BR112020009136A2 - polipeptídeos que contêm domínio d e usos dos mesmos - Google Patents

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BR112020009136A2
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amino acid
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David M. Hilbert
Jeffrey S. Swers
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Arcellx, Inc.
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    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
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Abstract

Trata-se de polipeptídeos que contêm (DDpp) domínio D (DD) que se ligam especificamente a alvos de interesse (por exemplo, BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP, e AFP p26), assim como ácidos nucleicos que codificam o DDpp, vetores que contêm os ácidos nucleicos e células hospedeiras que contêm os ácidos nucleicos e vetores. DDpp, como proteínas de fusão de DDpp, também são fornecidos, assim como métodos para produzir e usar o DDpp. Tais usos incluem, mas sem limitação, aplicações diagnósticas e terapêuticas.

Description

“POLIPEPTÍDEOS QUE CONTÊM DOMÍNIO D E USOS DOS MESMOS” FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
[001] Os reagentes à base de anticorpo aceleraram o passo da pesquisa biológica e desenvolvimento. As composições de anticorpo representam uma das classes mais importantes em bem-sucedidas de agentes terapêuticos e de diagnóstico utilizados na indústria farmacêutica. Entretanto, o custo, tempo e eficácia motivaram o desenvolvimento de reagentes de afinidade alternativos.
[002] Uma variedade de formatos de ligação não anticorpo surgiram para aplicações historicamente servidas por anticorpos. Embora muitos êxitos tenham sido relatados para peptídeos lineares não estruturados, resultados mais robustos foram alcançados impondo-se uma restrição estrutural na sequência de peptídeos – tipicamente através da introdução de uma ligação de dissulfeto. Essa restrição proporciona uma afinidade superior e maior especificidade através da termodinâmica mais favorável de complementaridade de formato fixo e apresentações de superfície de resíduos (por exemplo, aminoácidos hidrofóbicos) que podem, de outro modo, ser encobertos e, portanto, não voltados para o alvo (Ladner, Trends in Biotech. 13(10): 426-430 (1995)). Em contrapartida, formatos que contêm ligações de dissulfeto são tipicamente propensos ao pareamento impróprio de cisteínas, intradomínio ou interdomínio, que pode levar à expressão, rendimento de produto e qualidade de produto inferiores.
[003] A estrutura encontrada nos subdomínios de proteína forneceu outra fonte de restrição estrutural. As estruturas como repetições de tipo III de fibronectina (adnectinas), z-proteínas (aficorpos), knotinas, lipocalinas (anticalinas) e repetições de anquirina (DARPins) foram desenvolvidas com afinidades tipo anticorpo contra uma variedade de diferentes alvos (Hey et al., Trends in Biotech. 23(10): 514-422 (2005)). Estes domínios tipicamente contêm dois recursos que são análogos aos frameworks e regiões determinantes de complementaridade (CDRs) encontrados em domínios variáveis de anticorpo:
um arcabouço estrutural que confere alta estabilidade termodinâmica e resíduos ou laços que formam a base da variabilidade da biblioteca de exibição.
SUMÁRIO
[004] Permanece uma necessidade substancial não atendida de novas composições de ligação de alvo, e particularmente de tais agentes contendo arcabouços de ligação alternativos (por exemplo, arcabouços não anticorpo). Os agentes de interesse particular podem ser caracterizados por, por exemplo, custos de produção substancialmente reduzidos e/ou propriedades de reagente de diagnóstico e/ou terapêutico comparáveis ou superiores em comparação com anticorpos. A presente divulgação fornece polipeptídeos de domínio D (DD) de ligação de alvo inovadores que são baseados num arcabouço estrutural não anticorpo. Em algumas modalidades, os polipeptídeos de domínio D (DDpps) são caracterizados por alta afinidade de ligação de alvo e por um arcabouço estrutural não anticorpo. Em algumas modalidades, os DDpps são polipeptídeos de ligação específicos de alvo que podem ser vantajosamente usados para alvejar agentes terapêuticos (por exemplo, células imunes) para células particulares (por exemplo, células doentes), reduzindo ou eliminando, assim, efeitos fora do alvo. Em algumas modalidades, os DDpps fornecidos são usados como agentes terapêuticos para ligar células ou fatores solúveis envolvidos na doença.
[005] Em algumas modalidades, a divulgação fornece uma proteína que compreende um domínio de ligação de alvo de Domínio D (DD) (DDpp) em que o DD liga especificamente um alvo de interesse selecionado a partir do grupo que consiste em BCMA (SEQ ID NO: 7), CD123 (SEQ ID NO: 8), CS1 (SEQ ID NO: 925), HER2 (SEQ ID NO: 927), AFP (SEQ ID NO: 9), AFP p26 (SEQ ID NO: 10) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, os DDpp são monovalentes ou multivalentes. Em algumas modalidades, os DDpp são monoespecíficos ou multiespecífico. Em modalidades adicionais, os monoespecíficos e multivalentes. Em outras modalidades, os DDpp são multiespecíficos e multivalentes. As proteínas de fusão que compreendem um ou mais DD também são fornecidos, assim como métodos para produzir e usar as proteínas de fusão. Os ácidos nucleicos que codificam os DDpps e vetores e células hospedeiras contendo os ácidos nucleicos também são fornecidos. Os exemplos não limitantes de tais usos incluem, porém, sem limitações análise de alvo e aplicações de diagnóstico e terapêuticas.
[006] Em modalidades adicionais, a divulgação fornece uma proteína que compreende um domínio de ligação de alvo de Domínio D (DD) (DDpp) em que o DD é um membro selecionado a partir do grupo que consiste em: (a) um DD que liga especificamente BCMA (SEQ ID NO: 7) e compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11 a 305, ou 306; (b) um DD que liga especificamente CD123 (SEQ ID NO: 8) e compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 307 a 739, ou 740; (c) um DD que liga especificamente AFP (SEQ ID NO: 9) ou um fragmento do mesmo, e compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 741 a 874 ou 886 a 895; (d) um DD que liga especificamente AFP p26 (SEQ ID NO: 10) e compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 741 a 874 ou 886 a 895, (e) um DD que liga especificamente CS1 (SEQ ID NO: 925) ou um fragmento do mesmo, e compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 896 a 909 ou 910, e (f) um DD que liga especificamente HER2 ou um fragmento do mesmo, e compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 911 a 949 ou 950. As proteínas que compreendem variantes de (a) a (f) que retêm a capacidade de ligar especificamente seus respectivos alvos também são fornecidas. Em algumas modalidades, o DDpp é fundido a um polipeptídeo heterólogo. Em algumas modalidades, o polipeptídeo heterólogo compreende um anticorpo de comprimento total ou um fragmento de anticorpo. Em algumas modalidades, o DD é fundido: ao terminal amino de uma cadeia pesada de anticorpo de comprimento completo; ao terminal amino de uma cadeia leve de anticorpo de comprimento completo; ao terminal carboxila de uma cadeia pesada de anticorpo de comprimento completo; ou ao terminal carboxila de uma cadeia leve de anticorpo de comprimento completo.
Em outras modalidades, o DD é fundido a um fragmento de anticorpo que é um Fc.
Em modalidades adicionais, o polipeptídeo heterólogo compreende um membro selecionado a partir do grupo que consiste em: (i) um domínio transmembranar; (ii) um domínio que se associa à membrana; (iii) albumina do soro humano ou um fragmento da mesma; (iv) AFP ou um fragmento do mesmo; (v) AFP p26 ou um fragmento do mesmo; (vi) o domínio extracelular de um receptor ou um fragmento do mesmo; e (vii) o domínio extracelular de um receptor intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear) ou um fragmento do mesmo.
Em algumas modalidades, a proteína contém um polipeptídeo heterólogo que compreende o domínio extracelular, ou um fragmento de um domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7) ou CD123 (SEQ ID NO: 8) ou CD19 (SEQ ID NO: 3) ou CS1 (SEQ ID NO: 925). Em algumas modalidades, a proteína contém um polipeptídeo heterólogo que compreende o domínio extracelular, ou um fragmento de um domínio extracelular, de um receptor selecionado a partir do grupo que consiste em: CD19, CD20, CD22, HVEM, BTLA, DR3, CD37; TSLPR, IL7R e gp96. Em algumas modalidades, a proteína contém um polipeptídeo heterólogo que compreende uma porção antigênica de uma proteína de soro (por exemplo, AFP e AFP p26). Em algumas modalidades, a proteína contém um polipeptídeo heterólogo que compreende uma porção antigênica de uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear). Em algumas modalidades, a proteína é identificada.
Em modalidades adicionais, a identificação é selecionada a partir do grupo que consiste numa identificação enzimática, uma identificação fluorescente, uma identificação luminescente, uma identificação bioluminescente e uma porção química de biotina.
Em modalidades adicionais, a proteína é conjugada a um agente terapêutico ou citotóxico.
Em algumas modalidades, a proteína contém um polipeptídeo heterólogo que se liga a um ou mais, com complexo de histocompatibilidade principal (MHC), complexos de classe I ou classe II.
[007] Em algumas modalidades, um DD do DDpp liga especificamente BCMA.
Em algumas modalidades, o DD liga especificamente uma proteína de BCMA que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 7. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em outras modalidades, o DDpp de ligação de BCMA compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em algumas modalidades, o DDpp compreende múltiplos domínios de ligação de alvo (por exemplo, dímeros, trímeros, etc.). Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que ligam BCMA.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que têm a mesma sequência.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que ligam a diferentes epítopos de BCMA.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente BCMA e compreende adicionalmente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DDs ou domínios de ligação de alvo adicionais diferentes (por exemplo, scFvs) que se ligam a BCMA ou um antígeno-alvo diferente.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente BCMA e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos expressos na superfície de uma célula B.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente BCMA e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos de câncer.
Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 alvos diferentes.
Em modalidades adicionais, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes.
Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes expressos na superfície de uma célula de câncer.
Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer expressos na superfície de diferentes células de câncer.
[008] Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão que compreende um DD que liga especificamente BCMA. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD que liga especificamente uma proteína de BCMA que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 7. Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão que compreende um DD que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de BCMA compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de comprimento total ou uma porção (fragmento) de um anticorpo. Em alguma modalidade, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de IgG de comprimento total (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG2 ou IgG4). Em modalidades adicionais, o DDpp compreende um anticorpo terapêutico comercialmente aprovado (por exemplo, rituximab, ofatumumab, ocrelizumab, veltuzumab, MEDI-551, epratuzumab, belimumab, tabalumab, AMG-557, MEDI-570 e NN882). Em outras modalidades, o DDpp de ligação de BCMA é uma proteína de fusão de Fc.
[009] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD de ligação de BCMA operacionalmente ligado a uma proteína de soro. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11-305 e 306. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de BCMA compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp compreende albumina do soro humano ou um fragmento da mesma. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende AFP ou AFP p26, ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende AFP (por exemplo, SEQ ID NO: 9) ou um fragmento do mesmo. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende AFP p26 (SEQ ID NO: 10) ou um fragmento do mesmo.
[010] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp é uma proteína solúvel que compreende um ou mais DDpp de ligação de alvo e uma proteína de p29 (por exemplo, que tem a sequência de SEQ ID NO: 10, 928, 929, 930, 931, 932, 933 ou 934). Constatou-se, no presente documento, que as proteínas de fusão contendo sequências de p29 têm uma meia-vida em soro surpreendentemente longa. Em algumas modalidades, a proteína de fusão solúvel de DDpp tem uma meia-vida em plasma in vivo de pelo menos 1 hora, pelo menos 2 horas, pelo menos 4 horas, pelo menos 8 horas, pelo menos 16 horas, pelo menos 32 horas, pelo menos 64 horas ou mais. Em algumas modalidades, a proteína de fusão solúvel tem uma meia-vida em plasma in vivo de pelo menos 1 hora, pelo menos 2 horas, pelo menos 4 horas, pelo menos 8 horas, pelo menos 16 horas, pelo menos 32 horas, pelo menos 64 horas, ou mais horas, 65 horas, ou 1 a 10 horas, 2 a 10 horas, 4 a 10 horas, 6 a 10 horas, ou 6 a 9 horas num camundongo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão solúvel de DDpp tem uma meia-vida em plasma in vivo de pelo menos 1 hora, pelo menos 2 horas, pelo menos 4 horas, pelo menos 8 horas, pelo menos 16 horas, pelo menos 32 horas, pelo menos 64 horas, ou mais horas, 65 horas, ou 1 a 10 horas, 2 a 10 horas, 4 a 10 horas, 6 a 10 horas ou 6 a 9 horas num ser humano.
[011] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de BCMA compreende o domínio extracelular de um receptor ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de BCMA compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende o domínio extracelular de CD123 (SEQ ID NO: 8) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de BCMA- compreende o domínio extracelular de um receptor selecionado a partir do grupo que consiste em: CD19, CD20, CD22, HVEM, BTLA, DR3, CD37, CS1, TSLPR, IL7R e gp96 ou um fragmento dos mesmos.
[012] Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de BCMA compreende uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear) ou um fragmento da mesma. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de BCMA compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de BCMA compreende um fragmento de uma proteína de soro (por exemplo, HSA, AFP e AFP p26), um domínio extracelular de um receptor (por exemplo, BCMA, CD123, CS1 e CD19) ou uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear), que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 resíduos de aminoácido.
[013] Em algumas modalidades, um DD do DDpp liga especificamente CD123. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente uma proteína de CD123 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 8. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em outras modalidades, o DDpp de ligação de CD123 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em algumas modalidades, o DDpp compreende múltiplos domínios de ligação de alvo (por exemplo, dímeros, trímeros, etc.). Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que ligam CD123. Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que têm a mesma sequência. Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que ligam a diferentes epítopos de CD123. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente CD123 e compreende adicionalmente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DDs ou domínios de ligação de alvo adicionais diferentes (por exemplo, scFvs) que se ligam a BCMA ou um antígeno-alvo diferente. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente CD123 e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos expressos na superfície de uma célula B. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente CD123 e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos de câncer. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 alvos diferentes. Em modalidades adicionais, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes expressos na superfície de uma célula de câncer. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer expressos na superfície de diferentes células de câncer.
[014] Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão que compreende um DD que liga especificamente CD123. Em algumas modalidades, o DD liga especificamente uma proteína de CD123 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307-739 e 740. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de comprimento- total ou uma porção (fragmento) de um anticorpo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de IgG de comprimento total (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG2 ou IgG4). Em modalidades adicionais, o DDpp compreende um anticorpo terapêutico comercialmente aprovado (por exemplo, rituximab, ofatumumab, ocrelizumab, veltuzumab, MEDI-551, epratuzumab, belimumab, tabalumab, AMG-557, MEDI-570 e NN8828). Em outras modalidades, o DDpp de ligação de CD123 é uma proteína de fusão de Fc.
[015] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD de ligação de CD123 operacionalmente ligado a uma proteína de soro. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307-739 e 740. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp compreende albumina do soro humano ou um fragmento da mesma. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende AFP ou AFP p26, ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende AFP (por exemplo, SEQ ID NO: 9) ou um fragmento do mesmo. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende AFP p26 (SEQ ID NO: 10) ou um fragmento do mesmo.
[016] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende o domínio extracelular de um receptor ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307-739 e 740. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende o domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7) ou CD123 (SEQ ID NO: 8) ou um fragmento do mesmo. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende o domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7) ou CD123 (SEQ ID NO: 8) ou CS1 (SEQ ID NO: 925) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123- compreende o domínio extracelular de um receptor selecionado a partir do grupo que consiste em: CD19, CD20, CD22, HVEM, BTLA, DR3, CD37, CS1, TSLPR, IL7R e gp96 ou um fragmento dos mesmos.
[017] Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear) ou um fragmento da mesma. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307-739 e 740. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740.
[018] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende um fragmento de uma proteína de soro (por exemplo, HSA, AFP e AFP 26), um domínio extracelular de um receptor (por exemplo, BCMA, CS1, CD123 e CD19) ou uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear), que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 resíduos de aminoácido.
[019] Em algumas modalidades, um DD do DDpp liga especificamente CS1. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente uma proteína de CS1 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 925. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em outras modalidades, o DDpp de ligação de CS1 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em algumas modalidades, o DDpp compreende múltiplos domínios de ligação de alvo (por exemplo, dímeros, trímeros, etc.). Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que ligam CS1. Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que têm a mesma sequência.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que ligam a diferentes epítopos de CS1. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente CS1 e compreende adicionalmente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DDs ou domínios de ligação de alvo adicionais diferentes (por exemplo, scFvs) que se ligam a BCMA ou um antígeno-alvo diferente.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente CS1 e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos expressos na superfície de uma célula B.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente CS1 e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos de câncer.
Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 alvos diferentes.
Em modalidades adicionais, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes.
Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes expressos na superfície de uma célula de câncer.
Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer expressos na superfície de diferentes células de câncer.
[020] Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão que compreende um DD que liga especificamente CS1. Em algumas modalidades, o DD liga especificamente uma proteína de CS1 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 925. Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de comprimento- total ou uma porção (fragmento) de um anticorpo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de IgG de comprimento total (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG2 ou IgG4). Em modalidades adicionais, o DDpp compreende um anticorpo terapêutico comercialmente aprovado (por exemplo, rituximab, ofatumumab, ocrelizumab, veltuzumab, MEDI-551, epratuzumab, belimumab, tabalumab, AMG-557, MEDI-570 e NN8828). Em outras modalidades, o DDpp de ligação de CS1 é uma proteína de fusão de Fc.
[021] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD de ligação de CS1 operacionalmente ligado a uma proteína de soro. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp compreende albumina do soro humano ou um fragmento da mesma. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende AFP ou AFP p26, ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende AFP (por exemplo, SEQ ID NO: 9) ou um fragmento do mesmo. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende AFP p26 (SEQ ID NO: 10) ou um fragmento do mesmo.
[022] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 compreende o domínio extracelular de um receptor ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 compreende o domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7), CD123 (SEQ ID NO: 8) ou CS1 (SEQ ID NO: 925) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1- compreende o domínio extracelular de um receptor selecionado a partir do grupo que consiste em: CD19, CD20, CD22, HVEM, BTLA, DR3, CD37, CS-1, TSLPR, IL7R e gp96 ou um fragmento dos mesmos.
[023] Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 compreende uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear) ou um fragmento da mesma. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910.
[024] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 compreende um fragmento de uma proteína de soro (por exemplo, HSA, AFP e AFP 26), um domínio extracelular de um receptor (por exemplo, BCMA, CS1, CD123 e CD19) ou uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear), que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a
200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 resíduos de aminoácido.
[025] Em algumas modalidades, um DD do DDpp liga especificamente AFP ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente uma proteína de AFP que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 9 ou um fragmento da mesma. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a
895. Em outras modalidades, o DDpp compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, o DDpp compreende múltiplos domínios de ligação de alvo (por exemplo, dímeros, trímeros, etc.). Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD, que liga AFP ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que têm a mesma sequência. Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que ligam a diferentes epítopos de AFP ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP ou um fragmento do mesmo e compreende adicionalmente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DDs ou domínios de ligação de alvo diferentes adicionais (por exemplo, scFvs) que se ligam a AFP, um fragmento de AFP ou um antígeno-alvo diferente. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP ou um fragmento do mesmo e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos expressos na superfície de uma célula B. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos de câncer. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 alvos diferentes. Em modalidades adicionais, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes expressos na superfície de uma célula de câncer. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer expressos na superfície de diferentes células de câncer.
[026] Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão que compreende um DD que liga especificamente AFP ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, o DD liga especificamente uma proteína de AFP que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 9 ou um fragmento do mesmo. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em outras modalidades, o DDpp de ligação de AFP compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a
895. Em algumas modalidades, a proteína de fusão compreende um DD de ligação de AFP operacionalmente ligado a um anticorpo de comprimento total ou uma porção (fragmento) de um anticorpo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de IgG de comprimento total (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG2 ou IgG4). Em modalidades adicionais, o DDpp compreende um anticorpo terapêutico comercialmente aprovado (por exemplo, rituximab, ofatumumab, ocrelizumab, veltuzumab, MEDI-551, epratuzumab, belimumab, tabalumab, AMG-557, MEDI-570 e NN882). Em algumas modalidades, o DDpp de ligação de AFP é uma proteína de fusão de Fc.
[027] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP ou um fragmento de AFP, operacionalmente ligado a uma proteína de soro. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a
895. Em outras modalidades, o DDpp de ligação de AFP compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp compreende albumina do soro humano ou um fragmento da mesma.
[028] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP ou um fragmento de AFP e compreende adicionalmente o domínio extracelular de um receptor ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em outras modalidades, o DDpp de ligação de AFP compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende o domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7) ou CD123 (SEQ ID NO: 8) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende o domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7) ou CD123 (SEQ ID NO: 8) ou CS1 (SEQ ID NO: 925) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende o domínio extracelular de um receptor selecionado a partir do grupo que consiste em: CD19, CD20, CD22, HVEM, BTLA, DR3, CD37; TSLPR, IL7R e gp96 ou um fragmento dos mesmos.
[029] Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP ou um fragmento de AFP e compreende adicionalmente uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear) ou um fragmento da mesma. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a
895. Em outras modalidades, o DDpp de ligação de AFP compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895.
[030] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP compreende um fragmento de uma proteína de soro (por exemplo, HSA), um domínio extracelular de um receptor (por exemplo, BCMA, CS1, CD123 e CD19) ou uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear), que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 resíduos de aminoácido.
[031] Em algumas modalidades, um DD do DDpp liga especificamente AFP p26. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente um AFP p26 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 10 ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em modalidades adicionais, o DD liga especificamente AFP p26 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 10, porém, não liga especificamente AFP que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 9. Em algumas modalidades, o DDpp compreende múltiplos domínios de ligação de alvo (por exemplo, dímeros, trímeros, etc.). Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que ligam AFP p26. Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que têm a mesma sequência. Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que ligam a diferentes epítopos de AFP p26. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP p26 e compreende adicionalmente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DDs ou domínios de ligação de alvo adicionais diferentes (por exemplo, scFvs) que se ligam a AFP p26 ou um antígeno-alvo diferente. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP p26 e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos expressos na superfície de uma célula B. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP p26 e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos de câncer. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 alvos diferentes. Em modalidades adicionais, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes expressos na superfície de uma célula de câncer. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer expressos na superfície de diferentes células de câncer.
[032] Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão que compreende um DD que liga especificamente AFP p26. Em algumas modalidades, o DD liga especificamente AFP p26 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 10. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a
895. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP p26 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, um DD da proteína de fusão de DDpp liga especificamente AFP p26, porém, não liga especificamente AFP que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 9. Em modalidades adicionais, o DDpp é uma proteína de fusão que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em outras modalidades, o DDpp compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em outras modalidades, o DDpp de ligação de AFP p26 é uma proteína de fusão de Fc.
[033] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP p26. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD de ligação de AFP p26 operacionalmente ligado a uma proteína de soro. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP p26 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp compreende albumina do soro humano ou um fragmento da mesma.
[034] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD de ligação de AFP p26 e compreende adicionalmente o domínio extracelular de um receptor ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP p26- compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende o domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7) ou CD123 (SEQ ID NO: 8) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende o domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7), CD123 (SEQ ID NO: 8) ou CS1 (SEQ ID NO: 925) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende o domínio extracelular de um receptor selecionado a partir do grupo que consiste em: CD19, CD20, CD22, HVEM, BTLA, DR3, CD37; TSLPR, IL7R e gp96 ou um fragmento dos mesmos.
[035] Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD de ligação de AFP p26 e compreende adicionalmente uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear) ou um fragmento da mesma. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP p26 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP p26 compreende um fragmento de uma proteína de soro (por exemplo, HSA), um domínio extracelular de um receptor (por exemplo, BCMA, CS1, CD123 e CD19) ou uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear), que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 resíduos de aminoácido.
[036] Em algumas modalidades, um DD do DDpp liga especificamente HER2. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente uma proteína de HER2 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 927. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em outras modalidades, o DDpp de ligação de HER2 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em algumas modalidades, o DDpp compreende múltiplos domínios de ligação de alvo (por exemplo, dímeros, trímeros, etc.). Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que ligam HER2. Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que têm a mesma sequência. Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que ligam a diferentes epítopos de HER2. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente HER2 e compreende adicionalmente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DDs ou domínios de ligação de alvo adicionais diferentes (por exemplo, scFvs)
que se ligam a BCMA ou um antígeno-alvo diferente. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente HER2 e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos expressos na superfície de uma célula de câncer. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente HER2 e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos de câncer. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 alvos diferentes. Em modalidades adicionais, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes expressos na superfície de uma célula de câncer. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer expressos na superfície de diferentes células de câncer.
[037] Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão que compreende um DD que liga especificamente HER2. Em algumas modalidades, o DD liga especificamente uma proteína de HER2 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 927. Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de comprimento- total ou uma porção (fragmento) de um anticorpo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de IgG de comprimento total (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG2 ou IgG4). Em modalidades adicionais, o DDpp compreende um anticorpo terapêutico comercialmente aprovado. Em outras modalidades, o DDpp de ligação de HER2 é uma proteína de fusão de Fc.
[038] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD de ligação de HER2 operacionalmente ligado a uma proteína de soro. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp compreende albumina do soro humano ou um fragmento da mesma. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende AFP ou AFP p26, ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende AFP (por exemplo, SEQ ID NO: 9) ou um fragmento do mesmo. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende AFP p26 (SEQ ID NO: 10) ou um fragmento do mesmo.
[039] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 compreende o domínio extracelular de um receptor ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 compreende o domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7), CD123 (SEQ ID NO: 8) ou CS1 (SEQ ID NO: 925) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2- compreende o domínio extracelular de um receptor selecionado a partir do grupo que consiste em: CD19, CD20, CD22, HVEM, BTLA, DR3, CD37, CS-1, TSLPR, IL7R e gp96 ou um fragmento dos mesmos.
[040] Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 compreende uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear) ou um fragmento da mesma. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950.
[041] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 compreende um fragmento de uma proteína de soro (por exemplo, HSA, AFP e AFP 26), um domínio extracelular de um receptor (por exemplo, BCMA, CS1, CD123 e CD19) ou uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear), que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 resíduos de aminoácido.
[042] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de comprimento completo. Em modalidades adicionais, o DDpp é uma proteína de fusão que compreende um anticorpo de comprimento completo que liga especificamente um antígeno de câncer. Em modalidades adicionais, o DDpp é uma proteína de fusão que compreende um anticorpo de comprimento completo, em que o anticorpo liga especificamente um antígeno de câncer que se acredita que seja expresso pelo câncer do indivíduo ao qual a proteína de fusão de DDpp é administrada.
[043] Em algumas modalidades, o DDpp divulgado (por exemplo, uma proteína de fusão de DDpp) é identificado. As identificações que podem ser usadas para identificar o DDpp incluem, porém, sem limitações, uma identificação enzimática, uma identificação fluorescente, uma identificação luminescente e uma identificação bioluminescente. Em algumas modalidades, a identificação é uma porção química de biotina. Em algumas modalidades, a identificação é uma porção química de estreptavidina. Em algumas modalidades, a identificação é uma etiqueta His ou uma etiqueta FLAG. Em algumas modalidades, a identificação é luciferase, proteína fluorescente verde, proteína fluorescente vermelha ou outro agente similar.
[044] Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp é fixa a um suporte sólido. Em algumas modalidades, o suporte sólido é selecionado a partir do grupo que consiste em: uma microesfera, uma lâmina de vidro, um chip, uma gelatina e uma agarose.
[045] Em algumas modalidades, o DDpp (por exemplo, uma proteína de fusão de DDpp) é associado a um lipossomo. Em algumas modalidades, o DDpp é associado ao lipossomo através de ligação covalente. Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão. Em modalidades adicionais, o DDpp é um CAR. Em modalidades adicionais, o DDpp é associado ao lipossomo através de ligação iônica, porém, não de ligação covalente.
[046] Em algumas modalidades, o DDpp de ligação de alvo é conjugado a um agente terapêutico ou citotóxico (por exemplo, um agente quimioterapêutico ou um agente radioterapêutico).
[047] Em modalidades adicionais, a divulgação fornece um receptor de antígeno quimérico (CAR) que compreende um domínio de ligação de alvo compreendendo um DD aqui revelado (por exemplo, um DD compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950). Em algumas modalidades, o DD liga BCMA e compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em algumas modalidades, o DD liga CD123 e compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307-739 e 740. Em algumas modalidades, o DD liga AFP e compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, o DD liga AFP p26 e compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, o CAR compreende um domínio de ligação de alvo, um domínio transmembranar, e um domínio de sinalização intracelular. Em algumas modalidades, o domínio transmembranar de CAR compreende um domínio transmembranar de 41BB ou CD28. Em algumas modalidades, o CAR compreende um domínio de sinalização intracelular selecionado a partir do grupo que consiste num domínio de uma cadeia alfa, beta ou zeta de receptor de célula T humana; um domínio de 41BB humano; um domínio de CD28 humano; e qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intracelular de CAR compreende o domínio intracelular de uma molécula coestimulante selecionada a partir do grupo que consiste em CD27, CD28, 4lBB, OX40, CD30, CD40, PD1, antígeno 1 associado à função de linfócito (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, um ligando que se liga especificamente com CD83, e qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o CAR compreende adicionalmente um segundo domínio de ligação de alvo que tem um alvo igual ou diferente do domínio de ligação de alvo de DD. Em algumas modalidades, o CAR é expresso numa célula imune. Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula T (célula T de CAR) ou uma célula assassina natural (NK) (célula NK de CAR). Em algumas modalidades, o CAR é associado a um lipossomo.
[048] Em algumas modalidades, o CAR compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DD e/ou outros domínios de ligação (por exemplo, scFv) que ligam especificamente um alvo de interesse (por exemplo, BCMA ou CD123) expresso na superfície da célula de câncer. Em modalidades adicionais, o CAR compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DD ou outros domínios de ligação (por exemplo, scFv) que ligam especificamente um segundo alvo diferente de interesse, expresso na superfície da célula de câncer. Em modalidades adicionais, o CAR administrado compreende adicionalmente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DD ou outros domínios de ligação (por exemplo, scFv) que liga especificamente um segundo alvo de interesse expresso por uma segunda célula de câncer diferente ou uma célula endotelial vascular.
[049] Os ácidos nucleicos que codificam o DDpp divulgado (por exemplo, proteínas de fusão de DDpp) também são fornecidos. São adicionalmente fornecidos vetores (por exemplo, plasmídeos, vetores virais e vetores não virais) contendo ácidos nucleicos que codificam o DDpp (por exemplo, proteínas de fusão de DDpp) e células hospedeiras contendo os ácidos nucleicos e vetores. Em algumas modalidades, o vetor compreende uma sequência de nucleotídeos que regula a expressão do polipeptídeo codificado pela molécula de ácido nucleico. Em modalidades adicionais, o vetor compreende uma sequência promotora induzível. Em modalidades adicionais, o vetor inclui um ou mais componentes padrão adicionais para expressão de uma proteína codificada por um ácido nucleico (por exemplo, promotores, componentes de empacotamento, etc.). Em algumas modalidades, o vetor é um vetor lentiviral.
[050] A divulgação também fornece células hospedeiras que compreendem as moléculas de ácido nucleico que codificam um DDpp de ligação de alvo aqui divulgado. Em algumas modalidades, as células hospedeiras (por exemplo, células de uma linhagem celular) são geneticamente modificadas para expressar uma proteína contendo um DD aqui divulgado (por exemplo, um DD que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950). Em algumas modalidades, a expressão do DDpp pelas células hospedeiras permite a produção e o isolamento do DDpp. Em algumas modalidades, a expressão resulta em o DDpp sendo expresso na superfície e/ou integral à membrana das células hospedeiras. Em algumas modalidades, a célula hospedeira é uma partícula viral ou uma célula bacteriana, de levedura, fúngica ou vegetal. Em outras modalidades, a célula hospedeira é uma célula de mamífero. Numa modalidade adicional, a célula de mamífero é uma célula imune. Numa modalidade, a célula hospedeira é uma célula imune humana. Em algumas modalidades, a célula imune humana é uma célula T. Em outras modalidades, a célula imune humana é uma célula assassina natural (NK). Em algumas modalidades, a célula imune humana exibe o DDpp em sua superfície celular.
[051] A divulgação fornece adicionalmente uma célula hospedeira que expressa uma proteína compreendendo um DD aqui divulgado. Em algumas modalidades, a célula hospedeira expressa um receptor de antígeno quimérico (CAR) compreendendo um DD aqui divulgado. Em algumas modalidades, o CAR compreende um domínio de ligação de alvo que compreende um DD compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NO: 11 a 305 e 306; SEQ ID NO: 307 a 739 e 740; SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895; SEQ ID NO: 896 a 909 e 910; ou SEQ ID NO: 911 a 949 e 950 e um domínio transmembranar. Em algumas modalidades, o CAR compreende adicionalmente um domínio intracelular (compreendendo um domínio de sinalização). Em algumas modalidades, a célula imune de CAR é uma célula T. Em algumas modalidades, a célula imune de CAR é uma célula NK. Em algumas modalidades, a célula imune de CAR não é uma célula T ou uma célula NK. Em algumas modalidades, a célula hospedeira é uma célula imune que compreende adicionalmente um segundo polipeptídeo de CAR que tem um DD ou outro domínio de ligação (por exemplo, scFv) que liga especificamente um alvo igual ou diferente (por exemplo, um epítopo diferente do mesmo alvo ou um segundo alvo de interesse) expresso pela célula de câncer) como um primeiro CAR expresso pela célula imune hospedeira.
[052] Além disto, são fornecidas células de mamífero que geram partículas tipo vírus ligadas à membrana (VLPs), em que a célula de mamífero é geneticamente modificada para expressar uma proteína de fusão compreendendo o polipeptídeo de domínio D (DDpp) fundido a um receptor de antígeno quimérico (CAR), a proteína de fusão sendo expressa nas VLPs geradas (por exemplo, como proteínas transmembranares). Dependendo das modalidades, as VLPs produzidas pelas células de mamífero são adequadas para uso como imunogênios para geração de anticorpo.
[053] As composições farmacêuticas contendo uma proteína compreendendo um DD aqui divulgado, ácidos nucleicos que codificam as proteínas, vetores contendo os ácidos nucleicos e células hospedeiras contendo os ácidos nucleicos e ou vetores também são fornecidos. Assim como kits contendo um ou mais dos DDpps de ligação de alvo divulgados (por exemplo, proteínas de fusão de DDpp como DD-Fc e DD-CAR), moléculas de ácido nucleico, vetores e células hospedeiras (por exemplo, um kit terapêutico, um kit de diagnóstico, um kit para uso em pesquisa, etc.).
[054] O DDpp fornecido no presente documento têm atividades que incluem porém sem limitações, a capacidade de se ligar especificamente a um alvo de interesse (por exemplo, um alvo terapêutico e/ou alvo de diagnóstico como BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP e AFP p26, uma etiqueta de peptídeo e uma proteína de soro como alfa-fetoproteína, albumina do soro humano (HSA) ou uma imunoglobulina) in vitro ou in vivo e a capacidade de servir como um sítio reativo para ligação ou associação de uma proteína, como uma proteína de fusão de DDpp com uma ou mais porções químicas adicionais (por exemplo, um suporte sólido) e/ou outras modificações. O DDpp fornecido no presente documento também pode ter propriedades e/ou funcionalidades desejáveis adicionais úteis na fabricação, formulação e aplicações biológicas, diagnósticas e terapêuticas.
[055] Em algumas modalidades, o DDpp é usado para ligar, detectar e/ou quantificar um alvo de interesse (por exemplo, BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP ou AFP p26) numa amostra contendo o alvo. Numa modalidade, a divulgação fornece um método para detectar um alvo de interesse (por exemplo, BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP ou AFP p26) numa amostra, compreendendo: (a) colocar a amostra em contato com um DDpp contendo um DD que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 949 e 950, que liga especificamente o alvo, sob condições adequadas para ligação específica do DDpp ao alvo, para formar um complexo de alvo/DDpp, e (b) detectar a presença do complexo e/ou alvo capturado. Em algumas modalidades, o DDpp é imobilizado num suporte sólido. Em algumas modalidades, o DD compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 ou 306, e o DDpp é usado para ligar, detectar e/ou quantificar BCMA ou uma proteína de fusão compreendendo BCMA numa amostra. Em algumas modalidades, o DD compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 ou 740 e o DDpp é usado para ligar, detectar e/ou quantificar CD123 ou uma proteína de fusão compreendendo CD123 numa amostra. Em algumas modalidades, o DD compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 ou 886 a 895, e o DDpp é usado para ligar, detectar e/ou quantificar AFP p26 ou uma proteína de fusão compreendendo AFP p26 numa amostra. Em algumas modalidades, o DD compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 ou 910 e o DDpp é usado para ligar, detectar e/ou quantificar CS1 ou uma proteína de fusão compreendendo CS1 numa amostra. Em algumas modalidades, o DD compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 ou 950 e o DDpp é usado para ligar, detectar e/ou quantificar HER2 ou uma proteína de fusão compreendendo HER2 numa amostra.
[056] Também é fornecido um método para quantificar um alvo de interesse (por exemplo, BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP ou AFP p26) numa amostra contendo o alvo, compreendendo: (a) colocar a amostra em contato com um DDpp contendo um DD que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 949 e 950, que liga especificamente o alvo e que é imobilizado num suporte sólido, sob condições adequadas para ligação específica do DDpp ao alvo, para formar um complexo de alvo/DDpp e (b) detectar a presença do complexo de alvo/DDpp e/ou alvo capturado, em que a detecção quantitativa do produto indica ou é, de outro modo, capaz de ser correlacionada com a quantidade do alvo ou uma proteína de fusão contendo o alvo na amostra.
[057] Em modalidades adicionais, os DDpps fornecidos são usados na análise de proteína. Em algumas modalidades, os DDpps são conjugados a um agente e/ou etiqueta detectável. Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306; SEQ ID NO: 307 a 739 e 740; SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895; SEQ ID NO: 896 a 909 e 910; ou SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em outras modalidades, o DDpp compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306; SEQ ID NO: 307 a 739 e 740; ou SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895; SEQ ID NO: 896 a 909 e 910; ou SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em algumas modalidades, o DDpp é conjugado a um agente detectável. Numa modalidade, o agente detectável compreende um cromogênio. Em outra modalidade, o agente detectável compreende um corante fluorescente. Numa modalidade adicional, o agente detectável compreende um radionuclídeo. Em algumas modalidades, o DDpp é conjugado ao agente detectável por ligação covalente. Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão. Em modalidades adicionais, o DDpp é multimérico. Em modalidades adicionais, o DDpp é conjugado a uma etiqueta. Em algumas modalidades, a etiqueta é um membro selecionado a partir do grupo que consiste em: uma etiqueta de poli-histidila, uma etiqueta myc e uma etiqueta FLAG. Em modalidades adicionais, o DDpp é conjugado a uma combinação de etiquetas (por exemplo, uma etiqueta de poli-histidila e uma etiqueta FLAG). Em algumas modalidades, o DDpp é conjugado à etiqueta (ou etiquetas) por ligação covalente. Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão. Em algumas modalidades, o DDpp é multimérico.
[058] Em modalidades adicionais, o DDpp é conjugado a um suporte sólido ou etiqueta. Em algumas modalidades, o suporte sólido é uma microesfera de cromatografia, resina, lâmina de vidro, chip, gelatina ou agarose.
[059] Os métodos para usar DDpp em aplicações de diagnóstico e terapêuticas também são fornecidos. Numa modalidade, a divulgação fornece um método para tratar uma doença ou distúrbio compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um DDpp (por exemplo, uma proteína de fusão de DDpp) que liga especificamente um alvo terapêutico de interesse (por exemplo, BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP ou AFP p26) a um indivíduo que precisa do mesmo. Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio é câncer, uma malignidade de célula B, uma doença ou distúrbio do sistema imune ou uma infecção. Também são fornecidos métodos para tratar uma doença ou distúrbio que compreende coadministrar um agente terapêutico adicional juntamente com um DDpp divulgado. Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio é mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio é câncer de mama ou câncer de ovário.
[060] Os DDpps de ligação de alvo aqui divulgados têm uso que incluem aplicações de diagnóstico e terapêuticas. Em algumas modalidades, os DDpps são úteis num contexto terapêutico, por exemplo, para tratamento e/ou diagnóstico de uma doença, como um câncer (por exemplo, uma malignância sólida ou hematológica).
[061] Em algumas modalidades, a divulgação fornece um método para tratar um indivíduo que tem câncer, em que o método compreende: administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de: uma proteína (isto é, DDpp) contendo um DD aqui divulgado (por exemplo, divulgado na Tabela 1, ou que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950); um ácido nucleico que codifica a proteína; um vetor contendo o ácido nucleico; ou uma célula hospedeira contendo o ácido nucleico ou vetor. Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos de DD que liga especificamente BCMA. Em algumas modalidades, um DD do DDpp liga especificamente BCMA que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 7. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos de DD que liga especificamente CD123. Em algumas modalidades, um DD do DDpp liga especificamente CD123 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 8. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos de DD que liga especificamente CS1. Em algumas modalidades, um DD do DDpp liga especificamente CS1 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 925. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos de DD que liga especificamente HER2. Em algumas modalidades, um DD do DDpp liga especificamente HER2 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 927. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos de DD que liga especificamente AFP.
Em algumas modalidades, um DD do DDpp liga especificamente AFP que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 9. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741-874 e 886-895. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente um AFP p26 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 10. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741-874 e 886-895. Em algumas modalidades, um DD do DDpp liga especificamente AFP p26, porém, não liga especificamente AFP que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 9. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741-874 e 886-895.
[062] Em algumas modalidades, a divulgação fornece um método para tratar um indivíduo que tem uma malignidade de célula B, em que o dito método compreende: administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de: uma proteína contendo um DD aqui divulgado (por exemplo, divulgado na Tabela 1, ou que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950); um ácido nucleico que codifica a proteína; um vetor contendo o ácido nucleico; ou uma célula hospedeira contendo o ácido nucleico ou vetor. Em algumas modalidades, a malignidade de célula B é selecionada a partir do grupo que consiste em: um linfoma (por exemplo, um linfoma de Hodgkin e linfoma não Hodgkin (NHL), uma leucemia e um mieloma. Em algumas modalidades, a malignidade de célula B é selecionada a partir do grupo que consiste em: leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crônica, linfoma folicular, linfoma de célula do manto e linfoma de célula B difusa, plasmacitoma e mieloma múltiplo.
[063] Em algumas modalidades, a divulgação fornece um método para tratar um indivíduo que tem câncer, em que o método compreende: administrar ao indivíduo uma célula imune compreendendo um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que o CAR compreende: um domínio de ligação de alvo compreendendo um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 949 e 950, em que o polipeptídeo liga especificamente um alvo de interesse e um domínio transmembranar. Em modalidades adicionais, o alvo de interesse é expresso por uma célula de câncer. Em algumas modalidades, o DD liga especificamente BCMA que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 7. Em modalidades adicionais, o DD compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em algumas modalidades, o DD liga especificamente CD123 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO:
8. Em modalidades adicionais, o DD compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a
739 e 740. Em algumas modalidades, o DD liga especificamente CS1 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 925. Em modalidades adicionais, o DD compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em algumas modalidades, o DD liga especificamente HER2 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 927. Em modalidades adicionais, o DD compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em algumas modalidades, o DD liga especificamente AFP p26 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 10. Em modalidades adicionais, o DD compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, o CAR compreende um domínio intracelular. Em modalidades adicionais, o domínio intracelular compreende um domínio de sinalização, em que, mediante a administração a um indivíduo que tem câncer, o domínio de ligação de alvo se liga especificamente ao alvo de interesse expresso por uma célula de câncer (por exemplo, BCMA e CD123), e em que a ligação do alvo de interesse induz a célula imune a gerar sinais citotóxicos que resultam em efeitos citotóxicos na célula de câncer. Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula T. Em outras modalidades, a célula imune é uma célula NK. Em algumas modalidades, a célula imune de CAR administrada não é uma célula T ou uma célula NK. Em modalidades adicionais, uma combinação de diferentes tipos de célula imune de CAR (por exemplo, células NK e células T) é administrada ao indivíduo. Em algumas modalidades, a administração de célula imune é intravenosa. Em algumas modalidades, uma combinação de diferentes tipos de célula imune de CAR é administrada intravenosamente ao indivíduo. Em algumas modalidades, o câncer é mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, o câncer é câncer de mama ou câncer de ovário.
[064] Em algumas modalidades, a divulgação fornece um método para tratar um indivíduo que tem uma malignidade de célula B, em que o dito método compreende: administrar ao indivíduo uma célula imune compreendendo um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que o CAR compreende: um domínio de ligação de alvo compreendendo um polipeptídeo que tem uma sequência de aminoácidos compreendendo, o polipeptídeo que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 949 e 950, em que o polipeptídeo liga especificamente um alvo de interesse expresso por uma célula de câncer, um domínio transmembranar e um domínio intracelular. Em algumas modalidades, o domínio de ligação de alvo liga especificamente BCMA que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 7. Em modalidades adicionais, o domínio de ligação de alvo compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em algumas modalidades, o domínio de ligação de alvo liga especificamente CD123 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO:
8. Em modalidades adicionais, o domínio de ligação de alvo compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em algumas modalidades, o domínio de ligação de alvo liga especificamente CS1 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 925. Em modalidades adicionais, o domínio de ligação de alvo compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em algumas modalidades, o CAR compreende um domínio intracelular. Em modalidades adicionais, o domínio intracelular compreende um domínio de sinalização, em que, mediante a administração a um indivíduo que tem câncer, o domínio de ligação de alvo liga especificamente ao alvo de interesse expresso por uma célula B maligna (por exemplo, BCMA, CS1 e CD123), e em que a ligação do alvo de interesse induz a célula imune a gerar sinais citotóxicos que resultam em efeitos citotóxicos na célula de câncer B maligna. Em algumas modalidades, a malignidade de célula B é selecionada a partir do grupo que consiste em: um linfoma (por exemplo, um linfoma de Hodgkin e linfoma não
Hodgkin (NHL), uma leucemia e um mieloma. Em algumas modalidades, a malignidade de célula B é selecionada a partir do grupo que consiste em: leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crônica, linfoma folicular, linfoma de célula do manto e linfoma de célula B difusa, plasmacitoma e mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, a malignidade de célula B é mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula T. Em outras modalidades, a célula imune é uma célula NK. Em algumas modalidades, a célula imune de CAR administrada não é uma célula T ou uma célula NK. Em modalidades adicionais, uma combinação de diferentes tipos de célula imune de CAR (por exemplo, células NK e células T) é administrada ao indivíduo. Em algumas modalidades, a administração de célula imune é intravenosa. Em algumas modalidades, uma combinação de diferentes tipos de célula imune de CAR é administrada intravenosamente ao indivíduo.
[065] Em algumas modalidades, a divulgação fornece um método para tratar um indivíduo que tem um distúrbio associado à célula B, em que o dito método compreende: administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de: uma proteína contendo um DD aqui divulgado (por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos divulgada na Tabela 1, ou que tem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950); um ácido nucleico que codifica a proteína; um vetor contendo o ácido nucleico; ou uma célula hospedeira contendo o ácido nucleico ou vetor.
[066] Em algumas modalidades, a divulgação fornece um método para tratar um indivíduo que tem um distúrbio do sistema imune, em que o dito método compreende: administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de: uma proteína compreendendo um DD aqui divulgado (por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos divulgada na Tabela 1, ou que tem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950); um ácido nucleico que codifica a proteína; um vetor contendo o ácido nucleico; ou uma célula hospedeira contendo o ácido nucleico ou vetor. Em algumas modalidades, o distúrbio do sistema imune é uma doença autoimune como artrite reumatoide.
[067] Em algumas modalidades, a divulgação proporciona o uso de uma composição para tratar câncer, em que a composição compreende: uma proteína contendo um DD aqui divulgado (por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos divulgada na Tabela 1, ou que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950); um ácido nucleico que codifica a proteína; um vetor contendo o ácido nucleico; ou uma célula hospedeira contendo o ácido nucleico ou vetor. Em algumas modalidades, o câncer é uma malignidade de célula B. Em algumas modalidades, a malignidade de célula B é selecionada a partir do grupo que consiste em: um linfoma (por exemplo, um linfoma de Hodgkin e linfoma não Hodgkin (NHL), uma leucemia e um mieloma. Em algumas modalidades, a malignidade de célula B é selecionada a partir do grupo que consiste em: leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crônica, linfoma folicular, linfoma de célula do manto, linfoma de célula B difusa, plasmacitoma e mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, o câncer é mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, o câncer é câncer de mama ou câncer de ovário.
[068] Em algumas modalidades, a divulgação proporciona o uso de uma composição para tratar uma malignidade de célula B, em que a composição compreende: uma proteína contendo um DD aqui divulgado (por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos divulgada na Tabela 1, ou que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950); um ácido nucleico que codifica a proteína; um vetor contendo o ácido nucleico; ou uma célula hospedeira contendo o ácido nucleico ou vetor. Em algumas modalidades, a malignidade de célula B é selecionada a partir do grupo que consiste em: um linfoma (por exemplo, um linfoma de Hodgkin e linfoma não Hodgkin (NHL), uma leucemia e um mieloma. Em algumas modalidades, a malignidade de célula B é selecionada a partir do grupo que consiste em: leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crônica, linfoma folicular, linfoma de célula do manto e linfoma de célula B difusa, plasmacitoma e mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, a malignidade de célula B é mieloma múltiplo.
[069] Em algumas modalidades, a divulgação proporciona o uso de uma composição para o tratamento de um distúrbio associado à célula B, em que a composição compreende: uma proteína contendo um DD aqui divulgado (por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos divulgada na Tabela 1, ou que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950); um ácido nucleico que codifica a proteína; um vetor contendo o ácido nucleico; ou uma célula hospedeira contendo o ácido nucleico ou vetor.
[070] Em algumas modalidades, a divulgação proporciona o uso de uma composição para o tratamento de um distúrbio do sistema imune, em que a composição compreende: uma proteína contendo um DD aqui divulgado (por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos divulgada na Tabela 1, ou que tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950); um ácido nucleico que codifica a proteína; um vetor contendo o ácido nucleico; ou uma célula hospedeira contendo o ácido nucleico ou vetor. Em algumas modalidades, o distúrbio do sistema imune é uma doença autoimune como artrite reumatoide.
[071] Em modalidades adicionais, a divulgação proporciona o uso de uma célula imune compreendendo um receptor de antígeno quimérico (CAR) para o tratamento de câncer, em que o CAR compreende: um domínio de ligação de alvo compreendendo um polipeptídeo que tem uma sequência de aminoácidos compreendendo o polipeptídeo, que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 949 e 950, em que o polipeptídeo liga especificamente um alvo de interesse expresso por uma célula de câncer, um domínio transmembranar e um domínio intracelular, em que o domínio intracelular compreende um domínio de sinalização, em que, mediante a administração a um indivíduo que tem câncer, o domínio de ligação de alvo se liga especificamente ao alvo de interesse expresso por uma célula de câncer, e em que a ligação do alvo de interesse induz a célula imune a gerar sinais citotóxicos que resultam em efeitos citotóxicos na célula de câncer. Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula T ou uma célula assassina natural (NK). Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula T. Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula assassina natural (NK). Em algumas modalidades, a célula imune não é uma célula T ou uma célula NK. Em modalidades adicionais, uma combinação de diferentes tipos de célula imune de CAR (por exemplo, células T e células NK) é usada. Em algumas modalidades, o câncer é mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, o câncer é câncer de mama ou câncer de ovário.
[072] Em modalidades adicionais, a divulgação proporciona o uso de uma célula imune compreendendo um receptor de antígeno quimérico (CAR) para o tratamento de uma malignidade de célula B, em que o CAR compreende: um domínio de ligação de alvo compreendendo um polipeptídeo que tem uma sequência de aminoácidos compreendendo o polipeptídeo, que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950, em que o polipeptídeo liga especificamente um alvo de interesse (por exemplo, um alvo expresso por uma célula B maligna, como BCMA, CS1 ou CD123, em que o domínio de ligação de alvo compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 306, 307 a 740 e 896 a 910), um domínio transmembranar e um domínio intracelular, em que o domínio intracelular compreende um domínio de sinalização, em que, mediante a administração a um indivíduo que tem câncer, o domínio de ligação de alvo se liga especificamente ao alvo de interesse expresso por uma célula B maligna, e em que a ligação do alvo de interesse induz a célula imune a gerar sinais citotóxicos que resultam em efeitos citotóxicos na célula B maligna. Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula T ou uma célula assassina natural (NK). Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula T. Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula assassina natural (NK). Em algumas modalidades, a célula imune não é uma célula T ou uma célula NK.
Em modalidades adicionais, uma combinação de diferentes tipos de célula imune de CAR (por exemplo, células T e células NK) é usada. Em algumas modalidades, a malignidade de célula B é mieloma múltiplo.
[073] Em modalidades adicionais, a divulgação proporciona o uso de uma célula imune compreendendo um receptor de antígeno quimérico (CAR) para o tratamento de um distúrbio do sistema imune, em que o CAR compreende: um domínio de ligação de alvo compreendendo um polipeptídeo que tem uma sequência de aminoácidos compreendendo o polipeptídeo, que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 949 e 950, em que o polipeptídeo liga especificamente um alvo de interesse expresso pela célula imune a ser alvejada, um domínio transmembranar e um domínio intracelular, em que o domínio intracelular compreende um domínio de sinalização, em que, mediante a administração a um indivíduo que tem o distúrbio do sistema imune, o domínio de ligação de alvo se liga especificamente ao alvo de interesse expresso pela célula imune alvejada, e em que a ligação do alvo de interesse induz a célula imune recombinante a gerar sinais citotóxicos que resultam em efeitos citotóxicos na célula imune alvejada. Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula T ou uma célula assassina natural (NK). Em algumas modalidades, a célula imune não é uma célula T ou uma célula NK. Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula assassina natural (NK). Em algumas modalidades, a célula imune não é uma célula T ou uma célula NK. Em modalidades adicionais, uma combinação de diferentes tipos de célula imune de CAR (por exemplo, células T e células NK) é usada.
[074] Os métodos resumidos acima e/ou apresentados no presente documento descrevem certas ações tomadas por um clínico; entretanto, deve ser entendido que estes também podem incluir a instrução de tais ações por terceiros. Assim, as ações como “administrar uma célula T compreendendo um CAR de polipeptídeo de ligação específica de alvo” incluem “instruir a administração de uma célula T compreendendo um CAR de polipeptídeo de ligação específica de alvo".
[075] Em algumas modalidades, a divulgação fornece:
[076] Gg
[077] [1.] Proteína que compreende um domínio de ligação de alvo de Domínio D (DD) caracterizada pelo fato de que o DD é um membro selecionado do grupo que consiste em:
[078] (a) um DD que se liga especificamente a BCMA e compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 a 305, ou 306;
[079] (b) um DD que se liga especificamente a CD123 e compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 307 a 739, ou 740;
[080] (c) um DD que se liga especificamente a AFP e compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 741 a 874 ou 886 a 895;
[081] (d) um DD que se liga especificamente a AFP p26 e compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 741 a 874 ou 886 a 895;
[082] (e) um DD que se liga especificamente a CS1 e compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 896 a 909 ou 910; e
[083] (f) um DD que se liga especificamente a HER2 e compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 911 a 949 ou 950;
[084] [2.] a proteína de [1], em que o DD é fundido a um polipeptídeo heterólogo;
[085] [3.] a proteína de [2], em que o polipeptídeo heterólogo compreende um anticorpo de comprimento completo ou um fragmento de anticorpo.
[086] [4.] a proteína de [2], em que o polipeptídeo heterólogo compreende um membro selecionado do grupo que consiste em.
[087] (a) um domínio transmembranar;
[088] (b) um domínio que se associa à membrana;
[089] (c) albumina sérica humana ou um fragmento da mesma;
[090] (d) AFP ou um fragmento do mesmo;
[091] (e) AFP p26 ou a fragmento do mesmo; e
[092] (f) o domínio extracelular de um receptor ou um fragmento do mesmo;
[093] [5.] a proteína de [3], em que o DD é fundido a: o terminal amino de uma cadeia pesada de anticorpo de comprimento completo; o terminal amino de uma cadeia leve de anticorpo de comprimento completo; o terminal carboxila de uma cadeia pesada de anticorpo de comprimento completo; ou o terminal carboxila de uma cadeia leve de anticorpo de comprimento completo;
[094] [6.] a proteína de [3], em que o polipeptídeo heterólogo é um Fc;
[095] [7.] a proteína de [2], em que o polipeptídeo heterólogo compreende o domínio extracelular, ou um fragmento de um domínio extracelular, de um receptor selecionado do grupo que consiste em: BCMA, CD123, CS1 e CD19.
[096] [8.] a proteína, de acordo com qualquer um de [1] a [7], que é identificada;
[097] [9.] a proteína, de acordo com [9], em que a identificação é selecionada do grupo que consiste numa identificação enzimática, uma identificação fluorescente, uma identificação luminescente, uma identificação bioluminescente e uma porção química de biotina.
[098] [10.] uma proteína, de acordo com qualquer um dentre [1] a
[10], que é conjugada com um agente terapêutico ou agente citotóxico;
[099] [11.] um receptor de antígeno quimérico (CAR) que compreende um domínio de ligação de alvo compreendendo a proteína de acordo com qualquer um dentre [1] a [5];
[0100] [12.] o CAR de [11], que compreende um domínio de ligação de alvo, um domínio transmembranar e um domínio de sinalização intracelular;
[0101] [13.] o CAR de [11] ou [12], em que o domínio transmembranar compreende um domínio transmembranar de 41BB ou CD28;
[0102] [14.] o CAR de, acordo com qualquer um dentre [11] a [13], em que o domínio de sinalização intracelular é selecionado do grupo que consiste numa cadeia alfa, beta ou zeta de receptor de célula T humana; um domínio 41BB humano; um domínio CD28 humano; e qualquer combinação dos mesmos;
[0103] [15.] um CAR, de acordo com qualquer um dentre [11] a
[14], em que o domínio de sinalização intracelular compreende o domínio intracelular de uma molécula coestimulante selecionada do grupo que consiste em CD27, CD28, 4lBB, OX40, CD30, CD40, PD1, antígeno associado à função de linfócito 1 (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, NKG2D, B7-H3, um ligando que se liga especificamente a CD83, e qualquer combinação dos mesmos;
[0104] [16.] uma proteína, de acordo com qualquer um dentre [1] a
[15], que compreende adicionalmente um segundo domínio de ligação de alvo que tem um alvo igual ou diferente do domínio de ligação de alvo DD;
[0105] [17.] um ácido nucleico isolado que codifica a proteína de acordo com qualquer um dentre [1] a [16];
[0106] [18.] um vetor compreendendo o ácido nucleico de [17];
[0107] [19.] o vetor de [18], em que o ácido nucleico é operacionalmente ligado a uma sequência de nucleotídeos que regula a expressão da proteína codificada pelo ácido nucleico;
[0108] [20.] o vetor de [19], que é um vetor lentiviral;
[0109] [21.] uma célula hospedeira compreendendo o ácido nucleico de acordo com [17] ou o vetor de acordo com qualquer um dentre [18] a [21];
[0110] [22.] uma célula geneticamente modificada para expressar a proteína de acordo com qualquer um dentre [1] a [16];
[0111] [23.] uma célula, de acordo com [21] ou [22], em que a célula é uma célula T ou a célula exterminadora natural (NK);
[0112] [24.] uma composição farmacêutica compreendendo a proteína de acordo com qualquer um dentre [1] a [16], o ácido nucleico de [17], o vetor de [18], [19] ou [20], ou a célula de acordo com qualquer um dentre [21] a [23];
[0113] [25.] um kit compreendendo a proteína de acordo com qualquer um dentre [1] a [16];
[0114] [26.] um método para tratar um indivíduo que tem câncer, em que o método compreende:
[0115] administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma proteína, de acordo com qualquer um dentre [1] a [16], o ácido nucleico de [17], o vetor de [18], [19] ou [20], a célula, de acordo com qualquer um dentre [21] a
[23], ou a composição farmacêutica de acordo com [24];
[0116] [26.] o método de [26], em que o câncer é uma malignidade de célula B selecionada do grupo que consiste em: um linfoma (por exemplo, um linfoma de Hodgkin e linfoma não Hodgkin (NHL), uma leucemia, um plasmacitoma e um mieloma;
[0117] [28.] o método de [27], em que a malignidade de célula B é selecionada do grupo que consiste em: leucemia linfocítica crônica, linfoma folicular, linfoma de célula do manto, e linfoma de célula B grande difusa, plasmacitoma e mieloma múltiplo;
[0118] [27.] o método de [26], em que o câncer é uma malignância mieloide selecionada a partir do grupo que consiste em: leucemia mieloide crônica, leucemia mieloide aguda, leucemia, plasmacitoma e mieloma;
[0119] [29.] um método para tratar um indivíduo que tem um distúrbio associado à célula B (por exemplo, gamopatia monoclonal de significância determinada), (MGUS)) caracterizado pelo fato de que o método compreende: administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma proteína, de acordo com qualquer um dentre [1] a [16], o ácido nucleico de [17], o vetor de [18], [19] ou [20], a célula, de acordo com qualquer um dentre [21] a [23], ou a composição farmacêutica de acordo com [24];
[0120] [30.] um método para tratar um indivíduo que tem um distúrbio do sistema imune, em que o método compreende: administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma proteína de acordo com qualquer um dentre [1] a [16], o ácido nucleico de [17], o vetor de [18], [19] ou [20], a célula, de acordo com qualquer um dentre [21] a [23], ou a composição farmacêutica de acordo com [24];
[0121] [31.] o método de [30], em que o distúrbio do sistema imune é uma doença autoimune, como artrite reumatoide;
[0122] [32.] um método para tratar um indivíduo que tem câncer, em que o método compreende:
[0123] administrar uma célula imune que compreende um receptor de antígeno quimérico (CAR) ao indivíduo, em que o CAR compreende: um domínio de ligação de alvo que compreende um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste na SEQ ID NO: 11 a 949 e 950, opcionalmente, em que o DD se liga especificamente a um alvo de interesse expressado por uma célula de câncer;
[0124] um domínio transmembranar e um domínio intracelular; em que o domínio intracelular compreende um domínio de sinalização, e em que, mediante administração a um indivíduo, o domínio de ligação de alvo se liga especificamente ao alvo de interesse expressado por uma célula de câncer, e
[0125] em que a ligação do alvo de interesse induz a célula imune para gerar sinais citotóxicos que resultam em efeitos citotóxicos na célula de câncer;
[0126] [33.] o método de [32], em que a célula imune é uma célula T;
[0127] [34.] o método de [32], em que a célula imune é uma célula NK;
[0128] [35.] o método de [32], em que a administração é intravenosa;
[0129] [36.] uso de uma composição para tratar câncer, em que a composição compreende: uma proteína de acordo com qualquer um dentre [1] a [16], o ácido nucleico de [17], o vetor de [18], [19] ou [20], ou a célula de acordo com qualquer um dentre [21] a [23];
[0130] [37.] o uso, de acordo com [36], em que o câncer é uma malignidade de célula B;
[0131] [38.] o uso, de acordo com [37], em que a malignidade de célula B é selecionada a partir do grupo que consiste em: um linfoma (por exemplo, um linfoma de Hodgkin e linfoma não Hodgkin (NHL), uma leucemia e um mieloma;
[0132] [39.] o uso, de acordo com [38], em que a malignidade de célula B é selecionada do grupo que consiste em: leucemia linfocítica crônica, linfoma folicular, linfoma de célula do manto e linfoma de célula B grande difusa;
[0133] [40.] o uso de uma composição para o tratamento de um distúrbio associado à célula B, em que a composição compreende: uma proteína, de acordo com qualquer um dentre [1] a [16], o ácido nucleico de [17], o vetor de [18], [19] ou [20], a célula, de acordo com qualquer um dentre [21] a
[23] ou a composição farmacêutica, de acordo com [24]
[0134] [41.] o uso de uma composição para o tratamento de um distúrbio do sistema imune, em que a composição compreende: uma proteína, de acordo com qualquer um dentre [1] a [16], o ácido nucleico de [17], o vetor de [18], [19] ou [20], a célula, de acordo com qualquer um dentre [21] a [23] ou a composição farmacêutica, de acordo com [24]
[0135] [42.] o uso, de acordo com [41], em que o distúrbio do sistema imune é uma doença autoimune como artrite reumatoide;
[0136] [43.] o uso de uma célula imune que compreende um receptor de antígeno quimérico (CAR) para o tratamento de câncer, em que o CAR compreende: um domínio de ligação de alvo que compreende um DD que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste na SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950, e, opcionalmente, em que o domínio de ligação de alvo se liga especificamente a um alvo de interesse expressado por uma célula de câncer,
[0137] um domínio transmembranar e um domínio intracelular; em que o domínio intracelular compreende um domínio de sinalização, em que, mediante administração a um indivíduo que tem câncer, o domínio de ligação de alvo se liga especificamente ao alvo de interesse expresso por uma célula de câncer, e
[0138] em que a ligação do alvo de interesse induz a célula imune para gerar sinais citotóxicos que resultam em efeitos citotóxicos na célula de câncer;
[0139] [44.] o uso, de acordo com [43], em que a célula imune é uma célula T ou uma célula assassina natural (NK).
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[0140] As Figuras 1A a 1B, o DDpp confere especificidades de ligação inovadoras a outra molécula (por exemplo, um anticorpo de comprimento completo) como parte de uma proteína de fusão (por exemplo, uma proteína de fusão de anticorpo-DDpp. As fusões de DDpp-anticorpo foram criadas usando um anticorpo específico de RSV (SYN) e o peptídeo sem alvo da SEQ ID NO: 1 (DD) ou o DDpp específico de CD137 (bb10) (SEQ ID NO: 876). Os DDpps são fundidos ao N-terminal (bb10-SYN e DD-SYN) ou ao C- terminal (SYN-bb10 e SYN-DD). Todas as quatro fusões de anticorpo se ligam a RSV (Figura 1A). Entretanto, a fusão de bb10 ao N-terminal (bb10-SYN) ou ao C-terminal (SYN-bb10) de cadeia pesada de anticorpo confere uma especificidade de ligação de CD137 inovadora a um anticorpo, de outro modo, monoespecífico (Figura 1B).
[0141] As Figuras 2A a 2F. As células T de CD123-DDpp-CAR produzem citocinas em resposta à ligação de alvo. As Figuras 2A e 2B mostram dados relacionados à produção de interferon gama (IFNγ) por células T que expressam CD123-DDpp-CARs quando cocultivadas com tumor CD123 negativo K562 e tumor CD123 positivo BDCM, respectivamente. As Figuras 2C e 2D representam dados similares medindo a produção de interleucina-2 (IL2) por células T de CD123-DDpp-CAR quando cocultivadas com K562 e BDCM, respectivamente. As Figuras 2E e 2F mostram citocina conduzida por alvo similar (IFNγ, IL2) por células T de PD-L1-DDppCAR quando cocultivadas com PDL1 expressando células de tumor (SUDHL-1).
[0142] As Figuras 3A a 3B. As células T expressando DDpp-CARs não são submetidas à exaustão excessiva a um grau maior que scFv. A Figura 3A representa a expressão de três marcadores de exaustão (LAG3, PD1 e TIM3) em células T expressando vários DDpp-CARs em níveis similares da expressão de tais marcadores em scFv-CAR 32716 (32716 (Du X1, Ho M, Pastan I. 2007. Novas imunotoxinas alvejando CD123, um antígeno de célula- tronco em células de leucemia mieloide aguda. J Immunother. 30(6): 607-13). A Figura 3B mostra os dados de citometria de fluxo que representam uma expressão de marcador de exaustão similar em células T de DDpp-CAR (expressando CD123 alvejando DDpp de cg06) em comparação com uma célula T de CAR expressando scFv específico de CD123 (32716).
[0143] As Figuras 4A a 4C. As células T expressando DDpp-CARs (de alvejamento de CD123) são submetidas à desgranulação quando cocultivadas com células de tumor que expressam alvo (BDCM). As Figuras 4A a 4C mostram resultados obtidos através da cultura de células T sozinhas (Figura 4A) ou na presença de células de K562 (Figura 4B) ou de BDCM (Figura 4C).
[0144] Figuras 5A a 5D. As células T expressando DDpp-CARs mediam citoxicidade de tumor específica. A Figura 5A mostra dados relacionados à porcentagem de morte de células T de CD123-DDpp-CAR de células de tumor de K562 que são negativas para CD123. A Figura 5B mostra porcentagens de morte quando as células T de DDpp-CAR que alvejam CD123 são cocultivadas com células de BDCM CD123 positivas. Os dados das Figuras 5A e 5B foram gerados usando células T de uma primeira amostra de sangue de doador. As Figuras 5C e 5D mostram dados similares de células T coletadas a partir de um segundo doador.
[0145] Figuras 6A a 6E. Células T de DDpp-CAR biespecíficas. A Figura 6A mostra a porcentagem de células T expressando DDpp-CARs que alvejam CD123 (cg06). A Figura 6B mostra a porcentagem de células T expressando DDpp-CARs que alvejam PDL1 (pb04). A Figura 6C mostra a porcentagem de células T expressando DDpp-CARs de alvejam CD123-PDL1 biespecíficos (expressas com DDpp de cg06 distal à membrana de célula T versus o DDpp de pb04). A Figura 6D mostra a porcentagem de células T expressando PDL1-DDpp-CARs biespecíficos que alvejam CD123 (expressas com DDpp de pb04 distal à membrana de célula T versus o DDpp de cg06). A Figura 6E representa dados relacionados à sinalização intracelular aumentada de DDpp biespecífico.
[0146] As Figuras 7A e 7B mostram que as proteínas adaptadoras de domínio de ligação dupla acionam a sinalização intensificada por células repórteres de Jurkat NFAT-Luciferase expressando CAR em relação proteínas adaptadoras de domínio de ligação única. Na Figura 7A, 50.000 células repórteres anteriormente transduzidas com um CAR de ligação de AFP (domínio de p26) (af03) foram cultivadas por 5 horas na presença da proteína adaptadora de Cg06 específica de CD123 (Cg06-p26) ou a proteína adaptadora dupla de Cg06 (Cg06-p26-Cg06 na presença de 50.000 CD123+ MOLM13 ou células de MOLM13 deficientes em CD123, do que é avaliado para a atividade de luciferase. As células deficientes de CD123 foram geradas usando tecnologia de modificação genética de CRISPR/Cas9. Na Figura 7B,
50.000 células repórteres anteriormente transduzidas com um CAR de ligação de AFP (domínio de p26) (af03) foram cultivadas por 5 horas na presença da proteína adaptadora de Bc40 específica de BCMA (Bc40-p26) ou a proteína adaptadora dupla de Bc40 (Bc40-p26-Bc40) na presença ou ausência de
50.000 BCMA+ U266 células, do que é avaliado para a atividade de luciferase.
[0147] Figura 8. O DDpp-CAR de alvejamento de BCMA compreendendo o bc40 DDpp (SEQ-ID NO: 164) erradica o tumor que expressa BCMA, U226, num modelo de camundongo de câncer de célula B.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0148] Os cabeçalhos de seção usados no presente documento servem apenas a propósitos organizacionais e não devem ser interpretados de uma maneira que limite a matéria descrita.
DEFINIÇÃO DE TERMOS
[0149] Entende-se que sempre que as modalidades são descritas no presente documento com a linguagem “que compreende”, modalidades análogas descritas de outro modo em termos de “que consiste em” e/ou “que consiste essencialmente em” também são fornecidas. Entretanto, quando usadas nas reivindicações como frases de transição, cada uma deve ser interpretada separadamente e no contexto legal e factual apropriado (por exemplo, “compreendendo” é considerado como uma frase aberta, enquanto “que consiste em” é mais exclusivo e “consistindo essencialmente em” alcança um meio termo).
[0150] Conforme usado no presente documento, as formas singulares “um”, “uma”, "o" e “a" incluem referências plurais a não ser que indicado de outra maneira.
[0151] O termo "e/ou", conforme usado numa expressão, como "A e/ou B", no presente documento, é destinado a incluir "tanto A quanto B", "A ou B", "A" (sozinho) e "B" (sozinho). De modo similar, o termo "e/ou" como usado numa frase como "A, B e/ou C" se destina a englobar cada uma das seguintes modalidades: A, B e C; A, B ou C; A ou C; A ou B; B ou C; A e C; A e B; B e C; A (sozinho); B (sozinho); e C (sozinho).
[0152] Os termos “proteína” e “polipeptídeo” são usados de modo intercambiável no presente documento para se referir a um polímero biológico compreendendo unidades derivadas de aminoácidos ligadas por meio de ligações de peptídeo; uma proteína pode ser composta por duas ou mais cadeias de polipeptídeo.
[0153] Os termos “anticorpo” ou “imunoglobulina", como usados de modo intercambiável no presente documento, incluem anticorpos de comprimento total e fragmentos de anticorpo incluindo qualquer domínio funcional de um anticorpo como um fragmento de ligação de antígeno ou cadeias únicas do mesmo, um domínio efetor, epítopo de ligação de receptor selvagem ou porção do mesmo.
Um anticorpo típico compreende pelo menos duas cadeias pesadas (H) e duas cadeias leves (L) interconectadas por ligações dissulfetos.
Cada cadeia pesada é compreendida de uma região variável de cadeia pesada (abreviada no presente documento como VH) e uma região constante de cadeia pesada.
A região constante de cadeia pesada é compreendida de três domínios, CH1, CH2 e CH3. Cada cadeia leve é compreendida de uma região variável de cadeia leve (abreviada no presente documento as VL) e uma região constante de cadeia leve.
A região constante de cadeia leve é compreendida de um domínio, Cl.
As regiões VH e VL podem ser, ainda, subdivididas em regiões de hipervariabilidade, chamadas de regiões determinantes de complementaridade (CDRs), intercaladas com regiões que são mais conservadas, chamadas de regiões de arcabouço (FW). Cada VH e VL é composta por três CDRs e quatro FWs, disposta a partir de terminal amino até terminal carboxila na ordem a seguir: FW1, CDR1, FW2, CDR2, FW3, CDR3, FW4. As regiões variáveis das cadeias pesada e leve contêm um domínio de ligação que interage com um antígeno.
As regiões constantes dos anticorpos podem mediar a ligação da imunoglobulina para hospedar tecidos ou fatores, incluindo várias células do sistema imunológico (por exemplo, células efetoras) e o primeiro componente (C1q) do sistema complementar clássico.
Os exemplos de anticorpos da presente divulgação incluem anticorpos típicos, scFvs e combinações dos mesmos, em que, por exemplo, um DDpp é ligado covalentemente (por exemplo, por meio de ligações de peptídeo ou por meio de um ligante químico) ao N-terminal da cadeia pesada e/ou da cadeia leve de um anticorpo (de comprimento total) integral típico, ou intercalado na cadeia H e/ou na cadeia L de um anticorpo de comprimento total.
[0154] O termo “fragmento de anticorpo” se refere a uma porção de um anticorpo intacto e se refere a qualquer domínio funcional de um anticorpo, como um fragmento de ligação de antígeno ou cadeias únicas do mesmo, um domínio efetor ou uma porção do mesmo, e um epítopo de ligação de receptor selvagem ou uma porção do mesmo. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem, porém sem limitações, fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 e Fv, anticorpos lineares, anticorpos de cadeia única e anticorpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticorpo. “Fragmento de anticorpo”, como usado no presente documento, compreende um sítio de ligação de antígeno ou sítio de ligação de epítopo. Numa modalidade, a proteína de fusão de DDpp compreende um domínio efetor ou porção do mesmo. Numa modalidade, a proteína de fusão de DDpp compreende um epítopo de ligação de receptor selvagem ou porção do mesmo.
[0155] Como usado no presente documento, o termo, “região de Fc” ou simplesmente “Fc” é entendido de modo a significar a porção de terminal carboxila de uma região constante de cadeia de imunoglobulina, preferencialmente uma região constante de cadeia pesada de imunoglobulina, ou uma porção da mesma. Por exemplo, uma região de Fc de imunoglobulina pode compreender (1) um domínio de CH1, um domínio de CH2 e um domínio de CH3, (2) um domínio de CH1 e um domínio de CH2, (3) um domínio de CH1 e um domínio de CH3, 4) um domínio de CH2 e um domínio de CH3, ou (5) uma combinação de dois ou mais domínios e uma região de articulação de imunoglobulina. Portanto, em várias modalidades, em várias modalidades, Fc se refere aos últimos dois domínios de imunoglobulina de região constante de IgA, IgD e IgG, e aos últimos três domínios de imunoglobulina de região constante de IgE e IgM e o N-terminal de articulação flexível a estes domínios. Para IgA e IgM, Fc pode incluir a cadeia J. Para IgG, Fc compreende domínios de imunoglobulina Cγ2 e Cγ3 e a articulação entre Cγ1 e Cγ2. Numa modalidade preferencial, a região de Fc de imunoglobulina compreende pelo menos uma região de articulação de imunoglobulina, um domínio de CH2 e um domínio de CH3, e preferencialmente é desprovida do domínio de CH1. Numa modalidade, a classe de imunoglobulina da qual a região constante de cadeia pesada é derivada é IgG (Igγ) (subclasses de γ 1, 2, 3 ou 4). Outras classes de imunoglobulina, IgA (Igα), IgD (Igδ), IgE (Igε) e IgM (Igμ), podem ser usadas. Embora os limites da região de Fc podem variar, a região de Fc de cadeia pesada de IgG humana é geralmente definida de modo a compreender resíduos C226 ou p260 em sua terminação carboxila, em que a numeração é de acordo com o índice EU conforme apresentado em Kabat (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed. Public Health Service, NIH, Bethesda, Md. (1991)). O Fc pode se referir a esta região em isolamento, ou esta região no contexto de um anticorpo comprimento total, fragmento de anticorpo ou proteína de fusão de Fc. Os polimorfismos foram observados em inúmeras posições de Fc diferentes, incluindo, porém sem limitações, posições 270, 272, 312, 315, 356 e 358 conforme enumerado pelo índice EU e, portanto, pequenas diferenças entre a sequência apresentada e sequências na técnica anterior podem existir. A escolha de região constante de cadeia pesada de imunoglobulina apropriada é discutida em detalhes nas Patentes n os U.S.
5.541.087 e 5.726.044, cada uma das quais é incorporada no presente documento a título de referência em sua totalidade. A escolha de sequências de região constante de cadeia pesada de imunoglobulina particulares de certas classes e subclasses de imunoglobulina para alcançar um resultado particular é considerada como estando dentro do nível de perícia na técnica. A porção do construto de DNA que codifica a região de Fc de imunoglobulina preferencialmente compreende pelo menos uma porção de um domínio de articulação, e preferencialmente pelo menos uma porção de um domínio de CH3 de Fc gama ou dos domínios homólogos em qualquer um dentre IgA, IgD, IgE ou IgM. Ademais, é contemplado que a substituição ou deleção de aminoácidos dentro das regiões constantes de cadeia pesada de imunoglobulina pode ser útil na prática dos métodos e composições aqui divulgados. Um exemplo seria introduzir substituições de aminoácido na região
CH2 superior para criar uma variante de Fc com afinidade reduzida para receptores de Fc (Cole, J. Immunol. 159: 3613 (1997)).
[0156] “Citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo” ou “ADCC” se referem a uma reação mediada por células na qual células citotóxicas não específicas que expressam receptores Fc (FcRs) (por exemplo, células Exterminadoras Naturais (NK), neutrófilos e macrófagos) reconhecem anticorpo ligado numa célula-alvo e subsequentemente causam lise (ou outros efeitos citotóxicos) da célula-alvo. Para avaliar a atividade de ADCC de uma molécula de interesse, qualquer ensaio de ADCC in vitro conhecido na técnica pode ser usado, como aquele descrito nas Patentes n os U.S. 5.500.362 ou 5.821.337. As células efetoras úteis para tais ensaios incluem, porém sem limitações, células mononucleares de sangue periférico (PBMC) e células exterminadoras naturais (NK). Alternativa ou adicionalmente, a atividade de ADCC da molécula de interesse pode ser avaliada in vivo, por exemplo, num modelo animal, tal como aquele divulgado em Clynes et al. PNAS 95: 652-656 (1998).
[0157] Os termos “fragmento (ou fragmentos) variável de cadeia única", ou anticorpos de “scFv”, como usados no presente documento, se referem a formas de anticorpos (por exemplo, fragmentos de anticorpo) compreendendo as regiões variáveis apenas das cadeias pesadas e leves, conectadas por um peptídeo de ligante. Numa modalidade, uma proteína de fusão de DDpp compreende um DDpp e um scFv.
[0158] O termo “ligante” se refere a um peptídeo ou outra ligação química localizada entre um DDpp e outro polipeptídeo de uma proteína de fusão de DDpp. Os ligantes adequados para acoplar os dois ou mais DDpp ligados serão evidentes para aquelas pessoas versadas na técnica e exemplos não limitantes são descritos no presente documento.
[0159] O termo “operacionalmente ligado", como usado no presente documento, indica que duas moléculas são fixadas de modo que cada uma retenha pelo menos algum nível de atividade funcional que cada molécula tinha sozinha (presumindo que cada molécula tivesse uma atividade funcional). Nas modalidades, quando uma molécula não tinha atividade funcional, a mesma é operacionalmente ligada a outra molécula se a outra molécula retiver pelo menos algum nível de sua atividade funcional. Operacionalmente ligado também pode se referir à ligação de duas moléculas não funcionais. Duas moléculas podem ser “operacionalmente ligadas” independentemente de serem fixas direta ou indiretamente (por exemplo, por meio de um ligante).
[0160] Os termos “liga especificamente", “que tem afinidade seletiva para", “liga" ou “que liga” são usados de modo intercambiável de modo que signifiquem que um agente de ligação como um DDpp reage ou se associa mais frequentemente, mais rapidamente, com maior duração, com maio afinidade ou com alguma combinação dos supracitados, ao epítopo, à proteína ou molécula-alvo do que com substâncias alternativas, incluindo proteínas não relacionadas ao epítopo-alvo, proteína-alvo ou molécula-alvo. Devido à identidade de sequência entre proteínas homólogas em diferentes espécies, a ligação específica pode, em algumas modalidades, incluir um agente de ligação que reconhece uma proteína ou alvo em mais de uma espécie. De modo semelhante, devido à homologia dentro de certas regiões de sequências de polipeptídeo de diferentes proteínas, a ligação específica pode incluir um agente de ligação que reconhece mais de uma proteína ou alvo. É entendido que, em certas modalidades, um agente de ligação que liga especificamente um primeiro alvo pode se ligar ou pode não se ligar especificamente a um segundo alvo. Deste modo, “ligação específica” não exige necessariamente (embora possa incluir) ligação exclusiva, por exemplo, ligação a um único alvo. Portanto, um agente de ligação, em certas modalidades, pode ligar especificamente mais de um alvo. Em certas modalidades, múltiplos alvos podem ser ligados pelo mesmo sítio de ligação de antígeno no agente de ligação.
[0161] “Alvo” se refere a qualquer molécula ou combinação de moléculas que possam ser ligadas por um DDpp como uma proteína de fusão de DDpp, ou outro componente da proteína de fusão de DDpp como um anticorpo ou fragmento de domínio variável de anticorpo.
[0162] Os termos “epítopo” e “determinante antigênico” são usados de modo intercambiável no presente documento e se refere a tal porção de qualquer molécula (por exemplo, um alvo de interesse como BCMA, CD123, AFP, ou AFP p26) capaz de ser reconhecida e especificamente ligada por um agente de ligação particular (por exemplo, um DDpp ou anticorpo). Quando a molécula reconhecida é um polipeptídeo, epítopos podem ser formados a partir de aminoácidos contíguos e aminoácidos não contíguos e/ou outros grupos de moléculas de superfície quimicamente ativa (como carboidratos) justapostos por dobra terciária de uma proteína. Os epítopos formados a partir de aminoácidos contíguos são tipicamente retidos mediante a desnaturação de proteína, enquanto os epítopos formados por dobra terciária são tipicamente perdidos mediante a desnaturação de proteína. Um epítopo tipicamente inclui pelo menos 3 aminoácidos, e mais geralmente, pelo menos 5 ou 8 a 10 aminoácidos numa conformação espacial exclusiva.
[0163] Uma “etiqueta de peptídeo” como usado no presente documento se refere a uma sequência de peptídeos que é parte de ou fixada (por exemplo, através de modificação genética) a outra proteína, para fornecer uma função à fusão resultante. As etiquetas de peptídeo são, em geral, relativamente curtas em comparação com uma proteína à qual as mesmas são fundidas; a título de exemplo, as etiquetas de peptídeo têm, em algumas modalidades, quatro ou mais aminoácidos de comprimento, como, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20 ou 25 ou mais aminoácidos. Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão que contém uma etiqueta de peptídeo. Em outras modalidades, o DDpp liga especificamente uma etiqueta de peptídeo. Inúmeras etiquetas de peptídeo que têm usos conforme fornecido no presente documento são conhecidas na técnica. Os exemplos de etiquetas de peptídeo que podem ser um componente de uma proteína de fusão de DDpp ou um alvo ligado por um DDpp (por exemplo, uma proteína de fusão de DDpp) incluem porém sem limitações HA (hemaglutinina), c-myc, a glicoproteína D de vírus Simples da Herpes (gD), T7, GST, GFP, MBP, etiquetas Strep, etiquetas His, etiquetas Myc, etiquetas TAP e etiqueta FLAG® (Eastman Kodak, Rochester, N.Y.) De modo semelhante, os anticorpos para o epítopo de etiqueta permitem a detecção e localização da proteína de fusão usando técnicas conhecidas na técnica, como, Western blots, ensaios ELISA e imunomanchamento de células.
[0164] O termo “de ocorrência natural”, quando usado em conexão com materiais biológicos como moléculas de ácido nucleico, polipeptídeos e células hospedeiras, se refere àqueles que são encontrados na natureza, e não modificados por um ser humano. Em contrapartida, “não natural” ou “sintético”, quando usado em conexão com materiais biológicos, se refere àqueles materiais que não são encontrados na natureza e foram modificados por um ser humano.
[0165] Como usado no presente documento, “modificações” em relação à sequência de uma sequência de referência inclui substituições, deleções inserções e/ou adições da sequência da posição de aminoácido correspondente da sequência de referência (por exemplo, um DD aqui divulgado).
[0166] Uma “substituição” em relação à sequência de uma sequência de referência se refere a uma substituição de um resíduo de aminoácido particular com um resíduo de aminoácido diferente numa posição de aminoácido correspondente da sequência de referência.
[0167] Uma substituição de aminoácido “conservadora” é uma em que um resíduo de aminoácido é substituído por outro resíduo de aminoácido que tem uma cadeia lateral similar. Famílias de resíduos de aminoácido que têm cadeias laterais similares foram definidas na técnica, incluindo cadeias laterais básicas (por exemplo, lisina (K), arginina (R), histidina (H)), cadeias laterais ácidas (por exemplo, ácido aspártico (D), ácido glutâmico (E)), cadeias laterais polares não carregadas (por exemplo, glicina (G), asparagina (N), glutamina (Q), serina (S), treonina (T), tirosina (Y), cisteína (C)), cadeias laterais não polares (por exemplo, alanina (A), valina (V), leucina (L), isoleucina (I), prolina (P), fenilalanina (F), metionina (M), triptofano (W), cadeias laterais betarramificadas (por exemplo, treonina (T), valina (V), isoleucina (I)) e cadeias laterais aromáticas (por exemplo, tirosina (Y), fenilalanina (F), triptofano (W), histidina (H)). Por exemplo, a substituição de uma fenilalanina por uma tirosina é uma substituição conservadora. Em modalidades particulares, as substituições conservadoras nas sequências do DDpp resultam na ligação específica alterada ou não alterada do DDpp contendo a substituição para o alvo de interesse (por exemplo, BCMA, CD123, AFP ou AFP p26) ao qual o mesmo se liga. Numa modalidade, substituições conservadoras nas sequências do DDpp não anulam a ligação do DDpp contendo a substituição ao alvo de interesse ao qual se liga. Os métodos de identificação de substituições conservadoras e substituições não conservadoras de nucleotídeo e aminoácido que conferem, alteram ou mantêm afinidade de ligação seletiva são conhecidas na técnica (consultar, por exemplo, Brummell, Biochem. 32: 1180 a 1187 (1993); Kobayashi, Protein Eng. 12(10): 879-884 (1999); e Burks, PNAS 94: 412-417 (1997)).
[0168] Uma substituição de aminoácido “não conservadora” é uma em que um resíduo de aminoácido é substituído por outro resíduo de aminoácido que tem uma cadeia lateral dissimilar. Numa modalidade, as substituições não conservadoras nas sequências do DDpp resultam na ligação específica do DDpp contendo a substituição para o alvo de interesse (por exemplo, BCMA, CD123, AFP ou AFP p26) ao qual o mesmo se liga. Numa modalidade, substituições não conservadoras nas sequências do DDpp não anulam a ligação do DDpp contendo a substituição ao alvo de interesse ao qual se liga.
[0169] “Aminoácidos não naturais", “análogos de aminoácido” e “resíduos de aminoácido não padrão” são usados de modo intercambiável no presente documento. Os aminoácidos não naturais que podem ser substituídos num DDpp conforme fornecido no presente documento são conhecidos na técnica. Numa modalidade, o aminoácido não natural é 4-hidroxiprolina, que pode ser substituída por prolina; 5-hidroxilisina que pode ser substituída para lisina; 3-metil-histidina que pode ser substituída for histidina; homosserina que podem ser substituídas por serina; e ornitina que pode ser substituída por lisina. Os exemplos adicionais de aminoácidos não naturais que podem ser substituídos num DDpp aqui divulgado incluem, porém sem limitações, moléculas como: D-isômeros dos aminoácidos comuns, ácido 2,4- diaminobutírico, ácido alfa-amino isobutírico, ácido A-aminobutírico, Abu, ácido 2-amino butírico, gama-Abu, épsilon-Ahx, ácido 6-amino hexanoico, Aib, ácido 2-amino isobutírico, ácido 3-amino propiônico, ornitina, norleucina, norvalina, hidroxiprolina, sarcosina, citrulina, homocitrulina, ácido cisteico, t-butilglicina, t- butilalanina, fenilglicina, ciclo-hexilalanina, beta-alanina, lantionina, desidroalanina, ácido γ-aminobutírico, selenocisteína e pirrolisina fluoro- aminoácidos, aminoácidos de projeto como beta-metil aminoácidos, C alfa-metil aminoácidos e N alfa-metil aminoácidos ou combinações de aminoácidos não naturais. Aminoácidos não naturais adicionais podem incluir, por exemplo, ácido 4-amino butírico, ácido 4-amino-3-hidroxi-5-fenilpentanoico, ácido 4- amino-3-hidroxi-6-metil-heptanoico, 2-tienil alanina e/ou D-isômeros de aminoácidos. Conforme discutido no presente documento, em algumas modalidades, os aminoácidos não naturais ou análogos de aminoácido podem incluir deleção de um ou mais aminoácidos de uma sequência.
[0170] Os termos “polinucleotídeo” e “ácido nucleico”, usados de forma intercambiável, se referem a uma forma polimérica de nucleotídeos de qualquer comprimento, ribonucleotídeos ou desoxirribonucleotídeos. Estes termos incluem, porém sem limitações, DNA, RNA, cDNA (DNA complementar), mRNA (RNA mensageiro), rRNA (RNA ribossômico), shRNA (RNA em formato de grampo pequeno), snRNA (RNA nuclear pequeno), snoRNA (RNA nucleolar curto), miRNA (microRNA), DNA genômico, DNA sintético, RNA sintético e/ou tRNA.
[0171] O termo “DNA nu”, como usado no presente documento, se refere a DNA (por exemplo, DNA livre de histona) que codifica uma proteína como um DDpp (por exemplo, um CAR) aqui divulgado é um DNA que é clonado num vetor de expressão adequado em orientação apropriada para expressão (por exemplo, um plasmídeo). Os vetores virais que podem ser usados para portar e/ou expressar DNA que codifica o DDpp incluem, porém sem limitações, vetores lentivirais SIN, vetores retrovirais, vetores de vírus de espuma, vetores de adenovírus, vetores de vírus adenoassociado (AAV), vetores híbridos e/ou transposons de plasmídeo (por exemplo, sistema transposon Bela Adormecida) ou sistemas de vetores baseados em integrase. Outros vetores que podem ser usados em conexão com a produção e o uso de DDpp são descritos no presente documento ou, de outro modo, conhecidos na técnica.
[0172] Os termos “vetor”, “vetor de clonagem” e “vetor de expressão” como usados no presente documento se referem ao veículo pelo qual uma sequência de ácidos nucleicos (por exemplo, uma sequência de codificação de DDpp divulgada) pode ser mantida ou amplificada numa célula hospedeira (por exemplo, vetor de clonagem) ou introduzida numa célula hospedeira, de modo a transformar o hospedeiro e promover a expressão (por exemplo, transcrição e tradução) da sequência introduzida. Vetores incluem plasmídeos, fagos, vírus, etc.
[0173] Uma “célula hospedeira” inclui uma célula individual ou cultura celular que pode ser ou foi um recipiente de ácidos nucleicos que codificam um DDpp divulgado. As células hospedeiras incluem, porém sem limitações, partículas virais, fagomídeos, bactérias, leveduras, plantas, animais e células de mamíferos. As células hospedeiras incluem a progênie de uma célula hospedeira única, e a progênie pode não ser necessariamente idêntica por completo (em morfologia ou em complemento de DNA total) à célula progenitora original devido a mutação natural, acidental ou deliberada e/ou alteração. Uma célula hospedeira inclui células transfectadas ou infectadas in vivo, in vitro ou ex vivo com ácidos nucleicos que codificam um DDpp divulgado. Em alguns exemplos, a célula hospedeira é capaz de expressar e exibir um DDpp divulgado em sua superfície, como, por exemplo, em exibição de fago ou uma célula T de CAR. “Expressão” inclui transcrição e/ou tradução.
[0174] Como usado no presente documento, os termos “suporte sólido", “suporte", “matrizes", e “resinas” são usados de modo intercambiável e se referem, sem limitações, a qualquer coluna (ou material de coluna), microesfera, tubo de ensaio, placa de microtitulação, partícula sólida (por exemplo, agarose ou sefarose), microchip (por exemplo, silício, vidro de silício ou chip de ouro), ou membrana (por exemplo, membrana biológica ou de filtro) à qual um DDpp, anticorpo ou outra proteína pode ser fixada (por exemplo, acoplada, ligada ou aderida), direta ou indiretamente (por exemplo, através de outros intermediários de parceria de ligação como outros anticorpos ou Proteína A), ou em que um DDpp ou anticorpo pode ser embutido (por exemplo, através de um receptor ou canal). Os reagentes e técnicas para fixação de polipeptídeos a suportes sólidos (por exemplo, matrizes, resinas, plástico, etc.) são bem conhecidos na técnica. Os suportes sólidos adequados incluem, porém sem limitações, uma resina ou matriz cromatográfica (por exemplo, microesferas de agarose SEPHAROSE-4 FF), a parede ou piso de um poço numa placa de microtitulação de plástico, um biochip à base de sílica, poliacrilamida, agarose, sílica, nitrocelulose, papel, plástico, náilon, metal e combinações dos mesmos. O DDpp e outras composições podem ser fixados num material de suporte por uma associação não covalente ou por ligação covalente, usando reagentes e técnicas conhecidas na técnica. Numa modalidade, o DDpp é acoplado a um material cromatográfico usando um ligante.
[0175] Como usado no presente documento, os termos “farmaceuticamente aceitáveis” ou “fisiologicamente toleráveis” e suas variações gramaticais, dado que se referem a composições, transportadores, diluentes e reagentes, são utilizados indistintamente e significam que os materiais são capazes de administração a ou sobre um humano sem a produção de efeitos fisiológicos indesejáveis terapeuticamente proibitivos tais como náuseas, tontura, perturbação gástrica e similares.
[0176] Modular” significa o ajuste ou regulação de amplitude, frequência, grau ou atividade. Noutro aspecto relacionado, tal modulação pode ser modulada de forma positiva (por exemplo, um aumento na frequência, no grau ou atividade) ou modulada negativamente (por exemplo, uma diminuição na frequência, no grau ou atividade). Em algumas modalidades, a modulação numa direção positiva ou negativa é referenciada como em comparação com a função de célula, tecido, órgão antes da administração de um agente terapêutico. Em modalidades adicionais, a modulação numa direção positiva ou negativa é referenciada em relação a uma célula, tecido ou órgão saudável normal.
[0177] Uma “quantidade eficaz” de um DDpp como uma proteína de fusão de DDpp conforme fornecido no presente documento, é uma quantidade suficiente para executar um propósito especificamente declarado, como para gerar uma alteração observável no nível de uma ou mais atividades biológicas relacionadas ao alvo ao qual o DDpp (por exemplo, uma proteína de fusão de DDpp) se liga. Em certas modalidades, a alteração aumenta o nível de atividade de alvo. Em outras modalidades, a alteração diminui o nível de atividade de alvo. Uma “quantidade eficaz” pode ser determinada empiricamente e de uma maneira rotineira, em relação ao propósito afirmado. O termo “quantidade terapeuticamente eficaz” se refere a uma quantidade de um DDpp como uma proteína de fusão de DDpp, ou outro agente terapêutico eficaz para “tratar” (por exemplo, reduzir sintomas de) uma doença ou distúrbio num indivíduo (mamífero). O termo “quantidade terapeuticamente eficaz” também se refere a uma quantidade eficaz, em dosagens e por períodos de tempo necessários, para alcançar um resultado profilático desejado.
[0178] “Paciente”, “indivíduo”, “animal” e “mamífero” são usados de modo intercambiável e se referem a mamíferos como pacientes humanos e primatas não humanos, assim como animais experimentais como coelhos,
ratos e camundongos e outros animais. Animais incluem todos os vertebrados, por exemplo, mamíferos e não mamíferos, como galinhas, anfíbios e répteis. “Mamífero”, como usado no presente documento, se refere a qualquer membro da classe Mammalia, incluindo, sem limitações, seres humanos e primatas não humanos como chimpanzés e outras espécies de símios e de macaco; animais agrícolas como gado, ovelhas, porcos, cabras e cavalos; mamíferos domésticos como cachorros e gatos; animais de laboratório incluindo roedores como camundongos, ratos e cobaias e similares. Numa modalidade particular, o paciente é um ser humano. O termo não denota uma idade ou sexo particular. Assim, indivíduos adultos e recém-nascidos, assim como embriões e fetos, independentemente de ser macho ou fêmea, são destinados a serem abrangidos no escopo deste termo.
[0179] Os termos “tratar”, “tratamento” e “tratar”, como aqui utilizados, se referem tanto a um tratamento terapêutico quanto medidas profiláticas ou preventivas, em que o objetivo é prevenir ou desacelerar (diminuir ou atrasar) os sintomas, complicações ou indícios bioquímicos de uma doença, afecção ou distúrbio, aliviando os sintomas ou parando ou inibindo o desenvolvimento adicional da doença, afecção ou distúrbio. O tratamento pode ser profilático (para prevenir ou retardar o início da doença ou para prevenir a manifestação de sintomas clínicos ou subclínicos do mesmo) ou supressão terapêutica ou alívio dos sintomas após a manifestação da doença, afecção ou afecção patológica de distúrbio alvejado, prevenir a condição patológica ou buscar obter resultados benéficos, ou reduzir a probabilidade de o indivíduo desenvolver a afecção, mesmo se o tratamento for, por fim, malsucedido. Aqueles que precisam de tratamento incluem aqueles já com a afecção, bem como aqueles propensos a ter a afecção ou aqueles em quem a afecção deve ser evitada. O tratamento pode ser com uma proteína de fusão de DDpp sozinha ou em combinação com um agente terapêutico adicional.
[0180] “Câncer”, “tumor” ou “tumor maligno” são usados como termos sinônimos e se referem a qualquer um de uma série de doenças que se caracterizam por proliferação descontrolada anormal de células, a capacidade de células afetadas se espalharem localmente ou através da corrente sanguínea e sistema linfático para outras partes do corpo (metástase), bem como qualquer uma de inúmeras de característica estruturais e/ou características moleculares. “Tumor", conforme usado no presente documento, se refere a todo crescimento e proliferação celular neoplásticos, seja maligno ou benigno, e todas as células e tecidos cancerosos e pré-cancerosos. Um “tumor canceroso” ou “célula maligna” é entendida como uma célula que tem propriedades estruturais específicas, falta de diferenciação e capaz de invasão e metástase. Os cânceres que podem ser tratados usando proteínas de fusão de DDpp fornecidas no presente documento incluem tumores hematológicos, como leucemias e linfomas ou tumores sólidos. Em modalidades particulares, o câncer a ser tratado é uma leucemia ou um linfoma. Os tipos de cânceres a serem tratados com o DBDpp incluem, porém sem limitações, carcinoma, blastoma e sarcoma e certas malignâncias de leucemia ou linfoides, tumores benignos e malignos e malignâncias, por exemplo, sarcomas, carcinomas e melanomas. Os tipos de câncer e tumores que podem ser tratados usando DDpp incluem, sem limitações, câncer de mama, pulmão, cérebro, osso, fígado, rim, cólon, cabeça e pescoço, ovariano, hematopoiético (por exemplo, leucemia) e de próstata. Em algumas modalidades, o câncer e tumores que podem ser tratados usando DDpp incluem câncer de mama e câncer de ovário. Outros tipos de câncer e tumores que podem ser tratados usando anticorpos contendo DDpp são descritos no presente documento ou, de outro modo, conhecidos na técnica.
[0181] Os termos antígeno de tumor ou antígeno de câncer são usados de modo intercambiável no presente documento. Tumor e antígenos de câncer podem ser antígeno específico de tumor (TSA), antígeno específico de câncer (CSA) antígeno associado ao tumor (TAA) ou antígenos associados a câncer (CAA). Um TSA é um antígeno que é exclusivo às células de tumor e não ocorre em outras células no corpo. Um TAA é um antígeno que é encontrado tanto em tumor quanto em algumas células normais. Devido à natureza dinâmica de tumores, em alguns casos, as células de tumor podem expressar antígenos exclusivos em certos estágios, e em outros, também expressam antígenos que também são expressos em células não tumorígenas. Portanto, a inclusão de um certo marcador como um TAA não impede que seja considerado um TSA.
[0182] O termo “célula-alvo”, como usado no presente documento, se refere a uma célula ou células que são envolvidas numa doença e podem ser alvejadas por composições contendo DDpp. Outras células-alvo incluem qualquer célula num indivíduo (por exemplo, um ser humano ou animal) que pode ser alvejado pelo DDpp divulgado. A célula-alvo pode ser uma célula expressando ou superexpressando um alvo especificamente ligado por uma proteína de fusão de DDpp.
[0183] O termo “células efetoras” como usado no presente documento se refere a leucócitos que expressam um ou mais FcRs e realizam funções efetoras. Preferencialmente, as células expressam pelo menos Fc(RIII e realizam a função efetora de ADCC. Os exemplos de leucócitos humanos que mediam ADCC incluem células mononucleares de sangue periférico (PBMC), células exterminadoras naturais (NK), monócitos, células T citotóxicas e neutrófilos; com células PBMCs e NK sendo preferenciais em certas modalidades. As células efetoras podem ser isoladas de sua fonte nativa, por exemplo, de sangue ou PBMCs conforme descrito no presente documento ou, de outro modo, conhecido na técnica. Numa modalidade específica, as células efetoras são células efetoras humanas.
[0184] O termo “função efetora” se refere à função imune especializada de uma célula diferenciada. A função efetora de uma célula T, por exemplo, pode ser atividade citolítica ou atividade auxiliar incluindo a secreção de citocinas.
[0185] O termo “célula imune”, como usado no presente documento, se refere às células do sistema imune mamífero incluindo, porém sem limitações, células que apresentam antígeno, células B, basófilos, células T citotóxicas, células dendríticas, eosinófilos, granulócitos, células T auxiliares, leucócitos, linfócitos, macrófagos, mastócitos, células de memória, monócitos, células assassinas naturais, neutrófilos, fagócitos, células plasmáticas e células T.
[0186] Os termos “célula T” e “linfócito T” são intercambiáveis e utilizados aqui como sinônimos. Exemplos incluem, mas sem limitações, células T puras, células T de memória central, células T de memória efetora ou combinações das mesmas.
[0187] O termo “resposta imune”, como aqui utilizado, se refere a imunidades incluindo, mas, sem limitação, imunidade inata, a imunidade humoral, imunidade celular, imunidade, resposta inflamatória, imunidade adquirida (adaptativa), autoimunidade e/ou imunidade super-reativa.
[0188] O termo “transdução”, como aqui utilizado, se refere à introdução de um ácido nucleico estranho numa célula utilizando um vetor viral. “Transfecção” como usado no presente documento, se refere à introdução de um ácido nucleico estranho numa célula usando tecnologia de DNA recombinante. O termo “transformação” significa a introdução de uma sequência de ácidos nucleicos (DNA ou RNA) “estranhos” (por exemplo, extrínseco, extracelular ou, de outra maneira, não endógeno) a uma célula hospedeira, de modo que a célula hospedeira expresse o ácido nucleico introduzido para produzir uma substância desejada, como uma proteína ou uma enzima codificada pela sequência de codificação introduzida. A sequência de ácidos nucleicos introduzida também pode ser chamada de gene ou sequência “clonada” ou “externa”, pode incluir sequências reguladoras ou de controle, tais como sequências de partida, de paragem, promotoras, de sinal, de secreção ou outras sequências utilizadas pelo maquinário genético de uma célula. A sequência de ácidos nucleicos pode incluir sequências não funcionais ou sequências sem função conhecida. Uma célula hospedeira que recebe e expressa ácido nucleico introduzido (por exemplo, DNA ou RNA) foi “transformada” e é um “transformante” ou um “clone”. O DNA ou RNA introduzido numa célula hospedeira pode vir de qualquer fonte, incluindo células do mesmo gênero ou espécie que a célula hospedeira, ou células de um gênero ou espécie diferente ou podem ser de ocorrência não natural.
[0189] “Receptor de superfície celular” se refere a moléculas e complexos de moléculas capazes de receber um sinal e a transmissão de tal sinal através da membrana plasmática de uma célula. Um exemplo de um receptor de superfície celular fornecido no presente documento é um receptor de integrina ativada, por exemplo, um receptor de integrina αvβ3 ativada numa célula metastática. Tal como aqui utilizado, “receptor de superfície celular” também inclui uma molécula expressa numa superfície de célula que contém um DDpp capaz de ligar um alvo de interesse (por exemplo, BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP ou AFP p26). O termo “receptor” denota uma proteína associada à célula que se liga a, ou interage com uma molécula (por exemplo, um ligando) e media o efeito do aglutinante na célula. Em alguma modalidade, a molécula que interage com um receptor é uma molécula bioativa. Os receptores de superfície celular ligados à membrana são tipicamente caracterizados por uma estrutura de múltiplos domínios compreendendo um domínio de ligação a ligando extracelular, um domínio que abrange a membrana e um domínio efetor intracelular que é tipicamente envolvido em transdução de sinal.
[0190] O termo “CS1”, como aqui utilizado se refere a um receptor de célula NK de regulação das funções imunes que também é expresso em células B, células T, células dendríticas, células NK-T e monócitos. CS1 é superexpresso no mieloma múltiplo e foi alvejado com sucesso para o mieloma múltiplo de imunoterapia. Malaer & Mathew, Am J Cancer Res. 7(8): 1637-1641 (2017). CS1 também é conhecido como SLAM7, proteína 19A, CRACC e CD319. O termo “CS1” inclui variantes, isoformas, homólogos, ortólogos e parólogos. CS1 é uma proteína transmembranar com várias isoformas diferencialmente divididas. Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos de CS1 humano, compreendendo uma sequência de sinal N- terminal de resíduo de 22 aminoácidos (MAGSPTCLTLIYILWQLTGSAA, SEQ ID NO: 924) e um domínio extracelular compreendendo os 226 resíduos de N- terminal (SEQ ID NO: 925), tem no de Acesso ao Genbank NP_067004 (SEQ ID NO: 926). Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos de CS1 humano tem no de Acesso ao Genbank NP_001269517, NP_001269518, NP_001269519, NP_001269520, NP_001269521, NP_001269522, NP_001269523, NP_001269524 ou NP_001269525.
[0191] “Receptor de antígeno quimérico” ou “CAR” ou “CARs”, como usado no presente documento, se refere a um receptor geneticamente modificado, que enxerta uma especificidade de alvo ou antígeno numa célula (por exemplo, células T como células T virgens, células T de memória central, células T de memória efetora, células NK, células T NK ou combinação das mesmas). Os CARs também são conhecidos como receptores de célula T artificiais, receptores de célula T quiméricos ou imunorreceptores quiméricos. Polipeptídeos de Domínio D (DDpp)
[0192] Exceto se indicado de outro modo, a prática das composições e métodos divulgados emprega técnicas-padrão de biologia molecular (técnicas recombinantes incluindo, cultura de tecido e transformação de célula), microbiologia, biologia de célula, bioquímica e imunologia, que são abrangidos pela perícia da técnica. Tais técnicas são tipicamente realizadas de acordo com as especificações do fabricante ou como alcançado comumente usando ou modificando rotineiramente procedimentos conhecidos como, aqueles apresentados em Sambrook et al. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)); PCR Technology: Principles and Applications for DNA Amplification (ed. H. A. Erlich, Freeman Press, NY, N.Y., 1992); Oligonucleotide Synthesis (Gait, ed., 1984); Animal Cell Culture (Freshney, ed., 1987); Handbook of Experimental Immunology (Weir et al., eds.; Gene Transfer Vectors for
Mammalian Cells (Miller, ed., 1987); Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel., ed., 1987); PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications (Innis, ed., Academic Press, San Diego, Calif., 1990); Mattila, et al., Nucleic Acids Res. 19: 967 (1991); Eckert, et al., PCR Methods and Applications 1: 17 (1991); PCR (McPherson, ed., IRL Press, Oxford); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis, ed., 1994); Harlow, Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2a edição, 1988) e Kontermann, ed., “The Antibody Engineering Lab Manual” (Springer Verlag, Heidelberg/New York, 2000); Current Protocols in Immunology (Coligan, ed., 1991); The Immunoassay Handbook (Wild, ed., Stockton Press NY, 1994); e Methods of Immunological Analysis (Masseyeff., ed., Weinheim: VCH Verlags gesellschaft mbH, 1993); e Gennaro, et al. 2000, Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 20a edição. Lipincott Williams and Wilkins: Baltimore, Md., ou conforme descrito no presente documento. Exceto se definições específicas forem fornecidas, a nomenclatura utilizada em conexão com, e os procedimentos laboratoriais e técnicas de química analítica, química orgânica sintética e química medicinal e farmacêutica descritos no presente documento, são aqueles conhecidos e usados na técnica. Adicionalmente, as técnicas- padrão podem ser usadas para síntese química, análise química, produção recombinante, purificação, preparação farmacêutica, formulação, entrega e tratamento de pacientes.
[0193] De acordo com várias modalidades, a divulgação fornece um DDpp que liga especificamente um alvo de interesse selecionado a partir do grupo que consiste em BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP e AFP p26. Em algumas modalidades, um DD do DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 949 e 950. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um Domínio D (DD) selecionado a partir do grupo que consiste em: (a) um DD que se liga especificamente a BCMA e compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11 a 305 ou 306; (b) um DD que se liga especificamente a CD123 e compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 307 a 739 ou 740; (c) um DD que liga especificamente AFP ou um fragmento do mesmo, e compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 741 a 874 ou 886 a 895; (d) um DD que se liga especificamente a AFP p26 e compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 741 a 874 ou 886 a 895, (e) um DD que liga especificamente CS1 (SEQ ID NO: 925) ou um fragmento do mesmo, e compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 896 a 909 ou 910, (f) um DD que liga especificamente HER2 ou um fragmento do mesmo, e compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 911 a 949 ou 950. As proteínas que compreende, variantes de (a) a (f) que retêm a capacidade de ligar especificamente seus respectivos alvos também são fornecidas.
[0194] Em modalidades adicionais, um DD do DDpp é uma variante de uma sequência de referência de DD selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 949 e 950, que retém a capacidade de ligar especificamente o alvo do DD de referência. Em algumas modalidades, a sequência do DD variante compreende a sequência de aminoácidos de uma variante que tem pelo menos 75%, 80%, 85%, 87%, 89%, 90%, 92%, 94%, 96% ou 98% de identidade de sequência a uma sequência de DD de referência selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 949 e 950, e o DD variante retém a capacidade de ligar especificamente o alvo da sequência de DD de referência.
[0195] Em algumas modalidades, um DD do DDpp é uma variante de uma sequência de referência de DD de ligação de BCMA selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306, que retém a capacidade de ligar especificamente BCMA. Em algumas modalidades, a sequência do DD variante compreende a sequência de aminoácidos de uma variante que tem pelo menos 75%, 80%, 85%, 87%, 89%, 90%, 92%, 94%, 96% ou 98% de identidade de sequência a uma sequência de DD de referência selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306, e o DD variante retém a capacidade de ligar especificamente BCMA.
[0196] Em algumas modalidades, um DD do DDpp é uma variante de uma sequência de referência de DD de ligação de CD123 selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740, que retém a capacidade de ligar especificamente CD123. Em algumas modalidades, a sequência do DD variante compreende a sequência de aminoácidos de uma variante que tem pelo menos 75%, 80%, 85%, 87%, 89%, 90%, 92%, 94%, 96% ou 98% de identidade de sequência a uma sequência de DD de referência selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740, e o DD variante retém a capacidade de ligar especificamente CD123.
[0197] Em algumas modalidades, um DD do DDpp é uma variante de uma sequência de referência de DD de ligação de CS1 selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910, que retém a capacidade de ligar especificamente CS1. Em algumas modalidades, a sequência do DD variante compreende a sequência de aminoácidos de uma variante que tem pelo menos 75%, 80%, 85%, 87%, 89%, 90%, 92%, 94%, 96% ou 98% de identidade de sequência a uma sequência de DD de referência selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910 e o DD variante retém a capacidade de ligar especificamente CS1.
[0198] Em algumas modalidades, um DD do DDpp é uma variante de uma sequência de referência de DD de ligação de HER2 selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950, que retém a capacidade de ligar especificamente HER2. Em algumas modalidades, a sequência do DD variante compreende a sequência de aminoácidos de uma variante que tem pelo menos 75%, 80%, 85%, 87%, 89%, 90%, 92%, 94%, 96% ou 98% de identidade de sequência a uma sequência de DD de referência selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950 e o DD variante retém a capacidade de ligar especificamente HER2.
[0199] Em algumas modalidades, um DD do DDpp é uma variante de uma sequência de referência de DD de ligação de AFP selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895, que retém a capacidade de ligar especificamente AFP. Em algumas modalidades, a sequência do DD variante compreende a sequência de aminoácidos de uma variante que tem pelo menos 75%, 80%, 85%, 87%, 89%, 90%, 92%, 94%, 96% ou 98% de identidade de sequência a uma sequência de DD de referência selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895, e o DD variante retém a capacidade de ligar especificamente AFP.
[0200] Em algumas modalidades, um DD do DDpp é uma variante de uma sequência de referência de DD de ligação de AFP p26 selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 ou 886 a 895, que retém a capacidade de ligar especificamente AFP p26. Em algumas modalidades, a sequência do DD variante compreende a sequência de aminoácidos de uma variante que tem pelo menos 75%, 80%, 85%, 87%, 89%, 90%, 92%, 94%, 96% ou 98% de identidade de sequência a uma sequência de DD de referência selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 ou 886 a 895, e o DD variante retém a capacidade de ligar especificamente AFP p26.
[0201] Em modalidades particulares, a identidade entre uma sequência de DD variante (consulta) e uma sequência de DD de referência, também chamada de um alinhamento de sequência global, é determinada usando o programa de computador FASTDB baseado no algoritmo de Brutlag et al. Comp. App. Biosci. 6: 237-245 (1990). Os parâmetros preferenciais usados num alinhamento de aminoácido de FASTDB são: Matriz=PAM 0, k- tuplo=2, Penalidade de Incompatibilidade=1, Penalidade de Junção=20, Comprimento de Grupo de Recombinação=0, Pontuação de Corte=1, Tamanho de Janela=comprimento de sequência, Penalidade de Vão=5, Penalidade de Tamanho de Vão=0,05, Tamanho de Janela=500 ou o comprimento da sequência de aminoácidos do indivíduo, o que for mais curto. De acordo com esta modalidade, se a sequência de DD de referência for mais curta que a consulta de sequência de DD variante devido às deleções N- ou C-terminais, não devido às deleções internas, uma correção manual é produzida para os resultados para levar em consideração o fato de que o programa de FASTDB não considera os truncamentos N- e C-terminais da sequência de DD de referência ao calcular identidade percentual global. Para sequências de referência trincadas nos N- e C-terminais, em relação à sequência de consulta, a identidade percentual é corrigida pelo cálculo do número de resíduos da sequência de consulta que são N- e C-terminal da sequência de referência, que não são compatíveis/alinhados com um resíduo de indivíduo correspondente, como um percentual das bases totais da sequência de consulta. Uma determinação da possibilidade de um resíduo ser compatível/alinhada é determinada por resultados do alinhamento de sequência de FASTDB. Esta porcentagem é, então, subtraída da identidade percentual, calculada pelo programa de FASTDB acima usando os parâmetros especificados para alcançar numa pontuação de identidade percentual final. Esta pontuação de identidade percentual final é o que é usado para os propósitos desta modalidade.
[0202] Em algumas modalidades, o DDpp contém um DD variante contendo uma sequência de aminoácidos que difere de um DD de referência correspondente de SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950, em duas ou mais categorias de modificações de sequência (isto é, substituições, deleções, inserções e adições), e o DD variante retém a capacidade para ligar o alvo do respectivo DD de referência (por exemplo, BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP e AFP p26). Por exemplo, a sequência do DD variante pode incluir combinações de aminoácido deleções, inserções e substituições em comparação com a sequência da DD de referência. Em algumas modalidades, a sequência do DD variante contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais de 10, substituições de aminoácido em comparação com uma sequência de DD de referência de SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950. Em algumas modalidades, a sequência do DD variante contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais de 10, substituições conservadoras de aminoácido em comparação com uma sequência de DD de referência de SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950. Em algumas modalidades, a sequência do DD variante contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais de 10, substituições de aminoácido não conservadoras em comparação com uma sequência de DD de referência de SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950. Em algumas modalidades, a sequência do DD variante contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais de 10, substituições conservadoras e não conservadoras de aminoácido em comparação com uma sequência de DD de referência de SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950. Em algumas modalidades, a sequência do DD variante contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais de 10, deleções de aminoácido em comparação com uma sequência de DD de referência de SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950. Em algumas modalidades, a sequência do DD variante contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais de 10, inserções de aminoácido numa sequência de DD de referência de SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950 e o DD variante retém a capacidade de ligar o alvo do DD de referência. Adicionalmente, são fornecidos DDpps compreendendo um DD variante em que resíduos de aminoácido foram deletados do terminal amino, do terminal carbóxi, ou tanto do terminal amino quanto carbóxi de um DD de referência correspondente da SEQ ID NO: 866 e
867. Em algumas modalidades, a sequência do DD variante contém uma sequência com 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12, resíduos de aminoácido deletados do terminal amino de uma sequência de DD de referência de SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950 e o DD variante retém a capacidade de ligar o alvo do DD de referência. Em algumas modalidades, a sequência do DD variante contém uma sequência com 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12, resíduos de aminoácido deletados do terminal carbóxi de um DD de referência de SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950 e o DD variante retém a capacidade de ligar o alvo do DD de referência. Em algumas modalidades, a sequência da sequência de DD variante contém 1 a 5, 1 a 10 ou 1 a 15, resíduos de aminoácido deletados do terminal amino de uma sequência de DD de referência de SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950, a sequência de DD variante tem 1 a 5, 1 a 10 ou 1 a 15, resíduos de aminoácido deletados do terminal carbóxi da sequência de DD de referência, e o DD variante retém a capacidade de ligar o alvo do DD de referência. Proteínas de fusão de DDPP
[0203] A “proteína de fusão", “polipeptídeo quimérico", “proteína quimérica", “antígeno quimérico" e um DDpp que compreende/contém um polipeptídeo heterólogo, é um polipeptídeo compreendido de pelo menos dois polipeptídeos e opcionalmente um ligante para ligar operacionalmente os dois polipeptídeos num polipeptídeo contínuo produzido, por exemplo, por processos recombinantes. Os dois polipeptídeos podem ser operacionalmente fixados direta ou indiretamente.
[0204] Uma “proteína de fusão de DDpp” fornecida no presente documento compreende pelo menos um DDpp aqui divulgado que liga especificamente um alvo de interesse (por exemplo, BCMA (SEQ ID NO: 7), CD123 (SEQ ID NO: 8), CS1 (SEQ ID NO: 925), HER2 (SEQ ID NO: 927), AFP (SEQ ID NO: 9), AFP p26 (SEQ ID NO: 10) ou um fragmento do mesmo). Numa modalidade, a proteína de fusão de DDpp contém um DDpp.
[0205] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp é uma proteína solúvel que compreende um ou mais DDpp de ligação de alvo e uma proteína de p26 (por exemplo, que tem a sequência de SEQ ID NO: 10, 928, 929, 930, 931, 932, 933 ou 934). Constatou-se, no presente documento, que as proteínas de fusão contendo sequências de p26 têm uma meia-vida em soro surpreendentemente longa. Em algumas modalidades, a proteína de fusão solúvel de DDpp tem uma meia-vida em plasma in vivo de pelo menos 1 hora, pelo menos 2 horas, pelo menos 4 horas, pelo menos 8 horas, pelo menos 16 horas, pelo menos 32 horas, pelo menos 64 horas ou mais. Em algumas modalidades, a proteína de fusão solúvel tem uma meia-vida em plasma in vivo de pelo menos 1 hora, pelo menos 2 horas, pelo menos 4 horas, pelo menos 8 horas, pelo menos 16 horas, pelo menos 32 horas, pelo menos 64 horas, ou mais horas, 65 horas, ou 1 a 10 horas, 2 a 10 horas, 4 a 10 horas, 6 a 10 horas, ou 6 a 9 horas num camundongo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão solúvel de DDpp tem uma meia-vida em plasma in vivo de pelo menos
1 hora, pelo menos 2 horas, pelo menos 4 horas, pelo menos 8 horas, pelo menos 16 horas, pelo menos 32 horas, pelo menos 64 horas, ou mais horas, 65 horas, ou 1 a 10 horas, 2 a 10 horas, 4 a 10 horas, 6 a 10 horas ou 6 a 9 horas num ser humano.
[0206] Em algumas modalidades, a divulgação fornece um método para modificar a meia-vida in vivo (por exemplo, num camundongo ou ser humano) de uma proteína de fusão solúvel compreendendo uma proteína p26 (por exemplo, que tem a sequência de SEQ ID NO: 10, 928, 929, 930, 931, 932, 933 ou 934). Em algumas modalidades, a proteína de fusão p26 solúvel compreende um ou mais DDpp de ligação de alvo. Em algumas modalidades, a meia-vida da proteína p26 solúvel de fusão é aumentada ou diminuída substituindo-se ou deletando-se um ou mais resíduos de aminoácido normalmente encontrados na proteína p26 humana, ou através da inserção de um ou mais resíduos de aminoácido não encontrados normalmente na proteína p26 humana. Em outra modalidade, a sequência de p26 da proteína de fusão solúvel é modificada através de 1, 2, 3, 5, 5, 10 ou 1 a 20, 1 a 10, 3 a 10 ou 3 a 5, substituições de aminoácido (substituições conservadoras e/ou não conservadoras), deleções e/ou inserções, de modo a aumentar ou diminuir a meia-vida in vivo da proteína de fusão solúvel. Numa modalidade particular, o resíduo de aminoácido correspondente à glutamina (Gln, Q) na posição 217 de SEQ ID NO: 10 de p26 é substituída por outros resíduos de aminoácido. Numa modalidade adicional, a substituição é Gln217Pro. Em outra modalidade, a sequência de p26 da proteína de fusão solúvel é modificada através da deleção de 1 a 150, 1 a 100, 1 a 50, 1 a 25 ou 1 a 10 resíduos de aminoácido, de modo a aumentar ou diminuir a meia-vida in vivo da proteína de fusão solúvel. Em modalidades adicionais, a sequência de p26 da proteína de fusão solúvel é modificada através de 1, 2, 3, 5, 5, 10 ou 1 a 20, 1 a 10, 3 a 10 ou 3 a 5, substituições de aminoácido (substituições conservadoras e/ou não conservadoras), deleções e/ou inserções, de modo a aumentar ou diminuir a interação da proteína de fusão solúvel com FcRn.
PROTEÍNAS DE FUSÃO de DDPP MULTIMÉRICAS
[0207] Numa modalidade, a proteína de fusão de DDpp compreende mais de um DDpp, em que dois ou mais DDpps têm especificidades iguais ou diferentes. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp compreende uma repetição em tandem do DD igual ou diferente que permite uma proteína de fusão de DDpp para ligar múltiplos alvos e/ou epítopos de repetição ou epítopos diferentes no mesmo alvo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende pelo menos 2, 3, 4 ou 5 ou mais de 5 DDpps. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém 1 a 3, 1 a 4, 1 a 5 ou mais de 5 DDpps diferentes. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém pelo menos 2, 3, 4 ou 5 ou mais de 5 DDpps diferentes. Portanto, uma proteína de fusão de DDpp pode ser um DDpp monomérico (isto é, contendo um DDpp) ou um DDpp multimérico (isto é, contendo mais de um DDpp em tandem opcionalmente conectado de modo operacional por um ligante). Em algumas modalidades, o uso de DDpp multimérico fornece ligação de alvo intensificada (por exemplo, sinérgica). Em modalidades adicionais, o DDpp multimérico permite o alvejamento de mais de um alvo usando um único construto de DDpp (por exemplo, biespecífico, triespecífico, etc.). A ligação de dois ou mais DDpps idênticos resulta numa molécula multivalente que fornece vantagens distintas (por exemplo, avidez de ligação aumentada, agrupamento de alvo e ativação de receptor) em relação a composições monovalentes. A ligação de dois ou mais DDpps diferentes resulta numa molécula multivalente e multiespecífica que tem o potencial para ligar mais de um antígeno-alvo, independente ou simultaneamente.
[0208] A proteína de fusão de DDpp multimérico pode ser uma proteína de DDpp homomultimérico (isto é, contendo mais de um do mesmo DDpp em tandem opcionalmente conectado por ligante (ou ligantes) (por exemplo, homodímeros, homotrímeros, homotetrâmeros etc.) ou DDpp heteromultimérico (isto é, contendo dois ou mais DDpps, em que há pelo menos dois DDpps diferentes. O número de DDpp monomérico incluído numa composição multimérica pode variar, dependendo da modalidade, e pode ser definido, pelo menos em parte, pelo sistema de expressão em que o DDpp é produzida. Em algumas modalidades, entretanto, as proteínas de fusão podem compreender multímeros de cerca de 5 a cerca de 10 subunidades de DDpp, cerca de 10 a cerca de 15 subunidades, cerca de 15 a cerca de 20 subunidades, cerca de 20 a cerca de 25 subunidades, ou cerca de 25 a cerca de 30 subunidades (incluindo números entre aqueles listados, assim como pontos de extremidade). Ademais, múltiplos componentes em tandem de proteína de fusão de DDpp podem conter DDpps iguais ou diferentes. Em algumas fusões de DDpp, os DDpps estão presentes como um monômero, ou em homomultímeros ou heterômeros como, homodímeros ou heterodímeros, homotrímeros ou heterotrímeros, homotetrâmeros ou heterotetrâmeros.
[0209] Uma proteína de fusão de DDpp pode ser “monoespecífica” ou “multiespecífica". Uma proteína de fusão de DDpp que é “multiespecífica” (por exemplo, biespecífica, triespecífica ou de multiespecificidade maior) reconhece e se liga a dois ou mais epítopos diferentes presentes numa ou mais moléculas diferentes (por exemplo, proteínas, estruturas de suporte sólido, etc.).
[0210] Em algumas modalidades, dois ou mais DDs são fundidos em conjunto como um DDpp multivalente. O DD do DDpp multivalente pode ser igual ou diferente. Portanto, a divulgação fornece um DDpp homodimérico (isto é, a DDpp compreendendo dois DDs idênticos), a DDpp homomultiméricos (isto é, um DDpp compreendendo três ou mais DDs idênticos), um DDpp heterodimérico (isto é, um DDpp compreendendo dois DDs diferentes), e DDpp heteromultimérico (isto é, um DDpp compreendendo três ou mais DD, em que pelo menos dois dos DD são diferentes) compreendendo qualquer um dos DD descritos no presente documento, opcionalmente fixados por um ou mais ligantes.
[0211] Em algumas modalidades, dois ou mais DDs são ligados por um domínio de multimerização ou fixados por meio de ligação química, para gerar um complexo de DDs multivalentes. O DD do complexo de DDs multivalentes podem ser iguais ou diferentes. Portanto, a divulgação fornece um complexo de DDs homodiméricos (isto é, um complexo de DDs compreendendo dois DDs idênticos), um complexo de DDs homomultiméricos (isto é, um complexo de DDs compreendendo três ou mais DDs idênticos), um complexo de DDs heterodiméricos (isto é, um complexo de DDs compreendendo dois DD diferentes) e complexo de DDs heteromultiméricos (isto é, um complexo de DDs compreendendo três ou mais DD, em que pelo menos dois dos DDs são diferentes) compreendendo qualquer um dos DDs descritos no presente documento, opcionalmente fixados por um ou mais ligantes.
[0212] Numa modalidade, uma proteína de fusão de DDpp multiespecífica contém pelo menos dois DDpps que se ligam a pelo menos dois epítopos diferentes num único alvo de interesse (por exemplo, BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP ou AFP p26). Numa modalidade adicional, a fusão de DDpp é biespecífica e se liga especificamente a dois alvos diferentes expressos na superfície de dois tipos de célula diferentes. Numa modalidade, a proteína de fusão de DDpp biespecífica se liga especificamente a um alvo numa célula de câncer e um alvo numa célula efetora imune. Numa modalidade, a proteína de fusão de DDpp biespecífica liga especificamente um alvo expresso numa célula de câncer (por exemplo, BCMA, CS1, CD123 e CD19) e um alvo expresso na superfície de um linfócito T (por exemplo, CD3). Numa modalidade, a proteína de fusão de DDpp biespecífica liga especificamente BCMA e CS1.
[0213] Em modalidades adicionais, uma proteína de fusão de DDpp multiespecífica compreende pelo menos um DDpp que liga especificamente um epítopo num alvo de interesse e pelo menos um outro domínio ou sequência que confere função (por exemplo, um fragmento de anticorpo ou domínio como um scFv) que se liga especificamente a um epítopo diferente no mesmo alvo de interesse. Numa modalidade, uma proteína de fusão de DDpp multiespecífica compreende pelo menos um DDpp que se liga especificamente a um epítopo num alvo de interesse e pelo menos um domínio ou sequência que confere função por exemplo, um fragmento de anticorpo ou domínio (por exemplo, um scFv) que se liga especificamente a um epítopo num alvo de interesse diferente. Numa modalidade, a proteína de fusão de DDpp multiespecífica compreende pelo menos um DDpp que se liga especificamente a um epítopo num alvo de interesse e pelo menos um domínio ou sequência que se liga especificamente a um epítopo num alvo diferente na mesma célula. Em outras modalidades, uma proteína de fusão de DDpp compreende pelo menos um DDpp e pelo menos um outro DDpp ou sequência de domínio que confere função, por exemplo, um fragmento de anticorpo ou domínio que se liga especificamente a um suporte sólido.
[0214] Numa modalidade adicional, a fusão de DDpp multimérico compreendendo 2 ou mais DDpps é, por sua vez, fundida com outras proteínas heterólogas (ou seus subdomínios) e, ao fazê-lo, confere as propriedades multivalentes e multiespecíficas ao parceiro de fusão. Os exemplos de parceiros de fusão de um DDpp incluem porém sem limitações, anticorpos, subdomínios de anticorpo (por exemplo, domínios de scFv ou Fc), albumina do soro, subdomínios de albumina do soro, receptores de superfície celular, uma cadeia alfa de um receptor de célula T (TCR), uma cadeia beta de um receptor de célula T, subdomínios de receptor de superfície celular, peptídeos, etiquetas de peptídeo (por exemplo, FLAG ou myc), repetições de tipo III de fibronectina, -domínios z, polipeptídeos tipo elastina. O número e a localização de DDpp e suas respectivas posições dentro da proteína de fusão podem variar. Por exemplo, DDpp (ou DDpps) pode ser localizado num ou todos os terminais de um parceiro de fusão e/ou intercalado em subunidades heterólogas dentro do parceiro de fusão de DDpp.
[0215] Em modalidades adicionais, uma proteína de fusão de DDpp compreende um DDpp e uma sequência de polipeptídeo contendo um domínio adicional. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DDpp e um membro selecionado a partir de: um anticorpo, um fragmento de anticorpo (por exemplo, um domínio de ligação de antígeno ou porção do mesmo (por exemplo, um scFv), um domínio efetor ou porção do mesmo, um domínio de ligação de FcRn ou porção do mesmo, e um Fc ou uma porção do mesmo), uma proteína de soro (por exemplo, albumina ou uma porção da mesma), uma citocina, um fator de crescimento, um hormônio, um agente de imageamento, um agente de identificação e uma etiqueta de peptídeo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um domínio de Fc de uma imunoglobulina (por exemplo, um domínio de Fc humano) ou uma porção do mesmo. Em modalidades adicionais, o domínio de Fc é um domínio de Fc humano variante.
[0216] Em algumas modalidades, o DDpp é fundido a um polipeptídeo heterólogo. Em algumas modalidades, o polipeptídeo heterólogo compreende um anticorpo de comprimento total ou um fragmento de anticorpo. Em algumas modalidades, o DD é fundido a: o terminal amino de uma cadeia pesada de anticorpo de comprimento completo; o terminal amino de uma cadeia leve de anticorpo de comprimento completo; o terminal carboxila de uma cadeia pesada de anticorpo de comprimento completo; ou o terminal carboxila de uma cadeia leve de anticorpo de comprimento completo. Em outras modalidades, o DD é fundido a um fragmento de anticorpo que é um Fc. Em modalidades adicionais, o polipeptídeo heterólogo compreende um membro selecionado a partir do grupo que consiste em: (i) um domínio transmembranar; (ii) um domínio que se associa à membrana; (iii) albumina do soro humano ou um fragmento da mesma; (iv) AFP ou um fragmento do mesmo; (v) AFP p26 ou um fragmento do mesmo; (vi) o domínio extracelular de um receptor ou um fragmento do mesmo; e (vii) o domínio extracelular de um receptor intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, o DDpp contém um polipeptídeo heterólogo compreendendo o domínio extracelular, ou um fragmento de um domínio extracelular de um receptor de superfície celular.
[0217] Em algumas modalidades, o DDpp de uma proteína de fusão de DDpp é incorporado num complexo molecular de múltiplos domínios maior (por exemplo, uma proteína de fusão de DDpp monomérico ou multimérico) e, ao fazê-lo, confere os atributos funcionais do DDpp incorporado à proteína de fusão resultante. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DDpp e uma sequência de polipeptídeo de um anticorpo, um fragmento de anticorpo, uma proteína de soro (por exemplo, albumina do soro humano) ou fragmento de proteína de soro, ou um receptor de superfície celular, uma cadeia alfa de um receptor de célula T (TCR), uma cadeia beta de um receptor de célula T, citocina, fator de crescimento, hormônio ou enzima ou fragmento da mesma. A incorporação de DD em complexos de múltiplos domínios e/ou multifuncionais pode ser alcançada rotineiramente por meio de fusão recombinante a outro polipeptídeo, por ligação a outra porção química, e ligação química covalente a outro polipeptídeo (ou outro composto químico desejado) usando técnicas conhecidas na técnica. As proteínas de fusão de DDpp podem conter adicionalmente outros componentes opcionais como ligantes e outros componentes descritos no presente documento. Proteínas de fusão de DDpp COMO CARs
[0218] Além da incorporação de DD em proteínas de múltiplos domínios solúveis, a presente invenção fornece um meio pelo qual criar DDpp associado à célula, compreendido de pelo menos um DDpp projetado para conferir especificidade de ligação a uma proteína de fusão ligada à membrana. Os receptores de DDpp podem ser expressos por qualquer tipo de célula.
[0219] Numa modalidade, a proteína de fusão de receptor de DDpp compreende um receptor de antígeno quimérico (CAR), ou DDpp-CAR, que compreende: um domínio de alvejamento extracelular e um domínio transmembranar. Em outra modalidade, o DDpp-CAR é composto por um domínio de alvejamento extracelular, um domínio transmembranar e um domínio citoplasmático, em que o domínio citoplasmático compreende o domínio de sinalização.
Numa modalidade adicional, o domínio extracelular de DDpp-CAR compreende um ou mais DDpps, em que cada DDpp constitui um domínio de ligação específico com as especificidades iguais ou diferentes.
Em algumas modalidades, o domínio específico de alvo é direcionado a um (ou mais) dentre antígenos de tumor ou câncer aqui divulgados, como BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP e AFP p26, como exemplos não limitantes.
Numa modalidade, o domínio intracelular (por exemplo, o domínio citoplasmático) do DDpp-CAR compreende o domínio intracelular de cadeia zeta de CD3. Em outra modalidade, o domínio de sinalização intracelular do DDpp é compreendido de parte do domínio intracelular da cadeia zeta de CD3. Numa modalidade adicional, o domínio intracelular do DDpp-CAR compreende o domínio intracelular da cadeia zeta de CD3 e uma região de sinalização coestimulante.
A região de sinalização coestimulante se refere a uma porção do DDpp-CAR compreendendo todo ou parte do domínio intracelular de uma molécula coestimulante.
As moléculas coestimulantes são moléculas de superfície celular diferentes dos receptores de antígenos ou seus ligantes que são necessários para uma resposta eficaz de linfócitos ao antígeno.
As moléculas coestimulantes e porções destas moléculas que são capazes de conferir propriedades coestimulantes a um AR são conhecidas na técnica e podem ser rotineiramente incorporadas ao DDpp-CAR.
Além disto, os truncamentos ou a mutação destes domínios coestimulantes e de sinalização intracelular pode ser incorporada para intensificar ou reduzir adicionalmente a sinalização de receptor.
Em modalidades preferenciais, uma célula T é geneticamente modificada para expressar de modo estável um DDpp-CAR.
Em tais modalidades, o domínio citoplasmático do DDpp-CAR pode ser projetado para compreender o domínio de sinalização de CD28 e/ou 41BB por si só ou ser combinado com qualquer outro domínio (ou domínios) citoplasmático desejado útil no contexto das modalidades divulgadas.
Numa modalidade, o domínio citoplasmático do DDpp-CAR pode ser projetado para compreender adicionalmente o domínio de sinalização de CD3-zeta.
Numa modalidade, o
DDpp-CAR compreende um domínio de alvejamento extracelular, um ligante de proteína extracelular com um domínio transmembranar que passa através da membrana celular (como encontrado nas células T ou células NK), e um domínio citoplasmático, opcionalmente compreendendo múltiplos módulos de sinalização. Em algumas modalidades, o DDpp-CAR também pode compreender uma etiqueta de epítopo. Em algumas modalidades, o domínio citoplasmático do DDpp-CAR pode incluir, porém sem limitações, módulos de sinalização de CD3-zeta, 41BB e CD28 e combinações dos mesmos.
[0220] Em modalidades adicionais, a divulgação fornece um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que o CAR inclui um domínio de alvejamento compreendendo um DDpp aqui divulgado, um domínio transmembranar e um domínio de sinalização intracelular. Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intracelular é selecionado a partir do grupo que consiste num domínio zeta de CD3 humano, domínio de 41BB, um domínio de CD28 e/ou qualquer combinação dos mesmos. Dependendo da modalidade, a região de sinalização coestimulante pode compreender, por exemplo, o domínio intracelular de uma molécula coestimulante selecionada a partir do grupo que consiste em CD27, CD28, 4lBB, OX40, CD30, CD40, PD1, antígeno 1 associado à função de linfócito (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7H3, um ligando que se liga especificamente com CD83, e qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o domínio de alvejamento do CAR compreende uma pluralidade de domínios de ligação (por exemplo, DDs ou um ou mais DD e um scFv) que incluem um polipeptídeo de ligação de alvo adicional. Os ácidos nucleicos que codificam CARs que incluem os polipeptídeos de ligação de alvo como parte (ou a totalidade) da região de alvejamento também são fornecidos.
[0221] A divulgação também fornece células compreendendo uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um CAR, em que o CAR compreende um domínio de ligação de antígeno constituído por, pelo menos em parte, um DDpp divulgado que liga um alvo de interesse (por exemplo,
BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP e AFP p26), um domínio transmembranar e um domínio de sinalização. Em algumas modalidades, o CAR se liga especificamente a um antígeno de tumor (e, portanto, funciona para entregar a célula que expressa o CAR ao tumor. Em algumas modalidades, o antígeno de tumor é associado a uma malignância hematológica. Em algumas modalidades, o antígeno de tumor é BCMA. Em algumas modalidades, o antígeno de tumor é CD123. Em algumas modalidades, o antígeno de tumor é CS1. Em modalidades adicionais, o antígeno de tumor é associado a um tumor sólido. Em algumas modalidades, o antígeno de tumor é HER2. Em algumas modalidades, tanto o tumor sólido quanto o hematológico são alvejados. Em algumas modalidades, a célula expressando o CAR é uma célula T, uma célula assassina natural (NK) ou outro tipo de célula imune. Em algumas modalidades, a célula expressando o CAR (seja célula T, célula NK ou outro tipo de célula) exibe uma imunidade antitumor quando o polipeptídeo se liga ao seu antígeno de tumor correspondente.
DOMÍNIO EXTRACELULAR
[0222] Dependendo do antígeno que se deseja alvejar, o DDpp- CAR pode ser geneticamente modificado para incluir um DDpp de ligação de antígeno que é específico ao alvo de antígeno desejado. Por exemplo, se BCMA for o antígeno desejado que deve ser alvejado, um ou mais DDpp de ligação de BCMA podem ser incorporados no domínio de ligação específico de alvo do DDpp-CAR. Ademais, o DDpp-CAR pode incluir mais de um DDpp, conferindo multiespecificidade ou multivalência ao DDpp-CAR. Em algumas modalidades, o DDpp-CAR compreende um DDpp de ligação de BCMA. Em algumas modalidades, o DDpp-CAR compreende um DDpp de ligação de CS1. Em algumas modalidades, o DDpp-CAR compreende um DDpp de ligação de BCMA e um DDpp de ligação de CS1.
[0223] A escolha do DDpp incorporado ao domínio extracelular do receptor de DDpp (por exemplo, DDpp-CAR) depende da identidade da célula ou células a serem alvejadas. Por exemplo, um DDpp-CAR pode se ligar especificamente às proteínas de superfície celular como um receptor na mesma célula ou em outra célula. Em outras modalidades, o DDpp-CAR se liga especificamente a uma molécula solúvel, como uma imunoglobulina. Em outras modalidades, os alvos de interesse ligados pelo DDpp-CAR incluem aqueles associados a infecções, doenças e distúrbios virais, bacterianos e parasitários do sistema imune (por exemplo, doença autoimune).
[0224] Em outras modalidades, o DDpp-CAR pode ser escolhido para reconhecer um ligando que atua como um marcador de superfície celular em células-alvo associadas a um câncer. Um DDpp-CAR pode, em algumas modalidades, alvejar e ligar um antígeno de tumor (por exemplo, um TAA ou outro antígeno de tumor descrito no presente documento ou, de outro modo, conhecido na técnica. Consequentemente, são fornecidos, no presente documento, métodos para criar DDpp-CAR, seu uso na criação de células quiméricas como, células T e células assassinas naturais humanas e o uso destas células T quiméricas na imunoterapia adotiva.
[0225] No contexto fornecido no presente documento, “antígeno de tumor” se refere a antígenos que são comuns a distúrbios hiperproliferativos específicos como câncer. Os antígenos de tumor que podem ser especificamente ligados por um DDpp num DDpp-CAR são aqui divulgados. Numa modalidade, um DDpp num DDpp-CAR liga especificamente um antígeno específico de tumor (TSA) ou um antígeno associado ao tumor (TAA). Um TSA é exclusivo às células de tumor e não ocorre em outras células no corpo. Um antígeno associado ao TAA não é exclusivo para uma célula de tumor e, em vez disto, também é expresso numa célula normal sob condições que falham ao induzir um estado de tolerância imunológica ao antígeno. A expressão do antígeno sobre o tumor pode ocorrer sob condições que possibilitam que o sistema imune responda ao antígeno. Os TAAs podem ser antígenos que são expressos em células normais durante o desenvolvimento fetal, quando o sistema imune é imaturo e incapaz de responder ou, podem ser antígenos que são normalmente presentes em níveis extremamente baixos em células normais, porém, que são expressos em níveis muito superiores em células de tumor.
[0226] Em algumas modalidades, um DDpp na porção da porção química de ligação de antígeno de um DDpp-CAR liga especificamente BCMA, CS1, HER2 ou CD123. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente uma proteína de BCMA que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 7. Em modalidades adicionais, o DDpp liga especificamente BCMA e compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente uma proteína de CD123 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 8. Em modalidades adicionais, o DDpp liga especificamente CD123 e compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente uma proteína de CS1 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 925. Em modalidades adicionais, o DDpp liga especificamente CS1 e compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente um CS1 e BCMA. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente uma proteína de HER2 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 927. Em modalidades adicionais, o DDpp liga especificamente HER2 e compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em modalidades adicionais, a porção da porção química de ligação de antígeno do DDpp-CAR liga adicionalmente um alvo selecionado a partir de: HVEM, BTLA, DR3, CD19, CD20 e CD22.
[0227] Numa modalidade, um DDpp num DDpp-CAR liga especificamente um antígeno de tumor associado a um tumor maligno. Numa modalidade, um DDpp de um DDpp-CAR se liga a um antígeno selecionado a partir de: uma imunoglobulina idiotípica específica de linfoma de célula B; um antígeno de diferenciação de célula B como CD19, CD20 e CD37; TSLPR e IL7R em células mieloides, uma proteína gp96 de choque de calor em células de mieloma múltiplo.
[0228] Em algumas modalidades, um DDpp na porção da porção química de ligação de antígeno de um DDpp-CAR liga especificamente AFP, AFP p26, ou um fragmento dos mesmos. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente uma proteína de AFP que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 9 ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, o DDpp liga especificamente uma proteína de AFP p26 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 10 ou um fragmento do mesmo. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende especificamente uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, a porção da porção química de ligação de antígeno do DDpp- CAR liga adicionalmente um antígeno de tumor. Em modalidades adicionais, a porção da porção química de ligação de antígeno do DDpp-CAR liga adicionalmente um alvo selecionado a partir de: BCMA, CD123, CS1, HER2, HVEM, BTLA, DR3, CD19, CD20 e CD22.
DOMÍNIO TRANSMEMBRANAR
[0229] “Domínio transmembranar” (TMD), como usado no presente documento, se refere à região de uma proteína de fusão de DDpp expressa na superfície celular, como um DDpp-CAR, que cruza a membrana plasmática. Em algumas modalidades, o domínio transmembranar do DDpp- CAR é a região transmembranar de uma proteína transmembranar (por exemplo, proteínas transmembranares de Tipo I), uma sequência hidrofóbica artificial ou uma combinação das mesmas. Outros domínios transmembranares serão evidentes àqueles versados na técnica e podem ser usados em conexão com modalidades alternativas fornecidas no presente documento.
[0230] O receptor de DDpp (por exemplo, DDpp-CAR) pode ser projetado para conter um domínio transmembranar que é fundido ao domínio extracelular do receptor de DDpp. Conforme descrito acima, a fusão dos domínios extracelulares e transmembranares pode ser alcançada com ou sem um ligante. Numa modalidade, utiliza-se o domínio transmembranar que é naturalmente associado a um dos domínios no DDpp-CAR. Numa modalidade específica, o domínio transmembranar no DDpp-CAR é o domínio transmembranar de CD8. Em alguns casos, o domínio transmembranar do DDpp-CAR compreende o domínio de articulação de CD8. Em algumas modalidades, o domínio transmembranar deve ser selecionado ou modificado por substituição de aminoácido para promover ou inibir a associação com outras proteínas de membrana de superfície.
[0231] O domínio transmembranar pode ser derivado de uma fonte natural ou sintética. Onde a fonte for natural, o domínio pode ser derivado de qualquer proteína ligada à membrana ou transmembranar. As regiões transmembranares de uso particular para os propósitos no presente documento podem ser derivadas de (isto é, compreendem pelo menos a região (ou regiões transmembranar de) um membro selecionado a partir do grupo: a cadeia alfa, beta ou zeta do receptor de célula T; CD28, CD3 épsilon, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 e CD154. Alternativamente, o domínio transmembranar pode ser sintético, caso em que o domínio transmembranar de DDpp-CAR compreenderá predominantemente resíduos hidrofóbicos como leucina e valina. Em modalidades adicionais, o domínio transmembranar compreende o tripleto de fenilalanina, triptofano e valina, em cada extremidade de um domínio transmembranar sintético.
[0232] “Domínio de espaçador extracelular” (ESD), como usado no presente documento, se refere à região hidrofílica que há entre a região de alvejamento específica de antígeno e o domínio transmembranar. Em algumas modalidades, o DDpp-CAR compreende um domínio espaçador extracelular. Em outras modalidades, o DDpp-CAR não compreende um domínio espaçador extracelular. Os domínios espaçadores extracelulares incluem, porém sem limitações, fragmentos de Fc de anticorpos ou fragmentos ou derivados dos mesmos, regiões de articulação de anticorpos ou fragmentos ou derivados dos mesmos, regiões de CH2 de anticorpos, regiões de CH3 de anticorpos, sequências espaçadoras artificiais ou combinações dos mesmos. Os exemplos adicionais de domínios espaçadores extracelulares incluem, porém sem limitações, articulação de CD8a e espaçadores artificiais produzidos a partir de polipeptídeos que podem ser tão pequenos quanto, por exemplo, domínios de Gly3 ou CHI e CH3 de IgGs (como IgG4 humana). Em algumas modalidades, o domínio espaçador extracelular é qualquer um ou mais dentre (i) uma articulação, regiões de CH2 e CH3 de IgG4, (ii) uma região de articulação de IgG4, (iii) uma articulação e CH2 de IgG4, (iv) uma região de articulação de CD8a, (v) uma articulação, regiões de CH2 e CH3 de IgGl, (vi) uma região de articulação de IgGl ou (vi) uma articulação e CH2 região de IgGl. Outros domínios espaçadores extracelulares serão evidentes àqueles versados na técnica e podem ser usados em conexão com modalidades alternativas, fornecidas no presente documento.
[0233] Em algumas modalidades, um ligante de oligopeptídeo ou polipeptídeo curto, de cerca de 1 a 100 aminoácidos de comprimento, é usado para ligar qualquer um dos domínios de um DDpp-CAR. Os ligantes podem ser compostos por resíduos flexíveis como glicina e serina (ou qualquer outro aminoácido), de modo que os domínios de proteína adjacentes sejam livres para se moverem, um em relação ao outro. A composições de sequência de aminoácidos do ligante pode ser selecionada para minimizar a imunogenicidade potencial do DDpp-CAR ou proteína de fusão de DDpp. Os ligantes mais longos podem ser usados quando é desejável assegurar que dois domínios adjacentes não interfiram estericamente um com o outro. Em algumas modalidades, preferencialmente entre 2 e 10 aminoácidos de comprimento se forma a ligação entre o domínio transmembranar e o domínio citoplasmático de sinalização do DDpp-CAR. Em modalidades adicionais, o ligante tem entre 10 e 15 aminoácidos de comprimento, ou entre 15 e 20, ou entre 20 e 30, ou entre 30 e 60, ou entre 60 e 100 aminoácidos de comprimento (ou qualquer faixa entre aquelas listadas). Em modalidades adicionais, o ligante é uma sequência de dupleto de glicina-serina. As modalidades adicionais empregam um fragmento da região de articulação derivado de uma cadeia alfa de CD8 de glicoproteína de superfície de célula T humana (por exemplo, que varia da cadeia alfa de CD8 das posições de aminoácido 138 a 182; número de acesso de Swiss-Prot P01732). As modalidades adicionais empregam um fragmento da região de articulação de CD8 que foi adicionalmente modificado, através da substituição de aminoácido, para aprimorar a função de expressão ou imunogenicidade. As modalidades adicionais empregam um fragmento da região extracelular derivada da CD28 humana. As modalidades adicionais empregam um fragmento da região extracelular de CD28 que foi adicionalmente modificado, através da substituição de aminoácido, para aprimorar a função de expressão ou imunogenicidade.
DOMÍNIO INTRACELULAR
[0234] “Domínio de sinalização intracelular” (ISD) ou “domínio citoplasmático”, como usado no presente documento, se refere à porção do DDpp-CAR que transduz o sinal de função efetora e direciona a célula a realizar sua função especializada. O domínio citoplasmático (isto é, domínio de sinalização intracelular) de um DDpp-CAR é responsável pela ativação de pelo menos uma das funções efetoras normais de uma célula imune geneticamente modificada para expressar um DDpp-CAR. O termo “função efetora” se refere a uma função especializada de uma célula. A função efetora de uma célula T, por exemplo, inclui atividade citolítica e atividade auxiliar incluindo a secreção de citocinas. Portanto, o termo “domínio de sinalização intracelular” se refere à porção de uma proteína de DDpp-CAR que transduz o sinal de função efetora e direciona a célula a realizar uma função especializada. Embora tipicamente todo o domínio de sinalização intracelular correspondente a um receptor de ocorrência natural possa ser empregado, em muitos casos, não é necessário usar a cadeia inteira. Ao ponto em que uma porção truncada do domínio de sinalização intracelular é usada, tal porção truncada pode ser usada no lugar da cadeia intacta, desde que a mesma transduza o sinal de função efetora. O termo domínio de sinalização intracelular se destina, assim, a incluir qualquer porção truncada do domínio de sinalização intracelular suficiente para transduzir o sinal de função efetora. Numa modalidade, um domínio de sinalização intracelular no DDpp-CAR inclui as sequências citoplasmáticas do receptor de célula T (TCR) e também a sequência de correceptores que atuam em conjunto para iniciar a transdução de sinal após engate de receptor de antígeno ou qualquer derivado ou variante destas sequências que tenha capacidade funcional. Os exemplos de domínios que transduzem um sinal de função efetora incluem, porém sem limitação, a cadeia ζ do complexo de receptor de célula T ou qualquer um de seus homólogos (por exemplo, cadeia η, cadeias FcsRly e β, cadeia MB 1 (Iga), cadeia B29 (Ig), etc.), cadeia CD3 zeta humana, polipeptídeos CD3 (Δ, δ e ε), tirosina quinases da família syk (Syk, ZAP 70, etc.), tirosina quinases da família src (Lck, Fyn, Lyn, etc.) e outras moléculas envolvidas na transdução de célula T, tal como CD2, CD5 e CD28.
[0235] Sabe-se que os sinais gerados através do TCR sozinho são insuficientes para a ativação total da célula T e que um sinal secundário ou coestimulante também é necessário. Portanto, é possível dizer que a ativação de célula T é mediada por duas classes distintas de sequência de sinalização citoplasmática: aquelas que iniciam a ativação primária dependente de antígeno através do TCR (sequências de sinalização citoplasmática primária) e aquelas que atuam de uma maneira independente de antígeno para fornecer um sinal secundário ou coestimulante (sequências de sinalização citoplasmática secundária).
[0236] As sequências de sinalização citoplasmática primária regulam a ativação primária do complexo de TCR de uma forma estimulante ou de uma forma inibitória. As sequências de sinalização citoplasmática primária que atuam de uma maneira estimulante podem conter motivos de sinalização que são conhecidos como motivos de ativação com base em tirosina de imunorreceptor (ITAMs).
[0237] Os exemplos de ITAM contendo sequências de sinalização citoplasmática primária que são de uso particular nas modalidades fornecidas incluem aqueles derivados de TCR zeta, FcR gama, FcR beta, CD3 gama, CD3 delta, CD3 épsilon, CD22, CD79a, CD79b e CD66d. É particularmente preferencial que a molécula de sinalização citoplasmática no CAR compreenda uma sequência de sinalização citoplasmática derivada de CD3 zeta.
[0238] “Domínio coestimulante” (CSD), como usado no presente documento, se refere à porção de um CAR ou DDpp-CAR que intensifica a proliferação, sobrevivência e/ou desenvolvimento de células de memória. O DDpp-CAR pode compreender um ou mais domínios coestimulantes. Cada domínio coestimulante compreende o domínio coestimulante de qualquer um ou mais dentre, por exemplo, um membro da superfamília de TNFR, selecionado a partir de CD28, CD137 (4-lBB), CD134 (OX40), Dap10, CD27, CD2, CD5, ICAM-1, LFA-1(CD1 la/CD18), Lck, TNFR-I, TNFR-II, Fas, CD30 e CD40 ou uma combinação dos mesmos. Outros domínios coestimulantes (por exemplo, de outras proteínas) serão evidentes àqueles versados na técnica e podem ser usados em conexão com modalidades alternativas englobadas pela divulgação.
[0239] Numa modalidade preferencial, o domínio citoplasmático de um DDpp-CAR compreende o domínio de sinalização de CD3-zeta por si só ou combinado com qualquer outro domínio (ou domínios) citoplasmático desejado útil no contexto do DDpp-CAR. Por exemplo, o domínio citoplasmático do DDpp-CAR pode compreender uma porção de cadeia zeta de CD3 e uma região de sinalização coestimulante. A região de sinalização coestimulante se refere a uma porção do CAR compreendendo o domínio intracelular de uma molécula coestimulante. Uma molécula coestimulante é uma molécula de superfície celular diferente de um receptor de antígeno ou seus ligantes, que é necessária para uma resposta eficaz de linfócitos a um antígeno. Os exemplos de tais moléculas incluem CD27, CD28, 41BB (CD 137), OX40, CD30, CD40, PD1, ICOS, antígeno 1 associado à função de linfócito (LFA1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7H3, TIM1 e LAG3.
[0240] Os ligantes de polipeptídeo podem ser posicionados entre elementos adjacentes do DDpp-CAR. Por exemplo, ligantes podem ser posicionados entre DDpps adjacentes ou entre DDpp e o domínio transmembranar ou entre o domínio transmembranar e o domínio citoplasmático ou entre domínios citoplasmáticos adjacentes. As sequências de sinalização citoplasmáticas dentro da porção de sinalização citoplasmática do DDpp-CAR podem ser ligadas uma à outra numa ordem aleatória ou especificada. Opcionalmente, um ligante curto, de preferência, entre 2 e 10 aminoácidos de comprimento pode formar a ligação. Um dupleto glicina-serina proporciona um ligante particularmente adequado.
[0241] Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp é um receptor de antígeno quimérico (CAR) que compreende um domínio de ligação de alvo compreendendo um DD aqui revelado (por exemplo, um DD compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11 a 949 ou 950). Em algumas modalidades, o DD liga BCMA e compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em algumas modalidades, o DD liga CD123 e compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307-739 e 740. Em algumas modalidades, o DD liga CS1 e compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896-909 e 910. Em algumas modalidades, o DD liga HER2 e compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911-949 e 950. Em algumas modalidades, o DD liga AFP e compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, o DD liga AFP p26 e compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, o CAR compreende um domínio de ligação de alvo, um domínio transmembranar, e um domínio de sinalização intracelular.
Em algumas modalidades, o domínio transmembranar de CAR compreende um domínio transmembranar de 41BB ou CD28. Em algumas modalidades, o CAR compreende um domínio de sinalização intracelular selecionado a partir do grupo que consiste num domínio de uma cadeia alfa, beta ou zeta de receptor de célula T humana; um domínio de 41BB humano; um domínio de CD28 humano; e qualquer combinação dos mesmos.
Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intracelular de CAR compreende o domínio intracelular de uma molécula coestimulante selecionada a partir do grupo que consiste em CD27, CD28, 4lBB, OX40, CD30, CD40, PD1, antígeno 1 associado à função de linfócito (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, um ligando que se liga especificamente com CD83, e qualquer combinação dos mesmos.
Em algumas modalidades, o CAR compreende adicionalmente um segundo domínio de ligação de alvo que tem um alvo igual ou diferente do domínio de ligação de alvo de DD.
Em algumas modalidades, o CAR compreende um primeiro domínio de ligação de alvo que liga CS1 e um segundo domínio de ligação de alvo que liga BCMA.
Em algumas modalidades, o CAR é expresso numa célula imune.
Em algumas modalidades, a célula imune é uma célula T (célula T de CAR) ou uma célula assassina natural (NK) (célula NK de CAR). Em algumas modalidades, o CAR é associado a um lipossomo.
Em algumas modalidades, o CAR compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DD e/ou outros domínios de ligação (por exemplo, scFv) que ligam especificamente um alvo de interesse (por exemplo, BCMA, CS1 ou CD123) expresso na superfície da célula de câncer.
Em modalidades adicionais, o CAR compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DD ou outros domínios de ligação (por exemplo, scFv) que ligam especificamente um segundo alvo diferente de interesse, expresso na superfície da célula de câncer.
Em modalidades adicionais, o CAR administrado compreende adicionalmente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DD ou outros domínios de ligação (por exemplo, scFv) que liga especificamente um segundo alvo de interesse expresso por uma segunda célula de câncer diferente ou uma célula endotelial vascular. Proteínas de fusão de DDpp adicionais
[0242] Em algumas modalidades, o DDpp contém um polipeptídeo heterólogo compreendendo um fragmento que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 aminoácidos de um domínio extracelular, de um receptor de superfície celular. Em algumas modalidades, o DDpp contém um polipeptídeo heterólogo que compreende o domínio extracelular, ou um fragmento de um domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7) ou CD123 (SEQ ID NO: 8). Em algumas modalidades, o DDpp contém um polipeptídeo heterólogo que compreende o domínio extracelular, ou um fragmento de um domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7) ou CD123 (SEQ ID NO: 8) ou CS1 (SEQ ID NO: 925). Em algumas modalidades, o DDpp contém um polipeptídeo heterólogo que compreende o domínio extracelular, ou um fragmento de um domínio extracelular, de um receptor selecionado a partir do grupo que consiste em: CD19, CD20, CD22, HVEM, BTLA, DR3, CD37; TSLPR, IL7R e gp96.
[0243] Em algumas modalidades, a proteína contém um polipeptídeo heterólogo que compreende uma proteína de soro ou um fragmento antigênico de uma proteína de soro (por exemplo, AFP e AFP p26). Em algumas modalidades, o DDpp contém um polipeptídeo heterólogo compreendendo um fragmento que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 aminoácidos de uma proteína de soro. Em algumas modalidades, a proteína contém um polipeptídeo heterólogo que compreende uma proteína intracelular ou uma porção antigênica de uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear). Em algumas modalidades, o DDpp contém um polipeptídeo heterólogo compreendendo um fragmento que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a
100 ou 10 a 50 aminoácidos de uma proteína intracelular. Em algumas modalidades, o DDpp contém um polipeptídeo heterólogo que tem a sequência de SEQ ID NO: 10, 928, 929, 930, 931, 932, 933 ou 934.
[0244] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp liga especificamente BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP e/ou AFP p26, e liga adicionalmente um ou mais alvos de interesse adicionais. Os alvos de interesse especificamente ligados por uma proteína de fusão de DDpp podem ser qualquer molécula para a qual é desejado que um DDpp se ligue. Por exemplo, os alvos especificamente ligados pela proteína de fusão de DDpp podem ser BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP e/ou AFP p26, e adicionalmente qualquer alvo adicional de relevância ou valor de fabricação, formulação, terapêutico, diagnóstico ou prognóstico. Inúmeros alvos adicionais exemplificativos são fornecidos no presente documento, a título de exemplo, e são destinados a serem ilustrativos, e não limitantes. O alvo de interesse adicional ligado pela proteína de fusão de DDpp pode ser de ocorrência natural ou sintética. O alvo de interesse adicional pode ser um componente extracelular ou um componente intracelular, um fator solúvel (por exemplo, uma enzima, hormônio, citocina e fator de crescimento, toxina, veneno, poluente, etc.), ou uma proteína transmembranar (por exemplo, um receptor de superfície celular). Em algumas modalidades, o alvo de interesse ligado pela proteína de fusão de DDpp é uma proteína humana. Numa modalidade, um DDpp (por exemplo, uma proteína de fusão de DDpp) liga um alvo de proteína humana de interesse e seu ortólogo de macaco (por exemplo, macaco cinomólgo), camundongo, coelho, hamster e/ou um coelho.
[0245] Numa modalidade, uma proteína de fusão de DDpp liga especificamente BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP e/ou AFP p26 e uma proteína de soro. Numa modalidade, a proteína de fusão de DDpp liga especificamente uma proteína de soro selecionada a partir de: albumina do soro (por exemplo, albumina do soro humano (HSA)), proteína de ligação de tiroxina, transferina, fibrogênio e uma imunoglobulina (por exemplo, IgG, IgE e
IgM). Sem se ater à teoria, acredita-se que a ligação de um DDpp a uma proteína portadora conferira ao DDpp (ou uma fusão do mesmo) um perfil farmacodinâmico aprimorado que inclui, porém sem limitações, alvejamento de tumor aprimorado, penetração de tumor, difusão dentro do tumor e atividade terapêutica intensificada em comparação com a proteína de fusão de DDpp em que a sequência de ligação à proteína portadora está ausente (consultar, por exemplo, WO01/45746, cujo conteúdo está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade). PROTEÍNAS DE FUSÃO DE DDPP à base de anticorpo
[0246] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de comprimento total ou um fragmento ou subdomínio de um anticorpo. Em alguma modalidade, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de IgG de comprimento total (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG2 ou IgG4). Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de comprimento completo que liga especificamente um antígeno de câncer. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende um anticorpo terapêutico comercialmente aprovado (por exemplo, rituximab, ofatumumab, ocrelizumab, veltuzumab, MEDI-551, epratuzumab, belimumab, tabalumab, AMG-557, MEDI-570 e NN882). Em outras modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão de Fc. Em modalidades adicionais, a proteína de Fc compreende um domínio de Fc humano variante.
[0247] Em algumas modalidades, uma proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de comprimento total ou um fragmento de anticorpo ou subdomínio (por exemplo, um anticorpo de IgG1, anticorpo de IgG3, região variável de anticorpo, CDR3, scFv, Fc, subdomínio de ligação de FcRn e outros subdomínios de anticorpo). As proteínas de DDpp podem ser operacionalmente ligadas uma à outra e/ou a um ou mais terminais de um anticorpo, cadeia de anticorpo, fragmento de anticorpo ou subdomínio de anticorpo para formar uma proteína de fusão de DDpp.
[0248] O componente de anticorpo de uma proteína de fusão de
DDpp pode ser qualquer imunoglobulina de comprimento total adequada ou fragmento de anticorpo (por exemplo, um domínio de ligação de antígeno e/ou domínio efetor) ou um fragmento do mesmo. Numa modalidade, a proteína de fusão de DDpp-anticorpo retém as propriedades estruturais e funcionais de um anticorpo monoclonal tradicional. Portanto, em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp-anticorpo retém as propriedades de ligação de epítopo, porém, vantajosamente também incorpora, por meio da fusão de DDpp, uma ou mais especificidades de ligação de alvo adicionais. Os anticorpos que podem ser usados nas fusões de DDpp incluem, porém sem limitações, anticorpos monoclonais, multiespecíficos, humanos, humanizados, primatizados e quiméricos. As moléculas de imunoglobulina ou anticorpo fornecidas no presente documento podem ser de qualquer tipo (por exemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA e IgY), classe (por exemplo, IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl e IgA2) ou subclasse de molécula de imunoglobulina. Em modalidades específicas, os anticorpos são anticorpos otimizados por Fc. Os anticorpos podem ser de ou derivados de qualquer origem animal incluindo pássaros e mamíferos ou sinteticamente gerados. O componente de anticorpo da proteína de fusão de DDpp-anticorpo pode ser naturalmente derivado ou o resultado de modificação genética recombinante (por exemplo, exibição de fago, xenocamundongo e sintético). Em certas modalidades, o componente de anticorpo da fusão de anticorpo-DDpp intensifica a meia-vida e aumenta ou diminui a atividade de citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) e/ou citotoxicidade dependente de complemento (CDC). Em algumas modalidades, os anticorpos são humanos, murinos, de asno, coelho, cabra, cobaia, camelo, lhama, cavalo ou galinha. Em modalidades específicas, os anticorpos são humanos.
[0249] É geralmente entendido que a região constante media várias funções efetoras. Por exemplo, a ligação do componente de C1 do complemento aos anticorpos ativa o sistema de complemento. A ativação do complemento é importante na opsonização e lise de patógenos celulares. A ativação de complemento também estimula a resposta inflamatória e também pode estar envolvida na hipersensibilidade autoimune. Ademais, anticorpos se ligam às células por meio da região de Fc, com um sítio de receptor de Fc na região de anticorpo Fc que se liga a um receptor de Fc (FcR) numa célula. Há inúmeros receptores de Fc que são específicos para diferentes classes de anticorpo, incluindo IgG (receptores gama), IgE (receptores eta), IgA (receptores alfa) e IgM (receptores mu). A ligação de anticorpo aos receptores de Fc nas superfícies de célula provoca inúmeras respostas biológicas importantes e diversas incluindo engolfamento e destruição de partículas revestidas com anticorpo, liberação de complexos imunes, lise de células-alvo revestidas por anticorpo por células assassinas (chamada de citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo, ou ADCC), liberação de mediadores inflamatórios, transferência de placenta e controle de produção de imunoglobulina.
[0250] Em certas modalidades, a proteína de fusão de DDpp-Fc tem uma função efetora alterada que, por sua vez, afeta o perfil biológico da proteína de fusão de DDpp-Fc administrada. Por exemplo, a deleção ou inativação (através de mutações pontuais ou outros meios) de um subdomínio de região constante pode reduzir a ligação de receptor de Fc do anticorpo modificado circulatório. Em outros casos, as modificações de região constante podem moderar a ligação de complemento e, assim, reduzir a meia-vida em soro e a associação não específica de uma citotoxina conjugada. Contudo, outras modificações da região constante podem ser usadas para eliminar as ligações de dissulfeto ou porções químicas de oligossacarídeo que permitem a localização intensificada devido à especificidade de antígeno ou flexibilidade de anticorpo aumentadas. De modo semelhante, modificações na região constante de acordo com esta divulgação podem ser facilmente realizadas usando técnicas de modificação genética bioquímicas ou moleculares conhecidas por aqueles de habilidade comum na técnica.
[0251] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp-Fc não tem uma ou mais funções efetoras. Por exemplo, em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp-Fc não tem atividade de citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) e/ou nenhuma atividade de citotoxicidade dependente de complemento (CDC). Em certas modalidades, a proteína de fusão de DDpp-Fc não se liga a um receptor de Fc e/ou fatores de complemento. Em certas modalidades, a proteína de fusão de DDpp-Fc não tem função efetora. Exemplos de modificações de engenharia de sequência de Fc que reduzem ou eliminam atividade de ADCC e/ou de CDC e ligação de receptor de Fc e/ou fator de complemento são descritos no presente documento ou, de outro modo, conhecidos na técnica, assim como ensaios e procedimentos para testar os mesmos.
[0252] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp-Fc é geneticamente modificada para fundir o domínio de CH3 diretamente à região de articulação do respectivo anticorpo modificado. Em outros construtos, um espaçador de peptídeo é inserido entre a região de articulação e os domínios de CH2 e/ou CH3 modificados. Por exemplo, os construtos compatíveis podem ser expressos, em que o domínio de CH2 foi deletado e o domínio de CH3 restante (modificado ou não modificado) são unidos à região de articulação com um espaçador de 5 a 20 aminoácidos. Tal espaçador pode ser adicionado, por exemplo, para assegurar que os elementos reguladores do domínio constante permanecem livres e acessíveis ou que a região de articulação permanece flexível. Os espaçadores de aminoácido podem, em alguns casos, provem que são imunogênicos e surtem uma resposta imune indesejada contra o construto. Consequentemente, em certas modalidades, qualquer espaçador adicionado ao construto pode ser relativamente não imunogênico ou até mesmo totalmente omitido, de modo que mantenha as qualidades bioquímicas desejadas da proteína de fusão de DDpp-Fc modificada.
[0253] Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp- Fc é modificada pela deleção ou substituição parcial de poucos ou até mesmo um único aminoácido numa região constante. Por exemplo, a mutação de um único aminoácido em áreas selecionadas do domínio de CH2 pode ser suficiente para reduzir substancialmente a ligação de Fc, portanto. De modo semelhante, um ou mais domínios de região constante que controlam a função efetora (por exemplo, ligação de complemento C1Q) podem ser total ou parcialmente deletados. Tais deleções parciais das regiões constantes podem aprimorar as características selecionadas da proteína de fusão de DDpp-Fc (por exemplo, meia-vida em soro) enquanto deixam outras funções desejáveis associadas ao domínio de região constante correspondente intactas. Em algumas modalidades, a região constante da proteína de fusão de DDpp-Fc é modificada através da mutação ou substituição de um ou mais aminoácidos, que intensifica o perfil do construto resultante. Neste aspecto, é possível perturbar a atividade fornecida por um sítio de ligação conservado (por exemplo, ligação de Fc) enquanto mantém substancialmente a configuração e o perfil imunogênico da proteína de fusão de DDpp-Fc modificada. A divulgação também fornece uma proteína de fusão de DDpp-Fc que contém a adição de um ou mais aminoácidos à região constante para intensificar as características desejáveis como reduzir ou aumentar a função efetora ou fornecer sítios de fixação para uma ou mais de citotoxina, identificação ou porções químicas de carboidrato. Em tais modalidades, pode ser desejável inserir ou replicar sequências específicas derivadas de domínios de região constante selecionados.
[0254] Em algumas modalidades, o DDpp é operacionalmente ligado a um fragmento de anticorpo ou subdomínio (por exemplo, scFv, diacorpo, EP 404,097; WO93/111161; WO14/028776; e Holliger et al., PNAS 90: 6444-6448 (1993), em que o conteúdo de cada um dos mesmo está aqui incorporado a título de referência em sua totalidade. O fragmento de anticorpo ou subdomínio pode ser qualquer fragmento ou domínio de um anticorpo. Consultar, por exemplo, WO04/058820, WO99/42077 e WO05/017148, cujo conteúdo está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade. Por exemplo, uma proteína de fusão de DDpp pode conter um domínio efetor de anticorpo ou derivado de um domínio efetor de anticorpo que confere uma ou mais funções efetoras ao DDpp e/ou confere à proteína de fusão de DDpp a capacidade de se ligar a um ou mais receptores de Fc. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp-anticorpo contém um fragmento de ligação de antígeno de um anticorpo ou um fragmento do mesmo. Em modalidades adicionais, uma proteína de fusão de DDpp-anticorpo contém um domínio efetor de imunoglobulina que compreende um ou mais domínios de CH2 e ou CH3 de um anticorpo que tem função efetora fornecida pelos domínios de CH2 e CH3. Outras sequências na fusão de DDpp que fornecem uma função efetora e que são englobadas pela invenção ficarão evidentes para aqueles versados na técnica e podem ser rotineiramente escolhidas e projetadas numa proteína de fusão de DDpp englobada no presente documento com base na função (ou funções) efetora desejada.
[0255] Numa modalidade, a fusão de DDpp contém um anticorpo de comprimento total ou um fragmento de anticorpo que é um fragmento de ligação de antígeno. Numa modalidade adicional, o anticorpo ou fragmento de anticorpo liga um antígeno relacionado à doença. Numa modalidade, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo ou um fragmento de anticorpo que liga especificamente um antígeno de câncer. Em outra modalidade, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo ou um fragmento de anticorpo que liga especificamente um patógeno particular (por exemplo, uma célula bacteriana (por exemplo, tuberculose, varíola, carbúnculo)), um vírus (por exemplo, HIV), um parasita (por exemplo, malária, leishmaniose), uma infecção fúngica, um mofo, um micoplasma, um antígeno de príon. Em outra modalidade, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo ou um fragmento de anticorpo que liga especificamente um patógeno particular (por exemplo, uma célula bacteriana (por exemplo, tuberculose, varíola, carbúnculo)), um vírus (por exemplo, HIV), um parasita (por exemplo, malária, leishmaniose), uma infecção fúngica, um mofo, um micoplasma ou um antígeno de príon. Em outra modalidade, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo ou um fragmento de anticorpo que liga especificamente um antígeno associado a uma doença ou distúrbio do sistema imune.
[0256] Em modalidades preferenciais, a proteína de fusão de DDpp contendo um fragmento de anticorpo ou domínio retém atividades do anticorpo parental. Portanto, em certas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contendo um fragmento de anticorpo ou domínio é capaz de induzir citotoxicidade dependente de complemento. Em certas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contendo um fragmento de anticorpo ou domínio é capaz de induzir citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo (ADCC).
[0257] Consequentemente, em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um fragmento de anticorpo que confere à proteína de fusão de DDpp uma característica biológica ou bioquímica de uma imunoglobulina. Em algumas modalidades, o fragmento de anticorpo confere uma característica selecionada a partir de: a capacidade de dimerizar não covalentemente, a capacidade de se localizar no sítio de um tumor e uma meia-vida em soro aumentada em comparação com a proteína de fusão de DDpp em que o dito um ou mais DDpps foram deletados. Em certas modalidades, a proteína de fusão de DDpp é pelo menos tão estável quanto o anticorpo correspondente sem o DDpp fixado. Em certas modalidades, a proteína de fusão de DDpp é mais estável que o anticorpo correspondente sem o DDpp fixado. A estabilidade de proteína de fusão de DDpp pode ser medida usando métodos estabelecidos, incluindo, por exemplo, técnicas de ELISA. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp é estável em sangue total ((in vivo ou ex vivo) a 37° C por pelo menos cerca de 10 horas, pelo menos cerca de 15 horas, pelo menos cerca de 20 horas, pelo menos cerca de 24 horas, pelo menos cerca de 25 horas, pelo menos cerca de 30 horas, pelo menos cerca de 35 horas, pelo menos cerca de 40 horas, pelo menos cerca de 45 horas, pelo menos cerca de 48 horas, pelo menos cerca de 50 horas, pelo menos cerca de 55 horas, pelo menos cerca de 60 horas, pelo menos cerca de 65 horas, pelo menos cerca de 70 horas, pelo menos cerca de 72 horas, pelo menos cerca de 75 horas, pelo menos cerca de 80 horas, pelo menos cerca de 85 horas, pelo menos cerca de 90 horas, pelo menos cerca de 95 horas ou pelo menos cerca de 100 horas (incluindo qualquer tempo dentre estes listados). Numa modalidade, uma fusão de DDpp contém um domínio efetor de imunoglobulina ou domínio que influencia a meia-vida que corresponde a um domínio de imunoglobulina ou fragmento em que pelo menos uma fração de um ou mais dos domínios de região constante foi alterada de modo a fornecer características bioquímicas desejadas, tais como funções efetoras reduzidas ou aumentadas, a capacidade para dimerizar não covalentemente, capacidade aumentada para localizar no sítio de um tumor, meia-vida sérica reduzida ou meia-vida sérica aumentada em comparação a um fragmento de imunoglobulina que tem a sequência de imunoglobulina inalterada correspondente. Estas alterações dos domínios de região constante podem ser substituições, inserções ou deleções de aminoácidos.
[0258] Numa modalidade, uma proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de aminoácidos de um domínio efetor de imunoglobulina ou um derivado de um domínio efetor de imunoglobulina que confere citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) à proteína de fusão de DDpp. Em modalidades adicionais, uma proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de um domínio efetor de imunoglobulina que foi modificada para aumentar a ADCC (consultar, por exemplo, Bruhns, Blood 113: 3716-3725 (2009); Shields, J. Biol. Chem. 276: 6591-6604 (2001); Lazar, PNAS 103: 4005-4010 (2006); Stavenhagen, Cancer Res. 67: 8882-8890 (2007); Horton, Cancer Res. 68: 8049-8057 (2008); Zalevsky, Blood 113: 3735-3743 (2009); Bruckheimer, Neoplasia 11: 509-517 (2009); WO06/020114; Strohl, Curr. Op. Biotechnol. 20: 685-691 (2009); e WO04/074455; em que o conteúdo de cada um está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade). Os exemplos de modificações genéticas de fragmento de imunoglobulina contidos numa sequência de aminoácidos numa proteína de fusão de DDpp que aumenta a ADCC incluem sequências de domínio efetor de imunoglobulina que têm uma ou mais modificações correspondentes a: IgG1- S298A, E333A, K334A; IgG1-S239D, I332E; IgG1-S239D, A330L, I332E; IgG1- P247I, A339D ou Q; IgG1-D280H, K290S com ou sem S298D ou V; IgG1- F243L, R292P, Y300L; IgG1-F243L, R292P, Y300L, P396L; e IgG1-F243L, R292P, Y300L, V305I, P396L; em que a numeração dos resíduos na região de Fc é aquela do índice EU de Kabat et al. (Kabat et al., Sequences of proteins of Immunological Interest, 1991 Quinta edição, cujo conteúdo está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade).
[0259] Em outras modalidades, uma proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de um domínio efetor de imunoglobulina que foi modificada para diminuir a ADCC (consultar, por exemplo, Idusogie et al., J. Immunol. 166: 2571-2575 (2001); Sazinsky et al., PNAS 105: 20167-20172 (2008); Davis et al., J. Rheumatol. 34: 2204-2210 (2007); Bolt et al., Eur. J. Immunol. 23: 403-411 (1993); Alegre et al., Transplantation 57: 1537-1543 (1994); Xu et al., Cell Immunol. 200: 16-26 (2000); Cole et al., Transplantation 68: 563-571 (1999); Hutchins et al., PNAS 92: 11980-11984 (1995); Reddy et al., J. Immunol. 164: 1925-1933 (2000); WO97/11971; WO07/106585; US 2007/0148167A1; McEarchern et al., Blood 109: 1185-1192 (2007); Strohl, Curr. Op. Biotechnol. 20: 685-691 (2009); e Kumagai et al., J. Clin. Pharmacol. 47: 1489-1497 (2007), em que o conteúdo de cada um dos mesmo está aqui incorporado a título de referência em sua totalidade. Os exemplos de modificações genéticas de sequência de fragmento de imunoglobulina contidos numa sequência de aminoácidos numa proteína de fusão de DDpp que diminui a ADCC incluem sequências de domínio efetor de imunoglobulina que têm uma ou mais modificações correspondentes a: IgG1-K326W, E333S; IgG2-E333S; IgG1-N297A; IgG1-L234A, L235A; IgG2-V234A, G237A; IgG4-L235A, G237A, E318A; IgG4-S228P, L236E; IgG2- 118-260; IgG4- 261-447; IgG2-H268Q, V309L, A330S, A331S; IgG1-C220S, C226S, C229S, p268S; IgG1-C226S, C229S, E233P, L234V, L235A; ou IgG1-L234F, L235E, P331S; em que a numeração dos resíduos é aquela do índice EU de Kabat (Kabat et al.,
Sequences of Proteins of Immunological Interest, 1991 Quinta edição, cujo conteúdo está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade).
[0260] Em modalidades adicionais, uma proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de aminoácidos de um domínio efetor de imunoglobulina, ou um derivado de um domínio efetor de imunoglobulina, que confere fagocitose celular dependente de anticorpo (ADCP) à proteína de fusão de DDpp. Em modalidades adicionais, uma proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de um domínio efetor de imunoglobulina que foi modificado para aumentar a fagocitose celular dependente de anticorpo (ADCP); (consultar, por exemplo, Shields et al., J. Biol. Chem. 276: 6591-6604 (2001); Lazar et al., PNAS 103: 4005-4010 (2006); Stavenhagen et al., Cancer Res. 67: 8882-8890 (2007); Richards et al., Mol. Cancer Ther. 7: 2517-2527 (2008); Horton et al., Cancer Res. 68: 8049-8057 (2008), Zalevsky et al., Blood 113: 3735-3743 (2009); Bruckheimer et al., Neoplasia 11: 509-517 (2009); WO06/020114; Strohl, Curr. Op. Biotechnol. 20: 685-691 (2009); e WO04/074455, em que o conteúdo de cada um está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade). Os exemplos de modificações genéticas de fragmento de imunoglobulina contidos numa sequência de aminoácidos numa proteína de fusão de DDpp que aumenta a ADCP incluem sequências de domínio efetor de imunoglobulina que têm uma ou mais modificações correspondentes a: IgG1-S298A, E333A, K334A; IgG1- S239D, I332E; IgG1-S239D, A330L, I332E; IgG1-P247I, A339D ou Q; IgG1- D280H, K290S com ou sem S298D ou V; IgG1-F243L, R292P, Y300L; IgG1- F243L, R292P, Y300L, P396L; IgG1-F243L, R292P, Y300L, V305I, P396L; e IgG1-G236A, S239D, I332E; em que a numeração dos resíduos é aquela do índice EU de Kabat et al. (Kabat et al., Sequences of proteins of Immunological Interest, 1991 Quinta edição, cujo conteúdo está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade).
[0261] Em outras modalidades, uma proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de um domínio efetor de imunoglobulina que foi modificada para diminuir a ADCP (consultar, por exemplo, Sazinsky et al., PNAS 105: 20167-20172 (2008); Davis et al., J. Rheumatol. 34: 2204-2210 (2007); Bolt et al., Eur. J. Immunol. 23: 403-411 (1993); Alegre et al., Transplantation 57: 1537-1543 (1994); Xu et al., Cell Immunol. 200: 16-20 (2000); Cole et al., Transplantation 68: 563-571 (1999); Hutchins et al., PNAS 92: 11980-11984 (1995); Reddy et al., J. Immunol. 164: 1925-1933 (2000); WO97/11971; WO07/106585; US 2007/0148167A1; McEarchern et al., Blood 109: 1185-1192 (2007); Strohl, Curr. Op. Biotechnol. 20: 685-691 (2009); e Kumagai et al., J. Clin. Pharmacol. 47: 1489-1497 (2007), em que o conteúdo de cada um dos mesmo está aqui incorporado a título de referência em sua totalidade. A título de exemplo, as proteínas de fusão de DDpp podem conter um fragmento de anticorpo ou domínio que contém uma ou mais das seguintes modificações que diminuem a ADCC: IgG1-N297A; IgG1-L234A, L235A; IgG2- V234A, G237A; IgG4-L235A, G237A, E318A; IgG4-S228P, L236E; IgG2 sequência de EU 118 a 260; IgG4-sequência de EU 261 a 447; IgG2-H268Q, V309L, A330S, A331S; IgG1-C220S, C226S, C229S, p268S; IgG1-C226S, C229S, E233P, L234V, L235A; e IgG1-L234F, L235E, P331S; em que a numeração dos resíduos é aquela do índice EU de Kabat et al. (Kabat et al., Sequences of proteins of Immunological Interest, 1991 Quinta edição, cujo conteúdo está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade).
[0262] Em modalidades adicionais, uma proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de aminoácidos de um domínio efetor de imunoglobulina, ou um derivado de um domínio efetor de imunoglobulina, que confere citotoxicidade dependente de complemento (CDC) à proteína de fusão de DDpp. Em modalidades adicionais, uma proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de um domínio efetor de imunoglobulina que foi modificada para aumentar a citotoxicidade dependente de complemento (CDC) (consultar, por exemplo, Idusogie et al., J. Immunol. 166: 2571-2575 (2001);
Strohl, Curr. Op. Biotechnol. 20: 685-691 (2009); e Natsume et al., Cancer Res. 68: 3863-3872 (2008), em que o conteúdo de cada um dos mesmo está aqui incorporado a título de referência em sua totalidade. A título de exemplo, as proteínas de fusão de DDpp podem conter um fragmento de anticorpo ou domínio que contém uma ou mais das seguintes modificações que aumentam a CDC: IgG1-K326A, E333A; IgG1-K326W, E333S, IgG2-E333S; em que a numeração dos resíduos é aquela do índice EU de Kabat et al. (Kabat et al., Sequences of proteins of Immunological Interest, 1991 Quinta edição, cujo conteúdo está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade).
[0263] Em modalidades adicionais, uma proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de aminoácidos de um domínio efetor de imunoglobulina, ou um derivado de um domínio efetor de imunoglobulina, que confere a capacidade de ligar o receptor de FcgammaRIIb à fusão de DDpp. Em modalidades adicionais, uma proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de um domínio efetor de imunoglobulina que foi modificada para aumentar a ligação inibidora ao receptor de FcgammaRIIb (consultar, por exemplo, Chu et al., Mol. Immunol. 45: 3926-3933 (2008)). Um exemplo de uma modificação genética de fragmento de imunoglobulina contida numa sequência de aminoácidos numa proteína de fusão de DDpp que aumenta a ligação ao receptor de FcgammaRIIb inibidor é IgG1- S267E, L328F.
[0264] Em outras modalidades, uma proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de um domínio efetor de imunoglobulina que foi modificada para diminuir CDC (consultar, por exemplo, WO97/11971; WO07/106585; US 2007/0148167A1; McEarchern et al., Blood 109: 1185-1192 (2007); Hayden-Ledbetter et al., Clin. Cancer 15: 2739-2746 (2009); Lazar et al., PNAS 103: 4005-4010 (2006); Bruckheimer et al., Neoplasia 11: 509-517 (2009); Strohl, Curr. Op. Biotechnol. 20: 685-691 (2009); e Sazinsky et al., PNAS 105: 20167-20172 (2008); em que o conteúdo de cada um dos mesmo está aqui incorporado a título de referência em sua totalidade. A título de exemplo, as proteínas de fusão de DDpp podem conter um fragmento de anticorpo ou domínio que contém uma ou mais das seguintes modificações que diminuem a CDC: IgG1-S239D, A330L, I332E; IgG2- 118-260; IgG4- 261-447; IgG2-H268Q, V309L, A330S, A331S; IgG1-C226S, C229S, E233P, L234V, L235A; IgG1-L234F, L235E, P331S; e IgG1-C226S, p260S; em que a numeração dos resíduos é aquela do índice EU de Kabat et al. (Kabat et al., Sequences of proteins of Immunological Interest, 1991 Quinta edição, cujo conteúdo está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade).
[0265] A meia-vida de uma IgG é mediada por sua ligação dependente de pH ao receptor neonatal FcRn. Em certas modalidades, uma proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de aminoácidos de um domínio efetor de imunoglobulina, ou um derivado de um domínio efetor de imunoglobulina, que confere a capacidade de ligar o receptor neonatal FcRn à fusão de DDpp. Em certas modalidades, uma proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de uma imunoglobulina domínio de ligação de FcRn que foi modificada para intensificar a ligação a FcRn (consultar, por exemplo, Petkova et al., Int. Immunol. 18: 1759-1769 (2006); Dall'Acqua et al., J. Immunol. 169: 5171-5180 (2002); Oganesyan et al., Mol. Immunol. 46: 1750- 1755 (2009); Dall'Acqua et al., J. Biol. Chem. 281: 23514-23524 (2006); Hinton et al., J. Immunol. 176: 346-356 (2006); Datta-Mannan et al., Drug Metab. Dispos. 35: 86-94 (2007); Datta-Mannan et al., J. Biol. Chem. 282: 1709-1717 (2007); WO06/130834; Strohl, Curr. Op. Biotechnol. 20: 685-691 (2009); e Yeung et al., J. Immunol. 182: 7663-7671 (2009); em que o conteúdo de cada um dos mesmo está aqui incorporado a título de referência em sua totalidade.
[0266] Em modalidades adicionais, uma proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de um domínio efetor de imunoglobulina que foi modificado para ter uma afinidade seletiva para FcRn em pH 6,0, mas não em pH 7,4. A título de exemplo, as proteínas de fusão de DDpp podem conter um fragmento de anticorpo ou domínio que contém uma ou mais das seguintes modificações que aumentam a meia-vida: IgG1-M252Y, S254T, T256E; IgG1-T250Q, M428L; IgG1-H433K, N434Y; IgG1-N434A; e IgG1- T307A, E380A, N434A; em que a numeração dos resíduos é aquela do índice EU de Kabat et al. (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 1991 Quinta edição, cujo conteúdo está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade).
[0267] Em outras modalidades, uma proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de uma imunoglobulina domínio efetor que foi modificada para diminuir a ligação a FcRn (consultar, por exemplo, Petkova et al., Int. Immunol. 18: 1759-1769 (2006); Datta-Mannan et al., Drug Metab. Dispos. 35: 86-94 (2007); Datta-Mannan et al., J. Biol. Chem. 282: 1709-1717 (2007); Strohl, Curr. Op. Biotechnol. 20: 685-691 (2009); e Vaccaro et al., Nat. Biotechnol. 23: 1283-1288 (2005); em que o conteúdo de cada um dos mesmo está aqui incorporado a título de referência em sua totalidade. A título de exemplo, as proteínas de fusão de DDpp podem conter um fragmento de anticorpo ou domínio que contém uma ou mais das seguintes modificações que diminuem a meia-vida: IgG1-M252Y, S254T, T256E; H433K, N434F, 436H; IgG1-I253A; e IgG1-P257I, N434H e D376V, N434H; em que a numeração dos resíduos é aquela do índice EU de Kabat et al. (Kabat et al., Sequences of proteins of Immunological Interest, 1991 Quinta edição, cujo conteúdo está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade).
[0268] De acordo com outra modalidade, a proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de aminoácidos correspondente a um domínio efetor de imunoglobulina que foi modificado para conter pelo menos uma substituição sem sua sequência correspondente à posição da região de Fc (por exemplo, FC gama) selecionada a partir do grupo que consiste em: 238, 239, 246, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434,
435, 437, 438 e 439, em que a numeração dos resíduos na região de Fc é de acordo com o sistema de numeração EU; de Kabat et al. (Kabat et al., Sequences of proteins of Immunological Interest, 1991 Quinta edição, cujo conteúdo está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade). Numa modalidade específica, a proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de um domínio efetor de imunoglobulina derivado em que pelo menos um resíduo correspondente à posição 434 é um resíduo selecionado a partir do grupo que consiste em: A, W, Y, F e H. De acordo com outra modalidade, a proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de um fragmento efetor de imunoglobulina derivado que tem as seguintes respectivas substituições S298A/E333A/K334A. Numa modalidade adicional, a proteína de fusão de DDpp compreende um domínio efetor de imunoglobulina derivado que tem uma substituição correspondente a K322A. Em outra modalidade, a proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de um domínio efetor de imunoglobulina derivado que tem uma ou qualquer combinação das seguintes substituições K246H, H268D, E283L, S324G, S239D e I332E. De acordo com ainda outra modalidade, uma proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de um domínio efetor de imunoglobulina derivado que tem substituições correspondentes a D265A/N297A.
[0269] Em certas modalidades, uma proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de um domínio efetor de imunoglobulina que foi glicomodificada geneticamente ou mutada para aumentar a função efetora usando técnicas conhecidas na técnica. Por exemplo, a inativação (através de mutações pontuais ou outros meios) de uma sequência de domínio de região constante contida num DDpp pode reduzir a ligação de receptor de Fc da proteína de fusão de DDpp de circulação aumentando, assim, a localização de tumor. Em outros casos, pode ser que as modificações de região constante, consistentes com certas modalidades fornecidas, moderem a ligação de complemento e, assim, reduzam a meia-vida em soro e associação não específica de uma citotoxina conjugada. Contudo, outras modificações da região constante podem ser usadas para modificar as ligações de dissulfeto ou porções químicas de oligossacarídeo que permitem a localização intensificada devido à especificidade de antígeno ou flexibilidade de anticorpo aumentadas. O perfil fisiológico, biodisponibilidade e outros efeitos bioquímicos resultantes das modificações, como localização de tumor, biodistribuição e meia-vida em soro, podem ser facilmente medidos e quantificados usando técnicas imunológicas bem-conhecidas sem experimentação indevida.
[0270] Em algumas modalidades, uma célula efetora imune compreende um receptor de superfície celular para uma imunoglobulina ou outra molécula de ligação de peptídeo, tal como um receptor para uma região constante de imunoglobulina e incluindo a classe de receptores comumente denominadas “receptores Fc” (“FcR”s). Diversos FcRs foram caracterizados estrutural e/ou funcionalmente e são conhecidos na técnica, incluindo FcR que tem capacidades específicas de interagir com um subconjunto restrito de isotipos de cadeia pesada de imunoglobulina, ou que interagem com domínios Fc com afinidades variáveis e/ou que podem ser expressos em subconjuntos restritos de células efetoras imunes sob certas condições (por exemplo, Kijimoto-Ochichai et al., Cell Mol. Life. Sci. 59: 648 (2002); Davis et al., Curr. Top. Microbiol. Immunol. 266: 85 (2002); Pawankar, Curr. Opin. Allerg. Clin. Immunol. 1: 3 (2001); Radaev et al., Mol. Immunol. 38: 1073 (2002); Wurzburg et al., Mol. Immunol. 38: 1063 (2002); Sulica et al., Int. Rev. Immunol. 20: 371 (2001); Underhill et al., Ann. Rev. Immunol. 20: 825 (2002); Coggeshall, Curr. Dir. Autoimm. 5: 1 (2002); Mimura et al., Adv. Exp. Med. Biol. 495: 49 (2001); Baumann et al., Adv. Exp. Med. Biol. 495: 219 (2001); Santoso et al., Ital. Heart J. 2: 811 (2001); Novak et al., Curr. Opin. Immunol. 13: 721 (2001); Fossati et al., Eur. J. Clin. Invest. 31: 821 (2001)); em que o conteúdo de cada um dos mesmo está aqui incorporado a título de referência em sua totalidade.
[0271] As células que são capazes de mediar ADCC são exemplos de células efetoras imunes. Outras células efetoras imunes incluem células exterminadoras naturais, linfócitos T infiltrantes de tumor (TILs),
linfócitos T citotóxicos e células granulocíticas, tais como células que compreendem mecanismos de resposta alérgica. As células efetoras imunes, assim, incluem, porém sem limitação, células de origem hematopoiética, incluindo células em vários estágios de diferenciação sem linhagens mieloides ou linfoides e que podem (mas não precisam) expressar um ou mais tipos de FcR funcional de superfície celular, tais como linfócitos T, linfócitos B, células NK, monócitos, macrófagos, células dendríticas, neutrófilos, basófilos, eosinófilos, mastócitos, plaquetas, eritrócitos e precursores, progenitores (por exemplo, células-tronco hematopoiéticas), assim como formas quiescentes, ativadas e maduras de tais células. Outras células efetoras imunes podem incluir células de origem não hematopoiética que são capazes de mediar funções imunes, por exemplo, células endoteliais, queratinócitos, fibroblastos, osteoclastos, células epiteliais e outras células. As células efetoras imunes podem também incluir células que mediam eventos citotóxicos ou citostáticos, ou eventos endocíticos, fagocíticos ou pinocitóticos, ou que afetam a indução de apoptose, ou que afetam a imunidade microbiana ou neutralização de infecção microbiana, ou células que mediam reações alérgicas, inflamatórias, de hipersensibilidade e/ou autoimunes. PROTEÍNAS DE FUSÃO DE DDpp COM MEIA-VIDA AUMENTADA
[0272] O DDpp divulgado pode ser fundido ou complexado com um segundo domínio de peptídeo, que aumenta a meia-vida ou estabilidade do DDpp.
[0273] Num aspecto, o DDpp compreende adicionalmente um ou mais aminoácidos que facilitam a síntese, o manuseio ou uso do peptídeo, incluindo, porém sem limitações, uma ou duas lisinas no N-terminal e/ou C- terminal para aumentar a solubilidade do polipeptídeo. As proteínas de fusão adequadas incluem, porém sem limitações, proteínas compreendendo um DDpp ligado a um ou mais polipeptídeos, fragmentos de polipeptídeo, ou aminoácidos não reconhecidos em geral como sendo parte da sequência de proteínas. Num aspecto, um peptídeo de fusão compreende a totalidade das sequências de aminoácidos de dois ou mais peptídeos ou, alternativamente, compreende porções (fragmentos) de dois ou mais peptídeos. Em alguns aspectos, um peptídeo (por exemplo, peptídeo de ligação de Proteína S) é operacionalmente ligado, por exemplo, a um ou mais dos seguintes: uma proteína marcadora, um peptídeo que facilita a purificação, uma sequência de peptídeos que promove a formação de proteínas multiméricas ou um fragmento de qualquer um dos supracitados. Os parceiros de fusão adequados incluem, porém sem limitações, uma etiqueta His, uma etiqueta FLAG, uma etiqueta strep e uma etiqueta myc.
[0274] Em algumas modalidades, o DDpp é fundido a uma ou mais porções químicas que intensificam a meia-vida do polipeptídeo. A meia- vida pode ser aumentada, por exemplo, pelo aumento do peso molecular do DDpp para evitar a liberação renal e/ou pela incorporação de um domínio de ligação para trajetória de reciclagem mediada por FcRn. Numa modalidade, o DDpp é fundido a, ou quimicamente conjugado a um polipeptídeo de albumina ou um fragmento do mesmo (por exemplo, albumina do soro humano (HSA)). Em modalidades particulares, o fragmento de albumina fundido ou quimicamente conjugado compreende 10%, 25%, 50% ou 75% da proteína de albumina de comprimento total. Em modalidades adicionais ou alternativas, o DDpp é fundido a ou complexado com um domínio de ligação de albumina ou ácido graxo que liga albumina quando administrado in vivo. Um exemplo de um domínio de ligação de albumina é “albu-etiqueta", uma porção química derivada de um ácido 4-(p-iodofenil)-butanoico (Dumelin et al., Angew Chem. Int. Ed Engl. 47: 3196-3201 (2008)).
[0275] Numa modalidade, o DDpp é fundido a, ou quimicamente conjugado a um polipeptídeo de transferina ou um fragmento do mesmo (por exemplo, transferina humana). Em modalidades particulares, o fragmento de transferina fundido ou quimicamente conjugado compreende 10%, 25%, 50% ou 75% da proteína de transferina de comprimento total. Em modalidades adicionais ou alternativas, o DDpp é fundido a ou complexado com um domínio de ligação de transferina que liga transferina quando administrado in vivo.
[0276] Em algumas modalidades, o DDpp é fundido a, ou quimicamente conjugado a um multímero de prolina-alanina-serina (PASilação; XL-Proteína GmbH), uma sequência de peptídeos de repetição não exata (XTENilação, rPEG), um homopolímero de resíduos de glicina (HAPilação), sequências de repetição (ou repetições) tipo elastina (ELPilação; consultar, por exemplo, o Pedido de Patente no U.S. 61/442.106, cujo conteúdo está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade), um GLK artificial (fusão de GLK; Huang et al., Eur. J. Pharm. Biopharm. 72: 435–41 (2010)), ou um peptídeo de CTP de beta-subunidade de CG humano (fusão de CTP). PROTEÍNAS DE FUSÃO DE DDpp ADICIONAIS
[0277] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp liga especificamente BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP e/ou AFP p26, e liga adicionalmente um antígeno relacionado à doença. O antígeno relacionado à doença pode ser uma característica de antígeno de um câncer e/ou de um tipo de célula particular (por exemplo, uma célula hiperproliferativa) e/ou de um patógeno (por exemplo, uma célula bacteriana (por exemplo, tuberculose, varíola e carbúnculo), um vírus (por exemplo, HIV), um parasita (por exemplo, malária e leishmaniose), uma infecção fúngica, um mofo, um micoplasma, um antígeno de príon, ou um antígeno associado a um distúrbio do sistema imune. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp é conjugada a um agente terapêutico ou citotóxico.
[0278] Numa modalidade adicional, uma proteína de fusão de DDpp é ligada a uma ou mais porções químicas (por exemplo, identificações) que facilitam a detecção, multimerização, ligação com um parceiro de interação ou caracterização de atividade de DDpp. Uma porção química exemplificativa é a biotina. Outras porções químicas adequadas para conjugação ao DDpp incluem, porém sem limitações, um fotossensibilizador, um corante, um corante de fluorescência, um radionuclídeo, um complexo contendo radionuclídeo, uma enzima, uma toxina e um agente citotóxico. Os fotossensibilizadores incluem, por exemplo, Photofrin, Visudyne, Levulan, Foscan, Metvix, Hexvix.RTM., Cysview.TM., Laserphyrin, Antrin, Photochlor, Photosens, Photrex, Lumacan, Cevira, Visonac, BF-200 ALA e Amphinex. Em modalidades adicionais, uma etiqueta His, uma etiqueta FLAG, uma etiqueta strep ou uma etiqueta myc é conjugada ao DDpp.
[0279] Em outra modalidade, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD que liga BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP, AFP p26 ou um fragmento dos mesmos, e liga adicionalmente uma etiqueta de peptídeo presente num alvo de interesse. Tais etiquetas de peptídeo fornecem um meio útil através do qual detectar e/ou fixar alvos de interesse contendo as etiquetas de peptídeo. Numa modalidade, a proteína de fusão de DDpp liga especificamente uma etiqueta de peptídeo selecionada a partir do grupo: uma etiqueta hexa-histidila (His6), uma etiqueta myc ou uma etiqueta FLAG. Outras etiquetas de peptídeo são descritas no presente documento ou, de outro modo, conhecidas na técnica. PROTEÍNAS DE FUSÃO DE DDpp COM UMA ETIQUETA DE
EPÍTOPO
[0280] Em algumas modalidades, A proteína de fusão de DDpp compreende uma etiqueta de epítopo de peptídeo. Em algumas modalidades, a etiqueta de peptídeo é selecionada a partir do grupo que consiste numa etiqueta hexa-histidila (His6), uma etiqueta myc e uma etiqueta FLAG. Em modalidades adicionais, as etiquetas de peptídeo incluem, porém sem limitações, avitag (permite a biotinilação da etiqueta e isolamento com estreptavidina), calmodulina, E-etiqueta, hemaglutinina (HA), S-etiqueta, SBP- etiqueta, softag 1, estreptavidina, tetra ou poli-cisteína, V5, VSV e etiqueta Xpress. Adicionalmente, as etiquetas poli-histidila (além de 6 resíduos) podem ser usadas. Em modalidades adicionais, as etiquetas de peptídeo covalentes, etiquetas de proteína e similares podem ser usadas. As etiquetas de peptídeo covalentes incluem, porém sem limitações, isopeptag (liga covalentemente a proteína de pilinC), Spytag (se liga covalentemente à proteína SpyCatcher) e Snooptag (se liga covalentemente à proteína SnoopCatcher). Ainda em outras modalidades, as etiquetas de proteína, incluindo, porém sem limitações proteína portadora de carboxila de biotina (BCCP), glutationa-s-transferase, proteína fluorescente verde (ou outro fluoróforo), etiqueta Halo, etiqueta Nus, tiorredoxina e etiquetas Fc podem ser opcionalmente usadas. Ainda em outras modalidades, múltiplos tipos de etiquetas podem ser usados. Ainda em outras modalidades, nenhuma etiqueta é usada. Ainda em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende uma etiqueta removível. Qualquer combinação de domínios extracelulares, transmembranares e intracelulares aqui divulgados pode ser usada, dependendo da modalidade. LIGANTES DE DDpp
[0281] Os termos “ligante” e espaçador são usados de modo intercambiável no presente documento para a referência a um peptídeo ou outra ligação química que funcione para ligar domínios funcionais, de outro modo, independentes. Numa modalidade, um ligante num DDpp é localizado entre um DDpp e outro componente de polipeptídeo contendo um domínio funcional, de outro modo, independente. Os ligantes adequados para acoplar os dois ou mais DDpp ligados serão evidentes para as pessoas versadas na técnica e podem ser geralmente qualquer ligante usado na técnica para ligar peptídeos, proteínas ou outras moléculas orgânicas. Em modalidades particulares, tal ligante é adequado para construir proteínas ou polipeptídeos que são destinados ao uso farmacêutico.
[0282] Os ligantes adequados para ligar operacionalmente um DDpp e um componente adicional de uma proteína de fusão de DDpp numa sequência de aminoácidos de cadeia única incluem, porém sem limitações, ligantes de polipeptídeo como ligantes de glicina, ligantes de serina, ligantes mistos de glicina/serina, ligantes enriquecidos com glicina e serina ou ligantes compostos por fragmentos de polipeptídeo amplamente polares.
[0283] Numa modalidade, o ligante é constituído, em maior parte,
por aminoácidos selecionados a partir de glicina, alanina, prolina, asparagina, glutamina e lisina. Numa modalidade, o ligante é constituído, em maior parte, por aminoácidos selecionados a partir de glicina, alanina, prolina, asparagina, ácido aspártico, treonina, glutamina e lisina. Numa modalidade, o ligante de proteína de fusão de DDpp é constituído por um ou mais dentre os aminoácidos selecionados a partir de glicina, alanina, prolina, asparagina, glutamina e lisina. Numa modalidade, o ligante de proteína de fusão de DDpp é constituído por um ou mais dentre os aminoácidos selecionados a partir de glicina, alanina, prolina, asparagina, ácido aspártico, treonina, glutamina e lisina. Em outra modalidade, o ligante de proteína de fusão de DDpp é constituído, em maior parte, por aminoácidos que são estericamente desimpedidos. Em outra modalidade, um ligante em que a maioria dos aminoácidos são glicina, serina e/ou alanina. Em algumas modalidades, o ligante de peptídeo é selecionado a partir de poliglicinas (como (Gly) 5 (SEQ ID NO: 935) e (Gly)8 (SEQ ID NO: 936), poli(Gly-Ala) e polialaninas. Em algumas modalidades, o ligante de peptídeo contém a sequência de Gly-Gly-Gly-Gly- Thr-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO: 4). Em algumas modalidades, o ligante de peptídeo contém a sequência de Gly-Gly-Gly-Gly-Asp-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO: 5).
[0284] Numa modalidade, uma fusão de DDpp compreende um DDpp diretamente fixado (isto é, sem um ligante) a outro componente da proteína de fusão de DDpp. Numa modalidade, uma fusão de DDpp compreende pelo menos 2, pelo menos 3, pelo menos 4 DDpps diretamente fixados a outro componente da fusão de DDpp.
[0285] Em outra modalidade, um DDpp pode ser operacionalmente ligado a outro componente de uma proteína de fusão de DDpp através de um ligante. As proteínas de fusão de DDpp pode conter um único ligante, múltiplos ligantes ou nenhum ligante. Numa modalidade, uma fusão de DDpp compreende um DDpp operacionalmente ligado a outro componente da proteína de fusão de DDpp através de um peptídeo de ligante.
Numa modalidade, uma fusão de DDpp compreende pelo menos 2, 3, 4 ou 5 DDs operacionalmente ligados a outro componente da proteína de fusão de DDpp através de um peptídeo de ligante.
[0286] Os ligantes podem ser de qualquer tamanho ou composição, desde que sejam capazes de ligar operacionalmente um DDpp de uma maneira que possibilite que o DDpp ligue um alvo de interesse como BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP ou AFP p26. Em algumas modalidades, os ligantes têm cerca de 1 a cerca de 100 aminoácidos, cerca de 1 a 50 aminoácidos, cerca de 1 a 20 aminoácidos, cerca de 1 a 15 aminoácidos, cerca de 1 a 10 aminoácidos, cerca de 1 a 5 aminoácidos, cerca de 2 a 20 aminoácidos, cerca de 2 a 15 aminoácidos, cerca de 2 a 10 aminoácidos ou cerca de 2 a 5 aminoácidos. Deve ser claro que o comprimento, o grau de flexibilidade e/ou outras propriedades do ligante (ou ligantes) pode ter alguma influência sobre as propriedades das proteínas contendo DD fornecidas, incluindo, porém sem limitações, a afinidade, especificidade ou avidez para um alvo de interesse, ou para um ou mais outras proteínas-alvo de interesse. Quando dois ou mais ligantes são usados nas proteínas de fusão de DDpp, estes ligantes podem ser iguais ou diferentes. No contexto e na revelação fornecidos no presente documento, uma pessoa versada na técnica será capaz de determinar rotineiramente o comprimento e a composição de ligante ideais para o propósito de ligar operacionalmente um DDpp e outros componentes de uma proteína de fusão de DDpp.
[0287] O ligante pode também ser um ligante de não peptídeo, tal como um ligante de alquila ou um ligante de PEG. Por exemplo, ligantes de alquila, tais como -NH-(CH2)s-C(0)-, em que s = 2 a 20, podem ser usados. Estes ligantes de alquila podem ser, ainda, substituídos por qualquer grupo de impedimento não estérico, tal como alquila inferior (por exemplo, C1-C6), acila inferior, halogênio (por exemplo, CI, Br), CN, NH2, fenila, etc. Um ligante de não peptídeo exemplificativo é um ligante de PEG. Em certas modalidades, o ligante de PEG tem um peso molecular de cerca de 100 a 5000 kDa ou cerca de 100 a 500 kDa.
[0288] Os ligantes adequados para acoplar proteínas de fusão de DDpp por reticulação química incluem, porém sem limitação, compostos de reticulação química homobifuncionais, tais como glutaraldeído, imidoésteres, tais como adipimidato de dimetila (DMA), suberimidato de dimetila (DMS) e pimelimidato de dimetila (DMP), ou ésteres de N-hidroxissuccinimida (NHS), tais como ditiobis(succinimidilpropionato)(DSP) e ditiobis(sulfossuccinimidilpropionato)(DTSSP). Os exemplos de ligantes adequados para acoplar componentes de proteína de fusão de DDpp de reagentes heterobifuncionais para reticulação incluem, porém sem limitações, reticuladores com uma extremidade reativa à amina e uma porção química reativa à sulfidrila na outra extremidade, ou com um éster de NHS numa extremidade e um grupo reativo a SH (por exemplo, uma maleimida ou piridila).
[0289] Em modalidades adicionais, um ou mais dos ligantes na proteína de fusão de DDpp são cliváveis. Os exemplos de ligantes cliváveis incluem, sem limitações, uma sequência de peptídeos reconhecida por proteases (in vitro ou in vivo) de tipo variável, como Tev, trombina, fator Xa, plasmina (proteases do sangue), metaloproteases, catespinas (por exemplo, GFLG, etc.), e proteases encontradas em outros compartimentos corpóreos.
[0290] Numa modalidade, o ligante é um “ligante clivável” que facilita a liberação de um DDpp ou agente citotóxico numa célula. Por exemplo, um ligante lábil a ácido (por exemplo, hidrazona), ligante sensível à protease (por exemplo, sensível à peptidase), ligante fotolábil, ligante de dimetila ou ligante contendo dissulfeto (consultar, por exemplo, Chari, Can. Res. 52: 127- 131 (1992); Patente no U.S. 5.208.020; Publicação de Pedido n o U.S. 20090110753; em que o conteúdo de cada um está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade) pode ser usado, em que é desejável que a ligação covalente entre um DDpp ou um agente citotóxico e o parceiro de fusão seja clivada intracelularmente quando a composição é internalizada na célula. Os termos “clivado intracelularmente” e “clivagem intracelular” se referem a um processo ou reação metabólica dentro de uma célula num conjugado de fármaco de DDpp, em que a ligação covalente, isto é, ligado por meio de um ligante entre o DDpp e o agente citotóxico, o DDpp e o parceiro de fusão ou entre dois DDpps é rompida, resultando no DDpp e/ou agente citotóxico livre dissociado dentro da célula.
[0291] A otimização de ligante pode ser avaliada usando técnicas descritas no presente documento e/ou, de outro modo, conhecidas na técnica. Em algumas modalidades, os ligantes não perturbam a capacidade de um DDpp para ligar uma molécula-alvo e/ou outro componente de proteína de fusão de DDpp como um domínio de anticorpo ou fragmento para ligar um antígeno. DDpps COMO CONJUGADOS QUÍMICOS
[0292] As proteínas de fusão de DDpp que promovem a ligação específica a alvos de interesse podem ser quimicamente conjugadas com uma variedade de compostos como corantes fluorescentes, radioisótopos, composições de cromatografia (por exemplo, microesferas, resinas, géis, etc.) e agentes quimioterapêuticos. Os conjugados de DDpp têm usos que incluem, porém sem limitações aplicações diagnósticas, analíticas, de fabricação e terapêuticas.
[0293] A falta inerente de cisteínas na sequência de DD fornece a oportunidade para introdução de cisteínas exclusivas para propósitos de conjugação específica para sítio.
[0294] Em algumas modalidades, o DDpp (por exemplo, uma proteína de fusão de DDpp) contém pelo menos um resíduo reativo. Os resíduos reativos são úteis, por exemplo, como sítios para a fixação de conjugados como fármacos quimioterapêuticos. O resíduo reativo pode ser, por exemplo, uma cisteína, uma lisina ou outro resíduo reativo. Portanto, uma cisteína pode ser adicionada a um DDpp no N- ou C- terminal, ou dentro da sequência de DDpp. Uma cisteína pode ser substituída por outro aminoácido na sequência de um DDpp. Além disto, uma lisina pode ser adicionada a um
DDpp numa das extremidades ou dentro da sequência de DDpp e/ou uma lisina pode ser substituída por outro aminoácido na sequência de um DDpp. Numa modalidade, um resíduo reativo (por exemplo, cisteína, lisina, etc.) é localizado numa sequência de laço de um DD (por exemplo, resíduos de aminoácido 22 a 24 e 46 a 49 de SEQ ID NOS: 11 a 949 e 950). Numa modalidade, um resíduo reativo é localizado entre componentes de uma fusão de DDpp, por exemplo, num ligante localizado entre um DDpp e outro componente de uma proteína de fusão de DDpp. O resíduo reativo (por exemplo, cisteína, lisina, etc.) também pode ser localizado dentro da sequência de um DDpp, ou outro componente da proteína de fusão de DDpp. Numa modalidade, um DDpp ou uma proteína de fusão de DDpp compreende pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos três resíduos reativos. Numa modalidade, um DDpp como uma proteína de fusão de DDpp compreende pelo menos um, pelo menos dois, ou pelo menos três resíduos de cisteína. DDpp DE LIGAÇÃO DE BCMA
[0295] Em algumas modalidades, um DD do DDpp liga especificamente BCMA. Em modalidades adicionais, um DD do DDpp liga especificamente BCMA que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 7. Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em outras modalidades, o DDpp de ligação de BCMA compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306.
[0296] Em algumas modalidades, o DDpp de ligação de BCMA compreende múltiplos domínios de ligação de alvo que ligam um único alvo (por exemplo, dímeros, trímeros, etc.). Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DDs que ligam especificamente BCMA e que têm uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que têm a mesma sequência. Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DDs que se ligam especificamente a epítopos diferentes de BCMA e que têm uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente BCMA e compreende adicionalmente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DDs ou domínios de ligação de alvo adicionais diferentes (por exemplo, scFvs) que se ligam especificamente a BCMA ou um antígeno-alvo diferente.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente BCMA (por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306) e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos expressos na superfície de uma célula B.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente BCMA por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306) e compreende adicionalmente e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos de câncer.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente BCMA (por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 alvos diferentes.
Em modalidades adicionais, o DDpp compreende um DD que liga especificamente BCMA (por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente BCMA (por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes expressos na superfície de uma célula de câncer.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente BCMA (por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer expressos na superfície de diferentes células de câncer.
[0297] Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma variante de um DD de ligação de BCMA aqui divulgado (DD de referência) que retém a capacidade de ligar especificamente BCMA. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de BCMA contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10, substituições conservadoras ou não conservadoras em comparação com um DD de ligação de BCMA de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de BCMA contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10, substituições conservadoras em comparação com um DD de ligação de BCMA de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de BCMA contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10, substituições não conservadoras em comparação com um DD de ligação de BCMA de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306.
[0298] Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de BCMA contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras ou não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido 1 a 22, 29 a 46 e 52 a 72, de um DD de ligação de BCMA de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de BCMA contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras nas posições correspondentes aos resíduos de aminoácido 1 a 22, 29 a 46 e 52 a 72, de um DD de BCMA de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de BCMA contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido 1 a 22, 29 a 46 e 52 a 72, de um DD de ligação de BCMA de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11-305 e 306.
[0299] Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de BCMA contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras ou não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido: 2 a 6, 8 a 10, 12, 13, 15 a 17, 19, 20, 29, 30, 32 a 34, 36, 37, 39 a 41, 43, 44, 52 a 55, 57 a 59, 61, 62, 64 a 66 e 68 a 70, de um DD de ligação de BCMA de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de BCMA contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras nas posições correspondentes aos resíduos de aminoácido: 2 a 6, 8 a 10, 12, 13, 15 a 17, 19, 20, 29, 30, 32 a 34, 36, 37, 39 a 41, 43, 44, 52 a 55, 57 a 59, 61, 62, 64 a 66 e 68 a 70 de um DD de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de BCMA contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido: 2 a 6, 8 a 10, 12, 13, 15 a 17, 19, 20, 29, 30, 32 a 34, 36, 37, 39 a 41, 43, 44, 52 a 55, 57 a 59, 61, 62, 64 a 66 e 68 a 70, de um DD de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306.
[0300] Em algumas modalidades, a divulgação fornece um DDpp de ligação de BCMA que bloqueia completa ou parcialmente (por exemplo, se sobrepõe a um epítopo) a ligação de um DD de referência a BCMA, em que o DD de referência tem uma sequência de aminoácidos selecionada da SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em outras modalidades, a divulgação fornece um DDpp de ligação de BCMA que se liga ao mesmo epítopo de BCMA que um DD de referência que consiste numa sequência de aminoácidos selecionada da SEQ ID NO: 11 a 305 e 306.
[0301] Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão que compreende um DD que liga especificamente BCMA. Em algumas modalidades, o DD liga especificamente uma proteína de BCMA que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 7. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de BCMA compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em outras modalidades, o DDpp compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de comprimento total ou uma porção (fragmento) de um anticorpo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de IgG de comprimento total (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG2 ou IgG4). Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de comprimento completo que liga especificamente um antígeno de câncer. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende um anticorpo terapêutico comercialmente aprovado (por exemplo, rituximab, ofatumumab, ocrelizumab, veltuzumab, MEDI-551, epratuzumab, belimumab, tabalumab, AMG-557, MEDI-570 e NN882). Em outras modalidades, o DDpp de ligação de BCMA é uma proteína de fusão de Fc. Em modalidades adicionais, a proteína de Fc compreende um domínio de Fc humano variante.
[0302] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD de ligação de BCMA operacionalmente ligado a uma proteína de soro. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11-305 e 306. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de BCMA compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp compreende albumina do soro humano ou um fragmento da mesma. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende AFP ou AFP p26, ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende AFP (por exemplo, SEQ ID NO: 9) ou um fragmento do mesmo. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende AFP p26 (SEQ ID NO: 10) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um polipeptídeo que tem a sequência de SEQ ID NO: 10, 928, 929, 930, 931, 932, 933 ou 934. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém um fragmento de uma proteína de soro ou um fragmento antigênico de uma proteína de soro (por exemplo, AFP e AFP p26). Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um fragmento que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 aminoácidos de uma proteína de soro.
[0303] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de BCMA compreende o domínio extracelular de um receptor ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de BCMA compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de BCMA compreende o domínio extracelular de CD123 (SEQ ID NO: 8) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de BCMA- compreende o domínio extracelular de um receptor selecionado a partir do grupo que consiste em: CD19, CD20, CD22, HVEM, BTLA, DR3, CD37; TSLPR, IL7R e gp96 ou um fragmento dos mesmos.
[0304] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de BCMA contém um fragmento que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 aminoácidos de um domínio extracelular, de um receptor de superfície celular. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém um fragmento de um domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7) ou CD123 (SEQ ID NO: 8). Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém um fragmento de um domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7), CD123 (SEQ ID NO: 8) ou CS1 (SEQ ID NO: 925). Em algumas modalidades, o DDpp contém um fragmento de um domínio extracelular, de um receptor selecionado a partir do grupo que consiste em: CD19, CD20, CD22, HVEM, BTLA, DR3, CD37; TSLPR, IL7R e gp96.
[0305] Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de BCMA compreende uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear) ou um fragmento da mesma. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de BCMA compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de BCMA compreende um fragmento que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 resíduos de aminoácido de uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear).
DDPP DE LIGAÇÃO DE CD123
[0306] Em algumas modalidades, um DD do DDpp liga especificamente CD123. Em modalidades adicionais, o DD liga especificamente CD123 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em outras modalidades, o DDpp compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: SEQ ID NO: 307 a 739 e 740.
[0307] Em algumas modalidades, o DDpp de ligação de CD123 compreende múltiplos domínios de ligação de alvo que ligam um único alvo (por exemplo, dímeros, trímeros, etc.). Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DDs que ligam especificamente CD123 e que têm uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que têm a mesma sequência. Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DDs que se ligam especificamente a epítopos diferentes de CD123 e que têm uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente CD123 e compreende adicionalmente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DDs ou domínios de ligação de alvo adicionais diferentes (por exemplo, scFvs) que se ligam especificamente a CD123 ou um antígeno-alvo diferente. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente CD123 por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740) e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos expressos na superfície de uma célula B. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente CD123 por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740) e compreende adicionalmente e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos de câncer. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente CD123 por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 alvos diferentes. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende um DD que liga especificamente CD123 por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente CD123 por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes expressos na superfície de uma célula de câncer. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente CD123 por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer expressos na superfície de diferentes células de câncer.
[0308] Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma variante de um DD de ligação de CD123 aqui divulgado (DD de referência) que retém a capacidade de ligar especificamente CD123. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de CD123 contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10, substituições conservadoras ou não conservadoras em comparação com um DD de ligação de CD123 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de CD123 contém 1, 2,
3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10, substituições conservadoras em comparação com um DD de ligação de CD123 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de CD123 contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10, substituições não conservadoras em comparação com um DD de ligação de CD123 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740.
[0309] Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de CD123 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras ou não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido 1 a 22, 29 a 46 e 52 a 72, de um DD de ligação de CD123 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 4307 a 739 e 740. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de CD123 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras nas posições correspondentes aos resíduos de aminoácido 1 a 22, 29 a 46 e 52 a 72, de um DD de CD123 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de CD123 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido 1 a 22, 29 a 46 e 52 a 72, de um DD de ligação de CD123 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740.
[0310] Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de CD123 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras ou não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido: 2 a 6, 8 a 10, 12, 13, 15 a 17, 19, 20, 29, 30, 32 a 34, 36, 37, 39 a 41, 43, 44, 52 a 55, 57 a 59, 61, 62, 64 a
66 e 68 a 70, de um DD de ligação de CD123 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de CD123 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras nas posições correspondentes aos resíduos de aminoácido: 2 a 6, 8 a 10, 12, 13, 15 a 17, 19, 20, 29, 30, 32 a 34, 36, 37, 39 a 41, 43, 44, 52 a 55, 57 a 59, 61, 62, 64 a 66 e 68 a 70, de um DD de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de CD123 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido: 2 a 6, 8 a 10, 12, 13, 15 a 17, 19, 20, 29, 30, 32 a 34, 36, 37, 39 a 41, 43, 44, 52 a 55, 57 a 59, 61, 62, 64 a 66 e 68 a 70, de um DD de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740.
[0311] Em algumas modalidades, a divulgação fornece um DDpp de ligação de CD123 que bloqueia completa ou parcialmente (por exemplo, se sobrepõe a um epítopo) a ligação de um DD de referência a CD123, em que o DD de referência tem uma sequência de aminoácidos selecionada da SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em outras modalidades, a divulgação fornece um DDpp de ligação de CD123 que se liga ao mesmo epítopo de CD123 que um DD de referência que consiste numa sequência de aminoácidos selecionada da SEQ ID NO: 307 a 739 e 740.
[0312] Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão que compreende um DD que liga especificamente CD123. Em algumas modalidades, um DD da proteína de fusão de DDpp liga especificamente CD123 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO:
8. Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a
739 e 740. Em outras modalidades, o DDpp compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de comprimento total ou uma porção (fragmento) de um anticorpo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de IgG de comprimento total (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG2 ou IgG4). Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de comprimento completo que liga especificamente um antígeno de câncer. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende um anticorpo terapêutico comercialmente aprovado (por exemplo, rituximab, ofatumumab, ocrelizumab, veltuzumab, MEDI-551, epratuzumab, belimumab, tabalumab, AMG-557, MEDI-570 e NN882). Em outras modalidades, o DDpp de ligação de CD123 é uma proteína de fusão de Fc.
[0313] Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão que compreende um DD de ligação de CD123 operacionalmente ligado a uma proteína de soro. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende toda ou uma porção da albumina do soro humano. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende AFP (SEQ ID NO: 9) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende AFP p26 (SEQ ID NO: 10) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende um polipeptídeo que tem a sequência de SEQ ID NO: 10, 928, 929, 930, 931, 932, 933 ou 934. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém um fragmento de uma proteína de soro ou um fragmento antigênico de uma proteína de soro (por exemplo, AFP e AFP p26). Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um fragmento que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 aminoácidos de uma proteína de soro.
[0314] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende o domínio extracelular de um receptor ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende o domínio extracelular de CD123 (SEQ ID NO: 8) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123- compreende o domínio extracelular de um receptor selecionado a partir do grupo que consiste em: CD19, CD20, CD22, HVEM, BTLA, DR3, CD37; TSLPR, IL7R e gp96 ou um fragmento dos mesmos.
[0315] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 contém um fragmento que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 aminoácidos de um domínio extracelular, de um receptor de superfície celular. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém um fragmento de um domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7). Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém um fragmento de um domínio extracelular de CD123 (SEQ ID NO: 8). Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém um fragmento de um domínio extracelular de CS1 (SEQ ID NO: 925). Em algumas modalidades, o DDpp contém um fragmento de um domínio extracelular, de um receptor selecionado a partir do grupo que consiste em: CD19, CD20, CD22, HVEM, BTLA, DR3, CD37; TSLPR, IL7R e gp96.
[0316] Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear) ou um fragmento da mesma. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CD123 compreende um fragmento que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 resíduos de aminoácido de uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear). DDPP DE LIGAÇÃO DE CS1
[0317] Em algumas modalidades, um DD do DDpp liga especificamente CS1. Em modalidades adicionais, o DD liga especificamente CS1 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO:
925. Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em outras modalidades, o DDpp compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910.
[0318] Em algumas modalidades, o DDpp de ligação de CS1 compreende múltiplos domínios de ligação de alvo que ligam um único alvo (por exemplo, dímeros, trímeros, etc.). Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DDs que ligam especificamente CS1 e que têm uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que têm a mesma sequência.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DDs que se ligam especificamente a epítopos diferentes de CS1 e que têm uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente CS1 e compreende adicionalmente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DDs ou domínios de ligação de alvo adicionais diferentes (por exemplo, scFvs) que se ligam especificamente a CS1 ou um antígeno-alvo diferente.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente CS1 por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910) e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos expressos na superfície de uma célula B.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente CS1 por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910) e compreende adicionalmente e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos de câncer.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente CS1 por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 alvos diferentes.
Em modalidades adicionais, o DDpp compreende um DD que liga especificamente CS1 por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente CS1 por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes expressos na superfície de uma célula de câncer. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente CS1 por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer expressos na superfície de diferentes células de câncer.
[0319] Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma variante de um DD de ligação de CS1 aqui divulgado (DD de referência) que retém a capacidade de ligar especificamente CS1. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de CS1 contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10, substituições conservadoras ou não conservadoras em comparação com um DD de ligação de CS1 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de CS1 contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10, substituições conservadoras em comparação com um DD de ligação de CS1 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de CS1 contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10, substituições não conservadoras em comparação com um DD de ligação de CS1 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910.
[0320] Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de CS1 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras ou não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido 1 a 22, 29 a 46 e 52 a 72, de um DD de ligação de CS1 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de CS1 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras nas posições correspondentes aos resíduos de aminoácido 1 a 22, 29 a 46 e 52 a 72, de um DD de CS1 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de CS1 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido 1 a 22, 29 a 46 e 52 a 72, de um DD de ligação de CS1 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910.
[0321] Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de CS1 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras ou não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido: 2 a 6, 8 a 10, 12, 13, 15 a 17, 19, 20, 29, 30, 32 a 34, 36, 37, 39 a 41, 43, 44, 52 a 55, 57 a 59, 61, 62, 64 a 66 e 68 a 70, de um DD de ligação de CS1 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de CS1 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras nas posições correspondentes aos resíduos de aminoácido: 2 a 6, 8 a 10, 12, 13, 15 a 17, 19, 20, 29, 30, 32 a 34, 36, 37, 39 a 41, 43, 44, 52 a 55, 57 a 59, 61, 62, 64 a 66 e 68 a 70, de um DD de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de CS1 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido: 2 a 6, 8 a 10, 12, 13, 15 a 17, 19, 20, 29, 30, 32 a 34, 36, 37, 39 a 41, 43, 44, 52 a 55, 57 a 59, 61, 62, 64 a 66 e 68 a 70, de um DD de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ
ID NO: 896 a 909 e 910.
[0322] Em algumas modalidades, a divulgação fornece um DDpp de ligação de CS1 que bloqueia completa ou parcialmente (por exemplo, se sobrepõe a um epítopo) a ligação de um DD de referência a CS1, em que o DD de referência tem uma sequência de aminoácidos selecionada da SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em outras modalidades, a divulgação fornece DDpp de ligação de CS1 que se liga ao mesmo epítopo de CS1 que um DD de referência que consiste numa sequência de aminoácidos selecionada da SEQ ID NO: 896 a 909 e 910.
[0323] Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão que compreende um DD que liga especificamente CS1. Em algumas modalidades, um DD da proteína de fusão de DDpp liga especificamente CS1 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 925. Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em outras modalidades, o DDpp compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de comprimento total ou uma porção (fragmento) de um anticorpo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de IgG de comprimento total (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG2 ou IgG4). Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de comprimento completo que liga especificamente um antígeno de câncer. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende um anticorpo terapêutico comercialmente aprovado (por exemplo, rituximab, ofatumumab, ocrelizumab, veltuzumab, MEDI-551, epratuzumab, belimumab, tabalumab, AMG-557, MEDI-570 e NN882). Em outras modalidades, o DDpp de ligação de CS1 é uma proteína de fusão de Fc.
[0324] Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão que compreende um DD de ligação de CS1 operacionalmente ligado a uma proteína de soro. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 compreende toda ou uma porção da albumina do soro humano. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende AFP (SEQ ID NO: 9) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 compreende AFP p26 (SEQ ID NO: 10) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 compreende um polipeptídeo que tem a sequência de SEQ ID NO: 10, 928, 929, 930, 931, 932, 933 ou 934. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém um fragmento de uma proteína de soro ou um fragmento antigênico de uma proteína de soro (por exemplo, AFP e AFP p26). Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um fragmento que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 aminoácidos de uma proteína de soro.
[0325] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 compreende o domínio extracelular de um receptor ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 compreende o domínio extracelular de CS1 (SEQ ID NO: 925) ou um fragmento do mesmo.
Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1- compreende o domínio extracelular de um receptor selecionado a partir do grupo que consiste em: CD19, CD20, CD22, HVEM, BTLA, DR3, CD37; TSLPR, IL7R e gp96 ou um fragmento dos mesmos.
[0326] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 contém um fragmento que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 aminoácidos de um domínio extracelular, de um receptor de superfície celular. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém um fragmento de um domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7). Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém um fragmento de um domínio extracelular de CD123 (SEQ ID NO: 8). Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém um fragmento de um domínio extracelular de CS1 (SEQ ID NO: 925). Em algumas modalidades, o DDpp contém um fragmento de um domínio extracelular, de um receptor selecionado a partir do grupo que consiste em: CD19, CD20, CD22, HVEM, BTLA, DR3, CD37; TSLPR, IL7R e gp96.
[0327] Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 compreende uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear) ou um fragmento da mesma. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a 909 e 910. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de CS1 compreende um fragmento que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 resíduos de aminoácido de uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear).
DDpp DE LIGAÇÃO DE HER2
[0328] Em algumas modalidades, um DD do DDpp liga especificamente HER2. Em modalidades adicionais, o DD liga especificamente HER2 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO:
927. Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em outras modalidades, o DDpp compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950.
[0329] Em algumas modalidades, o DDpp de ligação de HER2 compreende múltiplos domínios de ligação de alvo que ligam um único alvo (por exemplo, dímeros, trímeros, etc.). Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DDs que ligam especificamente HER2 e que têm uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que têm a mesma sequência. Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DDs que se ligam especificamente a epítopos diferentes de HER2 e que têm uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente HER2 e compreende adicionalmente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DDs ou domínios de ligação de alvo adicionais diferentes (por exemplo, scFvs) que se ligam especificamente a HER2 ou um antígeno-alvo diferente. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente HER2 por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950) e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos expressos na superfície de uma célula de câncer. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente HER2 por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950) e compreende adicionalmente e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos de câncer. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente HER2 por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 alvos diferentes. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende um DD que liga especificamente HER2 por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente HER2 por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes expressos na superfície de uma célula de câncer. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente HER2 por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer expressos na superfície de diferentes células de câncer.
[0330] Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma variante de um DD de ligação de HER2 aqui divulgado (DD de referência) que retém a capacidade de ligar especificamente HER2. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de HER2 contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10, substituições conservadoras ou não conservadoras em comparação com um DD de ligação de HER2 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de HER2 contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8,
9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10, substituições conservadoras em comparação com um DD de ligação de HER2 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de HER2 contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10, substituições não conservadoras em comparação com um DD de ligação de HER2 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950.
[0331] Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de HER2 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras ou não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido 1 a 22, 29 a 46 e 52 a 72, de um DD de ligação de HER2 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de HER2 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras nas posições correspondentes aos resíduos de aminoácido 1 a 22, 29 a 46 e 52 a 72, de um DD de HER2 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de HER2 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido 1 a 22, 29 a 46 e 52 a 72, de um DD de ligação de HER2 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950.
[0332] Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de HER2 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras ou não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido: 2 a 6, 8 a 10, 12, 13, 15 a 17, 19, 20, 29, 30, 32 a 34, 36, 37, 39 a 41, 43, 44, 52 a 55, 57 a 59, 61, 62, 64 a
66 e 68 a 70, de um DD de ligação de HER2 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de HER2 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras nas posições correspondentes aos resíduos de aminoácido: 2 a 6, 8 a 10, 12, 13, 15 a 17, 19, 20, 29, 30, 32 a 34, 36, 37, 39 a 41, 43, 44, 52 a 55, 57 a 59, 61, 62, 64 a 66 e 68 a 70, de um DD de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de HER2 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido: 2 a 6, 8 a 10, 12, 13, 15 a 17, 19, 20, 29, 30, 32 a 34, 36, 37, 39 a 41, 43, 44, 52 a 55, 57 a 59, 61, 62, 64 a 66 e 68 a 70, de um DD de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950.
[0333] Em algumas modalidades, a divulgação fornece um DDpp de ligação de HER2 que bloqueia completa ou parcialmente (por exemplo, se sobrepõe a um epítopo) a ligação de um DD de referência a HER2, em que o DD de referência tem uma sequência de aminoácidos selecionada da SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em outras modalidades, a divulgação fornece DDpp de ligação de HER2 que se liga ao mesmo epítopo de HER2 que um DD de referência que consiste numa sequência de aminoácidos selecionada da SEQ ID NO: 911 a 949 e 950.
[0334] Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão que compreende um DD que liga especificamente HER2. Em algumas modalidades, um DD da proteína de fusão de DDpp liga especificamente HER2 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 927. Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950.
Em outras modalidades, o DDpp compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de comprimento total ou uma porção (fragmento) de um anticorpo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de IgG de comprimento total (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG2 ou IgG4). Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de comprimento completo que liga especificamente um antígeno de câncer. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende um anticorpo terapêutico comercialmente aprovado (por exemplo, rituximab, ofatumumab, ocrelizumab, veltuzumab, MEDI-551, epratuzumab, belimumab, tabalumab, AMG-557, MEDI-570 e NN882). Em outras modalidades, o DDpp de ligação de HER2 é uma proteína de fusão de Fc.
[0335] Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão que compreende um DD de ligação de HER2 operacionalmente ligado a uma proteína de soro. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 compreende toda ou uma porção da albumina do soro humano. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende AFP (SEQ ID NO: 9) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 compreende AFP p26 (SEQ ID NO: 10) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 compreende um polipeptídeo que tem a sequência de SEQ ID NO: 10, 928, 929, 930, 931, 932, 933 ou 934. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém um fragmento de uma proteína de soro ou um fragmento antigênico de uma proteína de soro (por exemplo, AFP e AFP p26). Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um fragmento que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 aminoácidos de uma proteína de soro.
[0336] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 compreende o domínio extracelular de um receptor ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 compreende o domínio extracelular de HER2 (SEQ ID NO: 927) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2- compreende o domínio extracelular de um receptor selecionado a partir do grupo que consiste em: CD19, CD20, CD22, HVEM, BTLA, DR3, CD37; TSLPR, IL7R e gp96 ou um fragmento dos mesmos.
[0337] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 contém um fragmento que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 aminoácidos de um domínio extracelular, de um receptor de superfície celular. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém um fragmento de um domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7). Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém um fragmento de um domínio extracelular de CD123 (SEQ ID NO: 8). Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém um fragmento de um domínio extracelular de CS1 (SEQ ID NO: 925). Em algumas modalidades, o DDpp contém um fragmento de um domínio extracelular, de um receptor selecionado a partir do grupo que consiste em: CD19, CD20, CD22, HVEM, BTLA, DR3, CD37; TSLPR, IL7R e gp96.
[0338] Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 compreende uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear) ou um fragmento da mesma. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de HER2 compreende um fragmento que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 resíduos de aminoácido de uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear). DDpp DE LIGAÇÃO DE AFP
[0339] Em algumas modalidades, um DD do DDpp liga especificamente AFP ou um fragmento do mesmo. Em modalidades adicionais, um DD do DDpp liga especificamente AFP que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 9 ou um fragmento da mesma. Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a
895. Em modalidades adicionais, o DDpp de ligação de AFP compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895.
[0340] Em algumas modalidades, o DDpp de ligação de AFP compreende múltiplos domínios de ligação de alvo que ligam um único alvo (por exemplo, dímeros, trímeros, etc.). Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DDs que ligam especificamente AFP e que têm uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que têm a mesma sequência.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DDs que se ligam especificamente a epítopos diferentes de AFP e que têm uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP e compreende adicionalmente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DDs ou domínios de ligação de alvo adicionais diferentes (por exemplo, scFvs) que se ligam especificamente a AFP ou um antígeno-alvo diferente.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895) e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos expressos na superfície de uma célula B.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895) e compreende adicionalmente e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos de câncer.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 alvos diferentes.
Em modalidades adicionais, o DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP (por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes.
Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes expressos na superfície de uma célula de câncer. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer expressos na superfície de diferentes células de câncer.
[0341] Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma variante de um DD de ligação de AFP aqui divulgado (DD de referência) que retém a capacidade de ligar especificamente AFP. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de AFP contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10, substituições conservadoras ou não conservadoras em comparação com um DD de ligação de AFP de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de AFP contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10, substituições conservadoras em comparação com um DD de ligação de AFP de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de AFP contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10, substituições não conservadoras em comparação com um DD de ligação de AFP de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895.
[0342] Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de AFP contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras ou não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido 1 a 22, 29 a 46 e 52 a 72, de um DD de ligação de AFP de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 4741 a 874 e 886 a
895. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de AFP contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras nas posições correspondentes aos resíduos de aminoácido 1 a 22, 29 a 46 e 52 a 72, de um DD de AFP de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de AFP contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido 1 a 22, 29 a 46 e 52 a 72, de um DD de ligação de AFP de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a
895.
[0343] Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de AFP contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras ou não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido: 2 a 6, 8 a 10, 12, 13, 15 a 17, 19, 20, 29, 30, 32 a 34, 36, 37, 39 a 41, 43, 44, 52 a 55, 57 a 59, 61, 62, 64 a 66 e 68 a 70, de um DD de ligação de AFP de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de AFP contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras nas posições correspondentes aos resíduos de aminoácido: 2 a 6, 8 a 10, 12, 13, 15 a 17, 19, 20, 29, 30, 32 a 34, 36, 37, 39 a 41, 43, 44, 52 a 55, 57 a 59, 61, 62, 64 a 66 e 68 a 70 de um DD de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a
895. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de AFP contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido: 2 a 6, 8 a 10, 12, 13, 15 a 17, 19, 20, 29, 30, 32 a 34, 36, 37, 39 a 41, 43, 44, 52 a 55, 57 a 59, 61, 62, 64 a 66 e 68 a 70, de um DD de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895.
[0344] Em algumas modalidades, a divulgação fornece um DDpp de ligação de AFP que bloqueia completa ou parcialmente (por exemplo, se sobrepõe a um epítopo) a ligação de um DD de referência a AFP, em que o DD de referência tem uma sequência de aminoácidos selecionada da SEQ ID NO: 741, 873 e 874. Em outras modalidades, a divulgação fornece um DDpp de ligação de AFP que se liga ao mesmo epítopo de AFP que um DD de referência que consiste numa sequência de aminoácidos selecionada da SEQ ID NO: 741, 873 e 874.
[0345] Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão que compreende um DD que liga especificamente AFP. Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão compreendendo um DD que liga especificamente AFP que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 9. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em outras modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão compreendendo um DD de ligação de AFP que é uma variante de um DD compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895.
[0346] Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão compreendendo um DD que liga especificamente AFP operacionalmente ligado a um anticorpo de comprimento total ou uma porção (fragmento) de um anticorpo. Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão de Fc. Em alguma modalidade, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de IgG de comprimento total (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG2 ou IgG4). Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de comprimento completo que liga especificamente um antígeno de câncer. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende um anticorpo terapêutico comercialmente aprovado (por exemplo, rituximab, ofatumumab, ocrelizumab, veltuzumab, MEDI-551, epratuzumab, belimumab, tabalumab, AMG-557, MEDI-570 e NN882). Em outras modalidades, o DDpp de ligação de AFP é uma proteína de fusão de Fc.
[0347] Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão que compreende um DD de ligação de AFP operacionalmente ligado a uma proteína de soro. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp compreende albumina do soro humano ou um fragmento da mesma. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém um fragmento de uma proteína de soro ou um fragmento antigênico de uma proteína de soro. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um fragmento que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 aminoácidos de uma proteína de soro.
[0348] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP compreende o domínio extracelular de um receptor ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a
895. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP compreende o domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7) ou CD123 (SEQ ID NO: 8) ou um fragmento do mesmo. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP compreende o domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7), CD123 (SEQ ID NO: 8) ou CS1 (SEQ ID NO: 925) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP- compreende o domínio extracelular de um receptor selecionado a partir do grupo que consiste em: CD19, CD20, CD22, HVEM, BTLA, DR3, CD37; TSLPR, IL7R e gp96 ou um fragmento dos mesmos.
[0349] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP contém um fragmento que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 aminoácidos de um domínio extracelular, de um receptor de superfície celular. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém um fragmento de um domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7) ou CD123 (SEQ ID NO: 8). Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém um fragmento de um domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7) ou CD123 (SEQ ID NO: 8) ou CS1 (SEQ ID NO: 925). Em algumas modalidades, o DDpp contém um fragmento de um domínio extracelular, de um receptor selecionado a partir do grupo que consiste em: CD19, CD20, CD22, HVEM, BTLA, DR3, CD37; TSLPR, IL7R e gp96.
[0350] Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP compreende uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear) ou um fragmento da mesma. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP compreende um fragmento que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 resíduos de aminoácido de uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear). DDpp DE LIGAÇÃO DE AFP p26
[0351] Em algumas modalidades, um DD do DDpp liga especificamente AFP p26. Em modalidades adicionais, um DD do DDpp liga especificamente AFP p26 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 10. Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em modalidades adicionais, o DDpp de ligação de AFP p26 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895.
[0352] Em algumas modalidades, o DDpp de ligação de AFP p26 compreende múltiplos domínios de ligação de alvo que ligam um único alvo (por exemplo, dímeros, trímeros, etc.). Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DDs que ligam especificamente AFP p26 e que têm uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DD que têm a mesma sequência. Em algumas modalidades, o DDpp compreende 2, 3, 4, 5 ou mais de 5, DDs que se ligam especificamente a epítopos diferentes de AFP p26 e que têm uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP p26 e compreende adicionalmente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DDs ou domínios de ligação de alvo adicionais diferentes (por exemplo, scFvs) que se ligam especificamente a AFP p26 ou um antígeno-alvo diferente. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP p26 (por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895) e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos expressos na superfície de uma célula B. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP p26 por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895) e compreende adicionalmente e compreende adicionalmente um ou mais DDs adicionais ou outros domínios de ligação de alvo que ligam um ou mais antígenos de câncer. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP p26 (por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 alvos diferentes. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP p26 (por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP p26 (por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer diferentes expressos na superfície de uma célula de câncer. Em algumas modalidades, o DDpp compreende um DD que liga especificamente AFP p26 (por exemplo, um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895) e liga especificamente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 antígenos de câncer expressos na superfície de diferentes células de câncer.
[0353] Em algumas modalidades, o DDpp compreende uma variante de um DD de ligação de AFP p26 aqui divulgado (DD de referência) que retém a capacidade de ligar especificamente AFP p26. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de AFP p26 contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10, substituições conservadoras ou não conservadoras em comparação com um DD de ligação de AFP p26 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de AFP p26 contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10, substituições conservadoras em comparação com um DD de ligação de AFP p26 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de AFP p26 contém 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10, substituições não conservadoras em comparação com um DD de ligação de AFP p26 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895.
[0354] Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de AFP p26 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras ou não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido 1 a 22, 29 a 46 e 52 a 72, de um DD de ligação de AFP p26 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 4741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de AFP p26 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras nas posições correspondentes aos resíduos de aminoácido 1 a 22, 29 a 46 e 52 a 72, de um DD de AFP p26 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de AFP p26 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido 1 a 22, 29 a 46 e 52 a 72, de um DD de ligação de AFP p26 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895.
[0355] Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de AFP p26 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras ou não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido: 2 a 6, 8 a 10, 12, 13, 15 a 17, 19, 20, 29, 30, 32 a 34, 36, 37, 39 a 41, 43, 44, 52 a 55, 57 a 59, 61, 62, 64 a 66 e 68 a 70, de um DD de ligação de AFP p26 de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de AFP p26 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições conservadoras nas posições correspondentes aos resíduos de aminoácido: 2 a 6, 8 a 10, 12, 13, 15 a 17, 19, 20, 29, 30, 32 a 34, 36, 37, 39 a 41, 43, 44, 52 a 55, 57 a 59, 61, 62, 64 a 66 e 68 a 70, de um DD de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a
895. Em algumas modalidades, a sequência da variante de DD de ligação de AFP p26 contém um total de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, 1 a 3, 1 a 5 ou 1 a 10 substituições não conservadoras em posições correspondentes aos resíduos de aminoácido: 2 a 6, 8 a 10, 12, 13, 15 a 17, 19, 20, 29, 30, 32 a 34, 36, 37, 39 a 41, 43, 44, 52 a 55, 57 a 59, 61, 62, 64 a 66 e 68 a 70, de um DD de referência que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895.
[0356] Em algumas modalidades, a divulgação fornece um DDpp de ligação de AFP p26 que bloqueia completa ou parcialmente (por exemplo, se sobrepõe a um epítopo) a ligação de um DD de referência a AFP p26, em que o DD de referência tem uma sequência de aminoácidos selecionada da SEQ ID NO: 741, 873 e 874. Em outras modalidades, a divulgação fornece um DDpp de ligação de AFP p26 que se liga ao mesmo epítopo de AFP p26 que um DD de referência que consiste numa sequência de aminoácidos selecionada da SEQ ID NO: 741, 873 e 874.
[0357] Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão que compreende um DD que liga especificamente AFP p26. Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão compreendendo um DD que liga especificamente AFP p26 que tem uma sequência de aminoácidos que consiste em SEQ ID NO: 9. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em outras modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão compreendendo um DD de ligação de AFP p26 que é uma variante de um DD compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a
895. Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão compreendendo um DD que liga especificamente AFP p26 operacionalmente ligado a um anticorpo de comprimento total ou uma porção (fragmento) de um anticorpo. Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão de Fc. Em alguma modalidade, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de IgG de comprimento total (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG2 ou IgG4). Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp compreende um anticorpo de comprimento completo que liga especificamente um antígeno de câncer. Em modalidades adicionais, o DDpp compreende um anticorpo terapêutico comercialmente aprovado (por exemplo, rituximab, ofatumumab, ocrelizumab, veltuzumab, MEDI-551, epratuzumab, belimumab, tabalumab, AMG-557, MEDI-570 e NN882). Em outras modalidades, o DDpp de ligação de AFP p26 é uma proteína de fusão de Fc. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de Fc compreende um domínio de Fc humano variante.
[0358] Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão que compreende um DD de ligação de AFP p26 operacionalmente ligado a uma proteína de soro. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP p26 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp compreende albumina do soro humano ou um fragmento da mesma. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém um fragmento de uma proteína de soro ou um fragmento antigênico de uma proteína de soro. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um fragmento que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 aminoácidos de uma proteína de soro.
[0359] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP p26 compreende o domínio extracelular de um receptor ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a
895. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP p26 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP p26 compreende o domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7) ou CD123 (SEQ ID NO: 8) ou um fragmento do mesmo. Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP p26 compreende o domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7) ou CD123 (SEQ ID NO: 8) ou CS1 (SEQ ID NO: 925) ou um fragmento do mesmo. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP p26- compreende o domínio extracelular de um receptor selecionado a partir do grupo que consiste em: CD19, CD20, CD22, HVEM, BTLA, DR3, CD37; TSLPR, IL7R e gp96 ou um fragmento dos mesmos.
[0360] Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP p26 contém um fragmento que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 aminoácidos de um domínio extracelular, de um receptor de superfície celular. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém um fragmento de um domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7) ou CD123 (SEQ ID NO: 8). Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp contém um fragmento de um domínio extracelular de BCMA (SEQ ID NO: 7) ou CD123 (SEQ ID NO: 8) ou CS1 (SEQ ID NO: 925). Em algumas modalidades, o DDpp contém um fragmento de um domínio extracelular, de um receptor selecionado a partir do grupo que consiste em: CD19, CD20, CD22, HVEM, BTLA, DR3, CD37; TSLPR, IL7R e gp96.
[0361] Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP p26 compreende uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear) ou um fragmento da mesma. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp compreende um DD que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP p26 compreende uma variante de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp de ligação de AFP p26 compreende um fragmento que consiste em 5 a 500, 5 a 400, 5 a 300, 5 a 200, 5 a 100, 5 a 50, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100 ou 10 a 50 resíduos de aminoácido de uma proteína intracelular (por exemplo, uma proteína nuclear).
[0362] Os ácidos nucleicos que codificam o DDpp e vetores contendo os ácidos nucleicos também são fornecidos. As células hospedeiras (incluindo partículas virais) contendo os ácidos nucleicos e vetores também são fornecidas. Em algumas modalidades, a célula hospedeira é uma procariota ou uma eucariota que exibe o DD variante em sua superfície. Em algumas modalidades, a célula hospedeira exibe o DD variante em sua superfície. Numa modalidade adicional, a célula hospedeira é um fago que exibe o DD variante em sua superfície. Numa modalidade adicional, a célula hospedeira é uma célula imune humana que expressa uma proteína de fusão de DD variante em sua superfície.
[0363] Um agonista de DDpp se refere a um DDpp que, de alguma forma, aumenta ou intensifica a atividade biológica do alvo de DDpp ou tem atividade biológica comparável com um agonista conhecido do alvo de DDpp. Em outra modalidade, o DDpp é um antagonista do alvo ele liga. Um antagonista de DDpp se refere a um DDpp que bloqueia completa ou parcialmente ou, de alguma forma, interfere com a atividade biológica da proteína-alvo de DDpp ou tem atividade biológica comparável com um antagonista conhecido ou inibidor da proteína-alvo de DDpp.
[0364] Expressões como “afinidade de ligação para um alvo”, “ligação a um alvo” e similares se referem a uma propriedade de um polipeptídeo que pode ser diretamente medida através da determinação das constantes de afinidade, por exemplo, a quantidade de DDpp que se associa e se dissocia a uma dada concentração de antígeno. Diferentes métodos podem ser utilizados para caracterizar a interação molecular, incluindo, porém sem limitações, análise de competição, análise de equilíbrio e análise microcalorimétrica, e análise de interação em tempo real com base em interação de ressonância plasmônica de superfície (por exemplo, utilizando um instrumento Biacore®). Estes métodos são conhecidos para a pessoa versada e são descritos, por exemplo, em Neri et al., Tibtech 14: 465-470 (1996) e Jansson et al., J Biol Chem 272: 8189-8197 (1997).
[0365] As exigências de afinidade para um dado evento de ligação de DDpp são contingentes numa variedade de fatores incluindo, porém sem limitações: a composição e complexidade da matriz de ligação, a valência e densidade tanto do DDpp quanto das moléculas-alvo, e a aplicação funcional do DDpp. Numa modalidade, o DDpp liga um alvo de interesse (por exemplo, BCMA, CD123, AFP ou AFP p26) com uma constante de dissociação (KD) menor ou igual a 5×10−3 M, 10−3 M, 5×10−4 M, 10−4 M, 5×10−5 M, ou 10−5 M. Numa modalidade adicional, um DDpp liga um alvo de interesse com uma KD menor ou igual a 5×10−6 M, 10−6 M, 5×10−7 M, 10−7 M, 5×10−8 M, ou 10−8 M. Em modalidades adicionais, um DDpp liga um alvo de interesse com uma KD menor ou igual a 5×10−9 M, 10−9 M, 5×10−10 M, 10−10 M, 5×10−11 M, 10−11 M, 5×10−12 M, 10−12 M, 5×10−13 M, 10−13 M, 5×10−14 M, 10−14 M, 5×10−15 M, ou 10−15 M. Em algumas modalidades, o DDpp fornecido tem uma constante de dissociação selecionada a partir do grupo que consiste em entre 10 -4 M e 10-5 M, entre 10-5 M e 10-6 M, entre 10-6 M e 10-7 M, entre 10-7 M e 10-8 M, entre 10-8 M e 10-9 M, entre 10-9 M e 10-10 M, entre 10-10 M e 10-11 M e entre 10-11 M e 10- 12 M.
[0366] Em algumas modalidades, o DDpp liga um alvo de interesse (por exemplo, BCMA, CD123, AFP ou AFP p26) em forma ativa. Numa modalidade, o DDpp liga de modo reversível o alvo de interesse na forma ativa e também libera o alvo ligado na forma ativa. Em algumas modalidades, o DDpp liga um alvo de interesse na forma nativa. Nas modalidades específicas, o DDpp liga um alvo de interesse com uma taxa de dissociação ou Kdissociação maior ou igual a 10−10 s−1, 5×10−9 s−1, 10−9 s−1, 5×10−8 s−1, 10−8 s −1, 5×10−7 s −1, 10−7 s-1, 5×10−6 s −1, 10−6 s −1, 5×10−5 s −1, 10−5 s −1, 5×10−4 s−1, 10−4 s−1, 5×10−3 s−1, 10−3 s−1, 5×10−2 s−1, 10−2 s−1, 5×10−1 s−1 ou 10−1 s−1.
[0367] Os experimentos de ligação para determinar a KD e a taxa de dissociação podem ser realizados rotineiramente em inúmeras condições incluindo, porém sem limitações, [pH 6,0, 0,01% de Tween 2, [pH 6,0, 0,1% de gelatina], [pH 5,0, 0,01% de Tween 2, [pH 9,0, 0,1% de Tween 2, [pH 6,0, 15% de etilenoglicol, 0,01% de Tween 2, [pH 5,0, 15% de etilenoglicol, 0,01% de Tween 2 e [pH 9,0, 15% de etilenoglicol, 0,01% de Tween 2. Os tampões nos quais se produz estas soluções podem ser determinados rotineiramente por um versado na técnica, e dependem amplamente do pH desejado da solução final. As soluções de pH baixo (< pH 5,5) podem ser produzidas, por exemplo, em tampão de citrato, tampão de glicina-HCl ou em tampão de ácido succínico. As soluções de pH alto podem ser produzidas, por exemplo, em Tris-HCl, tampões de fosfato ou tampões de bicarbonato de sódio. Inúmeras condições podem ser usadas rotineiramente usadas por aqueles versados na técnica para determinar a KD e a taxa de dissociação a fim de determinar, por exemplo, concentrações de sal e/ou pH ideais.
[0368] Numa modalidade, o DDpp liga especificamente um alvo de interesse (por exemplo, BCMA, CD123, AFP ou AFP p26) com uma KDissociação na faixa de 0,1 a 10-7 s-1, 10-2 a 10-7 s-1 ou 0,5 X 10-2 a 10-7 s-1. Numa modalidade específica, o DDpp (por exemplo, uma proteína de fusão de DDpp) liga um alvo de interesse com uma taxa de dissociação (KDissociação) menor que 5 X 10-2 s-1, 10-2 s-1, 5 X 10-3 s-1 ou 10-3 s-1. Numa modalidade adicional, um DDpp liga um alvo de interesse com uma taxa de dissociação (K Dissociação) menor que 5 X 10-4 s-1, 10-4 s-1, 5 X 10-5 s-1 ou 10-5 s-1, 5 X10-6 s-1, 10-6 s-1, 5 X 10-7 s-1 ou 10-7 s-1.
[0369] Numa modalidade, o DDpp liga especificamente um alvo de interesse (por exemplo, BCMA, CD123 AFP, ou AFP p26) com uma KAssociação na faixa de 103 to 107 M-1s-1, 103 a 106 M-1s-1 ou 103 a 105 M-1s-1. Numa modalidade específica, a DDpp (por exemplo, uma proteína de fusão de DDpp) liga o alvo de interesse com uma taxa de associação (KAssociação) maior que 103 M-1s-1, 5 X 103 M-1s-1, 104 M-1s-1 ou 5 X 104 M-1s-1. Numa modalidade adicional, o DDpp liga o alvo de interesse com uma KAssociação maior que 105 M-1s-1, 5 X 105 M-1s-1, 106 M-1 s-1 ou 5 X 106 M-1s-1 ou 107 M-1 s-1.
[0370] As moléculas de ácido nucleico que codificam o DDpp divulgado são englobadas no presente documento, assim como vetores contendo estes ácidos nucleicos, células hospedeiras contendo estes vetores de ácidos nucleicos e métodos para produzir as proteínas de fusão de DDpp- albumina e o uso destes ácidos nucleicos, vetores e/ou células hospedeiras. A invenção também engloba formulações farmacêuticas compreendendo uma proteína de fusão de DDpp-albumina e um diluente ou carreador farmaceuticamente aceitável. Tais formulações podem ser usadas em métodos para tratar, prevenir, melhorar ou diagnosticar uma doença ou sintoma de doença num paciente, preferencialmente um mamífero, com máxima preferência um ser humano, compreendendo a etapa de administrar a formulação farmacêutica ao paciente. PRODUÇÃO DE DDpp
[0371] O DDpp divulgado pode ser feito rotineiramente usando reagentes comercialmente disponíveis e técnicas conhecidas na técnica. Numa modalidade, os DDpps são sintetizados por técnicas de síntese de fase sólida conhecidas na técnica, como, Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 85: 2149 (1963); Davis et al., Biochem. Intl. 10: 394-414 (1985); Larsen et al., J. Am. Chem. Soc. 115: 6247 (1993); Smith et al., J. Peptide Protein Res. 44: 183 (1994); O'Donnell et al., J. Am. Chem. Soc. 118: 6070 (1996); Stewart e Young, Solid Phase Peptide Synthesis, Freeman (1969); Finn et al., The Proteins, 3.sup.rd ed., 2: 105-253 (1976); e Erickson et al., The Proteins, 3.sup.rd ed., 2: 257-527 (1976). A divulgação contempla peptídeos sintéticos. Alternativamente, o peptídeo é expresso recombinantemente pela introdução de um ácido nucleico que codifica o DDpp divulgado em células hospedeiras, que são cultivadas para expressar o peptídeo. Tais peptídeos são purificados a partir dos meios de cultura ou péletes de célula.
[0372] A produção do DDpp, útil na prática dos métodos fornecidos, pode ser executada usando uma variedade de técnicas-padrão para síntese química, métodos semissintéticos e metodologias de DNA recombinante conhecidos na técnica. Também é fornecido um método para produzir um DDpp, individualmente ou como parte de proteína de fusão de múltiplos domínios, como agentes solúveis e proteínas associadas à célula.
[0373] Opcionalmente, a sequência de referência e/ou os polipeptídeos modificados (por exemplo, DDpp) podem ser desimunizados. Por exemplo, resíduos ou motivos que são potencialmente imunogênicos podem ser identificados e modificados para reduzir ou eliminar potenciais respostas imunes ao DDpp. Os detalhes adicionais a respeito de várias modalidades da produção, seleção e isolamento de DDpp são fornecidos em maiores detalhes abaixo. EXPRESSÃO RECOMBINANTE DE DDpp
[0374] Em algumas modalidades, um DDpp como uma proteína de fusão de DDpp é “recombinantemente produzido", (isto é, produzido usando tecnologia de DNA recombinante). Os métodos recombinantes exemplificativos disponíveis para sintetizar proteínas de fusão de DDpp, incluem, porém sem limitações síntese com base em reação em cadeia da polimerase (PCR), concatemerização, clonagem sem emenda e ligação direcional recursiva (RDL) (consultar, por exemplo, Meyer et al., Biomacromolecules 3: 357-367 (2002); Kurihara et al., Biotechnol. Lett. 27: 665-670 (2005); Haider et al., Mol. Pharm. 2: 139-150 (2005); e McMillan et al., 32: 3643-3646 (1999); em que o conteúdo de cada um dos mesmo está aqui incorporado a título de referência em sua totalidade).
[0375] Os ácidos nucleicos compreendendo uma sequência de polinucleotídeos que codificam um DDpp também são fornecidos. Tais polinucleotídeos opcionalmente compreendem ainda uma ou mais elementos de controle de expressão. Por exemplo, o polinucleotídeo pode compreender um ou mais promotores ou intensificadores transcricionais, sítios de ligação ribossômicos, sinais de terminal de transcrição e sinais de poliadenilação, como elementos de controle de expressão. O polinucleotídeo pode ser inserido em qualquer vetor adequado, que pode ser contido em qualquer célula hospedeira adequada para expressão.
[0376] A expressão de ácidos nucleicos que codificam DDpp é tipicamente alcançada por ligação operacional de um ácido nucleico que codifica o DDpp a um promotor num vetor de expressão. Os típicos vetores de expressão contêm terminadores de transcrição e tradução, sequências se iniciação e promotores úteis para regulação da expressão da sequência de ácidos nucleicos desejada. Os métodos conhecidos na técnica podem ser usados para construir rotineiramente vetores de expressão contendo a sequência de ácidos nucleicos que codifica um DDpp juntamente com sinais de controle de tradução/transcrição apropriados. Estes métodos incluem, porém sem limitações, técnicas de DNA recombinante in vitro, técnicas sintéticas e recombinação in vivo/recombinação genética. A expressão do polinucleotídeo pode ser realizada em qualquer hospedeiro de expressão adequada conhecido na técnica incluindo, porém sem limitações células bacterianas, células de levedura, células de inseto, células de planta ou células de mamífero. Numa modalidade, uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um DDpp é operacionalmente ligada a uma sequência de promotor adequada de modo que a sequência de ácidos nucleicos seja transcrita e/ou traduzida em DDpp num hospedeiro. Os promotores úteis para expressão em E. coli, incluem, porém sem limitações, o promotor de T7.
[0377] Numa modalidade, um vetor compreendendo um DDpp que codifica ácido nucleico é introduzido numa célula hospedeira (por exemplo, fagomídeo) para expressão de um DDpp. O vetor pode permanecer epissômico ou se tornar cromossomicamente integrado, desde que a inserção que codifica um agente terapêutico possa ser transcrita. Os vetores podem ser construídos por tecnologia de DNA recombinante padrão. Os vetores podem ser plasmídeos, fagos, cosmídeos, fagomídeos, vírus ou quaisquer outros tipos conhecidos na técnica, que são usados para replicação e expressão em células procariótica ou eucariótica. Será observado por um versado na técnica que uma ampla variedade de componentes conhecidos na técnica (como elementos de controle de expressão) podem ser incluídos em tais vetores, incluindo uma ampla variedade de sinais de transcrição, como promotores e outras sequências que regulam a ligação de RNA polimerase no promotor. Qualquer promotor conhecido ou demonstrado como sendo eficaz nas células em que o vetor for expresso pode ser usado para iniciar a expressão do DDpp. Os promotores adequados podem ser induzíveis (por exemplo, regulados) ou constitutivos. Os exemplos não limitantes de promotores adequados incluem a região promotor inicial de SV40, o promotor contido na repetição terminal longo de 3' de vírus de sarcoma de Rous, o HSV-1 (vírus simples de herpes 1) promotor de quinase de timidina, as sequências reguladoras do gene de metalotioneiona, etc., assim como o seguinte regiões de controle transcricional de animal, que exibe especificidade de tecido e foram utilizados em animais transgênicos: região de controle de gene de elastase I que é ativo em células ancinares pancreáticas; região de controle de gene de insulina que é ativo em células beta pancreáticas, região de controle de vírus de tumor mamário de camundongo que é ativo em células testiculares, de mama, linfoide e de masto, região de controle de gene de albumina que é ativo em fígado, região de controle de gene alfa-fetoproteína que é ativo na fígado, região de controla de gene alfa 1-antitripsina que é ativa no fígado, região de controle de gene de beta-globina que é ativo em células eritroides, região de controle de gene de proteína básica de mielina que é ativa em células oligodendrócito no cérebro, região de controle de gene de cadeia leve 2 de miosina que é ativa em músculo esquelético e região de controle de gene hormonal de liberação de gonadotropina que é ativa no hipotálamo. Numa modalidade particular, o promotor é uma região de controle de gene de imunoglobulina que é ativa em células linfoides.
[0378] Numa modalidade, um ou vários ácidos nucleicos que codificam um DDpp são expressos sob o controle de um promotor constitutivo ou, alternativamente, um sistema de expressão regulado. Os sistemas de expressão regulados adequados incluem, porém sem limitações, um sistema de expressão regulado de tetraciclina, um sistema de expressão induzível por ecdisona, um sistema de expressão de lac-comutação, um sistema de expressão induzível por glucocorticoide, um sistema de promotor induzível por temperatura e um sistema de expressão induzível por metal de metalotioneína. Se vários ácidos nucleicos diferentes que codificam um DDpp forem contidos no sistema de célula hospedeira, alguns dos ácidos nucleicos podem ser expressos sob o controle de um promotor constitutivo, enquanto outros podem ser expressos sob o controle de um promotor regulado. Os níveis de expressão podem ser determinados por métodos conhecidos na técnica, incluindo análise de Western blot e análise de Northern blot.
[0379] Uma variedade de sistemas de vetor de expressão de hospedeiro pode ser utilizada para expressar um ácido nucleico que codifica um DDpp. Os vetores contendo os ácidos nucleicos que codificam o DDpp (por exemplo, subunidades de DD individuais ou fusões de DDpp) ou porções ou fragmentos dos mesmos, incluem vetores de plasmídeo, vetores de fago de filamento único ou duplo, assim como vetores virais de RNA ou DNA de filamento único ou duplo. O fago e vetores virais também podem ser introduzidos em células hospedeiras na forma de vírus embalados ou encapsulados usando técnicas conhecidas para infecção e transdução. Ademais, os vetores virais podem ser competentes para replicação ou alternativamente, com deficiência de replicação. Alternativamente, os sistemas de tradução livre de célula também podem ser usados para produzir a proteína usando RNAs derivados dos construtos de expressão de DNA (consultar, por exemplo, WO86/05807 e WO89/01036; e Patente no U.S. 5.122.464; em que o conteúdo de cada um está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade).
[0380] Geralmente, qualquer tipo de células ou linhagem celular cultivada pode ser usado para expressar um DDpp fornecido no presente documento. Em algumas modalidades, a linhagem celular de base usada para gerar células hospedeiras geneticamente modificadas é um fago, uma célula bacteriana, uma célula de levedura ou uma célula de mamífero. Uma variedade de sistemas de vetor de expressão em hospedeiro pode ser usada para expressar a sequência de codificação de uma proteína de fusão de DDpp. As células de mamífero podem ser usadas como sistemas de célula hospedeira transfectados com vetores de DNA plasmídeo ou DNA cosmídeo recombinantes contendo a sequência de codificação do alvo de interesse e a sequência de codificação do polipeptídeo de fusão.
[0381] As células podem ser isolados primários de organismos (incluindo ser humano), culturas ou linhagens celulares de natureza transformada ou transgênica. Em algumas modalidades, a célula hospedeira é uma célula humana. Em algumas modalidades, a célula hospedeira é uma célula T humana. Em algumas modalidades, a célula hospedeira é derivada de um paciente humano.
[0382] As células hospedeiras úteis incluem, porém sem limitações micro-organismos como, bactérias (por exemplo, E. coli e B. subtilis) transformadas com vetores de expressão de DNA de bacteriófago, DNA plasmídeo ou DNA cosmídeo recombinantes contendo sequências de codificação de DDpp; levedura (por exemplo, Saccharomyces, Pichia) transformada com vetores de expressão de levedura recombinante contendo sequências de codificação de DDpp; sistemas de célula de inseto infectados com vetores de expressão de vírus recombinante (por exemplo, Baculovírus) contendo sequências de codificação de DDpp; sistemas de célula vegetal infectadas com vetores de expressão de vírus recombinante (por exemplo, vírus do mosaico da couve-flor, CaMV; vírus do mosaico do tabaco, TMV) ou transformadas com vetores de expressão de plasmídeo recombinante (por exemplo, plasmídeo Ti) contendo sequências de codificação de DDpp. Em modalidades particulares, os sistemas de célula de mamífero são usados para produzir o DDpp. Os sistemas de célula de mamífero tipicamente utilizam construtos de expressão recombinante contendo promotores derivados do genoma de células de mamífero (por exemplo, promotor de metalotioneína) ou de vírus de mamífero (por exemplo, o promotor tardio de adenovírus; promotor
7.5K do vírus vaccinia).
[0383] Os procariontes úteis como células hospedeiras na produção de um DDpp como proteína de fusão de DDpp incluem organismos gram-negativos ou gram-positivos, tal como E. coli e B. subtilis. Os vetores de expressão para uso em células hospedeiras procarióticas, de modo geral, contêm um ou mais genes marcadores selecionáveis fenotípicos (por exemplo, genes que codificam proteínas que conferem resistência a antibióticos ou que fornecem um requisito autotrófico). Os exemplos de vetores de expressão de hospedeiro procariótico incluem a série pKK223-3 (Pharmacia, Uppsala, Suécia), pGEMl (Promega, Wis., EUA), pET (Novagen, Wis., EUA) e pRSET
(Invitrogen, Calif., EUA) de vetores (consultar, por exemplo, Studier, J. Mol. Biol. 219: 37 (1991) e Schoepfer, Gene 124: 83 (1993)). As sequências promotoras exemplificativas frequentemente usadas em vetores de expressão de célula hospedeira procarionte incluem T7, (Rosenberg et al., Gene 56: 125- 135 (1987)), beta-lactamase (penicilinase), sistema promotor de lactose (Chang et al., Nature 275: 615 (1978)); e Goeddel et al., Nature 281: 544 (1979)), sistema promotor de triptofano (trp) (Goeddel et al., Nucl. Acids Res. 8: 4057 (1980)) e promotor tac (Sambrook et al., 1990, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2ª edição, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.).
[0384] Numa modalidade, um sistema de célula hospedeira eucariótica é usado, incluindo células de levedura transformadas com vetores de expressão de levedura recombinantes contendo a sequência de codificação de um DDpp, tal como, o sistema de expressão ensinado no Pedido no U.S. 60/344.169 e WO03/056914 ( métodos para produzir glicoproteína do tipo humano numa célula hospedeira eucariótica não humana) (em que o conteúdo de cada um está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade). A levedura exemplificativa que pode ser usada para produzir as composições fornecidas, como, DD, inclui levedura dos gêneros Saccharomyces, Pichia, Actinomycetes e Kluyveromyces. Os vetores de levedura tipicamente contêm uma sequência de origem de replicação de um plasmídeo de levedura 2mu, uma sequência autonomamente replicante (ARS), uma região promotora, sequências para poliadenilação, sequências para terminação de transcrição e um gene marcador selecionável. Os exemplos de sequências promotoras em construtos de expressão de levedura incluem promotores de metalotioneína, 3-fosfoglicerato quinase (Hitzeman, J. Biol. Chem. 255: 2073 (1980)) e outras enzimas glicolíticas, tal como enolase, gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase, hexoquinase, piruvato descarboxilase, fosfofructoquinase, glicose-6-fosfato isomerase, 3-fosfo glicerato mutase, piruvato quinase, triosefosfato isomerase, fosfoglicose isomerase e glucoquinase. Os vetores e promotores adequados adicionais para uso em expressão de levedura assim como protocolos de transformação de levedura são conhecidos na técnica. Consultar, por exemplo, Fleer, Gene 107: 285-195 (1991) e Hinnen, PNAS 75: 1929 (1978).
[0385] Os sistemas de cultura de célula hospedeira de inseto e de planta também são úteis para produzir as composições englobadas pela divulgação. Tais sistemas de célula hospedeira incluem, por exemplo, sistemas de célula de inseto infectados com vetores de expressão de vírus recombinante (por exemplo, baculovírus) contendo a sequência de codificação de um DD; sistemas de célula vegetal infectados com vetores de expressão de vírus recombinante (por exemplo, vírus do mosaico da couve-flor, CaMV; vírus do mosaico do tabaco, TMV) ou transformados com vetores de expressão de plasmídeo recombinante (por exemplo, plasmídeo Ti) contendo a sequência de codificação de um DD, incluindo, porém sem limitação, os sistemas de expressão ensinados na Patente no U.S. 6.815.184; Publicações nos 60/365.769, e 60/368.047; e WO04/057002, WO04/024927, e WO03/078614; em que o conteúdo de cada um está incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade.
[0386] Numa modalidade adicional, os sistemas de célula hospedeira podem ser usados, incluindo sistemas de célula animal infectados com vetores de expressão de vírus recombinante (por exemplo, adenovírus, retrovírus, vírus adenoassociados, herpes vírus, lentivírus), incluindo linhagens celulares manipuladas para conter múltiplas cópias do DNA que codifica um DDpp estavelmente amplificado (CHO/dhfr) ou instavelmente amplificado em cromossomos de minuto duplo (por exemplo, linhagens celulares murinas). Numa modalidade, o vetor que compreende o polinucleotídeo (ou polinucleotídeos) que codifica o DDpp é policistrônico. As células de mamífero exemplificativas úteis para produzir estas composições incluem células 293 (por exemplo, 293T e 293F), células CHO, células BHK, células NS0, células SP2/0, células de mieloma YO, células de mieloma de camundongo P3X63, células PER, PER.C6 (Crucell, Países-Baixos) células VERY, células Hela,
células COS, células MDCK, células 3T3, células W138, células BT483, células Hs578T, células HTB2, células BT20, células T47D, células CRL7O30, células HsS78Bst, células de hibridoma e outras células de mamífero. As células hospedeiras de mamífero exemplificativas adicionais que são úteis na prática das modalidades fornecidas incluem, porém sem limitação, células T. Alguns exemplos de sistemas de expressão e métodos de seleção são descritos nas seguintes referências e nas referências citadas nas mesmas: Borth et al., Biotechnol. Bioen. 71(4): 266-73 (2000), em Werner et al., Arzneimittel- forschung/Drug Res. 48(8): 870-80 (1998), Andersen et al., Curr. Op. Biotechnol. 13: 117-123 (2002), Chadd et al., Curr. Op. Biotechnol. 12: 188-194 (2001), e Giddings, Curr. Op. Biotechnol. 12: 450-454 (2001). Os exemplos adicionais de sistemas de expressão e métodos de seleção são descritos em Logan et al., PNAS 81: 355-359 (1984), Birtner et al., Methods Enzymol. 153: 51-544 (1987)). As sequências de controle transcricional e traducional para vetores de expressão de célula hospedeira de mamífero são frequentemente derivadas de genomas virais. As sequências promotoras e sequências intensificadoras comumente usadas em vetores de expressão de mamífero incluem sequências derivadas de Polioma vírus, Adenovírus 2, Vírus Símio 40 (SV40) e citomegalovírus humano (CMV). Os vetores de expressão comercialmente disponíveis exemplificativos para uso em células hospedeiras de mamífero incluem pCEP4 (Invitrogen) e pcDNA3 (Invitrogen).
[0387] Os métodos físicos para introduzir um ácido nucleico numa célula hospedeira (por exemplo, uma célula hospedeira de mamífero) incluem precipitação de fosfato de cálcio, lipofecção, bombardeamento de partículas, microinjeção, eletroporação e similares. Métodos para produzir células que compreende vetores e/ou ácidos nucleicos exógenos são bem conhecidos na técnica. Consultar, por exemplo, Sambrook et al. (2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York).
[0388] Métodos biológicos para introduzir um polinucleotídeo de interesse numa célula hospedeira incluem o uso de vetores de DNA e RNA.
Vetores virais, e especialmente vetores retrovirais, se tornaram o método mais amplamente usado para inserir genes em células de mamífero (por exemplo, humanas). Outros vetores virais podem ser derivados de lentivírus, poxvírus, vírus herpes simplex I, adenovírus e vírus adenoassociados e similares. Consultar, por exemplo, as Patentes nos U.S. 5.350.674 e 5.585.362, cujo conteúdo está incorporado ao presente documento a título de referência em sua totalidade.
[0389] Os métodos para introduzir um polinucleotídeo de DNA e RNA de numa célula hospedeira incluem eletroporação de células, em que um campo elétrico é aplicado a células a fim de aumentar a permeabilidade da membrana celular, permitindo que produtos químicos, fármacos ou polinucleotídeos sejam introduzidos na célula. Construtos de DNA ou RNA contendo DDpp podem ser introduzidos em células de mamífero ou procariontes usando eletroporação.
[0390] Numa modalidade preferencial, a eletroporação de células resulta na expressão de um DDpp-CAR na superfície de células T, células NK, células NKT. Tal expressão pode ser transitória ou estável ao longo da vida da célula. A eletroporação pode ser realizada com métodos conhecidos na técnica, incluindo Sistemas de Transfecção MaxCyte GT® e STX® (MaxCyte, Gaithersburg, MD, EUA).
[0391] Meios químicos para introduzir um polinucleotídeo numa célula hospedeira incluem sistemas de dispersão coloidal, tais como complexos de macromoléculas, nanocápsulas, microesferas, esférulas e sistemas à base de lipídeos incluindo emulsões óleo-em-água, micélios, micélios mistos e lipossomos. Um sistema coloidal exemplificativo para uso como veículo de administração in vitro e in vivo é um lipossomo (por exemplo, uma vesícula membranar artificial). No caso em que um sistema de distribuição não viral é utilizado, um veículo de distribuição exemplificativo é um lipossoma. O uso de formulações lipídicas é contemplado para a introdução dos ácidos nucleicos numa célula hospedeira (in vitro, ex vivo ou in vivo). Em outro aspecto, o ácido nucleico pode estar associado a um lipídio. O ácido nucleico associado a um lipídio pode ser encapsulado no interior aquoso de um lipossoma, intercalado dentro da bicamada de lipídio de um lipossoma, ligado a um lipossoma por meio de uma molécula de ligação que está associado tanto ao lipossoma quanto ao oligonucleotídeo, capturado num lipossoma, complexado com um lipossoma, disperso numa solução contendo um lipídio, misturado com um lipídio, combinado com um lipídio, contido como uma suspensão num lipídio, contido ou complexado com uma micela ou associado de outro modo a um lipídio. As composições associadas a lipídio, lipídio/DNA ou lipídio/vetor de expressão não se limitam a qualquer estrutura particular na solução. Por exemplo, as mesmas podem estar presentes numa estrutura de bicamada, como micelas, ou com uma estrutura “colapsada”. As mesmas podem também ser simplesmente intercaladas numa solução, formando possivelmente agregados que não são uniformes no tamanho ou formato. Os lipídios são substâncias graxas que podem ser lipídios de ocorrência natural ou sintéticos. Por exemplo, lipídeos incluem as gotículas graxas que ocorrem naturalmente no citoplasma bem como a classe de compostos que contêm hidrocarbonatos alifáticos de cadeia longa e seus derivados, tais como ácidos graxos, álcoois, aminas, aminoálcoois e aldeídos.
[0392] Lipídeos adequados para uso podem ser obtidos a partir de fontes comerciais. Por exemplo, dimiristoil fosfatidilcolina (“DMPC”) pode ser obtida junto à Sigma, St. Louis, MO; fosfato de dicetila (“DCP”) pode ser obtido junto à K & K Laboratories (Plainview, NY); colesterol (“Choi”) pode ser obtido junto à Calbiochem-Behring; dimiristoil fosfatidilglicerol (“DMPG”) e outros lipídeos podem ser obtidos junto à Avanti Polar Lipids, Inc. (Birmingham, AL). Soluções de estoque de lipídios em clorofórmio ou clorofórmio/metanol podem ser armazenadas a cerca de -20°C. Clorofórmio pode ser usado como o único solvente, visto que é mais rapidamente evaporado do que metanol. “Lipossomo” é um termo genérico que abrange uma variedade de veículos lipídicos uni e multilamelares formados pela geração de bicamadas ou agregados lipídicos encerrados. Os lipossomos podem ser caracterizados como tendo estruturas vesiculares com uma membrana de bicamada fosfolipídica e um meio aquoso interno. Lipossomos multilamelares têm múltiplas camadas lipídicas separadas por meio aquoso. Se formam espontaneamente quando fosfolipídeos são suspensos num excesso de solução aquosa. Os componentes lipídicos passam por autorrearranjo antes da formação de estruturas fechadas e encerram água e solutos dissolvidos entre as bicamadas lipídicas (Ghosh et al., Glycobiology 5: 505-510 (1991)). No entanto, composições que têm diferentes estruturas em solução relativamente à estrutura vesicular normal também estão abrangidas. Por exemplo, os lipídios podem assumir uma estrutura micelar ou existir meramente como agregados não uniformes de moléculas lipídicas. Também são contemplados complexos lipofectamina-ácido nucleico.
[0393] A despeito do método usado para introduzir ácidos nucleicos exógenos numa célula hospedeira, a presença da sequência de ácidos nucleicos recombinante na célula hospedeira pode ser rotineiramente confirmada através de uma variedade de ensaios conhecidos na técnica. Tais ensaios incluem, por exemplo, ensaios de “biologia molecular” conhecidos na técnica, tais como Southern e Northern blotting, RT-PCR e PCR; ensaios “bioquímicos”, tais como detecção da presença ou ausência de um peptídeo particular, por exemplo, por meios imunológicos (ELISAs e Western blots) ou por ensaios descritos no presente documento para identificar agentes que são abrangidos pelo escopo da invenção.
[0394] Genes-repórter são usados para identificar células potencialmente transfectadas e para avaliar a funcionalidade de sequências regulatórias. Em geral, um gene-repórter é um gene que não está presente nem é expresso pelo organismo, tecido ou célula recebedora e que codifica um polipeptídeo cuja expressão é manifestada por alguma propriedade facilmente detectável, por exemplo, atividade enzimática. A expressão do gene-repórter é avaliada num tempo adequado após o DNA ter sido introduzido nas células receptoras. Uma lista não limitante de genes-repórter adequados pode incluir genes que codificam luciferase, beta-galactosidase, cloranfenicol acetil- transferase, fosfatase alcalina secretada ou o gene da proteína verde fluorescente (por exemplo, Ui-Tei et al., FEBS Lett. 479: 79-82 (2000)). Os sistemas de expressão adequados são conhecidos na técnica e podem ser preparados com o uso de técnicas conhecidas ou comercialmente obtidas. Em geral, o construto com a região flanqueadora 5’ mínima exibindo o nível mais elevado de expressão do gene repórter é identificado como o promotor. Tais regiões promotoras podem ser rotineiramente ligadas a um gene repórter e usadas para avaliar agentes para a capacidade de modular a transcrição acionada por promotor.
[0395] Diversos sistemas de seleção podem ser usados em sistemas de expressão de vetor de hospedeiro mamífero, incluindo, porém sem limitação, os genes de timidina quinase de vírus herpes simplex, hipoxantina- guanina fosforibosiltransferase e adenina fosforibosiltransferase (Lowy et al., Cell 22: 817 (1980)) que podem ser empregados em células tk-, hgprt- ou aprt-, respectivamente. Adicionalmente, a resistência antimetabólito pode ser usada com base na seleção, por exemplo, para dhfr, gpt, neo, hygro, trpB, hisD, ODC (ornitina descarboxilase) e o sistema de glutamina sintase. EXPRESSÃO DE DDpp associado à célula
[0396] Em outra modalidade, a produção de DDpp resultada em composições de DDpp associado à célula. Por exemplo, a expressão de vetores recombinantes que codificam DDpp operacionalmente ligado a uma âncora de membrana celular ou domínio transmembranar têm o potencial para permanecer associada à célula. Os DDpps compreendendo receptores de antígeno quimérico são intencionalmente associados à célula e usados no contexto da célula em que são expressos. Uma modalidade particular se refere a uma estratégia de transferência celular adotiva de células T que foram transduzidas para expressar um receptor de DDpp de antígeno quimérico (CAR). Preferencialmente, a célula pode ser geneticamente modificada para expressar de modo estável um DDpp em sua superfície, conferindo especificidade de alvo inovadora que é independente de MHC.
[0397] Uma variedade de vetores derivados de vírus pode ser usada em aplicações em que vírus são usados para transfecção e integração num genoma de célula de mamífero. Os vírus que são úteis como vetores incluem, porém sem limitação, retrovírus, adenovírus, vírus adenoassociados, herpes vírus e lentivírus. Os vetores lentivirais são particularmente adequados para atingir transferência de gene a longo prazo (por exemplo, terapia imune com célula T adotiva) visto que permitem integração estável a longo prazo de um transgene e sua propagação em células filhas. Os vetores lentivirais têm a vantagem adicional em relação a vetores derivados de oncorretrovírus, tais como vírus de leucemia murina, de poderem transduzir células não proliferativas, tais como hepatócitos. Os mesmos também têm a vantagem adicional de possuírem baixa imunogenicidade. Em geral, um vetor adequado contém uma origem de replicação funcional em pelo menos um organismo, uma sequência promotora, sítios de endonucleases de restrição convenientes e um ou mais marcadores selecionáveis (por exemplo, WO01/96584 e WO01/29058; e Patente no U.S. 6.326.193). Diversas sequências promotoras de vetor estão disponíveis para expressão dos transgenes. Um exemplo de um promotor adequado é a sequência promotora inicial imediata de citomegalovírus (CMV). Esta sequência promotora é uma sequência promotora constitutiva forte com a capacidade para acionar níveis elevados de expressão de qualquer sequência polinucleotídica operativamente à mesma. Outro exemplo de um promotor adequado é EF-1a. No entanto, outras sequências promotoras constitutivas também podem ser usadas, incluindo, porém sem limitação, o promotor inicial do vírus símio 40 (SV40), vírus do tumor mamário de camundongo (MMTV), promotor de repetições terminais longas (LTR) do vírus da imunodeficiência humana (HIV), promotor de MoMuLV, um promotor do vírus da leucemia aviária, um promotor inicial imediato do vírus Epstein- Barr, um promotor do vírus do sarcoma de Rous, bem como promotores de genes humanos, tais como, porém sem limitação, o promotor da actina, o promotor de miosina, o promotor de hemoglobina e o promotor de creatina cinase. Os promotores induzíveis incluem, porém sem limitação, um promotor da metalotioneína, um promotor de glicocorticoide, um promotor de progesterona e um promotor de tetraciclina.
[0398] Para avaliar a expressão de um polipeptídeo DDpp-CAR ou suas porções, o vetor de expressão a ser introduzido numa célula também pode conter um gene marcador selecionável ou um gene repórter ou ambos para facilitar a identificação e seleção de células de expressão a partir da população de células que se pretende transfectar ou infectar através de vetores virais, em outros aspectos, o marcador selecionável pode estar contido numa porção separada de DNA e ser usado num procedimento de cotransfecção. Marcadores selecionáveis e genes repórter podem ser flanqueados com sequências reguladoras apropriadas para permitir a expressão nas células hospedeiras. Os marcadores selecionáveis úteis incluem, por exemplo, genes para resistência a antibióticos, tais como neo e similares.
[0399] Antes da expansão e modificação genética das células T, uma fonte de células T é obtida a partir de um indivíduo. Células T podem ser obtidas de algumas fontes, incluindo células mononucleares do sangue periférico, medula óssea, tecido de gânglios linfáticos, sangue do cordão umbilical, tecido do timo, tecido de um sítio de infecção, ascites, efusão pleural, tecido do baço e tumores. Em várias modalidades, qualquer número de linhagens de célula T disponíveis na técnica pode ser usado.
[0400] Uma discussão completa sobre métodos de isolamento, cultura, ativação e expansão de célula T pode ser encontrada no documento n o WO/12079000, cujo conteúdo está incorporado ao presente documento a título de referência em sua totalidade.
[0401] É adicionalmente fornecida uma célula hospedeira compreendendo ácidos nucleicos que codificam um DDpp descrito no presente documento. Composições compreendendo uma sequência de ácidos nucleicos que codifica o DDpp também são fornecidas.
[0402] “Coexpressar”, como usado no presente documento, se refere à expressão simultânea de duas ou mais sequências de codificação de proteína. As sequências de codificação podem ser ácidos nucleicos que codificam, por exemplo, uma única proteína ou uma proteína quimérica como uma cadeia única de polipeptídeo. SÍNTESE QUÍMICA DE DDpp
[0403] Além dos métodos recombinantes, a produção de DDpp também pode ser executada usando síntese química orgânica do polipeptídeo desejado usando uma variedade de processos químicos de fase líquida e sólida conhecidos na técnica. Vários sintetizadores automáticos são comercialmente disponíveis e podem ser usados de acordo com protocolos conhecidos. Consultar, por exemplo, Tam et al., J. Am. Chem. Soc. 105: 6442 (1983); Merrifield, Science 232: 341-347 (1986); Barany e Merrifield, The Peptides, Gross e Meienhofer, eds, Academic Press, New York, 1- 284; Barany et al., Int. J. Pep. Protein Res. 30: 705-739 (1987); Kelley et al. em Genetic Engineering Principles and Methods, Setlow, J. K., ed. Plenum Press, NY. 1990, volume 12, páginas 1 a 19; Stewart et al., Solid-Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman Co., San Francisco, 1989. Uma vantagem destas metodologias é que as mesmas permitem a incorporação de resíduos de aminoácido não naturais na sequência do DDpp.
[0404] Os DDpps que são usados nos métodos abrangidos no presente documento podem ser modificados durante ou após a síntese ou tradução, por exemplo, por glicosilação, acetilação, benzilação, fosforilação, amidação, peguilação, formilação, derivação por grupos de proteção/bloqueio conhecidos, clivagem proteolítica, ligação a uma molécula de anticorpo, hidroxilação, iodação, metilação, miristoilação, oxidação, peguilação, processamento proteolítico, fosforilação, prenilação, racemização, selenoilação, sulfação, ubiquitinação, etc. (conferir, por exemplo, Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties, 2a Edição. (W.H. Freeman and
Co., N.Y., 1992); Postranslational Covalent Modification of Proteins, Johnson, edição. (Academic Press, New York, 1983), páginas 1-12; Seifter, Meth. Enzymol. 182: 626-646 (1990); Rattan, Ann. NY Acad. Sci. 663: 48-62 (1992).) Em modalidades específicas, os peptídeos são acetilados no N-terminal e/ou amidadas na C-terminal.
[0405] A divulgação também fornece derivados de DDpp e inclui polipeptídeos que foram quimicamente modificados de alguma maneira distinta de adição, deleção ou substituição de aminoácidos. Neste sentido, um DDpp é quimicamente ligado com polímeros, lipídeos, outras porções químicas orgânicas e/ou porções químicas inorgânicas. As modificações de polipeptídeo exemplificativas são fornecidas em Hermanson, Bioconjugate Techniques, Academic Press, (1996). Os DDpps opcionalmente compreendem um grupo funcional que facilita a conjugação para outra porção química (por exemplo, uma porção química de peptídeo). Os grupos funcionais exemplificativos incluem, porém sem limitações, isotiocianato, isocianato, acil azida, éster de NHS, cloreto de sulfonila, aldeído, epóxido, oxirano, carbonato, agente de arilação, imidoéster, carbodi-imida, anidrido, derivados de haleto de alquila (por exemplo, derivados de haloacetila), maleimida, aziridina, derivados de acriloíla, agentes de arilação, reagentes de troca de tiol-dissulfeto (por exemplo, dissulfetos de piridila ou tiol de TNB), diazoalcano, carboildi-imadazol, carbonato de N,N'-Disuccinila, cloroformato de N-hidroxisuccinimidila e derivados de hidrazina. A maleimida é útil, por exemplo, para gerar um DDpp que liga albumina in vivo.
[0406] Em algumas modalidades, o DDpp é covalentemente modificado para incluir uma ou mais ligações de polímero solúveis em água. O polímero solúvel em água (ou outra porção química) é fixada a qualquer resíduo de aminoácido, embora a ligação ao N- ou C-terminal seja preferencial em algumas modalidades. Os polímeros úteis incluem, porém sem limitações, PEG (por exemplo, PEG aproximadamente 40 kD, 30 kD, 20 kD, 10 kD, 5 kD ou 1 kD de tamanho), polioxietileno glicol, polipropileno glicol, monometoxi-
polietileno glicol, dextrano, amido de hidroxietila, celulose, poli-(N-vinil pirrolidona)-polietileno glicol, homopolímeros de propileno glicol, um óxido de polipropileno/óxido de etileno co-polímero, ácido polissiálico (PSA), poliois polioxietilados (por exemplo, glicerol) e álcool polivinílico, assim como misturas de qualquer um dos supracitados. Numa modalidade, o DDpp é PEGilado. As porções químicas de PEG são disponíveis em diferentes formatos, por exemplo, linear ou ramificado. Para discussão adicional de ligações de polímero solúveis em água, consultar a Patente no U.S. 4.640.835; 4.496.689;
4.301.144; 4.670.417; 4.791.192; e 4.179.337. Outras porções químicas úteis para aprimorar a meia-vida de peptídeo ou estabilidade são descritas no presente documento e incluem, por exemplo, albumina (opcionalmente modificada para permitir a conjugação ao DDpp), cadeias de ácido graxo (por exemplo, ácido graxo de C12-C18, como um ácido graxo de C14 ou ácidos dicarboxílicos, como ácido dicarboxílico octadecano (oddc)), um anticorpo ou fragmento do mesmo (por exemplo, uma porção de Fc de um anticorpo) e multímeros de prolina-alanina-serina.
[0407] Em algumas modalidades, o DDpp é conjugado a uma porção química de polietileno glicol (PEG), albumina do soro humano (HSA), um anticorpo ou fragmento de anticorpo, amido de hidroxietila, um multímero de prolina-alanina-serina (PASilação), um ácido graxo de C12-C18 ou ácido polissiálico.
[0408] Em algumas modalidades, os DDpps são acilados no aminoácido N-terminal do peptídeo. Em outro aspecto, os DDpps são amidados no aminoácido C-terminal do polipeptídeo. Ainda em outro aspecto, os peptídeos são acilados no aminoácido N-terminal do peptídeo e são amidados no aminoácido C-terminal do peptídeo.
[0409] Em algumas modalidades, o DDpp compreende um ou mais aminoácidos modificados ou não proteinogênicos ou um grupo de ligante modificado (consultar, por exemplo, Grant, Synthetic Peptides: A User's Guide, Oxford University Press (1992)). Os aminoácidos modificados incluem, por exemplo, aminoácidos em que o grupo amino e/ou carboxila é substituído por outro grupo. Os exemplos não -limitantes incluem aminoácidos modificados incorporando tioamidas, ureias, tioureias, acil-hidrazidas, ésteres, olefinas, sulfonamidas, amidas de ácido fosfórico, cetonas, álcoois, amidas de ácido borônico, benzodiazepinas e outros heterociclos aromáticos ou não aromáticos (consultar, Estiarte et al., Burgers Medicinal Chemistry, 6.sup.th edição, Volume 1, Parte 4, John Wiley & Sons, New York (2002)). Os aminoácidos não proteinogênicos incluem, porém sem limitações, beta-alanina (Bal), norvalina (Nva), norleucina (Nle), ácido 4-aminobutírico (gama-Abu), ácido 2-aminoisobutírico (Aib), ácido 6-amino-hexanoico (épsilon-Ahx), ornitina (Orn), hidroxiprolina (Hyp), taurina, sarcosina, citrulina (Cit), ácido cisteico (Coh), ciclo-hexilalanina (Cha), metioninassulfoxido (Meo), metioninassulfona (Moo), homosserina-metiléster (Hsm), propargilglicina (Eag), 5-fluorotriptofano (5Fw), 6-fluorotriptofano (6Fw), 3',4'-dimetoxifenil-alanina (Ear), 3',4'- difluorofenilalanina (Dff), 4'-fluorofenil-alanina (Pff), 1-naftil-alanina (1Ni), 2- naftilalanina (2Ni), 1-metiltriptofano (1Mw), penicilamina (Pen), homosserina (Hse), t-butilglicina, t-butilalanina, fenilglicina (Phg), benzotienilalanina (Bta), L-homo-cisteína (Hcy), N-metil-fenilalanina (Nmf), 2-tienilalanina (Thi), 3,3- difenilalanina (Ebw), L-alfa-t-butilglicina (Tle), Bpa, homofenilalanina (Hfe) e S- benzil-L-cisteína (Ece). Estes e outros aminoácidos não proteinogênicos podem existir como D- ou L-isômeros. Os exemplos de ligantes modificados incluem, porém sem limitações, o ligante flexível 4,7,10-trioxa-1,13-tridecanodiamina (Ttds), glicina, ácido 6-amino-hexanoico, beta-alanina (Bal), ácido pentinoico (Pyn) e combinações de Ttds, glicina, ácido 6-amino-hexanoico e Bal.
[0410] Qualquer uma dentre inúmeras modificações químicas podem ser executadas por técnicas conhecidas, incluindo, porém sem limitações acetilação, formilação, etc. Adicionalmente, o derivado pode conter um ou mais aminoácidos não clássicos.
TABELA 1 – DDS DE LIGAÇÃO ESPECÍFICA DE ALVO exemplificativos
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWYEFSWRLQAIHQRLNALGGSEAELAAFE 11 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRAYAAGIRG BCMA 9,48683
ALQAYRHN
MGSWHEFTWRLIAIQQRLEALGGSEAELAAFE 12 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRAYAAGIRH BCMA 17,125
HLQAYRHN
MGSWREFAWRLVAINSRLKALGGSEAELAAFE 13 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRHYAASIRD BCMA 9,66
GLQAYRHN
MGSWHEFAWRLQAINQRLNALGGSEAELAAF 14 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRHYAAHIR BCMA 13,14
NGLQAYRHN
MGSWNEFAWRLTAIEQRLMALGGSEAELAAFE 15 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRHYAAGIRD BCMA 18,28
NLQAYRHN
MGSWTEFAWRLQAIHQRLQALGGSEAELAAFE 16 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRVYAAKIRIS BCMA 18,71
LQAYRHN
MGSWIEFAWRLQAIHQRLDALGGSEAELAAFE 17 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLREYAANIRD BCMA 18,97
SLQAYRHN
MGSWHEFTWRLVAIQQRLQALGGSEAELAAFE 18 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRKFAAKIRY BCMA 19,51
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWHEFTWRLIAIRERLFALGGSEAELAAFEK 19 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEELREYAASIRNM BCMA 12,99
LQAYRHN
MGSWIEFSWRLEAIRQRLQALGGSEAELAAFE 20 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRSYAARIRQ BCMA 9,92
ELQAYRHN
MGSWVEFSWRLEAIRQRLQALGGSEAELAAFE 21 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRSYAARIRQ BCMA 19,14
ELQAYRHN
MGSWVEFSWRLEAIRQRLTALGGSEAELAAFE 22 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRKYAARIRG BCMA 21,3
ELQAYRHN
MGSWVEFAWRLTAIDQRLSALGGSEAELAAFE 23 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVENLRFYAAKIRS BCMA 8,43
HLQAYRHN
MGSWVEFAWRLEAIKQRLTALGGSEAELAAFE 24 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRLYAAKIRR BCMA 8,9
VLQAYRHN
MGSWVEFAWRLTAIHTRLWALGGSEAELAAFE 25 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRKYAAKIRK BCMA 6,08
QLQAYRHN
MGSWTEFAWRLEAINQRLQALGGSEAELAAFE 26 KEIAAFESELQAYKGKGKPEVEALRAYAAKIRT BCMA 15,1475
RLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWSEFAWRLEAIHQRLSALGGSEAELAAFE 27 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRLFAAQIRE BCMA 18,04
NLQAYRHN
MGSWNEFAWRLIAINQRLWALGGSEAELAAFE 28 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRHFAANIRN BCMA 11,53
DLQAYRHN
MGSWTEFAWRLIAIDQRLMALGGSEAELAAFE 29 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEILRELAAEIRFH BCMA 8,55
LQAYRHN
MGSWSEFMNRLDAITYRLVALGGSEAELAAFE 30 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVELLRHYAAQIRD BCMA 12,9
SLQAYRHN
MGSWTEFMERLDAISYRLWALGGSEAELAAFE 31 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRDYAAIIRNS BCMA 9,87
LQAYRHN
MGSWAEFMDRLDAITYRLWALGGSEAELAAFE 32 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRGYAAIIRSE BCMA 10,83
LQAYRHN
MGSWIEFQERLDAIFYRLHALGGSEAELAAFEK 33 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRDAAATIRRQ BCMA 18,58
LQAYRHN
MGSWIEFQQRLDAIFYRLYALGGSEAELAAFEK 34 EIAAFESELQAYKGKGNPEVENLRDMAAIIRKQ BCMA 20,02
LQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWYEFQSRLDAIFYRLFALGGSEAELAAFE 35 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLREAAASIRT BCMA 14,08
QLQAYRHN
MGSWSEFIDRLDAITYRLFALGGSEAELAAFEK 36 EIAAFESELQAYKGKGNPEVENLRWYAGVIRE BCMA 10,18
QLQAYRHN
MGSWSEFYDRLYAINQRLFALGGSEAELAAFE 37 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRWYAAFIRA BCMA 5,98
QLQAYRHN
MGSWYEFYDRLDAIVHRLDALGGSEAELAAFE 38 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVENLRWYAAMIR BCMA 14,68
VRLQAYRHN
MGSWVEFQDRLEAITDRLYALGGSEAELAAFE 39 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYSAAMIRVI BCMA 8,87825
LQAYRHN
MGSWVEFQERLMAISDRLYALGGSEAELAAFE 40 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRWQAAMIR BCMA 6,7
YTLQAYRHN
MGSWFEFQHRLEAISMRLHALGGSEAELAAFE 41 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRWQAAYIRV BCMA 4,05
VLQAYRHN
MGSWVEFQSRLEAIATRLRALGGSEAELAAFE 42 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRWQAAWIR BCMA 18,0075
MMLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWEEFQYRLGAIAARLQALGGSEAELAAFE 43 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRWQAAMIR BCMA 3,11
FMLQAYRHN
MGSWYEFQVRLQAISWRLKALGGSEAELAAFE 44 KEIAAFESELQAYKGKGNHEVEELRIQAALIRV BCMA 14,23
MLQAYRHN
MGSWVEFRSRLEAISNRLRALGGSEAELAAFE 45 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRTTAALIRVY BCMA 3,04
LQAYRHN
MGSWVEFKARLEAISSRLTALGGSEAELAAFEK 46 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYSAALIRVYL BCMA 8,70714
QAYRHN
MGSWSEFYTRLEAINNRLHALGGSEAELAAFE 47 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYTAALIRIY BCMA 3,66
LQAYRHN
MGSWAEFYHRLDAISSRLRALGGSEAELAAFE 48 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYTAALIRIY BCMA 4,31
LQAYRHN
MGSWTEFASRLVAIRQRLQALGGSEAELAAFE 49 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYSAAIIRVM BCMA 7,99
LQAYRHN
MGSWSEFDQRLAAIYQRLNALGGSEAELAAFE 50 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYSAALIRV BCMA 7,72
MLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWVEFHNRLSAISDRLGALGGSEAELAAFE 51 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYSAALIRV BCMA 7,36
MLQAYRHN
MGSWNEFEDRLSAISARLSALGGSEAELAAFE 52 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYSAALIRV BCMA 4,09
MLQAYRHN
MGSWVEFEYRLVAIFDRLQALGGSEAELAAFE 53 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYQAALIRV BCMA 7,63
MLQAYRHN
MGSWVEFQGRLGAIHERLQALGGSEAELAAFE 54 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYSAALIRV BCMA 3,83429
FLQAYRHN
MGSWYEFSMRLSAIWERLHALGGSEAELAAFE 55 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYQAALIRF BCMA 7,12
YLQAYRHN
MGSWTEFSQRLGAISERLYALGGSEAELAAFE 56 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYSAALIRF BCMA 4,15
MLQAYRHN
MGSWTEFHDRLEAITHRLNALGGSEAELAAFE 57 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYSAALLRV BCMA 5,79
FLQAYRHN
MGSWTEFEHRLEAIAGRLNALGGSEAELAAFE 58 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYSAALIRF BCMA 6,34
WLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWTEFANRLEAINARLHALGGSEAELAAFE 59 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRFSAALIRV BCMA 6,42
YLQAYRHN
MGSWEEFDRRLYAIARRLEALGGSEAELAAFE 60 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYQAALIRV BCMA 8,85
WLQAYRHN
MGSWIEFHQRLEAIVTRLEALGGSEAELAAFEK 61 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYQAALIRVF BCMA 8
LQAYRHN
MGSWSEFYDRLKAIADRLHALGGSEAELAAFE 62 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRTEAAIIRVY BCMA 8,215
LQAYRHN
MGSWWEFEDRLSAIMERLHALGGSEAELAAFE 63 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYRAAIIRVY BCMA 10,39
LQAYRHN
MGSWVEFEERLAAIATRLHALGGSEAELAAFE 64 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRWRAAIIRV BCMA 16,29
YLQAYRHN
MGSWSEFRGRLQAIHSRLNALGGSEAELAAFE 65 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYSAAIIRIYL BCMA 7,585
QAYRHN
MGSWTEFRDRLGAIYHRLDALGGSEAELAAFE 66 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYQAAIIRVY BCMA 6,7
LQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWVEFYHRLEAIRYRLSALGGSEAELAAFE 67 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYVAAVIRY BCMA 7,8
RLQAYRHN
MGSWVEFYDRLEAIRYRLSALGGSEAELAAFE 68 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYIAAVIRYR BCMA 5,636
LQAYRHN
MGSWVEFYDRLAAIRKRLYALGGSEAELAAFE 69 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRFRAALIRIW BCMA 9,76
LQAYRHN
MGSWEEFSERLEAISIRLRALGGSEAELAAFEK 70 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRVSAAIIRVWL BCMA 11,26
QAYRHN
MGSWSEFSDRLHAISDRLQALGGSEAELAAFE 71 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRIQAAIIRVW BCMA 6,3725
LQAYRHN
MGSWIEFSHRLEAIVDRLGALGGSEAELAAFEK 72 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRNTAAIIRVYL BCMA 18,67
QAYRHN
MGSWEEFSDRLEAILRRLDALGGSEAELAAFE 73 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRFAAAIIRVQ BCMA 9,08
LQAYRHN
MGSWMEFSHRLDAIHERLYALGGSEAELAAFE 74 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRFAAAIIRVQ BCMA 6,3
LQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWSEFQQRLHAIRTRLYALGGSEAELAAFE 75 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRFEAAIIRVM BCMA 11,615
LQAYRHN
MGSWYEFQNRLGAINRRLNALGGSEAELAAFE 76 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRFEAAIIRVM BCMA 4,68
LQAYRHN
MGSWQEFTGRLHAIRHRLEALGGSEAELAAFE 77 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRFEAAYIRV BCMA 3,315
WLQAYRHN
MGSWTEFDHRLGAIWERLVALGGSEAELAAFE 78 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRFHAAIIRIFL BCMA 9,54
QAYRHN
MGSWTEFHVRLSAIWDRLVALGGSEAELAAFE 79 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRFHAAIIRIVL BCMA 23,62
QAYRHN
MGSWNEFDNRLQAIWDRLHALGGSEAELAAF 80 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRFHAAMIRI BCMA 9,87
TLQAYRHN
MGSWTEFHERLQAIWFRLHALGGSEAELAAFE 81 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRFRAAIIRLY BCMA 12,0656
LQAYRHN
MGSWNEFSGRLTAIKDRLAALGGSEAELAAFE 82 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRFRAAVIRL BCMA 3,39
WLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWVEFDERLVAIWFRLHALGGSEAELAAFE 83 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEALRARAAYIRI BCMA 8,96
WLQAYRHN
MGSWSEFGQRLSAIWERLLALGGSEAELAAFE 84 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEALRADAAFIRI BCMA 14,01
WLQAYRHN
MGSWYEFEDRLVAIWIRLDALGGSEAELAAFE 85 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYNAAFIRG BCMA 4,93
ALQAYRHN
MGSWYEFGDRLSAIWERLAALGGSEAELAAFE 86 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRTHAAEIRTI BCMA 8,895
LQAYRHN
MGSWHEFYYRLEAIEQRLHALGGSEAELAAFE 87 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVETLRFDAALIRIY BCMA 3,73
LQAYRHN
MGSWSEFEERLAAIGSRLFALGGSEAELAAFE 88 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVETLRFDAALIRIY BCMA 4,85
LQAYRHN
MGSWLEFHYRLHAIQFRLYALGGSEAELAAFE 89 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVETLRHIAALIRNQ BCMA 12,7486
LQAYRHN
MGSWQEFYNRLEAIHMRLFALGGSEAELAAFE 90 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEGLRSDAAPIRD BCMA 6,47
VLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWNEFHHRLWAIFDRLGALGGSEAELAAFE 91 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRKMAAGIRG BCMA 3,88
GLQAYRHN
MGSWYEFHYRLKAINDRLYALGGSEAELAAFE 92 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRYSAAMIRH BCMA 6,04
KLQAYRHN
MGSWTEFHQRLGAIHARLGALGGSEAELAAFE 93 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRFSAAFIRLK BCMA 8,87
LQAYRHN
MGSWFEFQYRLEAIFYRLLALGGSEAELAAFEK 94 EIAAFESELQAYKGKGKPEVEELRVRAALIRHLL BCMA 17,31
QAYRHN
MGSWVEFHARLDAIYTRLGALGGSEAELAAFE 95 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRVLAAHIRIS BCMA 3,8
LQAYRHN
MGSWVEFGTRLSAIYNRLWALGGSEAELAAFE 96 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRFEAAIIRIM BCMA 15,425
LQAYRHN
MGSWVEFTHRLDAIYIRLWALGGSEAELAAFEK 97 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRHEAAVIREE BCMA 13,9167
LQAYRHN
MGSWVEFHGRLAAIYVRLFALGGSEAELAAFE 98 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRYHAAMIRR BCMA 4
NLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWVEFDRRLVAIYIRLWALGGSEAELAAFE 99 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEALRDDAALIRLL BCMA 8,93
LQAYRHN
MGSWVEFDRRLVAIYIRLWALGGSEAELAAFE 100 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRYDAATIRE BCMA 8
TLQAYRHN
MGSWLEFDRRLTAIYLRLWALGGSEAELAAFE 101 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEALREDAAMIRD BCMA 9,82
MLQAYRHN
MGSWIEFDRRLLAIHVRLWALGGSEAELAAFEK 102 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRADAAKIRME BCMA 13,72
LQAYRHN
MGSWIEFDRRLIAIWIRLWALGGSEAELAAFEK 103 EIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRSDAADIRQK BCMA 9,45
LQAYRHN
MGSWVEFDRRLIAIWVRLWALGGSEAELAAFE 104 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLRSDAAMIRE BCMA 5,77
HLQAYRHN
MGSWYEFHTRLIAIYVRLWALGGSEAELAAFEK 105 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRGDAAKIRG BCMA 4,06
YLQAYRHN
MGSWSEFSTRLSAIYVRLWALGGSEAELAAFE 106 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRNKAASIRK BCMA 5,35
TLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWVEFRYRLGAIYHRLWALGGSEAELAAFE 107 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRDRAATIRR BCMA 10,81
LLQAYRHN
MGSWNEFRNRLGAIDSRLWALGGSEAELAAFE 108 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVETLRAHAAIIRSV BCMA 4,69667
LQAYRHN
MGSWHEFRNRLGAIDSRLWALGGSEAELAAFE 109 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVETLRARAAMIRS BCMA 3,49359
VLQAYRHN
MGSWTEFYQRLEAINFRLWALGGSEAELAAFE 110 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRDKAALIRL BCMA 6,955
MLQAYRHN
MGSWNEFYNRLHAINLRLWALGGSEAELAAFE 111 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLREHAAIIRQA BCMA 3,00395
LQAYRHN
MGSWEEFYGRLSAIQDRLWALGGSEAELAAFE 112 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRMHAAVIR BCMA 3,28
RALQAYRHN
MGSWGEFNLRLVAIHVRLWALGGSEAELAAFE 113 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLRSQAANIRA BCMA 12,81
QLQAYRHN
MGSWGEFSDRLEAINERLWALGGSEAELAAFE 114 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRWQAAFIRA BCMA 4,26
NLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWMEFQGRLPAILARLRALGGSEAELAAFE 115 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEHLRDKAAYIRW BCMA 8,32
MLQAYRHN
MGSWMEFEGRLPAILARLRALGGSEAELAAFE 116 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEHLRDKAAYIRW BCMA 3,93
MLQAYRHN
MGSWFEFQNRLQAILFRLRALGGSEAELAAFE 117 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVENLRDKAAYIRL BCMA 5,39333
MLQAYRHN
MGSWVEFDMRLQAILERLRALGGSEAELAAFE 118 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEHLRDSAAYIRL BCMA 23,525
MLQAYRHN
MGSWVEFNARLDAILFRLRALGGSEAELAAFE 119 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEHLRDQAAYIRL BCMA 13,52
MLQAYRHN
MGSWMEFNVRLRAILDRLHALGGSEAELAAFE 120 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVELLRDKAAYIRF BCMA 15,59
MLQAYRHN
MGSWIEFDTRLAAIVHRLRALGGSEAELAAFEK 121 EIAAFESELQAYKGKGNPEVELLRDKAAYIRYM BCMA 13,9475
LQAYRHN
MGSWIEFDYRLKAILHRLRALGGSEAELAAFEK 122 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEGLRDKAAYIRFL BCMA 11,8767
LQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWYEFEDRLLAIKVRLRALGGSEAELAAFE 123 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRDQAAYIRF BCMA 17,6133
MLQAYRHN
MGSWYEFQDRLSAITTRLRALGGSEAELAAFE 124 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVELLRDKAAYIRF BCMA 10,085
MLQAYRHN
MGSWEEFDDRLNAIVYRLRALGGSEAELAAFE 125 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEMLRDQAAYIRL BCMA 18,64
MLQAYRHN
MGSWVEFEQRLHAIVVRLRALGGSEAELAAFE 126 KEIAAFESELQAYKGGGNPEVENLRDQAAYIRF BCMA 17,7467
MLQAYRHN
MGSWVEFEWRLEAIVVRLRALGGSEAELAAFE 127 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEHLRDKAAYIRY BCMA 14,95
MLQAYRHN
MGSWYEFEHRLKAIVSRLGALGGSEAELAAFE 128 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEHLRDKAAYIRY BCMA 4,55
MLQAYRHN
MGSWMEFKHRLAAITFRLRALGGSEAELAAFE 129 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVELLRDKAAYIRLL BCMA 6,06
LQAYRHN
MGSWMEFEGRLHAIKRRLRALGGSEAELAAFE 130 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRDQAAYIRL BCMA 7,335
LLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWSEFVFRLDTIKSRLRALGGSEAELAAFE 131 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVETLRDQAAYIRL BCMA 19,86
MLQAYRHN
MGSWYEFDERLSAIKLRLRALGGSEAELAAFE 132 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRAQAAYIRAI BCMA 16,94
LQAYRHN
MGSWMEFDERLWAIKKRLRALGGSEAELAAFE 133 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLRHQAAYIRM BCMA 9,526
LLQAYRHN
MGSWHEFDGRLSAIKRRLWALGGSEAELAAFE 134 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEHLRDQAAYIRY BCMA 5,4
MLQAYRHN
MGSWYEFDGRLQAIIARLRALGGSEAELAAFEK 135 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEHLRFRAAYIRWI BCMA 3,29
LQAYRHN
MGSWFEFDKRLYAIIHRLRALGGSEAELAAFEK 136 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRYKAAIIRLYL BCMA 11,82
QAYRHN
MGSWVEFDNRLYAIVDRLRALGGSEAELAAFE 137 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEHLRQKAAYIRLI BCMA 11,7167
LQAYRHN
MGSWIEFHQRLNAIFNRLRALGGSEAELAAFEK 138 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRHHAAYIRE BCMA 7,34167
MLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWNEFRLRLWAITERLRALGGSEAELAAFE 139 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVECLRAEAAWIRT BCMA 3,87179
MLQAYRHN
MGSWYEFWLRLSAISYRLQALGGSEAELAAFE 140 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRKEAAEIRS BCMA 14,4653
WLQAYRHN
MGSWYEFQLRLWAIHWRLIALGGSEAELAAFE 141 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRMRAAEIR BCMA 20,59
NELQAYRHN
MGSWYEFAHRLEAIEWRLIALGGSEAELAAFEK 142 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRQYAAAIRNY BCMA 9,48
LQAYRHN
MGSWYEFDTRLGAIRNRLGALGGSEAELAAFE 143 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRFQAAYIRF BCMA 13,934
LLQAYRHN
MGSWYEFWVRLTAIRWRLEALGGSEAELAAFE 144 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLREQAASIR BCMA 5,72
WVLQAYRHN
MGSWFEFDRRLKAIDRRLMALGGSEAELAAFE 145 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRMQAAIIRN BCMA 6,1625
YLQAYRHN
MGSWVEFWERLDAIDNRLGALGGSEAELAAFE 146 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRWHAAYIR BCMA 11,42
GYLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWAEFWDRLDAIDSRLNALGGSEAELAAFE 147 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLREWAAYIRG BCMA 18,22
YLQAYRHN
MGSWAEFDLRLRAIAKRLVALGGSEAELAAFE 148 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEMLRLDAAYIRG BCMA 4,09
VLQAYRHN
MGSWSEFWDRLYAIRIRLDALGGSEAELAAFE 149 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRSVAARIRN BCMA 12,52
WLQAYRHN
MGSWSEFWFRLGAIRNRLDALGGSEAELAAFE 150 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRDVAAHIRH BCMA 14,93
WLQAYRHN
MGSWSEFNDRLDAIRWRLDALGGSEAELAAFE 151 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRQVAATIRY BCMA 13,59
RLQAYRHN
MGSWVEFWDRLGAIRERLQALGGSEAELAAFE 152 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRYTAAAIRH BCMA 5,22
YLQAYRHN
MGSWAEFWDRLGAIRERLQALGGSEAELAAFE 153 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRYTAAAIRH BCMA
YLQAYRHN
MGSWTEFWDRLGAIRERLQALGGSEAELAAFE 154 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRYTAAAIRH BCMA
YLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWVEFWDRLGAIRERLQALGGSEAELAAFE 155 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLKYTAAAIRH BCMA
YLQAYRHN
MGSWVEFWDRLGAIRERLQALGGSEAELAAFE 156 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLQYTAAAIRH BCMA
YLQAYRHN
MGSWVEFWDRLGAIRERLQALGGSEAELAAFE 157 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRYTAAAIKH BCMA
YLQAYRHN
MGSWAEFWDRLGAIRERLQALGGSEAELAAFE 158 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLQYTAAAIKH BCMA
YLQAYRHN
MGSWTEFWDRLGAIRERLQALGGSEAELAAFE 159 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLQYTAAAIKH BCMA
YLQAYRHN
MGSWVEFWDRLGAIRERLEALGGSEAELAAFE 160 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRYVAAVIRH BCMA 4,18
RLQAYRHN
MGSWVEFWDRLGAIRERLQALGGSEAELAAFE 161 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRASAAAIRIA BCMA 3,07
LQAYRHN
MGSWVEFWDRLGAIRDRLDALGGSEAELAAFE 162 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRNTAAYIRT BCMA 16,034
FLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWSEFWVRLGAIRDRLDALGGSEAELAAFE 163 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEALRVTAAQIRH BCMA 23,5
YLQAYRHN
MGSWSEFWVRLGAIRERLDALGGSEAELAAFE 164 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRYTAATIRR BCMA 7,55667
FLQAYRHN
MGSWSEFWARLGAIRERLDALGGSEAELAAFE 165 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRYTAATIRR BCMA
FLQAYRHN
MGSWSEFWVRLGAIRERLDALGGSEAELAAFE 166 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRYTAGTIRR BCMA
FLQAYRHN
MGSWSEFWVRLGAIRERLDALGGSEAELAAFE 167 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRYTAATIKR BCMA
FLQAYRHN
MGSWSEFWARLGAIRERLDALGGSEAELAAFE 168 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRYTAGTIKR BCMA
FLQAYRHN
MGSWSEFWDRLTAIRVRLDALGGSEAELAAFE 169 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRYTAAHIRK BCMA 16,14
FLQAYRHN
MGSWTEFWTRLNAIYERLDALGGSEAELAAFE 170 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRFTAASIRM BCMA 8,43
YLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWFEFWDRLAAIRDRLEALGGSEAELAAFE 171 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRYVAAKIRV BCMA 12,78
RLQAYRHN
MGSWTEFWVRLNAIRDRLEALGGSEAELAAFE 172 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRHTAAIIRNY BCMA 12,53
LQAYRHN
MGSWVEFWHRLGAIYDRLEALGGSEAELAAFE 173 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRRTAALIRQ BCMA 19,904
TLQAYRHN
MGSWVEFWNRLGAIYDRLEALGGSEAELAAFE 174 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRHTAAVIRL BCMA 14,55
YLQAYRHN
MGSWSEFWERLEAIYDRLYALGGSEAELAAFE 175 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRRTAATIRS BCMA 18,78
FLQAYRHN
MGSWEEFDNRLEAIFDRLEALGGSEAELAAFE 176 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELREFAATIRIT BCMA 3,93
LQAYRHN
MGSWMEFWDRLYAIEFRLFALGGSEAELAAFE 177 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRRVAATIRN BCMA 11,6925
ELQAYRHN
MGSWTEFWERLYAIEYRLFALGGSEAELAAFE 178 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRSVAATIRY BCMA 12,7
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWNEFWERLYAIELRLFALGGSEAELAAFE 179 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRMTAAYIRN BCMA 9,945
ELQAYRHN
MGSWYEFWKRLYAIEYRLFALGGSEAELAAFE 180 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEALRKVAAKIRE BCMA 14,785
QLQAYRHN
MGSWTEFWARLYAIEMRLFALGGSEAELAAFE 181 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEHLRRVAALIRE BCMA 12,46
QLQAYRHN
MGSWHEFWDRLYAIEFRLFALGGSEAELAAFE 182 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRQVAAKIRW BCMA 7,3
HLQAYRHN
MGSWDEFEFRLGALRWRLIALGGSEAELAAFE 183 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRFGAAHIRHI BCMA 9,2
LQAYRHN
MGSWTEFYHRLYAIRERLSALGGSEAELAAFE 184 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRFGAAHIRH BCMA 9,6275
LLQAYRHN
MGSWVEFETRLDAIRMRLGALGGSEAELAAFE 185 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRFGAAHIRA BCMA 14,0717
LLQAYRHN
MGSWGEFDVRLFAIRERLSALGGSEAELAAFE 186 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRGYAAQIRS BCMA 7,35333
FLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWVEFDERLSAIRERLDALGGSEAELAAFE 187 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRLYAAQIRV BCMA 5,61
FLQAYRHN
MGSWSEFDGRLGAIWDRLYALGGSEAELAAFE 188 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRDRAAQIRE BCMA 10,0305
FLQAYRHN
MGSWGEFEGRLHAIRSRLSALGGSEAELAAFE 189 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRGYAAWIRA BCMA 6,17
LLQAYRHN
MGSWGEFNGRLGAIRERLQALGGSEAELAAFE 190 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLRAYAASIRA BCMA 4,95333
VLQAYRHN
MGSWWEFTFRLAAIEFRLEALGGSEAELAAFE 191 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRAIAAEIRKS BCMA 5,75
LQAYRHN
MGSWDEFQFRLAAIGFRLGALGGSEAELAAFE 192 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRRQAARIRH BCMA 6,155
LLQAYRHN
MGSWYEFVTRLHAIDHRLKALGGSEADLAAFE 193 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRFYAAGIR BCMA 4,12
MNLQAYRHN
MGSWSIEFWRLEAIKFRLIALGGSEAELAAFEK 194 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLRVEAAAIRRV BCMA 8,43
LQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWGEFEHRLDPSTCVWLALGGSEAELAAF 195 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRRGAAVIR BCMA 4,05
HWLQAYRHN
MGSWIEFAMRLEAIENRLTALGGSEAELAIFES 196 MIAHFEELLQNYKGKGNPEVEALIHEAFAIHKEL BCMA 10,73
WAYRHN
MGSWNEFYQRLEAIENRLQALGGSEAELAMFE 197 VRIALFEDMLQGYKGKGNPEVEALKQEAIAILR BCMA 6,01
ELIAYRHN
MGSWNEFYDRLRAIKKRLYALGGSEAELADFE 198 EDIAQFEVDLQDYKGKGNPEVEALHREAHAITH BCMA 12,36
ELWAYRHN
MGSWGEFKHRLALIKWYLEALGGSEAELAHFE 199 DWIAVFEVQLQNYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 17,09
DELQAYRHN
MGSWYEFKHRLAIIKWYLEALGGSEAELAKFEA 200 WIAEFEMILQRYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 5,505
LQAYRHN
MGSWYEFKHRLAIIKWYLEALGGSEAELAHFE 201 QYIADFEGTLQKYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 14,8333
ELQAYRHN
MGSWYNFKHRLAIIKWYLEALGGSEAELARFE 202 NFIANFETQLQLYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 6,7615
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWFQFKHRLAIIKWQLEALGGSEAELAWFE 203 QWIADFEHQLQHYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 10,39
DELQAYRHN
MGSWYNFKHRLAIIKWFLEALGGSEAELAVFEV 204 WIADFEHQLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 16,38
ELQAYRHN
MGSWDAFKHRLALIKWYLEALGGSEAELAHFE 205 EYIAEFESNLQSYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 12,98
ELQAYRHN
MGSWDGFKHRLALIKWYLEALGGSEAELANFE 206 NWIAEFEQRLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 23,62
DELQAYRHN
MGSWNGFKHRLAIIKWYLEALGGSEAELASFE 207 SYIAEFESGLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 16,53
ELQAYRHN
MGSWNSFKHRLALIKWYLEALGGSEAELATFE 208 WYIASFESELQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 10,34
ELQAYRHN
MGSWSDFKYRLAVIKFYLEALGGSEAELASFES 209 FIAHFEDDLQKYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 13,04
LQAYRHN
MGSWSGFKYRLAVIKFYLEALGGSEAELASFEL 210 FIAKFEIDLQNYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDEL BCMA 13,066
QAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWYGFKYRLAVIKWYLEALGGSEAELASFE 211 KYIAHFEHDLQAYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 9,05
ELQAYRHN
MGSWYGFKYRLAVIKWYLEALGGSEAELASFE 212 KYIAQFEHDLQAYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 7,63333
ELQAYRHN
MGSWYGFKYRLALIKWYLEALGGSEAELASFE 213 TYIADFEDLLQAYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 13,03
ELQAYRHN
MGSWSTFKYHLAVIKWYLEALGGSEAELASFE 214 DYIAQFETDLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 11,65
ELQAYRHN
MGSWHEFKYRLALIKWYLEALGGSEAELATFE 215 HHIAQFEWDLQKYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 16,19
DELQAYRHN
MGSWNMFKYRLAHIKWYLEALGGSEAELATFE 216 AYIADFEVDLQKYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 16,33
ELQAYRHN
MGSWHGFKYRLAIIKWWLEALGGSEAELAFFE 217 EWIASFERDLQIYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 6,025
ELQAYRHN
MGSWHGFKYRLAVIKWYLEALGGSEAELAMFE 218 GWIAQFEITLQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 5,99
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWQGFKYRLAVIKWMLEALGGSEAELAFFE 219 NWIAEFETKLQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 7,75
ELQAYRHN
MGSWSGFKYRLAVIKWYLEALGGSEAELATFE 220 EWIAEFETELQFYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 13,975
ELQAYRHN
MGSWGYFKYRLAMIKWYLEALGGSEAELASFE 221 SWIAEFEGSLQAYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 13,018
ELQAYRHN
MGSWHAFKYKLAMIKWYLEALGGSEAELAHFE 222 EWIAEFEALLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 11,63
ELQAYRHN
MGSWQHFKYRLAIIKWYLEALGGSEAELAFFES 223 FIAKFEHDLQKYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 8,91
LQAYRHN
MGSWNDFKYRLAIIKYYLEALGGSEAELAHFES 224 YIASFEHDLQNYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 15,1233
LQAYRHN
MGSWGAFKYRLAIIKFYLEALGGSEAELARFEE 225 FIANFEHDLQNYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 12,88
LQAYRHN
MGSWYNFKYRLAIIKFYLEALGGSEAELAQFEI 226 WIAEFEHDLQGYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 19,91
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWEQFKYRLAIIKYMLEALGGSEAELAWFE 227 SWIANFESDLQHYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 11,01
DELQAYRHN
MGSWQQFKYRLAIIKYYLEALGGSEAELAGFET 228 YIAKFEEVLQSYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 15,12
LQAYRHN
MGSWAGFKYRLAVIKYYLEALGGSEAELAHFE 229 QWIAHFEGMLQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 12,68
DELQAYRHN
MGSWTAFKYRLAIIKFYLEALGGSEAELAHFES 230 YIAHFEDMLQHYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 7,43
LQAYRHN
MGSWAHFKYRLAIIKFWLEALGGSEAELANFEE 231 YIAEFESTLQVYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 13,12
LQAYRHN
MGSWANFKYRLALIKWHLEALGGSEAELASFEI 232 WIADFEESLQWYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 14,2878
ELQAYRHN
MGSWATFKYRLALIKWHLEALGGSEAELADFE 233 EYIAGFEEGLQKYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 15,07
ELQAYRHN
MGSWTHFKYRLALIKWWLEALGGSEAELAGFE 234 VHIADFEAQLQMYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 7,36692
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWNTFKYHLAVIKFMLEALGGSEAELAFFE 235 QWIAEFEVTLQSYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 10,6006
ELQAYRHN
MGSWTQFKYHLAVIKWYLEALGGSEAELAGFE 236 QWIAEFEKTLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 21,1178
ELQAYRHN
MGSWNQFKYRLAVIKFYLEALGGSEAELAHFE 237 TWIAAFEEQLQFYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 12,85
ELQAYRHN
MGSWNEFKYHLAVIKFYLEALGGSEAELAHFET 238 WIAEFEYELQKYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 13,68
LQAYRHN
MGSWVQFKYHLAVIKFYLEALGGSEAELAHFE 239 TWIAEFEVALQGYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 12,6957
ELQAYRHN
MGSWVDFKYHLAVIKFWLEALGGSEAELANFE 240 TWIANFEQELQMYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 13,22
DELQAYRHN
MGSWVDFKYHLAVIKWYLEALGGSEAELADFE 241 NWIAHFESILQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 10,43
ELQAYRHN
MGSWVEFKYHLAVIKFTLEALGGSEAELADFEE 242 EIARFEMILQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 6,92
LQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWSHFKYHLALIKWYLEALGGSEAELAKFE 243 FWIAEFEHNLQMYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 7,93
DELQAYRHN
MGSWYHFKYHLALIKWYLEALGGSEAELAHFE 244 HWIAEFEWTLQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 8,85
DELQAYRHN
MGSWQGFKYHLALIKFYLEALGGSEAELAHFE 245 HWLAEFEHDLQTYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 21,2
DELQAYRHN
MGSWLSFKHHLALIKWYLEALGGSEAELASFE 246 AWIALFEHQLQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 6,305
DELQAYRHN
MGSWSEFKYKLALIKWYLEALGGSEAELAHFE 247 GWIANFETTLQKYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 11,2875
ELQAYRHN
MGSWIEFKYKLAIIKFYLEALGGSEAELAHFEH 248 WIADFEFVLQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 14,88
LQAYRHN
MGSWQNFKYHLAMIKWYLEALGGSEAELANFE 249 EFIAQFEINLQHYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 9,55
ELQAYRHN
MGSWYNFKYHLAIIKWWLEALGGSEAELADFE 250 HYIADFERNLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 8,62636
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWYQFKYHLAIIKWYLEALGGSEAELAGFE 251 NYIATFEQELQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 18,41
ELQAYRHN
MGSWSHFKYHLAIIKFYLEALGGSEAELAGFEI 252 WIAKFEDELQMYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 9,34
ELQAYRHN
MGSWVGFKAHLAIIKWYLEALGGSEAELAGFEI 253 FIADFEALLQMYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 9,71
LQAYRHN
MGSWVNFKYKLAIIKYMLEALGGSEAELAFFED 254 WIAEFERTLQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 7,38951
LQAYRHN
MGSWSNFKYRLAVIKYMLEALGGSEAELAFFE 255 DWIADFELHLQVYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 9,34
ELQAYRHN
MGSWTNFKYKLAVIKFMLEALGGSEAELAFFE 256 DWIAGFEIDLQNYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 11,4075
ELQAYRHN
MGSWTGFKYRLAIIKFMLEALGGSEAELAFFEQ 257 WIADFENELQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 13,89
LQAYRHN
MGSWHNFKYRLAIIKFMLEALGGSEAELAWFE 258 NWIADFEDSLQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 13,59
DELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWFAFKHRLAVIKYMLEALGGSEAELAFFE 259 HWIAQFEHDLQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 11,985
DELQAYRHN
MGSWYEFKHRLAVIKYMLEALGGSEAELAFFE 260 NWIAQFEHELQTYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 3,71
DELQAYRHN
MGSWYKFKHKLAVIKYMLEALGGSEAELAWFE 261 EWIAEFEVTLQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 4,54
ELQAYRHN
MGSWFYFKQKLAFIKWYLEALGGSEAELANFEI 262 YIAEFEVMLQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 7,23
LQAYRHN
MGSWFSFKHHLAVIKWNLEALGGSEAELASFE 263 EQIAEFESVLQAYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 6,45
ELQAYRHN
MGSWGNFKYRLAIIKFHLEALGSSEAELATFEA 264 WIANFESMLQNYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 22,7
ELQAYRHN
MGSWSYFKYGLAIIKIRLEALGGSEAELADFER 265 WIAAFEHDLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 13,33
LQAYRHN
MGSWSYFKFGLAHIKLRLEALGGSEAELADFE 266 QWIASFEEQLQTYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 18,354
DELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWSYFKWGLAHIKLRLEALGGSEAELADFE 267 FWIAEFEGLLQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 17,64
ELQAYRHN
MGSWIYFKYGLAHIKTRLEALGGSEAELADFEQ 268 WIAEFEKMLQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 21,12
ELQAYRHN
MGSWGYFKYGLATIKHRLEALGGSEAELADFE 269 LWIAKFEEQLQVYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 14,01
ELQAYRHN
MGSWEYFKYGLATIKMHLEALGGSEAELADFE 270 HWIAHFEHQLQMYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 18,4033
DELQAYRHN
MGSWSYFKYGLATIKEKLEALGGSEAELADFET 271 WIAMFEKQLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 18,15
ELQAYRHN
MGSWHYFKNGLAIIKEKLEALGGSEAELADFEI 272 WIAMFEMELQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 19,85
ELQAYRHN
MGSWQYFKYGLAIIKIKLEALGGSEAELADFEA 273 WIATFEKQLQHYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 10,28
LQAYRHN
MGSWVYFKHGLAVIKMRLEALGGSEAELADFE 274 TWIAQFEMTLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 21,45
DELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWVYFKYGLAVIKEKLEALGGSEAELADFE 275 TWIAEFEFGLQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 17,58
ELQAYRHN
MGSWYYFKYGLAVIKGKLEALGGSEAELADFE 276 TWIAKFENHLQSYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 3,84
ELQAYRHN
MGSWTYFKYGLALIKYRLEALGGSEAELADFEE 277 WIAQFEVSLQHYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 15,21
ELQAYRHN
MGSWDYFKYGLALIKIKLEALGGSEAELADFEV 278 WIAQFEMALQVYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 15,76
ELQAYRHN
MGSWTYFKFGLAHIKDSLEALGGSEAELADFE 279 QWIAMFEQDLQVYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 17,01
DELQAYRHN
MGSWGYFKHGLAHIKSSLEALGGSEAELADFE 280 VWIAAFENELQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 18,505
ELQAYRHN
MGSWGYFKTGLAIIKAQLEALGGSEAELADFEL 281 WIAQFEETLQFYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 12,75
LQAYRHN
MGSWAYFKYGLAVIKLHLEALGGSEAELADFE 282 RYIAEFEYELQAYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 13,44
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWLDFKEGLADIKRSLEALGGSEAELADFE 283 GVIALFEWKLQTYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 3,03
ELQAYRHN
MGSWEVFKHELAVIKDYLEALGGSEAELAHFE 284 WGIAWFEGFLQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 9,33
DELQAYRHN
MGSWIVFKQSLAWIKEHLEALGGSEAELAEFEF 285 YIANFEHTLQNYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 10,57
LQAYRHN
MGSWIYFKDSLAYIKKYLEALGGSEAELATFEY 286 YIANFEHELQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 3,2
LQAYRHN
MGSWDHFKYNLAWIKKYLEALGGSEAELATFE 287 WYIANFEKRLQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 9,81
DELQAYRHN
MGSWFTFKQNLAWIKLHLEALGGSEAELARFE 288 YYIADFENKLQLYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 14,204
ELQAYRHN
MGSWREFKYGLAHIKRVLEALGGSEAELAVFE 289 YYIAKFEQELQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 14,7
ELQAYRHN
MGSWIQFKYGLAHIKRTLEALGGSEAELAVFE 290 WYIADFEQQLQGYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 8,35667
DELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWVEFKHNLAWIKVTLEALGGSEAELAVFE 291 YYIAQFEEQLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 15,83
ELQAYRHN
MGSWISFKDNLAMIKEFLEALGGSEAELAVFE 292 WYIATFEVELQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 7,16
ELQAYRHN
MGSWHIFKDNLATIKAFLEALGGSEAELAVFEW 293 YIAKFEEELQGYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 3,47
LQAYRHN
MGSWTSFKHGLAGIKRVLEALGGSEAELATFE 294 WYIAQFERHLQAYKGKGNPEVEALRKEAAAIR BCMA 9,765
DELQAYRHN
MGSWQSFKHALADIKINLEALGGSEAELAQFEY 295 AIAVFEYRLQAYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 13,7188
LQAYRHN
MGSWHTFKEALAQIKGELEALGGSEAELASFE 296 YAIAVFEYRLQMYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 6,76
ELQAYRHN
MGSWTDFKTSLADIKAELEALGGSEAELAKFEY 297 YIAIFEYRLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDEL BCMA 18,76
QAYRHN
MGSWTNFKEGLAEIKRDLEALGGSEAELARFE 298 YVIAVFEFRLQNYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 12,3267
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWHTFKDGLAEIKSELEALGGSEAELAMFE 299 YVIAIFEYRLQNYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE BCMA 10,65
LQAYRHN
MGSWQFFKEHLASIKFWLEALGGSEAELAFFE 300 DAIADFEYHLQNYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 10,58
ELQAYRHN
MGSWTYFKEHLASIKFWLEALGGSEAELAFFE 301 DAIAEFEKDLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 6,59507
ELQAYRHN
MGSWIIFKGYLAHIKHHLEALGGSEAELADFEF 302 YIAIFEMELQKYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDEL BCMA 5,18
QAYRHN
MGSWYLFQSHLAHIKHHLEALGGSEAELAWFE 303 FTIAGFEQELQHYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 7,69
ELQAYRHN
MGSWYSFKWTLARIKLELEALGGSEAELAYFE 304 NVIAHFEMELQSYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 4,05
ELQAYRHN
MGSWTTLKWRLAHIKQHLEALGGSEAELALFE 305 YDIAHFEELLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 17,82
ELQAYRHN
MGSWYGFKWYLATIKKHLEALGGSEAELALFE 306 TEIATFELWLQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD BCMA 10,65
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWIEFNMRVLAIEDRLWALGGSEAELAAFE 307 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRYEACLDP CD123 3,2
WSSAAYRHN
MGSWIEFHERLWAIEDRLWALGGSEAELAAFE 308 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLREMAASIRH CD123 3,4
GLQAYRHN
MGSWFEFYERLWAIDDRLWALGGSEAELAAFE 309 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLREEAASIRS CD123 6
SLQAYRHN
MGSWFEFWDRLEAIDDRLFALGGSEAELAAFE 310 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRYNAAEIRK CD123 4,9
ELQAYRHN
MGSWHEFWSRLDAIDDRLFALGGSEAELAAFE 311 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRGAAADIRA CD123 3,8
ELQAYRHN
MGSWYEFWIRLEAIDDRLFALGGSEAELAAFEK 312 EIAAFESELQAYKGKGNPEVDILRDFAADIRTEL CD123 10,4
QAYRHN
MGSWHEFWDRLEAIDDRLYALGGSEAELAAFE 313 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLREEAAYIRE CD123 10,6
LLQAYRHN
MGSWEEFWDRLFAIDDRLWALGGSEAELAAF 314 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVETLRNEAAEIR CD123 3,1
MALQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWWEFDDRLFAIDTRLMALGGSEAELAAFE 315 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLREWAATIRM CD123 3,5
ELQAYRHN
MGSWTEFHDRLEAIDDRLWALGGSEAELAAFE 316 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLREEAAQIRW CD123 5,8
ELQAYRHN
MGSWAEFEDRLWAIEDRLWALGGSEAELAAF 317 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLREEAAAIR CD123 6,2
FELQAYRHN
MGSWVEFWFRLEAIDSRLWALGGSEAELAAFE 318 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLREEAAAIRE CD123 3,2
DLQAYRHN
MGSWVEFWQRLEAIESRLWALGGSEAELAAF 319 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLREEAAEIR CD123 7,7
WELQAYRHN
MGSWSEFWQRLEAIEDRLWALGGSEAELAAF 320 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRENAAMI CD123 4,7
RDELQAYRHN
MGSWSEFITRLEAIDDRLWALGGSEAELAAFEK 321 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEILREEAAEIRQHL CD123 3,3
QAYRHN
MGSWYEFETRLEAIYDRLWALGGSEAELAAFE 322 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVELLRVEAAEIRE CD123 3,2
DLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWTEFYYRLEAIEDRLWALGGSEAELAAFE 323 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLRVEAANIRD CD123 7,5
MLQAYRHN
MGSWYEFVIRLEAIEDRLWALGGSEAELAAFEK 324 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRWYAADIRHE CD123 6,4
LQAYRHN
MGSWTEFSIRLEAIYDRLVALGGSEAELAAFEK 325 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRTYAANIRHE CD123 11,9
LQAYRHN
MGSWTEFSIRLEAIYDRLVALGGSEAELAAFEK 326 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRTYAAFIRHE CD123 10,2
LQAYRHN
MGSWTEFVWRLEAIWDRLDALGGSEAELAAFE 327 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLREDAAVIRH CD123 3,6
FLQAYRHN
MGSWVEFHERLEAIEDRLMALGGSEAELAAFE 328 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLREDAAFIRQ CD123 3,7
LLQAYRHN
MGSWVEFHDRLEAIEDRLYALGGSEAELAAFE 329 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLREDAAYIRS CD123 4,6
ILQAYRHN
MGSWIEFYDRLEAIYDRLDALGGSEAELAAFEK 330 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLREDAAFIRS CD123 7,5
WLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWVEFDQRLEAIYDRLYALGGSEAELAAFE 331 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLREDAAQIRK CD123 5,1
WLQAYRHN
MGSWVEFHDRLEAIEDRLLALGGSEAELAAFE 332 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLREYAAGIRW CD123 3,3
FLQAYRHN
MGSWEEFAQRLYAIEWRLYALGGSEAELAAFE 333 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRYVAAQIRY CD123 16,9
HLQAYRHN
MGSWDEFAWRLDVIFARLGALGGSEAELAAFE 334 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRKNAAQIRD CD123 4,6
GLQAYRHN
MGSWDEFYYRLEAIEMRLGALGGSEAELAAFE 335 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRHYAAQIRH CD123 7,2
MLQAYRHN
MGSWEEFYDRLEAIYNRLGALGGSEAELAAFE 336 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLREYAADIRE CD123 18,6
MLQAYRHN
MGSWDEFGRRLYAIEWQLYALGGEEAELAAFE 337 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEALRKEAAVIRE CD123
NLQAYRHN
MGSWDEFGRRLYAIEWQLYALGGTEAELAAFE 338 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEALRKEAAVIRE CD123
NLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWDEFGRRLYAIETQLYALGGEEAELAAFE 339 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLREIAAVIREN CD123
LQAYRHN
MGSWDEFGRRLYAIEWQLYALGGEEAELAAFE 340 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLREIAAVIREN CD123
LQAYRHN
MGSWDEFGRRLYAIKWQLYALGGEEAELAAFE 341 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLREIAAVIREN CD123
LQAYRHN
MGSWDEFGRRLYAIEWQLYALGGEEAELAAFE 342 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRKIAAVIREN CD123
LQAYRHN
MGSWDEFGRRLYAIEWQLYALGGGEAELAAF 343 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLREIAAVIRE CD123
NLQAYRHN
MGSWDEFGRRLYAIEWQLYALGGTEAELAAFE 344 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLREIAAVIREN CD123
LQAYRHN
MGSWDEFGRRLYAIEWQLYALGGGEAELAAF 345 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLREIAAVIRS CD123
NLQAYRHN
MGSWDEFGRRLYAIEWQLYALGGTEAELAAFE 346 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLREIAAVIRSN CD123
LQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWDEFGRRLYAIEWQLYALGGEEAELAAFE 347 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLREIAAVIRSN CD123
LQAYRHN
MGSWDEFGRRLAAIEWQLYALGGEEAELAAFE 348 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLREIAAVIREN CD123
LQAYRHN
MGSWDEFGRRLYAIEWQLYALGGEEAELAAFE 349 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEALREIAAVIREN CD123
LQAYRHN
MGSWDEFGRRLYAIEWQLYALGGEEAELAAFE 350 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLREEAAVIRE CD123
NLQAYRHN
MGSWDEFGRRLYAIEWRLYALGGSEAELAAFE 351 KEIAAFESELQAYKGKGSPEVEKLREIAAVIRSN CD123
LQAYRHN
MGSWDEFGRRLYAIEWRLYALGGSEAELAAFE 352 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLREIAAVIRSN CD123 5,8
LQAYRHN
MGSWDEFGRRLYAIEWRLYALGGEEAELAAFE 353 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLREIAAVIRSN CD123
LQAYRHN
MGSWDEFGRRLYAIEWQLYALGGSEAELAAFE 354 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLREIAAVIRSN CD123
LQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWDEFSRRLYAIEWRLYALGGSEAELAAFE 355 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLREIAAVIRSN CD123
LQAYRHN
MGSWDEFGRRLYAIEWRLYALGGSEAELAAFE 356 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLREIAAVIREN CD123
LQAYRHN
MGSWDEFGRRLAAIKTQLAALGGEEAELAAFE 357 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLREIAAVIREN CD123
LQAYRHN
MGSWDEFGRRLAAIKTQLAALGGTEAELAAFE 358 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLREIAAVIREN CD123
LQAYRHN
MGSWDEFGRRLAAIKTQLAALGGEEAELAAFE 359 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEALRKEAAVIRE CD123
NLQAYRHN
MGSWDEFGRRLAAIKTQLAALGGTEAELAAFE 360 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEALRKEAAVIRE CD123
NLQAYRHN
MGSWDEFEQRLIAIEERLFALGGSEAELAAFEK 361 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLREEAAVIRKY CD123 5,9
LQAYRHN
MGSWVEFDQRLGAIWDRLVALGGSEAELAAFE 362 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEHLRQGAAVIRD CD123 5,3
DLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWVEFDMRLSAIWERLIALGGSEAELAAFE 363 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLREDAAEIRE CD123 3,3
FLQAYRHN
MGSWVEFDQRLDAIYERLYALGGSEAELAAFE 364 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRDEAAEIRE CD123 10,5
HLQAYRHN
MGSWHEFDQRLWAIEERLWALGGSEAELAAF 365 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVETLRLYAALIRH CD123 3,3
DLQAYRHN
MGSWVEFWDRLDAIEGRLWALGGSEAELAAF 366 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRWLAAEIR CD123 3,5
ADLQAYRHN
MGSWVEFYSRLDAIEDRLWALGGSEAELAAFE 367 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRIAAASIRE CD123 9,4
DLQAYRHN
MGSWYEFYERLDAIEERLWALGGSEAELAAFE 368 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRDWAAWIR CD123 8,4
EDLQAYRHN
MGSWFEFDDRLWAIENRLWALGGSEAELAAF 369 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRDNAAWIR CD123 4,2
EILQAYRHN
MGSWYEFWDRLDALEDRLWALGGSEAELAAF 370 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRDSAAFIR CD123 9,7
EELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWMEFVDRLDAIESRLWALGGSEAELAAFE 371 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRIEAAFIRE CD123 5,8
ELQAYRHN
MGSWDEFVDRLWAIEERLWALGGSEAELAAF 372 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRIQAAIIRE CD123 6
ALQAYRHN
MGSWFEFNYRLGAIEDRLWALGGSEAELAAFE 373 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEMLRQIAAEIRE CD123 6,9
FLQAYRHN
MGSWEEFFTRLDAINERLEALGGSEAELAAFE 374 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEMLRYEAAEIRH CD123 3,9
MLQAYRHN
MGSWYEFSNRLDAIGERLWALGGSEAELAAFE 375 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEILRHQAAEIRW CD123 3,9
FLQAYRHN
MGSWYEFWGRLDAIEERLWALGGSEAELAAF 376 EKEIAAFESELQAYKGRGNPEVEMLREDAAEIR CD123 5,4
GQLQAYRHN
MGSWVEFWDRLWAIDYRLFALGGSEAELAAFE 377 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEALRDEAAWIRE CD123 3,6
ELQAYRHN
MGSWVEFVDRLWAIDERLDALGGSEAELAAFE 378 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLRTWAAWIRE CD123 3,2
DLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWFEFWDRLEAIWERLDALGGSEAELAAFE 379 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRREAAIIRED CD123 10,3
LQAYRHN
MGSWFEFEDRLEAIYQRLDALGGSEAELAAFE 380 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRDEAAWIR CD123 5,5
SDLQAYRHN
MGSWFEFHDRLWAIDERLWALGGSEAELAAF 381 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEILREEAADIRL CD123 3,5
DLQAYRHN
MGSWYEFEDRLWAIDNRLWALGGSEAELAAF 382 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRVHAADIR CD123 4,9
DDLQAYRHN
MGSWFEFQDRLWAIDNRLWALGGSEAELAAF 383 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRDHAAMIR CD123 3,2
WELQAYRHN
MGSWDEFEERLFAIDERLWALGGSEAELAAFE 384 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEALRYLAADIRE CD123 5
ELQAYRHN
MGSWEEFWERLDAIDTRLWALGGSEAELAAFE 385 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRNDAADIRE CD123 6,8
PLQAYRHN
MGSWMEFWERLEAIDMRLWALGGSEAELAAF 386 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRDDAAVIR CD123 4,2
DDLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWLEFMWRLDAIDERLWALGGSEAELAAF 387 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVELLREMAAAIR CD123 5,1
DDLQAYRHN
MGSWTEFYNRLDAIDQRLWALGGSEAELAAFE 388 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEMLREYAADIRT CD123 3,3
DLQAYRHN
MGSWWEFIWRLEAIEQRLWALGGSEAELAAFE 389 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRSRAADIRT CD123 4
DLQAYRHN
MGSWSEFYDRLWAIEERLFALGGSEAELAAFE 390 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRYYAAEIRE CD123 17
ELQAYRHN
MGSWSEFEDRLWAIDQRLFALGGSEAELAAFE 391 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRAYAADIR CD123 4,2
WELQAYRHN
MGSWTEFWERLNAIDERLFALGGSEAELAAFE 392 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRLYAAEIRS CD123 4
ELQAYRHN
MGSWWEFEERLWAIDYRLHALGGSEAELAAF 393 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEMLRSWAAEIR CD123 4,1
ALLQAYRHN
MGSWWEFENRLWAIEERLEALGGSEAELAAFE 394 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEMLRNYAAEIR CD123 5,6
WELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWVEFEERLWAIDERLGALGGSEAELAAFE 395 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRDWAADIR CD123 4,1
WWLQAYRHN
MGSWVEFEERLEAIEERLFALGGSEAELAAFEK 396 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRDDAANIRH CD123 3,8
WLQAYRHN
MGSWMEFEERLWAIDSRLWALGGSEAELAAF 397 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRSEAAWI CD123 3,2
RMELQAYRHN
MGSWSEFEHRLEAIESRLFALGGSEAELAAFE 398 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRSEAAWIRE CD123 7,6
QLQAYRHN
MGSWFEFWERLDAIEWRLWALGGSEAELAAF 399 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRSTAADIR CD123 3,4
RYLQAYRHN
MGSWFEFWGRLEAIESRLKALGGSEAELAAFE 400 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELREHAAWIRA CD123 4,9
YLQAYRHN
MGSWQEFTMRLDAIYNRLETLGGSEAELAAFE 401 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRQSAANIRS CD123 13,7
ELQAYRHN
MGSWSEFNMRLDAIYERLTALGGSEAELAAFE 402 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRHSAARIRL CD123 13,7
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWSEFNMRLDAIYERLTALGGSEAELAAFE 403 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRHSAALIRL CD123 11,4
ELQAYRHN
MGSWIEFNMRLDAIYERLVALGGSEAELAAFEK 404 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRKVAANIRLE CD123 11,4
LQAYRHN
MGSWYEFHHRLDAIYERLLALGGSEAELAAFE 405 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRSSAANIRK CD123 11,9
ELQAYRHN
MGSWYEFAKRLDAIYERLVALGGSEAELAAFE 406 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRSSAANIRE CD123 15,3
ELQAYRHN
MGSWTEFYVRLDAIYERLDALGGSEAELAAFE 407 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRMVAANIRT CD123 16
ELQAYRHN
MGSWVEFYTRLDAIYGRLDALGGSEAELAAFE 408 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRQVAANIR CD123 14,4
MELQAYRHN
MGSWVEFHMRLDAIYERLDALGGSEAELAAFE 409 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRTAAANIRV CD123 9,1
ELQAYRHN
MGSWYEFAIRLDAIYERLHALGGSEAELAAFEK 410 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRVWAANIRTE CD123 25,5
LQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWNEFVIRLDAIYERLLALGGSEAELAAFEK 411 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRMAAANIRME CD123 16,6
LQAYRHN
MGSWSEFYVRVDAIYARLSALGGSEAELAAFE 412 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRVWAANIRH CD123 14,7
ELQAYRHN
MGSWSEFHVRLDAIYARLDALGGSEAELAAFE 413 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVERLREWAANIRR CD123 14,4
ELQAYRHN
MGSWVEFHLRLDAIYGRLMALGGSEAELAAFE 414 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVENLRVWAANIRN CD123 17,5
ELQAYRHN
MGSWVEFEMRLDAIVGRLYALGGSEAELAAFE 415 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRRWAANIRS CD123 25,3
ELQAYRHN
MGSWVEFNIRLDAIYERLYALGGSEAELAAFEK 416 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRHWAASIRRE CD123 13,4
LQAYRHN
MGSWHEFGVRLDAIYDRLMALGGSEAELAAFE 417 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLRQAAANIRS CD123 15,6
ELQAYRHN
MGSWTEFNLRLDAIYDRLMALGGSEAELAAFE 418 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRASAAAIRV CD123 14,4
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWTEFNLRLDAIYGRLSALGGSEAELAAFE 419 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLRAAAANIRV CD123 19,3
ELQAYRHN
MGSWVEFNWRLDAIYDRLVALGGSEAELAAFE 420 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRVSAAKIRG CD123 9,3
ELQAYRHN
MGSWNEFAWRLDAIYSRLAALGGSEAELAAFE 421 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRVAAANIRY CD123 17,7
ELQAYRHN
MGSWTEFAWRLDAIYDRLLALGGSEAELAAFE 422 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRHVAANIRR CD123 16,1
ELQAYRHN
MGSWVEFSIRLDAIYTRLVALGGSEAELAAFEK 423 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEMLRKGAANIRKE CD123 15,1
LQAYRHN
MGSWVEFYIRLDAIYVRLMALGGSEAELAAFEK 424 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRSYAANIRQE CD123 16,1
LQAYRHN
MGSWYEFSMRLDAIYDRLMALGGSEAELAAFE 425 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEQLRGYAANIRN CD123 13
ELQAYRHN
MGSWVEFIYRLDAIYDRLEALGGSEAELAAFEK 426 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRRYAANIRNE CD123 17
LQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWIEFEVRLDAIYNRLAALGGSEAELAAFEK 427 EIAAFESELQAYKGKGNPEVERLRRYAANIRHE CD123 20,8
LQAYRHN
MGSWFEFYDRLDAIYMRLIALGGSEAELAAFEK 428 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRRYAANIRAE CD123 13,6
LQAYRHN
MGSWFEFYMRLDAIYDRLTALGGSEAELAAFE 429 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVERLRTFAANIRK CD123 13,1
ELQAYRHN
MGSWYEFDYRLDAIYDRLAALGGSEAELAAFE 430 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVERLRKWAANIRE CD123 24,9
ELQAYRHN
MGSWSEFYLRLDAIYDRLDALGGSEAELAAFE 431 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRKTAANIRE CD123 15,7
ELQAYRHN
MGSWFEFYERLDAINWRLFALGGSEAELAAFE 432 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEALRGEAAAIRE CD123 3
DLQAYRHN
MGSWNEFEDRLDAIWWRLFALGGSEAELAAF 433 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEALRVEAAFIR CD123 5,1
TMLQAYRHN
MGSWFYFKDDLADINYMLEALGGSEAELAMFE 434 DDIAGFELTLLKYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,7
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWHFFKDDLAWIKNELEALGGSEAELAMFE 435 DDIAMFETMLQSYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,2
ELQAYRHN
MGSWHWFKTDLADIKEELEALGGSEAELAMFE 436 DDIAEFEEFLQMYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,5
ELQAYRHN
MGSWWLFKDDLAEIKYWLEALGGSEAELAFFE 437 DDIAEFERGLQIYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,3
ELQAYRHN
MGSWYEFKDDLAEIKEWLEALGGSEAELAFFE 438 LDIADFEWLLQLYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,8
ELQAYRHN
MGSWQWFKDDLAYIKETLEALGGSEAELALFE 439 DMIADFEFELQWYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 6,3
DELQAYRHN
MGSWILFKDDLAWIKETLEALGGSEAELAFFED 440 NIADFEEQLQGYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE CD123 6
LQAYRHN
MGSWIVFKDDLADIKRWLEALGGSEAELAMFE 441 DEIADFEWQLQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 3,9
DELQAYRHN
MGSWGHFKQDLAWIKDTLEALGGSEAELAFFE 442 DDIAMFEMELQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 4,9
DELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWGYFKDDLAWIKGELEALGGSEAELAEFE 443 WFIAVFEEDLQVYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 4,5
ELQAYRHN
MGSWYWFKDDLAEIKGLLEALGGSEAELAEFE 444 DEIAVFEQELQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 10,4
ELQAYRHN
MGSWMFFKEDLADIKWALEALGGSEAELAFFE 445 EEIALFEQHLQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,2
ELQAYRHN
MGSWTFFKEDLAGIKWELEALGGSEAELAWFE 446 DEIALFEEELQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 7
ELQAYRHN
MGSWVFFKDDLADIKDELEALGGSEAELAFFEI 447 AIALFEWELQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE CD123 8,8
LQAYRHN
MGSWTFFKNDLAEIKDWLEALGGSEAELADFE 448 WDIAEFEYSLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,9
ELQAYRHN
MGSWTYFKDDLADIKQWLEALGGSEAELAFFEI 449 EIAEFEEELQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE CD123 4,6
LQAYRHN
MGSWTVFKYDLADIKWWLEALGGSEAELADFE 450 EEIAEFEEELQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,9
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWYWFKQDLAHIKSMLEALGGSEAELAWF 451 EEDIADFESELQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 3,3
DELQAYRHN
MGSWTFFKWDLADIKANLEALGGSEAELAWFE 452 EDLAGFEAELQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 4,8
DELQAYRHN
MGSWSFFKEELANIQVYLEALGGSEAELAWFE 453 EDIADFEEDLQHYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,8
ELQAYRHN
MGSWEFFKYELADIKDELEALGGSEAELAWFE 454 EDIATFEEWLQGYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,4
ELQAYRHN
MGSWQTFKDELAHIKWELEALGGSEAELAWFE 455 WDIANFEEELQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 5,5
ELQAYRHN
MGSWYWFKEELAFIKWELEALGGSEAELALFE 456 EDIAYFEEMLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 9,4
ELQAYRHN
MGSWNSFKDELAEIKAELEALGGSEAELAFFEE 457 DIAWFEEHLQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,3
ELQAYRHN
MGSWDLFKWELAEIKLGLEALGGSEAELAEFE 458 YDIAWFEEDLQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 3,4
DELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWIFFKQDLAEIKLNLEALGGSEAELAWFED 459 DIAWFESHLQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,8
ELQAYRHN
MGSWHLFKWTLAEIKYELEALGGSEAELAWFE 460 DDIATFEEELQWYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 4
ELQAYRHN
MGSWVTFKDELADIKDFLEALGGSEAELAFFEV 461 DIAEFEAELQFYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE CD123 7,6
LQAYRHN
MGSWVYFKDELADIKDFLEALGGSEAELAEFE 462 EDIATFEYDLQWYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 4,6
ELQAYRHN
MGSWETFKYELAEIKDYLEALGGSEAELAWFE 463 DDIAEFEFELQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 4,4
ELQAYRHN
MGSWNTFKYELAEIKHFLEALGGSEAELAMFE 464 DDIAMFEWELQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 5
DELQAYRHN
MGSWYVFKDELAEIKQFLEALGGSEAELAWFE 465 DDIAEFETQLQHYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 9,9
ELQAYRHN
MGSWIFFKEQLAIIKWELEALGGSEAELAWFED 466 DIAAFEDDLQFYKGQGNPEVEALRKEAAAIRDE CD123 15
LQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWEFFKEVLAEIKYDLEALGGSEAELAWFE 467 TDIAGFEIDLQVYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 8,2
ELQAYRHN
MGSWVFFKEDLATIKNDLEALGGSEAELAWFE 468 MMIADFEADLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 3,1
DELQAYRHN
MGSWEEFKEDLAEIKVWLEALGGSEAELAWFE 469 MGIADFEDGLQFYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 4,3
DELQAYRHN
MGSWHWFKEDLANIKDWLEALGGSEAELAWF 470 EDNIADFEGDLQVYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 3,3
DELQAYRHN
MGSWFWFKEDLAFIKEDLEALGGSEAELAWFE 471 DGIAFFEWDLQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 13,7
DELQAYRHN
MGSWQWFKEDLAEIKHDLEALGGSEAELAWF 472 EDFIAQFEFDLQWYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 3,8
DELQAYRHN
MGSWHWFKEDLAIIKQDLEALGGSEAELATFE 473 QWIAEFEWDLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 5,5
DELQAYRHN
MGSWNWFKEDLAIIKMDLEALGGSEAELAWFE 474 HNIAGFEFELQGYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,1
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWSWFKEDLAEIKMELEALGGSEAELAYFE 475 WYIAEFEFQLQHYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 4,8
ELQAYRHN
MGSWSWFKQDLADIKIQLEALGGSEAELAWFE 476 WDIAEFEFELQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 4
ELQAYRHN
MGSWSWFKEDLADIKFELEALGGSEAELAWFE 477 LDIADFEQALQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 6,8
ELQAYRHN
MGSWSWFKEDLASIKAVLEALGGSEAELAFFE 478 SDIAEFEQELQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 6,9
ELQAYRHN
MGSWWEFKEDLAEIKWFLEALGGSEAELAWF 479 EHDIAKFEFELQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 5,1
DELQAYRHN
MGSWEWFKSDLASIKWELEALGGSEAELAWF 480 EHDIAEFEEDLQWYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 5,7
DELQAYRHN
MGSWNEFKDDLAMIKMTLEALGGSEAELAWFE 481 HDIAEFEDDLQWYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 3,5
DELQAYRHN
MGSWTFFKDDLAEIKWMLEALGGSEAELAWFE 482 SDIAYFEDELQWYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,3
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWSDFKDDLAEIKMILEALGGSEAELAYFEN 483 DIAWFEDDLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 4,7
ELQAYRHN
MGSWSMFKDDLAEIKASLEALGGSEAELAWFE 484 DDIAWFEDDLQHYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 5,2
DELQAYRHN
MGSWQYFKDDLAEIKMVLEALGGSEAELAWFE 485 ADIAMFEDDLQIYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,6
ELQAYRHN
MGSWSFFKDDLAEIKYFLEALGGSEAELAMFE 486 QTIAEFEYDLQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 10,1
ELQAYRHN
MGSWMEFKEELAEIKYILEALGGSEAELAWFE 487 QSIADFEYDLQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 5
ELQAYRHN
MGSWAWFKEDLAEIKVFLEALGGSEAELAEFE 488 VSIADFEYELQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,5
ELQAYRHN
MGSWYEFKFDLAEIKEQLEALGGSEAELALFED 489 DIAFFEYDLQNYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE CD123 4,6
LQAYRHN
MGSWYDFKYDLAEIKMDLEALGGSEAELAQFE 490 FDIAFFEEELQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,2
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWYIFKEDLAEIKEELEALGGSEAELAYFEE 491 EIALFEMELQWYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE CD123 11,1
LQAYRHN
MGSWVLFKEELAYIKFELEALGGSEAELALFEN 492 VIAIFESNLQNYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDEL CD123 3,5
QAYRHN
MGSWQDFKEDLAWIKYELEALGGSEAELAFFE 493 YDIAIFENNLQHYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,2
ELQAYRHN
MGSWDHFKNDLAWIKKHLEALGGSEAELAEFE 494 AVIAYFELYLQGYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,3
ELQAYRHN
MGSWYDFKEDLADIKWMLEALGGSEAELAEFE 495 NVIAYFENDLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 8
ELQAYRHN
MGSWYMFKEELADIKWYLEALGGSEAELAWF 496 EDDIAGFEWDLQAYKGKGNPEVEALRKEAAAI CD123 7
RDELQAYRHN
MGSWYYFKDELADIKWDLEALGGSEAELAWFE 497 MLIAQFELDLQWYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 4
ELQAYRHN
MGSWMYFKDTLADIKWYLEALGGSEAELAFFE 498 DWIAEFEDDLQVYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 3,1
DELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWYQFKHDLADIKYGLEALGGSEAELAWFE 499 DDIADFELDLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 4,7
ELQAYRHN
MGSWYVFKDDLADIKYMLEALGGSEAELAWFE 500 WEIANFEFDLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,8
ELQAYRHN
MGSWNFFKYDLADIMAYLEALGGSEAELAFFE 501 DEIANFEHDLQKYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 4,4
ELQAYRHN
MGSWHWFKIVLADIKDGLEALGGSEAELAYFE 502 TTIADFEMDLQHYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 4,3
ELQAYRHN
MGSWHWFKIVLADIKDGLEALGGSEAELAYFE 503 TTIADFEMDLHHYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,5
ELQAYRHN
MGSWFMFKEELADIKDWLEALGGSEAELASFE 504 SYIAWFEQDLQWYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 5,7
DELQAYRHN
MGSWFMFKQELAWIKEDLEALGGSEAELADFE 505 WDIAEFEWDLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 7,2
DELQAYRHN
MGSWQIFKGELAYIKQYLEALGGSEAELAFFEF 506 DIAEFEEDLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE CD123 4,7
LQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWDFFKEELAEIKHYLEALGGSEAELAFFEF 507 WIADFEQDLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,7
ELQAYRHN
MGSWFNFKEELAVIKFQLEALGGSEAELAFFE 508 WVIADFEDDLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 6,1
DELQAYRHN
MGSWYQFKTELAWIKDDLEALGGSEAELAWFE 509 WVIADFEDDLQFYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 6,6
ELQAYRHN
MGSWFEFKDYLADIKWDLEALGGSEAELAIFEH 510 DIAYFEHNLQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE CD123 3,8
LQAYRHN
MGSWVRFKDFLADIKMDLEALGGSEAELADFE 511 YHIAEFEHNLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 5,8
ELQAYRHN
MGSWWLFKEQLALIKYNLEALGGSEAELADFE 512 SWIAEFEHQLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 4,1
DELQAYRHN
MGSWHVFKTELADIKFYLEALGGSEAELAMFEL 513 WIAEFEHELQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE CD123 5,4
LQAYRHN
MGSWIWFKDWLADIKDLLEALGGSEAELAEFE 514 YDIALFEDQLQAYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 7,3
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWGWFKHELAFIKADLEALGGSEAELAWFE 515 EEIAEFEYELQFYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,3
ELQAYRHN
MGSWTWFKDNLAWIKEDLEALGGSEAELAWF 516 ELEIASFETALQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 6,9
DELQAYRHN
MGSWTYFKNDLAGIKEDLEALGGSEAELAQFE 517 FEIAEFEWLLQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,6
ELQAYRHN
MGSWTWFKWDLADIKGDLEALGGSEAELAFFE 518 EEIAEFEWRLQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 5,9
ELQAYRHN
MGSWLYFKEYLADIKSDLEALGGSEAELAWFE 519 YEIADFEEQLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,7
ELQAYRHN
MGSWHWFKEELAEIKEDLVALGGSEAELAWFE 520 YDIAMFELSLQNYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,1
ELQAYRHN
MGSWNDFKEELAWIKFDLEALGGSEAELAWFE 521 EDIAMFEQQLQAYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 3,8
DELQAYRHN
MGSWWDFKDWLAEIKHDLEALGGSEAELALFE 522 SEIADFEFGLQWYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 4,2
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWDEFKEDLAHIKTDLEALGGSEAELALFE 523 DEIADFEMYLQHYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 6,3
ELQAYRHN
MGSWDFFKYDLANINEWLEALGGSEAELADFE 524 YGIADFELWLQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 5,5
ELQAYRHN
MGSWYQFKDDLAHIKHLLEALGGSEAELAVFE 525 YIIADFESFLQIYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE CD123 4
LQAYRHN
MGSWAEFKHDLADIKRELEALGGSEAELAWFE 526 LSIAFFEDELQHYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,3
ELQAYRHN
MGSWVVFKQDLADINHQLEALGGSEAELAWFE 527 WEIADFEWELQHYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 3,6
DELQAYRHN
MGSWFQFKEFLAMITHNLEALGGSEAELAEFE 528 HDIALFESELQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 3,1
ELQAYRHN
MGSWHWFKEDLAMITDVLEALGGSEAELAAFE 529 SEIAVFEADLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD123 5,2
ELQAYRHN
MGSWSWFQWDLAGIKDHLEALGGSEAELAEF 530 ESEIAYFEDELQWYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 12,9
DELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWTEFKGELAEIKWILEALGGSEAELAFFED 531 EIAAFEWDLQKYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE CD123 8,2
LQAYRHN
MGSWFEFKWTLALIKQELEALGGSEAELADFE 532 QEIAEFEWWLQTYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CD123 4,9
DELQAYRHN
MGSWAEFKQRLAAIKTRLEALGGSEAELAAFM 533 DEIMAFEWELWAYKGKGNPEVEALMNEAFAID CD123 3,4
VELYAYRHN
MGSWAEFKQRLAAIKTRLEALGGSEAELAAFE 534 WEIVAFFSELFAYKGKGNPEVEALRDEAIAIETE CD123 3,6
LVAYRHN
MGSWWEFDHRLTAIDTRLQALGGSEAELAEFE 535 SSIAEFEWWLQDYKGKGNPEVEALFAEAEAIYV CD123 4,3
ELDAYRHN
MGSWWEFQFRLYAIDQRLLALGGSEAELAEFE 536 QDIADFEWMLQDYKGKGNPEVEALMLEADAIE CD123 3,1
AELKAYRHN
MGSWYEFDHRLDAIYQRLWALGGSEAELAEFE 537 YGIAEFEEYLQDYKGKGNPEVEALISEAWAIEW CD123 4,6
ELSAYRHN
MGSWYEFDMRLDAIWERLTALGGSEAELADFE 538 QYIAEFERQLQDYKGKGNPEVEALFDEAWAIE CD123 13,7
DELYAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWSEFDSRLDAIAYRLFALGGSEAELAQFE 539 WIIADFEEDLQMYKGKGNPEVEALFSEAYAIEIE CD123 4,3
LNAYRHN
MGSWYEFDDRLDAIAYRLNALGGSEAELAWFE 540 WEIAEFELDLQWYKGKGNPEVEALVWEADAIE CD123 4,6
WELEAYRHN
MGSWFEFDERLDAIGSRLTALGGSEAELASFE 541 FYIADFEEWLQQYKGKGNPEVEALEWEAFAID CD123 3,8
EELGAYRHN
MGSWEEFDQRLDAIDVRLYALGGSEAELAEFE 542 FDIAAFEEWLQLYKGKGNPEVEALNMEAFAITD CD123 3,6
ELCAYRHN
MGSWEEFDVRLDAIFNRLWALGGSEAELAEFE 543 FDIAWFEMDLQEYKGKGNPEVEALFDEAEAITN CD123 4,7
ELVAYRHN
MGSWEEFDKRLDAITRRLMALGGSEAELAEFE 544 STIAWFEWDLQEYKGKGNPEVEALDWEAYAID CD123 4,5
YELGAYRHN
MGSWYEFDHRLEAIYDRLWALGGSEAELAFFE 545 FDIADFEWDLQSYKGKGNPEVEALFDEAAAIGH CD123 4,5
ELLAYRHN
MGSWNEFDDRLLAIWGRLDALGGSEAELAFFE 546 EQIAGFEDELQWYKGKGNPEVEALDQEAEAIE CD123 4,1
KELWAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWVEFDDRLDAIWERLDALGGSEAELAWF 547 EEQIAVFEHQLQDYKGKGNPEVEALNQEAEAID CD123 5
LELKAYRHN
MGSWTEFDDRLFAIYWRLDALGGSEAELAWFE 548 EVIAEFENDLQVYKGKGNPEVEALDDEAHAISIE CD123 6,4
LEAYRHN
MGSWSEFDQRLEAIWNRLDALGGSEAELADFE 549 REIAYFENQLQWYKGKGNPEVEALNNEAFAIV CD123 3,4
DELGAYRHN
MGSWYEFDERLWAIWERLDALGGSEAELAHF 550 EWVIADFENDLQWYKGKGNPEVEALEFEAEAI CD123 3,6
VTELHAYRHN
MGSWMEFDYRLEAIWMRLIALGGSEAELADFE 551 SSIADFEHHLQSYKGKGNPEVEALEWEAFAIGV CD123 3,1
ELDAYRHN
MGSWYEFESRLEAIWWRLEALGGSEAELAQF 552 EQYIADFEQHLQWYKGKGNPEVEALDWEADAI CD123 4,4
WLELQAYRHN
MGSWEEFYMRLVAIHMRLRALGGSEAELAVFE 553 NYIAEFEEYLQYYKGKGNPEVEALTIEADAIGTE CD123 4,4
LGAYRHN
MGSWDEFYYRLVAITHRLHALGGSEAELAWFE 554 DDIAGFEWDLQTYKGKGNPEVEALYKEAGAIG CD123 5,4
MELTAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWEEFDTRLLAIFGRLGALGGSEAELALFE 555 MLIAKFEDDLQNYKGKGNPEVEALSEEAFAIDH CD123 6,7
ELGAYRHN
MGSWREFDQRLWAIDWRLEALGGSEAELAMF 556 EWMIATFEDDLQWYKGKGNPEVEALYREAFAI CD123 3,4
DWELDAYRHN
MGSWEEFHERLDAIDERLEALGGSEAELAFFE 557 DDIASFEDWLQWYKGKGNPEVEALSREADAIN CD123 4,3
FELEAYRHN
MGSWNEFYERLEAIDRRLFALGGSEAELALFE 558 WMIADFEDDLQMYKGKGNPEVEALINEAGAIG CD123 5,2
FELEAYRHN
MGSWTEFTQRLEAIVDRLFALGGSEAELAEFE 559 NSIADFEWDLQWYKGKGNPEVEALNREAVAID CD123 3,9
NELWAYRHN
MGSWVEFIMRLDAIYERLDALGGSEAELAEFE 560 WHIADFEDHLQWYKGKGNPEVEALFEEADAIW CD123 6,4
EELWAYRHN
MGSWNEFLLRLDAIEHRLFALGGSEAELAEFE 561 WEIADFEDDLQWYKGKGNPEVEALVEEAEAID CD123 3,2
VELVAYRHN
MGSWYEFNMRLGAIDDRLQALGGSEAELAWF 562 EDMIAIFEDDLQIYKGKGNPEVEALEQEAAAIHQ CD123 3,8
ELWAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWEEFHWRLGAIDARLEALGGSEAELAWF 563 EDGIADFEAILQDYKGKGNPEVEALDSEAVAIH CD123 3,3
HELWAYRHN
MGSWYEFYERLWAIDDRLWALGGSEAELAEF 564 EDSIATFEPSLQMYKGKGNPEVEALVAEAWAIF CD123 3,6
DELAAYRHN
MGSWFEFDQRLDAITFRLWALGGSEAELAEFE 565 DVIALFEYHLQDYKGKGNPEVEALEVEAWAIFH CD123 3,2
ELGAYRHN
MGSWSEFWFRLDAIEDRLWALGGSEAELAEFE 566 DNIALFEYSLQHYKGKGNPEVEALVKEANAIDD CD123 4,5
ELGAYRHN
MGSWYEFWDRLTAIEHRLWALGGSEAELAYFE 567 DSIAHFEGSLQVYKGKGNPEVEALYKEAEAIEW CD123 4,4
ELEAYRHN
MGSWYEFDDRLWAIFDRLFALGGSEAELAFFE 568 DSIAEFEEELQHYKGKGNPEVEALYLEAWAIEN CD123 4,7
ELGAYRHN
MGSWNEFVERLSAIDHRLWALGGSEAELADFE 569 QQIAEFEIHLQEYKGKGNPEVEALDFEADAIFD CD123 3,2
ELLAYRHN
MGSWSEFVDRLDAIFDRLWALGGSEAELAWF 570 EDTIAHFEWNLQEYKGKGNPEVEALNGEADAIT CD123 5,3
DELHAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWAEFDSRLDAIAQRLFALGGSEAELAHFE 571 DFIAQFEYSLQEYKGKGNPEVEALSNEADAIFN CD123 3,6
ELKAYRHN
MGSWAEFDSRLIAIFDRLWALGGSEAELAWFE 572 DDIAQFEQHLQAYKGKGNPEVEALRQEADAITF CD123 3,6
ELKAYRHN
MGSWTEFEERLEAIWDRLYALGGSEAELAAFE 573 WDIAYFEDGLQEYKGKGNPEVEALFMEAEAIIR CD123 5,9
ELKAYRHN
MGSWYEFEDRLAAIWDRLNALGGSEAELAIFE 574 WDIAWFEEGLQEYKGKGNPEVEALKHEASAIQ CD123 6,4
TELFAYRHN
MGSWLEFESRLWAIWDRLDALGGSEAELAHFE 575 QDIADFEMSLQEYKGKGNPEVEALIREAEAIET CD123 3,4
ELYAYRHN
MGSWMEFEDRLIAIWARLDALGGSEAELAWFE 576 ADIADFEESLQEYKGKGNPEVEALIFEAIAINKEL CD123 3,7
MAYRHN
MGSWFEFTIRLEAIQDRLDALGGSEAELAWFE 577 WDIAEFEEGLQFYKGKGNPEVEALHTEADAIM CD123 3,5
NELVAYRHN
MGSWYEFVSRLDAIEYRLWALGGSEAELAWFE 578 WDIADFEQGLQFYKGKGNPEVEALAQEANAIG CD123 3,2
SELTAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWEEFDYRLYAIQDRLYALGGSEAELAFFE 579 WEIADFEHMLQMYKGKGNPEVEALFQEADAID CD123 4,4
AELHAYRHN
MGSWIEFFHRLDAIQDRLDALGGSEAELAYFE 580 WAIADFEHMLQLYKGKGNPEVEALQFEAFAIEG CD123 3,5
ELYAYRHN
MGSWYEFSSRLNAIDDRLWALGGSEAELAYFE 581 TDIADFESLLQWYKGKGNPEVEALLNEADAIDY CD123 3,8
ELYAYRHN
MGSWFEFEYRLDAIIDRLFALGGSEAELAEFES 582 MIANFEYSLQEYKGKGNPEVEALYFEADAIVDE CD123 4
LTAYRHN
MGSWLEFEYRLDAIYDRLFALGGSEAELAAFE 583 QDIADFEKYLQYYKGKGNPEVEALWEEADAIM CD123 3,1
WELFAYRHN
MGSWHEFEERLMAIEDRLWALGGSEAELAEFE 584 QWIALFEYDLQEYKGKGNPEVEALGMEAFAIN CD123 5,8
NELSAYRHN
MGSWYEFEERLDAIEDRLIALGGSEAELAIFEDII 585 AFFEQDLQYYKGKGNPEVEALEMEAEAISIELD CD123 4,1
AYRHN
MGSWHEFEKRLYAIEDRLIALGGSEAELAWFE 586 DSIAWFEWDLQMYKGKGNPEVEALNEEADAIY CD123 3,6
QELDAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWIEFEDRLDAITDRLWALGGSEAELAEFE 587 HQIAFFEEDLQWYKGKGNPEVEALHMEAEAIM CD123 9,5
EELGAYRHN
MGSWMEFEDRLMAIVDRLWALGGSEAELADF 588 EWNIAMFEEELQWYKGKGNPEVEALGDEAEAI CD123 6,8
EWELYAYRHN
MGSWEEFEDRLFAIDSRLWALGGSEAELAEFE 589 NIIASFEEVLQEYKGKGNPEVEALSVEAFAIDRE CD123 3,7
LGAYRHN
MGSWEEFLFRLEAIQDRLWALGGSEAELAWFE 590 YEIASFEDVLQSYKGKGNPEVEALSTEAKAIDY CD123 8,2
ELFAYRHN
MGSWVEFDNRLFAIDERLWALGGSEAELAWF 591 EEEIASFEDNLQKYKGKGNPEVEALQLEAFAIM CD123 3,3
EELDAYRHN
MGSWFEFDDRLEAIFDRLWALGGSEAELAMFE 592 FAIAEFEDALQEYKGKGNPEVEALYEEAVAIDE CD123 4,1
ELYAYRHN
MGSWFEFDARLMAINDRLWALGGSEAELAAFE 593 YHIALFEDQLQMYKGKGNPEVEALTLEAVAINE CD123 4
ELWAYRHN
MGSWVEFDSRLAAIDYRLEALGGSEAELAWFE 594 YTIANFEHTLQMYKGKGNPEVEALVYEAHAIAT CD123 3,4
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWTEFDERLDAIDWRLEALGGSEAELAWF 595 EGDIALFEQYLQVYKGKGNPEVEALMEEADAIK CD123 4,5
AELDAYRHN
MGSWIEFDERLDAIDFRLWALGGSEAELAWFE 596 GWIAEFESDLQLYKGKGNPEVEALNEEANAIFH CD123 7
ELSAYRHN
MGSWWEFDSRLDAIDFRLWALGGSEAELAWF 597 EVEIADFEDWLQLYKGKGNPEVEALWHEADAI CD123 3,2
VTELYAYRHN
MGSWYEFDERLDAIFDRLWALGGSEAELAYFE 598 QVIATFEKTLQRYKGKGNPEVEALDTEAKAISW CD123 3
ELDAYRHN
MGSWYEFQERLDAIDSRLWALGGSEAELAWF 599 EYTIAEFEKELQMYKGKGNPEVEALGTEAVAIS CD123 5,5
EELMAYRHN
MGSWEEFEDRLWAIDGRLYALGGSEAELAWF 600 EQWIATFEEDLQDYKGKGNPEVEALEYEASAIF CD123 9,4
EELEAYRHN
MGSWFEFGDRLEAIDERLYALGGSEAELAQFE 601 WWIAEFEHHLQDYKGKGNPEVEALEYEADAIW CD123 4,5
GELHAYRHN
MGSWFEFNDRLDAISERLSALGGSEAELAYFE 602 WQIAVFEKTLQNYKGKGNPEVEALTLEANAIFE CD123 3,9
ELEAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWVEFMDRLEAIEERLSALGGSEAELAFFE 603 WEIAEFEEHLQVYKGKGNPEVEALEWEALAITE CD123 4
ELAAYRHN
MGSWIEFMDRLWAIDQRLWALGGSEAELAWF 604 EEEIAWFEEELQVYKGKGNPEVEALEWEATAIS CD123 6,5
EELWAYRHN
MGSWEEFNWRLRAIDERLFALGGSEAELAWF 605 EYDIAEFEEQLQVYKGKGNPEVEALRVEAAAIA CD123 5,4
EELYAYRHN
MGSWWEFEIRLDAIDERLWALGGSEAELAWFE 606 QSIAFFENDLQVYKGKGNPEVEALRWEANAIIE CD123 3,2
ELFAYRHN
MGSWYEFEWRLDAIDRRLWALGGSEAELADF 607 EEEIADFEWMLQNYKGKGNPEVEALVDEASAI CD123 10
QTELWAYRHN
MGSWYEFVYRLRAIDERLDALGGSEAELAMFE 608 FEIAFFEDQLQRYKGKGNPEVEALVDEAQAIDF CD123 4,5
ELFAYRHN
MGSWWEFEDRLYAIDDRLWALGGSEAELAQF 609 EREIAQFEIWLQEYKGKGNPEVEALDDEATAIN CD123 5,5
SELFAYRHN
MGSWDEFEFRLEAIDSRLWALGGSEAELAVFE 610 YEIAQFEFMLQEYKGKGNPEVEALGMEAWAIE CD123 3,6
NELFAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWEEFEWRLDAIDERLWALGGSEAELATFE 611 YEIAIFENELQQYKGKGNPEVEALDSEAYAIERE CD123 4,3
LGAYRHN
MGSWYEFFDRLDAIDERLWALGGSEAELAWF 612 EAEIAEFEMELQGYKGKGNPEVEALDVEAHAIE CD123 3,7
MELFAYRHN
MGSWYEFMGRLEAIDERLQALGGSEAELAWF 613 EHEIAEFEWSLQWYKGKGNPEVEALRFEAGAI CD123 3,5
PWELWAYRHN
MGSWVEFSNRLDAIWERLQALGGSEAELAYFE 614 WEIAEFEWELQSYKGKGNPEVEALNAEADAIE CD123 5,1
WELEAYRHN
MGSWEEFHMRLIAIDERLWALGGSEAELAGFE 615 ESIAYFESQLQDYKGKGNPEVEALDYEAHAIW CD123 3,9
RELYAYRHN
MGSWWEFKYRLDAICFRLAALGGSEAELASFE 616 DEIAYFEEDLQGYKGKGNPEVEALDYEALAIWD CD123 3,1
ELAAYRHN
MGSWDEFAMRLEAIQARLFALGGSEAELAIFED 617 EIAFFETMLQDYKGKGNPEVEALEYEAAAIEAE CD123 3,7
LGAYRHN
MGSWWEFNARLDAIEDRLMALGGSEAELAYFE 618 DIIASFENILQQYKGKGNPEVEALWYEAYAIEKE CD123 3,4
LNAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWIEFWNRLEAIEERLYALGGSEAELAYFE 619 DEIAEFEIYLQQYKGKGNPEVEALKHEAEAINKE CD123 5,2
LMAYRHN
MGSWNEFVIRLFAIDDRLYALGGSEAELAWFE 620 DEIATFEYELQRYKGKGNPEVEALEYEAEAIVS CD123 3,5
ELFAYRHN
MGSWYEFLARLYAIDERLWALGGSEAELATFE 621 HWIADFEEQLQSYKGKGNPEVEALTDEAVAIG CD123 4,5
EELSAYRHN
MGSWLEFETRLHAIDERLWALGGSEAELAEFE 622 EHIAWFEEDLQFYKGKGNPEVEALDFEADAIG CD123 4,6
WELWAYRHN
MGSWFEFETRLEAIDLRLWALGGSEAELATFE 623 DVIAFFEDWLQFYKGKGNPEVEALKMEAWAIG CD123 6,6
EELHAYRHN
MGSWHEFWQRLEAIEGRLWALGGSEAELADF 624 ESLIADFEEQLQEYKGKGNPEVEALMAEAEAID CD123 7
NELRAYRHN
MGSWYEFEQRLEAIEWRLGALGGSEAELATFE 625 EDIADFEEWLQEYKGKGNPEVEALQYEAYAIAE CD123 4,4
ELHAYRHN
MGSWYEFENRLFAIEERLWALGGSEAELAWFE 626 YEIANFEWGLQSYKGKGNPEVEALDNEAEAIDI CD123 3,3
ELAAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWYEFEQRLGAIEERLWALGGSEAELAAFE 627 DIIAYFEYQLQSYKGKGNPEVEALDEEAWAIDD CD123 10,6
ELWAYRHN
MGSWWEFEQRLDAIETRLWALGGSEAELAYF 628 EHIIADFEDELQIYKGKGNPEVEALGWEAFAIDG CD123 4,7
ELTAYRHN
MGSWFEFPYRLEAIEERLYALGGSEAELAQFE 629 QFIAWFEMDLQDYKGKGNPEVEALWFEANAIV CD123 3,1
EELDAYRHN
MGSWVEFYDRLEAIEIRLWALGGSEAELADFE 630 SFIAHFEDDLQAYKGKGNPEVEALMDEANAIVF CD123 4
ELDAYRHN
MGSWVEFWDRLDAIEERLWALGGSEAELAEF 631 EFMIAMFEQHLQEYKGKGNPEVEALIPEAGAID CD123 10
KELTAYRHN
MGSWDEFDARLWAIEERLWALGGSEAELAEF 632 EFMIAAFEDVLQEYKGKGNPEVEALMGEANAIV CD123 4,3
MELDAYRHN
MGSWYEFWRRLDAIEERLWALGGSEAELAMF 633 ETDIAGFEWMLQLYKGKGNPEVEALEHEAWAI CD123 3,6
NSELDAYRHN
MGSWHEFIWRLDAIEERLWALGGSEAELAWFE 634 TEIATFEAQLQDYKGKGNPEVEALEWEAIAIAW CD123 3,3
ELDAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWYEFYWRLEAIEERLWALGGSEAELAEFE 635 KAIATFEDQLQTYKGKGNPEVEALETEALAIHA CD123 3,7
ELEAYRHN
MGSWFEFQWRLEAIEDRLWALGGSEAELAEF 636 ETIIAGFEEQLQVYKGKGNPEVEALEEEAMAIQ CD123 3,4
TELHAYRHN
MGSWWEFEDRLWAIEQRLDALGGSEAELAVF 637 ENSIAKFEDMLQVYKGKGNPEVEALHEEADAII CD123 4,4
WELYAYRHN
MGSWWEFEDRLWAIDRRLMALGGSEAELAVF 638 EQMIAHFEQILQVYKGKGNPEVEALHFEAHAIG CD123 4,6
MELAAYRHN
MGSWWEFLDRLEAIEYRLQALGGSEAELAVFE 639 WEIAMFEDHLQGYKGKGNPEVEALHSEAHAIIS CD123 3,1
ELSAYRHN
MGSWAEFEDRLAAIERRLEALGGSEAELADFE 640 SSIAWFEPDLQYYKGKGNPEVEALMYEAEAIFS CD123 4,2
ELYAYRHN
MGSWWEFYDRLTAIEARLWALGGSEAELADFE 641 EGIADFEYDLQDYKGKGNPEVEALFWEAWAIQ CD123 3,2
SELTAYRHN
MGSWYEFEDRLAAIEARLWALGGSEAELADFE 642 EEIAYFEHGLQWYKGKGNPEVEALESEAMAIID CD123 3,8
ELHAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWWEFSWRLEAIETRLDALGGSEAELAFFE 643 MDIAWFEQDLQLYKGKGNPEVEALEEEAYAIYE CD123 3,3
ELEAYRHN
MGSWEEFFFRLEAIDDRLYALGGSEAELALFEE 644 VIAYFEQDLQWYKGKGNPEVEALYVEAYAIQEE CD123 3,2
LYAYRHN
MGSWFEFEERLNAISWRLHALGGSEAELAYFE 645 EDIAWFEDDLQFYKGKGNPEVEALENEAYAIW CD123 13
EELDAYRHN
MGSWFEFEERLEAIIYRLWALGGSEAELAMFE 646 ESIAWFESDLQQYKGKGNPEVEALEYEAMAIS CD123 3,7
KELKAYRHN
MGSWAEFDDRLEAIEYRLHALGGSEAELAWFE 647 EGIAGFEHALQSYKGKGNPEVEALETEAGAINE CD123 5,8
ELWAYRHN
MGSWDEFEERLQAIEYRLWALGGSEAELAWF 648 EEVIAQFEYDLQKYKGKGNPEVEALSTEAQAIQ CD123 3,8
DELWAYRHN
MGSWWEFTDRLDAIFDRLWALGGSEAELAAFE 649 ESIAIFEQDLQYYKGKGNPEVEALEYEANAIQY CD123 7,5
ELEAYRHN
MGSWWEFTDRLEAIEDRLWALGGSEAELAHF 650 EDSIAQFEQELQWYKGKGNPEVEALADEADAI CD123 16,6
ESELHAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWVEFFWRLDAIEDRLWALGGSEAELANF 651 EFEIADFEAWLQKYKGKGNPEVEALHSEADAIQ CD123 4
LELRAYRHN
MGSWVEFYNRLDAIENRLWALGGSEAELAFFE 652 ELIAQFEFALQDYKGKGNPEVEALEDEADAIWE CD123 6,9
ELMAYRHN
MGSWEEFYYRLHAIDNRLWALGGSEAELAYFE 653 WHIADFELELQDYKGKGNPEVEALSEEATAIFE CD123 3
ELWAYRHN
MGSWREFHDRLFAIDGRLWALGGSEAELANFE 654 WDIADFEFELQDYKGKGNPEVEALSWEADAIM CD123 5,6
QELGAYRHN
MGSWEEFDERLWAISDRLWALGGSEAELAYF 655 EGEIAYFEQNLQTYKGKGNPEVEALQTEALAID CD123 6,5
TELWAYRHN
MGSWEEFEQRLWAIDDRLWALGGSEAELAFF 656 EYEIAEFEMDLQWYKGKGNPEVEALFYEAHAIN CD123 5,7
EELWAYRHN
MGSWDEFHQRLAAIGDRLWALGGSEAELAYF 657 EWEIATFEWDLQVYKGKGNPEVEALYFEATAID CD123 3,7
EELMAYRHN
MGSWVEFEYRLDAISDRLWALGGSEAELAFFE 658 NEIASFESDLQFYKGKGNPEVEALMFEAEAIDD CD123 6,5
ELHAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWDEFDTRLDAIFSRLYALGGSEAELAMFE 659 GEIAEFEGSLQHYKGKGNPEVEALDFEAHAIDE CD123 4
ELWAYRHN
MGSWHEFDDRLDAIMSRLDALGGSEAELATFE 660 AEIATFEFVLQLYKGKGNPEVEALLAEAYAIDW CD123 7,7
ELEAYRHN
MGSWYEFFDRLDAIYDRLYALGGSEAELASFE 661 AQIAEFEVELQSYKGKGNPEVEALEWEAWAID CD123 4,7
EELYAYRHN
MGSWFEFLYRLDAIEDRLWALGGSEAELAEFE 662 QEIAKFESELQSYKGKGNPEVEALEWEAHAID CD123 6,6
MELEAYRHN
MGSWLEFEDRLVAIDHRLFALGGSEAELAEFE 663 EEIALFESYLQDYKGKGNPEVEALNWEADAIHA CD123 3,9
ELYAYRHN
MGSWYEFESRLDAIVDRLWALGGSEAELAEFE 664 YEIAKFEWELQDYKGKGNPEVEALNWEAGAIE CD123 5,1
FELYAYRHN
MGSWYEFEDRLDAILYRLLALGGSEAELAWFE 665 RDIAFFESELQWYKGKGNPEVEALEWEAMAID CD123 4,3
DELFAYRHN
MGSWGEFMDRLEAIDYRLWALGGSEAELAWF 666 ESDIAEFEQELQMYKGKGNPEVEALWDEAMAI CD123 4,6
RDELFAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWEEFDDRLDAIEHRLWALGGSEAELADFE 667 GSIAAFESWLQVYKGKGNPEVEALEAEAEAIAD CD123 4
ELWAYRHN
MGSWYEFADRLDAIMDRLVALGGSEAELAYFE 668 WEIAAFEEFLQMYKGKGNPEVEALDEEAEAIKD CD123 3,3
ELMAYRHN
MGSWNEFWERLDAIEWRLFALGGSEAELAFFE 669 LDIAWFEEELQWYKGKGNPEVEALIFEAHAITL CD123 3
ELDAYRHN
MGSWYEFDARLDAIEERLYALGGSEAELAAFE 670 FEIAGFEEALQWYKGKGNPEVEALLKEAEAITD CD123 8,9
ELYAYRHN
MGSWDEFSERLDAIWGRLEALGGSEAELATFE 671 FHIAEFEHELQYYKGKGNPEVEALQGEAAAIIN CD123 3,2
ELYAYRHN
MGSWDEFWDRLDAIEDRLFALGGSEAELADFE 672 RVIAWFENDLQEYKGKGNPEVEALDNEADAIRI CD123 3,9
ELHAYRHN
MGSWDEFDDRLEAIVDRLFALGGSEAELAMFE 673 FEIAQFEHQLQYYKGKGNPEVEALRDEADAIWI CD123 5,6
ELDAYRHN
MGSWEEFTIRLGAIYWRLFALGGSEAELANFE 674 WFIAEFEYELQPYKGKGNPEVEALVIEANAIDG CD123 3,3
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWFEFEWRLDAIENRLNALGGSEAELAWF 675 EYHIAAFEDSLQHYKGKGNPEVEALEWEAHAI CD123 3,3
QSELQAYRHN
MGSWYEFDDRLEAIWDRLGALGGSEAELAAFE 676 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRETAADIRA CD123 3,3
ELQAYRHN
MGSWGEFWARLEAIWIRLDALGGSEAELAAFE 677 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLREEAADIRR CD123 15
SLQAYRHN
MGSWIEFEVRLDAIWDRLFALGGSEAELAAFEK 678 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRDEAADIRQS CD123 4,2
LQAYRHN
MGSWTEFDRRLDAIWDRLFALGGSEAELAAFE 679 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLREEAADIRD CD123 9,2
YLQAYRHN
MGSWTEFDMRLDAIWDRLFALGGSEAELAAFE 680 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELREEAATIRG CD123 3,1
VLQAYRHN
MGSWEEFHDRLMAIETRLWALGGSEAELAAFE 681 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRYEAADIRD CD123 4,3
YLQAYRHN
MGSWVEFRDRLDAIETRLWALGGSEAELAAFE 682 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRYEAAEIRM CD123 4,2
VLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWMEFIDRLDAIEHRLWALGGSEAELAAFE 683 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLREEAAEIRM CD123 4,3
YLQAYRHN
MGSWTEFVWRLDAIEWRLEALGGSEAELAAFE 684 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLREEAAEIRD CD123 4,2
WLQAYRHN
MGSWVEFYDRLYAIEVRLLALGGSEAELAAFEK 685 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLRQEAAEIRDW CD123 5,8
LQAYRHN
MGSWYEFYDRLDAIEWRLWALGGSEAELAAF 686 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRDEAAQIR CD123 6,2
DFLQAYRHN
MGSWVEFYDRLDAIEHRLDALGGSEAELAAFE 687 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRDEAAFIRD CD123 3,4
MLQAYRHN
MGSWFEFVDRLTAIQVRLWALGGSEAELAAFE 688 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLREEAALIRY CD123 5,1
SLQAYRHN
MGSWFEFLDRLDAIEERLWALGGSEAELAAFE 689 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLREEAAVIRD CD123 12,2
SLQAYRHN
MGSWYEFMVRLDAIEERLFALGGSEAELAAFE 690 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLREEAASIRY CD123 4,1
HLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWYEFEDRLDAIQWRLWALGGSEAELAAF 691 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLRESAANIR CD123 6,3
QHLQAYRHN
MGSWSEFEYRLFAIENRLDALGGSEAELAAFE 692 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLREEAAMIRQ CD123 3,2
LLQAYRHN
MGSWVEFEYRLDAITERLLALGGSEAELAAFEK 693 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEILREEAAFIRQW CD123 3,9
LQAYRHN
MGSWWEFLDRLDAIEMRLFALGGSEAELAAFE 694 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLREEAALIRN CD123 9
MLQAYRHN
MGSWWEFEDRLDAIEYRLFALGGSEAELAAFE 695 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLREEAAFIRIF CD123 4,9
LQAYRHN
MGSWWEFESRLDAIFMRLTALGGSEAELAAFE 696 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLREDAAFIRE CD123 3,7
FLQAYRHN
MGSWVEFWHRLDAIKARLNALGGSEAELAAFE 697 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRWYAADFR CD123 3,5
LILQAYRHN
MGSWYEFYNRLSAIYARLQALGGSEAELAAFE 698 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRWYAADIRY CD123 10,6
MLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWYEFYDRLSAIYARLQALGGSEAELAAFE 699 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRWYAADIRY CD123 5,3
MLQAYRHN
MGSWNEFYDRLSAIYFRLQALGGSEAELAAFE 700 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEHLRWYAADIR CD123 10,6
MILQAYRHN
MGSWNEFYDRLSAIYFRLQALGGFEAELAAFE 701 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEHLRWYAADIR CD123 9
MILQAYRHN
MGSWEEFYDRLGAIFARLHALGGSEAELAAFE 702 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRWYAADIR CD123 3,9
MILQAYRHN
MGSWVEFYDRLHAIYFRLLALGGSEAELAAFEK 703 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRWYAADIRLV CD123 4,8
LQAYRHN
MGSWKEFDNRLYAIEDRLRALGGSEAELAAFE 704 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEHLRWYAADIR CD123 3,9
MILQAYRHN
MGSWVEFWDRLWAIEDRLWALGGSEAELAAF 705 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEHLRHYAADIR CD123 4,5
VWLQAYRHN
MGSWYEFADRLWAIEDRLWALGGSEAELAAF 706 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLRYYAADIR CD123 4
WVLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWYEFEERLYAIEDRLYALGGSEAELAAFE 707 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLRQEAADIRL CD123 11,5
MLQAYRHN
MGSWTEFEWRLYAIEDRLMALGGSEAELAAFE 708 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLRDEAADIRQ CD123 4,2
YLQAYRHN
MGSWIEFESRLWAIEDRLLALGGSEAELAAFEK 709 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLRLEAADIRED CD123 8,7
LQAYRHN
MGSWFEFEDRLDAIWDRLWALGGSEAELAAF 710 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLRMDAAMIR CD123 5,1
YILQAYRHN
MGSWEEFEDRLWAIEDRLWALGGSEAELAAF 711 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEILRYDAAYIRE CD123 4,1
ILQAYRHN
MGSWIEFEDRLYAIEDRLWALGGSEAELAAFE 712 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLRYEAAEIRY CD123 4
WLQAYRHN
MGSWYEFWDRLEAIEDRLWALGGSEAELAAF 713 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLRYSAAEIR CD123 4,2
YQLQAYRHN
MGSWVEFESRLAAIEHRLWALGGSEAELAAFE 714 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELREYAAEIRD CD123 3,7
WLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWWEFEHRLFAIEDRLWALGGSEAELAAFE 715 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLRDYAAEIRD CD123 7,6
YLQAYRHN
MGSWYEFDSRLMAIEDRLWALGGSEAELAAFE 716 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRQEAAEIRM CD123 3,2
ILQAYRHN
MGSWYEFEWRLMAIEDRLWALGGSEAELAAF 717 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRHEAAEIR CD123 3,4
DVLQAYRHN
MGSWYEFYNRLDAIEDRLWALGGSEAELAAFE 718 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRQEAADIRG CD123 11,3
QLQAYRHN
MGSWWEFHDRLEAIEDRLWALGGSEAELAAF 719 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRIEAADIRR CD123 6,4
QLQAYRHN
MGSWYEFWDRLEAIEERLWALGGSEAELAAFE 720 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRLEAADIRRI CD123 4,6
LQAYRHN
MGSWYEFEERLWAIEERLYALGGSEAELAAFE 721 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRYEAAWIRD CD123 5,4
FLQAYRHN
MGSWYEFENRLEAIEERLWALGGSEAELAAFE 722 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEMLREEAAFIRD CD123 6,1
WLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWYEFEYRLEAIEDRLWALGGSEAELAAFE 723 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLREEAAWIRV CD123 6,2
WLQAYRHN
MGSWYEFENRLGAIGDRLWALGGSEAELAAFE 724 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRDEAAYIRA CD123 4,8
VLQAYRHN
MGSWYEFEHRLDAIYDRLWALGGSEAELAAFE 725 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLREEAAWIRL CD123 6,3
WLQAYRHN
MGSWYEFEWRLDAIYDRLGALGGSEAELAAFE 726 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLREDAAEIRA CD123 6
LLQAYRHN
MGSWVEFENRLEAIENRLWALGGSEAELAAFE 727 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLREDAAQIR CD123 6,2
MMLQAYRHN
MGSWYEFEERLEAIEDRLWALGGSEAELAAFE 728 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLREQAAFIRT CD123 6
MLQAYRHN
MGSWFEFEWRLEAIFDRLYALGGSEAELAAFE 729 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRAEAAEIRL CD123 6,9
RLQAYRHN
MGSWWEFEDRLMAIYDRLYALGGSEAELAAFE 730 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRAEAALIRE CD123 15,3
TLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWFEFEDRLYAIEDRLYALGGSEAELAAFE 731 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRWGAATIRD CD123 4,7
ELQAYRHN
MGSWIEFWDRLEAIEDRLWALGGSEAELAAFE 732 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRDEAAWIRD CD123 4,5
SLQAYRHN
MGSWFEFWDRLDAIEDRLYALGGSEAELAAFE 733 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRDEAAWIRG CD123 4,9
TLQAYRHN
MGSWEEFTDRLWAIEDRLYALGGSEAELAAFE 734 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRDEAAFIRK CD123 8,9
SLQAYRHN
MGSWVEFVDRLEAIEDRLFALGGSEAELAAFE 735 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLRDQAAYIRF CD123 4,9
MLQAYRHN
MGSWFEFVDRLEAIEMRLFALGGSEAELAAFE 736 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVELLRWRAAMIRY CD123 7,1
DLQAYRHN
MGSWWEFEMRLEAIEDRLFALGGSEAELAAFE 737 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRWEAAFIRD CD123 4
ILQAYRHN
MGSWFEFEIRLEAIEDRLFALGGSEAELAAFEK 738 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLRDEAAEIRQV CD123 3
LQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWYEFYQRLEAIEDRLFALGGSEAELAAFE 739 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRDEAAEIRV CD123 3
VLQAYRHN
MGSWIEFEDRLEAIEDRLFALGGSEAELAAFEK 740 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRQEAAEIRLM CD123 21,8
LQAYRHN
MGSWHEFYDRLDAIYFRLWALGGSEAELAAFE 741 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVELLRLLAAEIRKE p26 9,6
LQAYRHN
MGSWHEFITRLEAIDQRLWALGGSEAELAAFE 742 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRFWAAEIRFI p26 16,91
LQAYRHN
MGSWMEFFDRLVAIDERLWALGGSEAELAAFE 743 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRMWAAEIRF p26 18,62
LLQAYRHN
MGSWVEFSGRLIAIDNRLWALGGSEAELAAFE 744 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRMWAAEIRY p26 5,28
ILQAYRHN
MGSWVEFHHRLFAIDERLWALGGSEAELAAFE 745 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRMVAAEIRYI p26 21,39
LQAYRHN
MGSWHEFMERLIAIDGRLWALGGSEAELAAFE 746 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRFVAAFIRD p26 17,85
VLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWKEFIQRLDAIHYRLWALGGSEAELAAFE 747 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRFVAAFIRF p26 18,41
ELQAYRHN
MGSWSEFIFRLDAIHSRLQALGGSEAELAAFEK 748 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRFIAAEIRLKL p26 28,3
QAYRHN
MGSWFEFYDRLNAIDARLWALGGSEAELAAFE 749 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVENLRVHAAAIRE p26 5,92
WLQAYRHN
MGSWLEFYDRLNAIDARLWALGGSEAELAAFE 750 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVENLRVHAAAIRE p26
WLQAYRHN
MGSWFEFYHRLNAIDARLWALGGSEAELAAFE 751 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVENLRVHAAAIRE p26
WLQAYRHN
MGSWFEFYDRLNAIDSRLWALGGSEAELAAFE 752 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVENLRVHAAAIRE p26
WLQAYRHN
MGSWFEFYDRLNAIDARLWALGGSEAELAAFE 753 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRVHAAAIRE p26
WLQAYRHN
MGSWFEFYDRLNAIDARLWALGGSEAELAAFE 754 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVENLRDHAAAIRE p26
WLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWFEFYDRLNAIDARLWALGGSEAELAAFE 755 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVENLREHAAAIRE p26
WLQAYRHN
MGSWFEFYDRLNAIDARLWALGGSEAELAAFE 756 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVENLRVHAAHIRE p26
WLQAYRHN
MGSWLEFYHRLNAIDSRLWALGGSEAELAAFE 757 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVENLRVHAAAIRE p26
WLQAYRHN
MGSWLEFYHRLNAIDSRLWALGGSEAELAAFE 758 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRDHAAHIRE p26 19,23
WLQAYRHN
MGSWFEFYHRLNAIDSRLWALGGSEAELAAFE 759 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRDHAAHIRE p26
WLQAYRHN
MGSWLEFYDRLNAIDSRLWALGGSEAELAAFE 760 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRDHAAHIRE p26
WLQAYRHN
MGSWLEFYHRLNAIDARLWALGGSEAELAAFE 761 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRDHAAHIRE p26
WLQAYRHN
MGSWLEFYHRLNAIDSRLWALGGSEAELAAFE 762 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVENLRDHAAHIRE p26
WLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWLEFYHRLNAIDSRLWALGGSEAELAAFE 763 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRVHAAHIRE p26
WLQAYRHN
MGSWLEFYHRLNAIDSRLWALGGSEAELAAFE 764 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRDHAAAIRE p26
WLQAYRHN
MGSWFEFYDRLNAIDARLWALGGSEAELAAFE 765 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRDHAAHIRE p26
WLQAYRHN
MGSWFEFYERLNAIDSRLWALGGSEAELAAFE 766 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRAHAASIRT p26 27,1
WLQAYRHN
MGSWIEFYWRLEAIDQRLWALGGSEAELAAFE 767 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRVHAAAIRW p26 9,4
WLQAYRHN
MGSWSEFVKRLDAIDQRLWALGGSEAELAAFE 768 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRVHAAAIRA p26 27
WLQAYRHN
MGSWEEFYYRLEAIDARLFALGGSEAELAAFE 769 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRVHAAHIRD p26 30,3
WLQAYRHN
MGSWVEFHYRLQAIDARLWALGGSEAELAAFE 770 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRVHAAHIRK p26 14,8
WLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWVEFVGRLNAIDARLWALGGSEAELAAFE 771 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRHHAAEIRN p26 26
WLQAYRHN
MGSWNEFMDRLNAIDNRLWALGGSEAELAAF 772 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVENLRKQAASIR p26 10
LWLQAYRHN
MGSWNEFFQRLNAIDERLWALGGSEAELAAFE 773 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRQHAANIR p26 28,7
WWLQAYRHN
MGSWYEFVVRLFAIDERLWALGGSEAELAAFE 774 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLREHAAHIRS p26 18,25
WLQAYRHN
MGSWYEFYLRLDAIDHRLWALGGSEAELAAFE 775 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEMLREHAAHIRK p26 16
WLQAYRHN
MGSWYEFRARLLAIDERLWALGGSEAELAAFE 776 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEHLREHAAHIRN p26 20,9
FLQAYRHN
MGSWTEFWHRLEAIDSRLWALGGSEAELAAFE 777 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLREHAAHIRV p26 13,19
WLQAYRHN
MGSWTEFQNRLNAIDHRLWALGGSEAELAAFE 778 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLREHAAKIRV p26 30,5
WLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWSEFFKRLEAIDRRLWALGGSEAELAAFE 779 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELREHAAHIRV p26 30,2
WLQAYRHN
MGSWYEFQQRLEAIDTRLWALGGSEAELAAFE 780 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELREHAAHIRH p26 27,3
WLQAYRHN
MGSWTEFEKRLHAIDYRLWALGGSEAELAAFE 781 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLREHAAAIRH p26 17,1
WLQAYRHN
MGSWTEFHQRLDAIDERLWALGGSEAELAAFE 782 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEFLREHAAKIRM p26 24,4
WLQAYRHN
MGSWLEFSQRLTAIDSRLWALGGSEAELAAFE 783 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVENLREHAAKIRN p26 30,4
WLQAYRHN
MGSWTEFVNRLYAIDSRLWALGGSEAELAAFE 784 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEGLRTHAAKIRH p26 16,7
WLQAYRHN
MGSWMEFVDRLSAIDRRLWALGGSEAELAAFE 785 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLREHAANIRQ p26 32,1
WLQAYRHN
MGSWVEFVSRLYAIDFRLWALGGSEAELAAFE 786 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEALREHAAQIRD p26 29
WLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWSEFHTRLDAIDTRLWALGGSEAELAAFE 787 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRRHAAAIRF p26 23,5
WLQAYRHN
MGSWLEFHSRLDAIDTRLWALGGSEAELAAFE 788 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLREHAAAIRH p26 30,8
YLQAYRHN
MGSWTEFYQRLDAIDTRLWALGGSEAELAAFE 789 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEGLRQQAAQIRA p26 29,7
WLQAYRHN
MGSWAEFSDRLNAIDQRLWALGGSEAELAAFE 790 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEILREHAAEIRKF p26 25,3
LQAYRHN
MGSWMEFNHRLQAIDGRLWALGGSEAELAAF 791 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEMLREHAAAIR p26 33,4
AFLQAYRHN
MGSWYEFYKRLEAIDNRLYALGGSEAELAAFE 792 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLREHAAAIRH p26 30,8
WLQAYRHN
MGSWYEFYYRLEAIDNRLIALGGSEAELAAFEK 793 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLREHAAKIREW p26 29,6
LQAYRHN
MGSWYEFVSRLEAIDDRLYALGGSEAELAAFE 794 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEMLRQHAAAIRH p26 33,1
WLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWYEFSHRLEAIEDRLFALGGSEAELAAFE 795 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEPLREHAAYIRH p26 26
WLQAYRHN
MGSWFEFFERLAAIEDRLWALGGSEAELAAFE 796 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRVHAAAIRA p26 20,3
FLQAYRHN
MGSWIEFKYRLDAIEWRLEALGGSEAELAAFEK 797 EIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRIHAAAIRTWL p26 18,3
QAYRHN
MGSWYEFMYRLDAIEYRLFALGGSEAELAAFE 798 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRIHAAMIRE p26 19,4
WLQAYRHN
MGSWVEFVTRLEAIEDRLFALGGSEAELAAFEK 799 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEHLRAHAAHIRH p26 11,7
WLQAYRHN
MGSWYEFVIRLDAIEDRLFALGGSEAELAAFEK 800 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEHLRVHAAHIRVW p26 30,1
LQAYRHN
MGSWVEFVERLDAIEFRLFALGGSEAELAAFEK 801 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRNHAAHIRSW p26 23,8
LQAYRHN
MGSWSEFVHRLDAIEVRLFALGGSEAELAAFE 802 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRYHAAKIRS p26 16,9
WLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWSEFYYRLAAIESRLFALGGSEAELAAFEK 803 EIAAFESELQAYKGKGNPEVERLREHAAHIRR p26 30,8
WLQAYRHN
MGSWYEFYLRLSAIEDRLFALGGSEAELAAFEK 804 EIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRVQAAHIRTW p26 27,4
LQAYRHN
MGSWYEFYDRLDAIEDRLFALGGSEAELAAFE 805 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRDQAAYIRT p26 31,9
WLQAYRHN
MGSWHEFWVRLEAIESRLFALGGSEAELAAFE 806 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRVQAAHIRS p26 26,9
WLQAYRHN
MGSWVEFYHRLEAIEQRLMALGGSEAELAAFE 807 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLREQAAAIRS p26 28,5
WLQAYRHN
MGSWVEFYERLNAIEYRLEALGGSEAELAAFE 808 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLREHAAYIRQ p26 28,7
WLQAYRHN
MGSWVEFYHRLDAIFDRLDALGGSEAELAAFE 809 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRANAAGIRS p26 20
WLQAYRHN
MGSWSEFTDRLFAIEDRLLALGGSEAELAAFEK 810 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRMHAASIRLW p26 25,4
LQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWHEFYDRLYAIWDRLDALGGSEAELAAFE 811 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEGLRNAAAVIRIF p26 22,91
LQAYRHN
MGSWFEFSNRLYAIWHRLTALGGSEAELAAFE 812 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRTQAAFIRIL p26 15,25
LQAYRHN
MGSWFEFSDRLYAIWERLDALGGSEAELAAFE 813 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRFQAAFIRY p26 18,99
QLQAYRHN
MGSWFEFEDRLFAIWTRLEALGGSEAELAAFE 814 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRQSAASIRW p26 10,89
LLQAYRHN
MGSWHEFSERLFAIWTRLEALGGSEAELAAFE 815 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEALRQSAAFIRV p26 8,21
MLQAYRHN
MGSWGEFTVRLYAIDRRLDALGGSEAELAAFE 816 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRRFAAIIRAF p26 8,54
LQAYRHN
MGSWYEFDHRLMAISFRLVALGGSEAELAAFE 817 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVETLRRRAANIRH p26 20,1
LLQAYRHN
MGSWSIFKYHLADIKLLLEALGGSEAELAYFEFL 818 IADFEFTLQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDEL p26 20,21
QAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWHHFKYFLADIKSILEALGGSEAELAIFEV 819 QIAYFEDLLQSYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE p26 8
LQAYRHN
MGSWLYFKYNLAVIKHWLEALGGSEAELAIFEM 820 SIADFEYELQWYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE p26 13,3
LQAYRHN
MGSWFYFKYELAWIKHWLEALGGSEAELASFE 821 THIAFFEHQLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 13,7
ELQAYRHN
MGSWADFKWTLAYIKHRLEALGGSEAELAFFE 822 MEIAYFEQSLQNYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 31,5
ELQAYRHN
MGSWAYFKGQLAYIKSGLEALGGSEAELAYFE 823 LRIAYFEHWLQNYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 11,4
ELQAYRHN
MGSWENFKDTLAWIKEYLEALGGSEAELAGFE 824 HRIAIFEHYLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 19,2
ELQAYRHN
MGSWVLFKDYLADIKHYLEALGGSEAELANFE 825 HLIANFEGDLQTYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 13,8
ELQAYRHN
MGSWSLFKHRLANIKVYLEALGGSEAELADFET 826 FIAYFEKDLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE p26 19,6
LQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWEHFKVELAGIKAYLEALGGSEAELALFE 827 WAIADFESILQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 18,1
ELQAYRHN
MGSWIYFKDELAGIKKYLEALGGSEAELAMFEV 828 AIADFEAILQKYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDEL p26 15,9
QAYRHN
MGSWVLFKQELAWIKWLLEALGGSEAELAAFE 829 EQIARFEHDLQKYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 29,5
ELQAYRHN
MGSWVLFKQELAWIKWYLEALGGSEAELAAFE 830 WEIAAFEQRLQIYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 22,5
ELQAYRHN
MGSWFLFKSELAWIKWRLEALGGSEAELAYFE 831 YQIAEFEFWLQSYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 25,8
ELQAYRHN
MGSWLLFKSELAWIKWYLEALGGSEAELAEFE 832 WNIAEFEKNLQKYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 25,7
ELQAYRHN
MGSWLLFKSDLAWIKWRLEALGGSEAELAEFE 833 ESIAMFEHWLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIR p26 33,3
DELQAYRHN
MGSWLYFKSDLAWIKWRLEALGGSEAELADFE 834 EAIAEFEQALQIYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE p26 21,2
LQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWKLFKYELAWIKWRLEALGGSEAELADFE 835 ASIAQFEKYLQTYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 23,4
ELQAYRHN
MGSWYLFKNELAWIKWRLEALGGSEAELADFE 836 MVIAMFEDHLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIR p26 31,1
DELQAYRHN
MGSWVYFKAHLAFIKWELEALGGSEAELANFE 837 STIAEFEKYLQVYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 20,8
ELQAYRHN
MGSWMYFKSHLAWIKWELEALGGSEAELAFFE 838 DNIAQFEYWLQLYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 19,8
ELQAYRHN
MGSWTLFKWDLAFIKWQLEALGGSEAELAWF 839 EYEIAAFEDSLQNYKGKGNPEVEALRKEAAAIR p26 12,1
DELQAYRHN
MGSWILFKEDLAFIKWQLEALGGSEAELAWFE 840 TTIANFESDLQKYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 23,3
ELQAYRHN
MGSWYFFKSRLAYIKVYLEALGGSEAELAGFE 841 WEIAHFEEWLQRYKGKGNPEVEALRKEAAAIR p26 30,1
DELQAYRHN
MGSWYIFKSELAWIKWYLEALGGSEAELANFE 842 VEIATFETWLQGYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 29,6
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWYIFKQELASIKLSLEALGGSEAELAHFEA 843 EIAWFEWWLQWYKGKGNPEVEALRKEAAAIR p26 19,4
DELQAYRHN
MGSWVRFKTELAYIKESLEALGGSEAELAMFE 844 SEIAIFEHSLQTYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE p26 20,5
LQAYRHN
MGSWYLFKTELAAIKYRLEALGGSEAELASFEY 845 EIAWFEHILQFYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE p26 20,1
LQAYRHN
MGSWYWFKYELAEIKWHLEALGGSEAELAHFE 846 HSIAVFESQLQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 21,5
ELQAYRHN
MGSWWVFKKTLAEIKWTLEALGGSEAELAYFE 847 AEIAFFEFILQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE p26 18,6
LQAYRHN
MGSWVYFKDHLAEIKSQLEALGGSEAELALFE 848 YDIAWFEFILQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 22,1
ELQAYRHN
MGSWVYFKHRLAEIKDQLEALGGSEAELAEFE 849 TDIAWFEWMLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIR p26 11,1
DELQAYRHN
MGSWIIFKTDLARIKNYLEALGGSEAELATFERD 850 IAWFEFMLQIYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDEL p26 16,7
QAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWMHFKQDLAEIKGYLEALGGSEAELAIFE 851 MDIAWFEYMLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIR p26 18,9
DELQAYRHN
MGSWQIFKQDLAAIKDYLEALGGSEAELAIFEF 852 DIAWFEHMLQWYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 17,4
ELQAYRHN
MGSWLAFKEDLAHIKSILEALGGSEAELAEFEH 853 DIAWFEYMLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 18,6
ELQAYRHN
MGSWFVFKEDLAGIKFILEALGGSEAELAMFET 854 DIAWFEYMLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 14,2
ELQAYRHN
MGSWTHFKEDLAHIKDRLEALGGSEAELAAFE 855 LDIAWFEFMLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 30,4
ELQAYRHN
MGSWYYFKERLAAIKDRLEALGGSEAELAIFEA 856 DIAWFEFMLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 31,5
ELQAYRHN
MGSWYTFKGSLAEIKNRLEALGGSEAELAMFE 857 SDIAWFEFMLQFYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 32,3
ELQAYRHN
MGSWFTFKDDLAQIKNRLEALGGSEAELANFE 858 MSIAWFEFMLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIR p26 30,8
DELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWVLFKQDLAMIKQRLEALGGSEAELAMFE 859 YDIAWFEHMLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIR p26 29,7
DELQAYRHN
MGSWVEFKRDLANIKQRLEALGGSEAELAQFE 860 MQIAWFEHTLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIR p26 30,4
DELQAYRHN
MGSWSYFKEDLANIKSSLEALGGSEAELAWFE 861 SSIAWFEHTLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 11,6
ELQAYRHN
MGSWSIFKQDLADIKDSLEALGGSEAELAMFE 862 MDIAWFEHTLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIR p26 16,6
DELQAYRHN
MGSWEIFKDDLASIKKVLEALGGSEAELALFES 863 DIAWFELMLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE p26 27,9
LQAYRHN
MGSWSIFKDDLAVIKERLEALGGSEAELAHFEQ 864 DIAWFEHLLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE p26 25,6
LQAYRHN
MGSWSVFKDDLAQIKDRLEALGGSEAELAQFE 865 LDIAWFEYVLQFYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 30,3
ELQAYRHN
MGSWAVFKDSLAHIKDVLEALGGSEAELALFE 866 MDIAWFEYVLQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIR p26 24,1
DELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWIAFKDHLAIIKQRLEALGGSEAELARFEF 867 EIAWFEWMLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 29,9
ELQAYRHN
MGSWIHFKNDLAVIKDELEALGGSEAELARFEI 868 MIAWFEDALQWYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 17,9
ELQAYRHN
MGSWMVFKQDLAEIKANLEALGGSEAELADFE 869 FAIAWFEYELQWYKGKGNPEVEALRKEAAAIR p26 17,8
DELQAYRHN
MGSWKNFKLELALIKSKLEALGGSEAELAQFEA 870 DIAFFEWSLQWYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 20,6
ELQAYRHN
MGSWHSFKQDLAYIKYLLEALGGSEAELAQFE 871 ELIAFFEYYLQTYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 25,6
ELQAYRHN
MGSWVVFKSSLAQIKILLEALGGSEAELAIFEVK 872 IAHFEQELQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDEL p26 8,6
QAYRHN
MGSWDQFKNSLASIKRVLEALGGSEAELAIFEV 873 KIAHFEHFLQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE p26 15,6
LQAYRHN
MGSWNNFKSSLASIKQVLEALGGSEAELAVFE 874 LQIAHFERELQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD p26 24,1
ELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWVEFGHRLWAIDQRLYALGGSEAELAAFE 875 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRQRAAFIRF CD137
RLQAYRHN
MGSWAEFKQRLAAIKTRLEALGGSEAELAAFL CD137 876 GEIWAFEMELAAYKGKGNPEVEALGREAAAIR (BB10)
MELQAYRHN
MGSWYEFDLRLHAIYDRLVALGGSEAELAAFE 877 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEILRDNAAYIRQ CD47
MLQAYRHN
MGSWHEFHDRLQAIHERLYALGGSEAELAAFE 878 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRIAAAHIRQV CTLA4
LQAYRHN
MGSWNYFKDHLAWIKNSLEALGGSEAELAHFE 879 TAIASFERQLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD DR5
ELQAYRHN
MGSWLWFKIFLAEIKYFLEALGGSEAELAAFDF 880 EIHAFHVELFAYKGKGNPEVEVLREVAAEIRWD KIR
LQAYRHN
MGSWTEFQSRLDAIHSRLRALGGSEAELAAFE 881 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVELLRDDAAFIRH PDL1
FLQAYRHN
MGSWVVFKVDLATIKYILEALGGSEAELAEFEG 882 EIAGFEYSLQFYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE TIM3
LQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWTIFKEWLAFIKTDLEALGGSEAELAFFEG 883 WIASFEMELQKYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD PD1
ELQAYRHN
MGSWEEFELRLNAIEERLYALGGSEAELAYFEY 884 VIADFEGNLQRYKGKGNPEVEALYFEADAIFEE CD19
LVAYRHN
MGSWVVFKQRLAYIKDLLEALGGSEAELAYFE 885 MSIAFFEEDLQVYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CD22
ELQAYRHN
MGSWVEFYERLDAIDRRLWALGGSEAELAAFE 886 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRVHAASIRA p26
WLQAYRHN
MGSWFEFYDRLNAIDARLWALGGSEAELAAFE 887 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRAHAAAIRE p26
WLQAYRHN
MGSWSEFYDRLNAIDARLWALGGSEAELAAFE 888 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRVHAAAIRE p26
WLQAYRHN
MGSWSEFYDRLNAIDARLWALGGSEAELAAFE 889 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRAHAAAIRE p26
WLQAYRHN
MGSWSEFYDRLNAIDARLWALGGSEAELAAFE 890 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLKAHAAAIRE p26
WLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWSEFYDRLNAIDARLWALGGSEAELAAFE 891 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLQAHAAAIRE p26
WLQAYRHN
MGSWSEFYDRLNAIDARLWALGGSEAELAAFE 892 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRAHAAGIRE p26
WLQAYRHN
MGSWFEFYDRLNAIDARLWALGGSEAELAAFE 893 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLREHAAHIRE p26
WLQAYRHN
MGSWFEFYDRLNAIDARLWALGGSEAELAAFE 894 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLREHAAAIRE p26
WLQAYRHN
MGSWSEFYDRLNAIDARLWALGGSEAELAAFE 895 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLREHAAAIRE p26
WLQAYRHN
MGSWVEFEARLSAIYERLEALGGSEAELAAFE 896 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRRHAAGIRS CS1
NLQAYRHN
MGSWVEFFVRLDAIWERLEALGGSEAELAAFE 897 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVETLRFHAAGIRQ CS1
KLQAYRHN
MGSWTEFNLRLDAIYERLEALGGSEAELAAFEK 898 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEALRWHAAGIRQ CS1
QLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWMEFYDRLDAIWVRLEALGGSEAELAAFE 899 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRFHAAGIRE CS1
QLQAYRHN
MGSWHEFNGRLWAIYARLDALGGSEAELAAFE 900 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVETLRRHAAGIRG CS1
ILQAYRHN
MGSWYEFVQRLHAINDRLSALGGSEAELAAFE 901 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRRHAAGIRY CS1
TLQAYRHN
MGSWAEFYQRLNAIWNRLEALGGSEAELAAFE 902 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEVLRRHAAGIRG CS1
QLQAYRHN
MGSWVEFNERLHAIYLRLDALGGSEAELAAFE 903 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVETLRRHAAGIRW CS1
QLQAYRHN
MGSWNEFKLELAFIKDWLEALGGSEAELANFE 904 EAIAEFEAGLQGYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD CS1
ELQAYRHN
MGSWMEFEARLEAIWDRLEALGGSEAELAAFE 905 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVESLRFHAAGIRQ CS1
HLQAYRHN
MGSWVEFEDRLNAIWWRLEALGGSEAELAAF 906 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRRHAAGIR CS1
TQLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWHHFKMHLAGIKLQLEALGGSEAELAEFE 907 EWIADFEGALQDYKGKGNPEVEALRKEAAAIR CS1
DELQAYRHN
MGSWAEFFARLDAIWERLEALGGSEAELAAFE 908 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVETLRFHAAGIRQ CS1
KLQAYRHN
MGSWAEFFARLDAIWDRLEALGGSEAELAAFE 909 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVETLRFHAAGIRQ CS1
KLQAYRHN
MGSWAEFFARLDAIWERLEALGGSEAELAAFE 910 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVETLKFHAAGIRQ CS1
KLQAYRHN
MGSWHEFRWRLFAIWQRLHALGGSEAELAAF 911 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRLDAALIR HER2 10,02
VMLQAYRHN
MGSWAEFRWRLHAIWLKLGELGGSEAELAAFE 912 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLREDAEQIKY HER2
ILQAYRHN
MGSWAEFRWALHAIWLKLGELGGSEAELAAFE 913 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLREDAEQIKY HER2
ILQAYRHN
MGSWAEFRWRLHAIWLKLGALGGSEAELAAFE 914 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRQDAAQIK HER2
YILQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWAEFRWRLHAIWLQLGALGGSEAELAAF 915 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRQDAAQI HER2
KYILQAYRHN
MGSWAEFRWRLHAIWLRLGALGGTEAELAAFE 916 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRQDAAQIK HER2
YILQAYRHN
MGSWAEFRWRLHAIWLRLGALGGSEAELAAF 917 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRQDAAQI HER2
KYILQAYRHN
MGSWAEFRWKLEAIWLRLGALGGSEAELAAFE 918 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRQDAAQIK HER2
YILQAYRHN
MGSWAEFRWKLGAIWLRLGALGGSEAELAAF 919 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRQDAAQI HER2
KYILQAYRHN
MGSWYEFRWRLHAIWLRLGALGGSEAELAAF 920 EKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEWLRQDAAQI HER2 7,18
RYILQAYRHN
MGSWHEFLRRLLAIEMRLYALGGSEAELAAFE 921 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEHLRVRAASIRQ HER2 8,15
MLQAYRHN
MGSWWGFKVNLAWIKWKLEALGGSEAELAYF 922 ELWIANFEHSLQEYKGKGNPEVEALRKEAAAIR HER2 8,69
DELQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWVNFKTHLARIKVHLEALGGSEAELALFE 923 HDIANFEQVLQQYKGKGNPEVEALRKEAAAIRD HER2 7,91
ELQAYRHN
MGSWLVFKDELAGIKNYLEALGGSEAELATFE 924 QDIAWFEQWLQNYKGKGNPEVEALRKEAAAIR HER2 3,28
DELQAYRHN
MGSWKTFKIELAGIKLELEALGGSEAELAGFEN 925 AIAQFESSLQYYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDE HER2 4,95
LQAYRHN
MGSWWEFKVRLSAIQYRLYALGGSEAELAAFE 926 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEALREQAALIRTI HER2 5,17
LQAYRHN
MGSWWEFHIRLHAINYRLAALGGSEAELAAFE 927 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEALRELAAKIRG HER2 11,90
DLQAYRHN
MGSWWEFQVRLRAIQYRLNALGGSEAELAAFE 928 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRGLAAQIRF HER2 14,39
DLQAYRHN
MGSWWEFKIRLYAIEYRLNALGGSEAELAAFEK 929 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEALRAKAAQIRYN HER2 4,49
LQAYRHN
MGSWFEFNIRLHAIEYRLKALGGSEAELAAFEK 930 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRNYAASIRKL HER2 7,86
LQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWFEFEIRLRAIEYRLSALGGSEAELAAFEK 931 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRELAAEIRYAL HER2 7,75
QAYRHN
MGSWFEFKIRLYAIQYRLSALGGSEAELAAFEK 932 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRNLAAEIRHS HER2 13,08
LQAYRHN
MGSWWEFKVRLRAIEYRLSALGGSEAELAAFE 933 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRVLAASIRIH HER2 10,09
LQAYRHN
MGSWSEFWFRLHAILYRLQALGGSEAELAAFE 934 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVETLRDAAAEIRV HER2 14,79
ALQAYRHN
MGSWIEFWVRLNAILYRLYALGGSEAELAAFEK 935 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEALRDSAAEIRRW HER2 3,91
LQAYRHN
MGSWVEFWIRLNAIKYRLLALGGSEAELAAFEK 936 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEKLRQDAADIREL HER2 10,62
LQAYRHN
MGSWTEFWWRLSAIVYRLNALGGSEAELAAFE 937 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRDMAADIRS HER2 5,76
LLQAYRHN
MGSWWEFYLRLRAISYRLQALGGSEAELAAFE 938 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEGLRQDAAEIRK HER2 5,10
LLQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWWEFHVRLRAIEYRLEALGGSEAELAAFE 939 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEQLRLIAANIRHL HER2 5,48
LQAYRHN
MGSWWEFHVRLKAIEYRLLALGGSEAELAAFE 940 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRYIAANIRQL HER2 4,56
LQAYRHN
MGSWWEFKVRLKAIEYRLLALGGSEAELAAFE 941 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRYIAANIRQL HER2
LQAYRHN
MGSWWEFQVRLAAIEYRLKALGGSEAELAAFE 942 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVENLRQLAAHIRS HER2 6,33
VLQAYRHN
MGSWWEFQVRLSAIEYRLTALGGSEAELAAFE 943 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEELRQKAARIRS HER2 9,61
LLQAYRHN
MGSWWEFNIRLHAIDYRLKALGGSEAELAAFE 944 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVELLREKAAQIRA HER2 9,75
QLQAYRHN
MGSWWEFRVRLEAIDYRLKALGGSEAELAAFE 945 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRMKAATIRAI HER2 6,82
LQAYRHN
MGSWYEFDIRLEAIKYRLSALGGSEAELAAFEK 946 EIAAFESELQAYKGKGNPEVEYLRKKAAVIRSM HER2 5,35
LQAYRHN
SEQ Sequência de domínio D Alvo ELISA_avg NO:
MGSWWEFRIRLEAIWYRLHALGGSEAELAAFE 947 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRIFAANIRSK HER2 8,04
LQAYRHN
MGSWWEFNVRLQAIKYRLSALGGSEAELAAFE 948 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRKTAAHIRW HER2 5,23
QLQAYRHN
MGSWWEFNVRLSAIRYRLLALGGSEAELAAFE 949 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEDLRASAAQIRA HER2 6,73
MLQAYRHN
MGSWWEFNMRLSAIKYRLYALGGSEAELAAFE 950 KEIAAFESELQAYKGKGNPEVEILRRLAADIRER HER2 3,08
LQAYRHN
[0411] Em algumas modalidades, a divulgação fornece composições compreendendo uma ou mais dentre as sequências de DD divulgadas na Tabela 1. Em outras modalidades, a divulgação fornece composições compreendendo um ou mais DDs compreendendo uma sequência com 60 a 70%, 70 a 75%, 75 a 80%, 80 a 85%, 85 a 90%, 95 a 99% de homologia (e faixas sobrepostas nas mesmas) com uma sequência divulgada na Tabela 1. Em algumas modalidades, o DD (ou DDs) que tem tal homologia é funcionalmente similar ou idêntico em comparação com a respectiva sequência de referência na Tabela 1. Em algumas modalidades, a divulgação fornece um polipeptídeo que compreende um ou mais DD que competem (integral ou parcialmente) com uma ou mais das sequências de DD divulgadas na Tabela 1 (sequência de referência) para seu respectivo alvo. A capacidade de um polipeptídeo de competir com um polipeptídeo de referência para ligação a um respectivo alvo pode ser rotineiramente determinada usando um ensaio de competição padrão conhecido na técnica. Em algumas modalidades, a competição não exige que o polipeptídeo compita pelo mesmo epítopo que um polipeptídeo (DD) da Tabela 1, em vez disto, o polipeptídeo pode competir pela ligação a um epítopo de inibição estérica, um epítopo de sobreposição, etc. MATURAÇÃO DE AFINIDADE E DESIMUNIZAÇÃO DE DD E DDpp
[0412] As estratégias de maturação de afinidade podem ser usadas para gerar DD e DDpp de alta afinidade que podem ser usados nas proteínas de fusão de DDpp descritas no presente documento. Um DD e DDpp aprimorados que ligam especificamente um alvo desejado (por exemplo, BCAM, CD123, CS1, HER2, AFP e AFP p26) também podem ser preparados com base numa sequência de DDpp de referência conhecida. Por exemplo, pelo menos um, dois, três, quatro, cinco ou mais mutações de aminoácido (por exemplo, substituições conservadoras ou não conservadoras), deleções ou inserções podem ser introduzidas numa sequência de DDs divulgada na Tabela 1 (isto é, uma sequência de referência) e o DDpp resultante pode ser examinado quanto à ligação ao respectivo alvo e atividade biológica, como a capacidade para antagonizar a atividade biológica do respectivo alvo ou agonizar a atividade biológica do respectivo alvo.
[0413] O DDpp divulgado, particularmente aquele administrado a um indivíduo, não são preferencialmente antigênicos em relação ao indivíduo (por exemplo, ser humano). Em algumas modalidades, a sequência do DDpp não contém um motivo de ligação de HLA-DR humano ou sítios de clivagem para proteassomos e imunoproteassomos. Em modalidades particulares, a sequência de DDpp não contém uma sequência antigênica conforme determinado por uma versão de modelo de previsão de computador existente na data de depósito deste relatório descritivo. Em modalidades particulares, a sequência de DDpp não contém uma sequência de sítio de ligação de MHC (classe I ou classe II) conforme previsto por um algoritmo selecionado a partir de ProPred (consultar, por exemplo, Singh, Bioinformatics 17(12): 1236-1237 (2001)), ProPred1 (Singh, Bioinformatics 19(8): 1009-14 (2003)), SYFPEITHI (consultar, por exemplo, Schuler, Immunoinf. Meth. in Mol. Biol. 409(1): 75-93 (2007)), SMM-align (consultar, por exemplo, Nielsen, BMC Bioinformatics 8: 238 (2007)), RANKPEP (consultar, por exemplo, Reche, Hum Immunol 63: 701-709. (2004)), ou TEPITOPE (consultar, Sturniolo, Nat Biotechnol 17: 555– 561 (1999)), em que a versão do algoritmo e o banco de dados aplicado estão em existência na data de depósito deste pedido. Em algumas modalidades, o DDpp não contém uma sequência que compartilha características com um epítopo de célula T de alta afinidade (limiar de ligação menor que 6%). (Singh, Bioinformatics 17: 1236-1237 (2001)). Em algumas modalidades, o DDpp não contém uma sequência que compartilha características com um epítopo de célula T promíscuo (presente em mais de 50% de alelos relevantes) (Singh, Bioinformatics 17: 1236-1237 (2001)). Em algumas modalidades, o DDpp não contém uma sequência que compartilha características com uma alta afinidade ou um epítopo de célula T promíscuo. Em modalidades particulares, o DDpp não contém a sequência LAAIKTRLQ (SEQ ID NO: 2). As técnicas para gerar, executar e identificar as variantes de DDpp de afinidade madura e variantes de DDpp de ligação de alvo contendo uma alteração de sequência que remove uma sequência de sítio de ligação de MHC (classe I ou classe II) prevista são conhecidas na técnica.
ARTIGOS DE FABRICAÇÃO
[0414] Os artigos de fabricação, incluindo kits, são fornecidos no presente documento. O artigo de fabricação pode compreender um recipiente e um rótulo ou bula ou associado ao recipiente. Os recipientes adequados incluem, por exemplo, garrafas, frascos ou seringas. Os recipientes podem ser formados a partir de uma variedade de materiais como vidro ou plástico. O recipiente retém um ou mais DDpp, ácidos nucleicos que codificam DDpp e/ou vetores ou células hospedeiras da presente divulgação. A identificação ou bula pode incluir direções para realizar a triagem e/ou detecção com base em afinidade.
[0415] Além disto, são fornecidos kits contendo um DDpp. Tais kits têm usos incluindo, porém sem limitações detectar o alvo de interesse ao qual o DDpp liga especificamente (por exemplo, BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP ou AFP p26)). Tal kit de ensaio pode ser útil na triagem pela presença de um alvo de interesse e/ou quantificação das concentrações de alvo de interesse num fluido, como, um fluido biológico (por exemplo, sangue, soro ou fluido sinovial).
[0416] Numa modalidade, um kit de ensaio de DDpp é contemplado, o qual compreende um ou mais recipientes de um DDpp que liga especificamente um alvo de interesse e, opcionalmente, uma detecção significa quanto à determinação da presença ou ausência de uma interação de um alvo/DDpp ou a ausência do mesmo. O kit opcionalmente contém ainda, proteína de alvo de interesse (por exemplo, BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP ou AFP p26) que pode ser usado, por exemplo, como um controle ou padrão. O DDpp pode ser livre ou expresso na superfície de uma célula hospedeira ou na superfície de um bacteriófago. Numa modalidade específica, o DDpp ou alvo de interesse fornecido no kit é identificado. Qualquer identificação conhecida na técnica pode ser usada. Em algumas modalidades, a identificação é selecionada a partir do grupo que consiste em biotina, um fluorógeno, uma enzima, um epítopo, um cromogênio ou um radionuclídeo. Em algumas modalidades, o DDpp é imobilizado num suporte sólido. O meio de detecção empregado e para detectar a identificação dependerá da natureza da identificação e pode ser qualquer um conhecido na técnica, por exemplo, filme para detectar um radionuclídeo; um substrato de enzima que gera ou amplifica um sinal detectável para detectar a presença de um alvo de interesse.
[0417] Preferencialmente, o kit compreende ainda um suporte sólido para o DDpp, que pode ser fornecido como um elemento separado ou em que um DDpp que liga especificamente um alvo de interesse (por exemplo, BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP, ou AFP p26) é imobilizado. Portanto, o DDpp que liga especificamente o alvo de interesse no kit pode ser imobilizado num suporte sólido, ou os mesmos podem ser imobilizados em tal suporte que é incluído com o kit ou fornecido separadamente do kit. Preferencialmente, o DDpp é revestido numa placa de microtitulação. Em algumas modalidades, a detecção envolve um sinal que amplifica a molécula. Onde o sinal que amplifica a molécula é uma enzima, o kit opcionalmente inclui ainda substratos e cofatores exigidos pela enzima, e em que a molécula de amplificação é um fluoróforo. O kit opcionalmente inclui ainda um precursor de corante que fornece o cromóforo detectável.
[0418] O kit também pode conter instruções para realizar o ensaio, assim como outras atividades como estabilizadores, tampões de lavagem e de incubação e similares. Os componentes do kit serão fornecidos em razões predeterminadas, com as quantidades relativas dos vários reagentes adequadamente variadas para proporcionar concentrações em solução dos reagentes que maximizam substancialmente a sensibilidade do ensaio. Particularmente, os reagentes podem ser fornecidos como pós secos, geralmente liofilizados, incluindo excipientes, que, em dissolução, fornecerá uma solução de reagente que tem a concentração apropriada para combinar com a amostra a ser testada.
[0419] Vários formatos e técnicas para ligar ensaios que podem ser usados são conhecidos na técnica e incluem porém sem limitações, imobilização a filtros como náilon ou nitrocelulose; arranjos bidimensionais, ensaio imunossorbente ligado à enzima (ELISA), radioimunoensaio (RIA), ensaios de ligação competitiva, ensaios de interposição direta e indireta, ensaios de imunoprecipitação, tecnologia de ensaio de microvolume fluorimétrico (FMATTM), ensaios de sistema LuminexTM, transferência de energia de ressonância fluorescente (FRET), transferência de energia de ressonância de bioluminescência (BRET), eletroimunoensaios, AlphaScreenTM, técnicas derivadas de nanopartícula e ressonância plasmônica de superfície (SPR).
[0420] Os ensaios de ligação podem ser homogêneos ou semi- homogêneos. Um ensaio homogêneo é um ensaio em que todos os componentes são misturados, incubados e, então, analisados. Um ensaio semi-homogêneo é um em que a maioria da reação ocorre como uma mistura complexa, porém, uma etapa de lavagem é necessária antes da adição de um reagente e análise finais, em contrapartida a um ensaio de interposição de montagem em etapas típico, em que cada componente é adicionado, então, lavado antes que o próximo componente seja adicionado. Em algumas modalidades, o ensaio é um imunoensaio. Em certas modalidades, o ensaio é um Imunoensaio de Enzima semi-homogêneo (EIA).
USOS
[0421] O DDpp, independentemente de estar sozinho, como proteínas de fusão, como conjugados químicos ou como outras modalidades, descrito no presente documento, tem uma variedade de aplicações. Em algumas modalidades, os DDpps são usados como reagentes de detecção, reagentes de diagnóstico ou reagentes analíticos. Algumas modalidades têm aplicações in vivo, in vitro e/ou ex vivo. Os métodos que empregam o DDpp in vitro podem ser realizados em diferentes formatos, como em placas de microtitulação, em arranjos de proteína, em superfícies de biossensor, em seções de tecido e em formatos adicionais que seriam evidentes para uma pessoa versada na técnica. De modo semelhante, os métodos que empregam o DDpp in vivo podem ser usados em diferentes formatos que incluem, porém sem limitações, proteínas de fusão de DDpp-Fc, células de CAR e anticorpos multiespecíficos de DDpp. Em modalidades particulares, o DDpp, como proteínas de fusão de DDpp, é usado como um agente terapêutico.
APLICAÇÕES ANALÍTICAS E DIAGNÓSTICAS
[0422] Independentemente de estarem sozinhos, como proteínas de fusão, como conjugados químicos ou como outras modalidades, descrito no presente documento, os DDpps têm uma variedade de aplicações. Em algumas modalidades, os DDpps são usados como reagentes de detecção de alvos de interesse numa variedade de diferentes tipos de amostra.
[0423] Numa modalidade, DDpps são usados para detectar alvos de interesse em soluções envolvidas em processos de fabricação, como expressão de proteína. As amostras podem incluir, porém sem limitações, água, tampões, amostras de purificação em processo, substância de fármaco a granel e produto de fármaco final. Ainda em outras modalidades, o DDpp pode ser usado para detectar contaminantes de uma amostra, como uma fonte de fornecimento de água ou água (ou outro fluido) usado na fabricação.
[0424] Em outra modalidade, os DDpps são usados para detectar alvos de interesse em amostras de diagnóstico. As amostras pode, incluir, porém sem limitações, homogenatos de tecido, extratos de célula, amostras de biópsia, soros, plasma, linfo, sangue, frações de sangue, urina, fluido sinovial, fluido espinhal, saliva, mucosa, septo, fluido pleural, aspirações lácteas, fluido dos tratos respiratório, intestinal e genitourinário, fluido de lágrima, leite materno, fluido do sistema linfático, sêmen, fluido cerebroespinhal, fluido do sistema intraórgão, fluido ascítico, fluido de cisto tumoral, fluido amniótico e meios ou lisado de células cultivadas.
[0425] Numa modalidade, os DDpps são úteis para detectar a presença de um fator ou múltiplos fatores (por exemplo, antígenos ou organismos) numa amostra biológica. O termo “detectar”, como usado no presente documento abrange detecção quantitativa ou qualitativa. Em certas modalidades, uma amostra biológica compreende uma célula, tecido ou fluido. Em certas modalidades, tais tecidos incluem tecidos normais e/ou cancerosos.
[0426] Vários formatos e técnicas para detecção são conhecidos na técnica e incluem, porém sem limitações análise de Western Blot, imuno- histoquímica, ELISA, análise de FACS, ensaios enzimáticos, autorradiografia e qualquer um dos ensaios de ligação mencionados no presente documento.
[0427] Numa modalidade, é fornecido um método para detectar um alvo de interesse (por exemplo, BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP ou AFP p26) numa solução contendo o alvo compreendendo: (a) colocar a solução em contato com um DDpp que liga especificamente o alvo de interesse sob condições adequadas para ligação específica do DDpp ao alvo e (b) detectar a ligação do DDpp e alvo. O DDpp pode ser livre ou imobilizado. É permitido tempo suficiente para possa haver ligação entre o alvo de interesse e o DDpp e componentes de não ligação na solução ou mistura são removidos ou removidos por lavagem. A formação de um complexo de ligação entre o DDpp e o alvo de interesse pode, então, ser detectada, por exemplo, pela detecção do sinal de uma identificação no DDpp, que é um componente do complexo de ligação. Uma identificação pode ser qualquer identificação que gere um sinal que pode ser detectado por métodos-padrão, como uma identificação fluorescente, um composto radioativo ou uma enzima que reage com um substrato para gerar um sinal detectável. Os exemplos de identificações adequadas para tais propósitos são descritos no presente documento e/ou, de outro modo, conhecidos na técnica.
[0428] O DDpp que se liga a um alvo de interesse como BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP ou AFP p26 pode ser detectavelmente identificado através do uso de radioisótopos, identificações de afinidade (como biotina, avidina, etc.), identificações enzimáticas (como peroxidase de rabanete, fosfatase alcalina, etc.) usando métodos conhecidos na técnica, como descrito no documento WO00/70023 e (Harlow e Lane (1989) Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory, páginas 1-726).
[0429] O marcador ou identificação detectável pode ser qualquer um que é capaz de produzir, direta ou indiretamente, um sinal mensurável, como um sinal radioativo, cromogênico, luminescência ou sinal fluorescente, que pode ser usado para quantificar a quantidade de porção química ou identificação detectável ligada numa amostra. As identificações detectáveis conhecidas na técnica incluem radioisótopos, como 3H, 14C, 32P, 35S ou 125I, identificações eletroquimioluminescentes (como catalisador à base de Rutênio (Ru) em conjunção com substratos, etc.), identificações luminescentes ou bioluminescentes (por exemplo, Európio, Vanádio), compostos fluorescentes ou quimioluminescentes, como isotiocianato de fluoresceína, rodamina ou luciferina, enzimas (por exemplo, enzima como fosfatase alcalina, beta-galactosidase ou peroxidase de rabanete), identificações colorimétricas como ouro coloidal, vidro colorido ou microesferas de plástico (por exemplo, poliestireno, polipropileno, látex, etc.), átomos paramagnéticos ou agentes magnéticos, reagentes densos de elétron, um nano ou microesferas contendo um corante fluorescente, nanocristais, um ponto quântico, uma microesfera quântica, uma nanoetiqueta, dendrímeros com uma identificação fluorescente, um microtransponder, uma molécula doadora de elétron ou estrutura molecular ou uma partícula de reflexão de luz, as micropartículas podem ser nanocristais ou pontos quânticos. Os nanocristais são substâncias que absorvem fótons de luz, então, reemitem fótons a um comprimento de onda diferente (fluoróforos). Além disto, identificações fluorescentes adicionais ou anticorpos secundários podem ser conjugadas aos nanocristais. Os nanocristais são comercialmente disponíveis de fontes como Invitrogen e Evident Technologies (Troy, N.Y.). Outras identificações incluem E)-5-[2-(metoxicarbonil) etenil]citidina, que é uma molécula não fluorescente que, quando submetido à irradiação ultravioleta (UV) rende um produto, 3 beta-D-ribofuranosil-2,7-dioxopirido[2,3-d]pirimidina, que exibe um sinal de fluorescência forte.
[0430] A inibição completa pode ser determinada por qualquer método conhecido na técnica, por exemplo, ensaios de ELISA de competição. Um DDpp, como uma proteína de fusão de DDpp (por exemplo, um DDpp-Fc, DDpp-CAR, um DDpp-scFv), ou outra molécula, é dito que “inibe competitivamente” a ligação de uma molécula de referência a um dado epítopo no caso de se ligar a tal epítopo ao ponto em que bloqueia, a certo grau, a ligação da molécula de referência ao epítopo. Como usado no presente documento, pode-se dizer que um DDpp (por exemplo, uma proteína de fusão de DDpp) ou outra molécula inibe competitivamente a ligação da molécula de referência a um dado epítopo, por exemplo, por pelo menos 90%, pelo menos 80%, pelo menos 70%, pelo menos 60%, pelo menos 50%, por pelo menos
40%, pelo menos 30% ou pelo menos 20%. Os termos “compete", “capacidade de competir” e “compete com” são termos relativos usados para descrever um DDpp, como uma proteína de fusão de DDpp, que produz pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40% ou pelo menos 50% de inibição de ligação de uma molécula de referência a um alvo por um DDpp como uma proteína de fusão de DDpp (por exemplo, um DDpp-Fc, DDpp CAR, um DDpp-scFv e um anticorpo-compreendendo um DDpp) como determinado num ensaio de competição padrão conforme descrito no presente documento ou, de outro modo, conhecido na técnica, incluindo, porém sem limitações, sistemas de ensaio competitivo usando técnicas como radioimunoensaios (RIA), imunoensaios de enzima (EIA), preferencialmente o ensaio imunossorbente ligado à enzima (ELISA), imunoensaios tipo “sanduíche”, ensaios imunorradiométricos, imunoensaios fluorescentes, luminescente, luminescente eletroquímico e ensaios de imunoeletroforese. Os métodos para determinar a ligação e afinidade de moléculas de ligação candidatas são conhecidos na técnica e incluem, porém sem limitações, cromatografia de afinidade, cromatografia de exclusão de tamanho, diálise de equilíbrio, deslocamento de sonda fluorescente e ressonância de plasma.
AGENTES TERAPÊUTICOS
[0431] O DD descrito no presente documento é útil numa variedade de aplicações incluindo, porém sem limitações, métodos de tratamento terapêutico, que podem ser métodos in vitro, ex vivo ou in vivo.
[0432] A aplicação como uma entidade terapêutica é um atributo da especificidade de ligação de alvo do DDpp. A incorporação de DDpp dentro de várias composições moleculares, (por exemplo, fusões de DD-anticorpo, conjugados de DD-fármaco e DD-receptores quiméricos) rendem aplicação numa variedade de indicações terapêuticas e modalidades, que incluem, porém sem limitações composições solúveis e associadas à célula.
[0433] Numa modalidade, o DDpp é uma proteína de fusão solúvel constituída por uma etiqueta de epítopo ideal 10 e um domínio de alvejamento que se liga a um alvo que é associado com uma doença ou distúrbio do sistema metabólico, cardiovascular, muscoesquelético, neurológico ou esquelético. Em outras modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão solúvel que se liga a um alvo que é associado com infecção ou doença de levedura, fúngica, viral ou bacteriana. Em algumas modalidades, o DDpp é uma proteína de fusão solúvel que liga a um alvo que é associado a uma doença ou distúrbio do sistema imune.
[0434] Além disto, são fornecidas composições terapêuticas úteis para praticar métodos terapêuticos descritos no presente documento. Numa modalidade, composições terapêuticas fornecidas no presente documento contêm um carreador tolerável fisiologicamente junto com pelo menos uma espécie de fusão de DDpp como descrito no presente documento, dissolvido ou disperso no mesmo como um ingrediente ativo. Em outra modalidade, composições terapêuticas fornecidas no presente documento contêm um carreador tolerável fisiologicamente junto com pelo menos uma espécie de um DDpp como descrito no presente documento, dissolvido ou disperso no mesmo como um ingrediente ativo. Numa modalidade preferencial, a composição terapêutica não é imunogênica quando administrada a um paciente humano para propósitos terapêuticos.
[0435] A preparação de uma composição farmacológica que contém ingredientes ativos dissolvidos ou dispersos no mesmo é bem entendida na técnica. Tipicamente, tais composições são preparadas como injetáveis estéreis como soluções ou suspensões líquidas, aquosas ou não- aquosas. Entretanto, formas sólidas adequadas para solução ou suspensões em líquido antes do uso também podem ser preparados. A preparação também pode ser emulsificada. Portanto, uma composição contendo DDpp pode assumir a forma de soluções, suspensões, comprimentos, cápsulas, formulações de liberação prolongada ou pós, ou outras formas composicionais. Em algumas modalidades, as composições de DDpp (por exemplo, proteínas de fusão de DDpp) são formuladas para assegurar ou otimizar a distribuição in vivo. Por exemplo, a barreira sangue- cérebro (BBB) exclui muitos compostos altamente hidrofílicos e, se for desejado, as composições são preparadas de modo a aumentar a transferência através da BBB, por exemplo, pela formulação em lipossomos. Para métodos de fabricação de lipossomos, consultar, por exemplo, Patente no U.S.
4.522.811, 5.374.548 e 5.399.331. Os lipossomos podem compreender uma ou mais porções químicas que são seletivamente transportadas para células ou órgãos específicos, portanto, intensificam a entrega de fármaco alvejado (consultar, por exemplo, Ranade, Clin. Pharmacol. 29: 685 (1989)).
[0436] O DDpp (e.g. proteína de fusão de DDpp) pode ser misturado com outros ingredientes ativos e/ou excipientes que são farmaceuticamente aceitáveis e compatíveis com o ingrediente ativo e em quantidades adequadas para uso em métodos terapêuticos descritos no presente documento. Os excipientes adequados são, por exemplo, água, solução salina, dextrose, glicerol, etanol ou similares e combinações dos mesmos. Adicionalmente, se for desejado, a composição pode conter quantidades menores de substâncias auxiliares, tais como agentes umectantes ou emulsificantes, agentes de tamponamento de pH e similares e outras substâncias auxiliares conhecidas na técnica, que aumentam a efetividade do ingrediente ativo.
[0437] O DDpp terapêutico pode incluir sais farmaceuticamente aceitáveis dos componentes dos mesmos. Os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de adição ácidos (formados com os grupos amino livres do polipeptídeo) que são formados com ácidos inorgânicos, como, por exemplo, ácidos clorídrico ou fosfórico, ou tais ácidos orgânicos, como acético, tartárico, mandélico e similares. Os sais formados com os grupos carboxila livres podem ser também derivados de bases inorgânicas, tais como, por exemplo, hidróxidos de sódio, potássio, amônio, cálcio ou ferro, e tais bases orgânicas como isopropilamina, trimetilamina, 2-etilamino etanol, histidina, procaína e similares.
[0438] Carreadores fisiologicamente toleráveis são conhecidos na técnica. Os exemplos de carreadores líquidos são soluções aquosas estéreis que não contêm materiais adicionalmente aos ingredientes ativos e água ou contêm um tampão, tal como fosfato de sódio em valor de pH fisiológico, solução salina fisiológica ou ambos, tal como solução salina tamponada com fosfato. Além disto, os carreadores aquosos podem conter mais de um sal de tampão, assim como sais tais como cloretos de sódio e potássio, dextrose, propilenoglicol, polietilenoglicol e outros solutos.
[0439] As composições líquidas também podem conter fases líquidas adicionalmente a e à exclusão de água. Os exemplos de tais fases líquidas adicionais são glicerina, óleos vegetais, tal como óleo de semente de algodão, ésteres orgânicos, tal como oleato de etila, e emulsões de água-óleo.
[0440] Numa modalidade, uma composição terapêutica contém uma proteína de fusão de DDpp, tipicamente numa quantidade de pelo menos 0,1 por cento em peso de proteína de fusão de DDpp por peso de composições terapêuticas totais. Um percentual em peso é uma razão em peso de fusão de DDpp por composição total. Portanto, por exemplo, 0,1 por cento em peso equivale a 0,1 gramas de DDpp por 100 gramas de composição total.
[0441] Uma composição terapêutica contendo proteína de fusão de DDpp tipicamente contém cerca de 10 microgramas (µg) por mililitro (ml) a cerca de 100 miligramas (mg) por ml de proteína de fusão de DDpp como ingrediente ativo por volume de composição, e mais preferencialmente contém cerca de 1 mg/ml a cerca de 10 mg/ml (isto é, cerca de 0,1 a 1 por cento em peso).
[0442] As faixas de dosagem para a administração do DDpp (por exemplo, uma proteína de fusão de DDpp) são aquelas suficientemente grandes para produzir o efeito desejado em que os sintomas de doença mediados pela molécula-alvo são melhorados. A dosagem não deve ser tão grande de modo a causar efeitos colaterais adversos, como síndromes de hiperviscosidade, edema pulmonar, insuficiência cardíaca congestiva e similares. Em geral, a dosagem irá variar com a idade, condição, sexo e extensão da doença no paciente e pode ser determinada por um versado na técnica. A dosagem pode ser ajustada pelo médico individual no caso de qualquer complicação.
[0443] O DDpp (por exemplo, uma proteína de fusão de DDpp) pode ser administrado parenteralmente por injeção ou por infusão gradual ao longo do tempo. Embora a molécula-alvo possa ser tipicamente acessada no corpo por administração sistêmica e, portanto, mais frequentemente tratada por administração intravenosa de composições terapêuticas, outros tecidos e meios de entrega são contemplados, em que há uma probabilidade de que o tecido alvejado contenha a molécula-alvo. Portanto, o DDpp pode ser administrado de modo intravenoso, intraperitoneal, intramuscular, subcutâneo, intracavidade, transdérmico, e pode ser entregue por meios peristálticos. As proteínas de fusão de DDpp também podem ser entregues por aerossol às vias aéreas e aos pulmões.
[0444] As composições terapêuticas contendo um DDpp podem ser convencionalmente administradas intravenosamente, como por injeção de uma dose unitária, por exemplo. O termo “dose unitária”, quando usado em referência a uma composição terapêutica fornecida no presente documento, refere-se a unidades fisicamente distintas adequadas como dosagem unitária para o indivíduo, em que cada unidade contém uma quantidade predeterminada de material ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação ao diluente necessário; por exemplo, carreador ou veículo. Em algumas modalidades, a composições terapêuticas contendo um DDpp são administradas subcutaneamente.
[0445] Os DDpps (por exemplo, uma proteína de fusão de DDpp) são administrados de uma maneira compatível com a formulação de dosagem, e numa quantidade terapeuticamente eficaz. A quantidade a ser administrada depende do indivíduo a ser tratado, capacidade do sistema do indivíduo de utilizar o ingrediente ativo da composição administrada e grau de efeito terapêutico desejado. As quantidades exatas de ingrediente ativo que precisam ser administradas dependem do discernimento do profissional e são peculiares para cada indivíduo. Entretanto, as faixas de dosagem adequadas para aplicação sistêmica são divulgadas no presente documento e dependem da via de administração. Os regimes adequados para administração são também viáveis, mas são tipificados por uma administração inicial seguida por doses repetidas em intervalos de uma ou mais horas por uma injeção subsequente ou outra administração. Alternativamente, é contemplada infusão intravenosa contínua suficiente para manter as concentrações no sangue nas faixas especificadas para terapias in vivo.
[0446] As composições de DDpp são formuladas, dosadas e administradas de uma forma consistente com boa prática medicinal. Os fatores para consideração neste contexto incluem o distúrbio particular sendo tratado, o mamífero particular sendo tratado, a condição clínica do paciente individual, a causa do distúrbio, o sítio de entrega do agente, o método de administração, o cronograma de administração e outros fatores conhecidos por médicos. As faixas de dosagem para a administração do DDpp são aquelas suficientemente grandes para produzir o efeito desejado em que os sintomas de doença mediados pela molécula-alvo são melhorados. A dosagem não deve ser tão grande de modo a causar efeitos colaterais adversos, como síndromes de hiperviscosidade, edema pulmonar, insuficiência cardíaca congestiva e similares. Em geral, a dosagem irá variar com a idade, condição, sexo e extensão da doença no paciente e pode ser determinada por um versado na técnica. A dosagem pode ser ajustada pelo médico individual no caso de qualquer complicação.
[0447] O cronograma de dosagem e quantidades eficazes para usos terapêuticos e profiláticos, isto é, o “regime de dosagem", dependerão de uma variedade de fatores, incluindo a causa, estágio e gravidade da doença ou distúrbio, a saúde, situação física, idade do mamífero sendo tratado, e o sítio e modo da entrega do DD. A eficácia terapêutica e a toxicidade do complexo e a formação podem ser determinados por procedimentos farmacêuticos, farmacológicos e toxicológicos padrão em culturas celulares ou animais experimentais. Os dados obtidos a partir destes procedimentos podem ser similarmente usados na formulação de uma faixa de dosagens para uso humano. Além disto, o índice terapêutico (isto é, a dose terapeuticamente eficaz em 50 por cento da população dividida pela dose letal para 50 por cento da população (ED50/LD50)) pode ser prontamente determinada usando procedimentos conhecidos. A dosagem está, de preferência, dentro de uma faixa de concentrações que inclui o ED50 com pouca toxicidade ou nenhuma toxicidade limitante de dose e pode variar dentro desta faixa dependendo da forma de dosagem empregada, sensibilidade do paciente e da via de administração.
[0448] O regime de dosagem também considera os parâmetros farmacocinéticos conhecidos na técnica, tal como, taxa de absorção de fármaco, biodisponibilidade, metabolismo e eliminação (consultar, por exemplo, Hidalgo-Aragones, J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 58: 611-617 (1996); Groning et al., Pharmazie 51: 337-341 (1996); Fotherby, Contraception 54: 59-69 (1996); e Johnson et al., J. Pharm. Sci. 84: 1144-1146 (1995)). Está bem dentro do estado e nível de habilidade do médico determinar o regime de dosagem para cada indivíduo que é tratado. Além disto, administrações únicas ou múltiplas de composições de DDpp podem ser realizadas dependendo da dosagem e frequência conforme necessário e tolerado pelo indivíduo. A duração de tratamento profilático e terapêutico variará dependendo da doença ou afecção particular que é tratada. Algumas doenças são receptivas a tratamento agudo, enquanto outras exigem terapia crônica a longo prazo. O DDpp pode ser administrado em série ou simultaneamente com o agente terapêutico adicional.
[0449] Em algumas modalidades, o DDpp é administrado a cerca de 1 mg/kg a cerca de 50 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a cerca de 25 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a cerca de 20 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a cerca de 15 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a cerca de 10 mg/kg ou cerca de 1 mg/kg a cerca de 5 mg/kg.
[0450] Em outra modalidade, o DDpp é administrado na combinação com um ou mais agentes terapêuticos adicionais.
[0451] A quantidade terapeuticamente eficaz do DDpp (por exemplo, uma proteína de fusão de DDpp) pode ser uma quantidade de modo que, quando administrada numa composição fisiologicamente tolerável, seja suficiente para atingir uma concentração plasmática de cerca de 0,1 micrograma (µg) por mililitro (ml) a cerca de 100 µg/ml, de preferência, de cerca de 1 µg/ml a cerca de 5 µg/ml e usualmente cerca de 5 µg/ml. Dito de outro modo, a dosagem pode variar de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 300 mg/kg, de preferência, de cerca de 0,2 mg/kg a cerca de 200 mg/kg, com máxima preferência, de cerca de 0,5 mg/kg a cerca de 20 mg/kg, numa ou mais administrações de dose diárias, por um ou diversos dias.
[0452] Em algumas modalidades, os DDpps descritos no presente documento são úteis para tratar uma doença ou distúrbio do sistema imune, como inflamação ou uma doença autoimune.
[0453] Em algumas modalidades, os DDpps descritos no presente documento são úteis para tratar câncer. Portanto, em algumas modalidades, a divulgação fornece um método para tratar câncer que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um DDpp (por exemplo, uma fusão de DDpp) a um paciente.
[0454] Em modalidades adicionais, a divulgação fornece um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que o CAR inclui um domínio de alvejamento, um domínio transmembranar e um domínio de sinalização intracelular. Em algumas modalidades, o domínio de alvejamento é constituído por, pelo menos em parte, um DDpp de ligação de alvo aqui divulgado.
[0455] A divulgação também fornece células compreendendo uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um CAR, em que o CAR compreende um domínio de ligação de antígeno constituído por, pelo menos em parte, um polipeptídeo divulgado que liga um alvo de interesse (por exemplo, BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP e AFP p26), um domínio transmembranar e um domínio de sinalização. Em algumas modalidades, o CAR se liga especificamente a um antígeno de tumor (e, portanto, funciona para entregar a célula que expressa o CAR ao tumor. Em algumas modalidades, o antígeno de tumor é associado a uma malignância hematologica. Em algumas modalidades, o antígeno de tumor é BCMA. Em algumas modalidades, o antígeno de tumor é CD123. Em algumas modalidades, o antígeno de tumor é CS1. Em modalidades adicionais, o antígeno de tumor é associado a um tumor sólido. Em algumas modalidades, o antígeno de tumor é HER2. Em algumas modalidades, tanto o tumor sólido quanto o hematológico são alvejados. Em algumas modalidades, a célula expressando o CAR é uma célula T, uma célula assassina natural (NK) ou outro tipo de célula imune. Em algumas modalidades, a célula expressando o CAR (seja célula T, célula NK ou outro tipo de célula) exibe uma imunidade antitumor quando o polipeptídeo se liga ao seu antígeno de tumor correspondente.
[0456] Em algumas modalidades, a divulgação fornece um método para tratar um indivíduo que tem câncer, compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma célula imune de CAR compreendendo um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que o CAR compreende um domínio de ligação de alvo que compreende um DD que liga especificamente BCMA (por exemplo, compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306), um domínio transmembranar e um domínio intracelular (compreendendo um domínio de sinalização). Em algumas modalidades, a célula imune de CAR administrada é uma célula T. Em algumas modalidades, a célula imune de CAR administrada é uma célula NK. Em algumas modalidades, a célula imune de CAR administrada não é uma célula T ou uma célula NK. Em modalidades adicionais, uma combinação de diferentes tipos de célula imune de CAR (por exemplo, células NK e células T) é administrada ao indivíduo.
[0457] Em algumas modalidades, o domínio de ligação de alvo da célula imune de CAR administrada liga especificamente BCMA expresso por uma célula de câncer do indivíduo, e induz a célula imune de CAR a gerar um sinal citotóxico que resulta em efeitos citotóxicos na célula de câncer, tratando, assim, o câncer.
[0458] Em algumas modalidades, a divulgação fornece um método para tratar um indivíduo que tem câncer, compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma célula imune de CAR compreendendo um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que o CAR compreende um domínio de ligação de alvo que compreende um DD que liga especificamente CD123 (por exemplo, compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 307 a 739 e 740), um domínio transmembranar e um domínio intracelular (compreendendo um domínio de sinalização). Em algumas modalidades, a célula imune de CAR administrada é uma célula T. Em algumas modalidades, a célula imune de CAR administrada é uma célula NK. Em algumas modalidades, a célula imune de CAR administrada não é uma célula T ou uma célula NK. Em modalidades adicionais, uma combinação de diferentes tipos de célula imune de CAR (por exemplo, células NK e células T) é administrada ao indivíduo. Em algumas modalidades, o domínio de ligação de alvo da célula imune de CAR administrada liga especificamente CD123 expresso por uma célula de câncer do indivíduo, e induz a célula imune de CAR a gerar um sinal citotóxico que resulta em efeitos citotóxicos na célula de câncer, tratando, assim, o câncer.
[0459] Em algumas modalidades, a divulgação fornece um método para tratar um indivíduo que tem câncer, compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma célula imune de CAR compreendendo um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que o CAR compreende um domínio de ligação de alvo que compreende um DD que liga especificamente CS1 (por exemplo, compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 896 a
909 e 910), um domínio transmembranar e um domínio intracelular (compreendendo um domínio de sinalização). Em algumas modalidades, a célula imune de CAR administrada é uma célula T. Em algumas modalidades, a célula imune de CAR administrada é uma célula NK. Em algumas modalidades, a célula imune de CAR administrada não é uma célula T ou uma célula NK. Em modalidades adicionais, uma combinação de diferentes tipos de célula imune de CAR (por exemplo, células NK e células T) é administrada ao indivíduo. Em algumas modalidades, o domínio de ligação de alvo da célula imune de CAR administrada liga especificamente CS1 expresso por uma célula de câncer do indivíduo, e induz a célula imune de CAR a gerar um sinal citotóxico que resulta em efeitos citotóxicos na célula de câncer, tratando, assim, o câncer.
[0460] Em algumas modalidades, a divulgação fornece um método para tratar um indivíduo que tem câncer, compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma célula imune de CAR compreendendo um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que o CAR compreende um domínio de ligação de alvo que compreende um DD que liga especificamente HER2 (por exemplo, compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 911 a 949 e 950), um domínio transmembranar e um domínio intracelular (compreendendo um domínio de sinalização). Em algumas modalidades, a célula imune de CAR administrada é uma célula T. Em algumas modalidades, a célula imune de CAR administrada é uma célula NK. Em algumas modalidades, a célula imune de CAR administrada não é uma célula T ou uma célula NK. Em modalidades adicionais, uma combinação de diferentes tipos de célula imune de CAR (por exemplo, células NK e células T) é administrada ao indivíduo. Em algumas modalidades, o domínio de ligação de alvo da célula imune de CAR administrada liga especificamente HER2 expresso por uma célula de câncer do indivíduo, e induz a célula imune de CAR a gerar um sinal citotóxico que resulta em efeitos citotóxicos na célula de câncer, tratando, assim, o câncer.
[0461] Adicionalmente, são fornecidos métodos para tratar ou prevenir câncer compreendendo administrar um linfócito T de DDpp-CAR a um paciente predisposto a ou que tem um câncer que expressa um antígeno de tumor na superfície de células-alvo e em que o DDpp liga especificamente o antígeno.
[0462] Em algumas modalidades, em que as células T de CAR são administradas ao indivíduo que tem câncer, a ligação do alvo de interesse (por exemplo, BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP ou AFP p26) estimula a célula T de CAR a iniciar a sinalização intracelular. Em modalidades adicionais, a ligação da célula T de CAR ao alvo de interesse estimula a célula T a iniciar a sinalização intracelular e produzir citocinas. Em modalidades adicionais, a ligação da célula T de CAR ao alvo de interesse estimula a célula T a iniciar a sinalização intracelular, produzir citocinas e se desgranular, levando aos efeitos citotóxicos na célula de câncer. Em algumas modalidades, a célula T de CAR se prolifera em resposta à ligação do alvo de interesse. Vantajosamente, em algumas modalidades, a atividade da célula T de CAR não resulta na célula T que exibe um fenótipo associado à exaustão de célula T. Em algumas modalidades, o domínio transmembranar da célula T de CAR compreende 41BB ou CD28, e o domínio citoplasmático compreende uma cadeia alfa, beta ou zeta do receptor de célula T.
[0463] Em algumas modalidades, o CAR administrado compreende ainda 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DDs e/ou outros domínios de ligação (por exemplo, scFv) que ligam especificamente o alvo de interesse (por exemplo, BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP ou AFP p26) expresso pela célula de câncer. Em modalidades adicionais, o CAR administrado compreende adicionalmente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DD ou outros domínios de ligação (por exemplo, scFv) que liga especificamente um alvo de interesse expresso pela célula de câncer. Em modalidades adicionais, o CAR administrado compreende adicionalmente 2, 3, 4, 5 ou mais de 5 DD ou outros domínios de ligação (por exemplo, scFv) que liga especificamente um alvo de interesse expresso por uma célula de câncer diferente ou uma célula endotelial vascular.
[0464] Em algumas modalidades, a célula imune administrada compreende ainda um segundo polipeptídeo de CAR que tem um DD ou outro domínio de ligação (por exemplo, scFv) que liga especificamente um segundo alvo de interesse expresso pela célula de câncer. Em algumas modalidades, a célula imune administrada compreende ainda um segundo polipeptídeo de CAR que tem um DD ou outro domínio de ligação (por exemplo, scFv) que liga especificamente um segundo alvo de interesse expresso por uma célula de câncer diferente ou uma célula endotelial vascular.
[0465] Em algumas modalidades, a administração das células imunes com um CAR é intravenosa. Em outras modalidades, as células imunes com um CAR são administradas através uma via intra-arterial, intramuscular, local ou outra via aceitável paro a dada situação de tratamento.
[0466] Em algumas modalidades, a divulgação também fornece métodos para tratar um indivíduo que tem câncer, compreendendo administrar ao indivíduo uma célula imune compreendendo um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que o CAR compreende um domínio de ligação de alvo, em que o domínio de ligação de alvo compreende um polipeptídeo que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306; SEQ ID NO: 307 a 739 e 740; SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895; SEQ ID NO: 896 a 909 e 910; ou SEQ ID NO: 911 a 949 e 950; em que o polipeptídeo liga especificamente um alvo de interesse (por exemplo, BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP ou AFP p26) expressa por uma célula de câncer.
[0467] Em modalidades adicionais, a divulgação fornece um método para tratar um indivíduo que tem câncer, em que o método compreende administrar intravenosamente ao indivíduo uma célula imune compreendendo um receptor de antígeno quimérico (CAR) expressa numa célula T, em que o CAR compreende um domínio de ligação de alvo compreendendo um polipeptídeo que tem uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306;
SEQ ID NO: 307 a 739 e 740; SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895; SEQ ID NO: 896 a 909 e 910; ou SEQ ID NO: 911 a 949 e 950; um domínio transmembranar selecionado a partir de 41BB e CD28, e um domínio intracelular, em que o domínio intracelular compreende um domínio de sinalização selecionado de uma cadeia alfa, beta ou zeta do receptor de célula T, em que, mediante administração a um indivíduo que tem câncer, o domínio de ligação de alvo liga especificamente ao alvo de interesse (por exemplo, BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP ou AFP p26) expresso por uma célula de câncer, e em que a ligação do alvo de interesse induz a célula T de CAR para gerar sinais citotóxicos que resultam em efeitos citotóxicos na célula de câncer. Em algumas modalidades, os efeitos citotóxicos resultam a partir de desgranulação das células T de CAR. Vantajosamente, em algumas modalidades, a ativação e atividade citotóxico das células T de CAR não é associada às células T de CAR exibindo um fenótipo associado à exaustão de célula T. Em algumas modalidades, o CAR opcionalmente compreende ainda um segundo domínio de ligação de alvo compreendendo um segundo polipeptídeo que tem um alvo diferente do domínio de ligação de alvo. Ainda em modalidades adicionais, domínios de alvejamento adicionais podem ser opcionalmente incluídos para intensificar capacidade de ligação a um marcador, ou conferir a especificidade de ligação a outros marcadores.
[0468] Em algumas modalidades, a divulgação proporciona o uso de uma célula imune compreendendo um receptor de antígeno quimérico (CAR) para o tratamento de câncer, em que o CAR compreende um domínio de ligação de alvo compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO: 11 a 305 e 306; SEQ ID NO: 307 a 739 e 740; SEQ ID NO: 741 a 874 e 886 a 895; SEQ ID NO: 896 a 909 e 910; ou SEQ ID NO: 911 a 949 e 950; um domínio transmembranar selecionado a partir de 41BB e CD28, e um domínio intracelular, em que o domínio intracelular compreende um domínio de sinalização selecionado de uma cadeia alfa, beta ou zeta do receptor de célula
T, em que, mediante administração a um indivíduo que tem câncer, o domínio de ligação de alvo liga especificamente ao alvo de interesse (por exemplo, BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP ou AFP p26) expresso por uma célula de câncer, e em que a ligação do alvo de interesse induz a célula imune para gerar sinais citotóxicos que resultam em efeitos citotóxicos na célula de câncer. Em modalidades diferentes, as células imunes podem ser uma célula T ou uma célula assassina natural (NK).
[0469] Os cânceres que podem ser tratados incluem tumores que não são vascularizados, ou ainda não substancialmente vascularizado, assim como tumores vascularizados. Os cânceres podem compreender tumores não sólidos (como tumores hematológicos, por exemplo, leucemias e linfomas) ou podem compreender tumores sólidos. Os tipos de cânceres a serem tratados com o DDpp incluem, porém sem limitações, carcinoma, blastoma e sarcoma, e certas malignâncias de leucemia ou linfoides, tumores benignos e malignos e malignâncias por exemplo, sarcomas, carcinomas e melanomas. Os tumores/cânceres adultos e pediátricos tumores/cânceres também são incluídos.
[0470] Em algumas modalidades, os DDpps descrito no presente documento são úteis para tratar um paciente que tem cânceres hematológicos. Os exemplos de cânceres hematológicos (ou hematogênicos) incluem leucemias, incluindo leucemias agudas (tal como leucemia linfocítica crônica, leucemia mielocítica aguda, leucemia mielógena aguda e mieloblastos, promielocítica, mielomonocítica, monocítica e eritroleucemia), leucemias crônicas (tal como leucemia mielocítica crônica (granulocítica), leucemia mielógena crônica e leucemia linfocítica crônica), policitemia vera, linfoma, doença de Hodgkin, linfoma não Hodgkin (formas indolentes e de alto grau), mieloma múltiplo, macroglobulinemia de Waldenstrom, doença de cadeia pesada, síndrome mielodisplástica, leucemia de célula pilosa e mielodisplasia. Em algumas modalidades, o câncer hematológico é mieloma múltiplo.
[0471] exemplos de tumores sólidos, tais como sarcomas e carcinomas, incluem fibrossarcoma, mixossarcoma, lipossarcoma, condrossarcoma, osteossarcoma e outros sarcomas, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiossarcoma, rabdomiossarcoma, carcinoma de cólon, malignidade linfoide, câncer pancreático, câncer de mama, cânceres de pulmão, câncer ovariano, câncer de próstata, carcinoma hepatocelular, carcinoma de célula escamosa, carcinoma de célula basal, adenocarcinoma, carcinoma de glândula sudorípara, carcinoma medular da tireoide, carcinoma papilar da tireoide, feocromocitomas, carcinoma de glândula sebácea, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, carcinoma medulares, carcinoma broncogênicos, carcinoma de célula renal, hepatoma, carcinoma do duto biliar, coriocarcinoma, tumor de Wilms, câncer cervical, tumor testicular, seminoma, carcinoma da bexiga, melanoma e tumores do CNS (tal como um glioma (tal como glioma do tronco cerebral e gliomas mistos), glioblastoma (também conhecido como glioblastoma multiforme), astrocitoma, linfoma do CNS, germinoma, meduloblastoma, craniofariogioma de Schwannoma, ependimoma, pineaioma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, menangioma, neuroblastoma, retinoblastoma e metástases cerebrais). Em algumas modalidades, o câncer é câncer de mama ou câncer de ovário.
[0472] In modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp liga (1) um alvo numa célula ou tecido de interesse (por exemplo, um antígeno de tumor numa célula de tumor) e (2) um alvo numa célula efetora, como, uma molécula receptora de célula T. De acordo com uma modalidade, a ligação de um ou mais alvos pela proteína de fusão de DDpp é usada para direcionar uma resposta imune a um agente infeccioso, célula, tecido, ou outra localização de interesse num paciente. Por exemplo, em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp liga especificamente um alvo na superfície de uma célula efetora. Portanto, em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp liga especificamente um alvo na superfície de uma célula T. Em modalidades específicas, a proteína de fusão de DDpp liga especificamente CD3. Em outras modalidades, a proteína de fusão de DDpp liga especificamente CD2. Numa modalidade adicional, a proteína de fusão de DDpp liga especificamente o receptor de célula T (TCR). De acordo com modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp liga especificamente um alvo na superfície de uma Célula Assassina Natural. Portanto, em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp liga especificamente um receptor de NKG2D (Grupo de Assassinas Naturais 2D). Em modalidades adicionais, a proteína de fusão de DDpp liga especificamente CD16 (isto é, RIII de Fc gama) CD64 (isto é, RI de Fc gama) ou CD32 (isto é, RII de Fc gama).
[0473] Numa modalidade, uma proteína de fusão de DDpp liga um alvo num leucócito e um antígeno de tumor numa célula de tumor. Em algumas modalidades, a proteína de fusão de DDpp liga NKG2D. Numa modalidade adicional, a proteína de fusão de DDpp liga NKG2D e um alvo selecionado a partir de ErbB2, EGFR, IGF1R, CD19, CD20, CD80 e EPCAM. Numa modalidade, uma proteína de fusão de DDpp liga CD3. Em modalidades particulares, o DDpp liga especificamente CD3 épsilon. Numa modalidade, uma proteína de fusão de DDpp liga CD4. CONJUGADOS DE FÁRMACO DE DDpp
[0474] Numa modalidade adicional uma proteína de fusão de DDpp pode ser ligada a outros substratos ou moléculas orgânicos ou inorgânicos através do uso de conjugação química. Numa modalidade, conjugados de DDpp-fármaco se destinam a facilitar a entrega local de agentes citotóxicos através da especificidade de alvejamento do DDpp. Esta combinação de especificidade de alvejamento e agente citotóxico permite a entrega alvejada do fármaco a tumores, e acúmulo intracelular nos mesmos, em que a administração sistêmica destes agentes de fármaco não conjugados pode resultar em níveis inaceitáveis de toxicidade a células normais, assim como as células de tumor que se busca eliminar (Baldwin et al., Lancet pages 603-605 (1986); Thorpe, “Antibody Carriers Of Cytotoxic agents In Cancer Therapy: A Review”, em Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical
Applications, A. Pinchera et al., (ed.s), páginas 475-506 (1985)).
[0475] Os agentes citotóxicos incluem agentes quimioterapêuticos, agentes inibidores de crescimento, toxinas (por exemplo, uma toxina enzimaticamente ativa de origem bacteriana, fúngica, vegetal ou animal, ou fragmentos da mesma), isótopos radioativos (isto é, um radioconjugado), etc. Os agentes quimioterapêuticos úteis na geração de tais imunoconjugados incluem, por exemplo, metotrexato, adriamicina, doxorrubicina, melfalano, mitomicina C, clorambucila, daunorrubicina ou outros agentes de intercalação. Os agentes quimioterapêuticos úteis na geração de tais imunoconjugados também incluem fármacos antitubulina, como auristatinas, incluindo monometil auristatina E (MMAE) e monometil auristatina F (MMAF). As toxinas enzimaticamente ativas e fragmentos das mesmas que podem ser usadas de acordo com os métodos divulgados incluem cadeia de difteria A, fragmentos de ativos não ligantes de toxina de difteria, cadeia de exotoxina A, cadeia de ricina A, cadeia de abrina A, cadeia de modecina A, alfassarcina, proteínas de Aleurites fordii, proteínas de diantina, proteínas de Phytolaca americana (PAPI, PAPII, e PAP-S), inibidor de momordica charantia, curcina, crotina, inibidor de sapaonaria officinalis, gelonina, mitogelina, restrictocina, fenomicina, enomicina e os tricotecenos.
[0476] Numa modalidade, um DDpp (por exemplo, uma proteína de fusão de DDpp) é conjugado a um radioisótopo. Numa modalidade adicional, um DDpp é conjugado a um isótopo selecionado a partir de 90Y, 125I, 131I, 123I, 111In, 105Rh, 153Sm, 67Cu, 67Ga, 166Ho, 177Lu, 186Re e 188Re usando qualquer um dentre inúmeros dos queladores conhecidos ou identificação direta. Em outras modalidades, o DDpp é acoplado a fármacos, pró-fármacos ou linfocinas como interferon. Os conjugados do DDpp e citotoxina podem ser rotineiramente produzidos usando uma variedade de agentes de acoplamento de proteína bifuncional como propionato de N-succinimidil-3-(2-piridi-iditiol) (SPDP), iminotiolano (IT), derivados bifuncionais de imidoésters (como HCL de adipimidato de dimetila), ésteres ativos (como suberato de dissuccinimidila),
aldeídos (como glutaraldeído), compostos de bis-azido (como bis(p- azidobenzoil) hexanodiamina), derivados de bis-diazônio (como bis-(p-diazo- niumbenzoil)-etilenodiamina), di-isocianatos (como tolieno 2,6-di-isocianato) e compostos de fluorina bis-ativos (como 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzeno). Numa modalidade específica, a toxina é conjugada a uma proteína de fusão de DDpp através de um sistema de ligante de enzima (por exemplo, como aquele presente em SGN-35). Os conjugados de um DDpp e uma ou mais toxinas de molécula pequena, como uma caliqueamicina, maitansinoides, um tricoteno e CC1065, e os derivados destas toxinas que têm atividade de toxina, também podem ser usados.
[0477] Em algumas modalidades, o agente citotóxico é covalentemente fixo a um DDpp por um ligante. Em algumas modalidades, o ligante que fixa o DDpp e o agente citotóxico é clivável por uma protease.
USO TERAPÊUTICO COMO RECEPTOR ASSOCIADO À CÉLULA
[0478] Numa modalidade, os DDpp-CARs divulgados são usados com o propósito de redirecionar células T transduzidas a um tumor alvo definido pela especificidade de ligação do DDpp-CAR. Numa modalidade, as células T primárias são transduzidas com um vetor lentiviral que codifica um CAR que combina um domínio de ligação de alvo de DD com um domínio transmembranar e um domínio intracelular de CD3-zeta, CD28, 41BB. A população resultante de células T transduzidas, portanto, pode surtir uma resposta de célula T mediada por DDpp-CAR. Em algumas modalidades, as células T são geneticamente modificadas para expressar DDpp-CAR e a célula T de DDpp-CAR é infundida a um recipiente que precisa da mesma. Em modalidades adicionais, a célula infundida é capaz de matar células de tumor no recipiente. As propriedade particularmente vantajosas de DDpp-CARs incluem um, vários ou todos os seguintes benefícios: (i) especificidade de ligação de alvo, (ii) eficácia terapêutica intensificada, (iii) efeitos colaterais fora do alvo reduzidos, (iv) personalização para marcadores de um paciente particular ou população de pacientes, (v) estabilidade intensificada durante a produção e o processamento e (vi) capacidade para alvejar um, dois ou mais alvos específicos para intensificar a terapia direcionada ao alvo.
[0479] “Células geneticamente modificadas”, “células redirecionadas”, “células geneticamente manipuladas” ou “células modificadas” como usado no presente documento se referem a células que expressam um DDpp fornecido no presente documento. Numa modalidade particular, as células geneticamente modificadas expressam uma proteína de fusão de DDpp como um DDpp-CAR. Numa modalidade adicional, as células geneticamente modificadas expressam e exibem um DDpp-CAR na superfície celular.
[0480] “Doença alvejada por células geneticamente modificadas” como usado no presente documento abrange o alvejamento de qualquer célula envolvida de qualquer maneira em qualquer doença pelas células geneticamente modificadas, independentemente de as células geneticamente modificadas alvejarem células doentes ou células saudáveis para efetuar um resultado terapeuticamente benéfico. As células geneticamente modificadas incluem, porém sem limitações, células T geneticamente modificadas, células NK, células-tronco hematopoiéticas, células-tronco embrionárias pluripotentes ou células-tronco embrionárias. As células geneticamente modificadas expressam o DDpp-CAR, que pode alvejar qualquer um dos antígenos expressos na superfície de células-alvo.
[0481] Numa modalidade, a porção de DDpp do DDpp-CAR é projetada para alvejar um câncer particular. Os cânceres que podem ser tratados incluem tumores que não são vascularizados, ou ainda não substancialmente vascularizado, assim como tumores vascularizados. Os cânceres podem compreender tumores não sólidos (como tumores hematológicos, por exemplo, leucemias e linfomas) ou podem compreender tumores sólidos. Os tipos de cânceres a serem tratados com o DDpp-CARs incluem, porém sem limitações, carcinoma, blastoma e sarcoma e certas malignâncias de leucemia ou linfoides, tumores benignos e malignos e malignâncias, por exemplo, sarcomas, carcinomas e melanomas. Os tumores/cânceres adultos e pediátricos tumores/cânceres também são incluídos.
[0482] Os exemplos de cânceres hematológicos (ou hematogênicos) incluem leucemias, incluindo leucemias agudas (tal como leucemia linfocítica crônica, leucemia mielocítica aguda, leucemia mielógena aguda e mieloblastos, promielocítica, mielomonocítica, monocítica e eritroleucemia), leucemias crônicas (tal como leucemia mielocítica crônica (granulocítica), leucemia mielógena crônica e leucemia linfocítica crônica), policitemia vera, linfoma, doença de Hodgkin, linfoma não Hodgkin (formas indolentes e de alto grau), mieloma múltiplo, macroglobulinemia de Waldenstrom, doença de cadeia pesada, síndrome mielodisplástica, leucemia de célula pilosa e mielodisplasia.
[0483] Os exemplos de tumores sólidos, tais como sarcomas e carcinomas, incluem fibrossarcoma, mixossarcoma, lipossarcoma, condrossarcoma, osteossarcoma e outros sarcomas, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiossarcoma, rabdomiossarcoma, carcinoma de cólon, malignidade linfoide, câncer pancreático, câncer de mama, cânceres de pulmão, câncer ovariano, câncer de próstata, carcinoma hepatocelular, carcinoma de célula escamosa, carcinoma de célula basal, adenocarcinoma, carcinoma de glândula sudorípara, carcinoma medular da tireoide, carcinoma papilar da tireoide, feocromocitomas, carcinoma de glândula sebácea, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, carcinoma medulares, carcinoma broncogênicos, carcinoma de célula renal, hepatoma, carcinoma do duto biliar, coriocarcinoma, tumor de Wilms, câncer cervical, tumor testicular, seminoma, carcinoma da bexiga, melanoma e tumores do CNS (tal como um glioma (tal como glioma do tronco cerebral e gliomas mistos), glioblastoma (também conhecido como glioblastoma multiforme), astrocitoma, linfoma do CNS, germinoma, meduloblastoma, craniofariogioma de Schwannoma, ependimoma, pineaioma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, menangioma, neuroblastoma, retinoblastoma e metástases cerebrais).
[0484] Numa modalidade, cânceres e distúrbios podem ser tratados usando célula expressando DDpp-CAR que alvejam BCMA, CD123, CS1, HER2, AFP ou AFP p26. Numa modalidade específica, o DD-CAR pode ser projetado para alvejar CD22 para tratar linfoma de célula B. Em outra modalidade, a célula expressando DDpp-CAR contém um DDpp projetado para alvejar CD19 pode ser usado para tratar cânceres e distúrbios incluindo, porém sem limitações, ALL pré-B (indicação pediátrica), ALL adulta, linfoma de célula do manto, linfoma de célula B grande difusa, transplante de medula óssea alogênico pós recuperação e similares. Em outra modalidade, a célula expressando DDpp-CAR que contém um DDpp projetado para alvejar CS1 pode ser usada para tratar mieloma múltiplo. Em outra modalidade, a célula expressando DDpp-CAR que contém um DDpp projetado para alvejar BCMA pode ser usada para tratar mieloma múltiplo. Em outra modalidade, a célula expressando DDpp-CAR que contém um DDpp projetado para alvejar CS1 e um DDpp projetado para alvejar BCMA pode ser usada para tratar mieloma múltiplo. Em outra modalidade, a célula expressando DDpp-CAR que contém um DDpp projetado para alvejar HER2 pode ser usada para tratar câncer de mama ou câncer de ovário.
[0485] “Doenças associadas à célula B”, como usado no presente documento, incluem imunodeficiências de célula B, doenças autoimunes e/ou proliferação celular excessiva/não controlada associada às células B (incluindo linfomas e/ou leucemias). Os exemplos de tais doenças, em que o DDpp-CAR pode ser usado para abordagens terapêuticas, incluem, porém sem limitação: lúpus eritematoso sistêmico (SLE), diabetes, artrite reumatoide (RA), artrite reativa, esclerose múltipla (MS), pênfigo vulgar, doença celíaca, doença de Crohn, doença inflamatória intestinal, colite ulcerativa, doença autoimune da tireoide, agamaglobulinemia ligada ao X, leucemia linfoblástica aguda pré-B, lúpus eritematoso sistêmico, imunodeficiência variável comum, leucemia linfocítica crônica, doenças associadas com a deficiência de IgA seletiva e/ou deficiência de subclasse IgG, linfomas de linhagem B (linfoma de Hodgkin e/ou linfoma não Hodgkin), imunodeficiência com timoma, hipogamaglobulinemia transiente e/ou síndrome de hiper IgM, bem como doenças de célula B mediadas viralmente, tal como doença linfoproliferativa mediada por EBV e infecções crônicas nas quais as células B participar na fisiopatologia.
[0486] Numa modalidade preferencial, o DDpp-CAR é expresso numa célula T e fornece um método para tratar ou prevenir câncer, compreendendo a administração de células hospedeiras expressando DDpp- CAR a um câncer paciente em que a célula de câncer expressa um antígeno de tumor em sua superfície, e em que o DDpp liga especificamente o antígeno- alvo. Os antígenos-alvo exemplificativos que o DDpp e DDpp-CAR ligam incluem, porém sem limitações, BCMA, CS1, HER2 e CD123.
[0487] As células T modificadas por DDpp-CAR também podem servir como um tipo de vacina para imunização ex vivo e/ou terapia in vivo num mamífero. Preferencialmente, o mamífero é um ser humano.
[0488] As células T modificadas por DDpp-CAR fornecidas no presente documento podem ser administradas sozinhas ou como uma composição farmacêutica em combinação com diluentes e/ou com outros componentes como quimioterapêuticos, anticorpos, citocinas ou populações celulares. As composições fornecidas no presente documento são preferencialmente formuladas para administração intravenosa que pode ser administrada uma ou mais vezes.
[0489] “Variantes de escape de perda de antígeno”, como usado no presente documento, se refere às células que exibem expressão reduzida ou perda de expressão do antígeno-alvo, os antígenos os quais são alvejados por um CAR fornecido no presente documento.
[0490] Várias modalidades da divulgação agora serão ilustradas através da descrição de experimentos conduzidos de acordo com as mesmas. Os exemplos a seguir são fornecidos para facilitar a prática das modalidades divulgadas, e não devem ser interpretados como limitantes de forma alguma no restante da divulgação. Nos exemplos, é feita referência às Figuras anexas.
EXEMPLOS EXEMPLO 1. ISOLAMENTO E CARACTERIZAÇÃO DE DDpp QUE
LIGA ALVOS DE INTERESSE EXEMPLIFICATIVOS
[0491] Uma biblioteca de DDpp preparada conforme descrito nas Publicações de Pedido Internacional nos WO2016164305 e WO 2016164369, foi examinada quanto ao fago que liga BCMA, CD123, AFP ou AFP p26 através de múltiplos ciclos de seleção. O conteúdo de cada uma dentre as Publicações de Pedido Internacional nos WO2016164305 e WO 2016164369, é incorporada no presente documento a título de referência em sua totalidade).
[0492] As colônias individuais contendo fagomídeo de saída de panoramização de BCMA foram escolhidas e os fagos foram recuperados em formato de 96 poços usando fago auxiliar de VCSM13 seguindo os protocolos- padrão. Para o ensaio de ligação de alvo por ELISA, placas de 96 poços foram revestidas com 1,3 mg/ml de anticorpo de IgG1-Fc anti-humano de cabra seguido por incubação com 5 nM de alvo humano recombinante (BCMA-Fc, CD123-Fc, AFP ou AFP123) ou IgG1-Fc. 50 ml de fago recuperado diluídos 5x em tampão de bloqueio de ELISA foram, então, adicionados a cada poço. A ligação foi detectada usando um anticorpo anti-M13 conjugado com HRP e a razão de ELISA para cada sequência é relatada como a absorbância a 450 nm para alvo (isto é, BCMA-Fc, CD123-Fc, AFP ou AFP123) dividida por aquela para IgG1-Fc de média por todos os poços examinados contendo tal clone. EXEMPLO 2: PROTEÍNAS DE FUSÃO DE DDpp
[0493] Para avaliar a natureza modular de DDpp como um elemento de ligação, o ligante de CD137 de DDpp, bb10 (SEQ ID NO: 876), foi reformatado como uma fusão para o terminal N ou C da cadeia pesada de um anticorpo derivado da sequência do anticorpo monoclonal específico de RSV, palivizumab (SYNAGIS®). Os anticorpos biespecíficos, SYN-bb10 e bb10-SYN exibem ligação tanto a CD137 quanto RSV (Figuras 1A a 1B; quadrados fechados são bb10-SYN, círculos fechados são SYN-bb10)), demonstrando que uma atividade de ligação inovadora foi conferida à sequência de domínio D parenteral e a funcionalidade de DDpp é retida como fusão tanto N-terminal quanto C-terminal. Em contrapartida, fusões entre um arcabouço de proteína alfa-helicoidal sem alvo (SEQ ID NO: 1) e SYN (DD-SYN para fusão N-terminal, círculos abertos; SYN-DD para fusão C-terminal, quadrados abertos) mostrou ligação apenas a RSV, porém, sem ligação a CD137.
[0494] A ligação de DDpp, bb10 a CD137 diretamente ligado a plástico foi demonstrada usando ELISA (Figuras 1A a 1B). A ligação de DDpp bb10 a CD137 como parte de uma membrana celular também foi observada in situ, usando FACS (dados não mostrados) EXEMPLO 3. DDpp-CARs EXPRESSOS EM CÉLULAS T
HUMANAS PRODUZEM CITOCINAS EM LIGAÇÃO DE ALVO
[0495] A capacidade do alvo: O engate de célula T expressando DDpp-CAR para resultar em indução de secreção de citocina foi avaliado por células 293T, transitoriamente transfectando 293T células com vetores de embalagem lentiviral da 3a geração (pRSV-REV, pMDLg/pRRE e pMD2.G) com vetores pELNS que codificam DDpp-CARs usando LIPOFECTAMINE® 3000. Seis horas pós-transfecção, os meios foram trocados, então, os meios contendo lentivírus foram coletados em 30 e 54 horas pós-transfecção, agrupados, então, centrifugados para remover detritos de célula. O lentivírus foi, então, aliquotado e armazenado a - 80°C até o uso para transdução viral. A transdução de células T humanas com lentivírus de CAR foi realizada usando PBMCs humanas totais, ativadas com microesferas de ativação de célula T de αCD3/CD28 em meios de cultura suplementados com 40 U/ml de IL2. Após 24 horas, 2 x 106 PBMCs foram dispostas em placas por poço numa placa de cultura de tecido de 6 poços com 1 ml de meios de cultura e 3 ml de lentivírus contendo meios suplementados com 40 U/ml de IL2 e sulfato de protamina. As placas foram, então, centrifugadas por 2 horas a 1000 × g a 32°C e, então, incubadas de um dia para o outro 37°C. No dia seguinte, o procedimento de transdução de lentivírus foi repetido com meios de cultura frescos e meios contendo lentivírus. 72 horas após a ativação celular inicial, as microesferas de ativação de célula T foram removidas, então, células T foram cultivadas para expansão a ~ 0,25 a 0,5×106 células T/ml em meios frescos suplementados com 100 U/ml de IL2. A cada 2 a 3 dias, as células T foram suplementadas com meios de célula T adicionais e IL2, até que fossem usados para os ensaios de citocina (descritos abaixo) 7 a 10 dias após a ativação inicial.
[0496] A produção de citocina em resposta à expressão de alvo de antígeno (CD123) foi avaliada através da cultura de 25.000 células T transduzidas (7 dias pós-ativação) com 25.000 células de tumor não alvo (K562, CD123-) ou alvo (BDCM, CD123+) por poço em placas de 96 poços. Após 24 horas, o sobrenadante de cultura foi coletado e a produção de citocina foi avaliada por ELISA. Os sobrenadantes de cultura foram diluídos 1: 5 antes de ELISA. De modo similar, a produção de citocina em resposta à expressão de antígeno-alvo de foi avaliada por cultura de 25.000 células T transduzidas (7 dias após a ativação) com 25.000 células de tumor não alvo (K562, PDL1 -) ou alvo (SUDHL1, PDL1+) por poço em placas de 96 poços. Após 24 horas, o sobrenadante de cultura foi coletado e a produção de citocina foi avaliada por ELISA. Os sobrenadantes de cultura foram diluídos 1: 5 antes de ELISA.
[0497] A Figura 2A e a Figura 2B demonstram que as células T expressando DDpp-CARs de ligação de CD123 produzem interferon gama (IFNγ) após o estímulo com células de BDCM de CD123+, mas não a linhagem celular de CD123-, K562. A Figura 2C e Figura 2D demonstra que células T expressando DDpp-CARs de ligação de CD123 produzem interleucina 2 (IL2) após o estímulo com células de BDCM de CD123+, porém, não a linhagem celular de CD123-, K562. De modo similar, as Figuras 2E e 2F demonstram que células T expressando DDpp-CARs de ligação de PDL1 produzem interferon gama (IFNγ) e IL2 respectivamente após o estímulo com células de SUDHL1 de PDL1+, porém, não a linhagem celular de PDL1-, K562. EXEMPLO 4. Células T transduzidas com DDpp-CAR NÃO EXIBEM
FENÓTIPOS ASSOCIADOS À EXAUSTÃO DE CÉLULA T
[0498] Para avaliar o potencial de exaustão independente de antígeno e células T expressando DDpp-CARs, células T transduzidas (dia 10 pós-ativação) foram manchados com anticorpos contra CD3 e marcadores de exaustão de célula T (LAG3, PD1 e TIM3). A Figura 3A resume dados de experimentos individuais através de vários doadores de célula T. Os dados demonstram que a expressão dos marcadores de exaustão não foi intensificada em células T de DDpp-CAR de ligação de CD123 em relação àquelas observadas com o CAR anti-CD123 compreendendo o scFv (32176). A Figura 3B mostra dados de citometria de fluxo representativos de expressão de LAG3, PD1 e TIM3 em células T transduzidas com um CAR contendo scFv (fileira superior) ou um DDpp-CAR (neste experimento particular, CD123 alvejando cg06) 10 dias após a ativação inicial das células T. A similaridade destes dados demonstra novamente que as células T de DDpp-CAR não regulam positivamente a expressão de marcadores de exaustão, que presta suporte adicional à sua eficácia em imunoterapia de câncer. EXEMPLO 5. Células T expressando DDpp-CAR EXIBEM
DESGRANULAÇÃO ESPECÍFICA DE ALVO E CITOTOXICIDADE DE TUMOR
[0499] Para avaliar a desgranulação de células T expressando DDpp-CARs, 1×105 células T transduzidas (dia 9 pós-ativação) foram cultivadas em meios de célula T por 4 horas na presença de monensina e CD107a/LAMP1 conjugados com PE. As células T foram cultivadas sozinhas (Figura 4A) ou na presença de 2×105 células de tumor não alvo (K562, que são CD123-, Figura 4B ou células de tumor que expressam alvo (BDCM, CD123 +, Figura 4C), então, lavadas e manchadas para a expressão de CD3. A desgranulação de célula T foi, então, avaliada por citometria de fluxo, primeiro chaveando-se nas células de CD3+SSC baixo (não tumor), então, as células CD3+CD107a+. Os símbolos representam amostrar de experimentos individuais usando múltiplos doadores.
[0500] A produção de CD107a (um marcador de desgranulação das células T de DDpp-CAR) foi equivalente a controles negativos quando células T de DDpp-CAR de alvejamento de CD123 foram cultivadas sozinhas. A expressão de CD107a limitada quando células T de DDpp-CAR foram cocultivadas com células de tumor de K562 CD123 negativas e expressão de CD107a significativa foi observada quando células T de DDpp-CAR de alvejamento de CD123 foram cocultivadas com células de BDCM CD123 positivas (dados não mostrados). Estes dados indicam que as células T são ativadas, sendo submetidas à sinalização, sendo submetidas à desgranulação e irá resultar em erradicação de tumor. Estes dados também fornecem suporte adicional para a ativação dependente de alvo de células T de expressando DDpp-CAR.
[0501] A atividade citolítica de células T de DDpp-CAR foi avaliada usando células T preparadas a partir de dois doadores independentes. Doador no 1 (Figuras 5A a 5B) células T de DDpp-CAR matam de modo eficaz o tumor que expressa CD123, BDCM, porém, mostram muito pouca atividade citolítica no tumor CD123 negativo, K562. Resultados similares foram observados com o Doador no 2 (Figuras 5C e 5D). EXEMPLO 6. DDpp biespecífico
[0502] Conforme discutido acima, DDpp pode ser monovalente ou multivalente e/ou multiespecífico. Para avaliar a capacidade de células T de DDppCAR multiespecíficas para surtir uma resposta imune, DDpp-CARs biespecíficos foram expressos em células Jurkat e sinalização intracelular em resposta às células de tumor expressando um ou ambos os alvos foi medida. Dois DDppCARs biespecíficos foram construídos, os quais diferem na ordem de fusão dos domínios de ligação. CG06-pb04 tem o domínio de pb04 fundido à região transmembranar de CD8a enquanto pb04-cg06 tem o domínio de cgo6 fundido à região transmembranar de CD8a. Ambos os construtos utilizaram um ligante de GS entre os domínios de ligação de alvo.
[0503] A Figura 6A demonstra que DDpp-CARs compreendendo cg06 apenas, pb04 apenas (Figura 6B), cg06-pb04, (Figura 5C) e pb04-cg06 (Figura 5D) podem ser transduzidos e expressos na linhagem celular repórter
Jurkat NFAT como avaliado por ligação de mAb anti-FLAG aos CARs. A capacidade dos CARs monoespecíficos e biespecíficos para ativar a trajetória de NFAT foi avaliada por cocultura dos vários CARs com células de tumor com diferentes níveis de expressão de CD123 e/ou PDL1. As células foram cocultivadas com células-alvo por 6 horas. A sinalização mediada por NFAT foi medida através da adição às células de reagente de ensaio de luciferase (Promega) e quantificação de unidades de luminescência relativa (RLU) como uma medida de sinalização intracelular induzida.
[0504] A Figura 6E representa os resultados deste experimento. O grupo mais à esquerda de barras e o histograma mostram o efeito de morte relativo do DDpp de cg06 contra vários tipos de célula. A resposta de sinalização após a cocultura com BDCM altamente CD123+ foi a maior com este DDpp-CAR. O próximo grupo à direita representa dados que mostram sinalização intracelular após a cocultura do DDpp de pb04 contra os mesmos tipos de célula. A sinalização foi a mais alta em BDCM, seguida por SUHDL1 e H460 (estes são os de maior expressão de linhagens celulares para CD123 e PDL1 (dados não mostrados)). O próximo grupo à direita representa dados que mostram a sinalização intracelular de um cg06-DDpp de pb04 biespecífico (cg06 mais distal à membrana de célula T em comparação com pb04). Por fim, o grupo mais à direita mostra a sinalização intracelular de um segundo DBPpp biespecífico (pb04-DDpp de cg06, em que pb04 é mais distal à membrana de célula T em comparação com cg06). Estes dois grupos indicam que DDpp- CARs biespecíficos de fato funcionam para promover a sinalização intracelular. De acordo com modalidades, DDpp-CARs biespecíficos mostram atividade intensificada (a magnitude de sinalização intracelular no grupo pb04-cg06 com células de BDCM é maior do que pode ser considerado apenas pelo DDpp de pb04 sozinho). Assim, em algumas modalidades, DDpp-CARs compreendendo dois DDpps podem cooperar para intensificar a função de célula T. Em algumas modalidades, há uma sinergia entre os vários DDpps usados num DDpp-CAR biespecífico (ou outro multimérico).
EXEMPLO 7. USO DE ADAPTADORES DE DOMÍNIO DE LIGAÇÃO
DUPLA PARA INTENSIFICAR SINALIZAÇÃO DE CAR
[0505] 50.000 células repórteres anteriormente transduzidas com um CAR de ligação de AFP (domínio de p26) (af03) (SEQ ID NO: 921) foram cultivadas por 5 horas na presença do adaptador de Cg06 específico de CD123 (Cg06-p26, SEQ ID NO: 913) ou a proteína adaptadora dupla de Cg06 (Cg06- p26-Cg06, SEQ ID NO: 916) na presença de 50.000 CD123 + MOLM13 ou células de MOLM13 deficientes em CD123, então, avaliadas quanto à atividade de luciferase. As células deficientes de CD123 foram geradas usando tecnologia de modificação genética de CRISPR/Cas9 (Figura 7A). De modo similar, 50.000 células repórteres anteriormente transduzidas com um CAR de ligação de AFP (domínio de p26) (af03) (SEQ ID NO: 921) foram cultivadas por 5 horas na presença do adaptador de Bc40 específico de BCMA (Bc40-p26, SEQ ID NO: 914) ou a proteína adaptadora dupla de Bc40 (Bc40-p26-Bc40, SEQ ID NO: 917) na presença ou ausência de 50.000 células U266 BCMA +, então, avaliadas quanto à atividade de luciferase (Figura 7B).
[0506] As Figuras 7A e 7B mostram que as proteínas adaptadoras de domínio de ligação dupla (bivalentes) acionam a sinalização intensificada por células de Jurkat expressando CAR em relação proteínas adaptadoras de domínio de ligação única. EXEMPLO 8. Imunoterapia in vivo de tumor mediada por DDpp
[0507] Para avaliar a atividade antitumor in vivo de um DDpp CAR, células T foram transduzidas com DDpp CAR de bc40 (CAR alvejando BCMA). Bc40 é SEQ ID NO: 164. Células transduzidas (5X10E6) foram administradas intravenosamente a camundongos NSG 34 dias após os camundongos receberem células 10E7 das células de tumor U226 expressando BCMA, identificadas por luciferase/gfp. Conforme mostrado nas Figura 8, quatro camundongos receberam o tumor U226 no Dia 0, que cresceu progressivamente até o Dia 32. No Dia 34, os camundongos n o 1, no 2 e no 4 receberam células T de CAR de bc40-DDpp. O camundongo no 3 não recebeu células T. No Dia 45, o tumor U226 foi removido nos camundongos recebendo células T de CAR enquanto o camundongo que não recebeu células T morreram pelo fardo do tumor.
[0508] Todas as publicações, patentes, pedidos de patente, sítios da internet e sequências de números de acesso/banco de dados (incluindo tanto sequências de polinucleotídeo quanto de polipeptídeo) citados estão incorporados no presente documento a título de referência em sua totalidade para todos os propósitos à mesma extensão que seria caso cada publicação, patente, pedido de patente, sítio da internet ou sequência de número de acesso/banco de dados individuais fosse específica e individualmente indicado como sendo assim incorporado a título de referência.
[0509] É contemplado que várias combinações ou subcombinações dos recursos e aspectos específicos divulgados acima podem ser produzidas e ainda serem abrangidas pelas modalidades englobadas pela divulgação. Adicionalmente, a divulgação de qualquer determinado recurso, aspecto, método, propriedade, característica, qualidade, atributo, elemento ou similares em conexão com uma modalidade pode ser usado em todas as outras modalidades apresentadas no presente documento. Consequentemente, deve ser entendido que vários recursos e aspectos das modalidades divulgadas podem ser combinados com ou substituídos um pelo outro a fim de formar modos variáveis das modalidades divulgadas. Portanto, pretende-se que o escopo das modalidades abrangidas pela presente divulgação não deve ser limitado pelas modalidades divulgadas particulares descritas no presente documento. Ademais, embora as modalidades abrangidas sejam suscetíveis a várias modificações e formas alternativas, exemplos específicos das mesmas foram mostrados nos desenhos e são descritos no presente documento em detalhes. Deve ser entendido, entretanto, que o escopo da divulgação não deve ser limitado às formas ou métodos particulares divulgados, mas, ao contrário, a divulgação deve cobrir todas as modificações, equivalentes e alternativas abrangidos pelo espírito e escopo das várias modalidades descritas e as reivindicações anexas. Quaisquer métodos aqui divulgados não precisam ser realizados na ordem mencionada. Os métodos aqui divulgados incluem certas ações realizadas por um médico; entretanto, também podem incluir qualquer instrução de terceiros de tais ações, expressamente ou por implicação. Por exemplo, ações como “administrar uma célula T compreendendo a DDpp-CAR” incluem “instruir a administração de uma célula T compreendendo um DDpp-CAR". Além disto, onde recursos ou aspectos da divulgação são descritos em termos de grupos de Markush, aqueles versados na técnica reconhecerão que a divulgação também é, portanto, descrita em termos de qualquer membro ou subgrupo de membros individuais do grupo de Markush.
[0510] As faixas aqui divulgadas também abrangem toda e qualquer sobreposição, subfaixas e combinações das mesmas. A linguagem como “até", “pelo menos", “maior que", “menor que", “entre" e similares inclui o número mencionado. Números antecedidos por um termo como “cerca de” ou “aproximadamente” incluem os números mencionados. Por exemplo, “cerca de 10 nanômetros” inclui “10 nanômetros". TABELA 2: DIVULGAÇÃO DE SEQUÊNCIA ADICIONAL:
SEQ Alvo Sequência ID: Domínio D MGSWAEFKQRLAAIKTRLQALGGSEAELAAFEKEIAAFE 1 (sem alvo) SELQAYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDELQAYRHN Epítopo de 2 LAAIKTRLQ
MHC LEKCFQTENPLECQDKGEEELQKYIQESQALAKRSCGL
FQKLGEYYLQNAFLVAYTKKAPQLTSSELMAITRKMAAT 3 CD19
AATCCQLSEDKLLACGEGAADIIIGHLCIRHEMTPVNPG VGQCCTSSYANRRPCFSSLVVDETYVPPAFSDDKFIFH
SEQ Alvo Sequência ID:
KDLCQAQGVALQTMKQEFLINLVKQKPQITEEQLEAVIA
DFSGLLEKCCQGQEQEVCFAEEGQKLISKTRAALGV 4 GlySer GGGGTGGGGS 5 GlySer GGGGDGGGGS a3D (Q19E) MGSWAEFKQRLAAIKTRLEALGGSEAELAAFEKEIAAFE 6 Sem alvo SELQAYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDELQAYRHN ECD de MLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTC 7
BCMA QRYCNASVTNSVKGTNA TKEDPNPPITNLRMKAKAQQLTWDLNRNVTDIECVKDA DYSMPAVNNSYCQFGAISLCEVTNYTVRVANPPFSTWI
LFPENSGKPWAGAENLTCWIHDVDFLSCSWAVGPGAP ECD de ADVQYDLYLNVANRRQQYECLHYKTDAQGTRIGCRFD 8 CD123 DISRLSSGSQSSHILVRGRSAAFGIPCTDKFVVFSQIEILT
PPNMTAKCNKTHSFMHWKMRSHFNRKFRYELQIQKRM QPVITEQVRDRTSFQLLNPGTYTVQIRARERVYEFLSA WSTPQRFECDQEEGANTRAWR RTLHRNEYGIASILDSYQCTAEISLADLATIFFAQFVQEA TYKEVSKMVKDALTAIEKPTGDEQSSGCLENQLPAFLE ELCHEKEILEKYGHSDCCSQSEEGRHNCFLAHKKPTPA
SIPLFQVPEPVTSCEAYEEDRETFMNKFIYEIARRHPFLY 9 AFP APTILLWAARYDKIIPSCCKAENAVECFQTKAATVTKELR
ESSLLNQHACAVMKNFGTRTFQAITVTKLSQKFTKVNFT EIQKLVLDVAHVHEHCCRGDVLDCLQDGEKIMSYICSQ QDTLSNKITECCKLTTLERGQCIIHAENDEKPEGLSPNL NRFLGDRDFNQFSSGEKNIFLASFVHEYSRRHPQLAVS
SEQ Alvo Sequência ID:
VILRVAKGYQELLEKCFQTENPLECQDKGEEELQKYIQE SQALAKRSCGLFQKLGEYYLQNAFLVAYTKKAPQLTSS ELMAITRKMAATAATCCQLSEDKLLACGEGAADIIIGHLC IRHEMTPVNPGVGQCCTSSYANRRPCFSSLVVDETYVP PAFSDDKFIFHKDLCQAQGVALQTMKQEFLINLVKQKP QITEEQLEAVIADFSGLLEKCCQGQEQEVCFAEEGQKLI SKTRAALGV LEKCFQTENPLECQDKGEEELQKYIQESQALAKRSCGL FQKLGEYYLQNAFLVAYTKKAPQLTSSELMAITRKMAAT
AATCCQLSEDKLLACGEGAADIIIGHLCIRHEMTPVNPG 10 AFP p26
VGQCCTSSYANRRPCFSSLVVDETYVPPAFSDDKFIFH KDLCQAQGVALQTMKQEFLINLVKQKPQITEEQLEAVIA DFSGLLEKCCQGQEQEVCFAEEGQKLISKTRAALGV LEKCFQTENPLECQDKGEEELQKYIQESQALAKRSCGL FQKLGEYYLQNAFLVAYTKKAPQLTSSELMAITRKMAAT
AATCCQLSEDKLLACGEGAADIIIGHLCIRHEMTPVNPG 928 P26Q217P
VGQCCTSSYANRRPCFSSLVVDETYVPPAFSDDKFIFH KDLCQAQGVALQTMKQEFLINLVKQKPQITEEQLEAVIA DFSGLLEKCCQGQEQEVCFAEEGPKLISKTRAALGV QESQALAKRSCGLFQKLGEYYLQNAFLVAYTKKAPQLT
SSELMAITRKMAATAATCCQLSEDKLLACGEGAADIIIGH P26 (Q26- LCIRHEMTPVNPGVGQCCTSSYANRRPCFSSLVVDETY 929 V229) VPPAFSDDKFIFHKDLCQAQGVALQTMKQEFLINLVKQK
PQITEEQLEAVIADFSGLLEKCCQGQEQEVCFAEEGQK LISKTRAALGV
SEQ Alvo Sequência ID:
QESQALAKRSCGLFQKLGEYYLQNAFLVAYTKKAPQLT
SSELMAITRKMAATAATCCQLSEDKLLACGEGAADIIIGH P26(Q26- LCIRHEMTPVNPGVGQCCTSSYANRRPCFSSLVVDETY 930 V229) Q217P VPPAFSDDKFIFHKDLCQAQGVALQTMKQEFLINLVKQK
PQITEEQLEAVIADFSGLLEKCCQGQEQEVCFAEEGPKL ISKTRAALGV KYIQESQALAKRSCGLFQKLGEYYLQNAFLVAYTKKAP
QLTSSELMAITRKMAATAATCCQLSEDKLLACGEGAADI p26 (K23- IIGHLCIRHEMTPVNPGVGQCCTSSYANRRPCFSSLVVD 931 V229) ETYVPPAFSDDKFIFHKDLCQAQGVALQTMKQEFLINLV
KQKPQITEEQLEAVIADFSGLLEKCCQGQEQEVCFAEE GQKLISKTRAALGV KYIQESQALAKRSCGLFQKLGEYYLQNAFLVAYTKKAP
QLTSSELMAITRKMAATAATCCQLSEDKLLACGEGAADI p26(K23- IIGHLCIRHEMTPVNPGVGQCCTSSYANRRPCFSSLVVD 932 V229) Q217P ETYVPPAFSDDKFIFHKDLCQAQGVALQTMKQEFLINLV
KQKPQITEEQLEAVIADFSGLLEKCCQGQEQEVCFAEE GPKLISKTRAALGV GEEELQKYIQESQALAKRSCGLFQKLGEYYLQNAFLVA
YTKKAPQLTSSELMAITRKMAATAATCCQLSEDKLLACG p26 (G17- EGAADIIIGHLCIRHEMTPVNPGVGQCCTSSYANRRPCF 933 V229) SSLVVDETYVPPAFSDDKFIFHKDLCQAQGVALQTMKQ
EFLINLVKQKPQITEEQLEAVIADFSGLLEKCCQGQEQE
VCFAEEGQKLISKTRAALGV 934 p26(G17- GEEELQKYIQESQALAKRSCGLFQKLGEYYLQNAFLVA
SEQ Alvo Sequência ID: V229) Q217P YTKKAPQLTSSELMAITRKMAATAATCCQLSEDKLLACG
EGAADIIIGHLCIRHEMTPVNPGVGQCCTSSYANRRPCF SSLVVDETYVPPAFSDDKFIFHKDLCQAQGVALQTMKQ EFLINLVKQKPQITEEQLEAVIADFSGLLEKCCQGQEQE VCFAEEGPKLISKTRAALGV DSSKWVFEHPETLYAWEGACVWIPCTYRALDGDLESFI LFHNPEYNKNTSKFDGTRLYESTKDGKVPSEQKRVQFL GDKNKNCTLSIHPVHLNDSGQLGLRMESKTEKWMERIH LNVSERPFPPHIQLPPEIQESQEVTLTCLLNFSCYGYPIQ LQWLLEGVPMRQAAVTSTSLTIKSVFTRSELKFSPQWS HHGKIVTCQLQDADGKFLSNDTVQLNVKHTPKLEIKVTP SDAIVREGDSVTMTCEVSSSNPEYTTVSWLKDGTSLKK
QNTFTLNLREVTKDQSGKYCCQVSNDVGPGRSEEVFL ECD maduro QVQYAPEPSTVQILHSPAVEGSQVEFLCMSLANPLPTN 923 de CD22 YTWYHNGKEMQGRTEEKVHIPKILPWHAGTYSCVAENI
LGTGQRGPGAELDVQYPPKKVTTVIQNPMPIREGDTVT LSCNYNSSNPSVTRYEWKPHGAWEEPSLGVLKIQNVG WDNTTIACAACNSWCSWASPVALNVQYAPRDVRVRKI KPLSEIHSGNSVSLQCDFSSSHPKEVQFFWEKNGRLLG KESQLNFDSISPEDAGSYSCWVNNSIGQTASKAWTLEV LYAPRRLRVSMSPGDQVMEGKSATLTCESDANPPVSH YTWFDWNNQSLPYHSQKLRLEPVKVQHSGAYWCQGT NSVGKGRSPLSTLTVYYSPETIGRR
SGPVKELVGSVGGAVTFPLKSKVKQVDSIVWTFNTTPL ECD maduro 925 VTIQPEGGTIIVTQNRNRERVDFPDGGYSLKLSKLKKND de CS1
SGIYYVGIYSSSLQQPSTQEYVLHVYEHLSKPKVTMGLQ
SEQ Alvo Sequência ID:
SNKNGTCVTNLTCCMEHGEEDVIYTWKALGQAANESH NGSILPISWRWGESDMTFICVARNPVSRNFSSPILARKL CEGAADDPDSSM TQVCTGTDMKLRLPASPETHLDMLRHLYQGCQVVQGN LELTYLPTNASLSFLQDIQEVQGYVLIAHNQVRQVPLQR LRIVRGTQLFEDNYALAVLDNGDPLNNTTPVTGASPGG LRELQLRSLTEILKGGVLIQRNPQLCYQDTILWKDIFHKN NQLALTLIDTNRSRACHPCSPMCKGSRCWGESSEDCQ SLTRTVCAGGCARCKGPLPTDCCHEQCAAGCTGPKHS DCLACLHFNHSGICELHCPALVTYNTDTFESMPNPEGR
YTFGASCVTACPYNYLSTDVGSCTLVCPLHNQEVTAED ECD maduro 927 GTQRCEKCSKPCARVCYGLGMEHLREVRAVTSANIQE de HER2
FAGCKKIFGSLAFLPESFDGDPASNTAPLQPEQLQVFET LEEITGYLYISAWPDSLPDLSVFQNLQVIRGRILHNGAYS LTLQGLGISWLGLRSLRELGSGLALIHHNTHLCFVHTVP WDQLFRNPHQALLHTANRPEDECVGEGLACHQLCARG HCWGPGPTQCVNCSQFLRGQECVEECRVLQGLPREY VNARHCLPCHPECQPQNGSVTCFGPEADQCVACAHYK DPPFCVARCPSGVKPDLSYMPIWKFPDEEGACQPCPIN CTHSCVDLDDKGCPAEQRASPLT
TABELA: 3 ADAPTADORES EXEMPLIFICATIVOS
SEQ ID Projeto de Adaptador Sequência de Adaptador NO:
DEMGSWDEFGRRLYAIEWRLYALGGS EAELAAFEKEIAAFESELQAYKGKGNPE
VEKLREIAAVIRSNLQAYRHNGGGGSG 911 GGGSGGGGSGMLQMAGQCSQNEYFD
SLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCN ASVTNSVKGTNAGGGGSGGGGSGGG GSHHHHHHHHHH DEGGGGSMGSWAEFKQRLAAIKTRLQ ALGGSEAELAAFEKEIAAFESELQAYKG
KGNPEVEALRKEAAAIRDELQAYRHNG 912 GGGSGGGGSGGGGSGMLQMAGQCS
QNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTC QRYCNASVTNSVKGTNAGGGGSGGG GSGGGGSHHHHHHHHHH DEHHHHHHHHHHKLENLYFQGGGGGS MGSWDEFGRRLYAIEWRLYALGGSEA ELAAFEKEIAAFESELQAYKGKGNPEVE KLREIAAVIRSNLQAYRHNGGGGSGGG
GSGGGGSLEKCFQTENPLECQDKGEE 913
ELQKYIQESQALAKRSCGLFQKLGEYY LQNAFLVAYTKKAPQLTSSELMAITRKM AATAATCCQLSEDKLLACGEGAADIIIG HLCIRHEMTPVNPGVGQCCTSSYANR RPCFSSLVVDETYVPPAFSDDKFIFHKD LCQAQGVALQTMKQEFLINLVKQKPQIT EEQLEAVIADFSGLLEKCCQGQEQEVC FAEEGQKLISKTRAALGV DEHHHHHHHHHHKLENLYFQGGGGGS MGSWSEFWVRLGAIRERLDALGGSEA ELAAFEKEIAAFESELQAYKGKGNPEVE KLRYTAATIRRFLQAYRHNGGGGSGG GGSGGGGSLEKCFQTENPLECQDKGE
EELQKYIQESQALAKRSCGLFQKLGEY 914 YLQNAFLVAYTKKAPQLTSSELMAITRK
MAATAATCCQLSEDKLLACGEGAADIII GHLCIRHEMTPVNPGVGQCCTSSYAN RRPCFSSLVVDETYVPPAFSDDKFIFHK DLCQAQGVALQTMKQEFLINLVKQKPQ ITEEQLEAVIADFSGLLEKCCQGQEQEV CFAEEGQKLISKTRAALGV DEHHHHHHHHHHKLENLYFQGGGGGS MGSWAEFKQRLAAIKTRLEALGGSEAE LAAFEKEIAAFESELQAYKGKGNPEVEA LRKEAAAIRDELQAYRHNGGGGSGGG GSGGGGSLEKCFQTENPLECQDKGEE
ELQKYIQESQALAKRSCGLFQKLGEYY 915
LQNAFLVAYTKKAPQLTSSELMAITRKM AATAATCCQLSEDKLLACGEGAADIIIG HLCIRHEMTPVNPGVGQCCTSSYANR RPCFSSLVVDETYVPPAFSDDKFIFHKD LCQAQGVALQTMKQEFLINLVKQKPQIT EEQLEAVIADFSGLLEKCCQGQEQEVC FAEEGQKLISKTRAALGV DEGGGGSMGSWDEFGRRLYAIEWQLY ALGGTEAELAAFEKEIAAFESELQAYKG KGNPEVEKLREIAAVIRENLQAYRHNG GGGSGGGGSGGGGSGLEKCFQTENP LECQDKGEEELQKYIQESQALAKRSCG LFQKLGEYYLQNAFLVAYTKKAPQLTSS ELMAITRKMAATAATCCQLSEDKLLAC
GEGAADIIIGHLCIRHEMTPVNPGVGQC 916 CTSSYANRRPCFSSLVVDETYVPPAFS
DDKFIFHKDLCQAQGVALQTMKQEFLIN LVKQKPQITEEQLEAVIADFSGLLEKCC QGQEQEVCFAEEGQKLISKTRAALGVG GGGSGGGGSGGGGSMGSWDEFGRR LYAIEWQLYALGGTEAELAAFEKEIAAF ESELQAYKGKGNPEVEKLREIAAVIREN LQAYRHNGGGGSGGGGSGGGGSHHH HHHHHHH DEGGGGSMGSWSEFWVRLGAIRERLD ALGGSEAELAAFEKEIAAFESELQAYKG KGNPEVEKLRYTAATIRRFLQAYRHNG GGGSGGGGSGGGGSGLEKCFQTENP
LECQDKGEEELQKYIQESQALAKRSCG 917
LFQKLGEYYLQNAFLVAYTKKAPQLTSS ELMAITRKMAATAATCCQLSEDKLLAC GEGAADIIIGHLCIRHEMTPVNPGVGQC CTSSYANRRPCFSSLVVDETYVPPAFS DDKFIFHKDLCQAQGVALQTMKQEFLIN LVKQKPQITEEQLEAVIADFSGLLEKCC QGQEQEVCFAEEGQKLISKTRAALGVG GGGSGGGGSGGGGSMGSWSEFWVR LGAIRERLDALGGSEAELAAFEKEIAAF ESELQAYKGKGNPEVEKLRYTAATIRR FLQAYRHNGGGGSGGGGSGGGGSHH
HHHHHHHH TABELA: 4 SEQUÊNCIAS DE CAR DE ADBD
SEQ ID Projeto de CAR Sequência de CAR NO:
MAFLWLLSCWALLGTTFGDYKDDDDK GGGGSGGGGSMGSWAEFKQRLAAIK TRLEALGGSEAELAAFEKEIAAFESELQ AYKGKGNPEVEALRKEAAAIRDELQAY
RHNGQAGSGTTTPAPRPPTPAPTIAS CTsp-Flag- GSlinker- QPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFA 918 α3D(Q19E)-GSlinker-CD8H- CDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKR TM-41BB-CD3ς GRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGC
SCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPA YKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKR RGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQ KDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGL
YQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CTsp-Flag- GSlinker-cg06- MAFLWLLSCWALLGTTFGDYKDDDDK 919 GSlinker-CD8H-TM-41BB- GGGGSGGGGSMGSWDEFGRRLYAIE CD3ς WRLYALGGSEAELAAFEKEIAAFESEL
QAYKGKGNPEVEKLREIAAVIRSNLQA YRHNGGGGSGGGGSGTTTPAPRPPT PAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHT RGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVI TLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQ EEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRS ADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYD VLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGL YNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGK GHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALP PR MAFLWLLSCWALLGTTFGDYKDDDDK GGGGSGGGGSMGSWSEFWVRLGAIR ERLDALGGSEAELAAFEKEIAAFESEL QAYKGKGNPEVEKLRYTAATIRRFLQA YRHNGGGGSGGGGSGTTTPAPRPPT
PAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHT CTsp-Flag- GSlinker-bc40-
RGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVI 920 GSlinker-CD8H-TM-41BB-
TLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQ CD3ς
EEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRS ADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYD VLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGL YNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGK GHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALP
PR CTsp-Flag- GSlinker-af03- MAFLWLLSCWALLGTTFGDYKDDDDK 921 GSlinker-CD8H-TM-41BB- GGGGSGGGGSMGSWFEFYDRLNAID CD3ς ARLWALGGSEAELAAFEKEIAAFESEL
QAYKGKGNPEVENLRVHAAAIREWLQ AYRHNGGGGSGGGGSGTTTPAPRPP TPAPTIASMGSWAEFKQRLAAIKTRLE ALGGSEAELAAFEKEIAAFESELQAYK GKGNPEVEALRKEAAAIRDELQAYRH NQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDF ACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCK RGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDG CSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAP AYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDK RRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNEL QKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHD GLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR MAFLWLLSCWALLGTTFGDYKDDDDK GGGGSGGGGSMGSWLEFYHRLNAID SRLWALGGSEAELAAFEKEIAAFESEL QAYKGKGNPEVESLRDHAAHIREWLQ AYRHNGGGGSGGGGSGTTTPAPRPP
TPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVH CTsp-Flag- GSlinker-af05-
TRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLV 922 GSlinker-CD8H-TM-41BB-
ITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTT CD3ς
QEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSR SADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEY DVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEG LYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRG KGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQAL PPR

Claims (44)

REIVINDICAÇÕES
1. Proteína que compreende um domínio de ligação de alvo de Domínio D (DD) caracterizada pelo fato de que o DD é um membro selecionado do grupo que consiste em: (a) um DD que se liga especificamente a BCMA e compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11-305 ou 306; (b) um DD que se liga especificamente a CD123 e compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 307-739 ou 740; (c) um DD que se liga especificamente a AFP e compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 741-874, ou 886-895; (d) um DD que se liga especificamente a AFP p26 e compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 741-874, ou 886- 895; (e) um DD que se liga especificamente a CS1 e compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 896-909, ou 910; e (f) um DD que se liga especificamente a HER2 e compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 911-949, ou 950.
2. Proteína, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o DD é fundido a um polipeptídeo heterólogo.
3. Proteína, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que o polipeptídeo heterólogo compreende um anticorpo de comprimento completo ou um fragmento de anticorpo.
4. Proteína, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que o polipeptídeo heterólogo compreende um membro selecionado do grupo que consiste em. (a) um domínio transmembranar; (b) um domínio que se associa à membrana; (c) albumina sérica humana ou um fragmento da mesma; (d) AFP ou um fragmento do mesmo; (e) AFP p26 ou a fragmento do mesmo; e
(f) o domínio extracelular de um receptor ou um fragmento do mesmo.
5. Proteína, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que DD é fundido a: o terminal amino de uma cadeia pesada de anticorpo de comprimento completo; o terminal amino de uma cadeia leve de anticorpo de comprimento completo; o terminal carboxila de uma cadeia pesada de anticorpo de comprimento completo; ou o terminal carboxila de uma cadeia leve de anticorpo de comprimento completo.
6. Proteína, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que o polipeptídeo heterólogo é um Fc.
7. Proteína, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que o polipeptídeo heterólogo compreende o domínio extracelular, ou um fragmento de um domínio extracelular, de um receptor selecionado do grupo que consiste em: BCMA, CD123, CS1 e CD19.
8. Proteína, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que é identificada.
9. Proteína, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que a identificação é selecionada do grupo que consiste numa identificação enzimática, uma identificação fluorescente, uma identificação luminescente, uma identificação bioluminescente e uma porção química de biotina.
10. Proteína, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada pelo fato de que é conjugada com um agente terapêutico ou agente citotóxico.
11. Receptor de antígeno quimérico (CAR) caracterizado pelo fato de que compreende um domínio de ligação de alvo que compreende a proteína conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 5.
12. CAR, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que compreende um domínio de ligação de alvo, um domínio transmembranar e um domínio de sinalização intracelular.
13. CAR, de acordo com a reivindicação 11 ou 12, caracterizado pelo fato de que o domínio transmembranar compreende um domínio transmembranar 41BB ou CD28.
14. CAR, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 13, caracterizado pelo fato de que o domínio de sinalização intracelular é selecionado do grupo que consiste numa cadeia alfa, beta ou zeta de receptor de célula T humana; um domínio 41BB humano; um domínio CD28 humano; e qualquer combinação dos mesmos.
15. CAR, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 14, caracterizado pelo fato de que o domínio de sinalização intracelular compreende o domínio intracelular de uma molécula coestimulante selecionada do grupo que consiste em CD27, CD28, 4lBB, OX40, CD30, CD40, PD1, antígeno associado à função de linfócito 1 (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, NKG2D, B7-H3, um ligando que se liga especificamente a CD83, e qualquer combinação dos mesmos.
16. Proteína, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente um segundo domínio de ligação de alvo que tem um alvo igual ou diferente do domínio de ligação de alvo DD.
17. Ácido nucleico isolado caracterizado pelo fato de que codifica a proteína conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16.
18. Vetor caracterizado pelo fato de que compreende o ácido nucleico conforme definido na reivindicação 17.
19. Vetor, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o ácido nucleico é ligado de modo operacional a uma sequência de nucleotídeo que regula a expressão da proteína codificada pelo ácido nucleico.
20. Vetor, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que é um vetor lentiviral.
21. Célula hospedeira caracterizada pelo fato de que compreende o ácido nucleico conforme definido na reivindicação 17, ou o vetor conforme definido em qualquer uma das reivindicações 18 a 21.
22. Célula caracterizada pelo fato de que é manipulada para expressar a proteína conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16.
23. Célula, de acordo com a reivindicação 21 ou 22, caracterizada pelo fato de que a célula é uma célula T ou a célula exterminadora natural (NK).
24. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende a proteína conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, o ácido nucleico conforme definido na reivindicação 17, o vetor conforme definido na reivindicação 18, 19 ou 20, ou a célula conforme definida em qualquer uma das reivindicações 21 a 23.
25. Kit caracterizado pelo fato de que compreende a proteína conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16.
26. Método para tratar um indivíduo que tem câncer caracterizado pelo fato de que o método compreende: administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma proteína conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, o ácido nucleico conforme definido na reivindicação 17, o vetor conforme definido na reivindicação 18, 19 ou 20, a célula conforme definida em qualquer uma das reivindicações 21 a 23, ou a composição farmacêutica conforme definida na reivindicação 24.
26. Método, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o câncer é uma malignidade de célula B selecionada do grupo que consiste em: um linfoma (por exemplo, um linfoma de Hodgkin e linfoma não Hodgkin (NHL), uma leucemia, um plasmacitoma e um mieloma.
28. Método, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que a malignidade de célula B é selecionada do grupo que consiste em: leucemia linfocítica crônica, linfoma folicular, linfoma de célula do manto, e linfoma de célula B grande difusa, plasmacitoma e mieloma múltiplo.
27. Método, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o câncer é uma malignidade mieloide selecionada do grupo que consiste em: leucemia mieloide crônica, leucemia mieloide aguda, leucemia, plasmacitoma e mieloma.
29. Método para tratar um indivíduo que tem um distúrbio associado à célula B (por exemplo, gamopatia monoclonal de significância determinada), (MGUS)) caracterizado pelo fato de que o método compreende: administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma proteína conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, o ácido nucleico conforme definido na reivindicação 17, o vetor conforme definido na reivindicação 18, 19 ou 20, a célula conforme definida em qualquer uma das reivindicações 21 a 23, ou a composição farmacêutica conforme definida na reivindicação 24.
30. Método para tratar um indivíduo que tem um distúrbio do sistema imune caracterizado pelo fato de que o método compreende: administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma proteína conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, o ácido nucleico conforme definido na reivindicação 17, o vetor conforme definido na reivindicação 18, 19 ou 20, a célula conforme definida em qualquer uma das reivindicações 21 a 23, ou a composição farmacêutica conforme definida na reivindicação 24.
31. Método, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que o distúrbio do sistema imune é uma doença autoimune, como artrite reumatoide.
32. Método para tratar um indivíduo que tem câncer caracterizado pelo fato de que o método compreende: administrar uma célula imune que compreende um receptor de antígeno quimérico (CAR) ao indivíduo, em que o CAR compreende: um domínio de ligação de alvo que compreende um DD que tem uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste na SEQ ID NO: 11-949, e 950, opcionalmente, em que o DD se liga especificamente a um alvo de interesse expressado por uma célula de câncer;
um domínio transmembranar e um domínio intracelular; em que o domínio intracelular compreende um domínio de sinalização, e em que, mediante administração a um indivíduo, o domínio de ligação de alvo se liga especificamente ao alvo de interesse expressado por uma célula de câncer, e em que a ligação do alvo de interesse induz a célula imune para gerar sinais citotóxicos que resultam em efeitos citotóxicos na célula de câncer.
33. Método, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que a célula imune é uma célula T.
34. Método, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que a célula imune é uma célula NK.
35. Método, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que a administração é intravenosa.
36. Uso de uma composição para tratar câncer caracterizado pelo fato de que a composição compreende: uma proteína conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, o ácido nucleico conforme definido na reivindicação 17, o vetor conforme definido em qualquer uma das reivindicações 18, 19 ou 20, ou a célula conforme definida em qualquer uma das reivindicações 21 a 23.
37. Uso, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pelo fato de que o câncer é uma malignidade de célula B.
38. Uso, de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo fato de que a malignidade de célula B é selecionada do grupo que consiste em: um linfoma (por exemplo, um linfoma de Hodgkin e linfoma não Hodgkin (NHL), uma leucemia, e um mieloma.
39. Uso, de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que a malignidade de célula B é selecionada do grupo que consiste em: leucemia linfocítica crônica, linfoma folicular, linfoma de célula do manto e linfoma de célula B grande difusa.
40. Uso de uma composição para o tratamento de um distúrbio associado à célula B caracterizado pelo fato de que a composição compreende: uma proteína conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, o ácido nucleico conforme definido na reivindicação 17, o vetor conforme definido na reivindicação 18, 19 ou 20, a célula conforme definida em qualquer uma das reivindicações 21 a 23, ou a composição farmacêutica conforme definida na reivindicação 24.
41. Uso de uma composição para o tratamento de um distúrbio do sistema imunológico caracterizado pelo fato de que a composição compreende: uma proteína conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, o ácido nucleico conforme definido na reivindicação 17, o vetor conforme definido na reivindicação 18, 19 ou 20, a célula conforme definida em qualquer uma das reivindicações 21 a 23, ou a composição farmacêutica conforme definida na reivindicação 24.
42. Uso, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que o distúrbio do sistema imune é uma doença autoimune, como artrite reumatoide.
43. Uso de uma célula imune caracterizado pelo fato de que compreende um receptor de antígeno quimérico (CAR) para o tratamento de câncer, em que o CAR compreende: um domínio de ligação de alvo que compreende um DD que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste na SEQ ID NO: 11-949, ou 950, e, opcionalmente, em que o domínio de ligação de alvo se liga especificamente a um alvo de interesse expressado por uma célula de câncer, um domínio transmembranar e um domínio intracelular; em que o domínio intracelular compreende um domínio de sinalização, em que, mediante administração a um indivíduo que tem câncer, o domínio de ligação de alvo se liga especificamente ao alvo de interesse expresso por uma célula de câncer, e em que a ligação do alvo de interesse induz a célula imune para gerar sinais citotóxicos que resultam em efeitos citotóxicos na célula de câncer.
44. Uso, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que a célula imune é uma célula T ou uma célula exterminadora natural (NK).
BR112020009136-7A 2017-11-14 2018-11-14 polipeptídeos que contêm domínio d e usos dos mesmos BR112020009136A2 (pt)

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