BR112020015071A2 - Conjugados de anticorpos liberáveis - Google Patents

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Marek Kwiatkowski
Christian Sund
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Abstract

conjulgados de anticorpos liberáveis. a presente invenção refere-se a compostos de fórmula (i): ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, em que d é um resíduo de um composto citotóxico ou quimioterapêutico, que é sub-metido à hidrólise sob condições fisiológicas para liberar o composto citotóxico ou quimioterapêutico e que são úteis no tratamento de cân-cer e outras doenças.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "CONJU- GADOS DE ANTICORPOS LIBERÁVEIS".
REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS
[0001] Este pedido reivindica prioridade ao Pedido de nº de Série U.S. 62/640.733, depositado em 9 de março de 2018, cujo conteúdo inteiro é incorporado ao presente documento, a título de referência.
CAMPO DA TÉCNICA
[0002] Este documento refere-se a conjugados de um composto citotóxico ou quimioterapêutico ligado direta ou indiretamente a um an- ticorpo alvo, em que o composto citotóxico ou quimioterapêutico pode ser liberado do conjugado in vivo. Tais conjugados são denominados no presente documento como "conjugados de anticorpos liberáveis". Este documento inclui adicionalmente métodos e materiais para fabri- car e usar esses conjugados de anticorpos liberáveis.
ANTECEDENTES
[0003] Os conjugados anticorpo-fármaco ou ADCs são uma classe importante de fármacos biofarmacêuticos altamente potentes projeta- das como terapia direcionada (por exemplo, para o tratamento de cân- cer). Por exemplo, diferentemente da quimioterapia, os ADCs têm co- mo objetivo atingir e exterminar apenas as células cancerígenas e poupar células saudáveis. ADCs são moléculas complexas compostas de um anticorpo ligado a uma molécula biologicamente ativa (por exemplo, uma carga ou fármaco citotóxico (anticâncer)).
SUMÁRIO
[0004] São fornecidos no presente documento conjugados de um composto citotóxico ou quimioterapêutico ligado indiretamente (por exemplo, através de uma porção de ligação, por exemplo, um polímero alifático) a um anticorpo (por exemplo, um anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo), em que o composto citotóxico ou quimiotera- pêutico pode ser liberado do conjugado in vivo. Tais conjugados são denominados no presente documento como "conjugados de anticorpos liberáveis". Este documento inclui adicionalmente métodos e materiais para fabricar e usar esses conjugados de anticorpos liberáveis.
[0005] Os conjugados de anticorpos liberáveis fornecidos no pre- sente documento têm base na constatação de que os grupos fosfotri- éster 3' de um ribonucleosídeo são instáveis na presença de porções químicas hidroxila 2//amino vicinais livres e podem se decompor após o ataque nucleofílico intramolecular de uma porção hidroxila 2//amino no grupo fosfotriéster 3". A reação de decomposição subsequente é considerada como controlada pela geometria do nucleófilo atacante e do átomo de fósforo, com a configuração ribo sendo as espécies mais reativas e as arabino-geometrias análogas sendo praticamente não reativas. Os conjugados fornecidos no presente documento fornecem vantajosamente a liberação de um composto citotóxico ou quimiotera- pêutico a partir de um conjugado que contém anticorpo com pouco ou nenhum traço do ligante anteriormente existente e do anticorpo alvo no composto citotóxico ou quimioterapêutico. O mesmo vale para outros compostos de afinidade alvo. Um tal exemplo é mostrado no Esquema 1 conforme o seguinte: Esquema 1 o x NãO Ho: o. Ho We mosue-o 67 Pora Lemes |
Q NãO HOT o. Fr marmuonço to + od D=ct + CO + HoN—Ffármaco
[0006] Neste exemplo, a clivagem do grupo E, a porção desenca- deante, resulta em um ataque nucleofílico da hidroxila liberada no átomo de fósforo, levando à formação de um fosfotriéster cíclico, qui- nona metídeo, dióxido de carbono (CO>z) e o composto citotóxico ou quimioterapêutico. O fosfotriéster cíclico pode ser adicionalmente hi- drolisado a pH fisiológico, resultando na abertura do anel de 5 mem- bros e formação de ambos os fosfodiésteres isoméricos. O metido de quinona também pode ser ainda mais hidrolisado (por exemplo, rea- gindo com água) em pH fisiológico para formar 4-(hidroximetil)-fenol.
[0007] Esse sistema fornece diversas vantagens sobre conjugados alvejados de anticorpos alternativos. Por exemplo, o sistema é modifi- cável e a clivagem pode ser alterada com base na identidade da por- ção acionadora, "E", conforme exemplificado acima. Por exemplo, E pode conter um grupo lábil a enzimas, uma funcionalidade lábil a áci- dos ou ser um clivável mediante redução, grupo funcional contendo ditiol. Além disso, como o grupo E não está ligado diretamente ao anti- corpo, a necessidade de modificar extensivamente cada E para cada conjugado é evitada, visto que a forma básica (não derivada) de qual- quer porção E pode ser anexada aos conjugados, conforme descrito no presente documento. Além disso, o uso de grupos de acionamento não substituídos oferece o potencial para um controle mais satisfatório sobre a cinética de desintegração de profármacos e liberação da mo- lécula biologicamente ativa livre in vivo. Finalmente, os conjugados de anticorpos liberáveis fornecidos no presente documento exibem liber- dade sintética substancial. Por exemplo, observando o Esquema 1 acima, não é necessário que a porção E seja introduzida seletivamen- te na hidroxila 2' juntamente com a introdução do fosfotriéster na hi- droxila 3' da porção ligante. De fato, o posicionamento oposto se com- porta de maneira similar, tornando ambos os isômeros posicionais, iso- ladamente ou em combinação, adequados e úteis como conjugados de anticorpos liberáveis.
[0008] Os métodos químicos descritos aqui permitem que o fárma- co seja liberado seletiva e completamente em resposta à hidrólise do E de acionamento e liberação do nucleófilo A; no entanto, esse método deixa alguma liberdade de escolha em relação à posição da ligação da porção de anticorpos. Por exemplo, na estrutura abaixo, a porção de anticorpo pode ser colocada em qualquer uma das posições indicadas por uma seta: 2 3 o PA
RN CX N No =. Fármaco Hi Doto o Gm 1
[0009] Cada uma dessas posições tem suas próprias vantagens e sua exemplificação prática é demonstrada no presente documento.
[0010] Em um primeiro aspecto geral, este documento fornece um composto de Fórmula (|):
RR A-E e q porção de anticorpo- O —P— Z!—MA-Zº-D o O, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: a porção de anticorpo é selecionada a partir de: anticorpo-L-(CH2)4- e anticorpo-L-(porção alifática)-; a porção alifática é selecionada a partir de um polímero, Rº, e um grupo selecionado a partir de:
polímero-L-(CH2)m- e polímero-L-(CH2-CH2-O),-(CH2)m-;
RP é selecionado a partir de C1.6 alguila opcionalmente substituída, C1-3 alquil-O-(CH2-CH2-O),-(CH2)m- opcionalmente substi- tuído e C3.7 cicloalquila opcionalmente substituída;
cada L é independentemente um grupo de ligação;
m e p são cada um, independentemente, um número inteiro de 1 a 10;
D é um resíduo de um composto citotóxico ou quimiotera- pêutico;
Z' é selecionado a partir de O, S e N(RN);
Z? é selecionado a partir de O e N(RN) ou Zº está ausente;
Aé O ou N, em que, quando A é O, então, Rº está ausente;
RN é selecionado a partir de H e C1.6 alquila opcionalmente substituída;
Rº é selecionado a partir de H e C1.6 alguila ou
R? e R!, junto com A e o átomo de carbono ao qual R' está fixado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcio- nalmente substituído; ou
R? e R?, junto com A, o átomo de carbono ao qual R' está fixado e o átomo de carbono ao qual R? está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros opcionalmente substituído;
Mº é um grupo autoimolativo que tem qualquer uma das fórmulas (a) a (i):
x o Ro o fºR o rcHreHo-t—t A peo-e-t El $ " "E RR "(by R “(o s O o o CURA, poa Ras “e:
x CH o xo Ss o Cem (Cf etmanno! & [Wu (g); 7 7 A NES NA A E o-ênonen ne: x RÊ CHs (h);* Rê CHs Hs SD (); em que x denota um ponto de fixação a Z' e y denota um ponto de fi- xação a Zº; R' e R? são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquila opcionalmente substitu- ída, Ce-10 arila opcionalmente substituída e heteroarila de 5 a 14 mem- bros opcionalmente substituída; ou R' e R? são unidos com os átomos de carbono aos quais estão fixados para formar um anel de C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída, um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcio- nalmente substituído, uma Cç-10 arila opcionalmente substituída ou uma heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída; ou R' e R? são unidos para formar um sistema de anel ribo- se; R? e Rô são independentemente selecionados a partir de H e C1.6 alquila; e E é uma porção clivável.
[0011] Em um segundo aspecto geral, este documento fornece um composto de Fórmula (Il): Ri A - R?
O porção alifática=O—P—Z1—MA-2Z3-D Õ (0),
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
a porção alifática é selecionada a partir de um polímero, Rº, e um grupo selecionado a partir de:
-polímero-L-(CH2)m- e -polímero-L-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m-;
RP é selecionado a partir de C1.6 alquileno opcionalmente substituído, C1.3 alquileno-O-(CH2-CH2-O),-(CH2)m- opcionalmente substituído, e C3-7 cicloalquileno opcionalmente substituído;
cada L é independentemente um grupo de ligação;
m e p são cada um, independentemente, um número inteiro de 1 a 10;
D é um resíduo de um composto citotóxico ou quimiotera- pêutico;
Z' é selecionado a partir de O, S e N(RY);
Z? é selecionado a partir de O e N(RN) ou Zº está ausente;
Aé O ou N, em que, quando A é O, então, Rô está ausente;
RN é selecionado a partir de H e C1.6 alquila opcionalmente substituída;
Rº é selecionado a partir de H e C1.6 alguila ou
R? e R!, junto com A e o átomo de carbono ao qual R' está fixado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcio- nalmente substituído; ou
Rº e R?, junto com A, o átomo de carbono ao qual R' está fixado e o átomo de carbono ao qual R? está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros opcionalmente substituído;
Mº é um grupo autoimolativo que tem qualquer uma das fórmulas (a) a (i):
“a, o RR o R o trcHCHO-C—: A p-eo-e- $ Et: . arm BR O,
ÁRÇA JgJ[ÚoeH&— oi CMEI “e: x CH o x CH 9 Cem (Cf etmanno! & [Wu (g);
RR RR Q EX! Dono $X( )-E—o-C-n-eHzoHa- NC x RÊ CHs (h);* Rê CHs Hs SD (); em que x denota um ponto de fixação a Z' e y denota um ponto de fi- xação a Z?; R' e R? são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquila opcionalmente substitu- ída, Ce-10 arila opcionalmente substituída e heteroarila de 5 a 14 mem- bros opcionalmente substituída; ou R' e R? são unidos com os átomos de carbono aos quais estão fixados para formar um anel de C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída, um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcio- nalmente substituído, uma Cç-10 arila opcionalmente substituída ou uma heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída; ou R' e R? são unidos para formar um sistema de anel ribo- se; em que um dentre R' ou R? é substituído direta ou indire- tamente através de um ligante (L) por uma porção de anticorpo seleci- onada a partir de um anticorpo, um fragmento de anticorpo e um grupo selecionado a partir de: anticorpo-L-(CH2)4- e anticorpo-L-(porção alifática)-; R? e Rô são independentemente selecionados a partir de H e C1.6 alquila; e E é uma porção clivável.
[0012] Em um terceiro aspecto geral, este documento fornece uma composição farmacêutica que compreende qualquer um dos compos-
tos descritos no presente documento, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
[0013] Em um quarto aspecto geral, esse documento fornece um método para tratamento de câncer em um sujeito que necessita do mesmo, em que o método compreende administrar ao sujeito de uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer um dos compostos descritos no presente documento, ou um sal farmaceuticamente acei- tável dos mesmos, ou uma composição farmacêutica que compreende qualquer um dos compostos descritos no presente documento, ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma.
[0014] A menos que definido de outro modo, todos os termos téc- nicos e científicos usados no presente documento têm o mesmo signi- ficado que é comumente entendido por um versado na técnica à qual o presente pedido se refere. Métodos e materiais são descritos no pre- sente documento para uso no presente pedido; outros métodos e ma- teriais adequados conhecidos na técnica também podem ser usados. Os materiais, métodos e exemplos são meramente ilustrativos e não exaustivos. Todas as publicações, pedidos de patentes, patentes, se- quências, entradas de banco de dados e outras referências menciona- das no presente documento são incorporadas a título de referência em sua totalidade. Em caso de conflito, a presente especificação, incluin- do definições, prevalecerá.
[0015] Outros recursos e vantagens do presente pedido serão evi- dentes a partir da descrição e figuras detalhadas a seguir e das reivin- dicações.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0016] Ao projetar propriedades de um fármaco, incluindo um fár- maco proteico, a ser administrado a seres humanos e animais (S.B. van Witteloostuijn et al, Half-life extension of biopharmaceuticals using chemical methods: Alternatives to PEGylation, ChemMedChem Revi- ews, 11: 2.474 a 2.495, 2016.; M. C. Manning, et al., Stability of Protein Pharmaceuticals: An Update, Pharmaceutical Research, 27: 544 a 575, 2010) certas propriedades-chave incluem uma ou mais das se- guintes:
1. Capacidade para se aglutinar a locais-alvo específicos.
2. Razoavelmente solúvel na circulação em doses eficazes.
3. Exibem meias-vidas de circulação que permitem alveja- mento e dosagem eficazes. |sso é frequentemente associado a meias- vidas estendidas devido à filtração glomerular reduzida ou à depura- ção do fígado.
4. Não enzimaticamente ou quimicamente alterado na circu- lação, de uma maneira que reduz sua eficácia.
5. Fisicamente (conformacionalmente) estável na formula- ção, entrega e circulação.
6. Não agregue na circulação, o que pode levar à ineficácia, além de várias complicações.
7. Não imunogênico sob uso agudo ou crônico.
[0017] Existem muitas abordagens para alcançar o acima exposto, no entanto, essas abordagens tendem a ser agrupadas nos métodos (1) que envolvem alteração química do fármaco, ou (Il) métodos que envolvem alteração em como o fármaco é administrado. Os métodos do tipo | podem incluir a adição de um grupo hidroxila de modo a in- tensificar a solubilidade aquosa ou a modificação do fármaco com um polímero hidrofílico, de modo a aumentar o tamanho (e reduzir a filtra- ção glomerular), assim como a solubilidade. Os métodos do tipo Il po- dem incluir a administração de um fármaco solúvel em água de modo insatisfatório, como a doxorrubicina, em um veículo de administração de fármaco, como um veículo lipossômico solúvel em água, ou a ad- ministração subcutânea do fármaco em um veículo de hidrogel polimé-
rico do qual o fármaco difunde lentamente na circulação (van Witte- loostuijn et al.; Manning et al., A. Kumari, et al.; Biodegradable polyme- ric nanoparticles based drug delivery systems, Colloids and Surfaces B: Biointerfaces 75: 1 a 18, 2010).
[0018] Um dos métodos mais comuns para aumentar a meia-vida de soro de um fármaco de pequeno peso molecular ou de um fármaco de proteína é por meio de sua modificação com um polímero hidrofí- lico, como poli (etileno glicol) ou PEG. No presente, há aproximada- mente 17 produtos farmacêuticos "PEGuilados" registrados que foram aprovados pela FDA/EMA (por exemplo, AdagenO, OncosparO, PE- Gintron&O, PegasysO, Somaverto, Neulasta&, Mircera6, CimziaO, KrystexxaO, LonguexO, PlegridyO, AdynovateO, RebinynO, JIviO, Ca- laspargaseG, Movantik&, OmontysO) (van Witteloostuijn et al.). A natu- reza hidrofílica e biocompatível do PEG é tal que, quando fixada cova- lentemente a um fármaco ou proteína de pequeno peso molecular, co- bre a mesma de modo eficaz com uma camada superficial rica em PEG (C. J. Fee e J. M. Van Alstine, Prediction of the Viscosity Radius and the Size Exclusion Chromatography Behavior of PEGylated Pro- teins, Bioconjugate Chem., 15: 1.304 a 1.313, 2004) cuja flexibilidade permite que as moléculas ainda se liguem a alvos, enquanto intensifi- cam potencialmente todas as propriedades desejáveis observadas acima (C. J. Fee e J. M. Van Alstine, PEG-proteins: Reaction enginee- ring and separation issues, Chemical Engineering Science 61: 924 a 939, 2006, Fee e Van Alstine, 2004; van Witteloostuijn et al.).
[0019] A modificação de fármacos de pequeno peso molecular ou produtos biofarmacêuticos com PEG ou outros polímeros hidrofílicos (coletivamente denominados no presente documento como PEGuila- ção) fornece grande flexibilidade à produção de produtos farmacêuti- cos complicados, incluindo conjugados anticorpo-fármaco. Uma razão para isso é que o PEG e muitos polímeros relacionados são solúveis tanto em soluções orgânicas quanto aquosas. A modificação de fár- macos ou proteínas hidrofóbicas pode ser executada em soluções or- gânicas e o fármaco modificado por polímero pode ser, então, adicio- nalmente modificado, por exemplo, acoplado a uma proteína ou ligante alvo, ou purificado adicionalmente em solução aquosa. As purificações à base de solução aquosa são tipicamente menos dispendiosas, mais seguras de operar, mais ecológicas e necessitam de linhas de proces- so menos complicadas.
[0020] A modificação de fármacos de pequeno peso molecular ou produtos biofarmacêuticos com PEG ou outros polímeros hidrofílicos (coletivamente denominados no presente documento como PEGuUila- ção) apresentam vários desafios. Inicialmente, normalmente a PEGuUi- lação é realizada em substâncias já purificadas. Por exemplo, muitos produtos biofarmacêuticos modificados por polímeros com vendas anuais de mais de um bilhão de dólares (por exemplo, PEGintron, Pe- gasys, Neulasta) são versões de meia-vida de soro intensificada com PEGuilado de produtos biofarmacêuticos já comprovados. Em um es- forço para ter um produto quimicamente bem definido, normalmente, tais PEG-biofarmacêuticos são modificados em um local de aminoáci- do (por exemplo, um grupo terminal carboxila ou amino, o grupo amino livre de um resíduo de aminoácido lisina ou um grupo cisteína sulfidri- la). A mistura do produto de reação resultante pode conter um terço de cada produto de fármaco mono-PEGuilado, entidades multi- PEGuUiladas, fármaco ou proteína nativa não modificada. Como resul- tado, a quantidade de medicamento funcional é reduzida para um ter- ço do material inicial (na razão molar) e deve ser purificada a partir da mistura de produto de reação - o que reduz ainda mais o rendimento e aumenta os custos relacionados à purificação, controle de qualidade, etc. Para tornar as coisas mais desafiadoras, uma mistura de produto de fármaco mono-PEGuilado pode não ser PEGuilada nos mesmos locais, levando às chamadas misturas PEGaméricas, em que "PEGa- mers" diferentes podem exibir propriedades farmacocinéticas diferen- tes. Este último é aceitável se as condições da reação forem altamente controladas e reproduzíveis (C. J. Fee e J. M. Van Alstine, PEG- proteins: Reaction engineering and separation issues, Chemical Engi- neering Science 61: 924 a 939, 2006). O valor dos benefícios de PE- Guilação é tal que, conforme evidenciado pelo grande número de fár- macos PEGuilados aprovados, os desafios relacionados à PEGuilação são frequentemente superados de modo econômico ou medicinal pe- los benefícios. Entretanto, os desafios de PEGuilação acima ainda de- vem ser superados e ainda há muito trabalho a ser feito para melhorar os produtos biofarmacêuticos covalentemente PEGuilados (van Witte- loostuijn et al.; R. L. Kwant, et al., Controlled levels of protein modifica- tion through a chromatography-mediated bioconjugation. Royal Society of Chemistry, Chem. Sci., 6: 2.596 a 2.601, 2015).
[0021] Uma vantagem da tecnologia de PEGuUilação liberável (re- versível) é que, uma vez que o polímero não está acoplado à substân- cia farmacêutica ativa quando é funcional, a natureza exata ou a hete- rogeneidade da modificação de polímero em relação ao local exato da modificação, peso molecular de polímero exato, etc., torna-se menos importante em relação à eficácia e variabilidade de fármaco. O fárma- co modificado por polímero, que também pode ser conjugado com um agente de alvejamento, como um anticorpo, é de fato um profármaco que deve permitir um comportamento in vivo muito mais previsível, particularmente se o fármaco e o anticorpo ao qual o polímero está se ligando forem aprovados ou tiverem sido clinicamente bem caracteri- zados (ou seja, em Testes de Fase Clínicos).
[0022] A PEGuilação em um local fisicamente removido do local ativo reduz tipicamente a afinidade de um fármaco ou proteína por seu alvo em cerca de uma ordem de magnitude (discutido em Fee e Van
Alstine, 2004, 2006). Em alguns casos, isso não impede a eficácia e a aprovação do fármaco PEG, mas acredita-se que, em outros casos, especialmente onde a PEGuilação ocorre próxima do local ativo ou reduza grandemente a atividade ou o alvejamento do medicamento, o mesmo proíbe o desenvolvimento de um fármaco PEG de atuação longa eficaz mais bem tolerado. As ligações liberáveis podem fornecer uma solução para esse desafio.
[0023] Embora a conjugação de PEG seja uma abordagem co- mum para a modificação de fármacos ou produtos biofarmacêuticos com polímeros, muitos outros polímeros hidrofílicos (Veeran Gowda Kadajji e Guru V. Betageri, Water Soluble Polymers for Pharmaceutical Applications, Polymers, 3: 1.972 a 2.009, 2011) incluindo polioxazoli- nas são conhecidos por serem úteis de modo similar (por exemplo, Zalipsky et al., documento nº US5395619A; Harris, documento nº WO 2010/006282 A2).
[0024] Desde os tempos de Pasteur, os médicos sonham em po- der fornecer substâncias de fármaco altamente ativas para partes es- pecíficas do corpo. O alvejamento eficaz de fármacos é um problema comum com muitos fármacos altamente tóxicos, como fármacos anti- câncer, como doxorrubicina ou daunomicina, que necessitam de admi- nistração em doses muito altas, o que pode levar a complicações sis- têmicas do paciente e limitar frequentemente a capacidade de muitos pacientes de ingerir certos fármacos ou ingerir tais fármacos em doses altas o suficiente para serem totalmente eficazes. A ideia de usar anti- corpos para administrar toxinas celulares a células cancerígenas foi primeiramente investigada por Mathe et al., em 1958 (G. Mathe, T. B. Loc, J. Bernard. Effect on mouse leukemia 1210 of a combination by diazo-reaction of amethopterin and gammaglobulins from hamsters inocu- lated with such leukemia by heterografts. C R Hebd Seances Acad Sci 246:1.626 a 1.628, 1958; K. Tsuchikama, Z. An., Antibody-drug conju-
gates: recent advances in conjugation and linker chemistries, Protein & Cell, publicado online 14 de outubro de 2016. DOI 10.1007/s13238- 016-0323-0). Isso foi revivido na década de 1970, quando os pesqui- sadores se interessaram pela possibilidade de acoplar vários fármacos a anticorpos direcionados a locais de entrega de fármaco ideais (R. Levy, et al., The Specific Cytotoxic Effects of Daunomycin Conjugated to Antitumor Antibodies, Cancer Research, 35, 1.182 a 1.186, 1975; E. Hurwitz, et al., The effect in vivo of chemotherapeutic drug—antibody conjugates in two murine experimental tumor systems, International J. of Cancer, 21, 747 a 755, 1978). Hurwitz et al. observou que a ligação eficaz de fármaco ao anticorpo era crucial, e que os polímeros podem desempenhar uma função significativa como ligantes, e que os fárma- cos modificados com polímeros, se liberados a partir de tais conjuga- dos, ainda podem ser eficazes.
[0025] Os estudos de conjugado anticorpo-fármaco (ADC) anterio- res acima foram limitados devido à incapacidade de obter apenas anti- corpos altamente alvejados de alguns pacientes. Em 1986, o primeiro produto biofarmacêutico anticorpo monoclonal Orthoclone OKT3Q& foi aprovado. Foi uma IgG2a anti-CD3 de camundongo que foi usada para tratar a rejeição de transplantes de órgãos humanos e comercializado por mais de vinte e cinco anos. Seu sucesso levou aos mais de 80 produtos biofarmacêuticos aprovados relacionados ao mAb atualmente aprovados (consultar abaixo) e ilustra algumas das principais caracte- rísticas dos biofármacos de mAb. Primeiro, os mesmos são bem tole- rados, mesmo com algumas mAbs não humanas iniciais sendo funcio- nais. Em segundo lugar, eles tinham uma vida de circulação razoavel- mente longa devido ao seu tamanho, impedindo-os de serem filtrados pelos rins e suas regiões Fc, permitindo que fossem "desviados" atra- vés (e não removidos) do fígado. Este último ponto é uma razão pela qual os mAbs não foram considerados como alvos para a PEGuilação e também porque a adição recombinante de regiões Fc a (aproxima- damente dez) fármacos não mAb também tem sido um método de ex- tensão de meia-vida bem-sucedido (van Witteloostuijn et al).
[0026] O advento de anticorpos monoclionais (mAbs) altamente específicos e bem tolerados, e de substâncias relacionadas ao mAb, como fragmentos de mAb (Fabs), tornou possível esse alvejamento. As substâncias de fármaco de interesse, que são altamente tóxicas e letais, se entregues sistemicamente, devem ser usadas em pequenas doses direcionadas para exterminar o câncer ou outras células pato- gênicas. Como tal, as mesmas precisam ser acopladas a anticorpos de uma maneira que permita a função de alvejamento de mAb e libe- ração controlada do fármaco no local da ligação. Isso pode ser efetua- do por meio da conjugação anticorpo-fármaco direta - tipicamente por meio de uma molécula ligante orgânica curta, ou indiretamente através do uso de um polímero que permite estereoquimicamente que o con- jugado anticorpo-fármaco se ligue de modo eficaz ao alvo e depois se- ja liberado (A. Beck et al, Strategies and challenges for the next gene- ration of antibody-drug conjugates, Nature Reviews, Drug Discovery, 16, 315 a 337, 2016). Espera-se que a presença de tais polímeros (de ligação) no conjugado melhore favoravelmente as propriedades farma- cocinéticas e de tolerância do paciente (isto é, estimulantes do sistema imunológico) dos conjugados de anticorpo-fármaco, bem como sua facilidade de formulação, redução da formação de agregados, redução de enzimas ou outra degradação (C. Fee and J. M. Van Alstine, PEG- proteins: Reaction engineering and separation issues, Chemical Engi- neering Science, 61:924 a 934, 2006; S.B. van Witteloostuijn et al, Half-life extension of biopharmaceuticals using chemical methods: Al- ternatives to PEGylation, ChemMedChem Reviews, 11:2.474 a 2.495, 2016).
[0027] Talvez de igual importância seja o fato de que muitos fár-
macos de interesse para a incorporação de ADC são de pequeno peso molecular (MW) em comparação com um anticorpo (150.000 Daltons) ou mesmo um fragmento de anticorpo relativamente pequeno (por exemplo, 25.000 Daltons), conforme desejável para poder ligar mais de uma molécula de fármaco (frequentemente relativamente hidrofóbi- ca) por ADC e ligantes poliméricos hidrofílicos podem fornecer um meio pronto para efetuar tal carga aprimorada de um ADC sem afetar negativamente as propriedades de alvejamento do anticorpo por meio de múltiplas modificações covalentes, ou a solubilidade de ADC. No caso de onde ADCs são formados com o uso de ligantes poliméricos hidrofílicos, não é apenas a liberação controlada do fármaco que pode ser desejável. Depois que o anticorpo se liga ao alvo e sua carga útil do fármaco é liberada, a liberação do anticorpo do polímero também pode ser desejável, de modo a auxiliar sua rápida quebra metabólica.
[0028] Até o momento, quatro ADCs foram aprovadas para diferen- tes tipos de tratamento contra o câncer. MylotargO& (Pfizer Wyeth) foi aprovado em 2001. Adcentris& (Seattle Genentics/Millenium/Takeda) foi aprovado em 2011, Kadcyla& (Genentech/Roche) em 2013 e Bespon- sa (Pfizer/Wyeth) em 2017. Kadcyla& usa um mAb já aprovado pela Food and Drug Administration (FDA) dos E.U.A. (Herceptin&) como agente de alvejamento. Adcentris& usa um ligante polipeptídico que é clivado de modo intracelular por uma enzima catepsina (há diversos tipos) para liberar um fármaco citotóxico de "estatina". O fármaco inibi- dor de crescimento celular de Kadcyla& (mertansina) pode funcionar sem liberação.
[0029] No presente, existem centenas de fármacos que os médi- cos gostariam de direcionar especificamente para vários locais do cor- po. Além disso, há aproximadamente 80 medicamentos com base em anticorpos monoclonais aprovados pelo FDA nos E.U.A., com talvez 600 em estudos em estágio tardio (Fase Ill) que demonstraram tole-
rância do paciente e ligação ao alvo satisfatórias. (W. R. Strohl, Cur- rent progress in innovative engineered antibodies, Protein Cell, 9:86 a 120, 2018). Todos esses mAbs representam agentes de alvejamento potenciais a serem usados em conjugados anticorpo-fármaco.
[0030] Embora alguns fármacos fornecidos pela ADC possam fun- cionar sem liberação, há diversas vantagens para ADCs com base em ligantes cliváveis. Uma é que os ligantes cliváveis (liberáveis) podem ser adaptados para serem liberados sob condições extracelulares ou intracelulares. O último permite o extermínio das células alvo, enquan- to o anterior pode eliminar as células próximas, o que também pode ser patogênico (consultar a revisão de Beck observada acima).
[0031] Dado o exposto, há muito interesse em ligantes e químicas de ligação inovadores. Isso é evidenciado em várias revisões (por exemplo, J. R. McCombs and S. C. Owen, Antibody Drug Conjugates: Design and selection of linker, payload and conjugation chemistry, The AAPS Journal, 17: 339 a 351, 2015) e publicações de pesquisa). Axup et al. apresentaram síntese de conjugados anticorpo-fármaco especiífi- cos de local com o uso de aminoácidos não naturais (Proceedings of the National Academy of Sciences. 109 (40): 16.101 a 16.106, 2012). R. P. Lyon et al. apresentaram ligações de maleimida auto- hidrolisantes (Bioconjugate Chem. 32 (10): 1.059 a 1.062, 2014) com S. Kolodych et al. que apresentam reagentes de acoplamento de ami- na a tiol inovadores (Bioconjugate Chem. 26(2): 197 a 200, 2015). A patente nº U.S. 7.745.394 atribuída à Seattle Genetics cobre ligações "val-cit-PAB" suscetíveis à catepsina específicas, enquanto a patente nº U.S. 5.208.020 cobre ligantes de maleimida exemplificativas. Como outro exemplo, a Patente nº U.S. 9.872.924 se refere a um ligante hidrofílico orgânico específico, enquanto o documento nº WO 2017/031034 se refere a um ligante com capacidade para acoplar covalentemente um ou mais tióis livres de um anticorpo.
[0032] Como observado acima, em 1978, reconheceu-se que a ligação eficaz de cargas úteis citotóxicas a anticorpos era crítica para a função conjugado de anticorpo-fármaco (ADC) (Hurwitz et al.). Mais de quarenta anos depois, ainda é reconhecido como crucial para os ADCs com base em mAb (L. Ducry e B. Stump, Antibody-Drug Conjugates: Linking Cytotoxic Payloads to Monoclonal Antibodies, Bioconjugate Chem., 21: 5 a 13, 2010; Jessica R. McCombs and Shawn C. Owen. Antibody Drug Conjugates: Design and Selection of Linker, Payload and Conjugation Chemistry, The AAPS Journal, 17: 339 a 351, 2015; N. Jain, et al., Current ADC Linker Chemistry, Pharm. Res., Publicado online em 11 de março de 2015, DOI 10.1007/s11095-015-1657-7).
[0033] Ligantes liberáveis (cliváveis) foram recentemente revisa- dos em Jain et al. e McCombs et al. Jain et al. observaram que exis- tem duas famílias de ligantes, não cliváveis e cliváveis, sendo que a última está relacionada à "liberação seletiva da citotoxina do ADC. Existem três mecanismos comumente usados: 1) sensibilidade à pro- tease, 2) sensibilidade ao pH e 3) sensibilidade à glutationa." Com a sensibilidade ao pH tendo vantagem do pH mais baixo (por exemplo, pH 5 a 6) nos compartimentos endossômicos e lisossômicos (célula cancerígena) em comparação com o citosol (pH 7,4), enquanto a sen- sibilidade à glutationa tem vantagem sobre concentrações intracelula- res relativamente mais altas de glutationa. Mais recentemente, Lyon et al. observaram que "mais ADCs de auristatina hidrofílica obtidos atra- vés do projeto de ligante hidrofílico ou fixação de cadeias de polietile- noglicol (PEG) ("PEGuilação") poderiam melhorar a eficácia" (R. P. Lyon, T. D. Bovee, S. O. Doronina, et al. Reduzir a hidrofobicidade de conjugados anticorpo-fármaco melhora a farmacocinética e índice te- rapêutico.
[0034] Diversas abordagens para modificação de polímero liberá- vel de moléculas biologicamente ativas e formação de ADC ligados a polímero foram descritas. Métodos melhorados para projetar, preparar e usar tais conjugados liberáveis são fornecidos no presente documen- to.
[0035] Por exemplo, a Tabela 1 fornece uma série de combina- ções de ADC conforme fornecido no presente documento. TABELA 1. COMBINAÇÕES DA ADC DE CORRENTES LIBERÁVEIS E NÃO LIBERÁVEIS* Anticorpo | Corrente a | Características Exemplificativas eta ts vu 1 NR NR Estabilidade de entrega in vitro satisfatória. A natureza NR de ligações pode permitir que o fármaco alvejado (por exemplo, enzima) funcione localmente por um período prolongado.
2 R1 R2 Pode ter liberação de R1 antes de R2 para facilitar a entrega de fármaco ativa; por exemplo, no caso de um fármaco com corrente de polímero. Pode ter liberação de R1 e R2 sob condições diferentes para facilitar, por exemplo, a liberação de um fármaco em um alvo com liberação controlada do fármaco nas células.
3 NR A corrente permanece com o agente de alvejamento e o semen “A 4 NR A corrente permanece com (e protege) o fármaco, que no caso de uma enzima ou aglutinante pode não ser afetada pela presença da corrente.
Ligação NR Direta Unica | A ligação NR clássica incorporada aos compostos conforme descrito no presente documento permite que grupos repórter e outros sejam adicionados. A mesma também permite a liberação de fármacos nativos e produção farmacêutica mais eficaz e menos dispendi- osa.
Ligação R Direta Unica A ligação R clássica incorporada aos compostos con- forme descrito no presente documento permite que grupos repórter e outros sejam adicionados. A mesma também permite a liberação de fármacos nativos e produção farmacêutica mais eficaz e menos dispendi- osa.
[0036] Os ligantes liberáveis (R) e não liberáveis (R) se referem a ligações de liberação controlada. O anticorpo representa a molécula alvo, que pode ser um anticorpo, fragmento de anticorpo ou outro gru- po de afinidade alvo. A corrente representa a molécula que liga o fár- maco ao agente de alvejamento, que pode ser, por exemplo, um polí- mero. A fármaco pode ser uma variedade de fármacos, incluindo pro- teínas enzimáticas ou outras, que podem ser ligadas a um ou mais fármacos com o uso de correntes (de polímero) e uma ou mais corren- tes (de polímero) por molécula alvo. Os detalhes são fornecidos neste documento, que também observa que a química R e NR do pedido pode ser usada para ligar diretamente o fármaco ao agente de alveja- mento, por meio de ligações R ou NR sem uma corrente independente (consultar, por exemplo, linhas 5 e 6 na tabela).
COMPOSTOS
[0037] São fornecidos no presente documento compostos de Fór- mula (1): Ri FP
VA R2 9 porção de anticorpo -O —P— Z1—MA-Zº-D O O), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: a porção de anticorpo é selecionada a partir de: anticorpo-L-(CH2)4- e anticorpo-L-(porção alifática)-; a porção alifática é selecionada a partir de um polímero, Rº, e um grupo selecionado a partir de: polímero-L-(CH2)m- e polímero-L-(CH2-CH2-O),-(CH2)m-; Rº é selecionado a partir de C1.6 alguila opcionalmente substituída, C1-3 alquil-O-(CH2-CH2-O),-(CH2)m- opcionalmente substi-
tuído e C3.7 cicloalquila opcionalmente substituída; cada L é independentemente um grupo de ligação; m, p e q são, cada um, independentemente, um número in- teiro de 1 a 10; D é um resíduo de um composto citotóxico ou quimiotera- pêutico; Z' é selecionado a partir de O, S e N(RN); Z? é selecionado a partir de O e N(RN) ou Zº está ausente; Aé O ou N, em que, quando A é O, então, Rº está ausente; RV é selecionado a partir de H e C1.6 alquila opcionalmente substituída; Rº é selecionado a partir de H e C1.6 alquila ou R? e R!, junto com A e o átomo de carbono ao qual R' está fixado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcio- nalmente substituído; ou R? e R?, junto com A, o átomo de carbono ao qual R' está fixado e o átomo de carbono ao qual R? está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros opcionalmente substituído; Mº é um grupo autoimolativo que tem qualquer uma das fórmulas (a) a (i): x o Ro o j R fe) rcHreHo-t—t A prEmo-êt Et $ " "E RR "(by R “(o O o o SOON : 7 eng onét RO '(ds* O (e); x CH; o x CcHs o em O seo da [Wu (g); 7 7 AOEo-Lon= AE o-dnononnê- : x RÊ CHs (h);* Rê CHs Hs SD ();
em que x denota um ponto de fixação a Z' e y denota um ponto de fi- xação a Z?; R' e R? são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquila opcionalmente substitu- ída, Ce-10 arila opcionalmente substituída e heteroarila de 5 a 14 mem- bros opcionalmente substituída; ou R' e R? são unidos com os átomos de carbono aos quais estão fixados para formar um anel de C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída, um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcio- nalmente substituído, uma Cç-10 arila opcionalmente substituída ou uma heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída; ou R' e R? são unidos para formar um sistema de anel ribo- se; R7 e Rº são independentemente selecionados a partir de H e C1.6 alquila; e E é uma porção clivável.
[0038] Também são fornecidos no presente documento os com- postos de Fórmula (Il): Ri R A-E
DA
O porção alifática SO—P—Z—MA-2Z3-D O (11), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: a porção alifática é selecionada a partir de um polímero, Rº, e um grupo selecionado a partir de: -polímero-L-(CH2)m- e -polímero-L-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m-; Rº é selecionado a partir de C1.6 alquileno opcionalmente substituído, C1.3 alquileno-O-(CH2-CH2-O),-(CH2)m- opcionalmente substituído, e C3-7 cicloalquileno opcionalmente substituído; cada L é independentemente um grupo de ligação; m e p são cada um, independentemente, um número inteiro de 1 a 10; D é um resíduo de um composto citotóxico ou quimiotera- pêutico; Z' é selecionado a partir de O, S e N(RN); Z? é selecionado a partir de O e N(RY) ou Zº? está ausente; Aé O ou N, em que, quando A é O, então, Rô está ausente; RV é selecionado a partir de H e C1.6 alquila opcionalmente substituída; Rº é selecionado a partir de H e C1.6 alquila ou Rº e R1, junto com A e o átomo de carbono ao qual R' está fixado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcio- nalmente substituído; ou Rº e R?, junto com A, o átomo de carbono ao qual R' está fixado e o átomo de carbono ao qual R? está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros opcionalmente substituído; Mº é um grupo autoimolativo que tem qualquer uma das fórmulas (a) a (i): x q E E trcHTCHAO-Cni A pero El : " "E RR "(by R “(o O o o SOON : 7 got ont R Y(d);* (e); xm Hs o x Hs o er Ofaemeno- : [Wu (g);
A NES NA A )-Eo-EnomoNê- : x Rº CHs “(h);* Rê CHs cHs (); em que x denota um ponto de fixação a Z' e y denota um ponto de fixação a Z?; R' e R? são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquila opcionalmente substitu- ída, Ce-10 arila opcionalmente substituída e heteroarila de 5 a 14 mem- bros opcionalmente substituída; ou R' e R? são unidos com os átomos de carbono aos quais estão fixados para formar um anel de C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída, um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcio- nalmente substituído, uma Cç-10 arila opcionalmente substituída ou uma heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída; ou R' e R? são unidos para formar um sistema de anel ribose; em que um dentre R' ou R? é substituído direta ou indire- tamente através de um ligante (L) por uma porção de anticorpo seleci- onada a partir de um anticorpo, um fragmento de anticorpo e um grupo selecionado a partir de: anticorpo-L-(CH2)4- e anticorpo-L-(porção alifática)-; R7 e Rº são independentemente selecionados a partir de H e C1.6 alquila; e E é uma porção clivável.
[0039] Em algumas modalidades, este documento fornece um composto de Fórmula (Ill): Ri & A-E e o porção de anticorpo -O—P—2Z'!—MA-2Z9-RA—D O (1), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
a porção de anticorpo é selecionada a partir de:
anticorpo-L-(CH2)4- e anticorpo-L-(porção alifática)-;
cada porção alifática é selecionada a partir de um polímero, RP, e um grupo selecionado a partir de:
polímero-L-(CH2)m- e polímero-L-(CH2-CH2-O),-(CH2)m-;
RP é selecionado a partir de C1.6 alguila opcionalmente substituída, C1-3 alquil-O-(CH2-CH2-O),-(CH2)m- opcionalmente substi- tuído e C3.7 cicloalquila opcionalmente substituída;
cada L é independentemente um grupo de ligação;
cada m e p são, independentemente, um número inteiro de 1a10;
D é um resíduo de um composto citotóxico ou quimiotera- pêutico;
Rº é selecionado a partir de um -polímero- e um grupo se- lecionado a partir de:
-polímero-L-(CH2)m- e -polímero-L-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m-;
Z' é selecionado a partir de O, S e N(RN);
Z? é selecionado a partir de O e N(RN) ou Zº está ausente;
Aé O ou N, em que, quando A é O, então, Rº está ausente;
RN é selecionado a partir de H e C1.6 alquila opcionalmente substituída;
Rº é selecionado a partir de H e C1.6 alguila ou
R? e R!, junto com A e o átomo de carbono ao qual R' está fixado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcio- nalmente substituído; ou
R? e R?, junto com A, o átomo de carbono ao qual R' está fixado e o átomo de carbono ao qual R? está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros opcionalmente substituído;
Mº é um grupo autoimolativo que tem qualquer uma das fórmulas (a) a (i):
x o ROO RR o rcHreHo-t—t A pço-e — El $ x (a) Rº “(b); Rº "(o s O. O o COR, porem wo “e: xm SHs o xy CH 9 e faso : [Wu (g); 7 7 A Dead Non A e od N-cteena-N-E- : x Rº CHs “(h);* Rê CHs cHs (); em que x denota um ponto de fixação a Z' e y denota um ponto de fi- xação a Zº; R' e R? são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquila opcionalmente substitu- ída, Ce-10 arila opcionalmente substituída e heteroarila de 5 a 14 mem- bros opcionalmente substituída; ou R' e R? são unidos com os átomos de carbono aos quais estão fixados para formar um anel de C3-; cicloalquila opcionalmente substituída, um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcio- nalmente substituído, uma Cç-10 arila opcionalmente substituída ou uma heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída; ou R' e R? são unidos para formar um sistema de anel ribo- se; R? e Rô são independentemente selecionados a partir de H e C1.6 alquila; e E é uma porção clivável.
[0040] Em algumas modalidades, este documento fornece um composto de Fórmula (IV):
R? nº
ATE e q porção: alifática-O —P— z!—MA-Z9-RA—D º (N), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: a porção alifática é selecionada a partir de um polímero, Rº, e um grupo selecionado a partir de: -polímero-L-(CH2)m- e -polímero-L-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m-; RP é selecionado a partir de C1.6 alquileno opcionalmente substituído, C1.3 alquileno-O-(CH2-CH2-O),-(CH2)m- opcionalmente substituído, e C3-7 cicloalquileno opcionalmente substituído; cada L é independentemente um grupo de ligação; cada m e p são, independentemente, um número inteiro de 1a10; D é um resíduo de um composto citotóxico ou quimiotera- pêutico; Rº é selecionado a partir de um -polímero- e um grupo se- lecionado a partir de: -polímero-L-(CH2)m- e -polímero-L-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m-; Z' é selecionado a partir de O, S e N(RY); Z? é selecionado a partir de O e N(RN) ou Zº está ausente; Aé O ou N, em que, quando A é O, então, Rº está ausente; RN é selecionado a partir de H e C1.6 alquila opcionalmente substituída; Rº é selecionado a partir de H e C1.6 alguila ou R? e R!, junto com A e o átomo de carbono ao qual R' está fixado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcio- nalmente substituído; ou
Rº e R?, junto com A, o átomo de carbono ao qual R' está fixado e o átomo de carbono ao qual R? está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros opcionalmente substituído; Mº é um grupo autoimolativo que tem qualquer uma das fórmulas (a) a (i): x o R o PR o CH CHO-t—i A preo-ê- $ El: . Mar SR BR YO: CURA poa Es “e: xa x e : (Cena: da ” O; "(g)
RR NS Q EX! Dono EX( ) E—o-C-NeHoH NC! x RÊ CHs (h);* Rê CHs Hs SD (); em que x denota um ponto de fixação a Z' e y denota um ponto de fi- xação a Z?; R' e R? são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquila opcionalmente substitu- ída, Ce-10 arila opcionalmente substituída e heteroarila de 5 a 14 mem- bros opcionalmente substituída; ou R' e R? são unidos com os átomos de carbono aos quais estão fixados para formar um anel de C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída, um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcio- nalmente substituído, uma Cç-10 arila opcionalmente substituída ou uma heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída; ou R' e R? são unidos para formar um sistema de anel ribo- se; em que um dentre R' ou R? é substituído direta ou indire- tamente através de um ligante (L) por uma porção de anticorpo seleci-
onada a partir de um anticorpo, um fragmento de anticorpo e um grupo selecionado a partir de: anticorpo-L-(CH2)4- e anticorpo-L-(porção alifática)-; R7 e Rº são independentemente selecionados a partir de H e C1.6 alquila; e E é uma porção clivável.
[0041] Em algumas modalidades da Fórmula (1) ou Fórmula (Ill), a porção de anticorpo compreende um anticorpo ou um fragmento de anticorpo ou entidade de alvejamento similarmente reativa. Essas en- tidades alvo incluem, por exemplo, lectinas, inibidores de enzimas da superfície celular, pequenos polipeptídeos de peso molecular com afi- nidades específicas e aptâmeros (por exemplo, L. Gold, SELEX: How it happened, where it will go, J] Mol Evol 81:140 a 143, 2015). Deve-se notar que todas essas entidades alvo são reativas sob condições quií- micas semelhantes e usando reações químicas semelhantes às des- critas no presente documento (G. T. Hermanson, Bioconjugation Tech- niques, 3º Edição, Academic Press, Nova lorque, 20013). Em algumas modalidades, a porção de anticorpo compreende um anticorpo (por exemplo, um anticorpo monoclonal) ou um fragmento de anticorpo conforme descrito no presente documento, em que o anticorpo ou fra- gmento de anticorpo é ligado por meio de um grupo de ligação con- forme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, a porção de anticorpo é selecionada a partir de anticorpo-L-(CH2)4- e an- ticorpo-L-(porção alifática)-. Em algumas modalidades, mais do que uma porção de anticorpo está presente. Em tais modalidades, as por- ções químicas de anticorpo podem ser iguais ou diferentes.
[0042] Em algumas modalidades de Fórmula (1) ou Fórmula (III), em que a porção alifática é selecionada a partir de um polímero, Rº, e um grupo de fórmula -polímero-L-(CH2)m-; Rº é selecionado a partir de C1-6 alquileno opcionalmente substituído e C3.7 cicloalquileno opcional-
mente substituído; e m é um número inteiro de 1 a 10.
[0043] Em algumas modalidades de Fórmula (II) ou Fórmula (IV), em que a porção alifática é selecionada a partir de um polímero, Rº, e um grupo de fórmula -polímero-L-(CH2)m-; Rº é selecionado a partir de C1-6 alquila opcionalmente substituída e C3.7 cicloalquila opcionalmente substituída; e m é um número inteiro de 1 a 10.
[0044] Em algumas modalidades de Fórmula (1) ou Fórmula (Ill), a porção alifática é um grupo de fórmula: -polímero-L-(CH2)m-. Em algu- mas modalidades de Fórmula (II) ou Fórmula (IV), a porção alifática é um grupo de fórmula: -polímero-L-(CH2)m-. Em alguns aspectos dessas modalidades, L é um grupo de ligação que compreende um heteroci- cloaquileno ou um heteroarileno. Por exemplo, L é um grupo de liga- ção que compreende uma succinimida ou um triazol. Em algumas mo- dalidades, L é um grupo de ligação de qualquer uma das seguintes fórmulas: o O e ; em que $ indica um ponto de fixação do grupo de ligação ao polímero ou ao grupo CH».
[0045] Em algumas modalidades, o grupo de ligação L é um grupo de ligação de fórmulas: AgNa A em que $ indica um ponto de fixação do grupo de ligação ao polímero ou ao grupo CH».
[0046] Em algumas modalidades, o grupo de ligação L é um grupo de ligação de fórmulas:
y de EA, em que :$ indica um ponto de fixação do grupo de ligação ao polímero ou o grupo CH>, e z é um número inteiro de 1 a 10 (por exemplo, 4).
[0047] Em algumas modalidades de Fórmula (1) ou de Fórmula (Ill), a porção de anticorpo é qualquer uma das seguintes fórmulas: o o + Live Live! anticorpo —S' NS : anticorpo —S' $ o : o Le anticorpo —-NH + anticorpo NN anticorpo $(CHom-S $ : ZM “e tem” - |
[0048] Em algumas modalidades, L compreende um grupo de fór- mula (L'):
NE c & (L1), em que o anel C é selecionado a partir do grupo que consiste em uma Cg-16 cicloalquila opcionalmente substituída e uma heterocicloalquila de 8 a 16 membros opcionalmente substituída, e : indica um ponto de fi- xação do grupo de ligação ao polímero ou ao grupo CH2. Em alguns aspectos dessas modalidades, a Cg-16 cicloalquila é uma ciclo-octenila que é opcionalmente fundida com 1 ou 2 anéis de benzeno. Em outros aspectos dessas modalidades, a Cg-16 cicloalquila é uma ciclo-octenila que é opcionalmente substituída por1, 2 ou 3 substituintes seleciona- dos a partir de halogênio, OH, C1-3 alquila e C1-3 alcóxi. Por exemplo, a ciclo-octenila pode ser substituída por 1 ou 2 flúor, ou com 1 ou 2 gru- pos metóxi.
[0049] Em algumas modalidades, o grupo de fórmula (L') é seleci-
onado a partir de qualquer uma das seguintes fórmulas:
NA
NON no NÃ nn N — — — Nº vn ADADO À e de x ; e :
[0050] Em algumas modalidades, o grupo de fórmula (L') é Eno nn
ALF NF
F F ou :
[0051] Em algumas modalidades, o grupo de fórmula (L') é
NÃ ENA ou :
[0052] Em algumas modalidades, o grupo de fórmula (L') é no NÃ -º
[0053] Em algumas modalidades, o grupo de fórmula (L') é nd NA no NÃ do ou & .
[0054] Em algumas modalidades, o grupo de fórmula (L') é
NANA no NÃ ou ! .
[0055] Em algumas modalidades, o grupo de fórmula (L') é
N No NÃ no NÃ O) O) Meo N MeOTN, de Ou 4“ .
[0056] Em algumas modalidades, m é um número inteiro de 1 a 6. Por exemplo, m é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Em algumas modalidades, m é um número inteiro de 1 a 4.
[0057] Em algumas modalidades, p é um número inteiro de 1 a 6. Por exemplo, p é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Em algumas modalidades, p é um número inteiro de 1 a 4.
[0058] Em algumas modalidades, q é um número inteiro de 1 a 6. Por exemplo, q é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Em algumas modalidades, q é um número inteiro de 1 a 4.
[0059] Em algumas modalidades de Fórmula (Il) ou de Fórmula (IV), a porção alifática é qualquer uma das seguintes fórmulas: o Loans N=ê (CHA , — = 2!m polímero —S > — polímero Jes/ : o tí el N=N polimero —| polímero AND — d S (CH) A e (CHa)m— em que o polímero compreende um polímero que é opcionalmente substituído por uma porção de anticorpo (por exemplo, uma porção de anticorpo selecionada a partir de: anticorpo-L-(CH2)- e anticorpo-L-
(porção alifática)-).
[0060] Em algumas modalidades de Fórmula (Il) ou de Fórmula (IV), a porção alifática é qualquer uma das seguintes fórmulas: nn (CHa)M + polímero n Ns “polímero — q YCHo)IM + em que o polímero compreende um polímero que é opcionalmente substituído por uma porção de anticorpo (por exemplo, uma porção de anticorpo selecionada a partir de: anticorpo-L-(CH2)- e anticorpo-L- (porção alifática)-).
[0061] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (ll), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), a porção alifática é um polímero (por exem- plo, qualquer um dos polímeros descritos no presente documento). O polímero na porção alifática pode ser selecionado a partir de po- lifalquileno glicol), poli(polietil oxietilado), poli(álcool olefínico), poli(1)- hidroxiácido), poli(álcool vinílico), polioxazolina ou copolímeros dos mesmos. Em algumas modalidades, o polímero na porção alifática é polietileno glicol. Por exemplo, a porção alifática compreende um polie- tileno glicol linear ou um polietileno glicol ramificado.
[0062] Em algumas modalidades de Fórmula (1) ou Fórmula (Ill), a porção alifática é RP. Em algumas modalidades, Rº é um C1.6 alquileno opcionalmente substituído ou um C3-7 cicloalquileno opcionalmente substituído. Por exemplo, RP é selecionado a partir de C1.6 alquileno, C1-.6 cianoalquileno e C3-7 cicloalquileno. Quando a porção alifática é RP, a porção alifática pode ser C1.6 alquileno (por exemplo, metileno, etileno, propileno, isopropileno, n-butileno, isobutileno, terc-butileno, amileno ou hexileno). Por exemplo, a porção alifática pode ser ciano- etileno. Em algumas modalidades, a porção alifática pode ser 2- cianoetileno. Em outras modalidades, a porção alifática é C3.; cicloal-
quileno (por exemplo, ciclopropileno, ciclobutileno, ciclopentileno ou ciclo-hexileno). Em algumas modalidades, Rº é isopropileno. Em al- gumas modalidades, RF é cianoetileno.
[0063] Em algumas modalidades de Fórmula (11) ou Fórmula (IV), a porção alifática é RP. Em algumas modalidades, Rº é uma C1.6 alquila opcionalmente substituída ou uma C3,7 cicloalguila opcionalmente substituída. Por exemplo, RP é selecionado a partir de C1-.6 alquila, C1-6 cianoalquila e Ca.7 cicloalquila. Quando a porção alifática é RP, a por- ção alifática pode ser C1-.6 alquila (por exemplo, metila, etila, propila, isopropila, n-butila, isobutila, terc-butila, amila ou hexila). Por exemplo, a porção alifática pode ser cianoetila. Em algumas modalidades, a porção alifática pode ser 2-cianoetila. Em outras modalidades, a por- ção alifática é C3.7 cicloalquila (por exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclo-hexila). Em algumas modalidades, Rº é isopropila. Em algumas modalidades, Rº é cianoetila.
[0064] Em algumas modalidades da Fórmula (II) ou Fórmula (IV), Rº é selecionado a partir do grupo de qualquer uma das seguintes fórmulas: exe alquiteno — oo! 6 slquieno — mas eus alquileno — n ; Cr1.6 alquita ; o ; HaN 1.6 alauleno À Pages seo o - HCEC-Cy;g alquileno À : ; , Qres alquileno — N3-C1.6 alquileno e o em que o alquileno compreende um alquileno que é opcionalmente substituído por uma porção de anticorpo (por exemplo, uma porção de anticorpo selecionada a partir de: anticorpo-L-(CH2)- e anticorpo-L- (porção alifática)-). Em algumas modalidades, os grupos Rº descritos acima contêm um polímero no lugar da porção de alquileno, em que o polímero compreende um polímero que é opcionalmente substituído por uma porção de anticorpo (por exemplo, uma porção de anticorpo selecionada a partir de: anticorpo-L-(CH2),4- e anticorpo-L-(porção alifá- tica)-).
[0065] Em algumas modalidades da Fórmula (II) ou Fórmula (IV), RP é selecionado a partir do grupo de qualquer uma das seguintes fórmulas: Oo Qes alquileno-—* HC=C-Cyg alquileno — —N3-Cy.6 alquileno e o em que o alquileno compreende um alquileno que é opcionalmente substituído por uma porção de anticorpo (por exemplo, uma porção de anticorpo selecionada a partir de: anticorpo-L-(CH2)- e anticorpo-L- (porção alifática)-). Em algumas modalidades, os grupos Rº descritos acima contêm um polímero no lugar da porção de alquileno, em que o polímero compreende um polímero que é opcionalmente substituído por uma porção de anticorpo (por exemplo, uma porção de anticorpo selecionada a partir de: anticorpo-L-(CH2),4- e anticorpo-L-(porção alifá- tica)-).
[0066] Em algumas modalidades de Fórmula (Il) ou de Fórmula (IV), RP é uma C1-6 alquila substituída de fórmula: o Qro o ; Na (CHÁ ou Hese-(CH), À, em que p é um número inteiro de 1 a 6. Por exemplo, p é 1,2,3,4,5 ou 6. Em algumas modalidades, p é um número inteiro de 1 a 4.
[0067] Em algumas modalidades da Fórmula (II) ou Fórmula (IV), Rº é selecionado a partir de qualquer uma das seguintes fórmulas:
A O C16 alauileno C1.6 alquileno À e C16 aluieno
[0068] Em algumas modalidades da Fórmula (11), RP é selecionado a partir de qualquer uma das seguintes fórmulas: A) = OMe MeO N (CXLowe C1.6 alquileno ú C1.6 alquileno —n | Ox : C41-6 alquileno sn C1.6 alquileno sn e :
[0069] Em algumas modalidades de Fórmula (II) ou Fórmula (IV), Ré
H Y H C16 alquileno —
[0070] Em algumas modalidades de Fórmula (II) ou Fórmula (IV), RP é (CH,À, em que p é um número inteiro de 1 a 6.
[0071] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (ll), Fór- mula (Il!) ou Fórmula (IV), Zº é selecionado a partir de O, S e N(RY). Em algumas modalidades, Z* é O. Em algumas modalidades, Z* é NH.
Em algumas modalidades, Z* é N(C1.6 alquila). Em algumas modalida- des, Z' é S.
[0072] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (ll), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), Zº é selecionado a partir de O e N(RN). Em algumas modalidades, Z? está ausente. Em algumas modalidades, Zzº é O. Em algumas modalidades, Z? é NH. Em algumas modalidades, Zzº é N(C1-6 alquila).
[0073] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (ll), Fór- mula (Ill) ou de fórmula geral (IV), Z2' é O e Zº é NH. Em algumas mo- dalidades, Z' é NH e Zº é O. Em algumas modalidades, 2º é O e 2º está ausente. Em algumas modalidades, Z' é O e 2? é O. Em algumas modalidades, Z* é NH e Zº é NH. Em algumas modalidades, Z' é NH e Z? está ausente. Em algumas modalidades, 2º é S e Z? é O. Em algu- mas modalidades, Z' é S e Zº é NH. Em algumas modalidades, Z' é S e Zº está ausente.
[0074] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (ll), Fór- mula (Ill), ou Fórmula (IV), Mê é um dirradical caracterizado por, por si só ou junto com Z', mediante ataque nucleofílico no átomo de fósforo na Fórmula (1), Fórmula (11), Fórmula (Ill), ou Fórmula (IV), Mº (junta- mente com Zº?-D ou Z?-R*-D) cria um grupo de saída melhor que qual- quer uma das porções químicas de anticorpo (Fórmula (1) ou Fórmula (I11)) ou porções químicas alifáticas (Fórmula (11) ou Fórmula (IV)) des- critas no presente documento. Por exemplo, conforme mostrado no Esquema 2 abaixo, mediante ataque nucleofílico no átomo de fósforo pelo grupo hidroxila 2' da unidade ribose, tanto 2-hidróxi propionato quanto o fragmento de anticorpo criam grupos de saída igualmente satisfatórios e a reação de substituição nucleofílica é não seletiva.
Esquema 2 ' o o "e a "co E. H à e H : 2 De : Hi-anticorpo Hi -anticorpo HW A anticormo
[0075] Em contraste, em algumas modalidades de Fórmula (1), por exemplo, conforme descrito no presente documento, um grupo que compreende o fragmento —Z*-M*- é um grupo de saída melhor do que a porção de anticorpo, de modo que, sob condições similares em comparação ao Esquema 2, mediante ataque nucleofílico no átomo de fósforo pelo grupo hidroxila 2' da unidade ribose, o fragmento que con- tém a porção de anticorpo permanece covalentemente fixado ao áto- mo de fósforo, enquanto o grupo que compreende o fragmento —Z'- M?- é seletivamente clivado.
[0076] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (ll), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), MA é um dirradical, caracterizado por, por si só ou junto com Z', mediante ataque nucleofílico no átomo de fósforo na Fórmula (1), Fórmula (11), Fórmula (Ill) ou Fórmula (IV), Mê (junta- mente com Z?-D ou Z?-R*-D) cria um grupo de saída melhor de do que a porção de anticorpo (Fórmula (1) ou Fórmula (IIl)) ou a porção alifáti- ca (Fórmula (II) ou Fórmula (IV)). Em algumas modalidades, o ácido conjugado da porção Z!-M*-Z?-D, representado pela fórmula HZ'-M?- Z?-D, tem um valor de pKa mais baixo do que o ácido conjugado da porção de anticorpo ou a porção alifática que é conjugada com um composto de Fórmula (1) ou Fórmula (Il). Em algumas modalidades, o grupo HZ!-MA-ZºD tem um valor de pKa mais baixo do que um polieti- leno glicol ou um álcool. Em alguns aspectos dessas modalidades, Z' é oxigênio e M* compreende uma porção aromática (por exemplo, Mº compreende um fenileno). Em algumas modalidades, Z' é nitrogênio e Mº compreende uma porção aromática (por exemplo, Mº compreende um fenileno), e a base conjugada do composto da fórmula HZ!-MA-Z?- D é um grupo de saída melhor do que qualquer uma das porções quií- micas de anticorpo (Fórmula (1)) ou porções químicas alifáticas (Fór- mula (11)), descritas no presente documento devido à deslocalização do par de elétrons único no átomo de nitrogênio de Z* no anel aromáti- co de MA.
[0077] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (|), Fór- mula (11), Fórmula (Ill) ou Fórmula (IV) compreende uma funcionalida- de imolativa única. Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (11), Fórmula (Ill) ou Fórmula (IV), Mº é um grupo autoimolativo. Em algumas modalidades, Mº é qualquer um dos grupos autoimolativos descritos, por exemplo, em Alouane, A. et al., "Self-immolative spa- cers: kinetic aspects, structure-property relationships, and applica- tions", Angew. Chem. Int. Ed., 2015, 54, 7.492 a 7.509. Em outras mo- dalidades, Mº é qualquer um dos grupos autoimolativos descritos, por exemplo, em Kolakowski, R. et al., "The Methylene Alkoxy Carbamate Self-Immolative Unit: Utilization for the Targeted Delivery of Alcohol- Containing Payloads with Antibody—Drug Conjugates", Angew. Chem. Int. Ed., 2016, 55 (28), 7.948 a 7.951.
[0078] Em algumas modalidades, Mº é um grupo autoimolativo que tem qualquer uma das fórmulas (a) a (i): x o Ro o fºR o rcHreHo-t—t A peo-e-t El $ " "E RR "(by R “(o s O 0 o CURA, poa Ras “e:
x — CH o x Ss o Cem (Cf etmanno! & (6; (9) 7 7 A NES NA A E o-ênonen ne: x Rê CHs (h);* Rê CHs Hs () em que x denota um ponto de fixação a Z' e y indica um ponto de fixa- ção a Zº.
[0079] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (ll), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), o grupo autoimolativo é caracterizado pela clivagem da aglutinação P-Z' gerar uma cascata de reações de de- composição (por exemplo, uma cascata de hidrólise, conforme descrito no presente documento), levando finalmente a:
1. liberação da base conjugada do composto HZº*-D quan- do Z? está presente; ou
2. liberação da base conjugada do composto HO-(C=O)-D quando Z? está ausente.
[0080] Em algumas modalidades, a base conjugada do composto de fórmula HZº-D é uma porção de fórmula “Z%-D. Em algumas moda- lidades, a base conjugada do composto de fórmula HO-(C=O)-D é uma porção de fórmula “O-(C=O)-D.
[0081] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (ll), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), Zº está presente (por exemplo, Zº é O ou NH) e Mº é um grupo autoimolativo. Em algumas modalidades, o gru- po autoimolativo é caracterizada pela clivagem da aglutinação P-Z' gerar uma cascata de reações de decomposição levando finalmente à liberação da base conjugada do composto HZ?-D.
[0082] Em alguns aspectos dessas modalidades, a clivagem da aglutinação P-Z' resulta na formação de Z'=M, CO»; e a base conju- gada de composto HZ*-D, em que Mº é um fragmento de um grupo autoimolativo (por exemplo, grupo autoimolativo de qualquer uma das fórmulas (a) a (g)) que não tem uma porção de fórmula: o obs
[0083] Em um exemplo, Mº é um grupo autoimolativo de fórmula (b), e M* é um fragmento de fórmula:
OE x Rê y, em que x denota um ponto de fixação a Z' e y indica um ponto de fixa- ção a Zº.
[0084] Em um exemplo, Mº é um grupo autoimolativo de fórmula (d), e Mº é um fragmento de fórmula: Pá — RO, em que x denota um ponto de fixação a Z' e y indica um ponto de fixa- ção a Zº.
[0085] Em algumas modalidades, no composto Z'=Mº, a segunda aglutinação entre Z* e M* conecta Z'º e qualquer um dos átomos do grupo a MY. Por exemplo, quando Mº é um grupo autoimolativo de fórmula (a), a segunda aglutinação entre Z* e Mº conecta Z' e o átomo de carbono de fórmula (a) que estava na posição B a Z' antes da rea- ção de decomposição: o z trz—cH—ecHrotd pp —> ho Am * CO + AD ZEN) :
[0086] Em outro exemplo do composto Z'=Mº, quando Mº é um grupo autoimolativo de fórmula (b-1), a segunda aglutinação entre Z'* e Mº conecta Z' e o átomo de carbono em Mº ao qual Z' está fixado e as aglutinações restantes em Mº são deslocalizadas:
o ZEN) .
[0087] Em outros aspectos das modalidades acima, a clivagem da aglutinação P-Z' resulta na formação da base conjugada do composto HZ?-D e um composto de fórmula:
à Ná
[0088] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (ll), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), Zº está ausente, e M é um grupo autoimo- lativo. Em algumas modalidades, o grupo autoimolativo é caracteriza- da pela clivagem da aglutinação P-Z' gerar uma cascata de reações de decomposição levando finalmente à liberação da base conjugada do composto HO-(C=O)-D. Em alguns aspectos dessas modalidades, a clivagem da aglutinação P-Z' resulta na formação de Z'=Mº (con- forme descrito no presente documento) e a base conjugada do com- posto HO-(O=C)-D.
[0089] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (ll), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), Z' é S e MA é um grupo autoimolativo de fórmula (a): o CH CHO-t—i * (a), em que x denota um ponto de fixação a Z' e y indica um ponto de fixa- ção a Zº.
[0090] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (ll), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), o grupo autoimolativo de fórmula (b) tem a fórmula (b-1):
o
U EQ pronmo-ct * Y(b-1), em que x denota um ponto de fixação a Z' e y indica um ponto de fixa- ção a Zº.
[0091] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (ll), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), o grupo autoimolativo de fórmula (b) tem a fórmula (b-2):
FR Of " &%& "(2 em que x denota um ponto de fixação a Z' e y indica um ponto de fixa- ção a Zº.
[0092] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (ll), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), o grupo autoimolativo de fórmula (c) tem a fórmula (c-1): x Sao! W" CHTOnC—t Y (01), em que x denota um ponto de fixação a Z' e y indica um ponto de fixa- ção a Zº.
[0093] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (ll), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), o grupo autoimolativo de fórmula (d) tem a fórmula (d-1): O o “COXA... F SeHa—OnC— y (d-1), em que x denota um ponto de fixação a Z' e y indica um ponto de fixa- ção a Zº.
[0094] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (ll), Fór- mula (II!) ou Fórmula (IV), 2º é O ou NH e MA é um grupo autoimolativo de qualquer um de fórmula (b) a (i). Em algumas modalidades, 2º é O ou NH, Zº? está ausente, e Mº é um grupo autoimolativo de qualquer um de fórmula (b) a (i).
[0095] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (ll), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), Z' é O ou NH, Zº está ausente, e MA é um grupo autoimolativo de fórmula (b), em que R? e Rô são, cada um, C1-6 alquila ou uma fórmula (b-2).
[0096] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (ll), Fór- mula (Il!) ou Fórmula (IV), 2! é 0, 72? é O e MA é um grupo autoimolati- vo de fórmula (h-1): o $X( Deramo-C-N-eHa—t ' em "(1 em que x denota um ponto de fixação a Z' e y indica um ponto de fixa- ção a Zº.
[0097] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (ll), Fór- mula (Il!) ou Fórmula (IV), 2! é O, 2? é O e Hº é um grupo autoimolati- vo de fórmula (i-1): o o A )eHZO-O-N-CHZ-CHo-N-C— À x CHs Hs (1), em que x denota um ponto de fixação a Z' e y indica um ponto de fixa- ção a Zº.
[0098] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (ll), Fór- mula (Il!) ou Fórmula (IV), 2! é NH, Z? é O e MA é um grupo autoimola- tivo de fórmula (h-1). Em algumas modalidades, em que Z* é NH, Zº é O e Mº é um grupo autoimolativo de fórmula (i-1).
[0099] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (ll), Fór- mula (Il!) ou Fórmula (IV), M é um dirradical estável. Por exemplo, o dirradical estável não é um grupo autoimolativo (por exemplo, median- te ataque nucleofílico no átomo de fósforo na Fórmula (A), o dirradical estável não leva à clivagem da aglutinação Z'-Mº ou da aglutinação
MA*-Z?). Em algumas modalidades, o dirradical estável é caracterizado por a clivagem da aglutinação P-Z' gerar uma base conjugada do composto da fórmula HZ!-MA-Z?-D, a qual é estável e não é submetida à reação de decomposição.
[00100] Em algumas modalidades, Mº é um dirradical estável que tem qualquer uma das fórmulas estruturais (j) a (1): Odi Ot: Ot: . “o “ "(ge Oo em que x denota um ponto de fixação a Z' e y indica um ponto de fixa- ção a Zº. Em alguns aspectos dessas modalidades, Z* e Z? são, inde- pendentemente, O ou NH (por exemplo, Z*º é O e Zº é NH). Em algu- mas modalidades, quando Mº é um dirradical estável de fórmula (j), 2º é O. Em algumas modalidades, quando Mº é um dirradical estável de fórmula (|), Z' é NH.
[00101] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (II!) ou Fórmula (IV), Mê é um dirradical estável que tem a fórmula (m): Tv
DES ' "mm, em que x denota um ponto de fixação a Z' e y indica um ponto de fixa- ção a Zº. Em alguns aspectos dessas modalidades, Z* e Zº são, inde- pendentemente, O ou NH (por exemplo, Z*º é O e Zº é NH). Em algu- mas modalidades, quando Mº é um dirradical estável de fórmula (m), Z' é OeR' e Rº são, cada um, hidrogênio.
[00102] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), R' e Rº são independentemente seleciona- dos a partir de H, C1.6 alguila, amino, (C1-.6 alquil)amino, di(C1-6 al- quil)amino, acilamino e um grupo amino protegido (por exemplo, o grupo protetor para o grupo amino pode ser selecionado a partir de qualquer um dos grupos protetores amino descritos, por exemplo, em
Greene e Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3º Ed., John Wiley & Sons, Nova lorque, N.Y., 1999). Em algumas modalidades, R e R$ são selecionados independentemente a partir de H, metila, amino e acilamino. Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fórmula (Ill) ou Fórmula (IV), R' e Rº são independentemente selecio- nados a partir de H e C1.6 alguila. Em algumas modalidades, R' e Rô são independentemente selecionados a partir de H e metila.
[00103] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (II), Fór- mula (Il!) ou Fórmula (IV), R' é selecionado a partir de C1-.6 alquila, Ca-7 cicloalquila, amino, acilamino e um grupo amino protegido, e Rô é H. Em algumas modalidades, Rº é selecionado a partir de C1-.6 alquila, Ca. 7 cCicloalquila, amino, acilamino e um grupo amino protegido, e R' é H.
[00104] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (Il!) ou Fórmula (IV), Rê é H e R7 é C1.6 alquila (por exemplo, me- tila, etila, propila, isopropila ou terc-butila).. Em algumas modalidades, R' é He Rê seja C1.6 alquila (por exemplo, metila, etila, propila, isopro- pila ou terc-butila). Em algumas modalidades, R? e Rº são ambos H. Em algumas modalidades, R' e R$ são ambos C1.6 alquila. Em outro exemplo, R' e R$ são ambos metila. Em outro exemplo, R' é metila e R$ é etila. Em algumas modalidades, R' e R$ são ambos C3-7 cicloal- quila (por exemplo, ciclopropila ou ciclobutila).
[00105] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (Il!) ou Fórmula (IV), R' e Rô são cada um independentemente H ou acilamino (por exemplo, acetilamino, propionilamino ou butiramino). Em algumas modalidades, R' é amino ou acetilamino. Em algumas modalidades, Rº é amino ou acetilamino. Em algumas modalidades, R” é acetilamino e Rº é H. Em algumas modalidades, R' é H. Em algumas modalidades, Rê é H.
[00106] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (II), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), Mº é um grupo autoimolativo de qualquer uma das fórmulas (b), (c) ou (d), e R' e R$ são ambos C1.6 alquila (por exemplo, metila, etila, propila, isopropila ou terc-butila).. Em algumas modalidades, Mº é um dirradical estável de fórmula (k) ou fórmula (|), e R7 e R$ são independentemente selecionados a partir de H ou acilami- no (por exemplo, acetilamino, propionilamino ou butiramino).
[00107] Em algumas modalidades da Fórmula (1), Fórmula (II), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), o dirradical estável de fórmula (k) tem a fór- mula (k-1): o
NÓ Here * "(k1), em que x denota um ponto de fixação a Z' e y indica um ponto de fixa- ção a Zº.
[00108] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (II), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), R' e R? são selecionados independente- mente a partir do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquila opcio- nalmente substituída, Ce-10 arila opcionalmente substituída e heteroari- la de 5 a 14 membros opcionalmente substituída. Em algumas modali- dades, R' e R? são, cada um, hidrogênio. Em algumas modalidades, R' e R? formam juntos uma aglutinação química (isto é, uma aglutina- ção dupla carbono-carbono é formado entre o carbono ao qual R' está fixado e o átomo de carbono ao qual R? está ligado).
[00109] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (II), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), R' e R? são unidos com os átomos de car- bono aos quais estão fixados para formar um anel de C3.7 cicloalquila opcionalmente substituída, um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcionalmente substituído, uma Cç-10 arila opcionalmente substituída ou uma heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída. Em algumas modalidades, R' e R2? em formam juntos um anel de C3-7 cicloalquila (por exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopen-
tila e ciclo-hexila). Em algumas modalidades, R' e R2 em formam jun- tos um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros (por exemplo, pir- rolidina, piperidina, tetra-hidrofurano e tetra-hidropirano).
[00110] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), R' e R? são unidos para formar um sistema de anel de ribose (por exemplo, adenosina, guanosina, 5-metiluridina, uridina, 5-metilcitidina, citidina, inosina, xantosina e wybutosina, cada um dos quais é substituído conforme descrito no presente documento). Em algumas modalidades, o ribonucleosídeo é uridina. Em algumas modalidades, R' e R? formam juntos um sistema de anel de ribose de fórmula: Nucleobase Ww-0o7 O a b ; em que a denota um ponto de fixação a O e b denota um ponto de fi- xação a A, ou a denota um ponto de fixação a A e b denota um ponto de fixação a O, e em que W é selecionado a partir do grupo que con- siste em H, um grupo acila e um grupo de proteção (por exemplo, um grupo de proteção diferente de acila). Sem estar vinculado a nenhuma teoria, acredita-se que um nucleotídeo à base de lixofuranose tenha reatividade similar quando comparado aos análogos de ribofuranose descritos no presente documento.
[00111] Da mesma forma, em um exemplo, é possível supor que o 5'-OH possa estar envolvido no ataque intramolecular a um fosfotriés- ter, mesmo que ele esteja localizado a 3 carbonos de distância. Isso é mais exigente que a interação à distância típica de 2 carbonos descrita no presente documento, mas esse lixoisômero pode facilitar a reação revertendo-se a orientação do 3' OH. Desse modo, os nucleosídeos de 2'-desoxi,3'-xila são uma alternativa adequada a um arcabouço de ri- bonucleotídeo ribose descrito acima para uso na unidade clivável.
[00112] Em algumas modalidades, o ribonucleosídeo é uridina. Em algumas modalidades, R' e R? formam juntos um sistema de anel de ribose de fórmula: W o nucleobase a b ; em que a denota um ponto de fixação a O e b denota um ponto de fi- xação a A, ou a denota um ponto de fixação a A e b denota um ponto de fixação a O, e em que W é selecionado a partir do grupo que con- siste em H e uma porção de anticorpo conforme descrito no presente documento. Sem estar vinculado a nenhuma teoria, acredita-se que um nucleotídeo à base de lixofuranose tenha reatividade similar quan- do comparado aos análogos de ribofuranose descritos no presente do- cumento.
[00113] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (II), Fór- mula (III) ou Fórmula (IV), a nucleobase é selecionada a partir do gru- po que consiste em adenina, citosina, guanina, timina, uracila e outras substâncias naturais e nucleobases não naturais.
[00114] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (III) ou Fórmula (IV), a nucleobase é uracila. Em algumas moda- lidades, a nucleobase é selecionada a partir do grupo que consiste em adenina, citosina, guanina, timina e uracila. Em algumas modalidades, a nucleobase é selecionada a partir do grupo que consiste em 5- metilcitosina, pseudouridina, di-hidrouridina, inosina, 7-metilguanosina, hipoxantina e xantina.
[00115] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), a nucleobase compreende um grupo fluo- rescente (por exemplo, um fluoróforo tradicional). Em algumas modali- dades, a nucleobase é um análogo fluorescente de adenina, citosina, guanina, timina ou uracila.
[00116] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (II), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), R' e R? formam juntos um sistema de anel de ribose de qualquer uma das seguintes fórmulas: o o HoN CE ço O No nO NON wo o w-om o Ww-o7 o a b ; a b ; a b ; NH? o
O EA
NOO NONÔUNHA Ww-o1 o Woo a b ; ou a b ;
[00117] em que a denota um ponto de fixação a O e b denota um ponto de fixação a A, ou a denota um ponto de fixação a A e b denota um ponto de fixação a O, e em que W é selecionado a partir do grupo que consiste em H, um grupo acila e um grupo de proteção (por exemplo, um grupo de proteção diferente de acila), ou uma porção de anticorpo conforme descrito no presente documento.
[00118] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (II), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), R' e R? formam juntos um sistema de anel de ribose de qualquer uma das seguintes fórmulas: em À Paetteno ate não CG, W-o7 o w-o1 o a b ; a “b ;
Ô — porção química alvo (porção química de anticorpo) w-o. no O. = b ; OU o ot
QE SS
NO W-0m o.
[00119] em que a denota um ponto de fixação a O e b denota um ponto de fixação a A, ou a denota um ponto de fixação a A e b denota um ponto de fixação a O, e em que W é selecionado a partir do grupo que consiste em H, um grupo acila, um grupo de proteção (por exem- plo, um grupo de proteção diferente de acila), ou uma porção de anti- corpo conforme descrito no presente documento.
[00120] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), R' e R? formam juntos um sistema de anel de ribose da seguinte fórmulas: q rupo fluorescente OX ip
NO WO o.
[00121] em que a denota um ponto de fixação a O e b denota um ponto de fixação a A, ou a denota um ponto de fixação a A e b denota um ponto de fixação a O, e em que W é selecionado a partir do grupo que consiste em H, um grupo acila, um grupo de proteção (por exem- plo, um grupo de proteção diferente de acila), e uma porção de anti- corpo conforme descrito no presente documento.
[00122] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), R' e R? formam juntos um sistema de anel de ribose que contém um grupo amino exocíclico usado como um pon- to de fixação a um fluoróforo ou uma molécula de ligação conectada a um grupo fluorescente ou uma porção de anticorpo, conforme exempli- ficado na seguinte fórmula: —eupo fluorescente
HN O.
[00123] Em alguns aspectos das modalidades acima, a porção alifá- tica é RP. Por exemplo, Rº é C1-.6 alquila (por exemplo, etila ou isopro- pila). Em outro exemplo, Rº é cianoetila. Em outros aspectos das mo- dalidades acima, a porção alifática é um polímero (por exemplo, polie- tileno glicol). Em outros aspectos de modalidades acima, a porção ali- fática é um grupo de fórmula: polímero-L-(CHa)m-.
[00124] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), W é um grupo de proteção. Por exemplo, W pode ser um grupo de proteção hidroxila, como éter metoximetílico (MOM), éter benziloximetílico (BOM), éter benzílico, éter p- metoxibenzílico (PMB), éter tritílico, éter silílico (por exemplo, TMS, TIPS) ou qualquer um dos grupos protetores hidroxila descritos, por exemplo, em P. G. M. Wuts and T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, 4º Ed., Wiley & Sons, Inc., Nova lorque (2006), que é incorporado ao presente documento a título de referência, em sua totalidade. Em algumas modalidades, W é um grupo de proteção de álcool selecionado a partir do grupo que consiste em t-butildimetilsílila, dietilisopropilsilila, trifenilsilila, formiato, metoximetilcarbonato, t butilcarbonato, — 9-fluorenilmetilcarbonato, — N-fenilcarbamato, —4,4”- dimetoxitritila, monometoxitritila, tritila e pixila.
[00125] Em algumas modalidades, W é hidrogênio.
[00126] Em algumas modalidades, W é um grupo acila.
[00127] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), W é qualquer um dos grupos acila descritos aqui (por exemplo, W é um grupo acila selecionado a partir de formila, acetila, propionila, acrilila, pivaloila e benzoíla). Em algumas modalida- des, W é pivaloila, carboxilato de adamantoila ou benzoíla. Em algu- mas modalidades, W e E são os mesmos (por exemplo, W e E são, cada um, um grupo acila). Em algumas modalidades, W é um grupo acila e E é um grupo clivável diferente de um grupo acila. Em algumas modalidades, um grupo acila é hidrolisável na presença de qualquer uma das várias enzimas hidrolase (por exemplo, enzimas intracelula- res de hidrolase) existentes in vivo. Em algumas modalidades, W é uma porção de anticorpo conforme descrito no presente documento. Por exemplo, uma porção de anticorpo é ligada direta ou indiretamente através de um ligante (L) ao O ligado à porção de ribose. Em algumas dessas modalidades, a porção de anticorpo é selecionada a partir de um anticorpo, um fragmento de anticorpo, um grupo, um grupo que mostra afinidade com um receptor presente na superfície da célula tu- moral (por exemplo, ciclopeptídeos, biciclopeptídeos, aptâmeros ou uma combinação dos mesmos), etc. e um grupo selecionado a partir de:
[00128] —anticorpo-L-(CH>2)4- e anticorpo-L-(porção alifática)-,
[00129] em que L, porção alifática, anticorpo e q são conforme des- crito no presente documento.
[00130] Em algumas modalidades de Fórmula (II), um de Rº ou Rº é substituído direta ou indiretamente através de um ligante (L) por uma porção de anticorpo selecionado a partir de um anticorpo, um fragmen- to de anticorpo, um grupo que mostra a afinidade a um receptor pre- sente na superfície da célula tumoral (por exemplo, ciclopeptídeos, bi- ciclopeptídeos, aptâmeros ou uma combinação dos mesmos), etc.
(consulte, por exemplo, O. J. Finn, Human Tumor Antigens Yesterday, Today, and Tomorrow, Cancer Immunological Res., 5: 2017), e um grupo selecionado a partir de:
[00131] —anticorpo-L-(CH>2)4- e anticorpo-L-(porção alifática)-;
[00132] em que oR! ou R? que é substituído pela unidade de anti- corpo não é H. Em algumas modalidades, R' é substituído por uma porção de anticorpo. Em algumas modalidades, R? é substituído por uma porção de anticorpo. Em algumas modalidades, quando R' é substituído por uma porção de anticorpo, conforme descrito no presen- te documento, a porção de anticorpo é ligada através da posição 5' do nucleosídeo. Em algumas modalidades, quando R? é substituído por uma porção de anticorpo, conforme descrito no presente documento, o anticorpo é ligado através da posição N3 da uracila. Em algumas mo- dalidades, a porção de anticorpo é ligada às posições de R' ou R? através de um ligante (L), conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, a porção de anticorpo é ligada às posições R' ou R? através de um ligante (L-(CH2)m), conforme descrito no pre- sente documento.
[00133] Em algumas modalidades da Fórmula (1), Fórmula (II), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), A é selecionado a partir de O e N(RY). Em algumas modalidades, A é O. Em algumas modalidades, A é N(RY). Em algumas modalidades, A é NH. Em algumas modalidades, A é N(C1.6 alquila). Em algumas modalidades, A é N(CH3). Em algumas modalidades, A é N(CH2CHs).
[00134] Em algumas modalidades, quando A é N(RY), RN e Rj, jun- to com A e o átomo de carbono ao qual R' está fixado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcionalmente substituí- do. Em alguns aspectos dessas modalidades, o anel heterocíclico ali- fático de 4 a 7 membros é selecionado a partir do grupo que consiste em:
Qi Sa Ea ED Gir Qto dos me o A E A A A o P O 2? fo) “ j Go - yo NOS Q y Ce W ns Qs y ad he de de ah de de
MON NX XX dO Ps Q, A Qu, Nos, Q y N Ty de dx me mo o o xo,
[00135] em que x denota um ponto de fixação a E, e Y denota um ponto de fixação ao átomo de carbono ao qual R' está fixado.
[00136] Em algumas modalidades, RN e R?, junto com A, o átomo de carbono ao qual R' está fixado e o átomo de carbono ao qual R? está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros opcionalmente substituído.
[00137] Em algumas modalidades, R? é selecionado a partir de H e C1-6 alquila ou
[00138] RºeR!, junto com Ae o átomo de carbono ao qual R' está fixado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcio- nalmente substituído; ou
[00139] RºeR?, junto com A, o átomo de carbono ao qual R' está fixado e o átomo de carbono ao qual R? está fixado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros opcionalmente substituído.
[00140] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), Aé N. Em outras modalidades, A é O.
[00141] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (II!) ou Fórmula (IV), A é NRº.
[00142] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (Il!) ou Fórmula (IV), quando A é NRº, Rº e R', junto com A e O átomo de carbono ao qual R' está fixado, formam um anel heterocícli- co alifático de 4 a 7 membros opcionalmente substituído. Em alguns aspectos dessas modalidades, o anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros é selecionado a partir do grupo que consiste em: Qin Qiy E DD; Qi Oy das r O AT AA 1 2 ; P O 2? fo) “ j ns De WO QL, y Qu Ca + Qu y ad he de de ah de de
MON NX XX dO
A OQ, CA Qu, Ls Qu y N 7y de dx me mo o o xo,
[00143] em que x denotaum ponto de fixação a E, e Y denota um ponto de fixação ao átomo de carbono ao qual R' está fixado.
[00144] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), quando A é NR3, Rº e R?, junto com A, o átomo de carbono ao qual R' é fixado, e o átomo de carbono ao qual R? está ligado, formam um anel heterocíclico opcionalmente substituí- do de 4 a 8 membros alifático.
GRUPOS E CLIVÁVEIS
[00145] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), E é uma porção clivável que, após a cliva- gem, libera um grupo AH livre, em que H é hidrogênio. A porção clivá- vel E pode incluir, por exemplo:
[00146] Uma porção E clivável por qualquer uma das seguintes en- zimas (por exemplo, enzimas intracelulares):
ESTERASES
[00147] Todos os ésteres, carbonatos e metilóxi ésteres podem ser hidrolisados por uma enzima esterase. A reatividade desses grupos funcionais na reação enzimática pode ser modulada pela seleção de um componente de ácido carboxílico do grupo funcional éster que con- tém grupos doadores de elétrons diferentes ou tornando o éster esteri- camente impedido. Tanto o componente ácido quanto o componente álcool do éster podem ser estericamente impedidos.
REDUTASES
[00148] Grupos metil azido, azido, carbamato de 3-(2-nitrofenil) propila, éteres [2,2-dimetil-2-(2-nitrofenil)acetilJoxikmetílicos (DAM), carbamato de 2-nitrofenil-metila e carbamatos de 2-oximetilenoantra- quinona (MAQC) são exemplos de porções químicas cliváveis E, que podem ser clivadas por uma enzima redutase. Por exemplo, uma por- ção E clivável por uma redutase é um grupo metil azido ou a porção E pode ter as seguintes fórmulas: o o
OO O : GLICOSIDASES
[00149] Se A-E representar um heteroátomo substituído por um re- síduo de açúcar, formando uma aglutinação glicosídica com o restante do composto de Fórmula (1), Fórmula (11), Fórmula (111) ou Fórmula (IV), uma ação de uma glicosidase in vivo pode clivar E e liberar o A-H livre.
[00150] Em algumas modalidades, E é clivável por uma enzima (por exemplo, uma enzima intracelular) selecionada a partir do grupo que consiste em uma esterase, uma peptidase específica ou inespecífica, uma redutase, uma oxidase, uma glicosidase, uma hidrolase, uma gli- cosil transferase e uma transaminase. Em algumas modalidades, E é clivável por uma enzima (por exemplo, uma enzima intracelular) sele- cionada a partir do grupo que consiste em uma esterase, uma redu- tase, uma oxidase, um glicosídeo, uma hidrolase e glicosil transferase.
[00151] Consultar, por exemplo, a Publicação nº U.S. 2018/0360974, que é incorporada ao presente documento a título de referência, em sua totalidade.
[00152] 2) Porções químicas cliváveis por ácidos.
[00153] “Qualquer grupo protetor de álcool clivável por ácido pode ser usado como porção clivável E. Por exemplo, acetais, orto-ésteres e éteres substituídos por fenila podem ser usados. Exemplos de tais porções químicas cliváveis incluem grupos de proteção, como THF, MTHP ou MDMP, e também acetais mais lábeis, como metóxi isopropil acetal ou metóxi ciclo-hexenil acetal. Outros exemplos de porções químicas cliváveis E desse tipo que são clivadas em um ambiente áci- do incluem grupos dimetoxitritila, trimetoxitritila e pixila. Consultar, por exemplo, a Publicação nº U.S. 2018/0360974, que é incorporada ao presente documento a título de referência, em sua totalidade.
[00154] 3) Glutationa
[00155] Em algumas modalidades, E contém um grupo ditio, clivá- vel por um tiol biogênico. Em algumas modalidades de Fórmula (!), Fórmula (II), Fórmula (Ill) ou Fórmula (IV), a porção E é clivável por uma glutationa.
[00156] Em algumas modalidades, E é um grupo de qualquer uma das seguintes fórmulas: o O-RF to OS AX TÚ) e S ;
[00157] em que RFº é selecionado a partir do grupo que consiste em C1-6 alquila e benzila. Em algumas modalidades, RE é C1.6 alquila. Em algumas modalidades, RE é benzila.
[00158] Em algumas modalidades, A é O, e E é um grupo de fórmu- la:
2S OS x
[00159] Em alguns aspectos dessas modalidades, AÉ NH, e E é um grupo de fórmula: 2S OS x
[00160] Em algumas modalidades, A é O, e E é um grupo de fórmu- la: o O-RF -S So.
[00161] Em alguns aspectos dessas modalidades, AÉ NH, e E é um grupo de fórmula: o O-RF -S So.
[00162] 4) Peptidase não específica
[00163] Em algumas modalidades, E contém um peptídeo curto co- nectado por meio de uma aglutinação amido com o grupo A (por exemplo, quando A = NH). Em algumas modalidades, essa aglutina- ção amido é clivada por proteases presentes em uma célula tumoral, conforme demonstrado em diversas publicações, por exemplo, D. Neri et al. Bioconjugate Chem. 2017, (28), 1.826 a 1.833 e em "List of Enzyme Inhibitors Inhibitors and Substrates" emitida por Peptide Insti- tute Inc. Japan. A hidrólise enzimática da aglutinação amido pode libe- rar um grupo amino vicinal livre, que pode, então, atacar o grupo fosfo- triéster conforme descrito no presente documento.
[00164] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (II), Fór-
mula (Ill) ou Fórmula (IV), E é clivável por uma enzima selecionada do grupo que consiste em uma esterase, uma redutase, uma oxidase e uma glicosidase ou glicosil transferase.
[00165] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), E é clivável por uma redutase.
[00166] Em alguns aspectos dessas modalidades, AÉ O e E é um grupo de fórmula: o o
ACOO O :
[00167] Em alguns aspectos dessas modalidades, AL NHe E é um grupo de fórmula:
A Na
[00168] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (II), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), E é clivável por uma glutationa. Em alguns aspectos dessas modalidades, A é NH. Em outros aspectos dessas modalidades, E é uma porção de fórmula: 2-8 OS Dé
[00169] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (II), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), E é clivável por uma glutationa. Em alguns aspectos dessas modalidades, A é NH. Em outros aspectos dessas modalidades, E é uma porção de fórmula: O O-RF -S So.
[00170] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (II), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), E é clivável por uma glutationa. Em alguns aspectos dessas modalidades, A é O. Em outros aspectos dessas mo- dalidades, E é uma porção de fórmula: O O-RF
O so
[00171] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), E é clivável por uma glicosidase. Em alguns aspectos dessas modalidades, E é um resíduo de açúcar (por exem- plo, glicose, galactose ou manose).
[00172] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), uma porção E é fixada a A com o uso de um grupo de fórmula (LP): a a Ant, | (E,
[00173] em que a denotaum ponto de fixação a A e b denota um ponto de fixação a E. Em alguns aspectos dessas modalidades, A é O. Em outros aspectos dessas modalidades, após a clivagem da porção E, o grupo de fórmula LF é submetido à reação de decomposição para render CO, e um composto de fórmula: o e
[00174] liberando, desse modo, um grupo A” livre, que pode, então, ser submetido a um ataque nucleofílico no átomo de fósforo no com- posto de Fórmula (1), Fórmula (11), Fórmula (Ill) ou Fórmula (IV). O gru- po A” também pode ser protonado para render o grupo AH antes do ataque nucleofílico.
[00175] Em algumas modalidades, E é uma porção clivável de qualquer uma das seguintes fórmulas (E-1) a (E-12) e (E-37):
ns Oo nO — a O so: oO = (E), (E-2), CN (E-3), O A PL OOo Aga P ES & rd . 1 Do Ú O (E4), O CHs (E-5),
PF 9 o AT g nO o x | ) >. NU (E-6), nO CN (E7), OO A CH3 O, Oo o % ? ; 4 À, Sen O O (E-8), = O * (E-9), 7 (E-10),
Q o XT) Q A ON À Fo Ô (E-11), * CN (E12),e 0,0 o e Po O "ns 1 é (E-37);
[00176] em que qualquer um dos anéis de fenila nas fórmulas (E-1) a (E-12) e (E-37) é opcionalmente substituído por 1, 2, 3, 4 ou 5 substi- tuintes selecionados a partir de C1-10 alquila, C1-10 haloalquila, C1-10 alcóxi, OH, NO>, CN, halogênio e acila.
[00177] Em algumas modalidades, E é uma porção clivável de qualquer uma das seguintes fórmulas (E-1) a (E-12).
[00178] Em algumas modalidades, qualquer um dos anéis fenila nas fórmulas (E-1) a (E-12) é opcionalmente substituído por 1, 2, 3 ou 4 substituintes selecionados a partir de F, CI, CN, acetila, NO? e CF3.
[00179] Em algumas modalidades, E é um grupo de qualquer uma das seguintes fórmulas (E-13) a (E-36):
H H H » o. ECO toe o O (E-13); oC (E-14); OC —
H H o AO (E15); oO (E16) oO (E-17);
H H Pies Mio, oo (E18; oO W (E19); d ma? “ No NR O NH> oo — (E-20), OO (E-21); : ” Nose - Rn oo (E-22);y OO "(E-23);
H H
NONO ANO oo (E-M) 00º (E-25);
H
O oo W (E-26); H H o O LO: oo (E27), oO WWW (E28) H H — Tee Ts N Nr oo (E-29), * O O (E-30);
H H Fio TO oo (E-31)) * 0 O (E-32);
É NO No) o o (E-34);
Fio Fier o > (E35)e q O (ESS),
[00180] emqueR é Ci alquila.
[00181] Em algumas modalidades, qualquer uma das porções clivá- veis (E-1) a (E-37) pode ser fixada a A com o uso de uma porção de fórmula (LF).
[00182] Em algumas modalidades, E é um anel heterocíclico alifáti- co de 4 a 7 membros. Por exemplo, o anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em pirrolidina, piperidina, tetra-hidrofurano e tetra-hidropirano.
[00183] Em algumas modalidades, E é N-Ala-Val-Ac.
COMPOSTOS CITOTÓXICOS OU QUIMIOTERAPÊUTICOS
[00184] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (II), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), D é um resíduo de qualquer um dos com- postos citotóxicos ou quimioterápicos descritos no presente documen- to. Os compostos citotóxicos ou quimioterapêuticos podem ser uma proteína terapêutica ou um fármaco de molécula pequena (por exem- plo, baixo peso molecular), conforme descrito no presente documento. O resíduo de compostos citotóxicos ou quimioterapêuticos na Fórmula (1), Fórmula (11), Fórmula (Ill) ou Fórmula (IV) pode ser mostrado como "D" ou "Fármaco", cujos símbolos são usados no presente documento de forma intercambiável.
[00185] Em um exemplo, antes de ser conjugado para formar um composto de Fórmula (1) ou Fórmula (II) conforme descrito no presente documento, o composto citotóxico ou quimioterapêutico pode ser des- crito como um composto de fórmula HZºD, em que HZ*?- representa um grupo amino ou hidroxila reativo do composto citotóxico ou quimiotera- pêutico (quando Z? é nitrogênio ou de oxigênio, respectivamente), e D é um resíduo do composto citotóxico ou quimioterapêutico (por exem- plo, um fármaco de molécula pequena). Por exemplo, quando o com-
posto citotóxico ou quimioterapêutico é um fármaco de molécula pe- quena que contém um grupo amino reativo, como o lisinoprila: o
OH
O ie, O.
E (Lisinoprila, HZ3D),
[00186] Dé um resíduo do composto citotóxico ou quimioterapêuti- co que tem a seguinte fórmula: o
OH o e O. “o (D de lisinoprila); e 273 é -NH-.
[00187] Em algumas modalidades de Fórmula (1) ou Fórmula (II), quando o composto citotóxico ou quimioterapêutico é uma proteína, HZ?- pode representar um grupo amino ou um grupo hidroxila da ca- deia lateral de um aminoácido na cadeia principal de proteína (por exemplo, lisina) e D representa o restante da cadeia principal de prote- ína. Por exemplo, HZ?- pode ser um grupo e-amino de uma lisina. Em outro exemplo, HZ?- pode ser um grupo OH- como em um resíduo de serina.
[00188] Em algumas modalidades de um composto de Fórmula (|) ou Fórmula (II), quando Zº? está ausente, antes de ser conjugado para formar o composto de Fórmula (1) ou Fórmula (Il), o composto citotóxi- co ou quimioterapêutico pode ser descrito como um composto de fór- mula HO-(C=O)-D. Neste exemplo, a porção de fórmula:
o oe x y,
[00189] no grupo autoimolativo Mº de qualquer uma das fórmulas (a) a (g) representa a parte do fármaco, após o fármaco ser conjugado para formar o composto de Fórmula (1) ou Fórmula (II). Nessa porção, x representa um ponto de fixação a Mº (conforme descrito no presente documento) do grupo autoimolativo ou ao H- do fármaco HO-(C=O)-D antes da conjugação, e y representa um ponto de fixação a D.
[00190] Por exemplo, se D foi um fármaco de molécula pequena que contém um grupo carboxila como o ibuprofeno: o TO, (ibuprofeno; HZ2-(C=O)-D),
[00191] D seria um resíduo do fármaco biologicamente ativo que tem a seguinte fórmula: TO, (D de ibuprofeno), e HZ2-(C=0O)- é HO-(C=0O)-.
[00192] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), o composto citotóxico ou quimioterapêutico é um oligopeptídeo, substância peptidomimética, polipeptídeo, uma proteína ou um oligonucleotídeo. Em algumas modalidades, o compos- to citotóxico ou quimioterapêutico é uma proteína terapêutica, como um anticorpo, um hormônio, uma proteína transmembranar, um fator de crescimento, uma enzima ou uma proteína estrutural.
[00193] Em algumas modalidades, a proteína terapêutica é qual- quer uma das proteínas terapêuticas descritas em, por exemplo, B.
Leader et al., Nature Reviews 2008, 7, 21 a 39, cuja revelação é incor- porada ao presente documento a título de referência, em sua totalida- de.
[00194] Em algumas modalidades, o anticorpo terapêutico é útil no tratamento de câncer. Em algumas modalidades, o anticorpo terapêu- tico útil no tratamento de câncer é abagovomab, adecatumumab, afu- tuzumab, alacizu pegol, pentetato de altumomab, amatuximab, anatu- momab mafenatox, apolizumab, arcitumomab, bavituximab, bectu- momab, belimumab, bevacizumab, bivatuzumab mertansina, blinatu- momab, brentuximab vedotina, cantuzumab mertansina, cantuzumab ravtansina, capromab pendetídeo, cetuximab, citatuzumab bogatox, cixutumumab, clivatuzumab tetraxetano, dacetuzumab, demcizumab, detumomab, drozitumab, ecromeximab, eculizumab, elotuzumab, ensi- tuximab, epratuzumab, etaracizumab, farletuzumab, figitumumab, flan- votumab, galiximab, gemtuzumab ozogamicina, girentuximab, ibritu- momab tiuxetano, imgatuzumab, ipilimumab, labetuzumab, lexatumu- mab, lorvotuzumab mertansina, nimotuzumab, ofatumumab, oregovo- mab, panitumumab, pemtumomab, pertuzumab, tacatuzumab tetra- xetano, tositumomab, trastuzumab, totumumab ou zalutumumab.
[00195] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), o composto citotóxico ou quimioterapêutico é um fármaco de moléculas pequenas. Os fármacos de moléculas pe- quenas são compostos de baixo peso molecular (tipicamente cerca de
2.000 daltons ou menos). Em algumas modalidades, o peso molecular da molécula de fármaco está na faixa de 200 a cerca de 2.000, de cer- ca de 200 a cerca de 1.800, de cerca de 200 a cerca de 1.600, de cer- ca de 200 a cerca de 1.400, de cerca de 200 a cerca de 1.200, de cer- ca de 200 a cerca de 1.000, de cerca de 200 a cerca de 800, de cerca de 200 a cerca de 600 daltons, de cerca de 300 a cerca de 2.000, de cerca de 300 a cerca de 1.800, de cerca de 300 a cerca de 1.600, de cerca de 300 a cerca de 1.400, de cerca de 300 a cerca de 1.200, de cerca de 300 a cerca de 1.000, de cerca de 300 a cerca de 800, e/ou de cerca de 300 a cerca de 600 daltons.
[00196] Em algumas modalidades, o fármaco de moléculas peque-
nas compreende um grupo amino (por exemplo, quando Zº é NH) ou um grupo carboxila (por exemplo, quando Zº está ausente).
[00197] Exemplos de agentes quimioterapêuticos adequados inclu- em qualquer um de: abarelix, aldesleucina, alitretinoína, alopurinol, al- tretamina, anastrozol, asparaginase, azacitidina, bexaroteno, bleomici- na, bortezomib, bussulfano, calusterona, capecitabina, carboplatina, carmustina, clorambucila, cisplatina, cladribina, clofarabina, ciclofos- famida, citarabina, dacarbazina, dactinomicina, dalteparina, dasatinib, daunorrubicina, decitabina, denileucina, dexrazoxano, docetaxel, do- xorrubicina, dromostanolona, epirrubicina, erlotinib, estramustina, eto- posídeo, exemestano, filgrastim, floxuridina, fludarabina, fluorouracila, fulvestrant, gefitinib, gemcitabina, acetato de goserelina, acetato de histrelina, idarrubicina, ifosfamida, imatinib, irinotecano, ditosilato de lapatinib, lenalidomídeo, letrozol, leucovorina, leuprolida, levamisol, lomustina, mecloretamina, megestrol, melfalano, mercaptopurina, me- totrexato, metoxisaleno, mitomicina C, mitotano, mitoxantrona, nandro- lona, nelarabina, nofetumomab, oxaliplatina, paclitaxel, pamidronato, pegaspargase, pegfilgrastim, pemetrexed, pentostatina, pipobromano, plicamicina, procarbazina, quinacrina, rasburicase, ruxolitinib, sorafe- nib, estreptozocina, sunitinib, tamoxifeno, temozolomida, teniposídeo, testolactona, talidomida, tioguanina, tiotepa, topotecano, toremifeno, tretinoína, mostarda de uracila, valrubicina, vinblastina, vincristina, vi- norelbinea, vorinostat e zoledronato ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
[00198] Em algumas modalidades, mais de um agente citotóxico é acoplado a um único ligante clivável (por exemplo, dois agentes citotó- xicos, três agentes citotóxicos, quatro agentes citotóxicos, etc.). Em algumas modalidades, mais do que agente citotóxico é acoplado a uma única porção de anticorpo (por exemplo, dois agentes citotóxicos, três agentes citotóxicos, quatro agentes citotóxicos, quatro agentes citotóxicos, cinco agentes citotóxicos, etc.).
ANTICORPOS DE ALVEJAMENTO
[00199] Um anticorpo de alvejamento ou um fragmento de anticorpo conforme descrito no presente documento pode ser qualquer anticorpo ou fragmento de anticorpo que é direcionado a uma enzima ou recep- tor de superfície (por exemplo, uma enzima ou receptor de superfície direcionado na terapia de anticorpo monoclonal). Conforme usado no presente documento, o termo "anticorpo" se refere a proteínas que se ligam a um antígeno específico. "Anticorpos" incluem, mas sem limita- ção, imunoglobulinas, incluindo anticorpos humanizados policlonais, monoclonais, quiméricos, de cadeia única, anticorpos humanizados, fragmentos Fab, fragmentos F(ab')2 e bibliotecas de expressão Fab.
[00200] Conforme usado no presente documento, o termo "anticor- po" se refere a uma glicoproteína evocada em um animal por um imu- nogênio (antígeno). Um anticorpo demonstra especificidade ao imuno- gênio, ou, mais especificamente, a um ou mais epítopos contidos no imunogênio. O anticorpo nativo compreende pelo menos duas cadeias polipeptídicas leves e pelo menos duas cadeias polipeptídicas pesa- das. Cada uma das cadeias polipeptídicas pesadas e leves contêm na porção amino terminal da cadeia polipeptídica uma região variável (isto é, Vu e V1, respectivamente), que contém um domínio de ligação que interage com o antígeno. Cada uma das cadeias polipeptídicas pesa- das e leves também compreende uma região constante das cadeias polipeptídicas (geralmente a porção carbóxi-terminal) que pode mediar a ligação da imunoglobulina a tecidos ou fatores hospedeiros que in- fluenciam várias células do sistema imunológico, algumas células fa- gocíticas e o primeiro componente (C1qg) do sistema de complemento clássico. A região constante das cadeias leves é denominada "região CL" e a região constante da cadeia pesada é chamada de "região CH". A região constante da cadeia pesada compreende uma região CH1,
uma região CH2 e uma região CH3. Uma porção da cadeia pesada entre as regiões CH1 e CH2 é referida como região de dobradiça (isto é, a "região H"). A região constante da cadeia pesada da forma de su- perfície de célula de um anticorpo compreende adicionalmente uma região espaçadora-transmembranar (M1) e uma região citoplasmática (M2) do terminal carbóxi da membrana. A forma secretada de um anti- corpo geralmente não tem as regiões M1 e M2.
[00201] “Conforme usado no presente documento, o termo "antíge- no" se refere a qualquer molécula ou grupo molecular que é reconhe- cido por pelo menos um anticorpo. Por definição, um antígeno deve conter pelo menos um epítopo (isto é, a unidade bioquímica específica com capacidade para ser reconhecida pelo anticorpo). O termo "imu- nogênio" se refere a qualquer molécula, composto ou agregado que induz a produção de anticorpos. Por definição, um imunogênio deve conter pelo menos um epítopo.
[00202] Em algumas modalidades, um anticorpo de alvejamento pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em 20-(74)-(74) (milatuzumab; veltuzumab), 3F8, 74-(20)-(20) (milatuzumab; veltuzu- mab), 8H9, A33, AB-16B5, abagovomab, abciximab, abituzumab, ABP 494 (biossimilar de cetuximab), abrilumab, ABT-700, ABT-806, acto- xumab, adalimumab, ADC-1013, adecatumumab, afelimomab, AFM13, afutuzumab, AGEN1884, alemtuzumab, alirocumab, altumomab, ama- tuximab, AMG 228, anifrolumab, anrucinzumab, APN311, apolizumab, APXOOSM, aselizumab, atezolizumab, atinumab, atlizumab (também denominado tocilizumab), atorolimumab, Avelumab, B-701, bapi- neuzumab, basiliximab, bavituximab, bectumomab, begelomab, be- limumab, benralizumab, bertilimumab, bevacizumab, bevacizumab (CBT124), BEVZ92 (biossimilar de bevacizumab), bezlotoxumab, BGB-A317, BHQ880, BI-505, bimagrumab, bimecizumab, BIW-8962, blinatumomab, blosozumab, BMS-936559, BMS-986012, BMS-986016,
BMS-986178, BNC101, bococizumab, BrevaRex, briacinumab, broda- lumab, brolucizumab, brontictuzumab, canacinumab, carlumab, caro- tuximab (TRC105), catumaxomab, CC-90002, cedelizumab, cemipli- mab (REGN2810), cetuximab, CGEN-15001T, CGEN-15022, CGEN- 15029 (PVRIG), CGEN-15049, CGEN-15052, CGEN-15092, cixutu- mumab, claudiximab (IMAB262), clazakizumab, clazakizumab (ALD518), clenoliximab, CM-24, codrituzumab, conatumumab, conci- zumab, cR6261, crenezumab, DA-3111 (biossimilar de trastuzumab), dacetuzumab, daclizumab, dalotuzumab, daratumumab, Daratumumab Enhanze (daratumumab), dectrekumab, demcizumab, denosumab, de- tumomab, DI-B4, dinutuximab (Ch 14.18), diridavumab, DKN-01, drozi- tumab, DS-1123, DS-8895, duligotumab, dupilumab, durvalumab, du- sigitumab, ecromeximab, eculizumab, edobacomab, edrecolomab, efa- lizumab, efungumab, eldelumab, elgemtumab, elotuzumab, elsili- momab, emactuzumab, emibetuzumab, enavatuzumab, enoblituzu- mab, enokizumab, enoticumab, ensituximab, epratuzumab, erlizumab, ertumaxomab, etaracizumab, etrolizumab, evinacumab, evolocumab, exbivirumab, faralimomab, farletuzumab, fasinumab, FBTAOS5, felvizu- mab, fezakinumab, ficlatuzumab, figitumumab, firivumab, flanvotumab, fletikumab, flotetuzumab, fontolizumab, foralumab, foravirumab, FPA144, fresolimumab, fulranumab, futuximab, galiximab, ganitumab, gantenerumab, Gatipotuzumab (PankoMab-GEXG), gavilimomab, geri- limzumab, gevokizumab, girentuximab, GNR-006, GNR-011, golimu- mab, gomiliximab, GSK2849330, GSK3174998, GSK3359609, gusel- cumab, Hu14.18K322A MAb, hu3S193, Hu8F4, HuL2G7, HuMab-5B1, ibalizumab, icrucumab, idarucizumab, IGN523, IMAB362, imalumab, IMC-CS4, IMC-D11, imgatuzumab, IMMU-114, Anticorpo Antagonista ImmuTune IMP701, INCAGN1876, inclacumab, INCSHR1210, inebili- zumab (MEDI-551), infliximab, inolimomab, intetumumab, IPH4102, ipilimumab, iratumumab, isatuximab, Istiratumab, itolizumab, ixecizu-
mab, JNJ-56022473, JNJ-61610588, keliximab, KTN3379, Labetuzu- mab, LAG525, LAG525, lambrolizumab, lebrikizumab, lemalesomab, lenzilumab, lerdelimumab, leucotuximab, lexatumumab, libivirumab, ligelizumab, lintuzumab, lirilumab, lodelcizumab, lokivetmab, lucatu- mumab, lumiliximab, lumretuzumab, LY3164530, mapatumumab, mar- getuximab, maslimomab, matuzumab, mavrilimumab, MB311, MCS- 110, MEDIO562, MEDI-0639, MEDIO680, MEDI-3617, MEDI-565, ME- DI6469, mepolizumab, metelimumab, MGB453, MGDO007, MGDOOS9, MGDO011, milatuzumab, minretumomab, mitumomab, MK-4166, MM- 111, mogamulizumab, MOR202, MOR208, MORAb-O066, morolimu- mab, motavizumab, muromonab-CD3, namilumab, narnatumab, nata- lizumab, nebacumab, necitumumab, nemolizumab, nerelimomab, nes- vacumab, nimotuzumab, nivolumab, NIZ985, obiltoxaximab, obinu- tuzumab, ocaratuzumab, ocrelizumab, odulimomab, ofatumumab, ola- ratumab, olokizumab, omalizumab, OMP-131R10, OMP-305B83, onar- tuzumab, ontuxizumab, opicinumab, oregovomab, orticumab, oteli- xizumab, otlertuzumab, oxelumab, ozanezumab, ozoralizumab, pagi- baximab, palivizumab, panitumumab, pankomab, panobacumab, pa- nobacumab, parsatuzumab, pascolizumab, pasotuxizumab, pateclizu- mab, patritumab, PAT-SC1, PAT-SM6, PDROO01, pembrolizumab, pem- tumomab, perakizumab, pertuzumab, pexelizumab, PF-06671008, PF- 06801591, pidilizumab, pintumomab, placulumab, ponezumab, PRO0131921, priliximab, pritoxaximab, pritumumab, PRO 140, quilizu- mab, racotumomab, rafivirumab, ralpancizumab, ramucirumab, raxiba- cumab, refanezumab, regavirumab, REGN1400, reslizumab, RG7356, RG7386, RG7802 (CEA TCB), RG7876, RG7888, rilotumumab, rinu- cumab, rituximab, RO7009789, robatumumab, roledumab, romosozu- mab, rontalizumab, rovelizumab, ruplizumab, samalizumab, sarilumab, SCT200, SCT400, SEA-CD40, secukinumab, seribantumab, setoxaxi- mab, sevacizumab (APX003, SIM-BDO801), sevirumab, sibrotuzumab,
sifalimumab, siltuximab, simtuzumab, siplizumab, sirukumab, sola- nezumab, solitomab, sonepcizumab, sontuzumab, stamulumab, su- vizumab, SYMOO04 (futuximab e modotuximab), TABO8, tabalumab, ta- docizumab, talizumab, tanezumab, Tanibirumab, tarextumab, TB-403, tefibazumab, tenatumomab, teneliximab, teplizumab, teprotumumab, tesidolumab, tetulomab, TG-1101, ticilimumab, tigatuzumab, tildra- Kkizumab, TNX-650, tocilizumab, toralizumab, tosatoxumab, tositu- momab, tovetumab, tralokinumab, trastuzumab, TRBS02, TRBSO7, tregalizumab, tremelimumab, trevogrumab, TRPH 011, TRX518, TSR- 042, TT1I-200.7, tuvirumab, U3-1565, U3-1784, ublituximab, ulocuplu- mab, urelumab, urtoxazumab, ustekinumab, utomilumab (PF- 05082566), vantictumab, vanucizumab, vapaliximab, varlilumab, vateli- zumab, vedolizumab, veltuzumab, vepalimomab, vesencumab, visili- zumab, volociximab, YYB-101, zalutumumab, zanolimumab, zatuximab e ziralimumab.
[00203] Em algumas modalidades, o anticorpo de alvejamento pode ser selecionado a partir da porção de anticorpo de um ADC seleciona- do a partir do grupo que consiste em ABBV-085, ABBV-221, ABBV- 838, AbGnN-107, ADCT-301, ADCT-402, AGS1I5E, AGS-16C3F, AGS62P1, AGS67E, AMG 172, AMG 224, AMG 595, anetumab ra- vtansina, ARX788, ASG-15ME, AVE9633, BAY 1129980 (Lupartumab amadotina), BAY1187982 (Aprutumab ixadotina), BIIBO15, bivatuzu- mab mertansina, BMS-936561, BMS-986148, brentuximab vedotina, cantuzumab mertansina, cantuzumab ravtansina, imunoconjugado de CBR96-doxorrubicina, CDX-014, CMB-401, CMD-193, coltuximab ra- vtansina, Cotara (derlotuximab biotina de iodo 1-131), denintuzumab mafodotina, “Depatuxizumab mafodotina,y derlotuximab biotina, DMOTA4039A, dorlimomab aritox, DS-8201a, DSTA4637S, enfortumab vedotina, Conjugado Anticorpo-Fármaco FGFR2, gemtuzumab o020- gamicina, glembatumumab vedotina, GSK2857916, HKT288, HuMax-
AXL-ADC, IMGN388, IMGN632, IMGN779, indatuximab ravtansina, indusatumab vedotina, inotuzumab ozogamicina, Labetuzumab Govi- tecan, laprituximab emtansina, lifastuzumab vedotina, LOP 628, lorvo- tuzumab mertansina, LY3076226, MEDI4276, MEDI547, Milatuzumab doxorrubicina, — Milatuzumab-SN-38, — mirvetuximab — soravtansina, MLN2704, MM-302, moxetumomab pasudotox, nacolomab tafenatox, Naratuximab emtansina (IMGN529), OX002 (MEN1309), PCAO62, PF-06263507, PF-06647020, PF-06647263, PF-06650808, PF-06664178, pinatuzumab vedotina, polatuzumab vedotina, PSMA ADC, RC48-ADC, RG7636, RG7841, RG7882, RG7986, RM-1929, Rovalpituzumab tesirina, sacituzumab govitecano, SAR408701, SAR428926, SAR566658, SC-002, SC-003, SGN-CD123A, SGN- CD19A, SGN-CD19B, SGN-CD33A, SGN-CD352A, SGN-CD7O0A, SGN-LIVIA, sirukumab vedotina, SYD985, telisotuzumab vedotina, Tisotumab vedotina, trastuzumab duocarmazina, trastuzumab emtan- sina, U3-1402, vadastuximab talirina, vandortuzumab vedotina, vorse- tuzumab mafodotina e XMT-1522.
[00204] Em algumas modalidades, o anticorpo de alvejamento pode ser selecionado a partir de uma porção de anticorpo de uma molécula selecionada a partir do grupo que consiste em Actimab-A (actínio Ac- 225 lintuzumab), alacizumab, alacizumab pegol, pentetato de altu- momab, anatumomab mafenatox, APN301, arcitumomab, ATL101, be- silesomab, Betalutin, Bl 836880, biciromab, C2-2b-2b, caplacizumab, capromab pendetídeo, CDX-1401, certolizumab pegol, citatuzumab bogatox, clivatuzumab tetraxetano, dapirolizumab pegol, Darleucina, enlimomab pegol, epitumomab cituxetano, epratuzumab tetraxetano, fanolesomab, FF-21101, Fibromun, FS102, ibritumomab tiuxetano, IGNO002, igovomab, imciromab, Ipafricept, L191L2/L19TNF, lampalizu- mab, L-DOS47, lilotomab satetraxetan, LKZ145, lulizumab pegol, MM- 151, naptumomab estafenatox, nofetumomab merpentano, oportuzu-
mab monatox, Proxinium, radretumab, ranibizumab, RFM-203, RG7813, SAT 012, satumomab pendetídeo, sulesomab, Sym015, ta- catuzumab tetraxetano, taplitumomab paptox, Teleucina, telimomab aritox, Conjugado de Tório-227-Epratuzumab, tositumomab-l1131, tuco- tuzumab celmoleucina, VB6-845, votumumab, zolimomab aritox.
[00205] Vários procedimentos conhecidos na técnica podem ser usados para a produção de anticorpos policlonais. Para a produção de anticorpo, vários animais hospedeiros podem ser imunizados por inje- ção com o peptídeo correspondente ao epítopo desejável, incluindo, mas sem limitação, coelhos, camundongos, ratos, ovelhas, cabras, etc. Em algumas modalidades, o peptídeo é conjugado com um veícu- lo imunogênico (por exemplo, toxoide de difteria, albumina sérica bovi- na [BSA] ou hemocianina de lapa californiana [KLH]). Vários adjuvan- tes podem ser usados para aumentar a resposta imunológica, depen- dendo da espécie hospedeira, incluindo, sem limitação, géis minerais de Freund (completos e incompletos), como hidróxido de alumínio, substâncias ativas de superfície como lisolecitina, polióis plurônicos, poliânions, peptídeos, emulsões de óleo, hemocianinas de lapa cali- forniana, dinitrofenol e adjuvantes humanos potencialmente úteis, co- mo BCG (Bacille Calmette-Guerin) e Corynebacterium parvum.
[00206] Para a preparação de anticorpos monoclonais, qualquer técnica que fornece produção de moléculas de anticorpo por linhas celulares contínuas em cultura pode ser usada. (Consultar, por exem- plo, Harlow e Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.). As mesmas inclu- em, mas sem limitação, a técnica de hibridoma originalmente desen- volvida por Kohler e Milstein (Kóhler e Milstein, Nature, 256: 495 a 497
[1975]), assim como a técnica de trioma, a técnica de hibridoma de células B humanas (consultar, por exemplo, Kozbor et al., Immunol. Hoje, 4:72 [1983]), e a técnica EBV-hibridoma para produzir anticorpos monoclonais humanos (Cole et al., Em Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., páginas 77 a 96 [1985]). Em outras modalidades, anticorpos monoclonais adequados, incluindo anticorpos monoclonais quiméricos recombinantes e proteínas de fusão de anti- corpos monoclonais quiméricos são preparados conforme descrito no presente documento.
[00207] As técnicas descritas para a produção de anticorpos de ca- deia única (Patente nº U.S. 4.946.778; incorporada ao presente docu- mento, a título de referência) podem ser adaptadas para produzir anti- corpos específicos de cadeia única, conforme desejável. Em algumas modalidades, métodos para a construção de bibliotecas de expressão Fab podem ser usados (Huse et al., Science, 246:1.275 a 1.281
[1989]) para permitir a identificação rápida e fácil de fragmentos Fab monoclonais com a especificidade desejável.
[00208] Os fragmentos de anticorpo que contêm o idiotipo (região de ligação ao antígeno) da molécula de anticorpo podem ser gerados por técnicas conhecidas. Por exemplo, tais fragmentos incluem, mas sem limitação: o fragmento F(ab')2 que pode ser produzido por diges- tão de pepsina de uma molécula de anticorpo; os fragmentos Fab' que podem ser gerados reduzindo-se as pontes de dissulfeto de um frag- mento F(ab')2 e os fragmentos Fab' que podem ser gerados tratando- se uma molécula de anticorpo com papaína e um agente de redução.
POLÍMEROS
[00209] Em algumas modalidades de Fórmula (1), Fórmula (Il), Fór- mula (Ill) ou Fórmula (IV), a porção alifática pode ser um polímero. Um polímero, conforme descrito no presente documento, pode ser ramifi- cado ou linear. Por exemplo, um polímero pode ter de 2 a 100 termi- nais (por exemplo, 2 a 80, 2a 75,2a60,2a50,2a40,2a35,2a25, 2a10,2a5,4a20,5a25,10a50,25a75,3a6,5a15 terminais). Em algumas modalidades, um polímero pode ter de 2a 5,4a6,5a6 ou 3 a 6 terminais. Em algumas modalidades, um polímero é linear e, portanto, tem 2 terminais. Em algumas modalidades de Fórmula (II), um terminal de um polímero é covalentemente aglutinado à estrutura de qualquer uma das fórmulas fornecidas no presente documento.
[00210] Um polímero pode ser, por exemplo, poli(alquileno glicol), poli(polietil oxietilado), poli(álcool olefínico), poli(B-hidroxiácido), po- liálcool vinílico), polioxazolina ou um copolímero do mesmo. Um poli- alquileno glicol inclui polióis de poliéter poliméricos lineares ou ramifi- cados. Esses polialquileno glicóis incluem, mas sem limitação, polieti- leno glicol (PEG), polipropileno glicol, polibutileno glicol e derivados dos mesmos. Outras modalidades exemplificativas estão listadas, por exemplo, em catálogos de fornecedores comerciais, como o catálogo da Shearwater Corporation "Polyethylene glycol and Derivatives for Biomedical Applications" (2001).
[00211] Em algumas modalidades, tais poliéter polióis poliméricos têm pesos moleculares médios entre cerca de 0,1 kDa a cerca de 100 KkDa. Por exemplo, esses polióis poliéter poliméricos incluem, mas não estão limitados a, entre cerca de 500 Da e cerca de 100.000 Da ou mais. O peso molecular do polímero pode estar entre cerca de 500 Da e cerca de 100.000 Da. Por exemplo, um polímero usado no presente documento pode ter um peso molecular de cerca de 100.000 Da,
95.000 Da, 90.000 Da, 85.000 Da, 80.000 Da, 75.000 Da, 70.000 Da,
65.000 Da, 60.000 Da, 55.000 Da, 50.000 Da, 45.000 Da, 40.000 Da,
35.000 Da, 30.000 Da, 25.000 Da, 20.000 Da, 15.000 Da, 10.000 Da,
9.000 Da, 8.000 Da, 7.000 Da, 6.000 Da, 5.000 Da, 4.000 Da, 3.000 Da, 2.000 Da, 1.000 Da, 900 Da, 800 Da, 700 Da, 600 Da e 500 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do polímero está entre cerca de 500 Da e cerca de 50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do polímero está entre cerca de 500 Da e cerca de
40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do polímero está entre cerca de 1.000 Da e cerca de 40.000 Da. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do polímero está entre cerca de 5.000 Da e cerca de 40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do polímero está entre cerca de 10.000 Da e cerca de 40.000 Da.
[00212] Em algumas modalidades, um polímero é um poli(etileno glicol) linear ou ramificado.
[00213] Em algumas modalidades, a molécula de poli(etileno glicol) é um polímero linear. O PEG linear pode ser alquilado (por exemplo, metilado ou etilado), em um terminal, mas os mesmos podem ser in- corporados ao conjugado de qualquer uma das fórmulas divulgadas no presente documento com o uso do terminal livre na forma de hidroxila não derivatizada. O peso molecular do PEG de cadeia linear pode es- tar entre cerca de 1.000 Da e cerca de 100.000 Da. Por exemplo, um PEG de cadeia linear usado no presente documento pode ter um peso molecular de cerca de 100.000 Da, 95.000 Da, 90.000 Da, 85.000 Da,
80.000 Da, 75.000 Da, 70.000 Da, 65.000 Da, 60.000 Da, 55.000 Da,
50.000 Da, 45.000 Da, 40.000 Da, 35.000 Da, 30.000 Da, 25.000 Da,
20.000 Da, 15.000 Da, 10.000 Da, 9.000 Da, 8.000 Da, 7.000 Da,
6.000 Da, 5.000 Da, 4.000 Da, 3.000 Da, 2.000 Da e 1.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG da cadeia linear está entre cerca de 1.000 Da e cerca de 50.000 Da. Em algumas modalida- des, o peso molecular do PEG da cadeia linear está entre cerca de
1.000 Da e cerca de 40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso mo- lecular do PEG da cadeia linear está entre cerca de 5.000 Da e cerca de 40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG da cadeia linear está entre cerca de 5.000 Da e cerca de 20.000 Da.
[00214] Em algumas modalidades, a molécula de poli(etileno glicol) é um polímero ramificado. Por exemplo, o PEG ramificado pode ter a forma de V ou T, dependendo do método pelo qual o PEG foi sinteti- zado. O peso molecular do PEG de cadeia ramificada pode estar entre cerca de 1.000 Da e cerca de 100.000 Da. Por exemplo, um PEG de cadeia ramificada usado no presente documento pode ter um peso molecular de cerca de 100.000 Da, 95.000 Da, 90.000 Da, 85.000 Da,
80.000 Da, 75.000 Da, 70.000 Da, 65.000 Da, 60.000 Da, 55.000 Da,
50.000 Da, 45.000 Da, 40.000 Da, 35.000 Da, 30.000 Da, 25.000 Da,
20.000 Da, 15.000 Da, 10.000 Da, 9.000 Da, 8.000 Da, 7.000 Da,
6.000 Da, 5.000 Da, 4.000 Da, 3.000 Da, 2.000 Da e 1.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG de cadeia ramificada está entre cerca de 1.000 Da e cerca de 50.000 Da. Em algumas mo- dalidades, o peso molecular do PEG de cadeia ramificada está entre cerca de 1.000 Da e cerca de 40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG de cadeia ramificada está entre cerca de
5.000 Da e cerca de 40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso mo- lecular do PEG de cadeia ramificada está entre cerca de 5.000 Da e cerca de 20.000 Da.
[00215] Em algumas modalidades, o polietileno glicol (linear ou ra- mificado) tem um peso molecular médio de cerca de 500 Da a cerca de 40.000 Da, de cerca de 1.000 Da a cerca de 30.000 Da, de cerca de 1.000 Da a cerca de 20.000 Da, de cerca de 5.000 Da a cerca de
20.000 Da.
[00216] Em algumas modalidades, o polímero (por exemplo, o po- lietileno glicol), conforme fornecido no presente documento, tem a se- guinte fórmula estrutural:
S o n —O-eHs
[00217] Em algumas modalidades, n é um número inteiro de 1 a
1.000, de 1 a 800, de 1 a 300 ou de 1 a 100. Em algumas modalida- des, n é selecionado entre 10, 20, 50, 100, 200, 250, 300, 500, 600 e
1.000.
SAIS FARMACEUTICAMENTE ACEITÁVEIS
[00218] Em algumas modalidades, um sal de um composto de Fór- mula (1), Fórmula (11), Fórmula (Ill) ou Fórmula (IV) divulgado no pre- sente documento é formado entre um grupo ácido e um básico do composto, como um grupo funcional amino, ou uma base e um grupo ácido do composto, como um grupo funcional carboxila. De acordo com outra modalidade, o composto é um sal de adição de ácido far- maceuticamente aceitável.
[00219] Em algumas modalidades, os ácidos comumente emprega- dos para formar sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de Fórmula (1), Fórmula (11), Fórmula (Ill) ou Fórmula (IV) divulgados no presente documento incluem ácidos inorgânicos, como bissulfeto de hidrogênio, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido iodídrico, ácido sulfúrico e ácido fosfórico, assim como ácidos orgânicos, como ácido paratoluenossulfônico, ácido salicílico, ácido tartárico, ácido bitartárico, ácido ascórbico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido glucônico, ácido glucurônico, ácido fórmico, ácido glutâmico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido benzenossulfônico, ácido láctico, ácido oxálico, ácido parabromofenilsulfônico, ácido carbônico, ácido succíni- co, ácido cítrico, ácido benzóico e ácido acético, assim como ácidos orgânicos e inorgânicos relacionados. Tais sais farmaceuticamente aceitáveis, desse modo, incluem include sulfato, pirossulfato, bisulfato, sulfito, bisulfito, fosfato, mono-hidrogenfosfato, di-hidrogenfosfato, me- tafosfato, pirofosfato, cloreto, brometo, iodeto, acetato, propionato, de- canoato, caprilato, formiato, isobutirato, caprato, heptanoato, propiola- to, oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, malea- to, butina-1,4-dioato, hexina-1,6-dioato, benzoato, clorobenzoato, me- tilbenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, ftalato, tereftalato, sulfo- nato, xileno sulfonato, fenilacetato, fenilpropionato, fenilbutirato, citrato,
lactato, B-hidroxibutirato, glicolato, maleato, tartrato, metanossulfonato, propanossulfonato, naftaleno-1-sulfonato, naftaleno-2-sulfonato, man- delato e outros sais. Em uma modalidade, sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis incluem aqueles formados com ácidos minerais, como ácido clorídrico e ácido bromídrico, e especialmente aqueles formados com ácidos orgânicos, como ácido maleico.
[00220] Em algumas modalidades, as bases comumente emprega- das para formar sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de Fórmula (1), Fórmula (11), Fórmula (Ill) ou Fórmula (IV) divulgadas no presente documento incluem hidróxidos de metais alcalinos, incluindo sódio, potássio e lítio; hidróxidos de metais alcalino-terrosos, como cálcio e magnésio; hidróxidos de outros metais, como alumínio e zinco; amoníaco, aminas orgânicas, como mono, di ou trialquilaminas não substituídas ou substituídas por hidroxila, diciclo-hexilamina; tributila- mina; piridina; N-metila, N-etilamina; dietilamina; trietilamina; mono, bis ou tris-(2-O0H-(C1-C6)-alquilamina), como N N-dimetil-N-(2-hidroxietil) amina ou tri-(2-hidroxietil)amina; N-metil-D-glucamina; morfolina; tio- morfolina; piperidina; pirrolidina; e aminoácidos, como arginina, lisina e semelhantes.
[00221] Em algumas modalidades, os compostos de Fórmula (!), Fórmula (11), Fórmula (Ill) ou Fórmula (IV) divulgados no presente do- cumento, ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são substancialmente isolados.
[00222] Em algumas modalidades, esse documento fornece com- postos de Fórmula (1), Fórmula (II), Fórmula (Ill) ou Fórmula (IV) divul- gados no presente documento, ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, preparados por qualquer um dos processos descritos no presente documento.
[00223] As adições similares de porções químicas de anticorpos ou substituição de cadeias principais de polímero e/ou porções químicas alifáticas podem ser feitas em outros compostos de fosfotriéster, como aqueles divulgados nos documentos nº WO 2012/080836 e WO 2013/186632, ambos incorporados ao presente documento a título de referência, em sua totalidade.
[00224] Em algumas modalidades, as porções químicas de anticor- pos descritas no presente documento podem incluir outros grupos no lugar dos anticorpos ou fragmentos de anticorpos. Por exemplo, nu- cleotídeos ou polinucleotídeos (aptâmeros*), biciclopeptídeos, hormô- nios ou outras substâncias que se ligam a receptores específicos da superfície celular. Consultar, por exemplo, documentos nº WO 2017/191460, US 2018/0200378, Mater Sci Eng C Mater Biol Appl. 1 de janeiro de 2017; 70 (Pt 1): 505 a 511; Chem Rev. 2017 11 de outu- bro; 117 (19): 12.133 a 12.164, Pusuluri, A. et al. Angew Chem. Int Ed. Engl. 28 de janeiro de 2019; 58 (5): 1.437 a 1.441, e Greg T. Herman- son, Bioconjugate Techniques, 3º Edição, Academic Press, Nova lor- que, 2013.
[00225] Em algumas modalidades, os compostos aqui fornecidos podem compreender adicionalmente grupos repórteres. Consultar, por exemplo, Inorganic Materials: Synthesis and Processing, Volume 64, Edição 3, Março de 2018 Páginas 835 a 859 e Mater Sci Eng C Mater Biol Appl. 1 de janeiro de 2017; 70(Pt 1):505 a 511. Além de agentes de alvejamento aptaméricos (por exemplo, Gupta et al., J Biol, Chem, 289, 8.706, 2014) em algumas modalidades, substâncias nucleosídi- cas ou nucleotídicas, incluindo substâncias não naturais, podem forne- cer uma função rastreadora.
MÉTODOS PARA PRODUÇÃO COMPOSTOS DE FÓRMULA (1) OU FÓRMULA (11)
[00226] Métodos sintéticos exemplificativos para preparar compos- tos de Fórmula (1) ou Fórmula (II) do presente documento são descri- tos abaixo.
[00227] Em algumas modalidades, os compostos de Fórmula (|I) podem ser preparados conforme descrito no Esquema 3.
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[00228] O fármaco citotóxico, doxorrubicina, mostrado no Esquema 3, foi selecionado a partir do grande número de fármacos citotóxicos existentes para demonstrar o princípio da presente metodologia. Em particular, a absorvância de luz característica de doxirrubicina, com um máximo a 480 nm, permite um seguimento claro do fármaco nos dife- rentes estágios da síntese de ADC e sua liberação após a adição de um agente de redução de ditiol. Como fármaco modelo, a doxorrubici- na tem, no entanto, algumas desvantagens. Ele contém um grupo car- bonila livre e reativo, impedindo o uso de ligantes submetidos a amino- Óxi e hidrazido para acoplamento covalente a anticorpos carbonilados. Portanto, o Esquema 3 descreve um exemplo em que a ligação cova- lente a um anticorpo foi criada por meio da reação de uma porção de fármaco ativada por NHS com um ou mais grupos amino presentes na superfície dos anticorpos. Consultar, por exemplo, o Exemplo 1.
[00229] Em algumas modalidades, os compostos de Fórmula (|I) podem ser preparados conforme descrito no Esquema 4. Consultar,
por exemplo, o Exemplo 2. Ds 2 AO FOCO X. ud ne De) . pruos esta DIOS KO TA e RO nv - “O - "0. toi ' o. Ay SO Db em Doxorrubicina Qua A v o 1" Lito Ao, «o 5 o Que, grs Asa So ea Aiss f " *, Lico ÁHi-oos
[00230] Em algumas modalidades, os compostos de Fórmula (lI) podem ser preparados conforme descrito no Esquema 5. Consultar, por exemplo, o Exemplo 3. Q, ao STA Glen do. o o Da) n QD A > “ | D o o Õ& PEGN ONT o Me dono o rÁ FT [lona o PES Y do. do. PD — YR 22 23 NA o Sl Ve % q NO ” PEGHNA O AIAON TS G ly vos PES ANT y lo o 7 LD Das do, So —=— nn 24 NA A Too: fito
[00231] A incorporação de um grupo maleimido, além de aumentar o escopo dos grupos funcionais, tem outras vantagens estratégicas e sintéticas. Um grupo maleimido é hidroliticamente estável em compa- ração com o NHS e, portanto, pode ser incorporado ao conjugado an- tes da ativação do hidroxil benzílico e da reação de um componente de agente citotóxico. Além disso, a adição de um grupo amino contendo agente citotóxico pode ser realizada na presença de uma base mais forte. Deve ser observado que há um grande número de outros grupos funcionais que poderiam ser usados em vez de um grupo maleimido. Por exemplo, os grupos azido, alcino aldeído, aminóxi e hidrazo e rea- gentes apropriados úteis para a introdução dessas funções no grupo amino são descritos na literatura. O Esquema 5 descreve a aplicação de um PEG mais longo do que no Esquema 4. Em algumas modalida- des, o aumento do comprimento de ligante pode melhorar a reativida- de do reagente com o anticorpo e melhorar a solubilidade em água do reagente.
[00232] Em algumas modalidades, os compostos de Fórmula (|I) podem ser preparados conforme descrito no Esquema 6. Consultar, por exemplo, o Exemplo 4. Pi Ia y UÚ U U valolla-O 7 o. Fivsloia-0 o. Homo. Phelia-0 o. so Lave SA Tu aeven - una: no mmocni-PEG-C o, 29 26 2 DD q A | '
UÚ UU U PisslR=O o. FPhelsiano o Heissos o) 0,,P HN-aavarao - 0,,P HN-aVarãe m 0,2 HN-aVarÃe FMOCNHPEG OO, FuocNHPEGI0TO, FMOC-NH-PEG. TA 2 OD nO . PR Atitos 11d) S 2
U U U Pivaloila O o Pivaloila—O- o. Pivaloila O- o. o, J HN-aa-Vaao Pp o " S HN Ala Valãe o o, Y HN Als Varão nanCPEG-OPO, - Cord, peeoo - ll y-pes-do, so QT TS FUSO os too DETIA
[00233] Em algumas modalidades, os compostos de Fórmula (II), em que R' é substituído por um anticorpo ou fragmento de anticorpo, podem ser preparados como descrito no Esquema 7. Consultar, por exemplo, o Exemplo 5.
o q o o GS . ÇS CS no PmPscBM NO 2 qo 2 mo ooo o EO O ES ” O eme à A frnoro 39 Arteoro “ma Lo wo Lido G xo NS “Anticorpo marcado com alkaleno "Cx "e "> o Po O o o o 7 eo o o Po 7 so, <) 0 o, + oo. “+ oo. + A Percuoconramaco A PercnocomssimaçA? Penciococenos — (? Percuçon E 4o
[00234] “Conforme é ilustrado pelo Esquema 7, a ligação de doxor- rubicina ou qualquer tipo de grupo amino que contém agente citotóxico a um composto de 41 é bem descrita no presente documento. Além disso, há muitos exemplos na literatura que ilustram métodos que en- volvem um grupo azido interagindo com proteínas alquina modificadas, formando uma ligação covalente com muitos tipos de proteínas, inclu- indo anticorpos.
[00235] Em algumas modalidades, os compostos de Fórmula (Il) em que R? é substituído por um anticorpo ou fragmento de anticorpo, podem ser preparados conforme descrito no Esquema 8. Consultar, por exemplo, o Exemplo 6. o o o q 2 recodiruos g. peo-o tone, Moro. Foro. Promo. Po o o o st ET E ss az mae mera — Pmao as 9 rraolimos 2 resrolficamos 1 2 reaollmoe né Ox O ndo ndo wo PDT o. À Promo. . FrOT4 o. é Asa Ano q “PRCHZ-0-CONH-Fármaco A PI-CHZO-CO-FR-NO 47 A PhCHOH 46 Q FPEGO-NH o ” R Pro o-tico nto Nos CC Promo. PNOT o. na anamo Fra emma
[00236] Foi constatado durante o curso deste trabalho que a prote- ção da posição N-3 da uridina é benéfica, pois permite a ativação da hidroxila benzílica com cloroformiato de p-nitrofenila sem o risco de reações colaterais ocorrerem na base nucleosídica. Consequentemen- te, qualquer grupo reativo pode ser introduzido nesta posição, por exemplo, um grupo com capacidade para ser fixado a um anticorpo. Essa estratégia pode aumentar o número de grupos reativos fixados a um nucleotídeo para quatro. Em algumas modalidades, uma dessas posições pode conter uma molécula de fluoróforo (ou qualquer outro tipo de marcador) além de uma molécula de ADC, a fim de rastrear a inserção da molécula de ADC em uma célula. Em algumas modalida- des, a substituição de uma grande funcionalidade (por exemplo, uma molécula de ADC) da unidade fosfotriéster por uma unidade alifática menor alterará a cinética observada e a especificidade de clivagem de carga útil.
[00237] A reatividade do composto 47 pode seguir métodos con- forme descrito no presente documento. Especificamente, a reação de carbonatos de p-nitrofenila com aminas. Adicionalmente, a reatividade de um grupo aminóxi com uma proteína carbonilada, incluindo anticor- pos carbonilados, está bem descrita na literatura.
[00238] Os métodos sintéticos adequados de materiais iniciais, in- termediários e produtos podem ser identificados por referência à litera- tura, incluindo fontes de referência como: Advances in Heterocyclic Chemistry, Volumes 1 a 107 (Elsevier, 1.963 a 2.012); Journal of Hete- rocyclic Chemistry Volumes 1 a 49 (Journal of Heterocyclic Chemistry,
1.964 a 2.012); Carreira, et al. (Ed.) Science of Synthesis, Volumes 1 a 48 (2.001 a 2.010); Katritzky et al. (Ed.); Comprehensive Organic Functional Group Transformations Il (Elsevier, 2º Edição, 2004); Smith et al., March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 6º Ed. (Wiley, 2007); Trost et al. (Ed.), Comprehensive
Organic Synthesis (Pergamon Press, 1991).
[00239] A preparação dos compostos fornecidos no presente do- cumento pode envolver a proteção e desproteção de vários grupos químicos. A química dos grupos de proteção pode ser encontrada, por exemplo, em P. G. M. Wuts e T. W. Greene, Protective Groups in Or- ganic Synthesis, 4º Ed., Wiley & Sons, Inc., Nova lorque (2006). A es- tratégia química e do grupo de proteção relacionada aos nucleosídeos e nucleotídeos pode ser encontrada em Methods in Molecular Biology - Oligonucleotide Synthesis, editado por Piet Herdewijn, Humana Press Inc. 2005 e também em Protocols for oligonucleotide conjugate, edita- do por Sudhir Agrawal, Humana Press Inc 1994. Materiais iniciais e intermediários adequados estão prontamente disponíveis em várias fontes comerciais. MÉTODOS PARA USAR DOS COMPOSTOS DO PRESENTE DO-
CUMENTO MÉTODOS DE TRATAMENTO DO CÂNCER
[00240] Em algumas modalidades, este documento fornece um mé- todo para o tratamento de uma doença, distúrbio ou afecção em um mamífero (por exemplo, um humano que necessita de tal tratamento), que compreende a etapa de administrar ao mamífero um composto de Fórmula (1), Fórmula (11), Fórmula (Ill) ou Fórmula (IV) conforme des- crito no presente documento, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica que compreende o mesmo.
[00241] Por exemplo, os compostos deste documento são úteis no tratamento de uma doença ou afecção tratada de modo benéfico pela administração de um composto citotóxico ou quimioterapêutico, con- forme descrito no presente documento a um sujeito.
[00242] Em algumas modalidades, a doença ou afecção é câncer.
[00243] Em algumas modalidades, o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em câncer de bexiga, câncer cerebral, câncer de mama, câncer colorretal, câncer cervical, câncer gastrointestinal, câncer geniturinário, câncer de cabeça e pescoço, câncer de pulmão, câncer de ovário, câncer de pâncreas, câncer de próstata, câncer re- nal, câncer de pele e câncer testicular.
[00244] Em algumas modalidades, câncer é selecionado a partir do grupo selecionado a partir de sarcoma, angiossarcoma, fibrossarcoma, rabdomiossarcoma, lipossarcoma, mixoma, rabdomioma, fibroma, li- poma, teratoma, câncer de pulmão, célula escamosa de carcinoma broncogênico, célula pequena não diferenciada, célula grande não di- ferenciada, adenocarcinoma, carcinoma brônquico alveolar, adenoma brônquico, sarcoma, linfoma, hamartoma condromatoso, mesotelioma, câncer gastrointestinal, câncer do esôfago, carcinoma de célula esca- mosa, adenocarcinoma, leiomiossarcoma, linfoma, câncer do estôma- go, carcinoma, linfoma, leiomiossarcoma, câncer do pâncreas, adeno- carcinoma ductal, insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, tumor carci- noide, vipoma, câncer do intestino delgado, adenocarcinoma, linfoma, tumores carcinoides, sarcoma de Kaposi, leiomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma, fibroma, câncer do intestino grosso ou cólon, adenoma tubular, adenoma viloso, hamartoma, leiomioma, câncer de trato genitourinário, câncer do rim adenocarcinoma, tumor de Wilm (nefroblastoma), linfoma, leucemia, câncer da bexiga, câncer da ure- tra, carcinoma de célula escamosa, carcinoma de célula transitória, câncer da próstata, câncer do testículo, seminoma, teratoma, carcino- ma embrionário, teratocarcinoma, coriocarcinoma, sarcoma, carcinoma de célula intersticial, fibroma, fibroadenoma, tumores adenomatoides, lipoma, câncer de fígado, carcinoma hepatocelular de hepatoma, co- langiocarcinoma, hepatoblastoma, angiossarcoma, adenoma hepato- celular, hemangioma, câncer ósseo, sarcoma osteogênico (osteossar- coma), fibrossarcoma, histiocitoma fibroso maligno, condrossarcoma,
sarcoma de Ewing, linfoma maligno (sarcoma de célula de retículo), mieloma múltiplo, tumor de célula gigante maligna, cordoma, osteo- crondroma (exostoses osteocartilagenoso), condroma benigno, con- droblastoma, condromixofibroma, tumor de célula gigante de osteoma osteoide, câncer de sistema nervoso, câncer do crânio, osteoma, he- mangioma, granuloma, xantoma, osteíte deformante, câncer da me- ningioma de meninges, meningiossarcoma, gliomatose, câncer do cé- rebro, astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma (pinealoma), glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, schwanno- ma, retinoblastoma, tumores congênitos, câncer da medula espinhal, neurofibroma, meningioma, glioma, sarcoma, câncer ginecológico, câncer do útero, carcinoma do endométrio, câncer do cérvix, carcino- ma cervical, displasia cervical pré-tumor, câncer dos ovários, carcino- ma ovariano, cistadenocarcinoma seroso, cistadenocarcinoma muci- noso, carcinoma não classificado, tumor de célula granulosa-teca, tu- mor de célula Sertoli Leidig, disgerminoma, teratoma maligno, câncer da vulva, célula escamosa carcinoma, carcinoma intraepitelial, adeno- carcinoma, fibrossarcoma, melanoma, câncer da vagina, carcinoma de célula transparente, carcinoma de célula escamosa, sarcoma botrioide, rabdomiossarcoma embrionário, câncer dos tubos de falópio, câncer hematológico, câncer do sangue, leucemia mieloide aguda (AML), leu- cemia mieloide crônica (CML), leucemia linfoblásica aguda (ALL), leu- cemia linfoblásica crônica, leucemia linfocítica crônica, doenças mielo- proliferativas, mieloma múltiplo, síndrome mielodisplásica, linfoma de Hodgkin, lifoma não Hodgkin (linfoma maligno), macroglobulinemia de Waldenstrom, câncer de pele, melanoma maligno, basal carcinoma de célula, carcinoma de célula escamosa, sarcoma de Kaposi, nevos dis- plásicos, lipoma, angioma, dermatofibroma, queloides, psoriáse, cân- cer de glândula adrenal e neuroblastoma.
COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS E FORMULAÇÕES
[00245] Este documento também fornece composições farmacêuti- cas que compreendem uma quantidade eficaz de um composto de qualquer uma das Fórmulas (1), Fórmula (11), Fórmula (III) ou Fórmula (IV) divulgadas no presente documento, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e um veículo farmaceuticamente aceitável. O veií- culo (ou veículos) é "aceitável" no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação e, no caso de um veículo farmaceu- ticamente aceitável, não prejudicial para o receptor do mesmo em uma quantidade usada no medicamento.
[00246] Os veículos, adjuvantes e veículos farmaceuticamente acei- táveis que podem ser usados nas composições farmacêuticas do pre- sente documento incluem, entre outros, trocadores de íons, alumina, estearato de alumínio, lecitina, proteínas séricas, como albumina séri- ca humana, substâncias tampão, como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potássio, misturas parciais de glicerídeos de ácidos graxos vegetais saturados, água, sais ou eletrólitos, como sulfato de protami- na, hidrogenofosfato dissódico, hidrogenofosfato de potássio, cloreto de sódio, sais de zinco, sílica coloidal, trissilicato de magnésio, polivi- nilpirrolidona, substâncias à base de celulose, polietilenoglicol, carbo- ximetilcelulose de sódio, poliacrilatos, ceras, polímeros de bloco de polietileno-polioxipropileno, polietilenoglicol e gordura de lã.
[00247] As composições ou formas de dosagem podem conter um composto de Fórmula (1), Fórmula (II), Fórmula (Ill) ou Fórmula (IV) descrito no presente documento na faixa de 0,005% a 100% com o equilíbrio constituído a partir dos excipientes aceitáveis farmaceutica- mente aceitáveis. As composições contempladas podem conter 0,001% a 100% de um composto de Fórmula (1), Fórmula (11), Fórmula (Ill) ou Fórmula (IV) fornecidas no presente documento, em uma mo- dalidade 0,1 a 95%, em outra modalidade 75 a 85%, em uma modali-
dade adicional 20 a 80%, em que o equilíbrio pode ser constituído de qualquer excipiente farmaceuticamente aceitável descrito no presente documento, ou qualquer combinação desses excipientes.
VIAS DE ADMINISTRAÇÃO E FORMAS DE DOSAGEM
[00248] As composições farmacêuticas do presente documento in- cluem aquelas adequadas para qualquer via de administração aceitá- vel. Em algumas modalidades, os conjugados fornecidos no presente documento são administrados por administração parentérica.
[00249] As composições e formulações descritas no presente do- cumento podem ser convenientemente apresentadas em uma forma de dosagem unitária e preparadas por quaisquer métodos bem conhe- cidos na técnica da farmácia. Consultar, por exemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins, Bal- timore, MD (20º ed. 2000). Tais métodos preparativos incluem a etapa de associar a molécula a ser administrada com ingredientes, como o veículo que constitui um ou mais ingredientes acessórios.
[00250] As composições adequadas para administração parentérica incluem soluções injetáveis estéreis aquosas e não aquosas ou solu- ções de infusão que podem conter antioxidantes, tampões, bacterios- táticos e solutos que tornam a formulação isotônica com o sangue do recipiente pretendido; e suspensões estéreis aquosas e não aquosas que podem incluir agentes de suspensão e agentes espessantes. As formulações podem ser apresentadas em recipientes de dose unitária ou de múltiplas doses, por exemplo, ampolas e frascos vedados, e po- dem ser armazenadas em uma condição secada a frio (liofilizada), ne- cessitando apenas da adição do veículo líquido estéril, por exemplo, água para injeções, solução salina ou dextrose 5%, imediatamente an- tes do uso. Soluções e suspensões de injeção extemporâneas podem ser preparadas a partir de pós, grânulos e comprimidos estéreis. As soluções de injeção podem estar na forma, por exemplo, de uma sus-
pensão aquosa ou oleaginosa estéril injetável. Esta suspensão pode ser formulada de acordo com técnicas conhecidas na arte com o uso de agentes dispersantes ou umectantes e agentes de suspensão ade- quados. A preparação injetável estéril também pode ser uma solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou solvente parenteri- camente aceitável não tóxico, por exemplo, como uma solução em 1,3- butanodiol. Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados estão manitol, água, solução de Ringer e solução isotôni- ca de cloreto de sódio. Além disso, óleos estéreis e fixos são conven- cionalmente usados como solvente ou meio suspensor. Com este pro- pósito, qualquer óleo fixo suave pode ser empregado, incluindo mono ou diglicerídeos sintéticos. Ácidos graxos, como o ácido oleico e seus derivados de glicerídeo, são úteis na preparação de injetáveis, assim como os óleos naturais farmaceuticamente aceitáveis, como óleo de oliva ou o óleo de rícino, especialmente em suas versões polioxietila- das. Essas soluções ou suspensões de óleo também podem conter um diluente ou dispersante de álcool de cadeia longa.
DOSAGENS E REGIMES
[00251] Nas composições farmacêuticas do presente documento, um composto de Fórmula (1), Fórmula (11), Fórmula (Ill) ou Fórmula (IV) divulgado no presente documento está presente em uma quantidade eficaz (por exemplo, uma quantidade terapeuticamente eficaz).
[00252] As doses eficazes podem variar, dependendo das doenças tratadas, da severidade da doença, da via de administração, do sexo, idade e condição geral de saúde do indivíduo, uso de excipientes, possibilidade de co-uso com outros tratamentos terapêuticos, como o uso de outros agentes e o julgamento do médico assistente.
[00253] Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (1), Fórmula (II), Fórmula (Ill) ou Fórmula (IV) divulgada no presente documento pode variar, por exemplo, de cerca de 0,001 mg/kg a cerca de 500 mg/kg (por exemplo, de cerca de 0,001 mg/kg a cerca de 200 mg/kg; de cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 200 mg/kg; de cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 150 mg/kg; de cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 100 mg/kg; de cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 50 mg/kg; de cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 10 mg/kg; de cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 5 mg/kg; de cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 1 mg/kg; de cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 0,5 mg/kg; de cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 0,1 mg/kg; de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 200 mg/kg; de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 150 mg/kg; de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 100 mg/kg; de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 50 mg/kg; de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 10 mg/kg; de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 5 mg/kg; de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 1 mg/kg; de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 0,5 mg/kg).
[00254] As dosagens supracitadas podem ser administradas diari- amente (por exemplo, em dose única ou em duas ou mais doses divi- didas, por exemplo, uma vez ao dia, duas vezes ao dia, três vezes ao dia) ou não diariamente (por exemplo, dia sim, dia não, a cada dois dias, a cada três dias, uma vez por semana, duas vezes por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vez por mês).
KITS
[00255] Este documento também inclui kits farmacêuticos úteis, por exemplo, no tratamento de distúrbios, doenças e afecções referidos no presente documento, que incluem um ou mais recipientes que contêm uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade tera- peuticamente eficaz de um composto fornecido no presente documen- to. Esses kits podem ainda incluir, se desejável, um ou mais dos vários componentes de kit farmacêutico, como, por exemplo, recipientes com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis, recipientes adicio- nais, etc. Instruções, como inserções ou como identificações, indican- do quantidades dos componentes a serem administrados, diretrizes para administração e/ou diretrizes para misturar os componentes tam- bém podem ser incluídas no kit.
DEFINIÇÕES
[00256] O termo "Cr+m alquila" inclui grupos alquila de cadeia linear (por exemplo, metila, etila, propila, butila, pentila, hexila, heptila, octila, nonila, decila, etc.) e grupos alquila de cadeia ramificada (por exemplo, isopropila, terc-butila, isobutila, etc.). Em certas modalidades, um al- quila de cadeia linear ou cadeia ramificada possui doze ou menos átomos de carbono em sua cadeia principal (por exemplo, C1-12 para cadeia linear; C3-12 para cadeia ramificada). Por exemplo, o termo C1-12 inclui grupos alquila que contêm 1 a 12 átomos de carbono.
[00257] Conforme usado no presente documento, o termo "Cn-m al- quileno", empregado sozinho ou em combinação com outros termos, refere-se a um grupo de ligação alquila divalente que tem n a m car- bonos. Exemplos de grupos alquileno incluem, mas sem limitação, etan-1,1-di-ila, etan-1,2-di-ila, propan-1,1-di-ila, propan-1,3-di-ila, pro- pan-1,2-di-ila, butan-1,4-di-ila, butan-1,3-di-ila, butan-1,2-di-ila, 2-metil- propan-1,3-di-ila e semelhantes. Em algumas modalidades, a porção alquileno contém 2 a 6,2a4,2a3,1a6,1a40ou1a?2 átomos de carbono.
[00258] “Como usado no presente documento, "Cn-m alquenila" se refere a um grupo alquila com uma ou mais aglutinações duplas car- bono-carbono e que têm n a m carbonos. Exemplos de grupos alqueni- la incluem, mas sem limitação, etenila, n-propenila, isopropenila, n- butila, sec-butila e semelhantes. Em algumas modalidades, a porção alquenila contém 2 a 6, 2a 4 ou 2 a 3 átomos de carbono. O termo "Cn-m alquenileno" se refere a grupos de ligação alquenila divalentes.
[00259] Conforme usado no presente documento, o termo "Cn-m alcóxi", empregado sozinho ou em combinação com outros termos, se refere a um grupo de fórmula -O-alquila, em que o grupo alquila tem n a m carbonos. Grupos alcóxi exemplificativos incluem, mas sem limita- ção, metóxi, etóxi, propóxi (por exemplo, n-propóxi e isopropóxi), butó- xi (por exemplo, n-butóxi e terc-butóxi) e semelhantes. Em algumas modalidades, o grupo alquila tem 1 a 6, 1 a 4 ou 1 a 3 átomos de car- bono.
[00260] Conforme usado no presente documento, o termo "Cn-m alqui- lamino" se refere a um grupo de fórmula -NH(alquila), em que o grupo alquila tem n a m átomos de carbono. Em algumas modalidades, o grupo alquila tem 1 a 6, 1 a 4 ou 1 a 3 átomos de carbono. Exemplos de grupos alquilamino incluem, mas sem limitação, N-metilamino, N-etila- mino, N-propilamino (por exemplo, N-(n-propil)amino e N-isopropila- mino), N-butilamino (por exemplo, N-(n-butil)amino e N-(terc-butil)ami- no) e semelhantes.
[00261] “Conforme usado no presente documento, o termo "di(Cr-m- alquil)amino" se refere a um grupo de fórmula -N(alquil)-, em que os dois grupos alquila têm, cada um, independentemente, n a m átomos de carbono. Em algumas modalidades, cada grupo alquila tem inde- pendentemente 1 a 6, 1 a 4 ou 1 a 3 átomos de carbono.
[00262] Conforme usado no presente documento, o termo "tio" se refere a um grupo de fórmula SH.
[00263] “Conforme usado no presente documento, o termo "amino" se refere a um grupo de fórmula -NH>.
[00264] “Conforme usado no presente documento, o termo "carbóxi" ou "carboxila" se refere a um grupo -C(O0)OH.
[00265] Conforme usado no presente documento, "halo" ou "halo- gênio" se refere a F, CI, Br ou |. Em algumas modalidades, halo é F, CI ou Br. Em algumas modalidades, halo é F ou CI.
[00266] O termo "den membros", em que n é um número inteiro, normalmente descreve o número de átomos formadores de anel em uma porção em que o número de átomos formadores de anel é n. Por exemplo, piperidinila é um exemplo de um anel heterocicloalquila de 6 membros, pirazolila é um exemplo de um anel heteroarila de 5 mem- bros, piridila é um exemplo de um anel heteroarila de 6 membros e 1,2,3,4-tetra-hidro-naftaleno é um exemplo de um grupo cicloalquila de membros.
[00267] Conforme usado no presente documento, "cicloalquila" se refere a hidrocarbonetos cíclicos não aromáticos, incluindo grupos al- quila e/ou alquenila ciclizados. Grupos cicloalquila podem incluir gru- pos mono ou policíclicos (por exemplo, que têm 2, 3 ou 4 anéis fundi- dos) e espirociclos. Os átomos de carbono formadores de anel de um grupo cicloalquila podem ser opcionalmente substituídos por oxo ou sulfido (por exemplo, C(O) ou C(S)). Também estão incluídas na defi- nição de cicloalquila as porções químicas que têm um ou mais anéis aromáticos fundidos (isto é, com uma aglutinação em comum com) ao hidrocarboneto cíclico não aromático, por exemplo, derivados de ben- zo ou tienil de ciclopentano, ciclo-hexano e semelhantes. Um grupo cicloalquila que contém um anel aromático fundido pode ser fixado através de qualquer átomo formador de anel, incluindo um átomo for- mador de anel do anel aromático fundido. Os grupos cicloalquila po- dem ter 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 átomos formadores de anel. Em algumas modalidades, a cicloalquila é uma cicloalquila monocíclica ou bicíclica de 3 a 12 membros. Em algumas modalidades, a cicloalquila é uma C3.7 cicloalquila monocíclica. Exemplos de grupos cicloalquila incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-heptila, ciclopentenila, ciclo-hexenila, ciclo-hexadienila, ciclo-heptatrienila, nor- bornila, norpinila, norcarnila, ciclo-octila, ciclo-octenila e semelhantes. Em algumas modalidades, cicloalquila é ciclopropila, ciclobutila, ciclo- pentila, ciclo-hexila, ciclo-octila ou ciclo-octenila. Em algumas modali- dades, a cicloalquila é um anel ciclo-octenila fundido com 1 ou 2 anéis de benzeno. Em algumas modalidades, a cicloalquila é um grupo ci-
cloalquila monocíclico de 3 a 8 ou 3 a 7 membros (por exemplo, C3-8 ou C3-7 cicloalquila). Em algumas modalidades, a cicloalquila é uma cicloalquila bicíclica de 8 a 12 membros. Em algumas modalidades, a cicloalquila é uma cicloalquila bicíclica ou tricícliica de 8 a 16 membros (por exemplo, Cs-16 cicloalquila).
[00268] Conforme usado no presente documento, "heteroarila" se refere a um heterociclo aromático monocíclico ou policíclico com pelo menos um membro do anel heteroátomo selecionado dentre enxofre, oxigênio e nitrogênio. Em algumas modalidades, o anel heteroarila tem 1, 2, 3 ou 4 membros no anel de heteroátomo independentemente se- lecionados a partir de nitrogênio, enxofre e oxigênio. Em algumas mo- dalidades, qualquer N formador de anel em uma porção heteroarila pode ser um N-óxido. Em algumas modalidades, a heteroarila é uma heteroarila monocíclica ou bicíclica de 5 a 10 membros que tem 1,2,3 ou 4 membros de anel de heteroátomo selecionados independente- mente a partir de nitrogênio, enxofre e oxigênio. Em algumas modali- dades, a heteroarila é uma heteroarila monocíclico de 5 a 6 membros com 1 ou 2 membros de anel de heteroátomo selecionados indepen- dentemente a partir de nitrogênio, enxofre e oxigênio. Em algumas modalidades, a heteroarila é um anel heteroarila de cinco ou seis membros. Um anel heteroarila de cinco membros é uma heteroarila com um anel com cinco átomos no anel, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2 ou 3) átomos do anel são independentemente selecio- nados a partir de N O e S. Heteroarilas de cinco membros exemplares são tienila, furila, pirrolila, imidazolila, tiazolila, oxazolila, pirazolila, iso- tiazolila, isoxazolila, 1,2,3-triazolila, tetrazolila, 1,2,3-tiadiazolila, 1,2,3- oxadiazolila, 1,2 ,4-triazolil 1,2,4-tiadiazolila, 1,2,4-oxadiazolila, 1,3,4- triazolila, 1,3,4-tiadiazolil e 1,3,4-oxadiazolila. Um anel heteroarila de seis membros é uma heteroarila com um anel que tem seis átomos de anel, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2 ou 3) átomos de anel são independentemente selecionados a partir de N, O e S. Heteroarilas de seis membros exemplificativas são piridila, pirazinila, pirimidinila, tria- zinila e piridazinila. O termo "heteroarileno" se refere a um grupo de ligação heteroarila divalente.
[00269] O termo "aromático" se refere a um carbociclo ou heteroci- clo que tem um ou mais anéis poli-insaturados que têm caráter aromá- tico (isto é, que têm (4n + 2) elétrons Tr (pi) deslocalizados, em que n é um número inteiro).
[00270] O termo "alifático" se refere a compostos orgânicos (inclu- indo polímeros) nos quais átomos e heteroátomos de carbono formam cadeias abertas e que não contêm anéis poli-insaturados que têm ca- ráter aromático. Os compostos alifáticos podem ser lineares ou cícli- cos, saturados ou insaturados, de cadeia linear ou ramificada.
[00271] Conforme usado no presente documento, o termo "políme- ro" se refere a uma macromolécula que contém uma pluralidade de subunidades de repetição.
[00272] O termo "arila", empregado sozinho ou em combinação com outros termos, se refere a um grupo hidrocarboneto aromático, que pode ser monocíclico ou policíclico (por exemplo, com 2, 3 ou 4 anéis fundidos). O termo "Cn-m arila" se refere a um grupo arila que tem de n a m átomos de carbono de anel. Grupos arila incluem, por exem- plo, fenila, naftila, antracenila, fenantrenila, indanila, indenila e simila- res. Em algumas modalidades, os grupos arila têm de 6 a cerca de 20 átomos de carbono, de 6 a cerca de 15 átomos de carbono ou de 6 a cerca de 10 átomos de carbono. Em algumas modalidades, o grupo arila é fenila. O termo "arileno" se refere a um grupo de ligação arila divalente.
[00273] Conforme usado no presente documento, "heterocicloalqui- la" ou "heterociclo alifático" se refere a heterociclos monocíclicos ou policíclicos não aromáticos que têm um ou mais heteroátomos forma-
dores de anéis selecionados a partir de O, N ou S.
São incluídos na heterocicloalquila os grupos heterocicloalquila de 4, 5, 6, 7, 8, 920u 10 membros monocíclicos.
Os grupos heterocicloalquila também podem incluir espirociclos.
Grupos heterocicloalquila exemplificativos incluem pirrolidin-2-ona, 1,3-isoxazolidin-2-ona, piranila, tetra-hidropurano, oxe- tanila, azetidinila, morfolino, tiomorfolino, piperazinila, tetra-hidrofu- ranila, tetra-hidrotienila, piperidinila, pirrolidinila, pirrolidinola, tiazolidini- la, imidazolidinila, azepanila, benzazapeno e semelhantes.
Os átomos e heteroátomos de carbono formadores de anéis de um grupo hetero- cicloalquila podem ser opcionalmente substituídos por grupos 0x0 ou sulfido (por exemplo, C(O), S(O), C(S) ou S(O)>, etc.). O grupo hetero- cicloalquila pode ser fixado através de um átomo de carbono formador de anel ou um heteroátomo formador de anel.
Em algumas modalida- des, o grupo heterocicloalquila contém O a 3 aglutinações duplas.
Em algumas modalidades, o grupo heterocicloalquila contém O a 2 agluti- nações duplas.
Também estão incluídas na definição de heterocicloal- quila as porções químicas que têm um ou mais anéis aromáticos fun- didos (isto é, com uma aglutinação em comum com) ao heterociclo não aromático, por exemplo, derivados de benzo ou tienila da piperidi- na, morfolina, azepina, etc.
Um grupo heterocicloalquila que contém um anel aromático fundido pode ser fixado através de qualquer átomo formador de anel, incluindo um átomo formador de anel do anel aro- mático fundido.
Em algumas modalidades, a heterocicloalquila é uma heterocicloalquila monocíclica de 4 a 6 membros que tem 1 ou 2 hete- roátomos independentemente selecionados a partir de nitrogênio, oxi- gênio ou enxofre e que tem um ou mais membros do anel oxidado.
Em algumas modalidades, a heterocicloalquila é uma heterocicloalquila monocíclica ou bicíclica de 4 a 10 membros (escrito abaixo como 4 a 10) com 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos independentemente selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio ou enxofre e com um ou mais membros do anel oxidado. Em algumas modalidades, a heterocicloalquila é uma heterocicloalquila de 8 a 12 membros (por exemplo, heterocicloalquila bicíclica). Em algumas modalidades, a heterocicloalquila é uma hete- rocicloalquila de 8 a 16 membros (por exemplo, heterocicloalquila bicí- Clica ou tricíclica). Em algumas modalidades, a heterocicloalquila bicí- Clica de 8 a 12 membros é um grupo heterocicloalquilarila fundido com 8 a 12 membros ou um grupo heterocicloalquila-heteroarila fundido com 8 a 12 membros. Em algumas modalidades, a heterocicloalquila é uma heterocicloalquila bicíclica de 9 a 12 membros. Em algumas mo- dalidades, a heterocicloalquila bicíclica de 9 a 10 membros é um grupo heterocicloalquilarila de 9 a 10 membros ou um grupo heterocicloal- quil-heteroarila fundido de 9 a 10 membros. O termo "heterocicloalqui- leno" se refere a um grupo de ligação heterocicloalquila divalente.
[00274] Conforme usado no presente documento, o termo "indiví- duo" ou "paciente", usado de modo intercambiável, se refere a qual- quer animal, incluindo mamíferos, preferencialmente camundongos, ratos, outros roedores, coelhos, cães, gatos, suínos, gado, ovelhas, cavalos ou primatas, e mais preferencialmente seres humanos.
[00275] — Conforme usado no presente documento, a expressão "quan- tidade terapeuticamente eficaz" se refere à quantidade de composto ativo ou agente farmacêutico que provoca a resposta biológica ou medicinal em um tecido, sistema, animal, indivíduo ou humano que está sendo pro- curada por um pesquisador, veterinário, médico ou outro clínico.
[00276] Conforme usado no presente documento, o termo "tratar" ou "tratamento" se refere a 1) inibição da doença; por exemplo, inibir uma doença, afecção ou distúrbio em um indivíduo que está experimentando ou exibindo a patologia ou sintomatologia da doença, afecção ou distúr- bio (isto é, interrompendo o desenvolvimento adicional da patologia e/ou sintomatologia) e/ou 2) melhorando a doença; por exemplo, melhorar uma doença, afecção ou distúrbio em um indivíduo que está experimen-
tando ou exibindo a patologia ou sintomatologia da doença, condição ou distúrbio (isto é, revertendo a patologia e/ou sintomatologia).
[00277] Os termos "grupo de proteção" e "grupo protetor" se refe- rem a uma porção que modifica de modo quimicamente reversível um grupo funcional a fim de obter a quimiosseletividade ou a fim de redu- zir a degradação em uma ou mais reações químicas subsequentes. Grupos protetores adequados são bem conhecidos na técnica (por exemplo, Greene e Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3º Ed., John Wiley & Sons, Nova lorque, N.Y., 1999, que é incorporado ao presente documento a título de referência, em sua totalidade).
[00278] O termo "grupo de saída", conforme usado no presente do- cumento, se refere a uma molécula ou um fragmento molecular (por exemplo, um ânion) que é deslocado em uma reação química como uma espécie estável, levando consigo os elétrons de aglutinação. Exemplos de grupos de saída incluem um grupo arilsulfonilóxi ou um grupo alquilsulfonilóxi, como um grupo mesilato ou tosilato. Grupos de saída aniônicos comuns também incluem haletos, como Cl-, Br- e |-.
[00279] Conforme usado no presente documento, o termo "sistema de anel de ribose" se refere a, por exemplo, um sistema de anel de ribofuranose, arabinofuranose, xilofuranose ou lixofuranose opcional- mente substituído, que tem a seguinte estrutura geral:
HO HO OH
[00280] Em algumas modalidades, o sistema de anel de ribose compreende uma parte de um ribonucleosídeo opcionalmente substitu- ído que tem a seguinte estrutura: nucleobase Homo v OH OH :
[00281] Em outras modalidades, o sistema de anel de ribose com- preende uma parte de um lixonucleosídeo opcionalmente substituído que tem a seguinte estrutura: Ho o] ruaisonese v .
[00282] Conforme usado no presente documento, o termo "autoimo- lativo" se refere a uma porção ou resíduo que fornece formação de aglutinação estável entre dois grupos de um composto ou conjugado, mas que se torna instável mediante ativação (por exemplo, ataque nu- cleofílico), que leva à rápida clivagem da porção ou resíduo e separa- ção dos dois grupos. A química de grupos autoimolativos é descrita na literatura, por exemplo, em Alouane, A. et al., "Self-immolative spacers: kinetic aspects, structure-property relationships, and applications", An- gew. Chem. Int. Ed., 2015, 54, 7.492 a 7.509; e Kolakowski, R. V. et al., "The methylene alkoxy carbamate self-immolative unit: Utilization of the targeted delivery of alcohol-containing payloads with antibody-drug conjugates", Angew. Chem. Int. Ed., 2016, 55, 7.948 a 7.951.
[00283] “Conforme usado no presente documento, o termo "opcio- nalmente substituído" se refere a um grupo (por exemplo, grupo alqui- la, grupo cicloalquila, grupo alquileno, grupo arila, grupo heteroarila e semelhantes), em que um ou mais hidrogênios no átomo designado, usualmente um átomo de carbono, oxigênio ou nitrogênio, pode ser substituído por um substituinte designado, desde que a valência nor- mal do átomo designado não seja excedida e que a substituição resul- te em um composto estável. Quando um substituinte é ceto ou oxo (is- to é, =O), então, 2 hidrogênios no átomo são substituídos. O um ou mais substituintes podem ser independentemente selecionados a partir de de C1.6 alquila, C1-4 haloalquila, C3a-7 cicloalquila, C2.6 alquenila, C2-6 alquinila, Ce-10 arila, heterocicloalquila de 4 a 7 membros, heteroarila, halo, CN, NO>2, OR?, SRº, C(O)Rº, C(O)NRºR?, C(O0)OR?, OC(O)Rº,
OC(O)NRºR?, N3, NHR?, NRºR?, NRºC(O)R?, NRºC(0)OR?, NRºC(O) NRºR?, NRºS(O)2Rº, S(O)2R? e S(O)NRºRº, em que cada Rº é inde- pendentemente selecionado a partir de H, C1.6 alquila, Ca-7 cicloalquila, Ce-10 arila, heterocicloalquila de 4 a 7 membros, heteroarila de 5 a 14 membros substituída, C14 haloalquila, C2.6 alquenila e C2.6 alquinila.
[00284] Em algumas modalidades, o um ou mais substituintes opci- onais são selecionados a partir de C1.6 alquila, C14 haloalquila, OH, NO;>, CN e acetila.
[00285] Em algumas modalidades, o substituinte opcional é SH.
[00286] Em algumas modalidades, o substituinte opcional é uma azida (N3).
[00287] Em algumas modalidades, o substituinte opcional é um grupo de fórmula: He=Á
[00288] Em algumas modalidades, o substituinte opcional é uma maleimida de fórmula: o & o.
[00289] Em algumas modalidades, o substituinte opcional é um ci- clo-octina, como dibenzociclo-octina (DBCO), difluorobenzociclo-octina (DIFBO), biarilazaciclo-octona (BARAC), dibenzociclo-octina (DIBO), ciclo-octocinina difluorada (DIFO), ciclo-octina monofluorada (MOFO), dimetoxiazaciclo-octina (DIMAC), ou octila sem arila (ALO), cada um dos quais opcionalmente substituído por 1, 2, 3, 4 ou 5 substituintes opcionais descritos no presente documento.
[00290] Em algumas modalidades, o substituinte opcional é uma ciclo-octina selecionada a partir do grupo que consiste em:
OX DV e :
[00291] “Conforme usado no presente documento, o termo "cerca de" é destinado a contabilizar variações devido a erro experimental. Conforme usados neste documento, as formas no singular "um", "uma", "o" e "a" incluem suas flexões no plural, salvo quando o contex- to ditar claramente o contrário.
[00292] Conforme usado no presente documento, o termo anticorpo se refere a um anticorpo, ou molécula derivada ou relacionada a anti- corpos, como fragmento de anticorpo, anticorpo bi ou triespecífico, an- ticorpo de cadeia única, nanocorpo, etc. As abordagens químicas usa- das no presente documento para acoplar um agente farmacêutico a um agente anticorpo alvo pode ser prontamente usadas com outros agentes alvo de proteína (por exemplo, lectinas, aptâmeros ou proteí- nas não anticorpo que se ligam a receptores de superfície celular es- pecíficos) ou ligantes que contêm grupos reativos similares às proteí- nas (consultar referências fornecidas no presente documento).
EXEMPLOS EXEMPLO 1 A. Ú x Ú eo) onmorolS 15 o EN PA oe ER aee &s HO ONE TT [) -»3— o Ho) o PA Nro A “22 der SAFE E mmoctiaeeno o 5 de
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[00293] (t)-trans-5-benzilóxi-1,2-ditiano-4-01 (Urata. H. et al. BMCL
27, 2017, 3.135 a 3.138) (1,5 g, 6,2 mmol) foi dissolvido em diclorome- tano seco (DCM) (95 ml) seguido pela adição de piridina seca (2,5 ml, 31 mmol) e a solução foi resfriada a 0 ºC.
[00294] A4-nitrofenilcloroformiato (1,87 g, 9,3 mmol) foi dissolvido em DCM seco (10 ml) e a solução foi adicionada por gotejamento à solu- ção de ditianol. A mistura resultante foi agitada durante 30 min. A mis- tura em DCM foi extraída com 1) água 2) bicarbonato de sódio aquoso saturado (2x), 3) ácido cítrico 0,5 M e 4) salmoura. A fase orgânica foi filtrada através de Na2SOs., foi evaporada até à secura e o resíduo foi coevaporado com tolueno. O resíduo solidificou enquanto foi mantido sob vácuo. O material era praticamente produto puro 4-nitrofenil-[(+)- trans-5-benzilóxi-1,2-ditiano-4-il]|carbonato 1. COMPOSTO 2
[00295] —4-nitrofenil-[(+)-trans-S-benzilóxi-1,2-ditiano-4-il|carbonato 1 (2,3 g, 5,5 mmol) foi dissolvido em dimetilformamida seca (DMF) (10 ml) e a solução foi adicionada por gotejamento com uma seringa a uma solução de amino-uridina (1,23 g, 5 mmol) em DMF seca (50 ml). A mistura foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente (RT) e, então, evaporada até a secura, coevaporada com tolueno e o resíduo foi cromatografado em flash através de sílica-gel 60A com gradiente de metanol metanol/diclorometano (2 a 4% a 7% de MeOH) para proporcionar o produto de título 2. Rendimento (2 g, 73%). COMPOSTO 3
[00296] O composto 2 (2 g, 3,9 mmol) foi dissolvido em piridina se- ca (8 ml) e resfriado a O ºC. Cloreto de pivaloíla (0,5 ml, 4 mmol), dissol- vido em diclorometano (8 ml), foi adicionado lentamente por gotejamento com agitação vigorosa e a mistura foi agitada por 5 a 10 minutos a 0 ºC e, então, agitada à RT de um dia para o outro. A mistura de reação foi resfriada bruscamente com metanol, concentrada em evaporador rotativo e a solução concentrada dividida entre diclorometano e bicarbonato de sódio aquoso saturado. A fase orgânica foi evaporada e o resíduo coe- vaporado com tolueno. O resíduo foi, então, cromatografado através de sílica-gel 60A com gradiente de MeOH/DCM (2 a 3% de MeOH) para proporcionar o produto de título 3. Rendimento (1,7 g, 75%). COMPOSTO 4
[00297] A uma solução de acetonitrila (0,2 M) de fosforil-tris- triazolida (obtida seguindo o procedimento da literatura — Tetrahedron Letters, 21, 1980, 2.935 a 2.936, com ligeira modificação) (11 ml, 2,2 mmol), 4-(DMTr-metilóxi)fenol seco (Iyer, R. P. et al. Tetrahedron Letters, 2001, 42, 3.669 a 3.672) (1,2 g, 2 mmol) dissolvido em piridina (3 ml) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 60 min seguida pela adição do composto 3 (1,0 g, 1,74 mmol). A segun- da etapa desta reação prosseguiu por 15 horas e a mistura de reação foi resfriada bruscamente por adição de solução de bicarbonato de trietila- mônio 1M (com o pH ajustado para 7,5 a 8,0). A mistura foi extraída com diclorometano, a fase orgânica foi evaporada e o resíduo coevaporado com tolueno. O resíduo foi cromatografado em flash em sílica-gel 60A com gradiente de MeOH/DCM (2 a 15% de MeOH) contendo piridina (0,2%) para proporcionar o fosfodiéster 4 como espuma branca em uma forma de sal de trietilamônio. Rendimento (1,7 g, 70%). COMPOSTO 5
[00298] O fosfodiéster 4 (0,6 g, 0,5 mmol), FmocNHPEGOH* (mw médio — 700 Da, 0,74 g, 1 mmol) e N-metilimidazol (0,33 ml, 4 mmol) foram secados por coevaporação com acetonitrila (3x5 ml) e dissolvi- dos em acetonitrila seca (5 ml). Mesitilenossulfonilcloreto (0,44 9, 2 mmol) foi dissolvido em 1 ml de acetonitrila seca e adicionado por go- tejamento. A mistura de reação foi agitada à RT durante 3 horas, res- friada bruscamente por adição de água, concentrada no evaporador rotativo e o concentrado dividido entre diclorometano e bicarbonato de sódio aquoso saturado. A fase orgânica foi evaporada e o resíduo co-
evaporado com tolueno. O resíduo foi separado com o uso de croma- tografia RP-HPLC preparativa, com o uso de tampão acetato de trieti- lamônio 0,1 M, pH 7,0/sistema de gradiente de acetonitrila. Rendimen- to do produto puro 5: 0,4 g (45%).
[00299] *Este amino-PEG-ligante protegido por FMOC foi preparado a partir de MMTr-aminoetóxi)etil]Jtosilato e sal monossódico de PEG400 para gerar o MMTrNH-PEGOH. Este produto foi detritilado e o grupo amino foi protegido por um grupo FMOC. (Modified procedures of Lazaro, R. et al. Letters in Peptide Science, 4, 1997, 455 a 461 e Liv- ingston, A.G. et al. Nature Chemistry, 2018). COMPOSTO 6
[00300] O composto purificado 5 (200 mg, 0,11 mmol) foi dissolvido em ácido acético 80% (AcOH) (15 ml) e agitado por 2 horas à RT. Os voláteis foram evaporados e o resíduo foi coevaporado com tolueno. O resíduo foi cromatografado em flash em sílica-gel 60A com gradiente de metanol/diclorometano (0 a 6%) para proporcionar o produto de tí- tulo 6. Rendimento (138 mg, 85%). COMPOSTO 7
[00301] O composto hidróxi 6 (100 mg, 68 umol) foi secado por co- evaporação com tolueno (2 x 10 ml), dissolvido em diclorometano (4 ml) e fosgênio 1,4 M em tolueno (5 ml) foi adicionado. A mistura foi agitada à RT por 3 horas e, então, todos os materiais voláteis foram evaporados. O resíduo foi coevaporado com tolueno seco três vezes para gerar o cloroformiato bruto.
[00302] Este cloroformiato bruto foi dissolvido em tetra-hidrofurano seco (THF) (5 ml) e DCM seco (2 ml) seguido pela adição de N- hidroxissuccinimida (78 mg, 0,68 mmol, 10 eq.) e piridina seca (0,27 ml, 3,4 mmol, 50 eq.). Esta mistura foi agitada à RT por 2 horas. Todos os materiais voláteis foram evaporados e o resíduo foi coevaporado com tolueno. O resíduo foi triturado três vezes com éter dietílico (3 x ml) e o resíduo foi secado sob vácuo e usado na seguinte etapa (produto de título 7) sem purificação adicional. COMPOSTO 8
[00303] A um frasco de vidro de fundo redondo (RB) de 10 ml que contém uma barra de agitação magnética foram sequencialmente adicio- nados dimetilformamida anidra (DMF) (2,5 ml), sal HCI de doxorrubicina (25 mg, 0,043 mmol) e di-isopropiletilamina (DIPEA) (38 ul, 0,19 mmol). O frasco de reação foi envolvido com folha de alumínio e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente sob nitrogênio por 30 min.
[00304] O DMEF eo excesso de DIPEA foram evaporados em rotava- por e o resíduo foi redissolvido em DMF anidro (2,5 ml). A essa solução, uma solução do NHS-carbonato 7 (104 mg, 0,064 mmol em DMF seco, 0,75 ml) foi adicionada. O frasco de reação foi embrulhado com folha de alumínio e a reação foi mantida sob nitrogênio e monitorada por TLC (di- clorometano/metanol/ácido acético, 6/2/2, v/v/v). Após 2 a 3 horas à tem- peratura ambiente, o solvente foi removido sob alto vácuo a 30 a 35 ºC.
[00305] A purificação do produto bruto foi feita com RP HPLC com o uso de acetato de trietilamônio 0,1 M, pH 7,0/acetonitrila, e o pico de produto UV distinto 8 foi coletado, evaporado e coevaporado com tolu- eno para obter 24 mg (30%) de material avermelhado. COMPOSTO 9
[00306] O composto 8 (20 mg, 10 umol) foi dissolvido em DMF seco (0,25 ml) seguido pela adição de trietilamina seca (70 ul, 0,5 mmol) e a mistura foi agitada por 12 horas à temperatura ambiente no escuro. Os voláteis foram removidos por rotavap e o resíduo foi sujeito a purifica- ção por RP HPLC com o eluente neutro mencionado no processo de preparação do Composto 8 para render o produto 9 como um sólido avermelhado seco após coevaporações com tolueno. 14 mg (75%). COMPOSTO 10
[00307] “Composto 9 (10 mg, 5,3 umol) foi dissolvido em DMF anidro
(0,2 ml). Esta solução foi lentamente adicionada por um minuto a uma solução de DMF seca (0,2 ml) contendo éster bis(hidroxissuccinimidil) de ácido adípico (9 mg, 26 umol) e di-isopropiletilamina (5 ul, 26 umol). A mistura de reação foi agitada sob nitrogênio na escuridão à tempera- tura ambiente e o progresso foi monitorado por TLC (diclorometa- no/metanol/ácido acético, 6/2/2, v/v/v). Após 2 horas, os voláteis foram removidos com rotavap sob alto vácuo a 30 a 35 ºC. O resíduo foi tritu- rado com éter dietílico três vezes e o material insolúvel foi secado sob vácuo para fornecer o produto bruto 10 que foi usado sem purificação adicional na etapa seguinte. COMPOSTO 11
[00308] A IgG sérica humana (10 mg, 67 nmol) foi dissolvida em tampão HEPES, 0,1 M, pH 7,4 (2 ml (34 uM)). Para esta solução, uma solução de éster de doxorrubicina-mono-NHS 9 (0,67 umol, 1,5 mg, 10 equiv. em DMF (0,2 ml). A concentração total de DMF foi de 9%) foi adicionada. A mistura foi mantida à temperatura ambiente com agita- ção ocasional por 6 horas. A mistura foi evaporada até à secura e o anticorpo que contém o produto ADC 11 foi separado do reagente não reagido por cromatografia SEC. EXEMPLO 2 pelo DÉO CS - Qua en r r r 15 * | ie. MR o Praça " At * Aos N o o Qua Oo Ns Qua O. “o, LL f-pox ô-Lil-Dor
COMPOSTO 13
[00309] — Fosforodicloridato de 4-formilfenila, preparado e destilado de acordo com MchMillen et al. Biochemistry, 25, 1, 1986, 183 (1,91 g, 8 mmol) foi dissolvido em acetonitrila seca (35 ml) em um tubo Falcon de 50 ml secado e, em seguida, 1,2,4-triazol secado (1,22 g, 17,6 mmol) foi adicionado. À suspensão agitada, foi adicionada por gotejamento trietilamina (2,23 ml, 16 mmol) e a mistura foi agitada por 1 hora à RT. A suspensão foi rapidamente filtrada e a solução 0,2 M levemente la- ranja transparente da bis-triazolida 13 foi recolhida para um frasco de fundo redondo. COMPOSTO 14
[00310] O N-FMOC [2-(2-hidroxietóxi)eti|carbamato 12 foi prepara- do convenientemente a partir de 2-(2-hidroxietóxi)etilamina (1,5 mol eq) e FMOC-CI (1,0 mol eq) em bicarbonato de sódio saturado (5 ml/mmol) e THF (2 ml/mmol), acidificação até pH 2, extração do produ- to por diclorometano, evaporação e cristalização do material puro a partir de pequena quantidade de tolueno. A uma solução de 12 (1,61 9, 4,9 mmol) em piridina seca (10 ml), bis-triazolida 13 (37 ml, 7,4 mmol) foi adicionada em uma única porção, e a mistura de reação foi agitada por 1 hora à RT. A reação foi resfriada bruscamente com bi- carbonato de trietilamônio 1M (5 ml) e a mistura foi dividida entre diclo- rometano e bicarbonato de trietilamônio IM. A fase orgânica foi evapo- rada; o resíduo coevaporado com tolueno e o produto 14 foi isolado por cromatografia flash em sílica-gel 60A com gradiente de meta- nol/diclorometano. Rendimento 2,15 g (85%). COMPOSTO 15
[00311] —Fosfodiéster 14 (2,0 g, 3,18 mmol), 2-(tetra-hidro-2H-piran- 2-ilóxi)etanol (0,94 g, 6,4 mmol) e N-metilimidazol (2,1 g, 25,5 mmol) foram secados por coevaporação com acetonitrila seca (30 ml) e, en- tão, dissolvidos em acetonitrila seca (20 ml). Mesitileno-sulfonilcloreto
(2,8 g, 12,7 mmol) foi adicionado em uma porção. A solução de reação foi agitada à RT durante 3 horas. A reação foi resfriada bruscamente com água e concentrada em um evaporador rotativo e o concentrado foi divi- dido entre diclorometano e bicarbonato de sódio aquoso saturado.
[00312] A fase orgânica foi evaporada, o resíduo foi coevaporado com tolueno e dissolvido em metanol (30 ml). A esta solução agitada magneticamente à RT, foi adicionado boro-hidreto de sódio sólido (0,15 g, 4 mmol) em uma única porção. A evolução de gás extensiva parou após 30 segundos e após 60 segundos a mistura foi dividida en- tre bicarbonato de sódio saturado e diclorometano. A fase orgânica foi coletada, evaporada e coevaporada com acetonitrila. O material resi- dual foi purificado por RP-HPLC preparativa para proporcionar o pro- duto de título 15 após remoção de TEAA residual a baixa pressão. Rendimento total de 15 calculado a partir de 14 (1,27 g, 61%). COMPOSTO 16
[00313] “Composto 15 (1,15 g, 1,7 mmol) foi dissolvido em DCM se- co (15 ml) seguido pela adição de piridina seca (0,69 ml, 8,5 mmol) e a solução foi arrefecida a 0 ºC. Cloroformiato de 4-nitrofenila (0,5 g, 2,55 mmol), dissolvido em DCM seco (5 ml), foi adicionado por gotejamento à solução de 15 e a mistura resultante foi agitada por 30 minutos. A mistura foi extraída com 1) água, 2) solução aquosa de NaHCO; (2x saturado), e 3) salmoura. A fase orgânica foi filtrada através de Na2SO., evaporada até à secura e o resíduo foi coevaporado com tolueno e foi secado sob vácuo. O material foi praticamente um produto puro 16. COMPOSTO 17
[00314] A um frasco de vidro de fundo redondo (RB) de 25 ml que contém uma barra de agitação magnética foi DMF anidro adicionado sequencialmente (3 ml), sal de HCI de doxorrubicina (30 mg, 0,052 mmol) e di-isopropiletilamina (45 ul, 0,26 mmol). O frasco de reação foi mantido no escuro e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente sob nitrogênio por 30 minutos.
[00315] O DMF e o excesso de DIPEA foram evaporados em um evaporador rotativo e o resíduo foi redissolvido em DMF anidro (3 ml). A esta solução, uma solução do carbonato de 4-nitrofenila 16 (63 mg, 0,078 mmol em DMF seco, 0,75 ml) foi adicionada. O frasco de reação foi mantido no escuro e a reação foi mantida sob nitrogênio e monito- rada por RP-HPLC com o uso de um sistema de tampão de acetato de trietilamônio. Após reação de um dia para o outro à temperatura ambi- ente, o solvente foi removido sob alto vácuo a 30 a 35 ºC.
[00316] A purificação do produto bruto foi feita com RP-HPLC com o uso de acetato de trietilamônio 0,1 M, pH 7,0/acetonitrila, e um pico distinto de produto UV (485 nm) foi coletado, evaporado e coevapora- do com tolueno para obter 24 mg de material avermelhado.
[00317] O conjugado de doxorrubicina obtido (20 mg, 10 umol) foi dissolvido em DMF seco (0,25 ml) seguido pela adição de trietilamina seca (70 ul, 0,5 mmol) e a mistura foi agitada durante 12 horas à tem- peratura ambiente no escuro. Os voláteis foram removidos por evapo- rador rotativo e o resíduo foi submetido à purificação por RP-HPLC com o eluente neutro mencionado acima para render o produto amino 17 como um sólido avermelhado seco após coevaporações com tolue- no. Rendimento 14 mg. COMPOSTO 18
[00318] Em um frasco de vidro RB de 5 ml, o composto 17 (10 mg, umol) foi dissolvido em DMF anidro (0,4 ml) e, em seguida, di- isopropiletilamina (14 ul, 80 umol) foi adicionado. A mistura foi agitada à temperatura ambiente no escuro sob nitrogênio por 30 minutos. Esta solução foi adicionada por gotejamento por alguns minutos a uma so- lução de DMF seca (0,4 ml) contendo éster bis(hidroxissuccinimidil) de ácido adípico (17 mg, 50 umol) e di-isopropiletilamina (10 ul, 50 umol). A mistura de reação foi agitada no escuro à temperatura ambiente e o progresso foi monitorado por RP-HPLC com o uso de um sistema tam- pão TFA (A: acetonitrila 5%/TFA 0,1%. B: TFA 0,1% em acetonitrila). Após 4 horas, os voláteis foram removidos do evaporador rotativo sob alto vácuo a 30 a 35 ºC. O resíduo foi triturado com éter dietílico três ve- zes e o material insolúvel foi secado sob vácuo para fornecer o produto bruto 18 que foi usado sem purificação adicional na próxima etapa. COMPOSTO 19
[00319] A IgG sérica humana (10 mg, 67 nmol) foi dissolvida em tampão HEPES, 0,1 M, pH 7,4 (2 ml (34 UM)). A essa solução, uma solução de éster de doxorrubicina-mono-NHS 18 (0,67 umol, 10 equiv. em DMF (0,2 ml). A concentração total de DMF foi de 9%. A mistura foi mantida à temperatura ambiente com agitação ocasional por 6 horas. A mistura foi evaporada até à secura e o conjugado ADC 19 foi isolado por cromatografia SEC em coluna de HPLC Zorbax GF-250.
[00320] A estrutura e a funcionalidade químicas foram evidenciadas pelo tratamento de um conjugado molecular puro e alto com 10% de áci- do acético (14 horas), remoção de ácido e neutralização do material resi- dual até pH 7,4, resultando na formação quantitativa de doxorrubicina livre. EXEMPLO 3 Quo TT Qua Qua Que eo “ NX — as X 22 Ú Moe Os | : E ES o : ts Ci
COMPOSTO 20
[00321] Um |fosfotriéster 20 foi obtido de uma maneira semelhante à descrita para o composto 15 no Exemplo 2, com exceção de que o FMOC-NH-PEGB500 foi usado em vez de um análogo curto de dietileno glicol e a ordem de incorporação do acionamento lábil de ácido e do PEG foi trocada. O fosfotriéster de benzaldeído foi reduzido a álcool benzólico por meio de boro-hidreto conforme descrito anteriormente e o composto final 20 foi obtido após cromatografia flash em sílica-gel. Rendimento de 49% (3 etapas). COMPOSTO 21
[00322] O Composto 20 (1,22 g, 1,413 mmol), dissolvido em acetoni- trila seca (5 ml), foi tratado com di-isopropiletilamina (2 ml) à RT por 2 dias. A análise por TLC mostrou um consumo completo de material inicial e toda as matérias voláteis foram evaporadas. O material resi- dual foi dissolvido em um volume mínimo de DCM seguido pela adição de éter de petróleo (40 ml) causando precipitação de 21 na forma de um óleo e separação do dibenzofulveno liberado. O produto foi isolado por centrifugação e secagem a vácuo. Rendimento 0,87 g (92%). COMPOSTO 22
[00323] 6-maleimido-hexanoato de N-succinamida comercial (0,41 9, 1,34 mmol) foi adicionado ao composto 21 (0,75 g, 0,89 mmol) dis- solvido em piridina seca (10 ml). A mistura de reação foi agitada à RT por 6 horas e foi dividida entre bicarbonato de sódio saturado e diclo- rometano. A fase orgânica foi evaporada, secada por coevaporação com tolueno e o produto 22 foi isolado após cromatografia em coluna de sílica-gel curta. Rendimento 0,59 g, 63%. COMPOSTO 23
[00324] O fosfotriéster 22 (0,40 g, 0,42 mmol) foi convertido em carbonato de nitrofenila 23 seguindo a metodologia descrita no Exem- plo 2. O produto foi obtido na forma de um óleo com rendimento prati-
camente quantitativo. COMPOSTO 24
[00325] O cloridrato de doxorrubicina (20 mg, 0,035 mmol) em DMF seca (2 ml) foi desprotonado por adição de di-isopropiletilamina e eva- porado até a secura. O resíduo foi redissolvido em DMF seco (1 ml) e o éster ativo 23 (80 mg, 0,07 mmol), dissolvido em DMF (0,75 ml), foi adicionado seguido por trietilamina seca (15 ml, 0,1 mmol). A mistura foi agitada à RT por 14 horas, evaporada e resfriada bruscamente por adição de água/piridina (1:9 v/v). Após 60 minutos, todas as matérias voláteis foram evaporadas, a mistura de reação dissolvida em acetoni- trila/água 7:3 e o produto 24 isolado por RP HPLC preparativa com o uso de gradiente de TEAA/MeCN e seguindo o produto vermelho es- curo com absorvância a 485 nm, claramente separado da doxorrubici- na inicial. Rendimento (com base em HPLC) ca.70%. COMPOSTO 25
[00326] O derivado de maleimida 24 foi conjugado com IgG humana seguindo essencialmente o procedimento de literatura de B.A. Men- delsohn et al., Bioconjugate Chemistry, 2017, 28, 371 a 381 para pre- parar o composto 25. A mistura de reação foi dessalinizada com o uso de uma coluna de dessalinização PD 10 e analisada por coluna de HPLC de filtração de gel Zorbax GF-250. Uma amostra de material iso- lado foi tratada com ácido acético a 10% por 16 horas à temperatura ambiente e a mistura foi concentrada em um concentrador de vácuo SpeedVac. O líquido residual foi levado a pH 7,4 por adição de um ex- cesso de tampão TRIS e após 60 minutos esta mistura foi analisada novamente na mesma coluna Zorbax para determinar que todo o ma- terial absorvente de 485 nm foi limitado a componentes de baixo peso molecular. A análise por HPLC em fase reversa evidenciou que esse componente é realmente a doxorrubicina inicial.
EXEMPLO 4 Praloila-D- y U eo meo TRL EO gar no Q Teo : l . 1) " U a 1) "o | a a "To | Mo For) " s V U : U a o dA nt H-no So oo COMPOSTO 26
[00327] A 2'-amino-uridina substituída por N-Ala-Val-Ac foi prepara- da por adição sequencial em fase de solução de cloreto de aminoacil N-FMOC (1,3 molar equivalente) (preparado recentemente antes de cada adição) dissolvido em THF seco, à solução vigorosamente agita- da de 2'-aminouridina em bicarbonato de sódio 1 M. Cada intermediá- rio foi purificado por cromatografia em sílica-gel e o grupo FMOC foi removido mediante tratamento com di-isopropil-etilamina. Remoção final de FMOC foi seguida por acetilação com anidrido acético em bi- carbonato de sódio 1 M, e o derivado de uridina 2'-N-substituida puro 26 foi obtido após cromatografia de coluna RP preparativa com um rendimento total de 37%. COMPOSTO 27
[00328] A pivaloilação do composto 26 (2 g, 4,5 mmol) com o uso do mesmo procedimento como no Exemplo 1, gerou o composto 27 (1,9 g) com um rendimento de 77%. COMPOSTO 28
[00329] Uma solução de acetonitrila 0,2 M de 4-formilfenilfosforo-
bistriazolida 13 (Exemplo 2) (18 ml, 3,6 mmol) foi adicionada a um frasco RB e, com agitação, uma solução de piridina de composto 27 (1,85 9, 3,4 mmol/6 ml de piridina) foi adicionada por gotejamento. À mistura de reação foi, então, agitada por 2 horas à temperatura ambi- ente. A reação foi resfriada bruscamente com bicarbonato de trietila- mônio 1 M (1 ml) e a mistura foi dividida entre diclorometano e bicar- bonato de trietilamônio 1 M. A fase orgânica foi evaporada, o resíduo coevaporado com tolueno e o produto 28 foi isolado por cromatografia flash em sílica-gel 60A com um gradiente de metanol/diclorometano. Rendimento de 1,8 g (73%). COMPOSTO 29
[00330] Fosfodiéster 28 (1,75 g, 2,4 mmol), FMOC-NH-PEG5o0OH (3,4 9, 4,8 mmol) e N-metilimidazol (1,5 ml, 19,2 mmol) foram secados por coevaporação com acetonitrila (2 x 50 ml) e, então, dissolvidos em acetonitrila seca (25 ml). Cloreto de mesitilenossulfonila (2,1 g, 9,6 mmol) foi adicionado em uma porção com agitação vigorosa. A solu- ção de reação foi agitada à RT durante 3 horas. A reação foi resfriada bruscamente com água e concentrada em um evaporador rotativo. O concentrado foi, então, dividido entre diclorometano e bicarbonato de sódio aquoso saturado. A fase orgânica foi evaporada e o resíduo co- evaporado com tolueno. O resíduo foi, então, cromatografado por flash através de sílica-gel 60A com gradiente de etanol/diclorometano (0 a 2% de etanol) para proporcionar o produto de título 29. Rendimento (2,4 9, 70%). COMPOSTO 30
[00331] Fosfotriéster 29 (2,3 g, 1,6 mmol) foi dissolvido em metanol (20 ml). NaBH, sólido (300 mg, 8 mmol) foi adicionado em uma porção com agitação. Após a evolução do gás ter parado (15 a 30 segundos), a mistura foi vertida em uma solução de bicarbonato de sódio aquosa saturada e extraída com diclorometano. A fase orgânica foi evaporada e o resíduo coevaporado com tolueno. O resíduo foi cromatografado através de sílica-gel 60A com gradiente de etanol/diclorometano (0 a 4% de etanol) para proporcionaro produto de título 30. Rendimento (2 9, 90%). COMPOSTO 31
[00332] O bloco de hidroxila 30 (1,9 g, 1,34 mmol) foi secado por coevaporação com tolueno (2 x 50 ml) e dissolvido em diclorometano seco (15 ml). A esta solução, fosgênio 1,4 M em tolueno (20 ml) foi adicionado. A mistura foi agitada à RT durante 3 horas seguida por evaporação de todos os materiais voláteis. O resíduo foi coevaporado com tolueno seco três vezes para gerar o cloroformiato bruto.
[00333] Este cloroformiato bruto foi dissolvido em THF seco (30 ml) e DCM seco (10 ml), seguido pela adição de N-hidroxissuccinimida (0,75 g, 6,7 mmol, 5 eq.) e piridina seca (5,4 ml, 67 mmol, 50 eq.). À mistura resultante foi agitada à RT por 2 horas. Todos os materiais vo- láteis foram evaporados e o resíduo de produto foi coevaporado com tolueno. O resíduo foi triturado três vezes com éter dietílico (3x50 ml) e o resíduo foi secado sob vácuo para fornecer o produto bruto 31 e usado como tal na próxima etapa. COMPOSTO 32
[00334] A um frasco de vidro de fundo redondo (RB) de 25 ml que contém uma barra de agitação magnética foram sequencialmente adi- cionados DMF anidro (5 ml), sal de HCI de doxorrubicina (50 mg, 0,086 mmol, 1 eq) e di-isopropiletilamina (75 ul, 0,38 mmol, 5 eq). À mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 30 h.
[00335] O DMF e o excesso de DIPEA foram removidos por meio de evaporação em um evaporador rotativo e o resíduo foi redissolvido em DMF anidro (5 ml). A esta solução, uma solução do NHS- carbonato 31 (210 mg, 0,13 mmol, 1,5 eq, em DMF seco, 2 ml) foi adi- cionada. Após reação de um dia para o outro à temperatura ambiente,
o solvente foi removido sob alto vácuo a 30 a 35 ºC.
[00336] A purificação do produto bruto foi realizada com o uso de RP-HPLC com acetato de trietilamônio 0,1 M, pH 7,0/acetonitrila, e o pico 32 de produto UV (485 nm) distinto foi coletado, evaporado e coe- vaporado com tolueno para obter 45 mg (26%) de material avermelha- do. COMPOSTO 33
[00337] “Composto 32 (30 mg, 15 umol) foi dissolvido em DMF seco (0,4 ml) seguido pela adição de trietilamina seca (105 ul, 0,75 mmol) e a mistura foi agitada por 12 horas à temperatura ambiente no escuro. Os voláteis foram removidos por evaporador rotativo e o resíduo foi submetido à purificação por RP HPLC com o eluente neutro usado pa- ra isolar o Composto 8 para render o produto 33 como um sólido avermelhado após coevaporação com tolueno. Rendimento 19 mg (70%). COMPOSTO 34
[00338] Em um frasco de vidro RB de 5 ml, o sal acetato de com- posto 33 (10 mg, 5,5 umol) foi dissolvido em DMF anidro (0,4 ml) e, então, di-isopropiletilamina (8 ul, 44 umol) foi adicionado. A mistura foi agitada à temperatura ambiente no escuro por 30 minutos. Esta solu- ção foi adicionada por gotejamento por alguns minutos a uma solução de DMF seca (0,4 ml) contendo éster bis(hidroxissuccinimidil) de ácido adípico (9 mg, 30 umol) e di-isopropiletilamina (8 ul, 44 umol). A mistu- ra de reação foi agitada no escuro à temperatura ambiente e o pro- gresso foi monitorado por RP-HPLC com o uso de um sistema tampão TFA (A: acetonitrila 5%/TFA 0,1%. B: TFA 0,1% em acetonitrila). Após 4 horas, os voláteis foram removidos por evaporador rotativo sob alto vácuo a 30 a 35 “ºC. O resíduo foi triturado com éter dietílico três vezes e o material insolúvel foi seco sob vácuo para fornecer o produto bruto 34, que foi usado sem purificação adicional na próxima etapa.
COMPOSTO 35
[00339] A IgG sérica humana (10 mg, 67 nmol) foi dissolvida em tampão HEPES, 0,1 M, pH 7,4 (2 ml (34 uM)). Para esta solução, uma solução de éster de doxorrubicina-mono-NHS 34 (137 mg, 0,67 umol, equiv. em DMF (0,5 ml) (a concentração total de DMF foi de 9%) foi adicionada. A mistura foi mantida à temperatura ambiente com agita- ção ocasional por 6 horas. A mistura foi evaporada até à secura e o conjugado de ADC 35 foi isolado por cromatografia SEC em coluna de HPLC Zorbax GF-250.
[00340] A estrutura química e a funcionalidade foram evidenciadas por tratamento de um conjugado molecular puro e alto com 10% de ácido acético (14 horas), remoção de ácido e neutralização do material residual até pH 7,4, resultando na formação quantitativa de doxorrubi- cina livre. EXEMPLO 5 xs Oo Ce E x. om” e T 2, Ns E. so oo o à moro so
O CE To EX f PmonocoomNo: — ( Percnon 91 40 COMPOSTO 36
[00341] A uridina (5,0 g, 20,5 mmol) foi suspensa em metanol seco (100 ml) e evaporada após adição de tolueno (200 ml). Esse material livre de água foi dissolvido em THF seco (75 ml) e metanol seco (8 ml) e trifenil fosfina (8 g, 30 mmol) foi adicionada seguida por di-
isopropilazodicarboxilato (6,26 g, 31 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 60 minutos e a análise de TLC mostrou total desaparecimento do material inicial de uridina e formação de um mate- rial com Rf ligeiramente superior. Todo o material volátil foi evaporado e o óleo residual foi coevaporado com piridina seca a 60 ºC. O óleo final foi dissolvido em piridina seca (100 ml) e 1,3-dicloro-1,1,3,3- tetraisopropildisiloxano (7,8 g, 24,7 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 12 horas e resfriada bruscamente por adição de metanol. A mistura foi, então, dividida en- tre bicarbonato de sódio saturado e diclorometano. Os extractos orgâà- nicos foram combinados e evaporados. O resíduo foi secado por coe- vaporação com tolueno, o óxido de trifenilfosfina cristalizado foi filtrado e a 5',3'-tetraisopropildisiloxil N3-metil-uridina foi brevemente purificada em uma coluna de sílica-gel grande. O material coletado foi secado por coevaporação com tolueno, dissolvido em dioxano (50 ml) seguido por adição de 2,3-di-hidrofurano (14 g, 0,2 mol) e ácido benzenossul- fônico (0,16 g, 1,0 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambien- te por 6 horas e o ácido foi neutralizado por adição de solução satura- da de bicarbonato de sódio, seguida por extração com diclorometano e evaporação. O material residual foi dissolvido em metanol (200 ml) e fluoreto de amônio sólido (6 g, 0,16 mol) foi adicionado. A suspensão foi agitada magneticamente por 16 horas até o desaparecimento com- pleto do material com alto Rf e a formação de composto 36. A mistura foi evaporada, secada por coevaporação com tolueno, dissolvida em diclorometano e filtrada. O material filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia de sílica-gel. As frações evaporadas que contêm 36 renderam material na forma de uma espuma (4,2 g, 63% de rendimen- to total).
COMPOSTO 37
[00342] A 72-O-thf-N3-metil-uridina 36 (3,0 g, 9,145 mmol) foi conver-
tida em seu derivado 5'-azido 37 em uma reação de Mitsunobu modifi- cada com o uso do método descrito em T. Hata et al., J. C. S. Perkin |, 1980, 306 a 310. O composto 37 foi obtido como um óleo (2,29 9, 71%). COMPOSTO 38
[00343] O nucleosídeo 37 (1,5 g,4,2mmol) em piridina seca (20 ml) foi reagido com bis-triazolida 13 (0,2 M em MeCN) (40 ml, 8,0 mmol) por 2 horas à RT. O excesso de triazolida foi hidrolisado por adição de bicarbonato de trietilamônio 1 M e após 10 minutos o produto foi extra- ído em diclorometano. A cromatografia de coluna de sílica-gel produziu sal de trietilamônio de 38 como um óleo incolor. Rendimento 2,25 9, 82%. COMPOSTO 39
[00344] O fosfodiéster 38 (2,0 g, 3,06 mmol) foi convertido em fosfo- triéster 39 por meio de uma reação Efimov padrão, conforme anterior- mente descrito no Exemplo 2, com exceção de que aqui o isopropanol foi usado como componente hidroxila. Outros álcoois, como MeO- PEG-OH, podem ser usados, por exemplo, para preparar um fosfotri- éster que exibe propriedades de solubilidade de água melhoradas.
[00345] O produto 39 foi isolado após cromatografia de sílica-gel curta. Rendimento 1,20 g, 66%. COMPOSTO 40
[00346] O fosfotriéster de aldeído 39 (1,1 g, 1,85 mmol), dissolvido em metanol (15 ml), foi reduzido ao produto de álcool benzílico 40 por adição de boro-hidreto de sódio sólido (2 eq) sob agitação vigorosa. À reação vigorosa decaiu após 30 segundos e a mistura foi dividida entre uma solução de bicarbonato e diclorometano, rendendo um material puro de TLC sem sinal de redução do grupo azido. Rendimento quanti- tativo.
COMPOSTO 41
[00347] O grupo hidroxila de composto 40 (1,0 g, 1,67 mmol) foi ati- vado por reação com cloroformiato de p-nitrofenila, de acordo com os procedimentos padronizados descritos no Exemplo 2. Após o trata- mento, o produto 41 foi essencialmente puro. Foi evaporado, coevapo- rado com tolueno e secado sob baixa pressão. EXEMPLO 6 mo mo mo ao OS RNA | Eme o : o ate a a COMPOSTO 44
[00348] Síntese de 2'-O-thf-fosfotriéster 44.
[00349] Esta síntese começou com a 2'-O-thf uridina 36, que é um derivado bem conhecido de uridina. Foi obtido a partir de 1,1,3,3- tetraisopropildisiloxiuridina e 2,3-di-hidrofurano em uma reação catali- sada por ácido, seguida pela remoção da proteção dissilóxi por fluore- to de amônio. O material cromatograficamente purificado foi protegido na posição 5'-O por cloreto de pivaloil em piridina (Exemplo 1) para obter, após purificação, o produto 42. A fosforilação deste nucleosídeo com bis-triazolida 13 gerou um fosfodiéster 43 que foi convertido no isopropil fosfotriéster 44. COMPOSTO 45
[00350] O composto 44 (0,62 g, 0,98 mmol) e N-FMOC aminóxi PEG 1500 (3,5 g, 2,0 mmol) foram secados por coevaporação repetiti- va com acetonitrila seca (3 x 50 ml) e dissolvidos em acetonitrila seca
(5 ml). Subsequentemente, trifenilfosfina (0,26 g, 1 mmol) foi adiciona- da em uma porção única, seguida pela adição por gotejamento de azodicarboxilato de di-isopropila (0,25 g, 1,2 mmol). A mistura foi len- tamente agitada à RT durante um período de 18 horas. Essa mistura de reação foi analisada em uma coluna de C18-HPLC analítica e puri- ficada em uma coluna de RP-HPLC preparativa com o uso de gradien- te de acetato de trietilamônio a pH 7,0/acetonitrila para eluição. O ma- terial puro isolado 45 foi evaporado, coevaporado com tolueno e seca- do de um dia para o outro em uma bomba de alto vácuo. Rendimento 1,54 9, 67%. COMPOSTO 46
[00351] O fosfotriéster de aldeído 45 (0,8 g, 0,34 mmol) em metanol (10 ml) foi reduzido por adição de boro-hidreto de sódio sólido, como no Exemplo 2. Após 1 minuto, a mistura foi dividida entre bicarbonato de sódio e diclorometano. A fase orgânica foi evaporada, coevaporada com tolueno e analisada por HPLC analítico. O rendimento de 46 foi assumido como quantitativo. COMPOSTO 47
[00352] A ativação de hidroxila benzílica de 46 foi realizada com o uso (0,25 g, 0,1 mmol) de 46 de acordo com o procedimento padrão (Exemplo 2). A análise por HPLC do material isolado mostrou uma conversão completa do composto 46 no reagente 47. O material foi evaporado e secado por coevaporação com tolueno.
OUTRAS MODALIDADES
[00353] Deve ser entendido que, embora o presente pedido tenha sido descrito em combinação com a descrição detalhada do mesmo, a descrição supracitada é destinada a ilustrar e não limitar o escopo do presente pedido, que é definido pelo escopo das reivindicações ane- xas. Outros aspectos, vantagens e modificações encontram-se dentro do âmbito das reivindicações a seguir.

Claims (67)

REIVINDICAÇÕES
1. Composto caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula (1) R' R
VA R2
O porção de anticorpo=O —P— Z 1 —MA-23-D O (1), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: a porção de anticorpo é selecionada a partir de: anticorpo-L-(CH2)4- e anticorpo-L-(porção alifática)-; a porção alifática é selecionada a partir de um polímero, Rº, e um grupo selecionado a partir de: -polímero-L-(CH2)m- e -polímero-L-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m-; Rº é selecionado a partir de C1.6 alguila opcionalmente substituída, C1-3 alquil-O-(CH2-CH2-O),-(CH2)m- opcionalmente substi- tuído e C3.7 cicloalquila opcionalmente substituída; cada L é independentemente um grupo de ligação; m e p são cada um, independentemente, um número inteiro de 1 a 10; D é um resíduo de um composto citotóxico ou quimiotera- pêutico; Z' é selecionado a partir de O, S e N(RN); Z? é selecionado a partir de O e N(RY) ou Zº? está ausente; Aé O ou N, em que, quando A é O, então, Rô está ausente; RV é selecionado a partir de H e C1.6 alquila opcionalmente substituída; Rº é selecionado a partir de H e C1.6 alquila ou
Rº e R1, junto com A e o átomo de carbono ao qual R' está fixado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcio- nalmente substituído; ou
Rº e R?, junto com A, o átomo de carbono ao qual R' está fixado e o átomo de carbono ao qual R? está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros opcionalmente substituído;
Mº é um grupo autoimolativo que tem qualquer uma das fórmulas (a) a (i):
x o RO "RR o CH CHO-t—i A preo-ê- $ El: . arm BR O, ÁRA JgJ[ÚAeH&— oe? o: oO “e x” Gs o xr CcHs 9 emo faemenol : [Wu (g);
7 7
AO EoLrnen AE o-Enononaê- :
x Rº CHs “(h);* Rê CHs cHs (); em que x denota um ponto de fixação a Z' e y denota um ponto de fi- xação a Z?;
R' e R? são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquila opcionalmente substitu- ída, Ce-10 arila opcionalmente substituída e heteroarila de 5 a 14 mem- bros opcionalmente substituída;
ou R' e R? são unidos com os átomos de carbono aos quais estão fixados para formar um anel de C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída, um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcio- nalmente substituído, uma Cç-10 arila opcionalmente substituída ou uma heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída;
ou R' e R? são unidos para formar um sistema de anel ribo-
se; R? e Rô são independentemente selecionados a partir de H e C1.6 alquila; e E é uma porção clivável.
2. Composto caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula (Il): Ro
SS R2
O porção aliftica-O—P—Z'=MA-Zº-D o (1), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: cada porção alifática é independentemente selecionada a partir de um polímero, Rº, e um grupo selecionado a partir de: polímero-L-(CH2)m- e polímero-L-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m-; RP é selecionado a partir de C1.6 alquileno opcionalmente substituído, C1.3 alquileno-O-(CH2-CH2-O),-(CH2)m- opcionalmente substituído, e C3-7 cicloalquileno opcionalmente substituído; cada L é independentemente um grupo de ligação; m e p são cada um, independentemente, um número inteiro de 1 a 10; D é um resíduo de um composto citotóxico ou quimiotera- pêutico; Z' é selecionado a partir de O, S e N(RY); Z? é selecionado a partir de O e N(RN) ou Zº está ausente; Aé O ou N, em que, quando A é O, então, Rô está ausente; RN é selecionado a partir de H e C1.6 alquila opcionalmente substituída;
Rº é selecionado a partir de H e C1.6 alguila ou R? e R!, junto com A e o átomo de carbono ao qual R' está fixado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcio- nalmente substituído; ou R? e R?, junto com A, o átomo de carbono ao qual R' está fixado e o átomo de carbono ao qual R? está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros opcionalmente substituído; Mº é um grupo autoimolativo que tem qualquer uma das fórmulas (a) a (i): x o Ro o fºR o rcHreHo-t—t A pr eo-e-t Et $ “ (a; R "(b); R "(o Á RA JgJ[ÚAeH&— oi o: O “e x CH o x CH o Cr semo Cf etman—o E [Wu (g);
RR NS Q EX! Dono EX( DE o-C-NeHoH NC! x RÊ CHs (h);* Rê CHs Hs SD (); em que x denota um ponto de fixação a Z' e y denota um ponto de fi- xação a Z?; R' e R? são selecionados independentemente a partir do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquila opcionalmente substitu- ída, Ce-10 arila opcionalmente substituída e heteroarila de 5 a 14 mem- bros opcionalmente substituída; ou R' e R? são unidos com os átomos de carbono aos quais estão fixados para formar um anel de C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída, um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcio- nalmente substituído, uma Cç-10 arila opcionalmente substituída ou uma heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída;
ou R' e R? são unidos para formar um sistema de anel ribo- se; em que um dentre R' ou R? é substituído por anticorpo-L- (CH2)4- e anticorpo-L-(porção alifática)-; R? e Rô são independentemente selecionados a partir de H e C1.6 alquila; e E é uma porção clivável.
3. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, carac- terizado pelo fato de que a porção de anticorpo compreende um anti- corpo ou um fragmento de anticorpo.
4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o composto citotóxico é se- lecionado a partir de um grupo de agentes alquilantes, antimetabólitos, inibidores de mitose e inibidores de topoisomerase.
5. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 4, caracterizado pelo fato de que E é clivável por uma enzima (por exemplo, uma enzima intracelular) selecionada a partir do grupo que consiste em uma esterase, uma peptidase específica ou inespecí- fica, uma redutase, uma oxidase, uma glicosidase, uma hidrolase, uma glicosil transferase e uma transaminase.
6. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 5, caracterizado pelo fato de que E é clivável por uma enzima (por exemplo, uma enzima intracelular) selecionada a partir do grupo que consiste em uma esterase, uma redutase, uma oxidase, um glico- sídeo, uma hidrolase e uma glicosil transferase.
7. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 6, caracterizado pelo fato de que E é não enzimaticamente clivável a pH ácido.
8. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 7, caracterizado pelo fato de que E é um grupo acila, um gru-
po O-metil-acila, um grupo metil azido, um resíduo de açúcar, um ace- tal protegido ou um éster de carbonato.
9. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 8, caracterizado pelo fato de que E é clivável por uma enzima redutase.
10. Composto, de acordo com a reivindicação 9, caracteri- zado pelo fato de que A é O e E é um grupo de fórmula: o o
OO O :
11. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 10, caracterizado pelo fato de que E contém um grupo ditio que é clivável por um tiol biogênico.
12. Composto, de acordo com a reivindicação 11, caracteri- zado pelo fato de que E é clivável por uma glutationa.
13. Composto, de acordo com a reivindicação 11 ou 12, ca- racterizado pelo fato de que E é um grupo de qualquer uma das se- guintes fórmulas: sa O-RF
O OS AX TT) e So em que RF é selecionado a partir do grupo que consiste em C1-6 alquila e benzila.
14. Composto, de acordo com a reivindicação 13, caracteri- zado pelo fato de que A é O e E é um grupo de fórmula: o O-Rº
FA sº :
15. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 8, caracterizado pelo fato de que E é clivável pela enzima gli- cosídeo hidrolase.
16. Composto, de acordo com a reivindicação 15, caracteri- zado pelo fato de que E é um resíduo de um açúcar selecionado a par- tir de glicose, galactose, manose e ácido glucurônico.
17. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 4, caracterizado pelo fato de que E é clivável por uma enzima esterase intracelular.
18. Composto, de acordo com a reivindicação 17, caracteri- zado pelo fato de que E é selecionado a partir de um grupo acila, um éster de carbonato e um éster O-metil-acílico.
19. Composto, de acordo com a reivindicação 18, caracteri- zado pelo fato de que E é um grupo acila.
20. Composto, de acordo com a reivindicação 7, caracteri- zado pelo fato de que E é um grupo selecionado a partir de um acetal, um orto-éster e éteres trifenilmetílicos substituídos.
21. Composto, de acordo com a reivindicação 7, caracteri- zado pelo fato de que E é selecionado a partir de tetra-hidrofuranila, 4- metoxitetra-hidropiran-4-ila, 1,5-dicarbo-metoxipentanila, metóxi iso- propil acetal, metóxi ciclo-hexenil acetal, dimetoxitritila, trimetoxitritila e pixila.
22. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 4, caracterizado pelo fato de que uma porção clivável E é fi- xada a A com o uso de um grupo de fórmula (LF): el a Ant, | (LE, em que a denota um ponto de fixação a A e b indica um ponto de fixação a E.
23. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 22, caracterizado pelo fato de que R' e R? são, cada um, hi- drogênio.
24. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 22, caracterizado pelo fato de que R' e R2formam juntos anel de C3.7 cicloalquila.
25. Composto, de acordo com a reivindicação 24, caracteri- zado pelo fato de que o anel de C3-7 cicloalquila selecionado a partir do grupo que consiste em ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila e ciclo- hexila.
26. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 24, caracterizado pelo fato de que R' e R? formam juntos um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros.
27. Composto, de acordo com a reivindicação 26, caracteri- zado pelo fato de que o anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros é selecionado a partir do grupo que consiste em pirrolidina, piperidina, tetra-hidrofurano e tetra-hidropirano.
28. Composto, de qualquer uma das reivindicações 1 a 24, caracterizado pelo fato de que R' e R? formam juntos um sistema de anel ribose de um ribonucleosídeo.
29. Composto, de acordo com a reivindicação 28, caracteri- zado pelo fato de que R' e R? formam juntos um sistema de anel ribo- se de fórmula: nucleobase Woo a b ; em que a denota um ponto de fixação a O e b denota um ponto de fixação a A, a denota um ponto de fixação a A e b denota um ponto de fixação a O e em que W é selecionado a partir do grupo que consiste em H, um grupo acila, um grupo protetor, anticorpo-L-(CH2),-
e anticorpo-L-(porção alifática)-.
30. Composto, de acordo com a reivindicação 29, caracteri- zado pelo fato de que a nucleobase é selecionada a partir do grupo que consiste em adenina, citosina, guanina, timina, uracila e outras nucleobases naturais e não naturais.
31. Composto, de acordo com a reivindicação 29, caracteri- zado pelo fato de que a nucleobase é selecionada do grupo que con- siste em 5-metilcitosina, pseudouridina, di-hidrouridina, inosina, 7- metilguanosina, hipoxantina e xantina.
32. Composto, de acordo com a reivindicação 29, caracteri- zado pelo fato de que a nucleobase compreende um grupo fluorescen- te.
33. Composto, de acordo com a reivindicação 29, caracteri- zado pelo fato de que a nucleobase compreende um polímero ou po- límero substituído (por exemplo, um polímero substituído por anticor- po-L-(CH>2)4-).
34. Composto, de acordo com a reivindicação 33, caracteri- zado pelo fato de que R' e R? formam juntos um sistema de anel ribo- se de fórmula: Oo CX polímero N Oo WwW-o7 o a b em que o polímero é opcionalmente substituído por anticor- po-L-(CH2),-.
35. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 34, caracterizado pelo fato de que Aé O.
36. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 34, caracterizado pelo fato de que A é NRº.
37. Composto, de acordo com a reivindicação 36, caracteri- zado pelo fato de que Rº e R', junto com A e o átomo de carbono ao qual R' está fixado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcionalmente substituído.
38. Composto, de acordo com a reivindicação 37, caracteri- zado pelo fato de que o anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros é selecionado a partir do grupo que consiste em: Qi Car Cos Us Qua GO, . do, . o, n de, de, . bh. . o 2? o H 0 y Cs y Oy y ANOS C, y Cd fd y Ah y Ox ; =. ; de ; do, ; d, ; de, ; o o o Ps de e O ce o y x , em que x denota um ponto de fixação a E, e Y denota um ponto de fixação ao átomo de carbono ao qual R' está fixado.
39. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 22, caracterizado pelo fato de que Rê eR?, junto com A, o átomo de carbono ao qual R' está fixado e o átomo de carbono ao qual R? está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros opcionalmente substituído.
40. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 39, caracterizado pelo fato de que A é NH.
41. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica-
ções 1 a 39, caracterizado pelo fato de que A é N (C1.6 alquila).
42. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 2 a 41, caracterizado pelo fato de que a porção alifática é seleci- onada a partir de um polímero, Rº e um grupo de fórmula: polímero-L-(CH2)m-; RP é selecionado a partir de C1.6 alguila opcionalmente substituída e C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída; e m é um número inteiro de 1 a 10.
43. Composto, de acordo com a reivindicação 42, caracteri- zado pelo fato de que a porção alifática é um grupo de fórmula: polí- mero-L-(CH2)m-.
44. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 e 3 a 43, caracterizado pelo fato de que a porção alifática é se- lecionada a partir de um polímero, Rº e um grupo de fórmula: -polímero-L-(CH2)m-; RP é selecionado a partir de C1.6 alguila opcionalmente substituída e C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída; e m é um número inteiro de 1 a 10.
45. Composto, de acordo com a reivindicação 44, caracteri- zado pelo fato de que a porção alifática é um grupo de fórmula: - polímero-L-(CH2)m-.
46. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 45, caracterizado pelo fato de que cada L é independente- mente um grupo de ligação que compreende um heterocicloaquileno ou um heteroarileno.
47. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 45, caracterizado pelo fato de que cada L é um grupo de liga- ção que compreende uma succinimida ou um triazol.
48. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 45, caracterizado pelo fato de que L é um grupo de ligação de qualquer uma das seguintes fórmulas: o =N
LM ENA Oo e OS ; em que :$ indica um ponto de fixação do grupo de ligação ao polímero ou ao grupo CH».
49. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 45, caracterizado pelo fato de que o grupo de ligação L é um grupo de ligação de fórmulas: Agi A em que $ indica um ponto de fixação do grupo de ligação ao polímero ou ao grupo CH».
50. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 45, caracterizado pelo fato de que o grupo de ligação L com- preende um grupo de fórmula (L'): N=N
NA c (L1), em que o anel C é selecionado a partir do grupo que consiste em uma Cg-16 cicloalquila opcionalmente substituída e uma heterocicloalquila de 8 a 16 membros opcionalmente substituída, e : indica um ponto de fi- xação do grupo de ligação ao polímero ou ao grupo CH.
51. Composto, de acordo com a reivindicação 50, caracteri- zado pelo fato de que o grupo de fórmula (L') é selecionado a partir de qualquer uma das seguintes fórmulas:
No nã nd NÃ AN à NA — — NON «oco A do x ; e :
52. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 51, caracterizado pelo fato de que m é um número inteiro de 1a.
53. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 51, caracterizado pelo fato de que m é um número inteiro de 1a.
54. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, carac- terizado pelo fato de que a porção alifática é um polímero.
55. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 54, caracterizado pelo fato de que o polímero é selecionado a partir do grupo que consiste em poli(alquileno glicol), poli(poliol oxieti- lado), poli(álcool olefínico), poli(a-hidroxiácido), poli(álcoo! vinílico), po- lioxazolina e copolímeros dos mesmos.
56. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 2 a 55, caracterizado pelo fato de que o polímero é um polietileno glicol.
57. Composto, de acordo com a reivindicação 56, caracteri- zado pelo fato de que o polietileno glicol é linear.
58. Composto, de acordo com a reivindicação 56, caracteri- zado pelo fato de que o polietileno glicol é ramificado.
59. Composto, de acordo com as reivindicações 2 a 58, ca- racterizado pelo fato de que a porção alifática é Rº.
60. Composto, de acordo com a reivindicação 59, caracteri- zado pelo fato de que Rº é uma C1-6 alquila opcionalmente substituída.
61. Composto, de acordo com a reivindicação 60, caracteri- zado pelo fato de que Rº é isopropila.
62. Composto, de acordo com a reivindicação 59, caracteri- zado pelo fato de que Rº é cianoetila.
63. Composto, de acordo com a reivindicação 59, caracteri- zado pelo fato de que RP é selecionado a partir do grupo de acordo com qualquer uma das seguintes fórmulas: opor alquileno S Ox alquileno o mas eis alquileno - H ; C1-6 alquila ; o ; HaN C1.6 alauileno s . PN nO asuiero - HCEC-Cyg alquileno É o Qro alquiteno —? N3-C1.6 alquileno 4 e oO
64. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 63, caracterizado pelo fato de que Zº é S e Mº é um grupo autoimolativo de fórmula (a): o CH CHO-t—i * (a), em que x denota um ponto de fixação a Z' e y indica um ponto de fixa- ção a Zº.
65. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 64, caracterizado pelo fato de que R' e Rº são independen- temente selecionados a partir de H e metila.
66. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende o composto, como definido em qualquer uma das rei- vindicações 1 a 65, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
67. Método para tratamento de câncer em um sujeito que necessita do mesmo, sendo que o método é caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao sujeito de uma quantidade terapeuti-
camente eficaz do composto, como definido em qualquer uma das rei- vindicações 1 a 65, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica, como definida na reivindicação 66.
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