BR112020003197A2 - composto pentacíclico - Google Patents

Abstract

A presente invenção proporciona compostos representados pelas fórmulas (I) a (VI) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Description

“COMPOSTO PENTACÍCLICO” Área Técnica

[0001] A presente invenção se relaciona com um composto pentacíclico ou um seu sal farmaceuticamente aceitável tendo efeito de ativação de neurônios colinérgicos e/ou neuroprotetor e seu uso farmacêutico. A presente invenção se relaciona também com composições farmacêuticas compreendendo o composto acima como um ingrediente ativo.

Técnica Antecedente

[0002] Os neurônios colinérgicos que liberam acetilcolina como um transmissor são amplamente projetados no prosencéfalo a partir do núcleo basal de Meynert e no núcleo septal do prosencéfalo basal para o hipocampo, amígdala e córtex cerebral e estão envolvidos na modulação da memória, aprendizagem, cognição e atenção (Literatura Patentária 1). Além disso, os neurônios colinérgicos no núcleo tegmental pedunculopontino e núcleo tegmental laterodorsal do tronco cerebral são projetados no estriado, núcleo accumbens, substância negra e tálamo e são considerados como estando envolvidos no controle da motivação e vigilância (Literaturas Não Patentárias 2 a 4).

[0003] Em particular, o papel dos neurônios colinérgicos no prosencéfalo basal foi mais esclarecido por análise usando muitos modelos animais tal como modelo de lesão. Especialmente, a correlação entre disfunção funcional dos neurônios colinérgicos e memória e aprendizagem diminuídos foi mostrada nos modelos animais (Literaturas Não Patentárias 5 a 7) e foi mostrado que o desempenho cognitivo é melhorado por aumento da quantidade de acetilcolina usando um inibidor da colinesterase e intensificação da função dos neurônios colinérgicos (Literaturas Não Patentárias 8 a 12).

[0004] Foi relatado que o Fator de Crescimento dos Nervos (NGF) mostra o efeito neuroprotetor nos neurônios colinérgicos no modelo animal indicando perda de neurônios colinérgicos. (Literaturas Não

Patentárias 13 a 15).

[0005] Particularmente para a doença de Alzheimer (AD), a perda de neurônios colinérgicos é encontrada a partir da etapa inicial da AD e é uma das características patológicas da AD. O acúmulo de placas senis por depósitos de amiloide beta e emaranhados neurofibrilares por agregação de proteína tau são também características patológicas da AD e, particularmente, se sabe que os emaranhados neurofibrilares aumentam com o progresso do estado da doença e provocam morte neuronal. Os emaranhados neurofibrilares são encontrados no núcleo basal de Meynert e córtex entorrinal a partir da etapa inicial da AD. Entre eles é relatado que a perda de neurônios colinérgicos no núcleo basal de Meynert por agregação de proteína tau é encontrada em etapa mais inicial e que existe uma correlação entre a perda e uma diminuição na pontuação da função cognitiva (Literaturas Não Patentárias 16 e 17). Similarmente à AD, hiperfosforilação e acúmulo anormal de proteína tau são encontrados em camundongos geneticamente modificados tendo uma mutação P301S que foi encontrada na demência frontotemporal familiar (camundongos transgênicos quanto a P301S de tau humana). Consequentemente, —emaranhados —neurofibrilaresó, uma característica patológica da AD, são formados (Literatura Não Patentária 18) e provocam disfunção cognitiva por comprometimento sináptico, neurodegeneração e perda de neurônios. Com base nestas descobertas, camundongos transgênicos quanto a P301S de tau humana são amplamente usados como modelos animais tipo AD (Literaturas Não Patentárias 19-22) e pode ser esperada melhoria do declínio cognitivo e supressão do progresso do estado da doença na doença de Alzheimer por supressão de mudanças patológicas tipo AD em camundongos transgênicos quanto a P301S de tau humana.

[0006] Além do mais, múltiplas análises usando camundongos geneticamente modificados e modelos animais de disfunções sugerem que o déficit de transporte axonal é uma das causas da perda de neurônios colinérgicos (Literaturas Não Patentárias 23-25). Entre eles, o axônio dos neurônios colinérgicos que se projeta a partir da área septal para o hipocampo está comprometido em um modelo lesionado de fímbria-fórnix e o comprometimento do transporte retrógrado de moléculas envolvidas na sobrevivência e função provoca perda de neurônios (Literaturas Não Patentárias 26-28). O comprometimento do transporte retrógrado é também encontrado em camundongos geneticamente modificados (Literaturas Não Patentárias 23 e 24) e a perda de neurônios colinérgicos pela lesão de fímbria- fórnix reflete um aspecto do estado da doença. Conformemente, pode ser esperada melhoria do declínio cognitivo e supressão do progresso do estado da doença na doença de Alzheimer por supressão ou melhoria da perda de neurônios colinérgicos em este modelo da disfunção.

[0007] A demência com corpos de Lewy (DLB) e a doença de Parkinson (PD) são disfunções neurodegenerativas progressivas nas quais corpos de inclusão (corpos de Lewy) anormais maioritariamente compostos por alfa sinucleína aparecem em neurônios e provocam degeneração e perda de neurônios. A disfunção cognitiva se desenvolve se os corpos de Lewy estiverem uniformemente distribuídos no córtex cerebral e o Parkinsonismo se desenvolve se os corpos de Lewy estiverem uniformemente distribuídos no tronco cerebral. Adicionalmente, a isto, sintomas psiquiátricos tais como alucinação visual, alucinação e delírio, disfunção do sono e sintomas autonômicos se desenvolvem também. O diagnóstico é demência com corpos de Lewy se a demência aparecer antes ou no espaço de um ano a partir do início do Parkinsonismo e o diagnóstico é doença de Parkinson com demência (PDD) se o Parkinsonismo tiver aparecido antes de um ano ou mais a partir do início da demência. Demência com corpos de Lewy, doença de Parkinson com demência e doença de Parkinson são patologicamente doenças iguais e amplamente referidas como doença dos corpos de Lewy (LBD) embora estas sejam diferentes na disfunção cognitiva e ordem de aparecimento e grau de Parkinsonismo. Na demência com corpos de Lewy e doença de Parkinson com demência, similarmente à doença de Alzheimer, os neurônios do núcleo basal de Meynert, um núcleo de origem do nervo colinérgico, são degenerados e perdidos e é relatado que aparece disfunção de neurônios colinérgicos grave no hipocampo e córtex (Literaturas Não Patentárias 29-31). Além do mais existe uma correlação entre o progresso da disfunção de neurônios colinérgicos e a disfunção cognitiva (Literatura Não Patentária 29) e foi demonstrado que os inibidores da colinesterase melhoram a função cognitiva. Com base nestas descobertas, a função cognitiva melhora pela melhoria da função dos neurônios colinérgicos e, similarmente à doença de Alzheimer, pode ser esperada melhoria do declínio cognitivo e supressão do progresso do estado da doença na demência com corpos de Lewy e doença de Parkinson com demência por supressão ou melhora da perda de neurônios colinérgicos em vários modelos da disfunção.

[0008] Portanto, com base nestas descobertas, pode ser esperada melhoria no desempenho cognitivo reduzido causado pela disfunção dos neurônios colinérgicos por alcance de ativação funcional e/ou efeito neuroprotetor nos neurônios colinérgicos na prática clínica.

[0009] Adicionalmente às doenças acima, exemplos de doenças para as quais foi relatada associação entre diminuição na função cognitiva e disfunção de neurônios colinérgicos incluem coreia de Huntington, síndrome de Down, esclerose lateral amiotrófica (ALS), depressão maior, esquizofrenia e similares.

Lista de Citações Literatura Não Patentária

[0010] [Literatura Não Patentária 1] Everitt BJ et al. “Central cholinergic systems and cognition”. Annu. Rev. Psychol. 48 (1997) 649-684.

[Literatura Não Patentária 2] Gulledge AT. et al. “Cholinergic inhibition of neocortical pyramidal neurons”. J. Neurosci. 25 (2005)

10308-20.

[Literatura Não Patentária 3] Daniel Dautan D. et al. “A major external source of cholinergic innervation of the striatum and nucleus accumbens originates in the brainstem”. J. Neurosci. 34 (2014) 4509-18.

[Literatura Não Patentária 4] M Steriade M. et al. “Neuronal activities in brain-stem cholinergic nuclei related to tonic activation processes in thalamocortical systems”. J. Neurosci. 10 (1990) 2541-59.

[Literatura Não Patentária 5] Fischer W. et al. “Progressive decline in spatial learning and integrity of forebrain cholinergic neurons in rats during aging”. Neurobiol. Aging 13 (1992) 9-23.

[Literatura Não Patentária 6] Leanza G. et al. “Selective lesioning of the basal forebrain cholinergic system by intraventricular 192 IgG- saporin: behavioural, biochemical and stereological studies in the rat”. Eur. J. Neurosci. 7 (1995) 329-43.

[Literatura Não Patentária 7] Leanza G. et al. “Selective immunolesioning of the basal forebrain cholinergic system disrupts short-term memory in rats”. Eur. J. Neurosci. 8 (1996) 1535-44.

[Literatura Não Patentária 8] Ogura H. et al. “Donepezil, a centrally acting acetylcholinesterase inhibitor, alleviates learning defícits in hypocholinergic models in rats". Methods Find Exp Clin Pharmacol. 22 (2000) 89-95.

[Literatura Não Patentária 9] Spowart-Manning L. et al. “Spatial discrimination defícits by excitotoxic lesions in the Morris water escape task”. Behav Brain Res. 156 (2005) 269-76.

[Literatura Não Patentária 10] Bruce AP. et al. “Choline acetyltransferase activity and cognitive domain score of Alzheimer's patients”. Neurobiol. Aging. 21 (2000) 11-17 [Literatura Não Patentária 11) Rogers SL. et al. “The efficacy and safety of donepezil in patients with Alzheimer's disease: results of a US Multicentre, Randomized, Double-Blind, Placebo-Controlled Trial. The

Donepezil Study Group". Dementia. 7 (1996) 293-303 [Literatura Não Patentária 12] Mori E. et al. “Donepezil for dementia with Lewy bodies: a randomized, placebo-controlled trial”. Ann Neurol. 72 (2012) 41-52 [Literatura Não Patentária 13] Mufson EJ. et al. “Human cholinergic basal forebrain: chemoanatomy and neurologic dysfunction”. J. Chem. Neuroanat. 26 (2003) 233-242 [Literatura Não Patentária 14] Mufson EJ. et al. “Cholinergic system during the progression of Alzheimer's disease: therapeutic implication”. Expert. Rev. Neurother. 8 (2008) 1703-1718 [Literatura Não Patentária 15] Schliebs R. et al. “The significance of the cholinergic system in the brain during aging and in Alzheimer's disease”. J. Neural. Transm 113 (2006) 1625-1644 [Literatura Não Patentária 16] Vana L et al. “Progression of tau pathology in cholinergic Basal forebrain neurons in mild cognitive impairment and Alzheimer's disease”. Am J Pathol. 179 (2011) 2533-2550.

[Literatura Não Patentária 17] Gómez-lsla T et al. “Neuronal loss correlates with but exceeds neurofibrillary tangles in Alzheimer's disease”. Ann Neurol. 41 (1997) 17-24.

[Literatura Não Patentária 18] Lee VM et al “Neurodegenerative tauopathies”. Annu. Rev. Neurosci. 24 (2001) 1121-1159.

[Literatura Não Patentária 19] Allen B et al. “Abundant tau filaments and nonapoptotic neurodegeneration in transgenic mice expressing human P301S tau protein”. J. Neurosci. 22 (2002) 9340-9351.

[Literatura Não Patentária 20] Xu H et al. “Memory defícits correlate with tau and spine pathology in P301S MAPT transgenic mice”. Neuropathol. Appl. Neurobiol. 40 (2014) 833-43.

[Literatura Não Patentária 21] Yoshiyama Y et al. “Synapse loss and microglial activation precede tangles in a P301S tauopathy mouse model”. Neuron. 53 (2007) 337-351.

[Literatura Não Patentária 22] Hoffmann NA et al. “Impaired plasticity of cortical dendritic spines in P301S tau transgenic mice”. Acta Neuropathol Commun. 1 (2013) 82.

[Literatura Não Patentária 23] Salehi A et al. “Increased App Expression in a Mouse Model of Down's Syndrome Disrupts NGF Transport and Causes Cholinergic Neuron Degeneration” Neuron 51 (2006) 29-

42.

[Literatura Não Patentária 24] Onishi T et al. “Early-onset cognitive deficits and axonal transport dysfunction inP301S mutant tau transgenic mice"” Neuroscience Research 80 (2014) 76-85.

[Literatura Não Patentária 25) Xu W et al. “Amyloid precursor protein-mediated endocytic pathway disruption induces axonal dysfunction and neurodegeneration” J. Clin. Invest. 126 (2016) 1815-33.

[Literatura Não Patentária 26] Lapchak PA et al. “Effect of recombinant human nerve growth factor on presynaptic cholinergic function in rat hippocampal slices following partial septohippocampal lesions: measures of ÉHlacetylcholine — synthesis, — PHJlacetylcholihne — release and choline acetyltransferase activity" Neuroscience 42 (1991) 639-49.

[Literatura Não Patentária 27] Gilmor ML et al. “Coordinate expression of the vesicular acetylcholine transporter and choline acetyltransferase following septohippocampal pathway lesions” J. Neurochem. 71 (1998) 2411-20.

[Literatura Não Patentária 28] Gu H et al. “Recombinant human NGF-loaded microspheres promote survival of basal forebrain cholinergic neurons and improve memory impairments of spatial learning in the rat model of Alzheimer's disease with fimbria-fornix lesion” Neurosci. Lett. 453 (2009) 204-9.

[Literatura Não Patentária 29] Shimada, H. et al, “Mapping of brain acetylcholinesterase alterations in Lewy body disease by PET" Neurology, vol.73, pp. 273-278, 2009.

[Literatura Não Patentária 30] Tiraboschi, P. et al, “Cholinergic dysfunction in diseases with Lewy bodies” Neurology 54 (2000) 407-411.

[Literatura Não Patentária 31] Perry, E. K. et al, “Neocortical cholinergic activities differentiate Lewy body dementia from classical Alzheimer's disease”, NeuroReport, vol.5, pp.747-749 (1994).

Sumário da Invenção Problema Técnico

[0011] Um objetivo da presente invenção é proporcionar um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável tendo efeito de ativação de neurônios colinérgicos e/ou neuroprotetores e tendo um uso potencial de um agente terapêutico para a doença de Alzheimer, demência com corpos de Lewy e doença de Parkinson com demência.

Solução do Problema

[0012] Como resultado de estudos extensos para resolver os problemas acima, os presentes inventores descobriram um composto pentacíclico ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis tendo efeito de ativação de neurônios colinérgicos e ou neuroprotetor.

[0013] Isto é, a presente invenção se relaciona com os seguintes <1> a <26>.

<1I> Um composto selecionado do grupo consistindo em: 3-fluoro-6,11-dimetil-6,7,10,11,12,13-hexa- hidrobenzo[f]pirido[4",3":4',5Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2-a][1 ,4]diazepina-5,14- diona:

F o Ss A (1)

5,10-dimetil-5,6,9,10,11,12-hexa- hidropirido[4",3":4',5'Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2-a]tieno[2,3-f][1 4Jdiazepina-

4,13-diona: o fÊ “Q = 1 Í o Ss A (11) 5,10-dimetil-5,6,9,10,11,12-hexa- hidropirido[4",3":4' 5'Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2-altieno[3,2-f][1 4Jdiazepina- 4,13-diona: o SN “Q Ss | o Ss A (11) (3aS,14aR)-5,10-dimetil-3,3a,5,6,9,10,11,12-octa-hidro- 1H-ciclopenta[flpirido[4",3":4' 5'Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2-a][1 4]diazepina- 4,13(2H,14aH)-diona: 9 (CX Deo Ss A (IV) (3aR,14aR)-5,10-dimetil-3,3a,5,6,9,10,11,12-octa-hidro- 1H-ciclopenta[flpirido[4",3":4' 5'Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2-a][1 4Jdiazepina- 4,13(2H,14aH)-diona: o “QN | o Ss AN (V) e (3aS,14aS)-5,10-dimetil-3,3a,5,6,9,10,11,12-octa-hidro- 1H-ciclopenta[flpirido[4",3":4' 5'Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2-a][1 AJdiazepina-

4,13(2H,14aH)-diona: o s “QU | o Ss A (VI) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. <2> 3-Fluoro-6,11-dimetil-6,7,10,11,12,13-hexa- hidrobenzo[flpirido[4",3":4',5Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2-a][1 4]diazepina-5,14- diona ou um seu sal farmaceuticamente aceitável:

F o “QU | o Ss AN (1) <3> 5,10-Dimetil-5,6,9,10,11,12-hexa- hidropirido[4",3":4',5'Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2-a]ltieno[2,3-f][1 4)diazepina- 4,13-diona ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: o P “QU >? | o Ss A (11) <4> 5,10-Dimetil-5,6,9,10,11,12-hexa- hidropirido[4",3":4' 5'Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2-a]ltieno[3,2-f][1 AJdiazepina- 4,13-diona ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: o SN “QE, | o Ss A (11) <5> (3aS,14aR)-5,10-Dimetil-3,3a,5,6,9,10,11,12- octa-hidro-1H-ciclopenta[f]pirido[4",3":4',5'Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2- a][1 AJdiazepina-4,13(2H,14aH)-diona ou um seu sal farmaceuticamente aceitável:

9 AX | eo Ss A (IV) <6> (3aR,14aR)-5,10-Dimetil-3,3a,5,6,9,10,11,12- octa-hidro-1H-ciclopental[f]pirido[4",3":4',5'Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2- a]l[1 AJdiazepina-4,13(2H,14aH)-diona ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: o “QU Í | o Ss AN (V) <T> (3aS,14aS)-5,10-Dimetil-3,3a,5,6,9,10,11,12- octa-hidro-1H-ciclopenta[flpirido[4",3":4',5'Ttieno[2',3':4,5]pirimido[1,2- a][1 AJdiazepina-4,13(2H,14aH)-diona ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: o 3 “QE | o Ss A (Vl) <8> Uma composição farmacêutica compreendendo o composto ou seu sal farmaceuticamente aceitável de acordo com qualquer um de <1> a <7> e um ou mais aditivos farmaceuticamente aceitáveis. <9-1> — A composição farmacêutica de acordo com <8>, que é um agente ativante de neurônios. <9-2> —A composição farmacêutica de acordo com <8>, que é um agente protetor de neurônios. <10> A composição farmacêutica de acordo com <8> para o tratamento de disfunção cognitiva. <> Um agente terapêutico para a disfunção cognitiva compreendendo o composto ou seu sal farmaceuticamente aceitável de acordo com qualquer um de <1> a <7>.

<12> Um método de tratamento da disfunção cognitiva, compreendendo “administração do composto ou seu sal farmaceuticamente aceitável de acordo com qualquer um de <1> a <7> a um paciente.

<13> O composto ou seu sal farmaceuticamente aceitável de acordo com qualquer um de <1> a <7> para uso no tratamento da disfunção cognitiva.

<14> Uso do composto ou seu sal farmaceuticamente aceitável de acordo com qualquer um de <1> a <7> para a fabricação de um agente terapêutico para a disfunção cognitiva.

<15> Um agente terapêutico para a doença de Alzheimer compreendendo o composto ou seu sal farmaceuticamente aceitável de acordo com qualquer um de <1> a <7>.

<16> Um método de tratamento da doença de Alzheimer, compreendendo administração do composto ou seu sal farmaceuticamente aceitável de acordo com qualquer um de <1> a <7> a um paciente.

<17> O composto ou seu sal farmaceuticamente aceitável de acordo com qualquer um de <1> a <7> para uso no tratamento da doença de Alzheimer.

<18> Uso do composto ou seu sal farmaceuticamente aceitável de acordo com qualquer um de <1> a <7> para a fabricação de um agente terapêutico para a doença de Alzheimer.

<19> Um agente terapêutico para a Demência com corpos de Lewy compreendendo o composto ou seu sal farmaceuticamente aceitável de acordo com qualquer um de <1> a <7>.

<20> Um método de tratamento da Demência com corpos de Lewy, compreendendo administração do composto ou seu sal farmaceuticamente aceitável de acordo com qualquer um de <1> a <7> a um paciente.

<21> O composto ou seu sal farmaceuticamente aceitável de acordo com qualquer um de <1> a <7> para uso no tratamento da Demência com corpos de Lewy.

<22> Uso do composto ou seu sal farmaceuticamente aceitável de acordo com qualquer um de <1> a <7> para a fabricação de um agente terapêutico para a Demência com corpos de Lewy.

<23> Um agente terapêutico para a doença de Parkinson com demência compreendendo o composto ou seu sal farmaceuticamente aceitável de acordo com qualquer um de <1> a <7>.

<24> Um método de tratamento da doença de Parkinson com demência, compreendendo administração do composto ou seu sal farmaceuticamente aceitável de acordo com qualquer um de <1> a </> a um paciente.

<25> O composto ou seu sal farmaceuticamente aceitável de acordo com qualquer um de <1> a <7> para uso no tratamento da doença de Parkinson com demência.

<26> Uso do composto ou seu sal farmaceuticamente aceitável de acordo com qualquer um de <1> a <7> para a fabricação de um agente terapêutico para a doença de Parkinson com demência.

Efeitos Vantajosos da Invenção

[0014] Os compostos pentacíclicos representados pelas fórmulas (1) a (VI) (doravante referidos como “os compostos (1) a (VI)”)) ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis de acordo com a presente invenção têm efeito de ativação de neurônios e/ou neuroprotetor, como mostrado nos dados da atividade nos exemplos de testes farmacológicos proporcionados mais tarde. Os compostos (1) a (VI) da presente invenção levam a uma melhoria do desempenho cognitivo devido ao seu efeito de ativação de neurônios e/ou neuroprotetor e, assim, têm um uso potencial como agentes terapêuticos para a doença de Alzheimer, Demência com corpos de Lewy e doença de Parkinson com demência.

Descrição de Modalidades

[0015] Doravante, os conteúdos da presente invenção serão descritos em detalhe.

[0016] No presente relatório descritivo, as fórmulas estruturais dos compostos podem representar isômeros específicos por conveniência; no entanto, a presente invenção pode incluir isômeros e tautômeros rotacionais, bem como misturas isoméricas, não está limitada às fórmulas descritas por conveniência e pode ser qualquer um dos isômeros ou uma mistura contendo os isômeros em qualquer proporção.

[0017] Adicionalmente podem também existir cristais polimórficos; no entanto, a presente invenção não está também limitada a qualquer um deles e pode ser uma forma unicamente cristalina ou uma sua mistura. Além disso, a presente invenção inclui também formas amorfas, e os compostos de acordo com a presente invenção incluem anidratos e solvatos (particularmente hidratos).

[0018] A presente invenção inclui também compostos marcados com isótopos dos compostos (1) a (VI). Os compostos marcados com isótopos são os mesmos que os compostos (1) a (VI), exceto que um ou mais átomos estão substituídos por um ou mais átomos tendo uma massa atômica ou número de massa diferente daqueles geralmente encontrados na natureza. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos da presente invenção incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, flúor, fósforo, enxofre, iodo e cloro e incluem, especificamente, ?H, ?H, “C, **C, **N, 189, 1ºF, *?p, **s, 121, | e similares.

[0019] Os compostos marcados com isótopos acima, por exemplo, compostos nos quais isótopos radioativos tais como *H e/ou **C são incorporados, são úteis para o ensaio de distribuição em tecidos de medicamentos e/ou substratos. *H e **C são considerados como sendo úteis devido à facilidade da sua preparação e detecção. Os isótopos "C e **F são considerados como sendo úteis para PET (tomografia por emissão de pósitrons), o isótopo **I1 é considerado como sendo útil para SPECT (tomografia computadorizada por emissão de fóton único) e todos eles são úteis para imagiologia cerebral. A substituição por isótopos mais pesados, tais como ?H, resulta em alguns tipos de vantagens terapêuticas, incluindo um aumento no período de meia-vida in vivo ou uma diminuição na dose requerida devido à estabilidade metabólica mais elevada e é, portanto, considerada como sendo útil sob algumas situações. Os compostos marcados com isótopos acima podem ser similarmente preparados levando a cabo procedimentos divulgados nos seguintes Exemplos usando reagentes facilmente usáveis marcados com isótopos em vez de reagentes não marcados com isótopos.

[0020] Os “sais farmaceuticamente aceitáveis” no presente relatório descritivo não estão particularmente limitados desde que sejam sais formados com os compostos de acordo com a presente invenção, e exemplos específicos incluem sais de adição de ácidos, tais como sais de ácidos inorgânicos, sais de ácidos orgânicos ou sais de aminoácidos ácidos.

[0021] O “sal farmaceuticamente aceitável” no presente relatório descritivo é qualquer sal formado em uma razão adequada a não ser que exista qualquer descrição especialmente limitante, e o número de moléculas de ácido por molécula do composto no sal formado não está particularmente limitado; no entanto é preferencial que o número de moléculas de ácido por molécula do composto seja cerca de 0,5 a cerca de 2 e é mais preferencial que o número de moléculas de ácido por molécula do composto seja cerca de 0,5, cerca de 1 ou cerca de 2.

[0022] Exemplos preferenciais dos sais de ácidos inorgânicos incluem hidrocloreto, hidrobrometo, sulfato, nitrato e fosfato; e exemplos preferenciais de sais de ácidos orgânicos incluem acetato, succinato, fumarato, maleato, tartarato, citrato, lactato, estearato, benzoato,

metanossulfonato, p-toluenossulfonato e benzenossulfonato.

[0023] Exemplos preferenciais dos sais de aminoácidos ácidos incluem aspartato e glutamato.

[0024] Quando os compostos (1) a (VI) de acordo com a presente invenção são obtidos em uma forma livre, eles podem ser convertidos em sais que podem ser formados pelos compostos (1) a (VI) ou seus hidratos de acordo com um método convencional.

[0025] Quando os compostos (1) a (VI) de acordo com a presente invenção são obtidos como sais dos compostos (1) a (VI) ou hidratos dos compostos (1) a (VI), eles podem ser convertidos nas formas livres dos compostos (1) a (VI) de acordo com um método convencional.

[0026] Além disso, vários isômeros (p.ex., isômeros ópticos, isômeros rotacionais, estereoisômeros, etc.) obtidos a partir dos compostos (1) a (VI) de acordo com a presente invenção podem ser purificados e isolados por meios gerais de separação, tais como recristalização, método de sal diastereoisomérico, método de resolução enzimática e várias técnicas cromatográficas (p.ex., cromatografia em camada fina, cromatografia em coluna, cromatografia gasosa, etc.).

[0027] [Preparação Farmacêutica] A composição farmacêutica de acordo com a presente invenção pode ser produzida por mistura de aditivos farmaceuticamente aceitáveis com um composto selecionado do grupo de compostos (1) a (VI) ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis. A composição farmacêutica de acordo com a presente invenção pode ser produzida por um método conhecido, por exemplo, o método descrito nas General Rules for Preparations of The Japanese Pharmacopoeia Décima Sétima Edição.

[0028] A composição farmacêutica de acordo com a presente invenção pode ser apropriadamente administrada a um paciente dependendo da sua forma de dosagem.

[0029] Adose dos compostos (1) a (VI) de acordo com a presente invenção ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis varia dependendo da gravidade dos sintomas, idade, sexo, peso corporal, forma de dosagem, tipo de sal, tipo específico de doença e outras condições; no entanto, em geral, a dose para um adulto por dia por administração oral é cerca de 30 vg a 10 g, preferencialmente 100 ug a 59 e, mais preferencialmente, 100 ug a 1 g; a dose para um adulto por dia por administração por injeção é cerca de 30 vg a 1 g, preferencialmente 100 ug a 500 mg e, mais preferencialmente, 100 ug a 300 mg; e a dose acima é administrada uma vez ou várias vezes.

[0030] Os compostos da presente invenção podem ser usados como sondas químicas para capturar as proteínas alvo de compostos bioativos de baixo peso molecular. Isto é, os compostos da presente invenção podem ser convertidos em sondas de cromatografia de afinidade, sondas de fotoafinidade, etc., por introdução de grupos marcadores, ligantes ou similar em uma fração diferente de uma fração estrutural essencial para O desenvolvimento da atividade dos compostos usando um método descrito, por exemplo, em J. Mass Spectrum. Soc. Jpn. Vol. 51, No. 5, 2003, pp. 492-498, WO?2007/139149 ou similares.

[0031] Exemplos de grupos marcadores, ligantes, etc., usados em sondas químicas incluem grupos mostrados no grupo consistindo nos seguintes (1) a (5): (1) grupos marcadores de proteína, tais como grupos marcadores de fotoafinidade (p.ex., um grupo benzoíla, um grupo benzofenona, um grupo azida, um grupo carbonilazida, um grupo diaziridina, um grupo enona, um grupo diazo, um grupo nitro, etc.) e grupos de afinidade química (p.ex., um grupo cetona no qual o átomo de carbono alfa está substituído por um átomo de halogênio, um grupo carbamoíla, um grupo éster, um grupo alquiltio, aceitador de Michael tal como um grupo cetona ou éster a,B- insaturado e um grupo oxirano);

(2) ligantes cliváveis, tais como -S-S-, -O-Si-O-, monossacarídeos (um grupo glucose, um grupo galactose, etc.) ou dissacarídeos (lactose, etc.), e ligantes de oligopeptídeos cliváveis por reação enzimática; (3) grupos marcadores de pesca, tais como biotina e um grupo 3-(4,4-difluoro-5,7-dimetil-4H-3a 4a-diaza-4-bora-s-indacen-3- il)propionila; (4) grupos marcadores radioativos, tais como 125, 3ºp, 3H e *C; grupos marcadores fluorescentes, tais como fluoresceina, rodamina, dansil, umbeliferona, 7-nitrofurazanila e um grupo 3-(4,4-difluoro-5,7-dimetil-4H- 3a 4a-diaza-4-bora-s-indacen-3-il)propionila; grupos quimioluminescentes, tais como luciferina e luminol; e marcadores capazes de detectar íons de metais pesados, tais como íons de metais lantanoides e íons de rádio; ou (5) grupos a serem anexados a transportadores sólidos tais como esférulas de vidro, leitos de vidro, placas de microtitulação, esférulas de agarose, leitos de agarose, esférulas de poliestireno, leitos de poliestireno, esférulas de náilon e leitos de náilon.

[0032] As sondas preparadas por introdução de grupos marcadores, etc., selecionados do grupo consistindo nos (1) a (5) acima nos compostos da presente invenção pelos métodos descritos nos documentos acima ou similares podem ser usadas como sondas químicas para identificar proteínas marcadas úteis para procurar novos alvos de desenho de fármacos, etc.

Exemplos

[0033] Os compostos (1) a (VI) da presente invenção podem ser produzidos, por exemplo, pelos métodos descritos nos seguintes Exemplos, e os efeitos dos compostos podem ser confirmados pelos métodos descritos nos seguintes Exemplos de Teste. No entanto, estes são apenas exemplos, e a presente invenção não está limitada aos seguintes exemplos específicos em nenhuma situação e pode ser modificada dentro de uma gama que não se afasta do escopo da presente invenção.

[0034] Os compostos descritos com nomes de documento, etc., indicam que os compostos foram produzidos de acordo com os documentos, etc.

[0035] Além disso, as abreviaturas usadas no presente relatório são bem conhecidas e comuns a um perito na técnica. No presente relatório descritivo são usadas as seguintes abreviaturas.

DCE: 1,2-dicloroetano DCM: diclorometano DIPEA: N N-di-isopropiletilamina DMT-MM: cloreto de 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5-triazin-2-i1)-4- metilmorfolínio DMSO: dimetilsulfóxido EDC: hidrocloreto de 1-etil-3-(3- dimetilaminopropil)carbodi-imida HATU: hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol|-1-il)- N,N,N',N'-tetrametilurônio HOBT: 1-hidroxibenzotriazol n-: normal NMM: N-metilmorfolina t-: terciário TBD: 1,3,4,6,7,8-hexa-hidro-2H-pirimido[1,2-a]pirimidina TBME: éter de butilmetila terciário TEA: trietilamina THF: tetra-hidrofurano RMN de 'H: espectrometria de ressonância magnética nuclear de prótons MS: espectrometria de massa

HPLC: Cromatografia líquida de elevado desempenho

[0036] O termo “temperatura ambiente" nos seguintes Exemplos e Exemplos de Produção se refere geralmente a cerca de 10 ºC a cerca de 35 ºC. % se refere à percentagem em peso a não ser que de outro modo especificado.

[0037] Os desvios químicos dos espectros de ressonância magnética nuclear de prótons são denotados em unidade 3 (ppm) em relação ao tetrametilssilano, e as constantes de acoplamento são registradas em Hertz (Hz). Os padrões são designados como s: singleto, d: dubleto, t; tripleto, q: quarteto, m: multipleto, |: largo, sl: singleto largo.

[0038] Para a resolução óptica do composto foi usado Parallex Flex"" produzido pela Biotage (coluna: uma de CHIRALPAKº AD-H, IA, IB e IC produzida pela DAICEL; e CHIRALCELº OD-H e OJ-H produzidas pela DAICEL).

[0039] Nas reações usando um reator de micro-ondas nos Exemplos de Produção, Exemplos de Referência e Exemplos foi usado Initiator"M ou Initiator+"M produzido pela Biotage.

[0040] No que diz respeito à cromatografia, como sílica gel, foi usado Silica Gel60 produzido pela Merck (ASTM malha 70-230 ou malha 230-400) ou PSQ60B produzido pela da Fuji Silysia Chemical Ltd., ou foi usada uma coluna pré-empacotada (fcoluna: Coluna Hi-Flash"M (Silicagel) produzida pela YAMAZEN, tamanho: um de S (16 x 60 mm), M (20 x 75 mm), L (26 x 100 mm), 2L (26 x 150 mm) e 3L (46 x 130 mm); ou Cartucho de Sílica Biotage"M SNAP Ultra produzido pela Biotage, tamanho: um 10 g, 25ge 50 g).

[0041] Como o sílica gel NH foi usado CHROMATOREX NH-DM?2035 produzido pela Fuji Silysia Chemical Ltd., ou foi usada uma coluna pré-empacotada (coluna: Coluna Hi-Flash""M (Amino) produzida pela YAMAZEN, tamanho: um de S (16 x 60 mm), M (20 x 75 mm), L (26 x 100 mm), 2L (26 x 150 mm) e 3L (46 x 130 mm); ou Presep “Y (Luer Lock) NH2(HC)

produzida pela Wako Pure Chemical Industries, Ltd., tamanho: um de tipo M (14 9/25 mL), tipo L (34 9/70 mL), tipo 2L (50 9g/100 mL) e tipo 3L (110 9g/200 mL)).

[0042] Como nomes dos compostos mostrados em baixo, exceto para reagentes geralmente usados, foram usados aqueles mostrados no “E-Notebook'” Versão 12 (PerkinElmer).

[0043] Exemplo de Produção 1 Síntese de 2-amino-6-metil-4,5,6,7-tetra-hidrotieno[2,3- clpiridina-3-carboxilato de etila o APS IAO — PQ º S NH TEA (61,6 mL, 442 mmol) foi adicionada à temperatura ambiente a uma mistura de 1-metil-4-piperidona (No. CAS 1445-73-4) (51,5 mL, 442 mmol), cianoacetato de etila (No. CAS 105-56-6) (47,2 mL, 442 mmol), enxofre (No. CAS 7704-34-9) (14,2 g, 442 mmol) e etanol (800 mL). A mistura reacional foi agitada a 40 ºC durante 15 horas e, depois, concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado com cromatografia em coluna (sílica gel NH, acetato de etila). O resíduo concentrado obtido foi triturado com acetato de etila. Os precipitados foram coletados por filtração, lavados com acetato de etila e secos sob pressão reduzida para originar o composto do título (58,4 9).

1H-RMN (400 MHz, CDCI3) 5 (ppm): 1,33 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 2,44 (s, 3H), 2,62-2,70 (m, 2H), 2,79-2,88 (m, 2H), 3,37 (t, J = 2,0 Hz, 2H), 4,26 (q, J = 7,3 Hz, 2H), 5,97 (s |, 2H).

MS (ESI) m/z: 241 [M+H]*

[0044] Exemplo de Produção 2 Síntese de 7-fluoro-4-metil-3 4-di-hidro-1H- benzol[e][1 4)diazepina-2,5-diona o o a Não ro A H o HO Sarcosina (No. CAS 107-97-1) (5,16 g, 58,0 mmol) foi adicionada à temperatura ambiente a uma solução de G6-fluoro-1H- benzo[d][1,3]oxazina-2,4-diona (No. CAS 321-69-7) (10,0 g, 55,2 mmol) em piridina (100 mL), e a mistura reacional foi agitada a 100 ºC durante 8 horas. À mistura reacional foi resfriada até à temperatura ambiente. Os precipitados foram coletados por filtração e lavados com éter de dietila. O sólido obtido foi seco sob pressão reduzida para originar o composto do título (5,34 g). 1H-RMN (400 MHz, CDCI3) 5 (ppm): 3,30 (s, 3H), 3,90 (s, 2H), 6,97 (dd, J = 8,8, 4,5 Hz, 1H), 7,20 (ddd, J = 8,6, 7,6, 2,9 Hz, 1H), 7,67 (dd, J = 9,0, 3,1 Hz, 1H), 7,99 (s |, 1H). MS (ESI) m/z: 209 [M+H]*

[0045] Exemplo de Produção 3 Síntese de 4-metil-3 4-di-hidro-1H-tieno[3,2- el[1 Aldiazepina-2,5-diona T Ss o / Ss o DX + Ho. mo FA, a

Y HC Y e Uma mistura de 1H,2H,4H-tieno[3,2-d][1,3]Joxazina-2,4- diona (No. CAS 78756-28-2) (300 mg, 1,77 mmol), sarcosina (395 mg, 4,43 mmol) e água (10 mL) foi aquecida sob refluxo durante 2 horas. A mistura reacional foi resfriada até O ºC. Os precipitados foram coletados por filtração e lavados sequencialmente com água e éter de dietila. O sólido obtido foi seco sob pressão reduzida para originar o composto do título (165 mg). 1H-RMN (400 MHz, CDCI3) 5 (ppm): 3,24 (s, 3H), 4,00 (s, 2H), 6,72 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 7,96 (s |, 1H).

MS (ESI) m/z: 197 [M+H]*

[0046] Exemplo de Produção 4 Síntese de 4-metil-3 4-di-hidro-1H-tieno[2,3- el[1 Aldiazepina-2,5-diona = o P o Q + HAN Q AN Ho EN o o E 1H,2H,4H-tieno[2,3-d][1,3]Joxazina-2,4-diona/ (No. CAS 103979-54-0) (600 mg, 3,55 mmol) foi adicionada a uma solução de sarcosina (790 mg, 8,87 mmol) em água (12 mL). A mistura reacional foi aquecida sob refluxo durante 1,5 horas. A mistura reacional foi resfriada até à temperatura ambiente. Clorofórmio foi adicionado à mistura reacional, e a camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi extraída com clorofórmio (duas vezes) e acetato de etila (3 vezes). A camada orgânica combinada foi seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O sólido obtido foi seco para originar o composto do título (430 mg). 1H-RMN (400 MHz, CDCI3) 5 (ppm): 3,23 (s, 3H), 3,99 (s, 2H), 6,90 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 8,39 (s |, 1H). MS (ES!) m/z: 197 [M+H]*

[0047] Exemplo de Produção 5 Síntese de (5aS,8aR)-4-metilocta- hidrociclopenta[e][1 4]diazepina-2,5-diona o O (o) OD A a) ÕÔ 2a Tr dO O x (1) Síntese de 2-((18,2R)-2-((t-butoxicarbonil)amino)-N- metilciclopentanocarboxamida)acetato de metila TEA (22,2 mL, 159 mmol), HOBT/mono-hidrato (11,7 9, 76,3 mmol) e EDC (14,6 g, 76,3 mmol) foram sequencialmente adicionados sob resfriamento em gelo a uma mistuira de ácido (1S8,2R)-2-((t butoxicarbonil)amino)ciclopentano-1-carboxílico (No. CAS 137170-89-9) (14,6 g, 63,6 mmol), hidrocloreto de éster de metila de sarcosina (No. CAS 13515-93- 0) (10,7 g, 76,3 mmol) e THF (150 mL). Após a mistura reacional ter sido agitada à temperatura ambiente durante 15 horas, acetato de etila e água foram adicionados, e a camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica combinada foi lavada sequencialmente com uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio e uma solução saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi purificado duas vezes por cromatografia em coluna (sílica gel, acetato de etila/n-heptano a 25-30%) para originar o composto do título (16,1 9).

MS (ES!) m/z: 337 [M+Na]* (2) Síntese de 5aS,8aR)-4-metilocta- hidrociclopenta[e][1 4]diazepina-2,5-diona Uma solução de cloreto de hidrogênio/1,4-dioxano a 4 N (160 mL, 640 mmol) foi adicionada sob resfriamento em gelo a 2-((18,2R)-2-((t butoxicarbonil)amino)-N-metilciclopentanocarboxamida)acetato de metila (16,1 g, 51,3 mmol). A mistura reacional foi agitada à mesma temperatura durante 30 minutos, depois agitada à temperatura ambiente durante 45 minutos e concentrada sob pressão reduzida. TBD (8,57 g, 61,6 mmol) foi adicionada sob resfriamento em água a uma solução do resíduo em metanol (130 mL). À mistura reacional foi agitada sob resfriamento em água durante 3 horas e, depois, resfriada até O ºC. O sólido resultante foi coletado por filtração, lavado 3 vezes com metanol resfriado em gelo e seco sob pressão reduzida para originar o composto do título (5,22 g).

TH-RMN (400 MHz, CDCI3) 5 (ppm): 1,41-1,59 (m, 2H), 1,78-1,98 (m, 2H), 2,00-2,15 (m, 1H), 2,36-2,53 (m, 1H), 3,08 (s, 3H), 3,18-3,32 (m, 1H), 3,49 (dd, J = 15,5, 1,7 Hz, 1H), 3,91-4,04 (m, 1H), 4,51 (d, J= 15,4 Hz,

1H), 5,54 (s |, 1H).

MS (ES!) m/z: 183 [M+H]*

[0048] Exemplo de Produção 6 Síntese de (5aR,8aR)-4-metilocta- hidrociclopenta[e][1 4]diazepina-2,5-diona do 2 O da A A 2) A —— ——> Oo Z À oH ZM 2 N ok DR (1) Síntese de 2-((1R,2R)-2-((t-butoxicarbonil)amino)-N- metilciclopentanocarboxamida)acetato de t-butila DIPEA (1,81 mL, 10,5 mmol) e HATU (1,99 g, 5,23 mmol) foram sequencialmente adicionados à temperatura ambiente a uma mistura de ácido — (1R,2R)-t-butoxicarbonil-2-aminociclopentanocarboxílico — (No. CAS 245115-25-7) (1,00 g, 4,36 mmol), hidrocloreto de éster de t-butila de sarcosina (No. CAS 136088-69-2) (872 mg, 4,80 mmol) e DCM (10 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora e, depois, diretamente purificada por cromatografia em coluna (sílica gel, acetato de etila/n-heptano a 30-50%) para originar o composto do título (1,61 9).

MS (ES!) m/z: 357 [M+H]* (2) Síntese de (5aR,8aR)-4-metilocta- hidrociclopenta[e][1 4]diazepina-2,5-diona Uma solução de cloreto de hidrogênio/1,4-dioxano a 4 N (16 mL, 64 mmol) foi adicionada à temperatura ambiente a 2-((1R,2R)-2-((t- butoxicarbonil)amino)-N-metilciclopentanocarboxamida)acetato de t-butila (1,61 g, 4,52 mmol), e a mistura foi agitada durante 20 horas. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. Hidrogenocarbonato de sódio (0,911 g, 10,8 mmol), metanol (24 mL), NMM (0,099 mL, 0,90 mmol) e DMT-MM (HO a 12,3% 1,80 g, 5,70 mmol) foram sequencialmente adicionados ao resíduo à temperatura ambiente, e a mistura foi agitada durante 20 horas. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi lavado com

DCM. O líquido lavado foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (sílica gel, metanol/acetato de etila a 5- 20%) para originar o composto do título (745 mg).

1H-RMN (400 MHz, CDCI3) 5 (ppm): 1,56-1,88 (m, 3H), 1,91-2,02 (m, 1H), 2,13-2,23 (m, 1H), 2,26-2,39 (m, 1H), 3,07 (s, 3H), 3,08-3,16 (m, 1H), 3,51-3,62 (m, 1H), 3,79 (d, J = 18,0 Hz, 1H), 4,58 (d, J = 18,0 Hz, 1H), 6,76 (s |, 1H).

MS (ES!) m/z: 183 [M+H]*

[0049] Exemplo de Produção 7 Síntese de (5aS,8aS)-4-metilocta- hidrociclopenta[e][1 4]diazepina-2,5-diona da Rn 0) da Rn A 2) RR > > o ZE 2 ZM 2 N ok DR (1) Síntese de 2-((18,2S)-2-((t-butoxicarbonil)amino)-N- metilciclopentanocarboxamida)acetato de ft-butila HATU (1,99 g, 5,23 mmol) foi adicionado à temperatura ambiente a uma mistira de ácido —(1S,2S)-t-butoxicarbonil-2- aminociclopentanocarboxílico (No. CAS 143679-80-5) (1,00 g, 4,36 mmol), hidrocloreto de éster de t-butila de sarcosina (872 mg, 4,80 mmol), DIPEA (1,81 mL, 10,5 mmol) e DCM (10 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite e, depois, diretamente purificada por cromatografia em coluna (sílica gel, acetato de etila/n-heptano a 30-50%) para originar o composto do título (1,55 g).

MS (ESI) m/z: 357 [M+H]* (2) Síntese de (5aS,8aS)-4-metilocta- hidrociclopenta[e][1,4]diazepina-2,5-diona Uma solução de cloreto de hidrogênio/1,4-dioxano a 4 N (16 mL, 64 mmol) foi adicionada à temperatura ambiente a 2-((18,28S)-2-((t butoxicarbonil)amino)-N-metilciclopentanocarboxamida)acetato de t-butila (1,55

9, 4,35 mmol), e a mistura foi agitada durante 16 horas. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. Hidrogenocarbonato de sódio (0,877 9, 10,4 mmol), metanol (24 mL), NMM (0,096 mL, 0,87 mmol) e DMT-MM (H2O a 12,3% 1,73 g, 5,48 mmol) foram sequencialmente adicionados ao resíduo à temperatura ambiente, e a mistura foi agitada durante 3 horas. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi lavado com DCM. O líquido lavado foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (sílica gel, metanol/acetato de etila a 0- 20%) para originar o composto do título (753 mg).

TH-RMN (400 MHz, CDCI3) 5 (ppm): 1,55-1,88 (m, 3H), 1,91-2,02 (m, 1H), 2,11-2,22 (m, 1H), 2,25-2,40 (m, 1H), 3,07 (s, 3H), 3,07-3,16 (m, 1H), 3,51-3,62 (m, 1H), 3,78 (d, J = 18,0 Hz, 1H), 4,57 (d, J = 18,0 Hz, 1H), 6,54 (s |, 1H).

MS (ES!) m/z: 183 [M+H]*

[0050] Exemplo 1 Síntese de 3-fluoro-6,11-dimetil-6,7,10,11,1213-hexa- hidrobenzo[flpirido[4",3":4', 5S'Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2-a][1 4])diazepina-5,14- diona o F QE = o H Oo SON N Oxicloreto de fósforo (4,65 mL, 49,9 mmol) foi adicionado à temperatura ambiente a uma mistura de 2-amino-6-metil-4,5,6,7-tetra- hidrotieno[2,3-c]piridina-3-carboxilato de etila (6,00 g, 25,0 mmol) obtido no Exemplo de Produção 1, 7-fluoro-4-metil-3,4-di-hidro-1H- benzol[e][1 ,4]diazepina-2,5-diona (5.20 g, 25.0 mmol) obtida no Exemplo de Produção 2 e DCE (300 mL). A mistura reacional foi agitada a 80 ºC durante 20 horas. Enquanto se agitava sob resfriamento em gelo, etóxido de sódio (uma solução a 20% em etanol, 80 mL, 207 mmol) foi adicionado à mistura reacional.

A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. Uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio e acetato de etila foram adicionados à mistura reacional, e a camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica combinada foi seca sobre sulfato de magnésio e filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi sequencialmente purificado por cromatografia em coluna (sílica gel NH, acetato de etila/n-heptano a 50- 100%) e cromatografia em coluna (sílica gel, metanol/acetato de etila a 0-50%). O sólido obtido foi triturado com TBME, e os precipitados foram coletados por filtração. O sólido obtido foi lavado com TBME e seco sob pressão reduzida para originar o composto do título (4.56 9).

1H-RMN (400 MHz, CDCI3) 5 (ppm): 2,51 (s, 3H), 2,66- 2,76 (m, 1H), 2,77-2,88 (m, 1H), 3,04-3,18 (m, 2H), 3,25 (s, 3H), 3,57-3,75 (m, 2H), 4,09 (d, J = 15,2 Hz, 1H), 4,47 (d, J = 14,8 Hz, 1H), 7,25-7,31 (m, 1H), 7,60-7,64 (m, 1H), 7,67 (dd, J = 9,0, 4,7 Hz, 1H).

MS (ES!) m/z: 385 [M+H]*

[0051] Exemplo 2 Síntese de 5,10-dimetil-5,6,9,10,11,12-hexa- hidropirido[4",3":4' 5'Jtieno[2',3":4,5]pirimido[1,2-altieno[2,3-f][1 4)diazepina- 4 13-diona f Oo + — h N so nºs e s AO 1 Oxicloreto de fósforo (0,157 mL, 1,688 mmol) foi adicionado à temperatura ambiente a uma mistura de 2-amino-6-metil-4,5,6,7- tetra-hidrotieno[2,3-c]piridina-3-carboxilato de etila (303 mg, 1,26 mmol) obtido no Exemplo de Produção 1, 4-metil-3,4-di-hidro-1H-tieno[3,2-e][1 4Jdiazepina- 2,5-diona (165 mg, 0,841 mmol) obtida no Exemplo de Produção 3 e 1,4- dioxano (10 mL). A mistura reacional foi agitada a 70ºC durante 2 horas e,

depois, agitada a 90 ºC durante 5 horas. Etóxido de sódio (uma solução a 20% em etanol, 2,60 mL, 6,73 mmol) foi adicionado à mistura reacional resfriada até à temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 40 minutos. Acetato de etila e uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio foram adicionados à mistura reacional, e a camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica combinada foi seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (sílica gel, metanol/acetato de etila a 50%) para originar o composto do título (90,0 mg).

H-RMN (400 MHz, CDCI3) 5 (ppm): 2,51 (s, 3H), 2,66- 2,87 (m, 2H), 3,07-3,20 (m, 2H), 3,26 (s, 3H), 3,56-3,74 (m, 2H), 4,21 (d J = 15,0 Hz, 1H), 4,56 (d, Jy = 15,0 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 5,3 Hz, 1H).

MS (ES!) m/z: 373 [M+H]*

[0052] Exemplo 3 Síntese de 5,10-dimetil-5,6,9,10,11,12-hexa- hidropirido[4",3":4' 5'Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2-a]ltieno[3,2-f][1 Aldiazepina- 4, 13-diona o = Pp o SN QÃÊo Ro —. AQ. o SO NH 5 Ss AN Oxicloreto de fósforo (1,43 mL, 15,3 mmol) foi adicionado à temperatura ambiente a uma mistura de 4-metil-3,4-di-hidro-1H-tieno[2,3- e][1 AJdiazepina-2,5-diona (1,00 g, 5,10 mmol) obtida no Exemplo de Produção 4, 2-amino-6-metil-4,5,6,7-tetra-hidrotieno[2,3-c]piridina-3-carboxilato de etila (1,84 g, 7,64 mmol) obtido no Exemplo de Produção 1 e 1,4-dioxano (30 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 minutos e agitada a 90 ºC durante 2 horas. Etóxido de sódio (uma solução a 20% em etanol, 21,7 mL, 56,1 mmol) foi adicionado ao longo de 5 minutos à mistura reacional resfíriada até à temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 horas. Acetato de etila, uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio e água foram sequencialmente adicionados à mistura reacional, e a camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica combinada foi seca sobre sulfato de magnésio anidro e filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (sílica gel, metanol/acetato de etila a 20%-50%). O sólido obtido foi triturado com etanol, e os precipitados foram coletados por filtração. O sólido obtido foi lavado com etanol e seco sob pressão reduzida para originar o composto do título (712 mg). 1H-RMN (400 MHz, CDCI3) 5 (ppm): 2,52 (s, 3H), 2,71- 2,87 (m, 2H), 3,05-3,30 (m, 5H), 3,59-3,75 (m, 2H), 4,23 (d, J = 14,8 Hz, 1H), 4,57 (d, J = 14,8 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 6,2 Hz, 1H), 7,39 (d, J = 5,9 Hz, 1H). MS (ESI) m/z: 373 [M+H]*

[0053] Exemplo 4 Síntese de (3aS,14aR)-5,10-dimetil-3,3a,5,6,9,10,11,12- octa-hidro-1H-ciclopenta[flpirido[4",3":4',5'Jtieno[2',3":4,5]pirimido[1,2- al[1 Aldiazepina-4,13(2H,14aH)-diona o Õ o AQ + a eo = PQ mm S NH, AA Ss ANNA Oxicloreto de fósforo (7,93 mL, 85,1 mmol) foi adicionado à temperatura ambiente a uma mistura de (5aS,8aR)-4-metilocta- hidrociclopenta[e][1,4]diazepina-2,5-diona (3,10 g, 17,0 mmol) obtida no Exemplo de Produção 5-(2)) 2-amino-6-metil-4,5,6,7-tetra-hidrotieno[2,3- clpiridina-3-carboxilato de etila (8,18 g, 34,0 mmol) obtido no Exemplo de Produção 1 e DCE (300 mL). A mistura reacional foi agitada a 80 ºC durante

14,5 horas. Uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio foi adicionada à mistura reacional a O ºC, a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3,5 horas e, depois, a camada orgânica foi separada. À camada aquosa foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica combinada foi lavada sequencialmente com uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio e uma solução saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de magnésio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (sílica gel NH, acetato de etila/n-heptano a 30-60%). O resíduo concentrado obtido foi triturado com TBME, e os precipitados foram coletados por filtração. O sólido obtido foi lavado 3 vezes com TBME e seco sob pressão reduzida para originar o composto do título (3,70 g).

1H-RMN (400 MHz, CDCI3) 5 (ppm): 1,51-1,73 (m, 2H), 1,94-2,18 (m, 2H), 2,30-2,41 (m, 1H), 2,44-2,59 (m, 4H), 2,71-2,82 (m, 2H), 3,04-3,19 (m, 5H), 3,42-3,54 (m, 1H), 3,64 (s, 2H), 4,17 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 4,75 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 5,69-5,82 (m, 1H).

MS (ESI) m/z: 359 [M+H]* Rotação específica: [a] 7? -146,0 (c 0,50, CHCIs) Análise por HPLC: (Condições da análise) Coluna: CHIRALPAK |B (produzida pela Daicel Chemical Industries, Ltd.) (0,46 cm q x 15 cm), 40 ºC, eluente: etanol/hexano = 20/80 (v/v), caudal: 1 mL/min., detecção: UV (254 nm).

(Resultados da análise) Quando o composto do título foi analisado sob as condições de análise acima, o tempo de retenção foi 10,38 minutos, a pureza óptica foi >98% de ee, e a rotação óptica foi (-). O tempo de retenção do enantiômero foi confirmado pelo produto sintetizado similarmente usando uma mistura racêmica como um material de partida.

[0054] Exemplo 5

Síntese de (3aR,14aR)-5,10-dimetil-3,3a,5,6,9,10,11,12- octa-hidro-1H-ciclopenta[fpirido[4",3":4',5'Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2- al[1 Aldiazepina-4,13(2H,14aH)-diona a NH; PAN Ss AN º Oxicloreto de fósforo (0,/93 mL, 8,51 mmol) foi adicionado à temperatura ambiente a uma mistura de (5aR,8aR)-4-metilocta- hidrociclopenta[e][1,4]diazepina-2,5-diona (310 mg, 1,70 mmol) obtida no Exemplo de Produção 6-(2)) 2-amino-6-metil-4,5,6,7-tetra-hidrotieno[2,3- clpiridina-3-carboxilato de etila (613 mg, 2,55 mmol) obtido no Exemplo de Produção 1 e DCE (16 mL). A mistura reacional foi agitada a 70 ºC durante 2,5 horas e depois devolvida à temperatura ambiente, e acetato de etila (15 mL) e uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio (30 mL) foram adicionados. A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 dias, acetato de etila foi adicionado, e a camada orgânica foi separada. À camada aquosa foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica combinada foi seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (sílica gel NH, acetato de etila/n-heptano a 50-70%). O produto obtido foi lavado 3 vezes com éter de dietila, depois lavado com TBME e seco sob pressão reduzida para originar o composto do título (143 mg).

1H-RMN (400 MHz, CDCI3) 5 (ppm): 1,29-1,49 (m, 1H), 1,68-1,83 (m, 1H), 1,82-2,21 (m, 3H), 2,50 (s, 3H), 2,76 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 2,98-3,23 (m, 6H), 3,40-3,54 (m, 1H), 3,57-3,68 (m, 2H), 4,17-4,34 (m, 2H), 5,30 (d, J = 17,4 Hz, 1H).

MS (ESI) m/z: 359 [M+H]* Análise por HPLC: (Condições da análise) Coluna: CHIRALPAK IC

(produzida pela Daicel Chemical Industries, Ltd.) (0,46 cm q x 15 cm), 40 ºC, eluente: etanol, caudal: 1 mL/min., detecção: UV (254 nm) (Resultados da análise) O tempo de retenção do composto do título foi 6,64 minutos, a pureza óptica foi >99% de ee e a rotação óptica foi (-).

[0055] Exemplo 6 Síntese de (3aS,14aS)-5,10-dimetil-3,3a,5,6,9,10,11,12- octa-hidro-1H-ciclopenta[flpirido[4",3":4',5'Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2- a]l[1 Aldiazepina-4,13(2H,14aH)-diona o Se ' ao — QE em o NH, PAN S ANN Oxicloreto de fósforo (0,859 mL, 9,22 mmol) foi adicionado à temperatura ambiente a uma mistura de (5aS,8aS)-4-metilocta- hidrociclopenta[e][1,4]diazepina-2,5-diona (336 mg, 1,84 mmol) obtida no Exemplo de Produção 7-(2)) 2-amino-6-metil-4,5,6,7-tetra-hidrotieno[2,3- clpiridina-3-carboxilato de etila (665 mg, 2,77 mmol) obtido no Exemplo de Produção 1 e DCE (17 mL). A mistura reacional foi agitada a 60 ºC durante 3,5 horas e, depois, resfriada até à temperatura ambiente. Acetato de etila (15 mL) e uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio (30 mL) foram adicionados à mistura reacional. Após a mistura reacional ter sido agitada à temperatura ambiente durante 5 dias, acetato de etila foi adicionado, e a camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica combinada foi seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (sílica gel NH, acetato de etila/n-heptano a 40-80%). O produto obtido foi lavado 3 vezes com éter de dietila e seco sob pressão reduzida para originar o composto do título (166 mg).

1H-RMN (400 MHz, CDCI3) 5 (ppm): 1,31-1,50 (m, 1H),

1,69-1,83 (m, 1H), 1,84-1,97 (m, 1H), 1,97-2,20 (m, 2H), 2,50 (s, 3H), 2,73-2,80 (m, 2H), 3,02-3,23 (m, 6H), 3,41-3,55 (m, 1H), 3,57-3,69 (m, 2H), 4,19-4,34 (m, 2H), 5,30 (d, J = 17,2 Hz, 1H).

MS (ES!) m/z: 359 [M+H]* (Condições da análise) Coluna: CHIRALPAK IC (produzida pela Daicel Chemical Industries, Ltd.) (0,46 cm q x 15 cm), 40 ºC, eluente: etanol, caudal: 1 mL/min,, detecção: UV (254 nm) (Resultados da análise) O tempo de retenção do composto do título foi 8,34 minutos, a pureza óptica foi >99% de ee e a rotação óptica foi (+).

[0056] Exemplos de testes farmacológicos Os seguintes testes farmacológicos foram conduzidos usando os compostos dos Exemplos 1 a 6.

[0057] Medição da liberação de acetilcolina (ACh) no sistema de cultura de neurônios septais primários de rato na presença de NGF 1) Cultura de neurônios septais primários de rato A área septal foi isolada a partir de ratos Sprague-Dawley (SD) (Charles River Laboratories Japan, Inc.) a uma idade fetal de 18 dias e cultivada. Especificamente, os fetos foram asseticamente removidos a partir de ratos grávidos sob anestesia com isoflurano. O cérebro foi extraído a partir de cada feto e imerso em meio L-15 resfriado em gelo (11415-064, Thermo Fisher Scientific). A área septal foi dissecada a partir do cérebro extraído sob um microscópio estereoscópico. A área septal dissecada foi sujeita a tratamento enzimático em uma solução enzimática contendo tripsina a 0,25% (15050-065, Thermo Fisher Scientific) e DNase a 0,01% (D5025-150KU, Sigma) a 37 ºC durante 30 minutos, deste modo dispersando as células. Em este caso, a reação enzimática foi terminada por adição de soro de cavalo inativado (26050- 088, Thermo Fisher Scientific). A solução tratada com enzima foi centrifugada a 1000 rpm durante 3 minutos, e o sobrenadante foi removido. Um meio em uma quantidade de 10 mL foi adicionado à massa de células obtida. O meio usado foi Meio de Eagle Modificado por Dulbecco (044-29765, WAKO) suplementado com suplemento N2 (17502-048, Thermo Fisher Scientific), piruvato de sódio a 1 mM (11360-070, Thermo Fisher Scientific) e Penicilina-Estreptomicina (15140-1221, Thermo Fisher Scientific). As células da massa de células à qual o meio foi adicionado foram redispersas por pipetagem suave e, depois, centrifugadas novamente a 1000 rpm durante 3 minutos, e o sobrenadante foi removido. O meio em uma quantidade de 10 mL foi adicionado à massa de células obtida, e a dispersão de células foi filtrada através de malha de náilon de 40 um (Cell Strainer) para se remover a massa de células, deste modo obtendo uma suspensão de células neuronais. A suspensão de células neuronais foi diluída com o meio, e soro de bovino inativado a 10% (26140-079, Thermo Fisher Scientific) e soro de cavalo inativado a 10% foram adicionados. Subsequentemente, 100 ul/poço da suspensão foram inoculados em uma placa com 96 poços (354461, CORNING) pré-revestida com poli-D-lisina tal que a densidade de cultura inicial fosse 1,4 x 10º células/cm?. Após as células inoculadas terem sido cultivadas sob CO, a 5%-ar a 95% em um incubador a 37 ºC durante 2 dias, o meio inteiro foi substituído por 120 ul de meio fresco, e as células foram subsequentememite cultivadas durante 5 dias.

2) Adição do composto No 7º dia de cultura, o composto foi adicionado da seguinte maneira. Uma solução do composto de teste em DMSO foi diluída com o meio tal que a concentração fosse 10 vezes mais elevada do que a concentração final. NGF (450-01, PEPRO TECH, INC.) foi preparado a 0,3 ng/mL. Estas duas soluções foram adicionadas cada uma em uma quantidade de 15 ul/poço, e a mistura foi misturada bem. A concentração final de DMSO foi 0,1% ou menos. Além do mais, somente DMSO e NGF foram adicionados ao grupo de controle.

(3) Medição da liberação de ACh

Um dia após adição do composto, uma quantidade de liberação de ACh foi medida por HPLC da seguinte maneira. Um tampão aquecido foi adicionado a 100 ul/poço após o meio ter sido eliminado, e o tampão foi imediatamente removido. Subsequentemente, um tampão ao qual colina a 10 um, fisostigmina a 10 um e KCl a 6 mM foram adicionados foi adicionado a 120 ul/poço. O tampão foi preparado por adição de NaCl a 125 mM, ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinaetanossulfônico a 25 mM, KH2PO, a 1,2 mM, MgSO, a 1,2 mM, CaCl; (2H;7O0) a 2,2 mM e glucose a 10 mM a água esterilizada, e o pH final da solução foi definido como 7,4. Após a placa com 96 poços à qual o tampão foi adicionado tiver sido incubada sob CO, a 5%-ar a 95% em um incubador a 37 ºC durante 40 minutos, 80 ul de tampão foram coletados. Uma solução padrão interna de IPHC (5 x 107 M) foi adicionada em uma quantidade de 6 ul ao tampão coletado, e o tampão foi transferido para um tubo para medição por HPLC e sujeito a medição por HPLC. Os resultados são representados pelo efeito de cada composto como a percentagem (% de controle) da concentração de ACh no tampão do grupo de controle, e as concentrações de composto mostrando um aumento de 20% a partir da concentração de ACh no tampão do grupo de controle são mostradas na seguinte Tabela 1.

[0058] [Tabela 1] Exemplo Concentração (uM) mostrando um aumento de 20% ou mais a UT ste nem c Acme mentem E |

[0059] Medição dos níveis de expressão de mRNA de colina acetiltransferase (ChAT) na área septal de rato 1) Administração do composto Em este estudo foram usados ratos machos SD (Charles River Laboratories Japan, Inc.) com um peso corporal de 250 a 350 g. O composto foi dissolvido em ácido clorídrico a 0,01 mol/L e oralmente administrado.

2) Amostragem Às 24 horas após a administração do composto, o tecido cerebral inteiro foi coletado sob anestesia com pentobarbital. O septo mediano foi isolado a partir do cérebro inteiro em gelo e congelado com nitrogênio líquido e, depois, armazenado a -80 ºC.

(3) Medição dos níveis de expressão de MRNA de ChAT Para purificação do RNA foi usado o Estojo RNeasy Plus Mini (474136: QIAGEN) em este estudo. A purificação do RNA foi realizada pelo método descrito no estojo. Após purificação do RNA, a concentração total de RNA foi medida por uso do Instrumento QIAxpert (QIAGEN). O cDNA foi sintetizado usando o Estojo SuperScriptº VILO'M cDNA Synthesis (H11754: Thermo Fisher Scientific). A síntese do cDNA foi realizada pelo método descrito no estojo. O cDNA sintetizado foi diluído 4 vezes com água isenta em RNase, e a solução diluída de cDNA foi usada como uma amostra. Mistura Tagman Universal PCR Master (ft4304437: Thermo Fisher Scientific), Ensaios Tagmanº? Gene Expression, INVENTORIED (tt4331182: Thermo Fisher Scientific), água isenta em RNase e a solução de cDNA foram misturados em quantidades de ul, 1 ul, 4 ul e 5 ul, respectivamente, e a mistura resultante foi usada como uma solução de amostra para medição. A reação em cadeia da polimerase quantitativa (QPCR) foi conduzida usando ABI PRISMº 7900HT (Thermo Fisher Scientific) por um método de sonda de fluorescência. A análise foi realizada por SDS 2.4 (Thermo Fisher Scientific). Os resultados foram calculados pela percentagem da quantidade de níveis de expressão de MRNA de ChAT no grupo com administração de composto aumentada a partir da quantidade de níveis de expressão de mMRNA de ChATt no grupo com administração de veículo. Os resultados são mostrados na seguinte Tabela 2.

[0060] [Tabela 2] Exemplo Quantidade (%) aumentada a partir da quantidade de níveis de expressão de MRNA de ChAT no grupo com administração de veículo a es | a E ag

[0061] Medição de acetilcolina (ACh) no Líquido cefalorraquidiano (CSF) de rato 1) Antecedentes A correlação entre aumento e diminuição de neurotransmissores intracerebrais e aqueles no líquido cefalorraquidiano (CSF) foi revelada por estudos em roedores e a correlação foi também vista em humanos (Lowe S et al. Psychopharmacology 219 (2012) 959-970). Assim, as mudanças na acetilcolina no CSF foram medidas de modo a se determinarem as mudanças na acetilcolina intracerebral pelos compostos de teste.

(2) Administração do composto Em este estudo foram usados ratos machos Fischer344 (Charles River Laboratories Japan, Inc.) com um peso corporal de 150 a 250 g. Os compostos de teste foram oralmente administrados aos ratos uma vez por dia a 10 mg/kg durante três dias. O veículo usado foi ácido clorídrico a 0,01 mol/L.

(3) Amostragem Às 24 horas após a administração do veículo e dos compostos de teste, o CSF foi coletado a partir da cisterna magna em um tubo contendo inibidores de AChE sob anestesia com pentobarbital. O CSF coletado foi centrifugado a 3500 x g a 4 ºC durante 10 minutos e o sobrenadante foi coletado. O sobrenadante coletado foi congelado com nitrogênio líquido e, depois, armazenado a -80 ºC.

4) Medição de Ach por LC-MS A 10 ul do CSF foram adicionados 50 uL de cloreto de acetilcolina-d9 (ACh-d9) a uma concentração final de 0,34 nmol/L como um padrão interno. A mistura foi pipetada e centrifugada a 1500 x g a 4 ºC durante minutos. O sobrenadante foi coletado e sujeito a LC/MS (NexeraX2 (MS), TSQ Altis (HPLC)), e a Ach foi detectada como íon precursor a m/z 146,050 e como fon de produto a m/z 87,071 e ACh-d9 como um padrão interno foi detectado como íon precursor a m/z 155,088 e como íon de produto a m/z 87,000. Os resultados foram mostrados como cálculos de uma percentagem de aumento na concentração de ACh no CSF no grupo com administração do composto de teste no que diz respeito àquela no grupo com administração de veículo (% de controle). Os resultados foram mostrados na Tabela 3.

[0062] [Tabela 3] quantidade de ACh no CSF o grupo com administração de veículo

[0063] Avaliação em camundongos transgênicos quanto a P301S de tau humana 1) Administração do composto Em este estudo, os compostos de teste foram oralmente administrados a camundongos transgênicos quanto a P301S de tau humana uma vez por dia durante três meses a partir de quatro meses de idade até sete meses de idade. O veículo usado foi ácido clorídrico a 0,01 mol/L.

2) Amostragem No dia inicial da administração (quatro meses de idade) e no dia seguinte da administração final, os camundongos do grupo com administração de veículo e grupo com administração de composto de teste foram anestesiados sob pentobarbital (50 mg/kg, i.p.) e perfundidos com PBS. Após a perfusão, o prosencéfalo incluindo a área septal mediana foi coletado e fixo com paraformaldeído a 4%.

(3) Preparação de seção congelada coronal cerebral O prosencéfalo coletado incluindo a área septal mediana foi imerso e agitado durante a noite em paraformaldeído a 4%. A solução de imersão foi substituída com solução de sacarose a 7,5%. Foi imerso e agitado durante a noite em solução de sacarose a 7,5%, e a solução de imersão foi substituída por solução de sacarose a 15% e foi imerso e agitado durante a noite. A solução de imersão foi substituída por solução de sacarose a 30% e foi imerso e agitado durante a noite. Seções congeladas coronais cerebrais com um de espessura foram preparadas a partir do prosencéfalo incluindo a área septal mediana por uso de um micrótomo (Leica, SM2000R).

4) Imuno-histoquímica de células positivas quanto a colina acetiltransferase (ChAT) As seções congeladas coronais cerebrais preparadas foram coloridas com DAB (ESTOJO DAB PEROXIDASE SUBSTRATE (Vector, SK-4100)) usando um anticorpo contra ChAT (Santa Cruz, SC-20672) como um anticorpo primário. A imagem da seção incluindo a área septal mediana como mostrado em “The mouse Brain in stereotaxic coordinates" (TERCEIRA EDIÇÃO COMPACTA, Keith B.J. Franklin & George Paxinos) foi tirada por um microscópio de fluorescência tudo-em-um (KEYENCE, BZ-X710) e as células positivas quanto a ChAT em torno do eixo principal da área septal mediana foram contadas pelo software de análise BZ (KEYENCE). Os resultados foram mostrados como uma percentagem do número de células positivas quanto a ChAT no grupo com administração de veículo e no grupo com administração de composto de teste no que diz respeito ao número de células positivas quanto a ChAT aquando da administração inicial (quatro meses de idade). Os dados são expressos como a média + SEM. As diferenças entre o grupo aquando da administração inicial e o grupo tratado com veículo (significativo: *) foram analisadas por um teste t não emparelhado, e também as diferenças entre o grupo tratado com veículo e grupo tratado com composto (significativo: ? foram analisadas por teste t não emparelhado. Um valor de P<0,05 foi considerado estatisticamente significativo. As análises estatísticas foram realizadas usando o GraphPad Prism versão 7.02. Os resultados foram mostrados na Tabela 4.

[0064] [Tabela 4] Grupo de Tratamento | Razão (%) do número de células positivas quanto a ChAT em comparação com aquele na administração inicial. Grupo aquando da 100,0+4,5 | misma ma O Grupo com 83,0+5,8 administração de veículo Grupo com 105,0+4,0* administração do Exemplo 1 (Dose: 10 mg/kg) Grupo com 105,3+4,3" administração do Exemplo 3 (Dose: 5 mg/kg)

[0065] Efeito neuroprotetor e restaurador em neurônios colinérgicos usando modelo de rato lesionado de fímbria-fórnix 1) Preparação de modelo de rato lesionado de fímbria- fórnix Em este estudo foram usados ratos machos Sprague- Dawley (Charles River Laboratories Japan, Inc.) com um peso corporal de 250 a 350 g. O rato foi anestesiado sob a combinação de três fármacos: midazolam (2 mg/kg s.c.), hidrocloreto de medetomidina (0,15 mg/kg s.c.) e tartarato de butorfanol (2,5 mg/kg s.c.) e fixo com um aparelho de estereotaxia cerebral (Narishige Co., Ltd.). O crânio foi exposto e um buraco com 5 mm de largura foi perfurado no crânio a partir da linha mediana 2 mm posterior a Bregma. Uma navalha com 4 mm de largura foi perfurada na Bregma a 5,5 mm de profundidade para cortar a fímbria-fórnix. Após hemostasia, o couro cabeludo foi suturado. Após a operação, o rato foi trazido de volta para a gaiola e recuperou da anestesia. No grupo falsamente operado, um buraco com 5 mm de largura foi perfurado no crânio a partir da linha mediana 2 mm posterior a Bregma, mas nenhuma navalha foi perfurada.

2) Administração do composto Os compostos de teste foram oralmente administrados aos ratos uma vez por dia a partir de cinco dias até aos nove dias após a operação (Exemplo 1: 10 mg/kg) ou a partir dos sete dias até aos catorze dias após a operação (Exemplo 3: 3 mg/kg). O veículo usado foi ácido clorídrico a 0,01 mol/L. No grupo falsamente operado, o veículo foi oralmente administrado uma vez por dia similarmente ao grupo com administração de composto de teste.

(3) Amostragem Os ratos foram anestesiados sob pentobarbital e transcardiacamente perfundidos com PBS gelado. Após a perfusão, o prosencéfalo incluindo a área septal mediana foi coletado e imerso e agitado durante a noite com paraformaldeído a 4%. A solução de imersão foi substituída com solução de sacarose a 7,5%. Foi imerso e agitado durante a noite em solução de sacarose a 7,5%, e a solução de imersão foi substituída por solução de sacarose a 15% e foi imerso e agitado durante a noite. À solução de imersão foi substituída por solução de sacarose a 30% e foi imerso e agitado durante a noite. Seções congeladas coronais cerebrais com 30 um de espessura foram preparadas a partir do prosencéfalo incluindo a área septal mediana por uso de um micrótomo (Leica, SM2000R).

4) Imuno-histoquímica de células positivas quanto à colina acetiltransferase (ChAT) e transportador de acetilcolina vesicular (VAChT) As seções congeladas coronais cerebrais preparadas foram coloridas com DAB (ESTOJO DAB PEROXIDASE SUBSTRATE (Vector, SK-4100)) usando um anticorpo contra ChAT (Santa Cruz, SC-20672) ou um anticorpo contra VAChT (Merck Millipore, ABN100) como um anticorpo primário. A imagem da seção incluindo a área septal mediana ou hipocampo como mostrado em “The mouse Brain in stereotaxic coordinates" (TERCEIRA EDIÇÃO COMPACTA, Keith B.J. Franklin & George Paxinos) foi tirada por um microscópio de fluorescência tudo-em-um (KEYENCE, BZ-X710) e as células positivas quanto a ChAT da área septal mediana ou densidade óptica (OD) em VAChT do hipocampo foram medidas pelo software de análise BZ (KEYENCE). Os resultados foram mostrados como uma percentagem do número de células positivas quanto a ChAT da área septal mediana ou OD em VAChT do hipocampo no grupo com administração de veículo e no grupo com administração de composto de teste no que diz respeito ao número de células positivas quanto a ChAT da área septal mediana ou OD em VAChNT do hipocampo no grupo falsamente operado. Os dados são expressos como a média + SEM, As diferenças entre o grupo tratado com veículo e grupo tratado com composto (significativo: *) foram analisadas por teste t não emparelhado. Um valor de P<0,05 foi considerado estatisticamente significativo. As análises estatísticas foram realizadas usando o GraphPad Prism versão 7.02. Os resultados foram mostrados nas Tabelas 5 e 6.

[0066] [Tabela 5] Exemplo | Número de células | Número de células Número de células positivas quanto a | positivas quanto a positivas quanto a ChAT (%) na ChAT (%) no grupo | ChAT (%) no grupo administração com administração | com administração de inicial de veículo composto de teste

[0067] [Tabela 6] Exemplo | OD em VAChT do | OD em VAChT do OD em VAChT do hipocampo (%) na | hipocampo (%) no hipocampo (%) no administração grupo com grupo com inicial administração de administração de veículo composto de teste

Claims (17)

REIVINDICAÇÕES

1. Composto caracterizado por ser selecionado do grupo consistindo em: 3-fluoro-6,11-dimetil-6,7,10,11,12,13-hexa- hidrobenzo[flpirido[4",3":4',5Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2-a][1,4)diazepina-5,14- diona:

F o “QU | o Ss A (1) 5,10-dimetil-5,6,9,10,11,12-hexa- hidropirido[4",3":4',5'Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2-a]tieno[2,3-f][1 4])diazepina- 4,13-diona: o FKs “QUO = | o Ss AN (1) 5,10-dimetil-5,6,9,10,11,12-hexa- hidropirido[4",3":4',5'Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2-a]ltieno[3,2-f][1 4])diazepina- 4,13-diona: o SN “QU = | o S A (11) (3aS,14aR)-5,10-dimetil-3,3a,5,6,9,10,11,12-octa- hidro-1H-ciclopenta[fpirido[4",3":4',5'Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2- a]l[1 AJdiazepina-4,13(2H,14aH)-diona: o ( X deo Ss AN (IV)

(3aR,14aR)-5,10-dimetil-3,3a,5,6,9,10,11,12-octa- hidro-1H-ciclopenta[flpirido[4",3":4', 5Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2- al[1,A]Jdiazepina-4,13(2H,14aH)-diona: o “RX | o Ss A (V) e (3aS,14aS)-5,10-dimetil-3,3a,5,6,9,10,11,12-octa- hidro-1H-ciclopenta[flpirido[4",3":4',5Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2- a][1,A]Jdiazepina-4,13(2H,14aH)-diona: o T Q : | o Ss A (VI) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

2. "Composto caracterizado pelo fato de ser 3-Fluoro- 6,11-dimetil-6,7,10,11,12,13-hexa-hidrobenzo[fpirido[4",3":4',5'Jtieno[2',3':4,5]pi- rimido[1,2-a][1 4Jdiazepina-5, 14-diona ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:

F o “QU | o Ss A (1)

3. "Composto caracterizado pelo fato de ser 5,10- Dimetil-5,6,9,10,11,12-hexa-hidropirido[4",3":4',5Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2- altieno[2,3-f][1 4]diazepina-4,13-diona ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:

o ff “0 = | o Ss A (11)

4. Composto caracterizado pelo fato de ser 5,10- Dimetil-5,6,9,10,11,12-hexa-hidropirido[4",3":4',5'Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2- altieno[3,2-f][1 4]Jdiazepina-4,13-diona ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo: o SN “Q) = | o S A (11)

5. Composto caracterizado pelo fato de ser (3aS,14aR)-5,10-Dimetil-3,3a,5,6,9,10,11,12-octa-hidro-1H-ciclopenta[flpirido [4",3":4' 5Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2-a][1 4Jdiazepina-4,13(2H,14aH)-diona/ ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo: o x (do Ss A (1V)

6. Composto caracterizado pelo fato de ser (3aR,14aR)-5,10-Dimetil-3,3a,5,6,9,10,11,12-octa-hidro-1H-ciclopenta[flpirido [4",3":4' 5Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2-a][1 4)diazepina-4,13(2H,14aH)-diona/ ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo: o “Qx | o Ss A (V)

7. Composto caracterizado pelo fato de ser (3aS,14aS)-5,10-Dimetil-3,3a,5,6,9,10,11,12-octa-hidro-1H-ciclopenta[f]pirido [4",3":4', 5Jtieno[2',3':4,5]pirimido[1,2-a][1 ,A4Jdiazepina-4,13(2H,14aH)-diona ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:

P FS QE. Ss | A (VI)

8. Composição farmacêutica caracterizada por compreender um composto, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3,4, 5, 6 o0u7,e um ou mais aditivos farmaceuticamente aceitáveis.

9. Agente terapêutico para a doença de Alzheimer caracterizado por compreender um composto, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1, 2,3,4,5,6 ou 7.

10. Método de tratamento da doença de Alzheimer, caracterizado por compreender a administração de um composto, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme definido na reivindicação 1, a um paciente.

11. Composto ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7, caracterizado por ser para uso no tratamento da doença de Alzheimer.

12. Agente terapêutico para a Demência com corpos de Lewy, caracterizado por compreender um composto, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7.

13. Método de tratamento da Demência com corpos de Lewy caracterizado por compreender a administração de um composto, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme definido na reivindicação 1, a um paciente.

14. Composto ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7,

caracterizado por ser para uso no tratamento da Demência com corpos de Lewy.

15. Agente terapêutico para a doença de Parkinson com demência, caracterizado por compreender um composto, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3,4, 5,6 ou 7.

16. Método de tratamento da doença de Parkinson com demência, caracterizado por compreender a administração de um composto, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme definido na reivindicação 1, a um paciente.

17. Composto ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7, caracterizado por ser para uso no tratamento da doença de Parkinson com demência.