BR112020009880A2 - derivados de 2-oxo-1-pirrolidinila imidazotiadiazol - Google Patents

Abstract

A presente invenção se refere a derivados de 2-oxo-1-pirrolidinila imidazotiadiazol, processos para a preparação dos mesmos, composições farmacêuticas que os contêm e seu uso como produtos farmacêuticos.

Description

“DERIVADOS DE 2-OXO-1-PIRROLIDINILA IMIDAZOTIADIAZOL”

INTRODUÇÃO

[0001] A presente invenção refere-se a derivados de 2-oxo-1-pirrolidinila imidazotiadiazol, a processos para prepará-los, composições farmacêuticas que os contêm e ao uso dos mesmos como produtos farmacêuticos.

[0002] O documento WO2011/047860 divulga compostos derivados de 2-oxo-1- pirrolidinila imidazotiadiazol da seguinte fórmula A:

A

[0003] em que: R1 é um C1-4 alquila contendo pelo menos um substituinte halogênio; R2 é um halogênio ou um C1-4 alquila contendo pelo menos um substituinte halogênio; e R3 é um C1-4 alquila contendo pelo menos um substituinte hidróxi ou alcóxi.

[0004] Um problema persistente no controle de crises convulsivas surge com aqueles pacientes que não respondem de modo algum ou apenas insuficientemente aos tratamentos atualmente disponíveis. Esses pacientes são vistos como refratários ao tratamento e representam um desafio considerável para a comunidade médica. Estima-se que cerca de 30% dos pacientes com epilepsia sejam classificados como refratários. Portanto, existe a necessidade de desenvolver novos medicamentos direcionados especificamente a essa população de pacientes.

[0005] Os compostos dessa invenção são para uso como medicamento, no tratamento de epilepsia, epileptogênese, distúrbios de crises convulsivas, convulsões, em particular para crises refratárias.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0006] Essa invenção fornece novos derivados de 2-oxo-1-pirrolidinila imidazotiadiazol que têm a fórmula (I), seus isômeros geométricos, enantiômeros, diastereoisômeros, isótopos e misturas, ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, (I)

[0007] Outros aspectos da invenção serão evidentes a partir da descrição detalhada.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0008] A presente invenção refere-se a derivados de 2-oxo-1-pirrolidinila imidazotiadiazol de acordo com a fórmula (I), (I)

[0009] em que R1 é um C1-4 alquila opcionalmente substituído por um ou mais substituintes halogênio; R2 é um C1-4 alquila contendo pelo menos um substituinte hidróxi ou alcóxi;

R3 é uma metila (incluindo –CD3)

[0010] O termo “C1-4 alquila”, como usado no presente documento, refere-se a grupos alquila com 1 a 4 átomos de carbono. Esse termo é exemplificado por grupos como metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila, terc-butila. Os grupos “C1-4 alquila” podem ser substituídos por um ou mais substituintes selecionados a partir de halogênio, hidróxi ou alcóxi.

[0011] O termo “Hidróxi”, como usado no presente documento, representa um grupo de fórmula -OH.

[0012] O termo “Alcóxi”, como usado no presente documento, refere-se a um grupo -OR, em que R inclui “C1-4 alquila”, como definido no presente documento acima.

[0013] O termo “Halogênio”, como usado no presente documento, refere-se a átomos de flúor, cloro, bromo e iodo, preferencialmente flúor e cloro.

[0014] A presente invenção inclui dentro de seu escopo tautômeros, isômeros geométricos, enantiômeros, diastereômeros, isótopos e misturas, e um sal farmaceuticamente aceitável dos compostos de fórmula (I). Por exemplo, qualquer porção química indicada como “H” na fórmula (I) pode ser um hidrogênio ou seus isótopos, deutério ou trítio.

[0015] Geralmente, R1 é um C1-4 alquila opcionalmente substituído por um ou mais substituintes halogênio.

[0016] Em uma modalidade, R1 é um C1-4 alquila não substituído. Em um primeiro aspecto dessa modalidade, R1 é n-propila. Em um segundo aspecto dessa modalidade, R1 é i-butila.

[0017] Em outra modalidade, R1 é um C1-4 alquila substituído por um ou mais halogênios. Em um primeiro aspecto dessa modalidade, R1 é 2,2-difluoropropila. Em um segundo aspecto dessa modalidade, R1 é 2-cloro-2,2-difluoroetila. Em um terceiro aspecto dessa modalidade, R1 é 2,2-difluoroetila. Em um quarto aspecto dessa modalidade, R1 é 2,2,2-trifluoroetila. Em um quinto aspecto dessa modalidade, R1 é 2- fluoroetila.

[0018] Em uma modalidade específica, R1 é i-butila, uma n-propila, 2,2-

difluoropropilaq, 2-cloro-2,2-difluoroetila, 2,2-difluoroetila, 2,2,2-trifluoroetil ou 2- fluoroetila.

[0019] Em outra modalidade específica, R1 é i-butila, n-propila, 2-cloro-2,2- difluoroetila, 2,2-difluoropropila ou 2,2,2-trifluoroetila.

[0020] Em uma modalidade preferencial, R1 é n-propila, 2-cloro-2,2-difluoroetila, 2,2-difluoropropila ou 2,2,2-trifluoroetila.

[0021] Geralmente, R2 é um C1-4 alquila contendo pelo menos um substituinte hidróxi ou alcóxi.

[0022] Em uma modalidade, R2 é um C1-4 alquila contendo pelo menos um substituinte hidróxi. Em um aspecto dessa modalidade, R2 é uma hidroximetila.

[0023] Em outra modalidade, R2 é um C1-4 alquila contendo pelo menos um substituinte metóxi. Em um primeiro aspecto dessa modalidade, R2 é metoximetila. Em um segundo aspecto dessa modalidade, R2 é CD3-O-CH2 -. Em um terceiro aspecto dessa modalidade, R2 é CH3O-CD2 -. Em um quarto aspecto dessa modalidade, R2 é CD3O-CD2 -.

[0024] Em uma outra modalidade específica, R2 é uma hidroximetila, uma metoximetila, CD3-O-CH2 -, CH3O-CD2 - ou CD3O-CD2 -.

[0025] Em uma modalidade preferencial, R2 é metoximetila, CD3-O-CH2 -, CH3O- CD2 - ou CD3O-CD2 -.

[0026] Em uma modalidade particular, R2 é metoximetila.

[0027] R3 geralmente representa metila. Em um aspecto, R3 representa –CH3. Em um outro aspecto, R3 representa –CD3.

[0028] Em uma outra modalidade específica, compostos de fórmula (I) são aqueles em que: R1 é uma porção química de n-propila, 2-cloro-2,2-difluoroetila, 2,2- difluoropropila ou 2,2,2-trifluoroetila; R2 é uma hidroximetila, metoximetila, CD3O-CH2 -, CH3 O-CD2 - ou CD3O- CD2 -; e R3 é –CH3 ou –CD3.

[0029] Em uma outra modalidade específica preferencial, compostos de fórmula

(I) são aqueles em que: R1 é n-propila, 2-cloro-2,2-difluoroetila, 2,2-difluoropropila ou 2,2,2- trifluoroetila; R2 é metoximetila, CD3O-CH2-, CH3O-CD2- ou CD3O-CD2-; e R3 é CH3 ou CD3.

[0030] Os compostos específicos da presente invenção são aqueles selecionados do grupo que consiste em: (4R)-4-(2-cloro-2,2-difluoro-etil)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]pirrolidin-2-ona; (4S)-4-(2-cloro-2,2-difluoro-etil)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil] pirrolidin-2-ona; (4S)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil] -4- propil-pirrolidin-2-1; (4R)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-4- propil-pirrolidin-2-1; (4R)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-4- (2,2,2-trifluoroetil)pirrolidin-2-ona; (4S)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil] -4- (2,2,2-trifluoroetil)pirrolidin-2-ona; (4R)-4-(2-cloro-2,2-difluoro-etil)-1-[[2-(metoximetil)-6-(trideuteriometil) imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]pirrolidin-2-ona; (4R)-(2,2-difluoropropil)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4] - tiadiazol-5-il]metil]pirrolidin-2-ona; e (4S)-(2,2-difluoropropil)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4] - tiadiazol-5-il]metil]pirrolidin-2-ona.

[0031] Os compostos da presente invenção são benéficos para o tratamento de epilepsia, epileptogênese, distúrbios de crises convulsivas, convulsões, em particular, para o tratamento de crises convulsivas refratárias.

[0032] Os parágrafos a seguir fornecem definições das várias porções químicas que compõem os compostos de acordo com a invenção e devem ser aplicadas de maneira uniforme em todo o relatório descritivo e reivindicações, a menos que uma definição expressa de outra forma forneça uma definição mais ampla.

[0033] Os “sais farmaceuticamente aceitáveis” de acordo com a invenção incluem formas de sal de ácido ou de base não tóxicas terapeuticamente ativas, cujos compostos de fórmula (I) são capazes de formar.

[0034] A forma de sal de adição de ácido de um composto de fórmula (I) que ocorre em sua forma livre como uma base pode ser obtida tratando a base livre com um ácido apropriado como um ácido inorgânico, por exemplo, um hidro-hálico como clorídrico ou bromídrico, sulfúrico, nítrico, fosfórico e similares; ou um ácido orgânico, como, por exemplo, acético, trifluoroacético, hidroxiacético, propanoico, lático, pirúvico, malônico, succínico, maleico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, metanossulfônico, etanossulfônico, benzenossulfônico, p-toluenossulfônico, ciclâmico, salicílico, p- aminosalicílico, pamoico e similares.

[0035] Os compostos de fórmula (I) contendo prótons ácidos podem ser convertidos em suas formas de sal de adição de base não tóxicas terapeuticamente ativas, por exemplo, sais de metal ou amina, por tratamento com bases orgânicas e inorgânicas apropriadas. As formas de sal de base apropriadas incluem, por exemplo, sais de amônio, sais de metais alcalinos e alcalino-terrosos, por exemplo, lítio, sódio, potássio, magnésio, sais de cálcio e similares, sais com bases orgânicas, por exemplo, N-metil-D-glucamina, sais de hidrabamina e sais com aminoácidos tais como, por exemplo, arginina, lisina e similares.

[0036] Inversamente, as ditas formas de sal podem ser convertidas nas formas livres por tratamento com uma base ou ácido apropriado.

[0037] Os compostos de fórmula (I) e seus sais podem estar na forma de um solvato, o qual está incluído no escopo da presente invenção. Tais solvatos incluem, por exemplo, hidratos, alcoolatos e similares.

[0038] Os compostos de fórmula (I) e/ou seus intermediários podem ter pelo menos um centro estereogênico em sua estrutura. Esse centro estereogênico pode estar presente em uma configuração R ou S, sendo que a dita notação R e S é usada em correspondência com as regras descritas em Pure Appl. Chem., 45 (1976) 11 a

30. A invenção também se refere a todas as formas estereoisoméricas, tais como formas enantioméricas e diastereoisoméricas dos compostos de fórmula (I) ou suas misturas (incluindo todas as possíveis misturas de estereoisômeros). No que diz respeito à presente invenção, a referência a um composto ou compostos pretende abranger esse composto em cada uma de suas possíveis formas isoméricas e suas misturas, a menos que a forma isomérica específica seja referida especificamente. A expressão “enantiomericamente puro”, como aqui utilizado, refere-se a compostos que têm excesso enantiomérico (ee) superior a 95%.

[0039] Os compostos de acordo com a presente invenção podem existir em diferentes formas polimórficas. Embora não sejam explicitamente indicados na fórmula acima, pretende-se que essas formas sejam incluídas no escopo da presente invenção.

[0040] Os compostos de fórmula (I) de acordo com a invenção podem ser preparados analogamente aos métodos convencionais, como entendido pelo versado na técnica de química orgânica sintética.

[0041] De acordo com uma modalidade, compostos com a fórmula geral (I) podem ser preparados por reação de um composto de fórmula (II) com uma pirrolidona de fórmula (III) de acordo com o seguinte esquema, (III) (I) (II)

[0042] em que R1, R2 e R3 têm as mesmas definições como definidas acima para compostos de fórmula (I).

[0043] Essa reação pode ser realizada utilizando um ácido como o ácido p- toluenossulfônico em um solvente aprótico como o sulfolano a alta temperatura.

[0044] Os compostos de fórmula (II) podem ser preparados por hidroximetilação de um composto de fórmula (IV) de acordo com o seguinte esquema,

(IV) (II)

[0045] em que R2 e R3 têm a mesma definição como definida acima para compostos de fórmula (I).

[0046] Essa reação pode ser realizada usando um agente de formilação como paraformaldeído sob condições ácidas em um solvente polar como dioxano a 100 °C, ou de acordo com qualquer outro método conhecido pelo versado na técnica.

[0047] Os compostos de fórmula (IV) podem ser sintetizados por reação de um composto de fórmula (V) com um derivado de bromo de fórmula (VI) de acordo com o seguinte esquema, (VI) (IV) (V)

[0048] em que R2 e R3 têm a mesma definição como descrito acima para compostos de fórmula (I).

[0049] Essa reação pode ser realizada usando procedimentos descritos na literatura ou conhecidos do versado na técnica.

[0050] De acordo com outra modalidade, os compostos de fórmula (I) podem ser sintetizados por uma reação do tipo Friedel-Crafts de um composto de fórmula (IV) com uma pirrolidona de fórmula (VII) de acordo com o esquema a seguir,

[0051] em que R1, R2 e R3 têm as mesmas definições definidas acima para compostos de fórmula (I).

[0052] Essa reação pode ser realizada com pirrolidonas de fórmula (VII) que porta um grupo de saída (Y), como um átomo de cloro ou um grupo p-toluenossulfonila, na presença de um ácido de Lewis, como cloreto de zinco ou cloreto férrico, em um solvente polar como sulfolano ou dioxano a temperaturas variando de 100 a 120 °C, ou de acordo com qualquer procedimento descrito na literatura ou conhecido do versado na técnica.

[0053] Os compostos de fórmula (VII) podem ser preparados a partir das pirrolidonas correspondentes de fórmula (VIII) de acordo com os métodos descritos no pedido de patente PCT WO2006/128693 ou de acordo com qualquer outro método conhecido do versado na técnica.

[0054] A síntese de compostos de fórmula (VIII) pode ser realizada utilizando procedimentos descritos na literatura ou conhecidos do versado na técnica.

[0055] Os compostos de fórmula (V) e de fórmula (VI) estão disponíveis comercialmente ou podem ser sintetizados de acordo com qualquer método conhecido pelo versado na técnica.

[0056] Os compostos da presente invenção são benéficos para o tratamento de epilepsia, epileptogênese, distúrbios de crises convulsivas, convulsões, em particular, convulsões refratárias.

[0057] Portanto, em outra modalidade, a presente invenção fornece um composto de fórmula (I) como definido acima, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso como medicamento.

[0058] Em um aspecto dessa modalidade, a presente invenção também fornece um composto de fórmula (I) como definido acima, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso no tratamento e/ou prevenção de epilepsia, epileptogênese, distúrbios de crises convulsivas, convulsões, em particular, convulsões refratárias.

[0059] Em uma modalidade adicional, a presente invenção fornece o uso de um composto de fórmula (I) como definido acima, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para a fabricação de um medicamento para o tratamento e/ou prevenção de epilepsia, epileptogênese, distúrbios de crises convulsivas, convulsões, em particular, para o tratamento de convulsões refratárias.

[0060] As crises convulsivas podem ser classificadas como refratárias quando um paciente não consegue se livrar das crises convulsivas por 12 meses ou mais do estado do tratamento da técnica com dois ou mais fármacos antiepiléticos em doses máximas toleradas. A Liga Internacional Contra a Epilepsia (ILAE) definiu a epilepsia resistente a medicamentos como “falha em ensaios adequados de dois esquemas de DAE tolerados e escolhidos e usados apropriadamente e usados (seja como monoterapias ou em combinação) para se tornar livre de crise convulsiva sustentada”.

[0061] Os métodos da invenção compreendem a administração a um mamífero (de preferência um humano) sofrendo das condições ou distúrbios mencionados acima, de um composto de acordo com a invenção em uma quantidade suficiente para aliviar ou prevenir o distúrbio ou condição.

[0062] A presente invenção, portanto, também inclui em seu escopo um método para o tratamento e/ou prevenção de epilepsia, epileptogênese, distúrbios de crises convulsivas, convulsões, em particular crises convulsivas refratárias, que compreende a administração a um paciente necessitado de tal tratamento de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) como definido acima, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0063] O composto é convenientemente administrado em qualquer forma de dosagem unitária adequada, incluindo, mas não se limitando a uma contendo 1 a

2.000 mg, preferencialmente 1 a 1.000 mg, mais preferencialmente 1 a 500 mg de ingrediente ativo por forma de dosagem unitária.

[0064] O termo “tratamento”, como usado no presente documento, inclui tratamento curativo e tratamento profilático.

[0065] Por “curativo” entende-se eficácia no tratamento de um episódio sintomático atual de um distúrbio ou condição.

[0066] Por “profilático” entende-se a prevenção da ocorrência ou recorrência de um distúrbio ou condição.

[0067] O termo “epilepsia”, como usado no presente documento, refere-se a uma condição neurológica crônica caracterizada por crises epilépticas recorrentes e não provocadas. Uma crise convulsiva epiléptica é a manifestação de uma descarga sincronizada excessiva e anormal de um conjunto de neurônios cerebrais; suas manifestações clínicas são repentinas e transitórias. O termo “epilepsia”, como usado no presente documento, também pode se referir a um distúrbio da função cerebral caracterizado pela ocorrência periódica de crises convulsivas. As crises convulsivas podem ser “não epilépticas” quando evocadas em um cérebro normal por condições como febre alta ou exposição a toxinas ou “epilépticas” quando evocadas sem provocação evidente.

[0068] O termo “crise convulsiva”, como usado no presente documento, refere-se a uma alteração transitória do comportamento devido ao disparo desordenado, síncrono e rítmico de populações de neurônios cerebrais.

[0069] Um outro aspecto da presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) em combinação com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.

[0070] É claro que a atividade em qualquer uma das indicações acima mencionadas pode ser determinada pela realização de ensaios clínicos adequados de uma maneira conhecida por um versado na técnica relevante para a indicação específica e/ou no projeto de ensaios clínicos em geral.

[0071] Para o tratamento de doenças, os compostos de fórmula (I) ou os sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos podem ser utilizados em uma dosagem diária eficaz e administrados na forma de uma composição farmacêutica.

[0072] Portanto, outra modalidade da presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo em combinação com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.

[0073] Para preparar uma composição farmacêutica de acordo com a invenção,

um ou mais dos compostos de fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo são intimamente misturados com um diluente ou veículo farmacêutico de acordo com técnicas convencionais de composição farmacêutica conhecidas pelo profissional versado.

[0074] Os diluentes e veículos adequados podem assumir uma ampla variedade de formas, dependendo da via de administração desejada, por exemplo, oral, retal, parentérica ou intranasal.

[0075] As composições farmacêuticas compreendendo compostos de acordo com a invenção podem, por exemplo, ser administradas por via oral, parentérica, isto é, por via intravenosa, intramuscular ou subcutânea, intratecal, transdérmica (adesivo), por inalação ou intranasalmente.

[0076] As composições farmacêuticas adequadas para administração oral podem ser sólidas ou líquidas e podem, por exemplo, estar na forma de comprimidos, pílulas, drágeas, cápsulas de gelatina, soluções, xaropes, gomas de mascar e similares.

[0077] Para este fim, o ingrediente ativo pode ser misturado com um diluente inerte ou um veículo não tóxico aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, como amido ou lactose. Opcionalmente, essas composições farmacêuticas também podem conter um aglutinante como celulose microcristalina, goma tragacanto ou gelatina, um desintegrante como ácido algínico, um lubrificante como estearato de magnésio, um deslizante como dióxido de silício coloidal, um adoçante como sacarose ou sacarina, ou agentes corantes ou um agente aromatizante, como hortelã-pimenta ou salicilato de metila.

[0078] A invenção também contempla composições que podem liberar a substância ativa de maneira controlada.

[0079] As composições farmacêuticas que podem ser usadas para administração parentérica estão na forma convencional, como soluções ou suspensões aquosas ou oleosas, geralmente contidas em ampolas, seringas descartáveis, frascos de vidro ou plástico ou recipientes para infusão.

[0080] Além do ingrediente ativo, essas soluções ou suspensões também podem opcionalmente conter um diluente estéril, como água para injeção, uma solução salina fisiológica, óleos, polietileno glicóis, glicerina, propileno glicol ou outros solventes sintéticos, agentes antibacterianos como álcool benzílico, antioxidantes como ácido ascórbico ou bissulfito de sódio, agentes quelantes como ácido etileno diamina-tetra- acético, tampões como acetatos, citratos ou fosfatos e agentes para ajustar a osmolaridade, como cloreto de sódio ou dextrose.

[0081] Essas formas farmacêuticas são preparadas utilizando métodos que são rotineiramente utilizados pelos farmacêuticos.

[0082] A quantidade de ingrediente ativo nas composições farmacêuticas pode se situar em uma ampla faixa de concentrações e depende de vários fatores, como sexo, idade, peso e condição médica do paciente, bem como do método de administração. Assim, a quantidade de composto de fórmula (I) nas composições para administração oral é de pelo menos 0,5% em peso e pode ser de até 80% em peso em relação ao peso total da composição.

[0083] De acordo com a invenção, também foi verificado que os compostos de fórmula (I) ou os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico podem ser administrados sozinhos ou em combinação com outros ingredientes farmaceuticamente ativos. Exemplos não limitativos desses compostos adicionais que podem ser citados para uso em combinação com os compostos de acordo com a invenção são antivirais, antiespásticos (por exemplo, baclofeno), antieméticos, agentes antimaníacos para estabilizar o humor, analgésicos (por exemplo, aspirina, ibuprofeno, paracetamol), narcóticos analgésicos, anestésicos tópicos, analgésicos opioides, sais de lítio, antidepressivos (por exemplo, mianserina, fluoxetina, trazodona), antidepressivos tricíclicos (por exemplo imipramina, desipramina), anticonvulsivantes (por exemplo, ácido valproico, carbamazepina, fenitoína), antipsicóticos (por exemplo, risperidídeos) benzodiazepínicos (por exemplo, diazepam, clonazepam), fenotiazinas (por exemplo, clorpromazina), bloqueadores dos canais de cálcio, anfetamina, clonidina, lidocaína, mexocaína, mexiletina, capsaicina, cafeína, quetiapina, antagonistas da serotonina, β-bloqueadores, antiarrítmicos, triptanos e derivados.

[0084] Para composições orais, a dosagem diária está na faixa de 1 mg a 2.000 mg de compostos de fórmula (I). Preferencialmente, na faixa de 1 mg a 1.000 mg de compostos de fórmula (I), mais preferencialmente de 1 mg a 500 mg.

[0085] Nas composições para administração parentérica, a quantidade de composto de fórmula (I) presente é de pelo menos 0,5% em peso e pode ser de até 33% em peso em relação ao peso total da composição. Para as composições parentéricas preferenciais, a unidade de dosagem está na faixa de 1 mg a 2.000 mg de compostos de fórmula (I).

[0086] A dose diária pode se situar em uma ampla faixa de unidades de dosagem do composto de fórmula (I) e está geralmente na faixa de 1 a 2.000 mg, preferencialmente 1 a 1.000 mg. No entanto, deve-se entender que as doses específicas podem ser adaptadas a casos particulares, dependendo dos requisitos individuais, a critério do médico.

[0087] Os compostos de ligação às proteínas SV2 fornecidos por essa invenção e seus derivados marcados podem ser úteis como padrões e reagentes na determinação da capacidade dos compostos testados (por exemplo, um potencial farmacêutico) para se ligar às proteínas SV2.

[0088] Os derivados marcados dos ligantes das proteínas SV2 proporcionados por essa invenção também podem ser úteis como radiotraçadores para imagiologia por tomografia de emissão de pósitrons (PET) ou para tomografia computadorizada de emissão de fóton único (SPECT).

[0089] A presente invenção, portanto, fornece ainda ligantes marcados como ferramentas para rastrear bibliotecas químicas para a divulgação de agentes farmacêuticos potenciais, em particular para tratamento e prevenção das condições aqui estabelecidas, com base em uma ligação mais potente às proteínas SV2, para localizar proteínas SV2 nos tecidos e para caracterizar proteínas SV2 purificadas. As proteínas SV2 incluem SV2A, SV2B e SV2C, em que SV2A é o local de ligação do fármaco anticonvulsivo levetiracetam e seus análogos. As isoformas de SV2 SV2A, SV2B ou SV2C podem ser derivadas de tecidos, especialmente do cérebro, de qualquer espécie de mamífero, incluindo humanos, ratos ou camundongos. Alternativamente, as isoformas podem ser versões clonadas de qualquer espécie de mamífero, incluindo humanos, ratos e camundongos, expressos heterologicamente e utilizados para ensaios. O método de triagem compreende expor membranas cerebrais, como membranas cerebrais de mamíferos ou humanos, ou linhagens celulares que expressam proteínas SV2 ou fragmentos das mesmas, especialmente SV2A e SV2C, mas incluindo SV2B, a um agente putativo e incubar as membranas ou proteínas ou fragmentos e o agente com composto marcado de fórmula (I). O método compreende ainda determinar se a ligação do composto de fórmula (I) à proteína é inibida pelo agente putativo, identificando assim parceiros de ligação para a proteína. Assim, os ensaios de triagem permitem a identificação de novos fármacos ou compostos que interagem com as proteínas SV2. A presente invenção também fornece ligantes fotoativáveis de proteínas SV2.

[0090] Os ligantes marcados também podem ser utilizados como ferramentas para avaliar o estado de conformação das proteínas SV2 após solubilização, purificação e cromatografia. Os ligantes marcados podem ser marcados direta ou indiretamente. Exemplos de marcadores adequados incluem um marcador radioativo, como 3H, um marcador fluorescente, uma enzima, európio, biotina e outros marcadores convencionais para ensaios desse tipo.

[0091] Os compostos marcados de fórmula (I) são úteis nos métodos como sondas em ensaios para rastrear novos compostos ou agentes que se ligam às proteínas SV2 (SV2A, SV2B e SV2C). Em tais modalidades de ensaio, os ligantes podem ser utilizados sem modificação ou podem ser modificados de várias maneiras; por exemplo, marcando, como unindo covalentemente ou não covalentemente uma porção química que direta ou indiretamente fornece um sinal detectável. Em qualquer um desses ensaios, os materiais podem ser marcados direta ou indiretamente. As possibilidades de marcação direta incluem grupos de marcadores, tais como: radiomarcadores, incluindo, mas não limitados a, [3H], [14C], [32P], [35S] ou [125I], enzimas como peroxidase e fosfatase alcalina e marcadores fluorescentes capazes de monitorar a alteração na intensidade da fluorescência, no deslocamento do comprimento de onda ou na polarização da fluorescência, incluindo, mas não se limitando a, fluoresceína ou rodamina. As possibilidades de marcação indireta incluem biotinilação de um constituinte seguido pela ligação à avidina acoplada a um dos grupos marcadores acima ou o uso de anticorpos antiligantes.

Os compostos também podem incluir espaçadores ou ligantes nos casos em que os compostos devem ser ligados a um suporte sólido.

Para identificar agentes ou compostos que competem ou interagem com ligantes marcados de acordo com a invenção para a ligação às proteínas SV2 (especialmente SV2A e SV2C), células intactas, fragmentos celulares ou de membrana contendo SV2A ou SV2C ou toda a proteína SV2 ou um fragmento da mesma podem ser usados.

O agente ou composto pode ser incubado com as células, membranas, proteína ou fragmento SV2 antes, ao mesmo tempo ou após a incubação com levetiracetam marcado ou um análogo ou derivado do mesmo.

Os ensaios podem ser modificados ou preparados em qualquer formato disponível, incluindo ensaios de triagem de alto rendimento (HTS) que monitoram a ligação do levetiracetam ou a ligação de seus derivados ou análogos às proteínas SV2 ou seus fragmentos.

Em muitos programas de triagem de fármacos que testam bibliotecas de compostos, são desejáveis ensaios de alto rendimento para maximizar o número de compostos pesquisados em um determinado período de tempo.

Tais ensaios de rastreio podem usar células intactas, fragmentos celulares ou membranares contendo SV2, bem como de sistemas livres de células ou livres de membrana, tal como pode ser derivado com proteínas purificadas ou semipurificadas.

A vantagem do ensaio com fragmento de membrana contendo proteínas e peptídeos SV2 ou SV2 purificados é que os efeitos da toxicidade celular e/ou biodisponibilidade do composto de teste podem ser geralmente ignorados, sendo o ensaio focado principalmente no efeito do fármaco no alvo molecular como pode se manifestar em uma inibição, por exemplo, da ligação entre duas moléculas.

O ensaio pode ser formulado para detectar a capacidade de um agente ou composto de teste para inibir a ligação do ligante marcado de acordo com a invenção ao SV2 ou a um fragmento de SV2 ou a levetiracetam marcado ou seus derivados ou análogos a SV2 ou a um fragmento de proteína SV2. A inibição da formação de complexos pode ser detectada por uma variedade de técnicas, como ensaios de filtração, placas Flash (Perkin Elmer), ensaios de proximidade de cintilação (SPA, GE). Para rastreios de alto rendimento (HTS), o ensaio de proximidade de cintilação que utiliza microesferas revestidas com membranas biológicas ou placas de flash revestidas com membranas biológicas são métodos poderosos que não requerem etapas de separação ou lavagem.

[0092] Um problema que pode ser enfrentado ao desenvolver compostos para uso em terapia é a capacidade de certos compostos (fármacos perpetradores), que podem ser coadministrados em conjunto com os compostos da presente invenção (fármacos vítimas), para induzir enzimas CYP450, em particular CYP3A4/5. A indução de tais enzimas pelos fármacos agressores pode impactar a exposição do fármaco vítima, quando metabolizado principalmente pelas enzimas CYP450 e CYP3A4/5 em particular, alterando potencialmente seu perfil de eficácia. Por conseguinte, é desejável desenvolver compostos com potencial limitado de metabolização pelas enzimas CYP3A4/5.

[0093] A contribuição do CYP3A4/5 para o metabolismo total dos compostos de acordo com a presente invenção foi avaliada calculando a razão entre as depurações de hepatócitos humanos na ausência e presença de um inibidor seletivo do CYP3A4/5, como a azamulina.

[0094] Quando testados nesse ensaio de acordo com o protocolo descrito no presente pedido de patente, os compostos de acordo com a presente invenção exibem uma fração metabolizada pelo CYP3A4/5 (Fm,CYP3A4/5) tipicamente menor que 40%, minimizando assim o risco de interações de fármaco-fármaco quando coadministrados com indutores do CYP450.

[0095] Além disso, pode ser benéfico que os compostos de acordo com a presente invenção demonstrem baixas folgas intrínsecas.

SEÇÃO EXPERIMENTAL ABREVIAÇÕES/REAGENTES RECORRENTES Ac: acetila ACN: Acetonitrila Salmoura: solução aquosa saturada de cloreto de sódio nBu: n-butila tBu: terc-butila

Bz: benzoíla CV: volumes da coluna DCM: Diclorometano DMF: N,N-dimetilformamida DMSO: Dimetilsulfóxido Et: etila EtOH: Etanol Et2O: éter dietílico EtOAc: acetato de etila h: hora HPLC: Cromatografia líquida de alta pressão LC: Cromatografia Líquida LCMS: Espectrometria de Massa por Cromatografia Líquida MeOH: Metanol min: minutos MTBE: éter metil terc-butílico RMN: Ressonância magnética nuclear iPrOH: isopropanol PTSA: ácido p-toluenossulfônico RT: temperatura ambiente SFC: Cromatografia de Fluido Supercrítico THF: Tetra-hidrofurano TLC: Cromatografia em Camada Fina

MÉTODOS ANALÍTICOS

[0096] Todas as reações envolvendo reagentes sensíveis ao ar ou à umidade foram realizadas sob atmosfera de nitrogênio ou argônio usando solventes secos e material de vidro. Os experimentos que requerem irradiação de micro-ondas são realizados em um forno de micro-ondas Biotage Initiator Sixty atualizado com a versão

2.0 do software operacional. Os experimentos são realizados para atingir a temperatura necessária o mais rápido possível (potência máxima de irradiação: 400

W, sem refrigeração externa). Solventes e reagentes comerciais foram geralmente usados sem purificação adicional, incluindo solventes anidros quando apropriado (geralmente produtos Sure-Seal™ da Aldrich Chemical Company ou AcroSeal™ da ACROS Organics). Em geral, as reações foram seguidas por cromatografia em camada fina, HPLC ou análises por espectrometria de massa.

[0097] As análises de HPLC são realizadas usando um sistema HPLC série 1100 Agilent montado com uma coluna Waters XBridge MS C18, 5 pm, 150 x 4,6 mm. O gradiente varia de 100% de solvente A (solução de água/ACN/formato de amônio 85/5/10 (v/v/v)) a 100% de solvente B (solução de água/ACN/formato de amônio 5/85/10 (v/v/v) em 6 minutos, com uma retenção a 100% B de 5 minutos, a taxa de fluxo é ajustada em 8 ml/min por 6 minutos e depois aumentada em 3 ml/min, durante 2 minutos, com uma retenção em 3 ml/min durante 3 minutos. Uma divisão de 1/25 é usada imediatamente antes da fonte de API. A cromatografia é realizada a 45 °C. A solução de formato de amônio (pH ~ 8,5) é preparada por dissolução de formato de amônio (630 mg) em água (1 l) e adição de hidróxido de amônio a 30% (500 µl).

[0098] Será evidente para os versados na técnica que diferentes tempos de retenção podem ser obtidos para dados de LC se diferentes condições analíticas forem usadas.

[0099] As medições espectrométricas de massa no modo LCMS são realizadas da seguinte forma:

[0100] - Para eluição básica, as análises são realizadas usando:

[0101] Um espectrômetro de massa quadrupolo simples QDA Waters é usado para análise LCMS. Esse espectrômetro é equipado com uma fonte ESI e uma UPLC Acquity Hclass com detector de matriz de diodos (200 a 400 nm). Os dados são adquiridos em uma varredura completa do MS de m/z 70 a 800 no modo positivo com uma eluição básica. A separação da fase reversa é realizada a 45 °C em uma coluna Waters Acquity UPLC BEHC18 de 1,7 µm (2,1 x 50 mm) para eluição básica. A eluição em gradiente é realizada com água/ACN/formato de amônio (95/5/63 mg/l) (solvente A) e ACN/água/formato de amônio (95/5/63 mg/l) (solvente B). Volume de injeção: 1 µl. Fluxo total em MS.

PROGRAMA BÁSICO “4 MIN” Tempo (min) A (%) B (%) Fluxo (ml/min) 0 99 1 0,4 0,3 99 1 0,4 3,2 0 100 0,4 3,25 0 100 0,5 4 0 100 0,5 PROGRAMA BÁSICO “10 MIN” Tempo (min) A (%) B (%) Fluxo (ml/min) 0 99 1 0,4 0,8 99 1 0,4 5,3 0 100 0,4 5,35 0 100 0,5 7,30 0 100 0,5 - Para eluição ácida, as análises são realizadas usando:

[0102] Um espectrômetro de massa quadrupolo simples QDA Waters é usado para análise LCMS. Esse espectrômetro é equipado com uma fonte ESI e uma UPLC Acquity Hclass com detector de matriz de diodos (200 a 400 nm). Os dados são adquiridos em uma varredura completa de MS de m/z 70 a 800 no modo positivo com uma eluição ácida. A separação da fase reversa é realizada a 45 °C em uma coluna Waters Acquity UPLC HSS T3 de 1,8 µm (2,1 x 50 mm) para eluição ácida. A eluição em gradiente é feita com água/ACN/TFA (95/5/0,5 ml/l) (solvente A) e ACN (solvente B). Volume de injeção: 1 µl. Fluxo total em MS.

PROGRAMA ÁCIDO “4 MIN” Tempo (min) A (%) B (%) Fluxo (ml/min) 0 99 1 0,4 0,3 99 1 0,4 3,2 5 95 0,4 3,25 5 95 0,5 4 5 95 0,5 PROGRAMA ÁCIDO “10 MIN” Tempo (min) A (%) B (%) Fluxo (ml/min) 0 99 1 0,4 0,8 99 1 0,4 5,3 5 95 0,4 5,35 5 95 0,5 7,30 5 95 0,5

[0103] Os materiais brutos podem ser purificados por cromatografia em fase normal, cromatografia em fase reversa (ácida ou básica), separação quiral ou recristalização.

[0104] A cromatografia em fase reversa normal é realizada usando colunas de sílica gel (sílica gel de malha 100:200 ou colunas Puriflash® -50SIHC-JP da Interchim).

[0105] CROMATOGRAFIA PREPARATIVA DE FASE REVERSA É REALIZADA DA SEGUINTE FORMA: - A purificação de LCMS (modo Básico, preparação de LCMS) usando um espectrômetro de massa com triplo quadrupolo SQD ou QM Waters é usada para purificação de LCMS. Esse espectrômetro está equipado com uma fonte ESI e uma bomba quaternária Waters com controlador Prep LC com detector de diodos (210 a 400 nm).

[0106] Parâmetros MS: tensão capilar ESI 3 kV. Tensão de cone e extrator 10. Temperatura do bloco de fonte 120 °C. Temperatura de dessolvatação 300 °C. Os dados são adquiridos em uma varredura completa de MS de m/z 100 a 700 em modo positivo com uma eluição ácida ou básica.

[0107] Parâmetros de LC: A separação de fase reversa é realizada à temperatura ambiente em uma coluna XBridge prep OBD C18 (5 µm, 30 x 50 mm) (eluição básica). O gradiente de eluição é feito com água (solvente A), ACN (solvente B), bicarbonato de amônio em água 8 g/l + 500 µl/l de NH4OH a 30% (solvente C) (pH ~ 8,5). Taxa de fluxo de HPLC: 35 ml/min a 60 ml/min, volume de injeção: 1 ml. A taxa de divisão é definida em +/- 1/6.000 para MS.

Tempo (min) A (%) B (%) C (%) Fluxo (ml/min) 0 85 5 10 35 1 85 5 10 35 7 5 85 10 35 9 5 95 00 60 12 5 95 00 60 12,5 85 5 10 35 16 85 5 10 35

[0108] Separações cromatográficas quirais preparativas são realizadas no uso de cromatografia em fase líquida ou de cromatografia de fluido supercrítico (SFC) com várias misturas de álcoois inferiores e alcanos C5 a C8 lineares, ramificados ou cíclicos em 360 ml/min. As misturas de solventes, bem como as colunas, são descritas em procedimentos individuais.

[0109] Os produtos foram geralmente secos sob vácuo antes das análises finais e submetidos a testes biológicos.

[0110] Os espectros de RMN são gravados em um espectrômetro de RMN Ultrashield BRUKER AVANCEIII 400 MHz equipado com uma estação de trabalho Windows 7 Professional executando o software Topspin 3.2 e uma sonda de banda larga de ressonância dupla de 5 mm (PABBI 1H/19F-BB Z-GRD Z82021/0075) ou uma sonda de ressonância tripla de 1 mm (PATXI 1H/D-13C/15N Z-GRD Z868301/004). Os compostos foram estudados em DMSO- d6 ou solução de CDCl3 a uma temperatura de sonda de 300 K e a uma concentração de 10 mg/ml. O instrumento está bloqueado no sinal de deutério do DMSO-d6 ou CDCl3. Os deslocamentos químicos são dados em ppm no campo inferior do TMS (tetrametilsilano), tomado como padrão interno.

[0111] As rotações ópticas ([a]D) foram medidas em um polarímetro PERKIN- ELMER 341 em uma cubeta ( l = 1 dm) a uma concentração de 10 mg/ml, a uma temperatura mencionada nos exemplos específicos, a 589 nm (lâmpada de sódio).

[0112] Os exemplos a seguir ilustram como os compostos cobertos pela fórmula (I) podem ser sintetizados. Eles são fornecidos apenas para fins ilustrativos e não se destinam, nem devem ser interpretados, como limitando a invenção de qualquer maneira. Os versados na técnica compreenderão que variações e modificações de rotina dos exemplos a seguir podem ser feitas sem exceder o espírito ou o escopo da invenção. EXEMPLO 1. SÍNTESE DE (4R)-4-(2-CLORO-2,2-DIFLUORO-ETIL)-1-[[2- (metoximetil)-6-METIL-IMIDAZO[2,1-B][1,3,4]tiadiazol-5-IL]METIL] PIRROLIDIN-2- ONA 1A

[0113] Síntese de 2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol II

[0114] A uma solução de 5- (metoximetil) -1,3,4-tiadiazol-2-amina I (CAS: 15884- 86-3, WO2011/047860, 1,0 eq., 7,0 g, 48,2 mmoles) em DMF (95 ml), a 100 °C, foi adicionada gota a gota uma solução de bromoacetona (1,0 eq., 4,2 ml, 46,2 mmoles, 97% de pureza) em DMF (5 ml). A mistura de reação foi agitada a 100 °C por 3 h. A mistura reacional foi arrefecida até à temperatura ambiente (TA) e o solvente foi evaporado até à secura sob alto vácuo para dar um óleo castanho. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash Biotage Isolera Four (coluna de 100 g de sílica gel KP-SNAP em um gradiente de 0% a 10% de metanol em diclorometano acima de 14 CV) e as frações puras foram evaporadas até a secura para dar 2-(metoximetil)-6- metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol II (5,0 g, 25,11 mmoles) como um sólido amarelo/laranja.

[0115] Rendimento: 52%

[0116] LC/MS: [M+H]+ = 184,0

[0117] 1H RMN (400 MHz, DMSO- d6): δ 8,53 (m, 1H), 4,76 (s, 2H), 3,40 (s, 3H), 2,25 (d, J = 1,0 Hz, 3H).

[0118] Síntese de [2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il] metanol III

[0119] Em um tubo selado, 2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol II (1,0 eq., 5,0 g, 25,1 mmoles), paraformaldeído (6,0 eq., 4,50 g, 150 mmoles) e uma solução aquosa de ácido clorídrico (4N) (2 equiv., 12,55 ml, 50,2 mmoles) foram misturados em 1,4-dioxano (12,5 ml). A mistura foi agitada a 100 °C durante 18 h, em seguida, a mistura em bruto foi aquecida até à temperatura ambiente e uma solução aquosa saturada de NaHCO3 foi adicionada até pH = 6 a 7. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (3 vezes) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4, filtradas e evaporadas até à secura. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash Biotage Isolera Four (coluna de sílica gel de 100 g KP-SNAP em um gradiente de 0% a 5% de metanol em diclorometano acima de 12 CV). As frações mais puras foram evaporadas até a secura para dar [2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]

metanol III (4,0 g, 18,57 mmoles) como um sólido branco.

[0120] Rendimento: 74%

[0121] LC/MS: [M+H]+ = 214,0

[0122] 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 5,10 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 4,79 (s, 2H), 4,63 (d, J = 5,4 Hz, 2H), 3,41 (s, 3H), 2,26 (s, 3H).

[0123] Síntese de (4R)-4-(2-cloro-2,2-difluoro-etil)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil- imidazo[2,1-b] [1,3, 4]tiadiazol-5-il]metil] pirrolidin-2-ona 1A

[0124] A uma mistura de [2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol-5- il] metanol III (1,0 eq., 3,65 g, 17,1 mmoles) e (4R)-4-(2-cloro-2,2-difluoro-etil) pirrolidin-2-ona IV (CAS: 1294000-89-7, WO2011/047860, 1,2 eq., 4,14 g, 20,5 mmoles) em sulfolano (86 ml), foi adicionado monoidrato de ácido p-toluenossulfônico (1,0 eq., 3,3 g, 17,1 mmoles) e a mistura foi agitada a 110 °C por 16 h. A mistura foi arrefecida à temperatura ambiente e depois foi adicionada água e a camada aquosa foi extraída com MTBE (4 vezes). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (4 vezes), secas sobre MgSO4, filtradas e evaporou-se até à secura. O produto em bruto obtido foi purificado por SFC aquiral (Phenomenex SiO2 Beta 10 µm, D=5 cm L=34 cm, gradiente cossolvente de 300 g/CO2/MeOH de 1% a 40%/150 bar/360 ml/min) para dar (4R)-4-(2-cloro-2,2-difluoro-etil)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil- imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil] pirrolidin-2-ona (2,32 g, 6,12 mmoles) como um óleo marrom.

[0125] Rendimento: 36%

[0126] LC/MS: [M+H]+ = 379,1

[0127] 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 4,77 (s, 2H), 4,60 (s, 2H), 3,40 (s, 4H), 3,05 (dd, J = 9,4, 7,5 Hz, 1H), 2,72 -2,56 (m, 3H), 2,42 (dd, J = 16,4, 8,2 Hz, 1H), 2,26 (s, 3H), 2,17 (dd, J = 16,4, 8,6 Hz, 1H).

[0128] (4S)-4-(2-cloro-2,2-difluoro-etil)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil] pirrolidin-2-ona 1B foi preparado de acordo com o mesmo procedimento a partir de [2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il] metanol III (1,0 eq., 700 mg, 3,3 mmoles) e 4-(2-cloro-2,2-difluoro-etil) pirrolidin-2- ona racêmica IV-rac (CAS: 1294000-88-6, WO2011/047860, 720 mg, 3,9 mmoles).

[0129] A mistura bruta obtida foi purificada por cromatografia flash em fase reversa Biotage Isolera Four (coluna SNAP 60 g/C18 em um gradiente de 5% a 95% de acetonitrila em água acima de 15 CV). As frações mais puras foram evaporadas até a secura para dar um óleo amarelo (650 mg) que foi repurificado por SFC aquiral (DIOL 5 µm D=5 cm L=25 cm 300 g, cossolvente metanol 5%) para dar um amarelo claro óleo (220 mg). A mistura de enantiômeros foi então purificada por cromatografia em fase reversa quiral (AS 50x265, 5 µm, 300 g, EtOH/Heptano 50/50, 100 ml/min., 35 °C) para dar (4S)-4-(2-cloro-2,2-difluoro-etil)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]pirrolidin-2-ona 1B (segundo pico eluído, tempo de retenção = 18 min, 83 mg, 0,217 mmol) como um óleo transparente.

[0130] Rendimento: 6,6%

[0131] LC/MS: [M+H]+ = 379

[0132] 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 4,77 (s, 2H), 4,60 (s, 2H), 3,44 (dd, J = 9,5, 7,7 Hz, 1H), 3,40 (s, 3H), 3,05 ( dd, J = 9,4, 7,5 Hz, 1H), 2,63 (ttd, J = 13,7, 8,2, 4,4 Hz, 3H), 2,42 (dd, J = 16,4, 8,2 Hz, 1H), 2,26 (s, 3H), 2,17 (dd, J = 16,4, 8,7 Hz, 1H).

[0133] HPLC quiral (AS, EtOH/heptano 50/50, 30 °C, 1,5 ml/min.): 1A: 2,01 min; 1B: 3,02 min. EXEMPLO 2. SÍNTESE DE (4S)-1-[[2-(metoximetil)-6-METIL-IMIDAZO[2,1-B] [1,3,4]tiadiazol-5-IL]METIL]-4-PROPIL -PIRROLIDIN-2-ONA 2A E (4R)-1-[[2- (metoximetil)-6-METIL-IMIDAZO[2,1-B][1,3,4]tiadiazol-5-IL]METIL] - 4-PROPIL- PIRROLIDIN-2-ONA 2B

[0134] 2.1 Síntese de (4S)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol 5-il]metil]-4-propil-pirrolidin-2-ona 2A e (4R)-1-[[2-(metoximetil)-6- metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-4-propil-pirrolidin-2-ona 2B. A uma mistura de [2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol-5-il] metanol III (1,0 eq., 200 mg, 0,94 mmol) e 4-propilpirrolidin-2-ona V (CAS: 89895-19-2, 1,8 eq., 214 mg, 1,68 mmol) em sulfolano (4,7 ml), foi adicionado monoidrato de ácido p- toluenossulfônico (1,0 eq., 178 mg, 0,94 mmol) e a mistura foi agitada a 110 °C durante 16 h. A mistura foi resfriada à temperatura ambiente e foi diretamente purificada por HPLC preparativa de fase reversa (condições básicas) para dar um sólido bege (130 mg) que foi purificado pela segunda vez por SFC aquiral (Princeton 2-etilpiridina 5 µm SiO2 5 cm-200 g/gradiente de cossolvente CO2/MeOH de 1% a 40%/150 bar/360 ml/min) para dar o composto esperado como um óleo castanho (93 mg). Os dois enantiômeros foram separados por SFC quiral (AD 50x279 mm, cossolvente CO2/MeOH 10%/360 ml/min, 30 °C) para dar (4S)-1-[[2- (metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil] -4-propil-pirrolidin-2- ona 2A (31 mg, 0,096 mmol) e (4R)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil] -4-propil-pirrolidin-2-ona 2B (26 mg, 0,081 mmol) como óleos castanhos. A estereoquímica absoluta de 2A e 2B foi avaliada inequivocamente por comparação alfa-D com uma amostra autêntica de 2B sintetizada de acordo com o mesmo procedimento a partir de (4R)-4-propilpirrolidona (CAS: 930123-37-8; WO2007031263).

[0135] Rendimentos estimados: 10 e 9%

[0136] LC/MS: [M+H]+ = 323,1

[0137] 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 4,78 (s, 2H), 4,58 (s, 2H), 3,45-3,32 (m, 4H), 2,85 (dd, J = 9,3, 6,9 Hz, 1H), 2,37 (dd, J = 16,4, 8,7 Hz, 1H), 2,25 (s, 3H), 1,92

(dd, J = 16,3, 7,5 Hz, 1H), 1,35-1,11 (m, 5H), 0,82 (t, J = 7,1 Hz, 3H).

[0138] Alfa-D (2B, MeOH, 10 mg/ml, 29 ° C) = + 13,8 EXEMPLO 3. SÍNTESE DE (4R)-1-[[2-(metoximetil)-6-METIL-IMIDAZO[2,1-B] [1,3,4]tiadiazol-5-IL]METIL]-4-(2,2,2-TRIFLUOROETIL) PIRROLIDIN-2-ONA 3A

[0139] 3.1 Síntese de (4R)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil] -4- (2, 2,2-trifluoroetil) pirrolidin-2-ona 3A

[0140] A uma mistura de [2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol-5- il] metanol III (1,0 eq., 100 mg, 0,47 mmol) e (4R)-4-(2,2,2-trifluoroetil)pirrolidin-2- ona VI (CAS: 1294001-34-5, WO2011/47860, 1,8 eq., 141 mg, 0,84 mmol) em sulfolano (2,3 ml), foi adicionado monoidrato de ácido p-toluenossulfônico (1,0 eq., 90 mg, 0,47 mmol) e a mistura foi agitada a 110 °C por 3,5 h. A mistura foi resfriada à temperatura ambiente e foi diretamente purificada por HPLC preparativa de fase reversa (condições básicas) para dar um sólido bege (125 mg) que foi purificada uma segunda vez por HPLC preparativa de fase reversa (KROMASIL-Eternity XT C18 10 µm, gradiente ACN/H2O/NH4OH 30/70/0,1 a 60/40/0,1). As frações mais puras foram evaporadas até a secura para dar (4R)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-4-(2,2,2-trifluoroetil)pirrolidin-2-ona 3A (69 mg, 0,19 mmol) como um óleo marrom.

[0141] Rendimento: 41%

[0142] LC/MS: [M+H]+ = 363,1

[0143] 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 4,78 (s, 2H), 4,61 (s, 2H), 3,41 (m, 4H), 3,03 (dd, J = 9,4, 7,6 Hz, 1H), 2,47 -2,36 (m, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,15 (dd, J = 16,3, 8,8 Hz, 1H).

[0144] (4S)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]-4- (2,2,2-trifluoroetil)pirrolidin-2-ona 3B é preparado de acordo com o mesmo procedimento a partir de (4S)-4-(2,2,2-trifluoroetil) pirrolidin-2-ona VII. Rendimento: 32% EXEMPLO 4. (4R)-4-(2-CLORO-2,2-DIFLUORO-ETIL)-1-[[2-(metoximetil)- 6(TRIDEUTERIOMETIL)IMIDAZO[2,1-B][1,3,4]tiadiazol-5-IL]METIL] PIRROLIDIN-2- ONA 4 SÍNTESE DE 1-BROMO-1,1,3,3,3-PENTADEUTERIO-PROPAN-2-ONA VIII

[0145] A uma mistura de 1,1,1,3,3,3-hexadeuteriopropan-2-ona (1,0 eq., 1,5 g, 23,0 mmol) em metanol (25 ml) a 0 °C foi adicionado gota a gota bromo (1,0 eq. 1,2 ml, 23,0 mmol) e a mistura foi agitada a 0 °C durante 3 h. Foi adicionada água (10 ml) e a mistura de reação foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A camada aquosa foi extraída com éter dietílico (3 vezes) e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e evaporadas até à secura (a 20 °C) para dar 1- bromo-1,1,3,3,3-pentadeuterio-propan-2-ona (2,16 g, 15,25 mmoles, 65% de rendimento) como um óleo amarelo pálido que foi utilizado como tal na próxima etapa sem análise e purificação adicionais.

[0146] 4.2 B. Síntese de 2-(metoximetil)-6-(trideuteriometil)imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol IX.

[0147] A uma solução de 5-(metoximetil)-1,3,4-tiadiazol-2-amina I (1,0 eq., 8,0 g, 55,1 mmoles) em DMF (100 ml), a 100 °C, foi adicionada gota a gota uma solução de 1-bromo-1,1,3,3,3-pentadeuterio-propan-2-ona VIII (1,05 eq., 8,22 g, 57,9 mmol) em

DMF (20 ml). A mistura de reação foi agitada a 110 °C durante 2 h 30. A mistura foi então arrefecida até à TA, uma solução saturada de NaHCO 3 foi adicionada e o solvente foi evaporado até à secura. O produto bruto obtido foi então diluído em EtOAc, filtrado e o filtrado foi evaporado até à secura para dar um óleo marrom (9,5 g). O produto bruto foi purificado por cromatografia flash Biotage Isolera Four (coluna de 100 g de sílica gel KP-SNAP em um gradiente de 0% a 10% de metanol em diclorometano acima de 14 CV) e as frações puras foram evaporadas até a secura para dar 2-(metoximetil)-6-(trideuteriometil) imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol IX (3,05 g, 15,6 mmoles) como um sólido amarelo.

[0148] Rendimento: 28%

[0149] LC/MS: [M+H]+ = 187,2

[0150] 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,45 (s, 1H), 4,70 (s, 2H), 3,48 (s, 3H)

[0151] 4.3 (4R)-4-(2-cloro-2,2-difluoro-etil)-1-[[2-(metoximetil)-6-(trideuteriometil) imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil] pirrolidin-2-ona 4

[0152] A uma mistura de (4R)-4-(2-cloro-2,2-difluoro-etil)-1-(hidroximetil)pirrolidin- 2-ona X (CAS: 1294000-97-7, WO2011/047860, 1,0 eq, 150 mg, 0,70 mmol) em diclorometano (3 ml) a 0 °C foi adicionado gota a gota cloreto de tionila (3 eq., 0,317 ml, 2,16 mmoles) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 2 h. A mistura foi então evaporada até à secura para dar um óleo laranja, principalmente (4R)-4-(2-cloro-2,2-difluoro-etil)-1-(clorometil)pirrolidin-2-ona XI (CAS: 1294001- 06-1, WO2011/047860, 160 mg, 0,69 mmol, 98,2% de rendimento), que foi usado diretamente na próxima etapa sem qualquer purificação.

[0153] A uma solução do composto obtido (4R)-4-(2-cloro-2,2-difluoro-etil)-1- (clorometil)pirrolidin-2-ona XI (1 eq., 160 mg, 0,69 mmol), em 1,4-dioxano (3 ml) à TA foi adicionado e 2-(metoximetil)-6-(trideuteriometil)imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol IX (1,0 eq., 130 mg 0,69 mmol) e cloreto de zinco (0,1 eq, 10 mg, 0,07 mmol). A mistura de reação foi agitada a 110 °C por 18 h, depois foi arrefecida, filtrada e evaporada até a secura para dar um óleo escuro que foi purificado por cromatografia flash Biotage Isolera Four (coluna de sílica gel KP-SNAP 10 g KP-SNAP em um gradiente de 0% até 10% de metanol em diclorometano acima de 12 CV). As frações mais puras foram evaporadas até à secura e purificadas por HPLC preparativa de fase inversa ((KROMASIL-Eternity XT C18 10 µm, gradiente ACN/H2O/NH4OH de 30/70/0,1 para 60/40/0,1) para se obter (4R)-4-(2-cloro-2,2-difluoro-etil)-1-[[2-(metoximetil)-6- (trideuteriometil)imidazo[2,1-b][1,3,4]tiadiazol-5-il]metil] pirrolidin-2-ona 4 (71 mg, 0,18 mmol) como um óleo amarelo.

[0154] Rendimento: 26%

[0155] LC/MS: [M+H]+ = 382,8

[0156] 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 4,77 (s, 2H), 4,60 (s, 2H), 3,44 (dd, J = 9,5, 7,6 Hz, 1H), 3,40 (s, 3H), 3,05 (dd, J = 9,5, 7,4 Hz, 1H), 2,72 - 2,53 (m, 3H), 2,42 (dd, J = 16,4, 8,1 Hz, 1H), 2,17 (dd, J = 16,4, 8,6 Hz, 1H). EXEMPLO 5. 4-(2,2-DIFLUOROPROPIL)-1-[[2-(metoximetil)-6-METIL-IMIDAZO[2,1- B] [1,3,4]-TIADIAZOL-5-IL]METIL ] PIRROLIDIN-2-ONA 5A E 5B

[0157] 5.1 Síntese de 4-(2,2-difluoropropil)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil- imidazo[2,1-b] [1,3,4] -tiadiazol-5-il]metil ] pirrolidin-2-ona 5A e 5B

[0158] A uma mistura de 4-(2,2-difluoropropil)-1-(hidroximetil)pirrolidin-2- ona XII (CAS: 1294000-92-2, WO2011/047860, 1,0 eq., 250 mg, 1,3 mmol) em diclorometano (5 ml) a 0 °C foi adicionado cloreto de tionila (3,0 eq., 260 µl, 3,6 mmoles) e a reação foi agitada à temperatura ambiente por 3 h. A mistura bruta foi concentrada até à secura. Ao óleo amarelo obtido foi adicionada uma solução de 2- (metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol II (0,9 eq, 210 mg, 1,1 mmol) em 1, 4-dioxano (7 ml) e cloreto de zinco (0,1 eq., 14 mg, 0,13 mmol). A mistura foi agitada a 100 °C por 22 h. Adicionou-se água à mistura e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (três vezes). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4, filtradas e evaporadas até à secura para dar um óleo amarelo.

[0159] O óleo amarelo foi purificado por LC/MS de fase reversa em modo básico para dar um óleo límpido que foi novamente purificado por SFC quiral (Phenomenex SiO2 Beta 10µm D=5 cm L=34 cm 300 g, cossolvente MeOH 10%) para dar 5 puro como uma mistura racêmica.

[0160] A mistura de enantiômeros foi separada por SFC quiral (Luxcell4 * MeOH 25%, 360 ml/min, 35 °C) para dar 4-(2,2-difluoropropil)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil- imidazo[2,1-b][1,3,4]-tiadiazol-5-il]metil] pirrolidin-2-ona 5A (primeiro eluído, 6,28 min, 7 mg, 0,02 mmol, 1,6% de rendimento) e 5B (segundo eluído, 8,63 min, 8 mg, 0,02 mmol, 1,8% de rendimento).

[0161] Rendimento: 3,3% (1,8% + 1,6%)

[0162] LC/MS: [M+H]+ = 359,1

[0163] 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 4,77 (s, 2H), 4,58 (d, J = 2,5 Hz, 2H), 3,39 (s, 3H), 2,96 (dd, J = 9,5, 7,7 Hz, 1H), 2,45 - 2,35 (m, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,54 (t, J = 19,1 Hz, 3H).

[0164] HPLC quiral (SFC, LuxCell4, 3 µm, 3 ml/min, 30 °C, 20% de MeOH): 5A: 2,24 min; 5B: 3,09 min.

[0165] A Tabela (I) indica o nome IUPAC (ou o nome gerado a partir Accelerys Draw 4.0) do composto, o pico do íon observado em espectroscopia de massa e a descrição de 1H RMN.

TABELA I: CARACTERIZAÇÃO FÍSICA DE EXEMPLOS DE COMPOSTOS.

n° NOME do Composto MH+ 1H RMN δ (DMSO- d6) 4,77 (s, 2H), 4,60 (s, 2H), (4R)-4-(2-cloro-2,2- 3,40 (s, 4H), 3,05 (dd, J = difluoro-etil)-1-[[2- 9,4, 7,5 Hz, 1H), 2,72-2,56 (metoximetil)-6-metil- 1A 379,0 (m, 3H), 2,42 (dd, J = 16,4, imidazo[2,1-b] 8,2 Hz, 1H), 2,26 (s, 3H), [1,3,4]tiadiazol -5- 2,17 (dd, J = 16,4, 8,6 Hz, il]metil]pirrolidin-2-ona 1H) 4,77 (s, 2H), 4,60 (s, 2H), (4S)-4-(2-cloro-2,2- 3,44 (dd, J = 9,5, 7,7 Hz, 1H), difluoro-etil)-1-[[2- 3,40 (s, 3H), 3,05 (dd, J = (metoximetil)-6-metil- 9,4, 7,5 Hz, 1H), 2,63 (ttd, J = 1B 379,0 imidazo[2,1-b] 13,7, 8,2, 4,4 Hz, 3H), 2,42 [1,3,4]tiadiazol -5- (dd, J = 16,4, 8,2 Hz, 1H), il]metil]pirrolidin-2-ona 2,26 (s, 3H), 2,17 (dd, J = 16,4, 8,7 Hz, 1H).

4,78 (s, 2H), 4,58 (s, 2H), 3,45-3,32 (m, 4H), 2,85 (dd, J (4S)-1-[[2-(metoximetil)- = 9,3, 6,9 Hz, 1H), 2,37 (dd, J 6-metil-imidazo[2,1-b] 2A 323,1 = 16,4, 8,7 Hz, 1H) , 2,25 (s, [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]- 3H), 1,92 (dd, J = 16,3, 7,5 4-propil-pirrolidin-2-ona Hz, 1H), 1,35-1,11 (m, 5H), 0,82 (t, J = 7,1 Hz, 3H) (4R)-1-[[2-(metoximetil)- 4,78 (s, 2H), 4,58 (s, 2H), 6-metil-imidazo[2,1-b] 3,45-3,32 (m, 4H), 2,85 (dd, J 2B 323,1 [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]- = 9,3, 6,9 Hz, 1H), 2,37 (dd, J 4-propil-pirrolidin-2-ona = 16,4, 8,7 Hz, 1H) , 2,25 (s,

3H), 1,92 (dd, J = 16,3, 7,5 Hz, 1H), 1,35-1,11 (m, 5H), 0,82 (t, J = 7,1 Hz, 3H) (4R)-1-[[2-(metoximetil)- 4,78 (s, 2H), 4,61 (s, 2H), 6-metil-imidazo[2,1-b] 3,41 (m, 4H), 3,03 (dd, J = [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]- 3A 363,1 9,4, 7,6 Hz, 1H), 2,47-2,36 4-(2,2,2 - (m, 3H), 2,27 (s, 3H) , 2,15 trifluoroetil)pirrolidin-2- (dd, J = 16,3, 8,8 Hz, 1H) ona (4S)-1-[[2-(metoximetil)- 4,78 (s, 2H), 4,61 (s, 2H), 6-metil-imidazo[2,1-b] 3,41 (m, 4H), 3,03 (dd, J = [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]- 3B 363,1 9,4, 7,6 Hz, 1H), 2,47-2,36 4- (2,2,2 - (m, 3H), 2,27 (s, 3H) , 2,15 trifluoroetil)pirrolidin-2- (dd, J = 16,3, 8,8 Hz, 1H) ona (4R)-4-(2-cloro-2,2- 4,77 (s, 2H), 4,60 (s, 2H), difluoro-etil)-1-[[2- 3,44 (dd, J = 9,5, 7,6 Hz, 1H), (metoximetil)-6- 3,40 (s, 3H), 3,05 (dd, J = 4 (trideuteriometil) 382,8 9,5, 7,4 Hz, 1H), 2,72 - 2,53 imidazo[2,1-b] (m, 3H), 2,42 (dd, J = 16,4, [1,3,4]tiadiazol-5- 8,1 Hz, 1H), 2,17 (dd, J = il]metil]pirrolidin-2-ona 16,4, 8,6 Hz, 1H).

4- (2,2-difluoropropil)-1- 4,77 (s, 2H), 4,58 (d, J = 2,5 [[2-(metoximetil)-6-metil- Hz, 2H), 3,39 (s, 3H), 2,96 imidazo[2,1-b] [1,3,4]- 5A 359,1 (dd, J = 9,5, 7,7 Hz, 1H), 2,45 tiadiazol-5- - 2,35 (m, 3H), 2,25 (s, 3H), il]metil]pirrolidin-2-ona 1,54 (t, J = 19,1 Hz, 3H) (enantiômero A)

4- (2,2-difluoropropil)-1- 4,77 (s, 2H), 4,58 (d, J = 2,5 [[2-(metoximetil)-6-metil- Hz, 2H), 3,39 (s, 3H), 2,96 imidazo[2,1-b] [1,3,4]- 5B 359,1 (dd, J = 9,5, 7,7 Hz, 1H), 2,45 tiadiazol-5- - 2,35 (m, 3H), 2,25 (s, 3H), il]metil]pirrolidin- 2-ona 1,54 (t, J = 19,1 Hz, 3H) (enantiômero B) EXEMPLO 5. ENSAIOS DE LIGAÇÃO A SV2A E SV2C.

[0166] As proteínas SV2A e SV2C humanas foram expressas em células de rim embrionário humano (HEK). As preparações de membrana HEK SV2A e HEK SV2C foram preparadas como descrito em Gillard et al. (Eur. J. Pharmacol. 2006, 536, 102 a 108). Para medir a afinidade de compostos não marcados, as experiências de competição foram realizadas da seguinte forma: Membranas que expressam proteínas SV2 (5 a 15 µg de proteínas por ensaio) foram incubadas por 60 minutos a 37 °C com [³H]-2-[4-(3-azidofenil)-2-oxo-1-pirrolidinil]butanamida (5 nM) e/ou [³H]-4R- (2-cloro-2,2-difluoroetil)-1-{[2-(metoximetil)-6-(trifluorometil)imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil} pirrolidin-2-ona (25 nM) em 0,2 ml de um tampão Tris-HCl 50 mM (pH 7,4) contendo 2 mM de MgCl2, 0,1% de dimetilsulfóxido e dez concentrações crescentes de composto de teste não marcado (0,1 nM a 10 µM). No final do período de incubação, o radioligante ligado à membrana foi recuperado por filtração rápida através de filtros de fibra de vidro GF/C pré-embebidos em polietilenoimina a 0,1%. As membranas foram lavadas com pelo menos 4 vezes o volume de ensaio de tampão Tris HCl 50 mM gelado (pH 7,4). Os filtros foram secos e a radioatividade determinada por cintilação líquida. Toda a etapa de filtração não excedeu 10 segundos. Os valores pIC50 de afinidade medidos foram corrigidos para o pKi de acordo com Cheng e Prusoff (Biochem. Pharmacol. 1973, 22 (23), 3.099 a 3.108).

[0167] Os compostos de fórmula (I) de acordo com a invenção mostram tipicamente valores de pKi SV2A de pelo menos 6,5 e valores de pKi SV2C de pelo menos 6,0. EXEMPLO 6. MODELOS DE CRISES CONVULSIVAS.

[0168] Os camundongos NMRI machos (Charles River, Alemanha) pesando 22 a 32 g são usados em todas as experiências. Os animais são mantidos em um ciclo de 12/12 h claro/escuro com luzes acesas às 6:00 da manhã e são alojados a uma temperatura mantida a 20 a 21 °C e a uma umidade de cerca de 40%. Os camundongos são alojados em grupos de 10 por gaiola (Tipo III). Todos os animais têm acesso livre à comida em esfera padrão e água antes da atribuição aleatória a grupos experimentais constituídos por 10 camundongos cada. Todas as experiências com animais são realizadas de acordo com as Regras Nacionais sobre Experiências com Animais e conduzidas de acordo com as diretrizes da diretiva do Conselho da Comunidade Europeia 2010/63/UE. Um comitê de ética local aprovou os protocolos experimentais.

6.1 MODELO DE crise convulsiva de 6 HZ

[0169] O modelo de 6 Hz é realizado de acordo com um protocolo previamente descrito (Kaminski et al., Epilepsia (2004), 45, 864 a 867). Resumidamente, a estimulação da córnea (pulsos retangulares monopolares de 44 mA, 0,2 ms de duração a 6 Hz por 3 s) é fornecida por um dispositivo de corrente constante (ECT Unit 57800; Ugo Basile, Comerio, Itália). Uma gota de cloridrato de oxibuprocaína a 0,4% (Unicaine, Thea, França) é colocada nos olhos antes da estimulação elétrica. Durante a estimulação, os camundongos são contidos manualmente e liberados na gaiola de observação (38 x 26 x 14 cm) imediatamente após a aplicação atual. As crises convulsivas são geralmente precedidas por um breve período (~ 2 a 3 s) de intensa agitação locomotora (corrida e salto selvagens). Os animais então exibem uma postura “atordoada” associada a movimentos automáticos da parte traseira e do membro anterior e clônus, tremor das vibrissas e cauda de Strub. No final da convulsão, os animais retomam seu comportamento exploratório normal. O ponto final experimental é a proteção contra as convulsões. O animal é considerado protegido se retomar seu comportamento exploratório normal dentro de 7 s após a estimulação.

[0170] As atividades in vivo determinadas para os compostos de teste são tipicamente compreendidas entre 0,05 mg/kg e 10 mg/kg após dosagem única de IP.

[0171] 6.2 MODELO DE CRISE CONVULSIVA DE PENTILENOTETRAZOL (PTZ)

[0172] O pentilenotetrazol é utilizado na dose de CD97 previamente estabelecida de 89 mg/kg; uma dose convulsiva induzindo convulsões clônicas de todas as quatro extremidades em 97% dos camundongos (Klitgaard et al., Eur. J. Pharmacol. (1998), 353, 191 a 206). Imediatamente após a injeção de pentilenotetrazol, os camundongos são colocados individualmente em gaiolas de Perspex e observados quanto à presença de convulsões clônicas nas quatro extremidades e extensão do membro posterior tônico durante um período de 60 min.

[0173] As atividades in vivo determinadas para os compostos de teste são tipicamente compreendidas entre 0,5 mg/kg e 30 mg/kg após dosagem única de IP. EXEMPLO 7. ENSAIO DE AZAMULINA

[0174] Os hepatócitos humanos criopreservados (conjunto de 20 doadores, lote BSU da Celsis/IVT/Bioreclamation) foram descongelados de acordo com as informações do fornecedor. A viabilidade (exclusão do azul de tripano) foi superior a 75%. Pré-incubações (250 µl de suspensão de hepatócitos a 2x106 hepatócitos/ml) foram realizadas com meio de William, contendo 2 mM de glutamina e 15 mM de Hepes, em placas de 48 poços a +37 °C, em uma incubadora (5% de CO2), sob agitação suave (agitador vibratório, Titramax 100, aproximadamente 300 rpm) durante 30 min. Após a pré-incubação, a incubação foi iniciada adicionando aos hepatócitos 250 µl de meio de cultura (ver composição acima) contendo composto UCB (1 µM) ou midazolam (controle positivo) com ou sem azamulina (6 µM - inibidor específico do CYP3A4/5). As concentrações finais de composto UCB e azamulina nas incubações são de 0,5 µM e 3 µM, respectivamente. As suspensões celulares foram rapidamente re-homogeneizadas por 2 pipetas de entrada e saída. Após 0, 30, 60, 120, 180 e 240 minutos de incubação, as reações foram interrompidas pela transferência de 50 µl de incubações para o poço apropriado da placa de 96 poços contendo 50 µl de acetonitrila gelada com cetoconazol 1 µM como padrão interno. Antes de cada amostragem, as incubações celulares são re-homogeneizadas por 2 pipetas de entrada e saída.

[0175] Uma vez terminada a incubação, as placas de 96 poços são centrifugadas a cerca de 3.700 rpm, +4 °C, por 15 minutos. 50 µl dos sobrenadantes são transferidos para poços de outras placas de poços profundos nas quais 150 µl de H2O Millipore foram adicionados. Essas amostras foram analisadas por micro UPLC/HR-MS para o desaparecimento parental e monitoramento da formação de metabólitos.

[0176] A contribuição do CYP3A4/5, conhecida como fração metabolizada pelo CYP3A4/5 (fm,CYP3A4/5) foi calculada para cada composto a partir da razão entre CLint (com base no desaparecimento dos fármacos parentais) na ausência e na presença de azamulina, usando a seguinte equação:

[0177] A fração metabolizada pelo CYP3A4/5 (fm,CYP3A4/5) dos compostos de teste está tipicamente compreendida entre 0 e 40%.

Claims (11)

REIVINDICAÇÕES

1. Derivados de 2-oxo-1-pirrolidinila imidazotiadiazol de acordo com a fórmula (I), seus isômeros geométricos, enantiômeros, diastereômeros, isótopos e misturas ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, (I) caracterizado pelo fato de que R1 é um C1-4 alquila opcionalmente substituído por um ou mais substituintes halogênio; R2 é um C1-4 alquila contendo pelo menos um substituinte hidróxi ou alcóxi; e R3 é uma metila (incluindo -CD3).

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 é i-butila, uma n-propila, 2,2-difluoropropila, 2-cloro-2,2-difluoroetila, 2,2- difluoroetila, 2,2,2-trifluoroetila ou 2-fluoroetila.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 é n-propila, 2-cloro-2,2-difluoroetila, 2,2-difluoropropila ou 2,2,2-trifluoroetila.

4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que R2 é hidroximetila, metoximetila, CD3O-CH2-, CH3O- CD2- ou CD3O-CD2-.

5. Composto, de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que R2 é metoximetila, CD3O-CH2-, CH3O-CD2- ou CD3O- CD2.

6. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que

R1 é uma porção química de n-propila, 2-cloro-2,2-difluoroetila, uma 2,2- difluoropropil ou uma 2,2,2-trifluoroetila; R2 é uma hidroximetila, metoximetila, CD3O-CH2-, CH3O-CD2- ou CD3O- CD2-; e R3 é –CH3 ou –CD3.

7. Composto, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que R1 é n-propila, 2-cloro-2,2-difluoroetila, 2,2-difluoropropila ou 2,2,2- trifluoroetila; R2 é metoximetila, CD3O-CH2-, CH3O-CD2- ou CD3O-CD2-; e R3 é CH3 ou CD3.

8. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que compreende: • (4R)-4-(2-cloro-2,2-difluoro-etil)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil] pirrolidin-2-ona; • (4S)-4-(2-cloro-2,2-difluoro-etil)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil] pirrolidin-2-ona; • (4S)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]- 4-propil-pirrolidin-2-1; • (4R)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]- 4-propil-pirrolidin-2-1; • (4R)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]- 4- (2,2, 2-trifluoroetil)pirrolidin-2-ona; • (4S)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil]- 4- (2,2, 2-trifluoroetil)pirrolidin-2-ona; • (4R)-4-(2-cloro-2,2-difluoro-etil)-1-[[2-(metoximetil)-6-(trideuteriometil) imidazo[2,1-b] [1,3,4]tiadiazol-5-il]metil] pirrolidin-2-ona; • (4R)-(2,2-difluoropropil)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]- tiadiazol-5-il]metil]pirrolidin-2-ona; e • (4S)-(2,2-difluoropropil)-1-[[2-(metoximetil)-6-metil-imidazo[2,1-b] [1,3,4]-

tiadiazol-5-il]metil ] pirrolidin-2-ona.

9. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que seu uso é como um medicamento.

10. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade eficaz de um composto, de acordo com as reivindicações 1 a 8, em combinação com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.

11. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que seu uso é no tratamento de epilepsia, epileptogênese, distúrbios de crises convulsivas, convulsões, em particular convulsões refratárias.