BR112020015991A2 - Métodos de tratamento de episódio inicial de ttp com domínios variáveis únicos de imunoglobulina - Google Patents

Abstract

a presente invenção baseia-se na constatação de que a administração de polipeptídeos compreendendo dois domínios variáveis simples de imunoglobulina (isvd) contra o fator von willebrand (vwf) a pacientes humanos com um episódio inicial de púrpura trombocitopênica trombótica (ttp), resulta em resultados melhorados, incluindo um tempo mais rápido para menor proporção de resposta de contagem de plaquetas de pacientes com morte, recorrência ou evento tromboembólico maior (te) durante o período de tratamento, menor taxa de recorrência, e prevenção de refratariedade. a invenção fornece um polipeptídeo compreendendo dois isvd contra o vwf para uso no tratamento de uma doença relacionada com o vwf, preferivelmente ttp, em um ser humano em necessidade do mesmo. a invenção também se refere a formas unitárias de dosagem, kits e usos médicos para o tratamento de ttp.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MÉTODOS DE TRATAMENTO DE EPISÓDIO INICIAL DE TTP COM DOMÍNIOS VARIÁVEIS ÚNICOS DE IMUNOGLOBULINA".

1. CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção é baseada na constatação de que a administração de polipeptídeos compreendendo pelo menos um domínio variável único de imunoglobulina (ISVD) contra o Fator de von Willebrand (vWF) em pacientes humanos com um episódio de púrpura trombocitopênica trombótica (TTP), por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de TTP, resulta em resultados melhorados, incluindo um tempo mais rápido para menor proporção de resposta à contagem de plaquetas de pacientes com morte, recorrência ou maior evento tromboembólico (TE) durante o período de tratamento, menor taxa de recorrência, e prevenção de refratariedade. A invenção fornece um polipeptídeo compreendendo pelo menos um ISVD contra o vWF para uso no tratamento de uma doença relacionada com o vWF, preferencialmente TTP, em um ser humano em necessidade do mesmo. A invenção refere-se ainda a formas unitárias de dosagem, kits e usos médicos para o tratamento de TTP.

2. ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

2.1 Papel do vWF na Agregação de Plaquetas

[002] A proteína plasmática multimérica vWF é essencial para o recrutamento de plaquetas circulantes para a parede do vaso danificada após lesão vascular. Este recrutamento é mediado através da ligação do domínio A1 do vWF com a glicoproteína GPIb-IX-V receptora de plaquetas.

[003] Após a expressão por células endoteliais, o vWF é secretado na circulação como multímeros ultra grandes ou vWF ultra grandes (ULvWF). Estes multímeros são processados em multímeros de tamanho regular menor através de clivagem enzimática por um similar de desintegrina e metaloprotease com repetições de trombospondina 13 (ADAMTS13). Nestes multímeros de tamanho regular de vWF, o local de ligação ao receptor de plaquetas GPIb-IX-V no domínio A1 é enigmático e não reage espontaneamente com plaquetas. Uma ativação conformacional do sítio de ligação do recetor de plaquetas GPIb-IX-V no domínio A1 é desencadeada por imobilização ou sob condições de tensão de cisalhamento, resultando em adesão plaquetária e subsequentemente na formação de trombos.

2.2 Papel do processamento de vWF e vWF na fisiopatologia de

TTP

[004] TTP é uma doença rara e com risco de vida do sistema de coagulação sanguínea, na qual o acúmulo de multímeros ULvWF está implicado, levando a um risco aumentado de formação de trombos em pequenos vasos sanguíneos devido à agregação excessiva de plaquetas. A condição é caracterizada pela agregação sistêmica de plaquetas na microcirculação, produzindo isquemia flutuante em muitos órgãos. Se mantids, isso pode causar infarto tecidual, associado à trombocitopenia profunda e fragmentação de eritrócito.

[005] Os multímeros ULvWF têm a capacidade natural de interagir espontaneamente com o receptor de plaquetas GPIb-IX-V. Verificou-se que a atividade de ADAMTS13 seria severamente deficiente na TTP hereditária, bem como na TTP idiopática adquirida (aTTP). A maioria dos pacientes com TTP possui autoanticorpos contra o ADAMTS13, resultando em comprometimento do processamento dos multímeros ULvWF. Como conseqüência, o domínio principal A1 do ULvWF é constitutivamente ativo e interage rapidamente com o receptor de plaquetas GPIb-IX-V. Isto eventualmente resulta na formação dos coágulos sanguíneos característicos encontrados na população de pacientes com TTP.

[006] A terapia atual de TTP com troca de plasma (aqui abreviada como "PE" ou "PEX") e a transfusão fornece ADAMTS13 de substituição e remove anticorpos contra a enzima, desse modo levando progressivamente a uma normalização do processamento de ULvWF. No entanto, esse tratamento requer múltiplas trocas e transfusões ao longo de muitos dias, durante os quais não há direcionamento farmacológico direto do processo ativo da agregação plaquetária mediada por ULvWF.

[007] Embora a introdução de PE e transfusão tenha reduzido significativamente as taxas de mortalidade por TTP nas últimas três décadas, a condição ainda apresenta um risco significativo de mortalidade e morbidade. A taxa de mortalidade de episódios agudos na TTP idiopática aguda, em pacientes tratados com as terapias atuais, permanece na ordem de 10% a 30% (Vesely et al. Blood 2003; 102: 60- 68; Allford et al. Br.J.Haematol. 2003; 120: 556-573; Sadler at al. Hematology. Am. Soc. Hematol. Educ. Program. 2004; 407-423). No caso de TTP, PE e transfusão são reconhecidas ser menos eficazes e a taxa de mortalidade é consideravelmente maior. Nos casos em que a doença é secundária à gravidez, em que PE é considerada como razoavelmente eficaz a taxa de mortalidade de um episódio agudo de TTP de aproximadamente 25%, elevando acima de 40% em casos com pré-eclâmpsia concomitante (Martin et al. Am. J. Obstet. Gynecol. 2008; 199: 98-104). No entanto, em casos secundários a, por exemplo, neoplasias subjacentes ou transplante de medula óssea, a taxa de mortalidade permanece entre 40% e 60%, apesar do uso de tais regimes de tratamento (Sadler et al., 2004 supra; Elliott et al., Mayo Clin.Proc. 2003; 78: 421-430; Kremer Hovinga and Meyer Curr. Opin. Hematol. 2008; 15: 445-450).

[008] Dado o contínuo nível significativo de mortalidade por TTP e as complicações observadas de PE e transfusão, há uma clara necessidade de desenvolvimento de métodos terapêuticos adicionais para suplementar ou reduzir potencialmente a necessidade de, métodos contemporâneos de tratamento.

[009] A pesquisa conduzida em TTP nas últimas três décadas melhorou a compreensão da fisiopatologia da doença, permitindo o desenvolvimento potencial de novos agentes direcionados aos processos subjacentes da doença.

[0010] Os domínios de variáveis simples de imunoglobulina (ISVDs) contra/ligação a vWF foram descritos, por exemplo, nos documentos WO 2004/015425, WO 2004/062551, WO 2006/074947, WO 2006/122825, WO 2009/115614 e WO 2011/067160.

[0011] O documento WO 2015/193326, em nome de Ablynx, descreve, entre outros, descoberta inesperada de que a administração de polipeptídeos compreendendo pelo menos um vWF de ligação a ISVD a pacientes com TTP humanos fornece uma diminuição no tempo de resposta, objetivada por uma recuperação de plaquetas ≥

150.000/µL. Isto é refletido por uma taxa de risco (ou normalização da contagem de plaquetas) de 2,2, o que significa que os indivíduos tratados com caplacizumabe tiveram 2,2 vezes mais chances de obter uma resposta da contagem de plaquetas em um dado momento. Desse modo, diminuindo o processo trombótico iniciado pelas características de complexos plaqueta-vWF desta doença. Assim, a prova do conceito do polipeptídeo da invenção foi demonstrada com redução estatisticamente significativa e clinicamente significativa do tempo até a resposta plaquetária confirmada. Além disso, houve uma redução no número de exacerbações de 11 no grupo de placebo para 3 no grupo de tratamento. Não houve nenhuma morte no grupo de tratamento em comparação com duas mortes no grupo placebo. De fato, foi demonstrado nos estudos de fase II (TITAN) e fase III (HERCULES) que os ISVDs contra o vWF (por exemplo, ALX 0081) são eficazes e seguros em tratamento de pacientes com TTP.

[0012] No entanto, o documento WO 2015/193326 e as comunicações sobre os resultados do TITAN e HERCULES ficaram em silêncio em pacientes com um episódio inicial de aTTP.

[0013] Se não tratada, a mortalidade de TTP é de 90%, o que pode ser reduzido com a pronta liberação de troca plasmática. No entanto, a morte precoce ainda ocorre: aproximadamente metade das mortes no registro regional do Reino Unido ocorreu dentro de 24 horas de apresentação, principalmente em mulheres (Scully et al., 2008 BJH 142: 819-826). Portanto, é da maior importância ter um diagnóstico correto de um episódio de ATTP (cf. Bindi et al. 2010 Transf Aph Sci 43: 167- 170). No entanto, o diagnóstico pode ser difícil, pois há sobreposição clínica da síndrome urêmica hemolítica (HUS), doença autoimune e um espectro de problemas relacionados com a gravidez (cf. Scully et al., 2012 BJH 158:323-335; George e Al-Nouri 2012 Hematology 604-609, Scully et al., 2017 J Thromb Haem 15: 312-322). De fato, as diretrizes para o diagnóstico de TTP e microangiopatias relacionadas - mudaram várias vezes nos últimos anos, de um pentad de trombocitopenia, MAHA (anemia hemolítica miangangangiopática), sinais neurológicos flutuantes, comprometimento renal e febre, geralmente com início insidioso, um diagnóstico baseado na história clínica, exame do paciente e esfregaço sanguíneo (Scully et al., 2012 BJH 158: 323-335) a um diagnóstico incluindo (i) MAHAT isolado (anemia hemolítica microangiopática e trombocitopenia), (ii) novo sintomas neurológicos focais, convulsões ou infarto do miocárdio (MI), com MAHAT inexplicável e (iii) história anterior de TTP (Scully et al. 2017 J Thromb Haem 15:312-322). Os ensaios de ADAMTS13 ajudam a confirmar o diagnóstico, monitorar o curso da doença e até mesmo direcionar outras opções de tratamento.

[0014] O diagnóstico correto é complicado pela rara frequência de TTP em uma população, devido à qual a maioria dos médicos não está familiarizada com os sintomas, principalmente quando um indivíduo apresenta um episódio inicial de TTP. De fato, os episódios iniciais de TTP são frequentemente diagnosticados posteriormente aos episódios recorrentes. Nos últimos casos, o paciente e a equipe médica estão cientes do histórico médico e reconhecem os sintomas mais facilmente. Como conseqüência, pacientes com um episódio inicial de TTP têm uma apresentação tardia e doença mais severa ao entrar na clínica do que aqueles com doença recorrente.

[0015] Portanto, resta esclarecer se os polipeptídeos que compreendem pelo menos um ISVD contra o vWF, como ALX 0081 ou ALX 0081-A, são benéficos em pacientes com um episódio inicial de TTP, se os polipeptídeos que incluem pelo menos um ISVD contra o vWF, como ALX 0081 ou ALX 0081-A, têm um efeito positivo e qual seria um tratamento e regime de dosagem eficazes.

[0016] Há uma necessidade de terapias melhoradas para pacientes com TTP, especialmente quando um indivíduo apresenta um episódio inicial de TTP.

3. SUMÁRO DA INVENÇÃO

[0017] A presente invenção baseia-se na descoberta inesperada de que a administração de polipeptídeos compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF em pacientes com TTP humana melhora os resultados de pacientes com um episódio inicial de TTP, que têm uma apresentação tardia e doença mais severa no início do que aqueles com doença recorrente, isto é, episódio recorrente de TTP (cf. Exemplo

7.11).

[0018] Além disso, a presente invenção também demonstra que os polipeptídeos da presente invenção (por exemplo, ALX 0081 ou ALX 0081-A) levaram a uma normalização mais rápida da contagem de plaquetas, impediram exacerbações e impediram que os pacientes se tornassem refratários ao tratamento. Isto foi refletido, inter alia, na redução dos parâmetros de troca de plasma, nos dias passados no hospital e na unidade de terapia intensiva (UTI) (cf. Exemplo 7.12).

[0019] Além disso, a presente invenção mostra que a terapia aberta (OL) com os polipeptídeos da presente invenção (por exemplo, ALX 0081 ou ALX 0081-A) foi eficaz em pacientes que experimentaram uma exacerbação de aTTP (cf. Exemplo 7.13).

[0020] Os dados atualmente disponíveis demonstram, portanto, que a redução em PE e transfusão e suas complicações associadas são alcançadas sem efeitos adversos significativos do uso dos polipeptídeos da própria invenção em si. Isto representa um claro benefício de segurança para o uso dos polipeptídeos da invenção no tratamento de pacientes com TTP.

[0021] Portanto, a administração de polipeptídeos compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF a pacientes humanos com TTP fornece um tempo de resposta inesperadamente diminuído, um efeito sustentado e prolongado, exacerbações reduzidas, hospitalização reduzida, incluindo ocupação de UTI, morbidade reduzida, mortes reduzidas e/ou um número reduzido de PEs em pacientes com um episódio de TTP, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de TTP.

[0022] Com base na extensa modelagem farmacocinética- farmacodinâmica (PKPD) baseada no mecanismo, diferentes cenários foram elaborados para apoiar o regime de dosagem. O modelo descreveu adequadamente a interação do complexo fármaco-vWF ao longo do tempo, incluindo a progressão da doença em pacientes com aTTP e os efeitos observados por tratamento de PE. O modelo foi aplicado com sucesso para facilitar o entendimento da interação da PKPD entre caplacizumabe e vWF na população alvo, e pelo uso de simulações apoiou a racionalidade da dosagem em pacientes adultos e pediátricos e permitiu a ponte para pacientes japoneses com aTTP (cf.

Exemplo 7.18). A análise farmacocinética da população em pacientes com aTTP mostrou que idade, sexo, raça e grupo sanguíneo não afetaram a farmacocinética do caplacizumabe. O peso corporal e a função renal, expressos pela depuração da creatinina (CrCL), tiveram um efeito estatisticamente significativo na farmacocinética, com uma maior exposição esperada em pacientes com menor peso corporal e CrCL. No entanto, a faixa de exposição esperada nas populações de pacientes com valores extremos dessas covariáveis foi amplamente sobreposta e nenhum ajuste de dose específico foi considerado necessário. Os níveis de linha de base de vWF tiveram um efeito estatisticamente significativo na exposição ao fármaco, mas o aumento da exposição a fármaco para pacientes com vWF elevado não resultou em um efeito farmacodinâmico diferente, e nenhum ajuste individual de dose foi considerado necessário (cf. Exemplo 7.16.5).

[0023] Como nenhum paciente pediátrico foi incluído em ensaios clínicos com caplacizumabe, esse modelo de PKPD também foi usado para recomendações de dosagem em adolescentes e crianças. Em contraste com o descrito acima, a dose recomendada em adolescentes de 12 a 18 anos com peso corporal ≥ 40 kg é de 10 mg e 5 mg se <40 kg. Como não eram esperadas diferenças na supressão de vWF: Ag com base nas diferenças de idade, a mesma recomendação de dosagem se aplica a crianças de 2 a 12 anos: 10 mg se o peso corporal for ≥ 40 kg e 5 mg se <40 kg (cf. Exemplo 7.19).

[0024] A terapia atual de TTP com PE e transfusão fornece ADAMTS13 de substituição e remove anticorpos contra a enzima, desse modo levando progressivamente a uma normalização do processamento de ULvWF. No entanto, este tratamento requer múltiplas permutas e transfusões ao longo de muitos dias, durante os quais não há alvejamento farmacológico direto do processo ativo da agregação plaquetária mediada por ULvWF.

[0025] Durante os ensaios clínicos em pacientes com aTTP, o caplacizumabe foi administrado como um bolus intravenoso de 10 mg (i.v.) antes de PE, seguido por 10 mg de doses subcutâneas diárias (s.c.) durante o período diário de PE e pelo menos 30 dias depois. O efeito potencial de diferentes intervalos de tempo entre o primeiro bolus i.v. e o PE subsequente, e o efeito de diferentes esquemas de PE, também foram investigados. Surpreendentemente, são esperados níveis eficazes de fármacos até que o PE seja iniciado até 5 horas após a primeira dose i.v. de caplacizumabe. Para atrasos mais longos, dose de 10 mg ou 11 mg de s.c. adicional pode ser prevista antes de PE. Em caso de oferta (duas vezes por dia) de PE durante 7 dias, o esquema de administração de s.c. de caplacizumabe poderia ser ajustado com oferta de caplacizumabe após cada tratamento com PE (cf. Exemplo

7.17).

[0026] Durante um programa de acesso gerenciado (MAP), os pacientes receberam caplacizumabe como terapia de linha de frente ou para o tratamento de um curso refratário de aTTP. Os relatórios de segurança espontâneos estavam alinhados com o perfil de segurança observado em estudos clínicos, sem novos sinais de segurança. A primeira evidência do mundo real com caplacizumabe em pacientes com aTTP confirma os importantes benefícios do caplacizumabe observados em ensaios clínicos, principalmente se iniciado como terapia de linha de frente.

[0027] Os polipeptídeos da presente invenção não interferem com a enzima substituída por transfusão de plasma. Os polipeptídeos da invenção (por exemplo, ALX 0081 ou ALX 0081-A) podem ser utilizados, em combinação com PE e transfusão, para inibir diretamente a formação contínua de pequenos trombos e consumo de plaquetas na microvasculatura. Isso permite um controle mais rápido do processo trombótico subjacente e o consumo de plaquetas associado, com os benefícios de um grau reduzido de complicações isquêmicas e hemorrágicas. Também resulta em uma recuperação clínica mais rápida e menos morbidade com um período mais curto e número reduzido de PEs e transfusões. De fato, uma análise dos biomarcadores LDH, troponina T ou I e creatinina específicos e clinicamente relevantes para danos aos órgãos sugeriu que a redução mais rápida da isquemia do tecido microvascular tem um benefício clínico. Além disso, a inibição demonstrada da interação plaquetária mediada por ULvWF pelos polipeptídeos da invenção (por exemplo, ALX 0081 ou ALX 0081-A) e os efeitos antitrombóticos observados mostram os efeitos positivos para seu uso a longo prazo depois que os pacientes se recuperam de um episódio agudo de TTP, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de TTP para evitar recaídas e/ou exacerbações da doença. Uma frequência reduzida de episódios agudos de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódios recorrentes de TTP representa um benefício significante, com um potencial para uma redução na mortalidade e morbidade associada à TTP e uma redução adicional na necessidade de PE e transfusões ao longo da vida de um paciente.

[0028] Embora uma recuperação mais rápida da TTP e uma redução nas exacerbações e recidivas sejam um benefício clínico claro em termos de eficácia do tratamento, a redução na duração e na frequência de PE e transfusão também oferece benefícios adicionais em termos de segurança do paciente. Embora a PE e a transfusão sejam atualmente consideradas como o tratamento padrão na gestão de TTP (Scully et al. Br.J. Haem. 2012; 158: 323–335), os procedimentos correm o risco de complicações significativas. O procedimento de PE requer altos volumes de fluidos e taxas de fluxo necessitando o uso de cateteres de hemodiálise de dupla luz venosa central. As complicações do procedimento incluem hemorragia por inserção do cateter, sepse, trombose do cateter, pneumotórax, sobrecarga de fluidos, hipóxia e hipotensão (Fontana et al.

Semin.

Semin.

Hematol. 2004; 41: 48-59; George J.Intensive Care Med. 2007; 22 : 82-91; Howard et al.

Transfusion 2006; 46: 154-156; Rizvi et al.

Transfusion 2000; 40: 896- 901; Nguyen et al.

Transfusion 2009; 49: 392-394). As reações anafilactóides complicam de 0,25% a 0,5% dos procedimentos (Allford et al. 2003 supra; George 2007 supra). Além disso, a infusão de produtos sanguíneos contendo plasma pode causar uma lesão pulmonar aguda relacionada à transfusão não infecciosa (TRALI). Essa condição é reconhecida como uma das causas mais frequentes de fatalidades relacionadas à transfusão, com uma incidência estimada entre 0,02% e 0,05% por unidade contendo plasma.

Com uma média diária de 17 unidades de plasma, o risco diário pode ser calculado em uma faixa de 0,34% e 0,85%. A maioria dos pacientes com TTP requer múltiplos PEs e transfusões.

Pacientes com TTP idiopática aguda requerem tratamentos diários, e uma média de aproximadamente 16 tratamentos é necessária para alcançar a remissão (Allford et al. 2003 supra). Em casos refratários, a frequência do tratamento pode ser aumentada para duas vezes ao dia (Allford et al. 2003 supra). No caso de pacientes com TTP familiar, recomenda-se infusões regulares de plasma profilático com intervalos de duas a três semanas (Lammle et al.

J.Thromb.Haemost. 2005; 3: 1663-1675). A anafilaxia e TRALI representam, portanto, riscos claros para pacientes com TTP, cujo tratamento requer tal frequência e regularidade de PEs e transfusões.

Embora se pense que esse risco possa ser menor se o plasma tratado com solvente/detergente (S/D) for usado em vez de plasma fresco congelado, o uso de grandes volumes de plasma S/D pode estar associado a um risco aumentado de tromboembolismo venoso (Allford et al., 2003 supra; Fontana et al., 2004 supra). No geral, estima-se que aproximadamente 30% a 40% dos pacientes apresentem efeitos adversos da PE e transfusão, e a taxa de mortalidade do procedimento é da ordem de 2% a 3% (George et al. Semin. Hematol. 2004; 41: 60- 67; George 2007 supra; George e Al-Nouri 2012 supra). Portanto, a redução na duração e frequência da PE e a transfusão também oferece benefícios adicionais em termos de segurança do paciente.

[0029] Após a recuperação de um episódio de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio recorrente de TTP, muitos pacientes descrevem anormalidades cognitivas durante muitos anos e relatam problemas com memória, concentração, energia reduzida e fadiga. Tais sintomas têm um impacto negativo na qualidade de vida diária dos pacientes. Além disso, esse déficit na qualidade de vida pode ocorrer em todos os pacientes com TTP, independentemente da etiologia e gravidade (Lewis et al. Transfusion 2009; 49: 118-124). Pensa-se que estes sintomas possam ser refletivos dos efeitos residuais da isquemia tecidual. Com base nisso, pode ser razoavelmente proposto que uma recuperação mais rápida de TTP e a limitação da formação de trombos na microvasculatura que os polipeptídeos da presente invenção, como ALX 0081 ou ALX 0081-A, fornecem, resultem em um resultado a longo prazo melhorado para os pacientes em termos de qualidade de vida.

[0030] Surpreendentemente, foi demonstrado em vários experimentos in vitro, estudos comparativos de ressonância magnética nuclear (RMN) e de ressonância plasmática de superfície (SPR) que caplacizumabe e caplacizumabe estendido no terminal C tinham características similares e perfis de ligação similares ao vWF alvo, embora o caplacizumabe estendido no terminal C tenha menos ligação pré- existente ao anticorpo. Em vista das características e perfis similares entre o caplacizumabe e o caplacizumabe estendido no terminal C, espera-se que esses compostos de caplacizumabe estendidos no terminal C possam ser utilizados no tratamento e/ou prevenção de aTTP também, similares ao caplacizumabe (conforme Exemplo 7.21).

[0031] Por conseguinte, a presente invenção fornece métodos para o tratamento ou alívio de doenças relacionadas ao vWF, como TTP, em um indivíduo, administrando ao indivíduo um polipeptídeo compreendendo pelo menos um ISVD contra o vWF, em que a quantidade do polipeptídeo administrado é eficaz para reduzir o tempo de resposta, reduzir exacerbações, reduzir recaídas, reduzir hospitalizações, incluindo ocupação na UTI, reduzir isquemia, reduzir o número de mortes e/ou reduzir o número de PEs necessárias. A presente invenção fornece faixas de doses específicas e esquemas de dosagem para os polipeptídeos da invenção que resultam em um ou mais desses efeitos benéficos em doenças relacionadas ao vWF, como TTP. Em particular, a invenção fornece agentes farmacologicamente ativos, composições, métodos e/ou esquemas de dosagem que têm certas vantagens em comparação com os agentes, composições, métodos e/ou esquemas de dosagem que são atualmente usados e/ou conhecidos na técnica, incluindo a exigência de administrar menos frequentemente PE. Essas vantagens ficarão claras a partir da descrição adicional abaixo.

[0032] Em um aspecto preferido, a invenção refere-se a um polipeptídeo compreendendo dois domínios variáveis únicos da imunoglobulina vWF anti-humana (ISVDs) para uso no tratamento (os sintomas de) de uma doença relacionada ao vWF em um ser humano, preferivelmente TTP, administrando ao ser humano uma dose de 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo se o referido ser humano tiver peso corporal ≥ 40 kg e 5 mg se o peso corporal for <40 kg.

[0033] Em um aspecto, a invenção refere-se a um polipeptídeo compreendendo dois domínios variáveis únicos da imunoglobulina anti- humana de fator de von Willebrand (vWF) (ISVDs) para uso no tratamento (dos sintomas de) de um episódio inicial de uma doença relacionada ao vWF em um ser humano, preferivelmente TTP,

administrando ao ser humano uma dose de 1 a 80 mg, preferivelmente 5 a 40 mg, ainda mais preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido po- lipeptídeo.

[0034] Em um aspecto, a invenção se refere a um polipeptídeo compreendendo dois domínios variáveis únicos da imunoglobulina anti- humana do fator de ville Willebrand (vWF) (ISVDs) para uso no tratamento da linha de frente de uma doença relacionada ao vWF em um ser humano, preferivelmente TTP, administrando ao humano uma dose de 1 a 80 mg, preferivelmente 5 a 40 mg, ainda mais preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo.

[0035] Em outro aspecto, a invenção se refere ao polipeptídeo aqui descrito para uso no tratamento (os sintomas de) de um episódio inicial de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano, preferivelmente TTP, em que a referida etapa de administração do polipeptídeo da invenção é repetida por pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 dias ou até mais de 10 dias, tais como, 20 dias, de preferência mais de 30 dias, tais como, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses ou mais (período de tratamento).

[0036] Em outro aspecto, a invenção se refere ao polipeptídeo aqui descrito para uso no tratamento (dos sintomas de) de um episódio inicial de uma doença relacionada ao vWF em um ser humano, preferivelmente TTP, em que o referido tratamento resulta em um tempo mais rápido para a resposta da contagem de plaquetas, menor proporção de pacientes com óbito, recorrência ou evento importante de TE durante o período de tratamento, menor taxa de recorrência e/ou prevenção de refratariedade.

[0037] Em outro aspecto, a invenção se refere ao polipeptídeo descrito aqui para uso no tratamento (dos sintomas de) de um episódio inicial de uma doença relacionada ao vWF em um ser humano, preferivelmente TTP, em que o referido polipeptídeo compreende pelo menos um vWF humano de ligação a ISVD (SEQ ID Nº: 20).

[0038] Em outro aspecto, a invenção se refere ao polipeptídeo aqui descrito para uso no tratamento (dos sintomas de) de uma doença relacionada ao vWF em um ser humano, preferivelmente TTP, em que o referido polipeptídeo é pelo menos 90% idêntico à SEQ ID Nº: 1 e compreendendo um (X)n estendido ao terminal C, em que n é 1 a 10, preferivelmente 1 a 5, como 1, 2, 3, 4 ou 5 (e preferivelmente 1 ou 2, tal como 1); e cada X é um resíduo de aminoácido (de preferência de ocorrência natural) que é escolhido independentemente e de preferência escolhido independentemente do grupo que consiste em alanina (A), glicina (G), valina (V), leucina (L) ou isoleucina (I); ainda mais preferivelmente alanina.

[0039] Em outro aspecto, a invenção se refere ao polipeptídeo aqui descrito para uso no tratamento (dos sintomas de) de um episódio inicial de uma doença relacionada ao vWF em um ser humano, em que pelo menos um ISVD é representado pela SEQ ID Nº: 19 (12A02H1).

[0040] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo descrito aqui para uso no tratamento de (os sintomas de) um episódio inicial de uma doença relacionada com vWF em um ser humano, preferivelmente TTP, em que o referido polipeptídeo é pelo menos 90% idêntico a SEQ ID Nº: 1.

[0041] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo descrito Aqui para uso no tratamento de (os sintomas de) um episódio inicial de uma doença relacionada com vWF em um ser humano, preferivelmente TTP, em que o referido polipeptídeo é ALX 0081 (SEQ ID Nº: 1) ou ALX 0081-A (SEQ ID Nº: 24).

[0042] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo descrito aqui para uso no tratamento de (os sintomas de) um episódio inicial de uma doença relacionada com vWF em um ser humano, preferivelmente TTP, em que a referida dose é administrada 1 vez por dia ou duas vezes por dia.

[0043] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo descrito aqui para uso no tratamento de (os sintomas de) um episódio inicial de uma doença relacionada com vWF em um ser humano, preferivelmente TTP, compreendendo repetir a administração do referido polipeptídeo até que o número de plaquetas no referido ser humano seja de pelo menos 150.000/µl.

[0044] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo descrito aqui para uso no tratamento de (os sintomas de) um episódio inicial de uma doença relacionada com vWF em um ser humano, compreendendo repetir a administração do referido polipeptídeo até que o número de plaquetas no referido ser humano seja de pelo menos

150.000/µl em pelo menos duas medições consecutivas.

[0045] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo descrito aqui para uso no tratamento de (os sintomas de) um episódio inicial de uma doença relacionada com vWF em um ser humano, preferivelmente TTP, em que a referida etapa de administração do polipeptídeo da invenção é repetida durante pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10 dias, ou mesmo mais que 10 dias, tal como 20 dias, preferivelmente mais que 30 dias ou mais, depois que o número de plaquetas for pelo menos 150.000/µl em pelo menos duas medições consecutivas.

[0046] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo descrito aqui para uso no tratamento de (os sintomas de) um episódio inicial de uma doença relacionada com vWF em um ser humano, em que as referidas 2 medidas consecutivas são pelo menos 24 horas, mais preferivelmente 48 horas de intervalo, tal como pelo menos 3 dias de intervalo, ou ainda mais tal como 4, 5, 6 ou ainda 7 dias de intervalo, preferivelmente uma semana de intervalo.

[0047] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo descrito aqui para uso no tratamento de (os sintomas de) um episódio inicial de uma doença relacionada com vWF em um ser humano, preferivelmente TTP, compreendendo repetir a administração do referido polipeptídeo até que a atividade de ADAMTS13 no referido ser humano seja de pelo menos 10% tal como pelo menos 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 45% ou ainda 50% de uma atividade de ADAMTS13 de referência.

[0048] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo descrito aqui para uso no tratamento de (os sintomas de) um episódio inicial de uma doença relacionada com vWF em um ser humano, preferivelmente TTP, compreendendo repetir a administração do referido polipeptídeo até o nível de um marcador de dano ao órgão, tal como nível de LDH, nível de troponina T, nível de troponina I e/ou nível de creatinina, no referido ser humano retornar a pelo menos 40%, ou ainda pelo menos 50%, tal como 60%, 70%, 80%, 90% ou ainda a 100% de níveis normais.

[0049] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo descrito aqui para uso no tratamento de (os sintomas de) um episódio inicial de uma doença relacionada com vWF em um ser humano, preferivelmente TTP, compreendendo executar uma Troca Plasmática.

[0050] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo descrito aqui para uso no tratamento de (os sintomas de) um episódio inicial de uma doença relacionada com vWF em um ser humano, em que a referida doença relacionada com o vWF é escolhida a partir da síndrome coronariana aguda (ACS), ataque isquêmico cerebral transitório, angina do peito instável ou estável, acidente vascular cerebral, infarto do miocárdio ou púrpura trombocitopênica trombótica (TTP), preferivelmente TTP.

[0051] Em um aspecto a invenção refere-se a um polipeptídeo compreendendo dois domínios variáveis simplesde imunoglobulina (ISVDs) de Fator von Willebrandanti-humano(vWF) para uso na redução de dias no hospital e/ou unidade de terapia intensiva (UTI) durante o tratamento de um episódio agudo de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, compreendendo administrar ao humano uma dose de 1 a 80 mg, preferivelmente 5 a 40 mg, ainda mais preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo.

[0052] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na redução de dias no hospital e/ou unidade de tratamento intensivo (UTI) durante o tratamento de um episódio agudo de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, em que a referida etapa de administração do polipeptídeo da invenção é repetida durante pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10 dias, ou ainda mais do que 10 dias, tal como 20 dias, preferivelmente mais de 30 dias, como 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses ou ainda mais (período de tratamento).

[0053] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na redução de dias no hospital e/ou unidade de tratamento intensivo (UTI) durante o tratamento de um episódio agudo de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, em que o referido tratamento resulta em um tempo mais rápido para responder à contagem de plaquetas, menor proporção de pacientes com morte, recorrência ou evento importante de TE durante o período de tratamento, menor taxa de recorrência, e/ou prevenção de refratariedade.

[0054] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na redução de dias no hospital e/ou unidade de tratamento intensivo (UTI) durante o tratamento de um episódio agudo de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, em que o referido polipeptídeo compreende pelo menos uma ligação ISVD SEQ ID Nº: 20.

[0055] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na redução de dias no hospital e/ou unidade de tratamento intensivo (UTI) durante o tratamento de um episódio agudo de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, pelo menos um ISVD é representado por SEQ ID Nº: 19 (12A02H1).

[0056] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na redução de dias no hospital e/ou unidade de tratamento intensivo (UTI) durante o tratamento de um episódio agudo de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, em que o referido polipeptídeo é pelo menos 90% idêntico a SEQ ID Nº: 1.

[0057] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na redução de dias no hospital e/ou unidade de tratamento intensivo (UTI) durante o tratamento de um episódio agudo de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, em que o referido polipeptídeo é ALX 0081 (SEQ ID Nº: 1) ou ALX 0081-A (SEQ ID Nº: 24).

[0058] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na redução de dias no hospital e/ou unidade de tratamento intensivo (UTI) durante o tratamento de um episódio agudo de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, em que a referida dose é administrada 1 vez por dia ou duas vezes por dia.

[0059] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na redução de dias no hospital e/ou unidade de tratamento intensivo (UTI) durante o tratamento de um episódio agudo de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, compreendendo repetir a administração do referido polipeptídeo até que o número de plaquetas no referido ser humano seja de pelo menos 150.000/µl.

[0060] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na redução de dias no hospital e/ou unidade de tratamento intensivo (UTI) durante o tratamento de um episódio agudo de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, compreendendo repetir a administração do referido polipeptídeo até que o número de plaquetas no referido ser humano seja de pelo menos 150.000/µl em pelo menos duas medições consecutivas.

[0061] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na redução de dias no hospital e/ou unidade de tratamento intensivo (UTI) durante o tratamento de um episódio agudo de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, em que a referida etapa de administração do polipeptídeo da invenção é repetida durante pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 dias, ou mesmo mais do que 10 dias, tal como 20 dias, preferivelmente mais que 30 dias ou mais, depois que o número de plaquetas for pelo menos 150.000/µl em pelo menos duas medições consecutivas.

[0062] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na redução de dias no hospital e/ou unidade de tratamento intensivo (UTI) durante o tratamento de um episódio agudo de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, em que as referidas duas medidas consecutivas são pelo menos 24 horas, mais preferivelmente 48 horas de intervalo, tal como pelo menos 3 dias de intervalo,ou ainda mais tal como 4, 5, 6 ou ainda 7 dias de intervalo, preferivelmente uma semana de intervalo.

[0063] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na redução de dias no hospital e/ou unidade de tratamento intensivo (UTI) durante o tratamento de um episódio agudo de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, compreendendo repetir a administração do referido polipeptídeo até que a atividade de ADAMTS13 no referido ser humano seja de pelo menos 10% tal como pelo menos 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 45% ou ainda 50% de uma atividade de ADAMTS13 de referência.

[0064] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na redução de dias no hospital e/ou unidade de tratamento intensivo (UTI) durante o tratamento de um episódio agudo de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, compreendendo repetir a administração do referido polipeptídeo até o nível de um marcador de dano ao órgão, tal como nível de LDH, nível de troponina T, nível de troponina I e/ou nível de creatinina, no referido ser humano retornar a pelo menos 40%, ou ainda pelo menos 50%, tal como 60%, 70%, 80%, 90% ou ainda a 100% de níveis normais

[0065] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na redução de dias no hospital e/ou unidade de tratamento intensivo (UTI) durante o tratamento de um episódio agudo de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, compreendendo a realização de uma Troca Plasmática.

[0066] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na redução de dias no hospital e/ou unidade de tratamento intensivo (UTI) durante o tratamento de um episódio agudo de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, em que a referida doença relacionada com o vWF é escolhida a partir da síndrome coronariana aguda (ACS), ataque isquêmico cerebral transitório, angina do peito instável ou estável, acidente vascular cerebral, infarto do miocárdio ou púrpura trombocitopênica trombótica (TTP), preferivelmente TTP.

[0067] Em um aspecto a invenção refere-se a um polipeptídeo compreendendo dois domínios variáveis simples de imunoglobulina (ISVDs) de fator von Willebrand anti-humano (vWF) para uso na prevenção de pacientes de refratários ao tratamento de um episódio agudo, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, compreendendo administrar ao humano uma dose de 1 a 80 mg, preferivelmente 5 a 40 mg, ainda mais preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo.

[0068] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na prevenção de pacientes se tornarem refratários ao tratamento de um episódio agudo, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, em que a referida etapa de administração do polipeptídeo da invenção é repetida durante pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10 dias, ou mesmo mais do que 10 dias, tal como 20 dias, preferivelmente mais que 30 dias, tal como 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses ou ainda mais (período de tratamento).

[0069] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na prevenção de pacientes se tornarem refratários ao tratamento de um episódio agudo, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, em que o referido tratamento resulta em um tempo mais rápido para responder à contagem de plaquetas, menor proporção de pacientes com morte,

recorrência ou evento importante de TE durante o período de tratamento, menor taxa de recorrência, e/ou prevenção de refratariedade.

[0070] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na prevenção de pacientes se tornarem refratários ao tratamento de um episódio agudo, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, em que o referido polipeptídeo compreende pelo menos uma ligação de ISVD SEQ ID Nº: 20.

[0071] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na prevenção de pacientes se tornarem refratários ao tratamento de um episódio agudo, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, pelo menos um ISVD é representado por SEQ ID Nº: 19 (12A02H1).

[0072] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na prevenção de pacientes se tornarem refratários ao tratamento de um episódio agudo, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, em que o referido polipeptídeo é pelo menos 90% idêntico a SEQ ID Nº: 1.

[0073] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na prevenção de pacientes se tornarem refratários ao tratamento de um episódio agudo, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, em que o referido polipeptídeo é ALX 0081 (SEQ ID Nº: 1) ou ALX 0081-A (SEQ ID Nº: 24).

[0074] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na prevenção de pacientes se tornarem refratários ao tratamento de um episódio agudo, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, em que a referida dose é administrada 1 vez por dia ou duas vezes por dia.

[0075] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na prevenção de pacientes se tornarem refratários ao tratamento de um episódio agudo, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, compreendendo repetir a administração do referido polipeptídeo até que o número de plaquetas no referido ser humano seja de pelo menos

150.000/µl.

[0076] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na prevenção de pacientes se tornarem refratários ao tratamento de um episódio agudo, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, compreendendo repetir a administração do referido polipeptídeo até que o número de plaquetas no referido ser humano seja de pelo menos

150.000/µl em pelo menos duas medições consecutivas.

[0077] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na prevenção de pacientes se tornarem refratários ao tratamento de um episódio agudo, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, em que a referida etapa de administração do polipeptídeo da invenção é repetida durante pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10 dias, ou mesmo mais do que 10 dias, tal como 20 dias, preferivelmente mais que 30 dias ou mais, depois que o número de plaquetas for pelo menos 150.000/µl em pelo menos duas medições consecutivas.

[0078] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na prevenção de pacientes se tornarem refratários ao tratamento de um episódio agudo, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, em que as referidas duas medidas consecutivas são pelo menos 24 horas, mais preferivelmente 48 horas de intervalo, tal como pelo menos 3 dias de intervalo,ou ainda mais tal como 4, 5, 6 ou ainda 7 dias de intervalo, preferivelmente uma semana de intervalo.

[0079] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na prevenção de pacientes se tornarem refratários ao tratamento de um episódio agudo, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, compreendendo repetir a administração do referido polipeptídeo até que a atividade de ADAMTS13 no referido ser humano seja de pelo menos 10% tal como pelo menos 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 45% ou ainda 50% de uma atividade de ADAMTS13 de referência.

[0080] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na prevenção de pacientes se tornarem refratários ao tratamento de um episódio agudo, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, compreendendo repetir a administração do referido polipeptídeo até o nível de um marcador de dano ao órgão, tal como nível de LDH, nível de troponina T, nível de troponina I e/ou nível de creatinina, no referido ser humano retornara pelo menos 40%, ou ainda pelo menos 50%, tal como 60%, 70%, 80%, 90% ou ainda a 100% de níveis normais

[0081] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na prevenção de pacientes se tornarem refratários ao tratamento de um episódio agudo, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, compreendendo a realização de uma Troca Plasmática.

[0082] Em outro aspecto a invenção refere-se ao polipeptídeo aqui descrito para uso na prevenção de pacientes se tornarem refratários ao tratamento de um episódio agudo, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, em que a referida doença relacionada com o vWF é escolhida a partir da síndrome coronariana aguda (ACS), ataque isquêmico cerebral transitório, angina do peito instável ou estável, acidente vascular cerebral, infarto do miocárdio ou púrpura trombocitopênica trombótica (TTP), preferivelmente TTP.

[0083] Consequentemente, a presente invenção fornece um polipeptídeo compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF, preferivelmente 2 ISVDs, ainda mais preferivelmente ALX 0081 ou ALX 0081-A, para uso no tratamento e/ou prevenção de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, preferivelmente TTP, compreendendo administrar ao referido ser humano uma primeira dose de 1 a 80 mg, tal como 5 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo.

[0084] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, para uso no tratamento e/ou prevenção de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, preferivelmente TTP, em que a referida administração de polipeptídeo é seguida dentro de 5 minutos a 8 h, realizando uma primeira PE.

[0085] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, para uso no tratamento e/ou prevenção de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, preferivelmente TTP, em que a administração da referida primeira dose é precedida pela realização de um procedimento precedido de PE, preferivelmente dentro de 36 horas, tal como dentro de 32 horas, 30 horas, 28 horas, 26 horas, 24 horas, 22 horas, 20 horas, 18 horas, 16 horas, 14 horas, 12 horas, 10 horas, 8 horas, por exemplo, dentro de 7 horas, 6 horas, 5 horas, 4 horas, 3 horas, 3 horas, 1 hora, 45 minutos, 30 minutos, 20 minutos, 15 minutos, 10 minutos ou ainda 5 minutos da referida primeira PE.

[0086] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, para uso no tratamento e/ou prevenção de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, preferivelmente TTP, em que o referida primeira PE é seguido pela administração de uma segunda dose de 1 a 80 mg, como 5 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg, do referido polipeptídeo, preferivelmente por injeção subcutânea, preferivelmente dentro de 1 a 60 minutos, mais preferivelmente dentro de 30 minutos do referida primeira PE.

[0087] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, para uso no tratamento e/ou prevenção de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, preferivelmente TTP, em que a referida PE precedida é realizada dentro de 36 horas, preferivelmente 32, 30, 28, 26, 24, 22, 20, 18 ou 16 horas, preferivelmente cerca de 24 horas da referida primeira PE.

[0088] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, para uso no tratamento e/ou prevenção de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, preferivelmente TTP, em que o referido polipeptídeo é administrado parenteralmente, preferivelmente por injeção subcutânea, intraperitoneal, intravenosa ou intramuscular, preferivelmente por uma injeção por impulso intravenosa (i.v.).

[0089] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, para uso no tratamento e/ou prevenção de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, preferivelmente TTP, em que a administração do referido polipeptídeo é seguida pela realização de uma PE dentro de 5 minutos a 8 horas, como dentro de 10 minutos a 6 h ou 15 minutos a 4 horas, por exemplo, dentro de 8 horas, 7 horas, 6 horas, 5 horas, 4 horas, 3 horas, 3 horas, 1 hora, 45 minutos, 30 minutos, 20 minutos, 15 minutos, 10 minutos ou até 5 minutos, preferivelmente em menos do que 5h.

[0090] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, para uso no tratamento e/ou prevenção de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, preferivelmente TTP, em que o referido tratamento de uma doença relacionada com o vWF, tal como o TTP, em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, compreende ainda: (i) realizar uma PE; e (seguido por) (ii) administrar uma dose de 1 a 80 mg, como 5 a 40 mg do referido polipeptídeo 5 minutos a 4 h após a referida PE da etapa (i); e (iii) medir opcionalmente a contagem de plaquetas e/ou a atividade de ADAMTS13 do referido paciente, em que a etapa (i) e a etapa (ii) são repetidas uma vez por dia, preferivelmente até que a contagem de plaquetas do referido paciente seja >150000/µl e/ou a referida atividade de ADAMTS13 seja pelo menos 10% tal como menos 15%, 20 %, 25%, 30%, 35%, 45% ou mesmo 50% da atividade de referência de ADAMTS13.

[0091] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, para uso no tratamento e/ou prevenção de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, preferivelmente TTP, compreendendo ainda administrar uma vez por dia uma dose de 1 a 80 mg, tal como 5 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo por pelo menos 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50 60, 90 ou mesmo 120 dias após a contagem de plaquetas do referido paciente ser > 150.000/µl pela primeira vez.

[0092] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, para uso no tratamento e/ou prevenção de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, preferivelmente TTP, compreendendo ainda administrar uma vez por dia uma dose de 1 a 80 mg, tal como 5 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo até o referido ser humano entrar em remissão.

[0093] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, para uso no tratamento e/ou prevenção de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, preferivelmente TTP, compreendendo administrar o referido polipeptídeo até que a atividade de ADAMTS13 seja pelo menos 10% tal como pelo menos 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 45% ou mesmo 50% da atividade de referência de ADAMTS13.

[0094] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, em que a referida dose é de cerca de 1 a 80 mg ou 5 a 40 mg, como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70 ou 80 mg, preferivelmente cerca de 10 mg ou 11 mgdo referido polipeptídeo.

[0095] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, para uso no tratamento e/ou prevenção de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo,

conforme descrito aqui, preferivelmente TTP, em que o referido ser humano sofre de um episódio de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou um episódio recorrente de TTP, uma exacerbação de TTP e/ou uma recaída de TTP.

[0096] Em um aspecto preferido, a presente invenção oferece um polipeptídeo compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF para uso no tratamento de uma doença relacionada com o vWF, tal como TTP, em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, como aqui descrito, compreendendo (1) opcionalmente realizar uma PE anterior; (2) administrar ao referido ser humano uma primeira dose de 1 a 80 mg, tal como 5 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo, e se a etapa (1) for realizada preferivelmente dentro de 36 horas, tal como dentro de 32 horas, 30 horas, 28 horas, 26 horas, 24 horas, 22 horas, 20 horas, 18 horas, 16 horas, 14 horas, 12 horas, 10 horas, 8 horas, por exemplo, dentro de 7 horas, 6 horas, 5 horas, 4 horas, 3 horas, 3 horas, uma hora, 45 minutos, 30 minutos, 20 minutos, 15 minutos, 10 minutos ou ainda 5 minutos de (o final de) etapa (1); (3) executar uma PE, opcionalmente dentro de 5 minutos a 8 horas, tal como 10 minutos a 6 horas ou 15 minutos a 4 horas, por exemplo, dentro de 8 horas, 7 horas, 6 horas, 5 horas, 4 horas, 3 horas, 3 horas, uma hora, 45 minutos, 30 minutos, 20 minutos, 15 minutos, 10 minutos ou até 5 minutos de etapa (2); (4) administrar uma dose adicional de 1 a 80 mg, tal como 5 a 40 mg, 10 mg ou 11 mg preferivelmente referido dentro de 5 minutos a 8 horas, tal como dentro de 10 minutos a 6 horas ou 15 minutos a 4horas, por exemplo, dentro de 8 horas, 7 horas, 6 horas, 5 horas, 4 horas, 3 horas, 3 horas, uma hora, 45 minutos, 30 minutos, 20 minutos, 15 minutos, 10 minutos ou até 5 minutos de (o final de) etapa (3);

(5) repetir etapa (3) e etapa (4) uma vez por dia; opcionalmente, até que a contagem de plaquetas do referido paciente seja > 150000/µl e/ou a atividade de ADAMTS13 seja pelo menos 10%, tal como pelo menos 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 45% ou até 50% da atividade de referência de ADAMTS13. (6) administrar opcionalmente uma vez por dia uma dose de 1 a 80 mg, tal como 5 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo por pelo menos 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50 60, 90 ou mesmo 120 dias após a contagem de plaquetas do referido paciente ser > 150.000/µl pela primeira vez ou até que a atividade de ADAMTS13 seja pelo menos 10%, tal como pelo menos 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 45 % ou até 50% da atividade de referência de ADAMTS13.

[0097] Se a etapa (3) for realizada após 5h de etapa (2), então a administração de uma dose adicional de 1 a 80 mg, tal como 5 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo.

[0098] Em outro aspecto preferido, a presente invenção fornece um polipeptídeo compreendendo pelo menos um ISVD contra vWFpara uso no tratamento de uma doença relacionada com o vWF, tal como TTP, em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, conforme descrito aqui, compreendendo (1) realizando uma PE duas vezes por dia; (2) administrar ao referido ser humano uma dose de 1 a 80 mg, tal como 5 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo após cada PE da etapa (1).

[0099] Além disso, a presente invenção fornece um polipeptídeo que compreende dois ISVDs de vWF anti-humano para uso na prevenção de (os sintomas de) uma recaída de uma doença relacionada com vWF em um ser humano, administrando ao humano 1 a 80 mg, tal como doses de 5 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo.

[00100] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, em que o referido ISVD contra vWF compreende pelo menos uma ligação de domínio variável simples de imunoglobulina a SEQ ID Nº: 20.

[00101] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, em que o referido ISVD contra vWF compreende um domínio variável de cadeia pesada que é derivado de um anticorpo convencional de quatro cadeias ou um domínio variável de cadeia pesada que é derivado de um anticorpo de cadeia pesada ou um Nanocorpo.

[00102] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, em que o referido Nanocorpo é um VHH.

[00103] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, em que o referido ISVD contra vWF consiste essencialmente em 4 regiões de estrutura (FR1 a FR4, respectivamente) e 3 regiões de determinação de complementaridade (CDR1 a CDR3, respectivamente), nas quais: a) CDR1 compreende ou consiste essencialmente de: - a sequência de aminoácido YNPMG; ou - uma sequência de aminoácidos que tem 2 ou apenas 1 diferenças de aminoácidos coma sequência de aminoácido YNPMG; e b) CDR2 compreende ou consiste essencialmente de: - a sequência de aminoácido AISRTGGSTYYPDSVEG; ou - uma sequência de aminoácido que possui pelo menos 80%, preferivelmente pelo menos 90%, mais preferivelmente pelo menos 95%, ainda mais preferivelmente pelo menos 99% de identidade de sequência coma sequência de aminoácido AISRTGGSTYYPDSVEG; ou - uma sequência de aminoácidos que tem 2 ou apenas 1 diferença de aminoácido coma sequência de aminoácido AISRTGGSTYYPDSVEG; e c) CDR3 compreende ou consiste essencialmente de: - a sequência de aminoácido AGVRAEDGRVRTLPSEYTF; ou - uma sequência de aminoácido que possui pelo menos 80%, preferivelmente pelo menos 90%, mais preferivelmente pelo menos 95%, ainda mais preferivelmente pelo menos 99% de identidade de sequência coma sequência de aminoácido AGVRAEDGRVRTLPSEYTF; ou - uma sequência de aminoácidos que tem 2 ou apenas 1 diferença de aminoácido coma sequência de aminoácido AGVRAEDGRVRTLPSEYTF.

[00104] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, em que: a) CDR1 é YNPMG (SEQ ID Nº: 21); b) CDR2 é AISRTGGSTYYPDSVEG (SEQ ID Nº: 22); e c) CDR3 é AGVRAEDGRVRTLPSEYTF (SEQ ID Nº: 23).

[00105] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, em que o ISVD contra vWF é representado pela SEQ ID Nº: 19 (12A02H1).

[00106] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, compreendendo ou consistindo em pelo menos dois ISVDs contra vWF.

[00107] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, em que cada ISVD dos referidos pelo menos dois ISVDs contra vWF consistem essencialmente em 4 regiões de estrutura (FR1 a FR4, respectivamente) e 3 regiões de determinação de complementaridade (CDR1 a CDR3, respectivamente), em que: a) CDR1 compreende ou consiste essencialmente de:

- a sequência de aminoácido YNPMG; ou - uma sequência de aminoácidos que tem 2 ou apenas 1 diferença de aminoácido coma sequência de aminoácido YNPMG; e b) CDR2 compreende ou consiste essencialmente de: - a sequência de aminoácido AISRTGGSTYYPDSVEG; ou - uma sequência de aminoácido que possui pelo menos 80%, preferivelmente pelo menos 90%, mais preferivelmente pelo menos 95%, ainda mais preferivelmente pelo menos 99% de identidade de sequência coma sequência de aminoácido AISRTGGSTYYPDSVEG; ou - uma sequência de aminoácidos que tem 2 ou apenas 1 diferença de aminoácido coma sequência de aminoácido AISRTGGSTYYPDSVEG; e c) CDR3 compreende ou consiste essencialmente de: - a sequência de aminoácido AGVRAEDGRVRTLPSEYTF; ou - uma sequência de aminoácido que possui pelo menos 80%, preferivelmente pelo menos 90%, mais preferivelmente pelo menos 95%, ainda mais preferivelmente pelo menos 99% de identidade de sequência coma sequência de aminoácido AGVRAEDGRVRTLPSEYTF; ou - uma sequência de aminoácidos que tem duas ou apenas uma diferença de aminoácido coma sequência de aminoácido AGVRAEDGRVRTLPSEYTF.

[00108] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, em que cada ISVD contra vWF consiste essencialmente em 4 regiões de estrutura (FR1 a FR4, respectivamente) e 3 regiões de determinação de complementaridade (CDR1 a CDR3, respectivamente), em que:

a) CDR1 é YNPMG (SEQ ID Nº: 21); b) CDR2 é AISRTGGSTYYPDSVEG (SEQ ID Nº: 22); e c) CDR3 é AGVRAEDGRVRTLPSEYTF (SEQ ID Nº: 23).

[00109] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, em que o referido polipeptídeo compreende ou consiste da SEQ ID Nºs 1 a 18 ou 24, preferivelmente SEQ ID Nº: 1 ou 24.

[00110] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, em que o referido ISVD contra vWF é um polipeptídeo de cadeia única que compreende um ou mais domínios variáveis simples de imunoglobulina.

[00111] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, em que o referido ISVD contra vWF é monovalente ou multivalente.

[00112] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, em que o referido ISVD contra vWF é monoespecífico ou multiespecífico.

[00113] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, em que um ou mais domínios variáveis simples de imunoglobulina são enxertados em CDR, humanizados, camelizados, desimunizados ou selecionados por exibição de fagos.

[00114] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, em que o referido ISVD contra vWF compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90% idêntico a SEQ ID Nº: 1.

[00115] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, compreendendo dois domínios variáveis simples da imunoglobulina de vWF anti-humano (ISVDs) e um ISVD de antialbumina sérica humana (HSA).

[00116] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, em que o referido polipeptídeo é formulado em uma formulação farmaceuticamente aceitável.

[00117] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, em que a referida formulação compreende um tampão de citrato ou fosfato com um pH na faixa de 5,0 a 7,5.

[00118] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, em que a referida formulação é adequada para administração parenteral, tal como uma ou mais selecionadas dentre injeção intravenosa, injeção subcutânea, injeção intramuscular ou injeção intraperitoneal.

[00119] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, em que a referida formulação está na forma líquida, liofilizada, secada por pulverização, liofilizada ou congelada reconstituída.

[00120] A presente invenção fornece um kit ou um artigo de fabricação, compreendendo um recipiente contendo o polipeptídeo como aqui descrito ou a formulação como aqui descrita e instruções de uso.

[00121] A presente invenção fornece um kit ou artigo de fabricação como aqui descrito, em que a formulação está presente em um frasco ou em uma seringa injetável.

[00122] A presente invenção fornece um kit ou artigo de fabricação como aqui descrito, em que a formulação está presente em uma seringa injetável pré-carregada.

[00123] A presente invenção fornece um kit ou artigo de fabricação conforme aqui descrito, em que a seringa ou um frasco é composto de vidro, plástico ou material polimérico escolhido dentre um polímero ou copolímero de olefina cíclica. A presente invenção fornece uma formulação compreendendo: (a) um polipeptídeo como descrito aqui em uma concentração de cerca de 0,1 mg/mL a cerca de 80 mg/mL; (b) um excipiente escolhido entre sacarose, glicina, manitol, trealose ou NaCl a uma concentração de cerca de 1% a cerca de 15% (peso/volume);

(c) Tween-80 a uma concentração de cerca de 0,001% a 0,5% (v/v); e (d) um tampão escolhido dentre tampão de citrato a uma concentração de cerca de 5 mM a cerca de 200 mM, de modo que o pH da formulação seja de cerca de 6,0 a 7,0 e um tampão de fosfato a uma concentração de cerca de 10 mM a cerca de 50 mM, de modo que o pH da formulação é de cerca de 6,5 a 7,5, para uso no tratamento de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, administrando ao humano 1 a 80 mg, tal como dose de 5 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo, em que a referida dose é opcionalmente seguida dentro de 5 minutos a 8 horas, como 15 minutos a 4 horas por uma primeira troca plasmática (PE).

[00124] A presente invenção fornece uma forma de dosagem unitária farmacêutica adequada para administração parenteral a um paciente, preferivelmente um paciente humano, compreendendo um polipeptídeo conforme aqui descrito ou uma formulação como aqui descrito.

[00125] A presente invenção fornece um polipeptídeo como aqui descrito, em que a referida doença relacionada com o vWF é escolhida a partir da síndrome coronariana aguda (ACS), ataque isquêmico cerebral transitório, angina do peito instável ou estável, acidente vascular cerebral, infarto do miocárdio ou (adquirida e/ou congênita) púrpura trombocitopênica trombótica (TTP), preferivelmente TTP.

[00126] A presente invenção fornece um método para o tratamento de um paciente humano suscetível ou diagnosticado com uma doença relacionada com o vWF, tal como TTP, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um polipeptídeo compreendendo pelo menos um domínio variável simples de imunoglobulina (ISVD) contra o fator von Willebrand (vWF) para o paciente humano.

[00127] A presente invenção fornece um método de tratamento ou prevenção de uma doença relacionada com o vWF, como TTP,

compreendendo a administração a um ser humano, 1 a 80 mg, tal como uma dose de 5 a 40 mg, preferivelmente de 10 mg ou 11 mg de um polipeptídeo compreendendo pelo menos um domínio variável simples de imunoglobulina (ISVD) contra o fator von Willebrand (vWF), reduzindo assim um ou mais sintomas associados à doença relacionada com o vWF.

[00128] A presente invenção fornece um tratamento como aqui descrito, em que a referida administração de um polipeptídeo conforme aqui descrito é seguida dentro de 5 minutos a 8 horas, tal como 15 minutos a 4 horas, realizando uma primeira troca plasmática (PE).

[00129] A presente invenção fornece um tratamento como aqui descrito, em que a referida administração de um polipeptídeo, como aqui descrito, é precedida pela realização de uma troca plasmática (PE) precedida, dentro de 36 horas, preferivelmente 32, 30, 28, 26, 24, 22, 20, 18 ou 16 horas, preferivelmente cerca de 24 horas da referida primeira PE.

[00130] A presente invenção fornece um tratamento conforme aqui descrito, em que a referida primeira PE é seguida pela administração de uma segunda dose de 1 a 80 mg, como 5 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg de um polipeptídeo, como descrito aqui dentro de 5 minutos a 8 horas, tal como 10 minutos a 6 horas ou 15 minutos a 4 horas, por exemplo, 8 horas, 7 horas, 6 horas, 5 horas, 4 horas, 3 horas, 3 horas, 1 hora, 45 minutos, 30 minutos, 20 minutos, 15 minutos, 10 minutos ou até 5 minutos, por exemplo, em que a segunda dose do referido polipeptídeo é administrada dentro de 1 a 60 minutos, tal como 30 minutos da referida primeira PE, preferivelmente por injeção subcutânea.

[00131] A presente invenção fornece um tratamento como aqui descrito, compreendendo ainda: (i) realizar uma PE; (seguido por)

(ii) administrar uma dose de 1 a 80 mg, como 5 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg de um polipeptídeo, conforme descrito aqui 15 minutos a 4 horas após a referida PE de etapa (i); e (iii) medir opcionalmente a contagem de plaquetas e/ou atividade de ADAMTS13 do referido paciente, em que a etapa (i) e a etapa (ii) são repetidas uma vez por dia, opcionalmente, até que a contagem de plaquetas do referido paciente seja>150000/µl e/ou a atividade de ADAMTS13 é pelo menos 10% tal como pelo menos 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 45% ou ainda 50% da atividade de referência de ADAMTS13.

[00132] A presente invenção fornece também um tratamento como aqui descrito, compreendendo ainda administrar uma vez por dia uma dose de 1 a 80 mg, tal como 5 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg de um polipeptídeo como aqui descrito por pelo menos 5, 10, 15, 20, 25 ou mesmo 30 dias após a contagem de plaquetas do referido paciente ser >150.000/µl.

[00133] A presente invenção fornece um tratamento como aqui descrito, administrando ainda uma vez por dia uma dose de 1 a 80 mg, tal como 5 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg de um polipeptídeo conforme descrito aqui até o referido ser humano entrar em remissão.

[00134] A presente invenção fornece um tratamento como aqui descrito, compreendendo a administração do referido polipeptídeo até a atividade de ADAMTS13 que é pelo menos 10% tal como pelo menos 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 45% ou ainda 50% da atividade de referência de ADAMTS13.

[00135] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método para reduzir o risco e/ou prevenir um episódio agudo de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, como um episódio de TTP, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de TTP, compreendendo ou consistindo de: (i) administrar ao referido ser humano uma dose de 5 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg, de um polipeptídeo compreendendo pelo menos um domínio variável simples de imunoglobulina (ISVD) contra o fator von Willebrand (vWF); a administração do referido polipeptídeo reduz o risco e/ou impede um episódio agudo de uma doença relacionada com o vWF, tal como um episódio de TTP, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de TTP. Preferivelmente, o referido risco é reduzido por um fator 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,75, 1,8, 2 ou mais, tal como 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou até 10, ou ainda mais, tal como 20, 50 ou até 100. Preferivelmente, o referido risco é reduzido em 10% ou ainda mais, tal como 20%, 30%, 40%, 50%, 60% ou mais, tal como 80% ou até 100%.

[00136] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método como aqui descrito, em que a referida etapa (i) de administrar o polipeptídeo da invenção é repetida durante menos de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 vezes, ou mesmo mais que 10 vezes, tal como 20 vezes, preferivelmente mais de 30 vezes ou ainda mais.

[00137] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método como aqui descrito, em que a referida etapa (i) de administrar o polipeptídeo da invenção é repetida durante pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 dias, ou mesmo mais do que 10 dias, tal como 20 dias, antes de mais de 30 dias, tal como 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses ou ainda mais.

[00138] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método como aqui descrito, em que a referida dose é administrada uma vez por dia ou duas vezes por dia (bid).

[00139] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método como aqui descrito, compreendendo ainda (ii) medir opcionalmente a atividade de ADAMTS13 do referido paciente;

(iii) comparar opcionalmente a atividade de ADAMTS13 do referido paciente com uma atividade de ADAMTS13 de referência; e (iv) se a referida atividade de ADAMTS13 for menor do que 30%, tal como 20%, 15% ou 10% da atividade de referência de ADAMTS13, então repetir a referida etapa (i) de administração do polipeptídeo da invenção.

[00140] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método como aqui descrito, em que a referida atividade de ADAMTS13 do referido paciente é medida todos os dias, ou a cada 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 dias, de preferência pelo menos uma vez por semana.

[00141] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método como aqui descrito, em que a referida etapa de administração do polipeptídeo da invenção é repetida até que a referida atividade de ADAMTS13 seja pelo menos 10%, 15%, 20% ou até 30% ou maior da referida atividade de ADAMTS13 de referência.

[00142] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método como aqui descrito, em que etapa (i) é repetido até que a referida atividade de ADAMTS13 seja pelo menos 10%, 15%, tal como 20% ou 30% da referida atividade de ADAMTS13 de referência em pelo menos duas medições consecutivas. Preferivelmente, as referidas duas medições consecutivas têm pelo menos 24 horas, mais preferivelmente 48 horas de intervalo, menos de 3 dias de intervalo ou ainda mais, 4, 5, 6 ou até 7 dias de intervalo, preferíveis com uma semana de intervalo.

[00143] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método como aqui descrito, em que a referida etapa (i) de administrar o polipeptídeo da invenção é repetida durante pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10 dias, ou mesmo mais do que 10 dias, tal como 20 dias, preferivelmente mais que 30 dias ou ainda mais, depois que a referida atividade de ADAMTS13 for pelo menos 10% ou 15%, tal como 20% ou 30% da referida atividade de referência em pelo menos duas medições consecutivas.

[00144] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método como aqui descrito, compreendendo ainda: - medir opcionalmente a atividade de ADAMTS13 do referido paciente; - comparar opcionalmente a atividade de ADAMTS13 do referido paciente com uma atividade de ADAMTS13 de referência; e - se a referida atividade de ADAMTS13 é> 10%, tal como mais do que 15%, ou mais do que 20% ou 30% da referida atividade de ADAMTS13 de referência, então repetir a referida etapa (i) de administrar o polipeptídeo da invenção por no máximo 30 dias, tal como no máximo 20 dias, ou ainda 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 dias ou ainda 1 dia.

[00145] Em uma modalidadea presente invenção refere-se a um método para reduzir o risco e/ou prevenir um episódio agudo de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, como um episódio de TTP, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de TTP, compreendendo pelo menos as seguintes etapas: (i) medir a atividade de ADAMTS13 do referido paciente; (ii) comparar a referida atividade de ADAMTS13com uma atividade de ADAMTS13 de referência; e (iii) se a referida atividade de ADAMTS13é menor que 30%, 20%, 15% ou 10% da referida atividade de referência, então administrar ao referido ser humano uma dose de 5 a 40 mg, como 10 mg ou 11 mg, de um polipeptídeo compreendendo pelo menos um domínio variável simples de imunoglobulina (ISVD) contra o fator von Willebrand (vWf);

[00146] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método como aqui descrito, em que - o risco de dano de órgãos, dano isquêmico e/ou formação de microtrombos é reduzido em 10%, 20%, 30%, preferivelmente pelo menos 40%, ou ainda pelo menos 50%, tal como 60%, 70%, 80%, 90% ou ainda a 100%; - o risco de dano de órgãos, dano isquêmico e/ou formação de microtrombos é reduzido em um fator de 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,75, 2ou mais, tal como 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou ainda 10, ou ainda mais tal como 20, 50 ou ainda 100; - dano de órgãos, dano isquêmico e/ou formação de microtrombos é reduzida preferivelmente em pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, ou ainda pelo menos 50%, tal como 60%, 70%, 80%, 90% ou ainda a 100%; - dano de órgão, dano isquêmico e/ou formação de microtrombos é reduzido por um fator, 2 ou mais, tal como 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou ainda 10, ou ainda mais tal como 20, 50 ou ainda 100; - marcadores de danos a órgãos, tal como níveis de LDH, troponina T, níveis de troponina I, e/ou níveis de creatinina, retornam a pelo menos 40%, ou ainda pelo menos 50%, tal como 60%, 70%, 80%, 90% ou ainda a 100% de níveis normais; - marcadores de danos a órgãos, tal como níveis de LDH, troponina T, níveis de troponina I, e/ou níveis de creatinina, melhoram em pelo menos 20%, 30% ou mais, tal como 40%, ou ainda pelo menos 50%, tal como 60%, 70%, 80%, 90% ou ainda a 100% de níveis normais.

Preferivelmente, os referidos marcadores dedanos em órgãos, tal como níveis de LDH, níveis de troponina T, níveis de troponina I e/ou níveis de creatinina, melhoram em menos de 30 dias de tratamento, preferivelmente em menos de 20 dias de tratamento, tal como menos de 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 dias ou até 1 dia. - o número de plaquetas é mantido em > 150000/µl. - o risco de exacerbações é reduzido em pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, ou ainda pelo menos 50%, tal como 60%, 70%, 80%, 90% ou ainda a 100%;

- o risco de exacerbações é reduzido por um fator, 2 ou mais, tal como 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou ainda 10, ou ainda mais tal como 20, 50 ou ainda 100; - mortalidade devido à referida doença relacionada com o vWF é reduzida em 10%, 20%, 30%, preferivelmentepelo menos 40%, ou ainda pelo menos 50%, tal como 60%, 70%, 80%, 90% ou ainda a 100%; - mortalidade devido à referida doença relacionada com o vWF é reduzida emum fator 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,75, 1,8, 2ou mais, tal como 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou ainda 10, ou ainda mais tal como 20, 50 ou ainda 100; - refratariedade é reduzida preferivelmente em pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, ou ainda pelo menos 50%, tal como 60%, 70%, 80%, 90% ou ainda a 100%; e/ou - refratariedade é reduzida por um fator 2 ou mais, tal como 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou ainda 10, ou ainda mais tal como 20, 50 ou ainda 100.

[00147] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método como aqui descrito, compreendendo ainda medir o número de plaquetas; e se o referido número de plaquetas for menor que

150.000/µl, então repetir a referida etapa de administração do polipeptídeo da invenção.

[00148] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método como aqui descrito, em que o referido número de plaquetas do referido paciente é medido a cada dia, ou a cada 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 dias, de preferência pelo menos a cada semana.

[00149] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método como aqui descrito, em que a referida etapa de administração do polipeptídeo da invenção é repetida até que o número de plaquetas seja pelo menos 150.000/µl.

[00150] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método como aqui descrito, em que a referida etapa de administração do polipeptídeo da invenção é repetida até que o número de plaquetas seja pelo menos 150.000/µl em pelo menos duas medições consecutivas. Preferivelmente, as referidas duas medições consecutivas têm pelo menos 24 horas, mais preferivelmente 48 horas de intervalo, menos de 3 dias de intervalo ou ainda mais, 4, 5, 6 ou até 7 dias de intervalo, preferíveis com uma semana de intervalo.

[00151] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método como aqui descrito, em que a referida etapa de administração do polipeptídeo da invenção é repetida durante pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10 dias, ou mesmo mais do que 10 dias, tal como 20 dias, preferivelmente mais que 30 dias ou mais, depois que o número de plaquetas for pelo menos 150.000/µl em pelo menos duas medições consecutivas. Preferivelmente, as referidas duas medições consecutivas são pelo menos 24 horas, mais preferivelmente 48 horas de intervalo, tal como pelo menos 3 dias de intervalo, ou ainda mais tal como, 4, 5, 6, ou ainda 7 dias de intervalo, preferivelmente uma semana de intervalo.

[00152] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método como aqui descrito, compreendendo ainda medir o número de plaquetas do referido paciente; e se o referido número de plaquetas for > 150.000/µl, em seguida repetir a referida etapa (i) de administrar o polipeptídeo da invenção por no máximo 30 dias, tal como no máximo 20 dias, ou ainda 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 dias ou ainda 1 dia.

[00153] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método para reduzir o risco e/ou prevenir um episódio agudo deuma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, tal como um episódio de TTP, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de TTP, preferivelmente TTP, compreendendo pelo menos as seguintes etapas:

(i) medir o número de plaquetas do referido paciente; e (ii) se o referido número de plaquetas for menor que 150.000/µl, administrar ao referido ser humano uma dose de 5 a 40 mg, como 10 mg ou 11 mg, de um polipeptídeo compreendendo pelo menos um domínio variável simples de imunoglobulina (ISVD) contra o fator von Willebrand (vWF); em que a administração do referido polipeptídeo reduz o risco e/ou impede um episódio agudo de uma doença relacionada com o vWF, tal como um episódio de TTP, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de TTP, preferivelmente TTP.

[00154] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método para o tratamento de um episódio de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio recorrente de TTP em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, compreendendo pelo menos as seguintes etapas; (i) administrar ao referido ser humano uma primeira dose de 5 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg de um polipeptídeo compreendendo pelo menos um domínio variável simples de imunoglobulina (ISVD) contra fator von Willebrand (vWF). (ii) realizar uma primeira troca plasmática (PE), preferivelmente dentro de 5 minutos a 8 horas de etapa (i), preferivelmente dentro de 5 horas.

[00155] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método para o tratamento de um episódio de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio recorrente de TTP, em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, tal como descrito aqui, em que a etapa (i), isto é, administrar ao referido ser humano o referido polipeptídeo da invenção, é precedida pela realização de uma PE precedente, preferivelmente dentro de 24 horas de etapa (ii), isto é, realizar uma primeira PE.

[00156] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método para o tratamento de um episódio de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio recorrente de TTP em um ser humano em necessidade do mesmo, preferivelmente TTP, compreendendo pelo menos as seguintes etapas: (i) realizar uma troca plasmática (PE); (ii) administrar ao referido ser humano uma dose de 5 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg de um polipeptídeo compreendendo pelo menos um domínio variável simples de imunoglobulina (ISVD) contra o fator von Willebrand (vWF). Preferivelmente a referida etapa (i), isto é, realizar uma PE, e a referida etapa (ii), isto é, administrar ao referido ser humano o referido polipeptídeo da invenção, são repetidas uma ou duas vezes por dia, por no máximo 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7 dias.

[00157] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método para o tratamento de um episódio de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio recorrente de TTP, em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, em que etapa (ii), isto é, administrar ao referido ser humano o referido polipeptídeo da invenção, é realizada dentro de 15 minutos a 4 horas de etapa (i), isto é, realizar uma PE.

[00158] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método para o tratamento de um episódio de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio recorrente de TTP, em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, compreendendo ainda medir a contagem de plaquetas do referido ser humano, preferivelmente após a etapa (ii), isto é, administrar ao referido ser humano o referido polipeptídeo da invenção; e se a referida contagem de plaquetas for <150.000/µl, repetir a referida etapa (i), isto é, realizar uma PE, e a referida etapa (ii), isto é, administrar ao referido ser humano o referido polipeptídeo.

[00159] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método para o tratamento de um episódio de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio recorrente de TTP, em um ser humano em necessidade do mesmo, como aqui descrito, compreendendo ainda medir o contagem de plaquetas do referido ser humano [preferivelmente após a etapa (ii), isto é, administrar ao referido ser humano do referido polipeptídeo da invenção]; e repetir a etapa (i), isto é, realizar uma PE, e a etapa (ii), isto é, administrar ao referido ser humano o referido polipeptídeo, [uma/duas vezes por dia] até que o número de plaquetas seja pelo menos 150.000/µl em pelo menos duas medições consecutivas. Preferivelmente, as referidas duas medições consecutivas têm pelo menos 24 horas, mais preferivelmente 48 horas de intervalo, menos de 3 dias de intervalo ou ainda mais, 4, 5, 6 ou até 7 dias de intervalo, preferíveis com uma semana de intervalo.

[00160] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método para o tratamento de um episódio de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio recorrente de TTP, em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, compreendendo ainda administrar uma vez por dia uma dose de 5 a 40 mg, 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo por pelo menos 1 a 30 dias após a contagem de plaquetas do referido ser humano pela primeira vez > 150.000/µl.

[00161] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método para o tratamento de um episódio de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio recorrente de TTP, em um ser humano em necessidade do mesmo, como aqui descrito, compreendendo ainda medir a atividade de ADAMTS13 do referido ser humano, preferivelmentee após a etapa (ii), isto é, administrar ao referido ser humano o referido polipeptídeo.

[00162] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método para o tratamento de um episódio de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio recorrente de TTP, em um ser humano em necessidade do mesmo, como aqui descrito, em que a etapa (i), isto é, realizar um PE, e a etapa (ii), isto é, administrar ao referido ser humano o referido polipeptídeo da invenção, são repetidas até que a atividade de ADAMTS13 seja [pela primeira vez] superior a 15% ou 20% ou mesmo 30% de uma atividade de ADAMTS13 de referência.

[00163] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método para reduzir o risco de e/ou prevenir danos isquêmicos, danos a órgãos, refratariedade e/ou formação de microtrombos [causáveis por uma doença relacionada com o vWF, como TTP, um episódio de TTP, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de TTP] em um ser humano em necessidade do mesmo, compreendendo pelo menos a seguinte etapa: (i) administrar ao referido ser humano uma dose de 5 a 40 mg/dia, preferivelmente 10 mg/dia ou 11 mg/dia de um polipeptídeo compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF; em que a administração do referido polipeptídeo reduz o risco e/ou evita danos isquêmicos, danos a órgãos, refratariedade e/ou formação de microtrombos em 10%, 20%, 30%, preferivelmentepelo menos 40%, ou ainda pelo menos 50%, tal como 60%, 70%, 80%, 90% ou mesmo a 100%. Preferivelmente, administração do referido polipeptídeo reduz o risco e/ou evita danos isquêmicos, danos a órgãos, refratariedade e/ou formação de microtrombos por um fator 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,75, 1,8, 2 ou mais, tal como 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou ainda 10, ou ainda mais tal como 20, 50 ou mesmo 100.

[00164] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método em que a referida etapa de administração do referido polipeptídeo é repetida durante pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 dias ou ainda mais, tal como uma semana, duas semanas, 3 semanas, ou ainda mais, tal como 1 mês ou mesmo 2 meses.

[00165] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método que compreende também medir a atividade de ADAMTS13 do referido paciente, preferivelmente uma vez por semana.

[00166] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método em que a referida etapa de administração do referido polipeptídeo é repetida durante pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 dias ou ainda mais, tal como 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, ou ainda mais, tal como 1 mês ou ainda 2 mesesquando a atividade de ADAMTS13 for [pela primeira vez] > 10%, tal como mais do que 15% ou ainda mais do que 20% de uma atividade de ADAMTS13 de referência.

[00167] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método de tratamento de um sintoma de uma doença relacionada com o vWF, tal como TTP, em um ser humano que sofre da referida doença, compreendendo administrar ao indivíduo um polipeptídeo da invenção, em uma quantidade eficaz para tratar o sintoma de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano que sofre da referida doença.

[00168] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método de inibir em um ser humano o início ou progressão de uma doença relacionada com o vWF, tal como TTP, cuja inibição é efetuada pela ligação de um polipeptídeo compreendendo pelo menos um domínio variável simples de imunoglobulina (ISVD) contra o fator von Willebrand (vWF) ao vWF, compreendendo administrar ao humano, em um intervalo pré-definido, doses inibitórias efetivas do referido polipeptídeo, em que cada administração do polipeptídeo libera ao humano de 0,1 mg por kg a 25 mg por kg do peso corporal do humano, preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo se o referido ser humano tiver peso corporal ≥ 40 kg, e 5 mg se o peso corporal for < 40 kg, de modo a inibir desse modo o aparecimento ou progressão da doença no humano.

[00169] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um método para reduzir a probabilidade de um ser humano contrair um dano isquêmico de órgão por uma doença relacionada com o vWF, que compreende administrar ao humano em uma dose predefinida de um polipeptídeo compreendendo pelo menos umdomínio variável simples de imunoglobulina (ISVD) contra o fator von Willebrand (vWF), em que cada administração do anticorpo libera ao humano de 0,1 mg por kg a 25 mg por kg do peso corporal, preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo se o referido ser humano tiver peso corporal ≥ 40 kg e 5 mg se o referido corpo o peso é <40 kg, de modo a reduzir a probabilidade do humano contrair dano isquêmico de órgão.

4. Descrição Detalhada

[00170] A menos que de outra forma indicado, todos os métodos, etapas, técnicas e manipulações que não são especificamente descritos em detalhes podem ser realizados e foram realizados de uma maneira conhecida per se, como ficará claro para a pessoa versada. É feita referência, por exemplo, novamente aos manuais padrão e à técnica geral aqui mencionada e às referências adicionais citadas; bem como, por exemplo, as seguintes revisões: Scully et al. 2017, supra, ePresta, Adv. Drug Deliv. Rev. 2006, 58 (5-6): 640-56; Levin e Weiss, Mol. Biosyst. 2006, 2(1): 49-57; Irving et al., J. Immunol. Methods, 2001, 248(1-2), 31-45; Schmitz et al., Placenta, 2000, 21 Suppl. A, S106-12, Gonzales et al., Tumour Biol., 2005, 26(1), 31-43, que descrevem técnicas para engenharia de proteínas, como maturação por afinidade e outras técnicas para melhorar a especificidade e outras propriedades desejadas de proteínas como imunoglobulinas. A menos que de outra forma indicado, todos os termos que não são especificamente definidos em detalhes neste documento são conhecidos no campo relevante e serão evidentes para a pessoa versada; bem como, por exemplo, Scully et al. 2017, supra, descrevendo o consenso sobre a padronização da terminologia em TTP e nas microangiopatias trombóticas relacionadas.

[00171] Deve-se notar que, conforme usado aqui, as formas singulares "um, uma (a)", "um, uma (an)", "o, a" incluem referências plurais, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Assim, por exemplo, a referência a "um reagente" inclui um ou mais desses reagentes diferentes e a referência ao "o método" inclui referências a etapas e métodos equivalentes conhecidos por aqueles versados na técnica que podem ser modificados ou substituído pelos métodos descritos aqui.

[00172] A menos que de outra forma indicado, o termo "pelo menos" que precede uma série de elementos deve ser entendido como se referindo a todos os elementos da série. Os versados na técnica reconhecerão, ou serão capazes de determinar, não mais que experimentação de rotina, muito equivalentes às modalidades específicas da invenção descritas aqui. Tais equivalentes devem ser abrangidos pela presente invenção.

[00173] O termo "e/ou" onde quer que seja usado aqui inclui o significado de "e", "ou" e "toda ou qualquer outra combinação dos elementos conectados pelo referido termo".

[00174] O termo "cerca de" ou "aproximadamente" Como usado aqui significa dentro de 20%, preferivelmente dentro de 15%, mais preferivelmente dentro de 10% e mais preferivelmente dentro de 5% de um determinado valor ou faixa.

[00175] Ao longo deste relatório descritivo e das reivindicações a seguir, a menos que o contexto exija de outra forma, a palavra "compreender" e variações como "compreende" e "compreendendo" serão entendidas como implicando a inclusão de um número inteiro declarado ou etapa ou grupo de números inteiros ou etapas, mas não a exclusão de qualquer outro número inteiro ou etapa ou grupo de número inteiro ou etapa. Quando usado aqui, o termo "compreendendo" pode ser substituído pelo termo "contendo" ou "incluindo" ou, às vezes, quando usado aqui com o termo "tendo".

[00176] O potencial terapêutico dos polipeptídeos da invenção, em particular o ALX 0081, em umaconfiguração de TTP foi posteriormente avaliado e demonstrado em um estudo de fase III (Hercules).

[00177] Foi demonstrado que os pacientes com um episódio inicial de um TTP tem apresentação tardia e uma doença mais grave no início do que aqueles com episódios recorrentes de doença. Mesmo nesse cenário de doença mais grave, foi demonstrado que o tratamento com caplacizumabe melhorou o resultado (Exemplo 7.11). Em particular, foi demonstrado que os polipeptídeos da invenção, como ALX 0081 e ALX 0081-A, melhoraram os resultados, incluindo um tempo mais rápido para responder à contagem de plaquetas, menor proporção de pacientes com morte, recorrência ou um evento TE importante durante o período de tratamento, menor taxa de recorrência durante todo o período de tratamento e prevenção de refratariedade em comparação ao placebo.

[00178] O TTP é uma doença aguda com crises ou surtos recorrentes, isto é, um evento de doença recorrente individual, que requer tratamento imediato para cada episódio. Como usado aqui, um "episódio inicial de TTP" (também indicado como "episódio de TTP inicial") é a primeira vez que um indivíduo apresenta um ataque ou surto de TTP. Como usado aqui, um "episódio recorrente de TTP" (também indicado como "episódio de TTP recorrente") é qualquer ataque de TTP após um episódio inicial de TTP.

[00179] A presente invenção é também, pelo menos em parte, baseada no fato de que, através do bloqueio rápido da adesão plaquetária mediada por vWF pelos polipeptídeos da invenção, tal como ALX 0081 ou ALX 0081-A, uma nova opção de tratamento para aTTP é fornecida. Em particular, o tratamento com caplacizumabe resultou em melhores resultados de tratamento, refletidos por reduções significativas na utilização de recursos de saúde, incluindo dias de PE, duração da hospitalização e dias gastos em UTI (Exemplo 7.12).

[00180] Foi ainda demonstrado que a administração de polipeptídeos de acordo com a invenção, compreendendo pelo menos um vWF de ligação a ISVD, como ALX 0081 ou ALX 0081-A, foi eficaz em pacientes que experimentaram uma exacerbação de um TTP (Exemplo 7.13).

[00181] Além disso, foi demonstrado que a administração de polipeptídeos de acordo com a invenção, compreendendo pelo menos um vWF de ligação a ISVD, como ALX 0081 ou ALX 0081-A, foi eficaz em pacientes na redução da refratariedade.

[00182] Embora a terapia atual de TTP com PE e transfusão tenha reduzido significativamente as taxas de mortalidade por TTP, foi mostrado que a terapia de linha de frente da administração dos polipeptídeos de acordo com a invenção, compreendendo pelo menos um vWF de ligação a ISVD, tal como ALX 0081 ou ALX 0081-A, era excepcionalmente vantajoso. Por exemplo, pode-se ganhar um tempo valioso ao usar o caplacizumabe como terapia de linha de frente.

[00183] Portanto, a invenção fornece um efeito prolongado e inesperadamente sustentado, exacerbações reduzidas, hospitalização reduzida, morbidade reduzida, um número reduzido de PEs necessários, isquemia reduzida, refratariedade reduzida, dano de órgão reduzido e/ou número reduzido de mortes, mesmo no quadro mais grave da doença nos episódios iniciais de TTP.

[00184] Portanto, a invenção refere-se ao uso dos polipeptídeos da invenção para tratar ou melhorar uma doença relacionada com o vWF em um paciente, tal como TTP, por uma diminuição inesperadamente grande no tempo de resposta, demonstrada por uma recuperação acelerada de plaquetas. A invenção também fornece PEs menos frequentes, enquanto mantém a recuperação das plaquetas no paciente humano por períodos inesperadamente prolongados. Consequentemente, são fornecidos métodos para diminuir o tempo de resposta em um paciente humano, administrando ao paciente um polipeptídeo da invenção, em que a quantidade do polipeptídeo administrado é eficaz para alterar um ou mais marcadores de doença de TTP, tal como o número de plaquetas, trombocitopenia, função neurocognitiva, níveis de ADAMTS13 e títulos de anticorpos anti- ADAMTS13, níveis de atividade de ADAMTS13, marcador cardíaco (Troponina T (TnT ou cTnT) ou Troponina I (TnI ou cTnI)), BNP (peptídeo natriurético cerebral) ou N-terminal pro peptídeo natriurético cerebral(NT proBNP) e marcadores de danos cerebrais (como NSE (enolase específica de neurônios) e Sβ100 (S100beta)), preferivelmente um aumento no número de plaquetas.

[00185] Além disso, o polipeptídeo da invenção, quando administrado a um paciente humano com TTP, era seguro, conforme examinado por marcadores de laboratório de segurança, tal como o cromógeno RICO, vWF e FVIII. Embora houvesse um potencial para um risco aumentado de sangramento, isso era totalmente gerenciável.

[00186] Os marcadores podem ser medidos usando métodos padrões conhecidos e usados por uma pessoa versada na técnica, tal como vários ensaios imunológicos, incluindo ensaios de imunoabsorção enzimática (ELISA; também conhecido como imunoensaio enzimático (EIA)), radioimunoensaios ou ensaios imunoenzimétricos. Ensaios químicos, colorimétricos e baseados em enzimas também podem ser utilizados quando adequado.

[00187] Em conformidade, a presente invenção fornece um polipeptídeo compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF, preferivelmente ALX 0081 ou ALX 0081-A, para uso no tratamento deuma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, tal como o TTP, administrando ao humano uma dose de 5 a 40 mg do referido polipeptídeo repetidamente, em que a dose é seguida dentro de 15 minutos a 4 h por uma primeira PE.

[00188] Os polipeptídeos da invenção foram administrados como tratamento adjuvante em momentos específicos relativos aos procedimentos de PE para tratar ou prevenir (por exemplo, reduzir ou melhorar um ou mais sintomas associados a) uma doença relacionada com o vWF, por exemplo, TTP.

[00189] O termo "tratando" (tratando, tratamento) refere-se à administração de uma terapia em uma quantidade, maneira e/ou modo eficaz para melhorar uma condição, sintoma ou parâmetro associado a uma doença ou para impedir a progressão de uma doença, em um grau estatisticamente significativo ou em um grau detectável por alguém versado na técnica. No caso de uso terapêutico, o tratamento pode melhorar, curar, manter ou diminuir a duração da doença ou condição no indivíduo. Em usos terapêuticos, o indivíduo pode ter uma manifestação parcial ou total dos sintomas. Em um caso típico, o tratamento melhora a doença ou condição do indivíduo em uma extensão detectável por um médico ou evita o agravamento da doença ou condição. Por exemplo, as características clínicas e os sinais em um episódio agudo de TTP, conforme mostrado na Tabela 1 ou conforme fornecido nas diretrizes de tratamento de TTP (Scully et al. 2012 supra), melhoram. Por exemplo, devido ao tratamento, a contagem de plaquetas normaliza, o título de autoanticorpo de ADAMTS13 diminui e/ou a atividade de ADAMTS13 aumenta, tudo como conhecido na técnica e/ou mais detalhadamente aqui (cf. infra). Uma quantidade efetiva, maneira ou modo pode variar de acordo com o indivíduo e pode ser adaptado ao indivíduo.

[00190] O termo "período de tratamento" refere-se ao intervalo de tempo em que um paciente é tratado, o que pode incluir PE e/ou administração do polipeptídeo da invenção, e opcionalmente outros medicamentos, como, por exemplo, esteróides ou rituximabe. Em uma modalidade preferida, o período de tratamento refere-se à administração do polipeptídeo da invenção a um paciente em necessidade do mesmo, em que a referida administração é repetida durante pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10 dias, ou mesmo mais do que 10 dias, tal como 20 dias, preferivelmente mais que 30 dias, tal como 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses ou ainda mais.

[00191] Como usado aqui, o termo "prevenção" significa mitigar um sintoma do distúrbio referenciado. Em particular, o referido termo abrange a gama completa de efeitos terapeuticamente positivos da administração de um polipeptídeo da invenção a um indivíduo, incluindo a redução de, mitigação e alívio de um distúrbio relacionado ao vWF, por exemplo, TTP e sintomas do mesmo.O termo "prevenção" inclui a prevenção ou adiamento do desenvolvimento da doença, prevenção ou adiamento do desenvolvimento de sintomas e/ou uma redução na gravidade de tais sintomas que irão ou se espera que se desenvolvam. Isso inclui a melhoria dos sintomas existentes, a prevenção de sintomas adicionais e a melhora ou prevenção das causas subjacentes dos sintomas.

[00192] Conforme usado neste documento, os termos "indivíduo" e "paciente" são usados de forma intercambiável. Conforme usado aqui, os termos "indivíduo" e "indivíduos" se referem a um animal, por exemplo, um mamífero incluindo um não primata (por exemplo, uma vaca, porco, cavalo, burro, cabra, camelo, gato, cachorro, cobaia, rato, camundongo, ovelha) e um primata (por exemplo, um macaco, como um macaco cynomolgus, chimpanzé, gorila e um ser humano). Um "paciente" refere-se preferivelmente a um ser humano. O referido paciente pode incluir idosos, adultos, adolescentes e crianças, de qualquer idade, por exemplo, crianças de 2 anos a menos do que 12 anos, adolescentes de 12 a menos do que 18 anos, adultos de 18 anos a menos do que 65 anos e idosos a partir de 65 anos.

[00193] Exemplos não limitativos de doenças relacionadas ao vWF que podem ser tratadas em particular, mas não se limitam a, por exemplo, síndrome coronariana aguda (SCA), ataque isquêmico cerebral transitório, angina do peito instável ou estável, acidente vascular cerebral, infarto do miocárdio, púrpura trombocitopênica trombótica (TTP) e síndrome de Upshaw-Schülman, preferivelmente TTP.

[00194] Os procedimentos de PE para tratar ou prevenir uma doença relacionada com o vWF, como por exemplo, TTP, foram descritos no consenso e nas diretrizes sobre o diagnóstico e tratamento de TTP e outras microangiopatias trombóticas (Scully et al. 2017 supra), que é explicitamente incorporado aqui por referência. Remissão completa é definida como contagem normal de plaquetas, isto é, > 150.000/µl, e opcionalmente a ausência de exacerbações (cf. Scully et al. 2012, 2017, supra).

[00195] Como usado aqui, o "tempo de resposta" é o tempo entre o primeiro tratamento de um paciente com um episódio agudo de TTP, por exemplo, um episódio inicial e/ou episódio recorrente de TTP e uma contagem de plaquetas de >150.000/µl, em que o primeiro tratamento é uma PE ou a administração de um polipeptídeo da invenção, ou ambos, o que ocorrer primeiro.

[00196] Como usado aqui, o termo "refratariedade" ou "refratário" refere-se a trombocitopenia persistente, falta de aumento sustentado da contagem de plaquetas ou contagem de plaquetas de< 50 * 109 L-1e um nível persistentemente aumentado de LDH (> 1,5 ULN) apesar de 5 PEs e tratamento com esteróides, incluindo indivíduos que não obtiveram remissão ou cuja contagem de plaquetas e nível de LDH melhoram, mas pioram apesar do tratamento em andamento

[00197] O termo "Troca Plasmática" ("PE" ou "PEX") refere-se a um procedimento terapêutico usado para tratar uma variedade de doenças,

incluindo a TTP, por meio da remoção em massa de plasma, isto é, um procedimento em que um grande volume de plasma é removido, geralmente de 1 a 1,5 volumes de plasma, que é substituído com um fluido de reposição (Winters 2012 Hematology ASH Education Book 1:7- 12). Através da remoção e substituição em volume de plasma, a PE remove substâncias patológicas, como autoanticorpos contra ADAMTS13 e ULvWF, mas também algumas plaquetas. O plasma é usado como um fluido de substituição para substituir ADAMTS13 no tratamento de TTP (McLeod Best Pract Res Clin Haematol. 2006; 19: 157-167). A remoção e substituição de volume de plasma também tem implicações nos testes de laboratório, tornando intrincados os testes dos pacientes.

[00198] Como a PE envolve a remoção em volume de plasma, qualquer coisa que circule no plasma será removida. Portanto, esse procedimento não é seletivo, removendo componentes plasmáticos normais e patológicos, mas também quaisquer medicamentos para tratar a TTP administrada antes da PE.

[00199] Não obstante os benefícios da PE no tratamento da TTP, na presente invenção foi demonstrado que o caplacizumabe é benéfico quando iniciado como terapia de linha de frente. O termo terapia de "linha de frente" (ou tratamento de linha de frente) refere-se ao primeiro tratamento (também conhecido como tratamento de "primeira linha") administrado a uma doença, por exemplo, TTP. Ao lado da terapia de linha de frente, tratamento adicional pode ser adicionado ou usado, tal como PE e tratamento imunossupressor adjuvante (por exemplo, corticosteróides como (metil)-prednisolona ou (metil)-prednisona; ou rituximabe), agentes antiplaquetários (por exemplo, aspirina), terapia de suporte com transfusão de hemácias ou suplementação de folato, tratamento com vincristina ou ciclosporina, anticorpos anti- autoADAMTS13 ou ADAMTS13.

[00200] A pessoa versada na técnica está bem familiarizada em determinar o número de plaquetas. A contagem de plaquetas pode ser realizada por qualquer método conhecido na técnica, como manualmente usando um hemocitômetro ou com um analisador automático, por exemplo, contagem eletrônica. As contagens também podem ser estimadas durante o exame de esfregaço de sangue. O método microcroscópico usa um microscópio de contraste de fase para visualizar o sangue em uma lâmina de hemacitômetro. A contagem eletrônica de plaquetas é o método mais comum. Existem dois tipos de sistemas de contagem eletrônica, de pulso de tensão e de contagem eletro-óptica. Por exemplo, o analisador de hematologia ADVIA® pode ser usado para obter contagens de plaquetas e verificar a contagem obtida estimando contagens no esfregaço de sangue manchado de Wright. O ADVIA mede as plaquetas por citometria de fluxo com base nos princípios da dispersão da luz. Por exemplo, as plaquetas são identificadas pelo tamanho (< 30 FL, dispersão da luz em ângulo baixo) e índice de refração (n = 1,35 en = 1,40 ou dispersão da luz em ângulo alto).

[00201] Em vários pacientes após um episódio agudo de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e ou episódios recorrentes de TTP, o polipeptídeo da invenção compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF, por exemplo, ALX 0081 ou ALX 0081-A, foi administrado após o referido paciente ter recebido uma EP ("EP anterior"; uma EP anterior à administração da primeira dose do polipeptídeo da invenção).

[00202] Consequentemente, a presente invenção refere-se à realização de uma EP (EP precedente) a um paciente em necessidade do mesmo, por exemplo, um paciente com um episódio agudo de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódios recorrentes de TTP, seguido por uma próxima PE dentro de 24 horas da referida PE anterior e administrando um polipeptídeo da invenção ("primeira dose")

cerca de 8 horas, 7 horas, 6 horas, 5 horas, 4 horas, 3 horas, 3 horas, 1 hora, 45 minutos, 30 minutos, 20 min, 15 minutos, 10 minutos ou até 5 minutos antes de iniciar a próxima PE, como de 6h a 15 min antes de iniciar a próxima PE (a "primeira PE").Na presente invenção, o termo "primeira dose" significa a primeira administração de um polipeptídeo da invenção a um paciente em necessidade do mesmo, por exemplo, após um episódio agudo de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio(s) recorrente(s) de TTP.

[00203] Em uma modalidade, uma administração do polipeptídeo da invenção a um paciente, preferivelmente uma primeira dose, é seguida dentro de 5 minutos a 8 horas, dentro de 10 minutos a 6 horas ou 15 minutos a 4 horas, por exemplo, dentro de 8 horas, 7 horas, 6 horas, 5 horas, 4 horas, 3 horas, 3 horas, 1 hora, 45 minutos, 30 minutos, 20 minutos, 15 minutos, 10 minutos ou até 5 minutos por uma PE.

[00204] Na presente invenção, o termo "primeira PE" significa a primeira PE realizada após (ou em alguns casos simultaneamente com) administração a um paciente de uma primeira dose do polipeptídeo da invenção.

[00205] O polipeptídeo da invenção pode ser administrado ou utilizado para administração na forma de uma solução líquida (por exemplo, soluções injetáveis e infusíveis). Tais composições podem ser administradas por um modo parentérico (por exemplo, injeção subcutânea, intraperitoneal ou intramuscular) ou por inalação. As frases "administração parenteral" e "administrada parenteralmente", conforme usadas neste documento, significam modos de administração diferentes da administração enteral e tópica, geralmente por injeção, e incluem administração subcutânea (s.c.) ou intramuscular, bem como administração intravenosa (i.v.), injeção e infusão intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcuticular, subcapsular, subaracnóide, intraespinal, epidural e intraesternal. Preferivelmentea segunda ou mais doses dos polipeptídeos da invenção aqui descritos são administradas por via subcutânea.

[00206] Preferivelmente, a administração da primeira dose de um polipeptídeo da invenção após um episódio agudo de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio(s) recorrente de TTP é uma injeção intravenosa em bolus, por exemplo, administrando o polipeptídeo através de uma linha intravenosa administrado de uma só vez, por um período de um ou dois minutos. Ainda mais preferivelmente, a administração da primeira dose de um polipeptídeo da invenção após um episódio agudo de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio(s) recorrente(s) de TTP é umainjeção intravenosa por pressão, por exemplo, administrando o polipeptídeo através de uma linha intravenosa, administrado de uma só vez, por um período de cerca de 30 segundos ou menos.

[00207] Os inventores, considerando que o polipeptídeo da invenção é seguro para uso como foi demonstrado em estudos anteriores em voluntários saudáveis e no presente estudo com pacientes com TTP (cf. Exemplos), pode ser difícil diagnosticar a TTP, especialmente um episódio TTP inicial, e que qualquer tempo perdido antes do início do tratamento resulta em adversidades, concluiram que essa descoberta tem o benefício de que um tratamento com o polipeptídeo da invenção já pode ser iniciado oportunamente, mesmo antes de o paciente entrar em um hospital, como, por exemplo, em uma ambulância. De preferência, o polipeptídeo da invenção, tal como o ALX 0081 ou o ALX 0081-A, é administrado por uma injeção intravenosa por pressão, uma vez que isso pode ser realizado facilmente fora dos hospitais, economizando tempo valioso.

[00208] Assim, a presente invenção refere-se à administração a um paciente em necessidade do mesmo, tal como, por exemplo, pacientes com episódios agudos (crises agudas) de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio(s) recorrente(s) de TTP, um polipeptídeo da invenção cerca de 8 horas, 7 horas, 6 horas, 5 horas, 4 horas, 3 horas, 3 horas, 1 hora, 45 minutos, 30 minutos, 20 minutos, 15 minutos, 10 minutos ou até 5 minutos antes de iniciar a PE, como de 6h a 15 minutos antes do início da PE ("primeira dose").

[00209] Em uma modalidade, a administração de uma primeira dose de um polipeptídeo da invenção após um episódio agudo de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio(s) recorrente(s) de TTP é seguido por uma PE ("primeira PE"). Esta primeira PE, precedida ou não de uma PE anterior, é seguida pela administração de uma segunda dose ou mais do polipeptídeo da invenção ("segunda dose" ou "dose adicional"). Preferivelmente, a segunda dose ou dose adicional é administrada dentro de 120, 90 ou 60 minutos, como dentro de 1 a 60 minutos, por exemplo, dentro de 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 5, 4, 3, 2 ou até 1 minuto após a primeira PE. Em alguns casos, pode ser vantajoso administrar a segunda dose ou mais em conjunto ou simultaneamente com o fluido de reposição, por exemplo, o plasma da PE.

[00210] Em modalidades adicionais, uma primeira dose, uma segunda dose ou outra dose do polipeptídeo da invenção é de cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35 ou 40, 50, 60, 70 ou 80 mg, 5 a 40 mg, ainda mais preferivelmente, 10 mg ou 11 mg, que podem ser administrados a um paciente que precisa fazer o mesmo, preferivelmente por dia.Para administração a pacientes jovens, tal como, por exemplo, crianças e adolescentes, a dose pode ser ajustada ao peso do paciente. Em modalidades particulares, a dose é de cerca de 0,01, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,12, 0,14, 0,15, 0,16, 1,08, 0,2, 0,22, 0,24 ou 0,25 mg/kg, preferivelmente 0,143 mg/kg, o que corresponde a uma dose de 10 mg em um adulto de

70 kg. Em outras modalidades, a dose é de cerca de 5 mg se o peso corporal da referida criança ou adolescente for < 40 kg.

[00211] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se à administração de cerca de 5 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg de um polipeptídeo da invenção, por exemplo, ALX 0081 ou ALX 0081- A, dentro de 1 a 60 minutos após um procedimento de PE, por exemplo, a primeira PE, a segunda PE ou outra PE.

[00212] Em uma modalidade, o polipeptídeo da invenção, por exemplo, ALX 0081 ou ALX 0081-A, é administrado uma vez por dia ou duas vezes por dia a um paciente com TTP em necessidade do mesmo, preferivelmente um paciente com uma contagem de plaquetas abaixo de 100.000/µl de plasma e/ou paciente com atividade de ADAMTS13 de < 10% tal como < 5%.

[00213] Em uma modalidade adicional, um paciente de TTP em necessidade do mesmo é tratado com (i) PE; e (ii) uma dose de 5 a 40 mg preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo 60 min a 1 minuto após o referido PE da etapa (i), em que a etapa (i) e a etapa (ii) sejam repetidas uma ou duas vezes por dia até que a contagem de plaquetas do referido paciente seja de pelo menos 50.000/µl de plasma, como 75.000, 100.000, 125.000 ou mesmo 150.000 por µl de plasma.

[00214] Em alguns casos, pode ser vantajoso repetir a etapa (i) e a etapa (ii) por um período mínimo de dois dias após a remissão completa (uma contagem de plaquetas > 150.000/µl de plasma).

[00215] Em uma modalidade, 5 a 40 mg do polipeptídeo da invenção é administrado diariamente ou duas vezes ao dia por pelo menos 5, 10, 15, 20, 25, 30, 60, 90 ou mesmo 120 dias após a contagem de plaquetas do referido paciente ser > 150.000/µl de plasma, particularmente quando a atividade de ADAMTS13 do referido paciente é <10%, tal como <5%, ou após a última PE.

[00216] Portanto,a administração de polipeptídeos compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF, tal como ALX 0081 ou ALX 0081-A, em pacientes com TTP humanos após um episódio agudo de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio(s) recorrente(s) de TTP fornece uma diminuição inesperada no tempo de resposta, independentemente da ordem de administração do referido polipeptídeo e da referida PE, por exemplo, se a PE é realizada antes ou após a administração da primeira dose do polipeptídeo da invenção.

[00217] Foi ainda surpreendentemente descoberto que o número de exacerbações diminuiu durante o período de tratamento duplo cedo (DB), quando os pacientes foram trocados para caplacizumabe de rótulo aberto ("OL"), juntamente com o reinício do tratamento diário de troca plasmática (PEX) e imunossupressão, mantendo os cegos para a alocação inicial do tratamento (cf. Exemplo 7.13).

[00218] O termo "exacerbação", conforme usado aqui, refere-se a trombocitopenia recorrente após uma resposta plaquetária confirmada e exigindo um reinício do tratamento diário com PE após ≥ 1 dia, mas ≤ 30 dias após a última PE diária.

[00219] Isso indica que o polipeptídeo da invenção, tal como ALX 0081 ou ALX 0081-A, pode ser o único responsável por tratar e/ou aliviar (os sintomas de) TTP.

[00220] Consequentemente, a presente invenção refere-sea um polipeptídeo compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF, como ALX 0081 ou ALX 0081-A, para uso no tratamento de uma doença relacionada a vWF, como TTP, em um ser humanoem necessidade do mesmo, administrando ao humano uma dose de 1 a 80 mg ou 5 a 40 mg, tal como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70 ou 80 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo se o referido ser humano tiver peso corporal ≥ 40 kg e 5 mg se o referido peso corporal for <40 kg.

[00221] Com base nas observações surpreendentes aqui contidas, um protocolo de tratamento otimizado adicional foi projetado pelos presentes inventores, em essência com base na ideia de que a distribuição do tempo de resposta confirmado de plaquetas é mais curta e não distorcida e tendenciosa para a direita (mais tempo para responder) no grupo de CAP (caplacizumabe) em comparação com o grupo de placebo. No protocolo de tratamento otimizado adicional, todos os indivíduos são tratados com um período fixo de tratamento de PE, que é definido por 3 a 5 dias, tal como 3 dias ou 4 dias ou 5 dias, preferivelmente 3 dias. Nesse caso, o período de tratamento com PE pode ser independente da recuperação de plaquetas (> 150.000/µl). No protocolo de tratamento otimizado, a carga para o paciente e os custos são reduzidos.

[00222] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um polipeptídeo compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF, tal como ALX 0081 ou ALX 0081-A, para uso no tratamento de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, compreendendo : (i) realizar uma PE; e (ii) administrar uma dose de 5 a 40 mg, como 10 mg ou 11 mg do polipeptídeo da invenção 15 minutos a 4 h após o referido PE da etapa (i), em que etapa (i) e etapa ( ii) são repetidos uma vez por dia por 3 a 5 dias, como 3 dias, 4 dias ou 5 dias, preferivelmente 3 dias; seguido por compreender ainda a administração uma vez por dia de uma dose de 5 a 40 mg, tal como 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo por pelo menos 10 dias, como pelo menos 20 dias ou pelo menos 30 dias e/ou pelo menos 10 dias, tal como pelo menos 20 dias ou pelo menos 30 dias após a contagem de plaquetas do referido paciente ter sido pela primeira vez>150.000/µl.

[00223] No presente estudo, por até um ano, pacientes com TTP foram acompanhados para remissão. O termo "remissão", Como usado aqui, refere-se à resposta plaquetária confirmada e à ausência de exacerbação. O termo "resposta plaquetária confirmada", conforme usado aqui, refere-se ao tempo de resposta do tratamento, conforme definido por uma recuperação de plaquetas ≥ 150.000/µL, cuja resposta deve ser confirmada 48 horas após a notificação inicial da recuperação plaquetária acima 150.000/µL por uma nova medida de plaquetas ≥

150.000/µL, epreferivelmente LDH ≤ 2 X ULN.

[00224] Como observado acima, a contagem de plaquetas é o principal meio para avaliar a remissão. A medição da atividade de ADAMTS13 em pacientes com histórico de TTP clássica é importante porque níveis baixos demonstraram ser preditivos de recaída. No entanto, não está claro no momento (e os dados são conflitantes) se o título de um anti-corpo inibitório para o ADAMTS13 é significativo, isto é, se aqueles indivíduos com um anticorpo anti-ADAMTS13 de alto título têm maior probabilidade de recair do que aqueles com um baixo título. O especialista na técnica reconhece que os testes atuais do ADAMTS13 são realizados sob condições estáticas e nem sempre refletem com precisão as alterações fisiológicas que ocorrrm in vivo (http://practicalhaemostasis.com/Miscellaneous/Miscellaneous%20Test s/adamts13_assays.html).

[00225] A remissão parece mais pronunciada para o subgrupo de indivíduos com baixa atividade de ADAMTS13 de linha de base (isto é, menos de 10%, como menos de 5%), ao iniciar o tratamento, por exemplo, administrar a primeira dose do polipeptídeo da invenção, tal como ALX 0081 ou ALX 0081-A.

[00226] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um polipeptídeo compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF para uso no tratamento de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, administrando ao referido ser humano uma primeira dose de 1 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo, até que a contagem de plaquetas do referido ser humano ser >150000/µl. Em um aspecto preferido, o referido ser humano tem uma atividade de ADAMTS13 inferior a 10%, tal como inferior a 5% ao administrar o referido polipeptídeo.

[00227] O termo "recaída", conforme usado aqui, refere-se a um novo evento de TTP que ocorre depois de 30 dias após a última PE diária.

[00228] A atividade de ADAMTS13 é um marcador preditivo para recorrências de TTP e seu potencial para decisões de tratamento. A atividade de ADAMTS13 é capaz de prever recaídas que ocorrem logo após a interrupção do tratamento com caplacizumabe. Essas recaídas são consideradas recaídas do episódio TTP presente (atividade não resolvida da doença, com base na atividade ADAMTS13 continuamente baixa). Um período de tratamento de 30 dias (pós PE) com caplacizumabe demonstrou ter um impacto significativo no número de exacerbações. Portanto, estender o período de tratamento com caplacizumabe para os pacientes em risco de recaída (isto é, com atividade subjacente da doença com base na atividade de ADAMTS13) manterá os efeitos protetores do caplacizumabe até que a doença subjacente seja tratada e resolvida adequadamente. Por outro lado, o tratamento preventivo com caplacizumabe reduzirá o risco de um novo episódio agudo de TTP.

[00229] Portanto, o tratamento com polipeptídeo da invenção, tal como ALX 0081 ou ALX 0081-A, deve ser continuado por períodos mais longos em comparação com pacientes com maior atividade de ADAMTS13. O polipeptídeo da invenção deve ser administrado a um paciente com TTP para reduzir o risco e/ou evitar a chance de recaída(s) até que a atividade de ADAMTS13 seja de pelo menos 10%, pelo menos 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, ou ainda 50% em comparação com a atividade normal ou de referência.

[00230] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um polipeptídeo compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF para uso na redução do risco e/ou prevenção de um episódio agudo de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio(s) recorrenteS) de TTP em um ser humano em necessidade do mesmo, compreendendo uma etapa (i): administrar ao referido ser humano uma dose de 5 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg, do referido polipeptídeo. De preferência, o referido risco é reduzido por um fator de pelo menos 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,75, 1,8, 2 ou mais, tal como 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou mesmo 10, ou ainda mais, tal como 20, 50 ou ainda 100. De preferência, o referido risco é reduzido em 10% ou ainda mais, tal como 20%, 30%, 40%, 50%, 60% ou mais, tal como 80% ou ainda 100%.

[00231] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um polipeptídeo como aqui descrito, para uso em tratamento e/ou prevenção de doenças relacionada pelo vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, em que a referida etapa de administração ao referido do referido polipeptídeo é repetida durante pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 vezes, ou mesmo mais que 10 vezes, igual a 20 vezes, preferivelmente mais do que 30 vezes ou ainda mais.

[00232] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um polipeptídeo como aqui descrito, para uso no tratamento e/ou prevenção de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, em que a referida etapa de administração ao referido polipeptídeo humanoé repetida durante pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10 dias, ou mesmo mais do que 10dias, tal como 20 dias, preferivelmente mais que 30 dias, tal como 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses ou ainda mais.

[00233] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um polipeptídeo como aqui descrito, para uso no tratamento e/ou prevenção de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, em que a referida dose é administrada 1 vez por dia ou duas vezes por dia.

[00234] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um polipeptídeo como aqui descrito, para uso no tratamento e/ou prevenção de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, compreendendo ainda (ii) comparando a atividade de ADAMTS13 com uma atividade de ADAMTS13 de referência; e (iii) se a referida atividade de ADAMTS13é menor que 30%, tal como 20%, 15%, 10% ou 5% da referida atividade de ADAMTS13 de referência, então repetir a referida etapa (i) de administração ao referido polipeptídeo humano.

[00235] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um polipeptídeo como aqui descrito, para uso no tratamento e/ou prevenção de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, em que a referidaatividade de ADAMTS13 do referido pacienteé medida e/ou comparada a cada dia, ou a cada 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 dias, de preferência pelo menos uma vez a cada semana.

[00236] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um polipeptídeo como aqui descrito, para uso no tratamento e/ou prevenção de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, em que etapa de administrar o polipeptídeo da invenção ao referido ser humanoé repetido até que a referida atividade de ADAMTS13 seja pelo menos 5%, 10%, 15%, tal como 20%, ou ainda 30% ou maior queda referida atividade de ADAMTS13 de referência.

[00237] Consequentemente, um presente invenção refere-se a um polipeptídeo compreendendo dois domínios variáveis simples da imunoglobulina (ISVDs) do fator de ville Willebrand anti-humano (vWF) para uso no tratamento (os sintomas de) de uma exacerbação de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano, compreendendo a administração ao referido ser humano de uma dose de 1 a 80 mg, preferivelmente 5 a 40 mg, ainda mais preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo, uma vez por dia ou duas vezes por dia, até que uma atividade de ADAMTS13 seja superior a 10% de uma atividade de ADAMTS13 de referência; repetindo opcionalmente a referida etapa de administração até que a atividade de ADAMTS13 seja superior a 10% de uma atividade de ADAMTS13 de referência por pelo menos 2 dias, tal como pelo menos 5 dias, 7 dias ou ainda mais, tal como 14 dias, 21 dias ou ainda menos de 1 mês.

[00238] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um polipeptídeo compreendendo dois domínios variáveis simples da imunoglobulina (ISVDs) do fator von Willebrand anti-humano(vWF) para uso no tratamento (os sintomas de) de uma recaída de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano, compreendendo administrar ao referido ser humano, uma dose de 1 a 80 mg, preferivelmente 5 a 40 mg, ainda mais preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo, uma vez por dia ou duas vezes por dia, até que uma atividade de ADAMTS13 seja superior a 10% de uma atividade de ADAMTS13 de referência; repetir opcionalmente a referida etapa de administração até que a atividade de ADAMTS13 seja superior a 10% de uma atividade de ADAMTS13 de referência por pelo menos 2 dias, tal como pelo menos 5 dias, 7 dias ou ainda mais, tal como 14 dias, 21 dias ou ainda pelo menos 1 mês.

[00239] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um polipeptídeo como aqui descrito, para uso no tratamento e/ou prevenção de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, em que etapa de administração ao referido polipeptídeo humano é repetido até que a referida atividade de ADAMTS13 seja pelo menos 5%, 10%, 15%, tal como 20% ou 30% da referida atividade de ADAMTS13 de referênciaem pelo menos duas medições consecutivas. Preferivelmente, as referidas duas medições consecutivas são pelo menos 24 horas, mais preferivelmente 48 horas de intervalo, tal como pelo menos 3 dias de intervalo ou ainda mais, tal como 4, 5, 6 ou até 7 dias de intervalo, preferivelmente uma semana de intervalo.

[00240] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um polipeptídeo como aqui descrito, para uso no tratamento e/ou prevenção de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano em necessidade do mesmo, conforme descrito aqui, em que a referida etapa de administração ao referido polipeptídeo humano é repetida durante pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10 dias, ou mesmo mais do que 10 dias, tal como 20 dias, preferivelmente mais que 30 dias ou ainda mais,depois que a referida atividade de ADAMTS13 for pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, tal como 20% ou pelo menos 30% da referida atividade de referência em pelo menos duas medições consecutivas.

[00241] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um polipeptídeo compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF para uso na redução do risco e/ou prevenção de um episódio agudo de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio(s) recorrente(s) de TTP em um ser humano em necessidade do mesmo, compreendendo a etapa (i): administrar ao referido ser humano uma dose de 5 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo, compreendendo ainda - medir a atividade de ADAMTS13 do referido paciente; - comparar a referida atividade de ADAMTS13 com uma atividade de ADAMTS13 de referência; e - se a referida atividade de ADAMTS13 é > 5%, tal como > 10%, ou ainda > 15%, ou mais do que 20% ou 30% da referida atividade de ADAMTS13 de referência, então repetir a referida etapa (i) por no máximo 30 dias, tal como no máximo 20 dias, ou ainda 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 dias ou mesmo 1 dia.

[00242] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um polipeptídeo compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF para uso na redução do risco e/ou prevenção de um episódio agudo de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio(s) recorrente(s) de TTP em um ser humano em necessidade do mesmo, compreendendo pelo menos as seguintes etapas: (i) medir opcionalmente aAtividade de ADAMTS13 do referido paciente; (ii) comparar opcionalmente a referida atividade de ADAMTS1com uma atividade de ADAMTS13 de referência; e (iii) se a referida atividade de ADAMTS13é menor que 30%, 20%, 15%, 10% ou 5% da referida atividade de referência, então adiministrar ao referido ser humano uma dose de 5 a 40 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeocompreendendo pelo menos umISVD contra vWF.

[00243] Como usado aqui, reduzir risco ou incidência inclui diminuir a probabilidade ou incidência de uma indicação, um sintoma ou resultado de doença relacionada com o vWF, tal como TTP, para um indivíduo comparado a uma relevante, por exemplo, não tratada, população de controle ou ao mesmo indivíduo antes do tratamento de acordo com a invenção.

[00244] Uma indicação, um sintoma ou resultado de uma doença relacionada com o vWF, tal como TTP, conforme usado aqui inclui qualquer dano a órgão, dano isquêmico, formação de microtrombos, exacerbações, mortalidade, recaídas, refratariedade, um ou mais marcadores de doença de uma doença relacionada com o vWF, como TTP, incluem o número de plaquetas, trombocitopenia, função neurocognitiva, níveis de ADAMTS13 e títulos de anticorpo anti-

ADAMTS13, níveis de atividade de ADAMTS13, marcador cardíaco (Troponina T ou Troponina I), BNP (peptídeo natriurético cerebral) ou pró-peptídeo natriurético cerebral N-terminal (NT proBNP), creatinina e marcadores de danos cerebrais (como NSE (enolase específica de neurônios) e Sβ100 (S100beta)), preferivelmente marcadores de danos a órgãos, tais como níveis de LDH, níveis de troponina T e/ou troponina I e/ou níveis de creatinina.

[00245] O risco ou incidência reduzido pode incluir atrasar ou impedir o início de uma indicação, sintoma ou resultado de doença relacionada com o vWF, tal como TTP. O risco ou a incidência também podem ser reduzidos se a gravidade de uma indicação, um sintoma ou resultado de uma doença relacionada com o vWF, tal como o TTP, for reduzida a um nível que não seja relevante para a clínica. Isto é, a indicação, sintoma ou resultado de uma doença relacionada com o vWF, como o TTP, pode estar presente, mas em um nível que não ponha em risco a vida, as atividades e/ou o bem estar do indivíduo. Em algumas circunstâncias, a ocorrência da doença relacionada com o vWF, tal como o TTP, é reduzida na medida em que o indivíduo não apresenta quaisquer sinais da doença relacionada com o vWF, tal como o TTP, durante e/ou após o período de tratamento.

[00246] Será apreciado que nenhuma prova real de risco reduzido para um indivíduo pode ser obtida porque, se o tratamento é fornecido, não se pode dizer se uma indicação, sintoma ou resultado de uma doença relacionada com o vWF, tal como o TTP, teria ocorrido ou teria ocorrido mais cedo na ausência de tal tratamento. Assim, o conceito de risco e risco aumentado ou reduzido referem-se apenas a valores estatísticos. Além disso, a redução do risco de uma indicação, sintoma ou resultado de uma doença relacionada com o vWF, tal como TTP, pode refletir em uma redução na gravidade de uma indicação, um sintoma ou resultado de uma doença relacionada com o vWF, tal como

TTP, bem como na ausência de observação ou atraso na observação de uma indicação, sintoma ou resultado de uma doença relacionada com o vWF, tal como TTP.

[00247] Será apreciado que o polipeptídeo da invenção reduza o risco e/ou prevenção de um episódio agudo de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio(s) recorrente(s) de TTP. Portanto, uma indicação, um sintoma ou resultado de um episódio agudo de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio(s) recorrente(s) de TTP, também é reduzido. Dada a fisiopatologia da TTP adquirida, na qual as cadeias ULvWF consomem plaquetas na formação de microtrombos, considerou-se que a recuperação das contagens de plaquetas é uma medida indireta da prevenção de mais formação de microtrombos. A morbidade e a mortalidade aguda associadas à TTP adquirida são resultado desses microtrombos.

[00248] De fato, esse raciocínio é sustentado pela normalização de marcadores de danos aos órgãos. Em particular, os resultados indicam que os marcadores de danos a órgãos, como troponina I e T, LDH e creatinina, retornam mais rapidamente aos níveis normais em indivíduos que recebem o polipeptídeo da invenção, por exemplo, ALX 0081 ou ALX 0081-A, do que em indivíduos que recebem placebo (cf. Exemplos).

[00249] Portanto, os resultados sugerem que uma taxa de normalização mais rápida desses marcadores de danos a órgãos está ligada a um melhor resultado clínico, isto é, um risco reduzido de e menos danos a órgãos devido à isquemia de órgãos causada por microtrombos e refratariedade reduzida.

[00250] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um método como aqui descrito, em que - o risco de dano de órgãos, dano isquêmico e/ou formação de microtrombos é reduzido em 10%, 20%, 30%, preferivelmentepelo menos 40%, ou ainda pelo menos 50%, tal como 60%, 70%, 80%, 90% ou ainda a 100% (por exemplo, ausência de dano a órgãos, dano isquêmico e/ou formação de microtrombos devido à doença relacionada com o vWF); - o risco de dano de órgãos, dano isquêmico e/ou formação de microtrombos é reduzido emum fator 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,75, 1,8, 2ou mais, tal como 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou ainda 10, ou ainda mais tal como 20, 50 ou ainda 100; - dano de órgãos, dano isquêmico e/ou formação de microtrombos é reduzida preferivelmente em pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, ou ainda pelo menos 50%, tal como 60%, 70%, 80%, 90% ou ainda a 100%; - dano de órgão, dano isquêmico e/ou formação de microtrombos é reduzido por um fator 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,75, 1,8, 2 ou mais, tal como 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou ainda 10, o ainda mais tal como 20, 50 ou ainda 100; - marcadores de danos a órgãos, tal como níveis de LDH, troponina T, níveis de troponina I, e/ou níveis de creatinina, retornam a pelo menos 40%, ou ainda pelo menos 50%, tal como 60%, 70%, 80%, 90% ou ainda a 100% de níveis normais; - marcadores de danos a órgãos, tal como níveis de LDH, troponina T, níveis de troponina I, e/ou níveis de creatinina, melhoram em pelo menos 20%, 30% ou mais, tal como 40%, ou ainda pelo menos 50%, tal como 60%, 70%, 80%, 90% ou ainda a 100% de níveis normais.

Preferivelmente, os referidos marcadores de danos em órgãos, tal como níveis de LDH, níveis de troponina T, níveis de troponina I e/ou creatinina, melhoram em menos de 30 dias de tratamento, preferivelmente em menos do que 20 dias de tratamento, tal como menos do que 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 dias ou ainda dentro 1 dia. - o número de plaquetas é mantido em > 150000/µl.

- o tempo para normalização de plaquetas ( >150000/µl) é reduzido em pelo menos 10%, 20%, 30%, 35%, 39%, preferivelmentepelo menos 40%, ou ainda pelo menos 50%, tal como 60%, 70%, 80%. - o risco de exacerbações é reduzido em pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, ou ainda pelo menos 50%, tal como 60%, 70%, 80%, 90% ou ainda a 100%; - o risco de exacerbações é reduzido por um fator 2 ou mais, tal como 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou ainda 10, ou ainda mais tal como 20, 50 ou ainda 100; - mortalidade devido à referida doença relacionada com o vWF é reduzida em 10%, 20%, 30%, preferivelmentepelo menos 40%, ou ainda pelo menos 50%, tal como 60%, 70%, 80%, 90% ou ainda a 100%; - mortalidade devido à referida doença relacionada com o vWF é reduzida emum fator, 2 ou mais, tal como 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou ainda 10, ou ainda mais tal como 20, 50 ou mesmo 100; - a remissão é aumentada por um fator 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,75, 1,8, 2 ou mais, tal como 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou ainda 10, ou ainda mais tal como 20, 50 ou mesmo 100; - refratariedade é reduzida preferivelmente em pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, ou ainda pelo menos 50%, tal como 60%, 70%, 80%, 90% ou mesmo a 100%; e/ou - refratariedade é reduzida por um fator, 2 ou mais, tal como 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou ainda 10, ou ainda mais tal como 20, 50 ou ainda 100.

[00251] O termo "atividade de referência", conforme usado aqui, refere-se à atividade média do ADAMTS13 de 5 indivíduos saudáveis no ensaio realizado, que é fixado em 100%. Por exemplo, em um ensaio de transferência de energia de ressonância de fluorescência (FRET)- vWF73, a curva de calibração gerada usando um lago de plasma humano normal, no qual o declive da curva de regressão é calculado para cada amostra de calibração e usado para gerar a curva de calibração (linha de tendência: y = ax + b; com x = ADAMTS13 (%) e y = RFU delta/delta de tempo). A atividade de ADAMTS13 (%) de uma amostra é então calculada como: (y - b) x 1/a, por exemplo, como descrito por Kokame et al. (Br J. Haematol. 2005, 129: 93-100). De fato, em geral, os pacientes que recaíram tiveram uma atividade de ADAMTS13 mais baixa do que os pacientes que não recaíram.

[00252] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um polipeptídeo para reduzir o risco de e/ou prevenir dano isquêmico, dano de órgão e/ou formação de microtrombos, para uma instância causável por uma doença relacionada com o vWF, tal como TTP, um episódio de TTP, por exemplo, um episódio inicial de TTP e/ou episódio(s) recorrente(s) de TTP, em um ser humanoem necessidade do mesmo, compreendendo pelo menos a seguinte etapa (i) administrar ao referido ser humano uma dose de 5 a 40 mg/dia, preferivelmente 10 mg/day ou 11 mg/day de um polipeptídeo compreendendo pelo menos um domínio variável simples de imunoglobulina (ISVD) contra o fator von Willebrand (vWF); em que a administração do referido polipeptídeo reduz o risco e/ou evita danos isquêmicos, danos a órgãos e/ou formação de microtrombos em pelo menos 10%, 20%, 30%, preferivelmente pelo menos 40%, ou ainda pelo menos 50%, tal como 60%, 70%, 80%, 90% ou mesmo a 100%. Preferivelmente, a adminitraçãodo referido polipeptídeo reduz o risco e/ou evita danos isquêmicos, danos a órgãos, refratariedade e/ou formação de microtrombos porum fator 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,75, 1,8, 2ou mais, tal como 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou ainda 10, ou ainda mais tal como 20, 50 ou mesmo 100.

[00253] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um polipeptídeo para reduzir o risco de e/ou prevenir danos isquêmicos, danos aos órgãos, refratariedade e/ou formação de microtrombos, conforme descrito aqui, em que a referida etapa de administrar o referido polipeptídeo é repetida durante pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 dias, ou ainda mais, tal como uma semana, duas semanas, 3 semanas, ou ainda mais, tal como 1 mês ou mesmo 2 meses.

[00254] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um polipeptídeo para reduzir o risco de e/ou prevenir danos isquêmicos, danos a órgãos, refratariedade e/ou formação de microtrombos, conforme descrito aqui, compreendendo ainda medir a atividade de ADAMTS13 do referido paciente, preferivelmente uma vez por semana.

[00255] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um polipeptídeo para reduzir o risco de e/ou prevenir danos isquêmicos, danos a órgãos, refratariedade e/ou formação de microtrombos, conforme descrito aqui, em que a referida etapa (i) da administração do referido polipeptídeo é repetida durante pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 dias ou mais, tal como uma semana, duas semanas, 3 semanas, ou mais ainda, tal como 1 mês ou ainda 2 meses quando a atividade de ADAMTS13 for [pela primeira vez]> 5%, tal como> 10%, ou mesmo> 15% de uma atividade de ADAMTS13 de referência.

[00256] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um polipeptídeo da invenção para o tratamento de um sintoma de uma doença relacionada com o vWF, tal como TTP, tal como descrito aqui em um ser humano que sofre da referida doença, compreendendo a administração ao indivíduo de um polipeptídeo da invenção, em uma quantidade eficaz para tratar o sintoma de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano que sofre da referida doença.

[00257] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um polipeptídeo da invenção para inibir em humanos o aparecimento ou progressão de uma doença relacionada com o vWF, tal como TTP, conforme descrito aqui, cuja inibição é efetuada pela ligação de um polipeptídeo que compreende pelo menos um ISVD contra vWF ao vWF, compreendendo a administração ao humano em um intervalo pré-

definido de doses inibitórias efetivas do referido polipeptídeo, em que cada administração do anticorpo fornece ao humano de 0,1 mg por kg a 25 mg por kg do peso corporal, preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo se o referido ser humano tiver peso corporal ≥ 40 kg e 5 mg se o peso corporal for <40 kg, de modo a inibir desse modo o aparecimento ou progressão da doença no humano.

[00258] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um polipeptídeo para reduzir a probabilidade de dano a um órgão isquêmico contraído por uma doença relacionada com o vWF, tal como aqui descrito, que compreende a administração ao humano em uma dose predefinida de um polipeptídeo compreendendo pelo menos um domínio variável simples de imunoglobulina (ISVD) contra o fator von Willebrand (vWF), em que cada administração do anticorpo fornece ao humano de 0,1 mg por kg a 25 mg por kg de peso corporal, preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo se o referido ser humano tiver peso corporal ≥ 40 kg e 5 mg se o referido peso corporal for <40 kg, de modo a reduzir a probabilidade do humano contrair dano isquêmico de órgão.

[00259] A modelagem com base nesses resultados indica que a manutenção da administração de polipeptídeos por períodos prolongados da invenção seria eficaz na prevenção de episódios agudos. Esse perfil vantajoso resulta em um risco menor para a saúde. Portanto, pode-se concluir que o polipeptídeo da invenção evita recaídas.

[00260] Consequentemente, a presente invenção refere-se à administração do polipeptídeo da invenção a cada 1, 2, 3, 4, 5, 6 7 dias ou até 2, 4, 6 ou 8 semanas em doses que variam de 1 a 80 mg, tal como 5 a 40 mg, preferivelmente em prevenção de episódios agudos de TTP. Doses eficazes particulares são de 10 a 20 mg. Em modalidades particulares, a dose compreende cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11,

12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70 ou 80 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg de um polipeptídeo compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF, tal como ALX 0081 ou ALX 0081-A. Doses eficazes particulares em humanos com peso corporal < 40 kg, tal como crianças e adolescentes, são de 2 a 10 mg. Em modalidades particulares, a dose compreende cerca de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 mg, preferivelmente 5 mg de um polipeptídeo compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF, tal como ALX 0081 ou ALX 0081-A.

[00261] Em uma modalidadea presente invenção refere-se a um método de prevenção de recaídas em um paciente com TTP, compreendendo (1) medir opcionalmente a atividade de ADAMTS13 de um paciente com TTP por um ensaio, como um ensaio direto ou indireto; (2) comparar opcionalmente uma atividade de ADAMTS1313 de um paciente com TTP com um valor de referência (valor normal); e (3) se a atividade de ADAMTS13 de um paciente com TTP for inferior a 15%, tal como pelo menos de 10% e inferior a 5%, do valor de referência, então administrar o polipeptídeo da invenção, por exemplo, ALX 0081 ou ALX 0081-A; desse modo impedindo a recivida.

[00262] Resultados preliminares sugerem que a administração da primeira dose do polipeptídeo da invenção antes da primeira PE já resulta em um aumento no número de plaqueta.

[00263] Consequentemente, a presente invenção refere-se à administração do polipeptídeo da invenção em um paciente em necessidade do mesmo, como por exemplo, um paciente com um episódio agudo de TTP, tal como um episódio inicial e/ou recorrente de TTP, uma dose de aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70 ou 80 mg, preferivelmente 10 mg ou 11 mg de um polipeptídeo compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF, tal como ALX 0081 ou ALX 0081-A.

[00264] Os polipeptídeos da invenção compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF, por exemplo, ALX 0081 ou ALX 0081-A, podem ser administrados a um inivíduo (por exemplo, um indivíduo humano) sozinho ou em combinação com um segundo agente, por exemplo, um segundo agente terapeuticamente ou farmacologicamente ativo para tratar ou prevenir (por exemplo, reduzir ou melhorar um ou mais sintomas associados com) uma doença relacionada com o vWF, por exemplo, TTP.

[00265] Exemplos não limitativos de agentes que podem ser usados como um segundo agente terapeuticamente ou farmacologicamente ativo ou coformulado ou com os polipeptídeos da invenção compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF, por exemplo, ALX 0081 ou ALX 0081- A, inclui, por exemplo, tratamento imunossupressor aditivo (por exemplo, corticosteróides como (metil)prednisolona ou (metil)-prednisona; ou rituximabe), agentes antiplaquetários (por exemplo, aspirina), terapia de suporte com transfusão de hemácias ou suplementação tardia, tratamento com vincristina ou ciclosporina, anticorpos anti-auto-ADAMTS13 ou ADAMTS13. Tais terapias combinadas podem utilizar vantajosamente doses mais baixas dos agentes terapêuticos administrados, evitando possíveis toxicidades ou complicações associadas às várias monoterapias.

[00266] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a uma terapia combinada do polipeptídeo da invenção juntamente com um tratamento imunossupressor, em particular o rituximabe, que evita eficazmente recaídas em pacientes com TTP. Preferivelmente, a terapia combinada é fornecida até uma atividade de ADAMTS13 de pelo menos > 5%, tal como > 10%, >15%, >20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% ou ainda normalizado como > 50% da atividade normal.

[00267] A TTP continua sendo um diagnóstico com base na história clínica, no exame do paciente e no filme sanguíneo. Os ensaios ADAMTS13 ajudam a confirmar o diagnóstico e monitorar o curso da doença e a possível necessidade de tratamentos adicionais. Os episódios agudos de TTP podem ser diagnosticados de acordo com a Tabela 1 e as diretrizes de, por exemplo, Scully et al. (2012, 2017 supra) Tabela 1 - Sinais e sintomas clínicos de um episódio agudo de TTP (inicial ou recorrente). Púrpura, epistaxe, hematomas, petéquias, sangramento Trombocitopeni gengival, hematúria,menorragia, sangramento gastrointestinal, a etc. Sinais Confusão, dor de cabeça, paresia, afasia, disartria, problemas neurológicos visuais,encefalopatia, coma, etc. Febre Temperatura corporal >37,5°C Sintomas não Palidez, icterícia, fadiga, artralgia ou mialgia, etc. específicos Insuficiência Proteinúria, micro-hematúria, etc. renal Cardíaco Dor no peito, insuficiência cardíaca, hipotensão, etc. Trato Gastro- Dor abdominal, etc. intestinal

[00268] A eficácia de qualquer polipeptídeo particular da invenção ou regime de dosagem pode ser determinada por métodos disponíveis para aqueles versados na técnica. Resumidamente, durante um ensaio clínico, os pacientes podem ser observados pelo pessoal médico e o estado da doença é avaliado por qualquer combinação de critérios. A melhoria do estado de doença de um paciente é determinada com base nesses critérios em vários momentos e a combinação dessas determinações em uma população de pacientes é plotada para avaliar a eficácia do tratamento.

[00269] Em modalidades exemplares, a avaliação da eficácia pode ser medida por qualquer um ou todos os critérios estabelecidos abaixo:

 Tempo para resposta do tratamento, definido por uma recuperação de plaquetas ≥ 150.000/µL. Essa resposta deve ser confirmada em 48 horas após a notificação inicial de recuperação de plaquetas acima de 150.000/µL por uma nova medida de plaquetas ≥

150.000/µL e preferivelmente por LDH ≤ 2 X ULN  Número de indivíduos com remissão completa  Número de (indivíduos com) exacerbações de TTP e tempo até a primeira exacerbação de TTP. Exacerbação é definida como trombocitopenia recorrente após uma resposta e requer um reinício do tratamento diário com PE após ≥ 1 dia, mas ≤ 30 dias após a última PE diária.  Número de indivíduos com recaída de TTP (definido como evento novo de TTP que ocorre depois de 30 dias após a última PE diária) por um período máximo de 1 ano e tempo para a primeira recaída de TTP  Dados diários de PE, incluindo eventos adversos graves (SAEs) relacionados ao tratamento diário de PE  Função neurocognitiva, medida por uma bateria de testes neurocognitivos, em remissão completa e em 1 ano de acompanhamento. Esse teste será precedido pelo Glasgow Coma Score para medir o estado de consciência do indivíduo  Melhoria da disfunção orgânica e melhora dos sinais e sintomas relacionados à TTP  Mortalidade total dentro do período diário de tratamento com PE e dentro do período subsequente de tratamento com medicamentos (incluindo redução gradual)  Determinação de biomarcadores de TTP, incluindo, mas não limitados a, similar à desintegrina e metaloprotease com níveis de repetições 13 de trombospondina (ADAMTS13) e títulos de anticorpos anti-ADAMTS13.

[00270] A pessoa versada na técnica é familiar para determinar as eficácias.

[00271] Por exemplo, a atividade de ADAMTS13 pode ser avaliada usando eletroforese de multímeros vWF para detectar multímeros ultragrandes não clivados pela protease (Moake et al. (1982) The New England journal of medicine 307, 1432-1435; Furlan, et al. (1997) Blood 89, 3097-3103 7, 8). A atividade de ADAMTS13 pode ser testada utilizando o FRETS-vWF73, um fragmento do vWF modificado quimicamente para emitir fluorescência quando clivado pelo ADAMTS13. No ensaio, o FRETS-vWF73 é adicionado a uma amostra do plasma do paciente e a alteração na fluorescência é medida ao longo do tempo para determinar a atividade de ADAMTS13. Se um inibidor está presente, é frequentemente um anticorpo IgG neutralizante direcionado contra o ADAMTS13, que pode ser medido por ELISA (Kokame et al. (2005) British journal of hematology 129, 93–100). Alternativamente ou em adição, a atividade de ADAMTS13 pode ser determinada como descrito em, por exemplo, Vesely et al. (2003, supra), Fontana et al. (2004, supra) ou Remuzzi et al. (Blood 2002; 100: 778- 7852002). Por exemplo, ensaios de atividade indireta de ADAMTS13 envolvem a detecção de clivagem de produtos de uma molécula de VWF completa ou de um fragmento de VWF que engloba o sítio de clivagem de ADAMTS13 no domínio principal A2 do VWF. (1) Ensaios de Ligação ao Colágeno. O plasma normal ou o VWF purificado são incubados com a amostra de plasma de teste na presença de BaCl2 e uréia a 1,5 M, que desnaturam o VWF. O VWF é clivado pelo ADAMTS13 e o VWF residual é medido por sua ligação ao colágeno Tipo III. O VWF ligado é quantificado usando um ensaio ELISA com um anticorpo anti-VWF conjugado. (2) Agregação induzida por ristocetina. Isto é semelhante ao ensaio de ligação ao colágeno acima, mas o VWF residual é medido pela agregação plaquetária induzida pela ristocetina usando um agregômetro plaquetário. (3) Ensaios de ELISA funcionais. Neste ensaio, um fragmento de VWF recombinante é imobilizado em uma placa ELISA usando um anticorpo para marcador no VWF. O fragmento VWF codifica o domínio A2 e o sítio de clivagem ADAMTS13 em Tyr1605-Met1606 e é marcado com Glutation-S-transferase [GST] - histidina [GST-VWF73-His]. O plasma é adicionado ao fragmento GST- VWF73-His imobilizado e a clivagem do fragmento imobilizado ocorre no sítio de clivagem de ADAMTS13. O fragmento residual de VWF clivado é medido usando um segundo anticorpo monoclonal que reconhece apenas o fragmento de VWF clivado e não o fragmento de interação. A atividade de ADAMTS13 é, portanto, inversamente proporcional à concentração residual do substrato. Este método forma a base do ELISA de atividade TECH-NOZYM® ADAMTS13.

[00272] A pessoa versada na técnica está familiarizada com a determinação de autoanticorpos contra o ADAMTS13, por exemplo, autoanticorpos anti-ADAMTS13 podem ser determinados por ELISA, tal como o TECHNOZYM® ADAMTS13 INH ELISA (Technoclone).

[00273] A pessoa versada na técnica está familiarizada na determinação da atividade do Cofator de Ristocetina em amostras humanas, por exemplo, o Cofator de Ristocetina pode ser determinado pelo vW Select® da Bio/Data corp. em um analisador agregômetro PAP- 8E (Bio/Data corp.).

[00274] A pessoa versada na técnica está familiarizada com a determinação do fator VIII em amostras humanas, por exemplo, usando o fator Coamático VIII (Chro-mogenix) em um analisador de evolução STA-R (Diagnostica Stago).

[00275] A pessoa versada na técnica está familiarizada na determinação do antígeno do fator von Willebrand em amostras humanas, por exemplo, usando um ensaio imunoturbidométrico (por exemplo, usando um teste STA Lia vWF: Ag) em um analisador de evolução STA-R (Diagnostica Stago).

[00276] A pessoa versada na técnica está familiarizada com a determinação dos níveis de LDH. A maioria dos métodos é baseada em uma análise enzimática à base de lactato desidrogenase em um espectrofotômetro. Uma revisão conveniente é fornecida por Medbø et al. (2000) "Examination of four different instruments for measuring blood lactate concentration". Scand J Clin Lab Invest 60:367-380. Várias empresas fornecem ensaios, tal como Abnova (número de catálogo KA1653), que mede a catálise por LDH da interconversão de lactato e piruvato, isto é, um ensaio colorimétrico não radioativo de LDH baseado na redução do sal de tetrazólio MTT em uma reação enzimática acoplada a NADH em uma forma reduzida de MTT que exibe um máximo de absorção a 565 nm. A intensidade da cor roxa formada é diretamente proporcional à atividade enzimática. Da mesma forma, no kit Sigma Aldrich (MAK066-1KT), o LDH reduz o NAD em NADH, o que é especificamente detectado pelo ensaio colorimétrico (450 nm). Os níveis normais são fornecidos na Tabela 1.1 abaixo.

[00277] A pessoa versada na técnica está familiarizada na determinação da troponina I e T. Em geral, a troponina T e I são medidas por métodos de imunoensaio, disponíveis em muitas plataformas diferentes de imunoensaio, por exemplo, DPC Immulite, Abbott AxSYM, Bayer ACS:Centaur, Ortho Vitros, Roche Elecsys, Terceira geração. Uma revisão conveniente é fornecida por Wu et al. (1999) National Academy of Clinical Biochemistry Standards of Laboratory Practice: recommenda-tions for the use of cardiac markers in coronary artery diseases. Clin Chem. Jul 1999; 45 (7): 1104-21. Os níveis normais são fornecidos na Tabela 1.1 abaixo.

[00278] A pessoa versada na técnica está familiarizado com a determinação da creatinina. Uma revisão conveniente é fornecida por Peake e Whiting "Measurement of Serum Creatinine – Current Status and Future Goals" Clin Bio-chem Rev. 2006 Nov; 27 (4): 173-184. Por exemplo, os níveis de creatinina podem ser determinados pelo Abcam Creatinine Assay Kit (ab65340) ou pelo Creativine Assay Kit da BioVision.No ensaio, a creatinina é convertida em creatina pela creatininase, a creatina é convertida em sarcosina, que é oxidada especificamente para produzir um produto que reage com uma sonda para gerar cor vermelha (λmax = 570 nm) e fluorescência (Ex/Em = 538/587 nm). Os níveis normais são fornecidos na Tabela 1.1 abaixo. Como a quantidade de creatinina no sangue aumenta com a massa muscular, os homens geralmente apresentam níveis mais altos de creatinina do que as mulheres. Tabela 1.1: Valores Normais Teste Amostra Unidades Unidades SI convencionais Creatinina Soro 0,7 a 1,3 mg/dL 61,9–115 μmol/L Lactato desidrogenase Soro 60 a 160 U/L 1 a 1,67 μkat/L (LDH) Troponina I Plasma < 0,1 ng/mL < 0,1 μg/L Troponina T Soro ≤ 0,03 ng/mL ≤ 0,03 μg/L

[00279] Será apreciado que os níveis normais fornecidos na Tabela

1.1 podem variar de laboratório para laboratório, entre homens e mulheres e por idade. No entanto, o especialista na técnica considerará que, dependendo do ensaio utilizado, os níveis normais fornecidos pelo fabricante podem normalmente ser usados como referência ou, alternativamente, os níveis normais como avaliados pelo médico em a configuração específica.

[00280] Os polipeptídeos da invenção tipicamente compreendem pelo menos um ISVD contra vWF. Os ISVDs da presente invenção se ligam e/ou têm afinidade pelo vWF ("contra o vWF"). No contexto da presente invenção, "vWF" inclui, entre outros, cynomolgus, babuíno, porco, cobaia, camundongo e/ou vWF humano e mais preferido vWF humano, isto é, entrada SEQ ID Nº: 20 ou GenBank : NP_000543.De preferência, o ISVD contra vWF consiste essencialmente em 4 regiões de estrutura (FR1 a FR4, respectivamente) e 3 regiões de determinação de complementaridade (CDR1 a CDR3, respectivamente), em que: a) CDR1 compreende ou consiste essencialmente de: - a sequência de aminoácido YNPMG; ou - uma sequência de aminoácidos que tem 2 ou apenas 1 diferença de aminoácido coma sequência de aminoácido YNPMG; e b) CDR2 compreende ou consiste essencialmente de: - a sequência de aminoácido AISRTGGSTYYPDSVEG; ou - uma sequência de aminoácido que possui pelo menos 80%, preferivelmente pelo menos 90%, mais preferivelmente pelo menos 95%, ainda mais preferivelmente pelo menos 99% de identidade de sequência coma sequência de aminoácido AISRTGGSTYYPDSVEG; ou - a sequência de aminoácidos que tem duas ou apenas uma diferença de aminoácido coma sequência de aminoácido AISRTGGSTYYPDSVEG; e c) CDR3 compreende ou consiste essencialmente de: - a sequência de aminoácido AGVRAEDGRVRTLPSEYTF; ou - uma sequência de aminoácido que possui pelo menos 80%, preferivelmente pelo menos 90%, mais preferivelmente pelo menos 95%, ainda mais preferivelmente pelo menos 99% de identidade de sequência coma sequência de aminoácido

AGVRAEDGRVRTLPSEYTF; ou - uma sequência de aminoácidos que tem duas ou apenas uma diferença de aminoácido coma sequência de aminoácido AGVRAEDGRVRTLPSEYTF.

[00281] Ainda mais preferivelmente, o ISVD contra vWF consiste essencialmente em 4 regiões de estrutura (FR1 a FR4, respectivamente) e 3 regiões de determinação de complementaridade (CDR1 a CDR3, respectivamente), nas quais: a) CDR1 é YNPMG (SEQ ID Nº: 21); b) CDR2 é AISRTGGSTYYPDSVEG (SEQ ID Nº: 22); e c) CDR3 é AGVRAEDGRVRTLPSEYTF (SEQ ID Nº: 23).

[00282] Ainda mais preferivelmente, oISVD contra vWF é representado pela SEQ ID Nº: 19 (12A02H1).

[00283] Preferivelmente, os polipeptídeos da invenção compreendem ou consistem em pelo menos dois ISVDs contra vWF.

[00284] Ainda mais preferivelmente, os polipeptídeos de uma presente invenção compreendem ou consistem em dois ISVDs contra vWF definidos pela SEQ ID Nº: s 1 a 18 ou 24, e a maioria das SEQ ID Nº: 1 (ALX 0081; INN "caplacizumabe") ou SEQ ID Nº: 24. O ALX 0081 é um nanocorpo bivalente, consistindo em dois blocos de construção monovalentes idênticos, que têm como alvo o vWF. ALX 0081-A é ALX 0081 mais uma alanina C-terminal.

[00285] Os polipeptídeos compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF, por exemplo, SEQ ID Nº: s 1 a 19 ou 24, podem ser usados no tratamento de uma doença relacionada com o vWF, em particular púrpura trombocitopênica trombótica (TTP).

[00286] Os termos "polipeptídeo" e "sequência de aminoácidos" são usados aqui de forma intercambiável.

[00287] Assim, por exemplo, polipeptídeos adequados para uso na invenção podem incluir os compostos da Tabela A-1, por exemplo, SEQ

ID Nº: 1 a 19 ou 24, ou um composto com 80% ou mais, mais preferivelmente identidade de sequência de aminoácidos de 85% ou mais, mais preferida de 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais, a um composto definido por qualquer uma das SEQ ID Nº: 1 a 19 ou 24 na Tabela A-1 (ver a seção de Definição para "identificação de sequência").

[00288] Preferivelmente, o ISVD contra vWF para uso nos polipeptídeos da invenção são compostos do tipo 12A02H1. Para os fins da presente descrição, um composto semelhante a 12A02H1 é um composto que compreende 12A02H1 (isto é, SEQ ID Nº: 19) ou um composto com 80% ou mais, mais preferivelmente 85% ou mais, mais preferivelmente 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais, identidade de sequência de aminoácidos de 12A02H1 (SEQ ID Nº: 19). Um polipeptídeo particularmente preferido que compreende dois ISVDs contra o vWF é ALX 0081 (SEQ ID Nº: 1) ou ALX 0081-A (SEQ ID Nº: 24).

[00289] Os domínios de variável simples de imunoglobulina, tal como domínios VHH camelídeos, domínios VH camelizados ou domínios VHH humanizados, representam novamente uma classe terapêutica em rápido crescimento. Por exemplo, os domínios variáveis simples de imunoglobulina contra o vWF foram descritos nos documentos WO 2004/015425, WO 2004/062551, WO 2006/074947, WO 2006/122825, WO 2009/115614 e WO 2011/067160. Outros domínios variáveis simples de imunoglobulina preferidos para utilização nos polipeptídeos da invenção incluem os Nanocorpos melhorados descritos em WO06/122825.

[00290] A menos que indicado de outra forma, o termo "sequência de imunoglobulina" - seja usado aqui para se referir a um anticorpo de cadeia pesada ou a um anticorpo convencional de 4 cadeias - é usado como um termo geral para incluir o anticorpo em tamanho real, as cadeias individuais do mesmo, assim como todas as partes, domínios ou fragmentos do mesmo (incluindo, entre outros, domínios ou fragmentos de ligação a antígeno, como domínios VHH ou domínios VH/VL, respectivamente). Além disso, o termo "sequência", conforme usado aqui (por exemplo, em termos como "sequência de imunoglobulina", "sequência de anticorpos", "sequência de domínio variável", "sequência de VHH" ou "sequência de proteínas"), deve geralmente ser entendido como incluindo a sequência de aminoácidos relevante, bem como os ácidos nucleicos ou as sequências de nucleotídeos que codificam a mesma, a menos que o contexto exija uma interpretação mais limitada.

[00291] O termo "domínio variável simples de imunoglobulina" ("ISVD"), usado de forma intercambiável com "domínio variável simples", define moléculas nas quais o sítio de ligação ao antígeno está presente e é formado por um domínio simples de imunoglobulina. Isso diferencia o domínio principal simples de imunoglobulina das imunoglobulinas "convencionais" ou seus fragmentos, em que dois domínios da imunoglobulina, em particular dois domínios variáveis, interagem para formar um sítio de ligação ao antígeno. Tipicamente, nas imunoglobulinas convencionais, uma variável do domínio principal da cadeia pesada (VH) e um domínio variável da cadeia leve (VL) interagem para formar um sítio de ligação ao antígeno. Nesse caso, as regiões de determinação de complementaridade (CDRs) de VH e VL contribuirão para o sitio de ligação ao antígeno, isto é, um total de 6 CDRs estará envolvido na formação do sítio de ligação ao antígeno.

[00292] Em contraste, o sítio de ligação de um domínio variável simples de imunoglobulina é formado por um domínio simplesVH ou VL. Portanto, o sítio de ligação ao antígeno de um domínio variável simples da imunoglobulina é formado por não mais que três CDRs.

[00293] O termo "domínio variável simples de imunoglobulina", portanto, não compreende imunoglobulinas convencionais ou seus fragmentos que requerem interação de pelo menos dois domínios variáveis para a formação de um sítio de ligação ao antígeno. Esse também é o caso de modalidades da invenção que "compreendem" ou "contêm" um domínio variável simples de imunoglobulina. No contexto da presente invenção, essas modalidades excluem imunoglobulinas convencionais ou seus fragmentos. Assim, um polipeptídeo ou uma composição que "compreende" ou "contém" um domínio variável simples de imunoglobulina pode se relacionar com, por exemplo, construções compreendendo mais de um domínio variável simples de imunoglobulina. Alternativamente, pode haver outros constituintes além dos domínios variáveis simples da imunoglobulina, por exemplo, agentes auxiliares de diferentes tipos, marcadores de proteínas, colorantes, corantes, etc. No entanto, esses termos compreendem fragmentos de imunoglobulinas convencionais em que os sítio de ligação ao antígeno é formado por um domínio variável simples.

[00294] Geralmente, domínios variáveis simples serão sequências de aminoácidos que consistem essencialmente em 4 regiões estruturais (FR1 a FR4 respectivamente) e 3 regiões de determinação de complementaridade (CDR1 a CDR3 respectivamente). Tais domínios e fragmentos variáveis simples são mais preferivelmente de modo que compreendam uma dobra de imunoglobulina isto ém capazes de formar, em condições adequadas, uma dobra de imunoglobulina. Como tal, o domínio variável simples pode por exemplo compreender uma sequência de domínio variável de cadeia leve (por exemplo, uma sequência VL) ou um fragmento adequado do mesmo; ou uma sequência de domínio variável da cadeia pesada (por exemplo, uma sequência VH ou sequência VHH) ou um fragmento adequado do mesmo; desde que seja capaz de formar uma única unidade de ligação ao antígeno (isto é, uma unidade funcional de ligação ao antígeno que consiste essencialmente no domínio variável simples, de modo que o domínio simples de ligação ao antígeno não precise interagir com outro domínio variável para formar um unidade funcional de ligação ao antígeno, como é o caso dos domínios variáveis que são presentes em, por exemplo, anticorpos convencionais e fragmentos scFv (fragmento variável de cadeia única) que precisam interagir com outro domínio variável - por exemplo, por meio de uma interação VH/VL - para formar um domínio de ligação ao antígeno funcional).

[00295] Em uma modalidade da invenção, os domínios variáveis simples de imunoglobulina são sequências de domínio variável de cadeia leve (por exemplo, uma sequência VL) ou sequências de domínio variável de cadeia pesada (por exemplo, uma sequência VH); mais especificamente, o domínio principal de variável simples de imunoglobulina pode ser sequências de domínio variável de cadeia pesada que são derivadas de um anticorpo convencional de quatro cadeias ou sequências de domínio variável de cadeia pesada que são derivadas de um anticorpo de cadeia pesada (por exemplo, um VHH).

[00296] Para uma descrição geral dos anticorpos de cadeia pesada e dos domínios variáveis do mesmo, é feita referência, entre outras coisas, à técnica anterior citada neste documento, bem como à técnica anterior mencionada na página 59 da WO 08/020079 e à lista das referências mencionadas nas páginas 41 a 43 do pedido internacional WO 06/040153, cuja técnica anterior e referências são aqui incorporadas por referência.Conforme descrito nessas referências, os nanocorpos (em particular as sequências de VHH e os nanocorpos parcialmente humanizados) podem ser caracterizados pela presença de um ou mais "resíduos de Hallmark" em uma ou mais das sequências de estrutura. Uma descrição adicional dos Nanocorpos, incluindo humanização e/ou camelização de Nanocorpos, bem como outras modificações, partes ou fragmentos, derivados ou "Fusão de Nanocorpos", construções multivalentes (incluindo alguns exemplos não limitativos de sequências de ligação) e diferentes modificações para aumentar a meia-vida dos nanocorpos e suas preparações podem ser encontradas, por exemplo, nos documentos WO 08/101985 e WO 08/142164.

[00297] Por exemplo, o domínio variável simples ou o domínio variável simples de imunoglobulina (ou uma sequência de aminoácidos que é adequada para uso como domínio variável simples de imunoglobulina) pode ser um anticorpo de domínio (simples) (ou uma sequência de aminoácidos adequada) para uso como um anticorpo de domínio (simples)), um "dAb" ou dAb (ou uma sequência de aminoácidos adequada para uso como dAb) ou um Nanocorpo (como aqui definido e incluindo, mas não se limitando a, uma sequência VHH) ; outro domínio variável simples, ou qualquer fragmento adequado de qualquer um dos mesmos. Para uma descrição geral de anticorpos (de um único) domínio, também é feita referência à técnica anterior citada aqui, bem como à EP 0 368 684. Para o termo "dAb's", é feita referência, por exemplo, a Ward et al. 1989 (Nature 341 (6242): 544-6), de Holt et al. 2003 (Trends Biotechnol. 21 (11): 484-490); bem como, por exemplo, WO 04/068820, WO 06/030220, WO 06/003388 e outros pedidos de patente publicados da Domantis Ltd.Deve-se notar também que, embora menos preferido no contexto da presente invenção por não serem de origem mamífera, domínios variáveis simples podem ser derivados de certas espécies de tubarão (por exemplo, os chamados "domínios IgNAR", por exemplo, WO 05/18629).

[00298] Em particular, o domínio variável simples de imunoglobulina pode ser um Nanobody® (como aqui definido) ou um fragmento adequado do mesmo. [Nota: Nanobody®, Nanobodies® e Nanoclone® são marcas registradas da Ablynx NV]. Para uma descrição geral dos Nanobodies, é feita referência à descrição adicional abaixo, bem como às técnicas anteriores citadas neste documento, como por exemplo, descrito em WO 08/020079 (página 16).

[00299] A sequência de aminoácidoe a estrutura de uma sequência de imunoglobulina, em particular um domínio variável simples de imunoglobulina, pode ser considerado - sem, no entanto, estar limitado ao mesmo - ser composto de quatro regiões de estrutura ou "FR's", que são referidos na arte e aqui como "região de estrutura 1" ou "FR1"; como "regiã de estrutura 2" ou "FR2"; como "região de estrutura 3" ou "FR3"; e como "região de estrutura 4" ou "FR4", respectivamente; em que regiões de estrutura são interrompidas por três regiões de determinação de complementaridade ou "CDRs", que são referidas na arte como "Região de determinação de complementaridade 1" ou "CDR1"; como "Região de determinação de complementaridade 2" ou "CDR2"; e como "Região de determinação de complementaridade3" ou "CDR3", respectivamente.

[00300] O número total de resíduos de aminoácidos em um domínio variável simples de imunoglobulina pode estar na região de 110- a 120, é preferivelmente 112 a 115 e é mais preferivelmente 113. No entanto, deve-se notar que partes, fragmentos, análogos ou derivados de um domínio variável simples de imunoglobulina não são particularmente limitados quanto ao seu comprimento e/ou tamanho, desde que essas partes, fragmentos, análogos ou derivados atendam aos requisitos adicionais descritos neste documento e também sejam preferivelmente adequados para os fins aqui descritos.

[00301] Assim, no significado da presente invenção, o termo "domínio variável simples da imunoglobulina" ou "domínio variável simples" compreende peptídeos derivados de uma fonte não humana, preferivelmente um camelídeo, preferivelmente um anticorpo de cadeia pesada de camelo. Eles podem ser humanizados, como descrito anteriormente, por exemplo, nos documentos WO 08/101985 e WO 08/142164. Além disso, o termo compreende polipetídeos derivados de fontes não camelideas, por exemplo, camundongo ou humano, que foram "camelizadas", conforme descrito anteriormente, por exemplo, nos documentos WO 08/101985 e WO 08/142164.

[00302] O termo "domínio variável simples de imunoglobulina" abrange sequências de imunoglobulinas de origem diferente, compreendendo sequências de imunoglobulina de camundongo, rato, coelho, burro, humana e camelídeo. Também inclui sequências de imunoglobulinas totalmente humanas, humanizadas ou quiméricas. Por exemplo, compreende sequências de imunoglobulina camelídea e sequências de imunoglobulina camelídea humanizada ou domínios variáveis simples de imu-noglobulina camelizada, por exemplo, dAb camelizado conforme descrito por Ward et al. (Ver, por exemplo, WO 94/04678 e Davies e Riechmann 1994, Febs Lett.333: 285 e 1996, Protein Engineering 9: 531).

[00303] Todos os ISVDs contra vWF (ou ligantes de vWF) mencionados acima são bem conhecidos na literatura. Isso inclui sua fabricação (veja, em particular, por exemplo, WO2006/122825, mas também WO2004/062551). Por exemplo, ALX 0081 ou ALX 0081-A é preparado como descrito por exemplo, nos documentos WO2006/122825 ou WO2009/115614.

[00304] Os domínios variáveis simples de imunoglobulina fornecidos pela invenção são preferivelmente na forma isolada ou essencialmente isolada, ou fazem parte de uma proteína ou polipeptídeo da invenção, que pode compreender ou consistir essencialmente em um ou mais domínios variáveis simples de imunoglobulina e que podem opcionalmente compreender ainda uma ou mais sequências de aminoácidos adicionais (todas opcionalmente ligadas por meio de um ou mais ligantes adequados). Por exemplo, e sem limitação, o um ou mais domínios variáveis simples de imunoglobulina podem ser usados como uma unidade de ligação em tal proteína ou polipeptídeo, que pode opcionalmente conter uma ou mais sequências de aminoácidos adicionais que podem servir como uma unidade de ligação (isto é, contra um ou mais outros alvos do que antígenos associados às células), de modo a fornecer um polipeptídeo monovalente, multivalente ou multiespecífico da invenção, respectivamente, tudo como aqui descrito. Essa proteína ou polipeptídeo também pode estar na forma isolada ou essencialmente isolada. Assim, de acordo com a invenção, os domínios principais simples de imunoglobulina compreendem construções compreendendo duas ou mais unidades de ligação ao antígeno na forma de domínios simples, conforme descrito acima. Por exemplo, dois (ou mais) domínios variáveis simples de imunoglobulina com a mesma ou diferente especificidade de antígeno podem ser ligados para formar, por exemplo, uma construção bivalente, trivalente ou multivalente. Combinando domínios variáveis simples de imunoglobulina de duas ou mais especificidades, podem ser formadas construções biespecíficas, triespecíficas, etc. Por exemplo, um polipeptídeo de acordo com a invenção pode compreender dois domínios variáveis simples de imunoglobulina direcionados contra o alvo A e um domínio variável simples de imunoglobulina contra o alvo B, tornando-o bivalente para A e monovalente para B. Tais construções e modificações do mesmo, que a pessoa versada pode facilmente imaginar, são todas abrangidas pela presente invenção. Em modalidades particulares, a invenção refere-se a construções bi- paratópicas compreendendo pelo menos dois domínios variáveis simples de imunoglobulina direcionados a diferentes epítopos dentro do mesmo antígeno alvo.

[00305] Todas essas moléculas também são referidas como "polipeptídeo da invenção", que é sinônimo de "sequências de imunoglobulina" ou "domínios variáveis únicos de imunoglobulina" da invenção.

[00306] Além disso, o termo "sequência", como usado aqui (por exemplo, em termos como "sequência de imunoglobulinas", "sequência de anticorpos", "sequência de domínio variável", "sequência de VHH" ou "sequência de proteínas"), deve geralmente ser entendido como incluindo tanto a sequência de aminoácidos relevante quanto as sequências de ácidos nucleicos ou sequências de nucleotídeos que codificam as mesmas, a menos que o contexto exija uma interpretação mais limitada.

[00307] De acordo com uma modalidade não limitante da invenção, as sequências de imunoglobulina, Nanobody® ou polipeptídeo da invenção são glicosiladas. De acordo com outra modalidade não limitante da invenção, as sequências de imunoglobulina, Nanobody® ou polipeptídeo da invenção são não glicosiladas.

[00308] Como mencionado acima, a presente invenção refere-se a polipeptídeos tipicamente compreendendo pelo menos um, tal como 2 ou mais ISVDs contra vWF, por exemplo, ISVDs que se ligam e/ou têm afinidade por um antígeno, como definido aqui, por exemplo, Fator de von Willebrand (vWF) e preferencialmente vWF humano (SEQ ID Nº: 20).

[00309] No contexto da presente invenção, "ligação a e/ou tendo afinidade por" um determinado antígeno tem o significado usual na técnica como entendido, por exemplo, no contexto de anticorpos e seus respectivos antígenos.

[00310] Em modalidades particulares da invenção, o termo "se liga a e/ou tendo afinidade por" significa que a sequência de imunoglobulina interage especificamente com um antígeno e é usada alternadamente com sequências de imunoglobulina "contra" o referido antígeno.

[00311] O termo "especificidade" refere-se ao número de diferentes tipos de antígenos ou determinantes antigênicos aos quais uma sequência de imunoglobulina particular, molécula de ligação ao antígeno ou proteína de ligação ao antígeno (como um Nanobody® ou um polipeptídeo da invenção) podem se ligar. A especificidade de uma proteína de ligação ao antígeno pode ser determinada com base na afinidade e/ou avidez. A afinidade, representada pela constante de equilíbrio para a dissociação de um antígeno com uma proteína de ligação ao antígeno (KD), é uma medida da força de ligação entre um determinante antigênico e um sítio de ligação ao antígeno na proteína de ligação ao antígeno: quanto menor o valor do KD, maior a força de ligação entre um determinante antigênico e a molécula de ligação ao antígeno (alternativamente, a afinidade também pode ser expressa como a constante de afinidade (KA), que é 1/KD). Como ficará claro para a pessoa versada (por exemplo, com base na divulgação adicional aqui), a afinidade pode ser determinada de uma maneira conhecida per se, dependendo do antígeno específico de interesse. Avidez é a medida da força de ligação entre uma molécula de ligação ao antígeno (tal como um Nanobody® ou polipeptídeo da invenção) e o antígeno pertinente. Avidez está relacionada à afinidade entre um determinante antigênico e seu sítio de ligação ao antígeno na molécula de ligação ao antígeno e ao número de sítios de ligação pertinentes presentes na molécula de ligação ao antígeno.

[00312] Tipicamente, sequências de imunoglobulina da presente invenção (tal como as sequências de aminoácido, Nanobodies® e/ou polipeptídeos da invenção) irão se ligar aos seus antígenos com uma constante de dissociação (KD) de 10-5 a 10-12 moles/litro ou menos, e preferivelmente 10-7 a 10-12 moles/litro ou menos e mais preferivelmente 10-8 a 10-12 moles/litro (por exemplo, com uma constante de associação (KA) de 105 a 1012 litro/moles ou mais, e preferivelmente 10 7 a 1012 litro/moles ou mais e mais preferivelmente 108 a 1012 litro/moles), e/ou se ligar aos antígenos associados à célula como definido aqui com uma taxa -1s-1 7 -1s-1 -1s-1 kon entre 102 M a cerca de 10 M , preferivelmente entre 103 M -1s-1 -1s-1 -1s-1 e 107 M , mais preferivelmente entre 104 M e 107 M , tal como

-1s-1 -1s-1 entre 105 M e 107 M ; e/ou se ligar aos antígenos associados à célula como definido aqui com uma taxa koff entre 1s-1 (t1/2 = 0,69 s) e 10-6 s-1 (fornecendo um complexo quase irreversível com um t1 /2 de múltiplos dias), preferivelmente entre 10-2 s-1 e 10-6 s-1, mais preferivelmente entre 10-3 s-1 e 10-6 s-1, tal como entre 10-4 s-1 e 10-6 s-1. -4

[00313] Qualquer valor de KD maior do que 10 M (ou qualquer valor de KA menor do que 104 M-1) é geralmente considerado para indicar ligação não específica.

[00314] Preferivelmente, uma sequência de imunoglobulina monovalente da invenção irá se ligar ao antígeno desejado com uma afinidade menor que 500 nM, preferivelmente menor que 200 nM, mais preferivelmente menor que 10 nM, tal como menor que 500 pM.

[00315] A ligação específica de uma proteína de ligação ao antígeno a um antígeno ou determinante antigênico pode ser determinada de qualquer maneira adequada conhecida per se, incluindo, por exemplo, análise Scatchard e/ou ensaios de ligação competitivos, tal como radioimunoensaios (RIA), imunoensaios de enzima (EIA) e ensaios de competição sanduíche, e diferentes variantes conhecidas dos mesmos per se na arte; bem como as outras técnicas mencionadas aqui.

[00316] A constante de dissociação (KD) pode ser a constante de dissociação real e evidente, como ficará claro para a pessoa versada. Métodos para determinar a constante de dissociação ficarão claros para a pessoa versada e, por exemplo, incluem as técnicas mencionadas aqui. A este respeito, também ficará claro que pode não ser possível medir constantes de dissociação de mais que 10-4 moles/litro ou 10-3 moles/litro (por exemplo, 10-2 moles/litro). Opcionalmente, como também ficará claro para a pessoa versada, a constante de dissociação (real ou evidente) pode ser calculada com base na constante de associação (real ou evidente) (KA), por meio da relação [KD = 1/KA].

[00317] A afinidade indica a força ou estabilidade de uma interação molecular. A afinidade é geralmente dada pelo KD, ou constante de dissociação, que possui unidades de mol/litro (ou M). A afinidade também pode ser expressa como uma constante de associação, KA, que é igual a 1/KD e possui unidades de (mol/litro) -1 (ou M 1). No presente relatório descritivo, a estabilidade da interação entre duas moléculas (tal como uma sequência de aminoácidos, sequência de imunoglobulina, Nanobody® ou polipeptídeo da invenção e seu alvo desejado) será expressa principalmente em termos do valor de KD de sua interação; ficando claro para a pessoa versada que, em vista da relação KA = 1/KD, especificar a força da interação molecular pelo seu valor de KD também pode ser usada para calcular o valor de KA correspondente. O valor de KD caracteriza a força de uma interação molecular também em um sentido termodinâmico, pois está relacionado à energia livre (DG) de ligação pela relação bem conhecida DG = RT.ln(KD) (equivalentemente DG = RT.ln(KA)), onde R é igual à constante de gás, T é igual à temperatura absoluta e ln indica o logaritmo natural.

[00318] O KD para interações biológicas, tal como a ligação das sequências de imunoglobulina da invenção ao antígeno associado à célula, como definido aqui, que são consideradas significativas (por exemplo, específicas), estão tipicamente na faixa de 10-10 M (0,1 nM) a 10-5 M (10000 nM). Quanto mais forte uma interação é, menor é seu KD.

[00319] O KD também pode ser expresso como a razão da constante de taxa de dissociação de um complexo, indicado como koff, para a constante do índice de associação, indicada como kon (de modo que KD = koff/kon e KA = kon/koff). A koff fora da taxa possui as unidades s- 1 (onde s é a notação de unidade SI de segundo). A constante da taxa de associação tem unidades M-1s-1.

[00320] No que diz respeito às sequências de imunoglobulina da invenção, a taxa de associação pode variar entre 102 M-1s-1 a cerca de

107 M-1s-1, aproximando-se da constante da taxa de associação limitada por difusão para interações bimoleculares. A taxa de dissociação está relacionada com a meia-vida de uma dada interação molecular pela relação t1/2 = ln(2)/koff. A taxa de dissociação de sequências de imunoglobulina da invenção pode variar entre 10-6s-1 (complexo quase irreversível com t1/2 de múltiplos dias) a 1 s-1 (t1/2 = 0,69 s).

[00321] A afinidade de uma interação molecular entre duas moléculas pode ser medida por meio de diferentes técnicas conhecidas per se, tal como a técnica bem conhecida de biossensor de ressonância plasmônica de superfície (SPR). (ver, por exemplo, Ober et al., Intern. Immunology, 13, 1551-1559, 2001) onde uma molécula é imobilizada no chip de biossensor e a outra molécula é passada sobre a molécula imobilizada sob condições de fluxo, produzindo medições kon, koff e, portanto, valores de KD (ou KA). Isso pode, por exemplo, ser realizado usando os instrumentos Biacore bem conhecidos.

[00322] Ficará claro também para a pessoa versada que o KD medido pode corresponder ao KD aparente se o processo de medição influenciar a afinidade de ligação intrínseca das moléculas implícitas, por exemplo, por artefatos relacionados ao revestimento no biossensor de uma molécula. Além disso, um KD aparente pode ser medido se uma molécula contiver mais de um sítio de reconhecimento para a outra molécula. Em tal situação, a afinidade medida pode ser afetada pela avidez da interação pelas duas moléculas.

[00323] Outro método que pode ser usado para avaliar afinidade é o procedimento ELISA em duas etapas (Ensaio Imunoabsorvente Ligado à Enzima) de Friguet et al. (J. Immunol. Methods, 77, 305-19, 1985). Este método estabelece uma medição do equilíbrio de ligação da fase da solução e evita possíveis ocorrências não naturais relacionadas com a absorção de uma das moléculas em um suporte tal como plástico.

[00324] No entanto, a medição precisa de KD pode ser bastante trabalhosa e, como consequência, geralmente valores aparentes de KD são determinados para avaliar a força de ligação de duas moléculas. Deve-se notar que, desde que todas as medições sejam feitas de maneira consistente (por exemplo, mantendo as condições do ensaio inalteradas), as medições aparentes de KD podem ser usadas como uma aproximação do KD verdadeiro e, portanto, no presente documento, KD e KD aparente devem ser tratados com igual importância ou relevância.

[00325] Finalmente, deve-se notar que, em muitas situações, o cientista experiente pode julgar conveniente determinar a afinidade de ligação relativa a alguma molécula de referência. Por exemplo, para avaliar a força de ligação entre moléculas A e B, uma pode, por exemplo, usar uma molécula de referência C que se sabe se ligar a B e que esteja adequadamente marcada com um grupo fluoroforo ou cromoforo ou outra porção química, tal como biotina para detecção fácil em um ELISA ou FACS (classificação de células ativadas por fluorescência) ou outro formato (o fluoroforo para detecção de fluorescência, o cromoforo para detecção de absorção de luz, a biotina para detecção de ELISA mediada por estreptavidina). Tipicamente, a molécula de referência C é mantida em uma concentração fixa e a concentração de A varia para uma determinada concentração ou quantidade de B. Como resultado, um valor de IC50 é obtido correspondente à concentração de A na qual o sinal medido para C na ausência de A é dividido pela metade. Fornecido a KD ref, o KD da molécula de referência, é conhecido, bem como a cref de concentração total da molécula de referência, a KD aparente para a interação A-B pode ser obtido da seguinte fórmula: KD = IC50/(1 + cref/KD ref). Note que se cref << KD ref, KD  IC50. Desde que a medição do IC50 seja realizada de maneira consistente (por exemplo, mantendo o cref fixo) para os ligantes que são comparados, a força ou a estabilidade de uma interação molecular pode ser avaliada pelo IC50 e essa medição é julgada como equivalente a KD ou a KD que aparece ao longo deste texto.

[00326] A presente invenção refere-se a domínios variáveis únicos de imunoglobulina descritos em, ou obtidos pelos métodos como descrito em WO 2004/015425, WO 2004/062551, WO 2006/074947, WO 2006/122825, WO 2009/115614, ou WO 2011/067160, todos em nome do presente requerente.

[00327] A invenção também abrange variantes otimizadas dessas sequências de aminoácidos. Geralmente, uma "variante otimizada" de uma sequência de aminoácidos de acordo com a invenção é uma variante que compreende uma ou mais substituições benéficas, tais como substituições que aumentam i) o grau de "humanização", ii) a estabilidade química e/ou iii) o nível de expressão; enquanto a potência (medida, por exemplo, pelo ensaio de potência como descrito na parte experimental de WO 2006/122825, permanece comparável (por exemplo, dentro de um desvio de 10%) ao tipo selvagem 12A02 (como definido em WO 2006/122825) ou comparável à variante 12A02H1 (SEQ ID Nº: 19), também como definido em WO 2006/122825. Preferivelmente, em comparação com a sequência de tipo selvagem de 12A02, uma sequência de aminoácidos da invenção contém pelo menos uma dessas substituições, e preferivelmente pelo menos duas tais substituições, e preferivelmente pelo menos três substituições de humanização e preferivelmente pelo menos 10 tais substituições de humanização.

[00328] Em um aspecto particular, as sequências de aminoácidos da invenção contêm um total entre 1 e 15, preferivelmente entre 2 e 14, como entre 9 e 13, por exemplo, 10, 11 ou 12 substituições de aminoácidos em comparação com a sequência de tipo selvagem 12A02. Como mencionado, essas diferenças preferivelmente pelo menos compreendem uma e preferencialmente pelo menos duas, como três,

quatro ou cinco ou dez substituições de humanização, e podem opcionalmente compreender uma ou mais substituições adicionais (tal como qualquer uma ou qualquer combinação adequada de quaisquer duas ou mais das substituições adicionais (a) a (c), como mencionado aqui). Novamente, com base na divulgação aqui e, opcionalmente, após um grau limitado de tentativa e erro, a pessoa versada poderá ser capaz de selecionar (uma combinação adequada de) uma ou mais tais substituições de humanização e/ou outras adequadas.

[00329] A presente invenção abrange sequências de polipeptídeo que são altamente similares a qualquer um dos exemplos específicos fornecidos aqui, ou qualquer um dos exemplos específicos definidos pela referência acima. Altamente similar significa uma identidade de aminoácidos de pelo menos 90%, por exemplo, 95, 97, 98 ou 99%. As sequências de polipeptídeo altamente similares terão a mesma função que a sequência da qual derivam, por exemplo, elas se ligam ao vWF, mais especificamente se ligam e inibem a interação entre vWF e as plaquetas, tal como ALX 0081-A, que é derivado de ALX 0081.

[00330] Em uma modalidade particular, a invenção refere-se a sequências altamente similares a qualquer uma das SEQ ID Nºs 1 a 19 ou 24, em particular SEQ ID Nº: 1. Entretanto, para cada estabilidade de sequência variante na formulação como definida aqui tem que ser avaliada, de modo que a invenção em particular se refira a variantes ou sequências altamente similares que são estáveis nas formulações como definido aqui.

[00331] Métodos para gerar sequências de polipeptídeo da invenção são amplamente conhecidos e incluem, por exemplo, expressão ou síntese recombinante. A pessoa versada conhece bem a tecnologia de expressão adequada, por exemplo, vetores recombinantes adequados e células hospedeiras, por exemplo, células hospedeiras bacterianas ou de levedura. A pessoa versada também é familiarizada com técnicas e protocolos de purificação adequados.

[00332] A presente invenção fornece também formulações de polipeptídeos compreendendo pelo menos um domínio variável simples de imunoglobulina contra vWF, por exemplo, ALX 0081 ou ALX 0081-A, que são estáveis e preferivelmente adequados para usos farmacêuticos, incluindo a preparação de medicamentos (também chamados "formulação farmacêutica da invenção" ou "formulações da invenção").

[00333] Em modalidades particulares, a formulação compreende um ou mais polipeptídeos selecionados de SEQ ID Nºs 1 a 19 ou 24, preferencialmente SEQ ID Nº: 1.

[00334] O termo "formulação farmacêutica" refere-se a uma preparação que é de forma tal que permita que a atividade biológica do ingrediente ativo (o polipeptídeo da invenção) seja eficaz e que não contenha componentes adicionais que sejam inaceitavelmente tóxicos para um indivíduo ao qual a formulação seria administrada. Tais formulações são estéreis. Excipientes "farmaceuticamente aceitáveis" (veículos, aditivos) são aqueles que podem ser razoavelmente administrados a um indivíduo mamífero para fornecer uma dose eficaz do ingrediente ativo empregado.

[00335] O termo "excipiente", como usado aqui, refere-se a uma substância inerte que é comumente usada como agente diluente, veículo, conservante, lioprotetor, tensoativo, aglutinante, transportador ou estabilizante para compostos que conferem uma propriedade física benéfica a uma formulação. A pessoa versada está familiarizada com os excipientes adequados para propósitos farmacêuticos, que podem ter funções particulares na formulação, tal como lioproteção, estabilização, conservação, etc.

[00336] Uma formulação "estéril" é asséptica ou livre ou essencialmente livre de todos os micro-organismos vivos e seus esporos. Isso é facilmente realizado por filtração através de membranas de filtração estéreis.

[00337] Uma formulação "estável" é aquela em que a proteína nela retém essencialmente sua estabilidade física e/ou estabilidade química e/ou atividade biológica após armazenamento. Preferivelmente, a formulação retém essencialmente sua estabilidade física e química, bem como sua atividade biológica após armazenamento. O período de armazenamento é geralmente selecionado com base no prazo de validade pretendido da formulação. Várias técnicas analíticas para medir a estabilidade de proteínas estão disponíveis na técnica e são revisadas em Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., Nova York, Nova York, Pubs. (1991) e Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993), por exemplo. A estabilidade pode ser medida em uma temperatura selecionada por um período de tempo selecionado. Em certas modalidades, a formulação é estável a cerca de 40°C por pelo menos cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou mais semanas. Além disso, a formulação é preferivelmente estável após congelamento (a, por exemplo, -20°C ou -70°C) e descongelamento da formulação, por exemplo, após 1, 2, 3, 4 ou 5 ciclos de congelamento e descongelamento. Estabilidade pode ser avaliada qualitativamente e/ou quantitativamente em uma variedade de maneiras diferentes conhecidas pela pessoa versada na técnica. Estudos de estabilidade mostraram que ALX 0081 ou ALX 0081-A é estável a -20°C durante pelo menos 3 anos.

[00338] A formulação compreende um portador aquoso. O portador aquoso é em particular um tampão.

[00339] Como usado aqui, "tampão" refere-se a uma solução tamponada que resiste a mudanças em pH pela ação de seus componentes conjugados ácido-base. A formulação da invenção compreende um tampão selecionado de pelo menos um tampão de citrato ou fosfato, preferivelmente um tampão de citrato. Como determinado anteriormente, esses tampões realçam a estabilidade dos ligantes do vWF.

[00340] A formulação de acordo com a invenção compreende um tampão de citrato em uma concentração na faixa de 5 a 200 mM, preferivelmente 7,5 a 80 mM, ainda mais preferivelmente 10 a 50, por exemplo, 10, 15, 20, 25 ou 30 mM, e mais preferivelmente 20 mM, em que cada valor é entendido como opcionalmente abrangendo uma faixa de ± 5 mM. Alternativamente, a formulação de acordo com a invenção pode compreender um tampão de fosfato em uma concentração na faixa de 5 a 200 mM, preferivelmente 5 a 80 mM, mais preferivelmente 7,5 a 60 mM, ainda mais preferivelmente 10 a 40, por exemplo, 10, 15, 20, 25 ou 30 mM, e mais preferencialmente 10 mM, em que cada valor é entendido como opcionalmente abrangendo uma faixa de ± 5 mM. Será entendido que uma concentração inferior do tampão tem um efeito sobre a osmolaridade final e, correspondentemente, nos solutos adicionais que podem ter que ser adicionados.

[00341] O pH da formulação da invenção está na faixa de 5,0 a 7,5, em que cada valor é entendido abranger uma faixa de ± 0,2. O pH mais vantajoso dependerá do tampão compreendido na formulação. Assim, a invenção refere-se particularmente a uma formulação compreendendo um tampão de fosfato, que preferivelmente tem um pH na faixa de 6,5 a 7,5, preferivelmente 6,9, 7,0, 7,1, p. 7.1 Foi demonstrado que a formulação que compreende um tampão de citrato era extraordinariamente adequada para armazenamento e uso. Portanto, uma presente invenção refere-se a uma formulação compreendendo um tampão de citrato, que preferivelmente tem um pH entre 6,0 e 7,0, mais preferivelmente 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8 ou 6,9, por exemplo, 6,5, em que cada valor é entendido como opcionalmente abrangendo uma faixa de ± 0,2.

[00342] As formulações da invenção compreenderão os polipeptídeos da invenção, em particular os domínios variáveis simples de imunoglobulina ou polipeptídeos compreendendo pelo menos um domínio variável simples de imunoglobulina contra vWF, tal como ALX 0081 ou ALX 0081-A, em uma concentração adequada para propósitos clínicos, que incluem concentrações usadas em soluções-mãe para diluição antes do uso no paciente. Além da estabilização melhorada, as formulações da invenção permitem altas concentrações dos polipeptídeos compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF, tal como ALX 0081 ou ALX 0081-A.

[00343] Concentrações típicas do agente ativo, por exemplo, polipeptídeos compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF, tal como ALX 0081 ou ALX 0081-A, em formulações da invenção compreendem os exemplos não limitantes de concentrações na faixa de 0,1 a 150 mg/mL, tal como 1 a 100 mg/mL, 5 a 80mg/mL, ou 10 a 40 mg/mL, preferivelmente 10 mg/mL ou 11 mg/mL, em que cada valor deve compreender opcionalmente uma faixa de ± 20% (por exemplo, um valor de 10 opcionalmente abrange uma faixa de 8 a 12 mg/mL).

[00344] Em outra modalidade da invenção, a formulação de acordo com qualquer aspecto da invenção pode também compreender um detergente ou tensoativo.

[00345] Aqui, um "tensoativo" refere-se a um agente tensoativo, preferivelmente um tensoativo não iônico. Exemplos de tensoativos aqui incluem polissorbato; poloxâmero (por exemplo, poloxâmero 188); Triton; dodecilsulfato de sódio (SDS); laurel sulfato de sódio; glicosídeo de octila de sódio; lauril-, miristil-, linoleil- ou estearil-sulfobetaína; lauril- , miristil-, linoleil- ou estearil-sarcosina; linoleil-, miristil- ou cetil-betaína; lauroamidopropil-, cocamidopropil-, linoleamidopropil-, miristamidopropil-, palmido-propil- ou isoestearamidopropil-betaína (por exemplo, lauroamidopropila); miris-tamidopropil, palmidopropil- ou isoestearamidopropil-dimetilamina; metil cocoil-taurato sódico, ou metil oleil-taurato dissódico; e a série MONAQUAT® (Mona Industries, Inc.,

Paterson, N.J.); polietil glicol, polipropil glicol e copolímeros de etileno e propileno glicol (por exemplo, Pluronics, PF68 etc); etc. Em uma modalidade, o tensoativo aqui é o polissorbato 80. Detergentes ou tensoativos adequados preferidos para uso com a invenção incluem, mas não são limitados a, ésteres de ácidos graxos de polioxietilenossorbitano, por exemplo, polissorbato -20, -40, -60, -65, - 80 ou -85. Nomes de marcas comuns para polissorbatos incluem Alkest, Canarcel e Tween. A pessoa versada conhece outros exemplos não limitantes de detergentes, tais como aqueles listados, por exemplo, em WO 2010/077422. Em uma modalidade preferida, o detergente é um detergente não iônico. Mais especificamente, o detergente é polissorbato-80, também chamado Tween-80 doravante. A pessoa versada pode determinar facilmente uma concentração adequada de detergente para uma formulação da invenção. Tipicamente, a concentração será tão baixa quanto possível, embora mantendo os efeitos benéficos dos detergentes, por exemplo, um efeito estabilizante sob condições de tensão de cisalhamento, por exemplo, agitação, que reduz a agregação dos polipeptídeos formulados da invenção. Em modalidades não limitantes exemplares, a concentração do detergente pode ser na faixa de 0,001 a 0,5%, por exemplo. 0,001, 0,002, 0,003, 0,004, 0,005, 0,01, 0,015, 0,02, 0,025, 0,03, 0,035, 0,04, 0,045, 0,05%, 0,1%, 0,2%, 0,3%, 0,4% ou 0,5%, preferivelmente em uma concentração entre 0,01 e 0,05%, mais preferivelmente entre 0,01 e 0,02%, por exemplo 0,01% (v/v).

[00346] A formulação da invenção pode também compreender excipientes tais como conservantes.

[00347] Um "conservante" é um composto que pode ser opcionalmente incluído na formulação para reduzir essencialmente a ação bacteriana nela, desse modo facilitando a produção de uma formulação multiuso, por exemplo. Exemplos de conservantes potenciais incluem cloreto de octadecildimetilbenzil amônio, cloreto de hexametônio, cloreto de benzalcônio (uma mistura de cloretos de alquilbenzildimetilamônio nas qual os grupos alquila são compostos de cadeia longa) e cloreto de benzetônio. Outros tipos de conservantes incluem álcoois aromáticos tais como álcool fenólico, butílico e benzílico, alquil parabenos tais como metil ou propil parabeno, catecol, resorcinol, cicloexanol, 3-pentanol e m-cresol. Em uma modalidade, o conservante aqui é álcool benzílico.

[00348] A formulação da invenção pode também compreender agentes estabilizantes, tais como polióis.

[00349] Um "poliol" é uma substância com múltiplos grupos hidroxila e inclui açúcares (açúcares redutores e não redutores), álcoois de açúcar e ácidos de açúcar. Um poliol pode opcionalmente ser incluído na formulação, por exemplo, para melhorar a estabilidade. Em certas modalidades, os polióis aqui têm um peso molecular que é menor do que cerca de 600 kD (por exemplo, na faixa de cerca de 120 a cerca de 400 kD). Um "açúcar redutor" é aquele que contém um grupo hemiacetal que pode reduzir íons metálicos ou reagir covalentemente com lisina e outros grupos amino em proteínas e um "açúcar não redutor" é aquele que não possui essas propriedades de um açúcar redutor. Exemplos de açúcares redutores são frutose, manose, maltose, lactose, arabinose, xilose, ribose, ramnose, galactose e glicose. Açúcares não redutores incluem sacarose, trealose, sorbose, melezitose e rafinose. Manitol, xilitol, eritritol, treitol, sorbitol e glicerol são exemplos de álcoois de açúcar. Quanto aos ácidos de açúcar, estes incluem L-gluconato e sais metálicos do mesmo. Onde se deseja que a formulação seja estável ao congelamento-descongelamento, o poliol é preferivelmente aquele que não cristaliza em temperaturas de congelamento (por exemplo, -20°C), de modo que desestabilize o anticorpo na formulação. Em certas modalidades, açúcares não redutores, tais como sacarose e trealose,

são exemplos de polióis, com a sacarose sendo preferida, apesar da estabilidade da solução de trealose.

[00350] Compostos terapêuticos da invenção usados de acordo com a presente invenção são preparados para armazenamento misturando um polipeptídeo tendo o grau de pureza desejado com portadores, excipientes ou estabilizantes farmaceuticamente aceitáveis opcionais (Remington's Pharmaceutical Sciences 16ª edição, Osol, A. Ed. [1980]), na forma de formulações liofilizadas ou soluções aquosas. Portadores, excipientes ou estabilizantes aceitáveis não são tóxicos a os receptores nas dosagens e concentrações empregadas. Consequentemente, as formulações de acordo com a invenção também podem opcionalmente compreender um ou mais excipientes.

[00351] Os estabilizantes e conservantes comumente usados são bem conhecidos pela pessoa versada (ver, por exemplo, WO 2010/077422). Portadores farmaceuticamente aceitáveis que podem ser usados nessas composições incluem, mas não são limitados a, permutadores de íons, alumina, estearato de alumínio, lecitina, proteínas séricas, tais como albumina sérica humana, substâncias tampão tais como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potássio, misturas parciais de glicerídeo de ácidos graxos vegetais saturados, água, sais ou eletrólitos, tais como sulfato de protamina, hidrogenofosfato dissódico, hidrogenofosfato de potássio, cloreto de sódio, sais de zinco, sílica coloidal, trissilicato de magnésio, polímeros hidrofílicos, tais como polivinil pirrolidona, substâncias à base de celulose, polietileno glicol, carboximetilcelulose de sódio, poliacrilatos, ceras, gelatina, polímeros em bloco de polietileno polioxipropileno, polietileno glicol e gorduras da lã, antioxidantes incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes; polipeptídeos de baixo peso molecular (menos de cerca de 10 resíduos); proteínas; e aminoácidos tais como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina ou lisina. Em modalidades vantajosas, o excipiente pode ser um ou mais selecionados da lista que consiste em NaCl, trealose, sacarose, manitol ou glicina.

[00352] Os ingredientes ativos também podem ser inseridos em microcápsulas preparadas, por exemplo, por técnicas de coacervação ou por polimerização interfacial, por exemplo, microcápsulas de gelatina ou hidroximetilcelulose e microcápsulas de poli(metilmetacrilato), respectivamente, em sistemas de liberação de fármacos coloidais (por exemplo, lipossomas, microesferas de albumina, microemulsões, nanopartículas e nanocápsulas) ou em macroemulsões. Tais técnicas são divulgadas na Remington's Pharmaceutical Sciences 16ª edição, Osol, A. Ed. (1980).

[00353] Os polipeptídeos da invenção podem ser formulados em qualquer formulação farmaceuticamente aceitável. A formulação pode ser líquida ou seca. A formulação pode ser gerada por mistura, secagem, liofilização, secagem a vácuo ou qualquer método conhecido para formular composições farmacêuticas.

[00354] Uma formulação preferida da invenção compreende um polipeptídeo compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF, tal como ALX 0081 ou ALX 0081-A, em uma solução tampão de fosfato (pH 7,1). Ainda mais preferivelmente, uma formulação da invenção compreende um polipeptídeo que compreende pelo menos um ISVD contra vWF, tal como ALX 0081 ou ALX 0081-A, em uma solução tampão de fosfato (pH 7,1), glicina (0,2 M) e polissorbato 80 (0,02% v/v).

[00355] Os polipeptídeos da invenção podem ainda ser formulados como descrito em WO 2014/184352.

[00356] Uma formulação particularmente preferida compreende: (a) um polipeptídeo compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF, tal como ALX 0081 ou ALX 0081-A em uma concentração de cerca de 0,1 mg/mL a cerca de 80 mg/mL, preferivelmente 5 mg ou 10 mg ou 11 mg; (b) um excipiente escolhido entre sacarose, glicina, manitol, trealose ou NaCl em uma concentração de cerca de 1% a cerca de 15% (p/v); (c) Tween-80 em uma concentração de cerca de 0,001% a 0,5% (v/v); e (d) um tampão de citrato em uma concentração de cerca de 5 mM a cerca de 200 mM, de modo que o pH da formulação seja de cerca de 6,0 a 7,0.

[00357] Uma formulação preferida adicional da invenção compreende um polipeptídeo compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF, tal como ALX 0081 ou ALX 0081-A, preferivelmente em uma concentração de 5 mg/mL, 10 mg/mL ou 11 mg/mL, um tampão de citrato em uma concentração de 20 mM (pH 6,5), compreendendo ainda 7% de sacarose (p/v) e Tween-80 em uma concentração de 0,01% (v/v).

[00358] Em algumas modalidades, uma formulação é armazenada como um líquido. Em outras modalidades, uma formulação é preparada como um líquido e em seguida é seca, por exemplo, por liofilização ou secagem por spray, antes do armazenamento. Uma formulação seca pode ser usada como um composto seco, por exemplo, como um aerossol ou pó, ou reconstituída para sua concentração original ou a outra concentração, por exemplo, usando água, um tampão ou outro líquido apropriado.

[00359] A presente invenção também se refere a frasconetes caregados com liofilizado contendo 12,5 mg de caplacizumabe e excipientes para solução para injeção. Excipientes (por mL de solução reconstituída): 0,21 mg de ácido cítrico, 5,58 mg de di-hidrato de citrato de sódio, 70 mg de sacarose, 0,11 mg de polissorbato-80 por frasco (pH 6,5 +/- 0,5). Após a reconstituição com 1 mL de água para injeção (WFI), a força é de 12,5 mg/mL de caplacizumabe (para dose nominal administrada de 10 mg ou 11 mg).

[00360] A invenção também abrange produtos que podem ser obidos por processamento adicional de uma formulação líquida, tal como um produto congelado, liofilizado ou secado por spray. Após a reconstituição, esses produtos sólidos podem se tornar formulações líquidas, como descrito aqui (mas não se limitam às mesmas). Em seu sentido mais amplo, portanto, o termo "formulação" abrange formulações líquidas e sólidas. Entretanto, formulações sólidas são entendidas como deriváveis das formulações líquidas (por exemplo, por congelamento, liofilização ou secagem por spray) e, portanto, têm várias características que são definidas pelos recursos especificados para formulações líquidas aqui. A invenção não exclui a reconstituição que leva a uma composição que se desvia da composição original antes de, por exemplo, secagem por congelamento ou por spray. Consequentemente, a formulação liofilizada pode ser reconstituída para produzir uma formulação que tenha uma concentração que difira da concentração original (por exemplo, antes da liofilização), dependendo da quantidade de água ou diluente adicionado ao liofilizado com relação ao volume de líquido que foi originalmente liofilizado. Formulações adequadas podem ser identificadas ensaiando um ou mais parâmetros de integridade do anticorpo.

[00361] Em uma modalidade preferida, as formulações de acordo com a invenção são isotônicas em relação ao sangue humano. Soluções isotônicas possuem a mesma pressão osmótica que o plasma sanguíneo e, portanto, podem ser infundidas intravenosamente em um indivíduo sem alterar a pressão osmótica do plasma sanguíneo do indivíduo. A tonicidade pode ser expressa em termos de osmolalidade, que pode ser uma osmolalidade teórica, ou preferivelmente uma osmolalidade determinada experimentalmente. Tipicamente, osmolalidade será na faixa de 290 ± 60 mOsm/kg, preferivelmente 290 ± 20 mOsm/ kg.

[00362] As formulações da invenção também podem compreender compostos que são especificamente úteis para proteger o polipeptídeo da invenção durante a liofilização. Tais compostos também são conhecidos como lioprotetores e são bem conhecidos pela pessoa versada. Exemplos específicos incluem, mas não são limitados a açúcares como sacarose, sorbitol ou trealose; aminoácidos tais como glutamato, em particular glutamato monossódico ou histidina; betaína, sulfato de magnésio, álcoois de açúcar, propileno glicol, polietileno glicóis e combinações dos mesmos. Apreciando a invenção, a quantidade requerida de tal composto a ser adicionado pode ser prontamente determinada pela pessoa versada, sob consideração da estabilidade da formulação em forma líquida e quando submetida à liofilização. As formulações que são particularmente adequadas para a liofilização podem, portanto, compreender agentes de volume. Agentes adequados são amplamente conhecidos pela pessoa versada. Foi demonstrado que uma formulação compreendendo sacarose não era apenas particularmente adequada para manter a estabilidade física, durante por exemplo, armazenamento e congelamento- descongelamento dos ligantes de vWF, mas também como lioprotetor.

[00363] Como descrito, qualquer uma das formulações pode ser também processada, por exemplo, por liofilização, secagem por spray ou congelamento, por exemplo, congelamento a granel. O produto processado resultante tem características derivadas da formulação líquida inicial, como definido acima. Onde necessário, agentes adicionais podem ser incluídos para processamento adicional, tal como, por exemplo, lioprotetores, etc.

[00364] As formulações da presente invenção têm o efeito após liofilização de manter a integridade química e física dos polipeptídeos da presente invenção, em particular ALX 0081 ou ALX 0081-A, isto é, mesmo após armazenamento prolongado, por exemplo, para durações como definido acima, em temperaturas entre -70°C e +40°C, o perfil de pureza/impureza do produto essencialmente não deve ser alterado. Por exemplo, o armazenamento prolongado após liofilização não teve um efeito significativo sobre os perfis de Cromatografia Líquida de Alto Desempenho de Fase Reversa (RP-HPLC), Cromatografia Líquida de Alto Desempenho por Exclusão de Tamanho (SE-HPLC) ou Focagem Isoelétrica Capilar (cIEF).

[00365] Os polipeptídeos da invenção podem ser produzidos por qualquer método comumente usado. Exemplos típicos incluem a expressão recombinante em sistemas hospedeiros adequados, por exemplo, bactérias ou leveduras. Os polipeptídeos da invenção serão submetidos a um regime de purificação adequado antes de ser formulados de acordo com a presente invenção.

[00366] Em geral, os polipeptídeos da invenção são produzidos por células hospedeiras vivas que foram geneticamente modificadas para produzir o polipeptídeo. Métodos de modificação genética de células para produzir proteínas são bem conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Ausubel et al., Eds. (1990), Current Protocols in Molecular Biology (Wiley, Nova Iorque). Tais métodos incluem a introdução de ácidos nucleicos que codificam e permitem a expressão do polipeptídeo nas células hospedeiras vivas. Essas células hospedeiras podem ser células bacterianas, células fúngicas ou células animais desenvolvidas em cultura. Células hospedeiras bacterianas incluem, mas não são limitadas a, células Escherichia coli. Exemplos de cepas de E. coli adequadas incluem: HB101, DH5a, GM2929, JM109, KW251, NM538, NM539 e qualquer cepa E. coli que não clivam DNA estranho. As células hospedeiras fúngicas que podem ser usadas incluem, mas não são limitadas a, células de Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris e Aspergillus. Alguns exemplos de linhagens de células animais que podem ser usadas são CHO, VERO, BHK, HeLa, Cos, MDCK, 293, 3T3 e WI38. Novas linhagens de células animais podem ser estabelecidas usando métodos bem conhecidos por aqueles versados na técnica (por exemplo, por transformação, infecção viral e/ou seleção). Opcionalmente, o polipeptídeo pode ser secretado pelas células hospedeiras no meio.

[00367] Em algumas modalidades, os polipeptídeos podem ser produzidos em células bacterianas, por exemplo, células de E. coli. Por exemplo, se o polipeptídeo é codificado por sequências em um vetor de exibição de fago que inclui um códon de interrupção suprimível entre a entidade de exibição e uma proteína de bacteriofago (ou fragmento da mesma), o ácido nucleico vetor pode ser transferido para uma célula bacteriana que não pode suprimir um códon de interrupção. Neste caso, o polipeptídeo não é fundido com a proteína do gene III e é secretado no periplasma e/ou meio.

[00368] Os polipeptídeos também podem ser produzidos em células eucarióticas. Em uma modalidade, os polipeptídeos são expressos em uma célula de levedura como Pichia (ver, por exemplo, Powers et al., 2001 J Immunol Methods 251: 123-35), Hansenula ou Saccharomyces.

[00369] Em uma modalidade, os polipeptídeos são produzidos em células mamíferas. Células hospedeiras mamíferas típicas para expressar os anticorpos do clone ou seus fragmentos de ligação ao antígeno incluem o Ovário de Hamster Chinês (células de CHO) (incluindo células de dhfr - CHO, descritas em Urlaub e Chasin, 1980 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220, usado com um marcador selecionável de DHFR, por exemplo, como descrito em Kaufman e Sharp, 1982 Mol. Biol. 159: 601-621), linhagens celulares linfocíticas, por exemplo, células de mieloma NS0 e células SP2, células COS e uma célula de um animal transgênico, por exemplo, um mamífero transgênico. Por exemplo, a célula é uma célula epitelial mamária.

[00370] Além das sequências de ácidos nucleicos que codificam o polipeptídeo, os vetores de expressão recombinante podem ser portadores de sequências adicionais, tais como sequências que regulam a replicação do vetor em células hospedeiras (por exemplo, origens de replicação) e genes marcadores selecionáveis. O gene marcador selecionável facilita a seleção de células hospedeiras nas quais o vetor foi introduzido (ver, por exemplo, Patentes Norteamericanas Nos. 4.399.216, 4.634.665, e 5.179.017). Por exemplo, tipicamente o gene marcador selecionável confere resistência a fármacos, tais como G418, higromicina ou metotrexato, em uma célula hospedeira na qual o vetor foi introduzido.

[00371] Técnicas padrão de biologia molecular podem ser usadas para preparar o vetor de expressão recombinante, transfectar as células hospedeiras, selecionar os transformantes, cultivar as células hospedeiras e recuperar a molécula de anticorpo do meio de cultura. Por exemplo, os polipeptídeos da invenção podem ser isolados por cromatografia de afinidade.

[00372] Em uma modalidade, o polipeptídeo da invenção é purificado como descrito no WO 10/056550. Em uma modalidade exemplar, o polipeptídeo é purificado de um ou mais contaminantes: contatando uma mistura de polipeptídeo e contaminante(s) com um suporte com base em proteína A e/ou um suporte de permuta de íon, sob condições que permitem ao polipeptídeo ligar-se a, ou adsorver o suporte; removendo um ou mais contaminantes lavando o suporte ligado sob condições em que o polipeptídeo permanece ligado ao suporte e seletivamente eluindo o polipeptídeo do suporte, eluindo a molécula de polipeptídeo adsorvida com um tampão de eluição.

[00373] Os polipeptídeos da invenção também podem ser produzidos por um animal transgênico. Por exemplo, a Patente Norte- Americana No. 5.849.992 descreve um método para expressar um anticorpo na glândula mamária de um mamífero transgênico. É construído um transgene que inclui um promotor específico de leite e ácidos nucleicos que codificam a molécula de anticorpo e uma sequência sinal para secreção. O leite produzido pelas fêmeas de tais mamíferos transgênicos inclui, secretado nele, o único domínio de interesse. A molécula de anticorpo pode ser purificada a partir do leite ou, para algumas aplicações, usada diretamente.

[00374] A presente invenção abrange métodos para produção das formulações como definido aqui.

[00375] As etapas de purificação e formulação podem coincidir, por exemplo, quando os polipeptídeos da invenção são eluídos de uma coluna usando um tampão de acordo com a presente invenção. Alternativamente, as formulações da invenção podem ser preparadas trocando um tampão por qualquer meio adequado, por exemplo, meios amplamente usados na técnica, tais como, diálise, ultrafiltração, etc.

[00376] Em algumas modalidades, o método de produção de uma formulação da invenção também pode se referir à reconstituição de uma formulação liofilizada ou secada por spray, por exemplo por adição de água ou um tampão adequado (que pode opcionalmente compreender excipientes adicionais).

[00377] Os métodos para preparar uma formulação de acordo com a presente invenção podem abranger etapas adicionais, tais como carregá-las em frasconetes adequados para uso clínico, tais como recipientes selados e/ou confeccionando-a em uma forma unitária de dosagem. Os métodos também podem compreender etapas adicionais, tais como secagem por spray, liofilização ou congelamento, por exemplo, congelamento a granel. A invenção também abrange os recipientes, formas de unitárias de dosagem ou outros produtos que podem ser obtidos por qualquer um dos métodos mencionados aqui.

[00378] As formulações da presente invenção podem ser usadas para armazenar os polipeptídeos da invenção, por exemplo,

polipeptídeos compreendendo pelo menos um ISVD contra vWF, tal como ALX 0081 ou ALX 0081-A, como definido aqui. Desse modo, a invenção abrange um método de armazenamento dos polipeptídeos da invenção como usado aqui, caracterizado pelo uso de uma formulação como definida aqui. Mais especificamente, a invenção abrange métodos para estabilizar os polipeptídeos da invenção para armazenamento, compreendendo, por exemplo, a preparação de uma formulação como aqui descrito. O armazenamento pode durar de 1 a 36 meses, tal como 1, 1,5, 3, 6, 9, 12, 18, 24, 30 ou 36 meses, por exemplo, pelo menos 12 meses, opcionalmente a uma temperatura entre -70°C e +40°C, como - 70°C, -20°C, + 5°C, + 25°C ou + 40°C, preferivelmente uma temperatura entre -70°C e + 25°C, mais preferivelmente a uma temperatura entre - 20°C e + 5°C. Desse modo, o armazenamento pode incluir congelamento, secagem por congelamento (liofilização) e/ou secagem por spray. Os métodos de armazenamento podem ainda compreender a avaliação da integridade física e química dos ligantes de vWF, como definido aqui.

[00379] A presente invenção também se refere a métodos para analisar formulações compreendendo pelo menos um dos ligantes de vWF como definido aqui. As formulações podem ser analisadas para quaisquer sinais de instabilidade química ou física dos ligantes de vWF, como definido aqui. Por exemplo, as formulações podem ser avaliadas quanto à presença de produtos de degradação, por exemplo, derivados de baixo peso molecular, tais como fragmentos proteoliticos; e/ou quanto a derivados químicos, por exemplo, variantes de piroglutamato; e/ou quanto a derivados de alto peso molecular, tais como agregados, aglomerados, etc. A formulação também pode ser avaliada quanto ao teor e/ou potência total de proteínas. Cada um dos vários métodos de ensaio aqui mencionados pode ser usado no método de análise da presente invenção.

[00380] Desse modo, a presente invenção também se refere a um método para monitorar e/ou avaliar a qualidade e/ou estabilidade de uma formulação, por exemplo, durante um ou mais de fabricação, armazenamento e uso. A invenção também se refere a um método de controle de qualidade de uma formulação, por exemplo, para avaliar se a formulação atende às especificações do produto, como também descrito aqui. A invenção em qualquer um desses aspectos compreende um ou mais selecionados da comparação com uma ou mais amostras de referência, a análise da variação batelada a batelada e o monitoramento contínuo de um processo de produção.

[00381] A presente invenção refere-se a qualquer produto que esteja associado com as formulações da presente invenção, por exemplo, compreendendo-as ou sendo necessário para sua produção ou confecção, sem quaisquer limitações.

[00382] Por exemplo, a presente invenção refere-se a um artigo de fabricação, por exemplo, um recipiente selado compreendendo uma ou mais das formulações de acordo com a presente invenção.

[00383] A invenção também se refere a uma forma de dosagem unitária farmacêutica, por exemplo, uma forma de dosagem adequada para administração parenteral (por exemplo, intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa e subcutânea) a um paciente, preferivelmente um paciente humano, compreendendo uma ou mais das formulações de acordo com qualquer modalidade descrita aqui.

[00384] A forma unitária de dosagem pode ser, por exemplo, no formato de uma seringa pré-carregada, uma ampola, cartucho ou frasconete.

[00385] Também são fornecidos kits ou artigos de fabricação, compreendendo a formulação da invenção e instruções para uso por, por exemplo, um profissional de saúde. Os kits ou artigos de fabricação podem incluir um frasconete ou uma seringa contendo a formulação da invenção como descrito aqui.

[00386] Preferivelmente, o frasconete ou seringa é composto de vidro, plástico ou um material polimérico escolhido de um polímero ou copolímero de olefina cíclico. A seringa, ampola, cartucho ou frasconete pode ser fabricado com qualquer material adequado, como vidro ou plástico e pode incluir materiais de borracha, tais como rolhas de borracha para frasconetes e êmbolos de borracha e selos de borracha para seringas e cartuchos. A invenção também se refere a um kit compreendendo uma ou mais das formulações de acordo com a presente invenção. O kit pode também compreender instruções de uso e/ou um folheto informativo da embalagem clínica. Em qualquer modalidade dos produtos como definido aqui, a invenção também abrange a presença de material de embalagem, instruções de uso e/ou folhetos de informativos de embalagens clínicas, por exemplo, como requerido por aspectos regulatórios.

[00387] Para propósitos de comparação de duas ou mais seqüências de aminoácidos, a percentagem de "identidade de sequência" entre uma primeira sequência de aminoácidos e uma segunda sequência de aminoácidos (também aqui referida como "identidade de aminoácido") pode ser calculada dividindo [o número de resíduos de aminoácidos na primeira sequência de aminoácidos que são idênticos aos resíduos de aminoácidos nas posições correspondentes na segunda sequência de aminoácidos] pelo [número total de resíduos de aminoácidos na primeira sequência de aminoácido] e multiplicando por [100%], em que cada deleção, inserção, substituição ou adição de um resíduo de aminoácido na segunda sequência de aminoácidos - em comparação com a primeira sequência de aminoácido - é considerada uma diferença em um único resíduo de aminoácido (posição), isto é, como uma "diferença de aminoácidos", como definido aqui.

[00388] Alternativamente, o grau de identidade de sequência entre duas sequências de aminoácidos pode ser calculado usando um algoritmo de computador conhecido, tal como aqueles mencionados acima para determinar o grau de identidade de sequência para sequências de nucleotídeos, novamente usando configurações padrão.

[00389] Normalmente, com o propósito de determinar a percentagem de "identidade de sequência" entre duas sequências de aminoácidos de acordo com o método de cálculo descrito acima, a sequência de aminoácidos com o maior número de resíduos de aminoácidos será tomada como a "primeira" sequência de aminoácidos, e a outra sequência de aminoácidos será tomada como a "segunda" sequência de aminoácidos.

[00390] Além disso, ao determinar o grau de identidade de sequência entre duas seqüências de aminoácidos, a pessoa versada pode levar em consideração as assim chamadas substituições de aminoácidos "conservadoras", que geralmente podem ser descritas como substituições de aminoácidos nas quais um resíduo de aminoácido é substituído por outro resíduo de aminoácido de estrutura química similar e que tem pouca ou essencialmente nenhuma influência sobre a função, atividade ou outras propriedades biológicas do polipeptídeo. Tais substituições de aminoácidos conservativas são bem conhecidas na técnica, por exemplo, de WO 04/037999, GB-A-3 357 768, WO 98/49185, WO 00/46383 e WO 01/09300; e tipos (preferidos) e/ou combinações de tais substituições podem ser selecionados com base nos ensinamentos pertinentes de WO 04/037999, bem como de WO 98/49185 e das referências adicionais citadas aqui. Tais substituições conservativas são preferivelmente substituições nas quais um aminoácido dentro dos seguintes grupos (a) - (e) é substituído por outro resíduo de aminoácido dentro do mesmo grupo: (a) pequenos resíduos alifáticos, não polares ou levemente polares: Ala, Ser, Thr, Pro e Gly; (b) resíduos polares com carga negativa e suas amidas (sem carga): Asp, Asn, Glu e Gln; (c) resíduos polares com carga positiva: His, Arg e Lys; (d) grandes resíduos alifáticos, não polares: Met, Leu, Ile, Val e

Cys; e (e) resíduos aromáticos: Phe, Tyr e Trp. Substituições conservativas particularmente preferidas são como segue: Ala por Gly ou por Ser; Arg por Lys; Asn por Gln ou por His; Asp por Glu; Cys por Ser; Gln por Asn; Glu por Asp; Gly por Ala ou por Pro; His por Asn ou por Gln; Ile por Leu ou por Val; Leu por Ile ou por Val; Lys por Arg, por Gln ou por Glu; Met por Leu, por Tyr ou por Ile; Phe por Met, por Leu ou por Tyr; Ser por Thr; Thr por Ser; Trp por Tyr; Tyr por Trp; e/ou Phe por Val, por Ile ou por Leu. Quaisquer substituições de aminoácidos aplicadas aos polipeptídeos aqui descritos também podem ser com base na análise das frequências de variações de aminoácidos entre proteínas homólogas de diferentes espécies desenvolvidas por Schulz et al., Principles of Protein Structure, Springer-Verlag, 1978, nas análises de potenciais formadores de estrutura desenvolvidos por Chou e Fasman, Biochemistry 13: 211, 1974 e Adv. Enzymol., 47: 45-149, 1978, e na análise de padrões de hidrofobicidade em proteínas desenvolvidas por Eisenberg et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 140-144, 1984; Kyte& Doolittle; J Molec. Biol. 157: 105-132, 1981, e Goldman et al., Ann. Rev. Biophys. Chem. 15: 321-353, 1986, todos incorporados aqui em sua íntegra por referência. Informações sobre a estrutura primária, secundária e terciária de Nanobodies® são fornecidas na descrição aqui e na técnica geral de base citada acima. Além disso, para esse propósito, a estrutura cristalina de um domínio VHH de uma lhama é, por exemplo, dada por Desmyter et al., Nature Structural Biology, Vol. 3, 9, 803 (1996); Spinelliet al., Natural Structural Biology (1996); 3, 752-757; e Decanniere et al., Structure, Vol. 7, 4, 361 (1999). Mais informações sobre alguns dos resíduos de aminoácidos que nos domínios VH convencionais formam a interface VH/VL e potenciais substituições de camelização nessas posições podem ser encontradas na técnica anterior citada acima.

[00391] A presente invenção também se refere a um método de tratamento ou prevenção de uma doença relacionada ao vWF, tal como,

por exemplo, síndrome coronariana aguda (ACS), ataque isquêmico cerebral transitório, angina do peito instável ou estável, acidente vascular cerebral, infarto do miocárdio ou púrpura trombocitopênica trombótica (TTP); o referido método compreendendo a administração a um indivíduo de uma composição farmacêutica compreendendo a formulação da invenção, reduzindo assim um ou mais sintomas associados com a referida doença relacionada com o vWF. Em particular, a referida doença relacionada com o vWF é TTP.

[00392] Em outra modalidade da invenção, é fornecido um artigo de fabricação contendo materiais úteis para o tratamento de uma doença como descrito acima. O artigo de fabricação compreende incluso, um rótulo e folheto informativo da embalagem. Recipientes adequados incluem, por exemplo, frascos, frasconetes, seringas, etc. Os recipientes podem ser de uma variedade de materiais, como vidro ou plástico. O recipiente retém a composição que é eficaz no tratamento da condição e pode ter uma porta de acesso estéril (por exemplo, o recipiente pode ser uma bolsa de solução intravenosa ou um frasconete tendo uma rolha perfurável por uma agulha de injeção hipodérmica). Pelo menos um agente ativo na composição é o polipeptídeo da invenção, tal como ALX 0081 ou ALX 0081-A. O rótulo sobre, ou associado com, o recipiente indica que a composição é usada para tratar a condição de escolha. O artigo de fabricação pode também compreender um segundo recipiente compreendendo um tampão farmaceuticamente aceitável, tal como uma salina tamponada por fosfato ou salina tamponada por citrato, como descrito aqui. Ele pode também incluir outros materiais desejáveis do ponto de vista do usuário ou comercial, incluindo outros tampões, diluentes, filtros, agulhas e seringas.

[00393] A presente invenção fornece um kit ou um artigo de fabricação, compreendendo um recipiente contendo o polipeptídeo como descrito aqui ou a formulação como aqui descrita e instruções de uso.

[00394] A presente invenção fornece um kit ou artigo de fabricação como aqui descrito, em que a formulação está presente em um frasconete ou uma seringa injetável.

[00395] A presente invenção fornece um kit ou artigo de fabricação aqui descrito, em que a formulação está presente em uma seringa injetável pré-carregada.

[00396] A presente invenção fornece um kit ou artigo de fabricação como aqui descrito, em que a seringa ou um frasconete é composto de vidro, plástico ou um material polimérico escolhido de um polímero ou copolímero de olefina cíclica.

[00397] As modalidades ilustradas e descritas neste relatório descritivo destinam-se apenas a ensinar àqueles versados na técnica a melhor maneira conhecida pelos inventores para preparar e usar a invenção. Modificações e variação das modalidades da invenção acima descritas são possíveis sem se afastar da invenção, como apreciado por aqueles versados na técnica à luz dos ensinamentos acima. Entende-se, portanto, que, dentro do escopo das reivindicações e seus equivalentes, a invenção pode ser praticada de outro modo que não o especificamente descrito.

[00398] A invenção será agora descrita novamente por meio dos seguintes aspectos, exemplos e figuras preferidos não limitantes.

[00399] Todo o teor de todas as referências (incluindo referências de literatura, patentes emitidas, pedidos de patente publicados e pedidos de patente pendente) citadas ao longo deste pedido é expressamente incorporado por referência, em particular para o ensinamento que é mencionado acima.

5. Abreviações

[00400] Uma lista de explicações das abreviações comumente usadas no presente relatório descritivo é fornecida na Tabela 5.

6. Legenda das Figuras Figura 1. Tempo para Normalização Confirmada da Contagem de Plaquetas na População que se pretende tratar. Dados do período de troca diária de plasma cegada dupla até o ponto de corte foram usados para a análise da finalidade primária. O ponto de corte dos dados foi definido por: 45 dias de troca plasmática diária após o início do fármaco do estudo, a interrupção da troca plasmática diária ou a interrupção do tratamento com fármaco do estudo; o que ocorreu primeiro. Figura 2. Atividade de ADAMTS13 de Acordo com as Recorrências. Painéis A e B mostram as categorias de atividade de ADAMTS13 para pacientes individuais na semana após o término da troca plasmática diária e no término do tratamento com fármaco em estudo, respectivamente. Em cada painel, são apresentadas as categorias de ADAMTS13 (suprimidas ≤ 10% ou normalizadas > 10%) para pacientes nos diferentes grupos de tratamento. A parte esquerda de cada painel indica dados para pacientes que não tiveram nenhuma recorrência, a parte direita de cada painel indica pacientes que tiveram uma recorrência e quando isso ocorreu com relação ao término PE diária ou ao término do tratamento. Figura 3. Média dos níveis de vWF:Ag versus perfis de tempo durante uma dose diária subcutânea repetida de 10 mg de caplacizumabe em voluntários saudáveis (painel superior) e durante a administração diária subcutânea repetida de 10 mg de caplacizumabe em pacientes com aTTP (painel inferior). aTTP: púrpura trombocitopênica trombótica adquirida; PE: troca plasmática; UF: acompanhamento;

vWF: fator de von Willebrand. Figura 4. Atividade média (± DP) do RICO na fase II ALX-0681-2.1/10 ("TITAN", painel superior) e na fase III ALX0681-C301 ("HERCULES", painel inferior). Valores de RICO < 20% representam o limiar da atividade farmacológica do caplacizumabe; para o propósito do gráfico, valores abaixo do limite inferior de quantificação de 15% foram fixados em 15%, valores acima do limite superior de quantificação de 120% foram fixados em 120%. Gráficos mostram média ± erro padrão da média. PE: troca plasmática; UF: acompanhamento; RICO: cofator de ristocetina; DP: desvio padrão; vWF: fator de von Willebrand. Figura 5. Concentração plasmática de caplacizumabe versus perfil de tempo após administração de doses subcutâneas únicas ascendentes (A) e após administração única e repetida de doses subcutâneas diárias de 10 mg por sete dias (B) em voluntários saudáveis.

7. EXEMPLOS

7.1 Regulamentos aplicáveis

[00401] Todas as amostras humanas usadas na seção Exemplos foram obtidas de fontes comerciais ou de voluntários humanos (após a obtenção de todos os consentimentos e aprovações necessárias) e foram usadas de acordo com os requisitos legais e regulamentares aplicáveis (incluindo aqueles relacionados ao segredo médico e à privacidade do paciente).

[00402] Os ensaios clínicos foram realizados de acordo com as leis e regulamentos aplicáveis (incluindo a Declaração de Helsinki e os princípios do segredo médico e à proteção da privacidade do paciente) e após todas as aprovações necessárias (incluindo aprovações dos comitês de éticas relevantes) e consentimentos (incluindo o consentimento informado de indivíduos envolvidos) foram obtidos.

[00403] Os objetivos e o teor deste estudo clínico, bem como seus resultados, foram tratados como confidenciais e não foram disponibilizados a terceiros. Os funcionários participantes do estudo estavam vinculados à confidencialidade. Todos os medicamentos não utilizados foram devolvidos ao requerente ou destruídos.

7.2 Critérios de elegibilidade

[00404] Os pacientes tiveram que cumprir todos os seguintes critérios para serem elegíveis para admissão no estudo da fase III: Critério de inclusão

1. Adulto masculino ou feminino com idade ≥ 18 anos no momento da assinatura do Termo de Consentimento Informado (ICF)

2. Diagnóstico clínico de TTP adquirida, que inclui trombocitopenia e evidência microscópica de fragmentação de glóbulos vermelhos (por exemplo, esquistócitos)

3. Requer início do tratamento diário com PE e ter recebido 1 tratamento com PE antes da randomização Critérios de exclusão • Contagem de plaquetas ≥100 × 109/L • Nível de creatinina sérica > 200 µmol/L, caso a contagem de plaquetas seja > 30×109/L (para excluir possíveis casos de Síndrome Urêmica Hemolítica atípica [HUS atípica]) • Outras causas conhecidas de trombocitopenia, incluindo, entre outras: - Evidência clínica de infecção entérica por E. coli 0157 ou organismo relacionado - HUS atípica - Microangiopatia trombótica associada a transplante de células estaminais hematopoiéticas, medulla óssea ou órgão - Sepse conhecida ou suspeita - Diagnóstico de coagulação intravascular disseminada

• TTP congênita (conhecida no momento da entrada no estudo) • Gravidez ou amamentação • Sangramento ativo clinicamente significativo ou alto risco de sangramento (excluindo trombocitopenia) • Tratamento crônico conhecido com tratamento anticoagulante que não pode ser parado (interrompido) com segurança, incluindo mas não se limitando a: - antagonistas da vitamina K - heparina ou heparina de baixo peso molecular (LMWH) - moléculas anti-inflamatórias não esteroidais de ácido não acetil salicílico • Hipertensão arterial maligna • Condição clínica diferente da associada com a TTP, com expectativa de vida < 6 meses, tal como malignidade em estágio terminal • Indivíduos que foram previamente incluídos em um estudo clínico com caplacizumabe e receberam caplacizumabe ou para quem o grupo de tratamento designado é desconhecido.

7.3 Planejamento do Estudo

[00405] O presente estudo foi planejado como um estudo randomizado, em fase III, duplo-cego, controlado por placebo, para avaliar a eficácia e segurança do tratamento com caplacizumabe quando administrado em adição ao tratamento padrão em pacientes com um episódio agudo de TTP adquirida (Hercules). O estudo avaliou a eficácia do caplacizumabe na restauração mais rápida das contagens normais de plaquetas e o efeito do tratamento com caplacizumabe em um resultado do composto de mortalidade relacionada ao TTP, prevenção da recorrência do episódio de TTP presente e prevenção de eventos tromboembólicos importantes (TE) durante o tratmento com o fármaco de estudo. Após confirmação da elegibilidade para participar do estudo (cf. Exemplo 7.2) e após o início do tratamento com PE, os indivíduos foram randomizados em uma proporção de 1:1 recebendo caplacizumabe ou placebo, além da terapia de padrão de cuidados. A randomização foi estratificada pela severidade dos sintomas neurológicos (escala de coma de Glasgow [GCS]).

[00406] A duração do estudo por indivíduo foi de aproximadamente 2 meses a aproximadamente 6 meses em caso de extensão e exacerbação do tratamento durante o período de 30 dias pós-PE diariamente ou recidiva durante a extensão do tratamento.

[00407] Os pacientes foram acompanhados em diferentes fases durante este estudo: - Período de valiação: desde a assinatura do Termo de Consentimento Informado (ICF) até a randomização; - Período de tratamento com o fármaco do estudo: abrangendo o período diário de PE (duração variável) e 30 dias após o período de PE diário; - Período de extensão do tratamento: extensões de 7 dias com no máximo 28 dias, ou seja, 4 x 7 dias; - Estudo Aberto: No caso de ocorrer uma exacerbação durante o período de tratamento de 30 dias ou ocorrer uma recaída durante o período de extensão do tratamento (primeira exacerbação ou recaída), o indivíduo recebeu caplacizumabe de venda livre (OL), juntamente com o reinício do PE diário, e tratamento imunossupressor otimizado. O esquema de tratamento com caplacizumabe e o esquem de visita foram os mesmos do período inicial de tratamento com o fármaco do estudo (abrangendo PE diária [duração variável] e 30 dias após o período pós-diário de PE) e o possível período de extensão do tratamento; - Período de acompanhamento (FU) de 4 semanas: uma primeira visita à FU sete dias e uma visita final à FU 28 dias após o último dia da administração do fármaco do estudo.

[00408] Os pacientes receberam os melhores cuidados e tratamento médico julgados apropriados pelo investigador em cada local e de acordo com as diretrizes para o tratamento da TTP.

[00409] O fármaco do estudo foi administrado como tratamento adjuvante em horários específicos em relação aos procedimentos de PE. O fármaco do estudo consistiu em 10 mg de caplacizumabe ("grupo de tratamento" ou "CAPLA") ou placebo ("grupo placebo"), uma ou duas vezes ao dia.

7.4 Tratamento com o fármaco do estudo para o estudo Hercules: • Carga de dose i.v.: os indivíduos receberam uma dose de carga única de 10 mg do fármaco do estudo por injeção em bolus i.v. de 6 horas a 15 minutos antes da primeira PE realizada após a randomização; um bolus i.v. de 10 mg foi também administrado antes da 1a PE feitao para o tratamento de uma primeira exacerbação ou recaída. • Dose subcutânea diária (s.c.): após completar cada PE diária, uma injeção s.c. de 10 mg do fármaco do estudo foi administrada diariamente durante toda o período do tratamento com PE. • Administração s.cu diária de 10 mg do fármaco do estudo foi continuada por um período de 30 dias após a interrupção diária da PE. Nenhum ajuste a este período foi feito para a redução da PE. • A extensão do tratamento com o fármaco do estudo além desses 30 dias foi guiada por vários fatores de risco para recidiva do episódio TTP presente, incluindo o perfil de atividade do ADAMTS13, bem como outros sinais e sintomas de atividade da doença subjacente. • No caso de uma primeira exacerbação do episódio de TTP apresentado, os indivíduos receberam Caplacizumabe de venda livre juntamente com PE diariamente.

• Caso em que um indivíduo tenha uma primeira recorrência de TTP enquanto ainda estiver recebendo o fármaco do estudo no período de extensão do tratamento, a PE diária foi iniciada como parte do tratamento padrão de cuidados, juntamente com o tratamento imunossupressor apropriado. • No caso de um indivíduo ter uma primeira recidiva ou subseqüente TTP após concluir o tratamento com o fármaco do estudo (isto é, no período da FU), foi iniciado o tratamento padrão de cuidados de PE diária e tratamento imunossupressor apropriado conforme a prática do sítio.

7.5 Finalidades

[00410] A finalidade primária deste estudo de fase III foi o tempo para resposta da contagem de plaquetas definida como contagem inicial de plaquetas ≥ 150×109/L com parada subsequente da PE diária dentro de 5 dias. As principais finalidades são listadas abaixo:

1. Proporção de indivíduos com morte relacionada à TTP, recorrência de TTP ou pelo menos um evento tromboembólico maior emergente do tratamento (por exemplo, infarto do miocárdio, acidente vascular cerebral, embolia pulmonar ou trombose venosa profunda [DVT]) durante o período de tratamento com o fármaco do estudo (incluindo extensões).

2. Proporção de indivíduos com uma recorrência de TTP no período de estudo geral (incluindo o período de quatro semanas de FU).

3. Proporção de indivíduos com TTP refratária, definida no estudo como ausência de duplicação da contagem de plaquetas após 4 dias de tratamento padrão e LDH > ULN.

4. Tempo para normalização de todos os três dos seguintes níveis marcadores de danos ao órgão: Tempo para LDH ≤ 1 x limite superior de normal (ULN) e cTnI ≤ 1 x ULN e creatinina sérica ≤ 1 x

ULN

5. Outros parâmetros incluíram duração e volume da troca plasmática, duração de permanência no hospital e unidade de cuidados intensivos, mortalidade, parâmetros farmacodinâmicos e farmacocinéticos e imunogenicidade.

6. As avaliações de segurança foram realizadas durante o tratamento com o fármaco do estudo e os períodos de acompanhamento, incluindo sinais vitais, exame físico, exames clínicos laboratoriais e eletrocardiograma de 12 derivações. Os eventos adversos relatados foram codificados com o uso de termos preferidos do Medial Dictionary for Regulatory Activities, Versão 20.0.

7.6 Análise estatística

[00411] No estudo Hercules, a amostra planejada de 132 pacientes foi especificada para fornecer um poder de 80% para detectar uma redução de 40% no tempo médio para normalização da contagem de plaquetas com caplacizumabe, usando um teste de classificação log bilateral em um nível de significância de 5%, assumindo uma taxa de abandono de 10%. Um tamanho de amostra de 132 indivíduos também foi definido para fornecer uma potência de 83% para detectar uma redução de 20% na primeira finalidade secundária chave, usando um teste qui-quadrado bilateral com uma grande aproximação de amostra e um nível de significância de 5%. Todas as análises de eficácia foram realizadas na população que se pretende tratar (composta por todos os pacientes randomizados) e as análises de segurança e imunogenicidade foram realizadas na população de segurança (consistindo em todos os pacientes que receberam pelo menos uma dose do fármaco do estudo). O tempo para resposta da contagem de plaquetas nos grupos caplacizumabe e placebo foi comparado através da realização de um teste de classificação estratificado bilateral com base em uma análise de Kaplan-Meier, com gravidade do envolvimento neurológico como um fator de estratificação.

[00412] Um método de sequência fixa foi aplicada para análises das finalidades sedundária chave. A morte relacionada com TTP, o evento tromboembólico maior e a recorrência do TTP (exacerbação) foram analisados usando um teste de Cochran-Mantel-Haenszel com ajuste quanto à gravidade do envolvimento neurológico, enquanto o quarto tempo para normalização dos marcadores de danos ao órgão foi analisado usando um tese de classificação log estratificado com base emu ma análise Kaplan-Meier com ajuste para a severidade de envolvimento neurológico e LDH.

7.7 Determinação da atividade de ADAMTS13

[00413] A atividade ADAMTS13 e a atividade inibidora funcional foram medidas por um ensaio fluorogênico usando o substrato FRETS-VWF73 (Kokame et al. 2005. Br J Haematol 129(1):93-100; Kremer Hovinga et al. 2006 J Thromb Haemost 4(5):1146-8).

[00414] Em síntese, o ensaio FRETS-VWF73 foi realizado essencialmente como descrito (Kokame et al. 2005 supra) com as seguintes modificações: Pefabloc SC (Boehringer, Mannheim, Alemanha) foi adicionado ao tampão de ensaio (5 mmol L-1 Bis-Tris, 25 mmol L-1 de CaCl2, 0,005% de Tween-20, pH 6,0) em uma concentração final de 1 mmol de L-1. A calibração do ensaio foi obtida utilizando um lago de plasma humano normal (NHP; Swiss Red Cross Blood Services, Berna, Suíça) diluído 1:25 (100%) em tampão de ensaio. Outras amostras de calibração foram obtidas por pré-diluições seriadas de NHP de 3:4 (75%), 1:2 (50%), 1:4 (25%), 1:10 (10%), 1:20 (5%), 1:50 (2%) e 1: 100 (1%) em NHP inativado por aquecimento, incubado durante 30 minutos a 56°C, seguido por 15 minutos de centrifugação a 15.000 xg) para corrigir um efeito da matriz plasmática na menor faixa de atividade da curva padrão. Todas estas padrão, bem como NHP inativado por aquecimento (0% de atividade ADAMTS13) e todas as amostras teste foram subsequentemente diluídas 1:25 em tampão de ensaio. Em seguida, 25 µL de cada padrão diluído ou amostra de paciente a 37°C em uma placa branca de 384 cavidades (NUNC, Roskilde, Dinamarca). Após 10 minutos, 25 µl de substrato peptídico L-1 FRETS-VWF73 a 4 µmol dissolvido em tampão de ensaio foram adicionados a cada cavidade e a evolução da fluorescência registrada a 37°C em uma leitora de microplacas de fluorescência (GENios, Tecan, Zürique, Suíça) equipado com um filtro de excitação de 340 nm (amplitude de faixa 35 nm) e um filtro de emissão de 450 nm (amplitude da faixa de 25 nm). A evolução da fluorescência foi medida ao longo do tempo (a cada 5 minutos por 42 ciclos). A taxa de reação foi calculada por análise de regressão linear (Passing-Bablok) da evolução da fluorescência ao longo do tempo de 5 (ciclo 2) a 60 minutos (ciclo 13). A inclinação da curva de regressão foi calculada para cada amostra de calibração, e usada para gerar a curva de calibração (linha de tendência: y = ax + b; com x = ADAMTS13 (%) e y = delta RFU/tempo delta). A atividade de ADAMTS13 (%) de uma amostra foi então calculada como: (y - b) x 1/a.

[00415] A atividade inibidora funcional de ADAMTS13 foi medida pelo mesmo método fluorogênico FRETS-VWF73 pela determinação da atividade residual de ADAMTS13 do plasma humano normal após incubação 1:1 (v:v) durante 2 horas a 37°C com plasma do paciente inativado por aquecimento (30 minutos a 56°C).

[00416] Para cada lote analítico, uma curva de calibração foi gerada usando um lago de plasma humano normal (NHP; Swiss Red Cross Blood Services, Berna, Suíça) diluído 1:25 (100%) em tampão de ensaio. Outras amostras de calibração foram obtidas por pré-diluições seriadas de NHP de 1:2 (50%), 1:4 (25%), 1:10 (10%), 1:20 (5%), 1:50 (2%) e 1:100 (1%) em NHP inativado por aquecimento. Todos os pontos de calibração foram aplicados em singlicate. Critérios de aceitação: (1) A inclinação da regressão final da linha de curva padrão deve ser > 6,0;

e (2) R² da regressão do gráfico final deve ser > 0,98 (ou R > 0,9899). Caso contrário, o ensaio foi rejeitado.

7.8 População do estudo

[00417] No presente estudo Hercules, 145 pacientes foram aleatoriamente designados para receber caplacizumabe (n = 72) ou placebo (n = 73). Todos os pacientes receberam o fármaco do estudo, exceto para um paciente do grupo caplacizumabe, que retirou o consentimento antes da primeira dosagem. No geral, 108 pacientes completaram o estudo (isto é, concluíram todas as visitas de tratamento agendadas e tiveram sua visita final de acompanhamento), enquanto 37 pacientes descontinuaram o estudo (14 no grupo caplacizumabe, 23 no grupo placebo). As razões mais frequentes para a descontinuação do estudo foram eventos adversos, retirada do consentimento e decisão do médico.

[00418] A demografia e as características basais da doença foram geralmente similares nos 2 grupos de estudo (Tabela 7.8), exceto nos episódios anteriores de TTP e atividade de ADAMTS13. No total, 97% (140/145) dos pacientes receberam glicocorticóides e em 24% deles (35/145), o tratamento com rituximabe foi iniciado durante a troca plasmática diária (17% ou 12/72 no grupo caplacizumabe e 32% ou 23/73 no grupo placebo).

Tabela 7.8 - Dados demográficos e características basais da doença* na população que se pretende tratar Caplacizumabe Placebo Total Característica (N=72) (N=73) (N=145) Idade media (faixa) – anos 45 (18-77) 47 (21-79) 46 (18-79) Sexo feminino – no. (%) 49 (68) 51 (70) 100 (69) Índice de Massa Corporal Média 30 (18-53) 30 (19-59) 30 (18-59) (faixa) - kg/m2 Raça ou grupo etínico – no. (%)§ Branco 47 (68) 50 (78) 97 (73) Preto 15 (22) 13 (20) 28 (21) Asiático 4 (6) 0 1 (1) Hispânico ou Latino 4 (6) 2 (3) 6 (4) Apresentando episódio de TTP – no. (%) 48 (67) 34 (47) 82 (57) Inicial 24 (33) 39 (53) 63 (43) Recorrente Contagem Média de Plaquetas 32 (3-119) 39 (9-133) 24 (3-133) (faixa) – 109/L LDH Média (faixa) – U/L 517 (151- 613 (120-2525) 565 (120-3343) 3343) 3,46 (0,01- 0,63 (0,01- 2,05 (0,01- cTnI Média (faixa) – µg/L 75,96) 7,28) 75,96)) Creatinina sérica (faixa) – µmol/L 100 (35-717) 102 (52-482) 101 (35-717) Atividade de ADAMTS13 – no. (%)¶ 58 (82) 65 (90) 123 (86) < 10% 13 (18) 7 (10) 20 (14) ≥ 10% 1 1 2 Ausente Classificação de Escala de Coma Glasgow – no. (%) 6 (8) 5 (7) 11 (8) ≤ 12 65 (91) 67 (93) 132 (92) 13-15 1 1 1 Ausente * Linha de Base foi definida como antes da primeira administação do fármaco do estudo; todos os pacientes deveriam ter uma PEX anterior antes da linha de base. § Raça e grupo etínico foram determinados pelo investigador.

[00419] Como um resultado do PEX anterior, em alguns casos a atividade de ADAMTS13 da linha de base foi maior do que localmente medica na admissão. Onde disponível os níveis de atividade de ADAMTS13 localmente medidos na admissão foram coletados e o menor dos valores da linha de base e admissão é representado

7.9 Finalidades Primárias e Secundárias Chave

[00420] Houve uma significativa redução em tempo para resposta de contagem de plaquetas no grupo de caplacizumabe com base na análise Kaplan Meier e um teste de classificação log estratificada (Figura 1). Em qualquer dado momento do tempo, pacientes recebendo caplacizumabe foram 1,55 vez mais prováveis de obter uma resposta de contagem de plaquetas em comparação com pacientes tratados com placebo (relação de normalização da contagem de plaquetas, 1,55; 95% de CI, 1,09 a 2,19; P=0,01). Durante o período de tratamento do fármaco do estudo, tratamento com caplacizumabe resultou em uma redução de 74% no número de pacientes com morte relacionada a TTP, recorrência de TTP, ou um maior evento tromboembólico (P<0,0001, Tabela 7.9). Durante o período de estudo geral, incluindo o período de acompanhamento livre de tratamento de 28 dias, 28 pacientes no grupo placebo que experimentou uma recorrência versus 9 pacientes no grupo de caplacizumabe, uma redução de 67% (P<0,001, Tabela 7.9). Em todos os 6 pacientes no grupo de caplacizumabe que experimentaram uma recorrência de TTP durante o período de acompanhamento (isto é, uma recaída, em mais de 30 dias após o término de troca de plasma diária), o nível de atividade de ADAMTS13 foi < 10% no término do tratamento com fármaco do estudo, sugerindo que a doença subjacente estava ainda ativa no momento em que o fármaco do estudo foi descontinuado. Nenhum paciente tratado com Caplacizumabe foi refratário à terapia, enquanto 3 pacientes sob placebo foram (P=0,057). Tratamento com caplacizumabe foi também associado com uma tentative de normalização mais rápida dos 3 marcadores de dano de órgão: LDH, cTnI, e creatinina sérica.

Tabela 7.9: Finalidades de Eficácia Primária e Secundária Chave na População que se pretende tratar Caplacizumabe Placebo Finalidade (N=72) (N=73) Finalidade Primária Tempo para resposta: caplacizumabe vs. placebo Relação de normalização da contagem de 1,55 (1,09-2,19) plaquetas (95% de CI) 0,01 Valor P Finalidades Secundárias Chave Pelo menos um dos eventos abaixo enquanto sob 9 (12,7) 36 (49,3) tratamento com o fármaco do estudo cegado – no. (%) 0 3 (4,1) Morte relacionada a TTP 6 (8,5) 6 (8,2) Evento tromboembólico maior 3 (4,2) 28 (38,4) Recorrência de TTP (exacerbação) Valor P <0,0001 Recorrência de TTP* durante todo o período do estudo – no. (%) 9 (12,7) 28 (38,4) enquanto sob fármaco do estudo cegado 3 (4,2) 28 (38,4) (exacerbação) 6 (9,1) 0 durante o período de acompanhamento (recidiva) Valor P <0,001 Refratário § ao tratamento – no. (%) 0 3 (4,2) Valor P 0,0572 Tempo para normalização de marcadores de dano ao órgão 3,36(1,88- 2,86 (1,93-3,86) Tempo médio – dias (95% de CI) 7,71)

* A recorrência foi definida como uma nova queda na contagem de plaquetas após a normalização inicial da contagem de plaquetas, necessitando o reinício de PEX.

De acordo com a terminologia de consenso, as recorrências dentro de 30 dias após o término de PEX diária são exacerbações, enquanto que aquelas que ocorrem mais de 30 dias após o final da PEX diária são denominadas recidivas (Scully et al., 2017 J Thromb Haemost 5:312-22).

§ Para este finalidade, a refratariedade foi definida como ausência de duplicação da contagem de plaquetas após 4 dias de tratamento e LDH acima dos níveis normais (Benhamou et al. 2015 J Thromb Haemost 13: 293-302).

7.10 Atividade do ADAMTS13 em relação à recorrência Exacerbação: Dos 145 pacientes randomizados no presente estudo Hercules, 129 alcançaram uma resposta de contagem de plaquetas e completaram o período diário de troca plasmática (65 no grupo de caplacizumabe e 64 no grupo de placebo). Na semana após o término da troca plasmática diária, a atividade do ADAMTS13 retornou acima de 10% em 42% (54/129) dos pacientes, mas permaneceu suprimida abaixo de 10% nos outros 58% (75/129). No total, 31 pacientes apresentaram exacerbação, 2 dos quais normalizaram a atividade do ADAMTS13 e 29 dos quais tiveram doença subjacente não resolvida, como evidenciado pelos níveis de atividade do ADAMTS13 <10% (Figura 2, painel A). Recaída: os níveis de atividade do ADAMTS13 no final do tratamento de fármaco de estudo estavam disponíveis para 120 pacientes (60 no final do tratamento com caplacizumabe em dupla ocultação, 34 no final do tratamento com placebo em dupla ocultação e 26 no final do tratamento com caplacizumabe de venda livre). Desses pacientes, 74% (89/120) tinham níveis normalizados de atividade do ADAMTS13 no momento em que o tratamento foi interrompido. Nenhum desses pacientes sofreu recaída durante os 28 dias de seguimento após o término do tratamento com o fármaco do estudo. Os outros 26% (31/120) dos pacientes ainda tinham suprimida a atividade do ADAMTS13 no momento em que o tratamento com o fármaco do estudo foi interrompido. No total, 9 desses 31 pacientes sofreram uma recaída nos 28 dias subsequentes, 6 dos 9 após o término do tratamento com caplacizumabe em dupla ocultação e 3 dos 9 após o término do tratamento com caplacizumabe de venda livre (Figura 2, painel B) (cf. Exemplo 7.13).

7.11 Caracterização e resultados de pacientes com aTTP com doença inicial ou recorrente Antecedentes: A púrpura trombocitopênica trombótica adquirida (aTTP) é um distúrbio de coagulação sanguínea autoimune com risco de vida. Os pacientes correm risco de morbidade significativa e morte durante cada episódio. Os dados de eficácia e segurança foram obtidos no estudo Hercules da Fase III com caplacizumabe em pacientes com aTTP (Scully et al., Blood 2017 130: LBA-1). Objetivos: Caracterização da apresentação da doença e avaliação dos resultados do tratamento em pacientes incluídos no estudo HERCULES com um episódio de aTTP inicial ou recorrente. Métodos: Demografia, características da doença de linha de base e resultados do tratamento (tempo para resposta à contagem de plaquetas, mortalidade, recorrência, eventos tromboembólicos principais (TE) e refratariedade) foram avaliados para ambos os subgrupos, usando resumos descritivos. A contagem de plaquetas, os níveis de LDH e os níveis cardíacos de troponina-I foram determinados de acordo com métodos padrão (cf. descrição detalhada). Resultados: 145 pacientes foram randomizados, 82 com episódio inicial de aTTP e 63 com doença recorrente. Os dados demográficos foram geralmente equilibrados entre os grupos, enquanto as características da doença de linha de base foram mais graves nos episódios iniciais vs. recorrentes: contagem média de plaquetas (28,8 x 109/L vs. 44,4 x 109/L), LDH média (598U/L vs. 523U/L) e Troponina I cardíaca mediana (0,119 µg/L vs. 0,036 µg/L). O tempo desde os primeiros sintomas até o diagnóstico também foi maior naqueles que experimentaram um episódio inicial (6,5 dias) versus um episódio recorrente (3,9 dias). Mais pacientes no grupo caplacizumabe tiveram seu primeiro episódio de aTTP (66,7%) versus o grupo placebo (46,6%). O tratamento com caplacizumabe melhorou os resultados [ou seja, tempo mais rápido para responder à contagem de plaquetas, menor proporção de pacientes com morte, recorrência ou evento importante de TE durante o período de tratamento, menor taxa de recorrência durante o período geral do estudo e prevenção de refratariedade] em ambos subgrupos comparados ao placebo (consulte a Tabela 7.11 para obter resultados detalhados). Conclusões: Pacientes com um episódio inicial de aTTP apresentam apresentação tardia e doença mais grave na linha de base do que aqueles com doença recorrente.

O tratamento com caplacizumabe melhora os resultados nos dois subgrupos.

Tabela 7.11 Resultados de eficácia por episódio anterior de TTP (população que se pretende tratar)

Episódio Inicial Episódio Recorrente

Resultados de Eficácia Caplacizumabe Placebo Caplacizumabe Placebo

N=48* N=34 N=24 N=39

Tempo para resposta de contagem de plaquetas 1,67 (1,025 a 2,722) 1,64 (0,951 a 2,818) Relação da taxa de normalização da contagem de plaquetas (95% CI)

Morte relacionada a TTP, recorrência de TTP ou um maior evento TE durante o 6 (12,8) 19 (55,9) 3 (12,5) 17 (43,6) período de tratamento do fármaco do estudo

Recorrência de TTP durante Período de 6 (12,8) 15 (44,1) 3 (12,5) 13 (33,3) Estudo Total – n (%)

TTP Refratário – n (%) 0 1 (2,9) 0 2 (5,1)

* as percentagens são com base em 47 pacientes (1 indivíduo retirou o consentimento antes do tratamento com o fármaco do estudo)

7.12 O tratamento da TTP adquirida com um nanocorpo anti-vWF resulta em uma redução significativa na utilização de recursos de saúde Antecedente: A eficácia e segurança do caplacizumabe, um nanocorpo anti-von Willebrand Factor (vWF), para o tratamento da púrpura trombocitopênica trombótica adquirida (aTTP) foram avaliadas (Scully et al., Blood 2017 130: LBA-1). Objetivos: Investigar o efeito do tratamento com caplacizumabe na utilização de recursos de saúde: parâmetros de troca plasmática (PE), dias passados no hospital e na unidade de terapia intensiva (UTI). Métodos: Volume e dias de PE, dias no hospital e UTI foram resumidos e comparados entre os grupos de caplacizumabe e placebo no período geral do tratamento com o fármaco do estudo, usando uma aproximação normal ao teste de Wilcoxon Rank Sum. Resultados: 145 pacientes foram randomizados no estudo Hercules, 73 com placebo e 72 com caplacizumabe. O tratamento com caplacizumabe levou a uma normalização mais rápida da contagem de plaquetas, preveniu exacerbações e impediu que os pacientes se tornassem refratários ao tratamento. Isso se refletiu em uma redução de 38% no número médio (± SE) de dias de PE no grupo caplacizumabe (n = 71) vs. placebo (n = 73): 5,8 (± 0,51) dias vs. 9,4 (± 0,81) dias (p <0,001). O volume total médio (± SE) de plasma trocado foi similarmente reduzido em 41%: 21,3 (± 1,6) L vs. 35,9 (± 4,2) L (p <0,001). A duração média da hospitalização (± SE) diminuiu 31% no grupo caplacizumabe (n = 71) vs. placebo (n = 73): 9,9 (± 0,7) dias vs. 14,4 (± 0,7) dias (p = 0,0025).

[00421] Um terço dos pacientes foi admitido na UTI (28 pacientes no grupo caplacizumabe e 27 pacientes no grupo placebo). No grupo caplacizumabe, o número médio (± SE) de dias passados na UTI foi reduzido em 65%: 3,4 (± 0,4) dias versus 9,7 (± 2,1) dias (p = 0,0098).

Conclusões: O caplacizumabe, através do bloqueio rápido da adesão plaquetária mediada por vWF, representa um novo tratamento para aTTP. O tratamento com caplacizumabe resulta em melhores resultados, refletidos por reduções significativas na utilização de recursos de saúde.

7.13 Eficácia e segurança do caplacizumabe de venda livre em pacientes com exacerbações de aTTP Antecedentes: A eficácia e a segurança do caplacizumabe em pacientes com púrpura trombocitopênica trombótica adquirida (aTTP) foram demonstradas em um estudo de fase 2 de ocultação única (Peyvandi et al., 2016 N Engl J Med 374: 511-522) e confirmadas em um estudo de fase 3 em dupla ocultação (Scully et al., Blood 2017 130: LBA-1). Objetivos: Apresentamos aqui os resultados de eficácia e segurança de pacientes que receberam caplacizumabe de venda livre (OL). Métodos: Em caso de recorrência durante o período de tratamento de ocultação dupla (DB), os pacientes foram transferidos para o caplacizumabe OL, juntamente com o reinício da troca plasmática diária (PEX) e imunossupressão, mantendo a ocultação para a alocação inicial do tratamento. As contagens de plaquetas foram determinadas de acordo com métodos padrão (cf. descrição detalhada). Atividade de ADAMTS13, conforme determinado no Exemplo 7.7. Resultados: 31 pacientes apresentaram exacerbação durante o período DB, 28 no grupo placebo e 3 no grupo caplacizumabe. 28 deles foram mudados para o tratamento OL com caplacizumabe (26 dos 28 pacientes tratados com placebo e 2 dos 3 pacientes tratados com caplacizumabe). No dia 6, 81% dos pacientes que receberam caplacizumabe OL alcançaram uma resposta confirmada da contagem de plaquetas (ou seja, contagem de plaquetas ≥ 150×109/L confirmada pela interrupção da PE diária em 5 dias). Não houve mortes. Um paciente (3,6%) apresentou exacerbação de TTP e 1 paciente (3,6%) apresentou um evento tromboembólico importante (trombose da veia cava) durante o período de tratamento com OL. Após o término do tratamento com OL, três pacientes apresentaram recorrência de TTP e os três tiveram atividade de ADAMTS13 <10% quando o tratamento foi interrompido. O perfil de segurança no grupo de caplacizumabe OL foi consistente com o observado no grupo de caplacizumabe DB. No total, 25 pacientes (89,3%) foram notificados com pelo menos um evento adverso emergente do tratamento. Conclusões: A terapia de venda livre com caplacizumabe foi eficaz em pacientes que apresentaram exacerbação de aTTP. O perfil de segurança era consistente com o observado no período de dupla ocultação (cf. Exemplo 7.14).

7.14 Período do estudo total: segurança e imunogenicidade.

[00422] Devido ao projeto do estudo Hercules (que incluiu uma mudança para o tratamento com caplacizumabe de venda livre no caso de recorrência de TTP enquanto estava em uso do fármaco do estudo de ocultação dupla), e quase todas as recorrências no grupo placebo (cf. Exemplo 7.13), a duração média da exposição foi maior no grupo caplacizumabe do que no grupo placebo: 35 (intervalo de 1 a 65) versus 23 (intervalo de 2 a 66) dias.

[00423] Durante o período do estudo total, 69 pacientes (97,2%) no grupo caplacizumabe e 71 pacientes (97,3%) no grupo placebo relataram pelo menos um evento adverso. Os eventos adversos foram considerados pelo menos possivelmente relacionados ao fármaco do estudo pelo investigador em 41 pacientes (57,7%) no grupo caplacizumabe e 32 pacientes (43,8%) no grupo placebo.

[00424] Quatro pacientes tiveram um evento adverso que levou à morte durante o estudo, 1 (1,4%) no grupo caplacizumabe (durante o período de acompanhamento sem tratamento, considerado pelo investigador como não relacionado ao fármaco do estudo) e 3 (4,1%) no grupo placebo (todos durante o período de tratamento com o fármaco do estudo).

[00425] Eventos adversos graves foram relatados em 28 pacientes (39,4%) no grupo caplacizumabe e 39 pacientes (53,4%) no grupo placebo durante o período geral do estudo. Por protocolo, as recorrências tiveram que ser relatadas como eventos adversos graves e foram numericamente o principal fator no grupo placebo. Eventos adversos graves foram considerados pelo menos possivelmente relacionados ao fármaco do estudo pelo investigador em 10 pacientes (14,1%) no grupo caplacizumabe e em 4 pacientes (5,5%) no grupo placebo.

[00426] Cinco pacientes no grupo caplacizumabe e 9 indivíduos no grupo placebo foram relatados com um evento adverso que levou à interrupção do fármaco em estudo.

[00427] Eventos adversos relacionados ao sangramento foram relatados em 46 pacientes (64,8%) no grupo caplacizumabe e 35 pacientes (47,9%) no grupo placebo. Os mais frequentes foram epistaxe e sangramento gengival; tudo isso resolvido, a maioria sem intervenção. Esses eventos foram leves ou moderados na maioria dos pacientes e graves em 3 pacientes em uso de caplacizumabe e 1 em placebo. Eventos adversos graves de sangramento foram relatados em 8 pacientes (11,3%) em uso de caplacizumabe e em um paciente (1,4%) em placebo. O evento adverso grave mais frequentemente relatado de sangramento foi epistaxe, em 4 pacientes do grupo caplacizumabe.

[00428] Anticorpos antifármacos induzidos por fármacos se desenvolveram em 3,1% dos pacientes tratados com caplacizumabe. Não foi observado impacto na eficácia clínica e não foram relatados eventos adversos graves nesses pacientes (cf. Exemplo 7.21).

7.15: Farmacodinâmica do caplacizumabe

[00429] A interação do caplacizumabe com o vWF é altamente específica e a ligação do caplacizumabe ao domínio do vWF A1 não afeta a capacidade do vWF de interagir com o fator VIII de coagulação (FVIII), para o qual o vWF tem uma função portadora. Da mesma forma, a ligação seletiva do caplacizumabe não afeta a capacidade do vWF de interagir com colágenos fibrilares, colágeno tipo VI ou ADAMTS13. Além disso, o caplacizumabe não reage de maneira cruzada com eritrócitos ou plaquetas. Devido a essa alta especificidade, efeitos fora do alvo não eram esperados e não foram observados em estudos pré-clínicos e ensaios clínicos.

[00430] Os níveis de vWF total (livre + complexo de fármaco), atividade do co-fator de ristocetina (RICO) e níveis de FVIII foram medidos em voluntários saudáveis após administração intravenosa ou subcutânea ascendente única e administração múltipla diária de 10 mg por via subcutânea e em pacientes de aTTP após doses subcutâneas uma vez ao dia de 10 mg múltiplas ou placebo após um bolus intravenoso inicial de 10 mg ou placebo.

7.15.1 Antígeno de vWF (vWF:Ag)

[00431] Na linha de base, os níveis de vWF:Ag eram mais altos em pacientes de aTTP do que em indivíduos saudáveis. Nos estudos clínicos conduzidos com caplacizumabe, os níveis médios (± desvio padrão [SD]) do vWF: Ag no plasma foram 38,5 ± 10,9 nM em indivíduos saudáveis e 70,5 ± 30,0 nM em pacientes com aTTP. O tratamento com caplacizumabe impactou a disposição do vWF, resultando em uma redução transitória dos níveis totais de vWF: Ag em circulação. Em média, esse efeito foi revertido dentro de 2 a 7 dias após a administração da dose final em voluntários saudáveis e pacientes com aTTP (Figura 3).

[00432] A diminuição transitória dos níveis totais de vWF:Ag foi atribuída a uma eliminação mais rápida do complexo alvo de fármaco em comparação com o alvo livre.

7.15.2 RIPA/RICO

[00433] Os ensaios de agregação plaquetária de ristocetina (RIPA) e RICO são ensaios in vitro para avaliar a capacidade de ligação plaquetária de vWF presente no sangue. A metodologia de ensaio RIPA e RICO baseia-se na adição de ristocetina ao plasma na presença de plaquetas, o que causa aglutinação plaquetária. O antibiótico ristocetina ativa o vWF em uma extensão similar às condições de alto fluxo sanguíneo e, consequentemente, modula a ligação do vWF ao receptor de plaquetas GP1b. Como a agregação plaquetária in vitro pode ser bloqueada pela interação do caplacizumabe com o vWF, esses métodos foram selecionados para avaliar a atividade do caplacizumabe durante o tratamento. A inibição total da adesão plaquetária mediada por vWF pelo caplacizumabe foi indicada pela atividade do RIPA ou RICO que diminuiu abaixo de 10% ou 20%, respectivamente. Foi observada inibição completa estável do alvo por pelo menos 24 horas após uma dose subcutânea única de ≥10 mg em voluntários saudáveis. Essa dose subcutânea de 10 mg, administrada diariamente, também provocou inibição total da adesão plaquetária mediada por vWF em pacientes com aTTP durante todo o período de tratamento (Figura 4). Em todos os estudos clínicos, a atividade do RICO recuperou para os valores de linha de base dentro de 7 dias após a descontinuação do fármaco do estudo.

7.15.3 FVIII

[00434] vWF atua como portador do FVIII. A modulação dos níveis totais de vWF pelo caplacizumabe também resultou em uma redução transitória dos níveis de FVIII e, como no vWF, a recuperação do FVIII para níveis normais foi observada dentro de 2 a 7 dias após a administração da dose final em voluntários saudáveis e pacientes com aTTP.

7.15.4 Estudos de QT/QTc

[00435] Nenhum efeito cardiovascular foi observado em estudos não clínicos. Não houve evidência de resultados clinicamente relevantes de eletrocardiograma (ECG) nos estudos humanos completos (cf. Exemplo

7.13).

[00436] Dada a estrutura molecular e o tamanho do caplacizumabe, sua especificidade alvo e a ausência de responsabilidade cardiovascular in vivo, não era esperado que o caplacizumabe prolongasse o intervalo QT.

[00437] Isto não foi observado.

7.16 Farmacocinética do caplacizumabe

[00438] Os níveis das concentrações totais de caplacizumabe (livres + ligados ao alvo) foram medidos no plasma de voluntários saudáveis e pacientes com aTTP. Os perfis farmacocinéticos completos foram obtidos em indivíduos saudáveis após infusões intravenosas ascendentes únicas e administração de dose subcutânea única e repetida (Figura 5). Amostras de plasma esparsas foram obtidas em pacientes de aTTP nos ensaios de fase II e fase III. O perfil farmacocinético do caplacizumabe foi investigado por meio de análise não compartimental padrão (NCA) em voluntários saudáveis e em análises farmacocinéticas populacionais em voluntários saudáveis e pacientes com ATTP.

[00439] Após administração subcutânea repetida de 10 mg por dia, o estado estacionário foi rapidamente atingido a partir da segunda administração do fármaco, com um acúmulo limitado de caplacizumabe, dependente da expressão do vWF:Ag alvo.

7.16.1 Absorção

[00440] Os principais parâmetros de exposição, estimados por métodos não compartimentados padrão após dose única em voluntários saudáveis ou modelo previsto no estado estacionário em pacientes com aTTP, são relatados nas Tabelas 7.16.1A e 7.16.1B.

Após a administração de dose única, a extensão (área sob a curva; AUC) e a taxa de exposição (concentrações máximas; Cmax) aumentaram com a dose administrada, mas não proporcionalmente.

Após administração subcutânea de 10 mg, o Cmax de caplacizumabe foi atingido 4 horas após a dose.

A biodisponibilidade absoluta determinada na análise farmacocinética da população foi estimada em 90% em pacientes com aTTP e perto de 100% em voluntários saudáveis.

Tabela 7.16.1A.

Parâmetros farmacocinéticos após administração intravenosa ou subcutânea única de 10 mg de Caplacizumabe em voluntários saudáveis.

Parâmetro Dose Intravenosa Dose Subcutânea

(n = 8) (n = 8) Tmax, h Mediano (faixa) 0,26 (0,25 a 6) 3,04 (3 a 9) Cmax, µg/mL Média (±SD) 1,63 (± 0,59) 0,57 (± 0,12) AUCinf, µg*h/mL Média (±SD) 14,5 (± 7,6) 26,7 (± 10,7) AUCinf: área sob a curva de concentração-tempo extrapolada para a infinidade; Cmax: concentração máxima; SD: desvio padrão; Tmax: tempo para Cmax

Tabela 7.16.1B. Parâmetros médios simulados de exposição farmacocinética em estado estacionário (AUC, Cmax, Cmin e Cavg) e efeito farmacodinâmico correspondente (vWF:Ag mudança desde o início) após 40 dias de administração diária subcutânea de 10 mg de caplacizumabe em pacientes com TTP.

Parâmetro Estado Estacionário AUCτ, µg*h/mL mediano (5a - 95a %) 12,5 (7,03 a 23,1) Cmax, µg/mL mediano (5a – 95a %) 0,609 (0,355 a 1,079) Cmin, µg/mL mediano (5a – 95a %) 0,436 (0,230 a 0,843) Cavg, µg/mL mediano (5a – 95a %) 0,520 (0,293 a 0,960) vWF: Ag mudança desde a linha de base (%) -43,8 (-67,7 a 0,5) aTTP: púrpura trombocitopênica trombótica adquirida; AUCτ: área sob a curva de concentração-tempo ao longo do intervalo de dosagem; Cavg: concentração média; Cmax: concentração máxima; Cmin: concentração mínima; vWF: Ag: antígeno do fator von Willebrand.

7.16.2 Distribuição e metabolismo

[00441] As farmacocinéticas do caplacizumabe apresentou perfil plasmático bifásico. Um volume central de distribuição de 5,35 e 6,33 L foi estimado em voluntários saudáveis e pacientes com aTTP, respectivamente, pelo modelo farmacocinético da população, enquanto o volume periférico de distribuição foi estimado em 27 L.

[00442] Estudos pré-clínicos em macacos cinomolgos indicaram que, na circulação sistêmica, o caplacizumabe liga-se e neutraliza sua atividade de vWF em cinco minutos. O complexo caplacizumabe-vWF, a principal forma circulante de caplacizumabe, distribuído no fígado e, similarmente ao vWF não ligado, foi rapidamente catabolizado pelo sistema retículo-endotelial. Estudos pré-clínicos sugeriram que o excesso de caplacizumabe não ligado distribuído para outros órgãos/tecidos bem perfundidos, onde é degradado pelo catabolismo inespecífico de alta capacidade. O caplacizumabe livre, com um MW de 28 KDa, pode ser filtrado através do glomérulo, embora não livremente. A contribuição renal para a eliminação geral de pequenas proteínas dependeu da atividade proteolítica em outras regiões do corpo. Para o caplacizumabe, a fração da dose administrada recuperada na urina era desprezível (< 0,5%).

7.16.3 Eliminação

[00443] A depuração aparente do caplacizumabe variou com a dose administrada. Após uma dose intravenosa única de 10 mg em voluntários saudáveis, uma depuração média de 769 ± 343 mL/h e uma meia-vida terminal média de 19,2 ± 7,5 h foram estimadas usando um método independente do modelo. As farmacocinéticas do caplacizumabe após dosage subcutânea parece ser controlada pela absorção. Após uma dose subcutânea única de 10 mg, a depuração aparente média foi de 386 ± 160 mL/h e a meia-vida terminal média foi de 38,5 ± 22,2 h em voluntários saudáveis.

7.16.4 Proporcionalidade da dose

[00444] Com o aumento das doses subcutâneas de caplacizumabe de 2 para 16 mg em indivíduos saudáveis, os aumentos na Cmax e na AUC foram menores do que proporcional à dose. Para uma razão de aumento da dose de 1,0:2,0:4,0:5,0:8,0, a razão média da Cmax foi de 1,0:1,8:2,0:2,4:2,8 e a AUC média aumentou na proporção de 1,0:3,9:4,1:5,3:6,1.

[00445] A depuração total do caplacizumabe dependeu dos níveis de fármaco e alvo e foi a soma de uma depuração linear (catabólica) e não linear (mediada por alvo). A meia-vida terminal do caplacizumabe também dependente do nível de fármaco e alvo. Em voluntários saudáveis, a meia-vida terminal aparente média aumentou de 13 para

40 h após dose intravenosa única (0,5 a 12 mg) e de 11 para 53 h após administração subcutânea única (2 a 16 mg).

7.16.5 Efeito de fatores demográficos e tamanho corporal

[00446] A análise farmacocinética da população em pacientes com aTTP mostrou que idade, sexo, raça e grupo sanguíneo não afetaram as farmacocinéticas do caplacizumabe. O peso corporal e a função renal, expressos pela depuração da creatinina (CrCL), tiveram um efeito estatisticamente significativo nas farmacocinéticas, com expectativa de maior exposição em pacientes com menor peso corporal e CrCL.

[00447] No entanto, a faixa de exposição esperada nas populações de pacientes com valores extremos dessas covariáveis foi amplamente sobreposta, conforme mostrado na Tabela 7.16.5, e nenhum ajuste de dose específico foi considerado necessário. Os níveis basais de vWF têm um efeito estatisticamente significativo sobre a exposição ao fármaco, mas a exposição ao fármaco aumentada para pacientes com vWF elevado não resultou em um efeito farmacodinâmico diferente (alteração do nível basal de vWF) e nenhum ajuste de dose individual foi considerado necessário (cf. também os Exemplos 7.16.6 e 7.18).

Tabela 7.16.5. Parâmetros medianos simulados de exposição farmacocinética no estado estacionário (AUC, Cmax, Cmin) e efeito farmacodinâmico correspondente (vWF:Ag mudança desde a linha de base) após 40 dias de 10 mg de administração subcutânea diária de caplacizumabe em 10 mg de pacientes com TTP com baixo peso corporal e alta linha de base vWF níveis e baixo CrCL. Pacientes com aTTP Parâmetro BW = 50 kg vWFb = 60 nM CrCL = 15 mL/min AUCτ, µg*h/mL mediano (5a - 13,3 (8,3 a 24,5) 18,6 (11,9 a 33,4) 13,3 (7,7 a 26,1) 95a %) Cmax, µg/mL mediano (5a - 0,662 (0,424 a 1,159) 0,895 (0,579 a 1,535) 0,643 (0,389 a 1,193) 95a %) Cmin, µg/mL mediano (5a - 0,452 (0,266 a 0,884) 0,670 (0,409 ao 1,260) 0,468 (0,257 a 0,986) 95a %) Cavg, µg/mL mediano (5a - 0,555 (0,345 a 1,021) 0,775 (0,498 a 1,391) 0,554 (0,322 a 1,085) 95a %) Cavg, µg/mL mediano (5a - -45,4 (-69,2 a -1,3) -43,8 (-67,8 a -0,6) -45,2 (-68,4 a -1,9) 95a %) aTTP: púrpura trombocitopênica trombótica adquirida; Área AUCτ sob a curva de concentração-tempo ao longo do intervalo de dosagem; PN: peso corporal; Cavg: concentração média; Cmax: concentração máxima; Cmin: concentração mínima; CrCL: depuração da creatinina; vWF: fator de von Willebrand; vWF: Ag: antígeno do fator von Willebrand.

7.16.6 Farmacocinética em populações especiais

[00448] Não foi realizado nenhum estudo formal com caplacizumabe em pacientes com comprometimento hepático agudo ou crônico grave e nenhum dado com respeito ao uso de caplacizumabe nessas populaces estava disponível. O risco associado ao uso de caplacizumabe em pacientes com insuficiência hepática leve e moderada foi considerado similar ao risco na população geral de pacientes, visto que o complexo caplacizumabe-vWF é acreditado ser eliminado pelas células Kupffer ativadas em vez de pelo parênquima hepatocelular modificado. No entanto, o caplacizumabe deve ser usado com cautela em pacientes com comprometimento hepático severo, apresentando risco aumentado de sangramento.

[00449] Nenhum estudo formal do efeito da insuficiência renal sobre as farmacocinéticas do caplacizumabe foi conduzido. No modelo farmacocinético/farmacodinâmico da população, a função renal (CRCL basal, faixa: 11,9 a >120 mL/min) teve um efeito estatisticamente significativo, o que resultou em um aumento limitado da exposição prevista (AUCss) no comprometimento renal severo. Nos estudos clínicos de pacientes com aTTP, aqueles com função renal diminuída não apresentaram risco adicional de eventos adversos.

7.16.7 Interações fármaco-fármaco

[00450] Nenhum estudo de interação fármaco-fármaco in vitro foi conduzido para o caplacizumabe, uma vez que os Nanocorpos, como fragmentos de anticorpos de domínio variável único, devem ser catabolizados por enzimas proteolíticas ubíquas e não interagem diretamente com as isoformas do citocromo P450 ou outras enzimas metabolizantes ou transportadores. Embora a modulação de citocinas possa ser um mecanismo indireto através do qual os Nanocorpos poderiam alterar a expressão de CYP, as interações de fármaco- fármaco relacionadas a CYP mediadas por citocinas são improváveis para o caplacizumabe: não se espera que o Nanobody® possua propriedades imunomoduladoras, pois ele seletivamente visa vWF.

[00451] Tratamento de aTTP geralmente envolve o uso de corticosteróides e rituximabe com aspirina e heparina de baixo MW, às vezes usada como tromboprofilaxia. Mais raramente, a vincristina, a ciclofosfamida ou a ciclosporina têm sido usadas na doença refratária. Exceto pelo rituximabe, sabe-se que todos esses compostos são eliminados extensivamente pelo fígado através de vias mediadas pelo

CYP, enquanto a via de depuração renal é apenas uma via menor e nenhuma interação fármaco-nanocorpo é antecipada caso esses tratamentos sejam iniciados em combinação com caplacizumabe. Quanto a outros anticorpos monoclonais, a degradação do rituximabe ocorre por proteólise inespecífica de alta capacidade, sem nenhum potencial de interação fármaco-fármaco esperado.

[00452] O caplacizumabe inibe seletiva e especificamente o domínio A1 do vWF. In vitro, o caplacizumabe competiu apenas parcialmente com a ligação da heparina ao vWF. In vivo, interações farmacodinâmicas entre heparina co-administrada e caplacizumabe não foram esperadas ser clinicamente significativas, uma vez que o principal efeito-alvo da heparina é mediado pela ligação ao inibidor de enzima antitrombina III.

7.16.8 Relação dose-resposta

[00453] Estudos em voluntários saudáveis após administração de doses intravenosa ascendente única e subcutânea única e repetida, confirmaram a resposta farmacológica esperada e a segurança do caplacizumabe.

7.17 Efeito de PE sobre as farmacocinéticas e farmacodinâmicas do caplacizumabe. Antecedente: Durante os ensaios clínicos em pacientes com púrpura trombocitopênica trombótica adquirida, o caplacizumabe foi administrado como um bolus intravenoso de 10 mg (i.v.) antes da troca plasmática (PE), seguido por doses subcutâneas diárias de 10 mg durante o período de PE diário e pelo menos 30 dias depois. Objetivos: O efeito potencial de diferentes intervalos de tempo entre o primeiro bolus i.v. e a PE subsequente, e o efeito de diferentes esquemas de PE, foram investigados. Métodos: Um modelo farmacocinético integrado (PK)/farmacodinâmico (PD) foi desenvolvido para descrever a interação entre caplacizumabe e vWF usando modelagem de efeitos mistos não lineares e usado para simular a PK e PD resultantes para diferentes cenários predeterminados: (1) início de PE 3, 5, 11, 23 horas após bolus i.v. de 10 mg de caplacizumabe (2) Esquema de PE: diariamente e duas vezes por dia (bid) no primeiro dia ou durante 7 dias Resultados: Os dados de ensaios clínicos indicaram neutralização completa da atividade do vWF para concentrações plasmáticas de caplacizumabe ≥ 500 ng/mL. Simulações sugeriram que os níveis plasmáticos medianos de caplacizumabe permaneceriam acima desse limiar se a PE iniciasse até 5 horas após o bolus i.v. de caplacizumabe. Para atrasos mais prolongados, os níveis plasmáticos médios de caplacizumabe podem cair abaixo de 500 ng/mL, e uma dose s.c. adicional de 10 mg antes da PE pode manter uma exposição eficaz ao fármaco.

[00454] Simulações do efeito de uma PE duas vezes ao dia durante 7 dias sugeriram que o esquema de dosagem s.c. de caplacizumabe durante o período de PE pode ser ajustado com dosage s.c. de 10 mg de caplacizumabe duas vezes após cada tratamento com PE durante o período de tratamento com PE duas vezes ao dia. Conclusões: Níveis eficazes de fármacos são esperados se a PE for iniciada até 5 horas após a primeira dose i.v. de caplacizumabe. Para atrasos mais longos, uma dose adicional s.c. de 10 mg antes da PE pode ser considerada.

[00455] Em caso de PE duas vezes ao dia durante 7 dias, o esquema de administração s.c. de caplacizumabe pode ser ajustado com o caplacizumabe duas vezes ao dia após cada tratamento com PE.

7.18 Razão de Dosagem de Caplacizumabe em Pacientes aTTP Suportada pela Modelagem de PKPD Com Base no Mecanismo Objetivos: Descrever a interação entre as concentrações de caplacizumabe e seu alvo, antígeno do fator de von Willebrand (vWF:Ag) após o tratamento em diferentes populações adultas. O modelo desenvolvido deve ser utilizado para simulações de cenários hipotéticos para apoiar o regime de dosagem. Métodos: A análise foi com base em dados de dez estudos1-10 de fase I a III de caplacizumabe em voluntários saudáveis (n = 100), pacientes submetidos a intervenção coronária percutânea (PCI) (n = 225) e pacientes com púrpura trombocitopênica trombótica adquirida (n = 216), com um total de 3629 observações PK e 6295 de PD. A maioria dos pacientes com aTTP recebeu troca de plasma (PE) e tratamento imunossupressor como padrão de cuidados. Uma ampla gama de níveis de dose, esquemas de tratamento e PE foi representados nos dados. Dados após administração i.v. e s.c. foram incluídos.

[00456] A análise de PKPD da população foi conduzida por modelagem de efeitos mistos não lineares usando o NONMEM, versão

7.3.0. O modelo foi desenvolvido etapa a etapa. Inicialmente, um subconjunto do conjunto de dados, incluindo dados em voluntários saudáveis e pacientes com ICP, foi usado para o desenvolvimento do modelo. Posteriormente, o modelo foi atualizado para descrever as características específicas relacionadas ao estado da doença aTTP e padrão de cuidados, PE, no subconjunto do conjunto de dados com pacientes com aTTP. Os efeitos da idade, sexo, raça, grupo sanguíneo, peso corporal, depuração da creatinina e tratamento concomitante foram avaliados com base na avaliação gráfica, por meio de checagens preditivas visuais corrigidas por previsão estratificada, e avaliação univariada em NONMEM.

[00457] As simulações foram realizadas usando o modelo final para pacientes com aTTP para avaliar o efeito da mudança de doses, peso corporal do paciente, necessidade de ajuste da dose em pacientes pediátricos. Resultados: A interação entre o caplacizumabe e o vWF:Ag foi adequadamente descrita por um modelo completo de disposição de fármaco mediada pelo alvo. O modelo incluiu um modelo de disposição de fármaco de dois compartimentos com processos de absorção de primeira ordem lenta e rápida em paralelo e eliminação linear de primeira ordem do fármaco livre. O modelo descreveu a formação de complexos fármaco-vWF com a capacidade de formar dímeros e trímeros. A produção e maturação do vWF foram descritas por compartimentos de trânsito e armazenagem do vWF em um compartimento da lago, imitando a armazenagem nos corpos Weibel- Palade no endotélio e subsequente liberação rápida e eliminação de vWF livre. A meia-vida do vWF livre foi fixada para o valor da literatura 16 horas (Lenting et al. 2015 Blood 26: 2019-2028; Favaloro et al. 2007 Thromb Haemost 97: 922-930; Dobrkovska et al. 1998 Haemophilia 4: 33-39; Goudemand et al., 2005 J Thromb Haemost 3: 2219-2227). Um mecanismo de feedback dual foi incluído, estimulando a taxa de produção e a liberação de vWF do lago quando o vWF diminuiu abaixo do nível da linha de base do indivíduo.

[00458] Para pacientes com aTTP, a progressão da doença foi capturada como um aumento transitório do vWF:Ag ao longo do tempo e o efeito da PE foi descrito como remoção paralela do vWF livre, fármaco livre e complexo fármaco-vWF. A taxa de eliminação total típica da população sob PE foi estimada em 3,7 vezes maior para o fármaco livre, 3,5 vezes maior para o vWF livre e 1,7 vez maior para o complexo fármaco-vWF.

[00459] O peso corporal foi incluído alometricamente no modelo (expoentes fixos) e a depuração da creatinina foi identificada como uma covariável estatisticamente significante, com uma menor redução na depuração para pacientes com CRCL abaixo da CRCL mediana (100 ml/min) em pacientes com aTTP.

[00460] O modelo foi aplicado com sucesso para simular cenários hipotéticos para apoiar o regime de dosagem, dosagem em populações especiais e como lidar com doses perdidas. Também foram realizadas simulações para informar o regime de dosagem em pacientes pediátricos e prever o comportamento de PKPD em pacientes japoneses com aTTP com base nas diferenças de tamanho corporal. Também foram realizadas simulações para aprender mais sobre o impacto das concentrações basais de vWF:Ag, bem como o efeito dos esquemas de PE em termos de tempo, intensidade e duração. Conclusões: Um modelo semimecânico de PKPD da população foi desenvolvido para descrever a interação entre caplacizumabe e vWF (com base em observações de vWF:Ag). O modelo descreveu adequadamente a interação do complexo fármaco-vWF ao longo do tempo, incluindo a progressão da doença em pacientes com aTTP e os efeitos governados pelo tratamento com PE. O modelo foi aplicado com sucesso para aumentar o entendimento da interação da PKPD entre o caplacizumabe e o vWF na população alvo, e pelo uso de simulações, apoiou a razão de dosagem tanto em pacientes adultos quanto pediátricos e permitiu a ponte para pacientes japoneses com aTTP.

7.19 Recomendações de dosagem com base em modelo de caplacizumabe em pacientes pediátricos com púrpura trombocitopênica trombótica adquirida. Antecedente: A púrpura trombocitopênica trombótica adquirida (aTTP) é um distúrbio de coagulação sanguínea auto-imune raro e com risco de vida, com incidência muito menor em crianças em comparação com adultos. O caplacizumabe foi avaliado nos ensaios clínicos randomizados de fase 2 e fase 3 em pacientes adultos com aTTP.

Objetivos: Como nenhum paciente pediátrico foi incluído em ensaios clínicos com caplacizumabe, as recomendações de dosage foram desenvolvidas usando simulações com base em modelos para essa população.

Métodos: Um modelo de população farmacocinético-farmacodinâmico semi-mecânico (PKPD) foi desenvolvido descrevendo a interação entre ca-placizumabe e antígeno do fator de von Willebrand (vWF:Ag) após administração intravenosa e subcutânea de caplacizumabe em diferentes populações adultas em vários níveis de dose usando modelagem não linear de efeitos mistos.

Simulações com base no modelo PKPD alometricamente escalado foram realizadas para estabelecer um regime de dosagem adequado em adolescentes e crianças > 2 anos.

Foram definidas oito categorias de idade, incluindo 1000 indivíduos em cada categoria, e os pesos corporais individuais correspondentes foram amostrados a partir do base de dados da National Health and Nutrition Examination Survey.

Os níveis simulados de exposição ao caplacizumabe nas diferentes categorias de idade foram comparados aos previstos em adultos.

Resultados: As simulações de exposição indicam que uma dose diária fixa de 10 mg resultaria em maior exposição em crianças com baixo peso corporal, principalmente crianças menores de 10 anos de idade.

Um ajuste da dose para 5 mg por dia em crianças com peso corporal < 40 kg resultaria em uma exposição similar média em todas as faixas de idade e de peso.

A dosage ajustada ao peso corporal é também prevista resultar em supressão altamente similar de vWF:Ag nos diferentes grupos de idade.

Conclusões: A dose recomendada em adolescentes de 12 a 18 anos com peso corporal ≥ 40 kg é de 10 mg e 5 mg se < 40 kg.

Visto que nenhuma diferença em supressão de vWF:Ag é esperada com base nas diferenças de idade, a mesma recomendação de dosagem se aplica a crianças de 2 a 12 anos, 10 mg se o peso corporal for ≥ 40 kg e 5 mg se < 40 kg.

7.20 Experiência do mundo real em pacientes de aTTP tratados com caplacizumabe por meio de um programa de acesso controlado Antecedente: A púrpura trombocitopênica trombótica adquirida (aTTP) é uma microangiopatia trombótica imunomediada (TMA), desafiadora da vida. A eficácia e segurança do caplacizumabe em pacientes com aTTP foram demonstradas em ensaios clínicos randomizados. Objetivos: Relatamos descritivamente a primeira experiência do mundo real com caplacizumabe em pacientes com aTTP, durante um programa de acesso controlado (MAP). Métodos: Os critérios de elegibilidade para o MAP foram: (i) paciente com um episódio de aTTP, que (ii) não teve a possibilidade de ser tratado satisfatoriamente com terapias aprovadas; (iii) a paciente não apresentava hipersensibilidade conhecida à substância ativa ou a qualquer um dos excipientes e (iv) não estava grávida. O acesso ao caplacizumabe foi concedido de acordo com as leis e regulamentos vigentes no país em que o produto foi solicitado. Os eventos relacionados à segurança devem ser relatados pelo médico solicitante, de acordo com toda a legislação nacional de farmacovigilância aplicável. Resultados: de 14 de maio de 2018 a 22 de janeiro de 2019, foram recebidas 118 solicitações de MAP, das quais 75 foram aprovadas, 7 foram recusadas, 35 não foram buscadas/retiradas pelo solicitante e 1 estava em avaliação. Das solicitações aprovadas, 67 pacientes receberam tratamento com caplacizumabe, enquanto 8 finalmente não iniciaram a terapia. Os pacientes receberam caplacizumabe como terapia de linha de frente ou para o tratamento de um curso refratário de aTTP. A terapia foi concluída com sucesso em 37 pacientes, continuada em 13 pacientes e descontinuada em 17 pacientes (dos quais 5 morreram). Todas as mortes ocorreram em pacientes para os quais o caplacizumabe foi iniciado tardiamente, por um curso refratário severo, e nenhuma foi considerada relacionada com o caplacizumabe. Os relatórios de segurança espontâneos foram alinhados com o perfil de segurança observado em estudos clínicos, sem novos sinais de segurança. Conclusões: A primeira evidência do mundo real com caplacizumabe em pacientes com aTTP confirma os importantes benefícios do caplacizumabe observados em ensaios clínicos, principalmente se iniciados como terapia de linha de frente.

7.21 Novos formatos

[00461] Um ensaio antifármaco-anticorpo modificado (mADA) foi usado para detectar ADA emergente do tratamento induzido por fármaco. O mADA emprega uma molécula de caplacizumabe modificada como reagente de detecção no formato de ponte, isto é, variante de caplacizumabe-ALA (SEQ ID Nº: 24). O caplacizumabe estendido à alanina no C-terminalmente não ligou nenhum anticorpo preexistente.

[00462] Em vários experimentos in vitro, o caplacizumabe e o caplacizumabe estendido por alanina C-terminal comportaram-se equivalente.

[00463] Por meio de análises comparativas de ressonância magnética nuclear (NMR) de 12A2H1 (o componente básico de caplacizumabe; SEQ ID Nº: 19), foi demonstrado que uma extensão do terminal C (alanina) não impacta a conformação do nanocorpo como um todo.

[00464] Além disso, na Ressonância Plasmônica de Superfície (SPR), foi demonstrado um perfil de ligação similar do caplacizumabe e caplacizumabe estendido por alanina C-terminal ao alvo (vWF).

[00465] Tendo em vista as características e perfis similares entre o caplacizumabe e o caplacizumabe estendido no terminal C, espera-se que esses compostos de caplacizumabe estendido C-terminalmente possam ser utilizados no tratamento e/ou prevenção da aTTP, bem como similar ao caplacizumabe.

7.22 Conclusão.

[00466] Durante as últimas duas décadas, a despeito de um maior entendimento da fisiopatologia da aTTP e do uso de novos imunossupressores, os resultados do tratamento não mudaram, com morbidade significativa e taxas de mortalidade relatadas em até 20% (Joly et al. 2017 Blood 129:2836-2846). O caplacizumabe, um nanocorpo direcionado ao domínio A1 do vWF, bloqueia a adesão e agregação de plaquetas-vWF e evita o consumo adicional de plaquetas nos microtrombos que causam trombocitopenia severa e danos aos tecidos e órgãos em aTTP.

[00467] aTTP permanece um diagnóstico clínico com base na história do paciente, exame físico e revisão de um esfregaço de sangue periférico. De fato, os pacientes com um episódio inicial de aTTP têm uma apresentação tardia e mais severa da doença no início do que aqueles com episódios recorrentes da doença.

[00468] Neste estudo, os pacientes com diagnóstico clínico de aTTP eram elegíveis para a inscrição, e o teste confirmativo de atividade do ADAMTS13 foi realizado em randomização. O diagnóstico clínico foi confirmado pela atividade do ADAMTS13 abaixo de 10% em 86% dos randomizados. Além disso, para 13 dos 20 pacientes com atividade do ADAMTS13 acima de 10% na linha de base, havia uma base para um diagnóstico de TTP, como histórico de TTP ou atividade suprimida do ADAMTS13 em outros momentos do estudo.

[00469] No estudo de TITAN de fase 2, o tratamento com caplacizumabe levou a uma normalização mais rápida da contagem de plaquetas e evitou exacerbações. No entanto, ocorreram recaídas precoces em um subconjunto de pacientes com atividade de doença subjacente não resolvida. Portanto, no presente estudo, os pesquisadores foram incentivados a prolongar o tratamento com o fármaco do estudo cegado, juntamente com a otimização da imunossupressão nos pacientes com evidência de atividade autoimune persistente.

[00470] Os resultados do estudo de HERCULES de fase 3 confirmaram a hipótese de que o tratamento com caplacizumabe reduz o tempo para resposta de contagem de plaquetas, interrompendo o consumo de plaquetas em microtrombos. Eles também demonstraram o impacto altamente clinicamente significativo do caplacizumabe na morte relacionada com TTP, na recorrência de TTP ou em um evento tromboembólico maior enquanto sob o tratamento com o fármaco do estudo e nas recorrências em geral. A método de estensão do tratamento com o fármaco do estudo e otimizaçõ da imunossupressão em pacientes com evidência de doença subjacente não resolvida foi validado pelos resultados deste estudo, conforme demonstrado pelo menor número de recorrências após o tratamento com o fármaco do estudo, em comparação com o observado na fase 2 do estudo. De fato, as recidivas observadas após a interrupção do fármaco do estudo foram todas em pacientes com atividade do ADAMTS13 abaixo de 10%. Em um cenário do mundo real, para proteger tais pacientes da recidiva da aTTP, o tratamento com caplacizumabe deve ser estendido até que a doença subjacente seja resolvida.

[00471] Mesmo no cenário mais sério da doença de pacientes com um episódio inicial de aTTP, foi demonstrado que o tratamento com caplacizumabe melhorou o resultado, incluindo um tempo mais rápido para responder à contagem de plaquetas, menor proporção de pacientes com morte, recorrência ou um evento TE maior durante o período de tratamento, menor taxa de recorrência durante o período geral de tratamento e prevenção de refratariedade em comparação ao placebo.

[00472] Em ambos estudos de fase 2 e fase 3, não foi relatada nenhuma morte durante o tratamento com caplacizumabe, um resultado favorável em relação à prevenção da mortalidade. Além disso, nenhum paciente tratado com caplacizumabe foi refratário à Troca Plasmática. Isto sugere que o caplacizumabe tem o potencial de prevenir doença refratária e os piores resultados relatados nesta subpopulação. Nos pacientes tratados com caplacizumab, também houve uma tendência à normalização mais rápida dos marcadores associados ao dano ao órgão.

[00473] O impacto do tratamento com caplacizumabe no tempo de resposta da contagem de plaquetas e prevenção de recorrências foi associado a uma economia considerável nos recursos de saúde.

[00474] O caplacizumabe interfere com vWF, uma proteína essencial na hemostasia e, com base nesse efeito farmacológico, ele é associado a um risco aumentado de sangramento mucocutâneo, similar ao observado na Doença de von Willebrand (Leebeek & Eikenboom 2016 N Engl J Med 375: 2067-2080). Os resultados de segurança foram alinhados com o que foi relatado anteriormente.

[00475] A atividade do ADAMTS13 é cada vez mais relevante no controle de aTTP, visto que ele é um marcador preditivo do risco de recorrência (Westwood et al. 2013, J. Thromb Haemost 11:481-490; Peyvandi et al. 2008 Haematologic 93:232:239; Lammle et al. 2008 Haematologica 93:172-177; Knovich et al. 2012 Eur J Haematol 88:518- 525; Kremer Hovinga et al. 2020, Bood 115:1500-1511; quiz 662; Bresin et al. 2009 Thromb Haemost 101: 233-238; Cataland et al. 2009 Eur J Haematol 83: 559-564; Goyal et al. 2013 J Clin Apher 28: 390-394). Seu valor foi confirmado no presente estudo, visto que quase todos os pacientes com recorrências suprimiram a atividade do ADAMTS13. Mais de 50% dos pacientes ainda não haviam atingido a normalização da atividade do ADAMTS13 no término do período de troca plasmática, e as exacerbações ocorreram até 25 dias após o término da troca plasmática neste grupo, apoiando a necessidade de continuar o tratamento com caplacizumabe durante pelo menos 30 dias após a obtenção da resposta da contagem de plaquetas.

[00476] O caplacizumabe, através do bloqueio rápido da adesão plaquetária mediada por vWF, representa uma adição importante ao arsenal de tratamento para pacientes com aTTP. Tabela A-1: Exemplos de polipeptídeos compreendendo ISVDs e CDRs contra vWF Nome SEQ Sequência ID Nº 12A02H1-3a- 1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSYNPMGWF 12A02H1 RQAPGKGRELVAAISRTGGSTYYPDSVEGRFTISRDNA

KRMVYLQMNSLRAEDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLP (ALX 0081)

SEYTFWGQGTQVTVSSAAAEVQLVESGGGLVQPGGSL RLSCAASGRTFSYNPMGWFRQAPGKGRELVAAISRTG GSTYYPDSVEGRFTISRDNAKRMVYLQMNSLRAEDTAV

YYCAAAGVRAEDGRVRTLPSEYTFWGQGTQVTVSS 12A02-3a-12A02 2 QVKLEESGGGLVQAGGALRLSCAASGRTFSYNPMGWF

RQAPGKERDLVAAISRTGGSTYYPDSVEGRFTISRDNAK RMVYLQMNNLKPEDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLPS EYTFWGQGTQVTVSSAAAEVQLVESGGGLVQAGGALR LSCAASGRTFSYNPMGWFRQAPGKERDLVAAISRTGG STYYPDSVEGRFTISRDNAKRMVYLQMNNLKPEDTAVY YCAAAGVRAEDGRVRTLPSEYTFWGQGTQVTVSS

12A02-GS9-12A02 3 QVKLEESGGGLVQAGGALRLSCAASGRTFSYNPMGWF

RQAPGKERDLVAAISRTGGSTYYPDSVEGRFTISRDNAK RMVYLQMNNLKPEDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLPS EYTFWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGGLV QAGGALRLSCAASGRTFSYNPMGWFRQAPGKERDLVA AISRTGGSTYYPDSVEGRFTISRDNAKRMVYLQMNNLK PEDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLPSEYTFWGQGTQV

TVSS 12A02-GS30- 4 QVKLEESGGGLVQAGGALRLSCAASGRTFSYNPMGWF 12A02 RQAPGKERDLVAAISRTGGSTYYPDSVEGRFTISRDNAK

RMVYLQMNNLKPEDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLPS EYTFWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS GGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQAGGALRLSCAASG RTFSYNPMGWFRQAPGKERDLVAAISRTGGSTYYPDSV EGRFTISRDNAKRMVYLQMNNLKPEGTAVYYCAAAGVR

AEDGRVRTLPSEYTFWGQGTQVTVSS 12A05-3a-12A05 5 AVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCLASGRIFSIGAMGMYR

QAPGKQRELVATITSGGSTNYADPVKGRFTISRDGPKNT VYLQMNSLKPEDTAVYYCYANLKQGSYGYRFNDYWGQ GTQVTVSSAAAEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCLASGR IFSIGAMGMYRQAPGKQRELVATITSGGSTNYADPVKG RFTISRDGPKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCYANLKQGS

YGYRFNDYWGQGTQVTVSS 12A05-GS9-12A05 6 AVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCLASGRIFSIGAMGMYR

QAPGKQRELVATITSGGSTNYADPVKGRFTISRDGPKNT VYLQMNSLKPEDTAVYYCYANLKQGSYGYRFNDYWGQ GTQVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRL SCLASGRIFSIGAMGMYRQAPGKQRELVATITSGGSTNY ADPVKGRFTISRDGPKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCYA NLKQGSYGYRFNDYWGQGTQVTVSS

12A05-GS30- 7 AVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCLASGRIFSIGAMGMYR 12A05 QAPGKQRELVATITSGGSTNYADPVKGRFTISRDGPKNT

VYLQMNSLKPEDTAVYYCYANLKQGSYGYRFNDYWGQ GTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGG GGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCLASGRIFSIGAMG MYRQAPGKQRELVATITSGGSTNYADPVKGRFTISRDG PKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCYANLKQGSYGYRFNDY

WGQGTQVTVSS 12B06-3a-12B06 8 QVQLVESGGGLVQAGGALRLSCAASGRTFSYNPMGWF

RQAPGKERDVVAAISRTGGSTYYARSVEGRFTISRDNA KRMVYLQMNALKPEDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLP SEYNFWGQGTQVTVSSAAAEVQLVESGGGLVQAGGAL RLSCAASGRTFSYNPMGWFRQAPGKERDVVAAISRTG GSTYYARSVEGRFTISRDNAKRMVYLQMNALKPEDTAV

YYCAAAGVRAEDGRVRTLPSEYNFWGQGTQVTVSS 12B06-GS9-12B06 9 QVQLVESGGGLVQAGGALRLSCAASGRTFSYNPMGWF

RQAPGKERDVVAAISRTGGSTYYARSVEGRFTISRDNA KRMVYLQMNALKPEDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLP SEYNFWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGGL VQAGGALRLSCAASGRTFSYNPMGWFRQAPGKERDVV AAISRTGGSTYYARSVEGRFTISRDNAKRMVYLQMNAL KPEDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLPSEYNFWGQGTQ

VTVSS 12B06-GS30- 10 QVQLVESGGGLVQAGGALRLSCAASGRTFSYNPMGWF 12B06 RQAPGKERDVVAAISRTGGSTYYARSVEGRFTISRDNA

KRMVYLQMNALKPEDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLP SEYNFWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGG SGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQAGGALRLSCAAS GRTFSYNPMGWFRQAPGKERDVVAAISRTGGSTYYAR SVEGRFTISRDNAKRMVYLQMNALKPEDTAVYYCAAAG VRAEDGRVRTLPSEYNFWGQGTQVTVSS

12A02H4-3a- 11 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSYNPMGWF 12A02H4 RQAPGKGRELVAAISRTGGSTYYPDSVEGRFTISRDNA

KRSVYLQMNSLRAEDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLPS EYTFWGQGTQVTVSSAAAEVQLVESGGGLVQPGGSLR LSCAASGRTFSYNPMGWFRQAPGKGRELVAAISRTGG STYYPDSVEGRFTISRDNAKRSVYLQMNSLRAEDTAVY

YCAAAGVRAEDGRVRTLPSEYTFWGQGTQVTVSS 12B06H2-3a- 12 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSYNPMGWF 12B06H2 RQAPGKGREVVAAISRTGGSTYYARSVEGRFTISRDNA

KRMVYLQMNSLRAEDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLP SEYNFWGQGTQVTVSSAAAEVQLVESGGGLVQPGGSL RLSCAASGRTFSYNPMGWFRQAPGKGREVVAAISRTG GSTYYARSVEGRFTISRDNAKRMVYLQMNSLRAEDTAV

YYCAAAGVRAEDGRVRTLPSEYNFWGQGTQVTVSS 12A02H1-GS9- 13 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSYNPMGWF 12A02H1 RQAPGKGRELVAAISRTGGSTYYPDSVEGRFTISRDNA

KRMVYLQMNSLRAEDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLP SEYTFWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGGL VQPGGSLRLSCAASGRTFSYNPMGWFRQAPGKGRELV AAISRTGGSTYYPDSVEGRFTISRDNAKRMVYLQMNSL RAEDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLPSEYTFWGQGTQ

VTVSS 12A02H4-GS9- 14 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSYNPMGWF 12A02H4 RQAPGKGRELVAAISRTGGSTYYPDSVEGRFTISRDNA

KRSVYLQMNSLRAEDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLPS EYTFWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGGLV QPGGSLRLSCAASGRTFSYNPMGWFRQAPGKGRELVA AISRTGGSTYYPDSVEGRFTISRDNAKRSVYLQMNSLRA EDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLPSEYTFWGQGTQVT VSS

12B06H2-GS9- 15 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSYNPMGWF 12B06H2 RQAPGKGREVVAAISRTGGSTYYARSVEGRFTISRDNA

KRMVYLQMNSLRAEDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLP SEYNFWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGGL VQPGGSLRLSCAASGRTFSYNPMGWFRQAPGKGREVV AAISRTGGSTYYARSVEGRFTISRDNAKRMVYLQMNSL RAEDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLPSEYNFWGQGTQ

VTVSS 12A02H1-GS30- 16 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSYNPMGWF 12A02H1 RQAPGKGRELVAAISRTGGSTYYPDSVEGRFTISRDNA

KRMVYLQMNSLRAEDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLP SEYTFWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGG SGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GRTFSYNPMGWFRQAPGKGRELVAAISRTGGSTYYPD SVEGRFTISRDNAKRMVYLQMNSLRAEDTAVYYCAAAG

VRAEDGRVRTLPSEYTFWGQGTQVTVSS 12A02H4-GS30- 17 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSYNPMGWF 12A02H4 RQAPGKGRELVAAISRTGGSTYYPDSVEGRFTISRDNA

KRSVYLQMNSLRAEDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLPS EYTFWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS GGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASG RTFSYNPMGWFRQAPGKGRELVAAISRTGGSTYYPDS VEGRFTISRDNAKRSVYLQMNSLRAEDTAVYYCAAAGV

RAEDGRVRTLPSEYTFWGQGTQVTVSS 12B06H2-GS30- 18 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSYNPMGWF 12B06H2 RQAPGKGREVVAAISRTGGSTYYARSVEGRFTISRDNA

KRMVYLQMNSLRAEDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLP SEYNFWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGG SGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GRTFSYNPMGWFRQAPGKGREVVAAISRTGGSTYYAR SVEGRFTISRDNAKRMVYLQMNSLRAEDTAVYYCAAAG

VRAEDGRVRTLPSEYNFWGQGTQVTVSS 12A02H1 19 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSYNPMGWF

RQAPGKGRELVAAISRTGGSTYYPDSVEGRFTISRDNA KRMVYLQMNSLRAEDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLP

SEYTFWGQGTQVTVSS 12A02H1 CDR1 21 YNPMG

12A02H1 CDR2 22 AISRTGGSTYYPDSVEG 12A02H1 CDR3 23 AGVRAEDGRVRTLPSEYTF ALX 0081-A 24 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSYNPMGWF

RQAPGKGRELVAAISRTGGSTYYPDSVEGRFTISRDNA KRMVYLQMNSLRAEDTAVYYCAAAGVRAEDGRVRTLP SEYTFWGQGTQVTVSSAAAEVQLVESGGGLVQPGGSL RLSCAASGRTFSYNPMGWFRQAPGKGRELVAAISRTG GSTYYPDSVEGRFTISRDNAKRMVYLQMNSLRAEDTAV

YYCAAAGVRAEDGRVRTLPSEYTFWGQGTQVTVSSA Tabela A-2 Nome SEQ Sequência ID Nº vWF 20 MIPARFAGVLLALALILPGTLCAEGTRGRSSTARCSLFGSDFVNTFD Humano GSMYSFAGYCSYLLAGGCQKRSFSIIGDFQNGKRVSLSVYLGEFFD

IHLFVNGTVTQGDQRVSMPYASKGLYLETEAGYYKLSGEAYGFVAR IDGSGNFQVLLSDRYFNKTCGLCGNFNIFAEDDFMTQEGTLTSDPY DFANSWALSSGEQWCERASPPSSSCNISSGEMQKGLWEQCQLLK STSVFARCHPLVDPEPFVALCEKTLCECAGGLECACPALLEYARTC AQEGMVLYGWTDHSACSPVCPAGMEYRQCVSPCARTCQSLHINE MCQERCVDGCSCPEGQLLDEGLCVESTECPCVHSGKRYPPGTSL SRDCNTCICRNSQWICSNEECPGECLVTGQSHFKSFDNRYFTFSGI CQYLLARDCQDHSFSIVIETVQCADDRDAVCTRSVTVRLPGLHNSL VKLKHGAGVAMDGQDIQLPLLKGDLRIQHTVTASVRLSYGEDLQMD WDGRGRLLVKLSPVYAGKTCGLCGNYNGNQGDDFLTPSGLAEPR VEDFGNAWKLHGDCQDLQKQHSDPCALNPRMTRFSEEACAVLTS PTFEACHRAVSPLPYLRNCRYDVCSCSDGRECLCGALASYAAACA GRGVRVAWREPGRCELNCPKGQVYLQCGTPCNLTCRSLSYPDEE CNEACLEGCFCPPGLYMDERGDCVPKAQCPCYYDGEIFQPEDIFS DHHTMCYCEDGFMHCTMSGVPGSLLPDAVLSSPLSHRSKRSLSCR PPMVKLVCPADNLRAEGLECTKTCQNYDLECMSMGCVSGCLCPP GMVRHENRCVALERCPCFHQGKEYAPGETVKIGCNTCVCRDRKW NCTDHVCDATCSTIGMAHYLTFDGLKYLFPGECQYVLVQDYCGSN PGTFRILVGNKGCSHPSVKCKKRVTILVEGGEIELFDGEVNVKRPMK DETHFEVVESGRYIILLLGKALSVVWDRHLSISVVLKQTYQEKVCGL CGNFDGIQNNDLTSSNLQVEEDPVDFGNSWKVSSQCADTRKVPLD SSPATCHNNIMKQTMVDSSCRILTSDVFQDCNKLVDPEPYLDVCIY DTCSCESIGDCACFCDTIAAYAHVCAQHGKVVTWRTATLCPQSCEE RNLRENGYECEWRYNSCAPACQVTCQHPEPLACPVQCVEGCHAH CPPGKILDELLQTCVDPEDCPVCEVAGRRFASGKKVTLNPSDPEHC QICHCDVVNLTCEACQEPGGLVVPPTDAPVSPTTLYVEDISEPPLHD FYCSRLLDLVFLLDGSSRLSEAEFEVLKAFVVDMMERLRISQKWVR VAVVEYHDGSHAYIGLKDRKRPSELRRIASQVKYAGSQVASTSEVL KYTLFQIFSKIDRPEASRIALLLMASQEPQRMSRNFVRYVQGLKKKK VIVIPVGIGPHANLKQIRLIEKQAPENKAFVLSSVDELEQQRDEIVSYL CDLAPEAPPPTLPPHMAQVTVGPGLRNSMVLDVAFVLEGSDKIGEA DFNRSKEFMEEVIQRMDVGQDSIHVTVLQYSYMVTVEYPFSEAQSK GDILQRVREIRYQGGNRTNTGLALRYLSDHSFLVSQGDREQAPNLV YMVTGNPASDEIKRLPGDIQVVPIGVGPNANVQELERIGWPNAPILI QDFETLPREAPDLVLQRCCSGEGLQIPTLSPAPDCSQPLDVILLLDG SSSFPASYFDEMKSFAKAFISKANIGPRLTQVSVLQYGSITTIDVPW NVVPEKAHLLSLVDVMQREGGPSQIGDALGFAVRYLTSEMHGARP GASKAVVILVTDVSVDSVDAAADAARSNRVTVFPIGIGDRYDAAQLR ILAGPAGDSNVVKLQRIEDLPTMVTLGNSFLHKLCSGFVRICMDEDG NEKRPGDVWTLPDQCHTVTCQPDGQTLLKSHRVNCDRGLRPSCP NSQSPVKVEETCGCRWTCPCVCTGSSTRHIVTFDGQNFKLTGSCS YVLFQNKEQDLEVILHNGACSPGARQGCMKSIEVKHSALSVELHSD MEVTVNGRLVSVPYVGGNMEVNVYGAIMHEVRFNHLGHIFTFTPQ NNEFQLQLSPKTFASKTYGLCGICDENGANDFMLRDGTVTTDWKTL VQEWTVQRPGQTCQPILEEQCLVPDSSHCQVLLLPLFAECHKVLAP ATFYAICQQDSCHQEQVCEVIASYAHLCRTNGVCVDWRTPDFCAM SCPPSLVYNHCEHGCPRHCDGNVSSCGDHPSEGCFCPPDKVMLE GSCVPEEACTQCIGEDGVQHQFLEAWVPDHQPCQICTCLSGRKVN CTTQPCPTAKAPTCGLCEVARLRQNADQCCPEYECVCDPVSCDLP PVPHCERGLQPTLTNPGECRPNFTCACRKEECKRVSPPSCPPHRL PTLRKTQCCDEYECACNCVNSTVSCPLGYLASTATNDCGCTTTTCL PDKVCVHRSTIYPVGQFWEEGCDVCTCTDMEDAVMGLRVAQCSQ KPCEDSCRSGFTYVLHEGECCGRCLPSACEVVTGSPRGDSQSSW KSVGSQWASPENPCLINECVRVKEEVFIQQRNVSCPQLEVPVCPS GFQLSCKTSACCPSCRCERMEACMLNGTVIGPGKTVMIDVCTTCR CMVQVGVISGFKLECRKTTCNPCPLGYKEENNTGECCGRCLPTAC TIQLRGGQIMTLKRDETLQDGCDTHFCKVNERGEYFWEKRVTGCP PFDEHKCLAEGGKIMKIPGTCCDTCEEPECNDITARLQYVKVGSCK SEVEVDIHYCQGKCASKAMYSIDINDVQDQCSCCSPTRTEPMQVAL HCTNGSVVYHEVLNAMECKCSPRKCSK

Tabela 5

Abreviação Explicação

ACS síndrome coronariana aguda

ADAMTS13 um similar à desintegrina e metaloproease com repetições 13 de trombospondina

ALX 0081 Caplacizumabe (SEQ ID Nº: 1)

ALX 0081-A Caplacizumabe mais alanina C-terminal (SEQ ID Nº: 24)

aTTP púrpura trombocitopênica trombótica adquirida

AUC Área sob a curva bid Duas vezes ao dia

BNP Peptídeo natriurético cerebral

CAP Caplacizumabe (SEQ ID Nº: 1)

CDR Região de determinação da complementaridade cIEF Focagem Isoelétrica Capilar

Cmax Concentrações máximas

CrCL Depuração de creatinina cTnI Troponina I cardíaca cTnT Troponina T cardíaca dAb Anticorpo de domínio único

DB Duplo cego

DVT Trombose de veia profunda

ECG Eletrocardiograma

EIA Imunoensaio de enzima

ELISA Ensaio Imunoabsorvente ligado à enzima

FACS Classificação celular ativada por fluorescência

ICF Forma de Consentimento Informado

ICU Unidade de Cuidados Intensivos

ISVD Domínio variável único de imunoglobulina i.v.

Intravenoso

FR Região de estrutura

FRET Transferência de energia de ressonância por fluorescência

FU Acompanhamento

GCS Escala de coma Glasgow

GST Glutation-S-transferase

HUS Síndrome urêmica hemolítica

KA Constante de associação

KD Constante de dissociação

LDH Lactato desidrogenase

LMWH Heparina de baixo peso molecular

MAHA Anemia hemolítica microangiopática

MAHAT Anemia hemolítica microangiopática e trombocitopenia

MI Infarto do miocárdio

MAP Programa de acesso gerenciado

NCA Análise não compartamental

NMR Ressonância magnética nuclear

NSE Enolase específica de neurônio

NT proBNP N-terminal pró-peptídeo natriurético cerebral

OL De Venda Livre

PCI Intervenção coronariana percutânea

PE or PEX Troca plasmática

PKPD Farmacocinética – farmacodinâmica

RIA Radioimunoensaios

RICO Atividade de cofator de ristocetina

RIPA Agregação de plaquetas de ristocetina

RP-HPLC Cromatografia Líquida de Alto Desempenho de Fase Reversa

SAE Sério evento adverso s.c.

Subcutâneo scFv Fragmento variável de cadeia única

SD Desvio padrão

S/D Solvente/Detergente

SE-HPLC Cromatografia Líquida de Alto Desempenho por Exclusão de Tamanho

SPR Ressonância de plasmônio de superfície

TE Evento tromboembólico

TMA Microangiopatia trombótica

TnI Troponina I

TnT Troponina T

TTP Púrpura trobocitopênica trombótica

TRALI Lesão pulmonar aguda relacionada com transfusão

TTP Púrpura trombocitopênica trombótica

ULN Limite superior normal

ULvWF vWF ultragrande

VH Domínio variável de cadeia pesada

VHH Sequência de domínio variável de cadeia pesada que é derivada de um anticorpo de cadeia pesada

VL Domínio variável de cadeia leve vWF Fator von Willebrand

Claims (17)

REIVINDICAÇÕES

1. Polipeptídeo, caracterizado pelo fato de que compreende dois domínios variáveis únicos da imunoglobulina (ISVDs) de fator de von Willebrand anti-humano (vWF) para uso no tratamento (dos sintomas de) de um episódio inicial de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano, administrando ao ser humano uma dose de 1 a 80 mg, preferivelmente 5 a 40 mg, ainda mais preferivelmente 10 mg ou 11 mg do referido polipeptídeo.

2. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 1, para uso no tratamento (dos sintomas) de um episódio inicial de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano, caracterizado pelo fato de que a referida etapa de administração do polipeptídeo da invenção é repetida por pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 dias, ou mesmo mais de 10 dias, tal como 20 dias, de preferência mais de 30 dias, tal como 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses ou ainda mais (período de tratamento).

3. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 2, para uso no tratamento (dos sintomas) de um episódio inicial de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano, caracterizado pelo fato de que o referido tratamento resulta em um tempo mais rápido da resposta da contagem de plaquetas, menor proporção de pacientes com morte, recorrência ou um maior evento de TE durante o período de tratamento, menor taxa de recorrência e/ou prevenção de refratariedade.

4. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, para uso no tratamento (dos sintomas de) de um episódio inicial de uma doença relacionada ao vWF em um ser humano, caracterizado pelo fato de que o referido polipeptídeo compreende pelo menos uma SEQ ID Nº: 20 de ligação ao ISVD.

5. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, para uso no tratamento (dos sintomas de) de um episódio inicial de uma doença relacionada ao vWF em um ser humano, caracterizado pelo fato de que pelo menos um ISVD é representado pela SEQ ID Nº: 19 (12A02H1).

6. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, para uso no tratamento (dos sintomas de) de um episódio inicial de uma doença relacionada ao vWF em um ser humano, caracterizado pelo fato de que o referido polipeptídeo é pelo menos 90% idêntico à SEQ ID Nº: 1.

7. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, para uso no tratamento (dos sintomas de) de um episódio inicial de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano, caracterizado pelo fato de que o referido polipeptídeo é ALX 0081 (SEQ ID Nº: 1) ou ALX 0081 -A (SEQ ID Nº: 24).

8. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, para uso no tratamento (dos sintomas de) de um episódio inicial de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano, caracterizado pelo fato de que a referida dose é administrada 1 vez por dia ou duas vezes por dia.

9. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, para uso no tratamento (dos sintomas de) de um episódio inicial de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano, caracterizado pelo fato de compreender a administração repetida do referido polipeptídeo até que o número de plaquetas no referido ser humano seja de pelo menos 150.000/µl.

10. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 9, para uso no tratamento (dos sintomas) de um episódio inicial de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano, caracterizado pelo fato de compreender a administração repetida do referido polipeptídeo até que o número de plaquetas no referido ser humano seja de pelo menos

150.000/µl em pelo menos duas medições consecutivas.

11. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 10, para uso no tratamento (dos sintomas de) de um episódio inicial de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano, caracterizado pelo fato de que a referida etapa de administração do polipeptídeo da invenção é repetida durante pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 dias, ou até mais de 10 dias, tal como 20 dias, preferivelmente mais de 30 dias ou ainda mais, após o referido número de plaquetas ser de pelo menos

150.000/µl em pelo menos pelo menos duas medições consecutivas.

12. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 10 ou 11, para uso no tratamento (dos sintomas de) de um episódio inicial de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano, caracterizado pelo fato de que as referidas duas medições consecutives são de pelo menos 24 horas, mais preferivelmente 48 horas de intervalo, tal como pelo menos 3 dias de intervalo, ou ainda mais, tal como 4, 5, 6 ou 7 dias de intervalo, preferivelmente uma semana de intervalo.

13. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, para uso no tratamento (os sintomas de) de um episódio inicial de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano, caracterizado pelo fato de compreender a administração repetida do referido polipeptídeo até que a atividade ADAMTS13 no referido ser humano seja pelo menos de 10%, como pelo menos 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 45% ou mesmo 50% de uma atividade de referência do ADAMTS13.

14. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, para uso no tratamento (os sintomas de) de um episódio inicial de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano, caracterizado pelo fato de compreender a repetição da administração do referido polipeptídeo até o nível de um marcador de dano ao órgão, tais como nível de LDH, nível de troponina T, nível de troponina I e/ou nível de creatinina, no referido ser humano retornar para pelo menos 40% ou mesmo pelo menos 50%, tal como 60%, 70%, 80%, 90% ou até 100% dos níveis normais.

15. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, para uso no tratamento (os sintomas de) de um episódio inicial de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano, caracterizado pelo fato de compreender a realização de uma Troca Plasmática.

16. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, para uso no tratamento (os sintomas de) de um episódio inicial de uma doença relacionada com o vWF em um ser humano, caracterizado pelo fato de que a referida doença relacionada com o vWF é escolhida dentre síndrome coronariana aguda (ACS), ataque isquêmico cerebral transitório, angina do peito instável ou estável, acidente vascular cerebral, infarto do miocárdio ou púrpura trombocitopênica trombótica (TTP), preferivelmente TTP.

17. Kit ou artigo de fabricação, caracterizado pelo fato de compreender um recipiente contendo o polipeptídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, e instruções de uso.