BR112021012365A2 - Compostos que compreendem ligante clivável e usos dos mesmos - Google Patents

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Sanghyeon Yun
Jihyeon Ha
Hyang Sook Lee
Okku Park
Beomseok Seo
Sena Kim
Jina Song
Minah Seol
Sung Ho Woo
Sunyoung Kim
Suho Park
Jongun Cho
Doohwan Jung
Donghoon Seo
Jaeho Lee
Sangkwang Lee
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Abstract

a presente invenção refere-se a um composto que inclui um ligante clivável, um uso do mesmo e um composto intermediário para preparar o mesmo e, mais particularmente, o composto que inclui um ligante clivável da presente invenção pode incluir um agente ativo (por exemplo, um fármaco, uma toxina, um ligante, uma sonda para detecção, etc.) que tem uma função ou atividade específica, um grupo funcional so2 que é capaz de liberar seletivamente o agente ativo e um grupo funcional que desencadeia uma reação química, uma reação fisioquímica e/ou uma reação biológica por estimulação externa e pode incluir, ainda, um ligante (por exemplo, oligopeptídeo, polipeptídeo, anticorpo, etc.) que tem especificidade de ligação para um receptor alvo desejado.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COM-
POSTOS QUE COMPREENDEM LIGANTE CLIVÁVEL E USOS DOS MESMOS". PEDIDOS RELACIONADOS
[001] Este pedido reivindica o benefício do Pedido de Patente Provisório U.S. nº 62/788.013, depositado em 3 de janeiro de 2019, cujo conteúdo está completamente incorporado a título de referência no presente documento.
ANTECEDENTES
[002] Os conjugados de anticorpo-fármaco (ADCs) estão emer- gindo como uma classe poderosa de agentes antitumorais com eficá- cia através de uma gama de cânceres. Os ADCs são comumente compostos por recursos distintos: um agente de ligação a célula ou porção química de alvejamento; um ligante; e um agente citotóxico. O componente ligante de ADC é um recurso importante no desenvolvi- mento de agentes anticâncer alvejados que possuem uma especifici- dade para alvo desejável, isto é, alta atividade em células tumorais, mas com baixa atividade em células saudáveis.
[003] Portanto, há uma necessidade de ligantes melhorados úteis para preparar ADCs.
SUMÁRIO
[004] São fornecidos no presente documento conjugados de Fórmula (I'): (D-L)n-(CB)cb (I')
[005] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo,
[006] em que:
[007] CB é uma porção química de alvejamento;
[008] cb e n são, cada um, independentemente, números inteiros que têm um valor de 1 a cerca de 20, de preferência, de 1 a cerca de
10;
[009] cada D-L, independentemente, é um grupo que tem a estru- tura de Fórmula (I"): (I")
[0010] cada Q é, independentemente, um agente ativo ligado a L' por um heteroátomo, de preferência, O ou N;
[0011] Z', independentemente para cara ocorrência, é um grupo de ligação que conecta a estrutura da Fórmula (I") a (CB)cb, um grupo so- lubilizante, um grupo reativo (por exemplo, um grupo precursor), uma superfície sólida (por exemplo, uma partícula), um grupo estabilizante, um quelante, um biopolímero (por exemplo, uma imunoglobulina, um ácido nucleico, uma proteína, um oligopepídeo, um polipeptídeo, um anticorpo, um fragmento de um polipeptídeo antigênico, ou um repe- corpo), um agente ativo, ou um porção química detectável, desde que pelo menos uma ocorrência de Z' conecta a estrutura da Fórmula (I'') a (CB)cb;
[0012] cada L' é, independentemente, uma porção química espa- çadora ligada ao SO2 através de um heteroátomo selecionado dentre O, S e N, de preferência, O ou N, e é selecionado de modo que a cli- vagem da ligação entre L' e SO2 promova a clivagem da ligação entre L' e Q para liberar o agente ativo;
[0013] cada X é, independentemente, -O-, -C(Rb)(Rc)-, ou -N(Rc)-, de preferência -C(Rb)(Rc)-;
[0014] E é um número inteiro que tem um valor de 1, 2, ou 3, de preferência 1;
[0015] Ar é um anel de arila com 6 membros ou heteroarila com 6 membros;
[0016] Y' é -N(Ra)-, -O-, ou -S-;
[0017] pelo menos um X é posicionado em uma relação orto ou para relação a Y' em Ar;
[0018] TG é um grupo de desencadeamento que, quando clivado, gera um átomo de N, O, ou S com capacidade para iniciar a liberação de SO2 e (Q)q-(L')w;
[0019] cada q é, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 20, de preferência, de 1 a cerca de 10;
[0020] cada w e x são, cada um, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 0 ou 1;
[0021] cada Ra e Rc é, independentemente, hidrogênio ou alquila inferior; e
[0022] cada Rb é, independentemente Z', hidrogênio ou alquila in- ferior, desde que pelo menos uma ocorrência de Rb é Z'; ou
[0023] Rb e Rc, juntamente com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel com 3 a 5 membros, de preferência, um anel com 3 ou 4 membros;
[0024] desde que, quando w for 0, q seja 1.
[0025] Em certas modalidades, cada X é posicionado em uma re- lação orto ou para a Y' em Ar.
[0026] Em certas modalidades, pelo menos um X e Y' são posicio- nados em uma relação orto entre si em Ar. Em certas modalidades, E é 2 ou 3. Em certas modalidades em que E é 2, ambas ocorrências de X são posicionadas em uma relação orto a Y'.
[0027] Em outras modalidades, pelo menos um X e Y' são posicio- nados em uma relação para entre si em Ar. Em certas modalidades, E é 1.
[0028] Em certas modalidades, pelo menos um X é posicionado em uma relação orto ou relação para a Y'.
[0029] Em certas modalidades, pelo menos um Rb além de Rb fi-
xado a Ar representa Z'.
[0030] A presente invenção também se refere a composições (por exemplo, composições farmacêuticas) que compreendem um compos- to de Fórmula (I') e um transportador (por exemplo, uma transportador farmaceuticamente aceitável).
[0031] Em um aspecto, a invenção fornece conjugados de Fórmula (I'), e composições que compreendem tais conjugados, por exemplo, para uso em terapia, imaginologia, como sensores, como comutadores moleculares, como máquinas moleculares e/ou como nanomáquinas.
[0032] Em outro aspecto, a invenção fornece, ainda, conjugados de Fórmula (I') e composições farmacêuticas dos mesmos, para uso em um método para entregar um agente ativo a uma célula, em que a porção química de alvejamento é selecionada para se ligar a uma mo- lécula associada a uma célula-alvo. Em particular, os presentes com- postos, conjugados e composições podem ser úteis para inibir a proli- feração de células anormais ou tratar um distúrbio proliferativo em um mamífero (por exemplo, um ser humano), tal como quando a célula- alvo é uma célula cancerosa e a porção química de alvejamento é se- lecionada para se ligar a uma molécula associada à célula cancerosa (e não associada a células saudáveis ou pelo menos, de preferência, associada a células tumorais em vez de células saudáveis).
[0033] Os presentes conjugados de Fórmula (I') e composições farmacêuticas dos mesmos podem ser úteis para tratar afecções, tal como câncer, artrite reumatoide, esclerose múltipla, doença de enxer- to-contra-hospedeiro (GVHD), rejeição de transplante, lúpus, miosite, infecção, deficiência imunológica, tal como AIDS, e doenças inflamató- rias em um mamífero (por exemplo, ser humano).
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0034] A Figura 1 mostra os resultados de uma análise de estabili- dade de Composto A-1.
[0035] A Figura 2 mostra os resultados de uma análise de estabili- dade de Composto A-2.
[0036] A Figura 3 mostra os resultados de uma análise de estabili- dade de Composto B-1.
[0037] A Figura 4 mostra os resultados de um ensaio de clivagem enzimática de Composto A-2.
[0038] A Figura 5 mostra os resultados de um ensaio de clivagem enzimática de Composto Int-T3.
[0039] A Figura 6 mostra os resultados de uma análise in vitro dos conjugados T-DM1, T-2-AB e T-3-AB em relação a NCI-N87.
[0040] A Figura 7 mostra os resultados de uma análise in vitro dos conjugados T-DM1, T-4-AB em relação a NCI-N87.
[0041] A Figura 8 mostra os resultados de uma análise in vitro dos conjugados T-DM1, T-5-AB e T-6-AB em relação a SK-BR3.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0042] A presente invenção se refere a compostos e conjugados que compreendem um ligante clivável e usos dos mesmos. Os com- postos e conjugados representativos descritos no presente documento compreendem um agente ativo (por exemplo, um fator químico, um fator biológico, um hormônio, um oligonucleotídeo, um fármaco, uma toxina, um ligante, uma sonda para detecção, etc.) que tem uma fun- ção ou atividade desejada, um grupo de desencadeamento que passa por uma reação química (por exemplo, uma reação fisicoquímica e/ou uma reação biológica) sob condições predeterminadas, e um grupo funcional SO2 posicionado em relação ao grupo de desencadeamento ou um anel de arila ou heteroarila de modo que ativar o grupo de de- sencadeamento faça com que o conjugado passe por 1,4-eliminação, ciclização intramolecular, 1,6-eliminação para liberar o agente ativo. Em algumas modalidades, os compostos e conjugados descritos no presente documento compreende, ainda, uma porção química de alve-
jamento (por exemplo, oligopeptídeo, polipeptídeo, anticorpo, etc.) que tem especificidade de ligação para um receptor alvo desejado ou outra molécula associada a uma célula-alvo.
DEFINIÇÕES
[0043] O significado do termo "alquila" é entendido na técnica. Por exemplo, "alquila" usada sozinha ou como parte de uma porção quími- ca maior, tal como "alcóxi", "haloalquila", "cicloalquila", "heterocicloal- quila", e similares, pode se referir a um hidrocarboneto de cadeia reta ou ramificado que é completamente saturado. Tipicamente, um grupo alquila de cadeia reta ou ramificado é um grupo acíclico que tem de 1 a cerca de 20 átomos de carbono, de preferência, de 1 a cerca de 10 átomos de carbono, a não ser que definido de outro modo. Os exem- plos de grupos alquila de cadeia reta e ramificados incluem, porém sem limitação, metila, etila, propila, isopropila, n-butila, sec-butila, terc- butila, n-pentila, n-hexila, n-heptila e n-octila. Um grupo C1-C6 alquila de cadeia linear ou ramificado é também chamado de grupo "alquila inferior". Os grupos alquila que têm duas valências abertas são algu- mas vezes denominados com um sufixo "eno", como em alquileno. Os grupos alquileno exemplificativos incluem metileno, etileno, propileno e similares.
[0044] Além disto, o termo "alquila" (ou "alquila inferior") pode in- cluir tanto "alquilas não substituídas" quanto "alquilas substituídas", as últimas das quais se referem a porções químicas alquila que têm subs- tituintes substituindo um hidrogênio em um ou mais carbonos da ca- deia principal de hidrocarboneto. Tais substituintes, se não especifica- dos de outro modo, podem incluir, por exemplo, um halogênio, uma hidroxila, uma carbonila (tal como uma carboxila, uma alcoxicarbonila, uma formila ou uma acila), uma tiocarbonila (tal como um tioéster, um tioacetato ou um tioformato), uma alcoxila, uma fosforila, um fosfato, um fosfonato, um fosfinato, um amino, um amido, uma amidina, uma imina, um ciano, um nitro, um azido, uma sulfidrila, um alquiltio, um sulfato, um sulfonato, uma sulfamoíla, um sulfonamido, uma sulfonila, uma heterociclila, uma aralquila ou uma parte aromática ou heteroa- romática. O versado na técnica entenderá que as porções químicas substituídas na cadeia de hidrocarboneto podem ser substituídas, se apropriado. Por exemplo, os substituintes de uma alquila substituída podem incluir formas substituídas e não substituídas de alquila, amino, azido, imino, amido, fosforila (incluindo fosfonato e fosfinato), sulfonila (incluindo sulfato, sulfonamido, sulfamoíla e sulfonato) e silila, assim como éteres, alquiltios, carbonilas (incluindo cetonas, aldeídos, carbo- xilatos e ésteres), -CF3, -CN e similares. As alquilas substituídas exemplificativas são descritas abaixo. As cicloalquilas podem ser, ain- da, substituídas com alquilas, alquenilas, alcóxis, alquiltios, aminoal- quilas, alquilas substituídas por carbonila, -CF3, -CN e similares.
[0045] O termo "Cx–Cy", quando usado em conjunto com uma por- ção química, tal como, por exemplo, acila, acilóxi, alquila, alquenila, alquinila ou alcóxi, pode incluir grupos que contêm de x a y carbonos na cadeia, em que "x" e "y" são números inteiros selecionados dentre 1 a cerca de 20, e em que x é um número inteiro de valor menor que y, e x e y não são o mesmo valor. Por exemplo, o termo "Cx–Cy-alquila" se refere a grupos hidrocarboneto saturados substituídos ou não subs- tituídos, incluindo grupos alquila de cadeia reta e de cadeia ramificada que contêm de x a y número de carbonos na cadeia, incluindo grupos haloalquila, tal como trifluorometila e 2,2,2-tirfluoroetila, etc. Os termos "C2–Cy-alquenila" e "C2–Cy-alquinila" se referem a análogos de grupos alifáticos instaurados substituídos ou não substituídos em comprimen- to e substituição possível às alquilas descritas acima, mas que contêm pelo menos uma ligação dupla ou tripla, respectivamente. Como apli- cado às heteroalquilas, "Cx–Cy" indica que o grupo contém de x a y número de carbonos e heteroátomos na cadeia. Como aplicado às es-
truturas carbocíclicas, tais como grupos arila e cicloalquila, "Cx–Cy" indica que o anel compreende x a y número de átomos de carbono no anel.
[0046] O significado do termo "alcóxi" é entendido na técnica e, por exemplo, pode se referir a um grupo alquila, de preferência, um grupo alquila inferior, que tem um oxigênio fixado ao mesmo. Grupos alcóxi representativos incluem metóxi, etóxi, propóxi, terc-butóxi e simi- lares.
[0047] Os termos "hal", "halo" e "halogênio" são usados intercam- biavelmente por todo o presente documento e se referem a flúor ou fluoro (F), cloro (Cl), bromo (Br) ou iodo (I).
[0048] O significado do termo "cicloalquila" é entendido na técnica e, por exemplo, pode se referir a um hidrocarboneto cíclico substituído ou não substituído que é completamente saturado. "Cicloalquila" inclui anéis monocíclicos e bicíclicos. Tipicamente, um grupo cicloalquila monocíclico tem de 3 a cerca de 10 átomos de carbono, mais tipica- mente, 3 a 8 átomos de carbono, exceto se definido de outro modo. O segundo anel de uma cicloalquila bicíclica pode ser selecionado dentre anéis saturados, insaturados e aromáticos. Cicloalquila inclui molécu- las bicíclicas nas quais um, dois ou três ou mais átomos são comparti- lhados entre os dois anéis. O termo "cicloalquila fundida" se refere a uma cicloalquila bicíclica na qual cada um dos anéis compartilha dois átomos adjacentes com o outro anel. O segundo anel de uma cicloal- quila bicíclica fundida pode ser selecionado dentre anéis saturados, insaturados e aromáticos. Um grupo "cicloalquenila" é um hidrocarbo- neto cíclico contendo uma ou mais ligações duplas.
[0049] O significado do termo "arila" é entendido na técnica e, por exemplo, pode se referir a grupos aromáticos de anel único substituído ou não substituído em que cada átomo do anel é carbono. De prefe- rência, o anel é um anel com 5 a 7 membros, mais preferencialmente,
um anel com 6 membros. O termo "arila" também inclui sistemas de anéis policíclicos tendo dois ou mais anéis cíclicos nos quais dois ou mais carbonos são comuns a dois anéis adjacentes em que pelo me- nos um dentre os anéis é aromático, por exemplo, os outros anéis cí- clicos podem ser cicloalquilas, cicloalquenilas, cicloalquilas, arilas, he- teroarilas e/ou heterociclilas. Os grupos arila incluem benzeno, nafta- leno, fenantreno, fenol, anilina e similares.
[0050] O significado dos termos "heterociclila" e "heterociclo" são entendidos na técnica e, por exemplo, podem se referir a estruturas de anel não aromático substituídas ou não substituídas, de preferência, anéis com 3 a 10 membros, mais preferencialmente, anéis com 3 a 7 membros, cujas estruturas de anel incluem pelo menos um heteroáto- mo, de preferência, um a quatro heteroátomos, mais preferencialmen- te, um ou dois heteroátomos. Tais heterociclos também incluem siste- mas de anéis policíclicos que têm dois ou mais anéis cíclicos nos quais dois ou mais carbonos são comuns a dois anéis adjacentes, em que pelo menos um dentre os anéis é heterocíclico, por exemplo, os outros anéis cíclicos podem ser cicloalquilas, cicloalquenilas, cicloal- quilas, arilas, heteroarilas e/ou heterociclilas. Os grupos heterociclila incluem, por exemplo, piperidina, piperazina, pirrolidina, morfolina, lac- tonas, lactamas e similares.
[0051] O significado do termo "heteroarila" é entendido na técnica e, por exemplo, pode se referir a estruturas de anel único aromático substituídas ou não substituídas, de preferência, anéis com 5 a 7 membros, mais preferencialmente, anéis com 5 a 6 membros, cujas estruturas de anel incluem pelo menos um heteroátomo, de preferên- cia, um a quatro heteroátomos, mais preferencialmente, um ou dois heteroátomos. Os termos "heteroarila" e "hetarila" também incluem sistemas de anéis policíclicos que têm dois ou mais anéis cíclicos nos quais dois ou mais carbonos são comuns a dois anéis adjacentes, em que pelo menos um dentre os anéis é heteroaromático, por exemplo, os outros anéis cíclicos podem ser cicloalquilas, cicloalquenilas, ciclo- alquilas, arilas, heteroarilas e/ou heterociclilas. Os grupos heteroarila incluem, por exemplo, pirrol, furano, tiofeno, imidazol, oxazol, tiazol, pirazol, piridina, pirazina, piridazina e pirimidina e similares.
[0052] O termo "substituído" se refere a porções químicas que têm substituintes que substituem um hidrogênio em um ou mais carbonos ou heteroátomos da porção química. O versado na técnica entenderá que "substituição" ou "substituído por" inclui a condição implícita que tal substituição está de acordo com a valência permitida do átomo substituído e do substituinte e que a substituição resulta em um com- posto estável, por exemplo, que não é espontaneamente submetido à transformação tal como por reorganização, ciclização, eliminação, etc. Como usado no presente documento, o termo "substituído" é contem- plado incluindo todos os substituintes permissíveis de compostos or- gânicos.
[0053] Em algumas modalidades, os substituintes permissíveis in- cluem substituintes acíclicos e cíclicos, ramificado e não ramificados, carbocíclicos e heterocíclicos, aromáticos e não aromáticos de com- postos orgânicos. Os substituintes permissíveis podem ser um ou mais e os mesmos ou diferentes para compostos orgânicos apropriados. Para os propósitos desta invenção, os heteroátomos tais como nitro- gênio podem ter substituintes de hidrogênio e/ou quaisquer substituin- tes permissíveis de compostos orgânicos descritos no presente docu- mento que satisfazem as valências dos heteroátomos. Os substituintes podem incluir quaisquer substituintes descritos no presente documen- to, tal como, por exemplo, um halogênio, uma hidroxila, uma carbonila (tal como uma carboxila, uma alcoxicarbonila, uma formila ou uma aci- la), uma tiocarbonila (tal como um tioéster, um tioacetato ou um tiofor- mato), uma alcoxila, uma fosforila, um fosfato, um fosfonato, um fosfi-
nato, um amino, um amido, uma amidina, uma imina, um ciano, um nitro, um azido, uma sulfidrila, um alquiltio, um sulfato, um sulfonato, uma sulfamoíla, um sulfonamido, uma sulfonila, uma heterociclila, uma alquila, uma aralquila ou uma parte aromática ou heteroaromática. O versado na técnica entenderá que os próprios substituintes podem ser substituídos, se adequado. Exceto se especificamente estabelecido como "não substituído", as referências a porções químicas no presente documento são entendidas como incluindo variantes substituídas. Por exemplo, referência a um grupo ou parte de "arila" inclui implicitamente variantes tanto substituídas como não substituídas.
[0054] O termo "indivíduo" ao qual a administração é contemplada inclui, por exemplo, seres humanos (isto é, um homem ou uma mulher de qualquer grupo etário, por exemplo, um indivíduo pediátrico (por exemplo, bebê, criança, adolescente) ou indivíduo adulto (por exem- plo, adulto jovem, adulto de meia idade ou adulto sênior)) e/ou outros primatas (por exemplo, macacos cinomolgo, macacos reso); mamífe- ros, incluindo mamíferos comercialmente relevantes, tal como gado, porcos, cavalos, ovelhas, cabras, gatos e/ou cães; e/ou aves, incluindo aves comercialmente relevantes, tais como galinhas, patos, gansos, codornas e/ou perus. Os indivíduos preferenciais são seres humanos.
[0055] Como usado no presente documento, um agente terapêuti- co que "evita" um distúrbio ou condição pode se referir, por exemplo, a um composto que, em uma amostra estatística, reduz a ocorrência do distúrbio ou afecção na amostra tratada em relação a uma amostra de controle não tratada ou atrasa o início ou reduz a severidade de um ou mais sintomas do distúrbio ou afecção em relação à amostra de con- trole não tratada.
[0056] O termo "tratar" inclui tratamento profiláticos e/ou terapêuti- cos. O termo tratamento "profilático ou terapêutico" é reconhecido na técnica e inclui a administração ao hospedeiro de uma ou mais das presentes composições. Se o mesmo for administrado antes da mani- festação clínica da condição indesejada (por exemplo, doença ou outro estado indesejado do animal hospedeiro), então o tratamento é profilá- tico (isto é, protege o hospedeiro contra o desenvolvimento da condi- ção indesejada), enquanto que se for administrado após a manifesta- ção da condição indesejada, o tratamento é terapêutico, (isto é, se destina a diminuir, melhorar ou estabilizar a condição indesejada exis- tente ou efeitos colaterais da mesma).
[0057] Em certas modalidades, compostos e conjugados descritos no presente documento podem ser usados sozinhos ou administrados conjuntamente com outro tipo de agente ou composto terapêutico. Como usado no presente documento, a expressão "administração con- junta" se refere a qualquer forma de administração de dois ou mais compostos terapêuticos diferentes de tal modo que o segundo com- posto seja administrado enquanto o composto terapêutico anterior- mente administrado ainda seja eficaz no corpo (por exemplo, os dois compostos são simultaneamente eficazes no paciente, que pode inclu- ir efeitos sinérgicos dos dois compostos). Por exemplo, os diferentes compostos e conjugados terapêuticos podem ser administrados ou na mesma formulação ou em uma formulação separada, concomitante ou sequencialmente. Em certas modalidades, os diferentes conjugados e compostos terapêuticos podem ser administrados em uma hora, 12 horas, 24 horas, 36 horas, 48 horas, 72 horas ou uma semana entre si. Assim, um indivíduo que recebe tal tratamento pode se beneficiar de um efeito combinado de diferentes conjugados e compostos terapêuti- cos.
[0058] Os termos "crescimento celular anormal" e "distúrbio prolife- rativo" são usados intercambiavelmente neste pedido. "Crescimento celular anormal", como usado no presente documento, a não ser que indicado de outro modo, se refere ao crescimento celular que é inde-
pendente de mecanismos reguladores normais (por exemplo, perda de inibição de contato). Isto inclui, por exemplo, o crescimento anormal de: (1) células tumorais (tumores) que proliferam expressando uma tirosina quinase com mutação ou superexpressão de uma tirosina qui- nase receptora; (2) células benignas e malignas de outras doenças proliferativas em que ocorre ativação de tirosina quinase aberrante; (3) qualquer tumores que proliferam por tirosina quinases receptoras; (4) quaisquer tumores que proliferam por ativação de serina/treonina qui- nase aberrante; e (5) células benignas e malignas de outras doenças proliferativas em que ocorre ativação serina/treonina quinase aberran- te.
[0059] Os termos "câncer" e "canceroso" se referem ou descrevem a afecção fisiológica em mamíferos que é tipicamente especificada pe- la proliferação não regulada de células. Um "tumor" compreende uma ou mais células cancerosas. Os exemplos de câncer incluem, porém sem limitação, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma e leucemia ou malignidades linfoides. Os exemplos mais particulares de tais cânce- res incluem célula de células escamosas (por exemplo, célula de célu- las escamosas epiteliais), câncer de pulmão, incluindo câncer de pul- mão de células pequenas, câncer de pulmão de células não pequenas ("NSCLC"), adenocarcinoma do pulmão e carcinoma escamoso do pulmão, câncer do peritôneo, câncer hepatocelular, câncer gástrico ou estomacal, incluindo câncer gastrointestinal, câncer pancreático, glioblastoma, câncer cervical, câncer ovariano, câncer de fígado, cân- cer de bexiga, hepatoma, câncer de cólon, câncer retal, câncer color- retal, carcinoma endometrial ou uterino, carcinoma de glândula salivar, câncer de rim ou renal, câncer de próstata, câncer vulval, câncer de tireoide, carcinoma hepático, carcinoma anal, carcinoma peniano, leu- cemia aguda, assim como câncer de cabeça/cérebro e pescoço.
COMPOSTOS E CONJUGADOS DA INVENÇÃO
[0060] A presente invenção fornece conjugados de Fórmula (I'): (D-L)n-(CB)cb (I')
[0061] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo,
[0062] em que:
[0063] CB é uma porção química de alvejamento;
[0064] cb e n são, cada um, independentemente, números inteiros que têm um valor de 1 a cerca de 20, de preferência, de 1 a cerca de 10;
[0065] cada D-L, independentemente, é um grupo que tem a estru- tura de Fórmula (I"): (I")
[0066] cada Q é, independentemente, um agente ativo ligado a L' por um heteroátomo, de preferência, O ou N;
[0067] Z', independentemente para cara ocorrência, é um grupo de ligação que conecta a estrutura da Fórmula (I") a (CB)cb, um grupo so- lubilizante, um grupo reativo (por exemplo, um grupo precursor), uma superfície sólida (por exemplo, uma partícula), um grupo estabilizante, um quelante, um biopolímero (por exemplo, uma imunoglobulina, um ácido nucleico, uma proteína, um oligopepídeo, um polipeptídeo, um anticorpo, um fragmento de um polipeptídeo antigênico, ou um repe- corpo), um agente ativo, ou um porção química detectável, desde que pelo menos uma ocorrência de Z' conecta a estrutura da Fórmula (I'') a (CB)cb;
[0068] cada L' é, independentemente, uma porção química espa- çadora ligada ao SO2 através de um heteroátomo selecionado dentre O, S e N, de preferência, O ou N, e é selecionado de modo que a cli-
vagem da ligação entre L' e SO2 promova a clivagem da ligação entre L' e Q para liberar o agente ativo;
[0069] cada X é, independentemente, -O-, -C(Rb)(Rc)-, ou -N(Rc)-, de preferência -C(Rb)(Rc)-;
[0070] E é um número inteiro que tem um valor de 1, 2, ou 3, de preferência 1;
[0071] Ar é um anel de arila com 6 membros ou heteroarila com 6 membros;
[0072] Y' é -N(Ra)-, -O-, ou -S-;
[0073] pelo menos um X é posicionado em uma relação orto ou para relação a Y' em Ar;
[0074] TG é um grupo de desencadeamento que, quando clivado, gera um átomo de N, O, ou S com capacidade para iniciar a liberação de SO2 e (Q)q-(L')w;
[0075] cada q é, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 20, de preferência, de 1 a cerca de 10;
[0076] cada w e x são, cada um, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 0 ou 1;
[0077] cada Ra e Rc é, independentemente, hidrogênio ou alquila inferior; e
[0078] cada Rb é, independentemente Z', hidrogênio ou alquila in- ferior, desde que pelo menos uma ocorrência de Rb é Z'; ou
[0079] Rb e Rc, juntamente com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel com 3 a 5 membros, de preferência, um anel com 3 ou 4 membros;
[0080] desde que, quando w for 0, q seja 1.
[0081] Em certas modalidades, cada X é posicionado em uma re- lação orto ou para a Y' em Ar.
[0082] Em certas modalidades, pelo menos um X e Y' são posicio- nados em uma relação orto entre si em Ar. Em certas modalidades, E é 2 ou 3. Em certas modalidades em que E é 2, ambas ocorrências de X são posicionadas em uma relação orto a Y'.
[0083] Em outras modalidades, pelo menos um X e Y' são posicio- nados em uma relação para entre si em Ar. Em certas modalidades, E é 1.
[0084] Em certas modalidades, pelo menos um X é posicionado em uma relação orto ou relação para a Y'.
[0085] Em certas modalidades preferenciais, pelo menos um Rb além de Rb fixado a Ar representa Z'.
[0086] Cada agente ativo pode ser qualquer agente ativo adequa- do, como descrito com mais detalhes abaixo. Embora muitos métodos de conjugação tradicionais exijam ter certos grupos funcionais, tais como aminas ou grupos hidroxila, para formar uma ligação estável, a invenção no presente documento fornece estratégias para formar co- nexões usando grupos funcionais, tais como fenóis e aminas terciá- rias, para formar ligações estáveis nos conjugados descritos no pre- sente documento, enquanto ainda permite a liberação sob as condi- ções predeterminadas que ativam o grupo de desencadeamento. Me- diante ativação do grupo de desencadeamento, a unidade ari- la/heteroarila passa por eliminação, (por exemplo, 1,6-eliminação para um grupo na posição para), liberar SO2 e expelir a porção química (Q)q-(L')w-H, em que o H é ligado ao heteroátomo de Q ou L' que foi anteriormente fixado à porção química SO2. Para grupos em uma rela- ção orto, a ativação do grupo de desencadeamento pode iniciar a 1,4- eliminação análoga e/ou ciclização intramolecular, expelindo assim (Q)q-(L')w-H. Os exemplos de 1,6-eliminação e 1,4-eliminação e/ou ci- clização desencadeada pela clivagem de um grupo de desencadea- mento são mostrados nos Esquemas 1 e 2.
[0087] Muitos grupos de desencadeamento adequados são co- nhecidos na técnica e grupos de desencadeamento exemplificativos e as condições que ativam os mesmos são discutidos abaixo, tais como porções químicas descritas para Y abaixo. Alguns grupos de desenca- deamento incluem o átomo de N, O ou S, mas em uma forma não nu- cleofílica. Por exemplo, um grupo NO2 é um grupo de desencadeamen- to que, sob condições redutivas, é reduzido para um grupo NH2 ou NHOH que pode reagir com o SO2, e iniciar a reação de eliminação. Um grupo acetato é um grupo de desencadeamento que, sob condi- ções hidrolíticas, é hidrolizado para um grupo hidroxila com capacida- de para desencadear a 1,6-eliminação do segmento autoimolativo. Ou- tros grupos de desencadeamento não incluem o átomo de N, O ou S, mas, quanto ativados, são convertidos em um átomo de N, O ou S nu- cleofílico. Por exemplo, um grupo boronato é um a grupo de desenca- deamento que, sob condições oxidantes (tal como peróxido), é conver- tido em um grupo hidroxila que pode reagir com o SO2. De preferência, o grupo de desencadeamento é selecionado de modo que as condi- ções que ativam o mesmo o façam seletivamente, sem clivar ou de- gradar outras porções do conjugado, tal como a porção química de alvejamento. Em algumas modalidades, uma vez que o átomo de N, O ou S nucleofílico é gerado, este átomo ataca intramolecularmente a porção química SO2 para formar um anel, expelindo a porção química (Q)q-(L')w-H, em que o H está ligado ao heteroátomo de Q ou L' que estava anteriormente ligado à porção química SO2.
[0088] Nas modalidades em que w é 0, q é 1 e Q está diretamente ligado ao SO2 através de um heteroátomo. Consequentemente, ativar o grupo de desencadeamento gera um heteroátomo nucleofílico que ataca intramolecularmente a porção química SO2 para formar um anel, expelindo o agente ativo Q-H, em que o H está ligado ao heteroátomo anteriormente ligado a SO2.
[0089] Nas modalidades em que w é 1, L' pode ser selecionado para permitir a ligação de múltiplas ocorrências de Q, que podem ser iguais ou diferentes. Consequentemente, cada caso de Q está indire- tamente ligado ao SO2 através de uma porção química espaçadora. Em tais modalidades, ativar o grupo de desencadeamento gera um heteroátomo nucleofílico que ataca intramolecularmente a porção quí- mica SO2 para formar um anel, expelindo a porção química (Q)q-L'-H, em que o H está ligado ao heteroátomo em L' que estava anteriormen- te ligado a SO2. Em tais modalidades, o heteroátomo liberado desen- cadeia uma reação intramolecular que expele o agente (ou agentes) ativo Q (tal como se Q tiver uma amina terciária que estava ligada a L' como um amônio quaternário) ou Q-H. Por exemplo, o heteroátomo pode sofrer uma reação de ciclização intramolecular com uma porção química éster formada com uma hidroxila de Q-H, formando um anel e ejetando o agente ativo Q-H. Alternativamente, o heteroátomo pode sofrer uma tautomerização intramolecular que expele o agente ativo Q ou Q-H.
[0090] Ar pode ser qualquer anel adequado, incluindo um anel de um biciclo ou outro policiclo, de modo que as porções químicas que sofrem ciclização intramolecular seja mantidas em proximidade estrei- ta para facilitar a reação após ativação do grupo de desencadeamento. O caráter plano de anéis aromáticos e heteroaromáticos é preferencial, visto que a geometria rígida de substituintes em tais anéis garante po- sicionamento favorável das porções químicas reativas, embora outros tipos de anéis, tal como cicloalquenila ou heterocicloalquenila, possam impor geometrias similares. Um anel com cinco ou seis membros, e/ou o número ou identidades de heteroátomos no anel, e/ou substituintes (por exemplo, substituintes doadores de elétrons ou removedores de elétrons) em outro anel podem ser selecionados para modular a taxa de ciclização com base nos ângulos de ligação resultantes do anel. Similarmente, as conformações mais flexíveis de anéis cicloalquila e heterociclila podem ser úteis quando é desejado reduzir a taxa de ci-
clização intramolecular.
[0091] Z' pode ser qualquer grupo de ligação adequado que co- necta Ar a um ou mais grupos CB. Tipicamente, o grupo de ligação deve ser suficientemente hidrofílico para promover a solubilidade em água (um grupo de solubilização) e desencorajar a agregação do con- jugado, tal como incluindo porções químicas, tais como porções quími- cas polietileno glicol (PEG), sequências de peptídeos, porções quími- cas que portam carga (tais como carboxilatos, aminas, anéis contendo nitrogênio, etc.), etc. para equilibrar o caráter hidrofóbico de quaisquer cadeias alquila que possam estar incluídas. Devido ao fato de que é frequentemente vantajoso preparar conjugados de uma forma modu- lar, Z' pode conter uma unidade de ligação, um grupo funcional que resulta da conjugação de uma porção química reativa a outra. As uni- dades de ligação representativas são discutidas em mais detalhes abaixo (por exemplo, em conexão com a variável Z), e os grupos de ligação comuns incluem amidas, triazóis, oximas, carbamatos, etc. Os grupos Z' representativos incluem grupos L1'-Z, como discutido em mais detalhes abaixo. Em algumas modalidades, todos os grupos D-L ligados a cada CB são idênticos, embora, em outras modalidades, ca- da CB possa estar ligado a um ou mais grupos D-L distintos. Por exemplo, alguns grupos D-L podem ter um grupo de desencadeamen- to que é ativado sob uma primeira condição, enquanto outros grupos D-L podem ter um grupo de desencadeamento que é ativado sob uma segunda condição, de modo que, por exemplo, um agente ativo possa ser seletivamente liberado sob a primeira condição, mas um segundo agente ativo possa ser seletivamente liberado sob a segunda condi- ção.
[0092] A invenção também fornece compostos que podem servir como intermediários ou reagentes na formação do grupo D-L na fór- mula (I'), como descrito na Fórmula (I"). Assim, em algumas modalida-
des, são fornecidos no presente documento compostos de Fórmula (Ia): (Ia)
[0093] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, especi- ficado pelo fato de que:
[0094] cada Q é, independentemente, um agente ativo ligado a L' por um heteroátomo, de preferência, O ou N;
[0095] Z', independentemente para cara ocorrência, está ausente, é um grupo de ligação;
[0096] cada L' é, independentemente, um grupo de ligação ligado ao SO2 através de um heteroátomo selecionado dentre O, S e N, de preferência, O ou N, e é selecionado de modo que a clivagem da liga- ção entre L' e SO2 promova a clivagem da ligação entre L' e Q para liberar o agente ativo;
[0097] cada X é, independentemente, -O-, -C(Rb)(Rc)-, ou -N(Rc)-, de preferência -C(Rb)(Rc)-;
[0098] E é um número inteiro que tem um valor de 1, 2, ou 3, de preferência 1;
[0099] Ar é um anel de arila com 6 membros ou heteroarila com 6 membros;
[00100] Y' é -N(Ra)-, -O-, ou -S-;
[00101] pelo menos um X é posicionado em uma relação orto ou para relação a Y' em Ar;
[00102] TG é um grupo de desencadeamento que, quando clivado, gera um átomo de N, O, ou S com capacidade para iniciar a liberação de SO2 e (Q)q-(L')w;
[00103] cada q é, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 20, de preferência, de 1 a cerca de 10;
[00104] cada w e x são, cada um, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 0 ou 1;
[00105] cada Ra e Rc é, independentemente, hidrogênio ou alquila inferior; e
[00106] cada Rb é, independentemente Z', hidrogênio ou alquila in- ferior, desde que pelo menos uma ocorrência de Rb é Z; ou
[00107] Rb e Rc, juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados, formam um anel com 3 a 5 membros, de preferência, um anel com 3 ou 4 membros;
[00108] desde que, quando w for 0, q seja 1.
[00109] Em algumas modalidades, são fornecidos no presente do- cumento compostos de Fórmula (Ia): (Ia)
[00110] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
[00111] cada Q é, independentemente, um agente ativo ligado a L' por um heteroátomo, de preferência, O ou N;
[00112] Z' é um grupo reativo (por exemplo, um grupo precursor que pode ser usado para fixar o composto a um agente de desenca- deamento, como um CB);
[00113] cada L' é, independentemente, um grupo de ligação ligado ao SO2 através de um heteroátomo selecionado dentre O, S e N, de preferência, O ou N, e é selecionado de modo que a clivagem da liga- ção entre L' e SO2 promova a clivagem da ligação entre L' e Q para liberar o agente ativo;
[00114] cada X é, independentemente, -O-, -C(Rb)(Rc)-, ou -N(Rc)-, de preferência -C(Rb)(Rc)-;
[00115] E é um número inteiro que tem um valor de 1, 2, ou 3, de preferência 1;
[00116] Ar é um anel de arila com 6 membros ou heteroarila com 6 membros;
[00117] Y' é -N(Ra)-, -O-, ou -S-;
[00118] pelo menos um X é posicionado em uma relação orto ou para relação a Y' em Ar;
[00119] TG é um grupo de desencadeamento que, quando clivado, gera um átomo de N, O, ou S com capacidade para iniciar a liberação de SO2 e (Q)q-(L')w;
[00120] cada q é, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 20, de preferência, de 1 a cerca de 10;
[00121] cada w e x são, cada um, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 0 ou 1;
[00122] cada Ra e Rc é, independentemente, hidrogênio ou alquila inferior; e
[00123] cada Rb é, independentemente Z', hidrogênio ou alquila in- ferior, desde que pelo menos uma ocorrência de Rb é Z; ou
[00124] Rb e Rc, juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados, formam um anel com 3 a 5 membros, de preferência, um anel com 3 ou 4 membros;
[00125] desde que, quando w for 0, q seja 1.
[00126] Em certas modalidades, cada X é posicionado em uma re- lação orto ou para a Y' em Ar.
[00127] Em certas modalidades, pelo menos um X e Y' são posicio- nados em uma relação orto entre si em Ar. Em certas modalidades, E é 2 ou 3. Em certas modalidades em que E é 2, ambas ocorrências de X são posicionadas em uma relação orto a Y'.
[00128] Em outras modalidades, pelo menos um X e Y' são posicio- nados em uma relação para entre si em Ar. Em certas modalidades, E é 1.
[00129] Em certas modalidades, pelo menos um X é posicionado em uma relação orto ou relação para a Y'.
[00130] Em certas modalidades, pelo menos um Rb além de Rb fi- xado a Ar representa Z'.
[00131] Em certas modalidades das Fórmulas (I') e (Ia), -Y' é - N(Ra)-, -O-, ou -S-. Em algumas tais modalidades, TG é um β- galactosídeo, β-glucuronídeo ou uma combinação de β-galactosídeo e β-glucuronídeo.
[00132] Em algumas modalidades das Fórmulas (I') e (Ia), (L')w liga cada Q ao -SO2-; e cada Q é um agente ativo ligado a um dos grupos L' através de um heteroátomo, de preferência, O ou N, e forma uma ligação de -O-, -OC(O)-, -OC(O)O- ou -OC(O)NH- que inclui o heteroá- tomo de Q.
[00133] Em outras modalidades, (Q)q-(L')w- é selecionado dentre: ; ; e ;
[00134] em que:
[00135] Q é um agente ativo ligado a L' através de um heteroátomo, de preferência, O ou N,
[00136] X4 está ausente ou forma uma ligação de -O-, -OC(O)-, - OC(O)O- ou -OC(O)NH- que inclui o heteroátomo de Q;
[00137] X1 é -O- ou -NRa-, de preferência -O-;
[00138] X2 é -O-, -OC(O)-, -OC(O)O- ou -OC(O)NH-;
[00139] X3 é -OC(=O)-;
[00140] w' é um número inteiro que tem um valor de 1, 2, 3, 4 ou 5;
[00141] R9 e R10 são, cada um, independentemente, hidrogênio, alquila, arila ou heteroarila, em que alquila, arila e heteroarila são não substituídas ou substituídas por um ou mais substituintes, por exem- plo, selecionados dentre alquila, -(CH2)uNH2, -(CH2)uNRu1Ru2 e - (CH2)uSO2Ru3;
[00142] Ru1, Ru2, e Ru3 são, cada um, independentemente, hidrogê- nio, alquila, arila ou heteroarila; e
[00143] u é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10.
[00144] Em algumas tais modalidades, (Q)q-(L')w- é selecionado dentre: ; .
[00145] Ademais, a invenção fornece intermediários para preparar conjugados de acordo com a Fórmula (I') ou compostos de acordo com a Fórmula (Ia), em que (Q)q-(L')w nestas Fórmulas é substituído por um grupo de saída, tal como um halogênio (de preferência, flúor), para permitir a ligação de (Q)q-(L')w.
[00146] Em certas tais modalidades, Z' inclui um grupo reativo (por exemplo, um grupo precursor, como discutido em mais detalhes em relação a Z) que pode ser usado para ligar o composto a um agente de desencadeamento, tal como um CB (por exemplo, para preparar um composto de Fórmula (I') como discutido em mais detalhes acima), a uma superfície sólida (por exemplo, para formar um arranjo sustentado por sólido, nanopartícula ou microesfera ou partículas sensoras), ou a qualquer molécula ou suporte de interesse.
[00147] Em certas modalidades, Z' inclui um grupo reativo (por exemplo, um grupo precursor, como discutido em maiores detalhes abaixo em relação a Z) que pode ser usado para fixar o composto a uma porção química de alvejamento, como um CB.
[00148] Em certas modalidades preferenciais, o composto de Fór- mula (I') é selecionado dentre:
; ;
; ;
; ;
; ;
; ; ; ; ; ; ;e
[00149] em que:
[00150] X é -O-, -C(Rb)(Rc)-, ou -N(Rc)-;
[00151] R1 é C1-C6 alquila; e
[00152] R21 e R22 são, cada um, independentemente, hidrogênio ou C1–C6-alquila
[00153] R9 e R10 são, cada um, independentemente, hidrogênio, alquila, arila ou heteroarila, em que alquila, arila e heteroarila são não substituídas ou substituídas por um ou mais substituintes, por exem- plo, selecionados dentre alquila, -(CH2)uNH2, -(CH2)uNRu1Ru2 e - (CH2)uSO2Ru3;
[00154] Ru1, Ru2, e Ru3 são, cada um, independentemente, hidrogê-
nio, alquila, arila ou heteroarila; e
[00155] u é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10.
[00156] Em outras modalidades, o composto de Fórmula (I') é sele- cionado dentre: ; ; ; ; ; R21
O R21 O R21
O R21 O
O O
O Q (L')w S X
O E ; Z-CB ; ; ;
;e .
[00157] Em outras modalidades, o composto de Fórmula (I') é sele- cionado dentre: ; ; ; ; .; ;
; ; ; ; e .
[00158] Em ainda outras modalidades, o composto de Fórmula (I') é selecionado dentre: ; ; ; ;
; ; ; ; R21 R21 O R21 R21
O O
O R21
O O O O
O O R21 O R22
O
O (Q)q-(L')w S X
O Z-(CB)cb ; ; ; ; ; ;
; ; e .
[00159] Em outras modalidades, o composto de Fórmula (I') é sele- cionado dentre: ; ; ; ;
; ; ; ; e .
[00160] Em outras modalidades, o composto de Fórmula (I') é sele- cionado dentre:
; ; ; ; ;e .
[00161] Em certas modalidades preferenciais, Z é um grupo de liga- ção que tem uma estrutura de Fórmula (F), (G), (H), (J), (K), (L), (M) ou (N):
O
H H H * N (CH2)qq (X''CH2CH2)o N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C **
O R12 (F)
O O
H H H * N (CH2)qq (X''CH2CH2)o N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (G)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (H)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (J)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (K) O Re O O
H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)e X 4 N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** 2 R12 (L)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (M)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (N)
[00162] em que:
[00163] * é o ponto de ligação a CB;
[00164] ** é o ponto de ligação a Ar;
[00165] Re é alquila;
[00166] X'' é -O-, -S-, -NH- ou -CH2-;
[00167] X4 é –NHC(O)-(CH2)g-NH- ou –C(O)NH-(CH2)h-NH-;
[00168] Wb1 e Wb2 são, cada um, independentemente, -C(O)NH-, -
NHC(O)-, ou ;
[00169] L2 é uma porção química espaçadora opcionalmente pre- sente e pode ser, ainda, substituída por um ou mais substituintes, tal como C1-C6 alquila, C5-C14 arila e C3-C8 heteroarila, em que a alquila, arila e heteroarila pode ser, ainda, substituída, por exemplo, por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em C1- C10 alquila, -(CH2)uNH2, -(CH2)uNRu1Ru2, -(CH2)uCO2H, -(CH2)uCO2Ru1 e -(CH2)uSO2Ru3, em que Ru1, Ru2 e Ru3 são, cada um, independente- mente hidrogênio, C1-C15 alquila, C6-C20 arila ou C3-C10 heteroarila; e u é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10;
[00170] R12 é hidrogênio, C1-C8 alquila ou uma porção aminoácido, tal como uma porção química de aminoácido natural;
[00171] b, c, d, e, g, h, o e qq são, cada um, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10; e
[00172] s' é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10.
[00173] Em outras modalidades, Z é um grupo de ligação que tem uma estrutura de Fórmula (F'), (G'), (H'), (J'), (K'), (L'), (M') ou (N'): s (F')
O O
H H H * N (CH2)qq (X''CH2CH2)o N N (CH2)b Wb1 L2 (X"CH2CH2)a HN(O)C ** R12 (G')
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (X"CH2CH2)a HN(O)C ** R12 (H')
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (X"CH2CH2)a HN(O)C ** R12 (J')
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (X"CH2CH2)a HN(O)C ** R12 (K') O Re O O
H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)e X4 N (CH2)b Wb1 L2 (X"CH2CH2)a HN(O)C ** 2 R12 (L')
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (X"CH2CH2)a HN(O)C ** R12 (M')
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (X"CH2CH2)a HN(O)C ** R12 (N')
[00174] Em certas modalidades preferenciais, CB é selecionado dentre:
O HN NH
H H , S O e .
[00175] Em certas modalidades preferenciais, (Q)q-(L')w é selecio- nado dentre:
e , em que * representa o ponto de ligação de (Q)q- (L')w a -SO2-.
[00176] Em algumas modalidades, (Q)q-(L')w- é selecionado dentre: , em que * representa o ponto de ligação de (Q)q-(L')w a -SO2-.
[00177] São também fornecidos no presente documento compostos de Fórmula (I): (I)
[00178] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, especi- ficado pelo fato de que:
[00179] cada X é, independentemente, X é -O-, -CH2- ou -NR'-;
[00180] E é um número inteiro que tem um valor de 1, 2, ou 3, de preferência 1;
[00181] R' é hidrogênio, C1–C6-alquila, C6–C14-arila ou C2–C20- heteroarila;
[00182] Ar é um C5–C20-anel aromático, um C2–C20-anel heteroaro- mático, um C2–C30-anel fundido ou um C5–C20-anel aromático-C2–C20- anel heteroaromático;
[00183] R é um substituinte em Ar ou -L1'-Z-(CB)cb, de preferência, - L1'-Z-(CB)cb;
[00184] L1' é C1–C200-alquileno ou C1–C200 alquileno que compreen- de, ainda, pelo menos uma dentre uma ligação de peptídeo, uma liga- ção de amino, uma ligação de éter, uma ligação de triazol, uma ligação de tetrazol, uma ligação de açúcar, uma ligação de sulfonamida, uma ligação de fosfonato, uma ligação de sulfo ou uma estrutura de den- drímero;
[00185] Z é uma unidade de ligação que conecta CB e L1' ou um grupo reativo (por exemplo, um grupo precursor que possibilita a co- nexão a CB);
[00186] CB é uma porção química de alvejamento, tal como um li- gante que tem uma propriedade em que o mesmo se liga a um recep- tor;
[00187] cb é um n é um número inteiro que tem um valor de 0, 1 ou 2;
[00188] n é um número inteiro que tem um valor de 1, 2, 3 ou 4;
[00189] Y é -NO2, -OC(O)(CH2)rC(O)R1, -O(CH2)r-Ar1-NO2, -NHOH, Ra O Rb  B O Rc 2 3 d -NHNH2, -BR R , R ou -Y'-TG, de preferência, Y é -NO2, -
Ra O Rb  B O Rc 1 1 2 3 d OC(O)(CH2)rC(O)R , -O(CH2)r-Ar -NO2, -NHNH2, -BR R , R ou -Y'-TG;
[00190] R1 é C1-C6 alquila;
[00191] r é um número inteiro que tem um valor de 1, 2, 3, 4 ou 5;
[00192] Ar1 é C6–C20 arileno;
[00193] R2 e R3 são, cada um, independentemente, hidrogênio, C1- C6 alquila, C1-C6 alcóxi ou hidróxi;
[00194] Ra, Rb, Rc e Rd são, cada um, independentemente, hidrogê- nio ou C1-C6 alquila;
[00195] Y' é -(CH2)xNR"-, -(CH2)xO- ou -(CH2)xS-;
[00196] R" é hidrogênio ou C1-C6 alquila;
[00197] x é um número inteiro que tem um valor de 0 ou 1;
[00198] TG é um grupo de desencadeamento;
[00199] Q é -Q1 ou -L'-(Q1)w;
[00200] L' é um espaçador de C7–C30-hidrocarboneto que tem -O- ou -NR'''- em uma extremidade e -O-, -OC(O)-, -O(CO)O-, -OC(O)NR'''- ou -OC(O)NR4CH2O- na outra extremidade, em que -O-, -OC(O)-, - O(CO)O- ou -OC(O)NR''''- pode ser, ainda, incluído no espaçador de C7-C30 hidrocarboneto, em que o espaçador de C7-C30 hidrocarboneto é, ainda, substituído por um ou mais substituintes, tal como C1-C6 al- quila, C5-C14 arila e C3-C8 heteroarila, em que a alquila, arila e hetero- arila pode ser, ainda, substituída, por exemplo, por um ou mais substi- tuintes selecionados a partir do grupo que consiste em C1-C10 alquila, - (CH2)uNH2, -(CH2)uNRu1Ru2, -(CH2)uCO2H, -(CH2)uCO2Ru1 e - (CH2)uSO2Ru3, em que Ru1, Ru2 e Ru3 são, cada um, independentemen- te, hidrogênio, C1-C15 alquila, C6-C20 arila ou C3-C10 heteroarila; e u é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10;
[00201] Q1 é um agente ativo que inclui pelo menos um grupo fun- cional de -OH, -NH-, -NR5R6, -SH, -SO2NH2 ou -COOH;
[00202] R4 é hidrogênio, C1–C6-alquila, C5–C14-arila ou C3–C8- heteroarila, em que a alquila, arila e heteroarila são substituídas ou não substituídas;
[00203] R5 e R6 são, cada um, independentemente, hidrogênio, C1– C6-alquila, C3–C9-cicloalquila ou C5–C10-heteroarila, em que a hetero- arila é substituída ou não substituída;
[00204] R''' e R'''' são, cada um, independentemente, hidrogênio ou C1–C6-alquila; e
[00205] w é um número inteiro que tem um valor de 1, 2, 3, 4 ou 5.
[00206] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (I) com- preende um grupo funcional (por exemplo, Y) capaz de induzir a cicli- zação intramolecular por estimulação externa. Em certas modalidades, o dito grupo funcional é introduzido em uma posição orto e/ou posição para em relação a cada X.
[00207] Em algumas modalidades, R' é C1–C6-alquila, C6–C14-arila ou C2–C20-heteroarila.
[00208] Em algumas modalidades, Ar é um C5–C20-anel aromático, um C2–C20-anel heteroaromático, um C2–C30-anel fundido ou um C5– C20-anel aromático-C2–C20-anel heteroaromático. Por exemplo, Ar po- de ser um anel benzeno, um anel naftaleno, um anel piridina ou um anel quinolona. De preferência, Ar é um anel benzeno ou um anel naf- taleno. Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (I) é um composto que tem uma estrutura de acordo com a Fórmula (II): (II) ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
[00209] Em outras modalidades, o composto de Fórmula (I) é um composto que tem uma estrutura de acordo com a Fórmula (III):
(III) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00210] Em outras modalidades, o composto de Fórmula (I) é um composto que tem uma estrutura de acordo com a Fórmula (IV): (IV) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00211] Em outras modalidades, o composto de Fórmula (I) é um composto que tem uma estrutura de acordo com a Fórmula (V): (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00212] Em outras modalidades, o composto de Fórmula (I) é um composto que tem uma estrutura de acordo com a Fórmula (VI): (VI)
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00213] Em outras modalidades, o composto de Fórmula (I) é um composto que tem uma estrutura de acordo com a Fórmula (VII): (VII) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00214] Em outras modalidades, o composto de Fórmula (I) é um composto que tem uma estrutura de acordo com a Fórmula (VIII): (VIII) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00215] Em outras modalidades, o composto de Fórmula (I) é um composto que tem uma estrutura de acordo com a Fórmula (IX): (IX)
[00216] Em algumas modalidades, o composto é um composto de Fórmula (I), (II), (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII) ou (IX), em que R é se- lecionado dentre hidrogênio, halogênio (hal), aldeído, acetal, cetal, -R*, -OR*, -SR*, -NR*R**, -C(hal)3, -CN, -OCN, -SCN, -N=C=O, -NCS, -NO,
-NO2, -N3, -NC, -C(O)R*, -OC(O)R*, -OS(O)R*, -S(O)2R*, -S(O)2OR*, - OS(O)OR*, -OS(O)2OR*, -S(O)NR*R**, -S(O)2NR*R**, -S(O)R*, - OP(O)(OR*)2, -P(O)(OR*)2, -OP(OR*)2, -OP(OR*)N(R**)2, - OP(O)(OR*)N(R**)2, -PR*, -P(O)2, -P(O)R*, -C(O)hal, -C(S)R*, -CO2R*, -C(S)OR*, -C(O)SR*, -C(S)SR*, -C(O)NR*R**, -C(S)NR*R**, - C(=NR*)NR*R**, -NR*C(O)R**, -NR*S(O)2OR**, -NR*S(O)R**, - NR*C(O)NR**, -SS-R* ou -R*SSR**, em que: R* e R** são, cada um, independentemente, hidrogênio, C1-C18 alquila, C6-C20 arila, C3-C15 he- terociclo ou C3-C20 heteroarila.
[00217] Em algumas modalidades, o composto é um composto da Fórmula (I), (II), (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII), ou (IX), em que R é hi- drogênio ou *-(La-A1-Lb-Lc-Z)m-CB; em que:
[00218] La é uma ligação simples ou C1–C20-alquileno;
[00219] A1 é –C(O)NR*-, -NR*C(O)-, -NR*-, -O-, -PO3-, -OPO3-, - SO-, -SO2- ou -SO3-;
[00220] Lb é -(CH2CH2O)a- ou -(CH2)a-;
[00221] R* é hidrogênio, C1–C18-alquila, C6–C20-arila, C3–C15- heterociclo ou C3-C20 heteroarila;
[00222] a é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 20;
[00223] Lc é uma ligação simples ou C1–C20-alquileno;
[00224] n é um n é um número inteiro que tem um valor de 1 ou 2; e
[00225] Z é uma unidade de ligação que conecta CB e Lc; ou
[00226] Z é um precursor selecionado dentre isocianeto, isotiocia- neto, dissulfeto de 2-piridila, haloacetamida (-NHC(O)CH2-hal), malei- mida, dieno, alceno, haleto, tosilato (TsO-), aldeído, sulfonato (R-
O N N O O N S O S H
O O SO3−), , O , ácido fosfônico (- P(=O)(OH)2), cetona, C8-C10 cicloalquinila, -OH, -NHOH, -NHNH2, -SH, ácido carboxílico (-COOH), acetileno (-C≡CH), azida (-N3), amino (- NH2), ácido sulfônico (-SO3H), um derivado de alquinona (-C(O)C≡C-
Ra, em que Ra é C1–C10-alquila) e fosfato de di-hidrogênio (- OP(=O)(OH)2);
[00227] CB é uma porção química de alvejamento, tal como um li- gante capaz de se ligar a um receptor; e
[00228] m é um número inteiro que tem um valor de 0, 1 ou 2.
[00229] Em algumas modalidades, o composto é um composto da Fórmula (I), (II), (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII), ou (IX), em que R é hi- drogênio ou *-La-A1-Lb-Lc-Z; em que:
[00230] La é uma ligação simples ou C1–C20-alquileno;
[00231] A1 é -C(O)NR*-, -NR*C(O)-, -NR*-, -O-, -PO3-, -PO4-, -SO-, - SO2- ou -SO3-;
[00232] Lb é -(CH2CH2O)a- ou -(CH2)a-;
[00233] R* é hidrogênio, C1–C18-alquila, C6–C20-arila, C3–C15- heterociclo ou C3–C20-heteroarila;
[00234] a é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 20;
[00235] Lc é uma ligação simples ou C1–C20-alquileno;
[00236] n é um n é um número inteiro que tem um valor de 1 ou 2; e
[00237] Z é um precursor selecionado dentre isocianeto, isotiocia- neto, dissulfeto de 2-piridila, haloacetamida (-NHC(O)CH2-hal), malei- mida, dieno, alceno, haleto, tosilato (TsO-), aldeído, sulfonato (R-
O N N O O N S O S H
O O SO3−), , O , ácido fosfônico (- P(=O)(OH)2), cetona, C8-C10 cicloalquinila, -OH, -NHOH, -NHNH2, -SH, ácido carboxílico (-COOH), acetileno (-C≡CH), azida (-N3), amino (- NH2), ácido sulfônico (-SO3H), um derivado de alquinona (-C(O)C≡C- Ra, em que Ra é C1–C10-alquila) e fosfato de di-hidrogênio (- OP(=O)(OH)2).
[00238] Em algumas modalidades, o composto é um composto da Fórmula (I), (II), (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII), ou (IX), em que R é *(- La-A1-Lb-Lc-Z)m-CB; em que:
[00239] La é uma ligação simples ou C1–C20-alquileno;
[00240] A1 é -C(O)NR*-, -NR*C(O)-, -NR*-, -O-, -PO3-, -PO4-, -SO-, - SO2- ou -SO3-;
[00241] Lb é -(CH2CH2O)a- ou -(CH2)a-;
[00242] R* é hidrogênio, C1–C18-alquila, C6–C20-arila, C3–C15- heterociclo ou C3–C20-heteroarila;
[00243] a é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 20;
[00244] Lc é uma ligação simples ou C1–C20-alquileno;
[00245] n é um n é um número inteiro que tem um valor de 1 ou 2;
[00246] Z é uma unidade de ligação que conecta CB e Lc;
[00247] CB é uma porção química de alvejamento, tal como um li- gante que tem uma propriedade em que o mesmo se liga a um recep- tor; e
[00248] m é um número inteiro que tem um valor de 1 a 2.
[00249] Em algumas modalidades, o composto é um composto da Fórmula (I), (II), (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII), ou (IX), em que L' é um espaçador de C7–C30 hidrocarboneto que compreende adicionalmente -O-, -OC(O)-, -O(CO)O- ou -OC(O)NR''''-.
[00250] Em algumas modalidades, o composto é um composto da Fórmula (I), (II), (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII), ou (IX), em que Q é -L'- (Q1)w selecionado dentre: ; ; ; ; e
[00251] em que:
[00252] Q1 é um agente ativo que compreende pelo menos um gru-
po funcional selecionado dentre -OH, -NR5R6, -SH e -COOH;
[00253] Q2 é um agente ativo que compreende -NR5R6;
[00254] X1 é -O- ou -NR'''-;
[00255] X2 e X4, cada um, independentemente, estão ausentes ou são selecionados dentre -O-, -OC(O)-, -OC(O)O- e -OC(O)NH-;
[00256] X3 é -OC(=O)-;
[00257] R5 e R6 são iguais como definido acima;
[00258] R9 e R10 são, cada um, independentemente, hidrogênio, C1- C6 alquila, C6-C14 arila ou C3-C9 heteroarila, em que a alquila, arila e heteroarila do R9 e R10 podem ser, ainda, substituídas por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em C1-C10 alquila, -(CH2)uNH2, -(CH2)uNRu1Ru2 e -(CH2)uSO2Ru3, e o Ru1, Ru2 e Ru3 são, cada um, independentemente, hidrogênio, C1-C15 alquila, C6-C20 arila ou C3-C10 heteroarila; e u é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10;
[00259] R"' é hidrogênio ou C1–C6-alquila; e
[00260] w é um número inteiro que tem um valor de 1, 2, 3, 4 ou 5.
[00261] Em certas modalidades, -L'-(Q1)w é selecionado dentre .
[00262] O pelo menos um grupo funcional de Q, Q1 ou Q2 selecio- nado dentre -OH, -NR5R6, -SH e –COOH serve como um ponto de co- nexão do agente ativo a L'. O grupo funcional pode existir como parte de um éster, tioéster, carbonato, carbamato, amida, sulfonamida, sul- fonato, sulfato ou outra ligação adequada; ou seja, a porção química - OH, -NR5R6, -SH e –COOH não existe como tal quando o agente ativo é parte do conjugado.
[00263] Em algumas modalidades, Q2 é um agente ativo que com- preende -NR5R6, em que o agente ativo é capaz de se ligar em uma estrutura de amina quaternária, por exemplo, a porção química -NR5R6 no agente ativo é capaz de formar uma ligação de amina quaternária com L'.
[00264] Em algumas modalidades das Fórmulas (I"), (Ia), (I), (II), (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII) ou (IX), R4 é alquila, arila ou heteroarila substituída. Em algumas tais modalidades, R4 é substituído por um ou mais substituintes selecionados dentre C1–C10 alquila, -(CH2)uNH2, - (CH2)uNRu1Ru2, -(CH2)uCO2H, -(CH2)uCO2Ru1 e -(CH2)uSO2Ru3, em que Ru1, Ru2 e Ru3 são, cada um, independentemente, hidrogênio, C1–C15- alquila, C6–C20-arila ou C3–C10-heteroarila; e u é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10.
[00265] Em algumas modalidades das Fórmulas (I"), (Ia), (I), (II), (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII), ou (IX), R5 e/ou R6 é heteroarila substitu- ída por -NR7R8, em que R7 e R8 são, cada um, independentemente, hidrogênio, C1–C6-alquila, C3–C9-cicloalquila, ou C5–C14-arila.
[00266] Em algumas modalidades das Fórmulas (I"), (Ia), (I), (II), (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII), ou (IX), Q ou -(L')w-(Q)q é selecionado dentre:
e , em que * representa o ponto de ligação de Q ou (Q)q- (L')w- a -SO2-.
[00267] Em algumas modalidades das Fórmulas (I"), (Ia), (I), (II), (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII), ou (IX), Q ou -(L')w-(Q)q é selecionado dentre: , em que * representa o ponto de ligação de Q ou (Q)q-(L')w a -SO2-.
[00268] Em certas modalidades, é fornecido no presente documen- to um composto da Fórmula (I), (II), (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII), ou (IX), em que:
[00269] Y é -NO2, -OC(O)(CH2)rC(O)R1, -O(CH2)r-Ar1-NO2, -NHOH, -BR2R3 ou -Y'-TG, de preferência, Y é -NO2, -OC(O)(CH2)rC(O)R1, - O(CH2)r-Ar1-NO2, -BR2R3 ou -Y'-TG;
[00270] R1 é C1-C6 alquila;
[00271] r é um número inteiro que tem um valor de 1, 2, 3, 4 ou 5;
[00272] Ar1 é fenileno, bifenileno ou naftileno;
[00273] R2 e R3 são, cada um, independentemente, hidrogênio, C1- C6 alquila, C1-C6 alcóxi ou hidróxi;
[00274] Y' é -(CH2)xNR"-, -(CH2)xO- ou -(CH2)xS-;
[00275] R" é hidrogênio ou C1-C6alquila;
[00276] x é um número inteiro que tem um valor de 0 ou 1;
[00277] R" é hidrogênio ou C1–C6-alquila; e
[00278] TG é um grupo de desencadeamento, tal como um β- galactosídeo, β-glucuronídeo ou uma combinação de β-galactosídeo e β-glucuronídeo.
[00279] Em certas modalidades, o composto da Fórmula (I), (II), (III) (IV), (V), (VI), (VII), (VIII), ou (IX), é selecionado dentre:
; ; ; ; ; ; R21 R21 O R21 R21
O O
O R21
O O O O
O O R21 O R22
O O Q S X O R ; ; ; ; ;
; ; ; ; ; R9 N 10
R HN O H N O
O O NH2
Q HN S O O O O S Q O ; ; R ;
; ; ; R1
O O O O O S Q O R O
S Q ; ; O ; R9 R10
N O HN O O NH O S Q O R O S Q ; ; O ; ; ;
; ;
; ; ;
; ;
; ;
; ; ; ;
; ; ;
; ;
; ; ;
; ; ; ; ; R1
O O O O O S Q Q S O O O R S Q O ; ; ; ; ;
;e
[00280] em que:
[00281] R1 é C1-C6 alquila;
[00282] R21 e R22 são, cada um, independentemente, hidrogênio ou acetila;
[00283] R é hidrogênio, *-La-A1-Lb-Lc-Z ou um grupo que tem uma estrutura de Fórmula (F), (G), (H), (J), (K), (L), (M) ou (N):
O
H H H * N (CH2)qq (X''CH2CH2)o N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C **
O R12 (F)
O O
H H H * N (CH2)qq (X''CH2CH2)o N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (G)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (H)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (J)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (K)
O Re O O
H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)e X4 N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** 2 R12 (L)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (M)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (N)
[00284] La é uma ligação simples ou C1-C20 alquileno;
[00285] A1 é –C(O)NH-, -NHC(O)-, -NH-, -O-, -PO3-, -PO4-, -SO-, - SO2- ou -SO3-;
[00286] Lb é -(CH2CH2O)a- ou -(CH2)a-;
[00287] a é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 20;
[00288] Lc é C1-C20 alquileno;
[00289] X'' é -O-, -S-, -NH- ou -CH2-;
[00290] Wb1 e Wb2 são, cada um, independentemente, -C(O)NH-, - NHC(O)-, ou ;
[00291] R12 é hidrogênio, C1-C8 alquila, uma porção química amino- ácido, -(CH2)sCOR13 ou -(CH2)pNR14R15;
[00292] R13 é OH ou –NH(CH2)s'(X"CH2CH2)s"Z;
[00293] R14 e R15 são, cada um, independentemente, hidrogênio ou -(C(O)(CH2)s'(X"CH2CH2)s"Z)m-CB;
[00294] X'' é -O-, -S-, -NH- ou -CH2-;
[00295] Re é C1–C8-alquila ou -(L1'-Z)m-CB;
[00296] X4 é –NHC(O)-(CH2)g-NH- ou –C(O)NH-(CH2)h-NH-;
[00297] b, c, d, e, g, h, o e q são, cada um, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10;
[00298] p é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10;
[00299] s e s'' são, cada um, independentemente, um número intei- ro que tem um valor de 0 a cerca de 10;
[00300] s' é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10;
[00301] m é um número inteiro que tem um valor de 0 ou 1;
[00302] Z é isocianeto, isotiocianeto, dissulfeto de 2-piridila, haloa- cetamida (-NHC(O)CH2-hal), maleimida, dieno, alceno, haleto, tosilato (TsO-), aldeído, sulfonato (R-SO3−), , , ácido fosfônico (-P(=O)(OH)2), cetona, C8-C10 cicloalquinila, -OH, -NHOH, -NHNH2, -SH, ácido carboxílico (-COOH), acetileno (-C≡CH), azida (-N3), amino (-NH2), ácido sulfônico (-SO3H), um derivado de alquinona (-C(O)C≡C-Ra, em que Ra é C1–C10-alquila) ou fosfato de di-hidrogênio (-OP(=O)(OH)2);
[00303] CB é um ligante selecionado dentre:
O HN NH
H H , S O e ;e
[00304] Q é selecionado dentre:
e , em que * representa o ponto de ligação de Q a -SO2-.
[00305] Em algumas modalidades, o composto da Fórmula (I), (II), (III) (IV), (V), (VI), (VII), (VIII), ou (IX), é selecionado dentre: ; ; ; ; ; ;
R21 R21 O R21 R21
O O
O R21
O O O O
O O R21 O R22
O O Q S X O R ; ; ; ; ; ; ; ; ;
; ; ; R9 N 10
R HN O H N O
O O NH2
Q HN S O O O O S Q
O R ; ; ; ; ; ; R1
O O O O O S Q O R O S Q O ; ; ;
R9 R10
N O HN O O NH O S Q O R O S Q O ; ; ; ; ; ; ; ; ; ;
; ;
; ; ; ;
; ; ;
; ;
; ; ; ; ; ; ; ; R1
O O O O O S Q Q S O O O R S Q O ; ; ;
; ; ; e
[00306] em que:
[00307] R1 é C1-C6 alquila;
[00308] R21 e R22 são, cada um, independentemente, hidrogênio ou acetila;
[00309] R é hidrogênio, *-La-A1-Lb-Lc-Z ou um grupo que tem uma estrutura de Fórmula (F), (G), (H), (J), (K), (L), (M) ou (N):
O
H H H * N (CH2)qq (X''CH2CH2)o N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C **
O R12 (F)
O O
H H H * N (CH2)qq (X''CH2CH2)o N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (G)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (H)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (J)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (K)
O Re O O
H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)e X4 N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** 2 R12 (L)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (M)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (N)
[00310] La é uma ligação simples ou C1-C20 alquileno;
[00311] A1 é –C(O)NH-, -NHC(O)-, -NH-, -O-, -PO3-, -PO4-, -SO-, - SO2- ou -SO3-;
[00312] Lb é -(CH2CH2O)a- ou -(CH2)a-;
[00313] a é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 20;
[00314] Lc é C1-C20 alquileno;
[00315] X'' é -O-, -S-, -NH- ou -CH2-;
[00316] Wb1 e Wb2 são, cada um, independentemente, -C(O)NH-, - NHC(O)-, ou ;
[00317] R12 é hidrogênio, C1-C8 alquila, uma porção química amino- ácido, -(CH2)sCOR13 ou -(CH2)pNR14R15;
[00318] R13 é OH ou –NH(CH2)s'(X"CH2CH2)s"Z;
[00319] R14 e R15 são, cada um, independentemente, hidrogênio ou -(C(O)(CH2)s'(X"CH2CH2)s"Z)m-CB;
[00320] X'' é -O-, -S-, -NH- ou -CH2-;
[00321] Re é C1–C8-alquila ou -(L1'-Z)m-CB;
[00322] X4 é –NHC(O)-(CH2)g-NH- ou –C(O)NH-(CH2)h-NH-;
[00323] b, c, d, e, g, h, o e q são, cada um, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10;
[00324] p é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10;
[00325] s e s'' são, cada um, independentemente, um número intei- ro que tem um valor de 0 a cerca de 10;
[00326] s' é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10;
[00327] m é um número inteiro que tem um valor de 0 ou 1;
[00328] Z é isocianeto, isotiocianeto, dissulfeto de 2-piridila, haloa- cetamida (-NHC(O)CH2-hal), maleimida, dieno, alceno, haleto, tosilato (TsO-), aldeído, sulfonato (R-SO3−), , , ácido fosfônico (-P(=O)(OH)2), cetona, C8-C10 cicloalquinila, -OH, -NHOH, -NHNH2, -SH, ácido carboxílico (-COOH), acetileno (-C≡CH), azida (-N3), amino (-NH2), ácido sulfônico (-SO3H), um derivado de alquinona (-C(O)C≡C-Ra, em que Ra é C1–C10-alquila) ou fosfato de di-hidrogênio (-OP(=O)(OH)2);
[00329] CB é um ligante selecionado dentre: , e ;e
[00330] Q é selecionado dentre:
, em que * representa o ponto de ligação de Q a -SO2-.
LIBERAÇÃO DO AGENTE ATIVO
[00331] Como descrito acima, em certas modalidades, os compos- tos e conjugados descritos no presente documento são capazes de dissociar um ou mais agentes ativos (representados por Q, Q1, Q2) através de uma reação de ciclização intramolecular após uma reação química que ativa o grupo de desencadeamento. Em certas modalida- des, a reação química é uma reação físico-química e/ou uma reação bioquímica.
[00332] Em algumas modalidades, os compostos e conjugados descritos no presente documento compreendem um grupo funcional nucleofílico (Y ou Y') introduzido em um átomo adjacente em Ar em relação a X (por exemplo, -CH2-). Tipicamente, o grupo funcional nu- cleofílico é mascarado por um grupo de desencadeamento (TG), como adicionalmente detalhado abaixo. Mediante ativação, o grupo de de- sencadeamento libera o grupo funcional nucleofílico para reagir com a porção química SO2 próxima em uma ciclização intramolecular e/ou 1,4-eliminação, por fim, liberando o um ou mais agentes ativos (Q, Q1 ou Q2) ou suas formas protonadas. Em algumas tais modalidades, um ou mais agentes ativos são liberados através de uma reação de cicli- zação intramolecular após uma reação química, uma reação físico- química e/ou uma reação bioquímica (consultar, por exemplo, o Es- quema de Reação 1), ou o agente ativo é liberado através de 1,6- eliminação ou 1,4-eliminação após reação de ciclização intramolecular (consultar, por exemplo, o Esquema de Reação 2).
[00333] Como um exemplo, o mecanismo quando Y é -Y'-TG é mostrado no Esquema de Reação 1: Esquema de Reação 1: .
[00334] O mecanismo quando Q é é mostrado no Esquema de Reação 2: Esquema de Reação 2:
[00335] O mecanismo de uma etsrutura multi-substituída é mostra- da no Esquema de Reação 3:
[00336] Em algumas modalidades, Q1 quando liberado é um agente ativo que compreende pelo menos um grupo funcional selecionado dentre -OH, -NH-, -SH e –COOH. De acordo com estas modalidades, como adicionalmente descrito no presente documento, Q1 é conjugado a um composto como descrito no presente documento pelo -OH, -NH-, -SH e –COOH, por exemplo, através de um grupo funcional seleciona- do dentre éster, amida, tioéster, carbamato, ureia, oxima, hidrazona, etc. Em algumas tais modalidades, Q2 é usado no lugar de Q1, e Q2 é um fármaco contendo grupo amina. Em outras modalidades, Q2 é um agente ativo capaz de se ligar a uma unidade de amônio. Em ainda outras modalidades, Q2 é capaz de ser dissociado em sua forma origi- nal que tem um grupo amina mediante liberação de Q2, em que o agente ativo pode ser um fármaco, uma toxina, um ligante por afinida- de, uma sonda para detecção ou uma combinação dos mesmos.
[00337] Em algumas modalidades, os compostos e conjugados descritos no presente documento são química e fisiologicamente está- veis. Em algumas tais modalidades, os compostos e conjugados des- critos no presente documento atingem uma célula-alvo desejada em um estado em que há pouca dissociação do agente ativo no sangue, liberando, assim, seletivamente o fármaco. GRUPOS DE DESENCADEAMENTO (TGs)
[00338] Em algumas modalidades, os conjugados da presente in- venção incluem um grupo de desencadeamento (TG). TGs são grupos capazes de ser clivados, de preferência, clivados seletivamente, por uma reação química, tal como uma reação biológica. De modo geral, os grupos de desencadeamento sirvam para mascarar a natureza nu- cleofílica do grupo Y ou Y', fornecendo assim, estabilidade (por exem- plo, impedindo a autoimolação ou ciclização intramolecular antes de o conjugado atingir uma localização-alvo ou experimentar uma condição de desencadeamento predeterminada) aos compostos e conjugados descritos no presente documento. Mediante ativação, o grupo de de- sencadeamento libera o grupo Y ou Y' nucleofílico para autoimolação ou ciclização intramolecular ocorrer, como descrito acima.
[00339] Em algumas modalidades, o TG compreende uma sequên- cia (tal como uma sequência de peptídeos, por exemplo, dipeptídeo (Val-Cit, Val-Ala) ou uma porção química reconhecida por TEV, tripsi- na, trombina, catepsina B, catepsina D, catepsina K, caspase 1, meta- loproteinase de matriz (MMP), e similares, que pode ser hidrolisada por uma enzima (por exemplo, uma oxidorredutase, uma transferase, uma hidrolase, uma liase, uma isomerase, uma ligase, etc.) e/ou pode incluir uma porção química selecionada dentre um fosfodiéster, um fosfolipídio, um éster, uma β-galactose, uma β-glicose, uma frutose, um oligoaçúcar e similares.
[00340] Em algumas modalidades, o TG compreende uma porção química reativa ou grupo funcional que pode ser clivado sob condições de reagente nucleofílico (por exemplo, um éter silílico, uma 2-N-acil nitrobenzenossulfonamida, um sulfeto de vinila insaturado, um sulfo- namida após ativação, um derivado de malondialdeído-indol, um éster levulinoílico, uma hidrazona ou uma acil hidrazona).
[00341] Em algumas modalidades, o TG pode compreender uma porção química reativa ou grupo funcional que pode ser clivado sob condições de reagente básico (por exemplo, um éster 2-cianoetílico, um dissuccinato de etileno glicolila, um éster 2-sulfoniletílico, um alquil tioéster ou um éster tiofenílico).
[00342] Em algumas modalidades, o TG pode compreender uma porção química reativa ou grupo funcional que pode ser clivado por fotoirradiação (por exemplo, derivado de 2-nitrobenzila, éster fenacíli- co, benzenossulfonato de 8-quinolinila, cumarina, fosfotriéster, bis-aril- hidrazona ou derivado de ácido bimano bi-tiopropiônico).
[00343] Em algumas modalidades, o TG pode compreender uma porção química reativa ou grupo funcional que pode ser clivado por condições de agente redutor (por exemplo, hidroxilamina, dissulfeto, levulinato, nitro ou derivado de 4-nitrobenzila).
[00344] Em algumas modalidades, o TG pode compreender uma porção química reativa ou um grupo funcional que pode ser clivado usando condições ácidas (por exemplo, sacarídeos, análogo de terc- butilcarbamato, dialquil ou diaril dialcoxissilano, ortoéster, acetal, aco- nitila, hidrazona, β-tiopropionato, fosforamidato, imina, tritila, éter viní-
lico, policetal e derivado de 2-(difenilfosfino)benzoato de alquila; éster alquílico, éster de 8-hidroxiquinolinae éster de picolinato).
[00345] Em algumas modalidades, o TG pode compreender uma porção química reativa ou grupo funcional que pode ser clivado sob condições oxidantes (por exemplo, um boronato, um diol vicinal, deri- vado de parametoxibenzila ou um composto de selênio).
[00346] Em certas modalidades preferenciais, o TG compreende um sacarídeo, que pode ser clivado sob condições ácidas ou enzimáti- cas. Em certas modalidades preferenciais, o grupo de desencadea- mento é -NO2, que pode ser clivado sob condições de redução. Em certas modalidades preferenciais, o grupo de desencadeamento é um boronato, que pode ser clivado sob condições oxidantes. Em certas modalidades preferenciais, o grupo de desencadeamento é um éster, que pode ser clivado sob condições ácidas, básicas ou enzimáticas. Em certas modalidades preferenciais, o grupo de desencadeamento é uma hidrazona, que pode ser clivado sob condições nucleofílicas ou sob condições ácidas. Em certas modalidades preferenciais, o grupo de desencadeamento é uma hidroxilamina, que pode ser clivado sob condições de redução.
GRUPOS DE DESENCADEAMENTO DE SACARÍDEO
[00347] Em algumas modalidades, os compostos e conjugados descritos no presente documento compreendem um grupo de desen- cadeamento de sacarídeo, por exemplo, um grupo de desencadea- mento selecionado dentre: ; ;e
[00348] em que cada R21 é independentemente hidrogênio ou é se- lecionado de modo que O-R21 seja um grupo protetor hidróxi (por exemplo, acetila); e R22 é hidrogênio ou alquila inferior (por exemplo, C1–C6-alquila). Em certas modalidades, o grupo protetor hidróxi é ca- paz de ser usado em síntese orgânica, incluindo, porém sem limitação: éter metílico, éter metoximetílico, éter metiltiometílico, éter 2- metoxietoximetílico, éter bis(2-cloroetóxi)metílico, éter tetra- hidropiranílico, éter tetra-hidrotiopiranílico, éter 4-metoxitetra- hidropiranílico, 4-metoxitetra-hidrotiopiranílico, éter tetra- hidrofuranílico, éter 1-etoxietílico, éter 1-metil-1-metoxietílico, éter2- (fenilselenil)etílico, éter t-butílico, éter alílico, éter benzílico, éter o- nitrobenzílico, éter trifenil metílico, éter α-naftildifenil metílico, éter p- metoxifenildifenilmetílico, éter 9-(9-fenil-10-oxo)antrílico, éter trimetilsi- lílico, éter isopropildimetilsilílico, éter t-butildimetilsilílico, éter t- butildifenilsilílico, éter tribenzilsilílico, éter tri-isopropilsilílico, éster de formato, éster de acetato, éster de tricloroacetato, éster de fenoxiace- tato, éster de isobutirato, éster de pivaloato, éster de adamantoato, éster de benzoato, éster de 2,4,6-trimetil-benzoato, carbonato de meti- la, carbonato de 2,2,2-tricloroetila, carbonato de alila, carbonato de p- nitrofenila, carbonato de benzila, carbonato de p-nitrobenzila, S- benziltiocarbonato, N-fenilcarbamato, éster de nitrato, éster de 2,4- dinitrofenilsulfenato, etc., mas sem limitação aos mesmos. GRUPOS PROTETORES COMO GRUPOS DE DESENCADEAMEN-
TO
[00349] Em algumas modalidades, TG é um grupo que é capaz de ser clivado por uma reação química, uma reação físico-química e/ou uma reação biológica. Em certas modalidades, TG é um grupo prote- tor. Em algumas tais modalidades, o grupo protetor é um grupo prote- tor de grupo amina, um grupo protetor álcool ou um grupo protetor tiol.
GRUPOS PROTETORES AMINA
[00350] Em certas modalidades, o grupo protetor amina é um grupo protetor geral que é capaz de ser usado na síntese orgânica, incluindo, porém sem limitação: carbamato de m-nitrofenila, carbamato de 3,5- dimetoxibenzila, carbamato de o-nitrobenzila, carbamato de fenil(o- nitrofenil)metila, carbamato de alquila, carbamato de 9-fluorenilmetila, carbamato de 2,2,2-tricloroetila, carbamato de 2-trimetilsililetila (Teoc), carbamato de t-butila (Boc), carbamato de vinila (Voc), carbamato de alila (Alloc), carbamato de 1-isopropilalila (Ipaoc), carbamato de 8- quinolila, carbamato de N-hidroxipiperidinila, carbamato de benzila, carbamato de p-metoxibenzila, carbamato de p-nitrobenzila, carbama- to de difenil metila, acetamida, cloroacetamida, tricloroacetamida, feni- lacetamida, benzamida, N-ftalimida, N-2,3-difenilmaleimida, N-2,5- dimetilpirrol, N-1,1-dimetiltiometilenoamina, N-benzilidenoamina, ben- zenossulfenamida, o-nitrobenzenossulfenamida, trifenilmetilsulfenami- da, p-toluenossulfonamida, metanossulfonamida, etc., mas sem limita- ção aos mesmos.
GRUPOS PROTETORES ÁLCOOL
[00351] Em certas modalidades, o grupo protetor álcool é um grupo protetor geral que é capaz de ser usado em síntese orgânica, incluin- do, porém sem limitação: éter metílico, éter metoximetílico (éter MOM), éter benziloximetílico (éter BOM), éter de 2-(trimetilsilil)etoximetílico (éter SEM), éter feniltiometílico (PTM ether), éter de 2,2-dicloro-1,1- difluoroetílico, éter p-bromofenacílico, éter cloropropilmetílico, éter iso- propílico, éter ciclo-hexílico, 4-metoxibenzila, éter 2,6-diclorobenzílico, éter 4-(dimetilaminocarbonil)benzílico, éter 9-antrilmetílico, éter 4- picolílico, éter metiltiometílico (éter MTM), éter 2-metoxietoximetílico (éter ME), éter bis(2-cloroetóxi)metílico, éter tetra-hidropiranílico (éter THP), éter tetra-hidrotiopiranílico, éter 4-metoxitetra-hidropiranílico, éter 4-metoxitetra-hidrotiopiranílico, éter tetra-hidrofuranílico, éter 1- etoxietílico, éter 1-metil-1-metoxietílico, éter 2-(fenilselenil)etílico, éter t-butílico, éter alpilico, éter benzílico, éter o-nitrobenzílico, éter trifenil- metílico, éter α-naftildifenilmetílico, éter p-metoxifenildifenilmetílico, éter 9-(9-fenil-10-oxo)antrílico, éter trimetilsilílico (éter TM), éter iso- propildimetilsilílico, éter t-butildimetilsilílica (éter TBDMS), éter t- butildifenil silílico, éter tribenzilsilílico, éter tri-isopropilsilílico, éster de formato, éster de acetato, éster de tricloroacetato, éster de fenoxiace- tato, éster de isobutirato, éster de pivaloato, éster de adamantoato, éster de benzoato, éster de 2,4,6-trimetilbenzoato (Mesitoato), carbo- nato de metila, carbonato de 2,2,2-trichloroetila, carbonato de alila, carbonato de p-nitrofenila, carbonato de benzila, carbonato de p- nitrobenzila, tiocarbonato de S-benzila, N-fenilcarbamato, éster de ni- trato, éster de 2,4-dinitrofenilsulfenato, éster dimetilfosfinílico (éster DMP), éster dimetiltiofosfinílico (éster MPT), metanossulfonato de arila, toluenossulfonato de arila, etc., porém sem limitação aos mesmos.
GRUPOS PROTETORES TIOL
[00352] Em certas modalidades, o grupo protetor tiol é capaz de ser usado em síntese orgânica, incluindo, porém sem limitação: Tioéter S- benzílico, tioéter S-p-metoxibenzílico, tioéter S-o- ou p-hidroxil ou ace- toxibenzílico, tioéter S-p-nitrobenzílico, tioéter S-4-picolílico, tioéter de N-óxido de S-2-picolila, tioéter S-9-antrilmetílico, tioéter S-9- fluorenilmetílico, S-metoximetil monotioacetal, derivado de A-acetila, derivado de S-benzoíla, S-(N-etilcarbamato), S-(N- metoxometilcarbamato), etc., porém sem limitação aos mesmos.
GRUPO DE LIGAÇÃO
[00353] Em algumas modalidades, os compostos e conjugados descritos no presente documento compreendem um grupo de ligação que conecta cada CB e Ar através de uma ligação covalente. Os gru- pos de ligação típicos são estáveis, porções químicas não hidrolisá- veis, tal como, por exemplo, um C10–C100 alquileno saturado ou insatu- rado, linear ou ramificado. Em certas modalidades, a unidade de liga-
ção satisfaz pelo menos dois e, mais preferencialmente, pelo menos três, dentre quatro dos seguintes critérios:
[00354] (i) pelo menos um -CH2- na porção química alquileno é substituído por (isto é, é trocado por) um ou mais heteroátomos seleci- onados dentre -NH-, -C(=O), -O-, -S- e -P-;
[00355] (ii) pelo menos um heteroarileno está incluído na porção química alquileno;
[00356] (iii) pelo menos uma porção química aminoácido, ligação de açúcar, ligação de peptídeo ou ligação de amida está incluída na por- ção química alquileno; e
[00357] (iv) o alquileno pode ser, ainda, substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em C1-C20 alquila, C6-C20 aril C1-C8 alquila, -(CH2)sCOOH e -(CH2)pNH2, em que s é um número inteiro que tem um valor de 0 a 10, e p é um número in- teiro que tem um valor de 1 a cerca de 10.
[00358] Em certas modalidades, a unidade de ligação compreende pelo menos dois e, mais preferencialmente, pelo menos três dentre os seguintes:
[00359] (i) pelo menos um heteroátomo selecionado dentre -NH-, - C(=O), -O-, -S- e -P-;
[00360] (ii) pelo menos um heteroarileno;
[00361] (iii) pelo menos uma porção química aminoácido, ligação de açúcar, ligação de peptídeo ou ligação de amida; e
[00362] (iv) o alquileno pode ser, ainda, substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em C1-C20 alquila, C6-C20 aril C1-C8 alquila, -(CH2)sCOOH e -(CH2)pNH2, em que s é um número inteiro que tem um valor de 0 a 10, e p é um número in- teiro que tem um valor de 1 a cerca de 10.
[00363] Em outras modalidades, o grupo de ligação que conecta cada CB e Ar compreende um grupo funcional produzido através de uma reação química click.
[00364] Em modalidades alternativas, a unidade de ligação com- preende um grupo funcional reativo capaz de particular em uma rea- ção química click.
[00365] Uma reação química click é uma reação que pode ser reali- zada sob condições moderadas e é extremamente seletiva para gru- pos funcionais que não são comumente encontrados em moléculas biológicas (por exemplo, um grupo azida, um grupo acetileno, etc.). Consequentemente, esta reação pode ser executada na presença de grupos de desencadeamento complexos, porções químicas de alveja- mento, etc. Ademais, a química click tem alta especificidade de rea- ção. Por exemplo, a reação química click entre um grupo azida e um grupo acetileno prossegue seletivamente sem interferência de outros grupos funcionais presentes na molécula. Por exemplo, a química click de azida-acetileno pode proporcionar uma porção química triazol em alto rendimento.
[00366] Assim, em algumas modalidades, o grupo de ligação que conecta cada CB e Ar compreende , ou , V pode ser uma ligação simples, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22 -, -NR23C(O)-, - NR24SO2- ou -SO2NR25-, R21 a R25 podem ser, cada um, independen- temente, hidrogênio, (C1-C6)alquila, (C1-C6)alquil(C6-C20)arila ou (C1- C6)alquil(C3-C20)heteroarila, r pode ser um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10, p pode ser um número inteiro que tem um valor de 0 a cerca de 10, q pode ser um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10, e L" pode ser uma ligação simples.
[00367] Em outras modalidades, a unidade de ligação que conecta cada CB e Ar é um grupo de ligação representado pela Fórmula (A):
**-Lc-Wb1-(CH2)b-Wa3-(P1)a-Y2-Wa2-Y1-Wa1-* (A)
[00368] em que:
[00369] * é o ponto de ligação a CB;
[00370] ** é o ponto de ligação a Ar;
[00371] Wa1, Wa2 e Wa3 são, cada um, independentemente, -NH-, - C(=O)- ou (-CH2-)b;
[00372] Wb1 é uma ligação de amida ou triazolileno;
[00373] P1 é um ligante que conecta Wa3 e Y2 e é uma porção quí- mica aminoácido, uma ligação de peptídeo ou uma ligação de amida;
[00374] Lc é alquileno;
[00375] Y2 é uma ligação simples, -Wa4-(CH2)c-Wb2-(CH2)d-Wa5- ou – Wa6-(CH2)e-CReRf-X-;
[00376] Re é C1-C8 alquila ou CB-Wa7-Y3-Wc1-(CH2)f-;
[00377] Rf é B-Wa7-Y3-Wc1-(CH2)f-;
[00378] X é -NHC(=O)-(CH2)g-Wa8- ou -C(=O)NH-(CH2)h-Wa9-;
[00379] Wa4, Wa5, Wa6, Wa7, Wa8 e Wa9 são, cada um, independen- temente, -NH-, -C(=O)- ou -CH2-;
[00380] Wb2 é uma ligação de amida ou triazolileno;
[00381] Wc1 é -NHC(=O)- ou -C(=O)NH-;
[00382] Y3 é -(CH2)i-(X'CH2CH2)j-(CH2)k-;
[00383] X' é -O-, -S-, -NH- ou -CH2-;
[00384] CB é igual como definido acima;
[00385] b, c, d, e, f, g, h, i e j são, cada um, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10;
[00386] k e y são, cada um, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 0 a cerca de 10;
[00387] Y1 é -(CH2)q-(CH2CH2X")o- ou -(CH2)q-(X"CH2CH2)o-;
[00388] X'' é -O-, -S-, -NH- ou -CH2-; e
[00389] o e q são um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10.
[00390] Em algumas modalidades, P1 compreende pelo menos uma unidade representada pela Fórmula (B) ou (C): (B) (C)
[00391] em que:
[00392] R12 é hidrogênio, C1–C8-alquila, uma cadeia lateral de ami- noácido, tal como uma cadeia lateral de aminoácido natural (por exemplo, H, metila, isopropila, isobutila, sec-butila, S-metil tioéter, benzila, indol, pirolidina, pirrolina, hidroximetila, tirosila, lisila, imidazol, glicila, glutamila, ácido carbamoilbutanoico, carboxamida, ácido aspár- tico, 1-hidroxietila e 2-hidroxietila), -(CH2)sCOR13 ou -(CH2)pNR14R15;
[00393] R13 é OH ou -NH(CH2)s'(X"CH2CH2)s"Z;
[00394] R14 e R15 são, cada um, independentemente, hidrogênio ou –(C(O)(CH2)s'(X"CH2CH2)s"Z)m-CB;
[00395] X'' é -O-, -S-, -NH- ou -CH2-;
[00396] Z e CB são iguais como definido acima;
[00397] p é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10;
[00398] s e s'' são um número inteiro que tem um valor de 0 a cerca de 10;
[00399] s' é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10; e
[00400] m é um número inteiro que tem um valor de 0 ou 1.
[00401] Em algumas modalidades, de fórmula (B) ou (C):
[00402] R12 é hidrogênio, alquila, uma cadeia lateral de aminoácido,
-(CH2)sC(O)R13 ou -(CH2)pNR14R15;
[00403] p é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10;
[00404] s é um número inteiro que tem um valor de 0 a cerca de 10;
[00405] R13 é OH ou –NH(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z''-(CB)m;
[00406] R14 e R15 são, cada um, independentemente, hidrogênio ou -C(O)(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z''-(CB)m;
[00407] s'' é um número inteiro que tem um valor de 0 a cerca de 10;
[00408] s' é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10;
[00409] m é um número inteiro que tem um valor de 0 ou 1;
[00410] X''' é -O-, -S-, -NH- ou -CH2-; e
[00411] Z'' é um grupo de ligação que conecta CB ao restante de R14 ou R15; ou Z'' é um grupo de ligação que compreende um grupo reativo.
[00412] Em algumas tais modalidades de fórmula (B) ou (C):
[00413] R13 é OH ou –NH(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z'';
[00414] R14 e R15 são, cada um, independentemente, hidrogênio ou -C(O)(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z''; e
[00415] Z é um precursor reativo de uma unidade de ligação seleci- onado dentre isocianeto, isotiocianeto, dissulfeto de 2-piridila, haloace- tamida (-NHC(O)CH2-hal), maleimida, dieno, alceno, haleto, tosilato
N N O
S O - O (TsO ), aldeído, sulfonato (R-SO3−), ,
O O N H S
O O , ácido fosfônico (-P(=O)(OH)2), cetona, C8-C10 cicloalquinila, -OH, -NHOH, -NHNH2, -SH, ácido carboxílico (-COOH), acetileno (-C≡CH), azida (-N3), amino (-NH2), ácido sulfônico (-SO3H), um derivado de alquinona (-C(O)C≡C-Ra, em que Ra é C1–C10-alquila) e fosfato de di-hidrogênio (-OP(=O)(OH)2).
[00416] Em outras tais modalidades de fórmula (B) ou (C):
[00417] R13 é OH ou –NH(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z''CB;
[00418] R14 e R15 são, cada um, independentemente, hidrogênio ou -C(O)(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z''CB; e
[00419] Z'' é uma unidade de ligação que conecta CB ao restante de R14 ou R15 formados a partir de um precursor selecionado dentre isocianeto, isotiocianeto, dissulfeto de 2-piridila, haloacetamida (- NHC(O)CH2-hal), maleimida, dieno, alceno, haleto, tosilato (TsO-), al-
O N N O O N S O S H
O O deído, sulfonato (R-SO3−), , O , ácido fosfônico (-P(=O)(OH)2), cetona, C8-C10 cicloalquinila, -OH, - NHOH, -NHNH2, -SH, ácido carboxílico (-COOH), acetileno (-C≡CH), azida (-N3), amino (-NH2), ácido sulfônico (-SO3H), um derivado de al- quinona (-C(O)C≡C-Ra, em que Ra é C1–C10-alquila) e fosfato de di- hidrogênio (-OP(=O)(OH)2).
[00420] Em algumas modalidades, Y2 é uma ligação simples ou é selecionado dentre: ; ; ; ; e
[00421] em que:  N   N  b2 N N N N
[00422] W é –C(O)NH-, -NHC(O)-, ou ;
[00423] Re é C1–C8-alquila ou –(L1'-Z-)mCB;
[00424] Rf é B-Wb2'-(CH2)i-(X''CH2CH2)j-NH-C(=O)-(CH2)f-;
[00425] Xa é -NHC(=O)-(CH2)g-NH- ou –C(O)NH-(CH2)h-NH-;
[00426] Wb2 é -C(O)NH- ou -NHC(=O)-;
[00427] c, d, e, f, g, h, i e j são, cada um, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10;
[00428] X'' é -O-, -S-, -NH- ou -CH2-; e
[00429] L1', Z, m e B são iguais como definido acima.
[00430] Em certas modalidades, a unidade de ligação que conecta cada CB e Ar é um grupo de ligação que compreende grupos (CH2)b, Lc, (P1)a, Wa1, Wa2, Wa3, Y1 e Y2 conectados uns aos outros por liga- ções covalentes, em que:
[00431] Wa1, Wa2 e Wa3 são, cada um, independentemente, -NH-, - C(O)- ou -CH2-;
[00432] Wb1 é uma ligação de amida ou triazolileno;
[00433] P1 é uma ligação de amida, um resíduo de aminoácido ou um peptídeo;
[00434] Lc é alquileno;
[00435] Y1 é -(CH2)q-(CH2CH2X")o- ou -(CH2)q-(X"CH2CH2X")o-;
[00436] X" é -O-, -S-, -NH- ou -CH2-;
[00437] Y2 é uma ligação simples ou um grupo selecionado dentre:
H O N (CH2)c Wb2 (CH2)d ; ; ;e
[00438] Wb2 é uma ligação de amida ou triazolileno;
[00439] a é 0 a 10;
[00440] b, c e d são, cada um, independentemente, um número in- teiro que tem um valor de 1 a cerca de 10; e
[00441] o e q são, cada um, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10.
[00442] Em algumas modalidades, R12 é uma cadeia lateral de ami- noácido natural. Em outras modalidades, R12 é uma cadeia lateral de aminoácido não natural.
[00443] Em algumas modalidades, a unidade de ligação que conec-
ta cada CB e Ar é um grupo de ligação representado pela Fórmula (A): **-Lc-Wb1-(CH2)b-Wa3-(P1)a-Y2-Wa2-Y1-Wa1-* (A)
[00444] em que:
[00445] * é o ponto de ligação a CB; e
[00446] ** é o ponto de ligação a Ar.
[00447] Em algumas tais modalidades, P1 é
O H H O
N N R12 ou R12
[00448] em que:
[00449] R12 é hidrogênio, alquila, uma cadeia lateral de aminoácido, -(CH2)sCOOH ou –(CH2)pNH2;
[00450] p é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10; e
[00451] s e s'' são, cada um, independentemente, um número intei- ro que tem um valor de 0 a cerca de 10.
[00452] Em algumas modalidades, P1 é
O O H H
N N R12 ou R12
[00453] em que:
[00454] R12 é hidrogênio, alquila, uma cadeia lateral de aminoácido, -(CH2)sC(O)R13 ou -(CH2)pNR14R15;
[00455] p é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10;
[00456] s é um número inteiro que tem um valor de 0 a cerca de 10;
[00457] R13 é OH ou –NH(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z''-(CB)m;
[00458] R14 e R15 são, cada um, independentemente, hidrogênio ou -C(O)(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z''-(CB)m;
[00459] s'' é um número inteiro que tem um valor de 0 a cerca de 10;
[00460] s' é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10;
[00461] m é um número inteiro que tem um valor de 0 ou 1;
[00462] X''' é -O-, -S-, -NH- ou -CH2-; e
[00463] Z'' é um grupo de ligação que conecta CB ao restante de R14 ou R15; ou Z'' é um grupo de ligação que compreende um grupo reativo.
[00464] Em algumas tais modalidades de P1:
[00465] R13 é OH ou –NH(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z'';
[00466] R14 e R15 são, cada um, independentemente, hidrogênio ou -C(O)(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z''; e
[00467] Z'' é um precursor reativo de uma unidade de ligação sele- cionado dentre isocianeto, isotiocianeto, dissulfeto de 2-piridila, haloa- cetamida (-NHC(O)CH2-hal), maleimida, dieno, alceno, haleto, tosilato
N N O
S O - O (TsO ), aldeído, sulfonato (R-SO3−), ,
O O N H S
O O , ácido fosfônico (-P(=O)(OH)2), cetona, C8-C10 cicloalquinila, -OH, -NHOH, -NHNH2, -SH, ácido carboxílico (-COOH), acetileno (-C≡CH), azida (-N3), amino (-NH2), ácido sulfônico (-SO3H), um derivado de alquinona (-C(O)C≡C-Ra, em que Ra é C1–C10-alquila) e fosfato de di-hidrogênio (-OP(=O)(OH)2).
[00468] Em outras tais modalidades de P1:
[00469] R13 é OH ou –NH(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z''CB;
[00470] R14 e R15 são, cada um, independentemente, hidrogênio ou -C(O)(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z''CB; e
[00471] Z'' é uma unidade de ligação que conecta CB ao restante de R14 ou R15 formados a partir de um precursor selecionado dentre isocianeto, isotiocianeto, dissulfeto de 2-piridila, haloacetamida (- NHC(O)CH2-hal), maleimida, dieno, alceno, haleto, tosilato (TsO-), al-
O N N O O N S O S H
O O deído, sulfonato (R-SO3−), , O , ácido fosfônico (-P(=O)(OH)2), cetona, C8-C10 cicloalquinila, -OH, - NHOH, -NHNH2, -SH, ácido carboxílico (-COOH), acetileno (-C≡CH), azida (-N3), amino (-NH2), ácido sulfônico (-SO3H), um derivado de al- quinona (-C(O)C≡C-Ra, em que Ra é C1–C10-alquila) e fosfato de di- hidrogênio (-OP(=O)(OH)2).
[00472] Em modalidades alternativas, a unidade de ligação que co- necta CB e Ar é um grupo de ligação representado pela Fórmula (F), (G), (H), (J), (K), (L), (M) ou (N):
O
H H H * N (CH2)qq (X''CH2CH2)o N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C **
O R12 (F)
O O
H H H * N (CH2)qq (X''CH2CH2)o N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (G)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (H)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (J)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (K) O Re O O
H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)e X 4 N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** 2 R12 (L)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (M)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (OCH2CH2)a HN(O)C ** R12 (N)
[00473] em que:
[00474] Re é alquila;
[00475] X4 é –NHC(O)-(CH2)g-NH- ou –C(O)NH-(CH2)h-NH-;
[00476] e, g, e h são, cada um, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10; e
[00477] s' é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10.
[00478] Em algumas modalidades de Fórmula (F), (G), (H), (I), (J), (K), (L) ou (M):
[00479] R12 é hidrogênio, alquila, uma cadeia lateral de aminoácido, -(CH2)sC(O)R13 ou -(CH2)pNR14R15;
[00480] p é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10;
[00481] s é um número inteiro que tem um valor de 0 a cerca de 10;
[00482] R13 é OH ou –NH(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z''-(CB)m;
[00483] R14 e R15 são, cada um, independentemente, hidrogênio ou -C(O)(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z''-(CB)m;
[00484] s'' é um número inteiro que tem um valor de 0 a cerca de 10;
[00485] s' é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10;
[00486] m é um número inteiro que tem um valor de 0 ou 1;
[00487] X''' é -O-, -S-, -NH- ou -CH2-; e
[00488] Z'' é um grupo de ligação que conecta CB ao restante de R14 ou R15; ou Z'' é um grupo de ligação que compreende um grupo reativo.
[00489] Em algumas tais modalidades de Fórmula (F), (G), (H), (I),
(J), (K), (L) ou (M):
[00490] R13 é OH ou –NH(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z'';
[00491] R14 e R15 são, cada um, independentemente, hidrogênio ou -C(O)(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z''; e
[00492] Z é um precursor reativo de uma unidade de ligação seleci- onado dentre isocianeto, isotiocianeto, dissulfeto de 2-piridila, haloace- tamida (-NHC(O)CH2-hal), maleimida, dieno, alceno, haleto, tosilato
N N O
S O - O (TsO ), aldeído, sulfonato (R-SO3−), ,
O O N H S
O O , ácido fosfônico (-P(=O)(OH)2), cetona, C8-C10 cicloalquinila, -OH, -NHOH, -NHNH2, -SH, ácido carboxílico (-COOH), acetileno (-C≡CH), azida (-N3), amino (-NH2), ácido sulfônico (-SO3H), um derivado de alquinona (-C(O)C≡C-Ra, em que Ra é C1–C10-alquila) e fosfato de di-hidrogênio (-OP(=O)(OH)2).
[00493] Em algumas tais modalidades de Fórmula (F), (G), (H), (I), (J), (K), (L) ou (M):
[00494] R13 é OH ou –NH(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z''CB;
[00495] R14 e R15 são, cada um, independentemente, hidrogênio ou -C(O)(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z''CB; e
[00496] Z'' é uma unidade de ligação que conecta CB ao restante de R14 ou R15 formados a partir de um precursor selecionado dentre isocianeto, isotiocianeto, dissulfeto de 2-piridila, haloacetamida (- NHC(O)CH2-hal), maleimida, dieno, alceno, haleto, tosilato (TsO-), al-
O N N O O N S O S H
O O deído, sulfonato (R-SO3−), , O , ácido fosfônico (-P(=O)(OH)2), cetona, C8-C10 cicloalquinila, -OH, - NHOH, -NHNH2, -SH, ácido carboxílico (-COOH), acetileno (-C≡CH),
azida (-N3), amino (-NH2), ácido sulfônico (-SO3H), um derivado de al- quinona (-C(O)C≡C-Ra, em que Ra é C1–C10-alquila) e fosfato de di- hidrogênio (-OP(=O)(OH)2).
PORÇÕES QUÍMICAS DE ALVEJAMENTO
[00497] Os compostos e conjugados da presente invenção pode compreender, ainda, um ligante ou porção química de alvejamento, CB. Em algumas modalidades, o ligante ou porção química de alveja- mento é qualquer elemento de reconhecimento molecular, que pode sofrer uma interação específica com pelo menos uma outra molécula através, por exemplo, de ligação não covalente, tal como ligação de hidrogênio, coordenação de metal, forças hidrofóbicas, forças de van der Waals, interações π-π, ligação de halogênio, efeitos eletrostáticos e/ou eletromagnéticos. Em certas modalidades, CB é selecionado den- tre uma nanopartícula, uma imunoglobulina, um ácido nucleico, uma proteína, um oligopeptídeo, um polipeptídeo, um anticorpo, um frag- mento de um polipeptídeo antigênico, um repecorpo e similares.
[00498] Os compostos e conjugados da presente invenção podem compreender uma ou mais porções químicas de alvejamento. Ou seja, a variável cb pode ter um valor de número inteiro selecionado dentre 1, 2, 3, 4, 5, 1 a 10 ou 1 a 20.
[00499] Em algumas modalidades, CB compreende dois ou mais aminoácidos naturais independentemente selecionados ou aminoáci- dos não naturais conjugados por ligações covalentes (por exemplo, ligações peptídicas), e o peptídeo pode incluir 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou mais aminoácidos naturais ou aminoácidos não naturais que são conjugados por ligações peptídicas. Em algumas modalidades, o ligante compreende sequências de ami- noácidos mais curtas (por exemplo, fragmentos de proteínas naturais ou fragmentos de polipeptídeos sintéticos) assim como proteínas de comprimento completo (por exemplo, proteínas pré-modificadas gene-
ticamente).
[00500] Em algumas modalidades, CB é selecionado dentre um an- ticorpo, um hormônio, um fármaco, um análogo de anticorpo (por exemplo, não IgG), proteína, um oligopeptídeo, um polipeptídeo, etc., que se liga a um receptor. Em certas modalidades, CB alveja seleti- vamente o fármaco em um órgão, tecido ou célula específica. Em ou- tras modalidades, CB se liga especificamente a um receptor superex- presso em células cancerosas em comparação com células normais e pode ser classificado em um anticorpo monoclonal (mAb) ou um frag- mento de anticorpo e um não anticorpo de baixo peso molecular. De preferência, CB é selecionado dentre peptídeos, peptídeos específicos para célula tumoral, aptâmeros específicos para célula tumoral, car- boidratos específicos para célula tumoral, anticorpos monoclonais es- pecíficos para célula tumoral, anticorpos policlonais e fragmentos de anticorpo que são identificados em uma triagem de biblioteca.
[00501] Os ligantes exemplificativos ou porções químicas de alve- jamento incluem, porém sem limitação, carnitina, inositol, ácido lipoico, piridoxal, ácido ascórbico, niacina, ácido pantotênico, ácido fólico, ribo- flavina, tiamina, biotina, vitamina B12, outras vitaminas solúveis em água (vitamina B), vitaminas solúveis em gordura (vitamina A, D, E, K), RGD (Arg-Gly-Asp), NGR (Asn-Gly-Arg), transfereína, receptor de VIP (peptídeo intestinal vasoativo), peptídeo APRPG (Ala-Pro-Arg-Pro- Gly), TRX-20 (tioredoxina-20), integrina, nucleolina, aminopeptidase N (CD13), endoglina, receptor de fator de crescimento epitelial vascular, receptor de lipoproteína de baixa densidade, receptor de transferrina, receptor de somatostatina, bombesina, neuropeptídeo Y, receptor de hormônio de liberação de hormônio luteinizante, receptor de ácido fóli- co, epidermal growth factor receptor de receptor de crescimento epi- dérmico, fator de crescimento de transformação, receptor de fator de crescimento de fibroblast, receptor de asialoglicoproteína, receptor de galectina-3, receptor de E-selectina, receptor de ácido hialurônico, an- tígeno de membrana específico para próstata (PSMA), receptor de co- lecistoquinina A, receptor de colecistoquinina B, receptor de domínio de discoidina, receptor de mucina, receptor de opioide, receptor de plasminogênio, receptor de bradiquinina, receptor de insulina, receptor de fator de crescimento semelhante à insulina, receptor de angiotensi- na AT1, receptor de angiotensina AT2, receptor de fator estimulante de colônia de granulócitos e macrófagos (receptor de GM-CSF), receptor de galactosamina, receptor de sigma-2, delta-semelhante 3 (DLL-3), aminopeptidase P, melanotransferrina, leptina, toxina de tétano Tet1, toxina de tétano G23, peptídeo de RVG (Glicoproteína do Vírus da Raiva), HER2 (receptor de fator de crescimento epidérmico humano 2), GPNMB (glicoproteína não metastática b), Ley, CA6, CanAng, SLC44A4(membro 4 da família 44 de transportador de soluto), CEA- CAM5 (molécula de adesão celular relacionada a antígeno carcinoem- briônico 5), Nectina-4, Anidrase Carbônica 9, TNNB2, 5T4, CD30, CD37, CD74, CD70, PMEL17, EphA2(receptor de efrina A2), Trop-2, SC-16, fator de tecido, ENPP-3(AGS-16), SLITRK6 (membro 6 da fa- mília semelhante a SLIT e NTRK), CD27, antígeno Y de Lewis, LIV1, GPR161 (Receptor acoplado à proteína G 161), PBR (receptor de benzodiazeoína do tipo periférico), receptor MERTK (tirosina quinase receptora de Mer), CD71, LLT1 (transcrito 1 semelhante a lecitina ou CLED2D), receptor de interleucina 22, receptor de sigma 1, receptor ativado por proliferador de peroxissomo, DLL3, C4,4a, cKIT, Efrina A, CTLA4 (Proteína 4 Associada a Linfócito T Citotóxico), FGFR2b (re- ceptor de fator de crescimento de fibroblasto 2b), receptor de N- acetilcolina, receptor de hormônio de liberação de gonadotropina, re- ceptor de peptídeo de liberação de gastrina, receptor de proteína mor- fogenética óssea do tipo 1B (BMPR1B), E16 (LAT1, SLC7A5), STE- AP1 (antígeno epitelial de transmembrana seis da próstata), 0772P
(CA125, MUC16), MPF (MSLN, mesotelina), Napi3b (SLC34A2), Se- ma5b (semaforina 5b), ETBR(receptor do tipo B de endotelina), MSG783(RNF124), STEAP2 (antígeno epitelial de transmembrana seis da próstata 2), TrpM4 (canal de cátion 5 potencial de receptor temporário, subfamília M, membro 4), CRIPTO (fator de crescimento derivado de teratocarcinoma), CD21, CD79b, FcRH2 (IFGP4), HER2 (ErbB2), NCA (CEACM6), MDP (DPEP1), IL20R-alfa (IN20Ra), Brevi- cano (BCAN), EphB2R, ASLG659 (B7h), CD276, PSCA (precursor de antígeno de célula-tronco da próstata), GEDA, BAFF-R (BR3), CD22 (BL-CAM), CD79a, CXCR5, HLA-DOB, P2X5, CD72, LY64, FcRH1, IRTA2, TENB2, SSTR2, SSTR5, SSTR1, SSTR3, SSTR4, ITGAV (In- tegrina, alfa 5), ITGB6 (Integrina, beta 6), MET, MUC1, EGFRvIII, CD33, CD19, IL2RA (receptor de interleucina 2, alfa), AXL, BCMA, CTA (antígenos tetis de câncer), CD174, CLEC14A, GPR78, CD25, CD32, LGR5 (GPR49), CD133 (Prominina), ASG5, ENPP3 (ectonucle- otídeo Pirofosfatase/Fosfodiesterase 3), PRR4 (proteína rica em proli- na 4), GCC (guanilato ciclase 2C), Liv-1 (SLC39A6), CD56, CanAg, TIM-1, RG-1, B7-H4, PTK7, CD138, Claudinas, Her3 (ErbB3), RON (MST1R), CD20, TNC (Tenascina C), FAP, DKK-1, CD52, CS1 (SLAMF7), Anexina A1, V-CAM, gp100, MART-1, MAGE-1 (gene 1 de codificação de antígeno de melanoma), MAGE-3 (antígeno 3 associa- do a melanoma), BAGE, GAGE-1, MUM-1(oncogene 1 de mieloma múltiplo), CDK4, TRP-1(gp75), TAG-72 (glicoproteína 72 associada a tumor), gangliosídeo GD2, GD3, GM2, GM3, VEP8, VEP9, My1, VIM- D5, D156-22, OX40, RNAK, PD-L1, TNFR1, TNFR2, etc.
ALVOS
[00502] Em algumas modalidades, o alvo ou alvos do elemento de reconhecimento molecular são especificamente associados a um ou mais tipos de célula ou tecido particular. Em algumas modalidades, os alvos são especificamente associados a um ou mais estados doentios particulares. Em algumas modalidades, os alvos são especificamente associados a um ou mais estágios de desenvolvimento particulares. Por exemplo, um marcador específico para tipo de célula é tipicamente expresso em níveis pelo menos 2 vezes maiores neste tipo de célula do que em uma população de células. Em algumas modalidades, o marcador específico de tipos de célula está presente em níveis pelo menos 3 vezes, pelo menos 4 vezes, pelo menos 5 vezes, pelo menos 6 vezes, pelo menos 7 vezes, pelo menos 8 vezes, pelo menos 9 ve- zes, pelo menos 10 vezes, pelo menos 50 vezes, pelo menos 100 ve- zes ou pelo menos 1000 vezes maiores que sua expressão média em uma população de referência. A detecção ou medição de um marcador específico do tipo de célula pode tornar possível distinguir o tipo ou tipos de célula de interesse de células de muitos, da maioria ou de to- dos os outros tipos. Em algumas modalidades, um alvo pode compre- ender uma proteína, um carboidrato, um lipídio e/ou um ácido nucleico, como descrito no presente documento.
[00503] Em algumas modalidades, uma substância é considerada como sendo "alvejada" se a mesma se ligar especificamente a uma porção química de alvejamento, tal como uma porção química de alve- jamento de ácido nucleico. Em algumas modalidades, uma porção química de alvejamento, tal como uma porção química de alvejamento de ácido nucleico se liga especificamente a um alvo sob condições es- tringentes.
[00504] Em certas modalidades, os conjugados e compostos descri- tos no presente documento compreendem uma porção química de al- vejamento que se liga especificamente a um ou mais alvos (por exem- plo, antígenos) associados a um órgão, tecido, célula, componente de matriz extracelular e/ou compartimento intracelular. Em algumas mo- dalidades, os conjugados e compostos descritos no presente docu- mento compreendem uma porção química de alvejamento que se liga especificamente a alvos associados a um órgão ou sistema de órgãos particular. Em algumas modalidades, os conjugados e compostos des- critos no presente documento compreendem uma porção química de alvejamento que se liga especificamente a um ou mais alvos intracelu- lares (por exemplo, organela, proteína intracelular). Em algumas mo- dalidades, os conjugados e compostos descritos no presente docu- mento compreendem uma porção química de alvejamento que se liga especificamente a alvos associados a órgãos, tecidos, células, com- ponentes de matriz extracelular e/ou compartimentos intracelulares doentes. Em algumas modalidades, os conjugados e compostos des- critos no presente documento compreendem uma porção química de alvejamento que se liga especificamente a alvos associados a tipos de célula particulares (por exemplo, células endoteliais, células cancero- sas, células malignas, células de câncer de próstata, etc.).
[00505] Em algumas modalidades, os conjugados e compostos descritos no presente documento compreendem uma porção química de alvejamento que se liga a um alvo que é específico para um ou mais tipos particulares de tecido (por exemplo, tecido do fígado vs. te- cido da próstata). Em algumas modalidades, os conjugados e compos- tos descritos no presente documento compreendem uma porção quí- mica de alvejamento que se liga a um alvo que é específico para um ou mais tipos particulares de célula (por exemplo, células T vs. células B). Em algumas modalidades, os conjugados e compostos descritos no presente documento compreendem uma porção química de alve- jamento que se liga a um alvo que é específico para um ou mais esta- dos doentios particulares (por exemplo, células tumorais vs. células saudáveis). Em algumas modalidades, os conjugados e compostos descritos no presente documento compreendem uma porção química de alvejamento que se liga a um alvo que é específico para um ou mais estágios particulares de desenvolvimento (por exemplo, células-
tronco vs. células diferenciadas).
[00506] Em algumas modalidades, um alvo pode ser um marcador que é exclusiva ou principalmente associado a um ou alguns tipos de célula, a uma ou algumas doenças e/ou a um ou alguns estágios de desenvolvimento. Um marcador específico para tipo de célula é tipi- camente expresso em níveis pelo menos 2 vezes maiores neste tipo de célula do que em uma população de células de referência, que po- de consistir, por exemplo, em uma mistura contendo células de uma pluralidade (por exemplo, 5 a 10 ou mais) de diferentes tecidos ou ór- gãos em quantidades aproximadamente iguais. Em algumas modali- dades, o marcador específico de tipos de célula está presente em ní- veis pelo menos 3 vezes, pelo menos 4 vezes, pelo menos 5 vezes, pelo menos 6 vezes, pelo menos 7 vezes, pelo menos 8 vezes, pelo menos 9 vezes, pelo menos 10 vezes, pelo menos 50 vezes, pelo me- nos 100 vezes ou pelo menos 1000 vezes maiores que sua expressão média em uma população de referência. A detecção ou medição de um marcador específico do tipo de célula pode tornar possível distin- guir o tipo ou tipos de célula de interesse de células de muitos, da maioria ou de todos os outros tipos.
[00507] Em algumas modalidades, um alvo compreende uma prote- ína, um carboidrato, um lipídio e/ou um ácido nucleico. Em algumas modalidades, um alvo compreende uma proteína e/ou porção caracte- rística da mesma, tal como um marcador tumoral, integrina, receptor de superfície celular, proteína transmembranar, proteína intercelular, canal iônico, proteína transportadora membranar, enzima, anticorpo, proteína quimérica, glicoproteína, etc. Em algumas modalidades, um alvo compreende um carboidrato e/ou porção característica do mes- mo, tal como uma glicoproteína, açúcar (por exemplo, monossacarí- deo, dissacarídeo, polissacarídeo), glicocálix (isto é, a zona periférica rica em carboidrato na superfície externa da maioria das células euca-
rióticas), etc. Em algumas modalidades, um alvo compreende um lipí- dio e/ou proteína característica do mesmo, tal como um óleo, ácido graxo, glicerídeo, hormônio, esteroide (por exemplo, colesterol, ácido biliar), vitamina (por exemplo, vitamina E), fosfolipídio, esfingolipídio, lipoproteína, etc. Em algumas modalidades, um alvo compreende um ácido nucleico e/ou porção característica do mesmo, tal como um áci- do nucleico de DNA; ácido nucleico de RNA; ácido nucleico de DNA modificado; ácido nucleico de RNA modificado; ácido nucleico que in- clui qualquer combinação de DNA, RNA, DNA modificado e RNA modi- ficado.
[00508] Numerosos marcadores são conhecidos na técnica. Os marcadores típicos incluem proteínas da superfície celular, por exem- plo, receptores. Os receptores exemplificativos incluem, porém sem limitação, o receptor de transferrina; receptor de LDL; receptores de fator de crescimento, tal como membros da família de receptor de fator de crescimento epidérmico (por exemplo, EGFR, Her2, Her3, Her4) ou receptores de fator de crescimento endotelial vascular, receptores de citocina, moléculas de adesão celular, integrinas, selectinas e molécu- las de CD. O marcador pode ser uma molécula que está presente ex- clusivamente ou em quantidades mais altas em uma molécula malig- na, por exemplo, um antígeno tumoral.
NANOPARTÍCULAS
[00509] Em algumas modalidades, a porção química de alvejamen- to compreende uma partícula (por exemplo, partícula-alvo), de prefe- rência, nanopartícula, opcionalmente uma nanopartícula alvejada liga- da a uma molécula de alvejamento que pode se ligar especificamente ou de preferência a um alvo. Em algumas modalidades, a partícula de alvejamento por si mesma guia o composto da presente invenção (tal como por enriquecimento em células ou tecido tumoral) e não há mo- léculas de alvejamento adicionais ligados à mesma.
[00510] "Nanopartícula" no presente documento significa qualquer partícula que tenha um diâmetro menor que 1000 nm. Em algumas modalidades, um agente terapêutico e/ou molécula de alvejamento podem estar associados ao corpo da partícula, por exemplo, em uma matriz polimérica. Em algumas modalidades, a molécula de alvejamen- to pode ser associada covalentemente à superfície da matriz poliméri- ca. Em algumas modalidades, a associação covalente é mediada por um ligante. Em algumas modalidades, o agente terapêutico pode estar associado à superfície de, ser encapsulado dentro, circundado por e/ou dispersado através da matriz polimérica. Consultar, por exemplo, a Patente US no 8.246.968, que está incorporada ao presente docu- mento em sua totalidade.
[00511] Em geral, as nanopartículas da presente invenção compre- endem qualquer tipo de partícula. Qualquer partícula pode ser usada em conformidade com a presente invenção. Em algumas modalidades, as partículas são biodegradáveis e biocompatíveis. Em geral, uma substância biocompatível não é tóxica às células. Em algumas modali- dades, uma substância é considerada como sendo biocompatível se sua adição às células for menor que um certo limite de morte celular. Em algumas modalidades, uma substância é considerada como sendo biocompatível se sua adição a células não induzir efeitos adversos. Em geral, uma substância biodegradável é aquela que sofre decompo- sição sob condições fisiológicas durante o curso de um período de tempo terapeuticamente relevante (por exemplo, semanas, meses ou anos). Em algumas modalidades, uma substância biodegradável é uma substância que pode ser decomposta pelo maquinário celular. Em algumas modalidades, uma substância biodegradável é uma substân- cia que pode ser decomposta por processos químicos. Em algumas modalidades, uma partícula é uma substância que é tanto biocompatí- vel quanto biodegradável. Em algumas modalidades, uma partícula é uma substância que é biocompatível, mas não biodegradável. Em al- gumas modalidades, uma partícula é uma substância que é biodegra- dável, mas não biocompatível.
[00512] É frequentemente desejável usar uma população de partí- culas que é relativamente uniforme em termos de tamanho, formato e/ou composição de modo que cada partícula tenha propriedades simi- lares. Por exemplo, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou pelo menos 95% das partículas podem ter um diâmetro ou dimensão maior que está dentro de 5%, 10% ou 20% do diâmetro médio ou dimensão mai- or. Em algumas modalidades, uma população de partículas pode ser heterogênea em relação ao tamanho, formato e/ou composição. Uma variedade de partículas diferentes pode ser usada em conformidade com a presente invenção. Em algumas modalidades, as partículas são esferas ou esferoides. Em algumas modalidades, as partículas são esferas ou esferoides. Em algumas modalidades, as partículas são planas ou em formato de placa. Em algumas modalidades, as partícu- las são cubos ou cuboides. Em algumas modalidades, as partículas são ovais ou elipses. Em algumas modalidades, as partículas são ci- lindros, cones ou pirâmides.
[00513] Em algumas modalidades, as partículas são micropartículas (por exemplo, microesferas). Em geral, uma "micropartícula" se refere a qualquer partícula que tem um diâmetro menor que 1000 μm. Em algumas modalidades, as partículas são picopartículas (por exemplo, picoesferas). Em geral, uma "picopartícula" se refere a qualquer partí- cula que tem um diâmetro menor que 1 nm. Em algumas modalidades, as partículas são lipossomos. Em algumas modalidades, as partículas são micelas.
[00514] As partículas podem ser sólidas ou ocas e podem compre- ender uma ou mais camadas (por exemplo, nanocascas, nanoanéis). Em algumas modalidades, cada camada tem uma composição única e propriedades únicas relativas às outras camadas. Por exemplo, as par- tículas podem ter uma estrutura de núcleo/casca, em que o núcleo é uma camada e a casca é uma segunda camada. As partículas podem compreender uma pluralidade de camadas diferentes. Em algumas modalidades, uma camada pode ser substancialmente reticulada, uma segunda camada não é substancialmente reticulada e assim por dian- te. Em algumas modalidades, uma, algumas ou todas as camadas di- ferentes podem compreender um ou mais agentes terapêuticos ou di- agnósticos a serem distribuídos. Em algumas modalidades, uma ca- mada compreende um agente a ser distribuído, uma segunda camada não compreender um agente a ser distribuído e assim por diante. Em algumas modalidades, cada camada individual compreende um agente diferente ou conjunto de agentes a serem distribuídos.
[00515] Em algumas modalidades, uma partícula é porosa, o que significa que a partícula contém furos ou canais, que são tipicamente pequenos em comparação com o tamanho de uma partícula. Por exemplo, uma partícula pode ser uma partícula de sílica porosa, por exemplo, uma nanopartícula de sílica mesoporosa ou pode ter um re- vestimento de sílica mesoporosa (Lin et al., 2005, J. Am. Chem. Soc, 17:4570). As partículas podem ter poros na faixa de cerca de 1 nm a cerca de 50 nm de diâmetro, por exemplo, entre cerca de 1 e 20 nm de diâmetro. Entre cerca de 10% e 95% do volume de uma partícula po- dem consistir em espaços vazios dentro dos poros ou canais.
[00516] As partículas podem ter uma camada de revestimento. O uso de uma camada de revestimento biocompatível pode ser vantajo- so, por exemplo, se as partículas contiverem materiais que são tóxicos às células. Os materiais de revestimento adequados incluem, porém sem limitação, proteínas naturais, tal como albumina sérica bovina (BSA), polímeros hidrofílicos biocompatíveis, tal como polietileno glicol (PEG) ou um derivado de PEG, fosfolipídio-(PEG), sílica, lipídios, po-
límeros, carboidratos, tal como dextrano, outras nanopartículas que podem ser associadas a nanopartículas da invenção, etc. Revestimen- tos podem ser aplicados ou montados de uma variedade de formas, tal como por imersão, usando uma técnica de camada por camada, por automontagem, conjugação, etc. A automontagem se refere a um pro- cesso de montagem espontânea de uma estrutura de ordem mais alta que se baseia na atração natural dos componentes da estrutura de ordem mais alta (por exemplo, moléculas) uns pelos outros. Isto tipi- camente ocorre através de movimentos aleatórios das moléculas e a formação de ligações com base no tamanho, formato, composição ou propriedades químicas.
[00517] Os exemplos de polímeros incluem polialquilenos (por exemplo, polietilenos), policarbonatos (por exemplo, poli(l,3-dioxan-2- ona)), polianidridos (por exemplo, poli(anidrido sebácico)), poli- hidroxiácidos (por exemplo, poli(3-hidroxialcanoato)), polifumaratos, policaprolactonas, poliamidas (por exemplo, policaprolactama), polia- cetais, poliéteres, poliésteres (por exemplo, polilactídeo, poliglicolídeo), poli(ortoésteres), álcoois polivinílicos, poliuretanos, polifosfazenos, po- liacrilatos, polimetacrilatos, policianoacrilatos, poliureias, poliestirenos e poliaminas. Em algumas modalidades, polímeros de acordo com a presente invenção incluem polímeros os quais foram aprovados para o uso em humanos pela Administração de Alimentos e Medicamentos (FDA) nos termos de 21 C.F.R. § 177.2600, o que inclui mas não se limita a poliésteres (por exemplo, ácido polilático, ácido poliglicólico, poli(ácido lático-co-glicólico), policaprolactona, polivalerolactona, po- li(1,3-dioxan-2ona)); polianidridos (por exemplo, poli(anidrido sebáci- co)); poliéteres (por exemplo, polietileno glicol); poliuretanos; polimeta- crilatos; poliacrilatos e policianoacrilatos.
[00518] Em algumas modalidades, as partículas podem ser partícu- las não poliméricas (por exemplo, partículas de metal, pontos quânti-
cos, partículas de cerâmica, polímeros que compreendem materiais inorgânicos, materiais derivados de osso, substitutos de osso, partícu- las virais, etc.). Em algumas modalidades, um agente terapêutico ou diagnóstico a ser distribuído pode estar associado à superfície de tal partícula não polimérica. Em algumas modalidades, uma partícula não polimérica é um agregado de componentes não poliméricos, tal como um agregado de átomos de metal (por exemplo, átomos de ouro). Em algumas modalidades, um agente terapêutico ou diagnóstico a ser dis- tribuído pode estar associado à superfície de e/ou encapsulado dentro, circundado por e/ou disperso através de um agregado de componen- tes não poliméricos.
[00519] As partículas (por exemplo, nanopartículas, micropartículas) podem ser preparadas usando qualquer método conhecido na técnica. Por exemplo, as formulações particuladas podem ser formadas por métodos como nanoprecipitação, canais fluidicos de focalização de fluxo, secagem por atomização, evaporação de solvente por emulsão singular e dupla, extração de solvente, separação de fases, moer, pro- cedimentos de microemulsão, microfabricação, nanofabricação, cama- das sacrificiais, coacervação complexa e simples e outros métodos adequados. Alternativa ou adicionalmente, a síntese de solvente orgâ- nico e aquoso para nanopartículas semicondutores monodispersos, condutivos, magnéticos, orgânicos e outros foram descritos (Pellegrino et al., 2005, Small, 1:48; Murray et al., 2000, Ann. Rev. Mat. Sci., 30:545; e Trindade et al., 2001, Chem. Mat., 13:3843).
[00520] Os métodos para produzir micropartículas para distribuição de agentes encapsulados são descritos na literatura (consultar, por exemplo, Doubrow, Ed., "Microcapsules and Nanoparticles in Medicine and Pharmacy," CRC Press, Boca Raton, 1992; Mathiowitz et al., 1987, J. Control. Release, 5:13; Mathiowitz et al., 1987, Reactive Polymers, δ: 275; e Mathiowitz et al., 1988, J. Appl. Polymer Sci.,
35:755).
PORÇÕES QUÍMICAS DE ALVEJAMENTO DE ÁCIDO NUCLEICO
[00521] Em algumas modalidades, a porção química de alvejamen- to compreende uma porção química de alvejamento de ácido nucleico.
[00522] Em geral, uma porção química de alvejamento de ácido nu- cleico é qualquer polinucleotídeo que se liga a um componente asso- ciado a um órgão, tecido, célula, componente de matriz extracelular e/ ou compartimento intracelular (o alvo).
[00523] Em algumas modalidades, as porções químicas de alveja- mento de ácido nucleico são aptâmeros. Um aptâmero é tipicamente um polinucleotídeo que se liga a uma estrutura-alvo específica que es- tá associada a um órgão, tecido, célula, componente de matriz extra- celular e/ou compartimento intracelular particular. Em geral, a função de alvejamento do aptâmero é baseada na estrutura tridimensional do aptâmero. Em algumas modalidades, a ligação de um aptâmero a um alvo é tipicamente mediada pela interação entre as estruturas bidi- mensionais e/ou tridimensionais tanto do aptâmero quanto do alvo. Em algumas modalidades, a ligação de um aptâmero a um alvo não é uni- camente baseada na sequência primária do aptâmero, mas depende da estrutura (ou estruturas) tridimensional do aptâmero e/ou alvo. Em algumas modalidades, o aptâmero se liga a seus alvos através de pa- reamento de bases de Watson-Crick complementar que é interrompido por estruturas (por exemplo, laços em forma de grampo) que interrom- pem o pareamento de bases.
[00524] Em algumas modalidades, as porções químicas de alveja- mento de ácido nucleico são spiegelmers (Publicações PCT WO 98/08856, WO 02/100442 e WO 06/117217). Em geral, spiegelmers são ácidos nucleicos de imagem espelhada, sintéticos que podem se ligar especificamente a um alvo (isto é, aptâmeros de imagem espe- lhada). Os spiegelmers são especificados por características estrutu-
rais que tornam os mesmos não suscetíveis a exonucleases e endo- nucleases.
[00525] Um versado na técnica reconhecerá que qualquer porção química de alvejamento de ácido nucleico (por exemplo, aptâmero ou spiegelmer) que é capaz de se ligar especificamente a um alvo pode ser usada em conformidade com a presente invenção. Em algumas modalidades, as porções químicas de alvejamento de ácido nucleico a serem usadas em conformidade com a presente invenção podem alve- jar um marcador associado a uma doença, distúrbio e/ou afecção. Em algumas modalidades, as porções químicas de alvejamento de ácido nucleico a serem usadas em conformidade com a presente invenção podem alvejar alvos associados a câncer. Em algumas modalidades, as porções químicas de alvejamento de ácido nucleico a serem usa- das em conformidade com a presente invenção podem alvejar marca- dores tumorais. Qualquer tipo de câncer e/ ou qualquer marcador tu- moral pode ser alvejado usando porções químicas de alvejamento de ácido nucleico em conformidade com a presente invenção. Para forne- cer apenas alguns exemplos, as porções químicas de alvejamento de ácido nucleico podem alvejar marcadores associado a câncer de prós- tata, câncer de pulmão, câncer de mama, câncer colorretal, câncer de bexiga, câncer pancreático, câncer endometrial, câncer de ovário, câncer ósseo, câncer de esôfago, câncer de fígado, câncer de estô- mago, tumores cerebrais, melanoma cutâneo e/ou leucemia.
[00526] Os ácidos nucleicos da presente invenção (incluindo por- ções químicas de alvejamento de ácido nucleico e/ou RNAs funcionais a serem distribuídos, por exemplo, entidades de indução de RNAi, ri- bozimas, tRNAs, etc., descritos em mais detalhes abaixo) podem ser preparados de acordo com qualquer técnica disponível, incluindo, po- rém sem limitação, síntese química, síntese enzimática, clivagem en- zimática ou química de um precursor mais longo, etc.
[00527] Os métodos para sintetizar RNAs são conhecidos na técni- ca (consultar, por exemplo, Gait, M. J. (ed.) Oligonucleotide synthesis: a practical approach, Oxford [Oxfordshire], Washington, D.C.: IRL Press, 1984; e Herdewijn, P. (ed.) Oligonucleotide synthesis: methods e applications, Methods in molecular biology, v. 288 (Clifton, NJ.) To- towa, N.J.: Humana Press, 2005).
[00528] O ácido nucleico que forma a porção química de alvejamen- to ácido nucleico pode compreender nucleosídeos de ocorrência natu- ral, nucleosídeos modificados, nucleosídeos de ocorrência natural com ligantes hidrocarboneto (por exemplo, um alquileno) ou um ligante po- liéter (por exemplo, um ligante PEG) inserido entre um ou mais nu- cleosídeos, nucleosídeos modificados com ligantes hidrocarboneto ou PEG inseridos entre um ou mais nucleosídeos ou uma combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, os nucleotídeos ou nucleotí- deos modificados da porção química de alvejamento de ácido nucleico podem ser substituídos por um ligante de hidrocarboneto ou um ligante de poliéter contanto que a afinidade e a seletividade de ligação da por- ção química de alvejamento de ácido nucleico não sejam substancial- mente reduzidas pela substituição (por exemplo, a constante de disso- ciação da porção química de alvejamento de ácido nucleico em rela- ção ao alvo não deve ser maior que cerca de 1 x 10-3 M).
[00529] Será entendido por aqueles versados na técnica que os ácidos nucleicos em conformidade com a presente invenção podem compreender nucleotídeos inteiramente dos tipos encontrados em áci- dos nucleicos de ocorrência natural ou podem, em vez disto, incluir um ou mais análogos de nucleotídeo ou ter uma estrutura que difere de outro modo daquela de um ácido nucleico de ocorrência natural. As Patentes U.S. nos 6.403.779; 6.399.754; 6.225.460; 6.127.533;
6.031.086; 6.005.087; 5.977.089; e as referências nas mesmas divul- gam uma ampla variedade de análogos de nucleotídeo específicos e modificações que podem ser usadas. Consultar Crooke, S. (ed.) Anti- sense Drug Technology: Principles, Strategies, and Applications (1ª edição), Marcel Dekker; ISBN: 0824705661; 1ª edição (2001) e refe- rências no mesmo. Por exemplo, as modificações 2' incluem grupos halo, alcóxi e alilóxi. Em algumas modalidades, o grupo 2'-OH é substi- tuído por um grupo selecionado dentre H, OR, R, halo, SH, SR, NH2, NHR, NR2 ou CN, em que R é C1-C6 alquila, alquenila ou alquinila, e halo é F, CI, Br ou I. Os exemplos de ligações modificadas incluem fosforotioato e ligações de 5'-N-fosforamidita.
[00530] Os ácidos nucleicos que compreendem uma variedade de análogos de nucleotídeo diferentes, cadeias principais modificadas ou ligações internucleosídeo de ocorrência não natural podem ser utiliza- dos em conformidade com a presente invenção. Os ácidos nucleicos da presente invenção podem incluir nucleosídeos naturais (isto é, ade- nosina, timidina, guanosina, citidina, uridina, desoxiadenosina, desoxi- timidina, desoxiguanosina e desoxicitidina) ou nucleosídeos modifica- dos. Os exemplos de nucleotídeos modificados incluem nucleosídeo modificado com base (por exemplo, aracitidina, inosina, isoguanosina, nebularina, pseudouridina, 2,6-diaminopurina, 2-aminopurina, 2- tiotimidina, 3-deaza-5-azacitidina, 2'-desoxiuridina, 3-nitorpirrol, 4- metilindol, 4-tiouridina, 4- tiotimidina, 2-aminoadenosina, 2-tiotimidina, 2-tiouridina, 5-bromocitidina, 5-iodouridina, inosina, 6-azauridina, 6- cloropurina, 7-deazaadenosina, 7-deazaguanosina, 8-aza-adenosina, 8- azidoadenosina, benzimidazol, Ml-metiladenosina, pirrolo-pirimidina, 2-amino-6-cloropurina, 3-metil adenosina, 5-propinilcitidina, 5- propiniluridina, 5-bromouridina, 5-fluorouridina, 5-metilcitidina, 7- deaza-adenosina, 7-deazaguanosina, 8-oxoadenosina, 8- oxoguanosina, 0(6)-metilguanina e 2-tiocitidina), bases química ou bio- logicamente modificadas (por exemplo, bases metiladas), açúcares modificados (por exemplo, 2'-fluororibose, 2'-aminoribose, 2'-
azidoribose, 2'-O-metilribose, nucleotídeos L-enantioméricos arabinose e hexose), grupos fosfato modificados (por exemplo, ligações de fosfo- rotioatos e 5'-N-fosforamidita) e combinações dos mesmos. Monôme- ros de nucleotídeo naturais e modificados para a síntese química de ácidos nucleicos estão prontamente disponíveis. Em alguns casos, os ácidos nucleicos que compreendem tais modificações exibem proprie- dades aprimoradas em relação a ácidos nucleicos que consistem ape- nas em nucleotídeos de ocorrência natural. Em algumas modalidades, as modificações de ácido nucleico descritas no presente documento são utilizadas para reduzir e/ou impedir digestão por nucleases (por exemplo, exonucleases, endonucleases, etc.). Por exemplo, a estrutu- ra de um ácido nucleico pode ser estabilizada incluindo-se análogos de nucleotídeo na extremidade 3' de uma ou ambas as fitas a fim de reduzir a digestão.
[00531] Os ácidos nucleicos modificados não precisam ser unifor- memente modificados ao longo do comprimento inteiro da molécula. Diferentes modificações de nucleotídeo e/ou estruturas de cadeia prin- cipal podem existir em várias posições no ácido nucleico. Um versado na técnica entenderá que os análogos de nucleotídeo ou outra modifi- cação (ou modificações) podem estar localizados em qualquer posição (ou posições) de um ácido nucleico, de modo que a função do ácido nucleico não seja substancialmente afetada. Para fornecer apenas um exemplo, as modificações podem estar localizadas em qualquer posi- ção de uma porção química de alvejamento de ácido nucleico, de mo- do que a capacidade da porção química de alvejamento de ácido nu- cleico de se ligar especificamente ao alvo não seja substancialmente afetada. A região modificada pode estar na extremidade 5' e/ou na ex- tremidade 3' de uma ou ambas as fitas. Por exemplo, as porções quí- micas de alvejamento de ácido nucleico modificadas em que aproxi- madamente 1 a 5 resíduos na extremidade 5' e/ou 3' de qualquer uma de ambas as fitas são análogos de nucleotídeo e/ou têm uma modifi- cação de cadeia principal foram usadas. A modificação pode ser uma modificação terminal 5' ou 3'. Uma ou ambas as fitas de ácido nucleico podem compreender pelo menos 50% de nucleotídeos não modifica- dos, pelo menos 80% de nucleotídeos não modificados, pelo menos 90% de nucleotídeos não modificados ou 100% de nucleotídeos não modificados.
[00532] Os ácidos nucleicos em conformidade com a presente in- venção podem, por exemplo, compreender uma modificação a uma ligação de açúcar, nucleosídeo ou internucleosídeo, tais como aqueles descrito nas Publicações de Pedido de Patente US 2003/0175950, 2004/0192626, 2004/0092470, 2005/0020525 e 2005/0032733. A pre- sente invenção abrange o uso de qualquer ácido nucleico que tem qualquer uma ou mais das modificações descritas no presente docu- mento. Por exemplo, foi relatado que diversos conjugados terminais, por exemplo, lipídios, tal como colesterol, ácido litocólico, ácido alúrico ou cadeias ramificadas de alquila longas, melhoram a absorção celu- lar. Análogos e modificações podem ser testados usando, por exem- plo, qualquer ensaio adequado conhecido na técnica, por exemplo, para selecionar aqueles que resultam em distribuição melhorada de um agente terapêutico ou diagnóstico, ligação específica melhorada de uma porção química de alvejamento de ácido nucleico a um alvo, etc. Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos em conformidade com a presente invenção podem compreender uma ou mais ligações de nucleosídeo não naturais. Em algumas modalidades, um ou mais nu- cleotídeos internos na extremidade 3', extremidade 5' ou ambas as ex- tremidades 3' e 5' da porção química de alvejamento de ácido nucleico são invertidos para produzir uma ligação, tal como uma ligação 3'-3' ou uma ligação 5'-5'.
[00533] Em algumas modalidades, os ácidos nucleicos em confor-
midade com a presente invenção não são sintéticos, mas são entida- des de ocorrência natural que foram isoladas de seus ambientes natu- rais.
[00534] Qualquer método pode ser usado para projetar porções químicas de alvejamento de ácido nucleico inovadoras (consultar, por exemplo, as Patentes U.S. nos 6.716.583; 6.465.189; 6.482.594;
6.458.543; 6.458.539; 6.376.190; 6.344.318; 6.242.246; 6.184.364;
6.001.577; 5.958.691; 5.874.218; 5.853.984; 5.843.732; 5.843.653;
5.817.785; 5.789.163; 5.763.177; 5.696.249; 5.660.985; 5.595.877;
5.567.588; e 5.270.163; e Publicações de Pedido de Patente US nos 2005/0069910, 2004/0072234, 2004/0043923, 2003/0087301, 2003/0054360 e 2002/0064780).
[00535] As porções químicas de alvejamento de ácido nucleico que se ligam a uma proteína, um carboidrato, um lipídio e/ou um ácido nu- cleico podem ser projetadas e/ou identificadas. Em algumas modalida- des, as porções químicas de alvejamento de ácido núcleo podem ser projetadas e/ou identificadas para uso nos complexos da invenção que se ligam a proteínas e/ou porções características das mesmas, tais como marcadores tumorais, integrinas, receptores de superfície celu- lar, proteínas transmembranares, proteínas intercelulares, canais iôni- cos, proteínas transportadoras membranares, enzimas, anticorpos, proteínas quiméricas, etc. Em algumas modalidades, as porções quí- micas de alvejamento de ácido nucleico podem ser projetadas e/ou identificadas para uso nos complexos da invenção que se ligam a car- boidratos e/ou porções características dos mesmos, tais como glico- proteínas, açúcares (por exemplo, monossacarídeos, dissacarídeos e polissacarídeos), glicocálix (isto é, a zona periférica rica em carboidra- to na superfície externa da maioria das células eucarióticas), etc. Em algumas modalidades, as porções químicas de alvejamento de ácido nucleico podem ser projetadas e/ou identificadas para uso nos com-
plexos da invenção que se ligam a lipídios e/ou porções características dos mesmos, tais como óleos, ácidos graxos saturados, ácidos graxos insaturados, glicerídeos, hormônios, esteroides (por exemplo, coleste- rol, ácidos biliares), vitaminas (por exemplo, vitamina E), fosfolipídios, esfingolipídios, lipoproteínas, etc. Em algumas modalidades, as por- ções químicas de alvejamento de ácido nucleico podem ser projetadas e/ou identificadas para uso nos complexos da invenção que se ligam a ácidos nucleicos e/ou porções características dos mesmos, tais como ácidos nucleicos de DNA; ácidos nucleicos de RNA; ácidos nucleicos de DNA modificados; ácidos nucleicos de RNA modificados; e ácidos nucleicos que incluem qualquer combinação de DNA, RNA, DNA modi- ficado e RNA modificado; etc.
[00536] As porções químicas de alvejamento de ácido nucleico (por exemplo, aptâmeros ou spiegelmers) podem ser projetadas e/ou iden- tificadas usando qualquer método disponível. Em algumas modalida- des, as porções químicas de alvejamento de ácido nucleico são proje- tadas e/ou identificadas identificando-se porções químicas de alveja- mento de ácido nucleico de uma mistura candidata de ácidos nuclei- cos.
MÉTODOS PARA PREPARAR OS COMPOSTOS DA INVENÇÃO
[00537] Os compostos e conjugados descritos no presente docu- mento podem ser preparados através de métodos de preparação sim- ples (consultar, por exemplo, os Exemplos 1 a 36). Tais métodos de preparação possibilitam uma purificação fácil.
[00538] Assim, são também fornecidos no presente documento mé- todos para preparar os compostos da invenção. Por exemplo, os com- postos da invenção podem ser preparados como mostrado em qual- quer um dos Esquemas de Reação 4, 5 ou 6: Esquema de Reação 4:
; Esquema de Reação 5: ; Esquema de Reação 6: ;
[00539] em que M é Cl ou F;
[00540] X, Y, Ar, R e n são iguais como definido acima.
COMPOSTOS INTERMEDIÁRIOS
[00541] Em algumas modalidades, os compostos e conjugados descritos no presente documento podem ser preparados por um méto- do que utiliza um composto intermediário que tem a estrutura de acor- do com a Fórmula (IV):
Y W X Ar n (R)n (IV)
[00542] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
[00543] X é -O-, -C(Rb)(Rc)-, ou -N(Rc)-, de preferência -C(Rb)(Rc)-;
[00544] W é -SO2-G;
[00545] G é halogênio (de preferência, flúor), imidazol ou N-metil imidazólio;
[00546] R é um substituinte ou -L1'-Z;
[00547] L1' é um C1–C200-alquileno que compreende opcionalmente pelo menos uma dentre uma ligação de peptídeo, uma ligação de ami- no, uma ligação de éter, uma ligação de triazol, uma ligação de tetra- zol, uma ligação de açúcar, uma ligação de sulfonamida, uma ligação de fosfonato, uma ligação de sulfo ou uma estrutura de dendrímero;
[00548] Z é um precursor selecionado dentre isocianeto, isotiocia- neto, dissulfeto de 2-piridila, haloacetamida (-NHC(O)CH2-hal), malei- mida, dieno, alceno, haleto, tosilato (TsO-), aldeído, sulfonato (R-
O N N O O N S O S H
O O SO3−), , O , ácido fosfônico (- P(=O)(OH)2), cetona, C8-C10 cicloalquila, -OH, -NHOH, -NHNH2, -SH, ácido carboxílico (-COOH), acetileno (-C≡CH), azida (-N3), amino (- NH2), ácido sulfônico (-SO3H), um derivado de alquinona (-C(O)C≡C- Ra, em que Ra é C1–C10-alquila) e fosfato de di-hidrogênio (- OP(=O)(OH)2);
[00549] n é um n é um número inteiro que tem um valor de 1 a 4;
[00550] Y é N(RC)-dipeptídeo (por exemplo, Val-Cit, Val-Ala), -NO2, -OC(O)(CH2)rC(O)R1, -O(CH2)r-Ar1-NO2, -NHOH, -NHNH2, -BR2R3, Ra O Rb  B O Rc d R ou -Y'-TG, como -NO2, -OC(O)(CH2)rC(O)R1, -O(CH2)r-Ar1- Ra O Rb  B O Rc d NO2, -NHNH2, -BR2R3, R ou -Y'-TG;
[00551] R1 é C1-C6 alquila;
[00552] r é um número inteiro de 1 a 5;
[00553] Ar1 é C6–C20-arileno;
[00554] R2 e R3 são, cada um, independentemente, hidrogênio, C1- C6 alquila, C1-C6 alcóxi ou hidróxi;
[00555] Ra, Rb, Rc e Rd são, cada um, independentemente, hidrogê- nio ou C1-C6 alquila;
[00556] Y' é -(CH2)xNR"-, -(CH2)xO- ou -(CH2)xS-;
[00557] R" é hidrogênio ou C1-C6 alquila;
[00558] x é um número inteiro de 0 ou 1; e
[00559] TG é um grupo de desencadeamento.
[00560] Em algumas modalidades, os compostos e conjugados descritos no presente documento podem ser preparados por um méto- do que utiliza um composto intermediário que tem a estrutura de acor- do com a Fórmula (V):
TG
O W X Ar n L1-Z (V)
[00561] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
[00562] W, L1' e Z são iguais como definido para a Fórmula (IV); e
[00563] TG é um grupo de desencadeamento, tal como um β- galactosídeo, β-glucuronídeo ou uma combinação de β-galactosídeo e β-glucuronídeo.
[00564] Em outras modalidades, os compostos e conjugados des- critos no presente documento podem ser preparados por um método que utiliza um composto intermediário que tem a estrutura de acordo com a Fórmula (VI):
Y W X Ar n (VI)
[00565] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
[00566] W é igual como definido para a Fórmula (IV);
[00567] Y é N(RC)-dipeptídeo (por exemplo, Val-Cit, Val-Ala), -NO2,
-OC(O)(CH2)rC(O)R1, -O(CH2)r-Ar1-NO2, -NHOH, -NHNH2, -BR2R3, ou - O-TG;
[00568] R1 é C1–C6-alquila, tal como NO2, -OC(O)(CH2)rC(O)R1, - O(CH2)r-Ar1-NO2, -NHOH, -NHNH2, -BR2R3 ou -O-TG;
[00569] R1 é C1–C6-alquila;
[00570] r é um número inteiro de 1 a 5;
[00571] Ar1 é fenileno, bifenileno ou naftaleno;
[00572] R2 e R3 são, cada um, independentemente, hidrogênio, C1- C6 alquila, C1-C6 alcóxi ou hidróxi;
[00573] Ra, Rb, Rc e Rd são, cada um, independentemente, hidrogê- nio ou C1–C6-alquila; e
[00574] TG é um grupo de desencadeamento, β-galactosídeo, β- glucuronídeo ou uma combinação de β-galactosídeo e β-glucuronídeo. CONJUGADOS DE ANTICORPO-FÁRMACO (ADCs)
[00575] Em algumas modalidades, CB é um anticorpo, e Q é um fármaco. Consequentemente, os compostos e conjugados descritos no presente documento podem ser usados para conjugar um anticorpo a uma porção química de fármaco para formar um conjugado de anticor- po-fármaco (ADC). Os conjugados de anticorpo-fármaco (ADCs) po- dem aumentar a eficácia terapêutica no tratamento de doença, por exemplo, câncer, devido à capacidade do ADC de entregar seletiva- mente uma ou mais porções químicas de fármaco a tecidos-alvo, tal como um antígeno associado a tumor. Assim, em certas modalidades, a invenção fornece ADCs para uso terapêutico, por exemplo, trata- mento de câncer.
[00576] Os ADCs da invenção compreendem um anticorpo ligado a uma ou mais porções químicas de fármaco. A especificidade do ADC é definida pela especificidade do anticorpo. Em uma modalidade, um anticorpo está ligado a um ou mais fármacos citotóxicos, que são dis- tribuídos internamente a uma célula cancerosa.
[00577] Os exemplos de fármacos que podem ser usados no ADC da invenção são fornecidos abaixo. Os termos "fármaco", "agente" e "porção química de fármaco" são usados intercambiavelmente no pre- sente documento. Os termos "ligado" e "conjugado" também são usa- dos intercambiavelmente no presente documento e indicam que o an- ticorpo ou porção química estão ligados covalentemente.
[00578] Em algumas modalidades, o ADC tem a seguinte fórmula (Fórmula VII): (D-L)n-Ab(VII)
[00579] em que Ab é o anticorpo e (D-L) é uma porção química Li- gante-Fármaco. A porção química Ligante-Fármaco é constituída por um ligante L e uma porção química de fármaco D. A porção química de fármaco pode ter, por exemplo, atividade citostática, citotóxica ou terapêutica de outro modo contra uma célula-alvo. n é um número in- teiro que tem um valor de 1 a cerca de 20, de preferência, de 1 a cerca de 10. De preferência, D-L é tem a estrutura de Fórmula (I''): (I")
[00580] cada Q é, independentemente, um agente ativo ligado a L' por um heteroátomo, de preferência, O ou N;
[00581] Z', independentemente para cara ocorrência, é um grupo de ligação que conecta a estrutura da Fórmula (I") a (CB)cb, um grupo so- lubilizante, um grupo reativo (por exemplo, um grupo precursor), uma superfície sólida (por exemplo, uma partícula), um grupo estabilizante, um quelante, um biopolímero (por exemplo, uma imunoglobulina, um ácido nucleico, uma proteína, um oligopepídeo, um polipeptídeo, um anticorpo, um fragmento de um polipeptídeo antigênico, ou um repe- corpo), um agente ativo, ou um porção química detectável, desde que pelo menos uma ocorrência de Z' conecta a estrutura da Fórmula (I'') a (CB)cb;
[00582] cada L' é, independentemente, uma porção química espa- çadora ligada ao SO2 através de um heteroátomo selecionado dentre O, S e N, de preferência, O ou N, e é selecionado de modo que a cli- vagem da ligação entre L' e SO2 promova a clivagem da ligação entre L' e Q para liberar o agente ativo;
[00583] cada X é, independentemente, -O-, -C(Rb)(Rc)-, ou -N(Rc)-, de preferência -C(Rb)(Rc)-;
[00584] E é um número inteiro que tem um valor de 1, 2, ou 3, de preferência 1;
[00585] Ar é um anel de arila com 6 membros ou heteroarila com 6 membros;
[00586] Y' é -N(Ra)-, -O-, ou -S-;
[00587] pelo menos um X é posicionado em uma relação orto ou para relação a Y' em Ar;
[00588] TG é um grupo de desencadeamento que, quando clivado, gera um átomo de N, O, ou S com capacidade para iniciar a liberação de SO2 e (Q)q-(L')w;
[00589] cada q é, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 20, de preferência, de 1 a cerca de 10;
[00590] cada w e x são, cada um, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 0 ou 1;
[00591] cada Ra e Rc é, independentemente, hidrogênio ou alquila inferior; e
[00592] cada Rb é, independentemente Z', hidrogênio ou alquila in- ferior, desde que pelo menos uma ocorrência de Rb é Z'; ou
[00593] Rb e Rc, juntamente com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel com 3 a 5 membros, de preferência, um anel com 3 ou 4 membros;
[00594] desde que, quando w for 0, q seja 1.
[00595] Em certas modalidades, cada X é posicionado em uma re- lação orto ou para a Y' em Ar.
[00596] Em certas modalidades, pelo menos um X e Y' são posicio- nados em uma relação orto entre si em Ar. Em certas modalidades, E é 2 ou 3. Em certas modalidades em que E é 2, ambas ocorrências de X são posicionadas em uma relação orto a Y'.
[00597] Em outras modalidades, pelo menos um X e Y' são posicio- nados em uma relação para entre si em Ar. Em certas modalidades, E é 1.
[00598] Em certas modalidades, pelo menos um X é posicionado em uma relação orto ou relação para a Y'.
[00599] Em certas modalidades, pelo menos um Rb além de Rb fi- xado a Ar representa Z'.
[00600] Em algumas modalidades, n tem um valor na faixa de 1 a 8, 1 a 7, 1 a 6, 1 a 5, 1 a 4, 1 a 3, 1 a 2, ou é um número inteiro que tem um valor de 1. Quando cb é 1 e n é 1, a razão entre fármaco e anticor- po (DAR) de um ADC é equivalente ao número de fármacos presentes em (D-L). Quando cb é diferente de 1, a razão entre fármaco e anti- corpo (DAR) de um ADC é equivalente à razão entre o número de fár- macos presentes em (D-L) e o número de anticorpos presentes no conjugado.
FÁRMACOS EXEMPLIFICATIVOS PARA CONJUGAÇÃO
[00601] Os ADCs da invenção fornecem uma terapia alvejada que pode, por exemplo, reduzir os efeitos colaterais frequentemente vistos com terapias anticâncer, como o um ou mais agente ativo ou fármaco é distribuído a uma célula específica.
[00602] Por exemplo, o fármaco pode ser selecionado dentre o gru- po que consiste em erlotinibe (TARCEVA; Genentech/OSI Pharm.); bortezomibe (VELCADE; MilleniumPharm.); fulvestrante (FASLODEX;
AstraZeneca); sutente (SU11248; Pfizer); letrozol (FEMARA; Novartis); mesilato de imatinibe (GLEEVEC; Novartis); PTK787/ZK 222584 (No- vartis); oxaliplatina (Eloxatin; Sanofi); 5-fluorouracil (5-FU); leucovori- na; rapamicina (Sirolimus, RAPAMUNE; Wyeth); lapatinibe (TYKERB, GSK572016; GlaxoSmithKline); lonafarnibe (SCH 66336); sorafenibe (BAY43-9006; Bayer Labs.); gefitinibe (IRESSA; Astrazeneca); AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen); agente alquilante (por exemplo, tiotepa ou CYTOXAN® ciclophosfamida); sulfonato de alquila (por exemplo, busulfan, improsulfan ou piposulfan); aziridina (por exemplo, benzodopa, carboquono, meturedopa ou uredopa); etilenimina, metil- melamina, altretamina, trietilenomelamina, trietilenofosforamida, trieti- lenothiofosforamida, trimetilolmelamina; acetogeninas (por exemplo, bulatacina ou bulatacinona); camptotecina que inclui análogo sintético topotecan; briostatina; calistatina; CC-1065 (incluindo adozelesina, carzelesina ou bizelesin e análogos sintéticos dos mesmos); criptofici- nas (por exemplo, criptoficina 1 ou criptoficina 8); dolastatina; duocar- micina (incluindo um análogo sintético, KW-2189, e CB1-TM1); eleute- robina; pancratistatina; sarcodictiina; spongistatina; mostarda de nitro- gênio (por exemplo, clorambucila, clornafazina, colofosfamida, estra- mustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloreta- mina, melfalan, novembichina, fenesterina, prednimustina, trofosfami- da ou mostarda de uracila); nitrousureia (por exemplo, carmustina, clo- rozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina ou ranimnustina); antibió- ticos (por exemplo, caliceamicina selecionada dentrte caliceamicina gama1 I e caliceamicina omega I 1 ou dinemicina incluindo dinemicina A com antibióticos de enedina); bisfosfonato (por exemplo, clodronato); esperamicina, cromóforo neocarzinostatina ou enediina cromóforos relacionada cromóforos antibióticos, aclacinomycin, actinomicina, an- tramycin, azaserina, bleomicina, cactinomicina, carabicina, carnino- mycin, carzinofilina, cromomicina, dactinomicina, daunorubicina, deto-
rubucin, norleucina 6-diazo-5-oxo-L-, ADRLIMYCIN ® doxorubicina (por exemplo, morfolino-doxorubicina, cianomorfolino-doxorubicina, 2- pirrolino-doxorubucin, doxorrubicina lipossomal ou desoxidoxorrubici- na), epirrubicina, esorrubicina, marcelomicina, mitomicina (por exem- plo, mitomicina C, ido micofenico, nogalamicina, olivomycin, peplomi- cina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptomi- grina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina ou zorrubici- na); anti-metabólitos (por exemplo, 5-fluorouracil (5-FU)); análogos de ácido fólico (por exemplo, denopterina, metotrexato, pteropterina ou trimetrexato); análogos de purina (por exemplo, fludarabina, 6- mercaptopurina, tiamiprina ou tiguanina); análogos de pirimidina (por exemplo, ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina ou floxuridina); androgênio (por exemplo, calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano ou testolactona); anti-adrenal (por exemplo, aminoglute- timida, mitotano ou trilostano); reforçador de ácido fólico (por exemplo, ácido folínico); aceglatona; glicosídeo aldofosfamida; ácido aminolevu- línico; eniluracil; amsacrina; bestrabucil; bisantreno; edatraxato; defo- famina; demecolcina; diaziquona; elfornitina; acetato de eliptínio; epoti- lona; etoglucida; nitrato de gálio; hidroxiureia; lentinan; lonidainina; maitansinoide (por exemplo, maitansina ou ansamitocina; tricoteceno (por exemplo, toxina T-2, verracurina A, roridina A ou anguidina); mito- guazona; mitoxantrona; mopidanmol; nitraerina; pentostatina; fenamet; etilprobicina; polissacarídeo; razoxano; rizoxina; sizofiran; espiroger- mânio; ácido tenuazônico; triaziquona; 2,2',2"-triclorotrietilamina; trico- teceno (particularmente, toxina T-2, verracurina A, roridina A ou angui- dina); manetano; vindesina; dacarbazina;; mitobronitol; mitolactol; pi- pobroman; gacitosina; arabinosídeo ('Ara-C'); ciclofosfamida; tiotepa; taxoides (por exemplo, TAXOL® paclitaxel (Bristol-Myers Squibb On- cology, Princeton, NJ), ABRAXANETM formulação de paclitaxel isenta de cremofor, American Pharmaceutical Partners, Schaumber, I11. ou TAXOTERE® doxetaxel ((Rhone-Poulenc Rorer, Antony, França))); cloranbucil; gemcitabina; 6-tioguanina; mercaptopurina; análogo da platina (por exemplo, cisplatina ou carboplatina); vinblastina; platina; etoposido, ifosfamida; mitoxantrona; vincristina; Vinorelbina NAVELBI- NE®; novantrona; teniposide; edatrexato; daunomicina; aminopterina; xeloda; ibandronato; CPT-11; inibidor de topoisomerase RFS 2000; difluorometilornitina (DFMO); retinoide (por exemplo, ácido retinoico); capecitabine; e um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, um solvato dos mesmos, um ácido dos mesmos ou um derivado dos mesmos.
INIBIDORES MITÓTICOS
[00603] Em algumas modalidades, os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a um ou mais inibidores mitóti- cos para formar um ADC para o tratamento de câncer. O termo "inibi- dor mitótico", como usado no presente documento, se refere a um agente citotóxico e/ou terapêutico que bloqueia a mitose ou divisão celular, um processo biológico particularmente importante para células cancerosas. O inibidor mitótico rompe microtúbulos, de modo que a divisão celular seja impedida, frequentemente afetando a polimeriza- ção de microtúbulo ou despolimerização de microtúbulo. Assim, em certas modalidades, um anticorpo é conjugado a um ou mais inibidores mitóticos que interrompem a formação de microtúbulo inibindo a poli- merização de tubulina. Em uma modalidade, o inibidor mitótico usado nos ADCs da invenção é Taxol® (paclitaxel), Taxotere® (docetaxel) ou Ixempra® (ixabepilona). Os exemplos de inibidores mitóticos que po- dem ser usados nos ADCs descritos no presente documento são for- necidos abaixo. Estão incluídas no gênero de inibidores mitóticos as auristatinas, descritas acima.
AURISTATINAS
[00604] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos uma auristatina. As auristatinas represen- tam um grupo de análogos de dolastatina que mostra, de modo geral, possuir atividade anticâncer por interferência na dinâmica de microtú- bulo e hidrólise de GTP, inibindo, assim, a divisão celular. Por exem- plo, Auristatina E (Patente US no 5.635.483) é um análogo sintético do produto natural marinho dolastatina 10, um composto que inibe a poli- merização de tubulina por ligação ao mesmo sítio na tubulina que o fármaco anticâncer vincristina (G. R. Pettit, Prog. Chem. Org. Nat. Prod, 70: 1-79 (1997)). Dolastatina 10, auristatina PE e auristatina E são peptídeos lineares que têm quatro aminoácidos, três dos quais são exclusivos para a classe dolastatina de compostos. As modalida- des exemplificativas da subclasse auristatina de inibidores mitóticos incluem, porém sem limitação, monometil auristatina D (MMAD ou de- rivado de auristatina D), monometil auristatina E (MMAE ou derivado de auristatina E), monometil auristatina F (MMAF ou derivado de auris- tatina F), auristatina F fenilenodiamina (AFP), auristatina EB (AEB), auristatina EFP (AEFP) e éster AE de ácido 5-benzoilvalérico (AEVB). A síntese e a estrutura de derivados de auristatina são descritas nas Publicações de Pedido de Patente US nos 2003-0083263, 2005- 0238649 e 2005-0009751; Publicação de Patente Internacional no WO 04/010957, Publicação de Patente Internacional no WO 02/088172 e Patentes U.S. nos 6.323.315; 6.239.104; 6.034.065; 5.780.588;
5.665.860; 5.663.149; 5.635.483; 5.599.902; 5.554.725; 5.530.097;
5.521.284; 5.504.191; 5.410.024; 5.138.036; 5.076.973; 4.986.988;
4.978.744; 4.879.278; 4.816.444; e 4.486.414; cada uma das quais está incorporada a título de referência no presente documento.
DOLASTATINAS
[00605] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos uma dolastatina para formar um ADC. As dolastatinas são compostos peptídicos curtos isolados da lebre do mar do oceano da Índia Dolabella auricularia (consultar Pettit et al., J. Am. Chem. Soc., 1976, 98, 4677). Os exemplos de dolastatinas incluem dolastatina 10 e dolatatina 15. A dolastatina 15, um depsipeptídeo com sete subunidades derivado de Dolabella auricularia, e é um potente agente antimitótico estruturalmente relacionado ao agente antitubulina dolastatina 10, um peptídeo com cinco subunidades obtido do mesmo organismo. Assim, em uma modalidade, o ADC da invenção compre- ende um anticorpo, um ligante, como descrito no presente documento, e pelo menos uma dolastatina. As auristatinas, descritas acima, são derivados sintéticos de dolastatina 10.
MAITANSINOIDES
[00606] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um maitansinoide para formar um ADC. Os maitansinoides são agentes antitumorais potentes que foram original- mente isolados de membros das famílias de plantas superiores Celas- traceae, Rhamnaceae e Euphorbiaceae, assim como algumas espé- cies de musgos (Kupchan et al, J. Am. Chem. Soc. 94:1354-1356
[1972]; Wani et al, J. Chem. Soc. Chem. Commun 390: [1973]; Powell et al, J. Nat. Prod. 46:660-666 [1983]; Sakai et al, J. Nat. Prod. 51:845- 850 [1988]; e Suwanborirux et al, Experientia 46:117-120 [1990]). A evidência sugere que os maitansinoides inibem mitose inibindo a poli- merização da proteína de microtúbulo tubulina, impedindo, assim, a formação de microtúbulos (consultar, por exemplo, a Patente US no
6.441.163 e Remillard et al., Science, 189, 1002-1005 (1975)). Os mai- tansinoides mostraram inibir o crescimento de células tumorais in vitro usando modelos de cultura celular e in vivo usando sistemas de ani- mais de laboratório. Além disto, a citotoxicidade de maitansinoides é 1000 vezes maior que os agentes quimioterápicos convencionais, tal como, por exemplo, metotrexato, daunorubicina e vincristina (consul-
tar, por exemplo, Patente US no 5.208.020).
[00607] Os maitansinoides incluem maitansina, maitansinol, C-3 ésteres de maitansinol e outros análogos e derivados de maitansinol (consultar, por exemplo, as Patentes U.S. nos 5.208.020 A1 e
6.441.163, cada uma das quais está incorporada ao presente docu- mento a título de referência). C-3 ésteres de maitansinol podem ser de ocorrência natural ou derivados sinteticamente. Além disto, C-3 éste- res de maitansinol tanto de ocorrência natural quanto sintéticos podem ser classificados como um C-3 éster com ácidos carboxílicos simples, ou um C-3 éster com derivados de N-metil-L-alanina, em que o último é mais citotóxico que o anterior. Os análogos de maitansinoide sintéti- cos são descritos, por exemplo, em Kupchan et al., J. Med. Chem., 21, 31-37 (1978).
[00608] Os maitansinoides adequados para uso em ADCs da in- venção podem ser isolados de fontes naturais, sinteticamente produzi- dos ou semissinteticamente produzidos. Além disto, o maitansinoide podem ser modificados de qualquer maneira adequada, contanto que citotoxicidade suficiente seja preservada na molécula de conjugado final. A estrutura de um maitansinoide exemplificativo, mertansina (DM1), é fornecida abaixo.
Mertansina (DM1)
[00609] Os exemplos representativos de maitansinoides incluem, porém sem limitação, DM1 (N2'-deacetil-N2'-(3-mercapto-1-oxopropil)- maytansina; também denominado mertansina, maitansinoide farma- cêutico 1; ImmunoGen, Inc.; consultar também Chari et al. (1992) Cancer Res 52:127), DM2, DM3 (N2'-deacetil-N2'-(4-mercapto-1- oxopentil)-maitansina), DM4 (4-metil-4-mercapto-1-oxopentil)- maitansina) e maitansinol (um análogo sintético de maitansinoide). Ou- tros exemplos de maitansinoides são descritos na Patente US no
8.142.784, incorporada ao presente documento a título de referência.
[00610] As ansamitocinas são um grupo de antibióticos de maitan- sinoide que foram isolados de várias fontes bacterianas. Estes com- postos têm atividades antitumorais potentes. Os exemplos representa- tivos incluem, porém sem limitação, ansamitocina P1, ansamitocina P2, ansamitocina P3 e ansamitocina P4.
ALCALOIDES DE PLANTA
[00611] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um alcaloide de planta, por exemplo, um taxano ou vinca alcaloide. Os alcaloides de planta são tratamentos quimioterápicos derivados produzidos a partir de certos tipos de plan- tas. Os vinca alcaloides são produzidos a partir da vinca-de-gato Ca- tharanthus rosea), enquanto os taxanos são produzidos a partir da casca do teixo do pacífico). Tanto os vinca alcaloides quanto os taxa- nos são também conhecidos como agentes antimicrotúbulo e são des- critos em mais detalhes abaixo.
TAXANOS
[00612] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um taxano. O termo "taxano", como usado no presente documento, se refere à classe de agentes antineoplásti- cos que têm um mecanismo de ação de microtúbulo e que têm uma estrutura que inclui a estrutura de anel de taxano e uma cadeia lateral estereospecífica que é necessária para atividade citostática. Está tam- bém incluída no termo "taxano" uma variedade de derivados conheci- dos, incluindo tanto derivados hidrofílicos quanto derivados hidrofóbi- cos. Os derivados de taxano incluem, porém sem limitação, derivados de galactose e manose descritos no Pedido de Patente Internacional no WO 99/18113; piperazino e outros derivados descritos no documen- to no WO 99/14209; derivados de taxano descritos nos documentos nosWO 99/09021, WO 98/22451 e Patente US no 5.869.680; derivados de 6-tio descritos no documento no WO 98/28288; derivados de sulfe- namida descritos na Patente US no 5.821.263; e derivado de taxol descrito na Patente US no 5.415.869, cada uma das quais está incor- porada ao presente documento a título de referência. Os compostos de taxado foram também anteriormente descritos nas Patentes U.S. nos 5.641.803, 5.665.671, 5.380.751, 5.728.687, 5.415.869, 5.407.683,
5.399.363, 5.424.073, 5.157.049, 5.773.464, 5.821.263, 5.840.929,
4.814.470, 5.438.072, 5.403.858, 4.960.790, 5.433.364, 4.942.184,
5.362.831, 5.705.503 e 5.278.324, todas as quais estão expressamen- te incorporadas a título de referência. Outros exemplos de taxanos in- cluem, porém sem limitação, docetaxel (Taxotere®; Sanofi Aventis), paclitaxel (Abraxane® ou Taxol®; Abraxis Oncology) e paclitaxel em nanopartícula (ABI-007/Abraxene®; Abraxis Bioscience).
[00613] Em uma modalidade, os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um docetaxel. Em uma modalidade, os ligantes da invenção podem ser usados para con- jugar um anticorpo a pelo menos um paclitaxel.
VINCA ALCALOIDES
[00614] Em uma modalidade, os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um vinca alcaloide. Vinca alcaloides são uma classe de fármacos específicos para ciclo celular que funcionam inibindo a capacidade das células cancerosas de se dividir atuando sobre a tubulina e impedindo a formação de mi- crotúbulos. Os exemplos de vinca alcaloides que podem ser usados nos ADCs da invenção incluem, porém sem limitação, sulfato de vin- desina, vincristina, vinblastina e vinorelbina.
ANTIBIÓTICOS ANTITUMORAIS
[00615] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a um ou mais antibióticos antitumorais para o tratamento de câncer. Como usado no presente documento, o termo "antibiótico antitumoral" significa um fármaco antineoplástico que bloqueia o cres- cimento celular por interferência no DNA e é produzido a partir de um micro-organismo. Frequentemente, os antibióticos antitumorais que- bram as fitas de DNA ou retardam ou interrompem a síntese de DNA. Os exemplos de antibióticos antitumorais que podem estar incluídos nos ADCs descritos no presente documento incluem, porém sem limi- tação, actinomicinas (por exemplo, pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepinas), antraciclinas, caliqueamicinas e duocarmicinas, descritas em mais de- talhes abaixo.
ACTINOMICINAS
[00616] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos uma actinomicina. As actinomicinas são uma subclasse de antibióticos antitumorais isolados de bactérias do gênero Streptomyces. Os exemplos representativos de actinomicinas incluem, porém sem limitação, actinomicina D (Cosmegen [tambem conhecido como actinomicina, dactinomicina, actinomicina IV, actino- micina C1], Lundbeck, Inc.), antramicina, quicamicina A, DC-81, maze- tramicina, neotramicina A, neotramicina B, porotramicina, protracarcina B, SG2285, sibanomicina, sibiromicina e tomaimicina. Em uma moda- lidade, D é pirrolobenzodiazepina (PBD). Os exemplos de PBDs inclu- em, porém sem limitação, antramicina, quicamicina A, DC-81, maze-
tramicina, neotramicina A, neotramicina B, porotramicina, protracarcina B, SG2000 (SJG-136), SG2202 (ZC-207), SG2285 (ZC-423), sibano- micina, sibiromicina e tomaimicina. Assim, em uma modalidade, D é actinomicina, por exemplo, actinomicina D, ou PBD, por exemplo, um dímero de pirrolobenzodiazepina (PBD).
[00617] As estruturas de PBDs podem ser encontradas, por exem- plo, nas Publicações de Pedido de Patente US nos 2013/0028917 e 2013/0028919 e no documento no WO 2011/130598 A1, cada um dos quais estão incorporado ao presente documento a título de referência em sua totalidade. A estrutura genérica de uma PBD é fornecida abai- xo.
[00618] As PBDs diferem no número, tipo e posição de substituin- tes, em ambos seus anéis A aromáticos e anéis C pirrolo, e no grau de saturação do anel C. No anel B, há, de modo geral, uma imina (N═C), uma carbinolamina (NH—CH(OH)) ou um éter metílico de carbinolami- na (NH—CH(OMe)) na posição N10-C11, que é o centro eletrofílico responsável pelo DNA alquilante. Todos os produtos naturais conheci- dos têm uma configuração (S) na posição C11α quiral que fornece aos mesmos uma torção à direita quando vistos a partir do anel C em dire- ção ao anel A. Outros exemplos de PBDs que podem ser conjugados a anticorpos através dos ligantes descritos no presente documento podem ser encontrados, por exemplo, nas Publicações de Pedido de Patente US nos 2013/0028917 A1 e 2013/0028919 A1, na Patente US no 7.741.319 B2 e nos documentos nos WO 2011/130598 A1 e WO
2006/111759 A1, cada um dos quais está incorporado ao presente do- cumento a título de referência em sua totalidade.
ANTRACICLINAS
[00619] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos uma antraciclina. As antraciclinas são uma subclasse de antibióticos antitumorais isolados de bactérias do gênero Streptomyces. Os exemplos representativos incluem, porém sem limi- tação, daunorubicina (Cerubidina, Bedford Laboratories), doxorubicina (Adriamicina, Bedford Laboratories; também denominada cloridrato de doxorubicina, hidroxidaunorubicina e Rubex), epirubicina (Ellence, Pfi- zer) e idarubicina (Idamicina; Pfizer Inc.). Assim, em uma modalidade, D é antraciclina, por exemplo, doxorubicina.
CALIQUEAMICINAS
[00620] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos uma caliqueamicina. As caliqueamicinas são uma família de antibióticos de enediína derivados do organismo do solo Micromonospora echinospora. As caliqueamicinas se ligam ao sulco menor do DNA e induzem quebras de DNA de fita dupla, resul- tando em morte celular com um aumento de 100 vezes em relação a outros quimioterápicos (Damle et al. (2003) Curr Opin Pharmacol 3:386). A preparação de caliqueamicinas que podem ser usadas como conjugados de fármaco na invenção foi descrita, consultar as Patentes U.S. nos 5.712.374; 5.714.586; 5.739.116; 5.767.285; 5.770.701;
5.770.710; 5.773.001; e 5.877.296. Os análogos estruturais de cali- queamicina que podem ser usados incluem, porém sem limitação, γ1 I, α2 I, α3 I, N-acetil-γ1 I, PSAG e θI 1 (Hinman et al., Cancer Research 53:3336-3342 (1993), Lode et al., Cancer Research 58:2925-2928 (1998) e as Patente Patente US anteriormente mencionadas nos
5.712.374; 5.714.586; 5.739.116; 5.767.285; 5.770.701; 5.770.710;
5.773.001; e 5.877.296. Assim, em uma modalidade, D é caliqueami-
cina.
DUOCARMICINAS
[00621] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos uma duocarmicina. As duocarmicinas são uma subclasse de antibióticos antitumorais isolados de bactérias do gênero Streptomyces. (consultar Nagamura e Saito (1998) Chemistry of Heterocyclic compostos, Volume 34, no 12). As duocarmicinas se ligam ao sulco menor do DNA e alquilam a nucleobase adenina na po- sição N3 (Boger (1993) Pure and Appl Chem 65(6):1123; e Boger e Johnson (1995) PNAS USA 92:3642). Os análogos sintéticos de duo- carmicinas incluem, porém sem limitação, adozelesina, bizelesina e carzelesina. Assim, em uma modalidade, o D é duocarmicina.
OUTROS ANTIBIÓTICOS ANTITUMORAIS
[00622] Adicionalmente ao anterior, os antibióticos antitumorais adi- cionais que podem ser usados nos ADCs da invenção incluem bleomi- cina (Blenoxano, Bristol-Myers Squibb), mitomicina e plicamicina (tam- bém conhecida como mitramicina).
AGENTES DE IMUNOMODULAÇÃO
[00623] Em algumas modalidades, os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um agente de imunomodulação. Como usado no presente documento, o termo "agente de imunomodulação" se refere a um agente que pode estimu- lar ou modificar uma resposta imunológica. Em uma modalidade, um agente de imunomodulação é um imunoestimulador que aumenta a resposta imunológica de um indivíduo. Em algumas modalidades, um agente de imunomodulação é um imunossupressor, que impede ou diminui a resposta imunológica do indivíduo. Um agente de imunomo- dulação pode modular células mieloides (monócitos, macrófagos, célu- las dendríticas, megacariócitos e granulócitos) ou células linfoides (cé- lulas T, células B e células exterminadoras naturais (NK)) e qualquer outra célula diferenciada das mesmas. Os exemplos representativos incluem, porém sem limitação, bacillus calmette-guerin (BCG) e leva- misol (Ergamisol). Outros exemplos de agentes de imunomodulação que podem ser usados nos ADCs da invenção incluem, porém sem limitação, vacinas contra câncer, citocinas e terapia gênica de imuno- modulação.
VACINAS CONTRA CÂNCER
[00624] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a uma vacina contra câncer. Como usado no presente documento, o termo "vacina contra câncer" se refere a uma composi- ção (por exemplo, um antígeno tumoral e uma citocina) que elicita uma resposta imunológica específica para tumor. A response é elicitada a partir do próprio sistema imunológico do indivíduo por administração da vacina contra câncer ou, no caso da presente invenção, administra- ção de um ADC que compreende um anticorpo e uma vacina contra câncer. Nas modalidades preferenciais, a resposta imunológica resulta na erradicação de células tumorais no corpo (por exemplo, células tu- morais primárias ou metastáticas). O uso de vacinas contra câncer en- volve, de modo geral, a administração de um antígeno particular ou grupo de antígenos que estão, por exemplo, presentes na superfície de uma célula cancerosa particular ou presentes na superfície de um agente infeccioso particular que mostrou facilitar a formação de cân- cer. Em algumas modalidades, o uso de vacinas contra câncer é para propósitos profiláticos, enquanto, em outras modalidades, o uso é para propósitos terapêuticos. Os exemplos não limitantes de vacinas contra câncer que podem ser usadas nos ADCs descritos no presente docu- mento incluem vacina contra papilomavírus bivalente recombinante (HPV) tipos 16 e 18 (Cervarix, GlaxoSmithKline), vacina contra papi- lomavírus quadrivalente recombinante (HPV) tipos 6, 11, 16, e 18 (Gardasil, Merck & Company) e sipuleucel-T (Provenge, Dendreon).
Assim, em uma modalidade, D é uma vacina contra câncer que é um imunoestimulador ou é um imunossupressor.
CITOCINAS
[00625] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos uma citocina. O termo "citocina", de modo geral, se refere a proteínas liberadas por uma população de células que atual sobre outra célula como mediadores intercelulares. As cito- cinas estimulam diretamente as células efetoras imunes e as células estromais no sítio tumoral e intensificam o reconhecimento de célula tumoral por células efetoras citotóxicas (Lee e Margolin (2011) Can- cers 3:3856). Inúmeros estudos de modelo tumoral em animais de- monstraram que as citocinas têm ampla atividade antitumoral e isto foi traduzido em diversas abordagens à base de citocina para terapia con- tra câncer (Lee e Margoli, supra). Recentemente diversas citocinas, incluindo GM-CSF, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18 e IL-21, entraram em testes clínicos para pacientes com câncer avançado (Lee e Margoli, supra).
[00626] Os exemplos de citocinas que podem ser usadas nos ADCs da invenção incluem, porém sem limitação, hormônio da paratiroide; tiroxina; insulina; proinsulina; relaxina; prorelaxina; hormônios de gli- coproteína, tal como hormônio estimulante de folículo (FSH), hormônio estimulante da tireoide (TSH) e hormônio luteinizante (LH); fator de crescimento hepático; fator de crescimento de fibroblasto; prolactina; lactogênio placental; fator de necreose tumoral; substância inibidora mulleriana; peptídeo associado a gonadotropina de camundongo; ini- bina; activina; fator de crescimento endotelial vascular; integrina; trom- bopoietina (TPO); fatores de crescimento de nervo, tal como NGF; fa- tor de crescimento de plaqueta; fatores de crescimento transformante (TGFs); fator de crescimento semelhante a insulina I e II; eritropoietina (EPO); atores osteoindutivos; interferons, tal como interferon α, β e γ, fatores estimulantes de colônia (CSFs); granulócito-macrófago-C-SF
(GM-CSF); e granulócito-CSF (G-CSF); interleucinas (ILs), tal como IL- 1, IL-la, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12; fator de necrose tumoral; e outros fatores de polipeptídeo, incluindo LIF e ligan- te kit (KL). Como usado no presente documento, o termo "citocina" in- clui proteínas de fontes naturais ou de cultura celular recombinante e equivalentes biologicamente ativos das citocinas de sequência nativa. Assim, em uma modalidade, D é uma citocina. FATORES ESTIMULANTES DE COLÔNIA (CSFs)
[00627] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um fator estimulante de colônia (CSF). Os fatores estimulantes de colônia (CSFs) são fatores de crescimento que auxiliam a medula óssea a produzir glóbulos vermelhos. Devido ao fa- to de que alguns tratamentos contra câncer (por exemplo, quimiotera- pia) podem afetar os glóbulos brancos (que ajudam a combater infec- ções), fatores estimulantes de colônia podem ser introduzidos para ajudar a suportar os níveis de glóbulos brancos e reforçar o sistema imunológico. Os fatores estimulantes de colônia podem ser também usados após um transplante de medula óssea para ajudar a nova me- dula a começar a produzir glóbulos brancos. Os exemplos representa- tivos de CSFs que podem ser usados em ADCs descritos no presente documento incluem, porém sem limitação, eritropoietina (Epoetins), filgrastim (Neopogen (também conhecido como fator estimulante de colônia de granulócitos (G-CSF); Amgen, Inc.), sargramostim (leucina (fator estimulante de colônia de granulócitos e macrófagos e GM- CSF); Genzyme Corporation), promegapoietina e Oprelvekin (IL-11 recombinante; Pfizer, Inc.). Assim, em uma modalidade, D é um CSF.
TERAPIA GÊNICA
[00628] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um ácido nucleico (direta ou indiretamente através de um transportador) para terapia gênica. A terapia gênica, de modo geral, se refere à introdução de material genético em uma célu- la, de modo que o material genético seja projetado para tratar uma do- ença. No que se refere aos agentes imunomoduladores, a terapia gê- nica é usada para estimular uma capacidade natural do indivíduo para inibir a proliferação de células cancerosas ou exterminar células can- cerosas. Em uma modalidade, o ADC da invenção compreende um ácido nucleico que codifica um gene terapêutico funcional, que é usa- do para substituir um gene com mutação ou disfuncional de outro mo- do (por exemplo, truncado) associado a câncer. Em outras modalida- des, o ADC da invenção compreende um ácido nucleico que codifica ou fornece de outro modo a produção de uma proteína terapêutica pa- ra tratar câncer. O ácido nucleico que codifica o gene terapêutico pode ser diretamente conjugado ao anticorpo ou, alternativamente, pode ser conjugado ao anticorpo através de um transportador. Os exemplos de transportadores que podem ser usados para distribuir um ácido nuclei- co para terapia gênica incluem, porém sem limitação, vetores virais ou lipossomos.
AGENTES ALQUILANTES
[00629] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a um ou mais agentes alquilantes. Os agentes alquilan- tes são uma classe de compostos antineoplásticos que liga um grupo alquila a DNA. Os exemplos de agentes alquilantes que podem ser usados nos ADCs da invenção incluem, porém sem limitação, sulfona- tos de alquila, etilenimimas, derivados de metilamina, epóxidos, mos- tardas de nitrogênio, nitrosoureias, triazinas e hidrazinas.
SULFONATOS DE ALQUILA
[00630] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um sulfonato de alquila. Os sulfonatos de alquila são uma subclasse de agentes alquilantes com uma fórmula geral: R—SO2—O—R1, em que R e R1 são tipicamente grupos alquila ou arila. Um exemplo representativo de um sulfonato de alquila é bus- sulfano (Myleran®, GlaxoSmithKline; Busulfex IV®, PDL BioPharma, Inc.).
MOSTARDAS DE NITROGÊNIO
[00631] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos uma mostarda de nitrogênio. Os exemplos representativos desta subclasse de compostos anticâncer incluem, po- rém sem limitação, clorambucila (Leukeran®, GlaxoSmithKline), ciclo- fosfamida (Cytoxan®, Bristol-Myers Squibb; Neosar, Pfizer, Inc.), es- tramustina (fosfato sódico de estramustina ou Estracyt®), Pfizer, Inc.), ifosfamida (Ifex®, Bristol-Myers Squibb), mecloretamina (Mustargen®, Lundbeck Inc.), e melfalano (Alkeran® ou L-Pam® ou mostarda de feni- lalanina; GlaxoSmithKline).
NITROSOUREIAS
[00632] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos uma nitrosoureia. As nitrosoureais são uma subclasse de agentes alquilantes que são solúveis em lipídio. Os exemplos representativos incluem, porém sem limitação, carmustina (BCNU [também conhecido como BiCNU, N,N-bis(2-cloroetil)-N- nitrosoureia ou 1,3-bis(2-cloroetil)-1-nitrosoureia], Bristol-Myers Squibb), fotemustina (também conhecido como Muphoran®), lomustina (CCNU ou 1-(2-cloro-etil)-3-ciclo-hexil-1-nitrosoureia, Bristol-Myers Squibb), nimustina (também conhecido como ACNU) e estreptozocina (Zanosar®, Teva Pharmaceuticals).
TRIAZINAS E HIDRAZINAS
[00633] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos uma triazina ou hidrazina. As triazinas e hidrazinas são uma subclasse de agentes alquilantes contendo nitro- gênio. Em algumas modalidades, estes compostos se decompõem es- pontaneamente ou podem ser matabolizados para produzir intermediá-
rios de alquil diazônio que facilitam a transferência de um grupo alquila a ácidos nucleicos, peptídeos e/ou polipeptídeos, causando, assim, efeitos mutagênico, carcinogênicos ou citotóxicos. Os exemplos repre- sentativos incluem, porém sem limitação dacarbazina (DTIC-Dome, Bayer Healthcare Pharmaceuticals Inc.), procarbazina (Mutalane®, Sigma-Tau Pharmaceuticals, Inc.) e temozolomida (Temodar®, Sche- ring Plough).
OUTROS AGENTES ALQUILANTES
[00634] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos uma etilenimina, derivado de metilamina ou epóxido. As etileniminas são uma subclasse de agentes alquilantes que tipicamente contêm pelo menos um anel aziridina. Os epóxidos representam uma subclasse de agentes alquilantes que são especifi- cados como éteres cíclicos com apenas três átomos de anel.
[00635] Os exemplos representativos de etileniminas incluem, po- rém sem limitação tiopeta (Thioplex, Amgen), diaziquona (também co- nhecida como aziridinil benzoquinona (AZQ)) e mitomicina C. A mito- micina C é um produto natural que contém um anel aziridina e parece induzir a citotoxicidade através de reticulação de DNA (Dorr R T, et al. Cancer Res. 1985; 45:3510; Kennedy K A, et al Cancer Res. 1985; 45:3541). Os exemplos representativos de derivados de metilamina e seus análogos incluem, porém sem limitação, altretamina (Hexalen, MGI Pharma, Inc.), que é também conhecida como hexametilamina e hexastato. Os exemplos representativos de epóxidos desta classe de composto anticâncer incluem, porém sem limitação, dianidrogalactitol. O dianidrogalactitol(1,2:5,6-dianidrodulcitol) está quimicamente relaci- onado às aziridinas e, de modo geral, facilita a transferência de um grupo alquila através de um mecanismo similar, como descrito acima. O dibromodulcitol é hidrolisado em dianidrogalactitol e, assim, é um pró-fármaco para um epóxido (Sellei C, et al. Cancer Chemother Rep.
1969; 53:377).
AGENTES ANTIANGIOGÊNICOS
[00636] Em algumas modalidades, os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um agente anti- angiogênico. Os antiangiogênicos inibem o crescimento de novos va- sos sanguíneos. Os antiangiogênicos exercem seus efeitos de uma variedade de formas. Em algumas modalidades, estes agentes interfe- rem na capacidade de um fator de crescimento de atingir seu alvo. Por exemplo, o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) é uma das proteínas primárias envolvidas no início da angiogênese por ligação a receptores particulares em uma superfície celular. Assim, certos anti- angiogênicos, que impedem a interação de VEGF com seu receptor cognato, impedem que VEGF inicie a angiogênese. Em outras modali- dades, estes agentes interferem nas cascatas de sinalização intracelu- lar. Por exemplo, um receptor particular em uma superfície celular foi desencadeado, uma cascata de outros sinais químicos é iniciada para promover o crescimento de vasos sanguíneos. Assim, certas enzimas, por exemplo, algumas tirosina quinases, que são conhecidas por facili- tar as cascatas de sinalização intracelular que contribuem para, por exemplo, proliferação celular, são alvos para tratamento de câncer. Em outras modalidades, estes agentes interferem nas cascatas de si- nalização intercelular. Ainda assim, em outras modalidades, estes agentes desabilitam alvos específicos que ativam e promovem o cres- cimento celular ou interferem diretamente no crescimento de vasos sanguíneos. As propriedades inibidoras de angiogênese foram desco- bertas em mais de 300 substâncias com inúmeros efeitos inibidores diretos e indiretos.
[00637] Os exemplos representativos de agentes anticariogênicos que podem ser usados nos ADCs da invenção incluem, porém sem limitação, angiostatina, ABX EGF, C1-1033, PKI-166, vacina EGF,
EKB-569, GW2016, ICR-62, EMD 55900, CP358, PD153035, AG1478, IMC-C225 (Erbitux, ZD1839 (Iressa), OSI-774, Erlotinib (tarceva), an- giostatina, arrestina, endostatina, BAY 12-9566 e com fluorouracila ou doxorubicina, canstatina, carboxiamidotriozol e com paclitaxel, EMD121974, S-24, vitaxina, dimetilxantenona, ácido acético, IM862, Interleucina-12, Interleucina-2, NM-3, HuMV833, PTK787, RhuMab, angiozima (ribozima), IMC-1C11, Neovastat, marimstat, prinomastat, BMS-275291, COL-3, MM1270, SU101, SU6668, SU11248, SU5416, com paclitaxel, com gencitabina e cisplatina e com irinotecano e cis- platina e com radiação, tecogalano, temozolomida e PEG interferon α2b, tetratiomolibdato, TNP-470, talidomida, CC-5013 e com taxotero, tumstatina, 2-metoxiestradiol, aprisionamento de VEGF, inibidores de mTOR (deforolimo, everolimo (Afinitor, Novartis Pharmaceutical Corpo- ration) e temsirolimo (Torisel, Pfizer, Inc.)), inibidores de tirosinase qui- nase (por exemplo, erlotinibe (Tarceva, Genentech, Inc.), imatinibe (Gleevec, Novartis Pharmaceutical Corporation), gefitinibe (Iressa, As- traZeneca Pharmaceuticals), dasatinibe (Sprycel, Brystol-Myers Squibb), sunitinibe (Sutent, Pfizer, Inc.), nilotinibe (Tasigna, Novartis Pharmaceutical Corporation), lapatinibe (Tykerb, GlaxoSmithKline Pharmaceuticals), sorafenibe (Nexavar, Bayer e Onyx), fosfoinositídeo 3-quinases (PI3K).
ANTIMETABÓLITOS
[00638] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos uma antimetabólito. Os antimetabólitos são tipos de tratamentos quimioterápicos que são muito similares a subs- tâncias normais dentro da célula. Quando as células incorporam um antimetabólito no metabolismo celular, o resultado é negativo para a célula, por exemplo, a célula é incapaz de se dividir. Os antimetabóli- tos são classificados de acordo com as substâncias com as quais in- terferem. Os exemplos de antimetabólitos que podem ser usados nos
ADCs da invenção incluem, porém sem limitação, um antagonista de ácido fólico (por exemplo, metotrexato), um antagonista de pirimidina (por exemplo, 5-Fluorouracila, Foxuridina, Citarabina, Capecitabina e Gencitabina), um antagonista de purina (por exemplo, 6- Mercaptopurina e 6-Tioguanina) e um inibidor de adenosina desami- nase (por exemplo, Cladribina, Fludarabina, Nelarabina e Pentostati- na), como descrito em mais detalhes abaixo.
ANTIFOLATOS
[00639] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos uma antifolato. Os antifolatos são uma subclasse de antimetabólitos que são estruturalmente similares a fola- to. Os exemplos representativos incluem, porém sem limitação, meto- trexato, ácido 4-amino-fólico (também conhecido como aminopterina e ácido 4-aminopteroico), lometrexol (LMTX), pemetrexed (Alimpta, Eli Lilly and Company) e trimetrexato (Neutrexin, Ben Venue Laboratories, Inc.)
ANTAGONISTAS DE PURINA
[00640] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um antagonista de purina. Os análogos de purina são uma subclasse de antimetabólitos que são estruturalmente similares ao grupo de compostos conhecidos como purinas. Os exem- plos representativos de antagonistas de purina incluem, porém sem limitação, azatioprina (Azasan, Salix; Imuran, GlaxoSmithKline), cladri- bina (Leustatin [also known as 2-CdA], Janssen Biotech, Inc.), mercap- topurina (Purinetol [também conhecido como 6-mercaptoetanol], Gla- xoSmithKline), fludarabina (Fludara, Genzyme Corporation), pentosta- tina (Nipent, também conhecido como 2′-desoxicoformicina (DCF)), 6- tioguanina (Lanvis [também conhecido como tioguanina], GlaxoSmith- Kline).
ANTAGONISTAS DE PIRIMIDINA
[00641] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um antagonista de pirimidina. Os antago- nistas de pirimidina são uma subclasse de antimetabólitos que são es- truturalmente similares ao grupo de compostos conhecidos como puri- nas. Os exemplos representativos de antagonistas de pirimidina inclu- em, porém sem limitação, azacitidina (Vidaza, Celgene Corporation), capecitabina (Xeloda, Roche Laboratories), Citarabina (também co- nhecido como citosina arabinosídeo e arabinosilcitosina, Bedford La- boratories), decitabina (Dacogen, Eisai Pharmaceuticals), 5- fluorouracila (Adrucil, Teva Pharmaceuticals; Efudex, Valeant Pharma- ceuticals, Inc), 5'-fosfato de 5′ fluoro-2′-desoxiuridina (FdUMP), trifosfa- to de 5-fluorouridina e gencitabina (Gemzar, Eli Lilly and Company).
AGENTES CONTENDO BORO
[00642] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um agente contendo boro. Os agentes contendo boro compreendem uma classe de compostos terapêuticos contra câncer que interferem na proliferação celular. Os exemplos re- presentativos de agentes contendo boro incluem, porém sem limita- ção, boroficina e bortezomibe (Velcade, Millenium Pharmaceuticals).
AGENTES QUIMIOPROTETORES
[00643] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um agente quimioprotetor. Os fármacos quimioprotetores são uma classe de compostos, que ajudam a prote- ger o corpo contra efeitos tóxicos específicos da quimioterapia. Os fármacos quimioprotetores podem ser administrados com várias qui- mioterapias a fim de proteger células saudáveis contra efeitos tóxicos de fármacos quimioterápicos, enquanto simultaneamente permitem que as células cancerosas sejam tratadas com o agente quimioterápi- co administrado. Os fármacos quimioprotetores representativos inclu- em, porém sem limitação, amifostina (Ethyol, Medimmune, Inc.), que é usada para reduzir a toxicidade renal associada a doses cumulativas de cisplatina, dexrazoxana (Totect, Apricus Pharma; Zinecard), para o tratamento de extravasação causada pela administração de antracicli- na (Totect) e para o tratamento de complicações relacionadas ao co- ração causadas pela administração do antibiótico antitumoral doxoru- bicina (Zinecard), e mesna (Mesnex, Bristol-Myers Squibb), que é usa- da para prevenir a cistite hemorrágica durante o tratamento quimiote- rápico com ifocfamida.
AGENTES HORMONAIS
[00644] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um agente hormonal. Um agente hormonal (incluindo hormônios sintéticos) é um composto que interfere na pro- dução ou atividade de hormônios endogenamente produzidos do sis- tema endócrino. Em algumas modalidades, estes compostos interfe- rem na proliferação celular ou produzem um efeito citotóxico. Os exemplos não limitantes incluem androgênios, estrogênios, acetato de medroxiprogesterona (Provera, Pfizer, Inc.) e progestinas. AGENTES ANTI-HORMONAIS
[00645] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um agente anti-hormonais. Um agente "an- ti-hormonal" é um agente que suprime a produção e/ou impede a fun- ção de certos hormônios endógenos. Em uma modalidade, o agente anti-hormonal interfere na atividade de um hormônio selecionado a partir do grupo que compreende androgênios, estrogênios, progeste- rona e hormônio de liberação de goanadotropina, interferindo, assim, o crescimento de várias células cancerosas. Os exemplos representati- vos de agentes anti-hormonais incluem, porém sem limitação, amino- glutetimida, anastrozol (Arimidex, AstraZeneca Pharmaceuticals), bica- lutamida (Casodex, AstraZeneca Pharmaceuticals), acetato de ciprote- rona (Cyprostat, Bayer PLC), degarelix (Firmagon, Ferring Pharmaceu-
ticals), exemestano (Aromasin, Pfizer Inc.), flutamida (Drogenil, Sche- ring-Plough Ltd), fulvestrant (Faslodex, AstraZeneca Pharmaceuticals), goserelina (Zolodex, AstraZeneca Pharmaceuticals), letrozol (Femara, Novartis Pharmaceuticals Corporation), leuprolida (Prostap), lupron, acetato de medroxiprogesterona (Provera, Pfizer Inc.), acetato de me- gestrol (Megace, Bristol-Myers Squibb Company), tamoxifeno (Nolva- dex, AstraZeneca Pharmaceuticals) e triptorelina (Decapetyl, Ferring).
CORTICOSTEROIDES
[00646] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um corticosteroide. Os corticosteroides po- dem ser usados nos ADCs da invenção para diminuir inflamação. Um exemplo de um corticosteroide inclui, porém sem limitação, um glico- corticoide, por exemplo, prednisona (Deltasone, Pharmacia & Upjohn Company, uma divisão da Pfizer, Inc.).
AGENTES TERAPÊUTICOS FOTOATIVOS
[00647] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um agente terapêutico fotoativo. Os agen- tes terapêuticos fotoativos incluem compostos que podem ser usados para exterminar células tratadas mediante exposição a radiação ele- tromagnética de um comprimento de onda particular. Os compostos terapeuticamente relevantes absorvem a radiação eletromagnética em comprimentos de onda que penetram tecido. Em modalidades prefe- renciais, o composto é administrado em uma forma não tóxica que é capaz de produzir um efeito fotoquímico que é tóxico a células ou teci- do mediante ativação suficiente. Em outras modalidades preferenciais, estes compostos são retidos por tecido canceroso e são prontamente liberados de tecidos normais. Os exemplos não limitantes incluem vá- rios cromogênios e corantes.
OLIGONUCLEOTÍDEOS
[00648] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um oligonucleotídeo. Os oligonucleotídeos são constituídos por cadeias de ácido nucleico curtas que funcionam interferindo no processamento de informações genéticas. Em algumas modalidades, os oligonucleotídeos para uso em ADCs são moléculas de DNA ou RNA de fita simples e/ou de fita dupla, enquanto, em ou- tras modalidades, estes oligonucleotídeos terapêuticos são moléculas de DNA ou RNA de fita simples e/ou de fita dupla quimicamente modi- ficadas. Em uma modalidade, os oligonucleotídeos usados nos ADCs são relativamente curtos (19 a 25 nucleotídeos) e se hibridizam a uma sequência de ácidos nucleicos exclusiva no agrupamento total de al- vos de ácido nucleico presentes nas células. Algumas das tecnologias de oligonucleotídeo importantes incluem os oligonucleotídeos antis- senso (incluindo interferência de RNA (RNAi)), aptâmeros, oligonu- cleotídeos CpG e ribozimas.
OLIGONUCLEOTÍDEOS ANTISSENSO
[00649] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um oligonucleotídeo antissenso. Os oligo- nucleotídeos antissenso são projetados para ligação a RNA através de hibridização de Watson-Crick. Em algumas modalidades, o oligonucle- otídeo antissenso é complementar a um nucleotídeo que codifica uma região, domínio, porção ou segmento do anticorpo conjugado. Em al- gumas modalidades, o oligonucleotídeo antissenso compreende de cerca de 5 a cerca de 100 nucleotídeos, de cerca de 10 a cerca de 50 nucleotídeos, de cerca de 12 a cerca de 35 e de cerca de 18 a cerca de 25 nucleotídeos
[00650] Há múltiplos mecanismos que podem ser explorados para inibir a função do RNA uma vez que o oligonucleotídeo se ligue ao RNA alvo (Crooke ST. (1999). Biochim. Biophys. Acta, 1489, 30-42). O mecanismo antissenso melhor especificado resulta em clivagem do RNA alvejado por nucleases celulares endógenas, tal como RNase H ou a nuclease associada ao mecanismo de interferência de RNA. En- tretanto, os oligonucleotídeos que inibem a expressão do gene-alvo por mecanismos não catalíticos, tal como modulação de splicing ou parada de tradução, podem ser também moduladores potentes e sele- tivos da função de gene.
[00651] Outro mecanismo antissenso dependente de RNase que recebeu recentemente muita atenção é RNAi (Fire et al. (1998). Natu- re, 391, 806-811; Zamore PD. (2002). Science, 296, 1265-1269.). A interferência de RNA (RNAi) é um processo pós-transcricional em que um RNA de fita dupla inibe a expressão gênica de uma forma específi- ca para sequência. Em algumas modalidades, O efeito de RNAi é atin- gido através da introdução de RNA de fita dupla relativamente mais longo (dsRNA), enquanto, em modalidades preferenciais, este efeito de RNAi é atingido pela introdução de RNAs de fita dupla mais curtos, por exemplo, RNA interferente pequeno (siRNA) e/ou microRNA (miRNA). Em ainda outra modalidade, o RNAi pode ser também atin- gido por introdução de plasmídeo que gera dsRNA complementar ao gene-alvo. Em cada uma das modalidades anteriores, o RNA de fita dupla é projetado para interferir na expressão gênica de uma sequên- cia-alvo particular dentro das células. De modo geral, o mecanismo envolve a conversão de dsRNA em RNAs curtos que direcionam ribo- nucleases a alvos de mRNA homólogos (sumarizados, Ruvkun, Scien- ce 2294:797 (2001)), que, então, degradam o mRNA endógeno cor- respondente, resultando, assim, na modulação da expressão gênica. Notavelmente, foi relatado que dsRNA tem propriedades antiprolifera- tivas, o que torna possível também visar aplicações terapêuticas (Au- bel et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA 88:906 (1991)). Por exemplo, o dsRNA sintético mostrou inibir o crescimento tumoral em camundon- gos (Levy et al. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 62:357-361 (1969)), é ativo no tratamento de camundongos com leucemia (Zeleznick et al., Proc.
Soc. Exp. Biol. Med. 130:126-128 (1969)) e inibe tumorigênese quimi- camente induzida na pele de camundongo (Gelboin et al., Science 167:205-207 (1970)). Assim, em modalidades preferenciais, a inven- ção fornece o uso de oligonucleotídeos antissenso em ADCs para o tratamento de câncer de mama. Em outras modalidades, a invenção fornece composições e métodos para iniciar o tratamento com oligo- nucleotídeo antissenso, em que o dsRNA interfere na expressão de célula-alvo de EGFR no nível de mRNA. dsRNA, como usado acima, se refere a RNA de ocorrência natural, RNA parcialmente purificado, RNA recombinantemente produzido, RNA sintético, assim como RNA alterado que difere de RNA de ocorrência natural pela inclusão de nu- cleotídeos não padrão, material não nucleotídeo, análogos de nucleo- tídeo (por exemplo, ácido nucleico bloqueado (LNA)), desoxirribonu- cleotídeos e qualquer combinação dos mesmos. O RNA da invenção precisa apenas ser suficientemente similar a RNA natural que tenha a capacidade de mediar a modulação à base de oligonucleotídeo antis- senso descrita no presente documento.
APTÂMEROS
[00652] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um aptâmero. Um aptâmero é uma molé- cula de ácido nucleico que foi selecionada dentre agrupamentos alea- tórios com base em sua capacidade de se ligar a outras moléculas. Como anticorpos, os aptâmeros podem se ligar a moléculas-alvo com afinidade e especificidade extraordinárias. Em muitas modalidades, os aptâmeros assumem formatos complexos, dependentes de sequência, tridimensionais que permitem que os mesmos interajam com uma pro- teína-alvo, resultando em um análogo complexo firmemente ligado a uma interação anticorpo-antígeno, interferindo, assim, na função da dita proteína. A capacidade particular de aptâmeros se ligarem de mo- do firme e específico a sua proteína-alvo acentua seu potencial como terapias moleculares alvejadas.
OLIGONUCLEOTÍDEOS CPG
[00653] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um oligonucleotídeo CpG. DNA bacteriano e viral são conhecidos por serem ativadores fortes da imunidade tanto inata quanto específica em seres humanos. Estas características imu- nológicas foram associadas a motivos de dinucleotídeo CpG não meti- lados encontrados em DNA bacteriano. Devido ao fato de que estes motivos são raros em seres humanos, o sistema imunológico humano envolveu a capacidade de reconhecer estes motivos como uma indi- cação precoce de infecção e subsequentemente iniciar respostas imu- nológicas. Portanto, os oligonucleotídeos contendo este motivo CpG podem ser explorados para iniciar uma resposta imunológica antitumo- ral.
RIBOZIMAS
[00654] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos uma ribozima. As ribozimas são moléculas de RNA catalíticas que variam de cerca de 40 a 155 nucleotídeos de comprimento. A capacidade das ribozimas de reconhecer e cortar mo- léculas de RNA específicas torna as mesmas candidatas potenciais para agentes terapêuticos. Um exemplo representativo inclui angiozi- ma. AGENTES DE RADIONUCLÍDEO (ISÓTOPOS RADIOATIVOS)
[00655] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um agente de radionuclídeo. Os agentes de radionuclídeo compreendem agentes que são especificados por um núcleo instável que é capaz de ser submetido a decaimento radioativo. A base para tratamento com radionuclídeo bem-sucedido depende de concentração suficiente e retenção prolongada do radionuclídeo pela célula cancerosa. Outros fatores a serem considerados incluem a meia-vida de radionuclídeo, a energia das partículas emitidas e a faixa máxima que a partícula emitida pode percorrer. Em modalidades pre- ferenciais, o agente terapêutico é um radionuclídeo selecionado a par- tir do grupo que consiste em 111In, 177Lu, 212Bi, 213Bi, 211At, 62Cu, 64Cu, 67Cu, 90Y, 125I, 131I, 32P, 33P, 47Sc, 111Ag, 67Ga, 142Pr, 153Sm, 161Tb, 166Dy, 166Ho, 186Re, 188Re, 189Re, 212Pb, 223Ra, 225Ac, 59Fe, 75Se, 77As, 89Sr, 99Mo, 105Rh, 109Pd, 143Pr, 149Pm, 169Er, 194Ir, 198Au, 199Au e 211Pb. São também preferenciais ra- dionuclídeos que decaem substancialmente com partículas emissoras de Auger. Por exemplo, Co-58, Ga-67, Br-80m, Tc-99m, Rh-103m, Pt- 109, In-111 1, Sb-119, 1-125, Ho-161, Os-189m e Ir-192. As energias de decaimento de nuclídeos emissores de partícula beta úteis são, de preferência, Dy-152, At-211, Bi-212, Ra-223, Rn-219, Po-215, Bi-21 1, Ac-225, Fr-221, At-217, Bi-213 e Fm-255. As energias de decaimento de radionuclídeos emissores de partícula alfa úteis são, de preferên- cia, 2000 a 10000 keV, mais preferencialmente, 3000 a 8,000 keV e, com máxima preferência, 4000 a 7000 keV. Os radioisótopos poten- ciais adicionais de uso incluem 11C, 13N, 150, 75Br, 198Au, 95Ru, 97Ru, 103Ru, 105Ru, 107Hg, 203Hg, 121mTe, 122mTe, 125mTe, 165Tm, 167Tm, 168Tm, 197Pt, 109Pd, 105Rh, 142Pr, 143Pr, 161Tb, 166Ho, 199Au, 57Co, 58Co, 51Cr, 59Fe, 75Se, 201Tl, 225Ac, 76Br, 169Yb e similares.
RADIOSSENSIBILIZADORES
[00656] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um radiossensibilizador. O termo "radios- sensibilizador", como usado no presente documento, é definido como uma molécula, de preferência, uma molécula de baixo peso molecular, administrada a animais em quantidades terapeuticamente eficazes pa- ra aumentar a sensibilidade das células radiossensibilizadas para radi- ação eletromagnética e/ou para promover o tratamento de doenças que são tratáveis com radiação eletromagnética. Os radiossensibiliza- dores são agentes que tornam as células cancerosas mais sensíveis à radioterapia, embora tipicamente tenham muito menos efeito sobre células normais. Assim, o radiossensibilizador pode ser usado em combinação com um anticorpo radiomarcado ou ADC. A adição do ra- diossensibilizador pode resultar em eficácia aumentada em compara- ção com o tratamento com o anticorpo radiomarcado ou fragmento de anticorpo sozinho. Os radiossensibilizadores são descritos em D. M. Goldberg (ed.), Cancer Therapy with Radiolabeled Antibodies, CRC Press (1995). Os exemplos de radiossensibilizadores incluem gencita- bina, 5-fluorouracila, taxano e cisplatina.
[00657] Os radiossensibilizadores podem ser ativados pela radiação eletromagnética de raios X. Os exemplos representativos de radios- sensibilizadores ativados por raios X incluem, porém, sem limitação, os seguintes: metronidazol, misonidazol, desmetilmisonidazol, pimoni- dazol, etanidazol, nimorazol, mitomicina C, RSU 1069, SR 4233, E09, RB 6145, nicotinamida, 5-bromodesoxiuridina (BUdR), 5- iododesoxiuridina (IUdR), bromodesoxicitidina, fluorodesoxiuridina (FUdR), hidroxiureia, cisplatina e análogos e derivados terapeutica- mente eficazes dos mesmos. Alternativamente, os radiossensibilizado- res podem ser ativados usando terapia fotodinâmica (PDT). Os exem- plos representativos de radiossensibilizadores fotodinâmicos incluem, porém sem limitação, derivados de hematoporfirina, fotofrina(r), deri- vados de benzoporfirina, NPe6, etioporfirina de estanho (SnET2), feo- borbida a, bacterioclorofila a, naftalocianinas, ftalocianinas, ftalocianina de zinco e análogo e derivados terapeuticamente eficazes dos mes- mos.
INIBIDORES DE TOPOISOMERASE
[00658] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um inibidor de topoisomerase. Os inibido-
res de topoisomerase são agentes quimioterápicos projetados para interferir na ação de enzimas topoisomerase (topoisomerase I e II), que são enzimas que controlam as alterações em estrutura de DNA por catálise, então, quebra e reunião da cadeia principal de fosfodiés- ter de fitas de DNA durante o ciclo celular normal. Os exemplos repre- sentativos de inibidores de DNA topoisomerase I incluem, porém sem limitação, camptotecinas e seus derivados irinotecano (CPT-11, Camp- tosar, Pfizer, Inc.) e topotecano (Hycamtin, GlaxoSmithKline Pharma- ceuticals). Os exemplos representativos de inibidores de DNA to- poisomerase II incluem, porém sem limitação, amsacrina, daunorubici- na, doxotrubicina, epipodofilotoxinas, elipticinas, epirubicina, etoposí- deo, razoxano e teniposídeo.
INIBIDOR DE TIROSINA QUINASE
[00659] Os ligantes da invenção podem ser usados para conjugar um anticorpo a pelo menos um inibidor de tirosina quinase. As tirosina quinases são enzimas dentro da célula que funcionam para fixar gru- pos fosfato ao aminoácido tirosina. Bloqueando-se a capacidade de proteínas tirosina quinases de funcional, o crescimento tumoral pode ser inibido. Os exemplos de tirosina quinases que podem ser usadas nos ADCs da invenção incluem, porém sem limitação, Axitinibe, Bosu- tinibe, Cediranibe, Dasatinibe, Erlotinibe, Gefitinibe, Imatinibe, Lapati- nibe, Lestaurtinibe, Nilotinibe, Semaxanibe, Sunitinibe e Vandetanibe.
OUTROS AGENTES
[00660] Os exemplos de outros agentes que podem ser usados nos ADCs da invenção incluem, porém sem limitação, abrina (por exemplo, cadeia A de abrina), toxina alfa, proteínas de Aleurites fordii, amatoxi- na, crotina, curcina, proteínas diantina, toxina de difteria (por exemplo, cadeia A de difteria e fragmentos ativos não ligantes de toxida da difte- ria), desoxirribonuclease (Dnase), gelonina, mitogelina, cadeia A de modeccina, inibidor de Momordica charantia, neomicina, onconase,
fenomicina, proteínas de Phytolaca americana (PAPI, PAPII, e PAP-S), proteína antiviral de erva-tintureira, endotoxina de Pseudomonas, exo- toxina de Pseudomonas (por exemplo, cadeia A de exotoxina (de Pseudomonas aeruginosa)), restrictocina, cadeia A de ricina, ribonu- clease (Rnase), inibidor de Sapaonaria officinalis, saporina, alfa- sarcina, enterotoxina A de Staphylcoccal, toxina de tétano, cisplatina, carboplatina e oxaliplatina (Eloxatin, Sanofi Aventis), inibidores de pro- teasome (por exemplo, PS-341 [bortezomibe ou Velcade]), inibidores de HDAC (vorinostat (Zolinza, Merck & Company, Inc.)), belinostat, entinostat, mocetinostat e panobinostat), inibidores de COX-2, ureias substituídas, inibidores de proteína de choque térmico (por exemplo, Geldanamicina e seus inúmeros análogos), supressores adrenocorti- cais e os tricotecenos. (Consultar, por exemplo, o documento no WO 93/21232). Outros agentes também incluem asparaginase (Espar, Lundbeck Inc.), hidroxiureia, levamisol, mitotano (Lysodren, Bristol- Myers Squibb) e tretinoína (Renova, Valeant Pharmaceuticals Inc.).
[00661] Deve-se perceber que os grupos mencionados anterior- mente de porções químicas de fármaco que podem ser usados nos ADCs da invenção não são exclusivos, pelo fato de que certos exem- plos de fármacos podem ser encontrados em mais de uma categoria, por exemplo, ansamitocinas, são tanto inibidores mitóticos quanto an- tibióticos antitumorais.
[00662] Todos os estereoisômeros das porções químicas de fárma- co são contemplados para os compostos da invenção, isto é, qualquer combinação de configurações R e S nos carbonos quirais de D.
[00663] Uma "porção química detectável" ou a "marcador" se refere a uma composição que é detectável por meios espectroscópicos, foto- químicos, bioquímicos, imunoquímicos, radioativos ou químicos. Por 32 35 exemplo, uma identificação útil inclui P, S, corantes fluorescentes, reagentes com densidade de elétrons, enzimas (por exemplo, enzimas que são, de modo geral, usadas em ELISA), biotina-estreptavidina, dioxigenina, hapteno e proteínas para as quais antissoros ou anticor- pos monoclonais estão disponíveis, ou moléculas de ácido nucleico com uma sequência complementar a um alvo. A porção química detec- tável frequentemente gera um sinal mensurável, por exemplo, um sinal radioativo, um sinal colorido ou um sinal fluorescente, que é usável para quantificar uma quantidade da porção química detectável que se liga na amostra. A quantificação do sinal pode ser realizada, por exemplo, por contagem de cintilação, medidor de densidade, análise de célula de fluxo, ELISA ou análise direta por espectroscopia de mas- sa de peptídeos circulares ou subsequentemente digeridos (um ou mais peptídeos podem ser avaliados). Aqueles versados na técnica estão familiarizados com técnicas e meios de detecção para um com- posto de identificação de interesse. Estas técnicas e métodos são convencionais e bem conhecidos na técnica.
[00664] A sonda para detecção se refere a (i) um material capaz de fornecer um sinal detectável, (ii) um material capaz de interagir com uma primeira sonda ou uma segunda sonda para alterar um sinal de- tectável fornecido pela primeira sonda ou pela segunda sonda, tal co- mo transferência de energia de ressonância de fluorescência (FRET), (iii) um material capaz de estabilizar uma interação com um antígeno ou um ligante ou aumentar a afinidade de ligação, (iv) um material ca- paz de afetar a mobilidade elétrica ou ação de invasão celular por pa- râmetros físicos, tal como carga, hidrofobicidade, etc., ou (v) um mate- rial capaz de ajustar a afinidade de ligante, ligação antígeno-anticorpo ou formação de complexo iônico.
[00665] Em certas modalidades, as técnicas de FRET podem ser usues para distinguir moléculas intactas de moléculas que foram ex- postas a condições que ativam o grupo de desencadeamento, por exemplo, ligando um cromóforo doador ao anel de Ar central e um cromóforo aceitador como Q.
[00666] Em algumas modalidades, são fornecidos no presente do- cumento os usos para os compostos descritos como um agente de imageamento (por exemplo, um fluoróforo ou um quelante), como fluo- resceína, rodamina, fósforos de lantanídeo e seus derivados. Exem- plos de fluoróforos incluem, mas não estão limitados a, isotiocianato de fluoresceína (FITC) (por exemplo, 5-FITC), amidita de fluoresceína (FAM) (por exemplo, 5-FAM), eosina, carboxifluoresceína, eritrosina, Alexa Fluor.RTM. (por exemplo, Alexa 350, 405, 430, 488, 500, 514, 532, 546, 555, 568, 594, 610, 633, 647, 660, 680, 700 ou 750), carbo- xitetrametilrodamina (TAMRA) (por exemplo, 5 -TAMRA), tetrametilro- damina (TMR) e sulforhodamina (SR) (por exemplo, SR101). Exem- plos de quelantes incluem, mas não estão limitados a, 1,4,7,10- tetraazaciclododecano-N, N', N", N''' - ácido tetraacético (DOTA), 1,4,7- triazaciclononano-1, Ácido 4,7-triacético (NOTA), 1,4,7- triazaciclononano, ácido 1-glutárico-4,7-acético (NODAGA), ácido dieti- lenotriaminopentaacético (DTPA) e 1,2-bis (o-aminofenóxi) ácido eta- no-N, N, N', N'-tetraacético) (BAPTA).
ANTICORPOS
[00667] O anticorpo de um ADC pode ser qualquer anticorpo que se liga, tipicamente, mas não de modo necessariamente específico, um antígeno expresso na superfície de uma célula-alvo de interesse. O antígeno não precisa, mas, em algumas modalidades, é capaz de in- ternalizar um ADC ligado ao mesmo na célula. As células-alvo de inte- resse podem incluir células em que a indução de apoptose é desejá- vel. Os antígenos-alvo podem ser qualquer proteína, glicoproteína, po- lissacarídeo, lipoproteína, etc. expressa na célula-alvo de interesse, mas serão tipicamente proteínas que são exclusivamente expressas na célula-alvo e não em células normais ou saudáveis ou que são su- perexpressas na célula-alvo em comparação com células normais ou saudáveis, de modo que os ADCs alvejem seletivamente células es- pecíficas de interesse, tal como, por exemplo, células tumorais. Como será percebido pelo versados na técnica, o antígeno específico e, por- tanto, anticorpo, selecionado dependerá da identidade da célula-alvo desejada de interesse. Em modalidades específicas, o anticorpo do ADC é um anticorpo adequado para administração a seres humanos.
[00668] Os anticorpos (Abs) e imunoglobulinas (Igs) são glicoprote- ínas que têm as mesmas características estruturais. Embora os anti- corpos exibam especificidade de ligação a um alvo específico, as imu- noglobulinas incluem tanto anticorpos quanto outras moléculas simila- res a anticorpo que carecem de especificidade ao alvo. Anticorpos e imunoglobulinas nativas são usualmente glicoproteínas heterotetramé- ricas de cerca de 150000 daltons, compostas por duas cadeias leves (L) idênticas e duas cadeias pesadas (H) idênticas. Cada cadeia pesa- da tem em uma extremidade um domínio variável (VH) seguido por diversos domínios constantes. Cada cadeia leve tem um domínio vari- ável em uma extremidade (VL) e um domínio constante em sua outra extremidade.
[00669] As referências a "VH" se referem à região variável de uma cadeia pesada de imunoglobulina de um anticorpo, incluindo a cadeia pesada de um Fv, scFv ou Fab. As referências a "VL" se referem à re- gião variável de uma cadeia leve de imunoglobulina, incluindo a cadeia leve de um Fv, scFv, dsFv ou Fab.
[00670] O termo "anticorpo" no presente documento é usado no sentido mais amplo e se refere a uma molécula de imunoglobulina que se liga especificamente a, ou é imunologicamente reativa com, um an- tígeno particular, e inclui formas policlonais, monoclonais, genetica- mente modificadas e modificadas de outro modo de anticorpos, inclu- indo, porém sem limitação, murinos, anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados, anticorpos heteroconjugados (por exemplo, anticorpos biespecíficos, diacorpos, triacorpos e tetracorpos) e fragmento de liga- ção a antígeno de anticorpos, incluindo, por exemplo, fragmentos Fab', F(ab')2, Fab, Fv, rIgG e scFv. O termo "scFv" se refere a um anticorpo Fv de cadeia única em que os domínios variáveis da cadeia pesada e da cadeia leve de um anticorpo tradicional foram unidos para formar uma cadeia.
[00671] Os anticorpos podem ser murinos, humanos, humanizados, quiméricos ou derivados de outras espécies. Um anticorpo é uma pro- teína gerada pelo sistema imunológico que tem capacidade para reco- nhecer e ligar-se a um antígeno específico. (Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5ª Edição, Garland Publishing, New York). Um antígeno alvo, de modo geral, tem inúme- ros sítios de ligação, também chamados de epitopos, reconhecidos por CDRs ou múltiplos anticorpos. Cada anticorpo que se liga especifica- mente a um epitopo diferente tem uma estrutura diferente. Assim, um antígeno pode ter mais de um anticorpo correspondente. Um anticorpo inclui uma molécula de imunoglobulina de comprimento completo ou uma porção imunologicamente ativa de uma molécula de imunoglobu- lina de comprimento completo, isto é, uma molécula que contém um sítio de ligação de antígeno que liga imunoespecificamente um antíge- no de um alvo de interesse ou parte do mesmo, em que tais alvos in- cluem, porém, sem limitação, célula ou células cancerosas que produ- zem anticorpos autoimunes associados a uma doença autoimune. A imunoglobulina descrita no presente documento pode ser de qualquer tipo (por exemplo, IgG, IgE, IgM, IgD e IgA), classe (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) ou subclasse de molécula de imunoglobulina. As imunoglobulinas podem ser derivadas de qualquer espécie. Em um aspecto, no entanto, a imunoglobulina é de origem humana, murina ou de coelho.
[00672] O termo "fragmento de anticorpo" se refere a uma porção de um anticorpo de comprimento completo, de modo geral, a região variável ou de ligação a alvo. Os exemplos de fragmentos de anticorpo incluem fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 e Fv. Um fragmento "Fv" é o fragmento de anticorpo mínimo que contém um sítio de reconhecimen- to de alvo completo. Esta região consiste em um dímero de um domí- nio variável de cadeia pesada e leve em uma associação não covalen- te estreita (dímero VH-VL). Nesta configuração, as três CDRs de cada domínio variável interagem para definir um sítio de ligação alvo na su- perfície do dímero VH-VL. Frequentemente, as seis CDRs conferem especificidade de ligação alvo ao anticorpo. Entretanto, em alguns ca- sos, mesmo um domínio variável único (ou metade de um Fv que compreende apenas três CDRs específicas para um alvo) pode ter a capacidade de reconhecer um alvo de ligação. Os fragmentos de anti- corpo "Fv de cadeia única" ou "scFv" compreendem os domínios VH e VL de um anticorpo em uma cadeia de polipeptídeo única. De modo geral, o polipeptídeo de Fv compreende, ainda, um ligante de polipep- tídeo entre os domínios VH e VL que possibilita que o scFv forme a estrutura desejada para ligação alvo. "Anticorpos de domínio único" são compostos pode um domínio VH ou VL único que exibe afinidade suficiente ao alvo. Em uma modalidade específica, o anticorpo de do- mínio único é um anticorpo camelizado (consultar, por exemplo, Riechmann, 1999, Journal of Immunological Methods 231:25-38).
[00673] O fragmento Fab contém o domínio constante da cadeia leve e o primeiro domínio constante (CH1) da cadeia pesada. Os fra- gmentos Fab' diferem-se de fragmentos Fab pela adição de alguns resíduos no terminal carboxila do domínio de CH1 de cadeia pesada incluindo uma ou mais cisteínas da região de dobradiça de anticorpo. Os fragmentos F(ab') são produzidos por clivagem da ligação de dis- sulfeto nas cisteínas de dobradiça do produto de digestão de pepsina F(ab')2. Acoplamentos químicos adicionais de fragmentos de anticorpo são conhecidos por aqueles versados na técnica.
[00674] Ambos os domínios de cadeia leve e cadeia pesada têm regiões determinantes de complementaridade (CDRs), também co- nhecidas como regiões hipervariáveis. As porções mais altamente conservadas de domínios variáveis são chamadas framework (FR). Como é conhecido na técnica, a posição/limite de aminoácido que de- lineia uma região hipervariável de um anticorpo pode variar dependen- do do contexto e das várias definições conhecidas na técnica. Algu- mas posições dentro de um domínio variável podem ser vistas como posições hipervariáveis híbridas pelo fato de que estas posições po- dem ser consideradas como estando dentro de uma região hipervariá- vel sob um conjunto de critérios enquanto são consideradas como es- tando fora de uma região hipervariável sob um conjunto diferente de critérios. Uma ou mais destas posições podem ser também encontra- das em regiões hipervariáveis estendidas. As CDRs em cada cadeia são mantidas juntas em estreita proximidade pelas regiões FR e, com as CDRs da outra cadeia, contribuem para a formação do sítio de liga- ção alvo de anticorpos (consultar Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institute of Health, Bethesda, Md. 1987). Como usado no presente documento, a numeração de resíduos de aminoácidos de imunoglobulina é realizada de acordo com o siste- ma de numeração de resíduos de aminoácidos de imunoglobulina de Kabat et al., a não ser que indicado de outro modo.
[00675] Em certas modalidades, os anticorpos dos ADCs da pre- sente invenção são anticorpos monoclonais. O termo "anticorpo mono- clonal" (mAb) se refere a um anticorpo que é derivado de uma única cópia ou clone, incluindo, por exemplo, qualquer clone eucariótico, procariótico ou de fago, e não ao método pelo qual o mesmo é produ- zido. De preferência, um anticorpo monoclonal da invenção existe em uma população homogênea ou substancialmente homogênea. O anti-
corpo monoclonal inclui tanto moléculas intactas assim como fragmen- tos de anticorpo (tal como, por exemplo, fragmentos Fab e F(ab')2), que são capazes de se ligar especificamente a uma proteína. Os fra- gmentos Fab e F(ab')2 não têm o fragmento Fc de anticorpo intacto, são eliminados mais rapidamente da circulação do animal e podem ter menos ligação de tecido não específica do que um anticorpo intacto (Wahl et al., 1983, J. Nucl. Med 24:316). Os anticorpos monoclonais úteis com a presente invenção podem ser preparados usando uma ampla variedade de conjuntos de procedimentos conhecidos na técni- ca incluindo o uso de conjuntos de procedimentos de apresentação em fago, recombinantes e de hibridoma ou uma combinação dos mesmos. Os anticorpos da invenção incluem anticorpos quiméricos, primatiza- dos, humanizados ou humanos.
[00676] Embora, na maioria dos casos, os anticorpos são compos- tos apenas pelos aminoácidos geneticamente codificados, em algumas modalidades, aminoácidos não codificados podem ser incorporados especificamente. Os exemplos de aminoácidos não codificados que podem ser incorporados em anticorpos para uso no controle de este- quiometria e localização de ligação, assim como métodos para produ- zir tais anticorpos modificados são discutidos em Tian et al., 2014, Proc Nat'l Acad Sci EUA 111(5):1766-1771 e Axup et al., 2012, Proc Nat'l Acad Sci EUA 109(40):16101-16106, cujo conteúdo inteiro está incorporado ao presente documento a título de referência.
[00677] Em certas modalidades, o anticorpo dos ADCs descritos no presente documento é um anticorpo quimérico. O termo anticorpo "quimérico" como usado no presente documento se refere a um anti- corpo que tem sequências variáveis derivadas de uma imunoglobulina não humana, tal como anticorpo de rato ou camundongo, e regiões constantes de imunoglobulina humana, tipicamente escolhidas dentre um modelo de imunoglobulina humana. Os métodos para produzir os anticorpos quiméricos são conhecidos na técnica. Consultar, por exemplo, Morrison, 1985, Science 229(4719):1202-7; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214-221; Gillies et al., 1985, J. Immunol. Methods 125:191-202; Patente US 5.807.715; 4.816.567; e 4,816397, que estão incorporadas ao presente documento a título de referência em sua to- talidade.
[00678] Em certas modalidades, o anticorpo dos ADCs descritos no presente documento é um anticorpo humanizado. As formas "humani- zadas" de anticorpos não humanos (por exemplo, murinos) são imu- noglobulinas quiméricas, cadeias de imunoglobulina ou fragmentos das mesmas (tais como Fv, Fab, Fab', F(ab')2 ou outros subdomínios de ligação alvo de anticorpos) que contêm sequências mínimas deri- vadas de imunoglobulina não humana. Geralmente, o anticorpo huma- nizado compreenderá substancialmente todos dentre pelo menos um e tipicamente dois domínios variáveis, em que todos ou substancialmen- te todas as regiões CDR correspondem àqueles de uma imunoglobuli- na não humana, e todas ou substancialmente todas as regiões FR são aqueles de uma sequência de imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado pode também compreender pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina (Fc), tipicamente aquela de uma sequência consenso de imunoglobulina humana. Os métodos de humanização de anticorpo são conhecidos na técnica. Consultar, por exemplo, Riechmann et al., 1988, Nature 332:323-7; Patente US nº
5.530.101; 5.585.089; 5.693.761; 5.693.762; e Patente US nº
6.180.370 por Queen et al.; EP239400; publicação PCT WO 91/09967; Patente US nº 5.225.539; EP592106; EP519596; Padlan, 1991, Mol. Immunol., 28:489-498; Studnicka et al., 1994, Prot. Eng. 7:805-814; Roguska et al., 1994, Proc. Natl. Acad Sci. EUA 91:969-973; e Patente US 5.565.332, todos os quais estão incorporados ao presente docu- mento a título de referência em sua totalidade.
[00679] Em certas modalidades, o anticorpo dos ADCs descritos no presente documento é um anticorpo humano. Anticorpos completa- mente "humanos" podem ser desejáveis para o tratamento terapêutico de pacientes humanos. Como usado no presente documento, "anticor- pos humanos" incluem anticorpos que têm a sequência de aminoáci- dos de uma imunoglobulina humana e incluem anticorpos isolados de bibliotecas de imunoglobulinas humanas ou de animais transgênicos para uma ou mais imunoglobulinas humanas e que não expressam imunoglobulinas endógenas. Os anticorpos humanos podem ser feitos por uma variedade de métodos conhecidos na técnica incluindo os mé- todos de apresentação em fago usando bibliotecas de anticorpos deri- vadas das sequências de imunoglobulina humana. Consultar as Paten- tes U.S. nº 4.444.887, 4.716.111, 6.114.598, 6.207.418, 6.235.883,
7.227.002, 8.809.151 e Pedido de Publicação U.S. nº 2013/189218, cujo conteúdo está incorporado ao presente documento a título de re- ferência em sua totalidade. Anticorpos humanos podem ser também produzidos usando camundongos transgênicos que incapazes de ex- pressar imunoglobulinas endógenas funcionais, mas que podem ex- pressar genes de imunoglobulina humana. Consultar, por exemplo, as Patentes U.S. nº 5.413.923; 5.625.126; 5.633.425; 5.569.825;
5.661.016; 5.545.806; 5.814.318; 5.885.793; 5.916.771; 5.939.598;
7.723.270; 8.809.051 e Pedido Publicado U.S. nº 2013/117871, que estão incorporados a título de referência ao presente documento em sua totalidade. Adicionalmente, empresas como Medarex (Princeton, N.J.), Astellas Pharma (Deerfield, Ill.) e Regeneron (Tarrytown, N.Y.) podem estar engajadas em fornecer anticorpos humanos direcionados contra um antígeno selecionado usando tecnologia similar àquela des- crita acima. Os anticorpos completamente humanos que reconhecem um epítopo selecionado podem ser gerados usando uma técnica de- nominada "detecção guiada". Nesta abordagem, um anticorpo mono-
clonal não humano selecionado, por exemplo, um anticorpo de ca- mundongo, é usado para guiar a seleção de um anticorpo completa- mente humano que reconhece o mesmo epítopo (Jespers et al., 1988, Biotechnology 12:899-903).
[00680] Em certas modalidades, o anticorpo dos ADCs descritos no presente documento é um anticorpo primatizado. O termo "anticorpo primatizado" se refere a um anticorpo que compreende regiões variá- veis de macaco e regiões constantes humanas. Os métodos para pro- duzir os anticorpos primatizados são conhecidos na técnica. Consultar, por exemplo, as Patentes U.S. nos 5.658.570; 5.681.722; e 5.693.780, que estão incorporadas ao presente documento a título de referência em sua totalidade.
[00681] Em certas modalidades, o anticorpo dos ADCs descritos no presente documento é um anticorpo biespecífico ou um anticorpo de domínio variável duplo (DVD). Os anticorpos biespecíficos e DVD são monoclonais, frequentemente humanos ou humanizados, anticorpos que têm especificidades de ligação para pelo menos dois antígenos diferentes. DVDs são descritos, por exemplo, na Patente US no
7.612.181, cuja invenção está incorporada ao presente documento a título de referência.
[00682] Em certas modalidades, o anticorpo dos ADCs descritos no presente documento é um anticorpo derivatizado. Por exemplo, porém sem limitação, os anticorpos derivatizados são tipicamente modifica- dos por glicosilação, acetilação, peguilação, fosforilação, amidação, derivatização por grupos protetores/bloqueadores conhecidos, cliva- gem proteolítica, ligação a um ligante celular ou outra proteína, etc. Qualquer uma dentre as inúmeras modificações químicas pode ser executada por técnicas conhecidas, incluindo, porém sem limitação, clivagem química específica, acetilação, formulação, síntese metabóli- ca de tunicamicina, etc. Adicionalmente, o derivado pode conter um ou mais aminoácidos não naturais, por exemplo, usando tecnologia ambrx (consultar, por exemplo, Wolfson, 2006, Chem. Biol. 13(10):1011-2).
[00683] Em certas modalidades, o anticorpo dos ADCs descritos no presente documento tem uma sequência que foi modificada para alte- rar pelo menos uma função efetora biológica mediada por região cons- tante em relação à sequência de tipo selvagem correspondente. Por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo pode ser modificado para reduzir pelo menos uma função efetora biológica mediada por região constante em relação a um anticorpo não modificado, por exemplo, ligação reduzida ao receptor de Fc (FcR). A ligação a FcR pode ser reduzida por mutação do segmento de região constante de imunoglobulina do anticorpo em regiões particulares necessárias para interações de FcR (consultar, por exemplo, Canfield e Morrison, 1991, J. Exp. Med 173:1483-1491; e Lund et al., 1991, J. Immunol. 147:2657-2662).
[00684] Em certas modalidades, o anticorpo dos ADCs descritos no presente documento é modificado para adquirir ou melhorar pelo me- nos uma função efetora biológica mediada por região constante em relação a um anticorpo não modificado, por exemplo, para melhorar interações de FcγR (consultar, por exemplo, o documento nº US 2006/0134709). Por exemplo, um anticorpo com uma região constante que liga FcγRIIA, FcγRIIB e/ou FcγRIIIA com maior afinidade que a região constante do tipo selvagem correspondente pode ser produzido de acordo com os métodos descritos no presente documento.
[00685] Em certas modalidades específicas, o anticorpo dos ADCs descritos no presente documento é um anticorpo que liga células tu- morais, tal como um anticorpo contra um receptor de superfície celular ou um antígeno associado a tumor (TAA). Nas tentativas de revelar alvos celulares eficazes para diagnóstico e terapia de câncer, os pes- quisadores buscaram identificar polipeptídeos de transmembrana ou de outro modo associados a tumor que são especificamente expressos na superfície de um ou mais tipos particulares de célula cancerosa em comparação a uma ou mais células não cancerosas normais. Frequen- temente, tais polipeptídeos associados a tumor são mais abundante- mente expressos na superfície das células cancerosas em compara- ção à superfície das células não cancerosas. Tal receptor de superfície celular e antígenos associados a tumor são conhecidos na técnica e podem ser preparados para uso na geração de anticorpos usando mé- todos e informações que são bem conhecidos na técnica. RECEPTORES DE SUPERFÍCIE CELULAR E TAAS EXEMPLIFICA-
TIVOS
[00686] Os exemplos de receptor de superfície celular e TAAs aos quais o anticorpo dos ADCs descritos no presente documento podem ser alvejados incluem, porém sem limitação, os vários receptores e TAAs listados abaixo na Tabela 1. Para conveniência, as informações relacionadas a estes antígenos, todos os quais são conhecidos na técnica, são listadas abaixo e incluem nomes, nomes alternativos, nú- meros de acesso ao Genbank e referência(s) primária(s), seguindo convenções de identificação de sequência de proteínas e ácidos nu- cleicos do Centro Nacional de Informações Biotecnológicas (NCBI). As sequências de proteínas e ácidos nucleicos que correspondem aos receptores de superfície celular e TAAs listados estão disponíveis em bancos de dados públicos, tal como o GenBank. TABELA 1. 4-1BB 5AC 5T4 Alfa-fetoproteína angiopoietina 2 ASLG659 TCL1
BMPR1B Brevican (BCAN, BEHAB) antígeno C2-42 C5 CA-125 CA-125 (imitação) CA-IX (anidrase carbônica 9) CCR4 CD140a CD152 CD19 CD20 CD200 CD21 (C3DR) 1) CD22 (isoforma CD22-B de receptor de células B) CD221 CD23 (receptor de gE) CD28 CD30 (TNFRSF8) CD33 CD37 CD38 (ADP ribose hidrolase cíclica) CD4 CD40 CD44 v6 CD51 CD52 CD56 CD70 CD72 (Lyb-2, antígeno de diferenciação de células B CD72) CD74 CD79a (CD79A, CD79α, alfa associado a imunoglobulina) número de acesso ao Genbank NP_001774,10)
CD79b (CD79B, CD79β, B29) CD80
CEA antígeno relacionado a CEA ch4D5 CLDN18,2 CRIPTO (fator de crescimento derivado de teratocarcinoma CR, CR1, CRGF, TDGF1) CTLA-4 CXCR5 DLL4 DR5 E16 (LAT1, SLC7A5) EGFL7
EGFR EpCAM EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5) Episialina ERBB3 ETBR (Receptor de endotelina do tipo B) FCRH1 (proteína 1 semelhante a receptor de Fc) FcRH2 (domínio IFGP4, IRTA4, SPAP1, SPAP1B, SPAP1C, SH2 contendo proteína âncora de fosfatase Domínio B extra de fibronectina Receptor de folato 1 Receptor frisado GD2
[0260] gangliosídeo GD3
GEDA
GPNMB HER1 HER2 (ErbB2) HER2/neu
HER3
HGF HLA-DOB HLA-DR Quinase receptora de fator difusor humano receptor de IGF-1 IgG4 IL-13 IL20Rα (IL20Ra, ZCYTOR7) IL-6 ILGF2 ILFR1R integrina α integrina α5β1 integrina αvβ3 IRTA2 (Translocação de receptor de superfamília da imunoglobulina associada 2, Cromossomo de Gene 1q21) antígeno de Lewis-Y LY64 (RP105) MCP-1 MDP (DPEP1) MPF (MSLN, SMR, mesotelina, fator potenciador de megacariócito) MS4A1 MSG783 (RNF124, proteína hipotética FLJ20315) MUC1 Mucina CanAg Napi3 (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, transportador de fosfato depen- dente de sódio tipo II 3b) NCA (CEACAM6) P2X5 (Canal de íons acionado por ligante P2X de receptor purinérgi- co 5) PD-1 PDCD1
PDGF-R α Antígeno de membrana específico para próstata PSCA (Precursor de antígeno de células-tronco de próstata) PSCA hlg
RANKL
RON SDC1 Sema 5b SLAMF7 (CS-1) STEAP1 STEAP2 (HGNC_8639, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, gene associado a câncer de próstata 1) TAG-72 TEM1 Tenascina C TENB2, (TMEFF2, tomoregulina, TPEF, HPP1, TR) TGF-β TRAIL-E2 TRAIL-R1 TRAIL-R2 TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, subfamília de canal de cátion potencial de receptor transitório M, membro 4) TA CTAA16,88 TWEAK-R TYRP1 (glicoproteína 75)
VEGF VEGF-A EGFR-1 VEGFR-2 Vimentina
ANTICORPOS EXEMPLIFICATIVOS
[00687] Os anticorpos exemplificativos a serem usados com ADCs da invenção incluem, porém sem limitação, 3F8 (GD2), Abagovomab
(CA-125 (imitação)), Adecatumumab (EpCAM), Afutuzumab (CD20), Alacizumab pegol (VEGFR2), ALD518 (IL-6), Alemtuzumnab (CD52), Altumomab pentetate (CEA), Amatuximab (Mesotelina), Anatumomnab mafenatox (TAG-72), Apolizumab (HLA-DR), Arcitumomab (CEA), Ba- vituximab (Fosfatidilserina), Bectumomab (CD22), Belimumab (BAFF), Besilesomab (antígeno relacionado a CEA), Bevacizumab (VEGF-A), Bivatuzumab mertansina (CD44 v6), Blinatumomab (CD19), Brentuxi- mab vedotina ((CD30 (TNFRSF8)), Cantuzumab mertansina (Mucin CanAg), Cantuzumab ravtansina (MUC1), Capromab pendetídeo (Cé- lulas de carcinoma prostático), Carlumab (MCP-1), Catumaxomab (EpCAM, CD3), CC49 (Tag-72), cBR96-DOX ADC (antígeno Lewis-Y), Cetuximab (EGFR), Citatuzumab bogatox (EpCAM), Cixutumumab (receptor de IGF-1), Clivatuzumab tetraxetano (MUC1), Conatumumab (TRAIL-E2), Dacetuzumab (CD40), Dalotuzumab (receptor de fator de crescimento 1 similar a insulina), Deratumumab ((CD38 (ribose hidro- lase ADP cíclica)), Demcizumab (DLL4), Denosumab (RANKL), Detu- momab (célula de linfoma B), Drozitumab (DR5), Dusigitumab (ILGF2), Ecromeximab (D3 gangliosídeo), Eculizumab (C5), Edrecolomab (EpCAM), Elotuzumab (SLAMF7), Elsilimomab (IL-6), Enavatuzumab (receptor de TWEAK), Enoticumab (DLL4), Ensituximab (5AC), Epitu- momab cituxetano (Episialina), Epratuzumab (CD22), Ertumaxomab ((HER2/neu, CD3)), Etancizumab (Integrina αvβ3), Farletuzumab (re- ceptor de folato 1), FBTA05 (CD20), Ficlatuzumab (HGF), Figitumu- mab (receptor de IGF-1), Flanvotumab ((TYRP1 (glicoproteína 75)), Fresolimumab (TGF-1), Galiximab (CD80), Ganitumab (IGF-I), Gem- tuzumab ozogamicina (CD33), Girentuximab ((anidrase carbônica 9 (CA-IX)), Glembatumumab vedotina (GPNMB), Ibritumomab tiuxetano (CD20) Icrucumab (VEGFR-1), Igovomab (CA-125), IMAB362 (CLDN18,2), Imgatuzumab (EGFR), Indatuximab ravtansina (SDC1), Intetumumab (CD51), Inotuzumab ozogamicina (CD22), Ipilimumab
(CD152), Iratumumab ((CD30 (TNFRSF8)), Labetuzumab (CEA), Lambrolizumab (PDCD1), Lexatumumab (TRAIL-R2), Lintuzumab (CD33), Lorvotuzumab mertansina (CD56), Lucatumumab (CD40), Lumiliximab ((CD23 (IgE receptor)), Mapatumumab (TRAIL-R1), Mar- getuximab (ch4DS), Matuzumab (EGFR), Milatuzumab (CD74), Mitu- momab (GD3 gangliosídeo), Mogamulizumab (CCR4), Moxetumomab pasudotox (CD22), Nacolomab tafenatox (antígeno C2-42), Naptu- momab estafenatox (5T4), Narnatumab (RON), Natalizumab (integrina α4), Necitumumab (EGFR), Nesvacumab (angiopoietina 2), Nimo- tuzumab (EGFR), Nivolumab (IgG4), Ocaratuzumab (CD20), Ofatu- mumab (CD20), Olaratumab (PDGF-R α), Onartuzumab (quinase re- ceptora de fator difusor humano), Ontuxizumab (TEM1), Oportuzumab monato (EpCAM), Oregovomab (CA-125), Otlertuzumab (CD37), Pani- tumumab (EGFR) Pankomab (glicosilação específica para tumor de MUC1), Parsatuzumab (EGFL7), Patritumab (HER3), Pemtumomab (MUC1), Pertuzumab (HER2/neu), Pidilizumab (PD-1), Pinatuzumab vedotina (CD22), Pritumumab (Vimentina), Racotumomab (ácido N- glicolilneuramínico), Radretumab (domínio extra de fibronectina-B), Ramucirumab (VEGFR2), Rilotumumab (HGF), Rituximab (CD20), Ro- batumumab (receptor de IGF-1), Samalizumab (CD200), Satumomab pendetídeo (TAG-72), Seribantumab (ERBB3), Sibrotuzumab (FAP), SGN-CD19A (CD19), SGN-CD33A (CD33), Siltuximab (IL-6), Solito- mab (EpCAM), Sonepcizumab (Esfingosina-1-fosfato), Tabalumb (BAFF), Tacatuzumab tetraxetano (Alfa-fetoproteína), Taplitumomab paptox (CD19), Tenatumomab (Tenascin C), Teprotumumab (CD221), TGN1412 (CD28), Ticilimumab (CTLA-4), Tigatuzumab (TRAIL-R2), TNX-650 (IL-13), Tovetumab (CD40a), Trastuzumab (HER2/neu), TRBS07 (GD2), Tremelimumab (CTLA-4), Tucotuzumab celmoleucina (EpCAM), Ublituximab (MS4A), Urelumab (4-1BB), Vandetanib (VEGF), Vantictumab (receptor Frizzled), Volociximab (integrina α5β1),
Vorsetuzumab mafodotina (CD70), Votumumab (antígeno tumoral CTAA16,88), Zalutumumab (EGFR), Zanolimumab (CD4) e Zatuximab (HER1).
MÉTODOS PARA PRODUZIR ANTICORPOS
[00688] O anticorpo de um ADC pode ser preparado por expressão recombinante de genes de cadeia leve e pesada de imunoglobulina em uma célula hospedeira. Por exemplo, para expressar um anticorpo recombinantemente, uma célula hospedeira é transfectada com um ou mais vetores de expressão recombinante que portam fragmentos de DNA que codificam as cadeias leve e pesada de imunoglobulina do anticorpo de modo que as cadeias leve e pesada sejam expressas na célula hospedeira e, opcionalmente, secretadas no meio em que as células hospedeiras são cultivadas, de cujo meio os anticorpos podem ser recuperados. As metodologias de DNA recombinante padrão são usadas para obter genes de cadeia pesada e leve de anticorpo, incor- porar estes genes em vetores de expressão recombinante e introduzir os vetores em células hospedeiras, tais como aquelas descritas em Molecular Cloning; A Laboratory Manual, Segunda Edição (Sambrook, Fritsch e Maniatis (eds), Cold Spring Harbor, N. Y., 1989), Current Pro- tocols in Molecular Biology (Ausubel, F. M. et al., eds., Greene Publis- hing Associates, 1989) e na Patente US no 4.816.397.
[00689] Em uma modalidade, os anticorpos variantes Fc são simila- res a seus equivalentes do tipo selvagem, exceto por alterações em seus domínios Fc. Para gerar ácidos nucleicos que codificam tais anti- corpos variantes Fc, um fragmento de DNA que codifica o domínio Fc ou uma porção do domínio Fc do anticorpo do tipo selvagem (denomi- nado o "domínio Fc do tipo selvagem") pode ser sintetizado e usado como um modelo para mutagênese para gerar um anticorpo como descrito no presente documento usando técnicas de mutagênese de rotina; alternativamente, um fragmento de DNA que codifica o anticor-
po pode ser diretamente sintetizado.
[00690] Uma vez que os fragmentos de DNA que codificam domí- nios Fc do tipo selvagem são obtidos, estes fragmentos de DNA po- dem ser, ainda, manipulados por técnicas de DNA recombinante pa- drão, por exemplo, para converter os genes de região constante em genes de cadeia de anticorpo de comprimento completo. Nestas mani- pulações, um fragmento de DNA que codifica CH é operacionalmente ligado a outro fragmento de DNA que codifica outra proteína, tal como uma região variável de anticorpo ou um ligante flexível. O termo "ope- racionalmente ligado", como usado neste contexto, se destina a signi- ficar que dois fragmentos de DNA são unidos de modo que as se- quências de aminoácidos codificadas pelos dois fragmentos de DNA permaneçam em quadro.
[00691] Para expressar os anticorpos variantes Fc, os DNAs que codificam cadeias pesada e leve de comprimento parcial ou completo, obtidos como descrito acima, são inseridos em vetores de expressão de modo que os genes sejam ligados operacionalmente a sequências de controle transcricional e traducional. Neste contexto, o termo "ligado operacionalmente" se destina a significar que um gene de anticorpo está ligado em um vetor de modo que as sequências de controle transcricional e traducional dentro do vetor sirvam à sua função de re- gular a transcrição e a tradução do gene de anticorpo. O vetor de ex- pressão e as sequências de controle de expressão são escolhidas pa- ra serem compatíveis com a célula hospedeira de expressão usada. Um gene de cadeia leve de anticorpo variante e o gene de cadeia pe- sada de anticorpo podem ser inseridos em vetores separados ou, mais tipicamente, ambos os genes são inseridos no mesmo vetor de ex- pressão.
[00692] Os genes de anticorpo são inseridos no vetor de expressão por métodos-padrão (por exemplo, ligação de sítios de restrição com-
plementares no fragmento de gene de anticorpo ou vetor, ou ligação de extremidade cega se nenhum sítio de restrição estiver presente). Antes da inserção das sequências de domínio Fc variante, o vetor de expressão pode já portar sequências de região variável de anticorpo. Adicional ou alternativamente, o vetor de expressão recombinante po- de codificar um peptídeo de sinalização que facilita a secreção da ca- deia de anticorpo de uma célula hospedeira. O gene de cadeia de an- ticorpo pode ser clonado no vetor de modo que o peptídeo de sinaliza- ção esteja ligado em quadro à terminação amino do gene de cadeia de anticorpo. O peptídeo de sinalização pode ser um peptídeo de sinali- zação de imunoglobulina ou um peptídeo de sinalização heterólogo (isto é, um peptídeo de sinalização de uma proteína não imunoglobuli- na).
[00693] Adicionalmente aos genes de cadeia de anticorpo, os veto- res de expressão recombinante portam sequências reguladoras que controlam a expressão dos genes de cadeia de anticorpo em uma cé- lula hospedeira. O termo "sequência reguladora" se destina a incluir promotores, intensificadores e outros elementos de controle de ex- pressão (por exemplo, sinais de poliadenilação) que controlam a transcrição ou a tradução dos genes de cadeia de anticorpo. Tais se- quências reguladoras são descritas, por exemplo, em Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185 (Academic Press, San Diego, Calif., 1990). Será entendido por aqueles versados na técnica que o projeto do vetor de expressão, incluindo a seleção de sequências reguladoras, pode depender de tais fatores como a esco- lha da célula hospedeira a ser transformada, o nível de expressão de proteína desejada, etc. Sequências reguladoras adequadas para ex- pressão de célula hospedeira de mamífero incluem elementos virais que direcionar altos níveis de expressão de proteína em células de mamífero, tais como promotores e/ou intensificadores derivados de citomegalovírus (CMV) (tal como o promotor/intensificador de CMV), Vírus Símio 40 (SV40) (tal como promotor/intensificador de SV40), adenovírus (por exemplo, o promotor tardio principal de adenovírus (AdMLP)) e polioma. Para descrição adicionar de elementos regulado- res virais e sequências dos mesmos, consultar, por exemplo, a Paten- te US nº 5.168.062 por Stinski, Patente US nº 4.510.245 por Bell et al. e Patente US nº 4.968.615 por Schnur et al.
[00694] Adicionalmente aos genes de cadeia de anticorpo e se- quências reguladoras, os vetores de expressão recombinante podem portar sequências adicionais, tais como sequências que regulam a re- plicação do vetor em células hospedeiras (por exemplo, origens de re- plicação) e genes marcadores selecionáveis. O gene marcador seleci- onável facilita a seleção de células hospedeiras em que o vetor foi in- troduzido (consultar, por exemplo, as Patentes U.S. nº 4.399.216,
4.634.665 e 5.179.017, todas por Axel et al.). Por exemplo, tipicamen- te, o gene marcador selecionável confere resistência a fármacos, tal como G418, puromicina, blasticidina, higromicina ou metotrexato, em uma célula hospedeira em que o vetor foi introduzido. Os genes mar- cadores selecionáveis adequados incluem o gene de di-hidrofolato re- dutase (DHFR) (para uso em DHFR− células hospedeiras com sele- ção/amplificação de metotrexato) e o gene neo (para seleção de G418). Para expressão das cadeias leve e pesada, o vetor (ou veto- res) de expressão que codifica as cadeias pesada e leve é transfecta- do em uma célula hospedeira por técnicas-padrão. As várias formas do termo "transfecção" são destinadas a abranger uma ampla varieda- de de técnicas comumente usadas para a introdução de DNA exógeno em uma célula hospedeira procariótica ou eucariótica, por exemplo, eletroporação, lipofecção, precipitação de fosfato de cálcio, transfec- ção de DEAE-dextrano e similares.
[00695] É possível expressar os anticorpos em célula hospedeira procarióticas ou eucarióticas. Em certas modalidades, a expressão de anticorpos é realizada em células eucarióticas, por exemplo, células hospedeiras de mamífero, para secreção ideal de um anticorpo ativo adequadamente enovelado e imunologicamente ativo. As células hos- pedeiras de mamífero exemplificativas para expressar os anticorpos recombinantes incluem Ovário de Hamster Chinês (células CHO) (in- cluindo células DHFR− CHO, descritas em Urlaub e Chasin, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 77:4216-4220, usadas com um marcador selecionável de DHFR, por exemplo, como descrito em Kaufman e Sharp, 1982, Mol. Biol. 159:601-621), células de mieloma NS0, células COS, células 293 e células SP2/0. Quando vetores de expressão re- combinante que codificam genes de anticorpo são introduzidos em cé- lulas hospedeiras de mamífero, os anticorpos são produzidos por cul- tura das células hospedeiras por um período de tempo suficiente para permitir a expressão do anticorpo nas células hospedeiras ou secreção do anticorpo no meio de cultura em que as células hospedeiras são cultivadas. Os anticorpos podem ser recuperados do meio de cultura usando métodos de purificação de proteína padrão. As células hospe- deiras podem ser também usadas para produzir porções de anticorpos intactos, tais como fragmentos Fab ou moléculas scFv.
[00696] Em algumas modalidades, o anticorpo de um ADC pode ser um anticorpo bifuncional. Tais anticorpos, em que uma cadeia pesada e uma leve são específicas para um antígeno e a outra cadeia pesada e leve é específica para um segundo antígeno, podem ser produzidos por reticulação de um anticorpo a um segundo anticorpo por métodos de reticulação química padrão. Os anticorpos bifuncionais podem ser também produzidos por expressão de um ácido nucleico geneticamen- te modificado para codificar um anticorpo bifuncional.
[00697] Em certas modalidades, anticorpos duplo-específicos, isto é, anticorpos que ligam um antígeno e um segundo antígeno não rela-
cionado usando o mesmo sítio de ligação, podem ser produzidos por mutação de resíduos de aminoácido nas CDRs de cadeia leve e/ou cadeia pesada. Os segundos antígenos exemplificativos incluem uma citocina pró-inflamatória (tal como, por exemplo, linfotoxina, interferon- γ ou interleucina-1). Os anticorpos duplo-específicos podem ser pro- duzidos, por exemplo, por mutação de resíduos de aminoácido na peri- feria do sítio de ligação a antígeno (consultar, por exemplo, Bostrom et al., 2009, Science 323:1610-1614). Os anticorpos duplo-funcionais po- dem ser produzidos por expressão de um ácido nucleico geneticamen- te modificado para codificar um anticorpo duplo-específico.
[00698] Os anticorpos podem ser também produzidos por síntese química (por exemplo, pelos métodos descritos em Solid Phase Pepti- de Synthesis, 2ª edição, 1984 The Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.). Os anticorpos podem ser também gerados usando uma plataforma sem célula (consultar, por exemplo, Chu et al., Biochemia No. 2, 2001 (Roche Molecular Biologicals)).
[00699] Os métodos para expressão recombinante de proteínas de fusão Fc são descritos em Flanagan et al., Methods in Molecular Bio- logy, volume 378: Anticorpos Monoclonais: Methods and Protocols.
[00700] Uma vez que um anticorpo tenha sido produzido por ex- pressão recombinante, o mesmo pode ser purificado por qualquer mé- todo conhecido na técnica para purificação de uma molécula de imu- noglobulina, por exemplo, por cromatografia (por exemplo, troca iôni- ca, afinidade, particularmente por afinidade a antígeno após seleção de Proteína A ou Proteína G e cromatografia em coluna de dimensio- namento), centrifugação, solubilidade diferencial ou por qualquer outra técnica padrão para a purificação de proteínas.
[00701] Uma vez isolado, um anticorpo pode ser, se for desejado, adicionalmente purificado, por exemplo, por cromatografia líquida de alto desempenho (consultar, por exemplo, Fisher, Laboratory Techni-
ques In Biochemistry And Molecular Biology (Work e Burdon, eds., El- sevier, 1980)) ou por cromatografia de filtração em gel em uma coluna Superdex™ 75 (Pharmacia Biotech AB, Uppsala, Suécia).
COMPOSTOS DE IMAGINOLOGIA E SENSORES
[00702] Em certas modalidades, são fornecidos no presente docu- mento usos para os compostos descritos em composições de imagino- logia e como sensores.
[00703] O sensor pode ser um biossensor, um sensor químico ou um comutador molecular. Os biossensores são capazes de identificar a presença ou a quantidade de um material específico por reação de materiais específicos (por exemplo, células cancerosas, vírus, vários produtos químicos, etc.) com biorreceptores (porções projetadas para serem capazes de absorver e reagir com biomateriais, tal como DNA, RNA, anticorpos, proteínas enzimáticas, células, membranas biológi- cas, receptores de hormônio, etc.) que têm especificidade de seleção e realizando medição usando um transdutor de sinal (um dispositivo que converte reação entre o material específico e um receptor biológi- co em um sinal elétrico usando vários métodos) e podem ser utilizados para indústrias médica, ambiental, de processo, militar (guerra quími- ca), recurso, alimento, etc. (consultar, por exemplo, Biosensors e Bioe- lectronics, 2016, 32-45; Pol. J. Environ. Stud. 2015, 19-25; Analytica Chimica Acta 568 (2006) 200–210; Biosensors e Bioelectronics 2017, 217–231; ACS Appl. Mater. Interfaces 2015, 7, 20190−20199; Journal of Coastal Life Medicine 2016; 4(3): 200-202; Artificial Cells, Blood Substitutes, e Biotechnology, 39: 281–288; Journal of Controlled Rele- ase 159 (2012) 154–163).
[00704] Sensores químicos monitora rápida de precisamente mate- riais específicos em muitos campos, tal como diagnóstico clínico, pes- quisa médica, medição de material químico, medição ambiental, etc., por um método para usar propriedades elétricas, tal como eletricidade,
resistência, diferença de potencial, etc., e propriedades ópticas, tal como cor, fluorescência, etc., e inclui um sensor de gás (hidrogênio, oxigênio, monóxido de carbono), um sensor de íon (cátion, ânion, íon sensível a gás), um sensor de componente (fase de vapor, fase líqui- da, componente luminescente), um sensor de umidade (umidade rela- tiva, umidade absoluta, condensação), sensor de poeira/fuligem (poei- ra em flutuação, poeira de sujeira, fuligem, turvação), etc. (consultar, por exemplo, Chem. Soc. Rev., 2015, 44, 3358; Journal of the Korean Chemical Society, 2010, 451-459; Chem. Sci., 2015, 6, 1150–1158; KR 10-1549347; J. Phys. Chem. B 2016, 120, 7053−7061; ACS Appl. Ma- ter. Interfaces 2015, 7, 704−712; J. Am. Chem. Soc. 2011, 133, 10960–10965; J. Am. Chem. Soc. 2012, 134, 20412−20420; Org. Lett. 2014, 16, 1680−1683; J. Org. Chem. 2013, 78, 702−705; J. Org. Chem. 2015, 80, 12129−12136; ACS Macro Lett. 2014, 3, 1191−1195; New J. Chem., 2012, 36, 386-393; Chem. Commun., 2010, 46, 6575- 6577; 2013).
[00705] Um comutador molecular é uma molécula que pode ser re- versivelmente comutada entre dois ou mais estados estáveis. As mo- léculas podem ser comutadas entre estados em resposta a estímulos ambientais, tais como alterações em ambiente químico (tal como pH), irradiação de luz (por exemplo, luz de um comprimento de onda parti- cular), temperatura, uma corrente elétrica, microambiente ou a presen- ça de um ligante. Em alguns casos, a comutação entre estados pode ser dependente de uma combinação de estímulos. As formas mais an- tigas de comutadores moleculares sintéticos são indicadores de pH, que exibem cores distintas como uma função de pH. Os comutadores moleculares sintéticos podem ser aplicados em computadores molecu- lares ou sistemas de entrega de fármacos responsivos. Os comutado- res moleculares também são importantes na biologia devido ao fato de que muitas funções biológicas se baseiam nos mesmos, por exemplo,
a regulação alostérica e a visão.
[00706] Tais biossensores, sensores químicos e comutadores mo- leculares podem compreender, ainda, porções químicas fotorreativas adicionais, tal como rodamina, vermelho de fenol, corante azo laranja, vermelho papa, cianina não sulfonatada, cianiona sulfonatada, sensor de fluoreto quimioluminescente (derivado de 1,2-dioxetano) e corantes D2A (corantes de fluorescência NIR). Alternativamente, a porção quí- mica fotorreativa pode ser selecionada a partir de um composto que tem grupos funcionais e estruturas similares ao seguinte:
[00707] em que:
[00708] R100 é H ou C1-C6 alquila;
[00709] R101 é H ou SO3H; R102 é C1–C6 alquila ou -(CH2)zCOOH;
[00710] z é um número inteiro de 3 a 8;
[00711] R103 e R104 são, cada um, independentemente, H ou C1-C6 alquila; e
[00712] R105 e R106 são, cada um, independentemente, hidrogênio, COOH ou SO3H.
[00713] Porções químicas fotorreativas adicionais são conhecidas na técnica. Consultar, por exemplo, Org. Lett. 2014, 16, 1680−1683; J.
Am. Chem. Soc. 2011, 133, 10960–10965; Dye Lasers, 3a Edição (Springer-Verlag, Berlin, 1990); J. Am. Chem. Soc. 2012, 134, 20412- 20420).
MÉTODOS DE TRATAMENTO TRATAMENTOS ORIENTADOS PARA ALVO
[00714] A porção química de alvejamento do conjugado pode ser reconhecida por uma célula, fornecendo, assim, um assim chamado tratamento orientado para alvo.
[00715] Em algumas modalidades, o conjugado compreende um agente ativo para uso em um tratamento orientado para alvo para tra- tar uma doença autoimune. Em algumas tais modalidades, o agente ativo é selecionado dentre: ciclosporina, ciclosporina A, micofenilato mofetila, sirolimo, tacrolimo, enanercepte, prednisona, azatioprina, me- totrexato ciclofosfamida, ácido aminocaproico, cloroquina, hidroxiclo- roquina, hidrocortisona, dexametasona, clororambucila, DHEA, dana- zol, bromocriptina, meloxicam, infliximab, etc.
[00716] Em algumas modalidades, o composto compreende um agente ativo Q para uso em um tratamento orientado para alvo para tratar uma doença infecciosa. Em algumas tais modalidades, Q é sele- cionado dentre: séries de beta-lactama (penicilina G, penicilina V, cloxacilina, dicloxacilina, meticilina, nafcilina, oxacilina, ampicilina, amoxicilina, becampicilina, azlocilina, carbenicilina, mezlocilina, pipe- racilina, ticarcilina), séries de aminoglicosídeo (amicacina, gentamici- na, canamicina, neomicina, netilmicina, estreptomicina, tobramicina), séries de macrolídeo (azithromicina, claritromicina, eritromicina, linco- micina, clindamicina), séries de tetraciclina (demeclociclina, doxicilina, minociclina, tetraciclina), séries de quinolona (cinoxacina, ácido nali- díxico), séries de fluoroquinolona (ciprofloxacina, enoxacina, grepa- floxacina, levofloxacina, lomefloxacina, norfloxacina, ofloxacina, espar- floxacina, trovafloxicina), séries de polipeptídeo (bacitracina, colistina,
polimixina B), séries de sulfonamida (sulfisoxazol, sulfametoxazol, sul- fadiazina, sulfametizol, sulfacetamida), outros antibióticos (trimetoprim, silfametazol, cloranfenicol, vancomicina, metronidazol, quinupristina, dalfopristina, rifampicina, espectinomicina, nitrofurantoína), agente an- tiviral geral (idoxuradina, vidarabina, aciclovir, famciciclovir, penciciclo- vir, valaciclovir, ganciciclovir, foscarnet, ribavirina, amantadina, riman- tadina, cidofovir, oligonucleotídeos antissenso, imunoglobuminas, in- terferonas), agente terapêutico para infecição por HIV (tenofovir, entri- citabina, zidovudina, didanosina, zalcitabina, estavudina, lamivudina, nevirapina, delaviridina, saquinavir, ritonavir, indinavir, nelfinavir), etc.
[00717] Em algumas modalidades, os compostos e conjugados descritos no presente documento compreendem um agente ativo Q para uso em um método para liberar um agente ativo para uma célula para tratar um tumor, em que a porção química de alvejamento é sele- cionada para ligação com uma célula-alvo (isto é, uma célula cancero- sa). Em particular, os presentes compostos, conjugados e composi- ções podem ser úteis para inibir a proliferação de células anormais ou tratar um distúrbio proliferativo em um mamífero (por exemplo, um ser humano), tal como quando a célula-alvo é uma célula cancerosa e a porção química de alvejamento é selecionada para se ligar a uma mo- lécula associada à célula cancerosa (e não associada a células sau- dáveis ou pelo menos, de preferência, associada a células tumorais em vez de células saudáveis).
[00718] Em algumas tais modalidades, o agente ativo é selecionado dentre: um agente citotóxico ou imunomodulador, um agente anticân- cer, um agente antitublina, um agente citotóxico, etc. De preferência, o agente citotóxico ou imunomodulador inclui um agente antitubulina, auristatina, um aglutinante de sulco menor de DNA, um inibidor de transcrição de DNA, um agente alquilante, antraciclina, antibiótico, an- tifolato, antimetabólito, um inibidor de calmodulina, um sensibilizador a quimioterapia, duocarmicina, etoposídeo, pirimidina fluorada, ionóforo, lexitropsina, maitansinoide, nitrosoureia, platinol, um composto forma- dor de poro, antimetabólito de purina, puromicina, sensibilizador a ra- diação, rapamicina, esteroide, taxano, inibidor de topoisomerase, vinca alcaloide, etc.; o agente anticâncer inclui metotrexato, taxol, L- asparaginase, mercaptopurina, tioguanina, hidroxiureia, citarabina, ci- clofosfamida, ifosfamida, nitrosoureias, cisplatina, carboplatina, mito- micina, dacarbazina, proocarbizina, topotecano, mortardas de nitrogê- nio, citoxano, etoposídeo, 5-fluorouracila, BCNU, irinotecano, campto- tecinas, bleomicina, doxorubicina, idaribicina, daunorubicina, dactino- micina, plicamicina, mitoxantrono, asparaginase, vinblastina, vincristi- na, vinorelbina, paclitaxel, docetaxel, etc.; o agente antitublina inclui taxano (por exemplo, paclitaxel, docetaxel), T67, vinca alquiloide (por exemplo, vincristina, vinblastina, vindesina, vinorelbina), um derivado de baccatina, um derivado de taxano, epotiolona (por exemplo, epotio- lona A, epotiolona B), nocodazol, colquicina, colcimid, estramustina, critoficinas, cemadotina, maitansinoides, combrestatinas, discodermo- lida, eleuterobina, um derivado de auristatina (AFP, MMAF, MMAE), etc.; o agente citotóxico inclui androgênio, antramicina (AMC), aspara- ginase, 5-azacitidina, azatioprina, bleomicina, bussulfano, butionina sulfoximina, caliqueamicina, derivado de caliqueamicina, camptoteci- na, carboplatina, carmustina (BSNU), CC-1065, clorambucina, cisplati- na, colquicina, ciclofosfamida, citarabina, citidina arabinoside, citocala- sina B, dacarbazina, dactinomicina (actinomicina), daunorubicina, de- carbazina, DM1, DM4, docetaxel, doxorubicina, etoposídeo, estrogê- nio, 5-fluordesoxiuridina, 5-fluorouracila, gencitabina, gramicidina D, hidroxiureia, idaribicina, ifosfamida, irinotecano, lomustina (CCNU), maitansina, mecloretamina, melfalano, 6-merceptopurina, metotrexato, mitramicina, mitomicina C, mitoxantrona, nitroimidazol, paclitaxel, pali- toxina, plicamicina, procarbizina, rizoxina, estreptozotocina, tenoposí-
deo, 6-tioguanina, tioTEPA, topotecano, vinblastina, vincristina, vinore- lbina, VP-16, VM-26; aglutinante de sulco menor de DNA (por exem- plo, enediina, lexitropsina, composto CBI), duocarmicina, taxano (por exemplo, paclitaxel, docetaxel), puromicinas, vinca alcaloides, CC- 1065, SN-38, topotecano, morfolino-doxorubicina, rizoxina, cianomor- folino-doxorubicina, equinomicina, combretastatina, netropsina, epoti- lona A, epotilona B, estramustina, criptoficinas, cemadotina, maitansi- noides, discodermolida, eleutherobina, mitoxantrona, etc..
PROLIFERAÇÃO CELULAR E APOPTOSE
[00719] Os compostos e conjugados descritos no presente docu- mento podem ser usados em métodos para induzir a apoptose em cé- lulas.
[00720] A apoptose desregulada foi implicada em uma variedade de doenças, incluindo, por exemplo, distúrbios autoimunes (por exemplo, lúpus eritematoso sistêmico, artrite reumatoide, doença de enxerto- contra-hospedeiro, miastenia grave ou síndrome de Sjӧgren), infec- ções inflamatórias crônicas (por exemplo, psoríase, asma ou doença de Crohn), distúrbios de hiperproliferação (por exemplo, câncer de mama, câncer de pulmão), infecções virais (por exemplo, herpes, papi- loma ou HIV) e outras afecções, tal como osteoartrite e aterosclerose. Os compostos, conjugados e composições descritos no presente do- cumento podem ser usados para tratar ou atenuar qualquer uma des- tas doenças. Tais tratamentos, de modo geral, envolvem administrar a um indivíduo que sofre da doença uma quantidade de um composto, conjugado ou composição descrita no presente documento suficiente para fornecer o benefício terapêutico. A identidade do anticorpo do composto, conjugado ou composição administrada dependerá da do- ença que é tratada—assim, o anticorpo deve se ligar a um antígeno de superfície celular expresso no tipo de célula em que a inibição seria benéfica. O benefício terapêutico atingido também dependerá da do-
ença específica que é tratada. Em certos casos, os compostos e com- posições descritos no presente documento podem tratar ou atenuar a própria doença, ou sintomas da doença, quando administradas como monoterapia. Em outros casos, os compostos e composições descritos no presente documento podem ser parte de um regime de tratamento global, incluindo outros agentes que, juntamente com o inibidor ou os compostos e composições descritos no presente documento, tratam ou atenuam a doença que é tratada, ou sintomas da doença. Os agen- tes úteis para tratar ou atenuar doenças específicas que podem ser administrados adjuvante a, ou com, os compostos e composições des- critos no presente documento serão evidentes àqueles versados na técnica.
[00721] Embora a cura absoluta seja sempre desejável em qualquer regime terapêutico, atingir uma cura não é necessário para fornecer benefício terapêutico. O benefício terapêutico pode incluir interromper ou retardar a progressão da doença, retroceder a doença sem curar e/ou atenuar ou retardar a progressão de sintomas da doença. Sobre- vida prolongada em comparação com médias estatísticas e/ou quali- dade de vida melhorada podem ser também consideradas benefício terapêutico.
[00722] Uma classe particular de doenças que envolvem apoptose desregulada e que são uma carga de saúde significativa em todo o mundo são cânceres. Em uma modalidade específica, os compostos e as composições descritos no presente documento podem ser usados para tratar cânceres. O câncer pode ser, por exemplo, tumores sólidos ou tumores hematológicos. Os cânceres que podem ser tratados com os compostos e composições descritos no presente documento inclu- em, porém sem limitação, câncer de bexiga, câncer cerebral, câncer de mama, câncer de medula óssea, câncer cervical, leucemia linfocíti- ca crônica, câncer colorretal, câncer de esôfago, câncer hepatocelular,
leucemia linfoblástica, linfoma folicular, malignidades linfoides de ori- gem em célula T ou célula B, melanoma, leucemia mielógena, mielo- ma, câncer oral, câncer de ovário, câncer de pulmão de célula não pe- quena, leucemia linfocítica crônica, mieloma, câncer de próstata, cân- cer de pulmão de célula pequena e câncer de baço. Os compostos e as composições descritos no presente documento podem ser especifi- camente benéficos no tratamento de cânceres devido ao fato de que o anticorpo pode ser usado para alvejar célula tumoral especificamente, evitando ou atenuando, assim, potencialmente efeitos colaterais e/ou toxicidades indesejáveis que podem estar associados à administração sistêmica de inibidores não conjugados. Uma modalidade se refere a um método para tratar uma doença que envolve apoptose intrínseca desregulada que compreende administrar a um sujeito que tem uma doença que envolve apoptose desregulada uma quantidade de um composto e uma composição descritos no presente documento eficaz para fornecer benefício terapêutico, em que o ligante dos compostos e composições descritos no presente documento se liga a um receptor de superfície celular em uma célula cuja apoptose intrínseca está des- regulada. Uma modalidade se refere a um método para tratar câncer que compreende administrar a um indivíduo que tem câncer um com- posto e uma composição descritos no presente documento, em que o ligante é capaz de se ligar a um receptor de superfície celular ou um antígeno associado a tumor expresso na superfície das células cance- rosas, em uma quantidade eficaz para fornecer benefício terapêutico.
[00723] No contexto de cânceres tumorigênicos, benefício terapêu- tico, além de incluir os efeitos discutidos acima, pode também incluir especificamente interromper ou retardar a progressão de crescimento tumoral, retroceder o crescimento tumoral, erradicar um ou mais tumo- res e/ou aumentar a sobrevida do paciente em comparação com as médias estatísticas para o tipo e estágio do câncer que tratado. Em uma modalidade, o câncer que é tratado é um câncer tumorigênico.
[00724] Os compostos e conjugados descritos no presente docu- mento podem ser administrados como monoterapia para fornecer be- nefício terapêutico ou podem ser administrados adjunto a ou com ou- tros agentes quimioterápicos e/ou radioterapia. Os agentes quimiote- rápicos com os quais os compostos e composições descritos no pre- sente documento podem ser utilizados como terapia adjunta podem ser alvejados (por exemplo, ADCs, inibidores de proteína quinase, etc.) ou não alvejados (por exemplo, agentes citotóxicos não específi- cos, tais como radionucleotídeos, agentes alquilantes e agentes inter- calantes). Os agentes quimioterápicos não alvejados com os quais os compostos e composições descritos no presente documento podem ser administrados de modo adjunto incluem, porém sem limitação, me- totrexato, taxol, L-asparaginase, mercaptopurina, tioguanina, hidroxiu- reia, citarabina, ciclofosfamida, ifosfamida, nitrosoureias, cisplatina, carboplatina, mitomicina, dacarbazina, procarbizina, topotecano, mos- tardas de nitrogênio, Citoxano, etoposídeo, 5-fluorouracila, BCNU, iri- notecano, camptotecinas, bleomicina, doxorubicina, idarubicina, dau- norubicina, dactinomicina, plicamicina, mitoxantrona, asperaginase, vinblastina, vincristina, vinorelbina, paclitaxel, caliqueamicina e doce- taxel.
[00725] Os compostos e os conjugados descritos no presente do- cumento que podem não ser eficazes como monoterapia para tratar câncer podem ser administrados adjuntos a ou com outros agentes quimioterápicos ou radioterapia para fornecer benefício terapêutico. Uma modalidade se refere a um método em que um composto ou composição descritos no presente documento é administrado em uma quantidade eficaz de sensibilizar as células tumorais a quimioterapia e/ou radioterapia padrão. Consequentemente, no contexto de trata- mento de cânceres, "benefício terapêutico" inclui administrar os com-
postos e composições descritos no presente documento adjuntos a ou com agentes quimioterápicos e/ou radioterapia, em pacientes que não começaram ainda tal terapia ou que têm ou não exibiram ainda sinais de resistência ou em pacientes que começaram a exibir sinais de re- sistência, como um meio de sensibilizar os tumores à quimioterapia e/ou radioterapia.
COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS E ADMINISTRAÇÃO DAS MESMAS
[00726] Os compostos e conjugados descritos no presente docu- mento podem ser utilizados para tratar um indivíduo que precisa do mesmo. Em certas modalidades, o indivíduo é um mamífero, tal como um ser humano ou um mamífero não humano. Quando administrada a um animal, tal como um ser humano, a composição ou o composto é, de preferência, administrado como uma composição farmacêutica que compreende, por exemplo, um composto descrito e um transportador farmaceuticamente aceitável.
[00727] Transportadores farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na técnica e incluem, por exemplo, soluções aquosas tais como água ou solução salina fisiologicamente tamponada ou outros solventes ou veículos tais como glicóis, glicerol, óleos tal como azeite de oliva ou ésteres orgânicos injetáveis. Nas modalidades preferenci- ais, quando tais composições farmacêuticas são para administração humana, particularmente para rotas invasivas de administração (isto é, rotas, tais como injeção ou implantação, que envolvem transporte ou difusão através de uma barreira epitelial), a solução aquosa é livre de pirogênio ou substancialmente livre de pirogênio. Os excipientes po- dem ser escolhidos, por exemplo, para efetuar liberação retardada de um agente ou para alvejar seletivamente uma ou mais células, tecidos ou órgãos. A composição farmacêutica pode estar em uma forma uni- tária de dosagem tal como tablete, cápsula (incluindo cápsula disper-
sível e cápsula de gelatina), grânulo, liófilo para reconstituição, pó, so- lução, xarope, supositório, injeção ou similares. A composição pode também estar presente em um sistema de liberação transdérmico, por exemplo, um emplastro de pele. A composição pode estar também presente em uma solução adequada para administração tópica, tal como uma pomada ou creme.
[00728] Um transportador farmaceuticamente aceitável pode conter agentes fisiologicamente aceitáveis que atuam, por exemplo, para es- tabilizar, aumentar a solubilidade ou para aumentar a absorção de um composto tal como um composto da invenção. Tais agentes fisiologi- camente aceitáveis incluem, por exemplo, carboidratos, tais como gli- cose, sacarose ou dextranas, antioxidantes, tais como ácido ascórbico ou glutationa, agentes quelantes, proteínas de baixo peso molecular ou outros estabilizantes ou excipientes. A escolha de um transportador farmaceuticamente aceitável, incluindo um agente fisiologicamente aceitável, depende, por exemplo, da rota de administração da compo- sição. A preparação de composição farmacêutica pode ser um sistema de distribuição de fármaco autoemulsificante ou um sistema de distri- buição de fármaco automicroemulsificante. A composição farmacêutica (preparação) também pode ser um lipossoma ou outra matriz poliméri- ca, que pode ter incorporado na mesma, por exemplo, um composto da invenção. Lipossomas, por exemplo, que compreendem fosfolipí- dios ou outros lipídeos, são transportadores fisiologicamente aceitável e metabolizáveis não tóxicos que são relativamente simples de fabricar e administrar.
[00729] A expressão "farmaceuticamente aceitável" é usada no presente documento para referir-se àqueles compostos, materiais, composições, e/ou formas de dosagem que estão contidas no escopo do julgamento médico do parecer, adequados para o uso em contato com os tecidos de indivíduos humanos e indivíduos animais sem ex-
cesso de toxicidade, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação, comensurável com uma razão benefício/risco razoável.
[00730] A expressão "transportador farmaceuticamente aceitável" como usado no presente documento significa um material composição ou veículo farmaceuticamente aceitável, tal como um líquido ou uma carga sólida, diluente, excipiente, solvente ou material de encapsula- ção. Cada transportador precisa ser "aceitável" no sentido de ser com- patível com os outros ingredientes da formulação e não prejudicial ao paciente. Alguns exemplos de materiais que podem servir como trans- portadores farmaceuticamente aceitáveis incluem: (1) açúcares, como lactose, glicose e sacarose; (2) amidos, como amido de milho e amido de batata; (3) celulose, e seus derivados, como carboximetilcelulose de sódio, etilcelulose e acetato de celulose; (4) tragacanto em pó; (5) malte; (6) gelatina; (7) talco; (8) excipientes, como manteiga de coco e ceras de supositório; (9) óleos, como óleo de amendoim, óleo de se- mente de algodão, óleo de cártamo, óleo de sésamo, óleo de oliva, óleo de milho e óleo de soja; (10) glicóis, como propileno glicol; (11) polióis, como glicerina, sorbitol, manitol e polietileno glicol; (12) éste- res, como oleato de etila e laurato de etila; (13) ágar; (14) agentes de tamponamento, como hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio; (15) ácido algínico; (16) água sem pirogênios; (17) solução salina iso- tônica; (18) solução de Ringer; (19) álcool etílico; (20) soluções tam- pão de fosfato; e (21) outras substâncias compatíveis não tóxicas usa- das em formulações farmacêuticas.
[00731] A composição farmacêutica (preparação) pode ser adminis- trada a um indivíduo por qualquer uma de inúmeras rotas de adminis- tração incluindo, por exemplo, por via oral (por exemplo, umedecidas como um soluções ou suspensões não aquosas ou aquosas, tabletes, cápsulas (incluindo cápsulas dispersíveis e cápsulas de gelatina), bo- lus, pós, grânulos, pastas para aplicação à língua); absorção através da mucosa oral (por exemplo, sublingual); por via anal, retal ou vaginal (por exemplo, como um pessário, creme ou espuma); por via parente- ral (incluindo intramuscular, intravenosa, subcutânea ou por via intra- tecal, como, por exemplo, uma solução ou suspensão estéril); por via nasal; por via intraperitoneal; por via subcutânea; por via transdérmica (por exemplo, como um emplastro aplicado à pele); e por via tópica (por exemplo, como um creme, pomada ou aspersão aplicada à pele ou como um colírio). O composto pode também ser formulado para inalação. Em certas modalidades, um composto pode ser simplesmen- te dissolvido ou suspenso em água estéril. Detalhes de rotas de admi- nistração apropriadas e composições adequadas para as mesmas po- dem ser encontradas, por exemplo, nas Patentes U.S. n° 6.110.973,
5.763.493, 5.731.000, 5.541.231, 5.427.798, 5.358.970 e 4.172.896, bem como em patentes citadas nas mesmas.
[00732] As formulações podem ser convenientemente apresentadas em forma de dosagem unitária e podem ser preparadas por meio de qualquer método bem conhecido na técnica da farmácia. A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinado com um material trans- portador para produzir uma forma de dosagem única irá variar depen- dendo do hospedeiro sendo tratado, do modo particular de administra- ção. A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinado com um material transportador para produzir uma forma de dosagem única será geralmente aquela quantidade do composto que produz um efeito terapêutico. Geralmente, de cem por cento, esta quantidade estará na faixa de cerca de 1 por cento a cerca de noventa e nove por cento de ingrediente ativo, preferencialmente de cerca de 5 por cento a cerca de 70 por cento, com máxima preferência de cerca de 10 por cento a cerca de 30 por cento.
[00733] Métodos de preparo destas formulações ou composições incluem a etapa de colocar em associação um composto ativo, tal co-
mo um composto da invenção, com o transportador e, opcionalmente, um ou mais ingredientes acessórios. Em geral, as formulações são preparadas associando de modo uniforme e profundo um composto da presente invenção a transportadores líquidos ou transportadores sóli- dos finamente divididos ou ambos e, então, se for necessário, confor- mando o produto.
[00734] Formulações da invenção adequadas para administração oral podem estar sob a forma de cápsulas (incluindo cápsulas disper- síveis e cápsulas de gelatina), hóstias, pílulas, tabletes, losangos (usando uma base flavorizada, geralmente sacarose e acácia ou tra- gacanto), liófilo, pós, grânulos ou como uma solução ou uma suspen- são em um líquido aquoso ou não aquoso ou como uma emulsão de óleo em água ou de água em óleo ou como um elixir ou xarope ou co- mo pastilhas (usando uma base inerte, tal como gelatina e glicerina ou sacarose e acácia) e/ou como colutório bucal e similares, cada um contendo uma quantidade predeterminada de um composto da presen- te invenção como um ingrediente ativo. Compostos, conjugados ou composições dos mesmos podem ser também administrados como um bolus, electuário ou pasta.
[00735] Para preparar formas de dosagem sólidas para administra- ção oral (cápsulas (incluindo cápsulas dispersíveis e cápsulas de gela- tina), tabletes, pílulas, drágeas, pós, grânulos e similares), o ingredien- te ativo é misturado com um ou mais transportadores farmaceutica- mente aceitáveis, tais como citrato de sódio ou fosfato de dicálcio e/ou qualquer um dos seguintes: (1) cargas ou extensores, tais como ami- dos, lactose, sacarose, glicose, manitol e/ou ácido silícico; (2) agluti- nantes, tais como, por exemplo, carboximetilcelulose, alginatos, gelati- na, polivinil pirrolidona, sacarose e/ou acácia; (3) umectantes, tais co- mo glicerol; (4) agentes de desintegração, tais como ágar-ágar, carbo- nato de cálcio, amido de batata ou tapioca, ácido algínico, certos silica-
tos e carbonato de cálcio; (5) agentes retardantes de solução, tais co- mo parafina; (6) aceleradores de absorção, tais como compostos de amônio quaternário; (7) agentes umectantes, tais como, por exemplo, álcool cetílico e monostearato de glicerol; (8) absorventes, tais como caulim e argila de bentonita; (9) lubrificantes, tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietileno glicóis sólidos, lauril sulfa- to de sódio e misturas dos mesmos; (10) agentes de complexação, tais como, ciclodextrinas modificadas e não modificadas; e (11) agentes de coloração. No caso de cápsulas (incluindo cápsulas dispersíveis e cápsulas de gelatina), tabletes e pílulas, as composições farmacêuti- cas podem também compreender agentes de tamponamento. Compo- sições sólidas de um tipo similar podem também ser usadas como cargas em cápsulas de gelatina com carga macia ou dura usando tais excipientes como lactose ou açúcares de leite, bem como polietileno glicóis de alto peso molecular e similares.
[00736] Um tablete pode ser feito por compressão ou moldagem, opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios. Tabletes comprimidos podem ser preparados usando aglutinante (por exemplo, gelatina ou hidroxipropilmetil celulose), lubrificante, diluente inerte, conservante, desintegrante (por exemplo, glicolato de amido de sódio ou carboximetil celulose de sódio reticulado), agente de ativo de super- fície ou dispersante. Tabletes moldados podem ser fabricados pela moldagem, em uma máquina adequada, de uma mistura do composto em pó umedecido com um diluente líquido inerte.
[00737] Os tabletes e outras formas de dosagem sólidas das com- posições farmacêuticas, tais como drágeas, cápsulas (incluindo cápsu- las dispersíveis e cápsulas de gelatina), pílulas e grânulos, podem op- cionalmente ser classificados ou preparados com revestimentos e cas- cas, tais como revestimentos entéricos e outros revestimentos bem conhecidos na técnica de formulação de farmacêuticos. Os mesmos podem também ser formulados de modo a fornecer liberação lenta ou controlada do ingrediente ativo nisto usando, por exemplo, hidroxipro- pilmetil celulose em proporções variadas para fornecer o perfil de libe- ração desejado, outras matrizes poliméricas, lipossomas e/ou microes- feras. Os mesmos podem ser esterilizados, por exemplo, por filtração através de uma carga de retenção de bactérias ou incorporando agen- tes esterilizantes sob a forma de composições sólidas estéreis que po- dem ser dissolvidas em água estéril ou algum outro meio injetável es- téril imediatamente antes do uso. Estas composições podem também opcionalmente conter agentes opacificantes e podem ser de uma composição que as mesmas liberam o ingrediente ativo (ou ingredien- tes) sozinho ou preferencialmente, em uma certa porção do trato gas- trointestinal, opcionalmente, de maneira atrasada. Exemplos de com- posições de incorporação que podem ser usadas incluem substâncias poliméricas e ceras. O ingrediente ativo pode também estar em forma microencapsulada, se adequado, com um ou mais dos excipientes descritos acima.
[00738] Formas de dosagem líquidas úteis para administração oral incluem emulsões farmaceuticamente aceitáveis, liófilos para reconsti- tuição, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires. Além do ingrediente ativo, as formas de dosagem líquidas podem conter di- luentes inertes comumente usados na técnica, tais como, por exemplo, água ou outros solventes, ciclodextrinas e derivados dos mesmos, agentes solubilizantes e emulsificantes, tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonato de etila, acetato de etila, álcool benzílico, ben- zoato de benzila, propileno glicol, 1,3-butileno glicol, óleos (em particu- lar, óleos de semente de algodão, amendoim, milho, gérmen, oliva, rícino e gergelim), glicerol, álcool de tetra-hidrofurila, polietileno glicóis e ésteres de ácido graxo de sorbitano e misturas dos mesmos.
[00739] Além de diluentes inertes, as composições orais podem também incluir adjuvantes tais como agentes umectantes, agentes emulsificantes e de suspensão, agentes adoçantes, flavorizantes, colo- rantes, aromatizantes e conservantes.
[00740] Suspensões, além dos compostos ativos, podem conter agentes de suspensão como, por exemplo, álcoois de isostearila etoxi- lados, polioxietileno sorbitol e ésteres de sorbitano, celulose microcris- talina, meta-hidróxido de alumínio, bentonita, ágar-ágar e tragacanto e misturas dos mesmos.
[00741] Formulações das composições farmacêuticas para adminis- tração retal, vaginal ou uretral podem ser apresentadas como um su- positório, que pode ser preparado misturando um ou mais compostos ativos com um ou mais excipientes ou transportadores não irritantes adequados compreendendo, por exemplo, manteiga de cacau, polieti- leno glicol, uma cera de supositório ou um salicilato e que é sólido à temperatura ambiente, mas líquido à temperatura corporal e, portanto, irá se fundir no reto ou na cavidade vaginal e liberar o composto ativo.
[00742] Formulações das composições farmacêuticas para adminis- tração na boca podem ser apresentadas como um colutório bucal ou uma aspersão oral ou uma pomada oral.
[00743] Alternativa ou adicionalmente, composições podem ser formuladas para liberação através de um cateter, stent, fio ou outro dispositivo intraluminal. A distribuição através de tais dispositivos pode ser especialmente útil para distribuição para a bexiga, uretra, uréter, reto ou intestino.
[00744] Formulações que são adequadas para administração vagi- nal também incluem pessários, absorventes internos, cremes, géis, pastas, espumas ou formulações de aspersão contendo tais transpor- tadores como são conhecidos na técnica por serem apropriados.
[00745] Formas de dosagem para a administração tópica ou trans- dérmica incluem pós, aspersões, pomadas, pastas, cremes, loções,
géis, soluções, emplastros e inalantes. O composto ativo pode ser mis- turado sob condições estéreis com um transportador farmaceutica- mente aceitável e com quaisquer conservantes, tampões ou propelen- tes que podem ser exigidos.
[00746] As pomadas, pastas, cremes e géis podem conter, além de um composto ativo, excipientes, tais como gordura animal e vegetal, óleos, ceras, parafinas, amido, tragacanto, derivados de celulose, poli- etileno glicóis, silicones, bentonitas, ácido silícico, talco e óxido de zin- co ou misturas dos mesmos.
[00747] Pós e aspersões podem conter, além de um composto ati- vo, excipientes tais como lactose, talco, ácido silícico, hidróxido de alumínio, silicatos de cálcio e pó de poliamida ou misturas destas substâncias. Aspersões podem adicionalmente conter propelentes ha- bituais, tais como clorofluoro-hidrocarbonetos e hidrocarbonetos não substituídos voláteis, tais como butano e propano.
[00748] Emplastros transdérmicos têm a vantagem adicionada de fornecer distribuição controlada de um composto da presente invenção para o corpo. Tais formas de dosagem podem ser feitas dissolvendo ou dispersando o composto ativo no meio apropriado. Acentuadores de absorção podem também ser usados para aumentar o fluxo do composto na pele. A taxa de tal fluxo pode ser controlada ou forne- cendo um membrana de controle de taxa ou dispersando o composto em uma matriz polimérica ou gel.
[00749] Formulações oftálmicas, pomadas para olho, pós, soluções e similares, são também contempladas como estando dentro do esco- po desta invenção. Formulações oftálmicas exemplificativas são des- critas na Publicação U.S. nº 2005/0080056, 2005/0059744, 2005/0031697 e 2005/004074; e Patente US nº 6.583.124, cujo conte- údo está incorporado ao presente documento a título de referência. Se for desejado, formulações oftálmicas líquidas têm propriedades simila-
res àquelas de fluidos lacrimais, humor aquoso ou humor vítreo ou são compatíveis com tais fluidos.
[00750] Os sintagmas "administração parenteral" e "administrado parenteralmente" como usado no presente documento significam mo- dos de administração além da administração enteral e tópica, geral- mente por injeção e incluem, sem limitação, injeção e infusão intrave- nosa, intramuscular, intra-arterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutânea, subcuticular, intra-articular, subcapsular, subaracnoide, intraspinhal e intrasternal.
[00751] Composições farmacêuticas adequadas para administração parenteral compreendem um ou mais compostos ativos em combina- ção com uma ou mais soluções aquosas ou não aquosas isotônicas estéreis farmaceuticamente aceitáveis, dispersões, suspensões ou emulsões ou pós estéreis que podem ser reconstituídas em soluções ou dispersões injetáveis estéreis logo antes do uso, que podem conter antioxidantes, tampões, bacteriostatos, solutos que tornam a formula- ção isotônica com o sangue do recipiendário previsto ou agentes de suspensão ou espessantes.
[00752] Exemplos de transportadores aquosos e não aquosos ade- quados que podem ser usados nas composições farmacêuticas da in- venção incluem água, etanol, polióis (tais como glicerol, propileno gli- col, polietileno glicol e similares) e misturas adequadas dos mesmos, óleos vegetais, tais como óleo de oliva e ésteres orgânicos injetáveis, tais como oleato de etila. A fluidez adequada pode ser mantida, por exemplo, usando materiais de revestimento, tais como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula exigido, no caso de dispersões, e pelo uso de tensoativos.
[00753] Estas composições podem também conter adjuvantes tais como conservantes, agentes umectantes, agentes de emulsificação e agentes dispersantes. A prevenção da ação de micro-organismos po- de ser assegurada pela inclusão de vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabeno, clorobutanol, fenol, ácido sórbico e similares. Pode ser desejável incluir agentes isotônicos, tais como açúcares, cloreto de sódio e similares nas composições. Além disto, a absorção prolongada da formas farmacêutica injetável pode ser provo- cada pela inclusão de agentes que atrasam a absorção tais como mo- noestearato de alumínio e gelatina.
[00754] Em alguns casos, a fim de prolongar o efeito de um fárma- co, é desejável reduzir a absorção do fármaco de injeção intramuscu- lar ou subcutânea. Isto pode ser realizado pelo uso de uma suspensão líquida de material cristalino ou amorfo tendo solubilidade em água ruim. A taxa de absorção do fármaco depende, então, de sua taxa de dissolução, que, por sua vez, pode depender do tamanho do cristal e da forma cristalina. Alternativamente, a absorção atrasada de uma forma de fármaco parenteralmente administrada é realizada dissolven- do ou suspendendo o fármaco em um veículo oleoso.
[00755] Formas de depósito injetáveis são feitas formando matrizes microencapsuladas dos compostos expostos em polímeros biodegra- dáveis tais como polilactídeo-poliglicosídeo. Dependendo da razão en- tre fármaco e polímero e da natureza do polímero particular usado, a taxa de liberação de fármaco pode ser controlada. Exemplos de outros polímeros biodegradáveis incluem poli(ortoésteres) e poli(anidridos). Formulações injetáveis de depósito são também preparadas aprisio- nando o fármaco em lipossomas ou microemulsões que são compatí- veis com o tecido corporal.
[00756] Para uso nos métodos desta invenção, compostos ativos podem ser dados por si só ou como uma composição farmacêutica contendo, por exemplo, 0,1 a cerca de 99,5% (mais preferencialmente, 0,5 a cerca de 90,0%) de ingrediente ativo em combinação com um transportador farmaceuticamente aceitável.
[00757] Em algumas modalidades da invenção, um composto da invenção é administrado conjuntamente com um ou mais compos- tos/agentes adicionais.
[00758] Em certas tais modalidades, a administração conjunta é si- multânea. Em certas tais modalidades, o composto da invenção é co- formulado com um ou mais compostos adicionais. Em certas outras tais modalidades, o composto da invenção é administrado separadamente, mas simultaneamente com um ou mais compostos adicionais. Em certas tais modalidades, a administração conjunta é sequencial, com adminis- tração do composto da invenção precedendo ou seguindo a administra- ção do um ou mais compostos adicionais por minutos ou horas.
[00759] Métodos de introdução de um composto da invenção po- dem ser também fornecidos por dispositivos recarregáveis ou biode- gradáveis. Vários dispositivos poliméricos de liberação lenta foram de- senvolvidos e testados in vivo nos últimos anos para a distribuição controlada de fármacos, incluindo biofarmacêuticos proteináceos. Uma variedade de polímeros biocompatíveis (incluindo hidrogéis), incluindo tanto polímeros biodegradáveis como não degradáveis, pode ser usa- da para formar um implante para a liberação sustentada de um com- posto em um local-alvo particular.
[00760] Níveis de dosagem reais dos ingredientes ativos nas com- posições farmacêuticas podem ser variados de modo a obter uma quantidade do ingrediente ativo que é eficaz para alcançar a resposta terapêutica desejada para um paciente particular, composição e modo de administração, sem ser tóxico para o paciente.
[00761] O nível de dosagem selecionado irá depender de uma vari- edade de fatores incluindo a atividade do conjugado composto particu- lar ou combinação de compostos e/ou conjugados usados ou do éster, sal ou amida do mesmo, da rota de administração, do tempo de admi-
nistração, da taxa de excreção do composto particular (ou compostos) sendo usado, da duração do tratamento, de outros fármacos, compos- tos e/ou materiais usados em combinação com o composto particular (ou compostos) usado, da idade, sexo, peso, condição, saúde geral e histórico médico anterior do paciente sendo tratado e fatores similares bem conhecidos na técnica médica.
[00762] Um médico ou veterinário sendo versado na técnica pode prontamente determinar e prescrever a quantidade terapeuticamente eficaz da composição farmacêutica necessária. Por exemplo, o médico ou veterinário pode iniciar doses da composição farmacêutica ou com- posto em níveis inferiores àqueles exigidos a fim de alcançar o efeito terapêutico desejado e gradualmente aumenta a dosagem até que o efeito desejado seja alcançado. "Quantidade terapeuticamente eficaz" se refere à concentração de um composto que é suficiente para pro- duzir o efeito terapêutico desejado. É geralmente entendido que a quantidade eficaz do composto irá variar de acordo com o peso, sexo, idade e histórico médico do indivíduo. Outros fatores que influenciam na quantidade eficaz podem incluir, sem limitação, a severidade da condição do paciente, o distúrbio sendo tratado, a estabilidade do composto e, se for desejado, outro tipo de agente terapêutico sendo administrado com o composto da invenção. Uma dose total maior pode ser distribuída por múltiplas administrações do agente. Métodos para determinar a eficácia e a dosagem são conhecidos pelos versados na técnica (Isselbacher et al. (1996) Harrison's Principles of Internal Medi- cine 13ª edição, 1814-1882, incorporado ao presente documento a títu- lo de referência).
[00763] Em geral, uma dose diária adequada de um composto ativo usado nas composições e métodos da invenção será aquela quantida- de do composto que é a menor dose eficaz para produzir um efeito terapêutico. Tal dose eficaz geralmente dependerá dos fatores descri-
tos acima.
[00764] Se for desejado, a dose diária eficaz do composto ativo ou conjugado pode ser administrada como uma, duas, três, quatro, cinco, seis ou mais subdoses administradas separadamente em intervalos apropriados ao longo do dia, opcionalmente, em formas de dosagem unitária. Em certas modalidades da presente invenção, o composto ativo pode ser administrado duas ou três vezes ao dia. Em modalida- des preferenciais, o composto ativo será administrado uma vez ao dia.
[00765] O paciente que recebe este tratamento é qualquer animal em necessidade, incluindo primatas, em particular, seres humanos e outros mamíferos tais como equinos, gado, suínos e ovelhas; e aves e animais de estimação em geral.
[00766] Em certas modalidades, compostos ou conjugados descri- tos no presente documento podem ser usados sozinhos ou adminis- trados conjuntamente com outro tipo de agente terapêutico. Como usado no presente documento, a expressão "administração conjunta" se refere a qualquer forma de administração de dois ou mais compos- tos ou conjugados terapêuticos diferentes de tal modo que o segundo composto ou conjugado seja administrado enquanto o composto ou conjugado terapêutico anteriormente administrado ainda seja eficaz no corpo (por exemplo, os dois compostos ou conjugados são simultane- amente eficazes no paciente, que pode incluir efeitos sinérgicos do dois compostos ou conjugados). Por exemplo, os diferentes compos- tos ou conjugados terapêuticos podem ser administrados ou na mes- ma formulação ou em uma formulação separada, concomitante ou se- quencialmente. Em certas modalidades, diferentes conjugados ou compostos terapêuticos podem ser administrados dentro de uma hora, 12 horas, 24 horas, 36 horas, 48 horas, 72 horas, uma semana ou mais um do outro. Assim, um indivíduo que recebe tal tratamento pode se beneficiar de um efeito combinado de diferentes conjugados ou compostos terapêuticos.
[00767] Esta invenção inclui o uso de sais farmaceuticamente acei- táveis de compostos ou conjugados descritos no presente documento. Em certas modalidades, sais contemplados da invenção incluem, sem limitação, sais de alquila, dialquila, trialquila ou tetra-alquil amônio. Em certas modalidades, sais contemplados da invenção incluem, sem limi- tação, sais de L-arginina, benentamina, benzatina, betaína, hidróxido de cálcio, colina, deanol, dietanolamina, dietilamina, 2- (dietilamino)etanol, etanolamina, etilenodiamina, N-metilglucamina, hidrabamina, 1H-imidazol, lítio, L-lisina, magnésio, 4-(2- hidroxietil)morfolina, piperazina, potássio, 1-(2-hidroxietil)pirrolidina, sódio, trietanolamina, trometamina e zinco. Em certas modalidades, sais contemplados da invenção incluem, sem limitação, Na, Ca, K, Mg, Zn ou outros sais metálicos.
[00768] Os sais de adição ácidos farmaceuticamente aceitáveis po- dem também existir como vários solvatos, tais como com água, meta- nol, etanol, dimetilformamida e similares. Misturas de tais solvatos po- dem também ser preparadas. A fonte de tal solvato pode ser do sol- vente de cristalização, inerente no solvente de preparação ou cristali- zação ou acidental para tal solvente.
[00769] Agentes umectantes, emulsificantes e lubrificantes, tais como lauril sulfato de sódio e estearato de magnésio, bem como agen- tes corantes, agentes de liberação, agentes de revestimento, adoçan- tes, agentes flavorizantes e aromatizantes, conservantes e antioxidan- tes podem também estar presentes nas composições.
[00770] Exemplos de antioxidantes farmaceuticamente aceitáveis incluem: (1) antioxidantes solúveis em água, tais como ácido ascórbi- co, cloridrato de cisteína, bissulfato de sódio, metabissulfito de sódio, sulfito de sódio e similares; (2) antioxidantes solúveis em óleo, tais como palmitato de ascorbila, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolue-
no butilado (BHT), lecitina, galato de propila, alfa-tocoferol e similares; e (3) agentes quelantes de metal, tais como ácido cítrico, ácido etile- nodiamina tetra-acético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfóri- co e similares.
[00771] A invenção agora sendo descrita de modo geral, a mesma será mais prontamente entendida por referência aos seguintes exem- plos, que estão incluídos meramente para propósitos de ilustração de certos aspectos e modalidades da presente invenção e não se desti- nam a limitar a invenção.
EXEMPLIFICAÇÃO PROTOCOLOS SINTÉTICOS
ABREVIAÇÕES AcO: acetila AcOH: ácido acético EA: acetato de etila DCM: diclorometano m-CPBA: ácido meta-cloroperoxibenzoico TBDMSOTf: triflato de terc-butildimetilsilila TBDMS: terc-Butildimetilsilila DMF: Dimetilformamida EDCI: 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida HOBt: Hidrato de 1-hidroxibenzotriazol ACN: Acetonitrila TBDMS-Cl: cloreto de terc-butildimetilsilila DBU: 1,8-Diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno THF: Tetra-hidrofurano DCC: N,N'-Diciclo-hexilcarbodiimida DMAP: 4-Dimetilaminopiridina NHS: N-hidroxissuccinimida DIPEA: Di-isopropiletilamina
TEA: trietilamina DEAD: azodicarboxilato de dietila Boc: terc-butiloxicarbonila LAH: hidreto de lítio e alumínio CDI: 1,1'-Carbonildi-imidazol BEMP: 2-terc-butilimino-2-dietilamino-1,3-dimetilper-hidro-1,3,2- diazafosforina TPSCl: Trifenilclorossilano tfa: Trifluoroacetila PyBop: hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxitripirrolidinofosfônio HBTU: hexafluorofosfato de N,N,N′,N′-tetrametil-O-(1H-benzotriazol-1- il)urônio TFA: Ácido trifluoroacético DIC: N,N'-Di-isopropilcarbodiimida DMPA: 2,2-Dimetóxi-2-fenilacetofenona TBAF: Fluoreto de Tetra-n-butilamônio AgOTf: Trifluorometanossulfonato de prata (BimC4A)3: 5,5',5''-[2,2',2''-nitrilotris(metileno)tris(1H-benzimidazol-2,1- diil)]tripentanoato hidrato de tripotássio [EXEMPLO 1] PREPARAÇÃO DE INT-TG
[00772] O pentaacetato de β-D-galactose (Alfa, CAS 4163-60-4, 5,0 g, 12,81 mmol) foi dissolvido em 33% de HBr em AcOH (20 ml) a 0 °C sob atmosfera de N2. A mistura foi amornada até a temperatura ambi- ente. Após agitação à temperatura ambiente por 4 horas, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida, e então EA (1000 ml) e bicarbona- to de sódio saturado (1000 ml) foram adicionados. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão re-
duzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para ob- ter o composto Int-TG (5,2 g, 99%).
[00773] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 6,70 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 5,52 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,41 (dd, J = 7,6, 2,8 Hz, 1H), 5,05 (dd, J = 6,4, 4,0 Hz, 1H), 4,49 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 4,22-4,09 (m, 2H), 2,16 - 2,01 (m, 12H). [EXEMPLO 2] PREPARAÇÃO DO COMPOSTO FA-INT
[00774] O composto FA-Int foi obtido por um método semelhante aos métodos descritos na Publicação do Pedido de Patente US Nº 2007/0276018, que é incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. [EXEMPLO 3] PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INTC-L-1 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INTCL-L-1A
[00775] A uma solução de 2,2-(etilenodióxi)bis(etilamina) (50 g, 337,4 mmol) in DCM (300 ml) foi adicionado Boc2O (14,7 g, 67,47 mmol) em DCM (200 ml) sob atmosfera de N2. A mistura foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente e arrefecida bruscamente comH2O (500 ml) e salmoura (150 ml X 3). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. Após concentração, o composto IntCl-L-1a foi usado diretamente na reação seguinte sem purificação (13,01 g, 78%).
[00776] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 5,20 (s, 1H), 3,62-3,62 (m, 4H), 3,55-3,51 (m, 4H), 3,35-3,25 (m, 2H), 2,90-2,87 (m, 2H), 1,45 (s, 9H). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INTCL-L-1B
[00777] A uma solução do composto IntCl-L-1a (6 g, 24,16 mmol) e z-L-Glu-OMe (5,94 g, 20,13 mmol) em DMF (30 ml) adicionou-se PyBOP (15,72 g, 30,20 mmol) e DIPEA (10,52 ml, 60,39 mmol) a 0 °C sob atmosfera de N2. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas. EA (20 ml X 6), H2O (20 ml) e salmoura (200 ml) foram adici- onados à mistura. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para obter o composto IntCl-L-1b (10,6 g, quant.).
[00778] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,40-7,28 (m, 5H), 6,32 (s, 1H), 5,80 (s, 1H), 5,11 (s, 2H), 5,02 (s, 1H), 4,36 (s, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,60 (s, 4H), 3,54 (s, 4H), 3,44-3,43 (m, 2H), 3,38-3,21 (m, 2H), 2,30- 2,20 (m, 3H), 2,04-2,00 (m, 1H), 1,76 (s, 1H), 1,44 (s, 9H). EI-MS m/z: 526 (M+). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INTCL-L-1C
[00779] A uma solução de composto IntCl-L-1b (3 g, 5,71 mmol) in MeOH (25 ml), foi adicionado Pd/C (900 mg) à temperatura ambiente sob H2. A mistura foi agitada por 3 horas e filtrada através de Celite® e, então, concentrada sob pressão reduzida. O composto IntCl-L-1c foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional (2,23 g, bruto).
[00780] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 6,56 (s, 1H), 5,20 (s, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,61 (s, 4H), 3,57-3,55 (m, 4H), 3,53-3,50 (m, 1H), 3,48- 3,44 (m, 4H), 2,40-2,32 (m, 2H), 2,18-2,10 (m, 1H), 1,88-1,81 (m, 1H), 1,44 (s, 9H). EI-MS m/z: 392 (M+). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INTCL-L-1D
[00781] A uma solução de composto IntCl-L-1c (2,23 g, 5,71 mmol) e composto FA-Int (2,12 g, 5,19 mmol) em DMF (15 ml) adicionou-se HBTU (2,36 g, 6,23 mmol) e DIPEA (1,36 ml, 7,78 mmol) a 0 °C sob atmosfera de N2. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 2,5 horas e EA (100 ml × 7) e H2O (100 ml) foram adicionados. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para obter o composto IntCl-L-1d (4,06 g, quant.).
[00782] RMN de 1H (400Hz, DMSO-d6) δ 8,89 (d, J =7,6 Hz, 1H), 8,63 (s, 1H), 7,90 (d, J =8 Hz, 2H), 7,64 (d, J =8,4 Hz, 2H), 6,76-6,75 (m, 1H), 5,12 (s, 1H), 4,41-4,36 (m, 1H), 3,64 (s, 3H), 3,47 (s, 4H), 3,39-3,35 (m, 4H), 3,20-3,12 (m, 2H), 3,07-3,02 (m, 2H), 2,23 (t, J =7,4 Hz, 2H), 2,09-2,06 (m, 1H), 1,96-1,91 (m, 1H), 1,36 (s, 9H). EI-MS m/z: 782 (M+). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INTCL-L-1
[00783] A uma solução de composto IntCl-L-1d (4,68 g, 5,99 mmol) em DCM (50 ml) TFA (10 ml) foi adicionado em gotas a 0 °C. A reação foi deixada aquecer até a temperatura ambientee agitada por 3 horas. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida e usada diretamente na próxima etapa sem purificaçãoadicional (4,08 g, bruto).
[00784] EI-MS m/z: 682 (M+). [EXEMPLO 4] PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INTC-L
O O O
H H NH2 N N
O O HO
O + O O
HO HCl NH NH K-1 NH Boc Boc Boc K-2 O CO2Me O
O H
O N N N H H + O N N NH2 O
HN N O O 2 tfa O H2N N N IntC-L-1
NH K Boc Boc
NH O CO2Me
O N O H H H N N N
HN N O N 2 H tfa O O H 2N N N IntC-L-2 Boc
NH O CO2Me
O N O H H H N N N
HN N O N H 2 H
O O H 2N N N IntC-L-3 NH2
O OH O O N O H H H N N N
HN N O N H 2 H
O O H 2N N N IntC-L PREPARAÇÃO DE COMPOSTO K-1
[00785] A uma solução de L-Lys(Boc)-OMe (3 g, 10,11 mmol) e áci- do 4-pentinoico (992 mg, 10,11 mmol) em DMF (30 ml), foi adicionado numa porção PyBop (7,89 g, 15,16 mmol) seguido por DIPEA (5,26 ml, 30,32 mmol) a 0°C sob atmosfera de N2. A mistura foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. EA (80 ml X 4) e ácido cítrico saturado (60 ml) foram adicionados à mistura e a camada orgânica foi lavada com NaHCO3 (120 ml), salmoura (100 ml), seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi puri- ficado por cromatografia em coluna para fornecer o composto K-1 (3,29 g, 95 %).
[00786] EI-MS m/z: 341 (M+).
PREPARAÇÃO DE COMPOSTO K-2
[00787] A uma solução de composto K-1 (3,29 g, 9,66 mmol) em MeOH (15 ml) a 0 ° C sob atmosfera de N2 foi adicionadoLiOH ∙ H2O (2,03 g, 48,32 mmol) dissolvido em H2O (15 ml).
[00788] A mistura foi agitada a 0 ° C por 30 minutos, e aquecida para a temperatura ambiente por 2 horas. A mistura foi acidificada com solução aquosa saturada de ácido cítrico, e EA (40 ml X 2) foi adicio- nado à mistura. A camada orgânica foi lavada com H2O (30 ml) e sal- moura (30 ml), seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O composto K-2 foi usado diretamente na etapa se- guinte sem purificação adicional (3,15 g, bruto).
[00789] EI-MS m/z: 327 (M+).
PREPARAÇÃO DE COMPOSTO K
[00790] A uma solução de composto K-2 (3,69 g, 11,31 mmol) em DMF (20 ml), foram adicionados NHS (1,69 mg, 14,7 mmol) e EDCI (2,93 g, 15,26 mmol) sob atmosfera de N2. A mistura foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente e então concentrada. O resí- duo, composto K, foi usado diretamente na etapa seguinte sem purifi- cação adicional (4,79 g, bruto).
[00791] EI-MS m/z: 446 (M++Na). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INTC-L-2
[00792] A uma solução de composto IntC-L-1 (4,08 g, 5,99 mmol) e composto K (4,79 g, 11,31 mmol) em DMF (25 ml), foi adicionado DI- PEA (5,21 ml, 29,93 mmol) sob atmosfera de N2. A mistura foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. H2O (70 ml) e salmou- ra (60 ml) foram adicionados à mistura e extraídos com EA (70 ml X 7). E a camada orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concen- trada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto IntC-L-2 (1,12 g, 19%).
[00793] EI-MS m/z: 991 (M+).
PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INTC-L-3
[00794] A uma solução de composto IntA-L-2 (1,12 g, 1,13 mmol) em MeOH (27 ml), foi adicionado LiOH∙H2O (356 mg, 8,48 mmol) dis- solvido em H2O (10 ml) a 0°C sob atmosfera de N2. A mistura foi agi- tada a 0 ° C por 30 minutos, e aquecida para a temperatura ambiente por 3 horas. A mistura foi acidificada com HCl 2 M e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo, composto- IntC-L-3, foi usado diretamen- te na etapa seguinte sem purificação adicional (996 mg, bruto).
[00795] EI-MS m/z: 880 (M+). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INTC-L
[00796] A uma solução de composto IntC-L-3 (996 mg, 1,13 mmol) em DCM (30 ml) foi adicionado TFA (8 ml) a 0 °C sob atmosfera de N2. Após a agitação 0°C por 1 hora, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em DMSO (5 ml) e purificado por HPLC preparatória, que produziu o composto IntC-L (409 mg, 32%).
[00797] EI-MS m/z: 780 (M+). [EXEMPLO 5] PREPARAÇÃO DO COMPOSTO MPS-D1 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO MPS-D1A
[00798] A uma solução de ácido 4-acetilbenzoico (9 g, 54,82 mmol) em EtOH (50 ml) foi adicionado cloridrato de piperidina (6,66 g, 54,82 mmol), paraformaldeído (4,95 g, 164,5 mmol) e HCl conc. (0,6 ml) à temperatura ambiente sob atmosfera de N2. A mistura foi agitada a 100 °C por 16 horas e resfriado até a temperatura ambiente. Acetona (90 ml) foi adicionada em gotaspara a mistura. A mistura foi agitada a 0°C por 1 hora. O sólido foi filtrado e lavado com éter dietílico (30 ml X 2)
para fornecer o composto MPS-D1a (6,11 g, 38%).
[00799] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,08 (s, 4H), 5,73 (s, 1H), 3,65 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 3,35 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 3,31 (m, 6H), 1,74 (s, 4H). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO MPS-D1B
[00800] A uma solução de MPS-D1a (6,11 g, 20,52 mmol) em EtOH (40 ml) e MeOH (26 ml), foi adicionado 4-metoxibenzenotiol (2,55 g, 20,52 mmol) e piperidina (0,3 ml, 3,08 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada a 100 °C por 16 horas, depois resfriado até 0 °C e Além disso agitado durante 1 hora. O sólido foi filtrado e lavado com éter (30 ml X 2) para fornecer o composto MPS-D1b (5,56 g, 90%).
[00801] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,04-7,99 (m, 4H), 7,27 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 3,39-3,36 (m, 2H), 3,25-3,21 (m, 2H), 2,27 (s, 3H). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO MPS-D1
[00802] A uma solução de MPS-D1b (5,56 g, 18,51 mmol) em MeOH (90 ml) e água destilada (90 ml) foi adicionado oxona (25,03 g, 40,72 mmol) a 0 °C sob atmosfera de N2. Após agitação à temperatura ambiente por 14 horas, a mistura foi bruscamente arrefecida com água destilada (100 ml) e clorofórmio (150 ml X 3). A camada orgânica foi lavada com salmoura (200 ml), seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer o composto MPS-D1 (5,29 g, 86 %).
[00803] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,04-7,99 (m, 4H), 7,81 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,46 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 3,63 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 3,41 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,44 (s, 3H). EI-MS m/z: 333 (M+). [EXEMPLO 6] PREPARAÇÃO DO COMPOSTO MPS-D2
PREPARAÇÃO DE COMPOSTO L-1A
[00804] A uma solução de hexaetileno glicol (5,0 g, 17,71 mmol) em DCM anidro (178 ml), foram adicionados KI (294 mg, 1,77 mmol) e Ag2O (4,92 g, 19,48 mmol) sob atmosfera de N2. A mistura foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após a reação ter sido concluída, a mistura foi filtrada através de Celite® e lavada com DCM (100 ml). O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto L-1a (5,98 g, 73%).
[00805] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,80 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 4,16 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 3,71-3,58 (m, 22H), 2,88 (br, 1H), 2,45 (s, 3H). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO L-1B
[00806] A uma solução de composto L-1a (5,98 g, 13,7 mmol) e DMF (30 ml), foi adicionado NaN3 (1,34 g, 20,55 mmol) sob atmosfera de N2. A mistura foi agitada a 110 °C por 1 hora e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto L-1b (4,1 g, 97%).
[00807] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 3,72-3,60 (m, 22H), 3,39 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 2,78 (br, 1H).
PREPARAÇÃO DE COMPOSTO L-1C
[00808] A uma solução de composto L-1b (2 g, 6,51 mmol) em ace- tona (56 ml) adicionou-se lentamente gota a gota a solução de rea- gente de Jones (5 ml) a -5 °C sob atmosfera de N2. A mistura foi agita- da à temperatura ambiente por 2 horas e filtrada através de celite, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O filtrado foi diluído com DCM (20 ml × 2) e água (5 ml). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para obter o composto L-1c (1,85 g, 89 %).
[00809] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 4,15(s, 2H), 3,76-3,67 (m, 18H), 3,40 (t, J = 4,8 Hz, 2H). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO L-1D
[00810] A uma solução de composto L-1c (500 mg, 1,56 mmol) em DCM (10 ml), foi adicionado t-BuOH (305 µl, 3,11 mmol), DIC (292,5 µl, 1,87 mmol) e DMAP (19mg, 0,16 mmol) sob atmosfera de N2. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 4 horas e diluída com DCM (30 ml × 2). A camada orgânica foi lavada com água (5 ml), seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer o composto L-1d (278,5 mg, 47 %).
[00811] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 4,01 (s, 2H), 3,70-3,66 (m, 18H), 3,38 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 1,47 (s, 9H). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO L-1E
[00812] A uma solução de composto L-1d (278 mg, 0,74 mmol) um EtOH (5 ml), foram adicionados Pd/C (236 mg, 0,11 mmol) e HCl 4 M (em 1,4-dioxano) sob atmosfera de N2. A mistura foi agitada à tempe- ratura ambiente por 1 hora. A mistura foi filtrada através de Celite® para remover Pd/C, e concentrada para fornecer o composto L-1e (255,3 mg, 89,2%).
[00813] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,32 (s, 1H), 3,98(s, 2H), 3,55-3,40 (m, 18H), 3,86 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,70-2,64 (m, 2H), 1,42 (s, 9H). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO MPS-D2
[00814] A uma solução de composto L-1e (255,3 mg, 0,66 mmol) e composto MPS-D1 (240,6 mg, 0,72 mmol) em DMF (6 ml), foram adi- cionados HBTU (300 mg, 0,79 mmol) e DIPEA (229,3 µl, 1,32 mmol) sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas e diluída com EA (20 ml × 2) e água (5 ml). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para fprmecer o composto MPS-D2 (306 mg, 71%).
[00815] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,95 (s, 4H), 7,82 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,38 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,33-7,30 (m, 1H), 3,98 (s, 2H), 3,68-3,63 (m, 18H), 3,55-3,53 (m, 2H), 3,49-3,47 (m, 2H), 2,95 (s, 1H), 2,88 (s, 1H), 2,46 (s, 3H) 1,46 (s, 9H). EI-MS m/z: 666(M++1). [EXEMPLO 7] PREPARAÇÃO DO COMPOSTO MPS-D4
PREPARAÇÃO DE COMPOSTO MPS-D3
[00816] A uma solução de composto MPS-D2 (120 mg, 0,18 mmol) em DCM (8 ml) foi adicionado TFA (4 ml) a 0 °C. A reação foi deixada aquecer à temperatura ambiente ao longo de 2 horas sob atmosfera de N2. Após a reação ter sido concluída, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida três vezes usando tolueno como um cossolvente, removendo, assim, TFA. Então, a mistura foi dissolvida em DMF no- vamente, e NHS (31 mg, 0,27 mmol) e EDCI (52 mg, 0,27 mmol) foram adicionados à mesma. A mistura foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após a reação ter sido concluída, o composto MPS-D3 foi usado diretamente na etapa seguinte sem purificação adi- cional (127 mg, bruto).
[00817] EI-MS m/z: 707 (M+). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO MPS-D4
[00818] A uma solução de composto IntC-L (60 mg, 0,08 mmol) e composto MPS-D3 (82 mg, 0,12 mmol) em DMF (6 ml), foi adicionado DIPEA (112 μl, 0,64 mmol) sob atmosfera de N2. A mistura foi agitada por 30 minutos e dissolvida em DMSO (3 ml) e purificada por HPLC, que produziu o composto MPS-D4 (77 mg, 73%).
[00819] EI-MS m/z: 1373 (M+). [EXEMPLO 8] PREPARAÇÃO DO COMPOSTO MPS-D5
[00820] A uma solução de composto MPS-D1 (500 mg, 1,50 mmol) em DMF (8 ml), foi adicionada propargil amina (106 μl, 1,65 mmol) à temperatura ambiente sob atmosfera de N2. A reação foi resfriada a 0°C, e PyBop (1,17 g, 2,26 mmol) e DIPEA (524 μl, 3,01 mmol) foram adicionados à mesma. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas e diluída com EA (30 ml × 2) e água destilada (20 ml). A camada orgânica foi extraída e lavada com salmoura (50 ml), seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para fprmecer o composto MPS-D5 (510 mg, 92 %).
[00821] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 9,11 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 7,98-7,89 (m, 4H), 7,79 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,43 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 4,05-4,03 (m, 2H), 3,60 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 3,39 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 3,12 (s, 1H), 2,38 (s, 3H). [EXEMPLO 9] PREPARAÇÃO DO COMPOSTO A-15-1 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO A-15-1A
[00822] A uma solução de z-Valina (1,01 g, 3,81 mmol) e N- metilanilina (412 μl, 3,81 mmol) em DCM (15 ml), foram adicionados DCC (1,18 g, 5,71 mmol) e DMAP (92 mg, 0,76 mmol) à temperatura ambiente sob atmosfera de N2, seguida por agitação à temperatura ambiente por 3 horas. A mistura foi filtrada através de Celite® e con- centrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromato- grafia em coluna para obter cromatografia em coluna para fornecer o composto A-15-1a (1,05 g, 78%).
[00823] EI-MS m/z: 584(M+). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO A-15-1B
[00824] O composto A-15-1a (1,05 g, 2,96 mmol) foi dissolvido em MeOH (15 ml) sob uma atmosfera de nitrogênio, Pd/C (378 mg, 0,18 mmol) foi adicionado. Após agitação à temperatura ambiente por 2 ho- ras sob H2, a mistura foi filtrada através de Celite® e lavada com
MeOH (30 ml). O filtrado foi concentrado para fornecer o composto A- 15-1b (560 mg, 86,0%).
[00825] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,45-7,41 (m, 2H), 7,38- 7,36 (m, 1H), 7,19 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 3,32 (s, 3H), 2,88 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 1,73 (q, J = 6,8 Hz, 1H), 0,86 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,80 (d, J = 6,8 Hz, 3H). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO A-15-1
[00826] A uma solução de composto A-15-1b (220 mg, 0,99 mmol) em DMF (8 ml), foi adicionado 37% de formaldeído (223 μl, 2,99 mmol) e AcOH (1,14 ml, 19,8 mmol) sob atmosfera de N2. Após agitação à temperatura ambiente por 5 minutos, NaCNBH3 (125 mg, 1,98 mmol) foi adicionado. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 2 ho- ras e bruscamente arrefecida com NaHCO3 saturado (15 ml X 2). À mistura, foram adicionados EA (20 ml X 2) e salmoura (20 ml). A ca- mada orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para obter cromatografia em coluna para fornecer o composto A-15-1 (189 mg, 81 %).
[00827] EI-MS m/z: 235(M+). [EXEMPLO 10] PREPARAÇÃO DO COMPOSTO POS-D1 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO POS-D1A
[00828] A uma solução de 4-hidrobenzoato de etila (20 g, 120,35 mmol) em EtOH (60 ml), foi adicionado NH2NH2∙H2O (88 ml, 1805,4 mmol) sob atmosfera de N2. A mistura foi agitada de um dia para o ou- tro em refluxo. Após a reação ter sido concluída, a mistura foi resfriada à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida, seguida por trituração de EtOH, obtendo, assim, o composto POS-D1a (17,539 g, 96%).
[00829] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,50 (s, 1H), 7,68 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,78 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 4,37 (s, 2H). EI-MS m/z: 431(M+). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO POS-D1B
[00830] A uma solução de composto POS-D1a (17,54 g, 115,28 mmol) em EtOH (200 ml) e DMF (100 ml), foram adicionados CS2 (45 ml, 749,32 mmol) e KOH (6,5 g, 115,28 mmol) sob atmosfera de N2. Após agitação a 85 ° C por 18 horas, EA (500 ml) e H2O (500 ml) fo- ram adicionados à mistura, que foi, então, acidificado com HCl 1M. A camada orgânica foi lavada com H2O (500 ml) e salmoura (500 ml), seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido a trituração de éter/hexano para fornecer o composto POS-D1b (20,7 g, 93%).
[00831] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,44 (s, 1H), 7,72 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,94 (d, J = 8,0 Hz, 2H). EI-MS m/z: 195(M+). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO POS-D1C
[00832] A uma solução de composto POS-D1b (5 g, 25,75 mmol) em THF (100 ml) foi adicionado em gotasEt 3 N (4,3 ml, 30,9 mmol) e MeI (1,76 ml, 28,33 mmol) a 0 °C. Após agitação a 0 °C por 10 minu- tos, a mistura foi aquecida para a temperatura ambiente. E, então, a mistura foi agitada por 2 horas e diluída com EA (100 ml X 2). A cama- da orgânica foi lavada com H2O (100 ml) e salmoura (100 ml), seca com Na2SO4 anidro, filtrada, e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido a trituração de éter para fornecer o composto POS-D1c (5,15 g, 96%).
[00833] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,80 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,94 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 2,74 (s, 3H). EI-MS m/z: 209(M+). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO POS-D1D
[00834] A uma solução de composto POS-D1c(3,2 g, 15,37 mmol) em EtOH (150 ml), foram adicionados 70% de m-CPBA (11,4 g, 46,11 mmol) a 0 °C sob atmosfera de N2. Após agitação à temperatura am- biente por 5 horas, 70% de m-CPBA (11,4 g, 46,11 mmol) foram, ain- da, adicionados. Então, a mistura foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente e bruscamente arrefecida com H2O (500 ml), NaHCO3 saturado (300 ml), diluída com EA (500 ml X 2). A camada orgânica foi lavada com salmoura (300 ml), seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido a trituração de HX/EA = 1: 1 (100 ml) para fornecer o composto POS- D1d (3,2 mg, 89%).
[00835] RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,95 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,01 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 3,69 (4s, 3H). EI-MS m/z: 241(M+). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO POS-D1
[00836] A uma solução de tetraetileno glicol (17,3 ml, 0,10 mol) em THF (50 ml) adicionou-se em gotas NaH (2,6 g, 0,065 mmol) a 0 °C. Após a mistura foi agitada a 0 °C por 1 hora, brometo de propargila (5,95 g, 0,05 mol) foi adicionado. A mistura foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente e bruscamente arrefecida com ge- lo/água, diluída com EA (100 ml X 2). A camada orgânica foi lavada com H2O (100 ml) e salmoura (100 ml), seca com Na2SO4 anidro, fil- trada e concentrada sob pressão reduzida. 3,6,9,12-tetraoxapentadec- 14-in-1-ol foi obtido por trituração do resíduo com éter (5,87 g, 51%).
[00837] RMN de 1H (400 MHz, CDCl 3) δ 4,21 (s, 2H), 3,73-3,66 (m, 14H), 3,59-3,61 (m, 2H), 2,60 (s, 1H), 2,42 (t, J = 2,4 Hz, 1H).
[00838] 3,6,9,12-Tetraoxapentadec-14-in-1-ol (660 mg, 2,84 mmol) e composto D-4-5 (310 mg, 1,29 mmol) foram dissolvidos em THF (8 ml) e DMF (0,8 ml), e PPh3 (667 mg, 2,58 mmol) foi adicionado. A mis- tura foi resfriada até 0 °C. 2,2 M DEAD (1,17 ml, 2,58 mmol) foi adicio- nado ao mesmo, e a mistura foi agitada a 0 °C por 3 horas. Após a re-
ação ter sido concluída, EA (15 ml × 2) e água destilada (15 ml) foram adicionados, e a camada orgânica foi extraída e lavada com salmoura (20 ml). A camada orgânica obtida foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer o composto POS- D1 (205 mg, 30%).
[00839] EI-MS m/z: 455(M+). [EXEMPLO 11] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-TG13
[00840] A uma solução de composto (1R,2S)-(-)-Norefedrina (1 g, 6,61 mmol) em DCM (5 ml), foram adicionados TEA (0,92 ml, 6,61 mmol) e cloreto de acetila (0,47 ml, 6,61 mmol) a 0°C sob atmosfera de N2. Após agitação à temperatura ambiente por 2 horas, a mistura foi bruscamente arrefecida com H2O (7 ml). A camada orgânica foi extraí- da com DCM (2 x 8 ml), seca com MgSO4anidro, filtrada e concentra- da. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para produzir o composto Int-TG13 (987 mg, 78%).
[00841] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,28 (m, 5H), 5,70 (m, 1H), 4,86 (s, 1H), 4,34-4,30 (m, 1H), 3,65 (m, 1H), 2,00(s, 3H), 1,01 (d, J = 7,2 Hz, 3H) [EXEMPLO 12] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INTB-Q3 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INTB-Q3-1
[00842] A uma solução de PNU-1529682 (52 mg, 0,081 mmol) em
MeOH (5 ml) / água destilada (3 ml), foi adicionado NaIO4 (18 mg, 0,081 mmol) à temperatura ambiente. Após agitação 2 horas, a mistu- ra foi concentrada sob pressão reduzida, que produziu o composto IntB-Q3-1 bruto (51 mg, 99%). EI-MS m/z: 628 (M+1). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INTB-Q3
[00843] A uma solução de composto IntB-Q3-1 (51 mg, 0,081 mmol) em DCM seco (5 ml), foram adicionados 2-(Dimetilamino)etil amina (6,1 µl, 0,089 mmol) e TEA (34 µl, 0,243 mmol), TBTU (52 mg, 0,162 mmol) à temperatura ambiente. Após agitação por 1 hora, a mis- tura foi diluída com DCM (2 x 8 ml). A camada orgânica foi lavada com H2O (8 ml), seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pres- são reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna pa- ra produzir o composto IntB-Q3 (38 mg, 67%).
[00844] EI-MS m/z: 698 (M+1). [EXEMPLO 13] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO L-2
[00845] O Composto L-2 foi sintetizado por uma rota sintética seme- lhante às sínteses descritas no Journal of Polymer Science, Part A: Polymer Chemistry, 2012, 50(19), 3986-3995. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO L-2A
[00846] Rendimento 30 %
[00847] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,80 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,34 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 4,16 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 3,74-3,58 (m, 14H), 2,45 (s, 3H). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO L-2B
[00848] Rendimento 68%
[00849] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 3,74-3,61 (m, 14H), 3,40 (t,
J = 4,8 Hz, 2H), 2,45 (t, J = 6,0 Hz, 1H). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO L-2C
[00850] Rendimento 63%
[00851] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 4,21 (d, J = 2,4 Hz, 2H), 3,72-3,67 (m, 14H), 3,39 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 2,43 (t, J = 2,4 Hz, 1H). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO L-2
[00852] Rendimento 76%
[00853] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 4,20 (d, J = 2,4 Hz, 2H), 3,71-3,61 (m, 12H), 3,51 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 2,87 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,43 (t, J = 2,4 Hz, 1H). [EXEMPLO 14] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO L-3
[00854] O composto L-3 foi sintetizado por uma via sintética seme- lhante às sínteses descritas em Journal of Organic Chemistry, 2002, 67, 5032-5035. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO L-3A
[00855] Rendimento 92 %
[00856] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 10,08 (s, 1H), 7,97(q, J = 8,8 Hz, 8,8 Hz, 4H), 7,16 (brs, 1H), 4,14(d, J = 2,4 Hz, 2H), 3,70-3,62 (m, 16H), 2,41 (t, J = 2,4 Hz, 1H). EI-MS m/z: 384(M+1) PREPARAÇÃO DE COMPOSTO L-3B
[00857] Rendimento 69 %
[00858] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,82(d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,60(d, J = 7,6 Hz, 2H), 6,88 (brs, 1H), 5,47 (brs, 1H), 4,14(d, J = 2,4 Hz, 2H), 3,70-3,63 (m, 16H), 2,42 (brs, 1H), 2,19 (s, 3H). EI-MS m/z: 404 (M+1) PREPARAÇÃO DE COMPOSTO L-3
[00859] Rendimento 81 %
[00860] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,19(d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,92(d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,07 (brs, 1H), 4,16(s, 2H), 3,70-3,49 (m, 16H), 2,42 (brs, 1H), 2,19 (s, 3H). EI-MS m/z: 402(M+1) [EXEMPLO 15] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO L-4
[00861] O composto L-4 foi sintetizado por uma via sintética seme- lhante às sínteses descritas em Journal of Medicinal Chemistry, 52(19), 5816-5825; 2009. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO L-4A
[00862] Rendimento 55%
[00863] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 4,21 (d, J = 2,0 Hz, 2H), 3,72-3,60 (m, 24H), 2,79 (brs, 1H), 2,43 (t, J = 2,4 Hz, 1H). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO L-4
[00864] EI-MS m/z: 400(M+1) [EXEMPLO 16] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO MPS-D6
[00865] O Composto L-5 foi sintetizado por meio de uma rota sinté-
tica semelhante às sínteses descritas no Exemplo 44 e Exemplo 45. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO MPS-D6A
[00866] Rendimento 91%
[00867] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,80 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 4,16 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 3,70-3,61 (m, 20H), 3,39 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 2,45 (s, 3H). EI-MS m/z: 462(M+1) PREPARAÇÃO DE COMPOSTO MPS-D6B
[00868] Rendimento 93%; EI-MS m/z: 610(M+1) PREPARAÇÃO DE COMPOSTO MPS-D6C
[00869] Rendimento 54%. EI-MS m/z: 584 (M+1) PREPARAÇÃO DE COMPOSTO MPS-D6
[00870] Rendimento 72 %; EI-MS m/z: 899(M+1) [EXEMPLO 17] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO MPS-D7
[00871] O composto MPS-D7 foi sintetizado por meio de uma via sintética semelhante às sínteses descritas no Exemplo 28.
[00872] Rendimento 80%; EI-MS m/z: 546(M+1)
[00873] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,11-7,94(m, 4H), 7,83(d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,44 (brs, 1H), 7,38(d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,15(s, 2H), 3,69- 3,65 (m, 14H), 3,58-3,48(m, 4H), 2,80 (s, 1H), 2,46(s, 3H). [EXEMPLO 18] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO IntB-Q10
PREPARAÇÃO DE COMPOSTO IntB-Q10-1
[00874] O composto IntB-Q10-1 foi sintetizado por meio de uma via sintética semelhante às sínteses descritas em Mol. Pharmaceutics 2015, 12, 1813-1835. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO IntB-Q10-2
[00875] O composto IntB-Q10-2 foi sintetizado por meio de uma ro- ta sintética semelhante às sínteses descritas em Angew. Chem. Int. Ed. 2010, 49, 7336-7339 e Publicação do Pedido de Patente Internaci- onal WO 2015/110935A1, que é incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO IntB-Q10-3
[00876] A uma solução de Composto IntB-Q 10 - 1 (80 mg, 0,239 mmol) e composto IntB-Q10-2 (118 mg, 0,239 mmol) em DCM (10 ml) foi adicionado uma peneira molecular e BF3 OEt 2 (14,8 µl, 0,12 mmol) a 0 ℃ sob atmosfera de N2. Após agitação durante 2 horas, a mistura foi filtrada através de Celite®, lavada com DCM (50 ml), e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para fornecer IntB-Q composto 10-3 (105 mg, 66 %) como uma espuma branca.
[00877] RMN de 1H (400 MHz, CDCl 3) δ 8,12 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,89 (brs, 1H), 7,63 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,50 (m, 1H), 7,35 (m, 1H), 5,70 (m, 1H), 5,51 (s, 1H), 5,33 (m, 1H), 5,20 (m, 1H), 4,23 (m, 3H), 4,11 (m, 2H), 3,93 (m, 2H), 3,42 (t, J = 10,8 Hz, 1H), 2,18 (s, 3H), 2,08 (s, 3 H), 2,04 (s, 3 H), 2,00 (s, 3 H), 1,55 (s, 9 H) EI-MS m/z: 564,4(M+1). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INTB-Q10-4
[00878] O composto IntB-Q10-3 (100 mg, 0,15 mmol) foi dissolvido em DCM (2 ml) e, então, HCl 4 N em 1,4-dioxano (1 ml) foi adicionado à solução a 0°C sob atmosfera de N2. Após agitação por 4 horas, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida.
[00879] A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 4 horas sob N2. O composto IntB-Q10-4 foi usado diretamente na eta- pa seguinte sem purificação adicional (90 mg, 99%).
[00880] EI-MS m/z: 564,2(M+1). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INTB-Q10
[00881] A uma solução de composto IntB-Q10-4 (90 mg, 0,149 mmol) em THF (5 ml), foi adicionado anidrido glutárico (18,8 µl, 0,164 mmol), Et3N (52 µl, 0,373 mmol) e 4-DMAP (2 mg, 0,015 mmol) à tem- peratura ambiente sob atmosfera de N2. A mistura de reação foi agita- da à temperatura ambiente por 2 horas e purificada por HPLC prepara- tória, gerando o composto IntB-Q10 (30 mg, 30%) como um sólido branco.
[00882] EI-MS m/z: 678,3(M+1). [EXEMPLO 19] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INTB-Q13
[00883] O composto IntB-Q13 foi sintetizado por meio de uma via sintética semelhante às sínteses descritas em Mol. Pharmaceutics 2015, 12, 1813-1835. [EXEMPLO 20] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INTB-Q14
O O
N HCl
HO N O
H IntB-Q14
[00884] O composto IntB-Q14 foi sintetizado por meio de uma rota sintética semelhante às sínteses descritas na Publicação do Pedido de Patente Internacional WO 2015/038426A1, cujo conteúdo completo é incorporado no presente documento a título de referência. [EXEMPLO 21] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INTB-Q15 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO IntB-Q15-1
[00885] A uma solução de composto IntB-Q10-1 (55 mg, 0,016 mmol) em DCM (2 ml), foram adicionados cloreto de acetila (26,8 µl, 0,032 mmol) e piridina (30 µl, 0,032 mmol) a 0 °C sob atmosfera de N2. Após agitação for 30 minutos, a reação foi amornada até a temperatu- ra ambiente e adicionalmente agitada por 1 hora. A mistura foi diluída com EA (20 ml) e lavada com H2O (10 ml). O composto IntB-Q15-1 (50 mg, 80%) foi isolado como uma espuma amarela pálida.
[00886] EI-MS m/z: 398,2(M+1+Na).
[00887] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,02 (brs, 1H) 7,79 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,72 (t, J = 8,8 Hz, 1H), 7,51 (m,1H), 7,38 (m, 1H), 4,16 (m, 1H), 4,04 (m, 1H), 3,92 (m, 1H), 3,71 (m, 1H), 3,36 (m, 1H), 2,27, (s, 3H), 1,54 (s, 9H). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INTB-Q15
[00888] O composto IntB-Q15 foi sintetizado por meio de uma rota sintética semelhante à síntese descrita no Exemplo 55.
[00889] Rendimento 99%; EI-MS m/z: 276,2(M+1). [EXEMPLO 22] PREPARAÇÃO DE DÍMERO DE COMPOSTO CBI
[00890] O dímero de CBI foi sintetizado por meio de uma rota sinté- tica semelhante às sínteses descritas na Publicação de Pedido de Pa- tente Internacional WO 2015/110935A. [EXEMPLO 23] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO SECO-DUBA
[00891] seco-DUBA foi sintetizado por meio de uma via sintética semelhante às sínteses descritas em Mol. Pharmaceutics 2015, 12, 1813-1835. [EXEMPLO 24] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO SECO-CBI-INDOL
[00892] seco- CBI-indol foi sintetizado por meio de uma rota sintéti- ca semelhante às sínteses descritas em ChemMedChem 2008, 3, 1946-1955. [EXEMPLO 25] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INTA-Q11
[00893] Boc-L-tirosina (2 g, 7,1 mmol) e cloridrato de metilamina (575,3 mg, 8,5 mmol) foram dissolvidos em DMF (20 ml) sob uma at- mosfera de nitrogênio. Adicionou-se 4-DMAP (433 mg, 3,55 mmol) e DCC (2,2 g, 10,65 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agita- da à temperatura ambiente por 3 horas. Após a reação ter sido conclu- ída, EA (30 ml × 3), H2O (20 ml) foram adicionados para realizar a ex- tração, e as camadas orgânicas obtida foi seca sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para obter o composto IntA-Q11 (1,27 g, 60%). 1
[00894] RMN de H (600 MHz, CDCl 3) δ 6,94 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,57 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 3,95 - 3,91 (m, 1H), 2,74 (dd, J = 13,8 Hz, 1H), 2,56 - 2,52 (m, 1H), 2,51 (d, J = 4,8 Hz, 3H), 1,25 (s, 9H).
[00895] EI-MS m/z: 317,24(M++Na).
[EXEMPLO 26] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INTA-Q12A PREPARAÇÃO DO COMPOSTO IntA-Q12a
[00896] Peneiras moleculares (15 g) foram colocadas em um frasco de fundo redondo, aquecidas e secas sob pressão reduzida. Compos- to Int-TG (5,0 g, 12,16 mmol), peneiras moleculares e salicilaldeído (1,3 ml, 12,16 mmol) foram adicionados a acetonitrila (75 ml). Ag2O (8,45 g, 36,48 mmol) foi adicionado à mistura, e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas sob uma atmosfera de nitrogê- nio. Após a reação ter sido concluída, a mistura foi filtrada através de um bloco de Celite® e, em seguida, o filtrado foi concentrado. O resí- duo foi purificado por cromatografia em coluna para obter o composto IntA-Q12a (4,1 g, 75%). PREPARAÇÃO DO COMPOSTO IntA-Q12b
[00897] A uma solução do composto IntA-Q12a (4,1 g, 9 mmol) em 2-propanol (15 ml) e CHCl 3 (75 ml) foi adicionado sílica gel (4 g) e NaBH 4 (681 mg, 18 mmol) a 0 °C sob uma atmosfera de nitrogênio. E a reação foi agitada a 0 °C por 4 horas sob uma atmosfera de nitrogê- nio. Após a reação ter sido completada, H2O (100 ml) e EA (100 ml x 3) foram adicionados à mistura, e a camada orgânica foi seca sobre anidro Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para obter o composto IntA- Q12b (3,8 g, 93%) com um sólido branco.
[00898] RMN de 1H (600 MHz, CDCl 3) δ 7,34 (dd, J = 7,8 Hz, 1H), 7,29 (dd, J = 8,4 Hz, 1H), 7,09 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,53 (dd, J = 10,8 Hz, 1H), 5,47 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,14 (dd, J = 10,2 Hz, 1H), 5,08 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,66 (dd, J = 12,6 Hz, 1H), 4,58 (dd, J = 13,2 Hz, 1H), 4,22 (dd, J = 10,8 Hz, 1H), 4,16 (dd, J = 12,0 Hz, 1H), 4,07 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 2,22 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 2,01 (s, 3H).
[00899] EI-MS m/z: 477,21(M++Na). PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INTA-Q12C
[00900] A uma solução do composto IntA-Q12b (1,25 g, 2,75 mmol) em DCM anidro (27 ml) foi adicionado DIPEA (1,44 ml, 8,25 mmol) e cloreto de metanossulfonila (0,43 ml, 5,5 mmol) a 0 °C sob uma atmos- fera de nitrogênio. A reação foi agitada a 0 °C por 20 minutos. Após a reação ter sido completada, H2O (20 ml) e DCM (20 ml x 3) foram adi- cionados para realizar extração, e a camada orgânica foi seca sobre anidro Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. Compos- to IntA-Q12c (1,46 g, 100%) foi usado diretamente na próxima reação sem purificação. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INTA-Q12D
[00901] A uma solução do composto IntA-Q12c (1,46 g, 2,75 mmol) em ACN (27 ml) foi adicionado tioacetato de potássio (409 mg, 3,58 mmol) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de nitrogênio. A reação foi agitada à temperatura ambiente por 4 horas. Após a reação ter sido concluída, EA (30 ml x 3) e solução aquosa de HCl 2N (1,8 ml,
3,6 mmol) foram adicionados. A camada orgânica obtida foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para obter o composto IntA- Q12d (1,27 mg, 90%).
[00902] RMN de 1H (600 MHz, CDCl 3) δ 7,38 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,21 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,01 (dd, J = 14,4 Hz, 2H), 5,55 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 5,47 (dd, J = 3,0 Hz, 1H), 5,13 (dd, J = 10,8 Hz, 1H), 5,08 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,25 (dd, J = 11,4 Hz, 1H), 4,18 - 4,05 (m, 4H), 2,32 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,03 (s, 3H).
[00903] EI-MS m/z: 535,18(M++Na). PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INTA-Q12E
[00904] A uma solução do composto IntA-Q12d (230 mg, 0,45 mmol) em ACN (4,5 ml) e HCl 2N (0,9 ml, 1,8 mmol) adicionou-se N- clorossuccinimida (240 mg, 1,8 mmol) a 0 °C sob uma atmosfera de nitrogênio. Após a reação ter sido agitada a 0 °C durante 1 hora, H2O (5 ml) e éter di-isopropílico (5 ml x 3) foram adicionados para realizar a extração. A camada orgânica obtida foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. Composto IntA-Q12e (241 mg, bru- to) usado diretamente na próxima reação sem purificação. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INTA-Q12F
[00905] O composto IntA-Q12e (241 mg, 0,45 mmol) e composto IntA-Q11 (133 mg, 0,45 mmol) foram dissolvidos em DCM anidro (5 ml) e TEA (0,19 ml, 1,35 mmol) foi adicionado a 0 °C sob uma atmos- fera de nitrogênio. Após a mistura ter sido agitada à temperatura am- biente durante 1 hora, H2O (5 ml) e EA (10 ml x 3) foram adicionados. A camada orgânica obtida foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentra- da sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para obter o composto IntA-Q12f (53 mg, 15%).
[00906] RMN de 1H (600 MHz, CDCl 3) δ 7,51 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,37 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 7,21 - 7,20 (m, 2H), 7,12 - 7,09 (m, 4H), 5,93
(s, 1H), 5,55 -5,52 (m, 1H), 5,48 (d, J = 3 Hz, 1H), 5,18 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,14 (dd, J = 10,2 Hz, 1H), 5,09 (brs, 1H), 4,86 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 4,34 (d, J = 14,4 Hz, 1H), 4,30 - 4,23 (m, 1H), 4,14 (dd, J = 9,6 Hz, 1H), 4,12 - 4,10 (m, 2H), 3,09 - 3,01 (m, 2H), 2,73 (d, J = 3,6 Hz, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,41 (s, 9H).
[00907] EI-MS m/z: 795,35(M++1). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INTB-Q12
[00908] A uma solução de composto IntA-Q12f (53 mg, 0,067 mmol) em MeOH (1,5 ml) foi adicionado metóxido de sódio 0,5 M em metanol (0,67 ml, 0,335 mmol) a 0 °C sob uma atmosfera de nitrogênio. Após a mistura de reação ter sido agitada a 0 °C durante 20 minutos, foi adici- onada solução aquosa de HCl 2N (0,17 ml, 0,335 mmol). O resíduo foi submetido a HPLC preparatória para obter o composto Int-Q12 (21,1 mg, 50%).
[00909] RMN de 1H (600 MHz, DMSO) δ 7,84 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,38 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,23 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,07 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 6,94 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,19 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 4,84 (d, J = 14,4 Hz, 1H), 4,72 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,10 - 4,06 (m, 1H), 3,72 (brs, 1H), 3,66 - 3,53 (m, 5H), 3,43 - 3,41 (m, 4H), 2,93 (dd, J = 13,8 Hz, 1H), 2,73 (t, J = 10,2 Hz, 1H), 2,57 (d, J = 4,2 Hz, 3H), 1,29 (s, 9H).
[00910] EI-MS m/z: 627,30(M++1). [EXEMPLO 27] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-A2 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-A2-1
[00911] A uma solução do composto Int-TG (1g, 2,43 mmol) e 4- hidroxibenzaldeído (297 mg, 2,43 mmol) em ACN anidro (15 ml) foram adicionados peneiras moleculares (3 g) e Ag2O (1,7 g, 7,29 mmol) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 3 horas, então, filtrada através de Celite®. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4. A mis- tura foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi puri- ficado por cromatografia em coluna para obter o composto Int-A2-1 (1,05 g, 95%).
[00912] RMN de 1H (600 MHz, CDCl 3) δ 9,93 (s, 1H), 7,86 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,54 (t, J = 9 Hz, 1H), 5,48 (d, J = 3 Hz, 1H), 5,17 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,15 (dd, J = 10,8, 3 Hz, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,18 - 4,11 (m, 2H), 2,19 (s, 3H), 2,07 (s, 6H), 2,02 (s, 3H). PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-A2
[00913] A uma solução do composto IntA-A2-1 (1,05 g, 2,32 mmol) em 2-propanol (4 ml) e CHCl 3 (24 ml) foi adicionado gel de sílica (2 g) e NaBH 4 (209 mg, 5,8 mmol) a 0 °C sob uma atmosfera de nitrogênio. Após a mistura de reação ter sido agitada a 0 °C por 4 horas, H2O (30 ml) e EA (30 ml x 3) foram adicionados para realizar extração, e a ca- mada orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para obter o composto Int-A2 (977 mg, 93%).
[00914] RMN de 1H (600 MHz, CDCl 3) δ 7,31 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 9 Hz, 1H), 5,50 (m, 1H), 5,46 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,12 (dd, J = 10,2, 3,6 Hz, 1H), 5,04 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,65 (s, 2H), 4,23 (m, 1H), 4,18 - 4,11 (m, 2H), 4,047 (t, J = 6 Hz, 1H), 2,18 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 2,01 (s, 3H). [EXEMPLO 28] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-A3
PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-A3-1
[00915] A uma solução do composto ácido 5-formilsalicílico (10 g, 60,1 mmol) em THF (120 ml) foram adicionados DIPEA (31 ml) e bro- meto de benzila (7,15 ml, 60,1 mmol) a 0 ° C sob uma atmosfera de nitrogênio. E a reação foi aquecida a 60 °C por 18 horas. Após a rea- ção ter sido completada, HCl 2N (200 ml) e EA (200 ml x 3) foram adi- cionados para realizar extração, e a camada orgânica foi seca sobre anidro Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para obter o composto Int- A3-1 (11,2 g, 73%).
[00916] RMN de 1H (600 MHz, CDCl3) δ 11,38 (s, 1H), 9,86 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,01 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,47 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,43 – 7,39 (m, 3H), 7,11 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,43 (s, 2H), PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-A3-2
[00917] Os compostos Int-A3-1 (2 g, 7,8 mmol) e Int-TG (3,2 g, 7,8 mmol) reagiram de maneira semelhante ao método de preparação do composto Int-A2-1 do Exemplo 27, obtendo assim um composto Int- A3-2 (4,13 g, 90%). PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-A3-3
[00918] O composto Int-A3-2 (4,13 g, 7,0 mmol) reagiu de maneira semelhante ao método de preparação do composto Int-A2 do Exemplo 27, obtendo-se assim o composto Int-A3-3 (3,93 g, 95%).
[00919] RMN de 1H (600 MHz, CDCl3) δ 7,73 (s, 1H), 7,46 (m, 3H),
7,39 – 7,31 (m, 3H), 7,19 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,59 (t, J = 10,2 Hz, 1H), 5,46 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,35 – 5,29 (m, 2H), 5,11 (dd, J = 10,2, 2,4 Hz, 1H), 5,06 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,66 (d, J = 6 Hz, 1H), 4,25 – 4,04 (m, 4H), 2,17 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-A3
[00920] Composto Int-A3-3 (1,35 g, 2,29 mmol) foi dissolvido em EtOH (80 ml), Pd/C (135 mg, 10% em peso) foi adicionado ao mesmo, e a mistura foi agitada durante 3 horas durante a injeção de gás H2 à temperatura ambiente. Após a reação ter sido concluída, a mistura foi filtrada através de Celite®, e então concentrada sob pressão reduzida. Após a concentração, o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para obter o composto Int-A3 (676 mg, 47 %).
[00921] RMN de 1H (600 MHz, CDCl 3) δ 7,90 (s, 1H), 7,46 (m, 1H), 7,13 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 5,56 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 5,47 (s, 1H), 5,16 (m, 2H), 4,63 (s, 2H), 4,23 (m, 1H), 4,16 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,01 (s, 3H). [EXEMPLO 29] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO A-1
PREPARAÇÃO DE COMPOSTO A-1-1
[00922] A uma solução de composto Int-A2 (977 mg, 2,15 mmol) em DCM anidro (20 ml) foram adicionados TEA (899 μl, 6,45 mmol) e cloreto de metanossulfonila (333 µl, 4,30 mmol) a 0 °C sob uma atmos- fera de nitrogênio. Após a mistura de reação ter sido agitada a 0 °C por 3 horas, H2O (20 ml) e DCM (20 ml x 3) foram adicionados para realizar extração, e a camada orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. Composto A-1-1 (1,15 g, bruto) foi usado diretamente na próxima reação sem purificação. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO A-1-2
[00923] A uma solução do composto A-1-1 (1,15 g, 2,15 mmol) em ACN (20 ml) foi adicionado tioacetato de potássio (282 mg, 2,47 mmol) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de nitrogênio. Após a mis- tura de reação ter sido agitada à temperatura ambiente durante 2 ho- ras, EA (20 ml x 3) e solução aquosa de HCl 2N (2,5 ml, 4,94 mmol) foram adicionados a ela. A camada orgânica obtida foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para obter cromatografia em coluna para obter o composto A-1-2 (361 mg, 32%).
[00924] RMN de 1H (600 MHz, CDCl3) δ 7,22 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,48 – 5,44 (m, 2H), 5,10 (dd, J = 10,8, 3,6 Hz, 1H), 5,10 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,23 – 4,15 (m, 2H), 4,07 (s, 2H), 4,05 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 2,06 (s, 6H), 2,01 (s, 3H); EI-MS m/z: 535,30(M+1+Na). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO A-1-3
[00925] A uma solução do composto A-1-2 (160 mg, 0,31 mmol) em ACN (2,5 ml) e HCl 2N (0,62 ml, 1,25 mmol) adicionou-se N- clorossuccinimida (166 mg, 1,25 mmol) a 0 °C sob uma atmosfera de nitrogênio. Após a reação ter sido agitada a 0 °C durante 1 hora, H2O (5 ml) e éter di-isopropílico (5 ml x 5) foram adicionados para realizar a extração. A camada orgânica obtida foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. Composto A-1-3 (252 mg, bruto) foi usado diretamente na próxima reação sem purificação. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO A-1-4
[00926] O composto A-1-3 (50 mg, 0,06 mmol) e composto Int-A1 (18 mg, 0,06 mmol) foram dissolvidos em DCM anidro (1 ml) e TEA (17 μl, 0,12 mmol) foi adicionado a 0 °C sob uma atmosfera de nitrogênio. Após a mistura ter sido agitada à temperatura ambiente durante 1 ho- ra, H2O (5 ml) e EA (5 ml x 3) foram adicionados. A camada orgânica obtida foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão re- duzida. O resíduo foi submetido a HPLC preparatória para obter o composto A-1-4 (17,1 mg, 35%). 1
[00927] RMN de H (600 MHz, CDCl 3) δ 7,39 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,05 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,90 (brs, 1H), 5,51 - 5,46 (m, 2H), 5,30 (s, 1H), 5,14 (dd, J = 10,8, 3 Hz, 1H), 5,09 (d, J = 8,14 Hz, 1H), 5,07 (brs, 1H), 4,46 (s, 2H), 4,28 - 4,22 (m, 2H), 4,17 - 4,08 (m, 3H), 3,07 - 3,03 (m, 2H), 2,74 (d, J = 4,2 Hz, 3H), 2,19 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,39 (s, 9H).
[00928] EI-MS m/z: 795,51(M+1). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO A-1
[00929] A uma solução de composto A-1-4 (10 mg, 0,0013 mmol) em MeOH (1 ml) foi adicionado metóxido de sódio 0,5 M em metanol (0,13 ml, 0,063 mmol) a 0 °C sob uma atmosfera de nitrogênio. Após a mistura de reação ter sido agitada a 0 ° C por 10 minutos, a reação foi ajustada para ter pH de 3 a 4 com solução aquosa de HCl 2N (31 μl, 0,063 mmol). O resíduo foi purificado por HPLC preparatória para ob- ter o composto A-1 (1 mg, 13%).
[00930] EI-MS m/z: 627,47(M+1). [EXEMPLO 30] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO A-2
PREPARAÇÃO DE COMPOSTO A-2-1
[00931] O Composto Int-A3 (510 mg, 1,02 mmol) e 11-azido-3,6,9- trioxaundecan-1-amina (284 mg, 1,12 mmol) foram dissolvidos em DMF (6 ml). PyBOP (629 mg, 1,33 mmol) e DIPEA (0,44 ml, 2,55 mmol) foram adicionados a 0 ° C sob uma atmosfera de nitrogênio. Após a mistura de reação ter sido agitada à temperatura ambiente por 1,5 hora, H2O (30 ml) e EA (20 ml x 3) foram adicionados para realizar extração, e a camada orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por croma- tografia em coluna para obter cromatografia em coluna para fornecer o composto A-2-1 (456 mg, 64%).
[00932] RMN de 1H (600 MHz, CDCl 3) δ 8,05 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,57 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 7,47 (dd, J = 8,4, 2,4 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 9 Hz, 1H), 5,54 - 5,49 (m, 2H), 5,24 (d, 8,4 Hz, 1H), 5,19 (dd, 10,2, 3,6 Hz, 1H), 4,64 (s, 2H), 4,24 - 4,09 (m, 3H), 3,79 - 3,62 (m, 14H), 3,55
(m, 1H), 3,43 (m, 2H), 2,21 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 2,04 (s, 3H)), 2,02 (s, 3H).
[00933] Composto A-2-2, composto A-2-3, composto A-2-4, com- posto A-2-5 e composto A-2 foram sintetizados por vias sintéticas se- melhantes às sínteses descritas no Exemplo 29. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO A-2-3
[00934] RMN de 1H (600 MHz, CDCl 3) δ 8,05 (s, 1H), 7,59 (brs, 1H), 7,39 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,96 (d, J = 9 Hz, 1H), 5,54 - 5,49 (m, 2H), 5,17 (m, 2H), 4,25 (m, 1H), 4,15 (m, 4H), 3,80 (m, 1H), 3,70 - 3,63 (m, 14H), 3,54 (m, 4H)), 2,34 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 2,06 (s, 6H), 2,02 (s, 3H); EI-MS m / z: 757,46(M+1). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO A-2-4
[00935] EI-MS m/z: 781,30(M+1). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO A-2-5
[00936] EI-MS m/z: 1039,47(M+1). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO A-2
[00937] EI-MS m/z: 871,50(M+1). [EXEMPLO 31] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-B1
[00938] A uma solução de Int-A1 (200 mg, 0,68 mmol) em DMF (5 ml) foram adicionados imidazol (138 mg, 2,03 mmol) e TBDMSCl (123 mg, 0,815 mmol) a 0 ° C sob uma atmosfera de nitrogênio. Após a mis- tura de reação ter sido agitada à temperatura ambiente por 3 horas, EA (50 ml) e salmoura (100 ml) foram adicionados para realizar extra- ção, e a camada orgânica obtida foi seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cro- matografia em coluna para obter o composto Int-B1 (250mg, 90%).
[00939] RMN de 1H (600 MHz, CDCl 3) δ 7,04 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,76 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 5,63 (brs, 1H), 5,30 (brs, 1H), 4,20 (m, 1H), 3,03 ~ 2,91 (m, 2H), 2,71 (d, J = 4,2 Hz, 3H), 1,41 (s, 9H), 0,97 (s, 9H), 0,18 (s, 6H). [EXEMPLO 32] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-B2
[00940] A uma solução do composto A-1-3 (250 mg, 0,46 mmol) em ACN (2 ml) foi adicionado KHF2 (73 mg, 0,92 mmol) em H20 (0,5 ml) à temperatura ambiente. Após a reação ter sido agitada na mesma tem- peratura por 2 horas, EA (50 ml) e salmoura (50 ml) foram adicionados para realizar extração, e a camada orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi puri- ficado por cromatografia em coluna para obter o composto Int-B2 (173 mg, 68%).
[00941] RMN de 1H (600 MHz, CDCl 3) δ 7,36 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,05 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 5,52 ~ 5,46 (m, 2H), 5,13 - 5,07 (m, 2H), 4,56 (s, 2H), 4,25 - 4,07 (m, 4H), 2,19 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 2,02 (s, 3H); EI-MS m / z: 543,23(M+1+Na). [EXEMPLO 33] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-B3
[00942] A uma solução de 4-hidroxibenzaldeído (1 g, 8,18 mmol) em DCM (20 ml) foi adicionado imidazol (1,67 g, 24,54 mmol) e TBD- MSCl (1,85 g, 12,27 mmol) a 0 ° C sob uma atmosfera de nitrogênio. Após a de reação ter sido agitada à temperatura ambiente por 1,5 ho- ras, EA (100 ml) e salmoura (100 ml) foram adicionados para realizar extração e então a camada orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para obter o composto Int-B3 (1,8 g, 93%).
[00943] RMN de 1H (600 MHz, CDCl3) δ 9,89 (s, 1H), 7,78 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,94 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 0,99 (s, 9H), 0,25 (s, 6H). [EXEMPLO 34] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-B4 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-B4-1
[00944] A uma solução de ácido D-pipecolínico (10 g, 77,42 mmol) em MeOH (400 ml) foi adicionado paraformaldeído (4,66 g, 154,8 mmol) e Pd/C (1,65g, 5% em peso, 15,48 mmol) à temperatura ambi- ente, e a mistura foi agitada à mesma temperatura durante 16 horas enquanto se injeta gás H2. Após a reação ter sido concluída, a mistura foi filtrada através de Celite®, e então concentrada sob pressão redu- zida. Após a concentração, o composto Int-B2-1 foi usado diretamente na próxima reação sem purificação (11,37 g, quant.)
[00945] EI-MS m/z: 144 (M+1). PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-B4
[00946] A uma solução de composto Int-B2-1 (1 g, 6,98 mmol) e anilina (0,7 ml, 7,68 mmol) em DMF (10 ml) foi adicionado DIC (1,3 ml, 8,38 mmol) e DMAP (171 mg, 1,4 mmol) a 0 °C sob uma atmosfera de nitrogênio. Após a agitação de um dia para o outro, a mistura de rea- ção foi diluída H2O (30 ml) e extraída com EA (2 x 30 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por croma- tografia em coluna para obter o composto Int-B4 (870 mg, 58 %).
[00947] RMN de 1H (600 MHz, CDCl3) δ 8,52 (s, 1H), 7,58-7,52 (m,
2H), 7,34-7,28 (m, 2H), 7,11-7,05 (m, 1H), 2,98-2,96 (m, 1H), 2,59-2,53 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,18-2,03 (m, 2H), 1,78-1,47 (m, 5H), EI-MS m / z: 219 (M+1). [EXEMPLO 35] PREPARAÇÃO DO COMPOSTO B-1 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO B-1-1
[00948] O composto Int-B2 (170 mg, 0,32 mmol) e composto Int-B3 (92,6 mg, 0,38 mmol) foram dissolvidos em ACN (5 ml). DBU (9,76 μl, 0,06 mmol) foi adicionado ao mesmo à temperatura ambiente. Após a mistura de reação ter sido agitada na mesma temperatura por 2 horas, EA (50 ml) e salmoura (100 ml) foram adicionados para realizar extra- ção, e a camada orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e con- centrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromato- grafia em coluna para obter cromatografia em coluna para fornecer o composto B-1-1 (60 mg, 30%).
[00949] RMN de 1H (600 MHz, CDCl 3) δ 10,00 (s, 1H), 7,91 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,39 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,30 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,04 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 5,52 ~ 5,47 (m, 2H), 5,13 ~ 5,07 (m, 2H), 4,53 (s, 2H), 4,23 (m, 1H), 4,16 (m, 1H), 4,08 (m, 1H), 2,19 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,01 (s, 3H); EI-MS m / z: 545,19 (M+1+Na). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO B-1-2
[00950] A uma solução do composto B-1-1 (60 mg, 0,096 mmol) em 2-propanol (0,4 ml) e CHCl 3 (2 ml) foi adicionado gel de sílica (10 mg) e NaBH 4 (10 mg, 0,24 mmol) a 0 °C sob uma atmosfera de nitrogênio. Após a mistura de reação ter sido agitada a 0 °C por 1,5 hora sob uma atmosfera de nitrogênio, H2O (100 ml) e EA (50 ml) foram adicionados para realizar extração e a camada orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi puri- ficado por cromatografia em coluna para obter cromatografia em colu- na para fornecer o composto B-1-2 (50 mg, 83%).
[00951] EI-MS m/z: 647,18(M+1+Na). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO B-1-3
[00952] O composto B-1-2 (50 mg, 0,08 mmol) foi dissolvido em DCM (3 ml) e 1M PBr 3 (40 μl, 0,04 mmol) dissolvido em DCM foi adi- cionado à solução. A mistura resultante foi deixada a agitar a 0 °C. A reação foi deixada aquecer até a temperatura ambiente e agitada por 2 horas. Após a reação ter sido completada, H2O (100 ml) e EA (50 ml) foram adicionados para realizar extração, e a camada orgânica foi se- ca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para obter croma- tografia em coluna para fornecer o composto B-1-3 (24mg, 44%).
[00953] RMN de 1H (600 MHz, CDCl3) δ 7,40 (m, 4H), 7,12 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,04 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 5,50 (m, 1H), 5,46 (m, 1H), 5,11 (m, 1H), 5,07 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,47 (m, 4H), 4,23 (m, 1H), 4,16 (m,
1H), 4,08 (m, 1H), 2,19 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,02 (s, 3H); EI-MS m/z: 709,05(M+1+Na). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO B-1
[00954] A uma solução do composto B-1-3 (24 mg, 0,035 mmol) e Int-B4 (8,4 mg, 0,038 mmol) em DMF (1 ml) foi adicionado DIPEA (18,3 μl, 0,10 mmol) à temperatura ambiente. Após a mistura de rea- ção ter sido agitada por 16 horas, NaOMe 0,5 M (50 μl) em solução de metanol foi adicionado à mesma a 0 ° C e adicionalmente agitada du- rante 15 minutos. A mistura foi arrefecida bruscamente com 0,1% de ácido fórmico em ACN (3 ml). O resíduo foi purificado por HPLC prepa- ratória, que produziu o composto B-1 (6,3 mg, 27%).
[00955] EI-MS m/z: 657,29(M+1). [EXEMPLO 36] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-B5
[00956] A uma solução de A-2-3 (20,0 mg, 0,026 mmol) em ACN (0,5 ml) e HCl 2N (52,8 μl, 0,106 mmol) adicionou-se N- clorossuccinimida (13,0 mg, 0,098 mmol) a 0 °C sob uma atmosfera de N2. Após agitação a 0 °C durante 1 hora, de KHF 2 (16,5 mg, 0,2112 mmol) e KF (24,5 mg, 0,4224 mmol) em H2O (0,1 ml) foram adiciona- dos, e a mistura de reação foi agitada à mesma temperatura durante 1 hora. EA (50 ml) e H 2 O (25 ml) foram adicionados para realizar a ex- tração, e a camada orgânica foi seca sobre Na2SO 4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por croma- tografia em coluna para obter o composto Int-B5 (13,0 mg, 65%). 1
[00957] RMN de H (600 MHz, CDCl 3) δ 8,17 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,51 (dd, J = 6,4, 2,4 Hz, 1H), 7,41 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,57 - 5,49 (m, 2H), 5,20 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,16 (dd, J = 8,0,
3,2 Hz, 1H), 4,60 (d, J = 3,2 Hz, 2H), 4,27 - 4,11 (m, 3H), 3,81 - 3,73 (m, 1H), 3,72 - 3,61 (m, 12H), 3,60 - 3,52 (m, 1H), 3,36 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 2,23 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 2,03 (s, 3H); EI-MS m / z: 765 (M+1). [EXEMPLO 37] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-T1 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-T1-A
[00958] A uma solução de α-amanitina (3 mg, 0,003 mmol, CAS No.23109-05-9) e composto Int-B5 (5,0 mg, 0,007 mmol) em ACN (0,1 ml) e DMF (5 gotas) foi adicionado BEMP (0,8 ul, 0,003 mmol) à tem- peratura ambiente sob atmosfera de N2. Após agitação durante 3 horas à temperatura ambiente, a mistura de reação foi purificada por HPLC para proporcionar o composto Int-T1-a (3,9 mg, 72%). EI-MS m/z:
1664(M+1). PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-T1
[00959] A uma solução do composto Int-T1-a (3,9 mg, 0,002 mmol) em MeOH (0,8 ml) e DCM (0,2 ml) foi adicionado K2CO3 (4,5 mg, 0,033 mmol) sob atmosfera de N2. Após agitação durante 1 hora a 0 ° C, a mistura de reação foi purificada por HPLC para fornecer o com- posto Int-T1 (2,8 mg, 81 %). EI-MS m/z: 1496 (M+1). [EXEMPLO 38] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-B6 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-B6-A
[00960] A uma solução de 4-hidroxibenzaldeído (20 g, 163,8 mmol) em DCM (1000 ml) foi adicionado TEA (45,7 ml, 327,6 mmol) a 0 ° C sob atmosfera de N2. Após agitação à temperatura ambiente durante 16 horas sob atmosfera de N2, a mistura de reação foi arrefecida brus- camente com H2O (400 ml) e extraída com DCM (500 ml X 3). A ca- mada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para obter o composto Int-B6-a (33,4 g, 100%).
[00961] RMN de 1H (400 MHz, CDCl 3) δ 10,07 (s, 1H), 8,06 - 8,02 (m, 2H), 7,56 - 7,52 (m, 2H). PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-B6-B
[00962] A uma solução do composto Int-B6-a (5 g, 24,49 mmol) em MeOH (40 ml) e THF (245 ml) foi adicionado NaBH 4 (1,85 g, 48,98 mmol) a -78 ° C sob atmosfera de N2. Após agitação a 0 ° C durante 1 hora, a mistura de reação foi arrefecida bruscamente por adição de HCl 2 N (5 ml) e extraída com H2O (250 ml) e EA (250 ml x 3). A ca- mada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para obter o composto Int-B6-b (5,01 g, 99%).
[00963] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,50 - 7,46 (m, 2H), 7,34 - 7,31 (m, 2H), 4,75 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 1,90 (t, J = 5,6 Hz, 1H). PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-B6
[00964] A uma solução do composto Int-B6-b (2 g, 9,7 mmol) em éter (32 ml) foi adicionado PBr 3 1,0 M em DCM (3,88 ml, 3,88 mmol) a 0 °C sob atmosfera de N2. Após agitação durante 2 horas, éter (100 ml) e NaHCO 3 (100 ml x 3) foram adicionados para realizar a extra- ção. A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para obter o composto Int-B6 (2,35 g, 90%).
[00965] RMN de 1H (400 MHz, CDCl 3) δ 7,52-7,49 (m, 2H), 7,34- 7,31 (m, 2H), 4,49 (s, 2H). [EXEMPLO 39] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-B7 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-B7-A
[00966] A uma solução de 4-hidroxiisofatalaldeído (112 mg, 0,746 mmol, CAS No: 3328-70-9) e hidreto de sódio (45 mg, 1,12 mmol, 60%) em DMF (5 ml) foi adicionado o composto Int-B6 (280 mg, 0,97 mmol) em DMF (2 ml) a 0 ° C sob atmosfera de N2. Após agitação à temperatura ambiente durante 4 horas sob atmosfera de N2, a mistura de reação foi arrefecida bruscamente pela adição de H2O (10 ml) e extraída com H2O (100 ml) e EA (100 ml x 2). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para obter o com- posto Int-B7-a (180 mg, 71%) como um sólido branco.
[00967] RMN de 1H (400 MHz, CDCl 3) δ 10,54 (s, 1H), 9,98 (s, 1H), 8,38 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,14 (dd, J = 2,0, 8,8 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 7,43 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,19 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,33 (s, 2H).
PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-B7
[00968] A uma solução do composto Int-B7-a (1 g, 2,96 mmol) em THF (8 ml) foi adicionado borohidreto de sódio (391 mg, 10,35 mmol) em MeOH (1,5 ml) e THF (1 ml) a -78 ° C sob atmosfera de N2. A mis- tura de reação foi agitada a 0 ° C por 1 hora sob atmosfera de N2. Após a reação ter sido concluída, a mistura foi arrefecida bruscamente com HCl 2N (2 ml) e extraída com H2O (100 ml) e EA (100 ml x 3). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para obter o composto Int-B7 (850 mg, 85%) como um sólido branco.
[00969] RMN de 1H (400 MHz, CDCl 3) δ 7,55 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,39 - 7,37 (m, 3H), 7,30 - 7,28 (m, 1H), 6,89 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,16 (s, 2H), 4,76 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 4,65 (d, J = 5,6 Hz, 2H). [EXEMPLO 40] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-B8 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-B8-1
[00970] A uma solução de ácido 3-formil-4-hidroxibenzoico (5 g, 43,06 mmol) em DMF (100 ml) foi adicionado brometo de benzil (5,1 ml, 43,06 mmol) e NaHCO 3 (2,53 g, 43,06 mmol) à temperatura ambi- ente sob atmosfera de N 2. A mistura foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente sob atmosfera de N2. EA (200 ml × 2) e água destilada (100 ml) foram adicionados para realizar a extração. A ca-
mada orgânica obtida foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para obter o composto Int-B8-1 (2,56 g, 39 %). 1
[00971] RMN de H (400 Hz, CDCl 3) δ 11,41 (s, 1H), 9,95 (s, 1H), 8,34 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,23 (dd, J = 6,4 Hz, 2,4 Hz, 1H), 7,46 - 7,35 (m, 5H), 7,04 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 5,37 (s, 2H). PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-B8-2
[00972] A uma solução do composto Int-B8-1 (1,0 g, 3,90 mmol) e Int-TG (1,6 g, 3,90 mmol) em ACN anidro (30 ml) foram adicionados peneiras moleculares (8 g) e Ag2O (3,62 g, 15,61 mmol) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de N2. A mistura foi agitada à temperatu- ra ambiente por 1 hora. Após a reação ter sido concluída, a mistura foi filtrada através de Celite® e lavada com DCM (20 ml). O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por croma- tografia em coluna para obter o composto Int-B8-2 (2,1 g, 92 %). 1
[00973] RMN de H (400 Hz, CDCl 3) δ 10,34 (s, 1H), 8,55 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,26 (dd, J = 6,8, 2,0 Hz, 1H), 7,45 - 7,35 (m, 5H), 7,17 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,63 - 5,60 (m, 1H), 5,50 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,37 (s, 2H), 5,23 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,16 (dd, J = 7,2, 3,6 Hz, 1H) 4,24 - 4,10 (m, 4H), 2,20 (s, 3H), 2,10 - 2,03 (m, 9H). PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-B8
[00974] A uma solução do composto Int-B8-2 (2,1 g, 3,58 mmol) em DCM (30 ml) foi adicionado m-CPBA (2,65 g, 10,74 mmol) a 0 ° C sob atmosfera de N2. Após agitação por 7 horas a 0 ° C, a mistura foi arre- fecida bruscamente pela adição de solução saturada de bicarbonato de sódio (40 ml × 2). A camada orgânica foi lavada com salmoura, se- ca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resí- duo foi dissolvido em DCM (5 ml) e hidrato de hidrazina (261 μl, 5,37 mmol) foi adicionado a 0 ° C sob atmosfera de N2. Após agitação a 0 ° C durante 1 hora, EA (30 ml × 2) e solução aquosa de HCl 1 M (10 ml)
foram adicionados para realizar a extração. A camada orgânica obtida foi seca com Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão redu- zida para fornecer o composto Int-B8 (1,1 g, 55%).
[00975] RMN de 1H (400 Hz, CDCl 3) δ 7,66 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,60 (dd, J = 8,4, 2,0 Hz, 1H), 7,45 - 7,35 (m, 5H), 7,00 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,50 - 5,45 (m, 2H), 5,34 (s, 2H), 5,15 (dd, J = 7,6, 3,2 Hz, 1H), 5,01 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,26 - 4,09 (m, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,03 (s, 3H).
[00976] EI-MS m/z: 575 (M++1). [EXEMPLO 41] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-B9 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-B9-1
[00977] A uma solução de composto Int-B8 (3 g, 5,22 mmol) em EA
(240 ml) foi adicionado Pd/C (300 mg, 10% em peso), a 0 ° C, e a mis- tura foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas, enquanto se injeta gás H2. Após a reação ter sido concluída, a mistura foi filtrada através de Celite®, e então concentrada sob pressão reduzida. O composto Int-B9-1 foi usado diretamente na próxima reação sem puri- ficação adicional (2,84 g, 100%, espuma bege)
[00978] ET-MS m/z: 507,2(M+1+Na) PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-B9-2
[00979] O Composto Int-B9-1 (1 g, 2,06 mmol) e 11-azido-3,6,9- trioxaundecan-1-amina (630 mg, 2,48 mmol) foram dissolvidos em DMF (10 ml). DIPEA (1,07 ml, 6,18 mmol) e PyBOP (1,28 g, 2,47 mmol) foram adicionados a 0 ° C sob atmosfera de N2. Após agitação à temperatura ambiente durante 4 horas sob atmosfera de N2, a mistu- ra foi arrefecida bruscamente com H2O (250 ml) e extraída com EA (250 ml X 3). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por croma- tografia em coluna para obter o composto Int-B9-2 (1,19 g, 84%) como uma espuma branca.
[00980] RMN de 1H (400 MHz, CDCl 3) δ 7,38 - 7,34 (m, 2H), 7,00 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,82 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 6,10 (brs, 1H), 5,49 - 5,45 (m, 2H), 5,14 (dd, J = 3,6, 10,4 Hz, 1H), 4,99 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,27 - 4,08 (m, 3H), 3,74 - 3,63 (m, 14H), 3,37 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 2,20 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,03 (s, 3H). ET-MS m/z: 685,3 (M+1). PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-B9-3
[00981] Composto Int-B9-2 (528 mg, 0,77 mmol) e composto Int-B7 (240 mg, 0,70 mmol) foram dissolvidos em ACN (30 ml) e DMF (5 ml). BEMP (0,26 ml, 0,91 mmol) foi adicionado a 0 ° C sob atmosfera de N2. Após agitação à temperatura ambiente durante 2 horas sob atmos- fera de N2, a mistura foi arrefecida bruscamente com H2O (100 ml) e extraída com EA (100 ml X 3). A camada orgânica foi seca sobre
Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para obter o composto Int-B9-3 (568 mg, 81%) como uma espuma branca. 1
[00982] RMN de H (400 MHz, CDCl 3) δ 7,80 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,76 (dd, J = 2,4, 8,8 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 8,4 Hz, 2H) 7,43 - 7,40 (m, 2H), 7,37 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,29 - 7,25 (m, 2H), 7,08 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,60 - 5,56 (m, 1H), 5,47 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 5,17 - 5,10 (m, 4H), 4,74 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 4,64 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 4,26 - 4,08 (m, 3H), 3,71 - 3,58 (m, 14H), 3,34 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 2,41 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 2,18 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), 1,77 (t, J = 6,0 Hz, 1H). ET-MS m/z: 1007,2 (M+1). PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-B9-4
[00983] A uma solução do composto Int-B9-3 (150 mg, 0,15 mmol) em CH2Cl2 (3 ml) foi adicionado cloreto de metanossulfonila (150 mg, 0,15 mmol) a 0 ° C sob atmosfera de N2. A mistura de reação foi agita- da à temperatura ambiente por 24 horas sob atmosfera de N2. Após a reação ter sido concluída, a mistura foi arrefecida bruscamente com H2O (50 ml) e extraída com CH 2Cl2 (50 ml X 3). A camada orgânica foi seca sobre Na 2 SO 4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida, produzindo o composto Int-B9-4 (214 mg, 100%) como uma espuma bege, que foi usada diretamente na próxima etapa sem purificação adicional. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-B9-5
[00984] A uma solução do composto In-B9-4 (214 mg, 0,15 mmol) em ACN (3 ml) foi adicionado tioacetato de potássio (43 mg, 0,37 mmol) à temperatura ambiente sob uma atmosfera de N2. Após agita- ção à temperatura ambiente durante 3 horas sob atmosfera de N2, a mistura foi arrefecida bruscamente com H2O (50 ml) e extraída com EA (50 ml X 3). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e con- centrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromato-
grafia em coluna para obter o composto Int-B9-5 (147 mg, 88%) como uma espuma amarela pálida.
[00985] RMN de 1H (400 MHz, CDCl 3) δ 7,87 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,78 (dd, J = 2,0, 8,4 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,43 - 7,41 (m, 2H), 7,31 - 7,27 (m, 2H), 7,15 (dd, J = 2,0, 8,0 Hz, 1H), 7,07 - 7,06 (m, 1H), 6,79 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,61 - 5,56 (m, 1H), 5,47 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 5,17 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,14 - 5,10 (m, 3H), 4,26 - 4,09 (m, 5H), 4,05 (s, 2H), 3,66 - 3,59 (m, 14H), 3,34 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 2,01 (s, 3H). ET- MS m/z: 1123,2 (M+1). PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-B9-6
[00986] A uma solução do composto Int-B9-5 (100 mg, 0,089 mmol) em ACN (2 ml) foi adicionado N-clorossuccinimida (90 mg, 0,676 mmol) e HCl 2N (356 ul, 0,712 mmol) a 0 ° C sob atmosfera de N2. Após agitação a 0 ° C durante 1 hora sob atmosfera de N2, foi adicio- nado sulfeto de dimetila (19,6 ul, 0,267 mmol) à temperatura ambiente. A mistura de reação foi ainda agitada à mesma temperatura durante 5 minutos. H2O (20 ml) e EA (20 ml x 3) foram adicionados para realizar a extração, e as camadas orgânicas obtidas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida, produzindo o composto Int-B9-6 (140 mg, 100%) como uma espuma branca, que foi usada diretamente na próxima etapa sem purificação adicional.
[00987] ET-MS m/z: 1173,9 (M+1). PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-B9
[00988] A uma solução de composto Int-B9-6 (140 mg, 0,089 mmol) em ACN (2 ml) foi adicionado fluoreto de hidrogênio e potássio (41,7 mg, 0,534 mmol) em H2O (0,2 ml) à temperatura ambiente sob atmos- fera de N2. Após agitação durante 2 horas à temperatura ambiente, a mistura foi purificada por HPLC preparativa para fornecer o composto Int-B9 (42 mg, 41%) como uma espuma branca.
[00989] RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,86 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,78 (dd, J = 2,0, 8,4 Hz, 1H), 7,53 - 7,43 (m, 6H), 7,29 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,13 - 7,11 (m, 1H), 7,05 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 5,61 - 5,56 (m, 1H), 5,48 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,20 (s, 2H), 5,17 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,12 (dd, J = 3,2, 10,4 Hz, 1H), 4,78 (d, J = 3,6 Hz, 2H), 4,26 - 4,09 (m, 3H), 3,70 - 3,60 (m, 14H), 3,5 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 2,18 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 2,01 (s, 3H). ET-MS m/z: 1139,1 (M+1). [EXEMPLO 42] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-T2 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-T2-1 E INT-T2-2
[00990] A uma solução de composto Int-B9 (12 mg, 0,0105 mmol) e combretastatina A-4 (3,3 mg, 0,0105 mmol, no CAS: 117048-59-6, também conhecido como CA-4) em ACN (0,8 ml) e DMF (0,2 ml) foi adicionado BEMP (3,05 ul, 0,0105 mmol) à temperatura ambiente sob atmosfera de N2. Após agitação durante 0,5 hora à temperatura ambi- ente, a mistura foi purificada por HPLC para proporcionar os compos- tos Int-T2-1 e In-T2-2.
[00991] Rendimento para o composto Int-T2-1: 3,5 mg, 19%, EI-MS m/z: 1732 (M++1)
[00992] Rendimento para o composto Int-T2-2: 6,0 mg, 40%, EI-MS m/z: 1436 (M+1)
PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-T2
[00993] A uma solução do Composto Int-T2-1 (7,3 mg, 0,0042 mmol) em MeOH (0,8 ml) e DCM (0,2 ml) foi adicionado K2CO3 (5,8 mg, 0,0421 mmol) sob atmosfera de N2. Após agitação por 50 minutos a 0 ° C, a mistura de reação foi purificada por HPLC para fornecer o composto Int-T2 (4,6 mg, 70%).
[00994] EI-MS m/z: 1564 (M+1). [EXEMPLO 43] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-T3
PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-T3-1
[00995] A uma solução de compostos Int-T2-2 (6,0 mg, 0,0042 mmol) e SN-38 (2,0 mg, 0,0050 mmol, CAA NO: 86639-52-3) em ACN (0,8 ml) e DMF (0,2 ml) foi adicionado BEMP (1,8 ul, 0,0062 mmol) à temperatura ambiente sob atmosfera de N2. Após agitação durante 1 hora à temperatura ambiente, a mistura de reação foi purificada por HPLC para proporcionar o composto Int-T3-1 (3,1 mg, 48%).
[00996] EI-MS m/z: 1808(M+1) PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-T3
[00997] A uma solução do composto Int-T3-1 (3,1 mg, 0,0017 mmol) em MeOH (0,8 ml) e DCM (0,2 ml) foi adicionado K2CO3 (2,4 mg, 0,0170 mmol) sob atmosfera de N2. Após agitação por 40 minutos a 0 ° C, a mistura de reação foi purificada por HPLC para fornecer o composto Int-T3 (2,1 mg, 75%).
[00998] EI-MS m/z: 1640(M+1). [EXEMPLO 44] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-T4
PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-T4-1
[00999] A uma solução do composto Int-B9 (10,0 mg, 0,0088 mmol) e SN-38 (3,4 mg, 0,0088 mmol) em ACN (0,8 ml) e DMF (0,2 ml) foi adicionado BEMP (2,5 ul, 0,0088 mmol) na sala temperatura sob at- mosfera de N2. Após agitação durante 2 horas à temperatura ambien- te, a mistura de reação foi purificada por HPLC para proporcionar o composto Int-T4-1 (4,5 mg, 27%).
[001000] EI-MS m/z: 1884 (M+1) PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-T4
[001001] A uma solução do Composto Int-T4-1 (4,5 mg, 0,0024 mmol) em MeOH (0,8 ml) e DCM (0,2 ml) foi adicionado K2CO3 (3,3 mg, 0,0239 mmol) sob atmosfera de N2. Após agitação por 40 minutos a 0 ° C, a mistura de reação foi purificada por HPLC para fornecer o composto Int-T4 (2,7 mg, 66%).
[001002] EI-MS m/z: 1716 (M+1). [EXEMPLO 45] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO L-5
[001003] Uma solução homogênea de 4-(N-maleimidometil) ciclohe- xano-carboxilato de N-succinimidila (85,5 mg, 0,26 mmol) e L-2 (75,3 mg, 0,28 mmol) em DCM seca à temperatura ambiente sob atmosfera de N2 foi tratada com DIPEA (44,5 ul, 0,26 mmol, 1 eq) e agitada à temperatura ambiente durante 45 minutos. A reação foi diluída com DCM (32 ml) e lavada com HCl 1N (30 ml), salmoura (30 ml), seca so- bre Na 2SO4 anidro, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi pu- rificado por HPLC preparativa para gerar o composto L-5 (70,8 mg, 61%, mistura 9 mg) como uma goma branca.
[001004] EI-MS m/z: 451(M+1) [EXEMPLO 46] PREPARAÇÃO DO COMPOSTO T-2
[001005] Uma solução homogênea do composto Int-T2 (1,4 mg, 0,90 μmol) e composto L-5 (0,81 mg, 1,79 μmol) em DMSO (1,5 ml) e H 2 O (0,1 ml) à temperatura ambiente sob atmosfera de N2 foram tratados com (BimC 4 A) 3 (2,2 mg, 2,69 μmol) e CuBr (1,26 mg, 8,95 μmol) e agitados por 10 min. A mistura de reação foi purificada por cromato- grafia em HPLC Prep para gerar o composto T-2 (0,9 mg, 50%).
[001006] EI-MS m/z: 1008 (M+1/2). [EXEMPLO 47] PREPARAÇÃO DO COMPOSTO T-3
[001007] O composto T-3 foi sintetizado através de uma via sintética similar como descrito no Exemplo 46.
[001008] Rendimento 55 %
[001009] EI-MS m/z: 1046 (M+1/2). [EXEMPLO 48] PREPARAÇÃO DO COMPOSTO T-4
[001010] O composto T-4 foi sintetizado através de uma via sintética similar como descrito no Exemplo 46.
[001011] Rendimento 81 %
[001012] EI-MS m/z: 1084 (M+1/2). [EXEMPLO 49] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-T5
PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-T5-1
[001013] A uma solução do composto Int-B9 (9,30 mg, 0,0082 mmol) e α-amanitina (5,00 mg, 0,0054 mmol, no CAS 23109-05-9) em ACN (0,8 ml) e DMF (0,2 ml) foi adicionado BEMP (1,57 ul, 0,0054 mmol) à temperatura ambiente sob atmosfera de N2. Após agitação durante 0,5 hora à temperatura ambiente, a mistura foi purificada por HPLC para proporcionar o composto Int-T5-1 (3,1mg, 29%).
[001014] EI-MS m/z: 1019 (M+1/2). PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-T5-2
[001015] A uma solução do composto Int-T5-1 (5,10 mg, 0,0025 mmol) e SN-38 (0,98 mg, 0,0025 mmol) em ACN (0,8 ml) e DMF (0,2 ml) foi adicionado BEMP (0,72 ul, 0,0025 mmol) à temperatura ambi- ente sob atmosfera de N2. Após agitação durante 1 hora à temperatura ambiente, a mistura de reação foi purificada por HPLC para proporcio- nar o composto Int-T5-2 (2,3 mg, 38%).
[001016] EI-MS m/z: 1206 (M+1/2). PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-T5
[001017] A uma solução do Composto Int-T5-2 (2,3 mg, 0,0009 mmol) em MeOH (0,3 ml) e H2O (0,2 ml) foi adicionado LiOH-H2O (0,32 mg, 0,0076 mmol) sob atmosfera de N2. Após agitação por 30 minutos a 0 ° C, a mistura de reação foi purificada por HPLC para for- necer o composto Int-T5 (1,7 mg, 79%).
[001018] EI-MS m/z: 1122 (M+1/2). [EXEMPLO 50] PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-T6
PREPARAÇÃO DE COMPOSTO INT-T6-1
[001019] A uma solução do composto Int-B9 (1,86 mg, 0,0016 mmol) e α-amanitina (3,00 mg, 0,0033 mmol, CAS No.23109-05-9) em ACN (0,4 ml) e DMF (0,1 ml) foi adicionado BEMP (0,47 ul, 0,0016 mmol) à temperatura ambiente sob atmosfera de N2. Após agitação durante 1 hora à temperatura ambiente, a mistura foi purificada por HPLC para proporcionar o composto Int-T6-1 (1,2 mg, 25%).
[001020] EI-MS m/z: 1469 (M+1/2). PREPARAÇÃO DO COMPOSTO INT-T6
[001021] A uma solução de composto Int-T6-1 (1,2 mg, 0,0004 mmol) em MeOH (0,4 ml) e H 2 O (0,2 ml) adicionou-se LiOH.H2O (0,14 mg, 0,0033 mmol) sob atmosfera de N2. Após agitação por 30 minutos a 0 °C, a mistura de reação foi purificada por HPLC para for- necer o composto Int-T6 (0,8 mg, 71%).
[001022] EI-MS m/z: 1385 (M+1/2). [EXEMPLO 51] PREPARAÇÃO DO COMPOSTO T-5
[001023] Uma solução homogênea do composto Int-T5 (1,7 mg, 0,76 μmol) e composto L-5 (0,68 mg, 1,52 μmol) em DMSO (1,5 ml) e H 2 O (0,2 ml) à temperatura ambiente sob atmosfera de N2 foi tratada com (BimC 4 A) 3 (1,87 mg, 2,27 μmol) e CuBr (1,06 mg, 7,58 μmol) e agita- da por 10 min. A mistura de reação foi purificada por cromatografia em HPLC Prep para gerar o composto T-5 (1,5 mg, 73%).
[001024] EI-MS m/z: 1347 (M+1/2). [EXEMPLO 52] PREPARAÇÃO DO COMPOSTO T-6
[001025] O composto T-6 foi sintetizado através de uma via sintética similar como descrito no Exemplo 51.
[001026] Rendimento 54%
[001027] EI-MS m/z: 1610 (M+1/2).
ESTUDOS BIOLÓGICOS E BIOQUÍMICOS [EXEMPLO 53] ESTUDO CINÉTICO DE ENSAIO DE CLIVAGEM
ENZIMÁTICA
[001028] Composto A-1, A-2 ou B-1 foi dissolvido em DMSO e mistu- rado com solução tampão PBS para preparar 500 μM de solução esto- que (1% de DMSO). Metil fenil sulfona (MPS, número CAS 3112-85-4, padrão interno) foi dissolvida em solução tampão PBS para produzir a 500 µM de solução. 790 μl de tampão PBS (pH 7,4), 10 μl da solução do composto A-1, A-2 ou B-1 (500 μM) e 200 μl de solução MPS (500 μM) foram misturados. Solução enzimática (E. coli β-galactosidase, Sigma G4155, 18 μl de 1 mg/ml) foi adicionada a 882 μl da mistura de reação. Ao comparar com β-galactosidase humana, 116 μl da solução de enzima (0,1 mg/ml) foram adicionados e soluções do composto A-1, A-2 ou B-1 (140 μl), MPS (140 μl), e a solução tampão (533 μl, pH 7,4) foram misturados.
[001029] A mistura de reação foi incubada a 37 °C. A solução de re- ação enzimática foi dividida em alíquotas 0 min antes da reação e em um tempo predeterminado após a reação, em que cada alíquota tinha 70 µl. O composto restante A-1, A-2 ou B-1, MPS e o material liberado pela reação enzimática foram analisados quantitativamente por HPLC. Os resultados dos estudos são mostrados na Tabela 1 e nas Figuras 4 e 5. [TABELA 1] Compostos t1/2de liberação de TG t1/2 de liberação de par- (min) te Q (min) A-1 < 5 min < 5 min A-2 < 10 min < 10 min B-1 < 5 min < 5 min Int-T3 145,7min 265,2 min (SN-38) 307,8 min (CA-4) [EXEMPLO 54] TESTES DE ESTABILIDADE DE PLASMA EM CA-
MUNDONGOS E HUMANOS
[001030] Os compostos A-1, A-2 ou B-1 e MPS (padrão interno) fo- ram dissolvidos em DMSO para atingir uma concentração de 60 mM. Em seguida, cada plasma humano (Biochemed 752PR-SC-PMG) e plasma de camundongo (Biochemed 029-APSC-MP) foram misturados com a solução do composto e MPS para atingir uma concentração fi- nal de 300 μM (0,5% de DMSO final). As misturas de plasma resultan- tes foram incubadas a 37 ° C. As alíquotas foram retiradas antes da reação e após 1 dia, 2 dias, 4 dias e 7 dias. Cada alíquota foi de 300 μl. Para concluir a reação, duas vezes o volume de acetonitrila foi adi- cionado, seguido por vortexação breve e centrifugação para precipita- ção de proteína plasmática. Cada sobrenadante obtido após centrifu- gação foi coletado e analisado por HPLC. Os compostos (A-1, A-2 ou B-1) foram detectados e quantificados no camundongo e no plasma humano por até 7 dias (> 95%). Este estudo demonstrou excelente estabilidade do ligante β-galactosídeo no plasma. Os resultados de estabilidade em vários plasmas foram mostrados nas FIGs.1-3. [EXEMPLO 55] PREPARAÇÃO DE CONJUGADOS
[001031] Redução/Oxidação de Anticorpos para Conjugação: Os anticorpos monoclonais projetados com cisteína foram reduzidos com um excesso de cerca de 20-50 vezes de cloridrato de TCEP (tris (2- carboxietil) fosfina em Tris 4 mM pH 7,3 com EDTA 1 mM por 1 hora a 37 ° C. HSAs fundidos com scFv foram reduzidos com cerca de 200 vezes o excesso de L-cisteína em tampão de acetato de sódio (pH 5,0) a 37 ° C por 1 dia. O tiomabe reduzido ou scFv-HSA foi diluído e car- regado em uma coluna PD-10 em PBS. A coluna foi eluída com PBS 10 mM (pH 7,3). Os tiomabEs eluídos foram restabelecidos por oxida- ção do ar a 4 °C por 4 dias. O valor de tiol/Ab ou tiol/scFv-HSA foi veri- ficado determinando a concentração de anticorpo reduzida a partir da absorbância em 280 nm da solução e a concentração de tiol por rea- ção com DTNB (Aldrich, CAS No D8130) e determinação da absor- bância em 412 nm.
[001032] Método de conjugação 1: O composto T-2, T-3 ou T-4 (obtido nos Exemplos 46, 47 e 48) (2,52 µl, 1,5 mmol, como intermedi- ário de toxina ligante) em DMSO foi tratado com o anticorpo reoxidado reduzido (7 µl, 0,12 mmol) e agitado suavemente a 40 °C por 1 hora. A mistura de conjugação foi carregada e eluída através da coluna PD-10 para remover o excesso de intermediário ligante de droga e outras im- purezas.
[001033] Método de conjugação 2: O composto T-2, T-3, T-4, T-5 ou T-6 (obtido no Exemplo 46, 47, 48, 51 e 52) (13,46 µl, 3,0 mmol, como intermediário de ligante-toxina) em DMSO foi tratado com o scFv-HSA reduzido (10 µl, 0,050 mmol) e agitado suavemente a 37 °C por 1 hora. A mistura de conjugação foi carregada e eluída através da coluna PD-10 para remover o excesso de intermediário ligante de dro- ga e outras impurezas.
[001034] Os compostos T-2, T-3, T-4, T-5 e T-6 foram usados para realizar a reação de conjugação a um grupo tiol de cisteína modificada de trastuzumabe (anti-HER2), preparando assim T-2-AB, T-3-AB, T-4-
AB, T-5-AB e T-6-AB como conjugados de droga de anticorpo. Os compostos T-2, T-3 e T-4 também foram usados para realizar a reação de conjugação a um grupo tiol da cisteína original de scFv-HSA (anti- HER2), preparando assim T-2-scFv-Alb, T- 3-scFv-Alb e T-4-scFv-Alb como conjugados de proteína e droga (PDC), respectivamente de acordo com métodos conhecidos na técnica (ver Nature Biotechno- logy, 2008, 26, 925-932, Bioconjugate Chem., 2013, 24, 1256-1263, Bioconjugate Chem., 2016, 27, 1324-1331, Bioconjugate Chem. 2014, 25, 460-469). DAR (razão entre fármaco e anticorpo) de anticorpo con- jugado foi analisado por HIC e os resultados da análise são mostrados na Tabela 2. [TABELA 2]. CONJUGADOS DE ANTICORPO/ALBUMINA SCFV-
FÁRMACO PDCs DAR Método de Conjuga- Ligante-Toxina, ção Exemplo T-2-AB 1,70 1 T-2, Exemplo 46 T-3-AB 1,75 1 T-3, Exemplo 47 T-4-AB 1,71 1 T-4, Exemplo 48 T-5-AB 0,93 1 T-5, Exemplo 51 T-6-AB 1,22 1 T-6, Exemplo 52 T-2-scFv-Alb 0,62 2 T-2, Exemplo 46 T-3-scFv-Alb 0,52 2 T-3, Exemplo 47 T-4-scFv-Alb 0,47 2 T-4, Exemplo 48 [EXEMPLO 56] CITOTOXICIDADE CELULAR DE CONJUGADOS
[001035] As células cancerosas NCI-N87, SK-BR3 foram inoculadas em placas com 96 poços a uma densidade de 5000 células por poço em 100 μl de meio e cultivadas por 24 horas. Os oito compostos obti- dos no Exemplo 55 e T-DM1 foram tratados por diluições em série de 1:5 de 50 nM a 0,000128 nM. Após 72 horas de incubação, 0,2 ml de corante brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio (MTT), dissolvido em solução tampão PBS (5 mg/ml), foi adicionado a cada poço das placas. As formazanas formadas por redução do corante MTT por oxidorredutases mitocondriais nas células vivas foram dissol- vidas em DMSO e medidas usando a absorbância a 550 nm. Os resul- tados da análise in vitro dos conjugados de proteína-fármaco são mos- trados na Tabela 3 e Figuras 6-8. [TABELA 3] CITOXICIDADE CELULAR DO CONJUGADO DE PRO- TEÍNA-FÁRMACO PDCs IC50(nM) NCI-N87 SK-BR3 T-DM1 0,766 0,042 T-2-AB ~50 - T-3-AB 9,574 - T-4-AB ~50 - T-5-AB 0,069 T-6-AB 0,049 T-2-scFv-Alb - >450 T-3-scFv-Alb - >347 T-4-scFv-Alb - >1000
INCORPORAÇÃO A TÍTULO DE REFERÊNCIA
[001036] Todas as publicações e patentes mencionadas no presente documento estão incorporadas ao presente documento a título de refe- rência em sua totalidade como se cada publicação ou patente indivi- dual estivesse específica e individualmente indicada como incorporada a título de referência. No caso de conflito, o presente pedido, incluindo quaisquer definições no presente documento, prevalecerá.
EQUIVALENTES
[001037] Embora modalidades específicas da presente invenção te- nham sido discutidas, o relatório descritivo acima é ilustrativo e não restritivo. Muitas variações da invenção serão tornadas evidentes àqueles versados na técnica mediante análise deste relatório descriti- vo e reivindicações abaixo. O escopo completo da invenção deve ser determinado por referência às reivindicações, juntamente com seu es- copo completo de equivalentes, e o relatório descritivo, juntamente com tais variações.

Claims (72)

REIVINDICAÇÕES
1. Conjugado de Fórmula (I'): (D-L)n-(CB)cb (I') ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: CB é uma porção química de alvejamento; cb e n são, cada um, independentemente, números inteiros que têm um valor de 1 a cerca de 20, de preferência, de 1 a cerca de 10; cada D-L, independentemente, é um grupo que tem a estru- tura de Fórmula (I"): (I") cada Q é, independentemente, um agente ativo ligado a L' por um he- teroátomo, de preferência, O ou N; Z', independentemente para cara ocorrência, é um grupo de ligação que conecta a estrutura da Fórmula (I") a (CB)cb, um grupo so- lubilizante, um grupo reativo (por exemplo, um grupo precursor), uma superfície sólida (por exemplo, uma partícula), um grupo estabilizante, um quelante, um biopolímero (por exemplo, uma imunoglobulina, um ácido nucleico, uma proteína, um oligopepídeo, um polipeptídeo, um anticorpo, um fragmento de um polipeptídeo antigênico, ou um repe- corpo), um agente ativo, ou um porção química detectável, desde que pelo menos uma ocorrência de Z' conecta a estrutura da Fórmula (I'') a (CB)cb; cada L' é, independentemente, uma porção química espa- çadora ligada ao SO2 através de um heteroátomo selecionado dentre
O, S e N, de preferência, O ou N, e é selecionado de modo que a cli- vagem da ligação entre L' e SO2 promova a clivagem da ligação entre L' e Q para liberar o agente ativo; cada X é, independentemente, -O-, -C(Rb)(Rc)-, ou -N(Rc)-, de preferência -C(Rb)(Rc)-; E é um número inteiro que tem um valor de 1, 2, ou 3, de preferência 1; Ar é um anel de arila com 6 membros ou heteroarila com 6 membros; Y' é -N(Ra)-, -O-, ou -S-; pelo menos um X é posicionado em uma relação orto ou para relação a Y' em Ar; TG é um grupo de desencadeamento que, quando clivado, gera um átomo de N, O, ou S com capacidade para iniciar a liberação de SO2 e (Q)q-(L')w; cada q é, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 20, de preferência, de 1 a cerca de 10; cada w e x são, cada um, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 0 ou 1; cada Ra e Rc é, independentemente, hidrogênio ou alquila inferior; e cada Rb é, independentemente Z', hidrogênio ou alquila in- ferior, desde que pelo menos uma ocorrência de Rb é Z'; ou Rb e Rc, juntamente com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel com 3 a 5 membros, de preferência, um anel com 3 ou 4 membros; desde que, quando w for 0, q seja 1.
2. Conjugado, de acordo com a reivindicação 1, caracteri- zado pelo fato de que X é -C(Rb)(Rc)-.
3. Conjugado, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, carac-
terizado pelo fato de que Ar é arila com 6 membros.
4. Conjugado, de acordo com a reivindicação 3, caracteri- zado pelo fato de que Ar é fenila.
5. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 4, caracterizado pelo fato de que pelo menos um X e Y' são posicionados em uma relação orto, um em relação ao outro, em Ar.
6. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 5, caracterizado pelo fato de que E é 2 ou 3.
7. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 6, caracterizado pelo fato de que E é 2, ambas as ocorrências de X são posicionadas em uma relação orto a Y'.
8. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 4, caracterizado pelo fato de que pelo menos um X e Y' são posicionados em uma relação para, um em relação ao outro, em Ar.
9. Conjugado, de acordo com a reivindicação 8, caracteri- zado pelo fato de que E é 1.
10. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que pelo menos um Rb além do Rb fixado a Ar representa Z'.
11. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que pelo menos um Z' (por exemplo, o Z' conectado a (CB)cb), opcionalmente cada Z', é uma por- ção química de C10–C100 alquileno linear ou ramificado, saturado ou insaturado que compreende pelo menos dois dos seguintes: (i) pelo menos um heteroátomo selecionado dentre -NH-, - C(=O), -O-, -S- e -P-; (ii) pelo menos um heteroarileno; (iii) pelo menos uma porção química de aminoácido, ligação de açúcar, ligação de peptídeo ou ligação de amida; e (iv) um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em C1-C20 alquila, C6-C20 aril C1-C8 alquila, -(CH2)sCOOH, e -(CH2)pNH2, s é um número inteiro que tem um valor de 0 a 10, e p é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10.
12. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que pelo menos um Z' (por exemplo, o Z' conectado a (CB)cb), opcionalmente cada Z', compreen- de um grupo funcional que pode ser produzido através de uma reação química click, como triazol.
13. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que pelo menos um Z' (por exemplo, o Z' conectado a (CB)cb), opcionalmente cada Z', compreen- de: , ou em que: cada V é independentemente uma ligação simples, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR24SO2- ou -SO2NR25-; R21, R22, R23, R24 e R25 são, cada um, independentemente, hidrogênio, (C1-C6)alquila, (C1-C6)alquil(C6-C20)arila ou (C1- C6)alquil(C3-C20)heteroarila; r é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10; p é um número inteiro que tem um valor de 0 a cerca de 10; q é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10; e L" é uma ligação simples.
14. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que o Z' que conecta CB e Ar é um grupo de ligação que compreende os grupos (CH2)b, Lc, (P1)a,
Wa1, Wa2, Wa3, Y1 e Y2 conectados uns aos outros em uma cadeia line- ar por ligações covalentes, em que: Wa1, Wa2 e Wa3 são, cada um, independentemente, -NH-, - C(O)- ou -CH2-; Wb1 é uma ligação de amida ou triazolileno; P1 é uma ligação de amida, um resíduo de aminoácido ou um peptídeo; Lc é alquileno; Y1 é -(CH2)q-(CH2CH2X")o- ou -(CH2)q-(X"CH2CH2X)o-; X" é -O-, -S-, -NH- ou -CH2-; Y2 é uma ligação simples ou um grupo selecionado dentre:
H O N (CH2)c Wb2 (CH2)d ; ; ;e Wb2 é uma ligação de amida ou triazolileno; a é 0 a 10; b, c e d são, cada um, independentemente, um número in- teiro que tem um valor de 1 a cerca de 10; e o e q são, cada um, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10.
15. Conjugado, de acordo com a reivindicação 14, caracte- rizado pelo fato de que o Z 'que conecta CB e Ar é um grupo de liga- ção da Fórmula (A): **-Lc-Wb1-(CH2)b-Wa3-(P1)a-Y2-Wa2-Y1-Wa1-* (A) em que: * é o ponto de ligação a CB; e ** é o ponto de ligação a Ar.
16. Conjugado, de acordo com a reivindicação 14 ou 15, caracterizado pelo fato de que P1 é
O O
H H
N N R12 ou R12 em que: R12 é hidrogênio, alquila, uma cadeia lateral de aminoácido, -(CH2)sC(O)R13 ou -(CH2)pNR14R15; p é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10; s é um número inteiro que tem um valor de 0 a cerca de 10; R13 é OH ou –NH(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z''-(CB)m; R14 e R15 são, cada um, independentemente, hidrogênio ou -C(O)(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z''-(CB)m; s'' é um número inteiro que tem um valor de 0 a cerca de 10; s' é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10; m é um número inteiro que tem um valor de 0 ou 1; X''' é -O-, -S-, -NH- ou -CH2-; e Z'' é um grupo de ligação que conecta CB ao restante de R14 ou R15; ou Z'' é um grupo de ligação que compreende um grupo reativo.
17. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 14 a 16, caracterizado pelo fato de que pelo menos um Z '(por exemplo, o Z' conectado a (CB) cb), opcionalmente cada Z ', é um gru- po de ligação da Fórmula (F), (G), (H), (J), (K), (L), (M) ou (N):
O
H H H * N (CH2)qq (X''CH2CH2)o N N (CH2)b Wb1 L2 (X"CH2CH2)a HN(O)C **
O R12 (F)
O O
H H H * N (CH2)qq (X''CH2CH2)o N N (CH2)b Wb1 L2 (X"CH2CH2)a HN(O)C ** R12 (G)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (X"CH2CH2)a HN(O)C ** R12 (H)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (X"CH2CH2)a HN(O)C ** R12 (J)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (X"CH2CH2)a HN(O)C ** R12 (K) O Re O O
H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)e X4 N (CH2)b Wb1 L2 (X"CH2CH2)a HN(O)C ** 2 R12 (L)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (X"CH2CH2)a HN(O)C ** R12 (M)
O O O
H H H H * N (CH2)qq(X''CH2CH2)o N (CH2)c Wb2 (CH2)d N N (CH2)b Wb1 L2 (X"CH2CH2)a HN(O)C ** R12 (N) em que: Re é alquila; X'' é -O-, -S-, -NH- ou -CH2-; X4 é –NHC(O)-(CH2)g-NH- ou –C(O)NH-(CH2)h-NH-; Wb1 e Wb2 são, cada um, independentemente, -C(O)NH-, - NHC(O)-, ou ; R12 é hidrogênio, alquila, uma cadeia lateral de aminoácido, -(CH2)sC(O)R13 ou -(CH2)pNR14R15; R13 é OH ou –NH(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z''-(CB)m; R14 e R15 são, cada um, independentemente, hidrogênio ou
-C(O)(CH2)s'(X'''CH2CH2)s"Z''-(CB)m; s e s'' são, cada um, independentemente, um número intei- ro que tem um valor de 0 a cerca de 10; m é um número inteiro que tem um valor de 0 ou 1; X''' é -O-, -S-, -NH- ou -CH2-; e Z'' é um grupo de ligação que conecta CB ao restante de R14 ou R15; ou Z'' é um grupo de ligação que compreende um grupo reativo; e b, c, d, e, g, h, o e q são, cada um, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10; e s' é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10.
18. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 1 a 17, caracterizado pelo fato de que TG é uma porção quími- ca reativa ou grupo funcional que pode ser clivado por condições de reagente nucleofílico, condições de reagente básico, fotoirradiação, condições de agente redutor, condições ácidas, condições enzimáticas ou condições oxidantes.
19. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 1 a 18, caracterizado pelo fato de que TG é selecionado den- tre: ; ;e em que: cada R21 é, independentemente, hidrogênio ou acetila; e R22 é hidrogênio ou alquila inferior.
20. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindi-
cações 1 a 17, caracterizado pelo fato de que x é 0.
21. Conjugado, de acordo com a reivindicação 20, caracte- rizado pelo fato de que TG é selecionado dentre -NO2, -C(O)- (CH2)2C(O)-alquila e nitrobenzila.
22. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 1 a 21, caracterizado pelo fato de que Q é um fator químico, um fator biológico, um hormônio, um oligonucleotídeo, um fármaco, uma toxina, um ligante por afinidade, uma sonda para detecção ou uma combinação dos mesmos.
23. Conjugado, de acordo com a reivindicação 22, caracte- rizado pelo fato de que Q é um fármaco selecionado dentre uma cito- cina, um composto imunomodulador, um agente anticâncer, um agente antiviral, um agente antibacteriano, um agente antifúngico, um agente anti-helmíntico ou uma combinação dos mesmos.
24. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 1 a 21, caracterizado pelo fato de que (Q)q-(L')w- é selecionado dentre: ; ; ; ;e ; em que: X1 é -O- ou -NRa-; X2 e X4, cada um, independentemente, estão ausentes ou são -C(O)- ou -C(O)O-; X3 é -OC(=O)-; w' é um número inteiro que tem um valor de 1, 2, 3, 4 ou 5; R9 e R10 são, cada um, independentemente, hidrogênio,
alquila, arila ou heteroarila, em que alquila, arila e heteroarila são não substituídas ou substituídas por um ou mais substituintes, por exem- plo, selecionados dentre alquila, -(CH2)uNH2, -(CH2)uNRu1Ru2 e - (CH2)uSO2Ru3; Ru1, Ru2, e Ru3 são, cada um, independentemente, hidrogê- nio, alquila, arila ou heteroarila; e u é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10.
25. Conjugado, de acordo com a reivindicação 24, caracte- rizado pelo fato de que (Q)q-(L')w- é selecionado dentre:
, em que * representa o ponto de ligação de (Q)q-(L')w a -SO2-.
26. Conjugado, de acordo com a reivindicação 24, caracte- rizado pelo fato de que (Q)q-(L')w- é selecionado dentre: ,
em que * representa o ponto de ligação de (Q)q-(L')w a -SO2-.
27. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 1 a 26, caracterizado pelo fato de que a porção química de al- vejamento é uma nanopartícula, uma imunoglobulina, um ácido nuclei- co, uma proteína, um oligopeptídeo, um polipeptídeo, um anticorpo, um fragmento de um polipeptídeo antigênico ou um repecorpo.
28. Conjugado, de acordo com a reivindicação 27, caracte- rizado pelo fato de que a porção química de alvejamento é um anticor- po selecionado dentre um anticorpo policlonal, um anticorpo monoclo- nal intacto, um fragmento de anticorpo, um mutante de cadeia única Fv (scFv), um anticorpo multiespecífico, um anticorpo biespecífico, um anticorpo quimérico, um anticorpo humanizado, um anticorpo humano, uma proteína de fusão que compreende uma porção determinante an- tigênica de um anticorpo e outras moléculas de imunoglobulina modifi- cadas que compreendem sítios de reconhecimento de antígeno.
29. Conjugado, de acordo com a reivindicação 27, caracte- rizado pelo fato de que o anticorpo é selecionado dentre Muromonab- CD3, Abciximab, Rituximab, Daclizumab, Palivizumab, Infliximab, Tras- tuzumab (herceptina), Etanercept, Basiliximab, Gemtuzumab ozogami- cina, Alemtuzumab, Ibritumomab tiuxetano, Adalimumab, Alefacept, Omalizumab, Efalizumab, Tositumomob-I131, Cetuximab, Bevacizumab, Natalizumab, Ranibizumab, Panitumumab, Eculizumab, Rilonacept, Certolizumab pegol, Romiplostim, AMG-531, CNTO-148, CNTO-1275, ABT-874, LEA-29Y, Belimumab, TACI-Ig, anti-CD20 de segunda gera- ção, ACZ-885, Tocilizumab, Atlizumab, Mepolizumab, Pertuzumab, Humax CD20, Tremelimumab (CP-675 206), Ticilimumab, MDX-010, IDEC-114, Inotuzumab ozogamicina, HuMax EGFR, Aflibercept, Hu- Max-CD4, Ala-Ala, ChAglyCD3, TRX4, Catumaxomab, IGN101, MT- 201, Pregovomab, CH-14.18, WX-G250, AMG-162, AAB-001, Mota- vizumab, MEDI-524, Efumgumab, Aurograb, Raxibacumab, anti-CD20 de terceira geração, LY2469298 e Veltuzumab.
30. Composto de Fórmula (Ia): (Ia) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: cada Q é, independentemente, um agente ativo ligado a L' por um heteroátomo, de preferência, O ou N; Z', independentemente para cara ocorrência, está ausente, é um grupo de ligação que conecta a estrutura da Fórmula (Ia) a (CB)cb, um grupo solubilizante, um grupo reativo (por exemplo, um grupo precursor), uma superfície sólida (por exemplo, uma partícula), um grupo estabilizante, um quelante, um biopolímero (por exemplo, uma imunoglobulina, um ácido nucleico, uma proteína, um oligopepí- deo, um polipeptídeo, um anticorpo, um fragmento de um polipeptídeo antigênico, ou um repecorpo), um agente ativo, ou um porção química detectável, desde que pelo menos uma ocorrência de Z' conecta a es- trutura da Fórmula (Ia) a (CB)cb; cada L' é, independentemente, um grupo de ligação ligado ao SO2 através de um heteroátomo selecionado dentre O, S e N, de preferência, O ou N, e é selecionado de modo que a clivagem da liga- ção entre L' e SO2 promova a clivagem da ligação entre L' e Q para liberar o agente ativo; cada X é, independentemente, -O-, -C(Rb)(Rc)-, ou -N(Rc)-, de preferência -C(Rb)(Rc)-; E é um número inteiro que tem um valor de 1, 2, ou 3, de preferência 1; Ar é um anel de arila com 6 membros ou heteroarila com 6 membros; Y' é -N(Ra)-, -O-, ou -S-; pelo menos um X é posicionado em uma relação orto ou para relação a Y' em Ar; TG é um grupo de desencadeamento que, quando clivado, gera um átomo de N, O, ou S com capacidade para iniciar a liberação de SO2 e (Q)q-(L')w; cada q é, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 20, de preferência, de 1 a cerca de 10; cada w e x são, cada um, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 0 ou 1; cada Ra e Rc é, independentemente, hidrogênio ou alquila inferior; e cada Rb é, independentemente Z', hidrogênio ou alquila in- ferior, desde que pelo menos uma ocorrência de Rb é Z; ou Rb e Rc, juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados, formam um anel com 3 a 5 membros, de preferência, um anel com 3 ou 4 membros; desde que, quando w for 0, q seja 1.
31. Composto de Fórmula (Ia): (Ia) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: cada Q é, independentemente, um agente ativo ligado a L' por um heteroátomo, de preferência, O ou N; Z 'é um grupo reativo cada L' é, independentemente, um grupo de ligação ligado ao SO2 através de um heteroátomo selecionado dentre O, S e N, de preferência, O ou N, e é selecionado de modo que a clivagem da liga- ção entre L' e SO2 promova a clivagem da ligação entre L' e Q para liberar o agente ativo; cada X é, independentemente, -O-, -C(Rb)(Rc)-, ou -N(Rc)-, de preferência -C(Rb)(Rc)-; E é um número inteiro que tem um valor de 1, 2, ou 3, de preferência 1; Ar é um anel de arila com 6 membros ou heteroarila com 6 membros; Y' é -N(Ra)-, -O-, ou -S-; pelo menos um X é posicionado em uma relação orto ou para relação a Y' em Ar; TG é um grupo de desencadeamento que, quando clivado, gera um átomo de N, O, ou S com capacidade para iniciar a liberação de SO2 e (Q)q-(L')w; cada q é, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 20, de preferência, de 1 a cerca de 10; cada w e x são, cada um, independentemente, um número inteiro que tem um valor de 0 ou 1; cada Ra e Rc é, independentemente, hidrogênio ou alquila inferior; e cada Rb é, independentemente Z', hidrogênio ou alquila in- ferior, desde que pelo menos uma ocorrência de Rb é Z; ou Rb e Rc, juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados, formam um anel com 3 a 5 membros, de preferência, um anel com 3 ou 4 membros; desde que, quando w for 0, q seja 1.
32. Composto, de acordo com a reivindicação 30 ou 31, ca- racterizado pelo fato de que Ar é arila com 6 membros.
33. Composto, de acordo com a reivindicação 30 ou 31, ca- racterizado pelo fato de que Ar é fenila ou naftila.
34. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 30 a 33, caracterizado pelo fato de que pelo menos um X e Y' são posicionados em uma relação orto, um em relação ao outro, em Ar.
35. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 30 a 34, caracterizado pelo fato de que E é 2 ou 3.
36. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 30 a 35, caracterizado pelo fato de que E é 2, ambas as ocorrên- cias de X são posicionados em uma relação orto a Y'.
37. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 30 a 33, caracterizado pelo fato de que pelo menos um X e Y' são posicionados em uma relação para, um em relação ao outro, em Ar.
38. Composto, de acordo com a reivindicação 37, caracteri- zado pelo fato de que E é 1.
39. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 30 a 38, caracterizado pelo fato de que pelo menos um Rb além do Rb fixado a Ar representa Z'.
40. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 30 a 39, caracterizado pelo fato de que pelo menos um Z ', opci- onalmente cada Z', compreende um ou mais grupos selecionados den- tre isocianeto, isotiocianeto, dissulfeto de 2-piridila, haloacetamida (- NHC(O)CH2-halo), maleimida, dieno, alceno, haleto, tosilato (TsO-), aldeído, sulfonato (R-SO 3-), , , ácido fosfônico (- P (= O) (OH) 2), cetona, C8-C10 cicloalquinila, -OH, - NHOH, -NHNH 2, -SH, ácido carboxílico (- COOH), acetileno (-C≡CH), azida (-N 3), amino (-NH 2), ácido sulfônico (-SO 3 H), um derivado de alcinona (-C (O) C≡C-R a) e di-hidrogenofosfato (-OP (= O) (OH) 2).
41. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 30 a 40, caracterizado pelo fato de que x é 0.
42. Composto, de acordo com a reivindicação 41, caracteri- zado pelo fato de que TG é -NO2, -OC(O)(CH2)rC(O)R1, -NHNH2, R4 O R5  B O R6 2 3 7 -BR R , ou R , em que: R1 é C1-C6 alquila; R2 e R3 são, cada um, independentemente, hidrogênio, C1- C6 alquila, C1-C6 alcóxi ou hidróxi; R4, R5, R6 e R7 são, cada um, independentemente, hidrogê- nio ou C1-C6 alquila; e r é um número inteiro que tem um valor de 1, 2, 3, 4 ou 5.
43. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 30 a 40, caracterizado pelo fato de que TG é selecionado dentre: ; ;e em que: cada R21 é, independentemente, hidrogênio ou acetila; e R22 é hidrogênio ou alquila inferior.
44. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 30 a 40, caracterizado pelo fato de que TG é selecionado dentre - NO2, -C(O)-(CH2)2C(O)-alquila e nitrobenzila.
45. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 30 a 44, caracterizado pelo fato de que (Q)q-(L')w- é selecionado dentre:
X2 Q X1 ; ; ; ;e ; em que: X1 é -O- ou -NRa-; X2 e X4, cada um, independentemente, estão ausentes ou são C(O)-, -C(O)O- ou -C(O)NH-; X3 é -OC(=O)-; w' é um número inteiro que tem um valor de 1, 2, 3, 4 ou 5; R9 e R10 são, cada um, independentemente, hidrogênio, alquila, arila ou heteroarila, em que alquila, arila e heteroarila são op- cionalmente substituídas por um ou mais substituintes, por exemplo, selecionados dentre alquila, -(CH2)uNH2, -(CH2)uNRu1Ru2 e - (CH2)uSO2Ru3; Ru1, Ru2, e Ru3 são, cada um, independentemente, hidrogê- nio, alquila, arila ou heteroarila; e u é um número inteiro que tem um valor de 1 a cerca de 10.
46. Composto, de acordo com a reivindicação 45, caracteri- zado pelo fato de que (Q)q-(L')w- é selecionado dentre:
, em que * representa o ponto de ligação de (Q)q-(L')w - a -SO2-.
47. Composto, de acordo com a reivindicação 45, caracteri- zado pelo fato de que (Q)q-(L')w- é selecionado dentre:
, em que * representa o ponto de ligação de (Q)q-(L')w a -SO2-.
48. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 30 a 45, caracterizado pelo fato de que Q é um fator químico, um fator biológico, um hormônio, um oligonucleotídeo, um fármaco, uma toxina, um ligante por afinidade, uma sonda para detecção ou uma combinação dos mesmos.
49. Composto, de acordo com a reivindicação 48, caracteri- zado pelo fato de que Q é um fármaco selecionado dentre uma citoci- na, um composto imunomodulador, um agente anticâncer, um agente antiviral, um agente antibacteriano, um agente antifúngico, um agente anti-helmíntico ou uma combinação dos mesmos.
50. Método para preparar um conjugado, caracterizado pelo fato de que compreende reagir o composto, como definido em qual- quer uma das reivindicações 30 a 49, com uma porção química de al- vejamento.
51. Método, de acordo com a reivindicação 50, caracteriza- do pelo fato de que a porção química de alvejamento é uma nanopar- tícula, uma imunoglobulina, um ácido nucleico, uma proteína, um oli- gopeptídeo, um polipeptídeo, um anticorpo, um fragmento de um poli- peptídeo antigênico ou um repecorpo.
52. Método, de acordo com a reivindicação 51, caracteriza- do pelo fato de que a porção química de alvejamento é um anticorpo selecionado dentre um anticorpo policlonal, um anticorpo monoclonal intacto, um fragmento de anticorpo, um mutante de cadeia única Fv (scFv), um anticorpo multiespecífico, um anticorpo biespecífico, um anticorpo quimérico, um anticorpo humanizado, um anticorpo humano, uma proteína de fusão que compreende uma porção determinante an- tigênica de um anticorpo e outras moléculas de imunoglobulina modifi- cadas que compreendem sítios de reconhecimento de antígeno.
53. Método, de acordo com a reivindicação 51, caracteriza- do pelo fato de que o anticorpo é selecionado dentre Muromonab-CD3, Abciximab, Rituximab, Daclizumab, Palivizumab, Infliximab, Trastuzu- mab (herceptina), Etanercept, Basiliximab, Gemtuzumab ozogamicina, Alemtuzumab, Ibritumomab tiuxetano, Adalimumab, Alefacept, Oma- lizumab, Efalizumab, Tositumomob-I131, Cetuximab, Bevacizumab, Na- talizumab, Ranibizumab, Panitumumab, Eculizumab, Rilonacept, Cer- tolizumab pegol, Romiplostim, AMG-531, CNTO-148, CNTO-1275, ABT-874, LEA-29Y, Belimumab, TACI-Ig, anti-CD20 de segunda gera- ção, ACZ-885, Tocilizumab, Atlizumab, Mepolizumab, Pertuzumab, Humax CD20, Tremelimumab (CP-675 206), Ticilimumab, MDX-010, IDEC-114, Inotuzumab ozogamicina, HuMax EGFR, Aflibercept, Hu- Max-CD4, Ala-Ala, ChAglyCD3, TRX4, Catumaxomab, IGN101, MT- 201, Pregovomab, CH-14.18, WX-G250, AMG-162, AAB-001, Mota- vizumab, MEDI-524, Efumgumab, Aurograb, Raxibacumab, anti-CD20 de terceira geração, LY2469298 e Veltuzumab.
54. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende um conjugado, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 29, e um transportador ou excipiente farmaceutica- mente aceitável.
55. Composição de imaginologia caracterizada pelo fato de que compreende um conjugado, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 29.
56. Método para imaginologia caracterizado pelo fato de que compreende colocar um material (por exemplo, uma célula) em contato com a composição de imaginologia, como definido na reivindi- cação 55.
57. Composto sensor caracterizado pelo fato de que com- preende um conjugado, como definido em qualquer uma das reivindi- cações 1 a 29.
58. Método para detecção caracterizado pelo fato de que compreende colocar um material em contato com o composto sensor, como definido na reivindicação 57.
59. Comutador molecular, máquina molecular ou nanomá- quina, caracterizada pelo fato de que compreende um conjugado, co- mo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 29.
60. Método para mover porções de um dispositivo molecu- lar, caracterizado pelo fato de que compreende misturar em uma solu- ção (1) o comutador molecular, máquina molecular ou nanomá- quina, de acordo com a reivindicação 59; e (2) um agente de ativação que ativa o grupo de desenca- deamento.
61. Método para entregar um agente ativo a uma célula, caracterizado pelo fato de que compreende colocar a célula em conta- to com um conjugado, como definido em qualquer uma das reivindica- ções 1 a 29, em que a porção química de alvejamento é selecionada para se ligar a uma molécula associada a uma célula-alvo.
62. Método, de acordo com a reivindicação 61, caracteriza- do pelo fato de que a célula está em um indivíduo que precisa do mesmo, tratando, assim, uma doença ou afecção.
63. Método, de acordo com a reivindicação 61 ou 62, carac- terizado pelo fato de que a célula-alvo é uma célula cancerosa e a porção química de alvejamento é selecionada para se ligar à molécula associada à célula cancerosa (e não associada a células saudáveis ou pelo menos, de preferência, associada a células tumorais em vez de células saudáveis).
64. Método, de acordo com a reivindicação 62 ou 63, carac- terizado pelo fato de que a doença ou afecção é uma doença autoimu- ne, uma doença infecciosa ou um tumor.
65. Método para tratar uma doença proliferativa, caracteri- zado pelo fato de que compreende administrar um conjugado, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 29.
66. Método, de acordo com a reivindicação 65, caracteriza- do pelo fato de que a doença proliferativa é selecionada dentre distúr- bios autoimunes (por exemplo, lúpus eritematoso sistêmico, artrite reumatoide, doença de enxerto-contra-hospedeiro, miastenia grave ou síndrome de Sjӧgren), infecções inflamatórias crônicas (por exemplo, psoríase, asma ou doença de Crohn), distúrbios de hiperproliferação (por exemplo, câncer de mama, câncer de pulmão), infecções virais (por exemplo, herpes, papiloma ou HIV), osteoartrite e aterosclerose.
67. Método, de acordo com a reivindicação 66, caracteriza- do pelo fato de que a doença proliferativa é câncer selecionado dentre carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma, leucemia ou uma malignidade linfoide.
68. Método, de acordo com a reivindicação 67, caracteriza- do pelo fato de que o câncer é câncer de célula escamosa (por exem- plo, câncer de célula escamosa epitelial), câncer de pulmão (por exemplo, câncer de pulmão de célula pequena, câncer de pulmão de célula não pequena ("NSCLC"), adenocarcinoma do pulmão e carci- noma escamoso do pulmão), câncer do peritônio, câncer hepatocelu- lar, câncer gástrico ou de estômago (por exemplo, câncer gastrointes- tinal), câncer pancreático, glioblastoma, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de fígado, câncer de bexiga, hepatoma, câncer de ma-
ma, câncer de cólon, câncer retal, câncer colorretal, câncer endometri- al ou uterino, carcinoma de glândula salivar, câncer de rins ou renal, câncer de próstata, câncer vulval, câncer de tireoide, carcinoma hepá- tico, carcinoma anal, carcinoma peniano, leucemia aguda e câncer de cabeça/cérebro e pescoço.
69. Método, de acordo com a reivindicação 68, caracteriza- do pelo fato de que o câncer é carcinoma cervical.
70. Composto da Fórmula (IV):
Y W X Ar n (R)n (IV) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: X é -O-, -C(Rb)(Rc)-, ou -N(Rc)-, de preferência -C(Rb)(Rc)-; W é -SO2-G; G é halogênio (de preferência, flúor), imidazol ou N-metil imidazólio; R é um substituinte ou -L1'-Z; L1' é um C1–C200-alquileno que compreende opcionalmente pelo menos uma dentre uma ligação de peptídeo, uma ligação de ami- no, uma ligação de éter, uma ligação de triazol, uma ligação de tetra- zol, uma ligação de açúcar, uma ligação de sulfonamida, uma ligação de fosfonato, uma ligação de sulfo ou uma estrutura de dendrímero; Z é um precursor selecionado dentre isocianeto, isotiocia- neto, dissulfeto de 2-piridila, haloacetamida (-NHC(O)CH2-hal), malei- mida, dieno, alceno, haleto, tosilato (TsO-), aldeído, sulfonato (R-
O
N N
O O N
S O S
H
O O SO3−), , O , ácido fosfônico (- P(=O)(OH)2), cetona, C8-C10 cicloalquila, -OH, -NHOH, -NHNH2, -SH, ácido carboxílico (-COOH), acetileno (-C≡CH), azida (-N3), amino (- NH2), ácido sulfônico (-SO3H), um derivado de alquinona (-C(O)C≡C- Ra, em que Ra é C1–C10-alquila) e fosfato de di-hidrogênio (- OP(=O)(OH)2); n é um n é um número inteiro que tem um valor de 1 a 4; Y é N(RC)-dipeptídeo (por exemplo, Val-Cit, Val-Ala), -NO2, -OC(O)(CH2)rC(O)R1, -O(CH2)r-Ar1-NO2, -NHOH, -NHNH2, -BR2R3, Ra O Rb  B O Rc d R ou -Y'-TG, como -NO2, -OC(O)(CH2)rC(O)R1, -O(CH2)r-Ar1- Ra O Rb  B O Rc NO2, -NHNH2, -BR2R3, Rd ou -Y'-TG; R1 é C1-C6 alquila; r é um número inteiro de 1 a 5; Ar1 é C6–C20-arileno; R2 e R3 são, cada um, independentemente, hidrogênio, C1- C6 alquila, C1-C6 alcóxi ou hidróxi; Ra, Rb, Rc e Rd são, cada um, independentemente, hidrogê- nio ou C1-C6 alquila; Y' é -(CH2)xNR"-, -(CH2)xO- ou -(CH2)xS-; R" é hidrogênio ou C1-C6 alquila; x é um número inteiro de 0 ou 1; e TG é um grupo de desencadeamento.
71. Composto da Fórmula (IV):
TG
O W X Ar n L1-Z (V) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: W, L1' e Z são iguais como definido para a Fórmula (IV); e TG é um grupo de desencadeamento, tal como um β- galactosídeo, β-glucuronídeo ou uma combinação de β-galactosídeo e β-glucuronídeo.
72. Composto da Fórmula (VI):
Y W X Ar n (VI) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: W é igual como definido para a Fórmula (IV); Y é N(RC)-dipeptídeo (por exemplo, Val-Cit, Val-Ala), -NO2, -OC(O)(CH2)rC(O)R1, -O(CH2)r-Ar1-NO2, -NHOH, -NHNH2, -BR2R3, ou - O-TG; R1 é C1–C6-alquila, tal como NO2, -OC(O)(CH2)rC(O)R1, - O(CH2)r-Ar1-NO2, -NHOH, -NHNH2, -BR2R3 ou -O-TG; R1 é C1–C6-alquila; r é um número inteiro de 1 a 5; Ar1 é fenileno, bifenileno ou naftaleno; R2 e R3 são, cada um, independentemente, hidrogênio, C1- C6 alquila, C1-C6 alcóxi ou hidróxi;
Ra, Rb, Rc e Rd são, cada um, independentemente, hidrogê- nio ou C1–C6-alquila; e TG é um grupo de desencadeamento, β-galactosídeo, β- glucuronídeo ou uma combinação de β-galactosídeo e β-glucuronídeo.
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Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3092254A4 (en) * 2014-01-10 2017-09-20 Birdie Biopharmaceuticals Inc. Compounds and compositions for treating her2 positive tumors
KR101628872B1 (ko) * 2014-05-28 2016-06-09 주식회사 레고켐 바이오사이언스 자가-희생 기를 포함하는 화합물
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KR101766822B1 (ko) * 2015-09-10 2017-08-24 서울대학교산학협력단 디페닐설페이트 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 c형 간염 바이러스 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2018124758A2 (ko) * 2016-12-28 2018-07-05 주식회사 인투셀 베타-갈락토사이드가 도입된 자가-희생 기를 포함하는 화합물
BR112019028295A2 (pt) * 2017-07-04 2020-07-21 Intocell, Inc. compostos que compreendem ligante clivável e usos dos mesmos

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