BR112019026753B1

BR112019026753B1 - Solução de colágeno estéril aglomerado, método para fabricar a mesma, recipiente de injeção estéril e uso de colágeno para recuperação de tecido de cartilagem

Info

Publication number: BR112019026753B1
Application number: BR112019026753-0A
Authority: BR
Inventors: Joon Ho Lee; Ji Chul Yoo; Dong Sam Suh; Cheong Ho Chang
Original assignee: Sewoncellontec Co., Ltd
Priority date: 2017-06-15
Filing date: 2017-07-06
Publication date: 2023-01-24
Also published as: MX2019015087A; WO2018230765A1; JP2020522361A; EP3643332A1; EP3643332A4; CA3067790C; KR101863532B1; AU2017418178A1; JP6899455B2; BR112019026753A2; CN110769865A; US20200197568A1; AU2021286330A1; CA3067790A1

Abstract

A presente invenção refere-se a um método de fabricar colágeno para restaurar tecido de cartilagem utilizável para uma articulação de uma maneira injetável, e um método de uso deste. A presente invenção fornece um método de obter uma injeção de solução de colágeno de alta concentração enchendo-se assepticamente um recipiente de injeção com colágeno separado do tecido de pele de porco, e um método de utilização do colágeno de alta viscosidade carregado no recipiente de injeção para o propósito de restauração de cartilagem. A regeneração de tecido de cartilagem é eficazmente induzida quando a restauração do tecido é implementada com respeito a uma porção deficiente de cartilagem usando colágeno, que é um material biocompatível, em uma forma que é capaz de ser injetada em um sítio de aplicação com uma agulha de injeção sem uma incisão cirúrgica. Consequentemente, a restauração e regeneração da cartilagem são facilmente e prontamente induzidas em um animal, excluindo um humano, enquanto aliviam o ônus relacionado à cirurgia.

Description

Campo Técnico

[001] A presente invenção refere-se a um método de fabricar colágeno para restaurar tecido de cartilagem e um método de uso deste. Mais particularmente, na presente invenção, o colágeno, que é um material biocompatível, é fabricado em uma forma injetável que é capaz de ser enxertada em uma porção deficiente de cartilagem. O colágeno é diretamente injetado em um sítio de aplicação usando uma agulha de injeção sem uma incisão cirúrgica para assim restaurar o tecido, de modo que a regeneração de tecido de cartilagem é eficazmente induzida. Consequentemente, a restauração e regeneração de cartilagem são facilmente e prontamente induzidas em um animal, excluindo um humano, enquanto aliviam o ônus relacionado à cirurgia. Portanto, a qualidade e a confiabilidade de um produto são bastante melhoradas, satisfazendo assim as várias necessidades de consumidores, isto é, usuários, fornecendo, desse modo, uma boa imagem.

Fundamentos da Técnica

[002] A cartilagem é um tecido que não é regenerado in vivo depois de danificado. O dano à cartilagem é acompanhado por dor e amplitude de movimento limitada e, eventualmente, prossegue para artrite degenerativa, que é uma doença na qual a cartilagem está desgastada e aparecem alterações degenerativas locais. A artrite degenerativa atingiu cerca de 60 milhões de pacientes em todo o mundo em 2010, e o marcado relacionado à artrite está aumentando a uma taxa média de 14 % por ano. Cerca de 80 % das pessoas com mais de 55 anos sofrem de artrite degenerativa. Além disso, pessoas jovens também correm risco de lesão devido ao crescente interesse e participação em atividades culturais tais como esportes de lazer e esportes radicais. De acordo com a Statistics Korea, na Coréia, espera-se que a proporção da população com 65 anos ou mais atinja 10,7 % em 2009, 14,3 % em 2018 e 20,8 % em 2026, e a Coréia está se tornando uma ‘sociedade super envelhecida’. Em países com uma grande proporção de pessoas idosas, a proporção de pacientes com artrite aumentará ainda mais, e a artrite é considerada uma doença que pode afetar qualquer um. Consequentemente, a artrite é uma doença de grande interesse na política médica e de saúde. Além disso, os pacientes idosos sofrendo de artrite precisam urgentemente de um tratamento cirúrgico usando um método minimamente invasivo (um método para minimizar a escala de uma operação) que incorre em menos ônus físico e econômico.

[003] Exemplos de um método convencional para tratar cartilagem danificada incluem desbridamento de cartilagem, regeneração guiada da medula óssea (técnica de estimulação da medula óssea), cirurgia de enxerto autocondral (autoenxerto osteocondral) e cirurgia de enxerto celular autocondral dependendo do dano à cartilagem. Entretanto, esses métodos muitas vezes requerem uma operação invasiva para reparar a cartilagem muito danificada. Recentemente, como um método de tratamento aplicável aos estágios iniciais de dano à cartilagem, um método para injetar um produto de ácido hialurônico em uma cavidade glenóide foi amplamente usado. Entretanto, o produto de ácido hialurônico injetado na articulação serve como um componente similar a um componente sinovial para então substituir apenas o componente sinovial com um agente de cura (medicamento), desse modo aliviando simplesmente a dor através de uma ação de lubrificação. Ao contrário, a injeção de colágeno purificado tendo viscosidade ideal para o movimento flexível das articulações pode substituir o componente sinovial para assim aliviar a dor através de uma ação de lubrificação e também pode formar uma rede flexível com o tecido circundante, revestindo com isso os sítios de tecido biológico danificado (cartilagem). Além disso, a injeção do colágeno purificado pode promover a infiltração celular e angiogênese, auxiliando assim a regeneração da lâmina splendens e membranas teciduais e fortalecendo o tecido intra-articular.

[004] O colágeno é uma proteína importante que constitui a cartilagem, ligamentos, tendões e ossos, que são tecidos e órgãos humanos, e é uma proteína estrutural que representa de 25 a 30 % da proteína que constitui o corpo humano. De modo a regenerar o tecido, o colágeno atua como um material básico que constitui o tecido, fornece espaço para a proliferação celular ativando assim o crescimento celular e citodiferenciação, e estimula as plaquetas no sangue para secretar fatores de crescimento. O colágeno é, portanto, uma proteína importante que é essencial in vivo para a regeneração de tecidos através de interações com componentes celulares e sanguíneos.

Documentos da Técnica Relacionada

[005] (Documento de Patente 1) Patente Coreana No 10-1279812 (28/6/2013)

[006] (Documento de Patente 2) Patente Coreana No 10-1114773 (5/3/2012)

[007] (Documento de Patente 3) Patente Coreana No 10-0684932 (20/2/2007)

[008] (Documento de Patente 4) Pedido de Patente Coreana Aberto ao Público No 2004-0008125 (28/1/2004)

Divulgação Problema Técnico

[009] Exemplos de um método convencional para tratar cartilagem danificada incluem desbridamento de cartilagem, regeneração guiada da medula óssea (técnica de estimulação da medula óssea), cirurgia de enxerto autocondral (autoenxerto osteocondral) e cirurgia de enxerto celular autocondral, dependendo do dano à cartilagem. Esses métodos de tratamento têm problemas tais como exigir ressecção para operação, extração do periósteo, complexidade de uso, custos de tratamento dispendiosos, perda de células-tronco adultas induzida no processo de estimulação da medula óssea e geração de fibrocartilagem anormal devido a problemas de hemostasia. Portanto, de modo a resolver os problemas acima descritos, existe uma necessidade urgente por uma operação usando um método minimamente invasivo ou um tratamento médico para substituir uma operação usando um método invasivo.

[010] A presente invenção fornece um método de fabricar colágeno para restaurar tecido de cartilagem e um método de uso deste. O colágeno é injetado para proteger e reforçar cartilagem articular, de modo que uma membrana que cobre o tecido da cartilagem articular é revestida com o colágeno para assim proteger o tecido, curando, desse modo, a osteoartrite e evitando dano à cartilagem.

<Comparação de conceitos de tratamento com injeção de colágeno e ácido hialurônico>

Solução Técnica

[011] A presente invenção fornece um método de fabricar colágeno para restaurar tecido conjuntivo, em que um tecido de pele de porco é fragmentado, lavado e submetido a tratamento enzimático, um colágeno é separado do mesmo, e o colágeno de alta concentração assepticamente carregado em um recipiente de injeção é obtido através de processos de tratamento com sal, esterilização por filtração, concentração e carregamento. O método inclui um processo de separação do colágeno do tecido da pele e carregamento do colágeno no recipiente de injeção. O processo inclui lavar o tecido da pele separado de um porco usando etanol (pelo menos 70 %, 20 a 24 horas) e hidróxido de sódio (pH de 11 ou maior, 2 horas), seguido por fragmentação; misturar o tecido fragmentado com uma solução ácida (pH de 3 ou menos) contendo uma enzima, seguido por agitação a 30 °C ou menos por 3 a 5 dias para realizar uma reação; adicionar NaCl de modo a obter o colágeno separado do tecido de modo que uma concentração final seja de 0,7 a 0,9 M; realizar passagem através de um filtro de membrana para separar os materiais (proteína não colágena, sal, pepsina, etc.) tendo um peso molecular que é menor que um peso molecular de colágeno (300 kDa), seguida pela passagem através de um filtro tendo poros de 0,22 μm para obter o colágeno estéril; realizar a aglomeração do colágeno usando um pH e uma temperatura, seguido por concentração através de centrifugação; e encher o recipiente de injeção com o colágeno concentrado usando ferramentas de enchimento estéreis.

Efeitos Vantajosos

[012] Como descrito em detalhes acima, a presente invenção fornece uma composição para restaurar tecido de cartilagem obtido enchendo-se assepticamente uma seringa com colágeno a uma concentração diluída de 5 a 60 mg/mL exceto água ou uma solução tamponada com fosfato fisiológico.

[013] Na presente invenção, de modo a superar as desvantagens (ação simples de lubrificação) de uma injeção de articulação convencional incluindo um componente de ácido hialurônico, o colágeno, que é um material biocompatível, é usado para restaurar a cartilagem danificada.

[014] Quando o colágeno é enxertado em uma porção deficiente de cartilagem, as fibras do colágeno formam uma rede flexível com tecidos circundantes de modo que os ferimentos de tecidos biológicos danificados sejam revestidos por ela, promovendo assim a infiltração celular e angiogênese, que auxilia no processo de cicatrização natural. Além disso, a membrana do tecido intra-articular é fortalecida para proteger o tecido da articulação e aumentar a elasticidade do tecido da articulação, que auxilia na ação de lubrificação do tecido da articulação, fortalecendo assim a função do tecido da articulação.

[015] Além disso, na presente invenção, o colágeno é fabricado de modo a ser aplicado em uma maneira injetável usando um método de operação asséptico, que permite ao operador realizar o tratamento médico usando um método não invasivo. Consequentemente, é possível estabilizar de forma simples e eficaz uma porção danificada do tecido de cartilagem.

[016] Além disso, é possível aliviar a dor causada pelas deficiências da cartilagem e promover a recuperação da função das articulações e a satisfação com a vida cotidiana.

Descrição dos Desenhos

[017] A FIG. 1 mostra um processo de fabricação de uma solução de colágeno assepticamente carregada em um recipiente de injeção;

[018] a FIG. 2 mostra a solução de colágeno assepticamente carregada no recipiente de injeção;

[019] a FIG. 3 é uma fotografia mostrando a solução de colágeno que está corada de azul de modo a confirmar o efeito da injeção em uma porção de cartilagem;

[020] a FIG. 4 é uma fotografia mostrando deficiência de cartilagem em um joelho de porco induzida de modo a confirmar o efeito do colágeno para injeção; e

[021] a FIG. 5 é uma fotografia mostrando o resultado da confirmação do efeito da injeção do colágeno e a porção deficiente de cartilagem preenchida com o colágeno.

Modo para Invenção (Exemplo 1) Método de encher assepticamente um recipiente de injeção com colágeno depois da fabricação de colágeno de alta concentração, do qual o sítio imune é removido

[022] Um tecido de pele de porco é fragmentado, lavado e submetido a tratamento enzimático, o colágeno é separado, e o colágeno de alta concentração assepticamente carregado em um recipiente de injeção é obtido através dos processos de tratamento com sal, esterilização por filtração, concentração e enchimento. 1. O tecido de pele de porco obtido é fragmentado depois da lavagem com etanol (pelo menos 70 %, 24 h) e hidróxido de sódio (pH de 11 ou maior, 2 h) 2. O tecido fragmentado é misturado com uma solução ácida contendo uma enzima (pH de 3 ou menos), seguido por agitação a 30 °C ou menos por 3 a 5 dias para realizar uma reação. 3. NaCl é adicionado a ele de modo que uma concentração final seja 0,7 a 0,9 M de modo a obter o colágeno separado do tecido. 4. Passagem através de um filtro de membrana é realizada de modo a separar os materiais (proteína não colágena, sal, pepsina, etc.) tendo um peso molecular que é menor que um peso molecular de colágeno (300 kDa). 5. Passagem através de um filtro tendo poros de 0,22 μm é realizada de modo a obter colágeno estéril. 6. Aglomeração do colágeno usando um pH e uma temperatura é realizada, seguida por concentração através de centrifugação. 7. O recipiente de injeção é enchido com a solução de colágeno concentrada usando ferramentas de enchimento estéreis.

(Exemplo 2) Método de aplicar o colágeno carregado em um recipiente de injeção à porção deficiente de cartilagem de um animal

[023] Propósito: Confirmar a capacidade de aplicar colágeno à porção deficiente de cartilagem de um joelho do porco em uma maneira injetável <Método e Confirmação de Efeito> 1. Uma solução de colágeno (uma concentração de 5 a 60 mg/mL) assepticamente carregada em um recipiente de injeção é preparada (concentração de colágeno). De modo a realizar a restauração da cartilagem, que é o propósito deste produto, é necessário que a concentração de colágeno seja de 5 mg/mL ou mais, a fim de preencher a porção deficiente com o colágeno e depois manter uma forma predeterminada. Devido às características (fabricação asséptica) do processo para fabricar produtos para propósitos medicinais (tipo de injeção), é difícil fabricar, usar na prática e aplicar um produto tendo uma viscosidade muito alta de 60 mg/mL ou mais. Por esta razão, a concentração de colágeno é definida na faixa de 5 mg/mL ou mais e 60 mg/mL ou menos. 2. A solução de colágeno é corada com uma pequena quantidade de corante azul (azul de triptano, ligado a proteínas) de modo a confirmar a olho nu o efeito depois da injeção no tecido de cartilagem do joelho de um animal (porco). 3. Depois que uma perna de porco é fixada a uma tala para expor a cartilagem da articulação do joelho usando dispositivos cirúrgicos, uma broca é usada para induzir porções deficientes tendo diâmetros de cerca de 4 cm e profundidade de cerca de 2 cm. 4. Uma agulha de injeção é conectada ao recipiente de injeção enchido com o colágeno. Uma agulha de injeção com 38 mm ou mais longa é usada. 5. Uma porção cortada é suturada usando um fio de sutura, e o colágeno corado contido no recipiente de injeção é diretamente injetado em uma cavidade glenóide (espaço preenchido com sinóvia) do joelho do porco. 6. Um movimento da articulação do joelho (CPM: movimento passivo contínuo) é realizado para ajudar a ação do colágeno naturalmente preenchendo a porção deficiente por injeção. Além disso, a porção suturada é cortada para expor a porção de cartilagem na qual o produto é injetado e, em seguida, observada.

[024] O colágeno injetado na porção deficiente da cartilagem naturalmente preencheu uma porção induzida por deficiência, e o efeito desejado pelo operador foi observado.

(Exemplo 3) Método de aplicação para tratar a cartilagem de animais usando colágeno carregado em recipiente de injeção

[025] Propósito: Teste para confirmar o efeito de cura da cartilagem de colágeno carregado em um recipiente de injeção usando coelhos com cartilagem deficiente em suas articulações <Método e Confirmação de Efeito> 1. Um experimento pré-clínico foi realizado usando um coelho (Coelho branco da Nova Zelândia) de modo a confirmar o efeito de cura da cartilagem da articulação. Os coelhos experimentais foram submetidos a jejum por um dia antes da fabricação de um modelo deficiente de cartilagem e do tratamento cirúrgico para injeção de colágeno. 2. Os coelhos foram anestesiados injetando-se um anestésico no dia do tratamento cirúrgico, e os pelos de uma porção a ser tratada cirurgicamente foram removidos usando uma máquina de remoção de pelos. 3. Depois da conclusão de remoção de pelos, a porção a ser tratada cirurgicamente foi limpa com etanol a 70 % e depois desinfetada com povidina. 4. Depois da incisão da pele da articulação do joelho do coelho usando um dispositivo de operação cirúrgica, o tecido subcutâneo foi aberto para expor a porção sulcada da rótula da cartilagem articular. 5. Um defeito de cartilagem que foi de 2 mm em diâmetro e de 2 mm em profundidade foi induzido usando um dispositivo de operação cirúrgica. 6. O tecido subcutâneo e a pele incisados foram suturados usando um fio de sutura e depois desinfetados com povidina. 7. Depois que uma agulha de injeção foi colocada no recipiente de injeção, colágeno foi injetado na porção deficiente de cartilagem. 8. Depois que os defeitos de cartilagem foram induzidos nas pernas dos coelhos experimentais como um grupo controle usando o método descrito acima, solução salina fisiológica foi injetada. 9. Antibióticos e analgésicos foram injetados nos coelhos experimentais, e os coelhos foram colocados em um ambiente de criação e verificados quanto a recuperação da anestesia.

<Fotografia mostrando a fabricação do modelo deficiente de cartilagem e tratamento cirúrgico de injeção de colágeno> A: Indução dos defeitos de cartilagem, B: Tamanho dos defeitos de cartilagem (0 2 mm), C: Injeção de colágeno 10. Os tecidos da articulação do joelho dos coelhos experimentais foram coletados às custas dos coelhos experimentais 3, 6, 9, e 12 semanas depois da conclusão do tratamento cirúrgico, e padrões de mudança (mudança de porções deficientes de cartilagem, estados de superfície, e continuidade da borda entre os tecidos que circundam os defeitos e os tecidos neoplásicos) foram observados a olho nu. 11. Os tecidos coletados 3 e 12 semanas depois da conclusão do tratamento cirúrgico foram fixados em formalina neutra a 10 % e foram submetidos ao embebimento de parafina para fabricar uma amostra de tecido de 5 μm. Os métodos de coloração com Hematoxilina-Eosina, Safranina O, Azul de Toluidina, Colágeno Tipo 1 e Colágeno Tipo 2 foram realizados para observar a regeneração de células e substratos. <Resultado>

[026] A porção deficiente de cartilagem do coelho foi observada a olho nu 3, 6, 9 e 12 semanas depois que o colágeno e a solução salina fisiológica foram injetados na porção deficiente de cartilagem do coelho. Como um resultado, foi confirmado que a porção deficiente foi restaurada depois de 3 semanas no grupo experimental no qual o colágeno foi injetado. Entretanto, foi observado que a porção deficiente não foi adequadamente restaurada mesmo depois de 3 semanas no grupo controle. Depois disso, foi confirmado que a superfície da cartilagem estava lisa porque a porção deficiente foi restaurada no grupo experimental no qual o colágeno foi injetado, mas que a superfície da porção deficiente de cartilagem não estava lisa no grupo controle no qual a solução salina fisiológica foi injetada.

<Observação a olho nu para confirmar o estado de restauração da porção deficiente de cartilagem de coelho>

[027] Grupo experimental: A, B, C e D, Grupo controle: E, F, G e H, Tempo de observação: 3 semanas (A, E), 6 semanas (B, F), 9 semanas (C, G), 12 semanas (D, H)

[028] A cartilagem do coelho, na qual o colágeno como o grupo experimental e a solução salina fisiológica como o grupo controle foram injetados, foi analisada usando coloração de tecido. Como um resultado, foi confirmado que, no caso do tecido no qual o colágeno foi injetado, um espaço deficiente de cartilagem foi preenchido com o colágeno depois de 3 semanas e o tecido de cartilagem foi regenerado depois de 12 semanas. Entretanto, foi confirmado que o tecido no qual a solução salina fisiológica foi injetada não preencheu suficientemente o espaço deficiente de cartilagem depois de 3 semanas e o tecido de cartilagem não foi regenerado suficientemente mesmo depois de 12 semanas e, consequentemente, a superfície da cartilagem não estava lisa.

<Análise histopatológica do tecido de cartilagem de coelho> (A) Amostras de grupos experimentais na 6a semana (a-1: método de coloração H&E, a-2: método de coloração de colágeno tipo 1) (B) Amostras de grupos experimentais e controle nas 3a e 12a semanas (b: método de coloração H&E, c: método de coloração Safranina-O, d: método de coloração de Azul de Toluidina, e: método de coloração de colágeno tipo 1, f: método de coloração de colágeno tipo 2, 1: Grupo experimental na 3a semana, 2: Grupo experimental na 12a semana, 3: Grupo controle na 3a semana e 4: Grupo controle na 12a semana)

(Exemplo 4) Método usando colágeno carregado em recipiente de injeção aplicado para tratar paciente sofrendo de artrite do joelho

[029] Propósito: Teste para confirmar se dor é aliviada ou a qualidade de vida é melhorada depois de injetar colágeno carregado em um recipiente de injeção no joelho de um paciente sofrendo de condromalácia ou artrite degenerativa <Método e Confirmação de Efeito> 1. Foram recrutados duzentos pacientes sofrendo de condromalácia ou artrite degenerativa nos joelhos. 2. Os pacientes que foram recrutados foram divididos aleatoriamente em um grupo experimental (grupo no qual o colágeno foi injetado na articulação do joelho, grupo BioColágeno) e um grupo controle (grupo no qual a solução salina foi injetada na articulação do joelho, grupo placebo) para realizar o tratamento cirúrgico. 3. Pacientes foram avaliados quanto ao alívio da dor (VAS*), melhoria da função de movimentação da articulação (WOMAC**), e satisfação da vida diária (SF- 36***) 4, 12 e 24 semanas depois da conclusão do tratamento cirúrgico. 1 VAS (Visual Analogue Scale): Um método de quantificar o nível de dor de um paciente. Quanto menor o valor numérico, menos dor. 2 * WOMAC (Western Ontario and McMaster Universities Artrite Index): Um método de avaliar os aspectos funcionais de movimento articular ao longo da vida diária do paciente com respeito a dor da articulação do joelho. Como itens de avaliação, a dor, a rigidez e a qualidade de vida foram medidas e comparadas. Quanto menor o valor numérico, melhor a função da articulação. 3 ** SF-36 (36-Item Short-form Health Survey): Um método de medir a satisfação da vida diária do paciente. Quanro maior o valor numérico, maior a satisfação do paciente.

[030] Como um resultado da medição e análise usando o método VAS, foi confirmado que, no grupo experimental (grupo no qual o colágeno foi injetado), a dor foi aliviada a 60,51 ± 13,82 mm antes da cura, mas depois de 6 meses, a dor foi aliviada a 28,88 ± 24,77 mm (A). Além disso, entre os pacientes do grupo experimental, 65 pacientes (73,86 %) tiveram uma melhoria de 20 % nos resultados de VAS e 59 pacientes (67,05 %) tiveram uma melhoria de 40 %. Ao contrário, entre os pacientes do grupo controle, 46 pacientes (54,12 %) tiveram uma melhoria de 20 % nos resultados de VAS e 38 pacientes (44,71 %) tiveram uma melhoria de 40 % (B).

<Resultados da análise do efeito de tratamento nos grupos experimentais e controle usando o método VAS> (A) Resultado da análise de VAS de 100 mm, (B) Taxa de alívio da dor do paciente

[031] Como um resultado da medição e análise usando um método VAS, foi confirmado que, no grupo experimental (grupo no qual o colágeno foi injetado), a dor foi aliviada a 16,17 ± 18,18 depois de 4 semanas, 23,50 ± 24,88 depois de 12 semanas e 28,40 ± 27,38 depois de 24 semanas em comparação com o caso antes da cura, desse modo verificando o efeito de alívio da dor (A). Como um resultado da medição e análise usando um método WOMAC, foi confirmado que, no grupo experimental (grupo no qual o colágeno foi injetado), a dor foi aliviada a 9,90 ± 13,62 depois de 4 semanas, 13,20 ± 15,96 depois de 12 semanas e 13,46 ± 17,45 depois de 24 semanas em comparação com o caso antes de cura, aliviando a dor e melhorando a rigidez e a qualidade de vida (B). Além disso, como um resultado da medição e análise usando um método SF-36, foi confirmado que, no grupo experimental (grupo no qual o colágeno foi injetado), a satisfação com a vida diária foi aumentada para 9,50 ± 12,97 depois de 4 semanas, 10,20 ± 16,62 depois de 12 semanas e 11,79 ± 17,57 depois de 24 semanas em comparação com o caso antes do tratamento (C).

<Resultados da análise do efeito do tratamento no grupo experimental usando os métodos VAS, WOMAC e SF-36> (A) Resultado da análise de VAS de 100 mm, (B) resultado da análise de WOMAC, (C) resultado da análise de SF-36 (D) resultado da análise da dor de WOMAC, (E) resultado da análise da rigidez de WOMAC, (F) qualidade de vida de WOMAC

Aplicabilidade Industrial

[032] A ideia técnica do método de fabricar colágeno para restaurar tecido de cartilagem de acordo com a presente invenção e o método de uso do mesmo tornam possível garantir repetidamente o mesmo resultado. Em particular, a presente invenção pode promover o desenvolvimento técnico, contribuindo assim para o desenvolvimento industrial, por isso vale a pena proteger.

Claims

1. Método para fabricar uma solução de colágeno estéril CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: lavar o tecido da pele de porco com etanol e hidróxido de sódio; fragmentar o tecido da pele lavado; misturar o tecido da pele fragmentado com uma solução ácida contendo uma enzima; adicionar cloreto de sódio; filtrar através de um filtro de membrana para separar o colágeno não filtrado dos materiais filtrados; esterilizar o colágeno separado por filtração através de um filtro tendo um tamanho de poro de 0,22 μm ou menor; coletar um filtrado compreendendo uma solução de colágeno estéril; e realizar a aglomeração do colágeno alterando o pH e uma temperatura, seguida por concentração.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende ainda adicionar um corante ao colágeno.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende ainda encher um recipiente de injeção estéril com o coláge- no concentrado.

4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, CARACTERIZADO pelo fato de que o etanol é pelo menos 70% de etanol.

5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, CARACTERIZADO pelo fato de que o hidróxido de sódio tem um pH de 11 ou maior.

6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, CARACTERIZADO pelo fato de que a solução ácida tem um pH de 3 ou menor.

7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, CARACTERIZADO pelo fato de que o NaCl é adicionado para uma concentração final de colágeno de 0,7 M a 0,9 M.

8. Recipiente de injeção estéril CARACTERIZADO pelo fato de que compre-ende a solução de colágeno estéril aglomerado fabricada pelo método, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7.

9. Uso de um colágeno CARACTERIZADO pelo fato de que é para a produ-ção da solução de colágeno estéril aglomerado, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, para restaurar um tecido de cartilagem.