BR112021000359A2 - Fungicidas para prevenir e controlar patógenos fúngicos - Google Patents

Abstract

fungicidas para prevenir e controlar patógenos fúngicos”. a invenção se refere ao campo de fungicidas biológicos com uma ampla faixa de atividade antifúngica provenientes de extratos de planta a partir da ordem de brassicales ou moléculas que revelam estrutura química semelhante. em particular, os requerentes forneceram surpreendentemente um novo uso de uma combinação de sulfonila e sulfinila contendo glucosinolatos alifáticos, seus subprodutos e análogos sintéticos como compostos antifúngicos eficientes com amplo espectro de atividade.

Description

“FUNGICIDAS PARA PREVENIR E CONTROLAR PATÓGENOS FÚNGICOS” CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A invenção refere-se ao campo de fungicidas biológicos com uma ampla faixa de atividade antifúngica, provenientes de extratos de planta a partir da ordem de Brassicales, ou moléculas que revelam estrutura química semelhante. Em particular, os Requerentes forneceram surpreendentemente um novo uso de uma combinação de sulfonila e sulfinila contendo glucosinolatos alifáticos, seus subprodutos e análogos sintéticos como compostos antifúngicos eficientes com amplo espectro de atividade.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] A população humana está aumentando a cada ano e está prestes a chegar a 8,6 bilhões em 2030. Para manter altos níveis de produção de alimentos, os agricultores têm que usar tratamentos externos, tais como: 1) pesticidas químicos que têm alta eficiência, custos acessíveis, mas revelam impacto negativo no meio ambiente e na saúde humana; 2) pesticidas biológicos não prejudiciais ao meio ambiente, mas com baixa eficiência (menos de 60 %, em relação aos pesticidas químicos existentes) e custos elevados. Isso torna os pesticidas biológicos inacessíveis para muitos países e abre possibilidades para desenvolver e levar ao mercado novos tratamentos orgânicos que revelam alta eficiência e custos acessíveis e são ecologicamente corretos.

[003] Nas últimas décadas, algumas abordagens biológicas foram desenvolvidas para prevenir B. cinerea no campo, por exemplo, a aplicação de Bacillus subtilis e Trichoderma harzanium, mas são pouco utilizados na agricultura devido à sua baixa eficiência.

[004] Na agricultura da Europa Ocidental, os fungicidas bio-preventivos comumente usados são cobre e enxofre. A aplicação desses fungicidas tem alto custo devido à necessidade de reaplicação após cada precipitação. Além disso, altas concentrações desses metais no solo têm impactos negativos no meio ambiente.

[005] Como uma consequência, surge a necessidade de proporcionar uma alternativa a estas técnicas, por ser mais respeitoso com o meio ambiente, bem como um tratamento preventivo altamente eficaz contra patógenos fúngicos.

[006] Patógenos fúngicos de plantas são um dos tratamentos agronômicos que levam a perdas severas de alimentos anualmente. A eficiência dos patógenos fúngicos é causada por sua fácil dispersão na natureza, rápida fixação na superfície do hospedeiro e rápido desenvolvimento do tubo germinativo que promove a penetração nas plantas. As plantas, por outro lado, desenvolveram vários mecanismos de defesa contra patógenos fúngicos, por exemplo, necrotróficos: a) prevenção da penetração do patógeno; b) níveis aumentados de espécies reativas de oxigênio; c) indução de hormônios de defesa, como jasmonato, etileno, ácido salicílico e abscísico. Além disso, algumas plantas estão sintetizando compostos fungitóxicos que impedem o desenvolvimento de fungos na superfície da planta e impedem a formação de doenças. A identificação de compostos vegetais com forte atividade antifúngica pode levar ao desenvolvimento de novos fungicidas biológicos que podem, potencialmente, substituir os tratamentos químicos existentes.

[007] Ordem de Brassicales consiste em plantas economicamente importantes que são amplamente distribuídas e utilizadas como fonte de alimento. Este grupo de plantas demonstrou ter um conjunto único de metabólitos secundários - glucosinolatos. Nas últimas décadas, os glucosinolatos mostraram ter propriedades anticancerígenas, anti-inflamatórias e inseticidas.

[008] Por exemplo, JPH11139949 A (OGAWA KORYO CO LTD) divulga como obter um agente antibacteriano-antifúngico livre de forte odor irritante, tendo um alto limiar, baixo em volatilidade e tendo uma excelente atividade antifúngica-antibacteriana pela composição de um composto de isotiocianato [omega]-alquenila específico ou um composto de isotiocianato [omega]- alquiltioalquila específico. Um composto de isotiocianato [omega]-alquenila tendo a fórmula: CH2 CH(CH2)m NCS [(m)=2-10] (por exemplo, isotiocianato de 3-butenila) ou um composto de isotiocianato [omega]-alquiltioalquila tendo a fórmula: RS(CH2)n2 NCS [(n)=1 - 10; R é uma alquila 1-4C] (por exemplo, isotiocianato de metiltiometila) é composto em um alimento em uma quantidade de 0,01 a 100 ppm, preferencialmente 1 a 50 ppm ou em um agente higiênico oral em uma concentração de cerca de 0,01 a 100 ppm.

[009] Da mesma forma, JPH11246319 A (OGAWA KORYO CO LTD) divulga como obter um agente antimicrobiano e antifúngico que pode aliviar amplamente o cheiro irritante e pode ser aplicado a vários tipos de bebidas e alimentos usando um isotiocianato de [omega]-alquilsulfinilalquilalquila específico como ingrediente ativo. Este agente antimicrobiano e antifúngico compreende um isotiocianato de [omega]-alquilsulfinilalquila representado pela fórmula: R-S(O)-(CH2)n -NCS (n é 1 - 10; R é uma alquila 1-4C). Em uma modalidade, esse isotiocianato é isotiocianato de 3-metilsulfinilpropila, isotiocianato de 6-metilsulfinil-propila ou semelhantes. O composto na Fórmula I onde n é < = 7 está incluído nos componentes de raiz forte, mas seu teor é baixo. O composto da Fórmula é preparado pelo isotiocianato [omega]-metiltioalquila oxidante da Fórmula: CH3 S-(CH2)n -NCS com um peróxido.

[0010] JP2000086414 A (KINJIRUSHI WASABI KK) divulga como obter um agente antimicrobiano contendo um componente aromático de raiz forte como um ingrediente ativo, esp. mostrando um espectro antibacteriano que varia amplamente de fungos para bactérias e, exercendo um forte efeito bacteriostático e antibacteriano mesmo com um conteúdo infinitesimal do componente aromático. O agente compreende, como um ingrediente ativo, um componente aromático de raiz forte de n-metilsulfonilalquilisotiocianato e um ou mais componentes aromáticos de raiz forte selecionados a partir do grupo que consiste em isotiocianato de n-metiltioalquila, isotiocianato de n- metilsulfinilalquila e isotiocianato de alila. O agente compreende, como um ingrediente ativo, componentes aromáticos de raiz forte tanto de isotiocianato de n-metiltioalquila quanto de isotiocianato de n- metilsulfinilalquila.

[0011] K. GILLIVER “The Inhibitory Action of Antibiotics on Plant Pathogenic Bacteria and Fungi”, ANNALS OF BOTANY., Vol. 10, nº 3, 1 de julho de 1946 (1946-07-01), páginas 271 a 282, XP55512767, GB ISSN: 0305-7364, DOI:

10.1093/oxfordjournals.aob.a083136; relata que exemplos de antagonismo entre microrganismos do solo e patógenos de plantas foram reconhecidos por muitos anos; e, em alguns casos, métodos biológicos de controle de doenças foram elaborados. Substâncias antibióticas específicas foram isoladas de filtrados de cultura de fungos, bactérias e actinomicetos, e alguns deles mostraram ter uma ação antagônica contra organismos causais de doenças de plantas. Em particular, é divulgada a atividade antifúngica da cheirolina.

[0012] Em T Sotelo et al. “In vitro activity of glucosinolates and its degradation products against Brassica-Pathogenic bactéria and fungi”, Applied and Environmental Microbiology, 1 de janeiro de 2015 (2015-01-01), páginas 432 a 440, XP55512754, DOI: 10.1128/AEM.03142-14, o objetivo do trabalho foi avaliar os efeitos biocidas de 17 glucosinolatos (GSLs) e produtos da hidrólise de glucosinolatos (GHPs) e de extratos metanólicos de folhas de diferentes culturas de Brassica enriquecidas com GSL na supressão do crescimento in vitro de duas bactérias (Xanthomonas campestris pv. campestris e Pseudomonas syringae pv. maculicola) e dois patógenos fúngicos Brassica (Alternaria brassicaea e Sclerotinia scletoriorum). GSLs, GHPs e extratos de folhas metanólicas inibiram o desenvolvimento dos patógenos testados em comparação com o controle, e o efeito foi dependente da dose. Em particular, este documento divulga a atividade antifúngica do sulorafano.

[0013] L DROBNICA et al. “Antifungal activity of lsothiocyanates and related compounds”, APPLIED MICROBIOLOGY, vol. 15, nº 4, 1967, páginas 701 a 709, apresenta os resultados de um estudo sobre a atividade antifúngica de isotiocianatos-derivados de bifenil (grupo “A”), de estilbeno (“B”), de azobenzeno e benzeneazonaftaleno (“C”), de naftaleno (“D”), e de outros hidrocarbonetos aromáticos policondensados (“E”). De um total de 48 compostos investigados, a atividade antifúngica foi observada apenas nos compostos dos grupos A e D. Os derivados dos grupos B, C e são extremamente insolúveis em água e as moléculas são muito grandes; como resultado, eles provavelmente não podem passar para esporos ou micélio de fungos. Foi sugerido que o grupo -NCS não pode manifestar sua reatividade. Em particular, este documento divulga a atividade antifúngica de glucoquirolina, glucoerisolina e glucoberteroína.

[0014] DE 17 93 450 A1 (PHILIPS NV) refere-se a composições fungicidas que contêm certos tiocianatos, isto é, sulfinila ou sulfonilmetileno rodanidas, e a métodos para preparar e proteger plantas contra infestação por fungos.

[0015] Entretanto, ainda existe a necessidade de fornecer moléculas, respeitando o meio ambiente, mas revelando um efeito fungitóxico mais forte e sendo ativo em uma faixa mais ampla de patógenos fúngicos.

BREVE DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

[0016] Na presente invenção, os Requerentes identificaram uma combinação de sulfonila e sulfinila contendo glucosinolatos alifáticos que revelam um forte efeito fungitóxico em uma ampla faixa de patógenos fúngicos. Essa combinação de produtos pode ser usada como uma nova linha de fungicidas biológicos.

[0017] Um dos objetivos da presente invenção é fornecer um uso de uma composição compreendendo a combinação de pelo menos dois compostos selecionados a partir da Fórmula Geral I: (I) Em que: Z representa nitrila (-CN), tiocianato (-SCN) ou isotiocianato (- N=C=S); X, Y representam, independentemente um do outro, um par solitário ou O, com a condição de que pelo menos um dos dois X ou Y é O; R1, R2 representam, independentemente um do outro, H, alquila(C1- C6) ramificada, cíclica ou linear saturada; A, C representam, independentemente um do outro, uma ligação covalente, alquila(C1-C8), arila C6 ramificada, policíclica, bicíclica, espirocíclica, cíclica ou linear saturada ou insaturada; B representa uma ligação covalente, alquila(C1-C8), arila C6 ramificada, policíclica, bicíclica, espirocíclica, cíclica ou linear saturada ou insaturada; desde que pelo menos um dentre A, B ou C seja diferente de uma ligação covalente, e caracterizado pelo fato de que os pelo menos dois compostos combinados compreendem: 1) pelo menos um grupo Z representando isotiocianato, e/ou,

2) pelo menos dois diferentes níveis de oxidação do átomo de enxofre, e/ou, 3) pelo menos um comprimento diferente no resíduo de cadeia de carbono -A-B-C-, na prevenção ou tratamento de patógenos fúngicos em plantas.

[0018] Um outro objetivo da presente invenção é fornecer uma composição compreendendo a combinação dos compostos da invenção para o uso em um método para prevenir ou tratar micose em pacientes humanos ou animais.

[0019] Um outro objetivo da invenção é fornecer uma composição fungicida compreendendo a combinação dos compostos da invenção.

[0020] A presente invenção também se refere a um alimento, uma bebida ou um agente de higiene oral contendo o agente antifúngico mencionado acima, isto é, a composição fungicida.

[0021] Outros objetivos e vantagens da invenção se tornarão evidentes para aquelas pessoas versados na técnica a partir de uma revisão da descrição detalhada que se segue, que prossegue com referência aos seguintes desenhos ilustrativos e às reivindicações correspondentes.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0022] A Figura 1: Representa o metabólito secundário recém-identificado na superfície dos cotilédones fad2-3. (A) Caracterização de 7-metilsulfonil-heptil- glucosinolato. Foi observado um íon (M-H) - em m/z 494,0823 correspondendo à fórmula molecular C15H29NO11S3 (massa calculada 494,0824, erro 0,1 mDa). Um íon de fragmento principal em m/z 96,9599 típico de uma porção de sulfato também estava presente. Nenhum composto conhecido foi relatado para a fórmula molecular C15H29NO11S3, entretanto os dados obtidos sugerem fortemente que este metabólito seja 7-metilsulfonil-heptil-glucosinolato, um novo glucosinolato, que seria o análogo de 15 carbonos do 8-metilsulfonil-octil- glucosinolato (C16H31NO11S3). (B) Identificação de um novo glucosinolato que era diferencialmente abundante na superfície dos cotilédones WT e fad2-3 e nas primeiras folhas verdadeiras. Abundância relativa de 7-metilsulfonil-heptil- glucosinolato em lavagens de isopropanol da superfície de cotilédones de 7 dias e folhas de 14 dias. Barras de erro representam a média de quatro repetições biológicas (± SD), cada uma de um pool de ≈ 980 mudas. A significância estatística na comparação de pares foi avaliada pelo teste de Student, onde ** p ≥ 0,01; *** p ≤ 0,001. (C). Estrutura química de 7-metilsulfonil-heptil- glucosinolato. (D) Estrutura de 7-metilsulfonil-heptil-isotiocianato.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0023] Embora métodos e materiais semelhantes ou equivalentes aos descritos neste documento possam ser usados na prática ou no teste da presente invenção, métodos e materiais adequados são descritos abaixo. Todas as publicações, pedidos de patentes, patentes e outras referências aqui mencionadas são incorporadas por referência em sua totalidade. As publicações e pedidos discutidos neste documento são fornecidos apenas para sua divulgação antes da data de depósito do presente pedido. Nada aqui deve ser interpretado como uma admissão de que a presente invenção não tem o direito de anteceder tal publicação em virtude da invenção anterior. Além disso, os materiais, métodos e exemplos são apenas ilustrativos e não se destinam a ser limitantes.

[0024] Em caso de conflito, o presente relatório descritivo, incluindo definições, prevalecerá.

[0025] A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos usados neste documento têm o mesmo significado que é comumente entendido por uma pessoa versada na técnica ao qual a matéria neste documento pertence. Tal como aqui utilizadas, as seguintes definições são fornecidas a fim de facilitar a compreensão da presente invenção.

[0026] O termo “compreender” é geralmente usado no sentido de incluir, ou seja, permitir a presença de um ou mais recursos ou componentes.

[0027] Como usado no relatório descritivo e reivindicações, as formas singulares “um”, “uma”, “o” e “a” incluem referências plurais, a menos que o contexto indique claramente o contrário.

[0028] A presença de palavras e frases ampliadas, como “um ou mais”, “pelo menos”, “mas não limitado a” ou outras frases semelhantes em alguns casos, não deve ser interpretada como significando que o caso mais restrito é pretendido ou exigido nos casos em que tais frases de alargamento podem estar ausentes.

[0029] Como usado aqui, os termos “sujeito” ou “paciente” são bem reconhecidos na técnica e são usados indistintamente neste documento para se referir a um mamífero, incluindo cão, gato, rato, camundongo, macaco, vaca, cavalo, cabra, ovelha, porco, camelo e, mais preferencialmente, um ser humano. Em algumas modalidades, o sujeito é um sujeito com necessidade de tratamento ou um sujeito com uma doença ou distúrbio. No entanto, em outras modalidades, o sujeito pode ser um sujeito normal. O termo não denota uma idade ou sexo específico. Assim, pretende-se que sejam contemplados assuntos adultos e recém-nascidos, sejam homens ou mulheres.

[0030] O termo “uma quantidade eficaz” refere-se a uma quantidade necessária para obter um efeito fisiológico. O efeito fisiológico pode ser alcançado por uma dose de aplicação ou por aplicações repetidas. A dosagem administrada pode, claro, variar dependendo de fatores conhecidos, tais como as características fisiológicas da composição particular; a idade, saúde e peso do sujeito; a natureza e extensão dos sintomas; o tipo de tratamento simultâneo; a frequência do tratamento; e o efeito desejado e pode ser ajustado por uma pessoa versada na técnica.

[0031] Um “fungo” é um eucarioto que digere alimentos externamente e absorve nutrientes diretamente através de suas paredes celulares. A maioria dos fungos se reproduz por esporos e tem um corpo (talo) composto de células tubulares microscópicas chamadas hifas. Os fungos são heterótrofos e, como os animais, obtêm seu carbono e energia de outros organismos. Alguns fungos obtêm seus nutrientes de um hospedeiro vivo (planta ou animal) e são chamados de biotrofos; outros obtêm seus nutrientes de plantas ou animais mortos e são chamados de saprótrofos (saprófitos, sapróbios). Alguns fungos infectam um hospedeiro vivo, mas matam as células do hospedeiro para obter seus nutrientes; estes são chamados de necrotróficos.

[0032] “Fungos patogênicos” também aqui referidos como “patógenos fúngicos” são fungos que causam doenças em plantas, seres humanos ou outros organismos. Aproximadamente 300 fungos são conhecidos por serem patogênicos para humanos. O estudo de fungos patogênicos para seres humanos é denominado “micologia médica”. Embora os fungos sejam eucarióticos, muitos fungos patogênicos são microrganismos. O estudo de fungos e outros organismos patogênicos às plantas é denominado patologia vegetal.

[0033] Existem milhares de espécies de fungos fitopatogênicos que, coletivamente, são responsáveis por 70 % de todas as doenças de plantas conhecidas. Fungos fitopatogênicos são parasitas, mas nem todos os fungos parasitas de plantas são patógenos. Fungos parasitas de plantas obtêm nutrientes de uma planta hospedeira viva, mas a planta hospedeira não necessariamente exibe quaisquer sintomas. Fungos fitopatogênicos são parasitas e causam doenças caracterizadas por sintomas.

[0034] “Fungicidas” são compostos químicos biocidas ou organismos biológicos usados para matar fungos parasitas ou seus esporos (aqui definidos como fungitóxicos). Um fungistático inibe seu crescimento. Os fungos podem causar sérios danos à agricultura, resultando em perdas críticas de produção, qualidade e lucro. Os fungicidas são usados na agricultura e na medicina para combater infecções fúngicas em animais ou seres humanos. Os produtos químicos usados para controlar o oomicetos, que não são fungos, também são chamados de fungicidas, pois os oomicetos usam os mesmos mecanismos dos fungos para infectar as plantas. Os fungicidas podem ser de contato, translaminar ou sistêmicos. Os fungicidas de contato não são absorvidos pelo tecido da planta e protegem apenas a planta onde a aspersão é depositada. Os fungicidas translaminar redistribuem o fungicida da superfície superior da folha em aspersão para a superfície inferior não em aspersão. Os fungicidas sistêmicos são absorvidos e redistribuídos pelos vasos do xilema. Poucos fungicidas se movem para todas as partes de uma planta. Alguns são localmente sistêmicos e alguns se movem para cima.

[0035] “Fungistáticos” são agentes antifúngicos que inibem o crescimento do fungo (sem matar o fungo). O termo fungistático pode ser usado tanto como substantivo quanto como adjetivo. Os fungistáticos têm aplicações na agricultura, na indústria de alimentos, na indústria de tintas e na medicina.

[0036] Uso de uma composição compreendendo a combinação de pelo menos dois compostos selecionados a partir da Fórmula Geral I: (I) Em que: Z representa nitrila (-CN), tiocianato (-SCN) ou isotiocianato (- N=C=S); X, Y representam, independentemente um do outro, um par solitário ou O, com a condição de que pelo menos um dos dois X ou Y é O; R1, R2 representam, independentemente um do outro, H, alquila(C1- C6) ramificada, cíclica ou linear saturada; A, C representam, independentemente um do outro, uma ligação covalente, alquila(C1-C8), arila C6 ramificada, policíclica, bicíclica, espirocíclica, cíclica ou linear saturada ou insaturada; B representa uma ligação covalente, alquila(C1-C8), arila C6 ramificada, policíclica, bicíclica, espirocíclica, cíclica ou linear saturada ou insaturada; desde que pelo menos um dentre A, B ou C seja diferente de uma ligação covalente, e caracterizado pelo fato de que os pelo menos dois compostos combinados compreendem: 1) pelo menos um grupo Z representando isotiocianato, e/ou, 2) pelo menos dois diferentes níveis de oxidação do átomo de enxofre, e/ou, 3) pelo menos um comprimento diferente no resíduo de cadeia de carbono -A-B-C-, na prevenção ou tratamento de patógenos fúngicos em plantas.

[0037] De preferência, anéis aromáticos podem ser substituídos em orto, meta e para; anéis cicloalquila podem ser substituídos em várias posições, e cis ou trans em relação ao anel; e alifático e aromático podem ser substituídos por grupos H, halogênio ou OMe.

[0038] Estados de oxidação comuns ou “níveis de oxidação” de enxofre variam de −2 a +6. Se o enxofre não foi reduzido nem oxidado; possui 6 elétrons de valência. É claro que nos sulfatos, SO2−4, e sulfitos, SO2−3, o átomo de enxofre assume estados de oxidação formais de VI+, e IV+; em sulfuretos −II.

[0039] É sugerido que para a combinação ou mistura dos pelo menos dois compostos, o comprimento no resíduo de cadeia de carbono -A-B-C- é importante. A combinação pode conter uma cadeia curta e uma longa, por exemplo, uma contendo um máximo de 6 átomos de carbono lineares e outra contendo um mínimo de 7 átomos de carbono lineares. No entanto, em certos casos, a combinação pode conter pelo menos dois compostos com resíduo de cadeia de carbono -A-B-C- do mesmo comprimento.

[0040] A composição da invenção para ser eficaz na prevenção ou tratamento de patógenos fúngicos em plantas deve pelo menos cumprir um dos critérios acima citados de acordo com 1) -3). As combinações ou misturas de pelo menos dois compostos selecionados da Fórmula Geral I e que cumprem os critérios 1) -3) mostraram um efeito sinérgico inesperado em comparação com os compostos individuais testados isoladamente.

[0041] É geralmente aceito que a “sinergia” ocorre quando a ação combinada de dois ou mais agentes é maior que a soma de seus efeitos individuais. Em outras palavras, diz-se que a sinergia ocorre quando a ação combinada de dois ou mais agentes é maior do que poderia ter sido prevista com base no desempenho dos agentes quando usados sozinhos.

[0042] Em particular, a composição da invenção é uma mistura em que pelo menos um composto com Z representando nitrila e um composto com Z representando isotiocianato.

[0043] Alternativamente, a mistura corresponde a pelo menos um composto com Z representando isotiocianato e um composto com Z representando isotiocianato.

[0044] Alternativamente, a mistura corresponde a pelo menos um composto com Z representando isotiocianato e um composto com Z representando tiocianato.

[0045] Alternativamente, a mistura corresponde a pelo menos um composto com Z representando tiocianato e um composto com Z representando isotiocianato.

[0046] Alternativamente, a mistura corresponde a pelo menos um composto com X representando um par solitário e Y representando um oxigênio e pelo menos um composto com X e Y representando um oxigênio.

[0047] Alternativamente a mistura corresponde a X e Y representando um oxigênio.

[0048] Alternativamente, a mistura corresponde a pelo menos um composto com X representando um par solitário e Y representando um oxigênio.

[0049] Alternativamente, a mistura da invenção onde pelo menos dois compostos são selecionados com a mesma fórmula A/B/C onde B representa uma ligação covalente e A e C representa independentemente um do outro uma alquila(C1-C8) ramificada, policíclica, bicíclica, espirocíclica, cíclica ou linear saturada ou insaturada.

[0050] De preferência, a mistura da invenção onde pelo menos dois compostos são selecionados com a fórmula A/B/C diferente onde B representa uma ligação covalente e A e C representa independentemente um do outro uma alquila(C1-C8) ramificada, policíclica, bicíclica, espirocíclica, cíclica ou linear saturada ou insaturada.

[0051] O termo “par solitário” se refere a um par de elétrons de valência que não são compartilhados com outro átomo e às vezes é chamado de par sem ligação. Pares solitários são encontrados na camada de elétrons mais externa dos átomos. Eles podem ser identificados usando uma estrutura de Lewis. Os pares de elétrons são, portanto, considerados pares solitários se dois elétrons estiverem emparelhados, mas não forem usados em ligações químicas. Assim, o número de pares de elétrons isolados mais o número de elétrons de ligação é igual ao número total de elétrons de valência em torno de um átomo. Um único par solitário pode ser encontrado com átomos no grupo nitrogênio, como nitrogênio na amônia, dois pares solitários podem ser encontrados com átomos no grupo calcogênio, como oxigênio na água, e os halogênios podem carregar três pares solitários, como no cloreto de hidrogênio.

[0052] Uma “ligação covalente”, também chamada de ligação molecular, é uma ligação química que envolve o compartilhamento de pares de elétrons entre os átomos. Esses pares de elétrons são conhecidos como pares compartilhados ou pares de ligação, e o equilíbrio estável das forças de atração e repulsão entre os átomos, quando eles compartilham elétrons, é conhecido como ligação covalente.

[0053] “Isotiocianato” é o grupo químico -N=C=S, formado pela substituição do oxigênio no grupo isocianato por um enxofre. Muitos isotiocianatos naturais de plantas são produzidos pela conversão enzimática de metabólitos chamados glucosinolatos. Esses isotiocianatos naturais, como isotiocianato de alila, também são conhecidos como óleos de mostarda. Um isotiocianato artificial, isotiocianato de fenil, é usado para sequenciamento de aminoácidos na degradação de Edman.

[0054] O termo “alquila” como usado aqui refere-se a grupos alifáticos saturados ou insaturados, incluindo grupos alquila de cadeia linear, grupos alquila de cadeia ramificada, opcionalmente substituídos com um ou vários halogênios. Em certas modalidades, um alquila de cadeia linear ou cadeia ramificada tem cerca de 30 ou menos átomos de carbono em sua cadeia principal (por exemplo, C1-C30 para cadeia linear, C3-C30 para cadeia ramificada), e alternativamente, cerca de 20 ou menos, por exemplo, de 1 a 6 carbonos (definidos como alquila inferior). De preferência, alquilas da invenção, têm de um a trinta, mais preferencialmente de um a vinte, mesmo mais preferencialmente de um a doze, mais preferencialmente de um a oito, mais preferencialmente de um a seis, e o mais preferencialmente de um a quatro átomos de carbono e é linear ou ramificado. O termo “alquila C1-C6” representa uma cadeia de alquila linear ou ramificada tendo de um a seis átomos de carbono. Os grupos alquila C1-C6 exemplificativos incluem metila, etila, n-propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butila, t-butila, pentila, neo-pentila, hexila, isohexila, e semelhantes. De preferência, alquila é uma alquila inferior, tal como n-butila, sec-butila, isobutila, terc-butila, n-propila ou isopropila, etila ou metila.

[0055] O termo “inferior” em alquila inferior, alcóxi inferior, alquenila inferior e alquinila inferior refere-se a uma cadeia de até 6 átomos de carbono ligados em uma forma linear ou ramificada.

[0056] O termo “cicloalquila” representa anel saturado ou parcialmente saturado, mono- ou poli-carbocíclico, de preferência com 5 a 14 átomos de carbono no anel. Cicloalquilas exemplificativas incluem anéis monocíclicos com 3 a 7, de preferência 3 a 6, átomos de carbono, tal como ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-heptila e semelhantes. Uma cicloalquila exemplificativa é uma cicloalquila C5-C7, que é uma estrutura do anel de hidrocarboneto saturado contendo de cinco a sete átomos de carbono.

[0057] O termo “alcoxila” representa -O-alquila. Um exemplo de uma alcoxila é uma alcoxila C1-C6, que representa uma cadeia de alquila linear ou ramificada tendo de um a seis átomos de carbono ligados a um átomo de oxigênio. Grupos alcoxila C1-C6 exemplificativos incluem metoxila, etoxila, propoxila, isopropoxila, butoxila, sec-butoxila, t-butoxila, pentoxila, hexoxila, e semelhantes. Alcoxila C1- C6 inclui dentro de sua definição uma alcoxila C1-C4.

[0058] O termo “arila” como usado aqui refere-se a um anel carbocíclico ou heterocíclico, aromático, monocíclico ou policíclico de 5 a 14 membros. Arilas exemplificativas incluem fenila, naftila, antrila, fenantrila, tienila, pirrolila, imidazolila, pirazolila, furila, isotiazolila, furazanila, isoxazolila, tiazolila, piridila, pirazinila, pirimidinila, piridazinila, triazinila, benzo[b]tienila, nafto[2,3- b]tiantrenila, isobenzofuranila, cromenila, xantenila, fenoxatienila, indolizinila, isoindolila, indolila, indazolila, purinila, isoquinolila, quinolila, ftalazinila, naftiridinila, quinoxialinila, quinzolinila, benzotiazolila, benzimidazolila, tetrahidroquinolinila, cinolinila, pteridinila, carbazolila, beta-carbolinila, fenantridinila, acridinila, perimidinila, fenantrolinila, fenazinila, isotiazolila, fenotiazinila, e fenoxazinila.

[0059] O termo “halogênio” representa cloro, flúor, bromo ou iodo. O termo “halo” representa cloro, fluoro, bromo ou iodo.

[0060] O termo “carbociclo” representa um anel aromático ou um saturado ou um parcialmente saturado monocíclico ou policíclico de 5 a 14 membros, tal como um anel monocíclico de 5 a 7 membros ou bicíclico de 7 a 10 membros,

em que todos os membros do anel são átomos de carbono.

[0061] O termo “policíclico” refere-se a um sistema de anel policíclico, em que pelo menos dois anéis são conectados juntos. Como usado aqui, “policíclico” refere-se a qualquer sistema de anel, que pode ser qualquer grau de saturação, aromático, alifático e opcionalmente conter um heteroátomo. Os sistemas podem ser ainda classificados de acordo com o número de anéis presentes (por exemplo, 2 = bicíclico, 3 = tricíclico, 4 = tetracíclico, etc.) e a forma como os anéis são conectados juntos. (1) Sistemas de anéis substituídos: Esses sistemas de anéis não têm átomos comuns. Nestes sistemas policíclicos, o anel menor pode ser considerado um substituinte do anel maior. A título de exemplo apenas, bifenila é um sistema de anel policíclico substituído. (2) Sistemas de anéis espiro: os sistemas de anéis espiro compartilham um único átomo comum. Consequentemente, os anéis se unem em um único “ponto”. O átomo de conexão também é chamado de espiroátomo, na maioria das vezes um carbono quaternário (“carbono espiro”). A título de exemplo, o composto espiro que consiste em um anel ciclo-hexano e um anel ciclopentano é denominado espiro [4.5] decano. (3) Sistemas de anéis fundidos: os sistemas de anéis fundidos compartilham dois átomos comuns em uma ligação comum, portanto, os anéis compartilham um lado. Exemplos de sistemas de anéis policíclicos fundidos incluem, mas não estão limitados a, Naftaleno, Benzofurano, Indol, Benzotiofeno, Quinolina e Antraceno. (4) Sistemas de anéis ligados em ponte: os sistemas de anéis ligados em ponte compartilham mais de dois átomos comuns, isto é, os sistemas de anéis ligados em ponte contêm anéis de intertravamento. A título de exemplo, Adamantano, Amantadina, Biperideno, Memantina, Metenamina, Rimantadina e Norbornano são todos sistemas de anéis ligados em ponte.

[0062] O termo “sulfonila” representa -SO2-L5, em que L5 é preferencialmente alquila, arila, cicloalquila, heterociclo ou amino. A alquila, arila, cicloalquila e heterociclo podem todos opcionalmente ser substituídos. Um exemplo de uma sulfonila é uma alquilsulfonila C1-C4, que é uma cadeia de alquila linear ou ramificada tendo de um a quatro átomos de carbono ligados a uma porção de sulfonila. Grupos alquilsulfonila C1-C4 exemplificativos incluem metilsulfonila, etilsulfonila, propilsulfonila, isopropil sulfonila, butilsulfonila, sec- butilsulfonila, t-butilsulfonila, e semelhantes.

[0063] Como indicado acima, muitos dos grupos são opcionalmente substituídos. Exemplos de substituintes para alquila e arila incluem mercapto, tioéter, nitro (N02), amino, arilaoxila, halogênio, hidroxila, alcoxila e acila, bem como arila, cicloalquila, e heterociclos saturados e parcialmente saturados. Exemplos de substituintes para heterociclo e cicloalquila incluem aqueles listados acima para alquila e arila, bem como arila e alquila.

[0064] Arilas substituídas exemplificativas incluem um anel fenila ou naftila substituído com um ou mais substituintes, preferencialmente um a três substituintes, independentemente selecionados de halo, hidróxi, morfolino(C 1- C4)alcóxi carbonila, piridil (C1-C4)alcóxicarbonila, halo (C1-C4)alquila, alquila C1- C4, alcóxi C1-C4, carbóxi, alcóxicarbonila C1-C4, carbamoila, N-(C1- C4)alquilcarbamoila, amino, alquilamino C1-C4, di(C1-C4)alquilamino ou um grupo da Fórmula -(CH2)a-R<7> onde um é 1, 2, 3, ou 4, e R<7> é hidróxi, alcóxi C 1- C4, carbóxi, alcóxicarbonila C1-C4, amino, carbamoila, alquilamino C1-C4 ou di(C1- C4)alquilamino.

[0065] Uma outra alquila substituída é halo(C1-C4)alquila, que representa uma cadeia de alquila linear ou ramificada tendo de um a quatro átomos de carbono com 1 a 3 átomos de halogênio ligados a ela. Grupos halo(C1-C4)alquila exemplificativos incluem clorometila, 2-bromoetila, 1-cloroisopropila, 3- fluoropropila, 2,3-dibromobutila, 3-cloroisobutila, iodo-t-butila, trifluorometila, e semelhantes.

[0066] Uma outra alquila substituída é hidróxi(C1-C4)alquila, que representa uma cadeia de alquila linear ou ramificada tendo de um a quatro átomos de carbono com um grupo hidróxi ligado a ela. Grupos hidróxi(C 1-C4)alquila exemplificativos incluem hidroximetila, 2-hidroxietila, 3-hidroxipropila, 2- hidroxiisopropila, 4-hidroxibutila, e semelhantes.

[0067] Ainda uma outra alquila substituída é alquiltio(C1-C4)alquila C1-C4, que é um grupo alquila C1-C4 linear ou ramificado com um grupo alquiltio C1-C4 ligado a ele. Grupos alquiltio(C1-C4)alquila C1-C4 exemplificativos incluem metiltiometila, etiltiometila, propiltiopropila, sec-butiltiometila, e semelhantes.

[0068] Uma cicloalquila pode ser opcionalmente substituída com 1 , 2 ou 3 substituintes independentemente selecionados de halo, halo(C1-C4)alquila, alquila C1-C4, alcóxi C1-C4, carbóxi, alcóxicarbonila C1-C4, carbamoila, N-(C1- C4)alquilcarbamoila, amino, alquilamino C1-C4, di(C1-C4)alquilamino ou um grupo tendo a estrutura -(CH2)a-R<7> onde um é 1, 2, 3, ou 4, e R<7> é hidróxi, alcóxi C1-C4, carbóxi, alcóxicarbonila C1-C4, amino, carbamoila, alquilamino C1-C4 ou di(C1-C4)alquilamino. Grupos cicloalquila substituídos exemplificativos incluem 3- metilciclopentila, 4-etoxiciclo-hexila, 5-carboxiciclo-heptila, 6- clorociclo-hexila, e semelhantes.

[0069] As ligações duplas, em princípio, podem ter configuração E ou Z. Os compostos desta invenção podem, portanto, existir como misturas isoméricas ou isômeros individuais. Se não for especificado, ambas as formas isoméricas são pretendidas. Quando um composto da invenção contém um centro quiral, o composto pode ser fornecido como um único isômero (R ou S) ou como uma mistura de isômeros, por exemplo, uma mistura racêmica. Quando um composto da invenção contém mais de um centro quiral, o composto pode ser fornecido como um diastereoisômero enantiomericamente puro ou como uma mistura de diastereoisômeros.

[0070] Em uma modalidade particular, a invenção fornece o uso de uma composição compreendendo a combinação de pelo menos dois compostos de isotiocianato, preferencialmente os ditos pelo menos dois compostos de isotiocianato têm pelo menos dois diferentes níveis de oxidação do átomo de enxofre, e/ou pelo menos um comprimento diferente no resíduo de cadeia de carbono -A-B-C-, preferencialmente compreendido entre C3 a C9.

[0071] De preferência, a invenção fornece o uso de uma composição compreendendo a combinação de pelo menos dois compostos selecionados a partir da Fórmula Geral I (como definido acima): em que: Z representa isotiocianato (-N=C=S); X, Y representam, independentemente um do outro O;

R1, R2 representam, independentemente um do outro, H, alquila(C 1- C6) cíclica ou linear saturada; A, C representam, independentemente um do outro, uma ligação covalente, alquila(C1-C8) cíclica ou linear saturada ou insaturada, desde que pelo menos um dentre A ou C seja diferente de uma ligação covalente; B representa uma ligação covalente; e em que o comprimento no resíduo de cadeia de carbono -A-B-C- é de C3 a C9; na prevenção de tratamento de patógenos fúngicos em plantas.

[0072] Mais preferencialmente, a invenção fornece o uso de uma composição compreendendo a combinação dos pelo menos dois compostos selecionados entre a lista compreendendo:

; e em que os pelo menos dois compostos combinados compreendem: 1) pelo menos um grupo Z representando isotiocianato, e/ou, 2) pelo menos dois diferentes níveis de oxidação do átomo de enxofre, e/ou, 3) pelo menos um comprimento diferente no resíduo de cadeia de carbono -A-B-C-, 4) e em que o comprimento no resíduo de cadeia de carbono -A-B- C- é de C3 a C9; na prevenção de tratamento de patógenos fúngicos em plantas.

[0073] De preferência, os pelo menos dois compostos combinados a serem usados na prevenção ou tratamento de patógenos fúngicos em plantas são selecionados a partir do grupo que consiste em: 8MSOH/8MSOOH; 8ASOH/8ASOOH; 8ESOH/8ESOOH; 8CSOH/3MSOOH; 8CSOH/7MSOH; 8CSOH/3MSOH; 8MSOOH/6MSOH; 8MSOH/3MSOOH; 8MSOH/7MSOH; 8MSOH/6MSOH; 8CSOH/8MSOH; 8CSOH/3MSOOH; 8MSOH/9MSOOH; 8CSOH/7MSOH; 8ESOH/7MSOH; 8ESOH/3MSOH; 8MSOOH/7MSOH; 8MSOOH/9MSOH; 8MSOOH/6MSOH; 8CSOH/7MSOH; 8MSOOH/3MSOH; 8MSOOH/8MSOON ou 8MSOOH/3MSOOH.

[0074] Mesmo mais preferencialmente, os pelo menos dois compostos combinados para serem usados na prevenção ou tratamento de patógenos fúngicos em plantas é a mistura de 7 metilsulfonilheptila e (E)-1-isotiocianato-8- (metilsulfinil)oct-2 ou uma mistura de 8 isotiocianato de metilsulfoniloctila e 8 isotiocianato de metilsulfiniloctila.

[0075] Os compostos identificados da invenção apresentam várias vantagens, pois revelam atividade fungitóxica e/ou fungistática contra patógenos fúngicos ambientais, vegetais, de armazenamento e médicos.

[0076] Além disso, os compostos identificados da invenção não revelam fitotoxicidade, são estáveis à luz e podem ser aplicados livremente nas plantas.

[0077] A composição usada na presente invenção mostrou estender a vida útil em um mínimo de uma semana para frutas, vegetais e flores de corte infectadas por patógenos fúngicos em instalações de armazenamento. Os compostos usados (isto é, mistura) mostraram não ser tóxicos para insetos e seres humanos. A composição da invenção é facilmente aplicável com um impacto específico no amadurecimento de alimentos perecíveis e nenhum custo de instalação extra é necessário. A composição da invenção é de interesse para empresas de armazenamento (ou seja, redução de custos com embalagem), indústria madeireira, jardineiros e agricultores.

[0078] Assim, a composição da invenção deve ser utilizada como fungitóxico e/ou fungistático em plantas. A composição da invenção para ser usada como fungicida mostrou uma grande eficácia no tratamento de várias plantas ou famílias de plantas (hospedeiros). Na verdade, a composição da invenção pode ser usada no tratamento de mais de 1400 espécies de culturas ou plantas agronômicas importantes, incluindo ordem de Solanales, Rosales, Vitales, Poales, etc.

[0079] A composição da invenção pode ser usada com qualquer parte de uma planta durante qualquer parte de seu ciclo de vida, incluindo, mas não se limitando a sementes, mudas, células vegetais, plantas ou flores.

[0080] De acordo com a invenção, todas as plantas e partes de plantas podem ser tratadas. Por “plantas” entende-se todas as plantas e populações de plantas, como plantas selvagens desejáveis e indesejáveis, cultivares e variedades de plantas (sejam ou não protegidas por variedades de plantas ou direitos do criador de plantas). Cultivares e variedades de plantas podem ser plantas obtidas por métodos convencionais de propagação e melhoramento que podem ser assistidos ou suplementados por um ou mais métodos biotecnológicos, tais como o uso de haplóides duplos, fusão de protoplastos, mutagênese aleatória e dirigida, marcadores moleculares ou genéticos ou por bioengenharia e métodos de engenharia genética. Por partes da planta entende- se todas as partes acima e abaixo do solo e órgãos de plantas, como broto, folha, flor e raiz, em que, por exemplo, folhas, acículas, caules, ramos, flores, corpos frutíferos, frutos e sementes, bem como raízes, cormos e rizomas são listados. As culturas e o material de propagação vegetativa e generativa, por exemplo, estacas, cormos, rizomas, estolhos e sementes também pertencem às partes da planta.

[0081] Entre as plantas que podem ser protegidas pela composição da invenção, pode-se mencionar as principais culturas de campo, como milho, soja, algodão, sementes oleaginosas de Brassica tal como Brassica napus (por exemplo, canola), Brassica rapa, B. juncea (por exemplo, anola), Brassica rapa, B. juncea ( ex. mostarda) e Brassica carinata, arroz, trigo, beterraba sacarina, cana-de-açúcar, aveia, centeio, cevada, painço, triticale, linho, videira e várias frutas e vegetais de vários taxa botânicos, como Rosaceae sp. (por exemplo, frutas vermelhas, como maçãs e peras, mas também frutas com caroço, como damascos, cerejas, amêndoas e pêssegos, frutas vermelhas, como morangos), Ribesioidae sp., Juglandaceae sp., Betulaceae sp., Anacardiaceae sp., Fagaceae sp ., Moraceae sp., Oleaceae sp., Actinidaceae sp., Lauraceae sp., Musaceae sp. (por exemplo, bananeiras e plantações), Rubiaceae sp. (por exemplo, café), Theaceae sp., Sterculiceae sp., Rutaceae sp. (por exemplo, limões, laranjas e toranjas); Solanaceae sp. (por exemplo, tomates, batatas, pimentões, berinjela), Liliaceae sp., Compositiae sp. (por exemplo, alface, alcachofra e chicória incluindo raiz de chicória, escarola ou chicória comum), Umbelliferae sp. (por exemplo, cenoura, salsa, salsão e aipo), Cucurbitaceae sp. (por exemplo, pepino incluindo pepino em conserva, abóbora, melancia, cabaças e melões), Alliaceae sp. (por exemplo, cebola e alho-poró), Cruciferae sp. (por exemplo, repolho branco, repolho roxo, brócolis, couve-flor, couve de Bruxelas, pak choi, couve-rábano, rabanete, raiz-forte, agrião, couve chinesa), Leguminosae sp. (por exemplo, amendoim, ervilha e feijão - como feijão trepadeira e favas), Chenopodiaceae sp. (por exemplo, mangold, espinafre beterraba, espinafre, beterraba), Malvaceae (por exemplo, quiabo), Asparagaceae (por exemplo, aspargo); culturas hortícolas e florestais; plantas e flores ornamentais, incluindo flores de corte; grama, isto é, campos de golfe, grama, bem como homólogos geneticamente modificados dessas culturas.

[0082] Por exemplo, a composição da presente invenção pode ser usada para controlar doenças fúngicas comuns, como míldio em pó, ferrugem, míldio macio e antracnose em plantações, árvores frutíferas e vegetais.

[0083] Além disso, a composição da invenção pode ser usada para o tratamento de doenças resistentes, principalmente para o controle do míldio em pó do trigo, brusone do arroz, ferrugem do arroz, míldio em pó do melão, míldio em pó do tomate, ferrugem da maçã, antracnose da melancia e míldio em pó da flor. Além disso, a composição tem efeitos de controle muito bons contra o míldio em pó do pepino, o míldio em pó da uva, sarna, antraz e desfolhação manchada.

[0084] Em uma modalidade particular da invenção, a composição da invenção deve ser usada no tratamento ou prevenção de doenças de árvores, causadas por patógenos fúngicos, por exemplo, doença do panamá da banana, morte das cinzas.

[0085] Além disso, a composição da invenção pode ser usada diretamente no campo em culturas de plantas mas também in vitro, por exemplo, para implementação em culturas de plantas.

[0086] Surpreendentemente, a composição de acordo com a presente invenção para ser usada como fungicida foi considerada extremamente ativa em pelo menos 43 patógenos fúngicos (ver lista abaixo), de 4 filos diferentes, 8 classes diferentes e 14 ordens diferentes: Espécie Filo Classe Ordem Basidiomycot Rhizoctonia solani Agricomycetes Cantharellales a Thamnidium elegans Zygomyceta Zygomycetes Mucorales Phytophthora cactorum Oomycota Oomycetes Peronosporales Phytophthora syringae Oomycota Oomycetes Peronosporales Phytophthora infestans Oomycota Oomycetes Peronosporales Phytophthora agathidicida cepa Oomycota Oomycetes Peronosporales 18407 Phythium sp. Oomycota Oomycetes Peronosporales Plasmopara viticola Oomycota Oomycetes Peronosporales

Aspergillus versicolor Ascomycota Eurotiomycetes Eurotiales Aspergillus pseudoglaucus Ascomycota Eurotiomycetes Eurotiales Aspergillus sp.

Ascomycota Eurotiomycetes Eurotiales Penicillium vulpinum Ascomycota Eurotiomycetes Eurotiales Penicillium wortmannii Ascomycota Eurotiomycetes Eurotiales Trichophyton rubrum Ascomycota Eurotiomycetes Onygenales Dothideomycete Botryosphaeriale Lasiodiplodia theobromae Ascomycota s s Dothideomycete Botryosphaeriale Guignardia bidwellii Ascomycota s s Dothideomycete Alternaria radicina Ascomycota Pleosporales s Dothideomycete Phoma exigua Ascomycota Pleosporales s Dothideomycete Phoma betae Ascomycota Pleosporales s Dothideomycete Helminthosporium solani Ascomycota Pleosporales s Dothideomycete Cladosporium langeronii Ascomycota Capnodiales s Dothideomycete Cladosporium haloterans Ascomycota Capnodiales s Dothideomycete Cladosporium sp.

Ascomycota Capnodiales s Fusarium verticillioides Ascomycota Sordariomycetes Hypocreales Fusarium gramineum Ascomycota Sordariomycetes Hypocreales Fusarium equiseti Ascomycota Sordariomycetes Hypocreales Fusarium culmorum Ascomycota Sordariomycetes Hypocreales Fusarium avenaceum Ascomycota Sordariomycetes Hypocreales Acremonium sp.

Ascomycota Sordariomycetes Hypocreales Piricularia oryzae Ascomycota Sordariomycetes Magnaporthales Scopulariopsis brevicaulis Ascomycota Sordariomycetes Microascales Scopulariopsis fusca Ascomycota Sordariomycetes Microascales Colletotrichum acutatum Ascomycota Sordariomycetes Glomerellales Colletotrichum coccodes Ascomycota Sordariomycetes Glomerellales Colletotrichum gloeosporioides Ascomycota Sordariomycetes Glomerellales Plectosphaerella cucumerina Ascomycota Sordariomycetes Glomerellales

Monilinia laxa Ascomycota Leotiomycetes Helotiales Botrytis cinerea Ascomycota Leotiomycetes Helotiales Sclerotinia sclerotiorum Ascomycota Leotiomycetes Helotiales Gloeosporium album Ascomycota Leotiomycetes Helotiales Hymenoscyphus fraxineus Ascomycota Leotiomycetes Helotiales Saccharomycete Saccaromycetale Geotrichum candidum Ascomycota s s Saccharomycete Saccaromycetale Pichia fermentans Ascomycota s s

[0087] Em particular, a composição da presente invenção se mostrou eficaz contra os patógenos fúngicos de plantas selecionados do filo compreendendo Basidiomycota, Zygomyceta, Oomycota ou Ascomycota.

[0088] Por exemplo, a composição da presente invenção se mostrou particularmente eficaz contra os patógenos fúngicos de plantas: Botrytis cinerea, Colletotrichum graminicola, Fusarium oxisporum, Sclerotiana sclerotiorum, Verticillium dahlia, Mycospharella gramincola e Sphacelotheca reliana.

[0089] Em uma outra modalidade, a composição da invenção (de acordo com a Fórmula Geral I como definida acima) pode ser usada como um antimicótico em alimento ou bebida. A presente invenção também se refere a um alimento e bebida e um agente de higiene oral contendo o agente antifúngico acima mencionado.

[0090] Em particular, o agente antifúngico ou antimicótico da presente invenção pode ser adicionado a alimentos ou bebidas para prevenir a deterioração de alimentos e fungos ou contaminação por patógenos.

[0091] Em uma modalidade particular da invenção, a composição da invenção pode ser vantajosamente usada por varejistas de alimentos para a extensão da vida útil de frutas e vegetais, evitando o desenvolvimento de patógenos fúngicos de plantas. Por exemplo, a composição da invenção pode estender a vida útil de vegetais, frutos, frutas ou flores cortadas em pelo menos uma semana.

[0092] De preferência, a quantidade adicionada está na faixa de 0,01 a 100 ppm com base no alimento.

[0093] Mais preferencialmente de 1 a 50 ppm.

[0094] Exemplos de alimentos e bebidas aos quais o agente antifúngico da presente invenção deve ser misturado incluem produtos de peixe, salsicha de peixe, presunto, salsicha de carne de peixe e presunto, produtos de surimi, produtos secos de peixe e marisco, produtos defumados, peixe salgado, peixe salgado, camarão. Produtos marinhos semissólidos, como ovas de bacalhau marinadas e semelhantes; produtos de carne de gado, como presunto, salsicha, bacon e produtos de carne moída; alimentos preparados, como saladas, hambúrgueres, bolinhos de massa, feijão cozido, repolho chinês, pepinos, vegetais Picles, como quimchee, batata doce, prato de tatame e alecrim de lótus; temperar líquidos como doces e sopas; condimentos como missô e molho de soja; macarrão, como macarrão de trigo sarraceno cru ou cozido, udon, macarrão, várias bebidas, como sucos de frutas, bebidas carbonatadas, chá, bebidas lácteas, bebidas de bactérias de ácido láctico, café, cacau, leite de soja e semelhantes; frutas e vegetais, leite em pó, leite fermentado, manteiga, queijo, sorvete, produtos lácteos, como nata, caramelo, doces, gomas de mascar, geleias, margarina e semelhantes.

[0095] Em uma modalidade preferida, a composição antimicótica da invenção compreende a combinação de pelo menos dois compostos selecionados a partir do grupo que consiste em: 8MSOH/8MSOOH; 8ASOH/8ASOOH; 8ESOH/8ESOOH; 8CSOH/3MSOOH; 8CSOH/7MSOH; 8CSOH/3MSOH; 8MSOOH/6MSOH; 8MSOH/3MSOOH; 8MSOH/7MSOH; 8MSOH/6MSOH; 8CSOH/8MSOH; 8CSOH/3MSOOH; 8MSOH/9MSOOH; 8CSOH/7MSOH; 8ESOH/7MSOH; 8ESOH/3MSOH; 8MSOOH/7MSOH; 8MSOOH/9MSOH; 8MSOOH/6MSOH; 8CSOH/7MSOH; 8MSOOH/3MSOH; 8MSOOH/8MSOON ou 8MSOOH/3MSOOH.

[0096] Mesmo mais preferencialmente, a composição antimicótica da invenção compreende pelo menos dois compostos combinados que consistem na mistura de 7 metilsulfonilheptila e (E)-1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct-2 ou a mistura de 8 isotiocianato de metilsulfoniloctila e 8 isotiocianato de metilsulfiniloctila.

[0097] Ainda em uma outra modalidade, a composição da invenção (de acordo com a Fórmula Geral I como definida acima) pode ser usada como um desinfetante em artigos de higiene oral ou sanitários.

[0098] De preferência, os artigos de higiene oral são selecionados entre um dentrífico, uma pastilha, um colutório em pó ou líquido, uma solução de revestimento, um agente de prevenção de halitose, uma goma de mascar.

[0099] A forma de dosagem do agente de higiene oral ao qual o agente antimicótico da presente invenção é misturado pode ser qualquer um de uma preparação líquida, uma preparação sólida, e um agente semissólido, e pode ser um dentrífico, uma pastilha, um colutório em pó ou líquido, Solução de revestimento, agente de prevenção de halitose, goma de mascar e semelhantes.

[00100] Além disso, o desinfetante da presente invenção pode ser usado em vários produtos chamados de bens antifúngicos (bens), como utensílios de cozinha, como tábuas de cortar, ferramentas de lavagem, como escovas de dente, artigos de papelaria, como instrumentos de escrita, borrachas e notas, roupas, como roupas íntimas, como itens de interior de automóveis, como alças e assentos; eletrodomésticos, como processadores de texto e refrigeradores; materiais de decoração de interiores, como tatames e papel de parede. Isto é, o agente antimicótico é amassado em matérias-primas na fase de produção do produto acima mencionado e misturado, ou por adição de um adjuvante, tal como um tensoativo conforme necessário com este solvente, à superfície de um produto. Aplicar aplicando ou por aspersão como uma aspersão. A formulação líquida ou a formulação em aspersão pode ser aplicada como galpões sanitários, assentos do toilete, desinfetantes para banheiro de visitas e agentes antimofo. Além disso, também pode ser aplicado como um artigo sanitário, como um limpador desinfetante ou um lenço de papel úmido, impregnando o agente formulado com um suporte absorvente de líquido, como papel ou tecido.

[00101] Em uma modalidade preferida, a composição desinfetante da invenção compreende a combinação de pelo menos dois compostos selecionados a partir do grupo que consiste em: 8MSOH/8MSOOH; 8ASOH/8ASOOH; 8ESOH/8ESOOH; 8CSOH/3MSOOH; 8CSOH/7MSOH; 8CSOH/3MSOH; 8MSOOH/6MSOH; 8MSOH/3MSOOH; 8MSOH/7MSOH; 8MSOH/6MSOH; 8CSOH/8MSOH; 8CSOH/3MSOOH; 8MSOH/9MSOOH;

8CSOH/7MSOH; 8ESOH/7MSOH; 8ESOH/3MSOH; 8MSOOH/7MSOH; 8MSOOH/9MSOH; 8MSOOH/6MSOH; 8CSOH/7MSOH; 8MSOOH/3MSOH; 8MSOOH/8MSOON ou 8MSOOH/3MSOOH.

[00102] Mesmo mais preferencialmente, a composição desinfetante da invenção compreende pelo menos dois compostos combinados que consistem na mistura de 7 metilsulfonilheptila e (E)-1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct-2 ou a mistura de 8 isotiocianato de metilsulfoniloctila e 8 isotiocianato de metilsulfiniloctila.

[00103] Vantajosamente, a composição da invenção também pode ser usada para o tratamento ou prevenção de infecção microbiana selecionada a partir da lista que consiste em infecção bacteriana, fúngica, por fungos e/ou viral.

[00104] De acordo com uma modalidade da invenção, a infecção bacteriana compreende uma infecção gram-positiva ou gram-negativa.

[00105] Em particular, a infecção bacteriana ou por fungos é uma infecção por Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, S. aureus, S. epiderme, Klebsiellae pneumoniae, Acinetobacter baumannii, B. subtilis, E. aerogenes, C. freundii, Staphylococcus spp, Streptococcus spp, Enterococcus spp, Proteus spp, Candida spp, Apophysomyces spp, Aspergillus, Mucor spáginas, Porphymonas gingivalis, Prevotella intermedia, Treponema denticola, Tannerella forsythensis ou Aggregatibacter actinomycetemcomitans.

[00106] É um outro objetivo da invenção fornecer uma composição compreendendo a combinação de pelo menos dois compostos selecionados a partir da Fórmula Geral I: (I) Em que: Z representa nitrila (-CN), tiocianato (-SCN) ou isotiocianato (- N=C=S); X, Y representam, independentemente um do outro, um par solitário ou O, com a condição de que pelo menos um dos dois X ou Y é O; R1, R2 representam, independentemente um do outro, H, alquila(C1- C6) ramificada, cíclica ou linear saturada; A, C representam, independentemente um do outro, uma ligação covalente, alquila(C1-C8), arila C6 ramificada, policíclica, bicíclica, espirocíclica, cíclica ou linear saturada ou insaturada; B representa uma ligação covalente, alquila(C1-C8), arila C6 ramificada, policíclica, bicíclica, espirocíclica, cíclica ou linear saturada ou insaturada; desde que pelo menos um dentre A, B ou C seja diferente de uma ligação covalente, e caracterizado pelo fato de que os pelo menos dois compostos combinados compreendem: 1) pelo menos um grupo Z representando isotiocianato, e/ou, 2) pelo menos dois diferentes níveis de oxidação do átomo de enxofre, e/ou, 3) pelo menos um comprimento diferente no resíduo de cadeia de carbono -A-B-C-, para o uso em um método para prevenir ou tratar micose em pacientes humanos ou animais.

[00107] De preferência, a composição é uma composição farmacêutica.

[00108] A composição farmacêutica de acordo com a invenção pode ser usada para a preparação de um medicamento útil para tratar curativamente ou preventivamente doenças fúngicas humanas ou animais, tais como, por exemplo, micoses, infecções por quitrídeo (Bd; Bs), dermatoses, doenças tricóftonas e candidíases ou doenças causadas por Aspergillus spp., por exemplo, Aspergillus fumigatus.

[00109] Em uma modalidade da invenção, a micose é devido às infecções Candida albicans ou Trichophyton rubrum.

[00110] Em particular, o agente antifúngico da presente invenção tem uma excelente atividade antimicrobiana contra Candida albicans, que é considerada uma das leveduras causadoras da estomatite dentária, portanto, se for misturado a um agente de higiene oral de acordo com um método convencional, infecção por Candida pode ser prevenida e tratada com eficácia.

[00111] Além disso, o agente antifúngico da presente invenção pode ser usado em combinação com outros agentes antimicrobianos, como álcool, ingredientes de especiarias, como sálvia e alecrim; ácidos orgânicos, tais como ácido cítrico, ácido láctico, ácido acético e semelhantes.

[00112] Em uma modalidade preferida, o agente antifúngico da invenção para prevenir ou tratar micose em pacientes humanos ou animais compreende a combinação de pelo menos dois compostos selecionados a partir do grupo que consiste em: 8MSOH/8MSOOH; 8ASOH/8ASOOH; 8ESOH/8ESOOH; 8CSOH/3MSOOH; 8CSOH/7MSOH; 8CSOH/3MSOH; 8MSOOH/6MSOH; 8MSOH/3MSOOH; 8MSOH/7MSOH; 8MSOH/6MSOH; 8CSOH/8MSOH; 8CSOH/3MSOOH; 8MSOH/9MSOOH; 8CSOH/7MSOH; 8ESOH/7MSOH; 8ESOH/3MSOH; 8MSOOH/7MSOH; 8MSOOH/9MSOH; 8MSOOH/6MSOH; 8CSOH/7MSOH; 8MSOOH/3MSOH; 8MSOOH/8MSOON ou 8MSOOH/3MSOOH.

[00113] Mais preferencialmente, os pelo menos dois compostos combinados para serem usados no método para prevenir ou tratar micose em pacientes humanos ou animais é a mistura de 7 metilsulfonilheptila e (E)-1-isotiocianato-8- (metilsulfinil)oct-2 ou uma mistura de 8 isotiocianato de metilsulfoniloctila e 8 isotiocianato de metilsulfiniloctila.

[00114] É ainda um outro objetivo da invenção fornecer uma composição fungicida compreendendo a combinação de pelo menos dois compostos selecionados a partir da Fórmula Geral I: (I) Em que: Z representa nitrila (-CN), tiocianato (-SCN) ou isotiocianato (-

N=C=S); X, Y representam, independentemente um do outro, um par solitário ou O, com a condição de que pelo menos um dos dois X ou Y é O; R1, R2 representam, independentemente um do outro, H, alquila(C1- C6) ramificada, cíclica ou linear saturada; A, C representam, independentemente um do outro, uma ligação covalente, alquila(C1-C8), arila C6 ramificada, policíclica, bicíclica, espirocíclica, cíclica ou linear saturada ou insaturada; B representa uma ligação covalente, alquila(C1-C8), arila C6 ramificada, policíclica, bicíclica, espirocíclica, cíclica ou linear saturada ou insaturada; desde que pelo menos um dentre A, B ou C seja diferente de uma ligação covalente, e caracterizado pelo fato de que os pelo menos dois compostos combinados compreendem: 1) pelo menos um grupo Z representando isotiocianato, e/ou, 2) pelo menos dois diferentes níveis de oxidação do átomo de enxofre, e/ou, 3) pelo menos um comprimento diferente no resíduo de cadeia de carbono -A-B-C-.

[00115] De preferência, a composição fungicida compreende a combinação de pelo menos dois compostos selecionados a partir da Fórmula Geral I, em que: Z representa isotiocianato (-N=C=S); X, Y representam, independentemente um do outro O; R1, R2 representam, independentemente um do outro, H, alquila(C1-C6) cíclica ou linear saturada; A, C representam, independentemente um do outro, uma ligação covalente, alquila(C1-C8) cíclica ou linear saturada ou insaturada, desde que pelo menos um dentre A ou C seja diferente de uma ligação covalente; B representa uma ligação covalente; e em que o comprimento no resíduo de cadeia de carbono -A-B-C- é de C3 a C9.

[00116] Em uma modalidade particular, a composição fungicida da invenção compreende a combinação de pelo menos dois compostos de isotiocianato, preferencialmente os ditos pelo menos dois compostos de isotiocianato têm pelo menos dois diferentes níveis de oxidação do átomo de enxofre, e/ou pelo menos um comprimento diferente no resíduo de cadeia de carbono -A-B-C-, preferencialmente compreendido entre C3 a C9.

[00117] Mais preferencialmente, a composição fungicida da invenção compreende a combinação dos pelo menos dois compostos selecionados entre a lista compreendendo:

; em que os pelo menos dois compostos combinados compreendem: 1) pelo menos um grupo Z representando isotiocianato, e/ou, 2) pelo menos dois diferentes níveis de oxidação do átomo de enxofre, e/ou, 3) pelo menos um comprimento diferente no resíduo de cadeia de carbono -A-B-C-, e em que o comprimento no resíduo de cadeia de carbono -A-B-C- é de C3 a C9.

[00118] De preferência, os pelo menos dois compostos combinados da composição fungicida de acordo com a invenção são selecionados a partir do grupo que consiste em: 8MSOH/8MSOOH; 8ASOH/8ASOOH; 8ESOH/8ESOOH; 8CSOH/3MSOOH; 8CSOH/7MSOH; 8CSOH/3MSOH; 8MSOOH/6MSOH; 8MSOH/3MSOOH; 8MSOH/7MSOH; 8MSOH/6MSOH; 8CSOH/8MSOH; 8CSOH/3MSOOH; 8MSOH/9MSOOH; 8CSOH/7MSOH; 8ESOH/7MSOH; 8ESOH/3MSOH; 8MSOOH/7MSOH; 8MSOOH/9MSOH; 8MSOOH/6MSOH; 8CSOH/7MSOH; 8MSOOH/3MSOH; 8MSOOH/8MSOON ou 8MSOOH/3MSOOH.

[00119] Mesmo mais preferencialmente, os pelo menos dois compostos combinados da composição fungicida é uma mistura de 7 metilsulfonilheptila e (E)-1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct-2 ou uma mistura de 8 isotiocianato de metilsulfoniloctila e 8 isotiocianato de metilsulfiniloctila.

[00120] Em particular, a composição fungicida da presente invenção se mostrou eficaz contra os patógenos fúngicos de plantas selecionados a partir do filo compreendendo: Basidiomycota, Zygomyceta, Oomycota, Ascomycota.

[00121] Por exemplo, a composição fungicida da presente invenção se mostrou particularmente eficaz contra os patógenos fúngicos de plantas: Botrytis cinerea, Colletotrichum graminicola, Fusarium oxisporum, Sclerotiana sclerotiorum, Verticillium dahlia, Mycospharella gramincola e Sphacelotheca reliana.

[00122] Em uma modalidade da invenção, a composição fungicida da invenção é aplicada em combinação com portadores ou diluentes aceitáveis, isto é, em uma aspersão.

[00123] A composição fungicida da invenção frequentemente será formulações concentradas que podem ser diluídas em água, ou outro líquido, para aplicação. Em certas modalidades, a composição fungicida também pode ser formulada em partículas ou formulações granulares que são aspersões ou aplicações sem tratamento adicional.

[00124] De preferência, os portadores ou diluentes a serem usados na presente invenção são fitologicamente aceitáveis.

[00125] Como usado aqui, o termo formulações "fitologicamente aceitáveis" se refere a composições, diluentes, excipientes e/ou portadores que são geralmente aplicáveis para uso com qualquer parte de uma planta durante qualquer parte de seu ciclo de vida, incluindo, mas não limitado a sementes, mudas, células vegetais, plantas ou flores. As formulações podem ser preparadas de acordo com procedimentos, métodos e fórmulas convencionais nas técnicas agrícolas. Seguindo os ensinamentos da presente invenção, a pessoa versada nas técnicas agrícolas e/ou químicas pode preparar facilmente uma composição desejada. Mais comumente, a composição fungicida da presente invenção pode ser formulada para ser armazenada e/ou aplicada, como suspensões aquosas ou não aquosas ou emulsões preparadas puras ou a partir de formulações concentradas das composições. As formulações solúveis em água, em suspensão em água ou emulsionáveis também podem ser convertidas ou formuladas como sólidos (por exemplo, pós molháveis), que podem então ser diluídos em uma formulação final. Em certas formulações, as composições fungicidas da presente invenção também podem ser fornecidas em meios de crescimento, por exemplo, meios in vitro para o crescimento de plantas ou outros tipos de células, em meios de crescimento de plantas de laboratório, no solo ou para aspersão em sementes, mudas, raízes, talos, caules, folhas, flores ou a planta inteira.

[00126] Estas formulações fitologicamente aceitáveis são produzidas de uma maneira conhecida, por exemplo, misturando a composição fungicida da invenção com extensores, ou seja, solventes líquidos, gases liquefeitos sob pressão e/ou portadores sólidos, opcionalmente com o uso de tensoativos, isto é, emulsificantes e/ou dispersantes e/ou formadores de espuma. Se o diluente utilizado for água, também é possível utilizar, por exemplo, solventes orgânicos como solventes auxiliares. Essencialmente, os solventes líquidos adequados incluem: aromáticos, como xileno, tolueno ou alquilnaftalenos, aromáticos clorados ou hidrocarbonetos alifáticos clorados, como clorobenzenos, cloroetilenos ou cloreto de metileno, hidrocarbonetos alifáticos, como ciclo- hexano ou parafinas, por exemplo, frações de petróleo, álcoois, como butanol ou glicol e seus éteres e ésteres, cetonas como acetona, metil etil cetona, metil isobutil cetona ou ciclo-hexanona, solventes fortemente polares como dimetilformamida e dimetilsulfóxido, ou então água. Os extensores ou portadores gasosos liquefeitos devem ser entendidos como significando líquidos que são gasosos à temperatura ambiente e sob pressão atmosférica, por exemplo, propulsores de aerossol, tais como butano, propano, nitrogênio e dióxido de carbono. Os portadores sólidos adequados são: por exemplo, minerais naturais moídos, tais como caulins, argilas, talco, giz, quartzo, atapulgita, montmorilonita ou terra diatomácea, e minerais sintéticos moídos, como sílica finamente dividida, alumina e silicatos. Portadores sólidos adequados para grânulos são: por exemplo, rochas naturais trituradas e fracionadas, como calcita, mármore, pedra-pomes, sepiolita e dolomita, ou então grânulos sintéticos de farinhas inorgânicas e orgânicas e grânulos de material orgânico, como serragem, cascas de coco, espigas de milho e caules de tabaco. Emulsionantes e/ou formadores de espuma adequados são: por exemplo, emulsificantes não iônicos e aniônicos, tais como ésteres de ácidos graxos de polioxietileno, éteres de álcool graxo de polioxietileno, por exemplo, éteres de alquilarila poliglicol, alquilsulfonatos, alquilsulfatos, arilsulfonatos, ou então hidrolisados de proteína. Os dispersantes adequados são: por exemplo, licores de resíduos de lignina-sulfito e metilcelulose.

[00127] A composição fungicida de acordo com a invenção pode ser usada em várias formas, tais como dispensador de aerossol, suspensão de cápsula,

concentrado de nebulização a frio, pó pulverizável, concentrado emulsionável, óleo de emulsão em água, água de emulsão em óleo, grânulo encapsulado, grânulo fino, concentrado fluido para tratamento de sementes, gás (sob pressão), produto gerador de gás, grânulo, concentrado de nebulização a quente, macrogrânulo, microgrânulo, pó dispersível em óleo, concentrado fluido miscível em óleo, líquido miscível em óleo, pasta, planta rodlet, pó para tratamento de semente seca, semente revestida com um pesticida, concentrado solúvel, pó solúvel, solução para tratamento de sementes, concentrado de suspensão (concentrado fluido), líquido de volume ultrabaixo (ULV), suspensão de volume ultrabaixo (ULV), grânulos ou comprimidos dispersíveis em água, dispersível em água pó para tratamento de lama, grânulos ou comprimidos solúveis em água, pó solúvel em água para tratamento de sementes e pó molhável. Essas composições incluem não apenas composições que estão prontas para serem aplicadas à planta ou semente a ser tratada por meio de um dispositivo adequado, como um dispositivo de pulverização ou pulverização, mas também composições comerciais concentradas que devem ser diluídas antes da aplicação na cultura.

[00128] Em uma modalidade preferida da invenção, a composição pode ser aplicada especificamente em frutas e vegetais em instalações de armazenamento com um nebulizador ultrassônico. O nebulizador ultrassônico é um dispositivo que usa ondas sonoras ultrassônicas para quebrar a água em gotículas muito pequenas (< 10 µm) e aspersões no ar como uma névoa fria densa (ou seja, não resultante de água fervente). Exemplos de nebulizadores ultrassônicos e sistemas são, isto é, descritos nas seguintes Patentes U.S.: Pat. U.S. Nº 4.042.016; Pat. U.S. Nº 4.058.253; Pat. U.S. Nº 4.118.945; Pat. U.S. Nº

4.564.375; Pat. U.S. Nº 4.667.465; Pat. U.S. Nº 4.702.074; Pat. U.S. Nº

4.731.990; Pat. U.S. Nº 4.731.998; Pat. U.S. Nº 4.773.846; US Nº 5.454.518; US Nº 6.854.661. Normalmente, um nebulizador ultrassônico inclui: um corpo geralmente cilíndrico tendo um furo axial com uma saída em uma face frontal do corpo; um suprimento de gás e um suprimento de líquido acoplado ao furo; pelo menos uma porção da face frontal tendo um contorno convexo curvo, a face frontal tendo uma região anular central plana circundando a saída do furo; e um ressonador espaçado e oposto à extremidade de saída do furo. Esses dispositivos são comumente usados para controlar o nível de umidade em estufas, para fornecer nutrientes às plantas em culturas aeropônicas ou para criar níveis de umidade ideais nas casas.

[00129] Os requerentes demonstraram que esta técnica pode ser usada para aplicar produtos usados para aumentar a frescura de frutas e vegetais em instalações de armazenamento, por exemplo, fungicidas naturais. Esta tecnologia permite tratar com eficiência frutas e vegetais que não são acessíveis aos tratamentos aplicados por aspersão ou outras aplicações, devido à sua embalagem (ou seja, não pode ser facilmente aspergido diretamente porque frutas e vegetais são armazenados, por exemplo, em recipientes ou porque a aspersão pode danificar frutas e vegetais).

[00130] Curiosamente, os requerentes realizaram ensaios de eficácia em frutas e vegetais em uma instalação de armazenamento de 30 m 3 usando umidificadores ultrassônicos MHS15 industrial (http://www.mainlandmart.com/humidify.html), gerando 15 kg de névoa/hora feita de gotículas de um tamanho compreendido entre 1 a 10 µm com média de 5 mícron. A composição da invenção, representada por pó, foi adicionada ao recipiente de água do nebulizador em uma dosagem de 400 a 600 µM, dependendo da espécie de planta testada. O pó foi dissolvido na água e aplicado nas frutas na forma de vapor frio. Os requerentes, confirmaram a distribuição igual do produto em todas as culturas tratadas e fácil acesso às partes anteriormente inacessíveis da embalagem.

[00131] A composição fungicida de acordo com a invenção também pode ser misturada com um ou mais inseticidas, pesticidas, atrativos, esterilizantes, bactericidas, acaricidas, nematicidas, outros fungicidas, reguladores de crescimento, herbicidas, fertilizantes, protetores, semioquímicos, agentes extenuantes de sabor ou outros compostos com atividade biológica. As misturas assim obtidas apresentam normalmente um espectro de atividade alargado. As misturas com outros compostos fungicidas são particularmente vantajosas.

[00132] A composição fungicida de acordo com a invenção compreendendo uma mistura com um composto bactericida também pode ser particularmente vantajosa. Exemplos de parceiros de mistura de bactericidas adequados podem ser selecionados na lista a seguir: bronopol, diclorofeno, nitrapirina, dimetilditiocarbamato de níquel, casugamicina, octilinona, ácido furancarboxílico, oxitetraciclina, probenazol, estreptomicina, tecloftalam, sulfato de cobre e outras preparações de cobre.

[00133] A dose da composição fungicida usualmente aplicada no tratamento de acordo com a invenção é geralmente e vantajosamente de 10 a 800 g/ha, preferencialmente de 50 a 300 g/ha para aplicações em tratamento foliar. A dose de composição fungicida aplicada é geralmente e vantajosamente de 2 a 200 g por 100 kg de semente, preferencialmente de 3 a 150 g por 100 kg de semente no caso de tratamento de sementes.

[00134] É claramente entendido que as doses aqui indicadas são dadas como exemplos ilustrativos do método de tratamento de acordo com a invenção. Uma pessoa versada na técnica saberá como adaptar as doses de aplicação, notadamente de acordo com a natureza da planta ou cultura a ser tratada.

[00135] Os glucosinolatos são metabólitos secundários contendo enxofre e nitrogênio que estão presentes na ordem de Capparales, que inclui a família das Brassicaceae agronomicamente importante. Cerca de 200 glucosinolatos foram descritos, até o momento. Todos eles podem ser subdivididos em três grupos principais com base em seus precursores de aminoácidos: glucosinolatos alifáticos, indólicos e aromáticos. O papel desses metabólitos nas plantas não é totalmente compreendido, no entanto, eles mostraram estar envolvidos nas respostas de defesa contra herbívoros, alguns fungos (Schreiner e Koide, 1993) e patógenos bacterianos (Dufour et al., 2015). Os glucosinolatos não são ativos na forma intacta, no entanto, durante a lesão do tecido, e. ataque de herbívoros, eles são divididos em três principais compostos bioativos: nitrilos, tiocianatos e isotiocianatos pela enzima mirosinase. Todos os três compostos ativos mostraram-se tóxicos para um grande grupo de patógenos de plantas (Lambrix et al., 2001). Neste estudo, os Requerentes revelaram surpreendentemente um novo papel dos glucosinolatos alifáticos, especificamente, compostos de cadeia de alquila reta de metilsulfonila e metilsulfinila (CH3S(O)2(CH2)n) na toxicidade para patógenos fúngicos.

[00136] Para este propósito, os Requerentes selecionaram mutantes de Arabidopsis thaliana afetados na composição da cutícula e realizaram ensaios de toxicidade de fungos usando Botrytis cinerea - um segundo patógeno fúngico agronomicamente importante, para o qual não existe tratamento orgânico eficiente até o momento. Com base nos resultados obtidos, os seguintes mutantes revelaram forte resistência a B. cinerea: mutantes de dessaturase de ácido graxo (fad2; fad3-2 fad7-2 fad8), um citocromo P450 pertencente à família CYP77/defensivo em cristas cutículas (cyp77 dcr), glicerol-3-fosfato aciltransferase/cutícula permeável 1 (gpat6 pec1) e mutantes duplo nocaute de glicerol-3-fosfato aciltransferase (gpat4 gpat8). Todos os mutantes selecionados exibiram uma forte resistência contra B. cinerea ou apenas no estágio de cotilédone (mutantes de moda passageira) ou em ambas as mudas e estágios adultos (cyp77 dcr; gpat6 pec1; mutantes duplos gpat4 gpat8). Para compreender o que leva à resistência a fungos nestas plantas, foram utilizadas diversas abordagens, por exemplo, biologia molecular, microscopia e bioquímica. O teste para os mecanismos atualmente conhecidos que estão envolvidos na resistência de B. cinerea, isto é, alterações hormonais, níveis mais elevados de ROS e modificação de superfície, não poderiam explicar totalmente a resistência de B. cinerea. Estes resultados conduzem os Requerentes ao uso da abordagem metabolômica de superfície para identificar compostos antifúngicos potenciais na superfície da planta. Com a ajuda desta técnica, os Requerentes foram capazes de identificar 2 compostos fortemente abundantes na superfície de diferentes mutantes de cutícula: glucosinolato de 7-metilsulfonil- heptila (nos cotilédones de mutantes fad2), para o conhecimento do Requerente não identificado anteriormente em plantas de Arabidopsis, e Glucosinolato de 8- metilsulfonil-octila (nos cotilédones de fad3-2 fad7-2 fad8 e folhas de mutantes gpat6 pec1). O enfoque na estrutura geral dos primeiros compostos identificados levou os Requerentes à identificação de 2 grupos principais de glucosinolatos alifáticos e suas misturas fortemente envolvidas na resistência a fungos.

[00137] As pessoas versadas na técnica apreciarão que a invenção aqui descrita é suscetível a variações e modificações além daquelas especificamente descritas. Deve ser entendido que a invenção inclui todas essas variações e modificações sem se afastar do espírito ou de suas características essenciais. A invenção também inclui todas as etapas, características, composições e compostos referidos ou indicados neste relatório descritivo, individual ou coletivamente, e qualquer e todas as combinações ou quaisquer duas ou mais das referidas etapas ou características. A presente divulgação deve, portanto, ser considerada como em todos os aspectos ilustrados e não restritivos, o escopo da invenção sendo indicado pelas reivindicações anexas, e todas as alterações, que vêm dentro do significado e intervalo de equivalência, se destinam a ser abrangidas.

[00138] A descrição anterior será mais completamente entendida com referência aos seguintes exemplos. Tais exemplos são, no entanto, exemplos de métodos de prática da presente invenção e não se destinam a limitar o escopo da invenção.

EXEMPLOS MATERIAIS E MÉTODOS

[00139] O acesso de Arabidopsis thaliana Columbia-0 (Col-0) foi usado como planta de tipo selvagem (WT). Os seguintes alelos no fundo Col-0 foram recebidos do Arabidopsis Biological Resource Center (ABRC): fad2-1 (CS8041), fad2-3 (SK18137), o fad2-1 fad6 e fad2-3 fad6 foram obtidos pelo cruzamento do mutantes únicos neste trabalho. Mutante duplo gpat4 gpat8 foi gentilmente cedido por Frédéric Beisson, sementes de fad3-2 fad7-2 fad8 foram oferecidas por John Browse, os mutantes duplos cyp77 dcr e gpat6 pec1 foram gentilmente cedidos pela Dra. Christiane Nawrath. Antes do plantio, as sementes foram estratificadas por 2 dias a 40 ºC e depois cultivadas a 21 ºC sob 100 μE m-2 s-1 de luz com fotoperíodos dependendo da aplicação (experimentos com mudas: 14 h de luz, 10 h de escuro (dia longo); no solo para propagação de sementes: 24 h de luz, dia contínuo).

[00140] Mudas usadas para experimentos foram cultivadas em meio sólido Murashige e Skoog de meia força (0,5 * MS, 2,15 g/L, pH 5,7; Duchefa Biochemie, Haarlem, Países Baixos) suplementado com 0,5 g/L de hidrato de MES (Sigma, Buchs, Suíça) e ágar vegetal a 0,7 % (Sigma, Buchs, Suíça). Após a estratificação, as sementes foram colocadas na malha de náilon (tamanho de poro de 200 μm; número do produto AH03444, Lanz-Anliker AG, Rohrbach, Suíça) para fornecer suporte sólido para germinação e crescimento uniforme de mudas. Todos os produtos químicos foram obtidos da Sigma-Aldrich, a menos que indicado. BIOENSAIO FÚNGICO IN VIVO COM B. CINEREA

[00141] Duas cepas de B. cinerea foram usadas neste trabalho: BMM e B05,10 fornecidas pela Drª Christiane Nawrath e pelo Prof. Michael Hahn, respectivamente. O fungo foi cultivado em ágar batata dextrose (PDA) por 10 dias. Os conídios foram filtrados e diluídos para 5 * 105 esporos/μl em caldo de dextrose de batata ½ força (PDB). 2 μl desta suspensão foram aplicados em cotilédones de Arabidopsis com 7 dias de idade, cultivados em placas de Petri. Mudas infectadas foram incubadas por 48 horas em condições de dias longos. BIOENSAIO FÚNGICO IN VITRO.

[00142] Nitrila e tiocianatos de metilsulfonila e metilsulfinila foram obtidos de SpiroChem (Basel, Suíça), isotiocianatos de metilsulfonila e metilsulfinila de SpiroChem e LKT LABS (Minnesota, Estados Unidos da América). Todos os compostos obtidos foram dissolvidos em dimetilsulfóxido (DMSO). As cepas fúngicas usadas durante o bioensaio fúngico in vitro foram obtidas na micoteca do Agroscope (www.mycoscope.bcis.ch).

[00143] Culturas puras de diferentes espécies de patógenos fúngicos de plantas foram inoculadas em PDA implementado com subprodutos de glucosinolatos alifáticos que foram dissolvidos preliminarmente em várias concentrações (por exemplo, 10, 100, 250, 400, 550, 700, 850, 1100, 1400 μM) em PDB e colocado nas placas de 24 poços (VWR International, Dietikon, Suíça). Os controles foram tratados de maneira semelhante com DMSO sozinho. Tampão ágar de 2 mm (Dufour et al. 2015) de uma pré-cultura de fungos foram colocados em cada poço, 3 repetições biológicas foram usadas para cada concentração. As placas foram incubadas pelo período de uma semana no fitotron (80 % de umidade relativa, temperatura constante de 23 ºC, em ciclos alternados de 16 h diurnos e 8 h noturnos). O crescimento do micélio foi medido após 7 dias usando ImageJ (http://imagej.net/Welcome), EC50 foi avaliado conforme descrito em Schnee et al., 2013.

ANÁLISE DE METABOLOMIA

[00144] A espectrometria de massa de tempo de voo de quadrupolo de cromatografia líquida de ultra alta performance (UPLC/QTOF-MS) em uma cromatografia líquida de ultra performance Acquity (UPLC) para um espectrômetro de massa de tempo de voo de quadrupolo Synapt G2 espectrômetro (QTOF; Waters) foi usado para realizar este experimento. Uma coluna C18 do híbrido de ponte de etileno Acquity UPLC (BEH) (50 x 2,1 mm, 1,7 μm; Waters) foi empregada a uma taxa de fluxo de 400 μL/min e mantida a uma temperatura de 25 ºC. O seguinte gradiente foi usado com 0,05 % de ácido fórmico em água como fase móvel A e 0,05 % de ácido fórmico em acetonitrila como fase móvel B: 0,0 a 7,0 min 2 a 100 % B, 7,0 a 9,0 min 100 % B, 9,0 a 11,0 min 2 % B. O volume de injeção foi de 2,5 μL. O QTOF foi operado em modo negativo de electrospray usando o modo MSE (aquisição simultânea de varredura completa e todos os íons de fragmento). Os parâmetros de espectrometria de massa foram os seguintes: faixa de massa 85 a 1200 Da, tempo de varredura 0,2 s, temperatura da fonte 120 ºC, voltagem capilar -2,0 kV, voltagem do cone -25 V, cone de extração -4,5 V, fluxo do gás de dessolvatação e temperatura 800 L/he 400 0C, respectivamente, fluxo de gás cônico 20 L/h, energia de colisão 4 eV (função de aquisição de baixa energia) e 10 a 35 eV (função de aquisição de alta energia), gás de colisão (argônio) 7 x 10 a 3 mbars. Uma solução de 400 ng/mL do peptídeo sintético leucina-encefalina em água:acetonitrila:ácido fórmico (50:50:0,1) foi infundida constantemente no espectrômetro de massa como referência interna para garantir medições de massa precisas. Os dados foram registrados por Masslynx v.4.1 (Waters). A detecção do marcador foi realizada usando Markerlynx XS (Waters) com os seguintes parâmetros: tempo de retenção inicial e final 0,0 e 9,0 min, faixa de massa 85 a 1200 Da, janela de massa 0,02 Da, janela de tempo de retenção 0,06 min, limite de intensidade 500 contagens, pico automático cálculo de ruído de linha de base de largura e pico a pico, função de desisotopia aplicada. Os dados foram centrados na média e na escala de Pareto antes de aplicar a análise de componentes principais. Os marcadores de interesse foram identificados provisoriamente com base em sua determinação de fórmula molecular e fragmentos obtidos por dissociação induzida por colisão. EXEMPLO 1:

[00145] O glucosinolato de 7-metilsulfonil-heptila foi identificado na superfície de mutante Arabidopsis thaliana de dessaturase de ácido graxo 2 (fad2 - 3) que revelou forte resistência ao patógeno fúngico necrotrófico Botrytis cinerea no estágio de cotilédone (Figura 1). A confirmação da atividade antifúngica de isotiocianato de 7-metilsulfonil-heptila (7MSOOH, o único subproduto comercialmente disponível de glucosinolato de 7-metilsulfonil-heptila) contra B. cinerea e outros patógenos fúngicos foi realizada in vitro por aplicação direta de isotiocianato em ágar dextrose de batata em diferentes dosagens. Os resultados obtidos revelaram ausência de atividade fungitóxica deste composto contra Botrytis cinerea na faixa de dosagem entre 10 e 1500 µM. Doses mais elevadas não foram aplicadas, devido ao potencial efeito tóxico deste composto. No entanto, o desempenho do bioensaio em outros patógenos fúngicos permitiu identificar que isotiocianato de 7-metilsulfonil-heptila é fungitóxico para algumas espécies de fungos, conforme mostrado na Tabela 1. Organismo # Espécies de Fungo ED50 (µM) Hospedeiro 1 Septoria tritici Trigo 350 Várias espécies de 2 Colletotrichum dematium 650 plantas 3 Serpula lacrymans Madeira 150 4 Hemenoscyphus fraxineus Freixo 770 TABELA 1: PROPRIEDADES ANTIFÚNGICAS DE ISOTIOCIANATO DE 7- METILSULFONIL-HEPTILA REVELADAS NO ENSAIO ANTIFÚNGICO IN VITRO.

[00146] Conclusão: Isotiocianato de 7-metilsulfonil-heptila revela uma estreita faixa de atividade fungitóxica em alguns patógenos fúngicos de plantas e mostra- se inativo em patógenos fúngicos de planta amplamente difundidos como Botrytis cinerea (mofo cinzento) ou Fusarium oxysporum. Entretanto, os requerentes mostraram surpreendentemente que a combinação de subprodutos dos glucosinolatos leva a uma forte atividade fungitóxica em um grande número de patógenos fúngicos importantes agronômicos (43 espécies, ver tabela nas páginas 23 a 24 para a lista de espécies). EXEMPLO 2:

[00147] Investigação de outros subprodutos naturais de glucosinolatos e suas combinações levou os Requerentes a identificar misturas de compostos antifúngicos altamente eficientes. Os requerentes usaram a dose efetiva que produz um efeito quantitativo em 95 % da população (ED95) na concentração máxima de 1500 µM para investigar a atividade fungitóxica dos compostos analisados. Os requerentes escolheram dois patógenos fúngicos de planta mais amplamente difundidos para realizar o ensaio de toxicidade: Botrytis cinerea (patógeno de 1400 espécies de plantas) e Fusarium oxysporum (patógeno de um grande número de espécies de plantas, por exemplo, tomate, banana). A seleção de tais patógenos fúngicos foi causada pela ausência de qualquer tratamento orgânico eficiente (menos de 60 % de eficiência) no mercado que cria a necessidade de identificação de novos produtos eficientes que podem ser usados pelos agricultores sem risco para sua saúde e também para o ambiente.

[00148] Inicialmente, os requerentes testaram moléculas únicas de isotiocianatos de 8-metilsulfonil-octil-(8MSOOH) e 8-metilsulfinil-octil-(8MSOH) que não revelaram nenhum efeito fungitóxico em Botrytis cinerea e Fusarium oxisporum. Entretanto, uma vez que 8-metilsulfonil-octil-(8MSOOH) e 8- metilsulfinil-octil-isotiocianato (8MSOH) são combinados, eles se tornam altamente tóxicos para B. cinerea (1400 µM) e F. oxisporum (923,64 µM).

[00149] Surpreendentemente, o ensaio de toxicidade com 8-metilsulfonil-octil- nitrila (8MSOON) e 8-metilsulfonil-octil-isotiocianato (8MSOOH) revelou efeito diferente em duas espécies de fungos. A combinação de nitrila e isotiocianatos foi tóxica para B. cinerea na dosagem de 850 µM (menor do que a combinação dos dois isotiocianatos). Entretanto, esta combinação teve um efeito moderado no desenvolvimento de F. oxisporum. Para este fúngico patógeno, o efeito fungitóxico foi obtido com a combinação de 8MSOOH+8MSOH, com uma EC95 de 923,64 µM.

[00150] A combinação de três moléculas juntas (isotiocianatos e nitrilas) não levou a um aumento nas atividades fungitóxicas dessas moléculas e ficou no mesmo nível que aquele com a combinação mais eficiente das 2 moléculas. Os resultados de moléculas únicas e combinações de moléculas são apresentados na Tabela 2. ED95 Botrytis cinerea F. oxisporum 8MSOH <1.500 <1.500 8MSOON <1.500 <1.500 8MSOOH <1.500 <1.500 8MSOH+8MSOON <1.500 <1.500 8MSOOH+8MSOON 850 <1.500 8MSOOH+8MSOH 1.400 923,64 8MSOOH+8MSOON+8MSOH 850 1.125,08 TABELA 2: ATIVIDADE FUNGITÓXICA DE DIVERSOS SUBPRODUTOS DE GLUCOSINOLATO (MOLÉCULAS COMBINADAS E ÚNICAS) CONTRA BOTRYTIS CINEREA E FUSARIUM OXISPORUM.

[00151] Conclusão: Subprodutos de glucosinolatos de metilsulfonila e metilsulfinila usados separadamente não revelam nenhuma atividade fungitóxica na maioria dos patógenos fúngicos de plantas amplamente difundidos nas concentrações testadas. Entretanto, a realização de combinações de isotiocianatos de metilsulfonila com nitrilas de metilsulfonila, tiocianatos ou isotiocianatos de metilsulfinila pode levar a atividades fungitóxicas. EXEMPLO 3:

[00152] O exame de outros isotiocianatos alifáticos levou os Requerentes a testar combinações de isotiocianatos de 6-Metilsulfonilhexila (6MSOOH) com : isotiocianatos de 6-metilsulfinilhexila (6MSOH), 4-metilsulfinilbutila (4MSOH), 8- metilsulfiniloctila (8MSOH) e 8-metilsulfoniloctila (8MSOOH) por seu efeito fungitóxico sobre Fusarium gramineum (patógeno da cevada e do trigo) e Phytophthora cactorum (patógeno de 200 espécies de plantas).

[00153] Os requerentes revelaram que a realização de combinações com compostos pouco ativos pode levar surpreendentemente a um aumento da atividade fungitóxica em um grande número de patógenos fúngicos. Por exemplo, tanto 6MSOOH quanto 6MSOH não são fungistáticos para Fusarium gramineum na dosagem de 1500 µM. Entretanto, quando aplicados em uma mistura (combinação de 6MSOOH e 6MSOH) eles se tornam altamente fungitóxicos com a dose efetiva de 116,8 µM que produz um efeito quantitativo em 50 % da população (ED50). Efeitos semelhantes foram observados com as outras combinações em ambas as espécies de fungos. ED50 P. cactorum F. gramineum 6MSOOH <1.500 <1.500 6MSOH 667,27 <1.500 4MSOH <1.500 628,38 8MSOOH 628,38 463,882 6MSOOH+6MSOH 207,17 116,84 6MSOOH+4MSOH 10 10 6MSOOH+8MSOOH 192,9 144,27 TABELA 3: ATIVIDADE FUNGITÓXICA DE ISOTIOCIANATOS EM DIVERSAS COMBINAÇÕES CONTRA P. CACTORUM E F. GRAMINEUM.

[00154] Conclusão: Combinação de isotiocianatos de metilsulfonila e metilsulfinila com diferentes comprimentos de cadeia de carbono está revelando fortes propriedades fungitóxicas contra uma ampla gama de patógenos fúngicos. Esses resultados levam ao desenvolvimento de novos produtos orgânicos naturais que podem ser usados na agricultura, por exemplo, na prevenção de infecções por patógenos. O desenvolvimento de novas combinações de produtos é particularmente útil para reduzir o uso de pesticidas químicos, bem como as doses. Além disso, devido à sua alta eficiência, essas novas combinações são muito úteis na promoção do desenvolvimento da agricultura biológica.

EXEMPLO 4: SÍNTESE QUÍMICA

[00155] Metil(oct-7-en-1-il)sulfano (2). Para uma suspensão de tiometóxido de sódio (3,23 g, 46,0 mmol) em dimetilformamida (85 ml) foi adicionado uma solução de 8-bromooct-1-eno (8 g, 41,9 mmol) em dimetilformamida (195 ml) a 0 ºC e a mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 14 h. A mistura de reação foi diluída com solução de cloreto de amônio saturada e, em seguida, extraída com éter (3x), camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para obter metil(oct-7-en-1-il)sulfano (7g, 44 mmol), que foi usado na próxima etapa sem qualquer purificação adicional.

[00156] RMN de 1H (300 MHz, Clorofórmio-d) δ 1,26 - 1,45 (m, 6H), 1,50 - 1,67 (m, 2H), 2,00 - 2,08 (m, 2H), 2,09 (s, 3H), 2,44 - 2,54 (m, 2H), 4,84 - 5,06 (m, 2H), 5,68 - 5,90 (m, 1H).

[00157] Ácido 7-(metilsulfonil)heptanóico (3). Para uma solução resfriada a gelo de metil(oct-7-en-1-il)sulfano (2) em acetonitrila (139 ml) e acetato de etila (139 ml) foi adicionado tricloreto de rutênio tri-hidratado (197 mg, 0,834 mmol) seguido por água (139 ml) e a mistura foi agitada usando agitador mecânico. Para essa solução de agitação foi adicionado periodato de sódio (71,3 g, 334 mmol) em porções ao longo de 10 min. (cuidado, possibilidade de explosão). Após a conclusão da adição, a mistura foi agitada durante a noite na temperatura ambiente. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada com NaHCO3 sat., até que as lavagens apresentassem pH básico. Todas as camadas aquosas coletadas foram lavadas com acetato de etila e, em seguida, acidificadas usando HCl 6N, seguido por extração com acetato de etila (3x). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para obter ácido 7-(metilsulfonil)heptanóico (3) (7,25 g, 34,8 mmol) em 83 % de rendimento. Uma amostra analítica foi preparada por trituração do bruto no éter, filtrada e seca ao ar e o material restante foi submetido à próxima etapa sem purificação adicional.

[00158] RMN de 1H (300 MHz, Clorofórmio-d) δ 1,34 - 1,56 (m, 4H), 1,66 (m, 2H), 1,79 - 1,93 (m, 2H), 2,37 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,90 (s, 3H), 2,95 - 3,07 (m, 2H).

[00159] 7-(metilsulfonil)heptan-1-ol (4). Para uma solução de ácido 7- (metilsulfonil)heptanóico (3) (1 g, 4,80 mmol) em tetra-hidrofurano (60 ml) foi adicionado solução de complexo de tetra-hidrofurano borano 1M em THF (14,40 ml, 14,40 mmol) às gotas a 0 ºC sob atmosfera inerte e a mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 3 h. A mistura de reação foi extinta pela adição de solução de cloreto de amônio saturada e, em seguida, as camadas foram separadas, a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (3x). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre anidro sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O bruto foi purificado por FC (Biotage, KP Sil-25g, DCM, acetato de etila, 0 a 100 %) para obter 7-

(metilsulfonil)heptan-1-ol (4) (0,72 g, 3,71 mmol, 77 % de rendimento) como um sólido branco.

[00160] RMN de 1H (300 MHz, Clorofórmio-d) δ 1,35 - 1,51 (m, 6H), 1,57 (m, 2H), 1,86 (m, 2H), 2,90 (s, 3H), 2,96 - 3,07 (m, 2H), 3,65 (td, J = 6,5, 1,0 Hz, 2H).

[00161] Metanosulfonato de 7-(metilsulfonil)heptila (5). Para uma solução de 7-(metilsulfonil)heptan-1-ol (4) (0,7 g, 3,60 mmol) em diclorometano (36,0 ml) foi adicionado trietilamina (1,023 ml, 7,21 mmol) e a mistura foi resfriada a 0 ºC. Para essa mistura foi adicionado cloreto de metanossulfonila (0,349 ml, 4,50 mmol) e, em seguida, a mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 14 h. A mistura de reação foi lavada com solução de HCl 1M e a camada aquosa foi extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O bruto resultante foi purificado por FC (Biotage, KP Sil-25g, DCM acetato de etila, 0 a 40 %) para obter metanosulfonato de 7-(metilsulfonil)heptila (5) (940 mg, 3,45 mmol, 96 % de rendimento) como um sólido branco.

[00162] RMN de 1H (300 MHz, Clorofórmio-d) δ 1,34 - 1,53 (m, 6H), 1,68 - 1,94 (m, 4H), 2,90 (s, 3H), 2,96 - 3,06 (m, 5H), 4,18 - 4,27 (m, 2H).

[00163] 1-(metilsulfonil)-7-tiocianatoheptano (6). Para uma solução de metanosulfonato de 7-(metilsulfonil)heptila (5) (0,2 g, 0,734 mmol) em acetona (5 ml) foi adicionado tiocianato de potássio (0,714 g, 7,34 mmol)) e a mistura foi agitada a 60 ºC em um tubo vedado por 18 h. Então, a mistura de reação resfriada foi filtrada através de um filtro de fitra e o resíduo foi lavado com éter várias vezes. Os filtrados combinados foram concentrados até a secura e, em seguida, purificados por FC (Biotage, KP Sil-25g, DCM, acetato de etila, 0 a 40 %) para obter 1-(metilsulfonil)-7-tiocianatoheptano (6) (156 mg, 0,663 mmol, 90 % de rendimento) como um óleo incolor.

[00164] RMN de 1H (300 MHz, Clorofórmio-d) δ 1,35 - 1,55 (m, 6H), 1,84 (m,

4H), 2,91 (s, 3H), 2,94 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,98 - 3,05 (m, 2H).

[00165] 8-(metilsulfonil)octanonitrila (7). Para uma solução de metanosulfonato de 7-(metilsulfonil)heptila (5) (0,2 g, 0,734 mmol) em dimetilsulfóxido (5 ml) foi adicionado cianeto de sódio (0,180 g, 3,67 mmol) e a mistura foi agitada a 60 ºC em um tubo vedado por 18 h. A mistura de reação resfriada foi diluída com acetato de etila e lavada com solução de cloreto de amônio saturada. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O bruto resultante foi purificado por FC (Biotage, KP Sil-25g, DCM, acetato de etila, 0 a 40 %) para obter 8-(metilsulfonil)octanonitrila (7) (0,136 g, 0,669 mmol, 91 % de rendimento) como um óleo incolor.

[00166] RMN de 1H (300 MHz, Clorofórmio-d) δ 1,33 - 1,55 (m, 6H), 1,60 - 1,74 (m, 2H), 1,79 - 1,94 (m, 2H), 2,35 (td, J = 7,0, 0,6 Hz, 2H), 2,90 (s, 3H), 2,96 - 3,05 (m, 2H).

SÍNTESE DE 5MSOOH 2-(5-BROMOPENTIL)ISOINDOLINA-1,3-DIONA (SVB-18 - 025)

[00167] Para uma solução de FTALIMIDA (3 g, 20,39 mmol) em acetona (102 ml) foi adicionado cloreto de N-benzil-N,N-dietiletanamínio (0,511 g, 2,243 mmol), K2CO3 (8,45 g, 61,2 mmol), e 1,5-dibromopentano (14,07 g, 61,2 mmol) e a mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente por 14 h. A mistura de reação foi concentrada até a secura e o resíduo foi recolocado em suspensão em água, extraído com DCM (3x), camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para obter o produto bruto. Este foi purificado usando FC (SiO2, hexano, acetato de etila, 0 a 40 %) para obter 2-(5-bromopentil)isoindolina-1,3-diona (2,3 g, 7,77 mmol, 38,1 % de rendimento) como um óleo incolor.

[00168] RMN de 1H (300 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,89 - 7,80 (m, 2H), 7,77 - 7,66 (m, 2H), 3,75 - 3,63 (m, 2H), 3,44 - 3,31 (m, 2H), 1,99 - 1,84 (m, 2H), 1,79 - 1,63 (m, 2H), 1,60 - 1,42 (m, 2H).

[00169] 2-(5-(METILTIO)PENTIL)ISOINDOLINA-1,3-DIONA (SVB-18 - 033)

[00170] Para uma suspensão de NaSMe (0,833 g, 11,89 mmol) em DMF (21,83 ml) foi adicionado uma solução de 2-(5-bromopentil)isoindolina-1,3-diona (3,2 g, 10,80 mmol) em DMF (50,2 ml) a 0 ºC e a mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente por 14 h. A mistura de reação foi diluída com solução de NH4Cl e, em seguida, extraída com éter (3x), camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para obter o produto bruto. Este foi usado na próxima etapa sem qualquer purificação adicional.

[00171] RMN de 1H (300 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,90 - 7,80 (m, 2H), 7,78 - 7,66 (m, 2H), 3,74 - 3,63 (m, 2H), 2,54 - 2,42 (m, 2H), 2,08 (s, 3H), 1,80 - 1,57 (m, 5H), 1,52 - 1,37 (m, 2H).

[00172] 2-(5-(METILSULFONIL)PENTIL)ISOINDOLINA-1,3-DIONA (SVB-18 - 038)

[00173] Para uma solução de 2-(5-(metiltio)pentil)isoindolina-1,3-diona (2,8 g, 10,63 mmol) em DCM (53,2 ml) a 0 ºC foi adicionado m-CPBA (6,55 g, 26,6 mmol) em porções e a mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente por 14 h. Para a reação foi adicionado 100 ml, solução 1:1 de NaHCO3 saturado e solução de tiosulfato de sódio a 10 % e esta foi agitada por 1 h, as camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com DCM (3x), camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas para obter 2-(5-(metilsulfonil)-pentil)-isoindolina-1,3-diona (3,1 g, 10,50 mmol, 99 % de rendimento) como um sólido branco.

[00174] RMN de 1H (300 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,89 - 7,82 (m, 2H), 7,77 - 7,68 (m, 2H), 3,71 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 3,07 - 2,95 (m, 3H), 2,93 - 2,87 (m, 4H), 1,99 - 1,86 (m, 2H), 1,82 - 1,67 (m, 2H), 1,61 - 1,43 (m, 2H). 5-(METILSULFONIL)PENTAN-1-AMINA (SVB-18 - 042)

[00175] Para uma solução de 2-(5-(metilsulfonil)pentil)isoindolina-1,3-diona (3,1 g, 10,50 mmol) em metanol (52,5 ml) a temperatura ambiente foi adicionado hidrato de hidrazina (1,020 ml, 20,99 mmol) e a mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente por 2 h. A mistura de reação foi concentrada sob vácuo e, em seguida, o resíduo foi colocado em suspensão em solução de KOH 1M, extraído com acetato de etila (3x) camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para obter 5-(metilsulfonil)pentan-1-amina (1,6 g, 9,68 mmol, 92 % de rendimento) como um sólido branco.. este material estava limpo o suficiente para usar na próxima reação.

[00176] 1-ISOTIOCIANATO-5-(METILSULFONIL)PENTANO (SVB-18 - 048)

[00177] Para uma solução de 5-(metilsulfonil)pentan-1-amina (0,25 g, 1,513 mmol) em clorofórmio (7,56 ml) a 0 ºC foi adicionado tiofosgênio (0,150 ml, 1,967 mmol) seguido por adição de NaOH aquoso a 5 % e a mistura foi agitada a 0 ºC por 2 h. A mistura de reação foi diluída com água e, em seguida, as camadas foram separadas, a camada aquosa foi extraída com DCM (3x). Camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio filtradas e concentradas sob pressão reduzida para obter o produto bruto. Este foi purificado usando FC(SiO2, hexano, acetato de etila, 0 a 40 %) para obter 1- isotiocianato-5-(metilsulfonil)pentano (0,185 g, 0,892 mmol, 59,0 % de rendimento).

[00178] RMN de 1H (300 MHz, Clorofórmio-d) δ 3,56 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 3,10 - 3,00 (m, 2H), 2,93 (d, J = 0,7 Hz, 3H), 1,98 - 1,86 (m, 2H), 1,83 - 1,70 (m, 2H), 1,68 - 1,53 (m, 2H). EXEMPLO 5:

[00179] A investigação de combinações naturais de isotiocianatos com diversos comprimentos de carbono e grupos sulfinila ou sulfonila levou os Requerentes a identificar misturas de compostos antifúngicos altamente eficientes. Os requerentes usaram a dose efetiva que produz um efeito quantitativo em 95 % da população (ED95) na concentração máxima de 1500 µM para investigar a atividade fungitóxica dos compostos analisados. Os requerentes escolheram o segundo patógeno fúngico de planta mais amplamente difundido para realizar o ensaio de toxicidade - Botrytis cinerea (patógeno de 1400 espécies de plantas), devido à sua distribuição mundial e à quantidade insuficiente de produtos orgânicos eficientes para tratar este patógeno fúngico.

[00180] Inicialmente, os Requerentes escolheram 4 compostos que mostraram ser fungitóxicos em um grande número de patógenos fúngicos, por exemplo, Phytophthora infestans, Fusarium gramineum: isotiocianatos de 5- metilsulfonil-pentil-(5MSOOH), 5-metilsulfinil-pentil-(5MSOH), 8-metilsulfonil-

octil-(8MSOOH) e 8-metilsulfinil-octil-(8MSOH). Entretanto, nenhum desses compostos isolados revelou efeito fungitóxico em Botrytis cinerea. Para melhorar as propriedades anti-Botrytis, os Requerentes realizaram combinações com compostos 5MSOOH, 5MSOH, 8MSOOH e 8MSOH. Surpreendentemente, apenas duas combinações revelaram propriedades antifúngicas: primeiro, 8MSOOH com 8MSOH (ED95 de 1400 µM) e segundo, 8MSOH com 5MSOOH que se tornou altamente tóxico para B. cinerea em uma dosagem de 550 µM. Os resultados de moléculas únicas e suas combinações são apresentados na Tabela 4. ED95 Botrytis cinerea 5MSOOH <1.500 5MSOH <1.500 8MSOOH <1.500 8MSOH <1.500 5MSOOH+5MSOH <1.500 8MSOOH+8MSOH 1.400 8MSOOH+5MSOH <1.500 8MSOOH+5MSOOH <1.500 8MSOH+5MSOOH 550 8MSOH+5MSOH <1.500 TABELA 4: ATIVIDADE FUNGITÓXICA DE DIVERSOS ISOTIOCIANATOS (MOLÉCULAS COMBINADAS E ÚNICAS) CONTRA BOTRYTIS CINEREA.

[00181] Conclusão: Subprodutos de glucosinolatos tais como isotiocianatos de metilsulfonila e metilsulfinila usados separadamente não revelam nenhuma atividade fungitóxica forte no patógeno fúngico de planta mais amplamente difundido - Botrytis cinerea nas concentrações testadas. Entretanto, a realização de combinações de compostos com diversos comprimentos de carbono e apresentando grupos sulfinila ou leva a fortes atividades fungitóxicas em baixas dosagens, aumentando assim o efeito fungitóxico em comparação com combinações de moléculas com os mesmos comprimentos de carbono e apresentando apenas diferenças em termos de grupos funcionais (isto é, grupos sulfinila e sulfonila). EXEMPLO 6:

[00182] O exame das propriedades fungitóxicas de isotiocianatos alifáticos únicos e combinados levou os Requerentes a atividades de investigação em profundidade de isotiocianatos de 8-metilsulfonil-octil-(8MSOOH) e 8- metilsulfinil-octil-(8MSOH). Os requerentes realizaram estudos fungitóxicos usando: Fusarium gramineum (patógeno de cevada e trigo), Phytophthora infestans (patógeno de Solanaceae) e Guignardia bidwellii (patógeno de uvas).

[00183] Os requerentes mediram um efeito fungitóxico causado por moléculas únicas e combinadas de 8MSOOH e 8MSOH em 50 % da população de fungos (ED50). Os resultados deste ensaio estão incluídos na Tabela 5. ED50 P. infestans F. gramineum G. bidwellii 8MSOH 26,36 292,03 30,38 8MSOOH 350 22,18 463,88 8MSOOH+8MSOH 10 61,73 40,2 TABELA 5: ATIVIDADE FUNGITÓXICA DE ISOTIOCIANATOS EM VÁRIAS COMBINAÇÕES CONTRA P. INFESTANS, F. GRAMINEUM E G. BIDWELLII.

[00184] Conclusão: Combinação de moléculas com o mesmo comprimento de cadeia de carbono de isotiocianatos de metilsulfonila e metilsulfinila não está aumentando as propriedades fungitóxicas em F. gramineum e G. bidwellii, mas tornou-se eficiente para P. infestans. EXEMPLO 7:

ATIVIDADES FUNGITÓXICAS DE ISOTIOCIANATOS COMBINADOS EM TRÊS ESPÉCIES FÚNGICAS NECROTRÓFICAS

[00185] Os requerentes examinaram as atividades fungitóxicas de isotiocianatos combinados em três espécies fúngicas necrotróficas, isto é, Alternaria radicina (classe: Dothideomycetes; ordem: Pleosporales; hospedeiro: cenoura), Fusarium gramineum (classe: Sordariomycetes; ordem: Hypocreales; hospedeiro: cereais) e Plectosphaerella cucumerina (classe: Sordariomycetes; ordem: Glomerellales; hospedeiro: tomate e cucurbitáceas). No geral, um total de 133 combinações foram testadas nas três espécies de fungos.

[00186] Isotiocianatos foram obtidos de SpiroChem (Basel, Suíça) e LKT LABS (Minnesota, Estados Unidos da América). Todos os compostos obtidos foram dissolvidos em dimetilsulfóxido (DMSO). As cepas fúngicas utilizadas para o bioensaio fúngico in vitro foram obtidas na micoteca da Agroscope (www.mycoscope.bcis.ch).

[00187] As atividades fungitóxicas foram testadas em placas de cultura de tecidos de 48 poços. Em mais detalhes, os patógenos fúngicos de plantas foram inoculados no PDA implementado com isotiocianatos que foram dissolvidos preliminarmente em várias concentrações (10, 150, 250, 375, 500, 700, 850 μM) em PDB. Tampão ágar de 2 mm (Dufour et al. 2015) de uma pré-cultura de fungos foram colocados em cada poço, 3 repetições biológicas foram usadas para cada concentração. As placas foram incubadas pelo período de uma semana no fitotron (80 % de umidade relativa, temperatura constante de 23 ºC, em ciclos alternados de 16 h diurnos e 8 h noturnos). O crescimento do micélio foi medido após 7 dias usando ImageJ (http://imagej.net/Welcome), ED50 foi avaliado conforme descrito em Schnee et al., 2013. Atividades fungitóxicas sinérgicas foram então estimadas como em Chou (2006), e o CompuSyn software (www.combosyn.com) foi usado para determinar o Índice de Combinação (CI) para combinações de duas moléculas e a presença de sinergismo (CI < 1). Os resultados obtidos para as melhores combinações para cada espécie de fungo estão resumidos nas Tabelas 6, 7 e 8. Mostra o ED50 (em μM) obtido para as duas moléculas sozinhas, para a combinação delas (sempre menor), e o Índice de combinação inferior para pelo menos uma determinada concentração em uma faixa que varia de 10 a 850 μM. Todos os CI listados na tabela abaixo sendo menores que 0,26, isso indica que as moléculas combinadas têm fortes sinergismos e são eficientes contra as espécies de fungos testadas.

[00188] Moléculas adicionais usadas nessas combinações são: 1- (isotiocianatometil)-3-(4-(metilsulfinil)butil)benzeno (8ASOH), 1- (isotiocianatometil)-3-(4-(metilsulfonil)butil)benzeno (8ASOOH), (E)-1- isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct-2-eno (8CSOH), 1-(etilsulfinil)-8- isotiocianatooctano (8ESOH), 1-(etilsulfonil)-isotiocianatooctano (8ESOOH), 1-

Isotiocianato-3-(metilsulfinil)-propano (3MSOH), 1-Isotiocianato-3-(metilsulfonil)- propano (3MSOOH), 1-Isotiocianato-9-(metilsulfinil)-nonano (9MSOH) e 1- Isotiocianato-9-(metilsulfonil)-nonano (9MSOOH). Molécula 1 de Molécula 2 de Combinação Combinação Combinação EC50 EC50 de EC50 de CI 8ASOH/8ASOOH 723,3 850 156,08 0,02872 8CSOH/8ESOH 704,24 472,4 390 0,08735 8CSOH/8ESOOH 472,4 850 474,46 0,115 8CSOH/3MSOOH 704,24 468,89 479,2 0,02991 8CSOH/7MSOH 704,24 536,96 534,04 0,08249 8CSOH/3MSOH 704,24 786,17 625,78 0,25268 TABELA 6: MELHOR COMBINAÇÃO DE MOLÉCULAS CONTRA ALTERNARIA RADICINA (MOLÉCULAS PARA AS QUAIS 850 É MENCIONADO PARA EC50 SÃO AS QUE NÃO SÃO ATIVIDADE FUNGITÓXICA NA FAIXA TESTADA).

Molécula 1 Molécula 2 de Combinação Combinação Combinação de EC50 EC50 de EC50 de CI 8MSOH/3MSOOH 316,78 386,88 252,41 0,24857 8MSOH/7MSOH 316,78 586,15 258,16 0,16426 8MSOH/9MSOH 316,78 552,9 263,27 0,15388 8MSOH/6MSOH 316,78 850 266,17 0,25732 8CSOH/8MSOH 850 316,78 274,62 0,13763 8CSOH/3MSOOH 850 386,88 282,16 0,10929 8MSOH/9MSOOH 316,78 850 283,52 0,13736 8CSOH/3MSOH 850 525,24 383,96 0,04368 8CSOH/7MSOH 850 586,15 389,42 0,03555 8ESOH/7MSOH 533,3 586,15 414,39 0,12419 8ESOH/3MSOH 533,3 525,24 455,21 0,15703 8MSOOH/7MSOH 850 586,15 540,78 0,06049 TABELA 7: MELHOR COMBINAÇÃO DE MOLÉCULAS CONTRA FUSARIUM GRAMINEUM (MOLÉCULAS PARA AS QUAIS 850 É MENCIONADO PARA EC50 SÃO AS QUE NÃO SÃO ATIVIDADE FUNGITÓXICA NA FAIXA TESTADA).

Molécula Molécula 2 Combinação Combinação de Combinação 1 de EC50 de EC50 de EC50 CI 8CSOH/7MSOH 272,83 337,32 145,68 0,18832 8MSOOH/3MSOH 850 626,83 483,44 0,09631 8MSOOH/3MSOOH 850 536,05 521,17 0,03061 TABELA 8: MELHOR COMBINAÇÃO DE MOLÉCULAS CONTRA A PLECTOSPHAERELLA CUCUMERINA (MOLÉCULAS PARA AS QUAIS 850 É MENCIONADO PARA EC50, SÃO AS SEM ATIVIDADE FUNGITÓXICA NA FAIXA TESTADA). EXEMPLO 8: BIOASSAIO FÚNGICO IN VIVO COM PLASMOPARA VITICOLA (CLASSE: OOMICETOS; ORDEM: PERONOSPORAIS; PATOGÊNIO BIOTRÓFICO DE UVA)

[00189] 1-Isotiocianato-8-(metilsulfonil)-octano e 1-Isotiocianato-8- (metilsulfinil)-octano foram obtidos de SpiroChem (Basel, Suíça). Os compostos foram dissolvidos em dimetilsulfóxido (DMSO).

[00190] Discos de folhas foram coletados das 4ª e 5ª folhas de Vitis vinifera cv. Cabernet Sauvignon lavado em água com antecedência. Para cada concentração (0, 100, 250, 500, 750 e 1000 µM), 10 discos de folhas secas foram colocados em placas de Petri sobre papel de filtro úmido. Os discos das folhas foram pulverizados com as diferentes concentrações de moléculas ativas e secos sob a capa estéril. Uma vez secos, eles foram pulverizados com uma solução de Plasmopara viticola (105 esporos/mL) e as placas de Petri foram fechadas e incubadas no escuro. Após 1 h, as placas de Petri foram colocadas aleatoriamente na bancada em condições normais de dia/noite. As porcentagens de infecção foram calculadas após 7 dias como em Schnee et al. (2013).

PLASMOPARA VITICOLA Combinação EC50 8MSOH/8MSOOH 94,2 TABELA 9: ATIVIDADE FUNGITÓXICA DE ISOTIOCIANATOS COMBINADOS CONTRA PLASMOPARA VITICOLA.

[00191] A combinação testada revelou uma forte eficácia contra este patógeno fúngico biotrófico (EC50: 94,2) EXEMPLO 9: TRICOPHYTON RUBRUM (CLASSE: EUROTIOMYCETES; ORDEM: ONYGENALES; PATOGÊNIO HUMANO DE PELE E UNHAS)

[00192] 1-Isotiocianato-8-(metilsulfonil)-octano e 1-Isotiocianato-8- (metilsulfinil)-octano foram obtidos de SpiroChem (Basel, Suíça). Os compostos foram dissolvidos em dimetilsulfóxido (DMSO).

[00193] A atividade fungitóxica foi testada em placas de cultura de tecidos de 48 poços. Tricophyton rubrum foi inoculado em PDA implementado com isotiocianatos que foram dissolvidos preliminarmente em várias concentrações (10, 150, 250, 375, 500, 700, 850 μM) em PDB. Tampões de ágar de 2 mm (Dufour et al. 2015) de uma pré-cultura de fungos foram colocados em cada poço, 3 repetições biológicas foram utilizadas para cada concentração. As placas foram incubadas pelo período de uma semana em fitotron (80 % de umidade relativa, temperatura constante de 23 ºC, em ciclos alternados de 16 h diurnos e 8 h noturnos). O crescimento do micélio foi medido após 7 dias usando ImageJ (http://imagej.net/Welcome), EC50 foi avaliado conforme descrito em Schnee et al., 2013.

TRICOPHYTON RUBRUM Combinação EC50 8MSOH/8MSOOH 275,2 TABELA 10: ATIVIDADE FUNGITÓXICA DE ISOTIOCIANATOS COMBINADOS

CONTRA TRICOPHYTON RUBRUM

[00194] A combinação testada revelou uma forte eficácia contra este patógeno fúngico humano (EC50: 275,2).

EXEMPLO 10: THAMNIDIUM ELEGANS (CLASSE ZYGOMYCETES; ORDEM MUCORALES; CARNE ARMAZENADA)

[00195] 1-Isotiocianato-8-(metilsulfonil)-octano e 1-Isotiocianato-8-

(metilsulfinil)-octano foram obtidos de SpiroChem (Basel, Suíça). Os compostos foram dissolvidos em dimetilsulfóxido (DMSO).

[00196] Atividade fungitóxica foi testada em placas de cultura de tecidos de 48 poços. Thamnidium elegans foi inoculado em PDA implementado com isotiocianatos que foram dissolvidos preliminarmente em várias concentrações (10, 150, 250, 375, 500, 700, 850 μM) em PDB. Tampões de ágar de 2 mm (Dufour et al. 2015) de uma pré-cultura de fungos foram colocados em cada poço, 3 repetições biológicas foram utilizadas para cada concentração. As placas foram incubadas pelo período de uma semana em fitotron (80 % de umidade relativa, temperatura constante de 23 ºC, em ciclos alternados de 16 h diurnos e 8 h noturnos). O crescimento do micélio foi medido após 7 dias usando ImageJ (http://imagej.net/Welcome), EC50 foi avaliado conforme descrito em Schnee et al., 2013.

Combinação EC50 8MSOH/8MSOOH 395,0 TABELA 11: ATIVIDADE FUNGITÓXICA DE ISOTIOCIANATOS COMBINADOS CONTRA THAMNIDIUM ELEGANS.

[00197] A combinação testada revelou ser eficiente contra esta espécie de fungo que se desenvolve em carne armazenada (EC50: 395).

LISTA DE MOLÉCULAS USADAS NOS EXEMPLOS Abreviação de molécula Nome IUPAC 7MSOH 1-Isotiocianato-7-(metilsulfinil)-heptano 8MSOOH 1-Isotiocianato-8-(metilsulfonil)-octano 8MSOH 1-Isotiocianato-8-(metilsulfinil)-octano 8MSOON 8-(metilsulfonil)octilnitrila 6MSOH 1-Isotiocianato-6-(metilsulfinil)-hexano 4MSOH 1-Isotiocianato-4-(metilsulfinil)-butano 6MSOOH 1-Isotiocianato-6-(metilsulfonil)-hexano 5MSOOH 1-Isotiocianato-5-(metilsulfonil)-pentano 5MSOH 1-Isotiocianato-5-(metilsulfinil)-pentano

1-(isotiocanatometil)-3-(4- 8ASOH (metilsulfinil)butil)benzeno 1-(isotiocianatometil)-3-(4- 8ASOOH (metilsulfonil)butil)benzeno (E)-1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct-2- 8CSOH eno 8ESOH 1-(etilsulfinil)-8-isotiocianatooctano 8ESOOH 1-(etilsulfonil)-8-isotiocianatooctano 3MSOOH 1-Isotiocianato-3-(metilsulfonil)-propano 3MSOH 1-Isotiocianato-3-(metilsulfinil)-propano 9MSOH 1-Isotiocianato-9-(metilsulfinil)-nonano 9MSOOH 1-Isotiocianato-9-(metilsulfonil)-nonano

REFERÊNCIAS

1. Schreiner RP, Koide RT. 1993a. Antifungal compounds from the roots of mycotrophic and non-mycotrophic plant species. New Phytol. 123:páginas 99a 105.

2. Dufour V, Stahl M, Baysse C. 2015. The antibacterial properties of isothiocyanates. Mycrobiol. 161(Pt 2):páginas 229 a 243.

3. Lambrix V, Reichelt M, Mitchell-Olds T, Kliebenstein DJ, Gershenzon J. 2001. The Arabidopsis epithiospecifier protein promotes the hydrolysis of glucosinolates to nitriles and influences Trichoplusia ni herbivory. Plant Cell. 13(12):páginas 2.793 a 2.807.

4. Schnee S, Queiroz EF, Voinesco F, Marcourt L, Dubuis P-H, Wolfender J-L, Gindro K. 2013. Vitis vinifera canes, a new source of antifungal compounds against Plasmopora viticola, Erysiphe necator, and Botrytis cinerea. J. Agric. Food Chem. 61(23):páginas 5.459 a 5.467.

5. Chou TC. 2006. Theoretical basis, experimental design, and computerized simulation of synergism and antagonism in drug combination studies. Pharmacol Rev 58:páginas 621 a 681, 2006.

Claims (14)

REIVINDICAÇÕES

1. Uso de uma composição compreendendo a combinação de pelo menos dois compostos selecionados a partir do grupo consistindo de: 1-isotiocianato-8- (metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-8- (metilsulfonil) -octano; 1-(isotiocianatometil)-3-(4-(metilsulfonil)butil)benzeno / 1- (isotiocianatometil)-3- (4-(metilsulfonil)butil)benzeno; 1-(etilsulfinil)-8-isotiocianatooctano / 1- (etilsulfonil)-8- isotiocianatooctano; (E) -1-isotiocianato-8- (metilsulfinil)oct-2-eno / 1-isotiocianato-3-(metilsulfonil)-propano; (E)-1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct- 2-eno / 1-isotiocianato-7-(metilsulfinil)-heptano; (E)-1-isotiocianato-8- (metilsulfinil)oct-2-eno / 1-isotiocianato-3-(metilsulfinil)-propano; 1-isotiocianato- 8-(metilsulfonil)-octano / 1-isotiocianato-6-(metilsulfinil)-hexano; 1-isotiocianato- 8-(metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-3-(metilsulfonil)-propano; 1-isotiocianato- 8-(metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-7-(metilsulfinil)-heptano; 1-isotiocianato- 8-(metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-6-(metilsulfinil)-hexano; (E)-1- isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct-2-eno / 1-isotiocianato-8-(metil ulfinil)-octano; (E) -1-isotiocianato-8-(metilsulfinil) oct-2-eno / 1-Isotiocianato-3-(metilsulfonil)- propano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-9-(metilsulfonil)- nonano; (E)-1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct-2-eno / 1-isotiocianato-7- (metilsulfinil)-heptano; 1-(etilsulfinil)-8-isotiocianatooctano / 1-isotiocianato-7- (metilsulfinil)-heptano; 1-(etilsulfinil)-8-isotiocianatooctano / 1-isotiocianato-3- (metilsulfinil)-propano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil)-octano / 1-isotiocianato-7- (metilsulfinil)-heptano; 1-isotiocianato-8- (metilsulfonil)-octano / 1-isotiocianato- 9-(metilsulfinil)-nonano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil)-octano / 1-isotiocianato- 6-(metilsulfinil) -hexano; (E)-1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct-2-eno / 1- isotiocianato-7-(metilsulfinil)-heptano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil)-octano / 1- isotiocianato-3-(metilsulfinil)-propano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil) -octano / 8-(metilsulfonil)octilnitrila ou 1-isotiocianato-8- (metilsulfonil) -octano / 1- isotiocianato-3-(metilsulfonil) -propano, caracterizado por ser na prevenção ou tratamento de patógenos fúngicos em plantas.

2. Uso da composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a referida combinação de pelo menos dois compostos é uma mistura de 1-isotiocianato-7-(metilsulfinil)-heptano e (E)-1-isotiocianato-8- (metilsulfinil)oct-2-eno ou uma mistura de 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil)octano e 1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)-octano.

3. Uso da composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a dita composição é fungitóxica e/ou fungistática em plantas.

4. Uso da composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que é em culturas de plantas no campo ou para implementação in vitro da mesma.

5. Uso da composição compreendendo a combinação de pelo menos dois compostos selecionados a partir do grupo consistindo de: 1-isotiocianato-8- (metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-8- (metilsulfonil) -octano; 1-(isotiocianatometil)-3-(4-(metilsulfonil)butil)benzeno / 1- (isotiocianatometil)-3- (4-(metilsulfonil)butil)benzeno; 1-(etilsulfinil)-8-isotiocianatooctano / 1- (etilsulfonil)-8- isotiocianatooctano; (E) -1-isotiocianato-8- (metilsulfinil)oct-2-eno / 1-isotiocianato-3-(metilsulfonil)-propano; (E)-1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct- 2-eno / 1-isotiocianato-7-(metilsulfinil)-heptano; (E)-1-isotiocianato-8- (metilsulfinil)oct-2-eno / 1-isotiocianato-3-(metilsulfinil)-propano; 1-isotiocianato- 8-(metilsulfonil)-octano / 1-isotiocianato-6-(metilsulfinil)-hexano; 1-isotiocianato- 8-(metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-3-(metilsulfonil)-propano; 1-isotiocianato- 8-(metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-7-(metilsulfinil)-heptano; 1-isotiocianato- 8-(metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-6-(metilsulfinil)-hexano; (E)-1- isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct-2-eno / 1-isotiocianato-8-(metil ulfinil)-octano; (E) -1-isotiocianato-8-(metilsulfinil) oct-2-eno / 1-Isotiocianato-3-(metilsulfonil)- propano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-9-(metilsulfonil)- nonano; (E)-1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct-2-eno / 1-isotiocianato-7- (metilsulfinil)-heptano; 1-(etilsulfinil)-8-isotiocianatooctano / 1-isotiocianato-7- (metilsulfinil)-heptano; 1-(etilsulfinil)-8-isotiocianatooctano / 1-isotiocianato-3- (metilsulfinil)-propano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil)-octano / 1-isotiocianato-7- (metilsulfinil)-heptano; 1-isotiocianato-8- (metilsulfonil)-octano / 1-isotiocianato- 9-(metilsulfinil)-nonano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil)-octano / 1-isotiocianato- 6-(metilsulfinil) -hexano; (E)-1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct-2-eno / 1-

isotiocianato-7-(metilsulfinil)-heptano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil)-octano / 1- isotiocianato-3-(metilsulfinil)-propano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil) -octano / 8-(metilsulfonil)octilnitrila ou 1-isotiocianato-8- (metilsulfonil) -octano / 1- isotiocianato-3-(metilsulfonil) -propano, caracterizado pelo fato de ser um antimicótico em alimento ou bebida.

6. Composição desinfetante em artigos de higiene oral ou sanitários, caracterizada por compreender a combinação de pelo menos dois compostos selecionados a partir do grupo consistindo de: 1-isotiocianato-8- (metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-8- (metilsulfonil) -octano; 1-(isotiocianatometil)-3-(4-(metilsulfonil)butil)benzeno / 1- (isotiocianatometil)-3- (4-(metilsulfonil)butil)benzeno; 1-(etilsulfinil)-8-isotiocianatooctano / 1- (etilsulfonil)-8- isotiocianatooctano; (E) -1-isotiocianato-8- (metilsulfinil)oct-2-eno / 1-isotiocianato-3-(metilsulfonil)-propano; (E)-1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct- 2-eno / 1-isotiocianato-7-(metilsulfinil)-heptano; (E)-1-isotiocianato-8- (metilsulfinil)oct-2-eno / 1-isotiocianato-3-(metilsulfinil)-propano; 1-isotiocianato- 8-(metilsulfonil)-octano / 1-isotiocianato-6-(metilsulfinil)-hexano; 1-isotiocianato- 8-(metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-3-(metilsulfonil)-propano; 1-isotiocianato- 8-(metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-7-(metilsulfinil)-heptano; 1-isotiocianato- 8-(metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-6-(metilsulfinil)-hexano; (E)-1- isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct-2-eno / 1-isotiocianato-8-(metil ulfinil)-octano; (E) -1-isotiocianato-8-(metilsulfinil) oct-2-eno / 1-Isotiocianato-3-(metilsulfonil)- propano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-9-(metilsulfonil)- nonano; (E)-1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct-2-eno / 1-isotiocianato-7- (metilsulfinil)-heptano; 1-(etilsulfinil)-8-isotiocianatooctano / 1-isotiocianato-7- (metilsulfinil)-heptano; 1-(etilsulfinil)-8-isotiocianatooctano / 1-isotiocianato-3- (metilsulfinil)-propano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil)-octano / 1-isotiocianato-7- (metilsulfinil)-heptano; 1-isotiocianato-8- (metilsulfonil)-octano / 1-isotiocianato- 9-(metilsulfinil)-nonano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil)-octano / 1-isotiocianato- 6-(metilsulfinil) -hexano; (E)-1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct-2-eno / 1- isotiocianato-7-(metilsulfinil)-heptano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil)-octano / 1- isotiocianato-3-(metilsulfinil)-propano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil) -octano / 8-(metilsulfonil)octilnitrila ou 1-isotiocianato-8- (metilsulfonil) -octano / 1-

isotiocianato-3-(metilsulfonil) -propano.

7. Composição desinfetante, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que os artigos de higiene oral são selecionados entre um dentífrico, uma pastilha, um colutório em pó ou líquido, uma solução de revestimento, um agente de prevenção de halitose, uma goma de mascar.

8. Composição caracterizada por compreender a combinação de pelo menos dois compostos selecionados a partir do grupo consistindo de: 1-isotiocianato-8- (metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-8- (metilsulfonil) -octano; 1-(isotiocianatometil)-3-(4-(metilsulfonil)butil)benzeno / 1- (isotiocianatometil)-3- (4-(metilsulfonil)butil)benzeno; 1-(etilsulfinil)-8-isotiocianatooctano / 1- (etilsulfonil)-8- isotiocianatooctano; (E) -1-isotiocianato-8- (metilsulfinil)oct-2-eno / 1-isotiocianato-3-(metilsulfonil)-propano; (E)-1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct- 2-eno / 1-isotiocianato-7-(metilsulfinil)-heptano; (E)-1-isotiocianato-8- (metilsulfinil)oct-2-eno / 1-isotiocianato-3-(metilsulfinil)-propano; 1-isotiocianato- 8-(metilsulfonil)-octano / 1-isotiocianato-6-(metilsulfinil)-hexano; 1-isotiocianato- 8-(metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-3-(metilsulfonil)-propano; 1-isotiocianato- 8-(metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-7-(metilsulfinil)-heptano; 1-isotiocianato- 8-(metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-6-(metilsulfinil)-hexano; (E)-1- isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct-2-eno / 1-isotiocianato-8-(metil ulfinil)-octano; (E) -1-isotiocianato-8-(metilsulfinil) oct-2-eno / 1-Isotiocianato-3-(metilsulfonil)- propano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-9-(metilsulfonil)- nonano; (E)-1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct-2-eno / 1-isotiocianato-7- (metilsulfinil)-heptano; 1-(etilsulfinil)-8-isotiocianatooctano / 1-isotiocianato-7- (metilsulfinil)-heptano; 1-(etilsulfinil)-8-isotiocianatooctano / 1-isotiocianato-3- (metilsulfinil)-propano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil)-octano / 1-isotiocianato-7- (metilsulfinil)-heptano; 1-isotiocianato-8- (metilsulfonil)-octano / 1-isotiocianato- 9-(metilsulfinil)-nonano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil)-octano / 1-isotiocianato- 6-(metilsulfinil) -hexano; (E)-1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct-2-eno / 1- isotiocianato-7-(metilsulfinil)-heptano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil)-octano / 1- isotiocianato-3-(metilsulfinil)-propano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil) -octano / 8-(metilsulfonil)octilnitrila ou 1-isotiocianato-8- (metilsulfonil) -octano / 1- isotiocianato-3-(metilsulfonil) -propano, para o uso em um método para prevenir ou tratar micose em pacientes humanos ou animais.

9. Composição, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que a referida combinação de pelo menos dois compostos é uma mistura de 1-isotiocianato-7-(metilsulfinil)-heptano e (E)-1-isotiocianato-8- (metilsulfinil)oct-2-eno ou uma mistura de 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil)octano e 1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)-octano.

10. Composição para o uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 ou 9, caracterizada pelo fato de que a micose é devido a infecções Candida albicans ou Trichophyton rubrum.

11. Composição fungicida compreendendo a combinação de pelo menos dois compostos selecionados a partir do grupo consistindo de: 1-isotiocianato-8- (metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-8- (metilsulfonil) -octano; 1-(isotiocianatometil)-3-(4-(metilsulfonil)butil)benzeno / 1- (isotiocianatometil)-3- (4-(metilsulfonil)butil)benzeno; 1-(etilsulfinil)-8-isotiocianatooctano / 1- (etilsulfonil)-8- isotiocianatooctano; (E) -1-isotiocianato-8- (metilsulfinil)oct-2-eno / 1-isotiocianato-3-(metilsulfonil)-propano; (E)-1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct- 2-eno / 1-isotiocianato-7-(metilsulfinil)-heptano; (E)-1-isotiocianato-8- (metilsulfinil)oct-2-eno / 1-isotiocianato-3-(metilsulfinil)-propano; 1-isotiocianato- 8-(metilsulfonil)-octano / 1-isotiocianato-6-(metilsulfinil)-hexano; 1-isotiocianato- 8-(metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-3-(metilsulfonil)-propano; 1-isotiocianato- 8-(metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-7-(metilsulfinil)-heptano; 1-isotiocianato- 8-(metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-6-(metilsulfinil)-hexano; (E)-1- isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct-2-eno / 1-isotiocianato-8-(metil ulfinil)-octano; (E) -1-isotiocianato-8-(metilsulfinil) oct-2-eno / 1-Isotiocianato-3-(metilsulfonil)- propano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)-octano / 1-isotiocianato-9-(metilsulfonil)- nonano; (E)-1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct-2-eno / 1-isotiocianato-7- (metilsulfinil)-heptano; 1-(etilsulfinil)-8-isotiocianatooctano / 1-isotiocianato-7- (metilsulfinil)-heptano; 1-(etilsulfinil)-8-isotiocianatooctano / 1-isotiocianato-3- (metilsulfinil)-propano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil)-octano / 1-isotiocianato-7- (metilsulfinil)-heptano; 1-isotiocianato-8- (metilsulfonil)-octano / 1-isotiocianato- 9-(metilsulfinil)-nonano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil)-octano / 1-isotiocianato- 6-(metilsulfinil) -hexano; (E)-1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)oct-2-eno / 1-

isotiocianato-7-(metilsulfinil)-heptano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil)-octano / 1- isotiocianato-3-(metilsulfinil)-propano; 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil) -octano / 8-(metilsulfonil)octilnitrila ou 1-isotiocianato-8- (metilsulfonil) -octano / 1- isotiocianato-3-(metilsulfonil)-propano.

12. Composição fungicida, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que a dita combinação de pelo menos dois compostos é uma mistura de 1-isotiocianato-7-(metilsulfinil)-heptano e (E)-1-isotiocianato-8- (metilsulfinil)oct-2-eno ou uma mistura de 1-isotiocianato-8-(metilsulfonil)octano e 1-isotiocianato-8-(metilsulfinil)-octano.

13. Composição fungicida, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 12, caracterizada pelo fato de que está em combinação com portadores ou diluentes aceitáveis.

14. Composição fungicida, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 13, em que a dita composição fungicida é caracterizada pelo fato de que é ativa contra patógenos fúngicos de plantas selecionados a partir do filo compreendendo Basidiomycota, Zygomyceta, Oomycota ou Ascomycota.