10) 所述VH包含與SEQ ID NO: 63具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與SEQ ID NO: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (11) 所述VH包含與SEQ ID NO: 64具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與SEQ ID NO: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (12) 所述VH包含與SEQ ID NO: 65具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與SEQ ID NO: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (13) 所述VH包含與SEQ ID NO: 65具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與SEQ ID NO: 68具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (14) 所述VH包含與SEQ ID NO: 63具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與SEQ ID NO: 68具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (15) 所述VH包含與SEQ ID NO: 66具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與SEQ ID NO: 67具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (16) 所述VH包含與SEQ ID NO: 64具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與SEQ ID NO: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (17) 所述VH包含與SEQ ID NO: 66具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與SEQ ID NO: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (18) 所述VH包含與SEQ ID NO: 63具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與SEQ ID NO: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列；或者 (19) 所述VH包含與SEQ ID NO: 65具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述VL包含與SEQ ID NO: 69具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列。
  4. 根據請求項1至3中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體包含重鏈（HC）和輕鏈（LC），並且其中： (1) 所述HC包含與SEQ ID NO: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與SEQ ID NO: 37具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (2) 所述HC包含與SEQ ID NO: 35具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與SEQ ID NO: 38具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (3) 所述HC包含與SEQ ID NO: 36具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與SEQ ID NO: 37具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (4) 所述HC包含與SEQ ID NO: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與SEQ ID NO: 39具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (5) 所述HC包含與SEQ ID NO: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與SEQ ID NO: 40具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (6) 所述HC包含與SEQ ID NO: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與SEQ ID NO: 41具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (7) 所述HC包含與SEQ ID NO: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與SEQ ID NO: 42具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (8) 所述HC包含與SEQ ID NO: 34具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與SEQ ID NO: 43具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (9) 所述HC包含與SEQ ID NO: 35具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與SEQ ID NO: 39具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (10) 所述HC包含與SEQ ID NO: 70具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與SEQ ID NO: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (11) 所述HC包含與SEQ ID NO: 71具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與SEQ ID NO: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (12) 所述HC包含與SEQ ID NO: 72具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與SEQ ID NO: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (13) 所述HC包含與SEQ ID NO: 72具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與SEQ ID NO: 75具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (14) 所述HC包含與SEQ ID NO: 70具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與SEQ ID NO: 75具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (15) 所述HC包含與SEQ ID NO: 73具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與SEQ ID NO: 74具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (16) 所述HC包含與SEQ ID NO: 71具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與SEQ ID NO: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (17) 所述HC包含與SEQ ID NO: 73具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與SEQ ID NO: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列； (18) 所述HC包含與SEQ ID NO: 70具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與SEQ ID NO: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列；或者 (19) 所述HC包含與SEQ ID NO: 72具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列，並且所述LC包含與SEQ ID NO: 76具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的胺基酸序列。
  5. 根據請求項1至4中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段特異性結合膜結合的間皮素。
  6. 根據請求項5所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段以比其結合可溶性間皮素的親和力更高的親和力結合膜結合的間皮素。
  7. 根據請求項5所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段以其結合可溶性間皮素的親和力的至少兩倍、至少三倍、至少五倍、至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少50倍或至少100倍的親和力結合膜結合的間皮素。
  8. 根據請求項5所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段不結合可溶性MSLN。
  9. 根據請求項1至8中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體是鼠抗體、嵌合抗體、人源化抗體或人抗體。
  10. 根據請求項1至9中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體是選自IgG、IgA、IgM、IgE和IgD的同種型。
  11. 根據請求項1至10中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體是選自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的亞型。
  12. 根據請求項1至11中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗原結合片段選自Fab、Fab'、F(ab') 2、Fd、Fd'、Fv、scFv、ds-scFv和dAb。
  13. 根據請求項1至12中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體是單株抗體、雙特異性抗體或多特異性抗體。
  14. 根據請求項1至13中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體是單價的、二價的或多價的。
  15. 根據請求項1至14中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段與螢光標記、放射性標記或細胞毒性劑連接。
  16. 一種雙特異性抗體，所述雙特異性抗體包含根據請求項1至15中任一項所述的抗體或其抗原結合片段以及特異性結合腫瘤相關抗原、免疫細胞抗原或免疫檢查點分子的第二抗原結合區。
  17. 一種核酸，所述核酸包含編碼根據請求項1至15中任一項所述的抗體或其抗原結合片段或根據請求項16所述的雙特異性抗體的核苷酸序列。
  18. 一種載體，所述載體包含根據請求項17所述的核酸。
  19. 一種宿主細胞，所述宿主細胞包含根據請求項17所述的核酸或根據請求項18所述的載體。
  20. 一種抗體藥物複合體（antibody drug conjugate, ADC），所述抗體藥物複合體包含根據請求項1至15中任一項所述的抗體或其抗原結合片段或根據請求項16所述的雙特異性抗體。
  21. 一種藥物組合物，所述藥物組合物包含根據請求項1至15中任一項所述的抗體或其抗原結合片段、或根據請求項16所述的雙特異性抗體、或根據請求項17所述的核酸、或根據請求項18所述的載體、或根據請求項19所述的宿主細胞、或根據請求項20所述的抗體藥物複合體，以及任選地藥學上可接受的載體或賦形劑。
  22. 根據請求項21所述的藥物組合物，其中所述組合物還包含選自抗體、化學治療劑、siRNA、反義寡核苷酸、多肽和小分子藥物的第二治療劑。
  23. 一種治療受試者的癌症的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的根據請求項1至15中任一項所述的抗體或其抗原結合片段、或根據請求項16所述的雙特異性抗體、或根據請求項17所述的核酸、或根據請求項18所述的載體、或根據請求項19所述的宿主細胞、根據請求項20所述的抗體藥物複合體、或根據請求項21或22所述的藥物組合物。
  24. 根據請求項23所述的方法，其中所述癌症選自間皮瘤、前列腺癌、肺癌、胃癌、鱗狀細胞癌、胰腺癌、膽管癌、乳腺癌（例如，三陰性乳腺癌）和卵巢癌。
  25. 根據請求項23或24所述的方法，所述方法還包括向所述受試者施用第二治療劑。
  26. 根據請求項25所述的方法，其中所述第二治療劑選自抗體、化學治療劑、siRNA、反義寡核苷酸、多肽和小分子藥物。
  27. 根據請求項1至15中任一項所述的抗體或其抗原結合片段、或根據請求項16所述的雙特異性抗體、或根據請求項17所述的核酸、或根據請求項18所述的載體、或根據請求項19所述的宿主細胞、根據請求項20所述的抗體藥物複合體、或根據請求項21或22所述的藥物組合物在製備用於治療受試者的癌症的藥物中的用途。
  28. 根據請求項27所述的用途，其中所述癌症選自間皮瘤、前列腺癌、肺癌、胃癌、鱗狀細胞癌、胰腺癌、膽管癌、乳腺癌（例如，三陰性乳腺癌）和卵巢癌。
  29. 根據請求項27或28中任一項所述的用途，其中所述藥物還包含第二治療劑，任選地所述第二治療劑選自抗體、化學治療劑、siRNA、反義寡核苷酸、多肽和小分子藥物。
  30. 根據請求項27或28中任一項所述的用途，其中所述藥物與第二治療劑組合施用，任選地所述第二治療劑選自抗體、化學治療劑、siRNA、反義寡核苷酸、多肽和小分子藥物。
  31. 根據請求項1至15中任一項所述的抗體或其抗原結合片段、或根據請求項16所述的雙特異性抗體、或根據請求項17所述的核酸、或根據請求項18所述的載體、或根據請求項19所述的宿主細胞、或根據請求項20所述的抗體藥物複合體、或根據請求項21或22所述的藥物組合物，用於治療受試者的癌症。
  32. 根據請求項31所述的用於所述用途的抗體或其抗原結合片段、雙特異性抗體、核酸、載體、宿主細胞、抗體藥物複合體或藥物組合物，其中所述癌症選自間皮瘤、前列腺癌、肺癌、胃癌、鱗狀細胞癌、胰腺癌、膽管癌、乳腺癌（例如，三陰性乳腺癌）和卵巢癌。
  33. 根據請求項31或32所述的用於所述用途的抗體或其抗原結合片段、雙特異性抗體、核酸、載體、宿主細胞、抗體藥物複合體或藥物組合物，還包括向所述受試者施用第二治療劑，任選地所述第二治療劑選自抗體、化學治療劑、siRNA、反義寡核苷酸、多肽和小分子藥物。
  34. 一種用於診斷受試者的間皮素陽性癌症的方法，所述方法包括： (a) 從所述受試者獲得生物樣本， (b) 使所述樣本與根據請求項1至15中任一項所述的抗體或其抗原結合片段接觸；以及 (c) 檢測所述抗體與所述樣本的結合， 其中相比於所述抗體或其抗原結合片段與對照樣本的結合，所述抗體或其抗原結合片段與所述樣本的結合增加，鑑定出所述受試者患有間皮素陽性癌症。
  35. 一種用於對受試者的間皮素陽性癌症進行成像的方法，所述方法包括： (a) 向所述受試者施用根據請求項1至15中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體綴合到可檢測標誌物；以及 (b) 檢測所述標誌物的存在。
  36. 根據請求項34所述的方法，其中： (a) 所述可檢測標誌物是 111In並且優選地所述標誌物的檢測是藉由單光子發射電腦斷層掃描進行的，或者 (b) 所述可檢測標誌物是 89Zr，並且優選地所述標誌物的檢測是藉由正電子發射斷層掃描進行的。
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