BR112020021458A2 - Microcápsula probiótica e método para a preparação de uma microcápsula - Google Patents

Microcápsula probiótica e método para a preparação de uma microcápsula Download PDF

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Abstract

microcápsula probiótica e método para a preparação de uma microcápsula. provê-se uma microcápsula probiótica compreendendo um núcleo que compreende microorganismos probióticos; e uma camada de revestimento compreendendo uma dispersão sólida híbrida que compreende uma molécula de gordura comestível dispersa uniformemente em um polímero de formação de filme hidrossolúvel e um mediador comestível, em que o dito mediador comestível é octenil-succinato de amido.

Description

MICROCÁPSULA PROBIÓTICA E MÉTODO PARA A PREPARAÇÃO DE UMA MICROCÁPSULA CAMPO DA INVENÇÃO
[001] A presente invenção se refere aos campos de revestimento de grânulos probióticos e, mais particularmente, a grânulos probióticos pretendidos para serem misturados a gêneros alimentícios com um nível relativamente elevado de atividade de água.
HISTÓRICO DA INVENÇÃO
[002] A proteção das formas de dosagem nutricionais e nutracêuticas proveniente da umidade do ambiente é importante quando o material ativo é adversamente afetado pela presença da água. Os efeitos negativos da umidade podem ocorrer durante processos comuns de produção, como processos que envolvem granulação úmida e/ou revestimento. Alternativamente, a umidade pode causar dano ao material ativo durante o armazenamento e afetar negativamente a vida útil de um produto final.
[003] Em relação aos probióticos, a umidade é um fator crucial especialmente na estabilidade e vida útil de muitas bactérias probióticas. Em muitos casos, a exposição destes probióticos a um determinado nível de umidade pode resultar na desativação da bactéria. Como resultado, a gama de produtos alimentícios, especialmente aqueles com um nível elevado de atividade de água, nos quais estas bactérias podem ser incorporados será limitada e a vida útil ser encurtada consideravelmente.
[004] As abordagens comuns destinadas a limitar o dano ao material ativo incluem embalagem das formas de dosagem contendo material ativo sensível à umidade em diferentes elementos de acondicionamento, como microcápsulas, comprimidos, cápsulas e similares. No entanto, especialmente em locais onde o clima é muito úmido, o acondicionamento especial não provê uma proteção completa contra umidade devido à umidade capturada dentro da embalagem supracitada. Outra forma de evitar ou diminuir o dado que pode ser causado pela umidade e reduzir a necessidade de embalagem especial é revestir as formas de dosagem sólida com materiais que apresentam propriedades de barreira à umidade.
[005] Estes materiais apresentam essencialmente uma baixa permeação ao vapor de água (WVP) ou uma baixa taxa de transmissão de vapor de água (WVTR). Estes revestimentos geralmente não afetam as propriedades básicas das formas de dosagem, como o tempo de desintegração e o perfil de liberação do material ativo. Os exemplos de fármacos sensíveis à umidade incluem atorvastatina, ranitidina, temazepam, a maioria das vitaminas, diversos produtos fitoterápicos, ácidos graxos insaturados e bactérias probióticas. Os danos que podem ocorrer devido à umidade podem incluir, por exemplo, degradação do material ativo por hidrólise, destruição das bactérias probióticas ou redução significativa no valor de UFC (unidades de formação de colônia), alterações na aparência da forma de dosagem em armazenamento, alterações nos tempos de desintegração e/ou dissolução da forma de dosagem. Portanto, aplicam-se revestimentos de barreira à umidade para proteger a forma de dosagem destes danos.
[006] Para se obter um revestimento de barreira à umidade geralmente utiliza-se um polímero não hidrossolúvel hidrofóbico. Os polímeros geralmente empregados para esta finalidade são acetato de polivinila, zeína, goma laca, ftalato de acetato de celulose (CAP), EUDRAGIT® E 100, que é um copolímero catiônico com base em metacrilato de dimetilaminoetila, metacrilato de butila e metacrilato de metila com uma razão de 2:1:1, etilcelulose (EC) e similares. No entanto, estes polímeros prolongam a desintegração da forma de dosagem no corpo após a administração e, assim, retardam a liberação dos materiais ativos ou bactérias probióticas. Da mesma forma, o revestimento com estes polímeros requer o envolvimento do uso de solvente orgânico, o qual não é desejável porque tal processo impõem despesas adicionais em relação ao equipamento de ar-condicionado, disposições antiexplosivas e similares para manuseio seguro destes materiais. Outra forma de se obter um revestimento de barreira à umidade é uma combinação de um polímero hidrossolúvel com substâncias lipofílicas. As partículas de substâncias hidrofóbicas ou lipofílicas serão incorporadas no filme hidrossolúvel após o revestimento ou formação de filme. Apesar de a presença de partículas de substâncias lipofílicas no filme poder reduzir a transmissão de vapor de água, não podem cobrir toda a área do filme e, assim, o vapor de água ainda pode penetrar facilmente através dos espaços entre as partículas.
[007] Em geral, os probióticos são microorganismos susceptíveis à umidade e há cepas específicas que são mais vulneráveis que as demais.
[008] BB-12 é uma cepa específica de Bifidobacterium lactis, cultivada por Chris Hansen, e LGG (cepa específica de Lactobacillus rhamnosus (LGG), cultivada por Chris Hansen), são altamente susceptíveis a umidade e especialmente a um ambiente com alta atividade de água (aw). Como resultado, a capacidade de sobrevivência destas bactérias reduz consideravelmente em um período muito curto quando combinadas em gêneros alimentícios com nível relativamente elevado de atividade de água.
[009] Bifidobactérias são bactérias Gram positivas anaeróbicas e em forma de bastonete que normalmente habitam o cólon de seres humanos adultos e infantis (Simon GL and Gorbach SL. Intestinal flora in health and disease. Gastroenterol, 1984; 86: 174-193). Os efeitos benéficos das bifidobactérias, inclusive a melhora da flora intestinal ao evitar a colonização de patógenos, ativação da sistema imunológico, aumento da digestão de proteína e melhoria da diarreia e constipação foram relatados (Ishibashi N and Shimamura S. Bifidobacteria: Research and development in Japan. Food Technol, 1993; 6: 126-136). As Bifidobactérias têm sido consumidas em alimentos fermentados durante décadas e as cepas comerciais atuais incluem Bifidobacterium animalis (B. animalis) ssp. lactis cepa Bf-6, Bifidobacterium lactis (B. lactis) BB-12, B. lactis DR10 (HNO19), Bifidobacterium longum (B. longum) BB536, B. breve Yakult, B. breve SBT-2928, e B. breve C50. Nos Estados Unidos diversas espécies Bifidobacterium foram determinadas como GRAS para uso em alimentos convencionais e fórmulas infantis, inclusive: B. animalis ssp. lactis Bf-6 para uso em alimentos selecionados (GRN 377; 1011 ufc/porção de alimentos convencionais); B. lactis Bb-12 para uso em fórmulas infantis para crianças de 4 meses de idade e maiores (GRN 49; 107-108 ufc/g de fórmula infantil) e B. longum BB536 para uso em alimentos selecionados e fórmulas infantis (GRN 268; 1010 ufc/porção de alimentos convencionais; 1010 ufc/g de fórmula de recém- nascido a termo). O nível mínimo de Bifidobactérias viáveis nos produtos lácteos comerciais para exercer efeitos benéficos sobre a saúde humana é conhecido como sendo aproximadamente 105～107 UFC/mL (Cui JH, Shim JM, Lee JS, et al. Gastric acid resistance of Lactobacilli and Bifidobacteria in commercial drink and lipid yogurts. Kor J Microbiol, 2000; 36: 161-165). Recentemente, tem havido uma motivação crescente na aplicação de Bifidobactérias em alimentos infantis, especialmente fórmulas infantis em pó (PIF) (Duncker, 2013). Isso se deve principalmente à manutenção benéfico da microflora em bebês, especialmente em tratamento antibiótico, o qual prejudica a microflora natural (Morinaga Milk Industry Co. Ltd. Bifidobacteria & Health.Japan: August 1997, pp. 4).
[0010] A Bifidobacterium breve M-16V (B. breve) é uma bactéria anaeróbica e Gram positiva em formato de Y. Este organismo foi depositado com as coleções coordenadas de microorganismos da Bélgica (BCCM) e designado LMG 23729. B. breve foi detectada em fezes de crianças e adultos. B. breve M-16V foi disponibilizada comercialmente pela primeira vez no Japão em 1976. A cultura congelada original de B. breve M-16V é rigidamente controlada para garantir a pureza e estabilidade da cepa. As especificações do produto garantem que B. breve M-16V seja adequada para uso em alimentos, inclusive fórmulas de recém-nascidos a termo, fórmulas de recém-nascidos a termo isentas e alimentos médicos. Os produtos acabados feitos com culturas de B. breve M-16V atendem de forma reproduzível os padrões de composição e estão em conformidade com os limites sobre contaminantes adequados para ingredientes de grau alimentar. B. breve M-16V atende aos padrões de segurança enumerados pelas diretrizes da Food and Agriculture Organization [Organização para agricultura e alimentação] das Nações Unidas/Organização Mundial da Saúde World Health Organization (FAO/WHO) quanto a avaliação de micróbios para uso probiótico em alimentos. Os resultados mostram que B. breve M-16V não é tóxico nem patogênico e, portanto, é seguro para uso em alimentos.
[0011] Bifidobacterium animalis subesp. Lactis (também comercialmente conhecida como BB-12) será aqui denominada "Bifidobacterium" e é uma bactéria negativa para catalase e em formato de bastonete. Foi depositada no banco de cultura celular de Chr. Hansen em 1983. No momento do isolamento, Bifidobacterium foi considerada pertencente às espécies Bifidobacterium bifidum. As técnicas de classificação molecular modernas reclassificaram BB-12 como Bifidobacterium animalis e posteriormente a uma nova espécies de Bifidobacterium lactis. Posteriormente demonstrou-se que a espécie B. lactis não atendia aos critérios de uma espécie e foi então incluída em Bifidobacterium animalis como uma subespécie. Atualmente, BB-12 está classificada, portanto, como Bifidobacterium animalis subesp. lactis. Apesar da alteração no nome ao longo dos anos, a cepa BB-12 não se alterou.
[0012] Bifidobacterium origina-se da coleção de culturas lácteas de Chr. Hansen. É uma cepa que foi especialmente selecionada por Chr. Hansen para a produção de produtos lácteos probióticos. Bifidobacterium tem sido usada nas fórmulas infantis, suplementos dietéticos e produtos lácteos fermentados em todo o mundo. Esta cepa é tecnologicamente bem adequada, expressando atividade de fermentação, aerotolerância elevada, boa estabilidade e tolerância elevada a ácidos e bile, também como produtos liofilizados em suplementos dietéticos. Além disso, a Bifidobacterium não apresenta efeitos adversos no sabor, aparência ou paladar e é capaz de sobreviver no alimento probiótico até o consumo.
[0013] Chr. Hansen é a produtora exclusivamente de Bifidobacterium, que é uma das cepas de bactérias probióticas mais importantes e mais amplamente estudadas de todos os tempos. Esta cepa específica é usada atualmente em diferentes suplementos dietéticos e produtos alimentícios, como fórmulas infantis e produtos lácteos fermentados.
[0014] Lactobacillus rhamnosus é um bastonete curto sem formação de esporo, heterofermentativo facultativo, anaeróbico e Gram positivo que geralmente aparece nas cadeias. Apesar de Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC 53103) ser capaz de sobreviver aos ácidos e bile do estômago e intestino, é considerado por colonizar o trato digestivo e equilibrar a microflora intestinal, e a evidência sugere que Lactobacillus rhamnosus provavelmente seja um habitante temporário e não autóctone. Apesar de tudo, é considerada um probiótico útil para o tratamento de diversas enfermidades, uma vez que atua em diversos níveis. Lactobacillus rhamnosus GG se liga à mucosa intestinal.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0015] A presente invenção será totalmente compreendida a partir da descrição detalhada fornecida aqui abaixo e dos desenhos anexos, fornecidos por meio de ilustração e exemplo apenas e não destinados a limitar o âmbito da invenção.
[0016] A Figura 1 representa um gráfico que demonstra o teor de água de bactérias microencapsuladas em comparação às bactérias não revestidas, mantidas nas mesmas condições em que o teste de estabilidade contínua é realizada, e também medido no decorrer do tempo usando-se o método de um perda em secagem (LOD).
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0017] De acordo com algumas realizações demonstrativas, provê-se aqui uma microcápsula probiótica que compreende: um núcleo compreendendo microorganismos probióticos; e uma camada de revestimento compreendendo uma dispersão sólida híbrida que compreende uma molécula de gordura comestível dispersa uniformemente em um polímero de formação de filme hidrossolúvel e um mediador comestível, em que o dito mediador comestível é octenil-succinato de amido.
[0018] De acordo com algumas realizações demonstrativas, o polímero de formação de filme hidrossolúvel pode ser hidroxipropilamido.
[0019] De acordo com algumas realizações, os microorganismos probióticos podem incluir Bifidobacterium.
[0020] De acordo com algumas realizações, a molécula de gordura comestível pode ser selecionada a partir do grupo que inclui ácido láurico, ácido mirístico, ácido palmítico, palmitato, palmitoleato, hidroxipalmitato, ácido araquídico, ácido oleico, ácido esteárico, estearato de sódio, estearato de cálcio, estearato de magnésio, hidroxiestearato de hidroxioctacosanila, ésteres de oleato de cadeia longa, ésteres de ácidos graxos, alcoóis graxos, dióis graxos esterificados, ácidos graxo hidroxilado, ácido graxo hidrogenado (ácidos graxos saturados ou parcialmente saturados), óleo de soja parcialmente hidrogenado, óleo de algodão parcialmente hidrogenado, alcoóis alifáticos, fosfolipídios, lecitina, fosfatidilcolina, triésteres de ácidos graxos, óleo de coco, óleo de coco hidrogenado, manteiga de cacau; óleo de palma; eutéticos de ácido graxo; mono e diglicerídeos, poloxâmeros, copolímeros em bloco de polietilenoglicol e poliésteres, ou uma combinação destes.
[0021] De acordo com algumas realizações preferidas, a molécula de gordura comestível pode ser manteiga de cacau e/ou ácido esteárico.
[0022] De acordo com algumas realizações, a dispersão sólida híbrida pode ser uma única dispersão sólida híbrida.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[0023] De acordo com algumas realizações demonstrativas, provê-se uma microcápsula (também aqui denominada grânulo) compreendendo um núcleo que compreende probióticos e pelo menos uma camada de revestimento que protege os probióticos da umidade.
[0024] De acordo com algumas realizações demonstrativas, o grânulo pode ser incorporado em gêneros alimentícios, principalmente alimentos líquidos que incluem, por exemplo, alimentos à base de água, fórmulas infantis líquidas, iogurte, produtos lácteos, néctares, sucos de frutas e similares.
[0025] De acordo com algumas realizações demonstrativas, a microcápsula pode ser incorporada preferencialmente em gêneros alimentícios com um nível relativamente elevado de atividade de água.
[0026] De acordo com algumas realizações demonstrativas, os probióticos podem incluir quaisquer microorganismos vivos adequados pretendidos a prover benefícios de saúde quando consumidos, geralmente melhorando ou restabelecendo a flora intestinal, por exemplo, um gênero selecionado a partir de Lactobacillus, Bifidobacterium, Bacillus.
[0027] De acordo com algumas realizações, os probióticos são preferencialmente bactérias Bifidobacterium e/ou LGG.
[0028] De acordo com algumas realizações demonstrativas, o pelo menos um revestimento pode incluir um revestimento de filme de vedação específico que compreende uma dispersão sólida híbrida na qual uma molécula de gordura comestível é dispersa uniformemente em um polímero de formação de filme hidrossolúvel usando-se, por exemplo, um mediador comestível.
[0029] De acordo com algumas realizações demonstrativas, a molécula de gordura pode incluir qualquer ácido graxo comestível, inclusive, por exemplo, ácido láurico, ácido mirístico, ácido palmítico, palmitato, palmitoleato, hidroxipalmitato, ácido araquídico, ácido oleico, ácido esteárico, estearato de sódio, estearato de cálcio, estearato de magnésio, hidroxiestearato de hidroxioctacosanila, ésteres de oleato de cadeia longa, ésteres de ácidos graxos, alcoóis graxos, dióis graxos esterificados, ácidos graxos hidroxilados, ácidos graxos hidrogenados (ácidos graxos saturados ou parcialmente saturados), óleo de soja parcialmente hidrogenado, óleo de algodão parcialmente hidrogenado, alcoóis alifáticos,
fosfolipídios, lecitina, fosfatidilcolina, triésteres de ácidos graxos, óleo de coco, óleo de coco hidrogenado, manteiga de cacau; óleo de palma; eutéticos de ácido graxo; mono e diglicerídeos, poloxâmeros, copolímeros em bloco de polietilenoglicol e poliésteres, ou uma combinação destes.
[0030] De acordo com algumas realizações, a molécula de gordura é preferencialmente manteiga de cacau e/ou ácido esteárico.
[0031] De acordo com algumas realizações demonstrativas, o polímero de formação de filme hidrossolúvel pode incluir, por exemplo, um ou mais dentre hidroxipropilamido (HPS), derivado de acrilamida poli-N- substituído, óxido de polipropileno, polivinilmetileter, produto parcialmente acetilado de álcool polivinílico, metilcelulose (MC), hidroxilpropilcelulose (HPC), metilhidroxietilceluloce (MHEC), hidroxilpropilmetilcelulose (HPMC), hidroxipropiletilcelulose (HPEC), hidroximetilpropilcelulose (HMPC), etilhidroxietilcelulose (EHEC) (Etulose), hidroxietilmetilcelulose (HEMC), hidroximetiletilcelulose (HMEC), propilhidroxietilcelulose (PHEC), hidroxietilcelulose hidrofobicamente modificada (NEXTON), amilose, amilopectina, poli(organofosfazenos), xiloglucano, proteínas derivadas de elastina sintética e quaisquer dos polímeros acima substituídos ainda por um monômero hidrofílico ou hidrofóbico.
[0032] De acordo com algumas realizações, o derivado de acrilamida poli-N-substituído pode incluir um ou mais dentre poli(N-isopropilacrilamida) (PNIPAM), poli-N- acriloilpiperidina, poli(N,N-dietilacrilamida) (PDEAAm), poli(N-vinlicaprolactam) (PVCL), poli[2-(dimetilamino)etil methacrilato] (PDMAEMA) , poli(etileneglicol) (PEG), poli(óxido de etileno) (PEO), polímeros metacrilatos de PEG (PEGMA), poli-N-propilmetacrilamida, poli-N- isopropilacrilamida, poli-N-dietilacrilamida, poli-N- isopropilmetacrilamida, poli-N-ciclopropilacrilamida, poli-N- acriloilpirrolidina, poli-N,N-etilmetilacrilamida, poli-N ciclopropilmetacrilamida, poli-N-etilacrilamida, derivados de metacrilamida poli-N-substituídos, copolímeros compreendendo um derivado de acrilamida N-substituído e um derivado de metacrilamida N-substituído, e um copolímero de N- isopropilacrilamida e ácido acrílico.
[0033] Em algumas realizações demonstrativas, o monômero hidrofílico pode incluir um ou mais dentre N-vinil pirrolidona, vinilpiridina, acrilamida, metacrilamida, N- metilacrilamida, hidroxietilmetacrilato, hidroximetilacrilato, hidroxietilacrilato, hidroximetil- metacrilato, ácido metacrílico e ácido acrílico tendo um grupo ácido, e sais destes ácidos, ácido vinilssulfônico, ácido estirenossulfônico, derivados tendo um grupo básico como N,N-dimetilaminoetilmetacrilato, N,N-dietilaminoetil metacrilato, N,N-dimetilaminopropil-acrilamida, e sais destes derivados.
[0034] Em algumas realizações demonstrativas, o monômero hidrofóbico pode incluir um ou mais dentre etilacrilato, metilmetacrilato e glicidilmetacrilato; derivados de alquimetacrilamida N-substituído como N-n- butilmetacrilamida; cloreto de vinila, acrilonitrila, estireno, acetato de vinila.
[0035] De acordo com algumas realizações, o polímero de formação de filme hidrossolúvel é HPS e/ou HPC.
[0036] De acordo com algumas realizações, o mediador comestível pode incluir, por exemplo, octenil- succinato de amido (SOS).
[0037] De acordo com algumas realizações demonstrativas, o mediador comestível pode reduzir a tensão interfacial entre o polímero de formação de filme hidrossolúvel e a molécula de gordura comestível.
[0038] De acordo com algumas realizações, a redução de tensão superficial pode criar uma forte integração entre o polímero de formação de filme hidrossolúvel e a molécula de gordura comestível, por exemplo, garantindo a formação de um revestimento de filme uniforme, firme e íntegro que circunda o núcleo das microcápsulas.
[0039] De acordo com algumas realizações, o octenil-succinato de amido compreende pelo menos duas porções que possibilitam a aderência surpreendente de um componente hidrofílico e um componente hidrofóbico. Especificamente, em algumas realizações, octenil-succinato de amido pode incluir uma porção hidrofílica que pode se aderir ao polímero de formação de filme hidrossolúvel, e pelo menos uma porção hidrofóbica que se adere à molécula de gordura comestível.
[0040] De acordo com algumas realizações, estas características únicas de octenil-succinato de amido permite a criação de uma única dispersão sólida híbrida, que atua como uma barreira à umidade, evitando a penetração de umidade no núcleo da dita microcápsula.
[0041] De acordo com algumas realizações, a dispersão sólida híbrida provê um revestimento essencialmente uniforme que repele a água de penetrar no núcleo.
[0042] De acordo com algumas realizações, uma única dispersão sólida híbrida pode prover propriedades superiores, por exemplo, em comparação à camada protetora separada, por exemplo, camadas separadas podem ter um potencial mais elevado de penetração de umidade, por exemplo, durante a estratificação e/ou devido a uma cobertura não homogênea de cada camada.
[0043] De acordo com algumas realizações demonstrativas, os probióticos podem estar presentes em uma quantidade que varia entre 10 e 60% p/p do peso da microcápsula.
[0044] De acordo com algumas realizações da presente invenção, o núcleo pode compreender ainda uma carga. Os exemplos de cargas incluem, entre outros, celulose microcristalina, açúcar, como lactose, glicose, galactose, frutose ou sacarose; fosfato dicálcico; alcoóis de açúcar como sorbitol, manitol, mantitol, lactitol, xilitol, isomalte, eritritol e hidrolisados de amido hidrogenado; amido de milho; amido de batata; carboximetilcelulose de sódio, etilcelulose e acetato de celulose, ou uma mistura destes. Em uma realização preferida, a carga é lactose.
[0045] De acordo com algumas realizações demonstrativas, a carga pode estar presente em uma quantidade que varia entre 60 e 70% p/p do peso da microcápsula.
[0046] De acordo com algumas realizações da presente invenção, o núcleo pode compreender ainda um ligante.
[0047] Os exemplos de ligantes incluem, por meio de exemplo não limitante, Povidona (PVP: polivinilpirrolidona), Copovidona (copolímero de vinilpirrolidona e acetato de vinila), álcool polivinílico,
hidroxipropilmetilcelulose (HPMC) de baixo peso molecular, hidroxipropilcelulose (HPC) de baixo peso molecular, hidroximetilcelulose (MC) de baixo peso molecular, carboximetilcelulose de sódio de baixo peso molecular, hidroxietilcelulose de baixo peso molecular, hidroximetilcelulose de baixo peso molecular, acetato de celulose, gelatina, gelatina hidrolisada, óxido de polietileno, acácia, dextrina, maltodextrina, amido e poliacrilatos e polimetacrilatos hidrossolúveis, etilcelulose de baixo peso molecular, ou uma mistura destes. Em uma realização preferida, o ligante é maltodextrina.
[0048] De acordo com algumas realizações demonstrativas, o ligante pode estar presente em uma quantidade que varia entre 10 e 15% p/p do peso da microcápsula.
[0049] De acordo com algumas realizações demonstrativas, a microcápsula pode ser incorporada em gêneros alimentícios que possuem alta atividade de água, por exemplo, sem prejudicar os probióticos contidos na microcápsula.
[0050] A atividade de água, ou aw, é a pressão de vapor parcial de água em uma substância dividida pela pressão de vapor parcial de água em estado padrão. Na área de ciência dos alimentos, o estado padrão é mais frequentemente definido como a pressão de vapor parcial de água pura na mesma temperatura. A água pura destilada possui uma atividade de água de exatamente um.
[0051] De acordo com algumas realizações demonstrativas, provê-se uma formação de microencapsulamento, o que provê às bactérias probióticas susceptíveis maior proteção contra a umidade para dificultar sua desativação e, assim, prolongar sua vida útil. Isso, por sua vez, pode estender a vida útil dos produtos nos quais as bactérias serão incorporadas mesmo em altas temperaturas.
[0052] Este estudo preliminar provê uma comprovação robusta do conceito para este microencapsulamento específico projetado para proteger as bactérias sensíveis a probióticos em um ambiente com umidade relativamente elevada em temperatura ambiente. A viabilidade da tecnologia é comprovada pela exposição das bactérias probióticas microencapsuladas ao ar em temperatura ambiente durante um período prolongado e ao teor de água usando-se um método LOD. Da mesma forma o processo microencapsulamento mostrou-se ser totalmente seguro onde o número inicial das bactérias foi mantido similar ao inicial.
[0053] De acordo com algumas realizações demonstrativas, provê aqui um método para a preparação de uma microcápsula para a proteção de probióticos contra a umidade, em que o método inclui: Preparação de um núcleo de microcápsula compreendendo Bifidobacterium; Revestimento do núcleo com pelo menos um revestimento compreendendo baixos valores de taxa de transmissão de vapor de água (WVTR); em que o pelo menos um revestimento compreende hidroxipropilamido (HPS), manteiga de cacau (CB) e octenil-succinato de amido.
[0054] De acordo com algumas realizações, o método pode incluir a preparação de uma solução 5% p/p de HPS ao adicionar HPS à água destilada aquecida (85 a 90°C); Adição de octenil-succinato de amido à água destilada aquecida e agitação contínua até obter-se uma solução homogênea límpida; e pré-derretimento da manteiga de cacau durante agitação usando um agitador mecânico.
[0055] De acordo com algumas realizações, a manteiga de cacau foi pré-derretida a 50°C.
[0056] De acordo com algumas realizações, a solução resultante de octenil-succinato de amido e CB derretida é homogeneizada em 5% p/p da solução de HPS usando um homogeneizador. C) Métodos: i) Preparação dos filmes: Baseados em hidroxipropilamido (HPS) como o polímero de formação de filme.
[0057] Preparam-se diferentes formulações de filme e foram caracterizadas pela taxa de transmissão de vapor de água (WVTR).
[0058] HPS, manteiga de cacau (CB) e octenil- succinato de amido (também denominado comercialmente como Emfix) foram pesados precisamente para se obter um determinada razão de HPS:CB:octenil-succinato de amido. A Tabela 2 apresenta diferentes formulações de filme que possuem diversas razões de HPS:CB:octenil-succinato de amido, preparadas no presente estudo. Primeiramente, adicionou-se uma quantidade desejada de HPS à água destilada aquecida (85 a 90°C) durante a mistura usando um agitador magnético para compor 5% p/p do polímero. A agitação continuou até obter-se uma solução homogênea límpida (15 a 30 min a 85 a 90°C). Em seguida, adicionou-se uma quantidade desejada de octenil- succinato de amido na água destilada aquecida, a agitação continuou até obter-se uma solução homogênea límpida. A manteiga de cacau foi pré-derretida a 50°C durante a agitação usando um agitador mecânico. A solução resultante de octenil- succinato de amido e CB derretida foi então homogeneizada em 5% p/p de solução de HPS usando um homogeneizador durante 90 segundos, com a velocidade do homogeneizador a 3500 RPM (Homogeneizador HSIANG TAI MACHINERY INDUSTRY, modelo: HG- 300; velocidade máxima – 26000 rpm). A última dispersão foi então resfriada a 32 a 36°C e mantida em agitação durante 20 minutos adicionais para permitir a dissolução completa do polímero.
EXEMPLOS Exemplo 1 – Realizações da composição do núcleo e revestimento - (formação de núcleo baseada na solução)
[0059] Os exemplos tanto do núcleo quanto do revestimento estão listados abaixo na Tabela 1. Tabela 1 – exemplos de núcleo e revestimento Nome do Material Nome do Produto Fabricante Uso para % p/p Probio-Tec – Bifidobacterium 10 - Bifidobacterium Ch. Hans. Bactérias Mistura – 100 20 V1 Pharmatose 100M Lactose 61 - Lactose DFE Pharma Carga Monohidratada, 67 coada MALDEX G190 TEROSE 12 - Maltodextrina Ligante PHARMA SYRAL 13 Hidroxipropilamido - Revestimento - (HPS)
Manteiga de cacau Manteiga de Lubeca Revestimento - (CB) cacau Alemanha Octenil-succinato - Revestimento - de amido (SOS) Exemplo 2 – Método de microencapsulamento de núcleo compreendendo Bifidobacterium
[0060] Em uma realização, o método de microencapsulamento é o seguinte. A) Formulação do Revestimento de Filme.
[0061] Para se determinar a formulação correta que provê a mais alta capacidade de barreira, foram preparadas diversas combinações dos componentes de revestimento e testadas quanto à taxa de transmissão de vapor de água (WVTR) nos laboratórios Versaperm Ltd. Laboratories (Maidenhead, Reino Unido). B) Preparação de Microencapsulamento de Bifidobacterium.
[0062] Primeiramente, o núcleo, que inclui Bifidobacterium, foi preparado usando uma formulação conforme desejada. O núcleo resultante foi então revestido usando aquelas formulações específicas de revestimento que apresentam os menores valores de WVTR. Da mesma forma, planejou-se o processo de microencapsulamento para determinar se a formulação específica de revestimento também é capaz de revestir o núcleo durante o processo apesar de sua capacidade de formar um filme livre, que era necessário para a realização do teste de WVTR. Os resultados desta parte do experimento mostraram que o processo de revestimento pode ocorrer de forma muito suave e rápida, em que ainda o tamanho da partícula e a distribuição de tamanho de partícula podem estar perfeitamente na faixa exigida. Os valores de LOD (Perda de secagem) podem ser controlados e ajustados em uma faixa que possibilite a estabilidade duradoura das bactérias. C) Métodos: i) Preparação de Filmes: Baseados em Hidroxipropilamido (HPS) como o polímero de formação de filme.
[0063] Foram preparadas diferentes formulações de filme e caracterizadas pela taxa de transmissão de vapor de água (WVTR).
[0064] HPS, manteiga de cacau (CB) e octenil- succinato de amido (também comercialmente denominado Emfix) foram pesados precisamente para se obter a razão correta de HPS:CB:octenil-succinato de amido. A Tabela 2 apresenta diferentes formulações de filme que possuem diversas razões de HPS:CB:octenil-succinato de amido, preparadas no presente estudo. Primeiramente, adicionou-se uma quantidade desejada de HPS à água destilada aquecida (85 a 90°C) durante a mistura usando um agitador magnético para compor 5% p/p do polímero. A agitação continuou até obter-se uma solução homogênea límpida (15 a 30 min a 85 a 90°C). Em seguida, adicionou-se uma quantidade desejada de octenil-succinato de amido na água destilada aquecida, a agitação continuou até obter-se uma solução homogênea límpida. A manteiga de cacau foi pré-derretida a 50°C durante a agitação usando um agitador mecânico. A solução resultante de octenil-succinato de amido e a CB derretida foram então homogeneizada em 5% p/p da solução de HPS usando um homogeneizador durante 90 segundos, a velocidade do homogeneizador foi 3500 RPM (Homogeneizador, HSIANG TAI MACHINERY INDUSTRY, modelo: HG-
300, velocidade máxima – 26000 rpm). A última dispersão foi então resfriada a 32 a 36°C e mantida agitada por 20 minutos adicionais para permitir a dissolução completa do polímero.
[0065] A dispersão foi finalmente vertida em uma placa de Petri (100 mm de diâmetro) e desidratada em temperatura ambiente sob fluxo de ar em uma coifa durante pelo menos 96 horas. Tabela 2 HPS:CB:octenil-succinato de amido % (p/p) Formulações octenil- de Filmes HPS CB succinato de amido 100:0:0 100 0 0 70:0:30 70 0 30 60:0:40 60 0 40 80:10:10 80 10 10 70:15:15 70 15 15 70:10:20 70 10 20 70:20:10 70 20 10 65:25:10 65 25 10 60:30:10 60 30 10 50:40:10 50 40 10 50:30:20 50 30 20 50:25:25 50 25 25 50:20:30 50 20 30
[0066] A Tabela 2 mostra algumas realizações de diferentes formulações de filme com base em diferentes razões de HPS:CB:octenil-succinato de amido.
ii) Preparação de Filme: Baseada em HPC (hidroxipropil celulose) como o polímero de formação de filme.
[0067] HPC, manteiga de cacau (CB) e octenil- succinato de amido foram pesados precisamente para se obter uma razão determinada de HPC:CB:octenil-succinato de amido. A Tabela 3 apresenta diferentes formulações de filme que possuem diversas razões de HPC:CB:octenil-succinato de amido preparadas no presente estudo. Primeiramente, adicionou-se quantidade desejada de octenil-succinato de amido à água destilada aquecida, a agitação continuou até obter-se uma solução homogênea límpida. A manteiga de cacau foi pré- derretida a 50°C durante a agitação usando um agitador mecânico. A mistura resultante foi então homogeneizada em 5% p/p de dispersão HPC LF, preparada em água destilada pré- aquecida a 75°C, como descrito acima, usando um homogeneizador. A última dispersão foi então resfriada abaixo da LCST do polímero e mantida agitada durante 30 minutos adicionais para permitir a dissolução completa do polímero. A dispersão foi finalmente vertida em uma placa de Petri (100 mm de diâmetro) e desidratada em temperatura ambiente sob fluxo de ar em uma coifa durante pelo menos 96 horas. Tabela 3 HPC:CB:octenil-succinato de amido % (p/p) Formulações octenil- de Filmes HPC CB succinato de amido 100:0:0 100 0 0 70:15:15 70 15 15
70:10:20 70 10 20 70:20:10 70 20 10 70:5:25 70 5 25 60:20:20 60 20 20 50:40:10 50 40 10 50:30:20 50 30 20 50:25:25 50 25 25 50:20:30 50 20 30
[0068] A Tabela 3 mostra algumas realizações de diferentes formulações de filme com base em diferentes razões de HPC: CB: octenil-succinato de amido iii) Testes de taxa de transmissão de vapor de água (WVTR).
[0069] O conceito deste teste é baseado na medição da quantidade de vapor de água transmitido através da área unitária da amostra de filme teste por tempo de unidade em condições especificadas. A taxa de transmissão de vapor de água é expressão em gramas por metro quadrado, 24 horas [g/ (m2⋅24 h)]. Um medidor digital Versaperm MkV WVTR (Versaperm Ltd., Maidenhead, Reino Unido) com área de medição de 10 cm², equipado com um sensor de detecção eletrolítica foi usado para medir a WVTR de diferentes filmes. O método baseou-se na ISO 15106-3:2003.
[0070] Teste 1 – O teste foi realizado a 40°C, 100% de umidade durante 24 horas.
[0071] Teste 2 – O teste foi realizado em Temperatura Ambiente (23 a 25°C), 100% de umidade durante 24 horas. iv) Preparação de filmes isentos de dispersão sólida híbrida para o processo de microencapsulamento.
[0072] HPS, manteiga de cacau (CB) e octenil- succinato de amido (octenil-succinato de amido) foram pesados precisamente para se obter uma razão determinada de HPS:CB:octenil-succinato de amido. A Tabela 4 apresenta diferentes formulações de filmes que possuem diversas razões de HPS:CB:octenil-succinato de amido preparadas no presente estudo. Primeiramente, adicionou-se uma quantidade desejada de HPS à água destilada pré-aquecida (85 a 90°C) durante a mistura usando um agitador magnético para compor 5% p/p do polímero. A agitação continuou até obter-se uma solução homogênea límpida (15 a 30 min a 85 a 90°C).
[0073] Em seguida, adicionou-se a quantidade desejada de octenil-succinato de amido à água destilada aquecida, a agitação continuou até obter-se uma solução homogênea límpida. A manteiga de cacau foi pré-derretida a 50°C durante a agitação usando um agitador mecânico. A solução resultante de octenil-succinato de amido e CB derretida foi então homogeneizada em 5% p/p da solução de HPS usando um homogeneizador durante 90 segundos, a uma velocidade do homogeneizador de 3500 RPM (Homogeneizador Hsiang Tai Machinery Industry, modelo: HG-300, velocidade máxima – 26000 rpm). A dispersão resultante foi então resfriada entre 32 e 36°C e mantida agitada durante 20 minutos adicionais para permitir a dissolução completa do polímero. Tabela 4 – Diferentes formulações de filme com base em diferentes razões de HPS:CB:octenil-succinato de amido Formulações HPC: CB: octenil-succinato de de Soluções amido % (p/p)
octenil- HPS CB succinato de amido 55:35:10 T1 55 35 10 65:25:10 T1 65 25 10 55:35:10 T2 55 35 10 65:25:10 T2 65 25 10
[0074] T1 – 20% p/p de Bactérias da microcápsula final. T2 – 10% p/p de Bactérias microcápsula final. v) Processo de Preparação de Microencapsulamento
[0075] O processo de microencapsulamento foi iniciado ao cria o núcleo seguido pelo processo de revestimento: 1) Preparação do Núcleo
[0076] O núcleo foi preparado por meio de um método de granulação úmida. Uma solução aquosa do ligante (por exemplo, maltodextrina) foi pulverizada sobre a mistura em pó que consiste nas bactérias e carga para consolidar as partículas para formar aglomerados. Os componentes usados para a preparação das microcápsulas estão resumidos na Tabela
5. Tabela 5. A composição das microcápsulas, de acordo com uma realização da presente invenção % p/p da Nome do Nome do Material Uso microcápsula Produto final Bifidobacteria Probio-Tec – lactis Bifidobacterium Bactérias 10 - 20 (Bifidobacterium) Mistura – 100
V1 Pharmatose 100M Lactose Lactose Carga 61 - 67 Monohidratada (peneirada) MALDEX G190 Maltodextrina Ligante 12 - 13
PHARMA Hidroxipropilamido EMDEN ESH 15 Revestimento 10 - 11 (HPS) manteiga de Manteiga de cacau Revestimento 4 - 5 cacau octenil- succinato de Octenil-succinato amido Revestimento 1,8 de amido (Emfix X02 , K02) 2) Processo de Revestimento
[0077] O revestimento ocorrer por meio da pulverização da solução do polímero diretamente sobre o núcleo resultante do estágio anterior.
[0078] Ambos os processos de preparação e revestimento de núcleo foram realizados em Innojet Ventilus
2.5 (Romaco-Huttlin, Esteinen- Alemanha).
[0079] A espessura das camadas foi expressa pela % de ganho de peso (WG), obtida mediante o processo de revestimento em relação ao peso do substrato inicial antes do processo de revestimento, de acordo com a seguintes equação: %WG =
[0080] Em que Wd e W0 são, respectivamente, o peso do substrato após e antes do processo de revestimento e WG é o ganho de peso.
Tabela 6 – Parâmetros para Granulação de Bifidobacterium Parâmetros do Processo de Dados Revestimento Temperatura de Entrada (°C) 40 - 42 Taxa de Fluxo de Ar 32 - 40 (m3/hora) Taxa de Pulverização (g/min) 3,8 – 4,2 Temperatura do Produto (0C) 38 - 40 Pressão de Pulverização 1,85 – 1,9 Superior (bar) Pressão de AR de Suporte 0,3 (bar) Tabela 7. Parâmetros usados para Revestimento dos Grânulos de Bifidobacterium Parâmetros do Processo de Revestimento Dado Temperatura de Entrada 40 - 45 (0C) Taxa de Fluxo de Ar 38 - 48 (m3/hora) Taxa de Pulverização 1,8 – 2,2 (g/min) Temperatura do Produto 40 (°C) Pressão de Pulverização 2,45 –
Superior (bar) 2,5 vi) Teste de Perda na Secagem (LOD)
[0081] Durante o processo de revestimento, em determinados momentos (todo 4% de ganho de peso), 2 g da microcápsula foram coletados para teste de LOD (dispositivo de LOD (MB – 50 – 1 – 250, MRC)). vii) Teste de Estabilidade. 1) Condições Ambientes:
[0082] Exposição de Bifidobacterium não revestida e Bifidobacterium microencapsulada às condições ambientes (temperatura e umidade variáveis) e amostragem para teste de microbiologia a cada semana durante o período de 6 montagens. 2) Atividade de Água de 0,795 Aw:
[0083] Exposição de Bifidobacterium não revestido e Bifidobacterium microencapsulado a condições de 0,795 Aw (usando o dessecador com 0,795 aw de solução no fundo do dessecador) e amostragem para teste de microbiologia a cada 2 dias durante 2 semanas. 3) Atividade de Água de 0,612 Aw:
[0084] Exposição de Bifidobacterium não revestido e Bifidobacterium microencapsulado a condições de 0,612 Aw (usando o dessecador com 0,795 aw de solução no fundo do dessecador) e amostragem para teste de microbiologia a cada 2 dias durante algumas semanas. 4) Testes de taxa de transmissão de vapor de água (WVTR)
[0085] O conceito deste teste é baseado na medição da quantidade de vapor de água transmitido através da área de unidade da amostra de filme do teste por tempo de unidade em condições especificadas.
A taxa de transmissão de vapor de água foi expressa em gramas por metro quadrado, 24 h [g/(m2,24 h)]. Um medidor digital Versaperm MkV Digital WVTR (Versaperm Ltd.
Maidenhead, Reino Unido) com área de medição de 10 cm2, equipado com um sensor de detecção eletrolítica foi usado para medir a WVTR de diferentes filmes.
O teste foi realizado em temperatura ambiente, 100% de umidade durante 24 h.
O método foi baseado na ISO 15106e3:2003. Resumidamente, a amostra teste foi inserida entre duas câmaras diferentes: uma câmara seca e uma câmara de umidade controlada.
O lado seco da amostra é varrido por um fluxo de gás de arraste seco, e a permeação de vapor de água através da amostra da câmara de umidade controlada é realizada pelo gás de arraste em uma célula eletrolítica.
Esta célula contém dois eletrodos de fio espiral, que absorve quantitativamente o vapor de água, realizado pelo gás de arraste, e o decompõe eletroliticamente em hidrogênio e oxigênio por uma tensão de corrente contínua aplicada aos eletrodos.
A massa da umidade que permeia através da amostra e é decomposta por tempo de unidade é calculada a partir da corrente eletrolítica necessária. viii) Resultados do Teste de WVTR. 11 98358-8312 Tabela 8.1. Resultados de WVTR de diferentes formulações de filme com base em diferentes razões de HPS:CB:octenil-succinato de amido Fórmula Tipo de WVTR (g/m2*dia) HPS manteiga octenil- octenil- Temperatura 400C de cacau succinato succinato Ambiente de amido de amido 60 - 40 K02 - 407 70 - 30 K02 - 348
80 20 - K02 - Desintegrou 70 10 20 K02 - 363 50 25 25 K02 - 363 50 20 30 K02 - Incapaz 50 30 20 K02 - 327 50 40 10 K02 - 273 70 20 10 X02 - 298 70 15 15 X02 - 328 65 25 10 X02 - 275 60 20 20 X02 212 - 50 25 25 X02 - Incapaz 50 20 30 X02 - 268 50 30 20 X02 - 275 50 40 10 X02 - 337 Tabela 8.2. Resultados de WVTR de diferentes formulações de filme com base em diferentes razões de HPC-L (hidroxipropilcelulose):CB:octenil-succinato de amido Fórmula Tipo de WVTR (g/m2*dia) HPC manteiga octenil- octenil- Temperatura 400C de cacau succinato succinato Ambiente de amido de amido 70 10 20 K02 - 247 70 25 5 K02 - 280 50 25 25 K02 180 - 50 20 30 K02 148 - 50 30 20 K02 134 50 60 20 20 K02 478 60 70 20 10 X02 129 330 70 25 5 X02 - 256
70 15 15 X02 145 - 70 5 25 X02 224 - 50 25 25 X02 141 - 50 20 30 X02 201 - 60 20 20 X02 194 - xi) Resultados do Teste de Estabilidade – 1) Estabilidade durante o processo de produção (processo de microencapsulamento baseado em uma solução aquosa do ligante durante a formulação de núcleo de granulação)
[0086] Os resultados do teste de microbiologia mostraram que o número de bactérias, apesar de sua alta sensibilidade, não é reduzido durante o processo de microencapsulamento e permanece igual ao do início do processo (início do processo com 1,5 *1011 UFC/g de Bifidobacterium e finaliza com 1,55 *1011 UFC/g de Bifidobacterium) – em 20% de ganho de peso (Uma conquista muito significativa).
[0087] A Tabela 9 apresenta os resultados de estabilidade para LGG e outra cepa de Lactobacillus rhamnosus durante o processo de microencapsulamento (com base em uma solução aquosa do ligante durante o processo de formação de núcleo). Tabela 9. A estabilidade (capacidade de sobrevivência) de LGG durante seu processo de microencapsulamento Resultados (UFC/g de Bactéria) Estágio do LGG (teor de Lactobacillus rhamnosus (teor de bactéria Processo bactéria de de 10% p/p)
10% p/p)
20% 20% 15% 15% Revestimento: Revestimento: Revestimento: Revestimento: (65:25:10)* (55:35:10)* (55:35:10)* (55:35:10)* (10% do teor (10% do teor (10% do teor (10% do teor de Bactéria) de Bactéria) de Bactéria) de Bactéria) Bactéria não 1,35*1011 2*1011 2*1011 - revestida Granulado 1,45*1011 2,3*1010 1,7*1010 3,1*1010 (núcleo) Ganho de peso obtido durante o processo de revestimento 2% 1,1*1011 1,5*1010 1,2*1011 2,7*1010 4% 1,16*1011 5*1010 1*1011 1,6*1010 6% 5,55*1010 1,1*1011 5,5*1010 1,3*1010 8% 1,15*1011 8,3*1010 1,7*1010 1,7*1010 10% 8,2*1010 4*1010 1,6*1010 3*1010 12% 3*1010 1*1011 1,6*1010 1,9*1010 14% 1,15*1011 9,7*1010 2,5*1010 1,6*1010 [15%] [15%] 16% 7,9*1010 4*1010 2,8*1010 1,4*1010 18% 3,1*1010 5,2*1010 - - 20% 2,3*1010 4,5*1010 - - *Fórmula de Revestimento: HPS:manteiga de cacau:octenil-succinato de amido X02 2) Estabilidade contínua ao longo do tempo
[0088] As partículas de bactérias microencapsuladas naturais [puras (não acondicionadas)] foram expostas ao ar em temperatura ambiente (20 a 22°C, ≈ 35 a 45% UR) e as amostras foram coletadas em diferente timepoints para o teste de enumeração para se determinar UFC/g das bactérias. Os resultados foram comparados à Bifidobacterium pura natural (bactérias não microencapsuladas ou desprotegidas) que foi mantida nas mesmas condições. Os resultados estão resumidos na Tabela 10.1 para até 180 dias.
[0089] Com base nos resultados, pode-se observar claramente que Bifidobacterium natural (bactéria não revestida) perde 4-5 registros após apenas três semanas e permanece quase inalterado ao longo do tempo. É digno de nota que Bifidobacterium em pó, como resultado da fixação das bactérias entre si, cria aparentemente uma camada rígida e dura na superfície ao longo do tempo, o que é manifestado por uma alteração dramática na coloração (de um esbranquiçado para amarelado e, posteriormente, para um marrom claro) e na sensação ao toque. Acredita-se que essa nova camada seja responsável pela proteção da bactéria e pela diminuição da redução de registro ao longo do tempo. Este ponto pode ser a principal razão para a estabilização de registro quando este permanece inalterado após aproximadamente três semanas (10^6).
[0090] Também pode-se observar que, para alguma formulação específica de microencapsulamento, as bactérias são totalmente estabilizadas onde observou-se apenas uma perda de registro após aproximadamente 13 semanas. Este fato indica que a formulação de microencapsulamento não provê a proteção necessária contra umidade ao longo do tempo.
[0091] A Tabela 10.1 resume os resultados dos testes de enumeração realizados na bactéria microencapsulada usando diferentes formulações e na Bifidobacterium lactis pura (Bifidobacterium) mantida desnuda (não acondicionada) em temperatura ambiente e ≈35 a 45% de UR por diferentes tempos de duração.
Resultados (UFC/g de BB12)
Tipo da Amostra 1 - 10 – 30 - 40 - 60 - 80 - 90 - 100 - 110 - 120 - 130 - 140 - 150 - 160 - 170 - 180- 20 - 30 50 - 60 70 - 80 Fresco 10 20 40 50 70 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 Dias Dias Dias Dias Dias Dias Dias Dias Dias Dias Dias Dias Dias Dias Dias Dias Dias Dias Dias (95 (102 (27 d) (46 d) (55 d) (62 (83 (124 (134 (76 d) d) d) (115d) BB12 1,5 *1011 WBD WBD 3,55 WBD 2,3* 2,5* d) d) d) d) 7*106 3,6* 3,6* 4,5*106 *107 108 107 6*106 5*106 2,6*106 3,1*106 106 106
HPS: manteiga de cacau:
(62 (90 d) d) 2,7* (83 7,5* (104 (27 d) 1010 106 1,25 (46 d) (55 d) (76 d) d) d) (50:20:30) WBD WBD 1,15 WBD *1011 1*108 2*107 3*107 1,8* (97 6,6* *109 (69 106 d) 106 d) 3,8* 3*109 107
(92 (20 d) (50 d) (71 d) d) 1,0* 1,6* 1,5* 1,0* 1011 (36 1010 (64 1010 (85 (108 (115 (122 (130 (1 d) (43 d) 1010 (55:35:10) 1.45 d) d) d) d) d) d) d) 1,35 WBD ~ 10% revestimento *1011 8,65* 2,25* 1,0* (99 7,7* 7* 6* 7* *1011 5*1010 (57 d) (78 d) (29 d) 1010 1010 1010 d) 109 109 109 109 1,1* 1,1* 3,5*1010 5,5* 1010 1010 109
(35 (84 (91 (100 (114 (121 (130 (13 (63 (70 d) 3,2* (21 d) d) (42 d) (56 d) d) d) d) d) d) d) HPS + 10% Ta* WBD d) d) 1,5* 1010 2*1010 5,7* 3*109 8*109 2,5* 5,5* 7,5* 2,5* 7,3* 1,2* 3*1010 2*1010 108 1010 108 108 109 109 108 108
(107 (130 d) d) 9,1* 1,3* 108 108 (77 d) (28 d) (49 d) 4*
4.5*1010 6*109 108 (80 (101 (122 (1 d) (22 d) (50 d) d) d) d) 6,4* (15 2,5*1010 3*1010 4,8* (94 9* (115 5,2* (136 1010 (36 (64 (55:35:10) 10% d) (43 d) (71 d) 1010 d) 109 d) 109 d) 8*1010 d) d) Ta** ~ 8,2*109 5*1010 (87 2,3* (108 7,5* (129 2* (8 d) 5*1010 2*1010 5*1010 (29 d) (57 d) d) 1010 d) 109 d) 109 1,2* 8,4*1010 1,8*1010 4* 8,5* 4,8* 1011 1010 109 109 (60 (90 (111 (132 (1d) (32 d) d) d) d) 8,2* d) (16 8,2* (83 8* (104 2,5* (125 1,3* (146 (153 1010 1*1011 (46 d) (53 d) (76 d) (65:25:10) 1.1* d) (23 d) 1010 d) 1010 d) 1010 d) 1010 d) d) 7,3* 8,2* 1,4* 1011 6,4* 9*1010 (39 (67 6,5* (97 2* (118 1,45* (139 1,2* 1,1* (8d) 1010 1010 1011 1010 d) d) 1010 d) 1010 d) 1010 d) 1010 1010 1,1* 8,2* 5,5* 7* 1,5* 1,25* 1011 1010 1010 1010 1010 1010 (92 (120 (141 (41 d) (183d) (20 d) (71 d) d) d) d) 6,8* 1,9* 1*1011 (62 5*1010 5,5* (106 (113 1,2* (134 3,65* (6d) (13 (34 1010 (55 d) (85 (162d) (176d) 109 (60:30:10) d) 1010 d) d) 1010 d) 109 2*1011 2,5* d) d) 3,6* d) - 1,1* 3* 3,5* (99 1,65* 1,4* (127 4* (148 1011 3*1010 1*1011 (48 d) 1010 1*1011 1010 109 (190d) (27 d) 1010 (78 d) d) 1010 1010 d) 109 d) 9,2* 2,2* 1,4*1011 3,8*1010 2* 4* 1,2* 1010 109 1010 109 1010 (34 (64 (85 (92 (106 (113 (120 (134 (141 (155 (13 (41 d) (55 d) (169d) (176d) (183d) (55:35:10) (K02) 1,75* (6 d) (20 d) d) d) (71 d) d) d) d) d) d) d) d) d) d) 1,1* 3* 4,5* 2,6* 2,5* – 10% BB12 1011 8*1010 1,5*1011 6,8* 9,1* 9,5*1010 4,5* 2* 1,4* 1,0* 4,5* 1,3* 1,6* 1,7* 6*1010 1011 1010 109 109 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 109 1010 1010 1010
(99 (127 (48 d) (27 d) (78 d) d) d) 5,5* 1,3*1011 3,6*1010 2,2* 1,25* 1010 1010 1010 (80 (101 (122 (171 (22 d) (50 d) d) d) d) d) 1,36* 2,7* (15 (36 (66 2* (94 1,7* (115 6* (136 (150 (164 3* (185 (8 d) 1011 (43 d) 1010 (73 d)
8.5* d) d) d) 1011 d) 1010 d) 109 d) d) d) 109 d) (70:15:15) 1,2* 6,8* 1,2* - 1010 1,5* 2,5* 4,5* (87 1,8* (108 1,4* (129 2,25* 2,0* 9,1* (178 6* 1011 (29 d) 1010 (59 d) 1011 1011 1011 1010 d) 1010 d) 1010 d) 1010 1010 109 d) 109 6,3* 1* 2,3* 1,3* 1,6* 3,5* 1010 1011 1010 1010 1010 109 (90 (111 (40 d) (70 d) (160d) (181d) d) d) 1,3* 3* 1,2* 1,1* 1,15* (104 2*1011 (19 (33 1011 (63 1011 (83 (125 (139 1011 1011 (3d) (26 d) (56 d) 1011 d) (153d) (174d) (195d) (55:35:10) – 20% 2,9* d) d) d) d) d) d) 3,2* 3,2* 3,3* 1,7* (118 1,3* 1,4* 3,2* Revestimento 1011 1,6* 3,3* 2,7* 1,6* (97 1,6* 1,3* 1011 1011 (49 d) 1011 (77 d) 1011 d) 1011 (167d) 1011 (188d) 1010 1011 1011 1011 1011 d) 1011 1011 2,4* 3* 1,5* 1,4* 9* 1,5* 1011 1010 1011 1011 1010 1011 (92 (20 d) (50 d) (71 d) (141d) (162d) d) 9,3* 2,3* 3* 2,2* 1,5* (36 (64 (85 2,8* (106 (113 (127 (55:35:10) – (13d) 1010 (43 d) 1011 1010 1010 (155d) 1010 (176d) (183d)
1.1* (4d) d) d) d) 1010 d) d) d) (65:25:10) – 20% 2,8 6* 1,5* 1,2* 9* 1011 1*1011 1,35* 1,3* 3* (99 2,4* 2,6* 2,6* Revestimento*** *109 (27 d) 1010 (57 d) (78 d) (148d) 1010 (169d) 1010 109 1011 1011 1010 d) 1010 1010 1010 5,5* 1,9* 2,9* 2,7* 1,5* 2,9* 1010 1011 1010 1010 1010 1010 (30 (122 (150 (2 d) (52 d) d) d) d) 6,9* 2,7* (16 4* (66 (80 (94 (108 (115 1,5* (136 (143 1,3* 1010 (23 d) (45 d) 1010 (73 d) (55:35:10) – 22% 8,2* d) 1010 d) d) d) d) d) 1010 d) d) 1010 3,2* 1* 2,9* Revestimento 1010 1,2* (37 2,5* 2,8* 2,5* 2,45* 2,6* (129 1,1* 1,4* (9 d) 1011 1011 (59 d) 1010 1011 d) 1010 1010 1010 1010 1010 d) 1010 1010 7,75* 2,8* 4* 1,9* 1010 1010 1010 1010
(30 (2 d) (51 d) d) 8* 3,0* (16 3,3* (65 (86 (100 (128 (135 (143 (65:25:10) – K02 1010 (23 d) (44 d) 1010 (72 d) (114 7,3* d) 1010 d) d) d) d) d) d) – 20% 4* 2,0* 2,3* - d) 1010 3* (37 2,1* 2,0* 2,45* 1,6* 1,8* 1,4* Revestimento (9 d) 1010 1010 (58 d) 1010 2,3* 1011 d) 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1,4* 2,8* 1010 2,5* 1011 1010 1010 (1 d) (72 d) (100d) 4,5* (15 (58 6,8* (86 2,3* (23 d) (30d) (37d) (44 d) (93d) (113d) 25% HPS + 10% 5,5* 108 d) d) 109 d) 109 1,3* 2,1* 1,8* 1,1* 3* 1,8* Ta* 108 (8 d) 1,2* 2,1* (79 d) 2,6* (107d) 109 109 109 1010 109 109 1,2* 109 109 3* 109 3,8* 109 109 109 (11 (31 (52 d) d) d) 2,1 1,1* 3,3 (66 (55:35:10) – HPC (2 d) (45 d) 1010 (73 d) 1011 1010 d) LF – 20% 1,45*1011 1,45* - 2,7 1,4 (17 (38 1,8 Revestimento**** 1011 1010 (59 d) 1010 d) d) 1010 2,1 1,0* 3,1 1010 1011 1010
* A Fórmula de Solução de Revestimento: apenas HPS e ácido tânico (Ta) **O revestimento continha adicionalmente Ta *** Revestimento de camada dupla, 55:35:10 como o revestimento de camada interna e 65:25:10 como a camada de revestimento externo **** HPC LF foi usado em vez de HPS Tabela 10.2 – O efeito do tipo de octenil-succinato de amido sobre a estabilidade do Bifidobacterium lactis (Bifidobacterium) microencapsulado mantido puro (não acondicionado) em temperatura ambiente e ≈35 a 45% de UR por tempos de duração diferentes em comparação à bactéria simples (não microencapsulada). Resultados (UFC/g BB12) Amostra/ 30 - 60 - 70 - 80 - 110 - 150 - Fórmula 1 - 10 10 – 20 20 - 30 40 - 50 50 - 60 90 - 100 100 - 110 120 - 130 - 140 - Fresco 40 70 80 90 120 160 Dias Dias Dias Dias Dias Dias Dias 130 Dias 140 Dias 150 Dias Dias Dias Dias Dias Dias Dias (46 d) 1,5 (27 d) (55 d) (62 d) (76 d) (83 d) (95 d) (102 d) (115d) (124 d) (134 d) BB12 - - - 2,3* WBD WBD *1011 3,55 *107 2,5*107 6*106 7*106 5*106 3,6*106 3,6*106 4,5*106 2,6*106 3,1*106 108 (71 d) (92 d) (20 d) (50 d) 1,5* 1,0* 1,0*1011 1,6*1010 1010 1010 (1 d) (36 d) (64 d) (85 d) (108 d) (115 d) (122 d) (130 d) (55:35:10)* – 1,45 (43 d) 1,35 - 8,65* 2,25* 1,0* 7,7* 7* 6* 7* WBD WBD X02 *1011 ~ 5*1010 *1011 1010 1010 1010 109 109 109 109 (78 d) (99 d) (29 d) (57 d) 1,1* 5,5* 3,5*1010 1,1*1010 1010 109 (71 d) (92 d) (120d) 9,5* 2* 4,5* (155 (34 d) (41 d) (55 d) (64 d) (85 d) (106 d) (113 d) (134 d) (141 d) (55:35:10) – 1,75* (6 d) (13 d) (20 d) 1010 1010 109 d) 6,8* 1,1* 3* 9,1* 4,5* 1,4* 1,0* 1,3* 1,6* K02 1011 8*1010 6*1010 1,5*1011 (78 d) (99 d) (127 d) 1,7* 1010 1011 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010
3.6* 2.2* 1.25* 1010 1010 1010 1010 * A Fórmula de Solução de Revestimento: HPS:manteiga de cacau:SOS (octenil-succinato de amido)
Tabela 10.2 – Os resultados dos testes de enumeração realizados tanto na bactéria microencapsulada quanto na LGG pura mantida sem proteção (não acondicionada) em temperatura ambiente e ≈35 a 45% de UR por duração de tempos diferentes.
Tipo de Tabela 10.2 - Resultados (UFC/g de Bactéria) Amostra Fresca 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 LGG não 1,35 1,2 1,5 5,5 1 1,1 9,5 3,2 1,2 1,2 4,5 2,4 1,3 0 acondicionada *1011 *1011 *1010 *109 *109 *109 *108 *108 *106 *106 *107 *104 *106
(65:25:10) – 2,3 1,2 3,2 4 2,2 2,8 2,2 2,1 1,4 8 8,6 1,3 3 1,3 20% *1010 *1010 *1010 *1010 *1010 *1010 *1010 *1010 *1010 *108 *108 *109 *109 *109
Tabela 10.3- Estabilidade de BB12 e BB12 Microencapsulada durante o tempo em AW de 0,612. Resultados (UFC/g de BB12) Tipo da 11 14 18 21 25 Amostra Fresca 2 dias 4 dias 7 dias 9 dias 16 dias dias dias dias dias dias 1,5 BB12 3,2*1010 3,6*1010 2*108 4*107 4,7*105 1,3*104 1,55*105 5,4*102 2*105 - *1011 1,45 (55:35:10) 7,3*1010 5,6*1010 1,5*1010 1*1010 4,8*108 5,5*108 7*106 7,7*106 1*105 - *1011
(65:25:10) 1,1*1011 1,1*1011 8,6*1010 1,4*1010 4,8*109 9*108 1*108 1,1*107 1,6*107 5,5*105 -
(55:35:10) – 20% 3,2*1011 1,1*1011 2,2*1011 1,9*1011 5*1010 2*1010 2*109 2*108 2*107 1,2*107 2,2*107 Revestimento (65:25:10) – 7,3* K02 – 20% 9*1010 5*1010 2,7*1010 1,1*1010 2,5*109 2,5*108 2,4*107 7*106 1,4*105 9*106 1010 Revestimento Tabela 10.4 – Estabilidade de BB12 e BB12 Microencapsulado durante o tempo em AW de 0,795 Resultados (UFC/g de BB12) Tipo de 11 14 Amostra Fresco 1 dias 2 dias 3 dias 4 dias 7 dias 8 dias 9 dias 10 dias dias dias 1,5 1,3*1011 1,1*1011 1*1011 9,5*109 7,3*107 3*106 8,2*107 3*104 6,8*104 6,8*103 *1011 BB12 1,5 5,6*1010 2,7*109 6*104 2,5*105 2*104 - 5,5*104 *1011 1,25 (50:20:30) 1,6*1011 9,55*1010 8,2*1010 4,5*109 1,4*108 1,2*107 5,9*105 2,5*105 5,4*103 4,1*104 *1011 (55:35:10) 1,45 2,9*1011 1,3*1011 8,4*1010 4,1*1010 4*109 1*109 1,4*108 3,4*106 1*105 1,3*103
*1011 HPS + 10% Ta 3,2*1010 3,2*1010 1,1*1010 3,4*1010 4,3*108 4*107 2,3*106 1,6*104 9,1*103 0 0 (55:35:10) 8*1010 1,2*1011 7*1010 6,4*1010 5,9*109 7,75*108 1,2*106 1,2*106 5*104 0 0 10% Ta
(65:25:10) 1,1*1011 1,6*1011 1,2*1011 9,3*1010 1,4*1010 8,2*108 3*108 3,6*107 1*106 7,7*104 3,4*104
(60:30:10) 2*1011 1,15*1011 1,2*1011 8,2*1010 2*1010 2,5*1011 2,8*108 2,1*108 1,4*107 2,8*105 9*103
(70:15:15) 8,5*1010 1,6*1011 1,1*1011 3*1010 1,45*1010 2,2*109 2*108 2*108 1,4*107 1*106 1,8*105 (55:35:10) – 20% 3,2*1011 2,25*1011 1,4*1011 2,9*1011 2,45*1011 1,1*1010 2,3*109 1,6*109 4*107 1,8*106 6,3*102 Revestimento (55:35:10) – (65:25:10) – 1,1*1011 2,3*1011 9,1*1010 1,5*1011 2,3*1010 2,8*109 1,3*109 1,9*106 1,65*108 2,7*108 0 20% Revestimento
(55:35:10) 1,75* 1,5* 5*1010 3*109 1,3*109 6,4*107 6,4*106 1,4*107 6,4*104 5*104 2*106 (K02) 1011 1011
(55:35:10) – 8,2* 1,1* 22% 2,3*1010 5*109 5*109 2,3*108 1,1*108 1,1*107 2*106 1,2*104 1*105 1010 1011 Revestimento
4) Medição do teor de água ao longo do tempo
[0092] O teor de água da bactéria microencapsulada com uma determinada formulação em comparação à bactéria pura, mantida nas mesmas condições em que o teste de estabilidade contínua é realizado, também foi medido ao longo do tempo usando um método de perda em secagem (LOD). Observe que qualquer aumento no teor de água pode indicar ocorrência de absorção de água pelo pó e, assim, uma capacidade de barreira insuficiente. Em contraste, nenhuma alteração no valor de LOD pode significar uma boa proteção contra a umidade.
[0093] Os resultados do teor de água estão resumidos na Tabela 11 e graficamente ilustrados na Figura 1 para BB-12. Tabela 11.1: o teor de água medido (captação de umidade) em Bifidobacterium microencapsulado mantido em temperatura ambiente, ≈ 35 a 45% de UR ao longo do tempo em comparação a Bifidobacterium natural. Tabela 11.1 - LOD (%) Descrição da Sema- Sema- 0 Amostra 24 h 96 h 120 h 144 h 168 h 192 h na na h 2 3 4, Bifidobacterium 9,0 10,1 10,2 10,0 10,1 9,5 8,0 9,2 2 Bifidobacterium 4, microencapsulado 5,9 5,4 5,3 6,1 6,1 5,9 5,6 5,8 8 Lote no 30082017
[0094] Faz-se referência à Figura 1, que representa o teor de água da bactéria microencapsulada com uma determinada formulação em comparação à bactéria pura, mantida nas mesmas condições de realização do teste de estabilidade contínua, também foi medida ao longo do tempo usando-se um método de perda em secagem (LOD).
[0095] Como mostrado na Figura 1, a formulação de microencapsulamento provê uma barreira adequada contra absorção de umidade e, consequentemente, nenhum aumento significativo no teor de água de Bifidobacterium microencapsulado poderia ser observado ao longo do tempo. Em contraste, a bactéria desprotegida após exposição de 24 horas ao ar absorveu aproximadamente 114% de umidade, que permanece quase constante ao longo do tempo.
[0096] O mesmo experimento foi realizado em LGG desprotegido (LGG natural) e microencapsulado e os resultados são demonstrados na Tabela 11.2. Tabela 11.2 – O teor de água (captação e umidade) medido em LGG microencapsulado mantido em temperatura ambiente, ≈ 35 a 45% de UR ao longo do tempo em comparação a LGG natural. LOD (%) Tipo da Amostra Tempo Semana Semana Semana Semana Semana Semana Semana 0 1 2 3 4 5 6 7 L. rhamnosus não 4,8 12,8 13 12,6 11,5 11,2 11 12,6 protegido L. rhamnosus 4,6 4,5 4,2 5 3,9 5,2 4,2 4,4 microencapsulado
[0097] Apesar de esta invenção ter sido descrita em termos de alguns exemplos específicos são possíveis muitas modificações e variações. Portanto, compreende-se que, no âmbito das reivindicações anexas, a invenção pode ser realizada de modo diferente do especificamente descrito.
Exemplo 2 – Realizações de composição do núcleo e revestimento - (formação de núcleo com base de derretimento)
[0098] O núcleo foi preparado por um método de granulação por derretimento. O líquido derretido do ligante (por exemplo, manteiga de cacau) foi pulverizado sobre a mistura em pó que consiste nas bactérias e na carga para consolidar as partículas para formação dos aglomerados. Os componentes usados para a preparação das microcápsulas estão resumidos na Tabela 12. Tabela 12. A composição de microcápsulas de acordo com uma realização da presente invenção % p/p de Nome do Nome do teor na Fornecedor Uso Material Produto microcápsula final Lactobacillus Lactobacillus Bactérias 10 - 60 Rhamnosus rhamnosus Pharmatose 100M Lactose Lactose DFE Pharma Carga 25 - 67 Monohidratada (peneirada) MALDEX G190 TEROSE Maltodextrina Carga 0 - 5
PHARMA SYRAL
EMSLAND HPS EMDEN ESH 15 Revestimento 10 - 11
GROUP Revestimento/ manteiga de manteiga de Lubeca Ligante 4 - 15 cacau cacau Alemanha derretido
Octenil- Octenil- succinato de EMSLAND succinato de Revestimento 1,8 amido X02, GROUP amido K02 Tabela 13 – Parâmetros usados para granulação por derretimento de Lactobacillus rhamnosus Parâmetros do processo de Dados revestimento Temperatura de entrada (°C) Temperatura ambiente Taxa de fluxo de ar 25 - 40 (m3/hora) Bombeamento líquido (RPM) 35 – 70 Temperatura do produto (0C) 30 - 32 Pressão de pulverização 0,5 – 0,8 superior (bar) Pressão de ar de suporte - (bar) Tabela 14. Parâmetros usados para o revestimento de grânulos de Lactobacillus rhamnosus Parâmetros do processo de revestimento Dados Temperatura de entrada 34 - 40 (0C) Taxa de fluxo de ar 38 - 60 (m3/hora) Taxa de pulverização 1,8 – 2,2 (g/min) Temperatura do produto 34 - 39 (°C)
Pressão de pulverização 2,45 – superior (bar) 2,5 Estabilidade durante o processo de produção
[0099] As amostras foram coletadas para o teste de enumeração para determinar a estabilidade das bactérias (Lactobacillus rhamnosus) durante o processo de microencapsulamento. Os resultados estão resumidos na Tabela
15. Tabela 15 - A estabilidade (capacidade de sobrevivência) de Lactobacillus rhamnosus durante seu processo de microencapsulamento usando um processo de granulação por derretimento.
Resultados (UFC/g de Bactéria) 10% 16% 10% 10% Estágio do Revestimento: Revestimento: Revestimento: Revestimento: (55:35:10)* (55:35:10)* (55:35:10)* (55:35:10)** Processo [Teor de [Teor de [Teor de [Teor de bactéria bactéria bactéria bactéria 10% p/p] 35% p/p] 50% p/p] 50% p/p] Bactéria não 2,4*1011 2,4*1011 2,4*1011 2,4*1011 revestida Granulado 1,6*1011 3,0*1011 3,0*1011 1,8*1011 Ganho de peso durante o processo de revestimento 2% 8,5*1010 1,1*1011 3,0*1011 1,1*1011 4% 6,9*1010 8,4*1010 3,3*1011 6,8*1010
6% 7,0*1010 8,5*1010 2,5*1011 1,2*1011 8% 8,6*1010 9,1*1010 2,4*1011 1,2*1011 10% 5,1*1010 8,3*1010 1,8*1011 1,8*1011 12% - 7,2*1010 - 14% - 5,5*1010 - 16% - 5,0*1010 - 18% - - - 20% - - - *Fórmula de Revestimento: HPS:manteiga de cacau:octenil-succinato de amido X02 **Fórmula de Revestimento: HPS:Ácido esteárico:octenil-succinato de amido X02
[00100] Apesar de esta invenção ter sido descrita em termos de alguns exemplos específicos são possíveis muitas modificações e variações. Portanto, compreende-se que, no âmbito das reivindicações anexas, a invenção pode ser realizada diferente do especificamente descrito.

Claims (10)

REIVINDICAÇÕES
1. MICROCÁPSULA PROBIÓTICA, caracterizada por compreender: núcleo compreendendo microorganismos probióticos; e camada de revestimento compreendendo uma dispersão sólida híbrida que compreende uma molécula de gordura comestível dispersa uniformemente em um polímero de formação de filme hidrossolúvel e um mediador comestível, em que o dito mediador comestível é octenil-succinato de amido.
2. MICROCÁPSULA PROBIÓTICA, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo dito polímero de formação de filme hidrossolúvel ser hidroxipropilamido.
3. MICROCÁPSULA PROBIÓTICA, de acordo com a reivindicação 2, sendo os ditos microorganismos probióticos caracterizados por compreender Bifidobacterium.
4. MICROCÁPSULA PROBIÓTICA, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pela dita molécula de gordura comestível ser selecionada a partir do grupo que inclui ácido láurico, ácido mirístico, ácido palmítico, palmitato, palmitoleato, hidroxipalmitato, ácido araquídico, ácido oleico, ácido esteárico, estearato de sódio, estearato de cálcio, estearato de magnésio, hidroxiestearato de hidroxioctacosanila, ésteres de oleato de cadeia longa, ésteres de ácidos graxos, alcoóis graxos, dióis graxos esterificados, ácido graxo hidroxilado, ácido graxo hidrogenado (ácidos graxos saturados ou parcialmente saturados), óleo de soja parcialmente hidrogenado, óleo de algodão parcialmente hidrogenado, alcoóis alifáticos, fosfolipídios, lecitina, fosfatidilcolina, triésteres de ácidos graxos, óleo de coco, óleo de coco hidrogenado,
manteiga de cacau; óleo de palma; eutéticos de ácido graxo; mono e diglicerídeos, poloxâmeros, copolímeros em bloco de polietilenoglicol e poliésteres, ou uma combinação destes.
5. MICROCÁPSULA PROBIÓTICA, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pela dita molécula de gordura comestível ser manteiga de cacau.
6. MICROCÁPSULA PROBIÓTICA, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pela dita molécula de gordura comestível ser ácido esteárico.
7. MICROCÁPSULA PROBIÓTICA, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pela dita dispersão sólida híbrida ser uma única dispersão sólida híbrida.
8. MÉTODO PARA A PREPARAÇÃO DE UMA MICROCÁPSULA, caracterizado por compreender: preparação de um núcleo de microcápsula compreendendo Bifidobacterium; preparação de pelo menos um revestimento compreendendo valores baixos de taxa de transmissão de vapor de água (WVTR) que compreende hidroxipropilamido (HPS), manteiga de cacau (CB) e octenil-succinato de amido; e revestimento do dito núcleo com o dito pelo menos um revestimento.
9. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 8, sendo a preparação de pelo menos um revestimento caracterizada por compreender: preparação de uma solução de 5% p/p de hidroxipropilamido (HPS) pela adição de HPS à água destilada aquecida (85 a 90°C); preparação de uma solução de octenil-succinato de amido (SOS) pela adição de SOS à água destilada aquecida e agitação contínua até obter-se uma solução homogênea límpida; pré-derretimento da manteiga de cacau (CB) durante agitação usando um agitador mecânico para prover CB derretida; e homogeneização da dita solução de SOS e da dita CB derretida na dita solução 5% p/p de HPS usando um homogeneizador.
10. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo pré-derretimento da dita manteiga de cacau (CB) ser realizado a 50°C.
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