BR112020008484A2 - derivados de sulfonamida aromática para tratamento de derrame isquêmico - Google Patents

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Abstract

DERIVADOS DE SULFONAMIDA AROMÁTICA PARA TRATAMENTO DE DERRAME ISQUÊMICO. Um composto da fórmula (I) (I) ou um N-óxido, um sal, um hidrato, um solvato, um tautômero ou um estereoisômero do composto ou um sal do referido N-óxido, tautômero ou estereoisômero para uso no tratamento ou profilaxia de isquemia cerebral, lesão cerebral isquêmica, derrame isquêmico (IS), derrame hemorrágico, lesão cerebral traumática, lesão da medula espinhal.

Description

DERIVADOS DE SULFONAMIDA AROMÁTICA PARA TRATAMENTO DE DERRAME
ISQUÊMICO Campo de aplicação da invenção
[001] A invenção refere-se a sulfonamidas aromáticas substituídas da fórmula (I) conforme descrito e definido neste documento, a composições e combinações farmacêuticas que compreendem os referidos compostos e ao uso dos compostos citados para fabricação de uma composição farmacêutica para tratamento ou profilaxia de isquemia cerebral, lesão cerebral isquêmica, derrame isquêmico (IS), derrame hemorrágico, lesão cerebral traumática, lesão da medula espinhal. A presente invenção, conforme descrito e definido aqui, refere-se àa composições farmacêuticas e combinações que compreendem um ingrediente ativo que é um antagonista ou um modulador alostérico negativo de P2X4 para tratamento ou profilaxia de isquemia cerebral, lesão cerebral isquêmica, derrame isquêmico (IS), derrame hemorrágico, lesão cerebral traumática, lesão da medula espinhal. O uso desses compostos na fabricação de uma composição farmacêutica para tratamento ou profilaxia de uma doença, em particular em mamíferos, como mas não limitado a doenças associadas a danos neuronais e inflamação cerebral ou na medula espinhal, lesão na medula espinhal ou cerebral isquêmica, como único agente ou em combinação com outros ingredientes ativos.
ANTECEDENTE DA INVENÇÃO
[002] O trifosfato de adenosina ATP é amplamente reconhecido como um importante neurotransmissor implicado em várias funções fisiológicas e patofisiológicas atuando por meio de diferentes subtipos de receptores purinérgicos (Burnstock 1993, Drug Dev Res 28:196-206; Burnstock 2011, Prog Neurobiol 95:229-274). Até a data, sete membros da família P2X foram clonados, compreendendo P2X1-7(Burnstock 2013, front Cell Neurosci 7:227). O receptor P2X4 é um canal iônico com ligação em ponte que é expressado em uma variedade de tipos de célula amplamente conhecidos por serem envolvidos em processos inflamatórios/imunes especificamente incluindo monócitos,
macrófagos, mastócitos e células micróglias (Wang et al., 2004, BMC Immunol 5:16; Brone et al., 2007 Immunol Lett 113:83-89). A ativação de P2X4 por ATP extracelular é conhecida, entre outras coisas, por levar à liberação de citocinas pró-inflamatórias e prostaglandinas (PGE2) (Bo et al., 2003 Cell Tissue Res 313:159- 165; Ulmann et al., 2010, EMBO Journal 29:2290-2300; de Ribero Vaccari et al., 2012, J Neurosci 32:3058-3066).
[003] O envolvimento de receptores P2X selecionados para ATP extracelular no início da morte da célula neuronal causado por privação de glucose/oxigênio tem sido investigado. Os estudos in vitro de culturas organotípicas a partir do hipocampo evidenciaram que P2X2 e P2X4 foram regulados para cima pela privação de glucose/oxigênio. Além disso, tem sido mostrado que as condições isquêmicas induziram perda neuronal específica não somente na área hipocampal, como também em culturas organotípicas corticais e estriatais, e os antagonistas do receptor P2 basilen blue e suramin impediram esses efeitos prejudiciais. As condições induzidas de hipoxia confirmaram a indução de receptores P2X no hipocampo de gerbilos em um experimento in vivo que foram submetidos à oclusão de carótida comum bilateral. Em particular, as proteínas de P2X2 e P2X4 se tornaram significativamente reguladas para cima, embora em amplitude diferente e fenótipos celulares diferentes. A indução foi confinada à camada de célula piramidal do subcampo CAl e à zona de transição do subcampo CA2 e foi coincidente com a área de dano neuronal. O P2X2 foi expressado em corpos de célula neuronal e fibras na camada de célula piramidal de CAl e strata oriens e radiatun. A imunofluorescência de P2X4 intensa foi localizada para as células micróglias. (F. Cavaliere et al., Neuroscience 120 (2003) 85-98).
[004] Em um modelo de hipoxia-isquemia em prematuros em camundongo no 3º dia pós-natal, foi caracterizado como a expressão de receptores P2X4 inotrópicos de purina mudam no pós- insulto cerebral. Após a hipoxia-isquemia, a expressão do receptor P2X4 aumento significativamente e foi associada a um aumento tardio na expressão de proteína da molécula-l do adaptador de ligação de cálcio ionizado indicativo da ativação da célula micróglia. A minociclina, um potente inibidor da micróglia, atenuou o aumento induzido pela hipoxia-isquemia na expressão do receptor P2X4. (Julie A. Wixey et al., Journal of Neuroimmunology 212 (2009) 35-43). Uma visão geral do que é conhecido sobre a expressão de P2X4 no CNS e evidência para funções patofisiológicas na neuroinflamação e dor neuropática é revisada em “P2X4 Receptor Function in the Nervous System and Current Breakthroughs in Pharmacology” [“Função do Receptor P2X4 no Sistema Nervoso e Atuais Progressos na Farmacologia] (L. Stokes et al., Frontiers in Pharmacology, maio de 2017 | Volume 8 | Artigo 291)
[005] Os documentos WO2015/088564 e WO2015/088565 apresentam os compostos de modulação do receptor P2X4, métodos de sua síntese, composições farmacêuticas que compreendem os compostos e métodos de seu uso. Os compostos de modulação do receptor P2X4 citados são úteis para tratamento, prevenção, e/ou cuidados com vários distúrbios, incluindo, sem limitação, dor crônica, neuropatia, doenças inflamatórias e distúrbios do sistema nervoso central.
[006] Não há referência a conhecimentos específicos sobre as sulfonamidas aromáticas substituídas da fórmula geral (1) conforme descrito e definido neste documento para ser usada na fabricação de uma composição farmacêutica para tratamento ou profilaxia de isquemia cerebral, lesão cerebral isquêmica, derrame isquêmico (IS), derrame hemorrágico, lesão cerebral traumática, lesão da medula espinhal, como um agente exclusivo ou em combinação com outros ingredientes ativos.
[007] Portanto, os inibidores de P2X4 da invenção atual representam compostos valiosos que devem complementar opções terapêuticas como agentes únicos ou em combinação com outros medicamentos.
DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se aos compostos da fórmula (1)
o od nt,
SÊ o | bx 1 e Jo JJ 9 (1)
[008] Xé CouN
[009] R! representa Re Rô : em que * indica o ponto de ligação do grupo citado com o restante da molécula e Rº, R%º representam independentemente um do outro flúor, cloro, metóxi ou hidrogênio;
[010] R representa
H [x NO ÃO O o. NA NO RN , , ou yr em que * indica o ponto de ligação do grupo citado com o restante da molécula e o grupo citado é opcionalmente substituído, de uma a duas vezes, por Rº+ sendo, independentemente um do outro, iguais ou diferentes.
[011] Rº representa, independentemente um do outro, halógeno, ciano, Ci-Caralquil, Ci-Ca-haloalquil, Ci-Carhidroxialquil, Ci-Caralcoxi, Ci-Ca-haloalcoxi, (Ci-C3;-alcoxi)-etil-, metoxi-etil- , Ca-Có-cicloalquil; ou um N-óxido, um sal, um hidrato, um solvato, um tautômero ou um estereoisômero do composto ou um sal do referido N-óxido, tautômero ou estereoisômero para uso no tratamento ou profilaxia de isquemia cerebral, lesão cerebral isquêmica, derrame isquêmico (IS), derrame hemorrágico, lesão cerebral traumática, lesão da medula espinhal.
[012] Um aspecto da invenção é o uso de um composto de fórmula geral (1) ou um estereoisômero, um tautômero, um N-óxido, um hidrato, um solvato ou seu sal, particularmente um sal aceitável farmaceuticamente ou uma mistura destes para a profilaxia ou tratamento de isquemia cerebral, lesão cerebral isquêmica, derrame isquêmico (IS), derrame hemorrágico, lesão cerebral traumática, lesão da medula espinhal.
[013] Outro aspecto da invenção refere-se ao uso de um composto de fórmula geral (1) ou um estereoisômero, um tautômero, um N- óxido, um hidrato, um solvato ou seu sal, particularmente um sal aceitável —“farmaceuticamente ou uma mistura destes para a preparação de um medicamento para profilaxia ou tratamento de isquemia cerebral, lesão cerebral isquêmica, derrame isquêmico (IS), derrame hemorrágico, lesão cerebral traumática, lesão da medula espinhal.
[014] A isquemia cerebral pode ocorrer por uma lesão cerebral não adquirida como parte de um distúrbio genético ou congênito, como síndrome do alcoolismo fetal, doença perinatal ou hipoxia perinatal; esses tipos de isquemia cerebral geralmente resultam em uma isquemia cerebral geral que afeta geralmente todo o cérebro.
[015] Outros exemplos de isquemia cerebral geral são aqueles que podem ocorrer por uma lesão cerebral adquirida, uma lesão que ocorre após o nascimento, causada por diferentes eventos, como hipoxia neonatal; hipoxia induzida, por ex., devido a doenças pulmonares ou cardíacas graves; hipoxia induzida devido a acidentes, por ex., perda de oxigênio durante o mergulho; doenças infecciosas do cérebro (virais, bacterianas, parasitárias) que podem causar forte edema cerebral e fortes reações imunes no cérebro; reações autoimunes; edema cerebral de diferentes razões, como, por ex., doença da altitude, abuso de drogas opioides, intoxicações, hipertensão maligna, bloqueios locais nas vias de fluido intersticial ou por obstrução do fluxo de líquido cefalorraquidiano (por exemplo, hidrocefalia obstrutiva).
[016] A isquemia cerebral também pode resultar de uma lesão cerebral adquirida e resultar em isquemia cerebral focal, na qual o evento isquêmico está localizado em uma área específica do cérebro; derrame isquêmico, derrame hemorrágico e lesão cerebral traumática são lesões cerebrais adquiridas comumente resultando em isquemia cerebral focal.
[017] Em particular, o derrame isquêmico é uma isquemia focal do cérebro que é associada a um ou mais infartos cerebrais focais como resultado de interrupção total ou parcial do suprimento de sangue arterial cerebral, geralmente devido a lesões ateroscleróticas ou eventos embólicos, o que leva à privação de oxigênio e glucose do tecido (isquemia). O derrame isquêmico cerebral é definido de acordo com a Classificação Internacional de Doenças (ICD), como disfunção neurológica focal causada por infarto focal em uma ou várias regiões do cérebro. Evidência de infarto agudo pode ser obtida a partir de a) sintoma com duração de mais de 24 horas ou b) neuroimagem ou outra técnica na área clinicamente relevante do cérebro. (WHO ICD1l1:https://icd.who.int/browsell/1- m/ent/http%3a%2f%2fid.who.int$2ficd%t2fentity%2f636274910)
[018] O derrame hemorrágico ocorre devido a um aneurisma cerebral rompido intracerebral ou subaracnoideo ou um vazamento de vaso sanguíneo enfraquecido subitamente e que leva a uma isquemia focal com interferências da função cerebral. O sangue se espalha dentro ou ao redor de uma área definida do cérebro e cria inchaço, pressão e isquemia, danificando células e tecido cerebral.
[019] A lesão cerebral traumática (TBI) é uma doença que leva principalmente a uma isquemia focal que ocorre quando uma força externa lesiona o cérebro. A TBI pode ser classificada com base na gravidade (baixa, moderada e grave) e no mecanismo (lesão da cabeça fechada ou com penetração). As TBIs de gravidade baixa e moderada levam principalmente a contusões cerebrais de diferentes graus, causando edema associado à isquemia cerebral. As TBIS moderadas e graves (fechada e de penetração no crânio levam a lesões politraumáticas (por ex., destruição de vasos, sangramento intracraniano, destruição do tecido cerebral) que são todas associadas a condições isquêmicas nas regiões afetadas do cérebro.
[020] Um aspecto da invenção são os compostos da fórmula (1), como descrito nos exemplos, como caracterizado por seus nomes no título e suas estruturas, bem como subcombinações de todos os resíduos especificamente divulgados nos compostos dos exemplos.
[021] Outro aspecto da invenção refere-se em especial ao uso de 2- (2-Clorofenil)-N-[4- (A4-ciano-lH-pirazol-1-il)-3- sulfamoilfenil]acetamida ou um estereoisômero, um tautômero, um N-óxido, um hidrato, um solvato ou seu sal, particularmente um sal aceitável farmaceuticamente ou uma mistura destes para a preparação de um medicamento para profilaxia ou tratamento de isquemia cerebral, lesão cerebral isquêmica, derrame isquêmico (IS), derrame hemorrágico, lesão cerebral traumática, lesão da medula espinhal.
[022] Outro aspecto da invenção são os compostos da fórmula (1), que estão presentes como seus sais, particularmente como sais farmacêuticos aceitáveis.
[023] Outro aspecto da presente invenção refere-se a uma formulação parenteral de um composto de fórmula geral (I) ou um estereoisômero, um tautômero, um N-óxido, um hidrato, um solvato ou seu sal, particularmente um sal aceitável farmaceuticamente ou uma mistura dos mesmos. Mais particularmente, a presente invenção refere-se a uma formulação parenteral de 2- (2- Clorofenil)-N-[4- (4-ciano-lH-pirazol-1-il)-3- sulfamoilfenil]acetamida ou um estereoisômero, um tautômero, um N-óxido, um hidrato, um solvato ou seu sal, particularmente um sal aceitável farmaceuticamente.
[024] De acordo com a presente invenção, uma fórmula parenteral de um composto da fórmula geral (I) e mais particularmente de 2- (2-Clorofenil)-N-[4- (4-ciano-lH-pirazol-1-il)-3- sulfamoilfenil]acetamida ou um estereoisômero, um tautômero, um N-óxido, um hidrato, um solvato ou seu sal, particularmente um sal aceitável farmaceuticamente ou uma mistura destes é uma formulação parenteral para administração intravenosa.
[025] Deve ser compreendido que a presente invenção está relacionada a qualquer subcombinação em uma representação ou aspecto da presente invenção dos compostos da fórmula geral (1) supra.
[026] Outra representação da invenção são compostos de acordo com as reivindicações conforme divulgado na seção de reivindicações, na qual as definições são limitadas de acordo com as definições preferenciais ou mais preferenciais, conforme divulgado abaixo ou especificamente resíduos divulgados dos compostos exemplificados e suas subcombinações. Definições
[027] Os constituintes que são opcionalmente substituídos como determinado neste documento podem ser substituídos, exceto se observado de outra maneira, uma ou mais vezes, independentemente uns dos outros em qualquer posição possível. Quando ocorre alguma variável mais de uma vez em qualquer constituinte, cada definição é independente. Por exemplo, quando R!, Rº, Rº, R%, R e/ou X ocorrem mais de uma vez em qualquer composto da fórmula (1), cada definição de Ri, Rà, Rº, R%º%, RU e X é independente.
[028] Se um constituinte for composto de mais de uma parte, por exemplo, Ci-Ca-alcoxi-Ci-Ca-alquil-, a posição de um possível substituinte pode estar em quaisquer dessas partes em qualquer posição adequada. Um hífen no início ou no fim do constituinte marca o ponto de ligação ao restante da molécula. Se um anel for substituído, o substituinte poderá estar em qualquer posição adequada do anel, também um átomo de nitrogênio do anel, se adequado.
[029] Além disso, um constituinte composto por mais de uma parte e compreendendo vários resíduos químicos, por ex., Ci-Ca-alcoxi- Ci-Caralquil ou fenil-Ci-Cs-alquil, deve ser lido da esquerda para a direita com o ponto de ligação com o restante da molécula na última parte (no exemplo mencionado anteriormente no resíduo C;- Caralquil)
[030] O termo "consistir" quando usado na especificação inclui "consistir em".
[031] Se for referido como "conforme citado acima" ou "citado acima" dentro da descrição, será referido a qualquer uma das divulgações feitas na especificação em qualquer página precedente.
[032] O termo "adequado", no sentido da invenção, significa que é possível quimicamente ser feito por métodos no conhecimento de uma pessoa qualificada.
[033] Conforme citado no texto deste documento, os termos têm preferencialmente os seguintes significados:
[034] O termo “halógeno”, “átomo de halógeno", ou "halo", ou "Hal" deve ser entendido como átomo de flúor, cloro, bromo ou iodo, preferencialmente, átomo de flúor ou cloro.
[035] o termo “Ci-Caralquil” deve ser entendido como preferencialmente significando um grupo de hidrocarboneto linear ou ramificado, saturado, monovalente com 1, 2, 3 ou 4 átomos de carbono, por exemplo, um grupo de metil, etil, propil, butil, isopropil, isobutil, sec-butil, tert-butil, particularmente 1, 2 ou 3 átomos de carbono (“Ci-C;-alquil”), por ex., um grupo de metil, etil, n-propil- ou iso-propil.
[036] O termo “Ci-Ca-haloalquil” deve ser compreendido com o significado preferencial de um grupo de hidrocarbonetos lineares ou ramificados, saturados, monovalentes nos quais o termo "C,-Ca- alquil" é definido supra, e no qual um ou mais átomos de hidrogênio são substituídos por um átomo de halógeno, de maneira idêntica ou diferente, isto é, um átomo de halógeno sendo independente um do outro. Particularmente, o átomo de halógeno citado é F. O grupo citado de Ci-Ca-haloalquil é, por exemplo, —CF3, -CHF7, -CH7F, -CF2CF3; ou-CH3CF3.
[037] o termo "Ci-Car-alcoxi" deve ser compreendido preferencialmente como um grupo de fórmula -O-alquil de hidrocarboneto linear ou ramificado, saturado monovalente no qual o termo "alquil" é definido supra, por ex. um grupo de metoxi, etoxi, n-propoxi, iso-propoxi, n-butoxi, iso-butoxi, tert-butoxi ou sec-butoxi ou um de seus isômeros.
[038] O termo "C,-Ca-haloalcóxi" deve ser compreendido com o significado preferencial de um grupo de Ci-Ca-alcóxi linear ou ramificado, saturado, monovalente, conforme definido supra, no qual um ou mais dos átomos de hidrogênio é substituído, de maneira idêntica ou diferente, por um átomo de halógeno. Particularmente, o átomo de halógeno citado é F. O grupo de C1i- Ca-haloalcóxi é, por exemplo, -OCF3, -OCHF;, -OCH;F, -OCF3xCF3, Ou —OCH2CF3.
[039] O termo "C,-Ca-hidróxialquil" deve ser compreendido como um grupo de hidrocarboneto linear u ramificado, saturado, monovalente no qual o termo "C,-Ca-alquil" é definido supra e no qual um ou mais átomos de hidrogênio são substituídos por um grupo de hidróxi, por ex., um grupo de hidróximetil, 1- hidróxietil, 2-hidróxietil, 1,2-di-hidróxietil, 3-hidróxipropil, 2-hidróxipropil, 2,3-di-hidróxipropil, 1,3-di-hidróxipropan-2- il, 3-hidróxi-2-metil-propil, 2-hidróxi-2-metil-propil, 1- hidróxi-2-metil-propil.
[040] O termo “C;-CÉ-cicloalquil” deve ser compreendido como um anel de hidrocarboneto saturado, monovalente, mono ou bicíclico que contém 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono (“C3-Cg-cicloalquil”). O grupo citado de C;3Ckçcicloalquil é, por exemplo, um anel de hidrocarboneto monocíclico, por ex., um anel de ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil ou ciclohexil ou hidrocarboneto bicíclico.
[041] O termo ",-Ca" conforme usado em todo este texto, por ex., no contexto da definição de "C,-Ca-alquil", "C,-Ca-haloalquil", "Ci-Caralcóxi" ou "Ci-Ca-haloalcóxi" deve ser compreendido como um grupo de alquil com um número finito de átomos de carbono de 1 a 4, isto é, 1, 2, 3 ou 4 átomos de carbono. Deve ser compreendido ainda que o termo "C;-C." citado deve ser interpretado como qualquer subvariação incluída, por ex., C1i-Ca, Ca-Ca, C3a-Ca, C1-C>o, C1-C3, particularmente C;-C», C1-C3, Ci-Ca; no caso de "“C,-Cks- haloalquil" ou “C,-C'a-haloalcóxi" ainda mais particularmente C;- Ca.
[042] Além disso, conforme usado aqui, o termo "C3-C'.", conforme usado em todo este texto, por ex., no contexto da definição de "C3;-Cg-cicloalquil", deve ser compreendido como um grupo de cicloalquil com um número finito de átomos de carbono de 3 a 6, isto é, 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono. Deve ser compreendido também que o termo citado "C3-CÁK" deve ser interpretado como qualquer subvariação que consiste em, por exemplo, C3-Cçe, Ca-Cs, C3-Cs, Ca-Cay Ca-Ce6, Cs-C6ç; particularmente C3-Cr.
[043] O termo "substituído" significa que um ou mais hidrogênios no átomo designado é substituído por uma seleção do grupo indicado, desde que a valência normal do átomo designado nas circunstâncias existentes não seja excedida e que a substituição resulte em um composto estável. As combinações de substituintes e/ou variáveis serão permitidas somente se essas combinações resultarem nos compostos estáveis.
[044] O termo "opcionalmente substituído" significa substituição opcional pelos grupos, radicais ou partes especificados.
[045] Substituinte do sistema de anéis significa um substituinte ligado a um sistema de anéis aromáticos ou não aromáticos que, por exemplo, substitui um hidrogênio disponível no sistema de anéis.
[046] Conforme usado aqui, o termo "um ou mais", por ex., na definição dos substituintes dos compostos das fórmulas gerais da presente invenção, é compreendido como "um, dois, três, quatro ou cinco" particularmente "um, dois, três ou quatro", mais particularmente "um, dois ou três", ainda mais particularmente "um ou dois".
[047] A invenção também inclui todas as variações isotópicas de um composto da invenção. Uma variação isotópica de um composto da invenção é definida como uma na qual pelo menos um átomo é substituído por um átomo que tenha o mesmo número atômico, mas uma massa atômica diferente da massa atômica geralmente ou predominantemente encontrada na natureza. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados em um composto da invenção incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, enxofre, flúor, cloro, bromo e iodo, como º?H (deutério), *ºH (trítio), UC, VC, “EC, *N, VO, 1%0, 32P, 33p, 33S, 315, 35S, 36S, 16F, 36C]l, 8ºBr, 1231, 1241, 1251, 12ºT e 31, respectivamente. Determinadas variações isotópicas de um composto da invenção, por exemplo, aquelas em que um ou mais isótopos radioativos, como *H ou '*C são incorporados, são úteis nos estudos de distribuição de droga e/ou tecido de substrato. Os isótopos de tritiado e carbono-14, isto é, 14C, são particularmente preferenciais por sua facilidade de preparação e capacidade de detecção. Além disso, a substituição com isótopos, como deutério, pode gerar determinadas vantagens terapêuticas que resultam da maior estabilidade metabólica, por exemplo, aumento da meia vida in vivo ou necessidade de dosagem reduzida e, consequentemente, pode ser preferencial em algumas circunstâncias. As variações isotópicas de um composto da invenção geralmente podem ser preparadas pelos procedimentos convencionais conhecidos por um especialista na arte pelos métodos ilustrativos ou pelas preparações descritas nos exemplos daqui por diante usando as variações isotópicas de reagentes adequados.
[048] Onde a forma no plural das palavras, compostos, sais, polimorfos, hidratos, solvatos e semelhantes, for usada neste documento, isso indicará também um único composto, sal, polimorfo, isômero, hidrato, solvato ou similar.
[049] "Composto estável" ou "estrutura estável" significa um composto que é robusto o bastante para resistir ao isolamento em um nível útil de pureza com base na mistura de uma reação e formulação em um agente terapêutico eficiente.
[050] Os compostos desta invenção podem conter um ou mais centros assimétricos, dependendo do local e da natureza dos vários substituintes desejados. os átomos de carbono assimétricos podem estar presentes na configuração (R) ou (S), resultando nas misturas racêmicas no caso de um único centro assimétrico e misturas diastereoméricas no caso de vários centros assimétricos. Em determinadas instâncias, a assimetria também pode estar presente devido à rotação restrita sobre uma determinada ligação, por exemplo, a ligação central adjacente a dois anéis aromáticos substituídos dos compostos especificados.
[051] Os substituintes em um anel também podem estar presentes na forma cis ou trans. A intenção é que todas essas configurações (incluindo enantiômeros e diastereômeros) sejam incluídas no escopo da presente invenção.
[052] Os compostos preferenciais são aqueles que produzem a atividade biológica mais desejável. os isômeros e os estereoisômeros separados, puros ou parcialmente purificados ou as misturas racêmicas ou diastereoméricas dos compostos desta invenção também estão incluídos no escopo da presente invenção. A purificação e a separação desses materiais pode ser realizada por técnicas padrão conhecidas na arte.
[053] Os isômeros óticos podem ser obtidos por resolução das misturas racêmicas de acordo com os processos convencionais, por exemplo, pela formação de sais diastereoisoméricos que usam um ácido oticamente ativo ou base ou formação de diastereômeros covalentes. Exemplos de ácidos apropriados são ácido tartárico, diacetiltartárico, ditoluoiltartárico e canforsulfônico. As misturas de diastereoisômeros podem ser separadas em seus diastereoisômeros “individuais com base em suas diferenças físicas e/ou químicas por métodos conhecidos na arte, por exemplo, por cromatografia ou cristalização fracionada. As bases ou os ácidos oticamente ativos são liberados dos sais diastereoméricos separados. Um processo diferente para separação de isômeros óticos envolve o uso de cromatografia quiral (por ex., colunas HPLC quirais), com ou sem derivação, escolhida de maneira ideal para maximizar a separação dos enantiômeros. As colunas HPLC quirais adequadas são fabricadas pela Diacel, por ex., Chiracel OD e Chiracel OJ entre muitas outras, todas rotineiramente selecionáveis. As separações enzimáticas, com ou sem derivação, também são úteis. Os compostos oticamente ativos desta invenção podem ser igualmente obtidos por sínteses quirais que utilizam materiais iniciais oticamente ativos.
[054] Para limitar os diferentes tipos de isômeros de uns dos outros, é feita referência às Regras de IUPAC, seção E (Pure Appl Chem 45, 11-30, 1976).
[055] A presente invenção inclui todos os estereoisômeros possíveis dos compostos da invenção, como estereoisômeros únicos ou qualquer mistura dos estereoisômeros citados, por ex., isômeros (R) ou (S) ou isômeros (E) ou (27) em qualquer proporção. Isolamento de um único estereoisômero, por ex., um único enantiômero ou diastereômero de um composto da presente invenção pode ser obtido por qualquer estado adequado do método da arte, como cromatografia, especialmente cromatografia quiral, por exemplo.
[056] Além disso, os compostos da presente invenção podem existir como tautômeros. Por exemplo, qualquer composto da presente invenção que contém uma parte de pirazol como um grupo de heteroaril, por exemplo, pode existir como um tautômero de 1H ou um tautômero de 2H ou até mesmo uma mistura em qualquer quantidade dos dois tautômeros ou uma parte de triazol, por exemplo, pode existir como um tautômero de 1H, um tautômero de 2H ou um tautômero de 4H ou até mesmo uma mistura em qualquer quantidade dos tautômeros citados de 1H, 2H e 4H, ou seja:
N N N A “v Z “NH CÃ “N N— N=/ NA
H 1H-tautômero 2H-tautômero 4H-tautômero.
[057] A presente invenção inclui todos os tautômeros possíveis dos compostos da invenção, como tautômeros únicos ou qualquer mistura dos tautômeros citados em qualquer proporção.
[058] Além disso, os compostos da presente invenção podem existir como N-óxidos que são definidos no caso em que pelo menos um nitrogênio dos compostos da presente invenção está oxidado. A presente invenção inclui todos esses N-óxidos possíveis.
[059] A presente invenção também está relacionada a formas úteis dos compostos conforme divulgado aqui, como metabólitos, hidratos, solvatos, pró-fármacos, sais, em particular sais aceitáveis farmaceuticamente, ésteres hidrolisáveis e coprecipitados.
[060] Os compostos da presente invenção podem existir como um hidrato, ou como um solvato, no qual os compostos da presente invenção contêm solventes polares, em particular, água, metanol ou etanol, por exemplo, como elemento estrutural da gelosia de cristal dos compostos. A quantidade de solventes polares, em particular, água, pode existir em uma proporção estequiométrica ou não estequiométrica. No caso dos solvatos estequiométrico, por ex., um hidrato, hemi-, (semi-), mono-, sesqui-, di-, tri-, tetra-, penta- etc., os solvatos ou os hidratos, respectivamente, são possíveis. A presente invenção inclui todos esses hidratos ou solvatos.
[061] Além disso, os compostos da presente invenção podem existir na forma livre, por exemplo, como uma base livre, ou como um ácido livre, ou como um zwitterion, ou pode existir na forma de um sal. O sal mencionado pode ser qualquer sal, sal de adição orgânico ou inorgânico, particularmente qualquer sal orgânico ou inorgânico aceitável farmaceuticamente, usado geralmente em farmácia.
[062] O termo "sal aceitável farmaceuticamente" se refere a um sal de adição ácida inorgânico ou orgânico não tóxico de um composto da presente invenção. Por exemplo, consulte S. M. Berge, et al. “Pharmaceutical Salts,” J. Pharm. Sci. 1977, 66, 1-19.
[063] Um sal aceitável farmaceuticamente dos compostos da presente invenção pode ser, por exemplo, um sal de adição ácida de um composto da presente invenção portador de um átomo de nitrogênio, em uma cadeia ou em um anel, por exemplo, que seja básico o suficiente, como um sal de adição ácida com um ácido inorgânico, como ácido clorídrico, hidrobrômico, hidroiódico, sulfúrico, bissulfúrico, fosfórico ou nítrico, por exemplo, ou com um ácido orgânico, como o ácido fórmico, acético, acetoacético, pirúvico, trifluoroacético, propiônico, butírico, hexanoico, heptanoico, undecanoico, láurico, benzoico, salicíclico, 2-(4-hidroxibenzoil)-benzoico, canfórico, cinâmico, ciclopentanopropiônico, diglucônico, 3-hidróxi-2-naftoico, nicotínico, pamoico, pectínico, perssulfúrico, 3- fenilpropiônico, Ppícrico, piválico, 2-hidróxietanossulfonato, itacônico, sulfâmico, trifluorometanossulfônico, dodecilssulfúrico, etanossulfúrico, benzenossulfônico, para- toluenossulfônico, metanossulfônico, 2-naftalenossulfônico, naftalinodissulfônico, ácido canforssulfônico, cítrico,
tartárico, esteárico, lático, oxálico, malônico, Ssuccínico, málico, adípico, algínico, maleico, fumárico, Dglucônico, mandélico, ascórbico, glucoheptanoico, glicerofosfórico, aspártico, sulfossalicílico, semissulfúrico ou ácido tiociânico, por exemplo.
[064] Além disso, outro sal aceitável farmaceuticamente de um composto da presente invenção que é acídico o suficiente é um sal de metal alcalino, por exemplo, um sal de sódio ou potássio, um sal de metal alcalino terroso, por exemplo, um sal de cálcio ou magnésio, um sal de amônio ou um sal com uma base orgânica que produz um cátion aceitável fisiologicamente, por exemplo, um sal com N-metilglucamina, dimetilglucamina, etilglucamina, lisina, diciclohexilamina, 1,6-hexadiamina, etanolamina, glucosamina, sarcosina, serinol, tris-hidróxi-metil-aminometano, aminipropandiol, base sofak, l1-amino-2,3,4-butantriol. Além disso, o nitrogênio básico que contém grupos pode ser quaternizado com esses agentes, como haletos de alquil inferiores, como cloretos de metil, etil, propil e butil, brometos e iodetos; dialquil sulfatos, como dimetil, dietil e dibutil sulfato e diamil sulfatos, haletos de cadeia longa, como decil, lauril, miristil e cloretos de estearil, brometos e iodetos, haletos de aralquil, como benzil e brometos de fenetil e outros.
[065] Os especialistas na arte reconhecerão que os sais de adição ácida dos compostos reivindicados podem ser preparados pela reação dos compostos com o ácido inorgânico ou orgânico apropriado por qualquer um dos vários métodos conhecidos. Como alternativa, os sais de metal alcalino terrosos e álcali dos compostos acídicos da invenção são preparados pela reação dos compostos da invenção com a base apropriada por meio de vários métodos conhecidos.
[066] A presente invenção inclui todos os sais possíveis dos compostos da invenção, como sais únicos ou qualquer mistura dos sais citados em qualquer proporção.
[067] Neste texto, em particular na Seção Experimental, para a síntese de intermediários e dos exemplos da presente invenção,
quando um composto é citado como uma forma de sal com a base ou o ácido correspondente, a composição estequiométrica exata da forma de sal citada, conforme obtida pela preparação respectiva e/ou processo de purificação é, na maioria dos casos, desconhecida.
[068] Exceto se especificado de outra forma, os sufixos para os nomes químicos ou fórmulas estruturais, como "hidrocloreto", "trifluoroacetato", "sal de sódio" ou "x HCl", "x CF3COOH", "x Nat", por exemplo, devem ser compreendidos como uma especificação não estequiométrica, mas exclusivamente como uma forma de sal.
[069] Isso se aplica de maneira semelhante aos casos em que os intermediários da síntese ou os compostos do exemplo ou seus sais foram obtidos, pela preparação e/ou processos de purificação descritos, como solvatos, por ex., hidratos com (se definida) composição estequiométrica desconhecida.
[070] os sais incluem sais insolúveis em água e, particularmente, solúveis em água.
[071] Além disso, os derivados dos compostos de fórmula (1) e seus sais que são convertidos em um composto da fórmula (I) ou um seu sal em um sistema biológico (bioprecursores ou pró- fármacos) são abrangidos pela invenção. O referido sistema biológico é, por ex., um organismo mamífero, particularmente um paciente humano. O bioprecursor é, por exemplo, convertido em um composto da fórmula (I) ou em seu sal por processos metabólicos.
[072] Além disso, a presente invenção inclui todas as formas cristalinas possíveis ou polimorfos dos compostos da presente invenção, como polimorfos únicos ou como uma mistura de um ou mais polimorfos em qualquer proporção.
[073] No contexto das propriedades dos compostos da presente invenção, o termo "perfil farmacocinético" significa um único parâmetro ou uma combinação dos mesmos, incluindo permeabilidade, biodisponibilidade, exposição e parâmetros farmacodinâmicos, como duração ou magnitude do efeito farmacológico, conforme medido em um experimento adequado. Os compostos com perfis farmacocinéticos melhorados podem, por exemplo, ser utilizados em doses mais baixas para obter o mesmo efeito, podem atingir uma duração de ação mais longa ou um pode atingir uma combinação de ambos os efeitos.
[074] Foi constatado, e isso constitui a base da presente invenção, que os compostos citados da presente invenção têm propriedades surpreendentes e vantajosas.
[075] Em particular, verificou-se surpreendentemente que os compostos, de acordo com a presente invenção, são efetivamente ativos como antagonista ou modulador alostérico negativo de P2X4 no tratamento de derrame isquêmico.
[076] Um modulador alostérico é uma substância que influencia (modula) indiretamente os efeitos de um agonista ou agonista inverso em uma proteína alvo, por exemplo, um receptor. Os moduladores alostéricos ligam-se a um local distinto do local de ligação do agonista ortostérico. Geralmente eles induzem uma mudança conformacional dentro da estrutura da proteína. Um modulador negativo (NAM) reduz os efeitos do ligando ortostérico, mas é inativo na ausência do ligando ortostérico. Utilidade comercial e indicações médicas . Como mencionado acima, verificou-se surpreendentemente que os compostos da presente invenção são efetivamente ativos como um antagonista ou um modulador alostérico negativo de P2X4. Um composto da fórmula geral (1) ou um N-óxido, um sal, um tautômero ou um estereoisômero do referido composto, ou um sal do referido N-óxido, tautômero ou estereoisômero, particularmente um sal aceitável farmaceuticamente do mesmo ou uma mistura do mesmo, como descrito e definido aqui, é adequado para uso no tratamento ou profilaxia de isquemia cerebral, lesão cerebral isquêmica, derrame isquêmico (IS), derrame hemorrágico, lesão cerebral traumática ou lesão da medula espinhal.
[077] A presente invenção refere-se ainda a um método para usar os compostos da fórmula geral (II) ou um N-óxido, um sal, um tautômero ou um estereoisômero do referido composto ou um sal do referido N-óxido, tautômero ou estereoisômero, particularmente um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma mistura do mesmo para tratar distúrbios e doenças de mamíferos associados a dor e inflamação.
[078] O termo "tratamento" conforme estabelecido em todo este documento é usado de maneira convencional, por ex., tratamento ou cuidado de um paciente com a finalidade de combater, aliviar, reduzir, abrandar, melhorar a condição de uma doença, etc. de uma doença ou distúrbio.
[079] De preferência, o método de tratamento das doenças mencionadas acima não se limita ao tratamento da referida doença, mas também inclui o tratamento de dor e inflamação relacionada ou associada às doenças citadas. Composições farmacêuticas dos compostos da invenção
[080] Esta invenção também está relacionada a composições farmacêuticas que contêm um ou mais compostos da presente invenção. Essas composições podem ser utilizadas para alcançar o efeito farmacológico desejado pela administração a um paciente necessitado. Para a finalidade desta invenção, um paciente é um mamífero, inclusive humano, que necessita de tratamento para a condição particular ou doença.
[081] Portanto, a presente invenção inclui composições farmacêuticas que consistem em um portador ou auxiliar aceitável farmaceuticamente e em uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um composto, ou seu sal, da presente invenção.
[082] Outro aspecto da invenção é uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um composto da fórmula (1) e um auxiliar farmaceuticamente aceitável para o tratamento de uma doença mencionada acima.
[083] Um portador ou auxiliar aceitável farmaceuticamente é preferencialmente um portador não tóxico e inócuo a um paciente em concentrações consistentes com a atividade eficaz de um ingrediente ativo para que qualquer efeito colateral atribuível ao portador não anule os efeitos benéficos do ingrediente ativo. Portadores e auxiliares são todos os tipos de aditivos que ajudam a composição a ser adequada para administração.
[084] Uma quantidade farmaceuticamente eficaz do composto é preferencialmente a quantidade que produz um resultado ou exerce a influência desejada na condição particular que está sendo tratada.
[085] Os compostos da presente invenção podem ser administrados com portadores ou auxiliares aceitáveis farmaceuticamente bem conhecidos na arte usando qualquer forma unitária de dosagem efetiva convencional, inclusive preparações de liberação imediata, lenta e regulada por via oral, parenteral, tópica, nasal, sublingual, retal e similares.
[086] Para a administração oral, os compostos podem ser formulados em preparações sólidas ou líquidas, como cápsulas, pílulas, pastilhas, comprimidos, dissolúveis, pós, soluções, suspensões ou emulsões e podem ser preparados de acordo com os métodos conhecidos na arte para a fabricação de composições farmacêuticas. As formas sólidas de dosagem unitária podem ser uma cápsula do tipo gelatinosa de revestimento rígido ou maleável, contendo auxiliares, por exemplo, surfactantes, lubrificantes e recheio inerte, como lactose, sucrose, fosfato de cálcio e amido de milho.
[087] Em outra representação, os compostos desta invenção podem ser fabricados em tabletes com bases convencionais para tabletes, como lactose, sucrose e amido de milho em combinação com ligadores, como acácia, amido de milho ou gelatina; os agentes desintegrantes se destinam a auxiliar a separação e a dissolução do tablete após a administração, como amido de batata, ácido algínico, amido de milho e goma qgqguar, goma alcantira, acácia; os lubrificantes se destinam a melhorar à o fluxo de granulação do tablete e evitar a aderência de material do tablete às superfícies dos perfuradores e moldadores do tablete, por exemplo, talco, ácido esteárico ou magnésio, cálcio ou estearato de zinco, tinturas, agentes corantes e aromatizantes como hortelã-pimenta, óleo de gaultéria Ou aromatizante de cereja destinados a aprimorar as qualidades estéticas dos tabletes e torná-los mais aceitáveis ao paciente. Os excipientes adequados para uso nas formas de dosagem oral líquida incluem fosfato dicálcio e diluentes, como água e alcoóis, por exemplo, etanol, álcool benzílico, alcoóis de polietileno alcoóis, com ou sem a adição de um surfactante aceitável farmaceuticamente, agente de suspensão ou agente emulsificante. Vários outros materiais podem estar presentes como revestimentos ou modificar a forma física da unidade de dosagem. Por exemplo, tabletes, pílulas ou cápsulas podem ser revestidos com goma-laca, açúcar ou ambos.
[088] Pós e grânulos dispersíveis são adequados para o preparo de uma suspensão aquosa. Eles fornecem o ingrediente ativo na mistura com um agente dispersante ou umectante, um agente de suspensão e um ou mais conservantes. Os agentes dispersantes ou umectantes e de suspensão são exemplificados por aqueles já citados anteriormente. Excipientes adicionais, por exemplo, os agentes adoçantes, aromatizantes e corantes descritos anteriormente, também podem estar presentes.
[089] As composições farmacêuticas desta invenção também podem estar na forma de emulsões de óleo em água. A fase oleosa pode ser um óleo vegetal, como parafina líquida ou uma mistura de óleos vegetais. Os agentes emulsificantes podem ser (1) gomas produzidas naturalmente, como goma acácia e goma alcantira, (2) fosfatídeos produzidos naturalmente, como soja e lecitina, (3) ésteres ou ésteres parciais derivados de ácidos graxos e anidridos de hexitol, por exemplo, mono-oleato de sorbitano, (4) produtos de condensação dos ésteres parciais citados com óxido de etileno, por exemplo, mono-oleato de sorbitano polioxietileno. As emulsões também — podem conter agentes adoçantes e aromatizantes.
[090] As suspensões oleosas podem ser formuladas suspendendo-se o ingrediente ativo em um óleo vegetal como, por exemplo, óleo de aráquis, óleo de oliva, óleo de gergelim ou óleo de coco em um óleo mineral, como parafina líquida. As suspensões de óleo podem conter um agente espessante, como, por exemplo, cera virgem, parafina rígida ou álcool cetílico. As suspensões também podem conter um ou mais conservantes, por exemplo, etil ou n- propil p-hidróxibenzoato; um ou mais agentes corantes; um ou mais agentes aromatizantes; e um ou mais agentes adoçantes, como sucrose ou sacarina.
[091] Os xaropes e elixires podem ser formulados com agentes adoçantes, como, por exemplo, glicerol, propileno qglicol, sorbitol ou sucrose. Essas formulações também podem conter um demulcente e conservante, como metil e propilparabenos, além de agentes aromatizantes e corantes.
[092] Os compostos desta invenção também podem ser administrados por via parenteral, ou seja, por exemplo, por meio subcutâneo, intravenoso, intraocular, intra-sinovial, intramuscular ou interperitoneal, como dosagens injetáveis do composto preferencialmente em um diluente aceitável fisiologicamente com um portador farmacêutico que pode ser um líquido estéril ou mistura de líquidos como água, soluções salinas, dextrose aquosa e açúcar relacionadas, um álcool, como etanol, isopropanol ou álcool hexadecílico, glicóis, como propileno glicol ou polietileno glicol, cetais de glicerol, como 2,2-dimetil-1,1- dioxolano-4-metanol, éteres, como poli(etileno glicol) 400, um óleo, um ácido graxo, um éster de ácido graxo ou um glicerídeo de ácido graxo ou um glicerídeo de ácido graxo acetilado, com ou sem a adição de um surfactante aceitável farmaceuticamente, como sabão ou detergente, agente de suspensão, como pectina, carbômeros, metilcelulose, hidróxipropilmetilcelulose ou carboximetilcelulose ou agente emulsificante e outros adjuvantes farmacêuticos.
[093] Óleos ilustrativos que podem ser usados nas formulações parenterais desta invenção são aqueles de petróleo, animal, vegetal ou origem sintética, por exemplo, óleo de amendoim, óleo de soja, óleo de gergelim, óleo de semente de algodão, óleo de milho, óleo de oliva, petrolato e óleo mineral. Os ácidos graxos adequados incluem ácido oleico, ácido esteárico, ácido isoesteárico e ácido mirístico. Os ésteres de ácidos graxos são, por exemplo, oleato de etila e isopropil miristato. Os sabões adequados incluem metal álcali de ácido graxo, amônio e sais de trietanolamina, e os detergentes adequados incluem detergentes catiônicos, por exemplo, haletos de dimetil dialquil amônio, haletos de alquil piridimiumy e acetatos de alquilamina; detergentes aniônico, por exemplo, alquil, aril e sulfonatos de olefino, éter e sulfatos de monoglicerídeo e sulfosuccinatos; detergentes não iônicos, por exemplo, óxidos de aminos graxos, alcanolamidas de ácido graxo e poli (oxietileno-oxipropileno)s ou óxido de etileno ou copolímeros de óxido de propileno; e detergentes anfotéricos, por exemplo, alquil-beta- aminopropionatos e sais de 2-alquilimidazolina amônio quaternário, bem como misturas.
[094] As composições .parenterais desta invenção conterão geralmente de aproximadamente 0,5% a aproximadamente 25% por peso do ingrediente ativo na solução. Mais particularmente, as composições parenterais de um composto da fórmula (TI) de acordo com a invenção geralmente conterá de cerca de 0,5% a cerca de 20%, ou de cerca de 0,5% a cerca de 15%, ou de cerca de 1% a cerca de 12%, ou de cerca de 3% a cerca de 12%, ou de cerca de 5% a cerca de 10 % por peso do ingrediente ativo na solução, sendo o referido composto em particular 2-(2-Clorofenil)-N-[4- (4-ciano-lH-pirazol-1-il)-3-sulfamoilfenil]acetamida ou um estereoisômero, um tautômero, um N-óxido, um hidrato, um solvato ou um sal do mesmo.
[095] Os conservantes e os tampões também podem ser usados de maneira vantajosa. Para minimizar ou eliminar irritação no local da injeção, essas composições podem conter um surfactante não iônico com um equilíbrio hidrófilo-lipófilo (HLB) preferencialmente de aproximadamente 12 a aproximadamente 17. A quantidade de surfactante nessa formulação varia preferencialmente de aproximadamente 5% a aproximadamente 15% por peso. O surfactante pode ser um único componente com o HLB acima ou pode ser uma mistura de dois ou mais componentes com o HLB desejado.
[096] O ilustrativo de surfactantes usados em formulações parenterais são a classe de ésteres de ácidos graxos de sorbitano, por exemplo, mono-oleato de sorbitano e os adutos de peso molecular elevado de óxido de etileno com uma base hidrofóbica, formada pela condensação de óxido de propileno com propileno glicol.
[097] As composições farmacêuticas podem estar na forma de suspensões aquosas estéreis injetáveis. Essas suspensões podem ser formuladas de acordo com os métodos conhecidos usando-se agentes dispersantes ou umectantes adequados e agentes de suspensão, como, por exemplo, carboximetilcelulose de sódio, metilcelulose, hidróxipropilmetil-celulose, alginato de sódio, polivinilpirrolidona, goma alcantira e goma acácia; agentes dispersantes ou umectantes que podem ser um fosfatídeo natural, como lecitina, um produto de condensação de um óxido de alquileno com um ácido graxo, por exemplo, polioxietileno estearato, um produto de condensação de óxido de etileno com um álcool alifático de cadeia longa, por exemplo, heptadeca- etileno-oxicetanol, um produto de condensação de óxido de etileno com um éster parcial derivado de um ácido graxo e um hexitol, como polioxietileno sorbitol mono-oleato ou um produto de condensação de um óxido de etileno com um éster parcial derivado de um ácido graxo e um anidrido de hexitol, por exemplo, polioxietileno sorbitano mono-oleato.
[098] A preparação injetável estéril também pode ser uma solução injetável estéril ou suspensão em um diluente ou solvente aceitável nãotóxico de maneira parenteral. Os diluentes e os solventes que podem ser empregados são, por exemplo, água, solução Ringer, soluções de cloreto de sódio isotônicas e soluções de glucose isotônicas. Além disso, os óleos fixados estéreis são empregados de modo convencional como solventes ou meio de suspensão. Para essa finalidade, qualquer óleo fixado suave pode ser empregado, inclusive mono- ou diglicerídeos sintéticos. Além disso, os ácidos graxos, como ácido oleico podem ser usados na preparação dos injetáveis.
[099] Uma composição da invenção também pode ser administrada na forma de supositórios para administração retal da droga. Essas composições podem ser preparadas por meio da mistura da droga com um excipiente adequado não irritante que é sólido a temperaturas comuns, mas líquido à temperatura retal e, portando, derreterá no reto para liberar a droga. Esses materiais são, por exemplo, manteiga de cacau e polietileno glicol.
[100] Formulações de liberação controlada para administração parenteral incluem formulações lipossomais, microesfera polimérica e gel polimérico que são conhecidos na arte.
[101] Pode ser desejável ou necessário introduzir a composição farmacêutica para o paciente via dispositivo de aplicação mecânica. A construção e o uso de dispositivos de distribuição mecânica para a aplicação de agentes farmacêuticos é bem conhecida na arte.' Técnicas diretas para administração, por exemplo, administrar uma droga diretamente no cérebro geralmente envolvem a colocação de um cateter de aplicação de droga no sistema ventricular do paciente para contornar a barreira sangue-cérebro. Um sistema de aplicação implantável, usado para o transporte de agentes para as regiões anatômicas específicas do corpo, é descrito na Patente Norte-Americana Nº 5.011.472, emitida em 30 de abril de 1991.
[102] As composições da invenção também podem conter outros ingredientes convencionais de compostos aceitáveis farmaceuticamente, geralmente “referidos como portadores ou diluentes, conforme necessário ou desejado. Os procedimentos convencionais para o preparo dessas composições nas formas de dosagem apropriadas podem ser utilizados.
[103] Esses ingredientes e procedimentos incluem os descritos nas referências a seguir, cada um incluído aqui para referência. Powell, M.F. et al., "Compendium of Excipients for Parenteral Formulations" PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 1998, 52(5), 238-311 ; Strickley, R.G "Parenteral Formulations of Small Molecule Therapeutics Marketed in the United States (1999) -Part-1" PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 1999, 53(6), 324-349 ; e Nema, S. et al., "Excipients and Their Use in Injectable Products" PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 1997, 51(4), 166-171.
[104] Os ingredientes farmacêuticos usados que podem ser usados como apropriados à fórmula da composição para sua via pretendida de administração incluem:
agentes acidificantes (exemplos incluem, sem limitação, ácido acético, ácido cítrico, ácido fumárico, ácido clorídrico, ácido nítrico); agentes alcalinizantes (exemplos incluem, sem limitação, solução de amônia, carbonato de amônio, dietanolamina, monoetanolamina, hidróxido de potássio, borato de sódio, carbonato de sódio, hidróxido de sódio, trietanolamina, trolamina); adsorventes (exemplos incluem, sem limitação, celulose em pó e carvão ativado) 1; propelentes de aerossol (exemplos “incluem, sem limitação, dióxido de carbono, CCl3;F>x, F2ClC-CClF, e CC1LF;3) agentes de deslocamento de ar - exemplos incluem, sem limitação, nitrogênio e argônio; conservantes —“antifúngicos (exemplos incluemy sem limitação, ácido benzoico, butilparabeno, etilparabeno, metilparabeno, propilparabeno, benzoato de sódio); conservantes antimicrobianos (exemplos incluem, sem limitação, cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio, álcool benzílico, cloreto de cetilpiridínio, clorobutanol, fenol, álcool feniletílico, nitrato de fenilmercúrico e timerosal); antioxidantes (exemplos incluem, sem limitação, ácido ascórbico, palmitato de ascorbil, hidróxianisole butilado, hidróxitolueno butilado, ácido hipofósforo, monotioglicerol, propil galato, ascorbato de sódio, bissulfeto de sódio, sulfoxilato formaldeído de sódio, metabissulfeto de sódio); materiais de ligação (exemplos incluem, sem limitação, polímeros de bloqueio, borracha natural e sintética, poliacrilatos poliuretanos, silicones, polisiloxanos e copolímeros de estireno-butadieno); agentes de tamponamento (exemplos “incluem, sem limitação, metafosfato de potássio, fosfato de dipotássio, acetato de sódio, citrato de sódio anídrico e di-hidrato de citrato de sódio); agentes portadores (exemplos incluem, sem limitação, xarope de acácia, xarope aromático, elixir aromático, xarope de cereja, xarope de cacau, xarope de laranja, xarope, óleo de milho, óleo mineral, óleo de amendoim, óleo de gergelim, injeção de cloreto de sódio bacteriostático e água bacteriostática para injeção); agentes quelantes (exemplos incluem, sem limitação, ededato dissódio e ácido edético); corantes (exemplos incluem, sem limitação, FD&C Vermelho No. 3, FD&C Vermelho No. 20, FD&C Amarelo No. 6, FD&C Azul No. 2, D&C Verde No. 5, D&C Laranja No. 5, D&C Vermelho No. 8, caramelo e vermelho óxido de ferro); agentes clareadores (exemplos incluem, sem limitação, bentonita); agentes emulsificantes (exemplos incluem, sem limitação, acácia, cetomacrogol,álcool cetílico, gliceril monoestearato, lecitina, sorbitano mono-oleato, polioxietileno 50 monoestearato); agentes encapsulantes (exemplos incluem, sem limitação, gelatina e celulose acetato ftalato), aromatizantes (exemplos incluem, sem limitação, óleo de anis, óleo de canela, cacau, mentol, óleo de laranja, óleo de hortelã- pimenta e baunilha); umectantes (exemplos incluem, sem limitação, glicerol, propileno glicol e sorbitol); agentes pulverizantes (exemplos incluem, sem limitação, óleo mineral e glicerina); óleos (exemplos incluem, sem limitação, óleo de aráquis, óleo mineral, óleo de oliva, óleo de amendoim, óleo de gergelim e óleo vegetal); bases de pomadas (exemplos incluem, sem limitação, lanolina, pomada hidrofílica, pomada de polietileno glicol, petrolato, petrolato hidrofílico, pomada branca, pomada amarela e pomada de água de rosas); intensificantes de penetração (aplicação transdérmica) (exemplos incluem, sem limitação, monohidróxi ou poli-hidróxi alcoóis, alcoóis mono- ou polivalentes, alcoóis graxos saturados Ou insaturados, ésteres graxos saturados ou insaturados, ácidos dicarboxílicos saturados ou insaturados, 6óleos essenciais,
derivados de fosfatidil, cefalina, terpenos, amidas, éteres, cetonas e ureias), plasticizantes (exemplos incluem, sem limitação, dietil ftalato e glicerol); solventes (exemplos incluem, sem limitação, etanol, óleo de milho, óleo de semente de algodão, glicerol, isopropanol, óleo mineral, ácido oleico, óleo de amendoim, água purificada, água para injeção, água estéril para injeção e água estéril para irrigação); agentes endurecedores (exemplos incluem, sem limitação, álcool cetílico, cera de ésteres cetílicos, cera microcristalina, parafina, estearil álcool, cera branca e cera amarela); bases de supositório (exemplos incluem, sem limitação, manteiga de cacau e polietileno glicóis (misturas)); surfactantes (exemplos incluem, sem limitação, cloreto de benzalcônio, nonoxinol 10, oxtoxinol 9, polissorbato 80, lauril sulfato de sódio e sorbitano mono-palmitato); agentes de suspensão (exemplos incluem, sem limitação, ágar, bentonita, carbômeros, carboximetilcelulose sódica, hidróxietil celulose, hidróxipropil celulose, hidróxipropil metilcelulose, caulim, metilcelulose, alcantira e veegum); agentes adoçantes (exemplos incluem, sem limitação, aspartame, dextrose, glicerol, manitol, propileno glicol, sacarina sódica, sorbitol e sucrose); antiaderentes de tabletes (exemplos incluem, sem limitação, estearato de magnésio e talco); ligadores de tabletes (exemplos incluem, sem limitação, acácia, ácido algínico, carboximetilcelulose sódica, açúcar comprimível, etilcelulose, gelatina, glucose líquida, metilcelulose, polivinil pirrolidona sem ligação cruzada e amido pré- gelatinizado); diluentes de tabletes e cápsulas (exemplos incluem, sem limitação, fosfato de cálcio dibásico, caulim, lactose, manitol, celulose microcristalina, celulose em pó, carbonato de cálcio precipitado, carbonato de sódio, fosfato de sódio, sorbitol e amido);
agentes de revestimento de tabletes (exemplos incluem, sem limitação, glucose líquida, hidróxietil celulose, hidróxipropil celulose, hidróxipropil metilcelulose, metilcelulose, etilcelulose, celulose acetato ftalato e goma-laca); excipientes de compressão direta de tabletes (exemplos incluem, sem limitação, fosfato de cálcio dibásico); desintegrantes de tabletes (exemplos incluem, sem limitação, ácido algínico, carboximetilcelulose cálcica, celulose microcristalina, polacrilina potássica, polivinilpirrolidona de ligação cruzada, alginato de sódio, glicolato de amido de sódio e amido); glidantes de tabletes (exemplos incluem, sem limitação, sílica coloidal, amido de milho e talco); lubrificantes de tabletes (exemplos incluem, sem limitação, estearato de cálcio, estearato de magnésio, óleo mineral, ácido esteárico e estearato de zinco); opacificantes de tabletes/cápsulas (exemplos incluem, sem limitação, dióxido de titânio); agentes de polimento de tabletes (exemplos incluem, sem limitação, cera de carnaúba e cera branca); agentes —espessantes (exemplos “incluem, sem limitação, cera virgem, álcool cetílico e parafina); agentes tonificantes (exemplos incluem, sem limitação, dextrose e cloreto de sódio); agentes de aumento de viscosidade (exemplos incluem, sem limitação, ácido algínico, bentonita, carbômeros carboximetilcelulose sódica, metilcelulose, polivinil pirrolidona, alginato de sódio e alcantira); e agentes umectantes (exemplos incluem, sem limitação, heptadecaetileno oxicetanol, lecitinas, sorbitol mono-oleato, polioxietileno sorbitol mono-oleato e polioxietileno estearato).
[105] As composições farmacêuticas, de acordo com a presente invenção, podem ser ilustradas como segue:
[106] Solução estéril i.v.: Uma solução de 5 mg/ml do composto desejado desta invenção pode ser produzida com o uso de água esterilizada injetável, e o pH é ajustado se necessário. A solução é diluída para administração a 1 - 2 mg/ml com 5% dextrose estéril que é administrada como uma infusão i.v. por aproximadamente 60 minutos.
[107] Pó liofilizado para administração i.v.: Um preparado estéril pode ser obtido com (i) 100 - 1000 mg, do composto desejado desta invenção, como um pó liofilizado, (ii) 32 - 327 mg/ml de citrato de sódio e (iii) 300 - 3000 mg, Dextrano 40. A formulação é reconstituída com solução salina estéril ou 5% dextrose injetável a uma concentração de 10 a 20 mg/ml, que é diluída com solução salina ou 5% dextrose a 0,2 - 0,4 mg/ml e é administrada com bolo IV ou infusão IV durante 15 - 60 minutos.
[108] Suspensão intramuscular: A seguinte solução ou suspensão pode ser preparada para injeção intramuscular: 50 mg/ml do composto insolúvel em água desejado desta invenção mg/ml de carboximetilcelulose de sódio 4 mg/ml TWEEN 80 9 mg/ml de cloreto de sódio 9 mg/ml de álcool benzílico
[109] ápsulas de revestimento rígido: Um grande número de cápsulas unitárias é preparado preenchendo-se cápsulas de gelatina rígida de duas peças padrão, cada uma com 100 mg de ingrediente ativo em pó, 150 mg de lactose, 50 mg de celulose e 6 mg de estearato de magnésio.
[110] Cápsulas de gelatina maleável: Uma mistura de ingrediente ativo em um óleo digestível, como óleo de soja, óleo de semente de algodão ou óleo de oliva é preparada e injetada por meio de uma bomba de deslocamento positivo na gelatina derretida para formar cápsulas de gelatina maleável contendo 100 mg do ingrediente ativo. As cápsulas são lavadas e secadas. O ingrediente ativo pode ser dissolvido em uma mistura de polietileno glicol, glicerina e sorbitol para preparar uma mistura de remédio miscível em água.
[111] Tabletes: Um grande número de tabletes é preparado pelos procedimentos convencionais para que à unidade de dosagem seja 100 mg de ingrediente ativo, 0,2 mg de dióxido de silício, 5 mg de estearato de magnésio, 275 mg de celulose microcristalina, 11 mg de amido e 98,8 mg de lactose. Os revestimentos apropriados aquosos e não aquosos podem ser aplicados para aumentar a palatabilidade, melhorar o sabor e a estabilidade ou atrasar a absorção.
[112] Tabletes/Cápsulas de Liberação Imediata: Há formas de dosagem oral sólida fabricadas por processos novos e convencionais. Essas unidades são tomadas oralmente sem água para dissolução imediata e entrega da medicação. O ingrediente ativo é misturado em um líquido que contém ingredientes, como açúcar, gelatina, pectina e adoçantes. Esses líquidos são solidificados em tabletes ou determinados tipos de pílulas sólidos por técnicas de secagem a frio e extração no estado sólido. Os compostos da droga podem ser comprimidos com açúcares e polímeros de viscoelástico e termoelástico ou componentes efervescentes para produzir matrizes porosas destinadas à liberação imediata, sem a necessidade de água. Dose e administração
[113] Com base nas técnicas laboratoriais padrão conhecidas na avaliação dos compostos úteis para o tratamento de distúrbios e/ou doença, que são influenciados por P2X4, pelos testes de toxicidade padrão e ensaios farmacológicos padrão para determinação do tratamento das condições identificadas acima em mamíferos e pela comparação desses resultados com os resultados de medicamentos bem conhecidos que são usados para tratar essas condições. A dosagem eficaz dos compostos desta invenção pode realmente ser determinada para o tratamento de cada indicação desejada. A quantidade do ingrediente ativo a ser administrado no tratamento de uma dessas condições pode variar amplamente de acordo com essas considerações, como o composto particular e a unidade de dosagem empregada, o modo de administração, Oo período de tratamento, a idade e o sexo do paciente tratado e a natureza e a extensão da condição tratada.
[114] A quantidade total de um composto da fórmula I a ser administrada geralmente varia de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 50 mg/kg por peso corporal por dia, mais particularmente de cerca de 0,2 mg/kg a cerca de 30 mg/kg por peso corporal por dia, mais particularmente de cerca de 0,5 mg/kg a cerca de 15 mg/kg por peso corporal por dia. As programações de dosagem clinicamente úteis irá variar de dosagem de uma a três vezes por dia a uma vez a cada quatro semanas. Além disso, os "feriados de medicamento" nos quais o paciente não é dosado com uma droga por um determinado período podem ser benéficos ao equilíbrio geral entre o efeito farmacológico e a capacidade de tolerância. Uma dosagem única pode conter de aproximadamente 5 ma a aproximadamente 500 mg do ingrediente ativo, particularmente cerca de 25 mg a cerca de 150 mg e pode ser administrada uma ou mais vezes por dia ou menos de uma vez ao dia.
[115] De acordo com uma forma particular da representação da invenção, uma dosagem unitária oral para uma administração dos compostos da presente invenção inclui, mas não está limitada, a 0,5 mg/kg a cerca de 10 mg/kg de peso corporal uma a três vezes ao dia uma vez por semana.
[116] A dosagem diária média para administração por injeção, incluindo injeções intravenosas, intramusculares, subcutâneas e parenterais e o uso de técnicas de infusão serão de acordo com uma fórmula particular da representação da invenção de 0,5 a 50 mg/kg do peso corporal total.
[117] A administração da dosagem retal diária média preferencialmente será de 0,5 a 50 mg/kg do peso corporal total.
[118] A administração da dosagem tópica média diária preferencialmente será de 0,5 a 50 mg/kg administradas entre uma a quatro vezes ao dia.
[119] A administração da dosagem de inalação diária média preferencialmente será de 0,5 a 30 mg/kg do peso corporal total.
[120] É claro que a administração de dosagem inicial e continuada específica para cada paciente irá variar de acordo com a gravidade da condição conforme determinada pelo diagnosticador do atendimento, a atividade empregada no composto específico, a idade e a condição geral do paciente, o tempo de administração, a via de administração, a taxa de excreção da droga, as combinações da droga e similares. O modo de tratamento e o número de doses desejados de um composto da presente invenção ou um sal aceitável farmaceuticamente ou seu éster ou composição podem ser verificados pelo especialista na arte usando testes de tratamento convencionais.
[121] A barreira hematoencefálica (BBB) é formada pelo endotélio capilar cerebral e funciona como filtro que exclui do cérebro —100% da molécula grande e mais de 98% de todas as moléculas pequenas destinadas a neuroterapêuticos. Durante a fase aguda da isquemia cerebral, lesão cerebral isquêmica, derrame isquêmico (IS), derrame hemorrágico, lesão cerebral traumática e lesão medular, a BBB é comprometida e suas junções que executam a função de exclusão são enfraquecidas. Nas janelas de tempo desde o início dos distúrbios identificados acima, desde o início do SI, até o fechamento da BBB, a administração de agentes terapêuticos em regiões específicas do cérebro é particularmente favorável.
[122] Um composto da fórmula geral (LI), ou um N-óxido, um sal, um tautômero ou um estereoisômero do referido composto, ou um sal do referido N-óxido, tautômero ou estereoisômero, particularmente um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma mistura de mesmo, como descrito e definido neste documento, é vantajosamente administrado desde o início da lesão cerebral isquêmica, derrame isquêmico (IS), derrame hemorrágico, lesão cerebral traumática e lesão da medula espinhal, em particular do IS, desde o início da doença até o restabelecimento da BBB para que o composto cruze a BBB em quantidades adequadas.
[123] Mais particularmente um composto da fórmula geral (1), como 2- (2-Clorofenil)-N-[4- (4-ciano-lH-pirazol-1-11)-3- sulfamoilfenil]acetamida, é administrado de maneira vantajosa desde o início da doença, como, por exemplo, IS, até cerca de um mês, mais particularmente até cerca de três semanas, mais particularmente até cerca de duas semanas, mais particularmente até cerca de dez dias.
[124] Mais particularmente, um composto da fórmula geral (1), como 2- (2-Clorofenil)-N-[4- (4-ciano-lH-pirazol-1-11)-3- sulfamoilfenil]acetamida, é administrado de maneira vantajosa dentro de 6 horas, mais particularmente dentro de 3 horas desde o início da doença.
[125] Como início da doença pode ser considerado não apenas o tempo exato em que a lesão cerebral isquêmica, derrarme isquêmico (IS), derrame hemorrágico, lesão cerebral traumática ou lesão da medula espinhal, mas também o tempo em que os sintomas dessa doença foram identificados ou que a doença foi confirmada, por exemplo, por meio de tomografia computadorizada (TC) ou Ressonância Magnética (RM). Terapias combinadas
[126] O termo "combinação" na presente invenção é usado e conhecido por especialistas na arte e pode estar presente como uma combinação fixa, uma combinação nãofixa ou combinação ou kit de partes.
[127] Uma "combinação fixa" na presente invenção é usada como conhecido por especialistas na arte e é definida como uma combinação na qual o primeiro ingrediente ativo e o segundo ingrediente ativo estão presentes juntos em uma dosagem unitária ou em uma única entidade. Um exemplo de uma "combinação fixa" é uma composição farmacêutica na qual o primeiro ingrediente ativo e o segundo ingrediente ativo citados estão presentes na mistura para administração simultânea, como em uma formulação. Outro exemplo de uma "combinação fixa" é uma composição farmacêutica na qual o primeiro ingrediente ativo e o segundo ingrediente ativo citados estão presentes em uma unidade sem ser uma mistura.
[128] Uma combinação não fixa ou um "kit de partes" na presente invenção é usada como conhecido por especialistas na arte e é definida como uma combinação na qual o primeiro ingrediente ativo e o segundo ingrediente ativo estão presentes em mais de uma unidade. Um exemplo de uma combinação não fixa ou kit de partes é uma combinação na qual o primeiro ingrediente ativo e o segundo ingrediente ativo estão separadamente presentes. Os componentes da combinação não fixa ou do kit de partes podem ser administrados separadamente, sequencialmente, simultaneamente ou cronologicamente escalonados.
[129] Os compostos da presente invenção podem ser administrados como o agente farmacêutico isolado ou combinado com um ou mais agentes farmacêuticos onde a combinação não causa efeitos adversos inaceitáveis. A presente invenção está relacionada também a essas combinações.
[130] Além disso, os compostos da presente invenção podem ser combinados com agentes terapêuticos ou ingredientes ativos, que já estão aprovados ou que estão ainda em desenvolvimento para tratamento e/ou profilaxia de doenças que estão relacionadas a ou mediadas por P2X4.
[131] Para tratamento e/ou profilaxia de isquemia cerebral, lesão cerebral isquêmica, derrame isquêmico (IS), derrame hemorrágico, lesão cerebral traumática, lesão da medula espinhal, os compostos da presente invenção podem ser administrados em combinação Ou como comedicação além do respectivo padrão de cuidados (SOC) = terapia básica em unidade de terapia intensiva, incluindo estabilização da pressão arterial (geralmente redução da pressão arterial); recanalização (lise intravenosa farmacológica com, por exemplo, rtPA e/ou recanalização mecânica por extração intra-arterial de trombo); tratamento de edema cerebral por osmoterapia com, Por ex., glicerol, manitol ou solução salina hipertônica e/ou tratamento com glicocorticoides.
[132] Para tratamento e/ou profilaxia da isquemia cerebral, lesão cerebral isquêmica, derrame isquêmico (IS), derrame hemorrágico, lesão cerebral traumática, lesão da medula espinhal, os compostos da presente invenção podem ser administrados em combinação ou como comedicação com qualquer substância que pode ser aplicada como agentes antitrombóticos, em particular anticoagulantes como glicosaminoglicanos, por exemplo, heparina, heparinas de baixo peso molecular ou Danaparoid; inibidores diretos da trombina como, por exemplo, Argatroban, Antitrombina ou Proteína C; Agentes antiplaquetários, como Aspirina ou Clopidogrel; Bloqueadores dos receptores da glicoproteina IIb/IIIa, como —Abciximab ou Eptifibatide (Integrilin), medicamentos fibrinolíticos, como estreptoquinase, anistreplase ou alteplase. Um exemplo muito particular é a administração ou comediação do composto da invenção juntamente com a aspirina.
[133] Os compostos da presente invenção podem ser combinados com outros agentes farmacológicos e compostos destinados a tratar doenças inflamatórias, dor inflamatória ou condições dolorosas em geral.
[134] Os métodos de teste para uma propriedade farmacológica ou farmacêutica são bem conhecidos pelos especialistas na arte.
[135] Os experimentos de teste do exemplo descritos aqui servem para ilustrar a presente invenção, que não está limitada aos exemplos fornecidos.
[136] Como será apreciado pelos especialistas na técnica, a invenção não se limita às modalidades particulares descritas aqui, mas abrange todas as modificações das referidas modalidades que estão dentro do âmbito e escopo da invenção, conforme definido pelas reivindicações anexas.
[137] Os exemplos a seguir ilustram a invenção com mais detalhes, sem restringi-la. Outros compostos de acordo com a invenção, dos quais a preparação não é explicitamente descrita, podem ser preparados de maneira análoga.
[138] Os compostos mencionados nos exemplos e nos seus sais são representações preferenciais da invenção, bem como uma reivindicação que abrange todas as subcombinações dos resíduos do composto de fórmula (1) como divulgado pelos exemplos específicos.
[139] O termo "de acordo com" na seção experimental é usado no sentido de que o procedimento referido deve ser usado "analogamente a". Síntese de compostos
[140] Os esquemas e procedimentos gerais a seguir ilustram as vias sintéticas gerais para os compostos da fórmula geral (1) da invenção e não devem ser limitadores. É óbvio para o especialista na arte que a ordem das transformações, conforme exemplificado nos esquemas 1 a 5, pode ser modificada de várias maneiras. A ordem das transformações exemplificadas nos esquemas
1 a 5 não deve ser, portanto, limitadora. Além disso, a interconversão dos substituintes, por exemplo, de resíduos R!, R? ou R!!, pode ser alcançada antes e/ou depois das transformações exemplificadas. Essas modificações podem ser como a introdução de grupos de proteção, clivagem de grupos de proteção, redução ou oxidação de grupos funcionais, halogenação, metalação, substituição ou outras reações conhecidas por um especialista na arte. Essas transformações incluem aquelas que introduzem uma funcionalidade que permite a interconversão de substituintes. Os grupos de proteção apropriados e sua introdução e clivagem são bem conhecidos por um especialista na arte (consulte, por exemplo, T.W. Greene e P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3º edição, Wiley 1999).
[141] Todos os reagentes utilizados para a preparação dos compostos da invenção estão disponíveis comercialmente, conhecidos na literatura ou podem ser preparados como descrito. substituição aromática Oo ” o SOC! WA W nucleofílica 2 W v Aminação & o= 2 V=LG o= 2 proteção V RH R Ao — ON - : - 2 W=NPG/NHPG ON V=CI,Br ON Acoplamento 1 de C-N 2 catalizado por 3 metal | redução o W o o-8- o R? — acoplamento de "= 2 o acilação/peptídeo R 1 =
R lh, HN H 2 5: W = NHPG ou NPG 4 desproteção 6: W= NH,
[142] Esquema 1: Procedimentos gerais para a preparação de compostos da fórmula geral (IT) e (Ta) correspondentes à fórmula 6; R' é como definido na descrição e nas reivindicações desta invenção; W corresponde à uma amina com hidrogênio e/ou a um grupo de proteção PG (por exemplo, (dimetilamino) metileno, 2,4- dimetoxibenzil); V corresponde a LG, cloreto ou brometo; LG corresponde a um grupo de saída (por exemplo, cloreto, fluoreto, tosil); R é um sistema heteroaromático com um nitrogênio nucleofílico (por exemplo, pirazol, imidazol, triazol) e sofre uma substituição aromática nucleofílica nesse átomo de nitrogênio.
[143] Os compostos da fórmula geral 6 podem ser sintetizados como representado no Esquema l. O especialista na técnica será capaz de converter cloretos de sulfonil 1 em sulfonil amidas protegidas 2 e poderá selecionar um grupo de proteção PG que seja adequado para as etapas a seguir. Exemplos para grupos de proteção adequados PG são 2,4-dimetoxibenzil ou (dimetilamino)metileno. No caso de V corresponder a um grupo de saída, os compostos LG (por exemplo, fluoreto, cloreto, tosil) 2 podem ser convertidos em uma reação de substituição aromática nucleofílica em um solvente adequado (por exemplo, acetonitrila) e na presença de uma base adequada (por exemplo, carbonato de potássio, carbonato de césio ,..) com um sistema heteroaromático Rº?H que contém um nitrogênio nucleofílico (por exemplo, pirazol, imidazol, triazol,..) para os compostos 3 enquanto forma uma nova ligação CN. No caso de V corresponder a cloreto ou brometo, os compostos 3 podem ser formados em uma reação de acoplamento CN catalisada por metal com um sistema heteroaromático contendo nitrogênio (por exemplo, 1,2,3-triazóis) e na presença de um sistema catalítico adequado (por exemplo, tris (dibenzilidenoacetona) dipaládio / di-tert-butil (2 ', 4', 6'- triisopropil-3,4,5,6-tetrametil- [1,1'-bifenil] -2-il) fosfina / fosfato de potássio / tolueno). Na etapa seguinte, os compostos nitro 3 podem ser convertidos nas anilinas correspondentes 4 por redução em condições de hidrogenação, em solventes polares como etanol, metanol, dioxano ou tetra-hidrofurano na presença de, por exemplo, catalisadores à base de Pd-, Pt-, Fer ou Sn. As anilinas 4 podem ser convertidas nas amidas correspondentes 5, por exemplo, por reação com acil cloretos ou por formação de ligação peptídica padrão, usando todos os procedimentos conhecidos, como reação do ácido carboxílico correspondente na presença de um reagente de acoplamento, por exemplo, HATU. Na última etapa, as amidas 5 são desprotegidas para as sulfonamidas desejadas 6. As condições de desproteção dependem do grupo protetor usado (por exemplo, TFA/diclorometano no caso de 2,4- dimetoxibenzil ou amônia aquosa/metanol no caso de (dimetilamino) metileno). SOC! Aminaçã CX o XM ci Aminação & aminação LL proteção LO Buchwald cr BINZ" WwsNeG [EN y | N 7 8 9 (Y=-N=CAr,) | substituição RºH| aromática nucleofílica o o" Cr o Y NA o S 7 lamento de — 10 (Y=-N=CAr,) RU | N — aciação/peptídeo - — ] desproteção Ns e———— — 11(Y=NH,) 12(W=NPG) desproteção LL 13 (W=NH,)
[144] Esquema 2: Procedimento geral para a preparação de compostos da fórmula geral (I) e (Ib) correspondentes à fórmula 13; Rº é como definido na descrição e nas reivindicações desta invenção; W corresponde a uma amina com hidrogênio e/ou a um grupo de proteção PG (por exemplo (dimetilamino) metileno); Ar é aril; R é um sistema heteroaromático com um nitrogênio nucleofílico (por exemplo, pirazol, imidazol, triazol) e sofre uma substituição aromática nucleofílica nesse átomo de nitrogênio.
[145] Os compostos da fórmula geral 13 podem ser sintetizados como representado no Esquema 2. O especialista na técnica será capaz de converter cloretos de sulfonil 7 em sulfonil amidas protegidas 8 e poderá selecionar um grupo de proteção PG que seja adequado para as etapas a seguir.
Um exemplo para um grupo de proteção adequado PG é (dimetilamino) metileno (reação dos cloretos de sulfonil 7 com amônia, depois reação com 1,1- dimetoxi-N, N-dimetilmetanamina em DMF). Usando estratégias de proteção e desproteção, a aminação de Buchwald de 8 na presença de catalisadores adequados (ver, por exemplo, WO2011120026A1) leva aos intermediários 9. A reação de substituição aromática nucleofílica em um solvente adequado (por exemplo, acetonitrila) e na presença de uma base adequada (por exemplo, carbonato de potássio,..) com um sistema heteroaromático RºH que contém um nitrogênio nucleofílico (por exemplo, pirazol, imidazol, triazol,..) leva a piridinas 10. A desproteção de 10 (em condições ácidas no caso Y = -N = CAr,) é seguida pela conversão das anilinas 11 resultantes em amidas 12, por exemplo, por reação com acil cloretos ou por formação de ligação peptídica padrão usando todos os procedimentos conhecidos, como reação dos ácidos carboxílicos correspondentes na presença de um reagente de acoplamento, por exemplo HATU.
Na última etapa, a amida 12 é desprotegida para as sulfonamidas desejadas 13. As condições de desproteção dependem do grupo protetor usado (por exemplo, amônia aquosa/metanol no caso de (dimetilamino) metileno).
O. q Cl o q Ww os Ww sd aminação & E NS Vv proteção Vv Suzuki R2 W=NPG/ ON NHPG — OWN ON 23 24 25 V=Br/CI V=Br duçã redução redução o o
OW O
HAN HN 29 26 acoplamento de acoplamento de acilação/peptídeo acilação/peptídeo o o
OW OW 2 o v Suzuki o R 1 —
H H [— Fases 27: W = NHPG/NPG «V= desproteção LL 31: V = B(OZ), proteç: 28:W=NH,
[146] Esquema 4: Procedimentos gerais para a preparação de compostos da fórmula geral (IT) e (Ta) correspondentes à fórmula 28; R' e Rº são como definidos na descrição e nas reivindicações desta invenção, B (0Z);, corresponde a B (OH); ou B(O2CkKH;i2) ou uma mistura de ambos e W corresponde a uma amina com hidrogênio e/ou um grupo de proteção PG (por exemplo, (dimetilamino) metileno, 2,4-dimetoxibenzil).
[147] Os compostos de fórmula geral 28 podem ser sintetizados como representado no Esquema 4. A partir dos cloretos de sulfonil correspondentes 23 (com V sendo brometo ou cloreto), os derivados aril e heteroaril conectados em C podem ser preparados via, por ex., reações de acoplamento cruzado de Suzuki conhecidas pelo especialista na técnica. A transformação das sulfonamidas protegidas 24 em compostos de aril/heteroaril com a fórmula geral 25 pode ser obtida pela reação com o ácido borônico correspondente (ou éster ou uma mistura de ambos) sob catálise de paládio em solventes próticos (por ex., isopropanol ou apróticos. As aminas correspondentes 26 podem ser obtidas a partir de intermediários 25 pela redução sob condições de hidrogenação, em solventes polares, como etanol ou tetra- hidrofurano na presença de, por exemplo, catalisadores à base de Pd-, Pt-, Fe- ou Sn-. A acilação subsequente às amidas correspondentes 27 pode ser obtida, por exemplo, por reação com acil cloretos ou por formação de ligação peptídica padrão, usando todos os procedimentos conhecidos, como reação do ácido carboxílico correspondente na presença de um reagente de acoplamento, por exemplo, HATU. Para W igual a um grupo de proteção, a desproteção subsequente do grupo de proteção com, por ex., ácido trifluoroacético (TFA) resulta em compostos da fórmula geral 28.
[148] Como alternativa, a partir dos intermediários 24 com V = Br, a redução sob condições de hidrogenação, em solventes polares como etanol ou tetra-hidrofurano na presença de, por exemplo, catalisadores à base de Pt, Fe ou Sn, produz aminas 29. As amidas correspondentes 30a podem ser obtidas por reação com acil cloretos ou por formação de ligação peptídica padrão usando todos os procedimentos conhecidos. Arilação/heteroarilação subsequente utilizando, por ex., os acoplamentos cruzados catalisados por paládio dão acesso aos intermediários 27. Como alternativa, os brometos 30a podem ser convertidos nos intermediários de ácido borônico/éster correspondentes 31 (B(0Z), = B(OH), ou B(OxCkKHi2)) e ainda reagiram com o uso de, por ex., catálise de paládio conhecida pelo especialista na técnica para obter os intermediários 27 que após a desproteção produziram os produtos finais com a fórmula geral 28.
o à Ww ow O. à Ww sb W=NPG se NS LX Suzuki Cc desproteção o A AA O. 9 (Y=-N=CAr,) 32 33 | acoplamento de acilação/peptídeo ow o o RU, [LN
H 34: W=NPG desproteção LL 35:W=NH,
[149] Esquema 5: Procedimento geral para a preparação de compostos da fórmula geral (1) e (Ib) correspondentes à fórmula 35; R e Rº são como definidos na descrição e nas reivindicações desta invenção, W corresponde à amina com hidrogênio e/ou a um grupo de proteção PG (por ex., (dimetilamino)metileno, 2,4- dimetoxibenzil); Ar é aril.
[150] Os compostos de fórmula geral 35 podem ser sintetizados como representado no Esquema 5. Iniciando a partir do intermediário 9, o aril acoplado a C e derivados de heteroaril 32 podem ser preparados via, por exemplo, acoplamentos cruzados, por ex., reações de Suzuki, conhecidas pelo especialista na técnica (ver, por exemplo, US 20110281865). A desproteção sob a condição ácida produz aminas 33. A acilação subsequente às amidas correspondentes pode ser obtida, por exemplo, por reação com acil cloretos ou por formação de ligação peptídica padrão, usando todos os procedimentos conhecidos, como reação do ácido carboxílico correspondente na presença de um reagente de acoplamento, por exemplo, HATU. Para W igual a um amino protegido, a desproteção subsequente da função de amino protegido (com, por ex., amônia aquosa no caso de
(dimetilamino)metileno como grupo de proteção) resulta em compostos da fórmula geral 35. Of NH, OL NH) o E gr — acoplamento de Br OÔ brominação ros acilação/peptídeo ; o CC HJN HN “A, 36 37 38: W=NH, proteção LL 30a: W = NHPG/NPG
[151] Esquema 6: Procedimento geral para a preparação de compostos da fórmula 30a; Rº' é como definido na descrição e nas reivindicações desta invenção, W corresponde à amina com hidrogênio e/ou a um grupo de proteção PG (por ex., (dimetilamino)metileno, 2,4-dimetoxibenzil); Ar é aril.
[152] Os compostos da fórmula geral 30a podem ser sintetizados como representado no Esquema 6. Iniciando a partir da anilina correspondente 36,a bromação (por ex., com NBS em DMF) leva a bromoanilina 37. A acilação subsequente às amidas correspondentes 38 pode ser obtida, por exemplo, por reação com acil cloretos ou por formação de ligação peptídica padrão, usando todos os procedimentos conhecidos, como reação do ácido carboxílico correspondente na presença de um reagente de acoplamento, por exemplo, HATU. A proteção subsequente da parte de sulfonamida (por exemplo, com 1,1-dimetoxi-N,N- dimetilmetanamina em DMF) leva a amidas protegidas 30a que podem ser ainda mais transformadas, por exemplo, usando a química de Suzuki como descrito no Esquema 4.
[153] Os compostos de acordo com a invenção são isolados e purificados de uma maneira conhecida per se, por ex., destilando o solvente sob vácuo e recristalizando o resíduo obtido de um solvente adequado ou submetendo-o a um dos métodos habituais de purificação, como cromatografia em um material de suporte adequado. Além disso, a HPLC preparativa de fase reversa dos compostos da presente invenção que possuem uma funcionalidade suficientemente básica ou ácida, pode resultar na formação de um sal, como, no caso de um composto da presente invenção que seja suficientemente básico, um trifluoroacetato ou sal de formato, por exemplo ou no caso de um composto da presente invenção que seja suficientemente ácido, por exemplo, um sal de amônio. Sais deste tipo podem ser transformados em sua base livre ou forma de ácido livre, respectivamente, por vários métodos conhecidos ao especialista na arte ou ser usado como sais nos ensaios biológicos subsequentes. Além disso, o processo de secagem durante o isolamento dos compostos da presente invenção pode não remover completamente vestígios de cossolventes, especialmente como ácido fórmico ou ácido trifluoroacético, para produzir solvatos ou complexos de inclusão. O especialista na técnica reconhecerá quais solvatos ou complexos de inclusão são aceitáveis para serem usados em ensaios biológicos subsequentes. Deve ser entendido que a forma específica (por ex., sal, base livre, solvato, complexo de inclusão) do composto da presente invenção seja isolado conforme descrito neste documento não seja necessariamente a única forma na qual o composto citado pode ser aplicado a um ensaio biológico para quantificar a atividade biológica específica.
[154] Os sais dos compostos de fórmula (1), (Ia) e (Ib) de acordo com a invenção podem ser obtidos dissolvendo-se oO composto livre em um solvente adequado (por exemplo, uma cetona, como acetona, metiletilcetona ou metilisobutilcetona, um éter como dietil éter, tetra-hidrofurano ou dioxano, um hidrocarboneto clorado, como cloreto de metileno ou clorofórmio ou um álcool alifático de baixo peso molecular, como metanol, etanol ou isopropanol) que contém o ácido ou base desejada ou para o qual o ácido ou base desejada é adicionado. O ácido ou base pode ser empregado na preparação de sal, dependendo de um ácido ou base mono ou polibásica e dependendo de qual sal é desejado, em uma proporção quantitativa equimolar ou em uma diferença a partir dela. Os sais são obtidos por filtração, reprecipitação, precipitação com um não solvente para o sal ou evaporação do solvente. Os sais obtidos podem ser convertidos nos compostos livres que, por sua vez, podem ser convertidos em sais. Desse modo, sais farmaceuticamente inaceitáveis, que podem ser obtidos, por exemplo, como produtos de processo na fabricação em escala industrial, podem ser convertidos em sais farmaceuticamente aceitáveis por processos conhecidos pelo especialista na técnica. Especialmente preferenciais são oS hidrocloretos e o processo usado na seção de exemplo.
[155] Podem ser obtidos diastereômeros puros e enantiômeros puros dos compostos e sais de acordo com a invenção, por ex., por síntese assimétrica, com o uso de compostos de iniciais quirais em síntese e dividindo misturas enantioméricas e diasterioméricas obtidas em síntese.
[156] As misturas enantioméricas e diastereoméricas podem ser divididas em enantiômeros puros e diastereômeros puros por métodos conhecidos por um especialista na técnica. Preferencialmente, as misturas diastereoméricas são separadas por cristalização, em particular cristalização fracionada Ou cromatografia. As misturas enantioméricas podem ser separadas, por ex., formando diastereômeros com um agente auxiliar quiral, resolvendo os diastereômeros obtidos e removendo o agente auxiliar quiral. Como agentes auxiliares quirais, por exemplo, ácidos quirais podem ser usados para separar bases enantioméricas, como, por exemplo, o ácido mandélico e as bases quirais podem ser utilizados para separar os ácidos enantioméricos pela formação de sais diastereoméricos. Além disso, derivados diastereoméricos, como ésteres diastereoméricos, podem ser formados a partir de misturas enantioméricas de alcoóis ou misturas enantioméricas de ácidos, respectivamente, utilizando ácidos quirais ou alcoóis quirais, respectivamente, como agentes auxiliares quirais. Além disso, complexos diastereoméricos ou clatratos diastereoméricos podem ser usados para separar misturas enantioméricas. Como alternativa, as misturas enantioméricas podem ser divididas usando colunas de separação quirais em cromatografia. Outro método adequado para o isolamento de enantiômeros é a separação enzimática.
[157] Um aspecto preferido da invenção é o processo para a preparação dos compostos da fórmula geral (1) (Ia) ou (Ib) ou um
N-óxido, um sal, um tautômero ou um estereoisômero do referido composto ou um sal do referido N-óxido, tautômero ou estereoisômero de acordo com os exemplos, também como intermediários usados para a preparação.
[158] Como opção, os compostos de fórmula (LI), (Ia) e (Ib) podem ser convertidos em seus sais ou, opcionalmente, sais dos compostos de fórmula (1), (Ia) e (Ib) podem ser convertidos em compostos livres. Os processos correspondentes são habituais para o especialista.
PARTE EXPERIMENTAL Abreviações
[159] A tabela a seguir lista as abreviações usadas neste parágrafo e na seção Exemplos Intermediários e Exemplos, quando não forem explicadas no corpo do texto. E ss
E A
EL E HATU 1- [Bis (dimetilamino)metileno] -1H-
FEET e ss — HPLC cromatografia líquida de alta Fo EE LC-MS espectrometria de massa de Fo Esses o NMR espectroscopia por ressonância magnética nuclear: os deslocamentos químicos (8) são apresentados em ppm. os deslocamentos químicos foram corrigidos pela configuração do sinal de DMSO a 2,50 ppm, a menos que seja determinado de outra maneira. PDA Matriz de foto diodo
ELLE Rt tempo de retenção (conforme medido com Po esssaAA UPLC cromatografia líquida de altíssima E E Fra a mom
[160] Outras abreviações têm seus significados habituais per se para o especialista.
[161] os vários aspectos da invenção descritos neste requerimento são ilustrados pelos exemplos a seguir que não pretendem limitar a invenção de maneira alguma.
Descrições experimentais específicas
[162] As formas de pico de NMR nas descrições experimentais específicas a seguir são explicadas como aparecem nos espectros, os efeitos de ordem mais elevada possível não foram considerados. As reações que empregam irradiação de micro-ondas podem ser executadas com um forno de micro-ondas Biotage InitiatorO opcionalmente equipado com uma unidade robótica. Os tempos de reação informados com aquecimento em micro-ondas devem ser compreendidos como tempos de reação fixos após alcançar a temperatura de reação indicada. Os compostos e intermediários produzidos de acordo com os métodos da invenção podem exigir purificação. A purificação dos compostos orgânicos é bem conhecida ao especialista na arte e pode haver várias maneiras de purificar o mesmo composto. Em alguns casos, a purificação pode não ser necessária. Em alguns casos, os compostos podem ser purificados por cristalização. Em alguns casos, as impurezas podem ser agitadas com o uso de um solvente adequado. Em alguns casos, os compostos podem ser purificados por cromatografia, particularmente cromatografia flash usando, por exemplo, cartuchos de sílica gel pré-embalados, por exemplo, da Separtis como a sílica gel Isoluteêe Flash ou Isolutee Flash NH; em combinação com um autopurificador IsoleraG (Biotage) e eluentes, como gradientes de, por ex., hexano/acetato de etila ou DCM/metanol. Em alguns casos, os compostos podem ser purificados por HPLC preparativa com o uso, por exemplo, de um autopurificador Waters equipado com um detector de matriz de diodo e/ou espectrômetro de massa de ionização por electrospray em conjunto com uma coluna de fase reversa pré-embalada e eluentes, por exemplo, gradientes de água e acetonitrila que podem conter aditivos, como ácido trifluoroacético, ácido fórmico ou amônia aquosa. Em alguns casos, os métodos de purificação, conforme descritos acima, podem fornecer os compostos da presente invenção que possui uma funcionalidade básica ou acídica o suficiente na forma de um sal, como no caso de um composto da presente invenção que seja básico O suficiente, um trifluoroacetato ou sal de formato, por exemplo, ou, no caso de um composto da presente invenção, que seja acídico o bastante, um sal de amônio, por exemplo. Um sal deste tipo pode ser transformado em sua base livre ou forma de ácido livre, respectivamente, por vários métodos conhecidos ao especialista na arte ou ser usado como sais nos ensaios biológicos subsequentes. Deve ser entendido que a forma específica (por ex., sal, base livre etc.) do composto da presente invenção seja isolado conforme descrito neste documento não seja necessariamente a única forma na qual o composto citado pode ser aplicado a um ensaio biológico para quantificar a atividade biológica específica.
[163] Os rendimentos percentuais relatados nos exemplos a seguir são baseados no componente inicial que foi usado na menor quantidade molar. A maioria das condições de reação não foi otimizada para o rendimento. Líquidos e soluções sensíveis ao ar e à umidade foram transferidos via seringa ou cânula e introduzidos nos vasos de reação através de septos de borracha. Reagentes de grau comercial e solventes foram utilizados sem purificação adicional. O termo “concentrado em vácuo” refere-se ao uso de um evaporador rotativo Buchi a uma pressão mínima de aproximadamente 15 mm de Hg. Todas as temperaturas são informadas não corrigidas em graus Celsius (ºC).
[164] Para que esta invenção possa ser melhor compreendida, os exemplos seguintes são apresentados. Estes exemplos são apenas para fins de ilustração e não devem ser interpretados como limitando o âmbito da invenção de qualquer maneira. Todas as publicações aqui mencionadas são incorporadas por referência na sua totalidade. Condições analíticas de LC-MS e UPLC-MS
[165] Os dados de LC-MS e UPLC-MS apresentados nas descrições experimentais específicas subsequentes referem-se (exceto se indicado em contrário) às seguintes condições:
Método A
[166] Instrumento: Waters Acquity UPLC-MS SingleQuad; Coluna: Acquity UPLC BEH C18 1,7 um, 50x2,l1mm; eluente A: água + 0,1 vol % ácido fórmico (99%), eluente B: acetonitrila, gradiente: 0-1,6 min 1-99% B, 1,6-2,0 min 99% B; fluxo de 0,8 ml/min; temperatura: 60 ºC; varredura DAD: 210-400 nm. Método B
[167] Instrumento: Waters Acquity UPLC-MS SingleQuad; Coluna: Acquity UPLC BEH C18 1,7 um, 50x2,l1mm; eluente A: água + 0,2 vol % aquosa amônia (32%), eluente B: acetonitrila, gradiente: 0-1,6 min 1-99% B, 1,6-2,0 min 99% B; fluxo de 0,8 ml/min; temperatura: 60 ºC; varredura DAD: 210-400 nm. Condições de cromatografia em coluna flash
[168] “Purificação por cromatografia em coluna (flash) ", conforme definido nas descrições experimentais específicas subsequentes, refere-se ao uso de um sistema de purificação Biotage Isolera. Para especificações técnicas, consulte o “Catálogo de produtos Biotage” em www.biotage.com. Procedimentos experimentais gerais SHz cH o o o 0 : H3C OD H3C” O
OX NH OBNH RE é FF RE Rs RR VT aa Oo R O RR
A B Procedimento geral GP1.2
[169] A sulfonamida A (por exemplo, 1,29 mmol) foi dissolvida em acetonitrila (15 mL no caso de uma escala de 1,29 mmol) e foram adicionados carbonato de potássio em pó fino (3,0 eq) e o azol correspondente (1,5 eq). A agitação continuou a 100 - 110ºC até o TLC mostrar consumo de material inicial. O solvente foi removido sob pressão reduzida, seguido pela adição de água e diclorometano. Depois, as fases foram separadas, a fase orgânica foi secada e foi concentrada em vácuo. O produto bruto foi usado sem purificação adicional ou purificado como indicado nos exemplos. SH SH; “O “O
ES NH ESNH R& Rê Rº R > =— * o RR ? Ro B c Procedimento geral GP2.1
[170] O composto de nitro B bruto (por exemplo, 1,29 mmol) foi dissolvido em dioxano (15 mL no caso de uma escala de 1,29 mmol) e foi adicionado di-hidrato de cloreto de estanho(II) (3,0 eq), e a mistura de reação foi agitada por 2 h a 70ºC. Após resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura da reação foi filtrada e concentrada em vácuo. O filtrado foi utilizado sem purificação adicional ou purificado como indicado nos exemplos. Procedimento geral GP2.2
[171] O composto de nitro B bruto (por exemplo, 1,29 mmol) foi dissolvido em dioxano (15 mL no caso de uma escala de 1,29 mmol) e foi adicionado di-hidrato de cloreto de estanho(II) (5,0 eq), e a mistura de reação foi agitada por 2 h a 70ºC. Após resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura da reação foi filtrada e concentrada em vácuo. O filtrado foi utilizado sem purificação adicional ou purificado como indicado nos exemplos.
SHs SHs3 "Om “O
ORNH EXNH Rº Rê Re Rn NS e o * Rn?» RR Rº HH Ro c D Procedimento geral GP3.4
[172] A anilina bruta substituída C (1,29 mmol) foi dissolvida em dimetilformamida (10 mL no caso de uma escala de 1,29 mmol) seguida pela adição do ácido correspondente (quantidade indicada nos exemplos), N,N-diisopropiletilamina (2,0 eq com base no ácido) e HATU (1,0 eq com base em ácido). A mistura de reação foi agitada durante a noite em temperatura ambiente ou aquecida a 50ºC até a TLC mostrar consumo de material inicial. Após resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura da reação foi concentrada em vácuo. Foram adicionados acetato de etila e água, a fase orgânica foi secada e concentrada em vácuo. O produto bruto foi utilizado sem purificação adicional. Procedimento geral GP3.5
[173] A anilina bruta substituída C (1,29 mmol) foi dissolvida em dimetilformamida (10 mL no caso de uma escala de 1,29 mmol seguida pela adição do ácido correspondente (quantidade indicada nos exemplos), N,N-diisopropiletilamina (4,0 eq com base no ácido) e HATU (1,3 eq com base em ácido). A mistura de reação foi agitada durante a noite em temperatura ambiente ou aquecida a 50ºC até a TLC mostrar consumo de material inicial. Após resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura da reação foi concentrada em vácuo. Foram adicionados acetato de etila e água, a fase orgânica foi secada e concentrada em vácuo. O produto bruto foi utilizado sem purificação adicional.
Ss ne JJ EXNH Eu MK kN RR E SN RR RN x RN, x
RRH O RRIH ÀS
D E Procedimento geral GP4.1
[174] A amida bruta D (por exemplo, 1,29 mmol) foi dissolvida em diclorometano (5-10 mL no caso de escala de 1,29 mmol), foi adicionado ácido trifluoroacético (50 eq) e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente até a TLC mostrar o consumo do material inicial. A mistura da reação foi concentrada em vácuo, foram adicionados acetato de etila e água ao produto bruto e a fase orgânica foi secada e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado como indicado nos exemplos. A purificação sem extração aquosa também foi possível, mas dificultou a purificação por HPLC. Procedimento geral GP4.2
[175] A amida bruta D (por exemplo, 1,29 mmol) foi dissolvida em diclorometano/ácido trifluoroacético 2/1 (6 mL no caso da escala de 1,29 mmol) e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente até a TLC mostrar o consumo do material inicial. A mistura da reação foi concentrada em vácuo, foram adicionados acetato de etila e água ao produto bruto e a fase orgânica foi secada e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado como indicado nos exemplos. A purificação sem extração aquosa também foi possível, mas dificultou a purificação por HPLC.
SH H.0? ” oS A os RE kh RR Na rs L RR H2N | 2 RS, 2X RO Rê Rº H nº c E Procedimento geral GP5.1
[176] Soluções de anilina substituída C (0,20 mmol em 0,4 mL de l1-metil-2-pirrolidon), o ácido correspondente (0,40 mmol em 0,8 mL de l-metil-2-pirrolidon), HATU (0,40 mmol em 0,8 mL de 1- metil-2 -pirrolidona), N-metilmorfolina (0,80 mmol em 0,267 mL de l-metil-2-pirrolidona, contendo 2,5% de 4- dimetilaminopiridina) foram adicionados e agitados durante a noite. Em seguida, foi concentrado em vácuo e o resíduo foi dissolvido novamente em ácido trifluoroacético/diclorometano 3/1 (2 mL, contendo 5% de água). A mistura da reação foi novamente agitada durante a noite, seguida de concentração em vácuo e purificação por HPLC. H3C, 2 C Hz bw Rº NR RR é kN R? H2N Fo A EA RO Rê Rº H Ro
F E Procedimento geral GP6.1
[177] A anilina bruta substituída F (0,137 mmol) foi dissolvida em dimetilformamida (2 mL no caso de uma escala de 0,137 mmol) seguida pela adição do ácido correspondente (quantidade indicada nos exemplos), N,N-diisopropiletilamina (2,7 eq com base no ácido) e HATU (1,0 eq com base em ácido). A mistura da reação foi agitada durante a noite em temperatura ambiente seguida de concentração em vácuo. Foram adicionados acetato de etila e água, a fase orgânica foi secada e concentrada em vácuo.
[178] O produto bruto foi redissolvido em metanol (1 mL), tratado com amônia aquosa concentrada (70 ul) e agitado durante a noite. A mistura da reação foi concentrada em vácuo e purificada como indicado nos exemplos. Síntese dos intermediários 2-Cloro-N-(2,4-dimetoxibenzil)-5-nitrobenzeno sulfonamida cn o H ? ó Cl “cn; Nº
O
[179] A uma solução de 2-cloro-5-nitrobenzeno sulfonil cloreto (10,8 g, 42,2 mmol) em diclorometano (108 mL) foi adicionado bicarbonato de sódio (7,09 g, 84,4 mmol) e 1-(2,4-dimetoxifenil) metanamina (7,05 g, 42,2 mmol). A mistura foi agitada durante a noite. A mistura de reação foi concentrada em vácuo, seguida por adição de água (75 mL) e acetato de etila (75 mL). Após agitação durante 10 min, o precipitado resultante foi separado por filtração e foi secado a 40ºC durante a noite em vácuo para produzir o composto titular (14,1 dg, 36,5 mmol, 86% de rendimento).
[180] LC-MS (Método A): Rt = 1,17 min; MS (ESIneg): m/z = 385 [M-H]" 1H-NMR (400MHz, DMSO-ds) 8 [ppm]: 3.56 (s, 3H), 3.61 (s, 3H),
4.08 (s, 2H), 6.10 (dy, 1H), 6.26 (dd, 1H), 7.04 (d, 1H), 7.79 (df, 1H), 8.19 (d, 1H), 8.28 (dd, 1H), 8.45 (s, 1H). N-(2,4-Dimetoxibenzil)-5-nitro-2-[4- (trifluorometil)-lH-pirazol- 1-il]benzeno sulfonamida
Hs
O O
DS o ? NH S No F
NE F
F Ot u Oo
[181] A uma solução de 2-cloro-N- (2, 4-dimetoxibenzil)-5- nitrobenzeno sulfonamida (5,69 g, 14,7 mmol) em acetonitrila (170 mL) foram adicionados 4-(trifluorometil)-lH-pirazol (3,00 g, 22,1 mmol) e carbonato de potássio em pó (6,09 g, 44,1 mmol) e foi agitado durante a noite a 100ºC. A mistura da reação foi concentrada em vácuo e o resíduo foi extraído com diclorometano e água. A fase orgânica foi lavada com salmoura e secada com sulfato de sódio. A concentração sob pressão reduzida levou ao composto titular bruto (7,50 g, quant., ap. 95% de pureza) que foi usada sem purificação adicional na etapa seguinte.
[182] LC-MS (Método B): Rt = 1,31 min; MS (ESIpos) m/z = 487 [M+H] * *H-NMR (400MHz, DMSO-ds) 8 [ppm]: 3.52 (s, 3H), 3.64 (s, 3H), 4,15 (d, 2H), 6.18 (d, 1H), 6.29 (dd, 1H), 7.08 (d, 1H), 7.93 (dy, 1H), 8.03 - 8.09 (m, 1H), 8.25 (d, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.49 (dd, 1H), 8.94 (s, 1H). 2- (4-Cloro-lH-pirazol-1-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-5- nitrobenzeno sulfonamida Hs Oo O
ORA o Q NH TS No no AE Ot yu o
[183] A uma solução de 2-cloro-N- (2, 4-dimetoxibenzil)-5- nitrobenzeno sulfonamida (5,03 g, 13,0 mmol) em acetonitrila (150 mL) foram adicionados 4-cloro-l-lH-pirazol (2,00 g, 19,5 mmol) e carbonato de potássio em pó (5,39 g, 39,0 mmol) e foi agitado durante a noite a 100ºC. A mistura da reação foi concentrada em vácuo e o resíduo foi extraído com diclorometano e água. A fase orgânica foi lavada com salmoura e secada. A concentração em vácuo levou ao composto titular bruto (6,27 g, quant., ap. 95% de pureza) que foi usada sem purificação adicional na etapa seguinte.
[184] LC-MS (Método A): Rt = 1,26 min; MS (ESIpos) m/z = 453 [M+H] * IH-NMR (400MHz, DMSO-ds) 8 [ppm]: 3.48 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 4,15 (s, 2H), 6.14 (dy, 1H), 6.27 (dd, 1H), 7.08 (d, 1H), 7.84 (dy, 1H), 8.05 (s, 1H), 8.09 (d, 1H), 8.21 (d, 1H), 8.45 (dd, 1H), 8.57 (s, 1H). N-(2,4-Dimetoxibenzil)-2-(4-fluoro-lH-pirazol-1-il)-5- nitrobenzeno sulfonamida Gs DD" ol NH so N= Dr
LS õ
[185] A uma solução de 2-cloro-N- (2, 4-dimetoxibenzil)-5- nitrobenzeno sulfonamida (5,00 g, 11,6 mmol) em acetonitrila (135 mL) foram adicionados 4-fluoro-lH-pirazol (1,50 g, 17,4 mmol) e carbonato de potássio em pó (4,82 g, 34,9 mmol) e foi agitado durante a noite a 100ºC. A mistura da reação foi concentrada em vácuo e o resíduo foi extraído com diclorometano e água. A fase orgânica foi lavada com salmoura e secada com sulfato de sódio. A concentração em vácuo levou ao composto titular bruto (5,54 g, quant., ap. 85 % de pureza) que foi usada sem purificação adicional na etapa seguinte.
[186] LC-MS (Método A): Rt = 1,23 min; MS (ESIpos) m/z = 437 [M+H] * 1H-NMR (400MHz, DMSO-ds) 8 [ppm]: 3.48 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 4,13 (s, 2H), 6.15 (dy, 1H), 6.28 (dd, 1H), 7.09 (d, 1H), 7.81 (d, 1H), 8.00 - 8.10 (m, 2H), 8.23 (d, 1H), 8.43 (dd, 1H), 8.59 (s, 1H). 2- (4-Bromo-lH-pirazol-1-1il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-5- nitrobenzeno sulfonamida
GH DD" ol NH 8º N— da o 3 o
[187] A uma solução de 2-cloro-N- (2, 4-dimetoxibenzil)-5- nitrobenzeno sulfonamida (1,75 g, 4,54 mmol) em acetonitrila (53 mL) foram adicionados 4-bromo-l-lH-pirazol (1,00 g, 6,80 mmol) e carbonato de potássio em pó (1,88 g, 13,6 mmol) e foi agitado durante a noite a 100ºC. A mistura da reação foi concentrada em vácuo e o resíduo foi extraído com diclorometano e água. A fase orgânica foi lavada com salmoura e secada com sulfato de sódio. A concentração em vácuo levou ao composto titular bruto (2,38 g, quant., ap. 95 % de pureza) que foi usada sem purificação adicional na etapa seguinte.
[188] LC-MS (Método A): Rt = 1,29 min; MS (ESIpos) m/z = 497 [M+H] * 1H-NMR (400MHz, DMSO-ds) 8 [ppm]: 3.48 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 4,13 (s, 2H), 6.15 (dy, 1H), 6.28 (dd, 1H), 7.09 (d, 1H), 7.84 (dy, 1H), 8.00 - 8.10 (m, 2H), 8.23 (s, 1H), 8.43 (dd, 1H), 8.65 (s, 1H).
2- (4-Ciano-lH-pirazol-1-1il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-5- nitrobenzeno sulfonamida Ghs “O o o NH * 5 ==N O” õ
[189] A uma solução de 2-cloro-N- (2, 4-dimetoxibenzil)-5- nitrobenzeno sulfonamida (15,0 g, 38,8 mmol) em acetonitrila (450 mL) foram adicionados lH-pirazol-4-carbonitrila (5,41 9, 93,1 mmol) e carbonato de potássio em pó (16,1 g, 116 mmol) e foi agitado durante a noite a 100ºC. A mistura da reação foi concentrada em vácuo e o resíduo foi extraído com acetato de etila e água. O composto titular puro precipitou e foi filtrado (9,09 gq 20,5 mmol, 53% de rendimento, 97% de pureza). A fase orgânica foi lavada com salmoura e secada em sulfato de sódio. A concentração em vácuo levou a outro composto titular bruto (9,11 g., ap. 60 % de pureza).
[190] LC-MS (Método B): Rt = 1,17 min; MS (ESIneg): m/z = 442 [M-H]" H-NMR (400MHz, DMSO-ds) 8 [ppm]: 3.53 (s, 3H), 3.64 (s, 3H),
4.08 (s, 2H), 6.20 (d, 1H), 6.29 (dd, 1H), 7.07 (d, 1H), 7.89 (dy, 1H), 8.12 (br s, 1H), 8.30 (br s, 1H), 8.41 - 8.54 (m, 2H),
9.17 (br s, 1H). 5-Amino-N-(2,4-dimetoxibenzil)-2-[4- (trifluorometil)-lH-pirazol- 1-il]benzeno sulfonamida hs
K DR o? NH TS No F i ADér
F H,aN
[191] Pd/C (carga a 10%, 750 mg) foi adicionado a uma solução de N- (2, 4-dimetoxibenzil)-5-nitro-2-[4- (trifluorometil)-lH-pirazol- 1-il]benzeno sulfonamida (7,50 g, 14,7 mmol) em metanol (120 mL) e agitado sob uma atmosfera de hidrogênio por 4 h em temperatura ambiente. Foi adicionado um pouco de acetato de etila para dissolver o produto precipitado, seguido de filtração, lavagem e concentração em vácuo para produzir o composto titular bruto (6,50 dg, quant., ap. 95% de pureza) que foi usada sem purificação adicional na etapa seguinte.
[192] LC-MS (Método A): Rt = 1,20 min; MS (ESIpos) m/z = 457 [M+H] * 'H-NMR (400MHz, DMSO-ds) 8 [ppm]: 3.70 (s, 3H), 3.73 (s, 3H),
3.94 (d, 2H), 6.01 (s, 2H), 6.41 - 6.48 (m, 2H), 6.78 (dd, 1H),
7.09 - 7.14 (m, 2H), 7.18 - 7.27 (m, 2H), 8.12 (s, 1H), 8.56 (s, 1H). 5-Amino-2- (4-cloro-lH-pirazol-l1-11)-N-(2,4- dimetoxibenzil)benzeno sulfonamida Hs X 7 ol NH
SS NS do H2N
[193] Pt/C (carga a 10%, 600 mg) foi adicionado a uma solução de 2- (4-cloro-lH-pirazol-1-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-5- nitrobenzeno sulfonamida bruta (6,27 g 13,9 mmol) em etanol (100 mL) e agitado sob atmosfera de hidrogênio por 24 h em temperatura ambiente. O catalisador foi removido por filtração, lavado com acetato de etila e o filtrado foi concentrado em vácuo para produzir o composto titular bruto (5,99 g, quant., ap. 90% de pureza) que foi usada sem purificação adicional na etapa seguinte.
[194] LC-MS (Método A): Rt = 1,23 min; MS (ESIpos) m/z = 423 [M+H] *+ 'H-NMR (400MHz, DMSO-ds) 8 [ppm]: 3.69 (s, 3H), 3.72 (s, 3H),
3.92 (d, 2H), 5.95 (s, 2H), 6.41 - 6.47 (m, 2H), 6.76 (dd, 1H),
7.08 - 7.12 (m, 2H), 7.15 (df, 1H), 7.19 (t, 1H), 7.78 (d, 1H),
8.15 (d, 1H). 5-Amino-N-(2,4-dimetoxibenzil)-2-(4-fluoro-lH-pirazol-l1- il)benzeno sulfonamida Hs DJ em Oo oss-"no i DF H,N
[195] Pt/C (carga a 10%, 1,76 g) foi adicionado a uma solução de N- (2, 4-dimetoxibenzil)-2-(4-fluoro-lH-pirazol-1-il)-5- nitrobenzeno sulfonamida bruta (5,50 g, 12,6 mmol) em uma mistura de etanol (125 mL) e dioxano (200 mL) e agitada sob atmosfera de hidrogênio durante 8 h em temperatura ambiente. O catalisador foi removido por filtração, lavado com acetato de etila e o filtrado foi concentrado em vácuo para produzir o composto titular bruto (5,07 g, quant., ap. 90% de pureza) que foi usada sem purificação adicional na etapa seguinte.
[196] LC-MS (Método A): Rt = 1,10 min
[197] MS (ESIpos): m/z = 407 [M+H]*+ 'H-NMR (400MHz, DMSO-ds) 8 [ppm]: 3.69 (s, 3H), 3.72 (s, 3H),
3.92 (d, 2H), 5.93 (s, 2H), 6.42 - 6.47 (m, 2H), 6.78 (dd, 1H),
7.08 - 7.19 (m, 4H), 7.74 (dd, 1H), 8.07 (dd, 1H).
5-Amino-2- (4-bromo-lH-pirazol-l1-11l)-N-(2,4- dimetoxibenzil)benzeno sulfonamida
GH DS" o? NH
SN da HaN
[198] Pt/C (carga a 10%, 1,76 g) foi adicionado a uma solução de 2- (4-bromo-lH-pirazol-1-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-5- nitrobenzeno sulfonamida bruta (5,60 g 12,8 mmol) em etanol (140 mL) e agitado sob atmosfera de hidrogênio por 14 h em temperatura ambiente. O catalisador foi removido por filtração, lavado com acetato de etila e o filtrado foi concentrado em vácuo para produzir o composto titular bruto (1,87 g, quant., ap. 90% de pureza) que foi usada sem purificação adicional na etapa seguinte.
[199] LC-MS (Método A): Rt = 1,18 min; MS (ESIpos): m/z = 467 (M+H)* 1H-NMR (400MHz, DMSO-ds) 8 [ppm]: 3.69 (s, 3H), 3.72 (s, 3H),
3.92 (d, 2H), 5.95 (s, 2H), 6.39 - 6.48 (m, 2H), 6.77 (dd, 1H),
7.08 - 7.23 (m, 4H), 7.79 (d, 1H), 8.15 (d, 1H). 2-Cloro-N-[ (dimetilamino)metileno]-5-nitrobenzeno sulfonamida Hs No ef CcH3
TS Cl
IS õ
[200] Foi adicionada 1,1-dimetoxi-N, N-dimetilmetanamina (3,02 g, 25,4 mmol) a uma solução de 2-cloro-5-nitrobenzeno sulfonamida (3,00 g, 12,7 mmol) em N,N-dimetilformamida (43 mL) e foi agitado em temperatura ambiente por 2 dias. A mistura da reação foi concentrada em vácuo e o resíduo foi extraído com diclorometano/água. A fase orgânica foi lavada com salmoura e secada. A concentração em vácuo produziu o composto titular bruto (4,18 g, quant., ap. 90% de pureza) que foi usada sem purificação adicional na etapa seguinte.
[201] LC-MS (Método A): Rt = 0,86 min; MS (ESIpos) m/z = 292 [M+H] * 'H-NMR (400MHz, DMSO-ds) 8 [ppm] 2.94 - 2.96 (m, 3H), 3.20 (s, 3H), 7.91 (d, 1H), 8.31 - 8.33 (m, 1H), 8.39 (dd, 1H), 8.69 (d, 1H). N-[ (Dimetilamino)metileno] -5-nitro-2-[5-(trifluorometil)piridin- 3-il]benzeno sulfonamida Hs o (Tot, Ou N Ns
SO Oo. F F o
[202] 2-Cloro-N-[ (dimetilamino)metileno]-5-nitrobenzeno sulfonamida (1,10 g, 3,77 mmol) foi dissolvido em n-propanol desgaseificado (33 mL) e tratado com [5-(trifluorometil)piridin- 3-il]ácido borônico (1,08 g, 5,68 mmol), bis (trifenilfosfina) dicloreto de paládio(II) (132 mg, 0,189 mmol) e trifenilfosfina (49,5 mg, 0,189 mmol). Foi adicionada uma solução aquosa de carbonato de potássio 2M desgaseificada (5,65 mL), o frasco foi selado e agitado por 16 horas a 100ºC. Após resfriamento até a temperatura ambiente, foi adicionada água e foi extraída três vezes com acetato de etila seguido de concentração em vácuo.
[203] A molécula alvo parcialmente desprotegida foi protegida como descrito anteriormente por agitação em temperatura ambiente com 1,1-dimetoxi-N,N-dimetilmetanamina em NDMF. A mistura da reação foi concentrada em vácuo e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa (Chromatorex c-18 10 um, 125x30mm, acetonitrila/água + amônia aquosa a 0,1% (32%)) para produzir o composto titular (174 mg, 0,432 mmol, 11 % de rendimento, 95% de pureza).
[204] LC-MS (Método B): Rt = 1,08 min; MS (ESIpos) m/z = 403 [M+H] * H-NMR (400MHz, DMSO-ds.) ô [ppm] 2.76 (s, 3H), 2.99 (s, 3H), 7.76 (s, 1H), 7.81 (d, 1H), 8.33 - 8.36 (m, 1H), 8.52 (dd, 1H), 8.76 (d, 1H), 8.88 (d, 1H), 9.09 (dd, 1H). 5-Amino-N-[ (dimetilamino)metileno]-2-[5- (trifluorometil)piridin- 3-il] benzeno sulfonamida Ss No
NEN so NX Os
F H,N F
[205] Pd/C (carga a 10%, 21 mg) foi adicionado a uma solução de N-[ (dimetilamino)metileno]-5-nitro-2-[5-(trifluorometil)piridin- 3-il]benzeno sulfonamida (174 mg, 0,39 mmol) em uma mistura de metanol (10 mL) e dioxano (10 mL) e agitada sob atmosfera de hidrogênio durante a noite em temperatura ambiente. o catalisador foi separado por filtração, lavado com acetato de etila e o filtrado foi concentrado em vácuo para produzir o composto titular (140 mg, quant., 95% de pureza) que foi usado sem purificação adicional na etapa seguinte.
[206] LC-MS (Método A): Rt = 0,90 min; MS (ESIpos) m/z = 373 [M+H] * 2-[1- (Difluorometil)-lH-pirazol-4-il]-N- [ (dimetilamino)metileno] -5-nitrobenzeno sulfonamida eh o ( eHs Og N —N EF
ST o.
[207] 2-Cloro-N-[ (dimetilamino)metileno]-5-nitrobenzeno sulfonamida (1,00 g, 3,43 mmol) foi dissolvido em n-propanol desgaseificado (30 mL) e tratado com 1-(difluorometil)-4-(4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-lH-pirazol (1,25 g, 5,14 mmol), bis(trifenilfosfina) dicloreto de paládio (11) (121 mg, 0,171 mmol) e trifenilfosfina (45,0 mg, 0,171 mmol). Foi adicionada uma solução aquosa de carbonato de potássio 2M desgaseificada (5,14 mL), o frasco foi selado e agitado por 16 horas a 100ºC. Após resfriamento até a temperatura ambiente, foi adicionada água e foi extraída três vezes com acetato de etila seguido de concentração em vácuo.
[208] O resíduo foi dissolvido novamente em uma mistura de metanol (25 mL) e n-propanol (25 mL), e amônia aquosa concentrada (50 mL) foi adicionada para desproteger completamente a molécula alvo para uma purificação mais fácil. A mistura da reação foi extraída com diclorometano e acetato de etila. As fases orgânicas foram secadas, seguidas de concentração em vácuo e purificação por HPLC preparativa (Chromatorex C-18 10 um, 125x30mm, acetonitrila/água + amônia aquosa a 0,1% (32%)) para produzir 2-[1-(difluorometil)-lH- pirazol-4-il]-5-nitrobenzeno sulfonamida (383 mg).
[209] Em seguida, a molécula alvo desprotegida foi protegida como descrito anteriormente por agitação em temperatura ambiente com 1,l1-dimetoxi-N, N-dimetilmetanamina em DMF. A concentração em vácuo produziu o composto titular (418 mg) que foi usado sem purificação adicional na etapa seguinte.
[210] LC-MS (Método B): Rt = 0,98 min; MS (ESIpos) m/z = 374 [M+H] * 'H-NMR (400MHz, DMSO-ds) 6 [ppm] 2.76 (d, 3H), 3.02 (s, 3H), 7.85 (dy, 1H), 7.91 - 7.93 (m, 2H), 7.95 (t, 1H), 8.19 - 8.21 (m, 1H),
8.43 (dd, 1H), 8.72 (d, 1H), 8.77 (d, 1H). 5-Amino-2-[1-(difluorometil)-lH-pirazol-4-il]-N- [ (dimetilamino)metileno]benzeno sulfonamida
Hs o fes Og N ON F
SS HAN
[211] Pd/C (carga a 10%, 54 mg) foi adicionado a uma solução de 2-[1- (difluorometil)-lH-pirazol-4-11]-N- [ (dimetilamino)metileno] -5-nitrobenzeno sulfonamida (418 mg 1,01 mmol) em uma mistura de metanol (10 mL) e dioxano (10 mL) e agitada sob atmosfera de hidrogênio durante a noite em temperatura ambiente. O catalisador foi removido por filtração, lavado com acetato de etila e o filtrado foi concentrado em vácuo para produzir o composto titular bruto (370 mg, quant., 90% de pureza) que foi usado sem purificação adicional na etapa seguinte.
[212] LC-MS (Método A): Rt = 0,74 min; MS (ESIpos) m/z = 344 [M+H] * 2-Bromo-5-nitrobenzeno sulfonamida
NH O=S=O ea nº o
[213] 2-bromo-5-nitrobenzenos sulfonil cloreto (20,0 g, 66,6 mmol) foi dissolvido em 1,4-dioxano (100 ml) e resfriado a 0ºC. Amônia aquosa (400 ml, 0,50 M, 200 mmol) foi adicionada lentamente e a agitação continuou em temperatura ambiente até a conclusão da reação. O solvente foi removido sob pressão reduzida e diclorometano foi adicionado. A fase orgânica foi lavada com água três vezes. A suspensão foi filtrada (sólido é produto) e a fase orgânica foi lavada com salmoura. As fases orgânicas combinadas foram secadas com sulfato de sódio, e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi recristalizado em dietil éter para produzir 16,4 g (93% de pureza, 88% de rendimento).
[2114] LC-MS (Método B): Rt = 0,45 min; MS (ESIpos) m/z = 281 [M+H] * 2-Bromo-N-[ (dimetilamino)metilideno] -5-nitrobenzeno sulfonamida H3C, CHz &.
Ode Br ox ) dr
[215] 2-bromo-5-nitrobenzeno sulfonamida (16,4 g, 58,3 mmol) foi dissolvida em DMF (200 ml) em temperatura ambiente e 1,1- dimetoxi-N,N-dimetilmetanamina (15 ml, 120 mmol) foi adicionada. A agitação continuou até a conclusão da reação. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto bruto foi dividido entre diclorometano e salmoura. A fase orgânica foi secada em filtro Whatman e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional (19,2 g, 78% de pureza, 98% de rendimento).
[216] LC-MS (Método A): Rt = 0,92 min; MS (ESIpos) m/z = 336 [M+H] *+ 5-Amino-2-bromo-N-[ (dimetilamino)metilideno]benzeno sulfonamida H3C. 2 CHs
SW O=S=O ê Br HaN
[217] 2-Bromo-N-|[ (dimetilamino)metilideno] -5-nitrobenzeno sulfonamida (12,7 g, 37,8 mmol) foi dissolvido em metanol (170 ml) e o frasco foi lavado com nitrogênio. Foi adicionada platina em carvão vegetal (carga a 5%, 1,61 g, 8,26 mmol) e o frasco foi esvaziado e subsequentemente lavado com hidrogênio (1 bar). A agitação continuou em temperatura ambiente até a conclusão da reação. A mistura de reação foi filtrada em Celite e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi usado sem purificação adicional na etapa seguinte (5,5 g, 76% de pureza, 59% de rendimento).
[218] LC-MS (Método A): Rt = 0,75 min; MS (ESIpos) m/z = 306 [M+H] *+ N- (4-Bromo-3-([(dimetilamino)metilideno] sul famoil)fenil)-2-(2- clorofenil)acetamida H3C 2 C Hs O=S=O o RYO CU, Cc H
[219] 5-Amino-2-bromo-N-[ (dimetilamino)metilideno]benzeno sulfonamida (4,85 g, 15,8 mmol) foi dissolvido em DMF (100 ml) e (2-clorofenil)ácido acético (3,24 g, 19,0 mmol) foi adicionado seguido pela adição de N,N-diisopropiletilamina (13 ml, 79 mmol) e HATU (9,64 g, 25,3 mmol). A mistura da reação foi agitada durante 3 horas a 50ºC. O solvente foi removido sob pressão reduzida e foram adicionados acetato de etila e água. As fases foram separadas, e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila. As fases orgânicas combinadas foram secadas em filtro Whatman e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi suspenso em diclorometano e filtrado, o solvente foi removido e o produto bruto foi usado sem purificação adicional na etapa seguinte (15,7 g).
[220] LC-MS (Método B): Rt = 1,08 min; MS (ESIpos) m/z = 458 [M+H] *+ Esse intermediário também pode ser usado como sal de HCl. 5-Amino-2- (1-ciclopropil-lH-pirazol-4-11)-N- [ (dimetilamino)metilideno] benzeno sulfonamida
H3C CH No > O=S=0 —N SS” H,N
[221] 2-Cloro-5-nitrobenzeno sulfonamida (674 mg, 2,85 mmol) e l-ciclopropil-4- (4,4,5,5-tetrametil-1l,3,2-dioxaborolan-2-il) - lH-pirazol (1,00 g, 4,27 mmol) foram dissolvidos em n-propanol (34 ml) e bis(trifenilfosfina) dicloreto de paládio (II) (CAS 13965-03-2) (100 mg, 142 umol) e trifenilfosfina (37,3 mg, 142 umol) foram adicionados. A reação foi purificada com argônio por minutos e carbonato de potássio aq. (5,7 ml, 1,0 M, 5,7 mmol) foi adicionado. A reação foi aquecida a 100ºC durante 3h. Depois a mistura foi filtrada em Celite e o solvente foi removido sob pressão reduzida. Foram adicionados acetato de etila e água. As fases foram separadas, e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila. As fases orgânicas combinadas foram secadas em filtro Whatman e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional.
[222] 2- (1-Ciclopropil-lH-pirazol-4-il)-5-nitrobenzeno sulfonamida (1,17 g, 3,79 mmol) e 1,1-dimetoxi-N,N- dimetilmetanamina (1,0 ml, 7,6 mmol) foram dissolvidos em DMF (25 ml) e a reação foi agitada em temperatura ambiente até a conclusão da reação. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto bruto foi usado sem purificação adicional na etapa seguinte.
[223] 2- (1-Ciclopropil-lH-pirazol-4-11)-N- [ (dimetilamino)metilideno] -5-nitrobenzeno sulfonamida (1,84 9, 5,06 mmol) foi dissolvido em THF (30 ml) e o frasco foi lavado com nitrogênio. Foi adicionado paládio em carvão (carga a 10%, 53,9 g, 506 umol) e o frasco foi esvaziado e subsequentemente lavado com hidrogênio (1 bar). A agitação continuou em temperatura ambiente até a conclusão da reação. A mistura de reação foi filtrada em Celite e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi utilizado sem purificação adicional na etapa seguinte (1,3 g, 53% de pureza, 75% de rendimento em 3 etapas).
[224] LC-MS (Método A): Rt = 0,70 min; MS (ESIpos) m/z = 334 [M+H] * 5-Amino-2-[1- (difluorometil)-lH-pirazol-4-il]benzeno sulfonamida
F F oo NS” HaN
[225] 2-Bromo-N-[ (dimetilamino)metilideno]-5-nitrobenzeno sulfonamida (800 mg, 2,3 mmol) e 1-(difluorometil)-4-(4,4,5,5- tetrametil-1l,3,2-dioxaborolano-2-il)-lH-pirazol (700 mg, 2,87 mmol) foram dissolvidos em n-propanol (15 ml) e bis (trifenilfosfina) dicloreto de paládio (II) (CAS 13965-03-2) (84 mg, 119 umol) e trifenilfosfina (31 mg, 119 umol) foram adicionados. A solução foi purificada com argônio durante 5 minutos e foi adicionado carbonato de potássio aq. (3,6 ml, 2,0 M, 7,2 mmol). A reação foi aquecida a 100ºC durante 16h. Água e acetato de etila foram adicionados. As fases foram separadas, e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila. As fases orgânicas combinadas foram secadas em filtro Whatman e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional.
[226] 2-[1- (Difluorometil)-lH-pirazol-4-il]-N- [ (dimetilamino)metilideno] -5-nitrobenzeno sulfonamida (2,16 g9, 5,79 mmol) foi dissolvido em tetra-hidrofurano (50 ml) e platina em carvão vegetal (carga a 5%, 307 mg, 1,57 mmol) foi adicionado. O frasco foi esvaziado três vezes e lavado com hidrogênio (1 bar). A reação foi agitada durante 4h em temperatura ambiente. De acordo com UPLC-MS, a reação não estava completa e as mesmas quantidades de platina em carvão foram adicionadas e a reação foi agitada sob atmosfera de hidrogênio por mais 16 h. Depois, a mistura foi filtrada em Celite e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.
[227] 5-Amino-2-[1- (difluorometil)-lH-pirazol-4-il]-N- [ (dimetilamino)metilideno]benzeno sulfonamida (670 mg, 1,95 mmol) foi dissolvido em metanol (25 ml) e tratado com solução aquosa de amônia (25 ml) a 25% em temperatura ambiente até a conclusão da reação. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (Biotage, gradiente diclorometano/acetato de etila) e subsequente purificação por HPLC ((Waters XBrigde C18 517 100x30mm, acetonitrila/água + ácido fórmico a 0,1%) para produzir 53 mg (99% de pureza, 9% de rendimento em 3 etapas). As reações foram repetidas e o produto bruto foi usado nas etapas seguintes usando esse intermediário.
[228] LC-MS (Método B): Rt = 0,58 min; MS (ESIpos) m/z = 289 [M+H] * 5-Bromo-2-cloro-N-[ (dimetilamino)metilideno]piridina-3- sulfonamida O Ps
N on "CH; DP Cl
LX
[229] 5-Bromo-2-cloropiridina-3-sulfonamida (3,86 g, 14,2 mmol e 1,1-dimetoxi-N,N-dimetilmetanamina (3,8 ml, 28 mmol) foram dissolvidos em DMF (40 ml) e agitados durante 2 horas em temperatura ambiente. O solvente foi removido sob pressão reduzida e diclorometano e salmoura foram adicionados. As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com água. As fases orgânicas combinadas foram secadas em filtro Whatman e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional (5,12 g).
[230] LC-MS (Método B): Rt = 0,89 min; MS (ESIpos) m/z = 326 [M+H] *
2-Cloro-N-[ (dimetilamino)metilideno]-5- [ (di fenilmetilideno) amino] piridina-3-sulfonamida H3C 2 CHs dy O=S=O e
[231] 5-Bromo-2-cloro-N-[ (dimetilamino)metilideno]piridina-3- sulfonamida (5,00 g, 15,3 mmol), 1,1-difenilmetanimina (3,9 ml, 23 mmol), XantPhos (886 mg, 1,53 mmol) e acetato de paládio (II) (172 mg, 765 umol) foram dissolvidos em dioxano (150 ml). A solução foi purificada com argônio durante 5 minutos e foi adicionado carbonato de césio (15,0 g, 45,9 mmol). A reação foi aquecida a 100ºC por 1 h. Depois, o solvente foi removido sob pressão reduzida e foram adicionados água e acetato de etila. As fases foram separadas, e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila. As fases orgânicas combinadas foram secadas em filtro Whatman e o solvente foi removido sob pressão reduzida. Metade do produto bruto foi utilizada sem purificação adicional e 3 9g foram purificados por cromatografia em sílica gel revestida com amônia (Biotage, hexano/acetato de etila) para produzir 1,00 g (78% de pureza, 15% de rendimento com base na quantidade total de material inicial)
[232] LC-MS (Método B): Rt = 1,26 min; MS (ESIpos) m/z = 427 [M+H] * 2-[1- (Difluorometil)-lH-pirazol-4-11]-N- [ (dimetilamino)metilideno]-5-[(difenilmetilideno) amino]piridina- 3-sulfonamida
H30 NC Ha my o=S8=0 =N F
O | F
[233] 2-Cloro-N-[ (dimetilamino)metilideno]-5- [ (di fenilmetilideno) amino] piridina-3-sulfonamida (1,50 g, 3,51 mmol, bruto) e 1- (difluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)-lH-pirazol (1,71 g, 7,03 mmol) foram dissolvidos em n-propanol (30 ml) /DMF (15 ml) e bis (trifenilfosfina) dicloreto de paládio (II) (CAS 13965-03-2) (371 mg, 527 umol), trifenilfosfina (225 mg, 0,85 mmol), fluoreto de potássio (408 mg, 7,03 mmol) e solução aq. de fosfato de potássio (1,8 ml, 2,0 M, 3,5 mmol) foram adicionados. A solução foi purificada com argônio por 5 minutos e a reação foi aquecida a 100ºC por 1 h no micro-ondas (1 bar / 30 W). O solvente foi removido sob pressão reduzida e foram adicionados água e acetato de etila. As fases foram separadas, e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila. As fases orgânicas combinadas foram secadas em filtro Whatman e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel revestida com amônia (Biotage, hexano/acetato de etila) (1,54 g, 65% de pureza, 86% de rendimento).
[234] LC-MS (Método B): Rt = 1,26 min; MS (ESIpos) m/z = 509 [M+H] * 5-Amino-2-[1- (difluorometil)-lH-pirazol-4-il]-N- [ (dimetilamino)metilideno] piridina-3-sulfonamida
H3C VE Hsa
SW Oo=S=0 =N A N.
SS N HAN R
[235] 2-[1- (Difluorometil)-lH-pirazol-4-il]-N- [ (dimetilamino)metilideno]-5-[(difenilmetilideno)amino]piridina- 3-sulfonamida (1,54 g, 3,03 mmol) foi dissolvido em dioxano (15 ml) e HCl aq. (2,0 ml, 3,0 M, 6,1 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada durante lh em temperatura ambiente. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto bruto foi usado sem purificação adicional na etapa seguinte (2,45 g).
[236] LC-MS (Método B): Rt = 0,66 min; MS (ESIpos) m/z = 345 [M+H] *+ 5-Amino-2- (4-cloro-lH-pirazol-1-il)-N- [ (dimetilamino)metileno]piridina-3-sulfonamida H3C. E Ha
SW O=S=O O Cl
N e
N Han
[237] 2-Cloro-N-[ (dimetilamino)metileno]-5- [ (di fenilmetileno) amino] piridina-3-sulfonamida (1,00 9, 2,34 mmol) foi dissolvido em DMSO (18 mL). 4-cloro-lH-pirazol (480 mg, 4,69 mmol), iodeto de potássio (389 mg, 2,34 mmol) e fosfato de potássio (746 mg, 3,51 mmol) foram adicionados, e a mistura de reação foi agitada durante a noite a 100ºC. Em seguida, foi concentrado em vácuo, extraído com diclorometano/água, e a fase orgânica foi lavada com salmoura e secada em sulfato de sódio, seguida de concentração em vácuo.
[238] Devido à desproteção parcial, o material foi dissolvido novamente em DMF (2 ml) e agitado durante a noite com 1,1- dimetoxi-N, N-dimetilmetanamina (0,5 mL). A agitação durante a noite resultou em um precipitado que foi removido por filtração (229 mg de 2- (4-cloro-lH-pirazol-1-il)-N- [ (dimetilamino)metileno]-5-[(difenilmetileno) amino] piridina-3- sulfonamida). O filtrado foi concentrado em vácuo, extraído com diclorometano / água e a fase orgânica foi lavada com salmoura e seca sobre sulfato de sódio, seguida de concentração em vácuo para produzir 2- (4-cloro-lH-pirazol-1-il)-N- [ (dimetilamino)metileno]-5-[(difenilmetileno)amino]piridina-3- sulfonamida (549 mg) bruta.
[239] LC-MS (Método A): Rt = 1,31 min, MS (ESIpos): m/z = 493 [M+H]* 1H-NMR (400MHz, DMSO-ds;) ô [ppm] 2.80 (s, 3H), 3.09 (s, 3H), 7.27 —- 7.33 (m, 2H), 7.38 - 7.44 (m, 3H), 7.49 - 7.56 (m, 2H), 7.58 -
7.64 (m, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.69 - 7.76 (my, 2H), 7.79 - 7.83 (Mm, 2H), 8.17 (d, 1H), 8.32 (d, 1H).
[240] O material puro (229 mg) da etapa anterior foi dissolvido em dioxano (2,0 mL) e HCl 2M em dioxano (1,00 mL, 2,00 mmol) foi adicionado, seguido de agitação durante a noite. Foi concentrado em vácuo e extraído com acetato de etila/água. A fase orgânica foi lavada com salmoura, secada em sulfato de sódio e concentrada em vácuo para produzir o composto titular bruto (200 mg) que foi usado sem purificação adicional nas etapas seguintes.
[241] LC-MS (Método A): Rt = 0,71 min, MS (ESIpos): m/z = 329 [M+H]* 5-Amino-N-[(dimetilamino)metilideno] -2- [4- (trifluorometil)-lH- pirazol-1-il]piridina-3-sulfonamida H30 OC Ha
RN
N F o=$=0 A x H.N TN
[242] A reação foi executada em uma escala de três vezes lg. 2- Cloro-N-[ (dimetilamino)metilideno]-5-
[ (di fenilmetilideno) amino] piridina-3-sulfonamida (3,00 g, 7,03 mmol) e 4-(trifluorometil)-lH-pirazol (1,43 g, 10,5 mmol) foram dissolvidos em DMSO (110 ml, 1,6 mol) e foram adicionados iodeto de potássio (583 mg, 3,51 mmol) e fosfato de potássio (2,24 g, 10,5 mmol). A reação foi aquecida por 5 h no micro-ondas a 100ºC. Depois, o sólido foi removido por filtração e foram adicionados ao filtrado acetato de etila e água. A fase orgânica foi lavada com salmoura e secada com sulfato de sódio. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (Biotage, acetato de etila/hexano) para produzir 15,7 g (424% de rendimento).
[243] LC-MS (Método A): Rt = 1,40 min; MS (ESIpos) m/z = 472 [M+H] *
[244] 5-[(Difenilmetilideno) amino]-2-[4-(trifluorometil)-lH- pirazol-l-il]piridina-3-sulfonamida (3,50 dg, 7,42 mmol) foi dissolvido em 1,4-dioxano (100 ml) e HCl (4,9 ml, 3,0 M, 15 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto bruto foi repartido entre acetato de etila e água. Depois, a fase orgânica combinada foi secada em MgSO4 e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi dissolvido em acetonitrila e água e liofilizado durante a noite.
[245] LC-MS (Método B): Rt = 0,56 min; MS (ESIpos) m/z = 307 [M+H] * 2- (4-Ciano-lH-pirazol-1-il)-5-nitrobenzeno sulfonamida
NH O=S=O N=— — Ds Nº
O
[246] 2-Cloro-5-nitrobenzenos sulfonamida (250 mg, 1,06 mmol) foi dissolvido em acetonitrila (10 mL), seguido pela adição de lH-pirazol-4-carbonitrila (148 mg, 1,59 mmol) e carbonato de potássio em pó fino (438 mg, 3,17 mmol). A mistura de reação foi agitada durante a noite a 100ºC. Após resfriamento até a temperatura ambiente, foram adicionados diclorometano e água, e a fase orgânica foi lavada com solução de salmoura, secada em sulfato de sódio e concentrada em vácuo. A purificação por HPLC preparativa (Chromatorex c-18 10 um, 125x30 mm, acetonitrila/água + ácido fórmico a 0,1%) produziu o composto titular (128 mg, 0,436 mmol, 41% de rendimento, 70% de pureza).
[247] LC-MS (Método A): Rt = 0,78 min; MS (ESIpos) m/z = 294 [M+H] *+ 1H-NMR (400MHz, DMSO-ds.) 8 [ppm]: 7.94 (br d, 2H), 7.98 (d, 1H),
8.42 (d, 1H), 8.61 (dd, 1H), 8.83 (d, 1H), 9.04 (d, 1H). 5-Amino-2- (4-ciano-lH-pirazol-1-il)benzeno sulfonamida
NH O=S=O N= — Ô = H,N
[248] 2- (4-Ciano-lH-pirazol-1-il)-5-nitrobenzeno sulfonamida (128 mg, 0,44 mmol) foi dissolvido em metanol (17 mL) e dioxano (3 mL). O frasco foi esvaziado e lavado com nitrogênio, seguido pela adição de paládio em carbono (13 mg, carga a 10%). Foi novamente esvaziado e agora lavado com hidrogênio, seguido de agitação em atmosfera de hidrogênio por 5 h em temperatura ambiente. O hidrogênio foi removido, o catalisador foi filtrado e o filtrado foi concentrado em vácuo. Foi dissolvido novamente em diclorometano e novamente concentrado em vácuo para produzir o composto titular (81 mg, 0,308 mmol, 70% de rendimento, 79% de pureza).
[249] LC-MS (Método B): Rt = 0,46 min; MS (ESIpos) m/z = 264 [M+H] *+ 1H-NMR (400MHz, DMSO-ds) 8 [ppm]: 6.06 (s, 2H), 6.77 (dd, 1H),
7.17 -— 7.23 (m, 4H), 8.23 (d, 1H), 8.71 (d, 1H) Exemplos de síntese Exemplo 19 2- (2-Clorofenil)-N-(3-sulfamoil-4-[4-(trifluorometil)-lH- pirazol-1-il] feniljacetamida
NH O=S=O0 CD o ea 7 e OU, cl H
[250] 5-Amino-N-(2,4-dimetoxibenzil)-2-[4-(trifluorometil)-1H- pirazol-1-il]benzeno sulfonamida (22,3 g, 48,9 mmol) foi dissolvido em DMF (460 mL) seguido pela adição de (2- clorofenil)ácido acético (12,5 SG, 73,3 mmol), N, N- diisopropiletilamina (25,3 g, 195 mmol) e HATU (27,9 g, 73,3 mmol). A mistura da reação foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. Foi concentrado em vácuo e extraído com diclorometano e água. A fase orgânica foi lavada com solução de bicarbonato de sódio, solução salina e cloreto de amônio, secada em sulfato de sódio e concentrada novamente em vácuo. O produto protegido foi precipitado parcialmente durante a lavagem com cloreto de amônio e foi removido antes da secagem com sulfato de sódio.
[251] Ambos, o resíduo e o precipitado foram dissolvidos em diclorometano (150 mL) e tratados com ácido trifluoroacético (75 mL), seguido de agitação durante a noite em temperatura ambiente.
[252] Novamente, o produto foi precipitado parcialmente e foi removido. A solução restante foi concentrada em vácuo e extraída com diclorometano e água. A fase orgânica foi lavada com solução de bicarbonato e salmoura, secada em sulfato de sódio e foi finalmente concentrada em vácuo. Durante a elaboração aquosa, O produto precipitou parcialmente novamente. As frações de precipitado combinadas mais a fração concentrada da fase orgânica foram combinadas e purificadas por cristalização a partir de acetato de etila em refluxo para produzir o composto titular (12,3 g, 26,8 mmol, 55% de rendimento em 2 etapas, 98% de pureza).
[253] LC-MS (Método B): Rt = 1,06 min; MS (ESIpos) m/z = 459 [M+H] *+
IH-NMR (400MHz, DMSO-ds;) 8 [ppm] 3.92 (s, 2H), 7.30 - 7.37 (m, 2H), 7.42 - 7.48 (m, 4H), 7.60 (df, 1H), 7.98 (dd, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.39 (d, 1H), 8.74 (s, 1H), 10.83 (s, 1H). Exemplo 20 2- (2-Fluorofenil)-N-(3-sulfamoil-4-[4-(trifluorometil)-lH- pirazol-1-il] feniljacetamida
NH O=S=0O A os ô NÃ E OU,
F H
[254] 5-Amino-N-(2,4-dimetoxibenzil)-2-[4-(trifluorometil)-l1H- pirazol-1-il]benzeno sulfonamida (350 mg, 0,767 mmol) foi dissolvido em DMF (15 mL) seguido pela adição de (2- fluorofenil)ácido acético (130 mg, 0,843 mmol), N,N- diisopropiletilamina (496 mg, 3,83 mmol) e HATU (466 mg, 1,23 mmol). A mistura da reação foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. Foi concentrada em vácuo e extraída com diclorometano e água. A fase orgânica foi lavada com salmoura, secada em sulfato de sódio e concentrada novamente em vácuo.
[255] O resíduo foi dissolvido em diclorometano (10 mL) e tratado com ácido trifluoroacético (4,37 g, 38,3 mmol), seguido de agitação durante a noite em temperatura ambiente. Foi concentrado em vácuo e purificado por HPLC preparativa (Chromatorex C-18 10 um, 125x30 mm, acetonitrila/água + ácido fórmico a 0,1%) %)) para produzir o composto titular (60,5 mg, 0,137 mmol, rendimento de 18% em 2 etapas, 98% de pureza).
[256] LC-MS (Método A): Rt = 1,10 min; MS (ESIpos) m/z = 443 [M+H] * 'H-NMR (400MHz, DMSO-ds) 8 [ppm] 3.82 (s, 2H), 7.17 - 7.23 (mM, 2H), 7.31 - 7.49 (m, 4H), 7.60 (df, 1H), 7.98 (dd, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.39 (d, 1H), 8.74 (s, 1H), 10.82 (s, 1H). Exemplo 24 2- (2-Clorofenil)-N-[4-(3-cloro-1H-1,2,4-triazol-1-il)-3- sulfamoilfenil]acetamida o ss N E Re OU, Cc H
[257] De acordo com os procedimentos gerais GPl.2, GP2.1, GP3.4 e GP4.2, 2-cloro-N- (2,4-dimetoxibenzil)-5-nitrobenzeno sulfonamida (500 mg, 1,29 mmol), 3-cloro-l1H-1,2,4-triazol (201 mg, 1,94 mmol) e (2-clorofenil) ácido acético (203 mg, 1,19 mmol) foram convertidos sem purificação de intermediários no composto titular e foram purificados no final por HPLC preparativa ( Waters XBridge C18 5p 100x30mm, acetonitrila/água + amônia aquosa a 0,2% (32%)) (9 mg, 0,0211 mmol, 2% de rendimento em 4 etapas, 97% de pureza).
[258] LC-MS (Método B): Rt = 0,70 min; MS (ESIpos) m/z = 426 [M+H] * 1H-NMR (600MHz, DMSO-ds) 8 [ppm]: 3.92 (s, 2H), 7.31 - 7.35 (m, 2H), 7.43 - 7.49 (m, 2H), 7.60 (s, 2H), 7.62 (d, 1H), 7.95 (dd, 1H), 8.42 (d, 1H), 8.81 (s, 1H), 10.87 (s, 1H). Exemplo 25 2- (2-Clorofenil)-N-[4- (4-cloro-lH-pirazol-1-il)-3- sulfamoilfenil]acetamida NH2 O=S=O Da Ss ô NÃ ; VN Cl H
[259] De acordo com os procedimentos gerais GPl.2, GP2.1, GP3.4 e GP4.2, 2-cloro-N- (2,4-dimetoxibenzil)-5-nitrobenzeno sulfonamida (500 mg, 1,29 mmol), 4-cloro-lH-pirazol (199 mg, 1,94 mmol) e (2-clorofenil) ácido acético (313 mg, 1,83 mmol) foram convertidos sem purificação de intermediários no composto titular e foram purificados no final por HPLC preparativa (Waters XBridge C18 5p 100x30mm, acetonitrila/água + amônia aquosa a 0,2% (32%)) (55 mg, 0,129 mmol, 10 % de rendimento em 4 etapas, 99 % de pureza)
[260] LC-MS (Método B): Rt = 0,95 min; MS (ESIpos) m/z = 425 [M+H] * 1H-NMR (500MHz, DMSO-ds) 8 [ppm]: 3.91 (s, 2H), 7.31 - 7.37 (m, 2H), 7.41 (s, 2H), 7.44 - 7.49 (m, 2H), 7.55 (d, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.97 (dd, 1H), 8.35 (d, 1H), 8.38 (d, 1H), 10.81 (s, 1H). Exemplo 26 2- (2-Clorofenil)-N-[4- (4-fluoro-lH-pirazol-1-il)-3- sulfamoilfenil]acetamida NH2 O=S=O0 Dt & Ô NÃ AU, Cc H
[261] De acordo com os procedimentos gerais GPl.2, GP2.1, GP3.4 e GP4.2, 2-cloro-N- (2,4-dimetoxibenzil)-5-nitrobenzeno sulfonamida (500 mg, 1,29 mmol), 4-fluoro-lH-pirazol (167 mg, 1,94 mmol) e (2-clorofenil) ácido acético (151 mg, 1,89 mmol) foram convertidos sem purificação de intermediários no composto titular e foram purificados no final por HPLC preparativa ( Waters XBridge C18 5p 100x30mm, acetonitrila/água + amônia aquosa a 0,2% (32%)) (43 mg, 0,105 mmol, 8 % de rendimento em 4 etapas, 97% de pureza).
[262] LC-MS (Método B): Rt = 0,88 min; MS (ESIpos) m/z = 409 [M+H] * 1H-NMR (500MHz, DMSO-ds) 8 [ppm]: 3.91 (s, 2H), 7.30 - 7.37 (m, 2H), 7.39 (s, 2H), 7.43 - 7.50 (m, 2H), 7.53 (d, 1H), 7.84 (d, 1H), 7.97 (dd, 1H), 8.26 (d, 1H), 8.37 (d, 1H), 10.79 (s, 1H). Exemplo 28 N-[4- (4-Bromo-lH-pirazol-1-il)-3-sulfamoilfenil]-2-(2- clorofenil)acetamida
NH O=S=O N=—
QT
N Cc H
[263] De acordo com os procedimentos gerais GPl.2, GP2.2, GP3.5 e GP4.1, 2-cloro-N- (2,4-dimetoxibenzil)-5-nitrobenzeno sulfonamida (400 mg, 1,03 mmol), 4-bromo-lH-pirazol (228 mg, 1,55 mmol) e (2-clorofenil) ácido acético (264 mg, 1,55 mmol) foram convertidos sem purificação de intermediários no composto titular e foram purificados no final por HPLC preparativa ( Waters XBridge C18 5p 100x30mm, acetonitrila/água + ácido fórmico a 0,1%) (27 mg, 0,0575 mmol, 6 % de rendimento em 4 etapas, 95 % de pureza).
[264] LC-MS (Método A): Rt = 1,10 min; MS (ESIpos): m/z = 469/471 [M+H]* 1H-NMR (400MHz, DMSO-ds) 8 [ppm]: 3.90 (s, 2H), 7.29 - 7.36 (m, 2H), 7.41 (s, 2H), 7.42 - 7.48 (m, 2H), 7.54 (d, 1H), 7.87 (d, 1H), 7.96 (dd, 1H), 8.34 (d, 1H), 8.37 (d, 1H), 10.80 (s, 1H). Exemplo 39 2- (2-Clorofenil)-N-[4-(4-ciano-lH-pirazol-1-il)-3- sulfamoilfenil]acetamida
NH O=S=O0 N= —z Qu”
N Cc! H
[265] Método 1: Pd/C (carga a 10%, 350 mg) foi adicionado a uma solução de 2-(4-ciano-lH-pirazol-1-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)-5- nitrobenzeno sulfonamida (9,09 g, 20,5 mmol) em uma mistura de metanol (120 mL) e tetra-hidrofurano (250 mL) e agitada em temperatura ambiente por 3 h sob um fluxo de hidrogênio. O catalisador foi removido por filtração, seguido de lavagem com tetra-hidrofurano e concentração do filtrado sob vácuo. Foi extraído com acetato de etila/água. Foi adicionada solução de carbonato de sódio e foi agitada durante a noite. O precipitado resultante foi removido por filtração e descartado. A fase orgânica foi separada, secada em sulfato de sódio e concentrada em vácuo para produzir 5-amino-2-(4-ciano-lH-pirazol-1-il)-N- (2, 4-dimetoxibenzil)benzeno sulfonamida bruto (6,37 g) que foi usado sem purificação adicional na etapa seguinte.
[266] LC-MS (Método B): Rt = 1,06 min; MS (ESIpos) m/z = 414 [M+H] * 'H-NMR (400MHz, DMSO-ds) 8 [ppm]: 3.69 (s, 3H), 3.72 (s, 3H),
3.92 (br d, 2H), 6.04 (s, 2H), 6.40 - 6.48 (m, 2H), 6.78 (dd, 1H), 7.08 - 7.14 (m, 2H), 7.19 (df, 1H), 7.27 (br t, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.70 (s, 1H).
[267] O material bruto da etapa anterior (6,37 g) foi dissolvido em DMF (87 mL) seguido pela adição de (2-clorofenil) ácido acético (3,94 g, 23,1 mmol), N,N-diisopropiletilamina (5,97 g, 46,2 mmol) e HATU (8,78 g, 23,1 mmol). A mistura da reação foi agitada durante o final de semana em temperatura ambiente. Foi então concentrado em vácuo e extraído com acetato de etila e água. A fase orgânica foi lavada com cloreto de amônio, solução de bicarbonato de sódio e salmoura, secada em sulfato de sódio e concentrada novamente em vácuo para produzir 2-(2-clorofenil)-N- (4- (4-ciano-lH-pirazol-1-11)-3-[(2,4-dimetoxibenzil)- sulfamoil] feniljacetamida bruta (9,77 gq) que foi usada sem purificação adicional na etapa seguinte.
[268] LC-MS (Método B): Rt = 1,27 min; MS (ESIpos) m/z = 566 [M+H] +
[269] O material bruto da etapa anterior (9,77 g) foi dissolvido em uma mistura de diclorometano (30 mL) e ácido trifluoroacético (15 mL) e foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Foi concentrado em vácuo, dissolvido em diclorometano e concentrado em vácuo novamente para remover o ácido trifluoroacético restante. Foi então agitado em uma mistura de diclorometano/água no fim de semana. O precipitado resultante foi removido por filtração e proporcionou o composto titular puro (5,40 g, 13,0 mmol, rendimento de 63% em 3 etapas, 97% de pureza). A pureza poderia ser melhorada ainda mais por recristalização em acetato de etila/hexanos.
[270] LC-MS (Método B): Rt = 0,84 min, MS (ESIpos): m/z = 416 [M+H]*+ *H-NMR (400MHz, DMSO-ds.) 8 [ppm]: 3.91 (s, 2H), 7.29 - 7.36 (m, 2H), 7.42 -— 7.49 (m, 4H), 7.58 (df, 1H), 7.97 (dd, 1H), 8.31 (d, 1H), 8.39 (d, 1H), 8.86 (d, 1H), 10.84 (br s, 1H).
[271] Método 2: 5-Amino-2- (4-ciano-lH-pirazol-l1-il)benzeno sulfonamida (81 mg, 0,31 mmol) foi dissolvido em dimetilformamida (1 mL), seguido pela adição de N, N- diisopropiletilamina (119 mg, 0,92 mmol), (2-clorofenil)ácido acético (63 mg, 0,37 mmol) e HATU (1- [bis (dimetilamino)metileno] -1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridínio 3- oxid hexafluorofosfato, 140 mg, 0,37 mmol). A mistura da reação foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. Depois foi concentrado em vácuo, foram adicionados acetato de etila e água, e a fase orgânica foi lavada com salmoura, secada em sulfato de sódio e foi concentrada em vácuo. A purificação por HPLC preparativa (Chromatorex c-18 10 um, 125x30 mm, acetonitrila/água + amônia aquosa a 0,1% (32%)) produziu oO composto titular (33 mg, 0,0794 mmol, 26% de rendimento, 50% de pureza). Exemplo 170 N-[4- (4-Cloro-lH-pirazol-1-il)-3-sulfamoilfenil]-2-(4- metoxifenil)acetamida NH2 O=S=O Da
DA NÃ N H
[272] De acordo com o procedimento geral GP5.1, 5-amino-2-(4- cloro-lH-pirazol-l1-il)-N-(2,4-dimetoxibenzil)benzeno sulfonamida (0,20 mmol) e (4-metoxifenil)ácido acético (0,40 mmol) foram convertidos no composto titular (12,2 mg, 0,0290 mmol, 14% de rendimento, 100% de pureza).
[273] LC-MS (Método A): Rt = 1,07 min; MS (ESIpos) m/z = 421 [M+H] * Exemplo 321 N-(6-[1- (Difluorometil)-lH-pirazol-4-il]-5-sulfamoilpiridin-3- il)-2- (2-fluorofenil)acetamida NH2 O=S=0 =N F
NS N F H
[274] 5-Amino-2-[1- (difluorometil)-lH-pirazol-4-il]-N- [ (dimetilamino)metilideno]piridina-3-sulfonamida (400 mg, 1,16 mmol) foi dissolvido em DMF (10 ml) e (2-fluorofenil)ácido acético (179 mg, 1,16 mmol) foi adicionado seguido pela adição de N,N-diisopropiletilamina (1,0 ml, 5,8 mmol) e HATU (530 mg, 1,39 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. O solvente foi removido sob pressão reduzida e acetato de etila e água foram adicionados. As fases foram separadas, e a fase aquosa foi lavada com acetato de etila. As fases orgânicas combinadas foram secadas em filtro Whatman e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por HPLC (Chromatorex C-18 10 um, 125x30 mm, acetonitrila/água + amônia aquosa a 0,2% (32%)) para produzir 30,0 mg (rendimento de 5%).
[275] LC-MS (Método B): Rr = 0,99 min; MS (ESIpos): m/z = 481 [M+H]*
[276] N- (6- [1- (Difluorometil)-lH-pirazol-4-il]-5- ([ (dimetilamino)metilideno] sulfamoil )piridin-3-il)-2-(2- fluorofenil)acetamida (30,0 mg, 62,4 umol) foi dissolvido em amônia em metanol (10 ml, 7 M) e agitado em temperatura ambiente. Posteriormente, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto bruto foi purificado por HPLC (Chromatorex c-18 l10um, 125x30mm, acetonitrila/água + amônia aquosa a 0,2%
(32%)) para produzir o composto titular (10,1 mg, 99% de pureza, 38% de rendimento).
[277] LC-MS (Método B): Rr = 0,66 min; MS (ESIpos): m/z = 426 [M+H]* !H-NMR (400MHz, DMSO-ds): 5 [ppm]= 3.83 (s, 2H), 7.15 -— 7.24 (m, 2H), 7.31 - 7.38 (my, 1H), 7.42 (td, 1H), 7.71 - 8.07 (m, 3H),
8.29 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.78 (d, 1H), 8.93 (d, 1H), 10.86 (s, 1H). Exemplo 326 2- (2-Clorofenil)-N-(4-[1-(difluorometil)-lH-pirazol-4-1il1]-3- sulfamoilfenilJ)acetamida
F NH2 yF o=S=0 (N DA, Cc H
[278] N- (4-Bromo-3-([ (dimetilamino)metilideno] sul famoil)fenil)- 2- (2-clorofenil)acetamida (1,50 Gg, 3,27 mmol), 1- (di fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)- lH-pirazol (958 mg, 3,92 mmol) e fluoreto de potássio (418 mg, 7,19 mmol) foram dissolvidos em DMF (36 ml). A mistura foi purificada com argônio por 5 minutos, seguida pela adição de bis (tri-tert-butilfosfina)paládio (0) (CAS 53199-31-8) (83,5 mg, 163 umol). A reação foi aquecida por 1 h a 100ºC, filtrada em um filtro de fibra de vidro e o procedimento foi repetido. Depois, o solvente foi removido sob pressão reduzida e acetato de etila e água foram adicionados. As fases foram separadas, e a fase aquosa foi lavada com acetato de etila. As fases orgânicas combinadas foram secadas em filtro Whatman e oO solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional (2,78 g).
[279] 2-(2-Clorofenil)-N-(4-[1-(difluorometil)-lH-pirazol-4-il]- 3-([ (dimetilamino)metilideno] sulfamoil)fenil) acetamida (2,78 g, 5,61 mmol) foi dissolvido em metanol (90 ml) e tratado com solução aquosa de amônia a 25% (90 ml) em temperatura ambiente até a conclusão da reação. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (Biotage, etanol a 8% em diclorometano) e, posteriormente, por HPLC (Chromatorex C-18 10 um, 125x30mm, acetonitrila/água + amônia aquosa a 0,2% (32% )) para produzir o composto titular (1,09 g, 99% de pureza, 34% em 2 etapas).
[280] LC-MS (Método B): Rt = 0,94 min; MS (ESIpos) m/z = 441 [M+H] * IH-NMR (400MHz, DMSO-ds): 8 [ppm]= 3.89 (s, 2H), 7.31 - 7.35 (m, 2H), 7.41 (s, 2H), 7.43 - 7.50 (my, 3H), 7.69 - 8.00 (m, 2H),
8.02 (m, 1H), 8.36 (d, 1H), 8.43 (m, 1H), 10.65 (s, 1H). Exemplo 331 2- (2-Clorofenil)-N-(3-sulfamoil-4-[5-(trifluorometil)piridin-3- il] fenil)acetamida F. í F Hz O=S=O Dx o 20 OU, Cc H
[281] N- (4-Bromo-3-([ (dimetilamino)metilideno] sulfamoil)fenil)- 2- (2-clorofenil)acetamida (500 mg, 1,09 mmol) e [5- (trifluorometil)piridin-3-il] ácido borônico (520 mg, 2,72 mmol) foram dissolvidos em n-propanol (15 ml) e bis(trifenilfosfina) dicloreto de paládio(II) (CAS 13965-03-2) (38,4 mg, 54,5 umol), trifenilfosfina (14,3 mg, 54,5 pmol), fluoreto de potássio (23,1 mg, 270 umol) e solução aq. de carbonato de potássio (1,4 ml, 2,0 M, 2,7 mmol) foram adicionados. A reação foi aquecida a 100ºC por lh no micro-ondas (1 bar / 15W). Depois a mistura foi filtrada em Celite, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto bruto foi codestilado com THF e usado sem purificação adicional na etapa seguinte.
[282] 2- (2-Clorofenil)-N-(3- ([ (dimetilamino)metilideno] sulfamoil)-4-[5-
(trifluorometil)piridin-3-il] fenil)acetamida (1,50 g, 2,86 mmol) foi dissolvido em metanol (29 ml) e tratado com hidróxido de sódio aquoso a 32% (1,6 ml) a 80ºC até a conclusão da reação. O solvente foi removido sob pressão reduzida, o produto bruto foi dissolvido em diclorometano e lavado com água. As fases foram separadas e as fases orgânicas combinadas foram secadas em filtro Whatman e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (Biotage, acetato de etila a 40% em hexano) e subsequentemente por HPLC (Chromatorex C-18 l0um, 125x30mm, acetonitrila/água + 0,1% de ácido fórmico) para produzir o composto titular (562 mg, 95% de pureza, 40% de rendimento em 2 etapas).
[283] LC-MS (Método A): Rt = 1,13 min; MS (ESIneg): m/z = 468 [M-H]" *H-NMR (400MHz, DMSO-ds): 8 [ppm]= 3.91 (s, 2H), 7.28 - 7.37 (m, 2H), 7.39 (df, 1H), 7.42 - 7.51 (m, 4H), 7.88 (dd, 1H), 8.10 -
8.16 (m, 1H), 8.40 (d, 1H), 8.81 (d, 1H), 8.96 (d, 1H), 10.73 (s, 1H). Exemplo 349 2- (2-Clorofenil)-N-[4- (1-ciclopropil-lH-pirazol-4-il)-3- sulfamoilfenil]acetamida Nº2 o=S=0 =N
OS OU, Cc H
[284] N- (4-Bromo-3-([ (dimetilamino)metilideno] sulfamoil)fenil)- 2- (2-clorofenil)acetamida (500 mg, 1,09 mmol), l-ciclopropil-4- (4,4,5, 5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-lH-pirazol (510 mg, 2,18 mmol) e fluoreto de potássio (139 mg, 2,4 mmol) foram dissolvidos em DMF seco e desgaseificado (30 ml) e a solução foi purificada novamente com argônio por 5 minutos seguida pela adição de bis(tri-tert-butilfosfina)paládio(0) (CAS 53199-31-8) (28 mg, 54 umol). A reação foi aquecida por 2 h a 100ºC. Depois a mistura foi filtrada em Celite, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto bruto foi usado sem purificação adicional na etapa seguinte.
[285] 2- (2-Clorofenil)-N-[4- (l1-ciclopropil-lH-pirazol-4-11)-3- ([ (dimetilamino)metilideno] sulfamoil])fenil]acetamida (560 mg, 1,15 mmol) foi dissolvido em metanol (54 ml) e tratado com hidróxido de sódio aquoso a 32% (560 pl) a 80ºC até a conclusão da reação. O solvente foi removido sob pressão reduzida e purificado por cromatografia em sílica gel (Biotage, acetato de etila/hexano) e subsequentemente por HPLC (Waters XBrigde C18 5 p 100x30mm, acetonitrila/água + amônia aquosa a 0,2% (32%)) para produzir o composto titular (192 mg, 95% de pureza, 37% de rendimento em 2 etapas).
[286] LC-MS (Método B): Rt = 0,96 min; MS (ESIneg): m/z = 429 [M-H]" *H-NMR (400MHz, DMSO-ds): 8 [ppm]l= 0.94 - 1.01 (m, 2H), 1.05 -
1.10 (m, 2H), 3.67 - 3.80 (m, 1H), 3.88 (s, 2H), 7.19 (s, 2H),
7.30 - 7.35 (m, 2H), 7.40 - 7.48 (my, 3H), 7.67 (df, 1H), 7.81 (dd, 1H), 8.04 (s, 1H), 8.31 (d, 1H), 10.57 (s, 1H). Exemplo 360 2- (2-Clorofenil)-N-[4- (1-metil-lH-pirazol-4-il)-3- sulfamoilfenil]acetamida Nã2 Oo=S=0 =N OU, Cc H
[287] N- (4-Bromo-3-([ (dimetilamino)metilideno] sulfamoil)fenil)- 2- (2-clorofenil)acetamida (900 mg, 1,96 mmol) e l-metil-4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-lH-pirazol (490 mg, 2,35 mmol) em DMF (25 ml), seguido pela adição de fluoreto de potássio (251 mg, 4,32 mmol). A solução foi purificada com argônio por 5 minutos e bis(tri-tert-butilfosfina)paládio (O (CAS 53199-31-8) (50,1 mg, 98,1 umol) foi adicionado. A reação foi aquecida por lh a 100ºC. A mistura foi filtrada através de um filtro de fibra de vidro e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi novamente submetido ao procedimento de reação descrito acima. Depois, o solvente foi removido sob pressão reduzida e acetato de etila e água foram adicionados. As fases foram separadas, e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila. As fases orgânicas combinadas foram secadas em filtro Whatman e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O produto bruto foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional (2,39 g).
[288] 2- (2-Clorofenil)-N-[3- ([(dimetilamino)metilideno] sul famoil)-4-(l1-metil-lH-pirazol-4- il) fenil Jacetamida (2,39 g, 5,20 mmol) foi dissolvido em metanol (80 ml) e tratado com solução aquosa de amônia a 25% (80 ml) em temperatura ambiente. A UPLC indicou reação incompleta, foi adicionada solução aquosa de amônia a 25% (80 ml) e a agitação foi continuada até a conclusão da reação. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (Biotage, etanol a 10% em diclorometano), seguido por HPLC (Waters XBrigde C18 517 100x30mm, acetonitrila/água + amônia aquosa a 0,2% (32%)) para rendimento do composto titular (327 mg, 98% de pureza, 15% de rendimento em 2 etapas).
[289] LC-MS (Método B): Rt = 0,86 min; MS (ESIneg): m/z = 403 [M-H]" IH-NMR (400MHz, DMSO-ds): 8 [ppm]l= 3.78 - 3.96 (m, 5H), 7.17 (s, 2H), 7.28 - 7.37 (my, 2H), 7.38 - 7.52 (my, 3H), 7.66 (d, 1H),
7.82 (dd, 1H), 7.96 (s, 1H), 8.32 (d, 1H), 10.57 (s, 1H). Exemplo 380 2- (2-Clorofenil)-N-(5-sulfamoil-6-[4- (trifluorometil)-1H- pirazol-1-il]piridin-3-iljacetamida NH, 0=8=0 N= e QI"
N RN Cc H
[290] 5-amino-N-[ (dimetilamino)metilideno]-2-[4- (trifluorometil)-lH-pirazol-l1-il]piridina-3-sulfonamida (250 mg, 690 umol) e (2-clorofenil)ácido acético (177 mg, 1,03 mmol) foram dissolvidos em DMF (10 ml) e N,N-diisopropiletilamina (600 pl, 3,4 mmol) e 2,4,6-tripropil-l1,3,5,2,4,6-trioxatrifosfinano 2,4, 6-trióxido (310 nl, 1,0 mmol) foram adicionados sucessivamente. A reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Depois, o solvente foi removido sob pressão reduzida e acetato de etila e água foram adicionados. As fases foram separadas e a fase orgânica foi secada em filtro Whatman. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto bruto foi usado sem purificação adicional na etapa seguinte (400 mg).
[291] 2- (2-Clorofenil)-N-(5- ([ (dimetilamino)metilideno] sul famoil)-6-[4- (tri fluorometil)-lH- pirazol-l-il]piridin-3-1il)acetamida (400 mg, 7177 umol) foi dissolvido em metanol (37 ml) e tratado com solução aquosa de hidróxido de sódio a 40% (24 nl, 1,9 mmol) durante lh a 50ºC. Posteriormente, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto bruto foi purificado por cromatografia HPLC (Chromatorex Cc-18 10 um, 125x30mm, acetonitrila/água + amônia aquosa a 0,2% (32%)) para produzir 3,8 mg do composto titular (pureza de 95%, rendimento de 1% em 2 etapas).
[292] LC-MS (Método B): Rt = 0,93 min; MS (ESIpos) m/z = 460 [M+H] * 'H-NMR (400MHz, DMSO-ds): 5 [ppm]= 3.95 (s, 2H), 7.29 - 7.39 (m, 2H), 7.43 - 7.52 (m, 2H), 7.61 (s, 2H), 8.24 (s, 1H), 8.86 (d, 1H), 8.91 (d, 1H), 8.97 (d, 1H), 11.06 (s, 1H). Exemplo 381 2- (2-Fluorofenil)-N-(5-sulfamoil-6-[4- (trifluorometil)-lH- pirazol-l1-il]piridin-3-il)acetamida NH, o=8=0 N= e
N TN F H
[293] O composto titular foi obtido de forma análoga ao Exemplo 380 a partir de 5-amino-N-[ (dimetilamino)metilideno]-2-[4- (trifluorometil)-lH-pirazol-l-il]piridina-3-sulfonamida (250 mg, 690 umol) em 2 etapas após a purificação por HPLC (Chromatorex C-18 10 um, 125x30 mm, acetonitrila/água + amônia aquosa a 0,2% (32%)) (12,8 mg, pureza de 90%, rendimento de 4%).
[294] LC-MS (Método B): Rt = 0,90 min; MS (ESIpos): m/z = 444 [M+H] + 1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): 5 [ppm]= 3.85 (s, 2H), 7.13 - 7.26 (m, 2H), 7.29 -— 7.47 (m, 2H), 7.61 (s, 2H), 8.23 (s, 1H), 8.86 (d, 1H), 8.91 (d, 1H), 8.97 (s, 1H), 11.04 (s, 1H). Exemplo 387 2- (2-Clorofenil)-N-[6- (4-cloro-lH-pirazol-1-il)-5- sulfamoilpiridin-3-il]acetamida
NÃ O=S=0O Da no Cc H
[295] De acordo com o procedimento geral GP6.l1, 5-amino-2-(4- cloro-lH-pirazol-1-il)-N-[(dimetilamino)metileno]piridina-3- sulfonamida bruta (100 mg) e (2-clorofenil)ácido acético (77,8 mg, 0,46 mmol) foram convertidos sem purificação de intermediários a 2 dos compostos titulares. O composto titular precipitou durante a reação e foi obtido por filtração, não foi necessária purificação adicional (38 mg, 0,0891 mmol, rendimento de 27% em 5 etapas, pureza de 99%).
[296] LC-MS (Método A): Rt = 1,13 min, MS (ESIpos): m/z = 426 [M+H]*+ !H-NMR (400 MHz, DMSO-ds) 5 [ppm]: 3.94 (s, 2H), 7.30 - 7.37 (m, 2H), 7.43 - 7.49 (m, 2H), 7.60 (s, 2H), 7.94 (d, 1H), 8.58 (d, 1H), 8.84 (d, 1H), 8.89 (d, 1H), 11.01 (s, 1H).
ENSAIOS BIOLÓGICOS
[297] Os seguintes ensaios podem ser utilizados para ilustrar a utilidade comercial dos compostos de acordo com a presente invenção.
[298] Exemplos foram testados em ensaios biológicos uma ou mais vezes. Quando testados mais de uma vez, os dados são informados como valores médios (méd.) ou como valores intermediários, nos quais - o valor médio, também referido como valor médio aritmético representa a soma dos valores obtidos divididos pelo número de valores obtidos e - valor intermediário representa o número médio do grupo de valores obtidos quando classificados em ordem ascendente ou descendente. Se o número de valores no conjunto de dados for ímpar, o intermediário será o valor médio. Se o número de valores no conjunto de dados for par, o intermediário será a média aritmética dos dois valores médios.
[299] Quando nenhum cálculo significativo de valores médios ou valores intermediários é possível devido à existência de valores de medição fora do âmbito da detecção do ensaio (indicado por < ou > nas tabelas abaixo), todos os valores de medição individuais são indicados.
[300] Os exemplos foram sintetizados uma ou mais vezes. quando sintetizados mais de uma vez, os dados dos ensaios biológicos representam valores médios ou valores intermediários calculados com o uso dos conjuntos de dados obtidos de testes de um ou mais lote sintético.
ESTUDOS IN VITRO Ensaio FLIPR de célula humana P2X4 HEK
[301] As células HEK293 que expressam de forma estável o P2X4 humano foram plaqueadas em placas de 384 poços revestidas com poli-D-lisina a uma densidade de 30000 células/poço e incubadas durante a noite. A função P2X4 foi avaliada medindo-se as alterações intracelulares de cálcio com o uso de corante quelante de cálcio Fluo8-AM (Molecular Devices) em um leitor de placas de imagem fluorescente (estação FLEX/FLIPR; Molecular
Devices). No dia do teste, o meio foi removido e as células foram incubadas por 30 min a 37ºC e CO; a 5% em 30 ul de tampão de corante (solução salina balanceada de Hank, HEPES 10 mM, HEPES 10 mM, CaCl2 1,8 mM, CaCl, 1,8 mM, MgCl; 1 mM, Probenecida 2 mM, mono-hidrato de D-glucose 5 mM, Fluo8-AM 5 uM, pH = 7,4). Os compostos diluídos em tampão de probenecida (solução salina balanceada de Hank, HEPES 10 mM, CaCl, 1,8 mM, MgCl;, 1 mM, probenecido 2 mM, mono-hidrato de D-glucose 5mMM, pH = 7,4) foram adicionados em um volume de 10 ul e deixados para incubar por 30 min em temperatura ambiente.
A concentração de DMSO do teste final é de 0,5%. O agonista, Bz-ATP (Tocris) foi adicionado em um volume de 10 ul a uma concentração representando o valor de ECgo.
O valor de ECgko de Bz-ATP foi determinado a cada dia de teste antes do perfil do composto.
A fluorescência foi medida em um intervalo de 120 segundos em intervalos de 2 segundos.
Os comprimentos de onda de excitação e emissão utilizados para monitorar a fluorescência foram de 470-495 nm e 515-575 nm, respectivamente.
Os dados foram analisados com base no aumento das unidades de fluorescência relativa de pico (RFU) em comparação com àa fluorescência basal e os dados foram normalizados para o controle de agonista.
Os compostos foram testados em trio por placa e os valores médios foram indicados em Excel XLFit para determinar os valores de ICsºo, a porcentagem de inibição máxima e os coeficientes de Hill.
Células HEK Células HEK P2X4 humanas Número do | P2X4 humanas (teste FLIPR) Exemplo (teste FLIPR) eficácia média ICso médio [nM] x EE á o ” ” ” PR dr
FE 7 7 : “ ” 7
S 7 Métodos FLIPR para células de astrocitoma h/m/rP2X4 1321N1
[302] As células de astrocitoma 1321N1 que expressam estavelmente P2X4 humana ou P2X4 de rato ou P2X4 de camundongo foram plaqueadas em microplaca tratada com TC de colágeno I a uma densidade de semeadura de 10000 células/poço e incubadas durante a noite. A função P2X4 foi avaliada medindo-se as alterações intracelulares de cálcio com o uso de corante quelante de cálcio Fluo8-AM (Molecular Devices) em um leitor de placas de imagem fluorescente (estação FLEX/FLIPR; Molecular Devices). No dia do teste, o meio foi removido e as células foram incubadas por 30 min a 370C e CO; a 5% em 30 ul de tampão de corante (solução salina balanceada de Hank, HEPES 10 mM, HEPES 10 mM, CaCl2 1,8 mM, CaCl2 1,8 mM, M9Cl; 1 mM, probenicida 2mM, mono-hidrato de D-glucose 5 mM, Fluo8-AM 5 uM, pH = 7,4). Os compostos diluídos em tampão de probenecida (solução salina balanceada de Hank, HEPES 10 mM, CaCl, 1,8 mM, M9gCl; 1 mM, probenecida 2 mM, mono-hidrato de D-glucose 5 mM, pH = 7,4) foram adicionados em um volume de 10 uL e deixados para incubar por 30 min em temperatura ambiente. A concentração de DMSO do teste final é de 0,25%. O agonista, Mg-ATP (Sigma), foi adicionado em um volume de 10 ul a uma concentração representando o valor de ECso. O ECgo foi determinado como sendo 0,5 uM para P2X4 humano e de camundongo e 5 uM para P2X4 de rato. A fluorescência foi medida em um intervalo de 120 segundos em intervalos de 2 segundos. Os comprimentos de onda de excitação e emissão utilizados para monitorar a fluorescência foram de 470-495 nm e 515-575 nm, respectivamente. Os dados foram analisados com base no aumento das unidades de fluorescência relativa de pico (REU) em comparação com a fluorescência basal e os dados foram normalizados para oO controle de agonista. Os compostos foram testados em trio por placa e os valores médios foram apresentados em Excel XLFit para determinar os valores de IC50, a porcentagem de inibição máxima e os coeficientes de Hill. Células de células de astrocitoma astrocitoma P2X4 humanas Número do | P2X4 humanas 1321N1 (teste Exemplo 1321N1 (teste FLIPR) FLIPR) ICso eficácia média médio [nM]
[3] 19 57 nM 60 % Células de Células de Astrocitoma Astrocitoma P2X4 de P2X4 de Número do camundongo camundongo Exemplo 1321N1 (teste 1321N1 (teste FLIPR) FLIPR) ICso Eficácia média médio [nM] [*] Células de | Células de Astrocitoma Astrocitoma Número do P2X4 de rato | P2X4 de rato Exemplo 1321N1 (teste | 1321N1 (teste FLIPR) ICso | FLIPR)
médio [nM] Eficácia média os Teste de electrofisiologia da célula P2X4 HEK humana Teste de eletrofisiologia A
[303] As células HEK293 que expressam estavelmente P2X4 humana foram semeadas em frascos de cultura de células T75 a uma densidade de 7* 106 células e incubadas durante a noite. A função P2X4 foi testada usando a plataforma automatizada de patch clamp PatchLiner (Nanion) no modo de furo único. A composição do tampão extracelular era (em mM) NaCl 145, KCl4, HEPES 10, CaCl;l1, MgCl; 0,5, mono-hidrato de D-glucose 10, pH = 7,4. O tampão intracelular continha (em mM): CsF 135, EGTA 1, HEPES 10, NaCl 10, pH 7.2. No dia do teste, as células foram coletadas usando Accumax (Sigma) e suspensas novamente em tampão extracelular. O agonista do ligando, adenosina S5'-trifosfato (ATP, 5 uM) foi adicionado em um volume de 5 ul, lavado diretamente por tampão extracelular (40 ul). As células foram fixadas em voltagem a -80 mV e o ligando foi aplicado a cada 5 minutos por 20 min. Durante este período, a resposta do agonista foi estável e os compostos foram medidos em concentração única por modo de poço. Os compostos diluídos em tampão extracelular (concentração final de DMSO de 0,3% do teste final) foram adicionados em um volume de 40 ul e deixados para incubar por 8 minutos em temperatura ambiente. Os dados foram analisados com base na diminuição da amplitude da corrente de pico e normalizados para o controle do agonista. Os valores médios foram apresentados em Excel XLFit para determinar os valores de ICso, à porcentagem de inibição máxima e os coeficientes de Hill.
ESA Número do HEK (Eletrofisiologia Exemplo PatchLiner) ICso médio
DM Teste de eletrofisiologia B
[304] Condições de cultura celular: As células HEK-293 mito- Photina pcDNA3(neo-)/pPURO N/pcDNA3 P2RX4, clone 2a/4 (HEK-293 mito-Photina/hP2RX4) foram cultivadas em EMEM Minimum Essential Medium Eagle com solução salina equilibrada de sais de Earl (BioWhittaker cat. BEl2-125F) suplementadas com 5 mL de 200 mM Ultraglutaminel (BioWhittaker cat. BEl7-605E/Ul1), 5 mL de 100X Penicilina/Estreptomicina (BioWhittaker cat. DE17-602E; concentração final de 1%), 4 mL de 50 mg/mL G418 (Sigma cat. G8168-100mL; concentração final 400 vo/mL), 10 pL de 10 mg/mL de Puromicina (InvivoGen cat.
[305] ant-pr-l1; concentração final 0,2 pg/mL) e 50 mL de soro bovino fetal (Sigma cat. F7524; concentração final 10%).
[306] Protocolo experimental: As linhagens de célula HEK-293 são semeadas por 72 ou 96 horas antes do experimento, em uma concentração de 5 ou 2,5 milhões de células, respectivamente em um frasco T225. Imediatamente antes as células dos experimentos são lavadas duas vezes com D-PBS w/o Ca2+/Mg2+ (Euroclone cat. ECB4004L) e retiradas do frasco com tripsin-EDTA (Sigma, cat. T4174 com diluição 1/10). As células são suspensas novamente na solução de suspensão: meio de 25 ml EX-CELL ACF CHO (Sigma, cat. C5467); 0,625 mL HEPES (BioWhittaker, cat. BEl7-737E); 0,25 mL de 100x Penicilina/Estreptomicina (BioWhittaker, cat. DE1l7- 602E), 0,1 mL de inibidor de tripsina de soja 10 mg/mL (Sigma, cat. T6522) e colocados no QPatch 16X.
[307] Preparação de composto e armazenamento: Soluções de estoque do composto (10 mM; 100% DMSO; armazenadas a -20ºC) foram usadas. Soluções frescas do estoque (1 ou 3 mM, 100% DMSO)
foram preparadas pouco antes dos experimentos (concentração final de DMSO a 0,1%).
[308] A solução de DMSO foi obtida a partir de SIGMA (cat.t D- 5879) e armazenada em temperatura ambiente.
[309] Análise de patch clamp com QPatchl6X (Figura 1): OS experimentos de grampeamento de voltagem de célula inteira padrão são realizados em temperatura ambiente usando a tecnologia multifuros.
[310] Para experimentos de grampeamento de voltagem em hP2X4, os dados de amostra são obtidos a 2 KHz. Após o estabelecimento da vedação e passagem em toda a configuração celular, as células são mantidas a -90 mV e a corrente hP2X4 é evocada pelo agonista na ausência (período do veículo, ou seja, 0,1% DMSO) ou na presença do composto sob investigação em concentrações crescentes; ver o protocolo de aplicação na Figura 1.
[311] Saída: a corrente de entrada máxima induzida pelo agonista (ATP 5 microM).
[312] A solução intracelular continha (mM) 135 CsF, 10 NaCl, 1 EGTA, 10 HEPES (pH 7,2 com CsOH) considerando a solução extracelular (mM) 145 NaCl, 4 KCl, 0,5 MgCl2, 1 CaCl2, 10 HEPES, Glucose (pH 7,4 com NaOH).
[313] Para a coleta de dados, o software Sophion foi usado e a análise foi realizada off-line usando Excel e GraphPad Prism.
[314] Quando possível, isto é, quando a % de inibição com a concentração mais elevada testada foi superior a 50 %, os dados das curvas de resposta da dose foram ajustados com a seguinte equação: Y=100/(1+10º ((LogIC50-X) *HillSlope)) [X e o registro de concentração; Y é a resposta normalizada (100% até 0%, diminuindo enquanto X aumenta); LogICso, mesmas unidades de registro de X ; HillSlope é um fator de inclinação ou inclinação de monte) Eos fa EE Número do humanas de exp. Exemplo (Eletrofisiologia
DMA ? Estudos ex vivo Teste de P2X4 de monócito humano
[315] O princípio do teste é medir o influxo de cálcio através de canais P2X4 endógenos em monócitos humanos primários, após a ativação por 2',3'-O0- (4-benzoil-benzoil)-ATP (Bz-ATP). As alterações na concentração intracelular de cálcio foram medidas com um dispositivo FliprTM (Molecular Devices) usando um corante sensível ao cálcio (Fluo-8). Nos monócitos primários, o P2X4 está localizado na membrana do lisossomo, portanto, a exocitose deve ser desencadeada para expor o P2X4 na membrana celular.
[316] As células mononucleares do sangue periférico humano (PBMCs) do sangue anticoagulado (células sanguíneas, BC) foram isoladas por centrifugação em gradiente de densidade. O sangue total foi diluído 1:3 com PBS. Amostras de 30 mL foram cuidadosamente colocadas em camadas sobre 15 mL de Biocoll (BIOCHROM) em tubos de centrífuga de 50 mL (Falcon). Os tubos foram centrifugados a 914 xg por 25 min em temperatura ambiente sem freio. A camada de PBMC foi removida com uma pipeta de 10 mL e transferida para tubos com PBS gelado em um volume total de 50 mL. As células foram lavadas duas vezes por granulação a 300 xg a 4ºC, por 10 min e por 5 min, respectivamente. As PBMCs foram suspensas novamente em 10 mL de meio (X-vivo, Biozym Scientific) e contadas em uma câmara Neubauer.
[317] Os monócitos foram isolados por seleção negativa usando o kit de isolamento de monócito II da Miltenyi (% 130-091-153) de acordo com as instruções. o isolamento deve ser feito rapidamente e as células e as soluções devem ser mantidas em gelo a qualquer momento. PBMCs em lotes de células l10exp8 foram sedimentadas (300 x9g, 10 min) e suspensas novamente com 300 uL de tampão MACS em um tubo Falcon de 50 mL. O reagente de bloqueio de FCR (100 uL) e Biotina-Ab (100 unL) foram adicionados, misturados e incubados em gelo por 10 min. Foram adicionados tampão MACS (300 ul) e micro-esferas anti-Biotina (100 uL), misturou-se e incubou-se em gelo durante 15 min. As células foram lavadas por granulação (300 x9g por 10 min) e suspensas novamente em 500 ul de tampão MACS. Para cada lote, uma coluna de separação foi colocada no separador MACS e lavada com 3 mL de tampão MACS. A suspensão de células foi adicionada à coluna, seguida por 3 x 3 mL de tampão MACS para lavagem e o eluente contendo os monócitos foi coletado. As células foram sedimentadas (300 xg por 10 min), suspensas novamente em meio X- vivo e contadas. Os monócitos foram semeados em microplacas revestidas com fibronectina (384 poços, fundo transparente preto liso; Corning * 3848) a uma densidade de 30.000 células/poço em 50 1L e cultivadas durante a noite (37ºC, CO;a 5%).
[318] As substâncias de teste foram dissolvidas em DMSO 100% a uma concentração de 10 mM e armazenadas a -20ºC em alíquotas. As diluições em série (2x) foram preparadas em DMSO e diluídas 500x com tampão de ensaio para gerar a placa do antagonista. Na medição de Flipr, 10 pL por poço foram transferidos (diluição de 4x) e foram obtidas no teste concentrações máximas finais de 5 UM e DMSO a 0,05%. O agonista BzZzATP foi armazenado a 10 mM em alíquotas e diluído para uma concentração intermediária de 15 uM para gerar a placa do agonista. Na medição de Flipr, 10 pL por poço foram transferidos (diluição de 5x), de modo que foi obtida uma concentração final de teste de 3 UM.
[319] Para o experimento, o meio da placa celular foi descartado manualmente e 70 nuL/tampão de carga do poço foram adicionados e incubados por lh (37ºC, CO; a 5%). O tampão de carga continha HBSS (sem cálcio/magnésio), Hepes 10 mM, pH 7,4, Fluo-8 5 uM (AM) (Tebu-bio) e metilamina 50 mM (Sigma) para desencadear exocitose. O tampão de carga foi descartado manualmente e foram adicionados 30 upL/tampão de teste de baixo teor de cálcio no poço (KCl 5 mM, NaCl 145 mM, CaCl;, 0,5 mM, glucose 13 mM, Hepes mM, pH 10,4). A placa antagonista foi transferida (10 uL/poço) e após 15 minutos em RT a placa agonista (10 uL/poço) foi transferida.
[320] A adição de agonista foi registrada por 240 segundos após uma linha de base de 10 segundos. Para análise, uma correção de linha de base foi aplicada e o máximo da curva foi extraído. Os dados foram normalizados para inibição de 0% (sinal a 3 UM de BzATP) e 100% de inibição (ausência de estimulação de BzATP) e ajustados com uma curva de inibição sigmoidal de quatro parâmetros usando o Prism GraphPad para obter valores de ICsxo. Número |Monócitos P2X4 humanos do (Teste FLIPR) Exemplo | IC;so (Eficácia) para diferentes doadores 59 nM (57%), 21 nM (74%), 76 nM (48%), 59 nM 27 nM (87%), 5 nM (82%), 127 nM (70%), 87 nM (70%), 118 nM (70%), 59 nM (53%), 63 nM (68%), 39 nM (111%) 158 nM (49%), 94 nM (49%), 157 nM (60%), 537 nM
LIFE 263 nM (70%), 251 nM (70%), 434 nM (70%), 93 nM Teste de P2X4 de sangue total humano
[321] Neste teste, ex vivo, o sangue de voluntárias saudáveis é sensibilizado primeiro com lipopolissacarídeo (LPS) e depois estimulado com ATP para desencadear a liberação de Interleucina lbeta (IL-l1B). Neste sistema, a eficácia dos antagonistas de P2X4 na produção de IL-l16b no sangue total foi testada. As células foram primeiramente tratadas com 100 ng/ml de LPS durante 2 h e depois estimuladas com ATP 3 mM e tratadas em triplicatas com os exemplos 19, 28, 39, 321, 326 e 380 em diferentes concentrações. Após lh de incubação, o sobrenadante foi usado e após a centrifugação, a IL-l1B no sobrenadante foi testada usando kits ELISA padrão. O teste foi realizado com sangue de três doadores diferentes (ver Figuras 2a e 2b).
[322] As Figuras 2a e 2b como exemplo explicativo não obrigatório de compostos de acordo com a invenção representam o efeito dos compostos de acordo com os exemplos 19, 28, 39, 321, 326 e 380 na geração de IL-l168 no sangue total humano após estimulação com ATP após a preparação das células com lipopolissacarídeo por duas horas e tratamento indicado. Os dados mostram a quantidade absoluta de IL-l168 em pg/ml no sobrenadante de sangue de três doadores no eixo y e os tratamentos de controle e tratamentos com diferentes concentrações de exemplos são indicados no eixo x. Para cada barra, a média de três cópias técnicas e SD são mostrados. Os dados mostram a inibição da liberação de IL-16B por vários, mas não todos os exemplos testados. Estudos in vivo Modelo de Curso Isquêmico Induzido por tMCAO em Ratos - Exemplo de Composto 39
[323] A oclusão transitória da artéria cerebral média (tMCAO) foi realizada em ratos machos Sprague Dawley (SD) de aproximadamente 3 meses de idade, de acordo com o método descrito por Schmid-Elsaesser et al. [Stroke. 1998; 29(10):2162- 2170]. Em particular, a artéria carótida comum direita (CCA) foi exposta por meio de uma incisão na linha média do pescoço e cuidadosamente dissecada, livre de nervos e fáscias circundantes - de sua bifurcação até a base do crânio. As ramificações occipital e superior da artéria tireoidiana da artéria carótida externa (ECA) foram isoladas e essas ramificações foram coaguladas. A ECA foi dissecada mais distalmente e coagulado juntamente com as ramificações terminais da artéria lingual e maxilar, imediatamente antes de sua bifurcação. A artéria carótida interna (ICA) foi isolada e cuidadosamente separada do nervo vago adjacente, e a artéria pterigopalatina foi ligada próxima à sua origem com uma sutura de náilon 5-0. Posteriormente, uma sutura de seda 4-0 foi amarrada frouxamente ao redor da parte da ECA mobilizada e um comprimento de 4 cm de sutura de monofilamento Doccol 4-0 (revestida com silicone) foi inserida através da ECA proximal na ICA e, portanto, no círculo de Willis, efetivamente ocluiu o MCA. A ferida operatória foi fechada e os animais foram devolvidos às gaiolas para recuperação da anestesia. Duas horas após a oclusão, os ratos foram novamente anestesiados e o monofilamento foi retirado para permitir reperfusão. A ferida foi fechada novamente e os ratos foram devolvidos às gaiolas.
[324] Quatro grupos de ratos com 12-15 ratos por grupo foram incluídos no estudo. Dois grupos foram submetidos a tMCAO e 2 grupos a animais operados simulados (grupo 1 = simulação sem tratamento, grupo 2 = simulação com tratamento de veículo, grupo 3 = tMCAO com tratamento de veículo, grupo 4 = tMCAO com tratamento com antagonista de P2X4). Os grupos 2, 3 e 4 foram tratados por sete dias duas vezes ao dia pela administração per os do veículo ou antagonista de P2X4, iniciando uma hora antes da cirurgia. A contagem de gravidade neurológica modificada (MNSS) foi usada para avaliar e avaliar as funções neurológicas [Li et al., Neurology 2001, 56: 1666-1672]. O mNSS é um composto de testes motores, sensoriais, reflexos e de equilíbrio e foi avaliado em uma escala de 0 a 18 (a contagem normal é 0 e a contagem de déficit máximo é representada por 18). Todos os ratos foram submetidos ao teste de mNSS antes da cirurgia para incluir apenas animais com mNSS normal. Duas horas pós-tMCAO, apenas ratos com um mNSS igual ou superior a 10 foram incluídos no estudo. O teste mNSS também foi realizado nos dias 1, 2, 8, 15, 22 e 29 após a cirurgia.
[325] A partir do dia 8, o grupo tMCAO tratado com antagonista de P2X4 levou a um mNSS significativamente menor do que Oo grupo tMCAO tratado com veículo (p <5%; análise estatística ANOVA bidirecional seguida de comparações post-hoc de Bonferroni). Ambos os grupos simulados mostraram um mNSS de O em cada momento (ver Fig. 3). Modelo de Curso Isquêmico Induzido por tMCAO em Camundongos
[326] A oclusão transitória da artéria cerebral média (tMCAO) foi realizada em camundongos machos C57BL/6N de 8 a 10 semanas de idade, de acordo com o método descrito por Hata et al. [J Cereb Blood Flow Metab. 2000; 20(6):937-946]. Em particular, a artéria carótida comum esquerda (CCA) foi exposta por meio de uma incisão no pescoço da linha média e cuidadosamente dissecada, livre de nervos e fáscias circundantes, e ligada em camundongos anestesiados. Em seguida, a artéria carótida externa esquerda (ECA) do mesmo lado foi separada e também ligada. Após obter uma boa visão da artéria carótida interna dissecada (ICA) e da artéria pterigopalatina (AP), ambas as artérias foram grampeadas. Posteriormente, um monofilamento de naílon 8-0 (Ethilon; Ethicon, Norderstedt, Alemanha) revestido com resina de silício (Xantopren; Bayer Dental, Osaka, Japão) foi introduzido através de uma pequena incisão na artéria carótida comum e avançou 9 mm distal à bifurcação da carótida por oclusão de MCA. O diâmetro da ponta do filamento (0,15 a 0,20 mm) foi selecionado para corresponder ao peso corporal dos animais. A ferida operatória foi fechada e os animais foram devolvidos às gaiolas para recuperação da anestesia. Quarenta e cinco minutos após a oclusão, os camundongos foram anestesiados e o monofilamento foi retirado para permitir reperfusão. A ferida foi fechada e os camundongos foram devolvidos às gaiolas.
[327] Quatro grupos de camundongos com 10-15 camundongos por grupo foram incluídos no estudo. Três grupos foram submetidos a tMCAO e 1 grupo a animais operados simulados (grupo 1 = simulação sem tratamento, grupo 2 = tMCAO com composto de referência MK-801, grupo 3 = tMCAO com tratamento de veículo, grupo 4 = tMCAO com tratamento com antagonista de P2X4). O grupo 2 foi tratado com o composto de referência MK-801 apenas uma vez por animal, por via intraperitoneal, 15 minutos antes da cirurgia do derrame, na dose de 3 mg/kg de peso corporal, em um volume de dose de 5 ml/kg de peso corporal. Os grupos 3 e 4 foram tratados por 14 dias duas vezes ao dia por administração per os do veículo ou antagonista de P2X4 (60 mg/kg de peso corporal) começando uma hora antes da cirurgia, ambos em um volume de dose de 5 ml/kg de peso corporal.
[328] Quatro testes senso-motores diferentes [Pontuação de Gravidade Neurológica modificada (MNSS), Teste de Remoção Adesiva (ART), Teste de Canto (CoT) e Teste de Cilindro (CT)] foram incluídos como parâmetros de leitura para medir os efeitos do tratamento medicamentoso.
[329] A Pontuação de Gravidade Neurológica modificado (mNSS) foi realizada antes da cirurgia e nos dias 1, 7, 14, 21 e 28 após a tMCAO ou cirurgia simulada. A mNSS utilizada neste estudo foi modificada de acordo com as neuropontuações publicadas em Orsini et al. [Circulação. 2012; 126(12):1484-1494] e De Simoni et al. [] Cereb Blood Flow Metab. 2003; 23(2):232-239]. A mNSS foi utilizada para avaliar o status geral e a disfunção neurológica focal após a tMCAO. A pontuação varia de O (sem déficits) a 39 (representando o pior desempenho em todos os itens) e é calculada como a soma dos déficits gerais e focais. Os resultados da mNSS foram expressados como uma pontuação neurológica composta, que incluía os seguintes déficits gerais (pontuações): cabelo (0 a 2), orelhas (0 a 2), olhos (0 a 3), postura (0 a 3), atividade espontânea (0 a 3) e os seguintes déficits focais (pontuações): simetria corporal (0 a 2), modo de andar (0 a 4), escalada em uma superfície inclinada a 45º (0 a 3), comportamento circulante (0 a 3), simetria do membro anterior (0 a 4), comportamento circulante (0 a 3), resposta do bigode ao toque leve (0 a 4) e teste de agarramento das patas dianteiras (0 a 3).
[330] Todos os camundongos foram submetidos ao teste de mNSS antes da cirurgia para incluir apenas animais com mNSS normal. Vinte e quatro horas após tMCAO, apenas os camundongos com um mMNSS igual ou superior a 8 foram incluídos no estudo.
[331] O teste de remoção de adesivo (ART) foi realizado para medir déficits somatossensoriais. Um pedaço de papel com adesivo (aproximadamente 2 mm 9) foi usado como estímulo tátil, fixando- os na região plantar do membro anterior direito. Uma semana antes da cirurgia com tMCAO, cada animal recebeu 3 ensaios de ART por dia, em dois dias. Se os animais não conseguiram remover o estímulo no segundo dia de condicionamento em um tempo médio de 2 60 segundos, foi incluído um dia de condicionamento adicional. Se o animal não conseguiu remover o estímulo mesmo após o dia de teste adicionado em 60 segundos, o animal foi excluído do estudo. O ART foi realizado antes da cirurgia e nos dias 7, 14, 21 e 28 após a cirurgia. Em cada dia de teste, o teste foi realizado 3 vezes por animal. O tempo nos três testes necessários para detectar e remover os estímulos adesivos do membro anterior direito foi registrado e avaliado.
[332] O teste de canto (CoT) foi usado para medir a acinesia do membro anterior relacionada ao derrame. O sistema de teste de canto foi produzido pelo uso de quatro pranchas que foram coladas para formar dois cantos opostos com ângulos de 30º, pelo que um desses cantos contém uma pequena lacuna para incentivar os ratos a encontrar esse respectivo canto. Este sistema de teste de canto foi colocado em uma gaiola com forragem padrão. Para realizar o CoT, a câmera foi iniciada, o camundongo foi colocado no meio do retângulo e gravado por 10 min. O camundongo tentou chegar ao canto com a lacuna. No entanto, os camundongos com um derrame não podem seguir em frente. Portanto, eles viraram para a esquerda ou para a direita e o número de voltas para a esquerda e para a direita foi contado a partir dos registros para a avaliação. O CoT foi realizado antes da cirurgia e nos dias 14 e 28 após a cirurgia.
[333] O teste do cilindro (CT) foi utilizado para investigar o comportamento exploratório, contando o uso espontâneo do membro anterior. Para realizar este teste, o camundongo foi colocado em um cilindro transparente (12 cm de diâmetro e 20 cm de altura por 5 min. Um espelho foi colocado atrás do cilindro em um ângulo para permitir o registro dos movimentos do membro anterior sempre que o animal se afastasse do observador. O cilindro era alto o suficiente para impedir que o animal chegasse à borda superior se levantando. Não foi permitida habituação ao cilindro antes da observação. O número de contatos de parede realizados independentemente com as patas dianteiras esquerda e direita e o contato paralelo com ambas as patas dianteiras foram contados por camundongo por sessão. Apenas contatos de suporte foram contados, isto é, aposições completas das patas com dedos abertos nas paredes do cilindro. O CT foi realizado nos dias 14 e 28 após a cirurgia.

Claims (9)

LReivindicações
1. Um composto da fórmula (1) o od nt,
SÁ o | ia 1 e Jl JA ' (n) XéCounN Rº representa R&º “O caracterizado por * indicar o ponto de ligação do grupo citado com o restante da molécula e Ró, R$a representam independentemente um do outro flúor, cloro, metóxi ou hidrogênio; R2? representa
O O O Ah AN Z NO 2 RN , , ou , em que * indica o ponto de ligação do grupo citado com o restante da molécula e o grupo citado é opcionalmente substituído, de uma a duas vezes, por Rº sendo, independentemente um do outro, iguais ou diferentes. RU representa, independentemente um do outro, halógeno, ciano, Ci-Caralquil, Ci-Ca-haloalquil, Ci-Carhidroxialquil, Ci-Caralcoxi, Ci-Ca-haloalcoxi, (Ci-C3-alcoxi)-etil-, metoxi-etil-, C3-Cçn cicloalquil; ou um N-óxido, um sal, um hidrato, um solvato, um tautômero ou um estereoisômero do composto ou um sal do referido N-óxido, tautômero ou estereoisômero para uso no tratamento ou profilaxia de isquemia cerebral, lesão cerebral isquêmica,
derrame isquêmico (IS), derrame hemorrágico, lesão cerebral traumática, lesão da medula espinhal.
2. Uso de um composto de fórmula geral (I) de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por ser para preparação de um medicamento para profilaxia ou tratamento de isquemia cerebral, lesão cerebral isquêmica, derrame isquêmico (IS), derrame hemorrágico, lesão cerebral traumática, lesão da medula espinhal.
3. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2 caracterizado pelo composto ser 2- (2-Clorofenil)-N-(3-sulfamoil-4-[4- (trifluorometil)-lH- pirazol-1-il] fenil )acetamida; 2- (2-Fluorofenil)-N-(3-sulfamoil-4-[4- (trifluorometil)-l1H- pirazol-l1-il] fenil)-acetamida; 2- (2-Clorofenil)-N-[4- (3-cloro-1H-1,2,4-triazol-1-1i11)-3- sulfamoilfenil]-acetamida; 2- (2-Clorofenil)-N-[4- (4-cloro-lH-pirazol-1-1i1)-3- sulfamoilfenil]acetamida; 2- (2-Clorofenil)-N-[4- (4-fluoro-lH-pirazol-1-11)-3- sulfamoilfenil]acetamida; N- [4- (4-Bromo-lH-pirazol-1-11)-3-sulfamoilfenil]-2-(2- clorofenil)acetamida; 2- (2-Clorofenil)-N-[4- (4-ciano-lH-pirazol-1-il)-3- sulfamoilfenil]acetamida N- [4- (4-Cloro-lH-pirazol-1-il)-3-sulfamoilfenil]-2-(4- metoxifenil)acetamida; N-(6-[1- (Difluorometil)-lH-pirazol-4-il]-5-sulfamoilpiridin-3- 11)-2- (2-fluorofenil)acetamida; 2- (2-Clorofenil)-N-(4-[1-(difluorometil)-lH-pirazol-4-i1]-3- sulfamoilfenil )acetamida; 2- (2-Clorofenil)-N-(3-sulfamoil-4-[5- (trifluorometil)piridin-3- il] fenil)-acetamida; 2- (2-Clorofenil)-N-[4- (1-ciclopropil-lH-pirazol-4-il)-3- sulfamoilfenil]acetamida; 2- (2-Clorofenil)-N-(5-sulfamoil-6-[4- (trifluorometil)-lH- pirazol-l1-il]piridin-3-ilj)acetamida;
2- (2-Fluorofenil)-N-(5-sulfamoil-6-[4- (trifluorometil)-lH- pirazol-l1-il]piridin-3-il)j)acetamida; 2- (2-Clorofenil)-N-[6- (4-cloro-lH-pirazol-1-il)-5- sulfamoilpiridin-3-il]acetamida ou um N-óxido, um sal, um hidrato, um solvato, um tautômero ou um estereoisômero do composto referido ou um sal do N-óxido, tautômero ou estereoisômero.
4. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2 caracterizado pelo composto ser 2-(2-Clorofenil)-N-[4- (4-ciano- lH-pirazol-1-il)-3-sulfamoilfenil]acetamida ou um estereoisômero, um tautômero, um N-óxido, um hidrato, um solvato um sal aceitável farmaceuticamente ou uma mistura destes para a preparação de um medicamento para profilaxia ou tratamento de isquemia cerebral, lesão cerebral isquêmica, derrame isquêmico (IS), derrame hemorrágico, lesão cerebral traumática, lesão da medula espinhal.
5. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2 caracterizado pelo composto ser administrado em combinação Ou como medicação auxiliar com agentes antitrombóticos.
6. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2 caracterizado pelo composto ser administrado em combinação ou como medicação auxiliar com Heparina, ou heparinas de baixo peso molecular, ou Danaparoide; ou Argatroban, ou Antitrombina ou Proteína (C; ou Aspirina, ou Clopidogrel, ou Abciximab ou Eptifibatide (Integrilin).
7. Uma formulação parenteral de um composto de fórmula geral (1), caracterizada por ser como definida na reivindicação 1 ou um estereoisômero, um tautômero, um N-óxido, um hidrato, um solvato ou um de seus sais, particularmente um de seus sais aceitáveis farmaceuticamente ou uma mistura dos mesmos.
8. Uma formulação caracterizada por ser parenteral de 2-(2- Clorofenil)-N-[4- (4-ciano-lH-pirazol-1-11)-3- sulfamoilfenil]acetamida ou um estereoisômero, um tautômero, um N-óxido, um hidrato, um solvato ou seu sal, particularmente um sal aceitável farmaceuticamente de acordo com a reivindicação 3.
9. Uma formulação parenteral de acordo com a reivindicação 5 caracterizada por ser uma formulação parenteral para administração intravenosa.
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