BR112020013342A2

BR112020013342A2 - composições e dispositivos para fornecimento sistêmico de uridina

Info

Publication number: BR112020013342A2
Application number: BR112020013342-6A
Authority: BR
Inventors: Reid W. von Borstel; Rolando Alejandro Garcia Garcia
Original assignee: Wellstat Therapeutics Corporation
Priority date: 2018-02-01
Filing date: 2019-02-01
Publication date: 2020-12-01
Also published as: AU2019215105A1; IL276236A; KR20200116096A; EP3746050A4; EP3746050A1; JP2021512061A; CA3217123A1; US20210187001A1; CA3088213A1; WO2019152776A8; CN111601589A; RU2020128453A; JP2024023386A; WO2019152776A1; ZA202003700B; MX2020007866A

Abstract

Uma solução de uridina em solução salina e opcionalmente contendo também beta-hidroxibutirato, pode ser administrada de forma subcutânea. É descrito um reservatório capaz de conter uma solução de uridina em solução salina, o reservatório estando ligado de forma fluida a uma ou mais agulhas de infusão e uma bomba configurada para transferir a solução do reservatório através da uma ou mais agulhas de infusão para um indivíduo.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “COMPOSIÇÕES E DISPOSITIVOS PARA FORNECIMENTO SISTÊMICO DE URIDINA”.

ANTECEDENTE DA INVENÇÃO

[0001] Lesão cerebral causada por trauma ou privação de oxigênio é a causa principal de morbidez irreversível e mortalidade. A lesão cerebral traumática (TBI) e a encefalopatia hipóxica-isquêmica (HIE) exibem cursos similares de danos e recuperação, pelo fato de que a injúria inicial (traumática ou isquêmica), uma vez estabilizada, é frequentemente acompanhada por uma fase de crise metabólica e dano secundário consequente que começa minutos até alguns dias após a injúria inicial, que pode incluir insuficiência mitocondrial, edema (com perfusão sanguínea no cérebro prejudicada consequente causada pela pressão intracraniana aumentada), convulsões, lesão excitotóxica, morte celular e inflamação. Esta fase secundária frequentemente contribui para consequências de longo prazo ou irreversíveis, que incluem mortalidade, após o início de HIE e TBI, mas também fornece uma janela de tempo em que agentes ou procedimentos neuroprotetores (tal como hipotermia cerebral) podem ser aplicados para atenuar os danos acumulativos e promover a recuperação.

[0002] Foi mostrado que injeções intraperitoneais de uridina exibem algum grau de efeitos neuroprotetores em modelos com roedores de TBI e HIE, reduzindo a morte celular e o edema cerebral. Entretanto, a maioria ou todos estes estudos foram realizados em ratos, que catabolizam rapidamente e extensivamente a uridina (utilizando citidina no lugar para transferência de pirimidina interórgãos) e, portanto, não preveem a atividade potencial (ou falta de atividade) da uridina em seres humanos ou outras espécies. A uridina também pode induzir hipotermia em ratos como uma consequência de sua degradação, potencialmente confundido a interpretação de resultados de proteção, uma vez que a hipotermia induzida pelo resfriamento da cabeça ou do corpo pode exibir alguma atividade neuroprotetora, já que pode reduzir as demandas de energia nos tecidos.

[0003] Em seres humanos, a administração sistêmica de uridina foi abandonada nos testes clínicos após terem sido encontrados problemas nas tentativas de administrar a uridina por infusão intravenosa. A hipertermia foi encontrada como uma toxicidade limitante da dose durante a infusão intravenosa de uridina em seres humanos (em contraste com um efeito hipotérmico em roedores); a hipertermia é contraprodutiva em indivíduos com lesão cerebral e pode exacerbar as lesões no traumatismo cerebral agudo ou na isquemia. Além disso, a infusão de uridina nas veias periféricas acessíveis em seres humanos causou flebite local e a administração através de cateteres venosos centrais foi necessária para resolver este efeito colateral. Por estas razões, a administração parenteral de uridina foi abandonada em favor do profármaco de uridina disponível oralmente, triacetato de uridina, como um método para fornecer uridina sistêmica no início dos anos de

1990.

[0004] Foram propostos combustíveis alternativos para suporte do metabolismo energético do cérebro após TBI ou HIE, mas também exibiram resultados ambíguos em modelos com animais. Beta- hidroxibutirato (BHB), um corpo cetônico que o cérebro pode utilizar diretamente em situações de disponibilidade de glicose reduzida ou utilização prejudicada de glicose, exibiu tanto efeitos positivos quanto deletérios em modelos de lesão cerebral, incluindo danos na integridade da barreira sangue-cérebro quando fornecido em doses neuroprotetoras através de infusão intravenosa, por exemplo, a 30 mg/kg de BHB durante 6 horas em ratos.

[0005] Uma variedade de outros agentes foi testada com a intenção de reduzir danos secundários no cérebro após TBI ou HIE, incluindo magnésio, que exibiu resultados ambíguos e algumas vezes deletérios em modelos pré-clínicos com animais e pouco ou nenhum benefício em testes clínicos em seres humanos. O transporte de magnésio através da barreira sangue-cérebro pode limitar sua utilidade e não é claro se os déficits de magnésio observados no cérebro após TBI e em outras situações patológicas é uma causa ou um efeito de danos celular ou insuficiência de energia. Uma revisão de experiência clínica com tratamento com magnésio na TBI concluiu, “There is no evidence to support the use of magnesium salts in patients with acute traumatic brain injury” (Arango MF e Bainbridge D, “Magnesium for acute traumatic brain injury (Review). Cochrane Database of Systematic reviews 2008, Issue 4, Article NO. CDO05400).

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0006] Esta invenção fornece uma solução que compreende uma quantidade neuroprotetora de uridina dissolvida em solução salina.

[0007] Esta invenção fornece um método de tratamento de uma condição de lesão cerebral aguda em um indivíduo, que compreende a administração a um indivíduo de uma composição que compreende uma quantidade neuroprotetora de uridina dissolvida em solução salina.

[0008] Esta invenção fornece um sistema para fornecimento de uridina, que compreende um reservatório capaz de carregar uma solução que compreende uridina dissolvida em solução salina, o reservatório estando ligado de forma fluida a uma ou mais agulhas de infusão e uma bomba configurada para transferir a solução do reservatório através da uma ou mais agulhas de infusão para um indivíduo.

[0009] Esta invenção fornece um método de administração de uridina a um indivíduo mamífero que necessita de terapia com uridina, que compreende a administração de forma subcutânea ao indivíduo de uma composição farmacêutica que compreende uridina dissolvida em uma solução salina, em uma quantidade suficiente para manter uma concentração de uridina no plasma de 50 a 150 micromolares no indivíduo.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0010] Figura 1: Efeito de Uridina e MgBHB Racêmico (B- hidroxibutirato de magnésio) sobre a Mortalidade em Camundongos Tratados com 60 mg/Kg de 3-NP (ácido 3-nitropropiônico). Em um modelo de camundongo 3-NP de disfunção mitocondrial a porcentagem de sobrevivência em vários pontos de tempo é mostrada para camundongos tratados com solução salina (controle negativo), solução de uridina subcutânea, MgBHB-3H2O ou tanto solução de uridina subcutânea quanto MA9BHB:3H20O.

[0011] Figura 2: Sobrevivência de camundongos que receberam 60 mg/kg/dia de ácido 3-nitropropiônico e foram tratados com uridina subcutânea 200 mg/kg t.i.d. e Na(D-BHB) versus Na(DL-BHB) 328 mg/kg t.i.d., isoladamente e em combinação

[0012] Figura 3: Alteração do peso corporal (% do peso na linha de base) em camundongos que receberam 60 mg/Kkg/dia de ácido 3- nitropropiônico e foram tratados com uridina subcutânea 200 mg/kg t.i.d. e Na(D-BHB) versus Na(DL-BHB) 328 mg/kg t.i.d., isoladamente e em combinação

[0013] Figura 4: Sobrevivência de camundongos que receberam 65 mg/kg/dia de ácido 3-nitropropiônico e foram tratados com uridina subcutânea 200 mg/kg t.i.d. e Na(D-BHB) 985 mg/kg t.i.d. isoladamente e em combinação

[0014] Figura 5: Sobrevivência de camundongos que receberam 70 mg/kg/dia de ácido 3-nitropropiônico e foram tratados com uridina subcutânea 200 mg/kg t.i.d. e Na(D-BHB) 985 mg/kg t.i.d. isoladamente e em combinação

[0015] Figura 6: Uridina no plasma após a administração subcutânea de uridina ou uridina + Na(D-BHB)

[0016] Figura 7: Uracila no plasma após a administração subcutânea de uridina ou uridina + Na(D-BHB)

[0017] Figura 8: Plasma [uridina + uracila] após a administração subcutânea de uridina ou uridina + Na(D-BHB)

[0018] Figura 9: Plasma D-beta-hidroxibutirato após a administração subcutânea de uridina ou uridina + Na(D-BHB)

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0019] Em situações de emergência tal lesão cerebral traumática (TBI) e encefalopatia hipóxica-isquêmica (HIE)—uma consequência de asfixia no parto-ou ressuscitação após parada cardíaca ou afogamento, o início de terapia neuroprotetora o mais rápido possível é essencial e a colocação de um cateter venoso central é problemática e arriscada nestas situações, especialmente quando outras lesões que frequentemente acompanham a TBI requerem atenção imediata.

[0020] Se uma vítima de TBI ou HIE estiver inconsciente ou incapacitada de outra maneira, pode ser difícil administrar um profármaco de uridina oral tal como triacetato de uridina apropriadamente, especialmente em uma situação de emergência, em que o tempo até o tratamento é crucial.

[0021] Existe uma necessidade de administrar de forma controlada rápida uridina sistêmica em concentrações e durações suficiente para proteger o cérebro e outros tecidos sem efeitos colaterais deletérios tal como hipertermia ou flebite e sem requerer acesso venoso central para administração.

[0022] Foi relatado que a uridina fornece neuroproteção em alguns modelos de disfunção mitocondrial e hipóxia aguda e isquemia quando fornecida na forma de triacetato de uridina oral ou na forma de injeções intraperitoneais da própria uridina. Para algumas indicações clínicas de emergência tal como asfixia no parto, derrame ou lesão cerebral traumática, uma rota subcutânea de fornecimento é potencialmente vantajosa, embora não tenha sido estabelecido até agora se o fornecimento de uridina na circulação sistêmica e no cérebro suficientemente rápido e em quantidades suficientes para neuroproteção é possível através desta rota de administração. A eficácia da uridina subcutânea em um modelo de insuficiência energética grave não foi relatada anteriormente. Além disso, a atividade terapêutica de outros supostos agentes neuroprotetores não foi previamente testada “cabeça a cabeça” com uridina, nem uma combinação destes agentes administrados em uma formulação subcutânea foi testada para determinar se há benefícios aditivos ou supra-aditivos de tais combinações. Dispositivo de infusão subcutânea de uridina

[0023] Apesar dos problemas encontrados com a administração intravenosa de uridina a seres humanos, para a administração de emergência de uridina sistêmica, a infusão subcutânea de uridina dissolvida em solução salina fisiológica é eficiente e prática. Ao contrário de muitos fármacos e agentes biológicos, a uridina é distribuída rapidamente na água corporal total e não é ligada aos tecidos subcutâneos.

[0024] Em uma modalidade, um dispositivo de infusão fornece líquido a uma taxa controlada através de uma ou mais agulhas de infusão de diâmetro pequeno curtas; em algumas modalidades, as agulhas são dispostas em um emplastro adesivo que as seguram no lugar após a inserção na pele. Os emplastros são aplicados na pele, por exemplo, sobre o abdômen e a uridina em uma concentração apropriada é infundida a uma taxa que fornece concentrações adequadas no plasma para produzir efeitos neuroprotetores no sistema nervoso central. A uridina na circulação cruza a barreira sangue-cérebro através de transportadores de nucleosídeos a uma taxa adequada para fornecer efeitos neuroprotetores, se concentrações suficientes no plasma forem mantidas ao longo de um período de tempo suficiente.

[0025] Para uso em emergência, os dispositivos de infusão que não requerem uma fonte de energia externa são vantajosos em algumas situações, especialmente fora dos hospitais. Os dispositivos de infusão que não requerem fonte de energia elétrica são conhecidos na técnica. Em uma modalidade, uridina é infundida através de um dispositivo de infusão mecânico ("acionado por molas") ou elastomérico que fornece uma taxa controlada de administração ao longo de um período de tempo adequado. Bombas elétricas, incluindo bombas alimentadas por bateria, são incluídas dentro do âmbito da invenção.

[0026] Bombas com vazões ajustáveis ou alternativamente bombas com reservatórios de tamanhos diferentes permitem a otimização da taxa de infusão para tratar pacientes com tamanhos corporais diferentes, variando de neonatos (e até mesmo bebês prematuros) a adultos, de forma que a uridina no plasma seja mantida na zona terapêutica apropriada para proteger o cérebro e outros tecidos.

[0027] Em algumas modalidades, uma única injeção ao invés de uma infusão de uridina é uma opção importante, por exemplo, uma injeção fornecida sob condições de emergência pelos socorristas antes da hospitalização. Sob tais condições, uma injeção subcutânea que pode ser facilmente administrada partindo de um dispositivo portátil pequeno tal como uma seringa pré-carregada, pode fornecer neuroproteção que atenua a disfunção celular e morte durante o período de tempo necessário para transporte para um hospital ou para uma avaliação mais completa para determinar o curso de tratamento. Um derrame que priva o cérebro de sangue ou oxigênio pode ser isquêmico ou hemorrágico. Agentes que dissolve um coágulo sanguíneo são apropriados para derrames isquêmicos, mas são potencialmente letais em pessoas com derrames hemorrágicos. A diferenciação de derrames isquêmico dos hemorrágicos geralmente requer equipamento de obtenção de imagens nos hospitais. As composições da invenção podem ser administradas de forma segura para fornecer neuroproteção independentemente do fato de um derrame ser isquêmico ou hemorrágico, preservando o tecido até a determinação do tipo de derrame e até que o tratamento possa ser realizado. Composições para infusão subcutânea

[0028] Em adição à uridina, outros agentes neuroprotetores são opcionalmente incluídos na infusão subcutânea da solução de uridina. As restrições são que os constituintes devem ser solúveis e facilmente difundidos do local da infusão para dentro da água corporal total, incluindo a circulação.

[0029] Ânions orgânicos também são opcionalmente incluídos na infusão de solução de uridina. Estes ânions incluem, mas não são limitados a beta-hidroxibutirato (também chamado de 3-hidroxibutirato), treonina, aspartato ou outros aminoácidos, gluconato, piroglutamato, citrato, cetoleucina, acetato e lactato. O beta-hidroxibutirato (BHB), um corpo cetônico que o cérebro pode utilizar como um combustível alternativo, é um ânion vantajoso, uma vez que foi relatado que o BHB tem alguns efeitos neuroprotetores. Uma consequência potencial de seu uso é que o BHB pode inibir a síntese de novo de nucleotídeos de uridina, agindo contra seus efeitos protetores líquidos. A coadministração de uridina com BHB resolve este problema potencial e foi observado que o efeito protetor de uma combinação é notavelmente mais eficiente em modelos com animais de insuficiência energética mitocondrial aguda do que qualquer componente individualmente, com efeitos supra-aditivos sobre a sobrevivência e a morbidez. O BHB racêmico ou, preferencialmente, o enanciômero D de BHB pode ser utilizado. O enanciômero D de BHB também é conhecido como o enanciômero R no sistema de nomenclatura (R)-(S). O enanciômero D de BHB pode ser referido com D-BHB, (R)-BHB, (R)-(-)-BHB, (R)-(-)-3- Hidroxibutirato, (R)-(-)-B-Hidroxibutirato, D-(-)-B-Hidroxibutirato, dentre outros nomes conhecidos pelos peritos na técnica.

[0030] Os ânions orgânicos requerem íons indicadores catiônicos, de forma que a composição tenha um pH dentro de uma faixa fisiologicamente tolerável, preferencialmente pH 5 a 7,5. Íons sódio (Na+) e íons magnésio (Mg?) são cátions adequados. Os íons magnésio podem ter alguns atributos neuroprotetores e protetores de tecidos, que se adicionam ao benefício geral das composições da invenção. Entretanto, há limites superiores sobre a quantidade de magnésio que pode ser administrada como uma dose aguda, como concentrações de plasma que excedem 4 mEq por litro podem causar efeitos colaterais tal como danos nos reflexos de tendões profundos e concentrações mais altas podem causar hipotensão e bloqueio cardíaco. Assim, para uma única injeção para tratamento de emergência, o sal de sódio de BHB é preferido ou uma mistura de íons de magnésio e sódio é administrada, se igualando à dose de magnésio em 40 mEq (1 grama de íons Mg) por injeção em um ser humano adulto ou 10 mEq (0,25 grama de íons Mg) por injeção em uma criança, com o restante do BHB, se algum, equilibrado com sódio como o íon indicador. Para infusões prolongadas das composições da invenção, que geralmente resultam em concentrações máximas menores dos agentes infundidos, é administrado BHB de sódio ou uma mistura de BHB de sódio e BHB de magnésio, em cujo caso a dose de Mg é igualada a 80 mEq por dia (40 mEq em um período de 12 horas) em um adulto ou 40 mEq por dia (20 mEq durante um período de 12 horas) em uma criança, com o restante dos íons indicadores para BHB compreendendo íons sódio.

[0031] A solução de infusão não precisa ser isotônica; soluções com osmolaridades de até aproximadamente 800 milimoles por litro são conhecidas como sendo aceitáveis para administração subcutânea em seres humanos. Soluções hipertônicas até um limite aceitável minimizam o volume total de fluido que tem que ser administrado.

[0032] Uma anestesia local, que inclui, mas não é limitada à lidocaína ou lignocaína, é opcionalmente adicionada a uma composição da invenção até um máximo de 2% p/v, preferencialmente 0,4 a 1%, para minimizar o desconforto ou a dor local após uma injeção ou infusão através da rota subcutânea.

[0033] A hipotermia induzida pelo resfriamento de superfície, com cateteres de troca de calor intravasculares ou através da infusão de fluidos resfriados, tem efeitos neuroprotetores nos indivíduos após TB, HIE ou parada cardíaca. Hipotermia farmacológica, induzida pela administração de agentes que afetam a termorregulação e reduzem a temperatura corporal ou do cérebro também protegem o cérebro e outros tecidos após lesão traumática ou isquêmica. A hipotermia farmacológica é especialmente importante em situações em que um equipamento de resfriamento sofisticado não está disponível. Os agentes hipotérmicos são opcionalmente incorporados em uma composição desta descrição. Os agentes hipotérmicos adequados incluem agonistas do receptor de adenosina A3 (seletivos ou não seletivos), agonistas do receptor de 5-HT (serotonina) 1 A, ativadores de canal de receptores transitórios de potencial de “aquecimento”, especialmente ativadores de TRPV1 (por exemplo, di-hidrocapsaicina ou rinvanil), TRPV3 (por exemplo, carvacrol) e opcionalmente inibidores do canal TRP “de resfriamento” TRPM8. Estes agentes são administrados em doses e a taxas de infusão que reduzem a temperatura corporal ou do cérebro com um perfil de segurança e tolerabilidade aceitável. A infusão concorrente de magnésio pode reduzir as respostas compensatórias de tremores e assim aprimorar tanto os efeitos hipotérmicos quanto o conforto do paciente.

Concentrações e Volumes

[0034] As concentrações de uridina e outros componentes da solução de infusão são inter-relacionadas com as vazões, a difusão dos espaços subcutâneos e o tamanho do reservatório do dispositivo de infusão.

[0035] O objetivo farmacocinético da infusão subcutânea de uridina é manter a uridina no plasma dentro de uma banda de concentração de 50 a 150 micromolares. A infusão subcutânea de 0,5 a 2 gramas/m? por hora de uridina em solução é adequada para manter a uridina no plasma dentro desta zona terapêutica. Em algumas modalidades, o fornecimento por infusão é pulsáti, com taxas de infusão periodicamente aumentadas e aumentos correspondentes na uridina no plasma e BHB, com concentrações de uridina no plasma na faixa de 200 a 500 micromolares, mais especificamente 300 a 500 micromolares, durante aproximadamente uma hora, com 2 a 4 destes picos em cada período de infusão de 24 horas. Similarmente, em modalidades nas quais as composições da invenção são administradas através de injeção subcutânea ao invés de uma infusão prolongada, as doses e as concentrações são medidas para atingir concentrações máximas de uridina no plasma de 200 a 500 micromolares ou mais especificamente 300 a 500 micromolares.

[0036] A uridina é extremamente solúvel em água (solubilidade à temperatura ambiente >50% ou >0,5 g/ml), permitindo a infusão de volumes relativamente baixos se desejado. Por exemplo, o fornecimento de 1 grama/m? com base na área de superfície do corpo (BSA) por hora de uridina durante 12 horas em um adulto típico (BSA de aproximadamente 1,6 m?) poderia ser realizado com um volume de infusão total menor que 40 ou 50 mL, uma quantidade que pode ser facilmente introduzida e absorbida partindo dos espaços subcutâneos ao longo de tal período de tempo.

[0037] As concentrações de íon magnésio na solução de infusão se baseiam nas taxas de infusão determinadas para fornecer exposição ótima à uridina no plasma. Em modalidades em que os íons magnésio são utilizados como um fon indicador do beta-hidroxibutirato, no caso de um adulto a dose preferida de íons magnésio é 10 a 40 miliequivalentes de íons magnésio ao longo de 12 horas, vantajosamente 20 a 30 mEq por 12 horas ou duas vezes estas quantidades ao longo de um período de infusão de 24 horas. No caso de uma criança a dose preferida de íons magnésio é 10 a 20 miliequivalentes de íons magnésio ao longo de 12 horas ou duas vezes esta quantidade ao longo de um período de infusão de 24 horas.

[0038] Após a infusão inicial ao longo de 12 horas, infusões adicionais ao longo de 12 horas são opcionalmente iniciadas sequencialmente quando necessário, dependendo do estado de saúde do paciente que é avaliado através de técnicas de monitoramento de cuidado neurocrítico instrumental, marcadores do plasma ou do soro de lesão cerebral ou sinais clínicos.

[0039] Para injeções de doses únicas como uma alternativa para infusões prolongadas, a composição da invenção compreende uridina suficiente ou uridina mais um sal metálico de BHB, para fornecer 10 a 40 mg/kg de peso corporal de uridina em uma dose única e O a 100 mg/kg de BHB, preferencialmente 50 a 100 mg/kg, em concentrações agregadas que não excedem 800 milimoles por litro. Em um adulto de 70 kg, estas faixas de doses seriam equivalentes a 700 a 2800 mg de uridina e O a 7000 mg de D-BHB, mais especificamente 4000 a 7000 mg de D-BHB. Em um recém-nascido de 3 kg, uma dose única de uma composição da invenção compreenderia 30 a 120 mg de uridina e O a 300 mg de D-BHB, mais especificamente 100 a 300 mg de D-BHB. Em modalidades de injeção de acordo com esta invenção em que os íons magnésio são utilizados como um íon indicador para beta-

hidroxibutirato, a dose preferida de íons magnésio é de 10 a 40 miliequivalentes no caso de um adulto e de 5 a 10 miliequivalentes no caso de uma criança. Danos nos Tecidos Periféricos na Encefalopatia Isquêmica Hipóxica

[0040] E encefalopatia hipóxica-isquêmica (HIE) é definida por lesão e disfunção cerebral causadas por asfixia ou isquemia cerebral perinatal, que pode ser causada por compressão do cordão umbilical, ruptura da placenta, incapacidade de começar a respirar imediatamente depois do parto ou infecção perinatal. A HIE é a causa principal de mortalidade infantil e deficiências de longa duração incluindo paralisia cerebral, atrasos no desenvolvimento e transtornos convulsivos.

[0041] Os bebês, especialmente prematuro, podem não ser capazes de receber medicações orais imediatamente, devido à imaturidade intestinal ou ao risco de induzir complicações intestinais tal como enterocolite necrosante.

[0042] A infusão subcutânea de uma solução de uridina apresenta um método para introduzir rapidamente uridina sistêmica que pode ganhar acesso ao cérebro através da circulação dos bebês recém- nascidos que sofreram asfixia no parto. Além disso, a HIE é muito comumente acompanhada por disfunção ou insuficiência de órgãos periféricos causada por hipoxia, isquemia ou inflamação. A uridina protege os tecidos periféricos contra hipoxia e inflamação e, dessa maneira, tem benefícios adicionais na HIE além de seus efeitos neuroprotetores quando administrados a um recém-nascido que se recupera de asfixia Similarmente, a TBI é frequentemente acompanhada por lesão nos tecidos periféricos, causada por trauma, problemas hemodinâmicos ou inflamação. As soluções de infusão desta descrição que compreendem uridina protegem os tecidos periféricos durante a recuperação da TBI.

[0043] Uma modalidade da composição farmacêutica desta invenção compreende ainda uma quantidade neuroprotetora de beta- hidroxibutirato e um fon indicador catiônico. Em uma modalidade preferida, o beta-hidroxibutirato e o íon indicador estão na mesma solução que a uridina. Em modalidades desta invenção o beta- hidroxibutirato é o enanciômero D de beta-hidroxibutirato ou uma mistura dos enanciômeros D e L, por exemplo, beta-hidroxibutirato racêmico. De acordo com esta invenção qualquer íon indicador catiônico convencional pode ser utilizado. Em uma modalidade, o fon indicador catiônico é Na*. Em outra modalidade tanto Na* quanto Mg?* estão presentes como íons indicadores.

[0044] Em uma modalidade desta invenção a solução compreende ainda um ânion orgânico selecionado do grupo que consiste em, um aminoácido, um gluconato, um piroglutamato, um citrato, um acetato e um lactato. Exemplos de aminoácidos adequados incluem treonina ou aspartato. Em uma modalidade desta invenção a solução compreende ainda um agente hipotérmico. Em uma modalidade desta invenção a solução salina é solução salina isotônica ou hipertônica. Em uma modalidade desta invenção a composição farmacêutica é formulada para administração subcutânea a um indivíduo.

[0045] Em uma modalidade desta invenção a composição farmacêutica é formulada para infusão subcutânea. Em uma modalidade mais específica a quantidade de uridina é suficiente para manter uridina no plaama em uma concentração de 50 a 150 micromolares em um indivíduo humano ao qual a composição farmacêutica é administrada. Em outra modalidade a quantidade de uridina é suficiente para manter uridina no plasma em uma concentração de 200 a 500 micromolares durante aproximadamente uma hora em um indivíduo humano ao qual a composição farmacêutica é administrada. Uma modalidade da composição farmacêutica para infusão subcutânea compreende ainda de 100 a 300 mg do enanciômero D de beta-hidroxibutirato e um íon indicador catiônico. Em uma modalidade mais específica o indivíduo é um ser humano adulto, em que o fon indicador catiônico compreende Mg?* em uma quantidade para fornecer de 10 a 40 miliequivalentes de Mg?* em um período de fornecimento de doze horas. Alternativamente, o indivíduo é uma criança, por exemplo, um bebê recém-nascido, em que o íon indicador catiônico compreende Mg?* em uma quantidade para fornecer de 10 a miliequivalentes de Mg?* em um período de fornecimento de doze horas.

[0046] Em uma modalidade desta invenção a composição farmacêutica é formulada para injeção subcutânea. Em uma modalidade mais específica a quantidade de uridina é suficiente para manter uridina no plasma em uma concentração de 200 a 500 micromolares durante aproximadamente uma hora em um indivíduo humano ao qual a composição farmacêutica é administrada.

[0047] Em uma modalidade da composição farmacêutica formulada para injeção subcutânea o indivíduo é um ser humano adulto e a quantidade de uridina é de 10 a 40 mg/kg. Uma modalidade mais específica compreende de 50 a 100 mg/kg do enanciômero D de beta- hidroxibutirato e um íon indicador catiônico. Em uma modalidade mais específica o íon indicador catiônico compreende Mg?* em uma quantidade de 10 a 40 miliequivalentes.

[0048] Em outra modalidade da composição farmacêutica formulada para injeção subcutânea o indivíduo é uma criança e a quantidade de uridina é de 30 a 120 mg. Uma modalidade mais específica compreende ainda de 100 a 300 mg do enanciômero D de beta-hidroxibutirato e um íon indicador catiônico. Em uma modalidade mais específica o íon indicador catiônico compreende Mg2+ em uma quantidade de 5 a 10 miliequivalentes.

[0049] Em uma modalidade desta invenção a composição farmacêutica é para tratamento de um paciente que tem uma condição de lesão cerebral aguda. Em modalidades mais específicas a condição de lesão cerebral aguda é selecionada do grupo que consiste em lesão cerebral traumática, asfixia no parto, encefalopatia hipóxica-isquêmica, derrame, lesão cerebral causada por parada cardíaca e lesão cerebral causada por afogamento.

[0050] Uma modalidade do método de tratamento de uma lesão cerebral aguda desta invenção compreende ainda a administração de uma quantidade neuroprotetora de beta-hidroxibutirato e um íon indicador catiônico. Em uma modalidade preferida o beta-hidroxibutirato e o íon indicador estão na mesma solução que a uridina. Em modalidades desta invenção o beta-hidroxibutirato é o enanciômero D de beta-hidroxibutirato ou uma mistura dos enanciômeros D e L, por exemplo, beta-hidroxibutirato racêmico. De acordo com esta invenção qualquer fon indicador catiônico convencional pode ser utilizado. Em uma modalidade o íon indicador catiônico é Na*. Em outra modalidade tanto Na* quanto Mg?* estão presentes como íons indicadores.

[0051] Em uma modalidade do método desta invenção a solução compreende ainda um ânion orgânico selecionado do grupo que consiste de, um aminoácido, um gluconato, um piroglutamato, um citrato, um acetato e um lactato. Exemplos de aminoácidos adequados incluem treonina ou aspartato. Em uma modalidade desta invenção a solução compreende ainda um agente hipotérmico. Em uma modalidade desta invenção a solução salina é solução salina isotônica ou hipertônica. Em uma modalidade desta invenção a composição farmacêutica é administrada de forma subcutânea.

[0052] Em uma modalidade desta invenção a administração é realizada por infusão subcutânea. Em uma modalidade mais específica a quantidade de uridina é suficiente para manter uridina no plasma em uma concentração de 50 a 150 micromolares. Em outra modalidade a quantidade de uridina é suficiente para manter uridina no plasma em uma concentração de 200 a 500 micromolares durante aproximadamente uma hora. Uma modalidade do método compreende ainda a administração de 100 a 300 mg do enanciômero D de beta- hidroxibutirato e um íon indicador catiônico. Em uma modalidade mais específica o indivíduo é um ser humano adulto e o íon indicador catiônico compreende Mg?* em uma quantidade para fornecer de 10 a 40 miliequivalentes de Mg?* em um período de fornecimento de doze horas. Alternativamente o indivíduo é uma criança, por exemplo, um bebê recém-nascido e o íon indicador catiônico compreende Mg?* em uma quantidade para fornecer de 10 a 20 miliequivalentes de Mg?* em um período de fornecimento de doze horas.

[0053] Em uma modalidade desta invenção a administração é feita através de injeção subcutânea. Em uma modalidade mais específica a quantidade de uridina é suficiente para manter uridina no plasma em uma concentração de 200 a 500 micromolares durante aproximadamente uma hora em um indivíduo humano.

[0054] Em uma modalidade do método em que a administração é realizada por injeção subcutânea o indivíduo é um ser humano adulto e a quantidade de uridina é de 10 a 40 mg/kg. Uma modalidade mais específica compreende ainda a administração de 50 a 100 mg/kg do enanciômero D de beta-hidroxibutirato e um íon indicador catiônico. Em uma modalidade mais específica o íon indicador catiônico compreende Mg?* em uma quantidade de 10 a 40 miliequivalentes.

[0055] Em outra modalidade do método em que a administração é realizada por injeção subcutânea o indivíduo é uma criança e a quantidade de uridina é de 30 a 120 mg. Uma modalidade mais específica compreende ainda a administração de 100 a 300 mg do enanciômero D de beta-hidroxibutirato e um íon indicador catiônico. Em uma modalidade mais específica o íon indicador catiônico compreende Mg2+ em uma quantidade de 5 a 10 miliequivalentes.

[0056] De acordo com esta invenção qualquer condição de lesão cerebral aguda tratada pode ser qualquer lesão cerebral aguda. Em modalidades mais específicas a condição de lesão cerebral aguda é selecionada do grupo que consiste de lesão cerebral traumática, asfixia no parto, encefalopatia hipóxica-isquêmica, derrame, lesão cerebral causada por parada cardíaca e lesão cerebral causada por afogamento.

[0057] A invenção será melhor entendida com referência aos exemplos a seguir, que ilustram, mas não limitam a invenção descrita aqui. EXEMPLO 1: Proteção contra a mortalidade causada pelo ácido 3- nitropropiônico, um inibidor de respiração mitocondrial

[0058] O ácido 3-nitropropiônico (3-NP) é um inibidor do Complexo |l da cadeia respiratória mitocondrial. A administração de 3-NP a animais experimentais foi utilizada como um modelo para doenças mitocondriais, doença de Huntington e consequências patológicas da hipóxia. A dosagem diária de 3-NP causa insuficiência energética no cérebro, no coração e em outros tecidos, resultando na mortalidade após vários dias. Um regime de dosagem de 3-NP que causou 100% de mortalidade em camundongos após aproximadamente uma semana foi selecionado para avaliação adicional de mortalidade, que é indicativa de efeitos neuroprotetores e cardioprotetores, de composições da invenção em um modelo de distúrbios causados por disfunção mitocondrial. Os tempos de sobrevivência (mediana da sobrevivência; o tempo no qual 50% dos animais em um grupo morreram) e a porcentagem de sobrevivência no final do estudo de 13 dias foram utilizados para quantificar os efeitos protetores dos agentes de teste.

[0059] Fêmeas de camundongos CD-1 com aproximadamente 16 semanas de idade foram divididas em grupos com pesos equivalentes de 10 camundongos cada. Todos os camundongos receberam injeções intraperitoneais diárias de 3-NP (60 mg/kg) em um volume de 0,01 mL por grama de peso corporal. O 3-NP foi administrado a 2 PM em cada um dos 13 dias consecutivos do experimento. Os pesos corporais foram registrados todos os dias para ajustar as doses do fármaco à medida que os camundongos perdiam peso durante o tratamento repetido com 3-NP.

[0060] A eficácia terapêutica de uridina (VWR International) e o sal de magnésio de beta-hidroxibutirato racêmico (B-hidroxibutirato de magnésio trihidratado; M9BHB:3H20O) (Nutra Planet) foi avaliada, assim como foi a eficácia de uma combinação de uridina e M9BHB. Todos os tratamentos terapêuticos foram administrados por injeção subcutânea em um volume de 0,02 mL/grama de peso corporal duas vezes ao dia, às 7:00 e às 13:00 h. Grupos:

1. Controle de Veículo — solução salina a 0,9% b.i.d.

2. Uridina 300 mg/kg b.i.d.

3. MgBHB 300 mg/kg b.i.d.

4. Uridina 300 mg/kg + MgBHB 300 mg/kg b.i.d. Resultados:

[061] Os camundongos no grupo de controle de veículo começaram a morrer no Dia 4 após o início da dosagem de 3-NP e todos os camundongos no grupo todo morreram até o Dia 7. As porcentagens de sobrevivência final e os tempos da mediana da sobrevivência no final do estudo de 13 dias são mostrados na tabela abaixo e na Figura 1. Tabela 1: Sobrevivência dos camundongos que receberam 60 mg/kg/dia de ácido 3-nitropropiônico e foram tratados com uridina subcutânea 300 mg/kg b.id e MgBHB 300 mg/kg b.iid. isoladamente e em combinação

[062] Estes resultados indicam que a administração subcutânea de uridina sozinha forneceu proteção substancial contra a toxicidade letal de 3-NP em doses repetidas. O MgBHB forneceu alguma proteção, mas inferior àquela da uridina. A combinação de uridina e MA9BHB era superior à uridina ou ao M9BHB sozinho. EXEMPLO 2: Proteção contra a mortalidade causada pelo ácido 3- nitropropiônico por uridina e beta-hidroxibutirato de sódio isoladamente e em combinação

[063] Tanto a uridina quanto o beta-hidroxibutirato (BHB) independentemente exibem efeitos protetores contra a toxicidade e a mortalidade causadas pela dosagem diária repetida de ácido 3- nitropropiônico, um inibidor do Complexo Il da cadeia respiratória mitocondrial. O BHB é um corpo cetônico endógeno que pode ser utilizado como um combustível metabólico pelo cérebro. O isômero D de BHB é a forma produzida como um produto do metabolismo de lipídeos e aminoácidos. Quando o BHB é produzido industrialmente, é frequentemente feito na forma de uma mistura enanciomérica DL, que é mais simples de sintetizar que seu isômero D puro. O L-BHB pode ser convertido enzimaticamente no D-BHB in vivo, de forma que ambos os D- e DL-BHB possam fornecer calorias equivalentes de energia que pode ser utilizada. Entretanto, a atividade relativa do D versus DL BHB para proteção contra a insuficiência energética em distúrbios associados à função mitocondrial prejudicada não foi estabelecida, especialmente quando qualquer uma das formas de BHB é combinada com uma fonte de uridina.

[064] A disfunção mitocondrial foi produzida através da administração diária de ácido 3-nitropropiônico (60 mg/kg/dia) por injeção intraperitoneal. Os grupos de camundongos também receberam solução salina (controle), uridina, DL-BHB, D-BHB e combinações de uridina e D-BHB e DL-BHB como indicado abaixo. Tanto D- quanto DL- BHB foram administrados na forma dos sais de sódio solúveis em água: Na(D-BHB) (Toronto Research Chemicals, catálogo HH833025) e Na(DL-BHB) (VWR International, catálogo t200012-200). Grupos:

1. Controle de Veículo — solução salina a 0,9% b.i.d.

2. Uridina 200 mg/kg t.i.d.

3. Na (DL-BHB) 328 mg/kg t.i.d.

4. Na (D-BHB) 328 mg/kg t.i.d.

5. Uridina 200 mg/kg + Na (DL-BHB) 328 mg/kg t.i.d.

6. Uridina 200 mg/kg + Na (D-BHB) 328 mg/kg t.i.d.

[065] Os tempos de sobrevivência (mediana da sobrevivência; o ponto de tempo no qual 50% dos animais em um grupo morreram) e a porcentagem de sobrevivência no final do estudo de 12 dias foram utilizados para quantificar e comparar os efeitos protetores dos agentes de teste.

[066] Fêmeas de camundongos CD-1 de aproximadamente 16 semanas de idade foram divididas em grupos com pesos equivalentes de 10 camundongos cada. Todos os camundongos receberam injeções intraperitoneais diárias de 3-NP (60 mg/kg) em um volume de 0,01 mL por grama de peso corporal às 17:00 h.

[067] Os tratamentos terapêuticos foram administrados por injeção subcutânea em um volume de 0,01 mL/grama de peso corporal três vezes ao dia, às 7:00 e às 12:00 e às 16:00 h. O 3-NP foi administrado às 17:00 h em cada um dos dias consecutivos do experimento. Os pesos corporais foram registrados todos os dias para ajustar as doses do fármaco à medida que os camundongos perdiam peso durante o tratamento repetido com 3-NP. O peso corporal foi representado graficamente para os vários grupos de camundongos até que o tamanho do grupo diminuísse até menos de 3. Resultados:

[068] As porcentagens de sobrevivência final e os tempos da mediana da sobrevivência no final do estudo são mostrados na tabela e seguir e na Figura 2. Tabela 2: Sobrevivência de camundongos que receberam 60 mg/kg/dia de ácido 3-nitropropiônico e foram tratados com uridina subcutânea 200 mg/kg t.i.d. e Na(DL-BHB) ou Na(D-BHB) 328 mg/kg t.i.d. isoladamente e em combinação

[069] Estes resultados indicam que a administração subcutânea de uridina sozinha forneceu proteção substancial contra a toxicidade letal de 3-NP em doses repetidas. Na(DL-BHB) e Na(D-BHB) ambos individualmente forneceram alguma proteção contra a mortalidade e não eram significativamente diferentes um do outro, com tempos da mediana da sobrevivência de 7,5 (sobrevivência final de 20%) e 8 dias (sobrevivência final de 10%) respectivamente. A uridina sozinha permitiu 50% de sobrevivência, com um tempo da mediana da sobrevivência de 12 dias. Na(DL-BHB) não aumentou o efeito protetor da uridina no final do experimento, com uma sobrevivência final de 50% com a combinação de uridina e Na(DL-BHB) e com um tempo da mediana da sobrevivência que era de 10 dias. Em contraste, Na(D-BHB)

fornecido com a uridina resultou em 90% de sobrevivência no final do estudo. Além disso, a combinação de uridina com Na(D-BHB) protegeu contra a perda de peso corporal melhor do que qualquer um dos agentes individualmente ou a combinação de uridina e Na(DL-BHB) (Figura 3). EXEMPLO 3: Proteção contra a mortalidade causada pelo ácido 3- nitropropiônico por uridina e beta-hidroxibutirato de sódio isoladamente e em combinação

[070] Tanto a uridina quanto o beta-hidroxibutirato exibem efeitos protetores contra a toxicidade e a mortalidade causadas pelo ácido 3- nitropropiônico (3-NP), um inibidor do Complexo || da cadeia respiratória mitocondrial que é utilizado como modelo de distúrbios do cérebro e outros tecidos que envolvem insuficiência de produção da energia mitocondrial.

[071] A administração subcutânea dos agentes terapêuticos é uma rota de administração adequada para fármacos de emergência que são pretendidos para uso em pessoas com lesão cerebral traumática, derrame ou asfixia, em que o paciente pode não ser capaz de ingerir medicações orais ou pode estar em uma situação em que é difícil colocar um cateter intravenoso. A administração subcutânea de fármacos é prática, mas a composição tem que estar em conformidade com os volumes e os valores de osmolaridade que são conhecidos como sendo compatíveis com esta rota de administração; uma osmolaridade excessivamente alta pode causar edema local e os volumes têm que ser baixos o suficiente para injeção sem contrapressão problemática. As — composições — compreendendo uridina,y beta- hidroxibutirato de sódio e uma combinação dos dois, com a osmolaridade restrita a um máximo de 800 milimoles/litro (um valor conhecido como sendo adequado para administração subcutânea de fluidos) foram testadas em um modelo de insuficiência energética no sangue total induzida por injeções intraperitoneais diárias de ácido 3-

nitropropiônico em dois níveis de doses, 65 mg/kg/dia e 70 mg/kg/dia.

[072] Os tempos de sobrevivência (mediana da sobrevivência; o ponto de tempo no qual 50% dos animais em um grupo morreram) e a porcentagem de sobrevivência no final de um estudo de 13 dias foram utilizados para quantificar e comparar os efeitos protetores dos agentes de teste.

[073] Fêmeas de camundongos CD-1 de aproximadamente 16 semanas de idade foram divididas em grupos com pesos equivalentes de 10 camundongos cada. Todos os camundongos receberam injeções intraperitoneais diárias de 3-NP (65 mg/kg ou 70 mg/kg) em um volume de 0,01 mL por grama de peso corporal às 17:00 h.

[074] Os tratamentos terapêuticos foram administrados por injeção subcutânea em um volume de 0,02 mL/grama de peso corporal três vezes ao dia, às 7:00 e às 12:00 e às 16:00 h. O 3-NP foi administrado às 17:00 h em cada um dos dias consecutivos do experimento. Os pesos corporais foram registrados todos os dias para ajustar as doses do fármaco à medida que os camundongos perdiam peso durante o tratamento repetido com 3-NP. O D-BHB foi administrado na forma do sal de sódio solúvel em água Na(D-BHB) (Toronto Research Chemicals, catálogo tH833025). Grupos:

1. Controle de Veículo — solução salina a 0,9% t.i.d.

2. Uridina 200 mg/kg t.i.d.

3. Na(D-BHB) 985 mg/kg t.i.d.

4. Uridina 200 mg/kg + Na(D-BHB) 985 mg/kg t.i.d. Resultados:

[075] Os camundongos no grupo de controle de veículo começaram a morrer no Dia 4 após o início da dosagem de 3-NP. As porcentagens de sobrevivência final e os tempos da mediana da sobrevivência no final dos estudos são mostrados nas tabelas a seguir e nas Figuras 4 e 5. Tabela 3: Sobrevivência de camundongos que receberam 65 mg/kg/dia de ácido 3-nitropropiônico e foram tratados com uridina subcutânea 200 mg/kg t.i.d. e Na(D-BHB) 985 mg/kg t.i.d. isoladamente e em combinação [FE JEFF NETRAFATTTAS Tabela 4: Sobrevivência de camundongos que receberam 70 mg/kg/dia de ácido 3-nitropropiônico e foram tratados com uridina subcutânea 200 mg/kg t.i.d. e Na(D-BHB) 985 mg/kg t.i.d. isoladamente e em combinação [FE CC TERESA TIRAS SETTE

[076] Estes resultados indicam que a administração subcutânea de uridina sozinha forneceu proteção substancial contra a toxicidade letal de 3-NP em doses repetidas. O NaBbBHB na dose utilizada neste estudo forneceu proteção similar àquela da uridina. A combinação de uridina e NaBbBHB era superior à uridina ou ao NaBHB individualmente, com uma vantagem notavelmente maior (mais que aditiva) para a combinação na dose mais alta de ácido 3-nitropropiônico (70 mg/kg/dia). EXEMPLO 4: Farmacocinéticas da uridina e do Na(D-BHB) no plasma após administração subcutânea

[077] Injeções subcutâneas de uma combinação de uridina e Na(D-BHB) (sal de sódio do isômero D de beta-hidroxibutirato) fornecem proteção contra morbidez e mortalidade causadas pela produção de energia mitocondrial prejudicada nos modelos com camundongos. À tradução deste efeito protetor para animais maiores incluindo os humanos depende da capacidade de atingir as concentrações protetoras de uridina e BHB no plasma com uma dose e um volume prático para injeção subcutânea.

[078] Há um máximo para a osmolaridade de soluções para administração subcutânea devido à possibilidade de edema osmótico local se a concentração dos solutos for muito alta. Aproximadamente 800 milimoles/litro são considerados um limite superior para concentração dos fluidos subcutâneos terapêuticos. Em estudos conduzidos em camundongos que receberam doses diárias do inibidor do Complexo || mitocondrial ácido 3-nitropropiônico, foi observado que uma composição subcutânea compreendendo uridina e o sal de sódio de D-BHB, com concentrações de solutos totais igualadas a <800 milimolares, confere proteção notável contra a mortalidade causada por insuficiência mitocondrial. Foi observado que três doses diárias fornecem proteção superior. Um estudo farmacocinético foi conduzido para determinar as concentrações no plasma de uridina e D-BHB atingidas após a administração de doses terapêuticas da composição, para determinar as concentrações e as durações de exposição que têm que ser atingidas para traduzir o efeito protetor para outras espécies incluindo os seres humanos.

[079] Grupos de 8 camundongos (Fêmeas de camundongos CD- 1, de aproximadamente 16 semanas de idade) foram tratados com uridina subcutânea ou uridina mais Na(D-BHB) como indicado na tabela abaixo. O D-BHB foi administrado na forma do sal de sódio solúvel em água Na(D-BHB) (Toronto Research Chemicals, catálogo tH833025 gro Tso Teams STSTAÇTS Fes e q

[080] 1. Grupo 1 (200 mg/kg Uridina + Na(D-BHB) recebeu 10 mg/mL de uridina e 49,26 mg/ml de Na(D-BHB) (0,02 mL/g de peso corporal).

[081] 2. Grupo 2 (300 mg/kg Uridina + Na(D-BHB) recebeu 15 mg/mL de uridina e 49,26 mg/ml de Na(D-BHB) (0,02 mL/g de peso corporal).

[082] 3. Grupo 3 (400 mg/kg Uridina + Na(D-BHB) recebeu 20 mg/mL de uridina e 49,26 mg/ml de Na(D-BHB) (0,02 mL/g de peso corporal).

[083] 4. Grupo 4 (400 mg/kg Uridina) recebeu 20 mg/mL de uridina (0,02 mL/g de peso corporal).

[084] As amostras de sangue foram obtidas do plexo retro-orbital nos pontos de tempo de 15, 30, 60 e 120 minutos após a injeção do fármaco. Foram coletadas duas amostras de sangue (<200 microlitros) de cada camundongo em tubos de polietileno com heparina, com o sangue extraído de 4 camundongos em 15 e 60 minutos e o sangue dos outros 4 camundongos em um grupo foi extraído em 30 e 120 minutos. Amostras do plasma foram obtidas por centrifugação e foram desproteinizadas e analisadas em relação à uridina e à uracila por um método de LC/MS. O D-BHB no plasma foi medido nas mesmas amostras através de um ensaio enzimático de alteração de cor comercial.

[085] Os roedores degradam uridina em uracila mais rapidamente e extensivamente que os seres humanos, que têm atividades mais baixas da enzima uridina fosforilase. Portanto, é importante levar em consideração a uracila nas concentrações no plasma em roedores para tradução ótima dos resultados farmacocinéticos dos roedores para a situação em seres humanos. A soma de uridina + uracila em roedores é uma melhor reflexão de equivalentes de uridina no plasma do que a uridina sozinha para tradução para outros modelos com animais ou para a dosagem em seres humanos.

[086] A uridina (e uridina + uracila)» apareceu no plasma rapidamente após a administração subcutânea com um Tmax de 15 a minutos após a dosagem (Figuras 6, 7 e 8). O D-BHB no plasma também aumentou rapidamente, com um Tmax em 15 minutos (Figura 9). A uridina no plasma (e uridina + uracila) exibiu valores de Cmax dependentes da dose (Figuras 6,7 e 8).

[087] Foi mostrando anteriormente que o regime de dosagem de uridina + Na(D-BHB) neste estudo farmacocinético produz fortes efeitos protetores contra a mortalidade causada por injeções diárias de ácido 3-nitropropiônico. Os dados farmacocinéticos indicam que a elevação transitória periódica de uridina e BHB no plasma é suficiente para induzir uma proteção robusta contra a insuficiência energética mitocondrial sistêmica letal. As concentrações máximas de uridina+uracila no plasma na dose mais alta de 400 mg/kg de uridina são menores que 500 micromolares, o que fica abaixo do limite para indução de hipertermia e tremores em seres humanos, que era um problema clínico relatado com a administração intravenosa de uridina. É sabido que a concentração máxima de D-BHB observada neste estudo, aproximadamente 3 milimolares, é bem tolerada em seres humanos, equivalente às concentrações observadas durante a cetose pós-exercício e bem abaixo dos limites para cetoacidose (>15 mM).

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade neuroprotetora de uridina dissolvida em solução salina.

2. Composição farmacêutica da reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende ainda uma quantidade neuroprotetora de beta-hidroxibutirato e um íon indicador catiônico.

3. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que o beta-hidroxibutirato é o enanciômero D de beta-hidroxibutirato.

4. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que o íon indicador catiônico é Na”.

5. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que o beta-hidroxibutirato é beta-hidroxibutirato racêmico.

6. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 2 ou 5, caracterizada pelo fato de que o íon indicador catiônico é selecionado do grupo que consiste de um ou mais de Na* e Mo?.

7. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que a solução compreende ainda um ânion orgânico selecionado do grupo que consiste de, um aminoácido, um gluconato, um piroglutamato, um citrato, um acetato e um lactato.

8. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que o aminoácido é treonina ou aspartato.

9. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que a solução compreende ainda um agente hipotérmico.

10. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que a solução salina é solução salina isotônica ou hipertônica.

11. Composição — farmacêutica “de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que é formulada para administração subcutânea a um indivíduo.

12. Composição — farmacêutica “de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que é formulada para infusão subcutânea.

13. Composição — farmacêutica “de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que a quantidade de uridina é suficiente para manter uridina no plasma em uma concentração de 50 a 150 micromolares em um indivíduo humano ao qual a composição farmacêutica é administrada.

14. Composição — farmacêutica “de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que a quantidade de uridina é suficiente para manter uridina no plasma em uma concentração de 200 a 500 micromolares durante aproximadamente uma hora em um indivíduo humano ao qual a composição farmacêutica é administrada.

15. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 14, caracterizada pelo fato de que compreende ainda de 100 a 300 mg do enanciômero D de beta-hidroxibutirato e um íon indicador catiônico.

16. Composição — farmacêutica “de acordo com a reivindicação 15, caracterizada pelo fato de que o indivíduo é um ser humano adulto, em que o íon indicador catiônico compreende Mg?* em uma quantidade para fornecer de 10 a 40 miliequivalentes de Mg?* em um período de fornecimento de doze horas.

17. Composição — farmacêutica “de acordo com a reivindicação 15, caracterizada pelo fato de que o indivíduo é uma criança, em que o fon indicador catiônico compreende Mg?* em uma quantidade para fornecer de 10 a 20 miliequivalentes de Mg?* em um período de fornecimento de doze horas.

18. Composição — farmacêutica “de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que é formulada para injeção subcutânea.

19. Composição — farmacêutica “de acordo com a reivindicação 18, caracterizada pelo fato de que a quantidade de uridina é suficiente para manter uridina no plasma em uma concentração de 200 a 500 micromolares durante aproximadamente uma hora em um indivíduo humano ao qual a composição farmacêutica é administrada.

20. Composição — farmacêutica = de acordo com a reivindicação 18 ou 19, caracterizada pelo fato de que o indivíduo é um ser humano adulto e a quantidade de uridina é de 10 a 40 mg/kg.

21. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 20, caracterizada pelo fato de que compreende ainda de 50 a 100 mg/kg do enanciômero D de beta-hidroxibutirato e um íon indicador catiônico.

22. Composição — farmacêutica de acordo com a reivindicação 21, caracterizada pelo fato de que o íon indicador catiônico compreende Mg?* em uma quantidade de 10 a 40 miliequivalentes.

23. Composição — farmacêutica de acordo com a reivindicação 18 ou 19, caracterizada pelo fato de que o indivíduo é uma criança e a quantidade de uridina é de 30 a 120 mg.

24. Composição — farmacêutica de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pelo fato de que compreende ainda de 100 a 300 mg do enanciômero D de beta-hidroxibutirato e um íon indicador catiônico.

25. Composição — farmacêutica de acordo com a reivindicação 24, caracterizada pelo fato de que o íon indicador catiônico compreende Mg2+ em uma quantidade de 5 a 10 miliequivalentes.

26. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5, 11-14 e 18-19, caracterizada pelo fato de que é para tratamento de um paciente que tem uma condição de lesão cerebral aguda.

27. Composição — farmacêutica de acordo com a reivindicação 26, caracterizada pelo fato de que a condição de lesão cerebral aguda é selecionada do grupo que consiste de lesão cerebral traumática, asfixia no parto, encefalopatia hipóxica-isquêmica, derrame, lesão cerebral causada por parada cardíaca e lesão cerebral causada por afogamento.

28. Processo de tratamento de uma condição de lesão cerebral aguda em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende a administração a um indivíduo de uma composição que compreende uma quantidade neuroprotetora de uridina dissolvida em solução salina.

29. Processo de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que a composição compreende ainda uma quantidade neuroprotetora de beta-hidroxibutirato e um fon indicador catiônico.

30. Processo de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que o beta-hidroxibutirato é o enanciômero D de beta-hidroxibutirato.

31. Processo de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que o íon indicador catiônico é Na*.

32. Processo de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que o beta-hidroxibutirato é beta- hidroxibutirato racêmico.

33. Processo de acordo com a reivindicação 29 ou 32,

caracterizado pelo fato de que o íon indicador catiônico é selecionado do grupo que consiste de um ou mais de Na* e Mg?*.

34. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 28 a 32, caracterizado pelo fato de que a solução compreende ainda um ânion orgânico selecionado do grupo que consiste de um aminoácido, um gluconato, um piroglutamato, um citrato, um acetato e um lactato.

35. Processo de acordo com a reivindicação 34, caracterizado pelo fato de que o aminoácido é treonina ou aspartato.

36. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 28-32, caracterizado pelo fato de que a solução compreende ainda um agente hipotérmico.

37. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 28-32, caracterizado pelo fato de que a solução salina é solução salina isotônica ou hipertônica.

38. Processo de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que a administração é subcutânea.

39. Processo de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que a administração é realizada por infusão subcutânea.

40. Processo de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é um ser humano e a quantidade de uridina é suficiente para manter uridina no plasma no indivíduo em uma concentração de 50 a 150 micromolares.

41. Processo de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que uridina é administrada em uma quantidade de 0,5 a 2 gramas/m?.

42. Processo de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é um ser humano e a quantidade de uridina é suficiente para manter uridina no plasma no indivíduo em uma concentração de 200 a 500 micromolares durante aproximadamente uma hora.

43. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 39 a 42, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a administração de 100 a 300 mg/kg do enanciômero D de beta- hidroxibutirato e um (on indicador catiônico.

44. Processo de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é um ser humano adulto e em que o íon indicador catiônico compreende Mg?* em uma quantidade para fornecer de 10 a 40 miliequivalentes de Mg?* em um período de fornecimento de doze horas.

45. Processo de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é uma criança e em que o íon indicador catiônico compreende Mg?* em uma quantidade para fornecer de 10 a 20 miliequivalentes de Mg?* em um período de fornecimento de doze horas.

46. Processo de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que a administração é feita através de injeção subcutânea.

47. Processo de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é um ser humano e a quantidade de uridina é suficiente para manter uridina no plasma no indivíduo em uma concentração de 200 a 500 micromolares durante aproximadamente uma hora.

48. Processo de acordo com a reivindicação 46 ou 47, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é um ser humano adulto e a quantidade de uridina é de 10 a 40 mg/kg.

49. Processo de acordo com a reivindicação 48, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a administração de 50 a 100 mg/kg mg do enanciômero D de beta-hidroxibutirato e um íon indicador catiônico.

50. Processo de acordo com a reivindicação 49, caracterizado pelo fato de que o íon indicador catiônico compreende Mg?* em uma quantidade de 10 a 40 miliequivalentes por dose.

51. Processo de acordo com a reivindicação 46 ou 47, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é uma criança e a quantidade de uridina é de 30 a 120 mg.

52. Processo de acordo com a reivindicação 51, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a administração de 150 a 300 mg do enanciômero D de beta-hidroxibutirato e um íon indicador catiônico.

53. Processo de acordo com a reivindicação 52, caracterizado pelo fato de que o íon indicador catiônico compreende Mg?* em uma quantidade de 5 a 10 miliequivalentes.

54. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 28-32, 38-42 e 46-47, caracterizado pelo fato de que a condição de lesão cerebral aguda é selecionada do grupo que consiste de lesão cerebral traumática, asfixia no parto, encefalopatia hipóxica- isquêmica, derrame, lesão cerebral causada por parada cardíaca e lesão cerebral causada por afogamento.

55. Sistema para fornecimento de uridina, caracterizado pelo fato de que compreende um reservatório capaz de carregar a solução de uridina em solução salina, o reservatório estando ligado de forma fluida a uma ou mais agulhas de infusão e uma bomba configurada para transferir a solução do reservatório através da uma ou mais agulhas de infusão para um indivíduo.

56. Sistema de acordo com a reivindicação 55, caracterizado pelo fato de que a uma ou mais agulhas de infusão são dispostas em um emplastro adesivo.

57. Sistema de acordo com a reivindicação 55, caracterizado pelo fato de que a solução é a composição farmacêutica como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 27.

58. Processo de administração de uridina a um indivíduo mamífero que necessita de terapia com uridina, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de forma subcutânea ao indivíduo de uma composição farmacêutica que compreende uridina dissolvida em uma solução salina, em uma quantidade suficiente para manter uma concentração de uridina no plasma de 50 a 150 micromolares no indivíduo.

59. Processo de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelo fato de que a solução salina é solução salina isotônica ou hipertônica.

60. Processo de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelo fato de que a composição compreende ainda uma quantidade eficiente de íons magnésio.

61. Processo de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é um indivíduo humano.