BR112020002401A2 - composições e métodos de inoculantes microbianos - Google Patents

Abstract

Uma composição de inoculante microbiano que inclui espécies bacterianas aquáticas. Em algumas modalidades, a composição de inoculante microbiano inclui pelo menos uma Pseudomonas spp. aquática e uma de Clostridium spp.

Description

COMPOSIÇÕES E MÉTODOS DE INOCULANTES MICROBIANOS REFERÊNCIAS PARA O PEDIDO RELACIONADO

[001] O presente pedido reivindica prioridade ao Pedido de Patente Provisório Americano No. 62/541,422, arquivado em 04 de agosto de 2017; Pedido de Patente Provisório Americano No. 62/660,830, arquivado em 20 de abril de 2018; Pedido de Patente Provisório Americano No. 62/663,069, arquivado em 26 de abril de 2018; e Pedido de Patente Provisório Americano No. 62/672,198, arquivado em 16 de maio de 2018, cada um dos quais incorporado aqui através de referência.

SUMÁRIO

[002] Esta apresentação descreve, em um aspecto, uma composição de inoculante microbiano. Geralmente, a composição de inoculante microbiano inclui uma Pseudomonas spp. aquática e uma Clostridium spp., em que a Pseudomonas spp. aquática faz com que a planta produza um hormônio vegetal.

[003] Em algumas modalidades, a Pseudomonas spp. aquática é P. moraviensis ou P. fluorescens.

[004] Em algumas modalidades, a Clostridium spp. é Clostridium saccharobutylicum.

[005] Em algumas modalidades, a composição de inoculante microbiano inclui ainda um Bacillus spp. Em algumas dessas modalidades, o Bacillus spp. é B. megaterium, B. subtilis, ou B. licheniformis.

[006] Em algumas modalidades, a composição de inoculante microbiano inclui ainda uma Delftia spp. aquática.

[007] Em algumas modalidades, a composição de inoculante microbiano inclui ainda uma Chryseobacterium spp. aquática.

[008] Em algumas modalidades, a composição de inoculante microbiano ainda inclui uma Brevundimonas kwangchunensis, uma Fictibacillus barbaricus/Bacillus barbaricus, Petição Petição870200142200, 870200142193,de de11/11/2020, 11/11/2020,pág. pág.10/56 5/45 uma Prosthecobacter spp., uma Sphingobacterium multivorum, ou uma Sphingomonas spp.

[009] Em algumas modalidades, a composição de inoculante microbiano ainda inclui Bacillus megaterium, Bacillus amyloliquifaciens, Bacillus subtilus, Bacillus pumilus, Sphingosinicella microcystinivorans, Pseudomonas chlororaphis, Pseudomonas mandelii, Pseudomonas umsongensis, uma Clostridium spp., Arthrobacter ramosus, Streptomyces yogyakartensis, uma Arthrobacter spp., uma Xanthomonas spp., ou uma Chryseobacterium indologenes.

[010] Em outro aspecto, esta apresentação descreve uma planta que inclui adesão a pelo menos uma parte da planta.

[011] Em outro aspecto, esta apresentação descreve uma semente que apresenta qualquer modalidade da composição de inoculante microbiano resumida acima aderida a pelo menos uma parte da semente.

[012] Em outro aspecto, esta apresentação descreve um método que inclui a aplicação de qualquer modalidade da composição de inoculante microbiano resumida acima em um tecido de uma planta.

[013] Em outro aspecto, esta apresentação descreve um método que inclui a aplicação de qualquer modalidade da composição de inoculante microbiano resumida acima na superfície de uma semente.

[014] Em outro aspecto, esta apresentação descreve um método que inclui a aplicação de qualquer modalidade da composição de inoculante microbiano resumida acima em uma sementeira.

[015] Em outro aspecto, esta apresentação descreve um método que inclui a aplicação de qualquer modalidade da composição de inoculante microbiano resumida acima em um campo compreendendo uma pluralidade de plantas.

[016] O sumário acima não pretende descrever cada modalidade revelada ou todas as formas de implementar a presente invenção. A descrição a seguir exemplifica mais particularmente as modalidades ilustrativas. Ao longo do pedido é fornecida uma orientação por meio de listas de exemplos que podem ser usados em várias combinações.

Petição Petição870200142200, 870200142193,de de11/11/2020, 11/11/2020,pág. pág.11/56 6/45

Em cada instância, a lista exibida serve apenas como um grupo representativo e não deve ser interpretada como uma lista exclusiva.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[017] FIG. 1. Efeito da composição de inoculante microbiano em grãos de soja. Os grãos de soja dispostos no meio e no lado direito são tratados com uma composição microbiana exemplar. Os grãos de soja do lado esquerdo não são tratados. Grãos de soja submetidos a tratamento possuem folhas maiores e mais ramificadas.

[018] FIG. 2. Efeito da composição de inoculante microbiano em grãos de soja. Os grãos de soja do lado esquerdo são tratados com uma composição microbiana exemplar. Os grãos de soja do lado direito não são tratados. Grãos de soja submetidos ao tratamento apresentam redução de folhas murchas e maior tamanho de folha.

[019] FIG. 3. Efeito da composição de inoculante microbiano no trigo. O trigo do lado direito não é tratado. O trigo disposto no meio é tratado no estágio foliar com uma composição de inoculante microbiano exemplar. O trigo do lado esquerdo é tratado com a mesma composição de inoculante microbiano no estágio de revestimento das sementes. O trigo que não foi submetido ao tratamento apresentou uma média de 29 cabeças, o trigo tratado no estágio foliar apresentou uma média de 40 cabeças, o trigo tratado no estágio de revestimento das sementes apresentou uma média de 61 cabeças.

[020] FIG. 4. Efeito da composição de inoculante microbiano na canola. A canola do lado direito não foi tratada. A canola do lado esquerdo foi tratada com uma composição de inoculante microbiano exemplar. A canola tratada apresentou maior ramificação e maior número de vagens.

[021] FIG. 5. Efeito da composição de inoculante microbiano no milho. A espiga disposta na figura superior é de uma planta não tratada. A espiga disposta na figura inferior é de uma planta tratada com uma composição de inoculante microbiano exemplar. A espiga da figura inferior apresenta um aumento de grãos por anel em comparação com Petição Petição870200142200, 870200142193,de de11/11/2020, 11/11/2020,pág. pág.12/56 7/45 a espiga não tratada. A diferença no tamanho dos grãos deve-se ao fato de que o milho tratado está em um estágio de desenvolvimento anterior ao do milho não tratado.

[022] FIG. 6. Girassol submetido a danos feitos por um cortador de grama, e posteriormente tratado com uma composição de inoculante microbiano exemplar.

[023] FIG. 7. Repolho submetido a danos feitos por um cortador de grama, e depois tratado com uma composição de inoculante microbiano exemplar.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES ILUSTRATIVAS

[024] A presente inovação descreve composições de inoculantes microbianos que incluem espécies microbianas aquáticas para aplicação em plantas terrestres. Em algumas modalidades, a mistura inoculante também inclui uma espécie que produz e/ou mantém um microambiente na planta que é adequado para que os outros micróbios na mistura inoculante possam prosperar.

[025] Uma perda de biodiversidade dentro de uma matriz do solo pode levar à depressão das produções agrícolas. Os inoculantes microbianos podem aumentar a solubilização, absorção e/ou assimilação dos nutrientes como, por exemplo, carbono, nitrogênio, potássio, fósforo, selênio, cobalto, zinco e cobre. Os inoculantes microbianos também podem reduzir os danos dos patógenos das plantas nas safras uma fonte estável e contínua de hormônios vegetais que melhoram o crescimento. Ainda que os microrganismos capazes de promover o crescimento da planta e a produção da planta possam ocorrer naturalmente no solo, a mera presença de micróbios não garante a integração bem- sucedida dos micróbios.

[026] Em pelo menos uma modalidade, como descrito abaixo, a composição de inoculante microbiano pode funcionar endofiticamente dentro de pelo menos uma planta para manter um estado de elétron disponível para ser utilizado dentro do processo metabólico da planta. Ou seja, a composição de inoculante microbiano pode atuar como um catalisador iônico para tanto aceitar ou remover um elétron como para transformar Petição Petição870200142200, 870200142193,de de11/11/2020, 11/11/2020,pág. pág.13/56 8/45 um elétron disponível ou remover o elétron da planta. Esse processo pode ocorrer, na ausência de uma composição de inoculante microbiano, quando uma planta passa pelo processo de fotossíntese durante o dia para a respiração noturna e vice-versa. A composição de inoculante microbiano, quando aplicada à planta, sustenta a planta, disponibilizando quimicamente os nutrientes necessários à produção de hormônios em um nível suficiente que promova o crescimento.

[027] A composição de inoculante microbiano pode inocular a planta estando próxima e/ou em contato físico direto com a planta. Como exemplo, uma gota de água contendo a composição de inoculante microbiano pode ser depositada na planta e, portanto, não depositada no solo e não absorvida pelas raízes.

[028] A presente inovação descreve novas composições de inoculantes microbianos isolados de um ambiente aquático para aplicação em plantas terrestres. Em algumas modalidades, a mistura inoculante também inclui uma espécie que produz e/ou mantém um microambiente na planta que é adequado para que os outros micróbios na mistura inoculante possam prosperar.

[029] Geralmente, a composição de inoculante microbiano inclui uma Pseudomonas spp. e uma Clostridium spp., como, por exemplo, P. fluorescens e C. saccharobutylicum.

[030] Em algumas modalidades, a composição de inoculante microbiano inclui ainda uma ou mais Agrobacterium tumefaciens (TPD7005), Bacillus megaterium (TPD7007), Bacillus megaterium (TPD 7008), Agrobacterium rhizogenes (TPD7009), Microbacterium testaceum (TPD7010), Bacillus megaterium (TPD7011), Microbacterium spp. (TPD7012), Pedobacter kribbensis (TPD70013), Janthinobacterium lividum (TPD7014), Bacillus racemilacticus (TPD7015), Bacillus megaterium (TPD 7018), Delftia spp. (TPD3002), Chryseobacterium spp. (TPD3003), Bacillus licheniformis, Brevundimonas kwangchunensis (TPD3004), Fictibacillus barbaricus/Bacillus barbaricus (TPD3005), Prosthecobacter spp. (TPD3006), Lactobacillus plantarum (TPD3007), Sphingobacterium multivorum, Sphingomonas spp. (TPD3009), Sphingosinicella microcystinivorans (TPD3010), Pseudomonas chlororaphis, Pseudomonas mandelii, Pseudomonas umsongensis, Clostridium saccharobutylicum (TPD3014), Arthrobacter ramosus (TPD3015), Streptomyces Petição Petição870200142200, 870200142193,de de11/11/2020, 11/11/2020,pág. pág.14/56 9/45 yogyakartensis (TPD3016), Arthrobacter spp. (TPD3017), Xanthomonas spp., Chryseobacterium indologenes (TPD3019), ou Lactobacillus plantarum.

[031] A Tabela 1 apresenta a análise de RNA 16S e/ou dados do projeto de sequenciamento do tipo shotgun completo de genomas para elementos exemplares da composição de inoculante microbiano.

[032] Tabela 1 Espécie Designação Número de acesso no GenBank Pseudomonas veronii TPD3012 MH190219.1 Pseudomonas mandelii TPD3013 MH221124.1 Pseudomonas moraviensis TPD3001 MH190053.1 Pseudomonas protegens TPD3011 MH221127.1 Pantoea agglomerans TPD7001 MH190052.1 Clostridium TPD3014 MH189851.1 saccharobutylicum Clostridium TPD7003 MH192394.1 saccharobutylicum Erwinia aphidicola TPD7004 MH190220.1 Serratia liquefaciens TPD7002 MH190215.1 Pedobacter kribbensis TPD70013 MH221086.1 Janthinobacterium lividum TPD7014 MH221099.1 Bacillus racemilacticus TPD7015 MH221098.1 Sphingomonas spp. TPD3009 QDFK00000000.1 Agrobacterium tumefaciens TPD7005 QDFL00000000.1 Bacillus megaterium TPD7018 QDFM00000000.1 Sphingomonas spp. TPD3009 QDFN00000000.1 Bacillus megaterium TPD7007 QDFO00000000.1 Petição 870200142200, 870200142193, de 11/11/2020, pág. 15/56 10/45

Bacillus megaterium TPD7008 QDFP00000000.1 Arthrobacter spp. TPD3018 QDFQ00000000.1 Agrobacterium rhizogenes TPD7009 QDFR00000000.1 Sphingomonas melonis TPD3008 QDFS00000000.1 Microbacterium testaceum TPD7010 QDFT00000000.1 Bacillus megaterium TPD7011 QDFU00000000.1 Microbacterium spp. TPD7012 QDFV00000000.1

[033] Finalmente, em algumas modalidades, a composição de inoculante microbiano inclui ainda uma ou mais cepas de levedura TAH3020 ou cepas de levedura TAH3021.

[034] A composição de inoculante microbiano pode promover o crescimento das plantas (por exemplo, aumentar o tamanho das folhas, aumentar a massa da raiz), diminuir o impacto do estresse, diminuir o consumo de água, aumentar solubilidade e/ou assimilação dos nutrientes, aumentar o valor nutricional, aumentar a deterioração das moléculas que contém carbono para que as moléculas orgânicas estejam mais prontamente disponíveis para a planta, aumentar a produção de hormônios de crescimento nas plantas e/ou aumentar o metabolismo da planta (diminuindo assim, o tempo necessário para produção de frutos). Além disso, nas leguminosas, a composição de inoculante microbiano pode aumentar o número de vagens, aumentar o crescimento das raízes, aumentar a nodulação, e/ou aumentar o número de ramos por planta. Em algumas modalidades, a composição de inoculante microbiano pode ser aplicada para entrar em contato e/ou interagir endofiticamente com a planta.

[035] Em particular, as bactérias da composição de inoculante microbiano podem produzir 1-aminociclopropano-1-carboxilato (ACC) desaminase. O ACC pode reduzir os níveis de etileno da planta, geralmente resultado de várias tensões, como, por exemplo, estresse através de calor e/ou seca. O ACC pode interagir sinergicamente com a planta e a auxina bacteriana, ácido indol-3-acético (IAA). As bactérias produtoras de ACC não apenas podem promover o crescimento das plantas, como também podem proteger as Petição 870200142200, 870200142193, de 11/11/2020, pág. 16/56 11/45 plantas contra inundações, secas, sal, murchas de flores, metais, contaminantes orgânicos, patógenos bacterianos e patógenos fúngicos.

[036] Em particular, diminuir o consumo de água pode aumentar a solubilização de minerais e/ou fertilizantes, de modo que as necessidades da água sejam reduzidas para transportar os minerais e/ou fertilizantes das raízes, aumentar o desenvolvimento das raízes de forma que os nutrientes do solo possam ser obtidos de uma área maior e/ou a água possa ser obtida mais profundamente no solo e/ou reduzir o estresse diário por calor. A redução do estresse diário por calor permite que a planta adquira melhor o CO2, metabolizando mais açúcares e aumentando o rendimento, regulando o pH, e/ou produzindo mais energia durante o dia.

[037] As composições de inoculantes microbianos podem incluir espécies microbianas adicionais ou outros aditivos para fornecer atividade fisiológica, metabólica ou outra atividade desejada.

[038] Em algumas modalidades, por exemplo, as composições de inoculantes microbianos podem incluir uma ou mais das seguintes espécies microbianas: Acetobacteraceae, spp. (por exemplo, Acidisphaera spp.), Acetivibrio spp. (por exemplo, Acetivibrio cellulolyticus), Acidiphilium spp., Acidimicrobiaceae spp. (por exemplo, um Acidimicrobium spp., um Aciditerrimonas spp.), Acidobacteriales spp. (por exemplo, um Acidobacteriaceae spp. [por exemplo, um Acidobacterium spp.]), Acidothermus spp., Acidovorax spp. (por exemplo, Acidovorax citrulli), Acinetobacter spp. (por exemplo, Acinetobacter lwoffii), Actinoallomurus spp. (por exemplo, Actinoallomurus iriomotensis), Actinocatenispora spp. (por exemplo, Actinocatenispora rupis), Actinomadura spp., Actinomycetales spp. (por exemplo, um Actinomyces spp.), Actinoplanes spp. (por exemplo, Actinoplanes auranticolor), Actinopolymorpha spp. (por exemplo, Actinopolymorpha pittospori), Actinotalea spp. (por exemplo, Actinotalea fermentans), Adhaeribacter spp. (por exemplo, Adhaeribacter terreus), Aeromicrobium spp. (por exemplo, Aeromicrobium fastidiosum), Afipia spp., Agromyces spp. (por exemplo, Agromyces ulmi, Agromyces subbeticus), Alcaligenaceae spp., Algoriphagus spp., Alkaliflexus spp., Alphaproteobacteria spp., Alsobacter spp. (por exemplo, Alsobacter metallidurans), Altererythrobacter spp., Alteromonadaceae spp., Amaricoccus Petição 870200142200, 870200142193, de 11/11/2020, pág. 17/56 12/45 spp., Aminobacter spp., Amycolatopsis spp. (por exemplo, Amycolatopsis iriomotensis, Amycolatopsis vancoresmycina), Anaeromyxobacteraceae spp. (por exemplo, an Anaeromyxobacter spp. [por exemplo, Anaeromyxobacter dehalogenans]), Ancylobacter spp., Angustibacter spp. (por exemplo, Angustibacter peucedani), Aquabacterium spp., Aquicella spp., Armatimonadetes spp., Arenimonas spp. (por exemplo, Arenimonas oryziterrae), Arsenicicoccus spp. (por exemplo, Arsenicicoccus dermatophilus), Arthrobacter spp. (por exemplo, Arthrobacter pascens, Arthrobacter tumbae), Asanoa spp. (por exemplo, Asanoa ishikariensis), Azohydromonas spp. (por exemplo, Azohydromonas australica), Azonexus spp., Azospira spp. (por exemplo, Azospira oryzae), Azospirillum spp. (por exemplo, Azospirillum lipoferum), Azotobacter spp. (por exemplo, Azotobacter chroococcum), Bacillaceae spp. (por exemplo, a Bacillus spp. [por exemplo, Bacillus acidiceler, Bacillus aphidicola, Bacillus senegalensis, Bacillus megaterium, Bacillus subtilis]), Bacteroidetes spp. (por exemplo, uma Bacteroidales spp. [por exemplo, uma Bacteroides spp.]), Bauldia spp. (por exemplo, Bauldia consociate), Bdellovibrionaceae spp., Beijerinckia spp., Blastococcus spp. (por exemplo, Blastococcus saxobsidens), Blastomonas spp., Bordetella spp. (por exemplo, Bordetella hinzii), Bosea spp., Bradyrhizobiaceae, spp. (por exemplo, Bradyrhizobium spp. [por exemplo, Bradyrhizobium elkanii, Bradyrhizobium yuanmingense]), Brevibacteriaceae spp., Brevundimonas spp. (por exemplo, Brevundimonas lenta), Bryobacter spp., Burkholderiales spp. (por exemplo, Burkholderiaceae spp. [por exemplo, Burkholderia spp.]), Brucellaceae spp., Buttiauxella spp. (por exemplo, Buttiauxella izardii), Byssovorax, spp., Caldilineales spp. (por exemplo, Caldilineaceae spp. [por exemplo, a Caldilinea spp.]), Caloramator spp., Candidatus spp. (por exemplo, Candidatus brocadiaceae, Candidatus entotheonella, Candidatus koribacter, Candidatus nitrosoarchaeum, Candidatus phytoplasma, Candidatus saccharibacteria, Candidatus solibacter), Carnobacterium spp., Catenuloplanes spp., Catellatospora spp., (por exemplo, Catellatospora citrea), Caulobacteraceae spp. (por exemplo, Caulobacter spp. [por exemplo, Caulobacter tundrae]), Cellulosimicrobium spp. (por exemplo, Cellulosimicrobium cellulans), Cellvibrio spp. (por exemplo, Cellvibrio vulgaris), Cellulomonas spp. (por exemplo, Cellulomonas terrae), Chelatococcus spp. (por

Petição 870200142200, 870200142193, de 11/11/2020, pág. 18/56 13/45 exemplo, Chelatococcus asaccharovorans, Chitinophagaceae spp., Chromobacteriaceae spp., Chloroflexales spp. (por exemplo, a Chloroflexaceae spp. [por exemplo, a Chloroflexus spp.]), Chthoniobacter spp. (por exemplo, Chthoniobacter flavus), Chryseobacterium spp., Citrobacter spp., Clavibacter spp. (por exemplo, Clavibacter michiganensis), Clostridiaceae spp. (por exemplo, Clostridium spp. [por exemplo, Clostridium bowmanii, Clostridium gasigenes, Clostridium uliginosum, Clostridium vincentii]), Comamonadaceae spp. (por exemplo, Comamonas, spp. [por exemplo, Comamonas koreensis]), Conexibacteraceae spp. (por exemplo, Conexibacter spp. [por exemplo, Conexibacter woesei]), Coxiellaceae spp., Crenotrichaceae spp., Cryomorphaceae spp., Cryobacterium spp. (por exemplo, Cryobacterium mesophilum), Cupriavidus spp. (por exemplo, Cupriavidus campinensis), Curtobacterium spp., Cyanobacteria spp., Cyclobacteriaceae spp., Cystobacteraceae spp. (por exemplo, a Cystobacter spp.), Cytophagaceae spp. (por exemplo, a Cytophaga spp.), Defluviicoccus spp., Dehalococcoidales spp. (por exemplo, Dehalogenimonas spp., Dehalococcoides spp.), Denitratisoma spp., Derxia spp., Desulfovibrionales spp. (por exemplo, Desulfobacteraceae spp. [por exemplo, Desulfocapsa spp., Desulfatiglans spp., Desulforegula spp.]), Desulfoglaeba spp., Desulfosporosinus spp. (por exemplo, Desulfosporosinus meridiei), Desulfotomaculum spp., Desulfuromonadales spp. (por exemplo, Desulfuromonas spp.), Devosia spp. (por exemplo, Devosia insulae), Dickeya spp. (por exemplo, Dickeya zeae), Dyadobacter spp., Ectothiorhodospiraceae spp., Elusimicrobia spp. (por exemplo, Elusimicrobiaceae spp. [por exemplo, Elusimicrobium spp.]), Endomicrobia spp., Enhygromyxa spp. (por exemplo, Enhygromyxa salina), Epilithonimonas spp., Erwinia spp. (por exemplo, Erwinia persicina), Exiguobacterium spp. (por exemplo, Exiguobacterium undae), Ferrimicrobium spp., Fictibacillus spp., Flavobacteriales spp. (por exemplo, Flavobacteriaceae, [por exemplo, Flavobacterium spp. como, por exemplo, Flavobacterium arsenatis, Flavobacterium columnare, Flavobacterium hauense, Flavobacterium johnsoniae, Flavobacterium terrigena]), Flavisolibacter spp., Flexibacter spp., Flindersiella spp., Fodinicola spp., Frankia spp., Frigoribacterium spp., Gaiellales spp. (por exemplo, Gaiella spp. [por exemplo, Gaiella occulta]), Gallionellaceae spp. (por exemplo, Gallionella spp.), Gemmatimonadales spp.

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(por exemplo, Gemmatimonadaceae spp. [Gemmatimonas spp.]), Gemmata spp., Geoalkalibacter spp., Geobacillus spp., Geobacteraceae spp. (por exemplo, Geobacter spp.), Gillisia spp., Glycomyces spp. (por exemplo, Glycomyces harbinensis), Halomonas spp. (por exemplo, Halomonas muralis), Haliangium spp., Herbaspirillum spp. (por exemplo, Herbaspirillum huttiense), Holophagales spp. (por exemplo, Holophagaceae, spp. [por exemplo, Holophaga spp.]), Humibacillus spp. (por exemplo, Humibacillus xanthopallidus), Hydrogenophaga spp. (por exemplo, Hydrogenophaga palleronii), Hydrogenophilaceae spp., Hyphomicrobiaceae spp. (por exemplo, Hyphomicrobium spp. [por exemplo, Hyphomicrobium methylovorum]), Hyphomonas spp., Iamiaceae spp. (por exemplo, Iamia spp.), Ideonella spp., Ignavibacteriales spp. (por exemplo, Ignavibacteriaceae spp. como, por exemplo, Ignavibacterium spp.), Ilumatobacter spp., Intrasporangiaceae spp. (por exemplo, Intrasporangium spp. [por exemplo, Intrasporangium oryzae]), Jiangella spp., Kaistia spp., Kaistobacter spp., Kallotenuales spp., Kineococcus spp., Kineosporia spp. (por exemplo, Kineosporia mikuniensis), Knoellia spp., Kofleriaceae spp. (por exemplo, Kofleria spp.), Kribbella spp. (por exemplo, Kribbella karoonensis, Kribbella swartbergensis), Labedella spp., Labilitrichaceae spp. (por exemplo, Labilithrix spp. [por exemplo, Labilithrix luteola]), Lactobacillus spp., Lactococcus spp. (por exemplo, Lactococcus garvieae), Lapillicoccus spp. (por exemplo, Lapillicoccus jejuensis), Legionellaceae spp., Leifsonia spp., Lentzea spp. (por exemplo, Lentzea albida), Leptospira spp., Leptothrix spp., Leucobacter spp. (por exemplo, Leucobacter tardus), Longilinea spp., Lysinibacillus spp. (por exemplo, Lysinibacillus sphaericus), Lysobacter spp., Marinimicrobium spp., Marinobacter spp., Marmoricola spp., Massilia spp. (por exemplo, Massilia timonae), Melioribacteraceae spp. (por exemplo, a Melioribacter spp.), Mesorhizobium spp. (por exemplo, Mesorhizobium loti, Mesorhizobium plurifarium), Methylibium spp., Methylobacillus spp. (por exemplo, Methylobacillus flagellates), Methylobacteriaceae spp. (por exemplo, Methylobacterium spp. [por exemplo, Methylobacterium adhaesivum]), Methylocella spp., Methylococcaceae spp. (por exemplo, Methylobacter spp.), Methylocystaceae spp. (por exemplo, a Methylocystis spp. [por exemplo, Methylocystis echinoides]), Methylosinus spp., Methyloversatilis spp., Microbacteriaceae spp. (por exemplo, a

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Microbacterium spp. [por exemplo, Microbacterium kitamiense], Microcella spp. [por exemplo, Microcella alkaliphile]), Micrococcaceae spp., Microlunatus spp., Microvirga spp. (por exemplo, Microvirga aerilata, Microvirga subterranean), Mycobacteriaceae spp. (por exemplo, Mycobacterium spp. [por exemplo, Mycobacterium sacrum, Mycobacterium salmoniphilum, Mycobacterium septicum]), Micromonosporaceae spp. (por exemplo, Micromonospora spp. [por exemplo, Micromonospora rhodorangea]), Modestobacter spp. (por exemplo, Modestobacter multiseptatus), Moorella spp., Myxococcales spp., Nakamurella spp., Nannocystaceae spp. (por exemplo, Nannocystis spp. [por exemplo, Nannocystis exedens]), Neorhizobium spp. (por exemplo, Neorhizobium huautlense), Niastella spp., Nitriliruptor spp., Nitrosomonadaceae spp. (por exemplo, Nitrosomonas spp. [por exemplo, Nitrosomonas communis, Nitrosomonas ureae]), Nitrosopumilales spp. (por exemplo, Nitrosopumilaceae spp.), Nitrosospira spp., Nitrosovibrio spp. (por exemplo, Nitrosovibrio tenuis), Nitrospirales spp. (por exemplo, Nitrospira spp.), Nocardiaceae spp. (por exemplo, Nocardia spp. [por exemplo, Nocardia anaemiae]), Nocardioidaceae spp. (por exemplo, Nocardioides spp. [por exemplo, Nocardioides albus, Nocardioides iriomotensis, Nocardioides islandensis, Nocardioides maritimus, Nocardioides perillae, Nocardia pneumoniae]), Nocardiopsis spp. (por exemplo, Nocardiopsis synnemataformans), Nonomuraea spp. (por exemplo, Nonomuraea kuesteri), Nordella spp., Novosphingobium spp., Ochrobactrum spp. (por exemplo, Ochrobactrum haematophilum), Ohtaekwangia spp., Olivibacter spp. (por exemplo, Olivibacter soli), Opitutaceae spp., Oryzihumus spp., Oxalobacteraceae spp., Oxalophagus spp. (por exemplo, Oxalophagus oxalicus), Paenibacillus spp., (por exemplo, Paenibacillus graminis, Paenibacillus chondroitinus, Paenibacillus validus), Pantoea spp. (por exemplo, Pantoea agglomerans), Paracoccus spp., Paracraurococcus spp., Parastreptomyces spp., Pasteuriaceae spp., (por exemplo, Pasteuria spp.), Pedosphaera spp. (por exemplo, Pedosphaera parvula), Pedobacter spp. (por exemplo, Pedobacter tournemirensis, Pedobacter kribbensis, Pedobacter kwangyangensis), Pelagibacterium spp. (por exemplo, Pelagibacterium halotolerans), Pelobacteraceae spp. (por exemplo, Pelobacter spp.), Peptoclostridium spp. (por exemplo, Peptoclostridium clostridium sordellii), Peredibacter spp., Phaselicystidaceae spp., Phenylobacterium spp.,

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Phycicoccus spp., Phycisphaerae spp., Phyllobacterium spp. (por exemplo, Phyllobacterium trifolii), Pigmentiphaga spp., Planococcus spp., Planomicrobium spp., (por exemplo, Planomicrobium novatatis), Planctomycetes spp. (por exemplo, a Pirellula spp., como Pirella staleyi), Plesiocystis spp., Polaromonas spp., Polyangiaceae spp., Procabacteriacae spp., Prolixibacter spp., Promicromonospora spp., (por exemplo, Promicromonospora sukumoe), Prosthecobacter spp., Prosthecomicrobium spp., Pseudoalteromonas spp., Pseudoclavibacter spp., (Pseudoclavibacter helvolus), Pseudolabrys spp., (por exemplo, Pseudolabrys taiwanensis), Pseudomonadaceae spp. (por exemplo, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas flavescens, Pseudomonas protegens, Pseudomonas veronii, Pseudomonas rhodesiae, Pseudomonas koreensis, Pseudomonas moorei, Pseudomonas baetica), Pseudonocardia spp., (por exemplo, Pseudonocardia zijingensis, Pseudonocardia carboxydivorans), Pseudorhodoferax spp., Pseudoxanthobacter spp., Pseudoxanthomonas spp., Ralstonia spp., Ramlibacter spp., Reyranella spp. (por exemplo, Reyranella massiliensis), Rheinheimera spp., Rhizobiales spp. (por exemplo, Rhizobiaceae spp., Rhodobiaceae spp.), Rhizobium spp. (por exemplo, Rhizobium etli), Rhizomicrobium spp., Rhodobacterales spp. (por exemplo, Rhodobacter spp.), Rhodococcus spp. (por exemplo, Rhodococcus gordoniae, Rhodococcus kroppenstedtii, Rhodococcus wratislaviensis), Rhodocyclales spp. (por exemplo, Rhodocyclaceae spp.), Rhodomicrobium spp., Rhodoplanes spp. (por exemplo, Rhodoplanes elegans), Rhodopseudomonas spp., Rhodospirillales spp. (por exemplo, Rhodospirillaceae spp.), Rhodothermus spp., Rickettsiaceae spp., Roseateles spp., Roseomonas spp., Rubrivivax spp. (por exemplo, Rubrivivax gelatinosus), Rubrobacterales spp. (por exemplo, Rubrobacter spp.), Ruminococcaceae spp., Saccharopolyspora spp. (por exemplo, Saccharopolyspora gloriosa), Sandaracinus spp., Saprospiraceae spp., Serratia spp. (por exemplo, Serratia proteamaculans), Shimazuella spp. (por exemplo, Shimazuella kribbensis), Shinella spp. (por exemplo, Shinella granuli), Sideroxydans spp. (por exemplo, Sideroxydans lithotrophicus, Sideroxydans paludicola), Sinobacteraceae spp. (por exemplo, Steroidobacter spp.), Sinorhizobium spp., Solibacteraceae spp. (por exemplo, Solibacter spp.), Solirubrobacteraceae spp. (por exemplo, Solirubrobacter spp.), Sorangium spp. (por exemplo, Sorangium cellulosum),

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Sphaerobacterales spp. (por exemplo, Sphaerobacteraceae spp. como, por exemplo, Sphaerobacter spp.), Sphingobacteriales spp. (por exemplo, Sphingobacteriaceae spp. como, por exemplo, Sphingobacterium spp.), Sphingobium spp. (por exemplo, Sphingobium herbicidovorans), Sphingomonadaceae spp. (por exemplo, Sphingobium spp. [por exemplo, S. xenophagum], Sphingomonas spp. [por exemplo, S. wittichii]), Sphingopyxis spp. (por exemplo, Sphingopyxis macrogoltabida), Sphingosinicella spp., Spirochaetales spp. (por exemplo, Spirochaeta spp.), Sporichthyaceae spp. (por exemplo, Sporichthya spp.), Stackebrandtia spp. (por exemplo, Stackebrandtia nassauensis, Stella spp., Stenotrophomonas spp. (por exemplo, Stenotrophomonas maltophilia), Stigmatella spp. (por exemplo, Stigmatella erecta), Streptacidiphilus spp., Streptoalloteichus spp., Streptomycetaceae spp. (por exemplo, Streptomyces spp. [por exemplo, Streptomyces aculeolatus, Streptomyces clavuligerus, Streptomyces fradiae, Streptomyces ghanaensis, Streptomyces glauciniger, Streptomyces hebeiensis, Streptomyces heteromorphus, Streptomyces mashuensis, Streptomyces microflavus, Streptomyces netropsis, Streptomyces phaeochromogenes, Streptomyces roseogriseolus, Streptomyces variabilis, Streptomyces vayuensis, Streptomyces viridodiastaticus, Streptomyces viridochromogenes, Streptomyces xylophagus, Streptomyces xinghaiensis]), Sulfuricella spp., Syntrophobacterales spp. (por exemplo, Syntrophorhabdaceae spp. como, por exemplo, Syntrophobacter spp. [por exemplo, S. wolinii], Syntrophorhabdus spp., Syntrophaceae spp., Syntrophus spp.), Taibaiella spp., Tepidamorphus spp., Terrabacter spp., Terriglobus spp., Terrimonas spp., Tetrasphaera spp. (por exemplo, Tetrasphaera elongate), Thermoanaerobacterales spp. (por exemplo, Thermoanaerobacteraceae spp.), Thermoflavimicrobium spp., Thermoleophilaceae spp., Thermomonosporaceae spp., Thioalkalivibrio spp., Thiobacillus spp., (por exemplo, Thiobacillus denitrificans), Thiobacter spp., Thiomonas spp., Thiorhodovibrio spp., Tolumonas spp., (por exemplo, Tolumonas auensis), Variovorax spp., (por exemplo, Variovorax paradoxus), Verrucomicrobiales spp., (por exemplo, Verrucomicrobia subdivision 3 spp.), Vibrionales spp., Woodsholea spp., (por exemplo, Woodsholea maritima),

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Xanthomonadaceae spp., (por exemplo, Xanthomonas spp.), Zoogloea spp., ou Zooshikella spp.

[039] Em pelo menos uma modalidade, podem destacar-se como antagonistas de pelo menos uma das espécies microbianas listadas acima, por exemplo, como Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas mandelii: Streptomyces hygroscopicus, Mycobacterium vaccae, Agrobacterium tumefaciens, Bacillus megaterium, Bacillus amyloliquifaciens, Bacillus subtilus, Bacillus pumilus, Shingomonas spp., Sphingomonas melonis, Arthrobacter spp., Agrobacterium rhizogenes, Serratia proteamaculans, Microbacterium testaceum, Pseudomonas spp., Erwinia spp., Pantoea agglomerans, Pseudomonas mandelii, Microbacterium spp., Clostridium saccharobutylicum, Pseudomonas moraviensis, Pantoea vagans, Serratia liquefaciens, Pedobacter kribbensis, Tolumonas auensis, Janthinobacterium lividum, Bacillus racemilacticus, Sporolactobacillus laevolacticus, Brevundimonas mediterranea, Pantoea cloacae, Clostridium acidisoli, Erwinia aphidicola, Bacillus arbutinivorans, Paenibacillus graminis, Pseudomonas veronii, Pseudomonas rhodesiae, Pseudomonas koreensis, Tolumonas auensis, Pseudomonas moorei, Pseudomonas baetica, e/ou Pseudomonas protegens.

[040] Em algumas modalidades, uma espécie microbiana que fornece atividade inseticida pode ser adicionada ao inoculante microbiano. Micróbios adequados podem incluir bactérias ou fungos que produzem fitoquímicos com propriedades inseticidas ou repelentes de insetos. Em algumas dessas modalidades, a espécie microbiana pode ser uma bactéria como, por exemplo, B. thuringiensis, B. pipilliae, Photohabdus luminescens, Pseudomonas entomohpilia, Erwinia aphidicola etc., ou um fungo como, por exemplo, Beaveria bassiana, Lagenidium giganteum, etc.

[041] A composição de inoculante microbiano também pode incluir um ou mais aditivos não microbianos. Por exemplo, a composição de inoculante microbiano pode incluir um ou mais macronutrientes ou um ou mais micronutrientes, como, por exemplo, carbono, nitrogênio, potássio, fósforo, zinco, magnésio, selênio, cromo, estanho, manganês, cobalto, zinco e/ou cobre. Macronutrientes ou micronutrientes adequados podem aumentar a longevidade das bactérias e micróbios, conduzindo a uma vida útil mais longa. Além disso, adicionar uma fonte de carbono de suporte de crescimento lento (por Petição 870200142200, 870200142193, de 11/11/2020, pág. 24/56 19/45 exemplo, glicerol, um óleo vegetal, lignina etc.) pode ser benéfico. Isso também pode funcionar como um meio de estratificação para micróbios mais anaeróbicos e aeróbicos em um único pacote.

[042] Como outro exemplo, a composição de inoculante microbiano pode incluir um ou mais hormônios vegetais, como, por exemplo, uma auxina. Exemplos de hormônios vegetais adequados incluem auxinas como ácido indol-3-acético (IAA), ácido 4- cloroindol-3-acético (4-CI-IAA), ácido 2-fenilacético (PAA), ácido indol-3-butírico (IBA), ácido indol-3-propiônico (IPA), ácido naftalenacético (NAA). A adição de um hormônio vegetal à composição de inoculante microbiano pode fornecer um impulso de crescimento inicial da planta e/ou estabelecer um padrão de crescimento mais rápido em um campo que tenha, por exemplo, sofrido danos nas plantações e seja replantado para que as culturas replantadas precisem amadurecer mais rapidamente do que o usual.

[043] Como outro exemplo, a composição de inoculante microbiano pode incluir um agente fertilizante. Um agente fertilizante pode incluir um agente fertilizante orgânico ou um agente fertilizante inorgânico. Agentes fertilizantes inorgânicos exemplares podem incluir, por exemplo, nitrogênio, fósforo, potássio, zinco e/ou magnésio. Fertilizantes orgânicos exemplares podem incluir, por exemplo, compostagem, esterco, resíduos agrícolas, farinha de ossos, extrato húmico de turfa e similares ou outros, como são conhecidos pelos especialistas na técnica.

[044] Como outro exemplo, ainda, a composição de inoculante microbiano pode incluir um ou mais agentes adesivos para promover a aderência da composição a uma planta, uma vez que é aplicada a uma planta ou campo de plantação. Um agente adesivo exemplar pode incluir qualquer agente adesivo biocompatível que pode ser misturado com a composição de inoculante microbiano e ressecado em uma semente. Como utilizado aqui, o termo “biocompatível” refere-se a um agente que é compatível com os outros componentes da composição, e não é prejudicial para a semente ou planta à qual é aplicada uma formulação que inclui o componente biocompatível. Agentes adesivos Petição 870200142200, 870200142193, de 11/11/2020, pág. 25/56 20/45 adequados incluem talco, grafite, goma de ágar, cana de açúcar, dextrina, goma-laca comercial de batata, amido ou outra substância conhecida pelos especialistas na técnica.

[045] Em outro aspecto, este documento descreve uma planta à qual qualquer modalidade de composição de inoculante microbiano descrita acima pode é aplicada. Plantas adequadas incluem plantas terrestres tais como, por exemplo, plantas de colheita, árvores (decíduas ou coníferas), plantas de alimentação (por exemplo, alfafa), culturas de biomassa ou plantas hortícolas.

[046] Plantas de colheita exemplares podem incluir trigo, aveia, cevada, algodão, beterraba sacarina, linho, amendoim, feijão, soja, batata, tomate, pimenta, milho (especialmente após a síndrome da beterraba sacarina), pepinos, alface, repolho, couve- flor, brócolis, rabanetes, cenouras, aipo, pimenta Jalapeño, quiabo, couve de Bruxelas, melancia, melão Musk, maçãs, peras, uvas, pêssegos, laranja, toranja, ameixas, damasco, limões, abacates, bananas, mandioca, batata doce, abacaxi, tâmaras, figos, amêndoas, nozes, avelãs, noz-pecã, castanha de caju, tabaco, cannabis, orégano, coentro, sálvia, açafrão, canela, agave, outras ervas ou outros elementos conhecidos pelos especialistas na técnica.

[047] Plantas de colheita de biomassa exemplares podem incluir álamos, mudas de capim, lentilha de água, capim-elefante, moringa ou outros conhecidos pelos especialistas na técnica.

[048] Árvores exemplares nas quais qualquer composição de inoculante microbiano pode ser aplicada incluem, por exemplo, choupo, salgueiro, bétula, álamo ou outras espécies conhecidas pelos especialistas na técnica.

[049] Plantas hortícolas exemplares podem incluir rosas, videiras, tubérculos perenes, petúnias, malva-rosa, narcisos, junco, tulipas, crisântemos ou outras espécies conhecidas pelos especialistas na técnica.

[050] Por exemplo, quando aplicada ao trigo, a composição de inoculante microbiano pode resultar em aumento da contagem de caules, aumento de perfilhamento, aumento de pesos de espiga, aumento de contagem de sementes, aumento do tamanho das folhas, aumento na contagem de grãos, aumento no peso dos grãos, maior número de proteínas contidas nos grãos, aumento na altura do caule, e/ou aumento da área total da folha Petição 870200142200, 870200142193, de 11/11/2020, pág. 26/56 21/45 bandeira. Em um exemplo, uma plantação de trigo não tratado rendeu aproximadamente 50 bushels por acre. Um campo comparável foi tratado com a composição de inoculante no estágio foliar e o rendimento foi aumentado para 75 bushels por acre. Um campo comparável tratado no estágio de desenvolvimento das sementes rendeu mais de 100 bushels por acre. O trigo tratado no estágio de revestimento das sementes apresentou um aumento de 30% no número de grãos, um aumento de 20% no peso dos grãos, e um aumento de 2% na proporção de proteína no grão. (FIG. 3).

[051] O efeito da composição de inoculante microbiano pode ser reduzido até certo ponto se utilizado combinado com certos fungicidas como, por exemplo, propiconazol. Se o fungicida for aplicado em conformidade com as quantidades recomendadas pelo fabricante, a eficácia da composição de inoculante microbiano poderá ser reduzida. Por exemplo, quando aplicado no trigo antes da articulação, o fungicida mata as bactérias da composição de inoculante microbiano e os efeitos da composição de inoculante microbiano podem ser anulados. Se o fungicida é aplicado no trigo após a articulação, ainda é possível observar um aumento na contagem de espigas, mas são reduzidos os aumentos no tamanho das folhas, no tamanho dos grãos, na proporção de proteínas etc.

[052] Quando aplicada à soja, a composição de inoculante microbiano pode resultar em, por exemplo, aumento nas ramificações, aumento na contagem de vagens, aumento na contagem de folhas, aumento no tamanho das folhas, aumento do número de nódulos de raiz, e/ou aumento de tamanho de nódulos de raiz (FIG. 1, FIG. 2). Em pelo menos uma modalidade, a composição de inoculante microbiano pode ser aplicada durante o estágio vegetativo final da soja. Os resultados da aplicação da composição de inoculante microbiano na soja podem incluir o aumento de 4 a 8 bushels por acre. Em pelo menos um exemplo de resultado, um campo teve um aumento de 16 bushels por acre. Em pelo menos um método de exemplo, a composição de inoculante microbiano é aplicada ao revestimento das sementes, um herbicida é adicionado para danificar as folhas da planta, um efeito Hydra ocorre, um herbicida adicional é acrescentado às folhas e os caules são quebrados para continuar a induzir o efeito Hydra.

[053] Quando aplicada em batatas, a composição de inoculante microbiano pode resultar em, por exemplo, aumento do enraizamento inicial, aumento da produção de rizoma, Petição 870200142200, 870200142193, de 11/11/2020, pág. 27/56 22/45 aumento do peso das batatas vendáveis promovendo a primeira e a segunda série sobre a terceira e a quarta série, produzindo uma coloração mais escura, aumentando a massa da planta acima do solo, e/ou aumentando o peso total dos tubérculos produzidos por acre. Em pelo menos um exemplo, a composição de inoculante microbiano pode ser aplicada em batatas e/ou plantas enraizadas como beterrabas, cebolas, cenouras etc. Em pelo menos um exemplo de aplicação em cebolas, uma única cebola pode crescer para aproximadamente 3.25 libras. Em contraste, uma cebola que não recebeu a composição de inoculante microbiano pode crescer de 0,25 a 0,5 libras. Além disso, em pelo menos um exemplo, as cebolas com a aplicação podem apresentar um aumento no volume em menos tempo para atingir o tamanho normal da cebola, mencionado acima. Em pelo menos um exemplo, a aplicação da composição de inoculante microbiano em beterraba sacarina, sem divisão, pode resultar em um aumento de 300% no peso. Em pelo menos um exemplo, a aplicação da composição de inoculante microbiano em batatas doces pode resultar em um aumento de duas vezes o tamanho da batata doce.

[054] Quando aplicada em árvores, a composição de inoculante microbiano pode resultar em, por exemplo, aumento da altura, aumento no número de folhas no primeiro ano e/ou aumento da massa total da árvore.

[055] Quando aplicada em tomates, a composição de inoculante microbiano pode resultar em, por exemplo, aumento da floração, aumento da contagem de brotos, melhor regeneração após a exploração, e/ou aumento do número de tomates produzidos por planta.

[056] Quando aplicada à alfafa, a composição de inoculante microbiano pode resultar em, por exemplo, aumento do volume de material vegetal por acre e/ou redução nos efeitos de florescimento por estresse. Reduzir os efeitos de florescimento por estresse permite que se espere mais tempo para cortar a alfafa antes que a mesma se torne lenhosa. Na primavera, isso permite que o agricultor deixe a alfafa crescer por mais tempo antes que ela se torne lenhosa, facilitando para que o mesmo ganhe tempo para plantar outras culturas que seriam necessárias para cortar a alfafa antes que ela se tornasse lenhosa. Esperar mais tempo entre as estacas antes que a alfafa se torne lenhosa permite que se obtenha mais tonelagem sem sacrificar a qualidade e/ou o valor nutricional da alfafa.

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Além disso, a aplicação da composição de inoculante microbiano à alfafa pode resultar em uma diminuição no teor de lignina da planta como uma porcentagem da biomassa total da planta. O conteúdo reduzido de lignina pode aumentar o valor nutricional da planta. A aplicação da composição de inoculante microbiano também pode aumentar o tamanho da folha e/ou aumentar a massa da raiz da planta. O aumento do tamanho das folhas, assim como a diminuição do teor de lignina, pode aumentar o valor nutricional da planta. Para apoiar a área superficial fotossintética aumentada que resulta do aumento do tamanho da folha, as plantas tratadas com a composição de inoculante microbiano podem apresentar um aumento de massa na raiz, elevando assim a quantidade de carbono no solo. Uma vez aplicada à alfafa, pode ser desejável reaplicar a composição de inoculante microbiano após cada corte.

[057] Em pelo menos uma modalidade, em resposta à aplicação da composição de inoculante microbiano, a produção de alfafa pode aumentar em 15 por cento na produção de alfafa por tonelagem. Em pelo menos uma modalidade, uma espécie de Rhizobium e/ou minerais incluindo cobalto podem ser adicionados junto com ou dentro da composição de inoculante microbiano. Em pelo menos um exemplo, a inoculação de alfafa ocorreu duas semanas antes do corte, resultando em um aumento de 35% na tonelagem.

[058] Os efeitos da composição de inoculante microbiano na alfafa podem ser um pouco reduzidos quando há uma deficiência de zinco e/ou molibdênio no solo e/ou na alfafa, o que pode ocorrer quando a alfafa é cultivada repetidamente no mesmo campo. A deficiência mineral pode se tornar um fator limitador do crescimento. A deficiência mineral pode afetar a atividade do ácido indol-3- (IAA) e de outros hormônios do crescimento, afetando a capacidade da planta de converter nitrato em amônio.

[059] Quando aplicada a girassóis, a composição de inoculante microbiano pode resultar em, por exemplo, aumento da área superficial das cabeças das flores, aumento de açúcares nas flores e/ou efeito Hydra. Em pelo menos uma modalidade, foi observado um aumento maior ou igual à área superficial das cabeças das flores. O aumento de açúcar nas flores pode aumentar a atração de polinizadores e, portanto, aumentar o processo de polinização. A composição de inoculante microbiano pode ser adicionada às plantas de girassol em Petição 870200142200, 870200142193, de 11/11/2020, pág. 29/56 24/45 resposta às cabeças das flores terem pelo menos 3 polegadas de altura, logo após emergirem. Em pelo menos um exemplo foi constatado um efeito Hydra, incluindo o corte de uma primeira cabeça e o crescimento de duas outras cabeças de substituição cujas cabeças de 10 ½ polegadas de altura foram observadas. Neste exemplo, isso pode dobrar o rendimento das cabeças de girassol.

[060] Quando aplicada a pimentões, a composição de inoculante microbiano pode resultar em, por exemplo, aumento do peso da fruta, aumento da rigidez do caule e/ou aumento da resistência do caule.

[061] Quando aplicada ao milho, a composição de inoculante microbiano pode resultar em, por exemplo, aumento no número de grãos por anel e/ou aumento da solubilidade do fósforo na planta, atenuando os efeitos da síndrome da beterraba sacarina, na qual uma planta de milho não tratada pode manifestar um crescimento atrofiado da planta, produção reduzida e/ou o milho pode apresentar uma aparência roxa. Em pelo menos uma modalidade, em resposta à composição de inoculante microbiano aplicada ao milho, um aumento de produção de uma tonelada para 2,5 toneladas por acre de silagem em terra seca pode ser obtido. A aplicação da composição de inoculante microbiano não depende do tempo; a composição de inoculante microbiano pode ser aplicada a qualquer momento, de V1 até a borla. Quando aplicada ao grão de milho, em pelo menos uma modalidade, dentro de uma semana das borlas, pode resultar em um aumento de 4,8 a 6,8 bushel por acre. Em pelo menos um exemplo, a composição de inoculante microbiano foi capaz de, através da aplicação no revestimento das sementes ou no pós-emergência, estabilizar o fósforo do milho que apresentava síndrome da beterraba sacarina (CFS), levando-o a superar os efeitos da síndrome CFS. A síndrome CFS pode se referir a quando o plantio de milho segue diretamente o plantio de beterraba sacarina, o que pode levar a retardamentos no desenvolvimento, entrenós encurtados, coloração arroxeada e/ou redução do vigor.

[062] Em grãos pequenos, como cevada, aveia, centeio etc., a aplicação da composição de inoculante microbiano antes da folha bandeira pode aumentar o tamanho da folha bandeira, o que pode, por sua vez, aumentar o suprimento de carboidratos disponíveis para alimentar os grãos. Ou seja, a massa do grão pequeno pode ser aumentada, o que Petição 870200142200, 870200142193, de 11/11/2020, pág. 30/56 25/45 pode aumentar a tonelagem dos grãos pequenos. Em pelo menos um exemplo, uma aplicação antecipada que precede um rebento de planta (por exemplo, caule) e a folha bandeira pode ampliar a quantidade de caules e aumentar o peso do grão pequeno, aumentando a tonelagem em entre 50% e 100%. Além disso, quando aplicada ao revestimento de sementes de grãos pequenos, a composição de inoculante microbiano pode aumentar a contagem de cabeças. Em pelo menos um exemplo, a composição de inoculante microbiano pode ser aplicada ao centeio ou ao trigo de inverno, no outono e novamente na primavera.

[063] Quando aplicada ao repolho, a composição de inoculante microbiano pode incluir uma ou mais B. thuringiensis e B. amyloliquifaciens. Em pelo menos um exemplo, em resposta à colheita de plantas de repolho que receberam a aplicação da composição de inoculante microbiano, as plantas de repolho produziram várias cabeças por planta. Em contrapartida, as plantas de repolho que não receberam a aplicação da composição de inoculante microbiano morreram após a colheita.

[064] Quando aplicada à grama, como a pradaria, gramado, relva etc., a composição de inoculante microbiano pode ser empregada tanto na semente como na grama, aumentando o tamanho das folhas e proporcionando uma coloração mais escura, intensificando o crescimento e aumentando o desenvolvimento de raízes que podem capturar mais carbono e/ou armazenar maiores quantidades de carbono no solo.

[065] Quando aplicada ao cânhamo, a composição de inoculante microbiano pode resultar em, por exemplo, aumento da altura, aumento da largura, aumento do tamanho da raiz, aumento da circunferência do caule, aumento do número de brotos, aumento do tamanho dos brotos, aumento do número de estruturas de sementes e/ou aumento no tamanho das estruturas de sementes.

[066] Quando aplicada à lentilha de água, a composição de inoculante microbiano pode promover o aumento do crescimento das raízes. Em pelo menos um exemplo, em que a lentilha de água pode crescer até aproximadamente uma (1) polegada, a aplicação da composição de inoculante microbiano pode promover um crescimento de até 12 polegadas. Além disso, o aumento do crescimento da lentilha de água pode resultar em um aumento da biomassa de fosfotransacetilase (pta) como alimento. Em pelo menos um Petição 870200142200, 870200142193, de 11/11/2020, pág. 31/56 26/45 exemplo, em resposta ao estresse da planta da lentilha de água (como desidratação, calor, alteração de pH etc.) à medida em que é colhida, pode ocorrer uma quebra da leucina. A quebra da leucina pode alterar a composição de aminoácidos e fornecer um produto com níveis mais baixos ou inexistentes de leucina.

[067] Quando aplicada a plantas de horticultura, a composição de inoculante microbiano pode resultar em, por exemplo, aumento do crescimento (medido em altura, comprimento ou massa total), aumento do número de flores, coloração mais intensa, aumento do tamanho das folhas de videira, aumento do número de estolhos e/ou tubérculos perenes transportando bactérias do inoculante para os anos subsequentes. Em pelo menos uma modalidade, a aplicação da composição de inoculante microbiano em plantas de horticultura pode manter a pressão do turgor por mais tempo do que as plantas onde a composição de inoculante microbiano não foi aplicada, fazendo com que a planta mantenha apelo estético por mais tempo, o que pode resultar em maiores vendas no varejo e menos plantas descartadas.

[068] Em pelo menos uma modalidade, danos pós-estresse podem ocorrer em qualquer uma das plantas, árvores e/ou culturas supramencionadas. Esse dano pós-estresse pode incluir dano de granizo, dano por ventos, inundações etc. Enquanto a planta, árvore e/ou cultura estiverem vivas, quanto maior é o dano, maior é a resposta da ação da composição de inoculante microbiano. Os resultados da resposta podem ser observados em menos de duas semanas. Se a composição de inoculante microbiano for aplicada antes do dano, a regeneração da planta, árvore e/ou cultura pode ocorrer imediatamente ou muito próximo do tempo do dano.

[069] A FIG. 6 mostra o efeito Hydra que resulta do tratamento do girassol com uma composição de inoculante microbiano após a aparagem do girassol. Além de sobreviver ao dano do corte, o girassol tratado com a composição de inoculante microbiano apresenta maior ramificação, maior número de cabeças e maior área de superfície da flor em comparação a um girassol que não foi exposto aos danos do cortador, tampouco foi submetido a tratamento com a composição de inoculante microbiano.

[070] A FIG. 7 mostra o efeito Hydra no repolho que resulta do tratamento do repolho com uma composição de inoculante microbiano após passar pela aparagem. Além de Petição 870200142200, 870200142193, de 11/11/2020, pág. 32/56 27/45 sobreviver ao dano do corte, o repolho tratado com a composição de inoculante microbiano apresenta maior número de cabeças e maior tamanho de cabeça em comparação a um repolho que não foi exposto aos danos do cortador, tampouco foi submetido a tratamento com a composição de inoculante microbiano.

[071] A composição de inoculante microbiano pode ser co-fermentada. Em pelo menos um exemplo, a composição de inoculante microbiano inclui uma mistura de pelo menos uma espécie aeróbica e pelo menos uma espécie anaeróbica. Durante a co-fermentação, os micróbios aeróbicos geralmente crescem mais rapidamente do que os micróbios anaeróbicos iniciais. Eventualmente, a fermentação realizada pelos aeróbios esgota o caldo de fermentação do oxigênio e produz CO2. A depleção de oxigênio no caldo promove o crescimento dos micróbios anaeróbicos, enquanto o acúmulo de CO2 no caldo retarda o crescimento dos micróbios aeróbicos. Deste modo, uma composição de inoculante microbiano que inclui uma espécie aeróbica e uma espécie anaeróbica pode ser preparada em uma única co-fermentação. Em pelo menos um exemplo, a composição de inoculante microbiano pode ser aerada para facilitar o crescimento de Pseudomonas spp.

[072] A composição de inoculante microbiano pode ser preparada através da incubação dos micróbios em um meio de cultura adequado a qualquer temperatura adequada. Um meio de cultura adequado pode incluir uma fonte de carbono (por exemplo, açúcar de cana ou sacarose), vinagre branco suficiente para ajustar o pH do meio de cultura para não mais do que 7,0 (por exemplo, não mais do que 6,8), ferro, e uma fonte de potássio (por exemplo, nitrato de potássio).

[073] Os micróbios podem ser incubados a uma temperatura mínima de pelo menos 5ºC, como, por exemplo, pelo menos 10ºC, pelo menos 15ºC pelo menos 20ºC, pelo menos 25ºC, pelo menos 30ºC, ou pelo menos 40ºC. Os micróbios podem ser incubados a uma temperatura máxima não superior a 50ºC, como, por exemplo, não superior a 45ºC, não superior a 45ºC, não superior a 40ºC, não superior a 35ºC, ou não superior a 30ºC. Os micróbios podem ser incubados a uma temperatura caracterizada por qualquer faixa que inclua, como parâmetros, qualquer combinação de uma temperatura mínima identificada acima e qualquer temperatura máxima identificada acima que seja maior do que a Petição 870200142200, 870200142193, de 11/11/2020, pág. 33/56 28/45 temperatura mínima. Por exemplo, em algumas modalidades, os micróbios podem ser incubados a uma temperatura de 10ºC a 40ºC.

[074] A composição de inoculante microbiano pode ser preparada a partir da incubação dos micróbios em um meio de cultura por um tempo suficiente para permitir o crescimento de micróbios aeróbicos e anaeróbicos na cultura de fermentação. Quando uma mistura de micróbios aeróbicos e anaeróbicos é co-fermentada, os micróbios podem ser incubados por um período mínimo de 48 horas, como, por exemplo, pelo menos 72 horas, pelo menos 96 horas, pelo menos 120 horas, pelo menos 144 horas ou pelo menos 168 horas. Os micróbios podem ser incubados por no máximo 240 horas, no máximo 216 horas, no máximo 192 horas, no máximo 168 horas, no máximo 144 horas, no máximo 120 horas, ou no máximo 96 horas. Os micróbios podem ser incubados por um período caracterizado por uma faixa que possui, como parâmetros, qualquer combinação de tempo mínimo de incubação supramencionado e qualquer tempo máximo de combinação supramencionado que seja maior do que o tempo mínimo de incubação.

[075] A composição de inoculante microbiano pode ser aplicada a sementes, plantas ou campos de plantações através de qualquer método adequado. Como descrito acima, a composição de inoculante microbiano pode ser formulada com um agente adesivo biocompatível que permite que a composição de inoculante microbiano seja aplicada e possa aderir a uma semente. Tal formulação pode ser um líquido foliar, revestimentos de sementes, hidrogel de revestimentos de sementes etc. A formulação pode ser misturada em uma semeadora durante o plantio ou pode ser misturada antes do plantio. Alternativamente, a composição de inoculante microbiano pode ser formulada com que ser às sementes e . Os agentes adequados incluem, por exemplo, tapioca seca, leite em pó ou goma arábica.

[076] Outros métodos de aplicação podem envolver o uso da composição de inoculante microbiano em um ou mais tecidos de plantas como, por exemplo, a raiz, o caule, uma ou mais folhas ou uma vagem produtora de sementes. Nesses casos, a composição de inoculante microbiano pode ser aplicada por qualquer método adequado, incluindo, por exemplo, pulverização ou administração de ampolas. A formulação pode ser pulverizada a partir de, por exemplo, uma unidade de pulverização portátil, um dispositivo de Petição 870200142200, 870200142193, de 11/11/2020, pág. 34/56 29/45 pulverização portátil, um equipamento de irrigação ou pulverização aérea. A administração de ampolas pode ser realizada manualmente ou usando um sistema automatizado.

[077] Outros métodos, ainda, podem envolver a aplicação da composição de inoculante microbiano no solo ou na sementeira na qual as sementes serão plantadas. Nestas modalidades, a composição de inoculante microbiano pode ser aplicada através de pulverização ou administração de ampola como descrito acima. Alternativamente, a composição de inoculante microbiano pode ser aplicada por meio de gotejamento. Em algumas dessas modalidades, a composição de inoculante microbiano pode ser aplicada, seja por pulverização ou por gotejamento, enquanto o solo está sendo semeado.

[078] Outros métodos de aplicação incluem, ainda, a aplicação com um spray foliar, através de um pivô de irrigação e como um revestimento de sementes. Em pelo menos um exemplo, um meio de revestimento de sementes capaz de reter água pode ser usado para permitir que as bactérias permaneçam vivas sem secar. Neste exemplo, as bactérias podem incluir principalmente as bactérias esporulantes que podem morrer quando dessecadas.

[079] Em alguns casos, a formulação da composição de inoculante microbiano pode incluir um teor de umidade predeterminado. O teor mínimo de umidade pode ser de pelo menos 5% como, por exemplo, pelo menos 6%, pelo menos 7%, pelo menos 8 pelo menos 9%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, ou pelo menos 50%.

[080] Em algumas modalidades, uma formulação da composição de inoculante microbiano pode incluir um açúcar (por exemplo, açúcar de cana ou sacarose) e vinagre (por exemplo, vinagre branco). O açúcar pode fornecer uma fonte metabólica de carbono. O vinagre pode fornecer um pH ácido e/ou uma fonte alternativa de carbono. Como alternativa ou em adição ao uso do vinagre para regular o pH, a composição de inoculante microbiano pode incluir Lactobacillus plantarum, como descrito acima, para ajudar a Petição 870200142200, 870200142193, de 11/11/2020, pág. 35/56 30/45 manter um pH ácido uma vez que a composição de inoculante microbiano é aplicada à planta.

[081] Em outras modalidades, uma formulação da composição de inoculante microbiano pode incluir meios de ácido lático para fornecer um pH ácido.

[082] Em outras modalidades, uma formulação da composição de inoculante microbiano pode incluir glicerol como meio de dispersão.

[083] Na descrição anterior e nas reivindicações a seguir, o termo “e/ou” significa um ou todos os elementos listados ou uma combinação de dois ou mais dos elementos listados; os termos “compreende”, “compreendendo” e suas variações devem ser interpretados como extremidades abertas — isto é, os elementos ou estágios adicionais são opcionais e podem ou não estar presentes; salvo indicação contrária, “um”, “uma”, “o”, “a” e “pelo menos um(a)” são termos utilizados de forma intercambiável e significam um ou mais de um; e as recitações de intervalos numéricos por pontos finais incluem todos os números apresentados nesse intervalo (por exemplo, 1 a 5 inclui 1, 1.5, 2, 2.75, 3, 3.80, 4, 5 etc.).

[084] Na descrição anterior, modalidades particulares podem ser descritas isoladamente para maior clareza. A menos que seja especificado expressamente de outra forma que as características de uma modalidade particular são incompatíveis com as características de outras modalidades, certas modalidades podem incluir uma combinação de características compatíveis descritas aqui em conexão com uma ou mais modalidades.

[085] Para qualquer método divulgado neste documento que inclua etapas discretas, as etapas podem ser conduzidas em qualquer ordem viável. E, conforme a situação, qualquer combinação de duas ou mais etapas pode ser conduzida simultaneamente.

[086] A presente invenção é ilustrada pelos exemplos a seguir. É necessário entender que os exemplos, materiais, quantidades e procedimentos devem ser interpretados de maneira ampla, de acordo com o escopo e o espírito da invenção, conforme aqui estabelecido.

EXEMPLOS Petição 870200142200, 870200142193, de 11/11/2020, pág. 36/56 31/45

Exemplo 1

[087] Método de produção:

[088] As plantas aquáticas são provenientes de Long Lake, no Condado de Codington, Dakota do Sul, e foram coletadas (raiz do Milfoil Eurasian e Bullrush Tuber). Estes tecidos de plantas aquáticas foram esterilizados na superfície usando uma solução de 10% de alvejante por 30 segundos. Os tecidos foram então novamente esterilizados na superfície com banho de 30% de álcool por cinco segundos e depois foram lavados com água destilada por 30 segundos para assegurar um material livre de bactérias epifíticas e outros micróbios. Esse material vegetal foi então macerado e colocado em uma incubadora de sete galões à temperatura ambiente com uma solução de sacarose, vinagre suficiente para ajustar o pH a não mais do que 6,8 micronutrientes (MICROPLEX, Miller Chemical & Fertilizer, LLC, Hanover, PA) para obter uma concentração final de ferro 1ppm e ¼ de colher de chá de nitrato de potássio como fonte de nitrogênio. A mistura permaneceu na incubadora pelo período de sete dias para permitir o crescimento de bactérias suficientes.

[089] Essa mistura foi então transferida para um tanque de plástico à temperatura ambiente, contendo entre 2500 galões e 3000 galões de água desclorada com 100 libras de açúcar de cana puro e dois galões de vinagre, duas libras de uma mistura de nutrientes (MICROPLEX, Miller Chemical & Fertilizer, LLC, Hanover, PA), e ¼ de xícara de nitrato de potássio. A solução foi capaz de incubar a uma concentração de bactérias igual ao padrão de McFarland, conforme determinado por comparação visual com padrões conhecidos, a uma concentração bacteriana final de cerca de 3 × 108 CFU/ml. Demorou aproximadamente 10 dias para essa concentração ser atingida. Essa mistura foi decantada em contêineres para aplicação no campo.

[090] A mistura é aplicada a uma taxa de um litro por acre utilizando um equipamento de pulverização convencional com uma pressão de aplicação de 50 psi ou menos e tamanho de gotícula suficiente para permitir uma cobertura uniforme da planta. Os agricultores foram instruídos a utilizar água desclorada (usando, por exemplo, decloradores disponíveis comercialmente, como tiossulfato de sódio ou sais tetra-sódio para remover cloro ou cloraminas da água), ou água de poço sem misturá-la com outros Petição 870200142200, 870200142193, de 11/11/2020, pág. 37/56 32/45 produtos químicos introduzidos no tanque ou herbicidas. Os agricultores também foram instruídos a não aplicar hormônios adicionais à planta após a aplicação do inoculante microbiano.

Exemplo 2

[091] O inoculante microbiano foi preparado como descrito no Exemplo 1. Foi adicionado ácido naftalenacético para uma concentração final de 2 ppm.

Exemplo 3

[092] O inoculante microbiano foi preparado como descrito no Exemplo 1. Bacillus thuringiensis foi adicionado ao inoculante para uma concentração final de 1.5 × 108 CFU/ml.

Exemplo 4

[093] A composição de inoculante microbiano foi aplicada às plantas e foi realizada uma remoção precoce do fruto primário das plantas. Um fruto secundário, muitas vezes sob forma de várias cabeças por planta, onde havia apenas uma, ou pelo menos mais do que o fruto primário, era tratado como a produção primária.

Exemplo 5

[094] A composição de inoculante microbiano pode ser colocada na presença de ácido gama-aminobútrico (GABA) a 500 ppm em solução aquosa, o que uma rápida replicação em contraste com as plantas nas quais a composição de inoculante microbiano não foi aplicada ou aplicada sem a presença do GABA.

[095] A divulgação completa de todas as patentes, pedidos de patentes e materiais disponíveis eletronicamente (incluindo, por exemplo, envios de sequências de nucleotídeos em, por exemplo, GenBank e RefSeq, e envios de sequências de aminoácidos em, por exemplo, SwissProt, PIR, PRF, PDB, e traduções das regiões codificadoras anotadas no GenBank e RefSeq) citados aqui são incorporados por referência em sua totalidade. No caso de existir alguma inconsistência entre a divulgação Petição 870200142200, 870200142193, de 11/11/2020, pág. 38/56 33/45 do presente pedido e a(s) divulgação(ões) de qualquer documento aqui incorporado por referência, a divulgação do presente pedido prevalecerá. A descrição detalhada e exemplos anteriores foram fornecidos apenas para maior clareza de entendimento. Nenhuma limitação desnecessária deve ser entendida a partir daí. A invenção não se limita aos detalhes exatos mostrados e descritos, pois variações óbvias para um especialista na técnica serão incluídas na invenção definida pelas reivindicações.

[096] Salvo indicação contrária, todos os números que expressam quantidades de componentes, pesos moleculares e assim por diante, usados na especificação e nas reivindicações, devem ser entendidos como modificados em todas as instâncias no termo “sobre”. Consequentemente, a menos que seja indicado o contrário, os parâmetros numéricos estabelecidos na especificação e nas reivindicações são aproximações que podem variar dependendo das propriedades desejadas que se deseja obter pela presente invenção. No mínimo, e não como uma tentativa de limitar a doutrina dos equivalentes ao escopo das reivindicações, cada parâmetro numérico deve pelo menos ser interpretado à luz do número de dígitos significativos relatados e aplicando técnicas de arredondamento comuns.

[097] Não obstante as faixas e parâmetros numéricos que estabelecem o amplo escopo da invenção sejam aproximações, os valores numéricos estabelecidos em exemplos específicos são relatados com a maior precisão possível. Todos os valores numéricos, no entanto, apresentam inerentemente um intervalo necessariamente resultante do desvio- padrão encontrado em suas respectivas medições de teste.

[098] Todos os títulos são para a conveniência do leitor e não devem ser usados para limitar o significado do texto que segue o título, a menos que seja especificado.

Petição 870200142200, 870200142193, de 11/11/2020, pág. 39/56 34/45

Claims (21)

Reivindicações

1. Uma composição de inoculante microbiano caracterizado por compreender: Pseudomonas spp. aquática; e Clostridium spp.; em que a Pseudomonas spp. aquática faz com que a planta produza um hormônio vegetal.

2. A composição do inoculante microbiano da reivindicação 1, em que a Pseudomonas spp. aquática é caracterizada por compreender P. moraviensis ou P. fluorescens.

3. A composição do inoculante microbiano, de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2, caracterizado pelo fato da Clostridium spp. ser Clostridium saccharobutylicum.

4. A composição do inoculante microbiano, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o hormônio produzido auxilie no crescimento da planta.

5. A composição do inoculante microbiano, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de conter ainda Bacillus spp.

6. A composição, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato em que Bacillus spp. seja B. megaterium, B. subtilis, ou B. licheniformis.

7. A composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de compreender ainda Delftia spp. aquática.

8. A composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de compreender ainda Chryseobacterium spp. aquática.

9. A composição do inoculante microbiano, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de compreender ainda Pseudomonas fluorescens aquática.

10. A composição do inoculante microbiano, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de compreender ainda Brevundimonas kwangchunensis, Fictibacillus barbaricus/Bacillus barbaricus, Prosthecobacter spp., Sphingobacterium multivorum, ou Sphingomonas spp.

11. A composição do inoculante microbiano, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de compreender ainda Bacillus megaterium, Bacillus amyloliquifaciens, Bacillus subtilus, Bacillus pumilus, Sphingosinicella microcystinivorans, Pseudomonas chlororaphis, Pseudomonas mandelii, Pseudomonas umsongensis, Clostridium spp., Arthrobacter ramosus, Streptomyces yogyakartensis, Arthrobacter spp., Xanthomonas spp., ou Chryseobacterium indologenes.

12. A composição do inoculante microbiano, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por compreender ainda uma cepa de levedura.

13. Uma planta contendo a composição do inoculante microbiano, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato do inoculante estar aderido a pelo menos uma parte da planta

14. Uma semente contendo a composição do inoculante microbiano, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a12, caracterizada pelo fato do inoculante estar aderido a pelo menos uma parte da semente.

15. Um método contendo a aplicação da composição do inoculante microbiano, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a12, caracterizada pelo fato de ser no tecido de uma planta.

16. Um método contendo a aplicação da composição do inoculante microbiano de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a12, caracterizado pelo fato de ser na superfície de uma semente.

17. Um método contendo a aplicação da composição do inoculante microbiano de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a12, caracterizado pelo fato de ser em uma sementeira.

18. Um método contendo a aplicação da composição do inoculante microbiano, de acordo comqualquer uma das reivindicações de 1 a12, caracterizado pelo fato de ser em um campo compreendendo uma pluralidade de plantas

19. Um método de produção da composição de inoculante microbiano caracterizado pelo fato de englobar: -fornecer uma espécie aeróbica de micróbios; -fornecer uma espécie anaeróbica de micróbios; -fornecer meio de cultura compreendendo: -uma fonte de carbono; -vinagre suficiente para ajustar o pH a não mais do que 6.8; -ferro a uma concentração de 1 ppm; e -nitrato de potássio;

incubar os micróbios aeróbicos e os micróbios anaeróbicos juntos no meio de cultura sob condições eficazes para permitir a fermentação aeróbica e a fermentação anaeróbica.

20. O método, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que os micróbios são incubados sob uma temperatura de pelo menos 15ºC.

21. O método, de acordo com a reivindicação 19 ou a reivindicação 20, caracterizado pelo fato dos micróbios serem incubados por pelo menos cinco dias.